WO2022270663A1 - 도네페질, 실로스타졸 및 아리피프라졸을 포함하는 치매, 인지장애 또는 혈관성 우울증의 예방, 개선 또는 치료용 약학적 조성물 - Google Patents

도네페질, 실로스타졸 및 아리피프라졸을 포함하는 치매, 인지장애 또는 혈관성 우울증의 예방, 개선 또는 치료용 약학적 조성물 Download PDF

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WO2022270663A1
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WO
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pharmaceutically acceptable
acceptable salt
donepezil
cilostazol
aripiprazole
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PCT/KR2021/008208
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정예황
소혜연
엄대식
정진석
홍기환
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동아에스티 주식회사
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    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia

Definitions

  • the present invention relates to a novel combination preparation useful for preventing, improving or treating dementia, cognitive impairment or vascular depression. More specifically, dementia, cognitive impairment or vascular depression, including a triple combination of donepezil or a pharmaceutically acceptable salt thereof, cilostazol or a pharmaceutically acceptable salt thereof and aripiprazole or a pharmaceutically acceptable salt thereof It relates to a pharmaceutical composition for the prevention, improvement or treatment of.
  • Dementia is caused by atrophy caused by extracellular amyloid-beta plaques and intracellular tau tangles.
  • the pathogenesis of dementia is based on various mechanisms, not just one mechanism, and for this reason, the need for a combination drug composed of drugs with different mechanisms has been actively discussed for a long time.
  • Donepezil is a cholinergic inhibitor that delays the progression of early Alzheimer's dementia for a short period of time, and has been prescribed to many dementia patients from the beginning based on clinical results that help improve cognitive function.
  • Cilostazol is a phosphodiesterase 3 inhibitor and is prescribed for chronic arterial occlusion and cerebral infarction. There is also a report on the possibility that cilostazol can effectively act on vascular dementia by increasing blood flow to the brain.
  • Aripiprazole has activity as an agonist for serotonin receptors and dopamine receptors and acts to stabilize the dopamine-serotonin system. Due to this mechanism, aripiprazole is prescribed for patients with neuropsychiatric disorders such as schizophrenia.
  • Donepezil is prescribed to many patients with dementia based on clinical results that it helps to improve cognitive intelligence, but other side effects such as insomnia in 5-14% of patients and nausea and diarrhea in 8-15% of patients. This is being reported Aripiprazole, a treatment for schizophrenia and depression, not only improves schizophrenia and depression, but also symptoms such as drowsiness and constipation have been reported in more than 10% of patients, and various side effects such as headache, extrapyramidal symptoms, fatigue, sedation, and nervousness this is being reported It is also known that cilostazol can cause side effects such as headache, heaviness, abnormal stool, diarrhea, rhinitis, infection, and tachycardia.
  • the present invention has been proposed to solve the above problems, and includes donepezil or a pharmaceutically acceptable salt thereof, cilostazol or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and aripiprazole or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
  • donepezil or a pharmaceutically acceptable salt thereof includes donepezil or a pharmaceutically acceptable salt thereof, cilostazol or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and aripiprazole or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
  • dementia, cognitive improvement or vascular disease including donepezil or a pharmaceutically acceptable salt thereof, cilostazol or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and aripiprazole or a pharmaceutically acceptable salt thereof
  • a pharmaceutical composition for preventing, improving, reducing or treating depression may be provided.
  • donepezil or a pharmaceutically acceptable salt thereof, cilostazol or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and aripiprazole or a pharmaceutically acceptable salt thereof are in the form of a single formulation, or together or separately It may be prepared in the form of separate formulations administered simultaneously or at different times.
  • donepezil or a pharmaceutically acceptable salt thereof, cilostazol or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and aripiprazole or a pharmaceutically acceptable salt thereof are mixed in a weight ratio of 1 to 10:1 to Compositions comprised from 200:1 to 25 may be provided.
  • donepezil or a pharmaceutically acceptable salt thereof, cilostazol or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and aripiprazole or a pharmaceutically acceptable salt thereof are prepared in a weight ratio of 1:1:1.
  • An included composition may be provided.
  • donepezil or a pharmaceutically acceptable salt thereof, cilostazol or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and aripiprazole or a pharmaceutically acceptable salt thereof are mixed in a weight ratio of 10:40 to 200: Compositions comprised from 1 to 25 may be provided.
  • donepezil or a pharmaceutically acceptable salt thereof, cilostazol or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and aripiprazole or a pharmaceutically acceptable salt thereof are prepared in a weight ratio of 10:40:25, Compositions comprising 10:100:2.5 or 10:200:5 may be provided.
  • a method for preventing, improving, reducing or treating dementia, cognitive improvement or vascular depression comprising administering a combination of donepezil or a pharmaceutically acceptable salt thereof, cilostazol or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and aripiprazole or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
  • donepezil or a pharmaceutically acceptable salt thereof, cilostazol or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and aripiprazole or a pharmaceutically acceptable salt thereof are in the form of a single formulation, or together or separately
  • a method for preventing, ameliorating, reducing or treating dementia, cognitive improvement or vascular depression administered in the form of separate preparations administered at the same time or at different times can be provided.
  • donepezil or a pharmaceutically acceptable salt thereof, cilostazol or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and aripiprazole or a pharmaceutically acceptable salt thereof are mixed in a weight ratio of 1 to 10:1 to
  • a method for preventing, ameliorating, reducing or treating dementia, cognitive improvement or vascular depression, characterized by administering 200:1 to 25 may be provided.
  • donepezil or a pharmaceutically acceptable salt thereof, cilostazol or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and aripiprazole or a pharmaceutically acceptable salt thereof are prepared in a weight ratio of 1:1:1.
  • a method for preventing, ameliorating, reducing or treating dementia, cognitive improvement or vascular depression characterized in that administration may be provided.
  • donepezil or a pharmaceutically acceptable salt thereof, cilostazol or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and aripiprazole or a pharmaceutically acceptable salt thereof are mixed in a weight ratio of 10:40 to 200:
  • a method for preventing, improving, reducing or treating dementia, cognitive improvement or vascular depression, characterized in that it is administered in 1 to 25 may be provided.
  • donepezil or a pharmaceutically acceptable salt thereof, cilostazol or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and aripiprazole or a pharmaceutically acceptable salt thereof are prepared in a weight ratio of 10:40:25, 10:100:2.5 or 10:200:5 may be administered to prevent, ameliorate, alleviate or treat dementia, cognitive improvement or vascular depression, characterized in that.
  • the pharmaceutical composition of the present invention contains a triple combination of donepezil or a pharmaceutically acceptable salt thereof, cilostazol or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and aripiprazole or a pharmaceutically acceptable salt thereof, thereby providing excellent dementia, cognitive Not only does it show excellent preventive, ameliorative, or therapeutic activity against vascular depression, but it also enables self-directed life and reduces toxicity or side effects that may occur when each drug is administered alone in high doses.
  • 1a to 1c are results of setting experimental conditions for measuring amyloid-beta and phosphorylated tau in N2a Swe cells.
  • 2a to 2f are results of evaluating the effects of the drug complex included in the composition of the present invention on amyloid-beta and phosphorylated tau in activated N2a Swe cells.
  • Figure 3 is a result of evaluating the effect of the drug complex included in the composition of the present invention on ADAM10 expression in N2a Swe cells.
  • 4a to 4d are results of evaluating the effect of the drug complex included in the composition of the present invention on ⁇ -secretase activity in N2a Swe cells.
  • 5a to 5c are results of evaluating the effect of the drug complex included in the composition of the present invention on SIRT1 expression and activity in N2a Swe cells.
  • 7a and 7b are results of evaluating the effect of the drug complex included in the composition of the present invention on neurite elongation in a mouse hippocampal cell line.
  • 10a to 10c are results of evaluation of the effect of various drug combination ratios of the drug complexes included in the composition of the present invention on neurite elongation of mouse hippocampal cell lines.
  • 11a to 11d are results of evaluating the effect of various drug combination ratios of the drug combination included in the composition of the present invention on cognitive function improvement in animal models with short-term memory impairment.
  • composition according to the present invention is characterized by comprising a combination of three components of donephenyl or a pharmaceutically acceptable salt thereof, cilostazol or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and aripiprazole or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.
  • pharmaceutically acceptable salt refers to any and all organic compounds of the above compound at a concentration that has an effective effect that is relatively non-toxic and harmless to patients, and side effects caused by this salt do not reduce the beneficial effect of donepezil.
  • an inorganic addition salt preferably an acid addition salt.
  • Free acids that can be used in the preparation of the pharmaceutically acceptable salts can be divided into inorganic acids and organic acids.
  • the inorganic acid hydrochloric acid, sulfuric acid, nitric acid, phosphoric acid, perchloric acid, hydrobromic acid, and the like may be used.
  • Organic acids are acetic acid, methanesulfonic acid, ethanesulfonic acid, p-toluenesulfonic acid, fumaric acid, maleic acid, malonic acid, phthalic acid, succinic acid, lactic acid, citric acid, citric acid, gluconic acid, tartaric acid, salicylic acid, malic acid, oxalic acid. , benzoic acid, embonic acid, aspartic acid, glutamic acid and the like can be used.
  • Organic bases that can be used in the preparation of organic base addition salts include tris(hydroxymethyl)methylamine and dicyclohexylamine.
  • Amino acids that can be used for preparing amino acid addition bases are natural amino acids such as alanine and glycine.
  • donepezil is a compound whose chemical name is '1-benzyl-4-[(5,6-dimethoxy-1-indanone)-2-ylmethyl]piperidine'
  • Donepezil or a pharmaceutically acceptable salt thereof is known as a drug useful for preventing senile dementia, particularly for preventing and treating Alzheimer's disease.
  • a pharmaceutically acceptable salt of the donepezil it may be preferably a hydrochloride salt.
  • aripiprazole is carbostyril also expressed as 7- ⁇ 4-[4-(2,3-dichlorophenyl)-1-piperazinyl]butoxy ⁇ -3,4-dihydro2(1H)-quinolinone is a derivative
  • Aripiprazole is 7-[4-[4-(2,3-dichlorophenyl)-1-piperazinyl]butoxy]-3,4-dihydrocarbostyril, Abilify OPC-14597, OPC-31 or BMS-337039.
  • Aripiprazole has activity as an agonist for serotonin receptors and dopamine receptors, and acts as an agonist or partial agonist for serotonin 5HT1A receptors and dopamine D2 receptors.
  • Aripiprazole is a dopamine-serotonin system stabilizer.
  • the scope of the present invention covers metabolites of aripiprazole. Dehydroaripiprazole is one of the metabolites of aripiprazole.
  • salts derived from inorganic acids such as hydrochloric acid, nitric acid, phosphoric acid, sulfuric acid, hydrobromic acid, hydroiodic acid, phosphorous acid and mixtures thereof, as well as organic acids such as aliphatic mono - and salts derived from dicarboxylic acids, phenyl-substituted alkanoic acids, hydroxy alkanoic acids, alkanedioic acids, aromatic acids, and aliphatic and aromatic sulfonic acids.
  • inorganic acids such as hydrochloric acid, nitric acid, phosphoric acid, sulfuric acid, hydrobromic acid, hydroiodic acid, phosphorous acid and mixtures thereof
  • organic acids such as aliphatic mono - and salts derived from dicarboxylic acids, phenyl-substituted alkanoic acids, hydroxy alkanoic acids, alkanedioic acids, aromatic acids, and aliphatic and aromatic sulfonic acids.
  • cilostazol is also expressed as 6-[4-(1-cyclohexyl-1H-tetrazol-5-yl)butoxy]-3,4-dihydrocarbostyril.
  • the pharmacologically acceptable salt of cilostazol according to the present invention may be in the form of an acid addition salt.
  • it can be easily prepared by reacting cilostazol with a pharmacologically acceptable acid.
  • Pharmacologically acceptable acids include, for example, organic acids such as oxalic acid, maleic acid, fumaric acid, malic acid, tartaric acid, citric acid, benzoic acid, and inorganic acids such as hydrochloric acid, sulfuric acid, phosphoric acid, hydrobromic acid.
  • organic acids such as oxalic acid, maleic acid, fumaric acid, malic acid, tartaric acid, citric acid, benzoic acid
  • inorganic acids such as hydrochloric acid, sulfuric acid, phosphoric acid, hydrobromic acid.
  • vascular dementia is particularly induced by cerebrovascular disorders.
  • vascular dementia also includes frontotemporal dementia, alcoholic dementia and partial dementia. More specific examples of vascular dementia include dementia induced by cerebrovascular disorders, and examples of cerebrovascular disorders include strokes (such as cerebral infarction, cerebral hemorrhage, and subarachnoid hemorrhage).
  • An even more specific example of vascular dementia includes dementia induced after cerebral ischemia caused by a stroke.
  • Examples of cognitive disorders include Alzheimer's disease, learning disorders caused by degenerative disorders, decline in learning ability, memory or cognitive dysfunction, such as mild cognitive impairment, senile cognitive impairment, age-related cognitive decline, cerebral senility, vascular cognitive impairment, AIDS-related dementia, electroshock induced amnesia, memory impairment associated with depression or anxiety, cognitive impairment in Parkinson's disease, Down's syndrome, stroke, traumatic brain injury, Huntington's disease and attention deficit disorder.
  • Examples of vascular cognitive impairment include cerebrovascular cognitive impairment, and examples of cerebrovascular cognitive impairment include cognitive impairment induced after cerebral ischemia caused by stroke (eg, cognitive impairment induced after cerebral ischemia caused by cerebral infarction). included Vascular cognitive impairment is induced by vascular disorders.
  • vascular cognitive impairment include cognitive impairment induced by cerebrovascular disorders.
  • cerebrovascular disorders include stroke (such as cerebral infarction, cerebral hemorrhage, and subarachnoid hemorrhage).
  • Even more specific examples of vascular cognitive impairment include cognitive impairment induced after cerebral ischemia caused by stroke (eg, cognitive impairment induced after cerebral ischemia caused by cerebral infarction).
  • vascular depression is induced after vascular disorders.
  • More specific examples of vascular dementia include depression induced by cerebrovascular disorders.
  • cerebrovascular disorders include stroke (such as cerebral infarction, cerebral hemorrhage, and subarachnoid hemorrhage).
  • Examples of vascular depression also include depression induced by age-related vascular disorders. Examples of vascular depression include post-stroke depression, post-cerebral infarction depression and geriatric depression.
  • the three active ingredients of the composition according to the present invention are donepezil or a pharmaceutically acceptable salt thereof, cilostazol or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and aripiprazole or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
  • Possible salts may be included in the composition in a weight ratio of 1 to 10:1 to 200:1 to 25.
  • the three active ingredients of the composition according to the present invention are donepezil or a pharmaceutically acceptable salt thereof, cilostazol or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and aripiprazole or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
  • the above three active ingredients are 1:1 in a weight ratio of donepezil or a pharmaceutically acceptable salt thereof, cilostazol or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and aripiprazole or a pharmaceutically acceptable salt thereof. 1 may be included in the composition.
  • the three active ingredients are 10:40 to 10:40 in weight ratio of donepezil or a pharmaceutically acceptable salt thereof, cilostazol or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and aripiprazole or a pharmaceutically acceptable salt thereof. 200:1 to 25 may be included in the composition.
  • the above three active ingredients are 10:40 in a weight ratio of donepezil or a pharmaceutically acceptable salt thereof, cilostazol or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and aripiprazole or a pharmaceutically acceptable salt thereof: 25, 10:100:2.5 or 10:200:5 may be included in the composition.
  • the above three active ingredients are 1:200 in a weight ratio of donepezil or a pharmaceutically acceptable salt thereof, cilostazol or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and aripiprazole or a pharmaceutically acceptable salt thereof. 5 may be included in the composition.
  • the pharmaceutical composition of the present invention may be in the form of a single formulation containing all three active ingredients, or may include a separate formulation in which some and the other of the three active ingredients are included, and two or one It may consist of two formulations (for example, three active ingredients are formulated as separate formulations, or two of the three active ingredients are formulated as a first formulation and the remaining one is formulated as a second formulation). form in which it is formulated).
  • composition of the present invention may be administered orally or parenterally (for example, intravenous, subcutaneous, intraperitoneal or topical application) depending on the desired method.
  • composition according to the present invention may be administered orally.
  • the pharmaceutical composition of the present invention has a synergistic complementary effect of donepezil or a pharmaceutically acceptable salt thereof, cilostazol or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and aripiprazole or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and as a result, excellent dementia , exhibits excellent preventive, ameliorative or therapeutic activity on cognitive impairment or vascular depression.
  • aripiprazole included in the combination drug suppresses the progression of various neuropsychiatric symptoms (Depression, Aggression, Anxiety, etc.) that accompany most patients with dementia, so there is a possibility that cognitive intelligence and quality of life can be improved simultaneously by the combination of the three drugs. Big.
  • insomnia is observed in 5-14% of patients and gastrointestinal side effects such as nausea and diarrhea are observed in 8-15% of patients.
  • side effects such as drowsiness and constipation have been reported with aripiprazole, so there is a possibility that side effects of donepezil may be improved when administered together with donepezil.
  • All three drugs mentioned are metabolized by CYP3A4, and since cilostazol is a CYP3A4 inhibitor, the exposure of aripiprazole is expected to increase when used in combination with cilostazol.
  • the exposure of aripiprazole is predicted to increase by about 1.5 times when used in combination with cilostazol, which also has the advantage of lowering the dosage of aripiprazole in combination.
  • the present invention is directed to the prevention, improvement or treatment of the above diseases, the specific drug
  • the three types of combination reduce the dosage of drugs and improve side effects, as well as exhibit excellent synergistic pharmacological effects, allowing patients with dementia, cognitive impairment, or vascular depression to reduce their dependence on nursing care by others so that they can lead a self-directed life. There are features that make this possible.
  • the composition according to the present invention exhibits an effect of reducing the expression of amyloid-beta, phosphorylated tau and acetylated tau in N2a swe cells.
  • composition according to the present invention exhibits an effect of increasing ADAM10 expression in N2a swe cells.
  • composition according to the present invention exhibits an effect of increasing ⁇ -secretase activity in N2a swe cells.
  • composition according to the present invention exhibits an effect of increasing SIRT1 expression in N2a swe cells.
  • composition according to the present invention exhibits significant cell viability in a mouse hippocampal cell line.
  • the composition according to the present invention exhibits a neurite outgrowth effect in human induced pluripotent stem cell-derived nerve cells.
  • composition according to the present invention exhibits an effect of improving cognitive ability in an animal model with short-term memory impairment.
  • prevention refers to any activity that suppresses or delays the onset of Alzheimer's disease by administering the composition of the present invention.
  • the term “improvement” refers to any action that at least reduces the severity of a parameter related to the condition being treated, for example, a symptom.
  • treatment refers to all activities in which symptoms caused by Alzheimer's dementia are improved or advantageously changed by administration of the composition of the present invention.
  • the pharmaceutical composition according to the present invention may include a pharmaceutically acceptable carrier in addition to the active ingredient.
  • Pharmaceutically acceptable carriers included in the pharmaceutical composition according to the present invention include saline, buffered saline, water, glycerol, polyethylene glycol, vegetable oil, isopropyl myristate, and ethanol, but are not limited thereto. .
  • diluents or excipients such as commonly used fillers, extenders, binders, wetting agents, disintegrants, and surfactants.
  • Solid preparations for oral administration include tablets, pills, powders, granules, capsules, troches, and the like, and these solid preparations contain at least one excipient, such as starch, calcium carbonate, and sucrose, in addition to the peptide according to the present invention. It is prepared by mixing sucrose, lactose, or gelatin. In addition to simple excipients, lubricants such as magnesium styrate and talc are also used.
  • Liquid preparations for oral administration include suspensions, internal solutions, emulsions, or syrups. In addition to water and liquid paraffin, which are commonly used simple diluents, various excipients such as wetting agents, sweeteners, aromatics, and preservatives are used.
  • Formulations for parenteral administration may include sterilized aqueous solutions, non-aqueous solutions, suspension solutions, emulsions, freeze-dried formulations, suppositories, and the like.
  • Propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oils such as olive oil, and injectable esters such as ethyl oleate may be used as non-aqueous solvents and suspending agents.
  • injectable esters such as ethyl oleate
  • a base for suppositories witepsol, macrogol, tween 61, cacao butter, laurin paper, glycerol, gelatin, and the like may be used.
  • composition according to the present invention may be administered orally or parenterally (for example, intravenously, subcutaneously, intraperitoneally or topically applied) depending on the desired method, and the dosage depends on the patient's condition and weight, and the degree of disease. , depending on the drug form, administration route and time, but can be appropriately selected by those skilled in the art.
  • the composition according to the present invention is administered in a pharmaceutically effective amount.
  • pharmaceutically effective amount means an amount sufficient to treat a disease with a reasonable benefit / risk ratio applicable to medical treatment, and the effective dose level is the type, severity, and activity of the drug of the patient's disease , sensitivity to the drug, time of administration, route of administration and excretion rate, duration of treatment, factors including concomitantly used drugs, and other factors well known in the medical field.
  • the composition according to the present invention may be administered as an individual therapeutic agent or in combination with other therapeutic agents, may be administered sequentially or simultaneously with conventional therapeutic agents, and may be administered single or multiple times. Considering all of the above factors, it is important to administer an amount that can obtain the maximum effect with the minimum amount without side effects, which can be easily determined by those skilled in the art.
  • the effective amount of the composition according to the present invention may vary depending on the patient's age, sex, and weight.
  • the daily dose of donepezil is usually about 0.1 to 300 mg/day, preferably about 1 to 10 mg/day
  • the daily dose of cilostazol is usually about 1 to 300 mg/day, preferably about 1 to 10 mg/day. It is preferably 10 to 250 mg/day, more preferably 50 to 200 mg/day
  • the daily dose of aripiprazole is usually about 0.01 to 300 mg/day, preferably 0.1 to 100 mg/day, more preferably Preferably, 1 to 30 mg/day is not limited thereto.
  • the present invention provides a method for preventing or treating dementia, cognitive impairment or vascular depression comprising administering the pharmaceutical composition to a subject.
  • the present invention comprises administering a combination of donepezil or a pharmaceutically acceptable salt thereof, cilostazol or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and aripiprazole or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
  • a method for preventing, improving, reducing or treating dementia, cognitive improvement or vascular depression may be provided.
  • “individual” means a subject in need of treatment of a disease, and more specifically, a human or non-human primate, mouse, rat, dog, cat, horse, cow, etc. of mammals. Furthermore, the present invention provides a use for preventing or treating dementia, cognitive impairment or vascular depression comprising the pharmaceutical composition.
  • Example 1 Establishment of conditions for increasing the expression of amyloid-beta, tau and major proteins in N2a Swe cells
  • Amyloid-beta and tau proteins are typical causative agents of dementia, and many attempts are being made to treat dementia by lowering the expression of these two proteins.
  • donepezil, cilostazol, and aripiprazole alone or in combination have activities to lower the expression of amyloid-beta and tau
  • experimental conditions were set up first. To this end, activated N2a Swe cells were treated with drugs, and then amyloid-beta through ELISA, phosphorylated tau (P-tau), acetylated tau (Ac-tau), P300, GSK-3 ⁇ P-Tyr-216 through western blot The expression level of was evaluated.
  • Mouse neuroblastoma-derived N2a cells and N2a Swe mutant cells were cultured in DMEM medium containing 10% FBS and used. In order to induce intracellular amyloid-beta overproduction, the medium containing 10% FBS was replaced with the medium containing 1% FBS, and cultured for 3, 12, 24, and 48 hours.
  • Substance information primary antibody against P-Tau Ser396 (Sigma-Aldrich), primary antibody against Ac-Tau Lys174 (Signalway Antibody), P300/P-GSK- A primary antibody against 3 ⁇ Tyr216 (Santa Cruz Biotechnology), a primary antibody against ⁇ -actin (MP Biomedicals).
  • Results are expressed as mean ⁇ standard error of the mean. The significance of differences between groups was analyzed by Tukey's multiple comparison analysis after ANOVA analysis. *p ⁇ 0.05, **p ⁇ 0.01 and ***p ⁇ 0.001 compared to the N2a cell control group.
  • Figure 1a is the result of evaluating the concentration of amyloid-beta in N2a cells and N2a Swe cells by ELISA
  • Figures 1b and 1c are western blots showing phosphorylated tau, acetylated tau, P300, and P-GSK-3 ⁇ Tyr-216. is the result of evaluation.
  • the concentration of amyloid-beta in N2a cells was low when cultured for 24-48 hours in FBS-deficient medium.
  • N2a Swe cultured in FBS-deficient medium increased the concentration of amyloid-beta as the culture time increased, and increased by 591% at 24 hours.
  • the expression of all the evaluation indicators increased in N2a Swe cells according to the FBS deprivation time. The efficacy of the drug was evaluated under the selected experimental conditions.
  • mice include N2a cells (control group), N2a Swe cells (vehicle treatment group; activated by culturing for 24 hours in a medium containing 1% FBS), N2a Swe cells (CA group; 3 ⁇ M cilostazol and 3 ⁇ M Activated after pretreatment with aripiprazole), N2a Swe cells (CAD group; activated after pretreated with 3 ⁇ M cilostazol, 3 ⁇ M aripiprazole, and 3 ⁇ M donepezil), N2a Swe cells (DNP group; after pretreated with 3 ⁇ M donepezil) activated) was used. N2a Swe cells were pretreated with the drug for 3 hours and cultured in 1% FBS medium for 24 hours. DMSO was used as the vehicle to make the final volume less than 0.1%.
  • Figure 2a is the result of evaluating amyloid-beta.
  • 2b, 2c, 2d, 2e, and 2f show the results of evaluating the expression of GSK-3 ⁇ P-Tyr-216, phosphorylated tau, P300, and acetylated tau.
  • Amyloid-beta accumulation was not inhibited by 3 ⁇ M donepezil, but was significantly reduced by CA (3 ⁇ M cilostazol + 3 ⁇ M aripiprazole) or CAD (CA + donepezil). Amyloid-beta was reduced by 65% by CA and by 55% by CAD, confirming that CAD reduced amyloid-beta more effectively.
  • GSK-3 ⁇ P-Tyr-216 which increased in the FBS-deficient condition, did not change in the donepezil treatment condition, but was reduced by CA and CAD to 73% and 54%, respectively.
  • Expression of phosphorylated tau was also unaffected by donepezil alone, but decreased by 69% by CA and by 49% by CAD.
  • Amyloid-beta aggregation activates P300 (300 kDa protein) and tau protein is acetylated by histone acetyltransferases as intracellular amyloid-beta accumulation increases (Nature. 1996 Dec 19-26;384(6610) :641-3).
  • Acetylated tau inhibits self-degradation and increases tau aggregation (Neuron.
  • ADAM10 When ADAM10 was overexpressed in neurons, it was reported that APP cleavage by ⁇ -secretase was increased and amyloid-beta production was decreased (J Clin Invest. 2004 May;113(10):1456-64). In addition, a mechanism leading to SIRT1-coupled RAR ⁇ activation, ADAM10/ ⁇ -secretase activity increase, and amyloid-beta production decrease by cilostazol in N2a Swe cells has been reported. (J Neurosci Res. 2014 Nov; 92(11):1581-90).
  • Substance information primary antibody against ADAM10 (Santa Cruz Biotechnology)
  • FIG 3A shows the results of ADAM10 expression over time in the FBS deficient condition
  • Figure 3B shows the effects of donepezil, CA, CAD, CAD and TIMP.
  • ADAM10 expression in N2a Swe cells was significantly decreased over time (0, 3, 12, and 24 hours) under FBS-deficient conditions.
  • ADAM10 expression which decreased to 28.3% in N2a cells, was increased by 220% by CA and 297% by CAD, compared to the control group.
  • the neuronal protective effect by CAD was reduced by 133% by 10 ⁇ M TIMP, an ADAM10 inhibitor.
  • Figure 4 is the result of evaluating the activity of ⁇ -secretase.
  • Figure 4a shows the effects of cilostazol
  • Figure 4b shows the effects of cilostazol and donepezil
  • Figure 4c shows the effects of cilostazol and aripiprazole
  • Figure 4d shows the effects of donepezil
  • Effects of CA, CAD, Rp-cAMPS, Sirtinol, and TIMP are shown.
  • ⁇ -secretase activity by CAD was 77.0% with 10 ⁇ M pretreatment of Rp-cAMPS, a cAMP-dependent protein kinase inhibitor, 69.5% with 20 ⁇ M pretreatment with sirtinol, an SIRT1 inhibitor, and 76.3% with 10 ⁇ M pretreatment with TIMP, an ADAM10 inhibitor. % was significantly inhibited.
  • ⁇ -secretase activity is increased synergistically when the drug is combined, and amyloid-beta formation is suppressed, and it was confirmed that SIRT1 and ADAM10 are important in this process.
  • N2a Swe cells were pretreated with 3 ⁇ M donepezil, CA (3 ⁇ M cilostazol + 3 ⁇ M aripiprazole), and CAD (3 ⁇ M cilostazol + 3 ⁇ M aripiprazole + 3 ⁇ M donepezil) and cultured in 1% FBS medium for 24 hours SIRT1 expression and deacetylation activity were evaluated.
  • CREB is also known to regulate neuronal differentiation and plasticity, and directly increases SIRT1 mRNA and protein expression in neurons (Nat Genet. 2002 May;31(1):47-54., Proc Natl Acad Sci USA. 2012 Jan 10;109(2):621-6.). CREB expression in activated N2a Swe cells was evaluated by Western blot.
  • Substance information primary antibody against SIRT1 (Covance), primary antibody against P-CREB Ser133 (Cell Signaling Technology)
  • Figure 5a shows the results of SIRT1 expression
  • Figure 5b shows the results of SIRT1 deacetylation activity
  • Figure 5c shows the results of CREB expression.
  • SIRT1 expression was not significantly changed by 3 ⁇ M donepezil or CA, but increased by 304.6% by CAD, confirming synergistic efficacy.
  • CAD CAD-induced efficacy
  • the deacetylation activity of SIRT1 decreased to 66% compared to the basal level upon activation of N2a Swe cells, but increased to 119% compared to the control group during CA pretreatment and to 155% by CAD.
  • the efficacy of CAD is significantly inhibited by pretreatment with 20 ⁇ M sirtinol.
  • SIRT1 activity was decreased by intracellular amyloid-beta, and the decreased SIRT1 expression and deacetylation activity were increased by the three drug combination (CAD), at which time a synergistic effect was observed compared to the single drug combination.
  • Soluble amyloid-beta inhibits several processes of synthesis/secretion of acetylcholine (ACh), inhibits various cholinergic functions at the nM level and reduces the expression of the presynaptic marker CHAT (Trends Neurosci. 1998 Jan;21(1): 43-9., Acta Neuropathol. 2011 Jul;122(1):49-60.). Changes in acetylcholine secretion and synaptic marker expression by amyloid-beta in N2a cells and synergistic inhibition by drug complexes were evaluated.
  • acetylcholine secretion The freeze-thaw process was repeated to disrupt N2a Swe cells and secrete intracellular factors. After centrifugation at 2,000 rpm for 20 minutes, the supernatant was used. Intracellular acetylcholine was measured using a commercially available acetylcholine ELISA kit.
  • CHAT expression evaluation Cells were homogenized with cold physiological saline and then centrifuged at 3,000 g to use the supernatant. Protein concentration was quantified by Coomassie blue method, and CHAT expression was evaluated by Western blotting.
  • Substance information primary antibody to CHAT (Millipore)
  • Figure 6A shows the result of acetylcholine secretion after treatment with donepezil, CA, and CAD
  • B of Figure 6 shows the result of CHAT expression after treatment with donepezil, CA, CAD, and MLA.
  • CHAT expression is reduced to 72.2% in activated N2a Swe cells.
  • the decrease was suppressed to a weak level by donepezil or CA pretreatment, but was inhibited by CAD to a level of 125.4% higher than the control.
  • CHAT expression increased by CAD was significantly decreased again by methyl lycaconitine (MLA), a selective ⁇ 7 nicotinic acetylcholine receptor ( ⁇ 7-nAChR) antagonist.
  • MVA methyl lycaconitine
  • ⁇ 7-nAChR selective ⁇ 7 nicotinic acetylcholine receptor
  • Example 7 Confirmation of the effect of drug complex on neurite elongation in mouse hippocampal cell line
  • Neuronal morphogenesis is the process by which neurites are formed and differentiated into axons and dendrites. It is known that neurite elongation plays a very important role in actual nerve cell function. Therefore, HT22 cells, a mouse hippocampal cell line, were used in experiments to evaluate whether neurite elongation, which was reduced by amyloid-beta, could be restored by a drug combination.
  • HT22 cells expressing TrkB, a BDNF receptor were cultured in DMEM medium containing 10% FBS.
  • K252A and LY294002 Calbiochem
  • imatinib Toronto Research Chemicals
  • methyl lycaconitine Search Biochemicals International
  • Figure 7a shows a representative photograph of a neurite
  • Figure 7b shows a result of neurite elongation analysis.
  • the average neurite length of the control group was 53.3 ⁇ m, but it was significantly reduced by amyloid-beta treatment, and the average length was 25.3 ⁇ m.
  • the decreased neurite length increased to an average of 65.9 ⁇ m in the CA-treated group and increased to an average of 130 ⁇ m in the CAD-treated group, a synergistic effect was observed, but no significant effect was observed in the donepezil alone group. It was confirmed that CAD significantly enhances neurite elongation in HT22 cells.
  • the average length of neurites increased to 130 ⁇ m by CAD was 45.7 ⁇ m when treated with 30 ⁇ M of PI3K inhibitor LY294002, 41.0 ⁇ m when treated with 100 nM of TrkB inhibitor K252A, and treated with 10 ⁇ M of beta-catenin inhibitor imatinib It decreased to an average of 33.3 ⁇ m when treated with 10 nM of methyl lycaconitine, a selective ⁇ 7 nicotinic acetylcholine receptor antagonist, to an average of 41.1 ⁇ m.
  • the ultimate goal of neurodegenerative brain disease treatment is inhibition of neuronal cell death, and MTT reduction evaluation was performed to evaluate whether the drug complex inhibits the cell viability of activated N2a Swe cells.
  • Example 9 Confirmation of neurite elongation effect in human induced pluripotent stem cell-derived nerve cells
  • iPSC Human induced pluripotent stem cell
  • Lentivirus in which Ngn2 expression is induced by the TetO gene, was treated for 24 hours.
  • the culture was changed to Neurobasal medium and treated with B27, GlutaMAX, 10 ng/ml BDNF, 10 ng/ml NT-3, 0.2 ⁇ g/ml laminin, 2 ⁇ g/ml doxycycline, and 1 ⁇ g/ml puromycin. cells that are not infected with the virus are removed while continuing to induce differentiation. The growth of proliferating non-neuronal cells is inhibited by treatment with 1 ⁇ M Ara-C for 3 days from the next day, and the development of neurons is promoted by using astrocyte conditioned media as a culture medium. They were differentiated into neurons for 5 weeks.
  • ANASPEC Amyloid-beta
  • MAP2 BioLegend
  • Amyloid-beta powder was dissolved according to the product instructions and incubated at 37° C. for one week to promote amyloid-beta oligomer formation, and oligomer formation was confirmed by non-reducing SDS-PAGE.
  • Nerve cells were pretreated with 1 ⁇ M donepezil, 1 ⁇ M cilostazol, 1 ⁇ M aripiprazole or each drug at a 1:1:1 mixing ratio (DCA) for 3 hours.
  • 20 ⁇ M amyloid-beta oligomer was co-treated for two days. Cells were fixed and 6–7 MAP2 fluorescence staining pictures were obtained per group. The neurite elongation of three neurons per picture was analyzed with the SNT plug-in of the ImageJ program.
  • Figure 9 shows the results of neurite elongation analysis.
  • Neurite elongation which was reduced to 61.3% by amyloid-beta treatment, was not significantly changed by treatment with donepezil, cilostazol, or aripiprazole alone. It was observed that the height increased and improved to a level of 98% compared to the control group.
  • the above results show that the neuronal cell protective efficacy of the three drug combinations demonstrated in Example 7 was also observed in human-derived sample models.
  • Amyloid-beta (Sigma-Aldrich).
  • FIG. 10a shows the result of treatment with a mixing ratio of donepezil, cilostazol, and aripiprazole of 10:40:25
  • FIG. 10b shows the result of treatment with a mixing ratio of 10:100:2.5
  • FIG. 10c shows It shows the result of treating the compounding ratio at 10:200:5.
  • Example 11 Confirmation of cognitive ability improvement effect by combination agent in short-term memory impairment animal model
  • Drug or vehicle was administered orally once a day for 2 weeks.
  • the drug administration group is as follows.
  • Y-maze test Before the experiment, the mice were left in the experiment space (Y-maze) for 30 minutes to acclimate to the environment. The three arms are labeled A, B, and C, respectively. The rats were placed in the middle of the Y-maze and allowed to behave freely for 8 minutes and recorded with a camera. It was recorded which arm the rats entered with the screen being filmed, and it was measured as entering the arm only when it entered the square. After 8 minutes, the rat was returned to the cage, the Y-maze was cleaned, and the next rat was tested. Alternation is a measure of when the rat enters the different arms in succession.
  • FIG. 11a shows the experimental schedule
  • FIG. 11b shows the results of administration of donepezil, aripiprazole, and cilostazol at a mixing ratio of 10:100:2.5
  • FIG. 11c shows administration at a mixing ratio of 10:100:5
  • FIG. 11d shows the result of administration at a compounding ratio of 10:200:5.
  • Cognitive function decreased when scopolamine was administered compared to the control group, but no significant change was elicited in the single-administered groups of donepezil, cilostazol, and aripiprazole.
  • Significant cognitive function improvement effects were observed in the groups administered with the three drug combinations at 10:100:2.5 and 10:100:5 compounding ratios compared to the vehicle-administered group.
  • the three-drug combination administration group at a 10:200:5 combination ratio which can be inferred through previously reported data, a similar level of efficacy to that of the single administration group was observed, and no synergistic effect was observed.
  • the above results revealed that the synergistic efficacy of the three drug combinations at the compounding ratios of 10:100:2.5 and 10:100:5, which could not be predicted from previously reported experimental results, was observed in animal models other than cell lines.

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Abstract

본 발명은 도네페질 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 실로스타졸 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염 및 아리피프라졸 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 삼중 조합을 포함하는, 치매, 인지 장애 또는 혈관성 우울증에 탁월한 예방, 개선 또는 치료효과를 나타내는 조성물에 관한 것이다.

Description

도네페질, 실로스타졸 및 아리피프라졸을 포함하는 치매, 인지장애 또는 혈관성 우울증의 예방, 개선 또는 치료용 약학적 조성물
본 발명은 치매, 인지 장애 또는 혈관성 우울증의 예방, 개선 또는 치료에 유용한 새로운 복합제제에 관한 것이다. 보다 상세하게는, 도네페질 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 실로스타졸 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염 및 아리피프라졸 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 삼중 조합을 포함하는, 치매, 인지 장애 또는 혈관성 우울증의 예방, 개선 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것이다.
치매는 세포 외 아밀로이드-베타 플라크(extracellular amyloid-beta plaque)와 세포 내 타우 엉김(intracellular tau tangle)으로 인한 신경세포사멸(atrophy)으로 인해 발병된다. 치매의 병인은 한 가지 기전이 아닌 다양한 기전에 의하며 이런 이유로 오래전부터 서로 다른 기전의 약물로 구성된 복합제가 필요하다는 논의가 활발히 진행 중이다.
도네페질은 초기 알츠하이머 치매의 진행을 단기간 지연시키는 콜린분해효소 억제제로서 인지능 개선에 도움을 준다는 임상결과를 바탕으로 많은 치매환자에게 초기부터 처방되고 있다. 실로스타졸은 포스포디에스터라아제 3의 억제제로 만성동맥폐색증과 뇌경색 등에 처방되고 있다. 실로스타졸은 또한 뇌의 혈류량을 증가시켜 혈관성 치매에 효과적으로 작용할 수 있는 가능성에 대한 보고도 있다. 아리피프라졸은 세로토닌 수용체 및 도파민 수용체에 대한 작용제로서 활성을 가지고 도파민-세로토닌 시스템 안정화에 작용한다. 이와 같은 기전으로 아리피프라졸은 조현병과 같은 신경정신질환 환자에게 처방되고 있다. 언급한 세 가지 약물 단독으로 신경세포에 처리 시 신경세포의 사멸을 억제하는 활성에 대해서는 기 보고된 바 있다. 하지만 서로 다른 기전의 위 세 가지 약물들을 같이 처리 시 단독 약물 처리 대비 상승적으로 신경세포 사멸을 억제하고 인지능을 개선시킬 가능성은 보고된 바 없다.
도네페질은 인지능 개선에 도움을 준 다는 임상결과를 바탕으로 많은 치매환자에게 처방되고 있으나, 그 외에 5-14%의 환자에서 불면증, 그리고 8-15% 환자에서 오심, 설사와 같은 위장관계 부작용이 보고되고 있다. 조현병과 우울증 질환의 치료제인 아리피프라졸은 조현병과 우울등의 개선뿐만 아니라 약 10% 이상의 환자에서 졸음과 변비와 같은 증상이 보고되고 있고, 그외 두통, 추체외로증상, 피로, 진정, 초조 등의 다양한 부작용이 보고되고 있다. 또 실로스타졸의 경우 두통, 두중감, 비정상적 대변, 설사, 비염, 감염, 빈맥 등의 부작용을 일으킬 수 있는 것으로 알려져 있다.
치매환자의 대부분이 진단 전후로 다양한 신경정신과적 증상(Depression, Aggression, Anxiety 등)을 동반하며 이 동반 질환의 적절한 치료가 질병의 진행 및 삶의 질 개선에 밀접한 관련이 있음이 보고된 바 있다. 도네페질과 실로스타졸을 병용 투여 시 도네페질 단독에 비해 혼합형 및 혈관성 치매환자의 인지능 개선은 기대되나 복합에 의한 신경정신과적 증상 개선은 보고된 없다. 실제 치매치료제가 임상시험에서 성공하기 위해서는 인지능과 관련된 지표 (ADAS, MMSE 등)의 개선과 동시에 삶의 질 관련된 지표 (QoL-AD12, QoL-AD36)의 개선이 관찰되어야 한다.
이러한 배경하에서, 치매, 또는 이와 관련된 인지 장애를 개선하고 동반되는 부작용 및 신경정신과적 증상을 개선하면서 혈관성 우울증에 대한 효과적인 제제의 개발에 대해서 환자들의 강력한 요구가 존재한다.
본 발명은 상기와 같은 문제를 해결하기 위해 제안된 것으로서, 도네페질 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 실로스타졸 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 및 아리피프라졸 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 치매, 인지개선 또는 혈관성 우울증의 예방, 개선, 경감 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.
본 발명의 일측면에 따르면, 도네페질 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 실로스타졸 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 및 아리피프라졸 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 치매, 인지개선 또는 혈관성 우울증의 예방, 개선, 경감 또는 치료용 약학적 조성물이 제공될 수 있다.
본 발명의 일측면에 따르면, 도네페질 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 실로스타졸 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 및 아리피프라졸 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이 단일 제제 형태, 또는 함께 또는 별개로 동시에 또는 다른 시간에 투여되는 개별 제제 형태로 제조되는 것일 수 있다.
본 발명의 일측면에 따르면, 도네페질 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 실로스타졸 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 및 아리피프라졸 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이 중량비로 1 내지 10:1 내지 200:1 내지 25로 포함된 조성물이 제공될 수 있다.
본 발명의 일측면에 따르면, 도네페질 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 실로스타졸 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 및 아리피프라졸 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이 중량비로 1:1:1로 포함된 조성물이 제공될 수 있다.
본 발명의 일측면에 따르면, 도네페질 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 실로스타졸 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 및 아리피프라졸 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이 중량비로 10:40 내지 200:1 내지 25로 포함된 조성물이 제공될 수 있다.
본 발명의 일측면에 따르면, 도네페질 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 실로스타졸 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 및 아리피프라졸 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이 중량비로 10:40:25, 10:100:2.5 또는 10:200:5로 포함된 조성물이 제공될 수 있다.
본 발명의 일측면에 따르면, 도네페질 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 실로스타졸 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 및 아리피프라졸 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 조합을 투여하는 단계를 포함하는, 치매, 인지개선 또는 혈관성 우울증의 예방, 개선, 경감 또는 치료 방법이 제공될 수 있다.
본 발명의 일측면에 따르면, 도네페질 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 실로스타졸 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 및 아리피프라졸 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이 단일 제제 형태, 또는 함께 또는 별개로 동시에 또는 다른 시간에 투여되는 개별 제제 형태로 투여되는 치매, 인지개선 또는 혈관성 우울증의 예방, 개선, 경감 또는 치료 방법이 제공될 수 있다.
본 발명의 일측면에 따르면, 도네페질 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 실로스타졸 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 및 아리피프라졸 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이 중량비로 1 내지 10:1 내지 200:1 내지 25로 투여되는 것을 특징으로 하는 치매, 인지개선 또는 혈관성 우울증의 예방, 개선, 경감 또는 치료 방법이 제공될 수 있다.
본 발명의 일측면에 따르면, 도네페질 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 실로스타졸 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 및 아리피프라졸 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이 중량비로 1:1:1로 투여되는 것을 특징으로 하는 치매, 인지개선 또는 혈관성 우울증의 예방, 개선, 경감 또는 치료 방법이 제공될 수 있다.
본 발명의 일측면에 따르면, 도네페질 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 실로스타졸 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 및 아리피프라졸 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이 중량비로 10:40 내지 200:1 내지 25로 투여되는 것을 특징으로 하는 치매, 인지개선 또는 혈관성 우울증의 예방, 개선, 경감 또는 치료 방법이 제공될 수 있다.
본 발명의 일측면에 따르면, 도네페질 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 실로스타졸 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 및 아리피프라졸 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이 중량비로 10:40:25, 10:100:2.5 또는 10:200:5로 투여되는 것을 특징으로 하는 치매, 인지개선 또는 혈관성 우울증의 예방, 개선, 경감 또는 치료 방법이 제공될 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 도네페질 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염과 실로스타졸 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염 및 아리피프라졸 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 삼중 조합을 포함함으로 인해, 우수한 치매, 인지능력장에 또는 혈관성 우울증에 대한 탁월한 예방, 개선 또는 치료 활성을 나타낼 뿐 아니라 자기주도적인 생활이 가능하도록 하고 각각의 약물들을 고용량으로 단독 투여시 발생할 수 있는 독성 또는 부작용 문제가 경감된다.
도 1a 내지 1c는 N2a Swe 세포에서 아밀로이드-베타와 인산화 타우 측정을 위한 실험조건 설정결과이다.
도 2a 내지 2f는 본 발명의 조성물에 포함되는 약물복합이 활성화된 N2a Swe 세포에서 아밀로이드-베타와 인산화 타우에 미치는 영향을 평가한 결과이다.
도 3은 본 발명의 조성물에 포함되는 약물복합이 N2a Swe 세포에서 ADAM10 발현에 미치는 영향을 평가한 결과이다.
도 4a 내지 4d는 본 발명의 조성물에 포함되는 약물복합이 N2a Swe 세포에서 α-secretase 활성에 미치는 영향을 평가한 결과이다.
도 5a 내지 5c는 본 발명의 조성물에 포함되는 약물복합이 N2a Swe 세포에서 SIRT1 발현과 활성에 미치는 영향을 평가한 결과이다.
도 6은 본 발명의 조성물에 포함되는 약물복합이 N2a Swe 세포에서 아세틸콜린 분비와 CHAT 발현에 미치는 영향을 평가한 결과이다.
도 7a 및 7b는 본 발명의 조성물에 포함되는 약물복합이 마우스 해마세포주에서 신경돌기 신장에 미치는 영향을 평가한 결과이다.
도 8는 본 발명의 조성물에 포함되는 약물복합이 마우스 해마세포주의 세포생존능에 미치는 영향을 평가한 결과이다.
도 9는 본 발명의 조성물에 포함되는 약물복합이 인간 유도만능줄기세포 유래 신경세포에서 신경돌기 신장에 미치는 영향을 평가한 결과이다.
도 10a 내지 10c는 본 발명의 조성물에 포함되는 약물복합의 다양한 약물복합비가 마우스 해마세포주의 신경돌기 신장에 미치는 영향을 평가한 결과이다.
도 11a 내지 11d는 본 발명의 조성물에 포함되는 약물복합의 다양한 약물복합비가 단기기억손상 동물모델에서 인지기능 개선에 미치는 영향을 평가한 결과이다.
이하, 본 발명을 더욱 상세하게 설명한다.
본 발명에 따른 조성물은 유효성분으로 도네페닐 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 실로스타졸 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염 및 아리피프라졸 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 3 성분의 조합을 포함하는 것을 특징으로 한다.
이러한 3가지 약물을 복합하는 경우, 신경세포 보호 및 그로 인한 인지능개선 가능성은 분자기전으로 정확하게 예측되지 않고 보고된 바도 없다.
본 발명의 용어 “약학적으로 허용되는 염”은, 환자에게 비교적 비독성이고 무해한 유효작용을 갖는 농도로서 이 염에 기인한 부작용이 도네페질의 이로운 효능을 저하시키지 않는 상기 화합물의 임의의 모든 유기 또는 무기 부가염을 의미하며, 바람직하기로는 산부가염일 수 있다. 상기 약학적으로 허용 가능한 염의 제조에 사용될 수 있는 유리산은 무기산과 유기산으로 나눌 수 있다. 무기산은 염산, 황산, 질산, 인산, 과염소산, 브롬산 등이 사용될 수 있다. 유기산은 초산, 메탄설폰산, 에탄설폰산, p-톨루엔설폰산, 푸마린산, 말레산, 말론산, 프탈산, 숙신산, 젖산, 구연산, 시트 르산, 글루콘산, 타타르산, 살리실산, 말산, 옥살산, 벤조산, 엠본산, 아스파르트산, 글루탐산 등이 사용될 수 있다. 유기염기부가염 제조에 사용될 수 있는 유기염기는 트리스(히드록시메틸)메틸아민, 디시클로헥실아민 등이다. 아미노산부가염기 제조에 사용될 수 있는 아미노산은 알라닌, 글라이신 등의 천연아미노산이다.
본 발명에 따른 조성물의 유효성분 중 도네페질은 화학적 명칭이 '1-벤질-4-[(5,6-디메톡시-1-인다논)-2-일메틸]피페리딘'인 화합물로서, 도네페질 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염은 노인성 치매의 예방, 특히 알츠하이머성 치매 질환의 예방 및 치료에 유용한 약물로 알려져 있다. 상기 도네페질의 약학적으로 허용 가능한 염으로서, 바람직하게는 염산염일 수 있다.
한편 아리피프라졸은 7-{4-[4-(2,3-디클로로페닐)-1-피페라지닐]부톡시}-3,4-디히드로2(1H)-퀴놀린온으로도 표현되는 카르보스티릴 유도체이다. 아리피프라졸은 7-[4-[4-(2,3-디클로로페닐)-1-피페 라지닐]부톡시]-3,4-디히드로카르보스티릴인 아빌리파이(Abilify) OPC-14597, OPC-31 또는 BMS-337039로도 알려져 있다. 아리피프라졸은 세로토닌 수용체 및 도파민 수용체에 대한 작용제로서 활성을 가지고 있는데, 세로토닌 5HT1A 수용체 및 도파민 D2 수용체에 대하여 작용제 또는 부분적 작용제로 작용한다. 아리피프라졸은 도파민-세로토닌 시스템 안정화제이다. 본 발명의 영역은 아리피프라졸의 대사물들을 포괄한다. 데히드로아리피프라졸이 아리피프라졸의 대사물들 중 하나이다. 아리피프라졸의 약학적으로 허용가능한 염으로서, 구체적인 형태로는 무기산, 예컨대 염산, 질산, 인산, 황산, 브로민화수소산, 아이오딘화수소산, 아인산 및 이들의 혼합물로부터 유도된 염뿐만 아니라 유기산, 예컨대 지방족 모노- 및 디카르복실산, 페닐-치환된 알칸산, 히드록시 알칸산, 알칸디오산, 방향족산, 및 지방족 및 방향족 술폰산으로부터 유도된 염을 포함할 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다.
한편, 실로스타졸은 6-[4-(1-시클로헥실-1H-테트라졸-5-일)부톡시]-3,4-디히드로 카보스티릴로도 표현된다. 본 발명에 따른 실로스타졸의 약리학적으로 허용가능한 염은 산부가염의 형태일 수 있다. 예를 들어, 실로스타졸을 약리학적으로 허용가능한 산과 반응시켜 용이하게 제조할 수 있다. 약리학적으로 허용가능한 산으로는, 예를 들어, 옥살산, 말레산, 푸마르산, 말산, 타르타르산, 시트르산, 벤조산과 같은 유기산, 및 염산, 황산, 인산, 브롬화수소산과 같은 무기산이 포함된다.
본 발명에 의해 예방, 개선 및/또는 치료되는 질환은 치매, 인지 장애 및 혈관성 우울증이다. 치매, 인지 장애 및 혈관성 우울증의 예에는 뇌졸중에 의해 야기되는 장애들이 포함된다. 치매의 예로는 혈관성 치매 및 노인성 치매가 포함된다. 혈관성 치매는 특히 뇌혈관 장애에 의해 유도된다. 따라서, 혈관성 치매에는 전측두엽성 치매, 알콜성 치매 및 부분 치매도 포함된다. 혈관성 치매의 더 구체적인 예로는 뇌혈관 장애에 의해 유도되는 치매가 포함되며, 뇌혈관 장애의 예에는 뇌졸중 (예컨대 뇌경색증, 뇌출혈 및 지주막하 출혈)이 포함된다. 혈관성 치매의 더욱 더 구체적인 예에는 뇌졸중에 의해 야기되는 뇌 허혈 후 유도되는 치매가 포함된다. 인지 장애의 예에는 알츠하이머병, 퇴행성 장애에 의해 야기되는 학습 장애, 학습 능력의 저하, 기억 또는 인지 기능장애, 예컨대 경도 인지 장애, 노인성 인지 장애, 연령-관련 인지 저하, 뇌 노쇠, 혈관성 인지 장애, AIDS 연관 치매, 전기 충격 유도 기억상실, 우울증 또는 불안과 연관된 기억 장애, 파킨슨병에서의 인지 장애, 다운 증후군, 뇌졸중, 외상성 뇌 손상, 헌팅톤병 및 주의력 결핍 장애가 포함된다. 혈관성 인지 장애의 예에는 뇌혈관성 인지 장애가 포함되며, 뇌혈관성 인지 장애의 예에는 뇌졸중에 의해 야기되는 뇌 허혈 후 유도되는 인지 장애 (예를 들면 뇌경색증에 의해 야기되는 뇌 허혈 후 유도되는 인지 장애)이 포함된다. 혈관성 인지 장애는 혈관 장애에 의해 유도된다. 혈관성 인지 장애의 더 구체적인 예에는 뇌혈관 장애에 의해 유도되는 인지 장애가 포함된다. 뇌혈관 장애의 예에는 뇌졸중 (예컨대 뇌경색증, 뇌출혈 및 지주막하 출혈)이 포함된다. 혈관성 인지 장애의 더욱 더 구체적인 예에는 뇌졸중에 의해 야기되는 뇌 허혈 후 유도되는 인지 장애 (예를 들면 뇌경색증에 의해 야기되는 뇌 허혈 후 유도되는 인지 장애)가 포함된다. 혈관성 우울증은 혈관 장애 후 유도된다. 혈관성 치매의 더 구체적인 예에는 뇌혈관 장애에 의해 유도되는 우울증이 포함된다. 뇌혈관 장애의 예에는 뇌졸중 (예컨대 뇌경색증, 뇌출혈 및 지주막하 출혈)이 포함된다. 혈 관성 우울증의 예에는 또한 연령-관련 혈관 장애에 의해 유도되는 우울증이 포함된다. 혈관성 우울증의 예에는 뇌졸중-후 우울증, 뇌경색증-후 우울증 및 노인성 우울증이 포함된다.
구체적인 일 양태에서, 본 발명에 따른 조성물의 상기 3종의 유효성분은, 도네페질 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 실로스타졸 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 및 아리피프라졸 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 중량비로, 1 내지 10:1 내지 200:1 내지 25로 상기 조성물에 포함될 수 있다. 구체적으로, 본 발명에 따른 조성물의 상기 3종의 유효성분은, 도네페질 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 실로스타졸 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 및 아리피프라졸 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 중량비로, 0.5 내지 2:0.5 내지 2:0.5 내지 2, 1 내지 2: 1 내지 2: 1 내지 2, 5 내지 20:30 내지 200:0.5 내지 25, 10:40 내지 200:1 내지 25, 5 내지 20: 30 내지 60:10 내지 30, 5 내지 20: 50 내지 150:2 내지 5, 5 내지 20:100 내지 200: 3 내지 7, 10:40 내지 200:1 내지 25, 10:100:2.5 내지 10:100:5 1:1:1, 10:40:25, 10:100:2.5, 10:100:5, 10:200:5 또는 10:200:5로 상기 조성물에 포함될 수 있다.
바람직하게, 상기 3종의 유효성분은, 도네페질 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 실로스타졸 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 및 아리피프라졸 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 중량비로 1:1:1로 상기 조성물에 포함될 수 있다.
바람직하게, 상기 3종의 유효성분은, 도네페질 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 실로스타졸 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 및 아리피프라졸 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 중량비로 10:40 내지 200:1 내지 25로 상기 조성물에 포함될 수 있다.
바람직하게, 상기 3종의 유효성분은, 도네페질 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 실로스타졸 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 및 아리피프라졸 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 중량비로 10:40:25, 10:100:2.5 또는 10:200:5로 상기 조성물에 포함될 수 있다.
바람직하게, 상기 3종의 유효성분은, 도네페질 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 실로스타졸 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 및 아리피프라졸 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 중량비로 1:200:5로 상기 조성물에 포함될 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은, 3종의 유효성분이 모두 포함된 단일의 제제형태일 수 있거나, 또는 3종의 유효성분 중 일부와 나머지 일부가 별개의 제제를 포함하는 것일 수 있으며, 2개 혹은 1개의 제제로 구성될 수도 있다(예를 들어 3종의 유효성분이 각각 별개의 제제로 제형화되거나, 3종의 유효성분 중 2종은 제1 제제로 제형화되고, 나머지 1종은 제2 제제로 제형화되는 형태).
본 발명의 조성물은 목적하는 방법에 따라 경구 투여하거나 비경구 투여(예를 들어 정맥 내, 피하, 복강 내 또는 국소에 적용) 할 수 있다. 구체적으로 본 발명에 따른 조성물은 경구 투여될 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 도네페질 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염과 실로스타졸 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염 및 아리피프라졸 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 상승 보완 효과가 확인되었으며, 그 결과 우수한 치매, 인지능력장에 또는 혈관성 우울증에 대한 탁월한 예방, 개선 또는 치료 활성을 나타낸다.
이상의 결과로 서로 다른 기전의 도네페질, 실로스타졸, 아리피프라졸을 같이 처리 시 단독 약물 처리 대비 상승적으로 신경세포 사멸을 억제하고 인지능을 개선시킬 가능성을 확인하였다. 아울러 복합제에 포함되어 있는 아리피프라졸에 의해서 치매환자의 대부분에 동반되는 다양한 신경정신과적 증상(Depression, Aggression, Anxiety 등) 진행을 억제해 세 약물 복합에 의해서 인지능과 삶의 질이 동시에 개선될 가능성이 크다.
도네페질을 처방 받은 환자에서 인지능 개선 작용 외에 5-14%의 환자에서 불면증, 그리고 8-15% 환자에서 오심, 설사와 같은 위장관계 부작용이 관찰된다. 아리피프라졸은 반대로 졸음과 변비와 같은 부작용이 보고되어 도네페질과 같이 투여 시 도네페질의 부작용이 개선될 가능성이 있다. 언급한 세 가지 약물 모두 CYP3A4에 의해 대사되며, 실로스타졸은 CYP3A4 저해제이므로 실로스타졸과 병용 시 아리피프라졸의 노출이 증가할 것으로 예상된다. PBPK 분석을 통해 약물상호작용에 따른 노출변화를 예측한 결과 실로스타졸과 병용 시 아리피프라졸의 노출이 1.5배 정도 증가할 것으로 예측되어 복합 시 아리피프라졸의 투여양을 낮출 수 있는 장점도 있다.
따라서, 종래에 상기 질환들에 사용된 약물들, 또는 이들의 조합은 대부분 질환의 진행 억제만을 도모하기 위한 것에 불과하였으나, 본 발명은 상기와 같은 질환의 예방, 개선 또는 치료에 있어서, 상기 특정한 약물들의 3종의 조합(복합)에 의해 약물의 투여양을 낮추면서 부작용도 개선시키고 아울러 탁월한 상승적인 약리효과를 나타내어 치매, 인지 장애 또는 혈관성 우울증 환자들이 타인에 의한 개호 의존도를 감소시켜 자기주도적인 생활이 가능하도록 하는 것에 특징이 있다.
구체적인 일 실시예에서, 본 발명에 따른 조성물은 N2a swe 세포 내부에서 아밀로이드-베타의 발현, 인산화 타우 및 아세틸화 타우를 감소시키는 효과를 나타낸다.
구체적인 일 실시예에서, 본 발명에 따른 조성물은 N2a swe 세포 내부에서 ADAM10 발현을 증가시키는 효과를 나타낸다.
구체적인 일 실시예에서, 본 발명에 따른 조성물은 N2a swe 세포 내부에서 α-secretase 활성을 증가시키는 효과를 나타낸다.
구체적인 일 실시예에서, 본 발명에 따른 조성물은 N2a swe 세포 내부에서 SIRT1 발현을 증가시키는 효과를 나타낸다.
구체적인 일 실시예에서, 본 발명에 따른 조성물은 마우스 해마 세포주에서 유의적인 세포생존능을 나타낸다
구체적인 일 실시예에서, 본 발명에 따른 조성물은 인간 유도 만능줄기세포유래의 신경세포에서 신경돌기신장 효과를 나타낸다.
구체적인 일 실시예에서, 본 발명에 따른 조성물은 단기기억손상 동물모델에서 인지능력개선효과를 나타낸다.
본 발명에서 사용되는 용어, "예방"이란 본 발명의 조성물의 투여에 의해 알츠하이머성 치매를 억제시키거나 발 병을 지연시키는 모든 행위를 의미한다.
본 발명에서 사용되는 용어 "개선"이란 치료되는 상태와 관련된 파라미터, 예를 들면 증상의 정도를 적어도 감소시키는 모든 행위를 의미한다.
본 발명에서 사용되는 용어, "치료"란 본 발명의 조성물의 투여에 의해 알츠하이머성 치매에 의한 증세가 호전 되거나 이롭게 변경되는 모든 행위를 의미한다.
본 발명에 따른 약학적 조성물은 유효성분 이외에 약학적으로 허용되는 담체를 포함할 수 있다. 본 발명에 따른 약학적 조성물에 포함되는 약학적으로 허용되는 담체로는 식염수, 완충 식염수, 물, 글리세롤, 폴리에틸렌글리 콜, 식물성 오일, 이소프로필미리스테이트, 및 에탄올 등이 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 본 발명에 따른 약학적 조성물을 제제화할 경우, 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면 활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 제조할 수 있다. 경구투여를 위한 고형 제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제, 트로키제 등이 포함되며, 이러한 고형 제제 는 본 발명에 따른 펩타이드에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 또는 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한, 단순한 부형제 외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구 투여를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 또는 시럽제 등이 해당되는데, 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁용제, 유제, 동결건조제제, 좌제 등이 포함될 수 있다. 비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈 (tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세롤, 젤라틴 등이 사용될 수 있다. 본 발명에 따른 조성물은 목적하는 방법에 따라 경구 투여하거나 비경구투여(예를 들어, 정맥 내, 피하, 복강 내 또는 국소에 적용)할 수 있으며, 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 시간 에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 본 발명에 따른 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여한다. 본 발명에 있어서, "약학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효용량 수준은 환자의 질환의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료 기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 본 발명에 따른 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있으며, 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기한 요소들을 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 이는 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다. 구체적으로, 본 발명에 따른 조성물의 유효량은 환자의 나이, 성별, 체중에 따라 달라질 수 있다. 예를 들어 도네페질의 1일 용량은 통상 약 0.1 내지 300 mg/일, 바람직하게는 1 내지 10 mg/일이고, 실로스타졸의 1일 용량은 통상적으로는 약 1 내지 300 mg/일, 바람직하게는 10 내지 250 mg/일, 더욱 바람직하게는 50 내지 200 mg/일이며, 아리피프라졸의 1일 용량은 통상적으로는 약 0.01 내지 300 mg/일, 바람직하게는 0.1 내지 100 mg/일, 더욱 바람직하게는 1 내지 30 mg/일이나 이에 제한되는 것은 아니다. 이러한 유효량을 다양한 투여 간격으로, 예를 들어 1일 1 내지 4회, 또는 격일 투여, 1주일내 1 내지 6회 등으로 나누어 투여할 수도 있다. 그러나 투여 경로, 질환의 중증도, 성별, 체중, 연령 등에 따라서 증감될 수 있으므로 상기 투여량이 어떠한 방법으로도 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다. 본 발명의 다른 양태로서, 본 발명은 상기 약학적 조성물을 개체에 투여하는 단계를 포함하는 치매, 인지 장애 또는 혈관성 우울증의 예방 또는 치료방법을 제공한다.
본 발명의 다른 양태로서, 본 발명은 도네페질 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 실로스타졸 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 및 아리피프라졸 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 조합을 투여하는 단계를 포함하는, 치매, 인지개선 또는 혈관성 우울증의 예방, 개선, 경감 또는 치료 방법이 제공될 수 있다.
본 발명에서 “개체”란 질병의 치료를 필요로 하는 대상을 의미하고, 보다 구체적으로는 인간 또는 비-인간인 영장류, 생쥐 (mouse), 쥐 (rat), 개, 고양이, 말, 및 소 등의 포유류를 의미한다. 나아가, 본 발명은 상기 약학적 조성물을 포함하는 치매, 인지 장애 또는 혈관성 우울증의 예방 또는 치료용도를 제공한다.
[실시예]
이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명이 하기 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.
실시예 1: N2a Swe 세포에서 아밀로이드-베타와 타우 및 주요 단백질의 발현이 증가되는 조건 설정
아밀로이드-베타와 타우 단백질은 대표적인 치매의 원인물질로 이 두 단백질의 발현을 낮춰 치매를 치료하고자 하는 많은 시도들이 진행되고 있다. 도네페질, 실로스타졸 그리고 아리피프라졸 단독 및 복합이 아밀로이드-베타와 타우의 발현을 낮추는 활성을 가지고 있는지를 평가하기 위해 먼저 실험조건 설정을 진행하고자 하였다. 이를 위해 활성화된 N2a Swe 세포에서 약물을 처리한 후 ELISA를 통해 아밀로이드-베타, 웨스턴블랏을 통해 인산화 타우 (P-tau), 아세틸화 타우 (Ac-tau), P300, GSK-3βP-Tyr-216의 발현 수준을 평가하였다.
방법
세포배양: 마우스 신경모세포종 유래 N2a 세포와 N2a Swe 돌연변이 세포를 10% FBS가 포함된 DMEM 배지에서 배양하여 사용하였다. 세포내 아밀로이드-베타 과생산을 유도하기 위해 10% FBS가 포함된 배지를 1% FBS가 포함된 배지로 바꿔서 3, 12, 24 및 48시간 동안 배양하였다.
웨스턴블랏: 약물처리 후 N2a Swe 돌연변이 세포를 긁어내어 용해 완충액으로 용해시켰다. 13,000 rpm으로 7분간 원심분리한 후 30 μg의 단백질을 10% SDS-폴리아크릴아마이드 겔에 로딩(loading)하였다. 전기영동으로 분리된 단백질을 나이트로셀룰로스 멤브레인 (nitrocellulose membrane)으로 전달하였다. 멤브레인은 5% 탈지 우유 용액을 사용하여 4℃에서 밤새 반응시켰다. 2차 항체까지 반응시킨 후 화학발광성 시약으로 면역반응성 밴드를 가시화하였다. 밴드를 정량하여 N2a 세포 컨트롤군 결과 값에 대비하여 표현하였다.
물질 정보: P-Tau Ser396에 대한 1차 항체 (시그마알드리치(Sigma-Aldrich)사), Ac-Tau Lys174에 대한 1차 항체 (시그널웨이안티바디(Signalway Antibody)사), P300/ P-GSK-3β Tyr216에 대한 1차 항체 (산타크루즈바이오테크놀로지(Santa Cruz Biotechnology)사), β-actin에 대한 1차 항체 (엠피바이오메디컬(MP Biomedicals)사).
통계 분석: 결과는 평균±평균의 표준오차로 표현하였다. 그룹간 차이의 유의성은 ANOVA 분석 후 Tukey’s 다중비교 분석으로 분석하였다. *p < 0.05, **p < 0.01 및 ***p < 0.001은 N2a 세포 컨트롤군에 대비한 것이다.
결과
도 1a는 N2a 세포와 N2a Swe 세포의 아밀로이드-베타의 농도를 ELISA로 평가한 결과이며, 도 1b 및 도 1c는 웨스턴블랏으로 인산화 타우, 아세틸화 타우, P300, P-GSK-3β Tyr-216를 평가한 결과이다.
FBS 결핍 배지로 24-48시간 배양 시 N2a 세포의 아밀로이드-베타 농도는 낮았다. 반면 FBS 결핍 배지로 배양한 N2a Swe는 배양시간이 증가함에 따라 아밀로이드-베타의 농도가 증가하며, 24시간 때 591% 증가하였다. 인산화 타우, 아세틸화 타우, P300, P-GSK-3β Tyr-216 발현 평가 시 FBS 결핍 시간에 따라 평가지표 모두 N2a Swe 세포에서 발현이 증가하는 경향성이 관찰되었다. 선정된 실험 조건으로 약물의 효능을 평가하고자 하였다.
실시예 2: 약물복합이 활성화된 N2a Swe 세포에서 아밀로이드-베타와 인산화 타우에 미치는 영향 확인
앞에서 선정한 조건으로 N2a swe 세포 내부에 아밀로이드-베타의 발현을 증가시킨 후 세 약물조합에 의해 감소되는지 평가하고자 하였다. 또한 신경세포와 허혈 신경세포에서 GSK-3β Tyr 216 위치에서 인산화가 GSK-3β의 활성을 증가시키고 활성화된 GSK-3β가 타우 과인산화를 증가시킨다는 보고가 있다 (Neuropathol Appl Neurobiol. 2007 Feb;33(1):43-55., Proc Natl Acad Sci USA. 2003 May 27;100(11):6370-5). 위 선행문헌을 참고하여 세 약물조합에 의해 GSK-3β P-Tyr-216, 인산화 타우, P300, 아세틸화 타우의 발현이 변하는지 평가해보고자 하였다. 선행문헌 (Oncotarget. 2017 Nov 30;8(66):110380-110391., J Neurosci Res. 2014 Feb;92(2):206-17)을 참고하여 약물 조합의 최소농도로 3 μM 실로스타졸, 3 μM 아리피프라졸을 사용하였다.
방법
약물 처리: 실험군은 N2a 세포 (대조군), N2a Swe 세포 (비히클처리군; 1% FBS가 포함된 배지에서 24시간 배양하여 활성화시킴), N2a Swe 세포 (CA군; 3 μM 실로스타졸과 3 μM 아리피프라졸을 전처리 후 활성화 시킴), N2a Swe 세포 (CAD군; 3 μM 실로스타졸, 3 μM 아리피프라졸, 3 μM 도네페질을 전처리 후 활성화 시킴), N2a Swe 세포 (DNP군; 3 μM 도네페질을 전처리 후 활성화 시킴)을 사용하였다. N2a Swe 세포에 약물을 3시간 전처리하고 1% FBS 배지에서 24시간 배양하였다. 비히클은 DMSO를 사용하여 최종 부피가 0.1% 이하가 되도록 하였다.
통계 처리: #p < 0.05, ##p < 0.01 및 ###p < 0.001은 비히클 처리군에 대비한 것이고 $p < 0.05 및 $$$p < 0.001은 도네페질 처리군에 대비한 것이다.
결과
도 2a는 아밀로이드-베타를 평가한 결과이다. 도 2b, 도 2c, 도 2d, 도 2e, 도 2f는 GSK-3β P-Tyr-216, 인산화 타우, P300, 아세틸화 타우 발현을 평가한 결과이다.
아밀로이드-베타 축적은 3 μM 도네페질에 의해 억제되지 않았으나, CA (3 μM 실로스타졸 + 3 μM 아리피프라졸) 혹은 CAD (CA + 도네페질)에 의해 유의적으로 감소하였다. 아밀로이드-베타가 CA에 의해 65%, CAD에 의해 55%로 감소하여 CAD에 의해 아밀로이드-베타가 더 효과적으로 감소함을 확인하였다.
FBS 결핍 조건에서 증가한 GSK-3β P-Tyr-216이 도네페질 처리 조건에서 변화가 없으나 CA와 CAD에 의해 각각 73%, 54% 수준으로 감소하였다. 인산화 타우의 발현 또한 도네페질 단독에 의해 영향이 없으나 CA에 의해 69%, CAD에 의해 49%로 감소하였다. 아밀로이드-베타 응집은 P300 (300 kDa 단백질)을 활성화시키고 타우 단백질은 세포 내부 아밀로이드-베타 축적이 증가함에 따라 히스톤 아세틸기 전달 효소에 의해 아세틸화된다 (Nature. 1996 Dec 19-26;384(6610):641-3). 아세틸화 타우는 스스로 분해되는 것을 억제하고 타우 응집을 증가시킨다 (Neuron. 2010 Sep 23;67(6):953-66). FBS 결핍 시 N2a Swe 세포에서 증가한 P300의 발현은 도네페질에 의해 감소되지 않으나 CA에 의해 52%, CAD에 의해 39% 수준으로 유의적인 감소되며 아세틸화 타우 평가시에도 비슷한 경향성이 관찰된다. 이상의 결과로 CAD 처리시 세포 내 아밀로이드-베타 축적으로 유도된 신경퇴행성 병증 요인의 발현을 단독 처리 대비 효과적으로 억제함을 보여준다.
실시예 3: 약물복합이 N2a Swe 세포에서 ADAM10 발현에 미치는 영향 확인
신경세포에서 ADAM10을 과발현 시켰을 때 α-secretase에 의한 APP 절단이 증가하면서 아밀로이드-베타 생성이 감소하는 것이 보고되었다 (J Clin Invest. 2004 May;113(10):1456-64). 또한 N2a Swe 세포에서 실로스타졸에 의해 SIRT1-coupled RARβ활성화, ADAM10/α-secretase 활성 증가, 아밀로이드-베타 생성 감소로 이어지는 기전이 보고된 바 있어 약물복합에 의한 ADAM10 발현 영향을 웨스턴블랏으로 평가하고자 하였다 (J Neurosci Res. 2014 Nov;92(11):1581-90).
방법
물질 정보: ADAM10에 대한 1차 항체 (산타크루즈바이오테크놀로지(Santa Cruz Biotechnology)사)
통계 분석: 비히클 처리군과 약물 처리군의 차이의 유의성은 ANOVA 분석 후 Tukey’s 다중비교 분석으로 분석하였다. 억제제를 처리한 군과 처리하지 않은 군 사이의 유의성을 평가하기 위해 스튜던트 t-검정을 사용하였다. ##p < 0.01 및 ###p < 0.001은 비히클 처리군에 대비한 것이고, $p < 0.05 및 $$$p < 0.001은 도네페질 처리군에 대비한 것이며, †††p < 0.001은 CAD 처리군에 대비한 것이다.
결과
도 3의 A는 FBS 결핍 조건에서 시간에 따른 ADAM10 발현 결과를 도시한 것이고, 도 3의 B는 도네페질, CA, CAD, CAD와 TIMP의 효과를 도시한 것이다. N2a 세포와 다르게 FBS 결핍 조건에서 N2a Swe 세포의 ADAM10 발현은 시간에 따라 유의적으로 감소하였다 (0, 3, 12, 24 시간). 24시간 동안 FBS를 결핍시킨 후 N2a 세포의 28.3% 수준으로 감소한 ADAM10 발현이 대조군 대비 CA에 의해 220%, CAD에 의해 297% 증가하였다. CAD에 의한 신경세포 보호 효능은 ADAM10 억제제인 10 μM TIMP에 의해 133%로 감소하였다. 이상의 결과로 약물 복합 시 상승적으로 아밀로이드-베타 생성이 억제되는 기전이 ADAM10의 활성 증가로 기인함을 확인하였다.
실시예 4: 약물복합이 N2a Swe 세포에서 α-secretase 활성에 미치는 영향 확인
활성화된 N2a Swe 세포에서 실로스타졸, 실로스타졸과 도네페질, 실로스타졸과 아리피프라졸 (CA) 및 실로스타졸과 아리피프라졸 및 도네페질(CAD)이 각각 α-secretase 활성에 미치는 영향을 평가하였다.
방법
α-secretase 활성 평가: 시중에서 판매하는 키트를 사용하여 세포 용해물에서 측정하였다 (아나스펙(ANASpec)사). 세포막은 0.1% 트리톤 X-100이 포함된 용액을 추가하여 균질화하였다. 각 well에 50 μl의 정지액 (Stop solution)을 추가하고 마이크로플레이트 리더 (Microplate reader)로 형광을 측정하였다 (흥분파장/방출파장 = 490 nm, 520 nm). 평가는 중복실험으로 세 차례 진행하였다.
통계 분석: **p < 0.01 및 ***p < 0.001은 컨트롤군에 대비한 것이고, #p < 0.01 및 ###p < 0.001은 비히클 처리군에 대비한 것이며, $$p < 0.01 및 $$$p < 0.001은 도네페질 처리군에 대비한 것이며, †††p < 0.001은 CAD 처리군에 대비한 것이며, φφφ p < 0.001은 CA 처리군에 대비한 것이다.
결과
도 4는 α-secretase의 활성을 평가한 결과이다. 도 4a는 실로스타졸의 효과를 도시한 것이고, 도 4b는 실로스타졸과 도네페질의 효과를 도시한 것이며, 도4c는 실로스타졸과 아리피프라졸의 효과를 도시한 것이며, 도 4d는 도네페질, CA, CAD, Rp-cAMPS, Sirtinol, TIMP의 효과를 도시한 것이다.
24시간 FBS 결핍 배지에 N2a Swe 세포를 노출시켰을 때 α-secretase의 활성이 55%로 감소하였으나 3 μM (C3), 10 μM (C10) 실로스타졸 3시간 전처리에 의해 각각 대조군의 99%, 119.2% 수준으로 활성 감소가 억제되어 증가하였다. α-secretase 활성은 3 μM 실로스타졸과 도네페질 (1, 3, 10 μM) 혹은 3 μM 실로스타졸과 아리피프라졸 (1, 3, 10 μM)을 복합 처리하였을 때에도 유의적으로 감소하였다.
도네페질 단독과 CA, CAD이 N2a Swe 세포에서 α-secretase 활성에 미치는 영향을 각각 비교하였다. 대조군 대비 56.1 %로 감소하였던 α-secretase 활성이 CAD에 의해 181.3% 수준으로 증가하여 도네페질 단독 혹은 실로스타졸과 아리피프라졸 조합에 의한 것보다 훨씬 높은 수치였다. CAD에 의한 α-secretase 활성 증가 효능은 cAMP-의존성 단백질 인산화 효소 억제제인 Rp-cAMPS을 10 μM 전처리시 77.0%, SIRT1 억제제인 sirtinol을 20 μM 전처리시 69.5%, ADAM10 억제제인 TIMP 10 μM 전처리시 76.3%로 유의적으로 억제되었다. 이상의 결과로 약물복합 시 상승적으로 α-secretase 활성이 증가하며 이로 아밀로이드-베타 형성이 억제되며 이 과정에서 SIRT1, ADAM10이 중요하게 관여함을 확인하였다.
실시예 5: 약물복합이 N2a Swe 세포에서 SIRT1 발현과 활성에 미치는 영향 확인
약물복합에 의해 SIRT1 발현이 증가되는 활성을 평가하고자 하였다. 선행 문헌에서 활성화된 N2a Swe 세포에서 시간에 따라 NAD+ 의존적인 단백질 탈아세틸화 효소인 SIRT1 발현이 감소함이 밝혀져 있다 (J Neurosci Res. 2014 Feb;92(2):206-17.). N2a Swe 세포에 3 μM 도네페질, CA (3 μM 실로스타졸 + 3 μM 아리피프라졸), CAD (3 μM 실로스타졸 + 3 μM 아리피프라졸 + 3 μM 도네페질)을 전처리 후 1% FBS 배지로 24시간 배양하였고 SIRT1 발현과 탈아세틸화 활성을 평가하였다. 또한 CREB은 신경세포의 분화와 가소성을 조절한다고 알려져 있으며 신경세포에서 직접 SIRT1 mRNA와 단백질 발현을 증가시킨다 (Nat Genet. 2002 May;31(1):47-54., Proc Natl Acad Sci USA. 2012 Jan 10;109(2):621-6.). 활성화된 N2a Swe 세포에서 CREB 발현을 웨스턴블랏으로 평가하였다.
방법
물질 정보: SIRT1에 대한 1차 항체 (코반스(Covance)사), P-CREB Ser133에 대한 1차 항체 (셀시그널링테크놀로지(Cell Signaling Technology)사)
통계 분석: *p < 0.05는 컨트롤군에 대비한 것이고, ##p < 0.01 및 ###p < 0.001은 비히클 처리군에 대비한 것이며, $p < 0.05, $$p <0.01 및 $$$p < 0.001은 도네페질 처리군에 대비한 것이며, Ψp < 0.05은 CA 처리군에 대비한 것이며, †p < 0.05, ††p < 0.01 및 †††p < 0.001은 CAD 처리군에 대비한 것이다.
결과
도 5a는 SIRT1 발현 결과를 도시한 것이고, 도 5b는 SIRT1 탈아세틸화 활성 결과를 도시한 것이며, 도 5c는 CREB 발현 결과를 도시한 것이다.
SIRT1 발현은 3 μM 도네페질 혹은 CA에 의해 크게 변하지 않은 반면 CAD에 의해 304.6% 증가하여 상승 효능이 확인되었다. SIRT1 억제제인 sirtinol을 20 μM 전처리시 CAD에 의한 효능은 유의적으로 억제되었다.
SIRT1의 탈아세틸화 활성은 N2a Swe 세포 활성화 시 기저수준 대비 66%로 감소하나 CA 전처리 시 대조군 대비 119%, CAD에 의해 155%로 증가한다. 20 μM sirtinol 전처리에 의해 CAD의 효능이 유의적으로 억제된다. SIRT1 활성이 세포내 아밀로이드-베타에 의해 감소하고 감소한 SIRT1 발현과 탈아세틸화 활성이 세 약물조합 (CAD)에 의해 증가하는데 이 때 단독 대비 상승 효과가 관찰되었다.
24시간 FBS 결핍 조건에서 N2a Swe 세포 내부에서 생성된 아밀로이드-베타로 인해 CREB, P-CREB Ser 133의 발현이 감소하였다. 그러나 CAD 전처리시 CREB, P-CREB Ser 133 발현 감소가 억제되었고 단독대비 상승 작용이 관찰되었다. 이 때 PI3K 억제제인 LY294002를 함께 처리하면 증가한 P-CREB Ser 133 발현이 유의적으로 감소하였다.
실시예 6: 약물복합이 N2a Swe 세포에서 아세틸콜린 분비와 CHAT 발현에 미치는 영향 확인
수용성 아밀로이드-베타는 아세틸콜린 (ACh)의 합성/분비의 여러 과정을 억제하며 nM 수준에서 다양한 콜린성 기능을 억제하고 시냅스전 마커인 CHAT 발현을 감소시킨다 (Trends Neurosci. 1998 Jan;21(1):43-9., Acta Neuropathol. 2011 Jul;122(1):49-60.). N2a 세포에서 아밀로이드-베타에 의해 아세틸콜린 분비 및 시냅스 마커 발현의 변화하고 약물복합에 의해 상승적으로 억제되는지 평가하였다.
방법
아세틸콜린 분비 평가: 얼림-녹임 과정을 반복하여 N2a Swe 세포를 파괴하고 세포내 요소를 분비시켰다. 2,000 rpm으로 20 분 동안 원심분리를 한 뒤 상층액을 사용하였다. 시중에서 구매할 수 있는 아세틸콜린 ELISA 키트를 사용하여 세포내 아세틸콜린을 측정하였다.
CHAT 발현 평가: 세포를 차가운 생리식염수로 균질화시킨 후 3,000 g로 원심분리하여 상층액을 사용하였다. 쿠마시 블루 (Coomassie blue method)로 단백질 농도를 정량하고, 웨스턴블랏을 통해 CHAT 발현을 평가하였다.
물질 정보: CHAT에 대한 1차 항체 (밀리포어(Millipore)사)
통계 분석: *p < 0.05 및 ***p < 0.001은 컨트롤군에 대비한 것이고, #p < 0.05, ##p < 0.01 및 ###p < 0.001은 비히클 처리군에 대비한 것이며, $$p < 0.01은 도네페질 처리군에 대비한 것이며, Ψp < 0.05은 CA 처리군에 대비한 것이며, †††p < 0.001은 CAD 처리군에 대비한 것이다.
결과
도 6의 A는 도네페질, CA, CAD 처리 후 아세틸콜린 분비 결과를 도시한 것이며, 도 6의 B는 도네페질, CA, CAD 및 MLA 처리 후 CHAT 발현 결과를 도시한 것이다.
10% FBS 조건에서 N2a Swe 세포를 배양했을 때 배지로 분비된 아세틸콜린의 농도는 0.15 pg/ml이며 이를 100%로 계산했을 때 활성화된 세포에서는 45.2%로 감소하였다. 도네페질 처리에 의해 66%, CA 처리에 의해 72.3%, CAD에 의해 89.5% 수준으로 회복하였다.
비슷하게 CHAT 발현이 활성화된 N2a Swe 세포에서 72.2%로 감소한다. 도네페질 혹은 CA 전처리에 의해 약한 수준으로 감소가 억제되지만 CAD에 의해 대조군보다 높은 125.4% 수준으로 억제되었다. CAD에 의해 증가한 CHAT 발현이 선택적인 α7 니코틴성 아세틸콜린 수용체 (α7-nAChR) 길항제인 메틸라이카코니틴 (MLA)에 의해 유의적으로 다시 감소하는 것이 확인되었다. 이를 통해 CAD가 α7-nAChR를 활성화시키고 CHAT 발현을 증가시키는 것을 알 수 있다.
실시예 7: 약물복합이 마우스 해마세포주에서 신경돌기 신장에 미치는 영향 확인
신경세포의 형태발생은 신경돌기가 형성되고 축색돌기, 수상돌기로 분화되는 과정이다. 신경돌기 신장은 실제 신경세포가 기능을 담당하는 데 매우 중요한 역할을 담당한다고 알려져 있다. 이에 마우스 해마세포주인 HT22 세포를 실험에 사용하여 아밀로이드-베타에 의해 감소한 신경돌기 신장을 약물복합에 의해 회복되는 지를 평가하고자 하였다.
방법
세포 배양: BDNF 수용체인 TrkB를 발현하는 HT22 세포는 10% FBS가 포함된 DMEM 배지에서 배양하여 사용하였다.
신경돌기 신장 평가: 도네페질 단독, 실로스타졸과 아리피프라졸 (CA), 실로스타졸과 아리피프라졸 및 도네페질 (CAD)을 전처리하고 3 μM 아밀로이드-베타를 5일간 처리하였다. 4% 파라포름알데히드로 세포를 고정하고 신경 필라멘트와 결합하는 SMI-312 항체와 1시간 동안 반응하였다. Alexa Fluor 488이 결합된 2차항체를 넣고 1시간 동안 반응하였다. 형광현미경을 사용하여 400x 배율로 형광사진을 얻은 후 HT22 세포의 신경돌기 신장을 분석하였다.
물질 정보: K252A 및 LY294002 (칼비오켐(Calbiochem)사), 이마티닙 (토론토리서치케미칼즈(Toronto Research Chemicals)사), 메틸라이카코니틴 (리서치바이오케미칼즈인터네셔널(Research Biochemicals International)사).
통계 분석: ***p < 0.001은 컨트롤군에 대비한 것이고, ###p < 0.001은 비히클 처리군에 대비한 것이며, $$$p < 0.001은 도네페질 처리군에 대비한 것이며, ΨΨΨp < 0.001은 CA 처리군에 대비한 것이며, †††p < 0.001은 CAD 처리군에 대비한 것이다.
결과
도 7a는 신경돌기 대표사진을 도시한 것이고, 도7b는 신경돌기 신장 분석 결과를 도시한 것이다.
대조군의 신경돌기 길이는 평균 53.3 μm였으나 아밀로이드-베타 처리에 의해 유의적으로 감소하여 평균 25.3 μm로 측정되었다. 감소한 신경돌기 길이는 CA 처리군에서 평균 65.9 μm로 증가하였고 CAD 처리군에서는 평균 130 μm로 증가하여 상승 효과가 관찰되었으나 도네페질 단독군에서는 큰 효능이 관찰되지 않았다. HT22 세포에서 CAD가 유의적으로 신경돌기 신장을 강화시키는 것이 확인되었다.
다음으로 CAD에 의해 증가한 신경돌기 길이에 어떤 분자기전이 영향을 미치는지를 평가하기 위해 효소 억제제를 같이 처리하였다. CAD에 의해 평균 130 μm까지 증가했던 신경돌기의 길이가 PI3K 억제제인 LY294002 30 μM 처리시 평균 45.7 μm, TrkB 억제제인 K252A 100 nM 처리시 평균 41.0 μm, 베타-카테닌 억제제인 이마티닙 (imatinib) 10 μM 처리시 평균 33.3 μm, 선택적인 α7 니코틴성 아세틸콜린 수용체 길항제인 메틸라이카코니틴 10 nM 처리시 평균 41.1 μm 로 감소하였다. 이상의 결과로 HT22 세포에 3 μM 아밀로이드-베타 처리 시 감소한 신경돌기 신장이 CAD에 의해 증가할 때, PI3K, BDNF, 베타-카테닌, α7-nAChR의 활성화가 관여한다는 것을 알 수 있다.
실시예 8: 약물복합이 마우스 해마세포주의 세포생존능에 미치는 영향 확인
신경퇴행성 뇌질환 치료제의 가장 궁극적인 목적인 신경세포사멸을 억제이며 이에 약물 복합군이 활성화된 N2a Swe 세포의 세포생존능 (Viability)을 억제하는 지를 평가하기 위해 MTT 환원평가를 진행하였다.
방법
MTT 평가: N2a Swe 세포에 CAD (3 μM 실로스타졸 + 3 μM 아리피프라졸 + 3 μM 도네페질)를 2시간 전처리 후 20 μM 아밀로이드-베타를 처리하여 24시간 동안 배양하였다. MTT (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) 를 PBS로 희석하여 5 mg/ml의 농도로 제조한 후 well 당 10 μl를 추가하고 3시간 동안 배양한다. 마이크로플레이트 리더로 570 nm에서 흡광도를 측정하여 세포생존능을 평가하였다. (대조 파장 = 630 nm)
통계 분석: ***p < 0.001은 컨트롤군에 대비한 것이고, #p < 0.001은 비히클 처리군에 대비한 것이며, ††p < 0.01 및 †††p < 0.001은 CAD 처리군에 대비한 것이다.
결과
도 8은 세포생존능 평가 결과를 도시한 것이다. 아밀로이드-베타 24시간 노출 후 세포생존능이 60%로 감소하였으나 CAD 전처리에 의해 80.5%까지 증가하였다. 이 결과로 실제 복합에 의해 신경세포사멸이 억제됨을 확인하였다.
다음으로 분자기전을 연구하기 위해 앞에서와 같이 다양한 효소 억제제를 같이 처리하였다. CAD에 의해 증가한 세포생존능은 30 μM LY294002에 의해 58%, 100 nM K252A에 의해 49.0%, 10 μM 이마티닙 (imatinib)에 의해 51%, 10 nM 메틸라이카코니틴에 의해 54%로 다시 감소하였다. 이상의 결과로 HT22 세포에 3 μM 아밀로이드-베타 처리에 의해 감소한 세포생존능이 CAD에 의해 증가할 때 PI3K, BDNF, 베타-카테닌, α7 니코틴성 아세틸콜린 수용체의 활성화가 중요한 역할을 하는 것을 알 수 있다.
실시예 9: 인간 유도만능줄기세포 유래 신경세포에서 신경돌기 신장 효과 확인
신경퇴행성 뇌질환을 연구 시 주로 사용하는 세포주 (cell line)는 신경세포의 본연의 특징을 보이지 않는 부분들이 있고 임상시험을 예측하는 데에 한계가 있다고 여겨져 인간 유도만능줄기세포 (iPSC) 유래 신경세포에서 약물 효능 평가를 진행하려는 많은 시도들이 있다. 앞에서 확인한 약물 복합에 의한 상승효과가 인간유래 시료에서도 관찰되는지를 확인하고자 하였다.
방법
인간 유도만능줄기세포 유래 신경세포 제작: 동질유전자형 유도만능줄기세포 (isogenic induced pluripotent stem cell)를 뇌신경세포로 분화시키기 위해 기존에 알려진 방법과 같이 (Neuron. 2013 Jun 5;78(5):785-98.) TetO 유전자에 의해 Ngn2 발현이 유도되는 렌티바이러스 (lentivirus)를 24시간 처리하였다. N2/Non-essential amino acid가 포함된 DMEM:F12 배지에 10 ng/ml BDNF, 10 ng/ml NT-3, 0.2 μg/ml 라미닌 (laminin), 2 μg/ml 독시사이클린 (doxycycline)을 48시간 처리한다. 배양액을 Neurobasal 배지로 바꾸고 여기에 B27, GlutaMAX 와 함께 10 ng/ml BDNF, 10 ng/ml NT-3, 0.2 μg/ml 라미닌, 2 μg/ml 독시사이클린, 1 μg/ml 퓨로마이신(puromycin)을 처리하여 분화를 계속 유도하면서 바이러스 감염이 되지 않은 세포를 제거한다. 다음 날부터 3일 동안 1 μM Ara-C를 처리하여 증식하는 비신경세포의 성장을 억제하고, 배양액으로 성상세포 조건화 배지 (astrocyte conditioned media)를 사용하여 신경세포 발달을 촉진시킨다. 5주간 신경세포로 분화시켰다.
물질 정보: 아밀로이드-베타 (아나스펙(ANASPEC)사), MAP2에 대한 1차 항체 (바이오레전드(BioLegend)사).
신경돌기 신장 평가: 아밀로이드-베타 가루를 제품설명서에 따라 녹인 후 37℃에서 일주일간 인큐베이션하여 아밀로이드-베타 올리고머 형성을 촉진하였고 비환원 (non-reducing) SDS-PAGE를 통해 올리고머 형성을 확인하였다. 신경세포에 1 μM 도네페질, 1 μM 실로스타졸, 1 μM 아리피프라졸 혹은 각 약물을 1 μM씩 1:1:1 배합비 (DCA)로 3시간 전처리하였다. 20 μM 아밀로이드-베타 올리고머를 이틀 동안 함께 처리하였다. 세포를 고정시키고 그룹당 6~7 장의 MAP2 형광 염색 사진을 얻었다. ImageJ 프로그램의 SNT plug-in으로 사진당 3개 신경세포의 신경돌기 신장을 분석하였다.
통계 분석: 스튜던트 T-검증으로 통계적 유의성을 분석하였다. *p < 0.05은 비히클 처리군에 대비한 유의성을 의미한다.
결과
도 9는 신경돌기 신장 분석 결과를 도시한 것이다. 아밀로이드-베타 처리에 의해 61.3%로 감소한 신경돌기 신장이 도네페질, 실로스타졸, 아리피프라졸 단독 처리에 의해서는 큰 변화가 없었으나 1:1:1의 배합비로 처리하였을 때 비히클 대비 유의적으로 신경돌기 신장이 증가하여 컨트롤군 대비 98% 수준으로 개선된 것이 관찰되었다. 상기 결과는 실시예 7에서 입증된 세 약물조합에 의한 신경세포 보호 효능이 인간 유래 시료 모델에서도 관찰된다는 것을 보여주고 있다.
실시예 10: 다양한 약물복합비에서 신경돌기 신장 효과 확인
앞의 결과에서 보여주고 있는 약물복합비 외에도 다양한 약물복합비에서 상승적으로 신경돌기 신장 효과를 보이는 지를 평가하였다.
방법
신경돌기 신장 평가: 약물 처리는 1% FBS가 포함된 DMEM 배지에서 3시간 전처리 후 10 μM 아밀로이드-베타를 5일간 처리하였다. 약물 처리군은 다음과 같다.
(1) 0.25 μM 도네페질, 1 μM 실로스타졸, 0.625 μM 아리피프라졸 단독처리 혹은 동일농도의 도네페질, 실로스타졸 및 아리피프라졸 복합처리 (도네페질 : 실로스타졸 : 아리피프라졸 용량 비율 = 10:40:25).
(2) 0.1 μM 도네페질, 1 μM 실로스타졸, 0.025 μM 아리피프라졸 단독처리 혹은 동일농도의 도네페질, 실로스타졸 및 아리피프라졸 복합처리 (도네페질 : 실로스타졸 : 아리피프라졸 용량 비율 = 10:100:2.5).
(3) 0.05 μM 도네페질, 1 μM 실로스타졸, 0.025 μM 아리피프라졸 단독처리 혹은 동일농도의 도네페질, 실로스타졸 및 아리피프라졸 복합처리 (도네페질 : 실로스타졸 : 아리피프라졸 용량 비율 = 10:200:5).
이 후 4% 파라포름알데히드로 세포를 고정하고 쿠마시 블루 용액으로 염색하였다. 각 군당 사진을 얻은 후 ImageJ 프로그램을 통해 HT22 세포의 신경돌기 신장을 분석하였다.
물질 정보: 아밀로이드-베타 (시그마알드리치(Sigma-Aldrich)사).
통계 분석: *p < 0.05 및 ***p < 0.001은 비히클 처리군에 대비한 스튜던트 T-검정 결과이다.
결과
도 10a는 도네페질, 실로스타졸, 아리피프라졸의 배합비를 10:40:25로 처리한 결과를 도시한 것이고, 도10b는 배합비를 10:100:2.5로 처리한 결과를 도시한 것이고, 도 10c는 배합비를 10:200:5로 처리한 결과를 도시한 것이다.
세 배합비 처리 실험에서 아밀로이드-베타 처리 시 신경돌기 신장이 컨트롤군 대비 감소하였으나 세 개의 약물 단독 처리군에서는 유의적인 변화가 관찰되지 않았다. 이 때 세 약물조합을 10:40:25, 10:100:2.5, 10:200:5의 배합비로 처리 시 비히클 처리군 대비 유의적인 신경돌기 신장 증가가 관찰되어 각각 컨트롤 대비 100.6%, 126.9%, 108.1% 수준인 것으로 관찰되었다. 통계적으로 유의성이 확보되지는 않았지만 각 약물의 단독군의 반응성의 합과 비교 시에도 복합에 의한 신경돌기 신장이 더 많이 증가됨을 보여주고 있다. 상기 결과는 실시예 7에서 입증된 1:1:1 배합비의 세 약물조합에 의한 신경세포 보호 효능이 10:40:25, 10:100:2.5, 10:200:5 배합비에서도 관찰된다는 것을 보여주고 있다.
실시예 11: 단기기억손상 동물모델에서 복합제에 의한 인지능력 개선 효과 확인
앞에서 평가했던 결과들이 실제 동물실험에서도 관찰되는 지를 평가하기 위해 C57BL6 마우스에 스코폴라민을 복강투여하여 인지능력 손상을 일으킨 후 세 약물조합에 의한 항치매 효능을 평가하였다.
방법
약물 투여: 약물 혹은 비히클 (PBS)을 2주 동안 하루에 한번 경구 투여하였다. 약물 투여군은 다음과 같다.
(1) 1 mg/kg 도네페질, 10 mg/kg 실로스타졸, 0.25 mg/kg 아리피프라졸 단독처리 혹은 도네페질, 실로스타졸 및 아리피프라졸 복합 처리 (도네페질 : 실로스타졸 : 아리피프라졸의 용량비율 = 10:100:2.5).
(2) 1 mg/kg 도네페질, 10 mg/kg 실로스타졸, 0.5 mg/kg 아리피프라졸 단독처리 혹은 도네페질, 실로스타졸 및 아리피프라졸 복합 처리 (도네페질 : 실로스타졸 : 아리프프라졸의 용량비율 = 10:100:5).
(3) 0.5 mg/kg 도네페질, 10 mg/kg 실로스타졸, 0.25 mg/kg 아리피프라졸 단독처리 혹은 도네페질, 실로스타졸 및 아리피프라졸 복합 처리 (도네페질 : 실로스타졸 : 아리프프라졸의 용량비율 = 10:200:5).
약물 투여 2주차 때 1 mg/kg 스코폴라민을 일주일 동안 하루에 한번 i.p. 투여하였고 하루 뒤 Y-미로 (Y-maze) 검사를 진행하였다.
Y-미로 검사: 실험 전 쥐들을 30분 동안 실험 공간 (Y-미로)에 놔두고 환경에 적응시켰다. 3개의 arm을 각각 A, B, C로 표시하였다. 쥐들을 Y-미로 가운데에 놓고 8분 동안 자유롭게 행동하게 둔 상태로 카메라로 녹화하였다. 촬영되는 화면으로 쥐들이 어느 arm에 들어가는지 기록하였고 사각형 안으로 들어갔을 경우에만 arm에 들어간 것으로 측정하였다. 8분이 지나면 쥐는 케이지로 돌려보내고 Y-미로를 청소한 후, 다음 쥐로 실험을 진행하였다. Alternation은 쥐가 연속으로 서로 다른 arm에 들어간 것을 측정한 값이다. 예를 들어 B-A-C-B-C의 순서대로 들어갔다면 Number of Alternations는 2번, Total number of arm entries는 5번인 것이다. Alternation (%)를 다음 식으로 계산하였다; Alternation = (Number of Alternations/Total number of arm entries - 2) × 100
통계 분석: ##p < 0.01 및 ###p < 0.001은 컨트롤군에 대비한 것이고, **p < 0.01 및 ***p < 0.001은 비히클 투여군에 대비한 것이다.
결과
도 11a는 실험 일정을 도시한 것이고, 도 11b는 도네페질, 아리피프라졸, 실로스타졸을 10:100:2.5의 배합비로 투여한 결과를 도시한 것이고, 도 11c는 10:100:5의 배합비로 투여한 결과를 도시한 것이고, 도11d는 10:200:5의 배합비로 투여한 결과를 도시한 것이다.
컨트롤군 대비 스코폴라민 투여 시 인지기능이 감소하였으나 도네페질, 실로스타졸 및 아리피프라졸 각각의 단독 투여군에서 유의적인 변화를 이끌어내지 못하였다. 10:100:2.5 및 10:100:5 배합비의 세 약물조합 투여군에서는 비히클 투여군 대비 유의적인 인지기능 개선 효능이 관찰되었다. 그러나 기존에 보고된 자료를 통해서 유추가능한 10:200:5 배합비의 세 약물조합 투여군에서는 단독 투여군과 비슷한 수준의 효능이 관찰되어 상승효능은 관찰되지 않았다. 상기 결과는 기 보고된 실험결과로는 예측할 수 없었던 10:100:2.5 및 10:100:5 배합비에서 세 약물조합에 의한 상승 효능이 세포주 외 동물모델에서도 관찰됨을 밝혔다.

Claims (15)

  1. 도네페질 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 실로스타졸 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 및 아리피프라졸 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 퇴행성 신경질환의 예방, 개선, 경감 또는 치료용 약학적 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 도네페질 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 실로스타졸 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 및 아리피프라졸 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이 단일 제제 형태, 또는 함께 또는 별개로 동시에 또는 다른 시간에 투여되는 개별 제제 형태로 제조되는 것인, 약학적 조성물.
  3. 제1항에 있어서, 도네페질 또는 이의 약핮거으로 허용가능한 염은 도네페질의 염산염인 것인, 약학적 조성물.
  4. 제1항에 있어서, 실로스타졸 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 실로스타졸의 옥살산, 말레산, 푸마르산, 말산, 타르타르산, 시트르산, 벤조산, 염산, 황산, 인산, 브롬화수소산 및 염산염으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것인, 약학적 조성물.
  5. 제1항에 있어서, 아리피프라졸 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 아리피프라졸의 제약상 허용되는 염으로서, 염산, 질산, 인산, 황산, 브로민화수소산, 아이오딘화수소산, 아인산, 지방족 모노- 및 디카르복실산, 페닐-치환된 알칸산, 히드록시알칸산, 알칸디오산, 방향족산, 및 지방족 및 방향족 술폰산으로부터 유도된 염으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것인, 약학적 조성물.
  6. 제1항에 있어서, 도네페질 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 실로스타졸 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 및 아리피프라졸 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 중량비로 1 내지 10:1 내지 200:1 내지 25로 포함되는 것인, 약학적 조성물.
  7. 제6항에 있어서, 도네페질 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 실로스타졸 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 및 아리피프라졸 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 중량비로 1:1:1로 포함되는 것인, 약학적 조성물.
  8. 제6항에 있어서, 도네페질 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 실로스타졸 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 및 아리피프라졸 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 중량비로 10:40 내지 200:1 내지 25 포함되는 것인, 약학적 조성물.
  9. 제6항에 있어서, 도네페질 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 실로스타졸 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 및 아리피프라졸 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 중량비로 10:40:25, 10:100:2.5 내지 10:100:5 또는 10:200:5로 포함되는 것인, 약학적 조성물.
  10. 제6항에 있어서, 도네페질 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 실로스타졸 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 및 아리피프라졸 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 중량비로 10:200:5로 포함되는 것인, 약학적 조성물.
  11. 제1항에 있어서, 상기 치매는 혈관성 치매 또는 노인성 치매인 것인, 약학적 조성물.
  12. 제11항에 있어서, 상기 혈관성 치매는 전측두엽성 치매, 알콜성 치매, 부분 치매, 뇌혈관 장애에 의해 유도되는 치매 및 뇌 허혈 후 유도되는 치매로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것인, 약학적 조성물.
  13. 제1항에 있어서, 상기 인지 장애는 알츠하이머병, 퇴행성 장애에 의해 야기되는 학습 장애, 학습 능력의 저하, 기억 또는 인지 기능장애인 것인, 약학적 조성물.
  14. 제1항에 있어서, 상기 혈관성 우울증은 뇌혈관 장애에 의해 유도되는 우울증, 연령-관련 혈관 장애에 의해 유도되는 우울증, 뇌졸중-후 우울증, 뇌경색증-후 우울증 및 노인성 우울증으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것인, 약학적 조성물.
  15. 제1항의 약학적 조성물을 개체에 투여하는 단계를 포함하는 치매, 인지 장애 또는 혈관성 우울증의 예방 또는 치료방법.
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Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20150152084A1 (en) * 2012-06-15 2015-06-04 Foundation For Biomedical Research And Innovation Prophylactic and/or therapeutic agent for mild cognitive impairment
JP2017506624A (ja) * 2014-02-04 2017-03-09 フォレスト・ラボラトリーズ・ホールディングス・リミテッド ドネペジル組成物及びアルツハイマー病を治療する方法
KR20180097652A (ko) * 2015-12-25 2018-08-31 오츠카 세이야쿠 가부시키가이샤 아리피프라졸 및 실로스타졸을 포함하는 약물

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20150152084A1 (en) * 2012-06-15 2015-06-04 Foundation For Biomedical Research And Innovation Prophylactic and/or therapeutic agent for mild cognitive impairment
JP2017506624A (ja) * 2014-02-04 2017-03-09 フォレスト・ラボラトリーズ・ホールディングス・リミテッド ドネペジル組成物及びアルツハイマー病を治療する方法
KR20180097652A (ko) * 2015-12-25 2018-08-31 오츠카 세이야쿠 가부시키가이샤 아리피프라졸 및 실로스타졸을 포함하는 약물

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
HEO HYE JIN, PARK SO YOUN, LEE YI SLE, SHIN HWA KYOUNG, HONG KI WHAN, KIM CHI DAE: "Combination therapy with cilostazol, aripiprazole, and donepezil protects neuronal cells from β-amyloid neurotoxicity through synergistically enhanced SIRT1 expression", KOREAN J PHYSIOL PHARMACOL, vol. 24, no. 4, 1 July 2020 (2020-07-01), KR , pages 299 - 310, XP093016000, ISSN: 1226-4512, DOI: 10.4196/kjpp.2020.24.4.299 *
LEE, J.H. PARK, S.Y. SHIN, Y.W. KIM, C.D. LEE, W.S. HONG, K.W.: "Concurrent administration of cilostazol with donepezil effectively improves cognitive dysfunction with increased neuroprotection after chronic cerebral hypoperfusion in rats", BRAIN RESEARCH, vol. 1185, 28 November 2007 (2007-11-28), NL , pages 246 - 255, XP022368747, ISSN: 0006-8993, DOI: 10.1016/j.brainres.2007.09.016 *
PARK SO YOUN, KIM HAE YOUNG, LEE YI SLE, HEO HYE JIN, SHIN HWA KYOUNG, LEE WON SUK, HONG KI WHAN, KIM CHI DAE: "Augmented improvement of cognition and memory by aripiprazole add-on for cilostazol treatment in the chronic cerebral hypoperfusion mouse model", BEHAVIOURAL BRAIN RESEARCH, vol. 365, 3 June 2019 (2019-06-03), NL , pages 133 - 140, XP093015993, ISSN: 0166-4328, DOI: 10.1016/j.bbr.2019.03.013 *

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