WO2022269113A1 - Compuestos ligandos del receptor cxcr4 y uso de los mismos - Google Patents

Compuestos ligandos del receptor cxcr4 y uso de los mismos Download PDF

Info

Publication number
WO2022269113A1
WO2022269113A1 PCT/ES2022/070379 ES2022070379W WO2022269113A1 WO 2022269113 A1 WO2022269113 A1 WO 2022269113A1 ES 2022070379 W ES2022070379 W ES 2022070379W WO 2022269113 A1 WO2022269113 A1 WO 2022269113A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
compound
acid
phenyl
compound according
heterocycle
Prior art date
Application number
PCT/ES2022/070379
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Ana MARTÍNEZ GIL
José Mario MELLADO GARCÍA
Nuria E CAMPILLO MARTÍN
Alfonso GARCÍA-RUBIA
José Miguel RODRÍGUEZ FRADE
Eva María GARCÍA CUESTA
César Augusto SANTIAGO
Original Assignee
Consejo Superior De Investigaciones Científicas (Csic)
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Consejo Superior De Investigaciones Científicas (Csic) filed Critical Consejo Superior De Investigaciones Científicas (Csic)
Publication of WO2022269113A1 publication Critical patent/WO2022269113A1/es

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/4192—1,2,3-Triazoles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D249/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having three nitrogen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D249/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having three nitrogen atoms as the only ring hetero atoms not condensed with other rings
    • C07D249/04—1,2,3-Triazoles; Hydrogenated 1,2,3-triazoles
    • C07D249/06—1,2,3-Triazoles; Hydrogenated 1,2,3-triazoles with aryl radicals directly attached to ring atoms

Definitions

  • the present invention relates to new compounds that act as ligands for the CXCR4 receptor, as well as their use for the treatment of diseases mediated by said receptor, such as cancer, HIV infection or rheumatoid arthritis.
  • the present invention therefore falls within the field of medicine.
  • the CXCR4 receptor is a protein found in the cell membrane and is involved in the development of certain diseases.
  • the CXCR4 receptor binds to the cytokine CXCL12, whose high levels are associated with difficult-to-treat inflammation and tumor metastasis.
  • the HIV virus which causes acquired immunodeficiency syndrome (AIDS)
  • AIDS acquired immunodeficiency syndrome
  • the HIV virus needs to bind to the CXCR4 receptor to infect the cell (Choi WT, Yang Y, Xu Y, An J. Targeting chemokine CXCR4 receptor for treatment of HIV-1 infection, tumor progression, and metastasis.Curr Top Med Chem. 2014;14(13):1574-89).
  • This CXCR4 receptor is also implicated in autoimmune diseases, such as multiple sclerosis (Eva M. Garc ⁇ a-Cuesta et al. The Role of the CXCL12/CXCR4/ACKR3 Axis in Autoimmune Diseases. Front Endocrinol (Lausanne) 2019; 10: 585) while involved in remyelination processes (Kevin S. Carvajal et al. XCR4 Signaling Regulates Remyelination by Endogenous Oligodendrocyte Progenitor Cells in a Viral Model of Demyelination. Glia. 2011 Dec; 59(12): 1813-1821).
  • Some compounds that act on the CXCR4 receptor are known in the state of the art, such as those disclosed in document ES2370986 (B1) in which their use for the treatment of Acquired Immunodeficiency Syndrome (AIDS) is claimed.
  • the present invention proposes new compounds that act as ligands of the same so as to inhibit its activity; in this way the compounds of the invention can be used for the treatment and/or prevention of diseases in which the CXCR4 receptor plays an important role.
  • the inventors of the present invention have shown that the compounds described here bind to the CXCR4 receptor (they are ligands of the CXCR4 receptor), so that they inhibit its activity in the development of diseases mediated by it, such as cancer, infection by HIV or rheumatoid arthritis.
  • a first aspect of the present invention refers to a compound of formula (I): a pharmaceutically acceptable salt, isomer or solvate thereof, wherein R 1 is H and R 2 is an aryl group or C 1 -C 4 alkyl or R 1 and R 2 form a 4 to 6 membered heterocycle with the N to which they are attached and where said heterocycle comprises one or more heteroatoms, all of which are N.
  • aryl refers to a group of aromatic hydrocarbons with a single (monocyclic) ring or multiple (bicyclic or polycyclic) rings, which may be fused or covalently bonded. Examples are: phenyl, naphthyl, diphenyl, indenyl, phenanthryl or anthracyl.
  • R 2 is aryl, it is preferably substituted by a heterocycle containing at least one nitrogen or by an amino -NR 3 R b , where R a and R b are each independently a C 1 -C 4 alkyl group, or, R a and R b form a heterocycle with N.
  • C 1 -C 4 alkyl refers, in the present invention, to radicals with linear or branched hydrocarbon chains, having from 1 to 4 carbon atoms and which are linked to the rest of the molecule by a single bond. , for example, propyl, ethyl, methyl, isopropyl, butyl, etc.
  • alkyl radicals can be optionally substituted by a heterocycle containing at least one nitrogen or by an amino -NR a R b , where R a and R b are each independently a C 1 -C 4 alkyl group, or R a and R b form a heterocycle with N.
  • heterocycle refers to cyclic hydrocarbon chains that have from 4 to 6 members, preferably 6, and that are linked to the rest of the molecule by a single bond, in which at least one carbon atom of the main chain has been replaced by O, N or S. They can be saturated or unsaturated, although they are preferably saturated.
  • R 1 is H and R 2 is a phenyl group.
  • R 1 is H and R 2 is a phenyl group substituted by a 4 to 6 membered heterocycle, more preferably by a heterocycle comprising one O and one N atom and six members.
  • R 1 is H and R 2 is a phenyl group substituted by a NR'R'' group.
  • R' and R" are each independently a C 1 -C 4 alkyl group, or R' and R" form with N a 4 to 6 membered heterocycle, preferably a 6 membered heterocycle and further containing one atom of oxygen.
  • R 1 is H and R 2 is C 1 -C 4 alkyl; more preferably R 2 is C 1 -C 4 alkyl substituted by a 4 to 6 membered heterocycle, more preferably by a heterocycle comprising one O and one N atom and six members.
  • R 1 is H and R 2 is ethyl; more preferably, R 2 is ethyl substituted by a 4- to 6-membered heterocycle, more preferably by a six-membered heterocycle comprising one O and one N atom.
  • R 1 and R 2 form a heterocycle, preferably saturated, with six members with N, where said heterocycle comprises one or two N atoms.
  • R 1 and R 2 form a heterocycle of 4 to 6 members with N where said heterocycle, comprising 1 or 2 N atoms, is substituted by an aryl, preferably phenyl. Said aryl is preferably substituted by one or more groups selected from NO 2 , CF 3 or combinations thereof.
  • R 1 and R 2 form a 6-membered heterocycle with N where said heterocycle, comprising 1 or 2 N atoms, is substituted by a -COOR"' group, R'" being a C 1 -alkyl C 4 , preferably ethyl.
  • the invention refers to a compound of formula (I) selected from the following:
  • the compounds of the present invention may contain one or more basic nitrogens and therefore could form salts with acids, both organic and inorganic.
  • salts include: salts with inorganic acids such as hydrochloric acid, hydrobromic acid, hydroiodic acid, nitric acid, perchloric acid, sulfuric acid or phosphoric acid; and salts with organic acids such as methanesulfonic acid, trifluoromethanesulfonic acid, ethanesulfonic acid, benzenesulfonic acid, p-toluenesulfonic acid, fumaric acid, oxalic acid, acetic acid, maleic acid, ascorbic acid, citric acid, lactic acid, tartaric acid, malonic acid, glycolic acid, succinic acid and propionic acid, among others.
  • Some compounds of the present invention may contain one or more acidic protons and can therefore also form salts with bases.
  • salts include: salts with inorganic cations such as sodium, potassium, calcium, magnesium, lithium, aluminum, zinc, etc.; and salts formed with pharmaceutically acceptable amines such as ammonia, alkylamines, hydroxyalkylamines, Usine, arginine, N-methylglucamine, procaine, and the like.
  • salts there is no limitation on the type of salt that can be used, but as long as it is used for therapeutic purposes, it will have to be pharmaceutically acceptable.
  • pharmaceutically acceptable salts are meant those salts which, according to medical criteria, are suitable for use in contact with tissues of humans or other mammals without causing undue toxicity, irritation, allergic response or the like. Pharmaceutically acceptable salts are widely known to those skilled in the art.
  • Salts of a compound of formula (I) may be obtained during the final isolation and purification of the compounds of the invention or may be prepared by treating a compound of formula (I) with a sufficient amount of the desired acid or base to give the salt in a conventional way. Salts of compounds of formula (I) can in turn be transformed into other salts of compounds of formula (I) by ion exchange via an ion exchange resin.
  • the compounds of formula (I) and their salts may differ in certain physical properties, but are equivalent for the purposes of the invention. All salts of the compounds of formula (I) are included within the scope of the invention.
  • the compounds of the present invention can form complexes with solvents in which they are reacted or with which they precipitate or crystallize. These complexes are known as solvates.
  • solvate refers to a complex of variable stoichiometry formed by a compound of formula (I) or a salt thereof (solute) and a solvent.
  • solvents include pharmaceutically acceptable solvents such as water, ethanol, and the like.
  • a complex with water is known as a hydrate.
  • Solvates of the compounds of the invention (or their salts), including hydrates, are encompassed within the scope of the invention.
  • the present invention encompasses all isomers of the compounds of formula (I), that is to say, all geometric, tautomeric and optical forms, and their mixtures (for example, racemic mixtures).
  • the present invention includes, within its scope, all possible diastereomers, including mixtures thereof.
  • the different isomeric forms can be separated or resolved between them using conventional methods or any isomer can be obtained using conventional synthetic methods or by means of stereospecific, stereoselective or asymmetric synthesis.
  • the compounds of formula (I) can exist in different physical forms, ie, in amorphous and crystalline forms. Furthermore, the compounds of the present invention may have the ability to crystallize from more than one form, a characteristic known as polymorphism. Polymorphs can be differentiated by various physical properties well known to those skilled in the art, such as X-ray diffractograms, melting points, or solubility. All physical forms of the compounds of formula (I), including all their polymorphic forms (“polymorphs”) are included within the scope of the present invention.
  • compounds of the invention also include compounds that differ only in the presence of one or more isotopically enriched atoms.
  • compounds having such a structure except substitution of a hydrogen for a deuterium or tritium, or substitution of a carbon for a 13C or 14C -enriched carbon or 15N -enriched nitrogen, are within the scope of this invention.
  • a second aspect of the invention refers to the process for preparing the compounds of formula (I) of the present invention.
  • the procedure comprises the reaction of 4-((4-(4-(hydroxymethyl)phenyl)-1H-1,2,3-triazol-1-yl)methyl)benzoic acid (II) with an amine Ri - NH- R 2 (III), (R 1 and R 2 as defined above) in dimethylformamide (DMF) as solvent and in the presence of 4-dimethylaminopyridine (DMAP) and A/-(3-dimethylaminopropyl)- hydrochloride /V-ethylcarbodiimide (EDC HCI) at room temperature (between 18 and 25°C), as shown in the following scheme:
  • reaction is carried out for a time between 24 and 72h, more preferably for 48h.
  • one mole of 4-((4-(4-(hydroxymethyl)phenyl)-1H-1,2,3-triazol-1-yl)methyl)benzoic acid (II) is used per mole of amine R r NH-R 2 (HI).
  • DMAP 4-dimethylaminopyridine
  • EDC HCL 4-((4-(4-(hydroxymethyl)phenyl) ⁇ 1H-1,2,3-triazol ⁇ 1-yl)methyl acid )benzoic(II) used.
  • the compound of formula (II) is prepared by reaction of 4-(azidomethyl)benzoic acid and (4-ethynylphenyl)methanol in a 1:1 molar ratio, in the presence of pentahydrated copper sulfate and sodium ascorbate at room temperature (between 18 and 25°C).
  • reaction takes place for 24 h.
  • the reaction solvent is preferably DMF.
  • the amount of copper sulfate pentahydrate is 0.1 mol % with respect to the moles of 4-(azidomethyl)benzoic acid or (4-ethynylphenyl)methanol and the moles of sodium ascorbate are twice that of sodium sulfate. copper pentahydrate.
  • Another aspect of the invention relates to the compound of formula (I), a pharmaceutically acceptable salt, isomer or solvate thereof, for use as a medicament.
  • the present invention also relates to the use of a compound of formula (I), a pharmaceutically acceptable salt, an isomer or a solvate thereof for the manufacture of a medicament.
  • Another aspect of the invention refers to the compound of formula (I), a pharmaceutically acceptable salt, an isomer or a solvate thereof for use in the treatment and/or prevention of diseases mediated by the CXCR4 receptor, preferably selected from the group comprising cancer, HIV infection and rheumatoid arthritis.
  • the present invention also refers to the use of a compound of formula (I), a pharmaceutically acceptable salt, an isomer or a solvate thereof for the manufacture of a medicament for the treatment and/or prevention of diseases mediated by the CXCR4 receptor, preferably selected from the group comprising cancer, HIV infection and rheumatoid arthritis.
  • the disease is cancer, and more preferably, tumor metastasis.
  • the disease is infection caused by HIV and, more preferably, AIDS.
  • the compound of formula (I), a pharmaceutically acceptable salt, isomer or solvate thereof is administered via the digestive or enteral, parenteral, respiratory, topical or transdermal routes.
  • the administration is digestive or enteral, more preferably oral.
  • dose and frequency of doses will vary according to the nature and severity of the disease to be treated, the age, general condition and weight of the patient, as well as the particular compound administered and the route of administration, among other factors.
  • treatment or prevention means to reverse, alleviate, inhibit the progress of, or prevent the disorder or condition to which it applies in such terms, one or more symptoms of such disorder or condition.
  • the compounds of formula (I), the isomers, salts or solvates thereof will be in a pharmaceutically acceptable or substantially pure form, that is to say, with a pharmaceutically acceptable degree of purity, excluding usual pharmaceutical additives, such as diluents and vehicles, not including material considered toxic at normal doses.
  • Purity levels for the active ingredient are preferably greater than 50%, more preferably greater than 70%, most preferably greater than 90%. In a preferred embodiment, they are more than 95% of the compounds of formula (I) or their salts, solvates or isomers.
  • Another aspect of the present invention relates to a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising a compound of formula (I) together with a pharmaceutically acceptable carrier or excipient.
  • composition must comprise the therapeutically effective amount of the compound of formula (I) to be administered and will depend, among other factors, on the individual to be treated, the severity of the disease suffered by said individual, the form of administration chosen, etc.
  • excipients, adjuvants and/or vehicles refers to molecular entities or substances with which the active ingredient is administered.
  • Such pharmaceutical excipients, adjuvants, or vehicles may be sterile liquids, such as waters and oils, including those of petroleum, animal, vegetable, or synthetic origin, such as peanut oil, soybean oil, mineral oil, sesame oil and the like, excipients, disintegrants, wetting agents or diluents
  • Another aspect of the invention refers to the pharmaceutical composition defined in the previous aspect of the invention for its use in the treatment and/or prevention of diseases mediated by the CXCR4 receptor, preferably selected from the group that includes cancer, HIV infection and rheumatoid arthritis.
  • Another aspect of the invention relates to a method for the treatment and/or prevention of diseases mediated by the CXCR4 receptor in a subject, preferably selected from the group comprising cancer, HIV infection and rheumatoid arthritis, comprising administration to said subject of the therapeutically effective amount of a compound of formula (I), as defined above.
  • a last aspect of the invention refers to the use of a compound of formula (I) for the preparation of a medicament for the treatment and/or prevention of diseases mediated by the CXCR4 receptor, preferably selected from the group comprising cancer, infection by HIV and rheumatoid arthritis.
  • Example 1 Synthesis and characterization of compounds of the present invention. 1.1. Synthesis of 4-((4-(4-(hydroxymethyl)phenyl)-1H-1,,2,3-triazol-1-yl)methyl)benzoic acid
  • the Jurkat cell line (American Type Culture Collection (ATCC), CRL-10915), human T lymphocytes expressing the CXCR4 receptor, was used.
  • Cells [(3 x 105 cells in 0.1 ml of RPMI 1640 medium with 0.1% bovine serum albumin (BSA) and 10 mM 4-(2-hydroxyethyl)piperazine-1-ylethanesulfonic acid (HEPES)j were placed in the top well of uncoated 24-well transmigration chambers (Transwell 5 pM pore size, Costar, Cambridge, MA).CXCL12 (20 nM) in 0.6 mL of RPMI was added to the bottom well.
  • BSA bovine serum albumin
  • HEPES 4-(2-hydroxyethyl)piperazine-1-ylethanesulfonic acid
  • Example 3 Determination of calcium mobilization induced by CXCL12
  • Jurkat cells and primary CD4 + naive T lymphocytes were resuspended in RPMI 1640 with 10% fetal calf serum (FCS) (2 x 10® cells/ml) and incubated with Fluo-3AM fluorescent probe (Invitrogen, Molecular Probes; 0.28 pig/pl in DMSO, 16 pl/10 6 cells; 30 min, 37°C).
  • FCS fetal calf serum
  • Fluo-3AM fluorescent probe Invitrogen, Molecular Probes; 0.28 pig/pl in DMSO, 16 pl/10 6 cells; 30 min, 37°C).
  • cells were treated with DMSO (control), or test compounds (1 h, 37°C, 5% CO2) before labeling with the Fluo-3-AM probe.
  • Cells were washed, resuspended in RPMI with 2 mM CaCh, and kept at 4°C until activated.
  • Example 4 Effect on the size of the clusters promoted by CXCL12 (MSI) and the mobility of the receptors (D1/4) in the cell membrane, measured by TIRE analysis
  • TIRF total internal reflection fluorescence
  • Leica AM TIRF inverted equipped with an EM-CCD camera
  • Andor DU 885-CS0-#10-VP a 100x oil immersion objective ( HCX PLAPO 100x/1.46 NA) and a 488 nm diode laser.
  • the microscope was equipped with incubation units and temperature control; experiments were performed at 37°C with 5% CO2.
  • Jurkat cells (ATCC) transfected in the laboratory with the CXCR4 receptor coupled to the Ac-GFP monomeric fluorescent protein were used.
  • Single particle imaging sequences 500 frames) were acquired at 49% laser power with frame rate of 10 Hz (100 ms/frame). The penetration depth of the evanescent field was 90 nm.
  • Particles were detected and tracked using previously described algorithms (U-Track2; Jaqaman et al, Robust single-particle tracking in live-cell time-lapse sequences. Nat Methods 2008, 5, 695-702.) implemented in MATLAB. Particle pixel positions and intensities were calculated by detecting significant local intensity maxima that depend on image contrast and noise in the images.
  • the Moment Scale Spectrum was used (Ewers et al., Single-particle tracking of murine polyoma virus-like particles on live cells and artificial membranes. Proc Natl Acad Sci USA 2005, 102, 15110-15115). Based on this analysis, trajectories of more than 50 frames could be classified as confined, Brownian, or directed, depending on the value of their first moment. Trajectories with a first moment between 2.5% and 97.5% of the distribution obtained from the simulations were considered Brownian. Conversely, trajectories whose first moment value was less than 2.5% (greater than 97.5%) of the distribution obtained in the simulations were classified as confined (directed).
  • the estimation of the stoichiometry of the particles from the intensity of the individual trajectories was determined by additional routines in MATLAB (Sorzano et al. Image Processing Protocol for the Analysis of the Diffusion and Cluster Size of Membrane Receptors by Fluorescence Microscopy. J Vis Exp. 2019 Apr 9;(146)).
  • the intensity value of each particle is given by the difference between the intensity of the particle and the background in each frame.
  • the total number of receptors/particles was finally estimated by dividing the average intensity of the particles by the intensity of the particles from individual AcGFP molecules.
  • Jurkat CD4* cells electroporated with the monomeric CD86-AcGFP were used as calibration.
  • these compounds are candidates for blocking the movement of tumor cells and therefore slowing down the development of metastases that are generated during tumor processes.
  • CXCR4 blockade has been shown to be effective in preventing HIV-1 infection of target cells.
  • the inhibition of CXCR4-mediated function induced by these compounds places them as interesting candidates for blocking the interaction between HIV-1 and the CXCR4 receptor present on the cell surface and therefore for preventing infection.
  • the CXCR4/CXCL12 axis has been shown to be of great importance for the development of rheumatoid arthritis, promoting cell movement and accumulation of disease-causing cells. Blocking cell movement using the compounds described here has great potential to reduce the symptoms caused by this disease.

Abstract

La presente invención se refiere a nuevos compuestos de fórmula (I) que actúan como ligandos del receptor CXCR4. La presente invención también se refiere a su uso para el tratamiento y/o prevención de enfermedades mediadas por dicho receptor, como son el cáncer, infección por VIH o la artritis reumatoide.

Description

DESCRIPCIÓN
Compuestos ligandos del receptor CXCR4 y uso de los mismos
La presente invención se refiere a nuevos compuestos que actúan como ligandos del receptor CXCR4, así como a su uso para el tratamiento de enfermedades mediadas por dicho receptor, como son el cáncer, infección por VIH o la artritis reumatoide.
La presente invención se encuadra, por tanto, en el campo de la medicina.
ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN
El receptor CXCR4 es una proteína que se encuentra en la membrana celular y que interviene en el desarrollo de ciertas enfermedades. En particular, el receptor CXCR4 se une a la citoquina CXCL12, cuyos niveles elevados están asociados a inflamaciones difícilmente tratables y a la metástasis tumoral. Por otra parte, el virus VIH, causante del síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA), necesita unirse al receptor CXCR4 para infectar la célula (Choi WT, Yang Y, Xu Y, An J. Targeting chemokine receptor CXCR4 for treatment of HIV-1 infection, tumor progression, and metastasis. Curr Top Med Chem. 2014;14(13):1574-89). Este receptor CXCR4 también está implicado en enfermedades autoinmunes, como la esclerosis múltiple (Eva M. García-Cuesta et al. The Role of the CXCL12/CXCR4/ACKR3 Axis in Autoimmune Diseases. Front Endocrinol (Lausanne) 2019; 10: 585) estando involucrado en procesos de remielinización (Kevin S. Carvajal et al. XCR4 Signaling Regulates Remyelination by Endogenous Oligodendrocyte Progenitor Cells in a Viral Model of Demyelination. Glia. 2011 Dec; 59(12): 1813-1821).
En el estado de la técnica se conocen algunos compuestos que actúan sobre el receptor CXCR4, tales como los divulgados en el documento ES2370986 (B1) en el que se reivindica su uso para el tratamiento del Síndrome de Inmunodeficiencia Adquirida (SIDA).
El documento US2014303170 (A1) describe compuestos que modulan la actividad de CXCR4 y que pueden usarse para el tratamiento de enfermedades en las que dicho receptor está involucrado, como es el caso del cáncer.
A fin de proporcionar nuevas terapias útiles para el tratamiento de enfermedades mediadas por el receptor CXCR4, la presente invención propone nuevos compuestos que actúan como ligandos del mismo de manera que inhiben su actividad; de esta forma los compuestos de la invención pueden utilizarse para el tratamiento y/o prevención de enfermedades en las que el receptor CXCR4 desempeña un papel importante.
DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN
Los inventores de la presente invención han demostrado que los compuestos aquí descritos se unen al receptor CXCR4 (son ligandos del receptor CXCR4), de manera que inhiben su actividad en el desarrollo de enfermedades mediadas por el mismo, como son el cáncer, la infección por VIH o la artritis reumatoide.
Asi, un primer aspecto de la presente invención se refiere a un compuesto de fórmula (I):
Figure imgf000003_0001
una sal farmacéuticamente aceptable, un isómero o un solvato del mismo, donde R1 es H y R2 es un grupo arilo o un alquilo C1-C4 o bien R1 y R2 forman un heterociclo de 4 a 6 eslabones con el N al que están unidos y donde dicho heterociclo comprende uno o varios heteroátomos, siendo todos ellos N.
El término "arilo" se refiere a un grupo de hidrocarburos aromáticos con un solo anillo (monocíclico) o múltiples anillos (bicíclico o policíclico), que pueden estar fusionados o unidos covalentemente. Ejemplos son: fenilo, naftilo, difenilo, indenilo, fenantrilo o antracilo.
Cuando R2 es arilo, éste está preferiblemente sustituido por un heterociclo conteniendo al menos un nitrógeno o por un amino -NR3Rb, donde Ra y Rb son cada uno independientemente un grupo alquilo C1-C4, o bien, Ra y Rb forman con el N un heterociclo.
De acuerdo a la presente invención, cuando se indica que “un grupo está sustituido” significa que al menos uno de los H de ese grupo está sustituido por un grupo distinto a H. El término “alquilo C1-C4” se refiere, en la presente invención, a radicales de cadenas hidrocarbonadas, lineales o ramificadas, que tienen de 1 a 4 átomos de carbono y que se unen al resto de la molécula mediante un enlace sencillo, por ejemplo, propilo, etilo, metilo, isopropilo, butilo, etc. Estos radicales alquilo pueden estar opcionalmente sustituidos por un heterociclo conteniendo al menos un nitrógeno o por un amino -NRaRb, donde Ra y Rb son cada uno independientemente un grupo alquilo C1-C4, o bien, Ra y Rb forman con el N un heterociclo.
En la presente invención, el término "heterociclo" se refiere a cadenas hidrocarbonadas cíclicas que tienen de 4 a 6 eslabones, preferiblemente 6, y que se unen al resto de la molécula mediante un enlace sencillo, en las que al menos un átomo de carbono de la cadena principal ha sido sustituido por O, N ó S. Pueden estar saturados o insaturados, aunque preferiblemente están saturados. $
En una realización preferida, R1 es H y R2 es un grupo fenilo.
En una realización más preferida, R1 es H y R2 es un grupo fenilo sustituido por un heterociclo de 4 a 6 eslabones, más preferiblemente por un heterociclo que comprende un átomo de O y uno de N y seis eslabones.
En otra realización preferida, R1 es H y R2 es un grupo fenilo sustituido por un grupo NR’R”. R' y R" son cada uno independientemente un grupo alquilo C1-C4, o bien, R’ y R” forman con el N un heterociclo de 4 a 6 eslabones, preferiblemente un heterociclo de seis eslabones y que contiene además un átomo de oxígeno.
En otra realización preferida, R1 es H y R2 es alquilo C1-C4; más preferiblemente R2 es alquilo C1-C4 sustituido por un heterociclo de 4 a 6 eslabones, más preferiblemente por un heterociclo que comprende un átomo de O y uno de N y seis eslabones.
En una realización más preferida, R1 es H y R2 es etilo; más preferiblemente, R2 es etilo sustituido por un heterociclo de 4 a 6 eslabones, más preferiblemente por un heterociclo que comprende un átomo de O y uno de N y seis eslabones.
En otra realización preferida, R1 y R2 forman un heterociclo, preferiblemente saturado, de seis eslabones con el N, donde dicho heterociclo comprende uno o dos átomos de N. En otra realización preferida, R1 y R2 forman un heterociclo de 4 a 6 eslabones con el N donde dicho heterociclo, comprendiendo 1 o 2 átomos de N, está sustituido por un arilo, preferiblemente fenilo. Dicho arilo está preferiblemente sustituido por uno o más grupos seleccionados de NO2, CF3 o combinaciones de los mismos.
En otra realización preferida, R1 y R2 forman un heterociclo de 6 eslabones con el N donde dicho heterociclo, comprendiendo 1 o 2 átomos de N, está sustituido por un grupo -COOR”’, siendo R’” un alquilo C1-C4, preferiblemente etilo.
Figure imgf000005_0002
De manera preferida, la invención se refiere a un compuesto de fórmula (I) seleccionado de ios siguientes:
Figure imgf000005_0001
Los compuestos de la presente invención pueden contener uno o más nitrógenos básicos y, por lo tanto, podrían formar sales con ácidos, tanto orgánicos como inorgánicos. Ejemplos de tales sales incluyen: sales con ácidos inorgánicos tales como ácido clorhídrico, ácido bromhidrico, ácido yodhídrico, ácido nítrico, ácido perclórico, ácido sulfúrico o ácido fosfórico; y sales con ácidos orgánicos tales como ácido metanosulfónico, ácido trifluorometano sulfónico, ácido etanosulfónico, ácido bencenosulfónico, ácido p-toluensulfónico, ácido fumárico, ácido oxálico , ácido acético, ácido maleico, ácido ascórbico, ácido cítrico, ácido láctico, ácido tartárico, ácido malónico, ácido glicólico, ácido succínico y ácido propiónico, entre otros. Algunos compuestos de la presente invención pueden contener uno o más protones ácidos y, por lo tanto, también pueden formar sales con bases. Ejemplos de tales sales incluyen: sales con cationes inorgánicos tales como sodio, potasio, calcio, magnesio, litio, aluminio, zinc, etc; y sales formadas con aminas farmacéuticamente aceptables tales como amoniaco, alquilaminas, hidroxialquilaminas, Usina, arginina, N-metilglucamina, procaina y similares.
No hay limitación sobre el tipo de sal que puede usarse, pero siempre y cuando se use para fines terapéuticos, tendrán que ser farmacéuticamente aceptables. Se entiende por sales farmacéuticamente aceptables aquellas sales que, según criterios médicos, son adecuadas para uso en contacto con tejidos de humanos u otros mamíferos sin causar indebida toxicidad, irritación, respuesta alérgica o similares. Las sales farmacéuticamente aceptables son ampliamente conocidas por los expertos en el tema.
Las sales de un compuesto de fórmula (I) se pueden obtener durante el aislamiento final y purificación de los compuestos de la invención o pueden prepararse por tratamiento de un compuesto de fórmula (I) con una cantidad suficiente del ácido o base deseado para dar la sal de una manera convencional. Las sales de los compuestos de fórmula (I) pueden a su vez ser transformados en otras sales de compuestos de fórmula (I) por intercambio iónico por un ion resina de intercambio.
Los compuestos de fórmula (I) y sus sales pueden diferir en ciertas propiedades físicas, pero son equivalentes a los efectos de la invención. Todas las sales de los compuestos de fórmula (I) están incluidos dentro del alcance de la invención.
Los compuestos de la presente invención pueden formar complejos con disolventes en los que se hacen reaccionar o con los cuales precipitan o cristalizan. Estos complejos son conocidos como solvatos. En este documento, el término solvato se refiere a un complejo de estequiometría variable formado por un compuesto de fórmula (I) o una sal del mismo (soluto) y un solvente. Ejemplos de disolventes incluyen disolventes farmacéuticamente aceptables como agua, etanol y similares. Un complejo con agua se conoce como hidrato. Los solvatos de los compuestos de la invención (o sus sales), incluidos los hidratos, están englobados dentro del alcance de la invención.
Debe entenderse que la presente invención abarca todos los isómeros de los compuestos de fórmula (I) , es decir, todas las formas geométricas, tautoméricas y ópticas, y sus mezclas (por ejemplo, mezclas racémicas). Cuando hay más centros quirales en los compuestos de fórmula (I), la presente invención incluye, dentro de su alcance, todas los posibles diastereómeros, incluidas sus mezclas. Las diferentes formas isoméricas pueden ser separadas o resueltas entre ellas utilizando métodos convencionales o se puede obtener cualquier isómero utilizando métodos sintéticos convencionales o p poorr medio de síntesis estereoespecífica, estereoselectiva o asimétrica.
Los compuestos de fórmula (I) pueden existir en diferentes formas físicas, es decir, en formas amorfas y cristalinas. Además, los compuestos de la presente invención pueden tener la capacidad de cristalizar a partir de más de una forma, una característica que se conoce como polimorfismo. Los polimorfos pueden diferenciarse por diversas propiedades físicas bien conocidas por los expertos en la técnica, tales como difractogramas de rayos X, puntos de fusión o solubilidad. Todas las formas físicas de los compuestos de fórmula (I), incluidas todas sus formas polimórficas ("polimorfos") se incluyen dentro del alcance de la presente invención.
A menos que se indique lo contrario, los compuestos de la invención también incluyen compuestos que solo difieren en la presencia de uno o más átomos enriquecidos isotópicamente. Por ejemplo, compuestos que tienen dicha estructura, excepto la sustitución de un hidrógeno por un deuterio o tritio, o la sustitución de un carbono por un carbono enriquecido en 13C o 14C o un nitrógeno enriquecido en 15N, están dentro del alcance de esta invención.
Un segundo aspecto de la invención, se refiere al procedimiento de preparación de los compuestos de fórmula (I) de la presente invención. El procedimiento comprende la reacción del ácido 4-((4-(4-(hidroximetil)fen¡l)-1H-1 ,2,3-tr¡azol-1-il)metil)benzoico (II) con una amina Ri- NH- R2 (III), (R1 y R2 como se han definido anteriormente) en dimetilformamida (DMF) como disolvente y en presencia de 4-dimetilaminopiridina (DMAP) e hidrocloruro de A/-(3- dimetilaminopropil)-/V-etilcarbodiimida (EDC HCI) a temperatura ambiente (entre 18 y 25°C), tal y como se muestra en el siguiente esquema:
Figure imgf000008_0001
En una realización preferida, la reacción se lleva a cabo durante un tiempo entre 24 y 72h, más preferiblemente durante 48h.
En una realización preferida, se utiliza un mol del ácido 4-((4-(4-(hidroxímetil)fenil)-1 H-1 ,2,3- triazol-1-il)metil)benzoico (II) por mol de amina RrNH-R2 (HI).
En una realización preferida, se utiliza el doble de moles de 4-dimetilaminopiridina (DMAP) que del ácido 4-((4-(4-(hidroximetil)fenil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)metil)benzoico (II).
En una realización preferida, se utilizan 1,2 moles de EDC HCL por cada mol de ácido 4-((4- (4-(hidroximetil)fenil)~1 H-1,2,3-triazol~1-il)metil)benzoico (II) utilizado.
El compuesto de fórmula (II) se prepara por reacción del ácido 4-(azidometil)benzoico y (4- etinilfenil)metanol en relación molar 1 :1, en presencia de sulfato de cobre pentahidratado y ascorbato de sodio a temperatura ambiente (entre 18 y 25°C).
En una realización preferida, la reacción tiene lugar durante 24 h.
El disolvente de reacción es preferiblemente DMF.
Preferiblemente, la cantidad de sulfato de cobre pentahidratado es 0,1 mol % con respecto a los moles de ácido 4-(azidometil)benzoico o (4-etinilfenil)metanol y los moles de ascorbato de sodio son el doble que los de sulfato de cobre pentahidratado.
La síntesis del compuesto (II) se representa en el siguiente esquema:
Figure imgf000009_0001
Otro aspecto de la invención se refiere al compuesto de fórmula (I), una sal farmacéuticamente aceptable, un isómero o un solvato del mismo, para su uso como medicamento.
La presente invención también se refiere al uso de un compuesto de fórmula (I), una sal farmacéuticamente aceptable, un isómero o un solvato del mismo para la fabricación de un medicamento.
Otro aspecto de la invención se refiere al compuesto de fórmula (I), una sal farmacéuticamente aceptable, un isómero o un solvato del mismo para uso en el tratamiento y/o prevención de enfermedades mediadas por el receptor CXCR4, preferiblemente seleccionadas del grupo que comprende cáncer, la infección por VIH y la artritis reumatoide.
La presente invención también se refiere al uso de un compuesto de fórmula (I), una sal farmacéuticamente aceptable, un isómero o un solvato del mismo para la fabricación de un medicamento para el tratamiento y/o prevención de enfermedades mediadas por el receptor CXCR4, preferiblemente seleccionadas del grupo que comprende cáncer, la infección por VIH y la artritis reumatoide.
En una realización preferida, la enfermedad es cáncer y, más preferiblemente, la metástasis tumoral.
En otra realización preferida, la enfermedad es la infección causada por VIH y, más preferiblemente, el SIDA. En una realización preferida, el compuesto de fórmula (I), una sal farmacéuticamente aceptable, un isómero o un solvato del mismo, se administra por vía digestiva o enteral, parenteral, respiratoria, tópica o transdérmica. Preferiblemente la administración es digestiva o enteral, más preferiblemente oral.
La dosis y la frecuencia de las dosis variarán según la naturaleza y la gravedad de la enfermedad a tratar, la edad, el estado general y el peso del paciente, así como el compuesto particular administrado y la vía de administración, entre otros factores.
La expresión “tratamiento o prevención” tal y como se usa aquí, a menos que se indique lo contrario, significa revertir, aliviar, inhibir el progreso de, o prevenir el trastorno o afección al que se aplica en tales términos, uno o más síntomas de tal trastorno o afección.
Para su aplicación terapéutica, los compuestos de fórmula (I), los isómeros, sales o solvatos de los mismos, estarán en una farmacéuticamente aceptable o sustancialmente forma pura, es decir, con un grado de pureza farmacéuticamente aceptable, excluyendo aditivos farmacéuticos habituales, como diluyentes y vehículos, sin incluir material considerado tóxico a dosis normales. Los niveles de pureza para el ingrediente activo son preferiblemente mayores que 50%, más preferiblemente, mayores que 70%, más preferiblemente, superior al 90%. En una realización preferida, son más del 95% de los compuestos de fórmula (I) o de sus sales, solvatos o isómeros.
Otro aspecto de la presente invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula (I) junto con un vehículo o excipiente farmacéuticamente aceptable.
La composición debe comprender la cantidad terapéuticamente efectiva del compuesto de fórmula (I) a administrar y dependerá, entre otros factores, del individuo que vaya a ser tratado, de la severidad de la enfermedad que padezca dicho individuo, de la forma de administración elegida, etc.
La expresión “excipientes, adyuvantes y/o vehículos” se refiere a entidades moleculares o sustancias con las que se administra el ingrediente activo. Tales excipientes, adyuvantes o vehículos farmacéuticos pueden ser líquidos estériles, tales como aguas y aceites, incluyendo aquellas de petróleo o de origen animal, vegetal o sintético, tales como aceite de cacahuete, aceite de soja, aceite mineral, aceite de sésamo y similares, excipientes, disgregantes, agentes humectantes o diluyentes
Otro aspecto de la invención se refiere a la composición farmacéutica definida en el anterior aspecto de la invención para su uso en el tratamiento y/o prevención de enfermedades mediadas por el receptor CXCR4, preferiblemente seleccionadas del grupo que comprende cáncer, la infección por VIH y la artritis reumatoide.
Otro aspecto de la invención se refiere a un método para el tratamiento y/o prevención de enfermedades mediadas por el receptor CXCR4 en un sujeto, preferiblemente seleccionadas del grupo que comprende cáncer, la infección por VIH y la artritis reumatoide, que comprende la administración a dicho sujeto de la cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de fórmula (I), como se ha definido anteriormente.
Un último aspecto de la invención se refiere al uso de un compuesto de fórmula (I) para la preparación de un medicamento para el tratamiento y/o prevención de enfermedades mediadas por el receptor CXCR4, preferiblemente seleccionadas del grupo que comprende cáncer, la infección por VIH y la artritis reumatoide.
A lo largo de la descripción y las reivindicaciones la palabra "comprende" y sus variantes no pretenden excluir otras características técnicas, aditivos, componentes o pasos. Para los expertos en la materia, otros objetos, ventajas y características de la invención se desprenderán en parte de la descripción y en parte de la práctica de la invención. Los siguientes ejemplos se proporcionan a modo de ilustración, y no se pretende que sean limitativos de la presente invención.
EJEMPLOS
A continuación, se ilustrará la invención mediante unos ensayos realizados por los inventores, que pone de manifiesto la efectividad del producto de la invención.
Ejemplo 1 : Síntesis y caracterización de compuestos de la presente invención. 1.1. Síntesis de ácido 4-((4-(4-(hidroximetíi)fenil)-1H-1,,2,3-triazol-1-il)metil)benzoico
Se adiciona en un matraz de fondo redondo ácido 4-(azidometil)benzoico (265 mg, 1 ,5 mmol, Chiralix) y (4-etinilfenil)metanol (198 mg, 1 ,5 mmol, Sigma Aldrich), A continuación, se disuelven en 8 mL de DMF (Sigma Aldrich) y se añaden sucesivamente sulfato de cobre pentahidratado (37,5 mg, 0,15 mmol, Sigma Aldrich) y ascorbato de sodio (59,5 mg, 0,3 mmol, Sigma Aldrich). La mezcla resultante se deja agitando a temperatura ambiente (18-25°C) durante 24 horas. A continuación, se adiciona H2O (30 mi) y se agita durante 0,5 h. Se filtra el sólido blanco resultante, se lava con agua y se seca a vacío, obteniéndose el ácido triazolil- benzoico como un sólido blanco (69 % de rendimiento). Pf: 232 - 234 °C.
1H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 6 8,65 (s, 1 H), 7,98 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,83 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 7,46 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,40 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 5,76 (s, 2H), 4,54 (s, 2H), 13C NMR (75 MHz, DMSO) 5 166,93, 146,73, 142,31 , 140,65, 129,78, 129,01 , 127,90, 126,89, 124,94, 121 ,51 , 62,64, 52,58,
La síntesis del triazol benzoico (II) se describe en el siguiente esquema:
Figure imgf000012_0001
1.2. Síntesis de compuestos de fórmula (I)
Sobre una disolución de ácido 4-((4-(4-(h¡droximetil)fenil)-1 H-1,2,3-triazol-1-il)metil)benzoico (II, 123 mg, 0,4 mmol) en 4 mL de DMF (Sigma Aldrich) se añade DMAP (97 mg, 0,8 mmol, Sigma Aldrich) y EDC HCI (92 mg, 0,48 mmol, Sigma Aldrich) y se agita durante 15 min a temperatura ambiente. Posteriormente se adiciona la amina correspondiente (III, 0,4 mmol) y se agita a temperatura ambiente (18-25°C) durante 48 h. A continuación, se adiciona H2O (10 mi) y se extrae con DCM (25 mL x 3). La fase orgánica se seca sobre MgSO», se filtra y se evapora a presión reducida. El crudo obtenido se purifica mediante cromatografía en columna eluyendo con la mezcla de disolventes DCM - MeOH (desde 99:1 hasta 90:10).
La síntesis de los compuestos se representa en el esquema siguiente:
Figure imgf000013_0001
Compuesto 1: 4-((4-(4-(Hidroximetil)fenil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)metil)-/V-(4-morfolino- fenil)benzamida
Figure imgf000013_0002
Se utilizó 4-morfolinofenilamina (71 mg, 0,4 mmol, Sigma Aldrich), obteniéndose tras la purificación en columna el correspondiente triazol como un sólido blanco (44% de rendimiento). Pf: 250 - 252 °C.
1H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 0 10,08 (s, 1H), 8,65 (s, 1H), 7,95 (d, 7,9 Hz, 2H), 7,82 (d,
J = 8,0 Hz, 2H), 7,62 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,48 (d, J= 8,0 Hz, 2H), 7,39 (d, J = 7,9 Hz, 2H), 6,93 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 5,74 (s, 2H), 5,23 (t, J = 5,7 Hz, 1 H), 4,53 (d, J = 5,7 Hz, 2H), 3,73 (dd, J = 6,0, 3,5 Hz, 4H), 3,06 (t, J= 4,8 Hz, 4H),13C NMR (75 MHz, DMSO) 6 164,85, 147,90, 147,09, 142,68, 139,45, 135,29, 131,55, 129,38, 128,39, 128,19, 127,27, 125,29, 121,81, 115,56, 66,46, 62,99, 52,99, 49,18.
HRMS (ESH) m/z Calc. 437,1563 [C27H27N5O3 + H] +. Encontrada: 437,1576 [M+H]+,
Compuesto 2: (4-((4~(4~(Hidroximetil)fenn)-1H-1,2,3-triazol-1-il)metil)fenil)(4-(2-nitro~4~
(trifluorometil)fenil) piperazm-1 -il)metanona
Figure imgf000014_0001
Se utilizó (2-n!tro-4-(trifluorometil)feníl)piperazina (110 mg, 0,4 mmol, Sigma Aldrich), obteniéndose tras la purificación en columna el correspondiente triazol como un sólido amarillo (37% de rendimiento). Pf: 184 - 186 °C.
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) 6 8,65 (s, 1 H), 8,19 (d, J = 2,3 Hz, 1 H), 7,89 (dd, J = 8,9, 2,3 Hz, 1 H), 7,81 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,53 - 7,35 (m, 7H), 5,71 (s, 2H), 5,23 (t, J = 5,7 Hz, 1 H), 4,52 (d, J = 5,4 Hz, 2H), 3,73 (s, 2H), 3,48 (s, 2H), 3,21 (s, 4H), 13C NMR (75 MHz, DMSO) 6 169,12, 147,70, 147,08, 142,67, 140,04, 137,84, 135,74, 130,59, 130,54, 129,38, 128,27, 128,00, 127,25, 125,65, 125,29, 124,12, 124,07, 122,06, 121 ,92, 121 ,82, 120,57, 120,12, 62,99, 62,87, 52,97, 50,33, 47,01.
HRMS (ESI+) m/z Cale. 437,1563 [C28H25FN6O4 + H] +. Encontrada: 437,1576 [M+H]+.
Compuesto 3: 4-(4-((4-(4-(Hidroximetil)fenil)-1H-1,2,3-tnazol-1-il)metil)benzoil) piperidina-1-carboxilato de etilo
Figure imgf000014_0002
Se utilizó piperadina-4-carboxilato de etilo (63 mg, 0,4 mmol, Sigma Aidrich), obteniéndose tras la purificación en columna el correspondiente triazol como un sólido blanco (30% de rendimiento), Pf: 119 ™ 121 °C,
1H NMR (300 MHz, Methanol-d4) 5 8,40 (s, 1 H), 7,89 - 7,74 (m, 2H), 7,56 - 7,31 (m, 6H), 5,73 (s, 2H), 4,66 (s, 2H), 4,48 (d, J = 13,2 Hz, 1 H), 4,16 (q, J = 7,1 Hz, 2H), 3,69 (d, J = 13,0 Hz, 1 H), 3,24 - 2,96 (m, 2H), 2,78 - 2,52 (m, 1 H), 2,15 - 1 ,52 (m, 4H), 1 ,27 (t, J = 7,1 Hz, 3H), 13C NMR (75 MHz, MeOD) 6 175,82, 171 ,87, 149,21 , 143,15, 138,81 , 137,25, 130,56, 129,43, 128,59, 128,56, 126,71 , 122,39, 64,88, 61 ,79, 54,58, 42,65, 41 ,96, 29,67, 28,96, 14,51. HRMS (ESI+) m/z Cale. 437,1563 [C25H28N4O4 + H] +. Encontrada: 437,1576 [M+H]+. Compuesto 44:: (4-((4-(4-(hidroximetn)fenil)-1 H-1,2,3-triazol-1-il)met!l)fenil)(4-fenH- piperazm-1-il) metanona
Figure imgf000015_0001
Se utilizó 4-fenilpiperazina (65 mg, 0,4 mmol, Sigma Aldrich), obteniéndose tras la purificación en columna el correspondiente triazol como un sólido blanco (38% de rendimiento). Pf: 159 - 161 °C.
1H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 6 8,66 (s, 1 H), 7,82 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,56 - 7,31 (m, 7H),
7.22 (dd, J = 8,5, 7,1 Hz, 2H), 6,94 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 6,81 (t, J = 7,2 Hz, 1 H), 5,71 (s, 2H),
5.23 (t, J = 5,7 Hz, 1 H), 4,52 (d, 5,6 Hz, 2H), 3,74 (s, 2H), 3,44 (s, 2H), 3,15 (d, J = 19,3
Hz, 4H), 13C NMR (75 MHz, DMSO) 6 168,90, 151 ,08, 147,09, 142,68, 137,74, 135,96, 129,38, 129,34, 128,28, 127,89, 127,26, 125,29, 121 ,84, 119,75, 116,27, 62,99, 52,98, 48,86, 47,18. HRMS (ESI+) m/z Cale. 437,1563 [C27H27N5O2 + H] +. Encontrada: 437,1576 [M+H]+-
Compuesto 5: 4-((4~(4~(h!drox!metil)fenH)~1 H-1,2,3-triazol-1-il)metn)~N~(2~morfolinoet!l) benzamida
Figure imgf000015_0002
Se utilizó 2-morfolinoetanamina (53 pL, 0,4 mmol, Sigma Aldrich), obteniéndose tras la purificación en columna el correspondiente triazol como un sólido blanco (31 % de rendimiento). Pf: 159 ™ 161 °C.
1H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 5 8,62 (s, 1 H), 8,43 (t, J = 5,7 Hz, 1 H), 7,85 - 7,75 (m, 4H), 7,45 - 7,35 (m, 4H), 5,70 (s, 2H), 5,23 (t, J = 5,7 Hz, 1 H), 4,52 (d, J = 5,3 Hz, 2H), 3,56 (t, J = 4,6 Hz, 4H), 3,37 (d, 6,9 Hz, 2H), 2,47 - 2,37 (m, 6H),13C NMR (75 MHz, DMSO) 6 166,00, 147,06, 142,67, 139,21 , 134,70, 129,37, 128,14, 127,98, 127,26, 125,28, 121 ,79, 66,53, 62,98, 57,67, 53,63, 52,96, 36,91.
HRMS (ESP) m/z Cale. 437,1563 [C23H27N5O3 + H] +. Encontrada: 437,1576 [M+H]+.
Ejemplo 2: Medida de la migración celular en insertos permeables (Transwells)
Se empleó la línea celular Jurkat (American Type Culture Collection (ATCC), CRL-10915), linfocitos T humanos que expresan el receptor CXCR4. Las células [ (3 x 105 células en 0,1 mi de medio RPMI 1640 con 0,1% de albúmina sérica bovina (BSA) y 10 mM de ácido 4-(2- hidroxietil)piperazin-1-iletanosulfónico (HEPES)j se colocaron en el pocilio superior de cámaras de transmigración de 24 pocilios sin recubrimiento (Transwell de 5 p.M de tamaño de poro, Costar, Cambridge, MA). En el pocilio inferior se añadió CXCL12 (20 nM) en 0,6 mi de RPMI con 0,1 % de BSA y 10 mM de HEPES. Cuando fue necesario, las células fueron tratadas con dimetilsulfoxido (DMSO, control) o los compuestos a analizar (30 min, 37°C, 5% CO2) antes de añadirlas al pocilio superior de la cámara de migración. Las placas se incubaron (120 min, 37°C, 5% CO2) y las células que migraron a la cámara inferior se contaron en un citómetro de flujo. La migración celular se expresa como el porcentaje de células migradas con respecto al número total de células añadidas al pocilio superior.
Ejemplo 3: Determinación de la movilización de calcio inducida por CXCL12
Las células Jurkat y los linfocitos T primarios CD4+ naive (procedentes del Centro de Transfusiones de la Comunidad Autónoma de Madrid) fueron resuspendidos en RPMI 1640 con 10% de suero de ternera fetal (FCS) (2 x 10® células/ml) e incubados con la sonda fluorescente Fluo-3AM (Invitrogen, Molecular Probes; 0,28 pig/pl en DMSO, 16 p.l/106 células; 30 min, 37°C). Cuando fue necesario, las células fueron tratadas con DMSO (control), o los compuestos a analizar (1 h, 37°C, 5% CO2) antes de marcarlas con la sonda Fluo-3-AM. Las células se lavaron, se resuspendieron en RPMI con 2 mM de CaCh y se mantuvieron a 4°C hasta su activación. El flujo de Ca2+ en respuesta a diferentes concentraciones de CXCL12 (10-50 nM, 37°C) se midió a 525 nm en un citómetro de flujo EPICS XL (Beckman Coulter).
Los datos, analizados con FlowJo 8.2 (Intel), se expresan como porcentaje de la señal máxima (100%).
Ejemplo 4: Efecto sobre el tamaño de los clusters promovidos por CXCL12 (MSI) y la movilidad de los receptores (D1/4) en la membrana celular, medidos por análisis TIRE Los experimentos se realizaron utilizando un microscopio de fluorescencia de reflexión interna total (TIRF) (Leica AM TIRF invertido) equipado con una cámara EM-CCD (Andor DU 885- CS0-#10-VP): un objetivo de inmersión en aceite 100x (HCX PLAPO 100x/1,46 NA) y un láser de diodo de 488 nm. El microscopio estaba equipado con unidades de incubación y control de temperatura; los experimentos se realizaron a 37°C con un 5% de CO2. Se utilizaron células Jurkat (ATCC) transfectadas en el laboratorio con el receptor CXCR4 acoplado a la proteína fluorescente monomérica Ac-GFP, Se adquirieron secuencias de imágenes de partículas individuales (500 fotogramas) a una potencia de láser del 49% con una frecuencia de fotogramas de 10 Hz (100 ms/fotograma). La profundidad de penetración del campo evanescente fue de 90 nm.
Las partículas se detectaron y rastrearon utilizando algoritmos previamente descritos (U- Track2; Jaqaman et aL, Robust single-particle tracking in live-cell time-lapse sequences. Nat Methods 2008, 5, 695-702.) implementados en MATLAB. Las posiciones e intensidades de los píxeles de las partículas se calcularon detectando los máximos de intensidad locales significativos que dependen del contraste de la imagen y del ruido en las imágenes.
Para determinar el coeficiente de difusión mínimo detectable en las condiciones experimentales, se utilizaron tanto proteínas monoméricas AcGFP purificadas e inmovilizadas en cubreobjetos de vidrio como células Jurkat CD4+ (cedidas por el Dr, J, Alcamí (Centro Nacional de Microbiología, Inst Salud Carlos III, Madrid, Spain) fijadas y electroporadas con CXCR4-AcGFP (JKCD4). Las células se sembraron en cubreobjetos de vidrio (30 min) y se fijaron con PFA al 4% (20 min). Como el 95% de la proteína monomérica AcGFP inmóvil o de las células JKCD4 fijadas mostraron un coeficiente de difusión de 0,0015 lum2.s "1, este valor se fijó como umbral para discriminar entre trayectorias inmóviles y móviles.
Para clasificar ei tipo de movimiento exhibido por las trayectorias individuales, se utilizó el espectro de escala de momentos (MSS) (Ewers et al., Single-particle tracking of murine polyoma virus-like particles on live cells and artificial membranes. Proc Natl Acad Sci U S A 2005, 102, 15110-15115). Según este análisis, las trayectorias de más de 50 fotogramas podían clasificarse como confinadas, brownianas o dirigidas, en función del valor de su primer momento. Las trayectorias con un primer momento entre el 2,5% y el 97,5% de la distribución obtenida de las simulaciones se consideraron brownianas. Por el contrario, las trayectorias cuyo valor del primer momento era inferior al 2,5% (superior al 97,5%) de la distribución obtenida en las simulaciones se clasificaron como confinadas (dirigidas). La estimación de la estequiometría de las partículas a partir de la intensidad de las trayectorias individuales se determinó mediante rutinas adicionales en MATLAB (Sorzano el al. Image Processing Protocol for the Analysis of the Diffusion and Cluster Size of Membrane Receptors by Fluorescence Microscopy. J Vis Exp. 2019 Apr 9;(146)). El valor de la intensidad de cada partícula viene dado por la diferencia entre la intensidad de la partícula y el fondo en cada fotograma. El número total de receptores/partículas se estimó finalmente dividiendo la intensidad media de las partículas por la intensidad de las partículas procedentes de moléculas individuales de AcGFP. Para identificar inequívocamente la intensidad emitida por una AcGFP individual, se utilizaron como calibración células Jurkat CD4* electroporadas con la CD86-AcGFP monomérica. Se realizaron experimentos SPT con CD86-AcGFP y se analizaron los datos de forma similar a la descrita anteriormente. La distribución de las intensidades de las partículas monoméricas se analizó mediante un ajuste gaussiano que arrojó un valor medio de 1336 ± 156 u.a. Este valor se utilizó entonces como referencia de monómero para estimar el tamaño de las partículas de CXCR4-AcGFP. Todos los experimentos TIRF se repitieron independientemente al menos tres veces, con un mínimo de 8-25 células en cada experimento.
Tabla 1. Resultados biológicos para los compuestos de la invención
Figure imgf000018_0001
Figure imgf000019_0001
Conclusiones
A la vista de los resultados de la tabla, puede concluirse que estos compuestos inhiben la migración inducida por CXCL12, con respuesta funcional en algún modelo celular y por tanto pueden ser candidatos a fármacos donde el eje CXCR4/CXCL12 esté involucrado.
Al inhibir la migración celular estos compuestos son candidatos a bloquear el movimiento de células tumorales y por lo tanto a frenar el desarrollo de metástasis que se generan durante los procesos tumorales.
El bloqueo del CXCR4 se ha demostrado efectivo para impedir la infección del VIH-1 de células diana. La inhibición de la función mediada por CXCR4 que inducen estos compuestos les sitúa como candidatos de interés para el bloqueo de la interacción entre el VIH-1 y el receptor CXCR4 presente en la superficie celular y por tanto para impedir la infección.
El eje CXCR4/CXCL12 se ha demostrado de gran importancia para el desarrollo de artritis reumatoide, promoviendo el movimiento celular y la acumulación de células que causan la enfermedad. El bloqueo del movimiento celular utilizando los compuestos aquí descritos tiene un gran potencial para disminuir los síntomas causados por esta enfermedad.

Claims

REIVINDICACIONES
1. Compuesto de fórmula (I):
Figure imgf000020_0001
una sal farmacéuticamente aceptable, un isómero o un solvato del mismo, donde R1 es H y R2 es un grupo arilo o un alquilo C1-C4, o bien, R1 y R2 forman un heterociclo de 4 a 6 eslabones con el N al que están unidos y donde dicho heterociclo comprende uno o varios heteroátomos, siendo todos ellos N.
2. Compuesto, según reivindicación 1 , donde R1 es H y R2 es un grupo fenilo.
3. Compuesto, según reivindicación 1 o 2, donde R1 es H y R2 es un grupo fenilo sustituido por un heterociclo de 4 a 6 eslabones.
4. Compuesto, según reivindicación 1, donde R1 es H y R2 es etilo.
5. Compuesto, según reivindicación 4, donde R ¡ es H y R2 es etilo sustituido por un heterociclo de 4 a 6 eslabones.
6. Compuesto, según reivindicación 1, donde R1 y R2 forman un heterociclo de seis eslabones con el N, donde dicho heterociclo comprende uno o dos átomos de N.
7. Compuesto, según reivindicación 6, donde el heterociclo está sustituido por un grupo arilo.
8. Compuesto de acuerdo a la reivindicación 1 , en el que el compuesto se selecciona de:
Figure imgf000021_0001
9. Procedimiento para la preparación de un compuesto de fórmula (I) como se ha definido en cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que comprende la reacción del ácido 4-((4-(4- (hidroximetil)fenil)-1 H-1,2,3-triazol-1-il)metil)benzoico (II) con una amina R1-NH-R2 (III), en dimetilformamida (DMF) como disolvente y en presencia de 4-dimetilaminopiridina (DMAP) e hidrocloruro de /V-(3-dimetilaminopropil)-/V-etilcarbod¡imida (EDO- HCI) a temperatura entre 18 y 25° C, de acuerdo al siguiente esquema:
Figure imgf000021_0002
siendo R1 y R2 como se han definido en cualquiera de las reivindicaciones anteriores.
10. Procedimiento, según reivindicación 9, donde se utiliza un mol del ácido 4-((4-(4- (hidroximetil)fenil)-1 H-1 ,2,3-triazol-1-il)metil)benzoico (II) por mol de amina R1-NH-R2 (III).
11. Procedimiento, según reivindicación 9 o 10, donde se utiliza el doble de moles de 4- dimetilaminopiridina (DMAP) que del ácido 4-((4-(4-(hidroximetil)fenil)-1 H-1 ,2,3-triazol-1- il)metil)benzoico (II) y/o se utilizan 1 ,2 moles de EDC HCL por cada mol de ácido 4-((4-(4- (hidroximetil)fenil)-1 H-1 ,2,3-triazol-1-il)metil)benzoico (II) utilizado.
12. Procedimiento, según cualquiera de las reivindicaciones 9 a 11 , donde la reacción se lleva a cabo durante 48h.
13. Procedimiento, según cualquiera de las reivindicaciones 9 a 12, donde el compuesto de fórmula (II) se prepara por reacción del ácido 4-(azidometil)benzoico y (4-etinilfenil)metanol en relación molar 1 :1 en presencia de sulfato de cobre pentahidratado y ascorbato de sodio a temperatura entre 18 y 25°C.
14. Procedimiento, según reivindicación 13, donde la cantidad de sulfato de cobre pentahidratado es 0,1 mol % con respecto a los moles de ácido 4-(azidometil)benzoico o (4- etinilfenil)metanol y los moles de ascorbato de sodio son el doble que los de sulfato de cobre pentahidratado.
15. Compuesto de acuerdo a cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 para su uso como medicamento.
16. Compuesto de acuerdo a cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 para su uso en el tratamiento y/o prevención de enfermedades mediadas por el receptor CXCR4 seleccionadas del grupo que comprende cáncer, la infección por VIH y la artritis reumatoide.
17. Compuesto para uso, según reivindicación 16, donde la enfermedad es la metástasis tumoral.
18. Compuesto para uso, según reivindicación 16, donde la enfermedad es el SIDA.
19. Composición farmacéutica que comprende al menos un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8.
20. Composición farmacéutica según la reivindicación 19 para su uso en ei tratamiento y/o prevención de enfermedades mediadas por ei receptor CXCR4 seieccionadas dei grupo que comprende cáncer, la infección por VIH y la artritis reumatoide.
PCT/ES2022/070379 2021-06-25 2022-06-16 Compuestos ligandos del receptor cxcr4 y uso de los mismos WO2022269113A1 (es)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
ESP202130605 2021-06-25
ES202130605A ES2932099B2 (es) 2021-06-25 2021-06-25 Compuestos ligandos del receptor cxcr4 y uso de los mismos

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2022269113A1 true WO2022269113A1 (es) 2022-12-29

Family

ID=84545235

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/ES2022/070379 WO2022269113A1 (es) 2021-06-25 2022-06-16 Compuestos ligandos del receptor cxcr4 y uso de los mismos

Country Status (2)

Country Link
ES (1) ES2932099B2 (es)
WO (1) WO2022269113A1 (es)

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2011127333A2 (en) * 2010-04-09 2011-10-13 University Of Louisville Research Foundation, Inc. Compounds for treating disease, for administering, and for pharmaceutical compositions
WO2021090194A1 (en) * 2019-11-07 2021-05-14 Foundation For Neglected Disease Research Treatment of malaria using histone deacetylase (hdac) inhibitors

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2011127333A2 (en) * 2010-04-09 2011-10-13 University Of Louisville Research Foundation, Inc. Compounds for treating disease, for administering, and for pharmaceutical compositions
WO2021090194A1 (en) * 2019-11-07 2021-05-14 Foundation For Neglected Disease Research Treatment of malaria using histone deacetylase (hdac) inhibitors

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
DEBNATH, B. ET AL.: "Small Molecule Inhibitors or CXCR4", THERANOSTICS, vol. 3, no. 1, 15 January 2013 (2013-01-15), pages 47 - 75, XP055391478, ISSN: 1838-7640, Retrieved from the Internet <URL:https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3563081> [retrieved on 20220603], DOI: 10.7150/thno.5376 *
PENG DIAN, CAO BIN, ZHOU YING-JUN, LONG YA-QIU: "The chemical diversity and structure-based evolution of non-peptide CXCR4 antagonists with diverse therapeutic potential", EUROPEAN JOURNAL OF MEDICINAL CHEMISTRY, ELSEVIER, AMSTERDAM, NL, vol. 149, 1 April 2018 (2018-04-01), AMSTERDAM, NL , pages 148 - 169, XP093020112, ISSN: 0223-5234, DOI: 10.1016/j.ejmech.2018.02.043 *

Also Published As

Publication number Publication date
ES2932099B2 (es) 2023-09-22
ES2932099A1 (es) 2023-01-12

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU2018255621B2 (en) Apoptosis-inducing agents
DK3041828T3 (en) 1,3,4-OXADIAZOL AND 1,3,4-THIADIAZOLD DERIVATIVES AS IMMUNE MODULATORS
CN110114075B (zh) 含有二硫化物的细胞穿透肽及其制备和使用方法
WO2018127130A1 (en) Compounds as bcl-2-selective apoptosis-inducing agents
WO2017001853A1 (en) Antiviral compounds
BR112013029537B1 (pt) derivados de quinazolina, seu uso no tratamento de infecções virais e outras doenças e composição farmacêutica que os compreende
EA025106B1 (ru) Бициклические пиримидиновые соединения
BR112020017702A2 (pt) Derivados de 2,4-diaminoquinazolina e usos médicos dos mesmos
PT2344449E (pt) Compostos de aril-fenil-sulfonamido-cicloalquilo e sua utilização
WO2005111020A2 (en) Pyrimidine hydantoin analogues which inhibit leukocyte adhesion mediated by vla-4
JP2024020453A (ja) Ｒｏｃｋ阻害剤としての重水素化合物
US20040132786A1 (en) Differential tumor cytotoxicity compounds and compositions
US11168078B2 (en) Sulfoximine, sulfonimidamide, sulfondiimine and diimidosulfonamide compounds as inhibitors of indoleamine 2,3-dioxygenase
KR100267883B1 (ko) 티아졸린 유도체
RU2738837C2 (ru) Некоторые ингибиторы протеинкиназы
WO2022089463A1 (zh) Bcl-2蛋白凋亡诱导剂及应用
ES2932099B2 (es) Compuestos ligandos del receptor cxcr4 y uso de los mismos
JPH01501477A (ja) 抗葉酸剤
JP2017516829A (ja) ピリドピリミジンジオン誘導体
JP2019522651A (ja) タンパク質キナーゼ阻害剤としての置換されているピロロ［２，３−ｄ］ピリダジン−４−オン及びピラゾロ［３，４−ｄ］ピリダジン−４−オン
RU2782469C2 (ru) Апоптоз-индуцирующие агенты
PT1663960E (pt) Amidinas e os seus derivados e composições farmacêuticas que os contêm
CA3213395A1 (en) Compositions and methods for treating polycythemia
JP2012214416A (ja) 抗炎症性腸疾患剤
WO2024026262A1 (en) Substituted pyrazolyl-pyridinyl compounds as ligand directed degraders of irak3

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 22827733

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE