WO2022247757A1 - 氟取代的嘧啶并吡啶类化合物及其应用 - Google Patents

氟取代的嘧啶并吡啶类化合物及其应用 Download PDF

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WO2022247757A1
WO2022247757A1 PCT/CN2022/094274 CN2022094274W WO2022247757A1 WO 2022247757 A1 WO2022247757 A1 WO 2022247757A1 CN 2022094274 W CN2022094274 W CN 2022094274W WO 2022247757 A1 WO2022247757 A1 WO 2022247757A1
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WO
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compound
reaction
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pharmaceutically acceptable
enantiomer
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PCT/CN2022/094274
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吴成德
沈春莉
王廷
高娜
黎健
陈曙辉
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南京明德新药研发有限公司
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    • C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D471/04—Ortho-condensed systems

Definitions

  • the present invention relates to a class of fluorine-substituted pyrimidopyridine compounds and applications thereof, and specifically discloses compounds represented by formula (IV) and pharmaceutically acceptable salts thereof.
  • RAS protein is the product of RAS gene expression, which refers to a kind of closely related monomer globulin composed of 189 amino acids, with a molecular weight of 21KDa.
  • the active state of RAS protein has an important impact on cell growth, differentiation, cytoskeleton, protein transport and secretion.
  • the KRAS protein acts as a molecular switch to regulate the activation of downstream pro-proliferative effects by alternating between an inactive state bound by guanosine diphosphate (GDP) and an active state bound by guanosine triphosphate (GTP) protein.
  • GDP guanosine diphosphate
  • GTP guanosine triphosphate
  • KRAS protein will affect its interaction with GAP, which also affects its ability to hydrolyze GTP to GDP, making it always in an activated state.
  • the activated RAS protein continues to give downstream protein growth signals, which eventually leads to the continuous growth and differentiation of cells, and finally produces tumors.
  • RAS oncogene mutations are the most common activating mutations in human cancers, occurring in 30% of human tumors.
  • the RAS gene family contains three subtypes (KRAS, HRAS, and NRAS), 85% of RAS-driven cancers are caused by mutations in KRAS subtypes, which most commonly occur in solid tumors such as lung adenocarcinoma, pancreatic tube and colorectal cancer.
  • the present invention provides a compound represented by formula (IV), or a pharmaceutically acceptable salt thereof, or an enantiomer thereof, or a cis-trans isomer thereof,
  • L is selected from O, S and NH
  • R is selected from H, F, Cl, Br, I, CN, C 1-3 alkyl and C 1-3 alkoxy, and the C 1-3 alkyl and C 1-3 alkoxy are optionally replaced by 1, 2 or 3 R a substitutions;
  • R 2 is selected from C 6-10 aryl and 5-10 membered heteroaryl, said C 6-10 aryl and 5-10 membered heteroaryl are optionally substituted by 1, 2, 3 or 4 R b ;
  • Ring B selected from
  • R 3 , R 4 , R 5 , R 6 , R 7 , R 8 , R 9 , R 10 and R 11 are independently selected from H, F, Cl, Br, I and C 1-3 alkyl;
  • Ring A is selected from said optionally substituted by 1, 2 or 3 Rc ;
  • q, r and s are 1, 2 or 3;
  • n 0, 1 or 2;
  • u, w and v are 1 or 2;
  • Each R a is independently selected from F, Cl, Br and I;
  • Each R b is independently selected from F, Cl, Br, I, OH, NH 2 , CN, C 1-3 alkyl, C 1-3 alkoxy, C 2-4 alkenyl and C 2-4 alkyne
  • the C 1-3 alkyl, C 1-3 alkoxy, C 2-4 alkenyl and C 2-4 alkynyl are optionally substituted by 1, 2 or 3 R;
  • Each R c is independently selected from F, Cl, Br, I and CH 3 ;
  • Each R is independently selected from F, Cl, Br and I.
  • L is selected from O, S and NH
  • R is selected from H, F, Cl, Br, I and CN;
  • R2 is selected from
  • Ring B selected from
  • R 3 , R 4 , R 5 , R 6 , R 7 , R 8 , R 9 , R 10 and R 11 are independently selected from H, F, Cl, Br, I and C 1-3 alkyl;
  • Ring A is q is 1, 2 or 3;
  • Each R b is independently selected from F, Cl, Br, I, OH, NH 2 , CN, C 1-3 alkyl, C 1-3 alkoxy, C 2-4 alkenyl and C 2-4 alkyne
  • the C 1-3 alkyl, C 1-3 alkoxy, C 2-4 alkenyl and C 2-4 alkynyl are optionally substituted by 1, 2 or 3 R;
  • Each R is independently selected from F, Cl, Br and I.
  • the present invention provides a compound represented by formula (IV), or a pharmaceutically acceptable salt thereof, or an enantiomer thereof, or a cis-trans isomer thereof,
  • L is selected from O, S and NH
  • R is selected from H, F, Cl, Br, CN, C 1-3 alkyl and C 1-3 alkoxy, and the C 1-3 alkyl and C 1-3 alkoxy are optionally replaced by 1, 2 or 3 R a substitutions;
  • R 2 is selected from C 6-10 aryl and 5-10 membered heteroaryl, said C 6-10 aryl and 5-10 membered heteroaryl are optionally substituted by 1, 2 or 3 R b ;
  • Ring B selected from
  • R 3 , R 4 , R 5 , R 6 , R 7 , R 8 , R 9 , R 10 and R 11 are independently selected from H, F, Cl, Br, I and C 1-3 alkyl;
  • Ring A is selected from said optionally substituted by 1, 2 or 3 Rc ;
  • q, r and s are 1, 2 or 3;
  • n 0, 1 or 2;
  • u, w and v are 1 or 2;
  • Each Ra is independently selected from F, Cl and Br;
  • Each R b is independently selected from F, Cl, Br, I, OH, NH 2 , CN, C 1-3 alkyl, C 1-3 alkoxy, C 2-4 alkenyl and C 2-4 alkyne
  • the C 1-3 alkyl, C 1-3 alkoxy, C 2-4 alkenyl and C 2-4 alkynyl are optionally substituted by 1, 2 or 3 R;
  • Each R c is independently selected from F, Cl, Br, I and CH 3 ;
  • Each R is independently selected from F, Cl, Br and I.
  • R b are independently selected from F, OH, NH 2 , CH 3 , CF 3 , CH 2 CH 3 , OCH 3 and -C ⁇ CH, and other variables are as defined in the present invention.
  • R b are independently selected from F, OH, NH 2 , CH 3 , CF 3 , CH 2 CH 3 and -C ⁇ CH, and other variables are as defined in the present invention.
  • R 1 is selected from H, F, Cl, Br, CN, CH 3 and OCH 3 , and the CH 3 and OCH 3 are optionally substituted by 1, 2 or 3 R a , other Variables are as defined herein.
  • R 1 is selected from F, and other variables are as defined in the present invention.
  • R 3 , R 4 , R 5 , R 6 , R 7 , R 8 , R 9 , R 10 and R 11 are independently selected from H, F, Cl and CH 3 , and other Variables are as defined herein.
  • the above ring B is selected from Other variables are as defined herein.
  • the above ring A is selected from Other variables are as defined herein.
  • the present invention provides a compound represented by formula (I), or a pharmaceutically acceptable salt thereof, or an enantiomer thereof, or a cis-trans isomer thereof,
  • R is selected from H, F, Cl, Br, CN, C 1-3 alkyl and C 1-3 alkoxy, and the C 1-3 alkyl and C 1-3 alkoxy are optionally replaced by 1, 2 or 3 R a substitutions;
  • R 2 is selected from C 6-10 aryl and 5-10 membered heteroaryl, said C 6-10 aryl and 5-10 membered heteroaryl are optionally substituted by 1, 2 or 3 R b ;
  • R 3 , R 6 , R 7 , R 8 and R 9 are independently selected from H, F, Cl and C 1-3 alkyl;
  • R 4 and R 5 are independently selected from H, F, Cl and Br;
  • Ring A is selected from said optionally substituted by 1, 2 or 3 Rc ;
  • q, r and s are 1, 2 or 3;
  • n 0, 1 or 2;
  • u, w and v are 1 or 2;
  • Each Ra is independently selected from F, Cl and Br;
  • Each R b is independently selected from F, Cl, Br, I, OH, NH 2 , CN, C 1-3 alkyl, C 1-3 alkoxy, C 2-4 alkenyl and C 2-4 alkyne
  • the C 1-3 alkyl, C 1-3 alkoxy, C 2-4 alkenyl and C 2-4 alkynyl are optionally substituted by 1, 2 or 3 R;
  • each Rc is independently selected from F, Cl, Br, I and CH3 ;
  • Each R is independently selected from F, Cl, Br and I.
  • R is selected from H, F, Cl, Br, I and CN;
  • R2 is selected from
  • R 3 , R 4 , R 5 , R 6 , R 7 , R 8 , R 9 and R are each independently selected from H, F, Cl, Br, I and C 1-3 alkyl;
  • Ring A is q is 1, 2 or 3;
  • Each R is independently selected from F, Cl, Br and I.
  • the present invention provides a compound represented by formula (I), or a pharmaceutically acceptable salt thereof, or an enantiomer thereof, or a cis-trans isomer thereof,
  • R is selected from H, F, Cl, Br, CN, C 1-3 alkyl and C 1-3 alkoxy, and the C 1-3 alkyl and C 1-3 alkoxy are optionally replaced by 1, 2 or 3 R a substitutions;
  • R 2 is selected from C 6-10 aryl and 5-10 membered heteroaryl, said C 6-10 aryl and 5-10 membered heteroaryl are optionally substituted by 1, 2 or 3 R b ;
  • R 3 , R 6 , R 7 , R 8 and R 9 are independently selected from H, F, Cl and C 1-3 alkyl;
  • R 4 and R 5 are independently selected from F, Cl and Br;
  • Ring A is selected from said optionally substituted by 1, 2 or 3 Rc ;
  • q, r and s are 1, 2 or 3;
  • n 0, 1 or 2;
  • u, w and v are 1 or 2;
  • Each Ra is independently selected from F, Cl and Br;
  • Each R b is independently selected from F, Cl, Br, I, OH, NH 2 , CN, C 1-3 alkyl, C 1-3 alkoxy, C 2-4 alkenyl and C 2-4 alkyne
  • the C 1-3 alkyl, C 1-3 alkoxy, C 2-4 alkenyl and C 2-4 alkynyl are optionally substituted by 1, 2 or 3 R;
  • R c and R d are independently selected from F, Cl, Br, I and CH 3 ;
  • Each R is independently selected from F, Cl, Br and I.
  • R b are independently selected from F, OH, NH 2 , CH 3 , CF 3 , CH 2 CH 3 and -C ⁇ CH, and other variables are as defined in the present invention.
  • R 1 is selected from H, F, Cl, Br, CN, CH 3 and OCH 3 , and the CH 3 and OCH 3 are optionally substituted by 1, 2 or 3 R a , other Variables are as defined herein.
  • R 1 is selected from F, and other variables are as defined in the present invention.
  • R 3 , R 6 , R 7 , R 8 and R 9 are independently selected from H, F, Cl and CH 3 , and other variables are as defined in the present invention.
  • the above ring A is selected from Other variables are as defined herein.
  • the above ring A is selected from Other variables are as defined herein.
  • the above-mentioned compound, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, or an enantiomer thereof, or a cis-trans isomer thereof is selected from:
  • R 4 , R 5 , R 10 , R 11 and R b are as defined in the present invention. E.g,
  • R 4 , R 5 , R 10 and R 11 are independently selected from H, F, Cl, Br, I and C 1-3 alkyl;
  • R b are independently selected from F, Cl, Br, I, OH, NH 2 , CN, C 1-3 alkyl, C 1-3 alkoxy, C 2-4 alkenyl and C 2-4 alkynyl , the C 1-3 alkyl, C 1-3 alkoxy, C 2-4 alkenyl and C 2-4 alkynyl are optionally substituted by 1, 2 or 3 R; R are independently selected from F , Cl, Br and I.
  • R 4 and R 11 are H, R 5 and R 10 are independently selected from H, F, Cl, Br and I;
  • R b are independently selected from F, Cl, Br, I, OH, NH 2 , CN, CH 3 , CH 2 CH 3 , and -C ⁇ CH, and the H 3 , CH 2 CH 3 , and -C ⁇ CH CH is optionally substituted by 1, 2 or 3 R; each R is independently selected from F, Cl, Br and I.
  • the present invention provides a compound represented by the following formula, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, or an enantiomer thereof, or a cis-trans isomer thereof,
  • the above compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof is selected from:
  • the present invention also provides a pharmaceutical composition, which contains any of the compounds described above, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, or an enantiomer thereof, or a cis-trans isomer thereof, and a pharmaceutically acceptable carrier.
  • the carrier includes conventional auxiliary materials in the art, such as fillers, binders, diluents, disintegrants, lubricants, coloring agents, flavoring agents, antioxidants and wetting agents.
  • the present invention also provides the application of the above-mentioned compound, or its pharmaceutically acceptable salt, or its enantiomer, or its cis-trans isomer in the preparation of a medicament for treating solid tumors.
  • the present invention also provides following synthetic method:
  • the compound of the present invention has a significant inhibitory effect on the combination of KRAS G12D protein and GTP; the compound of the present invention has a significant inhibitory effect on the phosphorylation of ERK protein downstream of the KRAS G12D signaling pathway; the compound of the present invention has a significant inhibitory effect on KRAS G12D mutant cells GP2D, AsPC-1 and Panc0403 Excellent cell anti-proliferation activity; the compound of the present invention has excellent pharmacokinetic properties.
  • pharmaceutically acceptable refers to those compounds, materials, compositions and/or dosage forms, which are suitable for use in contact with human and animal tissues within the scope of sound medical judgment , without undue toxicity, irritation, allergic reaction or other problems or complications, commensurate with a reasonable benefit/risk ratio.
  • pharmaceutically acceptable salt refers to a salt of a compound of the present invention, which is prepared from a compound having a specific substituent found in the present invention and a relatively non-toxic acid or base.
  • base addition salts can be obtained by contacting such compounds with a sufficient amount of base, either neat solution or in a suitable inert solvent.
  • Pharmaceutically acceptable base addition salts include sodium, potassium, calcium, ammonium, organic amine or magnesium salts or similar salts.
  • acid addition salts can be obtained by contacting such compounds with a sufficient amount of the acid, either neat solution or in a suitable inert solvent.
  • Examples of pharmaceutically acceptable acid addition salts include salts of inorganic acids including, for example, hydrochloric acid, hydrobromic acid, nitric acid, carbonic acid, bicarbonate, phosphoric acid, monohydrogen phosphate, dihydrogen phosphate, sulfuric acid, Hydrogen sulfate, hydriodic acid, phosphorous acid, etc.; and organic acid salts, such as acetic acid, propionic acid, isobutyric acid, maleic acid, malonic acid, benzoic acid, succinic acid, suberic acid, Fumaric acid, lactic acid, mandelic acid, phthalic acid, benzenesulfonic acid, p-toluenesulfonic acid, citric acid, tartaric acid and methanesulfonic acid and similar acids; also salts of amino acids such as arginine and the like , and salts of organic acids such as glucuronic acid. Certain specific compounds of the present invention contain basic and acidic functional groups and can thus be
  • the pharmaceutically acceptable salts of the present invention can be synthesized from the parent compound containing acid groups or bases by conventional chemical methods.
  • such salts are prepared by reacting the free acid or base form of these compounds with a stoichiometric amount of the appropriate base or acid in water or an organic solvent or a mixture of both.
  • the compounds of the invention may exist in particular geometric or stereoisomeric forms.
  • the present invention contemplates all such compounds, including cis and trans isomers, (-)- and (+)-enantiomers, (R)- and (S)-enantiomers, diastereomers isomers, (D)-isomers, (L)-isomers, and their racemic and other mixtures, such as enantiomerically or diastereomerically enriched mixtures, all of which are subject to the present within the scope of the invention.
  • Additional asymmetric carbon atoms may be present in substituents such as alkyl groups. All such isomers, as well as mixtures thereof, are included within the scope of the present invention.
  • enantiomer or “optical isomer” refer to stereoisomers that are mirror images of each other.
  • cis-trans isomers or “geometric isomers” arise from the inability to rotate freely due to the double bond or the single bond of the carbon atoms forming the ring.
  • diastereoisomer refers to stereoisomers whose molecules have two or more chiral centers and which are not mirror images of the molecules.
  • keys with wedge-shaped solid lines and dotted wedge keys Indicates the absolute configuration of a stereocenter, with a straight solid-line bond and straight dashed keys Indicates the relative configuration of the stereocenter, with a wavy line Indicates wedge-shaped solid-line bond or dotted wedge key or with tilde Indicates a straight solid line key or straight dotted key
  • the following formula (A) means that the compound exists as a single isomer of formula (A-1) or formula (A-2) or as two isomers of formula (A-1) and formula (A-2).
  • the following formula (B) means that the compound exists in the form of a single isomer of formula (B-1) or formula (B-2) or in the form of both formula (B-1) and formula (B-2) It exists as a mixture of isomers.
  • the following formula (C) represents that the compound exists in the form of a single isomer of formula (C-1) or formula (C-2) or in the form of two isomers of formula (C-1) and formula (C-2). It exists in the form of a mixture.
  • tautomer or “tautomeric form” means that isomers with different functional groups are in dynamic equilibrium at room temperature and are rapidly interconvertible. If tautomerism is possible (eg, in solution), then chemical equilibrium of the tautomers can be achieved.
  • proton tautomers also called prototropic tautomers
  • prototropic tautomers include interconversions via migration of a proton, such as keto-enol isomerization and imine-ene Amine isomerization.
  • Valence isomers (valence tautomers) involve interconversions by recombination of some bonding electrons.
  • keto-enol tautomerization is the interconversion between two tautomers of pentane-2,4-dione and 4-hydroxypent-3-en-2-one.
  • the terms “enriched in an isomer”, “enriched in an isomer”, “enriched in an enantiomer” or “enantiomerically enriched” refer to one of the isomers or enantiomers
  • the content of the enantiomer is less than 100%, and the content of the isomer or enantiomer is greater than or equal to 60%, or greater than or equal to 70%, or greater than or equal to 80%, or greater than or equal to 90%, or greater than or equal to 95%, or Greater than or equal to 96%, or greater than or equal to 97%, or greater than or equal to 98%, or greater than or equal to 99%, or greater than or equal to 99.5%, or greater than or equal to 99.6%, or greater than or equal to 99.7%, or greater than or equal to 99.8%, or greater than or equal to 99.9%.
  • the terms “isomer excess” or “enantiomeric excess” refer to the difference between the relative percentages of two isomers or two enantiomers. For example, if the content of one isomer or enantiomer is 90% and the other isomer or enantiomer is 10%, then the isomer or enantiomeric excess (ee value) is 80% .
  • Optically active (R)- and (S)-isomers as well as D and L-isomers can be prepared by chiral synthesis or chiral reagents or other conventional techniques. If one enantiomer of a compound of the invention is desired, it can be prepared by asymmetric synthesis or derivatization with chiral auxiliary agents, wherein the resulting diastereomeric mixture is separated and the auxiliary group is cleaved to provide pure desired enantiomer.
  • a diastereoisomeric salt is formed with an appropriate optically active acid or base, and then a diastereomeric salt is formed by a conventional method known in the art. Diastereomeric resolution is performed and the pure enantiomers are recovered. Furthermore, the separation of enantiomers and diastereomers is usually accomplished by the use of chromatography using chiral stationary phases, optionally in combination with chemical derivatization methods (e.g. amines to amino groups formate).
  • the compounds of the present invention may contain unnatural proportions of atomic isotopes at one or more of the atoms that constitute the compounds.
  • compounds may be labeled with radioactive isotopes such as tritium ( 3 H), iodine-125 ( 125 I) or C-14 ( 14 C).
  • radioactive isotopes such as tritium ( 3 H), iodine-125 ( 125 I) or C-14 ( 14 C).
  • heavy hydrogen can be used to replace hydrogen to form deuterated drugs.
  • the bond formed by deuterium and carbon is stronger than the bond formed by ordinary hydrogen and carbon.
  • deuterated drugs can reduce toxic side effects and increase drug stability. , enhance the efficacy, prolong the biological half-life of drugs and other advantages. All changes in isotopic composition of the compounds of the invention, whether radioactive or not, are included within the scope of the invention.
  • substituted means that any one or more hydrogen atoms on a specified atom are replaced by a substituent, which may include deuterium and hydrogen variants, as long as the valence of the specified atom is normal and the substituted compound is stable.
  • any variable eg, R
  • its definition is independent at each occurrence.
  • said group may optionally be substituted with up to two R, with independent options for each occurrence of R.
  • substituents and/or variations thereof are permissible only if such combinations result in stable compounds.
  • linking group When the number of a linking group is 0, such as -(CRR) 0 -, it means that the linking group is a single bond.
  • a substituent can be bonded to any atom on a ring when the bond of a substituent can cross-link two or more atoms on the ring, e.g., structural unit It means that the substituent R can be substituted at any position on cyclohexyl or cyclohexadiene. When the enumerated substituent does not indicate which atom it is connected to the substituted group, this substituent can be bonded through any atom, for example, pyridyl as a substituent can be connected to any atom on the pyridine ring. The carbon atom is attached to the group being substituted.
  • linking group listed does not indicate its linking direction
  • its linking direction is arbitrary, for example,
  • the connecting group L in the middle is -MW-, at this time -MW- can connect ring A and ring B in the same direction as the reading order from left to right to form It can also be formed by connecting loop A and loop B in the opposite direction to the reading order from left to right
  • any one or more sites of the group can be linked to other groups through chemical bonds.
  • connection method of the chemical bond is not positioned, and there is an H atom at the connectable site, when the chemical bond is connected, the number of H atoms at the site will decrease correspondingly with the number of chemical bonds connected to become the corresponding valence group.
  • the chemical bonds that the site connects with other groups can use straight solid line bonds Straight dotted key or tilde express.
  • the straight-shaped solid-line bond in -OCH3 indicates that it is connected to other groups through the oxygen atom in the group;
  • the straight dotted line bond indicates that the two ends of the nitrogen atom in the group are connected to other groups;
  • the wavy lines in indicate that the 1 and 2 carbon atoms in the phenyl group are connected to other groups;
  • the number of atoms in a ring is generally defined as the number of ring members, eg, "5-7 membered ring” means a “ring” with 5-7 atoms arranged around it.
  • C 1-3 alkyl is used to denote a straight or branched chain saturated hydrocarbon group consisting of 1 to 3 carbon atoms.
  • the C 1-3 alkyl group includes C 1-2 and C 2-3 alkyl groups, etc.; it can be monovalent (such as methyl), divalent (such as methylene) or multivalent (such as methine) .
  • Examples of C 1-3 alkyl include, but are not limited to, methyl (Me), ethyl (Et), propyl (including n - propyl and isopropyl), and the like.
  • C 1-3 alkoxy denotes those alkyl groups containing 1 to 3 carbon atoms attached to the rest of the molecule through an oxygen atom.
  • the C 1-3 alkoxy group includes C 1-2 , C 2-3 , C 3 and C 2 alkoxy groups and the like.
  • Examples of C 1-3 alkoxy include, but are not limited to, methoxy, ethoxy, propoxy (including n-propoxy and isopropoxy), and the like.
  • C2-4alkenyl is used to denote a straight or branched chain hydrocarbon group consisting of 2 to 4 carbon atoms containing at least one carbon-carbon double bond, a carbon-carbon double bond can be located anywhere in the group.
  • the C 2-4 alkenyl includes C 2-3 , C 4 , C 3 and C 2 alkenyl, etc.; the C 2-4 alkenyl can be monovalent, divalent or multivalent. Examples of C alkenyl include, but are not limited to, ethenyl, propenyl, butenyl, butadienyl, and the like.
  • C2-3 alkenyl is used to denote a straight or branched chain hydrocarbon group consisting of 2 to 3 carbon atoms containing at least one carbon-carbon double bond, a carbon-carbon double bond can be located anywhere in the group.
  • the C 2-3 alkenyl includes C 3 and C 2 alkenyl; the C 2-3 alkenyl can be monovalent, divalent or multivalent. Examples of C 2-3 alkenyl include, but are not limited to, ethenyl, propenyl, and the like.
  • C2-4 alkynyl is used to denote a straight or branched chain hydrocarbon group consisting of 2 to 4 carbon atoms containing at least one carbon-carbon triple bond, the carbon-carbon triple bond can be located anywhere in the group.
  • the C 2-4 alkynyl includes C 2-3 , C 4 , C 3 and C 2 alkynyl and the like. It may be monovalent, divalent or polyvalent. Examples of C alkynyl include, but are not limited to, ethynyl, propynyl, butynyl, and the like.
  • C 6-10 aromatic ring and “C 6-10 aryl” in the present invention can be used interchangeably, and the term “C 6-10 aromatic ring” or “C 6-10 aryl” means that the A cyclic hydrocarbon group composed of 6 to 10 carbon atoms with a conjugated ⁇ -electron system, which can be a monocyclic, fused bicyclic or fused tricyclic system, wherein each ring is aromatic. It can be monovalent, divalent or multivalent, and the C 6-10 aryl group includes C 6-9 , C 9 , C 10 and C 6 aryl groups and the like. Examples of C 6-10 aryl include, but are not limited to, phenyl, naphthyl (including 1-naphthyl and 2-naphthyl, etc.).
  • 5-10 membered heteroaryl ring and “5-10 membered heteroaryl” can be used interchangeably in the present invention, and the term “5-10 membered heteroaryl” means that there are 5 to 10 rings
  • the nitrogen and sulfur heteroatoms may be optionally oxidized (ie, NO and S(O) p , where p is 1 or 2).
  • the 5-10 membered heteroaryl can be attached to the rest of the molecule through a heteroatom or a carbon atom.
  • the 5-10 membered heteroaryl group includes 5-8 membered, 5-7 membered, 5-6 membered, 5-membered and 6-membered heteroaryl groups and the like.
  • Examples of the 5-10 membered heteroaryl groups include, but are not limited to, pyrrolyl (including N-pyrrolyl, 2-pyrrolyl and 3-pyrrolyl, etc.), pyrazolyl (including 2-pyrazolyl and 3-pyrrolyl Azolyl, etc.), imidazolyl (including N-imidazolyl, 2-imidazolyl, 4-imidazolyl and 5-imidazolyl, etc.), oxazolyl (including 2-oxazolyl, 4-oxazolyl and 5- Oxazolyl, etc.), triazolyl (1H-1,2,3-triazolyl, 2H-1,2,3-triazolyl, 1H-1,2,4-triazolyl and 4H-1, 2,4-triazolyl, etc.), tetrazolyl, isoxazolyl (3-isoxazolyl, 4-isoxazolyl and 5-isoxazolyl, etc.), thiazolyl (including 2-thiazolyl
  • the structure of the compounds of the present invention can be confirmed by conventional methods known to those skilled in the art. If the present invention involves the absolute configuration of the compound, the absolute configuration can be confirmed by conventional technical means in the art. For example, in single crystal X-ray diffraction (SXRD), the cultured single crystal is collected with a Bruker D8 venture diffractometer to collect diffraction intensity data, the light source is CuK ⁇ radiation, and the scanning method is: After scanning and collecting relevant data, the absolute configuration can be confirmed by further analyzing the crystal structure by direct method (Shelxs97).
  • SXRD single crystal X-ray diffraction
  • the compounds of the present invention can be prepared by a variety of synthetic methods well known to those skilled in the art, including the specific embodiments listed below, the embodiments formed by combining them with other chemical synthesis methods, and the methods well known to those skilled in the art Equivalent alternatives, preferred embodiments include but are not limited to the examples of the present invention.
  • the term "pharmaceutically acceptable carrier” of the present invention refers to any preparation or carrier medium that can deliver an effective amount of the active substance of the present invention, does not interfere with the biological activity of the active substance, and has no toxic side effects on the host or the patient. Carrier.
  • the term "effective amount” refers to a sufficient amount of the drug or agent that is non-toxic but can achieve the desired effect. The determination of the effective amount varies from person to person, depending on the age and general condition of the recipient, and also depends on the specific active substance. The appropriate effective amount in each case can be determined by those skilled in the art according to routine experiments.
  • the solvent used in the present invention is commercially available.
  • Figure 1 The binding mode diagram of compound 1A and KRAS G12D protein.
  • Figure 2 The binding mode diagram of compound 1B and KRAS G12D protein.
  • Figure 3 The binding mode diagram of compound 2A and KRAS G12D protein.
  • Figure 4 The cis-trans confirmation spectra of compounds 2-6.
  • Figure 6 Three-dimensional structure ellipsoid diagram of compound 5-11.
  • the molecular docking process was carried out by using Maestro ( Glide SP[1] and default options in version 2017-2).
  • the crystal structure PDB: 6UT0 of KRAS_G12C in the PDB database was selected, Cys12 was simulated and mutated into Asp12, and after energy optimization, it was used as a docking template.
  • hydrogen atoms were added using the Protein Preparation Wizard module of Maestro [2] and the OPLS3 force field was used.
  • ligand preparation the 3D structure of the molecule was generated using LigPrep and energy minimized [3], and the small molecule conformation was sampled using the confgen module.
  • the compound of the present invention has a good combination with KRAS G12D .
  • MRTX1133 refers to example 252 in WO2021041671A1.
  • Tetrahydrofuran (140 mL) and compound 2-4 (13.77 g, 36.03 mmol) were added to the reaction flask. Cool down to -70°C and add sodium hexamethyldisilazide (1M, 36.03 mL) dropwise. After reaction at -70°C for 0.5 hours, a solution of compound 2-3 (4.4 g, 24.02 mmol) in tetrahydrofuran (30 mL) was added. Return to 25°C and stir the reaction for 14 hours. Water (100 mL) was added to the reaction liquid, followed by extraction twice with ethyl acetate (50 mL).
  • Tetrahydrofuran (3 mL) and compound 2-5 (70 mg, 351.37 ⁇ mol) were added to the reaction flask. Cool down to 0°C and add lithium aluminum tetrahydride (26.67 mg, 702.74 ⁇ mol), and keep the reaction at 25°C for 14 hours. Water (0.03 mL), 15% aqueous sodium hydroxide solution (0.03 mL) and water (0.1 mL) were successively added to the reaction solution. After filtration, the filtrate was concentrated under reduced pressure to obtain compound 2-6.
  • Double bond configuration identification shows that H10 and H1 are related, confirming that the double bond is in cis configuration, see Figure 4.
  • Tetrahydrofuran (1 mL), compound 1-9 (85 mg, 198.46 ⁇ mol) and compound 2-6 (40.78 mg, 238.16 ⁇ mol) were added to the reaction flask. After cooling down to 0°C, sodium hydrogen (15.88 mg, 396.93 ⁇ mol, 60% purity) was added, and the temperature was raised to 25°C for 1 hour. Water (10 mL) was added to the reaction liquid, followed by extraction twice with ethyl acetate (10 mL). The combined organic phases were dried over anhydrous sodium sulfate, and the filtered filtrate was concentrated under reduced pressure to obtain a crude product.
  • Double bond configuration identification shows that H10 and H4 are related, confirming that the double bond is in trans configuration, see Figure 5.
  • Tetrahydrofuran 250 mL
  • compound 4-3 (10.0 g, 37.02 mmol) and sodium hydride (3.26 g, 81.44 mmol, 60% purity) were added to the reaction flask.
  • compound 1-2 13.88 g, 111.06 mmol was added, and the temperature was raised to 65°C for 5 hours.
  • the reaction solution was cooled to room temperature, water (50 mL) and ethyl acetate (50 mL) were added, and the layers were separated.
  • the organic phase was dried with anhydrous sodium sulfate, filtered, and the filtrate was concentrated under reduced pressure to obtain compound 4-4.
  • Tetrahydrofuran (80 mL), compound 4-4 (8.0 g, 17.89 mmol) and hydrochloric acid (1M, 53.67 mL) were added to the reaction flask, and the reaction was stirred at 25°C for 0.5 hours.
  • Water (150 mL) and ethyl acetate (100 mL) were added to the reaction system, and the layers were separated. The aqueous phase of compound 4-5 hydrochloride was obtained.
  • Tetrahydrofuran (1300 mL), compound 5-2 (61.5 g, 221.81 mmol) and allyl bromide (80.50 g, 665.43 mmol) were added to the reaction flask. Cool down to -65°C and add lithium hexamethyldisilazide (1M, 288.35mL) dropwise. After dropping, keep at -65°C for 2 hours and return to 25°C for 12 hours. The reaction solution was poured into saturated aqueous sodium chloride solution (300 mL), and the layers were separated.
  • Tetrahydrofuran (1500 mL), compound 5-3 (53 g, 167.02 mmol) were added to the reaction flask. After cooling down to 0°C, borane tetrahydrofuran solution (1M, 133.62 mL) was added, and the reaction was stirred at 0°C for 1 hour. Further water (150 mL), aqueous sodium hydroxide (3M, 222.69 mL) and hydrogen peroxide (170.41 g, 30% content) were added. Return the temperature to 25°C and react for 1 hour. Add 1000mL saturated aqueous sodium sulfite solution (1000mL) to the reaction, and the starch potassium iodide test paper does not turn blue.
  • Tetrahydrofuran (20 mL) and compound 5-7 (2.1 g, 9.67 mmol) were added to the reaction flask. After cooling down to 0°C, a solution of red aluminum (13.43 mL, 70% toluene solution) in tetrahydrofuran (20 mL) was added dropwise. Return to 25°C and stir the reaction for 16 hours. Water (2 mL), 15% aqueous sodium hydroxide solution (2 mL) and water (2 mL) were added to the reaction solution. After filtration, the filtrate was concentrated under reduced pressure to obtain a mixture of compounds 2-6 and 3-2.
  • Double bond configuration identification NOE showed that H10 and H4 were related, confirming that the double bond was in trans configuration.
  • Tetrahydrofuran (20 mL), compound 1-9 (1.88 g, 4.38 mmol) and compound 5-10 hydrochloride (0.7 g, 3.37 mmol) were added to the reaction flask. After cooling down to 0°C, sodium hydrogen (560mg, 14.00mmol, 60% purity) was added, and the temperature was raised to 25°C for 2 hours. Water (20 mL) was added to the reaction liquid, followed by extraction twice with ethyl acetate (10 mL). The combined organic phases were washed once with saturated aqueous sodium chloride (10 mL), dried over anhydrous sodium sulfate, and the filtered filtrate was concentrated under reduced pressure to obtain a crude product.
  • Diffraction collection range 2 ⁇ 5.006to133.02°, diffraction index range -7 ⁇ h ⁇ 7, -12 ⁇ k ⁇ 14, -42 ⁇ 1 ⁇ 42.
  • SHELXT (Sheldrick, GM2015.ActaCryst.A71, 3-8) was used for structure analysis
  • SHELXL (against F 2 ) was used for structure refinement.
  • the residual electron density value is 0.33 and
  • Tetrahydrofuran (20 mL), compound 1-9 (1.88 g, 4.38 mmol) and compound 6-2 hydrochloride (0.7 g, 3.37 mmol) were added to the reaction flask. After cooling down to 0°C, sodium hydrogen (560mg, 14.00mmol, 60% purity) was added, and the temperature was raised to 25°C for 2 hours. Water (20 mL) was added to the reaction liquid, followed by extraction twice with ethyl acetate (10 mL). The combined organic phases were washed once with saturated aqueous sodium chloride (10 mL), dried over anhydrous sodium sulfate, and the filtered filtrate was concentrated under reduced pressure to obtain a crude product.
  • Tetrahydrofuran (20 mL), compound 1-9 (1.88 g, 4.38 mmol) and compound 7-3 hydrochloride (0.74 g, 3.56 mmol) were added to the reaction flask. After cooling down to 0°C, sodium hydrogen (592mg, 14.80mmol, 60% purity) was added, and the temperature was raised to 25°C for 2 hours. Water (20 mL) was added to the reaction liquid, followed by extraction twice with ethyl acetate (10 mL). The combined organic phases were washed once with saturated aqueous sodium chloride (10 mL), dried over anhydrous sodium sulfate, and the filtered filtrate was concentrated under reduced pressure to obtain a crude product.
  • Tetrahydrofuran (20 mL), compound 1-9 (3.06 g, 4.82 mmol) and compound 8-2 hydrochloride (0.77 g, 3.71 mmol) were added to the reaction flask. After cooling down to 0°C, sodium hydrogen (616mg, 15.40mmol, 60% purity) was added, and the temperature was raised to 25°C for 2 hours. Water (20 mL) was added to the reaction liquid, followed by extraction twice with ethyl acetate (10 mL). The combined organic phases were washed once with saturated aqueous sodium chloride (10 mL), dried over anhydrous sodium sulfate, and the filtered filtrate was concentrated under reduced pressure to obtain a crude product.
  • Tetrahydrofuran (8 mL), water (2 mL), compound 10-1 (270 mg, 655.61 ⁇ mol), compound 10-2 (405 mg, 989.60 ⁇ mol) and potassium phosphate (280.8 mg, 10.37 ⁇ mol) were added to the reaction flask. After nitrogen replacement three times, add chloro(2-dicyclohexylphosphino-2,4,6-triisopropyl-1,1-biphenyl)[2-(2-amino-1,1-biphenyl) ] Palladium(II) (54 mg, 68.63 ⁇ mol). . After three more nitrogen replacements, the mixture was stirred and reacted at 100°C for 4 hours.
  • This experiment aims to investigate the inhibitory effect of the compound of the present invention on the combination of KRAS G12D and GTP by means of TR-FRET.
  • HEPES pH 7.3 Sodium Chloride, EDTA (Edetic Acid), Tween 20, Magnesium Chloride, Bodipy GDP, GTP (Guanosine 5′-triphosphate), Tb-SA (Terbium-Streptavidin), SOS (son of sevenless) protein, KRAS (Kirsten rat sarcoma viral oncogene) protein.
  • the stock solution concentration of the compound to be tested is 10 mM. Transfer 9 ⁇ L of the compound to be tested to the compound plate;
  • Z Prime 1-[3 ⁇ (STDEV HPE +STDEV ZPE )/ (AVG HPE -AVG ZPE )
  • ], Z value should be greater than or equal to 0.5%; Effect (Value cpd -AVG ZPE )/(AVG HPE -AVG ZPE ) ⁇ 100, the curve was fitted by Xlfit and the IC 50 was calculated.
  • the compound of the present invention has significant inhibitory effect on the combination of KRAS G12D protein and GTP.
  • This experiment aims to verify the inhibitory effect of the compound of the present invention on the phosphorylation of ERK protein downstream of the KRAS G12D signaling pathway.
  • AGS cells were purchased from Proser; RPMI-1640 medium was purchased from Biological Industries; fetal bovine serum was purchased from Biosera; Advanced Phospho-ERK1/2 (THR202/TYR204) KIT was purchased from Cisbio, and the components are shown in Table 7.
  • AGS cells are planted in a transparent 96-well cell culture plate, 80 ⁇ L of cell suspension per well, each well contains 10,000 AGS cells, the cell plate is placed in a carbon dioxide incubator, and incubated overnight at 37°C; after the incubation, discard the supernatant and add 80 ⁇ L
  • Each well of DMEM blank medium was starved overnight; the compound to be tested was diluted to 0.2mM with 100% DMSO as the first concentration, and then diluted 5 times to the eighth concentration with a pipette, that is, diluted from 0.2mM to 2.56 nM.
  • test compound AGS p-ERK IC 50 (nM) Formate salt of compound 1 2.39 Formate salt of compound 4 0.71 Formate salt of compound 5 0.30 Formate salt of compound 7 0.40 Formate salt of compound 11 0.46
  • the compound of the present invention has a significant inhibitory effect on the phosphorylation of ERK protein downstream of the KRAS G12D signaling pathway.
  • This experiment aims to verify the inhibitory effect of the compound of the present invention on the proliferation of GP2D human colon cancer cells with KRAS G12D mutation.
  • Cell line GP2D, DMEM medium, penicillin/streptomycin antibiotics were purchased from Vicente, and fetal bovine serum was purchased from Biosera.
  • CellTiter- 3D Cell Viability Assay (3D cell viability chemiluminescent detection reagent) reagents were purchased from Promega.
  • the GP2D cells were planted in a 96-well U-bottom cell culture plate, with 80 ⁇ L of cell suspension per well, which contained 2000 GP2D cells. Cell plates were cultured overnight in a carbon dioxide incubator. The compound to be tested was diluted 5 times to the 8th concentration with a row gun, that is, diluted from 200 ⁇ M to 2.56nM, and a double-well experiment was set up. Add 78 ⁇ L of medium to the middle plate, and then transfer 2 ⁇ L of each well of the gradient dilution compound to the middle plate according to the corresponding position, transfer 20 ⁇ L of each well to the cell plate after mixing. Compound concentrations ranged from 1 [mu]M to 0.0128 nM were transferred to the cell plate.
  • Cell plates were cultured in a carbon dioxide incubator for 5 days. After the incubation of the cell plate with the compound was completed, 100 ⁇ L of cell viability chemiluminescent detection reagent per well was added to the cell plate, and incubated at room temperature for 10 minutes to stabilize the luminescent signal. Read using a multi-label analyzer.
  • test compound GP2D 3D CTG IC 50 (nM) Formate salt of compound 1 3.2 Formate salt of compound 2 0.35 Formate salt of compound 3 0.57 Formate salt of compound 4 0.55 Formate salt of compound 5 0.30 Formate salt of compound 6 1.45 Formate salt of compound 7 0.43 Formate salt of compound 8 4.55 Formate salt of compound 9 0.27 Formate salt of compound 10 4.21 Formate salt of compound 11 0.45
  • the compound of the present invention shows excellent cell anti-proliferation activity on KRAS G12D mutant cell GP2D.
  • the purpose of this experiment is to verify the inhibitory effect of the compound of the present invention on the proliferation of AsPC-1 human pancreatic cancer cells with KRAS G12D mutation.
  • Cell line AsPC-1 purchased from Proser
  • RPMI-1640 medium penicillin/streptomycin antibiotics were purchased from Vicente
  • fetal bovine serum was purchased from Biosera.
  • the AsPC-1 cells were planted in a 96-well white cell culture plate, 80 ⁇ L of cell suspension per well, which contained 3000 ASPC-1 cells. Cell plates were cultured overnight in a carbon dioxide incubator. The compound to be tested was diluted 5 times to the 8th concentration with a row gun, that is, diluted from 2mM to 25.6nM, and a double-well experiment was set up. Add 78 ⁇ L of medium to the middle plate, and then transfer 2 ⁇ L of each well of the gradient dilution compound to the middle plate according to the corresponding position, transfer 20 ⁇ L of each well to the cell plate after mixing. Compound concentrations transferred to the cell plate ranged from 10 [mu]M to 0.128 nM.
  • Cell plates were cultured in a carbon dioxide incubator for 6 days. Prepare another cell plate, and read the signal value on the day of drug addition as the maximum value (Max value in the following equation) to participate in data analysis.
  • the compound of the present invention shows excellent cell anti-proliferation activity on KRAS G12D mutant cell AsPC-1.
  • the purpose of this experiment is to verify the inhibitory effect of the compound of the present invention on the proliferation of Panc0403 human pancreatic cancer cells with KRAS G12D mutation.
  • Cell line PANC0403 was purchased from Nanjing Kebai, RPMI1640 medium was purchased from BI, penicillin/streptomycin antibiotics were purchased from Yuanpei, and fetal bovine serum was purchased from Gibco.
  • 3D Cell ViabilityAssay (3D cell viability chemiluminescent detection reagent) reagents were purchased from Promega.
  • the PANC0403 cells were planted in a 96-well U-bottom cell culture plate, with 80 ⁇ L of cell suspension per well, which contained 4000 PANC0403 cells. Cell plates were cultured overnight in a carbon dioxide incubator. The compound to be tested was diluted 5 times to the 8th concentration with a row gun, that is, diluted from 2000 ⁇ M to 25.6nM, and a double-well experiment was set up. Add 78 ⁇ L of medium to the middle plate, and then transfer 2 ⁇ L of each well of the gradient dilution compound to the middle plate according to the corresponding position, transfer 20 ⁇ L of each well to the cell plate after mixing. Compound concentrations transferred to the cell plate ranged from 10 [mu]M to 0.128 nM.
  • Cell plates were cultured in a carbon dioxide incubator for 5 days. After the incubation of the cell plate with the compound was completed, 100 ⁇ L of cell viability chemiluminescent detection reagent per well was added to the cell plate, and incubated at room temperature for 10 minutes to stabilize the luminescent signal. Read using a multi-label analyzer.
  • the compound of the present invention shows better cell anti-proliferation activity than the reference compound MRTX1133 on KRAS G12D mutant cell Panc0403.
  • the purpose of this experiment is to verify the inhibitory effect of the compounds of the present invention on the proliferation of KRAS G12D mutated HPAC human pancreatic cancer cells.
  • the HPAC cell line (ATCC-CRL2119) was maintained in a 37-degree, 5% CO 2 incubator. When the cell saturation reached 80%, the cells were trypsinized and counted. The diluted cells were inoculated into 96-well low adsorption plates at 5000 per well. After overnight incubation, serially diluted compounds were added, starting at 10uM for 5-fold dilutions and 9 gradients. After continuing to incubate for 6 days, add cellciterglo detection reagent (Promega-G7573), avoid light and shake for 30 minutes, pipette and mix well, pipette 100ul into a 96-well black-walled plate, place at room temperature for 5min, and read the plate on Envision.
  • cellciterglo detection reagent Promega-G7573
  • the compound of the present invention shows better cell anti-proliferation activity than the reference compound MRTX1133 on KRAS G12D mutant cell HPAC.
  • the purpose of this experiment is to evaluate the pharmacokinetic behavior of the compound after a single intravenous injection and intraperitoneal injection, and to investigate the bioavailability after intraperitoneal injection.
  • Plasma concentrations were processed using the non-compartmental model of WinNonlin TM Version 6.3 (Pharsight, Mountain View, CA) pharmacokinetic software, and pharmacokinetic parameters were calculated using the linear log trapezoidal method.
  • Table 13 shows the evaluation results of PK properties in mice.
  • C max represents the maximum plasma concentration
  • T max represents the peak time
  • T 1/2 represents the half-life
  • Vdss represents the apparent volume of distribution
  • Cl represents the clearance rate
  • AUC 0-last represents the area of the curve (0-t)
  • AUC 0-inf represents the curve area (0-inf); NA represents not tested.
  • the compound of the present invention has higher apparent distribution volume and longer half-life in mice, better AUC and bioavailability for intraperitoneal injection, and good pharmacokinetic properties.

Abstract

一类氟取代的嘧啶并吡啶类化合物及其应用，具体公开了式(IV)所示化合物及其药学上可接受的盐。

Description

氟取代的嘧啶并吡啶类化合物及其应用
本申请主张如下优先权
CN202110577685.6，申请日：2021年05月26日；
CN202110859683.6，申请日：2021年07月28日；
CN202111540100.X，申请日：2021年12月15日。
技术领域
本发明涉及一类氟取代的嘧啶并吡啶类化合物及其应用，具体公开了式(IV)所示化合物及其药学上可接受的盐。
背景技术
第一个RAS癌基因发现自大鼠肉瘤(rat sarcoma)，因此得名。RAS蛋白是由RAS基因表达的产物，指一类紧密相关的，由189个氨基酸组成的单体球蛋白，其分子量为21KDa。RAS蛋白的活性状态对细胞的生长、分化、细胞骨架、蛋白质运输和分泌等都具有重要的影响。在生长因子信号通路中，KRAS蛋白作为一个分子开关，通过在鸟苷二磷酸(GDP)结合的非活性状态和鸟苷三磷酸(GTP)结合的活性状态之间交替来调控激活下游促增殖效应蛋白。KRAS蛋白的突变将影响其与GAP的作用，也就影响了其水解GTP到GDP的能力，使其一直处于活化状态。活化的RAS蛋白持续的给予下游蛋白生长信号，最终导致细胞不停的生长和分化，最终产生肿瘤。
RAS癌基因突变是人类癌症中最常见的激活突变，发生在30％的人类肿瘤中。尽管RAS基因家族包含三种亚型(KRAS、HRAS和NRAS)，但85％的RAS驱动型癌症是由KRAS亚型突变引起的，这种突变最常发生于实体肿瘤，如肺腺癌、胰管癌和结直肠癌。在KRAS突变型肿瘤中，最为常见的突变出现在12号甘氨酸(G12)，13号甘氨酸(G13)和61号谷氨酰胺(Q61)残基上，其中G12突变占所有KRAS突变的83％，最常见的突变为G12D(41％)、G12V(28％)和G12C(14％)。
近年来，人们利用KRAS G12C突变体12位半胱氨酸巯基的反应活性开展了其共价抑制剂的研究，并取得了较大的进展。目前对于KRAS G12D的研究都还处于临床前阶段。
发明内容
本发明提供了式(IV)所示化合物、或其药学上可接受的盐、或其对映异构体、或其顺反异构体，
Figure PCTCN2022094274-appb-000001
其中，
L 1选自O、S和NH；
R 1选自H、F、Cl、Br、I、CN、C 1-3烷基和C 1-3烷氧基，所述C 1-3烷基和C 1-3烷氧基任选被1、2或3个R a取代；
R 2选自C 6-10芳基和5-10元杂芳基，所述C 6-10芳基和5-10元杂芳基任选被1、2、3或4个R b取代；
环B选自
Figure PCTCN2022094274-appb-000002
R 3、R 4、R 5、R 6、R 7、R 8、R 9、R 10和R 11分别独立地选自H、F、Cl、Br、I和C 1-3烷基；
环A选自
Figure PCTCN2022094274-appb-000003
所述
Figure PCTCN2022094274-appb-000004
Figure PCTCN2022094274-appb-000005
任选被1、2或3个R c取代；
q、r和s为1、2或3；
m和n为0、1或2；
u、w和v为1或2；
各R a分别独立地选自F、Cl、Br和I；
各R b分别独立地选自F、Cl、Br、I、OH、NH 2、CN、C 1-3烷基、C 1-3烷氧基、C 2-4烯基和C 2-4炔基，所述C 1-3烷基、C 1-3烷氧基、C 2-4烯基和C 2-4炔基任选被1、2或3个R取代；
各R c分别独立地选自F、Cl、Br、I和CH 3；
各R分别独立地选自F、Cl、Br和I。
在本发明的一些方案中，所述式(IV)所示化合物、或其药学上可接受的盐、或其对映异构体、或其顺反异构体中，
L 1选自O、S和NH；
R 1选自H、F、Cl、Br、I和CN；
R 2选自
Figure PCTCN2022094274-appb-000006
环B选自
Figure PCTCN2022094274-appb-000007
R 3、R 4、R 5、R 6、R 7、R 8、R 9、R 10和R 11分别独立地选自H、F、Cl、Br、I和C 1-3烷基；
环A为
Figure PCTCN2022094274-appb-000008
q为1、2或3；
各R b分别独立地选自F、Cl、Br、I、OH、NH 2、CN、C 1-3烷基、C 1-3烷氧基、C 2-4烯基和C 2-4炔基，所述C 1-3烷基、C 1-3烷氧基、C 2-4烯基和C 2-4炔基任选被1、2或3个R取代；
各R分别独立地选自F、Cl、Br和I。
本发明提供了式(IV)所示化合物、或其药学上可接受的盐、或其对映异构体、或其顺反异构体，
Figure PCTCN2022094274-appb-000009
其中，
L 1选自O、S和NH；
R 1选自H、F、Cl、Br、CN、C 1-3烷基和C 1-3烷氧基，所述C 1-3烷基和C 1-3烷氧基任选被1、2或3个R a取代；
R 2选自C 6-10芳基和5-10元杂芳基，所述C 6-10芳基和5-10元杂芳基任选被1、2或3个R b取代；
环B选自
Figure PCTCN2022094274-appb-000010
R 3、R 4、R 5、R 6、R 7、R 8、R 9、R 10和R 11分别独立地选自H、F、Cl、Br、I和C 1-3烷基；
环A选自
Figure PCTCN2022094274-appb-000011
所述
Figure PCTCN2022094274-appb-000012
Figure PCTCN2022094274-appb-000013
任选被1、2或3个R c取代；
q、r和s为1、2或3；
m和n为0、1或2；
u、w和v为1或2；
各R a分别独立地选自F、Cl和Br；
各R b分别独立地选自F、Cl、Br、I、OH、NH 2、CN、C 1-3烷基、C 1-3烷氧基、C 2-4烯基和C 2-4炔基，所述C 1-3烷基、C 1-3烷氧基、C 2-4烯基和C 2-4炔基任选被1、2或3个R取代；
各R c分别独立地选自F、Cl、Br、I和CH 3；
各R分别独立地选自F、Cl、Br和I。
在本发明的一些方案中，上述各R b分别独立地选自F、Cl、Br、I、OH、NH 2、CN、CH 3、CH 2CH 3、OCH 3、OCH 2CH 3、-CH＝CH 2、-CH 2-CH＝CH 2和-C≡CH，所述CH 3、CH 2CH 3、OCH 3、OCH 2CH 3、-CH＝CH 2、-CH 2-CH＝CH 2和-C≡CH任选被1、2或3个R取代，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，上述R b分别独立地选自F、OH、NH 2、CH 3、CF 3、CH 2CH 3、OCH 3和-C≡CH，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，上述R b分别独立地选自F、OH、NH 2、CH 3、CF 3、CH 2CH 3和-C≡CH，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，上述R 1选自H、F、Cl、Br、CN、CH 3和OCH 3，所述CH 3和OCH 3任选被1、2或3个R a取代，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，上述R 1选自F，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，上述R 2选自
Figure PCTCN2022094274-appb-000014
其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，上述R 2选自
Figure PCTCN2022094274-appb-000015
其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，上述R 2选自
Figure PCTCN2022094274-appb-000016
其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，上述R 3、R 4、R 5、R 6、R 7、R 8、R 9、R 10和R 11分别独立地选自H、F、Cl和CH 3，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，上述环B选自
Figure PCTCN2022094274-appb-000017
其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，上述环A选自
Figure PCTCN2022094274-appb-000018
Figure PCTCN2022094274-appb-000019
其他变量如本发明所定义。
本发明提供了式(I)所示化合物、或其药学上可接受的盐、或其对映异构体、或其顺反异构体，
Figure PCTCN2022094274-appb-000020
其中，
R 1选自H、F、Cl、Br、CN、C 1-3烷基和C 1-3烷氧基，所述C 1-3烷基和C 1-3烷氧基任选被1、2或3个R a取代；
R 2选自C 6-10芳基和5-10元杂芳基，所述C 6-10芳基和5-10元杂芳基任选被1、2或3个R b取代；
R 3、R 6、R 7、R 8和R 9分别独立地选自H、F、Cl和C 1-3烷基；
R 4和R 5分别独立地选自H、F、Cl和Br；
环A选自
Figure PCTCN2022094274-appb-000021
所述
Figure PCTCN2022094274-appb-000022
Figure PCTCN2022094274-appb-000023
任选被1、2或3个R c取代；
q、r和s为1、2或3；
m和n为0、1或2；
u、w和v为1或2；
各R a分别独立地选自F、Cl和Br；
各R b分别独立地选自F、Cl、Br、I、OH、NH 2、CN、C 1-3烷基、C 1-3烷氧基、C 2-4烯基和C 2-4炔基，所述C 1-3烷基、C 1-3烷氧基、C 2-4烯基和C 2-4炔基任选被1、2或3个R取代；
各R c独立地选自F、Cl、Br、I和CH 3；
各R分别独立地选自F、Cl、Br和I。
在本发明的一些方案中，所述式(I)所示化合物、或其药学上可接受的盐、或其对映异构体、或其顺反异构体中，
R 1选自H、F、Cl、Br、I和CN；
R 2选自
Figure PCTCN2022094274-appb-000024
R 3、R 4、R 5、R 6、R 7、R 8、R 9和R分别独立地选自H、F、Cl、Br、I和C 1-3烷基；
环A为
Figure PCTCN2022094274-appb-000025
q为1、2或3；
各R b分别独立地选自F、Cl、Br、I、OH、NH 2、CN、CH 3、CH2CH 3、OCH 3、OCH2CH 3、-CH＝CH 2、-CH 2-CH＝CH 2和-C≡CH，所述CH 3、CH 2CH 3、OCH 3、OCH 2CH 3、-CH＝CH 2、-CH 2-CH＝CH 2和-C≡CH任选被1、2或3个R取代；
各R分别独立地选自F、Cl、Br和I。
本发明提供了式(I)所示化合物、或其药学上可接受的盐、或其对映异构体、或其顺反异构体，
Figure PCTCN2022094274-appb-000026
其中，
R 1选自H、F、Cl、Br、CN、C 1-3烷基和C 1-3烷氧基，所述C 1-3烷基和C 1-3烷氧基任选被1、2或3个 R a取代；
R 2选自C 6-10芳基和5-10元杂芳基，所述C 6-10芳基和5-10元杂芳基任选被1、2或3个R b取代；
R 3、R 6、R 7、R 8和R 9分别独立地选自H、F、Cl和C 1-3烷基；
R 4和R 5分别独立地选自F、Cl和Br；
环A选自
Figure PCTCN2022094274-appb-000027
所述
Figure PCTCN2022094274-appb-000028
Figure PCTCN2022094274-appb-000029
任选被1、2或3个R c取代；
q、r和s为1、2或3；
m和n为0、1或2；
u、w和v为1或2；
各R a分别独立地选自F、Cl和Br；
各R b分别独立地选自F、Cl、Br、I、OH、NH 2、CN、C 1-3烷基、C 1-3烷氧基、C 2-4烯基和C 2-4炔基，所述C 1-3烷基、C 1-3烷氧基、C 2-4烯基和C 2-4炔基任选被1、2或3个R取代；
R c和R d分别独立地选自F、Cl、Br、I和CH 3；
各R分别独立地选自F、Cl、Br和I。
在本发明的一些方案中，上述各R b分别独立地选自F、Cl、Br、I、OH、NH 2、CN、CH 3、CH 2CH 3、OCH 3、OCH 2CH 3、-CH＝CH 2、-CH 2-CH＝CH 2和-C≡CH，所述CH 3、CH 2CH 3、OCH 3、OCH 2CH 3、-CH＝CH 2、-CH 2-CH＝CH 2和-C≡CH任选被1、2或3个R取代，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，上述R b分别独立地选自F、OH、NH 2、CH 3、CF 3、CH 2CH 3和-C≡CH，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，上述R 1选自H、F、Cl、Br、CN、CH 3和OCH 3，所述CH 3和OCH 3任选被1、2或3个R a取代，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，上述R 1选自F，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，上述R 2选自
Figure PCTCN2022094274-appb-000030
其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，上述R 2选自
Figure PCTCN2022094274-appb-000031
其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，上述R 3、R 6、R 7、R 8和R 9分别独立地选自H、F、Cl和CH 3，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，上述结构单元
Figure PCTCN2022094274-appb-000032
选自
Figure PCTCN2022094274-appb-000033
Figure PCTCN2022094274-appb-000034
其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，上述结构单元
Figure PCTCN2022094274-appb-000035
选自
Figure PCTCN2022094274-appb-000036
其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，上述环A选自
Figure PCTCN2022094274-appb-000037
Figure PCTCN2022094274-appb-000038
其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，上述环A选自
Figure PCTCN2022094274-appb-000039
其他变量如本发明所定义。
本发明还有一些方案由上述变量任意组合而来。
本发明的一些方案中，上述化合物、或其药学上可接受的盐、或其对映异构体、或其顺反异构体，其选自：
Figure PCTCN2022094274-appb-000040
其中，
R 4、R 5、R 10、R 11和R b如本发明所定义。例如，
R 4、R 5、R 10和R 11分别独立地选自H、F、Cl、Br、I和C 1-3烷基；
R b分别独立地选自F、Cl、Br、I、OH、NH 2、CN、C 1-3烷基、C 1-3烷氧基、C 2-4烯基和C 2-4炔基，所述C 1-3烷基、C 1-3烷氧基、C 2-4烯基和C 2-4炔基任选被1、2或3个R取代；R分别独立地选自F、Cl、Br和I。
本发明的一些方案中，上述式(III-1)或(III-2)中，
R 4和R 11为H、R 5和R 10分别独立地选自H、F、Cl、Br和I；
R b分别独立地选自F、Cl、Br、I、OH、NH 2、CN、CH 3、CH 2CH 3、和-C≡CH，所述H 3、CH 2CH 3、和-C≡CH任选被1、2或3个R取代；R分别独立地选自F、Cl、Br和I。本发明提供了下式所示化合物、或其药学上可接受的盐、或其对映异构体、或其顺反异构体，
Figure PCTCN2022094274-appb-000041
在本发明的一些方案中，上述化合物或其药学上可接受的盐，其选自：
Figure PCTCN2022094274-appb-000042
Figure PCTCN2022094274-appb-000043
本发明还提供了一种药物组合物，含有上述任一所述化合物、或其药学上可接受的盐、或其对映异构体、或其顺反异构体，和药学上可接受的载体。所述载体，包括本领域中常规的辅料成分，例如、填充剂、粘合剂、稀释剂、崩解剂、润滑剂、着色剂、调味剂、抗氧化剂和润湿剂等。
本发明还提供了上述化合物、或其药学上可接受的盐、或其对映异构体、或其顺反异构体在制备治疗实体瘤的药物中的应用。
本发明还提供了下述合成方法：
Figure PCTCN2022094274-appb-000044
方法1：
Figure PCTCN2022094274-appb-000045
方法2：
Figure PCTCN2022094274-appb-000046
技术效果
本发明化合物对KRAS G12D蛋白与GTP结合有显著抑制作用；本发明化合物对KRAS G12D信号通路下游ERK蛋白磷酸化有显著抑制效果；本发明化合物对KRAS G12D突变型细胞GP2D、AsPC-1和Panc0403显示了优异的细胞抗增殖活性；本发明化合物具有优异的药代动力学性质。
定义和说明
除非另有说明，本文所用的下列术语和短语旨在具有下列含义。一个特定的术语或短语在没有特别定义的情况下不应该被认为是不确定的或不清楚的，而应该按照普通的含义去理解。当本文中出现商品名时，意在指代其对应的商品或其活性成分。
这里所采用的术语“药学上可接受的”，是针对那些化合物、材料、组合物和/或剂型而言，它们在可靠的医学判断的范围之内，适用于与人类和动物的组织接触使用，而没有过多的毒性、刺激性、过敏性反应或其它问题或并发症，与合理的利益/风险比相称。
术语“药学上可接受的盐”是指本发明化合物的盐，由本发明发现的具有特定取代基的化合物与相对无毒的酸或碱制备。当本发明的化合物中含有相对酸性的功能团时，可以通过在纯的溶液或合适的惰性溶剂中用足够量的碱与这类化合物接触的方式获得碱加成盐。药学上可接受的碱加成盐包括钠、钾、钙、铵、有机胺或镁盐或类似的盐。当本发明的化合物中含有相对碱性的官能团时，可以通过在纯的溶液或合适的惰性溶剂中用足够量的酸与这类化合物接触的方式获得酸加成盐。药学上可接受的酸加成盐的实例包括无机酸盐，所述无机酸包括例如盐酸、氢溴酸、硝酸、碳酸，碳酸氢根，磷酸、磷酸一氢根、磷酸二氢根、 硫酸、硫酸氢根、氢碘酸、亚磷酸等；以及有机酸盐，所述有机酸包括如乙酸、丙酸、异丁酸、马来酸、丙二酸、苯甲酸、琥珀酸、辛二酸、反丁烯二酸、乳酸、扁桃酸、邻苯二甲酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、柠檬酸、酒石酸和甲磺酸等类似的酸；还包括氨基酸(如精氨酸等)的盐，以及如葡糖醛酸等有机酸的盐。本发明的某些特定的化合物含有碱性和酸性的官能团，从而可以被转换成任一碱或酸加成盐。
本发明的药学上可接受的盐可由含有酸根或碱基的母体化合物通过常规化学方法合成。一般情况下，这样的盐的制备方法是：在水或有机溶剂或两者的混合物中，经由游离酸或碱形式的这些化合物与化学计量的适当的碱或酸反应来制备。
除非另有说明，术语“异构体”意在包括几何异构体、顺反异构体、立体异构体、对映异构体、旋光异构体、非对映异构体和互变异构体。
本发明的化合物可以存在特定的几何或立体异构体形式。本发明设想所有的这类化合物，包括顺式和反式异构体、(-)-和(+)-对映体、(R)-和(S)-对映体、非对映异构体、(D)-异构体、(L)-异构体，及其外消旋混合物和其他混合物，例如对映异构体或非对映体富集的混合物，所有这些混合物都属于本发明的范围之内。烷基等取代基中可存在另外的不对称碳原子。所有这些异构体以及它们的混合物，均包括在本发明的范围之内。
除非另有说明，术语“对映异构体”或者“旋光异构体”是指互为镜像关系的立体异构体。
除非另有说明，术语“顺反异构体”或者“几何异构体”系由因双键或者成环碳原子单键不能自由旋转而引起。
除非另有说明，术语“非对映异构体”是指分子具有两个或多个手性中心，并且分子间为非镜像的关系的立体异构体。
除非另有说明，“(+)”表示右旋，“(-)”表示左旋，“(±)”表示外消旋。
除非另有说明，用楔形实线键
Figure PCTCN2022094274-appb-000047
和楔形虚线键
Figure PCTCN2022094274-appb-000048
表示一个立体中心的绝对构型，用直形实线键
Figure PCTCN2022094274-appb-000049
和直形虚线键
Figure PCTCN2022094274-appb-000050
表示立体中心的相对构型，用波浪线
Figure PCTCN2022094274-appb-000051
表示楔形实线键
Figure PCTCN2022094274-appb-000052
或楔形虚线键
Figure PCTCN2022094274-appb-000053
或用波浪线
Figure PCTCN2022094274-appb-000054
表示直形实线键
Figure PCTCN2022094274-appb-000055
或直形虚线键
Figure PCTCN2022094274-appb-000056
除非另有说明，当化合物中存在双键结构，如碳碳双键、碳氮双键和氮氮双键，且双键上的各个原子均连接有两个不同的取代基时(包含氮原子的双键中，氮原子上的一对孤对电子视为其连接的一个取代基)，如果该化合物中双键上的原子与其取代基之间用波浪线
Figure PCTCN2022094274-appb-000057
连接，则表示该化合物的(Z)型异构体、(E)型异构体或两种异构体的混合物。例如下式(A)表示该化合物以式(A-1)或式(A-2)的单一异构体形式存在或以式(A-1)和式(A-2)两种异构体的混合物形式存在；下式(B)表示该化合物以式(B-1)或式(B-2)的单一异构体形式存在或以式(B-1)和式(B-2)两种异构体的混合物形式存在。下式(C) 表示该化合物以式(C-1)或式(C-2)的单一异构体形式存在或以式(C-1)和式(C-2)两种异构体的混合物形式存在。
Figure PCTCN2022094274-appb-000058
除非另有说明，术语“互变异构体”或“互变异构体形式”是指在室温下，不同官能团异构体处于动态平衡，并能很快的相互转化。若互变异构体是可能的(如在溶液中)，则可以达到互变异构体的化学平衡。例如，质子互变异构体(proton tautomer)(也称质子转移互变异构体(prototropic tautomer))包括通过质子迁移来进行的互相转化，如酮-烯醇异构化和亚胺-烯胺异构化。价键异构体(valence tautomer)包括一些成键电子的重组来进行的相互转化。其中酮-烯醇互变异构化的具体实例是戊烷-2，4-二酮与4-羟基戊-3-烯-2-酮两个互变异构体之间的互变。
除非另有说明，术语“富含一种异构体”、“异构体富集”、“富含一种对映体”或者“对映体富集”指其中一种异构体或对映体的含量小于100％，并且，该异构体或对映体的含量大于等于60％，或者大于等于70％，或者大于等于80％，或者大于等于90％，或者大于等于95％，或者大于等于96％，或者大于等于97％，或者大于等于98％，或者大于等于99％，或者大于等于99.5％，或者大于等于99.6％，或者大于等于99.7％，或者大于等于99.8％，或者大于等于99.9％。
除非另有说明，术语“异构体过量”或“对映体过量”指两种异构体或两种对映体相对百分数之间的差值。例如，其中一种异构体或对映体的含量为90％，另一种异构体或对映体的含量为10％，则异构体或对映体过量(ee值)为80％。
可以通过的手性合成或手性试剂或者其他常规技术制备光学活性的(R)-和(S)-异构体以及D和L异构体。如果想得到本发明某化合物的一种对映体，可以通过不对称合成或者具有手性助剂的衍生作用来制备，其中将所得非对映体混合物分离，并且辅助基团裂开以提供纯的所需对映异构体。或者，当分子中含有碱性官能团(如氨基)或酸性官能团(如羧基)时，与适当的光学活性的酸或碱形成非对映异构体的盐，然后通过本领域所公知的常规方法进行非对映异构体拆分，然后回收得到纯的对映体。此外，对映异构体和非对映异构体的分离通常是通过使用色谱法完成的，所述色谱法采用手性固定相，并任选地与化学衍生法相结合(例如由胺生成氨基甲酸盐)。
本发明的化合物可以在一个或多个构成该化合物的原子上包含非天然比例的原子同位素。例如，可用放射性同位素标记化合物，比如氚( 3H)，碘-125( 125I)或C-14( 14C)。又例如，可用重氢取代氢形成氘代药物，氘与碳构成的键比普通氢与碳构成的键更坚固，相比于未氘化药物，氘代药物有降低毒副作用、增加药物稳定性、增强疗效、延长药物生物半衰期等优势。本发明的化合物的所有同位素组成的变换，无论放射性与否，都包括在本发明的范围之内。
术语“任选”或“任选地”指的是随后描述的事件或状况可能但不是必需出现的，并且该描述包括其中所述事件或状况发生的情况以及所述事件或状况不发生的情况。
术语“被取代的”是指特定原子上的任意一个或多个氢原子被取代基取代，取代基可以包括重氢和氢的变体，只要特定原子的价态是正常的并且取代后的化合物是稳定的。当取代基为氧(即＝O)时，意味着两个氢原子被取代。氧取代不会发生在芳香基上。
术语“任选被取代的”是指可以被取代，也可以不被取代，除非另有规定，取代基的种类和数目在化学上可以实现的基础上可以是任意的。
当任何变量(例如R)在化合物的组成或结构中出现一次以上时，其在每一种情况下的定义都是独立的。因此，例如，如果一个基团被0-2个R所取代，则所述基团可以任选地至多被两个R所取代，并且每种情况下的R都有独立的选项。此外，取代基和/或其变体的组合只有在这样的组合会产生稳定的化合物的情况下才是被允许的。
当一个连接基团的数量为0时，比如-(CRR) 0-，表示该连接基团为单键。
当一个取代基数量为0时，表示该取代基是不存在的，比如-A-(R) 0表示该结构实际上是-A。
当一个取代基为空缺时，表示该取代基是不存在的，比如A-X中X为空缺时表示该结构实际上是A。
当其中一个变量选自单键时，表示其连接的两个基团直接相连，比如A-L-Z中L代表单键时表示该结构实际上是A-Z。
当一个取代基的键可以交叉连接到一个环上的两一个以上原子时，这种取代基可以与这个环上的任意原子相键合，例如，结构单元
Figure PCTCN2022094274-appb-000059
表示其取代基R可在环己基或者环己二烯上的任意一个位置发生取代。当所列举的取代基中没有指明其通过哪一个原子连接到被取代的基团上时，这种取代基可以通过其任何原子相键合，例如，吡啶基作为取代基可以通过吡啶环上任意一个碳原子连接到被取代的基团上。
当所列举的连接基团没有指明其连接方向，其连接方向是任意的，例如，
Figure PCTCN2022094274-appb-000060
中连接基团L为-M-W-，此时-M-W-既可以按与从左往右的读取顺序相同的方向连接环A和环B构成
Figure PCTCN2022094274-appb-000061
也可以按照与从左往右的读取顺序相反的方向连接环A和环B构成
Figure PCTCN2022094274-appb-000062
所述连接基团、取代基和/或其变体的组合只有在这样的组合会产生稳定的化合物的情况下才是被允许的。
除非另有规定，当某一基团具有一个或多个可连接位点时，该基团的任意一个或多个位点可以通过化学键与其他基团相连。当该化学键的连接方式是不定位的，且可连接位点存在H原子时，则连接化学键时，该位点的H原子的个数会随所连接化学键的个数而对应减少变成相应价数的基团。所述位点与其他基团连接的化学键可以用直形实线键
Figure PCTCN2022094274-appb-000063
直形虚线键
Figure PCTCN2022094274-appb-000064
或波浪线
Figure PCTCN2022094274-appb-000065
表示。例如-OCH 3中的直形实线键表示通过该基团中的氧原子与其他基团相连；
Figure PCTCN2022094274-appb-000066
中的直形虚线键表示通过该基团中的氮原子的两端与其他基团相连；
Figure PCTCN2022094274-appb-000067
中的波浪线表示通过该苯基基团中的1和2位碳原子与其他基团相连；
Figure PCTCN2022094274-appb-000068
表示该哌啶基上的任意可连接位点可以通过1个化学键与其他基团相连，至少包括
Figure PCTCN2022094274-appb-000069
这4种连接方式，即使-N-上画出了H原子，但是
Figure PCTCN2022094274-appb-000070
仍包括
Figure PCTCN2022094274-appb-000071
这种连接方式的基团，只是在连接1个化学键时，该位点的H会对应减少1个变成相应的一价哌啶基。
除非另有规定，环上原子的数目通常被定义为环的元数，例如，“5-7元环”是指环绕排列5-7个原子的“环”。
除非另有规定，术语“C 1-3烷基”用于表示直链或支链的由1至3个碳原子组成的饱和碳氢基团。所述C 1-3烷基包括C 1-2和C 2-3烷基等；其可以是一价(如甲基)、二价(如亚甲基)或者多价(如次甲基)。C 1- 3烷基的实例包括但不限于甲基(Me)、乙基(Et)、丙基(包括n-丙基和异丙基)等。
除非另有规定，术语“C 1-3烷氧基”表示通过一个氧原子连接到分子的其余部分的那些包含1至3个碳原子的烷基基团。所述C 1-3烷氧基包括C 1-2、C 2-3、C 3和C 2烷氧基等。C 1-3烷氧基的实例包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基(包括正丙氧基和异丙氧基)等。
除非另有规定，“C 2-4烯基”用于表示直链或支链的包含至少一个碳-碳双键的由2至4个碳原子组成的碳氢基团，碳-碳双键可以位于该基团的任何位置上。所述C 2-4烯基包括C 2-3、C 4、C 3和C 2烯基等；所述 C 2-4烯基可以是一价、二价或者多价。C 2-4烯基的实例包括但不限于乙烯基、丙烯基、丁烯基、丁间二烯基等。除非另有规定，“C 2-3烯基”用于表示直链或支链的包含至少一个碳-碳双键的由2至3个碳原子组成的碳氢基团，碳-碳双键可以位于该基团的任何位置上。所述C 2-3烯基包括C 3和C 2烯基；所述C 2-3烯基可以是一价、二价或者多价。C 2-3烯基的实例包括但不限于乙烯基、丙烯基等。
除非另有规定，“C 2-4炔基”用于表示直链或支链的包含至少一个碳-碳三键的由2至4个碳原子组成的碳氢基团，碳-碳三键可以位于该基团的任何位置上。所述C 2-4炔基包括C 2-3、C 4、C 3和C 2炔基等。其可以是一价、二价或者多价。C 2-4炔基的实例包括但不限于乙炔基、丙炔基、丁炔基等。
除非另有规定，本发明术语“C 6-10芳环”和“C 6-10芳基”可以互换使用，术语“C 6-10芳环”或“C 6-10芳基”表示由6至10个碳原子组成的具有共轭π电子体系的环状碳氢基团，它可以是单环、稠合双环或稠合三环体系，其中各个环均为芳香性的。其可以是一价、二价或者多价，C 6-10芳基包括C 6-9、C 9、C 10和C 6芳基等。C 6-10芳基的实例包括但不限于苯基、萘基(包括1-萘基和2-萘基等)。
除非另有规定，本发明术语“5-10元杂芳环”和“5-10元杂芳基”可以互换使用，术语“5-10元杂芳基”是表示由5至10个环原子组成的具有共轭π电子体系的环状基团，其1、2、3或4个环原子为独立选自O、S和N的杂原子，其余为碳原子。其可以是单环、稠合双环或稠合三环体系，其中各个环均为芳香性的。其中氮原子任选地被季铵化，氮和硫杂原子可任选被氧化(即NO和S(O) p，p是1或2)。5-10元杂芳基可通过杂原子或碳原子连接到分子的其余部分。所述5-10元杂芳基包括5-8元、5-7元、5-6元、5元和6元杂芳基等。所述5-10元杂芳基的实例包括但不限于吡咯基(包括N-吡咯基、2-吡咯基和3-吡咯基等)、吡唑基(包括2-吡唑基和3-吡唑基等)、咪唑基(包括N-咪唑基、2-咪唑基、4-咪唑基和5-咪唑基等)、噁唑基(包括2-噁唑基、4-噁唑基和5-噁唑基等)、三唑基(1H-1，2，3-三唑基、2H-1，2，3-三唑基、1H-1，2，4-三唑基和4H-1，2，4-三唑基等)、四唑基、异噁唑基(3-异噁唑基、4-异噁唑基和5-异噁唑基等)、噻唑基(包括2-噻唑基、4-噻唑基和5-噻唑基等)、呋喃基(包括2-呋喃基和3-呋喃基等)、噻吩基(包括2-噻吩基和3-噻吩基等)、吡啶基(包括2-吡啶基、3-吡啶基和4-吡啶基等)、吡嗪基、嘧啶基(包括2-嘧啶基和4-嘧啶基等)、苯并噻唑基(包括5-苯并噻唑基等)、嘌呤基、苯并咪唑基(包括2-苯并咪唑基等)、苯并噁唑基、吲哚基(包括5-吲哚基等)、异喹啉基(包括1-异喹啉基和5-异喹啉基等)、喹喔啉基(包括2-喹喔啉基和5-喹喔啉基等)或喹啉基(包括3-喹啉基和6-喹啉基等)。
本发明的化合物可以通过本领域技术人员所熟知的常规方法来确认结构，如果本发明涉及化合物的绝对构型，则该绝对构型可以通过本领域常规技术手段予以确证。例如单晶X射线衍射法(SXRD)，把培养出的单晶用Bruker D8 venture衍射仪收集衍射强度数据，光源为CuKα辐射，扫描方式：
Figure PCTCN2022094274-appb-000072
扫描，收集相关数据后，进一步采用直接法(Shelxs97)解析晶体结构，便可以确证绝对构型。
本发明的化合物可以通过本领域技术人员所熟知的多种合成方法来制备，包括下面列举的具体实施方 式、其与其他化学合成方法的结合所形成的实施方式以及本领域技术上人员所熟知的等同替换方式，优选的实施方式包括但不限于本发明的实施例。
除非另有规定，本发明术语“药学上可接受的载体”是指能够递送本发明有效量活性物质、不干扰活性物质的生物活性并且对宿主或者患者无毒副作用的任何制剂或载体介质代表性的载体。针对药物或药理学活性剂而言，术语“有效量”是指无毒的但能达到预期效果的药物或药剂的足够用量。有效量的确定因人而异，取决于受体的年龄和一般情况，也取决于具体的活性物质，个案中合适的有效量可以由本领域技术人员根据常规试验确定。
本发明所使用的溶剂可经市售获得。
本发明采用下述缩略词：aq代表水；eq代表当量、等量；DCM代表二氯甲烷；PE代表石油醚；DMSO代表二甲亚砜；EtOAc代表乙酸乙酯；EtOH代表乙醇；MeOH代表甲醇；DMF代表N，N-二甲基甲酰胺；Cbz代表苄氧羰基，是一种胺保护基团；Boc代表叔丁氧羰基是一种胺保护基团；r.t.代表室温；O/N代表过夜；THF代表四氢呋喃；Boc 2O代表二叔丁基二碳酸酯；TFA代表三氟乙酸；HCl代表盐酸；mp代表熔点。
化合物依据本领域常规命名原则或者使用
Figure PCTCN2022094274-appb-000073
软件命名，市售化合物采用供应商目录名称。
说明书附图
图1：化合物1A和KRAS G12D蛋白的结合模式图。
图2：化合物1B和KRAS G12D蛋白的结合模式图。
图3：化合物2A和KRAS G12D蛋白的结合模式图。
图4：化合物2-6的顺反确证谱图。
图5：化合物3-2的顺反确证谱图。
图6：化合物5-11的立体结构椭球图。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明进行详细描述，但并不意味着对本发明任何不利限制。本发明的化合物可以通过本领域技术人员所熟知的多种合成方法来制备，包括下面列举的具体实施方式、其与其他化学合成方法的结合所形成的实施方式以及本领域技术上人员所熟知的等同替换方式，优选的实施方式包括但不限于本发明的实施例。对本领域的技术人员而言，在不脱离本发明精神和范围的情况下针对本发明具体实施方式进行各种变化和改进将是显而易见的。
计算例1
Figure PCTCN2022094274-appb-000074
分子对接过程是通过使用Maestro(
Figure PCTCN2022094274-appb-000075
版本2017-2)中的Glide SP[1]和默认选项进行的。选取PDB数据库中KRAS_G12C的晶体结构PDB：6UT0，将Cys12模拟突变为Asp12，经过能量优化后，作为对接模板。为了准备蛋白质，使用Maestro[2]的蛋白质准备向导模块添加氢原子，并使用OPLS3力场。对于配体的准备，使用LigPrep生成了分子的三维结构，并进行了能量最小化[3]，使用confgen模块对小分子构象进行采样。以6UT0的配体作为质心生成了边长为
Figure PCTCN2022094274-appb-000076
的正方体对接网格。在分子对接过程中放置参考化合物。分析蛋白质受体与配体的相互作用类型，分析蛋白质受体与配体的相互作用类型，然后根据计算得到的docking scrore以及结合模式选择并保存了合理对接构象。化合物1A、1B、2A和KRAS G12D蛋白的结合模式图见附图1、附图2和附图3。
[1]Glide，
Figure PCTCN2022094274-appb-000077
LLC，New York，NY，2017.
[2]Maestro，
Figure PCTCN2022094274-appb-000078
LLC，New York，NY，2017.
[3]LigPrep，
Figure PCTCN2022094274-appb-000079
LLC，New York，NY，2017.
结论：本发明化合物与KRAS G12D有较好的结合。
参考例1
Figure PCTCN2022094274-appb-000080
MRTX1133的合成参照WO2021041671A1中example 252。
实施例1
Figure PCTCN2022094274-appb-000081
合成路线：
Figure PCTCN2022094274-appb-000082
1)化合物1-3的合成
向反应瓶中加入四氢呋喃(150mL)，化合物1-1(15.0g，65.42mmol)和化合物1-2(24.5g，196.27mmol)，降温至-40℃后滴加双(三甲硅基)氨基锂(1M，71.97mL)，缓慢回至25℃搅拌反应14小时。向反应体系中加入水(200mL)，分液。水相再分别用乙酸乙酯(100mL)萃取两次。合并有机相再用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩得粗品。粗品经柱层析纯化(乙酸乙酯∶石油醚＝0∶100～100∶0)得到化合物1-3。 1H NMR(400MHz，CDCl 3)δ5.39-5.34(m，1H)，5.10-5.06(m，1H)，4.08-3.98(m，2H)，3.75-3.70(m，3H)，3.56(td，J＝7.1，10.4Hz，1H)，3.39-3.18(m，2H)，2.70-2.64(m，1H)，2.24-1.98(m，2H)，1.93-1.67(m，2H)，1.50-1.40(m，9H)。
2)化合物1-4的三氟乙酸盐的合成
向反应瓶中加入二氯甲烷(70mL)，三氟乙酸(70mL)和化合物1-3(13.9g，43.74mmol)，25℃搅拌反应1小时。反应液减压浓缩得化合物1-4的三氟乙酸盐。 1H NMR(400MHz，CDCl 3)δ5.37(s，1H)，5.11(s，1H)，4.03-3.94(m，2H)，3.93-3.89(m，3H)，3.70-3.51(m，2H)，3.24(d，J＝15.9Hz，1H)，2.95-2.87(m，1H)，2.62-2.52(m，1H)，2.36-2.18(m，2H)，2.08-1.91(m，1H)。
3)化合物1-5的合成
向反应瓶中加入乙腈(400mL)，化合物1-4的三氟乙酸盐(22.1g，66.62mmol)和碳酸钾(42.0g，303.82mmol)，85℃搅拌反应14小时。反应液过滤，再用二氯甲烷(100mL)淋洗滤饼。滤液减压浓缩至干，再加入水(200mL)，分别用乙酸乙酯(100mL)萃取三次。合并有机相再用饱和氯化钠水溶液(50mL)洗一次，有机相再用无水硫酸钠干燥，过滤减压浓缩得化合物1-5。 1H NMR(400MHz，CDCl 3)δ4.94(br d，J＝1.9Hz，1H)，4.92-4.88(m，1H)，3.81-3.70(m，4H)，3.29-3.18(m，2H)，3.00(br d，J＝16.1Hz，1H)，2.69-2.59(m，1H)，2.46(dd，J＝1.4，16.1Hz，1H)，2.41-2.32(m，1H)，1.93-1.74(m，3H)。
4)化合物1-6的合成
氮气保护下向干燥洁净的反应瓶中加入四氢呋喃(10mL)和四氢铝锂(314mg，8.28mmol)，降温至0℃滴加化合物1-5(1.0g，5.52mmol)的四氢呋喃(5mL)溶液。加毕，回温至25℃搅拌反应1小时。氮气保护下向反应液中加入水(0.31mL)，15％氢氧化钠水溶液(0.31mL)，水(0.31mL)，搅拌10分钟，过滤。滤饼再用乙酸乙酯(20mL)淋洗，滤液减压浓缩得化合物1-6。 1H NMR(400MHz，CDCl 3)δ4.90(br s，1H)，4.87(br s，1H)，3.61(br d，J＝14.8Hz，1H)，3.37-3.14(m，4H)，3.10-3.00(m，1H)，2.63(td，J＝7.2，10.0Hz，1H)，2.49-2.40(m，1H)，2.35-2.25(m，1H)，1.95-1.60(m，4H)。
5)化合物1-9的合成
向预先干燥洁净的反应瓶中加入二氯甲烷(30mL)，化合物1-7(3g，11.88mmol)和二异丙基乙胺(3.07g，23.77mmol)。降温至-40℃再加入化合物1-8(2.65g，12.48mmol)，-40℃搅拌反应0.5小时。向反应液中加入饱和氯化铵水溶液(100mL)，再加入二氯甲烷(50mL)，分液。有机相再用无水硫酸钠干燥，过滤滤液减压浓缩得化合物1-9。LCMS(ESI)m/z：428.0[M+1] +。
6)化合物1-10的合成
向反应瓶中加入二氧六环(10mL)，化合物1-9(1.0g，2.33mmol)，N，N-二异丙基乙胺(905mg，7.00mmol，1.22mL)和化合物1-6(715mg，4.67mmol)。加热至90℃反应14小时。将反应液倒入水(200mL)中，再分别用二氯甲烷(20mL)萃取三次，合并有机相再用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得粗品。粗品经柱层析纯化(甲醇∶二氯甲烷＝0∶100～10∶90)得到化合物1-10。LCMS(ESI)m/z：545.3[M+1] +。
7)化合物1-12的合成
向反应瓶中加入二氧六环(3mL)，水(1mL)，化合物1-10(150mg，275.21μmol)，化合物1-11(211mg，412.81μmol)和碳酸铯(269mg，825.62μmol)，氮气置换三次后，加入1，1-双(二苯基磷)二茂铁氯化钯(20mg，27.52μmol)，氮气再置换三次后，100℃搅拌反应12小时。将反应液倒入水(100mL)中，再分别用二氯甲烷(30mL)萃取三次，合并有机相再用水(20mL)洗一次，有机相再用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得粗品。粗品经柱层析纯化(甲醇∶二氯甲烷＝0∶100～10∶90)得到化合物1-12。LCMS(ESI)m/z：895.3[M+1] +。
8)化合物1-13的盐酸盐的合成
向反应瓶中加入二氯甲烷(2mL)，化合物1-12(59mg，65.91μmol)，降温至0℃加入盐酸/乙酸乙酯(4M，0.5mL)，0℃保温反应1小时，反应液减压浓缩得化合物1-13的盐酸盐。LCMS(ESI)m/z：751.6[M+1] +。
9)化合物1的甲酸盐的合成
向反应瓶中加入N，N-二甲基甲酰胺(0.5mL)，化合物1-13的盐酸盐(45mg，54.62μmol)和氟化铯(41mg，273.09μmol)，25℃搅拌反应4小时。反应液过滤，滤液经制备高效液相色谱(色谱柱：Phenomenex Luna C18 75*30mm*3μm；流动相：[水(甲酸)-乙腈]；B(乙腈)％：1％-40％，8min)纯化得到化合物1的甲酸盐。 1H NMR(400MHz，CD 3OD)δ9.08(s，1H)，8.50-8.43(m，1H)，7.87(dd，J＝5.8，9.1Hz，1H)，7.40-7.28(m，2H)，7.21(d，J＝2.5Hz，1H)，5.29-5.20(m，2H)，4.74(br d，J＝13.6Hz，2H)，4.69-4.58(m，2H)，4.25(br d，J＝14.1Hz，1H)，3.97(br s，2H)，3.92-3.76(m，3H)，3.73-3.60(m，1H)，3.37-3.35(m，1H)，3.21-3.09(m，1H)，3.06-2.96(m，1H)，2.82-2.67(m，1H)，2.41-2.28(m，1H)，2.25-1.90(m，8H)；LCMS(ESI)m/z：595.3[M+1] +。
实施例2
Figure PCTCN2022094274-appb-000083
合成路线：
Figure PCTCN2022094274-appb-000084
1)化合物2-1的合成
向反应瓶中加入二氯甲烷(50mL)，甲醇(5mL)和化合物1-3(5g，15.73mmol)。降温至-78℃通入臭氧0.5小时，通毕，再用氮气吹0.5小时后，加入二甲硫醚(1.95g，31.47mmol)。-78℃搅拌1小时后升温至25℃搅拌14小时。反应液减压浓缩得残余物经柱层析纯化(乙酸乙酯∶石油醚＝0∶100～100∶0)得到化合物2-1。 1H NMR(400MHz，CDCl 3)δ4.37-4.20(m，2H)，3.75-3.69(m，3H)，3.67-3.41(m，3H)，3.39-2.91(m，1H)，2.78-2.54(m，1H)，2.32-2.11(m，1H)，2.08-1.77(m，2H)，1.44(s，9H)。
2)化合物2-2的三氟乙酸盐的合成
向反应瓶中加入二氯甲烷(47mL)，三氟乙酸(47mL)和化合物2-1(4.7g，14.70mmol)，25℃搅拌反应1小时。反应液减压浓缩得化合物2-2的三氟乙酸盐。 1H NMR(400MHz，CDCl 3)δ4.21-4.08(m，2H)，3.87(s，3H)，3.76-3.70(m，2H)，3.69-3.56(m，2H)，2.40-2.16(m，3H)，2.12-1.95(m，1H)。
3)化合物2-3的合成
向反应瓶中加入乙腈(120mL)，化合物2-2的三氟乙酸盐(6.0g，17.98mmol)和碳酸钾(12.43g，89.90mmol)，85℃搅拌反应2小时。反应液过滤，再用乙酸乙酯(50mL)淋洗滤饼。滤液减压浓缩，再加入水(30mL)，再用乙酸乙酯(100mL)萃取。有机相再用无水硫酸钠干燥，过滤滤液减压浓缩得化合物2-3。 1H NMR(400MHz，CDCl 3)δ3.74(s，3H)，3.64-3.56(m，1H)，3.43-3.33(m，1H)，3.21-3.12(m，1H)，2.89(d，J＝18.6Hz， 1H)，2.76-2.61(m，2H)，2.44-2.34(m，1H)，2.10-1.94(m，2H)，1.93-1.82(m，1H)。
4)化合物2-5和3-1的合成
向反应瓶中加入四氢呋喃(140mL)和化合物2-4(13.77g，36.03mmol)。降温至-70℃滴加六甲基二硅基胺基钠(1M，36.03mL)。-70℃保温反应0.5小时后加入化合物2-3(4.4g，24.02mmol)的四氢呋喃(30mL)溶液。回至25℃搅拌反应14小时。向反应液中加入水(100mL)，再分别用乙酸乙酯(50mL)萃取两次。合并有机相再用无水硫酸钠干燥，过滤滤液减压浓缩得粗品。粗品经柱层析纯化(甲醇∶二氯甲烷＝0∶100～10∶90)得到化合物2-5和3-1。
2-5： 1H NMR(400MHz，CDCl 3)δ6.64-6.39(m，1H)，3.90-3.82(m，1H)，3.75-3.71(m，3H)，3.47(dd，J＝1.9，15.3Hz，1H)，3.30-3.19(m，1H)，3.00-2.92(m，1H)，2.64(td，J＝7.6，9.8Hz，1H)，2.47-2.32(m，2H)，1.97-1.78(m，3H)；FNMR(400MHz，CDCl 3)δ-130.151。
3-1： 1H NMR(400MHz，CDCl 3)δ6.77-6.49(m，1H)，4.14-4.03(m，1H)，3.81-3.73(m，3H)，3.65-3.58(m，1H)，3.51-3.43(m，1H)，3.21-3.12(m，1H)，2.83-2.69(m，2H)，2.62-2.50(m，1H)，2.12-1.88(m，3H)；FNMR(400MHz，CDCl 3)δ-154.287。
5)化合物2-6的合成
Figure PCTCN2022094274-appb-000085
向反应瓶中加入四氢呋喃(3mL)和化合物2-5(70mg，351.37μmol)。降温至0℃加入四氢铝锂(26.67mg，702.74μmol)，25℃保温反应14小时。向反应液中依次加入水(0.03mL)，15％氢氧化钠水溶液(0.03mL)和水(0.1mL)。过滤，滤液减压浓缩得到化合物2-6。 1H NMR(400MHz，CDCl 3)δ6.64-6.35(m，1H)，3.79-3.65(m，2H)，3.48-3.39(m，1H)，3.34-3.25(m，2H)，3.15-3.01(m，1H)，2.74-2.58(m，1H)，2.45-2.22(m，2H)，1.97-1.60(m，3H)；FNMR(400MHz，CDCl 3)δ-130.626。
双键构型鉴定：NOE显示H10和H1相关，确证双键为顺式构型，见图4。
6)化合物2-7的合成
向反应瓶中加入四氢呋喃(1mL)、化合物1-9(85mg，198.46μmol)和化合物2-6(40.78mg，238.16μmol)。降温至0℃再加入钠氢(15.88mg，396.93μmol，60％纯度)，升温至25℃反应1小时。向反应液中加入水(10mL)，再分别用乙酸乙酯(10mL)萃取两次。合并有机相再用无水硫酸钠干燥，过滤滤液减压浓缩得粗品。粗品用薄层层析(石油醚∶乙酸乙酯＝0∶1)纯化得到化合物2-7。 1H NMR(400MHz，CDCl 3)δ8.73(s，1H)，6.64-6.32(m，1H)，4.60-4.29(m，4H)，4.27-4.07(m，2H)，3.96-3.82(m，1H)，3.80-3.50(m，2H)，3.49-3.34 (m，1H)，3.22-3.13(m，1H)，2.81-2.54(m，2H)，2.42-2.25(m，1H)，2.22-2.04(m，1H)，2.04-1.84(m，4H)，1.84-1.58(m，3H)，1.52(s，9H)；FNMR(400MHz，CDCl 3)δ-130.701，-134.188；LCMS(ESI)m/z：563.1[M+1] +。
7)化合物2-8的合成
向反应瓶中加入二氧六环(1mL)、水(0.33mL)、化合物2-7(22mg，39.07μmol)、化合物1-11(40.05mg，78.15μmol)和碳酸铯(38.19mg，117.22μmol)。氮气置换三次后，加入1，1-双(二苯基磷)二茂铁氯化钯(2.86mg，3.91μmol)。氮气再置换三次后，100℃搅拌反应5小时。将反应液倒入水(10mL)中，再分别用二氯甲烷(5mL)萃取两次。合并有机相再用无水硫酸钠干燥，过滤滤液减压浓缩得粗品。粗品经制备高效液相色谱纯化(色谱柱：Phenomenex Luna C18 100*30mm*5μm；流动相：[水(甲酸)-乙腈]；B(乙腈)％：25％-65％，10min)得到化合物2-8。LCMS(ESI)m/z：913.3[M+1] +。
8)化合物2-9的盐酸盐的合成
向反应瓶中加入盐酸/乙酸乙酯(4M，1mL)和化合物2-8(20mg，21.90μmol)，0℃保温反应1小时。反应液减压浓缩得化合物2-9的盐酸盐。LCMS(ESI)m/z：769.4[M+1] +。
9)化合物2的甲酸盐的合成
向反应瓶中加入N，N-二甲基甲酰胺(0.5mL)，化合物2-9的盐酸盐(18mg，21.38μmol)和氟化铯(32.48mg，213.80μmol)，20℃搅拌反应14小时。反应液过滤，滤液经制备高效液相色谱纯化(色谱柱：Phenomenex Luna C18 150*30mm*5μm；流动相：[水(FA)-ACN]；B(乙腈)％：1％-35％，8min)得到化合物2的甲酸盐。 1H NMR(400MHz，CD 3OD)δ9.07(s，1H)，8.46-8.38(m，1H)，7.94-7.83(m，1H)，7.40-7.28(m，2H)，7.26-7.16(m，1H)，6.90-6.61(m，1H)，4.74-4.72(m，1H)，4.60-4.44(m，3H)，4.26-3.96(m，3H)，3.95-3.72(m，3H)，3.54-3.41(m，1H)，3.35(br d，J＝3.5Hz，1H)，3.08-2.96(m，1H)，2.93-2.81(m，1H)，2.67-2.54(m，1H)，2.31-1.90(m，8H)；FNMR(400MHz，CD 3OD)δ-111.637，-129.741，139.276；LCMS(ESI)m/z：613.3[M+1] +。
实施例3
Figure PCTCN2022094274-appb-000086
合成路线：
Figure PCTCN2022094274-appb-000087
1)化合物3-2的合成
Figure PCTCN2022094274-appb-000088
向反应瓶中加入四氢呋喃(20mL)和化合物3-1(1.09g，5.47mmol)。降温至0℃加入四氢铝锂(415.32mg，10.94mmol)，25℃保温反应14小时。向反应液中依次加入水(0.4mL)，15％氢氧化钠水溶液(0.4mL)和水(1.2mL)。过滤，滤液减压浓缩得到化合物3-2。1H NMR(400MHz，CDCl 3)δ6.68-6.41(m，1H)，3.60-3.51(m，1H)，3.36-3.19(m，4H)，3.11-3.01(m，1H)，2.66-2.57(m，1H)，2.56-2.47(m，1H)，2.44-2.36(m，1H)，2.01-1.65(m，3H)；FNMR(400MHz，CDCl 3)δ-131.677。
双键构型鉴定：NOE显示H10和H4相关，确证双键为反式构型，见图5。
2)化合物3-3的合成
向反应瓶中加入四氢呋喃(10mL)、化合物1-9(800mg，1.87mmol)和化合物3-2(690mg，4.03mmol)。降温至0℃再加入钠氢(149.43mg，3.74mmol，60％纯度)，回至25℃保温反应1小时。向反应液中加入水(10mL)，再分别用乙酸乙酯(10mL)萃取两次。合并有机相再用无水硫酸钠干燥，过滤滤液减压浓缩得粗品。粗品经柱层析(甲醇∶二氯甲烷＝0∶1～5∶95)纯化得到化合物3-3。 1H NMR(400MHz，CDCl 3)δ8.73(s，1H)，6.73-6.44(m，1H)，4.56-4.13(m，6H)，3.78-3.52(m，3H)，3.32-3.22(m，1H)，3.19-3.09(m，1H)，2.93-2.80(m，1H)，2.68-2.58(m，1H)，2.52-2.42(m，1H)，2.24-2.11(m，1H)，2.00-1.86(m，4H)，1.85-1.75(m，1H)，1.74-1.67(m，2H)，1.54-1.48(m，9H)；FNMR(400MHz，CDCl 3)δ-132.354，-134.215；LCMS(ESI)m/z：563.1[M+1] +。
4)化合物3-4的合成
向反应瓶中加入二氧六环(6mL)、水(2mL)、化合物3-3(200mg，355.22μmol)、化合物1-11(364.12mg，710.43μmol)和碳酸铯(38.19mg，117.22μmol)。氮气置换三次后，加入1，1-双(二苯基磷)二茂铁氯化钯(25.99mg，35.52μmol)。氮气再置换三次后，100℃搅拌反应5小时。将反应液倒入水(30mL)中，再分别用二氯甲烷(10mL)萃取两次。合并有机相再用无水硫酸钠干燥，过滤滤液减压浓缩得粗品。粗品经制备高效液相色谱纯化(色谱柱：Phenomenex Luna C18 100*30mm*5μm；流动相：[水(FA)-ACN]；B(乙腈)％：25％-65％，10min)得到化合物3-4。LCMS(ESI)m/z：913.3[M+1] +。
5)化合物3-5的盐酸盐的合成
向反应瓶中加入盐酸/乙酸乙酯(4M，1mL)和化合物3-4(20mg，21.90μmol)，0℃保温反应1小时。反应液减压浓缩得化合物3-5的盐酸盐。LCMS(ESI)m/z：769.4[M+1] +。
6)化合物3的甲酸盐的合成
向反应瓶中加入N，N-二甲基甲酰胺(0.5mL)，化合物3-5的盐酸盐(18mg，21.38μmol)和氟化铯(32.48mg，213.80μmol)，20℃搅拌反应14小时。反应液过滤，滤液经制备高效液相色谱纯化(色谱柱：Phenomenex Luna C18 150*30mm*5μm；流动相：[水(FA)-ACN]；B(乙腈)％：1％-35％，8min)得到化合物3的甲酸盐。 1H NMR(400MHz，CD 3OD)δ9.11(s，1H)，8.52-8.38(m，1H)，7.93-7.83(m，1H)，7.42-7.28(m，2H)，7.24-7.18(m，1H)，6.95-6.67(m，1H)，4.72(br t，J＝11.3Hz，1H)，4.65-4.41(m，4H)，4.03-3.89(m，3H)，3.88-3.76(m，2H)，3.65-3.55(m，1H)，3.44-3.37(m，1H)，2.98-2.85(m，2H)，2.78-2.65(m，1H)，2.31-1.88(m，8H)；FNMR(400MHz，CD 3OD)δ-111.663，-131.351，139.350；LCMS(ESI)m/z：613.3[M+1] +。
实施例4
Figure PCTCN2022094274-appb-000089
合成路线：
Figure PCTCN2022094274-appb-000090
1)化合物4-3的合成
向反应瓶中加入二氯甲烷(300mL)，化合物4-1(20.0g，108.10mmol)、化合物4-2(15.09g，108.10mmol)、三乙胺(21.88g，216.20mmol)和无水硫酸镁(15.0g，124.62mmol)，25℃搅拌反应14小时。反应液过滤，滤饼再用二氯甲烷(100mL)淋洗。滤液减压浓缩得残余物，再向残余物中加入甲基叔丁基醚(200mL)，水(200mL)，分液。有机相再用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得化合物4-3。 1H NMR(400MHz，CDCl 3)δ8.25(s，1H)，7.69-7.62(m，2H)，7.59-7.53(m，2H)，4.43-4.36(m，2H)，4.24(q，J＝7.2Hz，2H)，1.31(t，J＝7.2Hz，3H)。
2)化合物4-4的合成
向反应瓶中加入四氢呋喃(250mL)，化合物4-3(10.0g，37.02mmol)和氢化钠(3.26g，81.44mmol，60％纯度)。25℃搅拌5分钟后再加入化合物1-2(13.88g，111.06mmol)，再升温至65℃反应5小时。反应液降至室温，加入水(50mL)，乙酸乙酯(50mL)，分液。有机相再用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得化合物4-4。 1H NMR(400MHz，CDCl 3)δ8.38(s，1H)，7.67-7.63(m，2H)，7.61-7.53(m，2H)，5.28-5.22(s，2H)，5.05-4.96(s，2H)，4.27-3.95(m，6H)，2.95-2.85(m，4H)，1.31(t，J＝7.2Hz，3H)。
3)化合物4-5的盐酸盐的合成
向反应瓶中加入四氢呋喃(80mL)，化合物4-4(8.0g，17.89mmol)和盐酸(1M，53.67mL)，25℃搅拌反应0.5小时。向反应体系中加入水(150mL)，乙酸乙酯(100mL)，分液。得到化合物4-5盐酸盐的水相。
4)化合物4-6的合成
向含有化合物4-5的盐酸盐(5.66g，17.87mmol)的水相中，滴加氢氧化钠水溶液(1M，61.52mL)调节pH＝9～10。加毕，25℃搅拌反应0.5小时。反应液分别用乙酸乙酯(100mL)萃取两次，合并有机相再用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得粗品。粗品经柱层析纯化(甲醇∶二氯甲烷＝0∶100～10∶90)得到化合物4-6。 1H NMR(400MHz，CDCl 3)δ4.97(td，J＝2.1，19.8Hz，2.0Hz，4H)，4.23-4.16(q，J＝7.2Hz，2H)，3.89-3.84(s，1H)，3.84-3.79(s，1H)，3.26(dd，J＝1.8，15.0Hz，2H)，2.98(dd，J＝1.1，16.5Hz，2H)，2.59(br dd，J＝1.8，16.5Hz，2H)，1.33-1.20(t，J＝7.2Hz，3H)。
5)化合物4-7的合成
向反应瓶中加入四氢呋喃(10mL)和化合物4-6(0.5g，2.41mmol)，降温至0℃再加入氢化铝锂(183.10mg，4.82mmol)，25℃搅拌反应14小时。降温至0℃，滴加水(0.2mL)，15％氢氧化钠水溶液(0.2mL)和水(0.6mL)，过滤。滤液减压浓缩得残余物。再向残余物中加入二氯甲烷(20mL)，过滤，滤液减压浓缩得化合物4-7。 1H NMR(400MHz，CDCl 3)δ4.94(td，J＝2.0，13.9Hz，4H)，3.74-3.66(m，1H)，3.66-3.63(m，1H)，3.30-3.21(m，4H)，2.57-2.49(m，2H)，2.43-2.36(m，2H)。
6)化合物4-8的合成
向反应瓶中加入二氧六环(4mL)，化合物1-9(400mg，0.93mmol)，N，N-二异丙基乙胺(362.11mg，2.80mmol)和化合物4-7(308.64mg，1.87mmol)。加热至90℃反应14小时。将反应液倒入水(200mL)中，再分别用二氯甲烷(20mL)萃取三次，合并有机相再用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得粗品。粗品经柱层析纯化(甲醇∶二氯甲烷＝0∶100～10∶90)得到化合物4-8。LCMS(ESI)m/z：557.3[M+1] +。
7)化合物4-9的合成
向反应瓶中加入二氧六环(4mL)，水(1mL)，化合物4-8(160mg，287.22μmol)，化合物1-11(300mg，585.33μmol)和磷酸钾(124mg，584.17μmol)，氮气置换三次后，加入氯(2-二环己基膦基-2，4，6-三异丙基-1，1-联苯 基)[2-(2-氨基-1，1-联苯)]钯(II)(24mg，30.50μmol)，再氮气置换三次后，85℃搅拌反应14小时。将反应液倒入水(30mL)中，再分别用二氯甲烷(10mL)萃取两次，合并有机相再用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得粗品。粗品经柱层析纯化(甲醇∶二氯甲烷＝0∶100～10∶90)得到化合物4-9。LCMS(ESI)m/z：907.3[M+1] +。
8)化合物4-10盐酸盐的合成
向反应瓶中加入化合物4-9(110mg，121.26μmol)和盐酸/乙酸乙酯(4M，2.0mL)，20℃保温反应2小时，反应液减压浓缩得化合物4-10的盐酸盐。LCMS(ESI)m/z：763.3[M+1] +。
9)化合物4的甲酸盐的合成
向反应瓶中加入N，N-二甲基甲酰胺(2mL)，化合物4-10的盐酸盐(101mg，120.82μmol)和氟化铯(183.54mg，1.21mmol)，25℃搅拌反应14小时。反应液过滤，滤液经制备高效液相色谱(色谱柱：Phenomenex Luna C18 75*30mm*3μm；流动相：[水(甲酸)-乙腈]；B(乙腈)％：1％-40％，8min)纯化得到化合物4的甲酸盐。 1H NMR(400MHz，CD 3OD)δ9.05(s，1H)，8.41(s，1H)，7.89-7.85(m，1H)，7.37-7.31(m，2H)，7.21(d，J＝2.4Hz，1H)，5.15-5.07(m，4H)，4.74(br t，J＝13.2Hz，3H)，4.53-4.45(m，2H)，4.10-3.93(m，4H)，3.93-3.79(m，2H)，3.58-3.50(m，2H)，3.37(m，1H)，2.91-2.87(br d，J＝16.8Hz，2H)，2.71-2.66(br d，J＝16.8Hz，2H)，2.11-1.97(m，4H)；LCMS(ESI)m/z：607.3[M+1] +。
实施例5
Figure PCTCN2022094274-appb-000091
合成路线：
Figure PCTCN2022094274-appb-000092
1)化合物5-2的合成
向反应瓶中加入四氢呋喃(300mL)和化合物5-1(15g，61.66mmol)。降温至0℃加入二氟二溴甲烷(28.46g，135.66mmol)和六甲基三胺基磷(22.14g，135.66mmol)。回温至25℃反应0.5小时后，再加入锌粉(9.27g，141.83mmol)，加热至70℃搅拌14小时。向反应体系中加入水(200mL)，乙酸乙酯(200mL)，分液。有机相再用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩得残余物。残余物经柱层析纯化(乙酸乙酯∶石油醚＝0∶100～100∶0)得 到化合物5-2。 1H NMR(400MHz，CDCl 3)δ4.57-4.40(m，1H)，4.20-4.01(m，2H)，3.74(s，3H)，3.02-2.83(m，1H)，2.75-2.58(m，1H)，1.53-1.34(m，9H)。
2)化合物5-3的合成
向反应瓶中加入四氢呋喃(1300mL)，化合物5-2(61.5g，221.81mmol)和烯丙基溴(80.50g，665.43mmol)。降温至-65℃滴加六甲基二硅胺锂(1M，288.35mL)，滴毕，-65℃保温反应2小时后回温至25℃反应12小时。将反应液倒入饱和氯化钠水溶液(300mL)中，分液。水相再用乙酸乙酯(150mL)萃取，合并有机相再用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩得残余物。残余物经柱层析纯化(乙酸乙酯∶石油醚＝0∶100～100∶0)得到化合物5-3。 1H NMR(400MHz，CDCl 3)δ5.79-5.62(m，1H)，5.23-5.08(m，2H)，4.29-4.11(m，1H)，4.09-3.96(m，1H)，3.73(s，3H)，3.17-2.88(m，1H)，2.81-2.67(m，2H)，2.59(dd，J＝8.0，14.2Hz，1H)，1.48-1.39(m，9H)。3)化合物5-4的合成
向反应瓶中加入四氢呋喃(1500mL)，化合物5-3(53g，167.02mmol)。降温至0℃后加入硼烷四氢呋喃溶液(1M，133.62mL)，0℃搅拌反应1小时。再加入水(150mL)，氢氧化钠水溶液(3M，222.69mL)和双氧水(170.41g，30％含量)。回温至25℃反应1小时。向反应中加入1000mL饱和亚硫酸钠水溶液(1000mL)，淀粉碘化钾试纸检测不变蓝。再用乙酸乙酯(500mL)萃取，有机相再用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩得残余物。残余物经柱层析纯化(乙酸乙酯∶石油醚＝0∶100～100∶0)得到化合物5-4。 1H NMR(400MHz，CDCl 3)δ4.32-3.97(m，2H)，3.75-3.60(m，4H)，2.89-2.60(m，2H)，2.45-2.18(m，1H)，2.03-1.69(m，2H)，1.68-1.31(m，11H)。
4)化合物5-5的合成
向反应瓶中加入二氯甲烷(30mL)，三乙胺(4.48g，44.28mmol)，4-二甲胺基吡啶(216.4mg，1.77mmol)和化合物5-4(5.94g，17.71mmol)。降温至0℃加入对甲基苯磺酰氯(5.07g，26.57mmol)，再回温至25℃搅拌反应14小时。向反应液中加入二氯甲烷(20mL)和饱和碳酸氢钠水溶液(10mL)，分液。有机相减压浓缩得残余物。残余物经柱层析纯化(乙酸乙酯∶石油醚＝0∶100～100∶0)得到化合物5-5。LCMS(ESI)m/z：512.0[M+23] +。
5)化合物5-6的三氟乙酸盐的合成
向反应瓶中加入二氯甲烷(200mL)，三氟乙酸(100mL)和化合物5-5(42.3g，86.41mmol)，25℃搅拌反应1小时。反应液减压浓缩得化合物5-6的三氟乙酸盐。LCMS(ESI)m/z：390.1[M+1] +。
6)化合物5-7的合成
向反应瓶中加入N，N-二甲基甲酰胺(120mL)，化合物5-6的三氟乙酸盐(45g，89.39mmol)和碳酸钾(53.6g，387.78mmol)，25℃搅拌反应14小时。将反应体系倒入水(600mL)淋洗滤饼，再分别用乙酸乙酯(100mL)萃取三次。合并有机相再分别用水(50mL)，饱和氯化钠水溶液(50mL)洗涤。有机相再用无水硫酸钠干燥， 过滤减压浓缩得残余物，残余物经柱层析纯化(甲醇∶二氯甲烷＝0∶100～10∶90)得化合物5-7。 1H NMR(400MHz，CDCl 3)δ3.81-3.65(m，4H)，3.37(dd，J＝1.7，14.4Hz，1H)，3.29-3.17(m，1H)，3.06-2.96(m，1H)，2.65-2.57(m，1H)，2.51-2.32(m，2H)，1.97-1.78(m，3H)。FNMR(400MHz，CDCl 3)δ-89.511(s，2F)。
7)化合物2-6和3-2的合成
向反应瓶中加入四氢呋喃(20mL)和化合物5-7(2.1g，9.67mmol)。降温至0℃滴加红铝(13.43mL，70％甲苯溶液)的四氢呋喃(20mL)溶液。回至25℃搅拌反应16小时。向反应液中加入水(2mL)，15％氢氧化钠水溶液(2mL)和水(2mL)。过滤，滤液减压浓缩得化合物2-6和3-2的混合物。 1H NMR(400MHz，CDCl 3)δ6.70-6.35(m，1H)，3.80-3.61(m，1H)，3.48-3.40(m，1H)，3.40-3.23(m，2H)，3.20-3.11(m，1H)，2.70-2.56(m，1H)，2.54(td，J＝1.3，2.6Hz，2H)，2.03-1.58(m，4H)。FNMR(400MHz，CDCl 3)δ-129.943--130.802(d，1F)。
8)化合物5-8和7-1的合成
Figure PCTCN2022094274-appb-000093
向反应瓶中加入二氯甲烷(15mL)和化合物2-6和3-2混合物(1.5g，8.76mmol)，4-二甲胺基吡啶(107.03mg，876.11μmol)和二异丙基乙胺(3.4g，26.28mmol)。再加入叔丁基二苯基氯硅烷(3.61g，13.14mmol)，25℃搅拌反应14小时。向反应液中加入二氯甲烷(10mL)，水(2mL)，分液。有机相减压浓缩得化合物残余物。残余物经柱层析纯化(乙酸乙酯∶石油醚＝0∶100～100∶0)得到化合物5-8和7-1。
5-8： 1H NMR(400MHz，CDCl 3)δ7.70-7.62(m，4H)，7.50-7.31(m，6H)，6.54-6.25(m，1H)，3.78-3.70(m，1H)，3.46-3.38(m，2H)，3.37-3.29(m，1H)，3.11-3.02(m，1H)，2.66-2.51(m，2H)，2.25-2.15(m，1H)，2.06-1.95(m，1H)，1.89-1.58(m，3H)，1.08(s，9H)。FNMR(400MHz，CDCl 3)δ-131.671(s，1F)。
双键构型鉴定：NOE显示H10和H1相关，确证双键为顺式构型。
7-1： 1H NMR(400MHz，CDCl 3)δ7.72-7.61(m，4H)，7.46-7.32(m，6H)，6.67-6.41(m，1H)，3.61-3.53(m，1H)，3.47-3.37(m，2H)，3.18(dd，J＝1.5，13.8Hz，1H)，3.10-2.98(m，1H)，2.90-2.81(m，1H)，2.60-2.48(m，1H)，2.39-2.30(m，1H)，2.05-1.96(m，1H)，1.89-1.55(m，3H)，1.08(s，9H)。FNMR(400MHz，CDCl 3)δ-133.143(s，1F)。
双键构型鉴定：NOE显示H10和H4相关，确证双键为反式构型。
9)化合物5-9和6-1的合成
化合物5-8经SFC(仪器型号：Waters SFC350 AP preparative SFC；色谱柱：Phenomenex-Cellulose-2， 250*50mm i.d.10μm；流动相；A：CO 2，B：MeOH(0.1％NH 3H 2O)；梯度：B％＝30％等度洗脱；流速：200g/min；柱温：35℃；系统压力：100bar)分离纯化减压浓缩后得到化合物5-9(Rt＝1.557min)和化合物6-1(Rt＝1.870min)。
5-9： 1H NMR(400MHz，CDCl 3)δ7.70-7.62(m，4H)，7.50-7.31(m，6H)，6.54-6.25(m，1H)，3.78-3.70(m，1H)，3.46-3.38(m，2H)，3.37-3.29(m，1H)，3.11-3.02(m，1H)，2.66-2.51(m，2H)，2.25-2.15(m，1H)，2.06-1.95(m，1H)，1.89-1.58(m，3H)，1.08(s，9H)。FNMR(400MHz，CDCl 3)δ-131.682(s，1F)。
6-1： 1H NMR(400MHz，CDCl 3)δ7.70-7.62(m，4H)，7.50-7.31(m，6H)，6.54-6.25(m，1H)，3.78-3.70(m，1H)，3.46-3.38(m，2H)，3.37-3.29(m，1H)，3.11-3.02(m，1H)，2.66-2.51(m，2H)，2.25-2.15(m，1H)，2.06-1.95(m，1H)，1.89-1.58(m，3H)，1.08(s，9H)。FNMR(400MHz，CDCl 3)δ-131.682(s，1F)。
10)化合物5-10的盐酸盐的合成
向反应瓶中加入化合物5-9(2.25g，5.49mmol)，二氧六环(45mL)和浓盐酸(13.50mL)，加热至100℃搅拌反应14小时。反应液减压浓缩得残余物，向残余物中加入水(20mL)，再分别用甲基叔丁基醚(10mL)萃取两次。水相减压浓缩得化合物5-10的盐酸盐。 1H NMR(400MHz，CDOD 3)δ6.99-6.72(m，1H)，4.32-4.20(m，1H)，4.06(br d，J＝14.8Hz，1H)，3.79-3.55(m，3H)，3.27-3.20(m，1H)，2.89-2.78(m，1H)，2.70-2.61(m，1H)，2.27-2.16(m，2H)，2.15-1.95(m，2H)。FNMR(400MHz，CDCl 3)δ-127.837(d，1F)。
11)化合物5-11的合成
向反应瓶中加入四氢呋喃(20mL)、化合物1-9(1.88g，4.38mmol)和化合物5-10的盐酸盐(0.7g，3.37mmol)。降温至0℃再加入钠氢(560mg，14.00mmol，60％纯度)，升温至25℃反应2小时。向反应液中加入水(20mL)，再分别用乙酸乙酯(10mL)萃取两次。合并有机相再用饱和氯化钠水溶液(10mL)洗一次，无水硫酸钠干燥，过滤滤液减压浓缩得粗品。经柱层析纯化(乙酸乙酯∶石油醚＝0∶100～100∶0)得到化合物5-11。 1H NMR(400MHz，CDCl 3)δ8.76-8.71(m，1H)，6.63-6.36(m，1H)，4.58-4.32(m，4H)，4.28-4.11(m，2H)，3.96-3.83(m，1H)，3.79-3.51(m，2H)，3.49-3.36(m，1H)，3.27-3.10(m，1H)，2.79-2.54(m，2H)，2.41-2.28(m，1H)，2.19-2.07(m，1H)，2.03-1.84(m，4H)，1.79(td，J＝8.5，12.6Hz，3H)，1.55-1.51(m，9H)；FNMR(400MHz，CDCl 3)δ-130.695(s，1F)，-134.194(s，1F)；LCMS(ESI)m/z：563.1[M+1] +。
单晶培养过程：10mg化合物5-11在室温条件下溶解于1.2mL乙腈/乙醇/水(1∶2∶1)中，将样品溶液置于4mL半密封样品瓶中，在55℃条件下缓慢挥发，第二天得到晶体。
仪器参数：
Rigaku Oxford Diffraction XtaLAB Synergy-S four-circle diffractometer equipped with a HyPix-6000HE area detector.
Cryogenic system：Oxford Cryostream 800
Cu：
Figure PCTCN2022094274-appb-000094
50W，Micro focus source with multilayer mirror(μ-CMF).
Distance from the crystal to the CCD detector：d＝35mm
Tube Voltage：50kV
Tube Current：1mA
数据收集：
衍射实验收集了49233个衍射点，其中独立衍射点4854个(R int＝0.0700)。衍射收集范围2θ＝5.006to133.02°，衍射指标范围-7≤h≤7，-12≤k≤14，-42≤1≤42。结构解析使用SHELXT(Sheldrick，G.M.2015.ActaCryst.A71，3-8)，结构精修使用SHELXL(against F 2)(Sheldrick，G.M.2015.ActaCryst.C71，3-8)。4854个独立衍射点中，参加结构精修的参数为355。精修后S＝1.082，R1＝0.0375，wR2＝0.0917。残余电子密度值为0.33和
Figure PCTCN2022094274-appb-000095
通过化合物5-11的单晶数据，可以确定其绝对构型。化合物5-11的单晶数据见表1～表5，化合物5-11立体结构椭球图见附图6。
表1化合物5-11的晶体数据和结构细化
Figure PCTCN2022094274-appb-000096
Figure PCTCN2022094274-appb-000097
表2化合物5-11晶体的原子坐标(×10 4)和等价各向同性移位参数
Figure PCTCN2022094274-appb-000098
Figure PCTCN2022094274-appb-000099
Figure PCTCN2022094274-appb-000100
表3化合物5-11的键长
Figure PCTCN2022094274-appb-000101
Figure PCTCN2022094274-appb-000102
表4化合物5-11的键角[deg]
Figure PCTCN2022094274-appb-000103
Figure PCTCN2022094274-appb-000104
表5化合物5-11的扭转角度[deg].
Figure PCTCN2022094274-appb-000105
Figure PCTCN2022094274-appb-000106
Figure PCTCN2022094274-appb-000107
12)化合物5-12的合成
向反应瓶中加入二氧六环(4mL)、水(1mL)、化合物5-11(350mg，621.63μmol)、化合物1-11(643mg，1.25mmol)和磷酸钾(266mg，1.25mmol)。氮气置换三次后，加入氯(2-二环己基膦基-2，4，6-三异丙基-1，1-联苯基)[2-(2-氨基-1，1-联苯)]钯(II)(49mg，62.28μmol)。氮气再置换三次后，85℃搅拌反应14小时。将反应液倒入水(30mL)中，再分别用二氯甲烷(10mL)萃取两次。合并有机相再用无水硫酸钠干燥，过滤滤液减压浓缩得粗品。粗品经柱层析纯化(乙酸乙酯∶石油醚＝0∶100～100∶0)得到化合物5-12。LCMS(ESI)m/z：913.3[M+1] +。
13)化合物5-13的盐酸盐的合成
向反应瓶中加入盐酸/乙酸乙酯(4M，4.09mL)和化合物5-12(300mg，328.53μmol)。25℃保温反应2小时。反应液减压浓缩得化合物5-13的盐酸盐。LCMS(ESI)m/z：769.4[M+1] +。
14)化合物5的甲酸盐的合成
向反应瓶中加入N，N-二甲基甲酰胺(2mL)，化合物5-13的盐酸盐(276mg，327.83μmol)和氟化铯(497.98mg，3.28mmol)，25℃搅拌反应14小时。反应液过滤，滤液经制备色谱纯化(色谱柱：Phenomenex Luna C18 150*30mm*5μm；流动相：[水(FA)-ACN]；B(乙腈)％：1％-35％，8min)得到化合物5的甲酸盐。 1H NMR(400MHz，CD 3OD)δ9.06(s，1H)，8.36(s，1H)，7.93-7.80(m，1H)，7.39-7.28(m，2H)，7.25-7.18(m，1H)，6.89-6.59(m，1H)，4.74(br t，J＝11.9Hz，2H)，4.59-4.40(m，2H)，4.16-4.08(m，1H)，4.05-3.94(m，2H)，3.90-3.73(m，3H)，3.50-3.41(m，1H)，3.38-3.34(m，1H)，3.03-2.92(m，1H)，2.91-2.82(m，1H)，2.66-2.54(m，1H)，2.31-1.90(m，8H)。FNMR(400MHz，CD3OD)δ-111.663(s，1F)，-130.029(s，1F)，139.302(s，1F)；LCMS(ESI)m/z：613.3[M+1] +。
实施例6
Figure PCTCN2022094274-appb-000108
合成路线：
Figure PCTCN2022094274-appb-000109
1)化合物6-2的盐酸盐的合成
向反应瓶中加入化合物6-1(2.46g，6.01mmol)，二氧六环(50mL)和浓盐酸(14.76mL)，加热至100℃搅拌反应14小时。反应液减压浓缩得残余物，向残余物中加入水(20mL)，再分别用甲基叔丁基醚(10mL)萃取两次。水相减压浓缩得化合物6-2的盐酸盐。 1H NMR(400MHz，CDOD 3)δ6.99-6.72(m，1H)，4.32-4.20(m，1H)，4.06(br d，J＝14.8Hz，1H)，3.79-3.55(m，3H)，3.27-3.20(m，1H)，2.89-2.78(m，1H)，2.70-2.61(m，1H)，2.27-2.16(m，2H)，2.15-1.95(m，2H)。FNMR(400MHz，CDCl 3)δ-127.832(d，1F)。
2)化合物6-3的合成
向反应瓶中加入四氢呋喃(20mL)、化合物1-9(1.88g，4.38mmol)和化合物6-2的盐酸盐(0.7g，3.37mmol)。降温至0℃再加入钠氢(560mg，14.00mmol，60％纯度)，升温至25℃反应2小时。向反应液中加入水(20mL)，再分别用乙酸乙酯(10mL)萃取两次。合并有机相再用饱和氯化钠水溶液(10mL)洗一次，无水硫酸钠干燥，过滤滤液减压浓缩得粗品。经柱层析纯化(乙酸乙酯∶石油醚＝0∶100～100∶0)得到化合物6-3。 1H NMR(400MHz，CDCl 3)δ8.76(s，1H)，6.63-6.36(m，1H)，4.58-4.32(m，4H)，4.28-4.11(m，2H)，3.96-3.83(m，1H)，3.79-3.51(m，2H)，3.49-3.36(m，1H)，3.27-3.10(m，1H)，2.79-2.54(m，2H)，2.41-2.28(m，1H)，2.19-2.07(m，1H)，2.03-1.84(m，4H)，1.79(td，J＝8.5，12.6Hz，3H)，1.55-1.51(m，9H)；FNMR(400MHz，CDCl 3)δ-130.685(s，1F)，-134.199(s，1F)；LCMS(ESI)m/z：563.1[M+1] +。
3)化合物6-4的合成
向反应瓶中加入二氧六环(4mL)、水(1mL)、化合物6-3(350mg，621.63μmol)、化合物1-11(643mg，1.25mmol)和磷酸钾(266mg，1.25mmol)。氮气置换三次后，加入氯(2-二环己基膦基-2，4，6-三异丙基-1，1-联苯基)[2-(2-氨基-1，1-联苯)]钯(II)(49mg，62.28μmol)。氮气再置换三次后，85℃搅拌反应14小时。将反应液 倒入水(30mL)中，再分别用二氯甲烷(10mL)萃取两次。合并有机相再用无水硫酸钠干燥，过滤滤液减压浓缩得粗品。粗品经柱层析纯化(乙酸乙酯∶石油醚＝0∶100～100∶0)得到化合物6-4。LCMS(ESI)m/z：913.3[M+1] +。
4)化合物6-5的盐酸盐的合成
向反应瓶中加入盐酸/乙酸乙酯(4M，3.41mL)和化合物6-4(250mg，273.78μmol)。25℃保温反应2小时。反应液减压浓缩得化合物6-5的盐酸盐。LCMS(ESI)m/z：769.4[M+1] +。
5)化合物6的甲酸盐合成
向反应瓶中加入N，N-二甲基甲酰胺(2mL)，化合物6-5的盐酸盐(230mg，273.19μmol)和氟化铯(414.98mg，2.73mmol)，25℃搅拌反应14小时。反应液过滤，滤液经制备高效液相色谱纯化(色谱柱：Phenomenex Luna C18150*30mm*5μm；流动相：[水(FA)-ACN]；B(乙腈)％：1％-35％，8min)得到化合物6的甲酸盐。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ9.06(s，1H)，8.36(s，1H)，7.93-7.80(m，1H)，7.39-7.28(m，2H)，7.25-7.18(m，1H)，6.89-6.59(m，1H)，4.74(br t，J＝11.9Hz，2H)，4.59-4.40(m，2H)，4.16-4.08(m，1H)，4.05-3.94(m，2H)，3.90-3.73(m，3H)，3.50-3.41(m，1H)，3.38-3.34(m，1H)，3.03-2.92(m，1H)，2.91-2.82(m，1H)，2.66-2.54(m，1H)，2.31-1.90(m，8H)。FNMR(400MHz，CD3OD)δ-111.658(s，1F)，-129.992(s，1F)，139.281(s，1F)；LCMS(ESI)m/z：613.3[M+1] +。
实施例7
Figure PCTCN2022094274-appb-000110
合成路线：
Figure PCTCN2022094274-appb-000111
1)化合物7-2和化合物8-1的合成
Figure PCTCN2022094274-appb-000112
将化合物7-1经SFC(仪器型号：Waters SFC350 AP preparative SFC；色谱柱：Phenomenex-Cellulose-2，250*50mm i.d.10μm；流动相：A：CO 2，B：MeOH(0.1％NH 3H 2O)；梯度：B％＝30％等度洗脱；流速：200g/min；柱温：35℃；系统压力：100bar)分离纯化减压浓缩后得到化合物7-2(Rt＝1.791min)和化合物8-1(Rt＝2.007min)。
7-2： 1H NMR(400MHz，CDCl 3)δ7.75-7.58(m，4H)，7.50-7.31(m，6H)，6.68-6.38(m，1H)，3.63-3.54(m，1H)，3.46-3.36(m，2H)，3.22-3.15(m，1H)，3.10-2.99(m，1H)，2.90-2.82(m，1H)，2.60-2.49(m，1H)，2.34(brd，J＝16.2Hz，1H)，2.07-1.94(m，1H)，1.89-1.60(m，3H)，1.08(s，9H)。FNMR(400MHz，CDCl 3)δ-133.166(s，1F)。
8-1： 1H NMR(400MHz，CDCl 3)δ7.75-7.58(m，4H)，7.50-7.31(m，6H)，6.68-6.38(m，1H)，3.63-3.54(m，1H)，3.46-3.36(m，2H)，3.22-3.15(m，1H)，3.10-2.99(m，1H)，2.90-2.82(m，1H)，2.60-2.49(m，1H)，2.34(brd，J＝16.2Hz，1H)，2.07-1.94(m，1H)，1.89-1.60(m，3H)，1.08(s，9H)。FNMR(400MHz，CDCl 3)δ-133.166(s，1F)。
2)化合物7-3的盐酸盐的合成
Figure PCTCN2022094274-appb-000113
向反应瓶中加入化合物7-2(1.27g，3.10mmol)，二氧六环(25mL)和浓盐酸(7.62mL)，加热至100℃搅拌反应14小时。反应液减压浓缩得残余物，向残余物中加入水(20mL)，再分别用甲基叔丁基醚(10mL)萃取两次。水相减压浓缩得化合物7-3的盐酸盐。 1H NMR(400MHz，CDOD 3)δ7.11-6.81(m，1H)，4.23-4.11(m，1H)，3.91(br d，J＝13.9Hz，1H)，3.79-3.52(m，3H)，3.25-3.13(m，1H)，2.95-2.84(m，1H)，2.84-2.73(m，1H)，2.28-1.94(m，4H)。FNMR(400MHz，CDCl 3)δ-128.792(d，1F)。
3)化合物7-4的合成
Figure PCTCN2022094274-appb-000114
向反应瓶中加入四氢呋喃(20mL)、化合物1-9(1.88g，4.38mmol)和化合物7-3的盐酸盐(0.74g，3.56mmol)。降温至0℃再加入钠氢(592mg，14.80mmol，60％纯度)，升温至25℃反应2小时。向反应液中加入水(20mL)，再分别用乙酸乙酯(10mL)萃取两次。合并有机相再用饱和氯化钠水溶液(10mL)洗一次，无水硫酸钠干燥，过滤滤液减压浓缩得粗品。经柱层析纯化(乙酸乙酯∶石油醚＝0∶100～100∶0)得到化合物7-4。 1H NMR(400MHz，CDCl 3)δ8.72(s，1H)，6.72-6.45(m，1H)，4.58-4.29(m，4H)，4.28-4.17(m，2H)，3.79-3.50(m，3H)，3.27(br d，J＝13.8Hz，1H)，3.22-3.11(m，1H)，2.93-2.82(m，1H)，2.70-2.58(m，1H)，2.54-2.38(m，1H)，2.22-2.11(m，1H)，2.03-1.85(m，4H)，1.84-1.63(m，3H)，1.60-1.43(m，9H)。FNMR(400MHz，CDCl 3)δ-132.194(s，1F)，-134.226(s，1F)；LCMS(ESI)m/z：563.1[M+1] +。
4)化合物7-5的合成
Figure PCTCN2022094274-appb-000115
向反应瓶中加入二氧六环(4mL)、水(1mL)、化合物7-4(350mg，621.63μmol)、化合物1-11(643mg，1.25mmol)和磷酸钾(266mg，1.25mmol)。氮气置换三次后，加入氯(2-二环己基膦基-2，4，6-三异丙基-1，1-联苯基)[2-(2-氨基-1，1-联苯)]钯(II)(49mg，62.28umol)。氮气再置换三次后，85℃搅拌反应14小时。将反应液倒入水(30mL)中，再分别用二氯甲烷(10mL)萃取两次。合并有机相再用无水硫酸钠干燥，过滤滤液减压浓缩得粗品。粗品经柱层析纯化(乙酸乙酯∶石油醚＝0∶100～100∶0)得到化合物7-5。LCMS(ESI)m/z：913.3[M+1] +。
5)化合物7-6的盐酸盐的合成
Figure PCTCN2022094274-appb-000116
向反应瓶中加入盐酸/乙酸乙酯(4M，3.41mL)和化合物7-5(260mg，284.73μmol)，25℃保温反应2小时。反应液减压浓缩得化合物7-6的盐酸盐。LCMS(ESI)m/z：769.4[M+1] +。
6)化合物7的甲酸盐的合成
Figure PCTCN2022094274-appb-000117
向反应瓶中加入N，N-二甲基甲酰胺(2mL)，化合物7-6的盐酸盐(239mg，283.88μmol)和氟化铯(431.21mg，2.84mmol)，25℃搅拌反应14小时。反应液过滤，滤液经制备高效液相色谱纯化(色谱柱：Phenomenex Luna C18 150*30mm*5μm；流动相：[水(FA)-ACN]；B(乙腈)％：1％-35％，8min)得到化合物7的甲酸盐。 1H NMR(400MHz，CD 3OD)δ9.06(s，1H)，8.46(s，1H)，7.92-7.82(m，1H)，7.42-7.29(m，2H)，7.21(d，J＝2.5Hz，1H)，6.98-6.70(m，1H)，4.74(br t，J＝10.6Hz，2H)，4.60-4.43(m，2H)，4.09-3.93(m，3H)，3.93-3.77(m，2H)，3.66-3.59(m，1H)，3.49-3.40(m，1H)，3.37-3.35(m，1H)，3.02-2.90(m，2H)，2.80-2.69(m，1H)，2.32-2.22(m，1H)，2.16-1.93(m，7H)。FNMR(400MHz，CD3OD)δ-111.658(s，1F)，-131.090(s，1F)，139.318(s，1F)；LCMS(ESI)m/z：613.3[M+1] +。
实施例8
Figure PCTCN2022094274-appb-000118
合成路线：
Figure PCTCN2022094274-appb-000119
1)化合物8-2的盐酸盐的合成
Figure PCTCN2022094274-appb-000120
向反应瓶中加入化合物8-1(1.37g，3.34mmol)，二氧六环(25mL)和浓盐酸(8.22mL)，加热至100℃搅拌反应14小时。反应液减压浓缩得残余物，向残余物中加入水(20mL)，再分别用甲基叔丁基醚(10mL)萃取两次。水相减压浓缩得化合物8-2的盐酸盐。 1H NMR(400MHz，CDOD 3)δ7.11-6.81(m，1H)，4.23-4.11(m，1H)，3.91(br d，J＝13.9Hz，1H)，3.79-3.52(m，3H)，3.25-3.13(m，1H)，2.95-2.84(m，1H)，2.84-2.73(m，1H)，2.28-1.94(m，4H)。FNMR(400MHz，CDCl 3)δ-128.776(d，1F)。
2)化合物8-3的合成
Figure PCTCN2022094274-appb-000121
向反应瓶中加入四氢呋喃(20mL)、化合物1-9(3.06g，4.82mmol)和化合物8-2的盐酸盐(0.77g，3.71mmol)。降温至0℃再加入钠氢(616mg，15.40mmol，60％纯度)，升温至25℃反应2小时。向反应液中加入水(20mL)，再分别用乙酸乙酯(10mL)萃取两次。合并有机相再用饱和氯化钠水溶液(10mL)洗一次，无水硫酸钠干燥，过滤滤液减压浓缩得粗品。经柱层析纯化(乙酸乙酯∶石油醚＝0∶100～100∶0)得到化合物8-3。 1H NMR(400MHz，CDCl 3)δ8.72(s，1H)，6.72-6.45(m，1H)，4.58-4.29(m，4H)，4.28-4.17(m，2H)，3.79-3.50(m，3H)，3.27(br d，J＝13.8Hz，1H)，3.22-3.11(m，1H)，2.93-2.82(m，1H)，2.70-2.58(m，1H)，2.54-2.38(m，1H)，2.22-2.11(m，1H)，2.03-1.85(m，4H)，1.84-1.63(m，3H)，1.60-1.43(m，9H)。FNMR(400MHz，CDCl 3)δ-132.237(s，1F)，-134.215(s，1F)；LCMS(ESI)m/z：563.1[M+1] +。
3)化合物8-4的合成
Figure PCTCN2022094274-appb-000122
向反应瓶中加入二氧六环(4mL)、水(1mL)、化合物8-3(350mg，621.63μmol)、化合物1-11(643mg，1.25mmol)和磷酸钾(266mg，1.25mmol)。氮气置换三次后，加入氯(2-二环己基膦基-2，4，6-三异丙基-1，1-联苯基)[2-(2-氨基-1，1-联苯)]钯(II)(49mg，62.28μmol)。氮气再置换三次后，85℃搅拌反应14小时。将反应液倒入水(30mL)中，再分别用二氯甲烷(10mL)萃取两次。合并有机相再用无水硫酸钠干燥，过滤滤液减压浓缩得粗品。粗品经柱层析纯化(乙酸乙酯∶石油醚＝0∶100～100∶0)得到化合物8-4。LCMS(ESI)m/z：913.3[M+1] +。
4)化合物8-5的盐酸盐的合成
Figure PCTCN2022094274-appb-000123
向反应瓶中加入盐酸/乙酸乙酯(4M，3.41mL)和化合物8-4(290mg，317.58μmol)。25℃保温反应2小时。反应液减压浓缩得化合物8-5的盐酸盐。LCMS(ESI)m/z：769.4[M+1] +。
5)化合物8的甲酸盐的合成
Figure PCTCN2022094274-appb-000124
向反应瓶中加入N，N-二甲基甲酰胺(2mL)，化合物8-5的盐酸盐(267mg，317.14μmol)和氟化铯(481.73mg，3.17mmol)。25℃搅拌反应14小时。反应液过滤，滤液经制备色谱纯化(色谱柱：Phenomenex Luna C18 150*30mm*5μm；流动相：[水(FA)-ACN]；B(乙腈)％：1％-35％，8min)得到化合物8的甲酸盐。 1H NMR(400MHz， CD 3OD)δ9.06(s，1H)，8.46(s，1H)，7.92-7.82(m，1H)，7.42-7.29(m，2H)，7.21(d，J＝2.5Hz，1H)，6.98-6.70(m，1H)，4.74(br t，J＝10.6Hz，2H)，4.60-4.43(m，2H)，4.09-3.93(m，3H)，3.93-3.77(m，2H)，3.66-3.59(m，1H)，3.49-3.40(m，1H)，3.37-3.35(m，1H)，3.02-2.90(m，2H)，2.80-2.69(m，1H)，2.32-2.22(m，1H)，2.16-1.93(m，7H)。FNMR(400MHz，CD3OD)δ-111.647(s，1F)，-130.967(s，1F)，139.308(s，1F)；LCMS(ESI)m/z：613.3[M+1] +。
实施例9
Figure PCTCN2022094274-appb-000125
合成路线：
Figure PCTCN2022094274-appb-000126
1)化合物9-1的合成
向反应瓶中加入二氯甲烷(10mL)，化合物5-13的盐酸盐(285mg，338.52μmol)和三乙胺(182.68mg，1.81mmol)。再加入BOC酸酐(90mg，412.38μmol)，15℃搅拌反应1小时。向反应液中加入水(5mL)，分液。有机相减压浓缩得化合物9-1。LCMS(ESI)m/z：969.5[M+1] +。
2)化合物9-2的合成
向反应瓶中加入甲醇(2mL)，化合物9-1(170mg，175.40μmol)和碳酸钾(50mg，361.78μmol)，15℃搅拌反应14小时。向反应液中加入二氯甲烷(15mL)，过滤。滤液减压浓缩得化合物9-2。LCMS(ESI)m/z：869.3[M+1] +。
3)化合物9-3的合成
向反应瓶中加入二氯甲烷(5mL)，化合物9-2(170mg，195.61μmol)和N，N-二异丙基乙基胺(63mg，487.45μmol)。再加入三氟乙酸酐(72mg，255.19μmol)，15℃搅拌反应5小时。向反应液中加入水(10mL)，二氯甲烷(10mL)，分液。有机相减压浓缩得粗品。经柱层析纯化(甲醇∶二氯甲烷＝0∶100～10∶0)得到化合物9-3。LCMS(ESI)m/z：1001.4[M+1] +。
4)化合物9-4的合成
向反应瓶中加入甲苯(1mL)、化合物9-3(50mg，49.94μmol)、二苯甲酮亚胺(19mg，104.84μmol)、碳酸铯(49mg，150.39μmol)和4，5-双(二苯基磷)-9，9-二甲基氧杂蒽(6mg，10.37μmol)。氮气置换三次后，加入三(二亚苄基丙酮)二钯(5mg，5.46μmol)。氮气再置换三次后，100℃搅拌反应4小时。向反应液加入水(10mL)，乙酸乙酯(10mL)，分液。有机相减压浓缩得粗品。粗品经制备板分离(二氯甲烷∶甲醇＝10∶1)得到化合物9-4。LCMS(ESI)m/z：1032.5[M+1] +。
5)化合物9-5的盐酸盐的合成
向反应瓶中加入盐酸/乙酸乙酯(4M，1mL)和化合物9-4(30mg，29.06μmol)，15℃保温反应1小时。反应液减压浓缩得化合物9-5的盐酸盐。LCMS(ESI)m/z：768.5[M+1] +。
6)化合物9的甲酸盐的合成
向反应瓶中加入N，N-二甲基甲酰胺(0.5mL)，化合物9-5的盐酸盐(24.44mg，29.06μmol)和氟化铯(50mg，329.16μmol)，15℃搅拌反应14小时。反应液过滤，滤液经制备色谱纯化(色谱柱：Phenomenex Luna C18 150*30mm*5μm；流动相：[水(FA)-ACN]；B(乙腈)％：1％-40％，8min)得到化合物9的甲酸盐。 1H NMR(400MHz，CD 3OD)δ9.04(s，1H)，8.45(br s，1H)，7.80-7.71(m，1H)，7.25(t，J＝8.9Hz，1H)，7.22-7.19(m，1H)，7.16-7.11(m，1H)，6.88-6.61(m，1H)，4.79-4.65(m，2H)，4.55-4.40(m，2H)，4.15-4.05(m，1H)，4.02-3.93(m，2H)，3.90-3.80(m，2H)，3.80-3.68(m，1H)，3.46-3.38(m，1H)，3.30-3.27(m，1H)，2.97(td，J＝7.0，10.6Hz，1H)，2.90-2.81(m，1H)，2.65-2.55(m，1H)，2.29-2.19(m，1H)，2.18-1.83(m，7H)；LCMS(ESI)m/z：612.3[M+1] +。
实施例10
Figure PCTCN2022094274-appb-000127
合成路线：
Figure PCTCN2022094274-appb-000128
1)化合物10-1的合成
向反应瓶中加入二甲基亚砜(5mL)，化合物1-9(500mg，1.17mmol)和氟化钾(270mg，4.65mmol)，100℃搅拌反应2小时。将反应液倒入水(50mL)中，再分别用乙酸乙酯(10mL)萃取两次。合并有机相再用水(5mL)洗，有机相再用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩得化合物10-1。LCMS(ESI)m/z：412.0[M+1] +。
2)化合物10-3的合成
向反应瓶中加入四氢呋喃(8mL)、水(2mL)、化合物10-1(270mg，655.61μmol)、化合物10-2(405mg，989.60μmol)和磷酸钾(280.8mg，10.37μmol)。氮气置换三次后，加入氯(2-二环己基膦基-2，4，6-三异丙基-1，1-联苯基)[2-(2-氨基-1，1-联苯)]钯(II)(54mg，68.63μmol)。。氮气再置换三次后，100℃搅拌反应4小时。向反应液加入水(50mL)，再分别用乙酸乙酯(10mL)萃取三次。合并有机相再用饱和氯化钠水溶液(5mL)洗一次，有机相再用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得粗品。粗品经柱层析纯化(乙酸乙酯∶石油醚＝0∶100～100∶0)得到化合物10-3。LCMS(ESI)m/z：741.3[M+1] +。
3)化合物10-4的合成
向反应瓶中加入N，N-二甲基甲酰胺(4mL)、乙酸银(246mg，1.47mmol)、化合物10-3(410mg，553.45μmol)和碘(287mg，1.13mmol)，15℃搅拌反应1小时。将反应液倒入水(40mL)中，再分别用乙酸乙酯(10mL)萃取三次。合并有机相再用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩得粗品。粗品经柱层析纯化(乙酸乙酯∶石油醚＝0∶100～100∶0)化合物10-4。LCMS(ESI)m/z：867.2[M+1] +。
4)化合物10-5的合成
向反应瓶中加入N，N-二甲基乙酰胺(5mL)和化合物10-4(270mg，311.52μmol)，氮气置换三次后加入碘化亚铜(297mg，1.56mmol)和氟磺酰二氟乙酸甲酯(607.5mg，3.16mmol)。氮气置换三次后100℃搅拌反应1小时。将反应液倒入水(50mL)中，再分别用乙酸乙酯(10mL)萃取三次。合并有机相再用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩得粗品。粗品经柱层析纯化(乙酸乙酯∶石油醚＝0∶100～100∶0)化合物10-5。LCMS(ESI)m/z：809.3[M+1] +。
5)化合物10-6的合成
向反应瓶中加入二氧六环(1mL)、化合物10-5(100mg，123.64μmol)、化合物1-6(30mg，195.80μmol)和N，N-二异丙基乙基胺(50mg，386.87μmol)，90℃搅拌反应14小时。将反应液倒入水(15mL)中，再分别用乙酸乙酯(3mL)萃取三次。合并有机相再用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩得粗品。粗品经制备板分离(二氯甲烷∶甲醇＝10∶1)得化合物10-6。LCMS(ESI)m/z：942.4[M+1] +。
6)化合物10的甲酸盐的合成
向反应瓶中加入二氯甲烷(1mL)、化合物10-6(54mg，57.32μmol)和三氟乙酸(0.2mL)，20℃搅拌反应2小时。将反应液倒入饱和碳酸氢钠水溶液中(15mL)，再分别用二氯甲烷(10mL)萃取两次。合并有机相再用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩得粗品。粗品经制备高效液相色谱纯化(色谱柱：Phenomenex Luna C18 150*30mm*5μm；流动相：[水(FA)-ACN]；B(乙腈)％：15％-60％，8min)得到化合物10的甲酸盐。 1H NMR(400MHz，CD 3OD)δ9.10(s，1H)，8.59-8.34(m，1H)，6.93-6.85(m，1H)，5.30-5.15(m，2H)，4.75-4.51(m，4H)，4.29-4.12(m，1H)，3.97-3.56(m，6H)，3.22-3.08(m，1H)，3.05-2.93(m，1H)，2.79-2.66(m，1H)，2.46-2.39(m，3H)，2.39-2.29(m，1H)，2.25-1.78(m，7H)；LCMS(ESI)m/z：602.3[M+1] +。
实施例11
Figure PCTCN2022094274-appb-000129
合成路线：
Figure PCTCN2022094274-appb-000130
1)化合物11-1的合成
向反应瓶中加入四氢呋喃(6mL)和化合物5-7(0.4g，1.84mmol)，降温至0℃加入硼氢化锂(60mg，2.75mmol)，回至25℃搅拌反应14小时。向反应液中加入水(0.5mL)后减压浓缩残余物。向残余物中加入二氯甲烷(10mL)，过滤，滤液减压浓缩得化合物11-1。 1H NMR(400MHz，CDCl 3)δ4.00-3.81(m，1H)，3.80-3.65(m， 2H)，3.46-3.35(m，1H)，3.11(td，J＝7.9，11.5Hz，1H)，3.01(brt，J＝6.8Hz，1H)，2.94-2.79(m，1H)，2.48(br d，J＝15.4Hz，1H)，2.33-2.21(m，1H)，2.19-2.07(m，1H)，2.04-1.82(m，2H)。
2)化合物11-2的合成
向反应瓶中加入二氧六环(3mL)、化合物1-9(100mg，233.49μmol)、化合物11-1(265.06mg，1.4mmol)和N，N-二异丙基乙基胺(90.53mg，700.46μmol)，90℃反应48小时。向反应液中加入水(30mL)，再分别用二氯甲烷(10mL)萃取两次，合并有机相减压浓缩得粗品。经柱层析纯化(乙酸乙酯∶石油醚＝0∶100～100∶0)得到化合物11-2。LCMS(ESI)m/z：581.2[M+1] +。
3)化合物11-3的合成
向反应瓶中加入二氧六环(0.9mL)、水(0.3mL)、化合物11-2(30mg，51.63μmol)、化合物1-11(50mg，97.55μmol)和碳酸铯(50mg，153.46μmol)。氮气置换三次后，加入1，1-双(二苯基磷)二茂铁氯化钯(4mg，5.47μmol)。氮气再置换三次后，85℃搅拌反应14小时。将反应液倒入水(30mL)中，再分别用二氯甲烷(10mL)萃取两次。合并有机相再用无水硫酸钠干燥，过滤滤液减压浓缩得粗品。粗品经制备高效液相色谱纯化(色谱柱：Phenomenex Luna C18 150*30mm*5μm；流动相：[水(FA)-ACN]；B(乙腈)％：30％-70％，10min)化合物11-3。LCMS(ESI)m/z：931.3[M+1] +。
4)化合物11-4的盐酸盐的合成
向反应瓶中加入盐酸/乙酸乙酯(4M，0.6mL)和化合物11-3(5mg，5.37μmol)，20℃保温反应2小时。反应液减压浓缩得化合物11-4的盐酸盐。LCMS(ESI)m/z：787.3[M+1] +。
5)化合物11的甲酸盐的合成
向反应瓶中加入N，N-二甲基甲酰胺(0.2mL)，化合物11-4的盐酸盐(4.6mg，5.35μmol)和氟化铯(9mg，59.25μmol)，20℃搅拌反应14小时。反应液过滤，滤液经制备高效液相色谱纯化(色谱柱：Phenomenex Luna C18 150*30mm*5μm；流动相：[水(FA)-ACN]；B(乙腈)％：5％-35％，8min)得到化合物11的甲酸盐。LCMS(ESI)m/z：631.3[M+1] +。
实验例1：KRAS G12D蛋白结合实验
实验目的：
本实验旨在通过TR-FRET的方法，考察本发明化合物对KRAS G12D与GTP结合的抑制效果。
实验材料：
HEPES pH 7.3，氯化钠，EDTA(Edetic Acid)，吐温20，氯化镁，Bodipy GDP，GTP(Guanosine 5′-triphosphate)，Tb-SA(Terbium-Streptavidin)，SOS(son of sevenless)蛋白，KRAS(Kirsten rat sarcoma viral oncogene)蛋白。
试剂准备：
a.储存试剂：
1)KRAS核苷酸交换缓冲液
取20mL 1000mM HEPES，20mL 500mM EDTA，10mL 5M氯化钠，100％0.1mL吐温20，949.9mL水，配制成1L溶液，用过滤法消毒，4℃条件下储存。
2)KRAS实验缓冲液
取20mL 1000mM HEPES，10mL 1000mM氯化镁，30mL 5M氯化钠，100％0.05mL吐温20，939.95mL水，配制成1L溶液，用过滤法消毒，4℃条件下储存。
3)KRAS/Bodipy GDP/Tb-SA混合液
取9.5μL 95μM KRAS蛋白，440.5μL KRAS核苷酸交换缓冲液混合，室温下孵育1小时后，与8.4μL 17.9μM Tb-SA，1.8μL 5mM Bodipy GDP，9539.8μL KRAS实验缓冲液，配制成1L溶液，混合后室温下静置6小时，储存至-80℃条件下。
b.实验试剂：
1)KRAS酶溶液
取73.3μL KRAS/Bodipy GDP/Tb-SA混合液，2126.7μL KRAS实验缓冲液，配制成2200μL溶液。
2)SOS/GTP混合液
取1.59μL 166μM SOS蛋白，198μL 100mM GTP，2000.41μL KRAS实验缓冲液，配制成2200μL溶液。
实验流程：
1)待测化合物母液浓度为10mM。转移9μL待测化合物至化合物板内；
2)使用Bravo将化合物板上的化合物进行10点3倍稀释；
3)使用Echo将化合物板上的化合物转移9nL至实验板；
4)使用Dragonfly自动加样仪依次向实验板每孔中加入3μL 3nM Kras/0.5nM Tb-SA/30nM BodipyGDP混合液和3μL KRAS实验缓冲液，以1000rpm，将实验板离心1分钟；
5)实验板在室温中孵育1小时；
6)使用Dragonfly自动加样仪在实验板每孔加入3μL 120nM SOS/9mM GTP混合液，以1000rpm，将实验板离心1分钟；
7)实验板在室温中孵育1小时；
8)使用Envision读板并记录数据；
数据分析：
使用Excel和Xlfit进行数据分析，计算待测化合物IC 50。Z Prime＝1-[3×(STDEV HPE+STDEV ZPE)/ (AVG HPE-AVG ZPE)|]，Z值应大于等于0.5％；Effect＝(Value cpd-AVG ZPE)/(AVG HPE-AVG ZPE)×100，借助Xlfit拟合曲线并计算出IC 50。
实验结果：见表6
表6本发明化合物对KRAS G12D与GTP结合抑制活性IC 50
受试化合物 KRAS G12D与GTP结合IC 50(nM)
化合物1的甲酸盐 0.3
化合物3的甲酸盐 0.2
化合物4的甲酸盐 0.25
化合物5的甲酸盐 0.5
化合物6的甲酸盐 0.32
化合物7的甲酸盐 0.22
化合物8的甲酸盐 0.19
实验结论：
本发明化合物对KRAS G12D蛋白与GTP结合有显著抑制作用。
实验例2：AGSp-ERK实验
实验目的：
本实验旨在验证本发明化合物对KRAS G12D信号通路下游ERK蛋白磷酸化的抑制效果。
实验材料：
AGS细胞购自普诺赛；RPMI-1640培养基购白Biological Industries；胎牛血清购自Biosera；Advanced Phospho-ERK1/2(THR202/TYR204)KIT购自Cisbio，成分如表7所示。
表7 Advanced Phospho-ERK1/2(THR202/TYR204)KIT成分表
成分名称 储存温度
Advanced PhosphoERK1/2 Eu Cryptate antibody ≤-16℃
Advanced PhosphoERK1/2 d2 antibody ≤-16℃
Blocking reagent(stock solution 100X) ≤-16℃
Lysis buffer#1(stock solution 4X) ≤-16℃
Detection buffer(ready-to-use) ≤-16℃
实验方法：
AGS细胞种于透明96孔细胞培养板中，80μL细胞悬液每孔，每孔包含10000个AGS细胞，细胞板放入二氧化碳培养箱，37℃过夜孵育；结束孵育后弃掉上清，加入80μL每孔DMEM空白培养基饥饿过 夜；将待测化合物用100％DMSO稀释到0.2mM作为第一个浓度，然后再用移液器进行5倍稀释至第8个浓度，即从0.2mM稀释至2.56nM。取2μL化合物加入78μL细胞饥饿培养基，混匀后，取20μL化合物溶液加入到对应细胞板孔中，细胞板放回二氧化碳培养箱继续孵育3小时，此时化合物浓度为1μM至0.0128nM，DMSO浓度为0.5％；结束孵育后，弃掉细胞上清加入50μL细胞裂解液每孔，室温摇晃孵育30分钟；使用Detection buffer将Phospho-ERK1/2 Eu Cryptate antibody和Phospho-ERK1/2 d2 antibody稀释20倍；取16μL细胞裂解物上清每孔到新的384白色微孔板中，再加入2μL Phospho-ERK1/2 Eu Cryptate antibody稀释液和2μL Phospho-ERK1/2 d2 antibody稀释液，常温孵育过夜；孵育结束后使用多标记分析仪读取HTRF excitation：320nm，emission：615nm，665nm。
数据分析：
利用方程式(Sample-Min)/(Max-Min)*100％将原始数据换算成抑制率，IC 50的值即可通过四参数进行曲线拟合得出(GraphPad Prism中log(inhibitor)vs.response--Variable slope模式得出)。
实验结果：见表8
表8本发明化合物对p-ERK的抑制作用
受试化合物 AGS p-ERK IC 50(nM)
化合物1的甲酸盐 2.39
化合物4的甲酸盐 0.71
化合物5的甲酸盐 0.30
化合物7的甲酸盐 0.40
化合物11的甲酸盐 0.46
实验结论：
本发明化合物对KRAS G12D信号通路下游ERK蛋白磷酸化有显著抑制效果。
实验例3：GP2D 3D CTG实验
实验目的：
本实验旨在验证本发明化合物对KRAS G12D突变的GP2D人结肠癌细胞的增殖抑制效果。
实验材料：
细胞株GP2D、DMEM培养基，盘尼西林/链霉素抗生素购自维森特，胎牛血清购自Biosera。CellTiter-
Figure PCTCN2022094274-appb-000131
3D Cell Viability Assay(3D细胞活率化学发光检测试剂)试剂购自Promega。
实验方法：
将GP2D细胞种于96孔U底细胞培养板中，80μL细胞悬液每孔，其中包含2000个GP2D细胞。细胞板置于二氧化碳培养箱中过夜培养。将待测化合物用排枪进5倍稀释至第8个浓度，即从200μM稀释 至2.56nM，设置双复孔实验。向中间板中加入78μL培养基，再按照对应位置，转移2μL每孔的梯度稀释化合物至中间板，混匀后转移20μL每孔到细胞板中。转移到细胞板中的化合物浓度范围是1μM至0.0128nM。细胞板置于二氧化碳培养箱中培养5天。加入化合物的细胞板结束孵育后，向细胞板中加入每孔100μL的细胞活率化学发光检测试剂，室温孵育10分钟使发光信号稳定。采用多标记分析仪读数。
数据分析：
利用方程式(Sample-Min)/(Max-Min)*100％将原始数据换算成抑制率，IC 50的值即可通过四参数进行曲线拟合得出(GraphPad Prism中″log(inhibitor)vs.response--Variable slope″模式得出)。
实验结果：见表9
表9本发明化合物对GP2D细胞的抗增殖活性IC 50
受试化合物 GP2D 3D CTG IC 50(nM)
化合物1的甲酸盐 3.2
化合物2的甲酸盐 0.35
化合物3的甲酸盐 0.57
化合物4的甲酸盐 0.55
化合物5的甲酸盐 0.30
化合物6的甲酸盐 1.45
化合物7的甲酸盐 0.43
化合物8的甲酸盐 4.55
化合物9的甲酸盐 0.27
化合物10的甲酸盐 4.21
化合物11的甲酸盐 0.45
实验结论：
本发明化合物对KRAS G12D突变型细胞GP2D显示了优异的细胞抗增殖活性。
实验例4：AsPC-1 3D CTG实验
实验目的：
本实验旨在验证本发明化合物对KRAS G12D突变的AsPC-1人胰腺癌细胞的增殖抑制效果。
实验材料：
细胞株AsPC-1(购自普诺赛)、RPMI-1640培养基，盘尼西林/链霉素抗生素购自维森特，胎牛血清购自Biosera。CellTiter-Glo(细胞活率化学发光检测试剂)试剂购自Promega。
实验方法：
将AsPC-1细胞种于96孔白色细胞培养板中，80μL细胞悬液每孔，其中包含3000个ASPC-1细胞。 细胞板置于二氧化碳培养箱中过夜培养。将待测化合物用排枪进5倍稀释至第8个浓度，即从2mM稀释至25.6nM，设置双复孔实验。向中间板中加入78μL培养基，再按照对应位置，转移2μL每孔的梯度稀释化合物至中间板，混匀后转移20μL每孔到细胞板中。转移到细胞板中的化合物浓度范围是10μM至0.128nM。细胞板置于二氧化碳培养箱中培养6天。另准备一块细胞板，在加药当天读取信号值作为最大值(下面方程式中Max值)参与数据分析。向此细胞板每孔加入25μL细胞活率化学发光检测试剂，室温孵育10分钟使发光信号稳定。采用多标记分析仪读数。加入化合物的细胞板结束孵育后，向细胞板中加入每孔25μL的细胞活率化学发光检测试剂，室温孵育10分钟使发光信号稳定。采用多标记分析仪读数。数据分析：
利用方程式(Sample-Min)/(Max-Min)*100％将原始数据换算成抑制率，IC 50的值即可通过四参数进行曲线拟合得出(GraphPad Prism中″log(inhibitor)vs.response--Variable slope″模式得出)。
实验结果：见表10
表10本发明化合物对AsPC-1细胞的抗增殖活性IC 50
受试化合物 AsPC-1 3D CTG IC 50(nM) AsPC-1 3D CTG IC 90(nM)
化合物1的甲酸盐 4.43 48.99
化合物4的甲酸盐 2.05 21.52
化合物5的甲酸盐 3.80 35.66
化合物6的甲酸盐 2.01 19.56
化合物7的甲酸盐 7.04 82.01
化合物11的甲酸盐 7.47 64.18
实验结论：
本发明化合物对KRAS G12D突变型细胞AsPC-1显示了优异的细胞抗增殖活性。
实验例5：Panc04033D CTG实验
实验目的：
本实验旨在验证本发明化合物对KRAS G12D突变的Panc0403人胰腺癌细胞的增殖抑制效果。
实验材料：
细胞株PANC0403购自南京科佰、RPMI1640培养基购自BI，盘尼西林/链霉素抗生素购自源培，胎牛血清购自Gibco。
Figure PCTCN2022094274-appb-000132
3D Cell ViabilityAssay(3D细胞活率化学发光检测试剂)试剂购自Promega。
实验方法：
将PANC0403细胞种于96孔U底细胞培养板中，80μL细胞悬液每孔，其中包含4000个PANC0403细胞。细胞板置于二氧化碳培养箱中过夜培养。将待测化合物用排枪进5倍稀释至第8个浓度，即从2000 μM稀释至25.6nM，设置双复孔实验。向中间板中加入78μL培养基，再按照对应位置，转移2μL每孔的梯度稀释化合物至中间板，混匀后转移20μL每孔到细胞板中。转移到细胞板中的化合物浓度范围是10μM至0.128nM。细胞板置于二氧化碳培养箱中培养5天。加入化合物的细胞板结束孵育后，向细胞板中加入每孔100μL的细胞活率化学发光检测试剂，室温孵育10分钟使发光信号稳定。采用多标记分析仪读数。
数据分析：
利用方程式(Sample-Min)/(Max-Min)*100％将原始数据换算成抑制率，IC 50的值即可通过四参数进行曲线拟合得出(GraphPad Prism中″log(inhibitor)vs.response--Variable slope″模式得出)。
实验结果：见表11
表11本发明化合物对Panc0403细胞的抗增殖活性IC 50
受试化合物 Panc0403 3D CTG IC 50(nM)
MRTX1133 8.1
化合物5的甲酸盐 1.2
化合物7的甲酸盐 6.5
实验结论：
本发明化合物对KRAS G12D突变型细胞Panc0403显示了优于参考化合物MRTX1133的细胞抗增殖活性。
实验例6：HPAC3D CTG实验
实验目的：
本实验旨在验证本发明化合物对KRAS G12D突变的HPAC人胰腺癌细胞的增殖抑制效果。
实验方法：
HPAC细胞系(ATCC-CRL2119)在37度、5％CO 2培养箱中维持培养。当细胞饱和度达到80％时，胰酶消化细胞，计数。稀释后的细胞以每孔5000个接种到96孔低吸附板中。过夜培养后，加入梯度稀释的化合物，10uM起始5倍稀释9个梯度。继续孵育培养6天后，加入cellciterglo检测试剂(Promega-G7573)，避光震荡30分钟，吹打混匀后吸取100ul到96孔黑壁板中，室温放置5min，在Envision上读板。
数据分析：
以PBS读值作为100％抑制，以DMSO孔读值作为0％抑制，处理孔抑制率(％)＝(1-(样品值-100％抑制的平均值)/(0％抑制的平均值-100％抑制的平均值))*100。将抑制率与化合物浓度参数在graphpad 8.0中进行非线性拟合，计算IC 50值。
实验结果：见表12
表12本发明化合物对HPAC细胞的抗增殖活性IC 50
受试化合物 HPAC 3D CTG IC 50(nM)
MRTX1133 3.2
化合物5的甲酸盐 0.79
化合物7的甲酸盐 0.94
实验结论：
本发明化合物对KRAS G12D突变型细胞HPAC显示了优于参考化合物MRTX1133的细胞抗增殖活性。
实验例7：化合物药代动力学评价
实验目的：
本实验目的是评价化合物单次静脉注射和腹腔注射给药后的药代动力学行为，考察腹腔注射给药后的生物利用度。
实验操作：
选取7至10周龄的CD-1雄性小鼠，静脉和腹腔注射给药的剂量分别为1毫克每公斤和2毫克每公斤，试验动物给药前需禁食一夜。
实验当天静脉组动物通过尾静脉单次注射给予化合物，给药体积为0.667mL/kg；腹腔组通过单次注射给予化合物，给药体积为2mL/kg。在给药前称量动物体重，根据体重计算给药体积。样品采集时间为：0.083(注射组)、0.25、0.5、1、2、4、8、24h。每个时间点通过隐静脉采集大约25μL全血用于制备血浆供高效液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)进行浓度测定。所有动物在采集完最后一个时间点的PK样品后进行CO 2麻醉安乐死。采用WinNonlin TM Version 6.3(Pharsight，Mountain View，CA)药动学软件的非房室模型处理血浆浓度，使用线性对数梯形法方法计算药动学参数。
实验结果：小鼠体内PK性质评价结果见表13。
表13化合物的药代动力学测试结果
Figure PCTCN2022094274-appb-000133
Figure PCTCN2022094274-appb-000134
注：C max代表最大血药浓度；T max代表达峰时间；T 1/2代表半衰期；Vdss代表表观分布容积；Cl代表清除率；AUC 0-last代表曲线面积(0-t)；AUC 0-inf代表曲线面积(0-inf)；NA代表未测试。
实验结论：
本发明化合物在小鼠体内有较高的表观分布容积和较长半衰期，腹腔注射AUC、生物利用度较好，具有良好的药代动力学性质。

Claims (15)

  1. 式(IV)所示化合物、或其药学上可接受的盐、或其对映异构体、或其顺反异构体，
    Figure PCTCN2022094274-appb-100001
    其中，
    L 1选自O、S和NH；
    R 1选自H、F、Cl、Br、I、CN、C 1-3烷基和C 1-3烷氧基，所述C 1-3烷基和C 1-3烷氧基任选被1、2或3个R a取代；
    R 2选自C 6-10芳基和5-10元杂芳基，所述C 6-10芳基和5-10元杂芳基任选被1、2、3或4个R b取代；
    环B选自
    Figure PCTCN2022094274-appb-100002
    R 3、R 4、R 5、R 6、R 7、R 8、R 9、R 10和R 11分别独立地选自H、F、Cl、Br、I和C 1-3烷基；
    环A选自
    Figure PCTCN2022094274-appb-100003
    所述
    Figure PCTCN2022094274-appb-100004
    Figure PCTCN2022094274-appb-100005
    任选被1、2或3个R c取代；
    q、r和s为1、2或3；
    m和n为0、1或2；
    u、w和v为1或2；
    各R a分别独立地选自F、Cl、Br和I；
    各R b分别独立地选自F、Cl、Br、I、OH、NH 2、CN、C 1-3烷基、C 1-3烷氧基、C 2-4烯基和C 2-4炔基，所述C 1-3烷基、C 1-3烷氧基、C 2-4烯基和C 2-4炔基任选被1、2或3个R取代；
    各R c分别独立地选自F、Cl、Br、I和CH 3；
    各R分别独立地选自F、Cl、Br和I。
  2. 根据权利要求1所述化合物、或其药学上可接受的盐、或其对映异构体、或其顺反异构体，其中，各R b分别独立地选自F、Cl、Br、I、OH、NH 2、CN、CH 3、CH 2CH 3、OCH 3、OCH 2CH 3、-CH＝CH 2、-CH 2-CH＝CH 2和-C≡CH，所述CH 3、CH 2CH 3、OCH 3、OCH 2CH 3、-CH＝CH 2、-CH 2-CH＝CH 2和-C≡CH任选被1、2或3个R取代。
  3. 根据权利要求2所述化合物、或其药学上可接受的盐、或其对映异构体、或其顺反异构体，其中，各R b分别独立地选自F、OH、NH 2、CH 3、CF 3、CH 2CH 3、OCH 3和-C≡CH。
  4. 根据权利要求1至3任一所述化合物、或其药学上可接受的盐、或其对映异构体、或其顺反异构体，其中，R 1选自H、F、Cl、Br、CN、CH 3和OCH 3，所述CH 3和OCH 3任选被1、2或3个R a取代。
  5. 根据权利要求4所述化合物、或其药学上可接受的盐、或其对映异构体、或其顺反异构体，其中，R 1选自F。
  6. 根据权利要求1至5任一所述化合物、或其药学上可接受的盐、或其对映异构体、或其顺反异构体，其中，R 2选自
    Figure PCTCN2022094274-appb-100006
  7. 根据权利要求6所述化合物、或其药学上可接受的盐、或其对映异构体、或其顺反异构体，其中，R 2选自
    Figure PCTCN2022094274-appb-100007
  8. 根据权利要求1至7任一所述化合物、或其药学上可接受的盐、或其对映异构体、或其顺反异构体，其中，R 3、R 4、R 5、R 6、R 7、R 8、R 9、R 10和R 11分别独立地选自H、F、Cl和CH 3。
  9. 根据权利要求1至8任一所述化合物、或其药学上可接受的盐、或其对映异构体、或其顺反异构体， 其中，环B选自
    Figure PCTCN2022094274-appb-100008
  10. 根据权利要求1至9任一所述化合物、或其药学上可接受的盐、或其对映异构体、或其顺反异构体，其中，环A选自
    Figure PCTCN2022094274-appb-100009
  11. 根据权利要求1～8任意一项所述化合物、或其药学上可接受的盐、或其对映异构体、或其顺反异构体，其选自：
    Figure PCTCN2022094274-appb-100010
    其中，
    R 4、R 5、R 10、R 11和R b如权利要求1～3，7～8任意一项所定义。
  12. 下式所示化合物、或其药学上可接受的盐、或其对映异构体、或其顺反异构体，
    Figure PCTCN2022094274-appb-100011
    Figure PCTCN2022094274-appb-100012
  13. 根据权利要求12所述化合物、或其药学上可接受的盐、或其对映异构体、或其顺反异构体，其选自：
    Figure PCTCN2022094274-appb-100013
    Figure PCTCN2022094274-appb-100014
  14. 一种药物组合物，含有权利要求1至13任一所述化合物、或其药学上可接受的盐、或其对映异构体、或其顺反异构体，和药学上可接受的载体。
  15. 根据权利要求1～13任意一项所述化合物、或其药学上可接受的盐、或其对映异构体、或其顺反异构体，或权利要求14所述药物组合物在制备治疗实体瘤的药物中的应用。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2023198078A1 (zh) * 2022-04-11 2023-10-19 杭州英创医药科技有限公司 作为kras g12d抑制剂的多环化合物
WO2024012456A1 (zh) * 2022-07-12 2024-01-18 南京明德新药研发有限公司 哌嗪桥取代的杂环并嘧啶类化合物

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2020146613A1 (en) * 2019-01-10 2020-07-16 Mirati Therapeutics, Inc. Kras g12c inhibitors
WO2021041671A1 (en) * 2019-08-29 2021-03-04 Mirati Therapeutics, Inc. Kras g12d inhibitors

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2020146613A1 (en) * 2019-01-10 2020-07-16 Mirati Therapeutics, Inc. Kras g12c inhibitors
WO2021041671A1 (en) * 2019-08-29 2021-03-04 Mirati Therapeutics, Inc. Kras g12d inhibitors

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2023198078A1 (zh) * 2022-04-11 2023-10-19 杭州英创医药科技有限公司 作为kras g12d抑制剂的多环化合物
WO2024012456A1 (zh) * 2022-07-12 2024-01-18 南京明德新药研发有限公司 哌嗪桥取代的杂环并嘧啶类化合物

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