WO2022218169A1 - 具有抗氧化作用的菠萝提取液组合物、其制备方法和应用 - Google Patents

具有抗氧化作用的菠萝提取液组合物、其制备方法和应用 Download PDF

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extract composition
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pineapple extract
water
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高思宇
李国庆
王昌涛
鹿发展
霍彤
安全
石秀芹
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云南白药集团健康产品有限公司
云南白药集团股份有限公司
北轻家化(黄山)科技有限公司
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    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A61Q19/08—Anti-ageing preparations

Definitions

  • the invention belongs to the field of cosmetics, and in particular relates to a pineapple extract composition with antioxidant effect, a preparation method and application thereof.
  • Natural cosmetics are more and more popular nowadays. Natural cosmetics, in addition to natural ingredients, do not add flavors, preservatives and other potentially irritating ingredients.
  • enzymolysis can transform macromolecular components into small molecules, which are accompanied by the production of other active substances such as polysaccharides and polypeptides.
  • Plants contain a variety of enzymes, including protease, cellulase, amylase, esterase, etc.
  • the enzymes contained in plants can be used to hydrolyze macromolecular proteins into oligopeptides, and starch and cellulose into oligosaccharides. , lipolysis into glycerol, fatty acid.
  • the application of these products in cosmetics is more conducive to the skin's absorption of functional ingredients, and finally achieves a certain effect.
  • the purpose of the present invention is to overcome the defects in the prior art, and provide a pineapple extract composition with antioxidant effect, its preparation method and application.
  • DPPH refers to: 1,1-diphenyl-2-trinitrophenylhydrazine.
  • PBS refers to: Phosphate Buffered Saline.
  • the first aspect of the present invention provides a pineapple extract composition with antioxidant effect
  • the pineapple extract composition is prepared by extracting the raw materials of the following components: pineapple, oat, papaya, Luo Han Guo, Tremella polysaccharide and water; and the pineapple extract composition is prepared by mixing oat with a mixed pretreatment solution containing pineapple, papaya, and Luo Han Guo, and then adding Tremella polysaccharide.
  • the parts by mass of each component in the pineapple extract composition are: 0.1-20 parts of pineapple, 0.1-20 parts of oat, 1-5 parts of papaya, and Luo Han Guo 1-5 parts, Tremella polysaccharide 0.1-10 parts, water 100 parts;
  • 0.1-10 parts of pineapple 0.5-10 parts of oat, 1-3 parts of papaya, 1-3 parts of Luo Han Guo, 0.1-5 parts of Tremella polysaccharide, and 100 parts of water;
  • a second aspect of the present invention provides a method for preparing the pineapple extract composition of the first aspect, the method comprising the following steps:
  • step (3) the oat obtained in step (1) and the mixed pretreatment solution obtained in step (2) are mixed, heated and stirred, and the supernatant is obtained by cooling and centrifugation;
  • step (1) wherein, in step (1), the oats are crushed and passed through a sieve of 60-100 meshes, preferably an 80-mesh sieve.
  • step (2) the mass ratio of the pineapple to water is 1:1-150, preferably 1:10-100, more preferably 1:20-80, and most Preferably it is 1:20 ⁇ 50;
  • the mass ratio of the papaya to water is 1:1-200, preferably 1:10-150, more preferably 1:20-120, most preferably 1:50-100;
  • the mass ratio of Luo Han Guo and water is 1:1-200, preferably 1:10-150, more preferably 1:20-120, most preferably 1:50-100; and/or
  • the standing time is 1 to 5 hours, preferably 2 to 4 hours, and most preferably 3 hours.
  • the mass ratio of the oat and the mixed pretreatment solution obtained in the step (2) is 1:1 ⁇ 200, preferably 1:10 ⁇ 150, more Preferably it is 1:20-100.
  • step (3) the heating temperature is 20-90°C, preferably 25-85°C, more preferably 30-80°C, and further preferably 40-70°C; and / or
  • the heating time is 0.5 to 10 hours, preferably 0.5 to 8 hours, more preferably 1 to 5 hours, and further preferably 2 to 4 hours.
  • the stirring rate is 50 ⁇ 1000r/min, preferably 50 ⁇ 800r/min, more preferably 50 ⁇ 500r/min, further preferably 50 ⁇ 1000r/min 300r/min; and/or
  • the centrifugation rate is 500-8000 rad/min, preferably 500-5000 rad/min, more preferably 500-3000 rad/min, still more preferably 800-2000 rad/min.
  • step (4) the mass ratio of the Tremella polysaccharide to the supernatant obtained in step (3) is 1:10-300, preferably 1:50-300, more preferably 1:50-250, most preferably 1:100-200; and/or
  • the homogenization time is 5 to 60 minutes, preferably 10 to 60 minutes, more preferably 10 to 40 minutes, still more preferably 15 to 30 minutes.
  • the sterilization treatment method is heat sterilization
  • the heat sterilization temperature is 60-100°C, preferably 70-90°C, most preferably 80°C; and/or the heat-sterilization time is 1-5 hours, preferably 1-3 hours , most preferably 2 hours.
  • a third aspect of the present invention provides an application of a pineapple extract composition in the preparation of antioxidant products, the pineapple extract composition comprising pineapple, oat, papaya, Luo Han Guo and Tremella polysaccharide;
  • the pineapple extract composition is the pineapple extract composition of the first aspect or the pineapple extract composition prepared according to the method of the second aspect.
  • a fourth aspect of the present invention provides a cosmetic product comprising the pineapple extract composition of the first aspect or the pineapple extract composition prepared by the method of the second aspect;
  • the dosage form of the cosmetic product is selected from one or more of the following: cream, lotion, water, gel, oil, powder, mud, aerosol, patch, film;
  • the cosmetic product is a cream, mask, lotion or essence.
  • the cosmetic product according to the fourth aspect of the present invention wherein, when the cosmetic product is a cream, its preparation method comprises the following steps:
  • step (c) adding the oil phase mixture prepared in step (b) to the water phase mixture prepared in step (a), and homogenizing to obtain the cosmetic product.
  • the water phase component includes vegetable oil and an antibacterial agent; and/or in the step (b), the oil phase component includes vegetable oil and an emulsifier;
  • the vegetable oil is selected from one or more of the following: glycerin, green thorn fruit oil, olive oil, peony seed oil, macadamia nut oil, babassu oil, toona japonica oil;
  • the antibacterial agent is selected from one or more of the following: hexanediol, methylparaben, propylparaben, phenoxyethanol; and/or
  • the emulsifier is selected from one or more of the following: wheat emulsifier, polyglycerol-3 diisostearate, dipolyhydroxystearic acid, and yeoleyl glucoside.
  • the ratio of the sterilized pineapple extract composition, vegetable oil and antibacterial agent is 80 ⁇ 95:1 ⁇ 10:0.01 ⁇ 1g/g/g, preferably 89 ⁇ 93:2 ⁇ 5: 0.05 ⁇ 0.2g/g/g;
  • the ratio of the vegetable oil to the emulsifier is 1 ⁇ 10:2 ⁇ 15g/g, preferably 2 ⁇ 5:5 ⁇ 10g/g; and/or
  • the ratio of the oil phase mixture to the water phase mixture is 2-25:0.5-5g/g, preferably 5-10:1-2g/g;
  • the heating temperature is 70-120°C, more preferably 70-100°C, further preferably 80-90°C; and /or
  • the homogenization time is 15-45 minutes, more preferably 20-40 minutes, and even more preferably 25-35 minutes.
  • a fifth aspect of the present invention provides a method for anti-oxidation, the method comprising: administering to a subject in need:
  • the pineapple extract composition of the first aspect is
  • the pineapple extract composition prepared according to the method described in the second aspect; or
  • the preparation method of the pineapple extract composition of the present invention comprises the following steps:
  • the ratio of the pineapple to water is 1:1 ⁇ 250g/mL, preferably 1:10 ⁇ 200g/mL, more preferably 1:20 ⁇ 150g/mL, most preferably 1:50g/mL mL;
  • the ratio of papaya to water is 1:1 ⁇ 150g/mL, preferably 1:10 ⁇ 150g/mL, more preferably 1:10 ⁇ 100g/mL, most preferably 1:20g/mL;
  • the ratio of the Luo Han Guo to water is 1:1 ⁇ 200g/mL, preferably 1:10 ⁇ 150g/mL, more preferably 1:10 ⁇ 100g/mL, most preferably 1:20g/mL;
  • the ratio of the oat and the extract (1) is 1:1 ⁇ 500g/mL, preferably 1:5 ⁇ 300g/mL, more preferably 1:20 ⁇ 200g/mL, most preferably 1:100g/mL;
  • the heating temperature is 1-150°C, preferably 10-100°C, more preferably 20-100°C, most preferably 40°C;
  • the heating time is 1-10 hours, preferably 1-8 hours, more preferably 1-5 hours, most preferably 4 hours
  • the stirring rate is 10-600 r/min, preferably 10-500 r/min, more preferably 10-300 r/min, and most preferably 150 r/min.
  • the centrifugal rotation speed is 200-8000 r/min, preferably 300-7000 r/min, more preferably 500-6000 r/min, and most preferably 2000 r/min.
  • the ratio of the Tremella polysaccharide to the extract is 1:1 ⁇ 1000g/mL, preferably 1:5 ⁇ 800g/mL, more preferably 1:10 ⁇ 500g/mL, most preferably 1:1: 200g/mL;
  • the homogenization speed is 100-3000r/min, preferably 200-2000r/min, more preferably 300-1500r/min; the most preferably 1000r/min;
  • the homogenization time is 1 to 60 minutes, preferably 1 to 40 minutes, more preferably 10 to 30 minutes, and most preferably 15 minutes.
  • the present invention provides the application of a pineapple extract composition in the preparation of products with anti-oxidation effect.
  • the inventors have proved through experiments that the extract composition of the present invention has a strong free radical scavenging effect and can significantly improve fiber formation.
  • the total antioxidant capacity of cells can significantly reduce the content of reactive oxygen species and reduce the damage of reactive oxygen species to cells.
  • FIG. 1 shows the ability of the extract composition of the present invention to scavenge DPPH free radicals in Test Example 1.
  • Figure 2 shows the Trolox standard curve in Test Example 2.
  • FIG. 3 shows the total antioxidant capacity of the extract composition of the present invention on fibroblasts in Test Example 3.
  • FIG. 4 shows the effect of the extract composition of the present invention on the content of reactive oxygen species in fibroblasts in Test Example 3.
  • FIG. 4 shows the effect of the extract composition of the present invention on the content of reactive oxygen species in fibroblasts in Test Example 3.
  • Figure 5 shows the change in skin moisture content (time point comparison) between the sample (cream 1) and the control (cream 3) in Test Example 5, where *, p ⁇ 0.05, indicating that it is significant compared to the background Difference; n.s., p>0.05, indicating no significant difference compared with the background.
  • Figure 6 shows the effects of the sample (cream 1) and the control (cream 3) on skin Q1 in Test Example 5 (time point comparison), where *, p ⁇ 0.05, indicating a significant difference compared to the background ; n.s., p>0.05, indicating that there is no significant difference compared with the background.
  • Figure 7 shows the proportion of consumers who are satisfied with the sensory evaluation of consumers in Test Example 5.
  • Oats (fried and cooked) were purchased from Zhangjiakou Jianjun Oat Food Co., Ltd.;
  • Pueraria lobata was purchased from Beijing Tongrentang (Group) Co., Ltd., Beijing, China;
  • Tremella polysaccharide was purchased from Shanghai Huiwen Biotechnology Co., Ltd.;
  • Homogenizer purchased from IKA Co., Ltd., model T25;
  • the medical centrifuge was purchased from Wuxi Ruijiang Analytical Instrument Co., Ltd., model RJ-TGL-10B.
  • This example is used to illustrate the preparation method of the pineapple extract composition of the present invention.
  • Papaya Wash, peel and cut into pieces.
  • Oatmeal After crushing, pass through 80 mesh for use.
  • step (3) Mix the oat and the mixed pretreatment solution obtained in step (2) in a ratio of 1:20 g/mL, heat at 70°C for 4 hours, and stir at 50 rad/min; liquid.
  • step (3) (4) adding the supernatant obtained in step (3) in a ratio of 1:100 g/mL Tremella polysaccharide, and the homogenizer rotating speed is 500 rad/min for 30 minutes.
  • the pineapple extract liquid composition is filled into a mask bag (containing a mask cloth).
  • This example is used to illustrate the preparation method of the pineapple extract composition of the present invention.
  • Papaya Wash, peel and cut into pieces.
  • Oatmeal After crushing, pass through 80 mesh for use.
  • step (3) Mix the oatmeal and the mixed pretreatment solution obtained in step (2) in a ratio of 1:100 g/mL, heat at 40°C for 2 hours, and stir at 300 rad/min; liquid.
  • step (3) adding and the ratio of the supernatant obtained in step (3) is 1:200g/mL Tremella polysaccharide, and the homogenizer rotating speed is 1000rad/min and homogenizing for 15 minutes.
  • the pineapple extract liquid composition is filled into a mask bag (containing a mask cloth).
  • This example is used to illustrate the preparation method of the pineapple extract composition of the present invention.
  • Papaya Wash, peel, and dice.
  • Oatmeal After crushing, pass through 80 mesh for use.
  • step (3) Mix the oatmeal and the mixed pretreatment solution obtained in step (2) in a proportion of 1:50 g/mL, heat at 50°C for 4 hours, and stir at 100 rad/min; liquid.
  • step (3) adding and the ratio of the supernatant obtained in step (3) is 1:150g/mL Tremella polysaccharide, and the rotating speed of the homogenizer is 1000rad/min and homogenizing for 20 minutes.
  • the pineapple extract liquid composition is filled into a mask bag (containing a mask cloth).
  • This example is used to illustrate the preparation method of the pineapple extract composition of the present invention.
  • Papaya Wash, peel, and dice.
  • Oatmeal After crushing, pass through 80 mesh for use.
  • step (3) Mix the oatmeal and the mixed pretreatment solution obtained in step (2) in a proportion of 1:80 g/mL, heat at 60° C. for 3 hours, and stir at 200 rad/min; liquid.
  • step (3) adding and the ratio of the supernatant obtained in step (3) is 1:200g/mL Tremella polysaccharide, and the rotating speed of the homogenizer is 1000rad/min and homogenizing for 25 minutes.
  • the pineapple extract liquid composition is filled into a mask bag (containing a mask cloth).
  • This example is used to illustrate the preparation method of the pineapple extract composition of the present invention.
  • Papaya Wash, peel, and dice.
  • Oatmeal After crushing, pass through 60 mesh for use.
  • step (3) Mix the oatmeal and the mixed pretreatment solution obtained in step (2) in a proportion of 1:150 g/mL, heat at 80°C for 1 hour, and stir at 500 rad/min; liquid.
  • step (3) adding and the ratio of the supernatant obtained in step (3) is 1:50g/mL Tremella polysaccharide, and the homogenizer rotating speed is 1000rad/min and homogenizing for 10 minutes.
  • the pineapple extract liquid composition is filled into a mask bag (containing a mask cloth).
  • This example is used to illustrate the preparation method of the pineapple extract composition of the present invention.
  • Papaya Wash, peel, and dice.
  • Oatmeal After crushing, pass through 90 mesh for use.
  • step (3) Mix the oatmeal and the mixed pretreatment solution obtained in step (2) in a ratio of 1:120 g/mL, heat at 30°C for 8 hours, and stir at 800 rad/min; liquid.
  • step (3) adding and the ratio of the supernatant obtained in step (3) is 1:250g/mL Tremella polysaccharide, and the rotating speed of the homogenizer is 1000rad/min and homogenizing for 40 minutes.
  • the pineapple extract liquid composition is filled into a mask bag (containing a mask cloth).
  • This example is used to illustrate the preparation method of the pineapple extract composition of the present invention.
  • Papaya Wash, peel, and dice.
  • Oatmeal After crushing, pass through 100 mesh for use.
  • step (3) Mix the oatmeal and the mixed pretreatment solution obtained in step (2) in a proportion of 1:200 g/mL, heat at 90°C for 0.5 hours, and stir at 1000 rad/min; liquid.
  • step (3) adding and the ratio of the supernatant obtained in step (3) is 1:300g/mL Tremella polysaccharide, and the homogenizer rotating speed is 1000rad/min and homogenizing for 60 minutes.
  • the pineapple extract liquid composition is filled into a mask bag (containing a mask cloth).
  • This example is used to illustrate the method for preparing an antioxidant facial cream using the pineapple extract composition of Example 2 of the present invention.
  • This example is used to illustrate the method for preparing an antioxidant facial cream using the pineapple extract composition of Example 3 of the present invention.
  • This example is used to prepare antioxidant cream 3 which is compared with Example 8 and Example 9.
  • composition of the pineapple extract is replaced with water, and the other ingredients, proportions and operation steps remain unchanged, and the face cream 3 is prepared.
  • This test example is used to illustrate the free radical scavenging ability of the pineapple extract composition of Example 2.
  • Tube A1 Take 3mL of the sample and mix it with 3mL of DPPH solution (2 ⁇ 10-4mol/L); Tube A2: Take 3mL of water and mix it with the same volume of DPPH solution; Tube A3: Take 3mL of absolute ethanol and Equal volumes of samples were mixed evenly; the absorbance of A1, A2 and A3 tubes was measured at 517 nm after reaction for 30 min.
  • DPPH free radical scavenging rate [(A2+A3)-A1]/A2 ⁇ 100%. The results are shown in Figure 3.
  • This test example is used to illustrate the effect of the facial mask liquid prepared in Example 1 on the total antioxidant capacity of fibroblasts.
  • ABTS working stock solution 400uL of ABTS and 400uL of oxidant solution were used to prepare ABTS working stock solution, which was stored in the dark at room temperature for 14 hours and then diluted 50 times with PBS to obtain ABTS working solution.
  • This test example is used to illustrate the effect of the facial mask liquid prepared in Example 2 on the content of reactive oxygen species in fibroblasts.
  • DCFH-DA was diluted 1:1000 in serum-free medium to a final concentration of 10 ⁇ mol/L. Add 1 ml per well. Incubate in a 37°C cell incubator for 20 minutes. Cells were washed three times with serum-free cell culture medium to sufficiently remove DCFH-DA that did not enter the cells.
  • the positive control can be used at a ratio of 1:1000. After adding reactive oxygen species as a positive control, after stimulating the cells for 20 minutes, wash twice with PBS, add 0.5ml of 0.25% trypsin to digest, and centrifuge at 5000r/min for 5min to discard the supernatant to obtain cell pellets.
  • the test results of the facial mask liquid on the content of reactive oxygen species in fibroblasts are shown in Figure 4.
  • the model group was a cell group that was only irradiated with UVA and no sample was added, the blank group was a cell group that was not irradiated and no sample was added, and the positive control group was to verify the stability of the system.
  • the test found that UVA irradiation slightly increased the reactive oxygen species content of cells.
  • the statistical difference between the sample group and the model group was compared, and it was found that this facial liquid could significantly reduce the reactive oxygen species content and reduce the damage of reactive oxygen species to cells.
  • the mask has antioxidant properties.
  • This test example is used to illustrate the effects of the compositions prepared in Examples 2 to 7 on the total antioxidant capacity of fibroblasts.
  • T1 The sample group has the absorbance value of ABTS system
  • T2 The absorbance value of the sample group without ABTS system.
  • Results The results of the clearance rate of the facial mask liquid prepared in Examples 2 to 7 to ABTS are shown in Table 12. It can be seen from the table that the clearance rate of the compositions prepared in Examples 2 to 7 is up to 92.5%, indicating that the pineapple of the present invention has a maximum clearance rate of 92.5%. All extract compositions have antioxidant capacity.
  • Example 2 1.529 0.015 92.46% 0.91%
  • Example 3 1.528 0.007 92.43% 0.40%
  • Example 4 1.529 0.002 92.50% 0.13%
  • Example 5 1.413 0.037 85.37% 2.28%
  • Example 6 1.467 0.011 86.98% 1.27%
  • Example 7 1.398 0.066 80.21% 2.1%
  • This test example is used to compare the antioxidant efficacy of the cream prepared in Example 8, Example 9 and the cream prepared in Example 10 when applied to human body.
  • test site has not undergone skin treatment, cosmetic or other tests that may affect the results
  • the specified content can be completed according to the requirements of the test plan.
  • Test environment temperature: 20 ⁇ 2°C; humidity: (50 ⁇ 10)%, and real-time dynamic monitoring is performed.
  • the left face was used the example sample
  • the right face was used the comparative sample
  • the skin elasticity Q1 value of both cheeks was collected at 0d and 14d
  • the skin of both cheeks was collected at 0d and 28d.
  • Figure 5 shows the change in skin moisture content (time point comparison) between the sample (cream 1) and the control (cream 3) in Test Example 5, where *, p ⁇ 0.05, indicating that it is significant compared to the background Difference; n.s., p>0.05, indicating no significant difference compared with the background. It can be seen from Figure 5 that after the 28D use cycle, the skin moisture content of 30 subjects after using Cream 1 was significantly increased compared with the background (P ⁇ 0.05), and the control group (Cream 3) had no significant change.
  • Figure 6 shows the effects of the sample (cream 1) and the control (cream 3) on skin Q1 in Test Example 5 (time point comparison), where *, p ⁇ 0.05, indicating a significant difference compared to the background ; n.s., p>0.05, indicating that there is no significant difference compared with the background. It can be seen from Figure 6 that after the 14D sample use cycle, the skin Q1 value of the sample group was significantly higher than the background. There was no significant difference in the skin Q1 value of the control group compared with the background.
  • Figure 7 shows the proportion of consumers who are satisfied with the sensory evaluation of consumers in Test Example 5.
  • 28D of use cycle in terms of product push-off smoothness, product absorption speed, skin smoothness after use, freshness after use and skin softness after use, 30 subjects face cream 2.
  • the satisfaction level of 93.33% was higher than that of the control group.
  • the face cream prepared by using the pineapple extract composition of the present invention has better moisturizing, firming and antioxidant effects than the face cream prepared by only adding water in Example 10 (comparative example).

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Abstract

本发明提供了一种具有抗氧化作用的菠萝提取液组合物，所述菠萝提取液组合物由以下成分的原料提取制备得到：菠萝、燕麦、木瓜、罗汉果、银耳多糖和水，还提供了其美容产品、制备方法和应用。本发明人通过试验证明，本发明提取液组合物具有较强的自由基清除作用，能显著提高成纤维细胞的总抗氧化能力，可极其显著的降低活性氧含量，减少活性氧对细胞的损伤。

Description

具有抗氧化作用的菠萝提取液组合物、其制备方法和应用
相关申请的交叉引用
本申请要求2021年04月16日提交的第CN202110412279.4号中国发明专利申请的优先权，所述申请以引用的方式整体并入本文。
技术领域
本发明属于化妆品领域，具体涉及一种具有抗氧化作用的菠萝提取液组合物、其制备方法和应用。
背景技术
天然化妆品如今越来越受到人们的青睐。天然化妆品，除了配方成分天然以外，同时不添加香精、防腐剂等具有潜在刺激性成分。
酶解作为一种广泛应用于食品、药品及化妆品领域的技术，可将大分子成分改造成小分子，并伴随多糖、多肽等其他活性物质产生。植物中含有的酶多种多样，有蛋白酶、纤维素酶、淀粉酶、酯酶等，利用植物中含有的酶可以将大分子蛋白质酶解成寡肽，将淀粉、纤维素酶解成寡糖，将脂肪酶解成甘油、脂肪酸。将这些产物应用在化妆品中，更有利于皮肤吸收功效成分，最终达到一定的功效。
发明内容
因此，本发明的目的在于克服现有技术中的缺陷，提供一种具有抗氧化作用的菠萝提取液组合物、其制备方法和应用。
在阐述本发明内容之前，定义本文中所使用的术语如下：
术语“DPPH”是指：1,1-二苯基-2-三硝基苯肼。
术语“PBS”是指：磷酸缓冲盐溶液。
为实现上述目的，本发明的第一方面提供了一种具有抗氧化作用的菠萝提取液组合物，所述菠萝提取液组合物由以下成分的原料提取制备得到：菠萝、燕麦、木瓜、罗汉果、银耳多糖和水；且所述菠萝提取液组合物通过将燕麦与含有菠萝、木瓜、罗汉果的混合预处理液混合后再加入银耳多糖制得。
根据本发明第一方面的菠萝提取液组合物，其中，所述菠萝提取液组合物中各成分的质量份数为：菠萝0.1～20份，燕麦0.1～20份，木瓜1～5份，罗汉果1～5份，银耳多糖0.1～10份、水100份；
优选地，菠萝0.1～10份，燕麦0.5～10份，木瓜1～3份，罗汉果1～3份，银耳多糖0.1～5份、水100份；
更优选地，菠萝1～5份，燕麦1～6份，木瓜1～2份，罗汉果1～2份，银耳多糖0.1～2份、水100份。
本发明的第二方面提供了第一方面所述菠萝提取液组合物的制备方法，所述方法包括以下步骤：
(1)燕麦粉碎过筛；
(2)菠萝、木瓜、罗汉果分别清洗、去皮、切块，与水混合打浆，室温静置，得到混合预处理液；
(3)将步骤(1)所得燕麦与步骤(2)所得混合预处理液混合加热搅拌，冷却离心取上清液；
(4)向步骤(3)中所得上清液中加入银耳多糖，均质得到所述菠萝提取液组合物。
根据本发明第二方面的方法，其中，步骤(1)中，所述燕麦粉碎后过60～100目优选为80目筛。
根据本发明第二方面的方法，其中，步骤(2)中，所述菠萝和水的质量比为1:1～150，优选为1:10～100，更优选为1:20～80，最优选为1:20～50；
所述木瓜和水的质量比为1:1～200，优选为1:10～150，更优选为1:20～120，最优选为1:50～100；
所述罗汉果和水的质量比为1:1～200，优选为1:10～150，更优选为1:20～120，最优选为1:50～100；和/或
所述静置时间为1～5小时，优选为2～4小时，最优选为3小时。
根据本发明第二方面的方法，其中，步骤(3)中，燕麦与步骤(2)所得混合预处理液预处理液的质量比为1:1～200，优选为1:10～150，更优选为1:20～100。
根据本发明第二方面的方法，其中，步骤(3)中，所述加热温度为20～90℃，优选为25～85℃，更优选为30～80℃，进一步优选为40～70℃；和/或
所述加热时间为0.5～10小时，优选为0.5～8小时，更优选为1～5小时，进一步优选为2～4小时。
根据本发明第二方面的方法，其中，步骤(3)中，所述搅拌速率为50～1000r/min，优选为50～800r/min，更优选为50～500r/min，进一步优选为50～300r/min；和/或
所述离心速率为500～8000rad/min，优选为500～5000rad/min，更优选为500～3000rad/min，进一步优选为800～2000rad/min。
根据本发明第二方面的方法，其中，步骤(4)中，所述银耳多糖与步骤(3)所得上清液的质量比为1:10～300，优选为1:50～300，更优选为1:50～250，最优选为1:100～200；和/或
所述均质时间为5～60分钟，优选为10～60分钟，更优选为10～40分钟，进一步优选为15～30分钟。
根据本发明第二方面的方法，其中，所述方法还包括以下步骤：
(5)对步骤(4)所得菠萝提取液组合物进行灭菌处理；
优选地，所述灭菌处理方式为加热灭菌；
更优选地，所述加热灭菌温度为60～100℃，优选为70～90℃，最优选为80℃；和/或所述加热灭菌时间为1～5小时，优选为1～3小时，最优选为2小时。
本发明的第三方面提供了一种菠萝提取液组合物在制备抗氧化产品中的应用，所述菠萝提取液组合物包含菠萝、燕麦、木瓜、罗汉果和银耳多糖；
优选地，所述菠萝提取液组合物为第一方面所述的菠萝提取液组合物或根据第二方面所述方法制备的菠萝提取液组合物。
本发明的第四方面提供了一种美容产品，所述美容产品包括第一方面所述的菠萝提取液组合物或根据第二方面所述方法制备的菠萝提取液组合物；
优选地，所述美容产品的剂型选自以下一种或多种：膏霜、乳液、水剂、凝胶、油剂、粉剂、泥、气雾剂、贴、膜；
更优选地，所述美容产品为膏霜、面膜、乳液或精华。
根据本发明第四方面的美容产品，其中，当所述美容产品为膏霜时，其制备方法包括以下步骤：
(a)在灭菌后的菠萝提取液组合物中加入水相成分，加热搅拌得水相混合物；
(b)将油相组分混合，加热溶解后得油相混合物；
(c)将步骤(b)制得的油相混合物加入到步骤(a)制备的水相混合物中，均质得所述美容产品。
根据本发明第四方面的美容产品，其中，
所述步骤(a)中，所述水相成分包括植物油和抗菌剂；和/或所述步骤(b)中，所述油相成分包括植物油和乳化剂；
优选地，所述植物油选自以下一种或多种：甘油、青刺果油、橄榄油、牡丹籽油、澳洲坚果油、巴巴苏子油、椿花油；
优选地，所述抗菌剂选自以下一种或多种：己二醇、羟苯甲酯、羟苯丙酯、苯氧乙醇；和/或
优选地，所述乳化剂选自以下一种或多种：小麦乳化剂、聚甘油-3二异硬脂酸酯、二聚羟基硬脂酸、耶油基葡糖苷。
根据本发明第四方面的美容产品，其中，
所述步骤(a)中，所述灭菌后的菠萝提取液组合物、植物油和抗菌剂的比例为80～95:1～10:0.01～1g/g/g，优选为89～93:2～5:0.05～0.2g/g/g；
所述步骤(b)中，所述植物油和乳化剂的比例为1～10:2～15g/g，优选为2～5:5～10g/g；和/或
所述步骤(c)中，所述油相混合物和所述水相混合物的比例为2～25:0.5～5g/g，优选为5～10：1～2g/g；
优选地，所述步骤(a)、所述步骤(b)和所述步骤(c)中，加热温度为70～120℃，更优选为70～100℃，进一步优选为80～90℃；和/或
优选地，所述步骤(c)中，所述均质的时间为15～45min，更优选为20～40min，进一步优选为25～35min。
本发明的第五方面提供了一种用于抗氧化的方法，所述方法包括：对有需要的受试者给予：
第一方面所述的菠萝提取液组合物；
按照第二方面所述的方法制备的菠萝提取液组合物；或
第四方面所述的美容产品。
本发明菠萝提取液组合物的制备方法包括以下步骤：
(1)将菠萝、木瓜、罗汉果与水混合打浆。室温静置3小时。
(2)将燕麦加入提取液(1)中，加热搅拌，离心，取上清。
(3)(2)中加入银耳多糖，均质得到所述面膜液。
(4)100℃ 2h灭菌，无菌条件下灌装。
步骤(1)中，所述菠萝和水的比例为1:1～250g/mL，优选为1:10～200g/mL，更优选为1:20～150g/mL，最优选为1:50g/mL；
所述木瓜和水的比例为1:1～150g/mL，优选为1:10～150g/mL，更优选为1:10～100g/mL，最优选为1:20g/mL；
所述罗汉果和水的比例为1:1～200g/mL，优选为1:10～150g/mL，更优选为1:10～100g/mL，最优选为1:20g/mL；
步骤(2)中，所述燕麦和提取液(1)的比例为1:1～500g/mL，优选为1:5～300g/mL，更优选为1:20～200g/mL，最优选为1:100g/mL；
所述加热温度为1～150℃，优选为10～100℃，更优选为20～100℃，最优选为40℃；
所述加热时间为1～10小时，优选为1-8小时，更优选为1～5小时，最优选为4小时
所述搅拌速率为10～600r/min，优选为10～500r/min，更优选为10～300r/min，最优选为150r/min。
所述离心转速为200～8000r/min，优选为300～7000r/min，更优选为500～6000r/min，最优选为2000r/min。
步骤(3)中，所述银耳多糖和提取液的比例为1:1～1000g/mL，优选为1:5～800g/mL，更优选为1:10～500g/mL，最优选为1:200g/mL；
所述均质速度为100～3000r/min，优选为200～2000r/min，更优选为300～1500r/min；最优为1000r/min；
均质时间为1～60分钟，优选为1～40分钟，更优选为10～30分钟，最优选为15分钟。
本发明的菠萝提取液组合物可以具有但不限于以下有益效果：
本发明提供了一种菠萝提取液组合物在制备具有抗氧化作用的产品中的应用，本发明人通过试验证明，本发明提取液组合物具有较强的自由基清除作用，能显著提高成纤维细胞的总抗氧化能力，可极其显著的降低活性氧含量，减少活性氧对细胞的损伤。
附图的简要说明
以下，结合附图来详细说明本发明的实施方案，其中：
图1示出了试验例1中本发明提取液组合物清除DPPH自由基的能力。
图2示出了试验例2中Trolox标准曲线。
图3示出了试验例3中本发明提取液组合物对成纤维细胞的总抗氧化能力。
图4示出了试验例3中本发明提取液组合物对成纤维细胞活性氧含量的影响。
图5示出了试验例5中样品(面霜1)和对照(面霜3)对皮肤水分含量的变化(时 间点比较)，其中，*，p<0.05，表示与本底相比，具有显著性差异；n.s.,p>0.05，表示与本底相比，无显著性差异。
图6示出了试验例5中样品(面霜1)和对照(面霜3)对皮肤Q1的影响(时间点比较)，其中，*，p<0.05，表示与本底相比，具有显著性差异；n.s.,p>0.05，表示与本底相比，无显著性差异。
图7示出了试验例5中消费者感官评价满意人数占比。
实施发明的最佳方式
下面通过具体的实施例进一步说明本发明，但是，应当理解为，这些实施例仅仅是用于更详细具体地说明之用，而不应理解为用于以任何形式限制本发明。实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件，或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可通过正规渠道商购获得的常规产品。
本部分对本发明试验中所使用到的材料以及试验方法进行一般性的描述。虽然为实现本发明目的所使用的许多材料和操作方法是本领域公知的，但是本发明仍然在此作尽可能详细描述。本领域技术人员清楚，在上下文中，如果未特别说明，本发明所用材料和操作方法是本领域公知的。
以下实施例中使用的试剂和仪器如下：
材料：
菠萝、木瓜、罗汉果，购自广东省湛江市红星农场；
燕麦(炒制熟)购自张家口建军燕麦食品有限公司；
葛根(干燥粉)购自中国北京同仁堂(集团)有限责任公司；
银耳多糖购自上海辉文生物技术股份有限公司；
成纤维细胞，赛百慷(上海)生物技术股份有限公司。
试剂：
总抗氧化能力检测试剂盒，北京索莱宝科技有限公司。
仪器：
酶联免疫检测仪，购自Thermo Fisher Scientific OY、型号1510-00662C；
均质机，购自IKA有限公司，型号T25；
医用离心机，购自无锡市瑞江分析仪器有限公司，型号RJ-TGL-10B。
实施例1
本实施例用于说明本发明菠萝提取液组合物的制备方法。
1、原料处理
菠萝：清洗、去皮、切块。
木瓜：清洗、去皮、切块。
罗汉果：清洗、去皮、切块。
燕麦：粉碎后过80目备用。
2、菠萝提取液组合物制备
(1)菠萝、木瓜、罗汉果与水添加比例如表1所示。
表1 混合预处理液的添加比例
原料 质量份数
水 100
菠萝 5
木瓜 2
罗汉果 2
(2)将菠萝、木瓜、罗汉果与水混合打浆，室温静置3小时，制备混合预处理液。
(3)燕麦与步骤(2)所得混合预处理液按照比例为1：20g/mL混合，70℃加热4小时，50rad/min进行搅拌；冷却至室温，以转速800rad/min离心，取上清液。
(4)加入与步骤(3)所得上清液比例为1：100g/mL银耳多糖，均质机转速为500rad/min均质30分钟。
3、灭菌处理
菠萝提取液组合物灌装入面膜袋(含面膜布)。
80℃灭菌2小时。
实施例2
本实施例用于说明本发明菠萝提取液组合物的制备方法。
1、原料处理(食品级)
菠萝：清洗、去皮、切块。
木瓜：清洗、去皮、切块。
罗汉果：清洗、去皮、切块。
燕麦：粉碎后过80目备用。
2、菠萝提取液组合物制备
(1)菠萝、木瓜、罗汉果与水添加比例如表2所示。
表2 混合预处理液的添加比例
原料 质量份数
水 100
菠萝 2
木瓜 1
罗汉果 1
(2)将菠萝、木瓜、罗汉果与水混合打浆，室温静置3小时，制备混合预处理液。
(3)燕麦与步骤(2)所得混合预处理液按照比例为1：100g/mL混合，40℃加热2小时，300rad/min进行搅拌；冷却至室温，以转速2000rad/min离心，取上清液。
(4)加入与步骤(3)所得上清液比例为1：200g/mL银耳多糖，均质机转速为1000rad/min均质15分钟。
3、灭菌处理
菠萝提取液组合物灌装入面膜袋(含面膜布)。
80℃灭菌2小时。
实施例3
本实施例用于说明本发明菠萝提取液组合物的制备方法。
1、原料处理
菠萝:清洗、去皮、切块。
木瓜:清洗、去皮、切块。
罗汉果:清洗、去皮、切块。
燕麦:粉碎后过80目备用。
2、菠萝提取液组合物制备
(1)菠萝、木瓜、罗汉果与水添加比例如表3所示。
表3 混合预处理液的添加比例
原料 质量份数
水 100
菠萝 4
木瓜 1.25
罗汉果 1.25
(2)将菠萝、木瓜、罗汉果与水混合打浆，室温静置3小时，制备混合预处理液。
(3)燕麦与步骤(2)所得混合预处理液按照比例为1:50g/mL混合，50℃加热4小时，100rad/min进行搅拌；冷却至室温，以转速1000rad/min离心，取上清液。
(4)加入与步骤(3)所得上清液比例为1:150g/mL银耳多糖，均质机转速为1000rad/min均质20分钟。
3、灭菌处理
菠萝提取液组合物灌装入面膜袋(含面膜布)。
80℃灭菌2小时。
实施例4
本实施例用于说明本发明菠萝提取液组合物的制备方法。
1、原料处理
菠萝:清洗、去皮、切块。
木瓜:清洗、去皮、切块。
罗汉果:清洗、去皮、切块。
燕麦:粉碎后过80目备用。
2、菠萝提取液组合物制备
(1)菠萝、木瓜、罗汉果与水添加比例如表4所示。
表4 混合预处理液的添加比例
原料 质量份数
水 100
菠萝 3
木瓜 2
罗汉果 2
(2)将菠萝、木瓜、罗汉果与水混合打浆，室温静置3小时，制备混合预处理液。
(3)燕麦与步骤(2)所得混合预处理液按照比例为1:80g/mL混合，60℃加热3小时，200rad/min进行搅拌；冷却至室温，以转速1500rad/min离心，取上清液。
(4)加入与步骤(3)所得上清液比例为1:200g/mL银耳多糖，均质机转速为1000rad/min均质25分钟。
3、灭菌处理
菠萝提取液组合物灌装入面膜袋(含面膜布)。
80℃灭菌2小时。
实施例5
本实施例用于说明本发明菠萝提取液组合物的制备方法。
1、原料处理
菠萝:清洗、去皮、切块。
木瓜:清洗、去皮、切块。
罗汉果:清洗、去皮、切块。
燕麦:粉碎后过60目备用。
2、菠萝提取液组合物制备
(1)菠萝、木瓜、罗汉果与水添加比例如表5所示。
表5 混合预处理液的添加比例
原料 质量份数
水 100
菠萝 10
木瓜 3
罗汉果 3
(2)将菠萝、木瓜、罗汉果与水混合打浆，室温静置4小时，制备混合预处理液。
(3)燕麦与步骤(2)所得混合预处理液按照比例为1:150g/mL混合，80℃加热1小时，500rad/min进行搅拌；冷却至室温，以转速3000rad/min离心，取上清液。
(4)加入与步骤(3)所得上清液比例为1:50g/mL银耳多糖，均质机转速为1000rad/min均质10分钟。
3、灭菌处理
菠萝提取液组合物灌装入面膜袋(含面膜布)。
90℃灭菌2小时。
实施例6
本实施例用于说明本发明菠萝提取液组合物的制备方法。
1、原料处理
菠萝:清洗、去皮、切块。
木瓜:清洗、去皮、切块。
罗汉果:清洗、去皮、切块。
燕麦:粉碎后过90目备用。
2、菠萝提取液组合物制备
(1)菠萝、木瓜、罗汉果与水添加比例如表6所示。
表6 混合预处理液的添加比例
原料 质量份数
水 100
菠萝 8
木瓜 2
罗汉果 2
(2)将菠萝、木瓜、罗汉果与水混合打浆，室温静置2小时，制备混合预处理液。
(3)燕麦与步骤(2)所得混合预处理液按照比例为1:120g/mL混合，30℃加热8小时，800rad/min进行搅拌；冷却至室温，以转速5000rad/min离心，取上清液。
(4)加入与步骤(3)所得上清液比例为1:250g/mL银耳多糖，均质机转速为1000rad/min均质40分钟。
3、灭菌处理
菠萝提取液组合物灌装入面膜袋(含面膜布)。
80℃灭菌2小时。
实施例7
本实施例用于说明本发明菠萝提取液组合物的制备方法。
1、原料处理
菠萝:清洗、去皮、切块。
木瓜:清洗、去皮、切块。
罗汉果:清洗、去皮、切块。
燕麦:粉碎后过100目备用。
2、菠萝提取液组合物制备
(1)菠萝、木瓜、罗汉果与水添加比例如表7所示。
表7 混合预处理液的添加比例
原料 质量份数
水 100
菠萝 20
木瓜 5
罗汉果 5
(2)将菠萝、木瓜、罗汉果与水混合打浆，室温静置5小时，制备混合预处理液。
(3)燕麦与步骤(2)所得混合预处理液按照比例为1:200g/mL混合，90℃加热0.5小时，1000rad/min进行搅拌；冷却至室温，以转速8000rad/min离心，取上清液。
(4)加入与步骤(3)所得上清液比例为1:300g/mL银耳多糖，均质机转速为1000rad/min均质60分钟。
3、灭菌处理
菠萝提取液组合物灌装入面膜袋(含面膜布)。
100℃灭菌1小时。
实施例8
本实施例用于说明利用本发明实施例2菠萝提取液组合物制备抗氧化面霜的方法。
1、制备抗氧化面霜，其中面霜的成分及比例如表8所示。
表8 面霜成分及添加比例
Figure PCTCN2022084833-appb-000001
Figure PCTCN2022084833-appb-000002
2、将表8中水相成分混合，在85℃加热30min，250rad/min进行搅拌，得到混合物1。
3、将表8中油相组分混合，在85℃下加热至溶解，得到混合物2。
4、在85℃环境下将混合物2加入混合物1中，均质30min，得到抗氧化面霜1。
实施例9
本实施例用于说明利用本发明实施例3菠萝提取液组合物制备抗氧化面霜的方法。
1、制备抗氧化面霜，其中面霜的成分及比例如表9所示。
表9 面霜成分及添加比例
Figure PCTCN2022084833-appb-000003
2、将表9中水相成分混合，在85℃加热30min，250rad/min进行搅拌，得到混合物1。
3、将表9中油相组分混合，在85℃下加热至溶解，得到混合物2。
4、在85℃环境下将混合物2加入混合物1中，均质30min，得到抗氧化面霜2。
实施例10
本实施例用于制备和实施例8、实施例9做对比的抗氧化面霜3。
区别在于把菠萝提取液组合物替换成水，其他成分及比例和操作步骤不变，制得面霜3。
试验例1
本试验例用于说明实施例2菠萝提取液组合物的自由基清除能力。
DPPH自由基清除能力实验
A1管：取3mL的样品与3mL的DPPH溶液(2×10-4mol/L)混匀；A2管：取3mL的水与同体积的DPPH溶液混匀；A3管：取3mL的无水乙醇与等体积样品混匀；反应 30min于517nm下测A1，A2和A3管的吸光度。DPPH自由基清除率＝[(A2+A3)-A1]/A2×100％。结果如图3所示。
结果：本试验例用于说明本发明菠萝提取液组合物清除DPPH自由基的能力。检测结果如图1和表10所示。由图表可知，本菠萝提取液组合物在作用浓度为25％时，其自由基清除能力即达到66.94％，说明本发明菠萝提取液组合物具有较强的自由基清除作用，具有一定的抗氧化功效。
表10 DPPH自由基清除率
浓度 清除率 标准差
3.13％ 14.34％ 0.007848885
6.25％ 13.23％ 0.031749094
12.50％ 20.39％ 0.063710321
25％ 66.94％ 0.021425335
50％ 71.20％ 0.011737973
100％ 93.51％ 0.033587572
试验例2
本试验例用于说明实施例1制备面膜液对成纤维细胞总抗氧能力的影响。
1)细胞裂解上清液制备
取对数生长期状态良好的成纤维细胞计数并接种于6孔培养板中，控制每孔细胞数5x10 5个细胞。在37℃，5％CO 2环境下培养过夜，弃培养基，加入少量的PBS(Ph＝7.4)以刚好覆盖细胞为宜，随后以UVA刺激细胞，UV辐射量为7J/cm 2，空白组不照射。吸弃PBS，加入不同浓度(使成纤维细胞存活率为50％、80％、100％的样品浓度)样品作用细胞24小时(模型组以及空白对照组加入无血清DMEM培养液)。取出，置于冰上，PBS洗涤2次；以细胞刮刀刮下细胞，收集至离心管中，5000r/min离心5min弃上清得到细胞沉淀，后加入200uL裂解液裂解细胞，12000g 4℃下离心5min，取上清得到细胞裂解上清液。
2)ABTS工作液的配制：
先将400uL的ABTS与400uL氧化剂溶液制备ABTS工作母液，室温避光存放14小时后以PBS稀释50倍得到ABTS工作液。
3)标准曲线测定的准备：
PBS来稀释标准品，把10mM Trolox标准溶液稀释成0.15、0.3、0.6、0.9、1.2和1.5mM。4)总抗氧化能力的测定：
96孔板的每个检测孔中加入200微升ABTS工作液，空白对照孔中加入10微升PBS溶液；标准曲线检测孔内加入10微升各种浓度的Trolox标准溶液；样品检测孔内加入10微升各种样品。轻轻混匀。室温孵育4分钟后测定A734。根据标准曲线计算出样 品的总抗氧化能力。
所得的标准曲线如图2所示，为：y＝-0.4357x+0.5565，R 2＝0.9921。
结果：面膜液对成纤维细胞的总抗氧化能力测试结果如图3所示。模型组是只通过UVA照射，未添加样品的细胞组，空白组为未照射且未添加样品的细胞组，经试验发现UVA照射会降低细胞的总抗氧化能力，样品组与模型组、空白组以及阳性对照组VC对比，经过统计学差异的计算后发现，本面膜液能显著提高成纤维细胞的总抗氧化能力，效果比阳性对照VC更为显著，说明本面膜能够达到抗氧化的作用。
试验例3
本试验例用于说明实施例2制备面膜液对成纤维细胞活性氧含量的影响。
实验方法：
取对数期生长良好的成纤维细胞，六孔板每空接种2ml DMEM完全培养液稀释的成纤维细胞悬浮液，设置空白对照组、模型组、阳性对照组和样品组。控制每孔细胞数5x10 5个。37℃，5％CO 2培养箱中培养24小时后，弃去培养基，加入少量的PBS(pH＝7.4)以刚好覆盖细胞为宜。使用UVA刺激细胞，UV辐射量为7J/cm 2，空白组不照射。吸弃PBS，加入不同浓度样品刺激细胞24小时。
对于空白对照组、模型组、样品组，去除样品后，PBS清洗两次，加入0.5ml 0.25％胰酶消化，离心收集细胞沉淀，加入1:1000用无血清培养液稀释DCFH-DA 1ml，37℃细胞培养箱内孵育20分钟，每3-5分钟颠倒一次。用无血清细胞培养液洗涤细胞三次，以充分去除未进入细胞内的DCFH-DA。5000r/min离心5min弃上清得到细胞沉淀，加PBS制成细胞悬液，使细胞数为1x106/ml。点板，每个样品设置3个复孔，使用荧光酶标仪在488nm激发波长，525nm发射波长处测定。
对于阳性对照，紫外照射后，去除细胞培养液，装载探针。按照1:1000用无血清培养液稀释DCFH-DA，使终浓度为10微摩尔/升。每孔加入1ml。37℃细胞培养箱内孵育20分钟。用无血清细胞培养液洗涤细胞三次，以充分去除未进入细胞内的DCFH-DA。阳性对照可以按照1:1000的比例使用，加入活性氧阳性对照在刺激细胞20分钟后，PBS清洗两次，加入0.5ml0.25％胰酶消化，5000r/min离心5min弃上清得到细胞沉淀，加PBS制成细胞悬液，使细胞数为1x106/ml。点板，每个样品设置3个复孔，使用荧光酶标仪在488nm激发波长，525nm发射波长处测定。
结果：面膜液对成纤维细胞内活性氧含量的测试结果如图4所示。模型组是只通过UVA照射，未添加样品的细胞组，空白组为未照射且未添加样品的细胞组，阳性对照组为验证体系稳定性。经试验发现UVA照射对细胞的活性氧含量稍有增加，样品组与模型组做统计学差异对比发现对比，本面部液可极其显著的降低活性氧含量，减少活性氧对细胞的损伤，即本面膜具有抗氧化的功效。
试验例4
本试验例用于说明实施例2～7制备的组合物对成纤维细胞的总抗氧化能力的影响。
操作步骤同试验例2，具体测试方案如表11：
表11 测试方案
Figure PCTCN2022084833-appb-000004
(1)根据总抗氧化能力检测试剂盒(ABTS法)说明书进行操作。
(2)ABTS自由基清除率计算方法:
Figure PCTCN2022084833-appb-000005
式中:C1——溶剂对照组有ABTS体系吸光度值；
C2——溶剂对照组无ABTS体系吸光度值；
T1——样品组有ABTS体系吸光度值；
T2——样品组无ABTS体系吸光度值。
结果：实施例2～7制备的面膜液对ABTS的清除率结果如表12所示，从表中可以看出实施例2～7制备的组合物清除率最高达92.5％，说明本发明的菠萝提取液组合物均具有抗氧化能力。
表12 抗氧化能力及ABTS自由基清除率
样品名称 抗氧化能力 SD 清除率 SD
实施例2 1.529 0.015 92.46％ 0.91％
实施例3 1.528 0.007 92.43％ 0.40％
实施例4 1.529 0.002 92.50％ 0.13％
实施例5 1.413 0.037 85.37％ 2.28％
实施例6 1.467 0.011 86.98％ 1.27％
实施例7 1.398 0.066 80.21％ 2.1％
试验例5(对比例)
本试验例用于对比实施例8、实施例9制备的面霜和实施例10制备的面霜应用于人 体的抗氧化功效。
1、基本原则
根据赫尔辛基宣言，志愿者的选择遵循人体测试的医学和伦理学标准，所有志愿者的测试都必须出于志愿者本人自愿，并在测试前签署知情同意书。志愿者在签署知情同意书之前，测试人员需要告知志愿者本次测试的目的、可能的利益、潜在的风险和问题以及相关的权利和义务。
2、志愿者筛选
符合下列所有条件的志愿者将被入选。
(1)年龄45～65岁的志愿者，干性皮肤、皮肤松弛、皱纹等级3级及以上，左右两侧颧骨下方F4平均值高于6，R 2平均值低于0.65，男女均可，其中妊娠或哺乳期妇女，或六个月内预备怀孕妇女除外；
(2)受试部位没有接受过皮肤治疗、美容以及其他可能影响结果的测试；
(3)近一个月内未曾使用激素类药物及免疫抑制剂者；
(4)现在或最近三个月受试部位未参加其他临床试验者。
(5)自愿参加并签署知情同意书。
(6)能按测试方案要求完成规定内容。
3、实验设计
(1)测试环境：温度:20±2℃；湿度:(50±10)％，并且进行实时动态监测。
(2)有效人数：45～65岁60人，30人使用面霜1和面霜3，30人使用面霜2和面霜3.
(3)实验仪器：MPA580(德国CK公司)多探头(Cutometer皮肤弹性测试仪器参数设置为:负压45kPa(450mbar)，10个循环周期，负压加载和清除时间均为2s)，VISIA CR
(4)测试区域：面部
(5)测试时间点及指标：
连续4周使用，早晚各一次，左脸使用实施例样品，右脸使用对比例样品，分别在0d，14d时采集两侧脸颊的皮肤弹性Q1值，在0d、28d时采集两侧脸颊的皮肤水分含量，和消费者自我评估问卷。需采用能够确保受试者正确区分两侧试验产品和对照产品和连续使用样品的监控措施。
(6)数据分析：
统计学方法：正态数据用均值、标准差进行描述，比较用t检验；非正态数据用中位数和四分位数间距进行描述，比较用非参数检验。以p<0.05表示差异有统计学意义。
结果：
图5示出了试验例5中样品(面霜1)和对照(面霜3)对皮肤水分含量的变化(时 间点比较)，其中，*，p<0.05，表示与本底相比，具有显著性差异；n.s.,p>0.05，表示与本底相比，无显著性差异。由图5可知，经过28D的使用周期，30名受试者使用面霜1后的皮肤水分含量与本底相比显著性升高(P<0.05)，对照组(面霜3)无显著性改变。
图6示出了试验例5中样品(面霜1)和对照(面霜3)对皮肤Q1的影响(时间点比较)，其中，*，p<0.05，表示与本底相比，具有显著性差异；n.s.,p>0.05，表示与本底相比，无显著性差异。由图6可知，经过14D样品使用周期，样品组皮肤Q1值显著性高于本底。对照组皮肤Q1值与本底相比无显著性差异。
图7示出了试验例5中消费者感官评价满意人数占比。由图7可知，经过28D的使用周期，在产品推开顺滑度、产品吸收速度、使用后肌肤顺滑度、使用后清爽度和使用后皮肤柔软度方面，30名受试者对面霜2的满意程度达到93.33％，高于对照组。
说明本发明的使用菠萝提取液组合物制备的面霜相较于实施例10(对比例)仅添加水制备的面霜，具有更好的保湿、紧致抗氧化效果。
尽管本发明已进行了一定程度的描述，明显地，在不脱离本发明的精神和范围的条件下，可进行各个条件的适当变化。可以理解，本发明不限于所述实施方案，而归于权利要求的范围，其包括所述每个因素的等同替换。

Claims (15)

  1. 一种具有抗氧化作用的菠萝提取液组合物，其特征在于，所述菠萝提取液组合物由以下成分的原料提取制备得到：菠萝、燕麦、木瓜、罗汉果、银耳多糖和水；且所述菠萝提取液组合物通过将燕麦与含有菠萝、木瓜、罗汉果的混合预处理液混合后再加入银耳多糖制得。
  2. 根据权利要求1所述的菠萝提取液组合物，其特征在于，所述菠萝提取液组合物中各成分的质量份数为：菠萝0.1～20份，燕麦0.1～20份，木瓜1～5份，罗汉果1～5份，银耳多糖0.1～10份、水100份；
    优选地，菠萝0.1～10份，燕麦0.5～10份，木瓜1～3份，罗汉果1～3份，银耳多糖0.1～5份、水100份；
    更优选地，菠萝1～5份，燕麦1～6份，木瓜1～2份，罗汉果1～2份，银耳多糖0.1～2份、水100份。
  3. 根据权利要求1或2所述的菠萝提取液组合物的制备方法，其特征在于，所述菠萝提取液组合物通过以下方法制备：
    (1)燕麦粉碎过筛；优选地，所述燕麦粉碎后过60～100目优选为80目筛；
    (2)菠萝、木瓜、罗汉果分别清洗、去皮、切块，与水混合打浆，室温静置，得到混合预处理液；
    (3)将步骤(1)所得燕麦与步骤(2)所得混合预处理液混合加热搅拌，冷却离心取上清液；
    (4)向步骤(3)中所得上清液中加入银耳多糖，均质得到所述菠萝提取液组合物。
  4. 根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述菠萝和水的质量比为1:1～150，优选为1:10～100，更优选为1:20～80，最优选为1:20～50；
    所述木瓜和水的质量比为1:1～200，优选为1:10～150，更优选为1:20～120，最优选为1:50～100；
    所述罗汉果和水的质量比为1:1～200，优选为1:10～150，更优选为1:20～120，最优选为1:50～100；和/或
    所述静置时间为1～5小时，优选为2～4小时，最优选为3小时。
  5. 根据权利要求3或4所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，燕麦与步骤(2)所得混合预处理液预处理液的质量比为1：1～200，优选为1：10～150，更优选为1：20～100。
  6. 根据权利要求3至5中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述加热温度为20～90℃，优选为25～85℃，更优选为30～80℃，进一步优选为40～70℃；和/或
    所述加热时间为0.5～10小时，优选为0.5～8小时，更优选为1～5小时，进一步优选为2～4小时。
  7. 根据权利要求3至6中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述搅拌速率为50～1000r/min，优选为50～800r/min，更优选为50～500r/min，进一步优选为50～300r/min；和/或
    所述离心速率为500～8000rad/min，优选为500～5000rad/min，更优选为500～3000rad/min，进一步优选为800～2000rad/min。
  8. 根据权利要求3至7中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(4)中，所述银耳多糖与步骤(3)所得上清液的质量比为1:10～300，优选为1:50～300，更优选为1:50～250，最优选为1:100～200；和/或
    所述均质时间为5～60分钟，优选为10～60分钟，更优选为10～40分钟，进一步优选为15～30分钟。
  9. 根据权利要求3至8中任一项所述的方法，其特征在于，所述方法还包括以下步骤：
    (5)对步骤(4)所得菠萝提取液组合物进行灭菌处理；
    优选地，所述灭菌处理方式为加热灭菌；
    更优选地，所述加热灭菌温度为60～100℃，优选为70～90℃，最优选为80℃；和/或所述加热灭菌时间为1～5小时，优选为1～3小时，最优选为2小时。
  10. 一种菠萝提取液组合物在制备抗氧化产品中的应用，其特征在于，所述菠萝提取液组合物包含菠萝、燕麦、木瓜、罗汉果和银耳多糖；
    优选地，所述菠萝提取液组合物为权利要求1或2所述的菠萝提取液组合物或根据权利要求3至9中任一项所述方法制备的菠萝提取液组合物。
  11. 一种美容产品，其特征在于，所述美容产品包括权利要求1或2所述的菠萝提取液 组合物或根据权利要求3至9中任一项所述方法制备的菠萝提取液组合物；
    优选地，所述美容产品的剂型选自以下一种或多种：膏霜、乳液、水剂、凝胶、油剂、粉剂、泥、气雾剂、贴、膜；
    更优选地，所述美容产品为膏霜、面膜、乳液或精华。
  12. 根据权利要求11所述的美容产品，其特征在于：当所述美容产品为膏霜时，其制备方法包括以下步骤：
    (a)在灭菌后的菠萝提取液组合物中加入水相成分，加热搅拌得水相混合物；
    (b)将油相组分混合，加热溶解后得油相混合物；
    (c)将步骤(b)制得的油相混合物加入到步骤(a)制备的水相混合物中，均质得所述美容产品。
  13. 根据权利要求12所述的美容产品，其特征在于：
    所述步骤(a)中，所述水相成分包括植物油和抗菌剂；和/或所述步骤(b)中，所述油相成分包括植物油和乳化剂；
    优选地，所述植物油选自以下一种或多种：甘油、青刺果油、橄榄油、牡丹籽油、澳洲坚果油、巴巴苏子油、椿花油；
    优选地，所述抗菌剂选自以下一种或多种：己二醇、羟苯甲酯、羟苯丙酯、苯氧乙醇；和/或
    优选地，所述乳化剂选自以下一种或多种：小麦乳化剂、聚甘油-3二异硬脂酸酯、二聚羟基硬脂酸、耶油基葡糖苷。
  14. 根据权利要求12或13所述的美容产品，其特征在于：
    所述步骤(a)中，所述灭菌后的菠萝提取液组合物、植物油和抗菌剂的比例为80～95:1～10:0.01～1g/g/g，优选为89～93:2～5:0.05～0.2g/g/g；
    所述步骤(b)中，所述植物油和乳化剂的比例为1～10:2～15g/g，优选为2～5:5～10g/g；和/或
    所述步骤(c)中，所述油相混合物和所述水相混合物的比例为2～25:0.5～5g/g，优选为5～10：1～2g/g；
    优选地，所述步骤(a)、所述步骤(b)和所述步骤(c)中，加热温度为70～120℃，更优选为70～100℃，进一步优选为80～90℃；和/或
    优选地，所述步骤(c)中，所述均质的时间为15～45min，更优选为20～40min，进一步优选为25～35min。
  15. 一种用于抗氧化的方法，其特征在于，所述方法包括：对有需要的受试者给予：
    权利要求1或2所述的菠萝提取液组合物；
    按照权利要求3至9中任一项所述的方法制备的菠萝提取液组合物；或
    权利要求11至14中任一项所述的美容产品。
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