CN113274333A - 具有抗氧化作用的菠萝提取液组合物、其制备方法和应用 - Google Patents

具有抗氧化作用的菠萝提取液组合物、其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种菠萝提取液组合物在制备具有抗氧化作用的产品中的应用，本发明人通过试验证明，本发明人通过试验证明，本发明提取液组合物具有较强的自由基清除作用，能显著提高成纤维细胞的总抗氧化能力，可极其显著的降低活性氧含量，减少活性氧对细胞的损伤。

Description

具有抗氧化作用的菠萝提取液组合物、其制备方法和应用
技术领域
本发明属于化妆品领域，具体涉及一种具有抗氧化作用的菠萝提取液组合物、其制备方法和应用。
背景技术
天然化妆品如今越来越受到人们的青睐。天然化妆品，除了配方成分天然以外，同时不添加香精、防腐剂等具有潜在刺激性成分。
酶解作为一种广泛应用于食品、药品及化妆品领域的技术，可将大分子成分改造成小分子，并伴随多糖、多肽等其他活性物质产生。植物中含有的酶多种多样，有蛋白酶、纤维素酶、淀粉酶、酯酶等，利用植物中含有的酶可以将大分子蛋白质酶解成寡肽，将淀粉、纤维素酶解成寡糖，将脂肪酶解成甘油、脂肪酸。将这些产物应用在化妆品中，更有利于皮肤吸收功效成分，最终达到一定的功效。
发明内容
因此，本发明的目的在于克服现有技术中的缺陷，提供一种具有抗氧化作用的菠萝提取液组合物、其制备方法和应用。
为实现上述目的，本发明的第一方面提供了一种具有抗氧化作用的菠萝提取液组合物，所述菠萝提取液组合物由以下成分的原料提取制备得到：菠萝、燕麦、木瓜、罗汉果、银耳多糖和水；且所述菠萝提取液组合物通过将燕麦与含有菠萝、木瓜、罗汉果的混合预处理液混合后再加入银耳多糖制得。
根据本发明第一方面的菠萝提取液组合物，其中，所述菠萝提取液组合物中各成分的质量份数为：菠萝0.1～20份，燕麦0.1～20份，木瓜1～5份，罗汉果1～5份，银耳多糖0.1～10份、水100份；
优选地，菠萝0.1～10份，燕麦0.5～10份，木瓜1～3份，罗汉果1～3份，银耳多糖0.1～5份、水100份；
更优选地，菠萝1～5份，燕麦1～6份，木瓜1～2份，罗汉果1～2份，银耳多糖0.1～2份、水100份。
本发明的第二方面提供了第一方面所述菠萝提取液组合物的制备方法，所述方法包括以下步骤：
(1)燕麦粉碎过筛；
(2)菠萝、木瓜、罗汉果分别清洗、去皮、切块，与水混合打浆，室温静置，得到混合预处理液；
(3)将步骤(1)所得燕麦与步骤(2)所得混合预处理液混合加热搅拌，冷却离心取上清液；
(4)向步骤(3)中所得上清液中加入银耳多糖，均质得到所述菠萝提取液组合物。
根据本发明第二方面的方法，其中，步骤(1)中，所述燕麦粉碎后过60～100目优选为80目筛。
根据本发明第二方面的方法，其中，步骤(2)中，所述菠萝和水的质量比为1:1～150，优选为1:10～100，更优选为1:20～80，最优选为1:20～50；
所述木瓜和水的质量比为1:1～200，优选为1:10～150，更优选为1:20～120，最优选为1:50～100；
所述罗汉果和水的质量比为1:1～200，优选为1:10～150，更优选为1:20～120，最优选为1:50～100；和/或
所述静置时间为1～5小时，优选为2～4小时，最优选为3小时。
根据本发明第二方面的方法，其中，步骤(3)中，燕麦与步骤(2)所得混合预处理液预处理液的质量比为1:1～200，优选为1:10～150，更优选为1:20～100。
根据本发明第二方面的方法，其中，步骤(3)中，所述加热温度为20～90℃，优选为25～85℃，更优选为30～80℃，进一步优选为40～70℃；和/或
所述加热时间为0.5～10小时，优选为0.5～8小时，更优选为1～5小时，进一步优选为2～4小时。
根据本发明第二方面的方法，其中，步骤(3)中，所述搅拌速率为50～1000r/min，优选为50～800r/min，更优选为50～500r/min，进一步优选为50～300r/min；和/或
所述离心速率为500～8000rad/min，优选为500～5000rad/min，更优选为500～3000rad/min，进一步优选为800～2000rad/min。
根据本发明第二方面的方法，其中，步骤(4)中，所述银耳多糖与步骤(3)所得上清液的质量比为1:10～300，优选为1:50～300，更优选为1:50～250，最优选为1:100～200；和/或
所述均质时间为5～60分钟，优选为10～60分钟，更优选为10～40分钟，进一步优选为15～30分钟。
根据本发明第二方面的方法，其中，所述方法还包括以下步骤：
(5)对步骤(4)所得菠萝提取液组合物进行灭菌处理；
优选地，所述灭菌处理方式为加热灭菌；
更优选地，所述加热灭菌温度为60～100℃，优选为70～90℃，最优选为80℃；和/或所述加热灭菌时间为1～5小时，优选为1～3小时，最优选为2小时。
本发明的第三方面提供了一种菠萝提取液组合物在制备抗氧化产品中的应用，所述菠萝提取液组合物包含菠萝、燕麦、木瓜、罗汉果和银耳多糖；
优选地，所述菠萝提取液组合物为第一方面所述的菠萝提取液组合物或根据第二方面所述方法制备的菠萝提取液组合物。
本发明菠萝提取液组合物的制备方法包括以下步骤：
(1)将菠萝、木瓜、罗汉果与水混合打浆。室温静置3小时。
(2)将燕麦加入提取液(1)中，加热搅拌，离心，取上清。
(3)(2)中加入银耳多糖，均质得到所述面膜液。
(4)100℃2h灭菌，无菌条件下灌装。
步骤(1)中，所述菠萝和水的比例为1:1～250g/mL，优选为1:10～200g/mL，更优选为1:20～150g/mL，最优选为1:50g/mL；
所述木瓜和水的比例为1:1～150g/mL，优选为1:10～150g/mL，更优选为1:10～100g/mL，最优选为1:20g/mL；
所述罗汉果和水的比例为1:1～200g/mL，优选为1:10～150g/mL，更优选为1:10～100g/mL，最优选为1:20g/mL；
步骤(2)中，所述燕麦和提取液(1)的比例为1:1～500g/mL，优选为1:5～300g/mL，更优选为1:20～200g/mL，最优选为1:100g/mL；
所述加热温度为1～150℃，优选为10～100℃，更优选为20～100℃，最优选为40℃；
所述加热时间为1～10小时，优选为1-8小时，更优选为1～5小时，最优选为4小时
所述搅拌速率为10～600r/min，优选为10～500r/min，更优选为10～300r/min，最优选为150r/min。
所述离心转速为200～8000r/min，优选为300～7000r/min，更优选为500～6000r/min，最优选为2000r/min。
步骤(3)中，所述银耳多糖和提取液的比例为1:1～1000g/mL，优选为1:5～800g/mL，更优选为1:10～500g/mL，最优选为1:200g/mL；
所述均质速度为100～3000r/min，优选为200～2000r/min，更优选为300～1500r/min；最优为1000r/min；
均质时间为1～60分钟，优选为1～40分钟，更优选为10～30分钟，最优选为15分钟。
本发明的菠萝提取液组合物可以具有但不限于以下有益效果：
本发明提供了一种菠萝提取液组合物在制备具有抗氧化作用的产品中的应用，本发明人通过试验证明，本发明提取液组合物具有较强的自由基清除作用，能显著提高成纤维细胞的总抗氧化能力，可极其显著的降低活性氧含量，减少活性氧对细胞的损伤。
附图说明
以下，结合附图来详细说明本发明的实施方案，其中：
图1示出了试验例1中本发明提取液组合物清除DPPH自由基的能力。
图2示出了试验例2中Trolox标准曲线。
图3示出了试验例3中本发明提取液组合物对成纤维细胞的总抗氧化能力。
图4示出了试验例3中本发明提取液组合物对成纤维细胞活性氧含量的影响。
具体实施方式
下面通过具体的实施例进一步说明本发明，但是，应当理解为，这些实施例仅仅是用于更详细具体地说明之用，而不应理解为用于以任何形式限制本发明。
本部分对本发明试验中所使用到的材料以及试验方法进行一般性的描述。虽然为实现本发明目的所使用的许多材料和操作方法是本领域公知的，但是本发明仍然在此作尽可能详细描述。本领域技术人员清楚，在上下文中，如果未特别说明，本发明所用材料和操作方法是本领域公知的。
以下实施例中使用的试剂和仪器如下：
试剂：
菠萝、木瓜、罗汉果，购自广东省湛江市红星农场；
燕麦(炒制熟)购自张家口建军燕麦食品有限公司；
葛根(干燥粉)购自同仁堂大药房；
银耳多糖购自上海辉文生物技术股份有限公司
仪器：
均质机，购自IKA。
成纤维细胞，黑色素细胞，购自中科院干细胞库；
血红细胞，购自北京兴隆动物养殖厂；，
SDS，购自阿拉丁；
氯化钠，购自国药；
仪器：
酶联免疫检测仪，购自Thermo Fisher Scientific OY、型号1510-00662C。
离心机，购自无锡市瑞江分析仪器有限公司
均质机，购自IKA。
实施例1
本实施例用于说明本发明菠萝提取液组合物的制备方法。
1、原料处理
菠萝：清洗、去皮、切块。
木瓜：清洗、去皮、切块。
罗汉果：清洗、去皮、切块。
燕麦：粉碎后过80目备用。
2、菠萝提取液组合物制备
(1)菠萝、木瓜、罗汉果与水添加比例如表1所示。
表1混合预处理液的添加比例
原料 质量份数
水 100
菠萝 5
木瓜 2
罗汉果 2
(2)将菠萝、木瓜、罗汉果与水混合打浆，室温静置3小时，制备混合预处理液。
(3)燕麦与步骤(2)所得混合预处理液按照质量比1：20混合，70℃加热4小时，50rad/min进行搅拌；冷却至室温，以转速800rad/min离心，取上清液。
(4)加入与步骤(3)所得上清液质量比1：100银耳多糖，均质机转速为500rad/min均质30分钟。
3、灭菌处理
菠萝提取液组合物灌装入面膜袋(含面膜布)。
80℃灭菌2小时。
实施例2
本实施例用于说明本发明菠萝提取液组合物的制备方法。
1、原料处理(食品级)
菠萝：清洗、去皮、切块。
木瓜：清洗、去皮、切块。
罗汉果：清洗、去皮、切块。
燕麦：粉碎后过80目备用。
2、菠萝提取液组合物制备
(1)菠萝、木瓜、罗汉果与水添加比例如表2所示。
表2混合预处理液的添加比例
Figure BDA0003024339850000061
Figure BDA0003024339850000071
(2)将菠萝、木瓜、罗汉果与水混合打浆，室温静置3小时，制备混合预处理液。
(3)燕麦与步骤(2)所得混合预处理液按照质量比1：100混合，40℃加热2小时，300rad/min进行搅拌；冷却至室温，以转速2000rad/min离心，取上清液。
(4)加入与步骤(3)所得上清液质量比1：200银耳多糖，均质机转速为1000rad/min均质15分钟。
3、灭菌处理
菠萝提取液组合物灌装入面膜袋(含面膜布)。
80℃灭菌2小时。
试验例1
本试验例用于说明实施例2菠萝提取液组合物的自由基清除能力。
DPPH自由基清除能力实验
A1管：取3mL的样品与3mL的DPPH溶液(2×10-4mol/L)混匀；A2管：取3mL的水与同体积的DPPH溶液混匀；A3管：取3mL的无水乙醇与等体积样品混匀；反应30min于517nm下测A1，A2和A3管的吸光度。DPPH自由基清除率＝[(A2+A3)-A1]/A2×100％。结果如图3所示。
结果：本试验例用于说明本发明菠萝提取液组合物清除DPPH自由基的能力。检测结果如图1和表3所示。由图表可知，本菠萝提取液组合物在作用浓度为25％时，其自由基清除能力即达到66.94％，说明本发明菠萝提取液组合物具有较强的自由基清除作用，具有一定的抗氧化功效。
表3 DPPH自由基清除率
浓度 清除率 标准差
3.13％ 14.34％ 0.007848885
6.25％ 13.23％ 0.031749094
12.50％ 20.39％ 0.063710321
25％ 66.94％ 0.021425335
50％ 71.20％ 0.011737973
100％ 93.51％ 0.033587572
试验例2
本试验例用于说明实施例1制备面膜液对成纤维细胞总抗氧能力的影响。
1)细胞裂解上清液制备
取对数生长期状态良好的成纤维细胞计数并接种于6孔培养板中，控制每孔细胞数5x105个细胞。在37℃，5％CO2环境下培养过夜，弃培养基，加入少量的PBS(Ph＝7.4)以刚好覆盖细胞为宜，随后以UVA刺激细胞，UV辐射量为7J/cm2，空白组不照射。吸弃PBS，加入不同浓度(使成纤维细胞存活率为50％、80％、100％的样品浓度)样品作用细胞24小时(模型组以及空白对照组加入无血清DMEM培养液)。取出，置于冰上，PBS洗涤2次；以细胞刮刀刮下细胞，收集至离心管中，5000r/min离心5min弃上清得到细胞沉淀，后加入200uL裂解液裂解细胞，12000g 4℃下离心5min，取上清得到细胞裂解上清液。
2)ABTS工作液的配制：
先将400uL的ABTS与400uL氧化剂溶液制备ABTS工作母液，室温避光存放14小时后以PBS稀释50倍得到ABTS工作液。
3)标准曲线测定的准备：
PBS来稀释标准品，把10mM Trolox标准溶液稀释成0.15、0.3、0.6、0.9、1.2和1.5mM。
4)总抗氧化能力的测定：
96孔板的每个检测孔中加入200微升ABTS工作液，空白对照孔中加入10微升PBS溶液；标准曲线检测孔内加入10微升各种浓度的Trolox标准溶液；样品检测孔内加入10微升各种样品。轻轻混匀。室温孵育4分钟后测定A734。根据标准曲线计算出样品的总抗氧化能力。
所得的标准曲线如图2所示，为：y＝-0.4357x+0.5565，R2＝0.9921
结果：面膜液对成纤维细胞的总抗氧化能力测试结果如图3所示。模型组是只通过UVA照射，未添加样品的细胞组，空白组为未照射且未添加样品的细胞组，经试验发现UVA照射会降低细胞的总抗氧化能力，样品组与模型组、空白组以及阳性对照组VC对比，经过统计学差异的计算后发现，本面膜液能显著提高成纤维细胞的总抗氧化能力，效果比阳性对照VC更为显著，说明本面膜能够达到抗氧化的作用。
试验例3
本试验例用于说明实施例2制备面膜液对成纤维细胞活性氧含量的影响。
实验方法：
取对数期生长良好的成纤维细胞，六孔板每空接种2ml DMEM完全培养液稀释的成纤维细胞悬浮液，设置空白对照组、模型组、阳性对照组和样品组。控制每孔细胞数5x105个。37℃，5％CO2培养箱中培养24小时后，弃去培养基，加入少量的PBS(pH＝7.4)以刚好覆盖细胞为宜。使用UVA刺激细胞，UV辐射量为7J/cm2，空白组不照射。吸弃PBS，加入不同浓度样品刺激细胞24小时。
对于空白对照组、模型组、样品组，去除样品后，PBS清洗两次，加入0.5ml 0.25％胰酶消化，离心收集细胞沉淀，加入1:1000用无血清培养液稀释DCFH-DA 1ml，37℃细胞培养箱内孵育20分钟，每3-5分钟颠倒一次。用无血清细胞培养液洗涤细胞三次，以充分去除未进入细胞内的DCFH-DA。5000r/min离心5min弃上清得到细胞沉淀，加PBS制成细胞悬液，使细胞数为1x106/ml。点板，每个样品设置3个复孔，使用荧光酶标仪在488nm激发波长，525nm发射波长处测定。
对于阳性对照，紫外照射后，去除细胞培养液，装载探针。按照1:1000用无血清培养液稀释DCFH-DA，使终浓度为10微摩尔/升。每孔加入1ml。37℃细胞培养箱内孵育20分钟。用无血清细胞培养液洗涤细胞三次，以充分去除未进入细胞内的DCFH-DA。阳性对照可以按照1:1000的比例使用，加入活性氧阳性对照在刺激细胞20分钟后，PBS清洗两次，加入0.5ml0.25％胰酶消化，5000r/min离心5min弃上清得到细胞沉淀，加PBS制成细胞悬液，使细胞数为1x106/ml。点板，每个样品设置3个复孔，使用荧光酶标仪在488nm激发波长，525nm发射波长处测定。
结果：面膜液对成纤维细胞内活性氧含量的测试结果如图4所示。模型组是只通过UVA照射，未添加样品的细胞组，空白组为未照射且未添加样品的细胞组，阳性对照组为验证体系稳定性。经试验发现UVA照射对细胞的活性氧含量稍有增加，样品组与模型组做统计学差异对比发现对比，本面部液可极其显著的降低活性氧含量，减少活性氧对细胞的损伤，即本面膜具有抗氧化的功效。
尽管本发明已进行了一定程度的描述，明显地，在不脱离本发明的精神和范围的条件下，可进行各个条件的适当变化。可以理解，本发明不限于所述实施方案，而归于权利要求的范围，其包括所述每个因素的等同替换。

Claims (10)

1.一种具有抗氧化作用的菠萝提取液组合物，其特征在于，所述菠萝提取液组合物由以下成分的原料提取制备得到：菠萝、燕麦、木瓜、罗汉果、银耳多糖和水；且所述菠萝提取液组合物通过将燕麦与含有菠萝、木瓜、罗汉果的混合预处理液混合后再加入银耳多糖制得。
2.根据权利要求1所述的菠萝提取液组合物，其特征在于，所述菠萝提取液组合物中各成分的质量份数为：菠萝0.1～20份，燕麦0.1～20份，木瓜1～5份，罗汉果1～5份，银耳多糖0.1～10份、水100份；
优选地，菠萝0.1～10份，燕麦0.5～10份，木瓜1～3份，罗汉果1～3份，银耳多糖0.1～5份、水100份；
更优选地，菠萝1～5份，燕麦1～6份，木瓜1～2份，罗汉果1～2份，银耳多糖0.1～2份、水100份。
3.根据权利要求1或2所述的菠萝提取液组合物的制备方法，其特征在于，所述菠萝提取液组合物通过以下方法制备：
(1)燕麦粉碎过筛；优选地，所述燕麦粉碎后过60～100目优选为80目筛；
(2)菠萝、木瓜、罗汉果分别清洗、去皮、切块，与水混合打浆，室温静置，得到混合预处理液；
(3)将步骤(1)所得燕麦与步骤(2)所得混合预处理液混合加热搅拌，冷却离心取上清液；
(4)向步骤(3)中所得上清液中加入银耳多糖，均质得到所述菠萝提取液组合物。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述菠萝和水的质量比为1:1～150，优选为1:10～100，更优选为1:20～80，最优选为1:20～50；
所述木瓜和水的质量比为1:1～200，优选为1:10～150，更优选为1:20～120，最优选为1:50～100；
所述罗汉果和水的质量比为1:1～200，优选为1:10～150，更优选为1:20～120，最优选为1:50～100；和/或
所述静置时间为1～5小时，优选为2～4小时，最优选为3小时。
5.根据权利要求3或4所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，燕麦与步骤(2)所得混合预处理液预处理液的质量比为1：1～200，优选为1：10～150，更优选为1：20～100。
6.根据权利要求3至5中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述加热温度为20～90℃，优选为25～85℃，更优选为30～80℃，进一步优选为40～70℃；和/或
所述加热时间为0.5～10小时，优选为0.5～8小时，更优选为1～5小时，进一步优选为2～4小时。
7.根据权利要求3至6中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述搅拌速率为50～1000r/min，优选为50～800r/min，更优选为50～500r/min，进一步优选为50～300r/min；和/或
所述离心速率为500～8000rad/min，优选为500～5000rad/min，更优选为500～3000rad/min，进一步优选为800～2000rad/min。
8.根据权利要求3至7中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(4)中，所述银耳多糖与步骤(3)所得上清液的质量比为1:10～300，优选为1:50～300，更优选为1:50～250，最优选为1:100～200；和/或
所述均质时间为5～60分钟，优选为10～60分钟，更优选为10～40分钟，进一步优选为15～30分钟。
9.根据权利要求3至8中任一项所述的方法，其特征在于，所述方法还包括以下步骤：
(5)对步骤(4)所得菠萝提取液组合物进行灭菌处理；
优选地，所述灭菌处理方式为加热灭菌；
更优选地，所述加热灭菌温度为60～100℃，优选为70～90℃，最优选为80℃；和/或所述加热灭菌时间为1～5小时，优选为1～3小时，最优选为2小时。
10.一种菠萝提取液组合物在制备抗氧化产品中的应用，其特征在于，所述菠萝提取液组合物包含菠萝、燕麦、木瓜、罗汉果和银耳多糖；
优选地，所述菠萝提取液组合物为权利要求1或2所述的菠萝提取液组合物或根据权利要求3至9中任一项所述方法制备的菠萝提取液组合物。
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