WO2022079755A1 - イムノクロマト方式を用いた新型コロナウイルスを検出する方法 - Google Patents

イムノクロマト方式を用いた新型コロナウイルスを検出する方法 Download PDF

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WO2022079755A1
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new coronavirus
labeled antibody
sample
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PCT/JP2020/038444
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賢治 西村
重雄 森
真理 橋本
裕 浜部
徳則 山本
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株式会社ジー・キューブ
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    • C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
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    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
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    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
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    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals

Definitions

  • the present invention relates to a method for detecting a new type of coronavirus using an immunochromatographic method.
  • SARS-CoV-2 Infectious diseases (COVID-19) caused by the new coronavirus (hereinafter also referred to as "SARS-CoV-2”) have spread, and each country is busy responding.
  • SARS-CoV-2 is a member of the Coronaviridae family and is classified as a positive-strand RNA virus.
  • the genome In the plus single-stranded RNA virus, the genome itself acts as mRNA, produces viral protein, and replicates in the cytoplasm with its own RNA-dependent RNA polymerase.
  • RNA which is the viral genome
  • capsid a protein shell
  • envelope consisting of a lipid double membrane so as to cover the virus genome and the outside of the capsid.
  • PCR gene amplification method
  • a primer of interest a DNA fragment of 20 to 30 bases complementary to each DNA end of the region to which the amplified gene is to be specifically increased
  • the DNA is prepared by DNA polymerase.
  • RT-PCR method as a PCR method for RNA viruses. It uses reverse transcriptase to perform a reverse transcription reaction into DNA using RNA as a template to synthesize cDNA (complementary DNA). This is a test method in which PCR is performed using this cDNA as a template.
  • the ELISA method is a method in which a target antigen or antibody contained in a sample solution is captured by a specific antibody or antigen, and is detected and quantified by using an enzymatic reaction. There is also a method of directly labeling and detecting a fluorescent substance on a specific antibody.
  • the hybridization method is a method in which sample DNA digested with a restriction enzyme is fractionated, denatured single-stranded DNA is hybridized with a labeled probe, and the target gene is detected. Two complementary nucleic acids are combined into a double strand. It also occurs between DNAs, RNAs, and combinations of DNAs and RNAs.
  • Patent Document 1 can provide a method for measuring an influenza virus using an azobenzene crosslinked peptide nucleic acid.
  • the present invention relates to the detection of influenza virus, which is a minus single-stranded RNA virus, and is not a prior art of the present invention relating to the detection of a new type coronavirus, which is a plus single-stranded RNA virus.
  • the invention described in Patent Document 1 is a step 1 of mixing a sample containing influenza virus and a lysate to extract an influenza virus genome and a step 1 as a method for qualitatively or quantitatively measuring influenza virus in a sample.
  • Step 2 in which the extract obtained in step 1 is brought into contact with the azobenzene compound to form a complex of the influenza virus genome and the azobenzene compound, and the complex formed by step 2 is subjected to the influenza virus genome.
  • a detection method consisting of step 3 in which an antibody against the nucleoprotein possessed is allowed to act and the influenza virus genome is measured based on the amount of binding of the antibody.
  • Patent Document 1 requires a step of preparing an azobenzene crosslinked peptide nucleic acid in which a peptide nucleic acid is modified with an azobenzene compound in order to detect influenza virus, and the detection method is somewhat complicated. rice field.
  • the invention according to claim 1 is a test kit used for inspecting the presence or absence of infection by the new corona virus, and develops a sample solution containing the new corona virus. It has a layer, a recognition unit provided in the middle of the development layer, and a reagent unit arranged on the upstream side of the development layer with reference to the direction in which the sample liquid expands the development layer.
  • the part is immobilized with a first-specific antibody and a second-specific antibody that specifically recognize the first antigen-determining site and the second antigen-determining site, respectively, which consist of the specific genome sequence of the new coronavirus, and the reagent.
  • the unit has a function of specifically recognizing the first antigen-determining site and the second antigen-determining site, each of which consists of a specific genome sequence of the new type coronavirus, and is labeled with a labeling substance. It is characterized by containing a first labeled antibody and a second labeled antibody.
  • the invention according to claim 2 is characterized in that the specific genomic sequence comprises a genomic sequence between positions 19,255 and 19,368 of the new coronavirus.
  • the invention according to claim 3 is characterized in that the specific genomic sequence contains at least 9 consecutive bases of the genomic sequence between the 19,255th to the 19,368th positions of the new coronavirus.
  • the invention according to claim 4 is characterized in that the first labeled antibody and the second labeled antibody are antibodies against a nucleoprotein possessed by a genome containing the specific genomic sequence.
  • the invention according to claim 5 is characterized by further comprising a diluted solution or an extract containing a buffer solution and a surfactant, or a tool for collecting a sample.
  • the invention according to claim 6 is an inspection method for inspecting the presence or absence of infection by a new type of coronavirus, in which a first step of supplying the sample solution to the developing layer and the sample solution developing the developing layer. It is characterized by having a second step of confirming whether or not the new coronavirus has been captured in the recognition unit provided in the middle of the development layer.
  • infection by the new coronavirus can be detected easily, quickly and accurately.
  • the test kit of the present invention is used to test for the presence or absence of infection with a virus, particularly a new type of coronavirus, by using an immunochromatographic method.
  • the immunochromatographic method is generally a method for determining the presence or absence of a virus as a test object in a sample liquid through the following steps. That is, first, the sample solution is brought into contact with a labeled antibody that specifically recognizes the virus as the object to be measured, and then the sample solution is developed in the developing layer by the capillary phenomenon. With a specific antibody that specifically recognizes the object to be measured immobilized in the middle of the above, capture the complex of the object to be measured and the labeled antibody, and observe the labeled antibody possessed by this captured complex. This is a method of determining the presence or absence of an object to be measured.
  • a sample to be measured contained in the sample solution can be detected by a simple operation such as dropping a sample solution such as a nasopharyngeal swab or saliva onto a test piece provided with a developing layer. ..
  • the genome of the new coronavirus is a single-stranded RNA with a length of about 29,000 bases. Compared to the influenza virus genome, which is about 13,500 bases long, and the rhinovirus, which causes colds, about 8,000 bases long, the new coronavirus genome is about 8,000 bases long. It's close to the limit and long.
  • PNA Peptide nucleic acid
  • the test kit 1 shown in FIGS. 1 and 2 uses a peptide nucleic acid (PNA) as a molecule that binds to the genome of the new coronavirus in a sequence-selective and highly efficient manner.
  • PNA peptide nucleic acid
  • a probe in which a peptide nucleic acid (PNA) having a base sequence that specifically binds to the new coronavirus genome is arranged has high specificity with a complex containing nucleoprotein (NP) and the new coronavirus genome (RNA). Strongly tied.
  • the peptide nucleic acid (PNA) of the test kit 1 can be synthesized using a peptide nucleic acid (PNA) synthesizer using the genomic sequence of the new coronavirus as a template.
  • the test kit 1 shown in FIGS. 1 and 2 specifically recognizes the first antigen determination site and the second antigen determination site consisting of the genomic sequences between the 19,255th to 19,368th positions of the new coronavirus, respectively.
  • the 1-specific antibody and the 2-specific antibody are immobilized.
  • the genomic sequence between the 19,255th and 19,368th positions of the new coronavirus has a sequence part peculiar to the new coronavirus, and the sequence does not change even if the virus is mutated.
  • the specific genomic sequence contains at least 9 consecutive bases of the genomic sequence between positions 19,255 and 19,368 of the new coronavirus. This reduces the risk that the test kit 1 will not be able to detect the mutated new coronavirus genome.
  • the test kit 1 can reduce the risk of not being able to detect the mutated new coronavirus genome even if the new coronavirus genome is mutated during its own replication.
  • the inspection kit 1 shown in FIGS. 1 and 2 has an immunochromatographic test piece 10 for determining the presence or absence of infection with the new coronavirus, and a housing case (casing) 20 for accommodating the immunochromatographic test piece 10.
  • the immunochromatographic test piece 10 (hereinafter, simply referred to as “test piece”) is a support substrate 11 and a filtration for filtering components in a sample solution arranged on the support substrate 11, respectively.
  • a sample supply unit 14 to which a sample solution having filtered components is supplied, a reagent unit 13 containing a labeled antibody that specifically recognizes the new coronavirus contained in the sample solution, and a sample solution.
  • the developing layer 12 to be developed, the recognition unit 17 provided in the middle of the developing layer 12 and the specific antibody specifically recognizing the new coronavirus contained in the sample solution are immobilized, and the middle of the developing layer 12.
  • the control unit 18 provided on the opposite side of the recognition unit 17 with respect to the reagent unit 13 and on which the anti-antibody (anti-labeled antibody) that recognizes the labeled antibody is immobilized, and the sample liquid in which the developing layer 12 is developed are absorbed. It has an absorption unit 16.
  • the sample supply unit 14 is arranged via the reagent unit 13 on the upstream side of the expansion layer 12 when the sample liquid expands the expansion layer 12, and the expansion layer 12 has a sample supply unit 14.
  • the absorption unit 16 is arranged on the downstream side.
  • the sample supply unit 14, the reagent unit 13, the expansion layer 12, and the absorption unit 16 are arranged on the support substrate 11 from the upstream side to the downstream side in the development direction.
  • the support substrate 11 is in the shape of a strip (flat plate), and is used to support various members constituting the test piece 10, that is, a filtration unit 15, a sample supply unit 14, a reagent unit 13, a developing layer 12, and an absorption unit 16. belongs to.
  • constituent material of the support substrate 11 examples include resin materials such as polystyrene, polycarbonate, polypropylene, polyester, cellulose acetate, and polyethylene terephthalate, and one or more of these may be used in combination. Can be done.
  • the thickness of the support substrate 11 is not particularly limited.
  • the filtration unit 15 has a strip-like overall shape and is arranged so as to be laminated on the sample supply unit 14.
  • the components are filtered (separated), and the sample liquid obtained by filtering the components is used as the sample supply unit 14. It is for supplying to.
  • test piece 10 By configuring the test piece 10 to include the filtration unit 15 in this way, it can be used as a sample solution for confirming the presence or absence of the new coronavirus.
  • the sample supply unit 14 has an overall shape of a strip and is arranged so as to be in contact with (overlap) the reagent unit 13, and supplies the sample liquid added via the filtration unit 15 to the reagent unit 13. Is for.
  • the sample supply unit 14 is not particularly limited as long as it has liquid permeability, and is formed by using, for example, a porous material and a fibrous material.
  • the porosity of the sample supply unit 14 is such that the pores communicate with each other or the fibers are stretched with respect to the longitudinal direction of the sample supply unit 14. It may have a unidirectionality in which the directions are parallel, or it may have a multidirectionality in which the communication direction of the pores or the stretching direction of the fibers is random.
  • Examples of the constituent materials of such porous materials and fibrous materials include cellulose materials such as paper and nitrocellol, glass wool, polypropylene, polyethylene, polyvinylidene fluoride, ethylene vinyl acetate, acrylonitrile, and polytetra. Examples thereof include resin materials such as fluoroethylene, and one or a combination of two or more of these can be used.
  • the reagent unit 13 has an overall shape of a strip shape, is arranged so as to be in contact with (overlap) the sample supply unit 14 and in contact with the developing layer 12, and the sample liquid supplied via the sample supply unit 14. Is supplied to the developing layer 12.
  • the reagent unit 13 has a function of specifically recognizing the new coronavirus as a reagent and has a labeled antibody labeled with a labeling substance, and the reagent unit 13 has this labeled antibody. Is supported (retained) on the porous carrier in a state where it can be released by the passage (permeation) of the liquid. That is, the reagent unit 13 contains, as a reagent, a labeled antibody that has a function of specifically recognizing the new coronavirus and is labeled with a labeling substance.
  • the labeled antibody (reagent) is added to the sample liquid.
  • the labeled antibody specifically recognizes the new coronavirus.
  • a complex composed of a labeled antibody and a new type coronavirus is formed, and the sample liquid is supplied to the developing layer 12 in the state of forming this complex.
  • the porous carrier included in the reagent unit 13 is not particularly limited as long as it is liquid permeable, and is formed by using a porous material and a fibrous material as in the sample supply unit 14, for example.
  • the labeled antibody is an antibody that specifically recognizes the new coronavirus and is labeled with a labeling substance.
  • the antibody has a genomic sequence between the 19,255th and 19,368th positions of the new coronavirus. It is preferable that it is an antibody against the nucleoprotein contained in the genome containing, and further preferably it is an antibody against the nucleoprotein contained in the genome containing at least 9 consecutive bases between the 19,255 and 19,368 positions.
  • the method for labeling the antibody is not particularly limited, and examples thereof include gold colloid labeling, colored latex particle labeling, radioactive labeling, fluorescent dye labeling, enzyme labeling, and the like, and one or more of these may be used. Although it can be used in combination, it is preferably a colloidal gold label. If it is a colloidal gold label, the complex composed of the labeled antibody and the new coronavirus can be visually recognized with excellent sensitivity (Fig. 2).
  • labeling of the antibody with gold colloid is performed, for example, by mixing the antibody and gold colloid in a buffer solution. According to such a method, the antibody is labeled by physically adsorbing the antibody to colloidal gold.
  • the porous carrier As a method of supporting the labeled antibody (reagent) on the porous carrier, that is, as a method of forming the reagent portion 13, for example, after preparing an aqueous solution containing the labeled antibody, the porous carrier is impregnated with this aqueous solution. Then, the method of drying is mentioned. According to such a method, the labeled antibody can be uniformly supported on the porous carrier.
  • the developed layer 12 has an overall shape of a strip, and is arranged so that the upstream edge portion in the longitudinal direction contacts (overlaps) the reagent portion 13 and the downstream edge portion contacts the absorption portion 16.
  • the purpose is to expand the sample solution containing the labeled antibody (reagent) supplied from the reagent unit 13 from the upstream edge to the downstream edge by capillarity.
  • the developing layer 12 is usually composed of a porous carrier so that the sample liquid can be developed by the capillary phenomenon, and specifically, it is composed of a cellulose derivative such as cellulose, cellulose acetate, and nitrocellulose. It is composed of a film, a glass filter, a filter paper, etc., and more preferably it is composed of a nitrocellulose film.
  • the development layer 12 having the above-described configuration is provided with a recognition unit 17 and a control unit 18 arranged on the downstream side of the recognition unit 17 in the middle of the development layer 12.
  • the recognition unit 17 has a specific antibody that specifically recognizes the new coronavirus immobilized in the middle of the development layer 12 on the upstream side of the control unit 18.
  • the recognition unit 17 is formed in a band shape on the upstream side of the control unit 18 of the expansion layer 12 so as to be orthogonal to the longitudinal direction of the expansion layer 12, as shown in FIG.
  • a sample solution containing the new coronavirus that is, a sample solution derived from a subject infected with the new coronavirus (positive sample solution) is a reagent unit 13.
  • a sample solution derived from a subject infected with the new coronavirus positive sample solution
  • a reagent unit 13 When supplied from, the presence or absence of the new coronavirus is confirmed in the recognition unit 17 as follows.
  • the specific antibody immobilized by the recognition unit 17 recognizes the new coronavirus. Therefore, the new coronavirus is captured by the recognition unit 17.
  • the reagent section 13 in the sample solution that has passed through the reagent section 13 and is supplied to the developing layer 12, a complex composed of the new coronavirus and the labeled antibody is formed. Therefore, when the new coronavirus is recognized (captured) by the recognition unit 17, the labeled antibody is also captured in a state of forming a complex with the new coronavirus.
  • the sample solution contains the new coronavirus (the subject is infected with the new coronavirus). .. As described above, the presence or absence of infection by the new coronavirus can be inspected.
  • the specific antibody immobilized on the recognition unit 17 is not particularly limited as long as it is a biotin antibody having an affinity for the labeled antibody, and for example, avilan or streptapilan having an affinity for biotin. May be good.
  • the recognition unit 17 can be formed by reliably immobilizing the specific antibody on the developing layer 12 by a simple step of bringing the aqueous solution containing the specific antibody into contact with the developing layer 12.
  • test kit 1 can be used to test for infection with the new coronavirus.
  • the control unit 18 has an anti-antibody (anti-labeled antibody) that recognizes a labeled antibody immobilized on the downstream side of the recognition unit 17 in the middle of the developing layer 12.
  • anti-antibody anti-labeled antibody
  • control unit 18 is formed in a band shape so as to be orthogonal to the longitudinal direction of the developing layer 12.
  • the control unit 18 When the reaction between the immobilized anti-antibody and the labeled antibody is confirmed in the control unit 18, the labeled antibody contained in the sample solution supplied to the developing layer 12 is released from the upstream side of the developing layer 12. It is proof that it has been deployed to the control unit 18 located on the downstream side. Therefore, by confirming such a reaction in the control unit 18, it can be seen that the detection result (determination result) confirmed by the recognition unit 17 is accurate.
  • the anti-antibody if it has an antibody capable of recognizing a labeled antibody, that is, an antibody capable of capturing a labeled antibody that has developed (permeated) the expanded layer 12 on the upstream side of the control unit 18.
  • the method is not particularly limited, and for example, IgG, IgA, IgM, IgE and IgD may be used, but IgG is preferably used because of its ease of handling.
  • an antibody that recognizes the constant site of the antibody contained in the labeled antibody is usually used.
  • the immobilization of the anti-antibody in the control unit 18 can be performed by using the same method as described in the immobilization of the specific antibody in the recognition unit 17.
  • the absorption unit 16 has an overall shape in the shape of a strip, and is arranged so that the edge portion on the upstream side in the longitudinal direction is in contact with (overlaps) the development layer 12, and the sample liquid developed in the development layer 12 is collected. It absorbs from the downstream end of the developing layer 12.
  • the absorption unit 16 exerts a function of assisting the capillary phenomenon in the developing layer 12, so that the sample liquid can be more smoothly developed from the upstream side to the downstream side in the developing layer 12.
  • the absorption unit 16 is not particularly limited as long as it is liquid permeable, and can be formed by using a porous material and a fibrous material as in the sample supply unit 14.
  • the housing case 20 is waterproof and has a hollow portion corresponding to the shape of the test piece 10. By storing the test piece 10 in this hollow portion, the test piece 10 (inspection kit 1) can be handled easily. To facilitate.
  • the housing case 20 has a sample liquid supply window 21 and an inspection result observation window 22, and the sample liquid supply window 21 to the filtration unit 15 in a state where the test piece 10 is housed in the hollow portion.
  • a part (upper surface) of the developed layer 12 is exposed, and a part of the developing layer 12 (the region where the recognition unit 17 and the control unit 18 are formed) is exposed from the inspection result observation window 22.
  • the sample liquid can be supplied to the sample supply unit 14 via the filtration unit 15. Then, the presence or absence of infection with the new coronavirus is detected by observing the presence or absence of capture of the labeled antibody in the recognition unit 17 and the control unit 18 provided on the expansion layer 12 exposed from the inspection result observation window 22. Can be done.
  • the constituent material of the housing case 20 is not particularly limited as long as it has waterproofness and appropriate strength, and examples thereof include resin materials such as polystyrene, polycarbonate, polypropylene, and polyethylene terephthalate. One of them or two or more of them can be used in combination.
  • the sample liquid collected from the subject is dropped onto the filtration unit 15 exposed from the sample liquid supply window 21.
  • the sample liquid is supplied to the sample supply unit 14 via the filtration unit 15 shown in FIG. 2, and the sample liquid is further transferred from the sample supply unit 14 to the reagent unit 13.
  • the labeled antibody (reagent) contained in the reagent section 13 comes into contact with the new coronavirus contained in the sample solution, and this contact forms a complex composed of the labeled antibody and the new coronavirus. Will be done.
  • the sample liquid that has passed through the reagent unit 13 is supplied to the developing layer 12.
  • the development layer 12 is expanded.
  • the complex is also expanded in the developed layer 12, and since the new coronavirus is contained in this complex, the new corona fixed to the recognition unit 17 formed in the middle of the expanded layer 12 is the new corona.
  • a specific antibody that specifically recognizes the virus captures the complex containing the new coronavirus.
  • the complex contains a labeled antibody, it is possible to know that the subject is infected with the new coronavirus by confirming (visually) the capture of the complex in the recognition unit 17. can.
  • the sample liquid that has passed through the recognition unit 17 reaches the control unit 18 located on the downstream side of the recognition unit 17 of the developing layer 12.
  • the detection result (determination result) that the subject confirmed by the recognition unit 17 is infected with the new coronavirus is accurate. I can know.
  • the sample liquid that has passed through the control unit 18 further expands on the downstream side of the control unit 18 of the expansion layer 12 to reach the end portion, and is finally absorbed by the absorption unit 16.
  • test kit 1 By going through the process using the test kit 1 as described above, it is possible to know whether or not the subject is infected with the new coronavirus.
  • the addition of the labeled antibody to the sample liquid is configured such that the test piece 10 is provided with the reagent unit 13 and is performed when the sample liquid permeates the reagent unit 13.
  • the configuration is not limited to this, and for example, the sample liquid may be directly added to the sample liquid in advance prior to the supply (dropping) of the sample liquid to the filtration unit 15. In the case of such a configuration, the test piece 10 can be configured not to have the reagent unit 13.
  • the present invention is not limited to this, and specific antibodies (first specific antibody and second specific antibody) suitable for each virus and labeled antibody (first specific antibody) are described.
  • the detection kit of the present invention can also be applied to the detection of other viruses by appropriately selecting (1 labeled antibody and 2nd labeled antibody).
  • the present invention provides a method for easily, quickly and accurately detecting an infection caused by a new type of coronavirus from a sample, and its industrial utility value is great.
  • Test kit 10 Immunochromatography test piece 11 . Support substrate 12 ... Expanded layer 13 ... Reagent section 14 ... Sample supply section 15 . Filter section 16 ... Absorption Part 17 ⁇ ⁇ ⁇ Recognition part 18 ⁇ ⁇ ⁇ Control part 20 ⁇ ⁇ ⁇ Housing case 21 ⁇ ⁇ ⁇ Sample liquid supply window 22 ⁇ ⁇ ⁇ Inspection result observation window

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Abstract

【課題】　大量の検体から新型コロナウイルスによる感染を簡易、迅速かつ正確に検出する方法を提供する。 【解決手段】　検査キットにおいて、イムノクロマト試験片１０の支持基板１１上に配置された、検体液中の成分をろ過するろ過部１５と、ろ過された検体液が供給される試料供給部１４と、検体液中に含まれる新型コロナウイルスを特異的に認識する標識化抗体を含有する試薬部１３と、検体液を展開する展開層１２と、検体液中に含まれる新型コロナウイルスを特異的に認識する特異抗体が固定化された認識部１７と、標識化抗体を認識する抗抗体（抗標識化抗体）が固定化されたコントロール部１８と、検体液を吸水する吸収部１６とを有することにより、新型コロナウイルスによる感染を簡易、迅速かつ正確に検出することができる。

Description

イムノクロマト方式を用いた新型コロナウイルスを検出する方法
　本発明は、イムノクロマト方式を用いた新型コロナウイルスを検出する方法関する。
　新型コロナウイルス（以下「SARS-CoV-2」ともいう。）による感染症（COVID-19）が広がり、各国が対応に追われている。このSARS-CoV-2、はコロナウイルス科の一種で、プラス1本鎖RNAウイルスに分類される。プラス1本鎖RNAウイルスは、ゲノム本体そのものがmRNAとして働き、ウイルス蛋白質を作り出し、細胞質内で自らが持つRNA依存性RNAポリメラーゼで複製する。
　また、新型コロナウイルスは、ウイルスゲノムであるRNAがカプシドという蛋白質の殻で覆われ、このウイルスゲノムとカプシドの外側を覆うように脂質二重膜からなるエンベロープが存在する。
　新型コロナウイルスの検出には、各種の方法が用いられ、それぞれ一長一短がある。
　遺伝子増幅法（PCR）は、1本鎖DNAを目的のプライマー（特異的に増幅遺伝子増させたい領域の各DNA末端と相補的20～30塩基のDNA断片）に結合させ、DNAポリメラーゼにより、DNA合成反応を行い、これを繰返すことにより、目的とするDNA配列を指数関数的に増幅させるもので、高感度・特異性が高いという特徴があるが、検出までに時間がかかるというデメリットがある。
　RNAウイルスを対象としたPCR法にRT－PCR法がある。これは、逆転写酵素を用いてRNAを鋳型としてDNAへの逆転写反応を行い、ｃDNA(complementaryDNA）を合成する。このｃDNAを鋳型にPCRを行う検査法である。
　ELISA法は、試料溶液中に含まれる目的の抗原あるいは抗体を、特異抗体あるいは抗原で捕捉するとともに、酵素反応を利用して検出・定量する方法である。特異抗体に直接蛍光物質を標識して検出する方法もある。
　ハイブリタイゼーション法は、制限酵素で消化した検体DNAを分画し、変性させた1本鎖DNAを標識プローブとハイブリダイゼーションさせ、目的遺伝子を検出する方法である。相補性のある二本の核酸を結合して2本鎖にする。DNA同士、RNA同士、DNAとRNAの組み合わせでも起こる。
　上記直接抗原検出法に対し、ウイルスの抗体を検査する抗体検査法がある。急性期に産出される抗体は短期間で消失するため、PCR検査ほど正確に検出できないとされる。
　新型コロナウイルスが引き起こす感染症（COVID－１９）の蔓延を防ぐには、大量の検体から簡易、迅速かつ正確に新型コロナウイルスを検出する必要がある。
　特許文献１に記載の発明は、アゾベンゼン架橋型ペプチド核酸を用いたインフルエンザウイルスを測定する方法を提供できるとする。
　なお、同発明は、マイナス１本鎖RNAウイルスであるインフルエンザウイルスの検出に係るもので、プラス1本鎖RNAウイルスである新型コロナウイルスの検出に係る本願発明の先行技術となるものではない。
　特許文献１に記載の発明は、検体中のインフルエンザウイルスを定性的又は定量的に測定する方法として、インフルエンザウイルスを含有する検体と溶解液を混合し、インフルエンザウイルスゲノムを抽出する工程１と、工程１にて得られる抽出液をアゾベンゼン化合物と接触させ、前記インフルエンザウイルスゲノムと前記アゾベンゼン化合物との複合体を形成させる工程２と、工程２によって形成された複合体に対して、該インフルエンザウイルスゲノムが有するヌクレオタンパクに対する抗体を作用させ、該抗体の結合量を基に、該インフルエンザウイルスゲノムを測定する工程３とからなる検出法などを提案する。
特開第２０１２－７５３７６号公報
　しかしながら、特許文献１の検出法は、インフルエンザウイルスを検出するために、ペプチド核酸にアゾベンゼン化合物を修飾させたアゾベンゼン架橋型ペプチド核酸を作成する工程が必要であり、検出法はやや複雑なものであった。
　そこで、本発明は、新型コロナウイルスによる感染を簡易、迅速かつ正確に検出することを課題とする。
　上記課題を解決するために、請求項１に記載の発明は、新型コロナウイルスによる感染の有無を検査するのに用いられる検査キットであって、前記新型コロナウイルスを含有する検体液を展開する展開層と、該展開層の途中に設けられた認識部と、前記検体液が前記展開層を展開する方向を基準として、前記展開層の上流側に配置された試薬部とを有し、前記認識部は、前記新型コロナウイルスの特定ゲノム配列からなる第１抗原決定部位および第２抗原決定部位を、それぞれ、特異的に認識する、第１特異抗体および第２特異抗体が固定化され、前記試薬部は、前記新型コロナウイルスの特定ゲノム配列からなる前記第１抗原決定部位および前記第２抗原決定部位を、それぞれ、特異的に認識する機能を有し、かつ標識物質で標識化されている、第１標識化抗体および第２標識化抗体を含むことを特徴とする。
　請求項２に記載の発明は、前記特定ゲノム配列が、前記新型コロナウイルスの19,255番目から19,368番目までの間のゲノム配列を含むことを特徴とする。
　請求項３に記載の発明は、前記特定ゲノム配列が、前記新型コロナウイルスの19,255番目から19,368番目番目までの間のゲノム配列の連続する少なくとも９個の塩基を含むことを特徴とする。
　請求項４に記載の発明は、前記第１標識化抗体および前記第２標識化抗体は、前記特定ゲノム配列を含むゲノムが有するヌクレオタンパクに対する抗体であることを特徴とする。
　請求項５に記載の発明は、緩衝液及び界面活性剤を含む希釈液もしくは抽出液または検体を採取するための用具をさらに含むことを特徴とする。
　請求項６に記載の発明は、新型コロナウイルスによる感染の有無を検査する検査方法であって、前記検体液を前記展開層に供給する第１工程と、前記検体液が前記展開層を展開する際に、前記展開層の途中に設けられた前記認識部に、前記新型コロナウイルスが捕捉されているか否かを確認する第２工程とを有することを特徴とする。
　上記発明によれば、新型コロナウイルスによる感染を簡易、迅速かつ正確に検出することできる。
本発明の実施形態の検査キット１である。 本発明の実施形態の新型コロナウイルスの感染を判定する概念図である。
　以下、本発明の好ましい実施形態について図面を参照して説明する。
　（実施形態）
　まず、本発明の検査キットについて説明する。本発明の検査キットは、イムノクロマト方式を用いて、ウイルス、特に新型コロナウイルスの感染の有無を検査するために用いられるものである。
　ここで、イムノクロマト方式とは、一般的に、以下のような工程を経て、検体液中における被測定物としてのウイルスの有無を判別する方法である。すなわち、まず、被測定物としてのウイルスを特異的に認識する標識化抗体に、検体液を接触させ、次いで、この検体液を展開層において毛細管現象により展開し、この展開の際に、展開層の途中に固定化した被測定物を特異的に認識する特異抗体で、被測定物と前記標識化抗体との複合体を捕捉し、この捕捉された複合体が有する標識化抗体を観察することにより被測定物の有無を判別する方法である。
　かかる方法によれば、鼻咽頭用スワブや唾液のような検体液を、展開層を備える試験片に滴下する等の簡単な操作で、検体液中に含まれる被測定物を検出することができる。
　以下では、本発明の検査キットを用いて、新型コロナウイルスを検出する場合を一例に説明する。
　新型コロナウイルスのゲノムは、約２万９，０００塩基長の１本鎖ＲＮＡである。インフルエンザウイルスのゲノムが、約１万３，５００塩基長、かぜの原因であるライノウイルスが、約８，０００塩基長であるのに比べ、新型コロナウイルスのゲノムの長さは、ウイルスのゲノムの限界に近く長い。
　新型コロナウイルスのゲノムの大きさは、自らの複製の際にゲノムの変異が生じる可能性を増加させる。ペプチド核酸（ＰＮＡ）は、ウイルスのゲノムと高い特異性を持って結合するが、ゲノムの変異の増加は、ゲノムの塩基配列に応答するペプチド核酸（ＰＮＡ）の結合作用を利用した検査装置が、変異した新型コロナウイルスのゲノムを検知できないリスクを増加させる。
　図１及び図２に示す検査キット１は、新型コロナウイルスのゲノムに配列選択的かつ高効率的に結合する分子として、ペプチド核酸（ＰＮＡ）を用いる。新型コロナウイルスゲノムと特異的に結合する塩基配列を有するペプチド核酸（ＰＮＡ）が配置されたプローブが、ヌクレオプロテイン（ＮＰ）及び新型コロナウイルスゲノム(ＲＮＡ)を含む複合体と、高い特異性を持って強固に結びつく。
　検査キット１のペプチド核酸（ＰＮＡ）は、新型コロナウイルスのゲノム配列を鋳型として、ペプチド核酸（ＰＮＡ）合成機を使用して合成することができる。
　図１及び図２に示す検査キット１は、新型コロナウイルスの19,255番目から19,368番目までの間のゲノム配列からなる第１抗原決定部位および第２抗原決定部位を、それぞれ、特異的に認識する第１特異抗体および第２特異抗体が固定化されている。新型コロナウイルスの19,255番目から19,368番目までの間のゲノム配列は、新型コロナウイルス特有の配列部分があり、かつウイルスが変異しても配列が変化しない部分である。
　図１及び図２に示す検査キット１は、特定ゲノム配列が、前記新型コロナウイルスの19,255番目から19,368番目までの間のゲノム配列の連続する少なくとも９個の塩基を含む。このことにより、検査キット１が変異した新型コロナウイルスのゲノムを検知できないリスクを低減させる。
　以上の構成により、検査キット１は、新型コロナウイルスのゲノムが自らの複製の際に変異が生じたとしても、変異した新型コロナウイルスのゲノムを検知できないリスクを低減することができる。
　図１及び図２に示す検査キット１は、新型コロナウイルスの感染の有無を判別するイムノクロマト試験片１０と、このイムノクロマト試験片１０を収納するハウジングケース（ケーシング）２０とを有している。
　イムノクロマト試験片１０（以下、単に「試験片」と言う。）は、図２に示すように、支持基板１１と、この支持基板１１上にそれぞれ配置された、検体液中の成分をろ過するろ過部１５と、成分がろ過された検体液が供給される試料供給部１４と、検体液中に含まれる新型コロナウイルスを特異的に認識する標識化抗体を含有する試薬部１３と、検体液を展開する展開層１２と、この展開層１２の途中に設けられ、検体液中に含まれる新型コロナウイルスを特異的に認識する特異抗体が固定化された認識部１７と、展開層１２の途中に前記認識部１７の試薬部１３に対する反対側に設けられ、標識化抗体を認識する抗抗体（抗標識化抗体）が固定化されたコントロール部１８と、展開層１２を展開した検体液を吸水する吸収部１６とを有している。
　なお、試験片１０では、検体液が展開層１２を展開する展開方向を基準としたとき、展開層１２の上流側に、試薬部１３を介して試料供給部１４が配置され、展開層１２の下流側に、吸収部１６が配置されている。換言すれば、支持基板１１上において、前記展開方向の上流側から下流側に向かって、試料供給部１４、試薬部１３、展開層１２および吸収部１６が、配置されている。
　支持基板１１は、短冊（平板）状をなしており、試験片１０を構成する各種部材、すなわち、ろ過部１５、試料供給部１４、試薬部１３、展開層１２および吸収部１６を支持するためのものである。
　この支持基板１１の構成材料としては、例えば、ポリスチレン、ポリカーボネート、ポリプロピレン、ポリエステル、酢酸セルロース、ポリエチレンテレフタレートのような樹脂材料等が挙げられ、これらのうちの１種または２種以上を組み合わせて用いることができる。
　支持基板１１の厚さは、特に限定されない。
　ろ過部１５は、その全体形状が短冊状をなし、試料供給部１４上に積層するように配置されており、成分をろ過（分離）して、成分がろ過された検体液を試料供給部１４に供給するためのものである。
　このように試験片１０を、ろ過部１５を備える構成とすることにより、新型コロナウイルスの存在の有無を確認する検体液として用いることができる。
　試料供給部１４は、その全体形状が短冊状をなし、試薬部１３に接触する（重なる）ように配置されており、ろ過部１５を介して添加された検体液を、試薬部１３に供給するためのものである。
　この試料供給部１４は、液体透過性を備えるものであれば特に限定されず、例えば、多孔質材料および繊維質材料を用いて形成される。なお、試料供給部１４を、多孔質材料または繊維質材料を用いて形成した場合、試料供給部１４の多孔性は、試料供給部１４の長手方向に対して、気孔の連通方向または繊維の延伸方向が平行をなしている一方向性を備えるものであっても良いし、気孔の連通方向または繊維の延伸方向がランダムとなっている多方向性を備えるものであっても良い。
　このような多孔質材料および繊維質材料の構成材料としては、例えば、紙やニトロセルロールのようなセルロース材料の他、ガラスウール、ポリプロピレン、ポリエチレン、ポリフッ化ビニリデン、エチレン酢酸ビニル、アクリロニトリル、ポリテトラフルオロエチレンのような樹脂材料が挙げられ、これらのうちの１種または２種以上を組み合わせて用いることができる。
　試薬部１３は、その全体形状が短冊状をなし、試料供給部１４に接触し（重なり）、展開層１２に接触するように配置されており、試料供給部１４を介して供給された検体液を展開層１２に供給する。
　さらに、この試薬部１３は、試薬として、新型コロナウイルスを特異的に認識する機能を有し、かつ標識物質で標識化されている標識化抗体を有し、試薬部１３では、この標識化抗体が、液体の通過（透過）により遊離可能な状態で、多孔質担体に担持（保持）されている。すなわち、試薬部１３は、試薬として、新型コロナウイルスを特異的に認識する機能を有し、かつ標識物質で標識化されている標識化抗体を含むものである。
　そのため、検体液が試薬部１３を透過（通過）して展開層１２に供給された際には、検体液中には、標識化抗体（試薬）が添加された状態となっている。
　また、検体液中に新型コロナウイルスが含まれる場合、すなわち被検者が新型コロナウイルスに感染している場合（陽性の場合）には、標識化抗体が新型コロナウイルスを特異的に認識するため、標識化抗体と新型コロナウイルスとで構成される複合体が形成され、この複合体を形成した状態で、検体液は展開層１２に供給される。
　この試薬部１３が備える多孔質担体は、液体透過性のものであれば特に限定されず、例えば、前記試料供給部１４と同様に、多孔質材料および繊維質材料を用いて形成される。
　また、標識化抗体は、新型コロナウイルスを特異的に認識する抗体を、標識物質で標識化したものであるが、この抗体としては、新型コロナウイルスの19,255番目から19,368番目までの間のゲノム配列を含むゲノムが有するヌクレオタンパクに対する抗体であることが好ましく、さらに19,255番目から19,368番目までの間の連続する少なくとも９個の塩基を含むゲノムが有するヌクレオタンパクに対する抗体であることが好ましい。
　抗体を標識化する方法としては、特に制限されず、例えば、金コロイド標識、着色ラテックス粒子標識、放射性標識、蛍光色素標識、酵素標識等が挙げられ、これらのうちの１種または２種以上を組み合わせて用いることができるが、金コロイド標識であることが好ましい。金コロイド標識であれば、標識化抗体と新型コロナウイルスとで構成される複合体を優れた感度で視認することができるようになる（図２）。
　なお、抗体を標識化する方法として金コロイド標識を用いる場合、金コロイドによる抗体の標識化は、例えば、抗体と金コロイドとを緩衝液中で混合することにより行われる。かかる方法によれば、抗体が金コロイドに物理的に吸着することで、抗体が標識化される。
　さらに、多孔質担体に標識化抗体（試薬）を担持させる方法、すなわち試薬部１３の形成方法としては、例えば、標識化抗体を含有する水溶液を調製した後、この水溶液を、多孔質担体に含浸させ、その後、乾燥する方法が挙げられる。かかる方法によれば、標識化抗体を多孔質担体に対して均一に担持させることができる。
　展開層１２は、その全体形状が短冊状をなし、その長手方向の上流側の縁部が試薬部１３に接触し（重なり）、下流側の縁部が吸収部１６に接触するように配置されており、試薬部１３から供給された、標識化抗体（試薬）を含有する検体液を、毛細管現象により、その上流側の縁部から下流側の縁部まで展開するためのものである。
　この展開層１２は、毛細管現象により検体液を展開し得るように、通常、多孔質担体で構成され、具体的には、例えば、セルロース、酢酸セルロース、ニトロセルロースのようなセルロース誘導体で構成される膜、ガラスフィルター、ろ紙等で構成されるが、中でもニトロセルロース膜で構成されているのが好ましい。展開層１２をニトロセルロース膜で構成される多孔質担体とすることで、後述する認識部１７における特異抗体の固定化、およびコントロール部１８における抗抗体の固定化を容易に行うことができる。
　また、上述したような構成の展開層１２には、その途中に、認識部１７と、この認識部１７よりも下流側に配置されたコントロール部１８とが設けられている。
　認識部１７は、展開層１２における、コントロール部１８の上流側の途中に、新型コロナウイルスを特異的に認識する特異抗体が固定化されたものである。
　この認識部１７は、本実施形態では、展開層１２のコントロール部１８よりも上流側において、図２に示すように、展開層１２の長手方向に直交するように、帯状に形成されている。
　かかる構成の認識部１７が設けられた展開層１２に、新型コロナウイルスを含む検体液、すなわち新型コロナウイルスに感染している被検者に由来する検体液（陽性の検体液）が試薬部１３から供給されると、以下のようにして認識部１７において新型コロナウイルスの有無が確認される。
　すなわち、検体液に新型コロナウイルスが含まれていると、認識部１７で固定化されている特異抗体が新型コロナウイルスを認識する。そのため、認識部１７に新型コロナウイルスが捕捉される。
　さらに、前記試薬部１３の説明で述べたように、試薬部１３を透過して展開層１２に供給された検体液では、新型コロナウイルスと標識化抗体とで構成される複合体が形成されているため、認識部１７において新型コロナウイルスが認識（捕捉）された際には、新型コロナウイルスとともに複合体を形成した状態で、標識化抗体も捕捉される。
　したがって、認識部１７において、標識化抗体の捕捉の有無を確認することにより、固定化されている特異抗体と複合体との反応が確認されることとなる。
　そのため、認識部１７において、標識化抗体の捕捉が確認されることで、検体液中に新型コロナウイルスが含まれている（被検者が新型コロナウイルスに感染している）と言うことができる。
　以上のようにして、新型コロナウイルスによる感染の有無を検査することができる。
　認識部１７で固定化されている特異抗体としては、標識化抗体と親和性を有するビオチン抗体であれば、特に限定されず、例えば、ビオチンと親和性を有するアビラン、ストレプトアピランなどであってもよい。
　また、認識部１７における、特異抗体の固定化は、上述したように展開層１２をニトロセルロース膜で構成される多孔質担体とした場合、特異抗体を含有する水溶液を、認識部１７を形成すべき領域に滴下した後、乾燥および洗浄することにより行うことができる。このように展開層１２をニトロセルロースで構成することで、展開層１２または特異抗体に対して化学的な処理を予め施すことなく、展開層１２と特異抗体との間で化学的な結合が形成される。そのため、特異抗体を含有する水溶液を展開層１２に接触させるという単純な工程で、展開層１２に特異抗体を確実に固定化して、認識部１７を形成することができる。
　以上のようにして、検査キット１を用いて、新型コロナウイルスによる感染の有無を検査することができる。
　コントロール部１８は、展開層１２の途中の認識部１７よりも下流側に、標識化抗体を認識する抗抗体（抗標識化抗体）が固定化されたものである。
　このコントロール部１８は、本実施形態では、展開層１２の長手方向に直交するように、帯状に形成されている。
　コントロール部１８において、固定化された抗抗体と標識化抗体との反応が確認されることにより、展開層１２に供給された検体液に含まれる標識化抗体が、展開層１２の上流側から、下流側に位置するコントロール部１８にまで展開されたことを示す証拠となる。そのため、コントロール部１８でかかる反応が確認されることで、認識部１７で確認された検出結果（判定結果）が正確であることが判る。
　また、抗抗体としては、標識化抗体を認識し得る抗体、すなわち、コントロール部１８よりも上流側の展開層１２を展開（透過）してきた標識化抗体を捕捉し得る機能を有するものであれば、特に限定されず、例えば、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＥおよびＩｇＤのいずれであってもよいが、取り扱いの容易さからＩｇＧが好ましく用いられる。
　なお、このような抗抗体としては、通常、標識化抗体が備える抗体の定常部位を認識するものが用いられる。
　また、コントロール部１８における抗抗体の固定化は、認識部１７における特異抗体の固定化で説明したのと同様の方法を用いて行うことができる。
　吸収部１６は、その全体形状が短冊状をなし、その長手方向の上流側の縁部が展開層１２に接触する（重なる）ように配置されており、展開層１２を展開してきた検体液を展開層１２の下流側の端部から吸収する。
　これにより、吸収部１６が展開層１２における毛細管現象を補助する機能を発揮するため、展開層１２における上流側から下流側に向かった検体液の展開をより円滑に行うことができるようになる。
　この吸収部１６は、液体透過性のものであれば特に限定されず、前記試料供給部１４と同様に、多孔質材料および繊維質材料を用いて形成することができる。
　ハウジングケース２０は、防水性を備え、試験片１０の形状に対応した中空部を有しており、この中空部に試験片１０を収納することで、試験片１０（検査キット１）の取り扱い性を容易にする。
　図１に示すとおり、このハウジングケース２０は、検体液供給窓２１と、検査結果観察窓２２とを有し、中空部に試験片１０を収納した状態で、検体液供給窓２１からろ過部１５の一部（上面）が露出し、検査結果観察窓２２から展開層１２の一部（認識部１７およびコントロール部１８が形成されている領域）が露出するように構成されている。
　これにより、検体液供給窓２１から露出するろ過部１５に検体液を滴下することで、ろ過部１５を介して試料供給部１４に検体液を供給することができる。そして、検査結果観察窓２２から露出する展開層１２に設けられた認識部１７およびコントロール部１８における、標識化抗体の捕捉の有無を観察することにより、新型コロナウイルスの感染の有無を検出することができる。
　このハウジングケース２０の構成材料としては、防水性と適度な強度とを備えるものであれば特に限定されないが、例えば、ポリスチレン、ポリカーボネート、ポリプロピレン、ポリエチレンテレフタレートのような樹脂材料等が挙げられ、これらのうちの１種または２種以上を組み合わせて用いることができる。
　以下、本実施形態１の検査キット１の使用方法と作用効果の一例について図面を参照し具体的に説明する。
　図１に示すとおり、まず、被検者から採取した検体液を検体液供給窓２１から露出するろ過部１５に滴下する。
　これにより、図２に示すろ過部１５を介して試料供給部１４に、検体液が供給され、さらに、この検体液が試料供給部１４から試薬部１３に移行する。
　この際、試薬部１３に含まれる標識化抗体（試薬）と、検体液に含まれる新型コロナウイルスとが接触し、この接触により、標識化抗体と新型コロナウイルスとで構成される複合体が形成される。
　次に、試薬部１３を透過した検体液が、展開層１２に供給される。
　そして、この供給の後、展開層１２中を展開する。このとき、展開層１２中を前記複合体も展開し、この複合体中には新型コロナウイルスが含まれるため、展開層１２の途中に形成された、認識部１７に固定化された、新型コロナウイルスを特異的に認識する特異抗体により、新型コロナウイルスを含む複合体が捕捉される。
　そして、複合体には標識化抗体が含まれているため、認識部１７における複合体の捕捉を確認（視認）することにより、被検者が新型コロナウイルスに感染していることを知ることができる。
　次に、認識部１７を透過した検体液が、さらに展開層１２の認識部１７よりも下流側に位置するコントロール部１８にまで到達する。
　このとき、コントロール部１８に到達した検体液中には、複合体の形成に関与しなかった標識化抗体が含まれるため、この標識化抗体が、コントロール部１８に固定化された標識化抗体を認識する抗抗体により捕捉される。
　そのため、このコントロール部１８における標識化抗体の捕捉を確認することにより、認識部１７で確認された被検者が新型コロナウイルスに感染しているという検出結果（判定結果）が正確であることを知ることができる。
　なお、コントロール部１８を透過した検体液は、さらに展開層１２のコントロール部１８よりも下流側を展開して端部にまで到達し、最終的には吸収部１６へと吸水されていく。
　以上のような検査キット１を用いた工程を経ることで、被検者の新型コロナウイルスの感染の有無を知ることができる。
　なお、本実施形態では、検体液中への標識化抗体の添加は、試験片１０を、試薬部１３を備える構成とし、この試薬部１３を検体液が透過する際に行われる構成としたが、かかる構成に限定されず、例えば、ろ過部１５への検体液の供給（滴下）に先立って、予め検体液に直接添加するようにしてもよい。なお、かかる構成とする場合、試験片１０を、試薬部１３を有しない構成のものとすることができる。
　なお、本実施形態では、新型コロナウイルスを検出する場合について説明したが、これに限定されず、各ウイルスに適した特異抗体（第１特異抗体および第２特異抗体）と、標識化抗体（第１標識化抗体および第２標識化抗体）とを適宜選択することで他のウイルスの検出にも、本発明の検出キットを適用することができる。
　本発明は、検体から新型コロナウイルスによる感染を簡易、迅速かつ正確に検出する方法を提供するもので、その工業的利用価値は大である。
　　１・・・検査キット
　１０・・・免疫クロマト試験片
　１１・・・支持基板
　１２・・・展開層
　１３・・・試薬部
　１４・・・試料供給部
　１５・・・ろ過部
　１６・・・吸収部
　１７・・・認識部
　１８・・・コントロール部
　２０・・・ハウジングケース
　２１・・・検体液供給窓
　２２・・・検査結果観察窓

Claims (6)

  1. 　新型コロナウイルスによる感染の有無を検査するのに用いられる検査キットであって、
    　前記新型コロナウイルスを含有する検体液を展開する展開層と、
    　該展開層の途中に設けられた認識部と、
    　前記検体液が前記展開層を展開する方向を基準として、前記展開層の上流側に配置された試薬部とを有し、
    　前記認識部は、前記新型コロナウイルスの特定ゲノム配列からなる第１抗原決定部位および第２抗原決定部位を、それぞれ、特異的に認識する、第１特異抗体および第２特異抗体が固定化され、
    　前記試薬部は、前記新型コロナウイルスの特定ゲノム配列からなる前記第１抗原決定部位および前記第２抗原決定部位を、それぞれ、特異的に認識する機能を有し、かつ標識物質で標識化されている、第１標識化抗体および第２標識化抗体を含むことを特徴とする検査キット。
  2. 　前記特定ゲノム配列が、前記新型コロナウイルスの19,255番目から19,368番目までの間のゲノム配列を含むことを特徴とする請求項１に記載の検査キット。
  3. 　前記特定ゲノム配列が、前記新型コロナウイルスの19,255番目から19,368番目までの間のゲノム配列の連続する少なくとも９個の塩基を含むことを特徴とする請求項１又は２に記載の検査キット。
  4. 　前記第１標識化抗体および前記第２標識化抗体は、前記特定ゲノム配列を含むゲノムが有するヌクレオタンパクに対する抗体であることを特徴とする請求項１ないし３のいずれか１項に記載の検査キット。
  5. 　緩衝液及び界面活性剤を含む希釈液もしくは抽出液または検体を採取するための用具をさらに含む請求項１ないし４のいずれか１項に記載の検査キット。
  6. 　新型コロナウイルスによる感染の有無を検査する検査方法であって、
    　前記検体液を前記展開層に供給する第１工程と、
    　前記検体液が前記展開層を展開する際に、前記展開層の途中に設けられた前記認識部に、前記新型コロナウイルスが捕捉されているか否かを確認する第２工程とを有することを特徴とする検査方法。
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