WO2022075756A1 - 베타-라파촌을 유효성분으로 포함하는 담즙 정체성 간질환 예방 또는 치료용 약학 조성물 - Google Patents

베타-라파촌을 유효성분으로 포함하는 담즙 정체성 간질환 예방 또는 치료용 약학 조성물 Download PDF

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Definitions

  • Cholestatic Liver Disease is a liver disease caused by an obstruction in the formation or flow of bile. Cholestasis refers to all biochemical, physiological, and clinical changes caused by circulatory disorders of bile, which is produced in the liver and circulates through the biliary tract and intestine.
  • PBC primary cholestasis cirrhosis
  • bile plays an important role in helping the absorption of fat and vitamins by delivering bile acids (salts) to the intestine. through the enterohepatic circulation.
  • bile acids salts
  • cholestasis occurs and bile components such as bile acids and bilirubin are stored in the liver cells and blood, or the bile to be delivered to the intestine decreases, causing jaundice, pruritus, gray stools, fatty diarrhea (steatorrhea), If vitamin malabsorption is present and worsens, it may progress to liver failure and liver transplantation may be required.
  • liver transplantation is the only proven treatment for PSC so far, and not all patients are eligible for liver transplantation, so there is an urgent need to develop an effective treatment for PSC.
  • IBD ulcerative colitis
  • CD Crohn's disease
  • beta-Rapachon ( ⁇ -Lapachone, hereinafter BL) is a quinone-based compound obtained from the Lapacho tree for a long time and has been used for medical purposes.
  • BL receives two electrons from NADH through the intracellular NQO1 (NAD(P)H:quinone oxidoreductase) enzyme and promotes conversion to NAD + both in vitro and in vivo .
  • NQO1 NAD(P)H:quinone oxidoreductase
  • Another object of the present invention is to provide a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of cholestatic liver disease and inflammatory bowel disease, comprising beta-rapachon ( ⁇ -Lapachone) as an active ingredient.
  • the present invention provides a pharmaceutical composition for preventing or treating cholestatic liver disease, comprising beta-lapachone or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.
  • the present invention provides a pharmaceutical composition for preventing or treating cholestatic liver disease comprising a compound represented by the following formula (1) or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.
  • the cholestatic liver disease is primary biliary cirrhosis (PBC), primary sclerosing cholangitis (PSC), progressive familial intrahepatic cholestasis (PFIC), benign recurrent intrahepatic cholestasis (Benign Reccurrent Intrahepatic Cholestasis), Intrahepatic Cholestasis of Pregnancy (ICP), cholestasis due to viral hepatitis, cholestasis due to alcoholic hepatitis, drug-induced cholestasis, cholestasis during parenteral nutrition, weak neoplastic cholestasis It may be at least one selected from the group consisting of stasis, cholestasis after liver transplantation, infectious cholestasis and Alagille syndrome (AS), and more preferably primary sclerosing cholangitis (PSC), primary biliary cirrhosis (PBC) Or progressive familial intrahepatic
  • the beta-Rapa village (BL) may be used in the form of a pharmaceutically acceptable salt, and the salt is an acid addition salt formed by a pharmaceutically acceptable free acid, a pharmaceutically acceptable salt using a base. It may also be made of a metal salt, but is not limited thereto.
  • inorganic acids and organic acids can be used as free acids. Hydrochloric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, phosphoric acid, etc. can be used as the inorganic acid, and citric acid, acetic acid, lactic acid, maleic acid, gluconic acid, methanesulfonic acid, succinic acid, 4-toluenesulfonic acid, glutamic acid, or aspartic acid can be used as the organic acid.
  • hydrochloric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, phosphoric acid, etc. can be used as the inorganic acid
  • citric acid acetic acid, lactic acid, maleic acid, gluconic acid, methanesulfonic acid, succin
  • the pharmaceutical composition for preventing or treating cholestatic liver disease of the present invention is characterized in that it specifically inhibits fibrosis of bile duct cells and inhibits inflammatory cytokines.
  • composition is characterized in that it improves one or more levels selected from the group consisting of AST, ALT, ALP and bilirubin in the blood.
  • IL-1 ⁇ Interleukin-1beta
  • IL-6 Interleukin-6
  • IL-18 Interleukin-18
  • INF- ⁇ Interferon- ⁇
  • TNF- ⁇ Tumor necrosis factor- ⁇
  • TNF- ⁇ Tumor necrosis factor- ⁇
  • MCP-1 Monocyte Chemoattractant Protein-1 characterized in that it inhibits at least one selected from the inflammatory cytokine factors consisting of.
  • the pharmaceutical composition for preventing or treating cholestatic liver disease is characterized in that it has a more excellent effect in cholestatic liver disease accompanying inflammatory bowel disease (IBD), inflammatory bowel disease (IBD) is Crohn's disease (CD) or ulcerative colitis (UC).
  • IBD inflammatory bowel disease
  • IBD inflammatory bowel disease
  • CD Crohn's disease
  • UC ulcerative colitis
  • composition of the present invention is that the composition further comprising ursodeoxycholic acid (UDCA) or obeticholic acid (hereinafter OCA) has a more excellent effect in cholestatic liver disease than each alone administration characterized.
  • UDCA ursodeoxycholic acid
  • OCA obeticholic acid
  • the beta-rapachon may be added in an amount of preferably 0.001 to 50% by weight, more preferably 0.001 to 40% by weight, and most preferably 0.001 to 30% by weight based on the total weight of the total pharmaceutical composition.
  • Carriers, excipients and diluents that may be included in the pharmaceutical composition include lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, xylitol, erythritol, maltitol, starch, acacia gum, alginate, gelatin, calcium phosphate, calcium silicate, cellulose, methyl cellulose, microcrystalline cellulose, polyvinyl pyrrolidone, water, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate and mineral oil.
  • Solid preparations for oral administration include tablets, pills, powders, granules, capsules, etc., and such solid preparations include at least one or more excipients, for example, starch, calcium carbonate, sucrose in the beta-Rapa village of the present invention. Alternatively, it is prepared by mixing lactose, gelatin, and the like. In addition to simple excipients, lubricants such as magnesium stearate and talc are also used.
  • Liquid formulations for oral use include suspensions, solutions, emulsions, syrups, etc.
  • various excipients such as wetting agents, sweetening agents, fragrances, preservatives, and acidulants are used. may be included.
  • Formulations for parenteral administration include sterile aqueous solutions, non-aqueous solutions, suspensions, emulsions, freeze-dried preparations, and suppositories.
  • Non-aqueous solvents and suspending agents include propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oils such as olive oil, and injectable esters such as ethyl oleate.
  • witepsol macrogol, tween-61, cacao butter, laurin fat, glycerogelatin, and the like can be used.
  • the dosage of the pharmaceutical composition of the present invention will vary depending on the age, sex, and weight of the subject to be treated, the specific disease or pathological condition to be treated, the severity of the disease or pathology, the route of administration, and the judgment of the prescriber. Dosage determination based on these factors is within the level of one of ordinary skill in the art, and dosages generally range from 0.01 mg/kg/day to approximately 500 mg/kg/day. A preferred dosage is 0.1 mg/kg/day to 200 mg/kg/day, and a more preferred dosage is 1 mg/kg/day to 200 mg/kg/day. Administration may be administered once a day, or may be administered in several divided doses. The above dosage does not limit the scope of the present invention in any way.
  • the pharmaceutical composition of the present invention may be administered to mammals such as mice, livestock, and humans by various routes. Any mode of administration can be envisaged, for example, by oral, rectal or intravenous, intramuscular, subcutaneous, intrauterine or intracerebrovascular injection and dermal application.
  • the pharmaceutical composition containing beta-rapachon of the present invention has almost no toxicity and side effects, so it is a drug that can be safely used even when taken for a long period of time for the purpose of prevention.
  • the present invention provides a health functional food for preventing or improving cholestatic liver disease comprising beta-lapachone as an active ingredient.
  • the present invention provides a health functional food for preventing or improving symptoms of cholestatic liver disease accompanying inflammatory bowel disease, comprising beta-lapachone as an active ingredient.
  • the inflammatory bowel disease may be Crohn's disease or ulcerative colitis.
  • the health functional food for preventing or improving symptoms of cholestatic liver disease containing ⁇ -lapachone as an active ingredient is ursodeoxycholic acid (UDCA) or obeticholic acid (OCA). ) may be further included.
  • UDCA ursodeoxycholic acid
  • OCA obeticholic acid
  • the health functional food is preferably 0.001 to 50% by weight, more preferably 0.001 to 30% by weight, and most preferably 0.001 to 10% by weight, based on the total weight of the total food, the composition containing beta-Rapa Village (BL). % can be added.
  • the health functional food refers to food manufactured and processed in the form of tablets, capsules, powders, pills or liquids using raw materials or ingredients having useful functions in the human body.
  • the term "functionality" refers to obtaining useful effects for health purposes, such as regulating nutrients or physiological effects on the structure and function of the human body.
  • the health functional food of the present invention can be prepared by a method commonly used in the art, and during the manufacture, it can be prepared by adding raw materials and components commonly added in the art.
  • the present invention relates to a pharmaceutical composition for preventing or treating cholestatic liver disease comprising beta-rapachon as an active ingredient, and can be used as an effective preventive and therapeutic agent for cholestatic liver disease.
  • the pharmaceutical composition for preventing or treating cholestatic liver disease containing beta-rapachon as an active ingredient can be used as an effective preventive and therapeutic agent for cholestatic liver disease by confirming that there is an effect of inhibiting sexual emulsification and inhibiting inflammation.
  • Figure 2 shows the effect of beta-Rapa village (BL) on the collagen tissue surrounding the portal vein of DDC-induced cholestasis liver disease animal model.
  • Figure 8 shows the effect of beta-rapa village (BL) on blood markers AST, ALT and ALP in an animal model of Poly I:C-induced cholestatic liver disease.
  • FIG. 11 is a photograph (A) and a graph (B) showing the intestinal length comparison of DSS-induced inflammatory bowel disease mice.
  • FIG. 12 is a graph showing the effect of beta-Rapa village (BL) on inflammatory cytokines in intestinal tissue of DSS-induced inflammatory bowel disease mice.
  • FIG. 13 is a graph showing the effect of rapa village (BL) on fibrosis-related mRNA expression in LX-2 hepatic stellate cell model.
  • Figure 14 is a macrophage (macrophage) line in Raw264.7 cell model inflammatory cytokine protein IL-1 ⁇ and TNF- ⁇ expression on the beta- a graph showing the effect of Rapa village.
  • PBMC 15 is a graph showing the effect of rapa village (BL) on the expression of inflammatory cytokines IL-1 ⁇ and IL-18 protein in peripheral blood mononuclear cells (PBMC).
  • beta-rapa village is used as a concept including both beta-rapa village itself and pharmaceutically acceptable salts thereof.
  • the causes of hepatobiliary stasis are very diverse, such as various drug side effects, infections, tumors, bile duct tumors, cysts, biliary duct stones, stenosis, and physical pressure on the bile ducts.
  • PBC Primary Sclerosing Cholangitis
  • PPC Primary Sclerosing Cholangitis
  • PFIC Progressive Familial Intrahepatic Cholestasis
  • Benign Reccurrent Intrahepatic Cholestasis Intrahepatic Cholestasis Cholestasis of Pregnancy (ICP)
  • ICP Intrahepatic Cholestasis Cholestasis of Pregnancy
  • cholestasis due to viral hepatitis cholestasis due to alcoholic hepatitis
  • drug-induced cholestasis cholestasis during parenteral nutrition
  • weak neoplastic cholestasis cholestasis after liver transplantation stasis
  • infectious cholestasis and Alagille syndrome (AS).
  • AS Alagille syndrome
  • DDC (3,5-diethoxycarbonyl-1,4-dihydrocollidine) induces the accumulation of protoporphyrin in the liver by inhibiting the activity of ferrochelatase, which inserts Fe into protoporphyrin IX to generate heme.
  • a mouse animal model of DDC-induced cholestatic liver disease was prepared according to the method of Elisa Pose et al. using 8-week-old C57BL/6 male mice (Samtako, Korea). Briefly, cholestatic liver disease was induced by feeding a standard rodent diet supplemented with 0.1% (w/w) DDC for 7 or 14 days. A 12-hour light-dark cycle was maintained and water was freely ingested.
  • the standard rodent diet included medium wheat, wheat, corn and corn gluten flour, and soybean oil (14% of protein). All animal-related procedures were reviewed and approved by the Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology (KRIBB), KRIBB-AEC-20165 Animal Care and Use Committee.
  • Prolonged supply of DDC induces duct obstruction by damaging the biliary epithelium by creating an intraductal porphyrin plug.
  • Toxic accumulation of bile in the bile duct leads to activation of bile duct cells and ductular reaction proliferation, which is positive for Sirius Red staining and Masson's trichrome staining.
  • tissue staining of the cholestasis liver disease animal model was measured through H&E staining (basic tissue staining), Sirius Red staining (collagen staining), and Masson's trichrome staining (collagen, cytoplasm, muscle fibers, etc.), and tissue staining was performed by an experienced researcher. was measured.
  • Example 2.1 The liver extracted in Example 2.1 was stained with Sirius Red and Masson's trichrome to confirm the tissue and the connective tissue around the cells, and is shown in FIG. 2A.
  • FIG. 2A As shown in FIG. 2A , as a result of Sirius Red and Masson's trichrome staining, the formation of connective tissue was increased by DDC, and it was confirmed that beta-Rapachon treatment inhibited the fibrosis process.
  • Figure 2B is a digital image quantification of the stained portion of Figure 2A.
  • beta-rapachon had a preventive effect such as fibrosis due to increase in connective tissue in the environment of cholestatic liver disease.
  • results obtained from independent experiments were analyzed using two-tailed Student's t-test. Differences were considered significant at p ⁇ 0.05.
  • the logrank (Mantel-Cox) test was used to graph and analyze the results according to the Kaplan-Meier survival analysis, that is, the product-limit method (Prism, version 5.0). , GraphPad Software).
  • Col1 ⁇ 1 Collagen Type I Alpha 1
  • Col4 ⁇ 1 Collagen Type IV Alpha 1
  • ⁇ -SMA Alpha
  • TGF- ⁇ 1 Transforming growth factor beta 1
  • Col1 ⁇ 2 Collagen Type I Alpha 2
  • TGF- ⁇ 2 Transforming growth factor beta 2
  • DDC-induced cholestatic liver disease mice simultaneously treated with beta-rapachon were identified with fibrosis-related genes Col1 ⁇ 1 (Collagen Type I Alpha 1), Col4 ⁇ 1 (Collagen Type IV Alpha 1), ⁇ -SMA (Alpha- Smooth Muscle Actin), Fibronectin, TGF- ⁇ 1 (Transforming growth factor beta 1), and TGF- ⁇ 2 (Transforming growth factor beta 2) to check the transcription level, and compare the expression level of vehicle-treated mice as a control group in FIG.
  • mice with DDC-induced cholestatic liver disease indicate that the portal vein lesion and reduction of fibrosis are at the level of fibrosis-related gene expression, and the pathological change that occurs during cholestatic liver disease induced beta-rapachondria (BL) was inhibited by pretreatment.
  • Example 3.1 After sacrificing the cholestatic liver disease mouse animal model of Example 3.1 and excising liver tissue, mRNA levels of fibrosis-related genes were measured in a manner similar to that of Example 2.3.
  • Col1 ⁇ 1 Collagen Type I Alpha 1
  • TGF- ⁇ 1 Transforming growth factor beta 1
  • Col1 ⁇ 2 Collagen
  • cholestatic liver disease inflammation in the portal vein and damage to the bile ducts in the liver progress chronically, resulting in cholestasis and liver fibrosis.
  • the mRNA level of the inflammatory cytokine gene in the liver tissue of a mouse animal model of cholestatic liver disease obtained in the same manner as in Example 3.1 was measured and shown in FIG. 6 .
  • the primer sequences used for gene expression analysis are shown in Table 2 below.
  • DDC significantly increased the transcriptional levels of inflammation-related genes, TNF ⁇ and IL-1 ⁇ , and beta-Rapa village (BL) inhibited the transcription levels of TNF ⁇ and IL-1 ⁇ , respectively.
  • Example 6.1 the experimental group was divided into a DSS untreated group (Control), a DSS treated group, and a DSS+beta-Rapa village 80 mg/kg treated group, respectively. After the end of the experiment, mice were sacrificed to remove the intestine, and the correct length of the intestine was measured using a vernier caliper, and it is shown in FIGS. 11A and 11B .
  • interleukin-1 ⁇ Interleukin-1beta, IL-1 ⁇
  • interleukin-6 Interleukin-6, IL-6
  • interleukin-18 Interleukin-18, IL-18
  • interferon which are inflammatory cytokine factors in intestinal tissue - ⁇ (Interferon, INF- ⁇ ), tumor necrosis factor- ⁇ (Tumor necrosis factor- ⁇ , TNF- ⁇ ), tumor necrosis factor- ⁇ (Tumor necrosis factor- ⁇ , TNF- ⁇ ), and monocyte chemoattractant protein
  • INF- ⁇ interleukin-1 ⁇
  • tumor necrosis factor- ⁇ Turosis factor- ⁇
  • TNF- ⁇ tumor necrosis factor- ⁇
  • monocyte chemoattractant protein monocyte chemoattractant protein
  • MCP-1 Monocyte Chemoattractant Protein-1
  • the intestinal length of the mouse was significantly shortened by DSS, and it was confirmed that beta-rapachon was recovered by treatment (BL).
  • Inhibition of inflammation may include inhibition of inflammatory cytokines and/or inhibition of cytokine gene expression.
  • IL-1 ⁇ , IL-6, IL-18, INF- ⁇ , TNF- ⁇ , TNF- ⁇ , and MCP-1 which are inflammatory factors in the intestinal tissue of mice.
  • LX-2 cell line model Cholestatic liver disease was tested using the hepatic stellate LX-2 cell line model, citing the method of Takaaki Higashi et al. (2017), focusing on the fact that inflammation and fibrosis of the bile ducts cause cirrhosis.
  • the LX-2 cell line was subcultured in DMEM medium containing 10% FS, 2 mM glutamine, 100 U penicillin, and 0.1 mg/ml streptomycin.
  • the LX-2 cell line was put into a 6-well plate at a density of 16 ⁇ 10 4 cells/well, and TGF- ⁇ 1 1 ng/ml, TGF- ⁇ 1 1 ng/ml + beta-rapachon 0.5 ⁇ M or TGF- ⁇ 1 1 ng/ml ml + beta-Rapa village 1 ⁇ M in DMEM containing the cultured for 24 hours. Thereafter, the protein expression levels of fibronectin and ⁇ -SMA of the obtained cells were performed according to a conventional method known in the art by a protein immunoblot method.
  • the macrophage cell line Raw264.7 (ATCC TIB-71, Manassas, Va.) was subcultured in DMEM medium supplemented with 10% FBS and 1% penicillin/streptomycin.
  • RAW264.7 cells were suspended in DMEM containing 2% FBS and inoculated to a cell number of 4 ⁇ 10 5 /ml in a 12 well plate, and then cultured at 37°C, 5% CO 2 in an incubator for 24 hours. did. While replacing with a new medium, the appropriate concentration of the corresponding substance and LPS (100 ng/ml) and beta-rapachon were treated to be 0.2, 0.5, 1, 2 ⁇ M and cultured for 24 hours, followed by ATP (2.5 mM) treatment and The supernatant was obtained by culturing for another 30 minutes.
  • Cytokine (IL-1 ⁇ , TNF- ⁇ ) release of Raw264.7 macrophages was quantified according to the manufacturer's instructions using each Invitrogen's cell-free supernatant-ELISA set (Invitrogen, Billerica, MA, USA). shown in
  • Peripheral blood mononuclear cells isolated from healthy 8-week-old C57BL/6 male mice (Samtako, Korea) were treated with RPMI-containing 10% FBS, 2 mM glutamine, 100 U penicillin, and 0.1 mg/ml streptomycin. It was maintained by primary culture in 1640 medium.
  • PBMC peripheral hide mononuclear cells

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Abstract

본 발명은 베타-라파촌 (β-lapachone)을 유효성분으로 포함하는 담즙 정체성 간질환 예방 또는 치료용 약학 조성물에 관한 것으로, 담즙 정체성 간질환의 효과적인 예방 및 치료제를 제공할 수 있다.

Description

베타-라파촌을 유효성분으로 포함하는 담즙 정체성 간질환 예방 또는 치료용 약학 조성물
본 발명은 베타-라파촌 (β-lapachone)을 유효성분으로 포함하는 담즙 정체성 간질환 예방 또는 치료용 약학 조성물에 관한 것이다.
담즙 정체성 간질환 (Cholestatic Liver Disease)은 담즙 형성 또는 흐름의 장애로 인한 간질환이다. 담즙 정체란 간에서 만들어져서 담도와 장을 통하여 순환하는 담즙의 순환장애로 인한 생화학적, 생리적, 임상적 변화를 모두 일컫는 것이다.
담즙 정체성 간질환의 대표적 증상인 원발성 담즙성 간경변증 또는 원발성 담즙정체성 간경변증 (Primary Biliary Cirrhosis, PBC)은 질환 초기 발병된 소엽속관 (intralobular duct) 과 함께, 간의 소담관의 더딘 진행성 파괴를 특징으로 하는, 간의 자가면역 질환이다. 이러한 관이 손상되는 경우, 담즙은 간에 축적되어 (담즙정체증), 시간이 지남에 따라 조직을 손상시키며, 이는 흉터, 섬유증 및 간경변을 야기할 수 있다.
담즙은 체내의 노폐물을 배설하는 기능 외에 담즙산(염)을 장으로 전달하여 지방과 비타민의 흡수를 돕는 중요한 역할을 하며, 간세포에서 만들어져서 미세 담관 (bile canaliculus)을 통하여 담도로 분비되고, 이어서 십이지장을 거쳐 장간 (enterohepatic) 순환을 하게 된다. 이러한 담즙 분비 과정에 장애가 초래되면 담즙정체가 발생하고 담즙산, 빌리루빈 등과 같은 담즙성분이 간세포 및 혈액 내에 저류되거나, 장으로 전달되어야 할 담즙이 감소하면서 황달, 소양증, 회색변, 지방성 설사 (steatorrhea), 비타민 흡수장애가 나타내며 악화되는 경우, 간부전으로 진행되어 간이식이 필요할 수 있다.
원발성 경화성 담관염 (Primary Sclerosing Cholangitis, 이하 PSC)은 일반적으로 담즙이 담낭에서 배출되도록 하는 담관의 염증과 섬유화가 특징이며 간 및 담낭의 장기 진행성 질환 (long-term progressive disease)이다. PSC의 증상은 초기에 나타나지 않을 수도 있고 피부와 눈의 황색 변색, 가려움증 및 복통과 같은 간 질환의 징후 및 증상을 경험할 수도 있다.
PSC에서 발생하는 담관 손상은 biliary tree의 관을 좁히고 장으로의 담즙 흐름을 방해함으로써, 결국 간경변과 간부전으로 이어질 수 있다. PSC는 간암, 담낭암, 결장 직장암, 담관암 등 다양한 암 발생 위험을 증가시킨다. PSC의 근본 원인은 알려지지 않았지만, 유전적 감수성, 면역계 기능 장애 및 장내 세균총의 비정상적인 구성이 중요한 역할을 할 수 있다. 이것은 PSC 환자가 높은 비율로 염증성 장질환 (Inflammatory Bowel Disease, 이하 IBD), 가장 흔히 궤양성 대장염을 앓고 있다는 점에서 IBD 환자와 가장 연관성이 높다. IBD 환자의 약 3~7.5%가 PSC를 앓고 있으며 PSC 환자의 80%는 어떤 형태의 IBD를 앓고 있다.
일반적으로 30대 또는 40대 젊은 사람들에게서 주로 발생하는 것으로 알려있는 PSC는 현재까지 효과적인 치료법은 없으며, 가장 확실한 치료법은 간 이식이지만 이식 후에도 재발할 우려도 있다. 미국식품의약국 (U.S. Food and Drug Administration, FDA)에 의해 PSC를 표적으로 하는 승인된 치료제는 아직 없다. 일부 전문가들은 PSC 환자에서 증가한 간 효소 수치를 낮추고 다른 담즙 정체성 간질환에서 효과가 입증된 Ursodeoxycholic acid (이하, UDCA)를 권장하고 있다. 그러나 UDCA에 의한 PSC 증상 호전 및 환자 생존율을 향상시키는 효과는 아직 명확하게 밝혀지지 않았다. 미국 간질환 연구협회 (American Association for the Study of Liver Diseases) 및 미국 위장병학 대학(American College of Gastroenterology)의 지침은 PSC의 치료를 위해 UDCA 사용을 권고하지 않지만, 유럽 간연구협회 (European Association for the Study of the Liver)는 중간 용량 (13-15 mg/kg)의 UDCA 사용을 권장한다. 따라서 현재까지 간이식 (Liver transplantation)만이 PSC의 입증된 유일한 치료법이며, 모든 환자가 간이식을 받을 수 있는 것은 아니기에 PSC에 효과적인 치료제 개발이 시급한 실정이다.
PSC 환자의 80%가 갖고 있는 IBD는 궤양성대장염 (Ulcerative Colitis, 이하 UC)과 크론병 (Crohn’s Disease, 이하 CD)으로 대표되는 원인을 알 수 없는 위장관의 만성 재발성 염증 질환이다. 질병이 진행되는 동안 악화와 호전 상태가 반복되고 나중에는 협착이나 천공과 같은 심각한 합병증이 발생한다. 과거에는 서구에 비해 아시아 국가의 발병률이 상대적으로 낮다고 보고되었지만, 세계적으로 IBD의 유병률은 증가 추세이고 서구보다는 아시아 국가에서의 증가율이 더 높다. IBD는 다른 만성질환과 달리 젊은 연령층에서의 발병 위험이 높은 점을 고려할 때 사회적 및 경제적 관점에서 매우 신중하게 관리될 필요가 있다.
한편, 베타-라파촌 (β-Lapachone, 이하 BL)은 퀴논 계열 화합물로 오래전부터 라파초 (Lapacho) 나무에서 얻어 의료 목적으로 사용되었다. BL은 세포 내 NQO1 (NAD(P)H:quinone oxidoreductase) 효소를 통해 NADH로부터 2개의 전자를 받아 NAD+로 전환을 촉진하는 것이 시험관 내(In-vitro) 및 생체 내(In-vivo) 모두에서 확인되었으며, 특히 NQO1-결손 (knock-out) 세포 연구에서 검증되었다. 그러나, 현재까지 BL이 NAD+-촉진제로서 담즙 정체성 간질환에 적용하는 연구는 이루어지지 않았다.
본 발명의 목적은 베타-라파촌 (β-Lapachone)을 유효성분으로 포함하는 담즙 정체성 간질환 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공하는 데 있다.
본 발명의 또 다른 목적은 베타-라파촌(β-Lapachone)을 유효성분으로 포함하는 담즙 정체성 간질환 및 염증성 장질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공하는 데 있다.
본 발명은 베타-라파촌 (β-Lapachone) 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는 담즙 정체성 간질환 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는 담즙 정체성 간질환 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.
[화학식 1]
Figure PCTKR2021013732-appb-I000001
상기 담즙 정체성 간질환은 원발성 담즙성 간경변증 (PBC), 원발성 경화성 담관염 (PSC), 진행성 가족성 간내 담즙정체증 (Progressive Familial Intrahepatic Cholestasis, PFIC), 양성 재발성 간내 담즙정체 (Benign Reccurrent Intrahepatic Cholestasis), 임신성 간내 담즙정체 (Intrahepatic Cholestasis of Pregnancy, ICP), 바이러스성 간염에 의한 담즙정체, 알코올성 간염에 의한 담즙정체, 약물 유발성 담즙정체, 경정맥 영양요법 (Parenteral nutrition) 시의 담즙정체, 약성 종양성 담즙 정체, 간이식 후 담즙정체, 감염성 담즙정체 및 알라질 증후군 (Alagille syndrome, AS)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 1 이상일 수 있으며, 더욱 바람직하게는 원발성 경화성 담관염 (PSC), 원발성 담즙성 간경변증 (PBC) 또는 진행성 가족성 간내 담즙정체 (Benign Reccurrent Intrahepatic Cholestasis), 알라질 증후군의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.
상기 베타-라파촌 (BL)은 약학적으로 허용 가능한 염의 형태로 사용될 수 있으며, 염으로는 약학적으로 허용 가능한 유리산 (free acid)에 의해 형성된 산 부가염, 염기를 사용한 약학적으로 허용 가능한 금속염으로도 만들 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다. 예를 들어, 유리산으로는 무기산과 유기산을 사용할 수 있다. 무기산으로는 염산, 브롬산, 황산, 인산 등을 사용할 수 있고, 유기산으로는 구연산, 초산, 젖산, 말레인산, 글루콘산, 메탄술폰산, 숙신산, 4-톨루엔술폰산, 글루탐산, 또는 아스파르트산 등을 사용할 수 있다.
본 발명의 담즙 정체성 간질환 예방 또는 치료용 약학 조성물은 특별하게 담관세포의 섬유화 억제 및 염증성 사이토카인 억제하는 것을 특징으로 한다.
또한 상기 조성물은 혈액 내 AST, ALT, ALP 및 빌리루빈으로 이루어진 군으로부터 선택된 1 이상의 수치를 개선하는 것을 특징으로 한다.
본 발명의 담즙 정체성 간질환 예방 또는 치료용 약학 조성물은 섬유화 억제 및 염증 억제를 특징으로 하며, 상기 섬유화 억제는 Col1α1 (Collagen Type Ⅰ Alpha 1), Col4α1 (Collagen Type IV Alpha 1), α-SMA (Alpha-Smooth Muscle Actin), Fibronectin, TGF-β1 (Transforming growth factor beta 1), Col1α2 (Collagen Type Ⅰ Alpha 2) 및 TGF-β2 (Transforming growth factor beta 2)으로 구성된 섬유화 인자 중 선택되는 적어도 1을 억제하는 것을 특징으로 한다.
상기 염증 억제는 IL-1β (Interleukin-1beta), IL-6 (Interleukin-6), IL-18 (Interleukin-18), INF-γ (Interferon-γ), TNF-α (Tumor necrosis factor-α), TNF-β (Tumor necrosis factor-β), MCP-1 (Monocyte Chemoattractant Protein-1)으로 구성된 염증성 사이토카인 인자 중 선택되는 적어도 1을 억제하는 것을 특징으로 한다.
또한 상기 담즙 정체성 간질환 예방 또는 치료용 약학 조성물은 염증성 장질환 (IBD)을 동반하는 담즙 정체성 간질환에서 더욱 우수한 효과를 갖는 것을 특징으로 하며, 염증성 장질환 (IBD)은 크론병 (CD) 또는 궤양성 대장염 (UC)일 수 있다.
본 발명의 조성물은 우르소데옥시콜린산 (Ursodeoxycholic acid, UDCA) 또는 오베티콜린산 (Obeticholic acid, 이하 OCA)을 더 포함하는 조성물이 각각의 단독 투여보다 담즙 정체성 간질환에서 더욱 우수한 효과를 갖는 것을 특징으로 한다.
상기 베타-라파촌은 전체 약학 조성물 총 중량에 대하여 바람직하게는 0.001~50중량%, 더 바람직하게는 0.001~40중량%, 가장 바람직하게는 0.001~30중량%로 하여 첨가될 수 있다.
상기 약학적 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 액제, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 상기 약학적 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로즈, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제, 감미제, 산미제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 본 발명의 베타-라파촌에 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로스 또는 락토즈, 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 스테아린산 마그네슘, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제, 산미제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween)-61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물의 투여량은 치료받을 대상의 연령, 성별, 체중과, 치료할 특정 질환 또는 병리 상태, 질환 또는 병리 상태의 심각도, 투여 경로 및 처방자의 판단에 따라 달라질 것이다. 이러한 인자에 기초한 투여량 결정은 당업자의 수준 내에 있으며, 일반적으로 투여량은 0.01㎎/㎏/일 내지 대략 500㎎/㎏/일의 범위이다. 바람직한 투여량은 0.1㎎/㎏/일 내지 200㎎/㎏/일이며, 더 바람직한 투여량은 1㎎/㎏/일 내지 200㎎/㎏/일이다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.
본 발명의 약학적 조성물은 쥐, 가축, 인간 등의 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁 내 경막 또는 뇌혈관 내 주사 및 피부 도포에 의해 투여될 수 있다. 본 발명의 베타-라파촌을 포함하는 약학적 조성물은 독성 및 부작용이 거의 없으므로 예방 목적으로 장기간 복용시에도 안심하고 사용할 수 있는 약제이다.
또한, 본 발명은 베타-라파촌 (β-lapachone)을 유효성분으로 포함하는 담즙 정체성 간질환 예방 또는 개선용 건강기능식품을 제공한다.
본 발명은 베타-라파촌 (β-lapachone)을 유효성분으로 포함하는 염증성 장질환을 동반하는 담즙 정체성 간질환 예방 또는 증상 개선용 건강기능식품을 제공한다. 상기 염증성 장질환은 크론병 또는 궤양성 대장염일 수 있다.
상기 베타-라파촌 (β-lapachone)을 유효성분으로 포함하는 담즙 정체성 간질환 예방 또는 증상 개선용 건강기능식품은 우르소데옥시콜린산 (Ursodeoxycholic acid, UDCA) 또는 오베티콜린산 (Obeticholic acid, OCA)을 더 포함할 수 있다.
상기 건강기능식품은 베타-라파촌 (BL)을 포함하는 조성물이 전체 식품 총 중량에 대하여 바람직하게는 0.001~50중량%, 더 바람직하게는 0.001~30중량%, 가장 바람직하게는 0.001~10중량%로 하여 첨가될 수 있다.
상기 건강기능식품은 인체에 유용한 기능성을 가진 원료나 성분을 사용하여 정제, 캡슐제, 분말, 환제 또는 액제 등의 형태로 제조 및 가공한 식품을 말한다. 여기서 기능성이라 함은 인체의 구조 및 기능에 대하여 영양소를 조절하거나 생리학적 작용 등과 같은 보건용도에 유용한 효과를 얻는 것을 의미한다. 본 발명의 건강기능식품은 당업계에서 통상적으로 사용되는 방법에 의하여 제조 가능하며, 상기 제조시에는 당업계에서 통상적으로 첨가하는 원료 및 성분을 첨가하여 제조할 수 있다.
본 발명은 베타-라파촌을 유효성분으로 포함하는 담즙 정체성 간질환 예방 또는 치료용 약학 조성물에 관한 것으로, 담즙 정체성 간질환의 효과적인 예방 및 치료제로 사용될 수 있다.
또한, 베타-라파촌을 유효성분으로 포함하는 담즙 정체성 간질환 예방 또는 치료용 약학 조성물은 성유화 억제 및 염증 억제 효과가 있음을 확인함으로써, 담즙 정체성 간질환의 효과적인 예방 및 치료제로 사용될 수 있다.
도 1은 DDC-유도 담즙 정체성 간질환 동물모델에서 베타-라파촌 (BL)을 적용 또는 미적용한 후의 간문맥 (PV) 주변 조직 사진을 나타낸 것이다.
도 2는 DDC-유도 담즙 정체성 간질환 동물모델의 간문맥 주변 콜라겐 조직에 미치는 베타-라파촌 (BL) 효과를 나타낸 것이다. A. Sirius Red 및 Masson’s trichrome 염색한 간문맥 주변 조직 사진 B. Sirius Red 및 Masson’s trichrome으로 염색된 조직의 이미지를 정량화한 그래프
도 3은 DDC-유도 담즙 정체성 간질환 마우스 (n=6)의 섬유화 관련 유전자 발현에 미치는 베타-라파촌 (BL) 효과를 나타낸 것이다.
도 4는 DDC-유도 담즙 정체성 간질환 마우스 (n=6)의 혈액지표 (ALT, AST, ALP, billirubin)에 미치는 베타-라파촌 (BL) 효과를 나타낸 것이다.
도 5는 DDC-유도 담즙 정체성 간질환 마우스 (n=6)의 섬유화 관련 유전자 발현에 미치는 베타-라파촌 (BL) 효과를 나타낸 것이다.
도 6은 DDC-유도 담즙 정체성 간질환 마우스 (n=6)의 염증 관련 유전자 발현에 미치는 베타-라파촌 (BL) 효과를 나타낸 것이다.
도 7은 DDC-유도 담즙 정체성 간질환 동물모델에서 혈액지표 (총 billirubin, ALP)에 미치는 베타-라파촌 (BL)의 효과를 나타낸 것이다.
도 8은 Poly I:C-유도 담즙 정체성 간질환 동물모델에서 혈액지표 AST, ALT 및 ALP에 미치는 베타-라파촌 (BL)의 효과를 나타낸 것이다.
도 9는 DSS-유도 염증성 장 질환 마우스에서 염증성 장질환 마우스의 생존율에 미치는 베타-라파촌 (BL)의 효과를 나타낸 것이다.
도 10은 DSS-유도 염증성 장질환 마우스 (n=10)의 체중 변화 (A) 및 대장염의 임상 점수(colitis score) (B) 에 베타-라파촌이 미치는 효과를 나타낸 그래프이다.
도 11은 DSS-유도 염증성 장질환 마우스의 장 길이 비교 사진 (A) 및 이를 나타낸 그래프 (B)이다.
도 12는 DSS-유도 염증성 장질환 마우스의 장조직의 염증성 사이토카인에 미치는 베타-라파촌 (BL) 효과를 나타낸 그래프이다.
도 13은 LX-2 간 성상 (Hepatic stellate) 세포 모델에서 섬유화-관련 mRNA 발현에 미치는 베타-라파촌 (BL)의 효과를 나타낸 그래프이다.
도 14는 대식세포 (macrophage)주인 Raw264.7 세포 모델에서 염증성 사이토카인 단백질 IL-1β 및 TNF-α 발현에 미치는 베타-라파촌의 효과를 나타낸 그래프이다.
도 15는 말초혈액단핵세포 (Peripheral blood mononuclear cell, PBMC)에서 염증성 사이토카인 IL-1β 및 IL-18 단백질 발현에 미치는 베타-라파촌 (BL)의 효과를 나타낸 그래프이다.
이하에서, 별도의 설명이 없는 한 베타-라파촌은 베타-라파촌 그 자체, 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 모두 포함하는 개념으로 사용하는 것으로 한다.
간담즙 정체의 원인은 각종 약물 부작용, 감염, 종양, 담관 종양, 낭포, 담관 결석, 협착, 담관에 대한 물리적 압력 등 매우 다양하며, 원인에 따른 담즙 정체성 간질환으로 원발성 담즙성 간경변증 (Primary Biliary Cirrhosis, PBC), 원발성 경화성 담관염 (Primary Sclerosing Cholangitis, PSC), 진행성 가족성 간내 담즙정체증 (Progressive Familial Intrahepatic Cholestasis, PFIC), 양성 재발성 간내 담즙정체 (Benign Reccurrent Intrahepatic Cholestasis), 임신성 간내 담즙정체 (Intrahepatic Cholestasis of Pregnancy, ICP), 바이러스성 간염에 의한 담즙정체, 알코올성 간염에 의한 담즙정체, 약물 유발성 담즙정체, 경정맥 영양요법 (Parenteral nutrition) 시의 담즙정체, 약성 종양성 담즙 정체, 간이식 후 담즙정체, 감염성 담즙정체 및 알라질 증후군 (Alagille syndrome, AS) 이 포함된다.
이하 본 발명의 바람직한 실시예를 상세히 설명하기로 한다. 그러나 본 발명은 여기서 설명되는 실시예에 한정되지 않고 다른 형태로 구체화될 수도 있다. 오히려, 여기서 소개되는 내용이 철저하고 완전해지고, 당업자에게 본 발명의 사상을 충분히 전달하기 위해 제공하는 것이다.
<실시예 1 담즙 정체성 간질환 마우스 동물모델 구축 >
DDC (3,5-diethoxycarbonyl-1,4-dihydrocollidine)는 heme을 생성하기 위해 protoporphyrin IX에 Fe를 삽입하는 ferrochelatase의 활성을 억제하여 간 내 protoporphyrin의 축적을 유도하며, 담즙을 통해서만 간 밖으로 배출이 가능한 소수성 protoporphyrin의 특성에 의한 담관 내 축적 및 결정화로 인해 담관 안팎에 염증 및 섬유화를 유발하게 된다. 상기 기전에 의해 간 조직 내 담즙 정체 및 염증과 섬유화를 유도하기 때문에 DDC 식이 유도 동물모델은 가장 많이 사용되는 설치류 담즙 정체성 간질환 동물모델 중 하나이다.
DDC로 유도된 담즙 정체성 간질환 마우스 동물 모델은 8주령 (8-week-old) C57BL/6 수컷 마우스 (Samtako, Korea)를 사용하여 Elisa Pose 등의 방법에 따라 준비하였다. 간략히 설명하면, 0.1% (w/w)의 DDC가 보충된 표준 설치류 식단을 7 또는 14일간 공급하여 담즙 정체성 간질환을 유도하였다. 12시간의 명암 주기를 유지하고 물을 자유롭게 섭취할 수 있도록 하였다. 표준 설치류 식단은 중간 밀, 밀, 옥수수 및 옥수수 글루텐 가루, 대두유 (단백질의 14%)를 포함하였다. 모든 동물 관련 절차는 한국생명공학연구원 (Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology (KRIBB), KRIBB-AEC-20165) 동물 보호 기관과 사용 위원회에 의해 검토되고 승인되었다.
<실시예 2. 담즙 정체성 간질환 마우스 동물모델의 병변에 대한 베타-라파촌의 예방 효과>
2.1 담즙 정체성 간질환 마우스 동물모델의 조직학(histology) 분석
DDC의 장기간 공급은 관내 포르피린 플러그 (porphyrin plug)를 생성하여 담도 상피를 손상시킴으로써 관 폐쇄를 유도한다. 담관에서의 담즙의 독성 축적은 담관세포의 활성화와 관 반응 증식 (ductular reaction proliferation)으로 이어지며, Sirius Red 염색과 Masson's trichrome 염색에 양성을 나타낸다.
담즙 정체성 간질환 동물모델의 조직 염색은 H&E 염색 (조직 기본 염색), Sirius Red 염색 (콜라겐 염색)과 Masson's trichrome 염색(콜라겐, 세포질, 근섬유 등)을 통해 측정하였으며, 조직염색은 숙련된 연구자에 의해 측정되었다.
14일 동안 마우스에 0.1% DDC를 포함하는 사료 식이 후, 간문맥 주변의 염증, 섬유화, 부착분자를 조직 염색하고 그 결과를 도 1에 나타내었다.
베타-라파촌 (β-Lapachone, BL)의 담즙 정체성 간질환에 대한 예방 효과를 확인하기 위하여, DDC 처리 3일전 0 (DDC-vehicle), 40 mg/kg (DDC-BL40) 및 80 mg/kg (DDC-BL80)으로 마우스에 사료 식이 (총 17일)하였으며, 3일 부터 DDC (총 14일)와 함께 사료 식이하였다. DDC 처리 14일 후, 마우스를 희생시켜 마우스의 간문맥 (portal vein, PV) 및 담관 (bile duct)을 포함하도록 간을 적출하고 H&E로 주변의 병변을 확인하여 도 1에 나타내었다.
도 1에서 보는 바와 같이, 대조군으로서 DDC 처리군 (DDC-vehicle)은 정상군 (SD, standard diet)과 비교하여 마우스의 간문맥 (portal vein, PV)과 담관에서 병변 (화살표 표시)을 증가시켰다. 또한, 베타-라파촌 (BL)을 처리한 DDC 유도 담즙 정체성 간질환 마우스 (DDC-BL40, DDC-BL80)는 비히클 (vehicle)을 처리한 대조군 (DDC-vehicle)과 비교하여 간문맥 (portal vein, PV) 및 담관 (bile duct) 주변의 병변 (화살표 표시)이 현저하게 감소한 것을 확인하였다. 또한, 40 mg/kg (BL40) 보다 80 mg/kg (BL80)로 베타-라파촌 (BL)을 처리한 군에서 병변 감소가 현저한 것으로 나타나 베타-라파촌 (BL)은 농도 의존적으로 DDC 처리된 간문맥 및 담관의 병변을 감소시키는 것을 확인하였다.
이러한 결과로부터 베타-라파촌 처리가 담즙 정체성 간질환 발생 환경에서 간문맥 및 담관 병변의 감소 등의 예방 효과가 있음을 확인하였다.
2.2 담즙 정체성 간질환 마우스 동물 모델에서의 콜라겐량에 대한 베타-라파촌의 효과
상기 실시예 2.1에서 적출한 간을 Sirius Red, Masson’s trichrome 염색으로 조직, 세포 주변의 결합조직을 확인하여 도 2A에 나타내었다.
도 2A 에서 보는 바와 같이, Sirius Red 및 Masson’s trichrome 염색 결과, DDC에 의하여 결합조직의 형성이 증가하였으며, 베타-라파촌 처리가 이러한 섬유화 진행을 억제함을 확인하였다. 도 2B는 도 2A 염색부분을 디지털 이미지로 정량화한 것이다.
상기 결과로부터 베타-라파촌의 처리가 담즙 정체성 간질환 발생 환경에서 결합조직 증가에 의한 섬유화 등의 예방 효과가 있음을 알 수 있었다.
통계처리는 전 실시예를 통하여 독립적인 실험 (평균(means) ± 표준오차(SEM))로부터 얻은 결과를 two-tailed Student's t-test를 사용하여 분석하였다. 차이(differences)는 p<0.05에서 유의한 것으로 간주하였다. 생존율 (survival) 비교 실험을 하는 경우, logrank (Mantel-Cox) 테스트를 사용하여 Kaplan-Meier 생존분석, 즉 누적한계추정법 (product-limit method)에 따라 결과를 그래프화 하고 분석하였다 (Prism, version 5.0, GraphPad Software).
2.3 담즙 정체성 간질환 마우스 동물모델에서 베타-라파촌의 섬유화 관련 유전자(mRNA) 전사 수준에 미치는 영향 확인
담즙 정체성 간질환 마우스 모델은 DDC에 의하여 담관이 손상되면서 섬유화가 유도되며, 이에 따라 섬유화 발달에 중요한 인자인 Col1α1 (Collagen Type Ⅰ Alpha 1), Col4α1 (Collagen Type IV Alpha 1), α-SMA (Alpha-Smooth Muscle Actin), Fibronectin, TGF-β1 (Transforming growth factor beta 1), Col1α2 (Collagen Type Ⅰ Alpha 2) 및 TGF-β2 (Transforming growth factor beta 2)의 전사 수준 증가 등을 확인하였다.
상기 실시예 2.1의 담즙 정체성 간질환 마우스 동물모델로부터 수득한 간조직에서 상기 인자들의 발현을 실시간 중합효소연쇄반응 (real-time polymerase chain reaction)법으로 다음의 절차에 따라 수행하였다. 간 샘플의 총 RNA를 Tri-RNA Reagent (Favrogen BIOTECH CORP, Nong-Ke Rd, Taiwan)를 이용하여 Favrogen에서 제시한 절차에 따라 추출하였고, PrimeScript™ RT reagent Kit with gDNA Eraser (TAKARA Korea Biomedical Inc, Seoul, 08506, Korea)를 이용하여 cDNA로 역전사하였다. 정량적 PCR은 TB Green™Premix Ex Taq™ II (Tli RNaseH Plus), ROX plus (TAKARA Korea Biomedical Inc, Seoul, 08506, Korea) 및 QuantStudio 5 Real-Time PCR Instrument (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA)를 이용하여 수행하였다. 사용한 프라이머 서열은 하기 표 1과 같다.
Gene name Primer Category Sequence
Col1a1 Forward 5’-CCTGAGTCAGCAGATTGAGAACA-3’
Reverse 5’-CCAGTACTCTCCGCTCTTCCA-3’
Col1a2 Forward 5’-TTCTGCAGGGTTCCAACGAT-3’
Reverse 5’-TGTCTTGCCCCATTCATTTG-3’
Fibronectin Forward 5’-AGGCAGAAAACAGGTCTCGATT-3’
Reverse 5’-CAGAATGCTCGGCGTGATG-3’
α-Sma Forward 5’-CACGGCATCATCACCAACTG-3’
Reverse 5’-GGCCACACGAAGCTCGTTAT-3’
TGFβ1 Forward 5’-GCAGTGGCTGAACCAAGGA-3’
Reverse 5’-AGAGCAGTGAGCGCTGAATC-3’
TGFβ2 Forward 5’-CAGCGCTACATCGATAGCAA-3’
Reverse 5’-CCTCGAGCTCTTCGCTTTTA-3’
베타-라파촌을 동시에 처리한 DDC 유도 담즙 정체성 간질환 마우스는 담즙 정체성 간질환 진행과 관련된 섬유화관련 유전자 Col1α1 (Collagen Type Ⅰ Alpha 1), Col4α1 (Collagen Type IV Alpha 1), α-SMA (Alpha-Smooth Muscle Actin), Fibronectin, TGF-β1 (Transforming growth factor beta 1) 및 TGF-β2 (Transforming growth factor beta 2)의 전사 수준을 확인하고 Vehicle을 처리한 마우스를 대조군으로 발현양을 비교하여 도 3에 나타내었다.도 3A 내지 도 3F에서 보는 바와 같이, 상기 간문맥 병변 및 섬유화의 감소 결과와 일치하게, 비히클 (vehicle)을 처리한 DDC 유도 담즙 정체성 간질환 대조군 마우스(DDC-vehicle)에 비해 베타-라파촌 (BL)을 처리한 DDC 유도 담즙 정체성 간질환 마우스(DDC-BL40, DDC-BL80)에서 Col1α1, Col4α1, α-SMA, Fibronectin 및 TGF-β1의 전사 수준이 유의하게 감소하는 것을 확인하였다. DDC 유도 담즙 정체성 간질환 마우스에서의 이러한 결과는 상기 간문맥 병변 및 섬유화의 감소가 섬유화 관련 유전자 발현 수준에서의 이루어지며, 담즙 정체성 간질환이 유발된 동안 일어나는 병리학적 변화는 베타-라파촌 (BL) 전처리에 의해 억제되었음을 나타낸다.
<실시예 3. 담즙 정체성 간질환 마우스 동물모델에서 베타-라파촌의 영향 확인 >
베타-라파촌 (BL)의 담즙 정체성 간질환 발병과정에 미치는 영향을 확인하고자, 1% DDC와 베타-라파촌을 마우스에 동시 투여하여 동물모델의 특성을 확인하였다.
3.1 혈액 지표 (ALT, AST, ALP, billirubin)에 미치는 영향 확인
8주령 (8-week-old) C57BL/6 수컷 마우스 (Samtako, Korea)를 각 군으로 나누고(=6), 정상군(vehicle), 대조군(DDC), DDC+베타-라파촌 20 mg/kg, DDC+베타-라파촌 40 mg/kg, DDC+베타-라파촌 80 mg/kg, DDC+베타-라파촌 100 mg/kg, 및 양성대조군 DDC+우루소데옥시콜린산 100 mg/kg 및 DDC+오베티콜린산 30 mg/kg으로 마우스에 사료 식이 (총 7일)하였다. 처리 7일 후, 마우스를 희생한 다음 심장으로부터 채혈하여 혈액지표인 알라닌 아미노트랜스퍼라제 (Alanine aminotransferase, ALT), 아스파르테이트 아미노스랜스퍼라제 (aspartate aminotransferase, AST), 알칼라인 포스파타제 (Alkaline Phosphatase, ALP), 빌리루빈 (billirubin) 수치를 분석하고 이를 도 4에 나타내었다.
도 4에서 보는 바와 같이, DDC 처리는 혈액 내 ALT, AST, ALP, billirubin 수치를 크게 증가시켰으며, 베타-라파촌 (BL)은 DDC 처리에 따라 증가되는 ALT, AST, ALP, billirubin 각각을 농도 의존적으로 억제시켰으며, 비교물질인 우루소데옥시콜린산 (UDCA)와 오베티콜린산 (OCA)와 비교하여 우수한 효과를 보여주었다.
3.2 섬유화 관련 유전자 전사 수준에 미치는 영향 확인
상기 실시예 3.1의 담즙 정체성 간질환 마우스 동물모델을 희생시켜 간조직을 적출한 후, 상기 실시예 2.3의 방법과 유사한 방법으로 섬유화 관련 유전자 mRNA 수준을 측정하였다.
담즙 정체성 간질환 마우스 모델은 DDC에 의하여 담관이 손상되면서 섬유화가 유도되며, 이에 따라 섬유화 발달에 중요한 인자인 Col1α1 (Collagen Type Ⅰ Alpha 1), TGF-β1 (Transforming growth factor beta 1) 및 Col1α2 (Collagen Type Ⅰ Alpha 2)의 전사 수준을 확인하고 그 결과를 도 5에 나타내었다.
도 5에서 보는 바와 같이, DDC는 섬유화와 관련된 유전자 Col1α1, TGF-β1 및 Col1α2의 전사 수준을 크게 증가시켰으며, 베타-라파촌 (BL)은 Col1α1, TGF-β1 및 Col1α2 각각의 전사수준을 농도 의존적으로 억제하였다.
3.3 염증 관련 유전자 전사 수준에 미치는 영향 확인
담즙 정체성 간질환은 문맥 내의 염증과 간 내 담관 손상이 만성적으로 진행되어 담즙 정체와 간 섬유화를 발생시킨다. 상기 실시예 3.1과 동일한 방법으로 수득한 담즙 정체성 간질환 마우스 동물모델의 간조직의 염증성 사이토카인 유전자 mRNA 수준을 측정하여 도 6에 나타내었다. 유전자 발현 분석을 위해 사용한 프라이머 서열은 하기 표 2와 같다.
Gene name Primer Category Sequence
TNFα Forward 5’-CTGAGGTCAATCTGCCCAAGTAC-3’
Reverse 5’-CTTCACAGAGCAATGACTCCAAAG-3’
IL-1β Forward 5’-GAAAGCTCTCCACCTCAATGG-3’
Reverse 5’-AGGCCACAGGTATTTTGTCGT-3’
도 6에서 보는 바와 같이, DDC는 염증 관련 유전자인 TNFα 및 IL-1β의 전사 수준을 크게 증가시켰으며, 베타-라파촌 (BL)은 TNFα 및 IL-1β 각각의 전사수준을 억제하였다.
<실시예 4. 담즙 정체성 간질환 유도된 마우스 동물모델에서 베타-라파촌의 치료 효과 확인 >
담즙 정체성 간질환 유도된 마우스 동물모델에서 베타-라파촌의 치료 효과를 확인하였다. 8주령 (8-week-old) C57BL/6 수컷 마우스 (Samtako, Korea)를 각 군으로 나누고(=6), 대조군을 제외한 각 군에 0.1%의 DDC를 포함하는 사료 식이를 3일간 수행하였다. 이후 4일간 정상군, DDC 대조군 (vehicle), DDC+베타-라파촌 20 mg/kg, DDC+베타-라파촌 40 mg/kg, DDC+베타-라파촌 80 mg/kg 및 양성대조군 DDC+오베티콜린산 30 mg/kg으로 마우스에 사료 식이(총 7일)하였다. 7일 식이 후, 마우스를 희생한 다음 심장으로부터 채혈하여 혈액지표인 billirubin 및 ALP 수치를 분석하고 이를 도 7에 나타내었다.
도 7에서 보는 바와 같이, DDC 처리는 혈액 내 billirubin 및 ALP 수치를 크게 증가시켰으며, 베타-라파촌은 DDC 처리에 의해 증가된 billirubin 및 ALP 각각을 농도 의존적으로 억제시켰다. 또한, 비교물질인 우루소데옥시콜린산 (UDCA)와 오베티콜린산 (OCA)와 비교하여 우수한 효과를 보여주었다.
<실시예 5. 원발성 담즙성 간질환 (PBC) 유도된 마우스 동물모델에서 베타-라파촌의 치료 효과 확인 >
담즙 정체성 간질환 중, 원발성 담즙성 간경변증 (PBC)은 바이러스 RNA 모방체 및 Toll-유사 수용체인 폴리이노신-폴리시티딜산 (polyinosinic-polycytidylic acid, Poly I:C)를 이용하여 유사상태로 유도할 수 있다.
8주령 (8-week-old) C57BL/6 수컷 마우스 (Samtako, Korea)를 각 군으로 나누고(=6), 정상군을 제외한 각 실험군에 Poly I:C를 5 mg/kg로 1주일에 2회씩 8주간 복강에 투여하였다. 이후, 대조군 (vehicle), 베타-라파촌 40 mg/kg, 베타-라파촌 80 mg/kg 및 양성대조군 우루소데옥시콜린산 100 mg/kg 및 오베티콜린산 30 mg/kg으로 마우스에 8주간 사료 식이하였다. 처리 실험 16주째 실험을 종료하고, 마우스를 희생한 다음 심장으로부터 채혈하여 혈액지표인 AST, ALT 및 ALP 수치를 분석하고 이를 도 8에 나타내었다.
도 8에서 보는 바와 같이, Poly I:C에 의하여 혈액 내 AST, ALT 및 ALP 수치가 증가하였으며, 베타-라파촌 (BL)은 Poly I:C에 의해 증가된 AST, ALT 및 ALP 각각을 억제시켰다. 대조군 중 UDCA는 DDC에 의해 증가된 AST, ALT 및 ALP를 베타-라파촌 (BL)은 비교물질인 우루소데옥시콜린산 (UDCA)와 오베티콜린산 (OCA)와 비교하여 우수한 효과를 보여주었다.
<실시예 6. 염증성 장질환 유도 마우스 동물모델에서 베타-라파촌의 효과 확인 >
담즙 정체성 간질환 환자의 약 80% 환자는 염증성 장질환 (IBD)를 앓고 있으므로 본 발명자들은 염증성 장질환 마우스 동물모델에서 베타-라파촌 (BL)의 효과를 확인하였다.
6.1 생존률, 체중, colitis score에 미치는 효과
DSS (dextran sodium sulfate)로 유도된 급성 대장염 마우스 모델은 8주령 (8-week-old) C57BL/6 암컷 마우스(Samtako, Korea)를 사용하여 구축하였다.
8주령 (8-week-old) C57BL/6 암컷 마우스 (Samtako, Korea)를 각 군으로 나누고(=10), 각 실험군에 3% (w/w)의 DSS가 음수에 보충된 표준 설치류 식단을 초기 5일간 급이하여 급성 대장염을 유도하면서, 대조군(Vehicle), 베타-라파촌 40 mg/kg 및 베타-라파촌 80 mg/kg을 경구로 14일간 투여하였다.
모든 동물 관련 절차는 한양대학교 동물 보호 기관과 사용 위원회에 의해 검토되고 승인되었다. 시간에 따른 생존률은 도 9에 나타내었고, 각 실험군 마우스의 체중(body weight) 변화율을 측정하여 도 10A에 나타내었으며, 직장 (rectum) 당 분변 잠재 출혈 (occult blood), 총 출혈 손실과 대변의 농도를 매일 측정하였다. 각 실험군의 대장염 임상 점수 (colitis score)는 처리 그룹에 대해 알지 못하는 2 명의 숙련된 연구자에 의해 동물 몸무게 감소 정도, 혈변 및 변의 묽기 등을 측정하여 표 3와 같이 점수로 변환하고, 이의 합을 계산하여 도 10B에 나타내었다.
몸무게 감소 변 상태 혈변
0점 몸무게 감소 없음 잘 형성된 알갱이 출혈이 없을 때
1점 1-5% 감소
2점 5-10% 감소 항문에 붙지 않은 채 반죽 같거나 (pasty) 반쯤 형성된 알갱이일 때 출혈이 보일 때
3점 10-20% 감소
4점 20% 이상 감소 항문에 붙은 채 액상의 변일 때 전반적인 출혈이 있을 때
도 9에서 보는 바와 같이, DSS에 의하여 유도된 IBD 마우스는 실험 14일째 70%가 폐사하였으며, 베타-라파촌 40 mg/kg 실험군은 50%, 그리고 베타-라파촌 80 mg/kg 실험군은 20%만이 폐사하였다.그리고, 도 10A에서 보는 바와 같이, DSS에 의하여 유도된 IBD 마우스는 체중이 감소하여 실험 개시일 8 일차에 기준 75%까지 감소하였다. 베타-라파촌 (BL)을 처리한 군의 경우, DSS에 의한 체중감소가 억제되었으며, 특히, 베타-라파촌 80 mg/kg 실험군은 초기 체중의 90%까지 회복되었다. 또한, 도 10B에서 보는 바와 같이, DSS에 의하여 유도된 IBD 마우스의 대장염의 임상 점수 (colitis score)는 베타-라파촌 (BL)의 처리 농도에 의존적으로 감소된 것을 확인하였다.
6.2 장 길이 회복 및 염증 억제에 미치는 효과
상기 실시예 6.1과 동일한 방법으로 실험군을 DSS 무처리군(Control), DSS 처리군, DSS+베타-라파촌 80 mg/kg 처리군으로 나누어 각각 처리하였다. 실험 종료 후 마우스를 희생시켜 장을 적출하고 버니어캘리퍼스 (vernier caliper)를 이용하여 정확한 장의 길이를 측정하고 도 11A 및 도 11B에 나타내었다. 또한, 장 조직 내의 염증성 사이토카인 인자인 인터루킨-1β (Interleukin-1beta, IL-1β), 인터루킨-6 (Interleukin-6, IL-6), 인터루킨-18 (Interleukin-18, IL-18), 인터페론-γ (Interferon, INF-γ), 종양괴사인자-α (Tumor necrosis factor-α, TNF-α), 종양괴사인자-β (Tumor necrosis factor-β, TNF-β), 및 단핵구 화학유인물질 단백질-1 (Monocyte Chemoattractant Protein-1, MCP-1)의 유전자 mRNA 수준을 통상적인 실험절차를 통해 실시간 중합효소연쇄반응 (real-time polymerase chain reaction)법으로 분석하여 도 12에 나타내었다.
도 11A 및 도 11B에서 보는 바와 같이, DSS에 의하여 마우스의 장 길이는 유의하게 짧아졌으며, 베타-라파촌 (BL) 처리에 의하여 회복된 것을 확인하였다.
염증 억제는 염증성 사이토카인 억제 및/또는 사이토카인 유전자 발현 억제를 포함할 수 있다. 이와 관련하여, 도 12에서 보는 바와 같이, DSS에 의하여 마우스의 장 조직 내 염증 인자인 IL-1β, IL-6, IL-18, INF-γ, TNF-α, TNF-β 및 MCP-1의 mRNA 수준이 크게 증가하였으며, DSS에 의하여 증가된 상기 각 염증성 사이토카인은 베타-라파촌 (BL) 처리에 의하여 모두 유의하게 감소하였다.
<실시예 7. 세포수준에서 베타-라파촌의 항섬유화 효과 확인 >
7.1. LX-2 간 성상 (Hepatic stellate) 세포주 모델에서 Fibronectin 및 α-SMA 활성에 대한 베타-라파촌의 효과
담즙 정체성 간질환은 담관의 염증 및 섬유화가 간경변을 유발하는 점에 착안하여 Takaaki Higashi 등(2017)의 방법을 인용하여 간성상 (Hepatic stellate) LX-2 세포주 모델을 이용하여 실험하였다. LX-2 세포주는 10% FS, 2 mM glutamine, 100 U penicillin, 0.1 mg/ml streptomycin이 포함된 DMEM 배지로 계대배양하였다. LX-2 세포주를 6-well plate에 16×104 cells/well 밀도로 투입하고 TGF-β1 1 ng/ml, TGF-β1 1 ng/ml + 베타-라파촌 0.5μM 또는 TGF-β1 1 ng/ml + 베타-라파촌 1μM을 함유한 DMEM으로 24시간 배양하였다. 이후 수득한 세포의 섬유화 관련 유전자 Fibronectin 및 α-SMA의 단백질 발현 수준을 단백질 면역 블랏 (Immunotblot)법으로 당업계에 알려진 통상적인 방법에 따라 수행하였다.
도 13에서 보는 바와 같이, 대조군인 LX-2 세포주에 TGF-β1을 처리하는 경우, 대조군 대비 섬유화 관련 Fibronectin 및 α-Smooth Muscle Actin (α-SMA)의 단백질 발현 수준이 증가하였으나 베타-라파촌을 투여한 경우, TGF-β1에 의하여 증가된 Fibronectin 및 α-SMA는 베타-라파촌 농도에 의존적으로 그 수준이 감소하였다.
7.2. 대식세포(marcrophage)주 Raw264.7 세포 모델에서 염증성 사이토카인 단백질 발현에 미치는 베타-라파촌의 효과
대식세포주인 Raw264.7 (ATCC TIB-71, 미국 버지니아 주 매너 서스)를 10% FBS, 1% penicillin/streptomycin이 보충된 DMEM 배지에서 계대배양하였다.
염증 유도를 위하여 RAW264.7 세포를 2% FBS가 포함된 DMEM에 현탁시킨 후 12 well plate에 4×105/ml의 세포수가 되도록 접종한 다음, 37℃, 5% CO2 incubator에서 24시간 배양하였다. 새로운 배지로 교체하면서 적정한 농도의 해당물질 및 LPS (100 ng/ml) 및 베타-라파촌 0.2, 0.5, 1, 2 μM이 되도록 처리하고 24 시간동안 배양한 후, ATP (2.5 mM)을 처리하고 30분 더 배양하여 상층액을 취하였다. Raw264.7 대식세포의 사이토카인 (IL-1β, TNF-α) 방출은 각각의 Invitrogen사의 무세포 상청액-ELISA 세트 (Invitrogen, Billerica, MA, USA)를 이용하여 제조업체의 지침에 따라 정량하여 도 14에 나타내었다.
도 14에서 보는 바와 같이, Raw264.7 세포주에 LPS 및 ATP를 처리하는 경우, 대조군 대비 염증성 관련 단백질인 IL-1β 및 TNF-α의 발현이 증가하였으나 베타-라파촌 (BL)을 투여한 경우, LPS 및 ATP에 의하여 증가된 IL-1β 및 TNF-α 단백이 베타-라파촌 농도 의존적으로 그 발현량이 감소하는 것을 확인하였다.
7.3. 말초혈액단핵세포 (Peripheral blood mononuclear cell, PMBC)에서 염증성 사이토카인 1L-1β 및 IL-18 사이토카인 분비에 미치는 베타-라파촌의 효과
담즙 정체성 간질환의 발병기전에 염증성 사이토카인이 중개하는 점에 착안하여 Boyum 등(1968)의 방법을 변형하여 말초혈액단핵세포 모델을 이용하였다. 건강한 8주령 (8-week-old) C57BL/6 수컷 마우스 (Samtako, Korea)로부터 분리된 말초혈액단핵세포를 10% FBS, 2 mM glutamine, 100 U penicillin, 0.1 mg/ml streptomycin이 포함된 RPMI-1640 배지에서 1차 배양하여 유지시켰다. 안정된 말초혁액단핵세포 (PBMC)에 LPS를 200 ng/mL과 ATP 및 베타-라파촌을 0, 0.5, 1, 2 μM이 되도록 배지에 처리하고 4시간 후, IL-1β 및 IL-18의 발현 수준을 확인하고 그 결과를 도 15에 나타내었다.
도 15에서 보는 바와 같이, 말초혈액단핵세포에 LPS 및 ATP를 처리하는 경우, 대조군 대비 염증성 관련 단백질인 IL-1β 및 IL-18의 발현 수준이 증가하였으나 베타-라파촌 (BL)을 투여한 경우, LPS 및 ATP에 의하여 증가된 IL-1β 및 IL-18의 수준이 베타-라파촌 (BL) 농도 의존적으로 그 발현량이 감소하는 것을 확인하였다.

Claims (12)

  1. 베타-라파촌(β-lapachone) 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는 담즙 정체성 간질환 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 담즙 정체성 간질환은 원발성 담즙성 간경변증 (Primary Biliary Cirrhosis, PBC), 원발성 경화성 담관염 (Primary Sclerosing Cholangitis, PSC), 진행성 가족성 간내 담즙정체증 (Progressive Familial Intrahepatic Cholestasis, PFIC), 양성 재발성 간내 담즙정체(Benign Reccurrent Intrahepatic Cholestasis), 임신성 간내 담즙정체(Intrahepatic Cholestasis of Pregnancy, ICP), 바이러스성 간염에 의한 담즙정체, 알코올성 간염에 의한 담즙정체, 약물 유발성 담즙정체, 경정맥 영양요법(Parenteral nutrition) 시의 담즙정체, 약성 종양성 담즙 정체, 간이식 후 담즙정체, 감염성 담즙정체 및 알라질 증후군 (Alagille syndrome, AS) 으로 이루어진 군으로부터 선택되는 1 이상인 것을 특징으로 하는 담즙 정체성 간질환 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  3. 제1항에 있어서,
    상기 조성물은 담관세포의 섬유화 억제 및 염증 억제를 특징으로 하는 담즙 정체성 간질환 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  4. 제1항에 있어서,
    상기 조성물은 혈액 내 AST, ALT, ALP 및 빌리루빈으로 이루어진 군에서 선택된 1 이상의 혈액지표의 수치를 개선하는 것을 특징으로 하는 담즙 정체성 간질환 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  5. 제3항에 있어서,
    상기 섬유화 억제는 Col1α1 (Collagen Type Ⅰ Alpha 1), Col4α1 (Collagen Type IV Alpha 1), α-SMA (Alpha-Smooth Muscle Actin), Fibronectin, TGF-β1 (Transforming growth factor beta 1), Col1α2 (Collagen Type Ⅰ Alpha 2) 및 TGF-β2 (Transforming growth factor beta 2)으로 구성된 섬유화 인자 중 선택되는 적어도 1을 억제하는 것을 특징으로 하는 담즙 정체성 간질환 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  6. 제3항에 있어서,
    상기 염증 억제는 IL-1β(Interleukin-1beta), IL-6(Interleukin-6), IL-18(Interleukin-18), INF-γ((Interferon-γ), TNF-α (Tumor necrosis factor-α), TNF-β (Tumor necrosis factor-β), MCP-1(Monocyte Chemoattractant Protein-1)으로 구성된 염증성 사이토카인 인자 중 선택되는 적어도 1을 억제하는 것을 특징으로 하는 담즙 정체성 간질환 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  7. 제1항에 있어서,
    상기 담즙 정체성 간질환은 염증성 장질환을 동반하는 것을 특징으로 하는 담즙 정체성 간질환 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  8. 제7항에 있어서,
    상기 염증성 장질환은 크론병 또는 궤양성 대장염인 것을 특징을 하는 담즙 정체성 간질환 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  9. 제7항에 있어서,
    상기 조성물은 장 조직의 섬유화 억제 및 염증성 사이토카인 억제를 특징으로 하는 담즙 정체성 간질환 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  10. 베타-라파촌 (β-lapachone) 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는 담즙 정체성 간질환 예방 또는 개선용 건강기능식품.
  11. 제10항에 있어서,
    상기 담즙 정체성 간질환은 염증성 장질환을 동반하는 것을 특징으로 하는 담즙 정체성 간질환 예방 또는 개선용 건강기능식품.
  12. 제11항에 있어서,
    상기 염증성 장질환은 크론병 또는 궤양성 대장염인 것을 특징을 하는 담즙 정체성 간질환 예방 또는 개선용 건강기능식품.
PCT/KR2021/013732 2020-10-08 2021-10-06 베타-라파촌을 유효성분으로 포함하는 담즙 정체성 간질환 예방 또는 치료용 약학 조성물 WO2022075756A1 (ko)

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