WO2022025229A1

WO2022025229A1 - 癒着防止用組成物

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Publication number: WO2022025229A1
Application number: PCT/JP2021/028275
Authority: WO
Inventors: 大知伊藤; 誠一太田; 潔長谷川; 三津子伊佐次; 大地田中
Original assignee: 持田製薬株式会社; 国立大学法人東京大学
Priority date: 2020-07-31
Filing date: 2021-07-30
Publication date: 2022-02-03
Also published as: US20230293782A1; CN116133702A; JPWO2022025229A1; EP4190368A1; AU2021318211A1

Abstract

癒着防止効果の高い癒着防止材が求められていた。　少なくとも一部が硬化剤で架橋された、アルギン酸塩を含有する、シート状の癒着防止材であって、　前記癒着防止材を、直径８ｍｍの略円形となるように裁断したサンプルを、寒天の略上面まで生理食塩水を添加したシャーレの寒天上にメッシュを介して静置し、振幅２５ｍｍ、振とう数４０回／分でシャーレを振とうし、少なくとも１つの任意の時点でサンプル重量を測定する溶解試験を行った際に、以下の（１）および（２）を満たす癒着防止材；（１）サンプル重量が０．０１ｇ未満となるまでの所要時間が試験開始から５時間以上、３６時間以内である、および（２）サンプル重量が最大重量に達するまでの所要時間が試験開始から１０時間以内である。

Description

癒着防止用組成物

　本発明は、癒着防止材、およびその製造方法に関する。

　癒着とは、互いに分離しているべき組織の表面が線維性の組織で連結または融合された状態のことをいう。癒着は、外傷や炎症に伴い組織の表面にフィブリンを含む滲出液が生じ、この滲出液が器質化して組織表面が連結または融合されることにより生じる。外科手術において組織の表面にできる外傷や、外傷により引き起こされる炎症、および外科手術において組織表面が乾燥することによる炎症は、癒着が生じる原因となっている。
　癒着は、時に、不妊、腸の通過障害、慢性骨盤痛の原因となり得る。また、外科手術後に生じた癒着を剥離するために、再度の外科手術が必要となることもある。例えば、肝臓がんの再発例に対しては複数回の手術が有効であるが、再手術適用の可否判断、治療のリスク、手術時の出血量、手術時間等は、いずれも前回の手術-後の癒着防止に大きく左右される。これらのことから、癒着を防止する必要があり、癒着防止のためにこれまでに様々な手段が講じられている。
　癒着防止のためのそのような手段のいくつかは、外傷または炎症部位とその隣接組織の間に配置して組織の連結または融合を防止する物理的バリアを設けることである。そのような物理的バリアとしては、シート状のものなどが知られている。
　具体的には、シート状のものとしては、ポリテトラフルオロエチレン（ＰＴＦＥ）フィルム（Ｐｒｅｃｌｕｄｅ（商品名）（ＷＬ　Ｇｏｒｅ　ａｎｄ　Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｉｎｃ．））、ヒアルロン酸（ＨＡ）とカルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）を含有するシート（Ｓｅｐｒａｆｉｌｍ（商品名）（Ｇｅｎｚｙｍｅ　ＧｍｂＨ））、再生酸化セルロースシート（ＩＮＴＥＲＣＥＥＤ（商品名）（Ｊｏｈｎｓｏｎ＆Ｊｏｈｎｓｏｎ））などがある。このうちＰＴＦＥフィルムは、生分解性でないため、体内に残存するという問題がある。ＨＡとＣＭＣを含有するシートおよび再生酸化セルロースシートは、生分解性であるものの、肝切除後に生じる癒着のような重篤な癒着を完全に防止できず、癒着防止の効果の点で改善の余地があった。
　ここで、コラーゲンなどのタンパク質や、カルボキシメチルセルロース、ヒアルロン酸、アルギン酸などの多糖から選択される生体適合性の材料をシート状、粒子状にして、医療用吸収物質、医療用貼付材、癒着防止材、生体組織補強材料などとして用いることが知られている（特許文献１～６）。
　また、特許文献７および８には、少なくとも一部が硬化剤で架橋された、低エンドトキシンアルギン酸の１価金属塩のスポンジ状の第１の層および第２の層を含み、第１の層のアルギン酸の１価金属塩の重量平均分子量が、第２の層のアルギン酸の１価金属塩の重量平均分子量よりも高い、生体に適用可能なスポンジ状積層体を含む、癒着防止材が記載されている。
　また、特許文献９には、アルギン酸組成物および架橋剤を含む術後癒着防止用のデバイスが記載されている。

特開昭４８－７９８７０号公報特開２００３－１２６２３５号公報国際公開第２００５／２６２１４号特開２０１１－２５０１３号公報特開２０１３－１６５８８４号公報特表２０１６－５０２８７４号公報国際公開第２０１８／０１２６０５号公報国際公開第２０１９／１３８５８３号公報米国公開第２０１２／００３９９５９号公報

　このような状況の下、新たな癒着防止材が求められていた。好ましくは、癒着防止効果が高い、創傷部の癒着とｄｅ　ｎｏｖｏ癒着の両方を抑えることができる、適用した生体に悪影響を及ぼさない、創傷部の治癒を妨げない、腸管吻合などにも使用できる、内視鏡手術においてトロッカーを介した適用が容易である、貼付位置を調整して貼り直すことが可能である、工業的な生産に適している、等の少なくとも一つの性能を有する癒着防止材が求められていた。

　本発明者らは、臨床における種々の手術を想定した動物による癒着モデルにおいて、フィルム（シート）状癒着防止材の長所とスプレー（液・ゲル・粉体）状癒着防止材の長所とを兼備する癒着防止材について鋭意検討を重ねた結果、所定の溶解試験において特定の条件を満たす癒着防止材が、術局所の癒着防止のみならず、適用領域の広い範囲において安定して優れた癒着防止効果を有すること、工業的な生産に適していることなどを見出し、本発明を完成するに至った。

　本発明は以下のとおりである。
［１－１］　少なくとも一部が硬化剤で架橋された、アルギン酸塩を含有する、シート状の癒着防止材であって、
　前記癒着防止材を、直径８ｍｍの略円形となるように裁断したサンプルを、寒天の略上面まで生理食塩水を添加したシャーレの寒天上にメッシュを介して静置し、振幅２５ｍｍ、振とう数４０回／分でシャーレを振とうし、少なくとも１つの任意の時点でサンプル重量を測定する溶解試験を行った際に、以下の（１）および（２）を満たす癒着防止材；
（１）サンプル重量が０．０１ｇ未満となるまでの所要時間が試験開始から５時間以上、３６時間以内である、および
（２）サンプル重量が最大重量に達するまでの所要時間が試験開始から１０時間以内である。
［１－２］　癒着防止材が第１の層および第２の層を含む、［１－１］に記載の癒着防止材。
［１－３］　アルギン酸塩の総量がアルギン酸ナトリウムの重量に換算して１．４ｍｇ／ｃｍ^２以上２．８ｍｇ／ｃｍ^２以下である、［１－１］または［１－２］に記載の癒着防止材。
［１－４］　硬化剤がカルシウムイオン化合物であり、カルシウム総量が塩化カルシウムの重量に換算して、０．１４ｍｇ／ｃｍ^２以上０．３０ｍｇ／ｃｍ^２以下である、［１－１］～［１－３］のいずれか１項に記載の癒着防止材。
［１－５］　シート状の癒着防止材の厚みが１００μｍ以上５００μｍ以下である、［１－１］～［１－４］のいずれか１項に記載の癒着防止材。
［１－６］　シート状の癒着防止材が、プレスされたものである、［１－１］～［１－５］のいずれか１項に記載の癒着防止材。
［１－７］　第１の層の溶解速度が第２の層よりも遅い、［１－２］～［１－６］のいずれか１項に記載の癒着防止材。
［１－８］癒着防止材１ｃｍ^２あたりに含まれるアルギン酸塩の総量が、アルギン酸ナトリウムの重量に換算して、２．１ｍｇ～２．４ｍｇであり、第２の層（上層）／第１の層（下層）のアルギン酸塩の配分比が２～３であり、硬化剤がカルシウムイオン化合物であり、癒着防止材１ｃｍ^２あたりに含まれる硬化剤の総量が、塩化カルシウムの重量に換算して、０．２４ｍｇ～０．２７ｍｇであり、第２の層（上層）／第１の層（下層）の硬化剤の配分比が０．２～０．４である、［１－２］～［１－７］のいずれか１項に記載の癒着防止材。
［１－９］　癒着防止材が単層である、［１－１］に記載の癒着防止材。
［１－１０］　以下の工程を含む、［１－１］～［１－９］のいずれか１項に記載の癒着防止材の製造方法。
　（１）アルギン酸の１価金属塩の水溶液を硬化剤により硬化（ゲル化）させる工程、
　（２）所望により、硬化（ゲル化）したアルギン酸の１価金属塩を凍結する工程、
　（３）所望により、第１の層の上で、アルギン酸の１価金属塩の水溶液を硬化剤により硬化（ゲル化）して第２の層を形成する工程、
　（４）所望により、さらに、（２）の工程、（３）の工程を繰り返し、第３の層を形成する工程、
　（５）得られた硬化物（ゲル）を凍結乾燥する工程。
［１－１１］　前記アルギン酸の１価金属塩が、１００，０００以上の重量平均分子量のアルギン酸の１価金属塩を少なくとも含む、［１－１０］に記載の製造方法。

［２－１］　少なくとも一部が硬化剤で架橋された、アルギン酸塩を含有する、シート状の癒着防止材であって、アルギン酸塩の総量がアルギン酸ナトリウムの重量に換算して１．４ｍｇ／ｃｍ^２以上２．８ｍｇ／ｃｍ^２以下である、癒着防止材。
［２－２］　癒着防止材が第１の層および第２の層を含む、［２－１］に記載の癒着防止材。
［２－３］　硬化剤がカルシウムイオン化合物であり、カルシウム総量が塩化カルシウムの重量に換算して、０．１４ｍｇ／ｃｍ^２以上０．３０ｍｇ以下／ｃｍ^２である、［２－１］または［２－２］に記載の癒着防止材。
［２－４］　シート状の癒着防止材の厚みが１００μｍ以上５００μｍ以下である、［２－１］～［２－３］のいずれか１項に記載の癒着防止材。
［２－５］　シート状の癒着防止材が、プレスされたものである、［２－１］～［２－４］のいずれか１項に記載の癒着防止材。
［２－６］　第１の層の溶解速度が第２の層よりも遅い、［２－２］～［２－５］のいずれか１項に記載の癒着防止材。
［２－７］癒着防止材１ｃｍ^２あたりに含まれるアルギン酸塩の総量が、アルギン酸ナトリウムの重量に換算して、２．１ｍｇ～２．４ｍｇであり、第２の層（上層）／第１の層（下層）のアルギン酸塩の配分比が２～３であり、硬化剤がカルシウムイオン化合物であり、癒着防止材１ｃｍ^２あたりに含まれる硬化剤の総量が、塩化カルシウムの重量に換算して、０．２４ｍｇ～０．２７ｍｇであり、第２の層（上層）／第１の層（下層）の硬化剤の配分比が０．２～０．４である、［２－２］～［２－６］のいずれか１項に記載の癒着防止材。
［２－８］　癒着防止材が単層である、［２－１］に記載の癒着防止材。
［２－９］　以下の工程を含む、［２－１］～［２－８］のいずれか１項に記載の癒着防止材の製造方法。
　（１）アルギン酸の１価金属塩の水溶液を硬化剤により硬化（ゲル化）させる工程、
　（２）所望により、硬化（ゲル化）したアルギン酸の１価金属塩を凍結する工程、
　（３）所望により、第１の層の上で、アルギン酸の１価金属塩の水溶液を硬化剤により硬化（ゲル化）して第２の層を形成する工程、
　（４）所望により、さらに、（２）の工程、（３）の工程を繰り返し、第３の層を形成する工程、
　（５）得られた硬化物（ゲル）を凍結乾燥する工程。
［２－１０］　前記アルギン酸の１価金属塩が、１００，０００以上の重量平均分子量のアルギン酸の１価金属塩を少なくとも含む、［２－９］に記載の製造方法。

［３－１］　少なくとも一部が硬化剤で架橋された、アルギン酸塩を含有する、シート状の癒着防止材であって、
　前記癒着防止材を、直径８ｍｍの略円形となるように裁断したサンプルを、寒天の略上面まで生理食塩水を添加したシャーレの寒天上にメッシュを介して静置し、振幅２５ｍｍ、振とう数４０回／分でシャーレを振とうし、少なくとも１つの任意の時点でサンプル重量を測定する溶解試験を行った際に、以下の（１）および（２）を満たす癒着防止材を、癒着防止を必要とする対象に適用することを含む、癒着防止方法；
（１）サンプル重量が０．０１ｇ未満となるまでの所要時間が試験開始から５時間以上、３６時間以内である、および
（２）サンプル重量が最大重量に達するまでの所要時間が試験開始から１０時間以内である。
［３－１ａ］　少なくとも一部が硬化剤で架橋された、アルギン酸塩を含有する、シート状の癒着防止材であって、アルギン酸塩の総量がアルギン酸ナトリウムの重量に換算して１．４ｍｇ／ｃｍ^２以上２．８ｍｇ／ｃｍ^２以下である癒着防止材を、癒着防止を必要とする対象に適用することを含む、癒着防止方法。
［３－２］　癒着防止材が第１の層および第２の層を含む、［３－１］または［３－１ａ］に記載の癒着防止方法。
［３－３］　アルギン酸塩の総量がアルギン酸ナトリウムの重量に換算して１．４ｍｇ／ｃｍ^２以上２．８ｍｇ／ｃｍ^２以下である、［３－１］または［３－２］に記載の癒着防止方法。
［３－４］　硬化剤がカルシウムイオン化合物であり、カルシウム総量が塩化カルシウムの重量に換算して、０．１４ｍｇ／ｃｍ^２以上０．３０ｍｇ／ｃｍ^２以下である、［３－１］～［３－３］のいずれか１項に記載の癒着防止方法。
［３－５］　シート状の癒着防止材の厚みが１００μｍ以上５００μｍ以下である、［３－１］～［３－４］のいずれか１項に記載の癒着防止方法。
［３－６］　シート状の癒着防止材が、プレスされたものである、［３－１］～［３－５］のいずれか１項に記載の癒着防止方法。
［３－７］　第１の層の溶解速度が第２の層よりも遅い、［３－２］～［３－６］のいずれか１項に記載の癒着防止方法。
［３－８］癒着防止材１ｃｍ^２あたりに含まれるアルギン酸塩の総量が、アルギン酸ナトリウムの重量に換算して、２．１ｍｇ～２．４ｍｇであり、第２の層（上層）／第１の層（下層）のアルギン酸塩の配分比が２～３であり、硬化剤がカルシウムイオン化合物であり、癒着防止材１ｃｍ^２あたりに含まれる硬化剤の総量が、塩化カルシウムの重量に換算して、０．２４ｍｇ～０．２７ｍｇであり、第２の層（上層）／第１の層（下層）の硬化剤の配分比が０．２～０．４である、［３－２］～［３－７］のいずれか１項に記載の癒着防止方法。
［３－９］　癒着防止材が単層である、［３－１］または［３－１ａ］に記載の癒着防止方法。

［４－１］　少なくとも一部が硬化剤で架橋された、アルギン酸塩を含有する、シート状の癒着防止材であって、
　前記癒着防止材を、直径８ｍｍの略円形となるように裁断したサンプルを、寒天の略上面まで生理食塩水を添加したシャーレの寒天上にメッシュを介して静置し、振幅２５ｍｍ、振とう数４０回／分でシャーレを振とうし、少なくとも１つの任意の時点でサンプル重量を測定する溶解試験を行った際に、以下の（１）および（２）を満たす癒着防止材を、対象の創傷部に適用する、癒着防止において使用されるためのアルギン酸塩；
（１）サンプル重量が０．０１ｇ未満となるまでの所要時間が試験開始から５時間以上、３６時間以内である、および
（２）サンプル重量が最大重量に達するまでの所要時間が試験開始から１０時間以内である。
［４－１ａ］　少なくとも一部が硬化剤で架橋された、アルギン酸塩を含有する、シート状の癒着防止材であって、アルギン酸塩の総量がアルギン酸ナトリウムの重量に換算して１．４ｍｇ／ｃｍ^２以上２．８ｍｇ／ｃｍ^２以下である癒着防止材を、対象の創傷部に適用する、癒着防止において使用されるためのアルギン酸塩。
［４－２］　癒着防止材が第１の層および第２の層を含む、［４－１］または［４－１ａ］に記載のアルギン酸塩。
［４－３］　アルギン酸塩の総量がアルギン酸ナトリウムの重量に換算して１．４ｍｇ／ｃｍ^２以上２．８ｍｇ／ｃｍ^２以下である、［４－１］または［４－２］のいずれか１項に記載のアルギン酸塩。
［４－４］　硬化剤がカルシウムイオン化合物であり、カルシウム総量が塩化カルシウムの重量に換算して、０．１４ｍｇ／ｃｍ^２以上０．３０ｍｇ／ｃｍ^２以下である、［４－１］～［４－３］のいずれか１項に記載のアルギン酸塩。
［４－５］　シート状の癒着防止材の厚みが１００μｍ以上５００μｍ以下である、［４－１］～［４－４］のいずれか１項に記載のアルギン酸塩。
［４－６］　シート状の癒着防止材が、プレスされたものである、［４－１］～［４－５］のいずれか１項に記載のアルギン酸塩。
［４－７］　第１の層の溶解速度が第２の層よりも遅い、［４－２］～［４－６］のいずれか１項に記載のアルギン酸塩。
［４－８］癒着防止材１ｃｍ^２あたりに含まれるアルギン酸塩の総量が、アルギン酸ナトリウムの重量に換算して、２．１ｍｇ～２．４ｍｇであり、第２の層（上層）／第１の層（下層）のアルギン酸塩の配分比が２～３であり、硬化剤がカルシウムイオン化合物であり、癒着防止材１ｃｍ^２あたりに含まれる硬化剤の総量が、塩化カルシウムの重量に換算して、０．２４ｍｇ～０．２７ｍｇであり、第２の層（上層）／第１の層（下層）の硬化剤の配分比が０．２～０．４である、［４－２］～［４－７］のいずれか１項に記載のアルギン酸塩。
［４－９］　癒着防止材が単層である、［４－１］または［４－１ａ］に記載のアルギン酸塩。

　本発明によれば、新たな癒着防止材が提供される。好ましい態様によれば、癒着防止効果が高い、創傷部の癒着とｄｅ　ｎｏｖｏ癒着の両方を抑えることができる、適用した生体に悪影響を及ぼさない、創傷部の治癒を妨げない、腸管吻合などにも使用できる、内視鏡手術においてトロッカーを介した適用が容易である、貼付位置を調整して貼り直すことが可能である、等の少なくとも一つの性能を有する癒着防止材を提供することができる。

癒着防止材の一例を示す図である。実施例１に係る癒着防止材の溶解試験の結果を示すグラフである。実施例２に係る癒着防止材の溶解試験の結果を示すグラフである。実施例３に係る癒着防止材の溶解試験の結果を示すグラフである。実施例４に係る癒着防止材の溶解試験の結果を示すグラフである。実施例５に係る癒着防止材の溶解試験の結果を示すグラフである。実施例６に係る癒着防止材の溶解試験の結果を示すグラフである。実施例７に係る癒着防止材の溶解試験の結果を示すグラフである。実施例８に係る癒着防止材の溶解試験の結果を示すグラフである。実施例９に係る癒着防止材の溶解試験の結果を示すグラフである。実施例１０に係る癒着防止材の溶解試験の結果を示すグラフである。実施例１１に係る癒着防止材の溶解試験の結果を示すグラフである。実施例１２に係る癒着防止材の溶解試験の結果を示すグラフである。実施例１３に係る癒着防止材の溶解試験の結果を示すグラフである。比較例１に係る癒着防止材の溶解試験の結果を示すグラフである。比較例２に係る癒着防止材の溶解試験の結果を示すグラフである。比較例３に係る癒着防止材の溶解試験の結果を示すグラフである。比較例４に係る癒着防止材の溶解試験の結果を示すグラフである。比較例５に係る癒着防止材の溶解試験の結果を示すグラフである。比較例６に係る癒着防止材の溶解試験の結果を示すグラフである。ラット肝臓切除モデルでの癒着形成の評価を示す図である（非離断面および離断面）。ミニブタ脾臓・腹壁癒着モデルでの癒着形成の評価を示す図である（局所）。ミニブタ脾臓・腹壁癒着モデルでの癒着形成の評価を示す図である（周辺部）。ミニブタ二期肝臓切除モデルでの癒着形成の評価を示す図である。ラット一部肝切除モデルでの癒着形成の評価を示す図である（Ｇｒａｄｅ）。ラット一部肝切除モデルでの癒着形成の評価を示す図である（Ｅｘｔｅｎｔ）。

　以下、本発明を詳細に説明するが、以下の実施の形態は本発明を説明するための例示であり、本発明はその要旨を逸脱しない限りさまざまな形態で実施することができる。

１．癒着防止
　「癒着」とは、互いに分離しているべき組織の表面が線維性の組織で連結または融合された状態のことをいう。癒着の原因は、外科手術において組織の表面にできる外傷や、外傷により引き起こされる炎症、外科手術において組織表面が乾燥することによる炎症などである。これらの外傷や炎症に伴い組織の表面にフィブリンを含む滲出液が生じ、この滲出液が器質化して組織表面が連結または融合されることにより癒着が形成される。
　「癒着防止」とは、癒着の形成を減少させることをいう。癒着防止は、必ずしも癒着の形成を完全に防止することまでも必要とせず、癒着防止材を適用しなかった場合の状態と比較して、癒着の形成が防止されていればよい。すなわち「癒着防止」は癒着の軽減と言い換えてもよく、例えば、癒着の頻度、範囲および程度から選ばれる少なくとも１つが軽減されていればよい。「癒着防止」は、例えば、実施例に記載した癒着のＥｘｔｅｎｔ評価を行った場合に、癒着防止材を適用しなかった場合の平均癒着のＥｘｔｅｎｔと比較して、平均癒着のＥｘｔｅｎｔがより低くなっていればよい。「癒着防止」は、好ましくは、外科手術に起因して生じる癒着、より好ましくは、外科手術に起因して生じる腹膜癒着の防止である。すなわち、「癒着防止」は、好ましくは、術後の癒着防止である。
　また、対象となる癒着としては、手術時の対象臓器の切除した部位の癒着およびｄｅ　ｎｏｖｏ癒着（手術部位以外の周辺および腹腔および体内での広範な部位との癒着）がある。

２．癒着防止材
　ここでは、次の癒着防止材が提供される。
　少なくとも一部が硬化剤で架橋された、アルギン酸塩を含有する、シート状の癒着防止材であって、　前記癒着防止材を、後述の溶解試験、すなわち直径８ｍｍの略円形となるように裁断した重量約２ｍｇのサンプルを、寒天の略上面まで生理食塩水を添加したシャーレの寒天上にメッシュを介して静置し、振幅２５ｍｍ、振とう数４０回／分でシャーレを振とうし、少なくとも１つの任意の時点でサンプル重量を測定する溶解試験を行った際に、以下の（１）および（２）を満たす癒着防止材を提供する。
（１）サンプル重量が０．０１ｇ未満となるまでの所要時間が試験開始から５時間以上、３６時間以内である、および
（２）サンプル重量が最大重量に達するまでの所要時間が試験開始から１０時間以内である。
　なお、上記寒天に代えて、天然または合成の水分保持能を有するゲル、例えば、ゼラチン、アガーなどを用いることもできる。

　癒着防止材の形状はシート状であれば特に限定されず、適用する表面の範囲、形状、凹凸などを考慮し適宜選択することができる。癒着防止材の形状は、例えば、長方形（正方形を含む）の平板状であってもよいし、あるいは円板状、などの形状をとることができる。好ましくは長方形（正方形を含む）の平板状または円板状である。平板状や円板状のとき、適用する表面の範囲、形状、凹凸などに合わせて癒着防止材をさらに切断して表面に適用することができる。
　癒着防止材は、プレスされたものであってもよく、プレスされたものが好ましい。具体的には、プレスされた癒着防止材とは、スポンジ状の材料をプレスすることにより得られたものである。「スポンジ状」とは、多孔性を有した状態を意味する。硬化剤によって硬化したゲルを凍結乾燥することにより、多孔性を有するスポンジ状組成物が得られる。プレスは、手動で、あるいはプレス機によって積層体を挟み、加圧することで行う。前記スポンジ状組成物をプレス（加圧）することにより、孔が潰れてスポンジ状組成物は変形し、シート状の組成物となる。プレスは、シート状組成物の水分吸収および溶解時間に影響を及ぼす。また、一般的に用いられる圧縮、薄層化などの工程も、ここでいうプレスに含まれるものとする。プレス圧力としては、例えば１ｋＰａ～１００ＭＰａが挙げられ、より好ましくは１０ｋＰａ～８０ＭＰａ、さらに好ましくは１００ｋＰａ～６０Ｍｐａが挙げられる。手動でのプレスは、積層体に均一に圧がかかるように手で押圧できるもの、例えば、アクリル定規、アクリル板、ガラス板、金属板等を介して行う。また、用いるプレス機としては、例えば、ホットプレス機（アズワン株式会社製　ＡＨ－１Ｔ）が挙げられる。
　プレスされた癒着防止材の高さ（厚み）は、好ましくは、１００～５００μｍ、より好ましくは１５０～４５０μｍ、さらに好ましくは２００～４００μｍである。
　さらに好ましい態様の癒着防止材は、長方形（正方形を含む）の平板状であり、かつそのような高さ（厚み）であることに加えて、縦と横の長さは、それぞれ、１ｍｍ～３００ｍｍｘ１ｍｍ～３００ｍｍであり、より好ましくは、３ｍｍ～２００ｍｍｘ３ｍｍ～２００ｍｍであり、さらに好ましくは、５ｍｍ～１５０ｍｍｘ５ｍｍ～１５０ｍｍである。
　さらに別の好ましい態様の癒着防止材は、円板状であり、かつそのような高さ（厚み）であることに加えて、直径は、１０ｍｍ～３００ｍｍであり、より好ましくは、２０ｍｍ～２００ｍｍであり、さらに好ましくは、３０ｍｍ～１５０ｍｍである。プレスされてシートとなった材は、丸めたり、折りたたむことも可能で、丸めた後も、容易にシート状に復元可能な適度な柔らかさと復元力を有する。
　なお、いくつかの態様では、プレスされた癒着防止材の厚みは均一である。また、別のいくつかの態様では、厚みは均一でなくても良く、一方が厚くて他方が薄い、傾斜構造であってもよい。また、本明細書においては、アルギン酸塩を含有するスポンジ状組成物をプレスしたものを、アルギン酸シートとも称する。

　癒着防止材は、少なくとも一部が硬化剤で架橋された、アルギン酸塩を含有する。好ましくは、癒着防止材は、アルギン酸の１価金属塩を含有する。「硬化剤」および「アルギン酸の１価金属塩」は後述の通りである。

　癒着防止材の溶解試験について詳述する。
　癒着防止材は、以下の溶解試験を行ったときに所定の条件を満たすものである。
　溶解試験では、シャーレ、寒天、生理食塩水、サンプル、メッシュおよびシェーカー（振とう機）を用いる。シャーレは寒天およびサンプルを載せたメッシュが入るものであれば、特に限定されないが、例えば、直径10cmのデッシュ(製品コード:3020-100、IWAKI社製)等を用いることができる。寒天は、例えば、２％寒天溶液をトレイで固化させたものを用いることができ、濃度は適宜変更可能である。また、上記寒天に代えて、水分保持能を有し、一定強度のゲルを形成する天然または合成のもの、例えば、ゼラチン、アガーなどを用いることもできる。サンプルは、癒着防止材を直径８ｍｍの略円形状となるように裁断することにより得られる。サンプルの裁断方法は特に限定されないが、例えば、直径８ｍｍの生検トレパンを用いて、前記サイズ、形状のサンプルを得ることができる。
このとき測定するサンプル重量を、測定開始時のサンプル重量とする。
　次に、シャーレに、所定のサイズ（具体的には、１ｃｍ×１ｃｍのサイズ）に切った、厚み０．７ｃｍの寒天を静置し、生理食塩水を入れる。生理食塩水の量は、生理食塩水をシャーレに入れたときに寒天の略上面に届くような量とする。
　次に、シャーレに入れた寒天の上に、メッシュに載せたサンプルを静置し、シェーカー（振とう機）にセットして振とうを開始する。ここでは、この振とう開始を、「試験開始」ということがある。ここで使用するメッシュは特に限定されないが、例えば、セルストレーナー（１００μｍ、ＦＡＬＣＯＮ社）の側面を切り落として作成したメッシュ等を使用することができる。なお、メッシュの風袋重量はあらかじめ電子天秤を用いて測定しておく。
　振とう機も特に限定されないが、例えば、TRIPLE SHAKER NR-80（TAITEC社製）などが例示される。振とうは、振幅２５ｍｍ、振とう数４０回／分でシャーレを振とうすることにより行う。ここで、生理食塩水の水面は寒天の上面と略同じ高さであるため、振とう中に、ときどきサンプルに生理食塩水がかかる。振とう時の温度は室温で実施する。
　次に、試験開始から少なくとも１つの任意の時点でサンプル重量を測定する。そして、測定サンプルが完全に溶解したことを目視により確認したら、試験を終了する。ここで、「少なくとも１つの任意の時点」は、例えば、試験開始から測定サンプルが完全に溶解するまでの間の任意の少なくとも１つの時点であり、例えば、試験開始から、０．５時間、１時間、１．５時間、２時間、２．５時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１１時間、１２時間、１３時間、１４時間、１５時間、１６時間、１７時間、１８時間、１９時間、２０時間、２１時間、２２時間、２３時間、２４時間、２５時間、２６時間、２７時間、２８時間、３０時間、３３時間、４８時間、４９時間、５１時間、５２時間、５４時間、５５時間、５８時間、１４４時間および１６８時間のうちの少なくも１つの任意の時点を挙げることができる。
　サンプル重量の測定は、時間毎にメッシュを取り出し、水分を拭き取った後に、電子天秤を用いて測定する。重量測定後、メッシュをシャーレの寒天上に戻し、規定量、例えば２００μＬの生理食塩水を添加する。

　溶解試験は、より詳細には、後述の実施例に記載の方法により行うことができる。

　癒着防止材は、以上の溶解試験を行った際に、以下の（１）および（２）を満たす。
（１）サンプル重量が０．０１ｇ未満となるまでの所要時間が試験開始から５時間以上、３６時間以内である、および
（２）サンプル重量が最大重量に達するまでの所要時間が試験開始から１０時間以内である。

　いくつかの態様の癒着防止材は、例えばヒト等の対象の生体内において、水分を吸収して膨潤し、溶解しつつ水分吸収量が飽和状態に達し、最終的にはすべて溶解する。
　この場合、上記（１）は、癒着防止材が、生体内で完全に溶解するまでの時間が早すぎず、かつ、生体内に長く残存し続けないことを表す。
　また、上記（２）は、癒着防止材が、生体内において速やかに吸水して膨潤することを表す。

　上記（１）に関して、「５時間以上、３６時間以内」は、例えば、試験開始から５～３６時間、１０時間～３０時間、１２時間～２４時間等であり得る。
　また、上記（２）に関して、「１０時間以内」は、例えば、１０時間以内、９．５時間以内、９時間以内、８．５時間以内、８時間以内、７時間以内、６時間以内等であり得る。
　ここで、上記（２）における「サンプル重量が最大重量に達するまでの所要時間」は、上記（１）における「サンプル重量が０．０１ｇ未満となるまでの所要時間」よりも短い時間となる。言い換えると、上記（１）における「サンプル重量が０．０１ｇ未満となるまでの所要時間」は、上記（２）における「サンプル重量が最大重量に達するまでの所要時間」よりも長い時間となる。
　なお、本明細書において、数値範囲に「～」の記号を用いる場合、「下限値以上、上限値以下」を意味するものであり、記号の両端の数値は当該範囲に含まれる。

　癒着防止材が、前記（１）および（２）を満たすようにするためには、例えば、硬化剤の総量を調整すること、アルギン酸の１価金属塩の総量を調整すること、上層／下層の硬化剤の配分比を調整すること、上層／下層のアルギン酸の１価金属塩の配分比を調整すること、プレス後の厚みを調整すること、などが挙げられる。

　硬化剤の総量を調整することについて、例えば、硬化剤としてカルシウムイオン化合物を使用する場合、硬化剤の量を塩化カルシウムの重量に換算して０．１４ｍｇ／ｃｍ^２以上とすることにより、局所およびｄｅ　ｎｏｖｏの癒着防止効果が得られ、（１）の条件を満たすことができる。また、硬化剤の量を塩化カルシウムの重量に換算して０．３０ｍｇ／ｃｍ^２以下とすることにより、製造時に均質な癒着防止材を得ることができ、工業的な生産性が向上する他、（１）および（２）の条件を満たすことができる。
　アルギン酸の１価金属塩の総量を調整することについて、例えば、アルギン酸の１価金属塩の総量をアルギン酸ナトリウムの重量に換算して１．４ｍｇ／ｃｍ^２以上とすることにより、局所およびｄｅ　ｎｏｖｏの癒着防止効果が得られ、（１）の条件を満たすことができる（癒着防止材の溶解速度を適当な速度まで遅くすることができる）。また、アルギン酸の１価金属塩の総量をアルギン酸ナトリウムの重量に換算して２．８ｍｇ／ｃｍ^２以下とすることにより、生体内での過度の残留が軽減された癒着防止材が得られる他、（１）の条件を満たすことができる（癒着防止材の溶解速度を適当な速度まで早めることができる）。
　上層／下層の硬化剤の配分比を調整することについて、例えば、上層／下層の硬化剤の配分比を０．１～１．２とすることにより、局所およびｄｅ　ｎｏｖｏの癒着防止効果が得られる。本発明のいくつかの態様においては、上層／下層の硬化剤の配分比として、好ましくは０．１～０．６が挙げられ、より好ましくは、０．２～０．４が挙げられる。
　上層／下層のアルギン酸の１価金属塩の配分比を調整することについて、例えば、上層／下層のアルギン酸の１価金属塩の配分比を１～３とすることにより、局所およびｄｅ　ｎｏｖｏの癒着防止効果が得られる。本発明のいくつかの態様においては、上層／下層のアルギン酸の１価金属塩の配分比として、好ましくは２～３が挙げられ、より好ましくは３が挙げられる。
　プレス後の厚みを調整することについて、例えば、プレス後の厚みを１００～５００μｍとすることにより、内視鏡手術下で、トロッカーを介した挿入が可能になる等、良好な操作性が得られる。また、プレス後の厚みを上記範囲とすることで、（１）および（２）の条件を満たすことができる。

　硬化剤がカルシウムイオン化合物である場合、癒着防止材７２ｃｍ^２あたりに含まれる硬化剤の総量は、塩化カルシウムの重量に換算して、例えば、１０ｍｇ以上かつ２２ｍｇ未満、好ましくは、１３ｍｇ～２０ｍｇ、より好ましくは、１７ｍｇ～１９ｍｇとする。
　また、いくつかの態様では、硬化剤がカルシウムイオン化合物である場合、癒着防止材１ｃｍ^２あたりに含まれる硬化剤の総量を、例えば、０．１４ｍｇ～０．３０ｍｇ、好ましくは、０．１８ｍｇ～０．２８ｍｇ、より好ましくは、０．２４ｍｇ～０．２７ｍｇとする。
　なお、「総量」は、「使用量」、「配合量」および「添加量」等に言い換えることができる。また、「総量」は、癒着防止材の厚みを１００～５００μｍとした場合の量を意味する。

　癒着防止材は、層状の構造を持たないもの（単層）、層状の構造を有するもの、あるいは２層以上の積層体の構造を有するものでもよい。２層以上の積層体は、例えば、２層、３層、４層、または５層の積層体であり、好ましくは、２層または３層の積層体であり、より好ましくは、２層の積層体である。癒着防止材が、積層体である場合、各層が明瞭な境界面を持った構造を有していてもよいし、あるいは、各層が明瞭な境界面を持たない構造を有していてもよい。

　２層構造を有する癒着防止材の一例を、図１に示す。癒着防止材１は、第１の層２と第２の層３とを含む積層体４を含む。積層体４は、スポンジ状積層体を必要に応じてプレスすることにより得られたものである。第１の層２と第２の層３は、プレス前は、それぞれスポンジ状である。
　「第１の層」は、積層体を対象に適用したときに下層となる層、すなわち、対象の適用すべき組織の表面と接触する側の層である。「第２の層」は、積層体を対象に適用したときに上層となる層、すなわち、対象の適用すべき組織の表面と接触しない側の層である。癒着防止材は、生体に適用可能である。「生体に適用可能」とは、医療材料として適用すべき組織の表面に配置することが可能であることを意味する。
　癒着防止材に用いられる生体に適用可能な積層体は、上記の第１の層、第２の層以外に、任意の成分を含む第３の層を有していてもよい。
　いくつかの態様では、少なくとも一部が硬化剤で架橋されたアルギン酸の１価金属塩をそれぞれ含む第１の層および第２の層を含む生体に適用可能な積層体を含み、第１の層の溶解速度が、第２の層よりも遅い。第１の層の溶解速度が第２の層の溶解速度よりも遅くなるようにするには、例えば、第１の層のアルギン酸の１価金属塩の重量平均分子量を第２の層よりも高いものとすること、硬化剤の種類を変更する、硬化剤の濃度を変更する、等により第１の層のアルギン酸の１価金属塩の架橋度を第２の層よりも高いものとすること、などが挙げられる。

　第１の層のアルギン酸の１価金属塩の重量平均分子量を第２の層よりも高いものとする場合、第１の層と第２の層で用いるアルギン酸の１価金属塩の重量平均分子量を、それぞれ、例えば、１０，０００～２，０００，０００と、１，０００～１，０００，０００とする。このような重量平均分子量は脱架橋処理、例えばキレート剤溶液に溶解した後にＧＰＣ－ＭＡＬＳ法により測定したものである。
　アルギン酸の１価金属塩は、重量平均分子量の異なるアルギン酸の１価金属塩を複数組み合わせて使用することもできる。例えば、第１の層において、１０，０００～２，０００，０００の範囲内の異なる重量平均分子量を有する複数のアルギン酸の１価金属塩を組み合わせて使用し、かつ／または、第２の層において、１，０００～１，０００，０００の範囲内の異なる重量平均分子量を有する複数のアルギン酸の１価金属塩を組み合わせて使用することができる。組み合わせるアルギン酸の１価金属塩の数は特に限定されず、例えば、１層当たり２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０種以上であってよい。アルギン酸の１価金属塩は、重量平均分子量の異なる、異なる種類の塩を組み合わせてもよいし、重量平均分子量の異なる、同じ種類の塩を組み合わせてもよい。組み合わせの比率も特に限定されず、例えば２種の塩を組み合わせる場合、その比率は、１：１００～１００：１、１：５０～５０：１、１：２５～２５：１、１：１０～１０：１、１：５～５：１、１：４～４：１、１：３～３：１、１：２～２：１、１：１などであってよい。

　いくつかの態様では、癒着防止材７２ｃｍ^２あたりに含まれるアルギン酸の１価金属塩の総量を、アルギン酸ナトリウムの重量に換算して、例えば、１００ｍｇ～２００ｍｇ、好ましくは、１２０ｍｇ～１８０ｍｇ、より好ましくは、１５０ｍｇ～１７０ｍｇとする。
　また、別のいくつかの態様では、癒着防止材１ｃｍ^２あたりに含まれるアルギン酸の１価金属塩の総量を、アルギン酸ナトリウムの重量に換算して、例えば、１．４ｍｇ～２．８ｍｇ、好ましくは、１．７ｍｇ～２．５ｍｇ、より好ましくは、２．１ｍｇ～２．４ｍｇとする。

　本発明のいくつかの態様では、癒着防止材１ｃｍ^２あたりに含まれるアルギン酸塩の総量が、アルギン酸ナトリウムの重量に換算して、２．１ｍｇ～２．４ｍｇであり、第２の層（または上層）／第１の層（または下層）のアルギン酸塩の配分比が２～３であり、硬化剤がカルシウムイオン化合物であり、癒着防止材１ｃｍ^２あたりに含まれる硬化剤の総量が、塩化カルシウムの重量に換算して、０．２４ｍｇ～０．２７ｍｇであり、第２の層（または上層）／第１の層（または下層）の硬化剤の配分比が０．２～０．４であるものが好ましい。

　いくつかの態様では、癒着防止材の製造に用いられるアルギン酸の１価金属塩が、１００，０００以上の重量平均分子量のアルギン酸を少なくとも含む。これにより、癒着防止材の物理的強度を高めることができる。

　好ましい態様の癒着防止材は、Ｓｅｐｒａｆｉｌｍ（商品名）と比較して、柔軟性が高く、割れにくい。

３．アルギン酸塩
　本発明の癒着防止材の原料として用いるアルギン酸塩は、アルギン酸の１価金属塩である。
　「アルギン酸の１価金属塩」は、アルギン酸の構成糖であるマンヌロン酸および／またはグルロン酸の６位のカルボン酸の水素原子を、Ｎａ^＋やＫ^＋などの１価金属イオンとイオン交換することでつくられる水溶性の塩である。アルギン酸の１価金属塩としては、具体的には、アルギン酸ナトリウム、アルギン酸カリウムなどを挙げることができるが、特には、市販品により入手可能なアルギン酸ナトリウムが好ましい。アルギン酸の１価金属塩の溶液は、硬化剤と混合したときにゲルを形成する。

　本発明に用いる「アルギン酸」は、生分解性の高分子多糖類であって、Ｄ－マンヌロン酸（Ｍ）とＬ－グルロン酸（Ｇ）という２種類のウロン酸が直鎖状に重合したポリマーである。より具体的には、Ｄ－マンヌロン酸のホモポリマー画分（ＭＭ画分）、Ｌ－グルロン酸のホモポリマー画分（ＧＧ画分）、およびＤ－マンヌロン酸とＬ－グルロン酸がランダムに配列した画分（ＭＧ画分）が任意に結合したブロック共重合体である。アルギン酸のＤ－マンヌロン酸とＬ－グルロン酸の構成比（Ｍ／Ｇ比）は、主に海藻等の由来となる生物の種類によって異なり、また、その生物の生育場所や季節による影響を受け、Ｍ／Ｇ比が約０．４の高Ｇ型からＭ／Ｇ比が約５の高Ｍ型まで高範囲にわたる。
　アルギン酸類は、褐藻類から抽出された当初は一般的に分子量が大きいが、熱による乾燥、精製などの過程で、徐々に分子量が小さくなる。製造工程の温度等の条件管理、原料とする褐藻類の選択、製造工程における分子量の分画などの手法により分子量の異なるアルギン酸類を製造することができる。さらに、異なる分子量を持つ別ロットのアルギン酸類と混合することにより、目的とする分子量を有するアルギン酸類とすることも可能である。
　本発明で用いられるアルギン酸の１価金属塩は、低エンドトキシン処理されたものであることが好ましい。低エンドトキシン処理は、公知の方法またはそれに準じる方法によって行うことができる。例えば、ヒアルロン酸ナトリウムを精製する、菅らの方法（例えば、特開平９－３２４００１号公報など参照）、β１，３－グルカンを精製する、吉田らの方法（例えば、特開平８－２６９１０２号公報など参照）、アルギネート、ゲランガム等の生体高分子塩を精製する、ウィリアムらの方法（例えば、特表２００２－５３０４４０号公報など参照）、ポリサッカライドを精製する、ジェームスらの方法（例えば、国際公開第９３／１３１３６号パンフレットなど参照）、ルイスらの方法（例えば、米国特許第５５８９５９１号明細書など参照）、アルギネートを精製する、ハーマンフランクらの方法（例えば、Ａｐｐｌ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ（１９９４）４０：６３８－６４３など参照）等またはこれらに準じる方法によって実施することができる。本発明の低エンドトキシン処理は、それらに限らず、洗浄、フィルター（エンドトキシン除去フィルターや帯電したフィルターなど）によるろ過、限外ろ過、カラム（エンドトキシン吸着アフィニティーカラム、ゲルろ過カラム、イオン交換樹脂によるカラムなど）を用いた精製、疎水性物質、樹脂または活性炭などへの吸着、有機溶媒処理（有機溶媒による抽出、有機溶剤添加による析出・沈降など）、界面活性剤処理（例えば、特開２００５－０３６０３６号公報など参照）など公知の方法によって、あるいはこれらを適宜組合せて実施することができる。これらの処理の工程に、遠心分離など公知の方法を適宜組み合わせてもよい。アルギン酸の種類に合わせて適宜選択するのが望ましい。
　エンドトキシンレベルは、公知の方法で確認することができ、例えば、リムルス試薬（ＬＡＬ）による方法、エンドスペシー（登録商標）ＥＳ－２４Ｓセット（生化学工業株式会社）を用いる方法などによって測定することができる。
　本発明に用いられるアルギン酸の１価金属塩のエンドトキシンの処理方法は特に限定されないが、その結果として、生体内吸収性多糖類のエンドトキシン含有量が、リムルス試薬（ＬＡＬ）によるエンドトキシン測定を行った場合に、５００エンドトキシン単位（ＥＵ）／ｇ以下であることが好ましく、さらに好ましくは、１００ＥＵ／ｇ以下、とりわけ好ましくは、５０ＥＵ／ｇ以下、特に好ましくは、３０ＥＵ／ｇ以下である。低エンドトキシン処理されたアルギン酸ナトリウムは、例えば、Ｓｅａ　Ｍａｔｒｉｘ（登録商標）（持田製薬株式会社）、ＰＲＯＮＯＶＡ^ＴＭ　ＵＰ　ＬＶＧ（ＦＭＣＢｉｏＰｏｌｙｍｅｒ）など市販品により入手可能である。また、国際公開第２０１８／０１２６０５号公報および国際公開第２０１９／１３８５８３号公報に記載されている低エンドトキシンアルギン酸ナトリウムであるＡＬ１０、ＡＬ２０、ＡＬ１００およびＡＬ５００を使用することもできる。

　また、いくつかの態様において、癒着防止材を第１の層および第２の層を有する多層構造とする場合、第１の層と第２の層のアルギン酸の１価金属塩の使用量の比（重量比）は、好ましくは、１：２０～２０：１であり、より好ましくは、１：５～５：１であり、さらに好ましくは、１：３～３：１である。

　なお、本明細書では、「アルギン酸、またはその塩」を総称して「アルギン酸」と呼ぶ場合がある。

４．硬化剤（架橋剤）
　癒着防止材は、少なくとも一部が硬化剤で架橋されたアルギン酸塩を含有するものである。癒着防止材が多層構造を有する場合、いくつかの層が硬化剤で架橋されたアルギン酸塩を含有し、他の層は硬化剤で架橋されたアルギン酸塩を含有しなくてもよく、あるいは、全ての層が硬化剤で架橋されたアルギン酸塩を含有していてもよい。癒着防止材が第１の層および第２の層を有する２層構造の場合、第１の層および第２の層のいずれか一方が硬化剤で架橋されたアルギン酸塩を含有してもよく（すなわち、第１の層および第２の層のいずれか一方が硬化剤で架橋されたアルギン酸塩を含有しなくてもよく）、あるいは、第１の層および第２の層の両方が硬化剤で架橋されたアルギン酸塩を含有してもよい。
　硬化剤は、アルギン酸の１価金属塩の溶液を架橋することにより、アルギン酸の１価金属塩を硬化するものである。硬化剤は、例えば、Ｃａ^２＋、Ｍｇ^２＋、Ｂａ^２＋、Ｓｒ^２＋、Ｚｎ^２＋、Ｆｅ^３＋などの２価以上の金属イオン化合物、分子内に２～４個のアミノ基を有する架橋性試薬などが挙げられる。これらは、アルギン酸と塩を形成すると同時に、イオン架橋を形成する。この架橋は可逆的なものであり、例えば、ＥＤＴＡなどで処理することにより脱架橋することが可能である。硬化剤として、より具体的には、２価以上の金属イオン化合物として、ＣａＣｌ_２、ＭｇＣｌ_２、ＣａＳＯ_４、ＺｎＣｌ_２、ＦｅＣｌ_３、ＢａＣｌ_２、ＳｒＣｌ_２等（好ましくは、ＣａＣｌ_２、ＣａＳＯ_４、ＺｎＣｌ_２、ＳｒＣｌ_２、ＦｅＣｌ_３、ＢａＣｌ_２等）を、分子内に２～４個のアミノ基を有する架橋性試薬として、窒素原子上にリジル（ｌｙｓｙｌ）基（－ＣＯＣＨ（ＮＨ_２）－（ＣＨ_２）_４－ＮＨ_２）を有することもあるジアミノアルカン、すなわちジアミノアルカンおよびそのアミノ基がリジル基で置換されてリジルアミノ基を形成している誘導体が包含され、具体的にはジアミノエタン、ジアミノプロパン、Ｎ－（リジル）－ジアミノエタン等を挙げることができる。その中でも、癒着防止材は、２価以上の金属イオン化合物として、ＣａＣｌ_２を含む硬化剤を含有することが好ましい。
　硬化剤の使用量は、アルギン酸の１価金属塩の使用量や分子量などに応じて適宜調節するのが望ましい。硬化剤の使用量は、例えば、塩化カルシウムでは、１．２６μｍｏｌ／ｃｍ^２～２．７０μｍｏｌ／ｃｍ^２であり、好ましくは、１．６２μｍｏｌ／ｃｍ^２～２．５２μｍｏｌ／ｃｍ^２であり、より好ましくは、２．１６μｍｏｌ／ｃｍ^２～２．４３μｍｏｌ／ｃｍ^２である。

　また、いくつかの態様において、癒着防止材を第１の層および第２の層を有する多層構造とする場合、第１の層と第２の層の硬化剤の使用量の比（重量比）は、好ましくは、１：１０～１０：１であり、より好ましくは、１：５～５：１であり、さらに好ましくは、１：３～３：１である。

　また、いくつかの態様において、硬化剤がカルシウムイオン化合物である場合、硬化剤の総量に対するアルギン酸の１価金属塩の使用量の比（重量比）は、好ましくは、１：２０～２０：１、より好ましくは、１：１６～１６：１である。

５．癒着防止材の製造方法
　癒着防止材は、例えば、以下の工程を経て製造することができる。（１）および（５）の工程で、層状の構造を持たない（単層）癒着防止材を製造することができる。また、（１）、（２）、（３）および（５）の工程、または、（１）、（３）および（５）の工程で、２層構造（積層構造）の癒着防止材を、（１）、（２）、（３）、（４）および（５）の工程、または、（１）、（３）、（４）および（５）の工程で、３層構造（積層構造）の癒着防止を製造することができる。

　（１）アルギン酸の１価金属塩の水溶液を硬化剤により硬化（ゲル化）させる工程、
　（２）所望により、硬化（ゲル化）したアルギン酸の１価金属塩を凍結する工程、
　（３）所望により、第１の層の上で、アルギン酸の１価金属塩の水溶液を硬化剤により硬化（ゲル化）して第２の層を形成する工程、
　（４）所望により、さらに、（２）の工程、（３）の工程を繰り返し、第３の層を形成する工程、
　（５）得られた硬化物（ゲル）を凍結乾燥する工程。

　具体的には、２層構造を有する積層癒着防止材の製造方法について説明する。
　上記工程（１）では、先ず、アルギン酸の１価金属塩（以下、「第１のアルギン酸塩」という）の溶液と硬化剤の溶液を準備する。第１のアルギン酸塩の溶液と硬化剤の溶液は、公知の方法またはそれに準じる方法により調製することができる。溶媒は、生体へ適用可能な溶媒であれば特に限定されないが、好ましくは水性溶媒であり、例えば、精製水、純水（例えば、蒸留水、イオン交換水）、ミリＱ水、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水、ＤＭＳＯなどであり、より好ましくは、純水である。これらは、滅菌されていることが好ましく、低エンドトキシン処理されたものが好ましい。
　そして、第１のアルギン酸塩の溶液と硬化剤の溶液を混合することにより、第１のアルギン酸塩を硬化（ゲル化）させることができる。混合は、例えば、平板状の容器を用いて行うことができる。

　上記工程（２）では、所望により、工程（１）で硬化させた第１のアルギン酸塩を、常法により凍結させる。工程（３）の前に一度凍結させることにより、第１の層と第２の層が混和する割合を低減することができる。凍結温度および時間は、例えば、－２０℃で４時間である。

　上記工程（３）では、先ず、アルギン酸の１価金属塩（以下、「第２のアルギン酸塩」という）の溶液と硬化剤の溶液を準備する。第２のアルギン酸塩の溶液と硬化剤の溶液は、公知の方法またはそれに準じる方法により調製することができる。溶媒は、上記工程（１）で説明したものと同様である。
　そして、第１の層の上で、第２のアルギン酸塩の溶液と硬化剤の溶液を混合することにより、第２のアルギン酸塩を硬化（ゲル化）させることができる。

　上記工程（５）では、上記工程（３）で得られた積層体を凍結乾燥する。
　凍結乾燥は、公知の方法により行うことができる。まず、積層体を凍結するが、凍結温度および時間は、例えば、－２０℃で４時間である。乾燥の条件は適宜調節可能であり、一次乾燥工程、二次乾燥工程等を設けてもよい。

　これらの工程により、第１のアルギン酸塩と硬化剤を含む第１の層と、第２のアルギン酸塩と硬化剤を含む第２の層を含む、生体適用可能な癒着防止材を得ることができる。

　なお、癒着防止材としての下層（生体損傷部位に密着する層）と上層（体腔（腹腔等）側）を作成する順序は、どちらを第１層として、最初にゲル化させても良い。

　またあるいは、第１のアルギン酸塩を硬化させて凍結乾燥することで第１の層を製造し、別途、第２のアルギン酸塩を硬化させて凍結乾燥することで第２の層を製造し、得られた各層を貼り合わせることにより、積層体を得ることも可能である。
　各工程の具体的な説明は、前記の方法と同様である。

　第１のアルギン酸塩および第２のアルギン酸塩を硬化させるときに、所望の大きさ、高さ（厚み）および形状の容器、型、基板、多孔膜、不織布、織布などを用いることで、所望の大きさ、高さ（厚み）および形状の癒着防止材を得ることができる。

　癒着防止材は、さらに、滅菌処理がなされていることが好ましい。滅菌は、γ線滅菌、電子線滅菌、エチレンオキシドガス滅菌、エタノール滅菌等が挙げられ、これらに限定されない。より好ましくは、癒着防止材は、電子線および／またはγ線照射により滅菌処理がされる。高分子材料をγ線、電子線等で照射処理することにより、好ましくは、生体内での貯留性を制御した生体適合性の高い医用材料が得られる（例えば、特開２０００－２３７２９４号参照）。
　電子線および／またはγ線滅菌する場合の照射条件として、例えば、吸収線量が１０ｋＧｙ～１５０ｋＧｙが挙げられ、より好ましくは２０ｋＧｙ～１００ｋＧｙが挙げられ、さらに好ましくは４０ｋＧｙ～８０ｋＧｙが挙げられる。電子線および／またはγ線滅菌する場合の照射条件の別の好ましい態様として、例えば、吸収線量が２０ｋＧｙ～８０ｋＧｙ、２０ｋＧｙ～６０ｋＧｙ、４０ｋＧｙ～６０ｋＧｙ等が挙げられる。γ線滅菌よりも電子線滅菌が好ましい。

　このようにして製造される癒着防止材は、プレスされる前のスポンジ状積層体として、例えば、平板状の形状を、縦×横×高さ（厚み）で表すと、縦と横の長さは特に限定されず、高さ（厚み）は、好ましくは０．２ｍｍ～３０ｍｍであり、より好ましくは０．３ｍｍ～１５ｍｍ、さらに好ましくは０．５ｍｍ～１０ｍｍである。さらに好ましくは、そのような高さ（厚み）であることに加えて、縦と横の長さは、それぞれ、１ｍｍ～３００ｍｍｘ１ｍｍ～３００ｍｍであり、特に好ましくは、３ｍｍ～２００ｍｍｘ３ｍｍ～２００ｍｍであり、さらに好ましくは、５ｍｍ～１５０ｍｍｘ５ｍｍ～１５０ｍｍである。

　いくつかの態様では、上記工程（５）などで得られた積層体をプレスする工程をさらに含む。プレスは、手動で、あるいはプレス機によって積層体を挟み、加圧することで行う。また、一般的に用いられる圧縮、薄層化などの工程も、本発明でいうプレスに含まれるものとする。プレス圧力としては、例えば１ｋＰａ～１００ＭＰａが挙げられ、より好ましくは１０ｋＰａ～８０ＭＰａ、さらに好ましくは１００ｋＰａ～６０Ｍｐａが挙げられる。手動でのプレスは、積層体に均一に圧がかかるように手で押圧できるもの、例えば、アクリル定規、アクリル板、ガラス板、金属板等を介して行う。また、用いるプレス機としては、例えば、ホットプレス機（アズワン株式会社製　ＡＨ－１Ｔ）が挙げられる。

６．使用方法
　癒着防止材は、癒着防止を必要とする対象に適用することにより使用される。好ましくは、癒着防止材は、通常、癒着防止効果を奏するのに必要な１週間程度、適用局所に滞留した後に吸収分解され、最終的には１～２カ月程度で代謝・排泄されてなくなるため、安全性に優れる。
　癒着防止材は、創傷部の表面、例えば外科手術に関連した組織の表面に適用するようにしてもよい。
　「外科手術に関連した組織」とは、外科手術において表面に外傷を負った組織や、外科手術において表面が乾燥することにより炎症が生じたまたは炎症が生じる恐れのある組織である。外科手術に関連した組織は、好ましくは、腹膜に包まれている臓器（例えば、胃、空腸、回腸、虫垂、結腸、肝臓、脾臓、十二指腸、および膵臓）である。本発明の好ましい態様の癒着防止材は、肝切除後に生じる癒着のような重篤な癒着を効果的に防止することができる。
　また、「適用する」とは、癒着防止材を、創傷部の表面（例えば、外科出術に関連した組織の表面）に置くことをいう。具体的には、癒着防止材の第１の層の表面が創傷部側の表面（例えば、組織の表面）と接触し、第２の層の表面が創傷部側の表面（例えば、組織の表面）とは反対側（例えば、腹腔側）を向くように、癒着防止材を創傷部側の表面（例えば、外科手術に関連した組織の表面）に置くようにする。例えば、癒着防止材の第１の層および第２の層を、第１の層の重量平均分子量が第２の層より高くなるように製造した場合、癒着防止材の第１の層は比較的重量平均分子量が高いため、組織の表面に癒着を防止するのに十分な時間溶解せずに残留し、創傷面の物理的バリアとして働く。一方、第２の層は比較的重量平均分子量が低いため、速やかに溶けて広がり、非創傷面の癒着防止の役割を果たす。
　好ましくは、癒着防止材は、Ｓｅｐｒａｆｉｌｍ（商品名）と比較して、柔軟性が高く、割れにくい。このため、好ましい態様では、癒着防止材は、適用する組織の表面に規定されず、例えば、腸管吻合の際にも腸管に巻き付けて使用できる。また、別の好ましい態様では、内視鏡を用いた外科手術の際にも、手術器具を対象において出し入れする通路から、容易に挿入できる。さらに別の好ましい態様では、癒着防止材は、貼りなおしが可能である。
　また、好ましくは、癒着防止材は、ＩＮＴＥＲＣＥＥＤ（商品名）と比較して、癒着防止対象が広範である。
　好ましくは、癒着防止材は、適用する表面の範囲、形状、凹凸などに応じて適当な大きさのものを準備し、癒着防止すべき外科手術に関連した組織の表面に適用する。「対象」は、ヒト、またはヒト以外の生物、例えば、トリおよび非ヒト哺乳動物（例えば、ウシ、サル、ネコ、マウス、ラット、モルモット、ハムスター、ブタ、イヌ、ウサギ、ヒツジ、およびウマ）である。
　癒着防止材は、プレスされたシート状のものが好ましい。プレスされたシート状とすることにより、コンパクトにまとめることができるので、例えば、内視鏡手術においてトロッカー等を介して癒着防止材を患部に比較的容易に適用することができる。そして、患部に適用された癒着防止材は、好ましくは、患部に存在する水分あるいは患部に適用された水分を吸収して厚みが回復する。
　好ましくは、癒着防止材は、Ｓｅｐｒａｆｉｌｍ（商品名）やＩＮＴＥＲＣＥＥＤ（商品名）と同様に、対象において安全に使用できる。
　外科手術に関連した組織の表面に適用した後、癒着防止材と外科手術に関連した組織の表面の縫合は通常は必要ないが、必要に応じて、癒着防止材と外科手術に関連した組織の表面を縫合してもよい。
　また、癒着防止材を、癒着防止を必要とする対象に適用することを含む、癒着防止方法が提供される。具体的な方法は、前述の通りである。
　また、癒着防止材を製造するための、積層体の使用が提供される。具体的な使用は、前述の通りである。
　さらに、癒着防止のための積層体が提供される。具体的な積層体は、前述の通りである。
　さらに、癒着防止材を対象の創傷部に適用する、癒着防止において使用されるためのアルギン酸塩が提供される。具体的なアルギン酸塩は、前述の通りである。

７．併用薬
　本発明の癒着防止材を外科手術に関連した組織に適用する前に、あるいは同時に、あるいは後で、ストレプトマイシン、ペニシリン、トブラマイシン、アミカシン、ゲンタマイシン、ネオマイシン、およびアンホテリシンＢ等の抗生物質、アスピリン、非ステロイド性解熱鎮痛剤（ＮＳＡＩＤｓ）、アセトアミノフェン等の抗炎症薬等の併用薬を投与するようにしてもよい。これらの薬剤は本発明の癒着防止材に混入して用いてもよい。
　癒着防止材は多孔性で吸水力もあるため、例えば、無孔性のＳｅｐｒａｆｉｌｍ（商品名）に比べて、用時調整による薬物担持が容易である。薬剤溶液をスポンジ状の癒着防止材に含浸させ、投与することで、腹腔、胸腔、心腔等において、癒着防止と薬物の局所徐放が同時に達成できる。さらに溶解速度が異なる層に薬物を担持することにより、速い徐放速度と遅い徐放速度での薬物の徐放も可能となる。

　なお、本明細書において引用した全ての刊行物、例えば、先行技術文献および公開公報、特許公報その他の特許文献は、その全体が本明細書において参照として組み込まれる。

　以下の実施例により本発明を更に詳述するが、本発明はこれら実施例に限定して理解されるべきものではない。

実施例１：アルギン酸シートの製造
　後述する各実験例で使用する、実施例１のアルギン酸積層スポンジ状組成物（アルギン酸シート）を、以下のように製造した。

［試薬］
　アルギン酸シートの製造に用いた各試薬は以下の通りである。
　低エンドトキシンアルギン酸ナトリウムは、持田製薬株式会社から入手した。
　　・ＡＬ１０：（Ｌｏｔ　ＮＯ．８Ｂ１９２０２），エンドトキシン量２ＥＵ／ｇ。
　　・ＡＬ５００：（Ｌｏｔ　ＮＯ．９Ｊ０２１２１），エンドトキシン量１２ＥＵ／ｇ。
　塩化カルシウムは、和光純薬工業株式会社から入手した（商品コード：０３６－００４８５）。
　大塚蒸留水は、株式会社大塚製薬工場より入手した（商品コード：０３５２０６９０３）。

［使用機器］
　樹脂製角型トレイ（内寸Ｗ６５ｍｍ×Ｄ６５ｍｍ×Ｈ１０ｍｍ）
　自動分注装置（武蔵エンジニアリング（株））
　真空凍結乾燥機（型式：ＤＦＭ－１０Ｃ－０４、（株）アルバック）

［調製手順］
　（１）溶液の調製
　ＡＬ５００を濃度０．３３％となるように大塚蒸留水に溶解させて、ＡＬ５００溶液を調製した。同様に、ＡＬ１０を濃度１％となるように大塚蒸留水に溶解させて、ＡＬ１０溶液を調製した。さらに、塩化カルシウムを大塚蒸留水に溶解させ、４．０ｍＭおよび９．６ｍＭの塩化カルシウム水溶液をそれぞれ調製した。

　（２）ＡＬ５００層（下層）の調製
　ＡＬ５００溶液７．０ｍＬおよび４．０ｍＭ塩化カルシウム水溶液７．０ｍＬを自動分注装置にて、均一に混合しながら樹脂製角型トレイに加えた。

　（３）ＡＬ１０層（上層）の積層
　（２）で製造したＡＬ５００層（下層）の上にＡＬ１０溶液７．０ｍＬおよび９．６ｍＭ塩化カルシウム水溶液７．０ｍＬを自動分注装置にて、均一に混合しながら加えた。

　（４）スポンジ状組成物の製造
　（３）で製造した二層を含む樹脂製角型トレイを凍結乾燥器にセットし、常法により凍結乾燥を行って、目的のアルギン酸積層スポンジ状組成物を得た。

　目的のアルギン酸積層スポンジ状組成物は、ＡＬ５００と塩化カルシウムを含むスポンジ状の下層（すなわち、第１の層）と、ＡＬ１０と塩化カルシウムを含むスポンジ状の上層（すなわち、第２の層）を含む。アルギン酸積層スポンジ状組成物は、１辺が約６５ｍｍ、厚み約３ｍｍの四角形であった。アルギン酸ナトリウムの上層と下層での使用量の合計は、約９３ｍｇ／枚であった（後述の表１に記載の７２ｃｍ^２あたりの量は、約１６０ｍｇとなる）。また、アルギン酸ナトリウムの上層と下層での使用量の比（重量比）は、３：１であった。さらに、塩化カルシウムの上層と下層での使用量の合計は、約１０ｍｇ／枚であった（後述の表１に記載の７２ｃｍ^２あたりの量は、約１８ｍｇとなる）。

　（５）重量平均分子量の測定
　製造原料として用いたアルギン酸ナトリウムについて、以下のＧＰＣ－ＭＡＬＳ法により重量平均分子量を測定した。

［前処理方法］
　試料に溶離液を加え溶解後、０．４５μｍメンブランフィルター濾過したものを測定溶液とした。

［測定条件（屈折率増分（ｄｎ／ｄｃ）測定）］
　示差屈折率計：Ｏｐｔｉｌａｂ　Ｔ－ｒＥＸ
　測定波長：６５８ｎｍ
　測定温度：４０℃
　溶媒：２００ｍＭ硝酸ナトリウム水溶液
　試料濃度：０．５～２．５ｍｇ／ｍＬ（５濃度）

［測定条件（絶対分子量分布測定）］
　カラム：ＴＳＫｇｅｌ　ＧＭＰＷ－ＸＬ×２＋Ｇ２５００ＰＷ－ＸＬ（７．８ｍｍ　Ｉ．Ｄ．×３００ｍｍ×３本）
　溶離液：２００ｍＭ硝酸ナトリウム水溶液
　流量：１．０ｍＬ／ｍｉｎ．
　濃度：０．０５％
　検出器：ＲＩ検出器、光散乱検出器（ＭＡＬＳ）
　カラム温度：４０℃
　注入量：２００μＬ

［結果］
　ＡＬ１０　：　５５，０００
　ＡＬ５００：　２８０，０００

　また、上記工程（１）、（２）および（４）の方法に準じて製造したＡＬ１０を含有する単層スポンジ状組成物と、ＡＬ５００を含有する単層スポンジ状組成物を電子線滅菌後、ＥＤＴＡ（エチレンジアミン四酢酸）溶液に溶解して、ＧＰＣ－ＭＡＬＳ法によりそれぞれ分子量を測定した。結果を以下に示す。

［結果］
（電子線滅菌の照射線量が２０ｋＧｙの場合）
　ＡＬ１０　：３６，０００
　ＡＬ５００：７５，０００
（電子線滅菌の照射線量が４０ｋＧｙの場合）
　ＡＬ１０　：２７，０００
　ＡＬ５００：４５，０００

　（６）スポンジ状組成物のプレスによるアルギン酸シートの製造
　上記（４）で得られたスポンジ状組成物をプレス機（アズワン株式会社製、製品名ＡＨ－１Ｔ）にセットした。１０ＭＰａの圧力で室温にてスポンジ状組成物をプレスし、５分間保持した。プレス後のスポンジ状組成物（アルギン酸シート）を、電子線を用いて、常法にて滅菌した。得られたアルギン酸シートは、実施例１として、後述の各実験例に用いた。
　なお、実施例１を含む各実施例および比較例に係るアルギン酸シートの処方を、実験例２－２の結果等とともに、表１に示す。

実施例２～６：アルギン酸シートの製造
　塩化カルシウムの使用量の総量および塩化カルシウムの上層／下層の使用量の比を表１の処方に変更した以外は、実施例１のアルギン酸シートの製造と同様の方法で、実施例２～６のアルギン酸シートを製造した。製造した各実施例のアルギン酸シートは、後述の各実験例に用いた。

実施例７～９：アルギン酸シートの製造
　上層に使用するアルギン酸として実施例１で使用したＡＬ１０を、下層に使用するアルギン酸として実施例１で使用したＡＬ５００を用い、上層および下層のアルギン酸ナトリウムの使用量の総量、アルギン酸ナトリウムの上層／下層の使用量の比を表１の処方に変更し、並びに塩化カルシウムの使用量の総量および塩化カルシウムの上層／下層の使用量の比を表１の処方に変更した以外は、実施例１のアルギン酸シートの製造と同様の方法で、実施例７～９のアルギン酸シートを製造した。製造した各実施例のアルギン酸シートは、後述の各実験例に用いた。

実施例１０および１１：アルギン酸シートの製造
　上層に使用するアルギン酸として実施例１で使用したＡＬ５００を用い（すなわち、上層および下層ともにＡＬ５００を使用）、上層および下層のアルギン酸ナトリウムの使用量の総量、アルギン酸ナトリウムの上層／下層の使用量の比を表１の処方に変更し、並びに塩化カルシウムの使用量の総量および塩化カルシウムの上層／下層の使用量の比を表１の処方に変更した以外は、実施例１のアルギン酸シートの製造と同様の方法で、実施例１０および１１のアルギン酸シートを製造した。製造した各実施例のアルギン酸シートは、後述の各実験例に用いた。

実施例１２および１３：アルギン酸シートの製造
　アルギン酸として実施例１で使用したＡＬ１０および、実施例１で使用したＡＬ５００を用い、表１の処方に従って、実施例１の方法に準じてＡＬ１０溶液およびＡＬ５００溶液を調製し、両者を均一に混合した。また、実施例１の方法に準じて、塩化カルシウム水溶液を調製した。アルギン酸ナトリウムの使用量の総量および塩化カルシウムの使用量の総量は表１の処方の通りとし、実施例１のアルギン酸シートの製造の［調製手順］（１）、（２）および（４）の方法に準じて、実施例１２および実施例１３のアルギン酸シート（単層）を製造した。製造した各実施例のアルギン酸シートは、後述の各実験例に用いた。

比較例１～４：アルギン酸シートの製造
　表１に示す組み合わせで、上層に使用するアルギン酸および下層に使用するアルギン酸として実施例１で使用したＡＬ１０またはＡＬ５００を用い、上層および下層のアルギン酸ナトリウムの使用量の総量、アルギン酸ナトリウムの上層／下層の使用量の比を表１の処方に変更し、並びに塩化カルシウムの使用量の総量および塩化カルシウムの上層／下層の使用量の比を表１の処方に変更した以外は、実施例１のアルギン酸シートの製造と同様の方法で、比較例１～４のアルギン酸シートを製造した。製造した各比較例のアルギン酸シートは、後述の各実験例に用いた。

比較例５および６：アルギン酸シートの製造
　表１に示す組み合わせで、塩化カルシウムの使用量の総量および塩化カルシウムの上層／下層の使用量の比を表１の処方に変更した以外は、実施例１のアルギン酸シートの製造と同様の方法で、比較例５のアルギン酸シートを製造した。また、塩化カルシウムの使用量の総量を表１の処方に変更した以外は、実施例１２のアルギン酸シートの製造と同様の方法で、比較例６のアルギン酸シートを製造した。製造した各比較例のアルギン酸シートは、後述の各実験例に用いた。

実験例１－１：アルギン酸シートの溶解試験（寒天の製造）
　後述する実験例１－２で使用する寒天を製造した。具体的な方法を以下に示す。

［材料］
・寒天（粉末）（和光純薬社製、商品コード：０１０－０８７５）
・純水
・生理食塩水（光製薬株式会社製）

［使用器具］
・電子レンジ（日本電気株式会社製、ＭＣ－Ｅ２）
・寒天製造専用トレイ（ゲルメーカーセット－Ｌ、Ｍｕｐｉｄ社製）

［手順］
　まず、３００ｍＬビーカーに純水２００ｍＬ、粉末の寒天４ｇを入れ、突沸しないように電子レンジで２～３分加熱し、寒天（粉末）を溶解させた。次いで、スターラーで寒天（粉末）を撹拌し、寒天製造専用トレイに溶液を流し入れた。そして、温度が下がり、寒天が固まるまで室温で静置した。その後、製造した寒天を１晩以上生理食塩水に浸し、寒天中に生理食塩水を浸透させた。

実験例１－２：アルギン酸シートの溶解試験（半浸漬試験）
　実施例１～１３および比較例１～６として製造したアルギン酸シートを用いて、溶解試験を実施した。具体的な方法を以下に示す。

［材料］
・実験例１－１で製造した寒天
・実施例１～１３および比較例１～６として製造したアルギン酸シート
・生理食塩水（光製薬株式会社製）

［使用器具］
・直径８ｍｍ生検トレパン（Ｋａｉ　ｍｅｄｉｃａｌ社　ＢＰ－８０Ｆ（商品名））
・直径１０ｃｍのディッシュ（ＩＷＡＫＩ社、商品コード：３０２０－１００）
・１００μｍセルストレーナー（ＦＡＬＣＯＮ社）
・電子天秤（島津製作所、ＡＵＷ２２０Ｄ（商品名））
・シェーカー（ＴＡＩＴＥＣ社、トリプルシェーカーＮＲ－８０（商品名））

［手順］
　まず、事前の準備として、セルストレーナーの底部をメッシュとして使用するため、セルストレーナーの側面を切り落とし、重量を計測した。また、実施例１～１３および比較例１～６として製造したアルギン酸シートを生検トレパンでくり抜き、重量を計測した。さらに、実験例２－１で製造した寒天を１ｃｍｘ１ｃｍ（厚み０．７ｃｍ）のサイズにカットした。
　次いで、直径１０ｃｍのディッシュにカットした寒天を入れ、生理食塩水を２８ｍＬ注ぎ入れた。寒天の上に、各アルギン酸シートのサンプルを載せたメッシュを置き、１０ｃｍディッシュをシェーカーに載せ、振とう数４０回／分、振幅２５ｃｍ、室温で振とうを開始した。
　その後、一定時間ごとに１０ｃｍディッシュからメッシュを取り出し、乾いた紙製ウエス(キムワイプ（商品名）、日本製紙クレシア社製)をメッシュの下にあてて、目視にてメッシュ上の水滴が確認できなくなるまで水分を除去した後に重量を測定し、必要に応じて外観写真を撮影し、１０ｃｍディッシュに戻した。また、重量を測定した後は、１０ｃｍディッシュに生理食塩水を２００μｍ添加した。そして、メッシュ上のサンプルが完全に溶解した時点で、溶解試験を終了した。

［結果］
　実施例１～１３および比較例１～６として製造したアルギン酸シートの、各測定時間における重量の変化を図２～図２０に示す。図２～図１２に示すとおり、実施例１～１１のサンプルは、いずれも（１）および（２）の条件を満たしていた。また、図１３および１４に示すとおり、単層構造の実施例１２および１３も、（１）および（２）の条件を満たしていた。
　なお、塩化カルシウムの使用量の総量を比較例１よりもさらに多くした比較例５および６のサンプルは、実験例１－２の溶解試験において、（１）の条件を満たさなかった。具体的には、当該サンプルは、サンプル重量が０．０１ｇ未満となるまでの所要時間が試験開始から３６時間を超えていた。
　なお、塩化カルシウムの使用量の総量を表１に示す量よりもさらに多くしたサンプルは、実験例１－２の溶解試験において、（１）および（２）の条件を満たさない。具体的には、当該サンプルは、サンプル重量が０．０１ｇ未満となるまでの所要時間が試験開始から３６時間を超え、サンプル重量が最大重量に達するまでの所要時間が試験開始から１０時間を超える。

　表１に記載した各実施例、比較例における、塩化カルシウムの重量に換算したＣａ含量、アルギン酸ナトリウムの重量に換算したアルギン酸含量は、癒着防止材７２ｃｍ^２あたりに含まれる含量を記載したものであり、癒着防止材のサイズは、試薬の量とトレイのサイズを変更することにより、適宜調整することができる。

実験例２：ラット一部肝切除モデル
　ラット一部肝切除モデルを用いて、癒着の形成を評価した。ラット一部肝切除モデルは、重篤な炎症を惹起し高い強度を有する癒着の形成を再現性高く観察できるモデルである（Ｓｈｉｍｉｚｕ　Ａ　ｅｔ　ａｌ．，（２０１４）Ｓｕｒｇ　Ｔｏｄａｙ．（４４）：３１４－３２３）。具体的には、以下のように癒着の形成を評価した。

［材料］
　実施例１～３、６～１１、並びに比較例５および６のサンプルは、前述のとおり用意した。
　前述の比較例１～４と同様の方法により比較例Ａのサンプルを用意した。なお、溶解試験を行った結果、比較例Ａのサンプルは、サンプル重量が０．０１ｇ未満となるまでの所要時間が５２～５５時間の間であり、条件（１）を満たさなかった。
　陽性対照群に使用するＳｅｐｒａｆｉｌｍ（商品名）を用意した。Ｓｅｐｒａｆｉｌｍは、カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）とヒアルロン酸を混合したシート状材料であり、Ｇｅｎｚｙｍｅ　ＧｍｂＨより入手した。

［実験群］
　対照群（ｎ＝８）：鉗子及びバイポーラ電気メスを用いて肝臓左葉については先端より約2cm、幅約3cmを、また肝臓中間葉（内側右葉：分葉しているうちの右側）については先端より約1cm、幅約2cmをそれぞれ離断して肝切除後癒着モデルを作製した（無処置対照群）。

　陽性対照群（ｎ＝８）：２×２ｃｍのＳｅｐｒａｆｉｌｍを癒着防止材として適用した。
　実施例１～３、６～１１群（ｎ＝１～８）：２×２ｃｍの各実施例のサンプルを癒着防止材として適用した。
　比較例５～６群（ｎ＝１～８）：２×２ｃｍの各比較例のサンプルを癒着防止材として適用した。
　比較例Ａ群：比較例Ａのサンプルを癒着防止材として適用した。

［手順］
　ラットに三種混合麻酔薬を2.5mL/kgの容量で背部皮下投与して全身麻酔を行った。約5cmの腹部正中切開にて開腹して肝臓を引き出し、鉗子及びバイポーラ電気メスを用いて肝臓左葉については先端より約2cm、幅約3cmを、また肝臓中間葉（内側右葉：分葉しているうちの右側）については先端より約1cm、幅約2cmをそれぞれ離断して肝切除後癒着モデルを作製した。肝臓の把持の際は、リングピンセットを使用した。対照群では、この後すぐ閉腹して処置を終了した。癒着防止材を適用する群では、癒着防止材を左葉離断面に適用した。肝臓を元の位置に戻した後、腹壁と皮膚を二回に分けて縫合し閉腹した。腹壁を縫合する際には生分解糸を用い、皮膚を縫合する際には非吸収糸を用いた。閉腹から一週間後に、ラットに三種混合麻酔薬を2.5mL/kgの容量で背部皮下投与して全身麻酔した後、頸動脈を切断して放血により安楽死させた。その後、再び開腹し、以下の通り癒着を評価した。

［癒着の評価］
　以下の通り、癒着の評価を行った。

（１）離断面
　上記［手順］に記載した肝左葉離断面について、以下の評価を行った。

癒着Ｅｘｔｅｎｔ
　幅３ｃｍの肝左葉離断面のうち、癒着が形成された幅を定規（ものさし）にて計測し、長さ（単位：ｍｍ）で表した（従って、離断面の最大Ｅｘｔｅｎｔは３０ｍｍとなる）。

（２）非離断面
　肝離断面以外、具体的には肝表面、大網、腹膜、小腸、正中創直下、等について、以下の評価を行った。非離断面の癒着は、ｄｅｎｏｖｏ癒着の指標となる。

癒着Ｅｘｔｅｎｔ
　肝離断面以外の部位について、癒着が形成された組織部分について、定規（ものさし）にて、その接着している幅を計測し、長さ（単位：ｍｍ）で表した。部位は特定せず、認められた癒着が形成された幅の最大値を、その試験動物の癒着Ｅｘｔｅｎｔとして記録した。

［結果］
　癒着の評価の結果を、離断面および非離断面ともに図２１に示した。
　離断面においては、各実施例群とも、対照群および陽性対照群と同等か、対照群および陽性対照群に比べて癒着が抑制される傾向が認められた。また、各実施例群は、比較例Ａ群および比較例５～６群に比べて癒着が抑制された。
　非離断面において、対照群並びに比較例Ａ群および比較例５～６群に比した各実施例群での顕著な癒着抑制効果が確認された。また、各実施例群は、陽性対照群と同等か、陽性対照群に比べて癒着が抑制される傾向が認められた。

実験例３：ミニブタ脾臓・腹壁癒着モデル
　ミニブタ腹壁欠損癒着モデルを用いて、癒着防止材の癒着の形成を評価した。ミニブタは腹腔内の状態がヒトに近いとされる実験動物であり、腹壁欠損癒着モデルは、癒着の形成を再現性高く観察できるモデルである。具体的には、以下のように癒着の形成を評価した。

［材料］
　実施例１、４および比較例１のサンプルは、前述のとおり用意した。
　陽性対照群に使用するＳｅｐｒａｆｉｌｍ（商品名）をＧｅｎｚｙｍｅ　ＧｍｂＨより入手した。

［実験群］
　対照群（ｎ＝６）：下記手順と同様の処置を行い、癒着防止材を適用せずに閉腹し、対照群とした（無処置対照群）。
　陽性対照群（ｎ＝４）：６×６ｃｍのＳｅｐｒａｆｉｌｍ３枚を癒着防止材として適用した。
　実施例１、４群（ｎ＝３～４）：各実施例のサンプル（６×６ｃｍ、各３枚）を癒着防止材として適用した。
　比較例１群（ｎ＝４）：比較例１のサンプル（６×６ｃｍ、３枚）を癒着防止材として適用した。

［手順］
　雌ミニブタ（富士マイクラ（株）より購入、体重２５．８～３１．１ｋｇ）を各群に群分けした。アトロピン（0.05mg/kg）の前投与を行った後、塩酸ケタミン（15mg/kg，第一三共プロファーマ（株））およびキシラジン（3mg/kg、バイエル薬品（株））の混合液を筋肉内投与して麻酔を行った。必要に応じて人工呼吸管理下（呼吸回数：10～15回　strokes/min及びTidal volume:5～15ml/kg/stroke）に日本薬局方イソフルラン（マイラン製薬（株））の吸入麻酔を行った。キャリアガスは酸素とし、気化器でイソフルランを1～3％の濃度を維持した。術野の正中部の広い範囲をバリカンで刈毛を行い、微温湯で洗った後に消毒用アルコール（和光純薬工業（株））および動物用イソジン液（ムンディファーマ（株）；1 mL中日本薬局方ポビドンヨード20 mg）で消毒した。モノポーラ電気メス等を用いて開腹後、脾臓および胃を露出し、確保した。脾臓および胃の表面をドライスクラブ（滅菌済ディスポブラシ）で物理的に擦り、腹膜はメスおよびハサミを用いて開創部の腹腔側を切除、剥離した癒着モデルを作製した。腹膜剥離部位に相対する擦過部位およびその近傍に各１枚の癒着防止材を密着させ、動かないことを確認後、臓器をもとの位置に戻し、腹膜の切開部位直下に１枚の癒着防止材を静置し、腹膜、筋層、皮下組織、皮膚を縫合した。
　モデル作製7日目にケタミン麻酔下で腋窩動・静脈を切断して放血殺を行った。開腹後、腹腔内の癒着を確認後、デジタルカメラでモデル作製部位およびその周囲を撮影した。モデル作製部位の癒着状態についての評価は肉眼的スコアとし、面積測定のために大きさを測定し、記録としてデジタルカメラで撮影した。脾臓および胃の擦過部位におけるモデル作製面においては癒着面およびモデル作製部位を摘出後、再度写真撮影を行った。

［癒着の評価］
　以下の通り、癒着の評価を行った。
　肉眼的に癒着スコア、癒着長さ、癒着面積等を観察して、写真撮影して記録した。
　　癒着スコア0：癒着なし、癒着がない状態を指す。
　　癒着スコア1：癒着あり、自重により剥離可能。片手で臓器を持ち上げただけ（めくる程度）で癒着が剥離する状態を指す。
　　癒着スコア2：癒着あり、鈍的剥離可能。両手で癒着の両端を引っ張って癒着が剥離する状態を指す。
　　癒着スコア3：癒着あり、鈍的剥離不可能。両手で癒着の両端を引っ張って癒着が剥離する前に組織が傷つく状態を指す（メスやハサミを使用する必要がある状態）。
　各スコア毎に癒着面積を測定し、スコア１・スコア２・スコア３の癒着面積の総和を比較した。

［結果］
　左右の腹壁欠損部のスコア１・スコア２・スコア３の癒着面積の総和の結果を、図２２に示した。
　図２２に示すとおり、実施例１群および実施例４群は、いずれも、対照群、陽性対照群、比較例１群に比べて、癒着防止材の適用部位（局所）での癒着が抑制された。この結果から、本発明の癒着防止材は、大型動物でも優れた癒着防止効果を発揮することが確認された。

　また、医療上問題となる強固な癒着である、腹腔内全体のスコア３の癒着についての結果を、図２３に示した。
　図２３に示すとおり、実施例１群および実施例４群は、いずれも、対照群、陽性対照群、比較例１群に比べて、癒着防止材の適用部位の周辺部でも著しく癒着が抑制された。この結果から、本発明の癒着防止材は、大型動物でも優れた癒着防止効果を発揮することが確認された。

実験例４：ミニブタ二期肝切除モデル
　ミニブタ二期肝切除モデルを用いて、癒着の形成を評価した。ミニブタ二期肝切除モデルは、重篤な炎症を惹起し高い強度を有する癒着の形成を再現性高く観察できるモデルである。具体的には、以下のように癒着の形成を評価した。

［材料］
　比較例３および４のサンプルは、前述のとおり用意した。
　陽性対照群に使用するＳｅｐｒａｆｉｌｍ（商品名）をＧｅｎｚｙｍｅ　ＧｍｂＨより入手した。

［実験群］
　対照群（ｎ＝５）：下記手順と同様の処置を行い、癒着防止材を適用せずに閉腹し、対照群とした（無処置対照群）。
　陽性対照群（ｎ＝５）：６×６ｃｍのＳｅｐｒａｆｉｌｍ３枚（１回分）を２回、癒着防止材として適用した。
　比較例３および４群（ｎ＝５）：比較例３および４のサンプル（６×６ｃｍ、３枚、１回分）を２回、癒着防止材として適用した。

［手順］
　雄ミニブタ（富士マイクラ（株）より購入、体重２２～２８ｋｇ）を各群に群分けした。アトロピン（0.05mg/kg）の前投与を行った後、塩酸ケタミン（15mg/kg，第一三共プロファーマ（株））およびキシラジン（3mg/kg，バイエル薬品（株））の混合液を筋肉内投与して麻酔を行った。必要に応じて人工呼吸管理下（呼吸回数：10～15回　strokes/min及びTidal volume:5～15ml/kg/stroke）に日本薬局方イソフルラン（マイラン製薬（株））の吸入麻酔を行った。キャリアガスは酸素とし，気化器でイソフルランを1～3％の濃度を維持した。術野の正中部の広い範囲をバリカンで刈毛を行い、微温湯で洗った後に消毒用アルコール（和光純薬工業（株））および動物用イソジン液（ムンディファーマ（株）；1 mL中日本薬局方ポビドンヨード20 mg）で消毒した。モノポーラ電気メス等を用いて開腹後、肝臓を露出し、確保した。１期目（１回目開腹時）は左葉（ＬＬ）を部分切除した。２期目（２回目開腹時）は中葉（ＭＬ）を部分切除した。なお、１期目は肝臓の離断面が長径約８ｃｍになるよう、２期目は離断面が長径約１０ｃｍになるように切除した。離断終了後、ＬＬ表面、ＭＬ表面、肝門部に癒着防止材を１枚ずつ（６×６ｃｍ）、計３枚（１頭当たり１０８ｃｍ^２）を貼付し、腹膜、筋層、皮下組織、皮膚を縫合した。
　２期目の肝部分切除、癒着防止材の貼付は、上記と同様にして、１期目から２週間後に行った。
　モデル作製２８日目にケタミン麻酔下で腋窩動・静脈を切断して放血殺を行った。開腹後、腹腔内の癒着を確認後、デジタルカメラでモデル作製部位およびその周囲を撮影した。モデル作製部位の癒着状態についての評価は肉眼的スコアとし、面積測定のために大きさを測定し、記録としてデジタルカメラで撮影した。

［癒着の評価］
　実験例３と同様に、癒着の評価を行った。

［結果］
　癒着の評価の結果を、図２４に示した。
　図２４に示すとおり、比較例３群および比較例４群は、対照群と比べると若干癒着が抑制されたが、陽性対照群よりも癒着の範囲が広かった。この結果から、溶解試験において（１）および／または（２）を満たさない癒着防止材は、大型動物における癒着防止効果が低いことが確認された。

実験例５：ラット一部肝切除モデル
　実験例２に準じて、ラット一部肝切除モデルを用いて、癒着の形成を評価した。

［材料］
　実施例１、実施例１２のサンプルは、前述のとおり用意した。
　陽性対照群に使用するＳｅｐｒａｆｉｌｍ（商品名）は、前述の通り用意した。

［実験群］
　対照群（ｎ＝８）：鉗子及びバイポーラ電気メスを用いて肝臓左葉の先端より約2cm、幅約3cmを離断して肝切除後癒着モデルを作製した（無処置対照群）。
　陽性対照群（ｎ＝８）：２×２ｃｍのＳｅｐｒａｆｉｌｍを癒着防止材として適用した。
　実施例１、実施例１２群（各ｎ＝８）：２×２ｃｍの各実施例のサンプルを癒着防止材として適用した。
　実施例１（Ａ）：離断面に貼付、
　実施例１（Ｂ）：離断面近傍に貼付、
　実施例１２（Ａ）：離断面に貼付、
　実施例１２（Ｂ）：離断面近傍に貼付

［手順］
　ラットに三種混合麻酔薬を2.5mL/kgの容量で背部皮下投与して全身麻酔を行った。約5cmの腹部正中切開にて開腹して肝臓を引き出し、鉗子及びバイポーラ電気メスを用いて肝臓左葉の先端より約2cm、幅約3cmを離断して肝切除後癒着モデルを作製した。肝臓の把持の際は、リングピンセットを使用した。対照群では、この後すぐ閉腹して処置を終了した。癒着防止材を適用する群では、癒着防止材を左葉離断面（陽性対照、実施例１（Ａ）、実施例１２（Ａ））、または左葉離断面の近傍（実施例１（Ｂ）、実施例１２（Ｂ））に適用した。肝臓を元の位置に戻した後、腹壁と皮膚を二回に分けて縫合し閉腹した。腹壁を縫合する際には生分解糸を用い、皮膚を縫合する際には非吸収糸を用いた。閉腹から一週間後に、ラットに三種混合麻酔薬を2.5mL/kgの容量で背部皮下投与して全身麻酔した後、頸動脈を切断して放血により安楽死させた。その後、再び開腹し、以下の通り癒着を評価した。

［癒着の評価］
　以下の通り、癒着の評価を行った。
（１）離断面（癒着グレードによる癒着強度）
　癒着の評価は、目視により行った。肝離断面以外の部位について、下記スコアリング法に基づき癒着スコアをつけた。部位は特定せず、認められた癒着スコアの最大値を、その試験動物の癒着スコアとして記録した。
　癒着スコア：
　　Ｇｒａｄｅ０：癒着が全く見られない。
　　Ｇｒａｄｅ１：自重により剥離する程度の癒着（生理的な癒着）
　　Ｇｒａｄｅ２：ピンセットによる剥離が可能な癒着（鈍的な癒着）
　　Ｇｒａｄｅ３：ハサミ、メスを使わないと剥離できない癒着（鋭的な癒着）
（２）離断面（Ｅｘｔｅｎｔ）
　上記［手順］に記載した肝左葉離断面について、以下の評価を行った。

［結果］
　癒着の評価の結果を、癒着強度については図２５に、Ｅｘｔｅｎｔについては図２６に示した。
　図２５に示すとおり、対照群においては、全例において医療上問題となる強固な癒着であるＧｒａｄｅ３の癒着が確認されたのに対し、実施例１（Ｂ）および実施例１２（Ａ）においては、８例中の各１例でＧｒａｄｅ２の癒着となり、癒着強度の低下傾向が確認された。とりわけ顕著な効果が認められたのが実施例１（Ａ）であり、８例中３例において、Ｇｒａｄｅ０（癒着が全く見られない）となり、癒着強度の顕著な低下が確認された。
　図２６に示すとおり、肝離断面にサンプルを貼付した実施例１（Ａ）および実施例１２（Ａ）においては、肝離断面における癒着の長さの顕著な低下が認められ、優れた癒着防止効果が確認された。また、肝離断面を避けて、その近傍にサンプルを貼付した実施例１（Ｂ）および実施例１２（Ｂ）においては、肝離断面にサンプルを貼付した場合に比べると、癒着防止効果は若干低下するものの、陽性対照と同等程度の癒着防止効果が得られることが確認された。
　以上の結果から、本発明の癒着防止材は、複数回の手術が必要な、肝臓がんなどの手術の際に用いる癒着防止材として、優れた癒着防止効果を発揮することが確認された。また、離断面における胆汁漏が懸念されるような症例においては、離断面を避けて、離断面近傍に貼付することによっても陽性対照と同等程度の癒着防止効果が得られることが確認された。
　なお、実施例１２のサンプルに代えて、実施例１３のサンプルを使用して試験した場合にも、実施例１２のサンプルと同様の結果が得られる。

１　　癒着防止材
２　　第１の層
３　　第２の層
４　　積層体

Claims

　少なくとも一部が硬化剤で架橋された、アルギン酸塩を含有する、シート状の癒着防止材であって、
　前記癒着防止材を、直径８ｍｍの略円形となるように裁断したサンプルを、寒天の略上面まで生理食塩水を添加したシャーレの寒天上にメッシュを介して静置し、振幅２５ｍｍ、振とう数４０回／分でシャーレを振とうし、少なくとも１つの任意の時点でサンプル重量を測定する溶解試験を行った際に、以下の（１）および（２）を満たす癒着防止材；
（１）サンプル重量が０．０１ｇ未満となるまでの所要時間が試験開始から５時間以上、３６時間以内である、および
（２）サンプル重量が最大重量に達するまでの所要時間が試験開始から１０時間以内である。
　癒着防止材が第１の層および第２の層を含む、請求項１に記載の癒着防止材。
　アルギン酸塩の総量がアルギン酸ナトリウムの重量に換算して１．４ｍｇ／ｃｍ^２以上２．８ｍｇ／ｃｍ^２以下である、請求項１または２に記載の癒着防止材。
硬化剤がカルシウムイオン化合物であり、カルシウム総量が塩化カルシウムの重量に換算して、０．１４ｍｇ／ｃｍ^２以上０．３０ｍｇ／ｃｍ^２以下である、請求項１～３のいずれか１項に記載の癒着防止材。
　シート状の癒着防止材の厚みが１００μｍ以上５００μｍ以下である、請求項１～４のいずれか１項に記載の癒着防止材。
　シート状の癒着防止材が、プレスされたものである、請求項１～５のいずれか１項に記載の癒着防止材。
　第１の層の溶解速度が第２の層よりも遅い、請求項２～６のいずれか１項に記載の癒着防止材。
　癒着防止材が単層である、請求項１に記載の癒着防止材。
　以下の工程を含む、請求項１～８のいずれか１項に記載の癒着防止材の製造方法。
　（１）アルギン酸の１価金属塩の水溶液を硬化剤により硬化（ゲル化）させる工程、
　（２）所望により、硬化（ゲル化）したアルギン酸の１価金属塩を凍結する工程、
　（３）所望により、第１の層の上で、アルギン酸の１価金属塩の水溶液を硬化剤により硬化（ゲル化）して第２の層を形成する工程、
　（４）所望により、さらに、（２）の工程、（３）の工程を繰り返し、第３の層を形成する工程、
　（５）得られた硬化物（ゲル）を凍結乾燥する工程。
　前記アルギン酸の１価金属塩が、１００，０００以上の重量平均分子量のアルギン酸の１価金属塩を少なくとも含む、請求項９に記載の製造方法。
　少なくとも一部が硬化剤で架橋された、アルギン酸塩を含有する、シート状の癒着防止材であって、
　前記癒着防止材を、直径８ｍｍの略円形となるように裁断したサンプルを、寒天の略上面まで生理食塩水を添加したシャーレの寒天上にメッシュを介して静置し、振幅２５ｍｍ、振とう数４０回／分でシャーレを振とうし、少なくとも１つの任意の時点でサンプル重量を測定する溶解試験を行った際に、以下の（１）および（２）を満たす癒着防止材を、癒着防止を必要とする対象に適用することを含む、癒着防止方法；
（１）サンプル重量が０．０１ｇ未満となるまでの所要時間が試験開始から５時間以上、３６時間以内である、および
（２）サンプル重量が最大重量に達するまでの所要時間が試験開始から１０時間以内である。
　少なくとも一部が硬化剤で架橋された、アルギン酸塩を含有する、シート状の癒着防止材であって、
　前記癒着防止材を、直径８ｍｍの略円形となるように裁断したサンプルを、寒天の略上面まで生理食塩水を添加したシャーレの寒天上にメッシュを介して静置し、振幅２５ｍｍ、振とう数４０回／分でシャーレを振とうし、少なくとも１つの任意の時点でサンプル重量を測定する溶解試験を行った際に、以下の（１）および（２）を満たす癒着防止材を、対象の創傷部に適用する、癒着防止において使用されるためのアルギン酸塩；
（１）サンプル重量が０．０１ｇ未満となるまでの所要時間が試験開始から５時間以上、３６時間以内である、および
（２）サンプル重量が最大重量に達するまでの所要時間が試験開始から１０時間以内である。