WO2022014436A1

WO2022014436A1 - 細胞培養容器、細胞培養容器の製造方法、細胞の製造方法、細胞培養装置、及び細胞培養用治具

Info

Publication number: WO2022014436A1
Application number: PCT/JP2021/025607
Authority: WO
Inventors: 修小関; 郷史田中; 貴彦戸谷; 洋佑松岡; 喬晴西山
Original assignee: 東洋製罐グループホールディングス株式会社
Priority date: 2020-07-11
Filing date: 2021-07-07
Publication date: 2022-01-20
Also published as: CN115698256A; EP4180512A1; US20230134478A1

Abstract

細胞を高密度に培養するためのガス透過性と強度に優れた細胞培養容器を提供する。少なくとも１つのポートを有し、対向する平面状器材１１によって形成された袋状の閉鎖系の細胞培養容器１であって、平面状器材１１の少なくとも一方がガス透過性フィルムからなり、少なくとも１つのガス透過性フィルムの外面に、当該ガス透過性フィルムの内面形状とは異なる形状の突起部１１１を備えると共に、当該ガス透過性フィルムの内面側に細胞を培養するための培養空間Ｓを備え、当該ガス透過性フィルムを平面に接触させたときに、突起部１１１によって、当該ガス透過性フィルムと平面との間に通気可能な空間が形成される細胞培養容器。

Description

細胞培養容器、細胞培養容器の製造方法、細胞の製造方法、細胞培養装置、及び細胞培養用治具

　本発明は、細胞培養技術に関し、特に細胞を高密度で培養するための細胞培養容器及び細胞培養用治具に関する。

　近年、医薬品の生産や、遺伝子治療、再生医療、免疫療法等の分野において、細胞や組織などを人工的な環境下で効率良く大量に培養することが求められている。
　このような状況において、袋状の細胞培養容器を用いて閉鎖系で細胞を自動的に大量培養することが提案されている。

　袋状の細胞培養容器を用いて細胞を培養する場合、容器をインキュベータ内に載置して用いたり、容器内での培養液の移動を抑制して培養環境を安定させるために、容器を押圧治具に挟み込んだ状態で用いることがある。
　ところが、袋状の細胞培養容器は、通常２枚のフィルムを貼り合わせて形成され、その外面が平坦であるため、インキュベータ内に載置すると、容器の底面を介したガス透過が不足することがあるという問題があった。

　すなわち、インキュベータの載置台には、通常パンチングメタルと呼ばれる穴開き板が用いられているが、その開口率は５０％以下であることが多いため、穴開き部分以外では、細胞培養容器の表面と載置台が密着して容器内へのガス透過が妨げられ、高密度培養時に細胞の酸素消費が多くなった場合、容器内における細胞周辺の酸素濃度が低下してしまうという問題があった。
　また、押圧治具に挟み込んだ状態で用いると、押圧治具の架台や押圧部材に容器表面が密着するため、この場合も容器のガス透過性能が阻害されて、細胞周辺の酸素濃度が低くなり、細胞増殖効率が低下するという問題があった。

　また、袋状の細胞培養容器を用いて細胞を大量培養する場合には、容器の強度とガス透過性の大きさが重要となる。
　例えば、ポリエチレンやエチレン酢酸ビニルなどのガス透過性フィルムを用いて細胞培養容器を製造する場合、容器の強度を確保するためには、通常１００μｍ以上の厚みが必要であった。

　しかしながら、この場合、培養細胞の密度が５０万個／ｃｍ^２以上の高密度になると容器のガス透過性能が不十分となり、細胞周辺の酸素濃度が低下して、増殖効率が低減してしまうという問題があった。
　一方、例えば５０μｍ以下の厚みのガス透過性フィルムを用いて細胞培養容器を製造した場合、培養細胞が高密度の状態でもガス透過性能は十分であるものの、容器の強度が不十分となって破袋の恐れが生じ、取り扱いが困難になるという問題があった。

特許第４８０６７６１号公報特開２０１６－７７１６４号公報

　ここで、特許文献１には、培養用トレイの押さえ板の袋状容器と接する位置に複数の通気孔を設けることによって、袋状容器のガス透過性能を向上させることが記載されている。
　しかしながら、袋状容器内において通常細胞は下面側に堆積するため、押さえ板に通気孔があるだけではガス透過性能の向上効果は小さく、この培養用トレイは、容器内における細胞周辺の酸素濃度が低下するという問題を十分に解消可能なものではなかった。

　そこで、本発明者らは鋭意研究して、容器を構成するガス透過性フィルムの外面に突起部を備え、ガス透過性フィルムを平面に接触させたときに、突起部によってガス透過性フィルムと平面との間に通気可能な空間を形成させることで、細胞培養容器のガス透過性能を高密度培養時でも十分なものにすることに成功した。
　また、このような細胞培養容器によれば、ガス透過性フィルムの厚みを１００μｍ未満にした場合でも取り扱い時の強度を確保することが可能である。

　また、本発明者らは、袋状の細胞培養容器を載置する架台と、その細胞培養容器を架台に対して押圧する押圧部材を備えた細胞培養用治具において、少なくとも架台を細胞培養容器の表面と架台との間で通気可能な器材で形成することによって、培養時における細胞培養容器のガス透過性能が阻害されることを抑制することに成功した。

　ところで、袋状の細胞培養容器のガス透過性能と強度を向上させるために、容器を構成するフィルムとして、その材料や密度が異なるものを積層して製膜した多層フィルムを用いる場合があるが、大きな性能向上には至っていない。

　また、ガス透過性能に優れた素材として、シリコーン材を挙げることができる。シリコーン材は強度が低いものの、厚みを３００μｍ以上にしても優れたガス透過性能を得ることができるため、取り扱い時の強度を確保することはできる。
　しかしながら、シリコーン材には、ポートなどを溶着することが困難であるという問題があった。また、シリコーン材は、放射線滅菌などによって有害な物質が溶出されるため、その後の培養性能に悪影響を及ぼす危険性があった。さらに、シリコーン材は、接着性細胞の培養に必要な表面処理が困難であるため、浮遊性細胞用の培養容器の製造は可能であるが、接着性細胞用の培養容器の製造が困難であるという問題もあった。

　そこで、本発明者らは、容器を構成するガス透過性フィルムの表面に複数の薄肉部と凸部とを形成し、薄肉部の厚みを７５μｍ以下にすることで、取り扱い時の強度を確保でき、かつガス透過度の大きさを細胞を高密度で培養可能なものとすることに成功して、本発明を完成させた。

　ここで、特許文献２には、ガス透過性フィルムに支持層を備えた細胞培養容器が記載されている。しかしながら、その支持層はフラスコなどの容器内に平置きに載置されるガス透過性フィルムの撓み防止するためのものであり、支持層によって容器の強度を向上させるものではなく、袋状の細胞培養容器のガス透過性能と強度を向上させて細胞を高密度で培養可能にするという課題を解消可能なものではなかった。

　これに対して、上記の構成によれば、容器を構成するガス透過性フィルムの表面に形成された凸部によって取り扱い時の強度が確保され、また所定の厚みの薄肉部によってガス透過性能を向上させることが可能となっている。

　本発明は、上記事情に鑑みてなされたものであり、細胞を高密度で培養するためのガス透過性と強度に優れた細胞培養容器、細胞培養容器の製造方法、細胞の製造方法、及び細胞培養装置の提供を目的とする。
　また、本発明は、細胞培養容器のガス透過性能が阻害されることを抑制して、細胞を高密度で培養することができる細胞培養用治具の提供を目的とする。

　上記目的を達成するため、本発明の細胞培養容器は、少なくとも１つのポートを有し、対向する平面状器材によって形成された袋状の閉鎖系の細胞培養容器であって、前記平面状器材の少なくとも一方がガス透過性フィルムからなり、少なくとも１つの前記ガス透過性フィルムの外面に、当該ガス透過性フィルムの内面形状とは異なる形状の突起部を備えると共に、当該ガス透過性フィルムの内面側に細胞を培養するための培養空間を備え、当該ガス透過性フィルムを平面に接触させたときに、前記突起部によって、当該ガス透過性フィルムと前記平面との間に通気可能な空間が形成される構成としてある。

　また、本発明の細胞培養容器を、前記培養空間の外側にあたる前記ガス透過性フィルムの外面領域において、前記突起部として、複数の略三角柱がそれぞれ山脈状に並列して形成された構成とすることが好ましい。
　さらに、本発明の細胞培養容器を、対向する前記平面状器材の両方がガス透過性フィルムからなり、それぞれのガス透過性フィルムの外面に前記突起部が備えられた構成とすることも好ましい。

　また、本発明の細胞培養容器の製造方法は、少なくとも１つのポートを有し、対向する平面状器材によって形成された袋状の閉鎖系の細胞培養容器の製造方法であって、前記平面状器材の少なくとも一方にガス透過性フィルムを用い、前記ガス透過性フィルムを平面に接触させたときに、前記ガス透過性フィルムと前記平面との間に通気可能な空間が形成されるように、前記ガス透過性フィルムの外面に、当該ガス透過性フィルムの内面形状とは異なる形状の突起部を形成し、対向する前記平面状器材の周縁部を貼り合わせて、前記ガス透過性フィルムの内面側に細胞を培養するための培養空間を形成する方法としてある。

　さらに、本発明の細胞の製造方法は、上記の細胞培養容器を用いて細胞を培養する方法としてある。

　また、本発明の細胞培養装置は、上記の細胞培養容器と、前記細胞培養容器を載置する平坦な架台、並びに、前記架台に載置された前記細胞培養容器を押圧する押圧部材を備え、前記細胞培養容器に形成された前記突起部によって、前記ガス透過性フィルムと前記架台との間、及び／又は、前記ガス透過性フィルムと前記押圧部材との間に通気可能な空間が形成される培養用治具とを有する構成としてある。

　また、上記目的を達成するため、本発明の細胞培養用治具は、少なくとも一方がガス透過性フィルムからなる対向する平面状器材によって形成された袋状の閉鎖系の細胞培養容器を保持する細胞培養用治具であって、細胞培養容器を載置する架台と、細胞培養容器を前記架台に対して押圧する押圧部材とを備え、前記架台は、前記ガス透過性フィルムが前記架台との間で通気可能な器材で形成され、前記細胞培養容器における前記ガス透過性フィルム側が前記架台に載置される構成としてある。

　また、本発明の細胞培養用治具を、前記押圧部材は、前記ガス透過性フィルムが前記押圧部材との間で通気可能な器材で形成され、前記細胞培養容器における前記ガス透過性フィルム側が前記押圧部材に押圧される構成とすることが好ましい。

　また、本発明の細胞培養用治具を、前記架台の四隅にガイドピンが立設され、前記ガイドピンは前記押圧部材に設けられたガイド穴に貫通し、前記押圧部材は、前記ガイドピンに沿って垂直方向に移動可能に備えられた構成とすることが好ましい。

　また、本発明の細胞培養用治具を、前記架台の四隅に支持柱が立設され、前記支持柱に天板が固定され、前記天板にガイドピンが備えられ、前記ガイドピンは前記押圧部材に設けられたガイド穴に貫通し、前記押圧部材は、前記ガイドピンに沿って垂直方向に移動可能に備えられた構成とすることが好ましい。

　また、本発明の細胞の製造方法は、上記の細胞培養用治具を用いて細胞を培養する方法としてある。

　さらに、上記目的を達成するため、本発明の細胞培養容器は、少なくとも１つのポートを有し、対向する平面状器材によって形成された袋状の閉鎖系の細胞培養容器であって、前記平面状器材の少なくとも一方がガス透過性フィルムからなり、当該ガス透過性フィルムにおける容器の内面側に細胞を培養するための培養空間が備えられ、この培養空間を形成する当該ガス透過性フィルムに複数の薄肉部と凸部とが形成され、前記薄肉部の厚みが７５μｍ以下である構成としてある。
　また、本発明の細胞培養容器を、前記薄肉部の厚みが２０～３５μｍである構成とすることも好ましい。

　また、本発明の細胞培養容器を、前記凸部が形成された前記ガス透過性フィルムの表面が、当該ガス透過性フィルムにおける容器の外面であり、当該ガス透過性フィルムにおける容器の内面が凹凸のない平坦状である構成とすることも好ましい。
　さらに、本発明の細胞培養容器を、前記凸部が形成された前記ガス透過性フィルムの表面が、当該ガス透過性フィルムにおける容器の内面であり、当該ガス透過性フィルムにおける容器の外面に複数の小突起部が形成され、当該外面を平面に接触させたときに、前記小突起部によって、当該ガス透過性フィルムと前記平面との間に通気可能な空間が形成される構成とすることも好ましい。

　また、本発明の細胞培養容器を、対向する前記平面状器材の両方がガス透過性フィルムからなり、それぞれのガス透過性フィルムに前記複数の薄肉部と前記凸部とが形成された構成とすることも好ましい。

　また、本発明の細胞培養容器を、前記凸部として、複数の略三角柱が山脈状に並列して形成された構成とすることも好ましい。
　さらに、本発明の細胞培養容器を、前記凸部として、複数の略三角柱が山脈状に並列して形成されると共に、当該複数の略三角柱に交差して他の複数の略三角柱が山脈状に並列して形成されて、これらの複数の略三角柱が格子状に備えられた構成とすることも好ましい。

　また、本発明の細胞培養容器を、平行して隣り合う前記凸部が１～５ｍｍの間隔を空けて形成された構成とすることも好ましい。
　さらに、本発明の細胞培養容器を、平行して隣り合う前記凸部が間隔を空けずに形成され、前記薄肉部が線状又は点状に形成された構成とすることも好ましい。

　また、本発明の細胞の製造方法は、上記の細胞培養容器を用いて細胞を培養する方法としてある。

　また、本発明の細胞培養容器の製造方法は、少なくとも１つのポートを有し、対向する平面状器材によって形成された袋状の閉鎖系の細胞培養容器の製造方法であって、前記平面状器材の少なくとも一方としてガス透過性フィルムを用いて、前記ガス透過性フィルムの表面に厚みが７５μｍ以下である複数の薄肉部と、凸部とを形成し、対向する前記平面状器材の周縁部を貼り合わせて、前記ガス透過性フィルムにおける容器の内面側に細胞を培養するための培養空間を形成する方法としてある。

　本発明によれば、細胞を高密度で培養するためのガス透過性と強度に優れた細胞培養容器、細胞培養容器の製造方法、細胞の製造方法、及び細胞培養装置の提供が可能となる。
　また、本発明によれば、細胞培養容器のガス透過性能が阻害されることを抑制して、細胞を高密度で培養することができる細胞培養用治具の提供が可能となる。

本発明の第一実施形態に係る細胞培養容器の平面図（ａ）及びＡＡ断面図（ｂ）を示す図である。本発明の第一実施形態に係る細胞培養容器に用いられるガス透過性フィルムの拡大図（ａ）及び同容器による細胞培養の様子を示す模式図（ｂ）である。本発明の第一実施形態に係る細胞培養容器を培養用治具に固定して培養を行う様子を示す図である。試験１の細胞培養容器（実施例１，比較例１）のガス透過性能の測定結果を表すグラフを示す図である。試験２の細胞培養容器（実施例２，比較例２）を用いた細胞培養の結果を示す図である。本発明の第二実施形態に係る細胞培養用治具及びこれに載置された細胞培養容器を示す斜視図（ａ）並びに同細胞培養用治具の架台と押圧部材の表面の拡大図（ｂ）である。本発明の第二実施形態に係る細胞培養用治具及びこれに載置された細胞培養容器を示す正面図である。本発明の第二実施形態に係る細胞培養用治具及びこれに載置された細胞培養容器を示す側面図である。本発明の第二実施形態に係る細胞培養用治具の変形例及びこれに載置された細胞培養容器を示す模式図である。本発明の第二実施形態に係る細胞培養用治具を用いた細胞培養の様子を示す模式図である。試験３の細胞培養用治具（実施例３，比較例３）に固定した細胞培養容器のガス透過性能の測定結果を表すグラフを示す図である。試験４の細胞培養用治具（実施例４，実施例５）に固定した細胞培養容器のガス透過性能の測定結果を表すグラフを示す図である。試験５の細胞培養用治具（実施例６，比較例４）を用いた細胞培養の結果を示す図である。試験６の細胞培養用治具（実施例７，比較例５）を用いた細胞培養の結果を示す図である。本発明の第三実施形態に係る細胞培養容器の平面図（ａ）及びＡＡ断面図（ｂ）を示す図である。本発明の第三実施形態に係る細胞培養容器に用いられるガス透過性フィルムの拡大図（ａ）及びＢＢ断面図（ｂ）である。本発明の第三実施形態に係る細胞培養容器などに用いられる各種ガス透過性フィルムの酸素透過度を示す図である。本発明の第三実施形態に係る細胞培養容器を用いて培養を行う様子を示す模式図である。本発明の第四実施形態に係る細胞培養容器に用いられるガス透過性フィルムの拡大図（ａ）及びＣＣ断面図（ｂ）である。本発明の第五実施形態に係る細胞培養容器に用いられるガス透過性フィルムの断面図（ａ）、及び第六実施形態に係る細胞培養容器に用いられるガス透過性フィルムの断面図（ｂ）である。本発明の第七実施形態に係る細胞培養容器に用いられるガス透過性フィルムの断面図（ａ）、及び第八実施形態に係る細胞培養容器に用いられるガス透過性フィルムの断面図（ｂ）である。本発明の第九実施形態に係る細胞培養容器に用いられるガス透過性フィルムの断面図（ａ）、及び第十実施形態に係る細胞培養容器に用いられるガス透過性フィルムの断面図（ｂ）である。

　以下、本発明の細胞培養容器、細胞培養容器の製造方法、細胞の製造方法、及び細胞培養装置の実施形態について詳細に説明する。ただし、本発明は、以下の実施形態及び実施例の具体的な内容に限定されるものではない。

［第一実施形態］
　本実施形態の細胞培養容器は、少なくとも１つのポートを有し、対向する平面状器材によって形成された袋状の閉鎖系の細胞培養容器であって、平面状器材の少なくとも一方がガス透過性フィルムからなり、少なくとも１つのガス透過性フィルムの外面に、当該ガス透過性フィルムの内面形状とは異なる形状の突起部を備えると共に、当該ガス透過性フィルムの内面側に細胞を培養するための培養空間を備え、当該ガス透過性フィルムを平面に接触させたときに、突起部によって、当該ガス透過性フィルムと平面との間に通気可能な空間が形成されることを特徴とする。

　具体的には、図１（ａ）に示すように、本実施形態の細胞培養容器１は、例えば矩形状の２枚の平面状器材１１の周縁部Ｈをヒートシールにより熱溶着させることによって得ることができる。２枚の平面状器材１１の間に形成された空間は、細胞を培養するための培養空間Ｓとして用いられる。平面状器材１１における培養空間Ｓを形成する領域は、細胞培養容器１において培養部を構成する。なお、平面状器材１１の全体形状や周縁部Ｈの形状、及び培養空間Ｓの形状は特に限定されず、任意の形状のものを用いることができる。

　平面状器材１１の少なくとも一方は、ガス透過性フィルムからなり、両方にガス透過性フィルムからなるものを用いることが好ましい。
　なお、平面状器材１１の「平面状」は、器材表面が凹凸のない平坦であることを意味せず、器材の全体形状が概ねであることを意味しており、平面状器材１１の表面に凹凸が形成されたものも含まれる。

　図１（ｂ）に示すように、本実施形態の細胞培養容器１において、ガス透過性フィルムである平面状器材１１の外面には突起部１１１が備えられ、ガス透過性フィルムを平面に接触させたときに、突起部１１１によって、ガス透過性フィルムと平面との間に通気可能な空間が形成されるようになっている。

　本実施形態における突起部１１１の形状は、特に限定されないが、例えば図１（ｂ）及び図２に示すように、複数の略三角柱が山脈状に並列して形成されたもの（以下、山脈状パターンと称する場合がある）とすることが好ましい。
　このように突起部１１１を山脈状パターンに形成することで、ガス透過性フィルムと平面との接触面積を小さくすることができ、細胞培養容器１のガス透過性能が阻害されることを防止することができる。

　また、このような山脈状パターンによれば、突起部１１１における突起の強度を向上させることができ、例えば押圧部材による押圧力で突起がゆがむなど損傷することを防止できる。
　さらに、突起部１１１を、複数の直方体が並列して配置されたものとしてもよく、その他の種々の形状にすることも可能である。

　本実施形態における突起部１１１は、培養空間Ｓの外側にあたるガス透過性フィルムの外面領域に形成することが好ましい。
　また、対向する平面状器材１１の両方にガス透過性フィルムを用いて、それぞれのガス透過性フィルムの外面に突起部１１１を備えることも好ましい。

　本実施形態の細胞培養容器１にこのような突起部１１１を備えることによって、細胞培養容器１を平面に載置した場合、当該平面に対面するガス透過性フィルムと、当該平面との間に通気可能な空間が形成されるため、細胞培養容器１のガス透過性能を大きく向上させることが可能になっている。
　また、細胞培養容器１の上面を押圧部材により押圧する場合、当該押圧部材の平面に対面するガス透過性フィルムと、当該平面との間に通気可能な空間が形成されるため、この場合にも、細胞培養容器１のガス透過性能を大きく向上させることが可能になっている。

　さらに、突起部１１１によって形成されたガス透過性フィルムと平面との間の空間に対して、送風を行うことにより、細胞培養容器１のガス透過性能をより向上させることも可能である。
　また、このように本実施形態の細胞培養容器１に突起部１１１を形成することで、細胞培養容器１の強度を向上させることも可能になっている。

　また、本実施形態の突起部１１１の形状は、ガス透過性フィルムの内面形状とは異なるものにすることが好ましく、例えば複数のウェルが容器の内面に形成され、当該ウェルの外面が容器の外側に半球を形成したようなものとは異なっている。
　すなわち、本実施形態の細胞培養容器１におけるガス透過性フィルムの外面に形成される突起部１１１は、ガス透過性フィルムの内面形状に拘わりなく、ガス透過性フィルムと平面との間の通気をより好適に行うことが可能な形状であることが好ましい。

　したがって、本実施形態の細胞培養容器１におけるガス透過性フィルムの内面の形状は、突起部１１１の形状に拘わりなく設定することができ、凹凸のない平坦状にすることも好ましく、突起部１１１の形状に拘わりなくガス透過性フィルムの内面に凹凸を形成して、容器内の培養面積を大きくすることもまた好ましい。

　平面状器材１１としては、樹脂フィルムなどを好適に用いることができ、ポリエチレンやポリプロピレンなどのポリオレフィン系樹脂等を用いることができる。例えば、ポリエチレン、エチレンとα－オレフィンの共重合体、エチレンと酢酸ビニルの共重合体、エチレンとアクリル酸やメタクリル酸共重合体と金属イオンを用いたアイオノマー等を挙げることができる。また、ポリオレフィン、スチレン系エラストマー、ポリエステル系熱可塑性エラストマー、シリコーン系熱可塑性エラストマー、シリコーン樹脂等を用いることもできる。さらに、シリコーンゴム、軟質塩化ビニル樹脂、ポリブタジエン樹脂、エチレン－酢酸ビニル共重合体、塩素化ポリエチレン樹脂、ポリウレタン系熱可塑性エラストマー、ポリエステル系熱可塑性エラストマー、シリコーン系熱可塑性エラストマー、スチレン系エラストマー、例えば、ＳＢＳ（スチレン・ブタジエン・スチレン）、ＳＩＳ（スチレン・イソプレン・スチレン）、ＳＥＢＳ（スチレン・エチレン・ブチレン・スチレン）、ＳＥＰＳ（スチレン・エチレン・プロピレン・スチレン）、ポリオレフィン樹脂、フッ素系樹脂等を用いてもよい。

　ガス透過性フィルムとしては、上記の平面状器材１１の材料のうち、特にガス透過性能に優れた熱可塑性樹脂を用いることが好ましく、例えば直鎖状低密度ポリエチレン（ＬＬＤＰＥ，Linear Low Density Polyethylene）などのポリエチレンやポリプロピレン等のポリオレフィン系樹脂を好適に用いることができる。また、細胞培養容器１の内部を視認可能にするために、ガス透過性フィルムは、透明材であることが好ましい。

　ここで、ガス透過性フィルムは、一般にその厚みが小さければ小さい程、ガス透過性能が高くなる一方で、ガス透過性フィルムの厚みが小さくなればなる程、その取り扱いが困難となり、特に厚みが３０μｍや２０μｍのものは食品用ラップ（厚み約１０μｍ）のような状態であるため、容器の強度が不足して破袋の恐れがある。
　しかしながら、本実施形態の細胞培養容器１は、ガス透過性フィルムの外面に突起部を備えているため、ガス透過性フィルムの厚みを比較的薄くしても取り扱うことができる。
　このため、本実施形態の細胞培養容器１におけるガス透過性フィルムの厚みは、１００μｍ未満であることが好ましく、７０μｍ以下で１０μｍ以上であることがより好ましく、３５μｍ以下で２０μｍ以上であることがさらに好ましい。

　本実施形態の細胞培養容器１による細胞培養の様子を、図２（ｂ）に示す。
　同図において、細胞培養容器１の中に、培養液を充填すると共に、培養液によって容積が拡大した培養空間Ｓに細胞２を播種して、培養が行われる様子が示されている。突起部１１１と細胞培養容器１の載置面との間には、通気空間Ｖが形成されている。
　このように、本実施形態の細胞培養容器１によれば、細胞培養を行うに際して、ガス透過性能に優れたものとすることができ、細胞を高密度で培養することが可能となっている。

　本実施形態の細胞培養容器１において、少なくとも１つのポート１２が、２枚の平面状器材１１の周縁部Ｈに挟み込まれ、熱溶着されて備えられている。
　図１では、ポート１２が平面状器材１１の長手方向両端に対向して２つ備えられているが、ポート１２の個数はこれに限定されず、１個でも３個以上であってもよい。
　ポート１２の材料としては、例えば、ポリエチレン、ポリプロピレン、塩化ビニル、ポリスチレン系エラストマー、ＦＥＰなどの熱可塑性樹脂等を用いることができる。

　本実施形態の細胞の製造方法は、前述した細胞培養容器１を用いて細胞を培養することを特徴とする。
　細胞培養容器１を用いて培養する細胞は、特に限定されず、培養液中に浮遊させて培養が行われるリンパ球や樹状細胞などの浮遊性細胞であっても、容器内の培養部に接着させて培養が行われる人工多能性幹細胞（ｉＰＳ細胞）、神経幹細胞、胚性幹細胞（ＥＳ細胞）、間葉系幹細胞、肝細胞、膵島細胞、心筋細胞、角膜内皮細胞、及び活性化工程のリンパ球等の接着性細胞であってもよい。

　本実施形態の細胞培養容器の製造方法は、少なくとも１つのポートを有し、対向する平面状器材によって形成された袋状の閉鎖系の細胞培養容器の製造方法であって、平面状器材の少なくとも一方にガス透過性フィルムを用い、ガス透過性フィルムを平面に接触させたときに、ガス透過性フィルムと平面との間に通気可能な空間が形成されるように、ガス透過性フィルムの外面に、当該ガス透過性フィルムの内面形状とは異なる形状の突起部を形成し、対向する平面状器材の周縁部を貼り合わせて、ガス透過性フィルムの内面側に細胞を培養するための培養空間を形成することを特徴とする。

　また、本実施形態の細胞培養容器の製造方法において、対向する平面状器材の両方にガス透過性フィルムを用い、それぞれのガス透過性フィルムの外面に突起部を形成することが好ましい。
　さらに、この突起部を、熱転写、キャスト製膜、又はインフレーション製膜によって形成することも好ましい。
　このような細胞培養容器の製造方法によれば、ガス透過性能と強度に優れた細胞培養容器を製造することが可能である。

　本実施形態の細胞培養装置は、前述した細胞培養容器と、細胞培養容器を載置する平坦な架台、並びに、架台に載置された細胞培養容器を押圧する押圧部材を備え、細胞培養容器に形成された突起部によって、ガス透過性フィルムと架台との間、及び／又は、ガス透過性フィルムと押圧部材との間に通気可能な空間が形成される培養用治具とを有することを特徴とする。

　すなわち、図３に示すように、本実施形態の細胞培養装置３は、細胞培養容器１、架台３１、押圧部材３２、及びガイドピン３３を備えている。
　細胞培養容器１は架台３１に載置され、細胞培養容器１の上面を押圧部材３２が押圧している。架台３１の四隅にはガイドピン３３が立設され、ガイドピン３３は押圧部材３２に設けられたガイド穴に貫通している。そして、押圧部材３２はこれらのガイドピン３３に沿って垂直方向に移動可能に支持されている。

　このとき、押圧部材３２の自重によって、細胞培養容器１を一定の圧力で押圧するように固定することができる。また、ガイドピン３３にバネ材を設置して、押圧部材３２を細胞培養容器１に適宜押し付けることもできる。
　本実施形態の細胞培養装置３をこのような構成にすることにより、細胞培養容器１への培養液の注入又は排出に伴って、押圧部材３２を垂直方向に移動可能とすることができる。

　本実施形態の細胞培養装置３において、細胞培養容器１に突起部１１１が備えられているため、架台３１の上面に対面するガス透過性フィルムと、当該架台３１の上面との間に通気可能な空間が形成されている。また、押圧部材３２の下面に対面するガス透過性フィルムと、当該押圧部材３２の下面との間に通気可能な空間が形成されている。
　このため、本実施形態の細胞培養装置３によれば、架台３１と押圧部材３２に挟まれて細胞培養容器１のガス透過性能が阻害されることを、抑制することが可能になっている。

　次に、本発明の細胞培養用治具、及び細胞の製造方法の実施形態について詳細に説明する。ただし、本発明は、以下の実施形態及び実施例の具体的な内容に限定されるものではない。

［第二実施形態］
　本実施形態の細胞培養用治具は、少なくとも一方がガス透過性フィルムからなる対向する平面状器材によって形成された袋状の閉鎖系の細胞培養容器を保持する細胞培養用治具であって、細胞培養容器を載置する架台と、細胞培養容器を架台に対して押圧する押圧部材とを備え、架台は、ガス透過性フィルムが架台との間で通気可能な器材で形成され、細胞培養容器におけるガス透過性フィルム側が架台に載置されることを特徴とする。
　また、本実施形態の細胞培養用治具において、押圧部材は、ガス透過性フィルムが押圧部材との間で通気可能な器材で形成され、細胞培養容器におけるガス透過性フィルム側が押圧部材に押圧されることが好ましい。

　具体的には、図６～図８に示すように、本実施形態の細胞培養用治具５は、細胞培養容器６を載置する架台５１と、細胞培養容器６を架台５１に対して押圧する押圧部材５２とを備えている。
　架台５１の四隅には支持柱５３が立設されており、支持柱５３に天板５４が固定されている。また、天板５４にガイドピン５５が備えられ、ガイドピン５５は押圧部材５２に設けられたガイド穴に貫通し、押圧部材５２は、ガイドピン５５に沿って垂直方向に移動可能に備えられている。なお、天板５４に開口部を設け、これを通じて細胞培養用治具５の内部が視認できるようにすることも好ましい。

　架台５１は、ガス透過性フィルムが当該架台５１との間で通気可能な器材で形成されており、例えば器材の表面を凹凸加工することによって形成されたものとすることが好ましく、凹凸加工によって、器材の表面に突起部５１１が形成されたものとすることがより好ましい。

　また、押圧部材５２は、ガス透過性フィルムが当該押圧部材５２との間で通気可能な器材で形成されており、例えば器材の表面を凹凸加工することによって形成されたものとすることが好ましく、凹凸加工によって、器材の表面に突起部５２１が形成されたものとすることがより好ましい。

　突起部５１１及び突起部５２１としては、図６（ｂ），図７，図８に示すように、複数の略三角柱が山脈状に並列して形成されたもの（以下、山脈状パターンと称する場合がある）とすることが好ましい。
　このように突起部５１１及び突起部５２１を山脈状パターンに形成することで、ガス透過性フィルムと架台５１及び押圧部材５２との接触面積を小さくすることができ、細胞培養容器６のガス透過性能が阻害されることを防止することができる。

　また、このような山脈状パターンによれば、突起部５１１及び突起部５２１における突起の強度を向上させることができ、押圧部材５２による押圧力で突起がゆがむなど損傷することを防止できる。
　さらに、山脈状パターンにおける複数の略三角柱の間に平坦部を設けることにより、ガス透過性フィルムが透明材である場合に細胞培養容器６の内部の視認性を確保することが可能となる。

　また、上記の通気可能な器材として、多孔質材を用いることも好ましい。さらに、上記の通気可能な器材として、穴開き板を用いることも好ましい。
　本実施形態の細胞培養用治具５において、通気可能な器材として、多孔質材や穴開き板を用いても、細胞培養容器のガス透過性能が阻害されることを抑制できる。

　また、本実施形態の細胞培養用治具５は、天板５４の四隅において、図示しないが、押圧部材５２を下方へ付勢する付勢手段として永久磁石を備えると共に、押圧部材５２の永久磁石に対応する位置に互いに同極側を対向させて付勢手段として永久磁石が備えることも好ましい。
　このような付勢手段を用いることで、押圧部材５２は、永久磁石間に働く斥力により、細胞培養容器６における平面状器材６１を垂直に押圧した状態で、垂直方向に移動可能にすることができる。
　なお、付勢手段は、永久磁石に限定されず、また付勢手段を省略して、押圧部材５２の自重により、押圧部材５２を上下に移動させる構成としてもよい。

　架台５１は、例えば、ポリカーボネートのような合成樹脂で形成することができる。
　また、押圧部材５２は、例えば、ポリカーボネートのような合成樹脂で形成してもよいし、ガラスで形成してもよい。なお、押圧部材５２としては、培養の進行状況や培養対象物の状態などを確認できるように、その一部又は全部が透明性を有しているものを用いることが好ましい。

　次に、本実施形態の細胞培養用治具の変形例について、図９を参照して説明する。
　同図に示すように、細胞培養用治具５ａの架台５１aに細胞培養容器６が載置され、細胞培養容器６の上面を押圧部材５２ａが押圧している。
　架台５１aの四隅にはガイドピン５５ａが立設され、ガイドピン５５ａは押圧部材５２ａに設けられたガイド穴に貫通している。そして、押圧部材５２ａは、ガイドピン５５ａに沿って垂直方向に移動可能に備えられている。

　このとき、押圧部材５２ａの自重によって、細胞培養容器６を一定の圧力で押圧するように固定することができる。また、ガイドピン５５ａにバネ材を設置して、押圧部材５２ａを細胞培養容器６に適宜押し付けることもできる。これにより、細胞培養容器６への培養液の注入又は排出に伴って、押圧部材５２ａを垂直方向に移動可能とすることができる。

　本実施形態において、細胞培養容器６は、特に限定されないが、例えば矩形状の２枚の平面状器材６１，６２の周縁部をヒートシールにより熱溶着させることによって形成されたものとすることができる。２枚の平面状器材の間に形成された空間は、細胞を培養するための培養空間として用いられ、平面状器材６１，６２における培養空間を形成する領域は、細胞培養容器６において培養部を構成する。

　平面状器材６１，６２の少なくとも一方は、ガス透過性フィルムからなり、両方にガス透過性フィルムからなるものを用いることが好ましい。ガス透過性フィルムとしては、例えば直鎖状低密度ポリエチレン（ＬＬＤＰＥ，Linear Low Density Polyethylene）などのポリエチレンやポリプロピレン等のポリオレフィン系樹脂を好適に用いることができる。また、細胞培養容器６の内部を視認可能にするために、ガス透過性フィルムは、透明材であることが好ましい。
　なお、平面状器材６１，６２の「平面状」は、器材表面が凹凸のない平坦であることを意味せず、器材の全体形状が概ねであることを意味しており、器材表面に凹凸が形成されたものも含まれる。

　細胞培養容器６に培養液が充填されているときは、図７及び図８に示すように、細胞培養容器６により押圧部材５２が押し上げられた状態となる。
　一方、細胞培養容器６からポート６３を介して培養液が排出されると、それに従って、細胞培養容器６における培養液の液厚は減少し、これに伴って押圧部材５２は下降する。

　図７において、ポート６３は、細胞培養容器６の長手方向両端に対向して２つ備えられているが、ポートの個数はこれに限定されず、１個でも３個以上であってもよい。ポートの材料としては、例えば、ポリエチレン、ポリプロピレン、塩化ビニル、ポリスチレン系エラストマー、ＦＥＰなどの熱可塑性樹脂等を用いることができる。

　本実施形態の細胞培養用治具５（５ａ）を用いた細胞培養の様子を、図１０に示す。
　同図において、細胞培養容器６の中に、培養液を充填すると共に、培養液によって容積が拡大した培養空間に細胞７を播種して、培養が行われる様子が示されている。
　細胞培養用治具５（５ａ）の架台５１（５１ａ）における突起部５１１（５１１ａ）と細胞培養容器６の架台側の平面状器材６２との間には、通気空間Ｖが形成されている。

　また、細胞培養用治具５（５ａ）の押圧部材５２（５２ａ）における突起部５２１（５２１ａ）と細胞培養容器６の天板側の平面状器材６１との間にも、通気空間Ｖが形成されている。
　このように、本実施形態の細胞培養用治具５（５ａ）によれば、細胞培養を行うに際して、細胞培養容器６のガス透過性能が阻害されることを抑制でき、細胞を高密度で培養することが可能となっている。

　本実施形態の細胞の製造方法は、前述した細胞培養用治具５を用いて細胞を培養することを特徴とする。
　細胞培養用治具５を用いて培養する細胞は、特に限定されず、培養液中に浮遊させて培養が行われるリンパ球や樹状細胞などの浮遊性細胞であっても、容器内の培養部に接着させて培養が行われる人工多能性幹細胞（ｉＰＳ細胞）、神経幹細胞、胚性幹細胞（ＥＳ細胞）、間葉系幹細胞、肝細胞、膵島細胞、心筋細胞、角膜内皮細胞、及び活性化工程のリンパ球等の接着性細胞であってもよい。

　以上説明したように、本実施形態の細胞培養用治具によれば、細胞培養容器のガス透過性能が阻害されることを抑制することができ、細胞を高密度で培養することが可能である。

　次に、本発明の細胞培養容器、細胞の製造方法、及び細胞培養容器の製造方法の実施形態について詳細に説明する。ただし、本発明は、以下の実施形態の具体的な内容に限定されるものではない。

［第三実施形態］
　まず、本発明の第三実施形態について、図１５～図１８を参照して説明する。
　本実施形態の細胞培養容器は、少なくとも１つのポートを有し、対向する平面状器材によって形成された袋状の閉鎖系の細胞培養容器であって、平面状器材の少なくとも一方がガス透過性フィルムからなり、当該ガス透過性フィルムにおける容器の内面側に細胞を培養するための培養空間が備えられ、この培養空間を形成する当該ガス透過性フィルムに複数の薄肉部と凸部とが形成され、薄肉部の厚みが７５μｍ以下であることを特徴とする。また、薄肉部の厚みを２０～３５μｍとすることも好ましい。

　具体的には、図１５（ａ）に示すように、本実施形態の細胞培養容器７は、例えば矩形状の２枚の平面状器材７１の周縁部Ｈをヒートシールにより熱溶着させることによって得ることができる。２枚の平面状器材７１の間に形成された空間は、細胞を培養するための培養空間Ｓとして用いられる。平面状器材７１における培養空間Ｓを形成する領域は、細胞培養容器７において培養部を構成する。なお、平面状器材７１の全体形状や周縁部Ｈの形状、及び培養空間Ｓの形状は特に限定されず、任意の形状のものを用いることができる。

　平面状器材７１の少なくとも一方は、ガス透過性フィルムからなり、両方にガス透過性フィルムからなるものを用いることが好ましい。
　なお、平面状器材７１の「平面状」は、器材表面が凹凸のない平坦であることを意味せず、器材の全体形状が概ねであることを意味しており、平面状器材７１の表面に凹凸が形成されたものも含まれる。

　図１５（ｂ）に示すように、本実施形態の細胞培養容器７において、ガス透過性フィルムである平面状器材７１には複数の薄肉部７１１が形成されている。また、当該ガス透過性フィルムにおける容器の外面には複数の凸部７１２が形成されている。さらに、当該ガス透過性フィルムにおける容器の内面は、凹凸のない平坦状となっている。
　なお、ガス透過性フィルムに形成する凸部の個数は複数に限定されず、第四実施形態の細胞培養器などにおける凸部のように、複数の凸部がつながりあって実質的に１個の凸部が形成されたものも含まれる。

　本実施形態では、対向する平面状器材７１の両方がガス透過性フィルムからなり、それぞれのガス透過性フィルムに薄肉部７１１と凸部７１２が形成されているが、いずれか一方のみの平面状器材７１をガス透過性フィルムからなるものとして、当該ガス透過性フィルムに薄肉部７１１と凸部７１２を形成した構成とすることもできる。

　凸部７１２は、図１６（ａ）及び図１６（ｂ）に示すように、複数の略三角柱が山脈状に並列して形成されたもの（以下、山脈状パターンと称する場合がある）とすることが好ましい。
　このように凸部７１２を山脈状パターンに形成することで、ガス透過性フィルムと平面との接触面積を小さくすることができ、細胞培養容器７のガス透過性能が阻害されることを防止することができる。
　また、このような山脈状パターンによれば、凸部７１２の突起の強度を向上させることができる。

　本実施形態の細胞培養容器７では、平行して隣り合う凸部７１２が１～５ｍｍの間隔を空けて形成されている。すなわち、薄肉部７１１の幅（短尺方向の幅）が１～５ｍｍとなるように形成されている。これにより、細胞培養容器７の取り扱い時の強度とガス透過性能を十分なものとすることができる。また、細胞培養容器７の取り扱い時の強度とガス透過性能をより好適にするために、薄肉部７１１の幅を１～３ｍｍとすることが好ましく、１～２ｍｍとすることがより好ましい。

　なお、平行して隣り合う凸部７１２の間隔は１ｍｍより小さくてもよく、後述する第五実施形態などにおいて説明するように、平行して隣り合う凸部７１２を間隔を空けずに形成した場合でも、取り扱い時の強度を確保できるのみならず、ガス透過度の大きさを細胞を高密度で培養可能なものにすることが可能である。

　ここで、図１７を参照して、複数の薄肉部と凸部が形成されたガス透過性フィルムなどの酸素透過度について説明する。
　まず、ガス透過性フィルムとして、凹凸のない平面状のもの２種類と、薄肉部と凸部が形成されたもの７種類を準備した。
　具体的には、ＬＬＤＰＥ（Linear Low Density Polyethylene，直鎖状低密度ポリエチレン）からなり、フィルムの厚みが１１０μｍの平面状フィルム（１）と、フィルムの厚みが３０μｍの平面状フィルム（２）を準備した。

　また、ＬＬＤＰＥからなる薄肉部と凸部が形成されたフィルム（３）～（８）として、薄肉部の厚みがそれぞれ１００μｍ，７５μｍ，５０μｍ，３５μｍ，３０μｍ，２５μｍ、凸部のピッチがいずれも２ｍｍ、凸部の底辺の長さがそれぞれ０．１５ｍｍ，０．２７ｍｍ，０．３６ｍｍ，０．４ｍｍ，０．４１ｍｍ，０．４２ｍｍ、薄肉部の幅がそれぞれ１．８５ｍｍ，１．７３ｍｍ，１．６４ｍｍ，１．６ｍｍ，１．５９ｍｍ，１．５８ｍｍ、凸部の高さがそれぞれ０．２７ｍｍ，０．５１ｍｍ，０．６７ｍｍ，０．７５ｍｍ，０．７７ｍｍ，０．８２ｍｍ、凸部の角度（凸部の底辺と斜辺のなす角）がいずれも７５°のものを準備した。

　さらに、ＬＬＤＰＥからなる薄肉部と凸部が形成されたフィルム（９）として、平行して隣り合う凸部が間隔を空けずに連続して形成されたもの（薄肉部の厚み２５μｍ、凸部のピッチ０．１１ｍｍ、凸部の底辺の長さ０．１１ｍｍ、凸部の高さ０．１９ｍｍ、凸部の角度７５°）のものを準備した。
　なお、フィルム（３）～（９）は、いずれもフィルムの厚みが１１０μｍのＬＬＤＰＥからなる平面状フィルムに各凸部を熱転写によって加工し形成したものである。

　そして、ガス透過測定装置（ＧＴＲテック株式会社製，フロー式ガス・水蒸気透過率測定装置GTR-20X）を用いて、フロー式(等圧式，JIS K 7126-2）にもとづき酸素透過度を計測した。

　図１７に示されるように、フィルムの厚みが１１０μｍ，３０μｍの平面状フィルムの酸素透過度（ｍｌ／ｍ^２・２４Ｈｒ・ａｔｍ）は、それぞれ９０００，３１０００であったのに対し、薄肉部と凸部が形成されたフィルム（薄肉部の厚み１００μｍ，７５μｍ，５０μｍ，３５μｍ，３０μｍ，２５μｍ，２５μｍ（凸部連続））の酸素透過度は、それぞれ８０００，１１０００，１７０００，２５０００，２７０００，２８０００，２７０００であった。

　このように、薄肉部と凸部が形成されたフィルムは、凸部を備えることで取り扱い時の強度を確保できるのみならず、その酸素透過度を厚み１１０μｍの平面状フィルムのもの以上にすることが可能になっている。すなわち、これらのフィルムは、前述のように、厚み１１０μｍの平面状フィルムを加工して得られたものであるが、薄肉部と凸部を形成することで、酸素透過度をより向上させることが可能になっている。

　特に、薄肉部の厚みが７５μｍ以下のものは、１１０００以上の酸素透過度を得ることができ、薄肉部の厚みが３５μｍ～２５μｍのものは、２５０００以上の優れた酸素透過度を得ることが可能になっている。
　なお、この酸素透過度は、凸部がガス透過性フィルムにおける容器の外側に形成されている場合でも同内側に形成されている場合でも同様である。

　平面状器材７１としては、樹脂フィルムなどを好適に用いることができ、ポリエチレンやポリプロピレンなどのポリオレフィン系樹脂等を用いることができる。例えば、ポリエチレン、エチレンとα－オレフィンの共重合体、エチレンと酢酸ビニルの共重合体、エチレンとアクリル酸やメタクリル酸共重合体と金属イオンを用いたアイオノマー等を挙げることができる。また、ポリオレフィン、スチレン系エラストマー、ポリエステル系熱可塑性エラストマー等を用いることもできる。さらに、軟質塩化ビニル樹脂、ポリブタジエン樹脂、エチレン－酢酸ビニル共重合体、塩素化ポリエチレン樹脂、ポリウレタン系熱可塑性エラストマー、ポリエステル系熱可塑性エラストマー、シリコーン系熱可塑性エラストマー、スチレン系エラストマー、例えば、ＳＢＳ（スチレン・ブタジエン・スチレン）、ＳＩＳ（スチレン・イソプレン・スチレン）、ＳＥＢＳ（スチレン・エチレン・ブチレン・スチレン）、ＳＥＰＳ（スチレン・エチレン・プロピレン・スチレン）、ポリオレフィン樹脂、フッ素系樹脂等を用いてもよい。

　ガス透過性フィルムとしては、上記の平面状器材７１の材料のうち、特にガス透過性能に優れた熱可塑性樹脂を用いることが好ましく、例えばＬＬＤＰＥなどのポリエチレンやポリプロピレン等のポリオレフィン系樹脂を好適に用いることができる。また、細胞培養容器７の内部を視認可能にするために、ガス透過性フィルムは、透明材であることが好ましい。

　ここで、ガス透過性フィルムは、一般にその厚みが小さければ小さい程、ガス透過性能が高くなる一方で、ガス透過性フィルムの厚みが小さくなればなる程、その取り扱いが困難となり、特に厚みが３０μｍや２０μｍのものは食品用ラップ（厚み約１０μｍ）のような状態であるため、容器の強度が不足して破袋の恐れがある。
　しかしながら、本実施形態の細胞培養容器７は、ガス透過性フィルムに凸部７１２を備えているため、ガス透過性フィルムの薄肉部７１１の厚みを比較的薄くしても取り扱うことができる。
　このため、本実施形態の細胞培養容器７におけるガス透過性フィルムの厚みは、１００μｍ未満であることが好ましく、７５μｍ以下であることがより好ましく、３５μｍ以下で２０μｍ以上であることがさらに好ましい。

　本実施形態の細胞培養容器７において、少なくとも１つのポート７２が、２枚の平面状器材７１の周縁部Ｈに挟み込まれ、熱溶着されて備えられている。
　図１５では、ポート７２が平面状器材７１の長手方向両端に対向して２つ備えられているが、ポート７２の個数はこれに限定されず、１個でも３個以上であってもよい。
　ポート７２の材料としては、例えば、ポリエチレン、ポリプロピレン、塩化ビニル、ポリスチレン系エラストマー、ＦＥＰなどの熱可塑性樹脂等を用いることができる。

　本実施形態の細胞培養容器７による細胞培養の様子を図１８に示す。
　同図において、細胞培養容器７の中に、培養液を充填すると共に、培養液によって容積が拡大した培養空間Ｓに細胞８を播種して、培養が行われる様子が示されている。
　細胞培養容器７を用いて培養する細胞は、特に限定されず、培養液中に浮遊させて培養が行われるリンパ球や樹状細胞などの浮遊性細胞であっても、容器内の培養部に接着させて培養が行われる人工多能性幹細胞（ｉＰＳ細胞）、神経幹細胞、胚性幹細胞（ＥＳ細胞）、間葉系幹細胞、肝細胞、膵島細胞、心筋細胞、角膜内皮細胞、及び活性化工程のリンパ球等の接着性細胞であってもよい。

　本実施形態の細胞の製造方法は、前述した細胞培養容器７を用いて細胞を培養することを特徴とする。後述する実施形態の細胞の製造方法も同様に、各実施形態の細胞培養容器を用いて細胞を培養することを特徴とするが、以下においてはその記載を省略する。

　本実施形態の細胞培養容器の製造方法は、少なくとも１つのポート７２を有し、対向する平面状器材７１によって形成された袋状の閉鎖系の細胞培養容器７の製造方法であって、平面状器材７１の少なくとも一方としてガス透過性フィルムを用いて、ガス透過性フィルムに厚みが７５μｍ以下である複数の薄肉部７１１と、凸部７１２とを形成し、対向する平面状器材７１の周縁部Ｈを貼り合わせて、ガス透過性フィルムにおける容器の内面側に細胞８を培養するための培養空間Ｓを形成することを特徴とする。

　また、本実施形態の細胞培養容器の製造方法において、ガス透過性フィルムに厚みが２０～３５μｍである複数の薄肉部７１１と、凸部７１２とを形成することも好ましい。
　さらに、本実施形態の細胞培養容器の製造方法において、凸部７１２をガス透過性フィルムにおける容器の外面に形成し、当該ガス透過性フィルムにおける容器の内面を凹凸のない平坦状とすることも好ましい。

　また、本実施形態の細胞培養容器の製造方法において、対向する平面状器材７１の両方にガス透過性フィルムを用いて、それぞれのガス透過性フィルムに複数の薄肉部７１１と凸部７１２とを形成することも好ましい。
　さらに、本実施形態の細胞培養容器の製造方法において、凸部７１２として、複数の略三角柱を山脈状に並列して形成することも好ましい。

　また、本実施形態の細胞培養容器の製造方法において、平行して隣り合う凸部７１２を１～５ｍｍの間隔を空けて形成することも好ましい。
　さらに、本実施形態の細胞培養容器の製造方法において、凸部７１２を熱転写、又はキャスト製膜によって形成することも好ましい。

　このように、本実施形態の細胞培養容器、細胞の製造方法、及び細胞培養容器の製造方法によれば、凸部が山脈状パターンに間隔を空けて容器の外側に形成された、ガス透過性能と強度に優れた細胞培養容器を製造することができ、この細胞培養容器を用いて細胞を効率的に大量培養することが可能である。

［第四実施形態］
　次に、本発明の第四実施形態について、図１９を参照して説明する。
　本実施形態の細胞培養容器は、ガス透過性フィルムに複数の薄肉部７１１ａと凸部７１２ａとが形成され、凸部７１２ａとして、ガス透過性フィルムにおける容器の外面に複数の略三角柱が山脈状に並列して形成されると共に、当該複数の略三角柱に交差して他の複数の略三角柱が山脈状に並列して形成されて、これらの複数の略三角柱が格子状に備えられている点で、第三実施形態と相違する。
　本実施形態の細胞培養容器、細胞の製造方法、及び細胞培養容器の製造方法のその他の構成については、以下に説明する点を除いて第三実施形態と同様である。

　具体的には、図１９（ａ）及び図１９（ｂ）に示すように、本実施形態の細胞培養容器において、ガス透過性フィルムである平面状器材７１ａには複数の薄肉部７１１ａが形成されている。また、当該ガス透過性フィルムにおける容器の外面には凸部７１２ａが形成されている。さらに、当該ガス透過性フィルムにおける容器の内面は、凹凸のない平坦状となっている。

　本実施形態では、対向する平面状器材７１ａの両方がガス透過性フィルムからなり、それぞれのガス透過性フィルムに薄肉部７１１ａと凸部７１２ａが形成されているが、いずれか一方のみの平面状器材７１ａをガス透過性フィルムからなるものとして、当該ガス透過性フィルムに薄肉部７１１ａと凸部７１２ａを形成した構成とすることもできる。

　凸部７１２ａは、複数の略三角柱が山脈状に並列して形成されると共に、当該複数の略三角柱に交差して他の複数の略三角柱が山脈状に並列して形成されたもの（以下、格子状パターンと称する場合がある）とすることが好ましい。
　図１９（ａ）及び図１９（ｂ）において、縦方向の略三角柱の高さよりも横方向の略三角柱の高さが低く形成されている。

　これにより、本実施形態の細胞培養容器の凸部７１２ａが形成された面を下向きにして平面に載置した場合に、平面状器材７１ａと平面との間に通気可能な空間が形成されるようになっている。
　また、本実施形態の細胞培養容器の凸部７１２ａが形成された面を上向きにして上方から押圧板などを用いて押圧した場合にも、平面状器材７１ａと平面との間に通気可能な空間が形成されるようになっている。
　このように、細胞培養容器に凸部を形成することで、細胞培養容器と平面との間に通気可能な空間が形成される点は、以下の実施形態においても同様である。

　このように凸部７１２ａを格子状パターンに形成することで、ガス透過性フィルムと平面との接触面積を小さくすることができ、細胞培養容器のガス透過性能が阻害されることを防止することができる。
　また、このような格子状パターンによれば、凸部７１２ａの突起の強度を向上させることができる。
　さらに、図１９（ａ）において、凸部７１２ａとして、複数の略三角柱と他の複数の略三角柱とが垂直に交差しているが、斜めに交差するように形成することもできる。

　また、本実施形態の細胞培養容器では、平行して隣り合う凸部７１２ａが１～５ｍｍの間隔を空けて形成されている。すなわち、薄肉部７１１ａの幅が１～５ｍｍとなるように形成されているが、薄肉部７１１ａの幅は１～３ｍｍとすることが好ましく、１～２ｍｍとすることがより好ましい。

　本実施形態の細胞培養容器の製造方法において、凸部７１２ａとして、複数の略三角柱を山脈状に並列して形成すると共に、当該複数の略三角柱に交差して他の複数の略三角柱を山脈状に並列して形成して、これらの複数の略三角柱を格子状に形成することが好ましい。

　このように、本実施形態の細胞培養容器、細胞の製造方法、及び細胞培養容器の製造方法によれば、凸部が格子状パターンに間隔を空けて容器の外側に形成された、ガス透過性能と強度に優れた細胞培養容器を製造することができ、この細胞培養容器を用いて細胞を効率的に大量培養することが可能である。

［第五実施形態］
　次に、本発明の第五実施形態について、図２０（ａ）を参照して説明する。
　本実施形態の細胞培養容器は、ガス透過性フィルムに複数の薄肉部７１１ｂと凸部７１２ｂとが形成され、凸部７１２ｂとして、ガス透過性フィルムにおける容器の外面に複数の略三角柱が山脈状に並列して形成され、かつ平行して隣り合う凸部７１２ｂが間隔を空けずに形成されて、薄肉部７１１ｂが線状に形成されている点で、第三実施形態と相違する。
　本実施形態の細胞培養容器、細胞の製造方法、及び細胞培養容器の製造方法のその他の構成については、以下に説明する点を除いて第三実施形態と同様である。

　具体的には、図２０（ａ）に示すように、本実施形態の細胞培養容器において、ガス透過性フィルムである平面状器材７１ｂには複数の薄肉部７１１ｂが平行して線状に（同図においては奥行き方向に）形成されている。また、当該ガス透過性フィルムにおける容器の外面には凸部７１２ｂが前後方向（同図においては奥行き方向）に平行して間隔を空けずに連続して形成されている。さらに、当該ガス透過性フィルムにおける容器の内面は、凹凸のない平坦状となっている。

　本実施形態では、対向する平面状器材７１ｂの両方がガス透過性フィルムからなり、それぞれのガス透過性フィルムに薄肉部７１１ｂと凸部７１２ｂが形成されているが、いずれか一方のみの平面状器材７１ｂをガス透過性フィルムからなるものとして、当該ガス透過性フィルムに薄肉部７１１ｂと凸部７１２ｂを形成した構成とすることもできる。

　凸部７１２ｂは、図２０（ａ）に示すように、複数の略三角柱が山脈状に並列して形成されたもの（山脈状パターン）とすることが好ましい。
　このように凸部７１２ｂを山脈状パターンに形成することで、ガス透過性フィルムと平面との接触面積を小さくすることができ、細胞培養容器のガス透過性能が阻害されることを防止することができる。
　また、このような山脈状パターンによれば、凸部７１２ｂの突起の強度を向上させることができる。

　本実施形態の細胞培養容器の製造方法において、凸部７１２ｂとして、平行して隣り合う凸部を間隔を空けずに形成し、薄肉部７１１ｂを線状に形成することが好ましい。

　このように、本実施形態の細胞培養容器、細胞の製造方法、及び細胞培養容器の製造方法によれば、凸部が山脈状パターンに間隔を空けずに容器の外側に形成された、ガス透過性能と強度に優れた細胞培養容器を製造することができ、この細胞培養容器を用いて細胞を効率的に大量培養することが可能である。

［第六実施形態］
　次に、本発明の第六実施形態について、図２０（ｂ）を参照して説明する。
　本実施形態の細胞培養容器は、ガス透過性フィルムに複数の薄肉部７１１ｃと凸部７１２ｃとが形成され、凸部７１２ｃとして、ガス透過性フィルムにおける容器の外面に複数の略三角柱が格子状に備えられ、かつ平行して隣り合う凸部７１２ｃが間隔を空けずに形成されて、薄肉部７１１ｃが点状に形成されている点で、第三実施形態と相違する。
　本実施形態の細胞培養容器、細胞の製造方法、及び細胞培養容器の製造方法のその他の構成については、以下に説明する点を除いて第三実施形態と同様である。

　具体的には、図２０（ｂ）に示すように、本実施形態の細胞培養容器において、ガス透過性フィルムである平面状器材７１ｃには複数の薄肉部７１１ｃが点状に形成されている。また、当該ガス透過性フィルムにおける容器の外面には凸部７１２ｃが前後方向（同図においては奥行き方向）及び左右方向に平行して間隔を空けずに連続して形成されている。さらに、当該ガス透過性フィルムにおける容器の内面は、凹凸のない平坦状となっている。

　本実施形態では、対向する平面状器材７１ｃの両方がガス透過性フィルムからなり、それぞれのガス透過性フィルムに薄肉部７１１ｃと凸部７１２ｃが形成されているが、いずれか一方のみの平面状器材７１ｃをガス透過性フィルムからなるものとして、当該ガス透過性フィルムに薄肉部７１１ｃと凸部７１２ｃを形成した構成とすることもできる。

　凸部７１２ｃは、複数の略三角柱が山脈状に並列して形成されると共に、当該複数の略三角柱に交差して他の複数の略三角柱が山脈状に並列して形成されたもの（格子状パターン）とすることが好ましい。
　図２０（ｂ）において、縦方向（同図においては奥行き方向）の略三角柱の高さよりも横方向の略三角柱の高さが低く形成されている。これにより、本実施形態の細胞培養容器を平面に載置した場合に、平面状器材７１ｃと平面との間に通気可能な空間が形成されるようになっている。

　このように凸部７１２ｃを格子状パターンに形成することで、ガス透過性フィルムと平面との接触面積を小さくすることができ、細胞培養容器のガス透過性能が阻害されることを防止することができる。
　また、このような格子状パターンによれば、凸部７１２ｃの突起の強度を向上させることができる。
　さらに、凸部７１２ｃとして、複数の略三角柱と他の複数の略三角柱とが斜めに交差するように形成することもできる。

　本実施形態の細胞培養容器の製造方法において、凸部７１２ｃとして、複数の略三角柱を山脈状に並列して形成すると共に、当該複数の略三角柱に交差して他の複数の略三角柱を山脈状に並列して形成して、これらの複数の略三角柱を格子状に形成することが好ましい。また、平行して隣り合う凸部７１２ｃを間隔を空けずに形成し、薄肉部７１１ｃを点状に形成することが好ましい。

　このように、本実施形態の細胞培養容器、細胞の製造方法、及び細胞培養容器の製造方法によれば、凸部が格子状パターンに間隔を空けずに容器の外側に形成された、ガス透過性能と強度に優れた細胞培養容器を製造することができ、この細胞培養容器を用いて細胞を効率的に大量培養することが可能である。

［第七実施形態］
　次に、本発明の第七実施形態について、図２１（ａ）を参照して説明する。
　本実施形態の細胞培養容器は、ガス透過性フィルムに複数の薄肉部７１１ｄと凸部７１２ｄとが形成され、凸部７１２ｄとして、ガス透過性フィルムにおける容器の内面に複数の略三角柱が山脈状に並列して形成され、かつ平行して隣り合う凸部７１２ｄが間隔を空けて形成されると共に、当該ガス透過性フィルムにおける容器の外面に複数の小突起部７１３ｄが形成され、当該外面を平面に接触させたときに、小突起部７１３ｄによって、当該ガス透過性フィルムと平面との間に通気可能な空間が形成される点で、第三実施形態と相違する。
　本実施形態の細胞培養容器、細胞の製造方法、及び細胞培養容器の製造方法のその他の構成については、以下に説明する点を除いて第三実施形態と同様である。

　具体的には、図２１（ａ）に示すように、本実施形態の細胞培養容器において、ガス透過性フィルムである平面状器材７１ｄには複数の薄肉部７１１ｄが形成されている。また、当該ガス透過性フィルムにおける容器の内面には凸部７１２ｄが前後方向（同図においては奥行き方向）に平行して間隔を空けて形成されている。さらに、当該ガス透過性フィルムにおける容器の外面には、複数の小突起部７１３ｄが形成されている。

　小突起部７１３ｄは、ガス透過性フィルムと平面との間に通気可能な空間を形成可能であればその形状は特に限定されず、円錐状、三角錐状、多角錐状、直方体状、山脈状パターン、格子状パターン等、様々な形状とすることができる。以下の実施形態の小突起部についても同様である。

　本実施形態では、対向する平面状器材７１ｄの両方がガス透過性フィルムからなり、それぞれのガス透過性フィルムに薄肉部７１１ｄ、凸部７１２ｄ、及び小突起部７１３ｄが形成されているが、いずれか一方のみの平面状器材７１ｄをガス透過性フィルムからなるものとして、当該ガス透過性フィルムに薄肉部７１１ｄ、凸部７１２ｄ、及び小突起部７１３ｄを形成した構成とすることもできる。

　凸部７１２ｄは、図２１（ａ）に示すように、複数の略三角柱が山脈状に並列して形成されたもの（山脈状パターン）とすることが好ましい。
　このように凸部７１２ｄを山脈状パターンに形成することで、ガス透過性フィルムと平面との接触面積を小さくすることができ、細胞培養容器のガス透過性能が阻害されることを防止することができる。
　また、このような山脈状パターンによれば、凸部７１２ｄの突起の強度を向上させることができる。

　また、本実施形態では、薄肉部７１１ｄの幅が１～５ｍｍとなるように形成されているが、薄肉部７１１ｄの幅は１～３ｍｍとすることが好ましく、１～２ｍｍとすることがより好ましい。

　本実施形態の細胞培養容器の製造方法において、凸部７１２ｄとして、ガス透過性フィルムにおける容器の内面に複数の略三角柱を山脈状に並列して間隔を空けて形成すると共に、当該ガス透過性フィルムにおける容器の外面に複数の小突起部７１３ｄを形成し、当該外面を平面に接触させたときに、小突起部７１３ｄによって、当該ガス透過性フィルムと平面との間に通気可能な空間が形成されるようにすることが好ましい。

　このように、本実施形態の細胞培養容器、細胞の製造方法、及び細胞培養容器の製造方法によれば、凸部が山脈状パターンに間隔を空けて容器の内側に形成された、ガス透過性能と強度に優れた細胞培養容器を製造することができ、この細胞培養容器を用いて細胞を効率的に大量培養することが可能である。

［第八実施形態］
　次に、本発明の第八実施形態について、図２１（ｂ）を参照して説明する。
　本実施形態の細胞培養容器は、ガス透過性フィルムに複数の薄肉部７１１ｅと凸部７１２ｅとが形成され、凸部７１２ｅとして、ガス透過性フィルムにおける容器の内面に複数の略三角柱が山脈状に並列して形成され、かつ平行して隣り合う凸部７１２ｄが間隔を空けずに形成される点で、第七実施形態と相違する。
　本実施形態の細胞培養容器、細胞の製造方法、及び細胞培養容器の製造方法のその他の構成については、以下に説明する点を除いて第七実施形態と同様である。

　具体的には、図２１（ｂ）に示すように、本実施形態の細胞培養容器において、ガス透過性フィルムである平面状器材７１ｅには複数の薄肉部７１１ｅが平行して線状に（同図においては奥行き方向に）形成されている。また、当該ガス透過性フィルムにおける容器の内面には凸部７１２ｅが前後方向（同図においては奥行き方向）に平行して間隔を空けずに形成されている。さらに、当該ガス透過性フィルムにおける容器の外面には、複数の小突起部７１３ｅが形成されている。

　本実施形態では、対向する平面状器材７１ｅの両方がガス透過性フィルムからなり、それぞれのガス透過性フィルムに薄肉部７１１ｅ、凸部７１２ｅ、及び小突起部７１３ｅが形成されているが、いずれか一方のみの平面状器材７１ｅをガス透過性フィルムからなるものとして、当該ガス透過性フィルムに薄肉部７１１ｅ、凸部７１２ｅ、及び小突起部７１３ｅを形成した構成とすることもできる。

　凸部７１２ｅは、図２１（ｂ）に示すように、複数の略三角柱が山脈状に並列して形成されたもの（山脈状パターン）とすることが好ましい。
　このように凸部７１２ｅを山脈状パターンに形成することで、ガス透過性フィルムと平面との接触面積を小さくすることができ、細胞培養容器のガス透過性能が阻害されることを防止することができる。
　また、このような山脈状パターンによれば、凸部７１２ｅの突起の強度を向上させることができる。

　本実施形態の細胞培養容器の製造方法において、凸部７１２ｅとして、ガス透過性フィルムにおける容器の内面に複数の略三角柱を山脈状に並列して間隔を空けずに形成すると共に、当該ガス透過性フィルムにおける容器の外面に複数の小突起部７１３ｅを形成し、当該外面を平面に接触させたときに、小突起部７１３ｅによって、当該ガス透過性フィルムと平面との間に通気可能な空間が形成されるようにすることが好ましい。

　このように、本実施形態の細胞培養容器、細胞の製造方法、及び細胞培養容器の製造方法によれば、凸部が山脈状パターンに間隔を空けずに容器の内側に形成された、ガス透過性能と強度に優れた細胞培養容器を製造することができ、この細胞培養容器を用いて細胞を効率的に大量培養することが可能である。

［第九実施形態］
　次に、本発明の第九実施形態について、図２２（ａ）を参照して説明する。
　本実施形態の細胞培養容器は、ガス透過性フィルムに複数の薄肉部７１１ｆと凸部７１２ｆとが形成され、凸部７１２ｆとして、ガス透過性フィルムにおける容器の内面に複数の略三角柱が格子状に備えられ、かつ平行して隣り合う凸部７１２ｆが間隔を空けて形成される点で、第七実施形態と相違する。
　本実施形態の細胞培養容器、細胞の製造方法、及び細胞培養容器の製造方法のその他の構成については、以下に説明する点を除いて第七実施形態と同様である。

　具体的には、図２２（ａ）に示すように、本実施形態の細胞培養容器において、ガス透過性フィルムである平面状器材７１ｆには複数の薄肉部７１１ｆが形成されている。また、当該ガス透過性フィルムにおける容器の内面には凸部７１２ｆが前後方向（同図においては奥行き方向）及び左右方向に平行して間隔を空けて形成されている。さらに、当該ガス透過性フィルムにおける容器の外面には、複数の小突起部７１３ｆが形成されている。

　凸部７１２ｆは、複数の略三角柱が山脈状に並列して形成されると共に、当該複数の略三角柱に交差して他の複数の略三角柱が山脈状に並列して形成されたもの（格子状パターン）とすることが好ましい。
　図２２（ａ）において、縦方向（同図においては奥行き方向）の略三角柱の高さよりも横方向の略三角柱の高さが低く形成されている。これにより、本実施形態の細胞培養容器を平面に載置した場合に、平面状器材７１ｆと平面との間に通気可能な空間が形成されるようになっている。

　このように凸部７１２ｆを格子状パターンに形成することで、ガス透過性フィルムと平面との接触面積を小さくすることができ、細胞培養容器のガス透過性能が阻害されることを防止することができる。
　また、このような格子状パターンによれば、凸部７１２ｆの突起の強度を向上させることができる。
　さらに、凸部７１２ｆとして、複数の略三角柱と他の複数の略三角柱とが斜めに交差するように形成することもできる。

　また、本実施形態では、薄肉部７１１ｆの幅が１～５ｍｍとなるように形成されているが、薄肉部７１１ｆの幅は１～３ｍｍとすることが好ましく、１～２ｍｍとすることがより好ましい。

　本実施形態の細胞培養容器の製造方法において、凸部７１２ｆとして、ガス透過性フィルムにおける容器の内面に複数の略三角柱を格子状に並列して間隔を空けて形成すると共に、当該ガス透過性フィルムにおける容器の外面に複数の小突起部７１３ｆを形成し、当該外面を平面に接触させたときに、小突起部７１３ｆによって、当該ガス透過性フィルムと平面との間に通気可能な空間が形成されるようにすることが好ましい。

　このように、本実施形態の細胞培養容器、細胞の製造方法、及び細胞培養容器の製造方法によれば、凸部が格子状パターンに間隔を空けて容器の内側に形成された、ガス透過性能と強度に優れた細胞培養容器を製造することができ、この細胞培養容器を用いて細胞を効率的に大量培養することが可能である。

［第十実施形態］
　次に、本発明の第十実施形態について、図２２（ｂ）を参照して説明する。
　本実施形態の細胞培養容器は、ガス透過性フィルムに複数の薄肉部７１１ｇと凸部７１２ｇとが形成され、凸部７１２ｇとして、ガス透過性フィルムにおける容器の内面に複数の略三角柱が格子状に備えられ、かつ平行して隣り合う凸部７１２ｇが間隔を空けずに連続して形成される点で、第七実施形態と相違する。
　本実施形態の細胞培養容器、細胞の製造方法、及び細胞培養容器の製造方法のその他の構成については、以下に説明する点を除いて第七実施形態と同様である。

　具体的には、図２２（ｂ）に示すように、本実施形態の細胞培養容器において、ガス透過性フィルムである平面状器材７１ｇには複数の薄肉部７１１ｇが点状に形成されている。また、当該ガス透過性フィルムにおける容器の内面には凸部７１２ｇが前後方向（同図においては奥行き方向）及び左右方向に平行して間隔を空けずに連続して形成されている。さらに、当該ガス透過性フィルムにおける容器の外面には、複数の小突起部７１３ｇが形成されている。

　本実施形態では、対向する平面状器材７１ｇの両方がガス透過性フィルムからなり、それぞれのガス透過性フィルムに薄肉部７１１ｇ、凸部７１２ｇ、及び小突起部７１３ｇが形成されているが、いずれか一方のみの平面状器材７１ｇをガス透過性フィルムからなるものとして、当該ガス透過性フィルムに薄肉部７１１ｇ、凸部７１２ｇ、及び小突起部７１３ｇを形成した構成とすることもできる。

　凸部７１２ｇは、複数の略三角柱が山脈状に並列して形成されると共に、当該複数の略三角柱に交差して他の複数の略三角柱が山脈状に並列して形成されたもの（格子状パターン）とすることが好ましい。
　図２２（ｂ）において、縦方向（同図においては奥行き方向）の略三角柱の高さよりも横方向の略三角柱の高さが低く形成されている。これにより、本実施形態の細胞培養容器を平面に載置した場合に、平面状器材７１ｇと平面との間に通気可能な空間が形成されるようになっている。

　このように凸部７１２ｇを格子状パターンに形成することで、ガス透過性フィルムと平面との接触面積を小さくすることができ、細胞培養容器のガス透過性能が阻害されることを防止することができる。
　また、このような格子状パターンによれば、凸部７１２ｇの突起の強度を向上させることができる。
　さらに、凸部７１２ｇとして、複数の略三角柱と他の複数の略三角柱とが斜めに交差するように形成することもできる。

　本実施形態の細胞培養容器の製造方法において、凸部７１２ｇとして、ガス透過性フィルムにおける容器の内面に複数の略三角柱を格子状に並列して間隔を空けずに形成すると共に、当該ガス透過性フィルムにおける容器の外面に複数の小突起部７１３ｇを形成し、当該外面を平面に接触させたときに、小突起部７１３ｇによって、当該ガス透過性フィルムと平面との間に通気可能な空間が形成されるようにすることが好ましい。

　このように、本実施形態の細胞培養容器、細胞の製造方法、及び細胞培養容器の製造方法によれば、凸部が格子状パターンに間隔を空けずに連続して容器の内側に形成された、ガス透過性能と強度に優れた細胞培養容器を製造することができ、この細胞培養容器を用いて細胞を効率的に大量培養することが可能である。

　まず、本発明の実施形態に係る細胞培養容器の効果を確認するために行った試験について説明する。

［試験１］
　第一実施形態の細胞培養容器と従来の細胞培養容器を準備して、それぞれのガス透過性能を比較する試験を行った。

　具体的には、第一実施形態の細胞培養容器（実施例１）として、両表面に突起部を形成したものを準備した。すなわち、厚み９０μｍの直鎖状低密度ポリエチレン（東洋製罐グループホールディングス株式会社製）からなるフィルムの一方の表面全体に高さが０．２ｍｍ、幅が０．２ｍｍ、ピッチが０．４２ｍｍの突起部を熱転写によって形成したものを準備した。このとき、突起部として、複数の略三角柱を山脈状に並列して形成した。フィルムの他方の表面は平坦とした。そして、２枚のフィルムを突起部が外側になるように重ねてその間に１つのポートを挟み込み、周縁部を熱溶着により袋状に形成した。外形のサイズは１２０ｍｍ×６５ｍｍであり、培養空間の底面積は４８ｃｍ^２であった。

　また、従来の細胞培養容器（比較例１）として、厚み９０μｍの直鎖状低密度ポリエチレン（東洋製罐グループホールディングス株式会社製）からなるフィルムの表面に突起部を形成せず、両表面が平坦なものを準備した。そして、２枚のフィルムの間に１つのポートを挟み込み、周縁部を熱溶着により袋状に形成した。外形のサイズは１２０ｍｍ×６５ｍｍであり、培養空間の底面積は４８ｃｍ^２であった。

　次に、各細胞培養容器内に非接触式酸素濃度計を設置して、純水２０ｍｌを充填した。各容器の液厚は４ｍｍであった。そして、各細胞培養容器内における底面付近の水の溶存酸素濃度の変化を測定した。
　このとき、各細胞培養容器を培養用治具に固定して、３７℃のＣＯ_２インキュベータに入れて一旦放置し、容器内の溶存酸素を大気中の酸素濃度である約２１％にした。容器内の酸素濃度が安定した後、ＣＯ_２インキュベータ内の酸素濃度を５％に下げた。

　また、培養用治具としては、細胞培養容器が配置される架台の上面全体と、細胞培養容器を上方から押圧する押圧部材の下面全体とが平坦なものを使用した。なお、細胞培養容器は、架台の上面及び押圧部材の下面のサイズより小さい。以下の試験においても同様である。

　ここで、容器周囲の酸素濃度が２１％から５％に変化することによって容器内外に酸素分圧差が生じるため、容器内の酸素がガス透過性フィルムを介して容器の中から抜け出す。このとき、酸素濃度の変化速度は、フィルムのガス透過性能と相関があるため、これによってガス透過性能を定量的に測定することができる。その結果を図４に示す。

　なお、図４において、測定開始時の実施例１の細胞培養容器内の酸素濃度が２０％程度であるのに対し、比較例１の細胞培養容器内の酸素濃度が２４％程度であった理由は、本試験で用いた非接触式酸素濃度計による測定は、容器内に取り付けた素子の変化を測定器で非接触にて行う仕組みであり、素子と計測部が接触している場合が正確な値であって、素子と測定部が離れるにつれ値が大きくなる特性であるため、通常３７℃の溶存酸素は２１％であるが、容器の厚みや設置状態によって大きい値となる。ただし、変化量については影響がなく、酸素透過性を変化量にもとづき判断しているため、性能評価の上では問題のない測定である。

　図４に示されるように、実施例１の細胞培養容器における１分あたりの酸素濃度変化量の最大値は、０．６％／分であった。これに対して、比較例１の細胞培養容器における１分あたりの酸素濃度変化量の最大値は、０．２％／分であった。すなわち、実施例１のガス透過性能は、比較例１の３倍大きく、本実施形態の細胞培養容器は、優れた酸素透過性を示すことが分かった。

［試験２］
　第一実施形態の細胞培養容器と従来の細胞培養容器を用いて細胞培養を行い、これらの培養性能を比較する試験を行った。
　具体的には、第一実施形態の細胞培養容器（実施例２）として、両表面に突起部を形成したものを準備した。すなわち、厚み９０μｍの直鎖状低密度ポリエチレン（ＬＬＤＰＥ，Linear Low Density Polyethylene，東洋製罐グループホールディングス株式会社製）からなるフィルムの表面全体に高さが０．２ｍｍ、幅が０．２ｍｍ、ピッチが０．４２ｍｍの突起部を熱転写によって形成したものを準備した。このとき、突起部として、複数の略三角柱を山脈状に並列して形成した。フィルムの他方の表面は平坦とした。そして、２枚のフィルムを突起部が外側になるように重ねてその間の長手方向両端に２つのポートを挟み込み、周縁部を熱溶着により袋状に形成した。外形のサイズは１２０ｍｍ×６５ｍｍであり、培養空間の底面積は４８ｃｍ^２であった。

　また、従来の細胞培養容器（比較例２）として、厚み９０μｍの直鎖状低密度ポリエチレン（東洋製罐グループホールディングス株式会社製）からなるフィルムの表面に突起部を形成せず、両表面が平坦なものを準備した。そして、２枚のフィルムの間の長手方向両端に２つのポートを挟み込み、周縁部を熱溶着により袋状に形成した。外形のサイズは１２０ｍｍ×６５ｍｍであり、培養空間の底面積は４８ｃｍ^２であった。

　さらに、培養用治具として、細胞培養容器が配置される架台の上面全体と、細胞培養容器を上方から押圧する押圧部材の下面全体とが平坦なものを使用した。

　培養する細胞としては、ｉＰＳ細胞（1231A3株）を使用した。また、培養液としては、StemFit AK02N（味の素株式会社）を使用し、これらを各細胞培養容器に充填した。充填した培養液は３７℃で１０ｍｌであり、各容器の液厚は２ｍｍであった。このとき、細胞培養容器に培養液１０ｍｌに10μM Y-27632、接着基質（i-Matrix, ラミニン511-E8)２４μｌを添加し、細胞7万個を注入して、細胞培養用治具にセットし培養を開始した。細胞播種から１，４，５，６日後に培養液１０ｍｌ（Y-27632と接着基質を添加していない培養液のみ）を全量交換して、７日間培養を行った。７日後に剥離液TrypLEを用いて細胞回収し、細胞数を計測して、増殖倍率を算出した。これらを各細胞培養容器につき２回行った。その結果を図５に示す。

　同図に示されるように、実施例２の細胞培養容器による細胞の増殖倍率は、比較例２によりも優れた結果を示しており、本実施形態の細胞培養容器によれば、適切なガス透過性能が得られていることが分かった。

　次に、本発明の実施形態に係る細胞培養用治具の効果を確認するために行った試験について説明する。

［試験３］
　第二実施形態の細胞培養用治具と従来の細胞培養用治具を用意し、それぞれに同じ細胞培養容器を固定して、ガス透過性能を比較する試験を行った。

　具体的には、第二実施形態の細胞培養用治具（実施例３）として、細胞培養容器が配置される架台の上面全体と、細胞培養容器を上方から押圧する押圧部材の下面全体とに、突起部を形成したものを準備した。
　架台と押圧部材の材料としてポリカーボネートを使用し、突起部として架台の上面全体と押圧部材の下面全体に、上述した実施形態に示されるような山脈状パターンを形成した。このとき、形成した山脈状パターンにおける突起の高さは２００μｍ、幅は４００μｍ、ピッチは８００μｍであった。なお、架台の上面全体と押圧部材の下面全体のサイズは、これに固定する後述の細胞培養容器のサイズより大きい。これは以下の試験においても同様である。

　この細胞培養用治具に固定する細胞培養容器の器材として、厚み１１０μｍの直鎖状低密度ポリエチレン（東洋製罐グループホールディングス株式会社製）からなる両表面が平坦なフィルムを準備した。そして、２枚のフィルムの間に１つのポートを挟み込み、周縁部を熱溶着により袋状に形成した。外形のサイズは１２０ｍｍ×６５ｍｍであり、培養空間の底面積は４８ｃｍ^２であった。

　また、従来の細胞培養用治具（比較例３）として、細胞培養容器が配置される架台の上面全体と、細胞培養容器を上方から押圧する押圧部材の下面全体とが平坦なものを準備した。
　架台と押圧部材の材料としては、ポリカーボネートからなる平面板を使用した。
　さらに、この細胞培養用治具に固定する細胞培養容器として、実施例３と同じものを準備した。

　次に、各細胞培養容器内に非接触式酸素濃度計を設置して、純水２０ｍｌを充填した。各容器の液厚は４ｍｍであった。そして、各細胞培養容器内における底面付近の水の溶存酸素濃度の変化を測定した。
　このとき、各細胞培養容器を各細胞培養用治具に固定して、３７℃のＣＯ_２インキュベータに入れて一旦放置し、容器内の溶存酸素を大気中の酸素濃度である約２１％にした。容器内の酸素濃度が安定した後、ＣＯ_２インキュベータ内の酸素濃度を１０％に下げ、その後、ＣＯ_２インキュベータ内の酸素濃度を２１％に上げた。

　ここで、容器周囲の酸素濃度が２１％から１０％に変化することによって容器内外に酸素分圧差が生じるため、容器内の酸素がガス透過性フィルムを介して容器の中から抜け出す。また、容器周囲の酸素濃度が１０％から２１％に変化することによって、容器の外の酸素がガス透過性フィルムを介して容器内へ入り込む。このとき、酸素濃度の変化速度は、フィルムのガス透過性能と相関があるため、これによってガス透過性能を定量的に測定することができる。その結果を図１１に示す。

　なお、図１１において、実施例３の細胞培養容器内の酸素濃度が１０％程度まで下がったのに対し、比較例３の細胞培養容器内の酸素濃度が１２％程度までしか下がらなかった理由は、比較例３の酸素濃度低下速度が遅く、実施例３と同様に１０％まで低下するまでには相当な時間かかることが予想されたため、比較例３は１２％程度で中断して２１％に戻して測定を行ったからである。

　図１１に示されるように、容器周囲の酸素濃度を２１％から１０％に変化させたとき、実施例３の細胞培養容器における１分あたりの酸素濃度変化量の最大値は、０．７５／分であった。これに対して、比較例３の細胞培養容器における１分あたりの酸素濃度変化量の最大値は、０．２５％／分であった。また、容器周囲の酸素濃度を１０％から２１％に変化させたとき、実施例３の細胞培養容器における１分あたりの酸素濃度変化量の最大値は、０．６％／分であった。これに対して、比較例３の細胞培養容器における１分あたりの酸素濃度変化量の最大値は、０．３％／分であった。

　すなわち、容器周囲の酸素濃度を２１％から１０％に変化させたとき、実施例３のガス透過性能は、比較例３の３倍程度大きく、容器周囲の酸素濃度を１０％から２１％に変化させたとき、実施例３のガス透過性能は、比較例３の２倍程度大きかった。
　このように、本実施形態の細胞培養用治具は、従来の細胞培養用治具に比べて優れた酸素透過性を示すことが分かった。

［試験４］
　第二実施形態の細胞培養用治具として構成の異なるもの（実施例４，実施例５）を用意し、それぞれに同じ細胞培養容器を固定して、ガス透過性能を比較する試験を行った。

　具体的には、第二実施形態の細胞培養容器（実施例４）として、細胞培養容器を上方から押圧する押圧部材の下面全体に、突起部を形成したものを準備した。細胞培養容器が配置される架台の上面には、突起部を形成しなかった。
　押圧部材の材料としてポリカーボネートを使用し、突起部として押圧部材の下面全体に、実施例３と同様に山脈状パターンを形成した。架台の材料としては、ポリカーボネートからなる平面板を使用した。
　また、この細胞培養用治具に固定する細胞培養容器として、実施例３と同じものを準備した。

　次に、第二実施形態の細胞培養容器（実施例５）として、細胞培養容器が配置される架台の上面全体に、突起部を形成したものを準備した。細胞培養容器を上方から押圧する押圧部材の下面には、突起部を形成しなかった。
　架台の材料としてポリカーボネートを使用し、突起部として架台の上面全体に、実施例３と同様に山脈状パターンを形成した。押圧部材の材料としては、ポリカーボネートからなる平面板を使用した。
　また、この細胞培養用治具に固定する細胞培養容器として、実施例３と同じものを準備した。

　次に、各細胞培養容器内に非接触式酸素濃度計を設置して、純水２０ｍｌを充填した。各容器の液厚は４ｍｍであった。そして、各細胞培養容器内における底面付近の水の溶存酸素濃度の変化を測定した。
　このとき、各細胞培養容器を各細胞培養用治具に固定して、３７℃のＣＯ_２インキュベータに入れて一旦放置し、容器内の溶存酸素を大気中の酸素濃度である約２１％にした。容器内の酸素濃度が安定した後、ＣＯ_２インキュベータ内の酸素濃度を１０％に下げ、その後、ＣＯ_２インキュベータ内の酸素濃度を２１％に上げた。その結果を図１２に示す。

　なお、図１２において、測定開始時の実施例４の細胞培養容器内の酸素濃度が２０％程度であるのに対し、実施例５の細胞培養容器内の酸素濃度が２４％程度であった理由は、本試験で用いた非接触式酸素濃度計による測定は、容器内に取り付けた素子の変化を測定器で非接触にて行う仕組みであり、素子と計測部が接触している場合が正確な値であって、素子と測定部が離れるにつれ値が大きくなる特性であるため、通常３７℃の溶存酸素は２１％であるが、容器の厚みや設置状態によって大きい値となる。ただし、変化量については影響がなく、酸素透過性を変化量にもとづき判断しているため、性能評価の上では問題のない測定である。

　図１２に示されるように、容器周囲の酸素濃度を２１％から１０％に変化させたとき、実施例４の細胞培養容器における１分あたりの酸素濃度変化量の最大値は、０．４％／分であった。これに対して、実施例５の細胞培養容器における１分あたりの酸素濃度変化量の最大値は、０．８％／分であった。また、容器周囲の酸素濃度を１０％から２１％に変化させたとき、実施例４の細胞培養容器における１分あたりの酸素濃度変化量の最大値は、０．２５％／分であった。これに対して、実施例５の細胞培養容器における１分あたりの酸素濃度変化量の最大値は、１．１％／分であった。

　すなわち、容器周囲の酸素濃度を２１％から１０％に変化させたとき、実施例５のガス透過性能は、実施例４の２倍程度大きく、容器周囲の酸素濃度を１０％から２１％に変化させたとき、実施例５のガス透過性能は、実施例４の４倍程度大きかった。
　このように、細胞培養用治具における突起部として、細胞培養容器が配置される架台の上面に形成する方が、細胞培養容器を上方から押圧する押圧部材の下面に形成するよりも、細胞培養用治具に固定して細胞培養に用いられる細胞培養容器の酸素透過性の向上効果が高くなることが分かった。

［試験５］
　第二実施形態の細胞培養用治具と従来の細胞培養用治具を用意し、それぞれに同じ細胞培養容器を固定して細胞培養を行い、これらの培養性能を比較する試験を行った。

　具体的には、第二実施形態の細胞培養用治具（実施例６）として、実施例３と同じものを準備した。すなわち、細胞培養容器が配置される架台の上面全体と、細胞培養容器を上方から押圧する押圧部材の下面全体とに、突起部を形成したものを準備した。
　突起部は、架台の上面全体と押圧部材の下面全体に、山脈状パターンを形成した。
　また、この細胞培養用治具に固定する細胞培養容器として、実施例３と同じものを準備した。

　また、従来の細胞培養用治具（比較例４）として、比較例３と同じものを準備した。すなわち、細胞培養容器が配置される架台の上面全体と、細胞培養容器を上方から押圧する押圧部材の下面全体とが平坦なものを準備した。
　さらに、この細胞培養用治具に固定する細胞培養容器として、実施例３と同じものを準備した。

　培養する細胞としては、ｉＰＳ細胞（1231A3株）を使用した。また、培養液としては、StemFit AK02N（味の素株式会社）を使用し、これらを各細胞培養容器に充填した。充填した培養液は３７℃で１０ｍｌであり、各容器の液厚は２ｍｍであった。このとき、細胞培養容器に培養液１０ｍｌに10μM Y-27632、接着基質（i-Matrix, ラミニン511-E8)２４μｌを添加し、細胞7万個を注入して、細胞培養用治具にセットし培養を開始した。細胞播種から１，４，５，６日後に培養液１０ｍｌ（Y-27632と接着基質を添加していない培養液のみ）を全量交換して、７日間培養を行った。７日後に剥離液TrypLEを用いて細胞回収し、細胞数を計測して、増殖倍率を算出した。これらを各細胞培養用治具につき２回行った。その結果を図１３に示す。

　同図に示されるように、実施例６の細胞培養容器による細胞の増殖倍率は、比較例４によりも優れた結果を示しており、本実施形態の細胞培養用治具によれば、細胞培養容器のガス透過性能が阻害されることを抑制して、細胞を高密度で培養できることが分かった。

［試験６］
　第二実施形態の細胞培養用治具と従来の細胞培養用治具を用意し、それぞれに同じ細胞培養容器を固定して細胞培養を行い、これらの培養性能を比較する試験を行った。

　具体的には、第二実施形態の細胞培養用治具（実施例７）として、細胞培養容器が配置される架台の上面全体が多孔質材からなるものを準備した。細胞培養容器を上方から押圧する押圧部材の下面には、多孔質材からなるものを使用せず、平坦なものを準備した。
　架台の材料としてポリプロピレンン製の多孔質フィルター板（孔径400μm, 厚み3mm, アズワン株式会社 3-2531-02）を使用した。押圧部材の材料としては、ポリカーボネートからなる平面板を使用した。
　また、この細胞培養用治具に固定する細胞培養容器として、実施例３と同じものを準備した。

　また、従来の細胞培養用治具（比較例５）として、比較例３と同じものを準備した。すなわち、細胞培養容器が配置される架台の上面全体と、細胞培養容器を上方から押圧する押圧部材の下面全体とが平坦なものを準備した。
　さらに、この細胞培養用治具に固定する細胞培養容器として、実施例３と同じものを準備した。

　培養する細胞としては、ｉＰＳ細胞（1231A3株）を使用した。また、培養液としては、StemFit AK02N（味の素株式会社）を使用し、これらを各細胞培養容器に充填した。充填した培養液は３７℃で１０ｍｌであり、各容器の液厚は２ｍｍであった。このとき、細胞培養容器に培養液１０ｍｌに10μM Y-27632、接着基質（i-Matrix, ラミニン511-E8)２４μｌを添加し、細胞7万個を注入して、細胞培養用治具にセットし培養を開始した。細胞播種から１，４，５，６日後に培養液１０ｍｌ（Y-27632と接着基質を添加していない培養液のみ）を全量交換して、７日間培養を行った。７日後に剥離液TrypLEを用いて細胞回収し、細胞数を計測して、増殖倍率を算出した。その結果を図１４に示す。

　同図に示されるように、実施例７の細胞培養容器による細胞の増殖倍率は、比較例５によりも優れた結果を示しており、本実施形態の細胞培養用治具によれば、細胞培養容器のガス透過性能が阻害されることを抑制して、細胞を高密度で培養できることが分かった。

　本発明は、以上の実施形態及び実施例に限定されるものではなく、本発明の範囲内において、種々の変更実施が可能であることは言うまでもない。例えば、細胞培養容器又は細胞培養用治具に形成する突起部や凸部の形状を実施形態とは別個の様々な形状にしたり、第三実施形態から第十実施形態の一部を組み合わせて、凸部を容器の外側及び内側に形成した細胞培養容器とするなど適宜変更することが可能である。

　本発明は、細胞培養バッグを使用して、細胞を高密度で大量培養する場合などに、好適に利用することが可能である。

　この明細書に記載の文献及び本願のパリ優先の基礎となる日本出願明細書の内容を全てここに援用する。

　１　細胞培養容器
　１１　平面状器材
　１１１　突起部
　１２　ポート
　２　細胞
　３　細胞培養装置
　３１　架台
　３２　押圧部材
　３３　ガイドピン
　Ｓ　培養空間
　Ｈ　周縁部
　Ｖ　通気空間
　５，５ａ　細胞培養用治具
　５１，５１ａ　架台
　５１１，５１１ａ　突起部
　５２，５２ａ　押圧部材
　５２１，５２１ａ　突起部
　５３　支持柱
　５４　天板
　５５，５５ａ　ガイドピン
　６　細胞培養容器
　６１，６２　平面状器材
　６３　ポート
　８　細胞培養容器
　８１，８１ａ～８１ｇ　平面状器材
　８１１，８１１ａ～８１１ｇ　薄肉部
　８１２，８１２ａ～８１２ｇ　凸部
　８１３ｄ～８１３ｇ　小突起部
　８２　ポート
　９　細胞

Claims

　少なくとも１つのポートを有し、対向する平面状器材によって形成された袋状の閉鎖系の細胞培養容器であって、
　前記平面状器材の少なくとも一方がガス透過性フィルムからなり、少なくとも１つの前記ガス透過性フィルムの外面に、当該ガス透過性フィルムの内面形状とは異なる形状の突起部を備えると共に、当該ガス透過性フィルムの内面側に細胞を培養するための培養空間を備え、当該ガス透過性フィルムを平面に接触させたときに、前記突起部によって、当該ガス透過性フィルムと前記平面との間に通気可能な空間が形成される
　ことを特徴とする細胞培養容器。
　前記培養空間の外側にあたる前記ガス透過性フィルムの外面領域において、前記突起部として、複数の略三角柱が山脈状に並列して形成されたことを特徴とする請求項１記載の細胞培養容器。
　対向する前記平面状器材の両方がガス透過性フィルムからなり、それぞれのガス透過性フィルムの外面に前記突起部が備えられたことを特徴とする請求項１又は２記載の細胞培養容器。
　前記ガス透過性フィルムの内面が、凹凸のない平坦状であることを特徴とする請求項１～３のいずれかに記載の細胞培養容器。
　前記ガス透過性フィルムの内面に凹凸が形成されたことを特徴とする請求項１～３のいずれかに記載の細胞培養容器。
　前記ガス透過性フィルムにおける前記突起部が形成されていない領域の厚みが、１００μｍ未満であることを特徴とする請求項１～５のいずれかに記載の細胞培養容器。
　前記ガス透過性フィルムにおける前記突起部が形成されていない領域の厚みが、７０μｍ～１０μｍであることを特徴とする請求項１～５のいずれかに記載の細胞培養容器。
　少なくとも１つのポートを有し、対向する平面状器材によって形成された袋状の閉鎖系の細胞培養容器の製造方法であって、
　前記平面状器材の少なくとも一方にガス透過性フィルムを用い、前記ガス透過性フィルムを平面に接触させたときに、前記ガス透過性フィルムと前記平面との間に通気可能な空間が形成されるように、前記ガス透過性フィルムの外面に、当該ガス透過性フィルムの内面形状とは異なる形状の突起部を形成し、
　対向する前記平面状器材の周縁部を貼り合わせて、前記ガス透過性フィルムの内面側に細胞を培養するための培養空間を形成する
　ことを特徴とする細胞培養容器の製造方法。
　対向する前記平面状器材の両方にガス透過性フィルムを用い、それぞれのガス透過性フィルムの外面に前記突起部を形成することを特徴とする請求項８記載の細胞培養容器の製造方法。
　前記突起部を、熱転写、キャスト製膜、又はインフレーション製膜によって形成することを特徴とする請求項８又は９記載の細胞培養容器の製造方法。
　請求項１～７のいずれかに記載の細胞培養容器を用いて細胞を培養することを特徴とする細胞の製造方法。
　請求項１～７のいずれかに記載の細胞培養容器と、
　前記細胞培養容器を載置する平坦な架台、並びに、前記架台に載置された前記細胞培養容器を押圧する押圧部材を備え、前記細胞培養容器に形成された前記突起部によって、前記ガス透過性フィルムと前記架台との間、及び／又は、前記ガス透過性フィルムと前記押圧部材との間に通気可能な空間が形成される培養用治具と、を有する
　ことを特徴とする細胞培養装置。
　少なくとも一方がガス透過性フィルムからなる対向する平面状器材によって形成された袋状の閉鎖系の細胞培養容器を保持する細胞培養用治具であって、
　細胞培養容器を載置する架台と、
　細胞培養容器を前記架台に対して押圧する押圧部材と、を備え、
　前記架台は、前記ガス透過性フィルムが前記架台との間で通気可能な器材で形成され、前記細胞培養容器における前記ガス透過性フィルム側が前記架台に載置される
　ことを特徴とする細胞培養用治具。
　前記押圧部材は、前記ガス透過性フィルムが前記押圧部材との間で通気可能な器材で形成され、前記細胞培養容器における前記ガス透過性フィルム側が前記押圧部材に押圧される
　ことを特徴とする請求項１３記載の細胞培養用治具。
　前記架台の四隅にガイドピンが立設され、前記ガイドピンは前記押圧部材に設けられたガイド穴に貫通し、前記押圧部材は、前記ガイドピンに沿って垂直方向に移動可能に備えられた
　ことを特徴とする請求項１３又は１４記載の細胞培養用治具。
　前記架台の四隅に支持柱が立設され、前記支持柱に天板が固定され、前記天板にガイドピンが備えられ、前記ガイドピンは前記押圧部材に設けられたガイド穴に貫通し、前記押圧部材は、前記ガイドピンに沿って垂直方向に移動可能に備えられた
　ことを特徴とする請求項１３又は１４記載の細胞培養用治具。
　前記通気可能な器材は、多孔質材であることを特徴とする請求項１３～１６のいずれかに記載の細胞培養用治具。
　前記通気可能な器材は、穴開き板であることを特徴とする請求項１３～１６のいずれかに記載の細胞培養用治具。
　前記通気可能な器材は、当該器材の表面を凹凸加工することによって形成されたことを特徴とする請求項１３～１６のいずれかに記載の細胞培養用治具。
　前記凹凸加工によって、前記通気可能な器材の表面に突起部が形成されたことを特徴とする請求項１９記載の細胞培養用治具。
　前記突起部として、複数の略三角柱が山脈状に並列して形成されたことを特徴とする請求項２０記載の細胞培養用治具。
　請求項１３～２１のいずれかに記載の細胞培養用治具を用いて細胞を培養することを特徴とする細胞の製造方法。
　少なくとも１つのポートを有し、対向する平面状器材によって形成された袋状の閉鎖系の細胞培養容器であって、
　前記平面状器材の少なくとも一方がガス透過性フィルムからなり、当該ガス透過性フィルムにおける容器の内面側に細胞を培養するための培養空間が備えられ、この培養空間を形成する当該ガス透過性フィルムに複数の薄肉部と凸部とが形成され、前記薄肉部の厚みが７５μｍ以下である
　ことを特徴とする細胞培養容器。
　前記薄肉部の厚みが２０～３５μｍであることを特徴とする請求項２３記載の細胞培養容器。
　前記凸部が形成された前記ガス透過性フィルムの表面が、当該ガス透過性フィルムにおける容器の外面であり、当該ガス透過性フィルムにおける容器の内面が凹凸のない平坦状であることを特徴とする請求項２３又は２４記載の細胞培養容器。
　前記凸部が形成された前記ガス透過性フィルムの表面が、当該ガス透過性フィルムにおける容器の内面であり、当該ガス透過性フィルムにおける容器の外面に複数の小突起部が形成され、当該外面を平面に接触させたときに、前記小突起部によって、当該ガス透過性フィルムと前記平面との間に通気可能な空間が形成されることを特徴とする請求項２３又は２４記載の細胞培養容器。
　対向する前記平面状器材の両方がガス透過性フィルムからなり、それぞれのガス透過性フィルムに前記複数の薄肉部と前記凸部とが形成されたことを特徴とする請求項２３～２６のいずれかに記載の細胞培養容器。
　前記凸部として、複数の略三角柱が山脈状に並列して形成されたことを特徴とする請求項２３～２７のいずれかに記載の細胞培養容器。
　前記凸部として、複数の略三角柱が山脈状に並列して形成されると共に、当該複数の略三角柱に交差して他の複数の略三角柱が山脈状に並列して形成されて、これらの複数の略三角柱が格子状に備えられたことを特徴とする請求項２３～２７のいずれかに記載の細胞培養容器。
　平行して隣り合う前記凸部が１～５ｍｍの間隔を空けて形成されたことを特徴とする請求項２３～２９のいずれかに記載の細胞培養容器。
　平行して隣り合う前記凸部が間隔を空けずに形成され、前記薄肉部が線状又は点状に形成されたことを特徴とする請求項２３～２９のいずれかに記載の細胞培養容器。
　請求項２３～３１のいずれかに記載の細胞培養容器を用いて細胞を培養することを特徴とする細胞の製造方法。
　少なくとも１つのポートを有し、対向する平面状器材によって形成された袋状の閉鎖系の細胞培養容器の製造方法であって、
　前記平面状器材の少なくとも一方としてガス透過性フィルムを用いて、前記ガス透過性フィルムに厚みが７５μｍ以下である複数の薄肉部と、凸部とを形成し、
　対向する前記平面状器材の周縁部を貼り合わせて、前記ガス透過性フィルムにおける容器の内面側に細胞を培養するための培養空間を形成する
　ことを特徴とする細胞培養容器の製造方法。