WO2021256550A1 - シナプス機能不全に起因する疾病、又はシナプス機能不全を付随する疾病の判定方法 - Google Patents

シナプス機能不全に起因する疾病、又はシナプス機能不全を付随する疾病の判定方法 Download PDF

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Definitions

  • the present invention relates to a determination method capable of determining the presence or absence and severity of a disease caused by synaptic dysfunction or a disease associated with synaptic dysfunction early and easily, a disease caused by synaptic dysfunction, or a disease.
  • the present invention relates to a method for screening a preventive agent and / or a therapeutic agent for a disease associated with synaptic dysfunction, an antibody for the determination method and the screening method, and a kit for performing the determination method.
  • Alzheimer's disease which is the main cause of dementia, is an irreversible progressive brain disease, and is said to be caused by dysfunction of synapses in the brain.
  • the increase in Alzheimer's disease patients has become a major social concern in recent years, and it is desired to establish early diagnostic methods and therapeutic agents for them.
  • Amyloid plaques are observed in the postmortem brain of Alzheimer's disease patients, which are known to be aggregates of "amyloid ⁇ protein" (amyloid plaques). It has been reported that deposition of amyloid ⁇ protein is the earliest pathologically identifiable lesion, in which amyloid ⁇ protein aggregates and exhibits direct neuronal toxicity.
  • Non-Patent Document 1 It is also known that the accumulation of amyloid ⁇ protein in the brain begins more than 20 years before the onset.
  • synaptic dysfunction occurs due to decreased blood flow in the brain (depression, etc.), cerebral hemorrhage, and cerebral infarction.
  • mitochondrial genetic diseases and dementia derived from diabetes are also known.
  • synaptic dysfunction may occur due to drug dependence.
  • diseases caused by these synaptic dysfunctions or diseases associated with synaptic dysfunction it is considered that cognitive function is deteriorated due to synaptic dysfunction, but its diagnosis is difficult.
  • the diagnosis of Alzheimer's disease can be confirmed only by performing pathological dissection after death, and the diagnosis before life is made by question-type examination or imaging examination, but in both cases, after the subjective symptoms appear. The fact is that the diagnosis has been made and early treatment has not been started.
  • Non-Patent Document 2 It is also reported that Alzheimer's disease can be diagnosed by lowering the concentration of amyloid ⁇ 42 protein in cerebrospinal fluid (Non-Patent Document 2), but it is a highly invasive test and difficult to apply to the elderly. There is a problem. In addition, all of the currently used therapeutic agents for Alzheimer's disease are drugs that suppress symptoms, and there are no drugs that lead to radical treatment. In addition, for other diseases caused by synaptic dysfunction or diseases associated with synaptic dysfunction, we rely on question-type tests (depression, dementia, etc.) and imaging tests (cerebral hemorrhage, etc.) easily and quickly. There is no way to make a diagnosis.
  • Drevlin A which is specifically found in dendritic spines, is characterized by being expressed only in nerve cells (see, for example, Non-Patent Documents 9 and 10). The present inventors further report that dendritic spine drebrin is extensively eliminated in dementia diseases such as Alzheimer's disease (Non-Patent Document 11).
  • An object of the present invention is to provide a determination method capable of early and easily determining the presence or absence and severity of a disease caused by synaptic dysfunction or a disease associated with synaptic dysfunction, and to cause synaptic dysfunction. It is an object of the present invention to provide a method for screening a therapeutic agent or a preventive agent for a disease caused by a disease or a disease associated with synaptic dysfunction.
  • the present inventors subjected the Western blotting method using an anti-drevulin antibody just in case for the precipitation fraction of the blood sample by protein A / G beads, and unexpectedly confirmed a band of drevlin at a position of about 130 kDa. We were able to.
  • Western blotting with an anti-drebrin A antibody was performed on the sedimented fraction of the blood sample with protein A / G beads. Although it was Drebrin E, it was possible to detect a plurality of bands having a molecular weight smaller than the total length of Drebrin A, which can be detected by the anti-Drebrin A antibody.
  • the band detected here was considered to be a fragment of Drebrin A having a translation peptide of the Ins2 sequence characteristic of the Drebrin A gene, or a splicing variant.
  • the present inventors have further studied and living organisms derived from patients suffering from diseases in which such Drebrin A-related proteins (DARPs: Drebrin A Related Proteins) are caused by synaptic dysfunction or diseases associated with synaptic dysfunction. We found that it was abundant in the sample. Furthermore, we found that DARPs bind to protein A / G beads via autoantibodies, that autoantibodies that recognize drebrin can damage neurons, and that autoantibodies damage neurons. It has been found that by suppressing synaptic dysfunction, diseases caused by synaptic dysfunction or diseases associated with synaptic dysfunction can be treated or prevented. The present invention has been completed based on these findings.
  • the present invention relates to the following. [1] Whether or not there is a risk of developing a disease caused by synaptic dysfunction, which is characterized by having the following steps (a-1) to (c-1), or a disease associated with synaptic dysfunction. Judgment method.
  • A-1) A step of measuring the concentration of drebrin A-related proteins (DARPs) in a biological sample collected from a subject;
  • B-1) A step of comparing the concentration of DARPs measured in step (a-1) with the concentration of DARPs in a control who does not develop a disease caused by synaptic dysfunction or a disease associated with synaptic dysfunction;
  • C-1) When the concentration of DARPs measured in step (a-1) is higher than the concentration of DARPs in the control, the subject is associated with a disease caused by synaptic dysfunction or synaptic dysfunction.
  • a method for determining the severity of a disease caused by synaptic dysfunction or a disease associated with synaptic dysfunction which comprises the following steps (a-2) to (c-2).
  • A-2) A step of measuring the concentration of drebrin A-related proteins (DARPs) in a biological sample collected from a subject who has a disease caused by synaptic dysfunction or a disease associated with synaptic dysfunction;
  • B-2) A step of comparing the concentration of DARPs measured in step (a-2) with the concentration of DARPs in a control having a disease caused by synaptic dysfunction or a disease associated with synaptic dysfunction. ;
  • C-2) When the concentration of DARPs and / or DARPs autoantibodies measured in step (a-2) is higher than the concentration of DARPs and / or DARPs autoantibodies in the control, the subject is the control.
  • a preventive agent for a disease associated with synaptic dysfunction or a synaptic dysfunction.
  • (A-3) Step of measuring the concentration of drebrin A-related proteins (DARPs) in a sample collected from a synaptic dysfunction model non-human animal to which the test substance was administered;
  • (B-3) The concentration of drebrin A-related protein (DARPs) measured in step (a-3) is the concentration of drebrin A-related protein (DARPs) in the synaptic dysfunction model non-human animal to which the test substance is not administered.
  • Step to compare (C-3)
  • the concentration of drebrin A-related proteins (DARPs) measured in step (a-3) is higher than the concentration of drebrin A-related proteins (DARPs) in a synaptic dysfunction model non-human animal to which the test substance is not administered.
  • test substance When it is also low, the test substance is effective for the prevention of diseases caused by synaptic dysfunction or diseases associated with synaptic dysfunction, or for the treatment of diseases caused by synaptic dysfunction or diseases associated with synaptic dysfunction.
  • (A-4) Synapse dysfunction model A step of administering a test substance to cultured cells and culturing them; (B-4) A step of measuring the concentration of drebrin A-related proteins (DARPs) in the culture medium of the synaptic dysfunction model cultured cells; (C-4) A step of comparing the concentration of DARPs measured in step (b-4) with the concentration of DARPs in the culture medium of the synaptic dysfunction model cultured cells to which the test substance is not administered; (D-4) When the concentration of DARPs measured in step (b-4) is lower than the concentration of DARPs in the culture medium of the synaptic dysfunction model cultured cells to which the test substance is not administered, the test substance is used.
  • DARPs drebrin A-related proteins
  • the DARPs are one or more selected from DARP40, DARP60, DARP70, DARP90, and DARP100.
  • the disease caused by synaptic dysfunction or a disease associated with synaptic dysfunction is a neurodegenerative disease.
  • a kit for determining the risk, presence / absence, or severity of onset risk, presence / absence, or severity of a disease caused by synaptic dysfunction which is characterized by containing the antibody according to the above [10], or a disease associated with synaptic dysfunction.
  • a disease caused by synaptic dysfunction characterized by searching for a dominant negative peptide against a drebrin A-related protein (DARPs) autoantibody, or a preventive agent for a disease associated with synaptic dysfunction, or caused by synaptic dysfunction.
  • Risk of developing diseases caused by synaptic dysfunction or diseases associated with synaptic dysfunction which comprises a step (a-1) of measuring the concentration of drebrin A-related proteins (DARPs) in a biological sample collected from a subject. , Or a method for determining the presence or absence of onset; A step (a-2) for measuring the concentration of drebrin A-related proteins (DARPs) in a biological sample collected from a subject who has a disease caused by synaptic dysfunction or a disease associated with synaptic dysfunction is provided.
  • a-1 of measuring the concentration of drebrin A-related proteins (DARPs) in a biological sample collected from a subject.
  • a method for determining the severity of a disease caused by synaptic dysfunction or a disease associated with synaptic dysfunction For determining the onset risk or presence / absence of a disease caused by synaptic dysfunction or a disease associated with synaptic dysfunction, which consists of one or more drebrin A-related proteins (DARPs), or due to synaptic dysfunction.
  • Biomarkers for determining the severity of disease or diseases associated with synaptic dysfunction Synaptic dysfunction model to which the test substance was administered A disease caused by synaptic dysfunction, comprising a step (a-3) of measuring the concentration of drebrin A-related proteins (DARPs) in a sample collected from a non-human animal.
  • a screening method for a preventive agent for a disease associated with synaptic dysfunction, or a therapeutic agent for a disease caused by synaptic dysfunction, or a disease associated with synaptic dysfunction A preventive agent for a disease caused by synaptic dysfunction or a disease associated with synaptic dysfunction, a disease caused by synaptic dysfunction, or a synaptic dysfunction, which comprises the above steps (a-4) and (b-4).
  • Screening method for therapeutic agents for associated diseases Collect data for diagnosing the risk of developing a disease caused by synaptic dysfunction or a disease associated with synaptic dysfunction, or the presence or absence of the onset, which comprises the above steps (a-1) to (c-1).
  • a method for collecting data for diagnosing the severity of a disease caused by synaptic dysfunction or a disease associated with synaptic dysfunction which comprises the above steps (a-2) to (c-2);
  • a preventive agent for a disease caused by synaptic dysfunction or a disease associated with synaptic dysfunction, a disease caused by synaptic dysfunction, or a synaptic dysfunction which comprises the above steps (a-3) to (c-3).
  • How to determine the efficacy of a therapeutic agent for an associated disease A preventive agent for a disease caused by synaptic dysfunction or a disease associated with synaptic dysfunction, a disease caused by synaptic dysfunction, or a synaptic dysfunction, which comprises the above steps (a-4) to (d-4).
  • DARPs drebrin A-related proteins
  • a disease caused by synaptic dysfunction or a disease associated with synaptic dysfunction which has so far relied on a question-type test (depression, dementia, etc.) or an imaging test (cerebral hemorrhage, etc.) Since the presence or absence and severity of the onset can be determined early and easily, it leads to prevention or early treatment of the onset of these diseases.
  • DARPs and anti-DARPs autoantibodies can also serve as screening indexes for preventive agents and therapeutic agents, and can contribute to drug discovery research.
  • FIG. 1 Various anti-drevlin antibodies (M2F6, 28D8, 3D9, 22G5, 17C3, 33A4: homemade) and anti-drevlin A antibody (4C2: homemade; DAS2: Institute of Immunobiology) for the bead adsorption fraction of Example 1 It is a figure which shows the result of having performed Western blotting using.
  • Blood samples were obtained from Example 2 from 2 Alzheimer's disease patients (AD01, AD02), 1 cerebral cortical basal nucleus syndrome patient (CBS), 1 Parkinson's disease patient (PD01), and a healthy 65-year-old man (Healthy). It is a figure which shows the result of having performed western blotting on the adsorbed fraction of protein A / G beads using the anti-drevlin A antibody DAS2 (Immune Biology Research Institute). It is a figure which shows the result of having detected DARPs by Western blotting using AD02 and control plasma (Ctrl) of Example 2.
  • Example 2 Blood samples were obtained from Example 2 from 2 Alzheimer's disease patients (AD01, AD02), 1 corticobasal syndrome patient (CBS), 1 Parkinson's disease patient (PD01), and a healthy 65-year-old man (Healthy). It is a figure which shows the result of having performed western blotting on the adsorbed fraction of protein A / G beads using anti-drebrin antibody 3D9 (homemade). Unlike FIG. 3, no difference was found between the samples.
  • Example 3 Alzheimer's disease patients (GHAD01-03, all with mild dementia), 1 muscular atrophic lateral sclerosis patient (ALS01), 1 spinocerebellar degeneration patient (SCD01), and depression.
  • a cerebrospinal fluid sample was obtained from one sick patient (Dep01), and the results of western blotting using the anti-Drebrin A antibody DAS2 (ImmunoBiology Laboratory) on the adsorbed fraction of protein A / G beads were obtained. It is a figure which shows. It is a figure which shows the result of having detected DARPs in the cerebrospinal fluid sample by Western blotting about 6 Alzheimer's disease patients shown in Table 1 of Example 4.
  • FIG. Human drevulin A (GFP-hDA) added with GFP tag of Example 5 was subjected to SDS-PAGE, and anti-drevlin antibody (3D9: homemade) (left) and plasma derived from Alzheimer's disease patient (AD plasma) (right).
  • Example 5 It is a figure which shows the result of having detected by Western blotting as a primary antibody. It is a figure which shows the result of having confirmed whether the anti-drebrin antibody (22G5: homemade) of Example 5 may have toxicity to rat hippocampal cultured cells.
  • A shows rat hippocampal cultured cells treated with 22G5
  • B shows rat hippocampal cultured cells treated with normal mouse IgG. It is a figure which shows the result of Western blotting which confirmed the existence of DARPs in the cultured rat cerebral cortex cells of Example 6.
  • step (a-1) is a step of measuring the concentration of drebrin A-related proteins (DARPs) in a biological sample collected from a subject;
  • step (b-1) a step of measuring DARPs measured in step (a-1).
  • the concentration of DARPs is higher than the concentration of DARPs in the control, the subject is at high risk of developing a disease resulting from synaptic dysfunction or a disease associated with synaptic dysfunction, or is due to synaptic dysfunction.
  • this judgment method 1 Judgment method (hereinafter, may be referred to as "this judgment method 1") and The following steps (a-2) Measure the concentration of drebrin A-related proteins (DARPs) in a biological sample collected from a subject who has a disease caused by synaptic dysfunction or a disease associated with synaptic dysfunction. Step; (b-2) Compare the concentration of DARPs measured in step (a-2) with the concentration of DARPs in a control having a disease caused by synaptic dysfunction or a disease associated with synaptic dysfunction.
  • DARPs drebrin A-related proteins
  • step (c-2) When the concentration of DARPs and / or DARPs autoantibodies measured in step (a-2) is higher than the concentration of DARPs and / or DARPs autoantibodies in the control, the subject , A step of assessing that a disease caused by synaptic dysfunction, or a disease associated with synaptic dysfunction, is more likely to be more severe than the control; a disease caused by synaptic dysfunction, or synaptic dysfunction.
  • the method for determining the severity of the disease associated with the disease hereinafter, may be referred to as "the determination method 2". Further, the determination method 1 and the determination method 2 are collectively referred to as the "determination method”. If there is), there is no particular limitation.
  • the "severity" includes an acute exacerbation period in which the synaptic disorder progresses rapidly.
  • the determination method assists a doctor in diagnosing the risk of developing a disease caused by synaptic dysfunction or a disease associated with synaptic dysfunction, or diagnosing the presence or absence and severity of the onset. It may not include the diagnosis by a doctor.
  • step (a-3) is a step of measuring the concentration of drebrin A-related proteins (DARPs) in a sample collected from a synaptic dysfunction model non-human animal to which the test substance is administered; (b). -3) The concentration of Drebrin A-related proteins (DARPs) measured in step (a-3) is compared with the concentration of Drebrin A-related proteins (DARPs) in a synaptic dysfunction model non-human animal to which the test substance is not administered. Steps; and (c-3) The concentration of drebrin A-related proteins (DARPs) measured in step (a-3) is the synaptic dysfunction model in non-human animals to which the test substance is not administered.
  • DARPs concentration of drebrin A-related proteins
  • the test substance is a disease caused by synaptic dysfunction or a disease associated with synaptic dysfunction, or a disease caused by synaptic dysfunction or a disease associated with synaptic dysfunction.
  • a screening method for a therapeutic agent hereinafter, may be referred to as “Screening Method 1” and the following step (a-4) A step of administering a test substance to a synaptic dysfunction model cultured cell and culturing it; (b-).
  • the concentration of DARPs in the culture medium of a synaptic dysfunction model cultured cell is lower than the concentration of DARPs, the test substance is caused by prevention of a disease caused by synaptic dysfunction or a disease associated with synaptic dysfunction, or due to synaptic dysfunction.
  • a method for screening a therapeutic agent for a disease associated with a disease or a disease associated with synaptic dysfunction (hereinafter, referred to as "the Screening Method 2"). Further, the present screening method 1 and the present screening method 2 are generically referred to as “the present screening method"), and are not particularly limited.
  • a fragment of human drebrin A (SEQ ID NO: 1) localized in the brain, or a splice variant of drebrin A-related proteins (DARPs: Drebrin A Related Proteins) is a disease or synaptic function caused by synaptic dysfunction. It was completed by discovering for the first time that it is abundant in biological samples derived from patients suffering from diseases associated with insufficiency.
  • DARPs Drebrin A Related Proteins
  • DARPs may be a fragment or splice variant of Drebrin A having at least a part of the Ins2 translation sequence RPYCPFIKASDSGPSSSSSSSSSPPRTPFPYITCHRTPNLSSSLPC (SEQ ID NO: 2) characteristic of Drebrin A, preferably DARP100 having a molecular weight of about 100 kDa.
  • DARP90 having a molecular weight of about 90 kDa
  • DARP70 having a molecular weight of about 70 kDa
  • DARP60 having a molecular weight of about 60 kDa
  • DARP40 having a molecular weight of about 40 kDa can be exemplified.
  • DARPs can be used alone in the Judgment Method or the Screening Method, or can be used in the Judgment Method or the Screening Method in combination with one or more DARPs. It is also possible to measure the total concentration of DARPs and use it in the present determination method and the present screening method.
  • the DARPs concentration can be measured by any known method.
  • the DARPs concentration is measured by a Western blotting method using an antibody that recognizes DARPs (hereinafter sometimes referred to as “anti-DARPs antibody”), an ELISA (Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay) method, immunoprecipitation, or the like.
  • anti-DARPs antibody an antibody that recognizes DARPs
  • ELISA Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay
  • immunoprecipitation or the like.
  • the anti-DARPs antibody may be either a monoclonal antibody or a polyclonal antibody as long as it is an antibody having a part of DARPs as an epitope, and may be used alone or in combination of two or more.
  • the present invention relates to an antibody that recognizes a drebrin A-specific epitope (hereinafter, may be referred to as “the antibody”) for use in the determination method and / or the screening method.
  • the “drebrin A-specific epitope” means an epitope that does not exist in drebrin E but exists in drebrin A, preferably a region containing at least a part of the Ins2 translation sequence RPYCPFIKASDSGPSSSSSSSSPPRTPFPYITCHRTPNLSSSLPC (SEQ ID NO: 2). And / or a specific conformation created for Drebrin A to contain the Ins2 translation sequence.
  • a method of using an anti-DARPs antibody as the primary antibody and detecting with a labeled secondary antibody that recognizes the primary antibody can be preferably used.
  • the primary antibody is a rabbit antibody
  • a labeled anti-rabbit IgG antibody can be used
  • a labeled anti-mouse IgG antibody can be used as the secondary antibody.
  • Examples of the labeling substance in the labeled secondary antibody include enzymes, radioisotopes, fluorescent substances, luminescent substances, colloidal gold and the like. Of these, enzymes are preferable from the viewpoint of sensitivity and ease of operation, and horseradish peroxidase (HRP), alkaline phosphatase (AP), glucose oxidase (GOD) and the like are more preferable.
  • HRP horseradish peroxidase
  • AP alkaline phosphatase
  • GOD glucose oxidase
  • TMB 3,3', 5,5'-tetramethylbenzidine
  • AMPPD (2'-spirodamantane) -4-methoxy-4- (3''-Phosphoryloxy) phenyl-1,2-dioxetane, 2-sodium salt
  • 9- (4-chlorophenylthiophosphoryloxymethylidene) -10-methylacridan disodium salt, etc. can be used as substrates.
  • fluorescent dyes such as FITC (fluorescein isothiocyanate) and rhodamine can also be used.
  • the method for detecting and quantifying DARPs differs depending on the labeling method, and can be carried out by a method well known to those skilled in the art.
  • a color-developing substrate or a luminescent substrate can be added, and the absorbance and the luminescence intensity can be measured to quantify the substance to be measured.
  • the substance to be measured can be quantified by measuring the fluorescence intensity thereof.
  • a radioisotope is used as a labeling substance, the substance to be measured can be quantified by measuring the radioactivity.
  • gold colloid is used as the labeling substance, the substance to be measured can be quantified by measuring the absorbance.
  • a calibration curve (standard curve) is created from a sample having a known DARPs concentration in advance, and the measured value is collated with the calibration curve to calculate the DARPs concentration in the sample.
  • the absorbance, radioactivity, and emission intensity may be directly used for comparison in the present determination method or the present screening method without calculating the DARPs concentration.
  • the DARPs concentration in the subject (DARPs concentration calculated above, absorbance, radioactivity, emission intensity) is the DARPs concentration in the control (DARPs concentration calculated above, absorbance, radioactivity, emission intensity).
  • DARPs concentration mean, mean + standard deviation (SD), mean + 2SD, mean + 3SD, mean-SD, mean -2SD, mean -3SD, median, median + SD, median + 2SD, median + 3SD, median-SD, median-2SD, median-3SD and the like can be mentioned. Further, in the present screening method, the DARPs concentration (DARPs concentration calculated above, absorbance, radioactivity, luminescence intensity) in the synaptic dysfunction model non-human animal or the synaptic dysfunction model cultured cell to which the test substance was administered is the subject.
  • the threshold can be set to any value in order to evaluate (determine), and the threshold may be, for example, a synaptic dysfunction model in which the test substance is not administered, or a non-human animal or synaptic dysfunction.
  • Average value of DARPs concentration in model cultured cells average value + standard deviation (SD), average value + 2SD, average value + 3SD, average value-SD, average value-2SD, average value -3SD, median, median + SD, median
  • SD standard deviation
  • the value + 2SD, the median + 3SD, the median-SD, the median -2SD, the median -3SD and the like can be mentioned.
  • the biological sample means a body fluid collected from a subject or a control person.
  • the body fluid include blood, lymph, tissue fluid, body cavity fluid, cerebrospinal fluid, and the like, with cerebrospinal fluid and blood being preferable.
  • Blood includes serum, plasma and the like.
  • the biological sample may be subjected to the measurement of the DARPs concentration as it is, but preferably, a pretreatment for increasing the detection sensitivity of DARPs is performed before the measurement.
  • the pretreatment method may be any method as long as it is a method for increasing the detection sensitivity of the protein to be measured in the biological sample, and examples thereof include immunoprecipitation using anti-DARPs antibodies.
  • the present inventors have succeeded in increasing the detection sensitivity of DARPs by treating a biological sample with protein A / G beads and using the fraction adsorbed on the beads for the determination method and the screening method.
  • the protein A / G bead treatment is performed for the purpose of reducing the background due to autoantibodies prior to immunoprecipitation, and the target protein is originally detected from the flow-through fraction after the protein A / G bead treatment.
  • the discovery by the present inventors that DARPs adsorb to protein A / G beads is not only an unexpected discovery, but also suggests the presence of anti-DARPs autoantibodies in biological samples.
  • the invention is a preventive agent, or synaptic dysfunction, of a disease caused by synaptic dysfunction, which is characterized by searching for a dominant negative peptide against anti-DARPs autoantibodies, or a disease associated with synaptic dysfunction.
  • the present invention relates to a method for screening a therapeutic agent for a disease caused by a disease or a disease associated with synaptic dysfunction.
  • a disease caused by synaptic dysfunction or a disease associated with synaptic dysfunction is a disease caused by synaptic dysfunction, that is, a disorder in information transmission at the synaptic (Alzheimer's disease, cerebrovascular dementia). , Levy body dementia, Parkinson's disease, cerebral cortical basal nucleus degeneration, muscular atrophic lateral sclerosis, spinocerebellar degeneration, etc.) and diseases in which synaptic dysfunction occurs after the onset of the disease (cerebral hemorrhage, cerebral infarction, brain tumor) Etc.). Depression caused by decreased cerebral blood flow, drug dependence, genetic disorders of mitochondria, diabetes, etc.
  • the disease caused by or associated with synaptic dysfunction means a neurodegenerative disease, among which Alzheimer's disease, cerebral cortical basal nucleus syndrome, Parkinson's disease, spinocerebellar degeneration and muscle atrophic side. Neurodegenerative diseases selected from cord sclerosis are preferred.
  • the subject in the determination method 1 is usually associated with a disease caused by synaptic dysfunction or synaptic dysfunction. It is possible to list subjects who have not developed a disease and whose future is uncertain whether or not they will develop a disease caused by synaptic dysfunction or a disease associated with synaptic dysfunction, and also caused by synaptic dysfunction. When determining the onset of a disease or a disease associated with synaptic dysfunction, it is usually unclear whether or not the subject has a disease caused by synaptic dysfunction or a disease associated with synaptic dysfunction.
  • the control in the determination method 1 refers to a disease caused by synaptic dysfunction, a disease caused by synaptic dysfunction, or a disease caused by synaptic dysfunction, which has a low or little risk of developing a disease associated with synaptic dysfunction. It means a healthy person who has not developed the associated disease.
  • the subject in the determination method 2 is, for example, a disease caused by synaptic dysfunction, or a disease associated with synaptic dysfunction, but a disease caused by synaptic dysfunction, or a disease associated with synaptic dysfunction. Subjects of unknown severity can be mentioned.
  • the control in the determination method 2 means, for example, a patient who has developed a disease caused by synaptic dysfunction or a disease associated with synaptic dysfunction, and whose severity has been determined.
  • the "patient whose severity has been determined” may be a patient whose severity has been determined based on known clinical practice guidelines.
  • a clinical practice guideline for a target disease it is desirable to use a clinical practice guideline for a target disease, and examples thereof include a clinical practice guideline for dementia, a clinical practice guideline for cerebral hemorrhage / cerebral infarction, and the like.
  • a clinical practice guideline for dementia dementia is divided into early, middle, and late stages by interviews, etc., but it is considered that DARPs in plasma are maximized from the early stage to the middle stage.
  • DARPs have been shown to be rather low after widespread neuronal cell death in the late stages (patients with severe dementia) (patients with AD01 in Example 2).
  • DARPs become high for a while after bleeding occurs, and become low and take a constant value in the chronic phase over time.
  • the synaptic dysfunction non-human animal in the Screening Method 1 may be a non-human animal that spontaneously develops synaptic dysfunction, or a non-human animal that induces the onset of synaptic dysfunction.
  • the non-human animal that has induced synaptic dysfunction may be specifically a model non-human animal of a disease caused by the above-mentioned synaptic dysfunction or a disease associated with synaptic dysfunction. Examples of the non-human animal include mice, as well as non-human mammals such as rats, hamsters, guinea pigs, monkeys, cows, pigs, horses, rabbits, sheep, goats, cats, and dogs.
  • the synaptic dysfunction model cultured cell in the screening method 2 may be a cultured cell in which synaptic dysfunction naturally occurs or a cultured cell in which synaptic dysfunction is induced.
  • the cultured cell that has induced the onset of synaptic dysfunction may be specifically a model cultured cell of a disease caused by the synaptic dysfunction or a disease associated with synaptic dysfunction.
  • the cultured cells are preferably cultured nerve cells, and in addition to human-derived cultured cells, mice, rats, hamsters, guinea pigs, monkeys, cows, pigs, horses, rabbits, sheep, goats, and cats. , Can be exemplified as cultured cells derived from non-human mammals such as dogs.
  • the present invention is a kit for determining the risk, presence / absence, or severity of the onset risk, presence / absence, or severity of a disease caused by synaptic dysfunction including the antibody of the present invention or a disease associated with synaptic dysfunction (hereinafter, "Kit of the present invention"). (Sometimes).
  • the kit is a kit for use in the determination method.
  • the kit may include a means for obtaining a biological sample from a subject, a labeled secondary antibody that recognizes the antibody, and a package insert that describes procedures and diagnostic criteria.
  • the experimental procedure is as follows. (1) 1.8 ml of plasma and 200 ⁇ l of protein A / G beads (Protein A / G PLUS-Agarose: manufactured by Santa Cruz) were suspended and reacted (pre-cleared) at 4 ° C. for 1 hour with a rotator. (2) Centrifuge to prepare supernatant (preclear plasma) and sediment (Beads Absorbed). (3) 30 ⁇ l of SDS sample buffer was added to the bead adsorption fraction and heat-denatured to elute.
  • Drebrin A Related Proteins DARPs
  • M2F6 is a general-purpose antibody for control IgG and drebrin, and was first discovered by the present inventors. Since Drebrin A is localized to the dendritic spines of the brain, DARPs can leak from the injured dendritic spines in patients with Alzheimer's disease, cross the blood-brain barrier, and migrate into the blood. It was suggested.
  • DARPs used as diagnostic biomarkers From Example 1, it was considered that DARPs leaked from damaged dendritic spines in patients with Alzheimer's disease. In other diseases caused by synaptic dysfunction or associated with synaptic dysfunction, DARPs may leak from the damaged dendrite spine and transfer into the blood. Therefore, in order to confirm whether DARPs in blood samples can be used as a diagnostic biomarker for diseases caused by synaptic dysfunction or diseases associated with synaptic dysfunction, the following experiments were conducted.
  • AD01 Alzheimer's disease patients
  • AD02 3 years after onset, with renal tumor
  • CBS corticobasal syndrome patient
  • PD01 Parkinson's disease patient
  • a blood sample was obtained from a healthy 65-year-old man (Healthy), and the adsorbed fraction of protein A / G beads was subjected to western blotting in the same manner as in Example 1. Detection was performed using the anti-drevlin A antibody DAS2 (Institute of Immunobiology).
  • DARP40 DARP40
  • DARP60 DARP70
  • DARP90 DARP100
  • FIG. 4 DARPs were detected by the same procedure using AD02 and control plasma (Ctrl: manufactured by Kojin Bio (KJB), normal human plasma / pool EDTA-2Na, lot: HMN389081).
  • DARP40, DARP60, DARP70, DARP90, and DARP100 was increased in AD02. Therefore, it has been shown that these DARPs can be used as diagnostic biomarkers for diseases caused by synaptic dysfunction or diseases associated with synaptic dysfunction.
  • AD01 the DARPs concentration was lower than that in Health (Fig. 3). This is due to the rapid leakage of DARPs, such as the acute exacerbation, in patients with chronic AD who have undergone neuronal cell death and have progressed to the final stage of dementia (high tau, poor MMSE score). Was not occurring, and it was considered that the DARPs concentration was low.
  • DARPs in cerebrospinal fluid samples can be used as diagnostic biomarkers for diseases caused by synaptic dysfunction or diseases associated with synaptic dysfunction.
  • DARPs in blood samples can be used as diagnostic biomarkers for diseases caused by synaptic dysfunction or diseases associated with synaptic dysfunction.
  • DARPs are associated with drebrin A localized in the brain, it is considered that a large amount of DARPs is also present in cerebrospinal fluid in patients with diseases caused by synaptic dysfunction or diseases associated with synaptic dysfunction. Therefore, in order to confirm that DARPs in the cerebrospinal fluid sample can be used as a diagnostic biomarker for diseases caused by synaptic dysfunction or diseases associated with synaptic dysfunction, the following experiments were conducted.
  • GAD01-03 Three patients with Alzheimer's disease (GHAD01-03, all with mild dementia), one patient with muscular atrophic lateral sclerosis (ALS01), one patient with spinocerebellar degeneration (SCD01), and one patient with depression (SCD01).
  • a cerebrospinal fluid sample was obtained from Dep01), and the adsorbed fraction of protein A / G beads was subjected to western blotting in the same manner as in Example 2 except that the cerebrospinal fluid sample was used instead of the blood sample. Detection was performed using the anti-drevlin A antibody DAS2 (Institute of Immunobiology).
  • DARP40, DARP60, DARP70, DARP90, and DARP100 were confirmed as in the blood sample.
  • ALS01 muscular atrophic lateral sclerosis
  • SCD01 spinocerebellar degeneration
  • Dep01 depression
  • the DARPs concentration determines the severity of the disease (degree of damage to dendritic spine). It was suggested that it could be reflected.
  • GHAD02 had a DARPs concentration similar to that of one depressed patient (Dep01). It is considered that the AD progression of GHAD02 has shifted to the chronic phase, the rapid leakage of DARPs as in the acute exacerbation phase has not occurred, and the DARPs concentration is low.
  • the DARPs concentration in depressed patients was lower than that in other neurodegenerative diseases, it is also recognized by the increased DARPs concentration in depressed patients, considering that depression may shift to cognitive dysfunction. It is considered that the transition to dysfunction can be evaluated.
  • DARPs in cerebrospinal fluid samples can be used as a diagnostic biomarker for Alzheimer's disease.
  • DARPs in the cerebrospinal fluid sample were detected by Western blotting in the 6 Alzheimer's disease patients shown in Table 1 below in the same manner as in Example 3.
  • TAU ⁇ means that the concentration of tau is high and leads to tau accumulation
  • a ⁇ ⁇ means that the concentration of amyloid ⁇ is high and leads to accumulation of amyloid ⁇ .
  • DARP100, DARP70 and DARP40 could be confirmed from the cerebrospinal fluid samples derived from all patients.
  • the DARPs concentration was high in the exacerbated patients (case numbers 1107-1110) who did not reach tau accumulation, but the DARPs concentration was low in the patient with case registration number 1111 having the highest tau.
  • the results here also showed that DARPs levels were lower in patients with advanced Alzheimer's disease and transition to the chronic phase.
  • DARPs are adsorbed on protein A / G beads having the ability to bind to antibodies (IgG, IgA).
  • Human drebrin A (GFP-hDA) with a GFP tag to confirm whether such adsorption is directly adsorbed on protein A / G beads or mediated by DARPs autoantibodies in blood samples.
  • GFP-hDA Human drebrin A
  • a sample expressed on HEK293 and homogenized with SDS buffer was subjected to SDS-PAGE, and anti-drebrin antibody (3D9: homemade) and plasma derived from Alzheimer's disease patient (AD plasma) were detected as primary antibodies.
  • FIG. A band could be confirmed at the same position (arrow in the figure) between the case of detection by 3D9 on the left of FIG. 8 and the case of detection by plasma (AD plasma) derived from a patient with Alzheimer's disease on the right of FIG. From this result, it was clarified that the plasma derived from Alzheimer's disease patients contains an autoantibody capable of recognizing drebrin A. It is probable that DARPs were adsorbed on the protein A / G beads via the autoantibodies.
  • anti-DARPs autoantibodies are also present in cerebrospinal fluid. Therefore, in order to confirm whether anti-DARPs autoantibodies may be toxic to nerve cells in the brain, anti-drevlin antibody (22G5: homemade) or commercially available normal mouse IgG (manufactured by Fujifilm Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) was used.
  • a disease caused by synaptic dysfunction or a disease associated with synaptic dysfunction which has so far relied on a question-type test (depression, dementia, etc.) or an imaging test (cerebral hemorrhage, etc.) Since the presence or absence and severity of the onset can be determined early and easily, it leads to prevention or early treatment of the onset of these diseases. Furthermore, DARPs and anti-DARPs autoantibodies can also serve as screening indexes for preventive agents and therapeutic agents, and can contribute to drug discovery research. Therefore, the industrial applicability of the present invention in the medical / pharmaceutical field is extremely high.

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Abstract

シナプス機能不全に起因する疾病、又はシナプス機能不全を付随する疾病の発症の有無や重症度を早期かつ簡便に判定することのできる判定方法を提供するとともに、シナプス機能不全に起因する疾病、又はシナプス機能不全を付随する疾病の治療剤、予防剤のスクリーニング方法を提供することを課題とする本発明は、ドレブリンＡ関連タンパク質（ＤＡＲＰｓ）を指標としてシナプス機能不全に起因する疾病、又はシナプス機能不全を付随する疾病の発症の有無や重症度を判定する判定方法や、ドレブリンＡ関連タンパク質（ＤＡＲＰｓ）を指標としてシナプス機能不全に起因する疾病、又はシナプス機能不全を付随する疾病の治療剤、予防剤のスクリーニングを行うスクリーニング方法により、これらの疾病を早期かつ簡便に判定することのできる判定方法を提供するとともに、これらの疾病に対する創薬研究に資することができる。

Description

シナプス機能不全に起因する疾病、又はシナプス機能不全を付随する疾病の判定方法
　本発明は、シナプス機能不全に起因する疾病、又はシナプス機能不全を付随する疾病の発症の有無や重症度を早期かつ簡便に判定することのできる判定方法や、シナプス機能不全に起因する疾病、若しくはシナプス機能不全を付随する疾病の予防剤及び／又は治療剤のスクリーニング方法や、該判定方法や該スクリーニング方法に用いるための抗体や、該判定方法を行うためのキットに関する。
　認知症の主な原因であるアルツハイマー病は、不可逆的な進行性の脳疾患であり、脳におけるシナプスが機能不全に陥ることによって生じるとされている。アルツハイマー病患者の増加は、近年、大きな社会的関心事となっており、その早期診断方法や治療薬の確立が望まれている。アルツハイマー病患者の死後脳では老人斑が観察され、これは「アミロイドβ蛋白質」の凝集体（アミロイド斑）であることが知られている。アミロイドβ蛋白質の沈着が、病理学的に確認できる最も初期の病変であり、アミロイドβ蛋白質が凝集し、そして直接神経細胞毒性を示すことが報告されている。そして、家族性アルツハイマー病患者の遺伝子解析から、アミロイドβ蛋白質の産生及び蓄積の異常がアルツハイマー病の発症に広く関連しているということが現在広く受け入れられている。これは、アミロイドカスケード仮説と呼ばれている。このように、アミロイドβ蛋白質がアルツハイマー病の主原因であることは、数多くの研究により広く受け入れられている（非特許文献１）。また、脳へのアミロイドβ蛋白質の蓄積は、発症より２０年以上前から始まっていることがわかっている。
　アルツハイマー病のほかにも、脳の血流の低下（うつ病など）、脳出血、脳梗塞などが原因となってシナプス機能不全が生じることがわかっている。さらに、ミトコンドリアの遺伝子疾患、糖尿病に由来する認知症なども知られている。また、薬物依存などでもシナプス機能不全が起こる場合もある。これらのシナプス機能不全に起因する疾病、又はシナプス機能不全を付随する疾病においても、シナプス機能不全によって認知機能が低下すると考えられているが、その診断は困難である。例えば、アルツハイマー病の診断は、死亡後に病理解剖を行うことによってのみ診断を確定することができ、生前の診断は質問式検査や画像検査によって行っているが、いずれも自覚症状が現れてからの診断となり、早期の治療開始ができていないのが実情である。また、脳脊髄液中のアミロイドβ４２蛋白質の濃度低下によりアルツハイマー病の診断を行うことができるとの報告もあるが（非特許文献２）、侵襲性の高い検査であり高齢者への適用が難しいという問題点がある。また、現状用いられているアルツハイマー病の治療薬は、いずれも症状を抑える薬であり、根本治療につながる医薬品は存在しない。また、その他のシナプス機能不全に起因する疾病、又はシナプス機能不全を付随する疾病においても、質問式検査（うつ病、認知症等）や画像検査（脳出血等）に頼っており、簡便且つ早期に診断するための方法は存在しない。
　本発明者らは、発生過程の神経細胞に多量発現するアクチン結合タンパクドレブリン（Drebrin）を世界に先駆けて発見し（例えば、非特許文献３及び４参照）、このドレブリンがアクチンファイバーの性状を変えることにより神経細胞の形態形成、特に突起形成に関わっていること（例えば、非特許文献５～７参照）や、発生中で移動している神経細胞では、細胞体と突起全体に存在するが、成熟した神経細胞では棘構造（樹状突起スパイン）中に特異的に存在すること（例えば、非特許文献８～１０参照）を既に証明している。ドレブリンには、胚性型（embryonic type）のドレブリンＥと成体型（adult type）のドレブリンＡという２つのアイソフォームが存在しており（例えば、非特許文献４参照）、成熟した神経細胞の樹状突起スパインに特異的に見られるドレブリンＡは、神経細胞にしか発現しないという特徴を有している（例えば、非特許文献９及び１０参照）。本発明者らは、さらに、アルツハイマー病などの痴呆性疾患では樹状突起スパインのドレブリンが広範囲に消失していることを報告している（非特許文献１１）。
斉藤　貴志，西道　隆臣「アルツハイマー病のモデルマウス」日薬理誌（Folia Pharmacol. Jpn.）144, 250-252, 2014 J. Neurol. Sci. 148, 41-45, 1997 J. Neurochem. 44, 1210-1216, 1985 J. Biochem. 117, 231-236, 1995 J. Neurosci. Res. 38, 149-159, 1994 Exp. Cell Res. 215, 145-153, 1994 J. Biol. Chem. 269, 29928-29933, 1994 J. Neurosci. 15, 7161-7170, 1996 Dev. Brain Res. 29, 233-244, 1986 Brain Res. 413, 374-378, 1987 J Neurosci. Res. 43(1), 87-92, 1996
　上述したとおり、現状ではシナプス機能不全に起因する疾病、又はシナプス機能不全を付随する疾病を早期かつ簡便に判定することはできていない。さらに、シナプス機能不全を直接的に治療することはできておらず、例えばアルツハイマー病の治療においても根本治療には至っておらず、対症療法を行っているのが現状である。本発明の課題は、シナプス機能不全に起因する疾病、又はシナプス機能不全を付随する疾病の発症の有無や重症度を早期かつ簡便に判定することのできる判定方法を提供するとともに、シナプス機能不全に起因する疾病、又はシナプス機能不全を付随する疾病の治療剤、予防剤のスクリーニング方法を提供することにある。
　本発明者らは、アルツハイマー病などの痴呆性疾患では樹状突起スパインのドレブリンＡが広範囲に消失しているという知見に基づいて、アルツハイマー病患者においてはドレブリンＡが神経細胞から血液中に漏出していると考えた。そこで、血液中のドレブリンＡを検出するため、常法に従い血液中の抗体を除去するためにプロテインＡ／Ｇビーズ処理を行い、その後、ドレブリンＡ及びドレブリンＥを認識する抗ドレブリン抗体を用いてウェスタンブロッティング法に供したが、ドレブリンのバンドは確認できなかった。本発明者らは、血液試料のプロテインＡ／Ｇビーズによる沈降画分について念のため抗ドレブリン抗体を用いてウェスタンブロッティング法に供したところ、予想に反し、約１３０ｋＤａの位置にドレブリンのバンドを確認することができた。このドレブリンのバンドがドレブリンＡであるかどうか確認するため、血液試料のプロテインＡ／Ｇビーズによる沈降画分について抗ドレブリンＡ抗体でのウェスタンブロッティングを行ったところ、約１３０ｋＤａのバンドはドレブリンＡ全長ではなくドレブリンＥであったものの、抗ドレブリンＡ抗体により検出することのできる、ドレブリンＡ全長より小さい分子量のバンドを複数検出することができた。ここで検出されたバンドは、ドレブリンＡ遺伝子に特徴的なＩｎｓ２配列の翻訳ペプチドを有するドレブリンＡの断片、又はスプライスバリアントであると考えられた。本発明者らは、さらに検討を重ね、このようなドレブリンＡ関連タンパク質（ＤＡＲＰｓ：Drebrin A Related Proteins）がシナプス機能不全に起因する疾病、又はシナプス機能不全を付随する疾病に罹患した患者由来の生体試料には多く存在していることを見いだした。さらに、本発明者らは、ＤＡＲＰｓが自己抗体を介してプロテインＡ／Ｇビーズに結合していることや、ドレブリンを認識する自己抗体が神経細胞を損傷し得ること、自己抗体による神経細胞の損傷を抑制することにより、シナプス機能不全に起因する疾病、若しくはシナプス機能不全を付随する疾病を治療又は予防し得ることを見いだした。本発明は、これらの知見により完成したものである。
　すなわち本発明は以下に関する。
〔１〕以下の工程（ａ－１）～（ｃ－１）を備えたことを特徴とするシナプス機能不全に起因する疾病、若しくはシナプス機能不全を付随する疾病の発症リスク、又は発症の有無の判定方法。
（ａ－１）被験者から採取された生体試料中のドレブリンＡ関連タンパク質（ＤＡＲＰｓ）の濃度を測定する工程；
（ｂ－１）工程（ａ－１）で測定したＤＡＲＰｓの濃度を、シナプス機能不全に起因する疾病、又はシナプス機能不全を付随する疾病を発症しない対照者におけるＤＡＲＰｓの濃度と比較する工程；
（ｃ－１）工程（ａ－１）で測定したＤＡＲＰｓの濃度が、前記対照者におけるＤＡＲＰｓの濃度よりも高いとき、前記被験者は、シナプス機能不全に起因する疾病、若しくはシナプス機能不全を付随する疾病を発症するリスクが高い、又はシナプス機能不全に起因する疾病、若しくはシナプス機能不全を付随する疾病を発症している可能性が高いと評価する工程；
〔２〕以下の工程（ａ－２）～（ｃ－２）を備えたことを特徴とするシナプス機能不全に起因する疾病、又はシナプス機能不全を付随する疾病の重症度の判定方法。
（ａ－２）シナプス機能不全に起因する疾病、又はシナプス機能不全を付随する疾病を発症している被験者から採取された生体試料中のドレブリンＡ関連タンパク質（ＤＡＲＰｓ）の濃度を測定する工程；
（ｂ－２）工程（ａ－２）で測定したＤＡＲＰｓの濃度を、シナプス機能不全に起因する疾病、又はシナプス機能不全を付随する疾病を発症している対照者におけるＤＡＲＰｓの濃度と比較する工程；
（ｃ－２）工程（ａ－２）で測定したＤＡＲＰｓ及び／又はＤＡＲＰｓ自己抗体の濃度が、前記対照者におけるＤＡＲＰｓ及び／又はＤＡＲＰｓ自己抗体の濃度よりも高いとき、前記被験者は、前記対照者よりもシナプス機能不全に起因する疾病、又はシナプス機能不全を付随する疾病が重症化している可能性が高いと評価する工程；
〔３〕以下の工程（ａ－３）～（ｃ－３）を備えたことを特徴とするシナプス機能不全に起因する疾病、若しくはシナプス機能不全を付随する疾病の予防剤、又はシナプス機能不全に起因する疾病、若しくはシナプス機能不全を付随する疾病の治療剤のスクリーニング方法。
（ａ－３）被検物質を投与したシナプス機能不全モデル非ヒト動物から採取された試料中のドレブリンＡ関連タンパク質（ＤＡＲＰｓ）の濃度を測定する工程；
（ｂ－３）工程（ａ－３）で測定したドレブリンＡ関連タンパク質（ＤＡＲＰｓ）の濃度を、前記被検物質を投与しないシナプス機能不全モデル非ヒト動物におけるドレブリンＡ関連タンパク質（ＤＡＲＰｓ）の濃度と比較する工程；
（ｃ－３）工程（ａ－３）で測定したドレブリンＡ関連タンパク質（ＤＡＲＰｓ）の濃度が、前記被検物質を投与しないシナプス機能不全モデル非ヒト動物におけるドレブリンＡ関連タンパク質（ＤＡＲＰｓ）の濃度よりも低いとき、前記被検物質は、シナプス機能不全に起因する疾病、若しくはシナプス機能不全を付随する疾病の予防、又はシナプス機能不全に起因する疾病、若しくはシナプス機能不全を付随する疾病の治療に有効であると評価する工程；
〔４〕以下の工程（ａ－４）～（ｄ－４）を備えたことを特徴とするシナプス機能不全に起因する疾病、若しくはシナプス機能不全を付随する疾病の予防剤、又はシナプス機能不全に起因する疾病、若しくはシナプス機能不全を付随する疾病の治療剤のスクリーニング方法。
（ａ－４）シナプス機能不全モデル培養細胞に被検物質を投与し、培養する工程；
（ｂ－４）前記シナプス機能不全モデル培養細胞の培養液中のドレブリンＡ関連タンパク質（ＤＡＲＰｓ）の濃度を測定する工程；
（ｃ－４）工程（ｂ－４）で測定したＤＡＲＰｓの濃度を、前記被検物質を投与しないシナプス機能不全モデル培養細胞の培養液中のＤＡＲＰｓの濃度と比較する工程；
（ｄ－４）工程（ｂ－４）で測定したＤＡＲＰｓの濃度が、前記被検物質を投与しないシナプス機能不全モデル培養細胞の培養液中のＤＡＲＰｓの濃度よりも低いとき、前記被検物質は、シナプス機能不全に起因する疾病、若しくはシナプス機能不全を付随する疾病の予防、又はシナプス機能不全に起因する疾病、若しくはシナプス機能不全を付随する疾病の治療に有効であると評価する工程；
〔５〕生体試料が、脳脊髄液試料又は血液試料であることを特徴とする上記〔１〕～〔３〕に記載の方法。
〔６〕ＤＡＲＰｓが、ＤＡＲＰ４０、ＤＡＲＰ６０、ＤＡＲＰ７０、ＤＡＲＰ９０、及びＤＡＲＰ１００から選択される１又は２種以上であることを特徴とする上記〔１〕～〔５〕に記載の方法。
〔７〕シナプス機能不全に起因する疾病、又はシナプス機能不全を付随する疾病が、神経変性疾患であることを特徴とする上記〔１〕～〔６〕に記載の方法。
〔８〕神経変性疾患が、アルツハイマー病、大脳皮質基底核症候群、パーキンソン病、脊髄小脳変性症及び筋萎縮性側索硬化症から選択されることを特徴とする上記〔７〕に記載の方法。
〔９〕ＤＡＲＰｓの濃度が、ドレブリンＡ特異的エピトープを認識する抗体を用いて測定されることを特徴とする上記〔１〕～〔８〕に記載の方法。
〔１０〕ドレブリンＡ特異的エピトープを認識することを特徴とする上記〔９〕に記載の方法に用いるための抗体。
〔１１〕上記〔１０〕に記載の抗体を含むことを特徴とするシナプス機能不全に起因する疾病、若しくはシナプス機能不全を付随する疾病の発症リスク、発症の有無、又は重症度の判定用キット。
〔１２〕ドレブリンＡ関連タンパク質（ＤＡＲＰｓ）自己抗体に対するドミナントネガティブペプチドを探索することを特徴とするシナプス機能不全に起因する疾病、若しくはシナプス機能不全を付随する疾病の予防剤、又はシナプス機能不全に起因する疾病、若しくはシナプス機能不全を付随する疾病の治療剤のスクリーニング方法。
　また本発明の実施の他の形態として、
　被験者から採取された生体試料中のドレブリンＡ関連タンパク質（ＤＡＲＰｓ）の濃度を測定する工程（ａ－１）を備えた、シナプス機能不全に起因する疾病、又はシナプス機能不全を付随する疾病の発症リスク、又は発症の有無の判定方法；や、
　シナプス機能不全に起因する疾病、又はシナプス機能不全を付随する疾病を発症している被験者から採取された生体試料中のドレブリンＡ関連タンパク質（ＤＡＲＰｓ）の濃度を測定する工程（ａ－２）を備えた、シナプス機能不全に起因する疾病、又はシナプス機能不全を付随する疾病の重症度の判定方法；や、
　１又は２以上のドレブリンＡ関連タンパク質（ＤＡＲＰｓ）からなる、シナプス機能不全に起因する疾病、若しくはシナプス機能不全を付随する疾病の発症リスク、又は発症の有無の判定用、或いはシナプス機能不全に起因する疾病、若しくはシナプス機能不全を付随する疾病の重症度の判定用バイオマーカー；や、
　被検物質を投与したシナプス機能不全モデル非ヒト動物から採取された試料中のドレブリンＡ関連タンパク質（ＤＡＲＰｓ）の濃度を測定する工程（ａ－３）を備えた、シナプス機能不全に起因する疾病、若しくはシナプス機能不全を付随する疾病の予防剤、又はシナプス機能不全に起因する疾病、若しくはシナプス機能不全を付随する疾病の治療剤のスクリーニング方法；や、
　上記工程（ａ－４）及び（ｂ－４）を備えた、シナプス機能不全に起因する疾病、若しくはシナプス機能不全を付随する疾病の予防剤、又はシナプス機能不全に起因する疾病、若しくはシナプス機能不全を付随する疾病の治療剤のスクリーニング方法；や、
　上記工程（ａ－１）～（ｃ－１）を備えた、シナプス機能不全に起因する疾病、若しくはシナプス機能不全を付随する疾病の発症リスク、又は発症の有無を診断するためのデータを収集する方法；や、
　上記工程（ａ－２）～（ｃ－２）を備えた、シナプス機能不全に起因する疾病、又はシナプス機能不全を付随する疾病の重症度を診断するためのデータを収集する方法；や、
　上記工程（ａ－３）～（ｃ－３）を備えた、シナプス機能不全に起因する疾病、若しくはシナプス機能不全を付随する疾病の予防剤、又はシナプス機能不全に起因する疾病、若しくはシナプス機能不全を付随する疾病の治療剤の有効性を判定する方法；や、
　上記工程（ａ－４）～（ｄ－４）を備えた、シナプス機能不全に起因する疾病、若しくはシナプス機能不全を付随する疾病の予防剤、又はシナプス機能不全に起因する疾病、若しくはシナプス機能不全を付随する疾病の治療剤の有効性を判定する方法；や、
　ドレブリンＡ関連タンパク質（ＤＡＲＰｓ）自己抗体に対するドミナントネガティブペプチドを含む、シナプス機能不全に起因する疾病、若しくはシナプス機能不全を付随する疾病の予防剤、又はシナプス機能不全に起因する疾病、若しくはシナプス機能不全を付随する疾病の治療剤；
を挙げることができる。
　本発明の判定方法によれば、これまで質問式検査（うつ病、認知症等）や画像検査（脳出血等）に頼っていたシナプス機能不全に起因する疾病、又はシナプス機能不全を付随する疾病の発症の有無や重症度を早期かつ簡便に判定することができるため、これらの疾病の発症を予防したり、早期治療することにつながる。さらに、ＤＡＲＰｓや抗ＤＡＲＰｓ自己抗体は、予防剤、治療剤のスクリーニング指標にもなるものであり、創薬研究に資することができる。
上段：実施例１の、ビーズ吸着画分（Beads Absorbed）、血漿（Plasma）及びプレクリア血漿（preclear plasma）をウェスタンブロッティングで解析した結果を示す図である。下段：実施例１の、各ＩＰ画分をウェスタンブロッティングで解析した結果を示す図である。 実施例１の、ビーズ吸着画分に対して種々の抗ドレブリン抗体（Ｍ２Ｆ６、２８Ｄ８、３Ｄ９、２２Ｇ５、１７Ｃ３、３３Ａ４：自家製）及び抗ドレブリンＡ抗体（４Ｃ２：自家製；ＤＡＳ２：免疫生物学研究所）を用いてウェスタンブロッティングを行った結果を示す図である。 実施例２の、アルツハイマー病患者２名（ＡＤ０１、ＡＤ０２）、大脳皮質基底核症候群患者１名（ＣＢＳ）、パーキンソン病患者１名（ＰＤ０１）、健常６５歳男性（Ｈｅａｌｔｈｙ）より血液試料を取得し、プロテインＡ／Ｇビーズの吸着画分に対して抗ドレブリンＡ抗体ＤＡＳ２（免疫生物学研究所）を用いてウェスタンブロッティングを行った結果を示す図である。 実施例２の、ＡＤ０２とコントロール血漿（Ｃｔｒｌ）を用い、ウェスタンブロッティングによりＤＡＲＰｓの検出を行った結果を示す図である。ＤＡＲＰ４０、ＤＡＲＰ６０、ＤＡＲＰ７０、ＤＡＲＰ９０、ＤＡＲＰ１００のいずれのＤＡＲＰも、ＡＤ０２において濃度が上昇していた。 実施例２の、アルツハイマー病患者２名（ＡＤ０１、ＡＤ０２）、大脳皮質基底核症候群患者１名（ＣＢＳ）、パーキンソン病患者１名（ＰＤ０１）、健常６５歳男性（Ｈｅａｌｔｈｙ）より血液試料を取得し、プロテインＡ／Ｇビーズの吸着画分に対して抗ドレブリン抗体３Ｄ９（自家製）を用いてウェスタンブロッティングを行った結果を示す図である。図３と異なり、サンプル間での差が見いだせなかった。 実施例３の、アルツハイマー病患者３名（ＧＨＡＤ０１～０３、いずれも軽度の認知症）、筋萎縮性側索硬化症患者１名（ＡＬＳ０１）、脊髄小脳変性症患者１名（ＳＣＤ０１）、及びうつ病患者１名（Ｄｅｐ０１）より脳脊髄液試料を取得し、プロテインＡ／Ｇビーズの吸着画分に対して抗ドレブリンＡ抗体ＤＡＳ２（免疫生物学研究所）を用いてウェスタンブロッティングを行った結果を示す図である。 実施例４の、表１に記載の６名のアルツハイマー病患者について、脳脊髄液試料中のＤＡＲＰｓをウェスタンブロッティングにより検出した結果を示す図である。 実施例５の、ＧＦＰタグを付加したヒトドレブリンＡ（ＧＦＰ－ｈＤＡ）をＳＤＳ－ＰＡＧＥに供し、抗ドレブリン抗体（３Ｄ９：自家製）（左）及びアルツハイマー病患者由来の血漿（AD plasma）（右）を一次抗体としてウェスタンブロッティングにより検出した結果を示す図である。 実施例５の、抗ドレブリン抗体（２２Ｇ５：自家製）が、ラット海馬培養細胞に対して毒性を有し得るかを確認した結果を示す図である。（Ａ）は、２２Ｇ５処理を行ったラット海馬培養細胞を示し、（Ｂ）は、正常マウスＩｇＧ処理を行ったラット海馬培養細胞を示す。 実施例６の、培養ラット大脳皮質細胞に、ＤＡＲＰｓが存在することを確認したウェスタンブロッティングの結果を示す図である。
　本発明は、以下の工程（ａ－１）被験者から採取された生体試料中のドレブリンＡ関連タンパク質（ＤＡＲＰｓ）の濃度を測定する工程；（ｂ－１）工程（ａ－１）で測定したＤＡＲＰｓの濃度を、シナプス機能不全に起因する疾病、又はシナプス機能不全を付随する疾病を発症しない対照者におけるＤＡＲＰｓの濃度と比較する工程；及び（ｃ－１）工程（ａ－１）で測定したＤＡＲＰｓの濃度が、前記対照者におけるＤＡＲＰｓの濃度よりも高いとき、前記被験者は、シナプス機能不全に起因する疾病、若しくはシナプス機能不全を付随する疾病を発症するリスクが高い、又はシナプス機能不全に起因する疾病、若しくはシナプス機能不全を付随する疾病を発症している可能性が高いと評価する工程；を含むシナプス機能不全に起因する疾病、若しくはシナプス機能不全を付随する疾病の発症リスク、又は発症の有無の判定方法（以下、「本件判定方法１」ということがある）や、
　以下の工程（ａ－２）シナプス機能不全に起因する疾病、又はシナプス機能不全を付随する疾病を発症している被験者から採取された生体試料中のドレブリンＡ関連タンパク質（ＤＡＲＰｓ）の濃度を測定する工程；（ｂ－２）工程（ａ－２）で測定したＤＡＲＰｓの濃度を、シナプス機能不全に起因する疾病、又はシナプス機能不全を付随する疾病を発症している対照者におけるＤＡＲＰｓの濃度と比較する工程；及び（ｃ－２）工程（ａ－２）で測定したＤＡＲＰｓ及び／又はＤＡＲＰｓ自己抗体の濃度が、前記対照者におけるＤＡＲＰｓ及び／又はＤＡＲＰｓ自己抗体の濃度よりも高いとき、前記被験者は、前記対照者よりもシナプス機能不全に起因する疾病、又はシナプス機能不全を付随する疾病が重症化している可能性が高いと評価する工程；を含むシナプス機能不全に起因する疾病、又はシナプス機能不全を付随する疾病の重症度の判定方法（以下、「本件判定方法２」ということがある。また、本件判定方法１と本件判定方法２を総称して、以下、「本件判定方法」ということがある）であれば特に制限されない。ここで、「重症度」とは、シナプスの障害の進み方が速い急性増悪期を含む。一態様において、本件判定方法は、医師によるシナプス機能不全に起因する疾病、若しくはシナプス機能不全を付随する疾病の発症リスクの診断、又は発症の有無や重症度の診断を補助する方法であって、医師による診断行為を含まないこともある。
　また、本発明は、以下の工程（ａ－３）被検物質を投与したシナプス機能不全モデル非ヒト動物から採取された試料中のドレブリンＡ関連タンパク質（ＤＡＲＰｓ）の濃度を測定する工程；（ｂ－３）工程（ａ－３）で測定したドレブリンＡ関連タンパク質（ＤＡＲＰｓ）の濃度を、前記被検物質を投与しないシナプス機能不全モデル非ヒト動物におけるドレブリンＡ関連タンパク質（ＤＡＲＰｓ）の濃度と比較する工程；及び（ｃ－３）工程（ａ－３）で測定したドレブリンＡ関連タンパク質（ＤＡＲＰｓ）の濃度が、前記被検物質を投与しないシナプス機能不全モデル非ヒト動物におけるドレブリンＡ関連タンパク質（ＤＡＲＰｓ）の濃度よりも低いとき、前記被検物質は、シナプス機能不全に起因する疾病、若しくはシナプス機能不全を付随する疾病の予防、又はシナプス機能不全に起因する疾病、若しくはシナプス機能不全を付随する疾病の治療に有効であると評価する工程；を含むシナプス機能不全に起因する疾病、若しくはシナプス機能不全を付随する疾病の予防剤、又はシナプス機能不全に起因する疾病、若しくはシナプス機能不全を付随する疾病の治療剤のスクリーニング方法（以下、「本件スクリーニング方法１」ということがある）や、以下の工程（ａ－４）シナプス機能不全モデル培養細胞に被検物質を投与し、培養する工程；（ｂ－４）前記シナプス機能不全モデル培養細胞の培養液中のドレブリンＡ関連タンパク質（ＤＡＲＰｓ）の濃度を測定する工程；（ｃ－４）工程（ｂ－４）で測定したＤＡＲＰｓの濃度を、前記被検物質を投与しないシナプス機能不全モデル培養細胞の培養液中のＤＡＲＰｓの濃度と比較する工程；及び（ｄ－４）工程（ｂ－４）で測定したＤＡＲＰｓの濃度が、前記被検物質を投与しないシナプス機能不全モデル培養細胞の培養液中のＤＡＲＰｓの濃度よりも低いとき、前記被検物質は、シナプス機能不全に起因する疾病、若しくはシナプス機能不全を付随する疾病の予防、又はシナプス機能不全に起因する疾病、若しくはシナプス機能不全を付随する疾病の治療に有効であると評価する工程；を含むシナプス機能不全に起因する疾病、若しくはシナプス機能不全を付随する疾病の予防剤、又はシナプス機能不全に起因する疾病、若しくはシナプス機能不全を付随する疾病の治療剤のスクリーニング方法（以下、「本件スクリーニング方法２」ということがある。また、本件スクリーニング方法１と本件スクリーニング方法２を総称して、以下、「本件スクリーニング方法」ということがある）であれば特に制限されない。
　本発明は、脳に局在するヒトドレブリンＡ（配列番号１）の断片、若しくはスプライスバリアントであるドレブリンＡ関連タンパク質（ＤＡＲＰｓ：Drebrin A Related Proteins）が、シナプス機能不全に起因する疾病、又はシナプス機能不全を付随する疾病に罹患した患者由来の生体試料に多く存在していることを初めて見いだしたことにより完成したものである。本発明において、ＤＡＲＰｓとは、ドレブリンＡに特徴的なＩｎｓ２翻訳配列RPYCPFIKASDSGPSSSSSSSSSPPRTPFPYITCHRTPNLSSSLPC（配列番号２）の少なくとも一部を有するドレブリンＡの断片若しくはスプライスバリアントであればよく、好ましくは分子量約１００ｋＤａのＤＡＲＰ１００、分子量約９０ｋＤａのＤＡＲＰ９０、分子量約７０ｋＤａのＤＡＲＰ７０、分子量約６０ｋＤａのＤＡＲＰ６０、及び分子量約４０ｋＤａのＤＡＲＰ４０を例示することができる。ＤＡＲＰｓは、単独で本件判定方法や本件スクリーニング方法に用いることもでき、１又は２以上のＤＡＲＰｓの組み合わせで本件判定方法や本件スクリーニング方法に用いることもできる。また、ＤＡＲＰｓの総濃度を測定し、本件判定方法や本件スクリーニング方法に用いることもできる。
　本発明において、ＤＡＲＰｓ濃度は、公知のいかなる方法で測定することができる。好ましい態様において、ＤＡＲＰｓ濃度は、ＤＡＲＰｓを認識する抗体（以下「抗ＤＡＲＰｓ抗体」ということがある）を用いたウェスタンブロッティング法、ＥＬＩＳＡ（Enzyme-Linked Immuno Sorbent Assay）法、免疫沈降等により測定される。抗ＤＡＲＰｓ抗体としては、ＤＡＲＰｓの一部をエピトープとする抗体であればモノクローナル抗体、ポリクローナル抗体のいずれでもよく、１種で用いても、２種以上を組み合わせて用いてもよい。また、全身に存在するドレブリンＥと区別するために、ドレブリンＡ特異的エピトープを認識する抗体を用いて測定されることが好ましい。一態様において、本発明は、本件判定方法及び／又は本件スクリーニング方法に用いるための、ドレブリンＡ特異的エピトープを認識する抗体（以下、「本件抗体」ということがある）に関する。ここで、「ドレブリンＡ特異的エピトープ」とは、ドレブリンＥには存在せず、ドレブリンＡに存在するエピトープを意味し、好ましくはＩｎｓ２翻訳配列RPYCPFIKASDSGPSSSSSSSSSPPRTPFPYITCHRTPNLSSSLPC（配列番号２）の、少なくとも一部を含む領域、及び／又は、ドレブリンＡがＩｎｓ２翻訳配列を含むために作られる特異的立体構造である。
　ウェスタンブロッティング法やＥＬＩＳＡ法を行う場合、一次抗体として抗ＤＡＲＰｓ抗体を用い、一次抗体を認識する標識化二次抗体により検出する方法を好ましく使用することができる。例えば、一次抗体がラビット抗体である場合は標識化抗ラビットＩｇＧ抗体を、一次抗体がマウス抗体である場合は標識化抗マウスＩｇＧ抗体を、二次抗体として用いることができる。
上記標識化二次抗体における標識物質としては、酵素、放射線同位元素、蛍光物質、発光物質、金コロイド等が挙げられる。これらのうち、感度及び操作の簡便さの観点から酵素が好ましく、西洋わさび過酸化酵素（ＨＲＰ）、アルカリフォスファターゼ（ＡＰ）、グルコースオキシダーゼ（ＧＯＤ）等がより好ましい。標識物質としてＨＲＰを用いる場合はＴＭＢ（３, ３’, ５, ５’－テトラメチルベンジジン）等を、ＡＰを用いる場合はＡＭＰＰＤ（３－（２'－スピロアダマンタン）－４－メトキシ－４－（３''－ホスホリルオキシ）フェニル－１，２－ジオキセタン・２ナトリウム塩）、９－（４－クロロフェニルチオホスホリルオキシメチリデン）－１０－メチルアクリダン二ナトリウム塩等を基質として使用することができる。また、標識物質としては、他にＦＩＴＣ（fluorescein isothiocyanate）、ローダミン等の蛍光色素等も使用することができる。
　ＤＡＲＰｓの検出・定量方法は、標識の方法によって異なり、当業者に周知慣用の方法で行うことができる。例えば、標識物質としてＨＲＰ、ＡＰ、ＧＯＤ等を用いた場合は、発色基質や発光基質を添加し、吸光度や発光強度を測定して測定対象物質を定量することができる。また、標識物質として蛍光物質を用いた場合は、その蛍光強度を測定することで測定対象物質を定量することができる。また、標識物質として放射性同位元素を用いた場合は、放射能を測定することで測定対象物質を定量することができる。また、標識物質として金コロイドを用いた場合は、吸光度を測定することで測定対象物質を定量することができる。定量の際は、例えば、予め既知のＤＡＲＰｓ濃度の試料で検量線（標準曲線）を作成しておき、測定値を検量線に照合して試料中のＤＡＲＰｓ濃度を算出し、本件判定方法又は本件スクリーニング方法における比較に用いてもよいが、ＤＡＲＰｓ濃度を算出せず、吸光度、放射能、発光強度を直接本件判定方法又は本件スクリーニング方法における比較に用いてもよい。ここで、本件判定方法において、被験者におけるＤＡＲＰｓ濃度（上記算出したＤＡＲＰｓ濃度や、吸光度、放射能、発光強度）が、対照者におけるＤＡＲＰｓ濃度（上記算出したＤＡＲＰｓ濃度や、吸光度、放射能、発光強度）よりも高いか否か、或いは低いか否かを評価（判定）するために、閾値（カットオフ値）は任意のものを設定することができ、かかる閾値としては、例えば、対照者におけるＤＡＲＰｓ濃度の平均値、平均値＋標準偏差（ＳＤ）、平均値＋２ＳＤ、平均値＋３ＳＤ、平均値－ＳＤ、平均値－２ＳＤ、平均値－３ＳＤ、中央値、中央値＋ＳＤ、中央値＋２ＳＤ、中央値＋３ＳＤ、中央値－ＳＤ、中央値－２ＳＤ、中央値－３ＳＤ等を挙げることができる。また、本件スクリーニング方法において、被検物質を投与したシナプス機能不全モデル非ヒト動物又はシナプス機能不全モデル培養細胞におけるＤＡＲＰｓ濃度（上記算出したＤＡＲＰｓ濃度や、吸光度、放射能、発光強度）が、前記被検物質を投与しないシナプス機能不全モデル非ヒト動物又はシナプス機能不全モデル培養細胞におけるＤＡＲＰｓ濃度（上記算出したＤＡＲＰｓ濃度や、吸光度、放射能、発光強度）よりも高いか否か、或いは低いか否かを評価（判定）するために、閾値（カットオフ値）は任意のものを設定することができ、かかる閾値としては、例えば、被検物質を投与しないシナプス機能不全モデル非ヒト動物又はシナプス機能不全モデル培養細胞におけるＤＡＲＰｓ濃度の平均値、平均値＋標準偏差（ＳＤ）、平均値＋２ＳＤ、平均値＋３ＳＤ、平均値－ＳＤ、平均値－２ＳＤ、平均値－３ＳＤ、中央値、中央値＋ＳＤ、中央値＋２ＳＤ、中央値＋３ＳＤ、中央値－ＳＤ、中央値－２ＳＤ、中央値－３ＳＤ等を挙げることができる。
　本発明において、生体試料とは、被験者や対照者から採取した体液を意味する。ここで、体液には、血液、リンパ液、組織液、体腔液、脳脊髄液等を挙げることができ、中でも脳脊髄液や血液が好ましい。血液には、血清、血漿等が含まれる。生体試料は、そのままＤＡＲＰｓ濃度の測定に供してもよいが、好ましくは測定前に、ＤＡＲＰｓの検出感度を高めるための前処理が施される。前処理の方法としては、生体試料中の測定対象タンパク質の検出感度を高める方法であればよく、例えば抗ＤＡＲＰｓ抗体を用いた免疫沈降を挙げることができる。また、本発明者らは、生体試料中をプロテインＡ／Ｇビーズで処理し、ビーズに吸着した画分を本件判定方法や本件スクリーニング方法に供することで、ＤＡＲＰｓの検出感度を高めることに成功した。プロテインＡ／Ｇビーズ処理は、免疫沈降に先立って、自己抗体によるバックグラウンドを低減することを目的として行うものであり、本来目的タンパク質はプロテインＡ／Ｇビーズ処理後のフロースルー画分から検出される。本発明者らによる、ＤＡＲＰｓがプロテインＡ／Ｇビーズに吸着するとの発見は、予想外な発見であるだけでなく、生体試料中に抗ＤＡＲＰｓ自己抗体が存在することを示唆するものである。本発明者らは、さらなる検討により生体試料中に抗ＤＡＲＰｓ自己抗体が存在することを確認し、さらに抗ＤＡＲＰｓ自己抗体が脳神経細胞を損傷し得ることを見いだした。これらの発見は、抗ＤＡＲＰｓ自己抗体に対するドミナントネガティブペプチドが、抗ＤＡＲＰｓ自己抗体による脳神経細胞の損傷を抑制し、シナプス機能不全に起因する疾病、若しくはシナプス機能不全を付随する疾病を治療及び／又は予防し得ることを示すものである。したがって、一態様において、本発明は、抗ＤＡＲＰｓ自己抗体に対するドミナントネガティブペプチドを探索することを特徴とするシナプス機能不全に起因する疾病、若しくはシナプス機能不全を付随する疾病の予防剤、又はシナプス機能不全に起因する疾病、若しくはシナプス機能不全を付随する疾病の治療剤のスクリーニング方法に関する。
　本発明において、シナプス機能不全に起因する疾病、又はシナプス機能不全を付随する疾病とは、シナプス機能不全、すなわちシナプスにおける情報伝達に障害が生じることによって発症する疾病（アルツハイマー病、脳血管性認知症、レビー小体型認知症、パーキンソン病、大脳皮質基底核変性症、筋萎縮性側索硬化症、脊髄小脳変性症等）や、疾病の発症後にシナプス機能不全が生じる疾病（脳出血、脳梗塞、脳腫瘍等）を意味する。脳の血流の低下によって生じるうつ病や、薬物依存、ミトコンドリアの遺伝子疾患、糖尿病等も、シナプス機能不全を付随し、認知機能が低下することが知られており、シナプス機能不全に起因する疾病、又はシナプス機能不全を付随する疾病に包含される。さらに、脳への外傷が生じた場合の後遺症の評価にも、本件判定方法を用いることができる。好ましくは、シナプス機能不全に起因する疾病、又はシナプス機能不全を付随する疾病とは神経変性疾患を意味し、中でもアルツハイマー病、大脳皮質基底核症候群、パーキンソン病、脊髄小脳変性症及び筋萎縮性側索硬化症から選択される神経変性疾患が好ましい。
　本件判定方法１における被験者としては、シナプス機能不全に起因する疾病、又はシナプス機能不全を付随する疾病の発症リスクを判定する場合、通常、シナプス機能不全に起因する疾病、又はシナプス機能不全を付随する疾病を発症しておらず、かつ、将来シナプス機能不全に起因する疾病、又はシナプス機能不全を付随する疾病を発症するか否かが不明な被験者を挙げることができ、また、シナプス機能不全に起因する疾病、又はシナプス機能不全を付随する疾病の発症の有無を判定する場合、通常、シナプス機能不全に起因する疾病、又はシナプス機能不全を付随する疾病を発症しているか否かが不明な被験者を挙げることができ、好ましくは、本発明の発症リスクの判定方法により、シナプス機能不全に起因する疾病、又はシナプス機能不全を付随する疾病を発症するリスクが高いと評価（判定）された者である。本件判定方法１における対照者とは、シナプス機能不全に起因する疾病、又はシナプス機能不全を付随する疾病を発症するリスクが低いか或いはほとんど無い、シナプス機能不全に起因する疾病、又はシナプス機能不全を付随する疾病を発症していない健常者を意味する。また、上記閾値の設定に当たっては、（ｉ）ＤＡＲＰｓ濃度を測定済みの全ての健常者、又は無作為に抽出した健常者、（ii）被験者と同じ年齢又は年齢範囲の健常者（脳内ドレブリン量は年齢とともに減少する）及び（iii）疾病発症前の被験者、のうちのいずれか１種以上を対照者とすることができる。これらの対照者のＤＡＲＰｓ濃度より設定した閾値を使って、シナプス機能不全の急性増悪期を見分けてもよい。
　本件判定方法２における被験者としては、例えば、シナプス機能不全に起因する疾病、又はシナプス機能不全を付随する疾病を発症しているものの、シナプス機能不全に起因する疾病、又はシナプス機能不全を付随する疾病の重症度が不明な被験者を挙げることができる。本件判定方法２における対照者とは、例えば、シナプス機能不全に起因する疾病、又はシナプス機能不全を付随する疾病を発症しており、且つ重症度の判定がされている患者を意味する。ここで、「重症度の判定がされている患者」とは、公知の診療ガイドラインに基づいて重症度の判定がされている患者であってもよい。公知の診療ガイドラインとしては、対象疾患の診療ガイドラインを用いることが望ましく、例えば認知症の診療ガイドライン、脳出血・脳梗塞の診療ガイドライン等を挙げることができる。例えば、アルツハイマー病における認知症では、問診等で認知症を初期、中期、後期等に分けているが、血漿中のＤＡＲＰｓは発症初期から中期にかけて最大になると考えられる。実際、後期に神経細胞死が広範に起きた後（重症な認知症患者）ではＤＡＲＰｓがむしろ少なくなることが示されている（実施例２のＡＤ０１の患者）。また、脳出血では、出血が起きてしばらくはＤＡＲＰｓが高くなり、時間がたって、慢性期になると低くなって一定の値を取るようになると考えられる。このように、対象疾患によって、対照者のＤＡＲＰｓの変化と重症度の関係は異なるため、適切な診療ガイドラインにより重症度の判定を行うことが好ましい。
　本件スクリーニング方法１におけるシナプス機能不全非ヒト動物としては、シナプス機能不全を自然に生じた非ヒト動物であってもよいし、シナプス機能不全の発症を誘導した非ヒト動物であってもよい。シナプス機能不全を誘導した非ヒト動物とは、具体的には、上記シナプス機能不全に起因する疾病、又はシナプス機能不全を付随する疾病のモデル非ヒト動物であってもよい。上記非ヒト動物としては、マウスの他、ラット、ハムスター、モルモット、サル、ウシ、ブタ、ウマ、ウサギ、ヒツジ、ヤギ、ネコ、イヌ等の非ヒト哺乳動物を例示することができる。
　本件スクリーニング方法２におけるシナプス機能不全モデル培養細胞としては、シナプス機能不全を自然に生じた培養細胞であってもよいし、シナプス機能不全を誘導した培養細胞であってもよい。シナプス機能不全の発症を誘導した培養細胞とは、具体的には、上記シナプス機能不全に起因する疾病、又はシナプス機能不全を付随する疾病のモデル培養細胞であってもよい。上記培養細胞としては、好ましくは培養神経細胞を例示することができ、ヒトに由来する培養細胞の他、マウス、ラット、ハムスター、モルモット、サル、ウシ、ブタ、ウマ、ウサギ、ヒツジ、ヤギ、ネコ、イヌ等の非ヒト哺乳動物に由来する培養細胞を例示することができる。
　一態様において、本発明は、本件抗体を含むシナプス機能不全に起因する疾病、若しくはシナプス機能不全を付随する疾病の発症リスク、発症の有無、又は重症度の判定用キット（以下、「本件キット」ということがある）に関する。好ましい態様において、本件キットは、本件判定方法に用いるためのキットである。本件キットは、本件抗体の他に、被験者から生体試料を取得するための手段や、本件抗体を認識する標識化二次抗体や、手順や診断基準を記載した添付文書を含んでもよい。
　以下、実施例により本発明をより具体的に説明するが、本発明の技術的範囲はこれらの例示に限定されるものではない。
１．血液試料からのＤＡＲＰｓの検出
　本発明者らは、アルツハイマー病患者の血漿中にドレブリンが存在していると考え、血漿に対して抗ドレブリン抗体を用いてウェスタンブロッティングを行ったが、ドレブリンを検出することはできなかった。そこで、血漿に夾雑している抗体成分を除去することを目的としてプロテインＡ／Ｇビーズ処理を行い、ウェスタンブロッティングに供した。
　実験手順は、以下のとおりである。
（１）血漿１．８ｍｌとプロテインＡ／Ｇビーズ（Protein A/G PLUS-Agarose：サンタクルズ社製）２００μｌを懸濁して４℃で１時間ローテーターで反応（プレクリア）させた。
（２）遠心して上清（preclear plasma：プレクリア血漿）と沈査（Beads Absorbed：ビーズ吸着画分）を調製。
（３）ビーズ吸着画分にＳＤＳサンプルバッファー３０μｌを加えて熱変性して溶出した。
（４）遠心した上清（preclear plasma：プレクリア血漿）の一部はＩｎｐｕｔ用に保存
、残りのプレクリア血漿と４種類の抗体（抗ドレブリン抗血清ＤＥｐ：自家製；ドレブリンＡ及びＥを認識する抗ドレブリンモノクローナル抗体２８Ｄ８と３Ｄ９：自家製；コントロールＩｇＧ：富士フイルム和光純薬株式会社製）をそれぞれ混合してｏ／ｎで反応（ＩＰ：免疫沈降）。
（５）ｏ／ｎで反応させた上記（４）のＩＰチューブに、さらにプロテインＡ／Ｇビーズ３０μｌを懸濁して４℃で１時間ローテーターで反応させ、その後ビーズを洗浄して、ビーズ画分にＳＤＳサンプルバッファー３０μｌを加えて熱変性して溶出（ＩＰ、免疫沈降画分）。
（６）各サンプル（上段：Beads absorbed、Plasma、Preclear Plasma；下段：各ＩＰ画分）をウェスタンブロットで解析（検出用抗体はモノクローナル抗体２８Ｄ８と３Ｄ９のｍｉｘｔｕｒｅを使用した）
　結果を図１に示す。免疫沈降を行った下段のウェスタンブロットではドレブリンが検出できなかったのに対し、プレクリアに用いたプロテインＡ／Ｇビーズの吸着画分（Beads absorbed）からは、予想に反してドレブリンのバンドを確認することができた（上段、矢印）。そこで、かかるバンドが、全身に存在するドレブリンＥか、脳のシナプスに局在するドレブリンＡかを確認するため、プロテインＡ／Ｇビーズの吸着画分に対してドレブリンＡ及びＥの両方を認識する種々の抗ドレブリン抗体（Ｍ２Ｆ６、２８Ｄ８、３Ｄ９、２２Ｇ５、１７Ｃ３、３３Ａ４：自家製）及びドレブリンＡにおいてＩｎｓ２の少なくとも一部を含む領域を認識する抗ドレブリンＡ抗体（４Ｃ２、自家製；ＤＡＳ２：免疫生物学研究所）を用いてウェスタンブロッティングを行ったところ、約１３０ｋＤａのドレブリン全長のバンドはドレブリンＡ特異的抗体である４Ｃ２やＤＡＳ２では染色されず、ドレブリンＥのバンドであることがわかった（図２）。このドレブリンＥは、腎腫瘍に由来すると考えられた。一方で、ドレブリンＥのバンドよりも低分子量側に、抗ドレブリンＡ抗体である４Ｃ２やＤＡＳ２でも染まるドレブリンＡの断片又はスプライスバリアントであると考えられるバンドが複数見いだされた。これらを、ドレブリンＡ関連タンパク質（Drebrin A Related Proteins、ＤＡＲＰｓ）と命名した。なお、図２において、ドレブリンＥと、ＤＡＲＰｓのうち分子量約４０ｋＤａのＤＡＲＰ４０を矢印で示す。ＤＡＲＰ４０は、コントロールＩｇＧやドレブリンの汎用抗体であるＭ２Ｆ６では明確に染色されず、本発明者らが初めて見いだしたものである。ドレブリンＡは脳の樹状突起スパインに局在していることから、ＤＡＲＰｓが、アルツハイマー病患者において損傷した樹状突起スパインから漏出して、血液脳関門を通過して血液中に移行することが示唆された。
２．血液試料中ＤＡＲＰｓの診断バイオマーカーとしての使用
　実施例１より、ＤＡＲＰｓがアルツハイマー病患者において損傷した樹状突起スパインから漏出したものであると考えられた。その他のシナプス機能不全に起因する疾病、又はシナプス機能不全を付随する疾病においても、損傷した樹状突起スパインからＤＡＲＰｓが漏出し、血液中に移行する可能性がある。そこで、血液試料中ＤＡＲＰｓが、シナプス機能不全に起因する疾病、又はシナプス機能不全を付随する疾病の診断バイオマーカーとして使用し得るかを確認するため、以下の実験を行った。
　アルツハイマー病患者２名（ＡＤ０１（発症後５年経過、腎腫瘍あり）、ＡＤ０２（発症後３年、ＭＭＳＥ２１点））、大脳皮質基底核症候群患者１名（ＣＢＳ）、パーキンソン病患者１名（ＰＤ０１）、健常６５歳男性（Ｈｅａｌｔｈｙ）より血液試料を取得し、実施例１と同様にプロテインＡ／Ｇビーズの吸着画分をウェスタンブロッティングに供した。検出は、抗ドレブリンＡ抗体ＤＡＳ２（免疫生物学研究所）を用いて行った。
　結果を図３に示す。いずれの血液試料からもＤＡＲＰｓのバンドが多数見いだされた。確認できたＤＡＲＰｓを、分子量に応じて、ＤＡＲＰ４０、ＤＡＲＰ６０、ＤＡＲＰ７０、ＤＡＲＰ９０、ＤＡＲＰ１００と命名した。ＡＤ０１を除く疾患患者由来の血液試料では、健常６５歳男性（Ｈｅａｌｔｈｙ）よりもＤＡＲＰｓ濃度が増加していた。さらに図４に示すように、ＡＤ０２とコントロール血漿（Ｃｔｒｌ：コージン・バイオ（ＫＪＢ）社製、正常ヒト血漿・プール　EDTA-2Na、ロット：HMN389081）を用い、同様の手順によりＤＡＲＰｓの検出を行ったところ、ＤＡＲＰ４０、ＤＡＲＰ６０、ＤＡＲＰ７０、ＤＡＲＰ９０、ＤＡＲＰ１００のいずれのＤＡＲＰも、ＡＤ０２において濃度が上昇していた。したがって、これらのＤＡＲＰｓが、シナプス機能不全に起因する疾病、又はシナプス機能不全を付随する疾病の診断バイオマーカーとして使用し得ることが示された。一方で、ＡＤ０１ではＤＡＲＰｓ濃度がＨｅａｌｔｈｙよりも低かった（図３）。これは、神経細胞死が起きて、痴呆の最終段階（タウが高く、ＭＭＳＥの点数が悪い）に進んでしまったような慢性期のＡＤ患者では、急性増悪期のようなＤＡＲＰｓの急速な漏出は起こっておらず、ＤＡＲＰｓ濃度が低くなっていると考えられた。
　さらに、図３と同じサンプルを、ドレブリンＡ及びＥの両方を認識する抗ドレブリン抗体３Ｄ９（自家製）で染色したところ、疾患患者と健常６５歳男性（Ｈｅａｌｔｈｙ）とでバンドの濃さに差が見られなかった（図５）。ここでの結果より、ドレブリンＥに由来するドレブリン関連タンパク質は診断バイオマーカーとして使用できないこと、及び、ドレブリンＡにおいてＩｎｓ２の少なくとも一部を含む領域を認識する抗体（ＤＡＳ２等）が、疾患の診断に使用し得ることが示された。
３．脳脊髄液試料中ＤＡＲＰｓの診断バイオマーカーとしての使用
　実施例２より、血液試料中のＤＡＲＰｓが、シナプス機能不全に起因する疾病、又はシナプス機能不全を付随する疾病の診断バイオマーカーとして使用し得ることが確認できた。ＤＡＲＰｓは脳に局在するドレブリンＡに関連するため、シナプス機能不全に起因する疾病、又はシナプス機能不全を付随する疾病の患者においては脳脊髄液中にもＤＡＲＰｓが多く存在すると考えられる。そこで、脳脊髄液試料中ＤＡＲＰｓが、シナプス機能不全に起因する疾病、又はシナプス機能不全を付随する疾病の診断バイオマーカーとして使用し得ることを確認するため、以下の実験を行った。
　アルツハイマー病患者３名（ＧＨＡＤ０１～０３、いずれも軽度の認知症）、筋萎縮性側索硬化症患者１名（ＡＬＳ０１）、脊髄小脳変性症患者１名（ＳＣＤ０１）、及びうつ病患者１名（Ｄｅｐ０１）より脳脊髄液試料を取得し、血液試料に代えて脳脊髄液試料を用いたほかは実施例２と同様にプロテインＡ／Ｇビーズの吸着画分をウェスタンブロッティングに供した。検出は、抗ドレブリンＡ抗体ＤＡＳ２（免疫生物学研究所）を用いて行った。
　結果を図６に示す。いずれの脳脊髄液試料からもＤＡＲＰｓのバンドが多数見いだされ、血液試料と同様に、ＤＡＲＰ４０、ＤＡＲＰ６０、ＤＡＲＰ７０、ＤＡＲＰ９０、ＤＡＲＰ１００が確認できた。神経変性疾患であるアルツハイマー病患者２名（ＧＨＡＤ０１及び０３）、筋萎縮性側索硬化症患者１名（ＡＬＳ０１）、脊髄小脳変性症患者１名（ＳＣＤ０１）では、うつ病患者１名（Ｄｅｐ０１）よりＤＡＲＰｓ濃度が多かった。また、同じアルツハイマー病に罹患した患者であっても、ＧＨＡＤ０１及び０３の比較から示されるようにＤＡＲＰｓ濃度に差があることから、ＤＡＲＰｓ濃度が疾患の重症度（樹状突起スパインの損傷度合い）を反映し得ることが示唆された。一方で、ＧＨＡＤ０２は、うつ病患者１名（Ｄｅｐ０１）と同程度のＤＡＲＰｓ濃度であった。ＧＨＡＤ０２はＡＤ進行が慢性期に移行しており、急性増悪期のようなＤＡＲＰｓの急速な漏出は起こっておらず、ＤＡＲＰｓ濃度が低くなっていると考えられる。また、うつ病患者におけるＤＡＲＰｓ濃度は他の神経変性疾患と比較して少なかったが、うつ病から認知機能障害に移行する場合があることに鑑みると、うつ病患者においてもＤＡＲＰｓ濃度の上昇により認知機能障害への移行を評価できると考えられる。
４．アルツハイマー病患者の他の指標とＤＡＲＰｓ量との関係
　実施例３より、脳脊髄液試料中ＤＡＲＰｓが、アルツハイマー病の診断バイオマーカーとして使用できることが示された。一方で、アルツハイマー病が進行して慢性期に移行した患者では、急性増悪期のようなＤＡＲＰｓの急速な漏出は起こっておらず、ＤＡＲＰｓ濃度が低くなると考えられる。そこで、以下の表１に記載の６名のアルツハイマー病患者について、実施例３と同様に脳脊髄液試料中のＤＡＲＰｓをウェスタンブロッティングにより検出した。なお、表中「ＴＡＵ↑」は、タウの濃度が高くタウ蓄積に至っていることを意味し、「Ａβ↑」は、アミロイドβの濃度が高くアミロイドβ蓄積に至っていることを意味する。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000001
　結果を図７に示す。全ての患者由来の脳脊髄液試料からＤＡＲＰ１００、ＤＡＲＰ７０及びＤＡＲＰ４０を確認できた。タウ蓄積に至っていない増悪期の患者（症例番号１１０７～１１１０）でＤＡＲＰｓ濃度が高かったが、タウが最も高い症例登録番号１１１１の患者ではＤＡＲＰｓ濃度が低かった。ここでの結果からも、アルツハイマー病が進行して慢性期に移行した患者では、ＤＡＲＰｓ濃度が低くなることが示された。
５．ＤＡＲＰｓ自己抗体の存在確認及び神経細胞毒性の検証
　実施例１より、ＤＡＲＰｓが、抗体（ＩｇＧ、ＩｇＡ）への結合能を有するプロテインＡ／Ｇビーズに吸着することが示された。かかる吸着が、ＤＡＲＰｓが直接プロテインＡ／Ｇビーズに吸着しているのか、血液試料中のＤＡＲＰｓ自己抗体を介したものかどうかを確認するために、ＧＦＰタグを付加したヒトドレブリンＡ（ＧＦＰ－ｈＤＡ：ＨＥＫ２９３で発現させ、ＳＤＳバッファーでホモゲナイズしたサンプル）をＳＤＳ－ＰＡＧＥに供し、抗ドレブリン抗体（３Ｄ９：自家製）及びアルツハイマー病患者由来の血漿（AD plasma）を一次抗体として検出した。
　結果を図８に示す。図８左の３Ｄ９で検出した場合と、図８右のアルツハイマー病患者由来の血漿（AD plasma）で検出した場合とで、同じ位置（図中矢印）にバンドを確認す
ることができた。この結果より、アルツハイマー病患者由来の血漿にはドレブリンＡを認識することができる自己抗体が存在していることが明らかになった。ＤＡＲＰｓは、該自己抗体を介してプロテインＡ／Ｇビーズに吸着していたと考えられる。
　脳脊髄液のＤＡＲＰｓもプロテインＡ／Ｇビーズに吸着することから、抗ＤＡＲＰｓ自己抗体は、脳脊髄液にも存在していると考えられる。そこで、抗ＤＡＲＰｓ自己抗体が、脳の神経細胞に毒性を有し得るかを確認するために、抗ドレブリン抗体（２２Ｇ５：自家製）又は市販の正常マウスＩｇＧ（富士フイルム和光純薬株式会社製）をＤＩＶ２３（インビトロでの培養日数）のラット海馬培養細胞（自家製）に投与して１時間インキュベート後にＰＢＳで洗浄して固定後、抗ＭＡＰ２抗体（アブカム社製）と反応させて、抗マウスＩｇＧ－Ａｌｅｘａ５６８（サーモフィッシャーサイエンティフィック社製）で２２Ｇ５及び正常マウスＩｇＧを可視化し、抗ウサギＩｇＧ－Ａｌｅｘａ４８８（サーモフィッシャーサイエンティフィック社製）でＭＡＰ２を可視化することで、抗ドレブリン抗体の神経細胞への影響を検証した。
　結果を図９に示す。市販の正常マウスＩｇＧ（富士フイルム和光純薬株式会社製）を１時間投与して洗浄して固定したラット海馬培養細胞は、マウスＩｇＧ（赤色。検出されず）は細胞内に取り込まれておらず、正常細胞と同様なＭＡＰ２の染色（緑色）が認められた（図９Ｂ）。一方、抗ドレブリン抗体（２２Ｇ５）を1時間投与して洗浄して固定した培養神経細胞では、２２Ｇ５は細胞体や一部の樹状突起に入り込んでいる像（赤色）が認められた。さらに、２２Ｇ５を取り込んだ領域では微小管に異常が生じ正常のＭＡＰ２の染色（緑色）が消失していた（図９Ａ）。ここでの結果より、ＤＡＲＰｓ自己抗体がシナプス機能不全に起因する疾病、又はシナプス機能不全を付随する疾病の発症により体内に多量に生産されると、脳の神経細胞を損傷し、病状をさらに進行させることが示唆された。したがって、ＤＡＲＰｓ自己抗体による脳神経細胞損傷作用を抑制するドミナントネガティブペプチドは、脳の神経細胞損傷を抑制することのできる上記疾病の治療剤及び／又は予防剤の候補化合物になると考えられる。
６．ラット神経細胞におけるＤＡＲＰｓの存在確認
　疾患モデル動物や、疾患モデル動物由来の培養神経細胞が、疾患の治療剤、予防剤のスクリーニングに使用し得るかを確認するため、以下の手順によりラット神経細胞にＤＡＲＰｓが存在するか検証した。
（１）ＤＩＶ８（インビトロでの培養日数）の培養ラット大脳皮質細胞を２ｄｉｓｈ分（６０ｍｍ　ｄｉｓｈ）、ＰＢＳで回収してソニケーションを行い細胞を破砕した。
（２）１５０００ｒｐｍで２０ｍｉｎ遠心後、上清を回収した（図１０左レーン、Ｉｎｐｕｔ）。
（３）免疫沈降は、上清に抗ドレブリン抗体（２８Ｄ８：自家製）とプロテインＡ／Ｇビーズ３０μｌを加えてＲｏｔａｔｅ（１時間）、その後ビーズはＰＢＳで３回洗浄（ＰＢＳを加えて混和して、１５００ｇで１０秒遠心して上清を除く）して、ＳＤＳバッファー５０μｌで結合物を溶出した（図１０中央レーン、２８Ｄ８　ＩＰ）。
（４）ネガティブコントロールとして上清にプロテインＡ／Ｇビーズ３０μｌを加えてＲｏｔａｔｅ（１時間）、その後ビーズはＰＢＳで３回洗浄（ＰＢＳを加えて混和して、１５００ｇで１０秒遠心して上清を除く）して、ＳＤＳバッファー５０μｌで結合物を溶出した（図１０右レーン、Ａ／Ｇ　ｂｅａｄｓ）。
（５）得られた各画分をウェスタンブロッティングに供した。検出は、抗ドレブリンＡ抗体ＤＡＳ２（免疫生物学研究所）を用いて行った。
　結果を図１０に示す。抗ドレブリン抗体により免疫沈降した画分にＤＡＲＰｓのバンドを確認することができ、ヒト以外のドレブリンを有する動物や、その培養細胞においてもＤＡＲＰｓが存在することが明らかになった。ここでの結果より、シナプス機能不全により細胞外（培養液中）に漏出するＤＡＲＰｓの濃度変化を、シナプス機能不全に起因する疾病、若しくはシナプス機能不全を付随する疾病の予防剤、又はシナプス機能不全に起因する疾病、若しくはシナプス機能不全を付随する疾病の治療剤のスクリーニングの指標として使用し得ることが示された。
７．アルツハイマー病モデルマウスにおけるＤＡＲＰｓの存在確認
　本発明者らは、５ｘＦＡＤマウス（家族性アルツハイマー病の遺伝子を５個持つマウス）とドレブリンノックアウトマウス（ホモ）を掛け合わせることにより５ｘＦＡＤ遺伝子とドレブリン遺伝子（＋／－）をヘテロに持つマウス（５ｘＦＡＤ／ＤＸＫＯ＋／－）を報告している（特願２０１９－１８５２４５）。このマウスから血液試料を取得し、実施例１と同様にプロテインＡ／Ｇビーズの吸着画分をウェスタンブロッティングに供した。検出は、抗ドレブリンＡ抗体ＤＡＳ２（免疫生物学研究所）を用いて行ったところ、５ｘＦＡＤ／ＤＸＫＯ＋／－のＤＡＲＰ１００濃度が野生型マウスよりも高いことが確認できた。
　本発明の判定方法によれば、これまで質問式検査（うつ病、認知症等）や画像検査（脳出血等）に頼っていたシナプス機能不全に起因する疾病、又はシナプス機能不全を付随する疾病の発症の有無や重症度を早期かつ簡便に判定することができるため、これらの疾病の発症を予防したり、早期治療することにつながる。さらに、ＤＡＲＰｓや抗ＤＡＲＰｓ自己抗体は、予防剤、治療剤のスクリーニング指標にもなるものであり、創薬研究に資することができる。
　したがって、本発明の、医療・製薬分野における産業上の利用可能性は極めて高い。

Claims (12)

  1. 　以下の工程（ａ－１）～（ｃ－１）を備えたことを特徴とするシナプス機能不全に起因する疾病、若しくはシナプス機能不全を付随する疾病の発症リスク、又は発症の有無の判定方法。
    （ａ－１）被験者から採取された生体試料中のドレブリンＡ関連タンパク質（ＤＡＲＰｓ）の濃度を測定する工程；
    （ｂ－１）工程（ａ－１）で測定したＤＡＲＰｓの濃度を、シナプス機能不全に起因する疾病、又はシナプス機能不全を付随する疾病を発症しない対照者におけるＤＡＲＰｓの濃度と比較する工程；
    （ｃ－１）工程（ａ－１）で測定したＤＡＲＰｓの濃度が、前記対照者におけるＤＡＲＰｓの濃度よりも高いとき、前記被験者は、シナプス機能不全に起因する疾病、若しくはシナプス機能不全を付随する疾病を発症するリスクが高い、又はシナプス機能不全に起因する疾病、若しくはシナプス機能不全を付随する疾病を発症している可能性が高いと評価する工程；
  2. 　以下の工程（ａ－２）～（ｃ－２）を備えたことを特徴とするシナプス機能不全に起因する疾病、又はシナプス機能不全を付随する疾病の重症度の判定方法。
    （ａ－２）シナプス機能不全に起因する疾病、又はシナプス機能不全を付随する疾病を発症している被験者から採取された生体試料中のドレブリンＡ関連タンパク質（ＤＡＲＰｓ）の濃度を測定する工程；
    （ｂ－２）工程（ａ－２）で測定したＤＡＲＰｓの濃度を、シナプス機能不全に起因する疾病、又はシナプス機能不全を付随する疾病を発症している対照者におけるＤＡＲＰｓの濃度と比較する工程；
    （ｃ－２）工程（ａ－２）で測定したＤＡＲＰｓ及び／又はＤＡＲＰｓ自己抗体の濃度が、前記対照者におけるＤＡＲＰｓ及び／又はＤＡＲＰｓ自己抗体の濃度よりも高いとき、前記被験者は、前記対照者よりもシナプス機能不全に起因する疾病、又はシナプス機能不全を付随する疾病が重症化している可能性が高いと評価する工程；
  3. 　以下の工程（ａ－３）～（ｃ－３）を備えたことを特徴とするシナプス機能不全に起因する疾病、若しくはシナプス機能不全を付随する疾病の予防剤、又はシナプス機能不全に起因する疾病、若しくはシナプス機能不全を付随する疾病の治療剤のスクリーニング方法。
    （ａ－３）被検物質を投与したシナプス機能不全モデル非ヒト動物から採取された試料中のドレブリンＡ関連タンパク質（ＤＡＲＰｓ）の濃度を測定する工程；
    （ｂ－３）工程（ａ－３）で測定したドレブリンＡ関連タンパク質（ＤＡＲＰｓ）の濃度を、前記被検物質を投与しないシナプス機能不全モデル非ヒト動物におけるドレブリンＡ関連タンパク質（ＤＡＲＰｓ）の濃度と比較する工程；
    （ｃ－３）工程（ａ－３）で測定したドレブリンＡ関連タンパク質（ＤＡＲＰｓ）の濃度が、前記被検物質を投与しないシナプス機能不全モデル非ヒト動物におけるドレブリンＡ関連タンパク質（ＤＡＲＰｓ）の濃度よりも低いとき、前記被検物質は、シナプス機能不全に起因する疾病、若しくはシナプス機能不全を付随する疾病の予防、又はシナプス機能不全に起因する疾病、若しくはシナプス機能不全を付随する疾病の治療に有効であると評価する工程；
  4. 　以下の工程（ａ－４）～（ｄ－４）を備えたことを特徴とするシナプス機能不全に起因する疾病、若しくはシナプス機能不全を付随する疾病の予防剤、又はシナプス機能不全に起因する疾病、若しくはシナプス機能不全を付随する疾病の治療剤のスクリーニング方法。
    （ａ－４）シナプス機能不全モデル培養細胞に被検物質を投与し、培養する工程；
    （ｂ－４）前記シナプス機能不全モデル培養細胞の培養液中のドレブリンＡ関連タンパク質（ＤＡＲＰｓ）の濃度を測定する工程；
    （ｃ－４）工程（ｂ－４）で測定したＤＡＲＰｓの濃度を、前記被検物質を投与しないシナプス機能不全モデル培養細胞の培養液中のＤＡＲＰｓの濃度と比較する工程；
    （ｄ－４）工程（ｂ－４）で測定したＤＡＲＰｓの濃度が、前記被検物質を投与しないシナプス機能不全モデル培養細胞の培養液中のＤＡＲＰｓの濃度よりも低いとき、前記被検物質は、シナプス機能不全に起因する疾病、若しくはシナプス機能不全を付随する疾病の予防、又はシナプス機能不全に起因する疾病、若しくはシナプス機能不全を付随する疾病の治療に有効であると評価する工程；
  5. 　生体試料が、脳脊髄液試料又は血液試料であることを特徴とする請求項１～３に記載の方法。
  6. 　ＤＡＲＰｓが、ＤＡＲＰ４０、ＤＡＲＰ６０、ＤＡＲＰ７０、ＤＡＲＰ９０、及びＤＡＲＰ１００から選択される１又は２種以上であることを特徴とする請求項１～５に記載の方法。
  7. 　シナプス機能不全に起因する疾病、又はシナプス機能不全を付随する疾病が、神経変性疾患であることを特徴とする請求項１～６に記載の方法。
  8. 　神経変性疾患が、アルツハイマー病、大脳皮質基底核症候群、パーキンソン病、脊髄小脳変性症及び筋萎縮性側索硬化症から選択されることを特徴とする請求項７に記載の方法。
  9. 　ＤＡＲＰｓの濃度が、ドレブリンＡ特異的エピトープを認識する抗体を用いて測定されることを特徴とする請求項１～８に記載の方法。
  10. 　ドレブリンＡ特異的エピトープを認識することを特徴とする請求項９に記載の方法に用いるための抗体。
  11. 　請求項１０に記載の抗体を含むことを特徴とするシナプス機能不全に起因する疾病、若しくはシナプス機能不全を付随する疾病の発症リスク、発症の有無、又は重症度の判定用キット。
  12. 　ドレブリンＡ関連タンパク質（ＤＡＲＰｓ）自己抗体に対するドミナントネガティブペプチドを探索することを特徴とするシナプス機能不全に起因する疾病、若しくはシナプス機能不全を付随する疾病の予防剤、又はシナプス機能不全に起因する疾病、若しくはシナプス機能不全を付随する疾病の治療剤のスクリーニング方法。
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