WO2021241611A1

WO2021241611A1 - 複素環化合物の製造方法

Info

Publication number: WO2021241611A1
Application number: PCT/JP2021/019911
Authority: WO
Inventors: 仁朗西川; 直博田家; 浩坂野; 雅俊山田; 和樹東; 彩香鈴木
Original assignee: 武田薬品工業株式会社
Priority date: 2020-05-27
Filing date: 2021-05-26
Publication date: 2021-12-02
Also published as: JPWO2021241611A1; EP4163280A1; US20230192685A1

Abstract

式（Ｂ－１）：で表される化合物と光学活性な有機酸との塩を晶析することを特徴とする、式（Ｂ－２）：で表される化合物またはその塩の製造工程を含む、式（Ｘ）：で表されるＭＡＬＴ１阻害作用を有する化合物またはその塩の製造方法。（式中、各記号は明細書中に記載の通りである。）

Description

複素環化合物の製造方法

　本発明は、ＭＡＬＴ１（Ｍｕｃｏｓａ　ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｌｙｍｐｈｏｉｄ　ｔｉｓｓｕｅ　ｐｒｏｔｅｉｎ　１）阻害作用を有し、癌等の予防または治療薬として有用であることが期待される新規な複素環化合物の効率的な製造方法に関する。

　ＭＡＬＴ１の活性を阻害する阻害剤は、Ｔ細胞受容体シグナルやＢ細胞受容体シグナルの異常によるＭＡＬＴ１活性亢進を是正することを可能とすると期待され、ＭＡＬＴ１活性に起因するがんや炎症性疾患等の予防または治療薬として有用であると考えられている。
　従来から、ＭＡＬＴ１阻害剤の研究が当技術分野では進められて来ており、例えば、特許文献１には、ＭＡＬＴ１阻害作用を有し、関節リウマチ、多発性硬化症、全身性エリテマトーデス、血管炎状態などの自己免疫性障害および炎症性疾患、慢性骨髄性白血病、骨髄性白血病、非ホジキンリンパ腫および他のＢ細胞リンパ腫を含む造血系由来の癌または固形腫瘍等の治療に有用な化合物が開示され、特許文献２には、ＭＡＬＴ１阻害作用を有し、関節リウマチ、多発性硬化症、乾癬、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデス、血管炎状態などの自己免疫性障害および炎症性疾患、慢性骨髄性白血病、骨髄性白血病、非ホジキンリンパ腫および他のＢ細胞リンパ腫を含む造血系由来の癌または固形腫瘍等の治療に有用な化合物が開示されている。また、特許文献３、４および５にも、ＭＡＬＴ１阻害作用を有する化合物が開示されている。

国際公開第２０１５／１８１７４７号国際公開第２０１７／０８１６４１号国際公開第２０１８／０２０４７４号国際公開第２０１８／０８５２４７号国際公開第２０２１／０００８５５号

　このような中、下記の式（Ｘ）で表される新規な化合物またはその塩が、優れたＭＡＬＴ１阻害作用を有することが見出されている（国際出願番号：ＰＣＴ／ＪＰ２０１９／０４６２６１（国際出願日：２０１９年１１月２７日）；国際公開番号：ＷＯ２０２０／１１１０８７（国際公開日：２０２０年６月４日））。

（式中、Ｒ_１はメチル基、
Ｒ_２は、Ｃ_１－６アルキル基またはハロゲン原子、
Ｒ_３は、Ｃ_１－６アルキル基、および
Ｒ_４は、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ_１－６アルキル基を示す。）

　より具体的には、下記の式（Ｘ１）および（Ｘ２）で表される新規な化合物が見出されている（以下、化合物（Ｘ１）および化合物（Ｘ２）と略記する場合がある。）。

化学名：（Ｓ）－Ｎ－（６－クロロ－４－（１－メトキシエチル）－１，５－ナフチリジン－３－イル）－Ｎ’－（６－（２Ｈ－１，２，３－トリアゾール－２－イル）－５－（トリフルオロメチル）ピリジン－３－イル）尿素（上記国際出願の実施例２の化合物）

化学名：（Ｓ）－Ｎ－（４－（１－メトキシエチル）－６－メチル－１，５－ナフチリジン－３－イル）－Ｎ’－（６－（２Ｈ－１，２，３－トリアゾール－２－イル）－５－（トリフルオロメチル）ピリジン－３－イル）尿素（上記国際出願の実施例３の化合物）

　化合物（Ｘ１）および（Ｘ２）の優れたＭＡＬＴ１阻害活性、および製造方法については、後記の［実施例］の項において詳述するが、以下の合成スキームにより製造されている。

　高い光学純度を有する化合物（Ｘ１）または（Ｘ２）を製造するために、上記の製造方法では、工程中または最終工程においてキラルカラムによる精製が使用されている。しかし、キラルカラム精製による手法は煩雑であり、高い光学純度を有する化合物の大量合成には適していない。
　従って、上記の合成スキームは、高い光学純度の化合物（Ｘ）を工業的に製造するための方法としては、必ずしも十分なものではなく、より工業的な製造に適した製造方法の創出が望まれている。

　本発明者らは、上記の問題点を解決すべく鋭意検討の結果、キラルカラム精製に代えて、化合物（Ｂ－１）を光学活性な有機酸とのジアステレオマー塩の形成を利用した光学分割法を用いることにより、高い光学純度の化合物（Ｂ－２）を効率的に製造できることを見出した。さらに化合物（Ｂ－１）を化合物（Ａ）の不斉還元によって製造する等、化合物７に至る合成スキームにも併せて改良を加え、化合物（Ｘ）の工業的な製造に適した新規な製造方法、および新規な中間体を見出し、本発明を完成した。本発明により、優れたＭＡＬＴ１阻害活性を有し、将来医薬品としての開発・上市が期待される新規な化合物（Ｘ）を、効率的に製造することが可能となった。
　本発明の製造方法は、以下の合成スキームにより示される。

（式中、Ｒ_１～Ｒ_４は、それぞれ前記と同義であり、
Ｒ_５およびＲ_６は、それぞれ独立して、水素原子またはアミノ保護基、および
Ｒ_７は水素原子、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ_１－６アルコキシ基、またはニトロ基で置換されていてもよいアリールオキシカルボニル基、をそれぞれ示す。）

　上記の各工程が本発明の製造方法を構成するものとして重要であるが、中でも、工程（１）は、式（Ｂ－１）で表される化合物（以下、化合物（Ｂ－１）と略記する場合がある。他の式で表される化合物についても同様である。）と光学活性な有機酸とのジアステレオマー塩を晶析することを特徴とする、化合物（Ｂ－２）の製造工程であり、本発明の中核となる工程である。本工程により、高い光学純度を有する化合物（Ｂ－２）を得ることができ、得られた化合物（Ｂ－２）またはその塩を用いて、その後の工程（２）および工程（３）を実施することにより、優れたＭＡＬＴ１阻害剤である化合物（Ｘ）またはその塩を製造することができる。従って、工程（１）の実施を含む化合物（Ｘ）またはその塩の製造方法が、本発明の好ましい実施態様の一つとなる。
　なお、工程（２）により得られる化合物（Ｃ）またはその塩は、新規化合物である。従って、本発明は、化合物（Ｘ）の製造のために有用な新規な化合物（Ｃ）の製造方法としても有用である。

　また、工程（１）において原料として用いられる化合物（Ｂ－１）は、ラセミ体であってもよいが、一方の光学異性体を他方の光学異性体よりも多く含有する混合物である光学活性体であってもよい。係る「光学活性体」である化合物（Ｂ－１）は、化合物（Ａ）を不斉還元に付すことにより得ることができる（工程（Ａ））。従って、当該工程（Ａ）も本発明のもう一つの中核となる工程である。工程（１）と組み合わせて工程（Ａ）を実施することを含む化合物（Ｘ）またはその塩の製造方法が、本発明の別の好ましい実施態様となる。

　限定されるわけではないが、本発明の好ましい実施態様を、以下に具体的に示す。
［１］式（Ｂ－１）：

（式中、Ｒ_１およびＲ_２は、それぞれ前記と同義である。）
で表される化合物（化合物（Ｂ－１））と光学活性な有機酸との塩を晶析することを特徴とする、式（Ｂ－２）：

（式中、Ｒ_１およびＲ_２は、それぞれ前記と同義である。）
で表される化合物（化合物（Ｂ－２））またはその塩の製造方法。
［２］１）式（Ｂ－１）：

（式中、Ｒ_１およびＲ_２は、それぞれ前記と同義である。）
で表される化合物と光学活性な有機酸との塩を晶析して、式（Ｂ－２）：

（式中、Ｒ_１およびＲ_２は、それぞれ前記と同義である。）
で表される化合物またはその塩を得て、
２）得られた化合物（Ｂ－２）またはその塩を、アルキル化反応に付すことを特徴とする、式（Ｃ）：

（式中、Ｒ_１～Ｒ_３は、それぞれ前記と同義である。）
で表される化合物（化合物（Ｃ））またはその塩の製造方法。
［３］１）式（Ｂ－１）：

（式中、Ｒ_１およびＲ_２は、それぞれ前記と同義である。）
で表される化合物またはその塩を得て、
２）得られた化合物（Ｂ－２）またはその塩を、アルキル化反応に付して、式（Ｃ）：

（式中、Ｒ_１～Ｒ_３は、それぞれ前記と同義である。）
で表される化合物またはその塩を得て、
３）得られた化合物（Ｃ）またはその塩を、式（Ｄ）：

（式中、Ｒ_４は、前記と同義であり、および
Ｒ_７は水素原子、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ_１－６アルコキシ基、またはニトロ基で置換されていてもよいアリールオキシカルボニル基を示す。）
で表される化合物（化合物（Ｄ））またはその塩と反応させることを特徴とする、式（Ｘ）：

（式中、Ｒ_１～Ｒ_４は、それぞれ前記と同義である。）
で表される化合物（化合物（Ｘ））またはその塩の製造方法。
［４］１）式（Ａ）：

（式中、Ｒ_１およびＲ_２はそれぞれ前記と同義であり、
Ｒ_５およびＲ_６は、それぞれ独立して、水素原子またはアミノ保護基を示す。）
で表される化合物（化合物（Ａ））またはその塩を、１）カルボニル基の不斉還元反応、または、２）カルボニル基の不斉還元反応およびアミノ保護基の脱離反応、に付して、式（Ｂ－１）：

（式中、Ｒ_１およびＲ_２はそれぞれ前記と同義である。）
で表される化合物またはその塩を得て、
２）得られた化合物（Ｂ－１）と光学活性な有機酸との塩を晶析することを特徴とする、式（Ｂ－２）：

（式中、Ｒ_１およびＲ_２はそれぞれ前記と同義である。）
で表される化合物またはその塩の製造方法。
［５］１）式（Ａ）：

（式中、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_５およびＲ_６は、それぞれ前記と同義である。）
で表される化合物またはその塩を、１）カルボニル基の不斉還元反応、または、２）カルボニル基の不斉還元反応およびアミノ保護基の脱離反応、に付して、式（Ｂ－１）：

（式中、Ｒ_１およびＲ_２はそれぞれ前記と同義である。）
で表される化合物またはその塩を得て、
２）得られた化合物（Ｂ－１）と光学活性な有機酸との塩を晶析して、式（Ｂ－２）：

（式中、Ｒ_１およびＲ_２はそれぞれ前記と同義である。）
で表される化合物またはその塩を得て、
３）得られた化合物（Ｂ－２）またはその塩を、アルキル化反応に付して、式（Ｃ）：

（式中、Ｒ_１～Ｒ_３は、それぞれ前記と同義である。）
で表される化合物またはその塩を得て、
４）得られた化合物（Ｃ）またはその塩を、式（Ｄ）：

（式中、Ｒ_４およびＲ_７は、それぞれ前記と同義である。）
で表される化合物またはその塩と反応させることを特徴とする、式（Ｘ）：

（式中、Ｒ_１～Ｒ_４は、それぞれ前記と同義である。）
で表される化合物またはその塩の製造方法。
［６］光学活性な有機酸が、Ｄ－（－）－酒石酸、Ｌ－（＋）－酒石酸、（Ｓ）－（－）－２－ピリドン－５－カルボン酸、（Ｒ）－（＋）－２－ピリドン－５－カルボン酸、Ｌ－リンゴ酸、Ｄ－リンゴ酸、（Ｓ）－（＋）－カンファー－１０－スルホン酸、（Ｒ）－（－）－カンファー－１０－スルホン酸、（Ｓ）－（＋）－２－（６－メトキシ－２－ナフチル）プロピオン酸、（Ｒ）－（－）－２－（６－メトキシ－２－ナフチル）プロピオン酸、（＋）－ｃｉｓ－２－ベンズアミドシクロヘキサンカルボン酸、（－）－ｃｉｓ－２－ベンズアミドシクロヘキサンカルボン酸、デヒドロアビエチン酸、（Ｒ）－（－）－Ｎ－（３，５－ジニトロベンゾイル）－α－フェニルグリシン、（Ｓ）－（＋）－Ｎ－（３，５－ジニトロベンゾイル）－α－フェニルグリシン、Ｄ－（－）－キナ酸およびＬ－（＋）－キナ酸から選択される、上記［１］～［５］のいずれか一つに記載の製造方法。
［７］光学活性な有機酸が、Ｄ－（－）－酒石酸である、上記［１］～［５］のいずれか一つに記載の製造方法。
［８］式（Ｃ）：

（式中、Ｒ_１～Ｒ_３は、それぞれ前記と同義である。）
で表される化合物またはその塩を、式（Ｄ）：

（式中、Ｒ_１～Ｒ_４は、それぞれ前記と同義である。）
で表される化合物またはその塩の製造方法。
［９］１）式（Ｂ－２）：

（式中、Ｒ_１およびＲ_２は、それぞれ前記と同義である。）
で表される化合物（化合物（Ｂ－２））またはその塩を、アルキル化反応に付して、式（Ｃ）：

（式中、Ｒ_１～Ｒ_３は、それぞれ前記と同義である。）
で表される化合物（化合物（Ｃ））またはその塩を得て、
２）得られた化合物（Ｃ）またはその塩を、式（Ｄ）：

（式中、Ｒ_４およびＲ_７は、それぞれ前記と同義である。）
で表される化合物（化合物（Ｄ））またはその塩と反応させることを特徴とする、式（Ｘ）：

（式中、Ｒ_１～Ｒ_４は、それぞれ前記と同義である。）
で表される化合物（化合物（Ｘ））またはその塩の製造方法。
［１０］式（Ｃ）：

（式中、Ｒ_１～Ｒ_３は、それぞれ前記と同義である。）
で表される化合物またはその塩。

　本発明により、工程数がより短く、キラルカラム精製といった煩雑な操作を必要とすることなく、高い光学純度を有する、新規なＭＡＬＴ１阻害剤である化合物（Ｘ）またはその塩を、効率良く大量に合成するための工業的製造方法が提供される。

　化合物（Ｘ）の塩としては、薬理学的に許容される塩が好ましく、このような塩としては、例えば、無機酸との塩、有機酸との塩、酸性アミノ酸との塩が挙げられる。
　無機酸との塩の好適な例としては、塩酸、臭化水素酸、硝酸、硫酸、リン酸等との塩が挙げられる。
　有機酸との塩の好適な例としては、ギ酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、フタル酸、フマル酸、シュウ酸、酒石酸、マレイン酸、クエン酸、コハク酸、リンゴ酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ－トルエンスルホン酸等との塩が挙げられる。
　酸性アミノ酸との塩の好適な例としては、アスパラギン酸、グルタミン酸等との塩が挙げられる。

　以下、本明細書中で用いられる各置換基の定義について詳述する。特記しない限り各置換基は以下の定義を有する。
　本明細書中、「ハロゲン原子」としては、例えば、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素が挙げられる。
　本明細書中、「Ｃ_１－６アルキル基」としては、例えば、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｓｅｃ－ブチル、ｔｅｒｔ－ブチル、ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、１－エチルプロピル、ヘキシル、イソヘキシル、１，１－ジメチルブチル、２，２－ジメチルブチル、３，３－ジメチルブチル、２－エチルブチルが挙げられる。
　本明細書中、「ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ_１－６アルキル基」としては、例えば、１ないし７個、好ましくは１ないし５個のハロゲン原子を有していてもよいＣ_１－６アルキル基が挙げられる。具体例としては、メチル、クロロメチル、ジフルオロメチル、トリクロロメチル、トリフルオロメチル、エチル、２－ブロモエチル、２，２，２－トリフルオロエチル、テトラフルオロエチル、ペンタフルオロエチル、プロピル、２，２―ジフルオロプロピル、３，３，３－トリフルオロプロピル、イソプロピル、ブチル、４，４，４－トリフルオロブチル、イソブチル、ｓｅｃ－ブチル、ｔｅｒｔ－ブチル、ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、５，５，５－トリフルオロペンチル、ヘキシル、６，６，６－トリフルオロヘキシルが挙げられる。
　本明細書中、「アリールオキシカルボニル基」としては、例えば、フェニルオキシカルボニル、１－ナフチルオキシカルボニル、２－ナフチルオキシカルボニル等のＣ_６－１４アリールオキシ－カルボニル基が挙げられる。当該「アリールオキシカルボニル基」のアリール部分は、１ないし３個のニトロ基を有していてもよい。
　本明細書中、「アミノ保護基」としては、当技術分野で慣用のアミノ保護基が挙げられ、例えば、Ｃ_１－６アルコキシ－カルボニル基（例、ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）が好適なものとして挙げられる。

　本明細書中、立体化学を特定せずに表記した式、化学構造または化合物名は、特に断りのない限り、存在し得る異性体の混合物（等量混合物を含む）を意味する。前記の化合物（Ｂ－１）

を例にとると、化合物（Ｂ－１）は、以下の式：

で表される２つの光学異性体の混合物を意味している。

　本発明の製造方法について以下に説明する。
　以下の製造方法における各工程で用いられた原料や試薬、ならびに得られた化合物は、それぞれ塩を形成していてもよい。このような塩としては、反応が進行する限り特に限定されないが、例えば、化合物（Ｘ）の塩と同様のもの（例：無機酸との塩）等が挙げられる。

　各工程で得られた化合物が遊離化合物である場合には、自体公知の方法により、目的とする塩に変換することができる。逆に各工程で得られた化合物が塩である場合には、自体公知の方法により、遊離体または目的とする他の種類の塩に変換することができる。このような塩としては、反応が進行する限り特に限定されないが、例えば、化合物（Ｘ）の塩と同様のもの（例：無機酸との塩）等が挙げられる。このような塩の変換は、反応の操作性の向上や反応の効率性の向上等を目的として行うことができる。また、かかる変換は、各工程の反応を行う前段階で行うことができる。必要により、遊離体に再変換することもできる。

　各工程で得られた化合物は反応液のままか、または粗生成物として得た後に、次反応に用いることもできる、あるいは、各工程で得られた化合物を、常法に従って、反応混合物から濃縮、晶出、再結晶、蒸留、溶媒抽出、分溜、クロマトグラフィーなどの分離手段により単離および／または精製することができる。

　各工程の原料や試薬の化合物が市販されている場合には、市販品をそのまま用いることができる。

　各工程の反応において、特に記載が無い場合、これらの反応は、無溶媒、あるいは適当な溶媒に溶解または懸濁して行われる。溶媒の具体例としては、後述の実施例に記載されている溶媒、あるいは以下が挙げられる。
アルコール類：メタノール、エタノール、ｔｅｒｔ－ブチルアルコール、２－メトキシエタノール、１－プロパノール、２－プロパノール、ｔ－アミルアルコールなど；
エーテル類：ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、シクロペンチルメチルエーテル、ジフェニルエーテル、テトラヒドロフラン、１，２－ジメトキシエタン、１，４－ジオキサンなど；
芳香族炭化水素類：クロロベンゼン、トルエン、キシレンなど；
飽和炭化水素類：シクロヘキサン、ヘキサンなど；
アミド類：Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ－ジメチルアセトアミド、Ｎ－メチルピロリドンなど；
ハロゲン化炭化水素類：ジクロロメタン、四塩化炭素など；
ニトリル類：アセトニトリルなど；
スルホキシド類：ジメチルスルホキシドなど；
有機塩基類：ピリジン、トリエチルアミンなど；
酸無水物類：無水酢酸など；
有機酸類：ギ酸、酢酸、トリフルオロ酢酸など；
無機酸類：塩酸、硫酸など；
エステル類：酢酸エチル、酢酸イソプロピルなど；
ケトン類：アセトン、メチルエチルケトンなど；
水。
　上記溶媒は、二種以上を適宜の割合で混合して用いてもよい。

　以下、本発明の各工程をその実施態様に沿って詳述する。

実施態様［１］について
　本発明の実施態様［１］は、化合物（Ｂ－１）と光学活性な有機酸との塩を晶析することを含む光学分割により、高い光学純度の化合物（Ｂ－２）またはその塩を得る（工程（１））ことを特徴とする製造方法である。
　当該光学分割は、溶媒中、化合物（Ｂ－１）を光学活性な有機酸と混合し、析出した結晶をろ取することにより行われる。本工程（１）の実施に際して化合物（Ｂ－１）が塩を形成している場合には、塩基を用いて遊離体（化合物（Ｂ－１））に変換した後、光学活性な有機酸と混合することにより行われる。
　本工程（１）で使用される「光学活性な有機酸」とは、実質的（例えば、光学純度が９５％以上）に一方の光学異性体のみからなる光学純度の高い光学活性な有機酸をいい、入手可能な場合は市販品を使用することができる。

　本工程（１）で用いられる光学活性な有機酸としては、例えば、Ｄ－（－）－酒石酸、Ｌ－（＋）－酒石酸、（Ｓ）－（－）－２－ピリドン－５－カルボン酸、（Ｒ）－（＋）－２－ピリドン－５－カルボン酸、Ｌ－リンゴ酸、Ｄ－リンゴ酸、（Ｓ）－（＋）－カンファー－１０－スルホン酸、（Ｒ）－（－）－カンファー－１０－スルホン酸、（Ｓ）－（＋）－２－（６－メトキシ－２－ナフチル）プロピオン酸、（Ｒ）－（－）－２－（６－メトキシ－２－ナフチル）プロピオン酸、（＋）－ｃｉｓ－２－ベンズアミドシクロヘキサンカルボン酸、（－）－ｃｉｓ－２－ベンズアミドシクロヘキサンカルボン酸、デヒドロアビエチン酸、（Ｒ）－（－）－Ｎ－（３，５－ジニトロベンゾイル）－α－フェニルグリシン、（Ｓ）－（＋）－Ｎ－（３，５－ジニトロベンゾイル）－α－フェニルグリシン、Ｄ－（－）－キナ酸およびＬ－（＋）－キナ酸が挙げられる。
　当業者であれば、適宜光学活性な有機酸を選択して本工程（１）を実施することができるが、好ましくはＤ－（－）－酒石酸、（Ｒ）－（－）－カンファー－１０－スルホン酸、（Ｒ）－（－）－Ｎ－（３，５－ジニトロベンゾイル）－α－フェニルグリシン挙げられ、特に好ましいものとしては、Ｄ－（－）－酒石酸が挙げられる。
　光学活性な有機酸の使用量は、化合物（Ｂ－１）として１モルに対して、通常０．３～１．２モル、好ましくは０．４～１．０モルである。
　光学活性な有機酸との混合のための溶媒としては、エステル類、ニトリル類、アルコール類、エーテル類、芳香族炭化水素類、飽和炭化水素類、アミド類、ハロゲン化炭化水素類、水等が挙げられる。
　混合は、通常０～１００℃、好ましくは２５～６０℃で行われる。反応時間は、通常、約１０分～約９６時間、好ましくは約０．５～約８０時間である。
　本工程（１）では、原料として用いられる化合物（Ｂ－１）は、ラセミ体であってもよいが、一方の光学異性体を他方の光学異性体よりも多く含有する混合物（「光学活性体」）であってもよい。係る「光学活性体」である化合物（Ｂ－１）は、例えば、化合物（Ａ）を不斉還元に付すことにより得ることができる（工程（Ａ））が、その他の適当な方法に従っても当業者であれば当該「光学活性体」を得ることができる。本工程を実施するに当たっては、「光学活性体」は、限定されるものではないが、例えば、目的とする光学異性体（式（Ｂ－２）で表される光学異性体）を７０～９９％（モル比）含むものが好ましく、８０～９９％（モル比）含むものがより好ましく、８５～９８％（モル比）含むものが最も好ましい。

実施態様［２］について
　本発明の実施態様［２］は、工程（１）と工程（２）を連続実施する態様であり、化合物（Ｂ－１）と光学活性な有機酸との塩を晶析することを特徴とする光学分割により、高い光学純度の化合物（Ｂ－２）またはその塩を得て（工程（１））、得られた化合物（Ｂ－２）またはその塩を、アルキル化反応に付すことにより化合物（Ｃ）またはその塩を得る（工程（２））ことを特徴とする製造方法である。

（１）工程（１）
　本実施態様においても、工程（１）は前記の実施態様［１］で説明された方法に従って実施することができる。

（２）工程（２）
　工程（２）では、反応は、溶媒中、化合物（Ｂ－２）またはその塩をアルキル化剤と反応させることにより行われる。
　アルキル化剤としては、ハロゲン化アルキル（例えば、ヨウ化メチル）、ｐ－トルエンスルホン酸メチル、トリメチルオキソニウム　テトラフルオロボラート等が挙げられる。アルキル化剤の使用量は、化合物（Ｂ－２）として１モルに対して、通常０．８～１．５モル、好ましくは０．９～１．２モルである。
　ハロゲン化アルキル、ｐ－トルエンスルホン酸メチルを使用する場合は、塩基の存在下で反応を行うことが好ましい。塩基としては、水素化ナトリウム、ナトリウムｔｅｒｔ－ブトキシド、カリウムｔｅｒｔ－ブトキシド、炭酸銀（Ｉ）、炭酸カリウム、炭酸ナトリウム、トリエチルアミン、イソプロピルエチルアミン等が挙げられる。塩基の使用量は、化合物（Ｂ－２）として１モルに対して、通常０．９～４モル、好ましくは１．０～３．５モルである。
　溶媒としては、エーテル類、アルコール類、芳香族炭化水素類、飽和炭化水素類、アミド類、ハロゲン化炭化水素類、エステル類、ケトン類、ニトリル類等が挙げられる。
　当該反応は、通常－３０～５０℃、好ましくは－１０～２５℃で行われる。反応時間は、通常、約１０分～約２４時間、好ましくは約１時間～約８時間である。

実施態様［３］について
　本発明の実施態様［３］は、工程（１）、工程（２）および工程（３）を連続実施する態様であり、化合物（Ｂ－１）と光学活性な有機酸との塩を晶析することを特徴とする光学分割により、高い光学純度の化合物（Ｂ－２）またはその塩を得て（工程（１））、得られた化合物（Ｂ－２）またはその塩を、アルキル化反応に付すことにより、化合物（Ｃ）またはその塩を得て（工程（２））、さらに得られた化合物（Ｃ）またはその塩と化合物（Ｄ）またはその塩を反応させることにより、化合物（Ｘ）またはその塩を得る（工程（３））ことを特徴とする製造方法である。

（１）工程（１）および工程（２）
　本実施態様においても、工程（１）は前記の実施態様［１］で説明された方法に従って実施することができ、工程（２）は前記の実施態様［２］で説明された方法に従って実施することができる。

（２）工程（３）
　工程（３）では、反応は、化合物（Ｃ）またはその塩と化合物（Ｄ）またはその塩と所望により活性化剤および塩基の共存下において、ウレア化することにより行われる。
　化合物（Ｄ）の使用量は化合物（Ｃ）として１モルに対して、通常０．７～２．０モル、好ましくは０．９～１．５モルである。
　活性化剤としては、クロロギ酸２，２，２－トリクロロエチル、クロロギ酸フェニル若しくはクロロギ酸ｐ－ニトロフェニル等のクロロギ酸エステル誘導体、トリホスゲン、ホスゲン、Ｎ，Ｎ’－カルボニルジイミダゾール又はＮ，Ｎ’－ジスクシンイミジルカルボナートが挙げられるが、トリホスゲン、クロロギ酸２，２，２－トリクロロエチルが好ましい。活性化剤の使用量は、化合物（Ｃ）として１モルに対して、通常０．３～１．５モル、好ましくは０．４～１．０モルである。
　塩基としてはトリエチルアミンやジイソプロピルエチルアミンのような有機塩基が好ましい。塩基の使用量は、化合物（Ｃ）として１モルに対して、通常０．８～５．０モル、好ましくは１．０～３．５モルである。
　溶媒としては、エーテル類、ニトリル類、アミド類、スルホキシド類等が挙げられる。
　当該反応は、通常０～１５０℃、好ましくは１０～１２０℃で行われる。反応時間は、通常、約１時間～約４８時間、好ましくは約２～約２４時間である。

実施態様［４］について
　本発明の実施態様［４］は、工程（Ａ）と工程（１）を連続実施する態様であり、化合物（Ａ）またはその塩を、１）カルボニル基の不斉還元反応、または、２）カルボニル基の不斉還元反応、およびアミノ保護基の脱離反応に付して、化合物（Ｂ－１）またはその塩を得て（工程（Ａ））、得られた化合物（Ｂ－１）と光学活性な有機酸との塩を晶析することを含む光学分割により、高い光学純度の化合物（Ｂ－２）またはその塩を得る（工程（１））ことを特徴とする製造方法である。

（１）工程（Ａ）
　工程（Ａ）は、不斉還元工程と、所望により、アミノ保護基の脱保護工程を実施することからなる。
（不斉還元工程）
　この工程は、化合物（Ａ）またはその塩を不斉還元反応に付して、化合物（Ｂ－１）またはその塩を得ることを含む。当該反応は、不斉触媒、あるいは触媒と不斉配位子の存在下、溶媒中、化合物（Ａ）またはその塩を水素源と反応させることにより行われる。
　水素源としては、ギ酸アンモニウム、イソプロピルアルコール、ギ酸、水素等が挙げられる。水素源の使用量は、化合物（Ａ）として１モルに対して、通常１～１００モル、好ましくは５～２０モルである。水素ガスを使用する場合は常圧または加圧下にて大過剰使用する。
　不斉触媒としては、クロロ（（１Ｓ，２Ｓ）－Ｎ－（ベンジルスルホニル）－１，２－ジフェニルエタンジアミン）（メシチレン）ルテニウム（ＩＩ）（ＲｕＣｌ（（Ｓ，Ｓ）－ＢｎＳＯ_２ｄｐｅｎ）（ｍｅｓｉｔｙｌｅｎｅ））、クロロ（（１Ｓ，２Ｓ）－Ｎ－（２’，６’－ジメチルベンジルスルホニル）－１，２－ジフェニルエタンジアミン）（メシチレン）ルテニウム（ＩＩ）（ＲｕＣｌ（（Ｓ，Ｓ）－２’，６’－（ＣＨ_３）_２ＢｎＳＯ_２ｄｐｅｎ）（（ｍｅｓｉｔｙｌｅｎｅ））、クロロ（（１Ｓ，２Ｓ）－Ｎ－（ｐ－トルエンスルホニル）－１，２－ジフェニルエタンジアミン）（メシチレン）ルテニウム（ＩＩ）（ＲｕＣｌ（（Ｓ，Ｓ）－ＴｓＤＰＥＮ）（ｍｅｓｉｔｙｌｅｎｅ））、クロロ（（１Ｓ，２Ｓ）－Ｎ－（イソブタンスルホニル）－１，２－ジフェニルエタンジアミン）（メシチレン）ルテニウム（ＩＩ）（ＲｕＣｌ（（Ｓ，Ｓ）－ｉ－ＢｕＳＯ_２ＤＰＥＮ）（ｍｅｓｉｔｙｌｅｎｅ））等が挙げられる。不斉触媒の使用量は、化合物（Ａ）として１モルに対して、通常０．００１～０．２モル、好ましくは０．００５～０．１モルである。
　触媒としては、ジクロロ（ベンゼン）ルテニウム（ＩＩ）ダイマー（［ＲｕＣｌ_２（ｂｅｎｚｅｎｅ）］_２）、ビス（ノルボルナジエン）ロジウム（Ｉ）テトラフルオロホウ酸塩（［Ｒｈ（ＮＢＤ）_２ＢＦ_４］）、クロロノルボルナジエンロジウム（Ｉ）ダイマー（［ＲｈＣｌ（ＮＢＤ）］_２）等が挙げられる。触媒の使用量は、化合物（Ａ）として１モルに対して、通常０．００１～０．２モル、好ましくは０．００５～０．１モルである。
　不斉配位子としては、（Ｒ）－（－）－４，１２－ビス（ジフェニルホスフィノ）－［２．２］－パラシクロファン（（Ｒ）－ＰＨＡＮＥＰＨＯＳ）、（Ｒ）－１－［（Ｓ）－２－ジフェニルホスフィノフェロセニル］エチル－ジ－ｔｅｒｔ．－ブチルホスフィン（（Ｒ，Ｓ）－ＰＰＦ－ＰｔＢｕ_２）などのホスフィン系配位子が挙げられる。不斉配位子の使用量は、化合物（Ａ）として１モルに対して、通常０．００１～０．２モル、好ましくは０．００５～０．１モルである。
　本反応は所望により、塩基の存在下行ってもよい。塩基としてはジエチルアミン、シクロヘキシルアミンなどの有機塩基が挙げられる。塩基の使用量は、化合物（Ａ）として１モルに対して、通常０．１～５モル、好ましくは０．２～１．０モルである。
　溶媒としては、ニトリル類、アルコール類、アミド類、芳香族炭化水素類、有機塩基類、水等が挙げられる。
　当該反応は、通常－１０～１００℃、好ましくは５０～８０℃で行われる。反応時間は、通常、約１～約７２時間、好ましくは約２～約４８時間である。
　反応終了後は、化合物（Ａ）またはその塩の単離・生成は行わず、反応混合物のまま、あるいは通常の後処理後、次の工程（１）に供してもよい。
（脱保護工程）
　本工程は、必要により実施することができる工程である。当業者であれば、当技術分野で公知のアミノ保護基の脱離反応（除去反応）を用いて、適宜本工程を実施することができる。

（２）工程（１）
　本実施態様においても、工程（１）は前記の実施態様［１］で説明された方法に従って実施することができる。

実施態様［５］について
　本発明の実施態様［５］は、工程（Ａ）、工程（１）、工程（２）および工程（３）を連続実施する態様であり、化合物（Ａ）またはその塩を、１）カルボニル基の不斉還元反応、または、２）カルボニル基の不斉還元反応およびアミノ保護基の脱離反応に付して、化合物（Ｂ－１）またはその塩を得て（工程（Ａ））、得られた化合物（Ｂ－１）と光学活性な有機酸との塩を晶析することを含む光学分割により、高い光学純度の化合物（Ｂ－２）またはその塩を得て（工程（１））、得られた化合物（Ｂ－２）またはその塩を、アルキル化反応に付すことにより、化合物（Ｃ）またはその塩を得て（工程（２））、さらに得られた化合物（Ｃ）またはその塩と化合物（Ｄ）またはその塩を反応させることにより、化合物（Ｘ）またはその塩を得る（工程（３））ことを特徴とする製造方法である。
　本実施態様においても、各工程（Ａ）、工程（１）～（３）は、前記の実施態様［１］～［４］で説明された方法に従って実施することができる。

実施態様［８］について
　本発明の実施態様［８］は、例えば、本発明の工程（Ａ）、工程（１）および工程（２）を適宜組み合わせて実施して得られた化合物（Ｃ）またはその塩と化合物（Ｄ）またはその塩を反応させることにより、化合物（Ｘ）またはその塩を得る（工程（３））ことを特徴とする製造方法である。
　本実施態様においても、工程（３）は前記の実施態様［３］で説明された方法に従って実施することができる。

実施態様[９]について
　本発明の実施態様［９］は、例えば、本発明の工程（Ａ）、工程（１）を適宜組み合わせて実施して得られた化合物（Ｂ－２）またはその塩を、アルキル化反応に付すことにより、化合物（Ｃ）またはその塩を得て（工程（２））、さらに得られた化合物（Ｃ）またはその塩と化合物（Ｄ）またはその塩を反応させることにより、化合物（Ｘ）またはその塩を得る（工程（３））ことを特徴とする製造方法である。
　本実施態様においても、工程（２）および（３）は前記の実施態様[２]および［３］で説明された方法に従って実施することができる。

　本発明は、更に以下の実施例、製剤例および試験例によって詳しく説明されるが、これらは本発明を限定するものではなく、また本発明の範囲を逸脱しない範囲で変化させてもよい。
　以下の実施例中の「室温」は通常約１０℃ないし約３５℃を示す。混合溶媒において示した比は、特に断らない限り容量比を示す。％は、特に断らない限り重量％を示す。
　シリカゲルカラムクロマトグラフィーにおいて、ＮＨと記載した場合は、アミノプロピルシラン結合シリカゲル、Ｄｉｏｌと記載した場合は、３－（２，３－ジヒドロキシプロポキシ）プロピルシラン結合シリカゲル、ＤｉＮＨと記載した場合は、Ｎ－（２－アミノエチル）－３－アミノプロピルシラン結合シリカゲルを用いた。ＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィー）において、Ｃ１８と記載した場合は、オクタデシル結合シリカゲルを用いた。溶出溶媒の比は、特に断らない限り容量比を示す。
　以下の実施例においては下記の略号を使用する。
Ｂｏｃ_２Ｏ：二炭酸ジ－ｔｅｒｔ－ブチル
ＣＤＣｌ_３：重クロロホルム
^１３Ｃ　ＮＭＲ：カーボン核磁気共鳴
ＤＭＳＯ－ｄ_６：重ジメチルスルホキシド
^１Ｈ　ＮＭＲ：プロトン核磁気共鳴
ＬＣ／ＭＳ：液体クロマトグラフ質量分析計
ＥＳＩ：エレクトロスプレーイオン化
ＡＰＣＩ：大気圧化学イオン化
ＤＢＵ：１，８－ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ－７－エン
ＤＩＥＡ：ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＡＰ：４－ジメチルアミノピリジン
ＤＭＦ：Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド
ｍｐ：融点
ＤＰＰＡ：ジフェニルリン酸アジド
ＭＳ：マススペクトル
［Ｍ＋Ｈ］^＋、［Ｍ－Ｈ］^－：分子イオンピーク
Ｍ：モル濃度
Ｎ：規定
Ｐｄ（ＯＡｃ）_２：酢酸パラジウム（ＩＩ）
ＳＰｈｏｓ：２－ジシクロヘキシルホスフィノ－２’，６’－ジメトキシビフェニル
ＴＥＡ：トリエチルアミン
ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸
ＴＨＦ：テトラヒドロフラン
　^１Ｈおよび^１３Ｃ　ＮＭＲはフーリエ変換型ＮＭＲで測定した。解析にはＡＣＤ／ＳｐｅｃＭａｎａｇｅｒ（商品名）などを用いた。水酸基やアミノ基などのプロトンが非常に緩やかなピークについては記載していない。
　ＭＳは、ＬＣ／ＭＳにより測定した。イオン化法としては、ＥＳＩ法、または、ＡＰＣＩ法を用いた。データは実測値（ｆｏｕｎｄ）を記載した。通常、分子イオンピーク（［Ｍ＋Ｈ］^＋、［Ｍ－Ｈ］^－など）が観測されるが、ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル基を有する化合物の場合、フラグメントイオンとして、ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル基あるいはｔｅｒｔ－ブチル基が脱離したピークが観測されることもある。また、水酸基を有する化合物の場合、フラグメントイオンとして、Ｈ_２Ｏが脱離したピークが観測されることもある。塩の場合は、通常、フリー体の分子イオンピークもしくはフラグメントイオンピークが観測される。

［国際出願番号：ＰＣＴ／ＪＰ２０１９／０４６２６１に記載された化合物（Ｘ）の製造方法］
参考例１
６－（２Ｈ－１，２，３－トリアゾール－２－イル）－５－（トリフルオロメチル）ピリジン－３－アミン
Ａ）　５－ニトロ－２－（２Ｈ－１，２，３－トリアゾール－２－イル）－３－（トリフルオロメチル）ピリジン
　２－クロロ－５－ニトロ－３－（トリフルオロメチル）ピリジン（３．０ｇ）およびＴＨＦ（１５ｍＬ）の混合物に、２Ｈ－１，２，３－トリアゾール（０．９２１ｍＬ）を室温で加え、反応混合物を同温度で２時間撹拌した。反応混合物を水で希釈し、水層を酢酸エチルで抽出した。有機層を水および飽和食塩水で洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧下留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル／ヘキサン）で精製し、標題化合物（２．７５ｇ）を得た。
ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］^＋　２５９．９．

Ｂ）　６－（２Ｈ－１，２，３－トリアゾール－２－イル）－５－（トリフルオロメチル）ピリジン－３－アミン
　５－ニトロ－２－（２Ｈ－１，２，３－トリアゾール－２－イル）－３－（トリフルオロメチル）ピリジン（３．５４ｇ）、１０％塩酸／メタノール溶液（１０１ｍＬ）およびメタノール（１００ｍＬ）の混合物に、スズ（ＩＩ）クロリド（１２．９５ｇ）を室温で加え、反応混合物を同温度で２時間撹拌した。溶媒を減圧下留去し、残渣に酢酸エチルを加え、混合物に２Ｎ水酸化ナトリウム水溶液を加え中和した。析出物を濾過し、濾液の水層を酢酸エチルで抽出した。有機層を水および飽和食塩水で洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧下留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル／ヘキサン）で精製し、標題化合物（２．９５ｇ）を得た。
ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］^＋　２２９．９．

参考例２
（Ｓ）－Ｎ－（６－クロロ－４－（１－メトキシエチル）－１，５－ナフチリジン－３－イル）－Ｎ’－（６－（２Ｈ－１，２，３－トリアゾール－２－イル）－５－（トリフルオロメチル）ピリジン－３－イル）尿素

Ａ）　ｔｅｒｔ－ブチル　（６－クロロ－２－（２－メトキシプロパノイル）ピリジン－３－イル）カルバマート
　ｔｅｒｔ－ブチル　（２－ブロモ－６－クロロピリジン－３－イル）カルバマート（２０．０ｇ）およびＴＨＦ（１６０ｍＬ）の混合物に１．０８Ｍ　メチルリチウム／ジエチルエーテル溶液（７２．３ｍＬ）を－７８℃で加え、反応混合物を同温度で１５分間撹拌した。反応混合物に１．６Ｍ　ｎ－ブチルリチウム／ヘキサン溶液（５２．８ｍＬ）を－７８℃で加え、反応混合物を同温度で１５分間撹拌した。反応混合物に２－メトキシ－１－モルホリノプロパン－１－オン（１６．９ｇ）のＴＨＦ（６０ｍＬ）溶液を－７８℃で加え、反応混合物を室温まで昇温しながら２時間撹拌した。反応混合物に酢酸（１５ｍＬ）の水（１５０ｍＬ）溶液を室温で加え、水層を酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液および飽和食塩水で洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、溶媒を減圧下留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル／ヘキサン）で精製し、標題化合物（１５．８１ｇ）を得た。
ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ－ｔＢｕ］^＋　２５８．９．

Ｂ）　１－（６－クロロ－３－（（２－ニトロビニル）アミノ）ピリジン－２－イル）－２－メトキシプロパン－１－オン
　ｔｅｒｔ－ブチル　（６－クロロ－２－（２－メトキシプロパノイル）ピリジン－３－イル）カルバマート（１５．７ｇ）および酢酸エチル（１００ｍＬ）の混合物に、４Ｎ塩化水素シクロペンチルメチルエーテル溶液（２００ｍＬ）を室温で加え、反応混合物を同温度で２時間撹拌した。反応混合物に更に４Ｎ塩化水素シクロペンチルメチルエーテル溶液（１００ｍＬ）を室温で加え、同温度で終夜撹拌し、溶媒を減圧下留去した。得られた残渣、（Ｅ）－４－（２－ニトロビニル）モルホリン（９．４７ｇ）、６Ｎ塩酸（３６ｍＬ）およびアセトン（１２０ｍＬ）の混合物を室温で３時間撹拌した。反応混合物を水（２４０ｍＬ）で希釈し、０℃で１時間撹拌した。析出物を濾取し水で洗浄し、得られた固体を減圧下乾燥し、標題化合物（１２．５５ｇ）を得た。
ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］^＋　２８６．０．

Ｃ）　２－クロロ－８－（１－メトキシエチル）－７－ニトロ－１，５－ナフチリジン
　ＤＢＵ（６．６２ｍＬ）およびＴＨＦ（１２０ｍＬ）の混合物に、１－（６－クロロ－３－（（２－ニトロビニル）アミノ）ピリジン－２－イル）－２－メトキシプロパン－１－オン（１２．５５ｇ）のＴＨＦ（２８０ｍＬ）溶液を室温で加え、反応混合物を同温度で１時間撹拌した。反応混合物に２Ｎ塩酸を加えｐＨを弱酸性に調整した後、水で希釈し、水層を酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、溶媒を減圧下留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル／ヘキサン）で精製し、標題化合物（９．８２ｇ）を得た。
ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］^＋　２６７．９．

Ｄ）　６－クロロ－４－（１－メトキシエチル）－１，５－ナフチリジン－３－アミン
　２－クロロ－８－（１－メトキシエチル）－７－ニトロ－１，５－ナフチリジン（５．００ｇ）、スズ（ＩＩ）クロリド　二水和物（２１．１ｇ）および酢酸エチル（１５０ｍＬ）の混合物を、６０℃で２時間撹拌した後、室温で終夜撹拌した。反応混合物を酢酸エチルで希釈し、混合物を２Ｍ炭酸カリウム水溶液で中和した。析出物を濾過し、濾液の水層を酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、溶媒を減圧下留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＮＨ、酢酸エチル／ヘキサン）で精製し、標題化合物（３．９１ｇ）を得た。
ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］^＋　２３８．０．

Ｅ）　（Ｓ）－６－クロロ－４－（１－メトキシエチル）－１，５－ナフチリジン－３－アミン
　６－クロロ－４－（１－メトキシエチル）－１，５－ナフチリジン－３－アミン（３．８４ｇ）をＨＰＬＣ（ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ　ＩＧ（ＶＪ００３）、２０ｍｍＩＤ×２５０ｍｍＬ、移動相：ヘキサン／エタノール＝９００／１００）で分取し、目的物を含む保持時間の大きい方の画分を減圧下で濃縮し、標題化合物（１８６５ｍｇ）を得た。
光学純度：９９．９％　ｅｅ，保持時間：７．３５９分（ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ　ＡＤ－Ｈ（ＶＪ０１９）、４．６ｍｍＩＤ×２５０ｍｍＬ、移動相：ヘキサン／２－プロパノール＝８５０／１５０）
ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］^＋　２３８．０．
絶対配置は単結晶Ｘ線回折装置を用いて決定した。

Ｆ）　（Ｓ）－Ｎ－（６－クロロ－４－（１－メトキシエチル）－１，５－ナフチリジン－３－イル）－Ｎ’－（６－（２Ｈ－１，２，３－トリアゾール－２－イル）－５－（トリフルオロメチル）ピリジン－３－イル）尿素
　反応を以下に示す４回に分けて行った。
　反応混合物１：トリホスゲン（６２ｍｇ）およびＴＨＦ（５ｍＬ）の混合物に、（Ｓ）－６－クロロ－４－（１－メトキシエチル）－１，５－ナフチリジン－３－アミン（１００ｍｇ）およびＤＩＥＡ（０．２２０ｍＬ）のＴＨＦ（２ｍＬ）溶液を０℃で加え、反応混合物を同温度で１時間撹拌した。反応混合物に参考例１で得られる６－（２Ｈ－１，２，３－トリアゾール－２－イル）－５－（トリフルオロメチル）ピリジン－３－アミン（１０６ｍｇ）を０℃で加え、反応混合物を６０℃で終夜撹拌した。
　反応混合物２：トリホスゲン（１８７ｍｇ）およびＴＨＦ（１２ｍＬ）の混合物に、（Ｓ）－６－クロロ－４－（１－メトキシエチル）－１，５－ナフチリジン－３－アミン（３００ｍｇ）およびＤＩＥＡ（０．６６０ｍＬ）のＴＨＦ（６ｍＬ）溶液を０℃で加え、反応混合物を同温度で１時間撹拌した。反応混合物に参考例１で得られる６－（２Ｈ－１，２，３－トリアゾール－２－イル）－５－（トリフルオロメチル）ピリジン－３－アミン（３１８ｍｇ）を０℃で加え、反応混合物を６０℃で２時間撹拌した。反応混合物に６－（２Ｈ－１，２，３－トリアゾール－２－イル）－５－（トリフルオロメチル）ピリジン－３－アミン（２９ｍｇ）を同温度で加え、反応混合物を終夜撹拌した。
　反応混合物３：トリホスゲン（３７５ｍｇ）およびＴＨＦ（２４ｍＬ）の混合物に、（Ｓ）－６－クロロ－４－（１－メトキシエチル）－１，５－ナフチリジン－３－アミン（６００ｍｇ）およびＤＩＥＡ（１．３２ｍＬ）のＴＨＦ（１２ｍＬ）溶液を０℃で加え、反応混合物を同温度で１時間撹拌した。反応混合物に参考例１で得られる６－（２Ｈ－１，２，３－トリアゾール－２－イル）－５－（トリフルオロメチル）ピリジン－３－アミン（６３６ｍｇ）を０℃で加え、反応混合物を６０℃で２時間撹拌した。反応混合物に６－（２Ｈ－１，２，３－トリアゾール－２－イル）－５－（トリフルオロメチル）ピリジン－３－アミン（１１６ｍｇ）を同温度で加え、反応混合物を終夜撹拌した。
　反応混合物４：トリホスゲン（５３１ｍｇ）およびＴＨＦ（３４ｍＬ）の混合物に、（Ｓ）－６－クロロ－４－（１－メトキシエチル）－１，５－ナフチリジン－３－アミン（８５０ｍｇ）およびＤＩＥＡ（１．８７ｍＬ）のＴＨＦ（１７ｍＬ）溶液を０℃で加え、反応混合物を同温度で１時間撹拌した。反応混合物に参考例１で得られる６－（２Ｈ－１，２，３－トリアゾール－２－イル）－５－（トリフルオロメチル）ピリジン－３－アミン（９０１ｍｇ）を０℃で加え、反応混合物を６０℃で２時間撹拌した。反応混合物に６－（２Ｈ－１，２，３－トリアゾール－２－イル）－５－（トリフルオロメチル）ピリジン－３－アミン（１６４ｍｇ）を同温度で加え、反応混合物を終夜撹拌した。
　反応混合物１－４を一つに合わせ、混合物を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で希釈し、水層を酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、溶媒を減圧下留去した。残渣にＴＨＦおよび酢酸エチルを加え、不溶物を濾過し、濾液を減圧下濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＮＨ、酢酸エチル／ヘキサン）で精製し、粗結晶（３．４６ｇ）を得た。得られた粗結晶を酢酸エチル（２０ｍＬ）に８０℃で溶解させ、混合溶液にｎ－ヘプタン（１８０ｍＬ）を同温度で滴下した。混合溶液を同温度で１時間撹拌した後、室温まで冷却し、同温度で終夜撹拌した。析出物を濾取し、酢酸エチルおよびｎ－ヘプタンの混合溶液で洗浄後、減圧下乾燥し、標題化合物（３．３５ｇ）を得た。
^１Ｈ　ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ１．５６（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ），３．３６（３Ｈ，ｓ），５．８５（１Ｈ，ｑ，Ｊ＝６．７Ｈｚ），７．７７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ），８．１８（２Ｈ，ｓ），８．４６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ），８．７４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．６Ｈｚ），８．８９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ），９．２４（１Ｈ，ｓ），９．６８（１Ｈ，ｓ），１０．８９（１Ｈ，ｓ）．
ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］^＋　４９１．１．
絶対配置は単結晶Ｘ線回折装置を用いて決定した。

参考例３
（Ｓ）－Ｎ－（４－（１－メトキシエチル）－６－メチル－１，５－ナフチリジン－３－イル）－Ｎ’－（６－（２Ｈ－１，２，３－トリアゾール－２－イル）－５－（トリフルオロメチル）ピリジン－３－イル）尿素

Ａ）　８－（１－メトキシエチル）－２－メチル－７－ニトロ－１，５－ナフチリジン
　２－クロロ－８－（１－メトキシエチル）－７－ニトロ－１，５－ナフチリジン（５００ｍｇ）、２，４，６－トリメチルボロキシン（０．３９ｍＬ）、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ_２・ＣＨ_２Ｃｌ_２（１５３ｍｇ）、リン酸三カリウム（７９３ｍｇ）と１，２－ジメトキシエタン（２０ｍＬ）の混合物をマイクロ波照射下、１００℃で１．５時間加熱した。反応混合物を酢酸エチルで希釈した。不溶物をセライト濾過し、酢酸エチルで洗浄した。濾液を減圧下濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル／ヘキサン）で精製し、標題化合物（４３９ｍｇ）を得た。
ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］^＋　２４７．９．

Ｂ）　４－（１－メトキシエチル）－６－メチル－１，５－ナフチリジン－３－アミン
　８－（１－メトキシエチル）－２－メチル－７－ニトロ－１，５－ナフチリジン（４７０ｍｇ）、スズ（ＩＩ）クロリド二水和物（２．５７ｇ）、ＴＨＦ（３ｍＬ）およびエタノール（１２ｍＬ）の混合物を、室温で終夜、６０℃で７時間撹拌した。反応混合物を酢酸エチルで希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で中和した。不溶物を濾過し、酢酸エチルで洗浄した。濾液を酢酸エチルで２回抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、溶媒を減圧下留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル／ヘキサン）、次いでシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＮＨ、酢酸エチル／ヘキサン）で精製し、標題化合物（３０６ｍｇ）を得た。
ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］^＋　２１７．９．

Ｃ）　Ｎ－（４－（１－メトキシエチル）－６－メチル－１，５－ナフチリジン－３－イル）－Ｎ’－（６－（２Ｈ－１，２，３－トリアゾール－２－イル）－５－（トリフルオロメチル）ピリジン－３－イル）尿素
　４－（１－メトキシエチル）－６－メチル－１，５－ナフチリジン－３－アミン（８０ｍｇ）、参考例１で得られる６－（２Ｈ－１，２，３－トリアゾール－２－イル）－５－（トリフルオロメチル）ピリジン－３－アミン（１０１ｍｇ）、ピリジン（０．０８９ｍＬ）のＴＨＦ（５ｍＬ）溶液にトリホスゲン（５４．６ｍｇ）のＴＨＦ（１ｍＬ）溶液を０℃で加えた。反応混合物を０℃で３０分、室温で３０分間撹拌した。ピリジン（０．０８９ｍＬ）を０℃で加え、次いでトリホスゲン（５４．６ｍｇ）のＴＨＦ（１ｍＬ）溶液を加えた。反応混合物を０℃で３０分、室温で４時間撹拌した。混合物を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液にあけ、酢酸エチルで２回抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、溶媒を減圧下留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＮＨ、酢酸エチル／ヘキサン）で精製し、表題化合物（１２７ｍｇ）を得た。
ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］^＋　４７３．１．

Ｄ）　（Ｓ）－Ｎ－（４－（１－メトキシエチル）－６－メチル－１，５－ナフチリジン－３－イル）－Ｎ’－（６－（２Ｈ－１，２，３－トリアゾール－２－イル）－５－（トリフルオロメチル）ピリジン－３－イル）尿素
　Ｎ－（４－（１－メトキシエチル）－６－メチル－１，５－ナフチリジン－３－イル）－Ｎ’－（６－（２Ｈ－１，２，３－トリアゾール－２－イル）－５－（トリフルオロメチル）ピリジン－３－イル）尿素（１１９．８ｍｇ）をＨＰＬＣ（ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ　ＡＤ－Ｈ（ＶＡ００１）、２０ｍｍＩＤ×２５０ｍｍＬ、移動相：ヘキサン／エタノール＝７００／３００）で分取し、目的物を含む保持時間の小さい方の画分を減圧下で濃縮し、標題化合物（５５．６ｍｇ）を得た。
ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］^＋　４７３．１．

［本発明による化合物（Ｘ）の製造方法］
製造例１
フェニル　６－（２Ｈ－１，２，３－トリアゾール－２－イル)－５－(トリフルオロメチル)ピリジン－３－アミノカーバメート
Ａ）　５－ニトロ－２－（２Ｈ－１，２，３－トリアゾール－２－イル）－３－（トリフルオロメチル）ピリジン
　２－クロロ－５－ニトロ－３－（トリフルオロメチル）ピリジン（３０ｇ）の２－プロパノール（１５０ｍＬ）の溶液に、１Ｈ－１，２，３－トリアゾール（８．４４ｍＬ）、炭酸カリウム（２７．４５ｇ）、２－プロパノール（２１０ｍＬ）を室温で加え、反応混合物を同温度で７時間撹拌した。反応混合物に水（２７０ｍＬ）を加え、混合物を同温度で１６時間撹拌した。得られた固体をろ取し、水（１５０ｍＬ）で洗浄後、５５℃で終夜乾燥することにより、標題化合物（２６．４３ｇ）を得た。
^１Ｈ　ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ８．０６（２Ｈ，ｓ），９．０６（１Ｈ，ｓ），９．５９（１Ｈ，ｓ）．

Ａ－１）２－クロロ－５－ニトロ－３－（トリフルオロメチル）ピリジン（７．９８ｋｇ）および２－プロパノール（７５．０ｋｇ）を混ぜ合わせた溶液に、１Ｈ－１，２，３－トリアゾール（２．９０ｋｇ）、炭酸カリウム（７．３０ｋｇ）を室温で加え、反応混合物を同温度で１２時間撹拌した。反応混合物に水（７２．０ｋｇ）を加え、混合物を同温度で３時間撹拌した。得られた固体をろ取し、水（３９．９ｋｇ）で洗浄後、５５℃で終夜乾燥することにより、標題化合物（７．２３ｋｇ）を得た。

Ｂ）　６－（２Ｈ－１，２，３－トリアゾール－２－イル）－５－（トリフルオロメチル）ピリジン－３－アミン
　５－ニトロ－２－（２Ｈ－１，２，３－トリアゾール－２－イル）－３－（トリフルオロメチル）ピリジン（２５ｇ）、１０％パラジウム－炭素（Ｋタイプ）（２．５ｇ）およびメタノール（６２５ｍＬ）の混合物をオートクレイブに加え、水素圧０．５ＭＰａ、５５℃で８時間撹拌した。混合物をろ過し、メタノール（５０ｍＬ）で洗浄した。ろ液を５０ｍＬまで濃縮した後に、水（１１０ｍＬ）、種晶、水（１１５ｍＬ）を５℃で順に加え、同温度で３時間撹拌した。得られた固体をろ過し、水（１００ｍＬ）で洗浄後、５５℃で終夜乾燥することにより、標題化合物（２０．１６ｇ）を得た。
^１Ｈ　ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ４．５６（２Ｈ，ｂｒ　ｓ），７．３０（１Ｈ，ｓ），７．８７（２Ｈ，ｓ），８．０３（１Ｈ，ｂｒ　ｓ）．

Ｂ－１）５－ニトロ－２－（２Ｈ－１，２，３－トリアゾール－２－イル）－３－（トリフルオロメチル）ピリジン（７．１４ｋｇ）、１０％パラジウム－炭素（Ｋタイプ）（０．７２ｋｇ）およびメタノール（１４２．６ｋｇ）の混合物をオートクレイブに加え、窒素置換後に水素圧０．５ＭＰａ、５５℃で８時間撹拌した。混合物をろ過し、メタノール（１１．４ｋｇ）で洗浄した。ろ液を約１４Ｌまで減圧濃縮した後に、水（３２．０ｋｇ）、種晶、水（３２．８ｋｇ）を５℃で順に加え、同温度で３時間撹拌した。得られた固体をろ過し、水（２８．８ｋｇ）で洗浄後、５５℃で終夜乾燥することにより、標題化合物（５．５５ｋｇ）を得た。

Ｃ）　フェニル　６－（２Ｈ－１，２，３－トリアゾール－２－イル）－５－（トリフルオロメチル）ピリジン－３－アミノカーバメート
　窒素雰囲気下、６－（２Ｈ－１，２，３－トリアゾール－２－イル）－５－（トリフルオロメチル）ピリジン－３－アミン（１５ｇ）、アセトニトリル（４５ｍＬ）およびピリジン（１０．３５ｇ）の混合物に、５℃でクロロ炭酸フェニル（１１．２７ｇ）を加え、同温度で１時間撹拌した。エタノール（１５ｍＬ）、水（１０５ｍＬ）および種晶を加え、さらに同温度で３時間撹拌した。得られた固体をろ取し、エタノール／水（１／１、４５ｍＬ）で洗浄後、５５℃で終夜乾燥することにより、表題化合物（２１．４７ｇ）を得た。
^１Ｈ　ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ７．１４－７．１９（２Ｈ，ｍ），７．２５－７．３０（１Ｈ，ｍ），７．３７－７．４５（２Ｈ，ｍ），７．９４（２Ｈ，ｓ），８．６１（１Ｈ，ｂｒ　ｓ），８．６９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．５２Ｈｚ）．

Ｃ－１）窒素雰囲気下、６－（２Ｈ－１，２，３－トリアゾール－２－イル）－５－（トリフルオロメチル）ピリジン－３－アミン（５．０１ｋｇ）、アセトニトリル（１１．８ｋｇ）およびピリジン（３．４９ｋｇ）の混合物に、５℃でクロロ炭酸フェニル（３．８０ｋｇ）を加え、同温度で１時間撹拌した。同温度でクロロ炭酸フェニル（０．３０ｋｇ）を加え、同温度で１時間撹拌した。同温度でクロロ炭酸フェニル（０．２９ｋｇ）を加え、同温度で１時間撹拌した。同温度でエタノール（３．９０ｋｇ）、水（３５．００ｋｇ）および種晶（５ｇ）を加え、同温度で３時間撹拌した。得られた固体をろ取し、エタノール（５．９０ｋｇ）と水（７．５５ｋｇ）を混合した溶液で洗浄後、５５℃で終夜乾燥することにより、表題化合物（７．２２ｋｇ）を得た。

製造例２
４－アセチル－６－クロロ－１，５－ナフチリジン－３－アミン
Ａ）　（Ｅ）－４－（２－ニトロビニル）モルホリン
　ニトロメタン（４６１ｍＬ）、オルトギ酸トリエチル（５１０ｍＬ）、ｐ－トルエンスルホン酸一水和物（９．８３ｇ）、モルホリン（１５０ｇ）の混合物を窒素雰囲気下、８０℃で４時間撹拌した。５０℃まで冷却した後、約３００ｍＬまで減圧濃縮した。エタノール（１５０ｍＬ）を加え、再び約３００ｍＬまで減圧濃縮した。濃縮液にメチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル（６００ｍＬ）およびエタノール（６０ｍＬ）の混合溶媒を加えて、室温で２時間、懸濁撹拌した。得られた固体をろ取し、メチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル／エタノールの混合溶媒（１０／１，３００ｍＬ）で洗浄後、３５℃で減圧乾燥することにより、表題化合物（２４２ｇ）を得た。
^１Ｈ　ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ３．２０－３．５０（４Ｈ，ｂｒ　ｓ），３．７３－３．８４（４Ｈ，ｍ），６．７４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１０．７２Ｈｚ），８．１０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．０３Ｈｚ）．

Ｂ）　３－（２－（Ｅ）－ニトロビニルアミノ）－６－クロロピリジン－２－カルボン酸
　３－アミノ－６－クロロピリジン－２－カルボン酸（１００ｇ）、（Ｅ）－４－（２－ニトロビニル）モルホリン（１１０ｇ）、アセトン（９００ｍＬ）の混合物に、６Ｍ塩酸（４８３ｍＬ）を２０～２８℃で加え、室温で３．５時間撹拌した。反応混合物に４Ｍ水酸化ナトリウム水溶液（６７０ｍＬ）を加え、２時間撹拌した。得られた固体を濾取し、アセトン／水（１／４，５００ｍＬ）で洗浄した後に６０℃で減圧乾燥することにより表題化合物（１６２．３ｇ）を得た。
^１Ｈ　ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ（Ｅ／Ｚ混合物）（主生成物）６．６９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．３１Ｈｚ），７．５４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．５１Ｈｚ），８．０１－８．１０（１Ｈ，ｍ），８．１５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．５１Ｈｚ），１４．６１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５．００Ｈｚ）．（副生成物）７．３７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１０．７２Ｈｚ），７．４７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．８３Ｈｚ），８．７２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１０．７２Ｈｚ）．

Ｃ）　６－クロロ－３－ニトロ－１，５－ナフチリジン－４－オール
　３－（２－（Ｅ）－ニトロビニルアミノ）－６－クロロピリジン－２－カルボン酸（１６０ｇ）、酢酸カリウム（７９．９３ｇ）、無水酢酸（８００ｍＬ）の混合物を窒素雰囲気下、８０℃で４時間撹拌した。反応混合物を５０℃に冷却した後、水（８００ｍＬ）を４５から６２℃の間で加えた。混合物を５０℃で１時間、室温で１．５時間撹拌した後、得られた固体を濾取し、アセトン／水（１／４、８００ｍＬ）で洗浄後、６０℃で乾燥することにより表題化合物（１０５．２ｇ）を得た。
^１Ｈ　ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ７．８８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．５１Ｈｚ），８．２０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．８３Ｈｚ），９．２８（１Ｈ，ｓ），１２．１７－１３．９５（１Ｈ，ｍ）．

Ｄ）　８－ブロモ－２－クロロ－７－ニトロ－１，５－ナフチリジン
　６－クロロ－３－ニトロ－１，５－ナフチリジン－４－オール（３５．０ｇ）のＤＭＦ（３４５ｍＬ）懸濁液に、窒素雰囲気下、三臭化りん（６３．１ｇ）を５±５℃で加えた。反応混合物を同温度で４時間撹拌した。反応混合物を５±５℃に冷却した水（６３０ｍＬ）に加え、さらに８Ｍ水酸化ナトリウム水溶液（６９．８ｍＬ）を加えた。得られた懸濁液を２５±５℃で１５時間撹拌し、得られた固体を濾取し、水（１７５ｍＬ）で洗浄した後、窒素をふきつけて乾燥した。得られた固体をエタノール（１７５ｍＬ）に懸濁し、水（３５０ｍＬ）を加え、２５±５℃で１時間撹拌した。得られた固体を濾取し、エタノール（１７５ｍＬ）で洗浄した後、窒素をふきつけて１時間乾燥し、表題化合物（４２．５２ｇ）を得た。
^１Ｈ　ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ８．１１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．５１Ｈｚ），８．６６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．８３Ｈｚ），９．４１（１Ｈ，ｓ）．

Ｅ）　２－クロロ－８－（１－エトキシビニル）－７－ニトロ－１，５－ナフチリジン
　８－ブロモ－２－クロロ－７－ニトロ－１，５－ナフチリジン（２４．５ｇ）、トリブチル（１－エトキシビニル）スズ（３３．７ｇ）のＤＭＥ（２４５ｍＬ）溶液を脱気し、窒素置換後、ＰｄＣｌ_２（Ａｍｐｈｏｓ）_２（１．２ｇ）を加え、混合物を８０℃で２時間撹拌した。反応混合物にフッ化カリウム（４９．３ｇ）の水（２４５ｍＬ）溶液を室温で加え、室温で１時間撹拌した。反応混合物を濾過した後、得られた不溶物をトルエン（１０８ｍＬ）で洗浄し、濾液を約３７０ｍＬまで減圧濃縮した。トルエン（２４５ｍＬ）を加え、有機層を分離し、得られた有機層を１０％食塩水で２回洗浄した。有機層をシリカゲル（ワコーゲル（登録商標）ＦＣ－４０、２５ｇ）に通し、トルエン（５０ｍＬ）で溶出した。溶出液を減圧濃縮した後に、アセトン（１３５ｍＬ）で希釈した。活性炭白鷺Ａ（登録商標）（４．９ｇ）を加え、室温で２０分撹拌した。活性炭をろ過後、減圧濃縮した。得られた残渣を２－プロパノール（４９ｍＬ）中に懸濁し、１時間撹拌した。得られた固体をろ取し、２－プロパノール（２４．５ｍＬ）で洗浄後、６０℃で減圧乾燥することにより、標題化合物（１７．１４ｇ）を得た。
^１Ｈ　ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ１．２７（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．９４Ｈｚ），３．９８（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝６．９４Ｈｚ），４．７３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．１５Ｈｚ），４．９８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．１５Ｈｚ），８．０５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．８３Ｈｚ），８．６１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．８３Ｈｚ），９．４４（１Ｈ，ｓ）．

Ｆ）　８－アセチル－２－クロロ－７－ニトロ－１，５－ナフチリジン
　２－クロロ－８－（１－エトキシビニル）－７－ニトロ－１，５－ナフチリジン（１５ｇ）のアセトン（６０ｍＬ）溶液に６Ｍ塩酸（１１ｍＬ）を２２から２６℃で加え、混合物を室温で４時間撹拌した。反応混合物に１Ｍ水酸化ナトリウム水溶液（７０ｍＬ）、さらに水（９９ｍＬ）を加え、室温で１時間撹拌した。得られた固体をろ取し、アセトン／水（１／３、７５ｍＬ）で洗浄した後、１３．０６ｇまで６０℃で減圧乾燥した。得られた固体と酢酸エチル（４５ｍＬ）の混合物を６０℃に加熱した。ヘプタン（７５ｍＬ）を加え、５℃で１．５時間撹拌した。得られた固体をろ取し、ヘプタン（７５ｍＬ）で洗浄後、６０℃で減圧乾燥することにより、標題化合物（１１．２１ｇ）を得た。
^１Ｈ　ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ２．７２（３Ｈ，ｓ），８．１４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．８３Ｈｚ），８．７０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．８３Ｈｚ），９．７０（１Ｈ，ｓ）．

Ｇ）　４－アセチル－６－クロロ－１，５－ナフチリジン－３－アミン
　８－アセチル－２－クロロ－７－ニトロ－１，５－ナフチリジン（１３．０ｇ）、５％パラジウム－炭素（ＰＥタイプ　１．３０ｇ）およびメタノール（２２１ｍＬ）をオートクレイブに入れ、１５℃に冷却し、水素圧０．２０ＭＰａで６時間撹拌した。水素圧を逃がした後、テトラヒドロフラン（１３０ｍＬ）を加え、５０℃に加温した。得られた溶液を５０℃で２０分撹拌したのち、触媒をろ過し、触媒をテトラヒドロフラン（５２ｍＬ）で洗浄した。ろ液を約５２ｍＬまで減圧下濃縮し、メタノール（１３０ｍＬ）を加えた。この操作を繰り返した。ろ液を約６５ｍＬまで減圧下濃縮し、６０℃に加温した。水（１３０ｍＬ）を６０℃で加え、同温度で１時間撹拌した。室温で１２時間撹拌した後、得られた固体をろ過し、得られた固体をメタノール／水（１／２、３９ｍＬ）で洗浄した。固体を６０℃で減圧下乾燥し、標題化合物（９．９１ｇ）を得た。
^１Ｈ　ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ２．８２（３Ｈ，ｓ），７．４４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．５１Ｈｚ），７．９４（２Ｈ，ｓ），８．２１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．５１Ｈｚ），８．７０（１Ｈ，ｓ）．

Ｈ）　ジｔｅｒｔ－ブチル　４－アセチル－６－クロロ－１，５－ナフチリジン－３－アミノジカルバマート
　４－アセチル－６－クロロ－１，５－ナフチリジン－３－アミン（２７ｇ）のＴＨＦ（２７０ｍＬ）溶液にＢｏｃ_２Ｏ（５７．９６ｇ）、トリエチルアミン（５０．４８ｍＬ）、ＤＭＡＰ（１４７．４８ｍｇ）を０～５℃で加えた。反応混合物を５０℃で３時間撹拌した。反応混合物を水で希釈し、酢酸エチルで２回抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄後、硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル／ヘキサン）で精製し、酢酸エチル／ヘキサンで結晶化し、標題化合物（３５ｇ）を得た。
ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］^＋　４２２．１．

実施例１
（Ｓ）－６－クロロ－４－（１－ヒロドキシエチル）－１，５－ナフチリジン－３－アミン

　ジｔｅｒｔ－ブチル　４－アセチル－６－クロロ－１，５－ナフチリジン－３－アミノジカルバマート（１０ｇ）、ギ酸カリウム（１９．９６ｇ）、クロロ（（１Ｓ，２Ｓ）－Ｎ－（ベンジルスルホニル）－１，２－ジフェニルエタンジアミン）（メシチレン）ルテニウム（ＩＩ）（２９４．９６ｍｇ）、ｔｅｒｔ－アミルアルコール（５０ｍＬ）および水（２５ｍＬ）の混合物をアルゴンで脱気し、５０℃で４８時間撹拌した。反応混合物を水にあけ、酢酸エチルで２回抽出した。有機層を水、次いで飽和食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧下濃縮した。
　残渣をトルエンに溶解し、シリカゲル濾過し、減圧下濃縮した。残渣をシクロペンチルメチルエーテル（５０ｍＬ）に溶解し、４Ｍ塩化水素のシクロペンチルメチルエーテル溶液（１００ｍＬ）を０℃で加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌した後、得られた固体を濾取した。得られた固体を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で中和し、酢酸エチル／ＴＨＦで抽出した。有機層を水、次いで飽和食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧下濃縮した。
　残渣を酢酸イソプロピル（１５０ｍＬ）に５０℃で溶解した。得られた溶液にＤ－（－）－酒石酸（１．６ｇ）のエタノール（２０ｍＬ）溶液を５０℃で加え、同温度で１時間撹拌した。酢酸イソプロピルを加え、混合物を室温で終夜撹拌した。得られた固体を濾取し、酢酸イソプロピルで洗浄し、表題化合物のヘミＤ－（－）－酒石酸塩（４．４ｇ、９７．２％ｅｅ）を得た。得られたヘミＤ－（－）－酒石酸塩を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で中和し、酢酸エチル／ＴＨＦで抽出した。有機層を水、次いで飽和食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧下濃縮し、表題化合物（３．２７ｇ）を得た。
ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］^＋　２２４．１．

実施例２
（Ｓ）－６－クロロ－４－（１－ヒロドキシエチル）－１，５－ナフチリジン－３－アミン　ヘミＤ－（－）－酒石酸塩

（１）［ＲｕＣｌ_２（ｂｅｎｚｅｎｅ）］_２（２１４．４ｍｇ）、（Ｒ）－ＰＨＡＮＥＰＨＯＳ（５９３．２ｍｇ）、４－アセチル－６－クロロ－１，５－ナフチリジン－３－アミン（９．５０ｇ）をオートクレイブに仕込み、窒素置換した後に、シクロヘキシルアミン（２．４４３ｍＬ）と脱酸素エタノール（３８０ｍＬ）の混合物を加えた。水素圧０．５ＭＰａとした後、６０℃に加熱した。水素圧を０．９５ＭＰａとした後に６０℃で１６時間撹拌した。５０℃に冷却したのちに水素を逃がし、約１４３ｍＬに減圧濃縮した。
　残留物に４Ｍ塩酸（１６．１ｍＬ）を加え、混合物を室温で３時間撹拌した。得られた固体をろ取し、冷エタノール（６６．５ｍＬ）で洗浄した。固体を６０℃で減圧乾燥することにより、３．７６ｇの固体を得た。得られた固体（３．５０ｇ）と水（１２２．５ｍＬ）の混合物を２０分撹拌した。固体をろ別し、水（１７．５ｍＬ）で洗浄した。濾液に酢酸イソプロピル（３５ｍＬ）と８Ｍ水酸化ナトリウム水溶液（１．６８２ｍＬ）を室温で加え、混合物を撹拌した。有機層を分離し、４０℃に加温した後に、Ｄ－（－）－酒石酸（１．２１ｇ）の熱エタノール（８．８ｍＬ）溶液を加えた。ヘプタン（２６．３ｍＬ）を加え、混合物を４０℃で３．５時間、室温で６６時間撹拌した。得られた固体をろ取し、酢酸イソプロピル／ヘプタン／エタノール（４／２／１、２４．５ｍＬ）で洗浄した。６０℃で減圧乾燥することにより、表題化合物（２．８０ｇ、＞９９．９％ｅｅ）を得た。
^１Ｈ　ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ１．４０（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．６２Ｈｚ），４．３３（１Ｈ，ｓ），５．７３（１Ｈ，ｂｒ　ｓ），５．９７（１Ｈ，ｑ，Ｊ＝６．６２Ｈｚ），６．２９（２Ｈ，ｂｒ　ｓ），７．３７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．５１Ｈｚ），８．１７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．８３Ｈｚ），８．５４（１Ｈ，ｓ）．

（２）［ＲｕＣｌ_２（ｂｅｎｚｅｎｅ）］_２（３３８．５ｇ）、（Ｒ）－ＰＨＡＮＥＰＨＯＳ（９３６．６ｇ）、４－アセチル－６－クロロ－１，５－ナフチリジン－３－アミン（１５．０ｋｇ）を５００Ｌ加圧反応機に仕込み、窒素置換した後に、シクロヘキシルアミン（３．３６ｋｇ）と脱酸素エタノール（４７４ｋｇ）の混合物を加えた。水素圧０．５ＭＰａとした後、６０℃に加熱した。水素圧を０．９５ＭＰａとした後に６０℃で２３時間撹拌した。３０℃に冷却したのちに水素を逃がし、約１５０Ｌに減圧濃縮した。
　残留物に４Ｍ塩酸（２３．７ｋｇ）を加え、混合物を室温で３時間撹拌した。得られた固体をろ取し、エタノール（８３．０ｋｇ）で洗浄した。固体を６０℃で減圧乾燥することにより、１４．０ｋｇの固体を得た。得られた固体と水（４９０ｋｇ）の混合物を３５分撹拌した。固体をろ別し、水（７０Ｌ）で洗浄した。濾液に酢酸イソプロピル（１２２．２ｋｇ）と８Ｍ水酸化ナトリウム水溶液（７．０ｋｇ）を室温で加え、混合物を撹拌した。有機層を分離し、４０℃に加温した後に、Ｄ－（－）－酒石酸（４．８５ｋｇ）のエタノール（２７．７ｋｇ）溶液を加えた。ヘプタン（７１．８ｋｇ）を加え、混合物を４０℃で３時間、室温で６１時間撹拌した。得られた固体をろ取し、酢酸イソプロピル／ヘプタン／エタノール（４／２／１、７９．１ｋｇ）で洗浄した。６０℃で減圧乾燥することにより、９．５ｋｇの固体を得た。得られた固体９．３ｋｇとエタノール（８２．５ｋｇ）を７０℃に加温し溶解した。同温度でヘプタン（１２２．０ｋｇ）を加え６０℃付近で８時間熟成後に１３時間かけて２０℃まで冷却した。得られた固体をろ取し、ヘプタン／エタノール（３／１、２６．４ｋｇ）で洗浄した。６０℃で減圧乾燥することにより、表題化合物（６．０ｋｇ、＞９９．９％ｅｅ）を得た。

実施例３
（Ｓ）－６－クロロ－４－（１－メトキシエチル）－１，５－ナフチリジン－３－アミン

　（Ｓ）－６－クロロ－４－（１－ヒロドキシエチル）－１，５－ナフチリジン－３－アミン（３．２７ｇ）のＴＨＦ（３３ｍＬ）溶液に６０％水素化ナトリウム（６１３．８ｍｇ）を０℃で加え、同温度で３０分間撹拌した。反応混合物にヨウ化メチル（２．３９ｇ）を０℃で加え、室温で２時間撹拌した。反応混合物を氷水にあけ、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧下濃縮した。合わせた残渣をメチルｔｅｒｔ－ブチルエーテルに５０℃で溶解し、ヘキサンを同温度で加え、１時間撹拌した。さらに室温で終夜撹拌した後、得られた固体を濾取し、ヘキサンで洗浄することにより、表題化合物（１．６９ｇ、９９．９％ｅｅ）を得た。
ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］^＋　２３８．０．

実施例４
（Ｓ）－６－クロロ－４－（１－メトキシエチル）－１，５－ナフチリジン－３－アミン

（１）（Ｓ）－６－クロロ－４－（１－ヒロドキシエチル）－１，５－ナフチリジン－３－アミン　ヘミ（Ｄ）－（－）－酒石酸塩（１．０ｇ）とアセトニトリル（２０ｍＬ）の混合物を５℃に冷却し、ナトリウムｔｅｒｔ－ブトキシド（９６５．２ｍｇ）を加えた。１０分後に、ｐ－トルエンスルホン酸メチル（０．５０７ｍＬ）を加え、３時間撹拌した。ナトリウムｔｅｒｔ－ブトキシド（６４．３ｍｇ）を加え、１時間撹拌した。水（５ｍＬ）を加え、混合物を１０ｍＬになるまで減圧濃縮した後、水（１５ｍＬ）を加えた。得られた懸濁液を室温で撹拌し、固体をろ取した。得られた固体を水（５ｍＬ）で洗浄し、６０℃で減圧乾燥することにより、表題化合物（５８４．８ｍｇ）を得た。
^１Ｈ　ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ１．４２（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．９４Ｈｚ），３．２１（３Ｈ，ｓ），５．６２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．６２Ｈｚ），６．２０（２Ｈ，ｓ），７．３８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．５１　Ｈｚ），８．１８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．５１Ｈｚ），８．５６（１Ｈ，ｓ）．

（２）（Ｓ）－６－クロロ－４－（１－ヒロドキシエチル）－１，５－ナフチリジン－３－アミン　ヘミ（Ｄ）－（－）－酒石酸塩（５．８ｋｇ）とアセトニトリル（９１．０ｋｇ）とＤＭＦ（２７．４ｋｇ）の混合物を５０℃に加熱し５０分間撹拌した。５℃に冷却し、ナトリウムｔｅｒｔ－ブトキシド（４．７ｋｇ）を加え、ｐ－トルエンスルホン酸メチル（３．７ｋｇ）を加え、４時間撹拌した。ナトリウムｔｅｒｔ－ブトキシド（０．２ｋｇ）を加え２時間撹拌した。２５℃に加温し２時間撹拌後に水（２９．０ｋｇ）を加えた。混合物を３０Ｌになるまで減圧濃縮した後、水（１２８ｋｇ）を加えた。６Ｍ塩酸水溶液を加えてｐＨを５に調整した。４時間撹拌し、固体をろ取した。得られた固体を水（５８ｋｇ）で洗浄し、６０℃で減圧乾燥することにより、表題化合物（３．６８ｋｇ）を得た。

実施例５
（Ｓ）－Ｎ－（６－クロロ－４－（１－メトキシエチル）－１，５－ナフチリジン－３－イル）－Ｎ’－（６－（２Ｈ－１，２，３－トリアゾール－２－イル）－５－（トリフルオロメチル）ピリジン－３－イル）尿素

　トリホスゲン（１７．４８ｇ）のＴＨＦ（２８０ｍＬ）の溶液に、（Ｓ）－６－クロロ－４－（１－メトキシエチル）－１，５－ナフチリジン－３－アミン（２８ｇ）およびＤＩＥＡ（６１．５６ｍＬ）を０℃で加え、反応混合物を同温度で１時間撹拌した。反応混合物に６－（２Ｈ－１，２，３－トリアゾール－２－イル）－５－（トリフルオロメチル）ピリジン－３－アミン（２９．７ｇ）を０℃で加え、反応混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物を水にあけ、水層を酢酸エチル／ＴＨＦで抽出した。有機層を水、次いで飽和食塩水で洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、溶媒を減圧下留去した。残渣を酢酸エチルに７０℃で溶解し、不溶物をセライト濾過した。濾液にＮＨシリカゲルを加え、７０℃で１時間撹拌した後、不溶物を濾過し、減圧下濃縮した。残渣を酢酸エチルに７０℃で溶解させ、混合溶液にｎ－ヘプタンを同温度で滴下した。混合溶液を同温度で１時間撹拌した後、室温まで冷却し、同温度で終夜撹拌した。析出物を濾取し、ｎ－ヘプタンで洗浄し、標題化合物（４１．３ｇ、９９．５％ｅｅ）を得た。
^１Ｈ　ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ１．５６（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），３．３６（３Ｈ，ｓ），５．７５－５．９４（１Ｈ，ｍ），７．７７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ），８．１８（２Ｈ，ｓ），８．４６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ），８．７４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．６Ｈｚ），８．８９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ），９．２４（１Ｈ，ｓ），９．６９（１Ｈ，ｓ），１０．８９（１Ｈ，ｂｒ　ｓ）．
ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］^＋　４９３．２．

実施例６
（Ｓ）－Ｎ－（６－クロロ－４－（１－メトキシエチル）－１，５－ナフチリジン－３－イル）－Ｎ’－（６－（２Ｈ－１，２，３－トリアゾール－２－イル）－５－（トリフルオロメチル）ピリジン－３－イル）尿素

（１）窒素雰囲気下、（Ｓ）－６－クロロ－４－（１－メトキシエチル）－１，５－ナフチリジン－３－アミン（３．００ｇ）、フェニル　６－（２Ｈ－１，２，３－トリアゾール－２－イル）－５－（トリフルオロメチル）ピリジン－３－アミノカーバメート（５．２９ｇ）をＤＭＦ（１５ｍＬ）に１００℃で溶かし、得られた混合物を同温度で４時間撹拌した。室温まで冷却し、エタノール（９ｍＬ）と水（５１ｍＬ）を加えた。得られた懸濁液を室温で２時間撹拌した。
　得られた固体をろ取し、エタノール／水（１／１、１５ｍＬ）で洗浄し、窒素をふきつけて乾燥した。得られた固体を酢酸エチル（４５ｍＬ）に７０℃で溶解した。不溶物を同温度でろ過し、濾液を２１ｍＬまで濃縮した。残留物を７０℃に加温し、ヘプタン（６０ｍＬ）を加え、混合物を５℃で２時間撹拌した。得られた固体をろ取し、酢酸エチル／ヘプタン（１／１、２４ｍＬ）で洗浄した。固体を６０℃で減圧乾燥することにより、表題化合物（４．６３ｇ、９９．１％ｅｅ）を得た。
^１Ｈ　ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ１．５７（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．６２Ｈｚ），３．３８（３Ｈ，ｓ），５．８６（１Ｈ，ｑ，Ｊ＝６．６２Ｈｚ），７．７６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．８３Ｈｚ），８．２０（２Ｈ，ｓ），８．４５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．８３Ｈｚ），８．７５（１Ｈ，ｓ），８．９０（１Ｈ，ｓ），９．２６（１Ｈ，ｓ），９．７０（１Ｈ，ｓ），１０．９１（１Ｈ，　ｂｒ　ｓ）．　^１３Ｃ　ＮＭＲ（１２６ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ１９．７６，５７．２８，７３．６６，１２０．９１，１２１．１７，１２１．４７，１２３．６４，１２４．７８，１２５．４０，１２５．４５，１３１．８９，１３４．４３，１３６．９４，１３８．１７，１３８．６４，１４１．１９，１４１．６０，１４１．６５，１４２．１０，１４８．０５，１５０．３７，１５２．６０．

（２）窒素雰囲気下、（Ｓ）－６－クロロ－４－（１－メトキシエチル）－１，５－ナフチリジン－３－アミン（３．６ｋｇ）、フェニル　６－（２Ｈ－１，２，３－トリアゾール－２－イル）－５－（トリフルオロメチル）ピリジン－３－アミノカーバメート（６．６ｋｇ）をＤＭＦ（１７．０ｋｇ）に１００℃で溶かし、得られた混合物を同温度で９時間２０分撹拌した。室温まで冷却し、エタノール（８．５ｋｇ）と水（６１．０ｋｇ）を加えた。得られた懸濁液を室温で３時間２０分撹拌した。得られた固体をろ取し、エタノール／水（１／１、１４．１ｋｇ）で洗浄し、６０℃で減圧乾燥した。得られた固体（７．６ｋｇ）を酢酸エチル（４８．０ｋｇ）に加え、７０℃で３時間撹拌した。不溶物を同温度でろ過し、酢酸エチル（１８０．０ｋｇ）で洗浄した。ろ洗液を７２Ｌまで減圧濃縮した。７０℃に加温し、ヘプタン（７２．０ｋｇ）を加え、同温度で１時間撹拌した。混合物を５℃に冷却し５時間撹拌した。得られた固体をろ取し、酢酸エチル／ヘプタン（１／１、２４．０ｋｇ）で洗浄した。固体を６０℃で減圧乾燥することにより、表題化合物（４．２０ｋｇ）を得た。得られた固体（４．１ｋｇ）を酢酸エチル（３２．２ｋｇ）に加え、７０℃で１５分間撹拌した。不溶物を同温度でろ過し、酢酸エチル（８．０ｋｇ）で洗浄した。ろ洗液を７０℃に加温し、ヘプタン（４７．０ｋｇ）を加え、同温度で１時間撹拌した。混合物を５℃に冷却し５時間撹拌した。得られた固体をろ取し、酢酸エチル／ヘプタン（１／１、１３．０ｋｇ）で洗浄した。固体を６０℃で減圧乾燥することにより、表題化合物（３．３２ｋｇ、＞９９．９％ｅｅ）を得た。

［化合物（Ｘ）のＭＡＬＴ１阻害活性等について］
試験例１
（１）組換え型ヒトＭＡＬＴ１タンパク質の調製
　ヒトＭＡＬＴ１遺伝子はＧＣ－０３０－Ｄ０９（ｐＥＮＴＲ２２１／ＭＡＬＴ１、ＧｅｎｅＣｏｐｏｅｉａ）を鋳型にＮ末にＢａｍＨ　ＩとＣ末にＮｏｔ　Ｉの制限酵素を付加したプライマーでＰＣＲを行いヒトＭＡＬＴ１（３４０－７８９ａａ）、二量体を形成させるために酵母ＧＣＮ４のロイシンジッパー遺伝子は酵母ＤＮＡを鋳型にＮ末にＮｄｅ　ＩとＣ末にＬｉｎｋｅｒ配列（ＧＧＡＡＧＴＧＧＣＴＣＡＧＧＴＡＧＣ：配列番号１）とＢａｍＨ　Ｉの制限酵素を付加したプライマーでＰＣＲを行い酵母ＧＣＮ４（２５１－２８１ａａ）を得た。得られた両断片を制限酵素処理して、ｐＥＴ２８ａ（Ｎｏｖａｇｅｎ）ベクターのＮｄｅ　Ｉ　とＮｏｔ　Ｉの間に挿入して、組換え型ヒトＭＡＬＴ１タンパク質発現ベクターｐＥＴ２８ａ／Ｈｉｓ－ＬＺ－ｈＭＡＬＴ１ｖ１（３４０－７８９）－Ｈｉｓを得た。
　組換え型ヒトＭＡＬＴ１タンパク質の調製は、上記で作製した発現プラスミドをＥＣＯＳ　Ｃｏｍｐｅｔｅｎｔ　Ｅ．ｃｏｌｉ　ＢＬ２１（ＤＥ３）（ニッポンジーン社）に形質転換させて行った。形質転換して得られた大腸菌を３００ｍＬのＬＢ培地（１％トリプトン、０．５％酵母エキス、０．５％塩化ナトリウム、０．０１％アンピシリン）に接種し、３０℃で１６時間培養した。得られた培養液を６Ｌの主発酵用培地（０．３％リン酸二水素カリウム、０．６％リン酸水素二ナトリウム、０．１％塩化アンモニウム、０．０５％塩化ナトリウム、０．０２４％硫酸マグネシウム、０．０１％Ａｎｔｉｆｏａｍ　ＰＥ－Ｌ、１．５％ソルビトール、１．５％カザミノ酸、０．５％酵母エキス、０．０１％アンピシリン）を含むジャー培養槽に移植して、３７℃、通気量５Ｌ／ｍｉｎ、撹拌回転数４００ｒｐｍで培養を開始した。培養液の濁度が約５００クレット単位になった時点で、培養温度を１６℃に下げた後イソプロピル－β－Ｄ－チオガラクトピラノシド（ＩＰＴＧ）を終濃度０．１ｍＭとなるように添加し、さらに１６時間培養を行うことでヒトＭＡＬＴ１タンパク質の誘導発現を行った。培養終了後、培養液を５，０００ｒｐｍ、１０ｍｉｎで遠心分離し、得られたヒトＭＡＬＴ１タンパク質発現大腸菌を５０ｍＭ　Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ　ｐＨ８．０、３００ｍＭ　ＮａＣｌ、５ｍＭ　ＤＴＴ、５Ｕ／ｍｌ　Ｂｅｎｚｏｎａｓｅ、２０ｍＭ　Ｉｍｉｄａｚｏｌｅ、１０％　ｇｌｙｃｅｒｏｌ、０．１％　ＮＰ－４０を含む緩衝液に懸濁後、ソニファイアー（ブランソン社）を用いて超音波処理を行った。この破砕液を遠心分離（１５，３００×Ｇ、３０ｍｉｎ、ＴＯＭＹ　ＭＸ－３０１）し、得られた上清を予め５０ｍＭ　Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ　ｐＨ８．０、３００ｍＭ　ＮａＣｌ、５ｍＭ　ＤＴＴ、１０％　ｇｌｙｃｅｒｏｌで平衡化したＮｉ－ＮＴＡ　Ｓｕｐｅｒｆｌｏｗ（ＱＩＡＧＥＮ社）カラムに通液して吸着させた後、５０ｍＭ　Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ　ｐＨ８．０、３００ｍＭ　ＮａＣｌ、５ｍＭ　ＤＴＴ、１０％　ｇｌｙｃｅｒｏｌ、２５０ｍＭ　Ｉｍｉｄａｚｏｌｅを含む緩衝液で溶出させた。更に予め５０ｍＭ　Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ　ｐＨ８．０、１５０ｍＭ　ＮａＣｌ、５ｍＭ　ＤＴＴ、１０％　ｇｌｙｃｅｒｏｌを含む緩衝液で平衡化したＳｕｐｅｒｄｅｘ　２００ｐｇカラムでゲルろ過を行って目的とする画分を回収し、５０ｍＭ　Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ　ｐＨ８．０、１５０ｍＭ　ＮａＣｌ、５ｍＭ　ＤＴＴ、９０％　ｇｌｙｃｅｒｏｌを等量加え、精製ヒトＭＡＬＴ１タンパク質とした。調製したタンパク質は－３０℃で保存し、タンパク質濃度は、ＢＳＡをスタンダードとしてＢＣＡ　Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ａｓｓａｙ　Ｋｉｔ（ＰＩＥＲＣＥ社）を用いて測定した。

（２）ＭＡＬＴ１酵素阻害活性の測定
　３８４　ｗｅｌｌ　黒プレート（グライナー）へアッセイ緩衝液（２０ｍＭ　ＨＥＰＥＳ（同仁化学）、１０ｍＭ　ＫＣｌ（和光純薬）、１．５ｍＭ　ＭｇＣｌ_２（シグマアルドリッチ）、１ｍＭ　ＥＤＴＡ（ｐＨ　８．０）（ニッポンジーン）、０．０１％　ＴｒｉｔｏｎＸ－１００（シグマアルドリッチ）、１ｍＭ　ＤＴＴ（和光純薬））で希釈した化合物溶液２μＬを添加した。次に精製した組み換え型ヒトＭＡＬＴ１酵素溶液２μＬを添加し、６０分間、室温でインキュベートした。基質溶液（７５μＭ　Ａｃ－ＬＲＳＲ－ＡＦＣ（ＳＭ　バイオケミカルズ）、２０ｍＭ　ＨＥＰＥＳ（同仁化学）、１０ｍＭ　ＫＣｌ（和光純薬）、１．５ｍＭ　ＭｇＣｌ_２（シグマアルドリッチ）、１ｍＭ　ＥＤＴＡ（ｐＨ　８．０）（ニッポンジーン）、０．０１％　ＴｒｉｔｏｎＸ－１００（シグマアルドリッチ）、１ｍＭ　ＤＴＴ（和光純薬））２μＬを添加し、室温で６０分間インキュベートした。プレートリーダーＥｎｖｉｓｉｏｎ（パーキンエルマー）で基質添加直後および酵素反応後のＥｘｃｉｔａｔｉｏｎ　４００ｎｍ、Ｅｍｉｓｓｉｏｎ　４８５ｎｍの蛍光値を測定し、酵素反応で増加した蛍光値を阻害率（％）計算に用いた。阻害率（％）は、酵素無添加の値を１００％、化合物無添加の値を０％として算出した。
　以下にＭＡＬＴ１酵素阻害活性の測定結果を示す。

　この結果から、化合物（Ｘ）がＭＡＬＴ１酵素阻害活性を有することが示された。

試験例２
ＯＣＩ－Ｌｙ３細胞を用いた増殖阻害活性測定
　９６穴プレートに１．２５ｘ１０^３ｃｅｌｌｓ／ウェルとなるように、２０％　ＦＣＳ（ウシ胎児血清、サーモフィッシャー・サイエンティフィック）及びモノチオグリセロール（富士フイルム和光純薬）を含む細胞培養培地ＩＭＤＭ（富士フイルム和光純薬）にＯＣＩ－Ｌｙ３細胞を播種した。試験化合物を非添加の細胞に対してＣｅｌｌ　Ｔｉｔｅｒ－Ｇｌｏ溶液（プロメガ）を添加し、１５分間室温で撹拌した後、Ｅｎｖｉｓｉｏｎ（パーキンエルマー）で発光値を播種当日に測定した。ジメチルスルホキシド（富士フイルム和光純薬）で溶解した試験化合物を添加した細胞をＣＯ_２インキュベータ（３７℃）で６日間静置後、同様に発光値を測定した。試験化合物のＯＣＩ－Ｌｙ３細胞増殖に対する阻害率（％）は、下記の式にて算出した。
細胞増殖阻害率（％）＝（１－（試験化合物処理６日目の発光値－試験化合物処理前の発光値）÷（化合物非添加６日目の発光値－化合物処理前の発光値））×１００
　以下に細胞増殖阻害率の測定結果を示す。

　この結果から、化合物（Ｘ）が細胞増殖を阻害することが示された。

試験例３
ＯＣＩ－Ｌｙ３細胞担癌モデルに対する抗腫瘍作用
　ヒトびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫細胞ＯＣＩ－Ｌｙ３（ＤＳＭＺ，　Ｇｅｒｍａｎ
　Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ　ａｎｄ　Ｃｅｌｌ　Ｃｕｌｔｕｒｅｓ）をＭａｔｒｉｇｅｌ（ＢＤ　バイオサイエンス）：ＨＢＳＳ（サーモフィッシャー・サイエンティフィック）＝１：１の溶液に懸濁し、ＮＯＧ雌マウス（日本クレア）の腹部皮下に１ｘ１０^７　ｃｅｌｌｓ移植した。生着した腫瘍の腫瘍径を測定し、以下の式で腫瘍体積を算出した。
　腫瘍体積＝長径×短径×短径×（１／２）
　腫瘍体積が１２０ｍｍ^３前後の大きさに腫瘍が生着した個体を選び、１群あたり６匹を実験に使用した。試験化合物の０．５％メチルセルロース溶液（富士フイルム和光純薬）懸濁液を１０ｍｇ／ｋｇ（１０ｍＬ／ｋｇ）の用量で１日２回、３週間経口投与した。腫瘍体積は投与開始前日、及び３日から４日毎に経時的に測定し、２１日間投薬終了翌日に最終的に腫瘍径を測定し腫瘍体積を算出した。対照投与群と比較した試験化合物投与群の腫瘍増殖を平均腫瘍体積増加比率Ｔ／Ｃとし以下の式で算出した。
Ｔ／Ｃ＝（（試験化合物投与群の投与終了後の腫瘍体積－試験化合物投与群の投与開始前日の腫瘍体積）／（対照投与群の投与終了後の腫瘍体積－対照投与群の投与開始前日の腫瘍体積））ｘ１００
　試験化合物のＴ／Ｃを以下に示す。

　これらの結果から、化合物（Ｘ）がヒトびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫細胞ＯＣＩ－Ｌｙ３の皮下移植モデルにおいて抗腫瘍作用を持つことが示された。

　本発明は、工程数がより短く、キラルカラム精製といった煩雑な操作を必要とすることなく、高い光学純度を有する、新規なＭＡＬＴ１阻害剤である化合物（Ｘ）またはその塩を、効率良く大量に合成するための工業的製造方法を提供するものであり、医薬品産業の分野で有用である。

　本出願は、日本で出願された特願２０２０－０９２６８７（出願日：２０２０年５月２７日）を基礎としており、その内容は本明細書に全て包含されるものである。

Claims

　式（Ｂ－１）：

（式中、Ｒ_１はメチル基、および
Ｒ_２は、Ｃ_１－６アルキル基またはハロゲン原子を示す。）
で表される化合物（化合物（Ｂ－１））と光学活性な有機酸との塩を晶析することを特徴とする、式（Ｂ－２）：

（式中、Ｒ_１およびＲ_２は、それぞれ前記と同義である。）
で表される化合物またはその塩の製造方法。
　１）式（Ｂ－１）：

（式中、Ｒ_１はメチル基、および
Ｒ_２は、Ｃ_１－６アルキル基またはハロゲン原子を示す。）
で表される化合物（化合物（Ｂ－１））と光学活性な有機酸との塩を晶析して、式（Ｂ－２）：

（式中、Ｒ_１およびＲ_２は、それぞれ前記と同義である。）
で表される化合物（化合物（Ｂ－２））またはその塩を得て、
２）得られた化合物（Ｂ－２）またはその塩を、アルキル化反応に付すことを特徴とする、式（Ｃ）：

（式中、Ｒ_１およびＲ_２は、それぞれ前記と同義であり、および
Ｒ_３は、Ｃ_１－６アルキル基を示す。）
で表される化合物（化合物（Ｃ））またはその塩の製造方法。
　１）式（Ｂ－１）：

（式中、Ｒ_１はメチル基、および
Ｒ_２は、Ｃ_１－６アルキル基またはハロゲン原子を示す。）
で表される化合物（化合物（Ｂ－１））と光学活性な有機酸との塩を晶析して、式（Ｂ－２）：

（式中、Ｒ_１およびＲ_２は、それぞれ前記と同義である。）
で表される化合物（化合物（Ｂ－２））またはその塩を得て、
２）得られた化合物（Ｂ－２）またはその塩を、アルキル化反応に付して、式（Ｃ）：

（式中、Ｒ_１およびＲ_２は、それぞれ前記と同義であり、および
Ｒ_３は、Ｃ_１－６アルキル基を示す。）
で表される化合物（化合物（Ｃ））またはその塩を得て、
３）得られた化合物（Ｃ）またはその塩を、式（Ｄ）：

（式中、Ｒ_４は、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ_１－６アルキル基、および
Ｒ_７は、水素原子、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ_１－６アルコキシ基、またはニトロ基で置換されていてもよいアリールオキシカルボニル基をそれぞれ示す。）
で表される化合物（化合物（Ｄ））またはその塩と反応させることを特徴とする、式（Ｘ）：

（式中、Ｒ_１～Ｒ_４は、それぞれ前記と同義である。）
で表される化合物（化合物（Ｘ））またはその塩の製造方法。
　１）式（Ａ）：

（式中、Ｒ_１はメチル基、
Ｒ_２は、Ｃ_１－６アルキル基またはハロゲン原子、
Ｒ_５およびＲ_６は、それぞれ独立して、水素原子またはアミノ保護基を示す。）
で表される化合物またはその塩を、１）カルボニル基の不斉還元反応、または、２）カルボニル基の不斉還元反応およびアミノ保護基の脱離反応、に付して、式（Ｂ－１）：

（式中、Ｒ_１およびＲ_２はそれぞれ前記と同義である。）
で表される化合物（化合物（Ｂ－１））またはその塩を得て、
２）得られた化合物（Ｂ－１）と光学活性な有機酸との塩を晶析することを特徴とする、式（Ｂ－２）：

（式中、Ｒ_１およびＲ_２はそれぞれ前記と同義である。）
で表される化合物（化合物（Ｂ－２））またはその塩の製造方法。
　１）式（Ａ）：

（式中、Ｒ_１はメチル基、
Ｒ_２は、Ｃ_１－６アルキル基またはハロゲン原子、
Ｒ_５およびＲ_６は、それぞれ独立して、水素原子またはアミノ保護基を示す。）
で表される化合物（化合物（Ａ））またはその塩を、１）カルボニル基の不斉還元反応、または、２）カルボニル基の不斉還元反応およびアミノ保護基の脱離反応、に付して、式（Ｂ－１）：

（式中、Ｒ_１およびＲ_２はそれぞれ前記と同義である。）
で表される化合物（化合物（Ｂ－１））またはその塩を得て、
２）得られた化合物（Ｂ－１）と光学活性な有機酸との塩を晶析して、式（Ｂ－２）：

（式中、Ｒ_１およびＲ_２はそれぞれ前記と同義である。）
で表される化合物（化合物（Ｂ－２））またはその塩を得て、
３）得られた化合物（Ｂ－２）またはその塩を、アルキル化反応に付して、式（Ｃ）：

（式中、Ｒ_１およびＲ_２は、それぞれ前記と同義であり、および
Ｒ_３は、Ｃ_１－６アルキル基を示す。）
で表される化合物（化合物（Ｃ））またはその塩を得て、
４）得られた化合物（Ｃ）またはその塩を、式（Ｄ）：

（式中、Ｒ_４は、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ_１－６アルキル基、および
Ｒ_７は、水素原子、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ_１－６アルコキシ基、またはニトロ基で置換されていてもよいアリールオキシカルボニル基をそれぞれ示す。）
で表される化合物（化合物（Ｄ））またはその塩と反応させることを特徴とする、式（Ｘ）：

（式中、Ｒ_１～Ｒ_４は、それぞれ前記と同義である。）
で表される化合物（化合物（Ｘ））またはその塩の製造方法。
　光学活性な有機酸が、Ｄ－（－）－酒石酸、Ｌ－（＋）－酒石酸、（Ｓ）－（－）－２－ピリドン－５－カルボン酸、（Ｒ）－（＋）－２－ピリドン－５－カルボン酸、Ｌ－リンゴ酸、Ｄ－リンゴ酸、（Ｓ）－（＋）－カンファー－１０－スルホン酸、（Ｒ）－（－）－カンファー－１０－スルホン酸、（Ｓ）－（＋）－２－（６－メトキシ－２－ナフチル）プロピオン酸、（Ｒ）－（－）－２－（６－メトキシ－２－ナフチル）プロピオン酸、（＋）－ｃｉｓ－２－ベンズアミドシクロヘキサンカルボン酸、（－）－ｃｉｓ－２－ベンズアミドシクロヘキサンカルボン酸、デヒドロアビエチン酸、（Ｒ）－（－）－Ｎ－（３，５－ジニトロベンゾイル）－α－フェニルグリシン、（Ｓ）－（＋）－Ｎ－（３，５－ジニトロベンゾイル）－α－フェニルグリシン、Ｄ－（－）－キナ酸およびＬ－（＋）－キナ酸から選択される、請求項１～５のいずれか１項に記載の製造方法。
　光学活性な有機酸が、Ｄ－（－）－酒石酸である、請求項１～５のいずれか１項に記載の製造方法。
　式（Ｃ）：

（式中、Ｒ_１はメチル基、
Ｒ_２は、Ｃ_１－６アルキル基またはハロゲン原子、および
Ｒ_３は、Ｃ_１－６アルキル基を示す。）
で表される化合物（化合物（Ｃ））またはその塩を、式（Ｄ）：

（式中、Ｒ_４は、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ_１－６アルキル基、および
Ｒ_７は、水素原子、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ_１－６アルコキシ基、またはニトロ基で置換されていてもよいアリールオキシカルボニル基をそれぞれ示す。）
で表される化合物（化合物（Ｄ））またはその塩と反応させることを特徴とする、式（Ｘ）：

（式中、Ｒ_１～Ｒ_４は、それぞれ前記と同義である。）
で表される化合物（化合物（Ｘ））またはその塩の製造方法。
１）式（Ｂ－２）：

（式中、Ｒ_１はメチル基、および
Ｒ_２は、Ｃ_１－６アルキル基またはハロゲン原子を示す。）
で表される化合物（化合物（Ｂ－２））またはその塩を、アルキル化反応に付して、式（Ｃ）：

（式中、Ｒ_１およびＲ_２は、それぞれ前記と同義であり、および
Ｒ_３は、Ｃ_１－６アルキル基を示す。）
で表される化合物（化合物（Ｃ））またはその塩を得て、
２）得られた化合物（Ｃ）またはその塩を、式（Ｄ）：

（式中、Ｒ_４は、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ_１－６アルキル基、および
Ｒ_７は、水素原子、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ_１－６アルコキシ基、またはニトロ基で置換されていてもよいアリールオキシカルボニル基をそれぞれ示す。）
で表される化合物（化合物（Ｄ））またはその塩と反応させることを特徴とする、式（Ｘ）：

（式中、Ｒ_１～Ｒ_４は、それぞれ前記と同義である。）
で表される化合物（化合物（Ｘ））またはその塩の製造方法。
　式（Ｃ）：

（式中、Ｒ_１はメチル基、
Ｒ_２は、Ｃ_１－６アルキル基またはハロゲン原子、および
Ｒ_３は、Ｃ_１－６アルキル基を示す。）
で表される化合物（化合物（Ｃ））またはその塩。