WO2021107013A1 - アジュバント組成物 - Google Patents

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英啓 福山
亮太 佐藤
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国立研究開発法人理化学研究所
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    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00

Definitions

  • the present invention relates to an adjuvant composition.
  • Vaccines are one of the greatest inventions in preventive medicine in the history of human health.
  • the number of patients and deaths of the ten major diseases that can be prevented by the vaccine such as measles, mumps, whooping cough, gray myelitis, rubella, smallpox, and tetanus, was recommended by the vaccine in the United States before 1980. As a result, it decreased by 92% and 98% or more.
  • Other infectious diseases, hepatitis A, acute hepatitis B, Haemophilus influenzae type b (HPV), chickenpox cases and deaths were 87% and 81 due to vaccine recommendations in the United States between 1980 and 2005. It decreased by more than%.
  • the adjuvant enhances the immune response and reduces the antigen load.
  • Aluminum salt (Alum) is the only adjuvant that has been approved for human use for 80 years.
  • Alum is the major adjuvant used in many vaccines, including diphtheria, whooping cough, tetanus, HPV, poliomyelitis and acute hepatitis B. Although this long-term adjuvant, Alum, has shown excellent results in vaccine efficacy, it has some side effects. These are arthralgia, fatigue, fever, headache, GI and myalgia, and local pain, redness, and swelling throughout the body.
  • Vitamin D3 is a biomolecule and plays an important role in the homeostasis of calcium and phosphate, and analogs such as oxalol are used in the treatment of psoriasis.
  • Patent Document 1 describes that the antibody response is enhanced when administered 1,25 (OH) 2 D 3 after vaccination with aluminum hydroxide adjuvant (Alum).
  • Al hydroxide adjuvant Alum
  • the use as adjuvants alone in place of 1,25 (OH) 2 D 3 in Alum has not been described or suggested.
  • the present invention provides a novel adjuvant composition.
  • the present inventor has discovered for the first time that a vitamin D compound has an adjuvant action, that is, it targets CD11c + cells in the epidermis and increases germinal center B cells, memory B cells and TFH cells.
  • the present invention is as follows. [1] The composition, which is an adjuvant composition containing a vitamin D compound and is not used in combination with an aluminum salt. [2] The composition of [1], wherein the vitamin D compound is active vitamin D 3 , active vitamin D 2, or a derivative thereof. [3] The composition of [1], wherein the vitamin D compound is maxacalcitol. [4] The composition of [1], which is for intradermal administration or nasal administration.
  • a method for stimulating an immune response in a subject which comprises administering a vitamin D compound to a subject who has not been administered an aluminum salt as an adjuvant.
  • the method of [9] wherein the vitamin D compound is active vitamin D 3 , active vitamin D 2, or a derivative thereof.
  • the adjuvant composition of the present invention can enhance the immunogenicity of the vaccine.
  • Transdermal application of oxalol protects against death from viral challenge. After vaccination under different conditions, mice vaccinated with the H1N1 A / California / 04/2009 strain were infected with the same type of virus. The survival rate was shown. The number of individuals is 5 per group. Representative examples of the results of two independent experiments are shown. Transdermal application of oxalol protects against infectious diseases. After vaccination under different conditions, mice vaccinated with the H1N1 A / California / 04/2009 strain were infected with the same type of virus. It showed a change in body weight. The number of individuals is 5 per group. Representative examples of the results of two independent experiments are shown. Transdermal application of oxalol enhances the recall liquid response.
  • influenza vaccine antigen was injected intraperitoneally without adjuvant for boosting.
  • Antigen-specific memory B cells expand after oxalol-assisted immunization. After hapten immunization under different conditions, the number of hapten-positive IgG1 + CD38 + GL7 - B cells in the auricular lymph nodes was determined by total lymphocyte counts and flocymetry analysis in the auricular lymph nodes.
  • Follicular T cells expand after immunization adjuvanted with oxalol.
  • CD4 + CXCR5 + PD-1 + FoxP in auricular lymph node - the number of TFH cells was determined by counting and flow cytometry analysis of total lymphocytes in auricular lymph nodes.
  • Antigen-specific GCB cells proliferated after oxalol adjuvant immunization.
  • total lymphocytes in the auricular lymph nodes were counted and flow cytometric analysis was performed to determine the number of hapten-positive CD38- GL7 + B cells in the auricular lymph nodes.
  • Vdr expression in keratinocytes for germinal center B cell proliferation Conditional Vdr knockout mice or Cre- littermates driven by hLangerin-Cre, CD11c-Cre, K5-Cre were immunized with NP-CGG / Oxarol on the skin of the ears. The total number of NIP + CD38 - GL7 + B220 + cells in the auricular lymph nodes is shown. Decreased serum anti-NP antibody titer in K5-Vdr cKO mice.
  • Anti-NP IgG1 titers were measured by ELISA at the time indicated.
  • NP 30 and NP 0.43 as hapten antigens were used to detect low and high affinity anti-NP antibodies, respectively.
  • the vitamin D compound is a kind of vitamin, which is a fat-soluble steroid derivative secosteroid, which is similar to natural vitamin D2 and natural vitamin D3 having different side chain structures, and artificially synthesized vitamins which can be active vitamins.
  • the vitamin D compound of the present invention is preferably active vitamin D 3 , active vitamin D 2 , or a derivative thereof, and more preferably oxalol.
  • the adjuvant refers to a substance used to enhance the immunogenicity of a vaccine. More preferably, it refers to a substance that is injected with a vaccine and used to enhance its immunogenicity.
  • any conventionally known administration system can be used. Intradermal or nasal administration is preferred.
  • the aluminum salt refers to a mixture containing AlOOH, Al (OH) 3 , AlPO 4 , AlK (SO 4 ) 2 ⁇ 12H 2 O and the like, which contains a trivalent aluminum salt.
  • the aluminum salt of the present invention preferably an aluminum salt containing Al (OH) 3 , is more preferably Imject® Alum.
  • composition of the present invention may be further formulated with a pharmaceutically acceptable carrier.
  • “Pharmaceutically acceptable” has the meaning commonly used in the pharmaceutical industry and, in some cases, a molecular entity or composition that does not cause an allergic or similar adverse reaction when administered to humans. Etc. can be used.
  • the preparation of aqueous compositions containing a protein as an active ingredient is well understood in the art. Typically, such compositions are prepared as injections, in liquid solutions or suspensions, and solid dosage forms suitable for dissolution or suspension in liquid prior to injection can also be prepared. The preparation can also be emulsified.
  • Carriers include any and all solvents, dispersion media, vehicles, coatings, diluents, antibacterial and antifungal agents, isotonic and absorption retarders, buffers, carrier solutions, suspensions, colloids, etc. be able to.
  • Carriers include buffers of phosphates, citrates, and other organic acid salts; antioxidants containing ascorbic acid; low molecular weight (less than about 10 amino acid residues) polypeptides; proteins (eg serum albumin, gelatin, etc.) Or immunoglobulins); hydrophobic polymers (eg polyvinylpyrrolidone); amino acids (eg glycine, glutamine, asparagine, arginine or lysine); monosaccharides, disaccharides and other carbohydrates including glucose, mannitol or dextran; chelates such as EDTA Agents; sugar alcohols such as mannitol or sorbitol; salt-forming counterions such as sodium; and / or nonionic surfactants (eg, polyoxyalkylenes).
  • antioxidants containing ascorbic acid eglycine, glutamine, asparagine, arginine or lysine
  • monosaccharides, disaccharides and other carbohydrates including glucose,
  • composition of the present invention can contain various surfactants used in the formulation.
  • the type of the surfactant is not particularly limited, and a nonionic surfactant, a cationic surfactant, an anionic surfactant, or an amphoteric surfactant can be mentioned.
  • NP-CGG was produced by binding 4-hydroxy-3-nitrophenylacetic acid active ester to chicken gamma globulin (Rockland) (LGC biosearch technology).
  • the adjuvant Oxalol ointment and Imject® Alum adjuvant were purchased from Chugai and Thermo Fisher Scientific, respectively. An ointment containing 2.5 ⁇ g maxacalcitol or a solution containing 2.5 ⁇ g aluminum hydroxide was administered to the ears of mice.
  • Influenza Infection Study 50 ⁇ L (2 x LD 50 ) of influenza H1N1 A / California / 04/2009 virus solution was intranasally administered to mice under anesthesia, followed by body weight and survival monitoring for 14 days.
  • the Foxp3 intracellular staining kit (Catalog 88-8824-00) was purchased from eBioscience. Staining with various antibodies including NIP (4-hydroxy-3-iodo-5-nitrophenylacetic acid) -APC (self-made). Dead cells were stained with 7-aminoactinomycin D (7-AAD) and excluded. Stained cells were analyzed using FACSCanto® II (BD bioscience). Data were analyzed using FlowJo® software (FlowJo, LLC).
  • Enzyme-linked immunosorbent assay A 96-well ELISA plate (Thermo Scientific) was coated with an antigen solution in PBS at a concentration of 1 ⁇ g / mL for the H1N1 A / California / 04/2009 split vaccine. After antigen binding, non-specific binding was blocked using Blocking One (Nacalai Tesque). A serially diluted serum sample and standard serum were then added, followed by a goat anti-mouse IgG1 antibody (Southern Biotech) conjugated to HRP. The antibody titer of each serum sample was calculated based on the standard curve.
  • mice C57BL / 6JJcl mice were presented by CLEA Japan, Inc. I bought from. Vdr-floxed mice, hLangerin-Cre BAC transgenic mice, K5-Cre transgenic mice, B6. Cg-Tg (Itgax-Cre) 1-1Reiz / J (Cd11c-Cre) transgenic mice were used in this study. All animal experiments were performed using a protocol approved by RIKEN IMS Instrumental Animal Care.
  • RNA-sequencing TRIzol TM reagent was used to extract RNA from the skin of the mouse ear.
  • a cDNA library was generated using the NEBNext Ultra RNA Library Preparation Kit (NEB) for Illumina. Sequencing was performed on a HiSeq 2500 sequencer (Illumina) in 50 bp single-ended read mode. Sequencing reads were trimmed for adapter sequences, masked for low complexity or low quality sequences, and mapped to the reference genome (mm9) using Bowtie2v2.1.0 and TopHat2v2.0.8. The amount of transcript was estimated using Cufflinks v2.1.1 as an FPKM (fragment per kilobase of mapped exon million fragments) value.
  • the adjuvant composition of the present invention is useful for enhancing the immunogenicity of a vaccine.

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Abstract

本発明は、ビタミンＤ化合物を含み、アルミニウム塩と併用しない、アジュバント組成物に関する。

Description

アジュバント組成物
　本発明は、アジュバント組成物に関する。
　ワクチンは、ヒトの健康の歴史の中で予防医学における最大の発明の一つである。ワクチンで予防可能な十大疾患、たとえば、麻疹、流行性耳下腺炎、百日咳、灰白髄炎、風疹、天然痘、及び破傷風の患者数及び死者数は、米国において１９８０年前にワクチンが推奨されたことによって９２％及び９８％以上減少した。他の感染性疾患、Ａ型肝炎、急性Ｂ型肝炎、インフルエンザ菌ｂ型（ＨＰＶ）、水痘の患者数及び死者数は、米国において１９８０～２００５年にワクチンが推奨されたことによって８７％及び８１％以上減少した。アジュバントは、免疫応答を高め、抗原負荷を減少させる。アルミニウム塩（Ａｌｕｍ）は、８０年間ヒトへの使用が認められている唯一のアジュバントである。
　今日においても、Ａｌｕｍは、ジフテリア、百日咳、破傷風、ＨＰＶ、灰白髄炎及びＢ型急性肝炎を含む、多くのワクチンに使用されている主要なアジュバントである。この長期に渡るアジュバントであるＡｌｕｍがワクチン有効性における優れた結果を示しているが、いくつかの副作用がある。これらは、全身における、関節痛、疲労、発熱、頭痛、ＧＩ及び筋肉痛、及び局所における疼痛、発赤、及び腫れである。
　ワクチン接種における副作用の社会的関心は、近頃高まっている。具体的には、ＨＰＶワクチン接種が、理論的には、１年当たり頸がん、肛門がん、膣がん、陰茎がん又は口腔咽頭がんを全世界で５００，０００件以上予防することができるにもかかわらず、ＨＰＶワクチン接種を受けた十代の子供の親が、頻繁に副作用に言及し、ワクチン接種が減少したことから、新しいＨＰＶワクチンの公衆への導入が阻止されている。これらの副作用は、主として、Ａｌｕｍによって生じた炎症が原因である。難しさは、免疫応答の強化は、有害な副作用と正に相関しており、分離不可能なことである。Ａｌｕｍ及び治験中の新しいアジュバントは、炎症を生じ、上記の副作用を生じる。ＨＰＶワクチン接種拒否に関する風評被害は、たとえば、麻疹の再発をもたらしている。アジュバントの副作用への公衆の関心の高まりを考慮すると、ワクチンの有効性を維持しつつ、局所及び全身の副作用をどのように最小限にするかを理解する必要性が、より高まっている。
　ビタミンＤ３は、生体分子であり、カルシウム及びリン酸の恒常性に重要な役割を奏し、オキサロールのようなアナログは、乾癬の治療に用いられている。
　特許文献１には、水酸化アルミニウムアジュバント（Ａｌｕｍ）を伴ったワクチン接種後に１，２５（ＯＨ）２Ｄ３を投与すると抗体応答が増強されることが記載されている。しかし、１，２５（ＯＨ）２Ｄ３をＡｌｕｍに代えて単独でアジュバントとして使用することは記載も示唆もされていない。
ＷＯ９４／１７８２３
　本発明は、新規アジュバント組成物を提供する。
　本発明者は、ビタミンＤ化合物が、アジュバント作用を有していること、すなわち、表皮のＣＤ１１ｃ＋細胞を標的として、胚中心Ｂ細胞、記憶Ｂ細胞及びTFH細胞を増加させることを初めて見出し、本発明を完成させた。すなわち、本発明は、以下のとおりである。
［１］ビタミンＤ化合物を含む、アジュバント組成物であって、アルミニウム塩と併用しない、前記組成物、
［２］ビタミンＤ化合物が、活性型ビタミンＤ３、活性型ビタミンＤ２、又はその誘導体である、［１］の組成物、
［３］ビタミンＤ化合物が、マキサカルシトールである、［１］の組成物、
［４］皮内投与又は経鼻投与のためである、［１］の組成物、
［５］アジュバントとしての使用のためのビタミンＤ化合物であって、アルミニウム塩と併用しない、前記化合物、
［６］ビタミンＤ化合物が、活性型ビタミンＤ３、活性型ビタミンＤ２、又はその誘導体である、［５］の化合物、
［７］ビタミンＤ化合物が、マキサカルシトールである、［５］の化合物、
［８］経皮投与のためである、［５］の化合物、
［９］アジュバントとしてアルミニウム塩を投与されていない対象にビタミンＤ化合物を投与することを含む、対象における免疫応答を刺激するための方法、
［１０］ビタミンＤ化合物が、活性型ビタミンＤ３、活性型ビタミンＤ２、又はその誘導体である、［９］の方法、
［１１］ビタミンＤ化合物が、マキサカルシトールである、［９］の方法、
［１２］ビタミンＤ化合物が、経皮的又は経鼻的に投与される、［９］の方法。
［１３］アジュバントとしてマキサカルシトールを含み、アジュバントとしてマキサカルシトールを含まない、ワクチン組成物。
［１４］ワクチンが、インフルエンザワクチンである、［１３］組成物。
　本発明のアジュバント組成物は、ワクチンの免疫原性を高めることができる。
オキサロールの経皮適用は、ウイルスチャレンジによる死亡から保護する。異なる条件でのワクチン接種後、Ｈ１Ｎ１　Ａ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／０４／２００９株をワクチン接種したマウスを同型のウイルスで感染させた。生存率を示した。個体数は、１群当たり５匹である。２回の独立した実験の結果の代表例を示した。 オキサロールの経皮適用は、感染性疾患から保護する。異なる条件でのワクチン接種後、Ｈ１Ｎ１　Ａ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／０４／２００９株をワクチン接種したマウスを同型のウイルスで感染させた。体重変化を示した。個体数は、１群当たり５匹である。２回の独立した実験の結果の代表例を示した。 オキサロールの経皮適用は、リコール液性応答を増強する。アジュバント無し、又はＡｌｕｍ又はオキサロールでのインフルエンザワクチン抗原のワクチン接種１月後、インフルエンザワクチン抗原をブーストのためにアジュバント無しで腹腔内に注射した。ブーストの１０日後に、血清を回収し、ＥＬＩＳＡに付し、抗ＮＰＩｇＧ１の血清レベルを決定した。個体数は、１群当たり５匹である。２回の独立した実験の結果の代表例を示した。 抗原特異的メモリーＢ細胞は、オキサロールでアジュバントした免疫化の後にエクスパンドする。異なる条件でのハプテン免疫化の後、耳介リンパ節におけるハプテン陽性ＩｇＧ１＋ＣＤ３８＋ＧＬ７－Ｂ細胞の数を耳介リンパ節における全リンパ球の計数及びフロサイトメトリー分析によって決定した。 濾胞Ｔ細胞は、オキサロールでアジュバントした免疫化の後にエキスパンドする。異なる条件でのハプテン免疫化の後、耳介リンパ節におけるＣＤ４＋ＣＸＣＲ５＋ＰＤ－１＋ＦｏｘＰ－のＴＦＨ細胞の数を耳介リンパ節における全リンパ球の計数及びフロサイトメトリー分析によって決定した。 抗原特異的ＧＣＢ細胞は、オキサロールアジュバント免疫後に増殖した。異なる条件でハプテンを免疫した後、耳介リンパ節の総リンパ球を数え、フローサイトメトリー分析を行うことにより、耳介リンパ節のハプテン陽性ＣＤ３８－ＧＬ７＋Ｂ細胞の数を決定した。 胚中心Ｂ細胞増殖のためのケラチノサイトにおけるＶｄｒ発現の要件。　ｈＬａｎｇｅｒｉｎ－Ｃｒｅ、ＣＤ１１ｃ－Ｃｒｅ、Ｋ５－Ｃｒｅ駆動の条件的ＶｄｒノックアウトマウスまたはＣｒｅ－同腹仔を、耳の皮膚でＮＰ－ＣＧＧ／Ｏｘａｒｏｌで免疫した。耳介リンパ節のＮＩＰ＋ＣＤ３８－ＧＬ７＋Ｂ２２０＋細胞の総数を示した。 Ｋ５－Ｖｄｒ　ｃＫＯマウスにおける血清抗ＮＰ抗体価の低下。Ｋ５－Ｖｄｒ　ｃＫＯマウス（ｎ＝９）またはＣｒｅ－同腹仔（ｎ＝１３）にワクチンを接種し、ワクチン接種後１か月でオキサロールアジュバントを含まないＮＰ－ＣＧＧで追加免疫した。抗ＮＰ　ＩｇＧ１力価を、示された時点でＥＬＩＳＡによって測定した。ハプテン抗原としてのＮＰ３０およびＮＰ０．４３を、それぞれ低親和性および高親和性の抗ＮＰ抗体の検出に使用した。 オキサロールアジュバントによるＣｙｐ２４ａ１誘導。ナイーブマウス（ｎ＝３）、ＰＢＳ注射マウス（ｎ＝３）、オキサロール注射野生型（ｎ＝３）およびＫ５－ＶＤＲマウス（ｎ＝３）の耳の皮膚を１日目に採取した。Ｃｙｐ２４ａ１の発現レベルをＦＫＰＭで示した。
　本発明において、ビタミンＤ化合物とは、ビタミンの一種で、脂溶性ステロイド誘導体セコステロイドで、側鎖構造のことなる天然ビタミンＤ２と天然ビタミンＤ３、および、活性型ビタミンになり得る人工合成によるビタミン類似体をいう。本発明のビタミンＤ化合物は、好ましくは、活性型ビタミンＤ３、活性型ビタミンＤ２、又はその誘導体であり、より好ましくは、オキサロールである。
　本発明において、アジュバントとは、ワクチンの免疫原性を高めるために用いられる物質をいう。より好ましくは、ワクチンと一緒に注射されその免疫原性を増強するために用いられる物質をいう。
　本発明のアジュバント組成物は、従来公知の任意の投与系を用いことができる。皮内投与又は経鼻投与であることが好ましい。
　本発明において、アルミニウム塩とは、３価のアルミニウム塩を含む、ＡｌＯＯＨ、Ａｌ（ＯＨ）３、ＡｌＰＯ４、ＡｌＫ（ＳＯ４）２・１２Ｈ２Ｏなどから構成される混合物をいう。本発明のアルミニウム塩、好ましくは、Ａｌ（ＯＨ）３を含むアルミニウム塩であり、より好ましくは、Ｉｍｊｅｃｔ（登録商標）Ａｌｕｍである。
　本発明の組成物は、製薬的に許容可能な担体をさらに含んで製剤化されていてもよい。「製薬的に許容可能な」とは、医薬業界で通常使用される意味を有し、場合により、ヒトに投与された場合にアレルギー反応または同様の有害反応を生じさせない分子的実体物質または組成物等の使用が可能であることを表す。タンパク質を活性成分として含む水性組成物の調製は当技術分野で十分に理解されている。典型的に、そのような組成物は、注射剤として、液体溶液または懸濁液として調製され、注射前の液体中での溶解または懸濁に好適な固体剤形を調製することもできる。調製物は乳化することもできる。
　「担体」には、任意およびすべての溶媒、分散媒、ビヒクル、コーティング、希釈剤、抗菌剤および抗真菌剤、等張および吸収遅延剤、バッファー、担体溶液、懸濁液、コロイド、などを含むことができる。担体としては、リン酸塩、クエン酸塩、及び他の有機酸塩のバッファー；アスコルビン酸を含む酸化防止剤；低分子量（約１０アミノ酸残基未満）ポリペプチド；タンパク質（例えば血清アルブミン、ゼラチン、又は免疫グロブリン）；疎水性ポリマー（例えばポリビニルピロリドン）；アミノ酸（例えばグリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニン又はリシン）；グルコース、マンノース又はデキストランを含む単糖類、二糖類、及び他の炭水化物；ＥＤＴＡ等のキレート剤；マンニトール又はソルビトール等の糖アルコール；ナトリウム等の塩形成対イオン；及び／又は非イオン性界面活性剤（例えば、ポリオキシアルキレン系）を挙げることができる。
　本発明の組成物は、製剤に使用される各種の界面活性剤を含むことができる。界面活性剤の種類は特に限定されず、ノニオン系界面活性剤、カチオン系界面活性剤、アニオン系界面活性剤、または両性界面活性剤を上げることができる。
　本発明の効果を以下の実施例において説明する。
　抗原
　インフルエンザＨ１Ｎ１　Ａ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／０４／２００９スプリットワクチンを一般財団法人 阪大微生物病研究会（BIKEN）から贈呈された。４－ヒドロキシ－３－ニトロフェニル酢酸活性エステルを（ＬＧＣバイオサーチテクノロジー）ニワトリγグロブリン（Ｒｏｃｋｌａｎｄ）に結合することによって、ＮＰ－ＣＧＧを生成した。
　アジュバント
　オキサロール軟膏及びＩｍｊｅｃｔ（登録商標）Ａｌｕｍアジュバントを、それぞれ、中外製薬及びＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ　Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃから購入した。２．５μｇのマキサカルシトールを含む軟膏又は２．５μｇの水酸化アルミニウムを含む溶液をマウスの耳に投与した
　免疫化
　オキサロールアジュバント免疫化のために、１０～２５μＬ中の７．５ｎｇのＨ１Ｎ１　Ａ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／０４／２００９スプリットワクチン抗原又は１μｇのＮＰ－ＣＧＧ抗原を耳の皮膚内に皮内注射し、次いで注射部位に亘り１００μｇのオキサロール軟膏（活性成分としてマキサカルシトール２．５μｇ）を投与した。抗原のみのために、上記の抗原の量を含む１０～２５μＬの溶液を耳の皮膚内に皮内注射した。Ａｌｕｍアジュバント免疫化のために、上記抗原の量及び２．５μｇの水酸化アルミニウムに相当するＡｌｕｍを含む１０～２５μＬの溶液を耳の皮膚内に皮内注射した。
　インフルエンザ感染研究
　５０μＬ（２×ＬＤ５０）のインフルエンザ　Ｈ１Ｎ１　Ａ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／０４／２００９ウイルス溶液を麻酔下でマウスに鼻腔内投与し、次いで、体重及び生存率を１４日間モニターした。
　フローサイトメトリー
　耳介リンパ球の単一細胞懸濁液をＭｏｕｓｅ　ＢＤ　Ｆｃ　Ｂｌｏｃｋ（登録商標）抗ＣＤ１６／ＣＤ３２（２．４Ｇ２、ＢＤから）で、次いで、Ｂ２２０（クローンＲＡ３－６Ｂ２、ＡＰＣ－Ｃｙ７、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄから）、ＧＬ７（ＧＬ７、ＦＩＴＣ及びＰＥ、ＢＤから）、ＣＤ３８（クローン９０、ＰＥ－Ｃｙ７、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄから）、ＩｇＧ１（クローンＸ５６、ＢＶ５１０、ＢＤから）、ＣＤ４－ＦＩＴＣ（ローンＲＭ４－５、ＢＤから）、ＣＸＣＲ５－ＢＶ４２１（クローンＬ１３８Ｄ７、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄから）、ＰＤ－１－ＰＥ（クローンＪ４３、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅから）、ＰＤ－１－ＰｅｒＣＰ－ｅＦｌｕｏｒ　７１０（クローンＲＭＰ１－３０、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅから）、Ｆｏｘｐ３－ＡＰＣ（クローンＦＪＫ－１６ｓ、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅから）。Ｆｏｘｐ３細胞内染色キット（カタログ８８－８８２４－００）をｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅから購入した。ＮＩＰ（４－ヒドロキシ－３－ヨード－５－ニトロフェニル酢酸）－ＡＰＣ（自製）を含む種々の抗体で染色した。死細胞を７－アミノアクチノマイシンＤ（７－ＡＡＤ）で染色し、除外した。染色した細胞をＦＡＣＳＣａｎｔｏ（登録商標）ＩＩ（ＢＤ　ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）を用いて分析した。データをＦｌｏｗＪｏ（登録商標）ソフトウェア（ＦｌｏｗＪｏ，ＬＬＣ）を用いて解析した。
　酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）
　９６ウェルのＥＬＩＳＡプレート（Ｔｈｅｒｍｏ　Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）をＨ１Ｎ１　Ａ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／０４／２００９スプリットワクチンについて１μｇ／ｍＬの濃度でＰＢＳ中の抗原溶液でコートした。抗原結合後、ＢｌｏｃｋｉｎｇＯｎｅ（ナカライテスク）を用い非特異的結合をブロックした。段階希釈した血清サンプル及び標準血清、次いでＨＲＰとコンジュゲートしているヤギ抗マウスＩｇＧ１抗体（ＳｏｕｔｈｅｒｎＢｉｏｔｅｃｈ）を加えた。各血清サンプルの抗体力価を標準曲線に基づき算出した。
　統計
　両側検定のスチューデントのｔ検定及び一元配置分散分析をＧｒａｐｈＰａｄＰｒｉｓｍソフトウェアを用いる統計解析に用いた。
　マウス
　Ｃ５７ＢＬ／６ＪＪｃｌマウスを、ＣＬＥＡ　Ｊａｐａｎ、Ｉｎｃ．から購入した。Ｖｄｒ－ｆｌｏｘｅｄマウス、ｈＬａｎｇｅｒｉｎ－Ｃｒｅ　ＢＡＣトランスジェニックマウス、Ｋ５－Ｃｒｅトランスジェニックマウス、Ｂ６．Ｃｇ－Ｔｇ（Ｉｔｇａｘ－Ｃｒｅ）１－１Ｒｅｉｚ　／　Ｊ（Ｃｄ１１ｃ－Ｃｒｅ）トランスジェニックマウスを、この研究で使用した。すべての動物実験は、理研ＩＭＳのＩｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ　Ａｎｉｍａｌ　Ｃａｒｅによって承認されたプロトコルを使用して実施した。
　ＲＮＡ－シークエンシング
　ＴＲＩｚｏｌ（商標）試薬を使用して、マウスの耳の皮膚のＲＮＡを抽出した。イルミナ用ＮＥＢＮｅｘｔウルトラＲＮＡライブラリー調製キット（ＮＥＢ）を使用してｃＤＮＡライブラリーを生成した。シーケンシングは、ＨｉＳｅｑ２５００シーケンサー（Ｉｌｌｕｍｉｎａ）で５０ｂｐシングルエンド読み取りモードで実行した。シーケンシングされたリードは、アダプターシーケンスについてトリミングされ、低複雑性または低品質シーケンスについてマスクされ、Ｂｏｗｔｉｅ２ｖ２．１．０およびＴｏｐＨａｔ２ｖ２．０．８を使用してリファレンスゲノム（ｍｍ９）にマッピングされた。転写産物量は、Ｃｕｆｆｌｉｎｋｓ　ｖ２．１．１を使用してＦＰＫＭ（マップされたエクソンミリオンフラグメントのキロベースあたりのフラグメント）値として推定した。
　結果
　インフルエンザウイルスのワクチン抗原を皮内注射し、その後、オキサロール軟膏をアジュバントとして用い、皮膚上に塗布したところ、抗原のみを投与したものに比べ、生存率が上昇した（図１）。この時、感染に伴う体重変化は、図２に示す様に、７日目までどの処置群においても体重減少が見られるが、オキサロール軟膏処理した群で、その減少は８日目以降で増加へと転じた。ワクチン投与後の一ヶ月の時点で、液性免疫記憶応答がどの程度あるのかを調べた。感染した状況を模倣し、ワクチン投与一ヶ月後、抗原のみを投与した。２回目の抗原のみの免疫(boost)で、優位にオキサロール処理群において、血清中のワクチン抗原に対するＩｇＧ１抗体価が、アラムワクチン投与群に比べて高いことがわかった(図３)。さらに、この液性免疫記憶応答が、記憶Ｂ細胞の数に起因しているかを調べる目的で、ワクチン投与部位にもっとも近い耳介リンパ節での抗原特異的ＩｇＧ１記憶Ｂ細胞の生成数を調べた（図４）。その結果、オキサロール処置群において、顕著に抗原特異的ＩｇＧ１記憶Ｂ細胞数が多いことがわかった。また、胚中心Ｂ細胞、抗体産生細胞、および記憶Ｂ細胞の生成に重要な働きを担うＴＦＨ細胞についても調べた。その結果、オキサロール群で有意にその割合が多くなっていることがわかった（図５）。さらに、抗原特異的胚中心Ｂ細胞数を調べた。その結果、オキサロール群で有意に増加していることがわかった（図６）。特筆すべき点は、オキサロール処理したマウスでは、通常、アラム投与時に見られるような投与部位の皮膚組織硬化、発疹等は認められなかった。
　さらに以下の知見も得られた。ビタミンＤ３は、ケラチノサイトにおけるＶｄｒを標的としていた（図７）。ケラチノサイト特異的Ｖｄｒ欠失は、液性応答を減少させた（図８）。オキサロールアジュバントは、Ｖｄｒの公知の標的遺伝子であるＣｙｐ２４ａ１を誘導した（図８）。
　本発明のアジュバント組成物は、ワクチンの免疫原性を高めるために有用である。

Claims (14)

  1. 　ビタミンＤ化合物を含む、アジュバント組成物であって、アルミニウム塩と併用しない、前記組成物。
  2. 　ビタミンＤ化合物が、活性型ビタミンＤ３、活性型ビタミンＤ２、又はその誘導体である、請求項１に記載の組成物。
  3. 　ビタミンＤ化合物が、マキサカルシトールである、請求項１に記載の組成物。
  4. 　皮内投与のためである、請求項１に記載の組成物。
  5. 　アジュバントとしての使用のためのビタミンＤ化合物であって、アルミニウム塩と併用しない、前記化合物。
  6. 　ビタミンＤ化合物が、活性型ビタミンＤ３、活性型ビタミンＤ２、又はその誘導体である、請求項５に記載の化合物。
  7. 　ビタミンＤ化合物が、マキサカルシトールである、請求項５に記載の化合物。
  8. 　経皮投与又は経鼻投与のためである、請求項５に記載の化合物。
  9. 　アジュバントとしてアルミニウム塩を投与されていない対象にビタミンＤ化合物を投与することを含む、対象における免疫応答を刺激するための方法。
  10. 　ビタミンＤ化合物が、活性型ビタミンＤ３、活性型ビタミンＤ２、又はその誘導体である、請求項９に記載の方法。
  11. 　ビタミンＤ化合物が、マキサカルシトールである、請求項９に記載の方法。
  12. 　ビタミンＤ化合物が、経皮的又は経鼻的に投与される、請求項９に記載の方法。
  13. 　アジュバントとしてマキサカルシトールを含み、アジュバントとしてマキサカルシトールを含まない、ワクチン組成物。
  14. 　ワクチンが、インフルエンザワクチンである、請求項１３に記載の組成物。
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Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH11512297A (ja) * 1995-09-19 1999-10-26 ファーマダイム・インコーポレイテッド 免疫化または遺伝子療法用の筋肉特異的調節要素を含有してなるｄｎａ構築物
JP2002536339A (ja) * 1999-02-02 2002-10-29 ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア 細菌毒性におけるｄｎａメチル化の必須な役割に基づいて病原性細菌感染を処置および予防するための組成物および方法
JP2010539918A (ja) * 2007-09-26 2010-12-24 サノフィ・パスツール インフルエンザウイルスの製造方法
JP2012246259A (ja) * 2011-05-30 2012-12-13 Japan Health Science Foundation Ｈ５ｎ１型インフルエンザワクチン及び感染防御キット
US20130011437A1 (en) * 2011-07-05 2013-01-10 Life Spring Immuno Science Corp. Immune compositions for treating H. pylori infection

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH11512297A (ja) * 1995-09-19 1999-10-26 ファーマダイム・インコーポレイテッド 免疫化または遺伝子療法用の筋肉特異的調節要素を含有してなるｄｎａ構築物
JP2002536339A (ja) * 1999-02-02 2002-10-29 ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア 細菌毒性におけるｄｎａメチル化の必須な役割に基づいて病原性細菌感染を処置および予防するための組成物および方法
JP2010539918A (ja) * 2007-09-26 2010-12-24 サノフィ・パスツール インフルエンザウイルスの製造方法
JP2012246259A (ja) * 2011-05-30 2012-12-13 Japan Health Science Foundation Ｈ５ｎ１型インフルエンザワクチン及び感染防御キット
US20130011437A1 (en) * 2011-07-05 2013-01-10 Life Spring Immuno Science Corp. Immune compositions for treating H. pylori infection

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CHIKAWA, FUMIHIKO ET AL: "Explanation of medicine Maxacalcitol", vol. 39, no. 10, 2003, pages 967 - 969 *
SATO R. ET AL.: "Repurposing the psoriasis drug Oxarol to an ointment adjuvant for the influenza vaccine", INT. IMMUNOL., vol. 32, no. 8, February 2020 (2020-02-01), pages 499 - 507, XP055832407 *

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