WO2020213906A1 - 혼합 생약 추출물을 포함하는 만성 폐쇄성 폐질환 치료용 약학 조성물 - Google Patents

혼합 생약 추출물을 포함하는 만성 폐쇄성 폐질환 치료용 약학 조성물 Download PDF

Info

Publication number
WO2020213906A1
WO2020213906A1 PCT/KR2020/004982 KR2020004982W WO2020213906A1 WO 2020213906 A1 WO2020213906 A1 WO 2020213906A1 KR 2020004982 W KR2020004982 W KR 2020004982W WO 2020213906 A1 WO2020213906 A1 WO 2020213906A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
coptis
extract
ivy
obstructive pulmonary
ivy leaf
Prior art date
Application number
PCT/KR2020/004982
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
황광우
윤여영
강영수
정세영
박경태
Original Assignee
안국약품 주식회사
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 안국약품 주식회사 filed Critical 안국약품 주식회사
Publication of WO2020213906A1 publication Critical patent/WO2020213906A1/ko

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/25—Araliaceae (Ginseng family), e.g. ivy, aralia, schefflera or tetrapanax
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/71—Ranunculaceae (Buttercup family), e.g. larkspur, hepatica, hydrastis, columbine or goldenseal
    • A61K36/718—Coptis (goldthread)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00

Definitions

  • the present invention relates to a pharmaceutical composition for treating chronic obstructive pulmonary disease (COPD), comprising a mixed extract of ivy leaf and Coptidis rhizome as an active ingredient.
  • COPD chronic obstructive pulmonary disease
  • the pharmaceutical composition of the present invention is particularly effective in the treatment of chronic obstructive pulmonary disease exacerbated by fine particles in the air including fine dust or sand dust.
  • Chronic obstructive pulmonary disease is one of the types of obstructive pulmonary disease. Symptoms include a long-term cough accompanied by sputum, and airway obstruction reduces the speed of airflow, making breathing difficult. Common cold-like respiratory infections. Chronic obstructive pulmonary disease is a disease that leads to death due to an increase in abnormal alveoli, emphysema and deterioration of lung function due to continued inflammation in the lungs. It is ranked 4th in the world and 7th in Korea.
  • the cause of such chronic obstructive pulmonary disease is an abnormal chronic inflammatory response of the lungs to toxic molecules or gases, and it is known that several factors such as smoking, urbanization and pollution, and respiratory infections are complexly involved. Moreover, air pollution in Northeast Asia, including Korea, Japan and China, is getting worse. Most air pollutants such as sand dust and fine dust are transported from domestic air pollutants such as waste treatment, road traffic and industrial emissions, as well as sand storms in China. Particles including fine dust and sand dust contain many toxic chemicals such as heavy metals, plastic components and microorganisms, and affect respiratory health through breathing.
  • particles with a diameter of less than 10 ⁇ m such as fine dust and sand dust, penetrate the respiratory tract and increase the expression of inflammatory cytokines that promote the inflammatory response of the lungs.
  • these fine particles cause small airway fibrosis and alveolar destruction, resulting in airway stricture, exacerbating chronic obstructive pulmonary disease.
  • BALF Broncholaveloar Lavage Fluid
  • Alveolar macrophages present in the lung space play an important role in mediating inflammation by infiltrating into the lungs and secreting reactive oxygen species (ROS), cytokines, and chemokines.
  • ROS reactive oxygen species
  • cytokines cytokines
  • chemokines chemokines
  • Chemokines such as MIP-2 and CXCL-1 secreted by alveolar macrophages show chemotactic effects by binding to receptors of airway epithelial cells, alveolar cells and inflammatory cells in the progression of chronic obstructive pulmonary disease. It causes excessive invasion of inflammatory cells to the inflammatory site in the lung tissue.
  • chemokines activate inflammatory cells to produce inflammatory cytokines (TNF- ⁇ , IL-1 ⁇ , IL-6, etc.), and in particular, TNF- ⁇ transmits inflammatory signals such as NF- ⁇ B (Nuclear factor- ⁇ B). By activating the pathway, it worsens the inflammatory response.
  • NF- ⁇ B is considered as a signaling pathway of a prototype that activates the release of pro-inflammatory cytokines such as TNF- ⁇ , IL-1 ⁇ , and IL-6 (Signal Transduction and Targeted Therapy volume 2, Article number: 17023 (2017). )).
  • NF- ⁇ B not only directly increases the production of inflammatory cytokines, chemokines and adhesion molecules, but also directly induces inflammation by regulating cell proliferation, cell death, morphogenesis and differentiation.
  • I ⁇ B ⁇ and p65 which are sub-proteins of the NF- ⁇ B signaling pathway, are known to be activated by phosphorylation (Nabel GJ, Verma IM (November 1993). "Proposed NF-kappa B/I kappa B family nomenclature". Genes & Development. 7 (11): 2063.).
  • chemokines produce not only pro-inflammatory factors, but also various growth factors and reactive oxygen species that cause continuous inflammatory reactions, damage to the lung parenchyma, and fibrosis in the lung tissue. This series of reactions causes a significant decrease in lung function, which is the most characteristic of patients with chronic obstructive pulmonary disease.
  • T cells can induce lung destruction either directly due to T cell-induced cytotoxicity, or indirectly due to activation of alveolar macrophages.
  • H Kim, YS Chung, HJ Choi.On air pollutant variations in the cases of long-range transport of dust particles observed in central Korea in the leeside of China in 2010, Air Qual Atmos Health. 7 (2014) 309- 323. That is, as the inflammation caused by chronic obstructive pulmonary disease increases, the amount of chemokine secretion increases, and thus the penetration of T lymphocytes into the inflammation site increases and the amount of secretion increases.
  • IL-6 an inflammatory cytokine produced by alveolar macrophages, promotes the differentiation of unsensitized T cells into helper T cell type 17 (“Th17”), which causes the IL-17A cytokine to be secreted, eventually Th17
  • Th17 helper T cell type 17
  • the increase in the secretion of inflammatory cytokines also affects the increase in the expression level of the transcription factor ROR ⁇ t primer of Th17 cells.Alveolar macrophages and Th17 cells further promote inflammation through interaction, and regulatory T cells and Th17 cells It causes an imbalance of the inflammatory disease and worsens the inflammatory action.
  • Treg regulatory T cells
  • Th17 helper T cell type 17
  • glucocorticoid a representative therapeutic agent, is strong in terms of effectiveness, but does not act selectively, but suppresses all immune and anti-inflammatory reactions, so there is a problem in suppressing even necessary immune responses in some cases, and drug side effects are problematic. And is performing inhalation treatment.
  • Korean Patent Publication No. 10-1130259 discloses that a mixed extract of ivy leaf and Coptis chinensis has expectorant activity, antitussive activity, antihistamine effect, bronchoconstriction inhibition, and pharmacological effect on asthma. Are doing. However, in the above document, it is not mentioned at all whether the mixed extract of ivy leaf and Coptis chinensis is effective in preventing or treating chronic obstructive pulmonary disease.
  • Patent Document 1 Korean Patent Publication No. 10-1130259
  • the present invention is a pharmaceutical for the prevention or treatment of chronic obstructive pulmonary disease, in particular, aggravated by microparticles in the air containing fine dust or sand dust, comprising a mixed extract of ivy leaf and Coptis chinensis as an active ingredient It is an object to provide a composition.
  • the present inventors completed the present invention by confirming that the mixed extract of ivy leaf and Coptis chinensis has an excellent effect on the treatment of the disease.
  • the present invention provides a pharmaceutical composition for preventing or treating chronic obstructive pulmonary disease comprising a mixed extract of ivy leaf and Coptis chinensis as an active ingredient.
  • the pharmaceutical composition of the present invention comprises a mixed extract of ivy leaf and Coptis Coptisium as an active ingredient, and the mixed extract of ivy leaf and Coptis chinensis extract is a mixture of ivy leaf extract and Coptis Coptis extract, or extract of a mixture of ivy leaf and Coptis Coptis
  • the ivy leaf extract, Coptis Coptis extract, or an extract of a mixture of Ivy leaves and Coptis Coptis leaves is one selected from the group consisting of ivy leaves, Coptis Coptis leaves, or a mixture of Ivy leaves and Coptis Coptisium, and a straight-chain or branched alcohol having 1 to 4 carbon atoms It is a crude extract obtained by adding the above solvent,
  • the chronic obstructive pulmonary disease may be a chronic obstructive pulmonary disease exacerbated by fine particles in the air including fine dust or sand dust.
  • the microparticles may have a diameter of less than 10 ⁇ m.
  • the content ratio of the ivy leaf extract and the Coptis chinensis extract in the mixed extract included in the pharmaceutical composition of the present invention is 0.1:1 to 10:1, preferably 0.2:1 to 5:1 ( Ivy leaf extract weight: Hwangryeon extract weight).
  • the pharmaceutical composition of the present invention may be formulated as a powder, granule, tablet, capsule, suspension, emulsion, syrup, aerosol, transdermal preparation, suppository, or sterile injectable solution.
  • the present invention also provides a health functional food for preventing or improving chronic obstructive pulmonary disease, comprising a mixed extract of ivy leaf and Coptis chinensis as an active ingredient.
  • the mixed extract of the ivy leaf and Coptis Rhizoma is a mixture of an ivy leaf extract and Coptis Coptisium extract, or an extract of a mixture of ivy leaf and Coptis Coptisium, and the extract of the ivy leaf extract, Coptis Coptis leaf extract or a mixture of ivy leaf and Coptis Coptisium Or a crude extract obtained by adding water and at least one solvent selected from the group consisting of a straight-chain or branched alcohol having 1 to 4 carbon atoms to a mixture of ivy leaves and Coptis Coptis, or a straight-chain or branched alcohol having 1 to 6 carbon atoms to the crude extract It may be a solvent-soluble extract obtained by adding an aqueous solution.
  • the mixed extract of ivy leaf and Coptis chinensis of the present invention is the number of alveolar macrophages increased by chronic obstructive pulmonary disease exacerbated by airborne microparticles including fine dust or sand dust, inflammatory cytokines And reducing the expression level of chemokines, alleviating submucosa enlargement and bleeding symptoms due to inflammatory cell infiltration, and inhibiting the activated NF- ⁇ B signaling pathway, including chronic obstructive pulmonary disease, particularly fine dust or sand dust. It has a pharmacological effect of prevention or treatment against chronic obstructive pulmonary disease exacerbated by airborne microparticles.
  • 1 shows a method of spraying fine dust or sand dust into a mouse trachea using zonde.
  • FIG. 2 shows a time table briefly showing an experiment schedule according to an embodiment of the present invention.
  • FIG. 3 shows a method of extracting BALF from a mouse model.
  • FIG. 4 is a graph showing the levels of cell populations and proinflammatory cytokines in alveolar macrophages of the COPD mouse model.
  • 5 is a graph showing the number of Th17 cells, the number of Treg cells, cytokines and transcription factors of the COPD mouse model.
  • FIG. 6 is an image photographed with a microscope of pathological changes in lung tissue of a COPD mouse model.
  • NF- ⁇ B 7 is a Western blotting method for sub-proteins of NF- ⁇ B (p65 and I ⁇ B ⁇ ) to confirm the mechanism of the mixed extract of ivy leaf and Coptis chinensis of the present invention through confirmation of the activity of NF- ⁇ B signaling in a COPD mouse model.
  • the analyzed band image and the calculated values of p-I ⁇ B ⁇ / I ⁇ B ⁇ and p-p65 / p65 are graphed.
  • prevention refers to any action that inhibits or delays progression of chronic obstructive pulmonary disease (COPD) by administration of the composition of the present invention.
  • COPD chronic obstructive pulmonary disease
  • treatment and “improvement” refer to any action in which symptoms of chronic obstructive pulmonary disease are improved or beneficially altered by administration of the composition of the present invention.
  • administering means providing a given composition of the present invention to a subject in any suitable manner.
  • the present invention provides a pharmaceutical composition for preventing or treating chronic obstructive pulmonary disease comprising a mixed extract of ivy leaf and Coptis chinensis as an active ingredient.
  • the pharmaceutical composition of the present invention comprises a mixed extract of ivy leaf and Coptis Coptisium as an active ingredient, and the mixed extract of ivy leaf and Coptis chinensis extract is a mixture of ivy leaf extract and Coptis Coptis extract, or extract of a mixture of ivy leaf and Coptis Coptis
  • the ivy leaf extract, Coptis Coptis extract, or an extract of a mixture of Ivy leaves and Coptis Coptis leaves is one selected from the group consisting of ivy leaves, Coptis Coptis leaves, or a mixture of Ivy leaves and Coptis Coptisium, and a straight-chain or branched alcohol having 1 to 4 carbon atoms It is a crude extract obtained by adding the above solvent, or a
  • the present invention provides a method for preventing or treating chronic obstructive pulmonary disease, comprising administering a mixed extract of ivy leaf and Coptis chinensis to a subject in need of preventing or treating chronic obstructive pulmonary disease.
  • subject as used herein includes human and non-human animals.
  • Non-human animals include all vertebrates, for example mammals, such as non-human primates, sheep, dogs, cattle, horses and the like.
  • the mixed extract of ivy leaf and Coptis chinensis reduces the number of alveolar macrophages increased by chronic obstructive pulmonary disease, the expression levels of inflammatory cytokines and chemokines, and enlarges the submucosa due to inflammatory cell infiltration and bleeding symptoms. It is characterized in that it exhibits a pharmacological effect to treat or alleviate the symptoms of chronic obstructive pulmonary disease by suppressing the activated NF- ⁇ B signaling pathway.
  • the mixed extract of ivy leaves and Coptis chinensis according to the present invention alleviates the aggravated symptoms, fine dust or sand dust It is characterized in that it has a pharmacological effect of treatment or alleviation even for chronic obstructive pulmonary disease exacerbated by fine particles in the air, including.
  • the microparticles may have a diameter of less than 10 ⁇ m, increase the expression of inflammatory cytokines that infiltrate the respiratory tract and promote the inflammatory response of the lungs, cause small airway fibrosis and alveolar destruction, causing airway stricture, It may be aggravating obstructive pulmonary disease.
  • Ivy belongs to Araliaceae and means plants of the genus Heedera ( Hedera spp. ), such as Hedera algeriensis, Hedera azorica, Hedera canariensis, Hedera colchica, Hedera helix, Hederahibernica, Hedera maderensis , Hedera nepalensis, Hedera pastuchowii, Hedera rhombea , and the like, but are not limited thereto.
  • Heedera Hedera spp.
  • Coptidis rhizoma is a perennial herb belonging to the Ranunculaceae family, and is known to have pharmacological effects such as antimicrobial action, blood pressure lowering action, and anti-inflammatory action. It is used as an agent of the bronchial and nervous system. It is known that it mainly contains alkaloids such as berberine and magnoflorine as a pharmacological ingredient (Sin Boo, Min-gyo Shin, Dohae Herbal Medicine (Great Medicine) Daejeon, 490-493, 1990).
  • the term'mixed extract of ivy leaves and Coptis Crusade' refers to both extracts obtained by extracting ivy leaves and Coptis Coptis leaves extract and mixtures of Ivy leaves and Coptis Coptis leaves extract, respectively, and It is used to indicate.
  • the'extract' refers to a crude extract or a specific solvent-soluble extract (fraction), and may be in the form of a solution, a concentrate, or a powder.
  • the content ratio of the ivy leaf extract and Coptis chinensis extract in the mixed extract is based on the weight of solids.
  • 0.1:1 to 10:1 weight of ivy leaf extract: weight of yellow lotus extract, hereinafter the same
  • 0.2:1 to 5:1 weight of ivy leaf extract: weight of yellow lotus extract, hereinafter the same
  • It may be 1 to 3.5:1, most preferably 2.5:1 to 3.5:1.
  • The'solid content' refers to a state in which the solvent used to prepare the extract has been removed.
  • the mixed extract according to the present invention may be a mixture of an ivy leaf extract and a yellow lotus extract.
  • the ivy leaf extract is a crude extract obtained by extracting dried ivy leaves with water and at least one selected from the group consisting of a straight chain or branched alcohol having 1 to 4 carbon atoms, or a lower alcohol aqueous solution having 1 to 6 carbon atoms in the crude extract, Preferably, it may be a solvent-soluble extract obtained by adding at least one selected from the group consisting of an aqueous propyl alcohol solution, an aqueous isopropyl alcohol solution, and water saturated butyl alcohol.
  • the ivy used in the manufacture of ivy leaf extract is Hedera spp.
  • Hedera algeriensis, Hedera azorica, Hedera canariensis, Hedera colchica, Hedera helix, Hedera hibernica, Hedera maderensis, Hedera nepalensis, Hedera pastuchowii, Hedera rhombea may be one or more selected from the group consisting of, but is not limited thereto.
  • the Coptis rhizoma extract is a crude extract or the crude extract obtained by extracting Coptidis rhizoma , preferably at least one selected from the group consisting of water and a straight chain or branched alcohol having 1 to 4 carbon atoms in the rhizome It may be a solvent-soluble extract obtained by adding at least one selected from the group consisting of an aqueous solution of a lower alcohol having 1 to 6 carbon atoms, preferably an aqueous propyl alcohol solution and an aqueous isopropyl alcohol solution, and saturated butyl alcohol.
  • the solvent used to prepare the crude extract of ivy leaves or Coptis chinensis is water, or 10 to 70% (v/v), preferably 20 to 60% (v/v), more preferably about It may be at least one selected from the group consisting of 25 to 55% (v/v) straight chain or branched alcohol aqueous solution having 1 to 4 carbon atoms, preferably methanol aqueous solution, ethanol aqueous solution, and water saturated butyl alcohol.
  • the solvent used in the preparation of the solvent-soluble extract of the ivy leaf or Coptis chinensis is 10 to 70% (v/v), preferably 20 to 60% (v/v), more preferably about 25 to 55% It may be at least one selected from the group consisting of (v/v) an aqueous solution of a lower alcohol having 1 to 6 carbon atoms, preferably an aqueous propyl alcohol solution, an aqueous isopropyl alcohol solution, and saturated butyl alcohol.
  • the mixed extract according to the present invention may be an extract of a mixture of ivy leaves and Coptis chinensis.
  • the mixed extract is a crude extract obtained by mixing ivy leaves and Coptis chinensis, and then extracting the mixture with water and at least one selected from the group consisting of straight chain or branched alcohols having 1 to 4 carbon atoms.
  • It may be a solvent-soluble extract obtained by adding at least one selected from the group consisting of an aqueous solution of a lower alcohol having 1 to 6 carbon atoms, preferably an aqueous propyl alcohol solution, an aqueous isopropyl alcohol solution, and saturated butyl alcohol.
  • the solvent used in the preparation of the crude extract of the mixture of ivy leaves and Coptis chinensis is water, or 10 to 70% (v/v), preferably 20 to 60% (v/v), more preferably It may be about 25 to 55% (v/v) aqueous methanol, aqueous ethanol solution, or saturated butyl alcohol.
  • the solvent used in the preparation of the solvent-soluble extract is 10 to 70% (v/v), preferably 20 to 60% (v/v), more preferably about 25 to 55% (v/v) It may be at least one selected from the group consisting of an aqueous solution of a lower alcohol having 1 to 6 carbon atoms, preferably an aqueous propyl alcohol solution, an aqueous isopropyl alcohol solution, and saturated butyl alcohol.
  • the present invention relates to a method of preparing a mixed extract of ivy leaf and Coptis chinensis having an activity for treating or improving chronic obstructive pulmonary disease.
  • the manufacturing method is one or more selected from the group consisting of water and a straight chain or branched alcohol having 1 to 4 carbon atoms, such as water, or 10 to 70% (v/v), Preferably 20 to 60% (v/v), more preferably about 25 to 55% (v/v) of methanol, ethanol, or water-saturated butyl alcohol to obtain an ivy leaf extract;
  • Coptis Rhizoma is at least one selected from the group consisting of water, and a straight chain or branched alcohol having 1 to 4 carbon atoms, such as water, or 10 to 70% (v/v), preferably 20 To 60% (v/v), more preferably about 25 to 55% (v/v) of methanol aqueous solution, ethanol aqueous solution, or water-saturated butyl alcohol extraction to obtain a Coptis Coptis extract; And 0.1:1 to 10:1 based on the weight of the solid content of the obtained ivy leaf extract and Coptis Rhizoma extract (Ivy leaf extract weight: Coptis Coptis extract weight), preferably 0.2:1 to 5:1, more preferably 1:1 To 4:1, more preferably 1.5:1 to 3.5:1, and most preferably 2.5:1 to 3.5:1.
  • Ivy leaf extract weight: Coptis Coptis extract weight preferably 0.2:1 to 5:1, more preferably 1:1 To 4:1, more preferably 1.5:1 to 3.5:1,
  • each of the ivy leaf extract preparation step and the Coptis chinensis extract preparation step is 1 selected from the group consisting of a lower alcohol aqueous solution having 1 to 6 carbon atoms in each extract, preferably water saturated butyl alcohol, propyl alcohol and isopropyl alcohol. It may further include the step of purifying the extract by taking the solvent-soluble extract obtained by adding more than one species.
  • the weight of the dried ivy leaves After cutting the ivy leaves and washing with water to remove constrictions and drying, about 5 to 20 times the weight of the dried ivy leaves, preferably 7 to 15 times the weight of water, and a straight chain having 1 to 4 carbon atoms Or at least one selected from the group consisting of branched alcohols, such as water, or 10 to 70% (v/v), preferably 20 to 60% (v/v), more preferably about 25 to 55% Extracted under reflux with an aqueous methanol solution, an aqueous ethanol solution or saturated butyl alcohol.
  • the extraction temperature is preferably 40 to 110°C, preferably 55 to 90°C.
  • the filtrate is collected by filtration, and at least one selected from the group consisting of about 5 to 15 times by volume, preferably 8 to 12 times by volume of water, and a straight chain or branched alcohol having 1 to 4 carbon atoms in the residue,
  • water or 10 to 70% (v/v), preferably 20 to 60% (v/v), more preferably about 25 to 55% (v/v) of aqueous methanol, aqueous ethanol or water Extracted under reflux with saturated butyl alcohol.
  • the extraction temperature is not particularly limited, but is preferably 40 to 110°C, preferably 55 to 90°C.
  • After extraction, it is filtered, combined with the filtrate obtained previously, and concentrated under reduced pressure to prepare an ivy leaf extract.
  • extraction efficiency can be improved by mixing the second extraction and the filtrate obtained after each extraction, but the extract of the present invention is not limited to the number of extractions.
  • the amount of the solvent used in the preparation of the ivy leaf extract is too small, stirring becomes difficult and the solubility of the extract decreases, resulting in lower extraction efficiency, and if too large, the amount of lower alcohol used in the next purification step increases, making it economical. This is not possible to cause problems in handling, so the amount of the solvent is preferably in the above range.
  • a method of re-extraction after the primary extraction can be adopted. This is because even if the herbal medicine extract is effectively filtered, loss occurs due to the high moisture content of the herbal medicine itself. Extraction alone is to prevent this because the extraction efficiency decreases. In addition, as a result of verifying the extraction efficiency of each step, it was found that about 80 to 90% of the total amount of extraction was extracted by the second extraction, and it is judged that multi-step extraction of the third or higher is not economical.
  • the concentrate obtained as described above is used 2 to 3 times with water of about 10 to 30 times by weight, preferably about 15 to 25 times by weight of the total amount of the concentrate in order to adjust the content of the lower alcohol remaining suitable for use as a pharmaceutical ingredient. It can be prepared as a powdery ivy leaf extract by azeotropic concentration and homogeneous suspension by adding an equal amount of water again and lyophilization.
  • the manufacturing process of the Coptis Rhizoma extract according to the present invention will be described as follows: After slicing the rhizome of Coptidis rhizoma, 3 to 20 times the weight of the raw material, preferably 5 to 15 times the volume of water , And at least one selected from the group consisting of a linear or branched alcohol having 1 to 4 carbon atoms, such as water, or 10 to 70% (v/v), preferably 20 to 60% (v/v), more Preferably, about 25 to 55% (v/v) of aqueous methanol, aqueous ethanol or saturated butyl alcohol is added, followed by reflux extraction for 1 to 10 hours, preferably 2 to 5 hours.
  • a linear or branched alcohol having 1 to 4 carbon atoms such as water, or 10 to 70% (v/v), preferably 20 to 60% (v/v)
  • aqueous methanol, aqueous ethanol or saturated butyl alcohol is added, followed by reflux extraction for 1 to 10 hours,
  • the extraction temperature is not particularly limited, but is preferably 40 to 110°C, preferably 55 to 90°C.
  • the filtrate is collected by filtration, and at least one selected from the group consisting of 1 to 10 times the weight of the raw material, preferably 4 to 7 times the weight of water, and a straight chain or branched alcohol having 1 to 4 carbon atoms in the residue ,
  • extraction efficiency can be increased by mixing the second extraction and the filtrate obtained after each extraction, but the extract of the present invention is not limited to the number of extractions.
  • the amount of the solvent used in the preparation of the Coptis Cranberry extract is too small, stirring becomes difficult and the solubility of the extract decreases, resulting in lower extraction efficiency, and if too large, the amount of lower alcohol used in the next purification step increases, making it economical. This may cause problems in handling, so the amount of the solvent is preferably within the above range.
  • a method of re-extraction after the first extraction may be adopted. This is because even if the herbal medicine extract is effectively filtered, loss occurs because the extract content of the herbal medicine itself is high. Extraction alone is to prevent this because the extraction efficiency decreases. In addition, as a result of verifying the extraction efficiency of each step, it was found that about 80 to 90% of the total amount of extraction was extracted by the second extraction, and it is judged that multi-step extraction of the third or higher is not economical.
  • Purifying impurities may be further performed by performing layer separation once to 10 times, preferably 2 to 4 times, with the same amount of lower alcohol as the filtrate to obtain a solvent fraction.
  • a straight chain or branched alcohol having 1 to 6 carbon atoms may be used as the lower alcohol, and at least one selected from the group consisting of butyl alcohol, propyl alcohol, and isopropyl alcohol may be used.
  • the lower alcohol fraction obtained after layer separation was concentrated under reduced pressure at 50 to 60°C to remove the solvent remaining in the sample.
  • the concentrate thus obtained is about 10 to 30 times, preferably 15 to 25 times, more preferably about 20 weight times of the total amount of the concentrate in order to adjust the content of the lower alcohol remaining suitable for use as a pharmaceutical raw material.
  • HPLC high-speed liquid chromatography
  • Coptis Coptis extract of the present invention comprises berberine, palmatin, coptisine, columbamine, and jatrorizine, and preferably, the composition is 15 to 30 parts by weight of berberine, 4 to 10 parts by weight of palmatin, 4 to copticine It may include 10 parts by weight, 0.3 to 5 parts by weight of columbamine, and 0.3 to 5 parts by weight of jatrorizine.
  • High-speed liquid chromatography was measured using a Waters Alliance 2695 model and Waters PDA (PDA) 2996.
  • YMC Hydrosphere C18 YMC Hydrosphere C18, S-5 ⁇ m, 120nm, 4.6 ⁇ 250mm I.D
  • sample temperature was 25°C ⁇ 1, and the column temperature was maintained at 30°C ⁇ 1.
  • Sample concentration was prepared at 1mg/ml, 10 ⁇ l was injected, and flow rate was analyzed at 1.0ml/min.
  • standard materials such as berberine, palmatin, and coptisine were commercially available from Sigma and used, and columbamine and jatrorizine were separated and purified from Coptis Coptis.
  • the calculation of the content of the active ingredient in the extract was performed by indicating the area ratio for each standard substance by weight percentage.
  • the ivy leaf extract and Coptis chinensis extract obtained above are 0.1:1 to 10:1 based on the weight of the solid content (Ivy leaf extract weight: Coptis chinensis extract weight), preferably 0.2:1 to 5:1, more preferably 1:1 To 4:1, more preferably 1.5:1 to 3.5:1, and most preferably 2.5:1 to 3.5:1.
  • each extract in the mixed extract is homogeneously mixed, about 2 to 3 times by weight of water is added to the mixed extract and then concentrated under reduced pressure at a temperature of 50 to 60°C, and the same amount of water is added to the concentrate. It is added again and homogeneously suspended and then freeze-dried to prepare a powdery composition.
  • the manufacturing method is a dry ivy leaf and Coptis chinensis, preferably 1:4 to 7:1 based on the weight of the rhizome region of Coptis Rhizoma (Ivy leaf weight: Coptis Coptis weight), preferably 1:1 to 6 : 1, more preferably 2: 1 to 5: 1 by mixing to prepare a mixture of ivy leaves and Coptera; And in the mixture, water, and at least one selected from the group consisting of a straight chain or branched alcohol having 1 to 4 carbon atoms, for example, water, or 10 to 70% (v/v), preferably 20 to 60% (v /v), more preferably about 25 to 55% (v/v) of an aqueous methanol solution, an aqueous ethanol solution, or a water-saturated butyl alcohol extract to obtain an extract of a mixture of ivy leaves and Coptis chinensis.
  • a straight chain or branched alcohol having 1 to 4 carbon atoms for
  • the method comprises, after the step of obtaining an extract of a mixture of ivy leaves and Coptis chinensis, a straight-chain or branched lower alcohol aqueous solution having 1 to 6 carbon atoms, preferably 1 selected from the group consisting of propyl alcohol, isopropyl alcohol, and water saturated butyl alcohol. It may further include the step of purifying the extract by taking the solvent-soluble extract obtained by adding more than one species.
  • the extraction method used in the present invention may be any commonly used method, for example, cold sedimentation, hot water extraction, ultrasonic extraction, or reflux cooling extraction method, but is not limited thereto.
  • the ivy leaf extract included in the mixed extract according to the present invention may be extracted with a 30% (m/m) ethanol extraction solvent, and the Coptis chinensis extract may be extracted with an anhydrous butanol extraction solvent.
  • composition comprising the mixed extract of ivy leaf and Coptis chinensis of the present invention can be administered to mammals, including humans, by various routes.
  • the mode of administration may be any mode commonly used, and may be administered, for example, by oral, rectal or intravenous, intramuscular, subcutaneous, intrauterine dura mater or intracerebroventricular injection.
  • compositions comprising the mixed extract of ivy leaf and Coptis chinensis of the present invention are oral formulations such as powders, granules, tablets, capsules, suspensions, emulsions, syrups, aerosols, etc., transdermal preparations, suppositories and sterile injections according to a conventional method. It can be formulated and used in a parenteral formulation in the form of a solution.
  • composition comprising the mixed extract of ivy leaf and Coptis chinensis of the present invention may further contain adjuvants such as a pharmaceutically suitable and physiologically acceptable carrier, excipient, and diluent in addition to the mixed extract.
  • Carriers, excipients and diluents that may be included in the composition of the present invention include lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, xylitol, erythritol, maltitol, starch, acacia rubber, alginate, gelatin, calcium phosphate, calcium silicate, Cellulose, methyl cellulose, microcrystalline cellulose, polyvinyl pyrrolidone, water, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate, and mineral oils.
  • diluents or excipients such as generally used fillers, extenders, binders, wetting agents, disintegrants, and surfactants can be used.
  • Solid preparations for oral administration include tablets, pills, powders, granules, capsules, and the like, and such solid preparations include at least one excipient in the extract, such as starch, calcium carbonate, and sucrose.
  • lactose (lactose), gelatin, etc. can be prepared by mixing.
  • lubricants such as magnesium stearate and talc are also used.
  • Liquid preparations for oral use include suspensions, liquid solutions, emulsions, syrups, etc.
  • various excipients such as wetting agents, sweetening agents, fragrances, and preservatives may be included. .
  • Preparations for parenteral administration include sterilized aqueous solutions, non-aqueous solutions, suspensions, emulsions, lyophilized preparations, suppositories, transdermal preparations, and the like.
  • non-aqueous solvent and suspending agent propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oil such as olive oil, and injectable ester such as ethyl oleate may be used.
  • injectable ester such as ethyl oleate
  • a base for suppositories witepsol, macrogol, tween 61, cacao butter, laurin paper, glycerogelatin, and the like can be used.
  • the dosage of the composition containing the mixed extract of the present invention may vary depending on the patient's age, weight, sex, dosage form, health condition, and disease degree, and may vary from once a day to several times a day at regular intervals according to the judgment of a doctor or pharmacist. It can also be administered in divided cycles.
  • the daily dosage may be 0.5 to 500 mg/kg, preferably 1 to 300/kg based on the active ingredient content.
  • the above dosage is an example of an average case, and the dosage may be high or low depending on individual differences.
  • the daily dosage of the composition containing the mixed extract of the present invention is less than the above dosage, a significant fruit cannot be obtained, and if it exceeds that, it is not only uneconomical, but also outside the range of the normal dosage, there is a concern that undesirable side effects may occur. It may occur, so it is better to set it within the above range.
  • the present invention provides a health functional food for preventing or improving chronic obstructive pulmonary disease containing a mixed extract of ivy leaf and Coptis chinensis.
  • the health functional food may be various foods, beverages, and food additives.
  • the content of the mixed extract as an active ingredient contained in the health functional food is not particularly limited appropriately depending on the form of the food, the desired use, etc., and may be added, for example, in 0.01 to 15% by weight of the total food weight, and a health beverage composition Silver may be added in an amount of 0.02 to 10 g, preferably 0.3 to 1 g, based on 100 ml.
  • the health beverage composition of the present invention has no particular limitation on the liquid component, and may contain various flavoring agents or natural carbohydrates as an additional component, such as a conventional beverage.
  • natural carbohydrates are monosaccharides such as disaccharides such as glucose and fructose, such as maltose, sucrose, and the like, and polysaccharides such as dextrin, cyclodextrin, and the like. These are sugars and sugar alcohols such as xylitol, sorbitol, and erythritol.
  • natural flavoring agents tacmatin, stevia extract (for example, rebaudioside A, glycyrrhizin, etc.)
  • synthetic flavoring agents sacharin, aspartame, etc.
  • the ratio of the natural carbohydrate is generally about 1 to 20 g, preferably about 5 to 12 g per 100 ml of the composition of the present invention.
  • the ivy leaf extract was obtained from the dried ivy leaves using a 30% (v/v) ethanol extraction solvent, and the Coptis chinensis extract was obtained by extracting Coptis chinensis with anhydrous butanol extraction solvent.
  • the ivy leaf extract and Coptis Coptis extract were dissolved in phosphate buffered saline (PBS) and mixed in a volume ratio of 1:3 to prepare a mixed extract of Ivy leaf and Coptis Coptisium, hereinafter prepared according to this example.
  • the mixed extract of the ivy leaves and Coptis chinensis was indicated as "AGNPP709" in each figure.
  • LPS Lipopolysaccharides
  • LPS Escherichia coli K-235. Sigma-Aldrich, St. Louis, MO
  • Non-Invasive Airway Mechanics Bomono® FinePointe, DSITM, USA
  • LPS was suspended in phosphate buffered saline to prepare an LPS solution.
  • Fine dust (PM10-LIKE, Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) was prepared as a standard base sample of fine dust for use in the experimental examples of the present invention, which was observed to have a maximum distribution size in a diameter of 2-14 ⁇ m. Became. As is known, the elements of fine dust are C 18 H 12 , C 20 H 12 , C 22 H 14 and C 22 H 12 and are similar to tunnel dust.
  • sand dust yellow soil, Hongik Bio
  • the sample was purified by heating at 250° C. for 30 minutes, and the maximum distribution size was 2.6 ⁇ m and It was observed to be 3.9 ⁇ m.
  • the elements of sand dust are SiO 2 , Al 2 O 3 , Fe 2 O 3 , K 2 O, TiO 2 , MgO and CaO, and have an elemental composition ratio very similar to that of sand dust collected during the yellow dust period in Korea. Confirmed.
  • mice 20-25g 6-10 week old male C57BL/6 mice (wild type mouse; Orient Bio, Korea) were purchased and bred for 1 week under standard laboratory conditions before use. All mice were maintained under air-conditioned 18-24° C. light/dark (12 hours/12 hours) conditions and relative humidity was 40-60%.
  • Example 2 In order to prepare a mouse model caused by chronic obstructive pulmonary disease, the LPS solution prepared in Example 2 was used 3 times a week for 4 weeks using Non-Invasive Airway Mechanics (Buxco ® FinePointe, DSITM, USA). By spraying into the bronchi of the mouse for 5 minutes, chronic obstructive pulmonary disease was induced by systemic sensitization.
  • mice in which chronic obstructive pulmonary disease was induced in Example 4-2 for the mice in which chronic obstructive pulmonary disease was induced in Example 4-2, for 2 weeks from day 21 (week 3).
  • a daily nebulizer (Microsprayer ® Aerosolizer) was injected into the trachea by 50ul of fine dust, sand dust, and a mixture of fine dust or sand dust (10 mg/ml concentration) according to Example 3 using zonde (20G, 50mm) (Fig. 1).
  • mice prepared according to Example 4-1 were randomly divided into 11 groups as follows (6 mice in each group):
  • PBS excipient negative control
  • LPS LPS alone injection group
  • Fine dust alone injection group (“Fine dust”);
  • Fine dust and sand dust mixed injection group (“Fine dust & Sand dust”);
  • mice of the negative control group were sprayed with 1 mL of PBS daily using Non-Invasive Airway Mechanics.
  • Dexamethasone was orally administered to mice of the positive control group at a daily dose of 1 mg/kg for 2 weeks.
  • the mixture was orally administered at a dose of 25 mg/kg or 100 mg/kg daily for 2 weeks.
  • the experimental time table of the present invention is briefly shown in FIG. 2.
  • the cells were filtered through a 40um cell strainer, red blood cells were removed through ACK lysis buffer, centrifuged, and then suspended in PBS, and then analyzed by FACs, RT-PCR, and Western blotting methods. .
  • interleukin an inflammatory cytokine produced by alveolar macrophages
  • absorbance at 405 nm using ⁇ -IL-1 ⁇ antibody, ⁇ -IL-6 antibody, and ⁇ -TNF- ⁇ antibody using an ELISA kit.
  • the amount of production of IL-1 ⁇ , IL-6, and tumor necrosis factor TNF- ⁇ was measured.
  • Th17 is ⁇ -IL-17A antibody
  • Tregs is ⁇ -TGF- ⁇ antibody
  • the amount of cytokine produced by each cell was measured using an ELISA kit in the same manner.
  • RNA was transcribed into cDNA at 42° C. for 1 hour in 25 ⁇ l solution containing 5x RT buffer, 10 mM dNTP (200 units), MMLV-RT (Molonimous leukemia virus-reverse transcriptase) and 100 pmol oligo-dT primer.
  • CFX ConnectTM Real-Time PCR Detection System Bio-Rad was used for 45 times at 95°C for 10 seconds and 60°C for 30 seconds.
  • Th17 cell transcription factor was confirmed by PCR assay using ROR ⁇ t primer, and the expression level of Treg cell transcription factor was confirmed by PCR assay using Foxp3 primer.
  • cDNA was used with 2x iQTM SYBR Green Supermix (Bio-Rad).
  • PCR product was subjected to melting-curve analysis.
  • a comparative threshold method was used to calculate the relative amount of mRNA in the experimental sample compared to the control sample. Gene expression was normalized to beta-actin.
  • the PCR primer sequences used in this test are shown in Table 1 below.
  • the lungs were fixed with 10% neutral phosphate buffered formalin and then embedded with paraffin.
  • the embedded lung tissue was excised (4 ⁇ m) and stained with hematoxylin-eosin (H&E) to visualize the inflammatory response and pathological changes in the lung tissue. This was observed at low magnification (x100) and high magnification (x630) through a microscope to confirm pathological effects.
  • H&E hematoxylin-eosin
  • Example 6-1 Measurement of cell activation and proinflammatory cytokine secretion of alveolar macrophages in lung cells and BALF
  • BALF and lung cells were extracted from 11 groups of mice as experimental subjects.
  • the extracted alveolar macrophages were stained with FITc-conjugated anti-CD11c antibody and APC-conjugated anti-CD45 antibody and analyzed for fluorescence with FACSCalibur (see Example 5-5), and inflammatory cytokines interleukin IL-1 ⁇ , IL-6, and tumor
  • FACSCalibur see Example 5-5
  • inflammatory cytokines interleukin IL-1 ⁇ , IL-6
  • tumor The production amount of necrosis factor TNF- ⁇ was measured by an ELISA assay (see Example 5-3), and is shown in FIG. 4.
  • the mixed extract of ivy leaf and Coptis chinensis of the present invention reduced the number of alveolar macrophages and the secretion of proinflammatory cytokines in the LPS alone administration group as well as the mice exposed to fine dust and sand dust along with LPS. .
  • the mixed extract of ivy leaf and Coptis chinensis of the present invention has a therapeutic effect on both chronic obstructive pulmonary disease and chronic obstructive pulmonary disease exacerbated by fine dust or sand dust.
  • BALF and lung cells were extracted from 11 groups of mice as experimental subjects, and are shown in FIG. 5, and the meaning of each graph of FIG. 5 is as follows.
  • FIG. 5A Number of Th17 cells (phenotype: CD4+IL17+ cells)
  • FIG. 5B Expression level of IL-17A (Th17 cell secreted inflammatory cytokine)
  • the expression level of Treg cells and the expression level of TGF- ⁇ decreased, and administration of the mixed extract of ivy leaf and Coptis chinensis of the present invention reduced the number of Treg cells and TGF- ⁇ . It was confirmed that the expression level was significantly increased.
  • the expression level of Foxp3, a transcription factor of Tregs decreases when the number of Treg cells decreases, but since TGF- ⁇ exhibits a mechanism that promotes the production of Foxp3, Foxp3 is similar to the expression level of TGF- ⁇ , not the number of Treg cells. It is understood to have a numerical change pattern.
  • administration of the mixed extract of ivy leaf and Coptis chinensis of the present invention reduces the increased number of Th17 cells in chronic obstructive pulmonary disease, and increases the number of reduced Treg cells, by the mechanism of increasing the number of reduced Treg cells, chronic obstructive pulmonary disease and fine dust or sand. It can be confirmed that it has a therapeutic effect for all chronic obstructive pulmonary disease exacerbated by dust.
  • Example 5 The lung parenchymal fragments were stained with hematoxylin and eosin according to -7, and then observed under a microscope (see Fig. 6).
  • mice administered with the mixed extract of ivy leaf and Coptis chinensis of the present invention the accumulation of cells infiltrated under the mucous membrane of the airway decreased and remarkably recovered to normal lung structure.
  • the invasion and accumulation of cells decreased by 60% and 70%, respectively.
  • the 100 mg/kg AGNPP709-administered mouse group significantly improved the pathological changes by making the inflammatory cell infiltration of the airway epithelium very mild compared to the AGNPP709 non-administered mice (FIG. 6E and F Reference).
  • the mixed extract of ivy leaf and Coptis chinensis of the present invention has a tissue and pathological therapeutic effect for both chronic obstructive pulmonary disease and chronic obstructive pulmonary disease exacerbated by fine dust or sand dust.
  • the ratio of p-I ⁇ B ⁇ in the active state and I ⁇ B ⁇ in the normal state (p-I ⁇ B ⁇ / I ⁇ B ⁇ ) for the 11 mice in the experimental group. And by measuring the ratio (p-p65 / p65) of p-p65 in the active state and p65 in the normal state, the difference in the degree of activation of the NF- ⁇ B signaling system was compared and confirmed.
  • Beta-actin is a protein mainly used as a control (loading control) to examine the integrity and protein denaturation of Western blotting cells.
  • the activation states of I ⁇ B ⁇ and p65 proteins increased in the LPS-treated group, and the activation states of I ⁇ B ⁇ and p65 were significantly increased in the group injected with fine dust and sand dust along with LPS.
  • the degree of activation of I ⁇ B ⁇ and p65 was similar to that of the negative control group in the group administered with the mixed extract of Ivy leaf and Coptis chinensis of the present invention (see the graph above in FIG. 7).
  • the mixed extract of ivy leaf and Coptis chinensis of the present invention is used for both chronic obstructive pulmonary disease and chronic obstructive pulmonary disease exacerbated by fine dust or sand dust, the amount of inflammatory cytokine produced by the mechanism of inhibiting the activation of I ⁇ B ⁇ and p65 It was confirmed that it has an anti-inflammatory effect by reducing it to show the therapeutic effect of chronic obstructive pulmonary disease.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Abstract

본 발명의 아이비엽 및 황련 혼합 추출물은, 만성 폐쇄성 폐질환, 특히 미세먼지 또는 모래먼지를 포함하는 공기 중 미세먼지에 의해 악화된 만성 폐쇄성 폐질환에 의해 증가된 폐포 대식세포의 수, 염증성 사이토카인 및 케모카인의 발현량의 감소시키고, 염증세포 침윤으로 인한 점막하층 확대 및 출혈 증상을 완화시키며, 활성화된 NF-κB 신호전달 경로를 억제하여, 상기 질환에 대하여 예방 또는 치료의 약리학적 효과를 갖는다. [대표도] 도 4

Description

혼합 생약 추출물을 포함하는 만성 폐쇄성 폐질환 치료용 약학 조성물
본 발명은 아이비엽과 황련(Coptidis rhizome)의 혼합 추출물을 활성 성분으로 포함하는, 만성 폐쇄성 폐질환(COPD)을 치료하기 위한 약학 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 약학 조성물은 특히 미세먼지 또는 모래먼지를 포함하는 공기 중 미세입자에 의해 악화된 만성 폐쇄성 폐질환의 치료에 효과적이다.
만성 폐쇄성 폐질환(chronic obstructive pulmonary disease; COPD)은 폐쇄성 폐질환의 유형 중 하나로, 증상으로는 장기간 객담을 동반하는 기침이 계속되고, 기도 폐쇄 증상으로 기류의 속도가 감소하여 호흡이 곤란해지며, 감기와 유사한 호흡기 감염이 빈발한다. 만성 폐쇄성 폐질환은 폐에 염증이 계속되어 비정상적 폐포의 증가와 폐기종 및 폐기능의 악화로 결국 사망에 이르게 하는 질환으로서, 세계 사망률 4위, 국내 사망률 7위를 차지한다.
이러한 만성 폐쇄성 폐질환의 원인은 독성 분자나 가스에 대한 폐의 비정상적 만성 염증 반응으로, 흡연, 도시화와 공해, 호흡기 감염증 등의 여러 가지 인자들이 복합적으로 관여하는 것으로 알려져 있다. 더욱이 한국, 일본 및 중국을 포함한 동북아시아의 대기오염이 점점 악화되고 있다. 모래먼지 및 미세먼지와 같은 대부분의 대기오염 물질은 중국의 모래폭풍뿐만 아니라 폐기물 처리, 도로 교통 및 산업 배출 등 국내 대기오염원으로부터 수송된다. 미세먼지 및 모래먼지를 포함한 입자는 중금속, 플라스틱 성분 및 미생물과 같이 많은 독성 화학물질을 함유하고 있으며 호흡을 통해 호흡기 건강에 영향을 미친다. 미세먼지 및 모래먼지와 같이 직경이 10 μm 미만(PM10)인 입자가 호흡기관에 침투하여 폐의 염증 반응을 촉진하는 염증성 사이토카인 발현을 증가시킨다는 것이 알려져 있다. 또한 이러한 미세 입자는 소기도(small airway) 섬유증과 폐포 파괴를 유발하여 기도 협착을 야기하여, 만성 폐쇄성 폐질환을 악화시킨다.
그러나, 이러한 만성 폐쇄성 폐질환의 증상은 비가역적이며 점차적으로 진행하는 것이 특징이며, 아직까지 어떠한 치료도 이의 진행을 막을 수 있는 것은 없는 것으로 알려져 있다(National Heart, Lung, and Blood Institute. Morbidity & Mortality: Chartbook on Cardiovascular, Lung, and Blood Diseases. Global Strategy for the Diagnosis, Management, and Prevention of Chronic Obstructive Pulmonary Disease, 2003).
만성 폐쇄성 폐질환의 정확한 발생기전은 알려져 있지 않지만, 최근 연구에 의하면, 만성 폐쇄성 폐질환 환자의 기관지폐포세척액(Broncholaveloar Lavage Fluid; BALF) 및 가래에서 폐의 공기 중 입자를 세척 및 처리하는 것으로 알려진 폐포 대식세포(alveolar macrophages; AM), 호중구, 호산구 및 T 림프구(T lymphocytes)가 증가되었고, 특히 건강한 비흡연자 및 건강한 흡연자에 비하여 폐포 대식세포 및 호중구의 비율이 유의하게 높게 나타났다고 보고되었다(P.J. Barnes, B. Chowdhury, S.A. Kharitonov, et al. Pulmonary biomarkers in chronic obstructive pulmonary disease, Am J Respir Crit Care Med. 174 (2006) 6-14).
폐 공간에 존재하는 폐포 대식세포는 폐로 침투한 뒤 활성산소종(reactive oxygen species; ROS), 사이토카인(cytokine) 및 케모카인(chemokine)을 분비함으로써 염증 매개에 중요한 역할을 한다.
폐포 대식세포로 인해 분비된 MIP-2와 CXCL-1 등의 케모카인(chemokine)은 만성 폐쇄성 폐질환의 진행에 있어, 기도상피세포, 폐포세포 및 염증세포의 수용체와 결합하여 화학주성 효과를 나타내며, 폐 조직내 염증부위로 과도한 염증세포의 침윤을 유발시킨다. 또한 케모카인은 염증세포를 활성화시켜, 염증성 사이토카인(TNF-α, IL-1β, IL-6 등)을 생산하게 되며, 특히 TNF-α는 NF-κB(Nuclear factor-κB)와 같은 염증성 신호전달 경로를 활성화시켜 염증반응을 더욱 악화시킨다.
NF-κB는 TNF-α, IL-1β, IL-6와 같은 전염증성 사이토카인의 방출을 활성화하는 프로토타입의 신호전달 경로로 간주된다(Signal Transduction and Targeted Therapy volume 2, Article number: 17023 (2017)). NF-κB는 염증성 사이토카인, 케모카인 및 접착 분자의 생성을 직접적으로 증가시킬 뿐만 아니라 세포 증식, 세포 사멸, 형태 형성 및 분화를 조절함으로써 직접적으로 염증을 유발시킨다. 한편, NF-κB 신호전달 경로의 하위 단백질인 IκBα와 p65은 인산화가 되면서 활성화되는 것으로 알려져 있다(Nabel GJ, Verma IM (November 1993). "Proposed NF-kappa B/I kappa B family nomenclature". Genes & Development. 7 (11): 2063.).
또한 케모카인은 전염증인자 뿐만 아니라 지속적인 염증반응, 폐실질조직의 손상, 폐조직내 섬유화를 일으키는 다양한 성장인자 및 활성산소종을 생산한다. 이러한 일련의 반응로 인해 만성 폐쇄성 폐질환 환자의 가장 큰 특징인 현저한 폐기능 저하를 야기한다.
최근 연구에 따르면 만성 폐쇄성 폐질환으로 인해 면역 시스템 특히 T 세포가 활성화되면, T 세포는 T 세포 유발 세포독성으로 인해 직접적으로, 또는 폐포 대식세포의 활성화로 인해 간접적으로 폐의 파괴를 유발할 수 있음이 보고되었다(H.S. Kim, Y.S Chung, H.J Choi. On air pollutant variations in the cases of long-range transport of dust particles observed in central Korea in the leeside of China in 2010, Air Qual Atmos Health. 7 (2014) 309-323.). 즉, 만성 폐쇄성 폐질환으로 인한 염증이 증가할수록 케모카인 분비량이 증가하며, 이로 인해 T 림프구의 염증 발생 위치로의 침투가 증가하게 되며 분비량이 증가하게 된다.
또한 폐포 대식세포에 의해 생성된 염증성 사이토카인 IL-6은 미감작 T 세포를 도움 T 세포 유형 17(“Th17”)로 분화되는 것을 촉진시키고, 이는 IL-17A 사이토카인이 분비되도록 하여, 결국 Th17 세포의 발현량 및 사이토카인의 분비량을 더욱 증가시키게 된다.
나아가, 염증성 사이토카인 분비량이 증가되면 Th17 세포의 전사 인자인 RORγt primer의 발현량 증가에도 영향을 미쳐, 폐포 대식세포 및 Th17 세포는 상호작용을 통해 염증 증가를 더욱 촉진시키고, 조절 T 세포 및 Th17 세포의 불균형을 유발하여 염증 작용을 악화시키게 된다.
또한 다른 연구에서는, 만성 폐쇄성 폐질환으로 인해 조절 T 세포(“Treg”)의 수는 감소되고, 도움 T 세포 유형 17(“Th17”)은 증가하는 것이 밝혀졌고, Treg 세포의 발현량 및 Th17 세포의 발현량은 음의 상관 관계가 있음이 확인되었다(Inflammation. 2016 Aug; 39(4): 1334-44. 및 Int J Chron Obstruct Pulmon Dis. 2008 Dec; 3(4): 531-541.). 한편 Th17 세포는 만성 폐쇄성 폐질환의 주요 특징인 폐 염증과 관련이 있으며, Treg 세포는 폐 염증에 대해 항염증 효과를 가지는 것으로 알려져 있는바, 상기 연구는 Treg 세포 및 Th17 세포의 발현량이 만성 폐쇄성 폐질환 발생에 중요한 역할을 한다는 것을 의미한다.
또한 만성 폐쇄성 폐질환의 병리·조직학적 특징은 증가된 염증 반응으로 인해 나타나는데, 이는 축적된 염증 세포로 인해 기도의 벽을 두껍게 만들고 폐 기능을 점진적으로 감소시키고, 염증 세포의 침윤으로 인한 점막하층 확대 및 출혈 현상을 유발시킨다.
현재 만성 폐쇄성 폐질환에 사용되는 치료물질은 폐 조직 내 염증을 개선하는 것을 중점적으로 개발되어 오고 있으며, 주로 스테로이드제제, 항염제 등이 사용되고 있다. 예컨대, 대표적인 치료제인 글루코코르티코이드(glucocorticoid)는 효과 면에서는 강력하나 선택적으로 작용하는 것이 아니라 모든 면역반응과 항염증반응을 억제하기 때문에 경우에 따라서 필요한 면역반응까지 억제하는 문제점이 있으며, 약물 부작용이 문제가 되어 흡입 치료를 시행하고 있다.
이러한 종래의 치료물질들은 주로 화학 합성 물질들로서, 면역억제 및 내성 등의 다양한 부작용을 야기하여 장기간 치료가 필요한 만성 폐쇄성 폐질환 환자에게는 부적합하다는 문제점이 있다. 이에 따라 부작용이 적으면서도 효과적인 만성 폐쇄성 폐질환 치료제가 요구되고 있다.
한편 부작용 감소의 측면에서 천연물의 사용이 주목받고 있다. 천연물에 관해 최근 보고된 연구로서, 한국특허공보 제10-1130259호에서는, 아이비엽 및 황련의 혼합 추출물이 거담 활성, 진해 활성, 항히스타민 효과, 기관지 수축 억제 및 천식에 대한 약리효과를 가진다는 것을 개시하고 있다. 그러나 상기 문헌에서는 아이비엽 및 황련의 혼합 추출물이 만성 폐쇄성 폐질환의 예방 또는 치료에 효과적인지에 대해서는 전혀 언급한 바 없다.
[선행기술문헌]
[특허문헌]
(특허문헌 1) 한국특허공보 제10-1130259호
본 발명은 아이비엽 및 황련의 혼합 추출물을 유효성분으로 포함하는, 만성 폐쇄성 폐질환, 특히, 미세먼지 또는 모래먼지를 포함하는 공기 중 미세입자에 의해 악화된 만성 폐쇄성 폐질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.
본 발명자들은 만성 폐쇄성 폐질환의 치료제를 개발하기 위하여 연구한 결과, 아이비엽 및 황련의 혼합 추출물이 상기 질환 치료에 우수한 효과가 있는 것을 확인하여 본 발명을 완성하였다.
이에 본 발명은 아이비엽 및 황련의 혼합 추출물을 유효성분으로 포함하는 만성 폐쇄성 폐질환 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다. 구체적으로, 본 발명의 약학 조성물은 아이비엽과 황련의 혼합 추출물을 유효성분으로 포함하고, 상기 아이비엽과 황련의 혼합 추출물은 아이비엽 추출물과 황련 추출물의 혼합물, 또는 아이비엽과 황련의 혼합물의 추출물이고, 상기 아이비엽 추출물, 황련 추출물 또는 아이비엽과 황련의 혼합물의 추출물은 아이비엽, 황련 또는 아이비엽과 황련 혼합물에 물, 및 탄소수 1 내지 4개의 직쇄 또는 분지형 알코올로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 용매를 가하여 얻어진 조추출물, 또는 상기 조추출물에 탄소수 1 내지 6개의 직쇄 또는 분지형 알코올 수용액을 가하여 얻어진 용매 가용 추출물이다.
일 실시태양에서, 상기 만성 폐쇄성 폐질환은 미세먼지 또는 모래먼지를 포함하는 공기 중 미세입자에 의해 악화된 만성 폐쇄성 폐질환일 수 있다. 상기 미세입자는 직경이 10 μm 미만인 것일 수 있다.
일 실시태양에서, 본 발명의 약학 조성물에 포함되는 혼합 추출물 내의 아이비엽 추출물과 황련 추출물의 함량비는 고형분 중량 기준으로 0.1:1 내지 10:1, 바람직하게는, 0.2:1 내지 5:1 (아이비엽 추출물 중량:황련 추출물 중량)일 수 있다.
일 실시태양에서, 본 발명의 약학 조성물은 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸, 경피제, 좌제, 또는 멸균 주사용액으로 제형화된 것일 수 있다.
본 발명은 또한 아이비엽과 황련의 혼합 추출물을 유효성분으로 포함하는 만성 폐쇄성 폐질환의 예방 또는 개선용 건강 기능성 식품을 제공한다. 상기 아이비엽과 황련의 혼합 추출물은 아이비엽 추출물과 황련 추출물의 혼합물, 또는 아이비엽과 황련의 혼합물의 추출물이고, 상기 아이비엽 추출물, 황련 추출물 또는 아이비엽과 황련의 혼합물의 추출물은 아이비엽, 황련 또는 아이비엽과 황련 혼합물에 물, 및 탄소수 1 내지 4개의 직쇄 또는 분지형 알코올로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 용매를 가하여 얻어진 조추출물, 또는 상기 조추출물에 탄소수 1 내지 6개의 직쇄 또는 분지형 알코올 수용액을 가하여 얻어진 용매 가용 추출물일 수 있다.
본 발명의 아이비엽 및 황련 혼합 추출물은, 만성 폐쇄성 폐질환, 특히 미세먼지 또는 모래먼지를 포함하는 공기 중 미세입자에 의해 악화된 만성 폐쇄성 폐질환에 의해 증가된 폐포 대식세포의 수, 염증성 사이토카인 및 케모카인의 발현량의 감소시키고, 염증세포 침윤으로 인한 점막하층 확대 및 출혈 증상을 완화시키며, 활성화된 NF-κB 신호전달 경로를 억제하여, 만성 폐쇄성 폐질환, 특히 미세먼지 또는 모래먼지를 포함하는 공기 중 미세입자에 의해 악화된 만성 폐쇄성 폐질환에 대하여 예방 또는 치료의 약리학적 효과를 갖는다.
도 1은 zonde를 이용한 미세먼지 또는 모래먼지의 마우스 기관내 분사하는 방법을 나타낸 것이다.
도 2는 본 발명의 실시예의 실험 스케줄을 간략히 나타낸 타임 테이블을 도시한 것이다.
도 3은 마우스 모델로부터 BALF를 추출하는 방법을 나타낸 것이다.
도 4는 COPD 마우스 모델의 폐포 대식세포에서 세포군 및 전염증성 사이토카인의 수치를 그래프로 도시한 것이다.
도 5는 COPD 마우스 모델의 Th17 세포수, Treg 세포수, 사이토카인 및 전사인자 수치를 그래프로 도시한 것이다.
도 6은 COPD 마우스 모델의 폐 조직 내 병리학적 변화를 현미경으로 촬영한 이미지이다.
도 7은 COPD 마우스 모델에서 NF-κB 신호전달의 활성도 확인을 통해 본 발명의 아이비엽 및 황련 혼합 추출물의 기전을 확인하기 위해, NF-κB의 하위 단백질(p65 및 IκBα)을 웨스턴 블롯팅 방법으로 분석한 밴드 이미지 및 이로부터 계산된 p-IκBα / IκBα 및 p-p65 / p65의 값을 그래프로 도시한 것이다.
본원에서 사용되는 용어 "예방"은 본 발명의 조성물의 투여로 만성 폐쇄성 폐질환(chronic obstructive pulmonary disease, COPD)을 억제시키거나 진행을 지연시키는 모든 행위를 의미한다.
본원에서 사용되는 용어 "치료" 및 "개선"은 본 발명의 조성물의 투여로 만성 폐쇄성 폐질환의 증상이 호전 또는 이롭게 변경되는 모든 행위를 의미한다.
본원에서 사용되는 용어 "투여"는 임의의 적절한 방법으로 개체에 소정의 본 발명의 조성물을 제공하는 것을 의미한다.
본 발명은 아이비엽 및 황련의 혼합 추출물을 유효성분으로 포함하는 만성 폐쇄성 폐질환 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다. 구체적으로, 본 발명의 약학 조성물은 아이비엽과 황련의 혼합 추출물을 유효성분으로 포함하고, 상기 아이비엽과 황련의 혼합 추출물은 아이비엽 추출물과 황련 추출물의 혼합물, 또는 아이비엽과 황련의 혼합물의 추출물이고, 상기 아이비엽 추출물, 황련 추출물 또는 아이비엽과 황련의 혼합물의 추출물은 아이비엽, 황련 또는 아이비엽과 황련 혼합물에 물, 및 탄소수 1 내지 4개의 직쇄 또는 분지형 알코올로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 용매를 가하여 얻어진 조추출물, 또는 상기 조추출물에 탄소수 1 내지 6개의 직쇄 또는 분지형 알코올 수용액을 가하여 얻어진 용매 가용 추출물이다.
일 실시태양에서, 본 발명은 아이비엽 및 황련의 혼합 추출물을 만성 폐쇄성 폐질환 예방 또는 치료를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 만성 폐쇄성 폐질환 예방 또는 치료 방법을 제공한다. 본원에서 사용된 용어 "대상체"는 인간 및 비-인간 동물을 포함한다. 비-인간 동물은 모든 척추동물, 예를 들어 포유류, 예컨대 비-인간 영장류, 양, 개, 소, 말 등을 포함한다.
본 발명에 따른 아이비엽 및 황련의 혼합 추출물은, 만성 폐쇄성 폐질환에 의해 증가된 폐포 대식세포의 수, 염증성 사이토카인 및 케모카인의 발현량을 감소시키고, 염증세포 침윤으로 인한 점막하층 확대 및 출혈 증상을 완화시키며, 또한 활성화된 NF-κB 신호전달 경로를 억제하여, 만성 폐쇄성 폐질환의 증상을 치료 또는 완화하는 약리 효과를 나타내는 것을 특징으로 한다.
또한 미세먼지 및 모래먼지로 악화된 만성 폐쇄성 폐질환으로 인해, 미세먼지 또는 모래먼지를 주입하지 않은 경우보다 폐포 대식세포의 수, 염증성 사이토카인 및 케모카인의 발현량이 더욱 증가되고, 염증세포 침윤으로 인한 점막하층 확대 및 출혈 증상이 더 악화되며, 또한 NF-κB 신호전달 경로가 더 활성화된다. 본 발명에서는 미세먼지 또는 모래먼지를 포함하는 공기 중 미세입자에 의해 악화된 만성 폐쇄성 폐질환에 대해서도 본 발명에 따른 아이비엽 및 황련의 혼합 추출물이 상기 악화된 증상들을 완화시켜, 미세먼지 또는 모래먼지를 포함하는 공기 중 미세입자에 의해 악화된 만성 폐쇄성 폐질환에 대해서도 치료 또는 완화의 약리 효과를 가지는 것을 특징으로 한다. 이 때 상기 미세입자는 직경이 10 μm 미만일 수 있으며, 호흡기관에 침투하여 폐의 염증 반응을 촉진하는 염증성 사이토카인 발현을 증가시키며, 소기도 섬유증과 폐포 파괴를 유발하여 기도 협착을 야기하며, 만성 폐쇄성 폐질환을 악화시키는 것일 수 있다.
아이비는 두릅나무과(Araliaceae)에 속하고, 송악속(Hedera)의 식물들(Hedera spp.)을 의미하는 것으로, 예컨대, Hedera algeriensis, Hedera azorica, Hedera canariensis, Hedera colchica, Hedera helix, Hederahibernica, Hedera maderensis, Hedera nepalensis, Hedera pastuchowii, Hedera rhombea 등일 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다.
한편, 황련(Coptidis rhizoma)은 미나리아제비과(Ranunculaceae)에 속하는 다년생 초본으로 항미생물작용, 혈압강하작용, 소염작용 등의 약리 효과가 있는 것으로 알려져 있으며, 한방에서는 건위제, 중추 신경계 작용제, 자궁, 방광, 기관지 및 신경계 작용제로 사용되고 있다. 주로 약리 성분으로서 알칼로이드(alkaloid)인 베르베린(berberine), 마그노플로린(magnoflorine) 등을 함유하고 있는 것으로 알려져 있다(정보섭, 신민교, 도해향약(생약)대사전, 490-493, 1990).
본 발명에 있어서, '아이비엽과 황련의 혼합 추출물'이라는 용어는 아이비엽과 황련을 각각 추출하여 얻어진 아이비엽 추출물과 황련 추출물과의 혼합물, 및 아이비엽과 황련의 혼합물을 추출하여 얻어진 추출물을 모두 나타내기 위한 것으로 사용된다. 또한 상기 '추출물'은 조추출물 또는 특정 용매 가용 추출물 (분획)을 의미하는 것으로, 용액, 농축물 또는 분말 상태일 수 있다.
본 발명은 아이비엽과 황련의 혼합 추출물을 사용함으로써 아이비엽 추출물과 황련 추출물을 단독으로 사용한 경우보다 시너지 효과를 얻을 수 있는데, 상기 혼합 추출물 내의 아이비엽 추출물과 황련 추출물의 함량비는 고형분 중량 기준으로 0.1:1 내지 10:1(아이비엽 추출물중량:황련 추출물 중량, 이하 동일), 바람직하게는 0.2:1 내지 5:1, 보다 바람직하게는 1:1 내지 4:1, 더욱 바람직하게는 1.5:1 내지 3.5:1, 가장 바람직하게는 2.5:1 내지 3.5:1일 수 있다. 상기 '고형분'은 추출물 제조에 사용된 용매를 제거한 상태를 의미한다.
한 구체예에 있어서, 본 발명에 따른 혼합 추출물은 아이비엽 추출물과 황련 추출물의 혼합물일 수 있다. 상기 아이비엽 추출물은 건조 아이비 잎을 물, 및 탄소수 1 내지 4개의 직쇄 또는 분지형 알코올로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상으로 추출하여 얻어진 조추출물 또는 상기 조추출물에 탄소수 1 내지 6개의 저급 알코올 수용액, 바람직하게는 프로필알코올 수용액 및 이소프로필알코올 수용액, 및 수포화 부틸알코올로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 가하여 얻어진 용매 가용 추출물일 수 있다. 아이비엽 추출물 제조에 사용되는 아이비는 Hedera spp. 예컨대, Hedera algeriensis, Hedera azorica, Hedera canariensis, Hedera colchica, Hedera helix, Hedera hibernica, Hedera maderensis, Hedera nepalensis, Hedera pastuchowii, Hedera rhombea 등으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상일 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다.
또한, 상기 황련 추출물은 황련(Coptidis rhizoma), 바람직하게는 황련 근경부위를 물, 및 탄소수 1 내지 4개의 직쇄 또는 분지형 알코올로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상으로 추출하여 얻어진 조추출물 또는 상기 조추출물에 탄소수 1 내지 6개의 저급 알코올 수용액, 바람직하게는 프로필알코올 수용액 및 이소프로필알코올 수용액, 및 수포화 부틸알코올로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 가하여 얻어진 용매 가용 추출물일 수 있다.
바람직한 구체예에 있어서, 아이비엽 또는 황련의 조추출물 제조에 사용되는 용매는 물, 또는 10 내지 70%(v/v), 바람직하게는 20 내지 60%(v/v), 보다 바람직하게는 약 25 내지 55%(v/v)의 탄소수 1 내지 4개의 직쇄 또는 분지형 알코올 수용액, 바람직하게는 메탄올 수용액, 에탄올 수용액, 및 수포화 부틸알코올로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상일 수 있다.
또한, 상기 아이비엽 또는 황련의 용매 가용 추출물의 제조에 사용되는 용매는 10 내지 70%(v/v), 바람직하게는 20 내지 60%(v/v), 보다 바람직하게는 약 25 내지 55%(v/v)의 탄소수 1 내지 6개의 저급 알코올 수용액, 바람직하게는 프로필알코올 수용액, 이소프로필알코올 수용액, 및 수포화 부틸알코올로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상일 수 있다.
또 다른 구체예에 있어서, 본 발명에 따른 혼합 추출물은 아이비엽과 황련의 혼합물의 추출물일 수 있다. 예컨대, 상기 혼합 추출물은 아이비엽과 황련을 혼합한 후, 상기 혼합물을 물, 및 탄소수 1 내지 4개의 직쇄 또는 분지형 알코올로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상으로 추출하여 얻어진 조추출물 또는 상기 조추출물에 탄소수 1 내지 6개의 저급 알코올 수용액, 바람직하게는 프로필알코올 수용액 및 이소프로필알코올 수용액, 및 수포화 부틸알코올로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 가하여 얻어진 용매 가용 추출물일 수 있다.
바람직한 구체예에 있어서, 아이비엽 및 황련 혼합물의 조추출물 제조에 사용되는 용매는 물, 또는 10 내지 70%(v/v), 바람직하게는 20 내지 60%(v/v), 보다 바람직하게는 약 25 내지 55%(v/v)의 메탄올 수용액, 에탄올 수용액 또는 수포화 부틸알코올일 수 있다. 또한, 상기 용매 가용 추출물의 제조에 사용되는 용매는 10 내지 70%(v/v), 바람직하게는 20 내지 60%(v/v), 보다 바람직하게는 약 25 내지 55%(v/v)의 탄소수 1 내지 6개의 저급 알코올 수용액, 바람직하게는 프로필알코올 수용액, 이소프로필알코올 수용액, 및 수포화 부틸알코올로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상일 수 있다.
또 다른 측면에 있어서, 본 발명은 만성 폐쇄성 폐질환 치료 또는 개선 활성을 갖는 아이비엽과 황련의 혼합 추출물을 제조하는 방법에 관한 것이다.
한 구체예에 있어서, 상기 제조 방법은 건조 아이비엽을 물 및 탄소수 1 내지 4개의 직쇄 또는 분지형 알코올로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상, 예컨대, 물, 또는 10 내지 70%(v/v), 바람직하게는 20 내지 60%(v/v), 보다 바람직하게는 약 25 내지 55%(v/v)의 메탄올 수용액, 에탄올 수용액 또는 수포화 부틸알코올로 추출하여 아이비엽 추출물을 얻는 단계;
황련, 바람직하게는 황련 근경부위를 물, 및 탄소수 1 내지 4개의 직쇄 또는 분지형 알코올로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상, 예컨대, 물, 또는 10 내지 70%(v/v), 바람직하게는 20 내지 60%(v/v), 보다 바람직하게는 약 25 내지 55%(v/v)의 메탄올 수용액, 에탄올 수용액 또는 수포화 부틸알코올로 추출하여 황련 추출물을 얻는 단계; 및 상기 얻어진 아이비엽 추출물과 황련 추출물을 고형분 중량 기준으로 0.1:1 내지 10:1(아이비엽 추출물 중량:황련 추출물 중량), 바람직하게는 0.2:1 내지 5:1, 보다 바람직하게는 1:1 내지 4:1, 더욱 바람직하게는 1.5:1 내지 3.5:1, 가장 바람직하게는 2.5:1 내지 3.5:1로 혼합하는 단계를 포함할 수 있다.
이 때, 상기 각각의 아이비엽 추출물 제조 단계 및 황련 추출물 제조 단계는 각각의 추출물에 탄소수 1 내지 6개의 저급 알코올 수용액, 바람직하게는 수포화 부틸알코올, 프로필 알코올 및 이소프로필 알코올로 이루어진군에서 선택된 1종 이상을 가하여 얻어진 용매 가용 추출물을 취하여 추출물을 정제하는 단계를 추가로 포함할 수 있다.
상기 구체예에 있어서, 본 발명에 따른 아이비엽 추출물의 제조 과정을 보다 상세하게 설명하면 다음과 같다:
아이비엽을 절단하고 물로 세척하여 협착물을 제거하고 건조시킨 후, 상기 건조 아이비엽의 중량에 대하여 약 5 내지 20 부피배, 바람직하게는 7 내지 15 부피배의 물, 및 탄소수 1 내지 4개의 직쇄 또는 분지형 알코올로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상, 예컨대, 물, 또는 10 내지 70%(v/v), 바람직하게는 20 내지 60%(v/v), 보다 바람직하게는 약 25 내지 55%의 메탄올 수용액, 에탄올 수용액 또는 수포화 부틸알코올로 환류 추출한다. 추출 온도는 40 내지 110℃, 바람직하게는 55 내지 90℃인 것이 좋다.
추출 후 여과하여 여과액을 모으고, 잔사에 다시 약 5 내지 15 부피배, 바람직하게는 8 내지 12 부피배의 물, 및 탄소수 1 내지 4개의 직쇄 또는 분지형 알코올로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상, 예컨대, 물, 또는 10 내지 70%(v/v), 바람직하게는 20 내지 60%(v/v), 보다 바람직하게는 약 25 내지 55%(v/v)의 메탄올 수용액, 에탄올 수용액 또는 수포화 부틸알코올로 환류 추출한다. 추출 온도는 특별한 제한은 없지만 40 내지 110℃, 바람직하게는 55 내지 90℃인 것이 좋다. 추출 후 여과하고 이전에 얻어진 여과액과 합쳐서 감압농축을 하여 아이비엽 추출물을 제조한다. 이와 같이 2차에 걸친 추출 및 각각의 추출 후 얻어진 여과액을 혼합함으로써 추출효율을 높일 수 있으나, 본 발명의 추출물이 추출 회수에 한정되는 것은 아니다.
상기 아이비엽 추출물 제조시에 사용되는 용매의 양이 너무 적으면 교반이 어렵게 되고 추출물의 용해도가 낮아져 추출효율이 떨어지게 되고, 지나치게 많은 경우는 다음의 정제단계에서 사용되는 저급 알코올의 사용량이 많아져 경제적이지 못하여 취급상 문제가 발생할 수 있으므로, 용매의 사용량은 상기 범위로 하는 것이 좋다.
본 발명의 한 바람직한 예에서는 1차 추출 후 다시 재추출하는 방법을 채택할 수 있는데, 이는 생약추출물을 대량 생산하는 경우 효과적으로 여과를 한다 하더라도 생약 자체의 수분 함량이 높기 때문에 손실이 발생하게 되어 1차 추출만으로는 추출효율이 떨어지므로 이를 방지하기 위함이다. 또한, 각 단계별 추출효율을 검증한 결과 2차 추출에 의해 전체 추출량의 80 내지 90% 정도가 추출되는 것으로 밝혀졌고, 3차 이상의 다단계 추출은 경제성이 없는 것으로 판단된다.
이와 같이 얻어진 농축물은 의약품 원료로 사용하기에 적합하도록 잔존하는 저급 알코올의 함량을 조절하기 위하여 농축물 총량의 약 10-30 중량배, 바람직하게는 약 15-25 중량배의 물로 2 내지 3회 공비 농축하고 재차 동량의 물을 가하여 균질하게 현탁시킨 후 동결건조시킴으로써 분말상태의 아이비엽 추출물로서 제조될 수 있다.
본 발명에 따른 황련 추출물의 제조과정을 설명하면 다음과 같다: 황련(Coptidis rhizoma)의 근경부위를 세절한 후, 상기 원료 중량에 대하여 3 내지 20 부피배, 바람직하게는 5 내지 15 부피배의 물, 및 탄소수 1 내지 4개의 직쇄 또는 분지형 알코올로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상, 예컨대, 물, 또는 10 내지 70%(v/v), 바람직하게는 20 내지 60%(v/v), 보다 바람직하게는 약 25 내지 55%(v/v)의 메탄올 수용액, 에탄올 수용액 또는 수포화 부틸알코올을 가하고 1 내지 10시간, 바람직하게는 2 내지 5시간 환류 추출한다. 추출 온도는 특별한 제한은 없지만 40 내지 110℃, 바람직하게는 55 내지 90℃인 것이 좋다. 추출 후 여과하여 여액을 모으고, 다시 잔사에 원료 중량의 1 내지 10 부피배, 바람직하게는 4 내지 7 부피배의 물, 및 탄소수 1 내지 4개의 직쇄 또는 분지형 알코올로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상, 예컨대, 물, 또는 10 내지 70%(v/v), 바람직하게는 20 내지 60%(v/v), 보다 바람직하게는 약 25 내지 55%(v/v)의 메탄올 수용액, 에탄올 수용액 또는 수포화 부틸알코올을 가하고 가온하여 1 내지 10 시간, 바람직하게는 2 내지 5 시간동안 재추출한 후, 여과하여 이전의 여액과 혼합하고 감압 농축함으로써 황련 추출물을 얻을 수 있다.
이와 같이 2차에 걸친 추출 및 각각의 추출 후 얻어진 여과액을 혼합함으로써 추출 효율을 높일 수 있으나, 본 발명의 추출물이 추출 회수에 한정되는 것은 아니다.
상기 황련 추출물 제조시에 사용되는 용매의 양이 너무 적으면 교반이 어렵게 되고 추출물의 용해도가 낮아져 추출효율이 떨어지게 되고, 지나치게 많은 경우는 다음의 정제단계에서 사용되는 저급 알코올의 사용량이 많아져 경제적이지 못하여 취급상 문제가 발생할 수 있으므로, 용매의 사용량은 상기 범위로 하는 것이 좋다.
본 발명의 한 바람직한 예에서는 1차 추출 후 다시 재추출하는 방법을 채택할 수 있는데, 이는 생약추출물을 대량 생산하는 경우 효과적으로 여과를 한다 하더라도 생약 자체의 추출액 함량이 높기 때문에 손실이 발생하게 되어 1차 추출만으로는 추출효율이 떨어지므로 이를 방지하기 위함이다. 또한, 각 단계별 추출효율을 검증한 결과 2차 추출에 의해 전체 추출량의 80 내지 90% 정도가 추출되는 것으로 밝혀졌고, 3차 이상의 다단계 추출은 경제성이 없는 것으로 판단된다.
상기와 같이 1, 2차에 걸쳐 메탄올 수용액 또는 에탄올 수용액 또는 수포화 부틸알코올로 추출하여 얻어진 황련 추출액을 여과 및 농축한 후, 여액 중에 함유된 불필요한 단백질, 다당류 및 지방산 등의 불순물을 정제하기 위하여, 상기 여액과 동량의 저급 알코올로 1회 내지 10회, 바람직하게는 2 내지 4회 층 분리를 실시하여 용매 분획을 얻음으로써 불순물을 정제하는 단계를 추가로 수행할 수 있다. 이 때, 상기 저급 알코올로서 탄소수 1 내지 6의 직쇄 또는 분지형 알코올을 사용 할 수 있고, 바람직하게는 부틸알코올, 프로필알코올 및 이소프로필알코올로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 사용할 수 있다. 상기 저급 알코올의 사용량이 여액에 비하여 적을 경우에는 지방산 등의 불필요한 성분들에 의한 미립자가 형성되어 층 분리가 원활하지 못할 뿐만 아니라 유효활성성분의 추출 함량이 낮아지게 되므로 효율적이지 못하다.
층 분리 후 얻어진 저급 알코올 분획을 50 내지 60℃로 감압 농축하여 시료중에 잔존하는 용매를 제거한다.
이와 같이 얻어진 농축물은 의약품 원료로 사용하기에 적합하도록 잔존하는 저급 알코올의 함량을 조절하기 위하여 농축물 총량의 약 10 내지 30배, 바람직하게는 15 내지 25배, 보다 바람직하게는 약 20 중량배의 물로 1 내지 5회, 바람직하게는 2 내지 3회 공비 농축하고 재차 동량의 물을 가하여 균질하게 현탁시킨 후 동결건조시킴으로써 분말상태의 황련 추출물로서 제조될 수 있다.
상기에서 수득한 황련 추출물을 메틸렌클로라이드와 메탄올 (30 : 1 ~ 7 : 1(v/v))의 혼합 용매로, 실리카겔 컬럼크로마토그래피를 수행하여 5개의 소분획으로 나누는 제 1단계, 상기 제 1단계의 분획물들에 대한 고속액체크로마토그라피(HPLC)를 수행하는 제 2단계 공정을 통해 본 발명의 추출물에 함유된 성분들을 규명하였다. 즉, 본 발명의 황련 추출물들의 성분을 분석한 결과, 베르베린, 팔마틴, 콥티신, 컬럼바민, 및 자트로리진이 포함된 것을 확인하였다.
본 발명의 황련 추출물은 베르베린, 팔마틴, 콥티신, 컬럼바민, 및 자트로리진을 포함하며, 바람직하게는 상기 조성물은 베르베린 15 내지 30 중량부, 팔마틴 4 내지 10 중량부, 콥티신 4 내지 10 중량부, 컬럼바민 0.3 내지 5 중량부, 자트로리진 0.3 내지 5 중량부를 포함하는 것일 수 있다.
상기 황련 추출물에 함유된 성분을 분석하는 과정을 설명하면 하기와 같다.
고속액체크로마토그래피는 워터스 얼라이언스 2695 모델로 워터스 피디에이(PDA) 2996을 이용하여 측정하였다. 컬럼은 와이엠씨 하이드로스피어 C18(YMC Hydrosphere C18, S-5㎛, 120nm, 4.6×250mm I.D)를 사용하였고 시료 온도는 25℃±1, 컬럼온도는 30℃±1을 유지하였다. 시료농도는 1mg/ml로 제조하여 10㎕ 주입하였으며 유속은 1.0ml/min으로 분석하였다. 또한 표준물질은 베르베린, 팔마틴, 콥티신 등은 상용화 되어있는 것을 시그마사로부터 구입하여 사용하였고 컬럼바민과 자트로리진은 황련으로부터 분리, 정제하여 사용하였다. 이동상은 0.2% 인산용액(용매 A)과 메탄올(용매 B)의 gradient 조건으로 0분~60분(A:B=9:1~6:4), 60분~70분(A:B=6:4~5:5), 70분~90분(A:B=5:5~0:10)으로 분석하였다. 추출물 중의 활성성분 함량의 계산은 각각의 표준물질에 대한 면적비를 중량 백분율로 나타내었다.
상기와 같이 제조된 두 가지의 추출물에 대한 혼합조성물의 제조과정을 설명하면 다음과 같다.
상기에서 얻어진 아이비엽 추출물과 황련 추출물을 고형분 중량 기준으로 0.1:1 내지 10:1 (아이비엽 추출물 중량:황련 추출물 중량), 바람직하게는 0.2:1 내지 5:1, 보다 바람직하게는 1:1 내지 4:1, 더욱 바람직하게는 1.5:1 내지 3.5:1, 가장 바람직하게는 2.5:1 내지 3.5:1로 혼합한 것일 수 있다.
상기 혼합 추출물 내 각각의 추출물이 균질하게 혼합되도록 하기 위하여, 혼합 추출물에 약 2 내지 3 중량배의 물을 첨가한 후 50 내지 60℃의 온도하에서 감압농축을 하고, 상기 농축물에 동량의 물을 다시 가하여 균질하게 현탁시킨 후 동결건조시킴으로써 분말상태의 조성물을 제조할 수 있다.
또 다른 구체예에서, 상기 제조 방법은 건조 아이비엽과 황련, 바람직하게는 황련 근경 부위를 중량 기준으로 1:4 내지 7:1 (아이비엽 중량:황련 중량), 바람직하게는 1:1 내지 6:1, 보다 바람직하게는 2:1 내지 5:1로 혼합하여 아이비엽과 황련 혼합물을 제조하는 단계; 및 상기 혼합물에 물, 및 탄소수 1 내지 4개의 직쇄 또는 분지형 알코올로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상, 예컨대, 물, 또는 10 내지 70%(v/v), 바람직하게는 20 내지 60%(v/v), 보다 바람직하게는 약 25 내지 55%(v/v)의 메탄올 수용액, 에탄올 수용액 또는 수포화 부틸알코올로 추출하여 아이비엽과 황련 혼합물의 추출물을 얻는 단계를 포함하는 것일 수 있다.
상기 방법은 아이비엽과 황련 혼합물의 추출물을 얻는 단계 이후에, 탄소수 1 내지 6개의 직쇄 또는 분지형 저급 알코올 수용액, 바람직하게는 프로필 알코올, 이소프로필 알코올, 및 수포화 부틸알코올로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 가하여 얻어진 용매 가용 추출물을 취하여 추출물을 정제하는 단계를 추가로 포함할 수 있다.
상기 조추출물 및 용매 가용 추출물 제조 단계의 구체적인 사항은 상기한 각각의 생약 추출물을 제조하는 바와 같다.
본 발명에 사용된 추출 방법은 통상적으로 사용되는 모든 방법일 수 있으며, 예컨대, 냉침, 열수추출, 초음파 출, 또는 환류 냉각 추출법일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
바람직한 구체예에서, 본 발명에 따른 혼합 추출물에 포함되는 아이비엽 추출물은 30%(m/m) 에탄올 추출 용매로 추출된 것이고, 황련 추출물은 무수부탄올 추출 용매로 추출된 것일 수 있다.
본 발명의 아이비엽 및 황련의 혼합 추출물을 포함하는 조성물은 인간을 포함하는 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여 방식은 통상적으로 사용되는 모든 방식일 수 있으며, 예컨대, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁내 경막 또는 뇌혈관내(intracerebroventricular) 주사에 의해 투여될 수 있다.
본 발명의 아이비엽 및 황련의 혼합 추출물을 포함하는 조성물은 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 경피제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태의 비경구 제형 등으로 제형화하여 사용될 수 있다.
본 발명의 아이비엽 및 황련의 혼합 추출물을 포함하는 조성물은 상기 혼합 추출물 이외에 약제학적으로 적합하고 생리학적으로 허용되는 담체, 부형제 및 희석제 등의 보조제를 추가로 함유하는 것일 수 있다. 본 발명의 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다.
제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제등의 희석제 또는 부형제를 사용할 수 있다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형 제제는 상기 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있다.
또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.
비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제, 경피제 등이 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜 (propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈 (tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.
본 발명의 혼합 추출물 함유 조성물의 투여 용량은 환자의 나이, 몸무게, 성별, 투여형태, 건강상태 및 질환정도에 따라 달라질 수 있으며, 의사 또는 약사의 판단에 따라 일정 시간간격으로 1일 1회 내지 수회로 분할 투여할 수도 있다. 예컨대, 유효성분 함량을 기준으로 1일 투여량이 0.5 내지 500 ㎎/kg, 바람직하게는 1 내지 300 /kg일 수 있다. 상기한 투여량은 평균적인 경우를 예시한 것으로서 개인적인 차이에 따라 그 투여량이 높거나 낮을 수 있다. 본 발명의 혼합 추출물 함유 조성물의 1일 투여량이 상기 투여 용량 미만이면 유의성 있는 과를 얻을 수 없으며, 그 이상을 초과하는 경우 비경제적일 뿐만 아니라 상용량의 범위를 벗어나므로 바람직하지 않은 부작용이 나타날 우려가 발생할 수 있으므로, 상기 범위로 하는 것이 좋다.
또 다른 측면에 있어서, 본 발명은 아이비엽 및 황련의 혼합 추출물을 함유하는 만성 폐쇄성 폐질환 예방 또는 개선용 건강 기능성 식품을 제공한다. 상기 건강 기능성 식품은 각종 식품, 음료, 식품 첨가제 일 수 있다.
상기 건강 기능성 식품에 함유된 유효성분으로서의 혼합 추출물의 함량은 식품의 형태, 소망하는 용도 등에 따라 적절하게 특별한 제한이 없으며, 예컨대, 전체 식품 중량의 0.01 내지 15 중량%로 가할 수 있으며, 건강 음료 조성물은 100 ㎖를 기준으로 0.02 내지 10 g, 바람직하게는 0.3 내지 1 g의 비율로 가할 수 있다.
본 발명의 건강 음료 조성물은 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 추출물을 함유하는 것 외에 액체성분에는 별한 제한점은 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등의 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등의 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제(타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 ㎖당 일반적으로 약 1 내지 20g, 바람직하게는 약 5 내지 12g이다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다.
[실시예 1] 아이비엽 및 황련의 혼합 추출물 제조
아이비엽 추출물은 건조된 아이비엽으로부터 30% (v/v) 에탄올 추출 용매를 사용해 수득하였고, 황련 추출물은 황련을 무수부탄올 추출 용매로 추출하여 수득하였다. 상기 아이비엽 추출물 및 황련 추출물을 인산완충생리식염수(phosphate buffered saline; PBS)에 용해하여 1:3의 부피비로 혼합하여, 아이비엽 및 황련의 혼합 추출물을 제조하였으며, 이하에서 본 실시예에 따라 제조된 아이비엽 및 황련의 혼합 추출물을 각 도면에서 “AGNPP709”라 표시하였다.
[실시예 2] 만성 폐쇄성 폐질환 동물 모델 제조를 위한 LPS 용액의 제조
마우스의 기관지 내에 Lipopolysaccharides(LPS)를 노출시켜 만성 폐쇄성 폐질환 동물 모델을 제조할 수 있음은 이미 알려져 있다(Tob. Induc. Dis. 2017; 15(May): 25).
LPS (Escherichia coli K-235. Sigma-Aldrich, St. Louis, MO)를 Non-Invasive Airway Mechanics (Buxco® FinePointe, DSI™, USA)를 동물의 기도에 분사할 수 있도록, 0.2mg/mL 용량의 LPS를 인산완충생리식염수에 현탁시켜 LPS 용액을 제조하였다.
[실시예 3] 미세먼지 및 모래먼지 입자의 제조
본 발명의 실험예에 사용하기 위한 미세먼지의 표준 베이스 샘플로서 미세먼지(PM10-LIKE, Sigma-Aldrich, St. Louis, MO)를 준비하였고, 이는 직경 2-14μm에서 최대 분포 크기를 갖는 것으로 관찰되었다. 미세먼지의 원소는 알려진 바와 같이, C18H12, C20H12, C22H14 및 C22H12이며 터널 먼지와 유사하였다.
또한 본 발명의 실험예에 사용하기 위한 모래먼지의 표준 베이스 샘플로서 모래먼지(황색토, 홍익바이오)를 준비하였으며, 이 샘플을 30분간 250℃에서 가열하여 정제하였고, 최대 분포 크기는 2.6μm과 3.9μm인 것으로 관찰되었다. 모래먼지의 원소는 알려진 바와 같이, SiO2, Al2O3, Fe2O3, K2O, TiO2, MgO 및 CaO이며 한국의 황사 기간 동안 수집된 모래먼지와 매우 유사한 원소 조성비를 가지는 것으로 확인되었다.
[실시예 4] 만성 폐쇄성 폐질환 동물 모델의 제조
[실시예 4-1] 실험동물의 준비
20-25g의 생후 6-10주 수컷 C57BL/6 마우스(wild type mouse; 오리엔트바이오, 한국)를 구입하여 사용 전 표준 실험실 조건 하에 1주일 동안 사육하였다. 모든 마우스는 공기 조절된 18-24℃의 빛/어둠(12시간/12시간) 조건 하에 유지되었고 상대습도는 40-60%였다.
[실시예 4-2] 만성 폐쇄성 폐질환 마우스 모델의 제조
만성 폐쇄성 폐질환이 유발된 마우스 모델을 제조하기 위하여, 상기 실시예 2에서 제조한 LPS 용액을 Non-Invasive Airway Mechanics (Buxco® FinePointe, DSI™, USA)를 사용하여 4주 동안 1주일에 3회씩 5분간 마우스의 기관지 내에 분사시켜, 전신성 감작으로 만성 폐쇄성 폐질환을 유도하였다.
[실시예 4-3] 미세먼지 및 모래먼지로 악화된 만성 폐쇄성 폐질환 마우스 모델의 제조
미세먼지 및 모래먼지로 악화된 만성 폐쇄성 폐질환이 유발된 마우스 모델을 제조하기 위하여, 상기 실시예 4-2에서 만성 폐쇄성 폐질환이 유도된 마우스에 대하여, 21일차(3주차)부터 2주 동안 매일 분무기(Microsprayer® Aerosolizer)로 실시예 3에 따른 미세먼지, 모래먼지 및 미세먼지 또는 모래먼지의 혼합물(10mg/ml 농도)을 50ul씩 zonde (20G, 50mm)를 이용하여 기관내 분사하였다(도 1 참조).
[실시예 4-4] 실험군의 분류 및 물질 주입 방법
실시예 4-1에 따라 준비된 마우스는 무작위로 다음과 같이 11개의 그룹으로 나누었다(각 그룹당 6마리):
(1) 부형제 음성 대조군 (“PBS”);
(2) LPS 단독 주입군 (“LPS”);
(3) 미세먼지 단독 주입군 (“Fine dust”);
(4) 황사 단독 주입군 (“Sand dust”);
(5) 미세먼지 및 모래먼지 혼합 주입군 (“Fine dust & Sand dust”);
(6) LPS 및 미세먼지 주입군 (“LPS + Fine dust”);
(7) LPS 및 모래먼지 주입군 (“LPS + Sand dust”);
(8) LPS, 미세먼지 및 모래먼지 주입군 (“LPS + Fine dust & Sand dust”);
(9) LPS, 미세먼지 및 모래먼지 주입 후, 덱사메타손(1mg/kg, p.o.) 투여군(양성 대조군) (“Dexamethasone + LPS + (Fine dust and Sand dust) Mixture”);
(10) LPS, 미세먼지 및 모래먼지 주입 후, 아이비엽 및 황련 혼합 추출물(25mg/kg, p.o.) 투여군 (“AGNPP709 25mg/kg + LPS + (Fine dust and Sand dust) Mixture”); 및
(11) LPS, 미세먼지 및 모래먼지 주입 후, 아이비엽 및 황련 혼합 추출물(100mg/kg, p.o.) 투여군 (“AGNPP709 100mg/kg + LPS + (Fine dust and Sand dust) Mixture”).
음성 대조군의 마우스에는 Non-Invasive Airway Mechanics를 사용하여 매일 1mL의 PBS를 분사하였다. 양성 대조군의 마우스에는 덱사메타손을 2주 동안 매일 1mg/kg의 용량으로 경구 투여하였다. 아이비엽 및 황련 혼합 추출물을 투여하는 경우에는, 상기 혼합물을 2주 동안 매일 25mg/kg 또는 100mg/kg의 용량으로 경구 투여하였다. 본 발명의 실험 타임 테이블을 도 2에 간략히 나타냈다.
[실시예 5] 약리활성 분석 방법
[실시예 5-1] 기관지폐포세척액(Bronchoalveolar lavage fluid; “BALF”) 추출 방법
실험 마우스(C57BL/6)의 기도를 완전히 절개한 후 ice-cold PBS 0.7mL를 폐에 도달하도록 주입한 후 다시 빨아올려 EP tube에 보관하고, 이를 2회 반복하였고, ACK lysis buffer 200ul를 이용하여 적혈구를 제거하여, BALF를 수집하였다. 수집된 BALF를 4℃에서 10분간 800×g로 원심분리하여 상층액만 옮겨, 이후 ELISA assay에 사용하기 위하여 -80℃에서 보관하였다(도 3 참조).
[실시예 5-2] 폐 세포 추출 방법
10ml의 collagenase digestion solution을 미리 만든 후 이를 4℃에 보관해 두었다. 실시예 5-1에 따라 BALF를 채취한 후, 마우스의 양쪽 폐를 분리하여 1-2mm2로 잘게 으깬 후, 미리 만들어 둔 collagenase digestion solution에 넣어 37℃에서 300rpm으로 1시간 동안 shake를 실시하였다.
그 후, 40um cell strainer를 통해 세포를 거르고, ACK lysis buffer를 통해 적혈구를 제거한 후 원심분리하고, 이를 PBS에 부유시켜, 이후 FACs, RT-PCR, 웨스턴 블롯팅(Western blotting) 방법을 통해 분석하였다.
[실시예 5-3] ELISA assay 방법
채취된 BALF에 대하여, ELISA kit를 이용하여 α-IL-1β 항체, α-IL-6 항체, α-TNF-α 항체를 통해 405nm에서 흡광도를 측정하여 폐포 대식세포가 생성하는 염증성 사이토카인인 인터루킨 IL-1β, IL-6, 종양괴사인자 TNF-α의 생성량을 측정하였다.
Th17은 α-IL-17A 항체를, Treg은 α-TGF-β 항체를 붙여 동일한 방법으로 ELISA kit를 이용하여 각각의 세포가 생성하는 사이토카인의 생성량을 측정하였다.
[실시예 5-4] RNA 추출 및 실시간 정량적 RT-PCR assay법
모든 세포는 IV형 소 췌장 유래 DNase (Roche Diagnostic; 1 μg/ml)와 콜라겐 분해효소 IV형(0.5mg/ml) (Sigma-Aldrich, 카탈로그 번호: C5138)을 사용하여 폐로부터 분리하였다. 전체 RNA는 72시간 동안 TRIzol 시약(Invitrogen)을 사용하여 lysis하여 각 샘플로부터 분리하였다.
RNA는 5x RT 완충액, 10mM dNTP (200 유닛), MMLV-RT (몰로니쥐류 백혈병 바이러스 - 역전사효소) 및 100pmol oligo-dT 프라이머가 함유된 25μl 용액에서 1시간 동안 42℃에서 cDNA로 전사되었다. cDNA를 증폭시키기 위하여, CFX Connect™ Real-Time PCR Detection System (Bio-Rad)을 사용하여 95℃에서 10초, 60℃에서 30초 주기로 45회 수행하였다.
Th17 세포의 전사 인자(transcription factor)는 RORγt primer를 이용하여 PCR assay 실시하여 그 발현 정도를 확인하였고, Treg 세포의 전사인자는 Foxp3 primer를 이용하여 PCR assay 실시하여 그 발현 정도를 확인하였다.
Foxp3 및 RORγt의 mRNA 수치를 확인하기 위해 2x iQTM SYBR Green Supermix (Bio-Rad)와 함께 cDNA를 사용하였다.
특이성의 확인을 위해 PCR 산물을 융해곡선분석(melting-curve analysis)하였다. 비교 역치 방법을 사용하여 대조군 샘플과 비교한 실험 샘플 내 mRNA의 상대적 양을 계산하였다. 유전자 발현은 베타액틴(β-actin)으로 정규화하였다. 본 시험에서 사용한 PCR 프라이머 서열은 하기 표 1에 나타냈다.
Figure PCTKR2020004982-appb-T000001
[실시예 5-5] 유세포(parenchymatous cell) 분석 방법
폐 세포 분리 후 30분간 4℃에서 폐포 대식세포의 분석을 위해 세포를 FITc 접합 항-CD11c 항체와 APC 접합 항-CD45 항체로 염색하였고, Th17 세포의 분석을 위해 PE 접합 항-IL-17 항체와 APC 접합 항-CD4 항체로 염색하였으며, Treg 세포 분석을 위해 Alexa 접합 항-CD25 항체, APC 접합 항-CD4 및 PE 접합 항-Foxp3 항체로 염색하였다. 또한 각 세포의 형광은 유속세포분석기(FACSCalibur)로 측정하였다.
[실시예 5-6] 웨스턴 블롯 분석 방법
폐로부터 세포를 추출하여 RIPA 완충액(ELPIS Biotech)로 총 세포 단백질을 추출한 다음, SDS-PAGE에서 동량의 단백질을 분리하고 PVDF 막(Poly Vinylidene Fluoride membrane)으로 이전시킨 다음, α-β-actin, α-phospho-IκBα, α-IκBα, α-phospho-p65, α-p65 항체로 staining 실시하여, 이를 ChemiDoc system(Bio-Rad) 하에 시각화하여 Quantity One(Bio-Rad) 소프트웨어로 분석하였다.
[실시예 5-7] 폐의 조직 병리학적 평가방법
조직학적 분석을 위해 폐를 10% 중성 인산염 완충된 포르말린으로 고정시킨 뒤 파라핀으로 포매하였다(embedding). 포매된 폐 조직은 절개하여(4μm) 폐 조직의 염증 반응 및 병리학적 변화를 시각화하기 위해 헤마톡실린-에오신(H&E)으로 염색하였다. 이를 현미경을 통해 저배율(x100), 고배율(x630)로 각각 관찰하여 병리학적 효과를 확인하였다.
[실시예 5-8] 통계적 분석 방법
데이터는 평균 ± SD로 표시하였고 스튜던트 t 검정(Student t - test)을 사용하여 통계적 분석을 수행하였다. 수치는 *, p < 0.05; **, p < 0.01; and ***, p < 0.001에서 통계적으로 유의한 것으로 간주되었다.
[실시예 6] 약리 활성 시험 결과
실시예 4-4에 따라 분류된 11개의 마우스 군에 대하여 설계된 대로 각 물질을 주입 또는 투여하였고, 실시예 1 내지 5에 따른 시험 방법 및 분석방법에 따라 그 결과를 나타냈다.
[실시예 6-1] 폐 세포 및 BALF에서 폐포 대식세포의 세포 활성화 및 전염증성 사이토카인 분비의 측정
실험 대상인 11개의 마우스 군에 대하여 BALF 및 폐 세포를 추출하였다. 추출된 폐포 대식세포를 FITc 접합 항-CD11c 항체와 APC 접합 항-CD45 항체로 염색하여 FACSCalibur로 형광 분석하고(실시예 5-5 참조), 염증성 사이토카인인 인터루킨 IL-1β, IL-6, 종양괴사인자 TNF-α의 생성량을 ELISA assay에 의해 측정하여(실시예 5-3 참조), 도 4에 도시하였다.
도 4로부터 알 수 있는 바와 같이, 실험 마우스에서 LPS는 폐포 대식세포를 활성화하고 전염증성 사이토카인 분비에 따라 폐포 대식세포군을 증가시켰다(도 4의 A 참조).
또한 마우스에 LPS와 함께 미세먼지 및 모래먼지의 혼합물에 동시 노출된 경우, 부형제 대조군(PBS)에 비하여, 폐포 대식세포 및 전염증성 사이토카인의 분비가 유의하게 증가하였는바(도 4의 B 내지 D 참조), 이는 미세먼지 및 모래먼지가 만성 폐쇄성 폐질환 발생의 중증도를 확실히 악화시키는 것으로 의미한다.
반면, LPS와 함께 미세먼지 및 모래먼지에 모두 노출된 마우스에 25mg/kg과 100mg/kg의 AGNPP709를 경구 투여한 군의 경우, AGNPP709를 투여하지 않은 군과 비교할 때, 폐포 대식세포의 수 및 전염증성 사이토카인의 분비가 모두 유의하게 감소하였음을 알 수 있다.
즉, 본 발명의 아이비엽 및 황련 혼합 추출물은 LPS 단독 투여군은 물론, LPS와 함께 미세먼지 및 모래먼지에 노출된 마우스 군에 대하여도, 폐포 대식세포의 수 및 전염증성 사이토카인의 분비를 감소시켰다.
이로부터 본 발명의 아이비엽 및 황련 혼합 추출물은 만성 폐쇄성 폐질환, 및 미세먼지 또는 모래먼지로 악화된 만성 폐쇄성 폐질환 모두에 대해서 치료 효과를 가진다는 것을 확인할 수 있다.
[실시예 6-2] 폐 세포 및 BALF에서 Th17 및 Treg 세포의 발현량 확인
실험 대상인 11개의 마우스 군에 대하여 BALF 및 폐 세포를 추출하여, 도 5에 도시하였으며, 도 5의 각 그래프가 의미하는 바는 하기와 같다.
① 도 5의 A의 좌측 그래프: Th17 세포 수 (표현형: CD4+IL17+ cell)
② 도 5의 A의 우측 그래프: Treg 세포 수 (표현형: CD4+CD25+Foxp3+ cell)
③ 도 5의 B의 좌측 그래프: IL-17A(Th17 세포 분비 염증성 사이토카인)의 발현량
④ 도 5의 B의 우측 그래프: TGF-β(염증과정 조절 기능 인자)의 발현량
⑤ 도 5의 C의 좌측 그래프: RORγt(Th17 세포의 전사인자)의 발현량
⑥ 도 5의 C의 우측 그래프: Foxp3(Treg 세포의 전사인자)의 발현량
도 5에서 알 수 있는 바와 같이, LPS 노출군, 미세먼지 및/또는 모래먼지에 노출되면, Th17 세포 수, RORγt 발현량 및 Th17 세포가 분비하는 염증성 사이토카인 IL-17A의 분비량은 대조군에 비하여 유의하게 증가하였고, 본 발명의 아이비엽 및 황련 혼합 추출물을 투여하면, Th17 세포 수, RORγt 발현량 및 IL-17A 분비량이 크게 감소되는 것을 확인할 수 있었다.
또한 LPS 노출군, 미세먼지 및/또는 모래먼지에 노출되면, Treg 세포 수 및 TGF-β의 발현량이 감소하였고, 본 발명의 아이비엽 및 황련 혼합 추출물을 투여하게 되면 Treg 세포 수 및 TGF-β의 발현량이 유의하게 증가하는 것을 확인할 수 있었다.
다만, Treg의 전사인자인 Foxp3의 발현량은 Treg 세포수가 감소하면 감소하게 되지만, TGF-β는 Foxp3의 생성을 촉진하는 기전도 나타내기 때문에, Foxp3은 Treg 세포수가 아닌 TGF-β의 발현량과 비슷한 수치 변화 양상을 가지는 것으로 이해된다.
이로부터 본 발명의 아이비엽 및 황련 혼합 추출물을 투여하게 되면 만성 폐쇄성 폐질환에서 증가된 Th17 세포수를 감소시키고, 감소된 Treg 세포수를 증가시키는 기전에 의해, 만성 폐쇄성 폐질환 및 미세먼지 또는 모래먼지로 악화된 만성 폐쇄성 폐질환 모두에 대해서 치료 효과를 가진다는 것을 확인할 수 있다.
[실시예 6-3] 폐 조직의 병리·조직학적 개선 효과 확인
만성 폐쇄성 폐질환에 따른 폐 조직의 염증반응 및 조직학적 변화와, 본 발명의 아이비엽 및 황련 혼합 추출물 투여에 의한 조직학적 개선 효과를 확인하기 위하여, 실험 대상인 11개의 마우스 군에 대하여, 실시예 5-7에 따라 폐 실질 단편을 헤마톡실린과 에오신으로 염색한 뒤, 현미경으로 관찰하였다(도 6 참조).
음성 대조군에 비해 LPS 처리 군에서는 출혈을 동반한 폐포 격막 손상이 발견되었으며, T 세포와 같은 면역세포의 침윤 및 축적이 58% 증가하였고, 또한 염증에 따른 점막조직의 확장에 의해 폐포벽이 두꺼워져 폐포 내 공간이 줄어들고 출혈이 발생한 것이 확인되었다(도 6의 A 및 B 참조).
LPS에 추가적으로 미세먼지 또는 모래먼지의 혼합물을 처리한 군에서 기도 점막 손상 및 점액의 과생성이 일어났고, 세포의 침윤 및 축적이 음성 대조군에 비해 88% 증가했으며, 폐포 벽 근육에 섬유증 및 기도 협착이 일어나 폐포 내 공간이 LPS 처리군에 비해 더 줄어들어 증상이 더 악화되었음이 확인되었다(도 6의 C 참조).
반면, 본 발명의 아이비엽 및 황련 혼합 추출물을 투여한 마우스는 기도의 점막하에 침윤된 세포 축적이 감소하였고 정상적인 폐 구조로 현저하게 회복되었음을 확인하였다.
구체적으로, LPS와 함께 미세먼지 및 모래먼지에 노출된 마우스 군과 비교할 때, 25mg/kg의 저농도 AGNPP709 투여군 및 100mg/kg의 고농도 AGNPP709 투여군에서는, 세포의 침윤 및 축적이 각각 60% 및 70% 감소한 것이 확인되었다. 특히, 100mg/kg의 AGNPP709 투여 마우스군은, AGNPP709 비투여 마우스와 비교할 때, 기도 상피의 염증 세포 침윤을 매우 경미하게 만들어 병리학적 변화를 유의하게 개선한 것을 알 수 있다(도 6의 E 및 F 참조).
이를 통해 본 발명의 아이비엽 및 황련 혼합 추출물은 만성 폐쇄성 폐질환 및 미세먼지 또는 모래먼지로 악화된 만성 폐쇄성 폐질환 모두에 대해서 조직, 병리학적으로 치료 효과를 가진다는 것을 확인하였다.
[실시예 6-4] NF-κB 신호전달을 통한 본 발명의 아이비엽 및 황련 추출물의 약리기전 확인
NF-κB 신호전달의 하위 단백질인 IκBα와 p65은 인산화가 되면서 활성화가 이루어지므로, 실험 대상인 11군의 마우스에 대하여, 활성화 상태인 p-IκBα와 일반 상태인 IκBα의 비율(p-IκBα / IκBα) 및 활성화 상태인 p-p65와 일반 상태인 p65의 비율(p-p65 / p65)을 측정하여, NF-κB 신호전달 체계의 활성화 정도 차이를 비교· 확인하였다.
이 때 실시예 5-6에 따른 웨스턴 블롯팅 방법으로 베타액틴, p-IκBα, IκBα, p65 및 p-p65의 발현을 분석하였으며(도 7의 아래 그림 참조), 이로부터 p-IκBα / IκBα 및 p-p65 / p65의 값을 계산하여 도시하였다(도 7의 위 그래프 참조). 도 7에서 Syn 25는 25mg/kg의 AGNPP709 투여군을 나타내고, Syn 100은 100mg/kg의 AGNPP709 투여군을 나타낸다.
베타액틴(β-actin)은 웨스턴 블롯팅 세포의 온전성 및 단백질 변성을 알아보기 위한 대조군(loading control)으로 주로 사용되는 단백질이다.
각 군의 단백질 정량화 정도의 비교군으로 설정했으며, 폐 내 존재하는 세포의 수가 적어 충분한 단백질량이 확보되지 못해 밴드의 밝기가 전반적으로 흐리게 측정되었다.
음성 대조군과 대비할 때, LPS 처리군에서 IκBα 및 p65 단백질의 활성화 상태가 증가했으며, LPS와 함께 미세먼지 및 모래먼지를 주입한 군에서는 더욱 크게 IκBα 및 p65의 활성화 상태가 증가하였다. 반면, 본 발명의 아이비엽 및 황련 혼합 추출물 투여군에서는 IκBα 및 p65의 활성화 정도가 음성 대조군과 유사한 값을 갖는 것을 확인할 수 있었다(도 7의 위 그래프 참조).
즉, LPS와 미세먼지 및 모래먼지가 폐에 주입된 경우, IκBα 및 p65 단백질의 활성화 상태가 증가되는 것이 확인되며, 이는 NF-κB 신호전달의의 활성화를 유발하여, 염증성 사이토카인의 생성량을 증가시켜, 결국 염증을 악화시킨다는 것을 의미한다.
반면, 본 발명의 아이비엽 및 황련 혼합 추출물 투여군에서는, 아이비엽 및 황련 혼합 추출물 비투여군에 비하여 IκBα와 p65의 활성화 상태가 감소되는 효과를 나타내는 것이 확인되었다.
이로부터, 본 발명의 아이비엽 및 황련 혼합 추출물은 만성 폐쇄성 폐질환 및 미세먼지 또는 모래먼지로 악화된 만성 폐쇄성 폐질환 모두에 대하여, IκBα 및 p65의 활성화를 억제하는 기전에 의해 염증성 사이토카인의 생성량을 감소시켜 항염증 효과를 가져 만성 폐쇄성 폐질환의 치료 효과를 나타내는 것을 확인할 수 있었다.
이상의 설명으로부터, 본 발명이 속하는 기술분야의 당업자는 본 발명이 그 기술적 사상이나 필수적 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 실시될 수 있다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 이와 관련하여, 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적인 것이 아닌 것으로서 이해해야만 한다. 본 발명의 범위는 상기 상세한 설명보다는 후술하는 특허 청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 등가 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.

Claims (7)

  1. 아이비엽과 황련의 혼합 추출물을 유효성분으로 포함하고,
    상기 아이비엽과 황련의 혼합 추출물은 아이비엽 추출물과 황련 추출물의 혼합물, 또는 아이비엽과 황련의 혼합물의 추출물이고,
    상기 아이비엽 추출물, 황련 추출물 또는 아이비엽과 황련의 혼합물의 추출물은 아이비엽, 황련 또는 아이비엽과 황련 혼합물에 물, 및 탄소수 1 내지 4개의 직쇄 또는 분지형 알코올로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 용매를 가하여 얻어진 조추출물, 또는 상기 조추출물에 탄소수 1 내지 6개의 직쇄 또는 분지형 알코올 수용액을 가하여 얻어진 용매 가용 추출물인,
    만성 폐쇄성 폐질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 만성 폐쇄성 폐질환은 미세먼지 또는 모래먼지를 포함하는 공기 중 미세입자에 의해 악화된 만성 폐쇄성 폐질환인 것을 특징으로 하는, 약학 조성물.
  3. 제2항에 있어서,
    상기 미세입자는 직경이 10 μm 미만인 것을 특징으로 하는, 약학 조성물.
  4. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    상기 혼합 추출물 내의 아이비엽 추출물과 황련 추출물의 함량비가 고형분 중량 기준으로 0.1:1 내지 10:1 (아이비엽 추출물 중량:황련 추출물 중량)인 것을 특징으로 하는, 약학 조성물.
  5. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    상기 혼합 추출물 내의 아이비엽 추출물과 황련 추출물의 함량비가 고형분 중량 기준으로 0.2:1 내지 5:1 (아이비엽 추출물 중량:황련 추출물 중량)인 것을 특징으로 하는, 약학 조성물.
  6. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    상기 조성물은 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸, 경피제, 좌제, 또는 멸균 주사용액으로 제형화된 것을 특징으로 하는, 약학 조성물.
  7. 아이비엽과 황련의 혼합 추출물을 유효성분으로 포함하고,
    상기 아이비엽과 황련의 혼합 추출물은 아이비엽 추출물과 황련 추출물의 혼합물, 또는 아이비엽과 황련의 혼합물의 추출물이고,
    상기 아이비엽 추출물, 황련 추출물 또는 아이비엽과 황련의 혼합물의 추출물은 아이비엽, 황련 또는 아이비엽과 황련 혼합물에 물, 및 탄소수 1 내지 4개의 직쇄 또는 분지형 알코올로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 용매를 가하여 얻어진 조추출물, 또는 상기 조추출물에 탄소수 1 내지 6개의 직쇄 또는 분지형 알코올 수용액을 가하여 얻어진 용매 가용 추출물인,
    만성 폐쇄성 폐질환의 예방 또는 개선용 건강 기능성 식품.
PCT/KR2020/004982 2019-04-19 2020-04-13 혼합 생약 추출물을 포함하는 만성 폐쇄성 폐질환 치료용 약학 조성물 WO2020213906A1 (ko)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020190046369A KR20200122937A (ko) 2019-04-19 2019-04-19 혼합 생약 추출물을 포함하는 만성 폐쇄성 폐질환 치료용 약학 조성물
KR10-2019-0046369 2019-04-19

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2020213906A1 true WO2020213906A1 (ko) 2020-10-22

Family

ID=72837410

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/KR2020/004982 WO2020213906A1 (ko) 2019-04-19 2020-04-13 혼합 생약 추출물을 포함하는 만성 폐쇄성 폐질환 치료용 약학 조성물

Country Status (2)

Country Link
KR (1) KR20200122937A (ko)
WO (1) WO2020213906A1 (ko)

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20120014255A (ko) * 2008-06-13 2012-02-16 안국약품 주식회사 혼합 생약 추출물을 함유하는 약학적 조성물
KR20190023236A (ko) * 2017-08-28 2019-03-08 씨제이헬스케어 주식회사 아세톤, 또는 아세톤 및 물의 혼합용매로부터 추출된 황련 추출물

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20120014255A (ko) * 2008-06-13 2012-02-16 안국약품 주식회사 혼합 생약 추출물을 함유하는 약학적 조성물
KR20190023236A (ko) * 2017-08-28 2019-03-08 씨제이헬스케어 주식회사 아세톤, 또는 아세톤 및 물의 혼합용매로부터 추출된 황련 추출물

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
"MEDICAL Observer News", SYNATURA, IDENTIFYING THE POSSIBILITY OF IMPROVING THE QUALITY OF LIFE OF COPD PATIENTS, 30 November 2018 (2018-11-30), Retrieved from the Internet <URL:http://www.monews.co.kr/news/articleView.html?idxno-122543> *
ANONYMOUS: "Natural Plant Can Improve a Body Exhausted by Yellow Dust and Fine Dust. Dong-a Ilbo News", DONGA, 20 March 2019 (2019-03-20), pages 1 - 5, XP055751639, Retrieved from the Internet <URL:http://www.donga.com/news/list/article/all/20190319/94626353/1?comm=>> *
JO, YOUNG JOO ET AL.: "Cough Treatment: Newly Developed Antitussives, Expectorants", 2011 THE KOREAN ACADEMY OF ASTHMA, ALLERGY AND CLINICAL IMMUNOLOGY FALL CONFERENCE, 2011, pages 5643 - S648 *

Also Published As

Publication number Publication date
KR20200122937A (ko) 2020-10-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR101243977B1 (ko) 혼합 생약 추출물을 함유하는 약학적 조성물
WO2017179931A1 (ko) 쥐꼬리망초 추출물을 포함하는 호흡기 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물
WO2015160219A1 (ko) 피스타시아 웨인마니폴리아 추출물, 이의 분획물 또는 이로부터 분리된 화합물을 포함하는 만성폐쇄성 폐질환(copd) 예방 또는 치료용 약학적 조성물
WO2018208094A2 (en) A composition comprising a combined herb extract of salvia plebia and red ginseng as active ingredients for preventing or treating a respiratory inflammation and the use thereof
WO2012108635A2 (ko) 천궁 및 종대황의 혼합 생약 추출물을 함유하는 호흡기 질환의 예방 또는 치료용 조성물
WO2019177428A1 (ko) 호흡기 질환의 예방 또는 치료용 생약 조성물
WO2020213906A1 (ko) 혼합 생약 추출물을 포함하는 만성 폐쇄성 폐질환 치료용 약학 조성물
JP5411261B2 (ja) 黄蓮抽出物を有効性分として含有する呼吸器疾患の予防用及び治療用組成物
WO2013100718A2 (ko) 라저스트로에미아 오바리폴리아 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 염증성 질환 또는 천식의 예방 또는 치료용 약학적 조성물
WO2012102581A9 (ko) 천궁 및 호장근의 혼합 생약 추출물을 함유하는 호흡기 질환의 예방 또는 치료용 조성물
WO2011118957A2 (ko) 파프리카 추출물을 함유하는 염증, 알레르기 또는 천식 질환 치료용 조성물
WO2019231211A1 (ko) 세신, 길경 및 계지 중 2종 이상의 혼합 추출물을 유효성분으로 포함하는 알레르기성 질환의 예방 또는 치료용 조성물
WO2016010340A1 (ko) 오풍칠 추출물을 유효성분으로 함유하는 염증 또는 알러지 질환의 예방 및 치료용 조성물 및 이의 용도
WO2019031729A2 (ko) 줄기세포 유래의 엑소좀을 유효성분으로 포함하는 조성물의 비알콜성 단순 지방간 또는 비알콜성 지방간염의 개선 용도
WO2012108634A2 (ko) 천궁 및 현호색의 혼합 생약 추출물을 함유하는 호흡기 질환의 예방 또는 치료용 조성물
WO2018199628A1 (ko) 약독화된 폐렴구균 균주를 포함하는 약제학적 조성물 및 이의 용도
WO2016175589A2 (ko) 혼합 생약 추출물을 함유하는 호흡기 질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물
WO2021150076A1 (ko) 만성폐쇄성 폐질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 또는 건강기능식품
WO2021071292A9 (ko) 락토바실러스 플란타럼 균주 등을 이용한 호흡기 질환 개선용 조성물
WO2015105373A1 (ko) 화살나무 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 천식의 예방 또는 치료용 조성물
WO2021033995A1 (ko) 초과 추출물을 함유하는 근육 감소 관련 질병의 예방, 개선, 또는 치료용 조성물
Venkateswarlu et al. Evaluation of anti-ulcer activity of hydro alcoholic extracts of Abutilon indicum, Helianthus annuus and combination of both against ethanol and pyloric ligation induced gastric ulcer in albino wistar rats
KR100643878B1 (ko) 장생도라지 추출물을 유효성분으로 함유하는 기관지질환의억제 및 치료용 약학적 조성물
WO2019225995A1 (ko) 바늘꽃 추출물 등을 이용한 천식 또는 만성폐쇄성폐질환 개선용 조성물
WO2019177424A1 (ko) 호흡기 질환의 예방 또는 치료용 생약 조성물

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 20791504

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

122 Ep: pct application non-entry in european phase

Ref document number: 20791504

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1