WO2016175589A2 - 혼합 생약 추출물을 함유하는 호흡기 질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물 - Google Patents

혼합 생약 추출물을 함유하는 호흡기 질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물 Download PDF

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Definitions

  • Another example provides a method of inhibiting leukotriene receptor, comprising administering two or more mixed herbal extracts selected from the group consisting of trichophytium, baekgulchae, yonggyu, and guru-in to a subject in need of inhibition of the leukotriene receptor.
  • Trichosanthe Semen is a perennial plant, Trichosanthes , belonging to the family Cucurbitaceae. kirilowii Maxim.) or ssangbyeon gwalru (as the seeds of Trichosanthes rosthronii Harms), parenthesis ruja, also called the gwaru is used as a fruit, root, foliage, herbs etc. rind.
  • the mixed herbal extracts include lipoxygenase (5-LO) inhibitory activity, phosphodiesterase (PDE) -4 inhibitory activity, beta-2-adrenergic receptor (adrenergic beta 2 receptor) activation, leukotriene receptor (Cysteinyl leukotriene receptor; CysLT1 receptor) inhibitory activity, muscarinic receptor (Muscarinic receptor; eg, Muscarinic M3 receptor) inhibitory activity and the like, it can exhibit an excellent effect in the prevention and / or treatment of various respiratory diseases.
  • 5-LO lipoxygenase
  • PDE phosphodiesterase
  • beta-2-adrenergic receptor adrenergic beta 2 receptor
  • leukotriene receptor Cysteinyl leukotriene receptor
  • CysLT1 receptor muscarinic receptor
  • muscarinic receptor Muscarinic receptor
  • Muscarinic M3 receptor Muscarinic M3 receptor
  • treatment refers to alleviation or amelioration of symptoms, reduction in the extent of disease, delay or alleviation of disease progression, amelioration, alleviation or stabilization of a disease state or symptom, partial or complete recovery, prolongation of survival, and other beneficial benefits. It is used to mean all the results of treatment.
  • the amount of the solvent used may be equal to or greater than the volume of the crude extract or suspension, for example, 1 to 10 times, 1 to 7 times, or 1 to 5 times. It can be used in an amount of volume double.
  • the present invention provides a health functional food for the prevention and / or improvement of respiratory diseases, containing two or more mixed herbal extracts selected from the group consisting of three hundred seconds, white oysters, yonggyu, and gururuin .
  • the respiratory disease may include asthma (bronch asthma, atopic asthma, atopic bronchial IgE mediated asthma, nonatopic asthma, allergic asthma, or nonallergic asthma), allergic rhinitis, bronchitis (such as chronic bronchitis or acute bronchitis), It may be selected from the group consisting of chronic obstructive pulmonary disease.
  • the health functional food may be various foods, beverage compositions, food additives, and the like.
  • each test drug was dissolved in dimethylsulfoxide (DMSO) to prepare a final concentration of 100 ug (microgram) / ml.
  • DMSO dimethylsulfoxide
  • Human recombinant 5-LO (Cayman Chemical 60402) was dissolved in pH 7.4 Tris buffer at a concentration of 10 U / ml, and 100 ul of the prepared test drug and fluorescence probe dihydrorhodamine-1,2,3 (DHR123) were added thereto. It was reacted with (5-LO) at 25 ° C. for 5 minutes in advance.
  • ARC0163 1.01 ⁇ M [ 3 H] cAMP + cAMP (ARC0163) was prepared as a substrate, and each test drug was dissolved in DMSO to prepare a final concentration of 100 ug / ml.
  • Human mononuclear cell line U937 cell (ATCC CRL 1593.2) was incubated at 37 ° C and 5% CO 2 using RPMI 1640 medium (Gibco) containing 100 Unit / ml penicillin-streptomycin and 10% (w / v) fetal bovine serum. Incubated at.
  • PDE-4 inhibition rate (%) [1- (each test drug and PDE-4 in the treated sample [3 H] Adenosine generation amount) / (untreated test drug (the processing man PDE-4) [3 H in the sample ] Adenosine production amount)] * 100
  • specific binding is defined as the total binding between the labeled ligand and the receptor minus the nonspecific binding, as described above.
  • composition ratio is merely an example of a component suitable for a favorite beverage, and may be arbitrarily changed according to regional and ethnic preferences such as demand hierarchy, demand country, and use purpose.

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Abstract

삼백초, 백굴채, 용규, 및 괄루인으로 이루어진 군에서 선택된 2종 이상의 혼합 생약 추출물을 유효성분으로 함유하는 호흡기 질환의 예방 및/또는 치료용 약학 조성물, 이의 제조방법, 및 상기 생약 추출물을 투여하는 단계를 포함하는 호흡기 질환의 예방 및/또는 치료 방법이 제공된다.

Description

혼합 생약 추출물을 함유하는 호흡기 질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물
삼백초, 백굴채, 용규, 및 괄루인으로 이루어진 군에서 선택된 2종 이상의 생약 추출물을 유효성분으로 함유하는 호흡기 질환의 예방 및/또는 치료용 약학 조성물, 이의 제조방법, 및 상기 생약 추출물을 투여하는 단계를 포함하는 호흡기 질환의 예방 및/또는 치료 방법이 제공된다.
천식, 알레르기 비염, 기관지염, 만성 폐쇄성 폐질환 등은 호흡기질환의 대표적인 질환이다. 이들은 모두 염증성 질환이며, 기도의 손상을 특징으로 한다.
대표적인 호흡기 질환인 천식 (Asthma)은 만성적인 기도 염증에 의한 비특이적 기도과민성 및 가역적 기도 폐쇄를 특징으로 하는 질환이다. 호흡 곤란, 기침, 색색거리는 거친 숨소리 (천명) 등의 증상이 반복적으로 발작적으로 나타나는 병증으로, 천식 환자의 약 30%에서 생후 1년 이내에 약 80%에서는 4~5세에 처음 천식 증상을 나타내며 우리나라에서도 약 10% 내외의 발병률을 나타내고 있다.　 천식을 병태/생리학적으로 보면, 기도 염증, 기도 과민성, 점막단백 과다분비가 일어나는 질환이며, 면역학적으로는 호산구의 침윤, Th2 세포 수의 증가, 활성화 비만 세포 수가 증가되는 것을 특징으로 하는 만성기도 염증 질환이다.
알레르기 비염 (Allergic rhinitis)은 알레르기 염증 반응으로 인하여 콧물, 재채기, 코 및 눈 가려움증 등의 증상이 나타나는 질환으로 삶의 질을 악화시키는 질환이다. 대부분의 산업국가에서는 인구의 8-24%가 이러한 질환을 나타낼 정도로 성인과 소아에서 매우 흔한 만성 질환 중의 하나이다. 비염은 알레르기가 아닌 다른 기전에 의해서도 나타날 수 있으나 알레르기 기전이 전체 비염의 약 2/3를 차지할 정도로 알레르기가 비염 발생의 중요한 요인이다. 알레르기 비염은 천식과 흔히 동반되며 유전적인 경향과 병태생리를 많이 공유한다.
만성 폐쇄성 폐질환 (Chronic Obstructive Pulmonary Disease, COPD)은 유해한 입자나 가스의 흡입 등에 의해 발생하는 기도와 폐의 비정상적인 염증반응과, 이와 동반되어 완전히 가역적이지 않은 기류 제한을 특징으로 하는 호흡기 질환이다. 만성 폐쇄성 폐질환은 전 인구의 10%의 유병률을 보이며 흡연자에게서는 50%까지 유병률을 보일 수 있고, 선진국을 중심으로 유병률과 사망률이 지속적으로 증가하고 있는 추세이다. 만성 폐쇄성 폐질환의 증상은 기침, 가래, 운동시 호흡곤란을 포함하며, 증상의 급성 악화를 자주 동반하고, 임상적으로 만성 기관지염을 포함하고 있다. 기도에는 염증세포 침윤 및 기도 벽의 비후로 기도 직경이 좁아져 기도저항이 증가되고, 폐포에서는 폐포벽의 염증침윤 및 폐포 파괴로 인한 폐기종 변화로 탄성압 감소를 초래하여, 호기 기류 감소를 유발한다.
급성기관지염 (Acute bronchitis)은 기관과 기관지의 급성 염증으로 대개는 호흡계의 감염과 관련이 있다. 급성 기관지염은 원인에 따라 급성 감염성 기관지염과 급성 자극성 기관지염으로 분류할 수 있는데 감염성 기관지염의 원인은 대부분 바이러스로 상기도 감염을 동반한다. 급성 자극성 기관지염은 다양한 금속성 물질이나 휘발성 용매, 이산화질소나 담배 등의 물질에 의한 자극, 혹은 알레르겐을 흡입함으로써 나타나는 알레르기 반응 등에 의한 것일 수 있다. 만성기관지염 (Chronic bronchitis)은 일반적으로 1년에 3개월 이상 2년 연속적으로 거의 매일 기침 및 과도한 가래가 나오는 만성 기관지점막의 염증으로 정의하며, 만성 기관지염 환자는 기침의 증가, 가래의 양과 화농성의 증가, 호흡 곤란 등 빈번하게 급성 악화를 경험하게 된다. 여러 국가에서 만성 기관지염과 그 악화로 인한 사망률이 증가하고 있다.
현재 이 같은 호흡기 질환에 있어서의 근본적인 치료법은 없으며 발작을 예방하고 합병증을 방지하기 위한 여러 가지 방법과 약물이 쓰이나 만족할 만한 효과를 얻지 못하는 실정이다. 주로 흡입용 기관지 확장제, 경구용 또는 주사용 기관지 확장제 (교감신경 자극제 및 테오필린계 약제들), 스테로이드 제제 (흡입용, 경구용, 주사용 등), 류코트리엔 길항제 (몬테루카스트, 트란루카스트, 질루톤 등), 항알러지 약제 (디소디움 클로로클리케이트, 크로몰린 소디움, 케토티펜) 등이 치료제로 활용되고 있다. 항콜린제, 베타2 수용체 항진제 등의 기도 확장제는 질병을 악화시키는 염증에는 효과가 없이 단순한 증상만 완화하기 때문에 장기간 사용시 약제 내성 발생 및 병증 악화의 우려가 있다. 염증에 효과가 있다고 알려진 스테로이드제는 심각한 부작용으로 인한 장기간 사용 시 문제가 되고 있다. 따라서, 이 둘을 병용 처방하는 경우가 많은데 스테로이드류의 부작용으로 인해 경구제보다 흡입제 형태로 개발되어 복용이 어렵기 때문에 복용순응도가 떨어지는 문제점이 있다.
따라서, 이러한 현 약물 치료제의 한계점을 극복하여, 원인을 근본적으로 치료하고 증상을 효과적으로 개선할 수 있는 새로운 치료제의 개발이 필요하다.
본 명세서에서, 삼백초 추출물, 백굴채 추출물, 용규 추출물 및 괄루인 추출물 중 2종 이상을 혼합한 혼합물의 리폭시게나아제 (5-lipoxygenase; 5-LO) 저해활성, 포스포다이에스테라아제 (phosphodiesterase; PDE)-4 저해활성, 베타-2-아드레날린 수용체 (adrenergic beta 2 receptor) 활성화, 류코트리엔 수용체 (Cysteinyl leukotriene receptor; CysLT1 receptor) 저해활성, 무스카린 수용체 (Muscarinic receptor; e.g., Muscarinic M3 receptor) 저해 활성 등이 우수함이 확인되었으며, 이러한 활성들은 각각의 추출물 단독 상태에서보다 혼합에 의하여 상승된 효과임이 확인되어, 상기 혼합물의 천식, 알레르기 비염, 기관지염, 만성폐쇄성 폐질환 등 호흡기 질환에 대한 효과적인 예방 및/또는 치료 용도가 제공된다.
구체적으로, 일 예는 삼백초, 백굴채, 용규, 및 괄루인으로 이루어진 군에서 선택된 2종 이상의 혼합 생약 추출물을 유효성분으로 포함하는 호흡기 질환의 예방 및/또는 치료용 약학 조성물을 제공한다. 상기 약학 조성물에 있어서, 약리학적 활성 시너지 효과가 가장 우수한 각 생약 성분 간의 최적의 조합 비율 또한 제공된다.
다른 예는 삼백초, 백굴채, 용규, 및 괄루인으로 이루어진 군에서 선택된 2종 이상의 혼합 생약 추출물을 포함하는 호흡기 질환 개선용 건강 기능성 식품 조성물을 제공한다.
다른 예는 삼백초, 백굴채, 용규, 및 괄루인으로 이루어진 군에서 선택된 2종 이상을 혼합하는 단계를 포함하는, 호흡기 질환의 예방 및/또는 치료 및/또는 개선용 조성물의 제조 방법을 제공한다.
다른 예는 삼백초, 백굴채, 용규, 및 괄루인으로 이루어진 군에서 선택된 2종 이상의 혼합 생약 추출물을 호흡기 질환의 예방 및/또는 치료를 필요로 하는 대상에게 투여하는 단계를 포함하는 호흡기 질환의 예방 및/또는 치료 방법을 제공한다.
다른 예는 삼백초, 백굴채, 용규, 및 괄루인으로 이루어진 군에서 선택된 2종 이상의 혼합 생약 추출물의 호흡기 질환의 예방 및/또는 치료, 또는 호흡기 질환의 예방 및/또는 치료용 조성물의 제조에 사용하기 위한 용도를 제공한다.
다른 예는 삼백초, 백굴채, 용규, 및 괄루인으로 이루어진 군에서 선택된 2종 이상의 혼합 생약 추출을 포함하는 리폭시게나아제 (5-lipoxygenase; 5-LO) 저해용 조성물을 제공한다.
다른 예는 삼백초, 백굴채, 용규, 및 괄루인으로 이루어진 군에서 선택된 2종 이상의 혼합 생약 추출을 리폭시게나아제의 저해를 필요로 하는 대상에게 투여하는 단계를 포함하는 리폭시게나아제의 저해 방법을 제공한다.
다른 예는 삼백초, 백굴채, 용규, 및 괄루인으로 이루어진 군에서 선택된 2종 이상의 혼합 생약 추출물의 리폭시게나아제의 저해, 또는 리폭시게나아제 저해제의 제조에 사용하기 위한 용도를 제공한다.
다른 예는 삼백초, 백굴채, 용규, 및 괄루인으로 이루어진 군에서 선택된 2종 이상의 혼합 생약 추출을 포함하는 포스포다이에스테라아제 (phosphodiesterase; PDE)-4 저해용 조성물을 제공한다.
다른 예는 삼백초, 백굴채, 용규, 및 괄루인으로 이루어진 군에서 선택된 2종 이상의 혼합 생약 추출을 포스포다이에스테라아제-4의 저해를 필요로 하는 대상에게 투여하는 단계를 포함하는 포스포다이에스테라아제-4의 저해 방법을 제공한다.
다른 예는 삼백초, 백굴채, 용규, 및 괄루인으로 이루어진 군에서 선택된 2종 이상의 혼합 생약 추출물의 포스포다이에스테라아제-4의 저해, 또는 포스포다이에스테라아제-4 저해제의 제조에 사용하기 위한 용도를 제공한다.
다른 예는 삼백초, 백굴채, 용규, 및 괄루인으로 이루어진 군에서 선택된 2종 이상의 혼합 생약 추출을 포함하는 베타-2-아드레날린 수용체 (adrenergic beta 2 receptor) 활성화용 조성물을 제공한다.
다른 예는 삼백초, 백굴채, 용규, 및 괄루인으로 이루어진 군에서 선택된 2종 이상의 혼합 생약 추출을 베타-2-아드레날린 수용체의 활성화를 필요로 하는 대상에게 투여하는 단계를 포함하는 베타-2-아드레날린 수용체의 활성화 방법을 제공한다.
다른 예는 삼백초, 백굴채, 용규, 및 괄루인으로 이루어진 군에서 선택된 2종 이상의 혼합 생약 추출물의 베타-2-아드레날린 수용체의 활성화, 또는 베타-2-아드레날린 수용체의 활성화제의 제조에 사용하기 위한 용도를 제공한다.
다른 예는 삼백초, 백굴채, 용규, 및 괄루인으로 이루어진 군에서 선택된 2종 이상의 혼합 생약 추출을 포함하는 류코트리엔 수용체 (Cysteinyl leukotriene receptor; CysLT1 receptor)의 저해용 조성물을 제공한다.
다른 예는 삼백초, 백굴채, 용규, 및 괄루인으로 이루어진 군에서 선택된 2종 이상의 혼합 생약 추출을 류코트리엔 수용체의 저해를 필요로 하는 대상에게 투여하는 단계를 포함하는 류코트리엔 수용체의 저해 방법을 제공한다.
다른 예는 삼백초, 백굴채, 용규, 및 괄루인으로 이루어진 군에서 선택된 2종 이상의 혼합 생약 추출물의 류코트리엔 수용체의 저해, 또는 류코트리엔 수용체의 저해제의 제조에 사용하기 위한 용도를 제공한다.
다른 예는 삼백초, 백굴채, 용규, 및 괄루인으로 이루어진 군에서 선택된 2종 이상의 혼합 생약 추출을 포함하는 무스카린 수용체 (Muscarinic receptor; e.g., Muscarinic M3 receptor)의 저해용 조성물을 제공한다.
다른 예는 삼백초, 백굴채, 용규, 및 괄루인으로 이루어진 군에서 선택된 2종 이상의 혼합 생약 추출을 무스카린 수용체의 저해를 필요로 하는 대상에게 투여하는 단계를 포함하는 무스카린 수용체의 저해 방법을 제공한다.
다른 예는 삼백초, 백굴채, 용규, 및 괄루인으로 이루어진 군에서 선택된 2종 이상의 혼합 생약 추출물의 무스카린 수용체의 저해, 또는 무스카린 수용체의 저해제의 제조에 사용하기 위한 용도를 제공한다.
삼백초, 백굴채, 용규, 및 괄루인으로 이루어진 군에서 선택된 2종 이상의 혼합 생약 추출물을 유효성분으로 함유하는 호흡기 질환의 예방 및/또는 치료용 약학 조성물, 이의 제조방법 및 이의 용도가 제공된다.
상기 삼백초, 백굴채, 용규, 및 괄루인으로 이루어진 군에서 선택된 2종 이상의 혼합 생약 추출물 또는 이를 포함하는 약학 조성물은, 생약 추출물이 단독으로 포함된 경우와 비교하여, 염증 억제 활성 및 기도수축 인자 억제 활성 (예컨대, 리폭시게나아제 (5-lipoxygenase; 5-LO) 저해 활성, 포스포다이에스테라아제 (phosphodiesterase; PDE)-4 저해 활성, 베타-2-아드레날린 수용체 (adrenergic beta 2 receptor) 활성화, 류코트리엔 수용체 (Cysteinyl leukotriene receptor; CysLT1 receptor) 저해 활성, 무스카린 수용체 (Muscarinic receptor; e.g., Muscarinic M3 receptor) 저해 활성 등)이 우수하여, 천식, 알레르기 비염, 기관지염, 만성폐쇄성 폐질환, 감기, 기침 등의 호흡기 질환의 예방 및/또는 치료에 유리한 효과를 나타내는 것을 특징으로 한다.
또한, 일 예는 삼백초 추출물, 백굴채 추출물, 괄루인 추출물 및 용규 추출물 중 2종 이상을 특정 비율로 혼합한 혼합 생약 추출물의 경우, 각 생약이 단독으로 존재하는 경우와 비교하여 현저하게 상승 된 호흡기 질환 예방 및 치료 효과를 가짐을 확인하고, 최고의 상승 효과를 얻기 위한 최적의 생약 추출물의 혼합 비율을 제공한다.
삼백초(Saurururi Herba)는 삼백초과(Saururuaceae)의 여러해살이 풀인 삼백초(Saururus chinensis (Laureiro) Baillon)의 지상부로, 항염증, 세포보호, 항암, 혈당강하 등의 약리 작용이 알려져 있으며, 한방에서는 부종, 각기, 황달, 대하, 임질, 배뇨장애, 등에 사용되고 있다.
백굴채(白屈菜; Chelidonid Herba)는 양귀비과(Papaveraceae)의 식물인 애기똥풀(Chelidonium Majus Linne var. asiaticum Ohwi)의 지상부로, 줄기를 자르면 진노랑의 유액이 나오기 때문에 애기똥풀이라는 이름을 갖게 되었고, 씨아똥, 젖풀이라고도 불리운다. 한의학과 민간에서 피부병, 각종 암, 눈병, 관절염, 무좀, 위염, 위경련, 위궤양, 간염, 복통, 소화기 질병의 치료에 사용되어 왔다.
용규(Solani Nigri Herba)는 가지과(Solanaceae)에 속하는 까마중(Solanum nigrum Linne)의 전초로, 우리나라 각처의 밭이나 길가에 흔히 나는 1년초이며, 항염증, 세포보호, 중추신경억제, 해열·진통, 항암 등의 작용이 있다고 알려져 있으며, 해열, 이뇨, 강정, 강장약으로 쓰인다.
괄루인(Trichosanthis Semen)은 박과(Cucurbitaceae)에 속하는 다년생 식물인 하눌타리(Trichosanthes kirilowii Maxim.) 또는 쌍변괄루(Trichosanthes rosthronii Harms)의 종자로서, 괄루자, 과루인이라고도 불리며, 과실, 뿌리, 경엽, 과피 등도 약재로 사용된다.
한국 공개특허 제 2013-0142638에 독성물질을 제거한 삼백초 정제물 및 분획물이 천식 및 알레르기성 질환에 예방 및 치료 효과가 있음이 개시되어 있고, 또한 한국 공개특허 제 2006-0111790에 삼백초 추출물이 천식 또는 알레르기성 질환에 예방 및 치료효과가 있음이 개시되어 있다. 그러나, 삼백초, 백굴채, 용규 및 괄루인에서 선택된 2종 이상의 혼합 생약 추출물의 천식, 알레르기 비염, 기관지염, 만성폐쇄성 폐질환 등 호흡기 질환 예방 및/또는 치료 효과에 대해서는 알려진 바 없다.
일 예는 삼백초, 백굴채, 용규 및 괄루인으로 이루어진 군에서 선택된 2 종 이상의 혼합 생약 추출물을 유효성분으로 함유하는 약학 조성물을 제공한다.
상기 혼합 생약 추출물은 리폭시게나아제 (5-lipoxygenase; 5-LO) 저해활성, 포스포다이에스테라아제 (phosphodiesterase; PDE)-4 저해활성, 베타-2-아드레날린 수용체 (adrenergic beta 2 receptor) 활성화, 류코트리엔 수용체 (Cysteinyl leukotriene receptor; CysLT1 receptor) 저해활성, 무스카린 수용체 (Muscarinic receptor; e.g., Muscarinic M3 receptor) 저해활성 등이 우수하여, 다양한 호흡기 질환의 예방 및/또는 치료에 우수한 효과를 나타낼 수 있다.
따라서, 상기 약학 조성물은 호흡기 질환의 예방 및/또는 치료용 약학 조성물일 수 있다.
다른 예는 삼백초, 백굴채, 용규, 및 괄루인으로 이루어진 군에서 선택된 2종 이상의 혼합 생약 추출물을 호흡기 질환의 예방 및/또는 치료를 필요로 하는 대상에게 투여하는 단계를 포함하는 호흡기 질환의 예방 및/또는 치료 방법을 제공한다. 상기 호흡기 질환의 예방 및/또는 치료 방법은 상기 투여하는 단계 이전에 호흡기 질환의 예방 및/또는 치료를 필요로하는 대상을 확인하는 단계를 추가로 포함할 수 있다.
다른 예는 삼백초, 백굴채, 용규, 및 괄루인으로 이루어진 군에서 선택된 2종 이상의 혼합 생약 추출물의 호흡기 질환의 예방 및/또는 치료, 또는 호흡기 질환의 예방 및/또는 치료용 조성물의 제조에 사용하기 위한 용도를 제공한다.
본 명세서에서, '치료'는 증상의 경감 또는 개선, 질환의 범위의 감소, 질환 진행의 지연 또는 완화, 질환 상태 또는 증상의 개선, 경감 또는 안정화, 부분적 또는 완전한 회복, 생존의 연장, 기타 다른 이로운 치료 결과 등을 모두 포함하는 의미로 사용된다.
상기 호흡기 질환은 염증을 동반하는 모든 질환일 수 있다. 구체적으로, 상기 호흡기 질환은 리폭시게나아제 (5-lipoxygenase; 5-LO), 포스포다이에스테라아제 (phosphodiesterase; PDE)-4, 베타-2-아드레날린 수용체 (adrenergic beta 2 receptor; 불활성화의 경우), 류코트리엔 수용체 (Cysteinyl leukotriene receptor; CysLT1 receptor), 무스카린 수용체 (Muscarinic receptor; e.g., Muscarinic M3 receptor) 등으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상에 의하여 유발되는 증상을 갖는 모든 호흡기 질환일 수 있다. 예컨대, 상기 호흡기 질환은 기관지 천식, 아토피성 천식, 아토피성 기관지 IgE 매개 천식, 비아토피성 천식, 알레르기성 천식, 비알레르기성 천식 등의 천식; 알레르기성 비염; 만성 기관지염 또는 급성 기관지염과 같은 기관지염; 만성 폐쇄성 폐질환; 감기; 기침 등으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 질환일 수 있다.
본 발명에 있어서, 용어 '혼합 생약 추출물 또는 혼합 추출물'은 상기한 4종의 생약을 각각 추출하여 얻어진 4종의 생약 추출물 중 선택된 2종 이상을 혼합하여 얻어진 생약 추출물의 혼합물 또는 상기 4종의 생약 중 선택된 2 종 이상의 혼합 생약을 추출하여 얻어진 혼합 생약의 추출물을 의미하는 것일 수 있다. 또한 상기 '추출물'은 조추출물 또는 특정 용매 가용 추출물 (분획)을 의미하는 것으로, 용액, 농축물 또는 분말 상태일 수 있다.
상기와 같은 혼합 생약 추출물은, 각 생약의 단독 추출물과 비교하여, 리폭시게나아제 (5-lipoxygenase; 5-LO) 저해활성, 포스포다이에스테라아제 (phosphodiesterase; PDE)-4 저해활성, 베타-2-아드레날린 수용체 (adrenergic beta 2 receptor) 활성화, 류코트리엔 수용체 (Cysteinyl leukotriene receptor) 저해활성, 무스카린 수용체 (Muscarinic receptor; e.g., Muscarinic M3 receptor) 저해 활성에 있어서 상승 효과를 가짐을 특징으로 한다.
일 예에서, 상기와 같은 상승 효과를 최대화하기 위한 각 생약 성분간의 혼합 비율이 제공된다. 혼합 생약 추출물이 각각의 생약 추출물의 혼합물인 경우 상기 생약 성분은 상기 각각의 생약 추출물을 의미한다. 혼합 생약 추출물이 혼합 생약의 추출물인 경우, 상기 생약 성분은 혼합 생약 내의 각각의 생약을 의미한다. 또한, 본 명세서에 기재된 각 생약 성분 간 혼합 비율은 모두 중량 기준으로 표현된 것이며, 혼합 비율 기재시 함께 병기된 생약 성분 (예컨대, "삼백초")은 이의 추출물 ("삼백초 추출물") 또는 생약 자체("삼백초")를 나타낸다. 또한 혼합 생약 추출물이 각각의 생약 추출물의 혼합물인 경우, 각각의 생약 추출물의 추출 용매 또는 분획 용매는 각각 독립적으로 선택된 것이며, 서로 같거나 다를 수 있다.
혼합 생약 추출물 내의 각 생약 성분 간의 혼합 비율은, 2종의 혼합 생약 추출물의 경우 1:10 내지 10:1, 1:5 내지 5:1, 또는 1:3 내지 3:1일 수 있고, 3종의 혼합 생약 추출물의 경우 1 내지 10:1 내지 10:1 내지 10, 1 내지 5:1 내지 5:1 내지 5,1 내지 3:1 내지 3:1 내지 3, 1:1 내지 3:1 내지 3, 또는 1:1:1 내지 3일 수 있으며, 4종의 혼합 생약 추출물의 경우1 내지 10:1 내지 10:1 내지 10:1 내지 10, 1 내지 5:1 내지 5:1 내지 5:1 내지 5,1 내지 3:1 내지 3:1 내지 3:1 내지 3, 1:1 내지 3:1 내지 3:1 내지 3, 1:1:1 내지 3:1 내지 3, 또는 1:1:1:1 내지 3일 수 있다. 본 명세서에 기재된 생약 성분 간의 혼합 비율은 용매가 제거된 고형분 중량 (생약 추출물의 혼합물의 경우) 또는 생약 자체의 중량 (혼합 생약의 추출물의 경우)을 기준으로 산정된 것이다. 본 명세서에 사용된 바로서, 두 수치 사이에 기재된 용어 '내지'는 앞뒤에 기재된 수치를 포함하는 상기 수치 사이 구간을 의미한다.
한 구체예에서, 상기 혼합 생약 추출물은 삼백초 및 백굴채의 혼합 생약 추출물일 수 있다. 이 때, 각 생약 성분 간의 혼합 비율 (삼백초:백굴채 또는 백굴채:삼백초)은 1:10 내지 10:1, 1:5 내지 5:1, 또는 1:3 내지 3:1일 수 있다.
다른 예에서, 상기 혼합 생약 추출물은 삼백초 및 용규의 혼합 생약 추출물일 수 있다. 이 때, 각 생약 성분 간의 혼합 비율 (삼백초:용규 또는 용규:삼백초)은 1:10 내지 10:1, 1:5 내지 5:1, 또는 1:3 내지 3:1일 수 있다.
다른 예에서, 상기 혼합 생약 추출물은 삼백초 및 괄루인의 혼합 생약 추출물일 수 있다. 이 때, 각 생약 성분 간의 혼합 비율 (삼백초:괄루인 또는 괄루인:삼백초)은 1:10 내지 10:1, 1:5 내지 5:1, 또는 1:3 내지 3:1일 수 있다.
다른 예에서, 상기 혼합 생약 추출물은 백굴채 및 용규의 혼합 생약 추출물일 수 있다. 이 때, 각 생약 성분 간의 혼합 비율 (백굴채:용규 또는 용규:백굴채)은 1:10 내지 10:1, 1:5 내지 5:1, 또는 1:3 내지 3:1일 수 있다.
다른 예에서, 상기 혼합 생약 추출물은 백굴채 및 괄루인의 혼합 생약 추출물일 수 있다. 이 때, 각 생약 성분 간의 혼합 비율 (백굴채:괄루인 또는 괄루인:백굴채)은 1:10 내지 10:1, 1:5 내지 5:1, 또는 1:3 내지 3:1일 수 있다.
다른 예에서, 상기 혼합 생약 추출물은 용규 및 괄루인의 혼합 생약 추출물일 수 있다. 이 때, 각 생약 성분 간의 혼합 비율 (용규:괄루인 또는 괄루인:용규)은 1:10 내지 10:1, 1:5 내지 5:1, 또는 1:3 내지 3:1일 수 있다.
다른 예에서, 상기 혼합 생약 추출물은 삼백초 및 백굴채의 혼합 생약 추출물에 용규 추출물, 괄루인 추출물, 또는 용규 및 괄루인의 혼합 생약 추출물을 추가로 포함하는 것일 수 있다. 다른 예에서, 상기 혼합 생약 추출물은 삼백초 및 용규의 혼합 생약 추출물에 백굴채 추출물, 괄루인 추출물, 또는 백굴채 및 괄루인의 혼합 생약 추출물을 추가로 포함하는 것일 수 있다. 다른 예에서, 상기 혼합 생약 추출물은 삼백초 및 괄루인의 혼합 생약 추출물에 백굴채 추출물, 용규 추출물, 또는 백굴채 및 용규의 혼합 생약 추출물을 추가로 포함하는 것일 수 있다. 다른 예에서, 상기 혼합 생약 추출물은 백굴채 및 용규의 혼합 생약 추출물에 삼백초 추출물, 괄루인 추출물, 또는 삼백초 및 괄루인의 혼합 생약 추출물을 추가로 포함하는 것일 수 있다. 다른 예에서, 상기 혼합 생약 추출물은백굴채 및 괄루인의 혼합 생약 추출물에 삼백초 추출물, 용규 추출물, 또는 삼백초 및 용규의 혼합 생약 추출물을 추가로 포함하는 것일 수 있다. 다른 예에서, 상기 혼합 생약 추출물은 용규 및 괄루인의 혼합 생약 추출물에 삼백초 추출물, 백굴채 추출물, 또는 삼백초 및 백굴채의 혼합 생약 추출물을 추가로 포함하는 것일 수 있다.
구체적으로, 상기 혼합 생약 추출물은 삼백초, 백굴채, 및 용규의 혼합 생약 추출물일 수 있다. 이 때, 각 생약 성분간의 혼합 비율 (삼백초:백굴채:용규, 삼백초:용규:백굴채, 백굴채:삼백초:용규, 백굴채:용규:삼백초, 용규:삼백초:백굴채, 또는 용규:백굴채:삼백초)은 1 내지 10:1 내지 10:1 내지 10, 1 내지 5:1 내지 5:1 내지 5, 1 내지 3:1 내지 3:1 내지 3, 1:1 내지 3:1 내지 3, 또는 1:1:1 내지 3일 수 있다.
다른 예에서, 상기 혼합 생약 추출물은 삼백초, 백굴채, 및 괄루인의 혼합 생약 추출물일 수 있다. 이 때, 각 생약 성분 간의 혼합 비율 (삼백초:백굴채:괄루인, 삼백초:괄루인:백굴채, 백굴채:삼백초:괄루인, 백굴채:괄루인:삼백초, 괄루인:삼백초:백굴채, 또는 괄루인:백굴채:삼백초)은 1 내지 10:1 내지 10:1 내지 10, 1 내지 5:1 내지 5:1 내지 5, 1 내지 3:1 내지 3:1 내지 3, 1:1 내지 3:1 내지 3, 또는 1:1:1 내지 3일 수 있다.
다른 예에서, 상기 혼합 생약 추출물은 삼백초, 용규, 및 괄루인의 혼합 생약 추출물일 수 있다. 이 때, 각 생약 성분 간의 혼합 비율 (삼백초:용규:괄루인, 삼백초:괄루인:용규, 용규:삼백초:괄루인, 용규:괄루인:삼백초, 괄루인:삼백초:용규, 또는 괄루인:용규:삼백초)은 1 내지 10:1 내지 10:1 내지 10, 1 내지 5:1 내지 5:1 내지 5, 1 내지 3:1 내지 3:1 내지 3, 1:1 내지 3:1 내지 3, 또는 1:1:1 내지 3일 수 있다.
다른 예에서, 상기 혼합 생약 추출물은 백굴채, 용규, 및 괄루인의 혼합 생약 추출물일 수 있다. 이 때, 각 생약 성분 간의 혼합 비율 (백굴채:용규:괄루인, 백굴채:괄루인:용규, 용규:백굴채:괄루인, 용규:괄루인:백굴채, 괄루인:백굴채:용규, 또는 괄루인:용규:백굴채)은 1 내지 10:1 내지 10:1 내지 10, 1 내지 5:1 내지 5:1 내지 5, 1 내지 3:1 내지 3:1 내지 3, 1:1 내지 3:1 내지 3, 또는 1:1:1 내지 3일 수 있다.
다른 예에서, 상기 혼합 생약 추출물은 삼백초, 백굴채, 용규, 및 괄루인의 혼합 생약 추출물일 수 있다. 이 때, 각 생약 성분 간의 혼합 비율 (삼백초:백굴채:용규:괄루인, 삼백초:백굴채:괄루인:용규, 삼백초:용규:백굴채:괄루인, 삼백초:용규:괄루인:백굴채, 삼백초:괄루인:백굴채:용규, 삼백초:괄루인:용규:백굴채, 백굴채: 삼백초:용규:괄루인, 백굴채:삼백초:괄루인:용규, 백굴채:용규:삼백초:괄루인, 백굴채:용규:괄루인:삼백초, 백굴채:괄루인:삼백초:용규, 백굴채:괄루인:용규:삼백초, 용규:삼백초:백굴채:괄루인, 용규:삼백초:괄루인:백굴채, 용규:백굴채:삼백초:괄루인, 용규:백굴채:괄루인:삼백초, 용규:괄루인:삼백초:백굴채, 용규:괄루인:백굴채:삼백초, 괄루인:삼백초:백굴채:용규, 괄루인:삼백초:용규:백굴채, 괄루인:백굴채:삼백초:용규, 괄루인:백굴채:용규:삼백초, 괄루인:용규:삼백초:백굴채, 또는 괄루인:용규:백굴채:삼백초)은 1 내지 10:1 내지 10:1 내지 10:1 내지 10, 1 내지 5:1 내지 5:1 내지 5:1 내지 5,1 내지 3:1 내지 3:1 내지 3:1 내지 3, 1:1 내지 3:1 내지 3:1 내지 3, 1:1:1 내지 3:1 내지 3, 또는 1:1:1:1 내지 3일 수 있다.
상기 삼백초 추출물, 백굴채 추출물, 용규 추출물, 괄루인 추출물, 또는 삼백초, 백굴채, 용규 및 괄루인으로 이루어진 군에서 선택된 2종 이상의 혼합 생약의 추출물은 (1) 삼백초, 백굴채, 용규, 또는 괄루인 각각, 또는 삼백초, 백굴채, 용규, 및 괄루인으로 이루어진 군에서 선택된 2종 이상의 혼합 생약을 물 및 탄소수 1 내지 4 개의 직쇄 또는 분지형 알코올로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상으로 추출하여 얻어진 조추출물 또는 (2) 상기 조추출물에 탄소수 1 내지 6개의 직쇄 또는 분지형 알코올 또는 비극성 용매를 가하여 얻은 용매 가용 추출물일 수 있다. 삼백초, 백굴채, 용규 및 괄루인은 그대로 사용하거나 적절한 크기로 절단 또는 분쇄하여 사용할 수 있다.
구체예에 있어서, 상기 조추출물 제조에 사용되는 용매는 물, 또는 10 내지 95%(v/v), 20 내지 95%(v/v), 30 내지 95%(v/v), 40 내지 95%(v/v), 50 내지 95%(v/v), 60 내지 95%(v/v), 70 내지 95%(v/v), 10 내지 90%(v/v), 20 내지 90%(v/v), 30 내지 90%(v/v), 40 내지 90%(v/v), 50 내지 90%(v/v), 60 내지 90%(v/v),70 내지 90%(v/v), 10 내지 85%(v/v), 20 내지 85%(v/v), 30 내지 85%(v/v), 40 내지 85%(v/v), 50 내지 85%(v/v), 60 내지 85%(v/v), 70 내지 85%(v/v), 10 내지 80%(v/v), 20 내지 80%(v/v), 30 내지 80%(v/v), 40 내지 80%(v/v),50 내지 80%(v/v), 60 내지 80%(v/v), 또는 70 내지 80%(v/v)의 탄소수 1 내지 4개의 직쇄 또는 분지형 알코올 수용액일 수 있으며, 상기 알코올 수용액은 예컨대상기 농도 범위의 메탄올 수용액, 에탄올 수용액, 이소프로판올 수용액, 및 수포화 부탄올로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상일 수 있다. 또한, 상기 용매 가용 추출물 제조에 사용되는 용매는 i) 탄소수 1 내지 6개 (예컨대, 탄소수 3 내지 5개)의 직쇄 또는 분지형 알코올, 예컨대, 프로판올, 이소프로판올, 및 부탄올로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상, 또는 ii) 비극성 용매, 예컨대, 헥산, 디클로로메탄, 클로로포름, 및 에틸아세테이트로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상일 수 있다.
천식 등의 알레르기 질환에 있어서, 알레르기 항원이 생체에 들어오게 되면 알레르기 항원에 특이적인 IgE 항체가 생성되어 알레르기 유발 세포 표면에 부착되고, 이 때 알레르기 항원이 다시 생체에 들어오면 알레르기 유발 세포 표면의 IgE 항체와 결합하고 자극 받은 알레르기 유발 세포는 히스타민을 포함한 여러 가지 매개물질을 방출하여 호산구를 비롯한 여러 종류의 염증 세포가 증가함으로써 염증 반응이 일어나게 된다. 이러한 염증 반응이 일어나게 되면, 기도에서 기관지 수축, 혈관확장, 감각신경 감작화, 콜린성 기관지 수축 등의 급성 염증반응을 일으키게 된다.　
천식, 만성폐쇄성 폐질환, 기관지염, 알레르기 비염 등의 호흡기 질환에 있어서, 기도의 염증 반응에 관여하는 여러 매개 물질 중, 류코트리엔 (cysteinyl leukotrienes)은 매우 강력한 항염증 매개체로 작용한다. 류코트리엔은 천식, 만성 기관지염, 폐쇄성 기도 질환, 폐쇄성 폐질환, 알레르기성 비염, 접촉성 피부염, 알레르기성 결막염 등의 알레르기 및 알레르기성 반응, 관절염, 또는 염증성 장 질환, 통증 등의 염증성 질환 등에 관여하는 것으로 알려져 있다 (Dahlen　SE, Eur. J. Pharmacol., 533:40-56, 2006). 류코트리엔은 알레르기 또는 염증성 호흡기 질환에서기도 평활근의 수축, 점액 분비, 점막 부종, 호중구나 호산구의 기도내 유도에 관여한다. 류코트리엔의 합성에는 크게 3 가지 효소, 즉, 리폭시게나아제 (5-lipoxygenase; 5-LO), 리폭시게나아제 활성화 단백질(5-lipoxygenase activating protein), 및 류코트리엔 C4 합성 효소 (leukotriene C4 (LTC4) synthase)가 작용한다. 이 중 5-LO는 류코트리엔의 생합성에 있어 가장 중요한 효소로, 아라키돈산의 산화를 촉진하며, 이후의 대사과정을 거쳐 류코트리엔 B4 (LTB4) 또는 cyteinyl leukotrienes (Cysteinyl-LT) 생성에 관여한다 (ACS Med. Chem. Lett. 1, 170-174, 2010). 류코트리엔은 크게 2 개의 수용체, 즉, 류코트리엔 수용체 (Cysteinyl leukotriene receptor) 1 (Cys LTR1)과 류코트리엔 수용체 (Cysteinyl leukotriene receptor) 2 (Cys LTR2)에 작용하는데, 이 중 알레르기 및 염증 질환의 병태생리와 관련되는 증상은 주로 Cys LTR1과 관련이 있다 (Korean Journal of Pediatrics Vol. 52, No.6, 2009). Cys LTR1 길항제들은 이러한 류코트리엔이 Cys LTR1에 결합하는 것을 막아주어, 기도 수축, 과도한 점액 분비, 호산구의 이동 등을 저해시킴으로써 기도 수축을 억제하기도 한다 (Therapeutics and Clinical Risk Management, Vol.3, No.5, 885-892, 2007). 본 발명의 혼합 생약 추출물은 5-LO 효소 작용의 저해 활성(실시예 3.1, 표 1 내지 7 참조) 및 Cys LTR1의 작용의 저해 활성(실시예 3.4, 표 22 내지 28 참조)을 갖는 것으로 확인되었으며, 이는 상기 혼합 생약 추출물의 호흡기 질환의 예방 및/또는 치료 효과를 입증하는 것이다.
포스포다이에스테라아제 (Phophodiesterase; PDEs)는 현재까지 11 개의 아형이 밝혀져 있는데, 이 효소들은 환형 뉴클레오타이드(cyclic nucleotides; cAMP 및/또는 cGMP)의 분해에 관여함으로써 신호전달의 조절에 관여한다. 이들 PDEs 중 PDE4, PDE7, PDE8 등은 cAMP에 대해 특이성을 나타내는데, 이 중에서도 PDE4는 면역 및 염증 세포에 있어서 cAMP 대사에 관여하는 주요한 효소로 알려져 있다. PDE4 억제제는 림포사이트, 호산구, 호중구, 단핵구 등에서 cAMP의 분해를 억제하여 히스타민과 류코트리엔 및 다양한 사이토카인 방출을 감소시킴으로써 항알레르기 및 항염증 효과를 나타낸다 (J Allergy Clin Immunol Vol 108, No.4, 530-6, 2001). 따라서 선택적 PDE4 억제제는 스테로이드제를 대신하는 항염증 치료의 대안으로 주목받기도 하였으며, 천식이나 알레르기 질환, 만성폐쇄성 폐질환이나 기관지염 등 다양한 염증성 질환을 가진 환자에게서 항염증 효과를 나타내는 것으로 알려졌다 (JPET 308, 555-563, 2004). 본 발명의 혼합 생약 추출물은 PDE4 효소 작용의 저해 활성(실시예 3.2, 표 8 내지 14 참조)을 갖는 것으로 확인되었으며, 이는 상기 혼합 생약 추출물의 호흡기 질환의 예방 및/또는 치료 효과를 입증하는 것이다.
베타수용체는 세포질에 박혀있는 단일 폴리펩타이드 당단백질기로서 현재까지 세 가지 (β1, β2, β3) 아형이 밝혀져 있다. 사람의 기관지 평활근에 있는 베타 수용체는 전적으로 β2 아형이다.
베타2 작용제는 베타2 수용체에 결합하여 베타2 수용체를 활성화시킴으로써, 기도 평활근 세포의 아데닐 사이클라아제 (adenyl cyclase)를 활성화시킴으로써 세포내 칼슘 이온의 농도를 낮추므로 수축된 기도 평활근을 이완시킨다. 또한, 베타2 작용제는 기도 평활근에 직접 작용하는 것뿐 아니라, 간접적으로는 염증세포로부터 기관지 수축에 관여하는 매개체들의 분비와 기도 신경으로부터 기관지 수축을 일으키는 신경전달물질들의 분비를 억제함으로써 기도 확장을 일으킨다. 이외에도 베타2 작용제는 비만세포로부터 방출되는 매개체 분비를 억제하고, 히스타민과 류코트리엔 같은 화학매체들에 노출된 후 미세혈과 누출을 억제함으로써 기관지 점막 부종의 발생을 억제하며, 기도상피의 ion transport를 증가시킴으로써 mucociliary clearance를 증가시키고, 기침을 감소시키는 효과를 나타내기도 한다 (Tuberculosis and Respiratory Diseases Vol.60, No.3, Mar. 2006). 본 발명의 혼합 생약 추출물은 베타-2-아드레날린 수용체에 결합하여 (실시예 3.3, 표 15 내지 21 참조), 베타2 작용제와 유사한 작용 (즉, 베타-2-아드레날린 수용체의 활성화)을 갖는 것으로 확인되었으며, 이는 상기 혼합 생약 추출물의 호흡기 질환의 예방 및/또는 치료 효과를 입증하는 것이다.
또한, 부교감신경이 자극을 받으면 acetylcholine (ACh)이 신경전도물질로 분비되어 기도평활근에 있는 무스카린 (M) 수용체를 자극하고 이로 인해 세포내의 효소인 GTP가 활성화되어 cGMP로 전환되고 기도평활근을 수축시킨다. ACh은 신경자극 이외에도 기도의 다양한 세포로부터 분비되며, 염증성 자극에 의해서 choline acetyltransferase의 발현이 증가하고 ACh이 증가한다. 사람에는 적어도 5 개 이상의 밀접한 상과관계가 있는 무스카린 수용체 유전자가 있으며 그 중에 3 개 (M1, M2, M3)가 폐에서 발현된다. 이 아형들은 폐의 각각 다른 조직에서 서로 각각 다른 생리적 작용을 하는 것으로 보인다. 이 중 M3 수용체는 기도의 평활근과 점막하 선에 분포하여 평활근의 수축과 점액 분비를 촉진하므로, M3 수용체의 작용을 저해하면 이러한 증상을 억제할 수 있다. 본 발명의 혼합 생약 추출물은 무스카린 M3 수용체 작용의 저해 활성(실시예 3.5, 표 29 내지 35 참조)을 갖는 것으로 확인되었으며, 이는 상기 혼합 생약 추출물의 호흡기 질환의 예방 및/또는 치료 효과를 입증하는 것이다.
다른 예는 삼백초, 백굴채, 용규, 및 괄루인으로 이루어진 군에서 선택된 2종 이상의 혼합 생약 추출을 포함하는 리폭시게나아제 (5-lipoxygenase; 5-LO) 저해용 조성물을 제공한다. 다른 예는 삼백초, 백굴채, 용규, 및 괄루인으로 이루어진 군에서 선택된 2종 이상의 혼합 생약 추출을 리폭시게나아제의 저해를 필요로 하는 대상에게 투여하는 단계를 포함하는 리폭시게나아제의 저해 방법을 제공한다. 상기 저해 방법은 상기 투여하는 단계 이전에 리폭시게나아제의 저해를 필요로 하는 대상을 확인하는 단계를 추가로 포함할 수 있다. 다른 예는 삼백초, 백굴채, 용규, 및 괄루인으로 이루어진 군에서 선택된 2종 이상의 혼합 생약 추출물의 리폭시게나아제의 저해, 또는 리폭시게나아제 저해제의 제조에 사용하기 위한 용도를 제공한다.
다른 예는 삼백초, 백굴채, 용규, 및 괄루인으로 이루어진 군에서 선택된 2종 이상의 혼합 생약 추출을 포함하는 포스포다이에스테라아제 (phosphodiesterase; PDE)-4 저해용 조성물을 제공한다. 다른 예는 삼백초, 백굴채, 용규, 및 괄루인으로 이루어진 군에서 선택된 2종 이상의 혼합 생약 추출을 포스포다이에스테라아제-4의 저해를 필요로 하는 대상에게 투여하는 단계를 포함하는 포스포다이에스테라아제-4의 저해 방법을 제공한다. 상기 저해 방법은 상기 투여하는 단계 이전에 포스포다이에스테라아제-4의 저해를 필요로 하는 대상을 확인하는 단계를 추가로 포함할 수 있다. 다른 예는 삼백초, 백굴채, 용규, 및 괄루인으로 이루어진 군에서 선택된 2종 이상의 혼합 생약 추출물의 포스포다이에스테라아제-4의 저해, 또는 포스포다이에스테라아제-4 저해제의 제조에 사용하기 위한 용도를 제공한다.
다른 예는 삼백초, 백굴채, 용규, 및 괄루인으로 이루어진 군에서 선택된 2종 이상의 혼합 생약 추출을 포함하는 베타-2-아드레날린 수용체 (adrenergic beta 2 receptor) 활성화용 조성물을 제공한다. 다른 예는 삼백초, 백굴채, 용규, 및 괄루인으로 이루어진 군에서 선택된 2종 이상의 혼합 생약 추출을 베타-2-아드레날린 수용체의 활성화를 필요로 하는 대상에게 투여하는 단계를 포함하는 베타-2-아드레날린 수용체의 활성화 방법을 제공한다. 상기 활성화 방법은 상기 투여하는 단계 이전에 베타-2-아드레날린 수용체의 활성화를 필요로 하는 대상을 확인하는 단계를 추가로 포함할 수 있다. 다른 예는 삼백초, 백굴채, 용규, 및 괄루인으로 이루어진 군에서 선택된 2종 이상의 혼합 생약 추출물의 베타-2-아드레날린 수용체의 활성화, 또는 베타-2-아드레날린 수용체의 활성화제의 제조에 사용하기 위한 용도를 제공한다.
다른 예는 삼백초, 백굴채, 용규, 및 괄루인으로 이루어진 군에서 선택된 2종 이상의 혼합 생약 추출을 포함하는 류코트리엔 수용체 (Cysteinyl leukotriene receptor; CysLT1 receptor)의 저해용 조성물을 제공한다. 다른 예는 삼백초, 백굴채, 용규, 및 괄루인으로 이루어진 군에서 선택된 2종 이상의 혼합 생약 추출을 류코트리엔 수용체의 저해를 필요로 하는 대상에게 투여하는 단계를 포함하는 류코트리엔 수용체의 저해 방법을 제공한다. 상기 저해 방법은 상기 투여하는 단계 이전에 류코트리엔 수용체의 저해를 필요로 하는 대상을 확인하는 단계를 추가로 포함할 수 있다. 다른 예는 삼백초, 백굴채, 용규, 및 괄루인으로 이루어진 군에서 선택된 2종 이상의 혼합 생약 추출물의 류코트리엔 수용체의 저해, 또는 류코트리엔 수용체의 저해제의 제조에 사용하기 위한 용도를 제공한다.
다른 예는 삼백초, 백굴채, 용규, 및 괄루인으로 이루어진 군에서 선택된 2종 이상의 혼합 생약 추출을 포함하는 무스카린 수용체 (Muscarinic receptor; e.g., Muscarinic M3 receptor)의 저해용 조성물을 제공한다. 다른 예는 삼백초, 백굴채, 용규, 및 괄루인으로 이루어진 군에서 선택된 2종 이상의 혼합 생약 추출을 무스카린 수용체의 저해를 필요로 하는 대상에게 투여하는 단계를 포함하는 무스카린 수용체의 저해 방법을 제공한다. 상기 저해 방법은 상기 투여하는 단계 이전에 무스카린 수용체의 저해를 필요로 하는 대상을 확인하는 단계를 추가로 포함할 수 있다. 다른 예는 삼백초, 백굴채, 용규, 및 괄루인으로 이루어진 군에서 선택된 2종 이상의 혼합 생약 추출물의 무스카린 수용체의 저해, 또는 무스카린 수용체의 저해제의 제조에 사용하기 위한 용도를 제공한다.
상기 약학 조성물 내의 유효성분으로서의 혼합 생약 추출물의 함량은 사용 형태 및 목적, 환자 상태, 증상의 종류 및 경중 등에 의하여 적절하게 조절할 수 있으며, 고형분 중량 기준으로 0.001 내지 99.9 중량%, 0.01 내지 70중량%, 또는 0.1 내지 50 중량%일 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.
본 명세서에 기재된 예방 및/또는 치료 방법, 저해 방법 또는 활성화 방법에서, 유효성분인 혼합 생약 추출물은 약학적 유효량으로 투여될 수 있다. 용어 "약학적 유효량"은 혼합 생약 추출물이 소망하는 효과, 즉 호흡기 질환의 예방 및/또는 치료, 리폭시게나아제의 저해, 포스포다이에스테라아제-4의 저해, 베타-2-아드레날린 수용체의 활성화, 류코트리엔 수용체의 저해 또는 무스카린 수용체의 저해효과를 나타낼 수 있는 양을 의미하며, 제제화 방법, 투여 방식, 환자의 연령, 체중, 성, 병적 상태, 음식, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하게 처방될 수 있다.
상기 혼합 생약 추출물 또는 약학 조성물의 투여 대상은 인간, 소, 말, 돼지, 개, 고양이, 양 등을 포함하는 포유류 또는 닭, 오리, 거위, 메추리 등을 포함하는 조류 중에서 선택될 수 있다. 상기 혼합 생약 추출물 또는 약학 조성물은 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여 방식은 통상적으로 사용되는 모든 방식일 수 있으며, 예컨대, 경구 투여, 또는 직장, 정맥, 근육, 피하, 자궁내 경막, 또는 뇌혈관 내 주사와 같은 비경구 투여일 수 있다. 상기 약학 조성물은 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 경피제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태의 비경구 제형 등으로 제형화하여 사용될 수 있다.
상기 약학 조성물은 상기 혼합 생약 추출물 이외에 약제학적으로 적합하고 생리학적으로 허용되는 담체, 부형제, 및/또는 희석제 등의 보조제를 추가로 함유하는 것일 수 있다. 상기 담체, 부형제, 또는 희석제의 예로서 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유 등으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 들 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 희석제 또는 부형제를 사용할 수 있다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상이 포함되며, 이러한 고형 제제는 상기 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트, 수크로스, 락토오스, 젤라틴 등으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 섞어 조제될 수 있다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구 투여를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제, 경피제 등으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상이 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔, 마크로골, 트윈 61, 카카로지, 라우린지, 글리세로제라틴 등으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상이 사용될 수 있다.
상기 혼합 생약 추출물 또는 약학 조성물을 인간에 적용하는 구체예에 있어서, 혼합 생약 추출물 조성물은 단독으로 투여될 수 있으나, 일반적인 투여방식과 표준 약제학적 관행 (standard pharmaceutical practice)을 고려하여 선택된 약제학적 담체와 혼합되어 투여될 수 있다. 예를 들면, 본 발명의 혼합 추출물 함유 조성물은 전분 또는 락토오즈를 함유하는 정제 형태로, 또는 단독 또는 부형제를 함유하는 캡슐 형태로, 또는 맛을 내거나 색을 띄게 하는 화학 약품을 함유하는 엘릭시스 또는 현탁제 형태로 경구, 구강내 또는 혀 밑 투여될 수 있다. 이러한 액체 제제는 현탁제 (예를 들면, 메틸셀룰로오즈, 위텝솔과 같은 반합성 글리세라이드 또는 행인유 (apricot kernel oil)와 PEG-6 에스테르의 혼합물 또는 PEG-8과 카프릴릭/카프릭 글리세라이드의 혼합물과 같은 글리세라이드 혼합물)와 같은 약제학적으로 허용 가능한 첨가제와 함께 제형화될 수 있다.
상기 약학 조성물의 투여 용량은 환자의 나이, 몸무게, 성별, 투여형태, 건강상태 및 질환 정도에 따라 달라질 수 있으며, 의사 또는 약사의 판단에 따라 일정 시간 간격으로 1일 1회 내지 수회로 분할 투여할 수도 있다. 예컨대, 유효성분 함량을 기준으로 1일 투여량이 0.5 내지 500 mg/kg 또는 1 내지 300mg/kg일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 상기한 투여량은 평균적인 경우를 예시한 것으로서 개인적인 차이에 따라 그 투여량이 높거나 낮을 수 있다.　
본 발명의 다른 예는 삼백초, 백굴채, 용규, 및 괄루인으로 이루어진 군에서 선택된 2종 이상의 혼합 생약 추출물을 제조하는 단계를 포함하는, 호흡기 질환의 예방 및/또는 치료 활성을 갖는 약학 조성물의 제조방법을 제공한다. 상기 호흡기 질환은 천식(예컨대, 기관지 천식, 아토피성 천식, 아토피성 기관지 IgE 매개 천식, 비아토피성 천식, 알레르기성 천식, 또는 비알레르기성 천식 등), 알레르기 비염, 기관지염 (예컨대, 만성 기관지염 또는 급성 기관지염 등), 만성폐쇄성 폐질환, 감기, 기침 (예컨대, 만성 기침 등) 등으로 이루어진 군에서 선택된 것일 수 있다.
한 구체예에 있어서, 상기 제조 방법은,
삼백초, 백굴채, 용규, 및 괄루인으로 이루어진 군에서 선택된 2종 이상을 각각 독립적으로 물 및 탄소수 1 내지 4 개의 직쇄 또는 분지형 알코올로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상, 예컨대, 물, 또는 10 내지 95%(v/v), 20 내지 95%(v/v), 30 내지 95%(v/v), 40 내지 95%(v/v), 50 내지 95%(v/v), 60 내지 95%(v/v), 70 내지 95%(v/v), 10 내지 90%(v/v), 20 내지 90%(v/v), 30 내지 90%(v/v), 40 내지 90%(v/v), 50 내지 90%(v/v), 60 내지 90%(v/v), 70 내지 90%(v/v), 10 내지 85%(v/v), 20 내지 85%(v/v), 30 내지 85%(v/v), 40 내지 85%(v/v), 50 내지 85%(v/v), 60 내지 85%(v/v), 70 내지 85%(v/v), 10 내지 80%(v/v), 20 내지 80%(v/v), 30 내지 80%(v/v), 40 내지 80%(v/v), 50 내지 80%(v/v), 60 내지 80%(v/v), 또는 70 내지 80%(v/v)의 탄소수 1 내지 4 개의 직쇄 또는 분지형 알코올 수용액 (예컨대, 메탄올 수용액, 에탄올 수용액, 이소프로판올 수용액, 및 수포화 부탄올로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상)으로 추출하여, 삼백초 추출물, 백굴채 추출물, 용규 추출물 및 괄루인 추출물로 이루어진 군에서 선택된 2종 이상의 생약 추출물을 얻는 단계; 및
상기 얻어진 2종 이상의 생약 추출물을 혼합하는 단계
를 포함할 수 있다.
다른 예에서, 상기 제조 방법은,
삼백초, 백굴채, 용규, 및 괄루인으로 이루어진 군에서 선택된 2종 이상의 생약을 혼합하여 생약 혼합물을 얻는 단계; 및
상기 얻어진 생약 혼합물을 물 및 탄소수 1 내지 4 개의 직쇄 또는 분지형 알코올로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상, 예컨대, 물, 또는10 내지 95%(v/v), 20 내지 95%(v/v), 30 내지 95%(v/v), 40 내지 95%(v/v), 50 내지 95%(v/v), 60 내지 95%(v/v), 70 내지 95%(v/v),10 내지 90%(v/v), 20 내지 90%(v/v), 30 내지 90%(v/v), 40 내지 90%(v/v), 50 내지 90%(v/v), 60 내지 90%(v/v), 70 내지 90%(v/v), 10 내지 85%(v/v), 20 내지 85%(v/v), 30 내지 85%(v/v), 40 내지 85%(v/v), 50 내지 85%(v/v), 60 내지 85%(v/v), 70 내지 85%(v/v), 10 내지 80%(v/v), 20 내지 80%(v/v), 30 내지 80%(v/v), 40 내지 80%(v/v), 50 내지 80%(v/v), 60 내지 80%(v/v), 또는 70 내지 80%(v/v)의 탄소수 1 내지 4 개의 직쇄 또는 분지형 알코올 수용액 (예컨대, 메탄올 수용액, 에탄올 수용액, 이소프로판올 수용액, 및 수포화 부탄올로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상)으로 추출하여 삼백초 추출물, 백굴채 추출물, 용규 추출물 및 괄루인 추출물로 이루어진 군에서 선택된 2종 이상의 생약 추출물을 얻는 단계
를 포함할 수 있다.
생약 또는 생약 추출물을 2종을 혼합 시, 이들 간의 혼합비는 앞서 설명한 바와 같다.
이 때, 각각의 생약 추출물 제조 단계 또는 생약 혼합물의 추출물 제조 단계는 얻어진 추출물 (조추출물)에 탄소수 1 내지 6개의 직쇄 또는 분지형 알코올, 예컨대 프로판올, 이소프로판올 및 부탄올로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상, 또는 비극성 용매, 예컨대, 헥산, 디클로로메탄, 클로로포름 및 에틸아세테이트로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 가하여 얻어진 용매 가용 추출물을 취하여 추출물을 정제하는 단계를 추가로 포함할 수 있다.
상기 추출 단계는 각각의 생약은 적절한 크기로 절단 또는 분쇄(예컨대, 괄루인의 경우)된 후 진행될 수 있다.
상기 방법에 사용된 추출 과정 (조추출물 추출 및/또는 용매 가용 추출물 추출)은 통상적으로 사용되는 모든 추출 방법에 의하여 수생될 수 있으며, 예컨대, 냉침, 열수 추출, 초음파 추출, 환류 추출법 등으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 방법에 의하여 수행될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
일 구체예에 있어서, 본 발명에 따른 삼백초 추출물, 백굴채 추출물, 용규 추출물, 괄루인 추출물, 또는 2종 이상의 생약 혼합물의 추출물의 제조 과정을 보다 상세하게 설명하면 다음과 같다: 생약 내 유용성분의 효율적인 추출을 위하여, 삼백초, 백굴채, 용규, 분쇄한 괄루인 또는 2종 이상의 생약 혼합물을 상기 생약 재료 (각각의 생약 또는 생약 혼합물) 중량 (g 또는 kg)대비 5 내지 30 부피배(mL 또는 L; 예컨대, 생약 재료 100g에 대하여 0.5 내지 3L, 이하 동일한 기준 적용), 5 내지 25 부피배, 5 내지 20 부피배, 5 내지 15 부피배, 7 내지 30 부피배, 7 내지 25 부피배, 7 내지 20 부피배, 7 내지 15 부피배, 10 내지 30 부피배, 10 내지 25 부피배, 10 내지 20 부피배, 또는10 내지 15 부피배의 물, 및 탄소수 1내지 4개의 직쇄 또는 분지형 알코올로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상, 예컨대 물, 또는 10 내지 95%(v/v), 20 내지 95%(v/v), 30 내지 95%(v/v), 40 내지 95%(v/v), 50 내지 95%(v/v), 60 내지 95%(v/v), 70 내지 95%(v/v), 10 내지 90%(v/v), 20 내지 90%(v/v), 30 내지 90%(v/v), 40 내지 90%(v/v), 50 내지 90%(v/v), 60 내지 90%(v/v), 70 내지 90%(v/v), 10 내지 85%(v/v), 20 내지 85%(v/v), 30 내지 85%(v/v), 40 내지 85%(v/v), 50 내지 85%(v/v), 60 내지 85%(v/v), 70 내지 85%(v/v), 10 내지 80%(v/v), 20 내지 80%(v/v), 30 내지 80%(v/v), 40 내지 80%(v/v), 50 내지 80%(v/v), 60 내지 80%(v/v), 또는 70 내지 80%(v/v)의 메탄올, 수용액, 에탄올 수용액, 이소프로판올 수용액, 및 수포화 부탄올로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 추출용매를 사용하여 환류 추출할 수 있다. 추출 온도는 추출방법에 따라서 적절히 조절가능하며, 예컨대, 25 내지 110℃, 40 내지 110℃, 25 내지 90℃, 또는 40 내지 90℃일 수 있다.
수득률을 높이기 위하여, 상기 추출 과정 (1차 추출) 얻어진 추출물을 여과하여 여과액을 모으고, 잔사는 동일한 방법으로 재추출(2차 추출)한 후 여과하여, 이전에 얻어진 여과액과 합하여 추출물을 제조할 수 있다. 상기 얻어진 추출물은 통상적인 방법으로 여과 및/또는 농축 (예컨대, 감압농축)하여 최종적인 삼백초 추출물, 백굴채 추출물, 용규 추출물, 괄루인 추출물, 또는 혼합 생약의 추출물로 제조될 수 있다. 이와 같이 2차에 걸친 추출 및 각각의 추출 후 얻어진 여과액을 혼합함으로써 추출 효율을 높일 수 있으나, 본 발명의 추출물의 추출 횟수에 한정되는 것은 아니다.
상기와 같이 1차 및/또는 2차 추출에 의하여 얻어진 추출물(조추출물)을 여과 및/또는 농축한 후, 여액 중에 함유된 불필요한 단백질, 다당류 및 지방산 등의 불순물을 정제하기 위하여, 상기 얻어진 조추출물 (예컨대, 조추출물의 여과액 또는 건조 또는 연조 농축물) 또는 상기 조추출물(예컨대, 건조 또는 연조 농축물)이 물(예컨대, 조추출물 중량 (g 또는 kg) 대비, 1 내지 10 부피배, 2 내지 8부피배, 또는 3 내지 6 부피배 (mL 또는 L))에 현탁된 현탁액에 상기 조추출물 또는 현탁액 부피의 1 내지10 부피배, 1 내지 7 부피배 또는 1 내지 5 부피배의 저급 알코올 또는 비극성 용매를 가하여 1 내지 10회, 1 내지 6회, 또는 2 내지 4회 층 분리를 실시하여 용매 가용 분획을 얻음으로써 불순물을 정제하는 단계를 추가로 수행할 수 있다. 예컨대, 상기 조추출물이 추출 후 여과를 거친 여과액인 경우, 상기 여과액 부피의 1 내지 5부피배의 분획 용매 (저급 알코올 또는 비극성 용매)를 가하여 분획물을 얻을 수 있고, 상기 조추출물이 건조 또는 연조 농축물인 경우, 상기 농축물 중량 대비 1 내지 10 부피배, 2 내지 8부피배, 또는 3 내지 6 부피배, 예컨대 약 5 부피배의 물(증류수)로 현탁시킨 현탁액 부피의 1 내지10 부피배, 1 내지 7 부피배 또는 1 내지 5 부피배의 분획용매를 가하여 분획물을 얻을 수 있다. 이 때, 상기 저급 알코올은 탄소수 1 내지 6의 직쇄 또는 분지형 알코올, 예컨대, 프로판올, 이소프로판올 및 부탄올로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상일 수 있으며, 상기 비극성 용매는 헥산, 디클로로메탄, 클로로포름 및 에틸아세테이트로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상일 수 있다. 상기 분획 용매로서 저급 알코올 또는 비극성 용매의 사용량이 조추출물 (예컨대 여과액 또는 건조 또는 연조 농축물) 또는 현탁액보다 적을 경우에는 지방산 등의 불필요한 성분들에 의한 미립자가 형성되어 층 분리가 원활하지 못할 뿐만 아니라 유효활성성분의 추출 함량이 낮아지게 되어정제 효율이 낮아질 수 있으므로, 상기 용매 사용량은 상기 조추출물 또는 현탁액 부피와 동일 부피 이상, 예컨대, 1 내지 10 부피배, 1 내지 7 부피배 또는 1 내지 5 부피배의 양으로 사용할 수 있다.
상기 층 분리 후 얻어진 저급 알코올 또는 비극성 용매 가용 분획을 40내지 80℃로 감압 농축하여 시료 중에 잔존하는 용매를 제거하여 농축물을 제조하는 공정을 추가로 거칠 수 있다.
이와 같이 얻어진 조추출물, 분획물, 또는 이들의농축물 (건조 또는 연조 농축물)은 의약품 원료로 사용하기에 적합하도록 잔존하는 용매의 함량을 조절하기 위하여, 조추출물, 분획물, 또는 농축물 총중량의 5 내지 30중량배, 5 내지 25중량배, 5 내지 20중량배, 10 내지 30중량배, 또는 10 내지 25 중량배, 또는 10 내지 20 중량배의 물로 1 내지 5회 또는 2 내지 3회 공비농축하고 재차 동량의 물을 가하여 균질하게 현탁시킨 후 농축하는 단계를 추가로 수행할 수 있다.
상기 제조 방법에 있어서, 2종 이상의 생약 추출물의 혼합 단계 또는 2종 이상의 생약의 혼합 단계에서의 각 생약 추출물(고형분 중량 기준) 또는 생약(생약 중량 기준)의 혼합비는 앞서 설명한 바와 같다. 즉, 2종의 생약 추출물 또는 2종의 생약을 혼합할 때, 상기 혼합 단계는 상기 2종의 생약 추출물 또는 2종의 생약의 혼합비가 1:10 내지 10:1, 1:5 내지 5:1, 또는 1:3 내지 3:1가 되도록 혼합하여 수행될 수 있다. 3종의 생약 추출물 또는 3종의 생약을 혼합할 때, 상기 혼합 단계는 상기 3종의 생약 추출물 또는 3종의 생약의 혼합비가 1 내지 10:1 내지 10:1 내지 10, 1 내지 5:1 내지 5:1 내지 5, 1 내지 3:1 내지 3:1 내지 3, 1:1 내지 3:1 내지 3, 또는 1:1:1 내지 3가 되도록 혼합하여 수행될 수 있다. 4종의 생약 추출물 또는 4종의 생약을 혼합할 때, 상기 혼합 단계는 상기 4종의 생약 추출물 또는 4종의 생약의 혼합비가1 내지 10:1 내지 10:1 내지 10:1 내지 10, 1 내지 5:1 내지 5:1 내지 5:1 내지 5 또는 1 내지 3:1 내지 3:1 내지 3:1 내지 3, 1:1 내지 3:1 내지 3:1 내지 3, 1:1:1 내지 3:1 내지 3, 또는 1:1:1:1 내지 3이 되도록 혼합하여 수행될 수 있다.
상기 혼합 추출물 내 각각의 추출물이 균질하게 혼합되도록 하기 위하여, 혼합 추출물에 약 2 내지 3 중량배의 물을 첨가한 후 40내지 60℃의 온도하에서 감압농축 하여 조성물을 제조할 수 있다.
또 다른 측면에 있어서, 본 발명은 삼백초, 백굴채, 용규, 및 괄루인으로 이루이전 군에서 선택된 2종 이상의 혼합 생약 추출물을 함유하는, 호흡기 질환이 예방 및/또는 개선용 건강 기능성 식품을 제공한다. 상기 호흡기 질환은 천식(기관지 천식, 아토피성 천식, 아토피성 기관지 IgE 매개 천식, 비아토피성 천식, 알레르기성 천식, 또는 비알레르기성 천식 등), 알레르기 비염, 기관지염 (만성 기관지염 또는 급성 기관지염 등), 만성폐쇄성 폐질환 등으로 이루어진 군에서 선택된 것일 수 있다. 상기 건강 기능성 식품은 각종 식품, 음료 조성물, 식품 첨가제 등일 수 있다.
상기 건강 기능성 식품에 함유된 혼합 생약 추출물의 함량은 식품의 형태, 소망하는 용도 등에 따라 적절하게 특별한 제한이 없으며, 예컨대, 전체 식품 중량의 0.001 내지 20 중량% 또는 0.01 내지 15 중량%일 수 있고, 건강 음료 조성물의 경우 100ml을 기준으로 0.001 내지 15g, 0.02 내지 10g, 또는 0.3 내지 1g일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 건강 음료 조성물의 상기 함량 범위로 포함된 혼합 생약 추출물 이외에 액체성분에는 특별한 제한 사항이 없으며, 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 및/또는 천연 탄수화물 등의 추가 성분이 포함될 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당 등의 모노사카라이드; 과당 등의 디사카라이드; 말토스, 슈크로스 등의 폴리사카라이드; 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당; 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜; 등으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상일 수 있다. 상기향미제는 천연 향미제 (타우마틴, 스테비아 추출물 (예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등) 및 합성 향미제 (사카린, 아스파르탐 등)로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상일 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 일반적으로 음료 조성물 100 ml 당 약 1 내지 20 g, 바람직하게는 약 5 내지 12 g 정도일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
이 외에, 상기 건강 기능성 식품은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물 (전해질), 합성 풍미제 또는 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제, 중진제 (치즈, 초콜릿 등), 펙트산 또는 그의 염, 알긴산 또는 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 추가로 함유할 수 있다. 그밖에, 상기 건강기능성 식품, 특히 건강 기능 음료 조성물은 천연 과일 주스, 과일 쥬스 음료, 또는 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 전체 조성물 100 중량부 당 1 내지 약 20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명에서 제안되는 삼백초, 백굴채, 용규, 및 괄루인으로 이루어진 군에서 선택된 2종 이상의 혼합 생약 추출물은, 리폭시게나아제 (5-lipoxygenase; 5-LO) 저해활성, 포스포다이에스테라아제 (phosphodiesterase; PDE)-4 저해활성, 베타-2-아드레날린 수용체 (adrenergic beta 2 receptor) 활성화, 류코트리엔 수용체 (Cysteinyl leukotriene receptor; CysLT1 receptor) 저해활성, 무스카린 수용체 (Muscarinic receptor; e.g., Muscarinic M3 receptor) 저해 활성 등에 있어서, 각각의 단일 생약 추출물보다 우수한 효과를 나타내므로, 천식, 알레르기성 비염, 기관지염, 만성폐쇄성 폐질환, 기침, 감기 등의 호흡기 질환에 보다 유리한 효과를 나타낼 것으로 기대된다. 또한, 상기 혼합 생약 추출물은 천연추출물의 일반적 특성에 비추어, 인체 투여시, 다른 합성 의약품에 비해, 부작용, 독성 등의 불리한 효과에 대한 염려가 매우 낮다는 이점이 있다.
이하, 본 발명을 바람직한 실시예를 참고로 하여 본 발명을 상세히 설명한다. 그러나 본 발명은 여러 가지 상이한 형태로 구현될 수 있으며 여기에서 설명하는 실시예에 한정되는 것은 아니다.
[ 참고예 : 단일 생약 추출물의 제조]
참고예 1: 물 조추출물의 제조
건조, 절단한 삼백초 (송림무약), 백굴채 (송림무약) 및 용규 (동의한재)와 건조, 분쇄한 괄루인 (동의한재)을 각각 200g씩 준비하여 2.6L의 증류수로 80℃에서 3시간동안 환류추출 후 여과하여 여과액을 모으고, 잔사를 동일한 방법으로 재추출한 후 여과하여 이전에 얻어진 여과액과 합쳐 감압 농축하여, 삼백초 물 추출물 27.2g (SC-W), 백굴채 물 추출물 43.0g (CM-W), 용규 물 추출물 33.6g (SN-W), 및 괄루인 물 추출물 19.4g (TK-W)을 각각 얻었다.
참고예 2: 에탄올 조추출물의 제조
건조, 절단한 삼백초, 백굴채, 용규와 건조, 분쇄한 괄루인을 각각 200g씩 준비하여 2.6 L의 80%(v/v)에탄올로 80℃에서 3시간동안 환류추출후 여과하여 여과액을모으고, 잔사를 동일한 방법으로 재추출한 후 여과하여 이전에 얻어진 여과액과 합쳐 감압 농축하였다. 대부분의 용매가 증발된 상태에서 중량대비 약 10배의 증류수를 가하여 공비 농축한 후, 상기 농축 과정을 추가로 2회 반복 수행하여, 삼백초 에탄올 추출물 24.6g (SC-E), 백굴채 에탄올 추출물 41.4g (CM-E), 용규 에탄올 추출물 30.0g (SN-E), 및 괄루인 에탄올 추출물 34.8g (TK-E)을 각각 얻었다.
참고예 3: 이소프로판올 조추출물의 제조
건조, 절단한 삼백초, 백굴채, 용규와 건조, 분쇄한 괄루인을 각각 200g씩 준비하여 2.6L의 80%(v/v) 이소프로판올로 80℃에서 3시간동안 환류추출 후여과하여여과액을 모으고, 잔사를 동일한 방법으로 재추출한 후 여과하여 이전에 얻어진 여과액과 합쳐 감압 농축하였다. 대부분의 용매가 증발된 상태에서 중량대비 약 10배의 증류수를 가하여 공비 농축한 후, 상기 농축 과정을 추가로 2회 반복 수행하여, 삼백초 이소프로판올 추출물 22.2g (SC-I), 백굴채 이소프로판올 추출물 33.8g (CM-I), 용규 이소프로판올 추출물 27.6g (SN-I), 및 괄루인 이소프로판올 추출물 32.6g (TK-I)을 각각 얻었다.
참고예 4: 용매 가용 추출물 (부탄올 분획물 )의 제조
상기 참고예 1 내지 3의 제조방법에 따라 제조하여 얻어진 삼백초, 백굴채, 용규 및 괄루인 각각의 조추출물에 중량대비 5배의 증류수를 넣어 현탁시킨 후, 상기 얻어진 현탁액 부피와 동량의 수포화부탄올로 2회 층분리를 실시하여 얻어진 부탄올 가용 분획부를 감압농축하였다. 대부분의 용매가 증발한 상태에서 중량대비 약 10중량배의 증류수를 가해 공비 농축한 후 다시 2회 반복하여, 다음과 같은 부탄올 분획물을 얻었다:
삼백초 분획물: 9.8g (SC-W-B, 물 추출물의 부탄올 분획물),　12.5g (SC-E-B, 에탄올 추출물의 부탄올 분획물), 12.0g (SC-I-B, 이소프로판올 추출물의 부탄올 분획물);
백굴채 분획물: 4.6g (CM-W-B, 물 추출물의 부탄올 분획물), 9.6g (CM-E-B, 에탄올 추출물의 부탄올 분획물), 8.8g (CM-I-B, 이소프로판올 추출물의 부탄올 분획물);
용규 분획물 각 9.8g (SN-W-B, 물 추출물의 부탄올 분획물), 12.6g (SN-E-B, 에탄올 추출물의 부탄올 분획물), 11.6g (SN-I-B, 이소프로판올 추출물의 부탄올 분획물); 및
괄루인 분획물 각 10.4g (TK-W-B,물 추출물의 부탄올 분획물), 27.2g (TK-E-B, 에탄올 추출물의 부탄올 분획물), 29.0g (TK-I-B, 이소프로판올 추출물의 부탄올 분획물).
[ 실시예 2: 혼합 추출물의 제조]
제조예 1: 삼백초 추출물과 백굴채 추출물의 혼합물
상기 참고예 1의 삼백초 물 추출물(SC-W)과 백굴채물 추출물(CM-W), 참고예 2의 삼백초 에탄올 추출물(SC-E)과 백굴채에탄올 추출물(CM-E), 참고예 3의 삼백초 이소프로판올 추출물(SC-I)과 백굴채이소프로판올 추출물(CM-I), 참고예 4의 삼백초 물 추출물의 부탄올 분획물(SC-W-B)과 백굴채 물 추출물의 부탄올 분획물(CM-W-B), 참고예 4의 삼백초 에탄올 추출물의 부탄올 분획물(SC-E-B)과 백굴채에탄올 추출물의 부탄올 분획물(CM-E-B), 참고예 4의 삼백초 이소프로판올 추출물의 부탄올 분획물(SC-I-B)과 백굴채 이소프로판올 추출물의 부탄올 분획물(CM-I-B)을 각각 중량 기준(삼백초 추출물 중량:백굴채 추출물 중량)으로 1:20, 1:15, 1:10, 1:5, 1:3, 1:1, 3:1, 5:1, 10:1, 15:1, 및 20:1로 혼합하였다. 균질한 혼합이 되도록 하기 위하여 각 혼합물에 3 중량배 가량의 물을 첨가한 후 50℃의 온도하에서 감압농축하여 삼백초와 백굴채의 혼합 생약 추출물을 각 용매별로 제조하였다.
　
제조예 2: 삼백초 추출물과 용규 추출물의 혼합물
상기 참고예 1의 삼백초 물 추출물(SC-W)과 용규물 추출물(SN-W), 참고예 2의 삼백초 에탄올 추출물(SC-E)과 용규에탄올 추출물(SN-E), 참고예 3의 삼백초 이소프로판올 추출물(SC-I)과 용규이소프로판올 추출물(SN-I), 참고예 4의 삼백초 물 추출물의 부탄올 분획물(SC-W-B)과 용규물 추출물의 부탄올 분획물(SN-W-B), 참고예 4의 삼백초 에탄올 추출물의 부탄올 분획물(SC-E-B)과 용규에탄올 추출물의 부탄올 분획물(SN-E-B), 참고예 4의 삼백초 이소프로판올 추출물의 부탄올 분획물(SC-I-B)과 용규이소프로판올 추출물의 부탄올 분획물(SN-I-B)을 각각 중량 기준(삼백초 추출물 중량:용규 추출물 중량)으로 1:20, 1:15, 1:10, 1:5, 1:3, 1:1, 3:1, 5:1, 10:1, 15:1, 및 20:1로 혼합하였다. 균질한 혼합이 되도록 하기 위하여 각 혼합물에 3 중량배 가량의 물을 첨가한 후 50℃의 온도하에서 감압농축을 하여 삼백초와 용규의 혼합 생약 추출물을 각 용매별로 제조하였다.
제조예 3: 삼백초 추출물과 괄루인 추출물의 혼합물
상기 참고예 1의 삼백초 물 추출물(SC-W)과 괄루인물 추출물(TK-W), 참고예 2의 삼백초 에탄올 추출물(SC-E)과 참고예 2의 괄루인 에탄올 추출물(TK-E), 참고예 3의 삼백초 이소프로판올 추출물(SC-I)과 괄루인이소프로판올 추출물(TK-I), 참고예 4의 삼백초 물 추출물의 부탄올 분획물(SC-W-B)과 괄루인물 추출물의 부탄올 분획물(TK-W-B), 참고예 4의 삼백초 에탄올 추출물의 부탄올 분획물(SC-E-B)과 괄루인 에탄올 추출물의 부탄올 분획물(TK-E-B), 참고예 4의 삼백초 이소프로판올 추출물의 부탄올 분획물(SC-I-B)과 괄루인이소프로판올 추출물의 부탄올 분획물(TK-I-B)을 각각 중량 기준(삼백초 추출물 중량:괄루인 추출물 중량)으로 1:20, 1:15, 1:10, 1:5, 1:3, 1:1, 3:1, 5:1, 10:1, 15:1, 및 20:1로 혼합하였다. 균질한 혼합이 되도록 하기 위하여 각 혼합물에 3 중량배 가량의 물을 첨가한 후 50℃의 온도하에서 감압농축을 하여 삼백초와 괄루인의 혼합 생약 추출물을 각 용매별로 제조하였다.
제조예 4: 백굴채 추출물과 용규 추출물의 혼합물
상기 참고예 1의 백굴채 물 추출물(CM-W)과 용규물 추출물(SN-W), 참고예 2의 백굴채 에탄올 추출물(CM-E)과 용규 에탄올 추출물(SN-E), 참고예 3의 백굴채 이소프로판올 추출물(CM-I)과 용규이소프로판올 추출물(SN-I), 참고예 4의 백굴채 물 추출물의 부탄올 분획물(CM-W-B)과 용규 물 추출물의 부탄올 분획물(SN-W-B), 참고예 4의 백굴채 에탄올 추출물의 부탄올 분획물(CM-E-B)과 용규에탄올 추출물의 부탄올 분획물(SN-E-B), 참고예 4의 백굴채 이소프로판올 추출물의 부탄올 분획물(CM-I-B)과 용규이소프로판올 추출물의 부탄올 분획물(SN-I-B)을 각각 중량 기준(백굴채 추출물 중량:용규 추출물 중량)으로 1:20, 1:15, 1:10, 1:5, 1:3, 1:1, 3:1, 5:1, 10:1, 15:1, 및 20:1로 혼합하였다. 균질한 혼합이 되도록 하기 위하여 각 혼합물에 3 중량배 가량의 물을 첨가한 후 50℃의 온도하에서 감압농축을 하여 백굴채와 용규의 혼합 생약 추출물을 각 용매별로 제조하였다.
제조예 5: 백굴채 추출물과 괄루인 추출물의 혼합물
상기 참고예 1의 백굴채 물 추출물(CM-W)과 괄루인물 추출물(TK-W), 참고예 2의 백굴채 에탄올 추출물(CM-E)과 괄루인 에탄올 추출물(TK-E), 참고예 3의 백굴채 이소프로판올 추출물(CM-I)과 괄루인이소프로판올 추출물(TK-I), 참고예 4의 백굴채 물 추출물의 부탄올 분획물(CM-W-B)과 괄루인물 추출물의 부탄올 분획물(TK-W-B), 참고예 4의 백굴채 에탄올 추출물의 부탄올 분획물(CM-E-B)과 괄루인에탄올 추출물의 부탄올 분획물(TK-E-B), 참고예 4의 백굴채 이소프로판올 추출물의 부탄올 분획물(CM-I-B)과 괄루인이소프로판올 추출물의 부탄올 분획물(TK-I-B)을 각각 중량 기준(백굴채 추출물 중량:괄루인 추출물 중량)으로 1:20, 1:15, 1:10, 1:5, 1:3, 1:1, 3:1, 5:1, 10:1, 15:1, 및 20:1로 혼합하였다. 균질한 혼합이 되도록 하기 위하여 각 혼합물에 3 중량배 가량의 물을 첨가한 후 50℃의 온도하에서 감압농축을 하여 백굴채와 괄루인의 혼합 생약 추출물을 각 용매별로 제조하였다.
제조예 6: 용규 추출물과 괄루인 추출물의 혼합물
상기 참고예 1의 용규 물 추출물(SN-W)과 괄루인물 추출물(TK-W), 참고예 2의 용규 에탄올 추출물(SN-E)과 괄루인에탄올 추출물(TK-E), 참고예 3의 용규 이소프로판올 추출물(SN-I)과 괄루인이소프로판올 추출물(TK-I), 참고예 4의 용규 물 추출물의 부탄올 분획물(SN-W-B)과 괄루인물 추출물의 부탄올 분획물(TK-W-B), 참고예 4의 용규 에탄올 추출물의 부탄올 분획물(SN-E-B)과 괄루인에탄올 추출물의 부탄올 분획물(TK-E-B), 참고예 4의 용규 이소프로판올 추출물의 부탄올 분획물(SN-I-B)과 괄루인이소프로판올 추출물의 부탄올 분획물(TK-I-B)을 각각 중량 기준(용규 추출물 중량:괄루인 추출물 중량)으로 1:20, 1:15, 1:10, 1:5, 1:3, 1:1, 3:1, 5:1, 10:1, 15:1, 및 20:1로 혼합하였다. 균질한 혼합이 되도록 하기 위하여 각 혼합물에 3 중량배 가량의 물을 첨가한 후 50℃의 온도하에서 감압농축을 하여 용규와 괄루인의 혼합 생약 추출물을 각 용매별로 제조하였다.
제조예 7: 삼백초 추출물, 백굴채 추출물 및 용규 추출물의 혼합물
상기 참고예 1의 삼백초 물 추출물(SC-W)과 백굴채 물 추출물(CM-W)과 용규 물 추출물(SN-W) 참고예 2의 삼백초 에탄올 추출물(SC-E)과, 백굴채 에탄올 추출물(CM-E)과 용규 에탄올 추출물(SN-E), 참고예 3의 삼백초 이소프로판올 추출물(SC-I)과 백굴채 이소프로판올 추출물(CM-I)과 용규 이소프로판올 추출물(SN-I), 참고예 4의 삼백초 물 추출물의 부탄올 분획물(SC-W-B)과 백굴채 물 추출물의 부탄올 분획물(CM-W-B)과 용규 물 추출물의 부탄올 분획물(SN-W-B), 참고예 4의 삼백초 에탄올 추출물의 부탄올 분획물(SC-E-B)과 백굴채에탄올 추출물의 부탄올 분획물(CM-E-B)과 용규 에탄올 추출물의 부탄올 분획물(SN-E-B), 참고예 4의 삼백초 이소프로판올 추출물의 부탄올 분획물(SC-I-B)과 백굴채이소프로판올 추출물의 부탄올 분획물(CM-I-B)과 용규 이소프로판올 추출물의 부탄올 분획물(SN-I-B)를 각각 중량 기준(삼백초 추출물 중량:백굴채 추출물 중량:용규 추출물 중량)으로 1:1:1, 1:1:3, 1:3:1, 3:1:1:, 3:3:1, 1:3:3, 3:1:3, 1:1:5, 1:5:1, 5:1:1, 5:5:1, 1:5:5, 및 5:1:5로 혼합하였다. 균질한 혼합이 되도록 하기 위하여 각 혼합물에 3 중량배 가량의 물을 첨가한 후 50℃의 온도하에서 감압농축을 하여 삼백초와 백굴채와 용규의 혼합 생약 추출물을 각 용매별로 제조하였다.
제조예 8: 삼백초 추출물, 백굴채 추출물 및 괄루인 추출물의 혼합물
상기 참고예 1의 삼백초 물 추출물(SC-W)과 백굴채 물 추출물(CM-W)과 괄루인 물 추출물(TK-W), 참고예 2의 삼백초 에탄올 추출물(SC-E)과 백굴채 에탄올 추출물(CM-E)과 괄루인 에탄올 추출물(TK-E), 참고예 3의 삼백초 이소프로판올 추출물(SC-I)과 백굴채 이소프로판올 추출물(CM-I)과 괄루인 이소프로판올 추출물(TK-I), 참고예 4의 삼백초 물 추출물의 부탄올 분획물(SC-W-B)과 백굴채 물 추출물의 부탄올 분획물(CM-W-B)과 괄루인 물 추출물의 부탄올 분획물(TK-W-B), 참고예 4의 삼백초 에탄올 추출물의 부탄올 분획물(SC-E-B)과 백굴채에탄올 추출물의 부탄올 분획물(CM-E-B)과 괄루인 에탄올 추출물의 부탄올 분획물(TK-E-B), 참고예 4의 삼백초 이소프로판올 추출물의 부탄올 분획물(SC-I-B)과 백굴채이소프로판올 추출물의 부탄올 분획물(CM-I-B)과 괄루인 이소프로판올 추출물의 부탄올 분획물(TK-I-B)을 각각 중량 기준(삼백초 추출물 중량:백굴채 추출물 중량:괄루인 추출물 중량)으로 1:1:1, 1:1:3, 1:3:1, 3:1:1:, 3:3:1, 1:3:3, 3:1:3, 1:1:5, 1:5:1, 5:1:1, 5:5:1, 1:5:5, 및 5:1:5로 혼합하였다. 균질한 혼합이 되도록 하기 위하여 각 혼합물에 3 중량배 가량의 물을 첨가한 후 50℃의 온도하에서 감압농축을 하여 삼백초와 백굴채와 괄루인의 혼합 생약 추출물을 각 용매별로 제조하였다.
제조예 9: 삼백초 추출물, 용규 추출물, 괄루인 추출물의 혼합물
상기 참고예 1의 삼백초 물 추출물(SC-W)과 용규 물 추출물(SN-W)과 괄루인 물 추출물(TK-W), 참고예 2의 삼백초 에탄올 추출물(SC-E)과 용규 에탄올 추출물(SN-E)과 괄루인 에탄올 추출물(TK-E), 참고예 3의 삼백초 이소프로판올 추출물(SC-I)과 용규 이소프로판올 추출물(SN-I)과 괄루인 이소프로판올 추출물(TK-I), 참고예 4의 삼백초 물 추출물의 부탄올 분획물(SC-W-B)과 용규 물 추출물의 부탄올 분획물(SN-W-B)과 괄루인 물 추출물의 부탄올 분획물(TK-W-B), 참고예 4의 삼백초 에탄올 추출물의 부탄올 분획물(SC-E-B)과 용규 에탄올 추출물의 부탄올 분획물(SN-E-B)과 괄루인 에탄올 추출물의 부탄올 분획물(TK-E-B), 참고예 4의 삼백초 이소프로판올 추출물의 부탄올 분획물(SC-I-B)과 용규 이소프로판올 추출물의 부탄올 분획물(SN-I-B)과 괄루인 이소프로판올 추출물(TK-I-B)를 각각 중량 기준(삼백초 추출물 중량:용규 추출물 중량:괄루인 추출물 중량)으로 1:1:1, 1:1:3, 1:3:1, 3:1:1:, 3:3:1, 1:3:3, 3:1:3, 1:1:5, 1:5:1, 5:1:1, 5:5:1, 1:5:5, 및 5:1:5로 혼합하였다. 균질한 혼합이 되도록 하기 위하여 각 혼합물에 3 중량배 가량의 물을 첨가한 후 50℃의 온도하에서 감압농축을 하여 삼백초와 용규와 괄루인의 혼합 생약 추출물을 각 용매별로 제조하였다.
제조예 10: 백굴채 추출물, 용규 추출물, 괄루인 추출물의 혼합물
상기 참고예 1의 백굴채 물 추출물(CM-W)과 용규 물 추출물(SN-W)과 괄루인 물 추출물(TK-W), 참고예 2의 백굴채 에탄올 추출물(CM-E)과 용규 에탄올 추출물(SN-E)과 괄루인 에탄올 추출물(TK-E), 참고예 3의 백굴채 이소프로판올 추출물(CM-I)과 용규 이소프로판올 추출물(SN-I)과 괄루인 이소프로판올 추출물(TK-I), 참고예 4의 백굴채 물 추출물의 부탄올 분획물(CM-W-B)과 용규 물 추출물의 부탄올 분획물(SN-W-B)과 괄루인 물 추출물의 부탄올 분획물(TK-W-B), 참고예 4의 백굴채 에탄올 추출물의 부탄올 분획물(CM-E-B)과 용규 에탄올 추출물의 부탄올 분획물(SN-E-B)과 괄루인 에탄올 추출물의 부탄올 분획물(TK-E-B), 참고예 4의 백굴채 이소프로판올 추출물의 부탄올 분획물(CM-I-B)과 용규 이소프로판올 추출물의 부탄올 분획물(SN-I-B)과 괄루인 이소프로판올 추출물(TK-I-B)를 각각 중량 기준(삼백초 추출물 중량:용규 추출물 중량:괄루인 추출물 중량)으로 1:1:1, 1:1:3, 1:3:1, 3:1:1:, 3:3:1, 1:3:3, 3:1:3, 1:1:5, 1:5:1, 5:1:1, 5:5:1, 1:5:5, 및 5:1:5로 혼합하였다. 균질한 혼합이 되도록 하기 위하여 각 혼합물에 3 중량배 가량의 물을 첨가한 후 50℃의 온도하에서 감압농축을 하여 백굴채와 용규와 괄루인의 혼합 생약 추출물을 각 용매별로 제조하였다.
제조예 11: 삼백초 추출물, 백굴채 추출물, 용규 추출물 및 괄루인 추출물의 혼합물
상기 참고예 1의 삼백초 물 추출물(SC-W)과 백굴채 물 추출물(CM-W)과 용규 물 추출물(SN-W)과 괄루인 물 추출물(TK-W), 참고예 2의 삼백초 에탄올 추출물(SC-E)과 백굴채 에탄올 추출물(CM-E)과 용규 에탄올 추출물(SN-E)과 괄루인 에탄올 추출물(TK-E), 참고예 3의 삼백초 이소프로판올 추출물(SC-I)과 백굴채 이소프로판올 추출물(CM-I)과 용규 이소프로판올 추출물(SN-I)과 괄루인 이소프로판올 추출물(TK-I), 참고예 4의 삼백초 물 추출물의 부탄올 분획물(SC-W-B)과 백굴채 물 추출물의 부탄올 분획물(CM-W-B)과 용규 물 추출물의 부탄올 분획물(SN-W-B)과 괄루인 물 추출물의 부탄올 분획물(TK-W-B), 참고예 4의 삼백초 에탄올 추출물의 부탄올 분획물(SC-E-B)과 백굴채 에탄올 추출물의 부탄올 분획물(CM-E-B)과 용규 에탄올 추출물의 부탄올 분획물(SN-E-B)과 괄루인 에탄올 추출물의 부탄올 분획물(TK-E-B), 참고예 4의 삼백초 이소프로판올 추출물의 부탄올 분획물(SC-I-B)과 백굴채 이소프로판올 추출물의 부탄올 분획물(CM-I-B)과 용규 이소프로판올 추출물의 부탄올 분획물(SN-I-B)과 괄루인 이소프로판올 추출물의 부탄올 분획물(TK-I-B)를 각각 중량 기준(삼백초 추출물 중량:백굴채 추출물 중량:용규 추출물 중량:괄루인 추출물 중량)으로 1:1:1:1, 1:1:1:3, 1:1:3:1, 1:3:1:1, 3:1:1:1, 1:1:3:3, 1:3:1:3, 3:1:1:3:, 1:3:3:1, 3:1:3:1, 3:3:1:1, 3:3:3:1, 3:3:1:3, 3:1:3:3, 1:3:3:3, 1:1:1:5, 1:1:5:1, 1:5:1:1, 5:1:1:1, 1:1:5:5, 1:5:1:5, 5:1:1:5, 1:5:5:1, 5:1:5:1, 5:5:1:1, 5:5:5:1, 5:5:1:5, 5:1:5:5, 및 1:5:5:5으로 혼합하였다. 균질한 혼합이 되도록 하기 위하여 각 혼합물에 3 중량배 가량의 물을 첨가한 후 50℃의 온도하에서 감압농축을 하여 삼백초와 백굴채와 용규와 괄루인의 혼합 생약 추출물을 각 용매별로 제조하였다.
[ 실시예 3: 약리활성 시험]
3.1: 리폭시게나아제 (5- lipoxygenase ; 5-LO)억제 활성
상기 제조예 1 내지 11에 의해 제조된 각각의 혼합 생약 추출물 및 참고예 1 내지 4에서 제조된각각의 단독 생약 추출물 (이하, 상기 혼합 생약 추출물과 단독 생약 추출물을 '시험약물'로 기재)의 5-lipoxygenase (5-LO) 억제 활성을 평가하기 위한 실험을 수행하였다 (참조문헌: Rufahl RA et al., Ana. Biochem. 2007, 15; 364(2), 204-12). 5-LO는 기질인 아라키돈산을 대사시켜 염증 및 천식유발물질인 다양한 류코트리엔들을 생성시킨다. 따라서, 아라키돈산으로부터 생성되는 류코트리엔 (예컨대, LTB4)의 양을 측정하면 5-LO의 활성 정도를 평가할 수 있다. 또한, 시험약물의 5-LO 활성 저해 여부를 평가함으로써 호흡기 질환의 예방 및/또는 개선 및/또는 치료 효과를 확인할 수 있다.
구체적으로, 기질로서 3.0μM 아라키돈산(arachidonic acid)을 준비하고, 각각의 시험약물을 디메틸설폭사이드 (dimethylsulfoxide; DMSO)에 녹여 최종 농도가 100 ug(microgram)/ml이 되도록 준비하였다. Human recombinant 5-LO (Cayman Chemical 60402)를 pH7.4 Tris buffer에 10 U/ml의 농도로 녹이고, 여기에 상기 준비된 시험약물 100 ul과 형광탐침 dihydrorhodamine-1,2,3(DHR123)을 넣어 효소(5-LO)와 함께 25℃에서 5분간 미리 반응시켰다. 이후 25 μM의 아라키돈산을 첨가하여 반응을 20분간 진행시키고, 반응 후 생성된 LTB4의 양을 spectrophotometer(SpectraMax, Molecular Devices)를 이용하여 각각 485 nm와 530 nm의 excitation과 emission에서 형광 강도로서 측정하였다. 시험약물의 5-LO 저해율은 아래의 수식으로 평가하였다:
5-LO 저해율(%) = [1-(각 시험약물 및 5-LO 처리된 시료에서의 LTB4 생성양)/(시험약물 미처리 (5-LO만 처리) 시료에서의 LTB4 생성양)] * 100
상기 얻어진 결과를 아래의 표 1 내지 7에 나타내었다.　
단일 생약 추출물의 5-LO 저해율
단일 생약 추출물 5-LO 저해율 (%)
참고예 1 SC-W 68
CM-W 70
SN-W 67
TK-W 70
참고예 2 SC-E 71
CM-E 72
SN-E 69
TK-E 71
참고예 3 SC-I 78
CM-I 79
SN-I 73
TK-I 69
참고예 4 SC-W-B 72
CM-W-B 73
SN-W-B 68
TK-W-B 71
SC-E-B 75
CM-E-B 74
SN-E-B 71
TK-E-B 72
SC-I-B 76
CM-I-B 75
SN-I-B 70
TK-I-B 73
혼합 생약 추출물(물 추출물)의 5-LO 저해율
　 혼합 생약 추출물 5-LO 저해율 (%)
제조예1 SC-W+CM-W 1:20 52
1:15 63
1:10 85
1:5 94
1:3 95
1:1 98
3:1 96
5:1 95
10:1 91
15:1 72
20:1 58
제조예2 SC-W+SN-W 1:20 48
1:15 63
1:10 87
1:5 91
1:3 93
1:1 94
3:1 93
5:1 93
10:1 90
15:1 70
20:1 61
제조예3 SC-W+TK-W 1:20 54
1:15 65
1:10 88
1:5 90
1:3 90
1:1 91
3:1 89
5:1 88
10:1 83
15:1 71
20:1 65
제조예4 CM-W+SN-W 1:20 60
1:15 73
1:10 84
1:5 88
1:3 93
1:1 95
3:1 91
5:1 90
10:1 87
15:1 61
20:1 53
제조예5 CM-W+TK-W 1:20 59
1:15 74
1:10 81
1:5 89
1:3 93
1:1 90
3:1 92
5:1 90
10:1 86
15:1 71
20:1 60
제조예6 SN-W+TK-W 1:20 55
1:15 68
1:10 88
1:5 91
1:3 92
1:1 93
3:1 92
5:1 90
10:1 90
15:1 70
20:1 61
제조예7 SC-W+CM-W+SN-W 1:1:1 95
1:1:3 91
1:3:1 93
3:1:1 96
3:3:1 94
1:3:3 92
3:1:3 93
1:1:5 78
1:5:1 76
5:1:1 80
5:5:1 71
1:5:5 73
5:1:5 72
제조예8 SC-W+CM-W+TK-W 1:1:1 94
1:1:3 95
1:3:1 92
3:1:1 96
3:3:1 97
1:3:3 92
3:1:3 93
1:1:5 81
1:5:1 82
5:1:1 79
5:5:1 71
1:5:5 65
5:1:5 73
제조예9 SC-W+SN-W+TK-W 1:1:1 96
1:1:3 92
1:3:1 94
3:1:1 93
3:3:1 93
1:3:3 96
3:1:3 95
1:1:5 79
1:5:1 77
5:1:1 78
5:5:1 69
1:5:5 71
5:1:5 72
제조예10 CM-W+SN-W+TK-W 1:1:1 91
1:1:3 89
1:3:1 87
3:1:1 90
3:3:1 89
1:3:3 93
3:1:3 92
1:1:5 71
1:5:1 67
5:1:1 72
5:5:1 65
1:5:5 69
5:1:5 68
제조예11 SC-W+CM-W+SN-W+TK-W 1:1:1:1 94
1:1:1:3 93
1:1:3:1 93
1:3:1:1 94
3:1:1:1 92
1:1:3:3 91
1:3:1:3 95
3:1:1:3 93
1:3:3:1 92
3:1:3:1 94
3:3:1:1 96
3:3:3:1 95
3:3:1:3 93
3:1:3:3 95
1:3:3:3 94
1:1:1:5 75
1:1:5:1 73
1:5:1:1 71
5:1:1:1 79
1:1:5:5 67
1:5:1:5 68
5:1:1:5 74
1:5:5:1 71
5:1:5:1 68
5:5:1:1 67
5:5:5:1 65
5:5:1:5 69
5:1:5:5 67
1:5:5:5 65
혼합 생약 추출물(에탄올 추출물)의 5-LO 저해율
　 혼합 생약 추출물 5-LO 저해율 (%)
제조예1 SC-E+CM-E 1:20 59
1:15 64
1:10 89
1:5 95
1:3 97
1:1 99
3:1 98
5:1 95
10:1 90
15:1 69
20:1 55
제조예2 SC-E+SN-E 1:20 59
1:15 63
1:10 88
1:5 93
1:3 96
1:1 97
3:1 95
5:1 94
10:1 90
15:1 69
20:1 60
제조예3 SC-E+TK-E 1:20 64
1:15 71
1:10 91
1:5 93
1:3 95
1:1 94
3:1 93
5:1 96
10:1 90
15:1 72
20:1 67
제조예4 CM-E+SN-E 1:20 57
1:15 69
1:10 88
1:5 86
1:3 90
1:1 94
3:1 91
5:1 91
10:1 90
15:1 71
20:1 62
제조예5 CM-E+TK-E 1:20 57
1:15 69
1:10 89
1:5 93
1:3 92
1:1 95
3:1 93
5:1 91
10:1 88
15:1 71
20:1 64
제조예6 SN-E+TK-E 1:20 63
1:15 72
1:10 89
1:5 93
1:3 92
1:1 96
3:1 94
5:1 92
10:1 90
15:1 73
20:1 67
제조예7 SC-E+CM-E+SN-E 1:1:1 93
1:1:3 96
1:3:1 97
3:1:1 98
3:3:1 95
1:3:3 94
3:1:3 93
1:1:5 71
1:5:1 68
5:1:1 69
5:5:1 65
1:5:5 71
5:1:5 67
제조예8 SC-E+CM-E+TK-E 1:1:1 92
1:1:3 91
1:3:1 93
3:1:1 94
3:3:1 92
1:3:3 90
3:1:3 93
1:1:5 62
1:5:1 63
5:1:1 64
5:5:1 61
1:5:5 59
5:1:5 58
제조예9 SC-E+SN-E+TK-E 1:1:1 95
1:1:3 92
1:3:1 93
3:1:1 92
3:3:1 93
1:3:3 95
3:1:3 96
1:1:5 64
1:5:1 58
5:1:1 57
5:5:1 56
1:5:5 58
5:1:5 59
제조예10 CM-E+SN-E+TK-E 1:1:1 91
1:1:3 90
1:3:1 93
3:1:1 89
3:3:1 92
1:3:3 90
3:1:3 91
1:1:5 65
1:5:1 58
5:1:1 54
5:5:1 51
1:5:5 53
5:1:5 61
제조예11 SC-E+CM-E+SN-E+TK-E 1:1:1:1 96
1:1:1:3 93
1:1:3:1 92
1:3:1:1 98
3:1:1:1 99
1:1:3:3 97
1:3:1:3 96
3:1:1:3 98
1:3:3:1 95
3:1:3:1 94
3:3:1:1 97
3:3:3:1 96
3:3:1:3 95
3:1:3:3 93
1:3:3:3 94
1:1:1:5 65
1:1:5:1 63
1:5:1:1 62
5:1:1:1 61
1:1:5:5 57
1:5:1:5 59
5:1:1:5 57
1:5:5:1 55
5:1:5:1 53
5:5:1:1 51
5:5:5:1 62
5:5:1:5 60
5:1:5:5 57
1:5:5:5 58
혼합 생약 추출물(이소프로판올 추출물)의 5-LO 저해율
　 혼합 생약 추출물 5-LO 저해율 (%)
제조예1 SC-I+CM-I 1:20 55
1:15 61
1:10 89
1:5 96
1:3 97
1:1 99
3:1 98
5:1 97
10:1 91
15:1 63
20:1 57
제조예2 SC-I+SN-I 1:20 58
1:15 67
1:10 86
1:5 92
1:3 93
1:1 93
3:1 94
5:1 91
10:1 85
15:1 65
20:1 49
제조예3 SC-I+TK-I 1:20 53
1:15 60
1:10 85
1:5 89
1:3 91
1:1 90
3:1 90
5:1 88
10:1 84
15:1 61
20:1 51
제조예4 CM-I+SN-I 1:20 52
1:15 59
1:10 83
1:5 89
1:3 90
1:1 92
3:1 89
5:1 90
10:1 85
15:1 60
20:1 56
제조예5 CM-I+TK-I 1:20 59
1:15 61
1:10 82
1:5 88
1:3 87
1:1 89
3:1 91
5:1 90
10:1 86
15:1 66
20:1 58
제조예6 SN-I+TK-I 1:20 56
1:15 69
1:10 81
1:5 83
1:3 86
1:1 87
3:1 88
5:1 85
10:1 83
15:1 68
20:1 68
제조예7 SC-I+CM-I+SN-I 1:1:1 98
1:1:3 97
1:3:1 98
3:1:1 99
3:3:1 97
1:3:3 99
3:1:3 98
1:1:5 65
1:5:1 66
5:1:1 61
5:5:1 63
1:5:5 60
5:1:5 65
제조예8 SC-I+CM-I+TK-I 1:1:1 96
1:1:3 97
1:3:1 98
3:1:1 97
3:3:1 98
1:3:3 97
3:1:3 97
1:1:5 64
1:5:1 67
5:1:1 60
5:5:1 69
1:5:5 61
5:1:5 66
제조예9 SC-I+SN-I+TK-I 1:1:1 90
1:1:3 89
1:3:1 90
3:1:1 91
3:3:1 92
1:3:3 89
3:1:3 92
1:1:5 66
1:5:1 65
5:1:1 61
5:5:1 68
1:5:5 63
5:1:5 68
제조예10 CM-I+SN-I+TK-I 1:1:1 87
1:1:3 88
1:3:1 89
3:1:1 93
3:3:1 92
1:3:3 90
3:1:3 93
1:1:5 67
1:5:1 65
5:1:1 67
5:5:1 66
1:5:5 69
5:1:5 59
제조예11 SC-I+CM-I+SN-I+TK-I 1:1:1:1 95
1:1:1:3 94
1:1:3:1 95
1:3:1:1 97
3:1:1:1 96
1:1:3:3 95
1:3:1:3 97
3:1:1:3 98
1:3:3:1 98
3:1:3:1 97
3:3:1:1 99
3:3:3:1 99
3:3:1:3 99
3:1:3:3 97
1:3:3:3 98
1:1:1:5 75
1:1:5:1 67
1:5:1:1 65
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1:5:1:5 68
5:1:1:5 66
1:5:5:1 65
5:1:5:1 61
5:5:1:1 63
5:5:5:1 62
5:5:1:5 64
5:1:5:5 67
1:5:5:5 60
혼합 생약 추출물(물 추출물의 부탄올 분획물)의 5-LO 저해율
　 혼합 생약 추출물 5-LO 저해율 (%)
제조예1 SC-W-B+CM-W-B 1:20 59
1:15 61
1:10 87
1:5 93
1:3 96
1:1 95
3:1 92
5:1 95
10:1 90
15:1 58
20:1 59
제조예2 SC-W-B+SN-W-B 1:20 61
1:15 67
1:10 90
1:5 91
1:3 93
1:1 93
3:1 94
5:1 91
10:1 88
15:1 62
20:1 57
제조예3 SC-W-B+TK-W-B 1:20 59
1:15 67
1:10 89
1:5 93
1:3 92
1:1 94
3:1 93
5:1 91
10:1 88
15:1 67
20:1 59
제조예4 CM-W-B+SN-W-B 1:20 59
1:15 61
1:10 87
1:5 91
1:3 93
1:1 93
3:1 92
5:1 94
10:1 90
15:1 63
20:1 57
제조예5 CM-W-B+TK-W-B 1:20 57
1:15 62
1:10 89
1:5 93
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1:1 93
3:1 92
5:1 94
10:1 87
15:1 62
20:1 57
제조예6 SN-W-B+TK-W-B 1:20 59
1:15 62
1:10 87
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1:3 93
1:1 94
3:1 93
5:1 90
10:1 92
15:1 67
20:1 58
제조예7 SC-W-B+CM-W-B+SN-W-B 1:1:1 94
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3:1:1 93
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1:5:5 58
5:1:5 59
제조예8 SC-W-B+CM-W-B+TK-W-B 1:1:1 92
1:1:3 96
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3:1:1 95
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3:1:3 93
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5:1:1 64
5:5:1 58
1:5:5 59
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제조예9 SC-W-B+SN-W-B+TK-W-B 1:1:1 93
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5:5:1 62
1:5:5 64
5:1:5 59
제조예10 CM-W-B+SN-W-B+TK-W-B 1:1:1 92
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1:5:1 61
5:1:1 58
5:5:1 63
1:5:5 59
5:1:5 66
제조예11 SC-W-B+CM-W-B+SN-W-B+TK-W-B 1:1:1:1 96
1:1:1:3 95
1:1:3:1 96
1:3:1:1 97
3:1:1:1 94
1:1:3:3 93
1:3:1:3 93
3:1:1:3 94
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3:1:3:1 95
3:3:1:1 97
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3:3:1:3 92
3:1:3:3 95
1:3:3:3 94
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1:1:5:1 59
1:5:1:1 58
5:1:1:1 61
1:1:5:5 54
1:5:1:5 52
5:1:1:5 63
1:5:5:1 58
5:1:5:1 59
5:5:1:1 61
5:5:5:1 60
5:5:1:5 54
5:1:5:5 53
1:5:5:5 62
혼합 생약 추출물(에탄올 추출물의 부탄올 분획물)의 5-LO 저해율
　 혼합 생약 추출물 5-LO 저해율 (%)
제조예1 SC-E-B+CM-E-B 1:20 58
1:15 57
1:10 91
1:5 97
1:3 97
1:1 99
3:1 96
5:1 95
10:1 90
15:1 65
20:1 61
제조예2 SC-E-B+SN-E-B 1:20 53
1:15 57
1:10 87
1:5 91
1:3 93
1:1 94
3:1 92
5:1 93
10:1 90
15:1 61
20:1 57
제조예3 SC-E-B+TK-E-B 1:20 58
1:15 61
1:10 89
1:5 93
1:3 92
1:1 95
3:1 94
5:1 94
10:1 92
15:1 57
20:1 51
제조예4 CM-E-B+SN-E-B 1:20 57
1:15 63
1:10 92
1:5 93
1:3 92
1:1 95
3:1 91
5:1 92
10:1 88
15:1 62
20:1 54
제조예5 CM-E-B+TK-E-B 1:20 54
1:15 61
1:10 86
1:5 89
1:3 93
1:1 95
3:1 91
5:1 94
10:1 91
15:1 68
20:1 53
제조예6 SN-E-B+TK-E-B 1:20 50
1:15 63
1:10 85
1:5 90
1:3 91
1:1 93
3:1 93
5:1 92
10:1 88
15:1 63
20:1 51
제조예7 SC-E-B+CM-E-B+SN-E-B 1:1:1 95
1:1:3 96
1:3:1 94
3:1:1 93
3:3:1 94
1:3:3 95
3:1:3 94
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1:5:5 63
5:1:5 62
제조예8 SC-E-B+CM-E-B+TK-E-B 1:1:1 96
1:1:3 95
1:3:1 97
3:1:1 98
3:3:1 99
1:3:3 94
3:1:3 93
1:1:5 61
1:5:1 58
5:1:1 63
5:5:1 66
1:5:5 58
5:1:5 59
제조예9 SC-E-B+SN-E-B+TK-E-B 1:1:1 96
1:1:3 95
1:3:1 93
3:1:1 96
3:3:1 95
1:3:3 94
3:1:3 95
1:1:5 58
1:5:1 61
5:1:1 59
5:5:1 57
1:5:5 62
5:1:5 64
제조예10 CM-E-B+SN-E-B+TK-E-B 1:1:1 92
1:1:3 93
1:3:1 91
3:1:1 93
3:3:1 94
1:3:3 92
3:1:3 93
1:1:5 68
1:5:1 57
5:1:1 59
5:5:1 56
1:5:5 61
5:1:5 62
제조예11 SC-E-B+CM-E-B+SN-E-B+TK-E-B 1:1:1:1 94
1:1:1:3 95
1:1:3:1 93
1:3:1:1 93
3:1:1:1 95
1:1:3:3 97
1:3:1:3 92
3:1:1:3 94
1:3:3:1 95
3:1:3:1 96
3:3:1:1 94
3:3:3:1 95
3:3:1:3 94
3:1:3:3 93
1:3:3:3 92
1:1:1:5 67
1:1:5:1 61
1:5:1:1 58
5:1:1:1 59
1:1:5:5 57
1:5:1:5 62
5:1:1:5 63
1:5:5:1 66
5:1:5:1 59
5:5:1:1 67
5:5:5:1 61
5:5:1:5 63
5:1:5:5 57
1:5:5:5 54
혼합 생약 추출물(이소프로판올 추출물의 부탄올 분획물)의 5-LO 저해율
　 혼합 생약 추출물 5-LO 저해율 (%)
제조예1 SC-I-B+CM-I-B 1:20 57
1:15 62
1:10 91
1:5 93
1:3 96
1:1 99
3:1 98
5:1 96
10:1 90
15:1 64
20:1 57
제조예2 SC-I-B+SN-I-B 1:20 57
1:15 61
1:10 90
1:5 93
1:3 92
1:1 95
3:1 93
5:1 94
10:1 91
15:1 63
20:1 57
제조예3 SC-I-B+TK-I-B 1:20 63
1:15 70
1:10 89
1:5 92
1:3 94
1:1 96
3:1 95
5:1 93
10:1 91
15:1 67
20:1 55
제조예4 CM-I-B+SN-I-B 1:20 53
1:15 66
1:10 88
1:5 91
1:3 90
1:1 93
3:1 92
5:1 93
10:1 89
15:1 63
20:1 57
제조예5 CM-I-B+TK-I-B 1:20 58
1:15 67
1:10 87
1:5 90
1:3 91
1:1 95
3:1 94
5:1 92
10:1 93
15:1 63
20:1 51
제조예6 SN-I-B+TK-I-B 1:20 54
1:15 61
1:10 90
1:5 95
1:3 93
1:1 95
3:1 92
5:1 91
10:1 89
15:1 68
20:1 54
제조예7 SC-I-B+CM-I-B+SN-I-B 1:1:1 95
1:1:3 94
1:3:1 93
3:1:1 96
3:3:1 95
1:3:3 94
3:1:3 93
1:1:5 55
1:5:1 54
5:1:1 65
5:5:1 57
1:5:5 53
5:1:5 51
제조예8 SC-I-B+CM-I-B+TK-I-B 1:1:1 93
1:1:3 95
1:3:1 94
3:1:1 96
3:3:1 99
1:3:3 98
3:1:3 95
1:1:5 57
1:5:1 54
5:1:1 59
5:5:1 62
1:5:5 61
5:1:5 52
제조예9 SC-I-B+SN-I-B+TK-I-B 1:1:1 94
1:1:3 93
1:3:1 95
3:1:1 95
3:3:1 97
1:3:3 96
3:1:3 94
1:1:5 65
1:5:1 63
5:1:1 57
5:5:1 59
1:5:5 58
5:1:5 52
제조예10 CM-I-B+SN-I-B+TK-I-B 1:1:1 89
1:1:3 91
1:3:1 92
3:1:1 90
3:3:1 91
1:3:3 93
3:1:3 92
1:1:5 66
1:5:1 59
5:1:1 64
5:5:1 57
1:5:5 58
5:1:5 62
제조예11 SC-I-B+CM-I-B+SN-I-B+TK-I-B 1:1:1:1 92
1:1:1:3 93
1:1:3:1 92
1:3:1:1 95
3:1:1:1 96
1:1:3:3 95
1:3:1:3 94
3:1:1:3 97
1:3:3:1 95
3:1:3:1 96
3:3:1:1 99
3:3:3:1 97
3:3:1:3 98
3:1:3:3 96
1:3:3:3 95
1:1:1:5 56
1:1:5:1 66
1:5:1:1 55
5:1:1:1 54
1:1:5:5 57
1:5:1:5 59
5:1:1:5 51
1:5:5:1 69
5:1:5:1 54
5:5:1:1 52
5:5:5:1 61
5:5:1:5 63
5:1:5:5 67
1:5:5:5 69
3.2: 포스포다이에스테라아제 ( phosphodiesterase ; PDE )-4 억제 활성
상기 제조예 1 내지 11에서 제조된 각각의혼합 생약 추출물 및 참고예 1 내지 4에서 제조된 각각의 단일 생약 추출물(이하, 상기 혼합 생약 추출물과 단독 생약 추출물을 '시험약물'로 기재)의phosphodiesterase-4 (PDE-4) 억제 활성을 평가하기 위한 실험을 수행하였다 (참조문헌: Nicholson CD et al., Trends Pharmacol. Sci. 12(1); 19-27, 1991).
PDE-4는 cAMP를 가수분해하여 세포내 cAMP를 고갈시키고 이로 인하여 기관지 수축이 일어난다. 따라서, cAMP분해 이후 과정에서 얻어진 물질의 양을 측정하여 PDE-4의 활성을 평가할 수 있으며, 시험약물의 PDE-4 활성 저해 여부를 평가함으로써, 호흡기 질환의 예방 및/또는 개선 및/또는 치료 효과를 확인할 수 있다.
구체적으로, 기질로서 1.01 μM [3H]cAMP+cAMP(ARC0163)를 준비하고, 각각의 시험약물을 DMSO에 녹여 최종 농도가 100 ug/ml이 되도록 준비하였다. 인간 단핵구 세포주인 U937 cell (ATCC CRL 1593.2)을 100 Unit/ml penicillin-streptomycin과 10%(w/v) fetal bovine serum이 함유된 RPMI 1640 배지 (Gibco)를 사용하여 37℃, 5% CO2 배양기에서 배양하였다. 상기 세포 (1 x 109개)를 PBS로 세척하고 완충액 (20 mM Tris-HCl pH7.1, 3 mM 2-mercaptoethanol, 1 mM MgCl2, 0.1 mM EGTA, 1 uM PMSF, 1 ug/ml leupeptin)에 넣어 용해 및 균질화한 후, 원심분리하여 얻어진 상층액을 Sephacryl S-200 컬럼 (GE Healthcare Life Science)을 이용하여 PDE4를 분리하였다. 상기 얻어진 Human U937세포 유래 PDE-4를 2.5 μg/ml의 농도로 pH7.5의 Tris-HCl buffer에 녹인 후, 상기 준비된 시험약물을 100 ul의 양으로 효소(PDE-4)와 함께 25℃에서 15분간 미리 반응시킨 다음, 상기 기질을 처리하여 20 분간 반응시켰다. 상기 얻어진 반응물을 100℃에서 끓여 반응을 종결시키고, 5'-nucleotidase(Sigma Aldrich)를 넣은 후, AG1-X2 수지 컬럼(Bio-Rad)에 걸고, 빠져나온 [3H]adenosine을 액체섬광계수기(Perkin Elmer MicroBeta 1450)를 이용하여 정량하였다. 시험약물의 PDE-4의 저해율은 아래의 수식으로 평가하였다:
PDE-4 저해율(%) = [1-(각 시험약물 및 PDE-4 처리된 시료에서의 [3H]Adenosine 생성양)/(시험약물 미처리 (PDE-4만 처리) 시료에서의 [3H]Adenosine 생성양)] * 100
상기 얻어진 결과를 아래의 표 8 내지 14에 나타내었다.
단일 생약 추출물의 PDE-4 저해 활성
단일 생약 추출물 PDE-4 저해율 (%)
참고예 1 SC-W 59
CM-W 61
SN-W 50
TK-W 45
참고예 2 SC-E 63
CM-E 64
SN-E 52
TK-E 47
참고예 3 SC-I 68
CM-I 69
SN-I 53
TK-I 49
참고예 4 SC-W-B 60
CM-W-B 62
SN-W-B 47
TK-W-B 46
SC-E-B 65
CM-E-B 67
SN-E-B 51
TK-E-B 47
SC-I-B 66
CM-I-B 65
SN-I-B 52
TK-I-B 48
혼합 생약 추출물 (물 추출물)의 PDE-4 저해 활성
　 혼합 생약 추출물 PDE-4 저해율 (%)
제조예1 SC-W+CM-W 1:20 55
1:15 58
1:10 86
1:5 91
1:3 93
1:1 95
3:1 91
5:1 94
10:1 89
15:1 56
20:1 51
제조예2 SC-W+SN-W 1:20 53
1:15 49
1:10 88
1:5 92
1:3 96
1:1 93
3:1 94
5:1 92
10:1 90
15:1 61
20:1 54
제조예3 SC-W+TK-W 1:20 49
1:15 51
1:10 87
1:5 89
1:3 96
1:1 91
3:1 95
5:1 92
10:1 88
15:1 56
20:1 48
제조예4 CM-W+SN-W 1:20 49
1:15 62
1:10 91
1:5 95
1:3 96
1:1 97
3:1 94
5:1 91
10:1 89
15:1 66
20:1 56
제조예5 CM-W+TK-W 1:20 53
1:15 47
1:10 85
1:5 91
1:3 93
1:1 97
3:1 95
5:1 91
10:1 90
15:1 60
20:1 41
제조예6 SN-W+TK-W 1:20 41
1:15 46
1:10 84
1:5 87
1:3 91
1:1 95
3:1 90
5:1 89
10:1 86
15:1 53
20:1 51
제조예7 SC-W+CM-W+SN-W 1:1:1 89
1:1:3 87
1:3:1 92
3:1:1 91
3:3:1 95
1:3:3 94
3:1:3 92
1:1:5 65
1:5:1 61
5:1:1 59
5:5:1 58
1:5:5 51
5:1:5 56
제조예8 SC-W+CM-W+TK-W 1:1:1 91
1:1:3 92
1:3:1 89
3:1:1 94
3:3:1 97
1:3:3 92
3:1:3 91
1:1:5 62
1:5:1 65
5:1:1 51
5:5:1 48
1:5:5 56
5:1:5 57
제조예9 SC-W+SN-W+TK-W 1:1:1 91
1:1:3 95
1:3:1 94
3:1:1 90
3:3:1 96
1:3:3 93
3:1:3 89
1:1:5 48
1:5:1 51
5:1:1 52
5:5:1 49
1:5:5 57
5:1:5 51
제조예10 CM-W+SN-W+TK-W 1:1:1 92
1:1:3 97
1:3:1 91
3:1:1 93
3:3:1 94
1:3:3 95
3:1:3 90
1:1:5 49
1:5:1 50
5:1:1 59
5:5:1 51
1:5:5 53
5:1:5 52
제조예11 SC-W+CM-W+SN-W+TK-W 1:1:1:1 92
1:1:1:3 98
1:1:3:1 93
1:3:1:1 94
3:1:1:1 91
1:1:3:3 94
1:3:1:3 97
3:1:1:3 93
1:3:3:1 91
3:1:3:1 94
3:3:1:1 92
3:3:3:1 97
3:3:1:3 91
3:1:3:3 93
1:3:3:3 92
1:1:1:5 59
1:1:5:1 56
1:5:1:1 51
5:1:1:1 57
1:1:5:5 52
1:5:1:5 58
5:1:1:5 53
1:5:5:1 51
5:1:5:1 49
5:5:1:1 52
5:5:5:1 54
5:5:1:5 48
5:1:5:5 55
1:5:5:5 51
혼합 생약 추출물 (에탄올 추출물)의 PDE-4 저해 활성
　 혼합 생약 추출물 PDE-4 저해율 (%)
제조예1 SC-E+CM-E 1:20 55
1:15 51
1:10 90
1:5 92
1:3 93
1:1 95
3:1 97
5:1 91
10:1 89
15:1 59
20:1 52
제조예2 SC-E+SN-E 1:20 55
1:15 53
1:10 90
1:5 95
1:3 96
1:1 98
3:1 93
5:1 91
10:1 89
15:1 56
20:1 49
제조예3 SC-E+TK-E 1:20 49
1:15 51
1:10 89
1:5 91
1:3 90
1:1 93
3:1 91
5:1 88
10:1 90
15:1 55
20:1 53
제조예4 CM-E+SN-E 1:20 57
1:15 54
1:10 88
1:5 90
1:3 93
1:1 94
3:1 92
5:1 90
10:1 89
15:1 60
20:1 57
제조예5 CM-E+TK-E 1:20 49
1:15 55
1:10 92
1:5 91
1:3 90
1:1 95
3:1 91
5:1 93
10:1 89
15:1 59
20:1 52
제조예6 SN-E+TK-E 1:20 55
1:15 50
1:10 86
1:5 91
1:3 89
1:1 93
3:1 90
5:1 92
10:1 89
15:1 59
20:1 51
제조예7 SC-E+CM-E+SN-E 1:1:1 92
1:1:3 90
1:3:1 89
3:1:1 93
3:3:1 95
1:3:3 92
3:1:3 95
1:1:5 69
1:5:1 65
5:1:1 58
5:5:1 61
1:5:5 60
5:1:5 51
제조예8 SC-E+CM-E+TK-E 1:1:1 92
1:1:3 98
1:3:1 96
3:1:1 91
3:3:1 94
1:3:3 93
3:1:3 90
1:1:5 65
1:5:1 67
5:1:1 59
5:5:1 69
1:5:5 63
5:1:5 62
제조예9 SC-E+SN-E+TK-E 1:1:1 88
1:1:3 91
1:3:1 94
3:1:1 93
3:3:1 97
1:3:3 92
3:1:3 93
1:1:5 69
1:5:1 62
5:1:1 67
5:5:1 63
1:5:5 59
5:1:5 50
제조예10 CM-E+SN-E+TK-E 1:1:1 92
1:1:3 95
1:3:1 93
3:1:1 96
3:3:1 91
1:3:3 90
3:1:3 92
1:1:5 54
1:5:1 63
5:1:1 62
5:5:1 66
1:5:5 50
5:1:5 52
제조예11 SC-E+CM-E+SN-E+TK-E 1:1:1:1 95
1:1:1:3 92
1:1:3:1 93
1:3:1:1 95
3:1:1:1 94
1:1:3:3 90
1:3:1:3 91
3:1:1:3 93
1:3:3:1 95
3:1:3:1 94
3:3:1:1 92
3:3:3:1 98
3:3:1:3 97
3:1:3:3 91
1:3:3:3 94
1:1:1:5 69
1:1:5:1 65
1:5:1:1 68
5:1:1:1 67
1:1:5:5 65
1:5:1:5 59
5:1:1:5 61
1:5:5:1 69
5:1:5:1 67
5:5:1:1 71
5:5:5:1 66
5:5:1:5 61
5:1:5:5 64
1:5:5:5 67
혼합 생약 추출물 (이소프로판올 추출물)의 PDE-4 저해 활성
　 혼합 생약 추출물 PDE-4 저해율 (%)
제조예1 SC-I+CM-I 1:20 56
1:15 61
1:10 86
1:5 91
1:3 93
1:1 95
3:1 94
5:1 92
10:1 85
15:1 63
20:1 51
제조예2 SC-I+SN-I 1:20 47
1:15 52
1:10 83
1:5 82
1:3 83
1:1 85
3:1 84
5:1 81
10:1 80
15:1 56
20:1 53
제조예3 SC-I+TK-I 1:20 45
1:15 55
1:10 83
1:5 84
1:3 86
1:1 87
3:1 85
5:1 83
10:1 81
15:1 52
20:1 49
제조예4 CM-I+SN-I 1:20 52
1:15 55
1:10 80
1:5 81
1:3 85
1:1 84
3:1 83
5:1 83
10:1 81
15:1 56
20:1 50
제조예5 CM-I+TK-I 1:20 41
1:15 44
1:10 80
1:5 80
1:3 83
1:1 82
3:1 80
5:1 79
10:1 80
15:1 47
20:1 45
제조예6 SN-I+TK-I 1:20 41
1:15 43
1:10 68
1:5 69
1:3 72
1:1 76
3:1 77
5:1 71
10:1 69
15:1 45
20:1 44
제조예7 SC-I+CM-I+SN-I 1:1:1 85
1:1:3 90
1:3:1 91
3:1:1 90
3:3:1 92
1:3:3 92
3:1:3 90
1:1:5 60
1:5:1 58
5:1:1 59
5:5:1 62
1:5:5 61
5:1:5 58
제조예8 SC-I+CM-I+TK-I 1:1:1 88
1:1:3 89
1:3:1 90
3:1:1 91
3:3:1 92
1:3:3 89
3:1:3 90
1:1:5 58
1:5:1 53
5:1:1 50
5:5:1 54
1:5:5 52
5:1:5 51
제조예9 SC-I+SN-I+TK-I 1:1:1 81
1:1:3 83
1:3:1 85
3:1:1 82
3:3:1 84
1:3:3 83
3:1:3 83
1:1:5 56
1:5:1 52
5:1:1 51
5:5:1 53
1:5:5 55
5:1:5 50
제조예10 CM-I+SN-I+TK-I 1:1:1 79
1:1:3 81
1:3:1 80
3:1:1 84
3:3:1 85
1:3:3 82
3:1:3 86
1:1:5 43
1:5:1 48
5:1:1 50
5:5:1 51
1:5:5 55
5:1:5 50
제조예11 SC-I+CM-I+SN-I+TK-I 1:1:1:1 88
1:1:1:3 87
1:1:3:1 89
1:3:1:1 90
3:1:1:1 91
1:1:3:3 87
1:3:1:3 89
3:1:1:3 91
1:3:3:1 91
3:1:3:1 92
3:3:1:1 95
3:3:3:1 94
3:3:1:3 93
3:1:3:3 90
1:3:3:3 89
1:1:1:5 47
1:1:5:1 45
1:5:1:1 46
5:1:1:1 40
1:1:5:5 49
1:5:1:5 50
5:1:1:5 43
1:5:5:1 46
5:1:5:1 41
5:5:1:1 51
5:5:5:1 39
5:5:1:5 42
5:1:5:5 43
1:5:5:5 50
혼합 생약 추출물 (물 추출물의 부탄올 분획물)의 PDE-4 저해 활성
　 혼합 생약 추출물 PDE-4 저해율 (%)
제조예1 SC-W-B+CM-W-B 1:20 63
1:15 67
1:10 85
1:5 90
1:3 92
1:1 93
3:1 91
5:1 89
10:1 86
15:1 63
20:1 65
제조예2 SC-W-B+SN-W-B 1:20 59
1:15 63
1:10 84
1:5 89
1:3 90
1:1 95
3:1 91
5:1 88
10:1 87
15:1 61
20:1 57
제조예3 SC-W-B+TK-W-B 1:20 49
1:15 53
1:10 86
1:5 89
1:3 93
1:1 90
3:1 91
5:1 88
10:1 85
15:1 57
20:1 61
제조예4 CM-W-B+SN-W-B 1:20 45
1:15 54
1:10 84
1:5 88
1:3 95
1:1 89
3:1 90
5:1 87
10:1 82
15:1 51
20:1 58
제조예5 CM-W-B+TK-W-B 1:20 48
1:15 52
1:10 86
1:5 92
1:3 94
1:1 94
3:1 90
5:1 88
10:1 84
15:1 58
20:1 61
제조예6 SN-W-B+TK-W-B 1:20 43
1:15 47
1:10 75
1:5 80
1:3 82
1:1 83
3:1 81
5:1 79
10:1 76
15:1 53
20:1 55
제조예7 SC-W-B+CM-W-B+SN-W-B 1:1:1 86
1:1:3 89
1:3:1 88
3:1:1 84
3:3:1 91
1:3:3 86
3:1:3 93
1:1:5 61
1:5:1 59
5:1:1 53
5:5:1 63
1:5:5 66
5:1:5 61
제조예8 SC-W-B+CM-W-B+TK-W-B 1:1:1 90
1:1:3 93
1:3:1 91
3:1:1 92
3:3:1 95
1:3:3 90
3:1:3 91
1:1:5 49
1:5:1 56
5:1:1 59
5:5:1 61
1:5:5 53
5:1:5 57
제조예9 SC-W-B+SN-W-B+TK-W-B 1:1:1 89
1:1:3 86
1:3:1 91
3:1:1 93
3:3:1 95
1:3:3 87
3:1:3 91
1:1:5 59
1:5:1 61
5:1:1 58
5:5:1 63
1:5:5 58
5:1:5 55
제조예10 CM-W-B+SN-W-B+TK-W-B 1:1:1 87
1:1:3 89
1:3:1 88
3:1:1 90
3:3:1 92
1:3:3 85
3:1:3 90
1:1:5 49
1:5:1 51
5:1:1 56
5:5:1 47
1:5:5 51
5:1:5 48
제조예11 SC-W-B+CM-W-B+SN-W-B+TK-W-B 1:1:1:1 86
1:1:1:3 88
1:1:3:1 85
1:3:1:1 90
3:1:1:1 95
1:1:3:3 93
1:3:1:3 92
3:1:1:3 91
1:3:3:1 90
3:1:3:1 89
3:3:1:1 88
3:3:3:1 86
3:3:1:3 91
3:1:3:3 90
1:3:3:3 89
1:1:1:5 56
1:1:5:1 61
1:5:1:1 48
5:1:1:1 51
1:1:5:5 53
1:5:1:5 61
5:1:1:5 59
1:5:5:1 54
5:1:5:1 57
5:5:1:1 56
5:5:5:1 52
5:5:1:5 54
5:1:5:5 55
1:5:5:5 53
혼합 생약 추출물 (에탄올 추출물의 부탄올 분획물)의 PDE-4 저해 활성
　 혼합 생약 추출물 PDE-4 저해율 (%)
제조예1 SC-E-B+CM-E-B 1:20 65
1:15 61
1:10 88
1:5 91
1:3 92
1:1 95
3:1 90
5:1 93
10:1 89
15:1 59
20:1 63
제조예2 SC-E-B+SN-E-B 1:20 64
1:15 59
1:10 91
1:5 92
1:3 90
1:1 93
3:1 91
5:1 92
10:1 88
15:1 57
20:1 55
제조예3 SC-E-B+TK-E-B 1:20 55
1:15 62
1:10 90
1:5 92
1:3 91
1:1 96
3:1 91
5:1 90
10:1 90
15:1 57
20:1 51
제조예4 CM-E-B+SN-E-B 1:20 59
1:15 63
1:10 87
1:5 90
1:3 93
1:1 97
3:1 94
5:1 91
10:1 88
15:1 61
20:1 58
제조예5 CM-E-B+TK-E-B 1:20 65
1:15 61
1:10 88
1:5 91
1:3 92
1:1 95
3:1 90
5:1 93
10:1 89
15:1 59
20:1 63
제조예6 SN-E-B+TK-E-B 1:20 49
1:15 54
1:10 86
1:5 89
1:3 91
1:1 95
3:1 97
5:1 91
10:1 84
15:1 53
20:1 57
제조예7 SC-E-B+CM-E-B+SN-E-B 1:1:1 95
1:1:3 94
1:3:1 92
3:1:1 96
3:3:1 98
1:3:3 91
3:1:3 89
1:1:5 63
1:5:1 64
5:1:1 61
5:5:1 62
1:5:5 59
5:1:5 64
제조예8 SC-E-B+CM-E-B+TK-E-B 1:1:1 98
1:1:3 91
1:3:1 94
3:1:1 96
3:3:1 99
1:3:3 90
3:1:3 91
1:1:5 64
1:5:1 59
5:1:1 58
5:5:1 61
1:5:5 62
5:1:5 57
제조예9 SC-E-B+SN-E-B+TK-E-B 1:1:1 88
1:1:3 91
1:3:1 90
3:1:1 89
3:3:1 90
1:3:3 92
3:1:3 91
1:1:5 64
1:5:1 61
5:1:1 58
5:5:1 62
1:5:5 47
5:1:5 56
제조예10 CM-E-B+SN-E-B+TK-E-B 1:1:1 91
1:1:3 88
1:3:1 89
3:1:1 94
3:3:1 92
1:3:3 93
3:1:3 91
1:1:5 65
1:5:1 61
5:1:1 58
5:5:1 62
1:5:5 55
5:1:5 59
제조예11 SC-E-B+CM-E-B+SN-E-B+TK-E-B 1:1:1:1 96
1:1:1:3 88
1:1:3:1 95
1:3:1:1 96
3:1:1:1 92
1:1:3:3 89
1:3:1:3 93
3:1:1:3 92
1:3:3:1 91
3:1:3:1 90
3:3:1:1 95
3:3:3:1 94
3:3:1:3 92
3:1:3:3 91
1:3:3:3 90
1:1:1:5 57
1:1:5:1 61
1:5:1:1 63
5:1:1:1 67
1:1:5:5 65
1:5:1:5 59
5:1:1:5 63
1:5:5:1 66
5:1:5:1 67
5:5:1:1 62
5:5:5:1 67
5:5:1:5 59
5:1:5:5 65
1:5:5:5 66
혼합 생약 추출물 (이소프로판올 추출물의 부탄올 분획물)의 PDE-4 저해 활성
　 구분 PDE-4 저해율 (%)
제조예1 SC-I-B+CM-I-B 1:20 63
1:15 59
1:10 89
1:5 92
1:3 95
1:1 97
3:1 91
5:1 92
10:1 88
15:1 58
20:1 64
제조예2 SC-I-B+SN-I-B 1:20 62
1:15 63
1:10 90
1:5 91
1:3 95
1:1 94
3:1 91
5:1 93
10:1 90
15:1 59
20:1 65
제조예3 SC-I-B+TK-I-B 1:20 54
1:15 59
1:10 88
1:5 90
1:3 91
1:1 94
3:1 90
5:1 89
10:1 88
15:1 56
20:1 62
제조예4 CM-I-B+SN-I-B 1:20 55
1:15 51
1:10 89
1:5 91
1:3 90
1:1 92
3:1 90
5:1 93
10:1 91
15:1 63
20:1 67
제조예5 CM-I-B+TK-I-B 1:20 58
1:15 45
1:10 85
1:5 89
1:3 93
1:1 94
3:1 93
5:1 91
10:1 90
15:1 61
20:1 64
제조예6 SN-I-B+TK-I-B 1:20 45
1:15 47
1:10 86
1:5 87
1:3 88
1:1 89
3:1 92
5:1 87
10:1 84
15:1 53
20:1 47
제조예7 SC-I-B+CM-I-B+SN-I-B 1:1:1 87
1:1:3 89
1:3:1 90
3:1:1 92
3:3:1 95
1:3:3 90
3:1:3 88
1:1:5 67
1:5:1 62
5:1:1 59
5:5:1 60
1:5:5 58
5:1:5 65
제조예8 SC-I-B+CM-I-B+TK-I-B 1:1:1 94
1:1:3 89
1:3:1 90
3:1:1 91
3:3:1 88
1:3:3 91
3:1:3 93
1:1:5 59
1:5:1 61
5:1:1 64
5:5:1 62
1:5:5 58
5:1:5 60
제조예9 SC-I-B+SN-I-B+TK-I-B 1:1:1 92
1:1:3 90
1:3:1 93
3:1:1 96
3:3:1 91
1:3:3 89
3:1:3 88
1:1:5 63
1:5:1 64
5:1:1 57
5:5:1 63
1:5:5 64
5:1:5 56
제조예10 CM-I-B+SN-I-B+TK-I-B 1:1:1 90
1:1:3 87
1:3:1 88
3:1:1 97
3:3:1 91
1:3:3 94
3:1:3 89
1:1:5 57
1:5:1 55
5:1:1 61
5:5:1 66
1:5:5 48
5:1:5 53
제조예11 SC-I-B+CM-I-B+SN-I-B+TK-I-B 1:1:1:1 89
1:1:1:3 86
1:1:3:1 88
1:3:1:1 92
3:1:1:1 95
1:1:3:3 91
1:3:1:3 93
3:1:1:3 94
1:3:3:1 90
3:1:3:1 97
3:3:1:1 94
3:3:3:1 96
3:3:1:3 93
3:1:3:3 92
1:3:3:3 94
1:1:1:5 61
1:1:5:1 62
1:5:1:1 59
5:1:1:1 64
1:1:5:5 66
1:5:1:5 48
5:1:1:5 59
1:5:5:1 61
5:1:5:1 60
5:5:1:1 67
5:5:5:1 58
5:5:1:5 53
5:1:5:5 59
1:5:5:5 61
3.3: 베타-2-아드레날린 수용체 ( β2 - adrenergic receptor)와 리간드 간 결합 저해 활성
상기 제조예 1 내지 11에서 제조된 각각의 혼합 생약 추출물 및 참고예 1 내지 4에서 제조된 각각의 단독 생약 추출물(이하, 상기 혼합 생약 추출물과 단독 생약 추출물을 '시험약물'로 기재)의 베타-2-아드레날린 수용체 (β2-adrenergic receptor)와 리간드 간 결합에 대한 활성을 평가하기 위한 실험을 수행하였다 (참조문헌: McCrea KE and Hill SJ, Br. J. Pharmacol. 110; 619, 1993). 베타-2-아드레날린 작용제가 수용체에 결합하면 베타-2-아드레날린 수용체를 활성화시켜 cAMP를 증가시켜 기도 평활근의 확장을 유도시킴으로써 호흡기 질환의 예방/치료가 가능하다. 본 실시예에서는, 베타-2-아드레날린 작용제와 유사하게, 시험약물이 베타-2-아드레날린 수용체에 결합하여 활성화를 유도할 수 있는지 여부를 확인하기 위하여, 시험약물의 베타-2-아드레날린 수용체와의 결합에 있어서의 경쟁물질의 베타-2-아드레날린 수용체 결합 저해 정도(경쟁물질의 수용체 결합 저해율)를 평가함으로써, 시험약물이 베타-2-아드레날린 수용체와 결합하여 상기 수용체의 활성화 유도 및 호흡기 질환의 예방 및/또는 치료가 가능함을 확인하였다.
각각의 시험약물을 DMSO에 녹여 최종 농도가 100 ug/ml이 되도록 준비하였다. CHO-K1 세포에 발현된 human recombinant 베타-2-아드레날린 수용체 (Perkin Elmer, ES-034-M)에 특이적인 길항제인 [3H]CGP-12177 리간드 (Perkin Elmer, NET-1061; 경쟁물질)가 결합하는 정도를 측정하였다. pH7.4의 Tris-HCl 완충액에서human recombinant 베타-2-아드레날린 수용체 50 ug와 0.2 nM의 [3H]CGP-12177 및 상기 준비된 시험약물 100 ul을 25℃에서 60분간 반응시키고, 이를 특이적 결합의 측정에 사용하였다. 상기 얻어진 반응 혼합물을 유리섬유 여과지 (GF/B, Whatman)로 여과시킨 후, 상기 여과지를 통과하지 못한 리간드와 수용체가 결합된 복합체를 포함하는 잔여물을 Tris-HCl 완충액으로 3회 반복 세척한 후, 표지된 리간드 ([3H]CGP-12177)와 수용체 간 결합을 측정하였다. 상기 표지된 리간드와 수용체 간 결합은 상기 여과 후 잔여물 내의 표지된 리간드 수준을 섬광계수기(Counter-Microbeta, Perkin Elmer)를 이용하여 측정함으로써 정량하였다.
경쟁물질로 사용된 리간드 [3H]CGP-12177의 비특이적 결합을 측정하기 위해서, 10 uM(micromole)의 ICI-118551(3-(isopropylamino)-1-[(7-methyl-4-indanyl)oxy]butan-2-ol)을 사용하여 상기 과정을 수행하였다 ([3H]CGP-12177와 함께 처리, 반응, 여과, 및 표지된 리간드와 수용체 간 결합 측정). 상기 ICI-118551 역시 베타-2 아드레날린 수용체에 특이적으로 결합하는 리간드로서, [3H]CGP-12177와 달리 표지되어 있지 않은 비표지 상태로 사용된다. 상기 비표지된 ICI-118551는 표지된 [3H]CGP-12177 (0.2 nM)와 비교하여 매우 고농도 (10uM)로 사용되므로, 베타-2 아드레날린 수용체는 모두 비표지된 ICI-118551와 결합하고 있다고 가정할 수 있고, 이 경우, 여과 결과 얻어진 잔여물에 표지된 [3H]CGP-12177이 검출된다면, 상기 검출된 [3H]CGP-12177는 베타-2 아드레날린 수용체가 아닌 세포 표면의 다른 부위와 비특이적 결합을 하고 있다고 할 수 있다. 따라서, 비표지된 리간드(ICI-118551)를 사용하지 않은 경우의 표지된 리간드([3H]CGP-12177) 결합 [전체 결합: 표지된 리간드와 베타-2 아드레날린 수용체 간 결합 (즉, 특이적 결합) + 표지된 리간드와 베타-2 아드레날린 수용체 이외의 부위 간 결합 (즉, 비특이적 결합)]에서 비표지된 리간드(ICI-118551)를 사용한 경우의 표지된 리간드([3H]CGP-12177) 결합 (비특이적 결합: 표지된 리간드와 베타-2 아드레날린 수용체 이외의 부위 간 결합)을 빼면 표지된 리간드와 베타-2 아드레날린 수용체의 특이적 결합을 얻을 수 있다. 상기 표지된 리간드와 수용체 간 결합은, 앞서 설명한 바와 같이, 여과 후 여과 필터를 통과하지 못한 잔여물 내의 표지된 리간드 수준 (예컨대, 표지 물질의 신호 정도)을 측정하여 얻을 수 있다.
따라서, 시험약물에 의한 경쟁물질의 수용체 결합 억제율 (%)은 다음과 같은 수식으로 평가하였다:
시험약물에 의한 경쟁물질의 베타-2-아드레날린 수용체 결합 저해율 (%)= [1-(시험약물 존재하에서의 특이적 결합)/(시험약물 처리되지 않았을 때의 특이적 결합)] * 100
상기 식에서, 특이적 결합은, 앞서 설명한 바와 같이, 표지된 리간드와 수용체 간 전체 결합에서 비특이적 결합을 뺀 값으로 정의된다.
상기 얻어진 결과를 아래의 표 15 내지 21에 나타내었다.　
단일 생약 추출물의 베타-2-아드레날린 수용체 결합 저해율
단일 생약 추출물 Adrenergic β2 binding inhibition (%)
참고예 1 SC-W 58
CM-W 56
SN-W 46
TK-W 45
참고예 2 SC-E 60
CM-E 57
SN-E 48
TK-E 50
참고예 3 SC-I 64
CM-I 59
SN-I 50
TK-I 52
참고예 4 SC-W-B 59
CM-W-B 54
SN-W-B 47
TK-W-B 49
SC-E-B 62
CM-E-B 55
SN-E-B 49
TK-E-B 50
SC-I-B 61
CM-I-B 57
SN-I-B 48
TK-I-B 51
혼합 생약 추출물(물 추출물)의 베타-2-아드레날린 수용체 결합 저해율
　 혼합 생약 추출물 Adrenergic β2 binding inhibition (%)
제조예1 SC-W+CM-W 1:20 51
1:15 49
1:10 84
1:5 87
1:3 85
1:1 87
3:1 88
5:1 86
10:1 81
15:1 53
20:1 55
제조예2 SC-W+SN-W 1:20 42
1:15 51
1:10 74
1:5 77
1:3 76
1:1 80
3:1 78
5:1 76
10:1 70
15:1 52
20:1 54
제조예3 SC-W+TK-W 1:20 42
1:15 44
1:10 71
1:5 75
1:3 73
1:1 79
3:1 70
5:1 67
10:1 66
15:1 49
20:1 52
제조예4 CM-W+SN-W 1:20 45
1:15 49
1:10 67
1:5 73
1:3 70
1:1 69
3:1 71
5:1 68
10:1 66
15:1 50
20:1 52
제조예5 CM-W+TK-W 1:20 42
1:15 44
1:10 66
1:5 72
1:3 70
1:1 74
3:1 67
5:1 61
10:1 69
15:1 48
20:1 45
제조예6 SN-W+TK-W 1:20 42
1:15 40
1:10 63
1:5 71
1:3 69
1:1 72
3:1 64
5:1 65
10:1 62
15:1 43
20:1 40
제조예7 SC-W+CM-W+SN-W 1:1:1 80
1:1:3 79
1:3:1 84
3:1:1 81
3:3:1 82
1:3:3 84
3:1:3 83
1:1:5 51
1:5:1 53
5:1:1 49
5:5:1 55
1:5:5 47
5:1:5 53
제조예8 SC-W+CM-W+TK-W 1:1:1 81
1:1:3 84
1:3:1 80
3:1:1 83
3:3:1 80
1:3:3 81
3:1:3 85
1:1:5 51
1:5:1 49
5:1:1 43
5:5:1 51
1:5:5 46
5:1:5 44
제조예9 SC-W+SN-W+TK-W 1:1:1 83
1:1:3 85
1:3:1 79
3:1:1 77
3:3:1 80
1:3:3 82
3:1:3 80
1:1:5 53
1:5:1 49
5:1:1 47
5:5:1 53
1:5:5 41
5:1:5 44
제조예10 CM-W+SN-W+TK-W 1:1:1 72
1:1:3 70
1:3:1 75
3:1:1 74
3:3:1 76
1:3:3 71
3:1:3 74
1:1:5 43
1:5:1 47
5:1:1 45
5:5:1 51
1:5:5 47
5:1:5 42
제조예11 SC-W+CM-W+SN-W+TK-W 1:1:1:1 79
1:1:1:3 77
1:1:3:1 83
1:3:1:1 87
3:1:1:1 81
1:1:3:3 85
1:3:1:3 88
3:1:1:3 79
1:3:3:1 76
3:1:3:1 77
3:3:1:1 79
3:3:3:1 83
3:3:1:3 84
3:1:3:3 86
1:3:3:3 83
1:1:1:5 46
1:1:5:1 49
1:5:1:1 53
5:1:1:1 51
1:1:5:5 47
1:5:1:5 45
5:1:1:5 49
1:5:5:1 47
5:1:5:1 51
5:5:1:1 55
5:5:5:1 43
5:5:1:5 47
5:1:5:5 52
1:5:5:5 46
혼합 생약 추출물(에탄올 추출물)의 베타-2-아드레날린 수용체 결합 저해율
　 혼합 생약 추출물 Adrenergic β2 binding inhibition (%)
제조예1 SC-E+CM-E 1:20 51
1:15 55
1:10 83
1:5 85
1:3 86
1:1 87
3:1 85
5:1 84
10:1 85
15:1 56
20:1 59
제조예2 SC-E+SN-E 1:20 47
1:15 51
1:10 73
1:5 74
1:3 78
1:1 80
3:1 79
5:1 72
10:1 70
15:1 59
20:1 53
제조예3 SC-E+TK-E 1:20 53
1:15 51
1:10 69
1:5 72
1:3 75
1:1 77
3:1 71
5:1 73
10:1 68
15:1 55
20:1 57
제조예4 CM-E+SN-E 1:20 42
1:15 45
1:10 66
1:5 68
1:3 67
1:1 70
3:1 69
5:1 70
10:1 65
15:1 51
20:1 47
제조예5 CM-E+TK-E 1:20 48
1:15 51
1:10 69
1:5 71
1:3 70
1:1 72
3:1 68
5:1 67
10:1 64
15:1 47
20:1 50
제조예6 SN-E+TK-E 1:20 42
1:15 45
1:10 72
1:5 68
1:3 69
1:1 70
3:1 66
5:1 64
10:1 66
15:1 43
20:1 41
제조예7 SC-E+CM-E+SN-E 1:1:1 80
1:1:3 81
1:3:1 79
3:1:1 82
3:3:1 83
1:3:3 84
3:1:3 80
1:1:5 51
1:5:1 53
5:1:1 48
5:5:1 46
1:5:5 51
5:1:5 52
제조예8 SC-E+CM-E+TK-E 1:1:1 81
1:1:3 80
1:3:1 82
3:1:1 79
3:3:1 81
1:3:3 86
3:1:3 82
1:1:5 52
1:5:1 52
5:1:1 56
5:5:1 48
1:5:5 51
5:1:5 53
제조예9 SC-E+SN-E+TK-E 1:1:1 77
1:1:3 76
1:3:1 78
3:1:1 75
3:3:1 80
1:3:3 81
3:1:3 77
1:1:5 50
1:5:1 51
5:1:1 57
5:5:1 54
1:5:5 48
5:1:5 46
제조예10 CM-E+SN-E+TK-E 1:1:1 72
1:1:3 71
1:3:1 76
3:1:1 70
3:3:1 75
1:3:3 77
3:1:3 73
1:1:5 44
1:5:1 49
5:1:1 43
5:5:1 51
1:5:5 47
5:1:5 49
제조예11 SC-E+CM-E+SN-E+TK-E 1:1:1:1 80
1:1:1:3 80
1:1:3:1 79
1:3:1:1 78
3:1:1:1 81
1:1:3:3 83
1:3:1:3 85
3:1:1:3 84
1:3:3:1 81
3:1:3:1 88
3:3:1:1 81
3:3:3:1 83
3:3:1:3 80
3:1:3:3 79
1:3:3:3 83
1:1:1:5 50
1:1:5:1 53
1:5:1:1 51
5:1:1:1 57
1:1:5:5 55
1:5:1:5 51
5:1:1:5 48
1:5:5:1 46
5:1:5:1 53
5:5:1:1 52
5:5:5:1 50
5:5:1:5 54
5:1:5:5 44
1:5:5:5 51
혼합 생약 추출물(이소프로판올 추출물)의 베타-2-아드레날린 수용체 결합 저해율
　 혼합 생약 추출물 Adrenergic β2 binding inhibition (%)
제조예1 SC-I+CM-I 1:20 51
1:15 53
1:10 82
1:5 84
1:3 88
1:1 87
3:1 89
5:1 85
10:1 83
15:1 56
20:1 59
제조예2 SC-I+SN-I 1:20 49
1:15 52
1:10 67
1:5 65
1:3 71
1:1 72
3:1 70
5:1 71
10:1 73
15:1 51
20:1 52
제조예3 SC-I+TK-I 1:20 50
1:15 49
1:10 66
1:5 64
1:3 67
1:1 68
3:1 71
5:1 65
10:1 71
15:1 51
20:1 53
제조예4 CM-I+SN-I 1:20 48
1:15 46
1:10 67
1:5 66
1:3 71
1:1 70
3:1 68
5:1 63
10:1 65
15:1 49
20:1 45
제조예5 CM-I+TK-I 1:20 50
1:15 46
1:10 69
1:5 65
1:3 73
1:1 71
3:1 69
5:1 68
10:1 71
15:1 47
20:1 50
제조예6 SN-I+TK-I 1:20 47
1:15 49
1:10 67
1:5 62
1:3 65
1:1 65
3:1 64
5:1 63
10:1 64
15:1 44
20:1 43
제조예7 SC-I+CM-I+SN-I 1:1:1 81
1:1:3 82
1:3:1 85
3:1:1 84
3:3:1 86
1:3:3 84
3:1:3 84
1:1:5 52
1:5:1 56
5:1:1 50
5:5:1 49
1:5:5 51
5:1:5 53
제조예8 SC-I+CM-I+TK-I 1:1:1 83
1:1:3 81
1:3:1 84
3:1:1 85
3:3:1 87
1:3:3 85
3:1:3 82
1:1:5 61
1:5:1 58
5:1:1 55
5:5:1 51
1:5:5 56
5:1:5 59
제조예9 SC-I+SN-I+TK-I 1:1:1 72
1:1:3 77
1:3:1 73
3:1:1 75
3:3:1 74
1:3:3 72
3:1:3 76
1:1:5 53
1:5:1 51
5:1:1 55
5:5:1 46
1:5:5 49
5:1:5 44
제조예10 CM-I+SN-I+TK-I 1:1:1 71
1:1:3 70
1:3:1 72
3:1:1 71
3:3:1 73
1:3:3 74
3:1:3 71
1:1:5 47
1:5:1 51
5:1:1 43
5:5:1 50
1:5:5 52
5:1:5 46
제조예11 SC-I+CM-I+SN-I+TK-I 1:1:1:1 82
1:1:1:3 80
1:1:3:1 81
1:3:1:1 81
3:1:1:1 82
1:1:3:3 79
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3:1:1:3 84
1:3:3:1 82
3:1:3:1 83
3:3:1:1 86
3:3:3:1 87
3:3:1:3 85
3:1:3:3 83
1:3:3:3 82
1:1:1:5 46
1:1:5:1 49
1:5:1:1 47
5:1:1:1 51
1:1:5:5 52
1:5:1:5 50
5:1:1:5 53
1:5:5:1 44
5:1:5:1 51
5:5:1:1 47
5:5:5:1 53
5:5:1:5 57
5:1:5:5 61
1:5:5:5 54
혼합 생약 추출물(물 추출물의 부탄올 분획물)의 베타-2-아드레날린 수용체 결합 저해율
　 구분 Adrenergic β2 binding inhibition (%)
제조예1 SC-W-B+CM-W-B 1:20 51
1:15 49
1:10 79
1:5 81
1:3 80
1:1 82
3:1 78
5:1 80
10:1 81
15:1 53
20:1 55
제조예2 SC-W-B+SN-W-B 1:20 49
1:15 44
1:10 77
1:5 80
1:3 78
1:1 83
3:1 80
5:1 79
10:1 80
15:1 51
20:1 47
제조예3 SC-W-B+TK-W-B 1:20 43
1:15 47
1:10 67
1:5 72
1:3 75
1:1 74
3:1 70
5:1 69
10:1 71
15:1 48
20:1 53
제조예4 CM-W-B+SN-W-B 1:20 42
1:15 45
1:10 64
1:5 69
1:3 71
1:1 70
3:1 67
5:1 65
10:1 68
15:1 47
20:1 50
제조예5 CM-W-B+TK-W-B 1:20 48
1:15 50
1:10 65
1:5 70
1:3 69
1:1 71
3:1 66
5:1 64
10:1 65
15:1 47
20:1 49
제조예6 SN-W-B+TK-W-B 1:20 42
1:15 44
1:10 65
1:5 66
1:3 69
1:1 68
3:1 64
5:1 65
10:1 69
15:1 45
20:1 47
제조예7 SC-W-B+CM-W-B+SN-W-B 1:1:1 79
1:1:3 82
1:3:1 81
3:1:1 83
3:3:1 76
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3:1:3 79
1:1:5 52
1:5:1 56
5:1:1 51
5:5:1 54
1:5:5 57
5:1:5 55
제조예8 SC-W-B+CM-W-B+TK-W-B 1:1:1 78
1:1:3 80
1:3:1 83
3:1:1 85
3:3:1 79
1:3:3 81
3:1:3 86
1:1:5 51
1:5:1 53
5:1:1 49
5:5:1 47
1:5:5 51
5:1:5 53
제조예9 SC-W-B+SN-W-B+TK-W-B 1:1:1 73
1:1:3 75
1:3:1 79
3:1:1 80
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1:3:3 76
3:1:3 79
1:1:5 49
1:5:1 55
5:1:1 47
5:5:1 51
1:5:5 55
5:1:5 51
제조예10 CM-W-B+SN-W-B+TK-W-B 1:1:1 71
1:1:3 73
1:3:1 74
3:1:1 71
3:3:1 78
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3:1:3 71
1:1:5 48
1:5:1 55
5:1:1 53
5:5:1 47
1:5:5 50
5:1:5 51
제조예11 SC-W-B+CM-W-B+SN-W-B+TK-W-B 1:1:1:1 83
1:1:1:3 82
1:1:3:1 85
1:3:1:1 84
3:1:1:1 79
1:1:3:3 81
1:3:1:3 80
3:1:1:3 83
1:3:3:1 81
3:1:3:1 82
3:3:1:1 81
3:3:3:1 78
3:3:1:3 79
3:1:3:3 83
1:3:3:3 80
1:1:1:5 51
1:1:5:1 45
1:5:1:1 47
5:1:1:1 43
1:1:5:5 49
1:5:1:5 51
5:1:1:5 53
1:5:5:1 49
5:1:5:1 53
5:5:1:1 55
5:5:5:1 56
5:5:1:5 54
5:1:5:5 48
1:5:5:5 51
혼합 생약 추출물(에탄올 추출물의 부탄올 분획물)의 베타-2-아드레날린 수용체 결합 저해율
　 혼합 생약 추출물 Adrenergic β2 binding inhibition (%)
제조예1 SC-E-B+CM-E-B 1:20 51
1:15 49
1:10 82
1:5 81
1:3 84
1:1 84
3:1 85
5:1 81
10:1 80
15:1 51
20:1 55
제조예2 SC-E-B+SN-E-B 1:20 48
1:15 53
1:10 78
1:5 75
1:3 79
1:1 81
3:1 76
5:1 72
10:1 75
15:1 55
20:1 58
제조예3 SC-E-B+TK-E-B 1:20 51
1:15 53
1:10 70
1:5 71
1:3 72
1:1 75
3:1 70
5:1 71
10:1 72
15:1 54
20:1 55
제조예4 CM-E-B+SN-E-B 1:20 44
1:15 47
1:10 65
1:5 70
1:3 71
1:1 73
3:1 72
5:1 73
10:1 77
15:1 50
20:1 52
제조예5 CM-E-B+TK-E-B 1:20 49
1:15 51
1:10 68
1:5 67
1:3 66
1:1 69
3:1 70
5:1 68
10:1 69
15:1 53
20:1 50
제조예6 SN-E-B+TK-E-B 1:20 46
1:15 47
1:10 64
1:5 65
1:3 63
1:1 65
3:1 64
5:1 66
10:1 69
15:1 43
20:1 40
제조예7 SC-E-B+CM-E-B+SN-E-B 1:1:1 79
1:1:3 80
1:3:1 78
3:1:1 77
3:3:1 83
1:3:3 85
3:1:3 84
1:1:5 58
1:5:1 51
5:1:1 50
5:5:1 49
1:5:5 52
5:1:5 43
제조예8 SC-E-B+CM-E-B+TK-E-B 1:1:1 82
1:1:3 81
1:3:1 83
3:1:1 79
3:3:1 81
1:3:3 86
3:1:3 85
1:1:5 43
1:5:1 48
5:1:1 47
5:5:1 49
1:5:5 51
5:1:5 47
제조예9 SC-E-B+SN-E-B+TK-E-B 1:1:1 76
1:1:3 77
1:3:1 76
3:1:1 74
3:3:1 80
1:3:3 76
3:1:3 79
1:1:5 44
1:5:1 48
5:1:1 43
5:5:1 47
1:5:5 51
5:1:5 49
제조예10 CM-E-B+SN-E-B+TK-E-B 1:1:1 74
1:1:3 73
1:3:1 71
3:1:1 70
3:3:1 76
1:3:3 75
3:1:3 73
1:1:5 45
1:5:1 43
5:1:1 51
5:5:1 53
1:5:5 47
5:1:5 46
제조예11 SC-E-B+CM-E-B+SN-E-B+TK-E-B 1:1:1:1 80
1:1:1:3 79
1:1:3:1 79
1:3:1:1 81
3:1:1:1 83
1:1:3:3 82
1:3:1:3 80
3:1:1:3 78
1:3:3:1 79
3:1:3:1 83
3:3:1:1 79
3:3:3:1 78
3:3:1:3 85
3:1:3:3 83
1:3:3:3 81
1:1:1:5 51
1:1:5:1 53
1:5:1:1 49
5:1:1:1 48
1:1:5:5 55
1:5:1:5 53
5:1:1:5 51
1:5:5:1 49
5:1:5:1 48
5:5:1:1 41
5:5:5:1 50
5:5:1:5 51
5:1:5:5 47
1:5:5:5 53
혼합 생약 추출물(이소프로판올 추출물의 부탄올 분획물)의 베타-2-아드레날린 수용체 결합 저해율
　 혼합 생약 추출물 Adrenergic β2 binding inhibition (%)
제조예1 SC-I-B+CM-I-B 1:20 51
1:15 52
1:10 81
1:5 82
1:3 80
1:1 83
3:1 84
5:1 82
10:1 85
15:1 59
20:1 54
제조예2 SC-I-B+SN-I-B 1:20 47
1:15 51
1:10 76
1:5 78
1:3 70
1:1 73
3:1 74
5:1 72
10:1 75
15:1 54
20:1 55
제조예3 SC-I-B+TK-I-B 1:20 49
1:15 51
1:10 76
1:5 67
1:3 69
1:1 70
3:1 73
5:1 69
10:1 72
15:1 54
20:1 57
제조예4 CM-I-B+SN-I-B 1:20 44
1:15 47
1:10 72
1:5 70
1:3 65
1:1 68
3:1 69
5:1 67
10:1 70
15:1 51
20:1 54
제조예5 CM-I-B+TK-I-B 1:20 50
1:15 52
1:10 64
1:5 71
1:3 70
1:1 72
3:1 70
5:1 69
10:1 73
15:1 52
20:1 54
제조예6 SN-I-B+TK-I-B 1:20 49
1:15 46
1:10 66
1:5 68
1:3 70
1:1 68
3:1 65
5:1 64
10:1 68
15:1 47
20:1 45
제조예7 SC-I-B+CM-I-B+SN-I-B 1:1:1 81
1:1:3 80
1:3:1 83
3:1:1 81
3:3:1 86
1:3:3 88
3:1:3 84
1:1:5 55
1:5:1 52
5:1:1 51
5:5:1 49
1:5:5 47
5:1:5 52
제조예8 SC-I-B+CM-I-B+TK-I-B 1:1:1 87
1:1:3 84
1:3:1 80
3:1:1 81
3:3:1 84
1:3:3 84
3:1:3 82
1:1:5 53
1:5:1 51
5:1:1 54
5:5:1 49
1:5:5 48
5:1:5 57
제조예9 SC-I-B+SN-I-B+TK-I-B 1:1:1 72
1:1:3 75
1:3:1 79
3:1:1 74
3:3:1 76
1:3:3 78
3:1:3 73
1:1:5 48
1:5:1 51
5:1:1 47
5:5:1 56
1:5:5 50
5:1:5 53
제조예10 CM-I-B+SN-I-B+TK-I-B 1:1:1 76
1:1:3 74
1:3:1 72
3:1:1 73
3:3:1 75
1:3:3 77
3:1:3 72
1:1:5 49
1:5:1 51
5:1:1 52
5:5:1 48
1:5:5 50
5:1:5 52
제조예11 SC-I-B+CM-I-B+SN-I-B+TK-I-B 1:1:1:1 78
1:1:1:3 83
1:1:3:1 81
1:3:1:1 85
3:1:1:1 84
1:1:3:3 86
1:3:1:3 82
3:1:1:3 83
1:3:3:1 81
3:1:3:1 84
3:3:1:1 83
3:3:3:1 85
3:3:1:3 87
3:1:3:3 84
1:3:3:3 83
1:1:1:5 55
1:1:5:1 51
1:5:1:1 52
5:1:1:1 57
1:1:5:5 49
1:5:1:5 48
5:1:1:5 51
1:5:5:1 50
5:1:5:1 53
5:5:1:1 49
5:5:5:1 48
5:5:1:5 51
5:1:5:5 55
1:5:5:5 51
3.4: 류코트리엔 ( cysteinyl leukotriene ; CysLT1 ) 수용체 결합 저해 활성
상기 제조예 1 내지 11에서 제조된 각각의 혼합 생약 추출물 및 참고예 1 내지 4에서 제조된 각각의 단일 생약 추출물(이하, 상기 혼합 생약 추출물과 단독 생약 추출물을 '시험약물'로 기재)의 류코트리엔 (cysteinyl leukotriene LT1; CysLT1)수용체 결합에 대한 활성을 평가하기 위한 실험을 수행하였다 (참조문헌: Martin V etal., Biochem. Pharmacol. 62(9): 1193, 2001).
CysLT1 수용체는 리간드인 류코트리엔과 결합하여 기관지 수축, 혈관 투과성 증가, 염증성 세포의 기도 침윤 항진, 부종 형성, 점액 분비 촉진, 염증, 과민 반응 등을 유도하여 천식 등의 호흡기 질환을 유발하며, CysLT1 수용체와 리간드 간 결합을 저해하면 이와 같은 호흡기 질환 유발을 억제할 수 있다. 따라서, 시험약물의 CysLT1 수용체와 리간드 간 결합 저해 활성을 평가함으로써, 호흡기 질환의 예방 및/또는 치료 효과를 확인할 수 있다.
각각의 시험약물은 DMSO에 녹여 최종 농도가 100 ug/ml가 되도록 준비하였다.
CHO-K1 세포에 발현된 human recombinant CysLT1 수용체 (Perkin Elmer, ES-470-M)에 특이적인 [3H]LTD4리간드 (Perkin Elmer, NET-1019)가 결합하는 정도를 측정하였다. pH7.4의 Tris-HCl 완충액에서, human recombinant CysLT1 수용체 5 ug와 0.3 nM의 [3H]LTD4 및 상기 준비된 시험약물 100 ul을 25℃에서 30분간 반응시키고, 이를 특이적 결합의 측정에 사용하였다. 상기 얻어진 반응 혼합물을 유리섬유 여과지 (GF/B, Whatman)로 여과시킨 후, 상기 여과지를 통과하지 못한 리간드와 수용체가 결합된 복합체를 포함하는 잔여물을 Tris-HCl 완충액으로 사용하여 3회 반복 세척한 후, 표지된 리간드 ([3H]LTD4)와 수용체 간 결합을 측정하였다. 상기 표지된 리간드와 수용체 간 결합은 상기 여과 후 잔여물 내의 표지된 리간드 수준을 섬광계수기 (Counter-Microbeta, Perkin Elmer)를 이용하여 측정함으로써 정량하였다.
표지된 리간드 [3H]LTD4의 비특이적 결합을 측정하기 위해서, 상기 표지된 리간드와 함께, 비표지된 리간드 LTD4를 300 nM의 양으로 사용하여 상기 과정을 수행하였다.
표지된 리간드의 CysLT1 수용체와의 특이적 결합은 전체 결합 (비표지된 리간드를 사용하지 않은 경우에 얻어진 표지된 리간드와 수용체 간 결합)에서 비특이적 결합(비표지된 리간드를 사용한 경우에 얻어진 표지된 리간드와 수용체 간 결합)을 뺀 값으로 정의하였으며, 그 구체적 방법은 상기 실시예 3.3에 상술한 바와 같다.
각각의 시험약물의 CysLT1 수용체와 리간드 간 결합 억제 활성은 아래의 수식으로 평가하였다:
시험약물에 의한 CysLT1 수용체와 리간드 간 결합 저해율(%) = [1-(시험약물 존재하에서의 특이적 결합)/(시험약물 처리되지 않았을 때의 특이적 결합)] * 100
상기 식에서, 특이적 결합은, 앞서 설명한 바와 같이, 표지된 리간드와 수용체 간 전체 결합에서 비특이적 결합을 뺀 값으로 정의된다.
상기 얻어진 결과를 아래의 표 22 내지 28에 나타내었다.　
단일 생약 추출물의 CysLT1 수용체 결합 저해율
단일 생약 추출물 CysLT1 receptor binding inhibition (%)
참고예 1 SC-W 70
CM-W 69
SN-W 60
TK-W 62
참고예 2 SC-E 73
CM-E 71
SN-E 63
TK-E 65
참고예 3 SC-I 75
CM-I 73
SN-I 65
TK-I 67
참고예 4 SC-W-B 71
CM-W-B 70
SN-W-B 62
TK-W-B 63
SC-E-B 74
CM-E-B 72
SN-E-B 64
TK-E-B 66
SC-I-B 73
CM-I-B 72
SN-I-B 61
TK-I-B 65
혼합 생약 추출물(물 추출물)의 CysLT1 수용체 결합 저해율
　 혼합 생약 추출물 CysLT1 receptor binding inhibition (%)
제조예1 SC-W+CM-W 1:20 65
1:15 63
1:10 89
1:5 91
1:3 95
1:1 97
3:1 96
5:1 93
10:1 91
15:1 69
20:1 65
제조예2 SC-W+SN-W 1:20 62
1:15 65
1:10 87
1:5 90
1:3 94
1:1 95
3:1 94
5:1 91
10:1 90
15:1 64
20:1 67
제조예3 SC-W+TK-W 1:20 59
1:15 64
1:10 86
1:5 85
1:3 88
1:1 91
3:1 92
5:1 90
10:1 88
15:1 66
20:1 68
제조예4 CM-W+SN-W 1:20 61
1:15 65
1:10 85
1:5 89
1:3 91
1:1 90
3:1 89
5:1 91
10:1 87
15:1 64
20:1 67
제조예5 CM-W+TK-W 1:20 59
1:15 63
1:10 87
1:5 90
1:3 90
1:1 92
3:1 88
5:1 93
10:1 89
15:1 65
20:1 69
제조예6 SN-W+TK-W 1:20 61
1:15 58
1:10 86
1:5 91
1:3 85
1:1 87
3:1 86
5:1 84
10:1 80
15:1 62
20:1 59
제조예7 SC-W+CM-W+SN-W 1:1:1 95
1:1:3 94
1:3:1 96
3:1:1 97
3:3:1 92
1:3:3 93
3:1:3 94
1:1:5 65
1:5:1 66
5:1:1 61
5:5:1 67
1:5:5 64
5:1:5 63
제조예8 SC-W+CM-W+TK-W 1:1:1 93
1:1:3 95
1:3:1 91
3:1:1 96
3:3:1 93
1:3:3 95
3:1:3 97
1:1:5 61
1:5:1 67
5:1:1 66
5:5:1 63
1:5:5 61
5:1:5 64
제조예9 SC-W+SN-W+TK-W 1:1:1 90
1:1:3 91
1:3:1 92
3:1:1 95
3:3:1 91
1:3:3 90
3:1:3 92
1:1:5 65
1:5:1 64
5:1:1 61
5:5:1 63
1:5:5 66
5:1:5 65
제조예10 CM-W+SN-W+TK-W 1:1:1 89
1:1:3 88
1:3:1 90
3:1:1 91
3:3:1 93
1:3:3 94
3:1:3 90
1:1:5 65
1:5:1 69
5:1:1 68
5:5:1 63
1:5:5 69
5:1:5 62
제조예11 SC-W+CM-W+SN-W+TK-W 1:1:1:1 92
1:1:1:3 93
1:1:3:1 94
1:3:1:1 91
3:1:1:1 90
1:1:3:3 92
1:3:1:3 94
3:1:1:3 90
1:3:3:1 93
3:1:3:1 89
3:3:1:1 91
3:3:3:1 90
3:3:1:3 94
3:1:3:3 92
1:3:3:3 95
1:1:1:5 70
1:1:5:1 66
1:5:1:1 63
5:1:1:1 67
1:1:5:5 68
1:5:1:5 61
5:1:1:5 69
1:5:5:1 65
5:1:5:1 64
5:5:1:1 61
5:5:5:1 63
5:5:1:5 69
5:1:5:5 68
1:5:5:5 62
혼합 생약 추출물(에탄올 추출물)의 CysLT1 수용체 결합 저해율
　 혼합 생약 추출물 CysLT1 receptor binding inhibition (%)
제조예1 SC-E+CM-E 1:20 68
1:15 71
1:10 92
1:5 94
1:3 98
1:1 97
3:1 98
5:1 95
10:1 93
15:1 72
20:1 70
제조예2 SC-E+SN-E 1:20 62
1:15 65
1:10 88
1:5 90
1:3 95
1:1 95
3:1 94
5:1 89
10:1 88
15:1 65
20:1 69
제조예3 SC-E+TK-E 1:20 61
1:15 64
1:10 85
1:5 89
1:3 88
1:1 91
3:1 90
5:1 89
10:1 88
15:1 69
20:1 70
제조예4 CM-E+SN-E 1:20 64
1:15 62
1:10 86
1:5 84
1:3 89
1:1 90
3:1 90
5:1 88
10:1 87
15:1 68
20:1 65
제조예5 CM-E+TK-E 1:20 64
1:15 67
1:10 88
1:5 86
1:3 91
1:1 92
3:1 90
5:1 86
10:1 89
15:1 63
20:1 68
제조예6 SN-E+TK-E 1:20 62
1:15 63
1:10 84
1:5 88
1:3 85
1:1 89
3:1 87
5:1 85
10:1 86
15:1 67
20:1 61
제조예7 SC-E+CM-E+SN-E 1:1:1 95
1:1:3 96
1:3:1 94
3:1:1 91
3:3:1 93
1:3:3 95
3:1:3 96
1:1:5 74
1:5:1 70
5:1:1 68
5:5:1 71
1:5:5 62
5:1:5 68
제조예8 SC-E+CM-E+TK-E 1:1:1 92
1:1:3 93
1:3:1 95
3:1:1 89
3:3:1 92
1:3:3 94
3:1:3 96
1:1:5 69
1:5:1 65
5:1:1 64
5:5:1 69
1:5:5 68
5:1:5 66
제조예9 SC-E+SN-E+TK-E 1:1:1 92
1:1:3 94
1:3:1 91
3:1:1 93
3:3:1 90
1:3:3 91
3:1:3 89
1:1:5 62
1:5:1 65
5:1:1 61
5:5:1 68
1:5:5 67
5:1:5 69
제조예10 CM-E+SN-E+TK-E 1:1:1 91
1:1:3 89
1:3:1 93
3:1:1 92
3:3:1 91
1:3:3 94
3:1:3 91
1:1:5 65
1:5:1 61
5:1:1 66
5:5:1 59
1:5:5 65
5:1:5 68
제조예11 SC-E+CM-E+SN-E+TK-E 1:1:1:1 95
1:1:1:3 96
1:1:3:1 91
1:3:1:1 97
3:1:1:1 98
1:1:3:3 92
1:3:1:3 95
3:1:1:3 93
1:3:3:1 94
3:1:3:1 92
3:3:1:1 90
3:3:3:1 98
3:3:1:3 92
3:1:3:3 95
1:3:3:3 96
1:1:1:5 70
1:1:5:1 68
1:5:1:1 65
5:1:1:1 64
1:1:5:5 68
1:5:1:5 69
5:1:1:5 72
1:5:5:1 70
5:1:5:1 68
5:5:1:1 62
5:5:5:1 68
5:5:1:5 63
5:1:5:5 67
1:5:5:5 69
혼합 생약 추출물(이소프로판올 추출물)의 CysLT1 수용체 결합 저해율
　 구분 CysLT1 receptor binding inhibition (%)
제조예1 SC-I+CM-I 1:20 71
1:15 70
1:10 93
1:5 95
1:3 99
1:1 100
3:1 100
5:1 96
10:1 95
15:1 75
20:1 71
제조예2 SC-I+SN-I 1:20 68
1:15 71
1:10 90
1:5 90
1:3 94
1:1 92
3:1 93
5:1 90
10:1 89
15:1 71
20:1 73
제조예3 SC-I+TK-I 1:20 65
1:15 66
1:10 88
1:5 86
1:3 89
1:1 91
3:1 90
5:1 89
10:1 87
15:1 61
20:1 69
제조예4 CM-I+SN-I 1:20 64
1:15 66
1:10 88
1:5 87
1:3 90
1:1 91
3:1 92
5:1 90
10:1 89
15:1 69
20:1 65
제조예5 CM-I+TK-I 1:20 69
1:15 65
1:10 86
1:5 87
1:3 89
1:1 91
3:1 90
5:1 88
10:1 89
15:1 71
20:1 72
제조예6 SN-I+TK-I 1:20 66
1:15 63
1:10 82
1:5 81
1:3 83
1:1 85
3:1 84
5:1 80
10:1 80
15:1 64
20:1 62
제조예7 SC-I+CM-I+SN-I 1:1:1 98
1:1:3 98
1:3:1 99
3:1:1 99
3:3:1 99
1:3:3 97
3:1:3 98
1:1:5 71
1:5:1 73
5:1:1 69
5:5:1 68
1:5:5 74
5:1:5 69
제조예8 SC-I+CM-I+TK-I 1:1:1 96
1:1:3 95
1:3:1 96
3:1:1 97
3:3:1 99
1:3:3 96
3:1:3 98
1:1:5 70
1:5:1 68
5:1:1 73
5:5:1 74
1:5:5 69
5:1:5 72
제조예9 SC-I+SN-I+TK-I 1:1:1 92
1:1:3 91
1:3:1 89
3:1:1 91
3:3:1 90
1:3:3 91
3:1:3 89
1:1:5 64
1:5:1 63
5:1:1 59
5:5:1 61
1:5:5 64
5:1:5 62
제조예10 CM-I+SN-I+TK-I 1:1:1 90
1:1:3 91
1:3:1 92
3:1:1 94
3:3:1 93
1:3:3 94
3:1:3 93
1:1:5 63
1:5:1 69
5:1:1 68
5:5:1 70
1:5:5 65
5:1:5 71
제조예11 SC-I+CM-I+SN-I+TK-I 1:1:1:1 96
1:1:1:3 95
1:1:3:1 94
1:3:1:1 95
3:1:1:1 96
1:1:3:3 95
1:3:1:3 97
3:1:1:3 96
1:3:3:1 98
3:1:3:1 97
3:3:1:1 100
3:3:3:1 99
3:3:1:3 100
3:1:3:3 98
1:3:3:3 97
1:1:1:5 68
1:1:5:1 65
1:5:1:1 71
5:1:1:1 74
1:1:5:5 66
1:5:1:5 69
5:1:1:5 67
1:5:5:1 70
5:1:5:1 71
5:5:1:1 65
5:5:5:1 72
5:5:1:5 70
5:1:5:5 68
1:5:5:5 67
혼합 생약 추출물(물 추출물의 부탄올 분획물)의 CysLT1 수용체 결합 저해율
　 혼합 생약 추출물 CysLT1 receptor binding inhibition (%)
제조예1 SC-W-B+CM-W-B 1:20 69
1:15 70
1:10 89
1:5 92
1:3 90
1:1 94
3:1 93
5:1 92
10:1 90
15:1 69
20:1 70
제조예2 SC-W-B+SN-W-B 1:20 65
1:15 62
1:10 88
1:5 89
1:3 89
1:1 90
3:1 91
5:1 89
10:1 87
15:1 67
20:1 64
제조예3 SC-W-B+TK-W-B 1:20 61
1:15 65
1:10 85
1:5 87
1:3 88
1:1 89
3:1 84
5:1 86
10:1 87
15:1 67
20:1 61
제조예4 CM-W-B+SN-W-B 1:20 60
1:15 66
1:10 88
1:5 89
1:3 87
1:1 89
3:1 88
5:1 90
10:1 87
15:1 65
20:1 60
제조예5 CM-W-B+TK-W-B 1:20 60
1:15 63
1:10 88
1:5 91
1:3 89
1:1 95
3:1 92
5:1 90
10:1 87
15:1 67
20:1 69
제조예6 SN-W-B+TK-W-B 1:20 59
1:15 61
1:10 86
1:5 88
1:3 89
1:1 92
3:1 90
5:1 89
10:1 87
15:1 62
20:1 59
제조예7 SC-W-B+CM-W-B+SN-W-B 1:1:1 90
1:1:3 94
1:3:1 96
3:1:1 94
3:3:1 93
1:3:3 90
3:1:3 92
1:1:5 60
1:5:1 59
5:1:1 64
5:5:1 61
1:5:5 63
5:1:5 58
제조예8 SC-W-B+CM-W-B+TK-W-B 1:1:1 87
1:1:3 92
1:3:1 90
3:1:1 94
3:3:1 93
1:3:3 95
3:1:3 92
1:1:5 71
1:5:1 72
5:1:1 68
5:5:1 64
1:5:5 69
5:1:5 71
제조예9 SC-W-B+SN-W-B+TK-W-B 1:1:1 95
1:1:3 92
1:3:1 93
3:1:1 90
3:3:1 92
1:3:3 91
3:1:3 93
1:1:5 72
1:5:1 74
5:1:1 70
5:5:1 68
1:5:5 65
5:1:5 69
제조예10 CM-W-B+SN-W-B+TK-W-B 1:1:1 89
1:1:3 90
1:3:1 91
3:1:1 87
3:3:1 89
1:3:3 88
3:1:3 90
1:1:5 69
1:5:1 70
5:1:1 65
5:5:1 64
1:5:5 60
5:1:5 63
제조예11 SC-W-B+CM-W-B+SN-W-B+TK-W-B 1:1:1:1 94
1:1:1:3 93
1:1:3:1 92
1:3:1:1 91
3:1:1:1 95
1:1:3:3 92
1:3:1:3 93
3:1:1:3 95
1:3:3:1 96
3:1:3:1 94
3:3:1:1 90
3:3:3:1 91
3:3:1:3 92
3:1:3:3 94
1:3:3:3 90
1:1:1:5 69
1:1:5:1 71
1:5:1:1 73
5:1:1:1 72
1:1:5:5 70
1:5:1:5 69
5:1:1:5 64
1:5:5:1 68
5:1:5:1 71
5:5:1:1 65
5:5:5:1 69
5:5:1:5 64
5:1:5:5 67
1:5:5:5 70
혼합 생약 추출물(에탄올 추출물의 부탄올 분획물)의 CysLT1 수용체 결합 저해율
　 혼합 생약 추출물 CysLT1 receptor binding inhibition (%)
제조예1 SC-E-B+CM-E-B 1:20 70
1:15 71
1:10 92
1:5 95
1:3 96
1:1 97
3:1 95
5:1 94
10:1 92
15:1 69
20:1 71
제조예2 SC-E-B+SN-E-B 1:20 69
1:15 66
1:10 90
1:5 92
1:3 95
1:1 96
3:1 94
5:1 92
10:1 90
15:1 68
20:1 70
제조예3 SC-E-B+TK-E-B 1:20 65
1:15 68
1:10 93
1:5 92
1:3 95
1:1 94
3:1 90
5:1 92
10:1 89
15:1 62
20:1 67
제조예4 CM-E-B+SN-E-B 1:20 61
1:15 65
1:10 92
1:5 94
1:3 90
1:1 94
3:1 93
5:1 92
10:1 90
15:1 62
20:1 65
제조예5 CM-E-B+TK-E-B 1:20 62
1:15 67
1:10 89
1:5 95
1:3 94
1:1 93
3:1 92
5:1 90
10:1 86
15:1 59
20:1 63
제조예6 SN-E-B+TK-E-B 1:20 65
1:15 59
1:10 87
1:5 89
1:3 94
1:1 96
3:1 89
5:1 91
10:1 87
15:1 64
20:1 65
제조예7 SC-E-B+CM-E-B+SN-E-B 1:1:1 90
1:1:3 89
1:3:1 95
3:1:1 93
3:3:1 92
1:3:3 90
3:1:3 87
1:1:5 65
1:5:1 69
5:1:1 64
5:5:1 62
1:5:5 61
5:1:5 63
제조예8 SC-E-B+CM-E-B+TK-E-B 1:1:1 95
1:1:3 92
1:3:1 90
3:1:1 89
3:3:1 97
1:3:3 94
3:1:3 96
1:1:5 69
1:5:1 67
5:1:1 75
5:5:1 74
1:5:5 64
5:1:5 66
제조예9 SC-E-B+SN-E-B+TK-E-B 1:1:1 85
1:1:3 88
1:3:1 91
3:1:1 90
3:3:1 92
1:3:3 87
3:1:3 89
1:1:5 64
1:5:1 66
5:1:1 61
5:5:1 68
1:5:5 62
5:1:5 66
제조예10 CM-E-B+SN-E-B+TK-E-B 1:1:1 87
1:1:3 92
1:3:1 94
3:1:1 92
3:3:1 94
1:3:3 93
3:1:3 90
1:1:5 67
1:5:1 59
5:1:1 68
5:5:1 63
1:5:5 60
5:1:5 61
제조예11 SC-E-B+CM-E-B+SN-E-B+TK-E-B 1:1:1:1 95
1:1:1:3 98
1:1:3:1 96
1:3:1:1 97
3:1:1:1 95
1:1:3:3 94
1:3:1:3 93
3:1:1:3 92
1:3:3:1 91
3:1:3:1 96
3:3:1:1 95
3:3:3:1 94
3:3:1:3 91
3:1:3:3 96
1:3:3:3 91
1:1:1:5 74
1:1:5:1 75
1:5:1:1 76
5:1:1:1 70
1:1:5:5 69
1:5:1:5 74
5:1:1:5 71
1:5:5:1 72
5:1:5:1 69
5:5:1:1 73
5:5:5:1 74
5:5:1:5 76
5:1:5:5 71
1:5:5:5 73
혼합 생약 추출물(이소프로판올 추출물의 부탄올 분획물)의 CysLT1 수용체 결합 저해율
　 혼합 생약 추출물 CysLT1 receptor binding inhibition (%)
제조예1 SC-I-B+CM-I-B 1:20 70
1:15 71
1:10 92
1:5 95
1:3 96
1:1 97
3:1 95
5:1 94
10:1 92
15:1 69
20:1 71
제조예2 SC-I-B+SN-I-B 1:20 69
1:15 66
1:10 90
1:5 92
1:3 95
1:1 96
3:1 94
5:1 92
10:1 90
15:1 68
20:1 70
제조예3 SC-I-B+TK-I-B 1:20 65
1:15 68
1:10 93
1:5 92
1:3 95
1:1 94
3:1 90
5:1 92
10:1 89
15:1 62
20:1 67
제조예4 CM-I-B+SN-I-B 1:20 61
1:15 65
1:10 92
1:5 94
1:3 90
1:1 94
3:1 93
5:1 92
10:1 90
15:1 62
20:1 65
제조예5 CM-I-B+TK-I-B 1:20 62
1:15 67
1:10 89
1:5 95
1:3 94
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3:1 92
5:1 90
10:1 86
15:1 59
20:1 63
제조예6 SN-I-B+TK-I-B 1:20 65
1:15 59
1:10 87
1:5 89
1:3 94
1:1 96
3:1 89
5:1 91
10:1 87
15:1 64
20:1 65
제조예7 SC-I-B+CM-I-B+SN-I-B 1:1:1 90
1:1:3 89
1:3:1 95
3:1:1 93
3:3:1 92
1:3:3 90
3:1:3 87
1:1:5 65
1:5:1 69
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1:5:5 61
5:1:5 63
제조예8 SC-I-B+CM-I-B+TK-I-B 1:1:1 95
1:1:3 92
1:3:1 90
3:1:1 89
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1:3:3 94
3:1:3 96
1:1:5 69
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1:5:5 64
5:1:5 66
제조예9 SC-I-B+SN-I-B+TK-I-B 1:1:1 85
1:1:3 88
1:3:1 91
3:1:1 90
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5:5:1 68
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5:1:5 66
제조예10 CM-I-B+SN-I-B+TK-I-B 1:1:1 87
1:1:3 92
1:3:1 94
3:1:1 92
3:3:1 94
1:3:3 93
3:1:3 90
1:1:5 67
1:5:1 59
5:1:1 68
5:5:1 63
1:5:5 60
5:1:5 61
제조예11 SC-I-B+CM-I-B+SN-I-B+TK-I-B 1:1:1:1 95
1:1:1:3 98
1:1:3:1 96
1:3:1:1 97
3:1:1:1 95
1:1:3:3 94
1:3:1:3 93
3:1:1:3 92
1:3:3:1 91
3:1:3:1 96
3:3:1:1 95
3:3:3:1 94
3:3:1:3 91
3:1:3:3 96
1:3:3:3 91
1:1:1:5 74
1:1:5:1 75
1:5:1:1 76
5:1:1:1 70
1:1:5:5 69
1:5:1:5 74
5:1:1:5 71
1:5:5:1 72
5:1:5:1 69
5:5:1:1 73
5:5:5:1 74
5:5:1:5 76
5:1:5:5 71
1:5:5:5 73
3.5: 무스카린 수용체 ( Muscarinic M3 receptor) 결합 저해활성
상기 제조예 1 내지 11에서 제조된 각각의 혼합 생약 추출물 및 참고예 1 내지 4에서 제조된 각각의 단일 생약 추출물 (이하, 상기 혼합 생약 추출물과 단독 생약 추출물을 '시험약물'로 기재)의 무스카린 수용체 (Muscarinic M3 receptor)결합에 대한 활성을 평가하기 위한 실험을 수행하였다 (참조문헌: Buckley NJ et al., Mol. Pharmacol. 35(4): 469, 1989). 무스카린 M3 수용체가 활성화되면 기도 평활근의 수축 및 점액 분비가 촉진되므로, 무스카린 M3 수용체의 활성을 저해하면 호흡기 질환의 예방 및/또는 치료가 가능하다. 따라서, 시험약물의 무스카린 M3 수용체와 리간드 간 결합 저해 활성을 평가함으로써, 천식, 만성폐쇄성 폐질환 등의 호흡기 질환의 예방 및/또는 치료 효과를 확인할 수 있다.
각각의 시험약물을 DMSO에 녹여 최종 농도가 100 ug/ml이 되도록 준비하였다.
CHO-K1 세포에 발현된 human recombinant 무스카린 M3 수용체 (Perkin Elmer, RBHM3M)에 특이적인 길항제인 [3H]N-Methylscopolamine 리간드 (Perkin Elmer, NET-636)가 결합하는 정도를 측정하였다. pH7.4의 Tris-HCl 완충액에서, human recombinant 무스카린 M3 수용체 12 ug와 0.8 nM의 [3H]N-Methylscopolamine 및 상기 준비된 시험약물 100 ul을 25℃에서 120분간 반응시키고, 이를 특이적 결합의 측정에 사용하였다. 상기 얻어진 반응 혼합물을 유리섬유 여과지 (GF/B, Whatman)로 여과시키고, 상기 여과지를 통과하지 못한 리간드와 수용체가 결합된 복합체를 포함하는 잔여물을 Tris-HCl 완충액을 사용하여 반복 세척한 후, 상기 표지된 리간드 ([3H]N-Methylscopolamine)와 수용체 간 결합을 측정하였다. 상기 표지된 리간드와 수용체 간 결합은 상기 여과 후 잔여물 내의 표지된 리간드 수준을 섬광계수기 (Counter-Microbeta, Perkin Elmer)를 이용하여 측정함으로써 정량하였다.
표지된 리간드 [3H]N-Methylscopolamine의 비특이적 결합을 측정하기 위해서, 상기 표지된 리간드와 함께, 무스카린 M3 수용체의 또 다른 리간드인 비표지된 atropine을 1 uM의 양으로 사용하여, 상기 과정을 수행하였다.
표지된 리간드의 무스카린 M3 수용체와의 특이적 결합은 전체 결합(비표지된 리간드를 사용하지 않은 경우에 얻어진 표지된 리간드와 수용체 간 결합)에서 비특이적 결합(비표지된 리간드를 사용한 경우에 얻어진 표지된 리간드와 수용체 간 결합)을 뺀 값으로 정의하였으며, 그 구체적 방법은 상기 실시예 3.3에 상술한 바와 같다.
각각의 시험약물의 무스카린 M3 수용체와 리간드 간 결합 억제 활성은 아래의 수식으로 평가하였다:
시험약물에 의한 무스카린 M3 수용체 결합 저해율(%) = [1-(시험약물 존재하에서의 특이적 결합)/(시험약물 처리되지 않았을 때의 특이적 결합)] * 100
상기 식에서, 특이적 결합은, 앞서 설명한 바와 같이, 표지된 리간드와 수용체 간 전체 결합에서 비특이적 결합을 뺀 값으로 정의된다.
상기 얻어진 결과를 아래의 표 29 내지 35에 나타내었다.　
단일 생약 추출물의 무스카린 M3 수용체 결합 저해율
구분 M3 receptor binding inhibition (%)
참고예 1 SC-W 57
CM-W 64
SN-W 54
TK-W 50
참고예 2 SC-E 61
CM-E 65
SN-E 56
TK-E 53
참고예 3 SC-I 64
CM-I 67
SN-I 59
TK-I 56
참고예 4 SC-W-B 58
CM-W-B 61
SN-W-B 55
TK-W-B 50
SC-E-B 60
CM-E-B 63
SN-E-B 58
TK-E-B 54
SC-I-B 62
CM-I-B 66
SN-I-B 57
TK-I-B 53
혼합 생약 추출물(물 추출물)의 무스카린 M3 수용체 결합 저해율
　 혼합 생약 추출물 M3 receptor binding inhibition (%)
제조예1 SC-W+CM-W 1:20 61
1:15 59
1:10 85
1:5 87
1:3 88
1:1 90
3:1 89
5:1 88
10:1 86
15:1 54
20:1 59
제조예2 SC-W+SN-W 1:20 50
1:15 53
1:10 78
1:5 80
1:3 81
1:1 83
3:1 82
5:1 84
10:1 80
15:1 56
20:1 58
제조예3 SC-W+TK-W 1:20 49
1:15 54
1:10 79
1:5 83
1:3 85
1:1 88
3:1 84
5:1 82
10:1 85
15:1 51
20:1 56
제조예4 CM-W+SN-W 1:20 55
1:15 57
1:10 78
1:5 86
1:3 81
1:1 85
3:1 83
5:1 89
10:1 84
15:1 58
20:1 51
제조예5 CM-W+TK-W 1:20 49
1:15 54
1:10 78
1:5 80
1:3 83
1:1 87
3:1 82
5:1 83
10:1 81
15:1 60
20:1 62
제조예6 SN-W+TK-W 1:20 49
1:15 57
1:10 76
1:5 77
1:3 79
1:1 84
3:1 80
5:1 78
10:1 77
15:1 51
20:1 50
제조예7 SC-W+CM-W+SN-W 1:1:1 85
1:1:3 89
1:3:1 84
3:1:1 87
3:3:1 91
1:3:3 90
3:1:3 86
1:1:5 59
1:5:1 61
5:1:1 65
5:5:1 64
1:5:5 67
5:1:5 58
제조예8 SC-W+CM-W+TK-W 1:1:1 89
1:1:3 90
1:3:1 85
3:1:1 91
3:3:1 93
1:3:3 86
3:1:3 83
1:1:5 51
1:5:1 60
5:1:1 58
5:5:1 52
1:5:5 59
5:1:5 57
제조예9 SC-W+SN-W+TK-W 1:1:1 80
1:1:3 84
1:3:1 86
3:1:1 89
3:3:1 88
1:3:3 84
3:1:3 82
1:1:5 53
1:5:1 56
5:1:1 52
5:5:1 59
1:5:5 57
5:1:5 55
제조예10 CM-W+SN-W+TK-W 1:1:1 81
1:1:3 80
1:3:1 86
3:1:1 89
3:3:1 93
1:3:3 91
3:1:3 87
1:1:5 49
1:5:1 57
5:1:1 54
5:5:1 50
1:5:5 57
5:1:5 61
제조예11 SC-W+CM-W+SN-W+TK-W 1:1:1:1 87
1:1:1:3 89
1:1:3:1 91
1:3:1:1 92
3:1:1:1 86
1:1:3:3 90
1:3:1:3 93
3:1:1:3 95
1:3:3:1 84
3:1:3:1 87
3:3:1:1 89
3:3:3:1 95
3:3:1:3 94
3:1:3:3 90
1:3:3:3 88
1:1:1:5 64
1:1:5:1 59
1:5:1:1 65
5:1:1:1 66
1:1:5:5 60
1:5:1:5 57
5:1:1:5 59
1:5:5:1 64
5:1:5:1 63
5:5:1:1 61
5:5:5:1 60
5:5:1:5 67
5:1:5:5 69
1:5:5:5 70
혼합 생약 추출물(에탄올 추출물)의 무스카린 M3 수용체 결합 저해율
　 혼합 생약 추출물 M3 receptor binding inhibition (%)
제조예1 SC-E+CM-E 1:20 60
1:15 64
1:10 85
1:5 87
1:3 90
1:1 92
3:1 89
5:1 86
10:1 84
15:1 62
20:1 59
제조예2 SC-E+SN-E 1:20 58
1:15 62
1:10 82
1:5 85
1:3 86
1:1 88
3:1 81
5:1 85
10:1 83
15:1 61
20:1 57
제조예3 SC-E+TK-E 1:20 52
1:15 60
1:10 79
1:5 82
1:3 85
1:1 90
3:1 84
5:1 83
10:1 85
15:1 57
20:1 50
제조예4 CM-E+SN-E 1:20 55
1:15 60
1:10 76
1:5 79
1:3 85
1:1 83
3:1 87
5:1 82
10:1 78
15:1 61
20:1 64
제조예5 CM-E+TK-E 1:20 55
1:15 57
1:10 83
1:5 87
1:3 90
1:1 91
3:1 88
5:1 84
10:1 80
15:1 58
20:1 63
제조예6 SN-E+TK-E 1:20 49
1:15 51
1:10 78
1:5 76
1:3 79
1:1 83
3:1 81
5:1 80
10:1 77
15:1 50
20:1 54
제조예7 SC-E+CM-E+SN-E 1:1:1 87
1:1:3 89
1:3:1 90
3:1:1 93
3:3:1 92
1:3:3 95
3:1:3 91
1:1:5 67
1:5:1 60
5:1:1 58
5:5:1 61
1:5:5 63
5:1:5 57
제조예8 SC-E+CM-E+TK-E 1:1:1 87
1:1:3 92
1:3:1 95
3:1:1 93
3:3:1 94
1:3:3 90
3:1:3 88
1:1:5 65
1:5:1 59
5:1:1 63
5:5:1 60
1:5:5 57
5:1:5 62
제조예9 SC-E+SN-E+TK-E 1:1:1 80
1:1:3 81
1:3:1 86
3:1:1 87
3:3:1 89
1:3:3 88
3:1:3 82
1:1:5 57
1:5:1 51
5:1:1 49
5:5:1 51
1:5:5 54
5:1:5 50
제조예10 CM-E+SN-E+TK-E 1:1:1 83
1:1:3 85
1:3:1 87
3:1:1 80
3:3:1 89
1:3:3 90
3:1:3 85
1:1:5 65
1:5:1 64
5:1:1 52
5:5:1 61
1:5:5 59
5:1:5 54
제조예11 SC-E+CM-E+SN-E+TK-E 1:1:1:1 88
1:1:1:3 89
1:1:3:1 93
1:3:1:1 91
3:1:1:1 86
1:1:3:3 87
1:3:1:3 94
3:1:1:3 91
1:3:3:1 90
3:1:3:1 92
3:3:1:1 90
3:3:3:1 92
3:3:1:3 95
3:1:3:3 94
1:3:3:3 93
1:1:1:5 60
1:1:5:1 71
1:5:1:1 73
5:1:1:1 76
1:1:5:5 70
1:5:1:5 68
5:1:1:5 64
1:5:5:1 69
5:1:5:1 61
5:5:1:1 59
5:5:5:1 68
5:5:1:5 61
5:1:5:5 60
1:5:5:5 63
혼합 생약 추출물(이소프로판올 추출물)의 무스카린 M3 수용체 결합 저해율
　 혼합 생약 추출물 M3 receptor binding inhibition (%)
제조예1 SC-I+CM-I 1:20 64
1:15 65
1:10 86
1:5 88
1:3 92
1:1 90
3:1 91
5:1 87
10:1 85
15:1 66
20:1 64
제조예2 SC-I+SN-I 1:20 60
1:15 63
1:10 80
1:5 79
1:3 84
1:1 86
3:1 85
5:1 81
10:1 81
15:1 58
20:1 61
제조예3 SC-I+TK-I 1:20 51
1:15 54
1:10 82
1:5 81
1:3 85
1:1 83
3:1 87
5:1 82
10:1 83
15:1 59
20:1 55
제조예4 CM-I+SN-I 1:20 58
1:15 61
1:10 79
1:5 79
1:3 83
1:1 84
3:1 85
5:1 80
10:1 78
15:1 62
20:1 66
제조예5 CM-I+TK-I 1:20 54
1:15 55
1:10 81
1:5 82
1:3 86
1:1 87
3:1 88
5:1 85
10:1 84
15:1 63
20:1 65
제조예6 SN-I+TK-I 1:20 54
1:15 51
1:10 78
1:5 77
1:3 81
1:1 80
3:1 79
5:1 76
10:1 77
15:1 53
20:1 50
제조예7 SC-I+CM-I+SN-I 1:1:1 90
1:1:3 87
1:3:1 89
3:1:1 88
3:3:1 91
1:3:3 92
3:1:3 88
1:1:5 61
1:5:1 59
5:1:1 58
5:5:1 60
1:5:5 63
5:1:5 61
제조예8 SC-I+CM-I+TK-I 1:1:1 93
1:1:3 91
1:3:1 90
3:1:1 89
3:3:1 92
1:3:3 93
3:1:3 87
1:1:5 65
1:5:1 61
5:1:1 64
5:5:1 62
1:5:5 60
5:1:5 59
제조예9 SC-I+SN-I+TK-I 1:1:1 84
1:1:3 82
1:3:1 83
3:1:1 81
3:3:1 87
1:3:3 84
3:1:3 81
1:1:5 65
1:5:1 62
5:1:1 61
5:5:1 59
1:5:5 65
5:1:5 58
제조예10 CM-I+SN-I+TK-I 1:1:1 81
1:1:3 79
1:3:1 82
3:1:1 83
3:3:1 78
1:3:3 84
3:1:3 81
1:1:5 59
1:5:1 62
5:1:1 68
5:5:1 62
1:5:5 58
5:1:5 64
제조예11 SC-I+CM-I+SN-I+TK-I 1:1:1:1 90
1:1:1:3 91
1:1:3:1 88
1:3:1:1 93
3:1:1:1 92
1:1:3:3 94
1:3:1:3 91
3:1:1:3 87
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3:1:3:3 90
1:3:3:3 91
1:1:1:5 61
1:1:5:1 59
1:5:1:1 68
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1:1:5:5 60
1:5:1:5 63
5:1:1:5 62
1:5:5:1 64
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5:5:1:1 60
5:5:5:1 67
5:5:1:5 61
5:1:5:5 63
1:5:5:5 64
혼합 생약 추출물(물 추출물의 부탄올 분획물)의 무스카린 M3 수용체 결합 저해율
　 혼합 생약 추출물 M3 receptor binding inhibition (%)
제조예1 SC-W-B+CM-W-B 1:20 58
1:15 54
1:10 84
1:5 86
1:3 88
1:1 89
3:1 87
5:1 86
10:1 85
15:1 56
20:1 54
제조예2 SC-W-B+SN-W-B 1:20 52
1:15 50
1:10 77
1:5 79
1:3 80
1:1 84
3:1 82
5:1 83
10:1 79
15:1 57
20:1 53
제조예3 SC-W-B+TK-W-B 1:20 49
1:15 54
1:10 78
1:5 81
1:3 86
1:1 87
3:1 82
5:1 80
10:1 78
15:1 55
20:1 51
제조예4 CM-W-B+SN-W-B 1:20 54
1:15 59
1:10 80
1:5 84
1:3 87
1:1 87
3:1 84
5:1 88
10:1 81
15:1 52
20:1 59
제조예5 CM-W-B+TK-W-B 1:20 49
1:15 53
1:10 77
1:5 81
1:3 82
1:1 85
3:1 83
5:1 83
10:1 79
15:1 55
20:1 59
제조예6 SN-W-B+TK-W-B 1:20 49
1:15 54
1:10 76
1:5 84
1:3 80
1:1 87
3:1 81
5:1 80
10:1 77
15:1 51
20:1 49
제조예7 SC-W-B+CM-W-B+SN-W-B 1:1:1 84
1:1:3 88
1:3:1 85
3:1:1 89
3:3:1 90
1:3:3 88
3:1:3 85
1:1:5 58
1:5:1 60
5:1:1 64
5:5:1 67
1:5:5 61
5:1:5 62
제조예8 SC-W-B+CM-W-B+TK-W-B 1:1:1 86
1:1:3 91
1:3:1 88
3:1:1 85
3:3:1 93
1:3:3 86
3:1:3 81
1:1:5 50
1:5:1 57
5:1:1 53
5:5:1 62
1:5:5 53
5:1:5 59
제조예9 SC-W-B+SN-W-B+TK-W-B 1:1:1 82
1:1:3 85
1:3:1 84
3:1:1 87
3:3:1 89
1:3:3 84
3:1:3 80
1:1:5 51
1:5:1 49
5:1:1 57
5:5:1 50
1:5:5 58
5:1:5 54
제조예10 CM-W-B+SN-W-B+TK-W-B 1:1:1 78
1:1:3 85
1:3:1 84
3:1:1 87
3:3:1 91
1:3:3 90
3:1:3 84
1:1:5 49
1:5:1 54
5:1:1 57
5:5:1 59
1:5:5 53
5:1:5 51
제조예11 SC-W-B+CM-W-B+SN-W-B+TK-W-B 1:1:1:1 85
1:1:1:3 88
1:1:3:1 92
1:3:1:1 91
3:1:1:1 83
1:1:3:3 88
1:3:1:3 90
3:1:1:3 97
1:3:3:1 94
3:1:3:1 84
3:3:1:1 89
3:3:3:1 85
3:3:1:3 87
3:1:3:3 92
1:3:3:3 85
1:1:1:5 49
1:1:5:1 53
1:5:1:1 51
5:1:1:1 55
1:1:5:5 51
1:5:1:5 58
5:1:1:5 59
1:5:5:1 57
5:1:5:1 52
5:5:1:1 61
5:5:5:1 62
5:5:1:5 58
5:1:5:5 51
1:5:5:5 53
혼합 생약 추출물(에탄올 추출물의 부탄올 분획물)의 무스카린 M3 수용체 결합 저해율
　 혼합 생약 추출물 M3 receptor binding inhibition (%)
제조예1 SC-E-B+CM-E-B 1:20 59
1:15 61
1:10 85
1:5 86
1:3 91
1:1 92
3:1 92
5:1 87
10:1 83
15:1 60
20:1 58
제조예2 SC-E-B+SN-E-B 1:20 54
1:15 61
1:10 83
1:5 85
1:3 89
1:1 88
3:1 93
5:1 84
10:1 80
15:1 58
20:1 64
제조예3 SC-E-B+TK-E-B 1:20 51
1:15 59
1:10 80
1:5 83
1:3 88
1:1 89
3:1 85
5:1 84
10:1 81
15:1 53
20:1 52
제조예4 CM-E-B+SN-E-B 1:20 54
1:15 60
1:10 79
1:5 80
1:3 83
1:1 84
3:1 85
5:1 82
10:1 79
15:1 58
20:1 54
제조예5 CM-E-B+TK-E-B 1:20 51
1:15 56
1:10 81
1:5 85
1:3 88
1:1 89
3:1 84
5:1 83
10:1 86
15:1 58
20:1 61
제조예6 SN-E-B+TK-E-B 1:20 52
1:15 55
1:10 75
1:5 77
1:3 80
1:1 83
3:1 82
5:1 79
10:1 76
15:1 50
20:1 53
제조예7 SC-E-B+CM-E-B+SN-E-B 1:1:1 88
1:1:3 86
1:3:1 91
3:1:1 90
3:3:1 89
1:3:3 94
3:1:3 90
1:1:5 62
1:5:1 61
5:1:1 59
5:5:1 53
1:5:5 65
5:1:5 60
제조예8 SC-E-B+CM-E-B+TK-E-B 1:1:1 88
1:1:3 85
1:3:1 87
3:1:1 84
3:3:1 91
1:3:3 89
3:1:3 87
1:1:5 61
1:5:1 58
5:1:1 49
5:5:1 51
1:5:5 59
5:1:5 53
제조예9 SC-E-B+SN-E-B+TK-E-B 1:1:1 79
1:1:3 78
1:3:1 75
3:1:1 79
3:3:1 82
1:3:3 83
3:1:3 80
1:1:5 88
1:5:1 91
5:1:1 61
5:5:1 55
1:5:5 57
5:1:5 60
제조예10 CM-E-B+SN-E-B+TK-E-B 1:1:1 84
1:1:3 84
1:3:1 85
3:1:1 81
3:3:1 90
1:3:3 86
3:1:3 89
1:1:5 58
1:5:1 51
5:1:1 57
5:5:1 58
1:5:5 53
5:1:5 55
제조예11 SC-E-B+CM-E-B+SN-E-B+TK-E-B 1:1:1:1 87
1:1:1:3 91
1:1:3:1 92
1:3:1:1 90
3:1:1:1 86
1:1:3:3 92
1:3:1:3 95
3:1:1:3 92
1:3:3:1 90
3:1:3:1 93
3:3:1:1 89
3:3:3:1 88
3:3:1:3 94
3:1:3:3 92
1:3:3:3 87
1:1:1:5 67
1:1:5:1 64
1:5:1:1 71
5:1:1:1 70
1:1:5:5 61
1:5:1:5 64
5:1:1:5 66
1:5:5:1 61
5:1:5:1 68
5:5:1:1 62
5:5:5:1 65
5:5:1:5 66
5:1:5:5 59
1:5:5:5 64
혼합 생약 추출물(이소프로판올 추출물의 부탄올 분획물)의 무스카린 M3 수용체 결합 저해율
　 혼합 생약 추출물 M3 receptor binding inhibition (%)
제조예1 SC-I-B+CM-I-B 1:20 62
1:15 61
1:10 89
1:5 85
1:3 90
1:1 87
3:1 86
5:1 88
10:1 83
15:1 61
20:1 65
제조예2 SC-I-B+SN-I-B 1:20 58
1:15 50
1:10 79
1:5 81
1:3 85
1:1 87
3:1 85
5:1 82
10:1 80
15:1 59
20:1 61
제조예3 SC-I-B+TK-I-B 1:20 54
1:15 57
1:10 84
1:5 80
1:3 86
1:1 87
3:1 84
5:1 83
10:1 80
15:1 54
20:1 58
제조예4 CM-I-B+SN-I-B 1:20 57
1:15 62
1:10 82
1:5 82
1:3 85
1:1 88
3:1 84
5:1 82
10:1 83
15:1 64
20:1 67
제조예5 CM-I-B+TK-I-B 1:20 54
1:15 56
1:10 80
1:5 83
1:3 87
1:1 88
3:1 84
5:1 86
10:1 83
15:1 62
20:1 66
제조예6 SN-I-B+TK-I-B 1:20 49
1:15 52
1:10 79
1:5 80
1:3 82
1:1 80
3:1 77
5:1 75
10:1 77
15:1 54
20:1 58
제조예7 SC-I-B+CM-I-B+SN-I-B 1:1:1 88
1:1:3 89
1:3:1 93
3:1:1 95
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1:3:3 93
3:1:3 87
1:1:5 56
1:5:1 61
5:1:1 62
5:5:1 64
1:5:5 59
5:1:5 61
제조예8 SC-I-B+CM-I-B+TK-I-B 1:1:1 90
1:1:3 92
1:3:1 89
3:1:1 87
3:3:1 90
1:3:3 92
3:1:3 88
1:1:5 64
1:5:1 66
5:1:1 61
5:5:1 58
1:5:5 57
5:1:5 64
제조예9 SC-I-B+SN-I-B+TK-I-B 1:1:1 83
1:1:3 80
1:3:1 87
3:1:1 85
3:3:1 88
1:3:3 82
3:1:3 80
1:1:5 61
1:5:1 58
5:1:1 57
5:5:1 60
1:5:5 51
5:1:5 50
제조예10 CM-I-B+SN-I-B+TK-I-B 1:1:1 83
1:1:3 85
1:3:1 82
3:1:1 79
3:3:1 81
1:3:3 83
3:1:3 85
1:1:5 57
1:5:1 60
5:1:1 64
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1:5:5 59
5:1:5 61
제조예11 SC-I-B+CM-I-B+SN-I-B+TK-I-B 1:1:1:1 92
1:1:1:3 87
1:1:3:1 89
1:3:1:1 93
3:1:1:1 94
1:1:3:3 90
1:3:1:3 89
3:1:1:3 88
1:3:3:1 89
3:1:3:1 91
3:3:1:1 95
3:3:3:1 93
3:3:1:3 91
3:1:3:3 89
1:3:3:3 88
1:1:1:5 59
1:1:5:1 63
1:5:1:1 65
5:1:1:1 67
1:1:5:5 60
1:5:1:5 68
5:1:1:5 65
1:5:5:1 63
5:1:5:1 61
5:5:1:1 58
5:5:5:1 60
5:5:1:5 64
5:1:5:5 62
1:5:5:5 61
[ 실시예 4: 정제의 제조]
상기 제조예 1 내지 11에서 제조된 혼합 생약 추출물 200 mg을 각각 경질 무수규산 10 mg, 스테아린산 마그네슘2 mg, 미세결정 셀룰로오즈 50 mg, 전분 글리콜산 나트륨 25 mg, 옥수수 전분 113 mg 및 무수에탄올 적량과 혼합하여 통상의 방법으로 정제로 타정하였다.
[실시예 5: 건강 식품의 제조]
혼합 생약 추출물(제조예 1 내지 11 중 어느 하나) 1000 mg
비타민 A 아세테이트 70 μg
비타민 E　　 1.0 mg
비타민 B1　　　　　 0.13 mg
비타민 B2　　　　　　　　　　　　　　　　 0.15 mg
비타민 B6　　　　　　　　　　　　　　　 0.5 mg
비타민 B12　　　　　　　　　　　　　　　 0.2 μg
비타민 C　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 10 mg
비오틴　　　　　　　　　　　　　　　　　 10 μg
니코틴산아미드　　　　　　　　　　　　　 1.7 mg
엽산　　　　　　　　　　　　　　　　　 50 μg
판토텐산 칼슘　　　　　　　　　　　　 0.5 mg
무기질 혼합물　　　　　　　　　　　　　　　　 적량
황산 제1철　　　　　　　　　　　　　　　 1.75 mg
산화아연　　　　　　　　　　　　　　　 0.82 mg
탄산마그네슘　　　　　　　　　　　　　　 25.3 mg
제1 인산칼륨　　　　　　　　　　　　　　 15 mg
제2 인산칼슘　　　　　　　　　　　　　　 55 mg
구연산칼륨　　　　　　　　　　　　　　　 90 mg
탄산칼슘　　　　　　　　　　　　　　　　 100 mg
염화마그네슘　　　　　　　　　　　　　　 24.8 mg
상기의 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비는 비교적 건강식품에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 건강식품 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 과립을 제조하고, 통상의 방법에 따라 건강식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.
[실시예 6: 건강 음료의 제조]
혼합 생약 추출물(제조예 1 내지 11 중 어느 하나) 1000 mg
구연산　　　　　　　　　　　　　　　 1000 mg
올리고당　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 10 g
매실농축액　　　　　　　　　　　　　　　　　　 2 g
타우린　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 1 g
정제수를 가하여　　　　　　　　　 전체 900 ml
통상의 건강음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1시간 동안 85℃에서 교반 가열 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2L 용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음, 본 발명의 건강음료 조성물 제조에 사용하였다다.
상기 조성비는 비교적 기호 음료에 적합한 성분을 예시한 것에 불과하며, 수요계층, 수요국가, 사용 용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합비를 임의로 변경 실시하여도 무방하다.

Claims (46)

  1. 삼백초, 백굴채, 용규, 및 괄루인으로 이루어진 군에서 선택된 2종 이상의 혼합 생약 추출물을 포함하고,
    상기 혼합 생약 추출물은 삼백초 추출물, 백굴채 추출물, 용규 추출물, 및 괄루인 추출물로 이루어진 군에서 선택된 2종 이상의 생약추출물의 혼합물, 또는 삼백초, 백굴채, 용규, 및 괄루인으로 이루어진 군에서 선택된 2종 이상의 혼합 생약의 추출물인,
    호흡기 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 삼백초 추출물, 백굴채 추출물, 용규 추출물, 및 괄루인 추출물, 또는 혼합 생약의 추출물은 물, 탄소수 1 내지 4개의 직쇄 또는 분지형 알코올로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 용매를 가하여 얻어진 조추출물 또는 상기 조추출물에 탄소수 1 내지 6 개의 직쇄 또는 분쇄형 알코올 또는 헥산, 디클로로메탄, 클로로포름, 및 에틸아세테이트로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 비극성 용매를 가하여 얻어진 용매 가용 추출물인, 약학적 조성물.
  3. 제1항에 있어서, 상기 혼합 생약 추출물은 삼백초 추출물, 백굴채 추출물, 용규 추출물, 및 괄루인 추출물로 이루어진 군에서 선택된 2종이 혼합된 생약 추출물의 혼합물 또는 삼백초, 백굴채, 용규, 및 괄루인으로 이루어진 군에서 선택된 2종이 혼합된 혼합 생약의 추출물이고, 상기 2종의 혼합비율은 중량 기준으로 1:10 내지 10:1인, 약학적 조성물.
  4. 제3항에 있어서, 상기 2종의 혼합 비율은 중량 기준으로 1:5 내지 5:1인, 약학적 조성물.
  5. 제4항에 있어서, 상기 2종의 혼합 비율은 중량 기준으로 1:3 내지 3:1인, 약학적 조성물.
  6. 제1항에 있어서, 상기 혼합 생약 추출물은 삼백초 추출물, 백굴채 추출물, 용규 추출물, 및 괄루인 추출물로 이루어진 군에서 선택된 3종이 혼합된 생약 추출물의 혼합물 또는 삼백초, 백굴채, 용규, 및 괄루인으로 이루어진 군에서 선택된 3종이 혼합된 혼합 생약의 추출물이고, 상기 3종의 혼합 비율은 중량 기준으로 1 내지 3:1 내지 3:1 내지 3인, 약학적 조성물.
  7. 제1항에 있어서, 상기 혼합 생약 추출물은 삼백초 추출물, 백굴채 추출물, 용규 추출물, 및 괄루인 추출물이 혼합된 생약 추출물의 혼합물 또는 삼백초, 백굴채, 용규, 및 괄루인이 혼합된 혼합 생약의 추출물이고, 상기 4종의 혼합 비율은 중량 기준으로 1 내지 3:1 내지 3:1 내지 3:1 내지 3인, 약학적 조성물.
  8. 제1항에 있어서, 상기 혼합 생약 추출물은 삼백초 추출물 및 백굴채 추출물의 혼합물 또는 삼백초 및 백굴채를 포함하는 혼합 생약의 추출물이고, 상기 삼백초 추출물과 백굴채 추출물의 혼합 비율 또는 삼백초와 백굴채의 혼합 비율은 중량 기준으로 1:10 내지 10:1인, 약학적 조성물.
  9. 제8에 있어서, 상기 삼백초 추출물과 백굴채 추출물의 혼합 비율 또는 삼백초와 백굴채의 혼합 비율은 중량 기준으로 1:5 내지 5:1인, 약학적 조성물.
  10. 제9에 있어서, 상기 삼백초 추출물과 백굴채 추출물의 혼합 비율 또는 삼백초와 백굴채의 혼합 비율은 중량 기준으로 1:3 내지 3:1인, 약학적 조성물.
  11. 제8항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 혼합 생약 추출출물은 용규 추출물, 괄루인 추출물, 용규 및 괄루인의 혼합 생약의 추출물, 또는 용규 추출물 및 괄루인 추출물의 혼합물을 추가로 포함하는 것인, 약학적 조성물.
  12. 제11항에 있어서, 상기 혼합 생약 추출물은 삼백초 추출물, 백굴채 추출물, 및 용규 추출물이 혼합된 생약 추출물의 혼합물 또는 삼백초, 백굴채, 및 용규가 혼합된 혼합 생약의 추출물이고, 삼백초 추출물, 백굴채 추출물, 및 용규 추출물의 혼합 비율 또는 삼백초, 백굴채, 및 용규의 혼합 비율이 1 내지 3:1 내지 3:1 내지 3인, 약학적 조성물.
  13. 제11항에 있어서, 상기 혼합 생약 추출물은 삼백초 추출물, 백굴채 추출물, 및 괄루인 추출물이 혼합된 생약 추출물의 혼합물 또는 삼백초, 백굴채, 및 괄루인이 혼합된 혼합 생약의 추출물이고, 삼백초 추출물, 백굴채 추출물, 및 괄루인 추출물의 혼합 비율 또는 삼백초, 백굴채, 및 괄루인의 혼합 비율이 1 내지 3:1 내지 3:1 내지 3인, 약학적 조성물.
  14. 제11항에 있어서, 상기 혼합 생약 추출물은 삼백초 추출물, 백굴채 추출물, 용규 추출물, 및 괄루인 추출물이 혼합된 생약 추출물의 혼합물 또는 삼백초, 백굴채, 용규, 및 괄루인이 혼합된 혼합 생약의 추출물이고, 삼백초 추출물, 백굴채 추출물, 용규 추출물, 및 괄루인 추출물의 혼합 비율 또는 삼백초, 백굴채, 용규, 및 괄루인의 혼합 비율이 1 내지 3:1 내지 3:1 내지 3:1 내지 3인, 약학적 조성물.
  15. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 호흡기 질환은 천식, 알레르기성 비염, 기관지염, 만성 폐쇄성 폐질환인, 감기, 또는 기침인 약학적 조성물.
  16. 삼백초, 백굴채, 용규, 및 괄루인으로 이루어진 군에서 선택된 2종 이상의 혼합 생약 추출물을 포함하고,
    상기 혼합 생약 추출물은 삼백초 추출물, 백굴채 추출물, 용규 추출물, 및 괄루인 추출물로 이루어진 군에서 선택된 2종 이상의 생약 추출물의 혼합물, 또는 삼백초, 백굴채, 용규, 및 괄루인으로 이루어진 군에서 선택된 2종 이상의 혼합 생약의 추출물인,
    호흡기 질환의 예방 또는 개선용 건강 기능성 식품.
  17. 삼백초, 백굴채, 용규, 및 괄루인으로 이루어진 군에서 선택된 2종 이상의 혼합 생약 추출물을 호흡기 질환의 예방 또는 치료를 필요로하는 대상에게 투여하는 단계를 포함하고,
    상기 혼합 생약 추출물은 삼백초 추출물, 백굴채 추출물, 용규 추출물, 및 괄루인 추출물로 이루어진 군에서 선택된 2종 이상의 생약추출물의 혼합물, 또는 삼백초, 백굴채, 용규, 및 괄루인으로 이루어진 군에서 선택된 2종 이상의 혼합 생약의 추출물인,
    호흡기 질환의 예방 또는 치료 방법.
  18. 제17항에 있어서, 상기 삼백초 추출물, 백굴채 추출물, 용규 추출물, 및 괄루인 추출물, 또는 혼합 생약의 추출물은 물, 탄소수 1 내지 4개의 직쇄 또는 분지형 알코올로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 용매를 가하여 얻어진 조추출물 또는 상기 조추출물에 탄소수 1 내지 6 개의 직쇄 또는 분쇄형 알코올 또는 헥산, 디클로로메탄, 클로로포름, 및 에틸아세테이트로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 비극성 용매를 가하여 얻어진 용매 가용 추출물인, 방법.
  19. 제17항에 있어서, 상기 혼합 생약 추출물은 삼백초 추출물, 백굴채 추출물, 용규 추출물, 및 괄루인 추출물로 이루어진 군에서 선택된 2종이 혼합된 생약 추출물의 혼합물 또는 삼백초, 백굴채, 용규, 및 괄루인으로 이루어진 군에서 선택된 2종이 혼합된 혼합 생약의 추출물이고, 상기 2종의 혼합비율은 중량 기준으로 1:10 내지 10:1인, 방법.
  20. 제19항에 있어서, 상기 2종의 혼합 비율은 중량 기준으로 1:5 내지 5:1인, 방법.
  21. 제20항에 있어서, 상기 2종의 혼합 비율은 중량 기준으로 1:3 내지 3:1인, 방법.
  22. 제17항에 있어서, 상기 혼합 생약 추출물은 삼백초 추출물, 백굴채 추출물, 용규 추출물, 및 괄루인 추출물로 이루어진 군에서 선택된 3종이 혼합된 생약 추출물의 혼합물 또는 삼백초, 백굴채, 용규, 및 괄루인으로 이루어진 군에서 선택된 3종이 혼합된 혼합 생약의 추출물이고, 상기 3종의 혼합 비율은 중량 기준으로 1 내지 3:1 내지 3:1 내지 3인, 방법.
  23. 제17항에 있어서, 상기 혼합 생약 추출물은 삼백초 추출물, 백굴채 추출물, 용규 추출물, 및 괄루인 추출물이 혼합된 생약 추출물의 혼합물 또는 삼백초, 백굴채, 용규, 및 괄루인이 혼합된 혼합 생약의 추출물이고, 상기 4종의 혼합 비율은 중량 기준으로 1 내지 3:1 내지 3:1 내지 3:1 내지 3인, 방법.
  24. 제17항에 있어서, 상기 혼합 생약 추출물은 삼백초 추출물 및 백굴채 추출물의 혼합물 또는 삼백초 및 백굴채를 포함하는 혼합 생약의 추출물이고, 상기 삼백초 추출물과 백굴채 추출물의 혼합 비율 또는 삼백초와 백굴채의 혼합 비율은 중량 기준으로 1:10 내지 10:1인, 방법.
  25. 제24에 있어서, 상기 삼백초 추출물과 백굴채 추출물의 혼합 비율 또는 삼백초와 백굴채의 혼합 비율은 중량 기준으로 1:5 내지 5:1인, 방법.
  26. 제25에 있어서, 상기 삼백초 추출물과 백굴채 추출물의 혼합 비율 또는 삼백초와 백굴채의 혼합 비율은 중량 기준으로 1:3 내지 3:1인, 방법.
  27. 제24항에 있어서, 상기 혼합 생약 추출출물은 용규 추출물, 괄루인 추출물, 용규 및 괄루인의 혼합 생약의 추출물, 또는 용규 추출물 및 괄루인 추출물의 혼합물을 추가로 포함하는 것인, 방법.
  28. 제27항에 있어서, 상기 혼합 생약 추출물은 삼백초 추출물, 백굴채 추출물, 및 용규 추출물이 혼합된 생약 추출물의 혼합물 또는 삼백초, 백굴채, 및 용규가 혼합된 혼합 생약의 추출물이고, 삼백초 추출물, 백굴채 추출물, 및 용규 추출물의 혼합 비율 또는 삼백초, 백굴채, 및 용규의 혼합 비율이 1 내지 3:1 내지 3:1 내지 3인, 방법.
  29. 제27항에 있어서, 상기 혼합 생약 추출물은 삼백초 추출물, 백굴채 추출물, 및 괄루인 추출물이 혼합된 생약 추출물의 혼합물 또는 삼백초, 백굴채, 및 괄루인이 혼합된 혼합 생약의 추출물이고, 삼백초 추출물, 백굴채 추출물, 및 괄루인 추출물의 혼합 비율 또는 삼백초, 백굴채, 및 괄루인의 혼합 비율이 1 내지 3:1 내지 3:1 내지 3인, 방법.
  30. 제27항에 있어서, 상기 혼합 생약 추출물은 삼백초 추출물, 백굴채 추출물, 용규 추출물, 및 괄루인 추출물이 혼합된 생약 추출물의 혼합물 또는 삼백초, 백굴채, 용규, 및 괄루인이 혼합된 혼합 생약의 추출물이고, 삼백초 추출물, 백굴채 추출물, 용규 추출물, 및 괄루인 추출물의 혼합 비율 또는 삼백초, 백굴채, 용규, 및 괄루인의 혼합 비율이 1 내지 3:1 내지 3:1 내지 3:1 내지 3인, 방법.
  31. 제17항에 있어서, 상기 호흡기 질환은 천식, 알레르기성 비염, 기관지염, 만성 폐쇄성 폐질환인, 감기, 또는 기침인, 방법.
  32. 호흡기 질환의 예방 또는 치료에 사용하기 위한, 삼백초, 백굴채, 용규, 및 괄루인으로 이루어진 군에서 선택된 2종 이상의 혼합 생약 추출물로서,
    상기 혼합 생약 추출물은 삼백초 추출물, 백굴채 추출물, 용규 추출물, 및 괄루인 추출물로 이루어진 군에서 선택된 2종 이상의 생약추출물의 혼합물, 또는 삼백초, 백굴채, 용규, 및 괄루인으로 이루어진 군에서 선택된 2종 이상의 혼합 생약의 추출물인,
    혼합 생약 추출물.
  33. 제32항에 있어서, 상기 삼백초 추출물, 백굴채 추출물, 용규 추출물, 및 괄루인 추출물, 또는 혼합 생약의 추출물은 물, 탄소수 1 내지 4개의 직쇄 또는 분지형 알코올로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 용매를 가하여 얻어진 조추출물 또는 상기 조추출물에 탄소수 1 내지 6 개의 직쇄 또는 분쇄형 알코올 또는 헥산, 디클로로메탄, 클로로포름, 및 에틸아세테이트로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 비극성 용매를 가하여 얻어진 용매 가용 추출물인, 호흡기 질환의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 혼합 생약 추출물.
  34. 제32항 또는 제33항에 있어서, 상기 혼합 생약 추출물은 삼백초 추출물, 백굴채 추출물, 용규 추출물, 및 괄루인 추출물로 이루어진 군에서 선택된 2종이 혼합된 생약 추출물의 혼합물 또는 삼백초, 백굴채, 용규, 및 괄루인으로 이루어진 군에서 선택된 2종이 혼합된 혼합 생약의 추출물이고, 상기 2종의 혼합비율은 중량 기준으로 1:10 내지 10:1인, 호흡기 질환의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 혼합 생약 추출물.
  35. 제34항에 있어서, 상기 2종의 혼합 비율은 중량 기준으로 1:5 내지 5:1인, 호흡기 질환의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 혼합 생약 추출물.
  36. 제35항에 있어서, 상기 2종의 혼합 비율은 중량 기준으로 1:3 내지 3:1인, 호흡기 질환의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 혼합 생약 추출물.
  37. 제32항 또는 제33항에 있어서, 상기 혼합 생약 추출물은 삼백초 추출물, 백굴채 추출물, 용규 추출물, 및 괄루인 추출물로 이루어진 군에서 선택된 3종이 혼합된 생약 추출물의 혼합물 또는 삼백초, 백굴채, 용규, 및 괄루인으로 이루어진 군에서 선택된 3종이 혼합된 혼합 생약의 추출물이고, 상기 3종의 혼합 비율은 중량 기준으로 1 내지 3:1 내지 3:1 내지 3인, 호흡기 질환의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 혼합 생약 추출물.
  38. 제32항 또는 제33항에 있어서, 상기 혼합 생약 추출물은 삼백초 추출물, 백굴채 추출물, 용규 추출물, 및 괄루인 추출물이 혼합된 생약 추출물의 혼합물 또는 삼백초, 백굴채, 용규, 및 괄루인이 혼합된 혼합 생약의 추출물이고, 상기 4종의 혼합 비율은 중량 기준으로 1 내지 3:1 내지 3:1 내지 3:1 내지 3인, 호흡기 질환의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 혼합 생약 추출물.
  39. 제32항 또는 제33항에 있어서, 상기 혼합 생약 추출물은 삼백초 추출물 및 백굴채 추출물의 혼합물 또는 삼백초 및 백굴채를 포함하는 혼합 생약의 추출물이고, 상기 삼백초 추출물과 백굴채 추출물의 혼합 비율 또는 삼백초와 백굴채의 혼합 비율은 중량 기준으로 1:10 내지 10:1인, 호흡기 질환의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 혼합 생약 추출물.
  40. 제39에 있어서, 상기 삼백초 추출물과 백굴채 추출물의 혼합 비율 또는 삼백초와 백굴채의 혼합 비율은 중량 기준으로 1:5 내지 5:1인, 호흡기 질환의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 혼합 생약 추출물.
  41. 제40에 있어서, 상기 삼백초 추출물과 백굴채 추출물의 혼합 비율 또는 삼백초와 백굴채의 혼합 비율은 중량 기준으로 1:3 내지 3:1인, 호흡기 질환의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 혼합 생약 추출물.
  42. 제39항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 혼합 생약 추출출물은 용규 추출물, 괄루인 추출물, 용규 및 괄루인의 혼합 생약의 추출물, 또는 용규 추출물 및 괄루인 추출물의 혼합물을 추가로 포함하는 것인, 호흡기 질환의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 혼합 생약 추출물.
  43. 제42항에 있어서, 상기 혼합 생약 추출물은 삼백초 추출물, 백굴채 추출물, 및 용규 추출물이 혼합된 생약 추출물의 혼합물 또는 삼백초, 백굴채, 및 용규가 혼합된 혼합 생약의 추출물이고, 삼백초 추출물, 백굴채 추출물, 및 용규 추출물의 혼합 비율 또는 삼백초, 백굴채, 및 용규의 혼합 비율이 1 내지 3:1 내지 3:1 내지 3인, 호흡기 질환의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 혼합 생약 추출물.
  44. 제42항에 있어서, 상기 혼합 생약 추출물은 삼백초 추출물, 백굴채 추출물, 및 괄루인 추출물이 혼합된 생약 추출물의 혼합물 또는 삼백초, 백굴채, 및 괄루인이 혼합된 혼합 생약의 추출물이고, 삼백초 추출물, 백굴채 추출물, 및 괄루인 추출물의 혼합 비율 또는 삼백초, 백굴채, 및 괄루인의 혼합 비율이 1 내지 3:1 내지 3:1 내지 3인, 호흡기 질환의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 혼합 생약 추출물.
  45. 제42항에 있어서, 상기 혼합 생약 추출물은 삼백초 추출물, 백굴채 추출물, 용규 추출물, 및 괄루인 추출물이 혼합된 생약 추출물의 혼합물 또는 삼백초, 백굴채, 용규, 및 괄루인이 혼합된 혼합 생약의 추출물이고, 삼백초 추출물, 백굴채 추출물, 용규 추출물, 및 괄루인 추출물의 혼합 비율 또는 삼백초, 백굴채, 용규, 및 괄루인의 혼합 비율이 1 내지 3:1 내지 3:1 내지 3:1 내지 3인, 호흡기 질환의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 혼합 생약 추출물.
  46. 제32항 내지 제45항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 호흡기 질환은 천식, 알레르기성 비염, 기관지염, 만성 폐쇄성 폐질환인, 감기, 또는 기침인, 호흡기 질환의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 혼합 생약 추출물.
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