WO2020196065A1 - ローヤルゼリー酵素分解物の製造方法及びローヤルゼリー酵素分解物 - Google Patents

ローヤルゼリー酵素分解物の製造方法及びローヤルゼリー酵素分解物 Download PDF

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peptidase
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enzymatic decomposition
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颯 板谷
礼訓 八巻
雅之 山家
央子 谷
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株式会社山田養蜂場本社
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    • C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
    • C12P21/06—Preparation of peptides or proteins produced by the hydrolysis of a peptide bond, e.g. hydrolysate products

Definitions

  • the present invention relates to a method for producing a royal jelly enzymatic degradation product and a royal jelly enzymatic degradation product. Specifically, the present invention relates to a method for producing a royal jelly enzymatic decomposition product in which allergenicity is reduced and browning is suppressed. The present invention also relates to a method for reducing allergenicity of royal jelly enzymatic degradation products and suppressing browning. Furthermore, the present invention relates to royal jelly enzymatic degradation products that may have antioxidant activity.
  • Royal jelly is a useful natural material, but it is known that it may cause allergic reactions. Therefore, various methods for reducing the amount of allergen by decomposing or reducing the molecular weight of a protein that can be an allergen have been studied.
  • royal jelly that has been reduced to allergen by decomposing proteins with peptidase is more susceptible to temperature and humidity than royal jelly that has not been enzymatically treated, and is subject to harsh conditions such as heating and humidification conditions. Coloring underneath progresses browning. Such coloring is considered to be due to the Maillard reaction that occurs between the amide group of the peptide or amino acid fragmented by enzymatic decomposition and the anomeric carbon of the reducing sugar.
  • Patent Documents 2 to 6 Various methods for suppressing the coloring of such enzyme-treated royal jelly have been reported (Patent Documents 2 to 6).
  • Patent Document 2 reports that the browning caused by the enzymatic treatment is significantly suppressed by performing the enzymatic treatment under a high pressure condition of 40 to 600 Mpa.
  • Patent Document 3 reports that royal jelly and at least one selected from dextrins having a starch and dextrose equivalent of 18 or less can be dissolved in a solvent and then freeze-dried to prevent discoloration of the appearance over time. ing.
  • Patent Documents 4 and 5 report that royal jelly is subjected to yeast fermentation treatment to suppress discoloration of the appearance of royal jelly over time.
  • Patent Document 6 it is reported that the yellowness is less than that by the conventional enzymatic method by enzymatically decomposing using an acidic protease having an optimum pH near the pH of an aqueous suspension of royal jelly. ..
  • Patent Document 2 in order to suppress browning, high pressure conditions (Patent Document 2), addition of starch and dextrin (Patent Document 3), and fermentation treatment with yeast (Patent Documents 4 and 5). ) are required respectively.
  • Patent Document 1 when royal jelly is enzymatically treated with an acidic protease as described in Patent Document 6, the allergenicity is increased.
  • the protein contained in royal jelly is decomposed into peptides or free amino acids by enzymatic decomposition, and although the composition of the peptide obtained by the enzyme used is expected to be different (Patent Documents 7 and 8), it has been produced so far. The details of the composition of the peptide and its functionality have not been clarified.
  • Patent Documents 2 to 5 do not describe that browning can be suppressed during and after the production of royal jelly enzymatic decomposition products.
  • the method described in Patent Document 6 cannot reduce allergenicity because an acidic protease is used.
  • the present invention comprises a method for producing a royal jelly enzymatic degradation product, which reduces allergenicity and suppresses browning during and after production, and reduces allergenicity of royal jelly enzymatic degradation products and suppresses browning during and after production.
  • the purpose is to provide a method.
  • royal jelly has long been known to be effective for indefinite complaints such as hypertension, diabetes, menopausal symptoms, and pain, but there are many unclear points about its bioactive substances.
  • a royal jelly enzymatic degradation product containing a peptide having at least antioxidant activity is provided.
  • the present inventors can reduce allergenicity by treating with peptidase having endopeptidase action and exopeptidase action, and brown at the time of manufacture and after manufacture. We obtained the finding that changes can be suppressed.
  • the present invention has been completed by further studying based on these findings, and the following method for producing a royal jelly enzymatic degradation product, reducing allergenicity of the royal jelly enzymatic degradation product, and suppressing browning during and after production. It provides a method.
  • (I) Method for producing royal jelly enzymatic degradation product (I-1) A royal jelly enzymatic degradation product characterized by treating royal jelly with a peptidase having an endopeptidase action and an exopeptidase action, which reduces allergenicity and suppresses browning during and after production. Manufacturing method.
  • (I-3) The method according to (I-1) or (I-2), wherein the optimum temperature of the peptidase is 50 ° C. or higher.
  • II Method for reducing allergenicity of royal jelly enzymatic degradation products and suppressing browning during and after production
  • II-2 The method according to (II-1), wherein the peptidase is an Aspergillus oryzae-produced peptidase.
  • II-3 The method according to (II-1) or (II-2), wherein the optimum temperature of the peptidase is 50 ° C. or higher.
  • (III) Royal jelly enzymatic degradation product (III-1) A royal jelly enzymatic degradation product produced by any of the methods (I-1) to (I-3), in which 100 mg of Tyr-Asp is added to 100 g of the dried royal jelly enzymatic degradation product. Royal jelly enzymatic degradation products including the above.
  • (III-2) A royal jelly enzymatic degradation product containing 100 mg or more of Tyr-Asp with respect to 100 g of the dried royal jelly enzymatic degradation product.
  • (III-3) Further, the royal jelly of (III-1) or (III-2) containing 40 mg or more of Val-Pro and 0.5 mg or more of Met-Pro with respect to 100 g of the dried product of the royal jelly enzymatic decomposition product. Enzymatic breakdown product.
  • (III-4) Further, one or more selected from the group consisting of Pro-Ile and / or Pro-Ile-Leu, Pro-Val, Ile-Pro and / or Ile-Leu-Pro, and Pro-Met.
  • the present invention it is possible to provide a method for producing a royal jelly enzymatic decomposition product, which suppresses browning during and after production caused by peptidase decomposition, while realizing improvement in safety by reducing allergenicity. .. Further, according to the present invention, it is possible to provide a method for reducing allergenicity of a royal jelly enzymatic decomposition product and suppressing browning during and after production. Furthermore, according to the present invention, it is possible to provide a royal jelly enzymatic decomposition product having at least antioxidant activity.
  • the royal jelly enzymatic degradation products of the present invention may also be effective against diabetes and hypertension.
  • the method for producing a royal jelly enzymatic decomposition product of the present invention is a method for producing a royal jelly enzymatic decomposition product in which allergenicity is reduced and browning during and after production is suppressed.
  • the royal jelly is treated with a peptidase having an endopeptidase action and an exopeptidase action.
  • Royal jelly is a milky white jelly-like substance made by mixing the secretions secreted by the worker bees 3 to 12 days old from the parotid gland and the parotid gland.
  • the main physiologically active ingredients in royal jelly include, for example, organic acids such as 10-hydroxydecenoic acid (hereinafter referred to as "decenoic acid”) peculiar to royal jelly, proteins, lipids, sugars, vitamin Bs, and the like. Examples include vitamins such as folic acid, nicotinic acid and pantothenic acid, and various minerals.
  • As the physiological activity and pharmacological action of this royal jelly antibacterial action, immunopotentiating action, antidepressant action, antitumor action, anti-inflammatory action, blood flow increasing action and the like are known. In addition, it has been reported that side effects of anticancer agents are reduced and the effect of prolonging life in the event of radiation injury is also reported.
  • the royal jelly used in the present invention is not particularly limited, and may be, for example, raw royal jelly or a treated royal jelly product obtained by treating raw royal jelly.
  • the royal jelly treated products include royal jelly concentrates or dilutions obtained by concentrating or diluting raw royal jelly, royal jelly powder obtained by drying and pulverizing raw royal jelly, water extracts obtained by extracting royal jelly with water or hydrous ethanol, or organic solvent extracts. And so on.
  • the royal jelly processed product may be one that has been subjected to a plurality of treatments.
  • the royal jelly concentrate can be obtained, for example, by removing water from raw royal jelly.
  • the royal jelly dilution can be obtained, for example, by adding water to the raw royal jelly.
  • the royal jelly powder can be obtained by pulverizing raw royal jelly by a method known in the art such as freeze-drying and spray-drying.
  • a method known in the art such as freeze-drying and spray-drying.
  • any known method used in general food processing can be used, such as natural drying such as ventilation drying and sun drying, forced drying in which the product is dried by heating with electricity, and freeze drying. It is preferably freeze-dried.
  • the drying time is not particularly limited, and it takes about 3 days for natural drying such as ventilation and sun drying, and about 1 to 3 days at about 50 ° C for forced drying by heating with electricity. Can be mentioned.
  • any known method such as a method of crushing using a crusher (for example, a mill such as a pin mill, a hammer mill, a ball mill, a jet mill, etc.) or a method of grinding using a stone mill is used. You may go.
  • a method of crushing using a crusher for example, a mill such as a pin mill, a hammer mill, a ball mill, a jet mill, etc.
  • a method of grinding using a stone mill is used. You may go.
  • a known method used in the art as described above can be widely adopted, and preferably, it is carried out by a method of freeze-drying and then pulverizing with a crusher (mill). it can.
  • the royal jelly organic solvent extract can be obtained by extracting raw royal jelly or royal jelly powder using an organic solvent such as ethanol, methanol, propanol or acetone as a solvent.
  • the extraction time can be appropriately set according to the form of raw royal jelly used as a raw material, the type and amount of solvent, the temperature at the time of extraction, the stirring conditions, and the like.
  • the solid content may be removed by filtration, centrifugation or the like. Further, the extracted solution may be used as it is, or the solvent may be removed from the solution and used as a concentrated solution or powder.
  • the royal jelly organic solvent extract is preferably a royal jelly ethanol extract.
  • Raw royal jelly can be obtained as a beekeeping product according to a conventional method, for example.
  • the production area of royal jelly is not limited and may be any of Japan, China, Brazil, European countries, Oceania countries, the United States and the like.
  • the peptidase used in the present invention is a peptidase having both an endopeptidase action and an exopeptidase action. According to the enzymatic treatment using such peptidase, the protein can be reduced in molecular weight by the one-step enzymatic treatment, so that the operation is simple and the physiological activity of the useful component contained in the royal jelly is lost or significantly reduced. It has the advantage that it can be prevented.
  • the peptidase used in the present invention has an EC number (enzyme number) of 3.4 group, and the origin is not particularly limited as long as the effect of the present invention is exhibited, and animals, plants, and microorganisms (bacteria, Peptidases derived from viruses, fungi (molds, yeasts, mushrooms, etc.), algae, etc.) can be widely used.
  • peptidases derived from bacteria or fungi are preferable, and peptidases produced by Aspergillus oryzae, peptidases produced by Streptomyces griseus, or peptidases produced by Aspergillus oryzae, or Aspergillus meleus (Aspergillus) Aspergillus oryzae-produced peptidases are particularly preferred.
  • Exopeptidase is classified into “aminopeptidase” and “carboxypeptidase”.
  • peptidase may give each enzyme the terms acidic, neutral, and alkaline, respectively, depending on the optimum pH, such as “acidopeptidase,” “neutral aminopeptidase,” and “alkaline endopeptidase.” It may be described in.
  • a commercially available product As a peptidase having both an endopeptidase action and an exopeptidase action, a commercially available product can be used, and as such a commercially available product, a peptidase produced by Aspergillus oryzae (trade name: Sumiteam) is preferable.
  • LP-G, Proteax, Flavorzyme, Protease A), Streptomyces griseus produced peptidase (trade name: Actinase AS), Aspergillus meleus (trade name: Aspergillus meleus) produced peptidase P) can be exemplified.
  • peptidase used in the present invention those derived from Aspergillus oryzae having an optimum temperature of 50 ° C. or higher and an optimum pH of 7 to 8 are particularly preferable, and examples of such peptidase include Proteax.
  • the peptidase used in the present invention is extracted with Tris-HCl buffer, precipitated with trichloroacetic acid, washed with acetone, and the protein obtained by trypsin digestion, desalting with a solid-phase column, and then liquid chromatography.
  • the amount of peptidase used for royal jelly varies depending on the royal jelly concentration used, enzyme titer, reaction temperature and reaction time, and cannot be unequivocally stated. In general, it is preferable to use peptidase at a ratio of 50 to 10000 action units per 1 g of protein contained in royal jelly. At this time, the peptidase may be added to the royal jelly all at once, or may be added in small portions.
  • the pH of royal jelly is selected from the range of pH 2 to 12, preferably pH 7 to 10, and more preferably pH 7 to 8.5, depending on the optimum pH of the enzyme used.
  • the acid and alkaline agents are adjusted to be in the range of pH 2 to 12, preferably pH 7 to 10, more preferably pH 7 to 8.5, depending on the type of enzyme used.
  • the pH is adjusted to the desired pH by adding a buffer.
  • hydrochloric acid, sulfuric acid, nitric acid, phosphoric acid, acetic acid and the like are used as the acid; sodium hydroxide, potassium hydroxide, potassium carbonate and the like are used as the alkaline agent; and phosphoric acid buffer and citric acid are used as the buffering agent.
  • Acid buffering agents and the like can be exemplified respectively.
  • the temperature of the peptidase treatment is not particularly limited, and is preferably from a range that can be put into practical use, that is, usually in the range of 20 to 70 ° C., including an optimum temperature range in which both endopeptidase action and exopeptidase action are exhibited. Be selected. It is preferably in the range of 40 to 70 ° C.
  • the time of the peptidase treatment depends on the reaction conditions such as the type of enzyme used, the reaction temperature, and the pH, and is not particularly limited.
  • the royal jelly can be subjected to peptidase treatment as it is or in a state of being dissolved or dispersed in water.
  • the royal jelly is in a dry form, it is preferably subjected to the peptidase treatment in a state of being dissolved in water.
  • the peptidase treatment is stopped by inactivating or removing the peptidase.
  • the deactivation operation can be performed by heat treatment (for example, at 80 ° C. for 15 minutes).
  • royal jelly may be treated with peptidase at least as described above, and not only the peptidase treatment but also sugar in combination with other enzymes, for example, peptidase treatment as long as the effect of the present invention is not impaired.
  • Degrading enzyme treatment and the like can also be performed.
  • the royal jelly enzymatic decomposition product produced by the production method of the present invention may then be prepared in the form of a liquid such as a drink or a syrup, or may be prepared in a semi-liquid form or a solid form.
  • Semi-liquid forms include paste-like and jelly-like forms
  • solid forms include freeze-dried products (for example, freeze-dried powder), tablets (including troches, chewable tablets, sugar-coated tablets, etc.), capsules, granules, and the like. be able to.
  • the lyophilized product can be prepared by subjecting the royal jelly enzymatic decomposition product treated with peptidase to the lyophilized product.
  • the freeze-drying treatment can be carried out according to a conventional method.
  • the method for reducing allergenicity of royal jelly enzymatic degradation products and suppressing browning during and after production is an endopeptidase of royal jelly. It can be carried out by treatment with a peptidase having an action and an exopeptidase action.
  • the target royal jelly, the type of peptidase used, and the conditions for peptidase treatment are as described above in (1).
  • the royal jelly enzymatic degradation product obtained by this method has a browning phenomenon both during and after production, although the protein is reduced in molecular weight like the royal jelly enzymatic degradation product obtained by the conventional method. It is significantly suppressed.
  • the royal jelly enzymatic decomposition product of the present invention contains 100 mg or more of Tyr-Asp (tyrosine-aspartic acid, YD) with respect to 100 g of the dried product of the royal jelly enzymatic decomposition product, and has antioxidant activity.
  • the royal jelly enzyme hydrolyzate is a product obtained by treating a royal jelly or a royal jelly protein with a predetermined proteolytic enzyme, and is also referred to as a royal jelly enzyme-treated product, and contains a plurality of types of peptides having a predetermined composition.
  • the royal jelly enzymatic hydrolyzate is a royal jelly proteolytic product in which the peptide composition after enzymatic treatment is not adjusted.
  • the royal jelly enzymatic degradation product of the present invention is preferably a royal jelly treated with a peptidase having an endopeptidase action and an exopeptidase action, particularly Proteax. Further, it is preferable that the royal jelly enzymatic degradation product of the present invention is a royal jelly enzymatic degradation product produced by the method for producing a royal jelly enzymatic degradation product of the present invention.
  • the royal jelly enzymatic decomposition product of the present invention may be in a solution state or may be dried and powdered as in freeze-drying or natural drying.
  • the amount of each peptide contained in the enzymatic decomposition product of the royal jelly of the present invention may vary depending on the raw material royal jelly.
  • YD may be 100 mg or more, preferably 120 mg or more, 150 mg or more or 170 mg or more, and 500 mg or less, 300 mg or less or 200 mg or less, with respect to 100 g of the dried product of the royal jelly enzymatic decomposition product. You may.
  • the royal jelly enzymatic degradation product of the present invention further contains 40 mg or more of Val-Pro (valine-proline, VP) and 0 of Met-Pro (methionine-proline, MP) with respect to 100 g of the dried royal jelly enzymatic degradation product. It may contain 5.5 mg or more.
  • the VP may be 40 mg or more, preferably 50 mg or more, 55 mg or more or 60 mg or more, and 200 mg or less, 150 mg or less or 100 mg or less with respect to 100 g of the dried product of the royal jelly enzymatic decomposition product. You may.
  • MP may be 0.5 mg or more, preferably 0.6 mg or more or 0.7 mg or more, and 10 mg or less, 5 mg or less, or 2 mg or less with respect to 100 g of the dried product of the royal jelly enzymatic decomposition product. There may be.
  • the royal jelly enzymatic degradation products of the present invention further include Pro-Ile (PI) and / or Pro-Leu (PL), Pro-Val (PV), Ile-Pro (IP) and / or Leu-Pro (LP), and It may contain one or more peptides selected from the group consisting of Pro-Met (PM).
  • PI and / or PL may be 2 mg or more, 5 mg or more or 8 mg or more, and 20 mg or less, 15 mg or less or or less than 100 g of the dried product of the royal jelly enzymatic degradation product. It may be 10 mg or less.
  • PV may be 10 mg or more, 15 mg or more or 20 mg or more, and may be 40 mg or less, 30 mg or less or 25 mg or less.
  • IP and / or LP may be 20 mg or more, 25 mg or more or 30 mg or more, and may be 50 mg or less, 45 mg or less or 40 mg or less.
  • PM may be 0.2 mg or more, 0.4 mg or more or 0.5 mg or more, and may be 2 mg or less, 1.5 mg or less or 1 mg or less.
  • the royal jelly enzymatic degradation product of the present invention is further selected from the group consisting of Asp-Tyr (DY), Arg-Leu (RL), Arg-Ile (RI), Leu-Arg (LR), and Ile-Arg (IR). It may contain one or more peptides which are used.
  • DY may be 5 mg or more or 8 mg or more, 20 mg or less or 15 mg or less
  • RL is 0 with respect to 100 g of the dried product of the royal jelly enzymatic decomposition product.
  • RI may be 1 mg or more or 2 mg or more, 4 mg or less or 3 mg or less
  • LR is 1 It may be .5 mg or more or 2 mg or more, 4 mg or less or 3 mg or less
  • IR may be 10 mg or more or 12 mg or more, and 20 mg or less or 16 mg or less.
  • the amount of each peptide in the royal jelly enzymatic degradation product can be measured by a commonly used method.
  • the royal jelly enzymatic decomposition product is in a liquid or powder state, for example, it is first dispersed in a 0.1% formic acid aqueous solution, then centrifuged at 15,000 rpm for 10 minutes, the supernatant is collected, and further, 0.1% formic acid methanol is used. The solution is added and centrifuged at 15,000 rpm for 10 minutes, and the supernatant is collected to obtain a solution of the peptide contained in the royal jelly enzymatic degradation product. If necessary, this peptide solution is treated with a solid phase column and the unadsorbed fraction is used as a sample.
  • the content of each peptide in the sample was analyzed by water-soluble liquid chromatography-mass spectrometry (LC-MS), and the royal jelly enzyme was analyzed using the peptide acid concentration in the sample and the calibration curve obtained with the standard solution.
  • the content of each peptide in the degradation product can be determined.
  • the royal jelly enzymatic decomposition product of the present invention contains YD having antioxidant activity, it may have antioxidant activity.
  • the royal jelly enzymatic degradation product of the present invention may further have antioxidant activity and antidiabetic activity by further containing MP and VP having antioxidant activity and antidiabetic activity.
  • the food composition, quasi-drug or pharmaceutical composition of the present invention contains the above-mentioned royal jelly enzymatic decomposition product and may have antioxidant activity.
  • the above-mentioned royal jelly enzymatic decomposition product may be used as it is as a product such as a pharmaceutical composition, a quasi-drug or a food composition, or as a component of a product such as a pharmaceutical composition, a quasi-drug or a food composition. It may be used.
  • a product containing a royal jelly enzymatic degradation product can be obtained, for example, by adding the above-mentioned royal jelly enzymatic degradation product to an intermediate product in the manufacturing process of the product.
  • a royal jelly enzymatic decomposition product is used as a component of a pharmaceutical composition, a non-pharmaceutical product or a food composition
  • the pharmaceutical composition, the non-pharmaceutical product or the food composition can be used as a component other than the royal jelly composition, for example, pharmaceutical.
  • Acceptable ingredients eg, excipients, binders, lubricants, disintegrants, emulsifiers, surfactants, bases, solubilizers, suspending agents
  • food-acceptable ingredients eg, Minerals, vitamins, flavonoids, quinones, polyphenols, amino acids, nucleic acids, essential fatty acids, refreshing agents, binders, sweeteners, disintegrants, lubricants, colorants, fragrances, stabilizers, preservatives, It may contain a sustained release modifier, a surfactant, a solubilizer, a wetting agent).
  • the product containing the royal jelly enzymatic decomposition product may be in a liquid form, a semi-liquid form or a solid form.
  • Liquid forms include drinks, syrups, liquids, suspensions, emulsions, and injections (including cases where they are mixed with distilled water or infusions such as amino acid infusions or electrolyte infusions at the time of use to prepare as liquids).
  • the semi-liquid form may be a paste form or a jelly form
  • the solid form may be a lyophilized product (for example, lyophilized powder), a tablet (uncoated tablet, sugar-coated tablet, effervescent tablet, film coat).
  • Tablets chewable tablets, troches, etc.
  • powders powders (powder), fine granules, granules, etc.
  • These various preparations can be prepared, for example, by mixing the royal jelly enzymatic decomposition product obtained by the above method with other components, if necessary, and molding them into the above dosage form.
  • the food composition emphasizes the tertiary function of the food, that is, the physical condition adjusting function.
  • examples of products in which the tertiary function of food is emphasized include health foods, foods with functional claims, foods with nutritional function, dietary supplements, supplements and foods for specified health use.
  • Examples of the food composition include soft drinks such as coffee, juice and tea drinks, dairy drinks, lactic acid bacteria drinks, yogurt drinks, carbonated drinks, and drinks such as sake such as Japanese sake, western sake, fruit wine and honey sake; custard cream.
  • Spreads such as; pastes such as fruit paste; Western sweets such as chocolate, donuts, pies, cream puffs, gum, jelly, candy, cookies, cakes and puddings; Japanese sweets such as Daifuku, rice cakes, buns, castella, anmitsu and sheep syrup; ice cream , Ice cakes such as ice cake and sherbet; cooked foods such as curry, beef bowl, miscellaneous dishes, miso juice, soup, meat sauce, pasta, pickles, jams; seasonings such as dressings, sprinkles, flavor seasonings and soup bases, etc. Can be mentioned.
  • the content of the royal jelly enzymatic decomposition product in the food composition, the pharmaceutical product or the pharmaceutical composition of the present invention is 0.1 part by weight or more of the royal jelly enzymatic decomposition product when the dry weight of the composition is 100 parts by weight. It may be 10 parts by weight or more, 25 parts by weight or more, 40 parts by weight or more, or 50 parts by weight or more, and 100 parts by weight or less, 90 parts by weight or less, 80 parts by weight or less, 70 parts by weight or less, 60 parts by weight. It may be less than or equal to 55 parts by weight.
  • Example 1 474 g of raw royal jelly was weighed in a 3 L flask, 400 ml of ion-exchanged water was added, and the mixture was stirred until uniform to prepare a diluted royal jelly solution. A 2N NaOH aqueous solution was added to adjust the pH of the royal jelly diluent to 7.8. Next, a solution prepared by dissolving 4.75 g of Proteax (Amano Enzyme Co., Ltd.), which has both endopeptidase action and exopeptidase action, in 20 mL of ion-exchanged water was added to the royal jelly diluted solution, and the total amount of ion-exchanged water was reduced to 980 g. Added to be.
  • the reaction mixture was reacted at 50 ° C. (constant temperature water tank) for 2 hours while stirring with a propeller to carry out hydrolysis.
  • the temperature of the constant temperature water tank was raised to 80 ° C. and stirred for 15 minutes to inactivate the enzyme, and then 11.73 g of crystalline cellulose and 5.85 g of locust bean gum were mixed and then water-cooled.
  • Example 1 A royal jelly enzymatic degradation product was obtained in the same manner as in Example 1 except that Actinase AS (Kaken Pharmaceutical Co., Ltd.) was used as an enzyme instead of Proteax and the pH was set to 8.8.
  • Actinase AS Korean Pharmaceutical Co., Ltd.
  • ⁇ Measurement of enzymatic decomposition degree> The degree of enzymatic degradation was confirmed by measuring the molecular weight of the compound after decomposition using gel filtration analysis. After the enzymatic reaction, 20 ⁇ L of the solution was weighed, and 9.5 mL of 50 mM NaPi / 0.3M NaCl buffer (pH 7.0) was added to prepare an analysis sample. Using cytochrome C (nacalai tesque, MW 12,384) as an index, the proportion of components eluted earlier than cytochrome C was calculated. The analysis conditions are shown below.
  • Example 1 no clear peak was observed before cytochrome C, and it was confirmed that the degree of decomposition was as high as that of the comparative example.
  • the amount of histamine released was measured by allowing an enzyme hydrolyzate of raw royal jelly to act on a blood sample of a subject who had experienced an allergic reaction to raw royal jelly.
  • This test will be given only to those who have distributed a manual describing the contents of this test to the subjects, fully explained the purpose and contents of the test, and obtained a written consent to participate voluntarily by the subjects themselves. Was done.
  • the measurement of free histamine was performed using a commercially available ELISA kit (Histamine ELISA (IMMUNO-BIOLOGICAL manufactured by LABORATORIES)).
  • Example 1 the histamine free value (ng / mL) is 1/2 or less as compared with Comparative Example 1, and the royal jelly enzymatic degradation product obtained by the method is superior to the royal jelly enzymatic degradation product obtained by the conventional method. It is considered that the allergenicity can be reduced.
  • Table 2 shows the results after powdering
  • Fig. 2 shows the results after storage at 50 ° C. for 7 days.
  • the phenomenon of decrease in brightness and browning that was observed by enzymatic decomposition in the conventional method is not observed in the royal jelly enzymatic decomposition product obtained by the method of the present invention, and browning is similarly observed even after storage at 50 ° C. for 7 days. It was suppressed.
  • Example 3 Composition analysis of royal jelly enzymatic degradation products
  • Example preparation a royal jelly solution treated with Proteax was obtained and further lyophilized to obtain two lots (181030, 190510) of royal jelly enzymatic decomposition product powder.
  • Actinase AS Korean Pharmaceutical Co., Ltd.
  • Protease A-treated royal jelly and Protease P-treated royal jelly were used instead of Proteax, and the pH was set to 8.8, 7.8, and 7.8, respectively.
  • a freeze-dried powder of each royal jelly enzymatic decomposition product was obtained in the same manner as in Example 1 except for the above.
  • a calibration curve is obtained from each concentration of the standard solution and the area of each peak obtained from the chromatogram.
  • the concentration of each peptide acid in the test solution was calculated from the calibration curve, and the content of each peptide acid in the sample was determined by the following formula.
  • Content (mg / 100g) Y ⁇ 100/100 ⁇ 1000
  • X Concentration of each peptide in the sample solution determined from the calibration curve (ng / mL)
  • V Volume of final dilution of sample (mL)
  • E Dilution ratio of the final dilution solution of the sample
  • W Sample amount (mg)
  • the proteax-treated royal jelly enzymatic decomposition product of the present invention contains more peptides than other royal jelly, such as MP (0.76 to 0.94 mg / 100 g royal jelly enzymatic decomposition product) and VP ( 61.48 to 74.76 mg / 100 g royal jelly enzymatic decomposition product), YD (173.02 to 180.99 mg / 100 g royal jelly enzymatic decomposition product), PI (L) (8.71 to 8.88 mg / 100 g royal jelly enzymatic decomposition product) ), PV (20.53 to 22.36 mg / 100 g royal jelly enzymatic decomposition product), I (L) P (32.67 to 38.21 mg / 100 g royal jelly enzymatic decomposition product), PM (0.56 to 0.96 mg / 100 g royal jelly enzymatic decomposition product) and the
  • the royal jelly enzymatic degradation product of the present invention has higher antidiabetic activity and antioxidative activity than other royal jelly. It was suggested that it has oxidative activity.

Abstract

本発明は、ローヤルゼリーをエンドペプチダーゼ作用とエキソペプチダーゼ作用とを有するペプチダーゼで処理することを特徴とする、アレルギー性が低減され且つ製造時及び製造後の褐変化が抑制されてなるローヤルゼリー酵素分解物の製造方法、ローヤルゼリーをエンドペプチダーゼ作用とエキソペプチダーゼ作用とを有するペプチダーゼで処理することを特徴とする、ローヤルゼリー酵素分解物のアレルギー性低減且つ製造時及び製造後の褐変化抑制方法、並びに、ローヤルゼリー酵素分解物の乾燥物１００ｇに対して、Ｔｙｒ－Ａｓｐを１００ｍｇ以上含む、ローヤルゼリー酵素分解物を提供する。

Description

ローヤルゼリー酵素分解物の製造方法及びローヤルゼリー酵素分解物
　本発明は、ローヤルゼリー酵素分解物の製造方法及びローヤルゼリー酵素分解物に関する。具体的には本発明は、アレルギー性が低減され且つ褐変化が抑制されてなるローヤルゼリー酵素分解物の製造方法に関する。また、本発明は、ローヤルゼリー酵素分解物のアレルギー性低減且つ褐変化抑制方法に関する。さらに、本発明は、抗酸化活性を有し得るローヤルゼリー酵素分解物に関する。
　ローヤルゼリーは、有用な天然素材であるが、一方でアレルギー反応を引き起こす場合があることが知られている。そこで、アレルゲンとなりえるタンパク質を分解又は低分子化してアレルゲン量を低減させる方法が種々検討されている。
　例えば、ローヤルゼリーについてアレルゲン量を低減させる方法、言い換えれば低アレルゲン化ローヤルゼリーを調製する方法としては、エンドペプチダーゼ作用とエキソペプチダーゼ作用の両方を有するアルカリ性ペプチダーゼでローヤルゼリーを一段階酵素処理する方法（特許文献１）などが提案されている。
　しかし、ペプチダーゼによりタンパク質を分解し、低アレルゲン化されたローヤルゼリー（ローヤルゼリー酵素分解物）は、酵素処理していないローヤルゼリーと比べて温度や湿度の影響を受けやすく、加温や加湿条件などの過酷条件下で着色して褐色化が進行する。かかる着色は、酵素分解によって断片化されたペプチドやアミノ酸のアミド基と還元糖のアノメリック炭素との間に起こるメイラード反応によるものと考えられる。
　このような酵素処理ローヤルゼリーの着色を抑制する各種方法が報告されている（特許文献２～６）。特許文献２では酵素処理を４０～６００Ｍｐａの高圧条件下で行うことにより酵素処理によって生じる褐変化が有意に抑制されることが報告されている。特許文献３では、ローヤルゼリーと、デンプン及びデキストロース当量が１８以下のデキストリンから選ばれる少なくとも一種とを溶媒に溶解した後、凍結乾燥することで経時的な外観の変色を防止することができることが報告されている。特許文献４及び５では、ローヤルゼリーを酵母発酵処理することにより、ローヤルゼリーの経時的な外観の変色が抑制されることが報告されている。特許文献６では、ローヤルゼリーの水懸濁液のｐＨ近傍に至適ｐＨを有する酸性プロテアーゼを用いて酵素分解することで、従来の酵素法によるものと比べて黄色度が少ないことが報告されている。
　しかしながら、特許文献２～５に記載の方法では、褐変化を抑制するために、高圧条件（特許文献２）、デンプン及びデキストリンの添加（特許文献３）、酵母による発酵処理（特許文献４及び５）がそれぞれ必要である。
　また、特許文献６に記載されているようにローヤルゼリーを酸性プロテアーゼで酵素処理した場合には、アレルゲン性が上昇することが特許文献１において記載されている。
　さらに、酵素分解によりローヤルゼリーに含まれるタンパク質がペプチド若しくは遊離アミノ酸に分解されるが、使用する酵素によって得られるペプチドの組成が異なることが予想されるものの（特許文献７及び８）、これまで産生されるペプチドの組成及びその機能性の詳細は明らかになっていない。
特開２００７－２９５９１９号公報 特開２００９－２５４３６３号公報 特開２０１１－１５２１０３号公報 特開２０１８－１０８１１６号公報 特開２０１８－１０２２９２号公報 特開２００３－３３４００３号公報 特開２００５－００６５３３号公報 特開２００５－２５５６７０号公報
　特許文献２～５に記載の方法では、ローヤルゼリー酵素分解物の製造時及び製造後において褐変化を抑制できることは記載されていない。また、特許文献６に記載の方法では、酸性プロテアーゼを用いるためアレルギー性を低減させることができない。
　本発明は、アレルギー性が低減され且つ製造時及び製造後の褐変化が抑制されてなるローヤルゼリー酵素分解物の製造方法、並びにローヤルゼリー酵素分解物のアレルギー性低減且つ製造時及び製造後の褐変化抑制方法を提供することを目的とする。
　また、ローヤルゼリーは古くから高血圧や糖尿病、更年期症状、疼痛等の不定愁訴に効果があることが知られているが、その生理活性物質は不明な点が多い。本発明ではローヤルゼリーのタンパク質を酵素分解することにより、アレルギー性が低減され、製造時及び製造後の褐変化が抑制された、さらに、少なくとも抗酸化活性を有するペプチドを含む、ローヤルゼリー酵素分解物の提供を目的とする。
　本発明者らは、上記目的を達成すべく鋭意研究を重ねた結果、エンドペプチダーゼ作用とエキソペプチダーゼ作用とを有するペプチダーゼで処理することにより、アレルギー性を低減できる上、製造時及び製造後の褐変化を抑制できるという知見を得た。
　本発明は、これら知見に基づき、更に検討を重ねて完成されたものであり、以下のローヤルゼリー酵素分解物の製造方法、並びにローヤルゼリー酵素分解物のアレルギー性低減且つ製造時及び製造後の褐変化抑制方法を提供するものである。
　(I)ローヤルゼリー酵素分解物の製造方法
(I-1)ローヤルゼリーをエンドペプチダーゼ作用とエキソペプチダーゼ作用とを有するペプチダーゼで処理することを特徴とする、アレルギー性が低減され且つ製造時及び製造後の褐変化が抑制されてなるローヤルゼリー酵素分解物の製造方法。
(I-2)前記ペプチダーゼがアスペルギルス・オリゼー産生ペプチダーゼである、(I-1)に記載の方法。
(I-3)前記ペプチダーゼの至適温度が５０℃以上である、(I-1)又は(I-2)に記載の方法。
　(II)ローヤルゼリー酵素分解物のアレルギー性低減且つ製造時及び製造後の褐変化抑制方法
(II-1)ローヤルゼリーをエンドペプチダーゼ作用とエキソペプチダーゼ作用とを有する
ペプチダーゼで処理することを特徴とする、ローヤルゼリー酵素分解物のアレルギー性低減且つ製造時及び製造後の褐変化抑制方法。
(II-2)前記ペプチダーゼがアスペルギルス・オリゼー産生ペプチダーゼである、(II-1)に記載の方法。
(II-3)前記ペプチダーゼの至適温度が５０℃以上である、(II-1)又は(II-2)に記載の方法。
　(III)ローヤルゼリー酵素分解物
(III-1)　(I-1)～(I-3)のいずれかの方法によって製造されたローヤルゼリー酵素分解物であって、ローヤルゼリー酵素分解物の乾燥物１００ｇに対して、Ｔｙｒ－Ａｓｐを１００ｍｇ以上含む、ローヤルゼリー酵素分解物。
(III-2)　ローヤルゼリー酵素分解物の乾燥物１００ｇに対して、Ｔｙｒ－Ａｓｐを１００ｍｇ以上含む、ローヤルゼリー酵素分解物。
(III-3)　さらにローヤルゼリー酵素分解物の乾燥物１００ｇに対して、Ｖａｌ－Ｐｒｏを４０ｍｇ以上、及び、Ｍｅｔ－Ｐｒｏを０．５ｍｇ以上含む、(III-1)又は(III-2)のローヤルゼリー酵素分解物。
(III-4)　さらに、Ｐｒｏ－Ｉｌｅ及び／若しくはＰｒｏ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ、Ｐｒｏ－Ｖａｌ、Ｉｌｅ－Ｐｒｏ及び／若しくはＩｌｅ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ、並びにＰｒｏ－Ｍｅｔからなる群より選択される１種以上のペプチドを含む、(III-1)～(III-3)のいずれかのローヤルゼリー酵素分解物。
　(IV)食品組成物、医薬部外品又は医薬組成物
　(III-1)～(III-4)のいずれかのローヤルゼリー酵素分解物を含む、食品組成物、医薬部外品又は医薬組成物。
　本発明によれば、アレルギー性の低減による安全性の向上を実現しつつ、ペプチダーゼ分解によって生じる製造時及び製造後の褐変化が抑制されてなるローヤルゼリー酵素分解物の製造方法を提供することができる。また、本発明によれば、ローヤルゼリー酵素分解物について、アレルギー性を低減し且つ製造時及び製造後の褐変化を抑制する方法を提供することができる。さらに、本発明によれば、少なくとも抗酸化活性を有するローヤルゼリー酵素分解物を提供できる。本発明のローヤルゼリー酵素分解物はまた、糖尿病及び高血圧に対しても有効であり得る。
実施例及び比較例のヒスタミン遊離試験の結果を示すグラフである。縦軸は被験者のヒスタミン遊離量（ｎｇ／ｍＬ）を示す。 実施例及び比較例の褐変評価の結果を示すグラフである。縦軸はＨＳＬ色空間における輝度（％）を示す。
　以下、本発明について詳細に説明する。
　なお、本明細書において「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」とは、「本質的にからなる（ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ　ｃｏｎｓｉｓｔ　ｏｆ）」という意味と、「のみからなる（ｃｏｎｓｉｓｔ　ｏｆ）」という意味をも包含する。
　（１）ローヤルゼリー酵素分解物の製造方法
　本発明のローヤルゼリー酵素分解物の製造方法は、アレルギー性が低減され且つ製造時及び製造後の褐変化が抑制されてなるローヤルゼリー酵素分解物の製造方法であって、ローヤルゼリーをエンドペプチダーゼ作用とエキソペプチダーゼ作用とを有するペプチダーゼで処理することを特徴とする。
　ローヤルゼリーは、蜜蜂のうち日齢３～１２日の働き蜂が下咽頭腺及び大腮腺から分泌する分泌物を混合して作る乳白色のゼリー状物質である。ローヤルゼリー中の主な生理活性成分としては、例えば、ローヤルゼリーに特有な１０－ハイドロキシデセン酸（以下、「デセン酸」と記載する）等の有機酸類をはじめ、タンパク質、脂質、糖類、ビタミンＢ類、葉酸、ニコチン酸、パントテン酸等のビタミン類、各種ミネラル類等が挙げられる。このローヤルゼリーの生理活性及び薬理作用としては、抗菌作用、免疫増強作用、抗うつ作用、抗腫瘍作用、抗炎症作用、血流量増加作用等が知られている。また、制癌剤の副作用低減及び放射線傷害時の延命効果も報告されている。
　本発明で用いられるローヤルゼリーとしては、特に制限されず、例えば、生ローヤルゼリーであってもよく、生ローヤルゼリーに処理を施したローヤルゼリー処理物であってもよい。
　ローヤルゼリー処理物としては、生ローヤルゼリーを濃縮又は希釈したローヤルゼリー濃縮物又は希釈物、生ローヤルゼリーを乾燥させて粉末化したローヤルゼリー粉末、ローヤルゼリーを水若しくは含水エタノール等により抽出した水抽出物又は有機溶媒抽出物等を挙げることができる。ローヤルゼリー処理物は複数の処理が施されたものであってもよい。
　ローヤルゼリー濃縮物は、例えば、生ローヤルゼリーから水分を除去することにより得ることができる。ローヤルゼリー希釈物は、例えば、生ローヤルゼリーに水分を添加することにより得ることができる。
　ローヤルゼリー粉末は、例えば、凍結乾燥及び噴霧乾燥等の本技術分野における公知の方法により生ローヤルゼリーを粉末化することにより得ることができる。乾燥方法としては、通風乾燥や天日乾燥などの自然乾燥、電気などで加熱して乾燥させる強制乾燥、凍結乾燥など、一般食品加工で採用される公知のいずれの方法を使用することができる。好ましくは、凍結乾燥である。なお、乾燥時間は特に制限されず、通風や天日乾燥などの自然乾燥の場合は、約３日程度、電気などで加熱して強制乾燥させる場合は、５０℃程度で１～３日程度を挙げることができる。通常、水分含量が１０質量％以下、好ましくは５質量％以下になるように乾燥させることが好ましい。なお、通風や天日乾燥などの自然乾燥の場合のように水分含量を１０質量％以下にすることが難しい場合は、その後、凍結乾燥機にかけて更に水分を下げる処理を行ってもよい。
　粉砕処理（粉末化処理）は、粉砕機（例えば、ピンミル、ハンマーミル、ボールミル、ジェットミル等のミル）を用いて粉砕する方法、石臼を用いてすりつぶす方法など、公知のいずれの方法を使用して行ってもよい。
　当該生ローヤルゼリーの乾燥処理及び粉末化処理には、上記のような当業界で使用される公知の方法が広く採用でき、好ましくは凍結乾燥後、粉砕機（ミル）によって粉砕する方法で行うことができる。
　ローヤルゼリー有機溶媒抽出物は、例えば、エタノール、メタノール、プロパノール、アセトン等の有機溶媒を溶媒として生ローヤルゼリー又はローヤルゼリー粉末を抽出することで得ることができる。抽出時間は、原料として用いられる生ローヤルゼリーの形態、溶媒の種類及び量、抽出の際の温度及び攪拌条件等に応じて適宜設定することができる。抽出後、ろ過、遠心分離等により固形分を除去してもよい。また、抽出された溶液をそのまま用いてもよいし、当該溶液から溶媒を除去して、濃縮液又は粉末として用いてもよい。ローヤルゼリー有機溶媒抽出物としては、ローヤルゼリーエタノール抽出物であることが好ましい。
　生ローヤルゼリーは、例えば、常法に従い養蜂産品として入手することができる。ローヤルゼリーの産地は、制限されず、日本、中国、ブラジル、ヨーロッパ諸国、オセアニア諸国、アメリカ等のいずれであってもよい。
　本発明で用いられるペプチダーゼは、エンドペプチダーゼ作用とエキソペプチダーゼ作用の両方を有するペプチダーゼである。かかるペプチダーゼを使用した酵素処理によれば、一段階酵素処理でタンパク質を低分子化することができるので、操作が簡便であるとともに、ローヤルゼリーに含まれる有用成分の生理活性の消失及び大幅な低減を防止することができるという利点がある。
　また、本発明で用いられるペプチダーゼは、ＥＣ番号（酵素番号）が３．４群のものであり、本発明の効果を奏する限り、由来は特に制限されず、動物、植物、及び微生物（細菌、ウィルス、真菌類（カビ、酵母、キノコ等）、藻類など）に由来するペプチダーゼを広く使用できる。これらの中でも細菌又は真菌類由来のペプチダーゼが好ましく、アスペルギルス・オリゼー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　ｏｒｙｚａｅ）産生ペプチダーゼ、ストレプトマイセス・グリセウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｇｒｉｓｅｕｓ）産生ペプチダーゼ、又は、アスペルギルス・メレウス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　ｍｅｌｌｅｕｓ）産生ペプチダーゼがより好ましく、アスペルギルス・オリゼー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　ｏｒｙｚａｅ）産生ペプチダーゼが特に好ましい。
　「エキソペプチダーゼ」は、「アミノペプチダーゼ」と「カルボキシペプチダーゼ」に分類される。また、ペプチダーゼは、至適ｐＨによって、それぞれ酸性、中性、アルカリ性という用語を各酵素につけることがあり、例えば、「酸性エキソペプチダーゼ」、「中性アミノペプチダーゼ」、「アルカリ性エンドペプチダーゼ」のように記載することもある。
　エンドペプチダーゼ作用とエキソペプチダーゼ作用の両方を有するペプチダーゼとしては、市販のものを使用することができ、そのような市販品としては、好ましくは、アスペルギルス・オリゼー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　ｏｒｙｚａｅ）産生ペプチダーゼ（商品名：スミチームＬＰ－Ｇ、プロテアックス、フレーバーザイム（Ｆｌａｖｏｕｒｚｙｍｅ）、プロテアーゼＡ）、ストレプトマイセス・グリセウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｇｒｉｓｅｕｓ）産生ペプチダーゼ（商品名：アクチナーゼＡＳ）、アスペルギルス・メレウス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　ｍｅｌｌｅｕｓ）産生ペプチダーゼ（商品名：プロテアーゼＰ）を例示することができる。
　本発明で用いられるペプチダーゼとしては、アスペルギルス・オリゼー由来の、至適温度が５０℃以上、至適ｐＨが７～８のものが特に好ましく、そのようなペプチダーゼとしてはプロテアックスが挙げられる。また、本発明で用いられるペプチダーゼとしては、Ｔｒｉｓ－ＨＣｌバッファーにて抽出、トリクロロ酢酸にて沈殿、アセトンにて洗浄することで得たタンパク質をトリプシン消化、固相カラムで脱塩後、液体クロマトグラフィー質量分析法により、下記分析条件にて分析した際に、特徴的な分子量の化合物イオン（ｍ／ｚ：９７０．５７０５［Ｍ－Ｈ］、９８０．５４３５［Ｍ－Ｈ］、５４１．３７２３［Ｍ－Ｈ］、８６０．３８５０［Ｍ－Ｈ］、８５５．４０２１［Ｍ－Ｈ］、８１５．４５３８［Ｍ－Ｈ］、１１５４．６１０２［Ｍ＋Ｈ］、５９５．５０５２［Ｍ＋Ｈ］、１２０８．９２６１［Ｍ－Ｈ］、１２０９．２６０３［Ｍ－Ｈ］、各±５ｐｐｍ以内）を有するものも好ましく、そのようなペプチダーゼとしてはプロテアックスが挙げられる。
（分析条件）
カラム：Ａｃｑｕｉｔｙ　ＢＥＨ　Ｃ１８（Ｗａｔｅｒｓ：２．１×１００ｍｍ，ｉｄ　１．７μｍ）
カラム温度：４０℃
溶媒Ａ：０．１％ギ酸
溶媒Ｂ：アセトニトリル
流速：０．３ｍＬ／ｍｉｎ
グラジェント：５％Ｂ（０－２ｍｉｎ）、５－５０％Ｂ（２－１２ｍｉｎ）、５０－１００％Ｂ（１２－２２ｍｉｎ）、１００％Ｂ（２２－２５ｍｉｎ）、５％Ｂ（２５－３０ｍｉｎ）
　ローヤルゼリーに対するペプチダーゼの使用量は、使用するローヤルゼリー濃度、酵素力価、反応温度及び反応時間により異なり一概には言えない。一般的には、ローヤルゼリーに含まれるタンパク質１ｇ当り５０～１００００作用単位の割合でペプチダーゼを用いることが好ましい。なお、このとき、ペプチダーゼのローヤルゼリーへの添加は、一度に添加してもよく、少量ずつ分割して添加してもよい。
　ペプチダーゼ処理に際してローヤルゼリーのｐＨは、使用酵素の至適ｐＨに対応して、ｐＨ２～１２、好ましくはｐＨ７～１０、より好ましくはｐＨ７～８．５の範囲から選択される。具体的には、前記ローヤルゼリーにペプチダーゼを添加する前に、使用酵素の種類によりｐＨ２～１２、好ましくはｐＨ７～１０、より好ましくはｐＨ７～８．５の範囲内になるように、酸、アルカリ剤、あるいは緩衝剤の添加により所望のｐＨに調整される。この場合、酸としては、塩酸、硫酸、硝酸、リン酸、酢酸等を；アルカリ剤としては水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸カリウム等を；また、緩衝剤としては、リン酸緩衝剤、クエン酸緩衝剤等をそれぞれ例示することができる。
　ペプチダーゼ処理の温度は、特に制限はなく、好ましくはエンドペプチダーゼ作用及びエキソペプチダーゼ作用の両作用が発現する最適温度範囲を含む、実用に供せられ得る範囲、すなわち、通常２０～７０℃の範囲から選択される。好ましくは４０～７０℃の範囲である。ペプチダーゼ処理の時間は、使用酵素の種類、反応温度、ｐＨ等の反応条件に依存し、特に限定されない。
　なお、ローヤルゼリーは、そのまま、又は水に溶解若しくは分散させた状態でペプチダーゼ処理に供することができる。ローヤルゼリーが乾燥形態である場合は、水に溶解させた状態でペプチダーゼ処理に供することが好ましい。
　ペプチダーゼ処理の停止は、ペプチダーゼを失活又は除去することにより行う。失活操作は加熱処理（例えば、８０℃で１５分間等）により行うことができる。
　本発明では、ローヤルゼリーを少なくとも前述するようにペプチダーゼで処理すればよく、ペプチダーゼ処理だけでなく、本発明の効果を損なわない限りにおいて、その他の酵素との組み合わせ処理、例えば、ペプチダーゼ処理と合わせて糖分解酵素処理などを行うこともできる。
　本発明の製造方法により製造されるローヤルゼリー酵素分解物は、その後、ドリンク剤やシロップ剤などの液剤の形態に調製されてもよいし、半液体形態、又は固体形態に調製されてもよい。半液体形態としてはペースト状及びゼリー状の形態が、固体形態としては凍結乾燥物（例えば、凍結乾燥粉末）、錠剤（トローチ、チュアブル錠、糖衣錠などを含む）、カプセル、顆粒などの形態を挙げることができる。なお、凍結乾燥物は、ペプチダーゼ処理を行ったローヤルゼリー酵素分解物を、凍結乾燥処理に供することによって調製することができる。凍結乾燥処理は、定法に従って行うことができる。
　（２）ローヤルゼリー酵素分解物のアレルギー性低減且つ製造時及び製造後の褐変化抑制方法
　本発明のローヤルゼリー酵素分解物のアレルギー性低減且つ製造時及び製造後の褐変化抑制方法は、ローヤルゼリーをエンドペプチダーゼ作用とエキソペプチダーゼ作用とを有するペプチダーゼで処理することにより実施することができる。
　ここで対象とするローヤルゼリー、使用するペプチダーゼの種類やペプチダーゼ処理の条件については、（１）で前述した通りである。
　当該方法によって得られるローヤルゼリー酵素分解物は、従来の方法によって得られるローヤルゼリー酵素分解物と同様にタンパク質が低分子化されているにもかかわらず、製造時及び製造後の両方の時点において褐変現象が有意に抑制されている。
　（３）ローヤルゼリー酵素分解物
　本発明のローヤルゼリー酵素分解物は、ローヤルゼリー酵素分解物の乾燥物１００ｇに対して、Ｔｙｒ－Ａｓｐ（チロシン－アスパラギン酸、ＹＤ）を１００ｍｇ以上含み、抗酸化活性を有する。ここで、ローヤルゼリー酵素分解物は、ローヤルゼリー又はローヤルゼリーのタンパク質を所定のタンパク質分解酵素で処理されたものであり、ローヤルゼリー酵素処理物ともいい、所定の組成を有する複数種のペプチドを含む。ローヤルゼリー酵素分解物は、酵素処理後のペプチド組成が調整されていない、ローヤルゼリータンパク質分解物である。
　本発明のローヤルゼリー酵素分解物は、上述したローヤルゼリーをエンドペプチダーゼ作用とエキソペプチダーゼ作用とを有するペプチダーゼ、特にプロテアックスによって処理されたものであることが好ましい。また、本発明のローヤルゼリー酵素分解物が、本発明のローヤルゼリー酵素分解物の製造方法によって製造されたローヤルゼリー酵素分解物であることが好ましい。
　本発明のローヤルゼリー酵素分解物は、溶液の状態であっても、例えば凍結乾燥や自然乾燥のように乾燥させて粉末状であってもよい。
　本発明のローヤルゼリー酵素分解物に含まれる各ペプチドの量は、原料ローヤルゼリーによって変動し得る。例えば、ＹＤがローヤルゼリー酵素分解物の乾燥物１００ｇに対して、１００ｍｇ以上であってよく、例えば１２０ｍｇ以上、１５０ｍｇ以上又は１７０ｍｇ以上であることが好ましく、また、５００ｍｇ以下、３００ｍｇ以下又は２００ｍｇ以下であってもよい。
　本発明のローヤルゼリー酵素分解物は、さらにローヤルゼリー酵素分解物の乾燥物１００ｇに対して、Ｖａｌ－Ｐｒｏ（バリン－プロリン、ＶＰ）を４０ｍｇ以上、及び、Ｍｅｔ－Ｐｒｏ（メチオニン－プロリン、ＭＰ）を０．５ｍｇ以上含んでもよい。例えば、ＶＰがローヤルゼリー酵素分解物の乾燥物１００ｇに対して、４０ｍｇ以上であってよく、例えば５０ｍｇ以上、５５ｍｇ以上又は６０ｍｇ以上であることが好ましく、また、２００ｍｇ以下、１５０ｍｇ以下又は１００ｍｇ以下であってもよい。ＭＰがローヤルゼリー酵素分解物の乾燥物１００ｇに対して、０．５ｍｇ以上であってよく、例えば０．６ｍｇ以上又は０．７ｍｇ以上であることが好ましく、また、１０ｍｇ以下、５ｍｇ以下又は２ｍｇ以下であってもよい。
　本発明のローヤルゼリー酵素分解物はさらに、Ｐｒｏ－Ｉｌｅ（ＰＩ）及び／若しくはＰｒｏ－Ｌｅｕ（ＰＬ）、Ｐｒｏ－Ｖａｌ（ＰＶ）、Ｉｌｅ－Ｐｒｏ（ＩＰ）及び／若しくはＬｅｕ－Ｐｒｏ（ＬＰ）、並びにＰｒｏ－Ｍｅｔ（ＰＭ）からなる群より選択される１種以上のペプチドを含んでもよい。本発明のローヤルゼリー酵素分解物において、ローヤルゼリー酵素分解物の乾燥物１００ｇに対して、例えば、ＰＩ及び／若しくはＰＬが２ｍｇ以上、５ｍｇ以上又は８ｍｇ以上であってよく、また、２０ｍｇ以下、１５ｍｇ以下又は１０ｍｇ以下であってよい。ＰＶが１０ｍｇ以上、１５ｍｇ以上又は２０ｍｇ以上であってよく、また、４０ｍｇ以下、３０ｍｇ以下又は２５ｍｇ以下であってよい。ＩＰ及び／若しくはＬＰが２０ｍｇ以上、２５ｍｇ以上又は３０ｍｇ以上であってよく、また、５０ｍｇ以下、４５ｍｇ以下又は４０ｍｇ以下であってよい。ＰＭが０．２ｍｇ以上、０．４ｍｇ以上又は０．５ｍｇ以上であってよく、また、２ｍｇ以下、１．５ｍｇ以下又は１ｍｇ以下であってよい。
　本発明のローヤルゼリー酵素分解物はさらに、Ａｓｐ－Ｔｙｒ（ＤＹ）、Ａｒｇ－Ｌｅｕ（ＲＬ）、Ａｒｇ－Ｉｌｅ（ＲＩ）、Ｌｅｕ－Ａｒｇ（ＬＲ）、及びＩｌｅ－Ａｒｇ（ＩＲ）からなる群より選択される１種以上のペプチドを含んでもよい。本発明のローヤルゼリー酵素分解物において、ローヤルゼリー酵素分解物の乾燥物１００ｇに対して、例えば、ＤＹが５ｍｇ以上又は８ｍｇ以上であってよく、また、２０ｍｇ以下又は１５ｍｇ以下であってよく、ＲＬが０．５ｍｇ以上又は１ｍｇ以上であってよく、また、５ｍｇ以下又は２ｍｇ以下であってよく、ＲＩが１ｍｇ以上又は２ｍｇ以上であってよく、また、４ｍｇ以下又は３ｍｇ以下であってよく、ＬＲが１．５ｍｇ以上又は２ｍｇ以上であってよく、また、４ｍｇ以下又は３ｍｇ以下であってよく、ＩＲが１０ｍｇ以上又は１２ｍｇ以上であってよく、また、２０ｍｇ以下又は１６ｍｇ以下であってよい。
　ローヤルゼリー酵素分解物における各ペプチドの量は、通常用いられる方法によって測定することができる。ローヤルゼリー酵素分解物が液体又は粉末の状態の場合、例えばまず０．１％ギ酸水溶液に分散したのち、１５，０００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、上清を回収し、さらに、０．１％ギ酸メタノール溶液を添加、１５，０００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、上清を回収し、ローヤルゼリー酵素分解物に含まれるペプチドの溶液を得る。必要があれば、このペプチド溶液を固相カラムにて処理し、未吸着画分を試料とする。当該試料における各ペプチドの含有量は、水溶性液体クロマトグラフィー－質量分析法（ＬＣ－ＭＳ）にて解析し、試料中のペプチド酸濃度及び標準液で得られた検量線を用いて、ローヤルゼリー酵素分解物における各ペプチドの含有量を求めることができる。
　本発明のローヤルゼリー酵素分解物は、抗酸化活性を有するＹＤを含むため、抗酸化活性を有し得る。本発明のローヤルゼリー酵素分解物はさらに、抗酸化活性及び抗糖尿病活性を有するＭＰ及びＶＰを含むことで、抗酸化活性及び抗糖尿病活性を有し得る。
　（４）食品組成物、医薬部外品又は医薬組成物
　本発明の食品組成物、医薬部外品又は医薬組成物は、上記ローヤルゼリー酵素分解物を含み、抗酸化活性を有し得る。
　上記のローヤルゼリー酵素分解物は、医薬組成物、医薬部外品又は食品組成物等の製品としてそのまま用いられてもよく、医薬組成物、医薬部外品又は食品組成物等の製品の一成分として用いられてもよい。ローヤルゼリー酵素分解物を含む製品は、例えば、製品の製造工程における中間製品に、上述のローヤルゼリー酵素分解物を添加することにより得ることができる。
　医薬組成物、医薬部外品又は食品組成物の一成分としてローヤルゼリー酵素分解物を用いる場合、医薬組成物、医薬部外品又は食品組成物は、ローヤルゼリー組成物以外の成分として、例えば、薬学的に許容される成分（例えば、賦形剤、結合材、滑沢剤、崩壊剤、乳化剤、界面活性剤、基剤、溶解補助剤、懸濁化剤）、食品として許容される成分（例えば、ミネラル類、ビタミン類、フラボノイド類、キノン類、ポリフェノール類、アミノ酸、核酸、必須脂肪酸、清涼剤、結合剤、甘味料、崩壊剤、滑沢剤、着色料、香料、安定化剤、防腐剤、徐放調整剤、界面活性剤、溶解剤、湿潤剤）を含んでいてもよい。
　ローヤルゼリー酵素分解物を含む製品は、液体の形態、半液体形態又は固体形態であってもよい。液体の形態としては、ドリンク剤、シロップ、液剤、懸濁液、乳濁液、注射剤（使用時に、蒸留水又はアミノ酸輸液若しくは電解質輸液等の輸液に配合して液剤として調製する場合を含む）であってもよく、半液体形態としてはペースト状及びゼリー状の形態であってよく、固体形態としては凍結乾燥物（例えば、凍結乾燥粉末）、錠剤（素錠、糖衣錠、発泡錠、フィルムコート錠、チュアブル錠、トローチ剤等を含む）、カプセル剤、丸剤、粉末剤（散剤）、細粒剤、顆粒剤等の剤形であってもよい。これらの各種製剤は、例えば、上述の方法により得られたローヤルゼリー酵素分解物と、必要に応じて他の成分とを混合して上記剤形に成形することによって調製することができる。
　上述のローヤルゼリー酵素分解物を食品組成物として又は食品組成物の一成分として用いる場合、該食品組成物は、食品の３次機能、すなわち体調調節機能が強調されたものであることが好ましい。食品の３次機能が強調された製品としては、例えば、健康食品、機能性表示食品、栄養機能食品、栄養補助食品、サプリメント及び特定保健用食品を挙げることができる。
　食品組成物としては例えば、コーヒー、ジュース及び茶飲料等の清涼飲料、乳飲料、乳酸菌飲料、ヨーグルト飲料、炭酸飲料、並びに、日本酒、洋酒、果実酒及びハチミツ酒等の酒などの飲料；カスタードクリーム等のスプレッド；フルーツペースト等のペースト；チョコレート、ドーナツ、パイ、シュークリーム、ガム、ゼリー、キャンデー、クッキー、ケーキ及びプリン等の洋菓子；大福、餅、饅頭、カステラ、あんみつ及び羊羹等の和菓子；アイスクリーム、アイスキャンデー及びシャーベット等の氷菓；カレー、牛丼、雑炊、味噌汁、スープ、ミートソース、パスタ、漬物、ジャム等の調理済みの食品；ドレッシング、ふりかけ、旨味調味料及びスープの素等の調味料などが挙げられる。
　本発明の食品組成物、医薬部外品又は医薬組成物におけるローヤルゼリー酵素分解物の含有量は、組成物の乾燥重量を１００重量部とした場合、ローヤルゼリー酵素分解物が０．１重量部以上、１０重量部以上、２５重量部以上、４０重量部以上、又は５０重量部以上であってもよく、また、１００重量部以下、９０重量部以下、８０重量部以下、７０重量部以下、６０重量部以下、５５重量部以下であってよい。
　以下、本発明を実施例により詳細に説明する。しかし、本発明はこれら実施例等になんら限定されるものではない。
〔実施例１〕
　生ローヤルゼリー４７４ｇを３Ｌフラスコに量りとり、イオン交換水４００ｍｌを加えて均一になるまで攪拌してローヤルゼリー希釈液を調製した。２Ｎ　ＮａＯＨ水溶液を加えてローヤルゼリー希釈液のｐＨを７．８に調整した。次に、エンドペプチダーゼ作用とエキソペプチダーゼ作用の両方を有するプロテアックス（天野エンザイム株式会社）４．７５ｇをイオン交換水２０ｍＬに溶かした溶液をローヤルゼリー希釈液に加え、さらにイオン交換水を全量が９８０ｇになるように加えた。反応混合物をプロペラで撹拌しながら５０℃（恒温水槽）で２時間反応させて、加水分解を行った。恒温水槽の温度を８０℃に上げて１５分間攪拌し酵素を失活させた後、結晶セルロース１１．７３ｇ、ローカストビーンガム５．８５ｇを混合後、水冷した。
〔比較例１〕
　酵素として、プロテアックスに代えて、アクチナーゼＡＳ（科研製薬株式会社）を使用しｐＨを８．８とした以外は、実施例１と同様にして、ローヤルゼリー酵素分解物を得た。
　＜酵素分解度測定＞
　ゲルろ過分析を用いて分解後の化合物の分子量を測定することで酵素分解度の確認を行った。酵素反応後溶液を２０μＬ量りとり、９．５ｍＬの５０ｍＭ　ＮａＰｉ／０．３Ｍ　ＮａＣｌ　ｂｕｆｆｅｒ（ｐＨ７．０）を加え分析サンプルとした。チトクロムＣ（ｎａｃａｌａｉ　ｔｅｓｑｕｅ、Ｍ．Ｗ．＝１２，３８４）を指標とし、チトクロムＣより早く溶出される成分の割合を算出した。分析条件を以下に示す。
カラム：Ｓｈｏｄｅｘ　ＰＲＯＴＥＩＮ　ＫＷ－８０２．５（５μｍ，８．０ｍｍ　ｉ．ｄ．×３００ｍｍ，昭和電工株式会社）、
ガードカラム：Ｓｈｏｄｅｘ　ＰＲＯＴＥＩＮ　ＫＷ－Ｇ（５μｍ，８．０ｍｍ　ｉ．ｄ．×１０ｍｍ，昭和電工株式会社）、カラムオーブン：３０℃、流速：０．５ｍＬ／ｍｉｎ、移動相：Ａ；５０ｍＭリン酸Ｎａ／０．３Ｍ　ＮａＣｌ緩衝液（ｐＨ７．０），Ｂ；なし、溶出：Ｂ　０％（６０ｍｉｎ　ｈｏｌｄ）、注入量：１０μＬ、検出：ＵＶ（２２０ｎｍ）。
　結果を表１に示す。実施例１においてチトクロムＣ以前には明らかなピークは見られず、比較例と同程度の高分解度となることが確認された。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000001
　＜ヒスタミン遊離試験（アレルゲン性確認）＞
　実施例１及び比較例１で得たローヤルゼリー酵素分解物について、ＣＡＳＴ法（ｃｅｌｌｕｌａｒ　ａｎｔｉｇｅｎ　ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ　ｔｅｓｔ）によって、遊離するヒスタミン量を測定した。
　具体的には、生ローヤルゼリーに対してアレルギー反応を経験したことのある被験者の血液サンプルに対し、生ローヤルゼリーの酵素加水分解物を作用させて、遊離するヒスタミン量を測定した。被験者には、本試験内容を記載した説明書を配布し、試験の趣旨及び内容を十分に説明し、被験者本人の自由意志により参加する旨の同意書を得た者に対してのみ、本試験を行った。遊離ヒスタミンの測定は、市販のＥＬＩＳＡキット（Ｈｉｓｔａｍｉｎｅ　ＥＬＩＳＡ（ＩＭＭＵＮＯ－ＢＩＯＬＯＧＩＣＡＬ　ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＩＥＳ社製））を用いて行った。
　結果を図１に示す。実施例１ではヒスタミン遊離値（ｎｇ／ｍＬ）が比較例１に比べて１／２以下となっており、当該方法によって得られるローヤルゼリー酵素分解物は従来の方法によって得られるローヤルゼリー酵素分解物より優位にアレルゲン性を低下できていると考えられる。
　＜褐変評価＞
　実施例及び比較例の酵素反応後のローヤルゼリー溶液を凍結乾燥し粉末化させ、デジタルカメラで撮影した画像を用いて褐変評価（輝度分析）を行った。撮影は粉末化後及び５０℃にて７日間保管後に行った。輝度の算出はカラーピッカーソフトである「ＦｌａｔＣｏｌｏｒＰｉｃｋｅｒ」を用いて行い、ＨＳＬ色空間における輝度（％）をその値とした。
　粉末後の結果を表２に、５０℃にて７日間保管後の結果を図２に示す。従来の方法では酵素分解により見られていた輝度の低下、褐変の現象が本発明の方法によって得られるローヤルゼリー酵素分解物では見られず、５０℃にて７日間の保管後においても同様に褐変が抑制されていた。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000002
〔実施例３　ローヤルゼリー酵素分解物の組成解析〕
　（試料の調製）
　実施例１の方法にしたがって、プロテアックスで処理したローヤルゼリー溶液を得て、さらに凍結乾燥させ、２つのロット（１８１０３０、１９０５１０）のローヤルゼリー酵素分解物の粉末を得た。比較として、プロテアックスに代えて、アクチナーゼＡＳ（科研製薬株式会社）、プロテアーゼＡ処理ローヤルゼリー、及びプロテアーゼＰ処理ローヤルゼリーを使用し、ｐＨをそれぞれ、８．８、７．８、及び７．８とした以外は、実施例１と同様にして、それぞれのローヤルゼリー酵素分解物の凍結乾燥粉末を得た。また、市販の酵素処理ローヤルゼリーとして、ＭＦ４（アピ株式会社）、ＲＪペプチドパウダー（アピ株式会社）、水溶化ローヤルゼリー末（森川健康堂株式会社）、ブラックローヤルゼリー末（有限会社マルオ食研）、水溶性ローヤルゼリー末（株式会社中原）、及び日新ローヤルゼリーＰ（日新蜂蜜株式会社）を使用した。さらに、酵素処理されていない未酵素処理ローヤルゼリーの乾燥粉末も使用した。
　それぞれの凍結乾燥粉末１００ｍｇに８００μＬの０．１％ギ酸水溶液を添加し、さらに５ｍｍ径のジルコニアビーズを添加し、ビーズ式ホモジナイザーで２５Ｈｚで２分間ホモジナイズした。１５，０００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、上清を１００μＬ回収し、さらに、０．１％ギ酸メタノール溶液３００μＬを添加、１５，０００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、上清を回収し、得られたペプチド溶液を解析のための試料とした。
　（固相カラム処理）
　ＭｏｎｏＳｐｉｎ　Ｃ１８カラムに０．１％ギ酸メタノール溶液を１００μＬ添加し、５，０００ｇで２分間遠心分離し、カラムに０．１％のギ酸を添加した７５％メタノール溶液１００μＬを添加し、さらに５，０００ｇで２分間遠心分離した。処理したカラムに上記得られた試料（ペプチド溶液）を１００μＬ添加し、５，０００ｇで２分間遠心分離し、カラム流出液（未吸着画分）を回収した。カラム流出液全量（約１００μｌ）に、０．１％のギ酸を添加した７５％メタノール溶液１００μＬを添加し、０．２μｍのシリンジフィルターでろ過した。
　（液体クロマトグラフィー－質量分析法（ＬＣ－ＭＳ）解析）
　上記ろ液全量を無希釈でＨＰＬＣバイアルに封入し、そのうち２μＬをＬＣ－ＭＳへ注入し、以下の条件でＬＣ－ＭＳを行った。
使用機器：Ｕｌｔｉｍａｔｅ３０００（Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ）
カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ　ＢＥＨ　Ａｍｉｄｅ（２．１×１５０ｍｍ、ｉ．ｄ．　２．５μｍ　Ｗａｔｅｒｓ）
カラムオーブン：６０℃
溶媒Ａ：１０ｍＭ　ギ酸アンモニウム（ｐＨ２．５）
溶媒Ｂ：１０ｍＭ　ギ酸アンモニウム　９５％アセトニトリル
流速：０．２ｍＬ／分
注入量：２μＬ
グラジェントは表３のとおりである。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000003
 ＭＳ測定条件
使用機器：Ｑ　Ｅｘａｃｔｉｖｅ　ｆｏｃｕｓ
Ｉｏｎ　ｓｏｕｒｃｅ：ＨＥＳＩ
Ｓｃａｎ　ｒａｎｇｅ：７０－１０００ｍ／ｚ
Ｆｕｌｌ　ｓｃａｎ　ｉｓｏｌａｔｉｏｎ：７０，０００
　標準液の各濃度とクロマトグラムより得られた各ピークの面積から検量線を得る。検量線から、試験溶液中の各ペプチド酸濃度を算出し、次式により、検体中の各々の含有量を求めた。
含有量（％）＝Ｙ＝Ｘ×Ｖ×Ｅ／Ｗ／１００００００×１００
含有量（ｍｇ／１００ｇ）＝Ｙ×１００／１００×１０００
Ｙ：ペプチドの含有量（％）
Ｘ：検量線から求めた試料溶液中の各ペプチドの濃度（ｎｇ／ｍＬ）
Ｖ：試料の最終希釈溶液の体積（ｍＬ）
Ｅ：試料の最終希釈溶液の希釈倍率
Ｗ：試料量（ｍｇ）
　（結果）
　各試料のローヤルゼリーに含まれる特定のペプチドについての結果は、表４に示す。表４から、本発明のプロテアックス処理したローヤルゼリー酵素分解物は、他のローヤルゼリーに比べて多く含まれているペプチドとして、ＭＰ（０．７６～０．９４ｍｇ／１００ｇローヤルゼリー酵素分解物）、ＶＰ（６１．４８～７４．７６ｍｇ／１００ｇローヤルゼリー酵素分解物）、ＹＤ（１７３．０２～１８０．９９ｍｇ／１００ｇローヤルゼリー酵素分解物）、ＰＩ（Ｌ）（８．７１～８．８８ｍｇ／１００ｇローヤルゼリー酵素分解物）、ＰＶ（２０．５３～２２．３６ｍｇ／１００ｇローヤルゼリー酵素分解物）、Ｉ（Ｌ）Ｐ（３２．６７～３８．２１ｍｇ／１００ｇローヤルゼリー酵素分解物）、ＰＭ（０．５６～０．９６ｍｇ／１００ｇローヤルゼリー酵素分解物）などが確認された。ＭＰ、ＶＰは抗糖尿病活性及び抗酸化活性を、ＹＤは抗酸化活性を有することが知られているため、本発明のローヤルゼリー酵素分解物は、他のローヤルゼリーに比べて、高い抗糖尿病活性、抗酸化活性を有することが示唆された。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000004

Claims (11)

  1. 　ローヤルゼリーをエンドペプチダーゼ作用とエキソペプチダーゼ作用とを有するペプチダーゼで処理することを特徴とする、アレルギー性が低減され且つ製造時及び製造後の褐変化が抑制されてなるローヤルゼリー酵素分解物の製造方法。
  2. 　前記ペプチダーゼがアスペルギルス・オリゼー産生ペプチダーゼである、請求項１に記載の方法。
  3. 　前記ペプチダーゼの至適温度が５０℃以上である、請求項１又は２に記載の方法。
  4. 　ローヤルゼリーをエンドペプチダーゼ作用とエキソペプチダーゼ作用とを有するペプチダーゼで処理することを特徴とする、ローヤルゼリー酵素分解物のアレルギー性低減且つ製造時及び製造後の褐変化抑制方法。
  5. 　前記ペプチダーゼがアスペルギルス・オリゼー産生ペプチダーゼである、請求項４に記載の方法。
  6. 　前記ペプチダーゼの至適温度が５０℃以上である、請求項４又は５に記載の方法。
  7. 　請求項１～３のいずれか一項に記載の方法によって製造されたローヤルゼリー酵素分解物であって、ローヤルゼリー酵素分解物の乾燥物１００ｇに対して、Ｔｙｒ－Ａｓｐを１００ｍｇ以上含む、ローヤルゼリー酵素分解物。
  8. 　ローヤルゼリー酵素分解物の乾燥物１００ｇに対して、Ｔｙｒ－Ａｓｐを１００ｍｇ以上含む、ローヤルゼリー酵素分解物。
  9. 　さらにローヤルゼリー酵素分解物の乾燥物１００ｇに対して、Ｖａｌ－Ｐｒｏを４０ｍｇ以上、及び、Ｍｅｔ－Ｐｒｏを０．５ｍｇ以上含む、請求項７又は８に記載のローヤルゼリー酵素分解物。
  10. 　さらに、Ｐｒｏ－Ｉｌｅ及び／若しくはＰｒｏ－Ｌｅｕ、Ｐｒｏ－Ｖａｌ、Ｉｌｅ－Ｐｒｏ及び／若しくはＬｅｕ－Ｐｒｏ、並びにＰｒｏ－Ｍｅｔからなる群より選択される１種以上のペプチドを含む、請求項７～９のいずれか一項に記載のローヤルゼリー酵素分解物。
  11. 　請求項７～１０のいずれか一項に記載のローヤルゼリー酵素分解物を含む、食品組成物、医薬部外品又は医薬組成物。
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