WO2020158912A1

WO2020158912A1 - 細胞外ａｔｐ濃度上昇抑制剤

Info

Publication number: WO2020158912A1
Application number: PCT/JP2020/003619
Authority: WO
Inventors: 藤田　幸子; 孝太郎坂元; ボロンビズワスカザール; 悟高山; 晃明桝谷
Original assignee: 一丸ファルコス株式会社
Priority date: 2019-02-01
Filing date: 2020-01-31
Publication date: 2020-08-06
Also published as: JPWO2020158912A1; JP6786193B1

Abstract

ロスマリン酸とルテオリングルクロニドとを所定量含有すること及び／又はペパーミントの抽出物を含有することにより、細胞外ＡＴＰ濃度上昇抑制を高める効果を発揮する組成物、例えば、皮膚外用剤や経口組成物を提供する。

Description

細胞外ＡＴＰ濃度上昇抑制剤

クロスリファレンス

　本出願は、日本国において、２０１９年２月１日に出願された特願２０１９－１６９９０号、２０１９年３月２２日に出願された特願２０１９－５４５３９号、及び２０１９年８月８日に出願された特願２０１９－１４６０４８号に基づく優先権を主張するものであり、当該出願に記載された内容は全て、参照によりそのまま本明細書に援用される。また、本願において引用した全ての特許、特許出願及び文献に記載された内容は全て、参照によりそのまま本明細書に援用される。

　本発明は、細胞外ＡＴＰ濃度上昇抑制の活性を持ち、主にヒトなどの皮膚の粘弾性を改善する効果などを発揮するための組成物（医薬品、食品、化粧品等）、及び／又はこれらに配合する素材に関する。

　皮膚の粘弾性は、年齢や紫外線被曝、化学物質への皮膚露出などによっても低下すると考えられている。例えば、皮膚の「はり」感の有無が健康状態や老化度の評価指標の一つと考えられている。「はり」は、角層・表皮由来のはりと真皮由来のはりの二つに分けられることもある。特に真皮由来のはりは、指で皮膚を押すと押し返すような弾力があり、指を離すと速やかに元に戻る状態をいい、物理的には粘弾性ともいう（特許文献１）。皮膚の粘弾性の低下を引き起こす詳細なメカニズムは明らかになっていないこともあるが、この低下の要因の１つとして、例えば、皮膚の菲薄化も考えられている。

　皮膚の菲薄化は、加齢により表皮および真皮が薄くなる肌老化の代表的な現象の一つである（特許文献２、非特許文献１）。皮膚の菲薄化は、マトリックスメタロプロテアーゼ（以下、ＭＭＰｓという）による細胞外マトリックスの分解が亢進されることが特徴の１つであるが、その詳細なメカニズムについては分かっていない。すなわち、現状は、皮膚の菲薄化を抑制する有効な手段が見出されていないと考えられている。

　老化した皮膚では細胞老化関連分泌現象（Ｓｅｎｅｓｃｅｎｃｅ　Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　Ｓｅｃｒｅｔｏｒｙ　Ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ、以下「ＳＡＳＰ」という）因子の産生亢進が知られている。そこで、本発明の発明者は、老化によるＳＡＳＰの産生亢進が菲薄化の増悪に関与していると考えた。しかし、菲薄化を抑制するためにＳＡＳＰ因子の全てを直接的に抑制することは難しいため、ＳＡＳＰを誘導する主要因子の一つとして考えられている細胞外ＡＴＰに着目をした（非特許文献２）。なお、現状は、この細胞外ＡＴＰの濃度上昇を抑制する手段も見出されていないと考えられている。

Ｄｏｋｋｙｏ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ　２００８　ｖｏｌ．３５（３）：２２７～２３６．ＧＥＮＥＳ　＆　ＤＥＶＥＬＯＰＭＥＮＴ　２０１４　ｖｏｌ．２８：９９－１１４．

特開２０１６－２１６４３６特開２０１１－２４６４４２

　本発明が解決しようとする課題は、細胞外ＡＴＰ濃度上昇抑制の活性を持ち、主にヒトなどの皮膚の粘弾性を改善する効果などを発揮する組成物（医薬品、食品、化粧品等）、及び／又はこれらに配合する新たな素材を提供することである。

　そこで、本発明の発明者は、細胞外ＡＴＰ濃度上昇抑制の活性を持つ物質の探索について鋭意検討を重ねた結果、本発明を完成した。

　本発明は、以下の項を含む。
〔項１〕（Ａ）ロスマリン酸と、（Ｂ）ルテオリングルクロニドとの含有比率が、重量比にて、（Ａ）：（Ｂ）＝１：０．２～１．５である、細胞外ＡＴＰ濃度上昇抑制剤。
〔項２〕ペパーミントの抽出物を含む、細胞外ＡＴＰ濃度上昇抑制剤。
〔項３〕抽出物が、（Ａ）ロスマリン酸と、（Ｂ）ルテオリングルクロニドとを、重量比にて、（Ａ）：（Ｂ）＝１．０：０．２～１．５の比率で含有する、〔項２〕に記載の細胞外ＡＴＰ濃度上昇抑制剤。
〔項４〕〔項１〕から〔項３〕の何れか一項に記載の剤を含有する、皮膚の粘弾性を改善するための組成物。
〔項５〕皮膚の菲薄化を改善するための組成物である、〔項４〕に記載の組成物。
〔項６〕皮膚外用剤の形態である、〔項４〕又は〔項５〕に記載の組成物。
〔項７〕経口組成物の形態である、〔項４〕又は〔項５〕に記載の組成物。

〔項８〕皮膚状態を改善する美容方法であって、ペパーミント抽出物の有効量を対象者の皮膚に塗布する工程を含み、抽出物が、細胞外ＡＴＰ濃度の上昇を抑制することにより皮膚の粘弾性及び／又は皮膚の菲薄化を改善する、美容方法。
〔項９〕組成物が、有効成分としての（Ａ）ロスマリン酸と、（Ｂ）ルテオリングルクロニドとを、重量比にて、（Ａ）：（Ｂ）＝１．０：０．２～１．５の比率で含有する、〔項８〕に記載の美容方法。
〔項１０〕細胞外ＡＴＰ濃度の上昇を抑制することにより皮膚の粘弾性を改善するか、及び／又は皮膚の菲薄化を改善する組成物を製造するための、ペパーミント抽出物の使用。
〔項１１〕組成物が、有効成分としての（Ａ）ロスマリン酸と、（Ｂ）ルテオリングルクロニドとを、重量比にて、（Ａ）：（Ｂ）＝１．０：０．２～１．５の比率で含有する、〔項１０〕に記載の使用。

　本発明により、細胞外ＡＴＰ濃度上昇抑制の活性を持ち、主にヒトなどの皮膚の粘弾性を改善する効果などを発揮する組成物（医薬品、食品、化粧品等）、及び／又はこれらに配合する新たな素材を提供できる。

　以下、本発明を実施するための形態について説明する。
（細胞外ＡＴＰ濃度上昇抑制剤）
　細胞外ＡＴＰ濃度上昇抑制剤は、細胞外のＡＴＰの濃度上昇を抑制するための剤である。この剤は、液体だけでなく、例えば固形等々も挙げられ、例えば皮膚外用剤だけでなく、経口組成物（例えば、固体でも液体でも作製可能）とも考えられる。

（ペパーミント）
　本発明で用いるペパーミント（別名：セイヨウハッカ、コショウハッカ）は、シソ科ハッカ属植物：ペパーミント（Ｍｅｎｔｈａ　ｐｉｐｅｒｉｔａ　Ｌ．）である。「ペパーミント」の抽出物を製造する際には、材料として、例えば、根、根茎、葉、茎、花全草、又はこれらの混合物を用いるが、細胞外ＡＴＰ濃度上昇抑制の活性に寄与する成分以外の有効成分も葉に多くあると考えられることから、材料として葉を用いるのが好ましいと考えられる。

　ペパーミントの抽出物は、例えば、材料を生のまま又は乾燥したものを粉砕後搾取して作製、材料を生のまま又は乾燥したものを粉砕後溶媒で抽出して作製、する。例えば、以下製造例により、ペパーミントの抽出物を製造する。なお、以下実施例で用いるペパーミントの抽出物は、以下製造例に従い、製造された。以下の実施例で用いられるペパーミントの抽出物中には、ロスマリン酸４０３．５５ｐｐｍ、ルテオリングルクロニド１６６．３５ｐｐｍが含有され、（Ａ）ロスマリン酸と（Ｂ）ルテオリングルクロニドとの含有比率が、重量比にて、（Ａ）：（Ｂ）＝１：０．４１、であった。

（ペパーミントの抽出物の製造例）
　ペパーミントの葉を粉砕し、粉砕物を作製する。この粉砕物１００ｇを５０％エタノール溶液２ｋｇに浸漬する。約１０℃～約３０℃の環境で、５～１０日間、この浸漬を行う。この浸漬を経て得られる溶液を、カラム（ＨＰ－２０）にて分画して、ロスマリン酸とルテオリングルクロニドとが含有されている画分を取り出す。この取り出す画分を、更にカラム（ＨＰ－２０）にて精製する。精製後の溶液は、好ましくは「（Ａ）ロスマリン酸と、（Ｂ）ルテオリングルクロニドとの含有比率が、重量比にて、（Ａ）：（Ｂ）＝１：０．２～１．５（（Ａ）が１の際に、（Ｂ）が０．２以上１．５以下）」となっている。なお、下記実施例で用いるペパーミントの抽出物は、（Ａ）ロスマリン酸と、（Ｂ）ルテオリングルクロニドとの含有比率が、重量比にて、（Ａ）：（Ｂ）＝１：０．４６である。

（ロスマリン酸）
　ロスマリン酸（Ｒｏｓｍａｒｉｃ　ａｃｉｄ）は、ポリフェノール類で、エタノールに可溶性である。

（ルテオリングルクノニド）
ルテオリングルクロニド（Ｌｕｔｅｏｌｉｎ　ｇｌｕｃｕｒｏｎｉｄｅ）は、フラボノイドで、例えば、ルテオリン７－グルクロニドや、ルテオリン３′‐グルクロニドが挙げられる。

（ロスマリン酸とルテオリングルクノニドとの含有比率）
　本発明の剤は、細胞外ＡＴＰ濃度上昇抑制の活性を発揮させる観点で、好ましくは、（Ａ）ロスマリン酸と、（Ｂ）ルテオリングルクロニドとの含有比率が、重量比にて、（Ａ）：（Ｂ）＝１：０．２～１．５（（Ａ）が１の際に、（Ｂ）が０．２以上１．５以下）、より好ましくは（Ａ）：（Ｂ）＝１：０．２～１．２（（Ａ）が１の際に、（Ｂ）が０．２以上１．２以下）、より好ましくは（Ａ）：（Ｂ）＝１：０．２５～１．１８（（Ａ）が１の際に、（Ｂ）が０．２５以上１．１８以下）、更に好ましくは（Ａ）：（Ｂ）＝１：０．３～１．１６（（Ａ）が１の際に、（Ｂ）が０．３以上１．１６以下）である。

（ペパーミントの抽出物の製造の際に用いる抽出溶媒）
　抽出溶媒としては、例えば、水、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール、ブタノール、イソブタノール等の低級アルコール或いは含水低級アルコール、プロピレングリコール、１，３－ブチレングリコール、１，２－ブチレングリコール、１，４－ブチレングリコール、１，５－ペンタンジオール、１，２－ペンタンジオール、１，３－ペンタンジオール、１，４－ペンタンジオール、１，３，５－ペンタントリオール、グリセリン、ポリエチレングリコール（分子量１００～１０万）等の多価アルコール或いは含水多価アルコール、アセトン、酢酸エチル、ジエチルエーテル、ジメチルエーテル、エチルメチルエーテル、ジオキサン、アセトニトリル、キシレン、ベンゼン、クロロホルム、四塩化炭素、フェノール、トルエン等の各種有機溶媒や、適宜規定度を調製した酸（塩酸、硫酸、硝酸、リン酸、ギ酸、酢酸等）やアルカリ（水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化カルシウム、アンモニア等）の中から選ばれる１種もしくは２種以上の混液が挙げられるが、溶媒を置換するケースも想定できるようにする観点で、エタノールを用いるのが好ましい。

（その他）
　本発明で用いるペパーミントの抽出物は、溶媒抽出後、更に適宜精製操作を施すことも可能である。精製操作は、例えば、酸（塩酸、硫酸、硝酸、リン酸、有機酸等）又はアルカリ（水酸化ナトリウム、水酸化カルシウム、アンモニア等）添加による分解、微生物による発酵又は代謝変換、イオン交換樹脂や活性炭、ケイ藻土等による成分吸着、種々の分離モード（イオン交換、親水性吸着、疎水性吸着、サイズ排除、配位子交換、アフィニティー等）を有するクロマトグラフィーを用いた分画、濾紙やメンブランフィルター、限外濾過膜等を用いた濾過、加圧又は減圧、加温又は冷却、乾燥、ｐＨ調整、脱臭、脱色、長時間の静置保管等であり、これらを任意に選択し、組合わせた処理を行うことも可能である。

（皮膚の粘弾性を改善するための組成物）
　本発明における「皮膚の粘弾性を改善する」は、「皮膚の粘弾性の低下を抑制すること（皮膚の粘弾性の低下を予防すること、など）」だけでなく、例えば「皮膚の粘弾性の低下が生じてしまった後、所定の組成物の投与（経口投与、経皮投与、皮膚への塗布など）により、皮膚の粘弾性の症状が改善されること（皮膚の厚みが増すことなど）」、も含む。また、この組成物の形態は、例えば、皮膚外用剤の形態、経口組成物の形態、が挙げられる。なお、皮膚の粘弾性の低下は、例えば皮膚の菲薄化により生じることもある。

（皮膚の菲薄化を改善するための組成物）
　本発明における「皮膚の菲薄化を改善する」は、「皮膚の菲薄化を抑制すること（皮膚の菲薄化を予防すること、など）」だけでなく、例えば「皮膚の菲薄化が生じてしまった後、所定の組成物の投与（経口投与、経皮投与、皮膚への塗布など）により、皮膚の菲薄化の症状が改善されること（皮膚の厚みが増すことなど）」、も含む。また、この組成物の形態は、例えば、皮膚外用剤の形態、経口組成物の形態、が挙げられる。

（経口組成物の形態）
　本発明による経口組成物は、例えば、飲料、食品、医薬品、医薬部外品が挙げられる。

（皮膚外用剤の形態）
　本発明による皮膚外用剤は、アンプル、カプセル、粉末、顆粒、液体、ゲル、気泡、エマルジョン、シート、ミスト、スプレー剤等利用上の適当な形態の１）医薬品類、２）医薬部外品類、３）局所用又は全身用の皮膚外用剤類（例えば、化粧水、乳液、クリーム、軟膏、ローション、オイル、パック等の基礎化粧料、固形石鹸、液体ソープ、ハンドウォッシュ等の洗顔料や皮膚洗浄料、マッサージ用剤、クレンジング用剤、除毛剤、脱毛剤、髭剃り処理料、アフターシェーブローション、プレショーブローション、シェービングクリーム、ファンデーション、口紅、頬紅、アイシャドウ、アイライナー、マスカラ等のメークアップ化粧料、香水類、美爪剤、美爪エナメル、美爪エナメル除去剤、パップ剤、プラスター剤、テープ剤、シート剤、貼付剤、エアゾール剤等）、４）頭皮・頭髪に適用する薬用又は／及び化粧用の製剤類（例えば、シャンプー剤、リンス剤、ヘアートリートメント剤、プレヘアートリートメント剤、パーマネント液、染毛料、整髪料、ヘアートニック剤、育毛・養毛料、パップ剤、プラスター剤、テープ剤、シート剤、エアゾール剤等）、５）浴湯に投じて使用する浴用剤、６）その他、腋臭防止剤や消臭剤、制汗剤、衛生用品、衛生綿類、ウエットティシュ等が挙げられる。

（皮膚外用剤の構成成分）
　また、このような剤には、必要に応じて、本発明の効果を損ねない範囲で以下に例示する成分や添加剤を任意に選択・併用して製造することができる。

（１）各種油脂類
　アボカド油、アーモンド油、ウイキョウ油、エゴマ油、オリーブ油、オレンジ油、オレンジラファー油、ゴマ油、カカオ脂、カミツレ油、カロット油、キューカンバー油、牛脂脂肪酸、ククイナッツ油、サフラワー油、シア脂、液状シア脂、大豆油、ツバキ油、トウモロコシ油、ナタネ油、パーシック油、ヒマシ油、綿実油、落花生油、タートル油、ミンク油、卵黄油、パーム油、パーム核油、モクロウ、ヤシ油、牛脂、豚脂、スクワレン、スクワラン、プリスタン又はこれら油脂類の水素添加物（硬化油等）等。

（２）ロウ類
　ミツロウ、カルナバロウ、鯨ロウ、ラノリン、液状ラノリン、還元ラノリン、硬質ラノリン、カンデリラロウ、モンタンロウ、セラックロウ、ライスワックス等。

（３）鉱物油
　流動パラフィン、ワセリン、パラフィン、オゾケライド、セレシン、マイクロクリスタンワックス等。

（４）脂肪酸類
　ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、ベヘン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸、ドコサヘキサエン酸、エイコサペンタエン酸、１２－ヒドロキシステアリン酸、ウンデシレン酸、トール油、ラノリン脂肪酸等の天然脂肪酸、イソノナン酸、カプロン酸、２－エチルブタン酸、イソペンタン酸、２－メチルペンタン酸、２－エチルヘキサン酸、イソペンタン酸等の合成脂肪酸。

（５）アルコール類
　エタノール、イソプロパノール、ラウリルアルコール、セタノール、ステアリルアルコール、オレイルアルコール、ラノリンアルコール、コレステロール、フィトステロール、フェノキシエタノール等の天然アルコール、２－ヘキシルデカノール、イソステアリルアルコール、２－オクチルドデカノール等の合成アルコール。

（６）多価アルコール類
　酸化エチレン、エチレングリコール、ジエチレングリコール、トリエチレングリコール、エチレングリコールモノエチルエーテル、エチレングリコールモノブチルエーテル、ジエチレングリコールモノメチルエーテル、ジエチレングリコールモノエチルエーテル、ポリエチレングリコール、酸化プロピレン、プロピレングリコール、ポリプロピレングリコール、１，３－ブチレングリコール、ペンチルグリコール、グリセリン、ペンタエリトリトール、トレイトール、アラビトール、キシリトール、リビトール、ガラクチトール、ソルビトール、マンニトール、ラクチトール、マルチトール等。

（７）エステル類
　ミリスチン酸イソプロピル、パルミチン酸イソプロピル、ステアリン酸ブチル、ラウリン酸ヘキシル、ミリスチン酸ミリスチル、オレイン酸オレイル、オレイン酸デシル、ミリスチン酸オクチルドデシル、ジメチルオクタン酸ヘキシルデシル、乳酸セチル、乳酸ミリスチル、フタル酸ジエチル、フタル酸ジブチル、酢酸ラノリン、モノステアリン酸エチレングリコール、モノステアリン酸プロピレングリコール、ジオレイン酸プロピレングリコール等。

（８）金属セッケン類
　ステアリン酸アルミニウム、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸亜鉛、ステアリン酸カルシウム、パルミチン酸亜鉛、ミリスチン酸マグネシウム、ラウリン酸亜鉛、ウンデシレン酸亜鉛等。

（９）ガム質、糖類又は水溶性高分子化合物
　アラビアゴム、ベンゾインゴム、ダンマルゴム、グアヤク脂、アイルランド苔、カラヤゴム、トラガントゴム、キャロブゴム、クインシード、寒天、カゼイン、乳糖、果糖、ショ糖又はそのエステル、トレハロース又はその誘導体、デキストリン、ゼラチン、ペクチン、デンプン、カラギーナン、カルボキシメチルキチン又はキトサン、エチレンオキサイド等のアルキレン（Ｃ_２～Ｃ_４）オキサイドが付加されたヒドロキシアルキル（Ｃ_２～Ｃ_４）キチン又はキトサン、低分子キチン又はキトサン、キトサン塩、硫酸化キチン又はキトサン、リン酸化キチン又はキトサン、アルギン酸又はその塩、ヒアルロン酸又はその塩、コンドロイチン硫酸又はその塩、ヘパリン、エチルセルロース、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシエチルセルロース、カルボキシエチルセルロースナトリウム、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ニトロセルロース、結晶セルロース、ポリビニルアルコール、ポリビニルメチルエーテル、ポリビニルピロリドン、ポリビニルメタアクリレート、ポリアクリル酸塩、ポリエチレンオキサイドやポリプロピレンオキサイド等のポリアルキレンオキサイド又はその架橋重合物、カルボキシビニルポリマー、ポリエチレンイミン等。

（１０）界面活性剤
　アニオン界面活性剤（アルキルカルボン酸塩、アルキルスルホン酸塩、アルキル硫酸エステル塩、アルキルリン酸エステル塩）、カチオン界面活性剤（アルキルアミン塩、アルキル四級アンモニウム塩）、両性界面活性剤：カルボン酸型両性界面活性剤（アミノ型、ベタイン型）、硫酸エステル型両性界面活性剤、スルホン酸型両性界面活性剤、リン酸エステル型両性界面活性剤、非イオン界面活性剤（エーテル型非イオン界面活性剤、エーテルエステル型非イオン界面活性剤、エステル型非イオン界面活性剤、ブロックポリマー型非イオン界面活性剤、含窒素型非イオン界面活性剤）、その他の界面活性剤（天然界面活性剤、タンパク質加水分解物の誘導体、高分子界面活性剤、チタン・ケイ素を含む界面活性剤、フッ化炭素系界面活性剤）等。

（１１）各種ビタミン類
　ビタミンＡ群：レチノール、レチナール（ビタミンＡ１）、デヒドロレチナール（ビタミンＡ２）、カロチン、リコピン（プロビタミンＡ）、ビタミンＢ群：チアミン塩酸塩、チアミン硫酸塩（ビタミンＢ１）、リボフラビン（ビタミンＢ２）、ピリドキシン（ビタミンＢ６）、シアノコバラミン（ビタミンＢ１２）、葉酸類、ニコチン酸類、パントテン酸類、ビオチン類、コリン、イノシトール類、ビタミンＣ群：ビタミンＣ酸又はその誘導体、ビタミンＤ群：エルゴカルシフェロール（ビタミンＤ２）、コレカルシフェロール（ビタミンＤ３）、ジヒドロタキステロール、ビタミンＥ群：ビタミンＥ又はその誘導体、ユビキノン類、ビタミンＫ群：フィトナジオン（ビタミンＫ１）、メナキノン（ビタミンＫ２）、メナジオン（ビタミンＫ３）、メナジオール（ビタミンＫ４）、その他、必須脂肪酸（ビタミンＦ）、カルニチン、フェルラ酸、γ－オリザノール、オロット酸、ビタミンＰ類（ルチン、エリオシトリン、ヘスペリジン）、ビタミンＵ等。

（１２）各種アミノ酸類
　バリン、ロイシン、イソロイシン、トレオニン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン、リジン、グリシン、アラニン、アスパラギン、グルタミン、セリン、システイン、シスチン、チロシン、プロリン、ヒドロキシプロリン、アスパラギン酸、グルタミン酸、ヒドロキシリジン、アルギニン、オルニチン、ヒスチジン等や、それらの硫酸塩、リン酸塩、硝酸塩、クエン酸塩、或いはピロリドンカルボン酸のごときアミノ酸誘導体等。

（１３）添加物
　添加しようとする製品種別、形態に応じて常法的に行われる加工（例えば、粉砕、製粉、洗浄、加水分解、醗酵、精製、圧搾、抽出、分画、ろ過、乾燥、粉末化、造粒、溶解、滅菌、ｐＨ調整、脱臭、脱色等を任意に選択、組み合わせた処理）を行い、各種の素材から任意に選択して供すれば良い。

　尚、抽出に用いる溶媒については、供する製品の使用目的、種類、或いは後に行う加工処理等を考慮した上で選択すれば良いが、通常では、水、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール、ブタノール、イソブタノール等の低級アルコール或いは含水低級アルコール、プロピレングリコール、１，３－ブチレングリコール、グリセリン等の多価アルコール或いは含水多価アルコール、アセトン、酢酸エチル等の各種有機溶媒の中から選ばれる１種若しくは２種以上の混液を用いるのが望ましい。但し、用途により有機溶媒の含有が好ましくない場合においては、水のみを使用したり、若しくは抽出後に除去しやすいエタノールを採用し、単独又は水との任意の混液で用いたりすれば良く、又、搾取抽出したものでも良い。

　尚、植物又は動物系原料由来の添加物を、全身用又は局所用の外用剤、化粧品類に供する場合、皮膚や頭髪の保護をはじめ、保湿、感触・風合いの改善、柔軟性の付与、刺激の緩和、芳香によるストレスの緩和、細胞賦活（細胞老化防止）、炎症の抑制、肌質・髪質の改善、肌荒れ防止及びその改善、発毛、育毛、脱毛防止、光沢の付与、清浄効果、疲労の緩和、血流促進、温浴効果等の美容的効果のほか、香付け、消臭、増粘、防腐、緩衝等の効果も期待できる。

　さらにこの他にも、これまでに知られている各原料素材の様々な美容的、薬剤的効果を期待し、これらを組み合わせることによって、本発明の目的とする効果の増進を図り、多機能的な効果を期待した製品とすることも可能である。なお、以下の実施例において、有効成分等の添加量を示すパーセンテージは、特に異なる記載がない限り重量％を意味する。

　以下、本発明の実施例について、説明する。以下、実施例で挙げる実験で用いた実験材料は次の通りである。
・正常ヒト成人表皮角化細胞：ＫＫ－４１０９（クラボウ）、ヒトの年齢で４０歳以上の細胞。
・正常ヒト成人皮膚繊維芽細胞：ＫＦ－４１０９（クラボウ）、ヒトの年齢で４０歳以上の細胞。
・正常ヒト新生児表皮角化細胞：ＫＫ－４００９（クラボウ）
・正常ヒト新生児包皮皮膚繊維芽細胞：ＫＦ－４００９（クラボウ）
・ＫＧ２培地：カルシウム０．０６ｍＭ含有のＨｕＭｅｄｉａ　ＫＧ２培地（クラボウ）。
・ＫＧ２　ＨＣ－培地：ハイドロコルチーゾン（ＨＣ）が除去された、カルシウム０．０６ｍＭ含有のＨｕＭｅｄｉａ　ＫＧ２培地（クラボウ）。

（実験１（ＳＡＳＰ因子の産生能の評価））
　ＡＴＰとＳＡＳＰ因子との関連性を確認するため、正常ヒト成人皮膚表皮角化細胞を用いてＳＡＳＰ因子（ＩＬ－１β、ＩＬ－８、ＩＬ－６）の産生量を評価した。

　本実験において、正常ヒト成人表皮角化細胞を用いた。前培養はＫＧ２培地を使用した。本実験ではＫＧ２　ＨＣ－培地を使用した。

　５×１０^４個の正常ヒト表皮角化細胞をφ３５ｍｍディッシュに播種し、７２時間培養した。その後、ＨｕＭｅｄｉａ　ＫＧ２　ＨＣ－培地（ハイドロコルチーゾン除去、カルシウム０．０６ｍＭ）に置換した。２４時間培養後、新たなＨｕＭｅｄｉａ　ＫＧ２　ＨＣ－培地に置換し、試料（ＡＴＰ　３０μＭ、１００μＭ、３００μＭ（Ｓｉｇｍａ：Ａｄｅｎｏｓｉｎｅ　５′－ｔｒｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ　ｄｉｓｏｄｉｕｍ　ｓａｌｔ　ｈｙｄｒａｔｅ　９９％））を添加し、２４時間培養した。培養後、上清を回収し上清中のＩＬ－１β量をＩＬ－１β　ＥＡＳＩＡ　Ｋｉｔ（Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ：ＫＡＣ１２１１）、ＩＬ－６量をＩＬ－６　Ｈｕｍａｎ　ＥＬＩＳＡ　Ｋｉｔ（Ｔｅｒｍｏ　Ｆｉｓｈｅｒ：ＥＨ２ＩＬ６）、ＩＬ－８量をＩＬ－８　Ｈｕｍａｎ　ＥＬＩＳＡ　Ｋｉｔ（ＲＳＤ：　Ｄ８０００Ｃ）を用いて評価した。なお、コントロールは、ＡＴＰを添加していない群である。

　評価した結果は次のようになった。
　ＩＬ－１β量については、コントロールが１００に対し、ＡＴＰ３０μＭ添加群では１５１．１３、ＡＴＰ１００μＭ添加群では１５５．７５であった。それぞれの添加群では、コントロールに比べ、有意に高い数値となった。

　ＩＬ－８量については、コントロールが１００に対し、ＡＴＰ３０μＭ添加群では５１５．２０、ＡＴＰ１００μＭ添加群では５１０．１０、ＡＴＰ３００μＭ添加群では５５８．５４であった。それぞれの添加群では、コントロールに比べ、有意に高い数値となった。

　ＩＬ－６量については、コントロールが１００に対し、ＡＴＰ３０μＭ添加群では２９０．４５、ＡＴＰ１００μＭ添加群では３３９．２５、ＡＴＰ３００μＭ添加群では３４０．３０であった。それぞれの添加群では、コントロールに比べ、有意に高い数値となった。

　よって、ＡＴＰの添加により、ＳＡＳＰ因子の産生亢進が確認でき、ＡＴＰとＳＡＳＰ因子との関連性を確認できた。なお、この評価では、Ｄｕｎｎｅｔｔ検定により、有意な値かどうかを検定した。

（実験２（有効成分の確認））
　ペパーミントの抽出物中の有効成分の確認のため、以下の実験を行った。
　本実験において、２種類の細胞、正常ヒト成人表皮角化細胞と正常ヒト成人皮膚繊維芽細胞とを用いた。正常ヒト成人表皮角化細胞の準備においては、前培養はＫＧ２培地を使用した。本実験ではＫＧ２　ＨＣ－培地を使用した。

　正常ヒト成人皮膚繊維芽細胞の準備のおいては、前培養は５％ＦＢＳを含むＤＭＥＭ培地（以下、ＤＭＥＭ培地を「ＤＭＥＭ」と標記することもある）を使用し、本実験では０．２５％ＦＢＳを含むＤＭＥＭを使用した。５％ＣＯ_２、３７℃の条件で培養した。

　５×１０^４個の正常ヒト表皮角化細胞をφ３５ｍｍディッシュに播種し、７２時間培養した。その後、ＫＧ２　ＨＣ－培地に置換した。２４時間培養後、新たなＨｕＭｅｄｉａ　ＫＧ２　ＨＣ－培地に置換し、試料（ＡＴＰ　３０μＭ（Ｓｉｇｍａ：Ａｄｅｎｏｓｉｎｅ　５′－ｔｒｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ　ｄｉｓｏｄｉｕｍ　ｓａｌｔ　ｈｙｄｒａｔｅ　９９％）、Ｌｕｔｅｏｌｉｎ　ｇｒｕｃｌｏｎｉｄｅ（０．１７３μＭと１．７３μＭ）、Ｒｏｓｍａｒｉｎｉｃ　ａｃｉｄ（１．０μＭと１０μＭ））を添加し、２４時間培養した。その後、上清を回収しコンディションメディウム：ＣＭとして、０．２５％ＦＢＳを含むＤＭＥＭと１：１の比率になるように、ヒト皮膚繊維芽細胞（ＮＨＤＦ）に加え、７２時間培養した。培養後、上清を回収し上清中のＰｒｏｃｏｌｌａｇｅｎの濃度をＰｒｏｃｏｌｌａｇｅｎ　Ｋｉｔ（Ｔａｋａｒａ：ＭＫ１０１）を用いて、評価した。ここで、コントロールは、ＡＴＰ　３０μＭのみ添加した群である。

　評価した結果は次のようになった。Ｐｒｏｃｏｌｌａｇｅｎの濃度（量）は、コントロール１００に対し、Ｒｏｓｍａｒｉｎｉｃ　ａｃｉｄ０．１７３μＭ添加した群では１１９．２、Ｒｏｓｍａｒｉｎｉｃ　ａｃｉｄ１．７３μＭ添加した群では１７３．７（コントロールに比べ有意な差がある）、Ｌｕｔｅｏｌｉｎ　ｇｒｕｃｌｏｎｉｄｅ１．０μＭ添加した群では１０１．６、Ｌｕｔｅｏｌｉｎ　ｇｒｕｃｌｏｎｉｄｅ１０μＭ添加した群では１４９．６（コントロールに比べ有意な差）であった。なお、この評価では、Ｄｕｎｎｅｔｔ検定を用い、ｐ値が０．０５未満を統計的に有意とみなした。
　よって、有効成分は、Ｌｕｔｅｏｌｉｎ　ｇｒｕｃｌｏｎｉｄｅ及び／又はＲｏｓｍａｒｉｎｉｃ　ａｃｉｄと考えられる。

（実験３（ＵＶＢ照射によるＳＡＳＰ因子とＭＭＰｓとの産生量の評価））
　細胞に対しＵＶＢ照射により傷害を与えた場合、その後ペパーミントの抽出物を所定量添加した場合の変化を確認した。

　本実験において、２種類の細胞、正常ヒト新生児表皮角化細胞と正常ヒト新生児包皮皮膚繊維芽細胞とを用いた。
　正常ヒト新生児表皮角化細胞の準備においては、前培養はＫＧ２培地を使用した。本実験ではＫＧ２　ＨＣ－培地を使用した。
　正常ヒト新生児包皮皮膚繊維芽細胞の準備のおいては、前培養は５％ＦＢＳを含むＤＭＥＭを使用し、本実験では０．２５％ＦＢＳを含むＤＭＥＭを使用した。５％ＣＯ_２、３７℃の条件で培養した。

　７×１０^４個の正常ヒト表皮角化細胞をφ３５ｍｍ　ディッシュに播種し７５％コンフルエント状態になるまで培養した。その後、ＫＧ２　ＨＣ－培地に置換し、試料（溶媒又はペパーミントの抽出物）を添加し１時間培養した。培養後、ＵＶＢ照射（２０ｍＪ／ｃｍ^２）をし、照射後直ちにＨｕＭｅｄｉａ　ＫＧ２　ＨＣ－培地に置換した。２４時間培養後、上清を回収し上清中のＩＬ－１β量をＩＬ－１β　ＥＡＳＩＡ　Ｋｉｔ（Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ：ＫＡＣ１２１１）、ＩＬ－６量をＩＬ－６　Ｈｕｍａｎ　ＥＬＩＳＡ　Ｋｉｔ（Ｔｅｒｍｏ　Ｆｉｓｈｅｒ：ＥＨ２ＩＬ６）、ＩＬ－８量をＩＬ－８　Ｈｕｍａｎ　ＥＬＩＳＡ　Ｋｉｔ（ＲＳＤ：Ｄ８０００Ｃ）を用いて評価した。

　評価した結果は次のようになった。
　コントロール（ＵＶＢを照射していない群）が１００に比べ、ＵＶＢ照射群のＩＬ－１β量が６０５．１３（有意な値）、ＵＶＢ照射群のＩＬ－６量が８３８．６７（有意な値）、ＵＶＢ照射群のＩＬ－８量が２３３１．９９（有意な値）であった。なお、この評価では、ｔ検定により、有意な値かどうかを検定した。

　よって、ＵＶＢにより、細胞に対し細胞傷害（炎症など）が与えられたことを確認して、このまま、ＭＭＰｓ量（ＭＭＰ－１量及びＭＭＰ－３量）の測定、ペパーミントの抽出物の添加の有無によりＭＭＰｓ量の違いの確認、を行った。

　上述の回収した上清の一部をコンディションメディウム：ＣＭとし、０．２５％ＦＢＳを含むＤＭＥＭと１：１の比率になるように、ヒト皮膚繊維芽細胞（ＮＨＤＦ）に加え、７２時間培養した。その後、培地中のＭＭＰ－１量及びＭＭＰ－３量をＨｕｍａｎ　ＭＭＰ１　ＥＬＩＳＡ　Ｋｉｔ（Ａｂｃａｍ：ａｂ１００６０４）とＨｕｍａｎ　ＭＭＰ３　ＥＬＩＳＡ　Ｋｉｔ（Ａｂｃａｍ：ａｂ１００６０４）を用いて、評価した。

　評価した結果は次のようになった。
　ＭＭＰ－１量の測定においては、コントロール（ＵＶＢ照射していない群）では１００に対し、ＵＶＢ照射した群（ペパーミントの抽出物を添加していない群）では１６９．４０、ＵＶＢ照射した群においてペパーミントの抽出物を最終濃度０．００１％添加した群では８２．４６、ＵＶＢ照射した群においてペパーミントの抽出物を最終濃度０．０１％添加した群では８３．８１（ＵＶＢ照射した群に比べ有意差あり）、ＵＶＢ照射した群においてペパーミントの抽出物を最終濃度０．１％添加した群では９７．９２（ＵＶＢ照射した群に比べ有意差あり）であった。なお、この評価では、Ｄｕｎｎｅｔｔ検定により、有意な値かどうかを検定した。

　ＭＭＰ－３量の測定においては、コントロール（ＵＶＢ照射していない群）では１００に対し、ＵＶＢ照射した群（ペパーミントの抽出物を添加していない群）では２４０．５５、ＵＶＢ照射した群においてペパーミントの抽出物を最終濃度０．００１％添加した群では７８．１０、ＵＶＢ照射した群においてペパーミントの抽出物を最終濃度０．０１％添加した群では７２．９９（ＵＶＢ照射した群に比べ有意差あり）、ＵＶＢ照射した群においてペパーミントの抽出物を最終濃度０．１％添加した群では７４．９３（ＵＶＢ照射した群に比べ有意差あり）であった。なお、この評価では、Ｄｕｎｎｅｔｔ検定により、有意な値かどうかを検定した。

　よって、ペパーミントの抽出物の添加により、上述での述べた皮膚の菲薄化に関与していると考えられているＭＭＰｓの発現が抑制された。

（実験４（ＡＴＰ添加によるＳＡＳＰ因子の発現上昇確認と、その後ペパーミントの抽出物を添加した場合のＳＡＳＰ因子の発現抑制確認））
　本実験において、正常ヒト成人表皮角化細胞を用いた。前培養はＫＧ２培地を使用し、５％ＣＯ_２、３７℃の条件で培養した。本実験ではＫＧ２　ＨＣ－培地を使用した。

　５×１０^４個の正常ヒト成人表皮角化細胞をφ３５ｍｍディッシュに播種し、７２時間培養した。その後、ＫＧ２　ＨＣ－培地に置換した。２４時間培養後、ＡＴＰ３０μＭ（Ｓｉｇｍａ：Ａｄｅｎｏｓｉｎｅ　５′－ｔｒｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ　ｄｉｓｏｄｉｕｍ　ｓａｌｔ　ｈｙｄｒａｔｅ　９９％）またはＡＴＰ３０μＭとペパーミントの抽出物０．１％を含む、ＫＧ２　ＨＣ－培地に置換した。２４時間培養後、上清を回収し上清中のＩＬ－１β量をＩＬ－１β　ＥＡＳＩＡ　Ｋｉｔ（Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ：ＫＡＣ１２１１）、ＩＬ－６量をＩＬ－６　Ｈｕｍａｎ　ＥＬＩＳＡ　Ｋｉｔ（Ｔｅｒｍｏ　Ｆｉｓｈｅｒ：ＥＨ２ＩＬ６）、ＩＬ－８量をＩＬ－８　Ｈｕｍａｎ　ＥＬＩＳＡ　Ｋｉｔ（ＲＳＤ：Ｄ８０００Ｃ）を用いて評価した。なお、この評価においては、コントロールとしてＡＴＰを添加した群とした。

　ＩＬ－１β量においては、ＡＴＰを添加していない群は７８．７８であるが、コントロールは１００に対し、ＡＴＰを添加して更にペパーミントの抽出物を添加した群は７５．２６であった。

　ＩＬ－６量においては、ＡＴＰを添加していない群は２７．３１であるが、コントロールは１００に対し、ＡＴＰを添加して更にペパーミントの抽出物を添加した群は８７．７４であった。

　ＩＬ－８量においては、ＡＴＰを添加していない群は６１．５５であるが、コントロールは１００に対し、ＡＴＰを添加して更にペパーミントの抽出物を添加した群は６８．５５であった。

　よって、ペパーミントの抽出物の添加により、上述での述べた細胞外ＡＴＰの濃度上昇に関与していると考えられているＳＡＳＰ因子の産生が抑制された。

（実験５（ＳＡＳＰ因子添加によるＭＭＰ－１の濃度変化確認と、その後ペパーミントの抽出物を添加した場合のＭＭＰ－１の濃度抑制確認））
　本実験では、正常ヒト新生児包皮皮膚繊維芽細胞を用いた。前培養は５％ＦＢＳを含むＤＭＥＭを使用し、本試験では０．２５％ＦＢＳを含むＤＭＥＭを使用した。５％ＣＯ_２、３７℃の条件で培養した。

　５×１０^４個の正常ヒト新生児包皮皮膚繊維芽細胞と正常ヒト成人皮膚繊維芽細胞をそれぞれ２４ｗｅｌｌｐｌａｔｅに播種し２４時間培養した。その後、０．２５％ＦＢＳを含むＤＭＥＭに置換し、２４時間前培養した後、新たな０．２５％ＦＢＳを含むＤＭＥＭに置換し、ＳＡＳＰ試料としてＩＬ－１β（１ｐｇ／ｍＬ、１０ｐｇ／ｍＬ、１００ｐｇ／ｍＬ、１ｎｇ／ｍＬ又は１０ｎｇ／ｍＬ）、ＩＬ－６（１ｐｇ／ｍＬ、１０ｐｇ／ｍＬ、１００ｐｇ／ｍＬ、１ｎｇ／ｍＬ又は１０ｎｇ／ｍＬ）、ＴＮＦ－α（１ｐｇ／ｍＬ、１０ｐｇ／ｍＬ、１００ｐｇ／ｍＬ、１ｎｇ／ｍＬ又は１０ｎｇ／ｍＬ）を添加し、同時に別の群の同様のサンプルを準備しそのサンプルに対してはＳＡＳＰ試料とペパーミントの抽出物０．１％の混合液を調整し添加した。７２時間培養後、上清を回収し、上清中に含まれるＭＭＰ－１量をＨｕｍａｎ　ＭＭＰ１　ＥＬＩＳＡ　Ｋｉｔ（Ａｂｃａｍ：ａｂ１００６０４）を用いて、評価した。

　評価結果を表１に示す。表１中の数値は、Ｈｕｍａｎ　ＭＭＰ１　ＥＬＩＳＡ　Ｋｉｔを用いて測定したＭＭＰ－１量（単位はｎｇ／ｍＬ）である。表１中の標記にて「ミントなし」は上述のペパーミントの抽出物を添加していない群であり、表１中の標記にて「ミントあり」は上述のペパーミントの抽出物０．１％を添加した群である。表１中の標記「０、１ｐｇ／ｍＬ、１０ｐｇ／ｍＬ、１００ｐｇ／ｍＬ、１ｎｇ／ｍＬ又は１０ｎｇ／ｍＬ」は、ＳＡＳＰ因子（ＩＬ－１β、ＩＬ－６、ＴＮＦ－α）の添加した量である。

　いずれの投与群においても、濃度依存的にＳＡＳＰ因子を添加することにより、概ね、ＭＭＰ－１量の増加が確認できた。ＳＡＳＰ因子とＭＭＰ－１量との関連性を確認できた。また、いずれの投与群においては、ペパーミントの抽出物を添加することにより、ペパーミントの抽出物を添加しない群に比べ、概ね、ＭＭＰ－１量の減少が確認された。

（実験６（有効成分の投与によるコラーゲン産生量の変化の確認））
　ペパーミントの抽出物中に含まれると考えられている有効成分を投与した場合、コラーゲン産生量が変化するかどうかを確認した。

　細胞は正常ヒト成人皮膚繊維芽細胞を用いた。前培養は５％ＦＢＳを含むＤＭＥＭを使用し、本実験では０．２５％ＦＢＳを含むＤＭＥＭを使用した。５％ＣＯ_２、３７℃の条件で培養した。

　１×１０^４個の正常ヒト成人皮膚繊維芽細胞を２４ｗｅｌｌ　ｐｌａｔｅに播種し７５％コンフルエント状態になるまで培養した。その後、０．２５％ＦＢＳを含むＤＭＥＭに置換し、２４時間培養した後、新たな０．２５％ＦＢＳを含むＤＭＥＭに置換し、試料（Ｌｕｔｅｏｌｉｎ　ｇｒｕｃｌｏｎｉｄｅ（３９．８ｎｇ／ｍＬと７９．６ｎｇ／ｍＬ）、Ｒｏｓｍａｒｉｎｉｃ　ａｃｉｄ（５ｎｇ／ｍＬと５０ｎｇ／ｍＬ））を添加し、７２時間培養した。その後、培地中のＰｒｏｃｏｌｌａｇｅｎ　の濃度をＰｒｏｃｏｌｌａｇｅｎ　Ｋｉｔ（Ｔａｋａｒａ：ＭＫ１０１）を用いて、評価した。

　未添加群（Ｌｕｔｅｏｌｉｎ　ｇｒｕｃｌｏｎｉｄｅも、Ｒｏｓｍａｒｉｎｉｃ　ａｃｉｄも添加していない群）のＰｒｏｃｏｌｌａｇｅｎ　の濃度を１００とした場合、Ｌｕｔｅｏｌｉｎ　ｇｒｕｃｌｏｎｉｄｅ３９．８ｎｇ／ｍＬ添加群は１３３．７３、Ｌｕｔｅｏｌｉｎ　ｇｒｕｃｌｏｎｉｄｅ７９．６ｎｇ／ｍＬ添加群は１５３．８０、Ｒｏｓｍａｒｉｎｉｃ　ａｃｉｄ５ｎｇ／ｍＬ添加群は１１７．９７、Ｒｏｓｍａｒｉｎｉｃ　ａｃｉｄ５０ｎｇ／ｍＬ添加群は１４４．１６であった。よって、Ｌｕｔｅｏｌｉｎ　ｇｒｕｃｌｏｎｉｄｅとＲｏｓｍａｒｉｎｉｃ　ａｃｉｄとの添加により、コラーゲン産生が促進され、皮膚の菲薄化を抑制できると考えられる。

（実験７（ＵＶＢ照射により細胞外ＡＴＰ濃度上昇起こるかの確認及びペパーミントの抽出物を添加することによる変化の確認））
　細胞は正常ヒト新生児表皮角化細胞を用いた。前培養はＫＧ２培地を使用し、５％ＣＯ_２、３７℃の条件で培養した。本実験ではＫＧ２　ＨＣ－培地）を使用した。

　７×１０^４個の正常ヒト表皮角化細胞をφ３５ｍｍ　ディッシュに播種し７５％コンフルエント状態になるまで培養した。その後、ＫＧ２　ＨＣ－培地に置換し、試料（溶媒又はペパーミントの抽出物）を添加した。１時間培養した後、ＵＶＢ照射（２０ｍＪ／ｃｍ^２）をし、ＵＶＢ照射後直ちにＨｕＭｅｄｉａ　ＫＧ２　ＨＣ－培地に置換し１時間培養した。培養後、上清を回収し、上清中に含まれるＡＴＰ量をＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（商標登録）２．０　Ａｓｓａｙ（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｇ９２４１）を用いて、評価した。

　コントロール（ＵＶＢを照射していない群）のＡＴＰ遊離量は４７０２．５５６であるが、ＵＶＢ照射群のＡＴＰ発現量は６６９９．１１１であるのに対し、ＵＶＢ照射後にペパーミントの抽出物を最終濃度０．００１％添加した群のＡＴＰ発現量は５３１１．７７８、ＵＶＢ照射後にペパーミントの抽出物を最終濃度０．０１％添加した群のＡＴＰ遊離量は４１６８．８８９であった。

　よって、ＵＶＢ照射により細胞外ＡＴＰ濃度上昇が起こり、ペパーミントの抽出液を添加することにより、ＵＶＢ照射により上昇した細胞外ＡＴＰ濃度を下げることが確認された。

（実験８（細胞において、老化による、細胞外ＡＴＰの濃度などの違い））
　正常ヒト細胞において、老化により、細胞外ＡＴＰの濃度などの違いがあるかを確認した。
　この確認において、細胞は、正常ヒト新生児表皮角化細胞と正常ヒト成人表皮角化細胞（当該新生児表皮細胞と比べ老化した細胞）とを用いた。前培養はＫＧ２培地を使用し、５％ＣＯ_２、３７℃の条件で培養した。本実験ではＫＧ２　ＨＣ－培地を使用した。５×１０^４個の正常ヒト新生児表皮角化細胞又は５×１０^４個の正常ヒト成人表皮角化細胞をφ３５ｍｍディッシュに播種し、７５％コンフルエント状態になるまで培養した。その後、ＫＧ２　ＨＣ－培地に置換した。２４時間培養後、上清を回収し、上清中に含まれるＡＴＰ量をＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標）２．０　Ａｓｓａｙ（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｇ９２４１）を用いて、評価した。

　本段落における以下の数値は、ＡＴＰ遊離量を記載する。正常ヒト新生児表皮角化細胞の群は４８８．１７、正常ヒト成人表皮角化細胞の群は９６６．５０であった。正常ヒト成人表皮角化細胞の群の数値は、正常ヒト新生児表皮角化細胞の群の数値に比べ、有意に（有意差の検定（ｔ検定）にて、ｐ＜０．０１）、高かった。よって、細胞の老化により、細胞外ＡＴＰの濃度上昇が起こりやすいことが確認できた。

　なお、正常新生児表皮細胞と正常成人表皮細胞（新生児と比べ老化した細胞）とが、ＭＭＰｓの量の違いを確認したが、正常成人表皮細胞の方がＭＭＰｓ（ＭＭＰ－１、ＭＭＰ－３）の量が多かった。更に、細胞外ＡＴＰの濃度も、正常ヒト新生児表皮角化細胞に比べ正常成人表皮細胞の方が高かった。

（実験９（環境ストレスによる細胞外ＡＴＰ濃度上昇が起こるかの確認及びペパーミントの抽出物を添加することによる変化の確認））
　細胞は正常ヒト新生児表皮角化細胞を用いた。前培養はＫＧ２培地を使用し、５％ＣＯ_２、３７℃の条件で培養した。本実験ではＫＧ２　ＨＣ－培地を使用した。

　５×１０^４個の正常ヒト新生児表皮角化細胞をφ３５ｍｍディッシュに播種し、７５％コンフルエント状態になるまで培養した。その後、　ＫＧ２　ＨＣ－培地に置換した。２４時間培養後、新たなＫＧ２　ＨＣ－培地に置換し試料（溶媒又はペパーミントの抽出物）を培養液中に添加した。さらに１時間培養後、培地の除去及びＰＢＳ洗浄をし、乾燥刺激（乾燥刺激：Ａｉｒ　ｅｘｐｏｓｕｒｅ）を５分、ｐＨ刺激（１Ｎ　ＮａＯＨにて培地をｐＨ８に調整）を１時間、Ｔｒｙｐｓｉｎ０．０１％刺激を１時間与えた。その後すべてのディッシュをＨｕＭｅｄｉａ　ＥｐｉＬｉｆｅ　ＫＧ２　ＨＣ－培地に置換し１時間培養後上清を回収し、上清中に含まれるＡＴＰ量をＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標）２．０　Ａｓｓａｙ（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｇ９２４１）を用いて、評価した。

　本段落における以下の数値は、ＡＴＰ遊離量を記載する。未処理群（環境ストレスを与えていない群）は４８１７．５、溶媒のみの群（環境ストレスを与えていない群で溶媒のみを投与した群）は８０２８．５、乾燥刺激を５分与えた群は１２９０８．７、乾燥刺激を５分与えた後ペパーミントの抽出物を最終濃度０．１％添加した群は７６８３．５、ｐＨ刺激を与えた群は３３５３１．５、ｐＨ刺激を与えた後ペパーミントの抽出物を最終濃度０．１％添加した群は２６１２９、Ｔｒｙｐｓｉｎ０．０１％刺激を１時間与えた群は２３９６０．２５、Ｔｒｙｐｓｉｎ０．０１％刺激を１時間与えた後ペパーミントの抽出物を最終濃度０．１％添加した群は１３８８８．７５であった。

　よって、環境ストレス（ここでは、乾燥刺激、ｐＨ刺激及びＴｒｙｐｓｉｎ処理）により細胞外ＡＴＰ濃度上昇起こり、ペパーミントの抽出液を添加することにより、これらの環境ストレスにより上昇した細胞外ＡＴＰ濃度を下げることが確認された。

（実験１０（環境ストレスによる細胞外ＡＴＰ濃度上昇起こるかの確認及びペパーミントの抽出物を添加することによる変化の確認））
　上述の実験９では、細胞として、正常ヒト新生児表皮角化細胞を用いた。しかし、この実験１０では、細胞として、正常ヒト成人皮膚繊維芽細胞を用いて、上述の実験９のような、環境ストレスによる細胞外ＡＴＰ濃度上昇起こるかの確認及びペパーミントの抽出物を添加することによる変化の確認を行った。

　５×１０^４個の正常ヒト成人皮膚繊維芽細胞をφ３５ｍｍディッシュに播種し、７５％コンフルエント状態になるまで培養した。その後、ＫＧ２　ＨＣ－培地に置換した。２４時間培養後、新たなＫＧ２　ＨＣ－培地に置換し試料（溶媒又はペパーミントの抽出物）を培養液中に添加した。さらに１時間培養後、培地の除去及びＰＢＳ洗浄をし、乾燥刺激（乾燥刺激：Ａｉｒ　ｅｘｐｏｓｕｒｅ）を５分与えた。その後すべてのディッシュをＫＧ２　ＨＣ－培地に置換し１時間培養後上清を回収し、上清中に含まれるＡＴＰ量をＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標）２．０　Ａｓｓａｙ（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｇ９２４１）を用いて、評価した。

　本段落における以下の数値は、ＡＴＰ遊離量を相対値で記載する。未処理群（環境ストレスを与えていない群）は１００．０、乾燥刺激を５分与えた群は６０１．３、乾燥刺激を５分与えた後ペパーミントの抽出物を最終濃度０．１％添加した群は３３２．６であった。

　よって、環境ストレス（ここでは、乾燥刺激）により、実験９と同様に、この実験１０においても、細胞外ＡＴＰ濃度上昇起こり、ペパーミントの抽出液を添加することにより、乾燥刺激より上昇した細胞外ＡＴＰ濃度を下げることが確認された。

　なお、環境ストレス（ここでは、乾燥刺激）によるＡＴＰ遊離量は、正常ヒト新生児表皮角化細胞に比べ、正常ヒト成人皮膚繊維芽細胞の方が大きい傾向であった。実験９と実験１０の実験を同時並行で行った際に、ＡＴＰ遊離量を測定した結果、正常ヒト新生児表皮角化細胞を用いた実験系では、未処理群（環境ストレスを与えていない群）は１００．０、乾燥刺激を５分与えた群は１０５９．５（１００．０の約１０．６倍）であったが、正常ヒト成人皮膚繊維芽細胞を用いた実験系では、未処理群（環境ストレスを与えていない群）は１１６．２、乾燥刺激を５分与えた群は３１１２．６（１１６．２の約２６．３倍）であった。また、正常ヒト成人皮膚繊維芽細胞を用いた実験系における乾燥刺激を５分与えた群のＡＴＰ遊離量（３１１２．６）は、正常ヒト新生児表皮角化細胞を用いた実験系における乾燥刺激を５分与えた群のＡＴＰ遊離量（１０５９．５）に比べ、有意に（有意差の検定（Ｄｕｎｎｅｔｔ検定）にて、ｐ＜０．００１）、高かった。

　さらに、これらの実験系において、乾燥刺激を５分与えた後、ロスマリン酸を最終濃度０．４μｇ／ｍＬを添加又はルテオリングルクロニドを最終濃度０．１６６μｇ／ｍＬ（ロスマリン酸の濃度を１とした際に０．４１５の濃度）を添加してＡＴＰ遊離量の変化の有無を確認した。この確認した結果を表２に示す。なお、表２において、「新生児細胞」は正常ヒト新生児表皮角化細胞を用いた実験系であること、「成人細胞」は正常ヒト成人皮膚繊維芽細胞を用いた実験系であること、「未処理群」は環境ストレス（乾燥刺激）を与えていない群、「乾燥刺激群」は上述の乾燥刺激を５分与えた群、「ＲＭＡ群」は当該乾燥刺激後にロスマリン酸を最終濃度０．４μｇ／ｍＬを添加した群、「ＬＧ群」はルテオリングルクロニドを最終濃度０．１６６μｇ／ｍＬ（ロスマリン酸の濃度を１とした際に０．４１５の濃度）を示す。「新生児細胞」でも「成人細胞」でも、所定量のロスマリン酸又はルテオリングルクロニドを添加することにより、乾燥刺激により高くなった上昇したＡＴＰ遊離量を減少させることが有意に（有意差の検定（Ｄｕｎｎｅｔｔ検定）にて、ｐ＜０．００１）確認できた。この有意差の検定は、「乾燥刺激群」の値を基準に測定した。

（実験１１（環境ストレス（ｐＨの変化）による細胞外ＡＴＰ濃度上昇が起こるかの確認及びペパーミントの抽出物を添加することによる変化の確認））
　上述の実験９の実験を更に進め、環境ストレス（ｐＨの変化）の処理を行った際に、正常ヒト新生児表皮角化細胞と正常ヒト成人皮膚繊維芽細胞とで、細胞外ＡＴＰ濃度上昇の違いがあるかなどを更に確認した。
　細胞は正常ヒト新生児表皮角化細胞、正常ヒト成人皮膚繊維芽細胞を用いた。前培養はＫＧ２培地を使用し、５％ＣＯ_２、３７℃の条件で培養した。本実験ではＫＧ２　ＨＣ－培地を使用した。

　５×１０^４個の正常ヒト新生児表皮角化細胞又は５×１０^４個の正常ヒト成人皮膚繊維芽細胞をφ３５ｍｍディッシュに播種し、７５％コンフルエント状態になるまで培養した。その後、ＨＣ－培地に置換した。２４時間培養後、新たなＫＧ２　ＨＣ－培地に置換し試料（溶媒又はペパーミントの抽出物）を培養液中に添加した。さらに１時間培養後、培地の除去及びＰＢＳ洗浄をし、ｐＨ刺激（１Ｎ　ＮａＯＨにて培地をｐＨ８．５に調整）を１時間行った。その後すべてのディッシュをＫＧ２　ＨＣ－培地に置換し１時間培養後上清を回収し、上清中に含まれるＡＴＰ量をＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標）２．０　Ａｓｓａｙ（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｇ９２４１）を用いて、測定した。

　測定結果を表３に示す。表３において、「新生児細胞」は正常ヒト新生児表皮角化細胞を用いた実験系であること、「成人細胞」は正常ヒト成人皮膚繊維芽細胞を用いた実験系であること、「未処理群」は環境ストレスを与えていない群（培地中のｐＨが７．２）、「ｐＨ刺激群」は上述のｐＨ刺激（ｐＨ＝８．５）を行った群、「ペパーミント添加群」は当該ｐＨ刺激前にペパーミントの抽出物を最終濃度０．１％添加した群、である。「新生児細胞」でも「成人細胞」でも、所定量のペパーミントの抽出物を添加することにより、ｐＨ刺激により高くなった上昇したＡＴＰ遊離量を減少させることが有意に（有意差の検定（Ｄｕｎｎｅｔｔ検定）にて、ｐ＜０．００１）確認できた。この有意差の検定は、「ｐＨ刺激群」の値を基準に測定した。
　なお、実験１０と同じように、環境ストレス（ここでは、ｐＨ刺激）によるＡＴＰ遊離量比率は、正常ヒト新生児表皮角化細胞に比べ、正常ヒト成人皮膚繊維芽細胞の方が高い傾向であった。

（実験１２　ヒトでの皮膚モニター試験その１、皮膚外用剤）
　３０歳から６９歳のヒト被験者（平均年齢４８．４歳）の男女１４名の顔の所定部位に、表４で示す組成のローション（ペパーミントの抽出物が含有）と、表５で示すプラセボローション（ペパーミントの抽出物が未含有）とを塗布することにより、２０１９年１月から２月の間に試験を行った。当該被験者は、自覚症状として、皮膚のたるみ、小じわ及び／又は皮膚の脆弱性を感じている方々である。表４で示す組成のローションを被験者の顔の左半分の所定部位に所定間隔にて塗布し、表５に示すローションを被験者の顔の右半分の所定部位に所定間隔にて塗布した。この所定間隔は、１日２回ずつ（朝晩）４週間である。所定部位は、下眼瞼部、鼻翼横及び口角横である。そして、これらのローションの塗布前の０週目と、ローションを塗布してから４週間目に、測定（真皮の厚さの測定、肌の粘弾性測定）を行った。真皮の厚さの測定は、ＤｅｒｍａＬａｂ（登録商標）Ｃｏｍｂｏを用いて行った。肌の粘弾性測定は、ＥＬＡＳＴＩＣＩＴＹｐｒｏｂｅを接続したＤｅｒｍａＬａｂ（登録商標）Ｃｏｍｂｏを用いて行った。真皮の厚さの測定の結果を表６と表７に、粘弾性測定の結果を表８に示す。表６から表８において、「表４塗布群」は表４で示す組成のローションを塗布した群、「表５塗布群」は表５で示す組成のローションを塗布した群、「０週」はローションを塗布する前に測定したこと、「４週」はローションを塗布してから４週間後に測定したこと、を示す。表６から表９に示す測定の結果は、各塗布群の「０週」の被験者の測定結果の平均値を「１００．００」として、各塗布群の「４週」の被験者の測定結果を（相対値として）算出した。

　表６に示すように、真皮の厚さの測定では、表５で示す組成のローションの塗布と比べ、表４で示す組成のローションの塗布により、真皮の厚さが大きくなった。また、表７で示すように、ローション塗布前のアンケートにより「自覚症状として肌のかさつきが高い」と回答した男女７名においては、下眼瞼部で、有意（ｔ検定にて、ｐ＜０．０５）に、表５で示す組成のローションの塗布と比べ、表４で示す組成のローションの塗布により、真皮の厚さが大きくなった。

　なお、表では測定結果を示さないが、表６で示すヒト被験者に対して、４週以降も、表４又は表５で示すローションを塗布させ（２０１９年１月から３月の間に試験）、１２週において下眼瞼部での真皮の厚みを測定した。この測定は、表６で示す測定と同様に、各塗布群の「０週」の被験者の測定結果の平均値を「１００．００」として、各塗布群の「１２週」の被験者の測定結果を（相対値として）算出した。その測定結果は、表５で示す組成のローションの塗布では９８．７５に対し、表４で示す組成のローションの塗布では１０５．３０であった。表５で示す組成のローションの塗布の群では、０週に比べ、１２週では真皮の厚みが薄くなっているが、表４で示す組成のローションの塗布の群では、１２週での真皮の厚みが４週の真皮の厚みとほぼ同じ（真皮の厚みを維持）であった。

　表８で示すように、鼻翼横、口角横で共に、表５で示す組成のローションの塗布と比べ、表４で示す組成のローションの塗布により、皮膚（肌）の粘弾性が増した。特に鼻翼横ではで、表５で示す組成のローションの塗布と比べ、表４で示す組成のローションの塗布により、有意（ｔ検定にて、ｐ＜０．０５）に、皮膚（肌）の粘弾性が増した。

　表６から表８で示すように、表４で示すローション（ペパーミントの抽出物が含有）をヒトの皮膚（肌）へ塗布することにより、真皮の厚さが増したこと及び皮膚（肌）の粘弾性が増したことから、皮膚（肌）の粘弾性が増したことの１つの要因として、皮膚の菲薄化が改善されたこと（真皮の厚さが増したこと）によるとも考えられる。

（実験１３　ヒトでの皮膚モニター試験その２、皮膚外用剤）
　実験１２と同じヒト被験者（平均年齢４８．４歳の男女１４名）の顔と首の所定部位に、表４で示す組成のローション（ペパーミントの抽出物が含有）と、表５で示すプラセボローション（ペパーミントの抽出物が未含有）とを塗布することにより、２０１９年１月から３月の間に試験を行った。表４で示す組成のローションを被験者の顔の左半分の所定部位に所定間隔にて塗布し、表５に示すローションを被験者の顔の右半分の所定部位に所定間隔にて塗布した。この所定間隔は、１日２回ずつ（朝晩）１２週間である。所定部位は、「目尻」、「鼻の脇から唇の端の部位」、「目の下から鼻の脇にかけての頬部」及び「首」である。ほうれい線の有無を測定するために、鼻の脇から唇の端の部位を測定部位として設定した。皮膚の水分分布及び乾燥度を測定するために、目の下から鼻の脇にかけての頬部を測定部位として設定した。皮膚のキメの密度と交点数を測定するために、目の下から鼻の脇にかけての頬部を測定部位として設定した。

　そして、これらのローションの塗布前の０週目と、ローションを塗布してから４週間目と、ローションを塗布してから１２週間目に、測定（目尻のシワの有無、ほうれい線の有無、首のシワの有無、皮膚の水分分布と乾燥度の測定、皮膚のキメの密度と交点数の測定）を行った。目尻のシワの有無の測定、ほうれい線の有無の測定及び首のシワの有無の測定を、ＡＮＴＥＲＡ　３Ｄ（登録商標、ガデリウス・メディカル株式会社）を用いて行った。皮膚の水分分布と乾燥度の測定及び皮膚のキメの密度と交点数の測定を、ＭｏｉｓｔｕｒｅＭＡＰ　ＭＭ１００（Ｃｏｕｒａｇｅ＋Ｋｈａｚａｋａ　ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃ　ＧｍｂＨ）を用いて行った。

　この実験１３で挙げるすべての測定は、各塗布群の０週の被験者の測定結果の平均値を「１００．００」として、各塗布群の４週の被験者と１２週の被験者の測定結果を相対値として算出して行った。より詳細に述べると、全ての測定において、０週の値（１００．００）は、１人につき１部位で３回測定し、３回測定した平均値を算出し、この算出した平均値を１４名分集めて集計した平均値を１００とした。４週の測定結果と１２週の測定結果は、０週の値と比べての変化率を算出した値である。

　表９で目尻のシワの有無の測定の結果を、表１０でほうれい線の有無の測定の結果を、表１１で首のシワの有無の測定の結果を示す。表９から表１１で示すシワ等の測定では、シワ等の大きさ（全体の大きさ）及び深度を測定した。表９から表１１で示すように、表５で示す組成のローションの塗布と比べ、表４で示す組成のローションの塗布により、シワ等の大きさが小さくなり、深度も浅くなった。
　表９で示す測定では、表４で示す組成のローションの塗布群では、０週に比べ、１２週では、有意（ｔ検定にて、ｐ＜０．０５）に、シワ等の大きさが小さくなり、深度も浅い、という結果であった。

　表１０で示す測定では、表４で示す組成のローションの塗布群では、０週に比べ、１２週では、有意（ｔ検定にて、ｐ＜０．０５）に、シワ等の大きさが小さくなり、深度も浅い、という結果であった。
　表１１で示す測定では、１２週において、表５で示す組成のローションの塗布と比べ、表４で示す組成のローションの塗布により、有意（ｔ検定にて、ｐ＜０．１）に、深度が浅い、という結果であった。
　表９から表１１で示すように、表４で示すローション（ペパーミントの抽出物が含有）をヒトの皮膚（肌）へ塗布することにより、真皮の厚さが増したこと及び皮膚（肌）の粘弾性が増したことから、しわの形成を抑制したとも考えられる。

　表１２で、皮膚の水分分布と皮膚の乾燥度の測定の結果を示す。この表１２で示す皮膚の測定では、皮膚表面を測定した。この表１２で示す測定では、表５で示す組成のローションの塗布と比べ、表４で示す組成のローションの塗布により、皮膚の水分分布も増加して、皮膚の乾燥も防止される、という結果であった。
　この水分分布の測定では、表４で示す組成のローションの塗布群では、０週に比べ、１２週では、有意（ｔ検定にて、ｐ＜０．０５）に、水分分布が高い、という結果であった。
　この乾燥度の測定では、１２週において、表５で示す組成のローションの塗布と比べ、表４で示す組成のローションの塗布により、有意（ｔ検定にて、ｐ＜０．０５）に、皮膚の乾燥が防止される、という結果であった。
　表１２で示すように、表４で示すローション（ペパーミントの抽出物が含有）をヒトの皮膚（肌）へ塗布することにより、真皮の厚さが増したこと及び皮膚（肌）の粘弾性が増したことから、皮膚の水分量を保ちつつ皮膚の乾燥を防止したとも考えられる。

　表１３で、キメの密度と交点数の測定の結果を示す。この表１３で示す測定では、表５で示す組成のローションの塗布と比べ、表４で示す組成のローションの塗布により、キメの密度と交点数が増加した、という結果であった。
　皮膚のキメの密度と交点数は、高齢者の皮膚ほど低いとされている。表１３で示すように、表４で示すローション（ペパーミントの抽出物が含有）をヒトの皮膚（肌）へ塗布することにより、真皮の厚さが増したこと及び皮膚（肌）の粘弾性が増したことから、皮膚の老化を抑制し、キメの密度と交点数が増加したとも考えられる。

　実験１から実験１３の実験結果から、ペパーミントの抽出物（ロスマリン酸とルテオリングルクロニドとが所定の割合で含有）を含有する組成物は、細胞外ＡＴＰ濃度上昇抑制により、皮膚の粘弾性を改善することが示された。この組成物は、例えば、以下の効能がある組成物として利用可能と考えられる。

（効能例）
・頭皮のカユミがとれる。
・頭皮のカユミを抑える。
・肌を整える。
・肌のキメを整える。
・皮膚を健やかに保つ。
・肌荒れを防ぐ。
・皮膚にうるおいを与える。
・皮膚の水分、油分を補い保つ。
・皮膚の柔軟性を保つ。
・皮膚を保護する。
・皮膚の乾燥を防ぐ。
・肌を柔らげる。
・肌にはりを与える。
・肌を滑らかにする。
・ひげを剃りやすくする。
・ひげ剃り後の肌を整える。
・日やけによるシミ、ソバカスを防ぐ。
・口唇の荒れを防ぐ。
・口唇のキメを整える。
・口唇にうるおいを与える。
・口唇を健やかにする。
・口唇を保護する。口唇の乾燥を防ぐ。
・口唇の乾燥によるカサツキを防ぐ。
・口唇を滑らかにする。
・乾燥による小ジワを目立たなくする

　以上、本発明の実施の形態（実施例も含め）について、図面を参照して説明してきたが、本発明の具体的構成は、これに限られるものではなく、本発明の要旨を逸脱しない範囲において、設計変更等があっても、本発明に含まれるものである。

　本発明は、例えば、主にヒトなどの細胞外ＡＴＰ濃度上昇抑制効果を発揮する組成物（剤など）として利用される。

Claims

　（Ａ）ロスマリン酸と、（Ｂ）ルテオリングルクロニドとの含有比率が、重量比にて、（Ａ）：（Ｂ）＝１：０．２～１．５である、細胞外ＡＴＰ濃度上昇抑制剤。
　ペパーミントの抽出物を含む、細胞外ＡＴＰ濃度上昇抑制剤。
　前記抽出物が、（Ａ）ロスマリン酸と、（Ｂ）ルテオリングルクロニドとを、重量比にて、（Ａ）：（Ｂ）＝１．０：０．２～１．５の比率で含有する、請求項２に記載の細胞外ＡＴＰ濃度上昇抑制剤。
　請求項１～３の何れか一項に記載の剤を含有する、皮膚の粘弾性を改善するための組成物。
　皮膚の菲薄化を改善するための組成物である、請求項４に記載の組成物。
　皮膚状態を改善する美容方法であって、
　ペパーミント抽出物の有効量を対象者の皮膚に塗布する工程を含み、
　前記抽出物が、細胞外ＡＴＰ濃度の上昇を抑制することにより皮膚の粘弾性及び／又は皮膚の菲薄化を改善する、美容方法。
　前記組成物が、有効成分としての（Ａ）ロスマリン酸と、（Ｂ）ルテオリングルクロニドとを、重量比にて、（Ａ）：（Ｂ）＝１．０：０．２～１．５の比率で含有する、請求項６に記載の美容方法。
　細胞外ＡＴＰ濃度の上昇を抑制することにより皮膚の粘弾性を改善するか、及び／又は皮膚の菲薄化を改善する組成物を製造するための、ペパーミント抽出物の使用。
　前記組成物が、有効成分としての（Ａ）ロスマリン酸と、（Ｂ）ルテオリングルクロニドとを、重量比にて、（Ａ）：（Ｂ）＝１．０：０．２～１．５の比率で含有する、請求項８に記載の使用。