WO2020139311A1 - Ешерихиозно-энтерококковая инактивированная жидкая вакцина «екопримавак» против кишечной палочки и энтерококков, способ ее изготовления, способ лечения и профилактики ею - Google Patents

Ешерихиозно-энтерококковая инактивированная жидкая вакцина «екопримавак» против кишечной палочки и энтерококков, способ ее изготовления, способ лечения и профилактики ею Download PDF

Info

Publication number
WO2020139311A1
WO2020139311A1 PCT/UA2019/000165 UA2019000165W WO2020139311A1 WO 2020139311 A1 WO2020139311 A1 WO 2020139311A1 UA 2019000165 W UA2019000165 W UA 2019000165W WO 2020139311 A1 WO2020139311 A1 WO 2020139311A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
enterococcus
registration number
escherichia coli
deposited under
under registration
Prior art date
Application number
PCT/UA2019/000165
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Игорь Семёнович МАРКОВ
Артём Игоревич МАРКОВ
Original Assignee
Игорь Семёнович МАРКОВ
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Игорь Семёнович МАРКОВ filed Critical Игорь Семёнович МАРКОВ
Publication of WO2020139311A1 publication Critical patent/WO2020139311A1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74—Bacteria
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/02—Bacterial antigens
    • A61K39/07—Bacillus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/02—Bacterial antigens
    • A61K39/116—Polyvalent bacterial antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Definitions

  • the group of inventions relates to medical microbiology, the pharmaceutical industry, in particular to vaccines, namely, vaccines against intestinal enterobacteria and enterococci, methods for their manufacture and methods of treatment and prevention, and can be used for the treatment and prevention of local and systemic, acute and chronic diseases of bacterial etiology in children and adults: nose, sinuses, pharynx, mouth, tongue, gums, teeth, conjunctiva and eyes, trachea, bronchi, lungs, urogenital system, gall bladder, abdominal cavity, skin, subcutaneous tissue and other
  • E. coli - a bacterium (a mobile rod-shaped microorganism) that lives normally in the human intestine, does no harm and is even used for the manufacture of medicines (for example, Kolibacterin, Mutaflor, etc.). But there are varieties of it that can cause damage to the stomach and intestines. They cause the development of a special type of acute intestinal infection called Escherichiosis or coli infection (from the Latin name for Escherichia coli: Escherichia coli). Typically, with an intestinal infection caused by E. coli, the stomach and small intestine are affected.
  • Enterococci (lat. Enterococcus) is a genus of spherical or slightly elongated gram-positive bacteria, which were first attributed to the genus Streptococci (Streptococcus) of group D. Due to the significant differences between enterococci and streptococci in 1984, they were assigned to the genus Enterococcus, and in 2001 - to an independent family Enterococcal (Enterococcaceae). Accommodation usually occurs in pairs (diplococci) or in short chains.
  • enterococci As of 2017, about 60 species of bacteria are classified as enterococci, the most pathogenic of which are enterococcus fecal (Enterococcus faecalis), enterococcus fecium (Enterococcus faecium) and enterococcus durans (Enterococcus durans), which are usually also considered as symbiotic microorganisms of the human intestine and used for the manufacture of medicines (for example, Linex drug).
  • An associated vaccine is known containing Escherichia coli, Salmonella typhimurium, Streptococcus pneumoniae and Streptococcus faecalis [RU N ° 2316345 Cl, A61K 39/116, 2008].
  • This vaccine is designed to treat colibacteriosis, salmonellosis, streptococcosis and enterococcal nutria infections.
  • the specified vaccine is developed against Escherichiosis, streptococcosis and staphylococcosis in cattle.
  • An associated vaccine is known containing Escherichia coli, Streptococcus bovis and Enterococcus faecalis [RU N 2429012 Cl, A61K 39/116, 2011].
  • This vaccine is designed against colibacteriosis, streptococcosis and enterococcal infections in calves and piglets.
  • An associated vaccine is known containing strains of Escherichia coli producing exotoxins, hemolytic strains of Streptococcus bovis and Enterococcus faecalis [RU Le RU 2650 628 Cl, A6 IK 39/116, 2018].
  • This vaccine like the previous analogue, was developed against colibacteriosis, streptococcosis and enterococcal infection of calves and piglets.
  • VP-4 Known multicomponent vaccine (VP-4) for immunotherapy of diseases, which includes such strains: Klebsiella pneumoniae, Proteus vulgaris, Escherichia coli, Staphylococcus aureus.
  • the vaccine can be used by the subcutaneous method, as well as by the combined intranasal-subcutaneous and intranasal-oral methods [RU N ° 94019810 A1, A61K 39/116, 1996].
  • Such a vaccine is intended for the treatment and prevention of exacerbations of chronic diseases caused by opportunistic microorganisms in humans.
  • Strovak vaccine containing the following strains: Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Enterococcus faecalis, Proteus mirabilis, Proteus morganii and is used for prevention and treatment recurrent urinary tract infections of bacterial origin [https://www.evrofarm.com.ua/strovak_STROVAC_idl 13299 /].
  • the composition of the Strovak vaccine does not take into account the actual bacterial strain that dominates the etiology of a particular disease in a particular patient (for example, Escherichia cystitis, enterococcal prostatitis), which makes the vaccine less stressed with a less pronounced positive clinical effect.
  • Strovak vaccine is limited to diseases of the genitourinary system.
  • Strovak is contraindicated in children under 5 years of age, it can not be used during breastfeeding. Strovak is not used in the acute period of diseases and in autoimmune diseases.
  • Strovak should not be used simultaneously with other medications, including antibiotics and corticosteroids. It also has side effects: nausea, headache, allergies, chills. The systemic manifestations of the side effects of the use of Strovak include diarrhea and inflammatory processes in the liver.
  • a known method of manufacturing a vaccine associated against colibacteriosis, salmonellosis, streptococcosis and enterococcal nutria infection which consists in the selection of affected organs from dead nutria from the local epizootic focus.
  • a suspension is prepared from pathological material and inoculated onto differential diagnostic media. Pure cultures of Escherichia coli, Salmonella typhimurium, Streptococcus pneumoniae and Streptococcus faecalis are isolated. Separate cultures are separately grown in a meat-peptone nutrient medium with the addition of 0.2% glucose until the concentration of microbial cells is reached - 4-5 billion in 1 cm 3 . Formalin is inactivated to 0.4-0.6% final concentration.
  • a known method of manufacturing a vaccine associated against escherichiosis, streptococcosis and staphylococcosis of cattle including: selection of pathological material from a sick and dead cattle from a local epizootic focus, preparation of a suspension, seeding on differential diagnostic media, isolation of cells of pure cultures of Escherichia Escherichia causative agents coli, streptococcosis Streptococcus pneumoniae and staphylococcosis Staphylococcus aureus, their separate growth, inactivation of cells with formalin, mixing in equal proportions and the introduction of an adjuvant - aluminum hydroxide into the mixture [RU N "RU 2538158 Cl, ⁇ 61 ⁇ 39/116, 2015].
  • Closest to the claimed method of manufacture is a method of manufacturing a vaccine associated against colibacteriosis, streptococcosis and enterococcal infection of calves and piglets, which consists in the fact that they carry out the isolation from the affected organs of calves and piglets of epizootic strains of Escherichia coli producing thermolabile, thermostable and other toxins, and also hemolytic strains of Streptococcus bovis and Enterococcus faecalis.
  • cultures of Escherichia coli, Streptococcus bovis and Enterococcus faecalis are grown on nutrient broth at a temperature of 37 ° C.
  • Escherichia coli cultures were grown for 7 days, and Streptococcus bovis and Enterococcus faecalis cultures for 24 hours. to a concentration of 5-6 billion microbial bodies in 1 ml. Then, separately grown cultures are inactivated with formalin at a concentration of 0.3-0.4% for 14 days, after which the cultures are mixed in equal volumes, packaged and sealed [Cl, A61K 39/116, 2011].
  • the disadvantage of this method is that the resulting vaccine contains a large number of ballast cells of Escherichia coli that carry excess antigenic load, which negatively affects the formation of immune defense against toxins of Escherichia coli, streptococci and enterococci, in addition, this vaccine can be reactogenic.
  • the method also uses formalin, which reduces its immunogenic effect, as well as immunological and positive clinical responses after vaccination.
  • the specified method like the previous analogues, is intended for vaccination of animals, not humans.
  • Strovak vaccine Strovak vaccine
  • a single dose of the vaccine is obtained by mixing one vial of the solvent with the ampoule of the lyophilisate (with the powder containing inactivated bacterial strains) and slowly injected intramuscularly into the region of the posterior surface of the shoulder, mainly into the deltoid muscle of the shoulder.
  • Dose for one injection is 0.5 ml of freshly prepared inoculum.
  • the main immunization (StroVac) consists of 3 injections of 0.5 ml of inoculum at intervals of 1 to 2 weeks. [Http://med88.ru/preparaty/strovak/].
  • the scheme for administering the Strovak vaccine consists of only 3 injections of 0.5 ml of the ready-made solution in the period from 1 to 2 weeks between each vaccine, which does not allow achieving stable positive immunological and clinical effects.
  • the Strovak vaccine is administered intramuscularly, which does not allow to achieve a more prolonged immunostimulating effect.
  • Strovak vaccine is limited to diseases of the genitourinary system.
  • the Strovak vaccine is available as a dry substance with additional solvent ampoules, and not in sterile ampoules as a ready-to-use injection solution.
  • the basis of the invention is the task of creating an Escherichia-enterococcal inactivated liquid vaccine against E. coli and Enterococcus, which would be highly effective, with a more prolonged immunostimulating effect, would have broader functionality and would not have side effects.
  • the second task which is the basis of the invention, is the creation of a method for the manufacture of Escherichia enterococcal inactivated liquid vaccine against Escherichia coli and Enterococcus, which would have a higher immunogenic effect and positive clinical responses after vaccination.
  • the third task which is the basis of the invention, is the creation of a method for the treatment and prevention of Escherichia enterococcal inactivated liquid vaccine against Escherichia coli and Enterococcus, which would achieve a stable positive clinical effect and a more prolonged immunostimulating effect, as well as have wider functionality.
  • the Escherichia enterococcal inactivated liquid vaccine against Escherichia coli and Enterococcus including the strains of bacteria Escherichia coli, Enterococcus faecalis, according to the invention, additionally contains strains of bacteria Enterococcus faecium and Enterococcus durans, in total at least 22 bacterial strains, and namely: Escherichia coli - 9, Enterococcus faecalis - 8, Enterococcus faecium - 3, Enterococcus durans - 2 of different locations, isolated in various acute and chronic inflammatory diseases of bacterial etiology, including bacterial strains deposited in the Depository of the Institute of Microbiology and Virology of the National Academy of Sciences of Ukraine, with varying degrees of resistance to antibiotics, including hospital strains with 100% antibiotic resistance:
  • Escherichia is not affiliated with registration number IIV ⁇ -7621;
  • Enterococcus durans is deposited under the registration number IIV B-7769.
  • the use of the Strovak vaccine is limited to diseases of the genitourinary system, the use of the EcoPrimavak vaccine is prescribed for chronic bacterial inflammatory diseases of any location caused by certain bacteria of the intestinal group (Escherichia coli) and enterococcus, that is, it has wider functionality.
  • EcoPrimavak can be used simultaneously with other medications, including antibiotics and corticosteroids, in the acute period of the disease and in autoimmune diseases.
  • EcoPrimavak can be used in children from 3-4 months of life (according to clinical indications), and not from 5 years old, like Strovak, and during breastfeeding.
  • the EcoPrimavak vaccine has no side effects. Only local (hyperemia, swelling and pain at the injection site) and general (fever, skin rash, as a manifestation of bacterial toxicoderma) reactions to the vaccine are possible. Such reactions are of a natural physiological nature and are due to the activation of local immunity (at the injection site) and a general immune response with the release of toxins from the bacteria against which the specific EcoPrimavak vaccine is directed, due to the rapid destruction of bacteria after their immune recognition by a tuned immune system.
  • Strovak vaccine is released as a dry substance with additional solvent ampoules.
  • the EcoPrimavak vaccine is contained in sterile ampoules in the form of a ready-to-use injection solution.
  • the Strovak vaccine is administered intramuscularly, mainly in the deltoid muscle of the shoulder, the EcoPrimavak vaccine is administered subcutaneously in turn into the outer surface of the shoulder and the front surface of the thigh (in a circle), which allows to achieve a more prolonged immunostimulating effect.
  • the second task is solved by the fact that in the method for the manufacture of Escherichia enterococcal inactivated liquid vaccine against Escherichia coli and Enterococcus, including the cultivation of bacteria strains Escherichia coli, Enterococcus faecalis, inactivation of the strains, mixing, according to the invention, the bacteria strains Enterocococcus faecium, and Enter there are at least 22 bacterial strains, namely: Escherichia coli - 9, Enterococcus faecalis - 8, Enterococcus faecium - 3, Enterococcus durans - 2 of a certain location, isolated from various acute and chronic inflammatory diseases of bacterial etiology, agar culture of bacteria grown Separately, they are washed off the surface of a solid nutrient medium with pyrogen-free distilled water and placed in sterile containers, and to eliminate impurities of the nutrient medium, bacterial strains
  • the method uses a 24-hour agar culture.
  • Erbisol or Inflamafertin are used as a preparation of embryonic origin.
  • Bacterial strains are washed with distilled water by centrifugation three times.
  • the pellet is standardized according to the MAK Farland (McF) standard with an optical density of 1.0, which corresponds to 3 billion (3.0 * 10 L 9) microbial cells in 1 ml.
  • McF MAK Farland
  • the vaccine is poured into ampoules of 1 ml.
  • Spilled and sealed ampoules are checked for leaks, labeled and packaged in 10 ampoules for vaccination, leaving 2 ampoules of each series for control.
  • the vaccination course consists of 10-12 injections that are given every other day, with on the first day at a dose of 0.1 ml intradermally into the inner surface of the forearm with the formation of a “lemon peel”, and the next subcutaneously in a circle in turn to the right shoulder / thigh, left thigh / shoulder with a gradual increase in dose the drug.
  • vaccination is carried out according to the scheme: 0.1 - 0.2 - 0.3 - 0.4 - 0.45 - 0.5 - 0.55 - 0.6 - 0.65 - 0.7 ml .
  • the EcoPrimavak vaccine is used for chronic bacterial inflammatory diseases of any location caused by certain bacteria of the intestinal group (Escherichia coli) and Enterococcus, that is, it has broader functionality than the Strovak vaccine.
  • the EcoPrimak vaccine can be used simultaneously with other medications, including antibiotics and corticosteroid drugs, in the acute period of diseases and in autoimmune diseases.
  • EcoPrimavak can be used in children from 3-4 months of life, and not from 5 years, like Strovak, and during breastfeeding,
  • the EcoPrimavak vaccine has no side effects.
  • the EcoPrimavak vaccine is administered subcutaneously in turn into the external surface of the shoulder and the front surface of the thigh (in a circle), which allows to achieve a more prolonged immunostimulating effect compared to the prototype where the Strovak vaccine is administered intramuscularly.
  • the Escherichia enterococcal inactivated liquid vaccine EcoPrimavak against Escherichia coli and Enterococcus includes strains of bacteria Escherichia coli, Enterococcus faecalis, Enterococcus faecium and Enterococcus durans, in total no less than 22 original bacterial strains, namely: Escherichia coli - 9, enterococ, faec Enterococcus faecium - 3, Enterococcus durans - 2 of a specific location, isolated from various acute and chronic inflammatory diseases of bacterial etiology in children and adults from smears from mucous membranes (nose, pharynx, oral cavity, gum, tongue, urethra, vagina, cervical canal) , from the skin and from various biological substrates (discharge from the urethra and vagina, from urine, prostate secretion, sputum, mucus from the nose,
  • Escherichia coli, strain 797 isolated from the vagina of a patient with recurrent colpitis 09/27/2017, deposited on 10/26/2017 under registration number IIV B-7662, antibiotic resistance - 10%;
  • Escherichia coli, strain 889 isolated from the urine of a patient with chronic cystitis on March 13, 2018, deposited on March 23, 2018 under registration number IIV B-7733, antibiotic resistance - 90%;
  • Escherichia coli, strain 726 isolated from the throat of a patient with chronic sinusitis on 04/11/2018, deposited on 05/07/2018 under registration number IIV B-7748, antibiotic resistance - 0%;
  • Escherichia coli, strain 863 isolated from sputum in a patient with asthma on September 26, 2018, deposited on October 31, 2018 under registration number IIB B-7784, antibiotic resistance - 10%;
  • Escherichia coli, strain 748 isolated from the urine of a patient with chronic pyelonephritis on 05/23/2018, deposited on 10/31/2018 under registration number IIV B-7802, antibiotic resistance - 95%;
  • Enterococcus faecalis strain 447, isolated from the urine of a patient with chronic bacterial intoxication syndrome, September 12, 2017, was deposited on October 26, 2017 under registration number IIB B-7632, antibiotic resistance - 30%;
  • Enterococcus faecalis strain 417, isolated from the urine of a patient with chronic prostatitis on September 19, 2017, was deposited on October 26, 2017 under registration number IIV B-7660, antibiotic resistance - 100%;
  • Enterococcus faecalis strain 552, isolated from the urine of a patient with chronic cystitis on 09/19/2017, deposited on 10/26/2017 under registration number IIV ⁇ -7661, antibiotic resistance - 10%;
  • Enterococcus faecalis strain 623, isolated from the sputum of a patient with chronic bronchitis on 10/03/2018, deposited on 10/31/2018 under registration number IIB B-7788, antibiotic resistance - 30%;
  • Enterococcus faecalis strain 248, isolated from the urine of a patient with chronic cystitis and pyelonephritis on 05/23/2018, deposited on 10/31/2018 under registration number IIV B-7800, antibiotic resistance - 100%;
  • Enterococcus faecalis strain 256, isolated from the urine of a patient with chronic prostatitis on 05/23/2018, deposited on 10/31/2018 under registration number IIV B-7801, antibiotic resistance - 100%;
  • Enterococcus faecium strain 91, isolated from urogenital secretions of a patient with chronic colpitis and cervicitis on 12/20/2017, deposited on 03/23/2018 under registration number IIV B-7713, antibiotic resistance - 0%;
  • Enterococcus faecium strain 517, isolated from the pharynx of a patient with chronic stomatitis on 02/20/2018, deposited on 03/23/2018 under registration number IIV B-7729, antibiotic resistance - 0%;
  • Enterococcus faecium strain 603, isolated from the sputum of a patient with acute tracheobronchitis on 10/03/2018, deposited on 10/31/2018 under registration number IIV B-7789, antibiotic resistance - 0%;
  • strain 887 isolated from mucus from the nose of a patient with chronic sinusitis and allergic rhinitis on 05/30/2018, deposited on 10/31/2018 under registration number IIV B-7769, antibiotic resistance - 100%.
  • a method for the manufacture of Escherichia enterococcal inactivated liquid vaccine EcoPrimavak against Escherichia coli and Enterococcus includes the cultivation of bacteria strains Escherichia coli, Enterococcus faecalis, Enterococcus faecium and Enterococcus durans, no less than 22 bacterial strains, namely: Escherichia coli - 9, Enterocococae, Faecococ 9, Faecococi Enterococcus faecium - 3, Enterococcus durans - 2, isolated in various acute and chronic inflammatory diseases of bacterial etiology in children and adults from smears from mucous membranes (nose, pharynx, oral cavity, gums, tongue, conjunctiva, urethra, vagina, cervical canal) , from the skin and from various biological substrates (discharge from the urethra and vagina, from urine, prostate secreti
  • a 24-hour agar culture of separately grown bacteria is washed off the surface of a solid nutrient medium with pyrogen-free distilled water and placed in sterile containers, and to eliminate impurities of the nutrient medium, bacterial strains are washed with distilled water by centrifugation three times at 1500-3000 rpm for 10- 15 minutes by pouring out the supernatant.
  • the resulting culture residue of the bacteriological strain is suspended in pyrogen-free distilled water for injection and standardized in accordance with the MAK Farland (McF) standard with an optical density of 1.0, which corresponds to 3 billion (3.0 * 10 L 9) microbial cells in 1 ml, and microorganism strains are taken in equal amounts.
  • McF MAK Farland
  • a standardized suspension of strains is inactivated in an autoclave at a temperature of 115-125 ° C and a pressure of 1 ATM. within 15-40 minutes.
  • an equal amount of a preparation of embryonic origin, or physiological saline or water for injection, or another solvent according to the technical regulations is added in equal amounts and a suspension of microbial cells of 1.5 billion (1.5 * 10 L 9) in 1 ml of the finished vaccine is obtained .
  • vaccine samples are plated on nutrient broth, crops are incubated in an incubator at a temperature of 37
  • Spilled and sealed ampoules are checked for leaks, labeled and packaged in 10 ampoules for vaccination, leaving 2 ampoules of each series for control.
  • the vaccination course consists of 10-12 injections that are given every other day, on the first day at a dose of 0.1 ml intradermally into the inner surface of the forearm with the formation of a "lemon peel", and the next subcutaneously in a circle alternately in the right shoulder / thigh, left thigh / shoulder with a gradual increase in the dose of the drug.
  • vaccination is carried out according to the scheme: 0.1 - 0.2 - 0.3 - 0.4 - 0.45 - 0.5 - 0.55 - 0.6 - 0.65 - 0.7 ml .
  • the expiration date of the EcoPrimavak vaccine is 24 months.
  • Vaccine can also can be made in the form of sublingual sucking tablets, capsules for oral administration, drops in the nose or spray, vaginal suppository suppositories, ointments, solution for irrigation of the mucous membranes.
  • the invention is illustrated by examples of treatment.
  • urinoculture of Escherichia coli E. coli was isolated.
  • Regularly conducted courses of antibiotic therapy taking into account the sensitivity of the isolated bacterial cultures to antibiotics.
  • the recurrence rate of cystitis increased in dynamics, a periodic increase in body temperature and pain in the lumbar region joined.
  • enterococcal etiology with the onset of cystitis in the near history (in March 2014) and nephrodisbacteriosis that occurred with manifestations of chronic bacterial intoxication syndrome with endotoxemia, moderate resorptive toxemia, secondary hypochromic anemia, episodes of cephalalgia and predominant asthenaegin. It was suspected that congestive optic nerve disks, loss of vision, as well as changes on the magnetic resonance imaging (MRI) and vasogram of the cerebral vessels are toxic in nature, associated with endotoxemia of bacterial etiology.
  • MRI magnetic resonance imaging
  • the first course of treatment of the bacterial Escherichia enterococcal vaccine EcoPrimavak of 10 subcutaneous injections was carried out. I came to the control examination after 2 months (12/15/2014). It turned out that 15 days after the start of treatment, visual acuity increased almost to normal - 90-100% (it was only 30-40%) and the visual signs of edema of the optic nerves of the left eye completely disappeared. Then, 2.5 months after the start of treatment, the signs of swelling of the optic disc and right eye completely disappeared. In addition, according to the ultrasound examination of the cerebral vessels, within 2.5 months, the symmetric blood flow in the middle cerebral arteries was completely restored and positive dynamics was observed in the venous outflow from the cranial cavity disturbed before treatment.

Abstract

Группа изобретений относится к медицинской микробиологии, фармацевтической промышленности, в частности к вакцинным препаратам, а именно, к вакцинам против кишечных энтеробактерий и энтерококкам, способам их изготовления и способам лечения и профилактики, и может быть использована для лечения и профилактики локальных и системных, острых и хронических заболеваний бактериальной этиологии у детей и взрослых. При этом эшерихиозно- энтерококковая инактивированная жидкая вакцина против кишечной палочки и энтерококка ЕкоПримавак включает штаммы бактерий Escherichia coli, Enterococcus faecalis, Enterococcus faecium и Enterococcus durans, всего не менее 22-х штаммов бактерий, а именно: Escherichia coli - 9, Enterococcus faecalis - 8, Enterococcus faecium - 3, Enterococcus durans - 2 определенной локации, выделенных при различных острых и хронических воспалительных заболеваниях бактериальной этиологии у детей и взрослых, с разной степенью резистентности к антибиотикам, включая госпитальные штаммы со 100%-ной антибиотикорезистентностью, в том числе штаммы бактерий, депонированные в Депозитарии Института микробиологии и вирусологии Национальной академии наук Украины.

Description

ЕШЕРИХИОЗНО-ЭНТЕРОКОККОВАЯ ИНАКТИВИРОВАННАЯ
ЖИДКАЯ ВАКЦИНА «ЕКОПРИМАВАК» ПРОТИВ КИШЕЧНОЙ ПАЛОЧКИ И
ЭНТЕРОКОККОВ, СПОСОБ ЕЕ ИЗГОТОВЛЕНИЯ, СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ И
ПРОФИЛАКТИКИ ЕЮ
Группа изобретений относится к медицинской микробиологии, фармацевтической промышленности, в частности к вакцинным препаратам, а именно, к вакцинам против кишечных энтеробактерий и энтерококкам, способам их изготовления и способам лечения и профилактики, и может быть использована для лечения и профилактики локальных и системных, острых и хронических заболеваний бактериальной этиологии у детей и взрослых: носа, придаточных пазух носа, глотки, ротовой полости, языка, десен, зубов, конъюнктивы и глаз, трахеи, бронхов, легких, мочеполовой системы, желчного пузыря, брюшной полости, кожи, подкожной клетчатки и др.
Кишечная палочка - бактерия (подвижный палочковидный микроорганизм), которая живет в норме в кишечнике человека, не наносит ущерба и даже используется для изготовления лекарственных средств (например, Колибактерин, Мутафлор и др.). Но существуют ее разновидности, способные вызвать поражение желудка и кишечника. Они являются причиной развития особого вида острой кишечной инфекции, называемой эшерихиозной или коли-инфекцией (от латинского названия кишечной палочки: Escherichia coli). Обычно при кишечной инфекции, вызванной кишечной палочкой, поражается желудок и тонкая кишка. В случаях, когда обычная непатогенная кишечная палочка из кишечника контактно-бытовым путем (обычное физиологическое заражение) оккупирует другие территории (слизистые оболочки других органов и систем) она превращаются из симбиотического непатогенного вида бактерий на абсолютно патогенный штамм, вызывающий тяжелые хронические бактериальные заболевания с рецидивирующим пожизненным течением и при развитии абсолютной резистентности к антибиотикам (в случаях постоянного агрессивного их применения с целью уничтожить кишечную палочку или другие бактерии) - даже с возможностью наступления летальных исходов.
Энтерококки (лат. Enterococcus) - это род шаровидных или слегка вытянутых грамположительных бактерий, которые сначала относили к роду стрептококков (Streptococcus) группы D. В связи с выявленными существенными различиями между энтерококками и стрептококками в 1984 г. они были отнесены к роду Enterococcus, а в 2001г. - к самостоятельной семье Энтерококковые (Enterococcaceae). Размещение обычно происходит парами (диплококки) или короткими цепочками.
По состоянию на 2017 год к энтерококкам отнесены около 60 видов бактерий, наиболее патогенными из которых являются энтерококк фекальный (Enterococcus faecalis), энтерококк фециум (Enterococcus faecium) и энтерококк дуранс (Enterococcus durans), рассматриваемые обычно также в качестве симбиотических микроорганизмов кишечника человека и даже используемые для изготовления лекарственных средств (например, препарат Линекс).
Известна вакцина ассоциированная, содержащая Escherichia coli, Salmonella typhimurium, Streptococcus pneumoniae и Streptococcus faecalis [RU N° 2316345 Cl, A61K 39/116, 2008].
Эта вакцина предназначена для лечения колибактериоза, сальмонеллеза, стрептококкоза и энтерококковых инфекции нутрий.
Указанная вакцина разработана против эшерихиоза, стрептококкоза и стафилококкоза крупного рогатого скота.
Известна вакцина ассоциированная, содержащая Escherichia coli, Streptococcus bovis и Enterococcus faecalis [RU N 2429012 Cl, A61K 39/116, 2011].
Эта вакцина разработана против колибактериоза, стрептококкоза и энтерококковой инфекции телят и поросят.
Известна вакцина ассоциированная, содержащая штаммы Escherichia coli, продуцирующих экзотоксины, гемолитические штаммы Streptococcus bovis и Enterococcus faecalis [RU Ле RU 2650 628 Cl, A6 IK 39/116, 2018].
Эта вакцина, как и предыдущий аналог, разработана против колибактериоза, стрептококкоза и энтерококковой инфекции телят и поросят.
Все указанные вакцины предназначены для иммунизации животных, у людей их применять нельзя.
Известна поликомпонентная вакцина (ВП-4) для иммунотерапии заболеваний, в состав которой входят такие штаммы: Klebsiella pneumoniae, Proteus vulgaris, Escherichia coli, Staphylococcus aureus. Вакцину можно применять подкожным методом, а также комбинированными интраназально-подкожным и интраназально-оральным методами [RU N°94019810 А1, А61К 39/116, 1996].
Такая вакцина предназначена для лечения и профилактики обострений хронических заболеваний, вызванных условно-патогенными микроорганизмами, у людей.
Наиболее близкой к заявляемой вакцине является вакцина Стровак (StroVac), содержащая такие штаммы: Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Enterococcus faecalis, Proteus mirabilis, Proteus morganii и применяется для профилактики и лечения рецидивирующих инфекций мочевых путей бактериального происхождения [https://www.evrofarm.com.ua/strovak_STROVAC_idl 13299/].
Состав вакцины Стровак не учитывает актуальный штамм бактерий, доминирующий в этиологии конкретного заболевания у конкретного пациента (например, эшерихиозный цистит, энтерококковый простатит), что делает действие вакцины менее акцентированным с менее выраженным положительным клиническим эффектом.
Происхождение штаммов бактерий в вакцине Стровак неизвестно.
Применение вакцины Стровак ограничено заболеваниями мочеполовой системы.
Стровак противопоказана детям до 5 лет, ее нельзя применять в период кормления грудью. Стровак не применяется при остром периоде заболеваний и при аутоиммунных заболеваниях.
Стровак нельзя применять одновременно с приемом других медикаментов, включая антибиотики и кортикостероидные препараты. Она также имеет побочные действия: тошнота, головная боль, аллергия, озноб. К системным проявлениям побочного действия применения Стровак относят диарею и воспалительные процессы в печени.
Известен способ изготовления вакцины, ассоциированной против колибактериоза, сальмонеллеза, стрептококкоза и энтерококковой инфекции нутрий, заключающийся в том, что осуществляют отбор пораженных органов от погибших нутрий из местного эпизоотического очага. Готовят суспензию из патологического материала и делают посев на дифференциально-диагностические среды. Выделяют чистые культуры Escherichia coli, Salmonella typhimurium, Streptococcus pneumoniae и Streptococcus faecalis. Отдельно выращивают выделенные культуры в мясопептонной питательной среде с добавлением 0,2% глюкозы до достижения концентрации микробных клеток - 4-5 млрд в 1 см3. Инактивируют формалином до 0,4-0,6%-ной конечной концентрации. Выдерживают при температуре 37°С в течение 72-96 часов. Смешивают культуры в равных соотношениях. Вносят 3%-ный раствор гидроксида алюминия в количестве 20% к объему культуры и тщательно перемешивают. После чего полученную вакцину фасуют и закупоривают [RU Ш 2316345 Cl, А61К 39/116, 2008].
Известен способ изготовления вакцины ассоциированной против эшерихиоза, стрептококкоза и стафилококкоза крупного рогатого скота, включающий: отбор патологического материала от больного и павшего крупного рогатого скота из местного эпизоотического очага, приготовление суспензии, проведение посева на дифференциально- диагностические среды, выделение клеток чистых культур возбудителей эшерихиоза Escherichia coli, стрептококкоза Streptococcus pneumoniae и стафилококкоза Staphylococcus aureus, раздельное их выращивание, инактивирование клеток формалином, смешивание в равных соотношениях и внесение в смесь адъюванта - гидроокиси алюминия [RU N«RU 2538158 Cl, А61К 39/116, 2015].
В обоих аналогах способов при получении вакцин используют формалин, что снижает их иммуногенный эффект и иммунологические и положительные клинические ответы после вакцинации.
Указанными способами изготавливают вакцины, предназначенные для вакцинации животных, и их нельзя применять для вакцинации людей
Наиболее близким к заявляемому способу изготовления является способ изготовления вакцины, ассоциированной против колибактериоза, стрептококкоза и энтерококковой инфекции телят и поросят, заключающийся в том, что проводят выделение из пораженных органов телят и поросят эпизоотических штаммов Escherichia coli, продуцирующих термолабильный, термостабильный и другие токсины, а также гемолитических штаммов Streptococcus bovis и Enterococcus faecalis. Отдельно выращивают культуры Escherichia coli, Streptococcus bovis и Enterococcus faecalis на питательном бульоне при температуре 37°С. При этом культуры Escherichia coli выращивают в течение 7 дней, а культуры Streptococcus bovis и Enterococcus faecalis в течение 24 час. до концентрации 5-6 млрд микробных тел в 1 мл. Затем отдельно инактивируют выращенные культуры формалином в концентрации 0,3 -0,4% в течение 14 суток, после чего смешивают культуры в равных объемах, фасуют и закупоривают [Cl, А61К 39/116, 2011].
Недостатком указанного способа является то, что в полученной вакцине содержится большое количество балластных клеток Escherichia coli, несущих лишнюю антигенную нагрузку, что отрицательно сказывается на формировании иммунной защиты против токсинов кишечной палочки, стрептококков и энтерококков, кроме того, данная вакцина может быть реактогенной.
В способе тоже используют формалин, что снижает его иммуногенный эффект, а также иммунологические и положительные клинические ответы после вакцинации.
Указанный способ, как и предыдущие аналоги, предназначен для вакцинации животных, а не людей.
Известен способ лечения и профилактики рецидивирующих инфекций мочевых путей бактериального происхождения вакциной Стровак (StroVac), содержащий штаммы: Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Enterococcus faecalis, Proteus mirabilis, Proteus morganii. Согласно способу разовую дозу вакцины (на 1 введение) получают, смешивая один флакон растворителя с ампулой лиофилизата (с порошком, содержащим инактивированные штаммы бактерий) и вводят медленно внутримышечно в область задней поверхности плеча, преимущественно в дельтовидную мышцу плеча. Доза для одной инъекции (одна доза) составляет 0,5 мл свежеприготовленного инокулята. Для взрослых и подростков от 16 лет следующий график: основная иммунизация (StroVac) состоит из 3 инъекций по 0,5 мл инокулята с интервалами от 1 до 2 недель. [Http://med88.ru/preparaty/strovak/].
Схема введения вакцины Стровак состоит всего из 3 инъекций по 0,5 мл готового раствора в период от 1 до 2 недель между каждой прививкой, что не позволяет достичь стойкого положительного иммунологического и клинического эффектов.
Вакцину Стровак вводят внутримышечно, что не позволяет добиться более пролонгированного иммуностимулирующего эффекта.
Применение вакцины Стровак ограничено заболеваниями мочеполовой системы.
Вакцину Стровак выпускают в виде сухого вещества с дополнительными ампулами растворителя, а не в стерильных ампулах в виде готового к употреблению раствора для инъекций.
В основу изобретения поставлена задача создать эшерихиозно-энтерококковую инактивированную жидкую вакцину против кишечной палочки и энтерококка, которая была бы высокоэффективной, с более пролонгированным иммуностимулирующим эффектом, имела бы более широкие функциональные возможности и не имела бы побочных действий.
Вторая задача, поставленная в основу изобретения, - это создание способа изготовления эшерихиозно-энтерококковой инактивированной жидкой вакцины против кишечной палочки и энтерококка, которая бы имела более высокий иммуногенный эффект и положительные клинические ответы после вакцинации.
Третья задача, поставленная в основу изобретения, - это создание способа лечения и профилактики эшерихиозно-энтерококковой инактивированной жидкой вакциной против кишечной палочки и энтерококка, которая позволила бы достичь устойчивого положительного клинического эффекта и более пролонгированного иммуностимулирующего эффекта, а также имела бы более широкие функциональные возможности.
Поставленную задачу решают тем, что эшерихиозно-энтерококковая инактивированная жидкая вакцина против кишечной палочки и энтерококка, включающая штаммы бактерий Escherichia coli, Enterococcus faecalis, согласно изобретению , дополнительно содержит штаммы бактерий Enterococcus faecium и Enterococcus durans, всего не менее 22-х штаммов бактерий, а именно: Escherichia coli - 9, Enterococcus faecalis - 8, Enterococcus faecium - 3, Enterococcus durans - 2 различной локации, выделенных при различных острых и хронических воспалительных заболеваниях бактериальной этиологии, в том числе штаммы бактерий, депонированные в Депозитарии Института микробиологии и вирусологии Национальной академии наук Украины, с разной степенью резистентности к антибиотикам, включая госпитальные штаммы со 100%-ной антибиотикорезистентностью :
Escherichia соНдепонирован под регистрационным номером ИМВ В-7621 ;
Escherichia coli депонирован под регистрационным номером ИМВ В-7622;
Escherichia coli депонирован под регистрационным номером ИМВ В-7662;
Escherichia coli депонирован под регистрационным номером ИМВ В-7733;
Escherichia coli депонирован под регистрационным номером ИМВ В-7748;
Escherichia coli депонирован под регистрационным номером ИМВ В-7628;
Escherichia coli депонирован под регистрационным номеромИМВ В-7784,;
Escherichia coli депонирован под регистрационным номером ИМВ В-7802;
Enterococcus faecalis депонирован под регистрационным номером ИМВ В-7632;
Enterococcus faecalis депонирован под регистрационным номером ИМВ В-7660;
Enterococcus faecalis депонирован под регистрационным номером ИМВ В-7661 ;
Enterococcus faecalis депонирован под регистрационным номером ИМВ В-7631 ;
Enterococcus faecalis депонирован под регистрационным номером ИМВ-7708;
Enterococcus faecalis депонирован под регистрационным номером ИМВ В-7788;
Enterococcus faecalis депонирован под регистрационным номером ИМВ В-7800;
Enterococcus faecalis депонирован под регистрационным номером ИМВ В-7801 ;
Enterococcus faecium депонирован под регистрационным номером ИМВ В-7713;
Enterococcus faecium депонирован под регистрационным номером ИМВ В-7729;
Enterococcus faecium депонирован под регистрационным номером ИМВ В-7789;
Enterococcus durans депонирован под регистрационным номером ИМВ В-7749;
Enterococcus durans депонирован под регистрационным номером ИМВ В-7769.
ЕкоПримавак по сравнению с прототипом имеет более акцентированное действие с более выраженным положительным клиническим эффектом.
Если применение вакцины Стровак ограничено заболеваниями мочеполовой системы, применение вакцины ЕкоПримавак предусмотрено при хронических бактериальных воспалительных заболеваниях любой локации, вызванных определенными бактериями кишечной группы (кишечной палочкой) и энтерококком, то есть она имеет более широкие функциональные возможности. Кроме того, ЕкоПримавак можно применять одновременно с приемом других медикаментов, включая антибиотики и кортикостероидные препараты, в остром периоде заболевания и при аутоиммунных заболеваниях.
ЕкоПримавак можно применять у детей с 3-4 месяцев жизни (по клиническим показаниям), а не с 5 лет, как Стровак, и в период кормления грудью.
Вакцина ЕкоПримавак не имеет побочных действий. Возможны только местные (гиперемия, отечность и болезненность в месте введения) и общие (повышение температуры тела, сыпь на коже, как проявление бактериальной токсикодермии) реакции на введение вакцины. Такие реакции носят естественный физиологический характер и обусловлены активацией местного иммунитета (в месте введения вакцины) и общего иммунного ответа с выделением токсинов из бактерий, против которых направлена конкретная вакцина ЕкоПримавак, за счет быстрого разрушения бактерий после их иммунного распознавания настроенной иммунной системой.
Если системными проявлениями побочного действия применения вакцины Стровак является диарея и воспалительные процессы в печени, то этого не бывает при применении вакцины ЕкоПримавак.
Вакцину Стровак выпускают в виде сухого вещества с дополнительными ампулами растворителя. Вакцина ЕкоПримавак содержится в стерильных ампулах в виде готового к употреблению раствора для инъекций.
Если вакцину Стровак вводят внутримышечно, преимущественно в дельтовидную мышцу плеча, то вакцину ЕкоПримавак вводят подкожно по очереди в наружную поверхность плеча и переднюю поверхность бедра (по кругу), что позволяет добиться более пролонгированного иммуностимулирующего эффекта.
Вторую поставленную задачу решают тем, что в способе изготовления эшерихиозно- энтерококковой инактивированной жидкой вакцины против кишечной палочки и энтерококка, включающем выращивание штаммов бактерий Escherichia coli, Enterococcus faecalis, инактивацию штаммов, смешивание, согласно изобретению, также выращивают штаммы бактерий Enterococcus faecium и Enterococcus durans, всего не менее 22-х штаммов бактерий, а именно: Escherichia coli - 9, Enterococcus faecalis - 8, Enterococcus faecium - 3, Enterococcus durans - 2 определенной локации, выделенные при различных острых и хронических воспалительных заболеваниях бактериальной этиологии, агаровую культуру бактерий, выращенных порознь, смывают с поверхности твердой питательной среды апирогенной дистиллированной водой и помещают в стерильные емкости, а для устранения примесей питательной среды штаммы бактерий отмывают дистиллированной водой путем центрифугирования при 1500-3000 об/мин. в течение 10-15 минут, выливая надосадочную жидкость, полученный осадок биомассы культуры бактериологического штамма, выращенного порознь, суспендируют в апирогенной дистиллированной воде для инъекций и стандартизируют, причем штаммы микроорганизмов берут в равных количествах, стандартизированную суспензию штаммов инактивируют в автоклаве при температуре 115- 125°С и давлении 1 атм. в течение 15-40 минут, в емкости с инактивированными бактериями добавляют в равных количествах препарат эмбрионального происхождения, или физиологический раствор, или воду для инъекций и получают суспензию микробных клеток, для контроля стерильности образцы вакцины высевают на питательный бульон, посевы инкубируют в термостате при температуре 35-40°С в течение 24-48 часов, а при отсутствии роста добавляют консервант и разливают вакцину в стерильные ампулы.
В способе используют 24-часовую агаровой культуры.
Как препарат эмбрионального происхождения используют Эрбисол или Инфламафертин.
Штаммы бактерий отмывают дистиллированной водой путем трехкратного центрифугирования .
Осадок стандартизируют соответствии со стандартом МАК Фарленд (McF) с оптической плотностью 1,0, что соответствует 3 млрд (3,0*10л9) микробных клеток в 1 мл.
В способе получают суспензию микробных клеток 1 ,5 млрд (1,5* 10Л9) в 1 мл готовой вакцины.
Разливают вакцину в ампулы по 1 мл.
Разлитые и запаянные ампулы проверяют на герметичность, этикетируют и упаковывают по 10 ампул для вакцинации, оставляя по 2 ампулы каждой серии для контроля.
Использование в способе не менее 22-х оригинальных штаммов бактерий, а именно: Escherichia coli - 9, Enterococcus faecalis - 8, Enterococcus faecium - 3, Enterococcus durans - 2, выделенных при различных острых и хронических воспалительных заболеваниях бактериальной этиологии у детей и взрослых, позволяет получить вакцину, имеющую высокий общий и местный иммуногенный эффекты, а также положительный клинический ответ после вакцинации.
Третью поставленную задачу решают тем, что в способе лечения и профилактики эшерихиозно-энтерококковой инактивированной жидкой вакциной против кишечной палочки и энтерококка, включающем введение вакцины в соответствующих нарастающих дозах, согласно изобретению, курс вакцинации состоит из 10-12 инъекций, которые делают через день, при этом в первый день в дозе 0,1 мл внутрикожно во внутреннюю поверхность предплечья с образованием «лимонной корки», а следующие - подкожно по кругу по очереди в правое плечо/бедро, левое бедро/плечо с постепенным увеличением дозы препарата.
Для детей первого года жизни вакцинацию осуществляют по схеме: 0,1 - 0,2 - 0,3 - 0,4 - 0,45 - 0,5 - 0,55 - 0,6 - 0,65 - 0,7 мл.
Для детей от одного до пяти лет вакцинацию осуществляют по схеме: 0,1 - 0,2 - 0,3 - 0,4 - 0,5 - 0,6 - 0,65 - 0,7 - 0,75 - 0,8 мл.
Для детей старше пяти лет и взрослых вакцинацию осуществляют по схеме: 0,1 - 0,2 - 0,3 - 0,4 - 0,5 - 0,6 - 0,7 - 0,8 - 0,9 - 1,0 мл.
Вакцину ЕкоПримавак применяют при хронических бактериальных воспалительных заболеваниях любой локации, вызванных определенными бактериями кишечной группы (кишечной палочкой) и энтерококком, то есть она имеет более широкие функциональные возможности, чем вакцина Стровак. Вакцину ЕкоПримак можно применять одновременно с приемом других медикаментов, включая антибиотики и кортикостероидные препараты, при остром периоде заболеваний и при аутоиммунных заболеваниях.
ЕкоПримавак можно применять у детей с 3-4 месяцев жизни, а не с 5 лет, как Стровак, и в период кормления грудью,
Вакцина ЕкоПримавак не имеет побочных действий.
Вакцину ЕкоПримавак вводят подкожно по очереди во внешнюю поверхность плеча и переднюю поверхность бедра (по кругу), что позволяет добиться более пролонгированного иммуностимулирующего эффекта по сравнению с прототипом, где вакцину Стровак вводят внутримышечно.
Эшерихиозно-энтерококковая инактивированная жидкая вакцина ЕкоПримавак против кишечной палочки и энтерококка включает штаммы бактерий Escherichia coli, Enterococcus faecalis, Enterococcus faecium и Enterococcus durans, всего не менее 22-х оригинальных штаммов бактерий, а именно: Escherichia coli - 9, Enterococcus faecalis - 8, Enterococcus faecium - 3, Enterococcus durans - 2 определенной локации, выделенных при различных острых и хронических воспалительных заболеваниях бактериальной этиологии у детей и взрослых из мазков со слизистых оболочек (нос, зев, ротовая полость, десна, язык, уретра, влагалище, цервикальный канал), с кожи и из различных биологических субстратов (выделения из уретры и влагалища, из мочи, секрета простаты, мокроты, слизи из носа и т.п.), в том числе штаммы бактерий, депонированные в Депозитарии Института микробиологии и вирусологии Национальной академии наук Украины, включительно с госпитальными штаммами со 100%-ной антибиотикорезистентностью:
Escherichia coli, штамм 483, изолированный из мочи больной хроническим циститом 05.09.2017 г., депонирован 26.10.2017 г. под регистрационным номером ИМВ В-7621, резистентность к антибиотикам - 0%; Escherichia coli, штамм 657, изолированный из мочи больного хроническим уретро- простатитом 05.09.2017 г., депонирован 26.10.2017 г. под регистрационным номером ИМВ В-7622, резистентность к антибиотикам - 0%;
Escherichia coli, штамм 797, изолированный из влагалища больной рецидивирующим кольпитом 27.09.2017 г., депонирован 26.10.2017 г. под регистрационным номером ИМВ В- 7662, резистентность к антибиотикам - 10%;
Escherichia coli, штамм 889, изолированный из мочи больной хроническим циститом 13.03.2018 г., депонирован 23.03.2018 г. под регистрационным номером ИМВ В-7733, резистентность к антибиотикам - 90%;
Escherichia coli, штамм 726, изолированный из зева больного хроническим гайморитом 11.04.2018 г., депонирован 07.05.2018 г. под регистрационным номером ИМВ В-7748, резистентность к антибиотикам - 0%;
Escherichia coli, штамм 463, изолированный из зева больного хроническим тонзилитом 12.09.2017 г., депонирован 26.10.2017 г. под регистрационным номером ИМВ В-7628, резистентность к антибиотикам - 95%;
Escherichia coli, штамм 863, изолированный из мокроты больной бронхиальной астмой 26.09.2018 г., депонирован 31.10.2018 г. под регистрационным номером ИМВ В- 7784, резистентность к антибиотикам - 10%;
Escherichia coli, штамм 748, изолированный из мочи больного хроническим пиелонефритом 23.05.2018 г., депонирован 31.10.2018 г. под регистрационным номером ИМВ В-7802, резистентность к антибиотикам - 95%;
Enterococcus faecalis, штамм 447, изолированный из мочи больного синдромом хронической бактериальной интоксикации 12.09.2017 г. депонирован 26.10.2017 г. под регистрационным номером ИМВ В-7632, резистентность к антибиотикам - 30%;
Enterococcus faecalis, штамм 417, изолированный из мочи больного хроническим простатитом 19.09.2017 г., депонирован 26.10.2017 г. под регистрационным номером ИМВ В-7660, резистентность к антибиотикам - 100%;
Enterococcus faecalis, штамм 552, изолированный из мочи больной хроническим циститом 19.09.2017 г., депонирован 26.10.2017 г. под регистрационным номером ИМВ В- 7661, резистентность к антибиотикам - 10%;
Enterococcus faecalis, штамм 357, изолированный из эякулята больного хроническим простатитом и аденомой простаты 12.09.2017 г. депонирован 16.10.2017 г. под регистрационным номером ИМВ В-7631, резистентность к антибиотикам - 30%;
Enterococcus faecalis, штамм 892, изолированный из урогенитальных выделений больного хроническим уретро-простатит 13.12.2017 г., депонирован 23.03.2018 г., под регистрационным номером ИМВ-7708, резистентность к антибиотикам - 100%;
Enterococcus faecalis, штамм 623, изолированный из мокроты больного хроническим бронхитом 03.10.2018 г., депонирован 31.10.2018 г. под регистрационным номером ИМВ В-7788, резистентность к антибиотикам - 30%;
Enterococcus faecalis, штамм 248, изолированный из мочи больной хроническими циститом и пиелонефритом 23.05.2018 г., депонирован 31.10.2018 г. под регистрационным номером ИМВ В-7800, резистентность к антибиотикам - 100%;
Enterococcus faecalis, штамм 256, изолированный из мочи больного хроническим простатитом 23.05.2018 г., депонирован 31.10.2018 г. под регистрационным номером ИМВ В-7801, резистентность к антибиотикам - 100%;
Enterococcus faecium, штамм 91, изолированный из урогенитальных выделений больной хроническими кольпитом и цервицитом 20.12.2017 г., депонирован 23.03.2018 г. под регистрационным номером ИМВ В-7713, резистентность к антибиотикам - 0%;
Enterococcus faecium, штамм 517, изолированный из зева больного хроническим стоматитом 20.02.2018 г., депонирован 23.03.2018 г. под регистрационным номером ИМВ В-7729, резистентность к антибиотикам - 0%;
Enterococcus faecium, штамм 603, изолированный из мокроты больной острым трахеобронхитом 03.10.2018 г., депонирован 31.10.2018 г. под регистрационным номером ИМВ В-7789, резистентность к антибиотикам - 0%;
Enterococcus durans, штамм 468, изолированный из мочи больной хроническим циститом 11.04.2018 г., депонирован 07.05.2018 г. под регистрационным номером ИМВ В- 7749, резистентность к антибиотикам - 0%;
Enterococcus durans, штамм 887, изолированный из слизи из носа больного хронический гайморитом и аллергическим насморком 30.05.2018 г., депонирован 31.10.2018 г. под регистрационным номером ИМВ В-7769, резистентность к антибиотикам - 100%.
Способ изготовления эшерихиозно-энтерококковой инактивированной жидкой вакцины ЕкоПримавак против кишечной палочки и энтерококк включает выращивание штаммов бактерий Escherichia coli, Enterococcus faecalis, Enterococcus faecium и Enterococcus durans, всего не менее 22 штаммов бактерий, а именно: Escherichia coli - 9, Enterococcus faecalis - 8, Enterococcus faecium - 3, Enterococcus durans - 2, выделенных при различных острых и хронических воспалительных заболеваниях бактериальной этиологии у детей и взрослых из мазков со слизистых оболочек (нос, зев, ротовая полость, десны, язык, конъюнктива, уретра, влагалище, цервикальный канал), с кожи и из разных биологических субстратов (выделения из уретры и влагалища, из мочи, секрета простаты, мокроты, слизи из носа и т.п.),
24-часовую агаровую культуру бактерий, выращенных порознь, смывают с поверхности твердой питательной среды апирогенной дистиллированной водой и помещают в стерильные емкости, а для устранения примесей питательной среды штаммы бактерий отмывают дистиллированной водой путем трехкратного центрифугирования при 1500-3000 об/мин в течение 10-15 минут, выливая надосадочную жидкость. Полученный осадок культуры бактериологического штамма суспендируют в апирогенной дистиллированной воде для инъекций и стандартизируют в соответствии со стандартом МАК Фарленд (McF) с оптической плотностью 1,0, что соответствует 3 млрд (3,0* 10л9) микробных клеток в 1 мл, причем штаммы микроорганизмов берут в равных количествах. Стандартизированную суспензию штаммов инактивируют в автоклаве при температуре 115-125°С и давлении 1 атм. в течение 15-40 минут. В емкости с инактивированными бактериями добавляют в равных количествах препарат эмбрионального происхождения, или физиологический раствор или воду для инъекций, или другой растворитель согласно техническому регламенту и получают суспензию микробных клеток 1,5 млрд (1,5* 10Л9) в 1 мл готовой вакцины. Для контроля стерильности образцы вакцины высевают на питательный бульон, посевы инкубируют в термостате при температуре 37
°С в течение 24-48 часов, а при отсутствии роста добавляют консервант и другие ингредиенты (согласно техническому регламенту) и разливают вакцину по 1 мл в стерильные ампулы.
Разлитые и запаянные ампулы проверяют на герметичность, этикетируют и упаковывают по 10 ампул для вакцинации, оставляя по 2 ампулы каждой серии для контроля.
Курс вакцинации состоит из 10-12 инъекций, которые делают через день, при этом в первый день в дозе 0,1 мл внутрикожно во внутреннюю поверхность предплечья с образованием «лимонной корки», а последующие - подкожно по кругу поочередно в правое плечо/бедро, левое бедро/плечо с постепенным увеличением дозы препарата.
Для детей первого года жизни вакцинацию осуществляют по схеме: 0,1 - 0,2 - 0,3 - 0,4 - 0,45 - 0,5 - 0,55 - 0,6 - 0,65 - 0,7 мл.
Для детей от одного до пяти лет вакцинацию осуществляют по схеме: 0,1 - 0,2 - 0,3 - 0,4 - 0,5 - 0,6 - 0,65 - 0,7 - 0,75 - 0,8 мл.
Для детей старше пяти лет и взрослых вакцинацию осуществляют по схеме: 0,1 - 0,2 - 0,3 - 0,4 - 0,5 - 0,6 - 0,7 - 0,8 - 0,9 - 1,0 мл.
Срок годности вакцины ЕкоПримавак составляет 24 месяца.
Изобретение не ограничивается изготовлением жидкой вакцины. Вакцина может также быть изготовлена в виде сублингвальных сосательных таблеток, капсул для приема внутрь, капель в нос или спрея, вагинальных свечей-суппозиториев, мази, раствора для орошения слизистых оболочек.
Изобретение поясняется примерами лечения.
Пример 1
Ребенок К., 6 лет, диагноз: хронический цистит и хронический пиелонефрит, подтвержденный результатами ультразвукового исследования почек (УЗИ) с дебютом в возрасте 2-х лет после очередного перенесенного острого респираторного заболевания и последующими периодическими рецидивами. Неоднократно при бактериологическом исследовании мочи выделяли уринокультуру кишечной палочки Escherichia coli. Регулярно проводили курсы антибактериальной терапии с учетом чувствительности выделенных культур бактерий к антибиотикам. Однако частота рецидивов цистита в динамике нарастала, присоединились периодическое повышение температуры тела и болевой синдром в поясничной области. Родители обратились в клинику в период очередного обострения (через 2 недели после проведенного накануне курса антибиотикотерапии) с лейкоцитурией 25-30 клеток в поле зрения и умеренной протеинурией (белок - 0,066 г/л). При бактериологическом исследовании теплой мочи (три дня подряд) были выделены три идентичные культуры Escherichia coli. Была приготовлена эшерихиозно-энтерококковая вакцина ЕкоПримавак. Проведен курс лечения из 10 подкожных инъекций через день. Состояние ребенка улучшилось, анализы мочи приблизились к нормальным показателям. Через 1 месяц был проведен второй курс иммунизации бактериальной поливалентной вакциной УроПримавак, тоже из 10 инъекций. В течение 2-х лет было проведено всего 5 курсов лечения бактериальными вакцинами. Наступила стойкая клиническая ремиссия, больше необходимости в назначении антибиотиков не возникало. Ребенок продолжает оставаться под амбулаторным наблюдением с периодическими мониторинговым исследованиям общего анализа мочи и бактериологического исследования теплой мочи.
Пример 2
Пациентка Т., 18 лет. Обратилась в клинику 10.09.2014 г. с диагнозом: застойные диски зрительных нервов обоих глаз с понижением зрения (VOD - 0,4; VOS - 0,3). Предыдущий курс лечения у офтальмологов длился 2 года 9 месяцев с практически нулевым результатом - застойные явления усиливались. Этиология этих застойных дисков не была верифицирована. Прошла в клинике дообследование на герпесвирусные инфекции - активных форм не обнаружено; на состояние иммунитета и ревмопробы - норма; отсутствовали серологические признаки аутоиммунно-системных заболеваний. Был заподозрен и подтвержден бактериологический диагноз урогенитального дисбактериоза энтерококковой этиологии с дебютом цистита в ближайшем анамнезе (в марте 2014 г.) и нефродисбактериозом, протекавшем с проявлениями синдрома хронической бактериальной интоксикации с эндотоксикозом, токсемией средней степени резорбтивного генеза, вторичной гипохромной анемией, эпизодами цефалгий и преобладающей астеновегетативной симптоматикой. Было заподозрено, что застойные диски зрительных нервов, потеря зрения, а также изменения на магниторезонансной томограмме (МРТ) и вазограмме сосудов головного мозга имеют токсический характер, ассоциированный с эндотоксикозом бактериальной этиологии.
Был проведен первый курс лечения бактериальной эшерихиозно-энтерококковой вакциной ЕкоПримавак из 10 подкожных инъекций. Пришла на контрольный осмотр через 2 месяца (15.12.2014 г.). Оказалось, что через 15 дней после начала лечения острота зрения повысилась почти до нормы - 90-100% (была всего 30-40%) и полностью исчезли визуальные признаки отеков дисков зрительных нервов левого глаза. Затем через 2,5 месяца после начала лечения полностью исчезли признаки отека диска зрительного нерва и правого глаза. Кроме того, по данным ультразвукового обследования сосудов головного мозга, за 2,5 месяца полностью восстановился симметричный кровоток по средним мозговым артериям и отмечена положительная динамика в нарушенном до лечения венозном оттоке из полости черепа. Через 3 месяца после окончания 1-го курса был проведен 2-ой курс иммунизации эшерихиозно-энтерококковой вакциной ЕкоПримавак из 10 инъекций и затем 3-й дополнительный курс вакцинации вакциной УроПримавак, тоже из 10 инъекций. В течение следующих 4-х лет катамнестического наблюдения рецидивов потери зрения (сохраняется 100% зрение на оба глаза), цистита и бактериурии больше не было.

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
1. Эшерихиозно-энтерококковая инактивированная жидкая вакцина против кишечной палочки и энтерококка, включающая штаммы бактерий Escherichia coli, Enterococcus faecalis, отличающаяся тем, что дополнительно содержит штаммы бактерий Enterococcus faecium и Enterococcus durans, всего не менее 22-х штаммов бактерий, а именно: Escherichia coli - 9, Enterococcus faecalis - 8, Enterococcus faecium - 3, Enterococcus durans - 2 определенной локации, выделенных при различных острых и хронических воспалительных заболеваниях бактериальной этиологии, с разной степенью резистентности к антибиотикам, включая госпитальные штаммы со 100%-ной антибиотикорезистентностью, в том числе штаммы бактерий, депонированные в Депозитарии Института микробиологии и вирусологии Национальной академии наук Украины:
Escherichia соНдепонирован под регистрационным номером ИМВ В-7621 ;
Escherichia coli депонирован под регистрационным номером ИМВ В-7622;
Escherichia coli депонирован под регистрационным номером ИМВ В-7662;
Escherichia coli депонирован под регистрационным номером ИМВ В-7733;
Escherichia coli депонирован под регистрационным номером ИМВ В-7748;
Escherichia coli депонирован под регистрационным номером ИМВ В-7628;
Escherichia coli депонирован под регистрационным номеромИМВ В-7784;
Escherichia coli депонирован под регистрационным номером ИМВ В-7802;
Enterococcus faecalis депонирован под регистрационным номером ИМВ В-7632;
Enterococcus faecalis депонирован под регистрационным номером ИМВ В-7660;
Enterococcus faecalis депонирован под регистрационным номером ИМВ В-7661;
Enterococcus faecalis депонирован под регистрационным номером ИМВ В-7631;
Enterococcus faecalis депонирован под регистрационным номером ИМВ-7708;
Enterococcus faecalis депонирован под регистрационным номером ИМВ В-7788;
Enterococcus faecalis депонирован под регистрационным номером ИМВ В-7800;
Enterococcus faecalis депонирован под регистрационным номером ИМВ В-7801;
Enterococcus faecium депонирован под регистрационным номером ИМВ В -7713;
Enterococcus faecium депонирован под регистрационным номером ИМВ В-7729;
Enterococcus faecium депонирован под регистрационным номером ИМВ В-7789;
Enterococcus durans депонирован под регистрационным номером ИМВ В -7749;
Enterococcus durans депонирован под регистрационным номером ИМВ В-7769.
2. Способ изготовления эшерихиозно-энтерококковой инактивированной жидкой вакцины против кишечной палочки и энтерококка, включающий выращивание штаммов бактерий Escherichia coli, Enterococcus faecalis, инактивацию штаммов, смешивания, отличающийся тем, что дополнительно выращивают штаммы бактерий Enterococcus faecium и Enterococcus durans, всего не менее 22-х штаммов бактерий , а именно: Escherichia coli - 9, Enterococcus faecalis - 8, Enterococcus faecium - 3, Enterococcus durans - 2 определенной локации, выделенных при различных острых и хронических воспалительных заболеваниях бактериальной этиологии, агаровую культуру бактерий, выращенных порознь, смывают с поверхности твердой питательной среды апирогенной дистиллированной водой и помещают в стерильные емкости, а для устранения примесей питательной среды штаммы бактерий отмывают дистиллированной водой путем центрифугирования при 1500-3000 об/мин. в течение 10-15 минут, выливая надосадочную жидкость, полученный осадок биомассы культуры бактериологического штамма, выращенного порознь, суспендируют в апирогенной дистиллированной воде для инъекций и стандартизируют, причем штаммы микроорганизмов берут в равных количествах, стандартизированную суспензию штаммов инактивируют в автоклаве при температуре 115- 125°С и давлении 1 атм. в течение 15-40 минут, в емкости с инактивированными бактериями добавляют в равных количествах препарат эмбрионального происхождения, или физиологический раствор, или воду для инъекций и получают суспензию микробных клеток, для контроля стерильности образцы вакцины высевают на питательный бульон, посевы инкубируют в термостате при температуре 35-40°С в течение 24-48 часов, а при отсутствии роста добавляют консервант и разливают вакцину в стерильные ампулы.
3. Способ по п.2, отличающийся тем, что используют 24-часовую агаровую культуру.
4. Способ по п.2, отличающийся тем, что в качестве препарата эмбрионального происхождения используют Эрбисол или Инфламафертин.
5. Способ по п.2, отличающийся тем, что штаммы бактерий отмывают дистиллированной водой путем трехкратного центрифугирования.
6. Способ по п.2, отличающийся тем, что стандартизируют в соответствии со стандартом МАК Фарленд (McF) с оптической плотностью 1,0, что соответствует 3 млрд (3,0* 10л9) микробных клеток в 1 мл.
7. Способ по п.2, отличающийся тем, что получают суспензию микробных клеток 1,5 млрд (1,5* 10Л9) в 1 мл готовой вакцины.
8. Способ по п.2, отличающийся тем, что разливают вакцину в ампулы по 1 мл.
9. Способ по п.2, отличающийся тем, что разлитые и запаянные ампулы проверяют на герметичность, этикетируют и упаковывают по 10 ампул для вакцинации, оставляя по 2 ампулы каждой серии для контроля.
10. Способ лечения и профилактики эшерихиозно-энтерококковой инактивированной жидкой вакциной против кишечной палочки и энтерококка, включающий введение вакцины в соответствующих нарастающих дозах, отличающийся тем, что курс вакцинации состоит из 10-12 инъекций, которые делают через день, при этом в первый день в дозе 0,1 мл внутрикожно во внутреннюю поверхность предплечья с образованием «лимонной корки», а последующие - подкожно по кругу по очереди в правое плечо/бедро, левое бедро/плечо с постепенным увеличением дозы препарата.
11. Способ по п.10, отличающийся тем, что для детей первого года жизни вакцинацию осуществляют по схеме: 0,1 - 0,2 - 0,3 - 0,4 - 0,45 - 0,5 - 0,55 - 0,6 - 0,65 - 0,7 мл.
12. Способ по п.10, отличающийся тем, что для детей от одного до пяти лет вакцинацию осуществляют по схеме: 0,1 - 0,2 - 0,3 - 0,4 - 0,5 - 0,6 - 0, 65 - 0,7 - 0,75 - 0,8 мл.
13. Способ по п.10, отличающийся тем, что для детей старше пяти лет и взрослых вакцинацию осуществляют по схеме: 0,1 - 0,2 - 0,3 - 0,4 - 0,5 - 0,6 - 0, 7 - 0,8 - 0,9 - 1,0 мл.
PCT/UA2019/000165 2018-12-27 2019-12-27 Ешерихиозно-энтерококковая инактивированная жидкая вакцина «екопримавак» против кишечной палочки и энтерококков, способ ее изготовления, способ лечения и профилактики ею WO2020139311A1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
UAA201812977A UA125901C2 (uk) 2018-12-27 2018-12-27 Ешерихіозно-ентерококова інактивована рідка вакцина проти кишкової палички та ентерокока, спосіб її виготовлення та спосіб лікування і профілактики нею
UAA201812977 2018-12-27

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2020139311A1 true WO2020139311A1 (ru) 2020-07-02

Family

ID=71129627

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/UA2019/000165 WO2020139311A1 (ru) 2018-12-27 2019-12-27 Ешерихиозно-энтерококковая инактивированная жидкая вакцина «екопримавак» против кишечной палочки и энтерококков, способ ее изготовления, способ лечения и профилактики ею

Country Status (2)

Country Link
UA (1) UA125901C2 (ru)
WO (1) WO2020139311A1 (ru)

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SU1452462A3 (ru) * 1984-08-31 1989-01-15 Золько Базель Аг (Фирма) Способ получени вакцины дл профилактики и лечени инфекции мочевых путей
US20130337012A1 (en) * 2004-06-07 2013-12-19 Qu Biologics Inc. Tissue Targeted Antigenic Activation of the Immune Response to Treat Cancers

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SU1452462A3 (ru) * 1984-08-31 1989-01-15 Золько Базель Аг (Фирма) Способ получени вакцины дл профилактики и лечени инфекции мочевых путей
US20130337012A1 (en) * 2004-06-07 2013-12-19 Qu Biologics Inc. Tissue Targeted Antigenic Activation of the Immune Response to Treat Cancers

Also Published As

Publication number Publication date
UA125901C2 (uk) 2022-07-06

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2465320C2 (ru) Композиция штаммов рода lactobacillus для производства лекарственного средства
US20040067223A1 (en) Probiotic compositions for the treatment of inflammatory bowel disease
US20080003207A1 (en) Treating inflammatory bowel disease with live bacteria
ES2331650T3 (es) Utilizacion de bacterias probioticas en el tratamiento de una infeccion.
CN113577218A (zh) 一种抑制幽门螺旋杆菌的灭活益生菌中药组合物及其制备方法和应用
WO2020139316A1 (ru) Поливалентная комбинированная инактивированная жидкая вакцина «уропримавак» и способ ее изготовления
CN110960561B (zh) 用于调节妇科菌群平衡的益生菌组合物
WO2020139311A1 (ru) Ешерихиозно-энтерококковая инактивированная жидкая вакцина «екопримавак» против кишечной палочки и энтерококков, способ ее изготовления, способ лечения и профилактики ею
WO2020139308A1 (ru) Инактивированная стафилококковая жидкая вакцина
RU2130316C1 (ru) Лечебно-профилактический биопрепарат "бактиспорин"
WO2020139314A1 (ru) Противобактериальная поливалентная комбинированная инактивированная жидкая вакцина
GB1585863A (en) Pharmaceutical lactobacillus preparations
French Problems raised by the treatment of steatorrhoea with antibacterial drugs
RU2322251C2 (ru) Способ комплексной коррекции дисбиоза кишечника с помощью жидкого пробиотика "нарине-форте" и пребиотика сиропа "фитолон" с хлорофиллом
WO2020139312A1 (ru) Клебсиелезно-протейная вакцина «клепропримавак» против клебсиеллы и протея
WO2020139309A1 (ru) Псевдомонадная инактивированная вакцина «псевдопримавак» против синегнойной палочки
RU2780868C1 (ru) Иммунобиологическое средство на основе бутирата и способ его использования для терапии воспалительных заболеваний кишечника
CN111569079B (zh) 一种抗葡萄球菌感染的抗体抗生素联合制剂
RU2805329C2 (ru) Комбинированный биологический препарат для лечения эндометритов у сельскохозяйственных животных
Corridan Antibiotic-resistant staphylococcal pseudomembraneous enteritis
Mathers Different types of streptococci and their relation to bovine mastitis
WO2020139313A1 (ru) Стрептококковая инактивированная жидкая вакцина
Barile Variant bacteria and chronic disease
RU2661624C1 (ru) Способ лечения синдрома раздражённого кишечника
RU2164143C2 (ru) Способ лечения острых и хронических кишечных заболеваний, лекарственный препарат и его форма

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 19903328

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

DPE1 Request for preliminary examination filed after expiration of 19th month from priority date (pct application filed from 20040101)
NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

122 Ep: pct application non-entry in european phase

Ref document number: 19903328

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1