ES2331650T3 - Utilizacion de bacterias probioticas en el tratamiento de una infeccion. - Google Patents
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Abstract
Utilización de un cultivo vivo de una bacteria probiótica apatógena de una calidad apropiada para alimentos o del sobrenadante de un cultivo vivo de una bacteria probiótica apatógena de una calidad apropiada para alimentos en la preparación de una composición para estimular el sistema inmunitario, en la que se selecciona una cepa de Lactococcus de entre los grupos que comprenden: Lactococcus lactis DPC3147, Lactococcus lactis DPC5399 y Lb. plantarum DPC4922, estando destinada la composición a ser utilizada en el tratamiento de una infección de tipo mastitis.
Description
Utilización de bacterias probióticas en el
tratamiento de una infección.
La presente invención se refiere a la
utilización de cultivos vivos de bacterias probióticas apatógenas o
sobrenadantes de dichos cultivos en la realización de una
composición para el tratamiento de infecciones bacterianas, que
consisten en mastitis de naturaleza infecciosa. En particular, la
presente invención tal como se ha definido anteriormente comprende
la utilización de cultivos vivos de Lactococcus lactis o el
sobrenadante de dichos cultivos. La presente invención tal como se
ha definido anteriormente se refiere a la utilización de bacterias
probióticas "inocuas" de una calidad apropiada para alimentos
para el tratamiento de enfermedades infecciosas (o de infecciones
localizadas) en seres humanos y en animales. En particular, el
tratamiento implica la aplicación de una bacteria del ácido láctico
apatógena al animal/ser humano con lo que se obtiene una reducción
de los síntomas clínicos de la infección/enfermedad.
\vskip1.000000\baselineskip
El concepto de bacterias "beneficiosas" que
contribuyen a la salud y el bienestar lo propuso por primera vez
hace aproximadamente un siglo el Prof. E. Metchnikoff, pero ha sido
en las dos últimas décadas cuando se ha apreciado completamente el
papel potenciador de la salud por parte de algunas bacterias. Los
tratamientos probióticos utilizan la interferencia y el ajuste de la
respuesta inmunitaria mediante bacterias para el control de las
infecciones, inflamaciones y trastornos inmunitarios graves. Por
ejemplo, cada vez existen más pruebas que indican que si bien la
reducción de la microflora o la falta de la misma en el tracto
gastrointestinal (GI) pueden provocar problemas digestivos tales
como una intolerancia hipoalérgica, la recolonización mediante
bacterias "beneficiosas" presenta la capacidad de rehabilitar
la tolerancia oral y recuperar el desarrollo de un sistema
inmunitario equilibrado (Alvarez-Olmos &
Oberhelman, 2001; Cross, 2002). Aunque se desconoce con exactitud
la complejidad de la señalización entre las colonizadoras de
novo y el sistema inmunitario, se considera que el ajuste de la
respuesta inmunitaria se produce probablemente mediante uno de los
mecanismos siguientes o una combinación de los mismos (Cross,
2002):
1. La producción localizada de ácido láctico por
parte de probióticos, lo que puede limitar el crecimiento de los
organismos patógenos.
2. La producción de sustancias apatógenas por
parte de la cepa probiótica, por ejemplo bacteriocinas, que
constituyen unos potentes compuestos bactericidas.
3. La limitación de la colonización mediante la
competición de zonas de colonización-"exclusión
competitiva".
4. La producción de señales de ajuste
inmunitario por parte de la cepa probiótica que estimulan la
inmunidad del anfitrión en un nivel suficiente para proporcionar
una mayor protección.
\vskip1.000000\baselineskip
Las bacterias del ácido láctico (LAB), que
comprenden miembros de los géneros Lactococcus, Lactobacillus,
Leuconostoc, Pedicococcus y Streptococcus se han
utilizado durante miles de años en la producción de alimentos
fermentados. Como resultado de sus antecedentes como bacterias
inocuas, dichos microorganismos se contemplan como GRAS
(consideradas generalmente como inocuas) en muchas aplicaciones, que
comprenden el consumo por parte de seres humanos y animales. En los
últimos años, se ha realizado una investigación exhaustiva por lo
que se refiere a la utilización de las LAB en el control de los
microorganismos patógenos, y como sustancias saludables o
"probióticas".
Hasta la fecha, se ha utilizado la terapia
probiótica principalmente en el tratamiento de problemas
gastrointestinales. Aunque en un principio se partía de rumores y
prácticas tradicionales, actualmente las pruebas científicas
contrastadas respaldan que el papel protector de los probióticos y
en particular de los lactobacilos LAB en el tracto GI es
considerable. Se ha propuesto una pluralidad de propiedades
antimicrobianas como factores protectores potenciales en el aparato
digestivo humano contra microorganismos tales como Escherichia
coli, Helicobacter pylori y especies de
Salmonella y Listeria (Alvarez-Olmos
& Oberhelman, 2001). Por ejemplo, se alimentaron ratones con
Lactobacillus acidophilus, Lb. casei o una combinación de
ambos, antes de una exposición oral a Salmonella
typhimurium, y tuvo como resultado un desplazamiento reducido de
los patógenos hacia el bazo y el hígado, en comparación con los
ratones de control. Ello tuvo como resultado un aumento de la
supervivencia de los ratones en los grupos alimentados con
probióticos, en particular en el grupo alimentado con ambas cepas.
Este estudio demostró asimismo que en los grupos alimentados con
probióticos, los macrófagos habían aumentado su actividad
fagocitaria (Perdigon et al., 1990a).
Se ha investigado asimismo el efecto protector
en ratones de Lb. casei contra S. typhimurium, E.
coli y Shigella sonnei. Se observó una mayor protección
ante la exposición oral a los patógenos mencionados anteriormente
cuando los ratones se alimentaron previamente con Lb. casei.
Además, se observaron unos mayores niveles de IgA y los ratones
alimentados con probióticos expuestos a Shigella presentaron
una mayor cantidad de anticuerpos anti-Shigella en el suero
y el tracto GI en comparación con el grupo de control (Perdigon
et al., 1990b; 1991).
Por lo tanto, un conjunto de pruebas cada vez
mayor, relaciona una protección antimicrobiana superior con el
aumento de las respuestas inmunitarias apropiadas mediante los
probióticos. Recientemente, se ha investigado la utilización de
probióticos que ajustan de la respuesta inmunitaria como agentes
protectores del tracto GI y, asimismo, en otras superficies
mucosas. En un estudio, se sometieron los ratones alimentados
previamente con Lb. casei a la exposición con aerosol a
Pseudomonas aeruginosa (Alvarez et al., 2001). Los
resultados demostraron que la alimentación con probióticos aumentaba
el coeficiente de depuración de P. aeruginosa de los
pulmones, sobrerregulaba la capacidad fagocitaria de los macrófagos
alveolares y aumentaba los niveles de IgA en el suero y en el
líquido del lavado broncoalveolar. A partir de estos resultados se
pone de manifiesto que la alimentación probiótica puede influir en
las respuestas inmunitarias de los tejidos del tracto respiratorio
y que este efecto resulta suficiente para proporcionar protección
contra los patógenos bacterianos del tracto respiratorio. Además,
se han admitido Lb. rhamnosus GR-1 y Lb.
fermentum RC-14 como agentes terapéuticos en la
prevención y el tratamiento de infecciones genitourinarias en
mujeres. El restablecimiento de una flora vaginal sana y normal se
produce tras la aplicación local de lactobacilos, lo que de muestra
que los lactobacilos administrados localmente, así como aquellos
administrados por vía oral, pueden proporcionar una mayor
protección contra los patógenos (Reid et al., 2001; Gardiner
et al., 2002). Por lo tanto, en las últimas décadas se han
extendido las áreas de utilización potencial de probióticos y
actualmente comprenden la prevención y el tratamiento de
enfermedades diarreicas en adultos y niños, la prevención de la
vaginitis e infecciones del tracto urinario en adultos, la
prevención de alergias alimentarias y una acción antitumoral en los
intestinos, la vejiga y el cuello del útero (Cross, 2002).
Aparte de las ventajas obvias de la utilización
de la utilización de organismos GRAS para estos últimos propósitos,
la utilización de bacterias grampositivas como los lactococos, los
lactobacilos y los estreptococos presenta la ventaja adicional que
se ha demostrado que la pared celular de las bacterias grampositivas
actúa como activador de la respuesta inmunitario. Otra ventaja
importante de la utilización de bacterias del ácido láctico como
agentes terapéuticos deriva de su capacidad para producir
bacteriocinas, unos potentes péptidos antimicrobianos (Ross et
al., 1999). Dichos péptidos eliminan rápidamente otros
microorganismos destruyendo o extendiéndose por la membrana
microbiana y disminuyendo la capacidad de realización de los
procesos metabólicos. Debido a su modo de acción, resulta poco
probable que se enfrenten a los mismos mecanismos de resistencia
antimicrobiana que limitan la utilización de los antibióticos
actuales.
La nisina fue la primera bacteriocina
identificada obtenida a partir de la fermentación de una bacteria
del ácido láctico, el Lactococcus lactis. Está autorizada su
utilización como conservante alimentario en los Estados Unidos y
obtuvo la categoría GRAS en el Registro Federal de los EE. UU. en el
año 1988. Está asimismo autorizado como conservante natural en más
de 40 países así como por la Organización Mundial de la Salud y la
Unión Europea. Aparte de su utilización como aditivo alimentario
para inhibir organismos putrefactivos y patógenos, varios estudios
han investigado su utilización como agente terapéutico, en el
tratamiento de enfermedades tan diversas como el acné, las
infecciones gastrointestinales en seres humanos y la mastitis
bovina (Blackburn et al., 1994; Sears et al., 1995).
Se utiliza actualmente como componente del producto comercial para
desinfectar chupetes (CONSEPT®, Babson Bros.).
La lacticina 3147 es una bacteriocina de amplio
espectro producida asimismo a partir de una cepa de lactococcos, la
L. lactis DPC3147. Se identificó por primera vez en una
colonia bacteriana obtenida a partir de granos del tipo kéfir
irlandés de uso doméstico en la producción de suero de la leche.
Mata todos las bacterias grampositivas analizadas hasta la fecha,
entre ellas patógenos resistentes a antibióticos potentes tales como
estafilococos resistentes a la meticilina, enterococos resistentes
a la vancomicina y neumococos resistentes a la penicilina (Galvin
et al., 1999) además de organismos causantes de
intoxicaciones alimentarias tales como la Listeria
monocytogenes y el Clostridium botulinum (Ross et
al., 1999). De un modo similar a la nisina, es un miembro de la
familia de bacteriocinas denominada lantibióticos. Consiste en una
bacteriocina de dos componentes, requiriéndose los dos componentes
para desarrollar una actividad completa. Su modo de acción implica
la formación de poros que, al dañar la membrana de las células
sensibles, se escapan los iones potasio y fosfato. Se ha de
destacar que la lacticina 3147 presenta ventajas sobre la lisina
como opción en calidad de agente terapéutico, que comprenden su
efectividad en un amplio espectro de pH (la nisina es más efectiva a
un pH ácido), lo que indica unas posibilidades adicionales en
alimentos no ácidos y en aplicaciones biomédicas (Ross et
al., 1999). Se ha utilizado y la lacticina 3147 en una amplia
gama de aplicaciones que comprenden su utilización como
bioconservante pulverulento (Morgan et al., 1999) y en el
tratamiento de la mastitis bovina (Ryan et al., 1999; Twomey
et al., 2000).
Se establece la competencia nutritiva como un
mecanismo importante mediante el que los probióticos consiguen su
efecto. Se han implicado asimismo factores inhibidores tales como
las bacteriocinas y productos metabólicos finales
(Alvarez-Olmos & Oberhelman, 2001; Cross,
2002).
Se define la mastitis como una inflamación de
las glándulas mamarias y se indica mediante incrementos en el
recuento de células somáticas (SCC). El SCC constituye un indicador
de los niveles de neutrófilos en la leche, lo que a su vez
constituye un indicador de la presencia de una infección. Un
cuadrante normal de la ubre carece de bacterias patógenas, presenta
muy pocos neutrófilos en la leche y, por lo tanto, un SCC bajo (<
0,2 x 10^{6}/ml de SCC). Un aumento en el SCC indica
habitualmente la presencia de una infección.
Cuando una vaca presenta mastitis clínica, el
cuadrante afectado puede presentar signos evidentes de inflamación
- calor, dolor e hinchazón, y la vaca puede presentar una
temperatura corporal elevada. El SCC aumenta hasta valores
superiores a 0,2 x 10^{6}/ml y los patógenos pueden ser
detectables (específicamente clínicos) o no ser detectables (no
específicamente clínicos). Los cuadrantes se consideran asimismo
como clínicos si la leche presenta alteraciones evidentes a simple
vista - por ejemplo coágulos presentes, incluso cuando no aparecen
signos clínicos mediante palpación. La mastitis clínica se puede
clasificar basándose en el aspecto de la leche de los cuadrantes
afectados. Se hace referencia a una infección clínica o subclínica
como "crónica" si persiste durante un período prolongado y no
responde al tratamiento con antibióticos. Los casos clínicos
crónicos los puede identificar fácilmente el ordeñador. En los casos
subclínicos, la ubre afectada presenta un aspecto normal pero la
leche presenta un SCC elevado (> 0,2 x 10^{6}/ml) y
habitualmente se encuentran patógenos presentes en la leche. Los
casos crónicos subclínicos se identifican únicamente mediante la
obtención repetida de muestras y la realización de análisis de
laboratorio. Una directiva del Consejo de la CE estipula las
normativas sobre la producción higiénica de leche y productos
lácteos.
Los casos agudos y crónicos se tratan
periódicamente con antibióticos. Sin embargo, existen casos que no
responden al tratamiento con antibióticos, o casos que responden
durante poco tiempo y a continuación se producen recaídas, incluso
tras una administración repetida del antibiótico. La administración
repetida de antibióticos tiene como resultado la pérdida de leche,
ya que se ha de retener la leche de la lechería hasta que no
presenta residuos de antibióticos.
Se ha investigado la utilización de un cultivo
vivo de L. lactis 3147 en el tratamiento de la mastitis
bovina. La utilización de un cultivo productor de bacteriocina en
lugar de una preparación de lacticina concentrada presenta ciertas
ventajas. En primer lugar, el organismo productor, L. lactis
es de tipo GRAS, y se aisló a partir de una fuente alimentaria. La
utilización del cultivo vivo en el tratamiento de la mastitis, se
puede contemplar como un ataque prolongado al patógeno - no se
trata únicamente de bacteriocina producida de un modo natural y
estable, sino que el cultivo competirá asimismo con los patógenos en
la colonización de la ubre. Además, otras sustancias
antimicrobianas tales como ácidos orgánicos, ácidos grasos libres,
amoníaco y peróxido de hidrógeno se pueden producir asimismo como
productos finales del metabolismo. Por último, la inyección de
L. lactis 3147 en el conducto mamario tiene como resultado un
efecto de ajuste de la respuesta inmunitaria, caracterizado por un
aumento breve del SCC, con una reducción o eliminación simultánea de
los patógenos, seguido por una mejora drástica tanto en el
desenlace clínico como en el aspecto y la calidad de la leche.
Constituye un objetivo de la presente invención
proporcionar una utilización mejorada según las reivindicaciones
para combatir la mastitis infecciosa. Constituye un objetivo
adicional proporcionar una composición farmacéutica para dicha
infección que no implique la utilización de antibióticos y que
utilice las propiedades de bacterias apatógenas y de una calidad
apropiada para alimentos.
Según la presente invención se proporciona la
utilización de un cultivo vivo de una bacteria probiótica apatógena
y de una calidad apropiada para alimentos tal como se define en las
reivindicaciones.
La bacteria probiótica es una bacteria de ácido
láctico apatógena. La bacteria del ácido lácticopuede ser una cepa
de Lactococcus. Una cepa apta de Lactococcus es el
Lactococcus lactis DPC3147.
En una forma de realización alternativa, la
presente invención proporciona asimismo la utilización del
sobrenadante de un cultivo vivo de una bacteria probiótica
apatógena y de una calidad apropiada para alimentos tal como se ha
definido anteriormente.
En otra forma de realización adicional, la
presente invención proporciona una composición farmacéutica que
comprende una cantidad farmacéuticamente efectiva de un cultivo vivo
apatógeno de una bacteria de una calidad apropiada para alimentos o
una cantidad farmacéuticamente efectiva del sobrenadante de un
cultivo de una bacteria probiótica apatógena y de una calidad
apropiada para alimentos tal como se define en las reivindicaciones
junto con un excipiente o diluyente farmacéuticamente aceptable.
Se proporciona asimismo la utilización tal como
se define en las reivindicaciones para el tratamiento de la
mastitis.
No se puede predecir que dichos cultivos vivos
resulten efectivos en el tratamiento de enfermedades por muchos
motivos. En primer lugar, en la mayor parte de aplicaciones
probióticas el organismo utilizado es uno que se encuentra
normalmente en la zona de tratamiento y la mayoría de dichas
aplicaciones están destinadas al tratamiento de problemas en el
tracto gastrointestinal. La efectividad del L. lactis.
resulta particularmente sorprendente por el hecho de que no es un
organismo entérico y además no se encuentra habitualmente en la
ubre. Además, nunca se ha propuesto en las técnicas anteriores que
se podía utilizar apatógenos satisfactoriamente en la estimulación
el sistema inmunitario para dichas aplicaciones.
En otra forma de realización, la presente
invención proporciona la utilización de un cultivo vivo de una
bacteria probiótica apatógena y de una calidad apropiada para
alimentos o el sobrenadante de un cultivo vivo de una bacteria
probiótica apatógena y de una calidad apropiada para alimentos tal
como se define en las reivindicaciones para la estimulación del
sistema inmunitario para dichas aplicaciones.
Figuras 1A y B: valores del recuento de células
somáticas y recuentos bacterianos en los cuadrantes de animales
tratados.
Figura 2A. Aspecto de la leche de muestras de la
vaca 1154LF obtenidas antes y después de la inyección de
Lactococcus lactis DPC 3147.
Figura 2B. Gráficos del recuento de células
somáticas y la puntuación clínica en leche de muestras de la vaca
1154LF obtenidas antes y después de la inyección de L. lactis
DPC 3147.
Figura 3A. Aspecto de la leche de muestras de la
vaca 1178LH obtenidas antes y después de la inyección de
Lactococcus lactis DPC 3147.
Figura 3B. Gráficos del recuento de células
somáticas y la puntuación clínica en leche de muestras de muestras
de la vaca 1178LH obtenidas antes y después de la inyección de L.
lactis DPC 3147.
Figura 4A. Aspecto de la leche de muestras de la
vaca 1850RF obtenidas antes y después de la inyección de
Lactococcus lactis DPC 3147. Muestras representadas en el día
0 y 9 días tras la inyección.
Figura 4B. Gráficos del recuento de células
somáticas y la puntuación clínica en leche de muestras de la vaca
1850RF obtenidas antes y después de la inyección de L. lactis
DPC 3147.
Figura 5A. Aspecto de la leche de muestras de la
vaca 1163RH obtenidas antes y después de la inyección de
Lactococcus lactis DPC 3147.
Figura 5B. Gráficos del recuento de células
somáticas y la puntuación clínica en leche de muestras de la vaca
11 63RH obtenidas antes y después de la inyección de L.
lactis DPC 3147.
Figura 6A. Aspecto de la leche de muestras de la
vaca 1184RF obtenidas antes y después de la inyección de
Lactococcus lactis DPC 3147.
Figura 6B. Gráficos del recuento de células
somáticas y la puntuación clínica en leche de muestras de la vaca
1184RF obtenidas antes y después de la inyección de L. lactis
DPC 3147.
Figura 7A. Aspecto de la leche de muestras de la
vaca 14LH obtenidas antes y después de la inyección de
Lactococcus lactis DPC 3147.
Figura 7B. Gráficos del recuento de células
somáticas y la puntuación clínica en leche de muestras de la vaca
14LH obtenidas antes y después de la inyección de L. lactis
DPC 3147.
Figura 8A. Aspecto de la leche de muestras de la
vaca 717RF obtenidas antes y después de la inyección de
Lactococcus lactis DPC 3147.
Figura 8B. Gráficos del recuento de células
somáticas y la puntuación clínica en leche de muestras de la vaca
717RF obtenidas antes y después de la inyección de L. lactis
DPC 3147.
Figura 9A. Aspecto de la leche de muestras de la
vaca 264LF obtenidas antes y después de la inyección de
Lactococcus lactis DPC 3147.
Figura 9B. Gráficos del recuento de células
somáticas y la puntuación clínica en leche de muestras de la vaca
264LF obtenidas antes y después de la inyección de L. lactis
DPC 3147.
Figura 10. Número de PMN (neutrófilos
polimorfonucleares) y linfocitos en cuadrantes individuales antes y
después del tratamiento con L. lactis DPC3147 (vaca 273RH y
vaca 1850RF); o caldo estéril (vaca 273 LH).
Figura 11. Número de PMN y linfocitos en
cuadrantes individuales en la vaca 1803 antes y después del
tratamiento con L. lactis DPC3147 (RH); antibiótico
intramamario (LF); sobrenadante sin células (LH) o control sin
tratar (RF).
Figura 12A. Producción del anión superóxido por
parte de los PMN en cada uno de los cuatro cuadrantes de una vaca
(vaca 1803) antes y después del tratamiento con Lactococcus
lactis DPC3147 (RH); antibiótico intramamario (LF);
sobrenadante sin células (LH) o control sin tratar (RF).
Figura 12B. Niveles de intensidad de
fluorescencia del anión superóxido en cada uno de los cuatro
cuadrantes de la vaca 1803 antes y después del tratamiento con
L. lactis DPC3147 (RH); antibiótico intramamario (LF);
sobrenadante sin células (LH) o control sin tratar (RF).
\newpage
Figura 13. Recuento de células somáticas en los
cuatro cuadrantes de la vaca 1803 tras la inyección con L.
lactis DPC3147 (RH); antibiótico intramamario (LF); sobrenadante
sin células (LH) o control sin tratar (RF). Día 0 = antes de la
inyección.
Figura 14. Números de PMN en cuadrantes
individuales en la vaca 1137, la vaca 1852 y la vaca 1570 antes (día
0) y después del tratamiento con L. lactis vivos DPC3147,
L. lactis muertos DPC3147, disolución salina estéril o
control sin tratar.
Figura 15. Números de PMN en cuadrantes
individuales antes y después del tratamiento con L. lactis
DPC3147 (L. lactis); L. lactis DPC5399 (Bact. neg.);
Lb. plantarum DPC4922 (plantarum) o controles sin
tratar.
Figura 16. Aumento proporcional relativo
posterior al tratamiento en los PMN obtenidos a partir de la leche
con respecto al tratamiento previo en la vaca 1163, la vaca 1171 y
la vaca 1181 respectivamente.
Figura 17. Efecto de inyectar distintas
preparaciones de L. lactis DPC3147 en los números de PMN en
la vaca 275, la vaca 1134 y la vaca 2810. Se trataron los
cuadrantes de cada vaca con un cultivo realizado durante la noche
de L. lactis DPC3147 (O/N); un cultivo liofilizado de L.
lactis DPC3147 (FD) o se dejaron sin tratar. A continuación se
procedió al análisis de los números de PMN procedentes de cada
cuadrante durante dos días.
Se aisló previamente Lactococcus lactis
DPC3147 a partir de granos de kéfir. Se diseminó del modo habitual
a 30ºC en caldo M17 (Difco Laboratories, Detroit, EE. UU.)
enriquecido con glucosa o lactosa al 0,5%. Dicho cultivo (3 ml,
\sim10^{9} cfu ml^{-1}) se utilizó directamente o se preparó
una mezcla para inyectar del siguiente modo: se mezclaron 2 ml de
un cultivo realizado por la noche de L. lactis DPC3147 con 3
ml de agua estéril para inyectar (Antigen Pharmaceuticals) a fin de
producir una concentración de trabajo del cultivo de
aproximadamente 10^{9} cfu ml^{-1}. Las mezclas de control para
inyectar comprendían caldo sin inocular, incubado durante la noche
a 30ºC y diluido a continuación de un modo similar al del
cultivo.
Se inyectaron los cultivos diluidos de L.
lactis DPC3147 directamente en los senos del pezón por el canal
galactóforo. Se inoculo el cultivo hasta una profundidad de 17 mm
utilizando una jeringa de punta roma alisada a fin de evitar
heridas en el pezón. Se realizó habitualmente la inyección de la
mezcla tras el ordeño de la tarde. En el caso de seis casos
enfermos crónicos se procedió a una única aplicación de 3 ml de
cultivo sin diluir. En el caso de nueve casos de mastitis clínica,
se realizó la inyección dos veces con un intervalo de 24 h para los
siete cuadrantes (vacas 1163RH, 14LH, 717RF, 1154LF, 1850RF, 1184RF,
1176LH), dos veces con un intervalo de 72 h para un cuadrante
(1178LH) y cuatro veces para la vaca 264LF, con 24 h entre las
inyecciones primera y segunda, 84 h entre las inyecciones segunda y
tercera y 48 h entre las inyecciones tercera y cuarta (Apéndices 1
a 9). Se prepararon 5 ml de la mezcla de la inyección tal como se ha
descrito anteriormente para inyectar en los cuadrantes con mastitis
clínica.
Antes de iniciar los experimentos in
vivo, se recogieron muestras del calostro de los cuadrantes de
un modo aséptico de todas las vacas potenciales y éstas se
seleccionaron con respecto a los patógenos que provocan la mastitis
disponiendo 10 \mul de cuadrantes distintos den la superficie de
placas AVA y procediendo a su incubación durante 16 h a 37ºC. Se
determinaron los resultados del recuento de células somáticas (SCC)
o la CMT (prueba de la mastitis) para cada cuadrante antes del
tratamiento. Se consideró asimismo el historial previo de infección
durante la selección. Se seleccionaron inicialmente seis cuadrantes
de ubre procedentes de 4 vacas con un historial de infección
crónica para el tratamiento. También se trataron posteriormente
nueve cuadrantes procedentes de 9 vacas con infecciones clínicas
adquiridas recientemente.
Dieciocho horas tras la inyección, se tomaron
muestras de calostro de los cuadrantes tratados de un modo aséptico
para su análisis microbiológico. Se dispusieron cien microlitros de
cada muestra de leche en la superficie de una placa de agar sangre
con esculina (ABA) que contenía la base de agar sangre n.º 2
(Oxoid), enriquecido con sangre de ternera entera con citrato al 7%
y esculina al 0,1% (Sigma, S. Luis, MO, USA) y se incubaron durante
24 h a 37ºC. Tras la incubación, se procedió al recuento e
identificación de las colonias basándose en la actividad hemolítica
y el aspecto de la colonia sobre el ABA. Se dispusieron asimismo
cien microlitros de cada muestra de leche en la superficie de una
placa de agar M17 enriquecido con glucosa o lactosa al 0,5% y se
incubaron durante la noche a 30ºC.
Se analizó la actividad antimicrobiana de las
colonias de L. lactis contra L. lactis HP, utilizando
el ensayo de difusión en pocillos con agar descrito previamente
(Parente & Hill, 1992). Además, se seleccionaron al azar
colonias aisladas en GM17 o LM17 procedentes de la leche, se
purificaron y se analizaron para confirmar el aislamiento de L.
lactis DPC3147 procedente de los cuadrantes de las ubres.
Se realizaron dos estudios independientes para
investigar el efecto de L. lactis DPC3147 en la inmunidad de
las vacas. En el primer estudio, se utilizaron dos vacas, un animal
sin infectar (vaca 273) y animal infectado con un SCC elevado (vaca
1850). Se inyectó un cuadrante de la vaca 273 con caldo estéril como
control (posterior izquierdo, LH) y se inyectó un cuadrante con el
cultivo de L. lactis (posterior derecho, RH). Se inyectó
asimismo un cuadrante de la vaca 1850 con el cultivo de L.
lactis (RF). Se tomaron muestras de leche inmediatamente antes
de la inyección intramamaria (día 0) para determinar los niveles
basales de las subpoblaciones de leucocitos. Se recogieron asimismo
muestras de leche 16 horas tras el tratamiento (día 1). En un
segundo estudio se escogió una vaca no infectada con unos recuentos
SCC en todos los cuadrantes de las ubres < 100.000/ml para los
estudios inmunológicos. Un cuadrante (RH) se inoculó con la
preparación de L. lactis DPC3147, un segundo cuadrante (LH)
se inyectó con sobrenadante sin células procedente de un cultivo
realizado por la noche de L. lactis DPC3147, un tercer
cuadrante (LF) se inyectó con el contenido de una jeringa
intramamaria con antibiótico que contenía 250 mg de sulfato de
neomicina, 100 mg de penicilina procaína, 10 mg de hidrocloruro de
oxitetraciclina y 10 mg de prednisolona (Multimast L.C., Bimeda
Ltd., Dublín) y un cuadrante (RF) se dejó sin tratar. Se tomaron
muestras de leche justo antes de las inyecciones intramamarias (día
0) y asimismo en las horas 24 y 48 tras el tratamiento. Se
almacenaron todas las muestras de ambos ensayos a temperatura
ambiente tras el ordeño y se analizaron en menos de tres horas
después de la recogida. Se identificaron los neutrófilos y los
linfocitos utilizando una combinación de anticuerpos específicos de
bovinos (BN15.6 y CD3 respectivamente) y unas técnicas precisas de
control en la citometría de flujo. Se realizaron ensayos de
producción de aniones para determinar la actividad funcional de los
neutrófilos. En el segundo ensayo, se tomaron asimismo muestras de
leche cada 24 h durante hasta 7 días para realizar el seguimiento
del recuento de células somáticas (SCC).
Se realizó un experimento para investigar el
efecto de la inyección de células muertas de L. lactis
DPC3147 en la respuesta inmunitaria de las vacas. Se seleccionaron
tres vacas con un SCC bajo (vacas 1852, 1135 y 1570) y los pezones
se inyectaron tanto con lactococos vivos, lactococos muertos o
disolución salina estéril (0,85% NaCl {p/v}) de un modo aleatorio.
Se prepararon las mezclas para la inyección de los lactococos vivos
tal como se ha descrito anteriormente. Las células muertas se
prepararon mediante el cultivo de L. lactis DPC3147 en LM17
durante la noche tal como se ha descrito anteriormente, y a
continuación se hirvieron a 100ºC durante 10 minutos. Una vez se
hubieron hervido se cultivaron las bacterias en placas con agar LM17
y se incubaron durante la noche para confirmar su falta de
viabilidad. El cultivo muerto se mezcló con agua estéril para
inyectar en una proporción de 2:3, y esta mezcla se utilizó para
inyectar tal como se ha descrito anteriormente. De un modo similar,
la disolución salina estéril se mezcló asimismo con agua estéril
para inyectar y se inyectó como control. Se dejó sin tratar un
cuarto cuadrante de cada vaca como control negativo. Se tomaron
muestras de leche justo antes de las inyecciones intramamarias (día
0) y en los días 1, 3, 6, 7 y 10 después del tratamiento. A
continuación se analizaron todas las muestras con respecto a su
actividad inmunitaria tal como se ha descrito anteriormente.
Se cultivó Lactobacillus plantarum
DPC4922 en un medio MRS en condiciones anaeróbicas a 37ºC. Se
cultivó L. lactis DPC5329, un derivado de L. lactis
DPC3147, que es incapaz de producir bacteriocina (Bac-), de un modo
idéntico al L. lactis DPC3147 (tal como se ha descrito
anteriormente). Se seleccionaron tres vacas (la vaca 1163, la vaca
1171 y la vaca 1181) para investigar los efectos de inyectar cepas
bacterianas probióticas potenciales en la respuesta inmunitaria de
las glándulas mamarias de vacas con un recuento bajo de células
somáticas. Se utilizaron tres vacas para realizar el seguimiento de
las respuestas inmunitarias entre los distintos animales. Se
administró un tratamiento distinto a cada cuadrante, distribuyendo
los tratamientos en los pezones de un modo aleatorio.
Se tomaron muestras de leche justo antes de las
inyecciones intramamarias (día 0), a fin de determinar los niveles
basales de subpoblaciones de leucocitos. Se recogieron muestras de
leche también en los días 1, 2, 3, 7 y 10 después del tratamiento.
Se almacenaron todas las muestras a temperatura ambiente tras el
ordeño y se analizaron en menos de tres horas después de la
recogida. Se identificaron los neutrófilos y los linfocitos
utilizando una combinación de anticuerpos específicos de bovinos y
citometría de flujo.
Se inoculó LM17 (200 ml) con un 1% (v/v) de
L. lactis DPC3147 y se incubó durante la noche a 30ºC. A
continuación se recogieron mediante centrifugación a 4ºC y a 4500
rpm en una centrífuga Sorvall RC 3C plus. Se retiró el
sobrenadante y se volvieron a suspender las células en \sim150 ml
de agua destilada estéril. A continuación se recogieron de nuevo
las células por centrifugación y se volvió a suspender el sedimento
en \sim100 ml de agua destilada estéril. Tras ello, se
liofilizaron las células resuspendidas en una preparación
pulverulenta durante la noche utilizando un liofilizador Modulyo
(Edwards). A continuación se volvió a suspender una muestra del
polvo resultante en agua destilada estéril como una disolución al
10% y se procedió al recuento de bacterias sembrando diluciones en
agar LM17 agar y se incubó durante la noche a 30ºC. A continuación
se añadieron unas cantidades adecuadas de polvo a 5 ml de agua
estéril para inyecciones de tal modo que la concentración final
resultó equivalente a aproximadamente 10^{9} cfu ml^{-1}. El
volvo resuspendido de este modo se utilizó a continuación como
mezcla de la inyección.
Se preparó, tal como se ha descrito
anteriormente, una mezcla para inyectar que comprendía células de
L. lactis DPC3147 liofilizadas resuspendidas. Esta mezcla y
una mezcla estándar para inyectar (caldo de cultivo diluido) se
inyectaron al azar en los pezones de tres vacas distintas. Se
utilizaron tres vacas distintas para permitir variaciones de la
respuesta inmunitaria entre vacas distintas. Se dejó un cuadrante de
cada vaca sin tratar como control negativo. Se tomaron muestras de
leche justo antes de las inyecciones intramamarias (día 0) para
determinar los niveles basales de las subpoblaciones de leucocitos.
Se recogieron asimismo muestras de leche en las horas 24 y 48 tras
el tratamiento. Se almacenaron todas las muestras a temperatura
ambiente tras el ordeño y se analizaron en menos de tres horas
después de la recogida. Se identificaron los neutrófilos y los
linfocitos tal como se ha indicado anteriormente.
Se realizó un ensayo a pequeña escala para
determinar la eficacia del tratamiento con L. lactis DPC3147
en comparación con el antibiótico intramamario que se utiliza
habitualmente que contiene amoxicilina (200 mg) y ácido clavulánico
(50 mg), (synulox, Pfizer animal Health). Se utilizaron 24
cuadrantes infectados de 12 vacas y se inyectaron los cuadrantes
con L. lactis DPC3147 (285LH, 370RH, 400LH, 598LF, 1157LF,
1170LF, 1183LH, 1658RF, 1807LF, 1827RH, 1867LH, 1868LF) o synulox
(285RF, 370RF, 400RH, 598RF, 1157RF, 1157LH, 1170LH, 1183LF,
1807RH, 1807LH, 1867RH, 1868RF). Se administró el antibiótico tres
veces, en intervalos de 12 horas, tal como se indica en las
instrucciones del productor. Se administró dos veces la inyección de
L. lactis DPC3147, con un intervalo de 24 h entre las
inyecciones. Se realizó el SCC y un análisis microbiológico estándar
antes y después de la inyección, y se tomaron asimismo muestras
después de 7 días tras la inyección y 12 días tras la
inyección.
Se realizó este estudio durante un período de 6
meses. Se detectaron 50 casos de mastitis clínica en 48 vacas por
parte del personal de la granja durante el ordeño rutinario y se
seleccionaron para el ensayo. Los cuadrantes se clasificaron según
presentasen mastitis clínica leve (mastitis C1/C2 mastitis, 25
cuadrantes) o grave (mastitis C3/C4, 25 cuadrantes). Se trataron
los cuadrantes con el antibiótico Leo Yellow Milking Co®
(hidroyoduro de penetamato 150 mg, dihidroestreptomicina 150 mg,
sulfato de framicetina 5 mg, Leo Laboratories Ltd., Dublín,
Irlanda) o con un cultivo de L. lactis DPC 3147 liofilizado
resuspendido que se preparó tal como se ha indicado anteriormente.
Las inyecciones del cultivo o el antibiótico se administraron tres
veces, con un intervalo de 24 h entre cada inyección. Se tomaron
muestras de leche en el día 1 antes del tratamiento y después en el
día 7 y el día 14 después del tratamiento. Se procedió al recuento
de patógenos y se determinó el SCC o la CMT de todas las muestras
tal como se ha descrito anteriormente. También se analizaron los
cuadrantes en cada ordeño durante el período de ensayo 14 días para
detectar cualquier efecto adverso del tratamiento. Los análisis de
la muestra del día 14 permitieron clasificar los cuadrantes como
"curación" o "no curación". Los cuadrantes curados se
definieron como presentando una "curación clínica" si la leche
no presentaba coágulos o copos, y el SCC era < 9 x 10^{6}
células ml^{-1}. No se tomó en consideración la presencia o
ausencia de patógenos cuando se clasificaron como "curación
clínica". Los cuadrantes se definieron como una "curación
bacteriológica" si el SCC de la muestra del día 14 era < 1 x
10^{6} células ml^{-1} y el recuento de patógenos era < 0,5
cfu \mul^{-1} en la muestra de leche.
Se seleccionaron para el tratamiento seis
cuadrantes de ubres procedentes de 4 vacas con un historial de
infección crónica. Dieciocho horas después de inyectar el cultivo
de L. lactis DPC3147, se tomaron muestras de la leche a
intervalos de hasta aproximadamente 30 días después de la inyección
y se procedió al recuento tal como se ha descrito anteriormente. Se
identificaron las colonias como L. lactis DPC3147 mediante la
producción de lacticina 3147. Se identificaron los estafilococos y
los estreptococos basándose en su hemólisis característica en el
agar sangre. En tres de los cuadrantes (714RH, 714LF y 96RF), tras
la inyección de L. lactis DPC3147 se produjo un aumento
rápido del SCC, y una reducción/eliminación simultánea del patógeno
(estafilococos) (Figura 1A). En tres de los cuadrantes (714LH,
700RH y 408RH) persistió la infección a pesar de la inyección del
cultivo de lactococos (Figura 1B). Sin embargo, resulta interesante
que en los últimos tres cuadrantes de la ubre, no pareció que el
cultivo de lactococos colonizara el cuadrante de la ubre (Figura
1B), mientras que en los cuadrantes "curados", resultó
evidente la presencia de L. lactis DPC 3147 (Figura 1A). El
cultivo de lactococos no sobrevivió a largo plazo en ninguno de los
cuadrantes de la ubre. Los recuentos de células somáticas volvieron
rápidamente, permaneciendo en ellos, a unos niveles aceptables en
todos los cuadrantes.
Los resultados anteriores nos llevaron a
investigar el efecto de inyectar L. lactis DPC3147 en
cuadrantes afectados clínicamente. Se trataron nueve cuadrantes de
9 vacas con signos clínicos recientes de mastitis. Tras el
tratamiento, se recogieron muestras de leche diarias hasta 14 días y
de un modo intermitente hasta 55 días. Se procedió al recuento de
los cultivos bacterianos en ABA o GM17 tal como se ha descrito
anteriormente. En todos los casos la calidad y el aspecto de la
leche mejoraron drásticamente después de la inyección del cultivo
de lactococos (Figuras 2 a 9). En algunos casos, a pesar de la
naturaleza clínica de la leche, no se cultivó patógeno alguno antes
de la inyección. Cuando se identificó un patógeno, sin embargo, la
inyección del cultivo de L. lactis DPC3147 tuvo como
resultado la eliminación/reducción del patógeno. Los patógenos
eliminados comprendían Staphylococcus epidermidis (vaca 14
LH), S. aureus (vaca 1184 RF) E. coli no hemolítica
(vaca 1163 RH) y Strep. uberis (vaca 1154 LF y vaca 264 LF)
(Tabla 1). En dos casos, aunque el tratamiento tuvo como resultado
una mejora en el aspecto y la calidad de la leche, no se eliminó el
patógeno. Dichos casos comprendían una infección por Strep.
uberis (vaca 1176 LH) y una infección por S. aureus
(vaca 1850 RF) (Tabla 1). Los datos de este ensayo, que comprenden
los datos históricos de todas las vacas utilizadas se pueden
examinar en los apéndices 1 a 9.
Se investigó el efecto del L. lactis
DPC3147 probiótico en los sistemas inmunitarios de las vacas
analizando los niveles de leucocitos y los fenotipos en la leche.
En un estudio preliminar se investigó el efecto de L. lactis
en la respuesta inmunitaria de dos vacas. Se utilizaron un animal
infectado y una vaca sin infección. Los resultados (Figura 10)
indicaron que la inyección del L. lactis DPC3147, pero no la
inyección del caldo estéril, tuvo como resultado una acumulación
masiva de PMN en la ubre, indicando que el L. lactis puede
ser un activador específico de la respuesta inmunitaria mamaria y
provoca la migración y la acumulación de los PMN. Se realizaron
asimismo ensayos de producción del anión superóxido e indicaron que
nos neutrófilos recién acumulados presentaban una capacidad de
absorción respiratoria superior que los neutrófilos que permanecen,
proporcionando de este modo a la glándula mamaria un mecanismo
efectivo para la eliminación de los patógenos de la mastitis.
A la vista de estos resultados, se realizó un
segundo ensayo. Se seleccionó un animal sin infectar (vaca 1803)
para investigar los efectos del cultivo de L. lactis. Como
controles, se inyectó un cuadrante (LF) con un antibiótico para una
vaca produciendo leche (Multimast L. C.) y un cuadrante (RF) se dejó
sin tratar. Un tercer cuadrante (LH) se inyectó con el sobrenadante
sin células de un cultivo realizado por la noche de L.
lactis DPC3147, y el cuadrante final (RH) se inyectó con el
cultivo de L. lactis DPC3147 diluido. Se recogieron muestras
de leche antes y después de la inyección y se analizaron con
respecto al SCC y a la fórmula leucocítica. La Figura 11 presenta
las proporciones de neutrófilos (PMN) y linfocitos (CD3) en las
muestras de leche antes del tratamiento (hora 0) y después del
tratamiento (horas 24 y 48). Se calcularon los valores reales
utilizando el porcentaje de células positivas a partir del análisis
de citometría de flujo de células vivas/muertas y los resultados
del contador de células somáticas Bentley Somacount Somatic Cell
Counter. Los niveles de PMN en el cuadrante de control (RF)
permanecieron invariables durante el período de ensayo. El
cuadrante en el que se inyectó el probiótico (RH) experimentó un
aumento drástico en el número de neutrófilos durante el primer
período de 24 h de 2,85 x 10^{2} células/ml antes del tratamiento
hasta 1,46 x 10^{4} células/ml al cabo de 24 h después del
tratamiento (Figura 11 y Tabla 2). Los tratamientos con sobrenadante
y antibiótico provocaron también un aumento, aunque no tan
pronunciado (desde 4-29 x 10^{2} células/ml hasta
1,68 x 10^{3} células/ml y desde 5,5 x 10^{2} hasta 1,3 x
10^{3} respectivamente), en los niveles de PMN de la leche (Tabla
2). Al cabo de 48 horas, pareció que disminuían los niveles de PMN
en el cuadrante tratado con L. lactis y en el cuadrante
tratado con Multimast, pero continuaron aumentando en el cuadrante
tratado con el sobrenadante (Tabla 2). Considerando estos
resultados, se puede llegar a la conclusión que la inyección del
cultivo de L. lactis tuvo como resultado una acumulación
masiva de PMN en la ubre durante el período de 24 horas después del
tratamiento. El sobrenadante del cultivo provocó asimismo una
acumulación de PMN en la ubre y consistió en un aumento más
continuo durante 24 horas y siguió aumentando hasta 48 después del
tratamiento. El antibiótico Multimast provocó una acumulación
temporal más pobre de PMN en la ubre. Estos resultados indican que
tanto el cultivo de L. lactis como el sobrenadante del
cultivo podrían ser activadores específicos de la respuesta del
sistema inmunitario mamario y provocar la migración y la acumulación
de PMN. Resulta posible que el factor responsable de la respuesta
inmunitaria se pudiese liberar en el medio de cultivo, lo que
explicaría la migración significativa de PMN como respuesta al
sobrenadante del cultivo. Se investigaron asimismo los niveles de
linfocitos. El cultivo de L. lactis y el sobrenadante del
cultivo en un menor grado, activaron una afluencia de linfocitos
hacia la ubre; sin embargo, el antibiótico no alteró el nivel de
linfocitos presentes cuando se comparó con los valores de control
(Tabla 2).
Se investigó la actividad funcional de los PMN
de las muestras de leche de cuadrante en todas las muestras antes y
después de la inyección. Los resultados de los ensayos de producción
del anión superóxido se presentan en las Figuras 12A y 12B. El
aumento de varias veces se refiere al aumento proporcional de la
producción del anión superóxido por parte de los PMN, desde un
estado de reposo (T0) hasta un estado activado tras la activación
con acetato de miristato forbol (PMA; incubación durante 10 minutos,
{TI 10). La activación más evidente se produjo en el cuadrante LH
que se trató con sobrenadante sin células, con una activación masiva
de los neutrófilos al cabo de 24 horas. Sorprendentemente, el
tratamiento con el cultivo de L. lactis no tuvo como
resultado una gran activación de varias veces por parte de los
neutrófilos (Figura 12A). Esto se puede explicar, sin embargo,
mediante los resultados de los análisis de la intensidad de
fluorescencia de todas las muestras (Fig. 12B). La intensidad
relativa de fluorescencia constituye una medida de la fluorescencia
emitida por las células; una mayor fluorescencia indica una
capacidad superior para generar el anión superóxido. Los neutrófilos
que permanecen en reposo del cuadrante tratado con L. lactis
(T0) y presentaban una capacidad muy elevada de producción del
anión superóxido (intensidad de fluorescencia elevada) al cabo de 24
horas y, por lo tanto, no podían presentar un aumento notable de la
activación tras el tratamiento con PMA. En resumen, el tratamiento
con L. lactis tuvo como resultado una acumulación masiva en
la ubre de PMN que se encontraban un estado de activación elevada.
El tratamiento con Multimast no alteró la producción del anión
superóxido en el cuadrante tratado y el cuadrante de control no
cambió significativamente durante el período del ensayo (Figuras 12A
y 12B). Los PMN acumulados como respuesta al tratamiento con el
sobrenadante del cultivo presentaron asimismo una capacidad elevada
de producción del anión superóxido, que parecía alcanzar su máximo
en el primer período de 24 horas después del tratamiento. Los
resultados indicaron que el tratamiento intramamario con L.
lactis DPC3147 o con el sobrenadante sin células obtenido a
partir de dicho cultivo, activaba la respuesta inmunitaria mamaria
provocando la afluencia de neutrófilos hacia la glándula mamaria
(Figura 11). Dichos neutrófilos recién acumulados presentaron una
capacidad de absorción respiratoria superior que los neutrófilos que
permanecen (Fig. 12).
Se realizó el seguimiento del recuento de
células somáticas cada 24 horas hasta 7 días después del
tratamiento. Los recuentos de células se presentan en la Figura 13
y la Tabla 3. Al observar la Figura 13 y la Tabla 3, resulta
evidente que el L. lactis DPC3147 provoca una gran respuesta
celular en 24 horas lo que tiene como resultado un SCC elevado, que
alcanza su máximo tras 48 horas con lo que se obtiene una infección
clínica leve y progresivamente se llega a un estado normal en el
curso de 3 a 4 días. El tratamiento con el sobrenadante del cultivo
provocó una respuesta similar. Nuestro análisis de las poblaciones
de leucocitos y de los niveles de la actividad de los neutrófilos
confirman estos resultados hasta las 48 horas.
A fin de investigar si se requerían L.
lactis DPC3147 viables para producir la respuesta inmunitaria
provocada anteriormente, se prepararon mezclas para inyectar que
contenían células vivas o muertas y se inyectaron al azar en los
pezones de tres vacas tal como se indica en la Tabla 4. Tanto las
células vivas como las muertas provocaron un aumento en el SCC
(datos no representados) y, tal como se puede observar en la Figura
14, las células muertas provocaron una pobre afluencia de ambos PMN
en cada una de las vacas. Se observó asimismo un aumento en los
números de linfocitos (datos no representados). Dicha acumulación de
PMN y de linfocitos en los cuadrantes con el cultivo muerto, sin
embargo, resultó insignificante en comparación con la afluencia
como respuesta al cultivo vivo. Por lo tanto, parece que el L.
lactis viable, pero no el cultivo muerto, puede provocar
específicamente la acumulación de PMN y linfocitos en la glándula
mamaria.
Al analizar los resultados, surge la cuestión de
si el fenómeno de la acumulación de los PMN se limita al propio
L. lactis DPC3147 o si otras cepas bacterianas pueden ejercer
también dicho efecto. Se decidió, por lo tanto, examinar el efecto
inyectando otras bacterias apatógenas de una calidad apropiada para
alimentos en las ubres de vacas productoras de leche. Se seleccionó
una cepa bacteriana, Lb. plantarum DPC4922 basándose en su
divergencia evolutiva del L. lactis (una relación bastante
lejana) así como por el hecho de que se aisló originariamente a
partir de una fuente alimentaria, por lo que se puede considerar,
del mismo modo que el L. lactis DPC3147, como un organismo
GRAS. Se utilizó asimismo una tercera cepa, el L. lactis
5329 (un derivado Bac- del L. lactis DPC3147) debido a su
gran similitud con el L. lactis DPC3147. Se prepararon las
mezclas para inyectar tal como se ha descrito en Materiales y
Métodos y a continuación se inyectaron las mezclas en los pezones
de tres vacas tal como se indica en la Tabla 5. Las Figuras 15 y 16
presentan las proporciones de neutrófilos (PMN) en las muestras de
leche procedentes de tres vacas durante el período de ensayo de 10
días. Se calcularon los valores reales utilizando el porcentaje de
células positivas a partir del análisis por citometría de flujo de
células vivas/muertas y las lecturas del Somacount. La respuesta en
las tres vacas resultó variable pero se observó una tendencia
similar en cada caso. Los niveles de PMN de los tres cuadrantes sin
tratar permanecieron relativamente invariables durante el período
del ensayo (Figura 15). El tratamiento con Lb. plantarum
DPC4922 tuvo como resultado un ligero aumento de los PMN en todos
los cuadrantes, que se acercaba a unos niveles similares a los que
se obtenían con el tratamiento con L. lactis DPC3147 en el
día 3 en la vaca 1181 (Figura 15). Sin embargo, la respuesta al
L. lactis DPC3147 response en la vaca 1181 resultó de algún
modo reducida en comparación con los otros dos animales (Fig.
15).
La inyección de L. lactis DPC3147 en cada
animal tuvo como resultado un aumento drástico de los neutrófilos
en el primer período de 24 horas tras el tratamiento. El cultivo
Bac- (L. lactis DPC5399) provocaba también un aumento en
todos los cuadrantes tratados, con unos niveles particularmente
superiores de PMN obtenidos en la leche de la vaca 1163. Sin
embargo, si se comparan los incrementos proporcionales de PMN con
respecto a los D0 (Figura 16), se puede observar que se produce un
aumento proporcional significativo en los PMN del cuadrante tratado
con L. lactis DPC3147 en comparación con el cuadrante tratado
con L. lactis DPC5399. Parece que la afluencia de PMN se
produce antes en los cuadrantes tratados con L. lactis
DPC3147 (en el día 1) en comparación con los cuadrantes tratados
con L. lactis DPC5399 (Bac-) o Lb. plantarum DPC4922
(Figura 15). En los cuadrantes tratados con los últimos dos
tratamientos, se observó únicamente un aumento significativo en el
día 2 (Figura 15). Por lo tanto, parece que el L. lactis
DPC3147 puede provocar una respuesta inmunitaria de mayor
intensidad y rapidez que tanto un derivado negativo a la
bacteriocina de la misma cepa u otra cepa de LAB, aunque estas
últimas cepas pueden provocar asimismo una respuesta más débil.
A fin de investigar si diferentes preparaciones
de L. lactis DPC3147, distintas del cultivo estándar
preparado durante la noche (preparación del caldo), podían producir
la respuesta inmunitaria provocada anteriormente, se prepararon
unas mezclas para inyectar que contenían células liofilizadas o
caldos de cultivo. A continuación se inyectaron las mezclas al azar
en los pezones de tres vacas tal como se indica en la Tabla 6. Los
resultados (Figura 17) muestran un aumento de los PMN en el día 1
en ambos cuadrantes tratados en comparación con el cuadrante sin
tratar de cana animal examinado. Ello parece que se trata de una
mayor afluencia en dos de los cuadrantes tratados con el cultivo
realizado por la noche en comparación con los cuadrantes tratados
con el cultivo liofilizado (vaca 275 y vaca 1134) obteniéndose un
número superior de PMN con el cultivo liofilizado en el animal
restante (vaca 2810). Las variaciones en la respuesta se deben a las
variaciones normales de la respuesta inmunitaria entre animales
distintos. Por lo tanto, las preparaciones "frescas" y
liofilizadas de L. lactis DPC3147 pueden provocar una
respuesta inmunitaria en la glándula mamaria.
Los efectos de la utilización del tratamiento
con L. lactis DPC3147 con respecto a la utilización de un
tratamiento con antibióticos empleado habitualmente tanto en el
tratamiento como en la prevención de infecciones intramamarias
provocadas por S. aureus se representan en la Tabla 7. Tal
como se puede observar en la Tabla, en el día 7, los resultados con
el L. lactis eran muy prometedores, con estafilococos
aislados a partir de únicamente dos cuadrantes de los 7 cuadrantes
infectados con dicho organismo. En comparación, los cuadrantes
tratados con synulox eliminaban el S. aureus en 6 de los 8
cuadrantes infectados originalmente. Sin embargo, en el día 12, dos
cuadrantes más inyectados con L. lactis eliminaban asimismo
el S. aureus, proporcionando un total de 3/7 "curados"
mediante el tratamiento con L. lactis a diferencia de los 2/8
"curados" mediante el tratamiento con synulox. Estos datos
indican que el tratamiento con L. lactis DPC3147 resulta tan
efectivo en la eliminación de infecciones como el tratamiento con
synulox.
En este estudio, se realizó la comparación de la
eficacia de la inyección de una preparación liofilizada resuspendida
de L. lactis DPC3147 (aproximadamente 10^{9} cfu
ml^{-1}) en el tratamiento de la mastitis clínica con la eficacia
de utilizar un antibiótico intramamario comprobado. En conjunto, 18
de los 25 casos tratados con el antibiótico se definieron como
presentando una "curación clínica" en el día 14. De dichos 18
cuadrantes, nueve se definieron como presentando una "curación
bacteriológica", es decir, el SCC era < 1 x 10^{6} células
ml^{-1} y el recuento bacteriológico era < 0,5 cfu
\mul^{-1} en la muestra de leche. Ello corresponde a un índice
de curación clínica global del 72% y a un índice de curación
bacteriológica del 36% para los cuadrantes tratados con el
antibiótico. En el caso de los cuadrantes tratados con la
preparación liofilizada resuspendida de L. lactis DPC3147, 16
(de 25) casos presentaron una "curación clínica" y 7 (de 25)
casos presentaron una "curación bacteriológica". Ello
corresponde a un índice de curación clínica del 64% y a un índice
de curación bacteriológica del 28% para los cuadrantes tratados con
el probiótico. Al comparar los dos tratamientos, el índice de
curación clínica resultó del 72% en comparación con el 64% y el
índice de curación bacteriológica resultó del 36% en comparación con
el 28% con el antibiótico con respecto a los tratamientos con L.
lactis, respectivamente. Cuando se compararon dichos valores
utilizando la prueba de la probabilidad exacta de Fischer, no se
detectaron diferencias estadísticas entre los tratamientos. Ello
indica que la inyección de la preparación liofilizada resuspendida
de L. lactis DPC3147 resultaba tan efectiva como un
antibiótico en el tratamiento de la mastitis clínica. Cuando se
subdividieron los grupos de tratamiento en función de la gravedad
de la mastitis del cuadrante (es decir, subgrupos C1/C2 o subgrupos
C3/C4) se observó una tendencia similar. En el grupo C1/C2, 8 de los
12 casos tratados con el antibiótico presentaron una curación
clínica (66,7%). De ellos, 4 casos presentaron una "curación
bacteriológica" (33,3%). Trece cuadrantes con mastitis C1/C2 se
trataron con L. lactis DPC3147, y dichos cuadrantes
alcanzaron un índice de curación clínica del 76,9% y un índice de
curación bacteriológica del 30,8%. En el grupo C3/C4, 10 de los 13
casos tratados con el antibiótico presentaron curación clínica
(76,9%). De ellos, 5 casos presentaron una "curación
bacteriológica" (38,5%). De los doce cuadrantes con mastitis
C3/C4 que se trataron con L. lactis DPC3147, 6 alcanzaron
una curación clínica (50%) y 3 se definieron como presentando una
curación bacteriológica (25%). La comparación de todos estos valores
utilizando la prueba de la probabilidad exacta de Fischer indicó
que no existía una diferencia significativa entre el índice de
curación clínica o bacteriológica, con independencia del
tratamiento en cualquiera de los cuadrantes con mastitis C1/C2 o los
cuadrantes con mastitis C3/C4. Por lo tanto, se puede llegar a la
conclusión que la inyección intramamaria de una preparación
liofilizada resuspendida de L. lactis DPC3147 resulta tan
efectiva como un antibiótico intramamario en el tratamiento de la
mastitis clínica.
A partir de estos resultados se pueden extraer
diversas conclusiones. En primer lugar, resulta evidente que la
inyección intramamaria de L. lactis DPC3147 en vacas con
infecciones crónicas tiene como resultado un aumento rápido del
SCC, seguido a menudo con la eliminación de la infección. Además, la
inyección en vacas con mastitis clínica recién adquirida tiene como
resultado una rápida mejora de la calidad de la leche. Se ha
demostrado que el tratamiento con L. lactis DPC3147 también
resulta tan efectivo como la utilización de un antibiótico
intramamario de amplio uso comercial en el tratamiento y la
prevención de infecciones intramamarias provocadas por S.
aureus. Resulta posible, por lo tanto, que la inyección de L.
lactis actúe como estímulo que provoca la liberación de
factores proinflamatorios y dé lugar a la acumulación de neutrófilos
en la glándula mamaria. Los resultados de los estudios
inmunológicos destacan un cierto número de descubrimientos
importantes que pueden aportar alguna luz al mecanismo de acción de
las bacterias probióticas L. lactis en la glándula mamaria.
Dichos descubrimientos comprenden los siguientes:
- El tratamiento intramamario tanto con un
cultivo de L. lactis como con el sobrenadante de un cultivo
activa la respuesta inmunitaria mamaria iniciando la afluencia de
neutrófilos hacia la glándula mamaria.
- El cultivo con L. lactis y el
sobrenadante del cultivo parecen ser específicos en la provocación
de la acumulación de PMN en la ubre, cuando se compara con el
antibiótico Multimast L. C.
- Dichos neutrófilos recién acumulados presentan
una capacidad de absorción respiratoria superior que los
neutrófilos que permanecen, proporcionando de este modo un mecanismo
efectivo para la eliminación de los patógenos de la mastitis.
- El/los factor(es) responsable(s)
de la provocación de una respuesta inmunitaria en la ubre
puede(n) ser factor(es) soluble(s)
liberado(s) en el medio de cultivo, dicho(s)
factor(es) ha(n) de ser termolábil(es) o
destruido(s)/utilizado(s) rápidamente cuando se matan
las células, ya que las células muertas más el sobrenadante no
provocan una respuesta inmunitaria.
- El cultivo de L. lactis ha de ser
viable para provocar una respuesta inmunitaria adecuada, aunque una
preparación liofilizada resulta asimismo efectiva en la estimulación
del sistema inmunitario de la glándula mamaria.
- Otras LAB pueden provocar también una
respuesta inmunitaria en la glándula mamaria, de un modo similar al
L. lactis DPC 3147, aunque posiblemente no en el mismo grado
que el L. lactis DPC 3147. Ello implica que otras LAB pueden
ser también capaces de curar mastitis clínicas en vacas lecheras y
en otros animales si los cuadrantes infectados se inyectan con
dichos cultivos.
- El tratamiento con un cultivo de L.
lactis o con una preparación liofilizada de L. lactis
DPC3147 resulta tan efectivo en la eliminación de infecciones como
el tratamiento antibiótico intramamario.
Los términos "comprende/comprendiendo" y
los términos "presentando/incluyendo" cuando se utilizan en la
presente memoria con referencia a la presente invariables se
utilizan para especificar la presencia de las características,
enteros, etapas o componentes indicados aunque no excluye la
presencia o adición de una o más características, enteros, etapas,
componentes o grupos de los mismos.
Alvarez, S., Herrero, C.,
Bru, E. y G. Perdigon (2001). Effect of
Lactobacillus casei and yoghurt administration on prevention
of Pseudomonas aeruginosa infection in young mice. J. Food
Prot. 64: 1768-1774.
Alvarez-Olmos, M. I. y R.
A. Oberhelman. 2001. Probiotic agents and infectious
diseases: a modern perspective on a traditional therapy. Clin.
Infect. Diseases 32: 1567-1576.
Blackburn, P. Projan, S. J. y E.
B. Goldberg. 1994. Pharmaceutical bacteriocin
compositions and methods for doing the same. United States Patent
5: 304, 540.
Cross, M. L. 2002. Microbes versus
microbes: immune signals generated by probiotic lactobacilli and
their role in protection against microbial pathogens. FEMS
Immun. Med. Microbiol. 1442: 1-9.
Galvin, M., Hill, C. y R. P.
Ross. 1999. Lacticin 3147 displays activity in buffer
against Gram-positive bacterial pathogens which
appear sensitive in standard plate assays. Lett. Appl.
Microbiol. 28: 355-358.
Gardiner, G. E., Heinmann, C.,
Bruce, A. W., Beuerman, D. y G. Reid.
2002. Peristence of Lactobacillus fermentum
RC-14 and Lactobacillus rhamnosus
GR-1 but not L. rhamnosus GG in the human
vagina as demonstrated by randomly amplified polymorphic DNA.
Clin. Diagn. Lab. Immunol. 9: 92-96.
Morgan, S. M., Galvin, M.,
Kelly, J., Ross, R. P. y C. Hill. 1999.
Development of a lacticin 3147 enriched whey powder with inhibitory
activity against foodbome pathogens. J. Food Protection. 62:
1011-1016.
Parente, E., y C. Hill.
(1992). Comparison of factors affecting the production of two
bacteriocins from lactic acid bacteria. J. Appl. Bacteriol.
73: 290-298.
Perdigon, G., de Marcias, M. E.
N., Alvarez, S., Oliver, G. y A. P. de Ruiz
Holgado. 1990a. Prevention of gastrointestinal infection
using immunobiological methods with milk fermented with
Lactobacillus casei y Lactobacillus acidophilus.
J. Dairy Res. 57: 255-264.
Perdigon, G., Alvarez, S., de
Marcias, M. E. N., Roux, M. E. y A. P. de Ruiz
Holgado. 1990b. The oral administration of lactic acid
bacteria increases the mucosal immunity in response to
enteropathogens. J. Food Protect. 53:
404-410.
Perdigon, G., Alvarez, S. y A. P.
de Ruiz Holgado. 1991. Immunoadjuvant activity of oral
Lactobacillus casei: influence of dose on the secretory
immune response and protective capacity in intestinal infections.
J. Dairy Res. 58: 485-496.
Reid, G., Beuerman, D.,
Heinemann, C. y A. W. Bruce. 2001. Probiotic
lactobacillus dose required to restore and maintain a normal
vaginal flora. FEMS Immunol. Med. Microbiol. 32:
37-41.
Ross, R. P., Galvin, M.,
McAuliffe, O., Morgan, S., Ryan, M.,
Twomey, D., Meaney, W. y C. Hill. 1999.
Developing applications for lactococcal bacteriocins. Antonie van
Leeuenhoek 76: 337-346.
Ryan, M. P., Flynn, J.,
Hill, C., Ross, R. P. y W. J. Meaney.
1999. The natural food grade inhibitor, lacticin 3147 can
prevent mastitis in non-lactating dairy cows. J.
Dairy Sci. 82: 2625-2631.
Sears, P.M., Peele, J.,
Lassauzet, M., y P. Blackburn. 1995. Use of
antimicrobial proteins in the treatment of bovine mastitis. In:
Proceedings of the 3rd International Mastitis seminar (p
17-18).
Twomey, D. P., Wheelock, A. I.,
Flynn, J., Meaney, W. J., Hill, C. y R. P.
Ross. 2000. Protection against Staphylococcus
aureus mastitis in dairy cows using a
bismuth-based teat seal containing the bacteriocin,
lacticin 3147. J. Dairy Sci. 83:
1981-1988.
\vskip1.000000\baselineskip
La presente lista de referencias citadas por el
solicitante se presenta únicamente para la comodidad del lector. No
forma parte del documento de patente europea. Aunque se han
compilado las referencias muy cuidadosamente, no se pueden excluir
errores u omisiones y la Oficina Europea de Patentes (EPO) declina
toda responsabilidad en este sentido.
- US 5304540 A [0050]
Alvarez, S., Herrero, C.,
Bru, E. y G. Perdigon (2001). Effect of
Lactobacillus casei and yoghurt administration on prevention
of Pseudomonas aeruginosa infection in young mice. J. Food
Prot., 2001, vol. 64: 1768-1774 [0050]
Alvarez-Olmos, M. I. y R.
A. Oberhelman. Probiotic agents and infectious diseases: a
modern perspective on a traditional therapy. Clin. Infect.
Diseases, 2001, vol. 32: 1567-1576
[0050]
Cross, M. L. Microbes versus microbes:
immune signals generated by probiotic lactobacilli and their role in
protection against microbial pathogens. FEMS Immun. Med.
Microbiol. 2002, vol. 1442: 1-9
[0050]
Galvin, M., Hill, C. y R. P.
Ross. Lacticin 3147 displays activity in buffer against
Gram-positive bacterial pathogens which appear
sensitive in standard plate assays. Lett. Appl. Microbiol.,
1999, vol. 28: 355-358
Gardiner, G. E., Heinmann, C.,
Bruce, A. W., Beuerman, D. y G. Reid.
Peristence of Lactobacillus fermentum RC-14
and Lactobacillus rhamnosus GR-1 but not
L. rhamnosus GG in the human vagina as demonstrated by
randomly amplified polymorphic DNA. Clin. Diagn. Lab.
Immunol., 2002, vol. 9: 92-96 [0050]
Morgan, S. M., Galvin, M.,
Kelly, J., Ross, R. P. y C. Hill. Development
of a lacticin 3147 enriched whey powder with inhibitory activity
against foodbome pathogens. J. Food Protection., 1999,
vol. 62: 1011-1016 [0050]
Parente, E., y C. Hill. Comparison
of factors affecting the production of two bacteriocins from lactic
acid bacteria. J. Appl. Bacteriol., 1992, vol. 73:
290-298 [0050]
Perdigon, G., de Marcias, M. E.
N., Alvarez, S., Oliver, G. y A. P. de Ruiz
Holgado. Prevention of gastrointestinal infection using
immunobiological methods with milk fermented with Lactobacillus
casei and Lactobacillus acidophilus. J. Dairy Res.,
1990, vol. 57: 255-264 [0050]
Perdigon, G., Alvarez, S., de
Marcias, M. E. N., Roux, M. E. y A. P. de Ruiz
Holgado. The oral administration of lactic acid bacteria
increases the mucosal immunity in response to enteropathogens. J.
Food Protect., 1990, vol. 53: 404-410
[0050]
Perdigon, G., Alvarez, S. y A. P.
de Ruiz Holgado. Immunoadjuvant activity of oral
Lactobacillus casei: influence of dose on the secretory
immune response and protective capacity in intestinal infections.
J. Dairy Res., 1991, vol. 58: 485-496
[0050]
Reid, G., Beuerman, D.,
Heinemann, C. y A. W. Bruce. Probiotic lactobacillus
dose required to restore and maintain a normal vaginal flora.
FEMS Immunol. Med. Microbiol., 2001, vol. 32:
37-41 [0050]
Ross, R. P., Galvin, M.,
McAuliffe, O., Morgan, S., Ryan, M.,
Twomey, D., Meaney, W. y C. Hill. Developing
applications for lactococcal bacteriocins. Antonie van Leeuenhoek,
1999, vol. 76: 337-346 [0050]
Ryan, M. P., Flynn, J.,
Hill, C., Ross, R. P. y W. J. Meaney. The
natural food grade inhibitor, lacticin 3147 can prevent mastitis in
non-lactating dairy la vacas. J. Dairy Sci.,
1999, vol. 82: 2625-2631 [0050]
Sears, P.M., Peele, J.,
Lassauzet, M., y P. Blackburn. Use of antimicrobial
proteins in the treatment of bovine mastitis. Proceedings of the
3rd International Mastitis seminar, 1995,
17-18 [0050]
Twomey, D. P., Wheelock, A. I.,
Flynn, J., Meaney, W. J., Hill, C. y R. P.
Ross. Protection against Staphylococcus aureus
mastitis in dairy la vacas using a bismuth-based
teat seal containing the bacteriocin, lacticin 3147. J. Dairy
Sci., 2000, vol. 83: 1981-1988 [0050]
Claims (3)
1. Utilización de un cultivo vivo de una
bacteria probiótica apatógena de una calidad apropiada para
alimentos o del sobrenadante de un cultivo vivo de una bacteria
probiótica apatógena de una calidad apropiada para alimentos en la
preparación de una composición para estimular el sistema
inmunitario, en la que se selecciona una cepa de Lactococcus
de entre los grupos que comprenden: Lactococcus lactis
DPC3147, Lactococcus lactis DPC5399 y Lb. plantarum
DPC4922, estando destinada la composición a ser utilizada en el
tratamiento de una infección de tipo mastitis.
2. Utilización según cualquiera de las
reivindicaciones anteriores, en la que el cultivo vivo de una
bacteria probiótica apatógena de una calidad apropiada para
alimentos se encuentra liofilizado.
3. Utilización según cualquiera de las
reivindicaciones 1 ó 2, en la que el cultivo vivo o el sobrenadante
están destinados a ser utilizados en la estimulación de las células
polimorfonucleares (PMN) a fin de provocar una respuesta
inmunitaria.
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US5965128A (en) * | 1997-08-13 | 1999-10-12 | University Of Georgia Research Foundation Inc. | Control of enterohemorrhagic E. coli 0157:H7 in cattle by probiotic bacteria and specific strains of E. coli |
KR100352659B1 (ko) * | 1997-09-19 | 2002-09-12 | 닛산 지도우샤 가부시키가이샤 | 자동차의 측부 충돌시 자동차의 승객 보호장치 |
AU2001284558B2 (en) * | 2000-08-08 | 2007-01-04 | Genesis Research And Development Corporation Limited | Lactobacillus rhamnosus polynucleotides, polypeptides and methods for using them |
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