WO2020130776A1 - Formulación oftálmica de pirfenidona para la prevención del desarrollo de opacidad corneal post cirugía fotorefractiva láser excimer - Google Patents

Formulación oftálmica de pirfenidona para la prevención del desarrollo de opacidad corneal post cirugía fotorefractiva láser excimer Download PDF

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WO2020130776A1
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pirfenidone
corneal
development
ophthalmic
excimer laser
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PCT/MX2019/000128
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Inventor
Arturo SANTOS GARCÍA
Juan Socorro ARMENDÁRIZ BORUNDA
Alejandra MEZA RÍOS
José NAVARRO PARTIDA
Carlos Daniel DÍAZ PALOMERA
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Centro De Retina Médica Y Quirúrgica, S.C.
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    • A61P27/02—Ophthalmic agents

Definitions

  • the present invention is related to the field of medicine, specifically to an ophthalmic formulation with pirfenidone (5-methyl-1-phenyl-2- (1H) -pyridone) and chitosan for the prevention of corneal opacification related to photo refractive ophthalmic surgeries with excimer laser, and the prevention of the development of post surgical fibrosis, in particular surgeries for the management of glaucoma; formulation that may preferably be in the form of drops.
  • the excimer laser or excimer laser is a type of laser that generates invisible, cold, ultraviolet light that, instead of cutting or burning, creates enough energy to separate molecules from tissues. In this way, when applied to the cornea, the surgeon can mold it and modify its graduation without affecting the tissues that surround it. Through the different procedures that use the excimer laser for a person to stop wearing glasses, it is possible to gently polish the corneal tissue, carving it until turning the cornea into a kind of contact lens; In this way, vision is recovered by correcting refractive defects in a fast, precise, reliable and safe.
  • the excimer laser operation is a 'minor outpatient surgery *, that is, it is performed extraocularly (does not affect the intraocular organs) and allows the patient, once operated, to go home without the need for hospital admission .
  • fibrosis is the result of an excessive accumulation of extracellular matrix components such as collagen and fibronectin, secreted by myofibroblasts in response to cellular damage.
  • the tissue response to the induced damage is a state of inflammation which can perpetuate and eventually favor the fibrosis process and lead to a pathological state with possible loss of function of the damaged tissue or organ through the permanent formation of a scar.
  • the cornea is a transparent and avascular tissue composed of three different cell layers: superficial stratified epithelium, central stroma and endothelium.
  • the corneal epithelium is anchored to its own basement membrane, which is composed of an organized network of extracellular matrix molecules such as type IV collagen, thrombosponidin, laminins, fibronectin and others.
  • Adjacent to the epithelial membrane is Bowman's collagenous layer, predominantly composed of type I, III, V, and VI collagen providing protection to the corneal stroma.
  • the stroma consists of keratocytes that maintain a slow turnover of the stromal extracellular matrix by synthesizing type I and V collagen and proteoglycans.
  • the unique arrangement of collagen and proteoglycan fibers is critical to maintaining corenal transparency.
  • the endothelium also contributes to clarity stromal controlling fluid and ionic movement, maintaining stroma hydration.
  • the cornea is subject to mechanical trauma and abrasive forces, as a result it has developed an efficient system for re-e skinning to avoid microbial infections and trauma to the stroma.
  • Migration of the epithelial sheet onto the bare surface and epithelial cell proliferation promote rapid re-epithelialization and restoration of epithelial layering.
  • deep corneal wounds interfere with the process and result in recurrent corneal erosions, stromal opacity, subepithelial fibrosis, and epithelial keratinization leading to visual impairment.
  • TGF-b Transforming growth factor b plays the leading role in such transdifferentiation, implicated in numerous fibrotic diseases of the eye including corneal opacification, pterygium, anterior subcapsular cataract, posterior capsular opacification, proliferative vitreoretinopathy, associated fibrovascular membrane formation. proliferative diabetic retinopathy, submacular fibrosis, glaucoma and orbital fibrosis.
  • a-SMA smooth muscle actin a
  • Corneal opacity resulting from refractive surgery is the cause of the normal tissue regeneration process directed by the activation of myofibroblasts previously described. Corneal opacity, even being transient, can lead to superficial irregularity, fluctuation in vision, irregular astigmatism, nictalopia, myopic regression, and a reduction in contrast.
  • LASIK laser-assisted keratomileusis in situ
  • the formation of the flap between the deep epithelium and the stroma leads to less interaction between both layers, as the integrity of the basement membrane is maintained, preventing central opacity of the cornea.
  • corneal opacity can be seen at the flap margins where there is epithelial-stromal contact.
  • Glanal opacity results in a circumference opacity at the incision site.
  • Current prophylactic strategies include the use of 0.02% mitomycin-C (MMC) in order to reduce cell proliferation, subepithelial scarring and fibrosis, however it is potentially dangerous, since its use is related to ocular surface toxicity, including stem cell deficiency, sterile fusion, and delayed re-epithelialization, observed in the application of topical MMC in other eye conditions.
  • MMC mitomycin-C
  • Other agents used for the prevention of corneal opacity are the topical spheroids used in the first 72 hours post-intervention, however, an anti-fibrogenic effect has not been observed.
  • the chitosan molecule contains three types of reactive functional groups; an amino / acetoamino group, primary and secondary hydroxyl groups on carbons 2,3 and 6.
  • reactive functional groups an amino / acetoamino group, primary and secondary hydroxyl groups on carbons 2,3 and 6.
  • the biological functions of the molecule and its derivatives are the antimicrobial, hypocholesterolemic, immune system enhancer, anti-tumor, anti-inflammatory effect. , antioxidant, drug carrier, accelerator of calcium and iron absorption, among others.
  • the antimicrobial activity of chitosan and its derivatives is considered as one of its most important properties. Studies have shown this effect on different microorganisms such as bacteria, yeasts and fungi. It generally shows a greater effect on gram negative bacteria at a concentration of 0.1%. The minimum concentration with antimicrobial effect is 0.05%, depending on the bacterial spice.
  • the immune stimulating activity of chitosan has been reported since 1984 by Nishimura et al., Which showed that chitosan can stimulate rats to produce a non-specific attack when they are infected with E. col ⁇ .
  • chitosan is an immune regulator that can activate macrophages and natural killer cells and increase the cytotoxic effect and induce mitosis of cells producing interleukins and interferon.
  • chitosan has been shown to improve the antibody-mediated humoral response. Its effect as an adjuvant in influenza inactivation vaccine has been studied. Mice of the BALB / c strain were abdominally inoculated with the vaccine and chitosan twice every three weeks. In serum samples, the levels of IgG, IgG 1 and IgG2 antibodies were measured, as well as IgA in nasal secretions.
  • H1N1 A / PR / 8/34 influenza virus
  • chitosan can significantly lower serum levels of free fatty acids and increase the activity of super oxide dismutase (SOD), catalase (CAT) and glutathione peroxidase (GSH-PX), the body's antioxidant enzymes. More important, indicating that chitosan regulates the activity of antioxidant enzymes and reduces lipid peroxidation.
  • SOD super oxide dismutase
  • CAT catalase
  • GSH-PX glutathione peroxidase
  • Another of its biological properties is that of chelator; Absorbs toxic metals like mercury, cadmium, lead.
  • Chitosan has shown high biocompatibility, antimicrobial and increase the retention time of topical drugs when co-administered on the ocular surface. By administering 0.5% chitosan to ophthalmic formulations, it significantly improves retention time on the precorneal surface and delays its removal. Chitosan has been shown in vitro to increase cell permeability by promoting drug delivery. Results suggesting that the opening of these tight junctions between cells is due to the binding of the positive charges of the chitosan molecule on the cell membrane, activating the chlorine-bicarbonate exchanger, increasing the permeability of molecules above 10 kDa. In vitro and in vivo studies have demonstrated the biological role of chitosan in increasing the passive diffusion of compounds across biological membranes.
  • the chitosan molecule has shown viscoelastic and pseudoplastic properties, which currently makes it a candidate for nanotechnological applications in the ophthalmic area.
  • the pirfenidone compound (PFD) 5-methyl-1-phenyl-2- (1H) -pyridone, was initially developed as an anthelmintic and antipyretic agent.
  • PFD is a small-sized molecule with a molecular weight of 185.23 Da, its chemical formula is C 12 H 11 NO, with high solubility in alcohol and chloroform.
  • the molecule is capable of moving between cell membranes without the need for a receptor. .
  • PFD has been tested in various cell and animal models of Inflammation and Fibrosis, where it has been shown to have anti-inflammatory, anti-oxidative stress and anti-proliferative properties.
  • PFD is known to regulate cytokines and key growth factors in the fibrotic process, which inhibits various inflammatory mediators, has an antioxidant effect, and restores the immune response.
  • the invention US3839346 where the method of obtaining the pirfenidone molecule is described, as well as its use as an anti-inflammatory agent.
  • 5-methyl-l-phenyl-2 (1H) pyridone has excellent analgesic activity, marked anti-inflammatory activity, and excellent antipyretic activity in test animals compared to the standard analgesic drug such as aminopyrine.
  • the compound when formulated in dosage form for oral administration or intraperitoneal showed markedly less toxicity in test animals.
  • the invention US3974281 describes analgesic, antipyretic, anti-inflammatory compositions containing as an active ingredient the compound, 5-methyl-1-phenyl-2- (1 H) -pyridone.
  • Such compositions have also been found to cause a significant decrease in serum uric acid and glucose levels and to be effective in treating various upper respiratory conditions in humans and other mammals. Skin conditions like dermatitis and poison ivy are also alleviated with this agent.
  • Compositions containing 5-methyl-1-phenyl-2- (1 H) -pyridone were verified to cause no irritation on oral administration or when applied to specific tissues showed no significant irritation or other sequelae.
  • compositions containing as an active ingredient the compound 5-methyl-1-phenyl-2- (1H) -pyridone are found to have a metabolic property that causes a significant decrease in serum glucose levels in humans and other mammals.
  • Compositions containing 5-methyl-1-phenyl- 2- (1H) -pyridone did not cause irritation on oral administration or when applied to specific tissues showed no significant irritation or other sequelae.
  • compositions containing as an active ingredient the compound 5-methyl-1-phenyl-2- (1 H) -pyridone were found to have a metabolic property that causes a significant decrease in serum uric acid levels in humans. humans and other mammals.
  • Compositions containing 5-methyl-1-phenyl- 2- (1 H) -pyridone did not cause irritation on oral administration or when applied to specific tissues showed no significant irritation or other sequelae.
  • the invention CN105496957 describes sustained release pirfenidone eye drops.
  • Each 150 ml of the sustained-release pirfenidone eye drops contain 0.75 g of pirfenidone, 1.13 g of sodium chloride, 0.30 g of sodium citrate, 1.5 g of hydroxypropyl methyl cellulose, 45 mg of ethylparaben and the rest of the water.
  • sustained-release pirfenidone eye drops Depending on the sustained-release pirfenidone eye drops, the concentration of drugs in the drops increases, the holding time of the drugs in the drops is prolonged, and the retention of drugs on the ocular surfaces is prolonged.
  • sustained-release pirfenidone eye drops have the advantages that the concentration of drugs in the cornea, aqueous humor, conjunctiva, and sclerotic tissue increases to different degrees through of a colloidal solution within 90 minutes of drug administration, and the ocular bioavailability of the drugs is improved.
  • the invention CN102349901 describes an application of pirfenidone in the preparation of medicines to control proliferative diseases after an ophthalmological operation and eye drops thereof.
  • pirfenidone is prepared in eye drops;
  • HLECs human lymphatic endothelial cells
  • cytotoxicity to HLECs within the range of action. (0-1mg / ml).
  • Pirfenidone can be used to delay the generation of posterior capsule opacity (PCO) after the operation of a rabbit's corneal cornea, reduce the spread of HLEC, and minimize PCO protection of the optic region.
  • PCO posterior capsule opacity
  • pirfenidone can be used to control proliferative diseases after an ophthalmological operation, especially the posterior capsule opacification generated after cataract surgery.
  • PFD In fibrosis, the positive balance for collagen synthesis is influenced by the production of TGF-b and other growth factors, which can be under-regulated by PFD.
  • PFD has also been shown to reduce keloid tissue formation in animal models. In eye tissue, PFD prevents collagen proliferation, migration, and contraction in human Tenon fibroblasts in vitro and inhibits postsurgical scar formation in experimental strabismus and glaucom models. PFD exhibits significant anti-fibrotic effect in fibroblasts isolated from patients with thyroid-associated ophthalmopathy, while inhibiting TGF-b-induced fibrogenesis of cells retinal pigment epithelial.
  • the developed invention described below is an ophthalmic formulation with pirfenidone (5-methyl-1-phenyl-2- (1H) -pyridone) and qultosana for prevention and treatment of diseases, in particular the prevention of corneal opacification related to excimer laser photorefractive ophthalmic surgeries, preferably as eye drops.
  • the object of this invention is to make available the use of pirfenidone in an ophthalmic solution for the prevention of the development of corneal opacity after ophthalmic refractive surgery with excimer laser and the prevention of the development of post surgical fibrosis, in particular surgeries for the management of glaucoma , preferably a pharmaceutical ophthalmic solution in drops or in gel form for its topical application.
  • Figure 1 shows the TGF-mediated myofibroblastic transformation pathway. b1 in HSC, liver cells, and parenchymal fibroblasts.
  • Figure 2 shows the proposed mechanism for inhibition of the myofibroblastic phenotype by pirfenidone.
  • Figure 3 shows the relative expression of the collagen 1 gene.
  • Figure 4 shows the relative expression of the a-SMA gene.
  • Figure 5 shows the comparison of the transparency of corneas in ex vivo culture stained with 1N NaOH in the presence of TGF-bI at different concentrations with a 15-day follow-up.
  • Figure 6 shows the comparison in corneal transparency in a prevention model.
  • Figure 7 shows the comparison in corneal transparency in a reversal model.
  • Figure 8 shows the comparison of the percentage of corneal transparency in the prevention model.
  • Figure 9 shows the comparison of the percentage of corneal transparency in the reversion model.
  • the graph shows that the treatment with prednisolone and Pred PFD is able to increase the real transparency significantly when used for 15 days in corneas with established damage.
  • Figure 10 shows the comparison of the percentage of corneal transparency in the reversion model. The graph shows that both pirfenidone and prednisolone are capable of reversing corneal damage once corneal damage has been established.
  • pirfenidone (5-methyl-1-phenyl-2- (1 H) -pyridone) and chitosan for the prevention of the development of corneal opacity after excimer laser photo refractive surgery
  • the formulation object of this document corresponds to a pirfenidone content in the ophthalmic solution is 0.1-1.5%, preferably 1.0%.
  • the ophthalmic solution contains pirfenidone 0.1-1.5%, chitosan 0.5-2.0%, Kolliphor HS 15%, boric acid 0.6-0.62%, povidone 0.5%, chlorobutanol 0.5%, NaCI 0.5-0.9%, water for injection.
  • the solution is filter sterilized through a 0.2 micron pore.
  • Each 100 mL of ophthalmic solution contains 0.1 to 1.50 g of pirfenidone, 0.5 g to 2 g of chitosan, 0.5 g of povidone, 5 g of Kolliphor HS 15, 0.6 g to 0.62 g of boric acid. 0.5 g to 0.9 g of sodium chloride, 0.5 g of chlorobutanol and water for injection.
  • the pH of the ophthalmic solution is 6.5 to 7.
  • the first - pass cells were seeded in 6 well plates at a density of 1x10 e cells / well, culture was maintained in DMEM / 10% FBS / 1% AA until reaching a confluence of 90% -100%. The cultures at confluence were changed to serum-free medium.
  • the study groups were as follows:
  • Keratocyte prevention groups with 1 ng / mL TGF-b plus 10 uM, 100 uM and 1000 uM pirfenidone.
  • FIG. 1 shows the TGF-bI mediated myofibroblastic transformation pathway in HSC, liver cells, and parenchymal fibroblasts, where TGF: Transforming growth factor.
  • KLF4 Kruppel type factor 4.
  • MK2 protein kinase 2 activator of MAP kinase.
  • miR micro RNA.
  • the transformation path is as follows:
  • Figure 2 shows the proposed mechanism for inhibition of the myofibroblastic phenotype by Pirfenidone, where PFD: Pirfenidone, KLF4: Kruppel 4-like factor, miR: micro RNA.
  • the proposed mechanism is as follows:
  • the genes evaluated were type I collagen and o-SMA (Alpha Smooth Muscle Actin).
  • Figure 4 shows the relative expression of the a-SMA gene.
  • the decrease in the expression of the a-SMA gene can be observed with the use of dexamethasone and pirfenidone at a concentration of 100uM. The results are shown as the mean ⁇ standard error.
  • PFD Pirfenidone
  • TGF-b Transforming growth factor beta
  • Corneal tissues were obtained from the enucleation of healthy rabbit eyes of the New Zealand strain. After surgical enucleation, the corneas that were chemically induced with 1N NaOH were cut, for which 6 mm filter paper discs were embedded in 1N NaOH solution and placed on the cornea, which were kept 30 seconds in contact with the tissue. The corneas were maintained in culture with DMEM / AA 1%. In triplicate, 3 groups were formed with different concentrations of TGF-bI, the concentrations tested were 2ng / mL, 5 ng / mL and 10 ng / mL.
  • the transparency of the corneal tissue was evaluated at 2, 6, 9 and 15 days post administration of TGF-p1. Transparency was evaluated with the following method; the corneas were placed over a text printed in arial typeface 8, several observers determined through which tissues it is veiled with more or less clarity of the text they covered.
  • the dose of TGF-bI to be used in the subsequent experiments was determined, which was 5 ng / mL.
  • FIG. 5 shows the comparison of the transparency of corneas in ex vivo culture damaged with 1N NaOH in the presence of TGF-bI at different concentrations with a 15-day follow-up. It is observed that the addition of TGF-b1 to the medium significantly increases corneal opacity at 15 days.
  • TGF-b Transforming growth factor beta.
  • Figure 6 shows the comparison in corneal transparency in a prevention model.
  • the differences in the transparency of the corneas can be observed without damage, with damage without TGF-bI, with damage + TGF-bI, as well as the damaged corneas treated with Pirfenidone (PFD) and prednisolone (Pred) as a preventive therapeutic agent in the appearance of corneal haze.
  • the drugs were used from day one until day 15 after the chemical insult.
  • the use of pirfenidone and prednisolone reduce corneal opacity significantly 15 days after chemical damage.
  • PFD Pirfenidone
  • TGF-b Transforming growth factor beta
  • Pred prednisolone.
  • FIG. 7 shows the comparison in corneal transparency in a reversal model. After fifteen days of chemical damage and once corneal fibrosis has been established, treatment with prednisolone (Pred) and pirfenidone (PFD) is started, starting treatment 15 days after establishing the damage. It can be seen that the corneal transparency increases in the treated groups unlike the control group with chemical damage and without treatment.
  • Pred prednisolone
  • PFD pirfenidone
  • TGF-0 Transforming growth factor beta
  • Pred prednisolone.
  • the PFD-treated prevention group shows greater transparency than the damage control group, demonstrating the prophylactic effect of PFD on the development of corneal opacity.
  • the therapeutic or reversal effect of pirfenidone administration was evaluated on tissues with induced damage with 1N NaOH and 5ng / mL of TGF-bI, the tissues were maintained in culture with 5ng / mL of TGF-bI for 15 for development tissue opacity. On day 15, treatment with 1.5% PFD was started, compared with 0.5% prednisolone. Transparency was evaluated and compared on the first day of starting treatment with transparency on day 15 of treatment.
  • the therapeutic group with PFD showed an increase in tissue transparency after 15 days of treatment compared to the damage control group.
  • Figure 8 shows the comparison of the percentage of corneal transparency in the prevention model.
  • the data shows a significant difference between the group with chemical damage and the group with chemical damage + TGF-bI establishing the utility of TGF-bI for the establishment of the model.
  • PFD pirfenidone
  • TGF-b transforming growth factor beta
  • Pred prednisolone.
  • Figure 9 shows the comparison of the percentage of corneal transparency in the reversion model.
  • PFD pirfenidone
  • TGF-b transforming growth factor beta
  • Pred prednisolone.
  • Figure 10 shows the comparison of the percentage of corneal transparency in the reversion model.
  • PFD pirfenidone
  • TGF-b transforming growth factor beta
  • Pred prednisolone.

Abstract

El objeto de la invención es proporcional el uso de 5-metil-1-fenil-2-(1H)-piridona (pirfenidona) y quitosana en una solución oftálmica para la prevención del desarrollo de la opacidad corneal post cirugía oftálmica refractiva con excimer láser. Cada 100 mL de la solución oftálmica contiene de 0.1 a 1.5 g de pirfenidona, 0.5 g a 2 g de quitosana, 0.5 de povidona, 5 g de Kolliphor HS 15, 0.6g a 0.62g de ácido bórico, 0.5g a 0.9g de cloruro de sodio, 0.5g de clorobutanol y agua inyectable. El pH de la solución oftálmica es de 6.5 a 7. En base a los experimentos realizados de la formulación desarrollada se observa que tanto la quitosana más pirfenidona como la prednisolona son capaces de revertir el daño de la córnea una vez establecido el daño corneal.

Description

FORMULACIÓN OFTÁLMICA DE PIRFENIDONA PARA LA PREVENCIÓN DEL DESARROLLO DE OPACIDAD CORNEAL POST CIRUGÍA FOTOREFRACTIVA LÁSER
EXCIMER
CAMPO DE LA INVENCIÓN
La presente invención está relacionada al campo de la medicina, concretamente a una formulación oftálmica con pirfenidona (5-metil-1-fenil-2-(1H)-piridona) y quitosana para prevención de la opacificación corneal relacionadas a cirugías oftálmicas foto refractivas con láser excimer, y la prevención del desarrollo de fibrosis post quirúrgica, en particular cirugías para el manejo de glaucoma; formulación que puede estar preferentemente en presentación de gotas.
ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN
El láser excimer o láser de excimeros es un tipo de láser que genera una luz ultravioleta, invisible y fría que, en vez de cortar o quemar, crea suficiente energía como para separar las moléculas de los tejidos. De esta forma, al aplicarlo sobre la córnea, el cirujano puede moldearla y modificar su graduación sin afectar a los tejidos que la rodean. A través de los diferentes procedimientos que emplean el láser excimer para que una persona deje de usar lentes, se consigue pulir con suavidad el tejido corneal, tallándolo hasta convertir la córnea en una especie de lentilla; de esta forma, se recupera la visión corrigiendo los defectos de la refracción de una forma rápida, precisa, fiable y segura. La operación con láser excimer es una ' cirugía menor ambulatoria* , es decir, que se realiza extra-ocularmente (no afecta a los órganos intraoculares) y permite que el paciente, una vez operado, pueda irse a su casa sin necesidad de ingreso hospitalario.
Por otro lado, la fibrosis es el resultado de una acumulación excesiva de componentes de matriz extracelular como colágenas y fibronectina, secretadas por miofibroblastos en respuesta a daño celular. La respuesta tisuiar al daño inducido es un estado de inflamación el cual puede perpetuarse y eventualmente favorecer el proceso de fibrosis y llevar a un estado patológico con posible pérdida de la función del tejido u órgano dañado a través de la formación permanente de una cicatriz.
En el ojo, la fibrosis altera los tejidos oculares normalmente transparentes resultando en la pérdida irreversible de la visión. La cornea es un tejido transparente y avascular compuesto de tres capas celulares diferentes: epitelio estratificado superficial, estroma central y endotelio. El epitelio corneal se ancla a una membrana basal propia la cual se compone de una red organizada de moléculas de matriz extracelular como colágena tipo IV, trombosponidina, lamininas, fibronectina entra otras. Adyacente a la membrana epitelial está la capa colagenosa de Bowman, compuesta predominantemente de colágena tipo I, III, V y VI proporcionando protección al estroma corneal. El estroma se compone de queratocitos que mantienen un recambio lento de la matriz extracelular del estroma sintetizando colágenas tipo I y V y proteoglicanos. El arreglo único de las fibras de colágenas y proteoglicanos es crítico para mantener la transparencia corenal. El endotelio también contribuye a la claridad estromal controlando el movimiento Iónico y de fluidos, manteniendo la hidratación del estroma.
La cornea es sujeta a traumas mecánicos y a fuerzas abrasivas, como resultado ha desarrollado un sistema eficiente para la re-e pitelización para evitar infecciones microbianas y traumas en el estroma. La migración de la hoja epitelial sobre la superficie desnuda y la proliferación celular epitelial, promueve la rápida re-epitelización y el restablecimiento de la estratificación epitelial. Sin embargo, heridas corneales profundas Interfieren con el proceso y resultan en erosiones corneales recurrentes, opacidad estromal, fibrosis subepitelial y queratinización epitelial llevando al impedimento visual.
Durante la evolución de la fibrosis corneal ocurre comúnmente la transdiferenciación de queratocitos a miofibroblastos (también denominados fibroblastos estromales), mediante un proceso denominado transición epitelio- mesénquima. Los miofibroblastos producen cantidades excesivas de matriz extracelular resultando en la modificación de la arquitectura tisular. El factor de crecimiento transformante b (TGF-b) juega el papel principal en dicha transdiferenciación, implicado en numerosas enfermedades fibróticas del ojo incluyendo la opacificación corneal, pterigión, catarata subcapsular anterior, opacificación capsular posterior, vitreoretinopatia proliferativa, formación de membrana fibrovascular asociada a retinopatía diabética proliferativa, fibrosis submacular, glaucoma y fibrosis orbital. Una de las principales características de los miofibroblastos activados es su neo-expresión de la actina de músculo liso a (a-SMA) la cual le confiere contractibilidad celular. La contracción de los miofibroblastos rompe la curvatura corneal normal, induciendo fallo en la función normal de la córnea. La expresión de a-SMA es regulada por la actividad combinada de factores de crecimiento y citocinas como TGF-b, proteínas especializadas de la matriz extracelular como fibronectina y el microambiente. En los miofibroblastos activados se ve una expresión disminuida de proteínas como las cristalinas corneales resultando en una opacidad estromal persistente.
La opacidad corneal resultado de una cirugía refractiva es causa del proceso normal de regeneración tisular dirigida por la activación de miofibroblastos previamente descrita. La opacidad corneal, aun siendo transitoria, puede llevar a la irregularidad superficial, fluctuación en la visión, astigmatismo irregular, nictalopia, regresión miope, y una reducción en contraste. En la queratomileusis in situ asistida por láser (LASIK) la formación del colgajo entre el epitelio profundo y el estroma lleva a una menor interacción entre ambas capas gracias a que se mantiene la integridad de la membrana basal evitando la opacidad central de la córnea. Sin embargo, se puede observar opacidad corneal en los márgenes del colgajo donde si existe el contacto epitelio-estroma. Resultando en una opacidad en circunferencia en el sitio de incisión. Las estrategias profilácticas actuales incluyen el uso de mitomlcina-C (MMC) al 0.02% con el objeto de reducir la proliferación celular, cicatrización subepitelial y fibrosis sin embargo es potencialmente peligroso, ya su uso está relacionado con la toxicidad de la superficie ocular, incluida la deficiencia de células madre, la fusión estéril y la re-epitelización retardada, observada en la aplicación de MMC tópica en otras afecciones oculares. Otros agentes utilizados para la prevención de la opacidad corneal son los esferoides tópicos utilizados en las primeras 72 horas post intervención, sin embargo, no se ha observado un efecto anti- fibrogénico. La molécula de quitosana contiene tres tipos de grupos funcionales reactivos; un grupo amino/acetoamino, grupos hidroxilo primarios y secundarios en los carbonos 2,3 y 6. Entre las funciones biológicas de la molécula y sus derivados están el efecto antimicrobiano, hipocolesterolémico, reforzador del sistema inmune, efecto anti-tumoral, anti-inflamatorio, antioxidante, acarreador de medicamentos, acelerador de la absorción de calcio y hierro, entre otros.
La actividad antimicrobiana de la quitosana y sus derivados se considera como una de sus propiedades más importantes. Estudios han demostrado dicho efecto sobre distintos microorganismos como bacterias, levaduras y hongos. Generalmente muestra mayor efecto sobre bacterias gram negativas en concentración de 0.1%. La concentración mínima con efecto antimicrobiano es de 0.05%, dependiendo de la especia bacteriana. La actividad inmuno estimuladora de la quitosana se reportó desde 1984 por Nishimura et al., los cuales mostraron que la quitosana puede estimular a las ratas a producir un ataque no especifico cuando son infectadas con E. colí. Concluyeron que la quitosana es un inmuno regulador que puede activar a macrófagos y a células asesinas naturales y aumentar el efecto citotóxico e Inducir mitosis de células productoras de interleucinas e interferón. Por otro lado, la quitosana ha mostrado mejorar la respuesta humoral mediada por anticuerpos. Se ha estudiado su efecto como adyuvante en la vacuna para inactivación de la influenza. Ratones de la cepa BALB/c fueron inoculados abdominalmente con la vacuna y la quitosana dos veces cada tres semanas. En muestras de suero se midieron los niveles de anticuerpos IgG, IgG 1 y lgG2, así como IgA en secreciones nasales. Una semana después del régimen de inmunización, los ratones fueron retados con el virus de la gripa A/PR/8/34(H1N1). Los resultados indicaron que el uso de quitosana como adyuvante aumenta el contenido de anticuerpos séricos, asi como el efecto antiviral, mejorando la reacción inmune.
El efecto antioxidante de la quitosana se ha estudiado in vitro e in vivo. Los resultados mostraron que quitosana puede disminuir de manera significativa los niveles séricos de ácidos grasos libres y elevar la actividad de la súper óxido dismutasa (SOD), de catalasa (CAT) y de la glutatión peroxidasa (GSH-PX), las enzimas antioxidantes corporales más importantes, indicando que quitosana regula la actividad de enzimas antioxidantes y reduce la peroxidaclón de lipidos. Otra de sus propiedades biológicas es la de quelante; absorbe metales tóxicos como mercurio, cadmio, plomo.
La quitosana ha mostrado alta biocompatibilidad, antimicrobiano y aumentar el tiempo de retención de medicamentos de uso tópico al co-administrarse sobre la superficie ocular. Al administrar 0.5% de quitosana a formulaciones oftálmicas mejora significativamente el tiempo de retención en la superficie precorneal y retrasa su eliminación. Se ha mostrado in vítro que quitosana aumenta la permeabilidad celular favoreciendo el envío de medicamentos. Resultados que sugieren que la apertura de estas uniones estrechas entre células se debe a la unión de las cargas positivas de la molécula de quitosana sobre la membrana celular, activando el intercambiador de cloro-bicarbonato, aumentando la permeabilidad de moléculas arriba de 10 kDa. Estudios in vitro e in vivo han demostrado la función biológica de quitosana de aumentar la difusión pasiva de compuestos a través de membranas biológicas. Además, la molécula de quitosana ha mostrado propiedades viscoelásticas y pseudoplásticas, lo que actualmente la hace candidata a aplicaciones nanotecnológicas en el área oftálmica. El compuesto pirfenidona (PFD), 5-metil-1-fenil-2-(1H)-piridona, inicialmente fue desarrollado como agente antihelmíntico y antipirético. PFD es una molécula de tamaño pequeño con peso molecular de 185.23 Da, su fórmula química es C12H11NO de alta solubilidad en alcohol y cloroformo, a su vez, la molécula es capaz de moverse entre membranas celulares sin la necesidad de un receptor. PFD se ha probado en varios modelos celulares y animales de Inflamación y fibrosis, donde ha mostrado tener efecto anti-inflamatorio, anti-estrés oxidativo y propiedades anti-proliferativas. PFD es conocida por regular citocinas y factores de crecimiento claves en el proceso fibrótico, la cual inhibe varios mediadores inflamatorios, tiene efecto anti oxidante, y restaura la respuesta Inmune.
Con base al análisis de documentos de arte previo, existen invenciones con antecedentes inventivos o que tratan de resolver problemas similares como es el caso de la invención descrita en el documento AU5427080 en la cual se divulga una composición farmacéutica que comprende como único ingrediente activo el compuesto pirfenidona en una cantidad suficiente para prevenir sustancialmente la proliferación de hiperplasia fibrótica en tejido de órganos pulmonares.
Por otro lado, la invención US3839346 donde se describe el método de obtención de la molécula pirfenidona, así como su uso como agente anti- inflamatorio. En el documento se describe que la 5-metil-l-fenil-2 (1 H) piridona tiene una excelente actividad analgésica, una marcada actividad antiinflamatoria y una excelente actividad antipirética en animales de ensayo en comparación con el fármaco analgésico estándar como aminopirina. Además, el compuesto cuando se formuló en forma de dosificación para administración oral o intraperitoneal , mostró una toxicidad notablemente menor en los animales de prueba.
La invención US3974281 describe composiciones analgésicas, antipiréticas, antiinflamatorias que contienen como ingrediente activo el compuesto, 5-metil- 1 -fenil-2- (1 H) -piridona. También se ha encontrado que dichas composiciones causan una disminución significativa de los niveles séricos de ácido úrico y glucosa y que son efectivas en el tratamiento de varias afecciones respiratorias superiores en humanos y otros mamíferos. Las condiciones de la piel como la dermatitis y la hiedra venenosa también se alivian con este agente. Se verificó que las composiciones que contenían 5-metil-1 -fenil-2- (1 H) -piridona no causaron irritación en la administración oral o cuando se aplicaron a tejidos específicos no mostraron irritación significativa u otras secuelas. La invención US4042699 describe composiciones farmacéuticas que contienen como ingrediente activo el compuesto 5-metil- 1 -fenil-2- (1H) -piridona. Se encontró que tales composiciones tienen una propiedad metabólica que causa una disminución significativa de los niveles de glucosa en suero en seres humanos y otros mamíferos. Las composiciones que contenían 5-metil-1-fenil- 2- (1H) -piridona no causaron irritación en la administración oral o cuando se aplicaron a tejidos específicos no mostraron irritación significativa u otras secuelas.
La invención US4052509 describe composiciones farmacéuticas que contienen como ingrediente activo el compuesto 5-metil-1 -fenil-2- (1 H) -piridona. Se encontró que tales composiciones tienen una propiedad metabólica que causa una disminución significativa de los niveles de ácido úrico en suero en seres humanos y otros mamíferos. Las composiciones que contenían 5-metil-1-fenil- 2- (1 H) -piridona no causaron irritación en la administración oral o cuando se aplicaron a tejidos específicos no mostraron irritación significativa u otras secuelas.
Efectos benéficos se han observado en el tratamiento con PFD de enfermedades fibróticas, incluyendo fibrosis renal, hepática y pulmonar, y esclerosis múltiple, condiciones que comparten una deposición anormal de colágena. La invención CN105496957 describe gotas oculares de pirfenidona de liberación sostenida. Cada 150 mi de las gotas oculares de pirfenidona de liberación sostenida contienen 0.75 g de pirfenidona, 1.13 g de cloruro de sodio, 0.30 g de citrato de sodio, 1.5 g de hidroxipropil metil celulosa, 45 mg de etilparabeno y el resto de agua. Según sean las gotas oculares de pirfenidona de liberación sostenida, la concentración de fármacos en las gotas aumenta, el tiempo de mantenimiento de los fármacos en las gotas se prolonga y la retención de los fármacos en las superficies oculares se prolonga. En comparación con las gotas oculares con la misma concentración, las gotas oculares de pirfenidona de liberación sostenida tienen las ventajas de que la concentración de los fármacos en la córnea, el humor acuoso, la conjuntiva y el tejido esclerótico se incrementa en diferentes grados a través de una solución coloidal en los 90 minutos posteriores a la administración del fármaco, y se mejora la biodlsponibilidad ocular de los fármacos. La invención CN102349901 describe una aplicación de pirfenidona en la preparación de medicamentos para controlar enfermedades proliferativas después de una operación oftalmológica y gotas para los ojos de la misma. De acuerdo con la invención, la pirfenidona se prepara en gotas para los ojos; los experimentos muestran que la pirfenidona tiene una buena estabilidad y una buena permeabilidad del tejido ocular, puede inhibir la migración y propagación de las HLEC (human lymphatic endothelial cells: células endoteliales linfáticas humanas) y no tiene citotoxicidad para las HLEC dentro del rango de acción (0- 1mg/ml). Con la pirfenidona dentro del rango de 0 a 1%, las gotas para los ojos se aplican continuamente en los ojos dentro de un mes con seguridad y sin efectos tóxicos ni efectos secundarios obvios. La pirfenidona se puede usar para retrasar la generación de PCO (posterior capsule opacity: opacidad de la cápsula posterior) después de la operación de la córnea corneal de un conejo, reduce la propagación de HLEC y minimiza la protección de PCO de la región óptica. Además, no hay una lesión ocular evidente en la superficie o agravación de la inflamación postoperatoria y una reacción adversa grave después de la aplicación de la PFD en la operación corneal de conejo. Por lo tanto, la pirfenidona se puede utilizar para controlar enfermedades proliferativas después de una operación oftalmológica, especialmente la opacificación de la cápsula posterior generada después de una cirugía de cataratas.
En la fibrosis, el balance positivo para la síntesis de colágena está influenciado por la producción de TGF-b y otros factores de crecimiento, los cuales pueden ser subregulados por PFD. También se ha visto que PFD reduce la formación de tejido queloide en modelos animales. En tejido ocular, PFD previene la proliferación, migración, y contracción de colágena en fibroblastos Tenon humanos in vitro e inhibe la formación de cicatriz postquirúrgica en modelos experimentales de estrabismo y glaucom. PFD exhibe efecto anti-fibrótico significativo en fibroblastos aislados de pacientes con oftalmopatia asociada a tiroides, al tiempo que inhibe la fibrogénesls inducida por TGF-b de las células epiteliales pigmentadas de la retina. También se ha mostrado que reduce la síntesis de colágena inducida por TGF-b y previene la formación de miofibroblastos en un modelo in vitro de fibrosis corneal de rata y en vivo mejora significativamente el proceso de regeneración y previene la fibrosis corneal post quemadura con álcali en un modelo en rata. PFD realiza las acciones antes mencionadas de manera segura y si generar toxicidad.
La invención desarrollada que a continuación se describe es una formulación oftálmica con pirfenidona (5-metil-1 -fenil-2-(1H)-piridona) y qultosana para prevención y tratamiento de enfermedades, en particular la prevención de la opacificación corneal relacionadas a cirugías oftálmicas fotorefractivas con láser excimer, preferentemente como gotas oftálmicas.
OBJETO DE LA INVENCIÓN
El objeto de esta invención es el hacer disponible el uso de pirfenídona en una solución oftálmica para la prevención del desarrollo de opacidad corneal post cirugía oftálmica refractiva con excimer láser y la prevención del desarrollo de fibrosis post quirúrgico, en particular cirugías para el manejo de glaucoma, preferentemente una solución farmacéutica oftálmica en gotas o en forma de gel para su aplicación tópica.
A continuación, se describen los detalles técnicos de la invención desarrollada. BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS
La figura 1 muestra la vía de transformación miofibroblástica mediada por TGF- b1 en HSC, células hepáticas y fibroblastos parenquimatosos.
La figura 2 muestra el mecanismo propuesto sobre la inhibición del fenotipo miofibroblástico por pirfenidona.
La figura 3 muestra la expresión relativa del gen de colágena 1.
La figura 4 muestra la expresión relativa del gen a-SMA. La figura 5 muestra la comparación de la transparencia de corneas en cultivo ex vivo dalladas con NaOH 1 N en presencia de TGF-bI a diferentes concentraciones con seguimiento de 15 dias.
La figura 6 muestra la comparación en la transparencia corneal en modelo de prevención.
La figura 7 muestra la comparación en la transparencia corneal en modelo de reversión. La figura 8 muestra la comparación del porcentaje de transparencia corneal en modelo de prevención.
La figura 9 muestra la comparación del porcentaje de transparencia corneal en modelo de reversión. En la gráfica se aprecia que el tratamiento con PFD prednisolona y Pred es capaz de incrementar la transparencia conreal de forma significativa al ser utilizada por 15 dias en corneas con daño establecido. La figura 10 muestra la comparación del porcentaje de transparencia corneal en modelo de reversión. En la gráfica se observa que tanto pirfenidona como prednisolona son capaces de revertir el daño de la córnea una vez establecido el daño corneal.
DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN
Los detalles característicos de la formulación oftálmica de pirfenidona (5-metil- 1-fenil-2-(1 H)-piridona) y quitosana para la prevención del desarrollo de opacidad corneal post cirugía foto refractiva láser excimer se muestran claramente en la siguiente descripción y en los dibujos ilustrativos que se anexan, sirviendo los mismos signos de referencia para señalar las mismas partes o pruebas realizadas. La formulación objeto de este documento corresponde a un contenido de pirfenidona en la solución oftálmica es de 0.1-1.5%, preferible 1.0%.
Preferentemente, la solución oftálmica contiene pirfenidona 0.1-1.5%, quitosana 0.5-2.0%, 5% de Kolliphor HS 15, ácido bórico 0.6-0.62 %, povidona 0.5%, clorobutanol 0.5%, NaCI 0.5-0.9%, agua inyectable. Preferentemente la solución se esteriliza por filtrado a través de un poro de 0.2 mieras.
Cada 100 mL de la solución oftálmica contiene de 0.1 a 1.50 g de pirfenidona, 0.5 g a 2 g de quitosana, 0.5 g de povidona, 5g de Kolliphor HS 15, 0.6 g a 0.62 g de ácido bórico. 0.5 g a 0.9 g de cloruro de sodio, 0.5 g de clorobutanol y agua inyectable. El pH de la solución oftálmica es de 6.5 a 7. Para la verificación de la formulación antea mencionada «e llevaron a cabo loe siguientes experimentos:
Estudio in vitro: de tejidos remanentes recolectados durante procedimiento quirúrgico de trasplante corneal se obtuvieron los cultivos primarios de queratocitos corneales. A los tejidos obtenidos se les removió el epitelio y endotelio con ayuda de un bisturí, el estroma resultante se cortó en fragmentos de 2mm x 2mm los cuales se dejaron reposar para una mejor adherencia a la superficie de la placa de cultivo por 5 min. Los explantes se mantuvieron en cultivo con medio DMEM (Dulbecco's modification of Eagle médium) suplementado con suero fetal bovino (SFB) al 10% y solución antibiótica/antimicótica (AA) al 1 % a 37‘C, 5% de CO¾ hasta una confluencia del 80-90% con recambio de medio cada tercer dia. Las células de primer pase se sembraron en placas de 6 pozos en una densidad de 1x10e células/pozo, el cultivo se mantuvo en DMEM/10% SFB/1 % AA hasta alcanzar una confluencia del 90%-100%. A los cultivos en confluencia se le hizo el cambio a medio libre de suero. Los grupos de estudio fueron los siguientes:
• Grupo control negativo monocapa de queratocitos (control negativo); · Grupo control de transdiferenciación queratocitos adicionados con TGF- b Ing/mL;
• Grupos de prevención queratocitos con TGF-b 1 ng/mL más pirfenidona al 10 uM, 100 uM y al 1000 uM.
• Todos los grupos se hicieron por triplicado.
En la figura 1 se muestra la vía de transformación miofibroblástica mediada por TGF-bI en HSC, células hepáticas y fibroblastos parenquimatosos, donde TGF: Factor de crecimiento transformante. KLF4: Factor tipo Kruppel 4. MK2: protelna cinasa 2 activadora de la MAP cinasa. miR: micro RNA. La vía de transformación es la siguientes:
Figure imgf000017_0001
Por otro lado, la figura 2 muestra el mecanismo propuesto sobre la inhibición del fenotipo miofibroblástico por Pirfenidona, donde PFD: Pirfenidona, KLF4: Factor tipo Kruppel 4, miR: micro RNA. El mecanismo propuesto es el siguiente:
1. PDF inhibe la activación (fosforilación) de p38 (presumiblemente p38g). lo evita la traslocación de p68,
2. La maduración de miRNA-145 es bloqueada
3. Lo anterior permite la actividad del represor del fenotipo miofibroblástico KLF4. A las 72 horas de cultivo con las distintas condiciones, se extrajo el RNA total de las células en adherencia por medio del método de Trizol y la posterior formación del cDNA para el análisis de expresión génica por la técnica de PCR tiempo real. En la figura 3 se muestra la expresión relativa del gen de colágena 1. Se puede observar la disminución de la expresión del gen de colágena 1 con el uso de dexametasona y pirfenidona a una concentración de 100uM. Los resultados se muestran como la media ± error estándar. PFD: Pirfenidona, TGF-b: Factor de crecimiento transformante beta.
Los genes evaluados fueron colágena tipo I y o-SMA (Actina de músculo liso alfa).
En la figura 4 se muestra la expresión relativa del gen a-SMA. Se puede observar la disminución de la expresión del gen a-SMA con el uso de dexametasona y pirfenidona a una concentración de 100uM, Los resultados se muestran como la media ± error estándar. PFD: Pirfenidona, TGF-b: Factor de crecimiento transformante beta
Estudio ex vivo: Los tejidos corneales se obtuvieron a partir de la enucleación de ojos de conejo sanos de la cepa Nueva Zelanda. Posterior a la enucleación quirúrgica se cortaron las córneas a las cuales se les indujo daño químico con NaOH 1 N. para lo cual discos de papel filtro de 6 mm fueron embebidos en solución de NaOH 1N y colocados en la córnea, los cuales se mantuvieron 30 segundos en contacto con el tejido. Las corneas se mantuvieron en cultivo con DMEM/AA 1%. Por triplicado, se formaron 3 grupos con distintas concentraciones de TGF-bI , las concentraciones probadas fueron de 2ng/mL, 5 ng/mL y 10 ng/mL.
La transparencia del tejido corneal se evaluó a los 2, 6, 9 y 15 días post administración de TGF-p1. La transparencia se evaluó con el siguiente método; las córneas se colocaron sobre un texto impreso en letra tipo arial 8, varios observadores determinaron a través de qué tejidos se vela con mayor o menor claridad el texto que cubrían.
Basados en los resultados, se determinó la dosis de TGF-bI a utilizarse en los experimentos subsecuentes, la cual fue de 5 ng/mL.
La figura 5 muestra la comparación de la transparencia de corneas en cultivo ex vivo dañadas con NaOH 1 N en presencia de TGF-bI a diferentes concentraciones con seguimiento de 15 días. Se observa que la adición de TGF- b1 al medio, incrementa significativamente la opacidad corneal a los 15 días. TGF-b: Factor de crecimiento transformante beta.
Continuando con la estandarización del método de daño, con nuevos tejidos corneales, se evaluó si TGF-bI contribuía en el desarrollo de la opacidad aunado al daño químico, para lo cual se evaluó la transparencia en tejidos control sanos (n=3), tejido expuesto al NaOH 1 N (n=3) y el grupo de tejido expuesto a NaOH 1N y a 5ng/mL de TGF-bI . Los tejidos se mantuvieron en cultivo y la transparencia se evaluó al día 4, 7, 11 y 15.
La figura 6 muestra la comparación en la transparencia corneal en modelo de prevención. Se pueden observar las diferencias en la transparencia de las córneas sin daño, con daño sin TGF-bI , con daño + TGF-bI , asi como las córneas dañadas tratadas con Pirfenidona (PFD) y prednisolona (Pred) como agente terapéutico preventivo en la aparición de haze corneal. Los fármacos se utilizaron desde el día uno y hasta el día 15 posterior al insulto químico. El uso de pirfenidona y prednisolona reducen la opacidad corneal de manera significativa a los 15 dias del daño químico. PFD: Pirfenidona, TGF-b: Factor de crecimiento transformante beta, Pred: prednisolona. La transparencia se evaluó con el método antes descrito y con un luxómetro con una sensibilidad de 0-50000 lux. El porcentaje de transparencia se determinó con las unidades de intensidad de iluminación (lum/m2=Lux). % Transparencia=([(Lux muestra*100)/(lux placa base)] + % de refracción).
La transparencia del control sano fue tomada como el 100%, para fines comparativos. La figura 7 muestra la comparación en la transparencia corneal en modelo de reversión. Tras quince días de daño químico y una vez establecida la fibrosis corneal, se inicia tratamiento con prednisolona (Pred) y pirfenidona (PFD) iniciando tratamiento a partir de los 15 días de establecer el daño. Se puede observar que se incrementa la transparencia corneal en los grupos trataos a diferencia del grupo control con daño químico y sin tratamiento. PFD: Pirfenidona, TGF-0: Factor de crecimiento transformante beta, Pred: prednisolona.
La disminución de transparencia más marcada fue en el grupo al que se le generó el daño con NaOH 1N y 5ng/mL TGF-01 , disminuyendo en un 30% con respecto al grupo de referencia y en un 14% con respecto al grupo con el daño con NaOH 1 N; lo que demuestra el efecto TGF-01 sobre el desarrollo de opacidad corneal en el modelo ex vivo.
Efecto preventivo y terapéutico de pirfenidona sobre el desarrollo de opacidad corneal. El efecto preventivo de la administración de pirfenidona sobre el desarrollo de opacidad post daño tisular se evaluó en el siguiente diseño experimental:
Los grupos por triplicado fueron:
1) grupo control sano,
2) daño con NaOH 1 N,
3) daño con NaOH 1N-5ng/mL TGF-bI ,
4) daño con NaOH 1 N-5ng/mL TGF-bI + 1.5% PFD y
5) daño con NaOH 1N-5ng/mL TGF-bI + 0.5% prednisolona (Pred).
La transparencia corneal se evaluó el día 4 y 15 post intervención.
El grupo de prevención tratado con PFD muestra mayor transparencia que el grupo control de daño, lo que demuestra el efecto profiláctico de PFD sobre el desarrollo de opacidad corneal. El efecto terapéutico o de reversión de la administración de pirfenidona se evaluó sobre tejidos con daño inducido con NaOH 1 N y 5ng/mL de TGF-bI , los tejidos se mantuvieron en cultivo con 5ng/mL de TGF-bI por 15 para el desarrollo de opacidad tisular. Al día 15 se inició con el tratamiento con 1.5% de PFD, comparándose con 0.5% de prednisolona. La transparencia se evaluó y comparó al primer día de iniciado el tratamiento con la transparencia al día 15 de tratamiento.
El grupo terapéutico con PFD mostró un aumento en la transparencia tisular después de los 15 días de tratamiento con respecto al grupo control de daño.
La figura 8 muestra la comparación del porcentaje de transparencia corneal en modelo de prevención. Los datos muestran una diferencia significativa entre el grupo con daño químico y el grupo con daño químico + TGF-bI estableciendo la utilidad de TGF-bI para el establecimiento del modelo. PFD y Pred incrementan de manera significativa la transparencia corneal al ser utilizados desde el día uno del Insulto químico y hasta el día 15 de seguimiento (modelo de prevención). Los datos son mostrados como la media ± desviación estándar. * = p<0.05. PFD: pirfenidona, TGF-b: Factor de crecimiento transformante beta, Pred: prednisolona.
La figura 9 muestra la comparación del porcentaje de transparencia corneal en modelo de reversión. En la gráfica se aprecia que el tratamiento con PFD prednisolona y pred es capaz de incrementar la transparencia corneal de forma significativa al ser utilizada por 15 días en corneas con dallo establecido. Los datos son mostrados como la media ± desviación estándar. * = p<0.05. PFD: pirfenidona, TGF-b: Factor de crecimiento transformante beta, Pred: prednisolona.
La figura 10 muestra la comparación del porcentaje de transparencia corneal en modelo de reversión. En la gráfica se observa que tanto pirfenidona como prednisolona son capaces de revertir el dallo de la córnea una vez establecido el daño corneal. Se anexan los grupos de control. Los datos son mostrados como la media ± desviación estándar. ** = p<0.01. PFD: pirfenidona, TGF-b: Factor de crecimiento transformante beta, Pred: prednisolona.
La descripción anterior de las definiciones dadas a conocer, se proporciona para permitir que cualquier persona experta en la técnica hacer o utilizar la presente invención. Diversas modificaciones a estas definiciones y/o implementaciones serán fácilmente evidentes para los expertos en la técnica, y los principios genéricos aquí definidos pueden aplicarse a otras realizaciones sin apartarse del espíritu o alcance de la invención. Asi, la presente invención no está destinada a limitarse a las realizaciones mostradas en este documento, sino que debe concedérsele el alcance más amplio consistente con las siguientes reivindicaciones y los principios y características novedosas descritas en este documento.

Claims

REIVINDICACIONES Habiendo descrito suficientemente mi invención, considero como una novedad y por lo tanto reclamo como de mi exclusiva propiedad, lo contenido en las siguientes cláusulas:
1. Una formulación oftálmica para la prevención del desarrollo de opacidad corneal post cirugía foto refractiva láser excimer caracterizada por comprender por cada 100 mL:
Figure imgf000024_0001
Preferentemente la solución se esteriliza por filtrado a través de un poro de
0.2 mieras.
2. Una formulación oftálmica para la prevención del desarrollo de opacidad corneal post cirugía foto refractiva láser excimer de acuerdo con la reivindicación 1 , donde dicha formulación se presenta como:
a. Gotas oftálmicas o
b. Gel para su aplicación tópica.
3. Una formulación oftálmica para la prevención del desarrollo de opacidad corneal post cirugía foto refractiva láser excimer de acuerdo con la reivindicación 1 , donde dicha formulación es auxiliar en la prevención de fibrosis post quirúrgica.
4. Una formulación oftálmica para la prevención del desarrollo de opacidad corneal post cirugía foto refractiva láser excimer de acuerdo con la reivindicación 1 , donde dicha formulación es auxiliar en la prevención de fibrosis post quirúrgica en cirugías para el manejo de glaucoma.
PCT/MX2019/000128 2018-12-19 2019-11-22 Formulación oftálmica de pirfenidona para la prevención del desarrollo de opacidad corneal post cirugía fotorefractiva láser excimer WO2020130776A1 (es)

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