WO2020101452A1 - 단백질을 포함하는 안정한 액상 조성물 - Google Patents

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WO2020101452A1
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홍자혜
주경희
이재민
이헌주
김용국
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Definitions

  • It relates to a stabilized liquid formulation of a protein, and a liquid composition of a protein comprising a protein and no buffer and / or histidine, and a method of making the same.
  • Antibody drugs have the advantage of being able to target, so they have fewer side effects than general protein drugs and can show large therapeutic effects in small amounts.
  • antibody pharmaceuticals inevitably require a large molecular weight and a complex structure in order to exert such effects, and these structural properties may lead to physical / chemical instability, which may lead to a problem that the activity of the antibody pharmaceuticals is inhibited. Therefore, there is a need to develop a formulation suitable for antibody pharmaceuticals.
  • instability of the antibody may occur due to various factors such as temperature, pH, buffer, concentration, and excipients.
  • methods such as buffer alteration, pH optimization, and stabilization are used.
  • Denosumab is marketed as two commercial products for the treatment of osteoporosis (Prolia®) and an anti-cancer drug (Xgeva®), and each product has different indications of acceptable indications.
  • Prolia® is a liquid formulation antibody drug consisting of 60 mg / mL denosumab, pH 5.2, 17 mM glacial acetic acid buffer, 4.7% sorbitol, and 0.01% polysorbate20
  • Xgeva® is a liquid formulation antibody drug 70 mg / mL denosumab , pH 5.2, 18 mM glacial acetic acid buffer, 4.6% sorbitol, and 0.01% polysorbate20.
  • the present specification provides a liquid pharmaceutical composition of a stable protein.
  • One example provides a liquid composition of a protein that contains a protein, pH 5-7, and does not contain one or more selected from the group consisting of acetate, succinate, and glutamate, or no buffer.
  • the liquid composition may further include histidine.
  • the liquid composition may further include a surfactant.
  • the liquid composition may be an aqueous liquid composition.
  • the liquid composition in one embodiment, the liquid composition,
  • proteins such as antibodies, such as anti-RANKL antibodies,
  • liquid composition in another embodiment, the liquid composition,
  • proteins such as antibodies, such as anti-RANKL antibodies,
  • liquid composition in another embodiment, the liquid composition,
  • proteins such as antibodies, such as anti-RANKL antibodies,
  • the liquid composition may be one that does not contain glutamate.
  • the liquid composition may further include histidine.
  • liquid composition in another embodiment, the liquid composition,
  • proteins such as antibodies, such as anti-RANKL antibodies,
  • liquid composition may not include histidine.
  • the liquid composition may be an aqueous liquid composition.
  • the liquid composition in addition to the protein, or in addition to the protein and histidine (if containing histidine), sugars, sugar derivatives (such as polyols such as sugar acids, sugar alcohols), amino acids, pharmaceuticals of the amino acids It may be to further include one or more selected from the group consisting of acceptable salts.
  • at least one selected from the group consisting of the sugar, sugar derivative, amino acid, pharmaceutically acceptable salt of the amino acid, etc. acts as a stabilizer and / or tonicity agent It may be.
  • the liquid composition in one example, the liquid composition,
  • the content of the stabilizer in the liquid composition is 1 to 15% based on the total liquid composition ( w / v), 3-15% (w / v), 5-15% (w / v), 7-15% (w / v), 1-10% (w / v), 3-10% ( w / v), 5-10% (w / v), 7-10% (w / v), 1-7% (w / v), 2-7% (w / v), 3-7% ( w / v), 4-7% (w / v), 1-5% (w / v), 2-5% (w / v), 3-5% (w / v), or 4-5% (w / v), 4.5 to 5% (w / v) (eg, about 4.7% (w / v)), or 7.8 to 8.2% (w / v), 4.5 to 5% (w / v) (eg, about 4.7% (w / v)), or 7.8 to 8.2% (w / v),
  • the content of the stabilizer in the liquid composition is 1 to 10% (w / v), 2.5 based on the total liquid composition.
  • the content of the stabilizer in the liquid composition is 0.1 to 300 mM, 0.5 to 300 mM, 1 to 300 mM, 5 to 300 mM, 10 to 300 mM, 30 to 300 mM, 50 to 50 300mM, 80-300mM, 100-300mM, 120-300mM, 0.1-250mM, 0.5-250mM, 1-250mM, 5-250mM, 10-250mM, 30-250mM, 50-250mM, 80-250mM, 100-250mM, 120 to 250 mM, 0.1 to 200 mM, 0.5 to 200 mM, 1 to 200 mM, 5 to 200 mM, 10
  • the liquid composition may further include a surfactant.
  • the surfactant is 0.001 to 1% (w / v), 0.001 to 0.5% (w / v), and 0.001 to 0.1% (w / v) based on the total liquid composition. , 0.001 to 0.05% (w / v), 0.005 to 1% (w / v), 0.005 to 0.5% (w / v), 0.005 to 0.1% (w / v), 0.005 to 0.05% (w / v) , Or 0.008 to 0.02% (w / v).
  • the surfactant may be one that includes at least one selected from all surfactants commonly used in protein formulations, such as nonionic surfactants.
  • Another example provides a pharmaceutical composition comprising the liquid composition.
  • the pharmaceutical composition has a pharmacological activity corresponding to the activity of the protein contained in the liquid composition.
  • the protein in the liquid composition or pharmaceutical composition, may have a molecular weight of 10 to 500 kDa, 10 to 400 kDa, 10 to 300 kDa, 10 to 200 kDa, or 10 to 150 kDa.
  • the protein can be a receptor activator of nuclear factor kappa-B ligand (RANKL) antagonist (e.g., an anti-RANKL antibody), e.g., Denosumab (molecular weight about 147 kDa; e.g. PROLIA®, XGEVA®, etc.), but is not limited thereto.
  • the protein is a RANKL antagonist (eg, anti-RANKL antibody), such as denosumab
  • the pharmaceutical composition may be applied to the treatment of osteoporosis and / or cancer / cancer metastasis.
  • Another example provides a method for stabilizing a protein or a method for preparing a stabilized liquid composition of a protein, comprising mixing the protein with the above-described composition.
  • One example provides a liquid composition of a protein that contains a protein, pH 5-7, and does not contain one or more selected from the group consisting of acetate, succinate, and glutamate, or no buffer.
  • the liquid composition may further include histidine.
  • the liquid composition may further include a surfactant.
  • the liquid composition may be an aqueous liquid composition.
  • the liquid composition in one embodiment, the liquid composition,
  • proteins such as antibodies, such as anti-RANKL antibodies,
  • liquid composition in another embodiment, the liquid composition,
  • proteins such as antibodies, such as anti-RANKL antibodies,
  • liquid composition in another embodiment, the liquid composition,
  • proteins such as antibodies, such as anti-RANKL antibodies,
  • the liquid composition may be one that does not contain glutamate.
  • the liquid composition may further include histidine.
  • liquid composition in another embodiment, the liquid composition,
  • proteins such as antibodies, such as anti-RANKL antibodies,
  • liquid composition may not include histidine.
  • the liquid composition may be an aqueous liquid composition.
  • the liquid composition pH 4 to 8, for example, pH 4.5 to 7, pH 4.8 to 7, pH 5 to 7, pH 5.2 to 7, pH 4.5 to 6.8, pH 4.8 to 6.8, pH 5 to 6.8, pH 5.2 to 6.8, pH 4.5 to 6.5, pH 4.8 to 6.5, pH 5 to 6.5, pH 5.2 to 6.5, pH 4.5 to 6.3, pH 4.8 to 6.3, pH 5 to 6.3, pH 5.2 to 6.3, pH 4.5 to 6, pH 4.8 to 6, pH 5-6, pH 5.2-6, pH 4.5-5.8, pH 4.8-5.8, pH 5-5.8, pH 5.2-5.8, pH 4.5-5.6, pH 4.8-5.6, pH 5-5.6, pH 5.2- 5.6, pH 4.9 to 5.5, pH 4.9, pH 5.0, pH 5.1, pH 5.2, pH 5.3, pH 5.4, or pH 5.5.
  • Liquid compositions of the proteins provided herein do not contain acetate, succinate, or both, in addition to glutamate, and / or contain histidine, an important factor affecting protein stability
  • One of the pH can be maintained within the appropriate range as described above, and the protein in the composition has excellent stability (e.g., protein aggregate content (% HMW) of protein,% charge variant (e.g., acidic variant content (% Acidic)) Etc.) has an advantage).
  • a liquid composition of a protein provided herein 'does not contain component A' means that the composition does not contain component A (the component A is not present in the composition) or substantially It may mean that it does not include (the component A is substantially not present in the composition), in this case, 'component A substantially does not contain or component A is substantially not present' means Functionality as a buffer if it does not contain component A at all (or component A is completely absent), or the intended pharmaceutical function in the liquid composition of the protein (e.g., if component A is acetate, succinate, and / or glutamate) ).
  • 'does not contain component A' may mean that component A is not detected in a conventional manner.
  • the protein is a protein drug, such as a protein having a molecular weight of 10 to 500 kDa, 10 to 400 kDa, 10 to 300 kDa, 10 to 200 kDa, or 10 to 150 kDa, such as an antibody. Can be.
  • Antibodies include all kinds of antibodies in which two heavy chains are linked to each other by disulfide bonds, and each heavy chain is linked to a light chain by disulfide bonds, either natural or recombinant / chemically synthesized It may be a non-naturally obtained antibody.
  • the term antibody is any protein comprising at least a portion of a conventional antibody and / or any antigen-binding fragment or single chain thereof, an immunoglobulin molecule having a biological activity that binds an antigen, without limitation. And / or peptide containing molecules.
  • an antibody is a single domain antibody and fragments thereof, e.g., the heavy chain of a single domain antibody, or the complementarity determining region (CDR) of a light chain or a ligand binding portion thereof, heavy or light chain variable region, heavy or light chain constant region, framework ( FR) region, and / or any portion thereof, and / or at least a portion of a binding protein.
  • the antibody can also be a monoclonal (monoclonal) antibody.
  • the antibody can be an animal-derived antibody, chimeric, humanized antibody, or human antibody.
  • the antibody can include a monospecific, bispecific, or multispecific antibody.
  • the protein can be a receptor activator of nuclear factor kappa-B ligand (RANKL) antagonist (e.g., an anti-RANKL antibody), e.g., Denosumab (molecular weight about 147 kDa; e.g., PROLIA ®, XGEVA®, etc.), but is not limited thereto.
  • RANKL nuclear factor kappa-B ligand
  • the pharmaceutical composition may be applied to the treatment of osteoporosis and / or cancer.
  • the protein contained in the liquid composition may be naturally occurring or non-naturally occurring, for example, recombinantly or synthetically produced.
  • the protein content in the liquid composition is 5 mg / ml to 300 mg / ml, 5 mg / ml to 250 mg / ml, 5 mg / ml to 200 mg / ml, 5 mg / ml to 150 mg / ml, 5 mg / ml to 125 mg / ml, 5 mg / ml to 100 mg / ml, 5 mg / ml to 90 mg / ml, 5 mg / ml to 80 mg / ml, 5 mg / ml to 70 mg / ml, 5 mg / ml to 60 mg / ml, 10 mg / ml to 300 mg / ml, 10 mg / ml to 250 mg / ml, 10 mg / ml to 200 mg / ml, 10 mg / ml to 150 mg / ml, 10 mg / ml to 125 mg / ml, 10 mg /
  • the liquid composition provided herein may be one that does not contain a buffer.
  • the buffer not included in the liquid composition may be one or more selected from buffers having a commonly used buffering capacity, for example, the components of the liquid composition Buffers excluded from (1) one or more acids selected from the group consisting of phosphoric acid, acetic acid, citric acid, succinic acid, carbonic acid, etc., their ionic form (e.g., phosphate, acetate, citrate, succinate, carbonate Etc); (2) one or more amino acids selected from the group consisting of pharmaceutically acceptable salts of the above acids (e.g., sodium salt, potassium salt, etc.), (3) glutamic acid, aspartic acid, etc., and their ionized forms (e.g. glutamate, Aspartate, etc.) and (4) pharmaceutically acceptable salts of the amino acids (eg, hydrochloride, etc.).
  • the acids of (1) and / or the amino acids of (3) and their ionized forms may have equivalent meanings to each other or may be used interchangeably, unless otherwise specified.
  • the liquid composition comprises phosphoric acid, acetic acid (e.g. glacial acetic acid), citric acid, succinic acid, carbonic acid, and ionized forms of the acid (phosphoric acid, acetic acid, citric acid, succinic acid, carbonic acid) (e.g.
  • amino acids phosphoric acid, acetic acid, citric acid, succinic acid, carbonic acid
  • pharmaceutically acceptable salts of the acids phosphoric acid, acetic acid, citric acid, succinic acid, carbonic acid
  • Aspartic acid, glutamic acid, ionized forms of the amino acids aspartic acid, glutamic acid
  • pharmaceutically acceptable salts of the amino acids aspartic acid, glutamic acid
  • the amino acids not included in the liquid composition may be free amino acids, not amino acids present in proteins.
  • the liquid composition may be one that does not contain acetic acid and / or acetate.
  • the liquid composition may be one that does not contain succinic acid and / or succinate.
  • the liquid composition may be one that does not include acetic acid, acetate, succinic acid, and succinate.
  • the liquid composition may be one that does not contain glutamic acid and / or glutamate.
  • the liquid composition may be one that does not contain acetic acid, acetate, glutamic acid, and glutamate.
  • the liquid composition may be one that does not contain succinic acid, succinate, glutamic acid, and glutamate.
  • the liquid composition may be one that does not contain acetic acid, acetate, succinic acid, succinate, glutamic acid, and glutamate.
  • the liquid composition may not include acetic acid, acetate, succinic acid, succinate, glutamic acid, glutamate, phosphoric acid, phosphate, citric acid, citrate carbonate, carbonate, aspartic acid, and aspartate.
  • the liquid composition provided herein may include histidine.
  • histidine may serve as a buffer.
  • histidine may also serve as a stabilizer for proteins, and for example, has a function of inhibiting the acidic deformation of a protein (inhibiting the production of acidic variants) or acting as an inhibitor of acidic modification of proteins. It may be.
  • histidine may act to inhibit the acidic modification of the protein (inhibit the generation of acidic variants, decrease the% Acidic increase rate).
  • histidine may also have an effect of inhibiting protein aggregation (eg, inhibiting protein aggregate (HMW) production and decreasing% HMW increase).
  • the liquid composition may include histidine as a buffer, and / or an acidic modification inhibitor and / or a protein aggregation inhibitor.
  • the histidine contained in the liquid composition may be in the form of free amino acids (ie, not included in the protein contained in the liquid composition).
  • the content of histidine in the liquid composition is 1 to 100 mM, 1 to 70 mM, 1 to 50 mM, 1 to 40 mM, 1 to 30 mM, 1 to 25 mM, 1 to 22 mM, 1 to 20 mM, 5 To 100 mM, 5 to 70 mM, 5 to 50 mM, 5 to 40 mM, 5 to 30 mM, 5 to 25 mM, 5 to 22 mM, 5 to 20 mM, 10 to 100 mM, 10 to 70 mM, 10 to 50 mM, 10 to 40 mM, 10 to 30 mM , 10 to 25 mM, 10 to 22 mM, 10 to 20 mM, 14 to 100 mM, 14 to 70 mM, 14 to 50 mM, 14 to 40 mM, 14 to 30 mM, 14 to 25 mM, 14 to 22 mM, 14 to 20 mM, 16 to 100 mM, 16 To 70
  • the liquid composition may include one or more selected from the group consisting of sugars, sugar derivatives, and amino acids.
  • the sugar, sugar derivative, one or more selected from the group consisting of amino acids, etc. may be to act as a protein stabilizer and / or tonicity agent (tonicity agent) in the liquid composition, but is not limited thereto.
  • the amino acid that can be included as the stabilizer and / or isotonic agent may be at least one selected from amino acids other than histidine (ie, it may not contain histidine).
  • sugars and sugar derivatives sucgar acid, polyols such as sugar alcohols, etc.
  • the sugar may be at least one selected from the group consisting of monosaccharides, disaccharides, oligosaccharides, and polysaccharides, but is not limited thereto.
  • the monosaccharide may be one or more selected from the group consisting of glucose, fructose, galactose, and mannose, but is not limited thereto.
  • the disaccharide may be one or more selected from the group consisting of sucrose, lactose, maltose, and trehalose, but is not limited thereto.
  • the oligosaccharide may be one or more selected from the group consisting of fructo-oligosaccharide, galacto-oligosaccharide, and mannan-oligosaccharide, but is not limited thereto.
  • the polysaccharide may be one or more selected from the group consisting of starch, glycogen, cellulose, chitin, and pectin, but is not limited thereto.
  • the sugar acid is one type selected from the group consisting of aldonic acid (such as glyceric acid), ulonic acid (such as neuraminic acid), uronic acid (such as glucuronic acid), and aldaric acid (such as tartaric acid). It may be the above, but is not limited thereto.
  • the sugar alcohol is glycerol, erythritol, thritol, arabitol, xylitol, ribitol, mannitol, sorbitol, galactitol, fusitol, iditol, inositol, bolitol, isomalt, maltitol, lactitol, maltotriitol, It may be one or more selected from the group consisting of maltotetraitol, polyglycitol, and the like, but is not limited thereto.
  • the liquid composition is one or more sugars or sugar alcohols selected from the group consisting of trehalose, sucrose, mannose, sorbitol, maltose, mannitol, etc. (eg, a group consisting of sorbitol, sucrose, trehalose, etc.) It may be to include one or more selected from).
  • the liquid composition in one embodiment, the liquid composition,
  • the content of the stabilizer in the liquid composition is 1 to 15% based on the total liquid composition ( w / v), 3-15% (w / v), 5-15% (w / v), 7-15% (w / v), 1-10% (w / v), 3-10% ( w / v), 5-10% (w / v), 7-10% (w / v), 1-7% (w / v), 2-7% (w / v), 3-7% ( w / v), 4-7% (w / v), 1-5% (w / v), 2-5% (w / v), 3-5% (w / v), 4-5% ( w / v), 4.5 to 5% (w / v) (eg, about 4.7% (w / v)) or 7.8 to 8.2% (w / v/ v), 4.5 to 5% (w / v) (eg, about 4.7% (w / v)) or 7.8 to 8.2% (w /
  • the content of the stabilizer in the liquid composition is 1 to 10% (w / v), 2.5 based on the total liquid composition.
  • the liquid composition based on the total liquid composition,
  • liquid composition based on the total liquid composition
  • the amino acids described herein may mean one or more selected from the amino acid, its ionized form, and a pharmaceutically acceptable salt.
  • the amino acid may be L-type, D-type, or a mixture thereof, for example, L-type, but is not limited thereto.
  • the amino acid included as the stabilizer and / or isotonic agent may be at least one selected from amino acids other than histidine and pharmaceutically acceptable salts thereof.
  • the amino acids are alanine (Ala), arginine (Arg), asparagine (Asn), aspartic acid (Asp), glutamine (Gln), glutamic acid (Glu), glycine (Gly), isoleucine (Ile), leucine (Leu) ), Lysine (Lys), Methionine (Met), Phenylalanine (Phe), Proline (Pro), Serine (Ser), Threonine (Thr), Tryptophan (Trp), Tyrosine (Tyr), Valine (Val), Cysteine (Cys) ), And a pharmaceutically acceptable salt of the amino acid (eg, hydrochloride, acetyl amino acid salt, etc.).
  • the amino acid may be a free amino acid other than the amino acid contained in the protein included in the liquid formulation provided herein
  • the amino acid is Arginine (Arg), lysine (Lys), proline (Pro), glycine (Gly), alanine (Ala), methionine (Met), serine (Ser), and the pharmaceutically acceptable amino acid It may include one or more amino acids selected from the group consisting of possible salts (eg, hydrochloride, acetyl amino acid salts, etc.).
  • the liquid composition comprises one or more amino acids (except histidine; e.g., arginine (Arg), lysine (Lys), proline (Pro), glycine (Gly), alanine (Ala), methionine (Met), serine ( Ser), and one or more selected from the group consisting of a pharmaceutically acceptable salt of the amino acid), wherein the content of the amino acid in the liquid composition is 0.1 to 300mM, 0.5 to 300mM, 1 to 300mM , 5 to 300 mM, 10 to 300 mM, 30 to 300 mM, 50 to 300 mM, 80 to 300 mM, 100 to 300 mM, 120 to 300 mM, 0.1 to 250 mM, 0.5 to 250 mM, 1 to 250 mM, 5 to 250 mM, 10 to 250 mM, 30 To 250 mM, 50 to 250 mM, 80 to 250 mM, 100 to 250 mM, 120 to 250 mM, 0.1 to 200
  • the liquid composition in one embodiment, the liquid composition,
  • arginine Arg
  • lysine Lys
  • proline Pro
  • Gly Gly
  • alanine Al
  • Methionine Metal
  • serine Ser
  • amino acids selected from the group consisting of pharmaceutically acceptable salts of the amino acids.
  • liquid composition More specifically, the liquid composition,
  • the liquid composition may be one that does not contain sodium chloride.
  • the sodium chloride may be a sleeping function as a stabilizer and / or isotonic agent.
  • the liquid composition may further include sodium chloride in addition to the sugars, sugar derivatives and / or amino acids described above.
  • the liquid composition may not include only sodium chloride as a component having a function as a stabilizer and / or isotonic agent. That is, when the liquid composition contains sodium chloride, the sugar, sugar derivatives (sugar acid, polyols such as sugar alcohols, etc.) described above, selected from the group consisting of amino acids and their pharmaceutically acceptable salts, etc. 1 In addition to the species, it may further include sodium chloride.
  • the liquid composition may not include polyethylene glycol (eg, PEG3350, etc.), cyclodextrin derivative (eg, Sulfobutylether- ⁇ -Cyclodextrin, etc.) as a stabilizer.
  • polyethylene glycol eg, PEG3350, etc.
  • cyclodextrin derivative eg, Sulfobutylether- ⁇ -Cyclodextrin, etc.
  • the liquid composition may further include a surfactant.
  • the surfactant is 0.001 to 1% (w / v), 0.001 to 0.5% (w / v), and 0.001 to 0.1% (w / v) based on the total liquid composition. , 0.001 to 0.05% (w / v), 0.005 to 1% (w / v), 0.005 to 0.5% (w / v), 0.005 to 0.1% (w / v), 0.005 to 0.05% (w / v) , Or 0.008 to 0.02% (w / v).
  • the surfactant may be selected from all pharmaceutically acceptable surfactants capable of uniformly dispersing the protein in the liquid composition medium.
  • the surfactant may be a nonionic surfactant, for example, polysorbates (e.g., polysorbate 20 (polyoxyethylene (20) sorbitan monolaurate), polysorbate 40 (polyoxyethylene (20)) Sorbitan monopalmitate), polysorbate 60 (polyoxyethylene (20) sorbitan monostearate), polysorbate 80 (polyoxyethylene (20) sorbitan monooleate); figures after the polyoxyethylene (20) represents the total number of oxyethylene groups (-(CH2CH2O)-)), poloxamer (PEO-PPO-PEO copolymer; PEO: poly (ethylene oxide), PPO: poly (propylene oxide)), Polyethylene-polypropylene glycol, polyoxyethylene compound (eg, polyoxyethylene-stearate, polyoxyethylene alkyl ether (alkyl: C1-C30), polyoxy
  • the liquid composition comprises proteins, sugars, sugar derivatives and / or amino acids, histidine (if included), and surfactants (if included), and the remaining amount of aqueous medium (e.g., water (purified water), physiology) Saline, water for injection, etc.).
  • aqueous medium e.g., water (purified water), physiology) Saline, water for injection, etc.
  • the liquid composition provided in the present specification may be isotonic with a living body.
  • the liquid composition has an osmotic pressure of about 200 mOsm / kg to about 450 mOsm / kg, about 200 mOsm / kg to about 400 mOsm / kg, about 200 mOsm / kg to about 350 mOsm / kg, about 200 mOsm / kg to About 330 mOsm / kg, about 250 mOsm / kg to about 450 mOsm / kg, about 250 mOsm / kg to about 400 mOsm / kg, about 250 mOsm / kg to about 350 mOsm / kg, about 250 mOsm / kg to about 330 mOsm / kg, about 270 mOsm / kg to about 450 mOsm / kg, about 270 mOsm / kg to about 400 m
  • Liquid compositions provided herein have an electrical conductivity of at least about 0 mS / cm (or greater), at least about 0.0001 mS / cm, or at least about 0.001 mS / cm, such as from about 0 mS / cm to about 10 mS / cm , About 0 mS / cm to about 7 mS / cm, 0 mS / cm to about 5 mS / cm, about 0 mS / cm to about 2.5 mS / cm, about 0 mS / cm to about 1 mS / cm, about 0 mS / cm to about 0.5 mS / cm, about 0 mS / cm to about 0.1 mS / cm, about 0 mS / cm to about 0.05 mS / cm, more than about 0 mS / cm and about 10 mS / cm or less, about 0 mS More than / cm about 7 mS
  • the liquid composition provided herein may be stably maintained at a high temperature of about 40 ° C for at least 4 weeks.
  • excellent stability or “keep stable” may mean that the structure, and / or physical, chemical, and / or biological properties of the protein in the composition is maintained during storage (eg, during storage).
  • Various analytical techniques for measuring protein stability are well known in the art.
  • Liquid compositions that do not include the buffer provided herein or that include histidine include a low protein aggregate content (aggregation rate) when compared to the case of including a buffer other than histidine, e.g., containing acetate or succinate. ) And / or having a low acidic strain content (acidic strain).
  • the liquid composition provided herein has a protein (antibody) content of 60 mg / ml, 70 mg / ml, or 80 mg / ml, for one week or more at 40 ° C. by conventional size exclusion chromatography (SEC),
  • SEC size exclusion chromatography
  • changes in protein aggregate content or aggregation rate (High Molecular Weight% (w / v);% HMW) measured during storage for 1 week, 2 weeks, 3 weeks, or 4 weeks ( ⁇ % HMW; storage 4 Parking% HMW-Week 0 (% HMW at the start of storage) is about 5% or less, such as about 4.5% or less, about 4% or less, about 3.5% or less, about 3% or less, about 2.5% Or less, about 2% or less, about 1.5% or less, about 1% or less, about 0.9% or less, about 0.8% or less, about 0.7% or less, about 0.65% or less, about 0.6% or less, about 0.55% or less, about 0.5%
  • the liquid composition provided herein has a protein (antibody) content of 60 mg / ml, 70 mg / ml, or 80 mg / ml, at 40 ° C. by conventional size exclusion chromatography (SEC).
  • Change in protein aggregate content or aggregation rate (High Molecular Weight% (w / v);% HMW) measured during storage for 1 week or longer, for example 1 week, 2 weeks, 3 weeks, or 4 weeks ( ⁇ % HMW;% HMW at Week 4 of storage-Week 0 (% HMW at initial storage) contains, as buffer, one or more selected from acetate, succinate, and glutamate and / or does not contain histidine
  • a liquid composition having the same composition except for about 0.01% or more, about 0.5% or more, about 0.1% or more, about 0.15% or more, about 0.2% or more, about 0.25% or more, about 0.3% or more, about 0.35% Or more, about 0.4% or more, about 0.45% or more, about 0.5% or more,
  • the liquid composition provided herein has a protein (antibody) content of 60 mg / ml, 70 mg / ml, or 80 mg / ml, at 40 ° C. by conventional CEX (cation exchange chromatography). Change in protein acidic variant content (% Acidic) measured during storage for more than a week, e.g.
  • 1 week, 2 weeks, 3 weeks, or 4 weeks ( ⁇ % Acidic;% Acidic-0 weeks of storage 4 weeks (storage % Acidic) at start-up is about 30.0% or less, about 28.0% or less, about 25.0% or less, about 23% or less, about 20% or less, about 18% or less, about 15% or less, about 13% Or less, about 10% or less, about 9% or less, about 8% or less, about 7.5% or less, about 7.2% or less, about 7% or less, about 6.9% or less, about 6.8% or less, about 6.7% or less, about 6.6% Or less, about 6.5% or less, about 6.4% or less, about 6.3% or less, about 6.2% or less, about 6.1% or less, about 6.0% or less, about 5.9% or less, about 5.8% or less, about 5.7% or less, about 5.6% Or less, about 5.5% or less, about 5.4% or less, about 5.3% or less, about 5.2% or less, about 5.1% or less, or about 5.0% or less, but is not limited thereto.
  • the liquid composition provided herein when the protein (antibody) content is 60 mg / ml, 70 mg / ml, or 80 mg / ml, at 40 ° C. by conventional CEX (cation exchange chromatography) Change in protein acidic variant content (% Acidic) measured during storage for more than 1 week, e.g. 1 week, 2 weeks, 3 weeks, or 4 weeks ( ⁇ % Acidic;% Acidic-0 weeks at week 4 of storage ( % Acidic at the start of storage (compared to a liquid composition having the same composition) except that it contains one or more selected from acetate, succinate, and glutamate as buffers and / or does not contain histidine.
  • % Acidic Change in protein acidic variant content measured during storage for more than 1 week, e.g. 1 week, 2 weeks, 3 weeks, or 4 weeks
  • ⁇ % Acidic;% Acidic-0 weeks at week 4 of storage % Acidic at the start of storage (compared to a liquid composition having the same composition) except that it contains one or
  • Another example provides a pharmaceutical composition comprising the liquid composition.
  • the liquid composition comprises, for example, an anti-RANKL antibody as a protein
  • the pharmaceutical composition has a prophylactic or therapeutic effect against Osteoporosis, cancer or metastasis of cancer (e.g., bone metastasis of cancer) It may be to have.
  • an example provides a pharmaceutical composition for preventing or treating osteoporosis, cancer, or cancer metastasis (eg, bone metastasis of cancer) comprising the liquid composition.
  • the liquid composition or pharmaceutical composition may be for administration to a mammal such as a human.
  • the liquid composition or pharmaceutical composition may be administered by oral or parenteral routes.
  • parenteral administration e.g., injection
  • intravenous administration subcutaneous administration, intramuscular administration, intraperitoneal administration, endothelial administration, topical administration, intranasal administration, intrapulmonary administration, rectal administration, intratumoral administration, etc.
  • parenteral administration e.g., injection
  • intravenous administration subcutaneous administration
  • intramuscular administration intraperitoneal administration
  • endothelial administration e.g., topical administration
  • intranasal administration intrapulmonary administration
  • rectal administration intratumoral administration, etc.
  • intratumoral administration etc.
  • the composition when the liquid composition or pharmaceutical composition comprises an anti-RANKL antibody, the composition may be administered by intravenous administration or subcutaneous administration.
  • liquid composition or pharmaceutical composition may be formulated to be suitable for the administration route described above.
  • the liquid composition or pharmaceutical composition may include a pharmaceutically acceptable carrier.
  • pharmaceutically acceptable carrier can mean one or more selected from non-toxic solid, semi-solid or liquid fillers, diluents, encapsulating materials, formulation aids, and any conventional types of excipients.
  • Another example provides a method for stabilizing a protein or a method for preparing a stabilized liquid composition comprising mixing the components described above.
  • proteins and sugars, sugar derivatives and / or amino acids (1) proteins and sugars, sugar derivatives and / or amino acids; or
  • a method for stabilizing a protein or a method for preparing a stabilized aqueous liquid composition comprising the step of mixing.
  • the method (1) is characterized in that the step of mixing one or more selected from the group consisting of acetate, succinate, and glutamate or a buffer is not performed.
  • the method (1) or (2) may further include mixing the surfactant.
  • protein drug formulations such as antibodies
  • protein drug formulations with improved stability of protein drugs can be obtained by optimizing buffer type and concentration, stabilizer type and concentration, pH, and the like.
  • 1A and 1C are graphs showing the average ⁇ % HMW for 4 weeks at 40 ° C of the protein liquid formulation measured in Example 1.2, the left is the average ⁇ % HMW for each buffer type, and the right is the average ⁇ % HMW for each stabilizer type Respectively, and the dotted line in FIG. 1C represents the average ⁇ % HMW (0.69%) of the PROLIA® formulation.
  • Figure 1b is a graph showing the average ⁇ % Acidic for 4 weeks at 40 °C conditions of the protein liquid formulation measured in Example 1.2, the left is the average ⁇ % Acidic by buffer type, the right is the average ⁇ % Acidic by type of stabilizer, respectively Shows.
  • Figure 2a is a graph showing the average ⁇ % HMW for 4 weeks at 40 °C conditions of the protein liquid formulation measured in Example 2.2, the left is the average ⁇ % HMW by protein drug concentration, the center is the average ⁇ % HMW by buffer type, The right shows the average ⁇ % HMW for each stabilizer type.
  • Figure 2b is a graph showing the average ⁇ % Acidic for 4 weeks at 40 °C conditions of the protein liquid formulation measured in Example 2.2, the left is the average ⁇ % Acidic by protein drug concentration, the center is the average ⁇ % Acidic by buffer type, The right shows the average ⁇ % Acidic for each stabilizer type.
  • Example 3 is a graph showing the average ⁇ % HMW according to the protein concentration, buffer concentration, stabilizer concentration, and pH measured for 4 weeks at 40 ° C. of the protein liquid formulation measured in Example 3.
  • Protein protein drug 60mg / mL, 0.01% polysorbate 20 (PS20), buffer and stabilizer To prepare a liquid formulation of pH 5.2 containing the following composition:
  • the liquid formulation was stored for 4 weeks at 40 ° C.
  • the protein aggregate content (% HMW) and acidic variant content (% Acidic) were measured by SEC (size-exclusion chromatography) and CEX (cation exchange chromatography), respectively. Specifically,% HMW was measured by SEC (size-exclusion chromatography) analysis, and% Acidic was measured by CEX (cation exchange chromatography) analysis.
  • SEC size-exclusion chromatography
  • CEX cation exchange chromatography
  • FIGS. 1a and 1c the average ⁇ % HMW for 4 weeks is shown in FIGS. 1a and 1c ( ⁇ % HMW; left: average ⁇ % HMW by buffer type, right: average ⁇ % HMW by stabilizer type, dotted line of 1c: average ⁇ % of the PROLIA® formulation In HMW (0.69%)
  • FIG. 1B the average ⁇ % Acidic for 4 weeks is shown in FIG. 1B ( ⁇ % Acidic; left: average ⁇ % Acidic by buffer type, right: average ⁇ % Acidic by stabilizer type), respectively.
  • FIGS. 1A and 1B under the condition of denosumab 60 mg / mL and pH 5.2, formulations 13-17 containing histidine as buffer and formulations 18 without buffer Low ⁇ % HMW and / or low ⁇ % Acidic as compared to formulations 1-12 containing acetic acid or succinate as a 22-valent buffer, and comprising sorbitol, sucrose, trehalose, or Arg as stabilizer
  • Formulations more specifically formulations comprising sorbitol, sucrose, or trehalose, particularly formulations containing sorbitol, showed relatively low ⁇ % HMW and / or low ⁇ % Acidic.
  • Average of STD Buffer (No. 1 ⁇ 17: 17mM) Average% HMW Average% Acidic 0 wk 4 wk 0 wk 4 wk % HMW ⁇ % HMW % Acidic ⁇ % Acidic 1-7 Acetic acid 0.43 1.31 0.88 17.77 24.70 6.93 8-12 Succinate 0.43 1.60 1.18 17.91 27.78 9.87 13-17 Histidine 0.38 1.12 0.74 17.84 24.03 6.18 18-22 Buffer free 0.49 1.21 0.73 18.19 24.51 6.33
  • a pH 5.2 liquid formulation was prepared comprising a buffer (acetate or histidine) and a stabilizer (sorbitol, sucrose, or trehalose) in the composition in Table 4 below:
  • Example 2.2 To test the stability of a liquid formulation (pH 5.2) comprising various concentrations of protein drug (denosumab) prepared in Example 2.1 and various combinations of buffer / stabilizer, referring to Example 2.2, the liquid formulation was stored at 40 ° C. for 4 weeks to measure the degree of aggregation of proteins in the formulation and the content of charge variants, respectively.
  • the average ⁇ % HMW for 4 weeks is shown in FIG. 2A ( ⁇ % HMW; left: average ⁇ % HMW by protein drug concentration, middle: average ⁇ % HMW by buffer type, right: average ⁇ % HMW by stabilizer type),
  • the average ⁇ % Acidic for 4 weeks is shown in FIG. 2B ( ⁇ % Acidic; left: average ⁇ % Acidic by protein drug concentration, middle: average ⁇ % Acidic by buffer type, right: average ⁇ % Acidic by stabilizer type), respectively. .
  • the formulation containing histidine as a buffer has superior stability of the protein drug compared to the formulation containing acetic acid, and in particular, the protein drug (denosu Mab) It was found that the concentration of 60 mg / mL, the stability of the protein drug of the formulation containing histidine as a buffer and sorbitol as a stabilizer was the best.
  • the average ⁇ % HMW and ⁇ % Acidic of the formulations containing histidine as a buffer are all protein drug concentrations tested, especially 60 mg / mL or 70 mg / mL In, it appeared lower than the acetic acid containing formulation. More specifically, the average ⁇ % HMW of the formulation containing histidine as a buffer was about 0.33%, while the average ⁇ % HMW of the formulation containing acetic acid was 0.59%, and the average ⁇ % Acidic of the formulation containing histidine as a buffer was While it was about 5.35%, the average ⁇ % of the acetic acid-containing formulation was 5.97%.
  • Liquid formulation comprising the anti-RANKL human monoclonal antibody Denosumab as a protein drug, histidine as a buffer, sorbitol as a stabilizer, and 0.01% polysorbate 20 (PS20) in the composition of Table 7 below.
  • ⁇ % HMW and ⁇ % Acidic were measured for 4 weeks with reference to Example 1.2 while storing the prepared liquid formulation at 40 ° C. for 4 weeks.
  • the average ⁇ % HMW for 4 weeks according to the protein concentration, buffer concentration, stabilizer concentration, and pH shown in Tables 8 and 9 is shown in FIG. 3.
  • The% RP (Relative Potency) was measured by the following method: After loading and incubating RANK 293 cells (HEK 293 cells expressing luciferase and RANK receptor) in 96-well plates sequentially loaded with Denosumab and RANKL, EnVision® % RP was analyzed using a multibabel reader (PerkinElmer, 2015).
  • % RBA Relative Binding Activity
  • RANKL was coated on a MaxiSorp 96 well plate (Nunc), and denosumab was loaded on the plate with the blocking completed. Thereafter, secondary antibody treatment was performed, and TMB ELISA substance solution and stop solution were sequentially processed, and then% RBA was analyzed using a Microplate Reader (SpectraMax 190).
  • the formulation containing histidine as a buffer maintains the activity (function) of the protein (denosumab) when stored for a relatively long time (4 weeks) at 40 ° C under severe conditions.

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Abstract

단백질의 안정화된 액상 제형과 관련된 것으로, 단백질을 포함하고 완충제를 포함하지 않거나 및/또는 히스티딘을 포함하는 단백질의 액상 조성물, 및 그의 제조 방법이 제공된다.

Description

단백질을 포함하는 안정한 액상 조성물
단백질의 안정화된 액상 제형과 관련된 것으로, 단백질을 포함하고 완충제를 포함하지 않거나 및/또는 히스티딘을 포함하는 단백질의 액상 조성물, 및 그의 제조 방법과 관련된 것이다.
항체 의약품은 표적화가 가능하므로 일반적인 단백질 의약품에 비해 부작용이 적으며 소량으로 큰 치료 효과를 볼 수 있다는 이점을 갖는다. 그러나, 항체 의약품이 이러한 효과를 발휘하기 위하여 필연적으로 거대한 분자량과 복잡한 구조를 필요로 하며, 이러한 구조적 특성은 물리/화학적 불안정성으로 연결되어 항체 의약품의 활성이 저해되는 문제가 발생할 수 있다. 따라서, 항체 의약품에 적절한 제형의 개발이 요구된다.
또한, 항체 의약품에 있어서, 온도, pH, 버퍼, 농도, 부형제 등의 다양한 요인에 의해 항체의 불안정성이 발생할 수 있다. 항체의 불안정성은 감소시키면서 quality는 증가시킬 수 있는 제형의 개발을 위해, 완충제 변경, pH 최적화, 안정화제 첨가 등의 방법이 사용되고 있다.
Denosumab은 골다공증(Prolia®) 치료제, 항암제(Xgeva®) 두 개의 commercial product로 판매되고 있으며, 각 product마다 허용되는 적응증의 양상도 다르다. Prolia® 는 액상 제형 항체 약물로 60 mg/mL denosumab, pH 5.2, 17 mM glacial acetic acid buffer, 4.7% sorbitol, 및 0.01% polysorbate20으로 구성되어 있으며, Xgeva®는 액상 제형 항체 약물로 70 mg/mL denosumab, pH 5.2, 18 mM glacial acetic acid buffer, 4.6% sorbitol, 및 0.01% polysorbate20으로 구성되어 있다. 두 가지 product는 동일한 성분을 포함하지만 항체 함량 등 조성비에 차이가 있다. Denosumab의 두 product의 경우 항체의 농도차이에 따라 발생하는 불안정성을 최소화하는 것이 필요하고, Prolia®의 경우 투여주기가 2회/1년으로 비교적 길기 때문에 제형의 안정성이 보다 요구되므로, 보다 안정한 제형을 개발하였다.
이에, 본 명세서는 안정한 단백질의 액상의 약학 조성물을 제공한다.
일 예는 단백질을 포함하고, pH 5 내지 7이며, 아세테이트, 숙시네이트, 및 글루타메이트로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 포함하지 않거나 완충제를 포함하지 않는 단백질의 액상 조성물을 제공한다. 상기 액상 조성물은 히스티딘을 추가로 포함하는 것일 수 있다. 상기 액상 조성물은 계면활성제를 추가로 포함할 수 있다. 상기 액상 조성물은 수성의 액상 조성물일 수 있다.
일 구체예에서, 상기 액상 조성물은,
(1) 단백질, 예컨대, 항-RANKL 항체 등의 항체를 포함하고,
(2) pH 5 내지 7이며,
(3-1) 아세테이트를 포함하지 않는 것일 수 있다.
다른 구체예에서, 상기 액상 조성물은,
(1) 단백질, 예컨대, 항-RANKL 항체 등의 항체를 포함하고,
(2) pH 5 내지 7이며,
(3-2) 숙시네이트를 포함하지 않는 것일 수 있다.
다른 구체예에서, 상기 액상 조성물은,
(1) 단백질, 예컨대, 항-RANKL 항체 등의 항체를 포함하고,
(2) pH 5 내지 7이며,
(3-3) 아세테이트 및 숙시네이트를 모두 포함하지 않는 것일 수 있다.
상기 액상 조성물은 글루타메이트를 포함하지 않는 것일 수 있다. 상기 액상 조성물은 히스티딘을 추가로 포함하는 것일 수 있다.
다른 구체예에서, 상기 액상 조성물은,
(1) 단백질, 예컨대, 항-RANKL 항체 등의 항체를 포함하고,
(2) pH 5 내지 7이며,
(3-4) 완충제를 포함하지 않는 것일 수 있다. 이 경우, 상기 액상 조성물은 히스티딘을 포함하지 않는 것일 수 있다.
상기 액상 조성물은 수성의 액상 조성물일 수 있다.
상기 액상 조성물은, 상기 단백질에 더하여, 또는 상기 단백질 및 히스티딘 (히스티딘을 포함하는 경우)에 더하여, 당, 당유도체 (당산(sugar acid), 당알코올 등의 폴리올 등), 아미노산, 상기 아미노산의 약학적으로 허용가능한 염 등으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 추가로 포함하는 것일 수 있다. 본 명세서에서 제공되는 액상 조성물에 있어서, 상기 당, 당유도체, 아미노산, 상기 아미노산의 약학적으로 허용가능한 염 등으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상은 안정화제 및/또는 등장화제 (tonicity agent)로서 작용하는 것일 수 있다.
일 예에서, 상기 액상 조성물이,
1종 이상의 당 (예컨대, 트레할로오스, 수크로오스, 만노오스, 및 말토오스로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상)을 포함하는 경우, 액상 조성물 내의 안정화제의 함량은 전체 액상 조성물 기준으로 1 내지 15%(w/v), 3 내지 15%(w/v), 5 내지 15%(w/v), 7 내지 15%(w/v), 1 내지 10%(w/v), 3 내지 10%(w/v), 5 내지 10%(w/v), 7 내지 10%(w/v), 1 내지 7%(w/v), 2 내지 7%(w/v), 3 내지 7%(w/v), 4 내지 7%(w/v), 1 내지 5%(w/v), 2 내지 5%(w/v), 3 내지 5%(w/v), 또는 4 내지 5%(w/v), 4.5 내지 5%(w/v) (e.g., 약 4.7%(w/v)), 또는 7.8 내지 8.2%(w/v) (e.g., 약 7.8%(w/v), 약 7.9%(w/v), 약 8%(w/v), 약 8.1%(w/v), 또는 약 8.2%(w/v))일 수 있고;
1종 이상의 당알코올 (예컨대, 소르비톨, 및 만니톨로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상)을 포함하는 경우, 액상 조성물 내의 안정화제의 함량은 전체 액상 조성물 기준으로 1 내지 10%(w/v), 2.5 내지 10%(w/v), 3 내지 10%(w/v), 3.5 내지 10%(w/v), 4 내지 10%(w/v), 1 내지 8%(w/v), 2.5 내지 8%(w/v), 3 내지 8%(w/v), 3.5 내지 8%(w/v), 4 내지 8%(w/v), 1 내지 6%(w/v), 2.5 내지 6%(w/v), 3 내지 6%(w/v), 3.5 내지 6%(w/v), 4 내지 6%(w/v), 4 내지 5.5%(w/v), 4 내지 5%(w/v), 4.2 내지 4.8%(w/v), 또는 4.4 내지 4.7%(w/v) (e.g., 약 4.4%(w/v), 약 4.5%(w/v), 약 4.6%(w/v), 또는 약 4.7%(w/v))일 수 있으며;
1종 이상의 아미노산 (예컨대, 아르기닌 (Arg), 라이신 (Lys), 프롤린 (Pro), 글라이신 (Gly), 알라닌 (Ala), 메티오닌 (Met), 세린 (Ser), 및 상기 아미노산의 약학적으로 허용 가능한 염으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상)을 포함하는 경우, 액상 조성물 내의 안정화제의 함량은 0.1 내지 300mM, 0.5 내지 300mM, 1 내지 300mM, 5 내지 300mM, 10 내지 300mM, 30 내지 300mM, 50 내지 300mM, 80 내지 300mM, 100 내지 300mM, 120 내지 300mM, 0.1 내지 250mM, 0.5 내지 250mM, 1 내지 250mM, 5 내지 250mM, 10 내지 250mM, 30 내지 250mM, 50 내지 250mM, 80 내지 250mM, 100 내지 250mM, 120 내지 250mM, 0.1 내지 200mM, 0.5 내지 200mM, 1 내지 200mM, 5 내지 200mM, 10 내지 200mM, 30 내지 200mM, 50 내지 200mM, 80 내지 200mM, 100 내지 200mM, 120 내지 200mM, 0.1 내지 160mM, 0.5 내지 160mM, 1 내지 160mM, 5 내지 160mM, 10 내지 160mM, 30 내지 160mM, 50 내지 160mM, 80 내지 160mM, 100 내지 160mM, 120 내지 160mM, 또는 130 내지 150mM 일 수 있다.
일 예에서, 상기 액상 조성물은 계면활성제를 추가로 포함할 수 있다. 상기 액상 조성물이 계면활성제를 포함하는 경우, 상기 계면활성제를 전체 액상 조성물 기준으로, 0.001 내지 1%(w/v), 0.001 내지 0.5%(w/v), 0.001 내지 0.1%(w/v), 0.001 내지 0.05%(w/v), 0.005 내지 1%(w/v), 0.005 내지 0.5%(w/v), 0.005 내지 0.1%(w/v), 0.005 내지 0.05%(w/v), 또는 0.008 내지 0.02%(w/v)의 양으로 포함할 수 있다. 상기 계면활성제는 단백질 제형에 통상적으로 사용되는 모든 계면활성제, 예컨대, 비이온성 계면활성제 중에서 선택된 1종 이상을 포함하는 것일 수 있다.
다른 예는 상기 액상 조성물을 포함하는 약학적 조성물을 제공한다. 상기 약학적 조성물은 상기 액상 조성물에 포함된 단백질의 활성에 대응하는 약리적 활성을 갖는다.
예컨대, 상기 액상 조성물 또는 약학적 조성물에 있어서, 상기 단백질은 분자량이 10 내지 500 kDa, 10 내지 400 kDa, 10 내지 300 kDa, 10 내지 200 kDa, 또는 10 내지 150 kDa인 것일 수 있다. 일 예에서, 상기 단백질은 RANKL (Receptor activator of nuclear factor kappa-B ligand) 길항제 (예컨대, 항-RANKL 항체)일 수 있으며, 예컨대, 데노수맙(Denosumab; 분자량 약 147 kDa; 예컨대, PROLIA®, XGEVA® 등)일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 상기 단백질이 RANKL 길항제 (예컨대, 항-RANKL 항체), 예컨대, 데노수맙인 경우, 상기 약학적 조성물은 골다공증 치료 및/또는 암/암전이 치료에 적용되는 것일 수 있다.
다른 예는 단백질을 상기한 조성을 혼합하는 단계를 포함하는 단백질의 안정화 방법 또는 단백질의 안정화된 액상 조성물의 제조 방법을 제공한다.
본 명세서에서는, 단백질의 안정한 액상 조성물, 및 이의 제조 방법이 제공된다.
일 예는 단백질을 포함하고, pH 5 내지 7이며, 아세테이트, 숙시네이트, 및 글루타메이트로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 포함하지 않거나 완충제를 포함하지 않는 단백질의 액상 조성물을 제공한다. 상기 액상 조성물은 히스티딘을 추가로 포함하는 것일 수 있다. 상기 액상 조성물은 계면활성제를 추가로 포함할 수 있다. 상기 액상 조성물은 수성의 액상 조성물일 수 있다.
일 구체예에서, 상기 액상 조성물은,
(1) 단백질, 예컨대, 항-RANKL 항체 등의 항체를 포함하고,
(2) pH 5 내지 7이며,
(3-1) 아세테이트를 포함하지 않는 것일 수 있다.
다른 구체예에서, 상기 액상 조성물은,
(1) 단백질, 예컨대, 항-RANKL 항체 등의 항체를 포함하고,
(2) pH 5 내지 7이며,
(3-2) 숙시네이트를 포함하지 않는 것일 수 있다.
다른 구체예에서, 상기 액상 조성물은,
(1) 단백질, 예컨대, 항-RANKL 항체 등의 항체를 포함하고,
(2) pH 5 내지 7이며,
(3-3) 아세테이트 및 숙시네이트를 모두 포함하지 않는 것일 수 있다.
상기 액상 조성물은 글루타메이트를 포함하지 않는 것일 수 있다.
상기 액상 조성물은 히스티딘을 추가로 포함하는 것일 수 있다.
다른 구체예에서, 상기 액상 조성물은,
(1) 단백질, 예컨대, 항-RANKL 항체 등의 항체를 포함하고,
(2) pH 5 내지 7이며,
(3-4) 완충제를 포함하지 않는 것일 수 있다. 이 경우, 상기 액상 조성물은 히스티딘을 포함하지 않는 것일 수 있다.
상기 액상 조성물은 수성의 액상 조성물일 수 있다.
상기 액상 조성물은, pH 4 내지 8, 예컨대, pH 4.5 내지 7, pH 4.8 내지 7, pH 5 내지 7, pH 5.2 내지 7, pH 4.5 내지 6.8, pH 4.8 내지 6.8, pH 5 내지 6.8, pH 5.2 내지 6.8, pH 4.5 내지 6.5, pH 4.8 내지 6.5, pH 5 내지 6.5, pH 5.2 내지 6.5, pH 4.5 내지 6.3, pH 4.8 내지 6.3, pH 5 내지 6.3, pH 5.2 내지 6.3, pH 4.5 내지 6, pH 4.8 내지 6, pH 5 내지 6, pH 5.2 내지 6, pH 4.5 내지 5.8, pH 4.8 내지 5.8, pH 5 내지 5.8, pH 5.2 내지 5.8, pH 4.5 내지 5.6, pH 4.8 내지 5.6, pH 5 내지 5.6, pH 5.2 내지 5.6, pH 4.9 내지 5.5, pH 4.9, pH 5.0, pH 5.1, pH 5.2, pH 5.3, pH 5.4, 또는 pH 5.5인 것일 수 있다.
본 명세서에서 제공되는 단백질의 액상 조성물은, 아세테이트, 숙시네이트, 또는 이들 모두를 포함하지 않거나, 여기에 추가하여 글루타메이트를 포함하지 않거나, 및/또는 히스티딘을 포함함으로써, 단백질 안정성에 영향을 미치는 중요한 인자 중 하나인 pH를 상기한 바와 같은 적정 범위로 유지시킬 수 있고, 조성물 내 단백질이 안정성이 우수(예컨대, 단백질의 단백질 응집물 함량 (%HMW), %charge variant (예, 산성 변형체 함량 (%Acidic) 등) 등의 단백질 안정성 표시 인자가 우수함)하다는 이점을 갖는다.
본 명세서에 사용된 바로서, 본 명세서에 제공된 단백질의 액상 조성물이 '성분 A를 포함하지 않는다' 함은 상기 조성물이 성분 A를 포함하지 않거나 (상기 성분 A가 상기 조성물 내에 존재하지 않거나), 실질적으로 포함하지 않는 것 (상기 성분 A가 상기 조성물 내에 실질적으로 존재하지 않는 것)을 의미할 수 있으며, 이 때, '성분 A를 실질적으로 포함하지 않거나 성분 A가 실질적으로 존재하지 않는다' 함은 상기 성분 A를 전혀 포함하지 않거나 (또는 성분 A가 전혀 존재하지 않거나), 단백질의 액상 조성물 내에서 의도된 약제학적 기능 (예컨대, 성분 A가 아세테이트, 숙시네이트, 및/또는 글루타메이트인 경우, 완충제로서의 기능)을 발휘할 수 없는 양 또는 검출 불가능한 양으로 포함(존재)하는 경우를 포함하는 것으로 해석될 수 있다. 일 예에서, '성분 A를 포함하지 않는다' 함은 상기 성분 A가 통상적인 방법으로 검출되지 않음을 의미할 수 있다.
이하, 본 명세서에 제공된 액상 조성물을 보다 상세히 설명한다:
1. 단백질
본 명세서에서 제공되는 액상 조성물에서, 단백질은 단백질 약물, 예컨대, 분자량이 10 내지 500 kDa, 10 내지 400 kDa, 10 내지 300 kDa, 10 내지 200 kDa, 또는 10 내지 150 kDa인 단백질, 예컨대, 항체일 수 있다.
항체는 2개의 중쇄가 다이설파이드(disulfide) 결합에 의해 서로 연결되어 있고 각각의 중쇄가 다이설파이드 결합에 의해 경쇄에 연결되어 있는 모든 종류의 항체를 포함하는 것으로서, 천연 항체 또는 재조합적/화학적으로 합성된 (non-naturally obtained) 항체일 수 있다. 본 명세서에서 사용된 바로서, 항체라는 용어는 제한없이 통상적인 항체 및/또는 이의 임의의 항원 결합 단편 또는 단일 사슬, 항원에 결합하는 생물학적 활성을 가지는 면역글로불린 분자의 적어도 일부를 포함하는 임의의 단백질 및/또는 펩티드 함유 분자를 포함한다. 따라서, 항체는 단일 도메인 항체 및 이의 단편, 예를 들어 단일 도메인 항체의 중쇄, 또는 경쇄의 상보성 결정 영역(CDR) 또는 이의 리간드 결합 부분, 중쇄 또는 경쇄 가변부, 중쇄 또는 경쇄 불변부, 프레임워크(FR) 영역, 및/또는 이의 임의의 일부, 및/또는 결합 단백질의 적어도 일부분을 포함할 수 있다. 일 예에서, 상기 항체는 또한 단일 클론(모노클로날) 항체일 수 있다. 일 예에서, 항체는 동물 유래 항체, 키메라, 인간화 항체, 또는 인간 항체일 수 있다. 일 예에서, 상기 항체는 단일 특이성 (monospecific), 이중특이성(bispecific), 또는 다중특이성 항체를 포함할 수 있다.
일 예에서, 상기 단백질은 RANKL (Receptor activator of nuclear factor kappa-B ligand) 길항제 (예컨대, 예컨대, 항-RANKL 항체)일 수 있으며, 예컨대, 데노수맙(Denosumab; 분자량 약 147 kDa; 예컨대, PROLIA®, XGEVA® 등)일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 상기 단백질이 RANKL 길항제 (예컨대, 항-RANKL 항체), 예컨대, 데노수맙인 경우, 상기 약학적 조성물은 골다공증 치료 및/또는 암 치료에 적용되는 것일 수 있다.
상기 액상 조성물에 포함되는 단백질은 자연적으로 존재하거나, 비자연적으로 존재하는 것(non-naturally occurring)일 수 있으며, 예컨대, 재조합적 또는 합성적으로 생산된 것일 수 있다.
상기 액상 조성물 내의 단백질 함량은 5 mg/ml 내지 300 mg/ml, 5 mg/ml 내지 250 mg/ml, 5 mg/ml 내지 200 mg/ml, 5 mg/ml 내지 150 mg/ml, 5 mg/ml 내지 125 mg/ml, 5 mg/ml 내지 100 mg/ml, 5 mg/ml 내지 90 mg/ml, 5 mg/ml 내지 80 mg/ml, 5 mg/ml 내지 70 mg/ml, 5 mg/ml 내지 60 mg/ml, 10 mg/ml 내지 300 mg/ml, 10 mg/ml 내지 250 mg/ml, 10 mg/ml 내지 200 mg/ml, 10 mg/ml 내지 150 mg/ml, 10 mg/ml 내지 125 mg/ml, 10 mg/ml 내지 100 mg/ml, 10 mg/ml 내지 90 mg/ml, 10 mg/ml 내지 80 mg/ml, 10 mg/ml 내지 70 mg/ml, 10 mg/ml 내지 60 mg/ml, 20 mg/ml 내지 300 mg/ml, 20 mg/ml 내지 250 mg/ml, 20 mg/ml 내지 200 mg/ml, 20 mg/ml 내지 150 mg/ml, 20 mg/ml 내지 125 mg/ml, 20 mg/ml 내지 100 mg/ml, 20 mg/ml 내지 90 mg/ml, 20 mg/ml 내지 80 mg/ml, 20 mg/ml 내지 70 mg/ml, 20 mg/ml 내지 60 mg/ml, 30 mg/ml 내지 300 mg/ml, 30 mg/ml 내지 250 mg/ml, 30 mg/ml 내지 200 mg/ml, 30 mg/ml 내지 150 mg/ml, 30 mg/ml 내지 125 mg/ml, 30 mg/ml 내지 100 mg/ml, 30 mg/ml 내지 90 mg/ml, 30 mg/ml 내지 80 mg/ml, 30 mg/ml 내지 70 mg/ml, 30 mg/ml 내지 60 mg/ml, 40 mg/ml 내지 300 mg/ml, 40 mg/ml 내지 250 mg/ml, 40 mg/ml 내지 200 mg/ml, 40 mg/ml 내지 150 mg/ml, 40 mg/ml 내지 125 mg/ml, 40 mg/ml 내지 100 mg/ml, 40 mg/ml 내지 90 mg/ml, 40 mg/ml 내지 80 mg/ml, 40 mg/ml 내지 70 mg/ml, 40 mg/ml 내지 60 mg/ml, 50 mg/ml 내지 300 mg/ml, 50 mg/ml 내지 250 mg/ml, 50 mg/ml 내지 200 mg/ml, 50 mg/ml 내지 150 mg/ml, 50 mg/ml 내지 125 mg/ml, 50 mg/ml 내지 100 mg/ml, 50 mg/ml 내지 90 mg/ml, 50 mg/ml 내지 80 mg/ml, 50 mg/ml 내지 70 mg/ml, 50 mg/ml 내지 60 mg/ml, 60 mg/ml 내지 300 mg/ml, 60 mg/ml 내지 250 mg/ml, 60 mg/ml 내지 200 mg/ml, 60 mg/ml 내지 150 mg/ml, 60 mg/ml 내지 125 mg/ml, 60 mg/ml 내지 100 mg/ml, 60 mg/ml 내지 90 mg/ml, 60 mg/ml 내지 80 mg/ml, 또는 60 mg/ml 내지 70 mg/ml, 예컨대, 50 mg/ml, 55 mg/ml, 60 mg/ml, 65 mg/ml, 70 mg/ml, 75 mg/ml, 또는 80 mg/ml일 수 있다.
2. 완충제
본원 명세서에서 제공되는 액상 조성물은 완충제를 포함하지 않는 것일 수 있다. 일 예에서, 상기 액상 조성물에 포함되지 않는 (상기 액상 조성물의 구성 성분에서 제외되는) 완충제는 통상적으로 사용되는 buffering capacity를 갖는 완충제들 중에서 선택된 1종 이상일 수 있으며, 예컨대, 상기 액상 조성물의 구성 성분에서 제외되는 완충제는 (1) 인산, 아세트산, 시트르산, 숙신산, 탄산 등으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 산, 이들의 이온화 형태(ionic form) (예컨대, 포스페이트, 아세테이트, 시트레이트, 숙시네이트, 카보네이트 등); (2) 상기 산들의 약학적으로 허용 가능한 염 (예컨대, 나트륨염, 칼륨염 등), (3) 글루탐산, 아스파르트산 등으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 아미노산, 이들의 이온화 형태 (예컨대, 글루타메이트, 아스파테이트 등) 및 (4) 상기 아미노산의 약학적으로 허용 가능한 염 (예컨대, 염산염 등) 등으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 포함하는 것일 수 있다.
본 명세서에서 상기, 별도의 언급이 없어도, (1)의 산 및/또는 (3)의 아미노산과 이들의 이온화 형태는 서로 등가적 의미를 가지거나, 상호 호환적으로 사용될 수 있다.
상기 액상 조성물은 인산, 아세트산 (예컨대, 빙초산 (Glacial acetic acid)), 시트르산, 숙신산, 탄산, 상기 산(인산, 아세트산, 시트르산, 숙신산, 탄산)들의 이온화된 형태 (예컨대, 포스페이트, 아세테이트, 시트레이트, 숙시네이트, 카보네이트 등), 상기 산(인산, 아세트산, 시트르산, 숙신산, 탄산)들의 약학적으로 허용 가능한 염 (예컨대, 나트륨염, 칼륨염 등); 아스파르트산, 글루탐산, 상기 아미노산(아스파르트산, 글루탐산)들의 이온화된 형태 (예컨대, 글루타메이트, 아스파테이트 등), 상기 아미노산(아스파르트산, 글루탐산)들의 약학적으로 허용 가능한 염 (예컨대, 염산염 등) 등으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 포함하지 않는 것일 수 있다. 상기 액상 조성물에 포함되지 않는 아미노산은, 단백질 중에 존재하는 아미노산이 아니고, 유리 아미노산일 수 있다.
일 구체예에서, 상기 액상 조성물은 아세트산 및/또는 아세테이트를 포함하지 않는 것일 수 있다.
다른 구체예에서, 상기 액상 조성물은 숙신산 및/또는 숙시네이트를 포함하지 않는 것일 수 있다.
다른 구체예에서, 상기 액상 조성물은 아세트산, 아세테이트, 숙신산, 및 숙시네이트를 포함하지 않는 것일 수 있다.
다른 구체예에서, 상기 액상 조성물은 글루탐산 및/또는 글루타메이트를 포함하지 않는 것일 수 있다.
다른 구체예에서, 상기 액상 조성물은 아세트산, 아세테이트, 글루탐산, 및 글루타메이트를 포함하지 않는 것일 수 있다.
다른 구체예에서, 상기 액상 조성물은 숙신산, 숙시네이트, 글루탐산, 및 글루타메이트를 포함하지 않는 것일 수 있다.
다른 구체예에서, 상기 액상 조성물은 아세트산, 아세테이트, 숙신산, 숙시네이트, 글루탐산, 및 글루타메이트를 포함하지 않는 것일 수 있다.
다른 구체예에서, 상기 액상 조성물은 아세트산, 아세테이트, 숙신산, 숙시네이트, 글루탐산, 글루타메이트, 인산, 포스페이트, 시트르산, 시트레이트 탄산, 카보네이트, 아스파르트산, 및 아스파테이트를 포함하지 않는 것일 수 있다.
3. 히스티딘
본 명세서에서 제공되는 액상 조성물은 히스티딘을 포함하는 것일 수 있다. 상기 액상 조성물에서 히스티딘은 완충제로서의 역할을 하는 것일 수 있다. 또한, 상기 액상 조성물에서, 히스티딘은 단백질의 안정화제로서의 역할도 할 수 있으며, 예를 들어, 단백질의 산성 변형 억제 (산성 변형체 (acidic variant) 생성 억제) 작용을 가지거나 단백질의 산성 변형 억제제로서의 역할을 하는 것일 수 있다. 또는, 상기 액상 조성물에서, 히스티딘은 단백질의 산성 변형 억제 (산성 변형체 (acidic variant) 생성 억제, %Acidic 증가율 감소) 작용을 할 수 있다. 또한, 히스티딘은 단백질 응집 억제 (예, 단백질 응집물(HMW) 생성 억제, %HMW 증가율 감소) 효과도 가질 수 있다. 따라서, 상기 액상 조성물은 히스티딘을 완충제, 및/또는 산성 변형 억제제 및/또는 단백질 응집 억제제로서 포함할 수 있다.
상기 액상 조성물에 포함되는 히스티딘은 유리 아미노산 형태 (즉, 액상 조성물 내에 포함되는 단백질 내에 포함되지 않은 형태)일 수 있다.
상기 액상 조성물이 히스티딘을 포함하는 경우, 액상 조성물 내 히스티딘의 함량은 1 내지 100mM, 1 내지 70mM, 1 내지 50mM, 1 내지 40mM, 1 내지 30mM, 1 내지 25mM, 1 내지 22mM, 1 내지 20mM, 5 내지 100mM, 5 내지 70mM, 5 내지 50mM, 5 내지 40mM, 5 내지 30mM, 5 내지 25mM, 5 내지 22mM, 5 내지 20mM, 10 내지 100mM, 10 내지 70mM, 10 내지 50mM, 10 내지 40mM, 10 내지 30mM, 10 내지 25mM, 10 내지 22mM, 10 내지 20mM, 14 내지 100mM, 14 내지 70mM, 14 내지 50mM, 14 내지 40mM, 14 내지 30mM, 14 내지 25mM, 14 내지 22mM, 14 내지 20mM, 16 내지 100mM, 16 내지 70mM, 16 내지 50mM, 16 내지 40mM, 16 내지 30mM, 16 내지 25mM, 16 내지 22mM, 또는 16 내지 20mM, 예컨대, 16mM, 17mM, 18mM, 19mM, 또는 20mM일 수 있다.
4. 당, 당유도체, 및/또는 아미노산
상기 액상 조성물은 당, 당유도체, 아미노산 등으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 포함하는 것일 수 있다.
상기 당, 당유도체, 아미노산 등으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상은 액상 조성물 내에서 단백질의 안정화제 및/또는 등장화제(tonicity agent)로서 작용 하는 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 이 때, 상기 안정화제 및/또는 등장화제로서 포함 가능한 아미노산은 히스티딘 이외의 아미노산 중에서 선택된 1종 이상일 수 있다 (즉, 히스티딘을 포함하지 않는 것일 수 있다).
(1) 당 및 당유도체 (당산(sugar acid), 당알코올 등의 폴리올 등)
일 예에서, 상기 당은 단당류, 이당류, 올리고당, 및 다당류로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 상기 단당류는 글루코오스, 프룩토오스, 갈락토오스, 만노오스 등으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 이당류는 수크로오스, 락토오스, 말토오스, 트레할로오스 등으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상일 수 이상일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 올리고당은 프룩토올리고당, 갈락토올릭고당, 만난올리고당 등으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 다당류는 전분, 글리코겐, 셀룰로스, 키틴, 펙틴 등으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 당산 (sugar acid)은 알돈산(글리세르산 등), 울로손산(뉴라민산 등), 우론산(글루쿠론산 등), 알다르산(타르타르산 등) 등으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 당알코올은 글리세롤, 에리스리톨, 트레이톨, 아라비톨, 자이리톨, 리비톨, 만니톨, 소르비톨, 갈락티톨, 푸시톨, 이디톨, 이노시톨, 볼레미톨, 아이소말트, 말티톨, 락티톨, 말토트리이톨, 말토테트라이톨, 폴리글리시톨 등으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상일 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다.
일 예에서, 상기 액상 조성물은 트레할로오스, 수크로오스, 만노오스, 소르비톨, 말토오스, 만니톨 등으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 당 또는 당알코올 (예컨대, 소르비톨, 수크로오스, 트레할로오스 등으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상)을 포함하는 것일 수 있다.
일 구체예에서, 상기 액상 조성물이,
1종 이상의 당 (예컨대, 트레할로오스, 수크로오스, 만노오스, 및 말토오스로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상)을 포함하는 경우, 액상 조성물 내의 안정화제의 함량은 전체 액상 조성물 기준으로 1 내지 15%(w/v), 3 내지 15%(w/v), 5 내지 15%(w/v), 7 내지 15%(w/v), 1 내지 10%(w/v), 3 내지 10%(w/v), 5 내지 10%(w/v), 7 내지 10%(w/v), 1 내지 7%(w/v), 2 내지 7%(w/v), 3 내지 7%(w/v), 4 내지 7%(w/v), 1 내지 5%(w/v), 2 내지 5%(w/v), 3 내지 5%(w/v), 4 내지 5%(w/v), 4.5 내지 5%(w/v) (e.g., 약 4.7%(w/v)) 또는 7.8 내지 8.2%(w/v) (e.g., 약 8%(w/v))일 수 있고 (예컨대, 트레할로오스 또는 수크로오스 7.8 내지 8.2%(w/v) (e.g., 약 7.8%(w/v), 약 7.9%(w/v), 약 8%(w/v), 약 8.1%(w/v), 또는 약 8.2%(w/v))일 수 있음);
1종 이상의 당알코올 (예컨대, 소르비톨, 및 만니톨로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상)을 포함하는 경우, 액상 조성물 내의 안정화제의 함량은 전체 액상 조성물 기준으로 1 내지 10%(w/v), 2.5 내지 10%(w/v), 3 내지 10%(w/v), 3.5 내지 10%(w/v), 4 내지 10%(w/v), 1 내지 8%(w/v), 2.5 내지 8%(w/v), 3 내지 8%(w/v), 3.5 내지 8%(w/v), 4 내지 8%(w/v), 1 내지 6%(w/v), 2.5 내지 6%(w/v), 3 내지 6%(w/v), 3.5 내지 6%(w/v), 4 내지 6%(w/v), 4 내지 5.5%(w/v), 4 내지 5%(w/v), 4.2 내지 4.8%(w/v), 또는 4.4 내지 4.7%(w/v) (e.g., 약 4.4%(w/v), 약 4.5%(w/v), 약 4.6%(w/v)), 또는 약 4.7%(w/v))일 수 있다.
일 예에서, 상기 액상 조성물은, 전체 액상 조성물 기준으로,
1 내지 15%(w/v), 3 내지 15%(w/v), 5 내지 15%(w/v), 7 내지 15%(w/v), 1 내지 10%(w/v), 3 내지 10%(w/v), 5 내지 10%(w/v), 7 내지 10%(w/v), 1 내지 7%(w/v), 2 내지 7%(w/v), 3 내지 7%(w/v), 4 내지 7%(w/v), 1 내지 5%(w/v), 2 내지 5%(w/v), 3 내지 5%(w/v), 4 내지 5%(w/v), 4.5 내지 5%(w/v) (e.g., 약 4.7%(w/v)) 또는 7.8 내지 8.2%(w/v) (e.g., 약 7.8%(w/v), 약 7.9%(w/v), 약 8%(w/v), 약 8.1%(w/v), 또는 약 8.2%(w/v))의 트레할로오스, 수크로오스, 만노오스, 및 말토오스로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 당;
1 내지 10%(w/v), 2.5 내지 10%(w/v), 3 내지 10%(w/v), 3.5 내지 10%(w/v), 4 내지 10%(w/v), 1 내지 8%(w/v), 2.5 내지 8%(w/v), 3 내지 8%(w/v), 3.5 내지 8%(w/v), 4 내지 8%(w/v), 1 내지 6%(w/v), 2.5 내지 6%(w/v), 3 내지 6%(w/v), 3.5 내지 6%(w/v), 4 내지 6%(w/v), 4 내지 5.5%(w/v), 4 내지 5%(w/v), 4.2 내지 4.8%(w/v), 또는 4.4 내지 4.7%(w/v) (e.g., 약 4.4%(w/v), 약 4.5%(w/v), 약 4.6%(w/v), 또는 약 4.7%(w/v))의 소르비톨, 및 만니톨로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 당알코올; 또는
이들의 조합
을 포함하는 것일 수 있다.
보다 구체적으로, 상기 액상 조성물은, 전체 액상 조성물 기준으로,
1 내지 15%(w/v), 3 내지 15%(w/v), 4 내지 15%(w/v), 5 내지 15%(w/v), 7 내지 15%(w/v), 1 내지 10%(w/v), 3 내지 10%(w/v), 4 내지 10%(w/v), 5 내지 10%(w/v), 7 내지 10%(w/v), 1 내지 7%(w/v), 3 내지 7%(w/v), 4 내지 7%(w/v), 1 내지 5%(w/v), 3 내지 5%(w/v), 4 내지 5%(w/v), 4.2 내지 5%(w/v), 4.5 내지 5%(w/v), 7 내지 9%(w/v), 7 내지 8.5%(w/v), 7 내지 8.2%(w/v), 7.5 내지 9%(w/v), 7.5 내지 8.5%(w/v), 7.5 내지 8.2%(w/v), 7.8 내지 9%(w/v), 7.8 내지 8.5%(w/v), 7.8 내지 8.2%(w/v), 4.7(w/v), 7.8%(w/v), 7.9%(w/v), 8%(w/v), 8.1%(w/v), 또는 8.2%(w/v)의 트레할로오스 또는 수크로오스;
1 내지 10%(w/v), 2.5 내지 10%(w/v), 3 내지 10%(w/v), 3.5 내지 10%(w/v), 4 내지 10%(w/v), 1 내지 8%(w/v), 2.5 내지 8%(w/v), 3 내지 8%(w/v), 3.5 내지 8%(w/v), 4 내지 8%(w/v), 1 내지 6%(w/v), 2.5 내지 6%(w/v), 3 내지 6%(w/v), 3.5 내지 6%(w/v), 4 내지 6%(w/v), 4 내지 5.5%(w/v), 4 내지 5.2%(w/v), 4 내지 5%(w/v), 4 내지 4.8%(w/v), 4.1 내지 5.5%(w/v), 4.1 내지 5.2%(w/v), 4.1 내지 5%(w/v), 4.1 내지 4.8%(w/v), 4.1 내지 4.7%(w/v), 4.2 내지 5.5%(w/v), 4.2 내지 5.2%(w/v), 4.2 내지 5%(w/v), 4.2 내지 4.8%(w/v), 4.2 내지 4.7%(w/v), 4.4%(w/v), 4.5%(w/v), 4.6%(w/v), 또는 4.7%(w/v)의 소르비톨; 또는
이들의 조합
을 포함하는 것일 수 있다.
(2) 아미노산
본 명세서에 기재된 아미노산은 해당 아미노산, 그의 이온화 형태 및 약학적으로 허용 가능한 염 중에서 선택되는 1종 이상을 의미하는 것일 수 있다. 상기 아미노산은 L형, D형, 또는 이들의 혼합물일 수 있으며, 예컨대, L형일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 안정화제 및/또는 등장화제로서 포함되는 아미노산은, 히스티딘을 제외한 아미노산 및 이들의 약학적으로 허용 가능한 염 중에서 선택된 1종 이상일 수 있다. 예컨대, 상기 아미노산은 알라닌 (Ala), 아르기닌 (Arg), 아스파라진 (Asn), 아스파르트산 (Asp), 글루타민 (Gln), 글루탐산 (Glu), 글라이신 (Gly), 이소류신 (Ile), 류신 (Leu), 라이신 (Lys), 메티오닌 (Met), 페닐알라닌 (Phe), 프롤린 (Pro), 세린 (Ser), 트레오닌 (Thr), 트립토판 (Trp), 타이로신 (Tyr), 발린 (Val), 시스테인 (Cys), 및 상기 아미노산의 약학적으로 허용 가능한 염 (예컨대, 염산염, 아세틸 아미노산염 등)으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상일 수 있다. 상기 아미노산은 본 명세서에서 제공되는 액상 제형에 포함된 단백질에 포함된 아미노산이 아닌 유리 아미노산일 수 있다.
일 예에서, 상기 아미노산은 아르기닌 (Arg), 라이신 (Lys), 프롤린 (Pro), 글라이신 (Gly), 알라닌 (Ala), 메티오닌 (Met), 세린 (Ser), 및 상기 아미노산의 약학적으로 허용 가능한 염 (예컨대, 염산염, 아세틸 아미노산염 등) 등으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 아미노산을 포함하는 것일 수 있다.
일 예에서, 상기 액상 조성물은 1종 이상의 아미노산 (히스티딘 제외; 예컨대, 아르기닌 (Arg), 라이신 (Lys), 프롤린 (Pro), 글라이신 (Gly), 알라닌 (Ala), 메티오닌 (Met), 세린 (Ser), 및 상기 아미노산의 약학적으로 허용 가능한 염으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상)을 포함하는 것일 수 있으며, 이 때 액상 조성물 내의 상기 아미노산의 함량은 0.1 내지 300mM, 0.5 내지 300mM, 1 내지 300mM, 5 내지 300mM, 10 내지 300mM, 30 내지 300mM, 50 내지 300mM, 80 내지 300mM, 100 내지 300mM, 120 내지 300mM, 0.1 내지 250mM, 0.5 내지 250mM, 1 내지 250mM, 5 내지 250mM, 10 내지 250mM, 30 내지 250mM, 50 내지 250mM, 80 내지 250mM, 100 내지 250mM, 120 내지 250mM, 0.1 내지 200mM, 0.5 내지 200mM, 1 내지 200mM, 5 내지 200mM, 10 내지 200mM, 30 내지 200mM, 50 내지 200mM, 80 내지 200mM, 100 내지 200mM, 120 내지 200mM, 0.1 내지 160mM, 0.5 내지 160mM, 1 내지 160mM, 5 내지 160mM, 10 내지 160mM, 30 내지 160mM, 50 내지 160mM, 80 내지 160mM, 100 내지 160mM, 120 내지 160mM, 또는 130 내지 150mM일 수 있다.
일 구체예에서, 상기 액상 조성물은,
80 내지 200mM, 100 내지 200mM, 130 내지 200mM, 80 내지 150mM, 100 내지 150mM, 또는 120 내지 160mM의 아르기닌 (Arg), 라이신 (Lys), 프롤린 (Pro), 글라이신 (Gly), 알라닌 (Ala), 메티오닌 (Met), 세린 (Ser), 및 상기 아미노산의 약학적으로 허용 가능한 염으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 아미노산을 포함할 수 있다.
보다 구체적으로, 상기 액상 조성물은,
80 내지 200mM, 100 내지 200mM, 120 내지 200mM, 80 내지 160mM, 100 내지 160mM, 120 내지 160mM, 120 내지 155mM, 120 내지 150mM, 120 내지 145mM, 130 내지 160mM, 130 내지 155mM, 130 내지 150mM, 130 내지 145mM, 130 내지 142mM, 135 내지 160mM, 135 내지 155mM, 135 내지 150mM, 135 내지 145mM, 135 내지 142mM, 138 내지 160mM, 138 내지 155mM, 138 내지 150mM, 138 내지 145mM, 138 내지 142mM, 또는 140mM의 아르기닌 (Arg) 또는 아르기닌 염산염 (Arg-HCl)
을 포함할 수 있다.
5. 염화나트륨 및 그 외 성분
일 예에서, 상기 액상 조성물은 염화나트륨을 포함하지 않는 것일 수 있다. 상기 염화나트륨은 안정화제 및/또는 등장화제로서 기능을 ㄱ자는 것일수 있다. 다른 예에서, 액상 조성물은 앞서 설명한 당, 당유도체 및/또는 아미노산에 더하여 염화나트륨을 추가로 포함하는 것일 수 있다. 다른 예에서, 상기 액상 조성물은 안정화제 및/또는 등장화제로서 기능을 갖는 성분으로서 염화나트륨만을 포함하는 것은 아닐 수 있다. 즉, 상기 액상 조성물이 염화나트륨을 포함하는 경우, 앞서 설명한 당, 당유도체 (당산(sugar acid), 당알코올 등의 폴리올 등), 아미노산 및 이들의 약학적으로 허용 가능한 염 등으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상에 더하여, 염화나트륨을 추가로 포함하는 것일 수 있다.
또 다른 예에서, 상기 액상 조성물은 안정화제로서 폴리에틸렌글리콜 (예, PEG3350 등), 사이클로덱스트린 유도체 (예, Sulfobutylether-β-Cyclodextrin 등) 등을 포함하지 않는 것일 수 있다.
6. 계면활성제
일 예에서, 상기 액상 조성물은 계면활성제를 추가로 포함할 수 있다. 상기 액상 조성물이 계면활성제를 포함하는 경우, 상기 계면활성제를 전체 액상 조성물 기준으로, 0.001 내지 1%(w/v), 0.001 내지 0.5%(w/v), 0.001 내지 0.1%(w/v), 0.001 내지 0.05%(w/v), 0.005 내지 1%(w/v), 0.005 내지 0.5%(w/v), 0.005 내지 0.1%(w/v), 0.005 내지 0.05%(w/v), 또는 0.008 내지 0.02%(w/v)의 양으로 포함할 수 있다.
상기 계면활성제는 단백질을 액상 조성물 매질에 고르게 분산시킬 수 있는 약학적으로 허용 가능한 모든 계면활성제들로부터 선택된 것일 수 있다. 상기 계면활성제는 비이온성 계면활성제일 수 있으며, 예컨대, 폴리소르베이트류 (예컨대, 폴리소르베이트 20 (폴리옥시에틸렌(20) 소르비탄 모노라우레이트), 폴리소르베이트 40 (폴리옥시에틸렌(20) 소르비탄 모노팔미테이트), 폴리소르베이트 60 (폴리옥시에틸렌(20) 소르비탄 모노스테아레이트), 폴리소르베이트 80 (폴리옥시에틸렌(20) 소르비탄 모노올레이트); 상기 폴리옥시에틸렌 뒤의 수치 (20)은 옥시에틸렌기(-(CH2CH2O)-)의 총 개수를 의미함), 폴록사머 (PEO-PPO-PEO 공중합체; PEO: poly(ethylene oxide), PPO: poly(propylene oxide)), 폴리에틸렌-폴리프로필렌 글리콜, 폴리옥시에틸렌 화합물 (예컨대, 폴리옥시에틸렌-스테아레이트, 폴리옥시에틸렌 알킬 에테르 (알킬: C1-C30), 폴리옥시에틸렌 모노라이릴 에테르, 알킬페닐 폴리옥시에틸렌 코폴리머(알킬: C1-C30) 등), 소듐 도데실 설페이트(sodium dodecyl sulphate, SDS) 등으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상일 수 있다. 예컨대, 상기 계면활성제는 폴리소르베이트류 (예컨대, 폴리소르베이트 20)일 수 있다.
7. 액상 조성물
상기 액상 조성물은 앞서 설명된 함량의 단백질, 당, 당유도체 및/또는 아미노산, 히스티딘 (포함되는 경우), 및 계면활성제 (포함되는 경우)와, 잔량의 수성 매질 (예컨대, 물 (정제수), 생리식염수, 주사 용수 등)을 포함하는 것일 수 있다.
본 명세서에서 제공되는 액상 조성물은 생체와 등장성인 것일 수 있다. 예컨대, 상기 액상 조성물은 삼투압이 약 200 mOsm/kg 내지 약 450 mOsm/kg, 약 200 mOsm/kg 내지 약 400 mOsm/kg, 약 200 mOsm/kg 내지 약 350 mOsm/kg, 약 200 mOsm/kg 내지 약 330 mOsm/kg, 약 250 mOsm/kg 내지 약 450 mOsm/kg, 약 250 mOsm/kg 내지 약 400 mOsm/kg, 약 250 mOsm/kg 내지 약 350 mOsm/kg, 약 250 mOsm/kg 내지 약 330 mOsm/kg, 약 270 mOsm/kg 내지 약 450 mOsm/kg, 약 270 mOsm/kg 내지 약 400 mOsm/kg, 270 mOsm/kg 내지 약 350 mOsm/kg, 270 mOsm/kg 내지 약 330 mOsm/kg, 약 300 mOsm/kg 내지 약 450 mOsm/kg, 약 300 mOsm/kg 내지 약 400 mOsm/kg, 약 300 mOsm/kg 내지 약 350 mOsm/kg, 또는 약 300 mOsm/kg 내지 약 330 mOsm/kg일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 이와 같은 삼투압은 상기 안정화제에 의하여 조절될 수 있다.
본 명세서에서 제공되는 액상 조성물은 전기 전도도가 약 0 mS/cm 이상 (또는 초과), 약 0.0001 mS/cm 이상, 또는 약 0.001 mS/cm 이상, 예컨대, 약 0 mS/cm 내지 약 10 mS/cm, 약 0 mS/cm 내지 약 7 mS/cm, 0 mS/cm 내지 약 5 mS/cm, 약 0 mS/cm 내지 약 2.5 mS/cm, 약 0 mS/cm 내지 약 1 mS/cm, 약 0 mS/cm 내지 약 0.5 mS/cm, 약 0 mS/cm 내지 약 0.1 mS/cm, 약 0 mS/cm 내지 약 0.05 mS/cm, 약 0 mS/cm 초과 약 10 mS/cm 이하, 약 0 mS/cm 초과 약 7 mS/cm 이하, 0 mS/cm 초과 약 5 mS/cm 이하, 약 0 mS/cm 초과 약 2.5 mS/cm 이하, 약 0 mS/cm 초과 약 1 mS/cm 이하, 약 0 mS/cm 초과 약 0.5 mS/cm 이하, 약 0 mS/cm 초과 약 0.1 mS/cm 이하, 약 0 mS/cm 초과 약 0.05 mS/cm 이하, 약 0.0001 mS/cm 내지 약 10 mS/cm, 약 0.0001 mS/cm 내지 약 7 mS/cm, 0.0001 mS/cm 내지 약 5 mS/cm, 약 0.0001 mS/cm 내지 약 2.5 mS/cm, 약 0.0001 mS/cm 내지 약 1 mS/cm, 약 0.0001 mS/cm 내지 약 0.5 mS/cm, 약 0.0001 mS/cm 내지 약 0.1 mS/cm, 약 0.0001 mS/cm 내지 약 0.05 mS/cm, 약 0.001 mS/cm 내지 약 10 mS/cm, 약 0.001 mS/cm 내지 약 7 mS/cm, 0.001 mS/cm 내지 약 5 mS/cm, 약 0.001 mS/cm 내지 약 2.5 mS/cm, 0.001 mS/cm 내지 약 1 mS/cm, 약 0.001 mS/cm 내지 약 0.5 mS/cm, 약 0.001 mS/cm 내지 약 0.1 mS/cm, 또는 약 0.001 mS/cm 내지 약 0.05 mS/cm인 것일 수 있다.
본 명세서에서 제공되는 액상 조성물은 약 40℃의 고온에서 4주일 이상 안정하게 유지될 수 있다.
상기 용어 "안정성이 우수하다" 또는 "안정하게 유지된다" 함은 보관 시에 조성물 내의 단백질의 구조, 및/또는 물리적, 화학적, 및/또는 생물학적 특성이 유지됨을 의미할 수 있다 (예컨대, 보관 중의 낮은 단백질 응집물 함량, 낮은 단백질 응집률, 낮은 단백질 분해율, 및/또는 낮은 산성 변형체 함량 등). 단백질의 안정성을 측정하는 다양한 분석 기술이 관련 기술분야에 잘 알려져 있다. 본 명세서에서 제공되는 완충제를 포함하지 않거나, 히스티딘을 포함하는 액상 조성물은, 히스티딘을 제외한 완충제를 포함하는 경우, 예컨대, 아세테이트, 또는 숙시네이트를 포함하는 경우와 비교하여, 낮은 단백질 응집물 함량 (응집률) 및/또는 낮은 산성 변형체 함량 (산성 변형률)을 갖는 것일 수 있다.
예컨대, 본 명세서에서 제공되는 액상 조성물은 단백질 (항체) 함량이 60 mg/ml, 70 mg/ml, 또는 80 mg/ml인 경우, 통상적인 SEC(size exclusion chromatography)로 40℃에서 1주일 이상, 예를 들어 1주일, 2주일, 3주일, 또는 4주일 동안 보관 시에 측정된 단백질 응집물 함량 또는 응집률 (High Molecular Weight %(w/v); %HMW)의 변화량 (Δ% HMW; 보관 4주차의 %HMW - 0주차(보관 개시 시(initial))의 %HMW)이 약 5% 이하, 예컨대, 약 4.5% 이하, 약 4% 이하, 약 3.5% 이하, 약 3% 이하, 약 2.5% 이하, 약 2% 이하, 약 1.5% 이하, 약 1% 이하, 약 0.9% 이하, 약 0.8% 이하, 약 0.7% 이하, 약 0.65% 이하, 약 0.6% 이하, 약 0.55% 이하, 약 0.5% 이하, 약 0.45% 이하, 또는 약 0.4% 이하인 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
또 다른 예에서, 본 명세서에서 제공되는 액상 조성물은, 단백질 (항체) 함량이 60 mg/ml, 70 mg/ml, 또는 80 mg/ml인 경우, 통상적인 SEC(size exclusion chromatography)로 40℃에서 1주일 이상, 예를 들어 1주일, 2주일, 3주일, 또는 4주일 동안 보관 시에 측정된 단백질 응집물 함량 또는 응집률 (High Molecular Weight %(w/v); %HMW)의 변화량 (Δ% HMW; 보관 4주차의 %HMW - 0주차(보관 개시 시(initial))의 %HMW)이, 완충제로서 아세테이트, 숙시네이트, 및 글루타메이트 중에서 선택된 하나 이상을 포함하거나 및/또는 히스티딘을 포함하지 않는 것을 제외하고 다른 조성이 동일한 액상 조성물과 비교하여, 약 0.01% 이상, 약 0.5% 이상, 약 0.1% 이상, 약 0.15% 이상, 약 0.2% 이상, 약 0.25% 이상, 약 0.3% 이상, 약 0.35% 이상, 약 0.4% 이상, 약 0.45% 이상, 약 0.5% 이상, 약 0.55% 이상, 약 0.6% 이상, 약 0.65% 이상, 약 0.7% 이상, 약 0.75% 이상, 약 0.8% 이상, 약 0.85% 이상, 약 0.9% 이상, 약 0.95% 이상, 또는 약 1% 이상 낮은 것일 수 있으며, 예컨대, 약 0.01% 내지 약 2%, 약 0.05% 내지 약 2%, 약 0.1% 내지 약 2%, 약 0.15% 내지 약 2%, 약 0.2% 내지 약 2%, 약 0.25% 내지 약 2%, 약 0.3% 내지 약 2%, 약 0.35% 내지 약 2%, 약 0.4% 내지 약 2%, 약 0.45% 내지 약 2%, 약 0.5% 내지 약 2%, 약 0.55% 내지 약 2%, 약 0.6% 내지 약 2%, 약 0.65% 내지 약 2%, 약 0.7% 내지 약 2%, 0.75% 내지 약 2%, 0.8% 내지 약 2%, 0.85% 내지 약 2%, 0.9% 내지 약 2%, 0.95% 내지 약 2%, 또는 1% 내지 약 2% 낮은 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
다른 예에서, 본 명세서에서 제공되는 액상 조성물은, 단백질 (항체) 함량이 60 mg/ml, 70 mg/ml, 또는 80 mg/ml인 경우, 통상적인 CEX (cation exchange chromatography)로 40℃에서 1주일 이상, 예를 들어 1주일, 2주일, 3주일, 또는 4주일 동안 보관 시에 측정된 단백질 산성 변형체 함량 (%Acidic)의 변화량 (Δ%Acidic; 보관 4주차의 %Acidic - 0주차(보관 개시 시(initial))의 %Acidic)이, 약 30.0% 이하, 약 28.0% 이하, 약 25.0% 이하, 약 23% 이하, 약 20% 이하, 약 18% 이하, 약 15% 이하, 약 13% 이하, 약 10% 이하, 약 9% 이하, 약 8% 이하, 약 7.5% 이하, 약 7.2% 이하, 약 7% 이하, 약 6.9% 이하, 약 6.8% 이하, 약 6.7% 이하, 약 6.6% 이하, 약 6.5% 이하, 약 6.4% 이하, 약 6.3% 이하, 약 6.2% 이하, 약 6.1% 이하, 약 6.0% 이하, 약 5.9% 이하, 약 5.8% 이하, 약 5.7% 이하, 약 5.6% 이하, 약 5.5% 이하, 약 5.4% 이하, 약 5.3% 이하, 약 5.2% 이하, 약 5.1% 이하, 또는 약 5.0% 이하일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
또 다른 예에서, 본 명세서에서 제공되는 액상 조성물은, 단백질 (항체) 함량이 60 mg/ml, 70 mg/ml, 또는 80 mg/ml인 경우, 통상적인 CEX (cation exchange chromatography)로 40℃에서 1주일 이상, 예를 들어 1주일, 2주일, 3주일, 또는 4주일 동안 보관 시에 측정된 단백질 산성 변형체 함량 (%Acidic)의 변화량 (Δ%Acidic; 보관 4주차의 %Acidic - 0주차(보관 개시 시(initial))의 %Acidic)이, 완충제로서 아세테이트, 숙시네이트, 및 글루타메이트 중에서 선택된 하나 이상을 포함하거나 및/또는 히스티딘을 포함하지 않는 것을 제외하고 다른 조성이 동일한 액상 조성물과 비교하여, 약 0.01% 이상, 약 0.5% 이상, 약 0.1% 이상, 약 0.15% 이상, 약 0.2% 이상, 약 0.25% 이상, 약 0.3% 이상, 약 0.35% 이상, 약 0.4% 이상, 약 0.45% 이상, 약 0.5% 이상, 약 0.55% 이상, 약 0.6% 이상, 약 0.65% 이상, 약 0.7% 이상, 약 0.75% 이상, 약 0.8% 이상, 약 0.85% 이상, 약 0.9% 이상, 약 0.95% 이상, 또는 약 1% 이상 낮은 것일 수 있으며, 예컨대, 약 0.01% 내지 약 2%, 약 0.05% 내지 약 2%, 약 0.1% 내지 약 2%, 약 0.15% 내지 약 2%, 약 0.2% 내지 약 2%, 약 0.25% 내지 약 2%, 약 0.3% 내지 약 2%, 약 0.35% 내지 약 2%, 약 0.4% 내지 약 2%, 약 0.45% 내지 약 2%, 약 0.5% 내지 약 2%, 약 0.55% 내지 약 2%, 약 0.6% 내지 약 2%, 약 0.65% 내지 약 2%, 약 0.7% 내지 약 2%, 0.75% 내지 약 2%, 0.8% 내지 약 2%, 0.85% 내지 약 2%, 0.9% 내지 약 2%, 0.95% 내지 약 2%, 또는 1% 내지 약 2% 낮은 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
8. 약학적 조성물
다른 예는 상기 액상 조성물을 포함하는 약학적 조성물을 제공한다. 상기 액상 조성물이 단백질로서 예컨대, 항-RANKL 항체를 포함하는 경우, 상기 약학적 조성물은 골다공증 (Osteoporosis), 암 또는 암의 전이 (예컨대, 암의 골전이 (Bone metastasis))에 대하여 예방 또는 치료 효과를 갖는 것일 수 있다. 따라서, 일 예는 상기 액상 조성물을 포함하는 골다공증, 암, 또는 암 전이 (예컨대, 암의 골전이)의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
상기 액상 조성물 또는 약학적 조성물은 인간 등의 포유 동물에 투여하기 위한 것일 수 있다.
상기 액상 조성물 또는 약학적 조성물은 경구 또는 비경구적 경로로 투여되는 것일 수 있다. 비경구 투여 (예컨대, 주사)인 경우에는 정맥 내 투여, 피하 투여, 근육 투여, 복강 내 투여, 내피 투여, 국소 투여, 비 내 투여, 폐 내 투여, 직장 내 투여, 종양 내 투여 등으로 투여할 수 있다.
일 구체예에서, 상기 액상 조성물 또는 약학 조성물이 항-RANKL 항체를 포함하는 경우, 상기 조성물은 정맥 내 투여 또는 피하 투여 경로로 투여될 수 있다.
상기 액상 조성물 또는 약학적 조성물은 상기한 투여 경로에 적합하도록 제형화된 것일 수 있다.
상기 액상 조성물 또는 약학 조성물은 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 것일 수 있다. 상기 "약학적으로 허용 가능한 담체"는 비-독성 고체, 반고체 또는 액체 충전제, 희석제, 캡슐화 물질, 제형 보조제, 및 임의의 통상적인 유형의 부형제들 중에서 선택된 하나 이상을 의미할 수 있다.
9. 단백질의 안정화 방법 또는 안정화된 액상 조성물 제조 방법
다른 예는 상기 설명한 성분을 혼합하는 단계를 포함하는 단백질의 안정화 방법 또는 안정화된 액상 조성물의 제조 방법을 제공한다.
일 구체예에서, 상기 방법은,
(1) 단백질 및 당, 당유도체 및/또는 아미노산; 또는
(2) 단백질, 당, 당유도체 및/또는 아미노산, 및 히스티딘
을 혼합하는 단계를 포함하는, 단백질의 안정화 방법 또는 안정화된 수성 액상 조성물의 제조 방법이 제공된다. 상기 방법 (1)은 아세테이트, 숙시네이트, 및 글루타메이트로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상 또는 완충제를 혼합하는 단계를 수행하지 않는 것을 특징으로 한다. 상기 방법 (1) 또는 (2)는 계면활성제를 혼합하는 단계를 추가로 포함할 수 있다.
단백질의 안정화 방법 또는 안정화된 수성 액상 조성물의 제조 방법에 사용되는 각 성분의 종류 및 사용량의 구체적 설명은 앞서 기재한 바와 같다.
항체와 같은 단백질 약물 제형에 있어서, 완충제 종류 및 농도, 안정화제 종류 및 농도, pH 등을 최적화함으로써, 단백질 약물의 안정성이 증진된 단백질 약물 제형을 얻을 수 있다.
도 1a 및 1c는 실시예 1.2에서 측정된 단백질 액상 제형의 40℃ 조건에서 4주 동안의 평균 Δ%HMW를 나타내는 그래프로, 왼쪽은 완충제 종류별 평균 Δ%HMW, 오른쪽은 안정화제 종류별 평균 Δ%HMW를 각각 나타내고, 도 1c의 점선은 PROLIA® 제형의 평균 Δ%HMW (0.69%)를 나타낸다.
도 1b는 실시예 1.2에서 측정된 단백질 액상 제형의 40℃ 조건에서 4주 동안의 평균 Δ%Acidic를 나타내는 그래프로, 왼쪽은 완충제 종류별 평균 Δ%Acidic, 오른쪽은 안정화제 종류별 평균 Δ%Acidic를 각각 나타낸다.
도 2a는 실시예 2.2에서 측정된 단백질 액상 제형의 40℃ 조건에서 4주 동안의 평균 Δ%HMW를 나타내는 그래프로, 왼쪽은 단백질 약물 농도별 평균 Δ%HMW, 가운데는 완충제 종류별 평균 Δ%HMW, 오른쪽은 안정화제 종류별 평균 Δ%HMW를 각각 나타낸다.
도 2b는 실시예 2.2에서 측정된 단백질 액상 제형의 40℃ 조건에서 4주 동안의 평균 Δ%Acidic를 나타내는 그래프로, 왼쪽은 단백질 약물 농도별 평균 Δ%Acidic, 가운데는 완충제 종류별 평균 Δ%Acidic, 오른쪽은 안정화제 종류별 평균 Δ%Acidic을 각각 나타낸다.
도 3은 실시예 3에서 측정된 단백질 액상 제형의 40℃ 조건에서 4주 동안 측정된 단백질 농도, 완충제 농도, 안정화제 농도, 및 pH에 따른 평균 Δ%HMW를 나타내는 그래프이다.
이하 본 발명을 실시예 및 시험예를 통하여 더욱 상세히 설명한다. 그러나, 이들 실시예 및 시험예는 본 발명을 예시하기 위한 것으로, 본 발명을 제한하는 것으로 해석되어서는 안 된다.
실시예 1. 완충제 /안정화제 선별
1.1. 액상 제형의 제조
단백질 약물로서 항-RANKL 인간 모노클로날 항체인 데노수맙 (Denosumab; Accession No. DB06643)을 사용하여, 단백질 약물 60mg/mL, 0.01% 폴리소르베이트20(PS20)를 포함하고, 완충제 및 안정화제를 하기의 조성으로 포함하는 pH 5.2의 액상 제형을 제조하였다:
STD No. Buffer Stabilizer
1-3 Acetic acid (17mM) 4.7% Sorbitol
1 Acetic acid (17mM) 4.7% Sorbitol
2 Acetic acid (17mM) 4.7% Sorbitol
3 Acetic acid (17mM) 4.7% Sorbitol
4 Acetic acid (17mM) 8% Sucrose
5 Acetic acid (17mM) 8% Trehalose
6 Acetic acid (17mM) 140 mM Arginine-HCl
7 Acetic acid (17mM) 0.8% NaCl
8 Succinate (17mM) 4.7% Sorbitol
9 Succinate (17mM) 8% Sucrose
10 Succinate (17mM) 8% Trehalose
11 Succinate (17mM) 140 mM Arginine-HCl
12 Succinate (17mM) 0.8% NaCl
13 Histidine (17mM) 4.7% Sorbitol
14 Histidine (17mM) 8% Sucrose
15 Histidine (17mM) 8% Trehalose
16 Histidine (17mM) 140 mM Arginine-HCl
17 Histidine (17mM) 0.8% NaCl
18 Buffer free 4.7% Sorbitol
19 Buffer free 8% Sucrose
20 Buffer free 8% Trehalose
21 Buffer free 140 mM Arginine-HCl
22 Buffer free 0.8% NaCl
(1-3: PROLIA®와 동일 조성; %: w/v)
1.2. %HMW 및 %Acidic 측정 (40℃ 조건)
실시예 1.1에서 제조된 다양한 조합의 완충제/안정화제를 포함하는 액상 제형 (데노수맙 60mg/mL, pH 5.2)의 안정성을 시험하기 위하여, 상기 액상 제형을 40℃ 조건에서 4주 동안 보관하면서 제형 내의 단백질 응집물 함량 (%HMW) 및 산성 변형체 함량 (%Acidic)을 SEC (size-exclusion chromatography)과 CEX (cation exchange chromatography)로 각각 측정하였다. 상세하게, SEC (size-exclusion chromatography) 분석법으로 %HMW를, CEX (cation exchange chromatography)분석법으로 %Acidic를 각각 측정하였다.
보다 구체적으로, SEC(size-exclusion chromatography)는 Waters社의 HPLC system을 사용하여 제조사 매뉴얼에 따라서 수행하였다. Retention time (단백질의 분자량)에 따라 총 3개의 peak로 분리되며, 이 3개의 peak는 Retention time이 짧은 (단백질의 분자량이 큰) 순서대로 HMW peak, monomer peak, 및 LMW peak에 해당되고, 이 때 모노머 보다 먼저 검출되는 물질을 HMW로 정의하며, %HMW는 HPLC (Waters 2695 separation module alliance) 및 column (Tosoh, TSK-gel G3000 SWXL)을 사용하여 0.7 mL/min. flow rate, 24 min injection run time 조건 하에서 측정하였다 (%HMW = AreaHMW/AreaTOTAL x 100).
또한, CEX (cation exchange chromatography)는 Waters社의 HPLC system을 사용하여 제조사 매뉴얼에 따라서 수행하였으며, Retention time (단백질의 전하)에 따라 총 3개의 peak로 분리되며, 이 3개의 peak는 Retention time이 짧은 순서대로 Acidic peak, Main peak, 및 Basic peak에 해당된다. 이 때 Main peak 보다 먼저 검출되는 물질을 Acidic peak로 정의하며, %Acidic(산성 변형체 함량)는 HPLC (Waters 2695 separation module alliance) 및 column (Thermo Scientific, Propac WCX-10 column)을 사용하여 1.0 mL/min flow rate, 32 min injection run time 조건 하에서 측정하였다 (%Acidic = AreaAcidic /AreaTOTAL x 100).
%HMW (High molecular weight%): %HMW= {area of HMW/area of (HMW + monomer + LMW)}*100;
% Acidic: Acidic variants의 함량비 (%Acidic = {area of acidic/area of (acidic + main + basic)}*100).
상기 측정된 %HMW (0주차 %HMW, 4주차 %HMW), 및 Δ%HMW (4주차 %HMW - 0주차 %HMW)를 표 1에, %Acidic (0주차 %Acidic, 4주차 %Acidic), 및 Δ%Acidic (4주차 %Acidic - 0주차 %Acidic)를 표 2에 각각 나타내었다:
STD No. Buffer (No. 1~17: 17mM) Stabilizer %HMW
0 wk 4 wk
%HMW Δ%HMW
1-3 Acetic acid 4.7% Sorbitol 0.44 1.14 0.69
N=3, SD:0.04 N=3, SD:0.07 N=3, SD:0.09
1 Acetic acid 4.7% Sorbitol 0.47 1.07 0.60
2 Acetic acid 4.7% Sorbitol 0.47 1.12 0.65
3 Acetic acid 4.7% Sorbitol 0.39 1.22 0.83
4 Acetic acid 8% Sucrose 0.40 1.15 0.75
5 Acetic acid 8% Trehalose 0.43 0.87 0.44
6 Acetic acid 140 mM Arginine-HCl 0.41 1.34 0.93
7 Acetic acid 0.8% NaCl 0.46 2.03 1.57
8 Succinate 4.7% Sorbitol 0.42 1.24 0.82
9 Succinate 8% Sucrose 0.41 1.34 0.93
10 Succinate 8% Trehalose 0.43 1.29 0.86
11 Succinate 140 mM Arginine-HCl 0.40 1.74 1.34
12 Succinate 0.8% NaCl 0.47 2.40 1.93
13 Histidine 4.7% Sorbitol 0.40 0.87 0.47
14 Histidine 8% Sucrose 0.40 0.83 0.43
15 Histidine 8% Trehalose 0.40 0.89 0.49
16 Histidine 140 mM Arginine-HCl 0.28 1.17 0.89
17 Histidine 0.8% NaCl 0.42 1.84 1.42
18 Buffer free 4.7% Sorbitol 0.53 1.02 0.49
19 Buffer free 8% Sucrose 0.51 0.99 0.48
20 Buffer free 8% Trehalose 0.50 1.06 0.56
21 Buffer free 140 mM Arginine-HCl 0.39 1.15 0.76
22 Buffer free 0.8% NaCl 0.50 1.85 1.35
(1-3: PROLIA®와 동일 조성)
STD No. Buffer (No. 1~17: 17mM) Stabilizer %Acidic
0 wk 4 wk
%Acidic Δ%Acidic
1-3 Acetic acid Sorbitol 17.62 25.31 7.69
N=3, SD:0.13 N=3, SD:0.24 N=3, SD:0.06
1 Acetic acid Sorbitol 17.78 25.42 7.64
2 Acetic acid Sorbitol 17.46 25.53 8.07
3 Acetic acid Sorbitol 17.62 24.97 7.35
4 Acetic acid Sucrose 18.39 25.19 6.8
5 Acetic acid Trehalose 18.01 24.9 6.89
6 Acetic acid Arginine-HCl 17.23 23.72 6.49
7 Acetic acid NaCl 17.59 24.36 6.77
8 Succinate Sorbitol 18.3 29.32 11.02
9 Succinate Sucrose 17.91 29.26 11.35
10 Succinate Trehalose 17.95 28.29 10.34
11 Succinate Arginine-HCl 17.19 25.16 7.97
12 Succinate NaCl 18.21 26.87 8.66
13 Histidine Sorbitol 18.11 23.93 5.82
14 Histidine Sucrose 17.27 23.81 6.54
15 Histidine Trehalose 18.14 24.01 5.87
16 Histidine Arginine-HCl 17.94 23.71 5.77
17 Histidine NaCl 17.76 24.67 6.91
18 Buffer free Sorbitol 18.7 23.78 5.08
19 Buffer free Sucrose 17.88 25.11 7.23
20 Buffer free Trehalose 18.45 25.35 6.9
21 Buffer free Arginine-HCl 17.5 24.24 6.74
22 Buffer free NaCl 18.4 24.08 5.68
(1-3: PROLIA®와 동일 조성)
또한, 4주 동안의 평균 Δ%HMW를 도 1a 및 1c (Δ%HMW; 왼쪽: 완충제 종류별 평균 Δ%HMW, 오른쪽: 안정화제 종류별 평균 Δ%HMW, 1c의 점선: PROLIA® 제형의 평균 Δ%HMW (0.69%))에, 4주 동안의 평균 Δ%Acidic를 도 1b (Δ%Acidic; 왼쪽: 완충제 종류별 평균 Δ%Acidic, 오른쪽: 안정화제 종류별 평균 Δ%Acidic)에 각각 나타내었다.
표 1, 표 2, 도 1a 및 도 1b에서 알 수 있는 바와 같이, 데노수맙 60 mg/mL 및 pH 5.2 조건 하에서, 완충제로서 히스티딘을 포함하는 제형 13~17 및 완충제를 포함하지 않는 제형 18~22가 완충제로서 아세트산 또는 숙시네이트를 포함하는 제형 1~12와 비교하여, 낮은 Δ%HMW 및/또는 낮은 Δ%Acidic를 보이며, 안정화제로서 소르비톨, 수크로오스, 트레할로오스, 또는 Arg를 포함하는 제형, 보다 구체적으로 소르비톨, 수크로오스, 또는 트레할로오스를 포함하는 제형, 특히 소르비톨을 포함하는 제형이 비교적 낮은 Δ%HMW 및/또는 낮은 Δ%Acidic를 보였다. 상기 결과는 완충제로서 히스티딘을 포함하거나 완충제를 포함하지 않는 제형 및 안정화제로서 소르비톨, 수크로오스, 트레할로오스, 또는 Arg를 포함하는 제형에서, 완충제로서 아세트산 또는 숙시네이트를 포함하는 제형과 비교하여, 단백질 약물이 비교적 안정함을 보여준다.
상기 표 1 및 2에 나타난 다양한 안정화제 (소르비톨, 수크로오스, 트레할로스, Arg 또는 NaCl)을 포함하는 제형의 단백질 응집물 함량 (%HMW) 및 산성 변형체 함량 (%Acidic) 결과들의 버퍼 종류에 따른 평균값을 구하여, 하기 표 3에 나타내었다:
Average of STD Buffer (No. 1~17: 17mM) 평균 %HMW 평균 %Acidic
0 wk 4 wk 0 wk 4 wk
%HMW Δ%HMW %Acidic Δ%Acidic
1-7 Acetic acid 0.43 1.31 0.88 17.77 24.70 6.93
8-12 Succinate 0.43 1.60 1.18 17.91 27.78 9.87
13-17 Histidine 0.38 1.12 0.74 17.84 24.03 6.18
18-22 Buffer free 0.49 1.21 0.73 18.19 24.51 6.33
상기 표 3에서 확인되는 바와 같이, 데노수맙 60 mg/mL 및 pH 5.2 조건 하에서, 완충제로서 히스티딘을 포함한 제형 13-17, 완충제를 포함하지 않는 제형 18-22가 완충제로서 아세트산 또는 숙시네이트를 포함하는 제형 1-12와 비교하여 낮은 평균 Δ%HMW와 평균 Δ%Acidic을 보였다. 상기 결과는 완충제로서 히스티딘을 포함하거나, 완충제를 포함하지 않는 제형에서 단백질 약물이 비교적 안정함을 보다 명확하게 보여준다.
실시예 2. 단백질 약물 함량에 따른 안정성 확인
2.1. 액상 제형의 제조
단백질 약물로서 항-RANKL 인간 모노클로날 항체인 데노수맙 (Denosumab)을 사용하여, 단백질 약물 60mg/mL, 70mg/mL, 또는 80mg/mL, 및 0.01% 폴리소르베이트20(PS20)를 포함하고, 완충제 (아세테이트 또는 히스티딘) 및 안정화제 (소르비톨, 수크로오스, 또는 트레할로오스)를 하기의 표 4의 조성으로 포함하는 pH 5.2의 액상 제형을 제조하였다:
STD No. Protein Conc. Buffer (17mM) Stabilizer
1-3 60 mg/mL Acetic acid 4.7% Sorbitol
4 8.0% Sucrose
5 8.0% Trehalose
6 Histidine 4.7% Sorbitol
7 8.0% Sucrose
8 8.0% Trehalose
9-11 70 mg/mL Acetic acid 4.7% Sorbitol
12 8.0% Sucrose
13 8.0% Trehalose
14 Histidine 4.7% Sorbitol
15 8.0% Sucrose
16 8.0% Trehalose
17 80 mg/mL Acetic acid 4.7% Sorbitol
18 8.0% Sucrose
19 8.0% Trehalose
20 Histidine 4.7% Sorbitol
21 8.0% Sucrose
22 8.0% Trehalose
23-25 60 mg/mL Prolia®
(1-3: PROLIA®와 동일 조성; 9-11: Xgeva®와 유사 조성; %: w/v)
2.2. %HMW 및 %Acidic 측정 (40℃ 조건)
실시예 2.1에서 제조된 다양한 농도의 단백질 약물 (데노수맙) 및 다양한 조합의 완충제/안정화제를 포함하는 액상 제형 (pH 5.2)의 안정성을 시험하기 위하여, 실시예 2.2를 참조하여, 상기 액상 제형을 40℃ 조건에서 4주 동안 보관하면서 제형 내의 단백질의 응집 정도 및 charge variant들의 함량을 각각 측정하였다.
상기 측정된 %HMW (0주차 %HMW, 4주차 %HMW), 및 Δ%HMW (4주차 %HMW - 0주차 %HMW)를 표 5에, %Acidic (0주차 %Acidic, 4주차 %Acidic), 및 Δ%Acidic (4주차 %Acidic - 0주차 %Acidic)를 표 6에 각각 나타내었다:
STD No. Protein Conc. Buffer (17mM) Stabilizer %HMW
0 wk 4 wk
%HMW Δ%HMW
1-3 60 mg/mL Acetic acid 4.7% Sorbitol 0.43 0.86 0.43
N=3, SD: 0.03 N=3, SD: 0.03 N=3, SD: 0.02
4 8.0% Sucrose 0.43 0.93 0.50
5 8.0% Trehalose 0.45 1.05 0.60
1-5 Average 0.44 0.95 0.51
6 Histidine 4.7% Sorbitol 0.41 0.66 0.25
7 8.0% Sucrose 0.44 0.74 0.30
8 8.0% Trehalose 0.46 0.74 0.28
6-8 Average 0.44 0.71 0.28
9-11 70 mg/mL Acetic acid 4.7% Sorbitol 0.47 1.04 0.57
N=3, SD: 0.04 N=3, SD: 0.05 N=3, SD: 0.08
12 8.0% Sucrose 0.47 1.05 0.58
13 8.0% Trehalose 0.46 0.98 0.52
9-13 Average 0.47 1.02 0.56
14 Histidine 4.7% Sorbitol 0.53 0.79 0.26
15 8.0% Sucrose 0.48 0.81 0.33
16 8.0% Trehalose 0.48 0.78 0.30
14-16 Average 0.50 0.79 0.30
17 80 mg/mL Acetic acid 4.7% Sorbitol 0.51 1.16 0.65
18 8.0% Sucrose 0.49 1.24 0.75
19 8.0% Trehalose 0.51 1.26 0.75
17-19 Average 0.50 1.22 0.72
20 Histidine 4.7% Sorbitol 0.51 0.84 0.33
21 8.0% Sucrose 0.53 1.01 0.48
22 8.0% Trehalose 0.48 0.88 0.40
20-22 Average 0.51 0.91 0.40
23-25 60 mg/mL Prolia® 0.61 0.98 0.36
N=3, SD: 0.01 N=3, SD: 0.07 N=3, SD: 0.08
(1-3: PROLIA®와 동일 조성; 9-11: Xgeva®와 유사 조성)
STD No. Protein Conc. Buffer (17mM) Stabilizer %Acidic
0 wk 4 wk
%Acidic Δ%Acidic
1-3 60 mg/mL Acetic acid 4.7% Sorbitol 18.36 24.32 5.96
N=3, SD: 0.09 N=3, SD: 0.10 N=3, SD: 0.17
4 8.0% Sucrose 18.37 24.27 5.90
5 8.0% Trehalose 18.21 23.70 5.49
1-5 Average 18.31 24.10 5.78
6 Histidine 4.7% Sorbitol 17.96 23.31 5.35
7 8.0% Sucrose 17.62 23.71 6.09
8 8.0% Trehalose 18.27 23.57 5.30
6-8 Average 17.95 23.53 5.58
9-11 70 mg/mL Acetic acid 4.7% Sorbitol 18.18 24.36 6.18
N=3, SD: 0.12 N=3, SD: 0.52 N=3, SD: 0.41
12 8.0% Sucrose 18.01 23.68 5.67
13 8.0% Trehalose 18.39 24.13 5.74
9-13 Average 18.19 24.06 5.86
14 Histidine 4.7% Sorbitol 18.18 23.18 5.00
15 8.0% Sucrose 18.49 23.86 5.37
16 8.0% Trehalose 18.37 23.28 4.91
14-16 Average 18.35 23.44 5.09
17 80 mg/mL Acetic acid 4.7% Sorbitol 18.19 24.19 6.00
18 8.0% Sucrose 17.94 24.93 6.99
19 8.0% Trehalose 17.98 23.76 5.78
17-19 Average 18.04 24.29 6.26
20 Histidine 4.7% Sorbitol 18.04 23.25 5.21
21 8.0% Sucrose 18.16 24.00 5.84
22 8.0% Trehalose 18.06 23.10 5.04
20-22 Average 18.09 23.45 5.36
23-25 60 mg/mL Prolia® 20.24 27.86 7.62
N=3, SD: 0.20 N=3, SD: 0.85 N=3, SD: 0.67
(1-3: PROLIA®와 동일 조성; 9-11: Xgeva®와 유사 조성)
또한, 4주 동안의 평균 Δ%HMW를 도 2a (Δ%HMW; 왼쪽: 단백질 약물 농도별 평균 Δ%HMW, 가운데: 완충제 종류별 평균 Δ%HMW, 오른쪽: 안정화제 종류별 평균 Δ%HMW)에, 4주 동안의 평균 Δ%Acidic를 도 2b (Δ%Acidic; 왼쪽: 단백질 약물 농도별 평균 Δ%Acidic, 가운데: 완충제 종류별 평균 Δ%Acidic, 오른쪽: 안정화제 종류별 평균 Δ%Acidic)에 각각 나타내었다.
표 5, 표 6, 도 2a 및 도 2b의 결과로부터, 전체적으로, 완충제로서 히스티딘을 포함하는 제형이 아세트산을 포함하는 제형과 비교하여 단백질 약물의 안정성이 우수하고, 그 중에서도 특히, 단백질 약물 (데노수맙) 농도가 60 mg/mL이고, 완충제로서 히스티딘 및 안정화제로서 소르비톨을 포함하는 제형의 단백질 약물의 안정성이 가장 우수한 것이 확인되었다. 또한, 표 6 및 표 7의 평균값 데이터에서 보여지는 바와 같이, 완충제로서 히스티딘을 포함하는 제형의 평균 Δ%HMW 및 Δ%Acidic는 시험된 모든 단백질 약물 농도, 특히 60 mg/mL 또는 70 mg/mL에서, 아세트산 포함 제형보다 낮게 나타났다. 보다 구체적으로, 완충제로서 히스티딘을 포함하는 제형의 평균 Δ%HMW은 약 0.33%인 반면, 아세트산 포함 제형의 평균 Δ%HMW 0.59%로 나타났고, 완충제로서 히스티딘을 포함하는 제형의 평균 Δ%Acidic는 약 5.35%인 반면, 아세트산 포함 제형의 평균 Δ%Acidic 5.97%로 나타났다. 이러한 결과는 완충제로서 히스티딘을 포함하는 제형이 시험된 모든 단백질 약물 농도, 특히 60 mg/mL 또는 70 mg/mL에서, 아세트산을 포함하는 제형과 비교하여 단백질 응집물 변화량 및 산성 변형체 함량이 현저히 낮고, 제형 안정성이 우수함을 보여준다.
실시예 3. 안정화제 농도, 완충제 농도, pH 및 단백질 약물 농도에 따른 안정성 확인
단백질 약물로서 항-RANKL 인간 모노클로날 항체인 데노수맙 (Denosumab), 완충제로서 히스티딘, 안정화제로서 소르비톨, 및 0.01% 폴리소르베이트20(PS20)을 다음의 표 7의 조성으로 포함하는 액상 제형을 준비하였다:
STD No. Protein Conc . pH Histidine Buffer Conc . (mM) Stabilizer Conc. (%) Surfactant Conc. (%)
1 50 mg/mL 4.9 10 4.0 0.01
2 5.5
3 30 4.0
4 5.5
5 5.5 10 4.0
6 5.5
7 30 4.0
8 5.5
9 80 mg/mL 4.9 10 4.0
10 5.5
11 30 4.0
12 5.5
13 5.5 10 4.0
14 5.5
15 30 4.0
16 5.5
17 65 mg/mL 5.2 20 4.75
18 4.75
19 4.75
(표 7에서 %는 %(w/v)를 의미함)
상기 준비된 액상 제형을 40℃ 조건에서 4주 동안 보관하면서 실시예 1.2를 참조하여 4주 동안 Δ%HMW 및 Δ%Acidic을 측정하였다.
상기 측정된 %HMW (0주차 %HMW, 4주차 %HMW), 및 Δ%HMW (4주차 %HMW - 0주차 %HMW)를 표 8에, %Acidic (0주차 %Acidic, 4주차 %Acidic), 및 Δ%Acidic (4주차 %Acidic - 0주차 %Acidic)를 표 9에 각각 나타내었다:
STD No. Protein Conc. pH Histidine Buffer Conc. (mM) Stabilizer Conc. (%) Surfactant Conc. (%) %HMW
0 wk 4 wk
%HMW Δ%HMW
1 50 mg/mL 4.9 10 4.0 0.01 0.27 0.48 0.21
2 5.5 0.28 0.45 0.17
3 30 4.0 0.27 0.58 0.31
4 5.5 0.26 0.62 0.36
5 5.5 10 4.0 0.31 0.51 0.20
6 5.5 0.32 0.54 0.22
7 30 4.0 0.33 0.64 0.31
8 5.5 0.33 0.62 0.29
9 80 mg/mL 4.9 10 4.0 0.31 0.72 0.41
10 5.5 0.32 0.71 0.39
11 30 4.0 0.31 0.93 0.62
12 5.5 0.31 0.90 0.59
13 5.5 10 4.0 0.40 0.91 0.51
14 5.5 0.40 0.93 0.53
15 30 4.0 0.39 0.95 0.56
16 5.5 0.39 0.89 0.50
17 65 mg/mL 5.2 20 4.75 0.33N=3, SD: 0.00 0.70N=3, SD: 0.01 0.37N=3, SD: 0.01
18 4.75
19 4.75
STD No. Protein Conc. pH Histidine Buffer Conc. (mM) Stabilizer Conc. (%) Surfactant Conc. (%) %Acidic
0 wk 4 wk
%Acidic Δ%Acidic
1 50 mg/mL 4.9 10 4.0 0.01 16.98 20.73 3.75
2 5.5 16.78 20.54 3.76
3 30 4.0 17.29 21.20 3.91
4 5.5 17.31 20.72 3.41
5 5.5 10 4.0 17.56 20.63 3.07
6 5.5 16.27 21.12 4.85
7 30 4.0 17.58 21.64 4.06
8 5.5 17.08 21.70 4.62
9 80 mg/mL 4.9 10 4.0 16.79 20.69 3.90
10 5.5 17.20 21.11 3.91
11 30 4.0 16.84 21.11 4.27
12 5.5 17.33 20.98 3.65
13 5.5 10 4.0 17.21 21.68 4.47
14 5.5 16.61 21.42 4.81
15 30 4.0 17.28 21.93 4.65
16 5.5 17.36 21.33 3.97
17 65 mg/mL 5.2 20 4.75 17.10N=3, SD: 0.49 20.60N=3, SD: 0.22 3.50N=3, SD: 0.55
18 4.75
19 4.75
상기 표 8 및 9에 나타낸 단백질 농도, 완충제 농도, 안정화제 농도, 및 pH에 따른 4주 동안의 평균 Δ%HMW를 도 3에 나타내었다. 도 3에서와 같이, 시험된 범위에서, 단백질 제형 내의 완충액 농도가 낮을수록, 단백질 약물이 농도가 낮을수록 단백질의 안정성이 증가하고, 안정화제 농도 및 pH는 시험된 모든 범위에서 동등 정도의 단백질 안정성을 보이는 것으로 나타났다.
실시예 4. 액상 제형 내 데노수맙 활성 시험
데노수맙 60mg/ml 및 0.01%(w/v) 폴리소르베이트 20를 포함하고, pH 5.2이며, 완충제와 안정화제를 다음의 표 11의 조성으로 포함하는 액상 제형을 준비하고, 상기 제형 내의 약리학적 유효성분인 데노수맙의 활성 유지 여부를 시험하기 위하여, 상기 제형을 40℃ 조건에서 4주 동안 보관하면서 조성물 내의 데노수맙의 RANKL에 대한 %RBA (Relative Binding Activity) 및 %RP (Relative Potency Activity)를 측정하였다.
%RP (Relative Potency)는 다음의 방법으로 측정하였다: Denosumab 및 RANKL을 순차적으로 loading시킨 96-well plate에 RANK 293 cell (luciferase와 RANK receptor를 발현하는 HEK 293 cell)을 loading 및 incubation 후, EnVision® multibabel reader (PerkinElmer, 2015)를 이용하여 %RP를 분석하였다.
%RBA (Relative Binding Activity)는 다음의 방법으로 측정하였다: MaxiSorp 96 well plate (Nunc)에 RANKL을 coating시키고 blocking이 완료된 plate에 denosumab을 loading 한다. 이후 2차 항체 처리를 하고 TMB ELISA substance solution과 stop solution을 순차적으로 처리한 후 Microplate Reader (SpectraMax 190)를 이용하여 %RBA를 분석하였다.
상기 측정된 단백질 액상 제형의 40℃에서의 initial(0주차)와 4주차의 %RBA, 4주 간의 %RBA 변화율 (Δ%RBA), 및 initial(0주차)와 4주차의 %RP 및 그 변화율 (Δ%RP)을 표 10에 나타내었다:
Buffer Stabilizer RANKL Neutralization
Initial 4 wk Initial 4 wk
%RBA %RBA %ΔRBA %RP %RP %ΔRP
17 mM acetic acid 4.7%(w/v) Sorbitol 105[N=3, SD:1] 105[N=3, SD:3] 0[N=3, SD:3] 99[N=3, SD:0] 99[N=3, SD:2] 0[N=3, SD:2]
8.0%(w/v) Trehalose 106[N=3, SD:5] 102[N=3, SD:2] -4[N=3, SD:2] 97[N=3, SD:1] 91[N=3, SD:4] -6[N=3, SD:4]
17 mM histidine 4.7%(w/v) Sorbitol 105[N=3, SD:3] 107[N=3, SD:1] 2[N=3, SD:1] 101[N=3, SD:8] 106[N=3, SD:5] 5[N=3, SD:5]
8.0%(w/v) Trehalose 107[N=3, SD:5] 111[N=3, SD:3] 4[N=3, SD:3] 92[N=3, SD:4] 100[N=3, SD:2] 8[N=3, SD:2]
Prolia® 105[N=3, SD:5] 100[N=3, SD:2] -5[N=3, SD:2] 105[N=3, SD:2] 104[N=3, SD:0] -1[N=3, SD:0]
표 10에 나타난 바와 같이, 완충제로서 히스티딘을 포함하는 제형이 40℃의 가혹 조건에서 비교적 장기간 (4주간) 보관시 단백질(데노수맙)의 활성(기능)을 잘 유지함을 보여준다.

Claims (50)

  1. 항-RANKL 항체를 포함하고, pH 5 내지 7 이고,
    아세테이트를 포함하지 않는, 액상 조성물.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 조성물은 숙시네이트를 포함하지 않는, 액상 조성물.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    상기 조성물은 글루타메이트를 포함하지 않는, 액상 조성물.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 조성물은 히스티딘을 포함하는, 액상 조성물.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 조성물은 1 내지 70mM의 히스티딘을 포함하는, 액상 조성물.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 조성물은 단백질 응집 억제제(aggregation inhibitor) 및/또는 산성 변형 억제제(acidic variants inhibitor)의 기능을 하는 히스티딘을 포함하는, 액상 조성물.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 조성물은 40℃에서 4주일 동안 보관 시,
    단백질 응집물 함량의 변화량 (Δ%HMW)이 5.0% 이하; 또는
    단백질 응집물 함량의 변화량 (Δ%HMW)이, 아세테이트, 숙시네이트, 및 글루타메이트 중에서 선택된 하나 이상을 포함하거나 및/또는 히스티딘을 포함하지 않는 것을 제외하고 다른 조성이 동일한 조성물과 비교하여, 0.05% 이상 낮은 것인,
    액상 조성물.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 조성물은, 40℃에서 4주일 동안 보관 시,
    산성 변형체 함량의 변화량 (Δ%Acidic)이 25.0% 이하; 또는
    산성 변형체 함량의 변화량 (Δ%Acidic)이, 아세테이트, 숙시네이트, 및 글루타메이트 중에서 선택된 하나 이상을 포함하거나 및/또는 히스티딘을 포함하지 않는 것을 제외하고 다른 조성이 동일한 조성물과 비교하여, 0.05% 이상 낮은 것인,
    액상 조성물.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 조성물은 알라닌, 아르기닌, 아스파라진, 아스파르트산, 글루타민, 글라이신, 이소류신, 류신, 라이신, 메티오닌, 페닐알라닌, 프롤린, 세린, 트레오닌, 트립토판, 타이로신, 발린, 시스테인, 및 이들의 약학적으로 허용 가능한 염으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 아미노산을 포함하는 액상 조성물.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 조성물은 0.1 mM 내지 300 mM의 아미노산을 포함하는, 액상 조성물.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 조성물은 글루코오스, 프룩토오스, 갈락토오스, 만노오스, 수크로오스, 락토오스, 말토오스, 트레할로오스, 프룩토올리고당, 갈락토올릭고당, 만난올리고당, 전분, 글리코겐, 셀룰로스, 키틴, 펙틴, 알돈산, 울로손산, 우론산, 알다르산, 글리세롤, 에리스리톨, 트레이톨, 아라비톨, 자이리톨, 리비톨, 만니톨, 소르비톨, 갈락티톨, 푸시톨, 이디톨, 이노시톨, 볼레미톨, 아이소말트, 말티톨, 락티톨, 말토트리이톨, 말토테트라이톨 및 폴리글리시톨로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 당 또는 당알코올을 포함하는, 액상 조성물.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 조성물은 전체 조성물 기준으로 1 내지 15 %(w/v)의 당 또는 1 내지 10 %(w/v)의 당알코올을 포함하는, 액상 조성물.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 조성물은 계면활성제를 포함하는, 액상 조성물.
  14. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 조성물은 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 80, 또는 이들의 조합인 계면활성제를 포함하는, 액상 조성물.
  15. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 조성물은 전체 조성물 기준으로 0.001 내지 1 %(w/v)의 계면활성제를 포함하는, 액상 조성물.
  16. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 조성물은 항-RANKL 항체를 50mg/mL 내지 80mg/mL의 양으로 포함하는, 액상 조성물.
  17. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항-RANKL 항체는 데노수맙인, 액상 조성물.
  18. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 조성물은 항-RANKL 항체 함량이 60mg/mL인 주사제와 70mg/mL인 주사제에 동시에 적용 가능한, 액상 조성물.
  19. 항-RANKL 항체를 포함하고, pH 5 내지 7 이고,
    숙시네이트를 포함하지 않는, 액상 조성물.
  20. 제19항에 있어서,
    상기 조성물은 아세테이트를 포함하지 않는, 액상 조성물.
  21. 제19항 또는 제20항에 있어서,
    상기 조성물은 글루타메이트를 포함하지 않는, 액상 조성물.
  22. 제19항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 조성물은 히스티딘을 포함하는, 액상 조성물.
  23. 제19항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 조성물은 1 내지 70mM의 히스티딘을 포함하는, 액상 조성물.
  24. 제19항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 조성물은 단백질 응집 억제제(aggregation inhibitor) 및/또는 산성 변형 억제제(acidic variants inhibitor)의 기능을 하는 히스티딘을 포함하는, 액상 조성물.
  25. 제19항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 조성물은 40℃에서 4주일 동안 보관 시,
    단백질 응집물 함량의 변화량 (Δ%HMW)이 5.0% 이하; 또는
    단백질 응집물 함량의 변화량 (Δ%HMW)이, 아세테이트, 숙시네이트, 및 글루타메이트 중에서 선택된 하나 이상을 포함하거나 및/또는 히스티딘을 포함하지 않는 것을 제외하고 다른 조성이 동일한 조성물과 비교하여, 0.05% 이상 낮은 것인,
    액상 조성물.
  26. 제19항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 조성물은, 40℃에서 4주일 동안 보관 시,
    산성 변형체 함량의 변화량 (Δ%Acidic)이 25.0% 이하; 또는
    산성 변형체 함량의 변화량 (Δ%Acidic)이, 아세테이트, 숙시네이트, 및 글루타메이트 중에서 선택된 하나 이상을 포함하거나 및/또는 히스티딘을 포함하지 않는 것을 제외하고 다른 조성이 동일한 조성물과 비교하여, 0.05% 이상 낮은 것인,
    액상 조성물.
  27. 제19항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 조성물은 알라닌, 아르기닌, 아스파라진, 아스파르트산, 글루타민, 글라이신, 이소류신, 류신, 라이신, 메티오닌, 페닐알라닌, 프롤린, 세린, 트레오닌, 트립토판, 타이로신, 발린, 시스테인, 및 이들의 약학적으로 허용 가능한 염으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 아미노산을 포함하는, 액상 조성물.
  28. 제19항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 조성물은 0.1 mM 내지 300 mM의 아미노산을 포함하는, 액상 조성물.
  29. 제19항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 조성물은 글루코오스, 프룩토오스, 갈락토오스, 만노오스, 수크로오스, 락토오스, 말토오스, 트레할로오스, 프룩토올리고당, 갈락토올릭고당, 만난올리고당, 전분, 글리코겐, 셀룰로스, 키틴, 펙틴, 알돈산, 울로손산, 우론산, 알다르산, 글리세롤, 에리스리톨, 트레이톨, 아라비톨, 자이리톨, 리비톨, 만니톨, 소르비톨, 갈락티톨, 푸시톨, 이디톨, 이노시톨, 볼레미톨, 아이소말트, 말티톨, 락티톨, 말토트리이톨, 말토테트라이톨 및 폴리글리시톨로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 당 또는 당알코올을 포함하는, 액상 조성물.
  30. 제19항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 조성물은 전체 조성물 기준으로 1 내지 15 %(w/v)의 당 또는 1 내지 10 %(w/v)의 당알코올을 포함하는, 액상 조성물.
  31. 제19항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 조성물은 계면활성제를 포함하는, 액상 조성물.
  32. 제19항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기조성물은 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 80, 또는 이들의 조합인 계면활성제를 포함하는, 액상 조성물.
  33. 제19항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기조성물은 전체 조성물 기준으로 0.001 내지 1 %(w/v)의 계면활성제를 포함하는 포함하는, 액상 조성물.
  34. 제19항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 조성물은 항-RANKL 항체를 50mg/mL 내지 80mg/mL의 양으로 포함하는, 액상 조성물.
  35. 제19항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항-RANKL 항체는 데노수맙인, 액상 조성물.
  36. 제19항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 조성물은 항-RANKL 항체 함량이 60mg/mL인 주사제와 70mg/mL인 주사제에 동시에 적용 가능한, 액상 조성물.
  37. 항-RANKL 항체를 포함하고, pH 5 내지 7 이고,
    완충제를 포함하지 않는, 액상 조성물.
  38. 제37항에 있어서,
    상기 조성물은 히스티딘을 포함하지 않는, 액상 조성물.
  39. 제37항 또는 제38항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 조성물은 40℃에서 4주일 동안 보관 시,
    단백질 응집물 함량의 변화량 (Δ%HMW)이 5.0% 이하; 또는
    단백질 응집물 함량의 변화량 (Δ%HMW)이, 아세테이트, 숙시네이트, 및 글루타메이트 중에서 선택된 하나 이상을 포함하거나 및/또는 히스티딘을 포함하지 않는 것을 제외하고 다른 조성이 동일한 조성물과 비교하여, 0.05% 이상 낮은 것인,
    액상 조성물.
  40. 제37항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 조성물은, 40℃에서 4주일 동안 보관 시,
    산성 변형체 함량의 변화량 (Δ%Acidic)이 25.0% 이하; 또는
    산성 변형체 함량의 변화량 (Δ%Acidic)이, 아세테이트, 숙시네이트, 및 글루타메이트 중에서 선택된 하나 이상을 포함하거나 및/또는 히스티딘을 포함하지 않는 것을 제외하고 다른 조성이 동일한 조성물과 비교하여, 0.05% 이상 낮은 것인, 액상 조성물.
  41. 제37항 또는 제40항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 조성물은 알라닌, 아르기닌, 아스파라진, 아스파르트산, 글루타민, 글라이신, 이소류신, 류신, 라이신, 메티오닌, 페닐알라닌, 프롤린, 세린, 트레오닌, 트립토판, 타이로신, 발린, 시스테인, 및 이들의 약학적으로 허용 가능한 염으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 아미노산을 포함하는 액상 조성물.
  42. 제37항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 조성물은 0.1 mM 내지 300 mM의 아미노산을 포함하는, 액상 조성물.
  43. 제37항 내지 제42항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 조성물은 글루코오스, 프룩토오스, 갈락토오스, 만노오스, 수크로오스, 락토오스, 말토오스, 트레할로오스, 프룩토올리고당, 갈락토올릭고당, 만난올리고당, 전분, 글리코겐, 셀룰로스, 키틴, 펙틴, 알돈산, 울로손산, 우론산, 알다르산, 글리세롤, 에리스리톨, 트레이톨, 아라비톨, 자이리톨, 리비톨, 만니톨, 소르비톨, 갈락티톨, 푸시톨, 이디톨, 이노시톨, 볼레미톨, 아이소말트, 말티톨, 락티톨, 말토트리이톨, 말토테트라이톨 및 폴리글리시톨로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 당 또는 당알코올을 포함하는 액상 조성물.
  44. 제37항 내지 제43항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 조성물은 전체 조성물 기준으로 1 내지 15 %(w/v)의 당 또는 1 내지 10 %(w/v)의 당알코올을 포함하는, 액상 조성물.
  45. 제37항 내지 제44항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 조성물은 계면활성제를 포함하는, 액상 조성물.
  46. 제37항 내지 제45항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기조성물은 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 80, 또는 이들의 조합인 계면활성제를 포함하는, 액상 조성물.
  47. 제37항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기조성물은 전체 조성물 기준으로 0.001 내지 1 %(w/v)의 계면활성제를 포함하는, 액상 조성물.
  48. 제37항 내지 제47항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 조성물은 항-RANKL 항체를 50mg/mL 내지 80mg/mL의 양으로 포함하는, 액상 조성물.
  49. 제37항 내지 제48항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항-RANKL 항체는 데노수맙인 액상 조성물.
  50. 제37항 내지 제49항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 조성물은 항-RANKL 항체 함량이 60mg/mL인 주사제와 70mg/mL인 주사제에 동시에 적용 가능한 액상 조성물.
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