CN113365658A

CN113365658A - 包含蛋白质的稳定的液体组合物

Info

Publication number: CN113365658A
Application number: CN201980089204.8A
Authority: CN
Inventors: 郑荣硕; 洪慈慧; 朱景熙; 李才慜; 李宪周; 金龙局
Original assignee: Samsung Bioepis Co Ltd
Current assignee: Samsung Bioepis Co Ltd
Priority date: 2018-11-16
Filing date: 2019-11-15
Publication date: 2021-09-07
Also published as: KR20210079373A; BR112021009548A2; EP3881865A4; AU2019378544A1; CA3120190A1; WO2020101452A1; EP3881865A1; US20220008536A1; TW202033216A

Abstract

本发明涉及一种稳定的蛋白质液体制剂，并提供一种液体蛋白质组合物，该组合物包含蛋白质且其中不含缓冲剂和/或其中包含组氨酸，及其制备方法。

Description

包含蛋白质的稳定的液体组合物

技术领域

本公开涉及蛋白质的稳定液体制剂以及包含蛋白质且不含缓冲剂和/或包含组氨酸的液体组合物及其制备方法。

背景技术

可以设计用于靶向的抗体药物具有以下优点：与普通蛋白质药物相比，产生的副作用更少，即使以小剂量使用时也具有更大的治疗效果。然而，为了发挥这种效果，抗体药物不可避免地需要巨大的分子量和复杂的结构。这些结构特征可能导致物理/化学不稳定性，其可能导致抑制抗体药物的活性。因此，需要为其开发合适的制剂。

在抗体药物中，由于各种因素，例如温度、pH、缓冲剂、浓度赋形剂等，抗体可能变得不稳定。为了开发能够减少抗体药物的不稳定性并提高药用质量的制剂，已经进行了缓冲剂改性、pH优化、稳定剂添加等的尝试。

Denosumab以两种商业产品的形式销售：一种的商品名为

用于治疗骨质疏松症；另一种的商品名为

用于治疗癌症。每个产品的适应症也不同。

是液体配制的抗体药物，包含60mg/mL的地诺单抗，pH 5.2、17mM的冰醋酸缓冲剂，4.7％的山梨糖醇和0.01％的聚山梨醇酯20。

也是液体配制的抗体药物制剂，包含70mg/mL的地诺单抗，pH 5.2、18mM的冰醋酸缓冲剂，4.6％的山梨糖醇和0.01％的聚山梨醇酯20。尽管两种产品包含相同的成分，但是它们在包括抗体含量等的组成比例方面彼此不同。在Denosumab的两种产品的情况下，需要将抗体浓度差异引起的不稳定性最小化。由于

每年给药两次，并且相对较长的给药期需要更稳定的制剂，因此已经开发了更稳定的药物制剂。

发明内容

技术问题

因此，本公开提供了蛋白质的稳定的液体药物组合物。

一个实施方案提供了一种蛋白质的液体组合物，其包含蛋白质，具有5至7的pH，并且不包含(不含)选自乙酸盐、琥珀酸盐和谷氨酸盐中的至少一种，或不包含缓冲剂。液体组合物可进一步包含组氨酸。液体组合物可以进一步包含表面活性剂。液体组合物可以是水性液体组合物。

在一个实施方案中，液体组合物可以：

(1)包含蛋白质，例如抗体，例如抗RANKL抗体，

(2)的pH值为5至7，并且

(3-1)不含乙酸盐。

在另一个实施方案中，液体组合物可以：

(1)包含蛋白质，例如抗体，例如抗RANKL抗体，

(2)的pH值为5至7，并且

(3-2)不含琥珀酸盐。

在另一个实施方案中，液体组合物可以：

(1)包含蛋白质，例如抗体，例如抗RANKL抗体，

(2)的pH值为5至7，并且

(3-3)不含乙酸盐和琥珀酸盐。

液体组合物可以不含谷氨酸盐。液体组合物可进一步包含组氨酸。

在另一个实施方案中，液体组合物可以：

(1)包含蛋白质，例如抗体，例如抗RANKL抗体，

(2)的pH值为5至7，并且

(3-4)不含缓冲剂。在该上下文下，液体组合物可以不含组氨酸。

液体组合物可以是水性液体组合物。

液体组合物可以进一步包含选自糖、糖衍生物(糖酸、多元醇如糖醇等)、氨基酸、其药学上可接受的盐等中的至少一种，除了蛋白质或蛋白质和组氨酸(如果包含)之外。在本公开提供的液体组合物中，选自糖、糖衍生物、氨基酸、其药学上可接受的盐等中的至少一种可以用作稳定剂和/或张度剂。

在一个实施方案中，当液体组合物包含至少一种糖(例如，选自海藻糖、蔗糖、甘露糖和麦芽糖中的至少一种)时，其浓度可以在1％至15％(w/v)、3至15％(w/v)、5至15％(w/v)、7至15％(w/v)、1至10％(w/v)、3至10％(w/v)、5至10％(w/v)、7至10％(w/v)、1至7％(w/v)、2至7％(w/v)、3至7％(w/v)、4至7％(w/v)、1至5％(w/v)、2至5％(w/v)、3至5％(w/v)或4至5％(w/v)，4.5至5％(w/v)(例如约4.7％(w/v))或7.8至8.2％(w/v)(例如约7.8％(w/v)、约7.9％(w/v)、约8％(w/v)、约8.1％(w/v)或约8.2％(w/v))的范围内，基于总液体组合物；

当液体组合物包含至少一种糖醇(例如，选自山梨糖醇和甘露糖醇中的至少一种)时，其浓度可以在1％至10％(w/v)、2.5至10％(w/v)、3至10％(w/v)、3.5至10％(w/v)、4至10％(w/v)、1至8％(w/v)、2.5至8％(w/v)、3至8％(w/v)、3.5至8％(w/v)、4至8％(w/v)、1至6％(w/v)、2.5至6％(w/v)、3至6％(w/v)、3.5至6％(w/v)、4至6％(w/v)、4至5.5％(w/v)，4至5％(w/v)、4.2至4.8％(w/v))或4.4至4.7％(w/v)(例如约4.4％(w/v)、约4.5％(w/v)、约4.6％(w/v)或约4.7％(w/v))的范围内，基于总液体组合物；

当液体组合物包含至少一种氨基酸(例如，选自精氨酸(Arg)、赖氨酸(Lys)、脯氨酸(Pro)、甘氨酸(Gly)、丙氨酸(Ala)、蛋氨酸(Met)、丝氨酸(Ser)和氨基酸的药学上可接受的盐)时，其浓度可以在0.1至300mM、0.5至300mM、1至300mM、5至300mM、10至300mM、30至300mM、50至300mM、80至300mM、100至300mM、120至300mM、0.1至250mM、0.5至250mM、1至250mM、5至250mM、10至250mM、30至250mM、50至250mM、80至250mM、100至250mM、120至250mM、0.1至200mM、0.5至200mM、1至200mM、5至200mM、10至200mM、30至200mM、50至200mM、80至200mM、100至200mM、120至200mM、0.1至160mM、0.5至160mM、1至160mM、5至160mM、10至160mM、30至160mM、50至160mM、80至160mM、100至160mM、120至160mM或130至150mM的范围内。

在一个实施方案中，液体组合物可以进一步包含表面活性剂。当液体组合物包含表面活性剂时，表面活性剂可以0.001至1％(w/v)、0.001至0.5％(w/v)、0.001至0.1％(w/v)、0.001至0.05％(w/v)、0.005至1％(w/v)、0.005至0.5％(w/v)、0.005至0.1％(w/v)、0.005至0.05％(w/v)或0.008至0.02％(w/v)的浓度使用，基于总液体组合物。表面活性剂可以是蛋白质制剂中可以常规使用的任何一种。例如，表面活性剂可包含选自非离子表面活性剂的至少一种。

另一个实施方案提供了包含液体组合物的药物组合物。药物组合物具有与液体组合物中所含蛋白质的活性相对应的药理活性。

在液体组合物或药物组合物中，例如，蛋白质可具有10至500kDa、10至400kDa、10至300kDa、10至200kDa或10至150kDa的分子量。在一个实施方案中，蛋白质可以是RANKL(核因子κB配体的受体激活剂)拮抗剂(例如，抗RANKL抗体)，例如地诺单抗(denosumab)(分子量为约147kDa；例如，

或

)，但不限于此。当蛋白质是RANKL拮抗剂(例如，抗RANKL抗体)，例如地诺单抗时，药物组合物可应用于治疗骨质疏松症和/或癌症/癌症转移。

另一个实施方案提供了用于稳定蛋白质或用于制备蛋白质的稳定液体组合物的方法，该方法包括在上述组合物中混合蛋白质的步骤。

技术方案

本公开提供了一种蛋白质的稳定的液体药物组合物及其制备方法。

一个实施方案提供了一种液体蛋白质组合物，其包含蛋白质，具有5至7的pH，并且不含选自乙酸盐、琥珀酸盐和谷氨酸盐中的至少一种，或者不含缓冲剂。液体组合物可进一步包含组氨酸。液体组合物可以进一步包含表面活性剂。液体组合物可以是水性液体组合物。

在一个实施方案中，液体组合物可以：

(1)包含蛋白质，例如抗体，例如抗RANKL抗体，

(2)的pH值为5至7，并且

(3-1)不含乙酸盐。

在另一个实施方案中，液体组合物可以：

(1)包含蛋白质，例如抗体，例如抗RANKL抗体，

(2)的pH值为5至7，并且

(3-2)不含琥珀酸盐。

在另一个实施方案中，液体组合物可以：

(1)包含蛋白质，例如抗体，例如抗RANKL抗体，

(2)的pH值为5至7，并且

(3-3)不含乙酸盐和琥珀酸盐。

液体组合物可以不含谷氨酸盐。

液体组合物可进一步包含组氨酸。

在另一个实施方案中，液体组合物可以：

(1)包含蛋白质，例如抗体，例如抗RANKL抗体，

(2)的pH值为5至7，并且

液体组合物可以是水性液体组合物。

液体组合物可具有在4至8的范围内，例如4.5至7、4.8至7、5至7、5.2至7、4.5至6.8、4.8至6.8、5至6.8、5.2至6.8、4.5至6.5、4.8至6.5、5至6.5、5.2至6.5、4.5至6.3、4.8至6.3、5至6.3、5.2至6.3、4.5至6、4.8至6、5至6、5.2至6、4.5至5.8、4.8至5.8、5至5.8、5.2至5.8、4.5至5.6、4.8至5.6、5至5.6、5.2至5.6、4.9至5.5、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4或5.5的pH。

本公开提供的蛋白质的液体组合物可以不含乙酸盐和琥珀酸盐之一或两者，也可以不含谷氨酸盐，和/或可以包含组氨酸，由此pH作为影响蛋白质稳定性的重要因素之一可以保持在上述合适的范围内，并且组合物中的蛋白质可以具有优异的稳定性(例如，优异的蛋白质稳定性指标，例如高分子量(％HMW)、电荷变体百分比(例如酸性变体的量(％酸性)。

如本文所用，诸如“本公开提供的蛋白质的液体组合物不含成分A”的描述旨在表示组合物不包含成分A(组合物中不存在成分A)或基本上不包含成分A(组合物中基本上不存在成分A)。就这一点而言，描述“组合物中基本上不包含或不存在成分A”可以理解为“根本不包含(或不存在)成分A”或“包含(或存在)的成分A的量太小，无法显示预期的药物功能或无法在蛋白质的液体组合物中检测到”。在一个实施方案中，术语“不含成分A”可以表示成分A未通过常规方法检测到。

在下文，将给出本公开提供的液体组合物的详细描述。

1.蛋白质

在本公开提供的液体组合物中，蛋白质可以是分子量为10至500kDa、10至400kDa、10至300kDa、10至200kDa、或10至150kDa的蛋白质药物，例如蛋白质，例如抗体。

可以使用任何抗体，只要它具有通过二硫键彼此连接的两个重链，其中每个重链通过二硫键连接至相应的轻链。该抗体可以是天然存在的一种，或者是重组/化学合成(非天然获得的)的一种。如本文所用，术语“抗体”旨在包括但不限于任何常规抗体和/或其抗原结合片段或单链，包含至少一部分具有与抗原结合的生物活性的免疫球蛋白分子的任何蛋白质或肽分子。因此，抗体可以包含单结构域抗体或其片段，例如，单结构域抗体或其配体结合部分的重链或轻链中的互补决定区(CDR)、重链或轻链可变区、重链或轻链恒定区、构架区(FR)和/或其任何部分和/或结合蛋白的至少一部分。在一个实施方案中，该抗体可以是单克隆抗体。在一个实施方案中，抗体可以是动物来源的抗体、嵌合抗体、人源化抗体或人抗体。在一个实施方案中，抗体可以包括单、双或多特异性抗体。

在一个实施方案中，蛋白质可以是RANKL(核因子κB配体的受体激活剂)拮抗剂(例如，抗RANKL抗体)，例如地诺单抗(denosumab)(分子量为约147kDa；例如，

)，但不限于此。当蛋白质是RANKL拮抗剂(例如，抗RANKL抗体)，例如地诺单抗时，药物组合物可应用于治疗骨质疏松症和/或癌症。

液体组合物中包含的蛋白质可以是天然存在的或非天然存在的，例如可以重组或合成的方式产生。

液体组合物可以包含浓度为5mg/ml至300mg/ml、5mg/ml至250mg/ml、5mg/ml至200mg/ml、5mg/ml至150mg/ml、5mg/ml至125mg/ml、5mg/ml至100mg/ml、5mg/ml至90mg/ml、5mg/ml至80mg/ml、5mg/ml至70mg/ml、5mg/ml至60mg/ml、10mg/ml至300mg/ml、10mg/ml至250mg/ml、10mg/ml至200mg/ml、10mg/ml至150mg/ml、10mg/ml至125mg/ml、10mg/ml至100mg/ml、10mg/ml至90mg/ml、10mg/ml至80mg/ml、10mg/ml至70mg/ml、10mg/ml至60mg/ml、20mg/ml至300mg/ml、20mg/ml至250mg/ml、20mg/ml至200mg/ml、20mg/ml至150mg/ml、20mg/ml至125mg/ml、20mg/ml至100mg/ml、20mg/ml至90mg/ml、20mg/ml至80mg/ml、20mg/ml至70mg/ml、20mg/ml至60mg/ml、30mg/ml至300mg/ml、30mg/ml至250mg/ml、30mg/ml至200mg/ml、30mg/ml至150mg/ml、30mg/ml至125mg/ml、30mg/ml至100mg/ml、30mg/ml至90mg/ml、30mg/ml至80mg/ml、30mg/ml至70mg/ml、30mg/ml至60mg/ml、40mg/ml至300mg/ml、40mg/ml至250mg/ml、40mg/ml至200mg/ml、40mg/ml至150mg/ml、40mg/ml至125mg/ml、40mg/ml至100mg/ml、40mg/ml至90mg/ml、40mg/ml至80mg/ml、40mg/ml至70mg/ml、40mg/ml至60mg/ml、50mg/ml至300mg/ml、50mg/ml至250mg/ml、50mg/ml至200mg/ml、50mg/ml至150mg/ml、50mg/ml至125mg/ml、50mg/ml至100mg/ml、50mg/ml至90mg/ml、50mg/ml至80mg/ml、50mg/ml至70mg/ml、50mg/ml至60mg/ml、60mg/ml至300mg/ml、60mg/ml至250mg/ml、60mg/ml至200mg/ml、60mg/ml至150mg/ml、60mg/ml至125mg/ml、60mg/ml至100mg/ml、60mg/ml至90mg/ml、60mg/ml至80mg/ml或60mg/ml至70mg/ml，例如浓度为50mg/ml、55mg/ml、60mg/ml、65mg/ml、70mg/ml、75mg/ml或80mg/ml的蛋白质。

2.缓冲剂

本公开中提供的液体组合物可以不含缓冲剂。在一个实施方案中，不包含在液体组合物中(排除在液体组合物之外)的缓冲剂可以是具有缓冲能力的常规使用的缓冲剂中的至少一种。例如，不包含在液体组合物中的缓冲剂可包含选自以下的至少一种：(1)选自磷酸、乙酸、柠檬酸、琥珀酸和碳酸的至少一种酸，及其离子形式(例如磷酸盐、乙酸盐、柠檬酸盐、琥珀酸盐、碳酸盐等)；(2)其药学上可接受的盐(例如，钠盐、钾盐等)，(3)选自谷氨酸和天冬氨酸的至少一种氨基酸，以及其离子形式(例如，谷氨酸盐、天冬氨酸盐等)和(4)氨基酸的药学上可接受的盐(例如，盐酸盐等)。

除非在本公开中另有说明，否则(1)的酸和/或(3)的氨基酸及其离子形式彼此具有相同的含义，或者可以互换使用。

液体组合物可以不包含选自以下的至少一种：磷酸、乙酸(例如，冰醋酸)、柠檬酸、琥珀酸、碳酸、酸(磷酸、乙酸、柠檬酸、琥珀酸、碳酸等)的离子形式(例如，磷酸盐、乙酸盐、柠檬酸盐、琥珀酸盐、碳酸盐等)、酸(磷酸、乙酸、柠檬酸、琥珀酸和碳酸)的药学上可接受的盐(例如，钠盐、钾盐等)；和天冬氨酸、谷氨酸、氨基酸(天冬氨酸、谷氨酸)的离子形式(例如，谷氨酸盐、谷氨酸盐等)和氨基酸(天冬氨酸、谷氨酸)的药学上可接受的盐(例如，盐酸盐等)。液体组合物中不包含的氨基酸可以不是蛋白质中存在的氨基酸，而是游离氨基酸。

在一个实施方案中，液体组合物可以不含乙酸和/或乙酸盐。

在另一个实施方案中，液体组合物可以不含琥珀酸和/或琥珀酸盐。

在另一个实施方案中，液体组合物可以不含乙酸、乙酸盐、琥珀酸和琥珀酸盐。

在另一个实施方案中，液体组合物可以不含谷氨酸和/或谷氨酸盐。

在另一个实施方案中，液体组合物可以不含乙酸、乙酸盐、谷氨酸和谷氨酸盐。

在另一个实施方案中，液体组合物可以不含琥珀酸、琥珀酸盐、谷氨酸和谷氨酸盐。

在另一个实施方案中，液体组合物可以不含乙酸、乙酸盐、琥珀酸、琥珀酸盐、谷氨酸和谷氨酸盐。

在另一个实施方案中，液体组合物可以不含乙酸、乙酸盐、琥珀酸、琥珀酸盐、谷氨酸、谷氨酸盐、磷酸、磷酸盐、柠檬酸、柠檬酸盐、碳酸、碳酸盐、天冬氨酸和天冬氨酸盐。

3.组氨酸

本公开中提供的液体组合物可以包含组氨酸。在液体组合物中，组氨酸可以充当缓冲剂。在液体组合物中，组氨酸还可以充当蛋白质的稳定剂。例如，组氨酸可以抑制蛋白质的酸性变体(抑制酸性变体的形成)或用作蛋白质的酸性变体抑制剂。在液体组合物中，组氨酸可以抑制蛋白质的酸性变体(抑制酸性变异体的形成，减少酸性增量百分比)。而且，组氨酸可能具有抑制蛋白质聚集的作用(例如，抑制高分子量(HMW)的形成，降低HMW增量百分比)。因此，液体组合物可以包含组氨酸作为缓冲剂，和/或酸性变体抑制剂和/或蛋白质聚集抑制剂。

在液体组合物中，组氨酸可以是分离的游离氨基酸形式(即，不是蛋白质的组氨酸残基)。

如果液体组合物包含组氨酸，则液体组合物中组氨酸的浓度可以在1至100mM、1至70mM、1至50mM、1至40mM、1至30mM、1至25mM、1至22mM、1至20mM、5至100mM、5至70mM、5至50mM、5至40mM、5至30mM、5至25mM、5至22mM、5至20mM、10至100mM、10至70mM、10至50mM、10至40mM、10至30mM、10至25mM、10至22mM、10至20mM、14至100mM、14至70mM、14至50mM、14至40mM、14至30mM、14至25mM、14至22mM、14至20mM、16至100mM、16至70mM、16至50mM、16至40mM、16至30mM、16至25mM、16至22mM或16至20mM的范围内；例如，16mM、17mM、18mM、19mM或20mM。

4.糖、糖衍生物和/或氨基酸

液体组合物可以包含选自糖、糖衍生物和氨基酸中的至少一种。

选自糖、糖衍生物和氨基酸的至少一种可以用作液体组合物中蛋白质的稳定剂和/或张度剂，但不限于此。就这一点而言，可被用作稳定剂和/或张度剂的氨基酸可以是除组氨酸以外的至少一种氨基酸(即，该氨基酸可以不包括组氨酸)。

(1)糖和糖衍生物(糖酸、多元醇如糖醇)

在一个实施方案中，糖可以是选自单糖、二糖、寡糖和多糖中的至少一种，但不限于此。单糖可以是选自葡萄糖、果糖、半乳糖、甘露糖等中的至少一种，但不限于此。二糖可以是选自蔗糖、乳糖、麦芽糖、海藻糖等中的至少一种，但不限于此。寡糖可以是选自低聚果糖、低聚半乳糖、甘露寡糖等中的至少一种，但不限于此。多糖可以是选自淀粉、糖原、纤维素、甲壳素、果胶等中的至少一种，但不限于此。

糖酸可以是选自醛糖酸(甘油酸等)、酮醣酸(神经氨酸等)、糖醛酸(葡糖醛酸等)、糖二酸(酒石酸等)等中的至少一种，但不限于此。

糖醇可以是选自甘油、赤藓糖醇、苏糖醇、阿拉伯糖醇、木糖醇、核糖醇、甘露糖醇、山梨糖醇、半乳糖醇、岩藻糖醇、艾杜糖醇、肌醇、庚七醇、异麦芽酮糖醇、麦芽糖醇、乳糖醇、麦芽三糖醇、麦芽四糖醇、聚葡糖醇等中的至少一种，但不限于此。

在一个实施方案中，液体组合物可以包含至少一种选自海藻糖、蔗糖、甘露糖、山梨糖醇、麦芽糖、甘露醇等的糖或糖醇(例如，选自山梨糖醇、蔗糖、海藻糖等中的至少一种)。

在一个实施方案中，当液体组合物包含至少一种糖(例如，选自海藻糖、蔗糖、甘露糖和麦芽糖中的至少一种)时，其浓度可以在1％至15％(w/v)、3至15％(w/v)、5至15％(w/v)、7至15％(w/v)、1至10％(w/v)、3至10％(w/v)、5至10％(w/v)、7至10％(w/v)、1至7％(w/v)、2至7％(w/v)、3至7％(w/v)、4至7％(w/v)、1至5％(w/v)、2至5％(w/v)、3至5％(w/v)、4至5％(w/v)、4.5至5％(w/v)(例如，约4.7％(w/v))或7.8至8.2％(w/v)(例如约8％(w/v))(例如，海藻糖或蔗糖可以7.8至8.2％(w/v)的量被包含(例如约7.8％(w/v)、约7.9％(w/v)、约8％(w/v)、约8.1％(w/v)或约8.2％(w/v))的范围内，基于总液体组合物；且

当液体组合物包含至少一种糖醇(例如，选自山梨糖醇和甘露糖醇中的至少一种)时，其浓度可以在1％至10％(w/v)、2.5至10％(w/v)、3至10％(w/v)、3.5至10％(w/v)、4至10％(w/v)、1至8％(w/v)、2.5至8％(w/v)、3至8％(w/v)、3.5至8％(w/v)、4至8％(w/v)、1至6％(w/v)、2.5至6％(w/v)、3至6％(w/v)、3.5至6％(w/v)、4至6％(w/v)、4至5.5％(w/v)，4至5％(w/v)、4.2至4.8％(w/v))或4.4至4.7％(w/v)(例如约4.4％(w/v)、约4.5％(w/v)、约4.6％(w/v)或约4.7％(w/v))的范围内，基于总液体组合物。

在一个实施方案中，液体组合物可包含：

至少一种选自海藻糖、蔗糖、甘露糖和麦芽糖的糖，其浓度为1％至15％(w/v)、3至15％(w/v)、5至15％(w/v)、7至15％(w/v)、1至10％(w/v)、3至10％(w/v)、5至10％(w/v)、7至10％(w/v)、1至7％(w/v)、2至7％(w/v)、3至7％(w/v)、4至7％(w/v)、1至5％(w/v)、2至5％(w/v)、3至5％(w/v)、4至5％(w/v)、4.5至5％(w/v)(例如约4.7％(w/v))或7.8至8.2％(w/v)(例如约7.8％(w/v)、约7.9％(w/v)、约8％(w/v)、约8.1％(w/v)或约8.2％(w/v))的范围内，基于其总液体组合物；

至少一种选自山梨糖醇和甘露糖醇的糖醇，其浓度为1％至10％(w/v)、2.5至10％(w/v)、3至10％(w/v)、3.5至10％(w/v)、4至10％(w/v)、1至8％(w/v)、2.5至8％(w/v)、3至8％(w/v)、3.5至8％(w/v)、4至8％(w/v)、1至6％(w/v)、2.5至6％(w/v)、3至6％(w/v)、3.5至6％(w/v)、4至6％(w/v)、4至5.5％(w/v)、4至5％(w/v)、4.2至4.8％(w/v)或4.4至4.7％(w/v)(例如约4.4％(w/v)、约4.5％(w/v)、约4.6％(w/v)或约4.7％(w/v)，基于其总液体组合物；或

或它们的组合。

更特别地，液体组合物可以包括：

海藻糖或蔗糖，其浓度为1至15％(w/v)、3至15％(w/v)、4至15％(w/v)、5至15％(w/v)、7至15％(w/v)、1至10％(w/v)、3至10％(w/v)、4至10％(w/v)、5至10％(w/v)、7至10％(w/v)、1至7％(w/v)、3至7％(w/v)、4至7％(w/v)、1至5％(w/v)、3至5％(w/v)、4至5％(w/v)、4.2至5％(w/v)、4.5至5％(w/v)、7至9％(w/v)、7至8.5％(w/v)、7至8.2％(w/v)、7.5至9％(w/v)、7.5至8.5％(w/v)、7.5至8.2％(w/v)、7.8至9％(w/v)、7.8至8.5％(w/v)、7.8至8.2％(w/v)、4.7(w/v)、7.8％(w/v)、7.9％(w/v)、8％(w/v)、8.1％(w/v)或8.2％(w/v)，基于其总液体组合物；

山梨糖醇，其浓度为1至10％(w/v)、2.5至10％(w/v)、3至10％(w/v)、3.5至10％(w/v)、4至10％(w/v)、1至8％(w/v)、2.5至8％(w/v)、3至8％(w/v)、3.5至8％(w/v)、4至8％(w/v)、1至6％(w/v)、2.5至6％(w/v)、3至6％(w/v)、3.5至6％(w/v)、4至6％(w/v)、4至5.5％(w/v)、4至5.2％(w/v)、4至5％(w/v)、4至4.8％(w/v)、4.1至5.5％(w/v)、4.1至5.2％(w/v)、4.1至5％(w/v)、4.1至4.8％(w/v)、4.1至4.7％(w/v)、4.2至5.5％(w/v)、4.2至5.2％(w/v)、4.2至5％(w/v)、4.2至4.8％(w/v)、4.2至4.7％(w/v)、4.4％(w/v)、4.5％(w/v)、4.6％(w/v)或4.7％(w/v)，基于其总液体组合物；或

它们的组合。

(2)氨基酸

如本公开中所使用的，术语“氨基酸”可以指选自氨基酸本身、其离子形式及其药学上可接受的盐中的至少一种。氨基酸可以是L-形式、D-形式或外消旋混合物，并且例如可以是L-形式，但不限于此。

作为稳定剂和/或张度剂包含的氨基酸可以是选自除组氨酸之外的氨基酸及其药学上可接受的盐中的至少一种。例如，氨基酸可以是选自丙氨酸(Ala)、精氨酸(Arg)、天冬酰胺(Asn)、天冬氨酸(Asp)、谷氨酰胺(Gln)、谷氨酸(Glu)、甘氨酸(Gly)、异亮氨酸(Ile)、亮氨酸(Leu)、赖氨酸(Lys)、蛋氨酸(Met)、苯丙氨酸(Phe)、脯氨酸(Pro)、丝氨酸(Ser)、苏氨酸(Thr)、色氨酸(Trp)、酪氨酸(Tyr)、缬氨酸(Val)、半胱氨酸(Cys)及其药学上可接受的盐(例如盐酸盐、乙酰氨基酸盐等)中的至少一种。氨基酸可以不是存在于本公开提供的蛋白质中的氨基酸，而是游离氨基酸。

在一个实施方案中，氨基酸可包括选自精氨酸(Arg)、赖氨酸(Lys)、脯氨酸(Pro)、甘氨酸(Gly)、丙氨酸(Ala)、蛋氨酸(Met)、丝氨酸(Ser)和氨基酸的药学上可接受的盐(例如盐酸盐、乙酰基氨基酸盐等)中的至少一种。

在一个实施方案中，液体组合物可包含至少一种氨基酸(除组氨酸之外；例如，选自精氨酸(Arg)、赖氨酸(Lys)、脯氨酸(Pro)、甘氨酸(Gly)、丙氨酸(Ala)、蛋氨酸(Met)、丝氨酸(Ser)和氨基酸的药学上可接受的盐中的至少一种)。就这一点而言，液体组合物中氨基酸的浓度可为0.1至300mM、0.5至300mM、1至300mM、5至300mM、10至300mM、30至300mM、50至300mM、80至300mM、100至300mM、120至300mM、0.1至250mM、0.5至250mM、1至250mM、5至250mM、10至250mM、30至250mM、50至250mM、80至250mM、100至250mM、120至250mM、0.1至200mM、0.5至200mM、1至200mM、5至200mM、10至200mM、30至200mM、50至200mM、80至200mM、100至200mM、120至200mM、0.1至160mM、0.5至160mM、1至160mM、5至160mM、10至160mM、30至160mM、50至160mM、80至160mM、100至160mM、120至160mM或130至150mM。

在一个实施方案中，液体组合物可包含浓度为80至200mM、100至200mM、130至200mM、80至150mM、100至150mM或120至160mM的选自精氨酸(Arg)、赖氨酸(Lys)、脯氨酸(Pro)、甘氨酸(Gly)、丙氨酸(Ala)、蛋氨酸(Met)、丝氨酸(Ser)和氨基酸的药学上可接受的盐的至少一种氨基酸。

更具体地，液体组合物可包含浓度为80至200mM、100至200mM、120至200mM、80至160mM、100至160mM、120至160mM、120至155mM、120至150mM、120至145mM、130至160mM、130至155mM、130至150mM、130至145mM、130至142mM、135至160mM、135至155mM、135至150mM、135至145mM、135至142mM、138至160mM、138至155mM、138至150mM、138至145mM、138至142mM或140mM的精氨酸(Arg)或精氨酸盐酸盐(Arg-HCl)。

5.氯化钠和其他成分

在一个实施方案中，液体组合物可以不含氯化钠。氯化钠可以用作稳定剂和/或张度剂。在另一个实施方案中，除了上述糖、糖衍生物和/或氨基酸之外，液体组合物还可包含氯化钠。在另一个实施方案中，液体组合物不包含单独的氯化钠作为稳定剂和/或张度剂。即，当液体组合物包含氯化钠时，如上所述，选自糖、糖衍生物(糖酸、多元醇如糖醇)、氨基酸及其药学上可接受的盐中的至少一种也可以包含在液体组合物中。

在另一个实施方案中，液体组合物可以不包含聚乙二醇(例如，PEG3350)、环糊精衍生物(例如，磺丁基醚-β-环糊精)等作为稳定剂。

6.表面活性剂

在一个实施方案中，液体组合物可以进一步包含表面活性剂。考虑到在液体组合物中，表面活性剂可以0.001至1％(w/v)、0.001至0.5％(w/v)、0.001至0.1％(w/v)、0.001至0.05％(w/v)、0.005至1％(w/v)、0.005至0.5％(w/v)、0.005至0.1％(w/v)、0.005至0.05％(w/v)或0.008至0.02％(w/v)的浓度包含，基于总液体组合物。

表面活性剂可以是药学上可接受的并且能够将蛋白质均匀地分散在液体组合物介质中的任何表面活性剂。表面活性剂可以是非离子表面活性剂，例如，选自聚山梨醇酯(例如，聚山梨醇酯20(聚氧乙烯(20)脱水山梨糖醇单月桂酸酯)、聚山梨醇酯40(聚氧乙烯(20)脱水山梨糖醇单棕榈酸酯)、聚山梨醇酯60(聚氧乙烯(20)脱水山梨糖醇单硬脂酸酯)、聚山梨酯80(聚氧乙烯(20)脱水山梨糖醇单油酸酯)；聚氧乙烯后的数字(20)表示氧乙烯单元(-(CH₂CH₂O)-))的总数、泊洛沙姆(PEO-PPO-PEO共聚物；PEO：聚环氧乙烷、PPO：聚环氧丙烷))、聚乙烯-聚丙二醇、聚氧乙烯化合物(例如，聚氧乙烯-硬脂酸酯、聚氧乙烯烷基醚(烷基：C1-C30)、聚氧乙烯单月桂基醚、烷基苯基聚氧乙烯共聚物(烷基：C1-C30)等)、十二烷基硫酸钠(SDS)等中的至少一种。例如，表面活性剂可以是聚山梨醇酯(例如聚山梨醇酯20)。

7.液体组合物

液体组合物可以包含在相应上述浓度内的蛋白质；糖、糖衍生物和/或氨基酸；组氨酸(如果包含的话)和表面活性剂(如果包含的话)，其余为水性介质(例如水(纯水)、盐溶液、注射液等)。

本公开中提供的液体组合物可以与生物体等渗。例如，液体组合物可具有约200mOsm/kg至约450mOsm/kg、约200mOsm/kg至约400mOsm/kg、约200mOsm/kg至约350mOsm/kg、约200mOsm/kg至约330mOsm/kg、约250mOsm/kg至约450mOsm/kg、约250mOsm/kg至约400mOsm/kg、约250mOsm/kg至约350mOsm/kg、约250mOsm/kg至约330mOsm/kg、约270mOsm/kg至约450mOsm/kg、约270mOsm/kg至约400mOsm/kg、270mOsm/kg至约350mOsm/kg、270mOsm/kg至约330mOsm/kg、约300mOsm/kg至约450mOsm/kg、约300mOsm/kg至约400mOsm/kg、约300mOsm/kg至约350mOsm/kg或约300mOsm/kg约330mOsm/kg的渗透压，但不限于此。渗透压可以通过稳定剂来调节。

本公开中提供的液体组合物可具有约0mS/cm或更大(或大于0mS/cm)、约0.0001mS/cm或更大、或约0.001mS/cm或更大的范围内，例如，约0mS/cm至约10mS/cm、约0mS/cm至约7mS/cm、0mS/cm至约5mS/cm、约0mS/cm至约2.5mS/cm、约0mS/cm至约1mS/cm、约0mS/cm至约0.5mS/cm、约0mS/cm至约0.1mS/cm、约0mS/cm至约0.05mS/cm、大于约0mS/cm和约10mS/cm或更小、大于约0mS/cm和约7mS/cm或更小、大于0mS/cm和约5mS/cm或更小、大于约0mS/cm和约2.5mS/cm或更小、大于约0mS/cm和约1mS/cm或更小、大于约0mS/cm和约0.5mS/cm或更小、大于约0mS/cm cm和约0.1mS/cm或更小、大于约0mS/cm和约0.05mS/cm或更小、约0.0001mS/cm至约10mS/cm、约0.0001mS/cm至约7mS/cm、约0.0001mS/cm至约5mS/cm、约0.0001mS/cm至约2.5mS/cm、约0.0001mS/cm至约1mS/cm、约0.0001mS/cm至约0.5mS/cm、约0.0001mS/cm至约0.1mS/cm、约0.0001mS/cm至约0.05mS/cm、约0.001mS/cm至约10mS/cm、约0.001mS/cm至约7mS/cm、0.001mS/cm至约5mS/cm、约0.001mS/cm至约2.5mS/cm、0.001mS/cm至约1mS/cm、约0.001mS/cm至约0.5mS/cm、约0.001mS/cm至约0.1mS/cm或约0.001mS/cm至约0.05mS/cm的电导率。

本公开提供的液体组合物可以在约40℃的高温下稳定保持4周或更长时间。

如本文所用，与液体组合物相关的表述“优异的稳定性”或“稳定地保持”是指组合物中的蛋白质在储存期间保留其结构和/或其物理、化学和/或生物学特性(例如，在储存过程中低分子量、低蛋白质聚集率、低蛋白质降解率和/或低酸性变体量)。用于评估蛋白质稳定性的各种分析在相关领域中是众所周知的。与包含除组氨酸之外的缓冲剂，例如包含乙酸盐或琥珀酸盐的情况相比，本公开提供的不含缓冲剂或包含组氨酸的液体组合物可以表现出低的高分子量(蛋白质聚集率)和/或低的酸性变体量(酸性变体率)。

例如，当本公开提供的液体组合物包含浓度为60mg/ml、70mg/ml或80mg/ml的蛋白质(抗体)时，在40℃下存储一周或更长时间(例如，一周、两周、三或四周)期间蛋白质聚集量或聚集速率的变化(高分子量％(w/v)；％HMW)(例如，变化可能是指Δ％HMW；4周时的％HMW-0周时的％HMW(初始)可为约5％或更小，例如约4.5％或更小、约4％或更小、约3.5％或更小、约3％或更小、约2.5％或更小、约2％或更小、约1.5％或更小、约1％或更小、约0.9％或更小、约0.8％或更小、约0.7％或更小、约0.65％或更小、约0.6％或更小、约0.55％或更小、约0.5％或更小、约0.45％或更小、或约0.4％或更小，如通过常规SEC(尺寸排阻色谱法)所测量的，但不限于此。

在另一个实施方案中，当本公开提供的液体组合物包含浓度为60mg/ml、70mg/ml或80mg/ml的蛋白质(抗体)时，在40℃下储存一周或更长时间(例如，一周、两周、三或四周)期间蛋白质聚集量或聚集速率的变化(高分子量％(w/v)；％HMW)(例如，变化可能是指Δ％HMW；在4周时的％HMW-在0周时(初始)的％HMW)可以低于除了包含选自乙酸盐、琥珀酸盐和谷氨酸盐中的至少一种作为缓冲剂和/或不包含组氨酸之外与本公开的液体组合物相同的液体组合物约0.01％或更高、约0.5％或更高、约0.1％或更高、约0.15％或更高、约0.2％或更高、约0.25％或更高、约0.3％或更高、约0.35％或更高、约0.4％或更高、约0.45％或更高、约0.5％或更高、约0.55％或更高、约0.6％或更高r、约0.65％或更高、约0.7％或更高、约0.75％或更高、约0.8％或更高、约0.85％或更高、约0.9％或更高、约0.95％或更高、或约1％或更高，例如、约0.01％至约2％、约0.05％至约2％、约0.1％至约2％、约0.15％至约2％、约0.2％至约2％、约0.25％至约2％、约0.3％至约2％、约0.35％至约2％、约0.4％至约2％、约0.45％至约2％、约0.5％至约2％、约0.55％至约2％、约0.6％至约2％、约0.65％至约2％、约0.7％至约2％、0.75％至约2％、0.8％至约2％、0.85％至约2％、0.9％至约2％、0.95％至约2％或1％至约2％，如通过常规SEC(尺寸排阻色谱法)测量的，但不限于此。

在另一个实施方案中，当本公开提供的液体组合物包含含量为60mg/ml、70mg/ml或80mg/ml的蛋白质(抗体)时，在40℃下储存一周或更长时间(例如，一周、两周、三或四周)期间酸性变体量(％酸性)的变化(例如，变化可能是指Δ％酸性；在4周时的％酸性-在0周时(初始)的％酸性)可为约30.0％或更小、约28.0％或更小、约25.0％或更小、约23％或更小、约20％或更小、约18％或更小、约15％或更小、约13％或更小、约10％或更小、约9％或更小、约8％或更小、约7.5％或更小、约7.2％或更小、约7％或更小、约6.9％或更小、约6.8％或更小、约6.7％或更小、约6.6％或更小、约6.5％或更小、约6.4％或更小、约6.3％或更小、约6.2％或更小、约6.1％或更小、约6.0％或更小、约5.9％或更小、约5.8％或更小、约5.7％或更小、约5.6％或更小、约5.5％或更小、约5.4％或更小、约5.3％或更小、约5.2％或更小、约5.1％或更小或约5.0％或更小，如通过常规CEX(阳离子交换色谱法)所测量的，但不限于此。

在另一个实施方案中，当本公开提供的液体组合物包含含量为60mg/ml、70mg/ml或80mg/ml的蛋白质(抗体)时，在40℃下储存一周或更长时间(例如，一周、两周、三或四周)期间酸性变体量的变化(％酸性)(例如，变化可能是指Δ％酸性；在4周时的％酸性-在0周时(初始)的％酸性)，其低于除了包含选自乙酸盐、琥珀酸盐和谷氨酸盐中的至少一种作为缓冲剂和/或不包含组氨酸之外与本公开的液体组合物相同的液体组合物约0.01％或更高、约0.5％或更高、约0.1％或更高、约0.15％或更高、约0.2％或更高、约0.25％或更高、约0.3％或更高、约0.35％或更高、约0.4％或更高、约0.45％或更高、约0.5％或更高、约0.55％或更高、约0.6％或更高r、约0.65％或更高、约0.7％或更高、约0.75％或更高、约0.8％或更高、约0.85％或更高、约0.9％或更高、约0.95％或更高、或约1％或更高，例如、约0.01％至约2％、约0.05％至约2％、约0.1％至约2％、约0.15％至约2％、约0.2％至约2％、约0.25％至约2％、约0.3％至约2％、约0.35％至约2％、约0.4％至约2％、约0.45％至约2％、约0.5％至约2％、约0.55％至约2％、约0.6％至约2％、约0.65％至约2％、约0.7％至约2％、0.75％至约2％、0.8％至约2％、0.85％至约2％、0.9％至约2％、0.95％至约2％或1％至约2％，如通过常规CEX(阳离子交换色谱法)所测量的，但不限于此。

8.药物组合物

另一个实施方案提供了包含液体组合物的药物组合物。当液体组合物包含例如，抗RANKL抗体作为蛋白质时，药物组合物可以对骨质疏松症、癌症或癌症转移(例如，癌症的骨转移)具有预防或治疗作用。因此，实施方案提供了包含液体组合物的药物组合物，用于预防或治疗骨质疏松症、癌症或癌症转移(例如，癌症的骨转移)。

可以将液体组合物或药物组合物施用于包括人在内的哺乳动物。

液体组合物或药物组合物可以口服或肠胃外施用。对于肠胃外施用(例如，注射)，施用途径可以选自静脉内、皮下、肌内、腹膜内、真皮内、局部、鼻内、肺内、直肠内和肿瘤内途径等。

在一个实施方案中，考虑到液体组合物包含抗RANKL抗体，则液体组合物或药物组合物可以静脉内或皮下施用。

可以将液体组合物或药物组合物制备成适合于施用途径的制剂。

液体组合物或药物组合物可以包含药学上可接受的载体。如本文所用，术语“药学上可接受的载体”可以指选自固体、半固体或液体填充剂、稀释剂、封装材料、配制助剂和任何常规赋形剂中的至少一种，其全部无毒。

9.稳定蛋白质的方法或稳定的蛋白质的液体组合物的制备方法

另一个实施方案提供了稳定蛋白质或制备稳定的蛋白质液体组合物的方法，该方法包括混合上述成分的步骤。

一个实施方案提供了稳定蛋白质或制备稳定的蛋白质水性液体组合物的方法，该方法包括混合：

(1)蛋白质与糖、糖衍生物和/或氨基酸；或

(2)蛋白质与糖、糖衍生物和/或氨基酸以及组氨酸的步骤

当包括步骤(1)时，该方法可以不包括混合选自乙酸盐、琥珀酸盐和谷氨酸盐中的至少一种，或混合缓冲剂。包括步骤(1)或步骤(2)的方法，可以进一步包括混合表面活性剂。

稳定蛋白质或制备蛋白质的稳定的水性液体组合物的方法中使用的各个成分的种类和量如上所述。

发明效果

对于蛋白质例如抗体的药物制剂，关于缓冲剂的种类和浓度、稳定剂的种类和浓度以及pH值进行优化，从而获得具有改善的蛋白质药物稳定性的蛋白质药物制剂。

附图说明

图1a是显示如在实施例1.2中测量的在40℃下持续四周的蛋白质液体制剂的平均Δ％HMW的图，其中左图显示了根据缓冲剂的种类的平均Δ％HMW，且右图显示了根据稳定剂的种类的平均Δ％HMW，并且在图1c中，虚线表示

制剂的平均Δ％HMW(0.69％)。

图1b是显示如在实施例1.2中测量的在40℃下持续四周的蛋白质液体制剂的平均Δ％酸性的图，其中左图显示了根据缓冲剂的种类的平均Δ％酸性，且右图显示了根据稳定剂的种类的平均Δ％酸性。

图2a是显示如在实施例2.2中测量的在40℃下持续四周的蛋白质液体制剂的平均Δ％HMW的图，其中左图显示了根据蛋白质药物的浓度的平均Δ％HMW，中间图显示了根据缓冲剂的种类的平均Δ％HMW，且右图显示了根据稳定剂的种类的平均Δ％HMW。

图2b是显示如在实施例2.2中测量的在40℃下持续四周的蛋白质液体制剂的平均Δ％酸性的图，其中左图显示了根据蛋白质药物的浓度的平均Δ％酸性，中间图显示了根据缓冲剂的种类的平均Δ％酸性，且右图显示了根据稳定剂的种类的平均Δ％酸性。

图3是显示如实施例3中测定的，根据蛋白质药物的浓度、缓冲剂的种类、稳定剂的种类和pH，在40℃下持续四周的蛋白质液体制剂的平均Δ％HMW的图。

具体实施方式

发明方式

通过以下实施例可获得对本公开更好的理解，这些实施例仅仅是为了举例说明本公开而提出的，而不应解释为限制本公开。

实施例1：缓冲剂/稳定剂的选择

1.1.液体制剂的制备

制备液体制剂，其pH为5.2，且包含以下成分：60mg/mL地诺单抗(登记号DB06643)，其为抗RANKL人单克隆抗体，作为蛋白药物、0.01％聚山梨醇酯20(PS20)、缓冲剂和稳定剂。

(1-3：具有与

相同成分的制剂；％：w/v)

1.2.％HMW和％酸性(40℃条件)的测量

为了测定在实施例1.1中制备的包含缓冲剂/稳定剂的各种组合的液体制剂(地诺单抗60mg/mL，pH 5.2)的稳定性，将液体制剂在40℃下储存四周，并且将液体制剂中的高分子量(％HMW)和酸性变体量(％酸性)分别通过SEC(体积排阻色谱)和CEX(阳离子交换色谱)测量。详细地，使用SEC(尺寸排阻色谱法)测量％HMW，使用CEX(阳离子交换色谱法)测量％酸性。

更详细地，根据制造商的手册，使用Waters的HPLC系统进行SEC(尺寸排阻色谱法)。根据保留时间(蛋白质的分子量)，分离出总共三个峰。这三个峰对应于HMW峰、单体峰和LMW峰，按照短保留时间(大分子量)的顺序。在单体之前检测到的物质定义为HMW。使用HPLC(Waters 2695分离模块联盟)和柱(Tosoh，TSK-gel G3000 SWXL)以0.7mL/min的流速测量％HMW。在24分钟的注射运行时间下(％HMW＝面积_HMW/面积_TOTAL x100)。

此外，根据制造商的手册，使用Waters的HPLC系统进行CEX(阳离子交换色谱法)。根据保留时间(蛋白质电荷)，分离了总共三个峰。这三个峰以短保留时间的顺序对应于酸性峰、主峰和碱性峰。在主峰之前检测到的物质定义为酸性峰。使用HPLC(Waters 2695分离模块联盟)和色谱柱(Thermo Scientific，Propac WCX-10色谱柱)在32分钟的进样运行时间下以1.0mL/min的流速测量酸的％酸性(酸性变体量)(％酸性＝面积_酸性/面积_总x100)。

％HMW(高分子量％)：％HMW＝{HMW面积/(HMW+单体+LMW)面积}*100；

％酸性：酸性变体的比率(％酸性＝{酸性的面积/(酸性+主+碱性)的面积}*100)。

表1总结了％HMW(0周时的％HMW、4周时的％HMW)和Δ％HMW(4周时的％HMW-0周时的％HMW)的结果，表2总结了％酸性(0周时的％酸性，4周时的％酸性)和Δ％酸性(4周时的％酸性-0周时的％酸性)的结果：

[表1]

(1-3：具有与

相同组成的制剂)

[表2]

(1-3：具有与

相同组成的制剂)

另外，在图1a和1c中描绘了四周的平均Δ％HMW(Δ％HMW；左：根据缓冲剂的种类的平均Δ％HMW，右：根据稳定剂的种类的平均Δ％HMW，图1c的虚线：

制剂的平均Δ％HMW(0.69％)且图1b中描绘了四周的平均Δ％酸性(Δ％酸性；左：根据缓冲剂的种类的平均Δ％酸性，右：根据稳定剂的种类的平均％酸性)。

如从表1和2以及图1a和1b的数据理解的，在地诺单抗60mg/mL和pH 5.2的条件下，与包括乙酸或琥珀酸盐作为缓冲剂的制剂1-12相比，包含组氨酸作为缓冲剂的制剂13-17和不含缓冲剂的制剂18-22显示出更低的Δ％HMW和/或更低的Δ％酸性。在含有山梨糖醇、蔗糖、海藻糖或Arg的制剂中，特别是在含有山梨糖醇、蔗糖或海藻糖的制剂中，更具体地在含有山梨糖醇作为稳定剂的制剂中，测量较低的Δ％HMW和/或较低的Δ％酸性。这些结果表明，与包含乙酸或琥珀酸盐作为缓冲剂的制剂相比，包含组氨酸作为缓冲剂或不含缓冲剂并且包含山梨糖醇、蔗糖、海藻糖或Arg作为稳定剂的制剂可使蛋白药物更稳定。

下表3中总结了表1和表2中列出的包含各种稳定剂(山梨糖醇、蔗糖、海藻糖、Arg或NaCl)的制剂中高分子量(％HMW)和酸性变体量(％酸性)的平均值：

[表3]

如表3可以看到，在地诺单抗60mg/mL和pH 5.2的条件下，与包括乙酸或琥珀酸盐作为缓冲剂的制剂1-12相比，包含组氨酸作为缓冲剂的制剂13-17和不含缓冲剂的制剂18-22显示出更低的平均Δ％HMW和/或更低的平均Δ％酸性。这些结果清楚地表明，包含组氨酸作为缓冲剂或不含缓冲剂的制剂使蛋白质药物更稳定。

实施例2：取决于蛋白质药物含量的稳定性

2.1.液体制剂的制备

制备如表4中列举的，pH 5.2的液体制剂，包含浓度为60mg/mL、70mg/mL或80mg/mL的抗RANKL人单克隆抗体地诺单抗、0.01％聚山梨醇酯20(PS20)、缓冲剂(乙酸盐或组氨酸)和稳定剂(山梨糖醇、蔗糖或海藻糖)。

[表4]

(1-3：与

具有相同组成的制剂；9-11：具有与

相似组成的制剂；％：w/v)

2.2.％HMW和％酸性(40℃条件)的测量

为了测定在实施例2.1中制备的包含各种浓度的蛋白药物(地诺单抗)和缓冲剂/稳定剂的各种组合的液体制剂(pH 5.2)的稳定性，参考实施例1.2测量液体制剂的蛋白质聚集和酸性变体量，同时在40℃下储存四周。

表5总结了％HMW(0周时的％HMW、4周时的％HMW)和Δ％HMW(4周时的％HMW-0周时的％HMW)的测量结果，表6总结了％酸性(0周时的％酸性，4周时的％酸性)和Δ％酸性(4周时的％酸性-0周时的％酸性)的测量结果：

[表5]

(1-3：与

具有相同组成的制剂；9-11：具有与

相似组成的制剂)

[表6]

(1-3：与

具有相同组成的制剂；9-11：具有与

相似组成的制剂)

另外，在图2a中描绘了四周的平均Δ％HMW(Δ％HMW；左：根据蛋白药物浓度的平均Δ％HMW；中：根据缓冲剂的种类的平均Δ％HMW；右：根据稳定剂的种类的平均Δ％HMW)，并且图2b中描绘了四周的平均Δ％酸性(Δ％酸性；左：根据蛋白药物浓度的平均Δ％酸性；中：根据缓冲剂的种类的平均Δ％酸性；右：根据稳定剂的种类的平均Δ％酸性)。

如表5和表6以及图2a和2b所示，总体上，与包含乙酸的制剂相比，包含组氨酸作为缓冲剂的制剂保证了蛋白质药物的更高的稳定性。特别地，发现以60mg/mL的浓度包含蛋白质药物(地诺单抗)并且包含组氨酸作为缓冲剂和山梨糖醇作为稳定剂的制剂显示出蛋白质药物的最高稳定性。另外，如从表5和6的平均值数据中可以看出，与包含乙酸的制剂相比，包含组氨酸作为缓冲剂的制剂在蛋白药物的所有浓度下，特别是在60mg/mL或70mg/mL的蛋白质药物下均具有较低的平均Δ％HMW和Δ％酸性值。更具体地，包含组氨酸作为缓冲剂的制剂的平均Δ％HMW为约0.33％，而包含乙酸的制剂的平均Δ％HMW为0.59％。另外，包含组氨酸作为缓冲剂的制剂的平均Δ％酸性为约5.35％，而包含乙酸的制剂的平均Δ％酸性为5.97％。这些结果表明，与包含乙酸的制剂相比，在测试的所有蛋白质药物浓度下，尤其是在60mg/mL或70mg/mL下，包含组氨酸作为缓冲剂的制剂的Δ％HMW和Δ％酸性均显著低，并且在制剂稳定性方面优异。

实施例3：取决于稳定剂浓度、缓冲剂浓度、pH和蛋白质药物浓度的稳定性

制备液体制剂，其包含下表7中列出的抗RANKL人单克隆抗体地诺单抗作为蛋白质药物，组氨酸作为缓冲剂，山梨糖醇作为稳定剂和0.01％的聚山梨醇酯20(PS20)。

[表7]

(在表7中，％表示％(w/v))

参照实施例1.2测量由此制备的液体制剂的Δ％HMW和Δ％酸性，同时将其在40℃下储存四周，

表8总结了％HMW(0周时的％HMW、4周时的％HMW)和Δ％HMW(4周时的％HMW-0周时的％HMW)的获得的结果，表9总结了％酸性(0周时的％酸性，4周时的％酸性)和Δ％酸性(4周时的％酸性-0周时的％酸性)的获得的结果：

[表8]

[表9]

图3中描绘了，如表8和9所示，根据蛋白质浓度、缓冲剂浓度、稳定剂浓度和pH持续四周的平均Δ％HMW。如图3中可以看出，在测试范围内，蛋白质的稳定性随着制剂中缓冲液浓度和蛋白质药物浓度的降低而增加。发现在所有测试范围内，稳定剂浓度和pH值均具有同等水平的蛋白质稳定性。

实施例4：液体制剂中的地诺单抗的活性测定

制备pH为5.2的液体制剂，其包含60mg/ml的地诺单抗和0.01％(w/v)的聚山梨醇酯20，并包含表10中所列的缓冲剂和稳定剂。为了测定其中的药物活性成分地诺单抗的活性，在40℃下储存四周的同时，测量制剂的地诺单抗针对RANKL的％RBA(相对结合活性)和％RP(相对效能活性)。

测量％RP(相对效能)如下：依次将地诺单抗和RANKL加载到96孔板中，然后加载RANK 293细胞(表达荧光素酶和RANK受体的HEK293细胞)。孵育后，使用

多标签读出器分析％RP(PerkinElmer，2015)。

如下测量％RBA(相对结合活性)：将MaxiSorp 96孔板(Nunc)用RANKL包被并封闭，然后将地诺单抗加载到其上。随后，将板用二抗处理，然后依次用TMB ELISA物质溶液和终止溶液处理。使用酶标仪(SpectraMax 190)分析％RBA。

在表10中，总结了蛋白质液体制剂中在第0周(初始)和第4周的％RBA及其变化(Δ％RBA)4周，和在第0周(初始)和第4周的％RP及其变化(Δ％RP)4周在40℃下的测量结果：

[表10]

如表10所示，即使在40℃的应激条件下，包含组氨酸作为缓冲剂的制剂在相当长的时间段(4周)内也很好地保留了蛋白质(地诺单抗)的活性(功能)。

Claims

1.一种液体组合物，其包含抗RANKL抗体，具有5至7的pH并且不含乙酸盐。

2.根据权利要求1所述的液体组合物，其不含琥珀酸盐。

3.根据权利要求1或2所述的液体组合物，其不含谷氨酸盐。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的液体组合物，其包含组氨酸。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的液体组合物，其包含1至70mM的组氨酸。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的液体组合物，其包含组氨酸作为蛋白质聚集抑制剂和/或酸性变体抑制剂。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的液体组合物，其中，根据在40℃下储存4周后测量的，所述液体组合物具有5.0％或更小的高分子量的变化(Δ％HMW)；或与除了包含选自乙酸盐、琥珀酸盐和谷氨酸盐中的至少一种，和/或不含组氨酸之外相同的组合物相比，所述液体组合物具有低至少0.05％的高分子量的变化(Δ％HMW)。

8.根据权利要求1至7中任一项所述的液体组合物，其中，根据在40℃下储存4周后测量的，所述液体组合物具有25.0％或更小的酸性变体量的变化(Δ％酸性)；或与除了包含选自乙酸盐、琥珀酸盐和谷氨酸盐中的至少一种，和/或不含组氨酸之外相同的组合物相比，所述液体组合物具有低至少0.05％的酸性变体量的变化(Δ％酸性)。

9.根据权利要求1至8中任一项所述的液体组合物，其包含选自丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、谷氨酰胺、甘氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸、缬氨酸、半胱氨酸中的至少一种氨基酸及其药学上可接受的盐。

10.根据权利要求1至9中任一项所述的液体组合物，其包含0.1mM至300mM的氨基酸。

11.根据权利要求1至10中任一项所述的液体组合物，其包含选自葡萄糖、果糖、半乳糖、甘露糖、蔗糖、乳糖、麦芽糖、海藻糖，低聚果糖、低聚半乳糖、甘露寡糖、淀粉、糖原、纤维素、甲壳素、果胶、醛糖酸、果糖酸、糖醛酸、糖二酸、甘油、赤藓糖醇、苏糖醇、阿拉伯糖醇、木糖醇、核糖醇、甘露醇、山梨糖醇、半乳糖醇、果糖醇、艾杜糖醇、肌醇、庚七醇、异麦芽酮糖醇、麦芽糖醇、乳糖醇、麦芽三糖醇、麦芽四糖醇和聚葡糖醇中的至少一种糖或糖醇。

12.根据权利要求1至11中任一项所述的液体组合物，其包含基于全部组合物的1至15％(w/v)的糖或1至10％(w/v)的糖醇。

13.根据权利要求1至12中任一项所述的液体组合物，其包含表面活性剂。

14.根据权利要求1至13中任一项所述的液体组合物，其包含聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯80或它们的组合作为表面活性剂。

15.根据权利要求1至14中任一项所述的液体组合物，其包含基于全部组合物的0.001至1％(w/v)的表面活性剂。

16.根据权利要求1至15中任一项所述的液体组合物，其包含50mg/mL至80mg/mL的抗RANKL抗体。

17.根据权利要求1至16中任一项所述的液体组合物，其中所述抗RANKL抗体是地诺单抗。

18.根据权利要求1至17中任一项所述的液体组合物，其适用于包含60mg/mL的抗RANKL抗体的注射剂和包含70mg/mL的抗RANKL抗体的注射剂。

19.一种液体组合物，其包含抗RANKL抗体，具有5至7的pH并且不含琥珀酸盐。

20.根据权利要求19所述的液体组合物，其不含乙酸盐。

21.根据权利要求19或20所述的液体组合物，其不含谷氨酸盐。

22.根据权利要求19至21中任一项所述的液体组合物，其包含组氨酸。

23.根据权利要求19至22中任一项所述的液体组合物，其包含1至70mM的组氨酸。

24.根据权利要求19至23中任一项所述的液体组合物，其包含组氨酸作为蛋白质聚集抑制剂和/或酸性变体抑制剂。

25.根据权利要求19至24中任一项所述的液体组合物，其中，根据在40℃下储存4周后测量的，所述液体组合物具有5.0％或更小的高分子量的变化(Δ％HMW)；或与除了包含选自乙酸盐、琥珀酸盐和谷氨酸盐中的至少一种，和/或不含组氨酸之外相同的组合物相比，所述液体组合物具有低至少0.05％的高分子量的变化(Δ％HMW)。

26.根据权利要求19至25中任一项所述的液体组合物，其中，根据在40℃下储存4周后测量的，所述液体组合物具有25.0％或更小的酸性变体量的变化(Δ％酸性)；或与除了包含选自乙酸盐、琥珀酸盐和谷氨酸盐中的至少一种，和/或不含组氨酸之外相同的组合物相比，所述液体组合物具有低至少0.05％的酸性变体量的变化(Δ％酸性)。

27.根据权利要求19至26中任一项所述的液体组合物，其包含选自丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、谷氨酰胺、甘氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸、缬氨酸、半胱氨酸中的至少一种氨基酸及其药学上可接受的盐。

28.根据权利要求19至27中任一项所述的液体组合物，其包含0.1mM至300mM的氨基酸。

29.根据权利要求19至28中任一项所述的液体组合物，其包含选自葡萄糖、果糖、半乳糖、甘露糖、蔗糖、乳糖、麦芽糖、海藻糖，低聚果糖、低聚半乳糖、甘露寡糖、淀粉、糖原、纤维素、甲壳素、果胶、醛糖酸、果糖酸、糖醛酸、糖二酸、甘油、赤藓糖醇、苏糖醇、阿拉伯糖醇、木糖醇、核糖醇、甘露醇、山梨糖醇、半乳糖醇、果糖醇、艾杜糖醇、肌醇、庚七醇、异麦芽酮糖醇、麦芽糖醇、乳糖醇、麦芽三糖醇、麦芽四糖醇和聚葡糖醇中的至少一种糖或糖醇。

30.根据权利要求19至29中任一项所述的液体组合物，其包含基于全部组合物的1至15％(w/v)的糖或1至10％(w/v)的糖醇。

31.根据权利要求19至30中任一项所述的液体组合物，其包含表面活性剂。

32.根据权利要求19至31中任一项所述的液体组合物，其包含聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯80或它们的组合作为表面活性剂。

33.根据权利要求19至32中任一项所述的液体组合物，其包含基于全部组合物的0.001至1％(w/v)的表面活性剂。

34.根据权利要求19至33中任一项所述的液体组合物，其包含50mg/mL至80mg/mL的抗RANKL抗体。

35.根据权利要求19至34中任一项所述的液体组合物，其中所述抗RANKL抗体是地诺单抗。

36.根据权利要求19至35中任一项所述的液体组合物，其适用于包含60mg/mL的抗RANKL抗体的注射剂和包含70mg/mL的抗RANKL抗体的注射剂。

37.一种液体组合物，其包含抗RANKL抗体，具有5至7的pH并且不含缓冲剂。

38.根据权利要求37所述的液体组合物，其不含组氨酸。

39.根据权利要求37或38所述的液体组合物，其中，根据在40℃下储存4周后测量的，所述液体组合物具有5.0％或更小的高分子量的变化(Δ％HMW)；或与除了包含选自乙酸盐、琥珀酸盐和谷氨酸盐中的至少一种，和/或不含组氨酸之外相同的组合物相比，所述液体组合物具有低至少0.05％的高分子量的变化(Δ％HMW)。

40.根据权利要求37至39中任一项所述的液体组合物，其中，根据在40℃下储存4周后测量的，所述液体组合物具有25.0％或更小的酸性变体量的变化(Δ％酸性)；或与除了包含选自乙酸盐、琥珀酸盐和谷氨酸盐中的至少一种，和/或不含组氨酸之外相同的组合物相比，所述液体组合物具有低至少0.05％的酸性变体量的变化(Δ％酸性)。

41.根据权利要求37和40中任一项所述的液体组合物，其包含选自丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、谷氨酰胺、甘氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸、缬氨酸、半胱氨酸中的至少一种氨基酸及其药学上可接受的盐。

42.根据权利要求37至41中任一项所述的液体组合物，其包含0.1mM至300mM的氨基酸。

43.根据权利要求37至42中任一项所述的液体组合物，其包含选自葡萄糖、果糖、半乳糖、甘露糖、蔗糖、乳糖、麦芽糖、海藻糖，低聚果糖、低聚半乳糖、甘露寡糖、淀粉、糖原、纤维素、甲壳素、果胶、醛糖酸、果糖酸、糖醛酸、糖二酸、甘油、赤藓糖醇、苏糖醇、阿拉伯糖醇、木糖醇、核糖醇、甘露醇、山梨糖醇、半乳糖醇、果糖醇、艾杜糖醇、肌醇、庚七醇、异麦芽酮糖醇、麦芽糖醇、乳糖醇、麦芽三糖醇、麦芽四糖醇和聚葡糖醇中的至少一种糖或糖醇。

44.根据权利要求37至43中任一项所述的液体组合物，其包含基于全部组合物的1至15％(w/v)的糖或1至10％(w/v)的糖醇。

45.根据权利要求37至44中任一项所述的液体组合物，其包含表面活性剂。

46.根据权利要求37至45中任一项所述的液体组合物，其包含聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯80或它们的组合作为表面活性剂。

47.根据权利要求37至46中任一项所述的液体组合物，其包含基于全部组合物的0.001至1％(w/v)的表面活性剂。

48.根据权利要求37至47中任一项所述的液体组合物，其包含50mg/mL至80mg/mL的抗RANKL抗体。

49.根据权利要求37至48中任一项所述的液体组合物，其中所述抗RANKL抗体是地诺单抗。

50.根据权利要求37至49中任一项所述的液体组合物，其适用于包含60mg/mL的抗RANKL抗体的注射剂和包含70mg/mL的抗RANKL抗体的注射剂。