WO2020101219A1 - 어성초 및 생강을 포함하는 해독 조성물 및 그 제조방법 - Google Patents

어성초 및 생강을 포함하는 해독 조성물 및 그 제조방법 Download PDF

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WO2020101219A1
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preparing
ginger
extract
present
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PCT/KR2019/014228
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유진희
권민선
최수영
김진학
김상우
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코스맥스엔에스 주식회사
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    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
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Definitions

  • the present invention relates to a body detoxifying composition containing plant extracts.
  • the present invention relates to a method for preparing the composition.
  • Toxins include waste products generated by metabolic processes, various by-products caused by free radicals, stress, etc., as well as toxic substances possessed by exotoxins, endotoxins, plants or animals generated by the invasion of bacteria. Recently, due to environmental problems, the contact rate of toxic substances such as heavy metals is increasing. Heavy metals are not easily discharged when they enter the body, and when their accumulation increases, they can cause poisoning such as weight loss, anemia, biochemical and morphological changes in organs, and brain damage. In addition, some toxic metals react with body tissues even at low concentrations and gradually exhibit toxic effects in the body.
  • heavy metals such as arsenic, cadmium, lead, and mercury can be taken together through food, accumulated in the body without being excreted outside the body, and generate active acid control (ROS) in the human body, causing various diseases.
  • ROS active acid control
  • Detoxification has the meaning of preventing harmful substances from entering the body and promoting the discharge of waste products through the intestine, kidneys, lungs, and skin. Specifically, it may include alcohol detoxification, drug detoxification, metabolic detoxification, and the like. In order to promote this detoxification, there has been a trend toward increasing efforts to release toxins through drinking tea or exercising or poultice, and products according to the needs of these consumers have been released.
  • the present invention to solve the above problems,
  • It provides a method for preparing a detoxifying composition comprising the step of preparing the composition by filtering and concentrating the extract.
  • the step of preparing the extract may be a step of extracting hot water.
  • the weight ratio of ginger and eoseongcho may be 1: 1.
  • the step of preparing the extract comprises adding 1 to 50 times the water of the mixture weight
  • a detoxifying composition prepared according to the above method.
  • the composition may increase the survival rate of cells treated with cadmium, lead, or a combination thereof by 1.1 to 1.5 times.
  • the composition may increase the DPPH radical scavenging activity by 5 to 60%.
  • the composition may reduce the amount of free radicals produced by 5 to 50%.
  • waste products or free radicals generated by metabolic processes, various by-products generated by stress, etc., exotoxins, endotoxins, plants or animals caused by infiltration of bacteria are sleeping.
  • Heavy metals and free radicals due to toxic substances can be removed and discharged from the body.
  • 1 is a graph showing the survival rate of cadmium-treated cells.
  • 2 is a graph showing the survival rate of cells treated with lead.
  • 3 is a graph showing DPPH free radical scavenging activity.
  • Figure 4 is a graph showing the rate of active oxygen species production.
  • the expression “to” is used as an expression including the corresponding numerical value. Specifically, for example, the expression “1 to 2” means not only to include 1 and 2, but also to include both numerical values between 1 and 2.
  • It provides a method for preparing a detoxifying composition comprising the step of preparing the composition by filtering and concentrating the extract.
  • the step of preparing the extract may be a step of extracting hot water.
  • the weight ratio of ginger and eoseongcho can be prepared by mixing, for example, 1: 1 to 4, for example 2: 1 to 4, for example 1: 1.
  • the step of preparing the extract comprises adding 1 to 50 times the weight of the mixture, for example, 10 to 30 times the water and 50 to 120 ° C, for example, 60 to 110 ° C 100 It may include a step of stirring for 300 to 300 minutes, for example, 200 to 300 minutes.
  • Water may be used as the extraction solvent, and in addition, alcohol, for example, ethanol such as alcohol may be used.
  • the composition can effectively increase the detoxification effect in the body by removing toxins in the body, that is, heavy metals and free radicals, by a combination of ginger and eoseongcho.
  • a composition may increase the viability of cells treated with cadmium, lead, or a combination thereof by 1.1 to 1.5 times.
  • the DPPH radical scavenging activity can be increased by 5 to 60%.
  • the amount of free radicals generated can be reduced by 5 to 50%.
  • the form of the food or functional food composition may be prepared in the form of powders, granules, pills, tablets, capsules, etc., and is not particularly limited as long as it is a general food or drink form.
  • the type of food composition may include all foods in a conventional sense, for example, meat, sausage, bread, chocolate, candy, snacks, confectionery, pizza, ramen, other noodles, gums, dairy products including ice creams Products, various soups, beverages, teas, drinks, alcoholic beverages, vitamin complexes, etc. may be included, but are not limited thereto.
  • the beverages and beverages may include general flavoring agents or natural carbohydrates, etc., as additional components, like ordinary beverages.
  • the natural carbohydrate may include monosaccharides such as glucose and fructose, disaccharides such as maltose and sucrose, and polysaccharides such as dextrin and cyclodextrin, and sugar alcohols such as xylitol, sorbitol, and erythritol.
  • Sweeteners may include natural sweeteners such as taumatine and stevia extracts, synthetic sweeteners such as saccharin and aspartame.
  • the food composition of the present invention includes nutrients, vitamins, minerals (electrolytes), flavoring agents such as synthetic and natural flavoring agents, coloring agents and neutralizing agents (cheese, chocolate, etc.), pectic acid and salts thereof, alginic acid and salts thereof , Organic acids, protective colloidal thickeners, pH adjusting agents, stabilizers, preservatives, glycerin, alcohol, carbonic acid used in carbonated beverages, and the like. It may also include flesh for the manufacture of natural fruit juices and vegetable drinks.
  • the composition may be formulated to include fillers, extenders, binders, wetting agents, disintegrating agents, surfactants, diluents, excipients, and the like.
  • specific examples of the carrier, excipients, diluents and additives include, but are not limited to, lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, erythritol, starch, acacia rubber, calcium phosphate, alginate, gelatin, calcium phosphate, calcium Silicate, microcrystalline cellulose, polyvinylpyrrolidone, cellulose, polyvinylpyrrolidone, methylcellulose, water, sugar syrup, methylcellulose, methyl hydroxy benzoate, propylhydroxy benzoate, talc, magnesium stearate And it may include one or more selected from the group consisting of mineral oil.
  • the cosmetic composition may include additional additives within a range not affected by the object of the present invention.
  • additive substances include vitamin C, vitamin B, kojic acid, isoflavones, amino acids, peptides, adenosine, protease and enzymes, arbutin, hyaluronic acid, hydroquinone, ceramide, coenzyme Q10, tetrahydroker It may include cuminoids, anthocyanins, collagen, retinol, bee-box extract, gardenia extract, turmeric extract, centella extract.
  • the cosmetic composition of the present invention is conventionally prepared in the art, and can be prepared in any formulation that can be applied dermatologically.
  • Being able to be applied dermatologically is a composition that can have a relatively non-toxic and harmless effect on the target of application, and may include an external agent that can be applied to the skin, and the side effects resulting from the composition indicate the efficacy of the active ingredient. It can mean that it does not degrade and does not impair the activity and properties of the active ingredients without causing serious irritation to the target.
  • Dermatologically applicable cosmetic compositions of the present invention include, for example, solutions, suspensions, emulsions, emulsions, pastes, gels, packs, creams, lotions, powders, soaps, surfactant-containing cleansing, oils, powder foundations , Emulsion foundation, wax foundation, spray and hair cosmetics, etc., but is not limited thereto.
  • the cosmetic composition is a skin lotion, skin softener, skin toner, astringent, lotion, gel, milk lotion, moisture lotion, nutrition lotion, massage cream, nutrition cream, moisture cream, hand cream, foundation, essence, ampule, nutrition Essence, Pack, Soap, Hair Shampoo, Foot Shampoo, Cleansing Foam, Cleansing Lotion, Cleansing Cream, Body Lotion, Body Cleanser, etc.
  • composition was prepared in the same manner as in Example 1, except that the ratio of dried ginger and eoseongcho solid content was 2: 1.
  • composition was prepared in the same manner as in Example 1, except that the ratio of dried ginger and eoseongcho solid content was 1: 2.
  • composition was prepared in the same manner as in Example 1, except that the ratio of dried ginger and Eoseongcho solid content was 1: 4.
  • composition was prepared in the same manner as in Example 1, except that ginger solid was used instead of the ginger and fish vinegar mixture.
  • composition was prepared in the same manner as in Example 1, except that the solids of Eoseongcho were used instead of the mixture of ginger and Eoseongcho.
  • human liver cancer cell line HepG2 cells were used. HepG2 cells were cultured for 24 hours in 95 wells with 1 ⁇ 10 4 / well. Each sample was pretreated for 2 hours. Thereafter, the heavy metal was treated with a concentration of 500 ng / ml of cadmium (Cd) or 400 ug / ml of lead (Pb) in the control group without treatment with the extract and the experiment group with each extract. MTT analysis was performed after 24 hours.
  • Cd cadmium
  • Pb lead
  • the cells treated with Eoseongcho, ginger, or a combination thereof increased cell viability compared to the control group, and the effect of improving the cell viability of the example composition containing Eoseongcho and ginger mixed extract showed significant results.
  • the weight ratio of each extract composition was set to a specific ratio, it was confirmed that there is a difference in cell viability, and in particular, when the weight ratio of ginger and Eoseongcho is 1: 1, it can be seen that the effect of improving cell viability is the best.
  • human liver cancer cell line HepG2 cells were used. Dulbeco's Modified Eagle Media (DMEM) containing fetal bovine serum (FBS) containing hepG2 penicillin 100IU / ml and streptomycin 100ug / ml and 10% heat inactivation The cells were cultured at a density of 70 to 80% in a 100 mm cell culture dish.
  • DMEM Dulbeco's Modified Eagle Media
  • FBS fetal bovine serum
  • streptomycin 100ug / ml and 10% heat inactivation
  • the cultured HepG2 cells were cultured using DMEM medium containing no penicillin 100IU / ml and streptomycin 100ug / ml and serum, and not containing phenol red. It was inoculated into a 96 well black plate at a concentration of x 10 4 cells / ml, and cultured at 5% CO 2 and 37 ° C. Each sample and control medium at a concentration of 400 ug / ml and a culture medium were treated with tert-butyl hydroperoxide (tBHP) at a concentration of 1000 uM at the same time.
  • tBHP tert-butyl hydroperoxide
  • ROS reactive oxygen species
  • the present invention can increase the survival rate of cells exposed to heavy metals, improve the DPPH free radical scavenging ability, and lower the production of free radical species.

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Abstract

본 발명은 해독 조성물 및 그 제조방법에 관한 것으로, 대사과정에 의하여 발생하는 노폐물이나 활성산소 또는 스트레스 등으로 발생하는 여러 부산물, 세균의 침투에 의해 발생하는 외독소, 내독소, 식물 또는 동물이 자기고 있는 독성 물질 등에 의한 중금속 및 활성산소를 체내로부터 제거 및 배출시킬 수 있다.

Description

어성초 및 생강을 포함하는 해독 조성물 및 그 제조방법
본 발명은 식물 추출물을 함유하는 신체 해독 조성물에 관한 것이다.
또한, 본 발명은 상기 조성물의 제조방법에 관한 것이다.
독소는 대사과정에 의하여 발생하는 노폐물이나 활성산소 또는 스트레스 등으로 발생하는 여러 부산물들을 포함할 뿐만 아니라 세균의 침투에 의하여 발생하는 외독소, 내독소, 식물 또는 동물이 가지고 있는 독성 물질을 포함한다. 최근, 환경의 문제로 인하여 중금속과 같은 독성 물질의 접촉률이 증가하는 추세이다. 중금속은 생체 내로 들어가면 쉽게 배출이 되지 않고, 그 축적량이 증가할 경우, 체중 감소, 빈혈, 장기의 생화학 및 형태학적 변화, 뇌 손상 등의 중독 현상을 일으킬 수 있다. 또한, 일부 유독성 금속은 낮은 농도에서도 체조직과 반응하여 체내에서 서서히 독성 작용을 나타내기도 한다. 특히, 비소, 카드뮴, 납, 수은 등과 같은 중금속은 식품을 통하여 함께 섭취될 수 있으며, 체외로 배출되지 않고 체내에 축적되어 인체 내에서 활성산조종(ROS)을 생성하며 각종 질병의 원인이 되고 있다.
근래에 들어 이와 같은 독소들을 제거하는 해독(detoxification)에 대한 관심이 증가되고 있다. 해독이란 유해 물질이 몸 안으로 유입되는 것을 방지하고, 장, 신장, 폐, 피부 등을 통하여 노폐물의 배출을 촉진시킨다는 의미를 가진다. 구체적으로는, 알콜 해독(alcohol detoxification), 약물 해독(drug detoxification), 대사성 해독(metabolic detoxification) 등을 포함할 수 있다. 이러한 해독 작용을 촉진시키기 위하여 종래에는 차를 마시거나 운동 또는 찜질을 통하여 독소를 배출시키려는 노력이 증가하는 추세이며, 이러한 소비자들의 요구에 따른 제품들이 출시되고 있다.
따라서, 더욱 간편하고 효과적으로 체내 독소를 배출시킬 수 있는 해독(detox) 조성물의 연구가 요구된다.
본 발명의 목적은 해독 조성물을 제공하는 것이다.
또한, 상기 해독 조성물의 제조방법을 제공하는 것이다.
상기 과제를 해결하기 위하여 본 발명은,
생강 및 어성초를 1 내지 2:1 내지 4의 중량비로 혼합하여 혼합물을 제조하는 단계;
물 또는 알콜을 사용하여 상기 혼합물로부터 추출물을 제조하는 단계; 및
상기 추출물을 여과 및 농축시켜 조성물을 제조하는 단계를 포함하는 해독 조성물 제조방법을 제공한다.
일구현예에 따르면, 상기 추출물을 제조하는 단계는 열수 추출하는 단계일 수 있다.
일구현예에 따르면, 생강 및 어성초의 중량비는 1:1일 수 있다.
일구현예에 따르면, 상기 추출물을 제조하는 단계는 상기 혼합물 중량의 1 내지 50배수의 물을 첨가하는 단계; 및
50 내지 120℃에서 100 내지 300분 동안 교반시키는 단계를 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 구현예에 따르면, 상기와 같은 방법에 따라 제조되는 해독 조성물을 제공한다.
일구현예에 따르면, 상기 조성물은 카드뮴, 납 또는 이들의 조합을 처리한 세포의 생존율을 1.1 내지 1.5배 증가시킬 수 있다.
일구현예에 따르면, 상기 조성물은 DPPH 라디칼 소거 활성을 5 내지 60% 증가시킬 수 있다.
일구현예에 따르면, 상기 조성물은 활성산소 생성량을 5 내지 50% 감소시킬 수 있다.
또 다른 구현예에 따르면, 상기와 같은 조성물을 포함하는 식품 조성물 또는 화장품 조성물을 제공할 수 있다.
기타 본 발명의 구현예들의 구체적인 사항은 이하의 상세한 설명에 포함되어 있다.
본 발명의 해독 조성물 및 그 제조방법에 따르면, 대사과정에 의하여 발생하는 노폐물이나 활성산소 또는 스트레스 등으로 발생하는 여러 부산물, 세균의 침투에 의해 발생하는 외독소, 내독소, 식물 또는 동물이 자기고 있는 독성 물질 등에 의한 중금속 및 활성산소를 체내로부터 제거 및 배출시킬 수 있다.
도 1은 카드뮴을 처리한 세포의 생존율을 나타낸 그래프이다.
도 2는 납을 처리한 세포의 생존율을 나타낸 그래프이다.
도 3은 DPPH 자유라디칼 소거 활성을 나타낸 그래프이다.
도 4는 활성산소종 생성율을 나타낸 그래프이다.
본 발명은 다양한 변환을 가할 수 있고 여러 가지 실시예를 가질 수 있는 바, 특정 실시예를 도면에 예시하고 상세한 설명에 상세하게 설명하고자 한다. 그러나, 이는 본 발명을 특정한 실시 형태에 대해 한정하려는 것이 아니며, 본 발명의 사상 및 기술 범위에 포함되는 모든 변환, 균등물 내지 대체물을 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 본 발명을 설명함에 있어서 관련된 공지 기술에 대한 구체적인 설명이 본 발명의 요지를 흐릴 수 있다고 판단되는 경우 그 상세한 설명을 생략한다.
본 명세서 내에서 특별한 언급이 없는 한, "내지"라는 표현은 해당 수치를 포함하는 표현으로 사용된다. 구체적으로 예를 들면, "1 내지 2"라는 표현은 1 및 2를 포함할 뿐만 아니라 1과 2 사이의 수치를 모두 포함하는 것을 의미한다.
이하, 본 발명의 구현예에 따른 해독 조성물에 대하여 보다 상세하게 설명한다.
구체적으로 본 발명은,
생강 및 어성초를 1 내지 2:1 내지 4의 중량비로 혼합하여 혼합물을 제조하는 단계;
물 또는 알콜을 사용하여 상기 혼합물로부터 추출물을 제조하는 단계; 및
상기 추출물을 여과 및 농축시켜 조성물을 제조하는 단계를 포함하는 해독 조성물 제조방법을 제공한다.
일구현예에 따르면, 상기 추출물을 제조하는 단계는 열수 추출하는 단계일 수 있다.
일구현예에 따르면, 생강 및 어성초의 중량비는 예를 들면 1:1 내지 4, 예를 들면 2:1 내지 4, 예를 들면 1:1로 혼합하여 혼합물을 제조할 수 있다.
일구현예에 따르면, 상기 추출물을 제조하는 단계는 상기 혼합물 중량의 1 내지 50배수, 예를 들면 10 내지 30배수의 물을 첨가하는 단계 및 50 내지 120℃, 예를 들면 60 내지 110℃에서 100 내지 300분, 예를 들면 200 내지 300분 동안 교반시키는 단계를 포함할 수 있다. 추출 용매로는 물을 사용할 수 있고, 이외에 알콜, 예를 들면 주정과 같은 에탄올(ethanol)을 사용할 수 있다.
본 발명의 다른 구현예에 따르면, 상기와 같은 방법에 따라 제조되는 해독 조성물을 제공할 수 있다.
일구현예에 따르면, 상기 조성물은 생강 및 어성초의 조합에 의하여 체내 독소, 즉, 중금속 및 활성산소를 제거하여 체내 해독 효과를 더욱 효과적으로 상승시킬 수 있다. 구체적으로 예를 들면, 이와 같은 조성물은 카드뮴, 납 또는 이들의 조합을 처리한 세포의 생존율을 1.1 내지 1.5배 증가시킬 수 있다. 또한, DPPH 라디칼 소거 활성을 5 내지 60% 증가시킬 수 있다. 또한, 활성산소 생성량을 5 내지 50% 감소시킬 수 있다.
일구현예에 따르면, 식품 또는 기능성 식품 조성물의 형태는 산제, 과립제, 환, 정제, 캡슐제의 형태 등으로 제조될 수 있고, 일반적인 식품 또는 음료의 형태라면 특별히 제한되지 않는다. 식품 조성물의 종류로는 통상적인 의미의 식품을 모두 포함할 수 있으며, 예를 들면, 육류, 소세지, 빵, 쵸콜렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알콜 음료, 비타민 복합제 등을 포함할 수 있으나, 이에 한정되지는 않는다.
상기 음료수 및 음료는 통상의 음료와 같이 일반적인 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로 포함할 수 있다. 상기 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토스, 슈크로스와 같은 디사카라이드 및 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜을 포함할 수 있다. 감미제로는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 포함할 수 있다.
또한, 본 발명의 식품 조성물은 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 포함할 수 있다. 또한, 천연 과일 쥬스 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 포함할 수 있다.
일구현예에 따르면, 상기 조성물에 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제, 희석제, 부형제 등을 포함하여 제제화할 수 있다. 상기 담체, 부형제, 희석제 및 첨가제의 구체적인 예로는 이에 한정하는 것은 아니나, 락토즈, 덱스트로즈, 슈크로즈, 솔비톨, 만니톨, 에리스리톨, 전분, 아카시아 고무, 인산칼슘, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 미세결정성 셀룰로즈, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로즈, 폴리비닐피롤리돈, 메틸셀룰로즈, 물, 설탕시럽, 메틸셀룰로즈, 메틸 하이드록시 벤조에이트, 프로필하이드록시 벤조에이트, 활석, 스테아트산 마그네슘 및 미네랄 오일로 이루어지는 그룹으로부터 선택되는 하나 이상을 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 구현예에 따르면, 상기와 같은 조성물을 포함하는 화장품 조성물을 제공할 수 있다.
일구현예에 따르면, 상기 화장품 조성물은 본 발명의 목적에 영향을 받지 않는 범위 내에서 추가의 첨가 물질을 포함할 수 있다. 첨가 물질로는 예를 들면, 비타민C, 비타민B, 코직산, 이소플라본, 아미노산류, 펩타이드류, 아데노신, 단백질 분해효소 및 효소류, 알부틴, 히알루론산, 하이드로퀴논, 세라마이드, 코엔자임Q10, 테트라하이드로커큐미노이드, 안토시아닌, 콜라겐, 레티놀, 벌사상자추출물, 치자추출물, 강황추출물, 병풀추출물 등을 포함할 수 있다.
일구현예에 따르면, 본 발명의 화장품 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되며, 피부학적으로 적용이 가능한 어떠한 제형으로도 제조될 수 있다. 피부학적으로 적용이 가능하다는 것은 적용 대상에게 비교적 비독성이고 무해한 유효작용을 할 수 있는 조성물로서, 피부에 적용할 수 있는 외용제를 포함할 수 있으며, 상기 조성물로부터 기인하는 부작용이 유효 성분의 효능을 저하시키기 않고, 적용 대상에 심각한 자극을 유발하지 않으면서 유효성분들의 활성 및 물성을 손상시키지 않는다는 것을 의미할 수 있다. 본 발명의 피부학적으로 적용이 가능한 화장품 조성물로는 예를 들어, 용액, 현탁액, 유액, 유탁액, 페이스트, 겔, 팩, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션, 스프레이 및 모발 화장품 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 구체적으로, 상기 화장품 조성물은 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 겔, 밀크로션, 모이스쳐 로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스처크림, 핸드크림, 파운데이션, 에센스, 엠플, 영양에센스, 팩, 비누, 헤어샴푸, 풋샴푸, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션, 바디클린저 등의 제형 등으로 제조될 수 있다.
이하, 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있도록 본 발명의 실시예에 대하여 상세히 설명한다. 그러나 본 발명은 여러 가지 상이한 형태로 구현될 수 있으며 여기에서 설명하는 실시예에 한정되지 않는다.
실시예 1
건조된 생강과 어성초 고형분 비율을 1:1로 혼합한 다음, 혼합한 시료 총 중량의 15배수로 물을 넣고 95℃에서 240분간 교반하면서 추출물을 추출하였다. 추출된 시료는 와트만(Whatman) 4번 여과지로 감압 여과시키고, 여과된 추출액을 진공 회전 농축기로 농축하여 용매 성분을 제거하여 조성물을 제조하였다.
실시예 2
건조된 생강과 어성초 고형분 비율을 2:1로 한 것을 제외하고 실시예 1과 동일한 방법으로 조성물을 제조하였다.
실시예 3
건조된 생강과 어성초 고형분 비율을 1:2로 한 것을 제외하고 실시예 1과 동일한 방법으로 조성물을 제조하였다.
실시예 4
건조된 생강과 어성초 고형분 비율을 1:4로 한 것을 제외하고 실시예 1과 동일한 방법으로 조성물을 제조하였다.
비교예 1
생강 및 어성초 혼합물 대신 생강 고형분을 사용한 것을 제외하고 실시예 1과 동일한 방법으로 조성물을 제조하였다.
비교예 2
생강 및 어성초 혼합물 대신 어성초 고형분을 사용한 것을 제외하고 실시예 1과 동일한 방법으로 조성물을 제조하였다.
실험예 1: 세포 생존율
중금속에 의한 세포 독성 해독 효과를 확인하기 위하여 사람 간암세포주 HepG2 세포를 사용하였다. HepG2 세포를 1X10 4/well로 95well에 넣어 24시간 동안 배양한다. 각각의 시료를 2시간 동안 전처리 하였다. 이 후 추출물을 처리하지 않은 대조군과 각각의 추출물을 처리한 실험군에 중금속을 카드뮴(Cd) 500ng/ml 또는 납(Pb) 400ug/ml의 농도로 처리하였다. 24시간이 지난 후 MTT 분석을 실시하였다. 3-(4,5-디메틸티아졸-2-일)-2,5-디페닐테트라졸리움 브로마이드(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide)를 처리하고, 4시간 동한 37℃에서 배양하였다. 이후, 배지를 제거하고 디메틸 설폭사이드(dimethyl sulfoxide, DMSO)를 첨가하여 녹이고, 570nm에서 흡광도를 측정하였다. 카드뮴을 처리한 세포의 생존율 측정 결과는 도 1, 납을 처리한 세포의 생존율 측정 결과는 도 2에 나타내었다. 도 1 및 2에 나타난 바와 같이, 카드뮴 또는 납을 처리한 대조군에서 세포 생존율이 감소하는 것을 확인하였다. 세포에 어성초, 생강 또는 이들의 조합을 처리한 군들이 대조군에 비하여 세포 생존도가 증가하였으며, 어성초 및 생강 혼합 추출물을 포함하는 실시예 조성물의 세포 생존율 향상효과가 유의적인 결과를 나타내었다. 또한, 각각의 추출물 구성의 중량비를 특정 비율로 하였을 때, 세포 생존율에 차이가 있는 것을 확인하였으며, 특히, 생강과 어성초의 중량비가 1:1인 경우 세포 생존율 향상 효과가 가장 우수한 것을 알 수 있다.
실험예 2: DPPH 자유 라디칼(free radical) 소거 활성
2,2-디페닐-1-피크릴히드라질(2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl, DPPH) 라디칼 소거 활성을 확인하기 위하여 400ug/ml 농도의 시료와 25uM 농도의 DPPH 용액을 각각 디메틸 설폭사이드(dimethyl sulfoxide, DMSO)와 에탄올(ethanol)에 용해시켰다. 각각의 시료와 DPPH 용액을 혼합하여 잘 섞어준 후, 10분 간 37℃에서 반응시켰다. 자외선-가시광선 분광(ultraviolet-visible spectroscopy, UV/Vis) 스펙트럼을 사용하여 517nm에서의 흡광도를 측정하여 DPPH 라디칼의 소거활성 정도를 평가하여 결과를 도 3에 나타내었다. 도 3에 나타난 바와 같이, 생강 및 어성초 혼합 추출물을 처리한 경우의 라디칼 소거능이 어성초 또는 생강 단독 추출물을 처리한 경우보다 우수하다는 것을 확인할 수 있다.
실험예 3: 활성산소종(reactive oxygen species, ROS) 생성율
중금속에 의한 세포 독성 해독 효과를 확인하기 위하여 사람 간암세포주 HepG2 세포를 사용하였다. HepG2를 페니실린(penicillin) 100IU/ml 및 스트렙토마이신(streptomycin) 100ug/ml과 10%의 열비활성화(heat inactivation)시킨 소태아혈청(fetal bovine serum, FBS)을 함유하는 Dulbeco's Modified Eagle Media(DMEM)를 이용하여 100mm 세포 배양 접시(cell culture dish)에 70 내지 80%의 밀도로 배양하였다.
배양시킨 HepG2 세포를 페니실린(penicillin) 100IU/ml 및 스트렙토마이신(streptomycin) 100ug/ml)과 혈청(serum)이 포함되어 있지 않고, 페놀 레드(phenol red)가 함유되어 있지 않은 DMEM 배지를 이용하여 5 x 10 4 cell/ml의 농도로 96 well 블랙 플레이트(black plate)에 접종하였고, 5% CO 2 및 37℃에서 배양하였다. 400ug/ml 농도의 각 시료와 대조군이 함유된 배지와 1000uM 농도의 tert-부틸 하이드로퍼옥사이드(tert-butyl hydroperoxide, tBHP)를 동시에 처리하여 배양하였다. 90분 후 배지를 제거하고, 포스페이트 버퍼 살린(phosphate buffered saline, PBS)으로 세척한 후, 25uM 농도의 DCF-DA(2',7'-dichlorodihydrofluorescein diacetate) 용액을 처리하였다. 30분 후, PBS로 세척하고, PBS 용액을 넣어 485nm/515nm에서 형광을 측정하였다. 활성산소종(ROS) 발현량 평가 결과는 도 4에 나타내었다. 도 4에 나타난 바와 같이, tBHP를 처리하여 활성산소종(ROS) 생성을 유발한 대조군의 경우보다 어성초, 생강 또는 이들의 조합을 처리한 경우 ROS 생성율이 감소함을 확인하였다. 특히, 어성초 및 생강 혼합 추출물을 처리하는 경우, tBHP를 처리하지 않은 대조군에 가까운 수준의 활성산소종 생성율을 나타냄을 알 수 있다.
상기와 같은 결과로부터 확인할 수 있는 바와 같이, 본 발명은 중금속에 노출된 세포의 생존율을 증가시킬 수 있고, DPPH 자유 라디칼 소거능을 향상시킬 수 있으며, 활성산소종 생성을 저하시킬 수 있음을 확인하였다.
이상의 설명은 본 발명의 기술 사상을 예시적으로 설명한 것에 불과한 것으로서, 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 다양한 수정 및 변형이 가능하다. 또한, 본 발명에 개시된 실시 예들은 본 발명의 기술 사상을 한정하기 위한 것이 아니라 설명하기 위한 것이고, 이러한 실시 예에 의하여 본 발명의 기술 사상의 범위가 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 보호 범위는 아래의 청구범위에 의하여 해석되어야 하며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 기술 사상은 본 발명의 권리범위에 포함되는 것으로 해석되어야 할 것이다.

Claims (10)

  1. 생강 및 어성초를 1 내지 2:1 내지 4의 중량비로 혼합하여 혼합물을 제조하는 단계;
    물 또는 알콜을 사용하여 상기 혼합물로부터 추출물을 제조하는 단계; 및
    상기 추출물을 여과 및 농축시켜 조성물을 제조하는 단계를 포함하는 해독 조성물 제조방법.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 추출물을 제조하는 단계가 열수 추출하는 단계인 것인, 해독 조성물 제조방법.
  3. 제1항에 있어서,
    생강 및 어성초의 중량비가 1:1인 것인, 해독 조성물 제조방법.
  4. 제1항에 있어서,
    상기 추출물을 제조하는 단계가 상기 혼합물 중량의 1 내지 50배수의 물을 첨가하는 단계; 및
    50 내지 120℃에서 100 내지 300분 동안 교반시키는 단계를 포함하는 것인, 해독 조성물 제조방법.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 따라 제조되는 해독 조성물.
  6. 제5항에 있어서,
    상기 조성물이 카드뮴, 납 또는 이들의 조합을 처리한 세포의 생존율을 1.1 내지 1.5배 증가시키는 것인, 해독 조성물.
  7. 제5항에 있어서,
    상기 조성물이 DPPH 라디칼 소거 활성을 5 내지 60% 증가시키는 것인, 해독 조성물.
  8. 제5항에 있어서,
    상기 조성물이 활성산소 생성량을 5 내지 50% 감소시키는 것인, 해독 조성물.
  9. 제5항에 따른 조성물을 포함하는 식품 조성물.
  10. 제5항에 따른 조성물을 포함하는 화장품 조성물.
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