WO2020080484A1 - 糸球体濾過能力の決定方法 - Google Patents

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WO2020080484A1
WO2020080484A1 PCT/JP2019/040960 JP2019040960W WO2020080484A1 WO 2020080484 A1 WO2020080484 A1 WO 2020080484A1 JP 2019040960 W JP2019040960 W JP 2019040960W WO 2020080484 A1 WO2020080484 A1 WO 2020080484A1
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blood
amount
glomerular filtration
serine
correlation
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PCT/JP2019/040960
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English (en)
French (fr)
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真史 三田
池田　達彦
友則 木村
Original Assignee
株式会社 資生堂
国立研究開発法人医薬基盤・健康・栄養研究所
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    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6803—General methods of protein analysis not limited to specific proteins or families of proteins
    • G01N33/6806—Determination of free amino acids
    • G01N33/6812—Assays for specific amino acids
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/34—Genitourinary disorders
    • G01N2800/347—Renal failures; Glomerular diseases; Tubulointerstitial diseases, e.g. nephritic syndrome, glomerulonephritis; Renovascular diseases, e.g. renal artery occlusion, nephropathy

Definitions

  • the present invention relates to a method for determining glomerular filtration ability and a blood analysis system for determining glomerular filtration ability.
  • the glomerular filtration rate is a representative indicator of renal function.
  • the glomerular filtration rate represents the amount of fluid that is filtered from blood in the glomerulus in 1 minute, and the measurement of inulin clearance is regarded as an international standard (gold standard).
  • gold standard the measurement of inulin clearance requires continuous infusion of inulin for 2 hours and multiple urine collections and blood collections, which imposes a heavy burden on subjects and practitioners. Therefore, the measurement of inulin clearance is routinely performed only in a limited situation such as a donor at the time of living kidney transplantation, and it is mostly replaced by the measurement of other markers such as creatinine. Is.
  • the values of many markers largely deviate from the actual glomerular filtration rate such as inulin clearance, which is a gold standard, which impedes accurate diagnosis of kidney disease.
  • Creatinine is commonly used in clinical settings as an indicator of renal function. Creatinine is the final metabolite of creatine required for muscle contraction. Creatine produced in the liver is taken up by muscle cells, part of which is metabolized to creatinine, transported to the kidney via blood, filtered by the glomerulus, and then reabsorbed in the urine without being reabsorbed by the renal tubules. Excreted into. When the glomerular filtration capacity is decreased, the excretion is impaired, and the value increases by staying in the blood, which is a useful indicator of uremic toxin accumulation, and is therefore used for the evaluation of renal function. However, the amount of creatinine in blood does not show a clear abnormal value unless GFR is reduced by 50% or more, and cannot be said to be a sensitive marker.
  • Cystatin C is a protein with a molecular weight of 13.36 kDa that is produced at a constant rate from nucleated cells throughout the body. It is all filtered by the glomerulus and then reabsorbed by the renal tubules before being degraded by the kidney. It is considered that it is removed from the blood according to the above, and the amount in the blood serves as an index of GFR.
  • the increase in the amount of cystatin C in the blood slows down, and accurate renal function evaluation is difficult in end stage renal disease.
  • Non-patent document 1 Non-patent document 2
  • Non-patent document 3 Non-patent document 4
  • an amino acid selected from the group consisting of D-serine, D-threonine, D-alanine, D-asparagine, D-alrosreonine, D-glutamine, D-proline and D-phenylalanine has an index value for the pathological condition of kidney disease. Is disclosed (Patent Document 1).
  • the D-amino acid in the blood of a patient suffering from kidney disease fluctuates as compared with a healthy person, so that it is possible to diagnose kidney disease using these fluctuations as an index, or
  • the correlation between the amount of D-serine in blood of a subject and the amount of creatinine or an estimated value obtained by correcting the amount of creatinine is merely disclosed, and the amount of D-amino acid in blood is directly the gold standard of inulin.
  • glomerular filtration capacity can be determined (estimated) in correlation with clearance.
  • urinary L-FABP, blood NGAL, urinary KIM-1 and the like have been developed as markers for kidney disease, but they do not correlate with glomerular filtration ability.
  • a method for accurately determining the glomerular filtration ability of a test subject in a wider range compared to renal function markers such as the amount of creatinine in blood known to date is desired.
  • the present inventors have focused on D-serine in blood and analyzed the relationship with GFR (inulin clearance). Surprisingly, in a blood sample of a kidney disease patient in a stage from healthy to early to terminal stage. The inventors have found that the amount of D-serine in blood has a higher correlation with GFR (inulin clearance) at all stages than the amount of creatinine and the amount of cystatin C, and the present invention has been completed.
  • the present invention relates to the following: [1] A method for determining glomerular filtration ability based on the amount of D-serine in blood. [2] The method according to Item 1, wherein the glomerular filtration capacity is a glomerular filtration rate determined based on a formula calculated from a correlation between inulin clearance and an amount of D-serine in blood. [3] The method according to item 1 or 2, wherein the blood is blood of a subject determined to be suspected of having kidney disease by an existing test. [4] The method according to any one of Items 1 to 3, wherein therapeutic intervention is performed on a subject for whom a decrease in glomerular filtration ability has been determined.
  • a diuretic As the therapeutic intervention, a diuretic, a calcium antagonist, an angiotensin converting enzyme inhibitor, an angiotensin receptor antagonist, a sympathetic blocker, an SGLT2 inhibitor, a sulfonylurea drug, a thiazolidine drug, a biguanide drug, an ⁇ -glucosidase inhibitor Drug, glinide drug, insulin drug, NRF2 activator, immunosuppressant, statin drug, fibrate drug, anemia treatment drug, erythropoietin drug, HIF-1 inhibitor, iron drug, electrolyte regulator, calcium receptor agonist,
  • An item comprising administering to the subject at least one drug selected from the group consisting of a phosphorus adsorbent, a uremic toxin adsorbent, a DPP4 inhibitor, an EPA preparation, a nicotinic acid derivative, a cholesterol transporter inhibitor, and a PCSK9 inhibitor.
  • a blood analysis system including a storage unit, an analysis measurement unit, a data processing unit, and a glomerular filtration capacity output unit,
  • the storage unit stores a correlation equation between the amount of D-serine and the glomerular filtration capacity;
  • the analysis and measurement unit separates and quantifies the amount of D-serine in the blood;
  • the data processing unit applies the amount of D-serine to the correlation formula stored in the storage unit to calculate the glomerular filtration capacity;
  • the pathological condition information output unit outputs information about the glomerular filtration capacity, which is a blood analysis system.
  • the blood analysis system according to item 7 wherein the glomerular filtration capacity is a glomerular filtration rate determined based on a formula calculated from a correlation between inulin clearance and an amount of D-serine in blood.
  • the blood is blood of a subject determined to be suspected of having kidney disease by an existing test.
  • the amount of D-serine in blood used in the method for determining glomerular filtration ability of the present invention has a better correlation with GFR (inulin clearance) than the amount of creatinine and cystatin C in blood.
  • FIG. 1 is a scatter diagram of D-serine amount (A), creatinine amount (B), and cystatin C amount (C) measured in a subject and GFR (inulin clearance) (body surface area corrected).
  • FIG. 2 is a scatter diagram of D-serine amount (A), creatinine amount (B), and cystatin C amount (C) measured in a subject and GFR (inulin clearance) (without body surface area correction).
  • FIG. 3 is a scatter diagram of the amount of D-serine in blood (A), the amount of creatinine (B), the amount of cystatin C (C), and the body surface area (BSA) in the data of the healthy subject group (GFR> 70). Is.
  • FIG. 1 is a scatter diagram of D-serine amount (A), creatinine amount (B), and cystatin C amount (C) measured in a subject and GFR (inulin clearance) (without body surface area correction).
  • FIG. 3 is a scatter diagram of the amount of D-s
  • FIG. 4 shows all data (All), GFR (inulin clearance) 100 or less, G3a or less (GFR (inulin clearance) 60 or less); G3b or less (GFR (inulin clearance) 45 or less); G4 or less (GFR (inulin clearance)) 30 or less); and G5 or less (GFR (inulin clearance) 15 or less), and blood D-serine amount (A), creatinine amount (B), and cystatin C amount (C), and GFR in each classification. It is a graph showing a correlation with (inulin clearance) (body surface area corrected).
  • FIG. 5 shows a block diagram of the sample analysis system of the present invention.
  • FIG. 6 is a flowchart showing an example of the operation for determining the glomerular filtration rate by the program of the present invention.
  • the present invention relates to a method for determining glomerular filtration ability based on the amount of D-serine in blood.
  • the glomerular filtration ability refers to the ability of the glomerulus to filter blood. In one aspect, it is represented by the glomerular filtration rate (GFR), but is not limited to the substantial glomerular filtration rate, and the glomerular filtration capacity can be determined in any unit.
  • GFR glomerular filtration rate
  • the amount of D-serine in blood can be expressed as a glomerular filtration ability as it is or after being corrected by an arbitrary numerical value as the case may be.
  • the glomerular filtration ability may be a glomerular filtration ability with body surface area correction or a glomerular filtration ability without body surface area correction. Since the required glomerular filtration ability differs depending on the physique, body surface area correction may be performed when used for comparison, statistical processing, or screening diagnosis.
  • the glomerular filtration rate refers to the amount of fluid that is filtered from blood in the glomerulus in one minute, and is expressed in the unit of “mL / min”. Since the required glomerular filtration rate changes depending on the physique, when used for statistical processing, comparison, and screening diagnosis, the glomerular filtration rate per standard body surface area of 1.73 m 2 is corrected to The unit is "/min/1.73 m 2 ". While correction values based on body surface area are generally used for comparison of renal function and screening diagnosis, when used for individual renal function diagnosis and determination of dosage of renal excretory drug, body surface area is not measured. Use the correction value.
  • the glomerular filtration rate is clinically determined from the clearance of inulin, sodium thiosulfate, creatinine, iotalamic acid, synistrin and the like.
  • the present invention determines the glomerular filtration ability based on the correlation between the amount of D-serine in blood and GFR (inulin clearance).
  • D-serine used as an index is an optical isomer of L-serine, which is an amino acid that constitutes proteins.
  • the amount of D-serine is strictly controlled in each tissue and blood mainly by metabolic enzymes such as serine racemase and D-amino acid oxidase, while in the case of renal damage, D-serine in blood is The amount varies.
  • the “amount of D-serine in blood” may refer to the amount of D-serine in a specific blood amount, or may be expressed as a concentration.
  • the amount of D-serine in blood is measured as the amount in a sample obtained by subjecting collected blood to centrifugation, sedimentation, or pretreatment for analysis. Therefore, the amount of D-serine in blood can be measured as the amount in a blood sample derived from blood such as collected whole blood, serum, plasma and the like.
  • the amount of D-serine contained in a predetermined amount of blood is represented by a chromatogram, and the height, area, and shape of peaks are compared with standard products and analyzed by calibration.
  • the amino acid concentration can be calculated by quantitative analysis using a standard curve.
  • the amounts of D-serine and L-serine can be measured by any method, for example, measurement using chiral column chromatography or enzymatic method, and immunological analysis using a monoclonal antibody that identifies optical isomers of amino acids. It can be quantified by the method.
  • the amounts of D-serine and L-serine in the sample in the present invention may be measured by any method known to those skilled in the art. For example, chromatographic methods and enzymatic methods (Y. Naga et al., Clinical Science, 73 (1987), 105. Analytical Biochemistry, 150 (1985), 238., A. D'Anielloetetal., ComparativeBiochemistry and Physiology Part B, 66 (1980), 319.
  • the separation / analysis system for optical isomers in the present invention may combine a plurality of separation / analysis. More specifically, a sample containing a component having an optical isomer, together with a first liquid as a mobile phase, is passed through a first column packing material as a stationary phase to separate the components of the sample. Holding each of the components of the sample individually in a multiloop unit, each of the components of the sample held individually in the multiloop unit as a stationary phase with a second liquid as a mobile phase. A second column packing material having an optically active center through a channel to separate the optical isomers contained in each of the components of the sample, and the optical isomers contained in each of the components of the sample.
  • the D- / L-amino acid amount in the sample can be measured by using the method for analyzing optical isomers, which comprises the step of detecting the body (specific characteristics). No. 4,291,628).
  • D- and L-amino acids were previously derivatized with fluorescent reagents such as o-phthalaldehyde (OPA) and 4-fluoro-7-nitro-2,1,3-benzoxadiazole (NBD-F). Or N-tert-butyloxycarbonyl-L-cysteine (Boc-L-Cys) may be used to diastereomerize (Kenji Hamase and Kiyoshi Zaitsu, Analytical Chemistry, 53, 677-690 ( 2004)).
  • the D-amino acid can be measured by an immunological method using a monoclonal antibody that recognizes an optical isomer of an amino acid, for example, a monoclonal antibody that specifically binds to D-serine, L-serine and the like.
  • a monoclonal antibody that specifically binds to D-serine, L-serine and the like for example, a monoclonal antibody that specifically binds to D-serine, L-serine and the like.
  • amino acids can be analyzed without distinguishing between D-form and L-form. In that case as well, it can be separated and quantified by an enzyme method, an antibody method, GC, CE, and HPLC.
  • the amount of creatinine in blood used in comparison with the present invention is strongly influenced by the amount of muscle from its origin, and therefore shows high values in athletes, patients with acromegaly and large amounts of meat, and neuromuscular diseases (muscular dystrophy). Etc.), emaciation, long-term bed rest, flail, sarcopenia, locomotive syndrome, patients with anputation and low levels of protein intake, thus failing to reflect accurate renal function.
  • the amount of creatinine in blood has a diurnal variation of about 10%, which is high in the morning, and should be handled with care.
  • the amount of cystatin C in the blood increases more sharply than the amount of creatinine in the blood, which is considered to be good for the discovery of early renal dysfunction.
  • the amount of steroid or cyclosporine affects the amount depending on the patient's condition such as diabetes, hyperthyroidism, inflammation, hyperbilirubinemia, and hypertriglyceridemia. Therefore, in diagnosing kidney disease, it is necessary to combine other markers, such as urea nitrogen (BUN) and urinary protein, to make a composite diagnosis.
  • BUN urea nitrogen
  • the accuracy of glomerular filtration rate determined based on conventional renal function markers such as blood creatinine level is low, while the gold standard inulin clearance enables accurate measurement of glomerular filtration rate.
  • the procedure is complicated and the burden on the subject and the medical staff is large, the implementation scene is limited.
  • INDUSTRIAL APPLICABILITY The method for determining glomerular filtering ability of the present invention can determine glomerular filtering ability more accurately than at least the amount of creatinine in blood, and more accurately than the amount of cystatin C in blood. Can be determined.
  • the amount of D-serine in blood can be used as a surrogate marker for inulin clearance.
  • the surrogate marker is a marker that can be scientifically proven to be associated with the final evaluation.
  • the inulin clearance surrogate marker was statistically shown to be related to the evaluation by inulin clearance using the amount of D-serine in blood.
  • D-serine was used instead of the GFR determination method based on inulin clearance. It means that the glomerular filtration rate can be determined based on the volume.
  • D-serine is not intended to be limited to theory, it has the advantage that it is not affected by muscle mass and therefore does not require correction by physique like creatinine in blood.
  • One aspect of the present invention is characterized in that the glomerular filtration rate determination method of the present invention does not perform correction based on at least one factor selected from the group consisting of sex, age, and muscle mass related to physique. To do.
  • the glomerular filtration capacity is a formula, a correspondence table or a graph calculated from the correlation between inulin clearance and the amount of D-serine in blood, and the amount of D-serine in the blood of a subject is shown in It can be determined by substituting.
  • the correlation between inulin clearance and the amount of D-serine has been shown to be higher than that between the inulin clearance and the amount of creatinine in blood, and the correlation between inulin clearance and the amount of D-serine in blood has been shown.
  • the glomerular filtration rate determined by substituting the D-serine amount of the subject into the formula, correspondence table or graph calculated from the correlation is the conventional glomerular filtration amount determined based on the amount of creatinine in blood. Is more accurate compared to.
  • the inulin clearance used for the correlation analysis may be inulin clearance after body surface area correction or may be inulin clearance before body surface area correction. It can be selected according to which of the glomerular filtration ability before and after the body surface area correction is necessary.
  • the correspondence table calculated from the correlation between inulin clearance and the amount of D-serine in blood may include the numerical value of glomerular filtration capacity corresponding to a certain amount of D-serine, or the numerical range. The severity classification of kidney disease according to may be described.
  • the severity of kidney disease can be classified based on the determination.
  • the chronic kidney disease patients can be classified according to six severity levels of G1, G2, G3a, G3b, G4, and G5.
  • a therapeutic intervention is performed on the subjects classified into the categories corresponding to G2 to G5.
  • the treatment intervention can be appropriately selected according to each classification.
  • lifestyle improvement, dietary guidance, blood pressure management, anemia management, electrolyte management, uremic toxin management, blood sugar level management, immune management, lipid management, etc. are instructed independently or in combination.
  • Dietary guidance includes salt reduction and protein restriction.
  • blood pressure control anemia control, electrolyte control, uremic toxin control, blood sugar level control, immune control, and lipid control can be treated by medication.
  • the blood pressure is controlled so as to be 130/80 mmHg or less, and in some cases, a therapeutic agent for hypertension can be administered.
  • antihypertensive drug examples include diuretics (thiazide diuretics, for example, trichlormethiazide, benzyl hydrochlorothiazide, hydrochlorothiazide, thiazide-like diuretics, such as methicrane, indabamide, tribamide, mefluside, loop diuretics, such as furosemide, potassium-sparing drugs.
  • diuretics thiazide diuretics, for example, trichlormethiazide, benzyl hydrochlorothiazide, hydrochlorothiazide, thiazide-like diuretics, such as methicrane, indabamide, tribamide, mefluside, loop diuretics, such as furosemide, potassium-sparing drugs.
  • Diuretics and aldosterone antagonists such as triamterene, spironolactone, eplerenone, etc., calcium antagonists (dihydropyridines such as nifedipine, amlodipine, efonidipine, cilnidipine, nicardipine, nisoldipine, nitrendipin, nilvadipine, valnidipine, felodipine, benidipine, manidipine, manidipine, manidipine) Alanidipine, benzothiazepines, diltiazem, etc.), angiotensin-converting enzyme inhibitor (captop) , Enalapril, aselapril, delapril, cilazapril, lisinopril, benazepril, imidapril, temocapril, quinapril, trandolapril, belindopril erbumin
  • Erythropoietin preparations, iron preparations, HIF-1 inhibitors and the like are used as therapeutic agents for anemia.
  • Calcium receptor agonists cinacalcet, etelcalcetide, etc.
  • phosphorus adsorbents are used as electrolyte modifiers.
  • Activated carbon or the like is used as the uremic toxin adsorbent.
  • Blood glucose levels are controlled to be less than Hbalc 6.9% and hypoglycemic agents are optionally administered.
  • SGLT2 inhibitors ipragliflozin, dapagliflozin, luseogliflozin, tofogliflozin, canagliflozin, empagliflozin, etc.
  • DPP4 inhibitors sitagliptin phosphate, vildagliptin, saxagliptin, alogliptin, linagliptin, tenelipliptin, trenlipliptin, threnaliptin , Anagliptin, omalipliptin, etc.
  • sulfonylurea drugs tolbutamide, acetohexamide, chlorpropamide, glyclopyramide, glibenclamide, gliclazide, glimepiride, etc.
  • thiazolidine drugs pioglitazone, etc.
  • biguanide drugs metalformin, buformin, etc.
  • Immunosuppressants are used for immune management.
  • LDL-C is controlled to be less than 120 mg / dL, and in some cases, dyslipidemia treatment agents such as statins (rosuvastatin, pitavastatin, atorvastatin, cervastatin, fluvastatin, simvastatin, pravastatin, lovastatin, mevastatin, etc.), Fibrate drugs (clofibrate, bezafibrate, fenofibrate, clinofibrate, etc.), nicotinic acid derivatives (tocorelol nicotinate, nicomol, niceritrol), cholesterol transporter inhibitors (ezetimibe, etc.), PCSK9 inhibitors (evolocumab, etc.) EPA A formulation or the like is used.
  • the dosage form of each drug may be a single drug or a combination drug.
  • renal replacement therapy such as peritoneal dialysis, hemodialysis, continuous hemodiafiltration, blood apheresis (plasma exchange, plasma adsorption, etc.) or renal transplantation is performed.
  • FIG. 4 is a block diagram of the sample analysis system of the present invention.
  • the sample analysis system 10 shown in FIG. 4 is configured to be able to carry out the method for determining the glomerular filtration capacity of the present invention.
  • Such a sample analysis system 10 includes a storage unit 11, an input unit 12, an analysis measurement unit 13, a data processing unit 14, and an output unit 15, analyzes a blood sample, and determines the glomerular filtration ability. Can be output.
  • the storage unit 11 stores an equation, a correspondence table or a graph calculated from the correlation between the inulin clearance input from the input unit 12 and the amount of D-serine in the blood sample
  • the analysis and measurement unit 13 separates and quantifies D-serine in the blood sample
  • the data processing unit 14 substitutes the D-serine amount into the formula calculated from the correlation between the inulin clearance and the D-serine amount in the blood sample, or reads it from the correspondence table or the graph to obtain the glomerular filtration ability.
  • Decide The output unit 15 can output the glomerular filtration capacity.
  • the storage unit 11 stores the threshold value input from the input unit 12, and the data processing unit 14 stores the separated and quantified D-serine amount and the threshold value. It may further include a step of comparing. In this case, when the amount of D-serine is lower than the threshold value, the output unit 15 outputs that the glomerular filtration capacity is high.
  • the data processing unit 14 substitutes the D-serine amount into the formula calculated from the correlation between the inulin clearance and the D-serine amount in the blood sample, or the correspondence table or The glomerular filtration capacity is determined by reading from the graph, and the output unit 15 outputs the glomerular filtration capacity.
  • the storage unit 11 has a memory device such as a RAM, a ROM, a flash memory, a fixed disk device such as a hard disk drive, or a portable storage device such as a flexible disk or an optical disk.
  • the storage unit stores data measured by the analysis measurement unit, data and instructions input from the input unit, results of arithmetic processing performed by the data processing unit, computer programs used for various processes of the information processing device, a database, and the like.
  • the computer program may be installed via a computer-readable recording medium such as a CD-ROM or a DVD-ROM, or the Internet.
  • the computer program is installed in the storage unit using a known setup program or the like.
  • the storage unit stores data regarding an equation, a correspondence table, or a graph calculated from the correlation between the inulin clearance and the amount of D-serine in the blood sample, which is input in advance from the input unit 12. Also, the renal function classification according to the glomerular filtration rate can be stored.
  • the input unit 12 is an interface and the like, and also includes operation units such as a keyboard and a mouse. Thereby, the input unit can input the data measured by the analysis measurement unit 13, the instruction of the arithmetic processing performed by the data processing unit 14, and the like. Further, the input unit 12 may include an interface unit capable of inputting measured data or the like via a network or a storage medium, in addition to the operation unit, for example, when the analysis measurement unit 13 is external.
  • the analysis / measurement unit 13 performs the measurement process of D-serine in the blood sample. Therefore, the analysis and measurement unit 13 has a configuration that enables separation and measurement of D-form and L-form of amino acids.
  • the amino acids may be analyzed one by one, but some or all types of amino acids may be analyzed together.
  • the analysis and measurement unit 13 is not intended to be limited to the following, but is, for example, a chiral chromatography system including a sample introduction unit, an optical resolution column, and a detection unit, and preferably a high performance liquid chromatography system. May be. From the viewpoint of detecting only a specific amino acid amount, quantification by an enzymatic method or an immunological method may be performed.
  • the analysis measurement unit 13 may be configured separately from the sample analysis system, and the measured data and the like may be input via the input unit 12 using a network or a storage medium.
  • the data processing unit 14 substitutes the measured D-serine amount into the formula calculated from the correlation between the inulin clearance and the D-serine amount in the blood sample, or reads it from the correspondence table or graph.
  • Sphere filtration capacity can be determined. If the formula, correspondence table or graph calculated from the correlation between inulin clearance and the amount of D-serine in the blood sample requires further correction values such as age, weight, sex, height, etc.
  • Information is input in advance from the input unit and stored in the storage unit. When calculating the glomerular filtration rate, the data processing unit can calculate the glomerular filtration rate by calling up such information and substituting it into the formula or reading it from the correspondence table or graph.
  • the data processing unit 14 can also determine kidney disease or renal function classification from the determined glomerular filtration capacity.
  • the data processing unit 14 executes various arithmetic processes on the data measured by the analysis measuring unit 13 and stored in the storage unit 11 according to the program stored in the storage unit.
  • the arithmetic processing is performed by the CPU included in the data processing unit.
  • the CPU includes a functional module that controls the analysis and measurement unit 13, the input unit 12, the storage unit 11, and the output unit 15, and can perform various controls. Each of these units may be composed of an independent integrated circuit, microprocessor, firmware, or the like.
  • the output unit 15 is configured to output the glomerular filtration capacity that is the result of the arithmetic processing in the data processing unit.
  • the output unit 15 may be a display device such as a liquid crystal display that directly displays the result of the arithmetic processing, an output unit such as a printer, or an interface unit for outputting to an external storage device or via a network. It may be. It is also possible to output the D-serine amount and / or the renal function classification together with the glomerular filtration ability or independently.
  • FIG. 5 is a flowchart showing an example of an operation for determining the glomerular filtration rate by the program of the present invention.
  • the program of the present invention is a program that causes an information processing apparatus including an input unit, an output unit, a data processing unit, and a storage unit to determine the glomerular filtration rate.
  • the program of the present invention is as follows: The amount of D-serine input from the input unit is stored in the storage unit, The formula, correspondence table or graph calculated from the correlation between the inulin clearance and the amount of D-serine in the blood sample stored in advance in the memory unit and the D-serine amount are read out, and the glomerular filtration ability is read in the data processing unit.
  • the program of the present invention may be stored in a storage medium, or may be provided via an electric communication line such as the Internet or LAN.
  • the analysis measurement unit measures the value from the blood sample and stores it in the storage unit instead of inputting the value of the D-serine amount from the input unit. May be included in the command.
  • inulin clearance measurement method The inulin clearance (Cin) of a subject was calculated from the inulin concentration in blood and urine and the urine volume according to the standard method described in Clin Exp Nephrol 13,50-54 (2009). Briefly, under fasting, postponement of medication, and water-loaded environment, 1% inulin (Inulead Note: Fuji Yakuhin Co., Ltd.) was administered to a blood and urine sample at three different time points during a continuous intravenous infusion of 2 hours. It was collected in. The test subject drank 500 mL of water orally 30 minutes before the infusion. To maintain the water load, 60 mL of water was drunk 40, 60, 90 minutes after the start of the inulin drip.
  • the initial rate of infusion was 300 mL / h for the first 30 minutes, followed by 100 mL / h for 90 minutes.
  • Blood samples were taken at 45, 75, and 105 minutes after the start of inulin infusion. The subject urinated so as to completely empty the bladder 30 minutes after the start of infusion. Urine samples were then taken between 30 and 60 minutes, between 60 and 90 minutes, and between 90 and 120 minutes. Inulin was measured using the enzymatic method. The average of three Cin values was used as Cin (Cin-ST) by the standard method.
  • Sample preparation from human plasma was performed as follows: 20 volumes of methanol were added to plasma and mixed thoroughly. After centrifugation, 10 ⁇ L of the supernatant obtained from methanol homogenate was transferred to a brown tube and dried under reduced pressure. The residue was added with 20 ⁇ L of 200 mM sodium borate buffer (pH 8.0) and 5 ⁇ L of fluorescent labeling reagent (40 mM 4-fluoro-7-nitro-2,1,3-benzoxadiazole (NBD- in anhydrous MeCN). F)) was added and then heated at 60 ° C. for 2 minutes. The reaction was stopped by adding 75 ⁇ L of 0.1% TFA aqueous solution (v / v), and 2 ⁇ L of the reaction mixture was subjected to two-dimensional HPLC.
  • fluorescent labeling reagent 40 mM 4-fluoro-7-nitro-2,1,3-benzoxadiazole (NBD- in anhydrous MeCN). F
  • Amino acid optical isomers were quantified using the following two-dimensional HPLC system.
  • a mobile phase (5-35% MeCN, 0-20% THF, and 0.05% TFA) of an NBD derivative of an amino acid was used as a mobile phase using a reverse phase column (KSAA RP, 1.0 mm id x 400 mm; Shiseido Co., Ltd.). was separated and eluted.
  • the column temperature was set to 45 ° C. and the mobile phase flow rate was set to 25 ⁇ L / min.
  • the separated amino acid fraction was collected using a multi-loop valve and continuously optically resolved by a chiral column (KSAACSP-001S, 1.5 mm id x 250 mm; Shiseido).
  • KSAACSP-001S a MeOH-MeCN mixed solution containing citric acid (0 to 10 mM) or formic acid (0 to 4%) was used according to the retention of amino acids.
  • NBD-amino acid was detected by fluorescence at 530 nm using excitation light of 470 nm.
  • the retention time of NBD-amino acid was identified by a standard of optical amino acid isomers and quantified by a calibration curve.
  • BSA Body Surface Area
  • GFR100 or less was 21 people, G3a or less was 8 people, G3b or less was 5 people, G4 or less was 4 people, and G5 or less was 3 people.
  • Correlation coefficient r value between GFR (inulin clearance) without body surface area correction and blood D-serine amount (A), creatinine amount (B), and cystatin C amount (C) in each data And p value was calculated.
  • the results are shown in Fig. 3.
  • the amount of D-serine was shown to be highly correlated with GFR (inulin clearance) in each group.
  • GFR inulin clearance
  • the amount of creatinine in blood shows a relatively good correlation in G3a or lower and G3b or lower, but it is shown that the correlation is low in all data (All) and GFR100 or lower, which indicates that renal function declines.
  • the result showed the defect of creatinine that it was not reflected when was mild.
  • the amount of cystatin C had a high correlation with GFR (inulin clearance) in the data of relatively excellent renal function, such as GFR100 or less and G3a or less, while as shown in G3b or less, as renal function deteriorates. It was shown that the correlation with GFR (inulin clearance) is decreasing.
  • the amount of D-serine in blood was shown to correlate well with GFR (inulin clearance) in each group.

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Abstract

本発明は、血液中のＤ－セリン量に基づく、糸球体濾過能力の決定方法を提供する。また、本発明は、記憶部と、分析測定部と、データ処理部と、糸球体濾過能力出力部とを含む、血液分析システムであって、前記記憶部は、血液中のＤ－セリン量と糸球体濾過能力との相関式を記憶し；前記分析測定部は、血液中のＤ－セリン量を分離し定量し；前記データ処理部は、Ｄ－セリン量を、記憶部に記憶された相関式にあてはめて、糸球体濾過能力を算出し；前記病態情報出力部は糸球体濾過能力についての情報を出力する、血液分析システムを提供する。

Description

糸球体濾過能力の決定方法
　本発明は、糸球体濾過能力の決定方法、及び糸球体ろ過能力を決定する血液分析システムに関する。
　腎機能を表す代表的な指標として糸球体濾過量（Ｇｌｏｍｅｒｕｌａｒ　Ｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ　Ｒａｔｅ：ＧＦＲ）がある。糸球体濾過量は、糸球体で血液から１分間に濾過される液量を表し、イヌリンクリアランスの測定はその国際的な標準（ゴールドスタンダード）とされている。しかしながら、イヌリンクリアランスの測定は、２時間にわたるイヌリンの持続点滴、及び複数回にわたる採尿及び採血が必要であり、被験者及び実施者の負担が大きい。したがって、日常臨床においてイヌリンクリアランスの測定は生体腎移植の際のドナーのような限られた状況でのみ実施されるに留まっており、クレアチニンのような他のマーカーの測定で代替されることが大半である。多くのマーカーの値はゴールドスタンダードであるイヌリンクリアランス等の実際の糸球体濾過量との乖離が大きく、腎臓病の正確な診断の障害となっている。
　クレアチニンは、腎機能の指標として臨床現場で汎用的に測定される。クレアチニンは筋肉の収縮に必要なクレアチンの最終代謝物である。肝臓で生成されたクレアチンは筋細胞に取り込まれ、一部が代謝されてクレアチニンとなり、血液を介して腎臓へ運ばれ、糸球体で濾過された後、尿細管で再吸収されることなく尿中へ排泄される。糸球体濾過能力が低下した場合に排出が障害され、血液中に留まって数値が上昇することで尿毒素蓄積の有益な指標となるため、腎機能の評価に利用される。しかし、血液中のクレアチニン量は、ＧＦＲが５０％以上低下しないと明らかな異常値を示さず、鋭敏なマーカーとはいえない。
　シスタチンＣは全身の有核細胞から一定の割合で産生される分子量１３．３６ｋＤａのタンパク質で、すべて糸球体で濾過された後に尿細管での再吸収を経て腎臓で分解されることから、濾過量に応じて血液中から除去されると考えられ、血液中の量がＧＦＲの指標となる。しかし、腎機能が高度に低下した時には血液中のシスタチンＣ量の上昇は鈍化し、末期の腎臓病では正確な腎機能評価が困難である。
　以上のように、被験者・患者に大きな負担をかけることなく、採血のみで早期から末期の広いレンジで個別患者の正確な糸球体濾過量を測定したいという臨床現場の要求に十分応えることのできるバイオマーカーは存在していなかった。
　従来、哺乳類の生体内には存在しないと考えられていたＤ－アミノ酸が、様々な組織に存在し、生理機能を担うことが明らかにされてきている。また、血液中のＤ－セリン、Ｄ－アラニン、Ｄ－プロリン、Ｄ－グルタミン酸、Ｄ－アスパラギン酸の量が、腎不全患者で変動し、クレアチニンと相関することから腎不全のマーカーになり得ることが示されている（非特許文献１、非特許文献２、非特許文献３、非特許文献４）。さらに、Ｄ－セリン、Ｄ－スレオニン、Ｄ－アラニン、Ｄ－アスパラギン、Ｄ－アロスレオニン、Ｄ－グルタミン、Ｄ－プロリン及びＤ－フェニルアラニンからなるグループから選択されるアミノ酸が、腎臓病の病態指標値とすることについて開示されている（特許文献１）。これらの文献では、健常者と比較して、腎臓病を患う患者の血液中のＤ－アミノ酸が変動していることから、これらの変動を指標にして腎臓病の診断が可能になる旨、あるいは単に対象における血液中のＤ－セリン量が、クレアチニン量又はクレアチニン量を補正した推算値との相関が開示されているに過ぎず、血液中のＤ－アミノ酸量が直接的にゴールドスタンダードであるイヌリンクリアランスに相関し糸球体濾過能力が決定（推定）できることについては何ら記載も示唆もされていない。なお、近年、腎臓病のマーカーとして、尿中Ｌ－ＦＡＢＰ、血液中ＮＧＡＬ、尿中ＫＩＭ－１等が開発されてきているが、それらは糸球体濾過能力と相関するものではない。
国際公開第２０１３／１４０７８５号
Ｆｕｋｕｓｈｉｍａ，Ｔ．ら、Ｂｉｏｌ．　Ｐｈａｒｍ．　Ｂｕｌｌ．　１８：　１１３０（１９９５） Ｎａｇａｔａ．Ｙ　Ｖｉｖａ　Ｏｒｉｇｉｎｏ　Ｖｏｌ．１８（Ｎｏ．２）　（１９９０）第１５回学術講演会講演要旨集 Ｉｓｈｉｄａら、北里医学　２３：５１～６２　（１９９３） Ｙｏｎｇ　Ｈｕａｎｇら、Ｂｉｏｌ．　Ｐｈａｒｍ．　Ｂｕｌｌ．　２１：（２）１５６-１６２（１９９８）
　現在までに知られている血液中のクレアチニン量等の腎機能マーカーと比較して、より広い範囲で正確に、被験者の糸球体濾過能力を決定する方法が望まれている。
　本発明者らは、血液中のＤ－セリンに着目し、ＧＦＲ（イヌリンクリアランス）との関係を解析したところ、驚くべきことに、健常から早期～末期のステージにある腎臓病患者の血液検体において、クレアチニン量やシスタチンＣ量よりも、血液中のＤ－セリン量が全てのステージにおいてＧＦＲ（イヌリンクリアランス）に対して高い相関を示すことを見出し、本発明に至った。
　そこで、本発明は下記に関する：
［１］　血液中のＤ－セリン量に基づく、糸球体濾過能力の決定方法。
［２］　前記糸球体濾過能力が、イヌリンクリアランスと、血液中のＤ－セリン量との相関から算出された式に基づき決定される糸球体濾過量である、項目１に記載の方法。
［３］　前記血液が、既存の検査により腎臓病の疑いがあると判定された対象の血液である、項目１又は２に記載の方法。
［４］　糸球体濾過能力の低下が判定された対象に対して、治療介入が行われる、項目１～３のいずれか一項に記載の方法。
［５］　前記治療介入が、生活習慣改善、食事指導、血圧管理、貧血管理、電解質管理、尿毒素管理、血糖値管理、免疫管理及び脂質管理からなる群から選ばれる、項目４に記載の方法。
［６］　前記治療介入として、利尿薬、カルシウム拮抗薬、アンジオテンシン変換酵素阻害薬、アンジオテンシン受容体拮抗薬、交感神経遮断薬、ＳＧＬＴ２阻害薬、スルホニル尿素薬、チアゾリジン薬、ビグアナイド薬、α―グルコシダーゼ阻害薬、グリニド薬、インスリン製剤、ＮＲＦ２活性化剤、免疫抑制剤、スタチン系薬剤、フィブラート系薬剤、貧血治療薬、エリスロポエチン製剤、ＨＩＦ－１阻害剤、鉄剤、電解質調整薬、カルシウム受容体作動薬、リン吸着剤、尿毒素吸着剤、ＤＰＰ４阻害薬、ＥＰＡ製剤、ニコチン酸誘導体、コレステロールトランスポーター阻害剤、ＰＣＳＫ９阻害剤からなる群から選ばれる少なくとも１の薬剤を前記対象に投与することを含む、項目４又は５に記載の方法。
［７］　記憶部と、分析測定部と、データ処理部と、糸球体濾過能力出力部とを含む、血液分析システムであって、
　前記記憶部は、Ｄ－セリン量と糸球体濾過能力との相関式を記憶し；
　前記分析測定部は、前記血液中のＤ－セリン量を分離し定量し；
　前記データ処理部は、Ｄ－セリン量を、記憶部に記憶された相関式にあてはめて、糸球体濾過能力を算出し；
　前記病態情報出力部は糸球体濾過能力についての情報を出力する、血液分析システム。
［８］　前記糸球体濾過能力が、イヌリンクリアランスと、血液中のＤ－セリン量との相関から算出された式に基づき決定される糸球体濾過量である、項目７に記載の血液分析システム。
［９］　前記血液が、既存の検査により腎臓病の疑いがあると判定された対象の血液である、項目７又は８に記載の血液分析システム。
　本発明の糸球体濾過能力の決定方法において用いる血液中のＤ－セリン量は、ＧＦＲ（イヌリンクリアランス）に対し血液中のクレアチニン量及びシスタチンＣ量よりも優れた相関を有する。
図１は、対象において測定された血液中のＤ－セリン量（Ａ）、クレアチニン量（Ｂ）、及びシスタチンＣ量（Ｃ）と、ＧＦＲ（イヌリンクリアランス）（体表面積補正済み）との散布図である。 図２は、対象において測定された血液中のＤ－セリン量（Ａ）、クレアチニン量（Ｂ）、及びシスタチンＣ量（Ｃ）と、ＧＦＲ（イヌリンクリアランス）（体表面積補正無し）との散布図である。 図３は、健常者群（ＧＦＲ＞７０）のデータにおける血液中のＤ－セリン量（Ａ）、クレアチニン量（Ｂ）、及びシスタチンＣ量（Ｃ）と、体表面積（ＢＳＡ）との散布図である。 図４は、全データ（Ａｌｌ）、ＧＦＲ（イヌリンクリアランス）１００以下、Ｇ３ａ以下（ＧＦＲ（イヌリンクリアランス）６０以下）；Ｇ３ｂ以下（ＧＦＲ（イヌリンクリアランス）４５以下）；Ｇ４以下（ＧＦＲ（イヌリンクリアランス）３０以下）；及びＧ５以下（ＧＦＲ（イヌリンクリアランス）１５以下）に分類し、各分類における血液中のＤ－セリン量（Ａ）、クレアチニン量（Ｂ）、及びシスタチンＣ量（Ｃ）と、ＧＦＲ（イヌリンクリアランス）（体表面積補正済み）との相関を示したグラフである。 図５は、本発明の試料分析システムの構成図を示す。 図６は、本発明のプログラムによる糸球体濾過量を決定するための動作の例を示すフローチャートである。
　本発明は、血液中のＤ－セリン量に基づく、糸球体濾過能力の決定方法に関する。
　本発明において、糸球体濾過能力は、糸球体が血液を濾過する能力を指す。一の態様では、糸球体濾過量（ＧＦＲ）により表されるが、実質糸球体濾過量に限られず、任意の単位で糸球体濾過能力を決定することができる。一例として、血液中のＤ－セリン量をそのまま、又は場合により任意の数値で補正して、糸球体濾過能力として表すこともできる。本発明において、糸球体濾過能力は、体表面積補正をされた糸球体濾過能力であってもよいし、体表面積補正を行っていない糸球体濾過能力であってもよい。体格により必要とされる糸球体濾過能力は異なることから、比較、統計処理、又はスクリーニング診断に用いる場合には、体表面積補正が行われる場合がある。
　糸球体濾過量とは、糸球体で血液から１分間に濾過される液量を指し、「ｍＬ／分」という単位で表される。体格により必要とされる糸球体濾過量は変化するため、統計処理や、比較、スクリーニング診断に用いる場合には、標準体表面積１．７３ｍ2当りの糸球体濾過量に補正がされて、「ｍＬ／分／１．７３ｍ2」という単位が用いられる。腎機能の比較やスクリーニング診断には、体表面積による補正値を用いることが一般的である一方で、個別の腎機能診断や腎排泄性の薬物の投薬量の決定に利用する場合、体表面積未補正値を用いる。糸球体濾過量は、臨床的にイヌリン、チオ硫酸ナトリウム、クレアチニン、イオタラム酸、シニストリン等のクリアランスから求められている。本発明は、血液中Ｄ－セリン量とＧＦＲ（イヌリンクリアランス）との相関を基に糸球体濾過能力を決定している。
　本発明において、指標として用いられるＤ－セリンは、タンパク質を構成するアミノ酸であるＬ－セリンの光学異性体である。Ｄ－セリン量は、主にセリンラセマーゼやＤ－アミノ酸オキシダーゼ等の代謝酵素によって、各組織や血液中で厳密に制御されている一方で、腎障害が生じた場合には血液中のＤ－セリン量が変動する。
　本発明において「血液中のＤ－セリン量」とは、特定の血液量中のＤ－セリン量のことを指してもよく、濃度で表されてもよい。血液中のＤ－セリン量は、採取された血液において、遠心分離、沈降分離、あるいは分析のための前処理が行われた試料における量として測定される。したがって、血液中のＤ－セリン量は、採取された全血、血清、血漿等の血液に由来する血液試料における量として測定されうる。一例として、ＨＰＬＣを用いた分析の場合、所定量の血液に含まれるＤ－セリン量は、クロマトグラムで表され、ピークの高さ・面積・形状について標準品との比較やキャリブレーションによる解析によって定量されうる。Ｄ－セリン濃度が既知のサンプルとの比較により、血液中のＤ－セリン濃度を測定することが可能であり、血液中のＤ－セリン量として、血液中のＤ－セリン濃度を用いることができる。また、酵素法では、標準品の検量線を用いた定量解析により、アミノ酸濃度を算出可能である。
　Ｄ－セリン及びＬ－セリン量は、任意の方法によって測定することができ、例えばキラルカラムクロマトグラフィーや、酵素法を用いた測定、さらにはアミノ酸の光学異性体を識別するモノクローナル抗体を用いる免疫学的手法によって定量することができる。本発明における試料中のＤ－セリン及びＬ－セリン量の測定は、当業者に周知ないかなる方法を用いて実施しても構わない。例えば、クロマトグラフィー法や酵素法（Y. Nagata et al., Clinical Science, 73 (1987), 105. Analytical Biochemistry, 150 (1985), 238., A. D'Aniello et al., Comparative Biochemistry and Physiology Part B, 66 (1980), 319. Journal of Neurochemistry, 29 (1977), 1053., A. Berneman et al., Journal of Microbial & Biochemical Technology, 2 (2010), 139., W. G. Gutheil et al., Analytical Biochemistry, 287 (2000), 196., G. Molla et al., Methods in Molecular Biology, 794 (2012), 273., T. Ito et al., Analytical Biochemistry, 371 (2007), 167. 等）、抗体法（T. Ohgusu et al., Analytical Biochemistry, 357 (2006), 15.,等 ）、ガスクロマトグラフィー（ＧＣ）（H. Hasegawa et al., Journal of Mass Spectrometry, 46 (2011), 502., M. C. Waldhier et al., Analytical and Bioanalytical Chemistry, 394 (2009), 695., A. Hashimoto, T. Nishikawa et al., FEBS Letters, 296 (1992), 33., H. Bruckner and A. Schieber, Biomedical Chromatography, 15 (2001), 166. , M. Junge et al., Chirality, 19 (2007), 228., M. C. Waldhier et al., Journal of Chromatography A, 1218 (2011), 4537. 等）、キャピラリー電気泳動法（ＣＥ）（H. Miao et al., Analytical Chemistry, 77 (2005), 7190., D. L. Kirschner et al., Analytical Chemistry, 79 (2007), 736., F. Kitagawa, K. Otsuka, Journal of Chromatography B, 879 (2011), 3078., G. Thorsen and J. Bergquist, Journal of Chromatography B, 745 (2000), 389. 等）、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）（N. Nimura and T. Kinoshita, Journal of Chromatography, 352 (1986), 169., A. Hashimoto et al., Journal of Chromatography, 582 (1992), 41., H. Bruckner et al., Journal of Chromatography A, 666 (1994), 259., N. Nimura et al., Analytical Biochemistry, 315 (2003), 262., C. Muller et al., Journal of Chromatography A, 1324 (2014), 109., S. Einarsson et al., Analytical Chemistry, 59 (1987), 1191., E. Okuma and H. Abe, Journal of Chromatography B, 660 (1994), 243., Y. Gogami et al., Journal of Chromatography B, 879 (2011), 3259., Y. Nagata et al., Journal of Chromatography, 575 (1992), 147., S. A. Fuchs et al., Clinical Chemistry, 54 (2008), 1443., D. Gordes et al., Amino Acids, 40 (2011), 553., D. Jin et al., Analytical Biochemistry, 269 (1999), 124., J. Z. Min et al., Journal of Chromatography B, 879 (2011), 3220., T. Sakamoto et al., Analytical and Bioanalytical Chemistry, 408 (2016), 517., W. F. Visser et al., Journal of Chromatography A, 1218 (2011), 7130., Y. Xing et al., Analytical and Bioanalytical Chemistry, 408 (2016), 141., K. Imai et al., Biomedical Chromatography, 9 (1995), 106., T. Fukushima et al., Biomedical Chromatography, 9 (1995), 10., R. J. Reischl et al., Journal of Chromatography A, 1218 (2011), 8379., R. J. Reischl and W. Lindner, Journal of Chromatography A, 1269 (2012), 262., S. Karakawa et al., Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 115 (2015), 123., 等）がある。
　本発明における光学異性体の分離分析系は、複数の分離分析を組み合わせてもよい。より具体的に、光学異性体を有する成分を含む試料を、移動相としての第一の液体と共に、固定相としての第一のカラム充填剤に通じて、前記試料の前記成分を分離するステップ、前記試料の前記成分の各々をマルチループユニットにおいて個別に保持するステップ、前記マルチループユニットにおいて個別に保持された前記試料の前記成分の各々を、移動相としての第二の液体と共に、固定相としての光学活性中心を有する第二のカラム充填剤に流路を通じて供給し、前記試料の成分の各々に含まれる前記光学異性体を分割するステップ、及び前記試料の成分の各々に含まれる前記光学異性体を検出するステップを含むことを特徴とする光学異性体の分析方法を用いることにより、試料中のＤ-／Ｌ-アミノ酸量を測定することができる（特許第４２９１６２８号）。ＨＰＬＣ分析では、予めｏ－フタルアルデヒド（ＯＰＡ）や４－フルオロ－７－ニトロ－２，１，３－ベンゾキサジアゾール（ＮＢＤ－Ｆ）のような蛍光試薬でＤ－及びＬ－アミノ酸を誘導体化したり、Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチルオキシカルボニル－Ｌ－システイン（Ｂｏｃ－Ｌ－Ｃｙｓ）等を用いてジアステレオマー化する場合がある（浜瀬健司及び財津潔、分析化学、５３巻、６７７－６９０（２００４））。代替的には、アミノ酸の光学異性体を識別するモノクローナル抗体、例えばＤ－セリン、Ｌ－セリン等に特異的に結合するモノクローナル抗体を用いる免疫学的手法によってＤ－アミノ酸を測定することができる。また、Ｄ体及びＬ体の合計量を指標とする場合、Ｄ体及びＬ体を分離して分析する必要はなく、Ｄ体及びＬ体を区別せずにアミノ酸を分析することもできる。その場合も酵素法、抗体法、ＧＣ、ＣＥ、ＨＰＬＣで分離及び定量することができる。
　本発明との比較で用いられる血液中のクレアチニン量は、その由来から筋肉量の影響を強く受けるため、スポーツ選手、先端巨大症の患者や肉の大量摂取時には高値を示し、神経筋疾患（筋ジストロフィー等）や羸痩、長期臥床、フレイル、サルコペニア、ロコモーティブシンドローム、anputationのある患者やタンパク質摂取制限時には低値を示すため、正確な腎機能を反映できない。また、血液中のクレアチニン量には朝に高値を示す１０％程度の日内変動が認められるため、その扱いには注意が必要である。軽度の腎機能低下時には、血液中のシスタチンＣ量のほうが血液中のクレアチニン量よりも鋭敏に上昇するため、初期の腎機能障害の発見によいとされている。しかし、ステロイドやシクロスポリンの使用や、糖尿病、甲状腺機能亢進症、炎症、高ビリルビン血症、高トリグリセリド血症等、患者の状態によって量に影響を及ぼすことが知られている。よって、腎臓病の診察にあたっては、他のマーカー、例えば尿素窒素（ＢＵＮ）や尿タンパク等の数値を合わせて複合的に診断することが必要となる。
　血液中のクレアチニン量をはじめとしたこれまでの腎機能マーカーに基づいて決定された糸球体濾量の正確性は低く、一方で、ゴールドスタンダードのイヌリンクリアランスは正確に糸球体濾過量の測定ができるものの、その手技が煩雑であり、被験者及び医療従事者の負担が大きいため、実施場面が限定されていた。本発明の糸球体濾能力の決定方法は、少なくとも血液中のクレアチニン量よりも、正確に糸球体濾能力を決定することができ、また血液中のシスタチンＣ量よりも、正確に糸球体濾能力を決定することができる。また、糸球体濾量に応じて分類された群においてイヌリンクリアランスとの相関解析をした場合に、Ｄ－セリンは、すべての群で、血液中のシスタチンＣ量及びクレアチニン量の両方に比較して相関係数ｒ値が高く、イヌリンクリアランスに対する相関が高いことが示された。また、その正確性については、今後の実験により明らかにされるべきものであるが、国際標準測定法であるイヌリンクリアランスによる糸球体濾過量決定方法に匹敵又は凌駕する性能を有しうる。したがって、本発明の別の態様では、血液中のＤ－セリン量をイヌリンクリアランスの代用マーカーとしての使用することができる。代用マーカーとは、最終評価との関連を科学的に証明できるマーカーのことをいう。したがって、イヌリンクリアランス代用マーカーとは、血液中のＤ－セリン量を用いて、イヌリンクリアランスによる評価との関連が統計的に示された結果、イヌリンクリアランスに基づくＧＦＲ決定方法に代えて、Ｄ－セリン量に基づいて糸球体濾過量を決定することができることをいう。
　Ｄ－セリンは、理論に限定されることを意図するものではないが、筋肉量による影響を受けないため、血液中のクレアチニンのように体格による補正が必要でないという利点がある。本発明の１の態様では、本発明の糸球体濾過量決定方法では、体格に関連する性別、年齢、及び筋肉量からなる群から選ばれる少なくとも１の要因に基づく補正を行わないことを特徴とする。
　血液中のクレアチニン量（ｐ＝０．００７４）、シスタチンＣ量（ｐ＝０．０４３）は体表面積（ＢＳＡ）との相関が観察されたが、Ｄ－セリン量（ｐ＝０．１７）は、ＢＳＡと相関しなかった（実施例３）。これは、クレアチニンとシスタチンＣが筋肉量をはじめとする体格に何らかの影響を受けており、正確な糸球体濾過能力を測定するためには人種、年齢、性別、体表面積等で補正する必要性を示している。一方でＤ－セリン量より判定される糸球体濾過能力は、高齢者のように筋肉の衰えた体格に影響を受けない正確な値を提供できることを意味している。体表面積は、既知の手法により決定することができ、一例として下記の式：
Figure JPOXMLDOC01-appb-M000001
 が用いられる。
　本発明の一の態様において、糸球体濾能力は、イヌリンクリアランスと、血液中のＤ－セリン量との相関から算出された式、対応表又はグラフに、被験者の血液中のＤ－セリン量を代入することで決定することができる。イヌリンクリアランスとＤ－セリン量との相関は、イヌリンクリアランスと、血液中のクレアチニン量との相関と比較して、高いことが示されており、イヌリンクリアランスと、血液中のＤ－セリン量との相関から算出された式、対応表又はグラフに、被験者のＤ－セリン量を代入することで決定された糸球体濾過能力は、従来の血液中のクレアチニン量に基づいて決定された糸球体濾過量に比較して、より正確である。相関の解析に用いるイヌリンクリアランスは、体表面積補正済みのイヌリンクリアランスであってもよいし、体表面積補正前のイヌリンクリアランスであってもよい。体表面積補正前と補正後の糸球体濾過能力のどちらが必要かに応じて、選択することができる。イヌリンクリアランスと、血液中のＤ－セリン量との相関から算出された対応表には、あるＤ－セリン量に対応している糸球体濾過能力の数値が記載されていてもよいし、数値範囲に応じた腎臓病の重症度分類が記載されていてもよい。
　慢性腎臓病（ＣＫＤ）の重症度分類では、糸球体濾過量の数値範囲に応じて、Ｇ１、Ｇ２、Ｇ３ａ、Ｇ３ｂ、Ｇ４、及びＧ５の６つの重症度に分類する。すなわち、９０ｍＬ／分／１．７３ｍ2以上を正常又は高値（Ｇ１）、６０～８９ｍＬ／分／１．７３ｍ2を正常又は軽度低下（Ｇ２）、４５～５９ｍＬ／分／１．７３ｍ2を軽度から中程度低下（Ｇ３ａ）、３０～４４ｍＬ／分／１．７３ｍ2を中等度から高度低下（Ｇ３ｂ）、１５～２９ｍＬ／分／１．７３ｍ2を高度低下（Ｇ４）、１５ｍＬ／分／１．７３ｍ2未満を末期腎不全（Ｇ５）と定義する（日本腎臓学会ガイドライン）。
　体格との相関が観察された血液中のクレアチニン量やシスタチンＣ量については、関連する人種や年齢、性別について大規模な患者データを用いてそれを補正して糸球体濾過量を推算する各種の式が考案されてきた。主な糸球体濾過量の推算式として　Ｃｏｃｋｃｒｏｆｔ－Ｇａｕｌｔ式、ＭＤＲＤ式、ＣＫＤ－ＥＰＩ式があり、現在日常診療で主に使用されている日本人用の推算式（ｅＧＦＲ）は下記の通りである。
Figure JPOXMLDOC01-appb-M000002
 　ただし、このように決定されたｅＧＦＲは、健康診断におけるスクリーニングや、多数の対象者を比較するような疫学研究における簡便な評価を主眼として作成された指標であり、平均的な体格に補正された値の算出を目的としているため、特に痩せた高齢者等個別の患者の正確な腎機能評価には、依然としてイヌリンクリアランスを用いることが推奨されている。（日本腎臓学会ガイドライン）。
　本発明の判定方法により、糸球体濾過能力が決定されると、それに基づき腎臓病の重症度の分類が可能になる。一例として、慢性腎臓病患者の分類であるＧ１、Ｇ２、Ｇ３ａ、Ｇ３ｂ、Ｇ４、及びＧ５の６つの重症度に則して分類することができる。Ｇ２～Ｇ５に対応する分類に分類された対象に対して、治療介入がされる。各分類に応じて治療介入は適宜選択することができる。治療介入は、生活習慣改善、食事指導、血圧管理、貧血管理、電解質管理、尿毒素管理、血糖値管理、免疫管理、及び脂質管理等が、独立に又は組み合わせて指導される。生活習慣改善としては、禁煙及びＢＭＩ値の２５未満への減量等が推奨される。食事指導としては、減塩及びタンパク質制限が行われる。この中でも特に、血圧管理、貧血管理、電解質管理、尿毒素管理、血糖値管理、免疫管理、脂質管理については、投薬による治療が行われうる。血圧管理としては、１３０／８０ｍｍＨｇ以下となるように、管理され、場合により高血圧治療薬が投与されうる。高血圧治療薬としては、利尿薬（サイアザイド系利尿薬、例えばトリクロルメチアジド、ベンチルヒドロクロロチアジド、ヒドロクロロチアジド、サイアザイド系類似利尿薬、例えばメチクラン、インダバミド、トリバミド、メフルシド、ループ利尿薬、例えばフロセミド、カリウム保持性利尿薬・アルドステロン拮抗薬、例えばトリアムテレン、スピロノラクトン、エプレレノン等）、カルシウム拮抗薬（ジヒドロピリジン系、例えばニフェジピン、アムロジピン、エホニジピン、シルニジピン、ニカルジピン、ニソルジピン、ニトレンジピン、ニルバジピン、バルニジピン、フェロジピン、ベニジピン、マニジピン、アゼルニジピン、アラニジピン、ベンゾチアゼピン系、ジルチアゼム等）、アンジオテンシン変換酵素阻害薬（カプトプリル、エナラプリル、アセラプリル、デラプリル、シラザプリル、リシノプリル、ベナゼプリル、イミダプリル、テモカプリル、キナプリル、トランドラプリル、ベリンドプリルエルブミン等）、アンジオテンシン受容体拮抗薬（アンジオテンシンII受容体拮抗薬、例えばロサルタン、カンデサルタン、バルサルタン、テルミサルタン、オルメサルタン、イルベサルタン、アジルサルタン等）、交感神経遮断薬（β遮断薬、例えばアテノロール、ビソプロロール、ベタキソロール、メトプロロール、アセプトロール、セリプロロール、プロプラノロール、ナドロール、カルテオロール、ピンドロール、ニプラジロール、アモスラロール、アロチノロール、カルベジロール、ラベタロール、ベバントロール、ウラピジル、テラゾシン、ブラゾシン、ドキサゾシン、ブナゾシン等）等が用いられうる。貧血治療薬としてはエリスロポエチン製剤、鉄剤、ＨＩＦ－１阻害剤等が用いられる。電解質調整薬としてカルシウム受容体作動薬（シナカルセト、エテルカルセチド等）、リン吸着剤が用いられる。尿毒素吸着剤として活性炭等が用いられる。血糖値は、Ｈｂａ１ｃ６．９％未満になるように管理され、場合により血糖降下薬が投与される。血糖降下薬として、ＳＧＬＴ２阻害薬（イプラグリフロジン、ダパグリフロジン、ルセオグリフロジン、トホグリフロジン、カナグリフロジン、エンパグリフロジン等）、ＤＰＰ４阻害薬（シタグリプチンリン酸、ビルダグリプチン、サキサグリプチン、アログリプチン、リナグリプチン、テネリグリプチン、トレラグリプチン、アナグリプチン、オマリグリプチン等）、スルホニル尿素薬（トルブタミド、アセトヘキサミド、クロルプロパミド、グリクロピラミド、グリベンクラミド、グリクラジド、グリメピリド等）、チアゾリジン薬（ピオグリタゾン等）、ビグアナイド薬（メトホルミン、ブホルミン等）、α―グルコシダーゼ阻害薬（アカルボース、ボグリボース、ミグリトール等）、グリニド薬（ナテグリニド、ミチグリニド、レパグリニド等）インスリン製剤、ＮＲＦ２活性化剤（バルドキソロンメチル等）等が用いられる。免疫管理としては、免疫抑制剤（ステロイド類、タクロリムス、抗ＣＤ２０抗体、シクロヘキサミド、ミコフェノール酸モフェチル（ＭＭＦ）等）が用いられる。脂質管理では、ＬＤＬ－Ｃ１２０ｍｇ／ｄＬ未満となるよう管理され、場合により脂質異常症治療薬、例えばスタチン系薬剤（ロスバスタチン、ピタバスタチン、アトルバスタチン、セリバスタチン、フルバスタチン、シンバスタチン、プラバスタチン、ロバスタチン、メバスタチン等）、フィブラート系薬剤（クロフィブラート、ベザフィブラート、フェノフィブラート、クリノフィブラート等）、ニコチン酸誘導体（ニコチン酸トコレロール、ニコモール、ニセリトロール等）、コレステロールトランスポーター阻害剤（エゼチミブ等）、ＰＣＳＫ９阻害剤（エボロクマブ等）ＥＰＡ製剤等が用いられる。いずれの薬剤も剤形は単剤でも合剤でもよい。腎機能の低下の度合いによっては、腹膜透析、血液透析、持続的血液濾過透析、血液アフェレーシス（血漿交換、血漿吸着等）や腎移植のような腎代替療法が施される。
　本発明の別の態様では、糸球体濾過能力を決定する方法を実行する試料分析システム、プログラムに関していてもよい。図４は、本発明の試料分析システムの構成図である。図４に示す試料分析システム１０は、本発明の糸球体濾過能力の判定方法を実施することができるように構成される。このような試料分析システム１０は、記憶部１１と、入力部１２、分析測定部１３と、データ処理部１４と、出力部１５とを含んでおり、血液試料を分析し、糸球体濾過能力を出力することができる。
　より具体的に、本発明の試料分析システム１０において、
　記憶部１１は、入力部１２から入力されたイヌリンクリアランスと血液試料中のＤ－セリン量との相関から算出された式、対応表又はグラフを記憶し、
　分析測定部１３は、血液試料中のＤ－セリンを分離定量し、
　データ処理部１４は、Ｄ－セリン量を、イヌリンクリアランスと血液試料中のＤ－セリン量との相関から算出された式に代入するか、又は対応表やグラフから読み出すことで、糸球体濾過能力を決定し、
　出力部１５が糸球体濾過能力を出力することができる。
　さらに好ましい態様では、本発明の試料分析システムは、記憶部１１が、入力部１２から入力された閾値を記憶する工程、及びデータ処理部１４が、分離定量されたＤ－セリン量と閾値とを比較する工程をさらに含んでもよい。この場合、Ｄ－セリン量が閾値より低い場合に、出力部１５は、糸球体濾過能力が高い旨を出力する。Ｄ－セリン量が閾値より高い場合、データ処理部１４は、Ｄ－セリン量を、イヌリンクリアランスと血液試料中のＤ－セリン量との相関から算出された式に代入するか、又は対応表又はグラフから読み出すことで、糸球体濾過能力を決定し、出力部１５が糸球体濾過能力を出力する。
　記憶部１１は、ＲＡＭ、ＲＯＭ、フラッシュメモリ等のメモリ装置、ハードディスクドライブ等の固定ディスク装置、又はフレキシブルディスク、光ディスク等の可搬用の記憶装置等を有する。記憶部は、分析測定部で測定したデータ、入力部から入力されたデータ及び指示、データ処理部で行った演算処理結果等の他、情報処理装置の各種処理に用いられるコンピュータプログラム、データベース等を記憶する。コンピュータプログラムは、例えばＣＤ－ＲＯＭ、ＤＶＤ－ＲＯＭ等のコンピュータ読み取り可能な記録媒体や、インターネットを介してインストールされてもよい。コンピュータプログラムは、公知のセットアッププログラム等を用いて記憶部にインストールされる。記憶部は、予め入力部１２から入力されたイヌリンクリアランスと血液試料中のＤ－セリン量との相関から算出された式、対応表又はグラフについてのデータを記憶する。また、糸球体濾過量に応じた腎機能分類を記憶することもできる。
　入力部１２は、インターフェイス等であり、キーボード、マウス等の操作部も含む。これにより、入力部は、分析測定部１３で測定したデータ、データ処理部１４で行う演算処理の指示等を入力することができる。また、入力部１２は、例えば分析測定部１３が外部にある場合は、操作部とは別に、測定したデータ等をネットワークや記憶媒体を介して入力することができるインターフェイス部を含んでもよい。
　分析測定部１３は、血液試料におけるＤ－セリンの測定工程を行う。したがって、分析測定部１３は、アミノ酸のＤ体及びＬ体の分離及び測定を可能にする構成を有する。アミノ酸は、１つずつ分析されてもよいが、一部又は全ての種類のアミノ酸についてまとめて分析することができる。分析測定部１３は、以下のものに限定されることを意図するものではないが、例えば試料導入部、光学分割カラム、検出部を備えたキラルクロマトグラフィーシステム、好ましくは高速液体クロマトグラフィーシステムであってもよい。特定のアミノ酸量のみを検出する観点では、酵素法や免疫学的手法による定量を実施してもよい。分析測定部１３は、試料分析システムとは別に構成されていてもよく、測定したデータ等をネットワークや記憶媒体を用いて入力部１２を介して入力してもよい。
　データ処理部１４は、測定されたＤ－セリン量から、イヌリンクリアランスと血液試料中のＤ－セリン量との相関から算出された式に代入することで、又は対応表又はグラフから読み出すことで糸球体濾過能力を決定することができる。イヌリンクリアランスと血液試料中のＤ－セリン量との相関から算出された式、対応表又はグラフが、さらに他の補正値、例えば年齢、体重、性別、身長等を必要とする場合、そのような情報は、予め入力部より入力されて、記憶部に記憶される。データ処理部は、糸球体濾過量を算出する際に、かかる情報を呼び出し、式に代入するか、又は対応表又はグラフから読み出すことで、糸球体濾過量を算出することができる。データ処理部１４は、決定した糸球体濾過能力から、腎臓病や腎機能分類を決定することもできる。データ処理部１４は、記憶部に記憶しているプログラムに従って、分析測定部１３で測定され記憶部１１に記憶されたデータに対して、各種の演算処理を実行する。演算処理は、データ処理部に含まれるＣＰＵによりおこなわれる。このＣＰＵは、分析測定部１３、入力部１２、記憶部１１、及び出力部１５を制御する機能モジュールを含み、各種の制御を行うことができる。これらの各部は、それぞれ独立した集積回路、マイクロプロセッサ、ファームウェア等で構成されてもよい。
　出力部１５は、データ処理部で演算処理を行った結果である糸球体濾過能力を出力するように構成さる。出力部１５は、演算処理の結果を直接表示する液晶ディスプレイ等の表示装置、プリンタ等の出力手段であってもよいし、外部記憶装置への出力又はネットワークを介して出力するためのインターフェイス部であってもよい。糸球体濾過能力と併せて、又は独立して、Ｄ－セリン量及び／又は腎機能分類を出力することもできる。
　図５は、本発明のプログラムによる糸球体濾過量を決定するための動作の例を示すフローチャートである。具体的に、本発明のプログラムは、入力部、出力部、データ処理部、記憶部とを含む情報処理装置に糸球体濾過量を決定させるプログラムである。本発明のプログラムは、以下の：
　入力部から入力されたＤ-セリン量を記憶部に記憶させ、
　記憶部に予め記憶されたイヌリンクリアランスと血液試料中のＤ－セリン量との相関から算出された式、対応表又はグラフと、Ｄ－セリン量とを読み出し、データ処理部に糸球体濾過能力を決定させ、
　決定された糸球体濾過能力を記憶部に記憶させ、そして
　記憶された糸球体濾過能力を出力部に出力させる
ことを前記情報処理装置に実行させるための指令を含む。本発明のプログラムは、記憶媒体に格納されてもよいし、インターネット又はＬＡＮ等の電気通信回線を介して提供されてもよい。
　情報処理装置が、分析測定部を備える場合、入力部からＤ－セリン量の値を入力させる代わりに、分析測定部が、血液試料から当該値を測定し記憶部に記憶させることを情報処理装置に実行させるための指令を含んでもよい。
　本明細書において言及される全ての文献はその全体が引用により本明細書に取り込まれる。
　以下に説明する本発明の実施例は例示のみを目的とし、本発明の技術的範囲を限定するものではない。本発明の技術的範囲は特許請求の範囲の記載によってのみ限定される。本発明の趣旨を逸脱しないことを条件として、本発明の変更、例えば、本発明の構成要件の追加、削除及び置換を行うことができる。
被験者集合
　診断及び／又は治療目的のために大阪大学医学部付属病院腎臓内科（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｎｅｐｈｒｏｌｏｇｙ，Ｏｓａｋａ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ））に、２０１６年～２０１７年の間に入院した慢性腎臓病（ＣＫＤ）患者からなるコホートから、１１人の患者について、後ろ向き研究に用いた。それとは別に、国立医薬基盤・健康・栄養研究所では１５名の２０歳以上の健常ボランティアを採用した。試験プロトコルは、各施設における倫理委員会により承認され、かつすべての被験者から書類によるインフォームドコンセントを取得した。
健常者及び慢性腎臓病患者の情報は下記の通りである：
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000003
イヌリンクリアランスの計測方法
　被験者のイヌリンクリアランス（Ｃｉｎ）を、Ｃｌｉｎ　Ｅｘｐ　Ｎｅｐｈｒｏｌ　１３，５０－５４（２００９）に記載された標準方法に従い、血液及び尿中のイヌリン濃度、並びに尿体積から計算した。簡潔に記載すると、絶食、服薬延期、及び水負荷環境下で、１％のイヌリン（イヌリード注：株式会社富士薬品）を２時間の持続静脈内点滴の間に、血液及び尿サンプルを異なる３時点で採取した。被験者は、点滴の３０分前に、経口で５００ｍＬの水を飲水した。水負荷を維持するために、イヌリン点滴の開始後、６０ｍＬの水を４０、６０、９０分で飲水した。点滴の初期速度は、最初の３０分間について、３００ｍＬ／ｈであり、続いて９０分について１００ｍＬ／ｈとした。イヌリン点滴の開始後、４５、７５、及び１０５分において血液試料を採取した。被験者は、点滴開始後、３０分で完全に膀胱を空にするように排尿した。次に、尿サンプルを、３０分～６０分の間、６０分～９０分の間、及び９０～１２０分の間で採取した。イヌリンは、酵素法を用いて計測した。３つのＣｉｎ値の平均を、標準方法によるＣｉｎ（Ｃｉｎ－ＳＴ）として用いた。
血液中Ｄ－アミノ酸の測定
サンプル調製
　ヒト血漿からのサンプル調製を、下記のとおり行った：
　２０倍体積のメタノールを血漿に添加し、完全に混合した。遠心後、メタノールホモジネートから得られた上清の１０μＬを褐色チューブに移し、減圧乾燥させた。残渣に、２０μＬの２００ｍＭホウ酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ８．０）及び５μＬの蛍光標識試薬（無水ＭｅＣＮ中に４０ｍＭの４－フルオロ―７－ニトロ－２，１，３－ベンゾオキサジアゾール（ＮＢＤ－Ｆ））を添加し、次いで６０℃で２分加熱した。７５μＬの０．１％ＴＦＡ水溶液（ｖ／ｖ）を加えて反応を止め、そして２μＬの反応混合液を２次元ＨＰＬＣに供した。
２次元ＨＰＬＣによるアミノ酸光学異性体の定量
　アミノ酸光学異性体を、以下の２次元ＨＰＬＣシステムを用いて定量した。アミノ酸のＮＢＤ誘導体を、逆相カラム（ＫＳＡＡ　ＲＰ、１．０ｍｍｉ．ｄ．　×４００ｍｍ；株式会社資生堂）を用い移動相（５～３５％ＭｅＣＮ、０～２０％ＴＨＦ、及び０．０５％ＴＦＡ）で分離、溶出した。カラム温度は４５℃、移動相の流速は２５μＬ／分に設定した。分離したアミノ酸の画分を、マルチループバルブを用いて分取し、連続的にキラルカラム（ＫＳＡＡＣＳＰ－００１Ｓ，１．５ｍｍｉ．ｄ．×２５０ｍｍ；資生堂）で光学分割した。移動相として、アミノ酸の保持に応じて、クエン酸（０～１０ｍＭ）又はギ酸（０～４％）含むＭｅＯＨ－　ＭｅＣＮの混合用液を用いた。ＮＢＤ－アミノ酸は４７０ｎｍの励起光を用い、５３０ｎｍで蛍光検出した。ＮＢＤ－アミノ酸の保持時間は、アミノ酸光学異性体の標準品により同定し、検量線により定量した。
ＧＦＲ（イヌリンクリアランス）との相関解析
（１）体表面積補正有
　２６名の被験者について、体表面積補正を行ったＧＦＲ（イヌリンクリアランス）と、血液中のＤ－セリン量（Ａ）、クレアチニン量（Ｂ）、及びシスタチンＣ量（Ｃ）とを散布図にプロットし、相関係数ｒ値とｐ値を算出した。結果を図１に示す。血液中のＤ－セリン量はＧＦＲ（イヌリンクリアランス）に対して、血液中のシスタチンＣ量と同等の相関を示した。
（２）体表面積補正無
　２６名の被験者について、体表面積補正を行っていないＧＦＲ（イヌリンクリアランス）と、血液中のＤ－セリン量（Ａ）、クレアチニン量（Ｂ）、及びシスタチンＣ量（Ｃ）とを散布図にプロットし、相関係数ｒ値とｐ値を算出した。結果を図２に示す。血液中のＤ－セリンが体表面積補正無しＧＦＲ（イヌリンクリアランス）に対して、最も高い相関を示した。
体表面積（ＢＳＡ）との相関
　健常者（ＧＦＲ＞７０）のデータについて、体表面積（ＢＳＡ）と、測定した血液中のＤ－セリン量、シスタチンＣ量、及びクレアチニン量とを散布図に表し、相関係数ｒ値及びｐ値を算出した。結果を図３に示す。血液中のクレアチニン量やシスタチンＣ量が、体表面積に相関するのに対し、血液中のＤ－セリン量は体表面積とは相関しなかった。
ＧＦＲの分類に基づく比較
　２６名の被験者を、イヌリンクリアランスによるＧＦＲに基づいて、以下の群に分類した（全データ（Ａｌｌ）；ＧＦＲ１００以下；Ｇ３ａ以下：ＧＦＲ６０以下；Ｇ３ｂ以下：ＧＦＲ４５以下；Ｇ４以下：ＧＦＲ３０以下；Ｇ５以下：ＧＦＲ１５以下）。ＧＦＲ１００以下は２１名、Ｇ３ａ以下は８名、Ｇ３ｂ以下は５名、Ｇ４以下は４名、Ｇ５以下は３名であった。各データにおける、体表面積補正を行っていないＧＦＲ（イヌリンクリアランス）と、血液中のＤ－セリン量（Ａ）、クレアチニン量（Ｂ）、及びシスタチンＣ量（Ｃ）との、相関係数ｒ値とｐ値を算出した。結果を図３に示す。群分けした場合に、各群において、Ｄ－セリン量はＧＦＲ（イヌリンクリアランス）への相関が高いことが示された。特に、血液中のクレアチニン量は、Ｇ３ａ以下やＧ３ｂ以下では比較的良好な相関を示しているものの、全データ（Ａｌｌ）やＧＦＲ１００以下では相関が低いことが示されており、これは腎機能低下が軽度の場合は反映しないというクレアチニンの欠点を示す結果となった。一方シスタチンＣ量は、ＧＦＲ１００以下、Ｇ３ａ以下等、比較的腎機能が優れているデータにおいてはＧＦＲ（イヌリンクリアランス）への相関が高かった一方で、Ｇ３ｂ以下のように、腎機能が悪化するに従いＧＦＲ（イヌリンクリアランス）への相関が低下していくことが示された。血液中のＤ－セリン量は、各群において、良好にＧＦＲ（イヌリンクリアランス）と相関することが示された。

Claims (6)

  1. 　血液中のＤ－セリン量に基づく、糸球体濾過能力の決定方法。
  2. 　前記糸球体濾過能力が、イヌリンクリアランスと、血液中のＤ－セリン量との相関から算出された式に基づき決定される糸球体濾過量である、請求項１に記載の方法。
  3. 　前記血液が、既存の検査により腎臓病の疑いがあると判定された対象の血液である、請求項１又は２に記載の方法。
  4. 　記憶部と、分析測定部と、データ処理部と、糸球体濾過能力出力部とを含む、血液分析システムであって、
    　前記記憶部は、血液中のＤ－セリン量と糸球体濾過能力との相関式を記憶し；
    　前記分析測定部は、血液中のＤ－セリン量を分離し定量し；
    　前記データ処理部は、Ｄ－セリン量を、記憶部に記憶された相関式にあてはめて、糸球体濾過能力を算出し；
    　前記病態情報出力部は糸球体濾過能力についての情報を出力する、血液分析システム。
  5. 　前記糸球体濾過能力が、イヌリンクリアランスと、血液中のＤ－セリン量との相関から算出された式に基づき決定される糸球体濾過量である、請求項４に記載の血液分析システム。
  6. 　前記血液が、既存の検査により腎臓病の疑いがあると判定された対象の血液である、請求項４又は５に記載の血液分析システム。
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Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP4291628B2 (ja) 2003-06-12 2009-07-08 株式会社資生堂 液体クロマトグラフ装置及び試料に含まれる光学異性体の分析方法
JP2012230082A (ja) * 2011-04-27 2012-11-22 Univ Of Miyazaki 糸球体濾過膜の異常に関連した疾患の検査方法、およびこれに使用するための検査用キット
WO2014129490A1 (ja) * 2013-02-19 2014-08-28 デンカ生研株式会社 尿中メガリン測定値から糸球体濾過量を推定する方法
JP2015132598A (ja) * 2013-12-11 2015-07-23 株式会社 資生堂 腎不全の早期診断マーカー
JP2016530532A (ja) * 2013-09-05 2016-09-29 アイデックス ラボラトリーズ インコーポレイテッドＩＤＥＸＸ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ， Ｉｎｃ． 腎疾患の検出方法
JP2017003589A (ja) * 2015-06-10 2017-01-05 国立大学法人金沢大学 腎臓病の病態バイオマーカー
JP2017207489A (ja) * 2016-05-17 2017-11-24 国立大学法人大阪大学 腎臓病の予後予測方法及びシステム

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20170276669A1 (en) * 2014-08-15 2017-09-28 The Johns Hopkins University Precise estimation of glomerular filtration rate from multiple biomarkers

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP4291628B2 (ja) 2003-06-12 2009-07-08 株式会社資生堂 液体クロマトグラフ装置及び試料に含まれる光学異性体の分析方法
JP2012230082A (ja) * 2011-04-27 2012-11-22 Univ Of Miyazaki 糸球体濾過膜の異常に関連した疾患の検査方法、およびこれに使用するための検査用キット
WO2014129490A1 (ja) * 2013-02-19 2014-08-28 デンカ生研株式会社 尿中メガリン測定値から糸球体濾過量を推定する方法
JP2016530532A (ja) * 2013-09-05 2016-09-29 アイデックス ラボラトリーズ インコーポレイテッドＩＤＥＸＸ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ， Ｉｎｃ． 腎疾患の検出方法
JP2015132598A (ja) * 2013-12-11 2015-07-23 株式会社 資生堂 腎不全の早期診断マーカー
JP2017003589A (ja) * 2015-06-10 2017-01-05 国立大学法人金沢大学 腎臓病の病態バイオマーカー
JP2017207489A (ja) * 2016-05-17 2017-11-24 国立大学法人大阪大学 腎臓病の予後予測方法及びシステム

Non-Patent Citations (39)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
A. BERNEMAN ET AL., JOURNAL OF MICROBIAL & BIOCHEMICAL TECHNOLOGY, vol. 2, 2010, pages 139
A. D'ANIELLO ET AL., COMPARATIVE BIOCHEMISTRY AND PHYSIOLOGY PART B, vol. 66, 1980, pages 319
A. HASHIMOTO ET AL., JOURNAL OF CHROMATOGRAPHY, vol. 575, 1992, pages 147
A. HASHIMOTOT. NISHIKAWA ET AL., FEBS LETTERS, vol. 296, 1992, pages 33
ANALYTICAL BIOCHEMISTRY, vol. 150, 1985, pages 238
C. MULLER ET AL., JOURNAL OF CHROMATOGRAPHY A, vol. 1324, 2014, pages 109
CLIN EXP NEPHROL, vol. 13, 2009, pages 50 - 54
D. GORDES ET AL., AMINO ACIDS, vol. 40, 2011, pages 553
D. L. KIRSCHNER ET AL., ANALYTICAL CHEMISTRY, vol. 79, 2007, pages 736
E. OKUMAH. ABE, JOURNAL OF CHROMATOGRAPHY B, vol. 660, 1994, pages 243
F. KITAGAWAK. OTSUKA, JOURNAL OF CHROMATOGRAPHY B, vol. 879, 2011, pages 3220
FUKUSHIMA, T. ET AL., BIOL. PHARM. BULL., vol. 18, 1995, pages 1130
G. MOLLA ET AL., METHODS IN MOLECULAR BIOLOGY, vol. 794, 2012, pages 273
G. THORSENJ. BERGQUIST, JOURNAL OF CHROMATOGRAPHY B, vol. 745, 2000, pages 389
H. BRUCKNER ET AL., JOURNAL OF CHROMATOGRAPHY A, vol. 666, 1994, pages 259
H. BRUCKNERA. SCHIEBER, BIOMEDICAL CHROMATOGRAPHY, vol. 15, 2001, pages 166
H. HASEGAWA ET AL., JOURNAL OF MASS SPECTROMETRY, vol. 46, 2011, pages 502
H. MIAO ET AL., ANALYTICAL CHEMISTRY, vol. 77, 2005, pages 7190
ISHIDA ET AL., KITASATO MEDICAL JOURNAL, vol. 23, 1993, pages 51 - 62
JOURNAL OF NEUROCHEMISTRY, vol. 29, 1977, pages 1053
KIMURA TOMONORI ET AL.: "Chiral amino acid metabolomics for novel biomarker screening in the prognosis of chronic kidney disease", SCIENTIFIC REPORTS, vol. 6, no. 26137, 18 May 2016 (2016-05-18), pages 1 - 7, XP055371897 *
M. C. WALDHIER ET AL., ANALYTICAL AND BIOANALYTICAL CHEMISTRY, vol. 394, 2009, pages 695
M. C. WALDHIER ET AL., JOURNAL OF CHROMATOGRAPHY A, vol. 1218, 2011, pages 8379
M. JUNGE ET AL., CHIRALITY, vol. 19, 2007, pages 228
N. NIMURA ET AL., ANALYTICAL BIOCHEMISTRY, vol. 269, 1999, pages 124
N. NIMURAT. KINOSHITA, JOURNAL OF CHROMATOGRAPHY, vol. 352, 1986, pages 169
NAGATA Y, VIVA ORIGINO, vol. 18, no. 2, 1990
R. J. REISCHLW. LINDNER, JOURNAL OF CHROMATOGRAPHY A, vol. 1269, 2012, pages 262
S. A. FUCHS ET AL., CLINICAL CHEMISTRY, vol. 54, 2008, pages 1443
S. EINARSSON ET AL., ANALYTICAL CHEMISTRY, vol. 59, 1987, pages 1191
S. KARAKAWA ET AL., JOURNAL OF PHARMACEUTICAL AND BIOMEDICAL ANALYSIS, vol. 115, 2015, pages 123
See also references of EP3869202A4
T. FUKUSHIMA ET AL., BIOMEDICAL CHROMATOGRAPHY, vol. 9, 1995, pages 106
T. ITO ET AL., ANALYTICAL BIOCHEMISTRY, vol. 371, 2007, pages 167
T. OHGUSU ET AL., ANALYTICAL BIOCHEMISTRY, vol. 357, 2006, pages 15
T. SAKAMOTO ET AL., ANALYTICAL AND BIOANALYTICAL CHEMISTRY, vol. 408, 2016, pages 141
W. G. GUTHEIL ET AL., ANALYTICAL BIOCHEMISTRY, vol. 287, 2000, pages 196
Y. NAGATA ET AL., CLINICAL SCIENCE, vol. 73, 1987, pages 105
YONG HUANG ET AL., BIOL. PHARM. BULL., vol. 21, no. 2, 1998, pages 156 - 162

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Vlachopoulos et al. P. 061 Relationship Between Fibrinogen and Arterial Stiffness in Patients with Essential Hypertension
Pietri et al. P. 062 White Blood Cell Count Predicts Wave Reflections in Patients with Essential Hypertension

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