TW202028747A

TW202028747A - 絲球體過濾能力之決定方法

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Publication number: TW202028747A
Application number: TW108137529A
Authority: TW
Inventors: 三田真史; 池田達彦; 木村友則
Original assignee: 日商資生堂股份有限公司; 國立研究開發法人醫藥基盤健康營養研究所
Priority date: 2018-10-17
Filing date: 2019-10-17
Publication date: 2020-08-01
Also published as: WO2020080484A1; EP3869202A4; JP6868878B2; JPWO2020080484A1; EP3869202A1; CN113196062A; US20210373031A1

Abstract

本發明提供一種基於血液中之D-絲胺酸量之絲球體過濾能力之決定方法。又，本發明提供一種血液分析系統，其包括記憶部、分析測定部、資料處理部及絲球體過濾能力輸出部；上述記憶部記憶血液中之D-絲胺酸量與絲球體過濾能力之相關式；上述分析測定部分離並定量血液中之D-絲胺酸量；上述資料處理部將D-絲胺酸量代入記憶部所記憶之相關式中，計算出絲球體過濾能力；上述病態資訊輸出部輸出絲球體過濾能力相關資訊。

Description

絲球體過濾能力之決定方法

本發明係關於一種絲球體過濾能力之決定方法、及決定絲球體過濾能力之血液分析系統。

作為表示腎功能之代表性指標，有絲球體過濾量(Glomerular Filtration Rate：GFR)。絲球體過濾量表示絲球體1分鐘內從血液中過濾出之液量，菊粉清除率之測定係其國際標準(黃金標準)。然而，菊粉清除率之測定需要連續2小時持續輸注菊粉，並且需要多次採尿及採血，受驗者及實施者之負擔較大。因此，於日常臨床中，菊粉清除率之測定停留在僅於如活體腎移植時之供體之有限情況下實施，多數情況是以測定如肌酸酐般之其他標記來代替。很多標記之值與作為黃金標準之菊粉清除率等實際絲球體過濾量之背離較大，妨礙腎病之準確診斷。

肌酸酐作為腎功能之指標於臨床現場被廣泛地測定。肌酸酐係肌肉之收縮所需之肌酸之最終代謝物。肝臟生成之肌酸被肌細胞吸收，一部分代謝後成為肌酸酐，經由血液輸送至腎臟，被絲球體過濾後，不被腎小管再次吸收而排泄至尿液中。於絲球體過濾能力降低之情形時其排泄受到影響，停留在血液中而數值上升，從而成為尿毒素累積之有用指標，因此用於評價腎功能。然而，血液中之肌酸酐量若非GFR降低50%以上則不會顯示出明顯異常值，不能說是敏感之標記。

胱抑素C(cystain C)係以一定比率自全身之有核細胞產生之分子量13.36 kDa之蛋白質，其全部被絲球體過濾後經由腎小管之再次吸收而被腎臟分解，由此認為其對應於過濾量而相應地自血液中清除，血液中之量成為GFR之指標。然而，腎功能顯著降低時血液中之胱抑素C之量之上升鈍化，於晚期腎病中難以準確地評價腎功能。

如上所述，尚不存在能夠充分響應想要僅以採血來於早期至晚期之寬範圍內測定個別患者之準確之絲球體過濾量而不給受驗者及患者造成較大負擔這一臨床現場之要求的生物標記。

已逐漸明確先前認為不存在於哺乳類生物體內之D-胺基酸存在於各種組織中，並承擔生理功能。又，已報告血液中之D-絲胺酸、D-丙胺酸、D-脯胺酸、D-麩胺酸、D-天冬胺酸之量於腎功能衰竭患者中會發生變動，並與肌酸酐相關，因此可成為腎功能衰竭之標記(非專利文獻1、非專利文獻2、非專利文獻3、非專利文獻4)。進而，揭示了有關選自由D-絲胺酸、D-蘇胺酸、D-丙胺酸、D-天冬胺酸、D-異體蘇胺酸、D-麩胺酸、D-脯胺酸及D-苯丙胺酸所組成之群中之胺基酸作為腎病之病態指標值之內容(專利文獻1)。於該等文獻中，僅揭示了與健康者相比，患有腎病之患者之血液中之D-胺基酸會發生變動，因此可以該等變動為指標診斷腎病這一主旨，或僅揭示了對象之血液中之D-絲胺酸量與肌酸酐量或對肌酸酐量進行修正後而得之推算值有關，而關於血液中之D-胺基酸量與作為黃金標準之菊粉清除率直接相關並能決定(推定)絲球體過濾能力沒有任何記載或暗示。再者，近年來作為腎病之標記，已開發出尿液中L-FABP(liver-type fatty acid binding protein，肝型脂肪酸結合蛋白)、血液中NGAL(neutrophil gelatinase-associated lipocalin，中性粒細胞明膠酶相關載脂蛋白)、尿液中KIM-1(kidney injury molecule-1，腎損傷分子-1)等，但其等與絲球體過濾能力無關。 [先前技術文獻] [專利文獻]

[專利文獻1]國際公開第2013/140785號 [非專利文獻]

[非專利文獻1] Fukushima, T.等人、Biol. Pharm. Bull. 18： 1130(1995) [非專利文獻2] Nagata. Y Viva Origino Vol.18(No.2) (1990)第15次學術講演會講演要旨集 [非專利文獻3] Ishida等人、北里醫學 23：51～62 (1993) [非專利文獻4] Yong Huang等人、Biol. Pharm. Bull. 21：(2)156-162(1998)

[發明所欲解決之問題]

期望一種與目前已知之血液中之肌酸酐量等腎功能標記相比，於更廣之範圍準確地決定受驗者之絲球體過濾能力之方法。 [解決問題之技術手段]

本發明人等著眼於血液中之D-絲胺酸，解析其與GFR(菊粉清除率)之關係，結果驚人地發現，從健康者到處於早期～晚期階段之腎病患者之血液檢體中，較肌酸酐量或胱抑素C量，血液中之D-絲胺酸量於所有階段均相對於GFR(菊粉清除率)顯示出較高之相關性，從而完成了本發明。

繼而，本發明係關於下述內容： [1]一種絲球體過濾能力之決定方法，其基於血液中之D-絲胺酸量。 [2]如項目1之方法，其中上述絲球體過濾能力係基於由菊粉清除率與血液中之D-絲胺酸量之相關性算出之式而決定的絲球體過濾量。 [3]如項目1或2之方法，其中上述血液係藉由既有檢查而判定為疑患腎病之對象之血液。 [4]如項目1至3中任一項之方法，其中對判定為絲球體過濾能力降低之對象實施治療干預。 [5]如項目4之方法，其中上述治療干預選自由生活習慣改善、飲食指導、血壓管理、貧血管理、電解質管理、尿毒素管理、血糖值管理、免疫管理及脂質管理所組成之群。 [6]如項目4或5之方法，其中作為上述治療干預，包括將選自由利尿藥、鈣拮抗劑、血管收縮素轉化酶抑制劑、血管收縮素受體拮抗劑、交感神經阻斷劑、SGLT2(sodium-dependent glucose transporters 2，鈉-葡萄糖協同轉運蛋白2)抑制劑、磺醯脲劑、噻唑啶類藥劑、雙胍劑、α-葡萄糖苷酶抑制劑、格列奈類藥劑、胰島素製劑、NRF2(nuclear factor erythroid-derived 2-related factor 2，激活核因子紅系2相關因子2)活化劑、免疫抑制劑、他汀類藥劑、芳氧芳酸酯類藥劑、貧血治療劑、紅血球生成素製劑、HIF-1(hypoxiainducedfactor1，缺氧誘導因子)抑制劑、鐵劑、電解質調整劑、擬鈣劑、磷吸附劑、尿毒素吸附劑、DPP4(Dipeptidyl peptidase-4，二肽基肽酶4)抑制劑、EPA(eicosapentenoic acid，二十碳五烯酸)製劑、菸鹼酸衍生物、膽固醇轉運體抑制劑、PCSK9(proprotein convertase subtilisin/kexin type 9，前蛋白轉化酶枯草桿菌蛋白酶/kexin9型)抑制劑所組成之群中之至少1種藥劑投予至上述對象。 [7]一種血液分析系統，其包括記憶部、分析測定部、資料處理部及絲球體過濾能力輸出部；上述記憶部記憶D-絲胺酸量與絲球體過濾能力之相關式；上述分析測定部分離並定量上述血液中之D-絲胺酸量；上述資料處理部將D-絲胺酸量代入記憶部所記憶之相關式中，計算出絲球體過濾能力；上述病態資訊輸出部輸出絲球體過濾能力相關資訊。 [8]如項目7之血液分析系統，其中上述絲球體過濾能力係基於由菊粉清除率與血液中之D-絲胺酸量之相關性算出之式而決定的絲球體過濾量。 [9]如項目7或8之血液分析系統，其中上述血液係藉由既有檢查而判定為疑患腎病之對象之血液。 [發明之效果]

與血液中之肌酸酐量及胱抑素C量相比，本發明之絲球體過濾能力之決定方法中所使用之血液中之D-絲胺酸量相對於GFR(菊粉清除率)具有更優異之相關性。

本發明係關於一種基於血液中之D-絲胺酸量之絲球體過濾能力之決定方法。

於本發明中，絲球體過濾能力係指絲球體過濾血液之能力。於一態樣中以絲球體過濾量(GFR)表示，但實質上不限於絲球體過濾量，可以任意單位決定絲球體過濾能力。作為一例，血液中之D-絲胺酸量可直接、或根據情況以任意數值修正後表示為絲球體過濾能力。於本發明中，絲球體過濾能力可為已修正體表面積之絲球體過濾能力，亦可為未修正體表面積之絲球體過濾能力。不同體型所需之絲球體過濾能力不同，因此於用於比較、統計處理、或篩查診斷之情形時，有時會修正體表面積。

所謂絲球體過濾量係指絲球體1分鐘內從血液中過濾之液量，以「mL/分鐘」為單位表示。不同體型所需之絲球體過濾量會發生變化，因此於用於統計處理、比較、篩查診斷之情形時，對每標準體表面積1.73 m² 之絲球體過濾量進行修正，使用「mL/分鐘/1.73 m² 」這一單位。腎功能之比較或篩查診斷中通常使用體表面積之修正值，另一方面於用於個體之腎功能診斷或決定腎排泄性藥物之給藥量之情形時，使用未修正體表面積之值。絲球體過濾量臨床上由菊粉、硫代硫酸鈉、肌酸酐、碘他拉酸、海蔥糖等之清除率求得。本發明基於血液中之D-絲胺酸量與GFR(菊粉清除率)之相關性而決定絲球體過濾能力。

於本發明中，用作指標之D-絲胺酸係構成蛋白質之胺基酸即L-絲胺酸之光學異構物。D-絲胺酸量於各組織或血液中主要由絲胺酸消旋酶或D-胺基酸氧化酶等代謝酶嚴格控制，另一方面於發生腎臟病變之情形時血液中之D-絲胺酸量將變動。

於本發明中，所謂「血液中之D-絲胺酸量」可指特定之血液量中之D-絲胺酸量，亦可以濃度表示。血液中之D-絲胺酸量作為採取之血液中進行了離心分離、沈澱分離、或用於分析之預處理的試樣中之量而測定。因此，血液中之D-絲胺酸量可作為源自採取之全血、血清、血漿等血液之血液試樣中之量而測定。作為一例，於使用HPLC(High Performance Liquid Chromatography，高效液相層析)之分析之情形時，規定量之血液中所含有之D-絲胺酸量以層析圖表示，波峰之高度、面積及形狀可藉由與標準品進行比較或校準解析而定量。可藉由將D-絲胺酸濃度與已知樣品進行比較而測定血液中之D-絲胺酸濃度，可使用血液中之D-絲胺酸濃度作為血液中之D-絲胺酸量。又，於酵素法中，可藉由使用標準品之校準曲線之定量解析而計算出胺基酸濃度。

D-絲胺酸及L-絲胺酸量可藉由任意方法測定，例如可藉由使用手性管柱層析法或酵素法之測定、進而使用識別胺基酸之光學異構物之單株抗體之免疫學方法而定量。本發明中之試樣中之D-絲胺酸及L-絲胺酸量之測定可利用本領域技術人員周知之任意方法而實施。例如，有層析法或酵素法(Y. Nagata et al., Clinical Science, 73 (1987), 105. Analytical Biochemistry, 150 (1985), 238., A. D'Aniello et al., Comparative Biochemistry and Physiology Part B, 66 (1980), 319. Journal of Neurochemistry, 29 (1977), 1053., A. Berneman et al., Journal of Microbial & Biochemical Technology, 2 (2010), 139., W. G. Gutheil et al., Analytical Biochemistry, 287 (2000), 196., G. Molla et al., Methods in Molecular Biology, 794 (2012), 273., T. Ito et al., Analytical Biochemistry, 371 (2007), 167. 等)、抗體法(T. Ohgusu et al., Analytical Biochemistry, 357 (2006), 15.,等)、氣相層析法(GC，Gas Chromatography)(H. Hasegawa et al., Journal of Mass Spectrometry, 46 (2011), 502., M. C. Waldhier et al., Analytical and Bioanalytical Chemistry, 394 (2009), 695., A. Hashimoto, T. Nishikawa et al., FEBS Letters, 296 (1992), 33., H. Bruckner and A. Schieber, Biomedical Chromatography, 15 (2001), 166. , M. Junge et al., Chirality, 19 (2007), 228., M. C. Waldhier et al., Journal of Chromatography A, 1218 (2011), 4537. 等)、毛細管電泳法(CE，capillary electrophoresis)(H. Miao et al., Analytical Chemistry, 77 (2005), 7190., D. L. Kirschner et al., Analytical Chemistry, 79 (2007), 736., F. Kitagawa, K. Otsuka, Journal of Chromatography B, 879 (2011), 3078., G. Thorsen and J. Bergquist, Journal of Chromatography B, 745 (2000), 389. 等)、高效液相層析法(HPLC)(N. Nimura and T. Kinoshita, Journal of Chromatography, 352 (1986), 169., A. Hashimoto et al., Journal of Chromatography, 582 (1992), 41., H. Bruckner et al., Journal of Chromatography A, 666 (1994), 259., N. Nimura et al., Analytical Biochemistry, 315 (2003), 262., C. Muller et al., Journal of Chromatography A, 1324 (2014), 109., S. Einarsson et al., Analytical Chemistry, 59 (1987), 1191., E. Okuma and H. Abe, Journal of Chromatography B, 660 (1994), 243., Y. Gogami et al., Journal of Chromatography B, 879 (2011), 3259., Y. Nagata et al., Journal of Chromatography, 575 (1992), 147., S. A. Fuchs et al., Clinical Chemistry, 54 (2008), 1443., D. Gordes et al., Amino Acids, 40 (2011), 553., D. Jin et al., Analytical Biochemistry, 269 (1999), 124., J. Z. Min et al., Journal of Chromatography B, 879 (2011), 3220., T. Sakamoto et al., Analytical and Bioanalytical Chemistry, 408 (2016), 517., W. F. Visser et al., Journal of Chromatography A, 1218 (2011), 7130., Y. Xing et al., Analytical and Bioanalytical Chemistry, 408 (2016), 141., K. Imai et al., Biomedical Chromatography, 9 (1995), 106., T. Fukushima et al., Biomedical Chromatography, 9 (1995), 10., R. J. Reischl et al., Journal of Chromatography A, 1218 (2011), 8379., R. J. Reischl and W. Lindner, Journal of Chromatography A, 1269 (2012), 262., S. Karakawa et al., Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 115 (2015), 123., 等)。

本發明中之光學異構物之分離分析體系可組合複數種分離分析。更具體而言，可藉由使用一種光學異構物之分析方法而測定試樣中之D-/L-胺基酸量，上述光學異構物之分析方法之特徵在於包括如下步驟：將包含具有光學異構物之成分之試樣與作為流動相之第一液體一起通入至作為固定相之第一管柱填充劑，並將上述試樣之上述成分分離；將上述試樣之上述成分之各者於多迴路單元中個別地保持；將上述多迴路單元中個別地保持之上述試樣之上述成分之各者與作為流動相之第二液體一起通過流路供給至作為固定相之具有光學活性中心之第二管柱填充劑，並將上述試樣之成分之各者中所包含之上述光學異構物分割；及檢測上述試樣之成分之各者中所包含之上述光學異構物(日本專利第4291628號)。於HPLC分析中，存在預先以鄰苯二甲醛(OPA，O-Phthalaldehyde)或4-氟-7-硝基-2,1,3-苯并㗁二唑(NBD-F，4-Fluoro-7-nitro-2,1,3-benzoxadiazole)之類的螢光試劑將D-胺基酸及L-胺基酸衍生物化，或使用N-第三丁氧羰基-L-半胱胺酸(Boc-L-Cys，N-(tert-Butoxycarbonyl)-L-cysteine)等進行非鏡像異構物化之情形(浜瀨健司及財津潔，分析化學，53卷，677-690(2004))。取而代之，可藉由使用識別胺基酸之光學異構物之單株抗體，例如與D-絲胺酸、L-絲胺酸等特異性地結合之單株抗體之免疫學方法而測定D-胺基酸。又，於以D體及L體之總量為指標之情形時，無需分離並分析D體及L體，可不區分D體及L體地分析胺基酸。於此情形時亦可以酵素法、抗體法、GC、CE、HPLC進行分離及定量。

用於與本發明進行比較之血液中之肌酸酐量因其來源而強烈地受到肌肉量之影響，因此運動員、肢端肥大症患者或大量攝取肉類時表現出高值，神經肌肉疾病(肌肉失養症等)或羸瘦、長期臥床、虛弱、肌肉減少症、運動障礙綜合症、截肢患者或限制攝取蛋白質時表現出低值，因此無法反映準確之腎功能。又，已確認血液中之肌酸酐量於晨間表現出高值，並存在10%左右之日內波動，因此處理時需要注意。輕度之腎功能降低時，血液中之胱抑素C量較血液中之肌酸酐量更敏銳地上升，因此認為其有利於發現早期之腎功能障礙。然而，類固醇或環孢素之使用、或糖尿病、甲狀腺功能亢進症、炎症、高膽紅素血症、高三酸甘油酯血症等患者之狀態會影響其量已為人所知。因此，診斷腎病時，需要綜合其他標記，例如尿素氮(BUN(blood urea nitrogen，血尿素氮))或尿蛋白等之數值綜合地進行診斷。

基於以血液中之肌酸酐量為首之先前之腎功能標記而決定之絲球體過濾量之準確性較低，另一方面作為黃金標準之菊粉清除率雖能夠準確地測定絲球體過濾量，但由於其流程繁雜，受驗者及醫療從業者之負擔較大，故而實施場景受限。本發明之絲球體過濾能力之決定方法至少較血液中之肌酸酐量能更準確地決定絲球體過濾能力，並且較血液中之胱抑素C量能更準確地決定絲球體過濾能力。又，於在根據絲球體過濾量分類之群中解析與菊粉清除率之相關性之情形時，D-絲胺酸於所有群中顯示出與血液中之胱抑素C量及肌酸酐量這兩者相比相關係數r值更高，相對於菊粉清除率之相關性更高。又，其準確性應藉由今後之實驗而明確，但其可具有匹敵或淩駕於利用國際標準測定法即菊粉清除率所進行之絲球體過濾量決定方法之性能。因此，於本發明之另一態樣中，可將血液中之D-絲胺酸量用作菊粉清除率之替代標記。所謂替代標記係指能夠科學地證明與最終評價之關聯之標記。因此，所謂菊粉清除率替代標記，係指使用血液中之D-絲胺酸量而統計性地示出與利用菊粉清除率所進行之評價之關聯，結果能夠代替基於菊粉清除率之GFR決定方法而基於D-絲胺酸量來決定絲球體過濾量。

D-絲胺酸並不意圖限定於理論，但由於不受肌肉量之影響，故而具有無需如血液中之肌酸酐般進行體型之修正這一優點。於本發明之一態樣中，本發明之絲球體過濾量之決定方法之特徵在於，不進行基於選自由與體型相關之性別、年齡、及肌肉量所組成之群中之至少1種因素之修正。

雖觀察到血液中之肌酸酐量(p＝0.0074)、胱抑素C量(p＝0.043)與體表面積(BSA)之相關性，但D-絲胺酸量(p＝0.17)與BSA不相關(實施例3)。其表明肌酸酐及胱抑素C多少受到以肌肉量為首之體型之影響，為測定準確之絲球體過濾能力，需基於人種、年齡、性別、體表面積等進行修正。另一方面意味著由D-絲胺酸量判定之絲球體過濾能力能夠提供不受如高齡者般肌肉衰退之體型之影響的準確值。體表面積可藉由已知方法而決定，作為一例可使用下述式： [數式1]

於本發明之一態樣中，絲球體過濾能力可藉由將受驗者之血液中之D-絲胺酸量代入由菊粉清除率與血液中之D-絲胺酸量之相關性算出之式、對照表或圖表中而決定。已顯示出菊粉清除率與D-絲胺酸量之相關性較菊粉清除率與血液中之肌酸酐量之相關性更高，並且藉由將受驗者之D-絲胺酸量代入由菊粉清除率與血液中之D-絲胺酸量之相關性算出之式、對照表或圖表中而決定之絲球體過濾能力與先前基於血液中之肌酸酐量而決定之絲球體過濾量相比更準確。用於相關性之解析之菊粉清除率可為已修正體表面積之菊粉清除率，亦可為修正體表面積之前之菊粉清除率。可根據是需要體表面積修正前還是修正後之絲球體過濾能力而進行選擇。由菊粉清除率與血液中之D-絲胺酸量之相關性而算出之對照表中可記載與某一D-絲胺酸量對應之絲球體過濾能力之數值，亦可記載與數值範圍對應之腎病之重症度分類。

於慢性腎病(CKD，Chronic Kidney Disease)之重症度分類中，根據絲球體過濾量之數值範圍，分類為G1、G2、G3a、G3b、G4、及G5這6個重症度。即，將90 mL/分鐘/1.73 m² 以上定義為正常或高值(G1)，將60～89 mL/分鐘/1.73 m² 定義為正常或輕度降低(G2)，將45～59 mL/分鐘/1.73 m² 定義為輕度至中度降低(G3a)，將30～44 mL/分鐘/1.73 m² 定義為中度至高度降低(G3b)，將15～29 mL/分鐘/1.73 m² 定義為高度降低(G4)，將未達15 mL/分鐘/1.73 m² 定義為晚期腎功能衰竭(G5)(日本腎臟學會指南)。

對於觀察到與體型存在相關性之血液中之肌酸酐量或胱抑素C量，已研究出各種針對相關人種、年齡、性別使用大量患者資料對其進行修正而推算絲球體過濾量之公式。作為主要之絲球體過濾量之推算公式有Cockcroft-Gault公式、MDRD公式、CKD-EPI公式，目前日常診療中主要使用之日本人用推算公式(eGFR)如下。 [數式2]

但是，如此決定之eGFR係主要著眼於健康診斷中之篩查、或如比較眾多對象者般之流行病學研究中之簡便之評價而制定之指標，其目的在於計算出修正為平均體型之值，因此為準確評價特別瘦之高齡者等個別患者之腎功能，仍然推薦使用菊粉清除率。(日本腎臟學會指南)。

若藉由本發明之判定方法而決定絲球體過濾能力，則可以此為基礎對腎病之重症度進行分類。作為一例，可依據慢性腎病患者之分類即G1、G2、G3a、G3b、G4、及G5這6個重症度進行分類。對於被分類成對應於G2～G5之分類之對象進行治療干預。治療干預可根據各分類適當地選擇。治療干預係獨立地或組合地指導生活習慣改善、飲食指導、血壓管理、貧血管理、電解質管理、尿毒素管理、血糖值管理、免疫管理、及脂質管理等。作為生活習慣改善推薦戒煙及減重至BMI(Body Mass Index，身體質量指數)值25以下。作為飲食指導進行減鹽及限制蛋白質。其中尤其對於血壓管理、貧血管理、電解質管理、尿毒素管理、血糖值管理、免疫管理、脂質管理可利用給藥進行治療。作為血壓管理，以達到130/80 mmHg以下之方式進行管理，視情況可投予高血壓治療藥。作為高血壓治療藥，可使用利尿藥(噻嗪類利尿藥，例如三氯噻嗪、苯甲基氫氯噻嗪、氫氯噻嗪；類似噻嗪類利尿藥，例如美替克侖、吲達帕胺、曲帕胺、美夫西特；亨氏環利尿藥，例如利尿磺胺；留鉀利尿藥/醛固酮拮抗劑，例如胺苯喋啶、螺內酯、依普利酮等)、鈣拮抗劑(二氫吡啶類，例如硝苯地平、胺氯地平、依福地平、西尼地平、尼卡地平、尼索地平、尼群地平、尼伐地平、巴尼地、非洛地平、貝尼地、馬尼地平、阿折地平、阿雷地平、苯并噻氮呯類、地爾硫等)、血管收縮素轉化酶抑制劑(卡托普利、依那普利、阿拉普利、地拉普利、西拉普利、賴諾普利、貝那普利、咪達普利、替莫普利、喹那普利、群多普利、培哚普利第三丁胺鹽等)、血管收縮素受體拮抗劑(血管收縮素II受體拮抗劑，例如洛沙坦、坎地沙坦、纈沙坦、替米沙坦、奧美沙坦、依貝沙坦、阿齊沙坦等)、交感神經阻斷劑(β阻斷劑，例如阿替洛爾、比索洛爾、倍他洛爾、美托洛爾、醋丁洛爾、塞利洛爾、普萘洛爾、納多洛爾、卡替洛爾、品多洛爾、尼普地洛、氨磺洛爾、阿羅洛爾、卡維地洛、拉貝洛爾、貝凡洛爾、烏拉地爾、特拉唑嗪、哌唑嗪、多沙唑嗪、布那唑嗪等)等。作為貧血治療劑可使用紅血球生成素製劑、鐵劑、HIF-1抑制劑等。作為電解質調整劑可使用擬鈣劑(西那卡塞特、維拉卡肽等)、磷吸附劑。作為尿毒素吸附劑可使用活性碳等。血糖值以未達Hba1c 6.9%之方式進行管理，視情況可投予降血糖藥。作為降血糖藥，可使用SGLT2抑制劑(伊格列淨、達格列淨、魯格列淨、托格列淨、卡格列淨、艾帕列淨等)、DPP4抑制劑(磷酸西他列汀酸、維格列汀、列汀、薩沙列汀、利拉列汀、特力列汀、曲格列汀、安奈格列汀、奧格列汀等)、磺醯脲劑(甲苯磺丁脲、乙醯苯磺醯環己脲、氯磺丙脲、格列吡脲、格列苯脲、格蓬酯、格列美脲等)、噻唑啶類藥劑(吡咯列酮等)、雙胍劑(二甲雙胍、丁雙胍等)、α-葡萄糖苷酶抑制劑(阿卡波糖、格列波糖、米格列醇等)、格列奈類藥劑(那格列奈、米格列奈、瑞格列奈等)胰島素製劑、NRF2活化劑(甲基巴多索隆等)等。作為免疫管理，可使用免疫抑制劑(類固醇類、他克莫司、抗CD20抗體、環己亞胺、麥考酚酸酯(MMF，Mycophenolate mofetil)等)。於脂質管理中，以LDL-C(Low Density Lipoprotein Chesterol，低密度脂蛋白膽固醇)未達120 mg/dL之方式進行管理，視情況可使用脂質異常症治療藥，例如他汀類藥劑(瑞舒伐他汀、匹伐他汀、阿托伐他汀、西立伐他汀、氟伐他汀、辛伐他汀、普伐他汀、洛伐他汀、美伐他汀等)、芳氧芳酸酯類藥劑(安妥明、苯紮貝特、非諾貝特、克利貝特等)、菸鹼酸衍生物(生育酚菸鹼酸酯、尼可莫耳、戊四醇煙酸酯等)、膽固醇轉運體抑制劑(依折麥布等)、PCSK9抑制劑(依伏庫單抗等)EPA製劑等。上述任一藥劑之劑型均可為單劑亦可為合劑。根據腎功能降低之程度，可實施腹膜透析、血液透析、連續性血液過濾透析、血液血球分離(血漿交換、血漿吸附等)或如腎移植之腎替代療法。

於本發明之另一態樣中，亦可關於一種執行決定絲球體過濾能力之方法之試樣分析系統、程式。圖4係本發明之試樣分析系統之結構圖。圖4所示之試樣分析系統10以能夠實施本發明之絲球體過濾能力之判定方法之方式構成。此種試樣分析系統10包括記憶部11、輸入部12、分析測定部13、資料處理部14、及輸出部15，能夠分析血液試樣，輸出絲球體過濾能力。

更具體而言，於本發明之試樣分析系統10中，記憶部11記憶由自輸入部12輸入之菊粉清除率與血液試樣中之D-絲胺酸量之相關性而算出之式、對照表或圖表，分析測定部13分離並定量血液試樣中之D-絲胺酸，資料處理部14藉由將D-絲胺酸量代入由菊粉清除率與血液試樣中之D-絲胺酸量之相關性而算出之式中，或自對照表或圖表中讀出D-絲胺酸量而決定絲球體過濾能力，輸出部15能夠輸出絲球體過濾能力。

於進而較佳之態樣中，本發明之試樣分析系統可進而包括記憶部11記憶自輸入部12輸入之閾值之步驟、及資料處理部14將分離定量之D-絲胺酸量與閾值進行比較之步驟。於此情形時，於D-絲胺酸量低於閾值之情形時，輸出部15輸出絲球體過濾能力較高這一內容。於D-絲胺酸量高於閾值之情形時，資料處理部14藉由將D-絲胺酸量代入由菊粉清除率與血液試樣中之D-絲胺酸量之相關性而算出之式中，或自對照表或圖表中讀出D-絲胺酸量而決定絲球體過濾能力，輸出部15輸出絲球體過濾能力。

記憶部11具有RAM(Random Access Memory，隨機存取記憶體)、ROM(Read Only Memory，唯讀記憶體)、快閃記憶體等記憶體裝置、硬碟驅動器等固定碟裝置、或軟碟、光碟等可移動之記憶裝置等。記憶部除記憶分析測定部測定之資料、自輸入部輸入之資料及指示、資料處理部進行之運算處理之結果等之外，亦記憶用於資訊處理裝置之各種處理之電腦程式、資料庫等。電腦程式例如可經由CD-ROM(compact disc read only memory，唯讀光碟)、DVD-ROM(Digital Versatile Disc-Read Only Memory，唯讀數位多功能光碟)等電腦可讀記錄媒體或網際網路而安裝。電腦程式使用公知之設置程式等而安裝於記憶部。記憶部記憶由預先自輸入部12輸入之菊粉清除率與血液試樣中之D-絲胺酸量之相關性而算出之式、對照表或圖表相關資料。又，亦可記憶與絲球體過濾量對應之腎功能分類。

輸入部12為介面等，亦包括鍵盤、滑鼠等操作部。藉此，輸入部可輸入分析測定部13測定之資料、資料處理部14進行之運算處理之指示等。又，輸入部12例如於分析測定部13位於外部之情形時，亦可除操作部之外，另外包括能夠經由網路或記憶媒體而輸入測定之資料等之介面部。

分析測定部13執行血液試樣中之D-絲胺酸之測定步驟。因此，分析測定部13具有能夠分離及測定胺基酸之D體及L體之構成。胺基酸可逐一分析，亦可將部分或所有種類之胺基酸集中分析。分析測定部13例如可為具有試樣導入部、光學拆分柱、檢測部之手性層析系統，較佳可為高效液相層析系統，但並非意在限於其等。就僅檢測特定之胺基酸量之觀點而言，亦可實施利用酵素法或免疫學方法之定量。分析測定部13可獨立於試樣分析系統而構成，亦可利用網路或記憶媒體將測定之資料等經由輸入部12輸入。

資料處理部14能夠藉由將測定之D-絲胺酸量代入由菊粉清除率與血液試樣中之D-絲胺酸量之相關性而算出之式中，或自對照表或圖表中讀出D-絲胺酸量而決定絲球體過濾能力。於由菊粉清除率與血液試樣中之D-絲胺酸量之相關性而算出之式、對照表或圖表進而需要其他修正值，例如年齡、體重、性別、身高等之情形時，此種資訊預先由輸入部輸入，記憶於記憶部中。資料處理部計算絲球體過濾量時，能夠藉由叫出相關資訊，代入式中，或自對照表或圖表中讀出而計算出絲球體過濾量。資料處理部14亦能夠根據所決定之絲球體過濾能力而決定腎病或腎功能分類。資料處理部14按照記憶部中記憶之程式，對由分析測定部13測定而記憶於記憶部11之資料執行各種運算處理。運算處理由包含於資料處理部內之CPU(Central Processing Unit，中央處理單元)執行。該CPU包括對分析測定部13、輸入部12、記憶部11、及輸出部15進行控制之功能模組，可進行各種控制。該等各部可分別包含獨立之積體電路、微處理機、韌體等。

輸出部15以輸出資料處理部進行運算處理之結果即絲球體過濾能力之方式構成。輸出部15可為直接顯示運算處理之結果之液晶顯示器等顯示裝置、印表機等輸出機構，亦可為用於向外部記憶裝置輸出或用於經由網路而輸出之介面部。亦可將D-絲胺酸量及/或腎功能分類與絲球體過濾能力一起輸出或獨立地輸出。

圖5係表示利用本發明之程式所進行之用於決定絲球體過濾量之動作之例的流程圖。具體而言，本發明之程式係使包括輸入部、輸出部、資料處理部、及記憶部之資訊處理裝置決定絲球體過濾量之程式。本發明之程式包含用於使上述資訊處理裝置執行以下內容之指令：使記憶部記憶自輸入部輸入之D-絲胺酸量，讀出預先記憶於記憶部之由菊粉清除率與血液試樣中之D-絲胺酸量之相關性而算出之式、對照表或圖表、及D-絲胺酸量，使資料處理部決定絲球體過濾能力，使記憶部記憶決定之絲球體過濾能力，然後使輸出部輸出記憶之絲球體過濾能力。本發明之程式可儲存於記憶媒體中，亦可經由網際網路或LAN(Local Area Network，區域網路)等電氣通訊線路而提供。

於資訊處理裝置包括分析測定部之情形時，亦可包括用於使資訊處理裝置執行由分析測定部自血液試樣測定相關值並使記憶部記憶之指令，以此代替自輸入部輸入D-絲胺酸量之值。

本說明書中所提及之所有文獻之全部內容藉由引用而併入本說明書中。

以下說明之本發明之實施例僅作示例之目的，並不限定本發明之技術範圍。本發明之技術範圍僅由申請專利範圍之記載限定。以不脫離本發明之主旨為條件，可進行本發明之變更，例如對本發明之構成要素進行追加、刪除及替換。 [實施例]

受驗者集合將出於診斷及/或治療目的而於2016年～2017年間於大阪大學醫學部附屬醫院腎臟內科(Department of Nephrology，Osaka University Hospital))住院之慢性腎病(CKD)患者所組成之群組中之11名患者用於回顧性研究。另外，於國立醫藥基盤健康營養研究所招募15名20歲以上之健康之志願者。試驗方案經過各機構內之倫理委員會批准，並且自所有受驗者獲得了書面知情同意。

健康者及慢性腎病患者之資訊如下： [表1]

表1 受驗者之基線特徵
	健康受驗者 n＝15	CKD患者 (n＝11)	P值
年齡	44(39-50)	50(40-65)	0.232
男性比率(%)	80(12)	45.5(5)	0.103
身高(m)	1.70(1.68-1.75)	1.63(1.59-1.66)	0.043
體重(kg)	68.9(61.0-73.5)	59.8(51.5-66.7)	0.194
BSA(m² )	1.80(1.72-1.90)	1.61(1.54-1.75)	0.102
BMI(kg/m² )	22.6(21.1-25.7)	22.5(19.3-24.2)	0.452
血清肌酸酐(mg/dL)	0.75(0.68-0.83)	1.14(0.75-2.59)	0.069
血清胱抑素C(mg/L)	0.78(0.69-0.84)	1.14(0.87-2.11)	0.005
菊粉清除率 ((mL/min/1.73 m² ))	97.0(94.1-107.3)	46.0(19.8-66.9)	＜0.001
值以中央值(IQR，Inter-Quartile Range)或%(計數)表示

菊粉清除率之測量方法按照Clin Exp Nephrol 13, 50-54(2009)中記載之標準方法由血液及尿液中之菊粉濃度、以及尿液體積計算受驗者之菊粉清除率(Cin)。簡言之，於禁食、延期服藥及水負荷之環境下，於連續2小時靜脈內輸注1%之菊粉(菊粉注射液：富士藥品股份有限公司)之過程中於3個不同時間點採集血液及尿液樣品。受驗者於輸注前30分鐘經口飲水500 mL。為了維持水負荷，於開始輸注菊粉後40分鐘、60分鐘及90分飲水60 mL。輸注之初始速度最初30分鐘為300 mL/h，之後90分鐘為100 mL/h。於開始輸注菊粉後45分鐘、75分鐘及105分鐘採集血液試樣。受驗者於開始輸注後30分鐘以使膀胱完全排空之方式排尿。繼而，於30分鐘～60分鐘之間、60分鐘～90分鐘之間、及90～120分鐘之間採集尿液樣品。使用酵素法測量菊粉。將3個Cin值之平均用作標準方法之Cin(Cin-ST)。

血液中D-胺基酸之測定樣品製備如下述般自人血漿製備樣品：將20倍體積之甲醇添加至血漿中，充分混合。離心後，將自甲醇勻漿獲得之10 μL上清液移至褐色試管，減壓乾燥。於殘渣中添加20 μL之200 mM硼酸鈉緩衝液(pH值8.0)及5 μL之螢光標記試劑(無水MeCN(methyl cyanide，乙腈)中添加40 mM之4-氟-7-硝基-2,1,3-苯并㗁二唑(NBD-F))，繼而於60℃下加熱2分鐘。加入75 μL之0.1%TFA(trifluoroacetic acid，三氟乙酸)水溶液(v/v)終止反應，繼而將2 μL之反應混合液供於2維HPLC。

利用2維HPLC所進行之胺基酸光學異構物之定量使用以下2維HPLC系統定量胺基酸光學異構物。使用反相管柱(KSAA RP，1.0 mmi.d.×400 mm；資生堂股份有限公司)以流動相(5～35%MeCN、0～20%THF(Tetrahydrofuran，四氫呋喃)、及0.05%TFA)分離並溶出胺基酸之NBD衍生物。管柱溫度設為45℃，流動相之流速設為25 μL/分鐘。使用多迴路閥分取所分離之胺基酸之組分，以手性管柱(KSAACSP-001S，1.5 mmi.d.×250 mm；資生堂)連續地光學分割。作為流動相，根據胺基酸之滯留，使用包含檸檬酸(0～10 mM)或甲酸(0～4%)之MeOH(methanol，甲醇)-MeCN之混合用液。使用470 nm之激發光於530 nm下螢光檢測NBD-胺基酸。NBD-胺基酸之滯留時間藉由胺基酸光學異構物之標準品而鑑定，藉由校準曲線而定量。

解析與GFR(菊粉清除率)之相關性 (1)有修正體表面積對於26名受驗者，將修正了體表面積之GFR(菊粉清除率)與血液中之D-絲胺酸量(A)、肌酸酐量(B)、及胱抑素C量(C)繪製於散佈圖中，計算出相關係數r值與p值。結果示於圖1。血液中之D-絲胺酸量顯示出相對於GFR(菊粉清除率)具有與血液中之胱抑素C量同等之相關性。

(2)未修正體表面積對於26名受驗者，將未修正體表面積之GFR(菊粉清除率)與血液中之D-絲胺酸量(A)、肌酸酐量(B)、及胱抑素C量(C)繪製於散佈圖中，計算出相關係數r值及p值。結果示於圖2。顯示血液中之D-絲胺酸相對於未修正體表面積之GFR(菊粉清除率)有最高之相關性。

與體表面積(BSA)之相關性關於健康者(GFR＞70)之資料，將體表面積(BSA)與測定之血液中之D-絲胺酸量、胱抑素C量及肌酸酐量表示於散佈圖中，計算出相關係數r值及p值。結果示於圖3。血液中之肌酸酐量或胱抑素C量與體表面積相關，而血液中之D-絲胺酸量與體表面積不相關。

基於GFR分類之比較基於利用菊粉清除率所得之GFR，將26名受驗者分類為以下群：(所有資料(All)；GFR100以下；G3a以下：GFR60以下；G3b以下：GFR45以下；G4以下：GFR30以下；G5以下：GFR15以下)。GFR100以下有21名，G3a以下有8名，G3b以下有5名，G4以下有4名，G5以下有3名。計算出各資料中未修正體表面積之GFR(菊粉清除率)與血液中之D-絲胺酸量(A)、肌酸酐量(B)、及胱抑素C量(C)之相關係數r值與p值。結果示於圖3。於分群之情形時，於各群中D-絲胺酸量顯示出與GFR(菊粉清除率)之相關性較高。尤其，血液中之肌酸酐量於G3a以下或G3b以下顯示出較好之相關性，但於所有資料(All)或GFR100以下顯示出相關性較低，該結果顯示了於輕度腎功能降低之情形時不反映這一肌酸酐之缺點。另一方面，胱抑素C量顯示出於GFR100以下、G3a以下等腎功能較優異之資料中與GFR(菊粉清除率)之相關性較高，但如G3b以下時，隨著腎功能變差，與GFR(菊粉清除率)之相關性逐漸降低。血液中之D-絲胺酸量於各群中顯示出與GFR(菊粉清除率)良好之相關性。

10:試樣分析系統 11:記憶部 12:輸入部 13:分析測定部 14:資料處理部 15:輸出部

圖1係於對象中測定之血液中之D-絲胺酸量(A)、肌酸酐量(B)及胱抑素C量(C)與GFR(菊粉清除率)(已修正體表面積)之散佈圖。圖2係於對象中測定之血液中之D-絲胺酸量(A)、肌酸酐量(B)及胱抑素C量(C)與GFR(菊粉清除率)(未修正體表面積)之散佈圖。圖3係健康者群(GFR＞70)之資料中之血液中之D-絲胺酸量(A)、肌酸酐量(B)及胱抑素C量(C)與體表面積(BSA，Body Surface Area)之散佈圖。圖4係分為所有資料(All)、GFR(菊粉清除率)100以下、G3a以下(GFR(菊粉清除率)60以下)、G3b以下(GFR(菊粉清除率)45以下)、G4以下(GFR(菊粉清除率)30以下)、及G5以下(GFR(菊粉清除率)15以下)這幾類，顯示各分類下血液中之D-絲胺酸量(A)、肌酸酐量(B)及胱抑素C量(C)與GFR(菊粉清除率)(已修正體表面積)之相關性之圖表。圖5表示本發明之試樣分析系統之結構圖。圖6係表示利用本發明之程式所進行之用於決定絲球體過濾量之動作之例的流程圖。

Claims

一種絲球體過濾能力之決定方法，其係基於血液中之D-絲胺酸量者。
如請求項1之方法，其中上述絲球體過濾能力係基於由菊粉清除率與血液中之D-絲胺酸量之相關性算出之式而決定的絲球體過濾量。
如請求項1或2之方法，其中上述血液係藉由既有檢查而判定為疑患腎病之對象之血液。
一種血液分析系統，其包括記憶部、分析測定部、資料處理部及絲球體過濾能力輸出部；上述記憶部記憶血液中之D-絲胺酸量與絲球體過濾能力之相關式；上述分析測定部分離並定量血液中之D-絲胺酸量；上述資料處理部將D-絲胺酸量代入記憶部所記憶之相關式中，計算出絲球體過濾能力；上述病態資訊輸出部輸出絲球體過濾能力相關資訊。
如請求項4之血液分析系統，其中上述絲球體過濾能力係基於由菊粉清除率與血液中之D-絲胺酸量之相關性算出之式而決定的絲球體過濾量。
如請求項4或5之血液分析系統，其中上述血液係藉由既有檢查而判定為疑患腎病之對象之血液。