WO2019189772A1 - 長鎖ノンコーディングｒｎａを標的とするがん治療剤およびがん診断方法 - Google Patents

長鎖ノンコーディングｒｎａを標的とするがん治療剤およびがん診断方法 Download PDF

Info

Publication number
WO2019189772A1
WO2019189772A1 PCT/JP2019/014028 JP2019014028W WO2019189772A1 WO 2019189772 A1 WO2019189772 A1 WO 2019189772A1 JP 2019014028 W JP2019014028 W JP 2019014028W WO 2019189772 A1 WO2019189772 A1 WO 2019189772A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
cancer
tm4sf1as1
expression
rna
inhibitor
Prior art date
Application number
PCT/JP2019/014028
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
洋志 北嶋
玲緒 丸山
英一郎 山本
拓 鈴木
Original Assignee
北海道公立大学法人 札幌医科大学
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 北海道公立大学法人 札幌医科大学 filed Critical 北海道公立大学法人 札幌医科大学
Priority to JP2020511097A priority Critical patent/JP7319688B2/ja
Publication of WO2019189772A1 publication Critical patent/WO2019189772A1/ja

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A61K31/7105—Natural ribonucleic acids, i.e. containing only riboses attached to adenine, guanine, cytosine or uracil and having 3'-5' phosphodiester links
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A61K31/713—Double-stranded nucleic acids or oligonucleotides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/13—Tumour cells, irrespective of tissue of origin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/10—Cells modified by introduction of foreign genetic material
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids

Definitions

  • the present invention relates to a cancer therapeutic agent and a cancer diagnosis method targeting a long non-coding RNA.
  • Long non-coding RNA is RNA having a length of 200 bases or more that does not encode a protein. lncRNA is involved in various life phenomena such as cell proliferation, apoptosis, cell differentiation and diseases (cancer, heart disease, neurodegenerative disease, etc.). It is known that the expression pattern of lncRNA shows tissue specificity and disease specificity. lncRNA shows an organ- or disease-specific expression pattern, and its relationship with cancer has recently attracted attention. The function of most of the lncRNAs present in 10,000 or more types is still unclear, but it is expected to clarify the functions of lncRNA in carcinogenesis and lead to the development of new diagnosis and treatment methods. However, there are currently no clinical applications targeting lncRNA.
  • Patent Document 1 describes a method for predicting the onset or recurrence of acute myeloid leukemia using TM4SF1 as a leukemia stem cell marker gene.
  • TM4SF1 is mRNA
  • TM4SF1AS1 is a long noncoding RNA.
  • Non-Patent Document 1 describes the identification of a long noncoding RNA associated with chronic gastritis and gastric cancer, but does not describe any specific genes or functions thereof.
  • An object of the present invention is to provide a new diagnosis and treatment method for cancer by clarifying the function of lncRNA in carcinogenesis.
  • the present inventors have conducted intensive research, and that the transcript RNA of TM4SF1AS1 is expressed from the precancerous lesion stage of gastric cancer and suppresses this expression. Thus, the inventors have found that the cell growth inhibitory effect is exhibited, and have completed the present invention.
  • the present invention relates to the following.
  • a cancer therapeutic agent comprising at least one of an inhibitor of TM4SF1AS1 expression, an inhibitor of PURA expression, and an inhibitor of YB1 expression.
  • the cancer therapeutic agent according to (1) comprising an inhibitor of TM4SF1AS1 expression.
  • the cancer therapeutic agent according to (2) wherein the inhibitor of TM4SF1AS1 expression is siRNA, antisense nucleic acid, shRNA, or miRNA against the transcript RNA of TM4SF1AS1.
  • the cancer therapeutic agent according to (3), wherein the inhibitor of TM4SF1AS1 expression is siRNA.
  • a pharmaceutical composition for treating cancer comprising the cancer therapeutic agent according to any one of (1) to (6), the vector according to (7), or the cell according to (8). object.
  • a method for measuring the expression level of a transcript RNA of TM4SF1AS1, as an index for predicting whether a human subject will develop cancer (A) determining the expression level of TM4SF1AS1 transcript RNA in a test sample derived from a human subject; (B) determining the expression level of TM4SF1AS1 transcript RNA in a control sample derived from a healthy human; and (c) expressing the TM4SF1AS1 transcript RNA expression in a test sample derived from a human subject. Predicting that a human subject will develop cancer if it exceeds twice the expression level of TM4SF1AS1 transcript RNA in a control sample derived from, Including the method.
  • the cancer therapeutic agent and pharmaceutical composition of the present invention exhibit a cell growth inhibitory effect in cancers such as stomach cancer, breast cancer, liver cancer, colon cancer, and pancreatic cancer by suppressing the expression of TM4SF1AS1. can do.
  • TM4SF1AS1 TM4SF1AS1.
  • the left figure of FIG. 1 shows the histone modification (H3K4me3) profile (ChIP-Seq method) of the background mucosa derived from healthy subjects and gastric cancer patients.
  • the center diagram of FIG. 1 shows gene annotation. Of the 35,387 peaks detected in the H3K4me3 profile, 1512 were up-regulated, 3140 were down-regulated, and 11398 were unchanged.
  • the right figure of FIG. 1 shows an example of the active region of the transcription start point by H3K4me3. TM4SF1AS1 was activated in cancer patients and was not activated in healthy individuals.
  • the left diagram of FIG. 2 shows the results of quantitative RT-PCR performed on total RNA obtained from each gastric cancer cell line.
  • TCONS_00006264 corresponding to TM4SF1AS1 was expressed more in gastric cancer cells (MKN45, HSC45, JRST) than in normal gastric mucosal cells.
  • the upper right diagram in FIG. 2 shows the positional relationship on the genome between TM4SF1AS1 and its mRNA, TM4SF1.
  • the lower right diagram of FIG. 2 shows the results of TM4SF1 and TM4SF1AS1 expression analysis in each gastric cancer cell line.
  • TM4SF1AS1 (right side) was expressed more than TM4SF1 (left side) except for a few gastric cancer cell lines.
  • the vertical axis shows the relative expression of gastric cancer cells compared to normal stomach, and the horizontal axis shows the names of gastric cancer cells.
  • FIG. 2B shows the results of quantitative RT-PCR performed on total RNA obtained from cancer tissues (clinical specimens) at each gastric cancer stage.
  • the left figure of FIG. 2B shows the expression of TM4SF1AS1 in the cancer tissue (clinical specimen) of each gastric cancer stage and the normal gastric mucosa of a healthy person, and the right figure shows the cancer part and non-cancer of the gastric cancer patient in each gastric cancer stage.
  • the expression of TM4SF1AS1 in the part is shown.
  • FIG. 3 shows the effect of TM4SF1AS1 (lncRNA) knockdown (KD) on cell proliferation ability using MTT assay.
  • the left figure shows gastric cancer cell line HSC45, the middle figure shows MKN45, and the right figure shows SNU1.
  • the vertical axis indicates cell viability (OD450), and the horizontal axis indicates the number of days after knockdown.
  • FIG. 4 shows the results of cell migration assay (left panel) and Matrigel invasion assay (right panel) for cells in which TM4SF1AS1 was knocked down by transfection.
  • the vertical axis of the left figure shows migrating cells (%), and the horizontal axis shows the type of RNA used for knockdown.
  • the vertical axis of the right figure shows infiltrating cells (%), and the horizontal axis shows the type of RNA used for knockdown.
  • FIG. 5 shows the evaluation of tumorigenicity by TM4SF1AS1 overexpression in mouse xenografts.
  • the upper left figure shows a tumor in which a SNU638 stable cell line (4 ⁇ 10 6 cells) was taken out 31 days after transplantation (photograph).
  • the vertical axis in the upper right figure shows the tumor volume (mm 3 ) of the TM4SF1AS1 overexpressing strain and the control strain (GFP), and the horizontal axis shows the number of days after cell line transplantation.
  • the lower left figure shows a tumor in which a SNU638 stable cell line (1 ⁇ 10 7 cells) was removed 30 days after transplantation (photograph).
  • the vertical axis in the lower right figure shows the tumor volume (mm 3 ) of the TM4SF1AS1 overexpressing strain and the control strain (GFP), and the horizontal axis shows the number of days after cell line transplantation.
  • FIG. 6 shows the tumor suppressive effect of TM4SF1AS1 knockdown (KD) in mouse xenografts.
  • the left figure shows a tumor in which the HSC45 cell line (2.7 ⁇ 10 6 cells) was removed 30 days after transplantation (photograph).
  • the vertical axis of the right figure shows the tumor volume (mm 3 ) of the TM4SF1AS1 knockdown cell line and non-knockdown cell line, and the horizontal axis shows the number of days after cell line transplantation.
  • FIG. 7 shows Western blotting for PURA or YB1.
  • TM4SF1AS1 and PURA and YB1 increased in band intensity due to the formation of the complex (left figure), and the band disappeared in the absence of TM4SF1AS1 (right figure).
  • FIG. 8 shows the influence of PURA or YB1 knockdown on cell proliferation ability.
  • the vertical axis of the left figure shows the cell viability compared to normal cells, and the horizontal axis shows the number of days after knockdown.
  • FIG. 9 shows the results of a microarray experiment after synthesizing RNA cRNA extracted from gastric cancer cell line HSC45 in which TM4SF1AS1 was knocked down.
  • FIG. 10 shows that expression of an immune response gene is suppressed by TM4SF1AS1 knockdown.
  • the vertical axis shows the relative expression of gastric cancer cells (TM4SF1AS1 siRNA administration) compared to gastric cancer cells (control siRNA administration), and the horizontal axis shows the names of immune response genes.
  • FIG. 11 shows that overexpression of TM4SF1AS1 induces immune response gene expression.
  • the vertical axis shows the relative expression of gastric cancer cells (TM4SF1AS1 overexpression) compared to gastric cancer cells (GFP expression), and the horizontal axis shows the names of immune response genes.
  • FIG. 12 shows that expression of immune response genes is suppressed in the TM4SF1AS1 overexpressing cell line by knocking down PURA.
  • the vertical axis shows the relative expression of gastric cancer cells (PURA siRNA administration) compared to gastric cancer cells (control siRNA administration), and the horizontal axis shows the names of immune response genes.
  • FIG. 13 shows the results of TM4SF1AS1 expression analysis in each cancer cell line.
  • TM4SF1AS1 was highly expressed in various breast cancer cells (left figure), various liver cancer cells (middle figure), and various colorectal cancer cells (right figure).
  • the vertical axis shows the relative expression of TM4SF1AS1 compared to actin, and the horizontal axis shows the names of various cancer cells.
  • the left figure of FIG. 14 shows that TM4SF1AS1 expression is suppressed after 2 days by knockdown of TM4SF1AS1 in a breast cancer cell line.
  • the vertical axis shows the relative expression of breast cancer cells (TM4SF1AS1 siRNA administration) compared to breast cancer cells (control siRNA administration), and the horizontal axis shows the name of the breast cancer cell line.
  • the right figure of FIG. 14 shows the influence on the cell growth ability by knockdown (KD) of TM4SF1AS1 (lncRNA) using the MTT assay.
  • KD knockdown
  • the upper right figure shows the breast cancer SK-BR-3 cell line
  • the lower right figure shows the MDA-MB-435S cell line.
  • the vertical axis indicates cell viability (OD450), and the horizontal axis indicates the number of days after knockdown.
  • the left figure of FIG. 15 shows that TM4SF1AS1 expression is suppressed after 2 days due to TM4SF1AS1 knockdown in hepatoma cells.
  • the vertical axis shows the relative expression of liver cancer cells (TM4SF1AS1 siRNA administration) compared to liver cancer cells (control siRNA administration), and the horizontal axis shows the name of the liver cancer cell line.
  • the right figure of FIG. 15 shows the influence on the cell growth ability by knockdown (KD) of TM4SF1AS1 (lncRNA) using the MTT assay.
  • KD knockdown
  • the upper right figure shows the liver cancer Huh7 cell line
  • the lower right figure shows the HT17 cell line.
  • the vertical axis indicates cell viability (OD450), and the horizontal axis indicates the number of days after knockdown.
  • the left figure of FIG. 16 shows that TM4SF1AS1 expression is suppressed after 2 days by knockdown of TM4SF1AS1 in hepatoma cells.
  • the vertical axis shows the relative expression of liver cancer cells (TM4SF1AS1 siRNA administration) compared to liver cancer cells (control siRNA administration), and the horizontal axis shows the name of the liver cancer cell line.
  • the upper right figure of FIG. 16 shows the influence on the cell proliferation ability by knockdown (KD) of TM4SF1AS1 (lncRNA) using the MTT assay. In the upper right figure, a liver cancer HLF cell line was used.
  • the vertical axis shows cell viability (OD450), and the horizontal axis shows the number of days after knockdown.
  • the lower right diagram in FIG. 16 shows the results of cell migration assay (left diagram) and Matrigel invasion assay (right diagram) for cells in which TM4SF1AS1 was knocked down by transfection.
  • the vertical axis of the left figure shows migrating cells (%), and the horizontal axis shows the type of RNA used for knockdown.
  • the vertical axis of the right figure shows infiltrating cells (%), and the horizontal axis shows the type of RNA used for knockdown.
  • the left figure of FIG. 17 shows that TM4SF1AS1 expression is suppressed after 2 days due to knockdown of TM4SF1AS1 in pancreatic cancer cells.
  • the vertical axis shows the relative expression of pancreatic cancer cells (TM4SF1AS1 siRNA administration) compared to pancreatic cancer cells (control siRNA administration), and the horizontal axis shows the name of the pancreatic cancer cell line.
  • the right figure of FIG. 17 shows the influence on the cell growth ability by knockdown (KD) of TM4SF1AS1 (lncRNA) using the MTT assay.
  • the vertical axis shows cell viability (OD450), and the horizontal axis shows the number of days after knockdown.
  • a therapeutic agent for suppressing at least one of TM4SF1AS1 expression, PURA expression, and YB1 expression eg, a therapeutic agent, composition, method and kit for suppressing TM4SF1AS1 expression
  • a method for detecting cancer comprising measuring the expression level of a transcript RNA of TM4SF1AS1.
  • the therapeutic agents, compositions, methods and kits include TM4SF1AS1 transcript RNA, eg, a nucleic acid molecule that binds TM4SF1AS1 transcript RNA exemplified by SEQ ID NO: 1 (eg, short interfering nucleic acid (siNA), short interfering RNA (SiRNA), double-stranded RNA (dsRNA), microRNA (miRNA) or short hairpin RNA (shRNA)).
  • TM4SF1AS1 transcript RNA eg, a nucleic acid molecule that binds TM4SF1AS1 transcript RNA exemplified by SEQ ID NO: 1 (eg, short interfering nucleic acid (siNA), short interfering RNA (SiRNA), double-stranded RNA (dsRNA), microRNA (miRNA) or short hairpin RNA (shRNA)).
  • TM4SF1AS1 transcript RNA eg, a nucleic acid molecule that
  • One aspect of the cancer therapeutic agent present invention of the present invention inhibitors of the expression of TM4SF1AS1, inhibitors of the expression of PURA, and cancer therapeutic agent comprising at least one inhibitor of expression of YB1, for example, the TM4SF1AS1
  • the present invention relates to a cancer therapeutic agent containing an expression inhibitor.
  • the cancer therapeutic agent of the present invention includes, for example, an inhibitor of TM4SF1AS1 expression.
  • the annotation data of TM4SF1AS1 of long non-coding RNA can be obtained from Human Body Map (Broad Institute).
  • the transcript RNA of TM4SF1AS1 is represented by SEQ ID NO: 1.
  • the transcript RNA of TM4SF1AS1 is derived from, for example, humans, and includes a nucleotide sequence represented by SEQ ID NO: 1 or a nucleotide sequence having a deletion, substitution, addition or insertion of one or several nucleotides in each nucleotide sequence. Or a base sequence having 70% or more, 80% or more, or 90% or more, preferably 95% or more, and more preferably 98% or more or 99% or more of the above-described base sequence. Good.
  • “several” means the number of bases of 2 to 10, preferably 2 to 5, more preferably 2 to 3.
  • the sequence identity can be determined using a known algorithm such as BLAST.
  • an inhibitor of TM4SF1AS1 expression is, for example, siRNA having RNA interference (RNAi) action (for example, 5′- CCAUCAGUUGGGAGUUGAAGA -3 ′ (SEQ ID NO: 2) or 5′-GCCAAGUGUCCGAGAUGCAAC-3 ′ (SEQ ID NO: 3)) or a precursor RNA thereof, or a modified RNA thereof, or a vector containing a DNA encoding siRNA against a transcript RNA of TM4SF1AS1 gene.
  • the TM4SF1AS1 expression inhibitor may be, for example, shRNA, miRNA, or the like.
  • the vector may contain antisense RNA or antisense DNA, DNA encoding the antisense RNA, or the antisense DNA.
  • siRNA is a sense RNA comprising 18 to 25 nucleotides, preferably 20 to 24 nucleotides, more preferably 21 to 23 nucleotides complementary to a part of the transcript RNA of TM4SF1AS1 gene, and having an RNAi (RNA interference) action. And double-stranded RNA consisting of antisense RNA. Each 3 ′ end of the sense RNA and antisense RNA may have a protruding end of 2 to 5 nucleotides, preferably 2 nucleotides.
  • the inhibitor of TM4SF1AS1 gene expression may be, for example, a combination of siRNA containing a sense strand and an antisense strand.
  • the sense strand 5′-CCAUCAGUUGGGAGUUGAAGA-3 ′ (SEQ ID NO: 2 ) And antisense strand 5'-UUCAACUCCCAACUGAUGGAA-3 '(SEQ ID NO: 4), or sense strand 5'-GCCAAGUGUCCGAGAUGCAAC-3' (SEQ ID NO: 3) and antisense strand 5'-UGCAUCUCGGACACUUGGCAG-3 '
  • SEQ ID NO: 5′-CCAUCAGUUGGGAGUUGAAGA-3 ′ (SEQ ID NO: 2 )
  • antisense strand 5'-UUCAACUCCCAACUGAUGGAA-3 ' (SEQ ID NO: 4)
  • sense strand 5'-GCCAAGUGUCCGAGAUGCAAC-3' (SEQ ID NO: 3) and antisense strand 5'-UGCAUCUCGGACACUUGGCAG-3 '
  • the combination of (SEQ ID NO: 5) is preferred.
  • the cancer therapeutic agent of the present invention does not contain an inhibitor of TM4SF1AS1 expression, suppresses the expression of PURA (purine-rich element binding protein A) and YB1 (Y box binding protein). Both of these may be included, or any one of these may be included alone.
  • the therapeutic agent for cancer of the present invention may contain a PURA expression inhibitor and a YB1 expression inhibitor in addition to the TM4SF1AS1 expression inhibitor.
  • a complex of PURA, PURB, and YB1 has been reported to be involved in transcriptional regulation (J Biol Chem, 2008; Mol Cell Biol, 2007).
  • an inhibitor of PURA expression and an inhibitor of YB1 expression are, for example, siRNAs having RNA interference (RNAi) action, for example, 5′-CCACCUAUCGCAACUCCAUTT-3 ′ (SEQ ID NO: 6) or 5 of siRNA against PURA, respectively.
  • RNAi RNA interference
  • '-GCUACUGCAGGGUGAGGAATT-3' SEQ ID NO: 7
  • a vector containing DNA encoding siRNA against the transcript RNA of PURA and YB1 genes may be, for example, shRNA.
  • the vector may contain antisense RNA or antisense DNA, DNA encoding the antisense RNA, or the antisense DNA.
  • SiRNA against PURA and YB1 consists of 18-25 nucleotides, preferably 20-24 nucleotides, more preferably 21-23 nucleotides complementary to a portion of transcript RNA of PURA and YB1 genes, and RNAi (RNA interference) It may be a double-stranded RNA consisting of sense RNA and antisense RNA having an action. Each 3 ′ end of the sense RNA and antisense RNA may have a protruding end of 2 to 5 nucleotides, preferably 2 nucleotides.
  • the inhibitor of PURA and YB1 gene expression may be, for example, a combination of siRNA containing a sense strand and an antisense strand.
  • 5'-CCACCUAUCGCAACUCCAUTT- Combination of 3 ′ (SEQ ID NO: 6) and antisense strand 5′-AUGGAGUUGCGAUAGGUGGTT-3 ′ (SEQ ID NO: 8), or sense strand 5′-GCUACUGCAGGGUGAGGAATT-3 ′ (SEQ ID NO: 7) and antisense strand 5 Combination of '-UUCCUCACCCUGCAGUAGCTT-3' (SEQ ID NO: 9), or 5'-CCUAUGGGCGUCGACCACATT-3 '(SEQ ID NO: 10) of the sense strand of siRNA against YB1 and 5'-UGUGGUCGACGCCCAUAGGTT-3' (SEQ ID NO: 9) of the antisense strand 12), or a combination of 5′-GUUCCAGUUCAAGGCAGUATT-3 ′ (SEQ ID NO: 11) of the sense strand and 5′-UACUGCCUUGAACUGGAACTT-3 ′ (SEQ ID NO: 13
  • Introduction of the therapeutic agent of the present invention into cells may be any known introduction method such as, but not limited to, lipofectamine method, lipofection method, calcium phosphate method, ultrasonic introduction method, electroporation method, particle gun method, virus A method using a vector (for example, an adenovirus vector, an adeno-associated virus vector or a retrovirus vector), a microinjection method, or the like can be used.
  • a viral vector is used, the virus titer is 1 ⁇ 10 3 to 1 ⁇ 10 15 p. f. u. (Plaque forming unit), preferably 1 ⁇ 10 5 to 1 ⁇ 10 13 , more preferably 1 ⁇ 10 7 to 1 ⁇ 10 11 , and even more preferably 1 ⁇ 10 8 to 1 ⁇ 10 10 be able to.
  • the nucleic acid molecule may be used as a naked nucleic acid or incorporated into various nucleic acid constructs or vectors.
  • any known vector such as a plasmid vector, a phage vector, a phagemid vector, a cosmid vector, or a virus vector can be used.
  • the nucleic acid construct or vector preferably contains at least appropriate transcriptional or translational control sequences derived from, for example, mammalian, microbial, viral, or insect genes.
  • regulatory sequences include sequences that have a regulatory role in gene expression, such as transcription promoters or enhancers, operator sequences for regulating transcription, sequences encoding ribosome binding sites within messenger RNA, and transcription, translation initiation Or an appropriate sequence that regulates transcription termination.
  • composition of the present invention also relates to a pharmaceutical composition comprising the therapeutic agent described above. Since the above therapeutic agent can suppress the growth of cancer cells, it is useful as an active ingredient of a pharmaceutical composition.
  • the pharmaceutical composition of the present invention may contain, in addition to the TM4SF1AS1 expression inhibitor, a PURA expression inhibitor and a YB1 expression inhibitor, and does not contain a TM4SF1AS1 expression inhibitor. Both an inhibitor of PURA expression and an inhibitor of YB1 expression may be included, or any of these may be included alone.
  • the pharmaceutical composition of the present invention may comprise the therapeutic agent described above and one or more pharmaceutically acceptable surfactants, carriers, diluents and / or excipients.
  • the above-mentioned pharmaceutical composition is not limited, and can be used for treatment of diseases related to high expression of TM4SF1AS1, PURA, and YB1, cell proliferative diseases, and the like. Therefore, the present invention also relates to a pharmaceutical composition comprising an effective amount of the above-described inhibitors of TM4SF1AS1, PURA, and YB1 transcript RNA for the treatment of diseases involving high expression of TM4SF1AS1, PURA, and YB1.
  • the cell proliferative disease includes, but is not limited to, for example, a benign tumor or a malignant tumor.
  • the cell proliferative disorder is cancer.
  • the pharmaceutical composition of the present invention can suppress the cell proliferation ability of cancer cells to, for example, one-half or less and one-third or less of normal cells in an MTT assay. .
  • the cancer targeted by the present invention is not limited as long as TM4SF1AS1, PURA, and YB1 transcript RNAs are expressed.
  • fibrosarcoma malignant fibrous histiocytoma, liposarcoma, rhabdomyosarcoma
  • Sarcomas such as leiomyosarcoma, angiosarcoma, Kaposi sarcoma, lymphangiosarcoma, synovial sarcoma, chondrosarcoma, osteosarcoma, brain tumor, head and neck cancer, breast cancer, lung cancer, esophageal cancer, gastric cancer, duodenal cancer, appendix cancer, large intestine Cancer, rectal cancer, liver cancer, pancreatic cancer, gallbladder cancer, bile duct cancer, anal cancer, renal cancer, ureteral cancer, bladder cancer, prostate cancer, penile cancer, testicular cancer, uterine cancer, ovarian cancer, vulvar cancer, vaginal cancer, skin
  • Whether a cancer cell expresses TM4SF1AS1, PURA, and YB1 can be determined by detecting the expression of TM4SF1AS1, PURA, and YB1 transcript RNA at the gene level.
  • any known gene expression analysis method such as Northern blotting method, RNase protection assay, PCR method such as RT-PCR, real-time PCR, in-situ hybridization method, in-vitro transcription method, etc. Can be detected.
  • the expression level of transcript RNA of TM4SF1AS1, PURA, and YB1 is 2 times or more, preferably 3 times or more, more preferably 5 times or more, still more preferably 10 times or more, compared to normal cells. Particularly preferably, it increases by 20 times or more.
  • the pharmaceutical composition of the present invention may further contain other agents useful for treating the target disease, such as antitumor agents, anti-inflammatory agents and the like.
  • antitumor agent include, but are not limited to, alkylating agents such as ifosfamide, nimustine (eg, nimustine hydrochloride), cyclophosphamide, dacarbazine, melphalan, ranimustine, gemcitabine (eg, gemcitabine hydrochloride), enocitabine, Cytarabine ocphosphatate, cytarabine preparation, tegafur uracil, tegafur gimeracil oteracil potassium combination drug (eg TS-1), antimetabolite such as doxyfluridine, hydroxycarbamide, fluorouracil, methotrexate, mercaptopurine, idarubicin (eg hydrochloric acid hydrochloride) Idarubicin), epirubicin (eg epirubici
  • Anti-inflammatory agents include, but are not limited to, steroidal anti-inflammatory agents (prednisolone, beclomethasone, betamethasone, fluticasone, dexamethasone, hydrocortisone, etc.) and nonsteroidal anti-inflammatory agents (acetylsalicylic acid, loxoprofen, acetaminophen, ketoprofen, thiaprofen) Acid, suprofen, tolmethine, carprofen, benoxaprofen, piroxicam, benzidamine, naproxen, diclofenac, ibuprofen, diflunisal, azapropazone, etc., RNAi molecules that suppress the expression of inflammatory cytokines (eg, siRNA, shRNA, ddRNA, miRNA, piRNA, rasiRNA, etc.), substances such as antisense nucleic acids, and / or drugs that suppress the action of inflammatory cytokines, eg , And antibodies to the
  • two or more kinds of molecules may be included in a single composition. These may be included separately in a plurality of compositions and used in combination.
  • two or more types of nucleic acid molecules may be incorporated into a single nucleic acid construct or vector, or may be prepared as a combination of a plurality of types of nucleic acid constructs or vectors each containing one type of nucleic acid molecule. .
  • the above-described cancer therapeutic agent can be used by being carried on various drug delivery carriers.
  • drug delivery carriers include, but are not limited to, polymer nanoparticles, polymer micelles, dendrimers, liposomes, virus nanoparticles, carbon nanotubes and the like (Cho K. et al., Clin Cancer Res. 2008 Mar 1; 14 (5) See 1310-6 etc.).
  • the therapeutic agent and pharmaceutical composition of the present invention can be used in various routes including both oral and parenteral, for example, without limitation, oral, intravenous, intramuscular, subcutaneous, topical, rectal, intratumoral, intraarterial. Intraportal, intramedullary, intramedullary, intradental, sublingual, oral, intraventricular, transmucosal, transdermal, intranasal, intraperitoneal, intrapulmonary, and intrauterine routes. It may be formulated into a dosage form suitable for the above. Any known dosage form and formulation method can be adopted as appropriate (see, for example, Standard Pharmacology, Yoshiaki Watanabe, Nankodo, 2003, Remington's Pharmaceuticals Sciences, etc.).
  • dosage forms suitable for oral administration include, but are not limited to, powders, granules, tablets, capsules, solutions, suspensions, emulsions, gels, syrups, etc.
  • Suitable dosage forms include injections such as solution injections, suspension injections, emulsion injections, and injections prepared at the time of use.
  • Formulations for parenteral administration can be in the form of aqueous or non-aqueous isotonic sterile solutions or suspensions.
  • Kit of the present invention provides a preparation kit for a composition comprising one or more containers containing the active ingredients that can be contained in the various agents or compositions of the present invention alone or in combination, and such It also relates to the necessary components of various agents or compositions provided in the form of a complete kit.
  • the kit of the present invention contains instructions describing how to prepare and administer the therapeutic agent or pharmaceutical composition of the present invention, such as instructions, electronic recording media such as CDs and DVDs, and the like. Also good.
  • Cancer Diagnosis Method of the Present Invention relates to a cancer diagnosis method targeting TM4SF1AS1 transcript RNA.
  • One aspect of the present invention is a method for measuring the expression level of a transcript RNA of TM4SF1AS1 as an index for predicting whether a human subject will develop cancer, (A) determining the expression level of TM4SF1AS1 transcript RNA in a test sample derived from a human subject; (B) determining the expression level of TM4SF1AS1 transcript RNA in a control sample derived from a healthy human; and (c) expressing the TM4SF1AS1 transcript RNA expression in a test sample derived from a human subject. Predicting that a human subject will develop cancer if it exceeds twice the expression level of TM4SF1AS1 transcript RNA in a control sample derived from, including.
  • the expression level of TM4SF1AS1 transcript RNA in a test sample derived from a human subject is greater than the expression level of TM4SF1AS1 transcript RNA in a control sample derived from a healthy human subject.
  • a human subject is predicted to develop cancer if it exceeds 3, 5, 10, or 20 times.
  • the cancer is not limited as long as the TM4SF1AS1 transcript RNA is expressed.
  • the cancer is preferably stomach cancer, breast cancer, liver cancer, colon cancer, or pancreatic cancer.
  • a human subject is a precancerous human subject.
  • a further aspect of the present invention provides a cancer therapeutic agent comprising at least one of the TM4SF1AS1 expression inhibitor, the PURA expression inhibitor, and the YB1 expression inhibitor of the present invention, for example,
  • the present invention relates to a method for treating a disease using a cancer therapeutic agent or pharmaceutical composition containing an inhibitor of TM4SF1AS1 expression.
  • the treatment method of the present invention administers to a subject a cancer therapeutic agent or pharmaceutical composition comprising at least one of the TM4SF1AS1 expression inhibitor, the PURA expression inhibitor, and the YB1 expression inhibitor of the present invention. Process.
  • the subject to be administered typically requires treatment with the TM4SF1AS1 expression inhibitor, the PURA expression inhibitor, the YB1 expression inhibitor, or the like of the present invention.
  • Such subjects include, but are not limited to, for example, diseases associated with high expression of TM4SF1AS1, PURA, and YB1, cell proliferative diseases, etc., or those diagnosed as having these diseases, Subjects with a high risk of developing any other disease. Therefore, the treatment method of the present invention requires treatment with a therapeutic agent or pharmaceutical composition comprising at least one of the TM4SF1AS1 expression inhibitor, the PURA expression inhibitor, and the YB1 expression inhibitor of the present invention. The method may further include the step of identifying the subject. Specific examples of cell proliferative diseases are as described above for the pharmaceutical composition.
  • the therapeutic agent or pharmaceutical composition of the present invention can be used in combination with other agents or treatment methods useful for treating a target disease.
  • the therapeutic agent or pharmaceutical composition of the present invention is expected to improve the sensitivity of cancer to chemotherapy and radiotherapy.
  • Agents that can be used in combination with the therapeutic agent or pharmaceutical composition of the present invention in the treatment of diseases, such as antitumor agents, anti-inflammatory agents, etc., are as described above for the pharmaceutical composition.
  • the treatment method of the present invention can be used in combination with physical therapy such as radiation therapy or surgical therapy such as surgery.
  • the effective amount in the treatment method of the present invention is, for example, an amount that reduces the symptoms of the disease or delays or stops the progression of the disease, and preferably an amount that suppresses or cures the disease. In addition, an amount that does not cause adverse effects exceeding the benefits of administration is preferred. Such an amount can be appropriately determined by an in vitro test using cultured cells or the like and a test in a model animal such as a mouse, rat, dog or pig, and such a test method is well known to those skilled in the art. . Moreover, the dose of the drug used in the treatment method of the present invention is known to those skilled in the art, or can be appropriately determined by the above-described test or the like.
  • the specific dose of active ingredient administered in the treatment methods of the invention described herein can vary depending on various conditions related to the subject in need of treatment, such as severity of symptoms, general health status of the subject, age, weight It can be determined taking into account the subject's sex, diet, timing and frequency of administration, medications used in combination, responsiveness to treatment, dosage form, compliance with treatment, and the like.
  • the dose of the drug used in the treatment method of the present invention is preferably, for example, about 0.01 mg to about 1,000 mg per person and in terms of siRNA molecules per kg body weight for an adult.
  • the concentration of the drug used in the treatment method of the present invention is preferably 1 nM to 200 ⁇ M, more preferably 5 nM to 180 ⁇ M, and particularly preferably 10 nM to 160 ⁇ M in the case of siRNA.
  • Administration routes include various routes including both oral and parenteral, such as oral, intravenous, intramuscular, subcutaneous, topical, intratumoral, rectal, intraarterial, intraportal, intramedullary, intradental, Sublingual, oral, intraventricular, transmucosal, transdermal, intranasal, intraperitoneal, intrapulmonary, and intrauterine routes are included.
  • the frequency of administration varies depending on the properties of the agent and composition used and the conditions of the subject including the above, but for example, many times a day (ie, 2, 3, 4 or 5 times a day), 1 day a day Times, every few days (ie every 2, 3, 4, 5, 6, 7 days, etc.), every week, every few weeks (ie every 2, 3, 4 weeks, etc.).
  • the term “subject” means any living individual, preferably an animal, more preferably a mammal, more preferably a human individual.
  • a subject may be healthy or suffer from some disease, but when treatment of a specific disease is intended, typically the subject is suffering from such disease.
  • treatment as used herein also encompasses all types of medically acceptable prophylactic and / or therapeutic interventions intended to cure, temporarily ameliorate, or prevent disease. Shall.
  • the term “treatment” encompasses medically acceptable interventions for various purposes, including delaying or stopping the progression of a disease, regression or disappearance of a lesion, prevention of onset or prevention of recurrence, and the like.
  • the inventor of the present invention can suppress cell proliferation in gastric cancer, breast cancer, liver cancer, colon cancer, pancreatic cancer cell lines by suppressing the expression of TM4SF1AS1 (SEQ ID NO: 1) by the present inventors this time. And, binding of PURA and TM4SF1AS1 (SEQ ID NO: 1), which are reported to be DNA or RNA binding proteins, is inhibited, resulting in a decrease in the expression of genes involved in the immune response. It was revealed. Therefore, the inhibitor of the present invention can bring about an action of inducing or maintaining an immune response in addition to cell growth inhibition.
  • the present invention also includes a composition for providing the above-mentioned action, including the above-mentioned inhibitor, use of the above-mentioned inhibitor in the production of a composition for providing the above-mentioned action, and the above-mentioned inhibition for providing the above-mentioned action.
  • the present invention also relates to an agent, a composition comprising an effective amount of the inhibitor for providing the action, and the use of the inhibitor for providing the action.
  • Example 1 Acquisition of lncRNA from gastric cancer cell lines and clinical specimens
  • Gastric cancer cell lines (AGS, AZ521, HSC43, HSC45, JRST, KATOIII, MKN1, MKN7, MKN28, MKN45, MKN74, NCI-N87, NUGC3, NUGC4, SH101, SNU1, SNU638), liver cancer cell lines (Hep3B, HepG2, Huh1, Huh7, HT17, Li-7, HLE, HLF, PLC / PRF / 5, JHH4), colon cancer cell lines (CaCO2, Colo320, DLD1, HCT116) , HT29, Lovo, RKO, SW48, SW480, SW620, T84, WiDr), breast cancer cell lines (MCF7, MDA-MB-157, MDA-MB-231, MDA-MB361, MDA-MB-435S, MDA-MB- 468, SK-BR-3, T47D) and pancreatic cancer cell line
  • gland ducts were isolated from a portion of tissue obtained by biopsy using the upper gastrointestinal tract by gland duct separation (Nakamura S, Goto J, Kitayama M, Kino I (1994) Application of The crypt-isolation technique to flow-cytometric analysis of DNA content in colorectal neoplasms. Gastroenterology 106 (1): 100-107). The analysis of clinical specimens was approved by Sapporo Medical University.
  • Example 2 ChIP-seq experiment and data analysis ChIP (chromatin sedimentation) experiment was performed using gland duct components obtained from normal gastric mucosa of healthy subjects and non-cancerous background mucosa of stomach cancer patients by gland duct separation method ( Maruyama R, Choudhury S, Kowalczyk A, Bessarabova M, Beresford-Smith B, Conway T, Kaspi A, Wu Z, Nikolskaya T, Merino VF, Lo PK, Liu XS, Nikolsky Y, Sukumar S, Haviv I, Polyak K ( 2011) Epigenetic regulation of cell type-specific expression patterns in the human mammary epithelium. PLoS genetics 7 (4): e1001369.
  • Example 3 RNA extraction and expression analysis Total RNA was extracted from each gastric cancer cell line using Trizol and subjected to reverse transcription reaction. Quantitative RT-PCR by the SYBR method was performed using primers designed for each gene. The normal gastric mucosa RNA was commercially available. The result is shown in FIG. 2A. It was found that TCONS_00006264 corresponding to TM4SF1AS1 was expressed more in gastric cancer cells than in normal gastric mucosal cells (left figure in FIG. 2A). In addition, TM4SF1AS1, which is a long non-coding RNA, was predicted to be co-expressed with TM4SF1, which is its mRNA, proximally on the genome (upper right figure in FIG. 2A).
  • TM4SF1AS1 and TM4SF1 were both expressed in many cell lines except for a very small number of gastric cancer cell lines (lower right figure in FIG. 2A). Furthermore, total RNA was extracted from cancer tissues (clinical specimens) at each gastric cancer stage using Trizol and subjected to reverse transcription reaction. Quantitative RT-PCR by the SYBR method was performed using primers designed for each gene. The normal gastric mucosa RNA was commercially available. The result is shown in FIG. 2B.
  • TM4SF1AS1 expression is enhanced in the cancerous part.
  • TM4SF1AS1 expression is increased in each stage (I-IV) compared to normal tissues, suggesting that it is effective for early detection of gastric cancer, prevention of gastric cancer, and early treatment. It was.
  • Example 4 Design of siRNA designed to target TM4SF1AS1
  • the design algorithm of Rossetta Inpharmatics and siDirect was used for the design of siRNA targeting TM4SF1AS1.
  • the sense strand eg, 5′-CCAUCAGUUGGGAGUUGAAGA-3 ′ (SEQ ID NO: 2), 5′-GCCAAGUGUCCGAGAUGCAAC-3 ′ (SEQ ID NO: 3)
  • the antisense strand eg, 5′-UUCAACUCCCAACUGAUGGAA-3 ′ (sequence) No.
  • 5′-UGCAUCUCGGACACUUGGCAG-3 ′ SEQ ID NO: 5′-UGCAUCUCGGACACUUGGCAG-3 ′
  • control siRNA Mission Negative control SIC-001 manufactured by Sigma was used (sequence not disclosed).
  • Example 5 Knockdown experiment and functional analysis A gastric cancer cell line was transfected with siRNA designed to target TM4SF1AS1 by the lipofectamine method.
  • the cells in which TM4SF1AS1 was knocked down by transfection were subjected to quantitative RT-PCR, MTT assay, cell migration assay, and Matrigel invasion assay. The results are shown in FIGS.
  • TM4SF1AS1 is knocked down using siRNA (si-TM4SF1AS1 # 2 (SEQ ID NO: 2, 4) and si-TM4SF1AS1 # 3 (SEQ ID NO: 3, 5)) (20 nM) in gastric cancer cells (HSC45, MKN45, SNU1)
  • siRNA si-TM4SF1AS1 # 2 (SEQ ID NO: 2, 4) and si-TM4SF1AS1 # 3 (SEQ ID NO: 3, 5)
  • HSC45, MKN45, SNU1 gastric cancer cells
  • Example 6 Establishment of TM4SF1AS1 stable expression strain A TM4SF1AS1-GFP expression vector or a control GFP vector was prepared.
  • TM4SF1AS1 was purchased from SGI-DNA's DNA synthesis service, and plasmid vector pBI-CMV2 (Clontech) was purchased.
  • PBI-CMV2 NeoR in which a neomycin resistance gene (NeoR) cassette amplified by PCR was incorporated into pBI-CMV2 by In-fusion reaction (Takara) was used as a control GFP vector.
  • TM4SF1AS1 amplified by PCR based on the synthetic DNA was incorporated into the MCS site of pBI-CMV2 NeoR by In-fusion reaction to prepare a TM4SF1AS1-GFP expression vector.
  • a gastric cancer cell line SNU638 was transfected with a TM4SF1AS1-GFP expression vector or a control GFP vector. After adding the antibiotic neomycin and selecting for 3 weeks, GFP positive cells were collected using BD FACS Aria (BD Bioscience).
  • Example 7 Mouse Xenograft Experiment A gastric cancer cell line SNU638 transfected with TM4SF1AS1-GFP expression vector or control GFP vector was subcutaneously transplanted to the left and right dorsal regions of nude mice (BALB / cAJcl-nu). Tumor size was measured periodically after transplantation. The results are shown in FIG. In addition, gastric cancer cell line HSC45 was subcutaneously transplanted to the left and right dorsal side of nude mice (BALB / cAJcl-nu).
  • TM4SF1AS1 SEQ ID NO: 2, 4
  • control siRNA 50 ⁇ M
  • the TM4SF1AS1 stable expression strain and the control GFP strain were subcutaneously transplanted into nude mice, and the tumor size was measured.
  • FIG. 5 In the SNU638 strain, which is a stable expression strain of TM4SF1AS1, since the tumor size was significantly increased (FIG. 5), it was understood that overexpression of TM4SF1AS1 promotes tumor formation. It was also understood that tumor formation was suppressed by knocking down TM4SF1AS1 in the HSC45 gastric cancer cell line (FIG. 6).
  • Example 8 Microarray analysis RNA was extracted from gastric cancer cell line HSC45 in which TM4SF1AS1 was knocked down. After cRNA was synthesized, a microarray experiment to SurePrint G3 Human GE 8x60K V2 microarray (Agilent Technologies) was performed. For data analysis, GeneSpring GX version 13 (Agilent Technologies) was used.
  • Example 9 Identification of TM4SF1AS1-binding protein RNA pull-down experiments were performed using 5-bromoUTP-labeled TM4SF1AS1 RNA synthesized by in vitro transcription reaction and RiboCluster Profiler RiboTrap Kit (MBL). A specific protein band was cut out with TM4SF1AS1 RNA by SDS-PAGE and subjected to mass spectrometry.
  • Example 10 Western blot The protein was subjected to SDS-PAGE, the protein was transferred from the gel to a PVDF membrane, and the membrane was then treated with a blocking agent. A primary antibody reaction was performed with antibodies against each protein, and a secondary antibody reaction was performed after washing the membrane. After washing the membrane again, the protein was developed with Clarity Western ECL substrate (BIORAD), and fluorescence was detected with ImageQuant LAS4000 mini (GE Heathcare).
  • Primary antibody is anti YB1 antibody (RN015P, MBL), anti Myc tag mAb (M192-3S, MBL), anti PURA antibody (ab79936, abcam), secondary antibody is mouse IgG antibody (CST, 7076) or Anti- Rabbit IgG antibody conjugated with horseradish peroxidase (CST, 7074) was used.
  • CST, 7076 mouse IgG antibody
  • CST, 7074 Anti- Rabbit IgG antibody conjugated with horseradish peroxidase
  • TM4SF1AS1 and PURA and YB1 increased in band intensity due to the formation of the complex (the left figure in FIG. 7), and the band disappeared in the absence of TM4SF1AS1 (the right figure in FIG. 7). Therefore, it was estimated that PURA and YB1 interact through TM4SF1AS1 RNA.
  • Example 11 Impact on cell proliferation ability by knockdown using siRNA of PURA and YB1
  • the design algorithms of Rossetta Inpharmatics and siDirect were used for the design of siRNA targeting PURA and YB1.
  • the sense strand for example, 5′-CCACCUAUCGCAACUCCAUTT-3 ′ (SEQ ID NO: 6) or 5′-GCUACUGCAGGGUGAGGAATT-3 ′ (SEQ ID NO: 7) of siRNA against PURA, 5′-CCUAUGGGCGUCGACCACATT-3 ′ (sequence of siRNA against YB1) No.
  • siRNA designed to target PURA or YB1 was transfected into gastric cancer cell line HSC45 by the lipofectamine method. MTT assay was performed on cells in which PURA or YB1 was knocked down by transfection. The results are shown in FIG. In gastric cancer cells (HSC45), siRNA (siPURA — 0411 (SEQ ID NO: 6, 8), siPURA — 0412 (SEQ ID NO: 7, 9), YBX — 7064 (SEQ ID NO: 10, 12), and YBX — 7065 (SEQ ID NO: 11, 13)) (20 nM) By using and knocking down PURA (left figure) or YB1 (right figure), the cell proliferation ability was significantly reduced.
  • Example 12 Search for downstream gene of TM4SF1AS1 RNA was extracted from gastric cancer cell line HSC45 knocked down TM4SF1AS1, cRNA was synthesized, and then microarray experiment to SurePrint G3 Human GE 8x60K V2 microarray (Agilent Technologies) was performed (FIG. 9). .
  • GeneSpring GX version 13 was used for data analysis.
  • immune response genes described in Table 1 below were accumulated in 649 genes whose expression was suppressed (Gene Ontology analysis).
  • siRNA si-TM4SF1AS1 # 2 (SEQ ID NO: 2, 4) and si-TM4SF1AS1 # 3 (SEQ ID NO: 3, 5)
  • RT-PCR expression analysis
  • the expression of immune response genes was actually suppressed
  • the expression of immune response genes was actually induced (FIG. 11).
  • siRNA si-PURA_ # 1 (SEQ ID NO: 6, 8) and si-PURA_ # 2 (SEQ ID NO: 7, 9) (20 nM) were used to knock down both TM4SF1AS1 and PURA. Compared with the case where TM4SF1AS1 alone was knocked down, the expression of immune response genes was further reduced (FIG. 12). Therefore, it was suggested that TM4SF1AS1 and PURA may be involved in the expression of immune response genes as an lncRNA-protein complex.
  • Example 13 Expression of TM4SF1AS1 in other cancer cells
  • TM4SF1AS1 RNA expression was analyzed in the same manner as in Example 3, TM4SF1AS1 was also highly expressed in breast cancer cells, liver cancer cells, and colon cancer cells. (FIG. 13). Therefore, also in cancer cell lines of other tissues, the expression of TM4SF1AS1 was enhanced, suggesting that it functions as an oncogene.
  • breast cancer cell lines (SK-BR-3, MDA-MB-231, MDA-MB-435S), liver cancer cell lines (Huh7, HLF, HT17, Li- 7, PLC / PRF / 5), colon cancer cell lines (SW620, HT29, DLD1, T84, WiDr) and pancreatic cancer cell line (Panc-2) were used for the knockout experiment.
  • siRNA siTM4SF1AS102 (SEQ ID NO: 2, 4)
  • 20 nM was used for breast cancer cell lines for SK-BR-3 and MDA-MB-435S, for liver cancer cell lines, Huh7, HLF, and Suppression of cell growth was confirmed for HT17 (FIGS.

Abstract

本明細書において、ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１の発現の抑制剤、ＰＵＲＡの発現の抑制剤、およびＹＢ１の発現の抑制剤の少なくとも１つを含むがん治療剤が提供される。

Description

長鎖ノンコーディングＲＮＡを標的とするがん治療剤およびがん診断方法
　本発明は、長鎖ノンコーディングＲＮＡを標的とするがん治療剤およびがん診断方法に関する。
　長鎖ノンコーディングＲＮＡ（ｌｏｎｇ　ｎｏｎ－ｃｏｄｉｎｇ　ＲＮＡ：ｌｎｃＲＮＡ）は、タンパク質をコードしない２００塩基以上の長さを有するＲＮＡである。ｌｎｃＲＮＡは、細胞増殖、アポトーシス、細胞分化や疾患（がん、心疾患、神経変性疾患など）などの様々な生命現象に関与している。ｌｎｃＲＮＡの発現様式には組織特異性や疾患特異性が見られることが知られている。
　ｌｎｃＲＮＡは臓器あるいは疾患特異的な発現パターンを示し、がんとの関わりも近年注目されている。１万種類以上存在するｌｎｃＲＮＡの大部分は機能が未だ不明であるが、発がんにおけるｌｎｃＲＮＡの機能を明らかにすることにより、新たな診断・治療法の開発につながることが期待されている。しかしながら、ｌｎｃＲＮＡを標的にした臨床への応用例は、現在のところ存在しない。
　特許文献１には、ＴＭ４ＳＦ１を白血病幹細胞マーカー遺伝子として使用する、急性骨髄性白血病の初発または再発を予測するための方法が記載されているが、ＴＭ４ＳＦ１はmRNAであり、長鎖noncoding RNAであるＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１は記載されておらず、これらの配列も異なるものである。
　非特許文献１には、慢性胃炎および胃癌に関連する長鎖noncoding RNAの同定について記載されているが、その具体的な遺伝子およびその機能については何ら記載されていない。
特開２０１５－２３１３７５号公報
北嶋洋志、P-1225慢性胃炎および胃癌に関連する長鎖noncoding RNAの同定、第75回日本癌学会学術総会、2016年10月6日
　本発明は、発がんにおけるｌｎｃＲＮＡの機能を明らかにすることにより、がんの新たな診断・治療法を提供することを課題とする。
　本発明者らは、上記課題を解決するため、鋭意研究を重ねる中で、ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１の転写体ＲＮＡが、胃がんの前がん病変の段階から発現していること、そして、この発現を抑制することにより、細胞増殖抑制効果を発揮することを見出し、本発明を完成するに至った。
　すなわち、本発明は、以下に関するものである。
（１）ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１の発現の抑制剤、ＰＵＲＡの発現の抑制剤、およびＹＢ１の発現の抑制剤の少なくとも１つを含むがん治療剤。
（２）ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１の発現の抑制剤を含む、（１）に記載のがん治療剤。
（３）ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１の発現の抑制剤が、ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１の転写体ＲＮＡに対するｓｉＲＮＡ、アンチセンス核酸、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである、（２）に記載のがん治療剤。
（４）ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１の発現の抑制剤がｓｉＲＮＡである、（３）に記載のがん治療剤。
（５）ＰＵＲＡの発現の抑制剤およびＹＢ１の発現の抑制剤をさらに含む、（２）～（４）のいずれかに記載のがん治療剤。
（６）がんが、胃がん、乳がん、肝がん、大腸がん、または膵がんである、（１）～（５）のいずれかに記載のがん治療剤。
（７）ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１の転写体ＲＮＡに対するｓｉＲＮＡ、アンチセンス核酸、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡを発現するベクター。
（８）（７）に記載のベクターを導入した細胞。
（９）（１）～（６）のいずれかに記載のがん治療剤、（７）に記載のベクター、または、（８）に記載の細胞を含む、がんを治療するための医薬組成物。
（１０）ヒト対象ががんを発症するか否かを予測するための指標として、ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１の転写体ＲＮＡの発現量を測定する方法であって、
（ａ）ヒト対象由来の試験サンプル中のＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１の転写体ＲＮＡの発現量を決定すること、
（ｂ）ヒト健常者由来の対照サンプル中のＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１の転写体ＲＮＡの発現量を決定すること、および
（ｃ）ヒト対象由来の試験サンプル中のＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１の転写体ＲＮＡの発現量が、ヒト健常者由来の対照サンプル中のＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１の転写体ＲＮＡの発現量よりも２倍を超える場合に、ヒト対象ががんを発症すると予測すること、
を含む、方法。
（１１）（ｃ）において、ヒト対象由来の試験サンプル中のＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１の転写体ＲＮＡの発現量が、ヒト健常者由来の対照サンプル中のＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１の転写体ＲＮＡの発現量よりも３倍を超える場合に、ヒト対象ががんを発症すると予測する、（１０）に記載の方法。
（１２）がんが、胃がん、乳がん、肝がん、大腸がん、または膵がんである、（１０）または（１１）に記載の方法。
（１３）ヒト対象が前がん状態である、（１０）～（１２）のいずれかに記載の方法。
　本発明のがん治療剤および医薬組成物は、ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１の発現を抑制することにより、胃がん、乳がん、肝がん、大腸がん、および膵がんなどのがんにおいて、細胞増殖抑制効果を発揮することができる。
　本発明の方法により、前がん段階において、がん発症の可能性を予測することができる。
図１の左図は、健常者および胃がん患者由来の背景粘膜のヒストン修飾（H3K4me3）プロファイル（ChIP-Seq法）を示す。図１の中央図は、遺伝子アノテーションを示す。H3K4me3プロファイルで検出された３５，３８７個のピークのうち、１５１２個が上方制御され、３１４０個が下方制御され、１１３９８個は不変であった。図１の右図は、H3K4me3による転写開始点の活性領域の一例を示す。ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１は、がん患者において活性化され、健常者で活性化されていなかった。 図２の左図は、各胃がん細胞株から得たtotal RNAについて行った定量ＲＴ－ＰＣＲの結果を示す。ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１に対応するTCONS_00006264が、正常胃粘膜細胞と比較して、胃がん細胞（MKN45、HSC45、JRST）において多く発現されていた。図２の右上図は、ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１と、そのｍＲＮＡであるＴＭ４ＳＦ１とのゲノム上での位置関係を示す。図２の右下図は、各胃がん細胞株におけるＴＭ４ＳＦ１とＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１の発現解析の結果を示す。ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１（右側）が、ごく少数の胃がん細胞株を除き、ＴＭ４ＳＦ１（左側）よりも多く発現していた。縦軸は、正常な胃と比較した胃がん細胞の相対的な発現を示し、横軸は、胃がん細胞の名称を示す。 図２Ｂは、各胃がんステージのがん組織（臨床検体）から得たtotal RNAについて行った定量ＲＴ－ＰＣＲの結果を示す。図２Ｂの左図は、各胃がんステージのがん組織（臨床検体）と健常者の正常胃粘膜におけるＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１の発現を示し、右図は、各胃がんステージの胃がん患者のがん部と非がん部におけるＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１の発現を示す。 図３は、ＭＴＴアッセイを用いた、ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１（ｌｎｃＲＮＡ）のノックダウン（ＫＤ）による細胞増殖能への影響を示す。左図が、胃がん細胞株HSC45、中央図がMKN45、右図がSNU1を示す。各図において、縦軸は、細胞生存率（OD450）を示し、横軸は、ノックダウン後の日数を示す。
図４は、トランスフェクションによりＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１をノックダウンした細胞についての細胞遊走アッセイ（左図）およびマトリゲル浸潤アッセイ（右図）の結果を示す。左図の縦軸は、遊走細胞（％）を示し、横軸は、ノックダウンに使用したＲＮＡの種類を示す。右図の縦軸は、浸潤細胞（％）を示し、横軸は、ノックダウンに使用したＲＮＡの種類を示す。 図５は、マウス異種移植におけるＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１過剰発現による腫瘍形成能の評価を示す。左上図は、SNU638安定細胞株（４×１０６細胞）を移植後３１日目に取り出した腫瘍を示す（写真）。右上図の縦軸は、ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１過剰発現株およびコントロール株（ＧＦＰ）の腫瘍体積(mm3)を示し、横軸は、細胞株移植後の日数を示す。左下図は、SNU638安定細胞株（１×１０７細胞）を移植後３０日目に取り出した腫瘍を示す（写真）。右下図の縦軸は、ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１過剰発現株およびコントロール株（ＧＦＰ）の腫瘍体積(mm3)を示し、横軸は、細胞株移植後の日数を示す。 図６は、マウス異種移植におけるＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１ノックダウン（ＫＤ）による腫瘍抑制効果を示す。左図は、HSC45細胞株（２．７×１０６細胞）を移植後３０日目に取り出した腫瘍を示す（写真）。右図の縦軸は、ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１ノックダウン細胞株および非ノックダウン株の腫瘍体積(mm3)を示し、横軸は、細胞株移植後の日数を示す。 図７は、ＰＵＲＡまたはＹＢ１に対するウエスタンブロッティングを示す。ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１とＰＵＲＡおよびＹＢ１は、複合体の形成により、バンド強度が増大し（左図）、ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１の非存在下では、バンドが消滅した（右図）。 図８は、ＰＵＲＡまたはＹＢ１のノックダウンによる細胞増殖能への影響を示す。左図の縦軸は、正常細胞と比較した細胞生存率を示し、横軸は、ノックダウン後の日数を示す。
図９は、ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１をノックダウンした胃がん細胞株HSC45から抽出したＲＮＡのｃＲＮＡを合成後のマイクロアレイ実験の結果を示す。 図１０は、ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１のノックダウンにより、免疫応答遺伝子の発現が抑制されることを示す。縦軸は、胃がん細胞（対照ｓｉＲＮＡ投与）と比較した胃がん細胞（ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１　ｓｉＲＮＡ投与）の相対的な発現を示し、横軸は、免疫応答遺伝子の名称を示す。 図１１は、ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１の過剰発現により、免疫応答遺伝子の発現が誘導されることを示す。縦軸は、胃がん細胞（ＧＦＰ発現）と比較した胃がん細胞（ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１過剰発現）の相対的な発現を示し、横軸は、免疫応答遺伝子の名称を示す。 図１２は、ＰＵＲＡのノックダウンにより、ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１過剰発現細胞株において、免疫応答遺伝子の発現が抑制されることを示す。縦軸は、胃がん細胞（対照ｓｉＲＮＡ投与）と比較した胃がん細胞（ＰＵＲＡ　ｓｉＲＮＡ投与）の相対的な発現を示し、横軸は、免疫応答遺伝子の名称を示す。
図１３は、各がん細胞株におけるＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１の発現解析の結果を示す。ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１が、各種乳がん細胞（左図）、各種肝がん細胞（中央図）、各種大腸がん細胞（右図）において、多く発現していた。縦軸は、アクチンと比較したＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１の相対的な発現を示し、横軸は、各種がん細胞の名称を示す。 図１４の左図は、乳がん細胞株において、ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１のノックダウンにより、２日後に、ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１の発現が抑制されることを示す。縦軸は、乳がん細胞（対照ｓｉＲＮＡ投与）と比較した乳がん細胞（ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１　ｓｉＲＮＡ投与）の相対的な発現を示し、横軸は、乳がん細胞株の名称を示す。図１４の右図は、ＭＴＴアッセイを用いた、ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１（ｌｎｃＲＮＡ）のノックダウン（ＫＤ）による細胞増殖能への影響を示す。右上図が、乳がんSK-BR-3細胞株、右下図がMDA-MB-435S細胞株を示す。各図において、縦軸は、細胞生存率（OD450）を示し、横軸は、ノックダウン後の日数を示す。
図１５の左図は、肝がん細胞において、ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１のノックダウンにより、２日後に、ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１の発現が抑制されることを示す。縦軸は、肝がん細胞（対照ｓｉＲＮＡ投与）と比較した肝がん細胞（ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１　ｓｉＲＮＡ投与）の相対的な発現を示し、横軸は、肝がん細胞株の名称を示す。図１５の右図は、ＭＴＴアッセイを用いた、ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１（ｌｎｃＲＮＡ）のノックダウン（ＫＤ）による細胞増殖能への影響を示す。右上図が、肝がんHuh7細胞株、右下図がHT17細胞株を示す。各図において、縦軸は、細胞生存率（OD450）を示し、横軸は、ノックダウン後の日数を示す。 図１６の左図は、肝がん細胞において、ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１のノックダウンにより、２日後に、ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１の発現が抑制されることを示す。縦軸は、肝がん細胞（対照ｓｉＲＮＡ投与）と比較した肝がん細胞（ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１　ｓｉＲＮＡ投与）の相対的な発現を示し、横軸は、肝がん細胞株の名称を示す。図１６の右上図は、ＭＴＴアッセイを用いた、ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１（ｌｎｃＲＮＡ）のノックダウン（ＫＤ）による細胞増殖能への影響を示す。右上図は、肝がんHLF細胞株を使用した。縦軸は、細胞生存率（OD450）を示し、横軸は、ノックダウン後の日数を示す。図１６の右下図は、トランスフェクションによりＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１をノックダウンした細胞についての細胞遊走アッセイ（左図）およびマトリゲル浸潤アッセイ（右図）の結果を示す。左図の縦軸は、遊走細胞（％）を示し、横軸は、ノックダウンに使用したＲＮＡの種類を示す。右図の縦軸は、浸潤細胞（％）を示し、横軸は、ノックダウンに使用したＲＮＡの種類を示す。 図１７の左図は、膵がん細胞において、ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１のノックダウンにより、２日後に、ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１の発現が抑制されることを示す。縦軸は、膵がん細胞（対照ｓｉＲＮＡ投与）と比較した膵がん細胞（ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１　ｓｉＲＮＡ投与）の相対的な発現を示し、横軸は、膵がん細胞株の名称を示す。図１７の右図は、ＭＴＴアッセイを用いた、ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１（ｌｎｃＲＮＡ）のノックダウン（ＫＤ）による細胞増殖能への影響を示す。縦軸は、細胞生存率（OD450）を示し、横軸は、ノックダウン後の日数を示す。
　本明細書において、ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１の発現、ＰＵＲＡの発現、およびＹＢ１の発現の少なくとも１つを抑制するための治療剤、例えば、ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１の発現を抑制するための治療剤、組成物、方法およびキット、ならびにＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１の転写体ＲＮＡの発現量を測定することを含むがんの検出方法が提供される。
　本治療剤、組成物、方法およびキットは、ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１の転写体ＲＮＡ、例えば配列番号１によって例示されるＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１の転写体ＲＮＡを結合する核酸分子（例えば短鎖干渉核酸（ｓｉＮＡ）、短鎖干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、二本鎖（double-stranded）ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）または短鎖ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ））を使用することを含んでいてもよい。
　また、本明細書において、ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１の高発現に関連する疾患、状態または障害、例えば細胞増殖疾患、腫瘍、がんなどを治療および／または予防するための治療剤、組成物、方法およびキットも提供される。
　さらに、本明細書において、ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１の高発現に関連する疾患、状態または障害、例えば細胞増殖疾患、腫瘍、がんなどを診断するための方法も提供される。
１．本発明のがん治療剤
　本発明の一側面は、ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１の発現の抑制剤、ＰＵＲＡの発現の抑制剤、およびＹＢ１の発現の抑制剤の少なくとも１つを含むがん治療剤、例えば、ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１の発現の抑制剤を含むがん治療剤に関する。
　本発明のがん治療剤は、例えば、ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１の発現の抑制剤を含む。長鎖ノンコーディングＲＮＡのＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１のアノテーションデータは、Human Body Map(Broad Institute)から取得することができる。本明細書において、ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１の転写体ＲＮＡは、配列番号１によって示される。
　本発明において、ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１の転写体ＲＮＡは、例えば、ヒト由来であり、配列番号１で示される塩基配列またはこの各塩基配列において１若しくは数個のヌクレオチドの欠失、置換、付加又は挿入を含む塩基配列、或いは、上記の各塩基配列と７０％以上、８０％以上又は９０％以上、好ましくは９５％以上、さらに好ましくは９８％以上もしくは９９％以上の配列同一性を有する塩基配列であってもよい。
　本明細書において、「数個」とは、２～１０個、好ましくは２～５個、より好ましくは２～３個の塩基数をいう。また、配列同一性は、例えばＢＬＡＳＴなどの公知のアルゴリズムを使用して決定することができる。
　本発明において、ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１の発現の抑制剤は、例えば、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）作用を有する、ｓｉＲＮＡ（例えば、5’- CCAUCAGUUGGGAGUUGAAGA -3’（配列番号２）または5’-GCCAAGUGUCCGAGAUGCAAC-3’（配列番号３））若しくはその前駆体ＲＮＡ、又はそれらの修飾ＲＮＡ、或いは、ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１遺伝子の転写体ＲＮＡに対するｓｉＲＮＡをコードするＤＮＡを含むベクターを包含する。また、本発明において、ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１の発現の抑制剤は、例えば、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡなどであってもよい。ベクターは、アンチセンスＲＮＡ若しくはアンチセンスＤＮＡ、該アンチセンスＲＮＡをコードするＤＮＡ若しくは該アンチセンスＤＮＡを含んでいてもよい。
　ｓｉＲＮＡは、ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１遺伝子の転写体ＲＮＡの一部に相補的な１８～２５ヌクレオチド、好ましくは２０～２４ヌクレオチド、さらに好ましくは２１～２３ヌクレオチドからなる、かつＲＮＡｉ（ＲＮＡ干渉）作用を有する、センスＲＮＡとアンチセンスＲＮＡとからなる二本鎖ＲＮＡであってもよい。センスＲＮＡとアンチセンスＲＮＡの各３'末端には、２～５ヌクレオチド、好ましくは２ヌクレオチドの突出末端を有していてもよい。
　本発明において、ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１遺伝子の発現の抑制剤は、例えば、センス鎖と、アンチセンス鎖とを含むｓｉＲＮＡの組み合わせであってもよく、例えば、センス鎖の5’-CCAUCAGUUGGGAGUUGAAGA-3’（配列番号２）とアンチセンス鎖の5’-UUCAACUCCCAACUGAUGGAA-3’（配列番号４）の組合せ、または、センス鎖の5’-GCCAAGUGUCCGAGAUGCAAC-3’（配列番号３）とアンチセンス鎖の5’-UGCAUCUCGGACACUUGGCAG-3’（配列番号５）の組合せが好ましい。
　本発明の一態様において、本発明のがん治療剤は、ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１の発現の抑制剤を含まずに、ＰＵＲＡ（purine-rich element binding protein A）の発現の抑制剤およびＹＢ１（Y box binding protein）の発現の抑制剤の両方を含んでいてもよいし、これらのいずれかを単独で含んでいてもよい。
　本発明の別の態様において、本発明のがん治療剤は、ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１の発現の抑制剤に加えて、ＰＵＲＡの発現の抑制剤およびＹＢ１の発現の抑制剤を含んでいてもよい。
　ＰＵＲＡ、ＰＵＲＢ、ＹＢ１の複合体は転写調節に関与することが報告されている(J Biol Chem, 2008; Mol Cell Biol, 2007)。ＰＵＲＡの発現の抑制剤およびＹＢ１の発現の抑制剤は、それぞれ、例えば、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）作用を有する、ｓｉＲＮＡ（例えば、PURAに対するsiRNAの5’-CCACCUAUCGCAACUCCAUTT-3’（配列番号６）または5’-GCUACUGCAGGGUGAGGAATT-3’（配列番号７）、YB１に対するsiRNAの5’-CCUAUGGGCGUCGACCACATT-3’（配列番号１０）または 5’-GUUCCAGUUCAAGGCAGUATT-3’（配列番号１１））若しくはその前駆体ＲＮＡ、又はそれらの修飾ＲＮＡ、或いは、ＰＵＲＡおよびＹＢ１遺伝子の転写体ＲＮＡに対するｓｉＲＮＡをコードするＤＮＡを含むベクターを包含する。また、本発明において、ＰＵＲＡまたはＹＢ１の発現の抑制剤は、例えば、ｓｈＲＮＡであってもよい。ベクターは、アンチセンスＲＮＡ若しくはアンチセンスＤＮＡ、該アンチセンスＲＮＡをコードするＤＮＡ若しくは該アンチセンスＤＮＡを含んでいてもよい。 
　ＰＵＲＡおよびＹＢ１に対するｓｉＲＮＡは、ＰＵＲＡおよびＹＢ１遺伝子の転写体ＲＮＡの一部に相補的な１８～２５ヌクレオチド、好ましくは２０～２４ヌクレオチド、さらに好ましくは２１～２３ヌクレオチドからなる、かつＲＮＡｉ（ＲＮＡ干渉）作用を有する、センスＲＮＡとアンチセンスＲＮＡとからなる二本鎖ＲＮＡであってもよい。センスＲＮＡとアンチセンスＲＮＡの各３'末端には、２～５ヌクレオチド、好ましくは２ヌクレオチドの突出末端を有していてもよい。
　本発明において、ＰＵＲＡおよびＹＢ１遺伝子の発現の抑制剤は、例えば、センス鎖と、アンチセンス鎖とを含むｓｉＲＮＡの組合せであってもよく、例えば、ＰＵＲＡに対するsiRNAのセンス鎖の5’-CCACCUAUCGCAACUCCAUTT-3’（配列番号６）とアンチセンス鎖の5’-AUGGAGUUGCGAUAGGUGGTT-3’（配列番号８）の組合せ、または、センス鎖の5’-GCUACUGCAGGGUGAGGAATT-3’（配列番号７）とアンチセンス鎖の5’-UUCCUCACCCUGCAGUAGCTT-3’（配列番号９）の組合せ、あるいは、YB１に対するsiRNAのセンス鎖の5’-CCUAUGGGCGUCGACCACATT-3’（配列番号１０）とアンチセンス鎖の5’-UGUGGUCGACGCCCAUAGGTT-3’（配列番号１２）との組合せ、または、センス鎖の5’-GUUCCAGUUCAAGGCAGUATT-3’（配列番号１１）とアンチセンス鎖の5’-UACUGCCUUGAACUGGAACTT-3’（配列番号１３）の組合せであってもよい。
　本発明の治療剤の細胞への導入は、任意の既知の導入手法、例えば、限定されずに、リポフェクタミン法、リポフェクション法、リン酸カルシウム法、超音波導入法、エレクトロポレーション法、パーティクルガン法、ウイルスベクター（例えば、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクターまたはレトロウイルスベクターなど）を利用する方法、またはマイクロインジェクション法などを用いることができる。
　ウイルスベクターを使用する場合、ウイルスの力価としては１×１０３～１×１０１５ｐ．ｆ．ｕ．（プラーク形成単位）であってもよく、好ましくは１×１０５～１×１０１３、より好ましくは１×１０７～１×１０１１、さらに好ましくは１×１０８～１×１０１０で用いることができる。
　上記核酸分子は、裸の核酸として使用しても、種々の核酸構築物またはベクターに組み込んで使用してもよい。ベクターとしては、プラスミドベクター、ファージベクター、ファージミドベクター、コスミドベクター、ウイルスベクター等の公知の任意のものを利用することができる。核酸構築物またはベクターは、例えば哺乳動物、微生物、ウイルス、または昆虫遺伝子から誘導される適当な転写または翻訳制御配列を少なくとも含んでいることが好ましい。かかる制御配列は、遺伝子発現において調節的役割を有する配列、例えば転写プロモーターまたはエンハンサー、転写を調節するためのオペレーター配列、メッセンジャーＲＮＡ内部のリボゾーム結合部位をコードしている配列、ならびに、転写、翻訳開始または転写終了を調節する適切な配列を包含する。
２．本発明の医薬組成物
　本発明はまた、上記の治療剤を含む医薬組成物に関する。上記の治療剤は、がん細胞の増殖を抑制することができるため、医薬組成物の有効成分として有用である。本発明の医薬組成物は、ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１の発現の抑制剤に加えて、ＰＵＲＡの発現の抑制剤およびＹＢ１の発現の抑制剤を含んでいてもよいし、ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１の発現の抑制剤を含まずに、ＰＵＲＡの発現の抑制剤およびＹＢ１の発現の抑制剤の両方を含んでいてもよいし、これらのいずれかを単独で含んでいてもよい。本発明の医薬組成物は、上記の治療剤と、１または２以上の薬学的に許容し得る界面活性剤、担体、希釈剤および／または賦形剤を含んでもよい。薬学的に許容し得る担体、希釈剤等は医薬分野でよく知られており、例えば、その全体を本明細書に援用するRemington's Pharmaceutical Sciences, 18th Ed., Mack Publishing Co., Easton, PA (1990)などに記載されている。 
　上記医薬組成物は、限定されずに、上記のＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１、ＰＵＲＡ、およびＹＢ１の高発現に関連する疾患や、細胞増殖性疾患などの処置に用いることができる。したがって、本発明はまた、ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１、ＰＵＲＡ、およびＹＢ１の高発現が関与する疾患の処置のための有効量の上記のＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１、ＰＵＲＡ、およびＹＢ１の転写体ＲＮＡの抑制剤を含む医薬組成物に関する。
　細胞増殖性疾患としては、限定されずに、例えば、良性腫瘍または悪性腫瘍などを含む。本発明の一態様において、細胞増殖性疾患はがんである。本発明の一態様において、本発明の医薬組成物は、がん細胞の細胞増殖能力を、例えば、ＭＴＴアッセイにおいて、正常細胞の２分の１以下、３分の１以下に抑制することができる。
　本発明が対象とするがんとしては、ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１、ＰＵＲＡ、およびＹＢ１の転写体ＲＮＡが発現している限り限定されないが、例えば、線維肉腫、悪性線維性組織球腫、脂肪肉腫、横紋筋肉腫、平滑筋肉腫、血管肉腫、カポジ肉腫、リンパ管肉腫、滑膜肉腫、軟骨肉腫、骨肉腫などの肉腫、脳腫瘍、頭頚部癌、乳癌、肺癌、食道癌、胃癌、十二指腸癌、虫垂癌、大腸癌、直腸癌、肝癌、膵癌、胆嚢癌、胆管癌、肛門癌、腎癌、尿管癌、膀胱癌、前立腺癌、陰茎癌、精巣癌、子宮癌、卵巣癌、外陰癌、膣癌、皮膚癌などの癌腫、さらには白血病や悪性リンパ腫などが挙げられる。
　がん細胞がＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１、ＰＵＲＡ、およびＹＢ１を発現しているか否かは、ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１、ＰＵＲＡ、およびＹＢ１の転写体ＲＮＡの発現を、遺伝子レベルで検出することにより判断できる。具体的には、遺伝子レベルでは、例えば、ノーザンブロッティング法、ＲＮａｓｅプロテクションアッセイ、ＲＴ－ＰＣＲ、リアルタイムＰＣＲ等のＰＣＲ法、in situハイブリダイゼーション法、in vitro転写法等の任意の公知の遺伝子発現解析法により検出することができる。本発明の一態様において、ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１、ＰＵＲＡ、およびＹＢ１の転写体ＲＮＡの発現量は、正常細胞に比べ、２倍以上、好ましくは３倍以上、より好ましくは５倍以上、さらに好ましく１０倍以上、特に好ましくは２０倍以上増加している。
　本発明の医薬組成物は、対象とする疾患を処置するのに有用な他の作用物質、例えば抗腫瘍剤、抗炎症剤などをさらに含んでもよい。
　抗腫瘍剤としては、限定されずに、例えば、イホスファミド、ニムスチン（例えば、塩酸ニムスチン）、シクロホスファミド、ダカルバジン、メルファラン、ラニムスチン等のアルキル化剤、ゲムシタビン（例えば、塩酸ゲムシタビン）、エノシタビン、シタラビン・オクホスファート、シタラビン製剤、テガフール・ウラシル、テガフール・ギメラシル・オテラシルカリウム配合剤（例えば、ＴＳ－１）、ドキシフルリジン、ヒドロキシカルバミド、フルオロウラシル、メトトレキサート、メルカプトプリン等の代謝拮抗剤、イダルビシン（例えば、塩酸イダルビシン）、エピルビシン（例えば、塩酸エピルビシン）、ダウノルビシン（例えば、塩酸ダウノルビシン、クエン酸ダウノルビシン）、ドキソルビシン（例えば、塩酸ドキソルビシン）、ピラルビシン（例えば、塩酸ピラルビシン）、ブレオマイシン（例えば、塩酸ブレオマイシン）、ペプロマイシン（例えば、硫酸ペプロマイシン）、ミトキサントロン（例えば、塩酸ミトキサントロン）、マイトマイシンＣ等の抗腫瘍性抗生物質、エトポシド、イリノテカン（例えば、塩酸イリノテカン）、ビノレルビン（例えば、酒石酸ビノレルビン）、ドセタキセル（例えば、ドセタキセル水和物）、パクリタキセル、ビンクリスチン（例えば、硫酸ビンクリスチン）、ビンデシン（例えば、硫酸ビンデシン）、ビンブラスチン（例えば、硫酸ビンブラスチン）等のアルカロイド、アナストロゾール、タモキシフェン（例えば、クエン酸タモキシフェン）、トレミフェン（例えば、クエン酸トレミフェン）、ビカルタミド、フルタミド、エストラムスチン（例えば、リン酸エストラムスチン）等のホルモン療法剤、カルボプラチン、シスプラチン（ＣＤＤＰ）、ネダプラチン等の白金錯体、サリドマイド、ネオバスタット、ベバシズマブ等の血管新生阻害剤、Ｌ－アスパラギナーゼなどが挙げられる。
　抗炎症剤としては、限定されずに、ステロイド系抗炎症剤（プレドニゾロン、ベクロメタゾン、ベタメタゾン、フルチカゾン、デキサメタゾン、ヒドロコルチゾン等）や非ステロイド系抗炎症剤（アセチルサリチル酸、ロキソプロフェン、アセトアミノフェン、ケトプロフェン、チアプロフェン酸、スプロフェン、トルメチン、カルプロフェン、ベノキサプロフェン、ピロキシカム、ベンジダミン、ナプロキセン、ジクロフェナク、イブプロフェン、ジフルニサール、アザプロパゾン等）、炎症性サイトカインの発現を抑制するＲＮＡｉ分子（例えば、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｄｄＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｐｉＲＮＡ、ｒａｓｉＲＮＡなど）、アンチセンス核酸などの物質、および／または炎症性サイトカインの作用を抑制する薬物、例えば、炎症性サイトカインに対する抗体や、炎症性サイトカインの受容体拮抗剤などが挙げられる。
　本発明のがん治療剤、医薬組成物などにおいて、２種以上のＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１、ＰＵＲＡ、およびＹＢ１の発現の抑制剤を組み合わせて用いる場合、２種以上の分子を単一の組成物に含めても、複数の組成物に別々に含ませ、それらを組み合わせて用いてもよい。例えば、核酸分子であれば、２種以上の核酸分子を単一の核酸構築物またはベクターに組み込んでも、それぞれ１種類ずつの核酸分子を含む複数種の核酸構築物またはベクターの組み合わせとして調製してもよい。
　本発明の種々の態様において、上記のがん治療剤は、種々の薬物送達担体に担持させて使用することもできる。かかる担体としては、限定されずに、例えば、ポリマーナノ粒子、ポリマーミセル、デンドリマー、リポソーム、ウイルスナノ粒子、カーボンナノチューブ等が挙げられる（Cho K. et al., Clin Cancer Res. 2008 Mar 1;14(5):1310-6など参照）。
　本発明の治療剤や医薬組成物は、経口および非経口の両方を包含する種々の経路、たとえば、限定することなく、経口、静脈内、筋肉内、皮下、局所、直腸、腫瘍内、動脈内、門脈内、骨髄内、歯髄内、舌下、口腔内、心室内、経粘膜、経皮、鼻内、腹腔内、肺内および子宮内等の経路で投与してもよく、各投与経路に適した剤形に製剤してもよい。かかる剤形および製剤方法は任意の公知のものを適宜採用することができる（たとえば、標準薬剤学、渡辺喜照ら編、南江堂、２００３年、上記Remington’s Pharmaceutical Sciencesなどを参照）。 
　例えば、経口投与に適した剤形としては、限定することなく、散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、液剤、懸濁剤、乳剤、ゲル剤、シロップ剤などが挙げられ、また非経口投与に適した剤形としては、溶液性注射剤、懸濁性注射剤、乳濁性注射剤、用時調製型注射剤などの注射剤が挙げられる。非経口投与用製剤は、水性または非水性の等張性無菌溶液または懸濁液の形態であることができる。
３．本発明のキット
　本発明は、本発明の各種剤または組成物に含まれ得る活性成分を、単独でもしくは組み合わせて含む１個または２個以上の容器を含む組成物の調製キット、ならびに、そのようなキットの形で提供される各種剤または組成物の必要構成要素にも関する。本発明のキットは、上記のほか、本発明の治療剤または医薬組成物の調製方法や投与方法などが記載された指示、例えば説明書や、ＣＤ、ＤＶＤ等の電子記録媒体等を含んでいてもよい。
４．本発明のがん診断方法
　本発明の一態様は、ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１の転写体ＲＮＡを標的とするがんの診断方法に関する。
　本発明の一態様は、ヒト対象ががんを発症するか否かを予測するための指標として、ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１の転写体ＲＮＡの発現量を測定する方法であって、
（ａ）ヒト対象由来の試験サンプル中のＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１の転写体ＲＮＡの発現量を決定すること、
（ｂ）ヒト健常者由来の対照サンプル中のＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１の転写体ＲＮＡの発現量を決定すること、および
（ｃ）ヒト対象由来の試験サンプル中のＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１の転写体ＲＮＡの発現量が、ヒト健常者由来の対照サンプル中のＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１の転写体ＲＮＡの発現量よりも２倍を超える場合に、ヒト対象ががんを発症すると予測すること、
を含む。
　本発明の別の一態様において、（ｃ）において、ヒト対象由来の試験サンプル中のＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１の転写体ＲＮＡの発現量が、ヒト健常者由来の対照サンプル中のＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１の転写体ＲＮＡの発現量よりも、例えば、３倍、５倍、１０倍、または２０倍を超える場合に、ヒト対象ががんを発症すると予測される。
　本発明の診断方法において、がんは、ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１の転写体ＲＮＡを発現している限り限定されないが、例えば、胃がん、乳がん、肝がん、大腸がん、または膵がんであることが好ましく、例えば、ヒト対象は、前がん状態のヒト対象である。
５．本発明のがん処置方法
　本発明のさらなる態様は、本発明のＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１の発現の抑制剤、ＰＵＲＡの発現の抑制剤、およびＹＢ１の発現の抑制剤の少なくとも１つを含むがん治療剤、例えば、ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１の発現の抑制剤を含むがん治療剤または医薬組成物を用いる疾患の処置方法に関する。本発明の処置方法は、本発明のＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１の発現の抑制剤、ＰＵＲＡの発現の抑制剤、およびＹＢ１の発現の抑制剤の少なくとも１つを含むがん治療剤または医薬組成物を対象に投与する工程を含む。投与される対象は、典型的には本発明のＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１の発現の抑制剤、ＰＵＲＡの発現の抑制剤、およびＹＢ１の発現の抑制剤等による処置を必要としている。かかる対象としては、限定されずに、例えば、上記のＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１、ＰＵＲＡ、およびＹＢ１の高発現に関連する疾患や、細胞増殖性疾患などを患っているか、これらの疾患を有すると診断されたか、これらの疾患を発症するリスクが高い対象である。したがって、本発明の処置方法は、本発明のＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１の発現の抑制剤、ＰＵＲＡの発現の抑制剤、およびＹＢ１の発現の抑制剤の少なくとも１つを含む治療剤または医薬組成物による処置を必要としている対象を同定する工程をさらに含んでもよい。細胞増殖性疾患の具体例は、医薬組成物に関して上記したとおりである。
　本発明の処置方法においては、本発明の治療剤または医薬組成物を、対象とする疾患を処置するのに有用な他の作用物質または処置方法と併用することができる。本発明の治療剤または医薬組成物により、化学療法や放射線治療に対するがんの感受性が改善することが期待される。疾患の処置において、本発明の治療剤または医薬組成物と併用し得る作用物質、例えば、例えば抗腫瘍剤、抗炎症剤などは、医薬組成物に関して上記したとおりである。また、本発明の処置方法は、放射線治療などの物理療法や外科手術などの外科的治療などと併用することができる。
　本発明の処置方法における有効量とは、例えば、疾患の症状を低減し、または疾患の進行を遅延もしくは停止する量であり、好ましくは、疾患を抑制し、または治癒する量である。また、投与による利益を超える悪影響が生じない量が好ましい。かかる量は、培養細胞などを用いたin vitro試験や、マウス、ラット、イヌまたはブタなどのモデル動物における試験により適宜決定することができ、このような試験法は当業者によく知られている。また、本発明の処置方法に用いる薬物の用量は当業者に公知であるか、または、上記の試験等により適宜決定することができる。
　本明細書に記載される本発明の処置方法において投与する活性成分の具体的な用量は、処置を要する対象に関する種々の条件、例えば、症状の重篤度、対象の一般健康状態、年齢、体重、対象の性別、食事、投与の時期および頻度、併用している医薬、治療への反応性、剤形、および治療に対するコンプライアンスなどを考慮して決定され得る。本発明の処置方法に用いる薬物の用量は、好ましくは、ヒトの場合、１回あたり、かつ成人１ｋｇ体重あたりｓｉＲＮＡ分子に換算して例えば約０．０１ｍｇ～約１，０００ｍｇである。本発明の処置方法に用いる薬物の濃度は、好ましくは、ｓｉＲＮＡの場合、１ｎＭ～２００μＭが好ましく、５ｎＭ～１８０μＭがより好ましく、１０ｎＭ～１６０μＭが特に好ましい。
　投与経路としては、経口および非経口の両方を包含する種々の経路、例えば、経口、静脈内、筋肉内、皮下、局所、腫瘍内、直腸、動脈内、門脈内、骨髄内、歯髄内、舌下、口腔内、心室内、経粘膜、経皮、鼻内、腹腔内、肺内および子宮内等の経路が含まれる。
　投与頻度は、用いる剤や組成物の性状や、上記のものを含む対象の条件によって異なるが、例えば、１日多数回（すなわち１日２、３、４回または５回以上）、１日１回、数日毎（すなわち２、３、４、５、６、７日毎など）、１週間毎、数週間毎（すなわち２、３、４週間毎など）であってもよい。
　本明細書で用いる場合、用語「対象」は、任意の生物個体を意味し、好ましくは動物、さらに好ましくは哺乳動物、さらに好ましくはヒトの個体である。本発明において、対象は健常であっても、何らかの疾患に罹患していてもよいものとするが、特定の疾患の処置が企図される場合には、典型的にはかかる疾患に罹患しているか、罹患するリスクを有する対象を意味する。
　また、用語「処置」は、本明細書で用いる場合、疾患の治癒、一時的寛解または予防などを目的とする医学的に許容される全ての種類の予防的および／または治療的介入を包含するものとする。例えば、「処置」の用語は、疾患の進行の遅延または停止、病変の退縮または消失、発症の予防または再発の防止などを含む、種々の目的の医学的に許容される介入を包含する。
　今回本発明者により、本発明の抑制剤が、ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１（配列番号１）の発現を抑制することにより、胃がん、乳がん、肝がん、大腸がん、膵がん細胞株において細胞増殖を抑制できること、そして、ＤＮＡあるいはＲＮＡ結合タンパク質であることが報告されているＰＵＲＡとＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１（配列番号１）との結合が阻害されて、結果として、免疫応答に関与する遺伝子群の発現の低下を生じることが明らかになった。
　したがって、本発明の抑制剤は、細胞増殖阻害以外に、免疫応答の惹起または維持の作用をもたらすことができる。したがって、本発明はまた、上記抑制剤を含む、上記作用を提供するための組成物、上記抑制剤の上記作用を提供するための組成物の製造における使用、上記作用を提供するための上記抑制剤、上記作用を提供するための有効量の上記抑制剤を含む組成物、ならびに、上記抑制剤の上記作用を提供するための使用にも関する。
　本発明を下記の実施例によってさらに具体的に説明するが、本発明の技術的範囲は、これらの実施例に限定されないものとする。
例１：胃がん細胞株及び臨床検体からのｌｎｃＲＮＡの取得
　胃がん細胞株（AGS, AZ521, HSC43, HSC45, JRST, KATOIII, MKN1, MKN7, MKN28, MKN45, MKN74, NCI-N87, NUGC3, NUGC4, SH101, SNU1, SNU638）、肝がん細胞株（Hep3B, HepG2, Huh1, Huh7, HT17, Li-7, HLE, HLF, PLC/PRF/5, JHH4）、大腸癌細胞株（CaCO2, Colo320, DLD1, HCT116, HT29, Lovo, RKO, SW48, SW480, SW620, T84, WiDr）、乳がん細胞株（MCF7, MDA-MB-157, MDA-MB-231, MDA-MB361, MDA-MB-435S, MDA-MB-468, SK-BR-3, T47D）、膵がん細胞株（Panc-1）を培養し解析に用いた。臨床検体については、上部消化管内視鏡による生検で得られた組織の一部から、腺管分離法により腺管を分離した（Nakamura S, Goto J, Kitayama M, Kino I (1994) Application of the crypt-isolation technique to flow-cytometric analysis of DNA content in colorectal neoplasms. Gastroenterology 106 (1):100-107）。臨床検体に関する解析は札幌医科大学の承認を得た。 
例２：ChIP-seq実験とデータ解析
　健常者の正常胃粘膜および胃がん患者の非がん部背景粘膜から腺管分離法で得た腺管成分を用いてChIP（クロマチン沈降）実験を行った（Maruyama R, Choudhury S, Kowalczyk A, Bessarabova M, Beresford-Smith B, Conway T, Kaspi A, Wu Z, Nikolskaya T, Merino VF, Lo PK, Liu XS, Nikolsky Y, Sukumar S, Haviv I, Polyak K (2011) Epigenetic regulation of cell type-specific expression patterns in the human mammary epithelium. PLoS genetics 7 (4):e1001369. doi:10.1371/journal.pgen.1001369）。転写開始点の活性化マーカーであるヒストン修飾H3K4me3に対する抗体を使用した。ChIP実験で得られたＤＮＡにアダプター配列を付加し、ＰＣＲで増幅後に次世代シーケンサーSOLiD4(Life Technologies)を用いて解析した。解析ソフトウェアMACS1.4を使用し、lncRNAのアノテーションデータはHuman Body Map(Broad Institute)から取得した。結果を図１に示す。
　健常個体と胃がん(GC)患者を比較した結果、上方制御されるアノテーションが１５１２個存在し、H3K4me3による転写開始点の活性領域の一例として、ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１（配列番号１）を見出した。
例３：ＲＮＡ抽出及び発現解析
　各胃がん細胞株からTrizolを用いてtotal RNAを抽出し、逆転写反応した。遺伝子毎に設計したプライマーを用いてSYBR法による定量ＲＴ－ＰＣＲを行った。正常胃粘膜のＲＮＡは市販のものを用いた。結果を図２Ａに示す。
　ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１に対応するTCONS_00006264が、正常胃粘膜細胞と比較して、胃がん細胞において多く発現されていることが分かった（図２Ａの左図）。また、長鎖ノンコーディングＲＮＡであるＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１は、そのｍＲＮＡであるＴＭ４ＳＦ１と、ゲノム上で近位に位置し、共発現することが予想された（図２Ａの右上図）。
　また、各胃がん細胞株におけるＴＭ４ＳＦ１とＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１の発現解析を行った結果、ごく少数の胃がん細胞株を除き、ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１とＴＭ４ＳＦ１が多くの細胞株で共に多く発現していた（図２Ａの右下図）。
　さらに、各胃がんステージのがん組織（臨床検体）からTrizolを用いてtotal RNAを抽出し、逆転写反応した。遺伝子毎に設計したプライマーを用いてSYBR法による定量ＲＴ－ＰＣＲを行った。正常胃粘膜のＲＮＡは市販のものを用いた。結果を図２Ｂに示す。健常者の正常胃粘膜または胃がん患者の非がん部との比較により、がん部ではＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１の発現が亢進することが示唆された。胃がんでは、各ステージ（Ｉ～ＩＶ）において、正常組織と比較して、ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１の発現が亢進されるので、胃がんの初期段階での検出、胃がんの予防、早期治療に有効であることが示唆された。
例４：ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１を標的に設計したｓｉＲＮＡの設計
　ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１を標的とするｓｉＲＮＡの設計にはRossetta InpharmaticsやsiDirectのデザインアルゴリズムを用いた。これによりセンス鎖（例えば、5’-CCAUCAGUUGGGAGUUGAAGA-3’（配列番号２）、5’-GCCAAGUGUCCGAGAUGCAAC-3’（配列番号３））と、アンチセンス鎖（例えば、5’-UUCAACUCCCAACUGAUGGAA-3’（配列番号４）、5’-UGCAUCUCGGACACUUGGCAG-3’（配列番号５））を用いた。 
　コントロールｓｉＲＮＡはシグマ社製Mission Negative control SIC-001を用いた（配列非公開）。 
例５：ノックダウン実験および機能解析
　リポフェクタミン法により、ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１を標的に設計したｓｉＲＮＡを胃がん細胞株にトランスフェクションした。トランスフェクションによりＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１をノックダウンした細胞について、定量ＲＴ－ＰＣＲ、ＭＴＴアッセイ、細胞遊走アッセイ、マトリゲル浸潤アッセイを行った。結果を図３，４に示す。
　胃がん細胞（HSC45、MKN45、SNU1）において、ｓｉＲＮＡ（ｓｉ－ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１＃２（配列番号２，４）およびｓｉ－ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１＃３（配列番号３，５））（２０ｎＭ）を用いて、ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１をノックダウンすることにより、細胞増殖能が有意に低下した（図３）。また、HSC45胃がん細胞株において、細胞遊走能力および浸潤能力が顕著に低下したため（図４）、ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１ががん遺伝子として機能していることが示唆された。
例６：ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１安定発現株の樹立
　ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１－ＧＦＰ発現ベクターまたはコントロールＧＦＰベクターを作成した。TM4SF1AS1についてはSGI-DNA社のDNA合成サービスより合成DNAを、プラスミドベクターについてはpBI-CMV2 (Clontech)を購入した。PCRで増幅したネオマイシン耐性遺伝子(NeoR)カセットをIn-fusion反応(Takara)によりpBI-CMV2に組み込んだpBI-CMV2 NeoRを、コントロールGFPベクターとした。さらに合成DNAをもとにPCRで増幅したTM4SF1AS1をIn-fusion反応によりpBI-CMV2 NeoRのMCS部位に組み込み、ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１－ＧＦＰ発現ベクターを作成した。
　胃がん細胞株SNU638にＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１－ＧＦＰ発現ベクターまたはコントロールＧＦＰベクターをトランスフェクションした。抗生物質ネオマイシンを添加し３週間選抜後、BD FACS Aria (BD Bioscience)を用いてＧＦＰ陽性細胞を分取した。 
例７：マウスゼノグラフト実験
　ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１－ＧＦＰ発現ベクターまたはコントロールＧＦＰベクターをトランスフェクションした胃がん細胞株SNU638を、ヌードマウス（BALB/cAJcl-nu）の左右背側部に皮下移植した。移植後に定期的に腫瘍サイズの測定を行った。結果を図５に示す。
　また、胃がん細胞株HSC45を、ヌードマウス（BALB/cAJcl-nu）の左右背側部に皮下移植した。移植後に定期的に腫瘍サイズの測定を行い、同時にAteloGene in vivo Transfection kit (KOKEN)を用いてＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１（配列番号２，４）、またはコントロールのｓｉＲＮＡ（５０μＭ）を腫瘍部分に注入し、マウス皮下腫瘍のノックダウンを行った。ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１安定発現株とコントロールＧＦＰ株については、同様にヌードマウスに皮下移植し、腫瘍サイズの測定を行った。結果を図６に示す。
　ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１安定発現株であるSNU638株において、腫瘍サイズが有意に増加したことから（図５）、ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１の過剰発現が腫瘍形成を促進することが理解された。また、胃がん細胞株のHSC45株におけるＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１のノックダウンによって、腫瘍形成が抑制されることが理解された（図６）。
例８：マイクロアレイ解析
　ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１をノックダウンした胃がん細胞株HSC45からＲＮＡを抽出し、ｃＲＮＡを合成後にSurePrint G3 Human GE 8x60K V2 microarray (Agilent Technologies)へのマイクロアレイ実験を行った。データ解析については、GeneSpring GX version 13 (Agilent Technologies)を使用した。
例９：ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１結合タンパク質の同定
　In vitro転写反応で合成した５－ブロモＵＴＰ標識ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１　ＲＮＡとRiboCluster Profiler RiboTrap Kit (MBL)を使用し、ＲＮＡプルダウン実験を行った。SDS-PAGEによりＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１　ＲＮＡで特異的なタンパク質バンドを切り出し、質量分析を行った。 
例１０：ウェスタンブロット
　タンパク質をＳＤＳ－ＰＡＧＥに供試し、ゲルからタンパク質をＰＶＤＦメンブレンに転写後、メンブレンをブロッキング剤で処理した。各タンパク質に対する抗体で一次抗体反応を行い、メンブレンの洗浄後２次抗体反応を行った。再度メンブレンの洗浄後、Clarity Western ECL substrate (BIORAD)を用いてタンパク質を発色させ、蛍光をImageQuant LAS4000 mini (GE Heathcare)で検出した。一次抗体は、anti YB1 antibody (RN015P, MBL)、anti Myc tag mAb (M192-3S, MBL)、anti PURA antibody (ab79936, abcam)を、二次抗体はmouse IgG antibody (CST, 7076) または Anti-rabbit IgG antibody conjugated with horseradish peroxidase (CST, 7074)を使用した。 
　ＰＵＲＡ、ＰＵＲＢ、ＹＢ１の複合体は転写調節に関与することが報告されている(J Biol Chem, 2008; Mol Cell Biol, 2007)。
　ウエスタンブロッティングの結果、ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１とＰＵＲＡおよびＹＢ１は、複合体の形成により、バンド強度が増大し（図７の左図）、ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１の非存在下では、バンドが消滅した（図７の右図）。従って、ＰＵＲＡとＹＢ１はＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１　ＲＮＡを介して相互作用することが推定された。
例１１：ＰＵＲＡおよびＹＢ１のｓｉＲＮＡを用いるノックダウンによる細胞増殖能への影響
　ＰＵＲＡおよびＹＢ１を標的とするｓｉＲＮＡの設計にはRossetta InpharmaticsやsiDirectのデザインアルゴリズムを用いた。これによりセンス鎖（例えば、ＰＵＲＡに対するsiRNAの5’-CCACCUAUCGCAACUCCAUTT-3’（配列番号６）または5’-GCUACUGCAGGGUGAGGAATT-3’（配列番号７）、YB１に対するsiRNAの5’-CCUAUGGGCGUCGACCACATT-3’（配列番号１０）または5’-GUUCCAGUUCAAGGCAGUATT-3’（配列番号１１））と、アンチセンス鎖（例えば、ＰＵＲＡに対するsiRNAの5’-AUGGAGUUGCGAUAGGUGGTT-3’（配列番号８）または5’-UUCCUCACCCUGCAGUAGCTT-3’（配列番号９）、YB１に対するsiRNAの5’-UGUGGUCGACGCCCAUAGGTT-3’（配列番号１２）または5’-UACUGCCUUGAACUGGAACTT-3’（配列番号１３））を用いた。
　コントロールｓｉＲＮＡはシグマ社製Mission Negative control SIC-001を用いた（配列非公開）。 
　リポフェクタミン法により、ＰＵＲＡまたはＹＢ１を標的に設計したｓｉＲＮＡを胃がん細胞株HSC45にトランスフェクションした。トランスフェクションによりＰＵＲＡまたはＹＢ１をノックダウンした細胞について、ＭＴＴアッセイを行った。結果を図８に示す。
　胃がん細胞（HSC45）において、ｓｉＲＮＡ（ｓｉＰＵＲＡ＿０４１１（配列番号６，８）、ｓｉＰＵＲＡ＿０４１２（配列番号７，９）、ＹＢＸ＿７０６４（配列番号１０，１２）、およびＹＢＸ＿７０６５（配列番号１１，１３））（２０ｎＭ）を用いて、ＰＵＲＡ（左図）またはＹＢ１（右図）をノックダウンすることにより、細胞増殖能が有意に低下した。
例１２：ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１の下流遺伝子の探索
　ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１をノックダウンした胃がん細胞株HSC45からＲＮＡを抽出し、ｃＲＮＡを合成後にSurePrint G3 Human GE 8x60K V2 microarray (Agilent Technologies)へのマイクロアレイ実験を行った（図９）。データ解析については、GeneSpring GX version 13 (Agilent Technologies)を使用した。発現が抑制された６４９個の遺伝子には、例えば、以下の表１に記載される免疫応答遺伝子が集積していた（Gene Ontology解析）。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000001
　また、ｓｉＲＮＡ（ｓｉ－ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１＃２（配列番号２，４）およびｓｉ－ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１＃３（配列番号３，５））（２０ｎＭ）を用いて、ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１をノックダウンで発現が抑制された免疫応答遺伝子の発現解析（ＲＴ－ＰＣＲ）を行ったところ、免疫応答遺伝子の発現が実際に抑制されていた（図１０）。これに対し、ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１安定発現細胞株では、免疫応答遺伝子の発現が実際に誘導されていた（図１１）。また、ｓｉＲＮＡ（ｓｉ－ＰＵＲＡ＿＃１（配列番号６，８）およびｓｉ－ＰＵＲＡ＿＃２（配列番号７，９））（２０ｎＭ）を用いて、ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１およびＰＵＲＡの両方をノックダウンした場合には、ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１のみをノックダウンした場合と比較して、免疫応答遺伝子の発現がさらに減少していた（図１２）。従って、ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１とＰＵＲＡは、ｌｎｃＲＮＡ－タンパク質複合体として、免疫応答遺伝子の発現に関与する可能性が示唆された。
例１３：他のがん細胞におけるＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１の発現
　例３と同様にして、ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１　ＲＮＡの発現を解析したところ、乳がん細胞、肝がん細胞、大腸がん細胞においても、ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１が高度に発現していた（図１３）。従って、他の組織のがん細胞株においても、ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１の発現は亢進し、がん遺伝子として機能していることが示唆された。
　例５と同様にして、上記細胞株のうち、乳がん細胞株（SK-BR-3、MDA-MB-231、MDA-MB-435S）、肝がん細胞株（Huh7、HLF、HT17、Li-7、PLC/PRF/5）、大腸がん細胞株（SW620、HT29、DLD1、T84、WiDr）および膵がん細胞株（Panc-2）をノックアウト実験に使用した。ｓｉＲＮＡ（ｓｉＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１　０２（配列番号２，４））（２０ｎＭ）を用いたところ、乳がん細胞株では、SK-BR-3およびMDA-MB-435Sについて、肝がん細胞株では、Huh7、HLF、およびHT17について、細胞増殖の抑制が確認され（図１４～１６）、肝がん細胞株のHLFについては、遊走浸潤能の抑制が確認され（図１６）、膵がん細胞株のPanc-1について、細胞増殖の抑制が確認された（図１７）。
　従って、胃がん以外のがん細胞株においても、ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１のノックダウンにより、細胞増殖抑制の効果が認められた。

Claims (13)

  1. 　ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１の発現の抑制剤、ＰＵＲＡの発現の抑制剤、およびＹＢ１の発現の抑制剤の少なくとも１つを含むがん治療剤。
  2. 　ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１の発現の抑制剤を含む、請求項１に記載のがん治療剤。
  3. 　ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１の発現の抑制剤が、ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１の転写体ＲＮＡに対するｓｉＲＮＡ、アンチセンス核酸、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである、請求項２に記載のがん治療剤。
  4. 　ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１の発現の抑制剤がｓｉＲＮＡである、請求項３に記載のがん治療剤。
  5. 　ＰＵＲＡの発現の抑制剤およびＹＢ１の発現の抑制剤をさらに含む、請求項２～４のいずれか１項に記載のがん治療剤。
  6. 　がんが、胃がん、乳がん、肝がん、大腸がん、または膵がんである、請求項１～５のいずれか１項に記載のがん治療剤。
  7. 　ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１の転写体ＲＮＡに対するｓｉＲＮＡ、アンチセンス核酸、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡを発現するベクター。
  8. 　請求項７に記載のベクターを導入した細胞。
  9. 　請求項１～６のいずれか１項に記載のがん治療剤、請求項７に記載のベクター、または、請求項８に記載の細胞を含む、がんを治療するための医薬組成物。
  10. 　ヒト対象ががんを発症するか否かを予測するための指標として、ＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１の転写体ＲＮＡの発現量を測定する方法であって、
    （ａ）ヒト対象由来の試験サンプル中のＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１の転写体ＲＮＡの発現量を決定すること、
    （ｂ）ヒト健常者由来の対照サンプル中のＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１の転写体ＲＮＡの発現量を決定すること、および
    （ｃ）ヒト対象由来の試験サンプル中のＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１の転写体ＲＮＡの発現量が、ヒト健常者由来の対照サンプル中のＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１の転写体ＲＮＡの発現量よりも２倍を超える場合に、ヒト対象ががんを発症すると予測すること、
    を含む、方法。
  11. 　（ｃ）において、ヒト対象由来の試験サンプル中のＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１の転写体ＲＮＡの発現量が、ヒト健常者由来の対照サンプル中のＴＭ４ＳＦ１ＡＳ１の転写体ＲＮＡの発現量よりも３倍を超える場合に、ヒト対象ががんを発症すると予測する、請求項１０に記載の方法。
  12. 　がんが、胃がん、乳がん、肝がん、大腸がん、または膵がんである、請求項１０または１１に記載の方法。
  13. 　ヒト対象が前がん状態である、請求項１０～１２のいずれか１項に記載の方法。
PCT/JP2019/014028 2018-03-30 2019-03-29 長鎖ノンコーディングｒｎａを標的とするがん治療剤およびがん診断方法 WO2019189772A1 (ja)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2020511097A JP7319688B2 (ja) 2018-03-30 2019-03-29 長鎖ノンコーディングｒｎａを標的とするがん治療剤およびがん診断方法

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2018-067701 2018-03-30
JP2018067701 2018-03-30

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2019189772A1 true WO2019189772A1 (ja) 2019-10-03

Family

ID=68061920

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/JP2019/014028 WO2019189772A1 (ja) 2018-03-30 2019-03-29 長鎖ノンコーディングｒｎａを標的とするがん治療剤およびがん診断方法

Country Status (2)

Country Link
JP (1) JP7319688B2 (ja)
WO (1) WO2019189772A1 (ja)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110923326A (zh) * 2019-12-30 2020-03-27 北京泱深生物信息技术有限公司 Linc01909在制备治疗癌症药物及诊断性试剂盒中的应用
CN110951884A (zh) * 2019-12-31 2020-04-03 北京泱深生物信息技术有限公司 Linc02166对胃癌诊断治疗的新用途
WO2020128534A1 (en) * 2018-12-21 2020-06-25 Uea Enterprises Limited Methods of treatment and diagnosis of tumours

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2016192963A (ja) * 2015-04-01 2016-11-17 学校法人産業医科大学 腫瘍細胞の生存を低下させるｙｂ−１アンチセンスオリゴヌクレオチド

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2016192963A (ja) * 2015-04-01 2016-11-17 学校法人産業医科大学 腫瘍細胞の生存を低下させるｙｂ−１アンチセンスオリゴヌクレオチド

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
DATABASE NCBI [online] 26 June 2017 (2017-06-26), "Homo sapiens TM4SF1 antisense RNA 1 (TM4SF1-AS1), transcript variant 2, long non-coding RNA", Database accession no. NR_046650 *
GUO Z.M. ET AL.: "Purine-rich element binding protein alpha promotes invasion and migration of esophageal squamous cell carcinoma KYSE 510 cells by inducing epithelialmesenchymal transition.", WORLD CHIN. J. DIGESTOLOGY, vol. 22, no. 36, 2014, pages 5579 - 5586 *
INOUE T. ET AL.: "Purine-rich element binding protein (PUR) alpha induces endoplasmic reticulum stress response, and cell differentiation pathways in prostate cancer cells.", PROSTATE, vol. 69, no. 8, 2009, pages 861 - 873 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2020128534A1 (en) * 2018-12-21 2020-06-25 Uea Enterprises Limited Methods of treatment and diagnosis of tumours
CN110923326A (zh) * 2019-12-30 2020-03-27 北京泱深生物信息技术有限公司 Linc01909在制备治疗癌症药物及诊断性试剂盒中的应用
CN110951884A (zh) * 2019-12-31 2020-04-03 北京泱深生物信息技术有限公司 Linc02166对胃癌诊断治疗的新用途

Also Published As

Publication number Publication date
JP7319688B2 (ja) 2023-08-02
JPWO2019189772A1 (ja) 2021-04-22

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Garcia-Saez et al. Eg5 targeting agents: From new anti-mitotic based inhibitor discovery to cancer therapy and resistance
Jeon et al. Combining microRNA-449a/b with a HDAC inhibitor has a synergistic effect on growth arrest in lung cancer
JP6340162B2 (ja) アポトーシス誘導剤
JP7319688B2 (ja) 長鎖ノンコーディングｒｎａを標的とするがん治療剤およびがん診断方法
CN106573062B (zh) 细胞凋亡诱导剂
JP2016204365A (ja) Ｂｒａｆ遺伝子変異を有する細胞に対する細胞死誘導剤、当該細胞の増殖抑制剤及び当該細胞の増殖異常に起因する疾患の治療用医薬組成物
CA3028934C (en) Agent for inducing cell death, agent for suppressing cell proliferation, and pharmaceutical composition used for treatment of disease resulting from abnormal cell proliferation
WO2019209704A1 (en) Microrna 584-5p compositions and methods for treating cancer
JP2022174117A (ja) Ｐｌｒｇ１（ｐｌｅｉｏｔｒｏｐｉｃ ｒｅｇｕｌａｔｏｒ １）抑制剤を含む癌治療用組成物
JP6768979B2 (ja) Ｈｓｐ４７の阻害物質を用いた、がん転移抑制
WO2019107487A1 (ja) マイクロｒｎａ及びその誘導体を有効成分とする医薬組成物
JP2020007260A (ja) 長鎖非コードｒｎａを標的とするがん治療剤およびがん診断・予後の予測方法
JP7453145B2 (ja) Ｈｓｐ４７の阻害物質を用いた、化学療法剤感受性の増強
JP2021031421A (ja) ＩＲＥ１αの阻害物質を用いた、がん転移抑制
WO2016167340A1 (ja) Ｂｒａｆ遺伝子変異を有する細胞に対する細胞死誘導剤、当該細胞の増殖抑制剤及び当該細胞の増殖異常に起因する疾患の治療用医薬組成物
WO2021132309A1 (ja) 医薬組成物
JP2010148501A (ja) がんマーカー、及び、がんの治療剤
JP2020029413A (ja) ＥＲＯ１−αの阻害物質を用いた、がん幹細胞分化誘導およびがん用化学療法の増強

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 19776655

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2020511097

Country of ref document: JP

Kind code of ref document: A

122 Ep: pct application non-entry in european phase

Ref document number: 19776655

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1