WO2018231089A1 - Биологически активные комбинаторные производные полисахаридов - Google Patents

Биологически активные комбинаторные производные полисахаридов Download PDF

Info

Publication number
WO2018231089A1
WO2018231089A1 PCT/RU2017/000422 RU2017000422W WO2018231089A1 WO 2018231089 A1 WO2018231089 A1 WO 2018231089A1 RU 2017000422 W RU2017000422 W RU 2017000422W WO 2018231089 A1 WO2018231089 A1 WO 2018231089A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
combinatorial
derivatives
polysaccharide
polysaccharides
biologically active
Prior art date
Application number
PCT/RU2017/000422
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Борис Славинович ФАРБЕР
Софья Борисовна ФАРБЕР
Артур Викторович МАРТЫНОВ
Original Assignee
Борис Славинович ФАРБЕР
Софья Борисовна ФАРБЕР
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Борис Славинович ФАРБЕР, Софья Борисовна ФАРБЕР filed Critical Борис Славинович ФАРБЕР
Priority to EA202090748A priority Critical patent/EA202090748A1/ru
Priority to US16/771,573 priority patent/US20210361696A1/en
Priority to PCT/RU2017/000422 priority patent/WO2018231089A1/ru
Publication of WO2018231089A1 publication Critical patent/WO2018231089A1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
    • A61K31/716—Glucans
    • A61K31/717—Celluloses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
    • A61K31/716—Glucans
    • A61K31/718—Starch or degraded starch, e.g. amylose, amylopectin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
    • A61K31/716—Glucans
    • A61K31/722—Chitin, chitosan
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
    • A61K31/726—Glycosaminoglycans, i.e. mucopolysaccharides
    • A61K31/727—Heparin; Heparan
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P41/00—Drugs used in surgical methods, e.g. surgery adjuvants for preventing adhesion or for vitreum substitution
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H15/00—Compounds containing hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B11/00—Preparation of cellulose ethers
    • C08B11/20—Post-etherification treatments of chemical or physical type, e.g. mixed etherification in two steps, including purification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C08B37/0006—Homoglycans, i.e. polysaccharides having a main chain consisting of one single sugar, e.g. colominic acid
    • C08B37/0024—Homoglycans, i.e. polysaccharides having a main chain consisting of one single sugar, e.g. colominic acid beta-D-Glucans; (beta-1,3)-D-Glucans, e.g. paramylon, coriolan, sclerotan, pachyman, callose, scleroglucan, schizophyllan, laminaran, lentinan or curdlan; (beta-1,6)-D-Glucans, e.g. pustulan; (beta-1,4)-D-Glucans; (beta-1,3)(beta-1,4)-D-Glucans, e.g. lichenan; Derivatives thereof
    • C08B37/0027—2-Acetamido-2-deoxy-beta-glucans; Derivatives thereof
    • C08B37/003—Chitin, i.e. 2-acetamido-2-deoxy-(beta-1,4)-D-glucan or N-acetyl-beta-1,4-D-glucosamine; Chitosan, i.e. deacetylated product of chitin or (beta-1,4)-D-glucosamine; Derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C08B37/0006—Homoglycans, i.e. polysaccharides having a main chain consisting of one single sugar, e.g. colominic acid
    • C08B37/0045—Homoglycans, i.e. polysaccharides having a main chain consisting of one single sugar, e.g. colominic acid alpha-D-Galacturonans, e.g. methyl ester of (alpha-1,4)-linked D-galacturonic acid units, i.e. pectin, or hydrolysis product of methyl ester of alpha-1,4-linked D-galacturonic acid units, i.e. pectinic acid; Derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C08B37/0006—Homoglycans, i.e. polysaccharides having a main chain consisting of one single sugar, e.g. colominic acid
    • C08B37/0051—Homoglycans, i.e. polysaccharides having a main chain consisting of one single sugar, e.g. colominic acid beta-D-Fructofuranans, e.g. beta-2,6-D-fructofuranan, i.e. levan; Derivatives thereof
    • C08B37/0054—Inulin, i.e. beta-2,1-D-fructofuranan; Derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
    • C08B37/0063—Glycosaminoglycans or mucopolysaccharides, e.g. keratan sulfate; Derivatives thereof, e.g. fucoidan
    • C08B37/0075—Heparin; Heparan sulfate; Derivatives thereof, e.g. heparosan; Purification or extraction methods thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
    • C08B37/0084—Guluromannuronans, e.g. alginic acid, i.e. D-mannuronic acid and D-guluronic acid units linked with alternating alpha- and beta-1,4-glycosidic bonds; Derivatives thereof, e.g. alginates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C40—COMBINATORIAL TECHNOLOGY
    • C40B—COMBINATORIAL CHEMISTRY; LIBRARIES, e.g. CHEMICAL LIBRARIES
    • C40B40/00—Libraries per se, e.g. arrays, mixtures
    • C40B40/04—Libraries containing only organic compounds
    • C40B40/12—Libraries containing saccharides or polysaccharides, or derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C40—COMBINATORIAL TECHNOLOGY
    • C40B—COMBINATORIAL CHEMISTRY; LIBRARIES, e.g. CHEMICAL LIBRARIES
    • C40B50/00—Methods of creating libraries, e.g. combinatorial synthesis
    • C40B50/08—Liquid phase synthesis, i.e. wherein all library building blocks are in liquid phase or in solution during library creation; Particular methods of cleavage from the liquid support

Definitions

  • the invention relates to organic and bioorganic combinatorial chemistry, namely, to new combinatorial libraries of derivatives of polysaccharides and supramolecular structures based on them, which, when used without separation into individual components, have high biological activity.
  • composition with a hemostatic effect a mixture of several substances, including several biological active hemostatic and wound healing, as well as several auxiliary and formative substances in the form of a sterile powder for local use, which can be used including to accelerate wound healing and stop bleeding as with capillary, venous and arterial bleeding due to the ability to quickly swell in the wound and tampon it.
  • the analogue of the proposed remedy is the drug "Celox" (Celox), capable of sucking blood from the wound and turning into a gel, thereby closing open bleeding.
  • carboxylation carboxycellulose or carboxystarch
  • maleic, succinic, phthalic and other dihydric and polycarboxylic anhydrides can be used, and for alkylation of substances such as monochloroacetic acid (thus formed carboxymethylcellulose or carboxymethyl starch).
  • Cellulose is one of the most common natural polymers of a polysaccharide nature, the main component of plant cell walls, which determines the mechanical strength and elasticity of plant tissues.
  • Cellulose macromolecules are built from D-glucose units linked by 1,4 ⁇ -glycosidic bonds into linear unbranched chains. The average degree of polymerization of cellulose (the number of glycoside residues) varies widely - from several hundred (for viscose fiber cellulose it is 300-500) to 10-14 thousand (for cotton fiber cellulose and bast fibers).
  • Cellulose has a complex supramolecular structure. The primary element is microfibrils, consisting of several hundred macromolecules and having the shape of a spiral (thickness 35-100, length 500-600 nm and above).
  • Karboksipropiltsellyuloza- PCC a cellulose derivative, wherein the cellulose carboxylation is carried out by introducing carboxypropyl group (-CH 2 - CH 2 -CH 2 -COOH) via a covalent bond with the hydroxyl groups of the glucose monomers. Used in coatings of tablets and as a prolonging excipient in the production of various dosage forms of drugs.
  • Carboxymethyl starch is a modified starch, starch ether, water-soluble anionic polymer. It is odorless, non-toxic, and linear in its degree of substitution above 0.2 or more, soluble in water.
  • Its sodium salt, also known as (CMS-Na) is commonly used. It is a white or yellow powder, tasteless and odorless, non-toxic, easily absorbs moisture. Soluble in alcohol, ether, chloroform and other organic solvents.
  • Combinatorial Polysaccharide Derivative is a polysaccharide derivative obtained according to the examples of the present invention, containing an unshared supramolecular mixture from different combinatorially modified polysaccharides.
  • cellulose Due to the presence of hydroxyl groups in the elementary units of the macromolecule, cellulose is easily esterified and alkylated; These reactions are widely used in industry for the production of cellulose ethers and esters. Many cellulose derivatives are capable of forming elastic films, which makes them used in the manufacture of various drugs.
  • acetylcellulose membranes For the processes of preparation by the method of reverse osmosis high quality water (including for medical purposes) produce several brands of acetylcellulose membranes (MGA series), which have a selectivity for sodium chloride from 70 to 90%.
  • Ultracellulose membranes pore size from 5 to 50 nm
  • cellulose acetate are used for cleaning and concentrating proteins, enzymes, antibiotics.
  • Microfiltration membranes pore size from 100 to 1000 nm) are used in microbiological, biological, and physicochemical analyzes to purify drug solutions from microorganisms, sterilizing filtration, electrophoretic separation of serum proteins and other high-molecular compounds.
  • cellulose acetate (AC) for the microencapsulation of low and high molecular weight drugs is promising.
  • polymeric microcapsules have sizes of the order of tens or hundreds of microns, and the thickness of the membrane is hundredths or tenths of microns.
  • Microencapsulated drugs (microcapsule size less than 20 microns) are introduced into ointment bases, used to prepare syrups and other liquid dosage forms. Microencapsulation is used in the preparation of injection mixtures in the form of microcapsule suspensions for intramuscular and subcutaneous administration with controlled release.
  • acetylcellulose for microencapsulation of drugs made it possible to obtain microcapsules with a drug release rate, depending on the size of the microcapsules.
  • Cellulose acetates are used as a polymer permeable membrane for immobilization of enzymes (glucooxidase, invertase, esterase, etc.), as well as multienzyme systems (glucose oxidase and catalase, glucose oxidase and peroxidase). Using cellulose triacetate, fibrous immobilized enzymes were obtained.
  • Water-soluble AC is used to cover tablets of various drugs (glucose, terpinehydrate, asphen, askofen, amidopirin, etc.) and serves as a protective coating, providing a prolonged effect of the drug substance.
  • MC methylcellulose
  • MHHF methylhydroxypropylcellulose
  • Phthalyl, acetylphthalyl, acetylsuschinil - cellulose derivatives are widely used in the manufacture of medicines.
  • the shell of the tablet dissolves, allowing the drug to be rapidly absorbed into the blood.
  • the sodium salt of carboxymethylcellulose can be used as a protective shell of suppositories intended for use in places with hot climates. Tablets with good appearance and satisfactory durability and disintegration characteristics in the body are usually obtained by using (1-8)% solutions of Na-CMC.
  • Aluminum salt CMC in the form of a 1-5% aqueous solution is used for the manufacture of rapidly disintegrating vaginal tablets.
  • Na-CMC films have a pronounced stimulating effect on reparative processes in infected skin wounds, accelerate the formation and maturation of granulation tissue, and actively influence the processes of fibrillogenesis.
  • An effective treatment for non-healing radiation burns is an ointment, which is a Na-CMC gel containing an anti-inflammatory substance, fodomos.
  • Na-CMC based ointments are used as light-protective, coating and cooling pastes.
  • Bactericidal liquids containing Na-CMC form water-washable films and can be used to treat external wounds.
  • Pure methylcellulose hydrogels are used as a drying ointment or wet dressing, as well as protective ointments when working with organic solvents and aggressive media.
  • ointments based on MC are used, containing anesthetics, antibiotics, salts of silver, mercury, zinc, etc.
  • MCC monocarboxes cellulose
  • This form of MCC can be considered as a biomaterial combining the properties of a wound cover and a healing agent that stimulates healing. Acceleration of healing of burns with the help of MCC is 35%.
  • the range of therapeutic action of the suspension can be significantly expanded by introducing biologically active substances into its composition.
  • the prolonged action of drugs can also be achieved by attaching them to the polymer matrix with a relatively labile covalent bond, in particular an ester or amide bond.
  • a relatively labile covalent bond in particular an ester or amide bond.
  • the drug fixation reaction is carried out with carboxymethylcellulose chloride.
  • carbohydrates are divided into “sugars” (mono- and disaccharides), oligosaccharides, and polysaccharides.
  • Oligo- and polysaccharides include compounds whose molecules are constructed from residues of monosaccharides linked by O-glycosidic bonds. The delimitation of oligosaccharides and polysaccharides cannot be done strictly, but from a methodological point of view it is advisable to consider compounds containing up to 8.10 monosaccharide units to be oligosaccharides, and higher molecular sugars can be attributed to polysaccharides.
  • the main components of dietary fiber are polysaccharides, forming both linear and branched chains.
  • polysaccharides An important role in determining the physical properties and the ability of polysaccharides to form associations with other polysaccharides and proteins is played by carbohydrate side chains and the configuration of their glycosidic bonds.
  • a part of polysaccharides consisting of D-glucose residues connected by 1–4 and 1–> 6 ⁇ -glycosidic bonds (starches) is hydrolyzed by mammalian salivary and pancreatic glands amylases, absorbed in the small intestine and together with the mono- and disaccharides forms the so-called available, or digestible, carbohydrates.
  • non-starch polysaccharides Another part of polysaccharides (non-starch polysaccharides) is not hydrolyzed by amylases, is not absorbed into the blood and partially or completely undergoes enzymatic degradation by the microflora of the colon.
  • oligosaccharides raffinose, stachyose, verbascosis
  • fructo-oligosaccharides high-molecular fructans (inulins), polyalcohols (sorbitol, xylitol, mannitol, etc.), polydextrose (synthetic glucose polymer), in-tec is also a measure of a template, and a template is used; less do not break down in the small intestine, are fermented by intestinal microflora and physiologically have much in common with dietary fiber.
  • dietary fiber includes a wider range of substances than non-digestible carbohydrates and non-starch polysaccharides.
  • Pectins, alginates, carrageenans, chitosans and fucoidans can be considered as the most studied non-starch polysaccharides. Pectins are part of the cell walls of higher plants, where they act as a cementing material for cellulose fibers.
  • pectins in the extracellular layer between the primary cell walls, where they are involved in the regulation of the movement of water and cell juices.
  • Primary The blocks of the pectin polymer chain are D-galacturonic acid residues, which are connected to each other by a ⁇ x (1-4) bond.
  • the chains thus formed have several hundred galacturon blocks.
  • L-ramnose residues between galacturonic acid blocks connected to galacturonic acid by a (1-> 2) bond as a result of which the pectin chain bends at about 90 ° at this point.
  • Side chains consisting of neutral sugars, most often arabinose and galactose, originate from the main linear chain of ramnogalacturonan.
  • the arabinan, galactonan and arabinogalactonan side chains are connected to the ramnose (1— * 4) connection.
  • the remains of arabinose are interconnected by (1— 5) -connections, and galactose. (1— "4), although there are (1-3) and (1-" 6) links.
  • D-galactopyranose, L-arabinofuranose, D-xylopyranose, D-glucopyranose and L-fucopyranose are also found and are very rare.
  • the side chains of neutral sugars have a length of from 8 to 20 molecules, and they account for 10.15% of the mass of pectin.
  • the methoxylated pectin is considered when the carboxyl groups of galacturonic acid residues are esterified with methyl alcohol. The more such groups in the polymer chain of pectin, the higher the degree of esterification, or methoxylation, and vice versa.
  • Highly methoxylated pectins are characterized by a degree of esterification of more than 50% (usually from 60 to 80%), and low methoxylated. less than 50% (usually 30-40%) [6].
  • Alginic acid and its salts are mainly found in marine brown algae (Phaeophyta), in which they constitute the main part of polysaccharides, reaching 40% of dry weight, as well as in red algae of the Corallinaceae family. It is now known that bacteria belonging to the genera Pseudomonas and Azotobacter contain acetylated alginates. In algal thalli, phycocolloids are the primary components of the cell walls and extracellular matrix, playing the role of a “skeleton” and providing the strength and flexibility of the tissue. Alginic acid consists of residues -O-mannuronic and aL-guluronic acids linked by (1-> 4) bonds.
  • the polymer string of alginates consists of homopolymer polymannuronic and polyguluronic regions, or blocks, between which alternating residues of both acids can be found.
  • alginic acid forms several types of alginates. In complete alginates, all carboxyl groups are bound to cations. Such alginates are insoluble in water. Incomplete alginates can be soluble and insoluble in water. At the same time, full alginates monovalent metals are highly soluble in water and form viscous, sticky solutions. Soluble salts include potassium, sodium, and magnesium and ammonium. Alginates can be monocationic when the cations of one metal are involved in the formation of alginate, and polycationic with cations of several metals.
  • the source of carrageenan is the red algae belonging to the families of Gigartinaceae, Solieriaceae, Rhabdoniaceae, Hypneaceae, Phyllophoraceae, Petrocelidaceae, Caulacanthaceae, Cystocloniaceae, Rhodophyllidaceae, Furcellaece, Tichocaceaceaceae, aphaephaceae.
  • Carrageenans are sulphated galactans containing D-galactose and its derivatives, the remnants of which are joined by regularly alternating ⁇ (1-4) - and a (1 - 3) - bonds.
  • the 4-O-substituted residue of carrageenans can be either galactose or its 3,6-anhydro derivative, and various hydroxyl groups can be sulphated.
  • Regular polysaccharides the molecules of which are built from disaccharide repeating units of the same type, got their own names.
  • several “marginal”, or idealized, carrageenan structures were established, which made it possible to divide them into types differing in the content of 3,6-anhydro-galactose, location and number of sulphate groups.
  • 6 main types of carrageenan are distinguished: excellent, ⁇ , ⁇ , ⁇ , ⁇ , and ⁇ .
  • Carrageenans ⁇ , ⁇ , and ⁇ can be converted into alkaline or enzymatic modification, respectively, of ⁇ -, ⁇ -, and ⁇ -carrageenans.
  • real natural polysaccharides rarely correspond to such idealized structures; Usually there is a combination of two or more limiting structures in a single polymer molecule.
  • a code system of capital letters is used to designate a hybrid or “masked” structure of the polysaccharide [33].
  • the chitosan precursor is the ⁇ -acetyl-O-glucosamine (chitin) polymer, which is synthesized in animals, mainly in crustaceans, mollusks and insects, being an important component of the exoskeleton, and in some fungi as the main fibrillar cell wall polymer.
  • Chitosan as a polymer P- (1- + 4) -2-acetamido-2-deoxy-0-glucopyranose is obtained by alkaline deacetylation of chitin.
  • Fucoidans are complex sulfated polysaccharides found in brown algae, in sea urchin eggs and in the wall of the body cucucary.
  • the fucoidan stem chain consists of L-fucose residues linked by ⁇ x (1–> 3) bonds to the sulfate groups in the 4th position on some fucose residues. Others join this polymer. fucose residues forming branch points through a (1— 2) - or a (1— 4) links.
  • the presence of a small amount of other sugars, such as xylose, galactose, mannose, and glucuronic acid, is also noted in fucoidan.
  • a known pharmaceutical composition (US Patent 5773033 "Autologous isolated anionic or cationic chitosan polymer"), which is a chitosan / fibrinogen containing hemostatic agents.
  • the disadvantage of this invention is the presence of expensive fibrinogen protein from donor blood in a lyophilized form.
  • chitosan and its salts have a very limited degree of swelling and the speed of onset of action.
  • Such compositions cannot be used for urgent stopping of heavy firearms, incl. abdominal, bleeding due to the onset of action in 15-20 minutes. After this period of time with arterial bleeding, the patient loses more than 50% of the blood and dies.
  • these compositions are not able to activate tissue regeneration.
  • the aim of the invention is to create a combinatorial mixture of biologically active derivatives of polysaccharides and pharmaceutical compositions based on them with hemostatic, wound healing, antiviral, immunomodulatory effects, able to show a quick effect in case of rupture of blood vessels, including firearms and incl. with arterial bleeding when applied topically as a sterile powder.
  • the goal is achieved by creating an undivided combinatorial mixture of a biologically active polysaccharide derivative (polysaccharides) and on-drug patterns based on them with hemostatic, wound healing, antiviral and immunomodulatory effects, containing as the main active ingredient the undivided supramolecular supramolecular mixture of the substituted derivatives containing a template and a template for a non-divisive template, which contains a set of a template, and is set by an amount of a template for an iodine, and an iodine pattern.
  • a biologically active polysaccharide derivative polysaccharides
  • on-drug patterns based on them with hemostatic, wound healing, antiviral and immunomodulatory effects
  • polysaccharide at least two covalent modif Katori, combinatorial mixture was formed with the maximum number of combinations of modified polysaccharide derivatives, as well as biologically active substances for preparing a pharmaceutical composition using whole combinatorial mixture of polysaccharide derivatives without separation into the individual components in the form of supramolecular structures in the synthesis result.
  • n the number of groups available for substitution in the polysaccharide (in terms of monomer is a derivative of glucopyranose);
  • 0.1-90 kg of starch is added to the mixer, 1-900 l of hot water is added, the solution is stirred until the polysaccharide is completely dissolved, the solution is cooled to room temperature, 0.02-10 kg of succinic anhydride and 0.02-10 kg of maleic anhydride are poured the solution is stirred until complete dissolution of the anhydrides.
  • To the solution is poured 1-500 l of 96% ethanol (or methanol), left for a day, the precipitate is separated by filtration and dried, then used as a variant K1 in pharmaceutical compositions.
  • starch instead of starch, other unsubstituted or monosubstituted starch derivatives can be used: carboxyl starch, succinyl starch, malein starch, carboxymethyl starch, and their mixture. Also, on the basis of the obtained combinatorial mixture of starch, salts with metals or amines can be obtained by standard methods known to an ordinary specialist in their field.
  • Example 2 Preparation of combinatorial mixture K2 based on cellulose derivatives
  • add m mol of caroxymethylcellulose in terms of monomer - monocarboxymethyl glucose
  • add 5 t mol of hot water and 5 t mol of ethanol stir the solution until the polysaccharide is completely dissolved, the solution is cooled to room temperature, pour in mole of succinic anhydride and pour in mole methyl chloride, the solution is stirred until complete dissolution of the modifiers.
  • To the solution is poured 5t mol of ethanol 96% ethanol (or methanol), leave for a day, the precipitate is separated by filtration and dried, then used as an option K2 in pharmaceutical compositions.
  • Such a mixture cannot physically be divided into individual components and, in aqueous solutions, forms a complex supramolecular structure through hydrogen and ionic bonds.
  • the biological activity of derivatives is due precisely to the supramolecular structure, and not the individual component.
  • Such a structure of many similar, but different polysaccharides resembles a mixture of immunoglobulins and glycoprotein adhesins with immunomodulatory effects.
  • the currently existing methods of physicochemical analysis are not able to identify 3.3 * 10 12 different molecules in the same mixture.
  • a distinctive feature of this structure is only the presence of unusual biological (pharmacological) properties in contrast to the original polysaccharides.
  • carboxymethyl cellulose instead of carboxymethyl cellulose, other unsubstituted or monosubstituted cellulose derivatives can be used: carboxy starch, succinyl starch, maleyl starch, carboxymethyl starch, or a mixture of these: succinyl cellulose, maleyl cellulose, carboxymethyl cellulose, propyl cellulose, and cellulose, or a mixture of these:
  • salts with metals or amines can be obtained by standard methods known to an ordinary specialist in their field.
  • such natural polysaccharides can be used: inulin, pectins, gums, mucus, alginic acid, chitosan.
  • NMR C13 CH: s: 106.1; 105.8; 104.3; 95.4; 78.5; 77.0; 75.6; 79.5; 78.8; 86.8; 80.1; 77.5;
  • the antiviral activity of the derivatives was studied by a screening method on models of the H1N1 influenza virus (Inf), a reference strain of vesicular stomatitis virus (Vesic-VVS) and herpes virus type 1 (Negr. Strain L-2) in plates on the culture of chicken fibroblasts according to the degree of degradation (cytopathic effect, detachment from the bottom of the hole).
  • the degree of "sloughing" of the cells was determined by the color of the culture with a vital dye,
  • Example 4 Obtaining the pharmaceutical composition "K1K”.
  • the mixer add 0, 1 -90 kg combinatorial mixture of modified starch (or its salts), add 0.1-30 kg of the base of the amino acid L-lysine, mix until complete homogeneity, packaged in 1- 30 g in aluminum bags or glass bottles.
  • the vials are sealed with rubber stoppers and rolled with aluminum caps, and aluminum bags are packed on a packaging machine.
  • the vials and bags are sterilized in an autoclave under standard sterilization conditions (120 ° C, 30 min).
  • Salts of combinatorial derivatives are obtained by known methods, which, as a rule, involve mixing K1 or with a pharmaceutically acceptable acid with the formation of an acid addition salt, or with a pharmaceutically acceptable base to form a base addition salt.
  • Whether the acid or base is pharmaceutically acceptable can be easily decided by a person skilled in the art, after taking into account the specific intended use of the compound. For example, not all acids and bases that are acceptable for ex vivo applications can be used for pharmaceutical compositions, and not all acids, and bases that are suitable for local use, can be used parenterally.
  • pharmaceutically acceptable acids include organic and inorganic acids, such as formic acid, acetic acid, propionic acid, lactic acid, glycolic acid, oxalic acid, pyruvic acid, succinic acid, maleic acid, malonic acid, brown acid, sulfuric acid, hydrochloric acid, hydrobromic acid, nitric acid, perchloric acid, phosphoric acid and thiocyanic acid, which form ammonium salts with free amino groups of peptides and conjugates.
  • organic and inorganic acids such as formic acid, acetic acid, propionic acid, lactic acid, glycolic acid, oxalic acid, pyruvic acid, succinic acid, maleic acid, malonic acid, brown acid, sulfuric acid, hydrochloric acid, hydrobromic acid, nitric acid, perchloric acid, phosphoric acid and thiocyanic acid, which form ammonium salts with free amino groups of peptides and conjugates.
  • palmitic acid for the production of
  • Pharmaceutically acceptable bases that form carboxylate salts with free K1 carboxyl groups and functional equivalents include ethylamine, methylamine, dimethylamine, triethylamine, isopropylamine, diisopropylamine, and other mono-, di-, and trialkylamines, as well as arylamines.
  • pharmaceutically acceptable solvates are also included.
  • Pharmaceutically acceptable salts may be used in the invention, for example, salts of inorganic acids, such as hydrochlorides, hydrobromides, phosphates, sulfates and the like; and salts of organic acids, such as acetates, propionates, malonates, benzoates, and the like.
  • inorganic acids such as hydrochlorides, hydrobromides, phosphates, sulfates and the like
  • organic acids such as acetates, propionates, malonates, benzoates, and the like.
  • Pharmaceutically acceptable carriers in pharmaceutical compositions may contain liquids such as water, brine, glycerin, and ethanol.
  • adjuvants such as a humectant or emulsifying agents, pH generating substances, and the like, may be present in such medicament media.
  • parenteral pharmaceutical compositions are prepared as injections, or as liquid solutions or suspensions; solid forms suitable for dissolving or forming suspensions in liquid medication media may also be prepared prior to injection.
  • Liposomes are included in the definition of a pharmaceutically acceptable carrier.
  • K1 can be obtained as described above and applied to an object that needs it. K1 can be introduced into the object by any suitable method, preferably in the form of a pharmaceutical composition adapted to such a method and in a dosage that is effective for the intended treatment.
  • Example 5 Preparation of the pharmaceutical composition “K2K” 0.1-90 kg of combinatorial mixture of modified cellulose (or its salts) is added to the mixer, 0.1-30 kg of L-lysine amino acid base is added, mixed until completely homogeneous, packed in 1- 30 g in aluminum bags or glass bottles. The vials are sealed with rubber stoppers and rolled with aluminum caps, and aluminum bags are packed on a packaging machine. The vials and bags are sterilized in an autoclave under standard sterilization conditions (120 ° C, 30 min).
  • Salts of combinatorial derivatives are obtained by known methods, which typically involve mixing K2 with either a pharmaceutically acceptable acid to form an acid addition salt or a pharmaceutically acceptable base to form a base addition salt.
  • Whether the acid or base is pharmaceutically acceptable can be easily decided by a person skilled in the art, after taking into account the specific intended use of the compound. For example, not all acids and bases that are acceptable for ex vivo applications can be used for pharmaceutical compositions, and not all acids, and bases that are suitable for local use, can be used parenterally.
  • pharmaceutically acceptable acids include organic and inorganic acids, such as formic acid, acetic acid, propionic acid, lactic acid, glycolic acid, oxalic acid, pyruvic acid, succinic acid, maleic acid, malonic acid, brown acid, sulfuric acid, hydrochloric acid, hydrobromic acid, nitric acid, perchloric acid, phosphoric acid and thiocyanic acid, which form ammonium salts with free amino groups of peptides and conjugates.
  • organic and inorganic acids such as formic acid, acetic acid, propionic acid, lactic acid, glycolic acid, oxalic acid, pyruvic acid, succinic acid, maleic acid, malonic acid, brown acid, sulfuric acid, hydrochloric acid, hydrobromic acid, nitric acid, perchloric acid, phosphoric acid and thiocyanic acid, which form ammonium salts with free amino groups of peptides and conjugates.
  • palmitic acid for the production of
  • Pharmaceutically acceptable bases that form carboxylate salts with free carboxyl groups 2 and functional equivalents include ethylamine, methylamine, dimethylamine, triethylamine, isopropylamine, diisopropylamine, and other mono-, di-, and trialkylamines, as well as arylamines.
  • pharmaceutically acceptable solvates are also included.
  • Pharmaceutically acceptable salts may be used in the invention, for example, salts of inorganic acids, such as hydrochlorides, hydrobromides, phosphates, sulfates and the like; and salts of organic acids, such as acetates, propionates, malonates, benzoates, and the like.
  • inorganic acids such as hydrochlorides, hydrobromides, phosphates, sulfates and the like
  • organic acids such as acetates, propionates, malonates, benzoates, and the like.
  • Pharmaceutically acceptable carriers in pharmaceutical compositions may contain liquids such as water, brine, glycerin, and ethanol.
  • adjuvants such as a humectant or emulsifying agents, pH-creating substances, and the like, may be present in such medicament media.
  • parenteral pharmaceutical compositions are prepared as injections, or as liquid solutions or suspensions; solid forms suitable for dissolving or forming a suspension in liquid medicaments can also be prepared prior to injection.
  • Liposomes are included in the definition of a pharmaceutically acceptable carrier.
  • K2 can be obtained as described above and applied to an object that needs it. K2 can be introduced into the object by any suitable method, preferably in the form of a pharmaceutical composition adapted to this method and in a dosage that is effective for the intended treatment.
  • 0.1-90 kg of combinatorial mixture of modified heparin (or its salts) is added to the mixer, 0.1-30 kg of L-lysine amino acid base is added, mixed to complete homogeneity, packed in 0.05-0.1 g into glass vials .
  • the vials are sealed with rubber stoppers and rolled with aluminum caps.
  • the bottles are sterilized in an autoclave under standard sterilization conditions (120 ° C, 30 min). You can also make a sterile 0.1-5% solution in distilled water or 0.9% solution sodium chloride, packaged in ampoules or syringes and sterilized by autoclaving (120 0 C, 30 min).
  • Salts of combinatorial derivatives are obtained by known methods, which, as a rule, involve mixing CG with either a pharmaceutically acceptable acid to form an acid addition salt or a pharmaceutically acceptable base to form a base addition salt.
  • Whether the acid or base is pharmaceutically acceptable can be easily decided by a person skilled in the art, after taking into account the specific intended use of the compound. For example, not all acids and bases that are acceptable for ex vivo applications can be used for pharmaceutical compositions, and not all acids, and bases that are suitable for local use, can be used parenterally.
  • pharmaceutically acceptable acids include organic and inorganic acids, such as formic acid, acetic acid, propionic acid, lactic acid, glycolic acid, oxalic acid, pyruvic acid, succinic acid, maleic acid, malonic acid, brown acid, sulfuric acid, hydrochloric acid, hydrobromic acid, nitric acid, perchloric acid, phosphoric acid and thiocyanic acid, which form ammonium salts with free amino groups of peptides and conjugates.
  • organic and inorganic acids such as formic acid, acetic acid, propionic acid, lactic acid, glycolic acid, oxalic acid, pyruvic acid, succinic acid, maleic acid, malonic acid, brown acid, sulfuric acid, hydrochloric acid, hydrobromic acid, nitric acid, perchloric acid, phosphoric acid and thiocyanic acid, which form ammonium salts with free amino groups of peptides and conjugates.
  • palmitic acid for the production of
  • Pharmaceutically acceptable bases that form carboxylate salts with free carboxyl CG groups and functional equivalents include ethylamine, methylamine, dimethylamine, triethylamine, isopropylamine, diisopropylamine, and other mono-, di-, and trialkylamines, as well as arylamines.
  • pharmaceutically acceptable solvates are also included.
  • Pharmaceutically acceptable salts may be used in the invention, for example, salts of inorganic acids, such as hydrochlorides, hydrobromides, phosphates, sulfates and the like; and salts of organic acids, such as acetates, propionates, malonates, benzoates, and the like.
  • inorganic acids such as hydrochlorides, hydrobromides, phosphates, sulfates and the like
  • organic acids such as acetates, propionates, malonates, benzoates, and the like.
  • Pharmaceutically acceptable carriers in pharmaceutical compositions may contain liquids such as water, brine, glycerin, and ethanol.
  • excipients such as as a humectant or emulsifying agents, pH generating substances, and the like, may be present in such medicament media.
  • parenteral pharmaceutical compositions are prepared as injections, or as liquid solutions or suspensions; solid forms suitable for dissolving or forming a suspension in liquid medicaments can also be prepared prior to injection.
  • Liposomes are included in the definition of a pharmaceutically acceptable carrier.
  • CPs can be obtained as described above and applied to an object that needs it.
  • the SCs can be introduced into the object by any suitable method, preferably in the form of a pharmaceutical composition adapted to such a method and in a dosage that is effective for the intended treatment.
  • Example 7 The effect of the drug "K1K” and “K2K” on the clotting time of blood
  • hemostatic collagen sponge HGH
  • Hemostop Hemostop
  • Celox Hemostop
  • experimental drugs K1K and K2K experimental drugs
  • the test tube with the hemostopus studied was removed from the thermostat and a visual descriptive assessment of the hemostatic agent was made.
  • the studied hemostopes were removed from the experimental medium and dried. Later, the hemostopus under study was reweighed. The difference in the mass of the hemostope before the experimental study and after its implementation expressed in percentage reflected the rate of resorption of the studied agent.
  • a study in an in vitro experiment on the rate of degradation of hemostatic agents showed that all the samples of materials studied were subjected to resorption.
  • SP sorption index
  • the obtained data were processed statistically with the calculation of the average values, the average errors of the mean, and the reliability of differences using Student's and Mann-Whitney criteria (in relation to the hemostatic collagen sponge).
  • the error of the statistical hypothesis was p ⁇ 0.05.
  • a hemostatic collagen sponge with a hygroscopicity of 69.41 ⁇ 1.65 ml / g and a sorption index of 15.1 ⁇ 0.95 mlxs / g showed a relatively high sorption activity.
  • Example 10 Determination of the influence of the compositions "K1K” and “K2K” on tissue regeneration The study of the wound healing properties of the compositions was carried out on male white Vistar rats. In 38 animals, which were pre-anesthetized, on the dorsal side of the body, behind the right shoulder blade, cut out a 2-by-2-cm area of skin. The skin was taken with forceps, pulled back, a 2-cm fragment of skin was cut, the wound depth was 2 mm, the average area wounds were 4 ⁇ 1.0 cm 2 . The resulting polygonal wounds were bleeding intensely. Then the animals of the first and second groups (10 in each) were applied to the wound "K1K” and "K2K".
  • the measurement of the area of wounds was carried out in the following way: its contours were applied to the celluloid film that was applied to the wound, after which the area of the wound surface was determined using millimeter paper.
  • Table 2 The results of the first series of experiments (Table 2) showed that under the influence of compositions K1K and K2K, wound healing at all stages of the study was significantly accelerated.
  • the effectiveness of the K2K composition was statistically higher than that of the K1K and Celox compositions.
  • Example 11 The study of the antiviral effects of drugs K1K, K2K and KPC on the influenza virus A (NZ N2)
  • Aqueous K2K solutions in various doses were injected into 15 chicken embryos in the allantoic cavity in a volume of 0.2 ml 12 hours after the introduction of the virus in the working dose (100 TCD 5 o / 0.2 ml). Each experiment was accompanied by the control of the test virus in the working dose. Infected and non-infected (control) embryos were incubated at 36 ° C for 48 hours. Then, embryos were dissected, from which allantoic fluid was aspirated. Titration of the virus in the allantoic fluid was performed according to the standard technique with 1% red blood cells of the 0 (1) human blood group. Determined the coefficient of protection (CC). The titer of the virus in the experimental and control groups of chicken embryos is presented in tables 3-5.
  • the composition of heparin-based KPC was the most effective, the minimum effective concentration of KPC in relation to the influenza virus, which completely inhibits the synthesis of the virus, is 50 ⁇ g / ml.
  • the effectiveness of KPC drops and is dose-dependent. This fact indicates the presence of a direct antiviral effect of the KPC drug in against influenza virus H3N2.
  • Other combinatorial derivatives also had antiviral activity, but in higher doses.
  • Example 12 The study of the antiviral effect of the compositions K1K, K2K, KPC on cytopathic viruses (vesicular stomatitis virus, coronavirus, herpes simplex virus type 1)
  • Antiviral activity against this group of viruses was determined in the culture of the above cells.
  • the formulation of the reaction was carried out as follows: 0.2 ml of the appropriate virus in the working dose (100 TCD 50 / 0.2 ml) was made in a volume of 0.2 ml in a 2-day washed cell culture. 0.8 ml support was added. With the appearance in the culture of the JRS contributed drugs in various doses. As a control, the same was done with the test viruses without the drug. Cells were incubated at 37 ° C in a thermostat. Accounting experience produced on 3,5,7 day. The decrease in virus titer under the influence of the test drug by 2 lg or more in comparison with the control was evaluated as an expression of antiviral activity. The results of the study of the antiviral activity of the drugs are presented in table 6
  • Drug MEK virus ⁇ g / ml
  • the tests were carried out in 96-hole plastic panels with the virus of transmissible gastroenteritis of pigs (TGS) strain "D-52" with the original titer 10 4 " 0 TCDbo / ml (tissue cytopathic doses) in transplantable pig test cell culture (PTP) and diarrhea virus cattle strain "Oregon” with an initial titer of 10 70 TCs 5 o / ml in transplantable culture of kidney cells saiga (PS).
  • TCS transmissible gastroenteritis of pigs
  • PTP transplantable pig test cell culture
  • PS kidney cells saiga
  • KR2 at various doses was introduced into cell cultures (CK) 1-1.5 hours after infection. adsorption period). For each dilution took 8 holes. After making the compound, the cell cultures were incubated at 37 ° C for 72-144 hours until a clear manifestation of CPD (cytopathogenic action) in the control of viruses.
  • the controls were cell cultures infected with a virus, inactivity QC and QC, where only different concentrations of the experimental compositions were added. Virusstatic action was determined by the difference in titers of viruses in the experiment and control. When determining the virucidal (inactivating) action, different doses of the compositions were mixed in equal volumes with the vaccinated material and incubated in a thermostat at 37 ° C for 24 hours.
  • Virus-containing material served as a control, to which, instead of a solution of the compound, placebo (0.9% sodium chloride solution) and intact cell cultures were added. The mixture after contact was titrated in parallel with the control. The results were taken into account after 72-144 hours after incubation at 37 ° C, after a clear manifestation of CPD in virus controls. Virucidal effect was determined by the difference in titers of viruses in the experiment and control and expressed in lg TCD50.
  • the KPC composition at a concentration of 50 ⁇ g / ml inhibited the reproduction of the TGS virus by 2.90 lg TCD50 / ml, at an infecting dose of 100 TCD 50 / ml and at the same dose by 4.15 lg TCCed / ml, at an infecting dose of 10 TCD50 / ml.
  • KPC inactivated TGS virus with 4.0 lg TCD50 / ml KPC inactivated TGS virus with 4.0 lg TCD50 / ml.
  • the K3R compound has the most pronounced virus-static (inhibitory) and virucidal (inactivating) effect on TGS viruses and diarrhea of cattle, on its basis it is possible to create chemotherapy drugs for the treatment and prevention of infectious diseases of viral etiology.
  • Derivatives of compositions K1K and K2K had a weak activity and showed it only in doses of 500-5000 ⁇ g / ml
  • Example 14 The study of the antiviral activity of KPC in the experiment on animals (Herpes virus kerato-conjunctivitis / encephalitis in rabbits)
  • Herpetic experimental infection is of interest due to the fact that herpes diseases are widespread and extremely variable in clinical manifestations. Models of experimental herpes in animals are increasingly used in the study of new antiviral substances. As you know, one of the clinical forms of systemic herpes is herpes encephalitis, which is reproduced in guinea pigs, hamsters, rats, mice, rabbits, dogs, monkeys.
  • Herpetic keratoconjunctivitis in rabbits with an average weight of 3.5 kg was obtained by applying an infectious material (herpes virus type 1, strain L-2) on the scarified cornea. The animal was fixed, anesthesia of the eye was performed with lidocaine (buried in the eye). Splayed eyelids, put several scratches on the cornea with a syringe needle. Then vaccinated material was injected and, closing the eyelids, rubbing it into the cornea in circular motions. Dose of virus: 0.05 ml. In the experiment, 16 rabbits were used, 10 of them were administered KPC (daily from the second day of infection, 14 days at a dose of 10 mg / kg, and six were given a placebo (0.9% sodium chloride).
  • an experimental group of rabbits were injected into the KR ear vein at a dose of 10 mg / kg body weight, and 0.9% sodium chloride solution was administered to the control group. Every day for two weeks, this procedure was repeated once a day. In the experimental group, all animals survived, and HSV1 DNA in the blood was not detected at 13-14 days. In addition, in the experimental group, the encephalic manifestations disappeared by the 7th day of using the drug, whereas in the control 2 animals died. By the 14th day of treatment, one animal died in the experimental group, whereas in the control group - 6.
  • the effectiveness index was 83.3%, which indicates a high therapeutic efficacy of KPC on the herpes keratoconjunctivitis / encephalitis model in rabbits.
  • the rabbits in the experimental group gained weight and all animals showed no signs of keratoconjunctivitis.
  • the chemotherapeutic index for rabbits for KPC was 1000, which indicates the viability of KPC as a highly effective antiviral drug with a broad spectrum of activity and low toxicity.
  • Example 15 Effect of KPC on the humoral immune response to a T-dependent antigen in mice.
  • the KPC composition is presented as an example of biological activity for a group of related derivatives provided for in the current application.
  • mice (Balb / cAcoNCrl, 7-8 weeks of age, Charles River Laboratories GmbH, Germany) were immunized with KLH, a T-cell dependent antigen.
  • 3 mice from the group were injected subcutaneously in the presence of Freund's complete adjuvant (50/50 v / v).
  • 20 mg of KPC immunomodulator in 200 ml of PBS was injected intraperitoneally. Blood samples (50-70 ml) were collected from mice on day 7, 14, 21, and 28 from a leg vein.
  • the serum was prepared by blood coagulation for 2 hours at 37 ° C, followed by 18 hours at 8 ° C, and centrifuged at 10,000 rpm in an Eppendorf-like centrifuge.
  • the sera were stored dissolved with an antibody stabilizer (SkyTec ABB500) at 4 ° C, and at the same time analyzed by ELISA.
  • 96-well ELISA test plates (Greiner, # 656061) were applied KLH (soluble substance, Sigma H7017) in phosphate buffer solution (PBS), 0.2 mg per well overnight at 4 ° C.
  • the dissolved sera were incubated with antigen (200 mg per well) for 1 hour at room temperature, followed by washing the cells with PBS / 0.1% Tween-20.
  • the binding of mouse antibodies to KLH was determined using isotope-specific anti-murine immunoglobulins conjugated to HRP (Southern Biotechnology Ltd., anti-mouse IgM # 1021-05, anti-mouse IgGl # 1070-05, anti-mouse IgG2a # 1080-05, anti-mouse IgG2b # 1090- 05) according to the manufacturer’s protocol. TMB was used as a substrate. The results were analyzed on a Bio-Rad photometer for a microplate model 550, the optical density was measured at 595 nm.
  • the titers of the sera used are from 1/300 to 1 / 20,000 in 1/2 steps (indicated on the X axis as from 1 to 6, respectively). Serum reactivity is represented as OD, shown by sample in ELISA. The points represent the average reactivity of samples from 3 sera (from 3 mice provided). The scatter factor represents a 95% confidence interval. After a single injection, the titer of a specific antibody at day 28 differs significantly between mice immunized with and without an immunomodulator.
  • the titer of specific IgGl in the sera of mice immunized in the presence of KPC was approximately 16 times higher, and the titer of IgG2a and IgG2b was 4 times higher than in control mice immunized with the same antigen.
  • Example 16 The effect of KPC on the expression of a gene in mouse splenocytes, as determined by the PCR matrix.
  • Inbred SPF Balb / c mice (females, 12 weeks of age) were administered either an antigen, or KPC, or a combination of both.
  • KPC a sterile lamb erythrocyte suspension
  • Injections were performed subcutaneously, in the neck, with an insulin needle. Control mice were injected with PBS only.
  • antigen injection 250 ml of a sterile lamb erythrocyte suspension (SRBC from Quad Five inc., Cat # 643-100) was injected intraperitoneally through the side. The suspension was prepared as 2 ml of the initial suspension, washed 2 times (1500 rpm, 5 min) with PBS and resuspended in 2 ml.
  • SRBC sterile lamb erythrocyte suspension
  • RNALater Ambion Inc, Cat # 7021
  • Samples in RNALater were immediately frozen at -70 ° C and kept at this temperature until the RNA was isolated.
  • RNA extraction and PCR template analysis was performed as a service using SuperArray Inc according to their established protocol (www.superarray.com). RESULTS. It was found that changes in mRNA expression based on PCR data are statistically significant if the difference with the control expression level was higher than 3-fold (or increased or decreased).
  • combinatorial compositions based on short-circuit have an activating effect on both humoral and cellular immunity and can be used as immunomodulators in various immunodeficiency states.
  • Example 17 Various pharmaceutical compositions
  • the CPT composition can be given orally or can be administered by intravascular, subcutaneous, intraperitoneal injection, in the form of an aerosol, by ocular administration, into the bladder, topically, and so on.
  • methods for inhalation administration are well known in the art.
  • the dose of the therapeutic composition will vary within wide limits depending on the specific CPR administered, the nature of the disease, the frequency of administration, the route of administration, the clearance of the agent used from the host organism, and the like. The initial dose may be higher with subsequent lower maintenance doses.
  • the dose can be administered at a frequency of once a week or once every two weeks, or divided into smaller doses and administered once or several times a day, twice a week, and so on to maintain an effective dose level. In many cases, a higher dose will be required for oral administration than for intravenous administration.
  • the compounds of this invention may be included in a variety of compositions for therapeutic administration.
  • the compounds of the present the invention may be included in pharmaceutical compositions in combination with suitable pharmaceutically acceptable carriers or diluents and may be included in preparations in solid, semi-solid, liquid or gaseous forms, such as capsules, powders, granules, ointments, creams, foams, solutions, suppositories, injections, forms for inhalation use, gels, microspheres, lotions and aerosols.
  • suitable pharmaceutically acceptable carriers or diluents may be included in preparations in solid, semi-solid, liquid or gaseous forms, such as capsules, powders, granules, ointments, creams, foams, solutions, suppositories, injections, forms for inhalation use, gels, microspheres, lotions and aerosols.
  • the administration of the compounds can be carried out in various ways, including oral, buccal, rectal, parenteral, intraperitoneal, intradermal, transdermal, intratracheal administration, and so on.
  • CPRs of the invention may be distributed systemically after administration, or may be localized using an implant or other composition that keeps the active dose at the site of implantation.
  • the compounds of the present invention may be administered alone, in combination with each other, or they may be used in combination with other known compounds (for example, perforin, anti-inflammatory agents, and so on).
  • the compounds may be administered in the form of their pharmaceutically acceptable salts.
  • the following methods and excipients are given only as examples and are in no way limiting.
  • the compounds can be used alone or in combination with suitable additives for the manufacture of tablets, powders, granules or capsules, for example, with conventional additives such as lactose, mannitol, corn starch or potato starch; with binding agents such as crystalline cellulose, cellulose derivatives, gum arabic, corn starch or gelatins; with disintegrating agents, such as corn starch, potato starch or sodium carboxymethylcellulose; with lubricating agents such as talc or magnesium stearate; and, if desired, with diluents, buffering agents, wetting agents, preservatives and flavoring agents.
  • suitable additives for the manufacture of tablets, powders, granules or capsules, for example, with conventional additives such as lactose, mannitol, corn starch or potato starch; with binding agents such as crystalline cellulose, cellulose derivatives, gum arabic, corn starch or gelatins; with disintegrating agents, such as corn starch, potato starch or sodium carboxymethylcellulose
  • the compounds may be included in compositions for injection by dissolving them, suspending or emulsifying in an aqueous or non-aqueous solvent, such as vegetable or other similar oils, synthetic aliphatic acid glycerides, esters of higher aliphatic acids or propylene glycol; and, if desired, with conventional additives such as solubilizers, isotonic agents, suspending agents, emulsifiers, stabilizers, and preservatives.
  • the compounds can be used in an aerosol composition for inhalation.
  • the compounds of the present invention may be incorporated into suitable propellants under pressure, such as dichlorodifluoromethane, propane, nitrogen and the like.
  • the compounds can be included in suppositories by mixing with a variety of bases, such as emulsifying bases or water-soluble bases.
  • bases such as emulsifying bases or water-soluble bases.
  • the compounds of the present invention can be administered rectally using a suppository.
  • a suppository may contain fillers, such as cocoa butter, carbowaxes and polyethylene glycols, melted at body temperature, but solid at room temperature.
  • unit dosage forms for injection or intravenous administration may contain the compound of the present invention in the composition in the form of a solution in sterile water, normal saline or another pharmaceutically acceptable carrier.
  • Implants for sustained release of compositions are well known in the art. Implants are made in the form of microspheres, plates and so on with biodegradable or non-biodegradable polymers. For example, polymers of lactic and / or glycolic acids form a degradable polymer that is well tolerated by the host.
  • the implant containing the CAT of the invention is located close to the site of infection, so that the local concentration of the active agent is elevated compared to the rest of the body.
  • standard dosage form refers to physically discrete units suitable for use as single doses for human and animal subjects, with each unit containing a predetermined number of compounds of the present invention, which is calculated to provide the desired effect. , together with a pharmaceutically acceptable diluent, carrier or excipient.
  • diluent a pharmaceutically acceptable diluent, carrier or excipient.
  • the descriptions of the standard dosage forms of the present invention depend on the specific compound used, and the effect to be achieved, and the pharmacodynamics of the compound used on the host.
  • Pharmaceutically acceptable excipients such as fillers, adjuvants, carriers or diluents, are widely available.
  • Typical doses for systemic administration range from 0.1 pg to 100 milligrams. per kg body weight of the subject for one introduction.
  • a typical dose may be one tablet for taking two to six times a day, or one capsule, or a sustained-release tablet for taking once a day with a proportionally higher content of active ingredient.
  • the effect of sustained release may be due to the materials from which the capsule is made, capsules that dissolve at different pH values, providing slow release under the influence of osmotic pressure or by any other known method of controlled release.
  • dose levels may vary depending on the particular compound, the severity of the symptoms and the susceptibility of the subject to side effects. Some of the specific compounds are more active than others. Preferred doses of this compound can be easily determined by those skilled in the art in a variety of ways. The preferred method is to measure the physiological activity of a given compound.
  • One method of interest is the use of liposomes as filler for delivery. Liposomes fuse with cells in the target area and deliver the contents of the liposomes inside the cells. The contact of the liposomes with the cells is maintained for a time sufficient for the fusion, using various methods of maintaining the contact, such as excretion, binding agents and the like.
  • the liposomes are designed to produce an aerosol for pulmonary administration.
  • Liposomes can be made with purified proteins or peptides that mediate membrane fusion, such as Sendai virus or influenza virus, and so on.
  • Lipids can be any useful combination of known lipid-forming lipids, including cationic or zwitterionic lipids, such as phosphatidylcholine. The remaining lipids will usually be neutral or acidic lipids, such as cholesterol, phosphatidylserine, phosphatidylglycerol, and the like.
  • To obtain liposomes the method described by Kato et al. (1991) J. Biol. Chem. 266: 3361.
  • lipids and a composition for inclusion in liposomes containing CAT are mixed in a suitable aqueous medium, suitably in a saline medium, where the total solids content will be in the range of approximately PO wt.%.
  • a suitable aqueous medium suitably in a saline medium, where the total solids content will be in the range of approximately PO wt.%.
  • the tube is placed in a warm water bath at approximately 25-40 ° C and this cycle is repeated approximately 5-10 times.
  • the composition is treated with ultrasound on over a suitable period of time, usually about 1-10 seconds, and possibly further stirred on a vortex mixer.
  • the volume is then increased by adding an aqueous medium, usually increasing the volume by about 1-2 times, followed by agitation and cooling.
  • the method allows to include supramolecular structures with a high total molecular weight in liposomes.
  • compositions with other active agents are provided.
  • PPCs of the invention can be included in compositions with other pharmaceutically active agents, in particular, other antimicrobial, antiviral, hemostatic, regeneration activating agents, including pantothenic acid, cyanocobalamin, cholecalciferol.
  • Other agents of interest also include a wide range of antibiotics known in the art.
  • Classes of antibiotics include penicillins, for example, penicillin G, penicillin V, methicillin, oxacillin, carbenicillin, nafcillin, ampicillin, and so on; penicillins in combination with betalactamase inhibitors; cephalosporins, for example, cefaclor, cefazolin, cefuroxime, moxalactam, and so on; carbapenems; monobactam; aminoglycosides; tetracyclines; macrolides; lincomycins; polymyxin; sulfonamides; quinolones; chloramphenicol; metronidazole; spectinomycin; trimethoprim; vancomycin; and so on.
  • penicillins for example, penicillin G, penicillin V, methicillin, oxacillin, carbenicillin, nafcillin, ampicillin, and so on
  • penicillins in combination with betalactamase inhibitors cephalosporins
  • Antifungal agents are also useful, including polyenes, for example, amphotericin B, nystatin, flucosin; and azoles, for example, miconazole, ketoconazole, itraconazole and fluconazole.
  • Anti-TB drugs include isoniazid, ethambutol, streptomycin and rifampin.
  • Other agents of interest include a wide range of antiviral derivatives of mononucleotides and other RNA polymerase inhibitors that are known in the art.
  • Classes of antivirals include interferons, lamivudine, ribavirin, and so on; amantadine; rimantadine, for example, zinamivir, oseltavimir, and so on; acyclovir, valacyclovir, valganciclovir; and so on.
  • adefovir vbakavir, didanosine, emtricitabine, lamivudine, stavudine, tenofovir, efavirenz, nevirapine, indinavir, lopinavir and ritonavir, nelfinavir, ritonavir, saquinavir, ritonavir, sacrinavir, nacinavir, ritonavir, naklinavir, ritonavir, naklinavir, rifonavir, nafinovir, efavirenz, nevirapine Cytokines may also be included in the CPR composition of the invention, for example, interferon gamma, tumor necrosis factor alpha, interleukin 12, and so on. Above, the present invention is described by examples, which should not be construed as limiting the scope of the invention.

Abstract

Область применения: Изобретение относится к органической и биоорганической комбинаторной химии, а именно, к новым комбинаторным библиотекам производных полисахаридов и супрамолекулярным структурам на их основе, которые при использовании без разделения на отдельные компоненты обладают высокой биологической активностью. Суть изобретения новая комбинаторная библиотека и супрамолекулярная структура на ее основе из биологически активных производных полисахаридов, а также фармацевтические композиции на их основе с кровоостанавливающим, ранозаживляющим, антивирусным и иммуномодулирующим действием, содержащей в качестве основного действующего вещества неразделенную цельную комбинаторную смесь замещенных производных полимера глюкопиранозы, полученную одновременной комбинаторной модификацией полисахарида как минимум двумя ковалентными модификаторами, в результате синтеза образуется комбинаторная смесь с максимальным количеством комбинаций модифицированных производных полисахарида, а в качестве биологически активных веществ для получения фармацевтической композиции используют цельную комбинаторную смесь производных полисахарида в виде супрамолекулярной структуры без разделения на индивидуальные компоненты. Технический результат: модифицированные комбинаторные производные полисахаридов с кровоостанавливающим, ранозаживляющим, антивирусным и иммуномодулирующим действием и др. свойствами на основе которых может быть получен лекарственный, ветеринарный, агрохимический или косметический препарат с широким спектром активности. Средство имеет широкий спектр действия, мало токсично и доступно для промышленного производства.

Description

Биологически активные комбинаторные производные полисахаридов Область техники
Изобретение относится к органической и биоорганической комбинаторной химии, а именно, к новым комбинаторным библиотекам производных полисахаридов и супрамолекулярным структурам на их основе, которые при использовании без разделения на отдельные компоненты обладают высокой биологической активностью. Предшествующий уровень техники
Терминология
Фармацевтическая композиция с гемостатическим действием— смесь нескольких веществ, в т. ч. нескольких биологических активных кровоостанавливающих и ранозаживляющих, а также нескольких вспомогательных и формообразующих веществ в виде стерильного порошка для местного применения, которая может применяться в том числе для ускорения заживления ран, остановки кровотечений как при капиллярных, венозных так и при артериальных кровотечениях благодаря способности быстро набухать в ране и тампонировать ее. Аналогом предложенного средства является препарат «Целокс» (Celox), способный всасывать кровь из раны и превращаться в гель, тем самым закрывая открытые кровотечения.
Карбоксилированное производное полимера глюкопиранозы—
[C6H702(OH)3-x(0-R-COOH)x]n, где х = 0,05-3, R=-CH2-;-CO-CH2-CH2-; -СО-СН=СН- и др.) — производное полимера глюкопиранозы (Рис. 1), в котором карбоксилирование остатков глюкозы ведут путем введения карбоксильной группы (-СООН) алкилированием или ацилированием гидроксильных остатков глюкозы (глюкопиранозы); мономеры глюкопиранозы соединены между собой 1 ,4-гликозидными связями. Модификация спиртовых гидроксилов глюкопиранозы может быть осуществлена с разной степенью замещения ( х = 0,08-3) путем карбоксилирования (карбоксицеллюлоза или карбоксикрахмал ). Для карбоксилирования полисахаридов могут быть использованы малеиновый, янтарный, фталевый и другие ангидриды ди- и поли-карбоновых кислот, а для алкилирования такие вещества как монохлоруксусная кислота (образуются при этом карбоксиметилцеллюлоза либо карбоксиметилкрахмал).
Целлюлоза - один из самых распространенных природных полимеров полисахаридной природы, главная составная часть клеточных стенок растений, обусловливающая механическую прочность и эластичность растительных тканей. Макромолекулы целлюлозы построены из элементарных звеньев D-глюкозы, соединенных 1 ,4-бета-гликозидными связями в линейные неразветвленные цепи. Средняя степень полимеризации целлюлозы (число гликозидных остатков) изменяется в широких пределах - от нескольких сотен (для целлюлозы вискозного волокна она составляет 300-500) до 10- 14 тыс. (для целлюлозы хлопкового волокна и лубяных волокон). Целлюлоза имеет сложную надмолекулярную структуру. Первичный элемент - микрофибрилла, состоящая из нескольких сотен макромолекул и имеющая форму спирали (толщина 35-100, длина 500-600 нм и выше). Карбоксиметилцеллюлоза- (КМЦ, целлюлозогликолевая кислота,
[С6Н702(ОН)3-х(ОСН2СООН)х]п, где х = 0,08-1,5)— производное целлюлозы, в котором карбоксилирование целлюлозы ведут путем введения карбоксилметильной группы (-СН2- СООН) через ковал ентную связь с гидроксильными группами глюкозных мономеров. Na- карбоксиметилцеллюлоза применяется в качестве пластификатора, загустителя, ресорбента. В качестве загущающего агента входит в состав зубной пасты, пищевых продуктов, косметики, лекарственных препаратов.
Карбоксипропилцеллюлоза- КПЦ, производное целлюлозы, в котором карбоксилирование целлюлозы ведут путем введения карбоксипропильной группы (-СН2- СН2-СН2-СООН) через ковалентную связь с гидроксильными группами глюкозных мономеров. Используется в покрытиях таблеток и как пролонгирующее вспомогательное вещество при производстве различных лекарственных форм препаратов.
Карбоксиметилкрахмал- (CMS) представляет собой модифицированный крахмал, простой эфир крахмала, водорастворимый анионный полимер. Не имеет запаха, нетоксичен, имеет линейную форму при степени замещения выше 0,2 или более растворим в воде. Формула: [СбН702 (ОН) 2OCH2COONa. Может быть использован как эмульгатор, загуститель, диспергирующий агент, стабилизатор, клеящее вещество, пленкообразующий агент, который широко используются в нефтяной, текстильной, химической, табачной, бумажной, строительной, пищевой, фармацевтической и других отраслях промышленности. Обычно используется его натриевая соль, также известная как (CMS-Na). Представляет собой белый или желтый порошок, без вкуса и запаха, нетоксичен, легко поглощает влагу. Растворим в спирте, эфире, хлороформе и других органических растворителях.
Комбинаторное производное полисахарида (КПП) - полученное согласно примеров данного изобретения производное полисахарида, содержащее неразделяемую супрамолекулярную смесь из разных комбинаторно модифицированных полисахаридов.
Препараты, на основе производных целлюлозы
Вследствие наличия в элементарных звеньях макромолекулы гидроксильных групп целлюлоза легко этерифицируется и алкилируется; эти реакции широко используются в промышленности для получения простых и сложных эфиров целлюлозы. Многие производные целлюлозы способны образовывать эластичные пленки, что обусловливает их применение в производстве разнообразных лекарственных средств.
Для процессов подготовки методом обратного осмоса воды высокого качества (в том числе и в медицинских целях) выпускают несколько марок ацетилцеллюлозных мембран (серия МГА), которые имеют селективность по хлориду натрия от 70 до 90 %. Ультрацеллюлозные мембраны (размер пор от 5 до 50 нм) на основе ацетата целлюлозы применяют для очистки и концентрирования белков, ферментов, антибиотиков. Микрофильтрационные мембраны (размер пор от 100 до 1000 нм) используют в микробиологических, биологических и физико-химических анализах, для очистки растворов лекарственных препаратов от микроорганизмов, стерилизующей фильтрации, электрофоретического разделения белков сыворотки крови и других высокомолекулярных соединений.
Перспективным является применение ацетилцеллюлозы (АЦ) для микрокапсулирования низко- и высокомолекулярных лекарственных препаратов. Обычно полимерные микрокапсулы имеют размеры порядка десятков или сотен микрон, а толщина мембраны составляет сотые или десятые доли микрон. Микрокапсулированные лекарственные препараты (размер микрокапсул менее 20 мкм) вводятся в мазевые основы, используются для приготовления сиропов и других жидких лекарственных форм. Микрокапсулирование применяется при приготовлении инъекционных смесей в виде суспензий микрокапсул для внутримышечного и подкожного введения с контролируемым высвобождением .
Использование ацетилцеллюлозы для микрокапсулирования лекарственных препаратов позволило получить микрокапсулы со скоростью высвобождения препарата, зависящей от размера микрокапсулы.
Ацетаты целлюлозы используются в качестве полимерной проницаемой оболочки при иммобилизации ферментов (глюкооксидазы, инвертазы, эстеразы и др.), а также полиферментных систем (глюкозооксидазы и каталазы, глюкозооксидазы и пероксидазы). С использованием триацетата целлюлозы получены волокнистые иммобилизованные ферменты.
В производстве таблеток АЦ используется для создания пленки, предохраняющей лекарственное вещество от воздействия внешней среды, а также в качестве связывающего и гранулирующего вещества.
Водорастворимая АЦ применяется для покрытия таблеток различных препаратов (глюкозы, терпингидрата, асфена, аскофена, амидопирина и др.) и служит защитной оболочкой, обеспечивая пролонгированное действие лекарственного вещества.
Пленкообразующие свойства метилцеллюлозы (МЦ) позволяют использовать ее в качестве защитной оболочки лекарственных веществ для энтерального или местного применения. Путем растворения или суспендирования лекарственных веществ различного назначения в растворе МЦ с концентрацией полимера до 60 % получены лекарственные средства однократной дозировки в виде пленок толщиной 0,05-1 мм.
Из метилгидроксипропилцеллюлозы (МГПЦ) изготавливают пленочные покрытия для желудочнорастворимьгх твердых лекарственных форм.
Фталил, ацетилфталил, ацетилсущинил— производные целлюлозы (выпускаются японскими фирмами) широко используются в производстве лекарственных средств. Оболочка таблеток из таких полимеров не растворяется в желудке (рН = 1,4) и защищает лекарственное вещество от вредного воздействия содержимого желудка. Попав в кишечник (рН = 6,7 U 7,4), оболочка таблетки растворяется, что позволяет лекарству быстро всосаться в кровь.
Натриевая соль карбоксиметилцеллюлозы (Na-КМЦ) может использоваться в качестве защитной оболочки суппозиториев, предназначенных для употребления в местах с жарким климатом. Таблетки с хорошим внешним видом и удовлетворительными характеристиками по прочности и распадаемости в организме обычно получаются при использовании (1-8) % растворов Na-КМЦ. Алюминиевая соль КМЦ в виде 1-5% водного раствора применяется для изготовления быстро распадающихся вагинальных таблеток.
Пленки Na-КМЦ обладают выраженным стимулирующим действием на репаративные процессы в инфицированных ранах кожи, ускоряют образование и созревание грануляционной ткани, активно влияют на процессы фибриллогенеза. Эффективным средством для лечения длительно не заживающих радиационных ожогов является мазь, представляющая собой гель Na-КМЦ, содержащий противовоспалительное вещество— фодомос. Мази на основе Na-КМЦ применяются в качестве светозащитных, покрывающих и охлаждающих паст. Бактерицидные жидкости, содержащие Na-КМЦ, образуют смываемые водой пленки и могут использоваться для обработки наружных ран.
Чистые гидрогели метилцеллюлозы используются как высыхающая мазь или влажная повязка, а также как защитные мази при работе с органическими растворителями и агрессивными средами. Для лечения кожных заболеваний, ожогов и местного обезболивания применяются мази на основе МЦ, содержащие анестетики, антибиотики, соли серебра, ртути, цинка и др.
Для лечения ран и ожогов предложено использование монокарбоксгшцеллюлозы (МКЦ) в виде седиментационно устойчивой водной суспензии, которая образует на подсыхающей раневой поверхности пленку. Такая форма МКЦ может рассматриваться как биоматериал, сочетающей в себе свойства раневого покрытия и лечебного средства, стимулирующего заживление. Ускорение заживления ожогов с помощью МКЦ составляет 35 %. Диапазон лечебного действия суспензии может быть значительно расширен за счет введения в ее состав биологически активных веществ.
Поскольку фармакологическое действие многих лекарственных веществ определяется наличием в их составе соответствующих химических групп, реализован новый подход к синтезу лекарственных полимеров с использованием химических свойств производных целлюлозы. Заданный характер фармакологического действия придается полимеру введением в полимерную цепочку соответствующих химических групп.
Пролонгированное действие лекарств может быть достигнуто и путем их присоединения к полимерной матрице относительно лабильной ковалентной связью, в частности сложноэфирной или амидной. Для получения такого рода производных реакцию фиксации лекарственного средства проводят с хлорангидридом карбоксиметилцеллюлозы.
Ранее комбинаторных производных полисахаридов не получали, двойной модификации не проводили и биологические свойства таких соединений не известны. Некрахмальные полисахариды
С химической точки зрения углеводы разделяют на «сахара» (моно- и дисахариды), олигосахариды и полисахариды. К олиго- и полисахаридам относятся соединения, молекулы которых построены из остатков моносахаридов, соединенных О-гликозидными связями. Разграничение олигосахаридов и полисахаридов не может быть сделано строго, но с методической точки зрения целесообразно считать олигосахаридами соединения, содержащие до 8.10 моносахаридных звеньев, а к полисахаридам относить более высокомолекулярные сахара. Главными компонентами пищевых волокон являются полисахариды, образующие как линейные, так и разветвленные цепи. Важную роль в определении физических свойств и способности полисахаридов образовывать ассоциации с другими полисахаридами и белками играют боковые углеводные цепи и конфигурация их гликозидных связей. Часть полисахаридов, состоящих из остатков D-глюкозы, соединенных 1— »4 и 1— >6 α-гликозидными связями (крахмалы), гидролизуется амилазами слюнных и панкреатических желез млекопитающих, абсорбируется в тонкой кишке и вместе с моно- и дисахаридами составляет так называемые доступные, или усваиваемые, углеводы. Другая часть полисахаридов (некрахмальные полисахариды) не гидролизуется амилазами, не абсорбируется в кровь и частично или полностью подвергается ферментной деградации микрофлорой толстой кишки. Кроме некрахмальных полисахаридов, ряд олигосахаридов (раффиноза, стахиоза, вербаскоза), фрукто-олигосахариды, высокомолекулярные фруктаны (инулины), полиспирты (сорбит, ксилит, маннит и др.), полидекстроза (синтетический полимер глюкозы), а также резистентный крахмал в большей или меньшей степени не расщепляются в тонкой кишке, ферментируются кишечной микрофлорой и физиологически имеют много общего с пищевыми волокнами. Более того, некоторые авторы к пищевым волокнам относят пентозаны, аминосахара грибов и членистоногих, неуглеводное соединение лигнин и неперевариваемые белки. Следовательно, термин «пищевые волокна» включает более широкий круг веществ, чем неусваиваемые углеводы и некрахмальные полисахариды. К наиболее изученным некрахмальным полисахаридам можно отнести пектины, альгинаты, каррагинаны, хитозаны и фукоиданы. Пектины входят в состав клеточной стенки высших растений, где они выполняют функции цементирующего материала для волокон целлюлозы. Многие растения содержат пектины в межклеточном слое между первичными клеточными стенками, где они участвуют в регуляции движения воды и клеточных соков. Первичными блоками полимерной цепи пектинов являются остатки D-галактуроновой кислоты, которые соединены друг с другом <х(1—4)-связью. Образованные таким образом цепи насчитывают несколько сотен галактуроновых блоков. Между блоками галактуроновой кислоты на разных расстояниях друг от друга располагаются остатки L-рамнозы, соединенные с галактуроновой кислотой а(1— >2)-связью, вследствие чего цепь пектина в этом месте изгибается примерно на 90°. От основной линейной цепи рамногалактуронана берут начало боковые цепи, состоящие из нейтральных Сахаров, чаще всего арабинозы и галактозы. Арабинановая, галактонановая и арабиногалактонановая боковые цепи соединены с рамнозой (1— *4)-связью. Остатки арабинозы соединяются между собой (1— »5)-связыо, а галактозные . (1— »4), хотя встречаются (1—3) и (1— »6)-связи. Встречаются также D- галактопираноза, L-арабинофураноза, D-ксилопираноза, D-глюкопираноза и L- фукопираноза и очень редко. D-апиоза, 2-0-метил-В-ксилоза и 2-О-метилфукоза. Обычно боковые цепи из нейтральных Сахаров имеют длину от 8 до 20 молекул, и на их долю приходится 10.15 % массы пектина. Различают высокометоксилированные и низкометоксилированные пектины. Метоксилированным пектин считается в том случае, когда карбоксильные группы остатков галактуроновой кислоты этерифицированы метиловым спиртом. Чем больше таких групп в полимерной цепи пектина, тем выше степень этерификации, или метоксилирования, и наоборот. Высокометоксилированные пектины характеризуются степенью этерификации более 50 % (обычно от 60 до 80 %), а низкометоксилированные . менее 50 % (обычно 30-40 %) [6]. Альгиновая кислота и ее соли встречаются главным образом в морских бурых водорослях (Phaeophyta), в которых они составляют основную часть полисахаридов, достигая 40 % сухой массы, а также в красных водорослях семейства Corallinaceae. Сейчас известно, что бактерии, принадлежащие к родам Pseudomonas и Azotobacter, содержат ацетилированные альгинаты. В талломах водорослей фикоколлоиды являются первичными компонентами клеточных стенок и внеклеточного матрикса, играя роль «скелета» и обеспечивая прочность и гибкость ткани. Альгиновая кислота состоит из остатков -О-маннуроновой и a-L-гулуроновой кислот, соединенных (1— >4)-связями. Полимерная нить альгинатов состоит из гомополимерных полиманнуроновых и полигулуроновых областей, или блоков, между которыми могут находиться чередующиеся остатки обеих кислот. С поливалентными металлами альгиновая кислота образует несколько типов альгинатов. У полных альгинатов все карбоксильные группы связаны с катионами. Такие альгинаты нерастворимы в воде. Неполные альгинаты могут быть растворимы и нерастворимы в воде. В то же время полные альгинаты одновалентных металлов хорошо растворимы в воде и образуют вязкие, клейкие растворы. К растворимым относятся соли калия, натрия, а также магния и аммония. Альгинаты могут быть монокатионными, когда в образовании альгината участвуют катионы одного металла, и поликатионными с катионами нескольких металлов. Источником каррагинана являются красные водоросли, относящиеся к семействам Gigartinaceae, Solieriaceae, Rhabdoniaceae, Hypneaceae, Phyllophoraceae, Petrocelidaceae, Caulacanthaceae, Cystocloniaceae, Rhodophyllidaceae, Furcellariaceae, Tichocarpaceae и Dicranemataceae. Каррагинаны представляют собой сульфатированные галактаны, содержащие D-галактозу и ее производные, остатки которых соединены регулярно чередующимися β(1—4)- и а(1— »3)- связями. 4-О-замещенный остаток каррагинанов может быть, как галактозой, так и ее 3,6- ангидропроизводным, а различные гидроксильные группы могут быть сульфатированы. Регулярные полисахариды, молекулы которых построены из дисахаридных повторяющихся звеньев одного типа, получили собственные названия. Так, установлено несколько «предельных», или идеализированных, структур каррагинана, что позволило разделить их на типы, различающиеся содержанием 3,6-ангидро-галактозы, местоположением и количеством сульфатных групп. В соответствии со структурными особенностями повторяющегося звена выделяют 6 главных типов каррагинана: к, λ, ι, ν, μ и θ. Каррагинаны μ, ν и λ могут быть превращены соответственно в κ-, ι- и θ-каррагинаны щелочной или ферментативной модификацией. Однако реальные природные полисахариды редко соответствуют таким идеализированным структурам; обычно наблюдается комбинация двух или более предельных структур в одной полимерной молекуле. Согласно модифицированной номенклатуре галактанов красных водорослей для обозначения гибридной или «замаскированной» структуры полисахарида используется кодовая система заглавных букв [33]. Предшественником хитозана является полимер Ν-ацетил-О- глюкозамин (хитин), который синтезируется у животных, главным образом у ракообразных, моллюсков и насекомых, являясь важным компонентом экзоскелета, и у некоторых грибов в качестве основного фибриллярного полимера клеточной стенки. Хитозан как полимер Р-(1-+4)-2-ацетамидо-2-дезокси-0-глюкопиранозы получают путем щелочного деацетилирования хитина. Фукоиданы являются сложными сульфатированными полисахаридами, встречающимися в бурых морских водорослях, в яйцах морских ежей и в стенке тела кукумарий. Стержневая цепь фукоидана состоит из остатков L-фукозы, соединенных <х(1— >3)-связями с сульфатными группами в 4-м положении на некоторых остатках фукозы. К этому полимеру присоединяются другие остатки фукозы, формирующие точки ветвления через а(1— »2)- или а(1— »4)-связи. Отмечено также присутствие в фукоидане небольшого количества других Сахаров, таких как ксилоза, галактоза, манноза и глукуроновая кислота. Известна фармацевтическая композиция (US Patent 5773033 "Autologous isolated and purified fibrinogen with biocompatible anionic or cationic chitosan polymer"), представляющая собой хитозан/фибриноген содержащие гемо статические агенты. Запатентованы агенты, содержащие фибриноген и хитозан имеющие сильные гемостатические свойства и применимые в ургентных случаях для остановки кровотечения из поврежденных сосудов. Хитозан и фибриноген наносят на тканевую основу и при кровотечениях подобную ткань наносят на рану, останавливая тем самым кровотечение.
Недостатком данного изобретения является наличие дорогостоящего белка фибриногена из донорской крови в лиофилизированном виде. Кроме того, хитозан и его соли имеют очень ограниченную степень набухания и скорость начала действия. Такие композиции не могут применяться для ургентной остановки тяжелых огнестрельных, в т.ч. абдоминальных, кровотечений в связи с началом действия через 15-20 минут. Через этот промежуток времени при артериальных кровотечениях пациент теряет более 50% крови и погибает. Кроме того, эти композиции не способны активировать регенерацию тканей.
Данные недостатки устраняются путем применения комбинаторных смесей бинарно модифицированных производных полисахаридов, в том числе в виде солей. Невысокая себестоимость этих продуктов, образование солей между ними и карбокси- полисахаридным носителем при набухании, высокая скорость набухания и высокий процент захвата жидкости обуславливает возможность применения данной композиции в виде порошка при внесении в рану для остановки ургентных, в т.ч. артериальных кровотечений. Суперэффектом предлагаемых производных полисахаридов является практически мгновенное набухание (5 секунд для поглощения 10 объемов жидкости).
Раскрытие изобретения
Целью изобретения является создание комбинаторной смеси биологически активных производных полисахаридов и фармацевтических композиций на их основе с гемостатическим, ранозаживляющим, антивирусным, иммуномодулирующим действием, способной проявлять быстрый эффект в экстренных случаях при разрывах сосудов, в т.ч. огнестрельных и в т.ч. при артериальных кровотечениях при местном применении в виде стерильного порошка.
Поставленная цель достигается путем создания неразделяемой комбинаторной смеси биологически активного производного полисахарида (полисахаридов) и фармацевтических композиций на их основе с кровоостанавливающим, ранозаживляющим, антивирусным и иммуномодулирующим действием, содержащей в качестве основного действующего вещества неразделяемую супрамолекулярную комбинаторную смесь замещенных производных полимера глюкопиранозы, полученную одновременной комбинаторной модификацией полисахарида как минимум двумя ковалентными модификаторами, в результате синтеза образуется комбинаторная смесь с максимальным количеством комбинаций модифицированных производных полисахарида, а в качестве биологически активных веществ для получения фармацевтической композиции используют цельную комбинаторную смесь производных полисахарида в виде супрамолекулярной структуры без разделения на индивидуальные компоненты.
Дополнительными отличиями предлагаемого изобретения является то, что
- мольное соотношение полисахарида и ковалентных модификаторов в реакции комбинаторного синтеза рассчитывают по формулам:
О) k= n x (2n - 1)
(2) m= 4 χ (3χ2η'2 - 1),
где
п=количество доступных для замещения групп в полисахариде (в пересчете на мономер - производное глюкопиранозы);
т=количество молей исходного полисахарида и количество разных молекул
комбинаторных производных после синтеза (в пересчете на производное глюкопиранозы); к=количество молей каждого из двух модификаторов в реакции комбинаторного синтеза для получения максимального количества разных производных;
- в качестве исходного полимера для последующего комбинаторного бинарного синтеза используют целлюлозу, карбоксиметилцеллюлозу, карбоксиметилпропилцеллюлозу, гепарин, хитозан, сукцинилхитозан, карбоксиметилхитозан, крахмал, карбоксиметилкрахмал, метилкрахмал, гепарин;
- дополнительно содержит основание аминокислоты лизина; - фармацевтические композиции на основе полученных комбинаторных производных обладают иммуномодулирующим, противовирусным, ранозаживляющим и кровоостанавливающим действием. Краткое описание чертежей
Фиг.1. Химическая структура гепарина (С AS 9041-08-1, Mr= 1134.899 g/mol, п=6), содержит 6 доступных для модификации равноценных гидроксильных групп в структуре глюкопиранозы.
Варианты осуществления изобретения
Пример 1. Получение комбинаторной смеси К1 на основе производных крахмала
В смеситель добавляют 0,1-90 кг крахмала, добавляют 1-900 л горячей воды, перемешивают раствор до полного растворения полисахарида, раствор охлаждают до комнатной температуры, всыпают 0,02-10 кг янтарного ангидрида и 0,02-10 кг малеинового ангидрида, раствор перемешивают до полного растворения ангидридов. К раствору приливают 1-500 л 96% этанола (или метанола), оставляют на сутки, осадок отделяют фильтрованием и высушивают, далее используют как вариант К1 в фармацевтических композициях.
Вместо крахмала могут быть использованы другие незамещенные или монозамещенные производные крахмала: карбоксикрахмала, сукцинилкрахмал, малеинилкрахмал, карбоксиметилкрахмал и их смесь. Также на основе полученной комбинаторной смеси крахмала могут быть получены соли с металлами либо аминами стандартными методами, известными ординарному специалисту в своей области.
Пример 2. Получение комбинаторной смеси К2 на основе производных целлюлозы В смеситель добавляют m моль кароксиметилцеллюлозы (в пересчете на мономер - монокарбоксиметил глюкозу), добавляют 5т моль горячей воды и 5т моль этанола, перемешивают раствор до полного растворения полисахарида, раствор охлаждают до комнатной температуры, всыпают к моль янтарного ангидрида и вливают к моль метилхлорида, раствор перемешивают до полного растворения модификаторов. К раствору приливают 5т моль этанола 96% этанола (или метанола), оставляют на сутки, осадок отделяют фильтрованием и высушивают, далее используют как вариант К2 в фармацевтических композициях.
Расчет мольного соотношения модификаторов и полисахарида ведут по формулам:
(1) k= n x (2n - 1)
(2) m= 4 х (3χ2η-2 - 1),
где
п=количество доступных для замещения групп в полисахариде (в пересчете на мономер - производное глюкопиранозы, п=4 для глюкопиранозы, средняя длина цепи 10 звеньев, соответственно для КМЦ п=40);
т=количество молей исходного полисахарида и количество разных молекул
комбинаторных производных после синтеза (в пересчете на производное глюкопиранозы) т= 3298534883324 (3,3* 1012)
k-количество молей каждого из двух модификаторов в реакции комбинаторного синтеза для получения максимального количества разных производных (для КМЦ =
43980465111000 или 4,4* 1013 моль каждого модификатора)
Это означает, что для получения комбинаторной смеси с максимальным количеством разных производных, которых к смеси будет 3298534883324 молекул (или моль), нужно взять 3298534883324 (или 3,3* 1012) моль полисахарида (со средним количеством звеньев цепи = 10 по 4 доступных гидроксильных групп в каждом) и по 43980465111000 моль каждого из модификатора (4,4* 1013 моль). Таким образом, мольное соотношение полисахарид: модификатор jVsl : модификатор N°2 составляет 1 : 13: 13. При этом образуется комбинаторная смесь из 3,3* 1012 разных молекул производных полисахарида с разным положением заместителей и разной степенью замещения молекул. Такая смесь физически не может быть разделена на отдельные компоненты и в водных растворах образует сложную супрамолекулярную структуру через водородные и ионные связи. Биологическая активность производных обусловлена именно супрамолекулярной структурой, а не индивидуальным компонентом. Такая структура из множества похожих, но отличающихся полисахаридов напоминает смесь иммуноглобулинов и гликопротеидных адгезинов с иммуномодулирующим эффектов. Существующие в настоящее время методы физико- химического анализа не в состоянии идентифицировать 3,3* 1012 разных молекул в одной смеси. Отличительным признаком данной структуры является только наличие необычных биологических (фармакологических) свойств в отличии от исходных полисахаридов. Применение классических физико-химических методов через определение мономерной последовательности, мест замещения не актуальны, т.к. структура полисахарида изначально нами была известна и доказана, а определять места замещения не имеет смысла, т.к. замещение идет по принципу комбинаторики в случайном порядке, а производные по количеству распределены согласно нормальному распределению. Медианы нормального распределения могут быть смещены вправо либо влево в зависимости от степени доступности той или иной группы, но физико-химические анализы подобных структур пока не разработаны. При изменении мольного соотношения полисахарид: модификаторы в сторону увеличения количества модификаторов, более чем по 13 моль на 1 моль полисахарида вместо разных комбинаторных производных синтезируются полностью замещенные производные в значительно меньшем количестве. Аналогичная картина наблюдается при уменьшении количества модификаторов менее 13 моль на 1 моль полисахарида. В этом случае также наблюдается значительное уменьшение количества разнообразных производных за счет наличия незамещенных производных. Максимальной активностью обладают не индивидуальные производные, а супрамолекулярная структура из них. Эта структура стабилизируется только на пике синтеза максимального разнообразия производных, то есть при соотношении полисахарид: модификаторы как 1 :13:13.
Вместо карбоксиметилцеллюлозы могут быть использованы другие незамещенные или монозамещенные производные целлюлозы: карбоксикрахмала, сукцинилкрахмал, малеинилкрахмал, карбоксиметилкрахмал или их смесь: сукцинилцеллюлоза, малеинилцеллюлоза, карбоксиметилцеллюлоза, пропилцеллюлоза, фталилцеллюлоза и их смесь.
Также на основе полученной комбинаторной смеси целлюлозы могут быть получены соли с металлами либо аминами стандартными методами, известными ординарному специалисту в своей области.
Пример 3. Получение комбинаторной смеси КЗ на основе производных гепарина
В смеситель добавляют m моль (CAS 9041-08-1, Mr= 1134.899 g/mol, п=6) гепарина (Фиг.1.), добавляют 5т моль горячей воды и 5т моль этанола, перемешивают раствор до полного растворения полисахарида, раствор охлаждают до комнатной температуры, всыпают к моль янтарного ангидрида и вливают к моль малеинового ангидрида, раствор перемешивают до полного растворения модификаторов. К раствору приливают 5т моль этанола 96% этанола (или метанола), оставляют на сутки, осадок отделяют фильтрованием и высушивают, далее используют как вариант К2 в фармацевтических композициях.
Расчет мольного соотношения модификаторов и полисахарида ведут по формулам:
О) k= n x (2"- 1)
(2) m= 4 χ (3*2η-2 - 1),
где
п=количество доступных для замещения групп в полисахариде (для данного полисахарида гепарина п=6);
т=количество молей исходного полисахарида и количество разных молекул
комбинаторных производных после синтеза (для гепарина) m= 188
к=количество молей каждого из двух модификаторов в реакции комбинаторного синтеза для получения максимального количества разных производных (для гепарина = 378 моль каждого модификатора)
Это означает, что для получения комбинаторной смеси с максимальным количеством разных производных, которых к смеси будет 188 производных гепарина, нужно взять 188 моля гепарина (с 6-ю доступными для модификации группами) и по 378 моль каждого из модификатора. Таким образом, мольное соотношение полисахарид: модификатор N°l: модификатор N°2 составляет 1 : 2 : 2. При этом образуется комбинаторная смесь из 188 разных молекул производных гепарина с разным положением заместителей и разной степенью замещения молекул. Такая смесь в водных растворах образует сложную супрамолекулярную структуру через водородные и ионные связи. Биологическая активность производных обусловлена именно супрамолекулярной структурой, а не индивидуальным компонентом. Такая структура из множества похожих, но отличающихся полисахаридов напоминает смесь иммуноглобулинов и гликопротеидных адгезинов с иммуномодулирующим эффектов. В дальнейшем образцы К1, К2, КЗ были изучены на несколько видов биологической активности. Существующие в настоящее время методы физико-химического анализа не в состоянии идентифицировать множество разных молекул в одной смеси, если молекулы близки по молекулярным массам. Отличительным признаком данной структуры является только наличие необычных биологических (фармакологических) свойств в отличии от исходных полисахаридов. Также на основе полученной комбинаторной смеси гепарина могут быть получены соли с металлами либо аминами стандартными методами, известными ординарному специалисту в своей области.
Вместо гепарина могут быть использованы такие природные полисахариды: инулин, пектины, камеди, слизи, альгиновая кислота, хитозан.
ЯМР С13: СН: s: 106,1; 105,8; 104,3; 95,4; 78,5; 77,0; 75,6; 79,5; 78,8; 86,8; 80,1; 77,5;
78,2; 71,8; 73,8; 69,2; 66,1; 58,1; 56,1; С: m 166,5 - 174,7; СН2: 62,2; 68,2; 29,5; 29,1; 23,6; СН: 134,9; 136,1
Исходя их ЯМР спектра можно с уверенностью сказать о наличии остатков янтарной и малеиновой кислот в комбинаторно смеси, а образование сложной супрамолекулярной структуры подтверждается наличием сплошного мультиплета полос в области 166,5-174,7. Аналогичная картина характерна для сложных супрамолекулярных структур катенанов и ротаксанов.
Для проверки антивирусной активности синтезированных производных гепарина с другими соотношениями компонентов в реакции комбинаторного синтеза изучали противовирусную активность производных скрининговым методом на моделях вируса гриппа H1N1 (Inf), референтного штамма вируса везикулярного стоматита (Vesic- VVS) и вируса герпеса 1 типа (Негр. - штам Л-2) в планшетах на культуре куриных фибробластов по степени деградации (цитопатический эффект, открепление от дна лунки). Степень «слущивания» клеток определяли по окраске культуры витальным красителем,
концентрацию которого определяли спектрофотометрически относительно здорового монослоя и пустой лунки. Результаты исследований in vitro приведены в таблице 1.
Таблица 1. - Антивирусная активность супрамолекулярных комбинаторных
производных гепарина КЗ, полученных в реакции с разным мольным соотношением модификаторов
N° п/п Мольные соотношения реагентов* % цитопротекторного
антивирусного действия** m kl k2 Inf Негр Vesic
1 188 1512*** 1512*** 0 0 0
2 -II- 756 756 50 45 45
3 -II- 378 378 100 90 100
4 -II- 94 94 59 30 45
5 -II- 47 47 0 0 0 -II- 23 23 0 0 0
-II- 12 12 0 0 0
-II- 6 6 0 0 0
-II- 3 3 0 0 0
-II- 1 1 0 0 0
-II- 0 0 0 0 0
-II- 1512*** 0 0 0 0
-II- 756 0 0 0 0
-II- 378 0 0 0 0
-II- 94 0 0 0 0
-II- 47 0 0 0 0
-II- 23 0 0 0 0
-II- 12 0 0 0 0
-II- 6 0 0 0 0
-II- 3 0 0 0 0
-II- 1 0 0 0 0
-II- 0 1512*** 0 0 0
-II- 0 756 0 0 0
-II- 0 378 0 0 0
-II- 0 94 0 0 0
-II- 0 47 0 0 0
-II- 0 23 0 0 0
-II- 0 12 0 0 0
-II- 0 6 0 0 0
-II- 0 3 0 0 0
-II- 0 1 0 0 0
-II- 3024*** 0 0 0 0
-II- 1512 1 0 0 0
-II- 756 3 0 0 0
-II- 378 6 0 0 0
-II- 94 12 0 0 0
-II- 47 23 40 35 30 39 -II- 23 47 0 0 0
40 -II- 12 94 0 0 0
41 -II- 6 378 0 0 0
42 -II- 3 756 0 0 0
43 -II- 1 1512 0 0 0
44 -II- 0 3024*** 0 0 0
* m- количество молей гепарина в реакции комбинаторного синтеза; к1- количество молей янтарного ангидрида в реакции; к2 - количество молей малеинового ангидрида в реакции; ** % оставшегося монослоя клеток после инфицирования вирусами и замены культуры на исследуемый препарата в культуре после 48 часов инкубации в присутствии исследуемого вещества, добавленного в предварительно подобранной концентрации (ED9o=0,075
мкг/мл);
*** максимальное мольное соотношение, при котором замещаются все группы в
полисахариде, превышение этого соотношения приводит к тому, что в реакционной среде остаются непрореагировавшие модификаторы - янтарный ангидрид и малеиновый ангидрид.
Как видно из таблицы 1, только при рассчитанном соотношении компонентов, когда образуется максимальное количество разных производных гепарина, образуется биологическая активная и эффективная супрамолекулярная структура (производное 3 или КЗ), способная в дозе 0,075 мкг/мл полностью защищать монослой клеток (EDioo) от деградирующего цитопатического действия вирусов.
Пример 4. Получение фармацевтической композиции «К1К» В смеситель добавляют 0, 1 -90 кг комбинаторную смесь модифицированного крахмала (или его солей), добавляют 0,1-30 кг основания аминокислоты L-лизина, перемешивают до полной однородности, фасуют по 1-30 г в алюминиевые пакеты или стеклянные флаконы. Флаконы укупоривают резиновыми пробками и вальцуют алюминиевыми крышками, а алюминиевые пакеты запаковывают на упаковочной машине. Флаконы и пакеты стерилизуют в автоклаве при стандартных условиях стерилизации (120 0 С, 30 мин).
Соли комбинаторных производных получают известными способами, которые, как правило, включают смешивание К1 либо с фармацевтически приемлемой кислотой с образованием соли присоединения кислоты, либо с фармацевтически приемлемым основанием с образованием соли присоединения основания. Является ли кислота или основание фармацевтически приемлемыми, может быть легко решено специалистом, квалифицированным в данной области техники, после принятия во внимание определенного предполагаемого использования соединения. Например, не все кислоты и основания, которые являются приемлемыми для ex vivo применений, могут быть использованы для фармацевтических композиций, и не все кислоты, и основания, которые являются подходящими для локального использования, могут быть применены парентерально. В зависимости от предполагаемого использования, фармацевтически приемлемые кислоты включают органические и неорганические кислоты, такие как муравьиная кислота, уксусная кислота, пропионовая кислота, молочная кислота, гликолевая кислота, щавелевая кислота, пировиноградная кислота, янтарная кислота, малеиновая кислота, малоновая кислота, коричневая кислота, серная кислота, соляная кислота, бромистоводородная кислота, азотная кислота, хлорная кислота, фосфорная кислота и тиоциановая кислота, которые образуют соли аммония со свободными аминогруппами пептидов и конъюгатов. Особенно предпочтительной является, таким образом, пальмитиновая кислота для производства солей К1 изобретения. Фармацевтически приемлемые основания, которые образуют соли карбоксилатов со свободными карбоксильными группами К1 и функциональными эквивалентами, включают этиламин, метиламин, диметиламин, триэтиламин, изопропиламин, диизопропиламин и другие моно-, ди- и триалкиламины, так же как ариламины. Кроме того, также включены фармацевтически приемлемые сольваты.
Фармацевтически приемлемые соли могут быть использованы в изобретении, например, соли неорганических кислот, такие как гидрохлориды, гидробромиды, фосфаты, сульфаты и т.п.; и соли органических кислот, такие как ацетаты, пропионаты, малонаты, бензоаты и т.п. Полное обсуждение фармацевтически приемлемых наполнителей доступно в Фармацевтических Науках Ремингтона (Mack Pub. Co., N. J. 1991). Фармацевтически приемлемые носители в фармацевтических композициях могут содержать жидкости, такие как воду, соляной раствор, глицерин и этанол. Кроме того, вспомогательные вещества, такие как увлажнитель или эмульгирующие вещества, вещества, создающие рН, и т.п., могут присутствовать в таких средах для лекарства. Как правило, парентеральные фармацевтические композиции готовят в качестве инъекций, или в качестве жидких растворов или суспензий; твердые формы, подходящие для растворения или образования суспензии в жидких средах для лекарства, могут также быть приготовлены до инъекции. Липосомы включены в определение фармацевтически приемлемого носителя. Для терапевтического воздействия К1 может быть получен как описано выше и применены к объекту, который нуждается в этом. К1 могут быть введены в объект любым подходящим способом, предпочтительно в форме фармацевтической композиции, приспособленной к такому способу и в дозировке, которая является эффективной для предполагаемого лечения.
Пример 5. Получение фармацевтической композиции «К2К» В смеситель добавляют 0,1-90 кг комбинаторную смесь модифицированной целлюлозы (или ее солей), добавляют 0,1-30 кг основания аминокислоты L- лизина, перемешивают до полной однородности, фасуют по 1-30 г в алюминиевые пакеты или стеклянные флаконы. Флаконы укупоривают резиновыми пробками и вальцуют алюминиевыми крышками, а алюминиевые пакеты запаковывают на упаковочной машине. Флаконы и пакеты стерилизуют в автоклаве при стандартных условиях стерилизации (120 0 С, 30 мин).
Соли комбинаторных производных получают известными способами, которые, как правило, включают смешивание К2 либо с фармацевтически приемлемой кислотой с образованием соли присоединения кислоты, либо с фармацевтически приемлемым основанием с образованием соли присоединения основания. Является ли кислота или основание фармацевтически приемлемыми, может быть легко решено специалистом, квалифицированным в данной области техники, после принятия во внимание определенного предполагаемого использования соединения. Например, не все кислоты и основания, которые являются приемлемыми для ex vivo применений, могут быть использованы для фармацевтических композиций, и не все кислоты, и основания, которые являются подходящими для локального использования, могут быть применены парентерально. В зависимости от предполагаемого использования, фармацевтически приемлемые кислоты включают органические и неорганические кислоты, такие как муравьиная кислота, уксусная кислота, пропионовая кислота, молочная кислота, гликолевая кислота, щавелевая кислота, пировиноградная кислота, янтарная кислота, малеиновая кислота, малоновая кислота, коричневая кислота, серная кислота, соляная кислота, бромистоводородная кислота, азотная кислота, хлорная кислота, фосфорная кислота и тиоциановая кислота, которые образуют соли аммония со свободными аминогруппами пептидов и конъюгатов. Особенно предпочтительной является, таким образом, пальмитиновая кислота для производства солей К2 изобретения. Фармацевтически приемлемые основания, которые образуют соли карбоксилатов со свободными карбоксильными группами 2 и функциональными эквивалентами, включают этиламин, метиламин, диметиламин, триэтиламин, изопропиламин, диизопропиламин и другие моно-, ди- и триалкиламины, так же как ариламины. Кроме того, также включены фармацевтически приемлемые сольваты.
Фармацевтически приемлемые соли могут быть использованы в изобретении, например, соли неорганических кислот, такие как гидрохлориды, гидробромиды, фосфаты, сульфаты и т.п.; и соли органических кислот, такие как ацетаты, пропионаты, малонаты, бензоаты и т.п. Полное обсуждение фармацевтически приемлемых наполнителей доступно в Фармацевтических Науках Ремингтона (Mack Pub. Co., N. J. 1991). Фармацевтически приемлемые носители в фармацевтических композициях могут содержать жидкости, такие как воду, соляной раствор, глицерин и этанол. Кроме того, вспомогательные вещества, такие как увлажнитель или эмульгирующие вещества, вещества создающие рН, и т.п., могут присутствовать в таких средах для лекарства. Как правило, парентеральные фармацевтические композиции готовят в качестве инъекций, или в качестве жидких растворов или суспензий; твердые формы, подходящие для растворения или образования суспензии в жидких средах для лекарства, могут также быть приготовлены до инъекции. Липосомы включены в определение фармацевтически приемлемого носителя. Для терапевтического воздействия К2 может быть получен как описано выше и применены к объекту, который нуждается в этом. К2 могут быть введены в объект любым подходящим способом, предпочтительно в форме фармацевтической композиции, приспособленной к такому способу и в дозировке, которая является эффективной для предполагаемого лечения.
Пример 6. Получение фармацевтической композиции «КЗК»
В смеситель добавляют 0,1-90 кг комбинаторную смесь модифицированного гепарина (или его солей), добавляют 0,1-30 кг основания аминокислоты L-лизина, перемешивают до полной однородности, фасуют по 0,05-0,1 г в стеклянные флаконы. Флаконы укупоривают резиновыми пробками и вальцуют алюминиевыми крышками. Флаконы стерилизуют в автоклаве при стандартных условиях стерилизации (120 0 С, 30 мин). Также можно изготовить стерильный 0,1-5% раствор на дистиллированной воде либо 0,9% растворе хлорида натрия, расфасовать в ампулы или шприцы и простерилизовать автоклавированием (120 0 С, 30 мин).
Соли комбинаторных производных получают известными способами, которые, как правило, включают смешивание КЗ либо с фармацевтически приемлемой кислотой с образованием соли присоединения кислоты, либо с фармацевтически приемлемым основанием с образованием соли присоединения основания. Является ли кислота или основание фармацевтически приемлемыми, может быть легко решено специалистом, квалифицированным в данной области техники, после принятия во внимание определенного предполагаемого использования соединения. Например, не все кислоты и основания, которые являются приемлемыми для ex vivo применений, могут быть использованы для фармацевтических композиций, и не все кислоты, и основания, которые являются подходящими для локального использования, могут быть применены парентерально. В зависимости от предполагаемого использования, фармацевтически приемлемые кислоты включают органические и неорганические кислоты, такие как муравьиная кислота, уксусная кислота, пропионовая кислота, молочная кислота, гликолевая кислота, щавелевая кислота, пировиноградная кислота, янтарная кислота, малеиновая кислота, малоновая кислота, коричневая кислота, серная кислота, соляная кислота, бромистоводородная кислота, азотная кислота, хлорная кислота, фосфорная кислота и тиоциановая кислота, которые образуют соли аммония со свободными аминогруппами пептидов и конъюгатов. Особенно предпочтительной является, таким образом, пальмитиновая кислота для производства солей КЗ изобретения. Фармацевтически приемлемые основания, которые образуют соли карбоксилатов со свободными карбоксильными группами КЗ и функциональными эквивалентами, включают этиламин, метиламин, диметиламин, триэтиламин, изопропиламин, диизопропиламин и другие моно-, ди- и триалкиламины, так же как ариламины. Кроме того, также включены фармацевтически приемлемые сольваты.
Фармацевтически приемлемые соли могут быть использованы в изобретении, например, соли неорганических кислот, такие как гидрохлориды, гидробромиды, фосфаты, сульфаты и т.п.; и соли органических кислот, такие как ацетаты, пропионаты, малонаты, бензоаты и т.п. Полное обсуждение фармацевтически приемлемых наполнителей доступно в Фармацевтических Науках Ремингтона (Mack Pub. Co., N. J. 1991). Фармацевтически приемлемые носители в фармацевтических композициях могут содержать жидкости, такие как воду, соляной раствор, глицерин и этанол. Кроме того, вспомогательные вещества, такие как увлажнитель или эмульгирующие вещества, вещества создающие рН, и т.п., могут присутствовать в таких средах для лекарства. Как правило, парентеральные фармацевтические композиции готовят в качестве инъекций, или в качестве жидких растворов или суспензий; твердые формы, подходящие для растворения или образования суспензии в жидких средах для лекарства, могут также быть приготовлены до инъекции. Липосомы включены в определение фармацевтически приемлемого носителя. Для терапевтического воздействия КЗ может быть получен как описано выше и применены к объекту, который нуждается в этом. КЗ могут быть введены в объект любым подходящим способом, предпочтительно в форме фармацевтической композиции, приспособленной к такому способу и в дозировке, которая является эффективной для предполагаемого лечения.
Пример 7. Влияние препарата «К1К» и «К2К» на время свертывания крови
Наиболее тяжелым видом хирургической патологии являются ранения и травмы живота, сопровождающиеся обильным кровотечением. В связи с этим обеспечение надежного гемостаза является одной из самых актуальных проблем современной хирургии.
В результате исследований было установлено время кровотечения в условиях применения современных гемостопов. В качестве материалов для экспериментальных исследований были использованы следующие аппликационные препараты: губка гемостатическая коллагеновая (ГГК), «Гемостоп», «Целокс», и экспериментальные препараты «К1К» и «К2К». Эксперимент проводили на 60-х крысах-самцах линии Вистар. В остром эксперименте под наркозом производили срединную лапаротомию, моделировали стандартную травму печени и селезенки. На область раны всыпали гемостатическое средство, сопоставимое с её размерами. Одновременно с моделированием раны с использованием секундомера начинали отсчет времени кровотечения. Таким образом, было установлено, что все подопытные материалы обладают гемостатической активностью, значительно укорачивая время кровотечения, за исключением эксперимента с материалом «Гемостоп», показатели которого приближаются к контролю. Время кровотечения из травмы печени в условиях применения материалов «К1К» и «К2К» сократилось на 89,5- 93,5 % относительно контроля и на 42,1-44,9% относительно ГГК. Укорочение времени остановки кровотечения из стандартной травмы селезенки было максимальным при тестировании материалов «К1К», «К2К» и было в 3,43-3,55 раз (р<0,001) меньше относительно контроля и в 2,80-2,89 раз (р<0,05) - относительно ГГК. Показатели времени кровотечения материала ГГК, способствовало снижению времени остановки кровотечения из травмы печени на 37,0-42,4% и из травмы селезенки на 22,3-27,4% относительно контроля. Пример 8. Скорость резорбции «К1К» и «К2К»
Одним из наиболее важных показателей кровоостанавливающих препаратов является их биологическая инертность и полная контролируемая биодеградация. Соответственно в результате исследований in vitro была установлена скорость резорбции современных гемостатических материалов «К1 К» и «К2К». Материалами для исследования являлись гемостатические аппликационные средства: губка гемостатическая коллагеновая (ГГС), «Целлокс», «Гемостоп», а также новые материалы на «К1К» и «К2 ». Исследование проводили в экспериментальных условиях in vitro: в мерную пробирку, содержащую 5 мл дистиллированной воды, помещали образец гемостатического материала весом 1 г. Пробирку помещали в термостат с постоянной температурой 37°. Результаты скорости биологической деградации каждого гемостатического материала оценивали на 1, 3, 7 и 14- е сутки. Пробирку с исследуемым гемостопом извлекали из термостата и производили визуальную описательную оценку гемостатического средства. Исследуемый гемостоп изымали из экспериментальной среды и высушивали. В дальнейшем производили повторное взвешивание изучаемого гемостопа. Разница в массе гемостопа до экспериментального исследования и после его осуществления выраженная в процентах отражала темпы резорбции изучаемого средства. Изучение в эксперименте in vitro скорости деградации гемостатических средств показало, что все изучаемые образцы материалов подвергались резорбции. Высокая резорбтивная активность наблюдалась у гемостатической композиции «К2К» - 100% (Р<0,001), показатель резорбции - 98,73% (Р<0,001), максимальная резорбтивная активность наблюдалась у препаратов ГГС и К1К. Минимальные темпы деградации отмечены при изучении материала «Гемостоп», резорбция которого в 10 раз меньше относительно материалов «Целокс» (42,3% (Р<0,05)) составила 10,34% (Р<0,05).
Пример 9. Изучение сорбционной активности «К1К» и «К2К»
В результате исследования были оценены сорбционные свойства современных аппликационных гемостопов «К1К» и «К2К». Изучению были подвергнуты образцы следующих гемостопов губка гемостатическая коллагеновая, «Целокс», «Гемостоп», «К1К» и «К2К». В ходе эксперимента определяли массу дистиллированной воды, которую способен поглотить опытный образец исследуемых материалов стандартной одинаковой массы (1 г). Степень полного насыщения изучаемого средства определяли визуально по изменению пространственных свойств материала - набуханию. Время полного насыщения аппликационных препаратов фиксировали с использованием секундомера. Для оценки сорбционной активности исследуемых образцов материалов определяли их гигроскопичность по представленной ниже формуле: гигроскопичность (мл/г)=т1/т2 , где: mi— объем (масса) воды, поглощенной материалом (мл); т2 - масса (г) материала. Для комплексной оценки сорбционных свойств аппликационных материалов нами использовался сорбционный показатель (СП), который представляет собой объем жидкости, которую способен поглотить 1 г образца материала на протяжении 1 с: СП (млхс/г)=гигроскопичность/х, где: t - время полного насыщения материала (с). Полученные данные были обработаны статистически с вычислением средних величин, средних ошибок средних и достоверности различий с использованием критериев Стьюдента и Манна-Уитни (по отношению к губке гемостатической коллагеновой). Ошибка статистической гипотезы составляла р<0,05. Таким образом, относительно высокую сорбционную активность продемонстрировала губка гемостатическая коллагеновая, имеющая гигроскопичность 69,41±1,65 мл/г и сорбционный показатель 15,1±0,95 млхс/г. Результаты гигроскопичности материалов «К1К» и «К2К» составили— 78,62±2,18 мл/г (р<0,05) и 88,3±2,11 мл/г (р<0,05), а сорбционный показатель - 23,8±1,24 млхс/г (р<0,05) и 25,5±1,41 млхс/г (р<0,05) соответственно. Минимальные сорбционные свойства отмечены у гемостопов «Целокс» и «Гемостоп», гигроскопичность которых составила 5,63±1,21 мл/г и 6,11±1,16 мл/г, а сорбционный показатель 1,23±0,11 млхс/г и 1,10±0,04 млхс/г соответственно.
Пример 10. Определение влияния композиций «К1К» и «К2К» на регенерацию тканей Изучение ранозаживляющих свойств композиций проводили на самцах белых крыс Vistar. У 38 животных, которых предварительно анестезировали, на дорсальном боку тела, сзади правой лопатки выстригали область кожи размеров 2 на 2 см. Кожу брали пинцетом, оттягивали ее, срезали фрагмент кожи размером 2 см, глубина раны 2 мм, средняя площадь раны составила 4±1,0 см2. Полученную раны многоугольной формы интенсивно кровоточили. Затем животным первой и второй групп (по 10 в каждой) на рану наносили «К1К» и «К2К». Раны крыс 3-й группы обрабатывали «целоксом», 4-ю группу из 8 животных составляла контрольная группа, раны этих животных не обрабатывали. Препараты наносили таким образом, чтобы образовавшиеся гели покрывали всю поверхность раны и захватывали небольшой фрагмент вокруг раны. Сверху на гель наносили клей БФ-6, высушивали и животных отпускали в клетки. Через 3, 6, 9, И и 13 дней от начала эксперимента (до заживления ран у животных всех групп) проводилось планиметрическое исследование, которое позволило судить об особенностях репаративных процессов. Измерение площади ран проводилось таким образом: на целлюлоидную пленку, которая прикладывалась к ране, наносили ее контуры, после чего с помощью миллиметровой бумаги определяли площадь раневой поверхности. Результаты первой серии опытов (Табл. 2) показали, что под влиянием композиций К1К и К2К значительно ускорилось заживление ран на всех стадиях исследования. Эффективность композиции К2К была статистически выше, чем у композиции К1К и Целокс.
Таблица 2. Показатели заживления кожных ран у крыс под влиянием композиций
К1К и К2К.
Figure imgf000027_0001
* Р<0,05
Как видно из таблицы 2, фактически в 2 раза быстрее заживали раны у животных, раны которых, были обработаны композицией К2К (с 13 до 6 суток), тогда как эффективность контрольного образца Целокс не отличалась от контроля. Эпитализация ран инициировалась уже на второй день после нанесения композиции.
Пример 11. Изучение антивирусного действия препаратов К1К, К2К и КЗК на вирус гриппа А (НЗ N2)
Водные растворы К2К в различных дозах (десятикратные разведения) вводили 15 куриным эмбрионам в аллантоисную полость в объеме 0,2 мл через 12 часов после внесения вируса в рабочей дозе (100 ТЦД5о/0,2 мл). Каждый опыт сопровождался контролем тест-вируса в рабочей дозе. Зараженные и незараженные (контроль) эмбрионы инкубировали при 36°С в течение 48 часов. Затем производили вскрытие эмбрионов, из которых отсасывали аллантоисную жидкость. Титрование вируса в аллантоисной жидкости проводили по общепринятой методике с 1% эритроцитами 0(1) группы крови человека. Определили коэффициент защиты (КЗ). Титр вируса в опытной и контрольной группах куриных эмбрионов представлен в таблицах 3-5.
Таблица 3. Эффективная концентрация К1К на модели гриппозной инфекции in ovo
Figure imgf000028_0001
Таблица 4. Эффективная концентрация К2К на модели гриппозной инфекции in ovo Группа Концентрац Титр вируса Минимальная ия (lg ТЦД 50/мл) эффективная препарата концентрация опыт контроль
(мг/мл) (МЭК мг/мл)
Контрольная (вводили 12 12
0,9 % раствор натрия
хлорида)
Опытная 50±5 0 12
5±1 2 12 0,5
0,5 ± 0,05 4 12
0,05+0,005 8 12
5
0,005+0,0005 8 12
Таблица 5. Эффективная концентрация КЗК на модели гриппозной инфекции in ovo
Группа Концентрац Титр вируса Минимальная ия (lg ТЦД 50/мл) эффективная препарата концентрация опыт контроль
(мг/мл) (МЭК мг/мл)
Контрольная (вводили 12 12
0,9 % раствор натрия
хлорида)
Опытная 50±5 0 12
5±1 0 12 0,05
0,5 ± 0,05 1 12
0,0510,005 3 12
5
0,005±0,0005 6 12
Как видно из таблиц 3-5, наиболее эффективной оказалась композиция КЗК на основе гепарина, минимальная эффективная концентрация КЗК в отношении вируса гриппа, которая полностью тормозит синтез вируса, равна 50 мкг/мл. При увеличении разведения препарата, эффективность КЗК падает и имеет дозозависимый характер. Данный факт свидетельствует о наличии прямого противовирусного эффекта у препарата КЗК в отношении вируса гриппа H3N2. Другие комбинаторные производные также обладали антивирусной активностью, но в более высоких дозах.
Пример 12. Исследование антивирусного действия композиций К1К, К2К, КЗК на цитопатические вирусы (вирус везикулярного стоматита, коронавирус, вирус простого герпеса 1 типа)
Противовирусную активность в отношении этой группы вирусов определяли в культуре вышеуказанных клеток. Постановку реакции осуществляли следующим способом: 0,2 мл соответствующего вируса в рабочей дозе (100 ТЦД50/0,2 мл) вносили в объеме 0,2 мл в 2-х суточную отмытую культуру клеток. Добавляли 0,8 мл поддерживающей среды. При появлении в культуре ЦПД вносили препараты в различных дозах. В качестве контроля выполняли то же самое с тест-вирусами без препарата. Клетки инкубировали при 37 0 С в термостате. Учет опыта производили на 3,5,7 день. Снижение титра вируса под влиянием испытуемого препарата на 2 lg и более в сравнении с контролем оценивали, как проявление антивирусной активности. Результаты изучения противовирусной активности препаратов представлены в таблице 6
Таблица 6. Изучение противовирусного действия препарата KR в отношении вирусов: везикулярного стоматита, коронавируса, вируса простого герпеса 1 типа)
Препарат Вирус МЭК, мкг/мл Максимальное падение титра вируса, lg ТЦ so/мл
К1К ВВС 5000 4,3
KB 5000 3,9
впп 5000 4,9
К2К ВВС 500 4,4
KB 500 3,8
впп 500 4,8
КЗК ВВС 50 4,6
KB 50 4,4
впп 50 4,6 Как видно из таблицы 6, все комбинаторные производные полисахаридов обладает антивирусной активностью и способностью подавлять репродукцию всех изученных нами вирусов в концентрациях от 50 до 5000 мкг/мл 0,05 мг/мл. Наиболее интересным для внедрения является композиция КЗК, ХТИ которой составляет 1000. Кроме того, все композиции были активны в отношении всех изученных вирусов, тогда как не один препарат сравнения не проявлял подобной активности. Таким образом, препарат не связан с конкретными особенностями вируса или клеточной культуры, а влияет на общие для всех клеток механизмы. Пример 13. Изучение антивирусного действия фармацевтических композиций К1К, К2К, КЗК in vitro на моделях вирусов сельскохозяйственных животных
Испытания проводили в 96-ти луночных пластиковых панелях с вирусом трансмиссивного гастроэнтерита свиней (ТГС) штамм «Д-52» с исходным титром 104'0 ТЦДбо/мл (тканевых цитопатических доз) в перевиваемой культуре клеток тестикул поросенка (ПТП) и вирусом диареи крупного рогатого скота штамм «Орегон» с исходным титром 1070 ТЦЦ5о/мл в перевиваемой культуре клеток почки сайги (ПС). При испытании вирусстатического (ингибирующего) действия культуры клеток инфицировали вирусами в дозах 100 и 10 ТЦДед/мл и инкубировали в термостате при 37° С. KR2 в различных дозах вносили в культуры клеток (КК) через 1-1,5 часов после заражения (после периода адсорбции). На каждое разведение брали по 8 лунок. После внесения соединения культуры клеток инкубировали при 37 С в течение 72-144 часов до четкого проявления ЦПД (цитопатогенного действия) в контроле вирусов. Контролями служили культуры клеток, инфицированные вирусом, инактные КК и КК, куда вносили только различные концентрации опытных композиций. Вирусстатическое действие определяли по разнице титров вирусов в опыте и контроле. При определении вирулицидного (инактивирующего) действия разные дозы композиций смешивали в равных объемах с вируссодержащим материалом и инкубировали в термостате при 37 °С в течение 24 часов. Контролем служили вируссодержащий материал, к которому вместо раствора соединения добавляли плацебо (0,9% раствор натрия хлорида) и интактные культуры клеток. Смеси после контакта титровали параллельно с контролем. Результаты учитывали через 72-144 часа после инкубирования при 37° С, после четкого проявления ЦПД в контролях вирусов. Вирулицидное действие определяли по разнице титров вирусов в опыте и контроле и выражали в lg ТЦД50. В результате проведенных исследований установлено, что композиция КЗК в концентрации 50 мкг\мл подавляла репродукцию вируса ТГС на 2,90 lg ТЦД50/мл, при заражающей дозе 100 ТЦД50/мл и в той же дозе на 4,15 lg ТЦЦед/мл, при заражающей дозе 10 ТЦД50/мл. В дозе 50 мкг/мл КЗК инактивировал вирус ТГС на 4,0 lg ТЦД50/мл. Композиция КЗК в дозе 50 мкг\мл инактивировала вирус диареи КРС на 4,4 lg ТЦД50/МЛ.
Таким образом, соединение K3R обладает наиболее выраженным вирусстатическим (ингибирующем) и вирулицидным (инактивирующим) действием на вирусы ТГС и диареи КРС, на его основе возможно создание химиопрепаратов для лечения и профилактики инфекционных болезней вирусной этиологии. Производные из композиций К1К и К2К обладали слабой активностью и проявляли ее только в дозах 500-5000 мкг/мл
Пример 14. Изучение противовирусной активности КЗК в эксперименте на животных (Герпесвирусный керато-конъюнктивит/энцефалит у кролей)
Особенности экспериментальной системы и уровень ее адекватности естественному заболеванию человека несомненно играют решающую роль в оценке влияния антивирусного вещества на течение инфекции. Герпетическая экспериментальная инфекция представляет собой интерес в связи с тем, что заболевания герпетической природы широко распространены и чрезвычайно вариабельны по клиническим проявлениям. Модели экспериментального герпеса на животных находят все более широкое применение в изучении новых противовирусных веществ. Как известно, одной из клинических форм системного герпеса является герпетический энцефалит, который воспроизводится у морских свинок, хомяков, крыс, мышей, кроликов, собак, обезьян. Герпетический кератоконъюнктивит у кроликов среднего веса 3,5 кг был получен путем нанесения инфекционного материала (вирус герпеса 1 типа, штамм Л-2) на скарифицированую роговицу. Животного фиксировали, анестезию глаза проводили лидокаином (закапывали в глаз). Раздвигали веки глаза, наносили несколько царапин на роговицу при помощи иглы шприца. Затем вводили вируссодержащий материал и, смыкая веки, круговыми движениями втирали его в роговицу. Доза вируса: 0,05 мл. В опыте использовали 16 кролей, из них десятерым вводили КЗК (ежедневно со второго дня инфицирования -14 дней в дозе 10 мг/кг, а шестерым - плацебо (0,9 % натрия хлорида). После заражения кролей ВПГ1 ежедневно контролировали состояние роговицы, наличие кератоконъюнктивита, энцефальных нарушений и наличие в лимфоцитах периферической крови антигенов ВПГ1 методом real- time PLR до и после инфицирования. До инфицирования у всех животных в крови отсутствовала ДНК вируса, что свидетельствовало об отсутствии в периферической крови вируса герпеса 1 типа. На 3 день после инфицирования у всех животных в крови определялась количественно ДНК ВПГ1, которая составила 5,7*106 копий геномов/мл Кроме того, у трех кролей (двух - из опытной группы до начала лечения и у одного из контрольной группы) появились энцефальные проявления - судорожный синдром, отсутствие аппетита. У всех животных развился кератоконъюнктивит. На 4 день после инфицирования опытной группе кролей ввели в ушную вену KR в дозе 10 мг/кг веса тела, а контрольной группе ввели 0,9% раствор натрия хлорида. Каждый день в течение двух недель повторяли эту процедуру один раз в день. В опытной группе все животные выжили, а ДНК ВПГ1 в крови не определялась на 13-14 день. Кроме того, в опытной группе энцефальные проявления исчезли к 7 дню применения препарата, тогда как в контроле погибло 2 животных. К 14 дню лечения в опытной группе погибло одно животное, тогда как в контроле - 6. Соответственно индекс эффективности был равен 83,3 %, что свидетельствует о высокой лечебной эффективности КЗК на модели герпетического кератоконъюнктивита/ энцефалита у кролей. Кроме того, кроли в опытной группе набрали в весе и у всех животных отсутствовали признаки кератоконъюнктивита. Химиотерапевтический индекс для кролей по препарату КЗК составил 1000, что свидетельствует о перспективности КЗК как высокоэффективного противовирусного препарата с широким спектром действия и низкой токсичностью.
Пример 15. Действие КЗК на гуморальный иммунный ответ на Т-зависимый антиген на мышах.
Композиция КЗК представлена как пример биологической активности для группы родственных производных, предусмотренных текущей заявкой.
Чтобы исследовать влияние КЗК, инбредные SPF мыши (Balb/cAcoNCrl, 7-8 недельного возраста, Charles River Laboratories GmbH, Германия) были иммунизированы с KLH, Т-клеточным зависимым антигеном. 3 мышам из группы были введены подкожно в присутствии полного адъюванта Фрейнда (50/50 v/v). Смесь антигена (20 мг в 100 мл) с адъювантом (Sigma, #F-5881) была эмульгированна и введена в область шеи. В тот же день 20 мг иммуномодулятора КЗК в 200 мл PBS было введено внутрибрюшинно. Образцы крови (50-70 мл) были отобраны у мышей на 7, 14, 21, и 28 день из вены ноги. Сыворотка была приготовлена коагуляцией крови в течение 2 часов при 37°С, с последующими 18 часами при 8°С, и центрифугированием при 10 000 оборотов в минуту в Эппендорф-подобной центрифуге. Сыворотки хранили растворенными со стабилизатором антитела (SkyTec АВВ500) при 4°С, и в то же время анализировали твердофазным иммуноферментным анализом ELISA. Для второго образца, в 96-луночные плашки для иммуноферментного анализа ELISA (Greiner, #656061) были нанесены KLH (растворимое вещество, Sigma Н7017) в фосфатном буферном растворе (PBS), 0,2 мг на лунку на ночь при 4°С. Растворенные сыворотки были инкубированы с антигеном (200 мг на лунку) в течение 1 часа при комнатной температуре, с последующей отмывкой клеток с PBS/0,1% Tween-20. Связывание антител мыши с KLH было определено, используя изотоп-специфические антимышиные иммуноглобулины, конъюгированные с HRP (Southern Biotechnology Ltd., антимышиный IgM #1021-05, антимышиный IgGl #1070-05, антимышиный IgG2a #1080-05, антимышиный IgG2b #1090-05) согласно протоколу изготовителя. ТМВ был использован в качестве субстрата. Результаты были проанализированы на Фотометре Bio-Rad для микропланшет модель 550, оптическая плотность была измерена при 595 нм. Титры используемых сывороток находятся от 1/300 до 1/20,000 с шагом 1/2 (обозначены на оси X как от 1 до 6 соответственно). Реактивность сыворотки представлена как O.D., показанная образцом в ELISA. Точки представляют среднюю реактивность образцов из 3 сывороток (из 3 мышей при условии). Разброс фактора представляет 95%-ный доверительный интервал. После единичной инъекции титр специфического антитела на 28 день существенно отличается между мышами, иммунизированными с и без иммуномодулятора. Таким образом, титр специфического IgGl в сыворотках мышей, иммунизированных в присутствии КЗК, был приблизительно в 16 раз выше, а титр IgG2a и IgG2b в 4 раза выше, чем в мышах контроля, иммунизированных одним антигеном.
Пример 16. Влияние КЗК на экспрессию гена в спленоцитах мыши, определенное с помощью ПЦР матрицы.
Инбредным SPF Balb/c мышам (женские особи, 12 недельного возраста) были введены или антиген, или КЗК, или комбинация их обоих. Для инъекций 25 мг КЗК было растворено в 250 мл стерильного PBS. Инъекции были выполнены подкожно, в области шеи, с иглой инсулина. Контрольным мышам был введен только PBS. Для инъекции антигена: 250 мл суспензии стерильного бараньего эритроцита (SRBC из Quad Five inc., Cat# 643-100) было введено внутрибрюшинно через бок. Суспензия была приготовлена как 2 мл первоначальной суспензии, отмытой 2 раза (1500 оборотов в минуту, 5 мин) с PBS и повторно суспендированной в 2 мл. 10 мл 50%-ной суспензии было растворено в 250 мл PBS и введено. 48 ч спустя мыши были забиты, их селезенка выделена и помещена в RNALater (Ambion Inc, Cat# 7021) сразу после выделения. Образцы в RNALater немедленно были заморожены при -70°С и выдержаны при этой температуре до выделения РНК. Выделение РНК и анализ ПЦР матрицы было выполнено как обслуживание с помощью SuperArray Inc согласно их установленному протоколу (www.superarray.com). РЕЗУЛЬТАТЫ. Было найдено, что изменения в экспрессии мРНК, основанные на данных ПЦР, являются статистически значимыми, если различие с контрольным уровнем экспрессии было выше 3 -кратного (или увеличения или уменьшения). Из анализа экспрессии для 84 генов, уровень 75-85% генов во всех образцах не был статистически отличным от контрольного образца (селезенка мыши, введенная с PBS вместо и антигена и иммуномодулятора (не показано). Ясно, что статистически значимое различие было замечено для ряда цитокиновых и хемокиновых генов и соответствующих рецепторов IL-4, IL-11, Sppl, IL-10RA и в меньшей степени IL-lf6, IL-13, IL-17b, IL-20, IL-6 и IL-1R1).
Таким образом, комбинаторные композиции на основе КЗ обладают активирующим влиянием как на гуморальный, так и на клеточный иммунитет и могут использоваться как иммуномодуляторы при различных иммунодефициты состояниях.
Пример 17. Разные фармацевтические композиции
Могут быть использованы различные способы введения супрамолекулярных комбинаторных производных полисахаридов (КПП). КПП композицию можно давать перорально или можно вводить внутрисосудистой, подкожной, внутрибрюшинной инъекцией, в форме аэрозоля, глазным способом введения, в мочевой пузырь, местно и так далее. Например, способы ингаляционного введения хорошо известны в данной области техники. Доза терапевтической композиции будет варьировать в широких пределах в зависимости от конкретного вводимого КПП, природы заболевания, частоты введения, способа введения, клиренса используемого агента из организма хозяина и тому подобного. Начальная доза может быть более высокой с последующими более низкими поддерживающими дозами. Дозу можно вводить с частотой один раз в неделю или один раз в две недели, или делить на меньшие дозы и вводить их один или несколько раз в сутки, два раза в неделю и так далее для поддержания эффективного уровня дозы. Во многих случаях для перорального введения будет необходима более высокая доза, чем для внутривенного введения. Соединения по данному изобретению могут быть включены во множество композиций для терапевтического введения. Более конкретно, соединения по настоящему изобретению могут быть включены в фармацевтические композиции в сочетании с подходящими фармацевтически приемлемыми носителями или разбавителями и могут быть включены в препараты в твердой, полутвердой, жидкой или газообразной формах, таких как капсулы, порошки, гранулы, мази, кремы, пены, растворы, суппозитории, инъекции, формы для ингаляционного применения, гели, микросферы, лосьоны и аэрозоли. Как таковое, введение соединений может быть осуществлено различными способами, включая пероральное, трансбуккальное, ректальное, парентеральное, внутрибрюшинное, внутрикожное, чрескожное, внутритрахеальное введение и так далее. КПП по изобретению могут распределяться системно после введения или могут быть локализованы с использованием имплантата или другой композиции, удерживающей активную дозу в месте имплантации. Соединения по настоящему изобретению могут быть введены сами по себе, в комбинации друг с другом, или они могут быть использованы в комбинации с другими известными соединениями (например, перфорином, противовоспалительными агентами, и так далее). В фармацевтических лекарственных формах соединения могут быть введены в форме их фармацевтически приемлемых солей. Следующие способы и эксципиенты приведены лишь в качестве примеров и никоим образом не являются ограничивающими. Для препаратов для перорального введения соединения могут быть использованы сами по себе или в комбинации с подходящими добавками для изготовления таблеток, порошков, гранул или капсул, например, с обычными добавками, такими как лактоза, маннит, кукурузный крахмал или картофельный крахмал; со связывающими агентами, такими как кристаллическая целлюлоза, производные целлюлозы, аравийская камедь, кукурузный крахмал или желатины; с разрыхлителями, такими как кукурузный крахмал, картофельный крахмал или карбоксиметилцеллюлоза натрия; со смазывающими агентами, такими как тальк или стеарат магния; и, если желательно, с разбавителями, буферными агентами, увлажняющими агентами, консервантами и корригентами. Соединения могут быть включены в композиции для инъекций путем их растворения, суспендирования или эмульгирования в водном или неводном растворителе, таком как растительные или другие подобные масла, синтетические глицериды алифатических кислот, эфиры высших алифатических кислот или пропиленгликоля; и, если желательно, с обычными добавками, такими как солюбилизаторы, изотонические агенты, суспендирующие агенты, эмульгаторы, стабилизаторы и консерванты. Соединения могут быть использованы в аэрозольной композиции для ингаляционного введения. Соединения по настоящему изобретению могут быть включены в приемлемые пропелленты под давлением, такие как дихлордифторметан, пропан, азот и тому подобное. Кроме того, соединения могут быть включены в суппозитории смешиванием с множеством основ, таких как эмульгирующие основы или водорастворимые основы. Соединения по настоящему изобретению могут быть введены ректально с использованием суппозитория. Суппозиторий может содержать наполнители, такие как масло какао, карбоваксы и полиэтиленгликоли, расплавляющиеся при температуре тела, но твердые при комнатной температуре. Могут быть изготовлены стандартные лекарственные формы для перорального или ректального введения, такие как сиропы, эликсиры и суспензии, где каждая единица дозы, например, чайная ложка, столовая ложка, таблетка или суппозиторий, содержит предопределенное количество композиции, содержащей одно или более соединений по настоящему изобретению. Сходным образом, стандартные лекарственные формы для инъекции или внутривенного введения могут содержать соединение по настоящему изобретению в композиции в форме раствора в стерильной воде, нормальном физиологическом растворе или другом фармацевтически приемлемом носителе. Имплантаты для длительного высвобождения композиций хорошо известны в данной области техники. Имплантаты изготавливают в форме микросфер, пластинок и так далее с биодеградируемыми или не являющимися биодеградируемыми полимерами. Например, полимеры молочной и/или гликолевой кислот образуют деградируемый полимер, хорошо переносимый хозяином. Имплантат, содержащий КПП по изобретению, располагают близко к очагу инфекции, так чтобы локальная концентрация активного агента была повышенной по сравнению с остальными областями тела. При использовании здесь термин «стандартная лекарственная форма» относится к физически дискретным единицам, подходящим для использования в качестве однократных доз для субъектов людей и животных, при этом каждая единица содержит предопределенное количество соединений по настоящему изобретению, которого, согласно вычислениям, достаточно для оказания желаемого эффекта, совместно с фармацевтически приемлемым разбавителем, носителем или наполнителем. Описания стандартных лекарственных форм по настоящему изобретению зависят от конкретного используемого соединения, и эффекта, который должен быть достигнут, и фармакодинамики используемого соединения у хозяина. Фармацевтически приемлемые эксципиенты, такие как наполнители, адъюванты, носители или разбавители, общедоступны. Кроме того, общедоступны фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества, такие как агенты для регулирования рН и буферные агенты, агенты для регулирования тоничности, стабилизаторы, смачивающие агенты и тому подобное. Типичные дозы для системного введения варьируют от 0,1 пг до 100 миллиграмм на кг массы тела субъекта на одно введение. Типичная доза может представлять собой одну таблетку для приема от двух до шести раз в сутки или одну капсулу, или таблетку с длительным высвобождением для приема один раз в сутки с пропорционально более высоким содержанием активного ингредиента. Эффект длительного высвобождения может быть обусловлен материалами, из которых изготовлена капсула, растворяющимися при различных значениях рН, капсулами, обеспечивающими медленное высвобождение под воздействием осмотического давления или любым другим известным способом контролируемого высвобождения. Специалистам в данной области техники будет ясно, что уровни доз могут варьировать в зависимости от конкретного соединения, тяжести симптомов и предрасположенности субъекта к побочным эффектам. Некоторые из конкретных соединений обладают большей активностью, чем другие. Предпочтительные дозы данного соединения могут быть легко определены специалистами в данной области техники множеством способов. Предпочтительным способом является измерение физиологической активности данного соединения. Один из интересующих способов представляет собой применение липосом в качестве наполнителя для доставки. Липосомы сливаются с клетками целевой области и обеспечивают доставку содержимого липосом внутрь клеток. Контакт липосом с клетками под держивают в течение времени, достаточного для слияния, с использованием различных способов поддержания контакта, таких как выделение, связывающие агенты и тому подобное. В одном аспекте изобретения липосомы разработаны для получения аэрозоля для легочного введения. Липосомы могут быть изготовлены с очищенными белками или пептидами, опосредующими слияние мембран, такими как вирус Сендай или вирус гриппа и так далее. Липиды могут представлять собой любую полезную комбинацию известных липидов, образующих липосомы, включая катионные или цвиттерионные липиды, такие как фосфатидилхолин. Остальные липиды будут обычно нейтральными или кислыми липидами, такими как холестерин, фосфатидилсерин, фосфатидилглицерин и тому подобное. Для получения липосом может быть использован способ, описанный Kato et al.(1991) J. Biol. Chem. 266:3361. Кратко, липиды и композицию для включения в липосомы, содержащую КПП, смешивают в подходящей водной среде, подходящим образом в солевой среде, где общее содержание твердых веществ будет находиться в диапазоне приблизительно ПО масс.%. После интенсивного перемешивания в течение коротких периодов времени, приблизительно 5-60 сек, пробирку помещают в теплую водяную баню при приблизительно 25-40° С и этот цикл повторяют приблизительно 5-10 раз. Затем композицию обрабатывают ультразвуком на протяжении подходящего периода времени, обычно приблизительно 1-10 сек, и, возможно, дополнительно перемешивают на вихревой мешалке. Затем объем увеличивают добавлением водной среды, обычно увеличивая объем в приблизительно 1-2 раза, с последующим взбалтыванием и охлаждением. Способ позволяет включать в липосомы супрамолекулярные структуры с высокой суммарной молекулярной массой.
Композиции с другими активными агентами
Для применения в рассматриваемых способах КПП по изобретению могут быть включены в композиции с другими фармацевтически активными агентами, в частности другими антимикробными, антивирусными, кровеостанавливающими, активирующими регенерацию агентами, в том числе пантотеновую кислоту, цианокобаламин, холекальциферол. Другие интересующие агенты также включают широкий спектр антибиотиков, известных в данной области техники. Классы антибиотиков включают пенициллины, например, пенициллин G, пенициллин V, метициллин, оксациллин, карбенициллин, нафциллин, ампициллин и так далее; пенициллины в комбинации с ингибиторами беталактамазы; цефалоспорины, например, цефаклор, цефазолин, цефуроксим, моксалактам и так далее; карбапенемы; монобактамы; аминогликозиды; тетрациклины; макролиды; линкомицины; полимиксины; сульфонамиды; хинолоны; хлорамфеникол; метронидазол; спектиномицин; триметоприм; ванкомицин; и так далее. Также полезны противогрибковые агенты, включая полиены, например, амфотерицин В, нистатин, флукозин; и азолы, например, миконазол, кетоконазол, итраконазол и флуконазол. Противотуберкулезные лекарственные средства включают изониазид, этамбутол, стрептомицин и рифампин. Другие интересующие агенты включают широкий спектр противовирусных производных мононуклеотидов и других средств-ингибиторов РНК- полимераз, известных в данной области техники. Классы антивирусных средств включают интерфероны, ламивудин, рибавирин и так далее; амантадин; ремантадин, например, зинамивир, озельтавимир и так далее; ацикловир, валацикловир, валганцикловир; и так далее. Другие группы антивирусных средств включают адефовир, вбакавир, диданозин, эмтрицитабин, ламивудин, ставудин, тенофовир, эфавиренз, невирапин, индинавир, лопинавир и ритонавир, нельфинавир, ритонавир, сакинавир, даклатасвир, совофбувир. В композицию КПП по изобретению могут также быть включены цитокины, например, интерферон гамма, фактор некроза опухоли альфа, интерлейкин 12 и так далее. Выше настоящее изобретение описано примерами, которые не следует толковать как ограничивающие объем изобретения.

Claims

Формула изобретения
1. Биологически активные комбинаторные производные полисахаридов, отличающиеся тем, что в качестве комбинаторных производных полисахаридов используют супрамолекулярную неразделенную комбинаторную смесь замещенных производных полисахарида с максимальным количеством комбинаций, полученную одновременной комбинаторной модификацией полисахарида как минимум двумя ковалентными модификаторами.
2. Биологически активные комбинаторные производные полисахаридов по п. 1, отличающиеся тем, что мольное соотношение полисахарида и ковалентных модификаторов в реакции комбинаторного синтеза рассчитывают по формулам:
О) k= n x (2n - 1)
(2) m= 4 (3x2n-2 - l),
где
п=количество доступных для замещения групп в полисахариде (в пересчете на мономер - производное глюкопиранозы);
т=количество молей исходного полисахарида и количество разных молекул
комбинаторных производных после синтеза (в пересчете на производное глюкопиранозы); к=количество молей каждого из двух модификаторов в реакции комбинаторного синтеза для получения максимального количества разных производных.
3. Биологически активные комбинаторные производные полисахаридов по п. 1., отличающиеся тем, что в качестве исходного полисахарида используют целлюлозу.
4. Биологически активные комбинаторные производные полисахаридов по п. 1., отличающиеся тем, что в качестве исходного полисахарида используют карбоксиметилцеллюлозу.
5. Биологически активные комбинаторные производные полисахаридов по п. 1., отличающиеся тем, что в качестве исходного полисахарида используют карбоксиметилпропилцеллюлозу.
6. Биологически активные комбинаторные производные полисахаридов по п. 1., отличающиеся тем, что в качестве исходного полисахарида используют гепарин.
7. Биологически активные комбинаторные производные полисахаридов по п. 1., отличающиеся тем, что в качестве исходного полисахарида используют хитозан.
8. Биологически активные комбинаторные производные полисахаридов по п. 1., отличающиеся тем, что в качестве исходного полисахарида используют сукцинилхитозан.
9. Биологически активные комбинаторные производные полисахаридов по п. 1., отличающиеся тем, что в качестве исходного полисахарида используют карбоксиметилхитозан.
10. Биологически активные комбинаторные производные полисахаридов по п. 1., отличающиеся тем, что в качестве исходного полисахарида используют крахмал.
11. Биологически активные комбинаторные производные полисахаридов по п. 1., отличающиеся тем, что в качестве исходного полисахарида используют карбоксиметилкрахмал.
12. Биологически активные комбинаторные производные полисахаридов по п. 1., отличающиеся тем, что в качестве исходного полисахарида используют метилкрахмал.
13. Фармацевтическая композиция, содержащая биологически активные комбинаторные производные полисахаридов по любому из п.п.1-12, отличающаяся тем, что дополнительно содержит основание аминокислоты лизина.
14. Фармацевтическая композиция по п.14, отличающаяся тем, что приготовлена в виде порошка и используется как средство для остановки кровотечений
15. Фармацевтическая композиция, содержащая биологически активные комбинаторные производные полисахаридов по п.п.1-12, отличающаяся тем, что используется как иммуномодулирующее средство.
16. Фармацевтическая композиция, содержащая биологически активные комбинаторные производные полисахаридов по п.п.1-12, отличающаяся тем, что используется как противовирусное средство.
17. Фармацевтическая композиция, содержащая биологически активные комбинаторные производные полисахаридов по п.п.1-12, отличающаяся тем, что используется как ранозаживляющее средство.
PCT/RU2017/000422 2017-06-16 2017-06-16 Биологически активные комбинаторные производные полисахаридов WO2018231089A1 (ru)

Priority Applications (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EA202090748A EA202090748A1 (ru) 2017-06-16 2017-06-16 Биологически активные комбинаторные производные полисахаридов
US16/771,573 US20210361696A1 (en) 2017-06-16 2017-06-16 Biologically active combinatorial polysaccharide derivatives
PCT/RU2017/000422 WO2018231089A1 (ru) 2017-06-16 2017-06-16 Биологически активные комбинаторные производные полисахаридов

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PCT/RU2017/000422 WO2018231089A1 (ru) 2017-06-16 2017-06-16 Биологически активные комбинаторные производные полисахаридов

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2018231089A1 true WO2018231089A1 (ru) 2018-12-20

Family

ID=64659298

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/RU2017/000422 WO2018231089A1 (ru) 2017-06-16 2017-06-16 Биологически активные комбинаторные производные полисахаридов

Country Status (3)

Country Link
US (1) US20210361696A1 (ru)
EA (1) EA202090748A1 (ru)
WO (1) WO2018231089A1 (ru)

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5773033A (en) * 1995-01-23 1998-06-30 The Regents Of The University Of California Fibrinogen/chitosan hemostatic agents
RU2204376C2 (ru) * 1999-06-21 2003-05-20 Л'Ореаль Композиция для окислительного окрашивания кератиновых волокон, способ их окрашивания, набор для окислительного окрашивания кератиновых волокон
RU2264230C2 (ru) * 2001-03-22 2005-11-20 Хераеус Кульцер Гмбх Унд Ко.Кг Препарат антибиотика/антибиотиков с замедленным высвобождением активного вещества
US20060051812A1 (en) * 2002-10-04 2006-03-09 Glykos Finland Oy Novel carbohydrate compositions and a process of preparing same
US20060240473A1 (en) * 2002-07-19 2006-10-26 The University Of Liverpool Saccharide libraries
WO2010084038A1 (en) * 2009-01-23 2010-07-29 Aziende Chimiche Riunite Angelini Francesco A.C.R.A.F. S.P.A. Controlled release pharmaceutical or food formulation and process for its preparation
EP1917355B1 (en) * 2005-08-24 2010-12-08 The Rockefeller University Ply-gbs mutant lysins

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5773033A (en) * 1995-01-23 1998-06-30 The Regents Of The University Of California Fibrinogen/chitosan hemostatic agents
RU2204376C2 (ru) * 1999-06-21 2003-05-20 Л'Ореаль Композиция для окислительного окрашивания кератиновых волокон, способ их окрашивания, набор для окислительного окрашивания кератиновых волокон
RU2264230C2 (ru) * 2001-03-22 2005-11-20 Хераеус Кульцер Гмбх Унд Ко.Кг Препарат антибиотика/антибиотиков с замедленным высвобождением активного вещества
US20060240473A1 (en) * 2002-07-19 2006-10-26 The University Of Liverpool Saccharide libraries
US20060051812A1 (en) * 2002-10-04 2006-03-09 Glykos Finland Oy Novel carbohydrate compositions and a process of preparing same
EP1917355B1 (en) * 2005-08-24 2010-12-08 The Rockefeller University Ply-gbs mutant lysins
WO2010084038A1 (en) * 2009-01-23 2010-07-29 Aziende Chimiche Riunite Angelini Francesco A.C.R.A.F. S.P.A. Controlled release pharmaceutical or food formulation and process for its preparation

Also Published As

Publication number Publication date
US20210361696A1 (en) 2021-11-25
EA202090748A1 (ru) 2020-08-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Su et al. Carbohydrate-based macromolecular biomaterials
Bianculli et al. Antiviral polymers: past approaches and future possibilities
US8222399B2 (en) Photoreactive polysaccharide, photocrosslinked polysaccharide product and method of making same and medical materials made from the crosslinked polysaccharide
AU2009302160B2 (en) Polysaccharides containing carboxyl functional groups substituted by a hydrophobic alcohol derivative
Dumitriu Polysaccharides as biomaterials
Tiwari et al. Role of heparan sulfate in sexually transmitted infections
US20060189573A1 (en) Solutions and films of glycated chitosan
US8455001B2 (en) Cellulose derivative and method for production thereof
HU204858B (en) Process for producing bridge bonded esters of hyaluronic acid
ES2668273T3 (es) Uso de derivados de heparina químicamente modificada en drepanocitosis
JP3714426B2 (ja) フコイダンオリゴ糖組成物含有癌転移抑制剤
JPH027577B2 (ru)
Inamdar et al. Chitosan and low molecular weight chitosan: biological and biomedical applications
WO2019191119A1 (en) Acetylation of polysaccharides
US5055457A (en) Pharmaceutical combinations product and the preparation and use thereof
US20210308249A1 (en) Vlp formulations
JP2007126453A (ja) ヒアルロナン産生促進剤及びヒアルロナン分解抑制剤
WO2018231089A1 (ru) Биологически активные комбинаторные производные полисахаридов
EA042207B1 (ru) Фармацевтическая композиция на основе производных полисахаридов с противовирусным, кровоостанавливающим, регенерирующим действием
JPH08277224A (ja) 抗炎症剤
Carlescu et al. Synthetic sialic-acid-containing polyvalent antiviral inhibitors
WO2016076744A1 (ru) Фармацевтическая композиция с гемостатическим и ранозаживляющим действием
JP2010035744A (ja) 癒着防止材
US20210353662A1 (en) Joint cavity injection preparation and use thereof
Mondal et al. Marine Polysaccharide‐Based Nanomaterials

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 17913641

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

122 Ep: pct application non-entry in european phase

Ref document number: 17913641

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1