WO2018078919A1 - 免疫不全用、自己免疫疾患用または難治性血管炎用の治療剤、および、これらの疾患の診断のためのデータの取得方法 - Google Patents

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野島　博
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国立大学法人大阪大学
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    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids

Definitions

  • the present invention relates to a therapeutic agent for immunodeficiency, autoimmune disease or refractory vasculitis, and a method for acquiring data for diagnosis of these diseases.
  • IVIG intravenous immunooglobulin therapy
  • immunodeficiencies eg, X-linked agammaglobulinemia, hypogammaglobulinemia, and acquired immune disorders with low antibody levels
  • autoimmune diseases For example, idiopathic thrombocytopenic purpura, etc.
  • refractory vasculitis eg, Kawasaki disease, etc.
  • IgG immunoglobulin G
  • Kawasaki disease is a systemic vasculitis syndrome that affects infants.
  • Kawasaki disease medium-sized blood vessels present throughout the body are inflamed, causing various symptoms (for example, fever, rash, and coronary artery lesions) in infants.
  • Infants 0 to 4 years old often suffer from Kawasaki disease, and among them, infants around 1 year old suffer from Kawasaki disease.
  • Infants suffering from Kawasaki disease may die, and it is necessary to check regularly whether the infant suffers from Kawasaki disease.
  • immunoglobulin high-dose therapy is used for the treatment of Kawasaki disease.
  • immunoglobulin high-dose therapy is used for the treatment of various diseases, but it turns out that the target molecule of the treatment, in other words, which immunoglobulin in the preparation has medicinal properties. Not done. Therefore, immunoglobulin high-dose therapy uses a preparation made from human blood, which contains various immunoglobulins that recognize various antigens derived from blood collected from more than 1000 blood donors. include.
  • the present invention has been made in view of the above problems, and its purpose is to provide a new treatment that replaces the conventional IVIG treatment using a therapeutic agent that is artificially produced without using blood as a material. It is to provide.
  • the target molecule for IVIG treatment which has not been known so far, is FCN1 (M-ficolin), and have completed the present invention.
  • the therapeutic agent for immunodeficiency, autoimmune disease, or refractory vasculitis contains a binding inhibitor that inhibits the binding of ficolin protein and IgG in order to solve the above problems. It is characterized by being.
  • the method for obtaining data for diagnosis of immunodeficiency, autoimmune disease, or refractory vasculitis comprises a step of detecting ficolin protein contained in collected serum in order to solve the above-mentioned problem. It is characterized by having.
  • the therapeutic agent of the present invention does not require blood as a material, the therapeutic agent of the present invention can be manufactured inexpensively, stably and in large quantities.
  • the therapeutic agent of the present invention does not require blood as a material, it is possible to realize a safe therapeutic agent without the risk of contamination with viruses (eg, AIDS virus, hepatitis C virus, etc.).
  • viruses eg, AIDS virus, hepatitis C virus, etc.
  • the therapeutic agent of the present invention contains a high concentration of medicinal ingredients, the patient can be effectively treated with a small amount of the therapeutic agent. Therefore, the therapeutic agent of the present invention can reduce the burden on the patient's body during treatment.
  • the therapeutic agent of the present invention does not contain unnecessary components other than medicinal components, side effects can be suppressed.
  • the therapeutic agent of the present invention can treat various diseases (for example, autoimmune diseases, refractory vasculitis, etc.) that are the targets of IVIG treatment.
  • diseases for example, autoimmune diseases, refractory vasculitis, etc.
  • the ficolin protein 1 is bound via the binding region 2 which is a partial peptide of the ficolin protein 1. It is believed to be associated with subject 5. And in the living body, it is thought that the ficollin protein 1 is exhibiting various functions in a state of being bound to the binding target 5. If the function is exhibited in a situation where the function is not required, various diseases are caused.
  • the complex formed by the ficolin protein 1 and the binding target 5 contains a substance 10 (for example, a partial peptide of IgG) that binds to the ficolin protein 1
  • a substance 10 for example, a partial peptide of IgG
  • the substance 10 binds to the binding region 2 as shown on the right side of the arrow in FIG. 5 dissociates.
  • the binding target 5 is dissociated from the ficolin protein 1, the ficolin protein cannot exhibit a function of developing a disease such as vasculitis.
  • the function of the ficolin protein 1 is suppressed by the substance 10 described above, whereby a disease caused by the ficolin protein 1 can be treated.
  • a polypeptide containing a binding region 2 for example, a partial peptide of ficolin protein in a complex formed by the ficolin protein 1 and the binding target 5 ) Is added, the binding target 5 is bound to the binding region 2 to which the binding target 5 has been added, and as a result, the binding target 5 is dissociated from the ficolin protein 1 as a result.
  • the binding target 5 is dissociated from the ficolin protein 1, the ficolin protein cannot exhibit a function of developing a disease such as vasculitis.
  • the function of ficolin protein 1 is suppressed by the binding region 2 described above, whereby a disease caused by ficolin protein 1 can be treated.
  • the therapeutic agent of the present embodiment is a therapeutic agent for immunodeficiency, autoimmune disease, or refractory vasculitis, and includes a binding inhibitor that inhibits the binding of ficollin protein and IgG. It is a therapeutic agent.
  • the above-mentioned ficolin protein can be a ficolin protein of any species or a mutant protein of the ficolin protein, but from the viewpoint of realizing a therapeutic agent that can effectively treat human diseases, It is preferable that the ficolin protein is a human ficolin protein mutant protein or a protein having high homology with these proteins.
  • the ficolin protein may be a polypeptide of the following (1) to (3): (1) a polypeptide comprising the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1; (2) In the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 1, one or several amino acids consist of an amino acid sequence substituted, deleted, inserted and / or added, and have activity as a ficollin protein A polypeptide having; (3) A polypeptide comprising an amino acid sequence having 90% or more homology with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 1 and having activity as a ficoline protein.
  • Whether or not a desired protein has activity as a ficoline protein can be determined by confirming whether or not the desired protein has a binding ability to N-acetylglucosamine. Specifically, if the desired protein has the ability to bind to N-acetylglucosamine, it can be determined that the protein has activity as a ficolin protein. More specifically, the desired protein and an excess amount of N-acetylglucosamine (eg, N-acetylglucosamine 100 times the mass of the desired protein) are mixed in physiological saline to obtain 50% of the total desired protein. When the above binds to N-acetylglucosamine, preferably 60% or more, more preferably 70% or more, more preferably 80% or more, most preferably 90% or more, the protein has activity as a ficolin protein It can be determined that
  • amino acid sequence in which one or several amino acids are substituted, deleted, inserted and / or added the position at which substitution, deletion, insertion and / or addition occurs is particularly It is not limited.
  • the number of amino acids intended by “one or several amino acids” is not particularly limited, but is preferably 20 amino acids or less, more preferably 19 amino acids or less, and 18 or less amino acids. It is more preferably an amino acid, more preferably no more than 17 amino acids, still more preferably no more than 16 amino acids, still more preferably no more than 15 amino acids, and no more than 14 amino acids. More preferably, it is preferably 13 amino acids or less, more preferably 12 amino acids or less, further preferably 11 amino acids, and 10 amino acids or less.
  • it is 9 amino acids or less, more preferably 8 amino acids or less, 7 Is more preferably within 6 amino acids, more preferably within 6 amino acids, further preferably within 5 amino acids, still more preferably within 4 amino acids, and within 3 amino acids. It is more preferably an amino acid, more preferably 2 amino acids or less, and most preferably 1 amino acid.
  • the amino acid substitution is preferably a conservative substitution.
  • the conservative substitution means that a specific amino acid is substituted with another amino acid having the same chemical properties and / or structure as the amino acid.
  • Chemical properties include, for example, hydrophobicity (hydrophobic and hydrophilic), charge (neutral, acidic and basic).
  • Examples of the structure include an aromatic ring, an aliphatic hydrocarbon group, and a carboxyl group that exist as a side chain or a functional group of the side chain.
  • conservative substitutions include, for example, substitution of serine and threonine, substitution of lysine and arginine, and substitution of phenylalanine and tryptophanamino.
  • substitutions include, for example, substitution of serine and threonine, substitution of lysine and arginine, and substitution of phenylalanine and tryptophanamino.
  • the present invention is not limited to these substitutions.
  • the homology of amino acid sequences can be determined by a known method. Specifically, GENETYX-WIN (manufactured by Genetics Co., Ltd.) is used in accordance with the GENETYX-WIN manual, for example, a homology search (homology search) between a specific amino acid sequence and an amino acid sequence to be compared is performed, and the same The homology can be calculated as the percentage (%) of amino acids.
  • GENETYX-WIN manufactured by Genetics Co., Ltd.
  • the homology can be calculated as the percentage (%) of amino acids.
  • the homology can be calculated as the ratio (%) of the number of identical amino acids to the total number of amino acids of the longer amino acid sequence of the amino acid sequences to be compared.
  • the polypeptide described in (3) above has a homology of 90% or more with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 1, but the homology is preferably 91% or more, and 92% or more More preferably, it is 93% or more, more preferably 94% or more, more preferably 95% or more, more preferably 96% or more, and 97% or more. Is more preferably 98% or more, and most preferably 99% or more.
  • the therapeutic agent of the present embodiment contains a binding inhibitor that inhibits the binding between ficolin protein and IgG.
  • the subclass of IgG that binds to ficolin protein is not particularly limited, and may be, for example, IgG1, IgG2, IgG3, or IgG4.
  • the above-mentioned binding inhibitor is not particularly limited, and may be a low molecular compound or a high molecular compound (for example, a polypeptide or a protein).
  • Whether or not any low molecular compound or high molecular compound is a binding inhibitor can be determined, for example, by a combination of immunoprecipitation and Western blotting.
  • an aqueous solution containing a binding inhibitor candidate substance, ficolin protein, and IgG is subjected to immunoprecipitation using an anti-ficolin protein antibody, and the resulting precipitate is defined as precipitate A.
  • an aqueous solution containing ficolin protein and IgG is subjected to immunoprecipitation using an anti-ficolin protein antibody, and the resulting precipitate is defined as precipitate B.
  • the precipitate A and the precipitate B were subjected to Western blot using an anti-IgG antibody, and the band observed in the precipitate A (corresponding to IgG bound to ficollin protein in an aqueous solution) and the precipitate B Compared to the band observed in sediment A compared with the band observed in sediment (corresponding to IgG bound to ficoline protein in aqueous solution). If it is thin, it can be determined that the candidate substance described above is a binding inhibitor.
  • an aqueous solution containing a binding inhibitor candidate substance, ficolin protein, and IgG is subjected to immunoprecipitation using an anti-IgG antibody, and the resulting precipitate is defined as precipitate C.
  • an aqueous solution containing ficolin protein and IgG is subjected to immunoprecipitation using an anti-IgG antibody, and the resulting precipitate is defined as precipitate D.
  • Precipitate C and precipitate D were subjected to Western blot using an anti-ficolin protein antibody, and the band observed in precipitate C (corresponding to ficolin protein bound to IgG in aqueous solution) and sedimentation The band observed in sediment C is compared with the band observed in sediment D (corresponding to the ficolin protein bound to IgG in aqueous solution). If it is thinner, it can be determined that the candidate substance described above is a binding inhibitor.
  • binding inhibitor examples include a polypeptide containing a partial peptide of IgG, a polypeptide containing a partial peptide of ficolin protein, and an antibody that binds to ficolin protein. Each configuration will be described below.
  • the binding inhibitor may be an antibody that binds to ficolin protein.
  • An antibody that binds to ficolin protein may bind to ficolin protein at any part of the antibody.
  • the above antibody may bind to the ficolin protein via its own antigen binding site (Fab), or ficolin via a part other than its own antigen binding site (for example, the hinge region and Fc). It may bind to a protein. From the viewpoint of realizing a higher therapeutic effect, it is preferable that the ficollin protein and the antibody bind strongly, and among the above-described antibodies, the ficollin protein binds to the ficollin protein via its own antigen binding site (Fab). Antibodies are more preferred.
  • an antibody that binds to ficolin protein via its own antigen binding site (Fab) is particularly referred to as an anti-ficolin protein antibody.
  • the antibody is not particularly limited as long as it binds to ficolin protein, but may be one that binds to the amino terminal region of ficolin protein (SEQ ID NO: 14 corresponding to FCN1-Nt described in Examples). Alternatively, it may be one that binds to a polypeptide consisting of an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 16, 17, or 18 (corresponding to the antigen at the time of producing a monoclonal antibody described in the Examples).
  • the antibody is preferably a monoclonal antibody, and binds to a polypeptide comprising the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 18 (for example, a polypeptide comprising the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 18 as an antigen).
  • the one that binds to the polypeptide consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 16 is second most preferred, and the one that binds to the polypeptide consisting of the amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 17 (for example, the one that uses the polypeptide consisting of the amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 17 as an antigen) is the third most preferable.
  • the class of the antibody that binds to the ficolin protein is not particularly limited, and may be IgG, IgM, IgA, or IgE. From the viewpoint of more easily producing a therapeutic agent, the class of the antibody that binds to the ficolin protein is preferably IgG.
  • the antibody that binds to the ficolin protein may be a monoclonal antibody or a polyclonal antibody. From the viewpoint of more easily producing a therapeutic agent and a therapeutic agent that exhibits a stable therapeutic effect. From the viewpoint of production, a monoclonal antibody is preferable.
  • the antibody that binds to ficolin protein is preferably a chimeric antibody of a human antibody and a mouse antibody, more preferably a fully human antibody, from the viewpoint of producing a safer therapeutic agent.
  • a chimeric antibody it is preferable that as much of the chimeric antibody as possible is derived from a human antibody, 50% or more, preferably 60% or more, more preferably 70% or more, more preferably 80% or more. More preferably, 90% or more, more preferably 95% or more, and most preferably 98% or more of the portion is derived from a human antibody.
  • the method for producing the antibody is not particularly limited, and may be produced according to a known method. For example, according to the method described in Harlow et al., “Antibodies: A Laboratory manual, Cold Spring Harbor Laboratory, New York (1988)”, Iwasaki et al., “Monoclonal antibody hybridomas and ELISA, Kodansha (1991)”. do it.
  • the amount of the antibody contained in the therapeutic agent of the present embodiment is not particularly limited, but may be 1 ng to 100 mg, 10 ng to 100 mg, 100 ng to 100 mg, It may be 1 mg to 100 mg, or 10 mg to 100 mg.
  • the binding inhibitor may be a polypeptide containing a partial peptide of ficolin protein or a polypeptide consisting of a partial peptide of ficolin protein.
  • the partial peptide may include any part of ficoline protein.
  • the partial peptide is 90% or less, 80% or less, 70% or less, 60% or less, 50% or less, 40% or less, 30% or less, 20% or less, 15% or less of the total length of ficolin protein, It may be a peptide consisting of a region of 10% or less, 9% or less, 8% or less, 7% or less, 6% or less, 5% or less, 4% or less, 3% or less, 2% or less, or 1% or less.
  • the partial peptide is preferably as small as possible.
  • the number of amino acids constituting the partial peptide is not particularly limited, and for example, 100 or less, 90 or less, 80 or less, 70 or less, 60 or less, 50 or less, 40 or less, 30 or less, 20 Or less, 19 or less, 18 or less, 17 or less, 16 or less, 15 or less, 14 or less, 13 or less, 12 or less, 11 or less, or 10 or less. From the viewpoint of preparing a therapeutic agent more easily and from the viewpoint of preparing a therapeutic agent that exhibits a stable therapeutic effect, the partial peptide is preferably as small as possible.
  • the partial peptide may be any part of the ficolin protein, but is preferably a peptide corresponding to the amino terminal region of the ficolin protein, from the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 14. More preferably, the peptide is:
  • the amount of the partial peptide contained in the therapeutic agent of the present embodiment is not particularly limited, but may be 1 ng to 100 mg, 10 ng to 100 mg, or 100 ng to 100 mg. It may be 1 mg to 100 mg, or 10 mg to 100 mg.
  • the binding inhibitor may be a polypeptide containing a partial peptide of IgG. Further, the binding inhibitor may be a polypeptide consisting of a partial peptide of IgG.
  • IgG subclass is not particularly limited, and may be, for example, IgG1, IgG2, IgG3, or IgG4.
  • the partial peptide may contain any part of an IgG protein.
  • the partial peptide is 90% or less, 80% or less, 70% or less, 60% or less, 50% or less, 40% or less, 30% or less, 20% or less, 15% or less of the total length of IgG protein. % Or less, 9% or less, 8% or less, 7% or less, 6% or less, 5% or less, 4% or less, 3% or less, 2% or less, or 1% or less of a peptide.
  • the partial peptide is preferably as small as possible.
  • the number of amino acids constituting the partial peptide is not particularly limited, and for example, 100 or less, 90 or less, 80 or less, 70 or less, 60 or less, 50 or less, 40 or less, 30 or less, 20 Or less, 19 or less, 18 or less, 17 or less, 16 or less, 15 or less, 14 or less, 13 or less, 12 or less, 11 or less, or 10 or less. From the viewpoint of preparing a therapeutic agent more easily and from the viewpoint of preparing a therapeutic agent that exhibits a stable therapeutic effect, the partial peptide is preferably as small as possible.
  • the partial peptide may be any part of the IgG protein, but is preferably a peptide having an amino acid sequence represented by any one of SEQ ID NOs: 6, 8 to 13.
  • the amount of the partial peptide contained in the therapeutic agent of the present embodiment is not particularly limited, but may be 1 ng to 100 mg, 10 ng to 100 mg, or 100 ng to 100 mg. It may be 1 mg to 100 mg, or 10 mg to 100 mg.
  • IVIG treatment is a treatment method that can be applied to various diseases. Therefore, the therapeutic agent of the present embodiment can be used for the treatment of a disease (for example, immunodeficiency, autoimmune disease, or refractory vasculitis) that is a target of IVIG treatment.
  • a disease for example, immunodeficiency, autoimmune disease, or refractory vasculitis
  • immunodeficiency examples include, but are not limited to, X-linked agammaglobulinemia, hypogammaglobulinemia, or acquired immune disorder.
  • autoimmune disease examples include idiopathic thrombocytopenic purpura, rheumatoid arthritis, or unknown fever.
  • intractable vasculitis are not particularly limited, but include Kawasaki disease, Takayasu disease, microscopic polyangiitis, polyangiitis granulomatosis, allergic granulomatous vasculitis / Churg-Strauss syndrome, or giant Mention may be made of cellular arteritis.
  • the data acquisition method of this embodiment is a method for acquiring data for diagnosis of immunodeficiency, autoimmune disease, or refractory vasculitis, and includes collected serum (specifically, subject A step of detecting ficolin protein contained in the serum collected from
  • the method for detecting ficoline protein is not particularly limited, and a known method for detecting protein can be used.
  • the ficolin protein contained in the collected serum may be detected by Western blotting or ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay).
  • the data acquisition method of the present embodiment includes the amount of ficolin protein contained in serum collected from a healthy person and the amount of ficolin protein contained in serum collected from a subject.
  • a step of comparing may be included.
  • Serum collected from a subject before IVIG treatment and serum collected from the same subject after IVIG treatment can be used.
  • the amount of ficolin protein contained in the serum collected from the same subject after the IVIG treatment was performed. If the amount is small (for example, 80% or less, preferably 70% or less, preferably 60% or less, more preferably 50% or less, more preferably 40% or less, more preferably 30% or less, more preferably before treatment). 20% or less, most preferably 10% or less), and the subject can be determined to be an effective subject for IVIG treatment.
  • the ficolin contained in the serum collected from the same subject after the IVIG treatment was performed. If the amount of protein is equal or greater (eg, greater than 80% prior to treatment), the subject can be determined to be a subject for whom IVIG treatment is not effective.
  • the data acquisition method of the present embodiment is (i) the same subject after the IVIG treatment as the collected serum and the serum collected from the subject before the IVIG treatment. And (ii) the amount of ficolin protein contained in the serum collected from the subject before the IVIG treatment and the same subject after the IVIG treatment. A step of comparing the amount of ficolin protein contained in the serum collected from
  • the present invention can also be configured as follows.
  • a therapeutic agent for immunodeficiency, autoimmune disease, or refractory vasculitis characterized by containing a binding inhibitor that inhibits the binding between ficolin protein and IgG.
  • the binding inhibitor is a polypeptide containing a partial peptide of IgG, a polypeptide containing a partial peptide of ficolin protein, or an antibody that binds to ficolin protein, ⁇ 1 > For immunodeficiency, autoimmune disease, or refractory vasculitis.
  • the polypeptide containing the IgG partial peptide contains a polypeptide having an amino acid sequence represented by any one of SEQ ID NOs: 6 and 8 to 13, ⁇ 2> A therapeutic agent for immunodeficiency, autoimmune disease or refractory vasculitis described in 1.
  • polypeptide containing the partial peptide of ficoline protein comprises a polypeptide consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 14.
  • Therapeutic agent for use in autoimmune diseases or refractory vasculitis comprises a polypeptide consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 14.
  • ⁇ 5> The immunity according to ⁇ 2>, wherein the antibody that binds to the ficolin protein binds to a polypeptide having an amino acid sequence represented by any of SEQ ID NOs: 16 to 18.
  • a therapeutic agent for failure, autoimmune disease, or refractory vasculitis is provided.
  • ⁇ 6> The immunodeficiency according to any one of ⁇ 1> to ⁇ 5>, wherein the immunodeficiency is X-linked agammaglobulinemia, hypogammaglobulinemia, or acquired immune disorder Therapeutic agent for use in autoimmune diseases or refractory vasculitis.
  • the autoimmune disease is idiopathic thrombocytopenic purpura, rheumatoid arthritis, or unknown fever, which is for immunodeficiency according to any one of ⁇ 1> to ⁇ 5>, A therapeutic agent for autoimmune diseases or refractory vasculitis.
  • the intractable vasculitis is Kawasaki disease, Takayasu disease, microscopic polyangiitis, polyangiitis granulomatosis, allergic granulomatous vasculitis / Churg-Strauss syndrome, or giant cell arteritis
  • the therapeutic agent for immunodeficiency, autoimmune disease, or refractory vasculitis according to any one of ⁇ 1> to ⁇ 5>, wherein
  • a method for acquiring data for diagnosis of immunodeficiency, autoimmune disease, or refractory vasculitis comprising the step of detecting ficollin protein contained in collected serum.
  • PBMC Peripheral Blood Mononuclear cell
  • PBMC blood cells
  • mRNA was further collected from the blood cells.
  • RNA 6000 Nano LabChip Kit p / n 5065-4476
  • Agilent 2100 Bioanalyzer G2940BA; Agilent Technologies, Inc., Palo Alto, CA
  • each mRNA before and after IVIG treatment was analyzed with Agilent®Whole®Human®Genome®Microarray® (4 ⁇ 44K®G4112F), and the expression intensity of various genes was measured.
  • Agilent®Whole®Human®Genome®Microarray® (4 ⁇ 44K®G4112F)
  • the specific method of the measurement of expression intensity followed the protocol attached to the microarray.
  • the test described above was performed on a plurality of Kawasaki disease patients, and a plurality of measured values were obtained as the expression intensity of each gene. And the average value of several measured values was computed, and the said average value was used for subsequent analysis.
  • a value of “average value of expression intensity before IVIG treatment / average value of expression intensity after IVIG treatment” was calculated, and a scatter plot based on the value was created.
  • a scatter plot is shown in FIG. In FIG. 2, the gene plotted below the diagonal line is a gene whose mRNA expression level decreased after IVIG treatment, in other words, a target molecule for IVIG treatment (specifically, IVIG A gene encoding a protein that is considered to be bound by IgG administered in therapy.
  • FCN1 M-ficolin
  • RT-PCR analysis is ⁇ 1.
  • Analysis using microarray> The mRNA collected in ⁇ 1> and primers for amplifying the FCN1 (M-ficolin) gene were used.
  • each mRNA was reverse-transcribed using the above mRNA, primer, and High Capacity Archive Kit (ABI) to synthesize cDNA.
  • PCR was performed using the cDNA as a template and further using the primers described above.
  • a denaturation reaction is first carried out at 95 ° C. for 10 minutes, followed by a reaction cycle comprising an annealing reaction at 95 ° C. for 15 seconds and an extension reaction at 60 ° C. for 1 minute. Reaction conditions for 40 cycles were employed.
  • test results are shown in Figs. 3 to 5, “KD01 to KD25” represents each patient, “1d” represents data before IVIG treatment, and “2d” represents 2 to 3 days after IVIG treatment. “7d” indicates data 6 to 8 days after IVIG treatment.
  • the inflammation of the Kawasaki disease patient returned to the original normal state 6 to 8 days after the IVIG treatment. Therefore, a gene whose mRNA expression is decreased 2 to 3 days after IVIG treatment compared to before IVIG treatment is considered as a target molecule for IVIG treatment.
  • the expression level of FCN1 mRNA is 2 to 3 days after IVIG treatment compared to before IVIG treatment. Had fallen.
  • KD2, KD15, and KD16 are considered to be patients for whom IVIG treatment is not effective, and it has been revealed that the expression level of FCN1 mRNA does not decrease in these patients even after IVIG treatment.
  • lysate of blood cells was prepared using LeukoCatch (registered trademark) (BioAcademia) according to the protocol attached to the kit. Then, according to a known method, the lysate of blood cells was subjected to analysis by Western blotting to analyze protein expression in the blood cells.
  • LeukoCatch registered trademark
  • BioAcademia BioAcademia
  • Fig. 6 and Fig. 7 show the test results.
  • SE is a detection result when a luminescent substance bound to a protein to be detected is exposed to a detection film for a short time in Western blotting
  • LE is In Western blotting, it is a detection result when the luminescent substance couple
  • IgG administered to a patient's vein in IVIG treatment will be primarily present in the patient's serum. Therefore, target molecules for IVIG treatment are thought to be primarily present in the patient's serum.
  • each patient's serum (10 ⁇ L) was subjected to analysis by Western blotting to analyze protein expression in the serum.
  • Figure 8 shows the test results.
  • FCN-Fs a vector that expresses the full length of FCN1 protein
  • FCN1-Nt a vector that expresses an amino terminal portion of FCN1 protein
  • FCN1-Ct a carboxyl terminal portion of FCN1 protein
  • FCN1-Ct a vector expressing (FCN1-Ct) was prepared (see FIG. 9A).
  • the specific amino acid sequence of FCN-Fs corresponds to the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 1.
  • the specific amino acid sequence of FCN1-Nt corresponds to the amino acid sequence consisting of the first to 120th amino acids counted from the amino terminal side in the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 1 (corresponding to SEQ ID NO: 14).
  • the specific amino acid sequence of FCN1-Ct corresponds to the amino acid sequence consisting of the 98th to 326th amino acids counted from the amino terminal side in the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 1 (corresponding to SEQ ID NO: 15).
  • each vector was designed so that the three types of proteins described above were expressed as fusion proteins fused with a Flag tag.
  • IgG-Fs a vector expressing the full length of IgG protein
  • the specific amino acid sequence of IgG-Fs corresponds to the amino acid sequence obtained by translating the base sequence shown in SEQ ID NO: 2.
  • each vector was designed so that the above-described protein was expressed as a fusion protein fused with a Myc tag.
  • the above-described vectors were introduced into human kidney cells (HEK293T) in various combinations, and the target protein was expressed in the human kidney cells.
  • the human kidney cells were disrupted in a solution (20 mM Tris-HCl [pH 7.5], 200 mM NaCl, 1 mM EDTA [pH 8.0], 0.2% NP-40), and then the solution was centrifuged. A supernatant was obtained.
  • the immunoprecipitate was recovered from the supernatant using an anti-Myc antibody. The recovered immunoprecipitate was then subjected to Western blot analysis using an anti-Flag antibody.
  • FIG. 9B shows the result of normal Western blot analysis
  • FIG. 9B shows the result of automatic Western blot analysis using a Wes instrument.
  • FIG. 9B shows that IgG-Fs binds to FCN-Fs and FCN1-Nt.
  • a vector expressing each portion (IgG-1, IgG-2, IgG-3, IgG-4, and IgG-5) obtained by dividing the IgG protein into five was prepared (FIG. 10 (A)).
  • the specific amino acid sequence of IgG-1 corresponds to the amino acid sequence consisting of the first to 120th amino acids counted from the amino terminal side in the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 2.
  • the specific amino acid sequence of IgG-2 corresponds to the amino acid sequence consisting of amino acids 121 to 240 from the amino terminal side in the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 2.
  • the specific amino acid sequence of IgG-3 corresponds to the amino acid sequence consisting of amino acids 241 to 340 counted from the amino terminal side in the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 2.
  • the specific amino acid sequence of IgG-4 corresponds to the amino acid sequence consisting of amino acids 341 to 440 from the amino terminal side in the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 2.
  • the specific amino acid sequence of IgG-5 corresponds to the amino acid sequence consisting of the 441st to 544th amino acids from the amino terminal side in the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 2.
  • each vector was designed so that the five types of proteins described above were expressed as fusion proteins fused with the Myc tag.
  • the above-described vectors were introduced into human kidney cells (HEK293T) in various combinations, and the target protein was expressed in the human kidney cells.
  • the human kidney cells were disrupted in a solution (20 mM Tris-HCl [pH 7.5], 200 mM NaCl, 1 mM EDTA [pH 8.0], 0.2% NP-40), and then the solution was centrifuged. A supernatant was obtained.
  • the immunoprecipitate was recovered from the supernatant using an anti-Myc antibody. The recovered immunoprecipitate was then subjected to Western blot analysis using an anti-Flag antibody.
  • FIG. 10 (B) revealed that FCN1-Nt binds to IgG-2, IgG-3, and IgG-4.
  • a vector expressing each portion (IgG-3a, IgG-3b, IgG-3c, and IgG-3d) obtained by dividing IgG-3 into four was prepared (FIG. 11 (A )reference).
  • the specific amino acid sequence of IgG-3a corresponds to the amino acid sequence consisting of amino acids 228 to 260 from the amino terminal side in the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 2.
  • the specific amino acid sequence of IgG-3b corresponds to the amino acid sequence consisting of the 261st to 292nd amino acids from the amino terminal side in the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 2.
  • the specific amino acid sequence of IgG-3c corresponds to the amino acid sequence consisting of the 293rd to 320th amino acids from the amino terminal side in the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 2.
  • the specific amino acid sequence of IgG-3d corresponds to the amino acid sequence consisting of amino acids 321 to 355 from the amino terminal side in the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 2.
  • each vector was designed so that the four types of proteins described above were expressed as fusion proteins fused with a Myc tag.
  • the above-described vectors were introduced into human kidney cells (HEK293T) in various combinations, and the target protein was expressed in the human kidney cells.
  • the human kidney cells were disrupted in a solution (20 mM Tris-HCl [pH 7.5], 200 mM NaCl, 1 mM EDTA [pH 8.0], 0.2% NP-40), and then the solution was centrifuged. A supernatant was obtained.
  • the immunoprecipitate was recovered from the supernatant using an anti-Myc antibody. The recovered immunoprecipitate was then subjected to Western blot analysis using an anti-Flag antibody.
  • FIG. 11 (B) revealed that FCN1-Nt binds to IgG-3d.
  • each partial peptide (iViep1, iViep2, iViep3, iViep4, iViep5, and iViep6) obtained by dividing IgG-3d into 6 was chemically synthesized (see FIGS. 13A and 13B). ).
  • iViep1, iViep2, iViep3, iViep4, iViep5, and iViep6 are respectively represented by 3d-1, 3d-2, 3d-3, 3d-4, 3d-5, and 3d-6. Show.
  • IgG-3d EEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKA (SEQ ID NO: 3), iView1: EEQYNS (SEQ ID NO: 4), iView2: TYRVVS (SEQ ID NO: 5), iView3: VLTVLH (SEQ ID NO: 6), iView4: QDWLNG (SEQ ID NO: 7), iView5: KEYKCK (SEQ ID NO: 8), iView6: KVSNKA (SEQ ID NO: 9).
  • FCN1-Nt a vector that expresses the amino terminal portion (FCN1-Nt) of the FCN1 protein was prepared according to a known method.
  • the vector was designed so that the above-described protein was expressed as a GST fusion protein fused with a GST (Glutathione S-transferase) protein.
  • the GST fusion protein was refine
  • the vector expressing IgG-3d described in the section “Specifying the site to which the FCN1 protein binds in IgG-3” was used.
  • the vector was designed so that the protein was expressed as a fusion protein fused with the Myc tag.
  • the vector was introduced into human kidney cells (HEK293T), and the target protein was expressed in the human kidney cells to obtain IgG-3d protein.
  • the GST fusion protein and the IgG-3d protein were mixed and stirred, and then glutathione sepharose beads were further added and mixed and stirred. Thereafter, the mixture was centrifuged to collect precipitates (specifically, glutathione sepharose beads and proteins bound to the glutathione sepharose beads). The recovered precipitate was then subjected to Western blot analysis using an anti-Myc antibody.
  • each partial peptide obtained by dividing CH into 11 was chemically synthesized (see (A) and (B) of FIG. 15).
  • the specific amino acid sequence of each partial peptide is shown below. That means CH1-1: ASTKGPSVFP (SEQ ID NO: 19) CH1-2: LAPSSKSTSG (SEQ ID NO: 20) CH1-3: GTAALGCLVK (SEQ ID NO: 10), CH1-4: DYFPEPVTVS (SEQ ID NO: 21) CH1-5: WNSGALTSGV (SEQ ID NO: 11), CH1-6: HTFPAVLQSS (SEQ ID NO: 22) CH1-7: GLYSLSSVVT (SEQ ID NO: 23) CH1-8: VPSSSLGTQT (SEQ ID NO: 12), CH1-9: YICNVNHKPS (SEQ ID NO: 24) CH1-10: NTKVDKKVEP (SEQ ID NO: 13), CH1-11: KSCDKTHTCPPCP (SEQ ID NO:
  • the vector was designed so that the above-described protein was expressed as a GST fusion protein fused with a GST (Glutathione S-transferase) protein. And according to the well-known method, the GST fusion protein was refine
  • the vector was designed so that the protein was expressed as a fusion protein fused with the Myc tag.
  • the vector was introduced into human kidney cells (HEK293T), and the target protein was expressed in the human kidney cells to obtain IgG-2 protein.
  • GST fusion protein and IgG-2 protein were mixed and stirred, and then glutathione sepharose beads were further added and mixed and stirred. Thereafter, the mixture was centrifuged to collect precipitates (specifically, glutathione sepharose beads and proteins bound to the glutathione sepharose beads). The recovered precipitate was then subjected to Western blot analysis using an anti-Myc antibody.
  • FIG. 15C Lanes 6, 8, 11 and 13 show the results of tests using CH1-3, CH1-5, CH1-8 and CH1-10, respectively. From FIG. 15C, it was revealed that CH1-3, CH1-5, CH1-8, and CH1-10 inhibit the binding between IgG-2 and FCN1-Nt.
  • Anti-ficolin protein / mouse monoclonal antibody was prepared according to a known method using three types of polypeptides as antigens. Two types of antibodies were prepared for each antigen.
  • the amino acid sequence of the polypeptide used as the antigen was as follows. That means Polypeptide 1: GDRGEKGMRGEKGDC (SEQ ID NO: 16), Polypeptide 2: CGSSELRVDLVDFEG (SEQ ID NO: 17), Polypeptide 3: CQFAKYKSFKVADEA (SEQ ID NO: 18).
  • FIG. 16 shows the test results of two antibodies prepared using the polypeptide 3 as an antigen. “# 5” and “# 6” in FIG.
  • the antibody prepared using polypeptide 3 as an antigen detected ficollin protein of a Kawasaki disease patient with high sensitivity As is clear from “# 6” in FIG. 16, the antibody prepared using polypeptide 3 as an antigen detected ficollin protein of a Kawasaki disease patient with high sensitivity.
  • Candida Albicans Water Soluble Fraction (CAWS) is known to cause vasculitis similar to Kawasaki disease when administered intraperitoneally to mice (Nagi-Miura N, Okuzaki D, Torigata K, Sakurai MA, Ito A, Ohno N , Nojima H: CAWS administration increases the expression of interferon gamma and complement factors that lead to severe vasculitis in DBA / 2 mice. See BMC Immunol, 14 (1): 44, 2013).
  • CAWS follows a well-known method, C.I. Adjusted from albicans strain NBRC1385.
  • C.I. Albicans strain NBRC1385 In the 5L C-limiting medium, C.I. Albicans strain NBRC1385, while shaking at 400 rpm and adding air at 5 L / min at 27 ° C. for 2 days, C.I. Albicans strain NBRC1385 was cultured. After culturing, the same amount of ethanol as the culture solution was added to the culture solution and allowed to stand overnight, and then the precipitate was collected. The precipitate was dissolved in 250 mL of water, ethanol was added to the aqueous solution, and the mixture was allowed to stand overnight, and then the precipitate was collected. The precipitate was dried using acetone, and the dried product was used as CAWS.
  • a small amount of blood was collected from the same mouse administered with CAWS at 0, 2, 3, 4 and 5 days after CAWS administration to mice, and serum was prepared from the blood and subjected to Western blot analysis.
  • Fcnb Fcnb 1
  • FCN1 Fcnb 1
  • a mouse monoclonal antibody may be useful as a substitute for IVIG in the treatment of vasculitis (for example, CAWS-induced vasculitis). Suggests.
  • mice decreases when vasculitis develops.
  • mice administered with a specific anti-FCN1 monoclonal antibody see “# 5 mAb wk1” and “# 6 mAb wk3” shown in FIG. 18A), weight loss of the mice was not observed.
  • A is a line graph showing the results of the CAWS mouse treatment experiment
  • B is a statistical analysis of weight change by dividing the data of the line graph of “A” for each experimental group.
  • C is the result of statistical analysis after adding the vasculitis development experiment (for 3 CAWS mice) as a raw food group to the result of “B”.
  • mice 5-week-old Male DBA / 2 mice (Japan SLC) were used. Specifically, 3 mice (mouse 1 to 3) receiving physiological saline as a negative control, 3 mice (mouse 4 to 6) receiving IVIG preparation as positive control, and a mouse monoclonal antibody (specific Specifically, three mice (mice 7 to 9) to be administered (corresponding to # 6 mouse monoclonal antibody in FIG. 16) were prepared.
  • mice were bred for 7 days to accustom them to the test environment, and then the test was started.
  • CAWS (1 mg / animal) was intraperitoneally administered to each of the mice (mouse 1 to 9) for 5 days after the start of the test.
  • mice 1 to 3 100 ⁇ L of physiological saline was intraperitoneally administered to each of the mice 1 to 3, and each of the mice 4 to 6 was treated with an IVIG preparation (40 mg / 200 ⁇ L / Mice) was intraperitoneally administered, and a mouse monoclonal antibody (4 mg / 200 ⁇ L / mouse) was intraperitoneally administered to each of mice 7-9.
  • IVIG preparation 40 mg / 200 ⁇ L / Mice
  • the mouse was anesthetized and blood was collected from the heart cavity, the mouse was sacrificed, and the heart was removed from the mouse. Then, the heart was fixed with 10% formaldehyde solution.
  • the above test was outsourced to UNITEC.
  • mice administered with severe vasculitis As shown in FIG. 19A, when a mouse administered with physiological saline, a mouse administered with an IVIG preparation, and a mouse administered with a mouse monoclonal antibody were compared, The highest percentage of mice with severe vasculitis, the second highest percentage of mice with severe vasculitis in mice that received IVIG preparations, and the vasculitis in mice that received mouse monoclonal antibodies The percentage of mice with severe symptoms was the lowest.
  • mice administered with the IVIG preparation Comparing the mice administered with the IVIG preparation and the mice administered with the mouse monoclonal antibody, it can be seen that the present invention has a very high therapeutic effect compared to the conventional IVIG preparation. Specifically, the proportion of mice with severe vasculitis symptoms in mice administered with the mouse monoclonal antibody is 1 ⁇ 2 or less of the proportion of mice with severe vasculitis symptoms in mice administered with the VIG preparation. A small percentage.
  • FIG. 19B shows the results of the staining test. As shown in FIG. 19B), in mice 1 to 3, infiltration of inflammatory cells around the blood vessels in the base of the heart and destruction of structures around the blood vessels in the base of the heart are observed when the symptoms are severe (severe). It was.
  • FIG. 20 and FIG. 21 show the test results regarding the concentrations of various cytokines in blood (more specifically, in serum). As shown in FIGS. 20 and 21, in the mouse administered with the mouse monoclonal antibody, the concentration of IL-10 in blood (more specifically, in serum) was significantly increased.
  • mice (Japan SLC) were used. Specifically, 3 mice (mouse 10 to 13) were administered with physiological saline as a negative control, and 8 mice were administered with a mouse monoclonal antibody (specifically, corresponding to the mouse monoclonal antibody # 6 in FIG. 16). One mouse (mouse 14-21) was prepared.
  • mice were bred for 7 days to accustom them to the test environment, and then the test was started.
  • mice 10 to 21 were immunized with CFA (complete Freund's adjuvant) and collagen (1st immu- nization). Further, one day after the start of the test, 200 ⁇ L of physiological saline was intraperitoneally administered to each of the mice 10 to 13, and a mouse monoclonal antibody (4 mg / 200 ⁇ L) was administered to each of the mice 14 to 21. Per mouse) was administered intraperitoneally.
  • mice 10 to 21 were immunized with ICFA (in-complete Freund's adjuvant) and collagen (1st immobilization). Further, one day after the start of the test, 200 ⁇ L of physiological saline was intraperitoneally administered to each of the mice 10 to 13, and a mouse monoclonal antibody (4 mg / 200 ⁇ L) was administered to each of the mice 14 to 21. Per mouse) was administered intraperitoneally.
  • ICFA in-complete Freund's adjuvant
  • collagen 1st immobilization
  • FIG. 22 shows the total evaluation value of each index. In addition, it shows that arthritis is serious, so that the sum total of an evaluation value is large.
  • the total of the evaluation values was smaller in the mouse administered with the mouse monoclonal antibody compared to the mouse administered with physiological saline. This indicates that arthritis has subsided in mice administered with mouse monoclonal antibodies.
  • the evaluation value was 4 or more in more than half of the mice administered with saline, and almost all of the mice administered with mouse monoclonal antibodies.
  • the evaluation value was less than 4. If the evaluation value is 4 or more, it is diagnosed that arthritis has developed. Therefore, it became clear that more than half of mice given saline had developed arthritis, while almost all mice given mouse monoclonal antibody did not develop arthritis. . This indicates that the mouse monoclonal antibody has a very high arthritis therapeutic effect.
  • the rheumatoid arthritis model mouse (CIA mouse) and the CAWS-administered mouse used in the examples of the present application are both model mice for suppressing onset.
  • the present invention can be used for treatment of immunodeficiency, autoimmune disease, or intractable vasculitis.
  • the present invention can also be used for the manufacture of therapeutic agents for immunodeficiency, autoimmune diseases, or refractory vasculitis.

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Abstract

血液を材料として用いること無く人工的に製造された、従来のＩＶＩＧ治療に代わる新たな治療のための治療剤として、フィコリンタンパク質とＩｇＧとの結合を阻害する結合阻害剤を含有している、免疫不全用、自己免疫疾患用、または、難治性血管炎用の治療剤を用いる。

Description

免疫不全用、自己免疫疾患用または難治性血管炎用の治療剤、および、これらの疾患の診断のためのデータの取得方法
　本発明は、免疫不全用、自己免疫疾患用または難治性血管炎用の治療剤、および、これらの疾患の診断のためのデータの取得方法に関する。
　免疫グロブリン大量療法（ＩＶＩＧ（intravenous immunoglobulin）治療）は、免疫不全（例えば、Ｘ連鎖無γグロブリン血症、低γグロブリン血症、および、低い抗体レベルを伴う獲得免疫障害など）、自己免疫疾患（例えば、特発性血小板減少性紫斑病など）および、難治性血管炎（例えば、川崎病など）の治療に広く用いられる方法であって、Ｆｃ活性を有する免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）を大量に静脈に投与することによって、各種疾患を治療する方法である（例えば、非特許文献１～３参照）。
　例えば、川崎病（kawasaki disease：ＫＤ）は、乳幼児が患う、全身性の血管炎症候群である。川崎病では、全身に存在する中型の血管が炎症を起こすことで、乳幼児に、様々な症状（例えば、発熱、発疹、および、冠動脈病変など）を惹き起こす。０歳～４歳の乳幼児が川崎病を患うケースが多く、その中でも、１歳前後の乳幼児が川崎病を患うケースが、特に多い。川崎病を患った乳幼児は死亡する場合もあり、乳幼児が川崎病を患っているか否かを定期的にチェックし、患っている場合には、早急に治療する必要がある。そして、川崎病の治療には、一般的に免疫グロブリン大量療法が用いられている。
　上述したように、免疫グロブリン大量療法は様々な疾患の治療に用いられているが、当該治療の標的分子、換言すれば、製剤中の何れの免疫グロブリンが薬効を有しているのか、が判明していない。それ故に、免疫グロブリン大量療法では、ヒトの血液から製造された製剤を用い、当該製剤には、１０００人を超える献血者から採取した血液に由来する、様々な抗原を認識する様々な免疫グロブリンが含まれている。
Wong PH, "Impact of Immunoglobulin Therapy in Pediatric Disease: a Review of Immune Mechanisms.", Clin Rev Allergy Immunol., 2015 July 4 Burns JC, Franco A., "The immunomodulatory effects of intravenous immunoglobulin therapy in Kawasaki disease.", Expert Rev Clin Immunol., 2015, 11(7), 819-25 Galeotti C., "Molecular and immunological biomarkers to predict IVIg response.", Trends Mol Med. 2015 Mar, 21(3), 145-7
　しかしながら、上述のような従来の製剤は、その材料として血液を必要とするが故に、血液に由来する様々な問題点を有していた。
　より具体的に、従来の製剤は、（ｉ）安価に、安定的に、かつ、大量に製造できない、（ｉｉ）ウイルスが混入する危険がある、（ｉｉｉ）患者に大量に投与する必要がある、（ｉｖ）薬効成分以外の不要な成分が含まれている、などの様々な問題点を有していた。
　本発明は、前記の問題点に鑑みてなされたものであり、その目的は、血液を材料として用いること無く人工的に製造される治療剤を用いた、従来のＩＶＩＧ治療に代わる新たな治療を提供することにある。
　本発明者らは、上記課題に鑑み鋭意検討した結果、従来不明であったＩＶＩＧ治療の標的分子がＦＣＮ１（Ｍ－ｆｉｃｏｌｉｎ）であることを見出し、本発明を完成させるに至った。
　本発明の免疫不全用、自己免疫疾患用、または、難治性血管炎用の治療剤は、上記課題を解決するために、フィコリンタンパク質とＩｇＧとの結合を阻害する結合阻害剤を含有していることを特徴としている。
　本発明の免疫不全、自己免疫疾患、または、難治性血管炎の診断のためのデータの取得方法は、上記課題を解決するために、採取された血清に含まれるフィコリンタンパク質を検出する工程を有することを特徴としている。
　本発明の治療剤は、材料として血液を必要としないので、本発明の治療剤を、安価に、安定的に、かつ、大量に製造することができる。
　本発明の治療剤は、材料として血液を必要としないので、ウイルス（例えば、エイズウイルス、Ｃ型肝炎ウイルスなど）が混入する危険が無い、安全な治療剤を実現することができる。
　本発明の治療剤は、薬効成分を高濃度に含んでいるので、少量の治療剤によって、患者を効果的に治療することができる。それ故に、本発明の治療剤は、治療の際に患者の体にかかる負担を軽減することができる。
　本発明の治療剤は、薬効成分以外の不要な成分が含まれていないので、副作用を抑えることができる。
　本発明の治療剤は、ＩＶＩＧ治療の対象となる様々な疾患（例えば、自己免疫疾患、および、難治性血管炎など）を治療することができる。
本発明の基本原理を説明する図である。 本発明の実施例において、ＩＶＩＧ治療の前後でｍＲＮＡの発現量が変化する遺伝子を示したスキャッタープロットを示す図である。 本発明の実施例における、ＲＴ－ＰＣＲによる試験の結果を示すグラフである。 本発明の実施例における、ＲＴ－ＰＣＲによる試験の結果を示すグラフである。 本発明の実施例における、ＲＴ－ＰＣＲによる試験の結果を示すグラフである。 本発明の実施例における、ウエスタンブロット法による試験の結果を示す図である。 本発明の実施例における、ウエスタンブロット法による試験の結果を示す図である。 本発明の実施例における、ウエスタンブロット法による試験の結果を示す図である。 本発明の実施例における、ウエスタンブロット法による試験の結果を示す図である。 本発明の実施例における、ウエスタンブロット法による試験の結果を示す図である。 本発明の実施例における、ウエスタンブロット法による試験の結果を示す図である。 本発明の実施例における、ウエスタンブロット法による試験の結果を示す図である。 本発明の実施例における、ウエスタンブロット法による試験の結果を示す図である。 本発明の実施例における、ウエスタンブロット法による試験の結果を示す図である。 本発明の実施例における、ウエスタンブロット法による試験の結果を示す図である。 本発明の実施例における、ウエスタンブロット法による試験の結果を示す図である。 本発明の実施例における、ウエスタンブロット法による試験の結果を示す図である。 本発明の実施例における、マウスの体重減少を測定した試験の結果を示す図である。 本発明の実施例における、マウスモノクローナル抗体に関する試験の結果を示す図である。 本発明の実施例における、マウスモノクローナル抗体に関する試験の結果を示す図である。 本発明の実施例における、マウスモノクローナル抗体に関する試験の結果を示す図である。 本発明の実施例における、マウスモノクローナル抗体に関する試験の結果を示す図である。
　本発明の一実施形態について以下に説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。本発明は、以下に説明する各構成に限定されるものではなく、特許請求の範囲に示した範囲で種々の変更が可能であり、異なる実施形態や実施例にそれぞれ開示された技術的手段を適宜組み合わせて得られる実施形態や実施例についても本発明の技術的範囲に含まれる。また、本明細書中に記載された学術文献及び特許文献の全てが、本明細書中において参考文献として援用される。また、本明細書において特記しない限り、数値範囲を表す「Ａ～Ｂ」は、「Ａ以上、Ｂ以下」を意図する。
　〔１．本発明の基本原理〕
　まず、図１を用いて、本発明の基本原理を説明する。
　図１（ａ）および図１（ｂ）の矢印の左側に記載しているように、生体内において、フィコリンタンパク質１は、フィコリンタンパク質１の部分ペプチドである結合領域２を介して、結合対象５と結合していると考えられている。そして、生体内において、フィコリンタンパク質１は、結合対象５と結合した状態で、様々な機能を発揮していると考えられている。当該機能を必要としない局面で当該機能が発揮されると、様々な疾患を引き起こすことになる。
　図１（ａ）の矢印の左側のように、フィコリンタンパク質１と結合対象５とが形成している複合体に、フィコリンタンパク質１と結合する物質１０（例えば、ＩｇＧの部分ペプチドを含有するポリペプチド、または、フィコリンタンパク質と結合する抗体）を加えると、図１（ａ）の矢印の右側のように、結合領域２に物質１０が結合し、その結果、フィコリンタンパク質１から結合対象５が解離する。フィコリンタンパク質１から結合対象５が解離すると、フィコリンタンパク質は、血管炎などの疾患を発症する機能を発揮することができない。
　つまり、本発明では、上述した物質１０によってフィコリンタンパク質１の機能を抑制し、それによって、フィコリンタンパク質１が原因となる疾患を治療することができる。
　また、図１（ｂ）の矢印の左側のように、フィコリンタンパク質１と結合対象５とが形成している複合体に、結合領域２（例えば、フィコリンタンパク質の部分ペプチドを含有するポリペプチド）を加えると、図１（ｂ）の矢印の右側のように、結合対象５が加えられた結合領域２に結合し、その結果、フィコリンタンパク質１から結合対象５が解離する。フィコリンタンパク質１から結合対象５が解離すると、フィコリンタンパク質は、血管炎などの疾患を発症する機能を発揮することができない。
　つまり、本発明では、上述した結合領域２によってフィコリンタンパク質１の機能を抑制し、それによって、フィコリンタンパク質１が原因となる疾患を治療することができる。
　以下に、本発明について、詳細に説明する。
　〔２．治療剤〕
　本実施の形態の治療剤は、免疫不全用、自己免疫疾患用、または、難治性血管炎用の治療剤であって、フィコリンタンパク質とＩｇＧとの結合を阻害する結合阻害剤を含んでいる治療剤である。
　上述したフィコリンタンパク質は、あらゆる生物種のフィコリンタンパク質、または、当該フィコリンタンパク質の変異タンパク質であり得るが、ヒトの疾患を効果的に治療し得る治療剤を実現するという観点からは、ヒトのフィコリンタンパク質、または、ヒトのフィコリンタンパク質の変異タンパク質、または、これらのタンパク質とホモロジーが高いタンパク質、であることが好ましい。
　具体的に、フィコリンタンパク質は、以下の（１）～（３）のポリペプチドであってもよい：
　（１）配列番号１に示されるアミノ酸配列からなるポリペプチド；
　（２）配列番号１に示されるアミノ酸配列において、１個もしくは数個のアミノ酸が、置換、欠失、挿入、および／または、付加されたアミノ酸配列からなり、かつ、フィコリンタンパク質としての活性を有するポリペプチド；
　（３）配列番号１に示されるアミノ酸配列と９０％以上の相同性を有するアミノ酸配列からなり、かつ、フィコリンタンパク質としての活性を有するポリペプチド。
　所望のタンパク質が、フィコリンタンパク質としての活性を有するか否かは、所望のタンパク質が、Ｎ－アセチルグルコサミンに対する結合能を有しているか否かを確認することによって知ることができる。具体的に、所望のタンパク質がＮ－アセチルグルコサミンに対する結合能を有していれば、当該タンパク質はフィコリンタンパク質としての活性を有するものである、と判定することができる。より具体的に、生理食塩水中で、所望のタンパク質と過剰量のＮ－アセチルグルコサミン（例えば、所望のタンパク質の１００倍の質量のＮ－アセチルグルコサミン）とを混合し、全所望のタンパク質の５０％以上、好ましくは６０％以上、より好ましくは７０％以上、より好ましくは８０％以上、最も好ましくは９０％以上がＮ－アセチルグルコサミンに結合すれば、当該タンパク質はフィコリンタンパク質としての活性を有するものである、と判定することができる。
　本明細書における「１個もしくは数個のアミノ酸が、置換、欠失、挿入、および／または、付加されたアミノ酸配列」では、置換、欠失、挿入、および／または、付加が生じる位置は特に限定されない。
　また、「１個もしくは数個のアミノ酸」が意図するアミノ酸の数は特に限定されないが、２０個以内のアミノ酸であることが好ましく、１９個以内のアミノ酸であることが更に好ましく、１８個以内のアミノ酸であることが更に好ましく、１７個以内のアミノ酸であることが更に好ましく、１６個以内のアミノ酸であることが更に好ましく、１５個以内のアミノ酸であることが更に好ましく、１４個以内のアミノ酸であることが更に好ましく、１３個以内のアミノ酸であることが更に好ましく、１２個以内のアミノ酸であることが更に好ましく、１１個のアミノ酸であることが更に好ましく、１０個以内のアミノ酸であることが好ましく、９個以内のアミノ酸であることが更に好ましく、８個以内のアミノ酸であることが更に好ましく、７個以内のアミノ酸であることが更に好ましく、６個以内のアミノ酸であることが更に好ましく、５個以内のアミノ酸であることが更に好ましく、４個以内のアミノ酸であることが更に好ましく、３個以内のアミノ酸であることが更に好ましく、２個以内のアミノ酸であることが更に好ましく、１個のアミノ酸であることが最も好ましい。
　アミノ酸の置換は、保存的置換であることが好ましい。なお、保存的置換とは、特定のアミノ酸から、当該アミノ酸と同様な化学的性質および／または構造を有する他のアミノ酸に置換されることをいう。化学的性質としては、例えば、疎水性度（疎水性および親水性）、電荷（中性、酸性および塩基性）が挙げられる。構造としては、例えば、側鎖、または、側鎖の官能基として存在する芳香環、脂肪炭化水素基およびカルボキシル基が挙げられる。
　保存的置換の例としては、例えば、セリンとスレオニンとの置換、リジンとアルギニンとの置換、およびフェニルアラニンとトリプトファンアミノとの置換、が挙げられる。勿論、本発明は、これらの置換に限定されない。
　また、アミノ酸配列の相同性は、公知の方法で求めることができる。具体的には、ＧＥＮＥＴＹＸ－ＷＩＮ（株式会社ゼネティックス社製）を、ＧＥＮＥＴＹＸ－ＷＩＮのマニュアルに従って使用し、例えば、特定のアミノ酸配列と比較対象のアミノ酸配列とのホモロジーサーチ（ｈｏｍｏｌｏｇｙ　ｓｅａｒｃｈ）を行い、同一のアミノ酸の割合（％）として相同性を算出することができる。
　更に具体的には、比較するアミノ酸配列のうちの長い方のアミノ酸配列の総アミノ酸数に対する、同一のアミノ酸の数の割合（％）として、相同性を算出することができる。
　上述した（３）に記載のポリペプチドは、配列番号１に示されるアミノ酸配列と９０％以上の相同性を有するものであるが、相同性は、９１％以上であることが好ましく、９２％以上であることがより好ましく、９３％以上であることがより好ましく、９４％以上であることがより好ましく、９５％以上であることがより好ましく、９６％以上であることがより好ましく、９７％以上であることがより好ましく、９８％以上であることがより好ましく、９９％以上であることが最も好ましい。
　上述したように、本実施の形態の治療剤は、フィコリンタンパク質とＩｇＧとの結合を阻害する結合阻害剤を含有している。
　フィコリンタンパク質と結合するＩｇＧのサブクラスは、特に限定されず、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４であってもよい。
　上述した結合阻害剤は、特に限定されず、低分子化合物であってもよいし、高分子化合物（例えば、ポリペプチド、タンパク質）であってもよい。
　任意の低分子化合物または高分子化合物が結合阻害剤であるか否かは、例えば、免疫沈降法およびウエスタンブロット法の組み合わせによって判定することができる。
　具体的に、結合阻害剤の候補物質、フィコリンタンパク質、およびＩｇＧを含む水溶液を、抗フィコリンタンパク質抗体を用いた免疫沈降に供し、得られた沈降物を沈降物Ａとする。一方、フィコリンタンパク質、およびＩｇＧを含む水溶液を、抗フィコリンタンパク質抗体を用いた免疫沈降に供し、得られた沈降物を沈降物Ｂとする。沈降物Ａおよび沈降物Ｂを、抗ＩｇＧ抗体を用いたウエスタンブロットに供し、沈降物Ａにて観察されるバンド（水溶液中でフィコリンタンパク質に結合していたＩｇＧに対応）と、沈降物Ｂにて観察されるバンド（水溶液中でフィコリンタンパク質に結合していたＩｇＧに対応）とを比較して、沈降物Ａにて観察されるバンドが、沈降物Ｂにて観察されるバンドよりも薄ければ、上述した候補物質は結合阻害剤であると判定することができる。
　また、結合阻害剤の候補物質、フィコリンタンパク質、およびＩｇＧを含む水溶液を、抗ＩｇＧ抗体を用いた免疫沈降に供し、得られた沈降物を沈降物Ｃとする。一方、フィコリンタンパク質、およびＩｇＧを含む水溶液を、抗ＩｇＧ抗体を用いた免疫沈降に供し、得られた沈降物を沈降物Ｄとする。沈降物Ｃおよび沈降物Ｄを、抗フィコリンタンパク質抗体を用いたウエスタンブロットに供し、沈降物Ｃにて観察されるバンド（水溶液中でＩｇＧに結合していたフィコリンタンパク質に対応）と、沈降物Ｄにて観察されるバンド（水溶液中でＩｇＧに結合していたフィコリンタンパク質に対応）とを比較して、沈降物Ｃにて観察されるバンドが、沈降物Ｄにて観察されるバンドよりも薄ければ、上述した候補物質は結合阻害剤であると判定することができる。
　結合阻害剤の具体例として、ＩｇＧの部分ペプチドを含有するポリペプチド、フィコリンタンパク質の部分ペプチドを含有するポリペプチド、および、フィコリンタンパク質と結合する抗体を挙げることができる。以下に、各構成について説明する。
　＜Ａ．フィコリンタンパク質と結合する抗体＞
　上述したように、結合阻害剤は、フィコリンタンパク質と結合する抗体であってもよい。
　フィコリンタンパク質と結合する抗体は、当該抗体の何れの部分でフィコリンタンパク質と結合してもよい。上記抗体は、自身の抗原結合部位（Ｆａｂ）を介してフィコリンタンパク質と結合してもよいし、自身の抗原結合部位以外の部分（例えば、ヒンジ領域、および、Ｆｃなど）を介してフィコリンタンパク質と結合してもよい。より高い治療効果を実現するという観点からは、フィコリンタンパク質と抗体とが強く結合することが好ましく、上述した抗体の中では、自身の抗原結合部位（Ｆａｂ）を介してフィコリンタンパク質と結合する抗体がより好ましい。なお、本明細書では、自身の抗原結合部位（Ｆａｂ）を介してフィコリンタンパク質と結合する抗体を、特に、抗フィコリンタンパク質抗体と呼ぶ。
　上記抗体は、フィコリンタンパク質と結合するものであれば特に限定されないが、フィコリンタンパク質のアミノ末端領域（実施例に記載のＦＣＮ１－Ｎｔに対応する配列番号１４）と結合するものであってもよいし、配列番号１６、１７または１８（実施例に記載のモノクローナル抗体作製時の抗原に対応）にて示されるアミノ酸配列からなるポリペプチドと結合するものであってもよい。
　上記抗体は、モノクローナル抗体であることが好ましく、配列番号１８にて示されるアミノ酸配列からなるポリペプチドと結合するもの（例えば、配列番号１８にて示されるアミノ酸配列からなるポリペプチドを抗原とするもの）が最も好ましく、配列番号１６にて示されるアミノ酸配列からなるポリペプチドと結合するもの（例えば、配列番号１６にて示されるアミノ酸配列からなるポリペプチドを抗原とするもの）が２番目に好ましく、配列番号１７にて示されるアミノ酸配列からなるポリペプチドと結合するもの（例えば、配列番号１７にて示されるアミノ酸配列からなるポリペプチドを抗原とするもの）が３番目に好ましい。
　フィコリンタンパク質と結合する抗体のクラスは、特に限定されず、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、または、ＩｇＥであり得る。より簡便に治療剤を作製するという観点からは、フィコリンタンパク質と結合する抗体のクラスは、ＩｇＧであることが好ましい。
　フィコリンタンパク質と結合する抗体は、モノクローナル抗体であってもよいし、ポリクローナル抗体であってもよいが、より簡便に治療剤を作製するという観点、および、安定した治療効果を発揮する治療剤を作製するという観点から、モノクローナル抗体であることが好ましい。
　フィコリンタンパク質と結合する抗体は、より安全性の高い治療剤を作製するという観点から、ヒト抗体とマウス抗体とのキメラ抗体であることが好ましく、完全ヒト抗体であることが更に好ましい。キメラ抗体の場合には、キメラ抗体のできるだけ多くの部分がヒト抗体に由来するものであることが好ましく、５０％以上、好ましくは６０％以上、より好ましくは７０％以上、より好ましくは８０％以上、より好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、最も好ましくは９８％以上の部分が、ヒト抗体に由来するものであることが好ましい。
　上記抗体の作製方法は、特に限定されず、周知の方法にしたがって作製すればよい。例えば、ＨａｒＬｏｗらの「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ（１９８８）」、岩崎らの「単クローン抗体　ハイブリドーマとＥＬＩＳＡ，講談社（１９９１）」に記載の方法にしたがって、抗体を作製すればよい。
　本実施の形態の治療剤に含まれる抗体の量は、特に限定されないが、１ｎｇ～１００ｍｇであってもよいし、１０ｎｇ～１００ｍｇであってもよいし、１００ｎｇ～１００ｍｇであってもよいし、１ｍｇ～１００ｍｇであってもよいし、１０ｍｇ～１００ｍｇであってもよい。
　＜Ｂ．フィコリンタンパク質の部分ペプチドを含有するポリペプチド＞
　上述したように、結合阻害剤は、フィコリンタンパク質の部分ペプチドを含有するポリペプチド、または、フィコリンタンパク質の部分ペプチドからなるポリペプチドであってもよい。
　上記部分ペプチドは、フィコリンタンパク質の何れの部分を含むものであってもよい。例えば、上記部分ペプチドは、フィコリンタンパク質の全長の、９０％以下、８０％以下、７０％以下、６０％以下、５０％以下、４０％以下、３０％以下、２０％以下、１５％以下、１０％以下、９％以下、８％以下、７％以下、６％以下、５％以下、４％以下、３％以下、２％以下、または、１％以下の領域からなるペプチドであり得る。より簡便に治療剤を作製するという観点、および、安定した治療効果を発揮する治療剤を作製するという観点から、上記部分ペプチドは、小さいほど好ましい。
　上記部分ペプチドを構成するアミノ酸の数は特に限定されないが、例えば、１００個以下、９０個以下、８０個以下、７０個以下、６０個以下、５０個以下、４０個以下、３０個以下、２０個以下、１９個以下、１８個以下、１７個以下、１６個以下、１５個以下、１４個以下、１３個以下、１２個以下、１１個以下、または、１０個以下であり得る。より簡便に治療剤を作製するという観点、および、安定した治療効果を発揮する治療剤を作製するという観点から、上記部分ペプチドは、小さいほど好ましい。
　上述したように、上記部分ペプチドはフィコリンタンパク質の何れの部分であってもよいが、フィコリンタンパク質のアミノ末端領域に対応するペプチドであることが好ましく、配列番号１４にて示されるアミノ酸配列からなるペプチドであることがより好ましい。
　本実施の形態の治療剤に含まれる部分ペプチドの量は、特に限定されないが、１ｎｇ～１００ｍｇであってもよいし、１０ｎｇ～１００ｍｇであってもよいし、１００ｎｇ～１００ｍｇであってもよいし、１ｍｇ～１００ｍｇであってもよいし、１０ｍｇ～１００ｍｇであってもよい。
　＜Ｃ．ＩｇＧの部分ペプチドを含有するポリペプチド＞
　上述したように、結合阻害剤は、ＩｇＧの部分ペプチドを含有するポリペプチドであってもよい。また、結合阻害剤は、ＩｇＧの部分ペプチドからなるポリペプチドであってもよい。
　上述したＩｇＧのサブクラスは、特に限定されず、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４であってもよい。
　上記部分ペプチドは、ＩｇＧタンパク質の何れの部分を含むものであってもよい。例えば、上記部分ペプチドは、ＩｇＧタンパク質の全長の、９０％以下、８０％以下、７０％以下、６０％以下、５０％以下、４０％以下、３０％以下、２０％以下、１５％以下、１０％以下、９％以下、８％以下、７％以下、６％以下、５％以下、４％以下、３％以下、２％以下、または、１％以下の領域からなるペプチドであり得る。より簡便に治療剤を作製するという観点、および、安定した治療効果を発揮する治療剤を作製するという観点から、上記部分ペプチドは、小さいほど好ましい。
　上記部分ペプチドを構成するアミノ酸の数は特に限定されないが、例えば、１００個以下、９０個以下、８０個以下、７０個以下、６０個以下、５０個以下、４０個以下、３０個以下、２０個以下、１９個以下、１８個以下、１７個以下、１６個以下、１５個以下、１４個以下、１３個以下、１２個以下、１１個以下、または、１０個以下であり得る。より簡便に治療剤を作製するという観点、および、安定した治療効果を発揮する治療剤を作製するという観点から、上記部分ペプチドは、小さいほど好ましい。
　上述したように、上記部分ペプチドはＩｇＧタンパク質の何れの部分であってもよいが、配列番号６、８～１３の何れかにて示されるアミノ酸配列からなるペプチドあることが好ましい。
　本実施の形態の治療剤に含まれる部分ペプチドの量は、特に限定されないが、１ｎｇ～１００ｍｇであってもよいし、１０ｎｇ～１００ｍｇであってもよいし、１００ｎｇ～１００ｍｇであってもよいし、１ｍｇ～１００ｍｇであってもよいし、１０ｍｇ～１００ｍｇであってもよい。
　ＩＶＩＧ治療は、様々な疾患に適用することができる治療方法である。それ故に、本実施の形態の治療剤は、ＩＶＩＧ治療の対象である疾患（例えば、免疫不全、自己免疫疾患、または、難治性血管炎）の治療に用いることができる。
　免疫不全の具体例は、特に限定されないが、Ｘ連鎖無γグロブリン血症、低γグロブリン血症、または、獲得免疫障害を挙げることができる。
　自己免疫疾患の具体例は、特に限定されないが、特発性血小板減少性紫斑病、慢性関節リウマチ、または、不明熱を挙げることができる。
　難治性血管炎の具体例は、特に限定されないが、川崎病、高安病、顕微鏡的多発血管炎、多発血管炎性肉芽腫症、アレルギー性肉芽腫性血管炎／Churg-Strauss症候群、または、巨細胞性動脈炎を挙げることができる。
　〔３．免疫不全、自己免疫疾患、または、難治性血管炎の診断のためのデータの取得方法〕
　本実施の形態のデータの取得方法は、免疫不全、自己免疫疾患、または、難治性血管炎の診断のためのデータの取得方法であって、採取された血清（具体的には、被検者から採取された血清）に含まれるフィコリンタンパク質を検出する工程を有している。
　フィコリンタンパク質を検出する方法としては、特に限定されず、タンパク質を検出するための周知の方法を用いることができる。例えば、ウエスタンブロット法、または、ＥＬＩＳＡ法（enzyme linked immunosorbent assay）にて、採取された血清に含まれるフィコリンタンパク質を検出すればよい。
　以下に、データの取得方法の２つの態様について説明する。
　＜態様１＞
　健常者から採取された血清に含まれるフィコリンタンパク質の量と比較して、被検者から採取された血清に含まれるフィコリンタンパク質の量が多ければ、当該被検者は、免疫不全、自己免疫疾患、または、難治性血管炎を患っていると判定することができる。
　それ故に、本実施の形態のデータの取得方法は、健常者から採取された血清に含まれるフィコリンタンパク質の量と、被検者から採取された血清に含まれるフィコリンタンパク質の量と、を比較する工程を含んでいてもよい。
　＜態様２＞
　血清として、ＩＶＩＧ治療を行う前に被検者から採取された血清と、ＩＶＩＧ治療が行われた後（例えば、ＩＶＩＧ治療を行ってから、１日～３日後）に同じ被検者から採取された血清とを用いることが可能である。ＩＶＩＧ治療を行う前に被検者から採取された血清に含まれるフィコリンタンパク質の量と比較して、ＩＶＩＧ治療が行われた後に同じ被検者から採取された血清に含まれるフィコリンタンパク質の量が少なければ（例えば、治療前の、８０％以下、好ましくは７０％以下、好ましくは６０％以下、更に好ましくは５０％以下、更に好ましくは４０％以下、更に好ましくは３０％以下、更に好ましくは２０％以下、最も好ましくは１０％以下の量）、当該被検者を、ＩＶＩＧ治療が有効な被検者であると判定することができる。一方、ＩＶＩＧ治療を行う前に被検者から採取された血清に含まれるフィコリンタンパク質の量と比較して、ＩＶＩＧ治療が行われた後に同じ被検者から採取された血清に含まれるフィコリンタンパク質の量が同等、または、多ければ（例えば、治療前の８０％よりも多い量）、当該被検者を、ＩＶＩＧ治療が有効でない被検者であると判定することができる。
　それ故に、本実施の形態のデータの取得方法は、（ｉ）採取された血清として、ＩＶＩＧ治療を行う前に被検者から採取された血清と、ＩＶＩＧ治療が行われた後に同じ被検者から採取された血清と、を用い、かつ、（ｉｉ）ＩＶＩＧ治療を行う前に被検者から採取された血清に含まれるフィコリンタンパク質の量と、ＩＶＩＧ治療が行われた後に同じ被検者から採取された血清に含まれるフィコリンタンパク質の量と、を比較する工程を含んでいてもよい。
　本発明は、以下のように構成することも可能である。
　＜１＞フィコリンタンパク質とＩｇＧとの結合を阻害する結合阻害剤を含有していることを特徴とする、免疫不全用、自己免疫疾患用、または、難治性血管炎用の治療剤。
　＜２＞上記結合阻害剤は、ＩｇＧの部分ペプチドを含有するポリペプチド、フィコリンタンパク質の部分ペプチドを含有するポリペプチド、または、フィコリンタンパク質と結合する抗体であることを特徴とする、＜１＞に記載の免疫不全用、自己免疫疾患用、または、難治性血管炎用の治療剤。
　＜３＞上記ＩｇＧの部分ペプチドを含有するポリペプチドは、配列番号６、８～１３の何れかにて示されるアミノ酸配列からなるポリペプチドを含有するものであることを特徴とする、＜２＞に記載の免疫不全用、自己免疫疾患用、または、難治性血管炎用の治療剤。
　＜４＞上記フィコリンタンパク質の部分ペプチドを含有するポリペプチドは、配列番号１４にて示されるアミノ酸配列からなるポリペプチドを含有するものであることを特徴とする、＜２＞に記載の免疫不全用、自己免疫疾患用、または、難治性血管炎用の治療剤。
　＜５＞上記フィコリンタンパク質と結合する抗体は、配列番号１６～１８の何れかにて示されるアミノ酸配列からなるポリペプチドと結合するものであることを特徴とする、＜２＞に記載の免疫不全用、自己免疫疾患用、または、難治性血管炎用の治療剤。
　＜６＞上記免疫不全は、Ｘ連鎖無γグロブリン血症、低γグロブリン血症、または、獲得免疫障害であることを特徴とする、＜１＞～＜５＞の何れかに記載の免疫不全用、自己免疫疾患用、または、難治性血管炎用の治療剤。
　＜７＞上記自己免疫疾患は、特発性血小板減少性紫斑病、慢性関節リウマチ、または、不明熱であることを特徴とする、＜１＞～＜５＞の何れかに記載の免疫不全用、自己免疫疾患用、または、難治性血管炎用の治療剤。
　＜８＞上記難治性血管炎は、川崎病、高安病、顕微鏡的多発血管炎、多発血管炎性肉芽腫症、アレルギー性肉芽腫性血管炎／Churg-Strauss症候群、または、巨細胞性動脈炎であることを特徴とする、＜１＞～＜５＞の何れかに記載の免疫不全用、自己免疫疾患用、または、難治性血管炎用の治療剤。
　＜９＞採取された血清に含まれるフィコリンタンパク質を検出する工程を有することを特徴とする、免疫不全、自己免疫疾患、または、難治性血管炎の診断のためのデータの取得方法。
　＜１．マイクロアレイによるｍＲＮＡの発現解析＞
　本試験では、川崎病の患者にＩＶＩＧ治療を行い、治療の前後において、当該患者に由来する血液細胞（ＰＢＭＣ（Peripheral Blood Mononuclear cell）、主として白血球を含む細胞群）内でｍＲＮＡの発現が変化する遺伝子を、マイクロアレイによって調べた。以下に、試験方法、および、試験結果について説明する。
　まず、ＩＶＩＧ治療の前に、川崎病の患者から血液細胞（ＰＢＭＣ）を採取し、更に、当該血液細胞からｍＲＮＡを採取した。次いで、ＩＶＩＧ治療を行った後に、当該川崎病の患者から血液細胞（ＰＢＭＣ）を採取し、更に、当該血液細胞からｍＲＮＡを採取した。
　なお、ｍＲＮＡの採取は、PAXgene Blood RNA Kit（Qiagen）を用いて行い、具体的な採取方法は、当該キットに添付のプロトコールにしたがった。また、採取されたｍＲＮＡの品質を、RNA 6000 Nano LabChip Kit（p/n 5065-4476）、および、Agilent 2100 Bioanalyzer（G2940BA; Agilent Technologies, Inc., Palo Alto, CA）を用いて解析し、採取されたｍＲＮＡが純度高くｍＲＮＡを含有したものであることを確認した。
　次いで、ＩＶＩＧ治療前後の各ｍＲＮＡを、Agilent Whole Human Genome Microarray （4×44K G4112F）にて解析し、様々な遺伝子の発現強度を測定した。なお、発現強度の測定の具体的な方法は、当該マイクロアレイに添付のプロトコールにしたがった。
　上述した試験を複数の川崎病患者に対して行い、各遺伝子の発現強度として、複数の測定値を得た。そして、複数の測定値の平均値を算出し、当該平均値を以後の解析に用いた。
　各遺伝子に関して「ＩＶＩＧ治療前の発現強度の平均値／ＩＶＩＧ治療後の発現強度の平均値」の値を算出し当該値に基づくスキャッタープロットを作成した。スキャッタープロットを、図２に示す。なお、図２において、対角線よりも下側にプロットされた遺伝子は、ＩＶＩＧ治療を行った後でｍＲＮＡの発現量が減少した遺伝子、換言すれば、ＩＶＩＧ治療の標的分子（具体的には、ＩＶＩＧ治療で投与されたＩｇＧが結合すると考えられるタンパク質をコードしている遺伝子）である。
　図２に示すように、ＩＶＩＧ治療の標的分子として、ＦＣＮ１（Ｍ－ｆｉｃｏｌｉｎ）を見出すことに成功した。
　＜２．ＲＴ－ＰＣＲによるｍＲＮＡの発現解析＞
　本試験では、複数の川崎病の患者（ＫＤ０１～ＫＤ０５、ＫＤ１１～ＫＤ１６、ＫＤ１８～２５）にＩＶＩＧ治療を行い、治療の前後において、これらの患者に由来する血液細胞（ＰＢＭＣ（Peripheral Blood Mononuclear cell）、主として白血球を含む細胞群）内でＦＣＮ１（Ｍ－ｆｉｃｏｌｉｎ）のｍＲＮＡの発現が変化するか否かを、ＲＴ－ＰＣＲによって調べた。以下に、試験方法、および、試験結果について説明する。
　ＲＴ－ＰＣＲによる解析は、＜１．マイクロアレイによる解析＞にて採取したｍＲＮＡ、および、ＦＣＮ１（Ｍ－ｆｉｃｏｌｉｎ）遺伝子を増幅させるためのプライマーを用いて行った。
　まず、上記ｍＲＮＡ、プライマー、および、High Capacity cDNA Archive Kit（ABI）を用いて各ｍＲＮＡを逆転写し、ｃＤＮＡを合成した。次いで、鋳型として当該ｃＤＮＡを用い、更に、上記プライマーを用いて、ＰＣＲを行った。なお、ＰＣＲの反応条件としては、まず９５℃にて１０分間の変性反応を行った後、９５℃にて１５秒間のアニーリング反応、および、６０℃にて１分間の伸長反応からなる反応サイクルを４０サイクル繰り返す反応条件を採用した。
　図３～図５に試験結果を示す。なお、図３～図５において、「ＫＤ０１～ＫＤ２５」は、各患者を示し、「１ｄ」は、ＩＶＩＧ治療前のデータを示し、「２ｄ」は、ＩＶＩＧ治療を行ってから２日～３日後のデータを示し、「７ｄ」は、ＩＶＩＧ治療を行ってから６日～８日後のデータを示している。なお、ＩＶＩＧ治療を行ってから６日～８日後には、川崎病患者の炎症は元の正常な状態に戻っていた。それ故に、ＩＶＩＧ治療前と比較してＩＶＩＧ治療を行ってから２日～３日後にｍＲＮＡの発現が少なくなっている遺伝子が、ＩＶＩＧ治療の標的分子と考えられる。
　図３～図５に示すように、ＫＤ２、ＫＤ１５、ＫＤ１６以外の大多数の患者においては、ＩＶＩＧ治療前と比較してＩＶＩＧ治療を行ってから２日～３日後に、ＦＣＮ１のｍＲＮＡの発現量が低下していた。
　川崎病患者には、ＩＶＩＧ治療が有効である患者と、ＩＶＩＧ治療が有効でない患者とが存在することが知られている。ＫＤ２、ＫＤ１５、ＫＤ１６は、ＩＶＩＧ治療が有効でない患者であると考えられ、これらの患者では、ＩＶＩＧ治療を行っても、ＦＣＮ１のｍＲＮＡの発現量が低下しないことが明らかになった。
　＜３．血液細胞内におけるタンパク質の発現解析＞
　本試験では、複数の川崎病の患者（ＫＤ０１～ＫＤ０４、ＫＤ１１、ＫＤ１２、ＫＤ１４～ＫＤ１６、ＫＤ１８～２５）にＩＶＩＧ治療を行い、治療の前後において、これらの患者に由来する血液細胞（ＰＢＭＣ（Peripheral Blood Mononuclear cell）、主として白血球を含む細胞群）内でＦＣＮ１（Ｍ－ｆｉｃｏｌｉｎ）のタンパク質の発現が変化するか否かを、ウエスタンブロット法によって調べた。以下に、試験方法、および、試験結果について説明する。
　血液細胞の溶解物の調製は、ＬｅｕｋｏＣａｔｃｈ（登録商標）（BioAcademia）を用いて、当該キットに添付のプロトコールにしたがって行った。そして、周知の方法にしたがって、血液細胞の溶解物をウエスタンブロット法による解析に供し、血液細胞内におけるタンパク質の発現を解析した。
　図６および図７に試験結果を示す。
　なお、図６において、「ＳＥ」は、ウエスタンブロット法において、検出対象であるタンパク質に結合した発光物質を、検出用フィルムに対して短時間露光したときの検出結果であり、「ＬＥ」は、ウエスタンブロット法において、検出対象であるタンパク質に結合した発光物質を、検出用フィルムに対して長時間露光したときの検出結果である。
　また、図６および図７において、「Ｈ１」～「Ｈ８」は、健常人の試験結果である。
　また、図６および図７において、「１ｄ」は、ＩＶＩＧ治療前のデータを示し、「２ｄ」は、ＩＶＩＧ治療を行ってから２日後のデータを示し、「３ｄ」は、ＩＶＩＧ治療を行ってから３日後のデータを示し、「４ｄ」は、ＩＶＩＧ治療を行ってから４日後のデータを示し、「６ｄ」は、ＩＶＩＧ治療を行ってから６日後のデータを示し、「７ｄ」は、ＩＶＩＧ治療を行ってから７日後のデータを示し、「８ｄ」は、ＩＶＩＧ治療を行ってから８日後のデータを示している。
　図６から明らかなように、大多数の患者においては、ＩＶＩＧ治療前と比較してＩＶＩＧ治療を行った直後に、血液細胞内におけるＦＣＮ１タンパク質の発現量が低下していた。
　一方、図６および図７から明らかなように、大多数の患者においては、ＩＶＩＧ治療前と比較してＩＶＩＧ治療を行った直後に、血液細胞内におけるＦＣＮ１以外のタンパク質（例えば、ＨＳＰ９０、ＨｐＲ、α－Ｔｕｂｕｌｉｎなど）の発現量に有意な変化（具体的には、タンパク質の量の減少）が認められなかった。例えば、ＨｐＲに関しては、全ての患者において、略等量発現していた。
　＜４．血清内におけるタンパク質の発現解析＞
　ＩＶＩＧ治療において患者の静脈に投与されたＩｇＧは、主として、患者の血清中に存在することになる。それ故に、ＩＶＩＧ治療の標的分子は、主として、患者の血清中に存在すると考えられる。
　そこで、本試験では、複数の川崎病の患者（ＫＤ２６～ＫＤ４４：１９名）にＩＶＩＧ治療を行い、治療の前後において、これらの患者に由来する血清内でＦＣＮ１（Ｍ－ｆｉｃｏｌｉｎ）のタンパク質の発現が変化するか否かを、ウエスタンブロット法によって調べた。以下に、試験方法、および、試験結果について説明する。
　周知の方法にしたがって、各患者の血清（１０μＬ）をウエスタンブロット法による解析に供し、血清内におけるタンパク質の発現を解析した。
　図８に試験結果を示す。
　図８から明らかなように、試験した全ての患者において、ＩＶＩＧ治療前（図８における「ＩＶＩＧ－」）と比較してＩＶＩＧ治療を行った直後（図８における「ＩＶＩＧ＋」）に、血清内におけるＦＣＮ１タンパク質の発現量が大幅に低下していた。
　一方、大多数の患者においては、ＩＶＩＧ治療前と比較してＩＶＩＧ治療を行った直後に、血清内におけるＦＣＮ１以外のタンパク質（例えば、Ｃ１ｑ、ＨｐＲなど）の発現量に有意な変化が認められなかった。例えば、ＨｐＲに関しては、全ての患者において、略等量発現していた。一方、Ｃ１ｑに関しては、一部の患者（具体的には、ＫＤ２８、ＫＤ２９およびＫＤ３４）を除いては、ＩＶＩＧ治療前と比較してＩＶＩＧ治療を行った直後に、発現量に有意な変化が認められなかった。
　＜５．ＦＣＮ１タンパク質内における、ＩｇＧタンパク質が結合する部位の特定＞
　本試験では、ＩｇＧタンパク質が、ＦＣＮ１タンパク質内のどの箇所に結合するか、特定した。以下に、試験方法、および、試験結果について説明する。
　まず、周知の方法にしたがって、ＦＣＮ１タンパク質の全長（ＦＣＮ－Ｆｓ）を発現するベクター、ＦＣＮ１タンパク質のアミノ末端側の部分（ＦＣＮ１－Ｎｔ）を発現するベクター、および、ＦＣＮ１タンパク質のカルボキシル末端側の部分（ＦＣＮ１－Ｃｔ）を発現するベクターを作製した（図９（Ａ）参照）。なお、ＦＣＮ－Ｆｓの具体的なアミノ酸配列は、配列番号１に示されるアミノ酸配列に対応する。ＦＣＮ１－Ｎｔの具体的なアミノ酸配列は、配列番号１に示されるアミノ酸配列における、アミノ末端側から数えて１番目～１２０番目のアミノ酸からなるアミノ酸配列に対応する（配列番号１４に対応）。ＦＣＮ１－Ｃｔの具体的なアミノ酸配列は、配列番号１に示されるアミノ酸配列における、アミノ末端側から数えて９８番目～３２６番目のアミノ酸からなるアミノ酸配列に対応する（配列番号１５に対応）。また、上述した３種類のタンパク質は、Ｆｌａｇタグと融合した融合タンパク質として発現されるように、各ベクターを設計した。
　次いで、周知の方法にしたがって、ＩｇＧタンパク質の全長（ＩｇＧ－Ｆｓ）を発現するベクターを作製した。なお、ＩｇＧ－Ｆｓの具体的なアミノ酸配列は、配列番号２に示される塩基配列を翻訳したアミノ酸配列に対応する。また、上述したタンパク質は、Ｍｙｃタグと融合した融合タンパク質として発現されるように、各ベクターを設計した。
　上述したベクターを様々な組み合わせでヒト腎臓細胞（ＨＥＫ２９３Ｔ）に導入し、当該ヒト腎臓細胞内で目的のタンパク質を発現させた。当該ヒト腎臓細胞を溶液（２０ｍＭ　Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ［ｐＨ７．５］、２００ｍＭ　ＮａＣｌ、１ｍＭ　ＥＤＴＡ［ｐＨ８．０］、０．２%　ＮＰ－４０）中で破砕した後、当該溶液を遠心分離処理して上清を得た。抗Ｍｙｃ抗体を用いて、上清から免疫沈降物を回収した。次いで、回収された免疫沈降物を、抗Ｆｌａｇ抗体を用いたウエスタンブロット解析に供した。
　試験結果を図９（Ｂ）に示す。図９（Ｂ）の左側は、通常のウエスタンブロット解析の結果を示し、図９（Ｂ）の右側は、Ｗｅｓ機器を用いた自動ウエスタンブロット解析の結果を示している。図９（Ｂ）から、ＩｇＧ－Ｆｓは、ＦＣＮ－Ｆｓ、および、ＦＣＮ１－Ｎｔと結合することが明らかになった。
　＜６．ＩｇＧタンパク質内における、ＦＣＮ１タンパク質が結合する部位の特定＞
　本試験では、ＩｇＧタンパク質内のどの箇所にＦＣＮ１タンパク質が結合するか、特定した。以下に、試験方法、および、試験結果について説明する。
　まず、周知の方法にしたがって、ＩｇＧタンパク質を５つに分割した各部分（ＩｇＧ－１、ＩｇＧ－２、ＩｇＧ－３、ＩｇＧ－４、および、ＩｇＧ－５）を発現するベクターを作製した（図１０（Ａ）参照）。なお、ＩｇＧ－１の具体的なアミノ酸配列は、配列番号２に示されるアミノ酸配列における、アミノ末端側から数えて１番目～１２０番目のアミノ酸からなるアミノ酸配列に対応する。ＩｇＧ－２の具体的なアミノ酸配列は、配列番号２に示されるアミノ酸配列における、アミノ末端側から数えて１２１番目～２４０番目のアミノ酸からなるアミノ酸配列に対応する。ＩｇＧ－３の具体的なアミノ酸配列は、配列番号２に示されるアミノ酸配列における、アミノ末端側から数えて２４１番目～３４０番目のアミノ酸からなるアミノ酸配列に対応する。ＩｇＧ－４の具体的なアミノ酸配列は、配列番号２に示されるアミノ酸配列における、アミノ末端側から数えて３４１番目～４４０番目のアミノ酸からなるアミノ酸配列に対応する。ＩｇＧ－５の具体的なアミノ酸配列は、配列番号２に示されるアミノ酸配列における、アミノ末端側から数えて４４１番目～５４４番目のアミノ酸からなるアミノ酸配列に対応する。また、上述した５種類のタンパク質は、Ｍｙｃタグと融合した融合タンパク質として発現されるように、各ベクターを設計した。
　更に、本試験では、＜５．ＦＣＮ１タンパク質内における、ＩｇＧタンパク質が結合する部位の特定＞の欄で説明した、ＦＣＮ１タンパク質のアミノ末端側の部分（ＦＣＮ１－Ｎｔ）を発現するベクターを用いた。なお、当該タンパク質は、Ｆｌａｇタグと融合した融合タンパク質として発現されるように、ベクターを設計した。
　上述したベクターを様々な組み合わせでヒト腎臓細胞（ＨＥＫ２９３Ｔ）に導入し、当該ヒト腎臓細胞内で目的のタンパク質を発現させた。当該ヒト腎臓細胞を溶液（２０ｍＭ　Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ［ｐＨ７．５］、２００ｍＭ　ＮａＣｌ、１ｍＭ　ＥＤＴＡ［ｐＨ８．０］、０．２%　ＮＰ－４０）中で破砕した後、当該溶液を遠心分離処理して上清を得た。抗Ｍｙｃ抗体を用いて、上清から免疫沈降物を回収した。次いで、回収された免疫沈降物を、抗Ｆｌａｇ抗体を用いたウエスタンブロット解析に供した。
　試験結果を図１０（Ｂ）に示す。図１０（Ｂ）から、ＦＣＮ１－Ｎｔは、ＩｇＧ－２、ＩｇＧ－３、および、ＩｇＧ－４と結合することが明らかになった。
　更に、上述した試験結果の再現性を確認するために、免疫沈降に使用した抗Ｍｙｃ抗体と混ぜる細胞抽出液のタンパク質量を４倍に増やして、免疫沈降を行った。当該試験の結果を図１０（Ｃ）に示す。図１０（Ｃ）から、ＩｇＧ－２、ＩｇＧ－３、および、ＩｇＧ－４のうちでは、ＩｇＧ－３が最も強くＦＣＮ１－Ｎｔと結合することが明らかになった。そこで、今後は、ＩｇＧ－３内の結合領域を狭めることを目的として、更なる実験を行うことにした。
　＜７．ＩｇＧ－３内における、ＦＣＮ１タンパク質が結合する部位の特定＞
　本試験では、ＩｇＧ－３内のどの箇所にＦＣＮ１タンパク質が結合するか、特定した。以下に、試験方法、および、試験結果について説明する。
　まず、周知の方法にしたがって、ＩｇＧ－３を４つに分割した各部分（ＩｇＧ－３ａ、ＩｇＧ－３ｂ、ＩｇＧ－３ｃ、および、ＩｇＧ－３ｄ）を発現するベクターを作製した（図１１（Ａ）参照）。なお、ＩｇＧ－３ａの具体的なアミノ酸配列は、配列番号２に示されるアミノ酸配列における、アミノ末端側から数えて２２８番目～２６０番目のアミノ酸からなるアミノ酸配列に対応する。ＩｇＧ－３ｂの具体的なアミノ酸配列は、配列番号２に示されるアミノ酸配列における、アミノ末端側から数えて２６１番目～２９２番目のアミノ酸からなるアミノ酸配列に対応する。ＩｇＧ－３ｃの具体的なアミノ酸配列は、配列番号２に示されるアミノ酸配列における、アミノ末端側から数えて２９３番目～３２０番目のアミノ酸からなるアミノ酸配列に対応する。ＩｇＧ－３ｄの具体的なアミノ酸配列は、配列番号２に示されるアミノ酸配列における、アミノ末端側から数えて３２１番目～３５５番目のアミノ酸からなるアミノ酸配列に対応する。また、上述した４種類のタンパク質は、Ｍｙｃタグと融合した融合タンパク質として発現されるように、各ベクターを設計した。
　更に、本試験では、＜５．ＦＣＮ１タンパク質内における、ＩｇＧタンパク質が結合する部位の特定＞の欄で説明した、ＦＣＮ１タンパク質のアミノ末端側の部分（ＦＣＮ１－Ｎｔ）を発現するベクターを用いた。なお、当該タンパク質は、Ｆｌａｇタグと融合した融合タンパク質として発現されるように、ベクターを設計した。
　上述したベクターを様々な組み合わせでヒト腎臓細胞（ＨＥＫ２９３Ｔ）に導入し、当該ヒト腎臓細胞内で目的のタンパク質を発現させた。当該ヒト腎臓細胞を溶液（２０ｍＭ　Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ［ｐＨ７．５］、２００ｍＭ　ＮａＣｌ、１ｍＭ　ＥＤＴＡ［ｐＨ８．０］、０．２%　ＮＰ－４０）中で破砕した後、当該溶液を遠心分離処理して上清を得た。抗Ｍｙｃ抗体を用いて、上清から免疫沈降物を回収した。次いで、回収された免疫沈降物を、抗Ｆｌａｇ抗体を用いたウエスタンブロット解析に供した。
　試験結果を図１１（Ｂ）に示す。図１１（Ｂ）から、ＦＣＮ１－Ｎｔは、ＩｇＧ－３ｄと結合することが明らかになった。
　＜８．ＩｇＧ－３内における、ＦＣＮ１タンパク質が結合する部位の特定－２＞
　ＧＳＴ－ＦＣＮ１－Ｎｔと、Ｍｙｃ－Ｈｓ　ＩｇＧ－３と、を混合した後、当該混合物にグルタチオンセファロースビーズを加えて、混合および撹拌した。その後、混合物を遠心分離することによって、沈殿物（具体的には、グルタチオンセファロースビーズ、および、当該グルタチオンセファロースビーズに結合しているタンパク質）を回収した。次いで、回収された沈殿物を、抗Ｍｙｃ抗体を用いたウエスタンブロット解析に供した。なお、ポジティブコントロールとしては、「ＣＨ１＋ＣＨ２」を用いた。
　試験結果を図１２に示す。図１２より、ＩｇＧとＦＣＮ１とは、ＩｇＧ－３ｄを介して結合していることが明らかになった。
　＜９．ＩｇＧ－３ｄ内における、ＦＣＮ１タンパク質が結合する部位の特定＞
　本試験では、ＩｇＧ－３ｄ内のどの箇所にＦＣＮ１タンパク質が結合するか、特定した。以下に、試験方法、および、試験結果について説明する。
　まず、周知の方法にしたがって、ＩｇＧ－３ｄを６つに分割した各部分ペプチド（ｉＶｉｅｐ１、ｉＶｉｅｐ２、ｉＶｉｅｐ３、ｉＶｉｅｐ４、ｉＶｉｅｐ５、および、ｉＶｉｅｐ６）を化学合成した（図１３（Ａ）および（Ｂ）参照）。なお、図１３中、ｉＶｉｅｐ１、ｉＶｉｅｐ２、ｉＶｉｅｐ３、ｉＶｉｅｐ４、ｉＶｉｅｐ５、および、ｉＶｉｅｐ６の各々を、３ｄ－１、３ｄ－２、３ｄ－３、３ｄ－４、３ｄ－５、および、３ｄ－６にて示している。
　各ペプチドの具体的なアミノ酸配列を、以下に示す。つまり、
ＩｇＧ－３ｄ：EEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKA　　（配列番号３）、
ｉＶｉｅｐ１：EEQYNS　　　　　　　　　　　　　　 　　（配列番号４）、
ｉＶｉｅｐ２：　　　TYRVVS　　　　　　　　　　　 　　（配列番号５）、
ｉＶｉｅｐ３：　　　　　　VLTVLH　　　　　　　　 　　（配列番号６）、
ｉＶｉｅｐ４：　　　　　　　　　QDWLNG　　　　　 　　（配列番号７）、
ｉＶｉｅｐ５：　　　　　　　　　　　　KEYKCK　　 　　（配列番号８）、
ｉＶｉｅｐ６：　　　　　　　　　　　　　　 KVSNKA　　（配列番号９）。
　次いで、周知の方法にしたがって、ＦＣＮ１タンパク質のアミノ末端側の部分（ＦＣＮ１－Ｎｔ）を発現するベクターを作製した。なお、上述したタンパク質は、ＧＳＴ（Glutathione S-transferase）タンパク質と融合したＧＳＴ融合タンパク質として発現されるように、ベクターを設計した。そして、周知の方法にしたがって、当該ベクターを用いて、ＧＳＴ融合タンパク質を精製した。
　更に、本試験では、＜７．ＩｇＧ－３内における、ＦＣＮ１タンパク質が結合する部位の特定＞の欄で説明した、ＩｇＧ－３ｄを発現するベクターを用いた。なお、当該タンパク質は、Ｍｙｃタグと融合した融合タンパク質として発現されるように、ベクターを設計した。当該ベクターをヒト腎臓細胞（ＨＥＫ２９３Ｔ）に導入し、当該ヒト腎臓細胞内で目的のタンパク質を発現させて、ＩｇＧ－３ｄタンパク質を取得した。
　ｉＶｉｅｐ１、ｉＶｉｅｐ２、ｉＶｉｅｐ３、ｉＶｉｅｐ４、ｉＶｉｅｐ５、または、ｉＶｉｅｐ６の存在下で、ＧＳＴ融合タンパク質とＩｇＧ－３ｄタンパク質とを混合および撹拌した後、更に、グルタチオンセファロースビーズを加えて、混合および撹拌した。その後、混合物を遠心分離することによって、沈殿物（具体的には、グルタチオンセファロースビーズ、および、当該グルタチオンセファロースビーズに結合しているタンパク質）を回収した。次いで、回収された沈殿物を、抗Ｍｙｃ抗体を用いたウエスタンブロット解析に供した。
　試験結果を図１３（Ｃ）に示す。なお、図１３（Ｃ）にて、「ＮＣ」は「negative control」を意図し、「ＮＰ」は「no peptide added」を意図している。図１３の（Ｃ）から、ｉＶｉｅｐ３、ｉＶｉｅｐ５、および、ｉＶｉｅｐ６は、ＩｇＧ－３ｄとＦＣＮ１－Ｎｔとの結合を阻害することが明らかになった。
　＜１０．ＩｇＧ内における、ＦＣＮ１タンパク質が結合する部位の特定＞
　図１４の「Ａ」に示す断片化部位とは異なる断片化部位を発現するプラスミド（図１４の「Ｂ」参照）を、ヒト腎臓細胞（ＨＥＫ２９３Ｔ）細胞に遺伝子導入して発現させた後、細胞抽出液とＧＳＴ－ＦＣＮ１－Ｎｔとを混ぜ、グルタチオンセファロースを加えて遠心沈降し、沈降物をウエスタンブロット解析に供した。
　試験結果を図１４に示す。図１４より、ＣＨ１＋ＣＨ２とＣＨ１＋１５ａａ（ＣＨ１にリンカー領域の１５アミノ酸を付加したペプチド断片）とがＦｌａｇ－ＦＣＮ１－Ｎｔと結合することが明らかになった。
　＜１１．ＩｇＧ－２内における、ＦＣＮ１タンパク質が結合する部位の特定＞
　上述した＜６．ＩｇＧタンパク質内における、ＦＣＮ１タンパク質が結合する部位の特定＞では、ＩｇＧ－２のみならず、ＣＨ１を含むＩｇＧ－２もＦＣＮ１－Ｎｔと結合することが明らかになった。そこで、本試験では、ＣＨ１内のどの箇所にＦＣＮ１タンパク質が結合するか、特定した。以下に、試験方法、および、試験結果について説明する。
　まず、周知の方法にしたがって、ＣＨを１１個に分割した各部分ペプチドを化学合成した（図１５の（Ａ）および（Ｂ）参照）。なお、各部分ペプチドの具体的なアミノ酸配列を、以下に示す。つまり、
ＣＨ１－１　：ASTKGPSVFP　　（配列番号１９）
ＣＨ１－２　：LAPSSKSTSG　　（配列番号２０）
ＣＨ１－３　：GTAALGCLVK　　（配列番号１０）、
ＣＨ１－４　：DYFPEPVTVS　　（配列番号２１）
ＣＨ１－５　：WNSGALTSGV　　（配列番号１１）、
ＣＨ１－６　：HTFPAVLQSS　　（配列番号２２）
ＣＨ１－７　：GLYSLSSVVT　　（配列番号２３）
ＣＨ１－８　：VPSSSLGTQT　　（配列番号１２）、
ＣＨ１－９　：YICNVNHKPS　　（配列番号２４）
ＣＨ１－１０：NTKVDKKVEP　　（配列番号１３）、
ＣＨ１－１１：KSCDKTHTCPPCP （配列番号２５）
　次いで、周知の方法にしたがって、ＦＣＮ１タンパク質のアミノ末端側の部分（ＦＣＮ１－Ｎｔ）を発現するベクターを作製した。なお、上述したタンパク質は、ＧＳＴ（Glutathione S-transferase）タンパク質と融合したＧＳＴ融合タンパク質として発現されるように、ベクターを設計した。そして、周知の方法にしたがって、当該ベクターを用いて、ＧＳＴ融合タンパク質を精製した。
　更に、本試験では、＜６．ＩｇＧタンパク質内における、ＦＣＮ１タンパク質が結合する部位の特定＞の欄で説明した、ＩｇＧ－２を発現するベクターを用いた。なお、当該タンパク質は、Ｍｙｃタグと融合した融合タンパク質として発現されるように、ベクターを設計した。当該ベクターをヒト腎臓細胞（ＨＥＫ２９３Ｔ）に導入し、当該ヒト腎臓細胞内で目的のタンパク質を発現させて、ＩｇＧ－２タンパク質を取得した。
　各ペプチドの存在下で、ＧＳＴ融合タンパク質とＩｇＧ－２タンパク質とを混合および撹拌した後、更に、グルタチオンセファロースビーズを加えて、混合および撹拌した。その後、混合物を遠心分離することによって、沈殿物（具体的には、グルタチオンセファロースビーズ、および、当該グルタチオンセファロースビーズに結合しているタンパク質）を回収した。次いで、回収された沈殿物を、抗Ｍｙｃ抗体を用いたウエスタンブロット解析に供した。
　試験結果を図１５（Ｃ）に示す。図１５（Ｃ）において、Ｌａｎｅ６、８、１１および１３は、各々、ＣＨ１－３、ＣＨ１－５、ＣＨ１－８、および、ＣＨ１－１０を用いた試験の結果を示す。図１５（Ｃ）から、ＣＨ１－３、ＣＨ１－５、ＣＨ１－８、および、ＣＨ１－１０は、ＩｇＧ－２とＦＣＮ１－Ｎｔとの結合を阻害することが明らかになった。
　＜１２．抗フィコリンタンパク質・マウスモノクローナル抗体の作製＞
　３種類のポリペプチドを抗原として、周知の方法にしたがって、抗フィコリンタンパク質・マウスモノクローナル抗体を作製した。なお、各抗原に対し、各々２種類の抗体を作製した。抗原として用いたポリペプチドのアミノ酸配列は、以下のとおりであった。つまり、
ポリペプチド１：GDRGEKGMRGEKGDC　　（配列番号１６）、
ポリペプチド２：CGSSELRVDLVDFEG　　（配列番号１７）、
ポリペプチド３：CQFAKYKSFKVADEA　　（配列番号１８）。
　ＩＶＩＧ治療を行う前、およびＩＶＩＧ治療を行った後の川崎病患者の血清を、作製した抗フィコリンタンパク質・マウスモノクローナル抗体を用いたウエスタンブロット解析に供した。試験結果を図１６に示す。
　図１６の「♯１」および「♯２」は、ポリペプチド１を抗原として作製された２つの抗体の試験結果であり、図１６の「♯３」および「♯４」は、ポリペプチド２を抗原として作製された２つの抗体の試験結果であり、図１６の「♯５」および「♯６」は、ポリペプチド３を抗原として作製された２つの抗体の試験結果である。
　図１６の「♯６」から明らかなように、ポリペプチド３を抗原として作製された抗体は、川崎病患者のフィコリンタンパク質を感度良く検出した。
　＜１３．マウスモノクローナル抗体に関する検討－１＞
　Candida Albicans Water Soluble Fraction（ＣＡＷＳ）をマウスに腹腔内投与すると川崎病に類似した血管炎を起こすことが知られている（Nagi-Miura N, Okuzaki D, Torigata K, Sakurai MA, Ito A, Ohno N, Nojima H: CAWS administration increases the expression of interferon gamma and complement factors that lead to severe vasculitis in DBA/2 mice. BMC Immunol, 14(1): 44, 2013参照）。
　ＣＡＷＳは、周知の方法にしたがい、Ｃ．　ａｌｂｉｃａｎｓ　ｓｔｒａｉｎ　ＮＢＲＣ１３８５から調整した。まず、５ＬのＣ－ｌｉｍｉｔｉｎｇ　ｍｅｄｉｕｍ中にＣ．　ａｌｂｉｃａｎｓ　ｓｔｒａｉｎ　ＮＢＲＣ１３８５を加え、４００ｒｐｍにて振とうしながら２７℃にて２日間、５Ｌ／ｍｉｎにて空気を加えながら、Ｃ．　ａｌｂｉｃａｎｓ　ｓｔｒａｉｎ　ＮＢＲＣ１３８５を培養した。培養の後、培養液に対して培養液と同量のエタノールを加え、一昼夜放置した後、沈殿物を回収した。当該沈殿物を２５０ｍＬの水に溶解させた後、当該水溶液に対してエタノールを加え、一昼夜放置した後、沈殿物を回収した。アセトンを用いて当該沈殿物を乾燥させ、当該乾燥物をＣＡＷＳとして用いた。
　マウスにＣＡＷＳ投与後、０、２、３、４、５日後の各々に、ＣＡＷＳを投与した同一のマウスから少量の血液を採取し、当該血液から血清を調製してウエスタンブロット解析に供した。
　マウスのＦｃｎｂ（ヒトのＦＣＮ１に相当する）に対するポリクローナル抗体を作製してウエスタンブロット解析に用いたところ、ＣＡＷＳ投与後、２日後から５日後にかけて、Ｆｃｎｂの量が徐々に増えていることが観察された（図１７の上図参照）。
　一方、ＦＣＮ１に対するマウスモノクローナル抗体（具体的に、図１６における♯６のマウスモノクローナル抗体に対応）を用いたところ、抗Ｆｃｎｂポリクローナル抗体よりもマウスのＦｃｎｂを感度高く認識し、やはりＣＡＷＳ投与後、２日後から５日後にかけて、Ｆｃｎｂの量が徐々に増えていることが観察された（図１７の下図参照）。
　この結果は、ＣＡＷＳ惹起型血管炎においても、Ｆｃｎｂ（ＦＣＮ１）の増加が重要な働きをしていることが示唆している。さらには、マウスモノクローナル抗体（具体的に、図１６における♯６のマウスモノクローナル抗体に対応）が、ＩＶＩＧの代替品として血管炎（例えば、ＣＡＷＳ惹起型血管炎）の治療に有用である可能性を示唆している。
　＜１４．マウスモノクローナル抗体に関する検討－２＞
　川崎病に類似した血管炎を生じることが知られているCandida Albican培養上清由来の可溶性多糖画分（Albicans Water Soluble Fraction：ＣＡＷＳ）をマウスに腹腔内投与した。その後、ＣＡＷＳを投与してから１週間後（ｗｋ１）または３週間後（ｗｋ３）に、当該マウスに対して、ヒト由来のＩＶＩＧ製剤、または抗ＦＣＮ１モノクローナル抗体（具体的に、図１６における♯１～♯６のマウスモノクローナル抗体に対応）を腹腔内投与し、１、２、３、４、５週間目の体重変化を測定した（図１８のＡ参照）。
　血管炎を発症すると、マウスの体重が減少することが知られている。特定の抗ＦＣＮ１モノクローナル抗体が投与されたマウス（図１８のＡに示す「♯５　ｍＡｂ　ｗｋ１」および「♯６　ｍＡｂ　ｗｋ３」参照）では、マウスの体重減少が観察されなかった。
　なお、図１８において、「Ａ」は、ＣＡＷＳマウス治療実験の結果を示す折れ線グラフであり、「Ｂ」は、「Ａ」の折れ線グラフのデータを実験群毎に分けて体重変化を統計解析した結果であり、「Ｃ」は、「Ｂ」の結果に、血管炎発症実験（ＣＡＷＳマウス３匹分）を生食群として加えた上で統計解析した結果である。
　実験群ごとに分けて統計解析をすると、特定の抗ＦＣＮ１モノクローナル抗体（図１６における♯５および♯６のマウスモノクローナル抗体に対応）が投与されたマウスで体重減少が見られなかった事実は歴然としていることが判明した（図１８のＢおよびＣ参照）。この結果は抗FCN1モノクローナル抗体を大量培養して製剤化すれば、ＩＶＩＧよりも優れた医薬品に成る可能性が示唆された。
　＜１５．マウスモノクローナル抗体に関する検討－３＞
　本実施例では、５週令のＭａｌｅ　ＤＢＡ／２マウス（Japan SLC）を用いた。具体的に、ネガティブコントロールとして生理食塩水を投与するマウスを３匹（マウス１～３）、ポジィティブコントロールとしてＩＶＩＧ製剤を投与するマウスを３匹（マウス４～６）、および、マウスモノクローナル抗体（具体的に、図１６における♯６のマウスモノクローナル抗体に対応）を投与するマウスを３匹（マウス７～９）を準備した。
　マウスを７日間飼育することによって、当該マウスを試験環境に慣れさせ、その後、試験を開始した。
　まず、マウス（マウス１～９）の各々に対して、試験を開始してから５日間、ＣＡＷＳ（１ｍｇ／匹）を腹腔内投与した。
　次いで、試験を開始してから８日後に、マウス１～３の各々に対して、１００μＬの生理食塩水を腹腔内投与し、マウス４～６の各々に対して、ＩＶＩＧ製剤（４０ｍｇ／２００μＬ／匹）を腹腔内投与し、マウス７～９の各々に対して、マウスモノクローナル抗体（４ｍｇ／２００μＬ／匹）を腹腔内投与した。
　試験を開始してから１日後、８日後、１０日後、１５日後、２２日後、２９日後、３６日後、および、４３日後に、体重測定および、尾静脈からの採血を行った。また、試験を開始してから５０日後は、心腔採血を行った。
　試験を開始してから５０日後に、マウスに麻酔を施し、心腔採血を行った後、マウスを屠殺し、当該マウスから心臓を摘出した。そして、当該心臓を、１０％　ホルムアルデヒド液を用いて固定した。なお、以上の試験は、ユニーテック社に委託した。
　周知のHematoxylin and Eosin（ＨＥ）染色、および、Elastica Van Gieson（ＥＶＧ）染色によって、心臓組織切片の病理学的変化を確認した。なお、オールインワン顕微鏡システム（KEYENCE, Japan）によって、染色後の心臓組織切片の病理学的変化を確認した。全てのマウスは、試験が終了するまで、specific pathogen free（ＳＰＦ）条件下にて飼育され、実験動物である当該マウスの取り扱いは、ユニーテック社の施設内取り扱い規約に従った。
　また、市販のキット（ＣＢＡ（Becton Dickinson Japan））を用いて、尾静脈または心腔から採取した血液中（より具体的に、血清中）の各種サイトカインの濃度を測定した。
　図１９のＡ）に示すように、生理食塩水が投与されたマウス、ＩＶＩＧ製剤が投与されたマウス、および、マウスモノクローナル抗体が投与されたマウスを比較すると、生理食塩水が投与されたマウスでは、血管炎の症状が重いマウスの割合が最も多く、ＩＶＩＧ製剤が投与されたマウスでは、血管炎の症状が重いマウスの割合が二番目に多く、マウスモノクローナル抗体が投与されたマウスでは、血管炎の症状が重いマウスの割合が最も少なかった。
　ＩＶＩＧ製剤が投与されたマウス、および、マウスモノクローナル抗体が投与されたマウスを比較すると、本願発明が、従来のＩＶＩＧ製剤と比較して、極めて治療効果が高いことが判る。具体的に、マウスモノクローナル抗体が投与されたマウスにおける血管炎の症状が重いマウスの割合は、ＶＩＧ製剤が投与されたマウスにおける血管炎の症状が重いマウスの割合の、１／２以下という、極めて少ない割合であった。
　図１９のＢ）に、染色試験の結果を示す。図１９のＢ）に示すように、マウス１～３では、心基部の血管周辺における炎症細胞の浸潤や、症状が重い場合（severe）には、心基部の血管周辺の構造の破壊が観察された。
　図２０および図２１に、血液中（より具体的に、血清中）の各種サイトカインの濃度に関する試験結果を示す。図２０および図２１に示すように、マウスモノクローナル抗体が投与されたマウスでは、血液中（より具体的に、血清中）のＩＬ－１０の濃度が有意に上昇していた。
　＜１６．マウスモノクローナル抗体に関する検討－４＞
　本実施例では、マウス（Japan SLC）を用いた。具体的に、ネガティブコントロールとして生理食塩水を投与するマウスを３匹（マウス１０～１３）、マウスモノクローナル抗体（具体的に、図１６における♯６のマウスモノクローナル抗体に対応）を投与するマウスを８匹（マウス１４～２１）を準備した。
　マウスを７日間飼育することによって、当該マウスを試験環境に慣れさせ、その後、試験を開始した。
　まず、試験を開始してから１日後に、マウス（マウス１０～２１）の各々に対して、ＣＦＡ（ｃｏｍｐｌｅｔｅ　ｆｒｅｕｎｄ‘ｓ　ａｄｊｕｖａｎｔ）およびコラーゲンを免疫した（１ｓｔ　ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ）。更に、試験を開始してから１日後に、マウス１０～１３の各々に対して、２００μＬの生理食塩水を腹腔内投与し、マウス１４～２１の各々に対して、マウスモノクローナル抗体（４ｍｇ／２００μＬ／匹）を腹腔内投与した。
　次いで、試験を開始してから２２日後に、マウス（マウス１０～２１）の各々に対して、ＩＣＦＡ（ｉｎ－ｃｏｍｐｌｅｔｅ　ｆｒｅｕｎｄ‘ｓ　ａｄｊｕｖａｎｔ）およびコラーゲンを免疫した（１ｓｔ　ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ）。更に、試験を開始してから１日後に、マウス１０～１３の各々に対して、２００μＬの生理食塩水を腹腔内投与し、マウス１４～２１の各々に対して、マウスモノクローナル抗体（４ｍｇ／２００μＬ／匹）を腹腔内投与した。
　周知の方法（例えば、Wooley PH, Luthra HS, Griffiths MM, Stuart JM, Huse A, David CS. Type II collagen-induced arthritis in mice. IV. Variations in immunogenetic regulation provide evidence for multiple arthritogenic epitopes on the collagen molecule. J Immunol. 1985 Oct;135(4):2443-51.を参照）にしたがって、試験を開始してから２９日後、３６日後、および、４３日後に、関節炎の症状を判定するための指標（例えば、体重変化、サイトカイン濃度、および、足関節の組織観察）を評価した。図２２に、各指標の評価値の合計を示す。なお、評価値の合計が大きいほど、関節炎が重篤であることを示している。
　図２２のＡ）およびＢ）に示すように、生理食塩水が投与されたマウスと比較して、マウスモノクローナル抗体が投与されたマウスでは、評価値の合計が小さかった。このことは、マウスモノクローナル抗体が投与されたマウスでは、関節炎が沈静化されていることを示している。
　より具体的に、試験を開始してから４３日後では、生理食塩水が投与されたマウスの半分以上において、評価値が４以上の値になり、マウスモノクローナル抗体が投与されたマウスの略全てにおいて、評価値が４未満の値になった。評価値が４以上の場合、関節炎が発症していると診断される。それ故に、生理食塩水が投与されたマウスの半分以上が、関節炎を発症している一方で、マウスモノクローナル抗体が投与されたマウスの略全てが、関節炎を発症していないことが明らかになった。このことは、マウスモノクローナル抗体の関節炎治療効果が極めて高いことを示している。
　なお、本願の実施例で用いた関節リウマチモデルマウス（ＣＩＡマウス）およびＣＡＷＳ投与マウスは、何れも、発症抑制のモデルマウスである。
　本発明は、免疫不全、自己免疫疾患、または、難治性血管炎の治療に用いることができる。また、本発明は、免疫不全用、自己免疫疾患用、または、難治性血管炎用の治療剤の製造に用いることができる。
　　１　フィコリンタンパク質
　　２　結合領域
　　５　結合対象
　１０　物質

Claims (9)

  1. 　フィコリンタンパク質とＩｇＧとの結合を阻害する結合阻害剤を含有していることを特徴とする、免疫不全用、自己免疫疾患用、または、難治性血管炎用の治療剤。
  2. 　上記結合阻害剤は、ＩｇＧの部分ペプチドを含有するポリペプチド、フィコリンタンパク質の部分ペプチドを含有するポリペプチド、または、フィコリンタンパク質と結合する抗体であることを特徴とする、請求項１に記載の免疫不全用、自己免疫疾患用、または、難治性血管炎用の治療剤。
  3. 　上記ＩｇＧの部分ペプチドを含有するポリペプチドは、配列番号６、８～１３の何れかにて示されるアミノ酸配列からなるポリペプチドを含有するものであることを特徴とする、請求項２に記載の免疫不全用、自己免疫疾患用、または、難治性血管炎用の治療剤。
  4. 　上記フィコリンタンパク質の部分ペプチドを含有するポリペプチドは、配列番号１４にて示されるアミノ酸配列からなるポリペプチドを含有するものであることを特徴とする、請求項２に記載の免疫不全用、自己免疫疾患用、または、難治性血管炎用の治療剤。
  5. 　上記フィコリンタンパク質と結合する抗体は、配列番号１６～１８の何れかにて示されるアミノ酸配列からなるポリペプチドと結合するものであることを特徴とする、請求項２に記載の免疫不全用、自己免疫疾患用、または、難治性血管炎用の治療剤。
  6. 　上記免疫不全は、Ｘ連鎖無γグロブリン血症、低γグロブリン血症、または、獲得免疫障害であることを特徴とする、請求項１～５の何れか１項に記載の免疫不全用、自己免疫疾患用、または、難治性血管炎用の治療剤。
  7. 　上記自己免疫疾患は、特発性血小板減少性紫斑病、慢性関節リウマチ、または、不明熱であることを特徴とする、請求項１～５の何れか１項に記載の免疫不全用、自己免疫疾患用、または、難治性血管炎用の治療剤。
  8. 　上記難治性血管炎は、川崎病、高安病、顕微鏡的多発血管炎、多発血管炎性肉芽腫症、アレルギー性肉芽腫性血管炎／Churg-Strauss症候群、または、巨細胞性動脈炎であることを特徴とする、請求項１～５の何れか１項に記載の免疫不全用、自己免疫疾患用、または、難治性血管炎用の治療剤。
  9. 　採取された血清に含まれるフィコリンタンパク質を検出する工程を有することを特徴とする、免疫不全、自己免疫疾患、または、難治性血管炎の診断のためのデータの取得方法。
PCT/JP2017/016632 2016-10-31 2017-04-26 免疫不全用、自己免疫疾患用または難治性血管炎用の治療剤、および、これらの疾患の診断のためのデータの取得方法 WO2018078919A1 (ja)

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Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2006077248A1 (en) * 2005-01-21 2006-07-27 Innogenetics N.V. Nucleic acid variants in the ficolin genes associated with altered innate immunity
JP2012533288A (ja) * 2009-07-17 2012-12-27 リグショスピタレト 補体活性化の阻害剤
JP2013520979A (ja) * 2010-03-05 2013-06-10 リグショスピタレト 補体活性化のキメラ抑制分子
JP2014520765A (ja) * 2011-06-28 2014-08-25 リグショスピタレト フィコリン−３の治療標的

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2006077248A1 (en) * 2005-01-21 2006-07-27 Innogenetics N.V. Nucleic acid variants in the ficolin genes associated with altered innate immunity
JP2012533288A (ja) * 2009-07-17 2012-12-27 リグショスピタレト 補体活性化の阻害剤
JP2013520979A (ja) * 2010-03-05 2013-06-10 リグショスピタレト 補体活性化のキメラ抑制分子
JP2014520765A (ja) * 2011-06-28 2014-08-25 リグショスピタレト フィコリン−３の治療標的

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
DAISUKE OKUZAKI ET AL.: "Nanjisei Kekkan'en ni Okeru Hotaikei no Juyosei", JAPANESE JOURNAL OF CLINICAL MEDICINE, vol. 71, no. 1, 2013, pages 588 - 594, ISSN: 0047-1852 *
HIROSHI NOJIMA: "Nanjisei Kekkan'en no Bunshiron", DAI 26 KAI JAPANESE SOCIETY FOR HOST DEFENSE RESEARCH GAKUJUTSU SOKAI KOEN SHOROKUSHU, 2015, pages 22 *
MUSO, E. ET AL.: "Ficolin-1 is up-regulated in leukocytes and glomeruli from microscopic polyangiitis patients", AUTOIMMUNITY, vol. 46, no. 8, August 2013 (2013-08-01), pages 513 - 524, XP055503290, ISSN: 0891-6934 *
OKUZAKI, D. ET AL.: "Ficolin 1 expression is elevated in the peripheral blood mononuclear cells of Takayasu's vasculitis patients", J MOL BIOMARK DIAGN, vol. 3, no. 3, 6 April 2012 (2012-04-06), pages 1 - 7, XP055503183, ISSN: 2155-9929 *

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