JP6143209B1 - 自己免疫疾患用または難治性血管炎用の治療剤、および、これらの疾患の診断のためのデータの取得方法 - Google Patents
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Abstract
【課題】その目的は、血液を材料として用いること無く人工的に製造される治療剤を用いた、従来のＩＶＩＧ治療に代わる新たな治療を提供する。【解決手段】本発明は、免疫不全用、自己免疫疾患用、または、難治性血管炎用の治療剤であって、フィコリンタンパク質とＩｇＧとの結合を阻害する結合阻害剤を含有している治療剤を用いる。【選択図】図１
Description
本発明は、免疫不全用、自己免疫疾患用または難治性血管炎用の治療剤、および、これらの疾患の診断のためのデータの取得方法に関する。
免疫グロブリン大量療法（ＩＶＩＧ（intravenous immunoglobulin）治療）は、免疫不全（例えば、Ｘ連鎖無γグロブリン血症、低γグロブリン血症、および、低い抗体レベルを伴う獲得免疫障害など）、自己免疫疾患（例えば、特発性血小板減少性紫斑病など）および、難治性血管炎（例えば、川崎病など）の治療に広く用いられる方法であって、Ｆｃ活性を有する免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）を大量に静脈に投与することによって、各種疾患を治療する方法である（例えば、非特許文献１〜３参照）。
例えば、川崎病（kawasaki disease：ＫＤ）は、乳幼児が患う、全身性の血管炎症候群である。川崎病では、全身に存在する中型の血管が炎症を起こすことで、乳幼児に、様々な症状（例えば、発熱、発疹、および、冠動脈病変など）を惹き起こす。０歳〜４歳の乳幼児が川崎病を患うケースが多く、その中でも、１歳前後の乳幼児が川崎病を患うケースが、特に多い。川崎病を患った乳幼児は死亡する場合もあり、乳幼児が川崎病を患っているか否かを定期的にチェックし、患っている場合には、早急に治療する必要がある。そして、川崎病の治療には、一般的に免疫グロブリン大量療法が用いられている。
上述したように、免疫グロブリン大量療法は様々な疾患の治療に用いられているが、当該治療の標的分子、換言すれば、製剤中の何れの免疫グロブリンが薬効を有しているのか、が判明していない。それ故に、免疫グロブリン大量療法では、ヒトの血液から製造された製剤を用い、当該製剤には、１０００人を超える献血者から採取した血液に由来する、様々な抗原を認識する様々な免疫グロブリンが含まれている。
Wong PH, "Impact of Immunoglobulin Therapy in Pediatric Disease: a Review of Immune Mechanisms.", Clin Rev Allergy Immunol., 2015 July 4
Burns JC, Franco A., "The immunomodulatory effects of intravenous immunoglobulin therapy in Kawasaki disease.", Expert Rev Clin Immunol., 2015, 11(7), 819-25
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しかしながら、上述のような従来の製剤は、その材料として血液を必要とするが故に、血液に由来する様々な問題点を有していた。
より具体的に、従来の製剤は、（ｉ）安価に、安定的に、かつ、大量に製造できない、（ｉｉ）ウイルスが混入する危険がある、（ｉｉｉ）患者に大量に投与する必要がある、（ｉｖ）薬効成分以外の不要な成分が含まれている、などの様々な問題点を有していた。
本発明は、前記の問題点に鑑みてなされたものであり、その目的は、血液を材料として用いること無く人工的に製造される治療剤を用いた、従来のＩＶＩＧ治療に代わる新たな治療を提供することにある。
本発明者らは、上記課題に鑑み鋭意検討した結果、従来不明であったＩＶＩＧ治療の標的分子がＦＣＮ１（Ｍ−ｆｉｃｏｌｉｎ）であることを見出し、本発明を完成させるに至った。
本発明の免疫不全用、自己免疫疾患用、または、難治性血管炎用の治療剤は、上記課題を解決するために、フィコリンタンパク質とＩｇＧとの結合を阻害する結合阻害剤を含有していることを特徴としている。
本発明の免疫不全用、自己免疫疾患用、または、難治性血管炎用の治療剤では、上記結合阻害剤は、ＩｇＧの部分ペプチドを含有するポリペプチド、フィコリンタンパク質の部分ペプチドを含有するポリペプチド、または、フィコリンタンパク質と結合する抗体であることが好ましい。
本発明の免疫不全用、自己免疫疾患用、または、難治性血管炎用の治療剤では、上記ＩｇＧの部分ペプチドを含有するポリペプチドは、配列番号６、８〜１３の何れかにて示されるアミノ酸配列からなるポリペプチドを含有するものであることが好ましい。
本発明の免疫不全用、自己免疫疾患用、または、難治性血管炎用の治療剤では、上記フィコリンタンパク質の部分ペプチドを含有するポリペプチドは、配列番号１４にて示されるアミノ酸配列からなるポリペプチドを含有するものであることが好ましい。
本発明の免疫不全用、自己免疫疾患用、または、難治性血管炎用の治療剤では、上記フィコリンタンパク質と結合する抗体は、配列番号１６〜１８の何れかにて示されるアミノ酸配列からなるポリペプチドと結合するものであることが好ましい。
本発明の免疫不全用、自己免疫疾患用、または、難治性血管炎用の治療剤では、上記免疫不全は、Ｘ連鎖無γグロブリン血症、低γグロブリン血症、または、獲得免疫障害であることが好ましい。
本発明の免疫不全用、自己免疫疾患用、または、難治性血管炎用の治療剤では、上記自己免疫疾患は、特発性血小板減少性紫斑病、慢性関節リウマチ、または、不明熱（ＵＦＯ：Fever of Unknown Origin）であることが好ましい。
本発明の免疫不全用、自己免疫疾患用、または、難治性血管炎用の治療剤では、上記難治性血管炎は、川崎病、高安病、顕微鏡的多発血管炎（ＭＰＡ：Microscopic Polyangitis）、多発血管炎性肉芽腫症（ＧＰＡ：Granulomatosis with Polyangitis、旧称ウェゲナー肉芽腫症：ＷＧ（Wegener））、アレルギー性肉芽腫性血管炎／Churg-Strauss症候群（ＡＧＡ/ＣＳＳ）、または、巨細胞性動脈炎（ＧＣＡ：Giant cell arteritis）であることが好ましい。
本発明の免疫不全、自己免疫疾患、または、難治性血管炎の診断のためのデータの取得方法は、上記課題を解決するために、採取された血清に含まれるフィコリンタンパク質を検出する工程を有することを特徴としている。
本発明の治療剤は、材料として血液を必要としないので、本発明の治療剤を、安価に、安定的に、かつ、大量に製造することができる。
本発明の治療剤は、材料として血液を必要としないので、ウイルス（例えば、エイズウイルス、Ｃ型肝炎ウイルスなど）が混入する危険が無い、安全な治療剤を実現することができる。
本発明の治療剤は、薬効成分を高濃度に含んでいるので、少量の治療剤によって、患者を効果的に治療することができる。それ故に、本発明の治療剤は、治療の際に患者の体にかかる負担を軽減することができる。
本発明の治療剤は、薬効成分以外の不要な成分が含まれていないので、副作用を抑えることができる。
本発明の治療剤は、ＩＶＩＧ治療の対象となる様々な疾患（例えば、自己免疫疾患、および、難治性血管炎など）を治療することができる。
本発明の一実施形態について以下に説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。本発明は、以下に説明する各構成に限定されるものではなく、特許請求の範囲に示した範囲で種々の変更が可能であり、異なる実施形態や実施例にそれぞれ開示された技術的手段を適宜組み合わせて得られる実施形態や実施例についても本発明の技術的範囲に含まれる。また、本明細書中に記載された学術文献及び特許文献の全てが、本明細書中において参考文献として援用される。また、本明細書において特記しない限り、数値範囲を表す「Ａ〜Ｂ」は、「Ａ以上、Ｂ以下」を意図する。
〔１．本発明の基本原理〕
まず、図１を用いて、本発明の基本原理を説明する。
まず、図１を用いて、本発明の基本原理を説明する。
図１（ａ）および図１（ｂ）の矢印の左側に記載しているように、生体内において、フィコリンタンパク質１は、フィコリンタンパク質１の部分ペプチドである結合領域２を介して、結合対象５と結合していると考えられている。そして、生体内において、フィコリンタンパク質１は、結合対象５と結合した状態で、様々な機能を発揮していると考えられている。当該機能を必要としない局面で当該機能が発揮されると、様々な疾患を引き起こすことになる。
図１（ａ）の矢印の左側のように、フィコリンタンパク質１と結合対象５とが形成している複合体に、フィコリンタンパク質１と結合する物質１０（例えば、ＩｇＧの部分ペプチドを含有するポリペプチド、または、フィコリンタンパク質と結合する抗体）を加えると、図１（ａ）の矢印の右側のように、結合領域２に物質１０が結合し、その結果、フィコリンタンパク質１から結合対象５が解離する。フィコリンタンパク質１から結合対象５が解離すると、フィコリンタンパク質は、血管炎などの疾患を発症する機能を発揮することができない。
つまり、本発明では、上述した物質１０によってフィコリンタンパク質１の機能を抑制し、それによって、フィコリンタンパク質１が原因となる疾患を治療することができる。
また、図１（ｂ）の矢印の左側のように、フィコリンタンパク質１と結合対象５とが形成している複合体に、結合領域２（例えば、フィコリンタンパク質の部分ペプチドを含有するポリペプチド）を加えると、図１（ｂ）の矢印の右側のように、結合対象５が加えられた結合領域２に結合し、その結果、フィコリンタンパク質１から結合対象５が解離する。フィコリンタンパク質１から結合対象５が解離すると、フィコリンタンパク質は、血管炎などの疾患を発症する機能を発揮することができない。
つまり、本発明では、上述した結合領域２によってフィコリンタンパク質１の機能を抑制し、それによって、フィコリンタンパク質１が原因となる疾患を治療することができる。
以下に、本発明について、詳細に説明する。
〔２．治療剤〕
本実施の形態の治療剤は、免疫不全用、自己免疫疾患用、または、難治性血管炎用の治療剤であって、フィコリンタンパク質とＩｇＧとの結合を阻害する結合阻害剤を含んでいる治療剤である。
本実施の形態の治療剤は、免疫不全用、自己免疫疾患用、または、難治性血管炎用の治療剤であって、フィコリンタンパク質とＩｇＧとの結合を阻害する結合阻害剤を含んでいる治療剤である。
上述したフィコリンタンパク質は、あらゆる生物種のフィコリンタンパク質、または、当該フィコリンタンパク質の変異タンパク質であり得るが、ヒトの疾患を効果的に治療し得る治療剤を実現するという観点からは、ヒトのフィコリンタンパク質、または、ヒトのフィコリンタンパク質の変異タンパク質、または、これらのタンパク質とホモロジーが高いタンパク質、であることが好ましい。
具体的に、フィコリンタンパク質は、以下の（１）〜（３）のポリペプチドであってもよい：
（１）配列番号１に示されるアミノ酸配列からなるポリペプチド；
（２）配列番号１に示されるアミノ酸配列において、１個もしくは数個のアミノ酸が、置換、欠失、挿入、および／または、付加されたアミノ酸配列からなり、かつ、フィコリンタンパク質としての活性を有するポリペプチド；
（３）配列番号１に示されるアミノ酸配列と９０％以上の相同性を有するアミノ酸配列からなり、かつ、フィコリンタンパク質としての活性を有するポリペプチド。
（１）配列番号１に示されるアミノ酸配列からなるポリペプチド；
（２）配列番号１に示されるアミノ酸配列において、１個もしくは数個のアミノ酸が、置換、欠失、挿入、および／または、付加されたアミノ酸配列からなり、かつ、フィコリンタンパク質としての活性を有するポリペプチド；
（３）配列番号１に示されるアミノ酸配列と９０％以上の相同性を有するアミノ酸配列からなり、かつ、フィコリンタンパク質としての活性を有するポリペプチド。
所望のタンパク質が、フィコリンタンパク質としての活性を有するか否かは、所望のタンパク質が、Ｎ−アセチルグルコサミンに対する結合能を有しているか否かを確認することによって知ることができる。具体的に、所望のタンパク質がＮ−アセチルグルコサミンに対する結合能を有していれば、当該タンパク質はフィコリンタンパク質としての活性を有するものである、と判定することができる。より具体的に、生理食塩水中で、所望のタンパク質と過剰量のＮ−アセチルグルコサミン（例えば、所望のタンパク質の１００倍の質量のＮ−アセチルグルコサミン）とを混合し、全所望のタンパク質の５０％以上、好ましくは６０％以上、より好ましくは７０％以上、より好ましくは８０％以上、最も好ましくは９０％以上がＮ−アセチルグルコサミンに結合すれば、当該タンパク質はフィコリンタンパク質としての活性を有するものである、と判定することができる。
本明細書における「１個もしくは数個のアミノ酸が、置換、欠失、挿入、および／または、付加されたアミノ酸配列」では、置換、欠失、挿入、および／または、付加が生じる位置は特に限定されない。
また、「１個もしくは数個のアミノ酸」が意図するアミノ酸の数は特に限定されないが、２０個以内のアミノ酸であることが好ましく、１９個以内のアミノ酸であることが更に好ましく、１８個以内のアミノ酸であることが更に好ましく、１７個以内のアミノ酸であることが更に好ましく、１６個以内のアミノ酸であることが更に好ましく、１５個以内のアミノ酸であることが更に好ましく、１４個以内のアミノ酸であることが更に好ましく、１３個以内のアミノ酸であることが更に好ましく、１２個以内のアミノ酸であることが更に好ましく、１１個のアミノ酸であることが更に好ましく、１０個以内のアミノ酸であることが好ましく、９個以内のアミノ酸であることが更に好ましく、８個以内のアミノ酸であることが更に好ましく、７個以内のアミノ酸であることが更に好ましく、６個以内のアミノ酸であることが更に好ましく、５個以内のアミノ酸であることが更に好ましく、４個以内のアミノ酸であることが更に好ましく、３個以内のアミノ酸であることが更に好ましく、２個以内のアミノ酸であることが更に好ましく、１個のアミノ酸であることが最も好ましい。
アミノ酸の置換は、保存的置換であることが好ましい。なお、保存的置換とは、特定のアミノ酸から、当該アミノ酸と同様な化学的性質および／または構造を有する他のアミノ酸に置換されることをいう。化学的性質としては、例えば、疎水性度（疎水性および親水性）、電荷（中性、酸性および塩基性）が挙げられる。構造としては、例えば、側鎖、または、側鎖の官能基として存在する芳香環、脂肪炭化水素基およびカルボキシル基が挙げられる。
保存的置換の例としては、例えば、セリンとスレオニンとの置換、リジンとアルギニンとの置換、およびフェニルアラニンとトリプトファンアミノとの置換、が挙げられる。勿論、本発明は、これらの置換に限定されない。
また、アミノ酸配列の相同性は、公知の方法で求めることができる。具体的には、ＧＥＮＥＴＹＸ−ＷＩＮ（株式会社ゼネティックス社製）を、ＧＥＮＥＴＹＸ−ＷＩＮのマニュアルに従って使用し、例えば、特定のアミノ酸配列と比較対象のアミノ酸配列とのホモロジーサーチ（ｈｏｍｏｌｏｇｙ ｓｅａｒｃｈ）を行い、同一のアミノ酸の割合（％）として相同性を算出することができる。
更に具体的には、比較するアミノ酸配列のうちの長い方のアミノ酸配列の総アミノ酸数に対する、同一のアミノ酸の数の割合（％）として、相同性を算出することができる。
上述した（３）に記載のポリペプチドは、配列番号１に示されるアミノ酸配列と９０％以上の相同性を有するものであるが、相同性は、９１％以上であることが好ましく、９２％以上であることがより好ましく、９３％以上であることがより好ましく、９４％以上であることがより好ましく、９５％以上であることがより好ましく、９６％以上であることがより好ましく、９７％以上であることがより好ましく、９８％以上であることがより好ましく、９９％以上であることが最も好ましい。
上述したように、本実施の形態の治療剤は、フィコリンタンパク質とＩｇＧとの結合を阻害する結合阻害剤を含有している。
フィコリンタンパク質と結合するＩｇＧのサブクラスは、特に限定されず、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４であってもよい。
上述した結合阻害剤は、特に限定されず、低分子化合物であってもよいし、高分子化合物（例えば、ポリペプチド、タンパク質）であってもよい。
任意の低分子化合物または高分子化合物が結合阻害剤であるか否かは、例えば、免疫沈降法およびウエスタンブロット法の組み合わせによって判定することができる。
具体的に、結合阻害剤の候補物質、フィコリンタンパク質、およびＩｇＧを含む水溶液を、抗フィコリンタンパク質抗体を用いた免疫沈降に供し、得られた沈降物を沈降物Ａとする。一方、フィコリンタンパク質、およびＩｇＧを含む水溶液を、抗フィコリンタンパク質抗体を用いた免疫沈降に供し、得られた沈降物を沈降物Ｂとする。沈降物Ａおよび沈降物Ｂを、抗ＩｇＧ抗体を用いたウエスタンブロットに供し、沈降物Ａにて観察されるバンド（水溶液中でフィコリンタンパク質に結合していたＩｇＧに対応）と、沈降物Ｂにて観察されるバンド（水溶液中でフィコリンタンパク質に結合していたＩｇＧに対応）とを比較して、沈降物Ａにて観察されるバンドが、沈降物Ｂにて観察されるバンドよりも薄ければ、上述した候補物質は結合阻害剤であると判定することができる。
また、結合阻害剤の候補物質、フィコリンタンパク質、およびＩｇＧを含む水溶液を、抗ＩｇＧ抗体を用いた免疫沈降に供し、得られた沈降物を沈降物Ｃとする。一方、フィコリンタンパク質、およびＩｇＧを含む水溶液を、抗ＩｇＧ抗体を用いた免疫沈降に供し、得られた沈降物を沈降物Ｄとする。沈降物Ｃおよび沈降物Ｄを、抗フィコリンタンパク質抗体を用いたウエスタンブロットに供し、沈降物Ｃにて観察されるバンド（水溶液中でＩｇＧに結合していたフィコリンタンパク質に対応）と、沈降物Ｄにて観察されるバンド（水溶液中でＩｇＧに結合していたフィコリンタンパク質に対応）とを比較して、沈降物Ｃにて観察されるバンドが、沈降物Ｄにて観察されるバンドよりも薄ければ、上述した候補物質は結合阻害剤であると判定することができる。
結合阻害剤の具体例として、ＩｇＧの部分ペプチドを含有するポリペプチド、フィコリンタンパク質の部分ペプチドを含有するポリペプチド、および、フィコリンタンパク質と結合する抗体を挙げることができる。以下に、各構成について説明する。
＜Ａ．フィコリンタンパク質と結合する抗体＞
上述したように、結合阻害剤は、フィコリンタンパク質と結合する抗体であってもよい。
上述したように、結合阻害剤は、フィコリンタンパク質と結合する抗体であってもよい。
フィコリンタンパク質と結合する抗体は、当該抗体の何れの部分でフィコリンタンパク質と結合してもよい。上記抗体は、自身の抗原結合部位（Ｆａｂ）を介してフィコリンタンパク質と結合してもよいし、自身の抗原結合部位以外の部分（例えば、ヒンジ領域、および、Ｆｃなど）を介してフィコリンタンパク質と結合してもよい。より高い治療効果を実現するという観点からは、フィコリンタンパク質と抗体とが強く結合することが好ましく、上述した抗体の中では、自身の抗原結合部位（Ｆａｂ）を介してフィコリンタンパク質と結合する抗体がより好ましい。なお、本明細書では、自身の抗原結合部位（Ｆａｂ）を介してフィコリンタンパク質と結合する抗体を、特に、抗フィコリンタンパク質抗体と呼ぶ。
上記抗体は、フィコリンタンパク質と結合するものであれば特に限定されないが、フィコリンタンパク質のアミノ末端領域（実施例に記載のＦＣＮ１−Ｎｔに対応する配列番号１４）と結合するものであってもよいし、配列番号１６、１７または１８（実施例に記載のモノクローナル抗体作製時の抗原に対応）にて示されるアミノ酸配列からなるポリペプチドと結合するものであってもよい。
上記抗体は、モノクローナル抗体であることが好ましく、配列番号１８にて示されるアミノ酸配列からなるポリペプチドと結合するもの（例えば、配列番号１８にて示されるアミノ酸配列からなるポリペプチドを抗原とするもの）が最も好ましく、配列番号１６にて示されるアミノ酸配列からなるポリペプチドと結合するもの（例えば、配列番号１６にて示されるアミノ酸配列からなるポリペプチドを抗原とするもの）が２番目に好ましく、配列番号１７にて示されるアミノ酸配列からなるポリペプチドと結合するもの（例えば、配列番号１７にて示されるアミノ酸配列からなるポリペプチドを抗原とするもの）が３番目に好ましい。
フィコリンタンパク質と結合する抗体のクラスは、特に限定されず、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、または、ＩｇＥであり得る。より簡便に治療剤を作製するという観点からは、フィコリンタンパク質と結合する抗体のクラスは、ＩｇＧであることが好ましい。
フィコリンタンパク質と結合する抗体は、モノクローナル抗体であってもよいし、ポリクローナル抗体であってもよいが、より簡便に治療剤を作製するという観点、および、安定した治療効果を発揮する治療剤を作製するという観点から、モノクローナル抗体であることが好ましい。
フィコリンタンパク質と結合する抗体は、より安全性の高い治療剤を作製するという観点から、ヒト抗体とマウス抗体とのキメラ抗体であることが好ましく、完全ヒト抗体であることが更に好ましい。キメラ抗体の場合には、キメラ抗体のできるだけ多くの部分がヒト抗体に由来するものであることが好ましく、５０％以上、好ましくは６０％以上、より好ましくは７０％以上、より好ましくは８０％以上、より好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、最も好ましくは９８％以上の部分が、ヒト抗体に由来するものであることが好ましい。
上記抗体の作製方法は、特に限定されず、周知の方法にしたがって作製すればよい。例えば、ＨａｒＬｏｗらの「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８８）」、岩崎らの「単クローン抗体 ハイブリドーマとＥＬＩＳＡ，講談社（１９９１）」に記載の方法にしたがって、抗体を作製すればよい。
本実施の形態の治療剤に含まれる抗体の量は、特に限定されないが、１ｎｇ〜１００ｍｇであってもよいし、１０ｎｇ〜１００ｍｇであってもよいし、１００ｎｇ〜１００ｍｇであってもよいし、１ｍｇ〜１００ｍｇであってもよいし、１０ｍｇ〜１００ｍｇであってもよい。
＜Ｂ．フィコリンタンパク質の部分ペプチドを含有するポリペプチド＞
上述したように、結合阻害剤は、フィコリンタンパク質の部分ペプチドを含有するポリペプチド、または、フィコリンタンパク質の部分ペプチドからなるポリペプチドであってもよい。
上述したように、結合阻害剤は、フィコリンタンパク質の部分ペプチドを含有するポリペプチド、または、フィコリンタンパク質の部分ペプチドからなるポリペプチドであってもよい。
上記部分ペプチドは、フィコリンタンパク質の何れの部分を含むものであってもよい。例えば、上記部分ペプチドは、フィコリンタンパク質の全長の、９０％以下、８０％以下、７０％以下、６０％以下、５０％以下、４０％以下、３０％以下、２０％以下、１５％以下、１０％以下、９％以下、８％以下、７％以下、６％以下、５％以下、４％以下、３％以下、２％以下、または、１％以下の領域からなるペプチドであり得る。より簡便に治療剤を作製するという観点、および、安定した治療効果を発揮する治療剤を作製するという観点から、上記部分ペプチドは、小さいほど好ましい。
上記部分ペプチドを構成するアミノ酸の数は特に限定されないが、例えば、１００個以下、９０個以下、８０個以下、７０個以下、６０個以下、５０個以下、４０個以下、３０個以下、２０個以下、１９個以下、１８個以下、１７個以下、１６個以下、１５個以下、１４個以下、１３個以下、１２個以下、１１個以下、または、１０個以下であり得る。より簡便に治療剤を作製するという観点、および、安定した治療効果を発揮する治療剤を作製するという観点から、上記部分ペプチドは、小さいほど好ましい。
上述したように、上記部分ペプチドはフィコリンタンパク質の何れの部分であってもよいが、フィコリンタンパク質のアミノ末端領域に対応するペプチドであることが好ましく、配列番号１４にて示されるアミノ酸配列からなるペプチドであることがより好ましい。
本実施の形態の治療剤に含まれる部分ペプチドの量は、特に限定されないが、１ｎｇ〜１００ｍｇであってもよいし、１０ｎｇ〜１００ｍｇであってもよいし、１００ｎｇ〜１００ｍｇであってもよいし、１ｍｇ〜１００ｍｇであってもよいし、１０ｍｇ〜１００ｍｇであってもよい。
＜Ｃ．ＩｇＧの部分ペプチドを含有するポリペプチド＞
上述したように、結合阻害剤は、ＩｇＧの部分ペプチドを含有するポリペプチドであってもよい。また、結合阻害剤は、ＩｇＧの部分ペプチドからなるポリペプチドであってもよい。
上述したように、結合阻害剤は、ＩｇＧの部分ペプチドを含有するポリペプチドであってもよい。また、結合阻害剤は、ＩｇＧの部分ペプチドからなるポリペプチドであってもよい。
上述したＩｇＧのサブクラスは、特に限定されず、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４であってもよい。
上記部分ペプチドは、ＩｇＧタンパク質の何れの部分を含むものであってもよい。例えば、上記部分ペプチドは、ＩｇＧタンパク質の全長の、９０％以下、８０％以下、７０％以下、６０％以下、５０％以下、４０％以下、３０％以下、２０％以下、１５％以下、１０％以下、９％以下、８％以下、７％以下、６％以下、５％以下、４％以下、３％以下、２％以下、または、１％以下の領域からなるペプチドであり得る。より簡便に治療剤を作製するという観点、および、安定した治療効果を発揮する治療剤を作製するという観点から、上記部分ペプチドは、小さいほど好ましい。
上記部分ペプチドを構成するアミノ酸の数は特に限定されないが、例えば、１００個以下、９０個以下、８０個以下、７０個以下、６０個以下、５０個以下、４０個以下、３０個以下、２０個以下、１９個以下、１８個以下、１７個以下、１６個以下、１５個以下、１４個以下、１３個以下、１２個以下、１１個以下、または、１０個以下であり得る。より簡便に治療剤を作製するという観点、および、安定した治療効果を発揮する治療剤を作製するという観点から、上記部分ペプチドは、小さいほど好ましい。
上述したように、上記部分ペプチドはＩｇＧタンパク質の何れの部分であってもよいが、配列番号６、８〜１３の何れかにて示されるアミノ酸配列からなるペプチドあることが好ましい。
本実施の形態の治療剤に含まれる部分ペプチドの量は、特に限定されないが、１ｎｇ〜１００ｍｇであってもよいし、１０ｎｇ〜１００ｍｇであってもよいし、１００ｎｇ〜１００ｍｇであってもよいし、１ｍｇ〜１００ｍｇであってもよいし、１０ｍｇ〜１００ｍｇであってもよい。
ＩＶＩＧ治療は、様々な疾患に適用することができる治療方法である。それ故に、本実施の形態の治療剤は、ＩＶＩＧ治療の対象である疾患（例えば、免疫不全、自己免疫疾患、または、難治性血管炎）の治療に用いることができる。
免疫不全の具体例は、特に限定されないが、Ｘ連鎖無γグロブリン血症、低γグロブリン血症、または、獲得免疫障害を挙げることができる。
自己免疫疾患の具体例は、特に限定されないが、特発性血小板減少性紫斑病、慢性関節リウマチ、または、不明熱を挙げることができる。
難治性血管炎の具体例は、特に限定されないが、川崎病、高安病、顕微鏡的多発血管炎、多発血管炎性肉芽腫症、アレルギー性肉芽腫性血管炎／Churg-Strauss症候群、または、巨細胞性動脈炎を挙げることができる。
〔３．免疫不全、自己免疫疾患、または、難治性血管炎の診断のためのデータの取得方法〕
本実施の形態のデータの取得方法は、免疫不全、自己免疫疾患、または、難治性血管炎の診断のためのデータの取得方法であって、採取された血清（具体的には、被検者から採取された血清）に含まれるフィコリンタンパク質を検出する工程を有している。
本実施の形態のデータの取得方法は、免疫不全、自己免疫疾患、または、難治性血管炎の診断のためのデータの取得方法であって、採取された血清（具体的には、被検者から採取された血清）に含まれるフィコリンタンパク質を検出する工程を有している。
フィコリンタンパク質を検出する方法としては、特に限定されず、タンパク質を検出するための周知の方法を用いることができる。例えば、ウエスタンブロット法、または、ＥＬＩＳＡ法（enzyme linked immunosorbent assay）にて、採取された血清に含まれるフィコリンタンパク質を検出すればよい。
以下に、データの取得方法の２つの態様について説明する。
＜態様１＞
健常者から採取された血清に含まれるフィコリンタンパク質の量と比較して、被検者から採取された血清に含まれるフィコリンタンパク質の量が多ければ、当該被検者は、免疫不全、自己免疫疾患、または、難治性血管炎を患っていると判定することができる。
健常者から採取された血清に含まれるフィコリンタンパク質の量と比較して、被検者から採取された血清に含まれるフィコリンタンパク質の量が多ければ、当該被検者は、免疫不全、自己免疫疾患、または、難治性血管炎を患っていると判定することができる。
それ故に、本実施の形態のデータの取得方法は、健常者から採取された血清に含まれるフィコリンタンパク質の量と、被検者から採取された血清に含まれるフィコリンタンパク質の量と、を比較する工程を含んでいてもよい。
＜態様２＞
血清として、ＩＶＩＧ治療を行う前に被検者から採取された血清と、ＩＶＩＧ治療が行われた後（例えば、ＩＶＩＧ治療を行ってから、１日〜３日後）に同じ被検者から採取された血清とを用いることが可能である。ＩＶＩＧ治療を行う前に被検者から採取された血清に含まれるフィコリンタンパク質の量と比較して、ＩＶＩＧ治療が行われた後に同じ被検者から採取された血清に含まれるフィコリンタンパク質の量が少なければ（例えば、治療前の、８０％以下、好ましくは７０％以下、好ましくは６０％以下、更に好ましくは５０％以下、更に好ましくは４０％以下、更に好ましくは３０％以下、更に好ましくは２０％以下、最も好ましくは１０％以下の量）、当該被検者を、ＩＶＩＧ治療が有効な被検者であると判定することができる。一方、ＩＶＩＧ治療を行う前に被検者から採取された血清に含まれるフィコリンタンパク質の量と比較して、ＩＶＩＧ治療が行われた後に同じ被検者から採取された血清に含まれるフィコリンタンパク質の量が同等、または、多ければ（例えば、治療前の８０％よりも多い量）、当該被検者を、ＩＶＩＧ治療が有効でない被検者であると判定することができる。
血清として、ＩＶＩＧ治療を行う前に被検者から採取された血清と、ＩＶＩＧ治療が行われた後（例えば、ＩＶＩＧ治療を行ってから、１日〜３日後）に同じ被検者から採取された血清とを用いることが可能である。ＩＶＩＧ治療を行う前に被検者から採取された血清に含まれるフィコリンタンパク質の量と比較して、ＩＶＩＧ治療が行われた後に同じ被検者から採取された血清に含まれるフィコリンタンパク質の量が少なければ（例えば、治療前の、８０％以下、好ましくは７０％以下、好ましくは６０％以下、更に好ましくは５０％以下、更に好ましくは４０％以下、更に好ましくは３０％以下、更に好ましくは２０％以下、最も好ましくは１０％以下の量）、当該被検者を、ＩＶＩＧ治療が有効な被検者であると判定することができる。一方、ＩＶＩＧ治療を行う前に被検者から採取された血清に含まれるフィコリンタンパク質の量と比較して、ＩＶＩＧ治療が行われた後に同じ被検者から採取された血清に含まれるフィコリンタンパク質の量が同等、または、多ければ（例えば、治療前の８０％よりも多い量）、当該被検者を、ＩＶＩＧ治療が有効でない被検者であると判定することができる。
それ故に、本実施の形態のデータの取得方法は、（ｉ）採取された血清として、ＩＶＩＧ治療を行う前に被検者から採取された血清と、ＩＶＩＧ治療が行われた後に同じ被検者から採取された血清と、を用い、かつ、（ｉｉ）ＩＶＩＧ治療を行う前に被検者から採取された血清に含まれるフィコリンタンパク質の量と、ＩＶＩＧ治療が行われた後に同じ被検者から採取された血清に含まれるフィコリンタンパク質の量と、を比較する工程を含んでいてもよい。
＜１．マイクロアレイによるｍＲＮＡの発現解析＞
本試験では、川崎病の患者にＩＶＩＧ治療を行い、治療の前後において、当該患者に由来する血液細胞（ＰＢＭＣ（Peripheral Blood Mononuclear cell）、主として白血球を含む細胞群）内でｍＲＮＡの発現が変化する遺伝子を、マイクロアレイによって調べた。以下に、試験方法、および、試験結果について説明する。
本試験では、川崎病の患者にＩＶＩＧ治療を行い、治療の前後において、当該患者に由来する血液細胞（ＰＢＭＣ（Peripheral Blood Mononuclear cell）、主として白血球を含む細胞群）内でｍＲＮＡの発現が変化する遺伝子を、マイクロアレイによって調べた。以下に、試験方法、および、試験結果について説明する。
まず、ＩＶＩＧ治療の前に、川崎病の患者から血液細胞（ＰＢＭＣ）を採取し、更に、当該血液細胞からｍＲＮＡを採取した。次いで、ＩＶＩＧ治療を行った後に、当該川崎病の患者から血液細胞（ＰＢＭＣ）を採取し、更に、当該血液細胞からｍＲＮＡを採取した。
なお、ｍＲＮＡの採取は、PAXgene Blood RNA Kit（Qiagen）を用いて行い、具体的な採取方法は、当該キットに添付のプロトコールにしたがった。また、採取されたｍＲＮＡの品質を、RNA 6000 Nano LabChip Kit（p/n 5065-4476）、および、Agilent 2100 Bioanalyzer（G2940BA; Agilent Technologies, Inc., Palo Alto, CA）を用いて解析し、採取されたｍＲＮＡが純度高くｍＲＮＡを含有したものであることを確認した。
次いで、ＩＶＩＧ治療前後の各ｍＲＮＡを、Agilent Whole Human Genome Microarray （4×44K G4112F）にて解析し、様々な遺伝子の発現強度を測定した。なお、発現強度の測定の具体的な方法は、当該マイクロアレイに添付のプロトコールにしたがった。
上述した試験を複数の川崎病患者に対して行い、各遺伝子の発現強度として、複数の測定値を得た。そして、複数の測定値の平均値を算出し、当該平均値を以後の解析に用いた。
各遺伝子に関して「ＩＶＩＧ治療前の発現強度の平均値／ＩＶＩＧ治療後の発現強度の平均値」の値を算出し当該値に基づくスキャッタープロットを作成した。スキャッタープロットを、図２に示す。なお、図２において、対角線よりも下側にプロットされた遺伝子は、ＩＶＩＧ治療を行った後でｍＲＮＡの発現量が減少した遺伝子、換言すれば、ＩＶＩＧ治療の標的分子（具体的には、ＩＶＩＧ治療で投与されたＩｇＧが結合すると考えられるタンパク質をコードしている遺伝子）である。
図２に示すように、ＩＶＩＧ治療の標的分子として、ＦＣＮ１（Ｍ−ｆｉｃｏｌｉｎ）を見出すことに成功した。
＜２．ＲＴ−ＰＣＲによるｍＲＮＡの発現解析＞
本試験では、複数の川崎病の患者（ＫＤ０１〜ＫＤ０５、ＫＤ１１〜ＫＤ１６、ＫＤ１８〜２５）にＩＶＩＧ治療を行い、治療の前後において、これらの患者に由来する血液細胞（ＰＢＭＣ（Peripheral Blood Mononuclear cell）、主として白血球を含む細胞群）内でＦＣＮ１（Ｍ−ｆｉｃｏｌｉｎ）のｍＲＮＡの発現が変化するか否かを、ＲＴ−ＰＣＲによって調べた。以下に、試験方法、および、試験結果について説明する。
本試験では、複数の川崎病の患者（ＫＤ０１〜ＫＤ０５、ＫＤ１１〜ＫＤ１６、ＫＤ１８〜２５）にＩＶＩＧ治療を行い、治療の前後において、これらの患者に由来する血液細胞（ＰＢＭＣ（Peripheral Blood Mononuclear cell）、主として白血球を含む細胞群）内でＦＣＮ１（Ｍ−ｆｉｃｏｌｉｎ）のｍＲＮＡの発現が変化するか否かを、ＲＴ−ＰＣＲによって調べた。以下に、試験方法、および、試験結果について説明する。
ＲＴ−ＰＣＲによる解析は、＜１．マイクロアレイによる解析＞にて採取したｍＲＮＡ、および、ＦＣＮ１（Ｍ−ｆｉｃｏｌｉｎ）遺伝子を増幅させるためのプライマーを用いて行った。
まず、上記ｍＲＮＡ、プライマー、および、High Capacity cDNA Archive Kit（ABI）を用いて各ｍＲＮＡを逆転写し、ｃＤＮＡを合成した。次いで、鋳型として当該ｃＤＮＡを用い、更に、上記プライマーを用いて、ＰＣＲを行った。なお、ＰＣＲの反応条件としては、まず９５℃にて１０分間の変性反応を行った後、９５℃にて１５秒間のアニーリング反応、および、６０℃にて１分間の伸長反応からなる反応サイクルを４０サイクル繰り返す反応条件を採用した。
図３〜図５に試験結果を示す。なお、図３〜図５において、「ＫＤ０１〜ＫＤ２５」は、各患者を示し、「１ｄ」は、ＩＶＩＧ治療前のデータを示し、「２ｄ」は、ＩＶＩＧ治療を行ってから２日〜３日後のデータを示し、「７ｄ」は、ＩＶＩＧ治療を行ってから６日〜８日後のデータを示している。なお、ＩＶＩＧ治療を行ってから６日〜８日後には、川崎病患者の炎症は元の正常な状態に戻っていた。それ故に、ＩＶＩＧ治療前と比較してＩＶＩＧ治療を行ってから２日〜３日後にｍＲＮＡの発現が少なくなっている遺伝子が、ＩＶＩＧ治療の標的分子と考えられる。
図３〜図５に示すように、ＫＤ２、ＫＤ１５、ＫＤ１６以外の大多数の患者においては、ＩＶＩＧ治療前と比較してＩＶＩＧ治療を行ってから２日〜３日後に、ＦＣＮ１のｍＲＮＡの発現量が低下していた。
川崎病患者には、ＩＶＩＧ治療が有効である患者と、ＩＶＩＧ治療が有効でない患者とが存在することが知られている。ＫＤ２、ＫＤ１５、ＫＤ１６は、ＩＶＩＧ治療が有効でない患者であると考えられ、これらの患者では、ＩＶＩＧ治療を行っても、ＦＣＮ１のｍＲＮＡの発現量が低下しないことが明らかになった。
＜３．血液細胞内におけるタンパク質の発現解析＞
本試験では、複数の川崎病の患者（ＫＤ０１〜ＫＤ０４、ＫＤ１１、ＫＤ１２、ＫＤ１４〜ＫＤ１６、ＫＤ１８〜２５）にＩＶＩＧ治療を行い、治療の前後において、これらの患者に由来する血液細胞（ＰＢＭＣ（Peripheral Blood Mononuclear cell）、主として白血球を含む細胞群）内でＦＣＮ１（Ｍ−ｆｉｃｏｌｉｎ）のタンパク質の発現が変化するか否かを、ウエスタンブロット法によって調べた。以下に、試験方法、および、試験結果について説明する。
本試験では、複数の川崎病の患者（ＫＤ０１〜ＫＤ０４、ＫＤ１１、ＫＤ１２、ＫＤ１４〜ＫＤ１６、ＫＤ１８〜２５）にＩＶＩＧ治療を行い、治療の前後において、これらの患者に由来する血液細胞（ＰＢＭＣ（Peripheral Blood Mononuclear cell）、主として白血球を含む細胞群）内でＦＣＮ１（Ｍ−ｆｉｃｏｌｉｎ）のタンパク質の発現が変化するか否かを、ウエスタンブロット法によって調べた。以下に、試験方法、および、試験結果について説明する。
血液細胞の溶解物の調製は、ＬｅｕｋｏＣａｔｃｈ（登録商標）（BioAcademia）を用いて、当該キットに添付のプロトコールにしたがって行った。そして、周知の方法にしたがって、血液細胞の溶解物をウエスタンブロット法による解析に供し、血液細胞内におけるタンパク質の発現を解析した。
図６および図７に試験結果を示す。
なお、図６において、「ＳＥ」は、ウエスタンブロット法において、検出対象であるタンパク質に結合した発光物質を、検出用フィルムに対して短時間露光したときの検出結果であり、「ＬＥ」は、ウエスタンブロット法において、検出対象であるタンパク質に結合した発光物質を、検出用フィルムに対して長時間露光したときの検出結果である。
また、図６および図７において、「Ｈ１」〜「Ｈ８」は、健常人の試験結果である。
また、図６および図７において、「１ｄ」は、ＩＶＩＧ治療前のデータを示し、「２ｄ」は、ＩＶＩＧ治療を行ってから２日後のデータを示し、「３ｄ」は、ＩＶＩＧ治療を行ってから３日後のデータを示し、「４ｄ」は、ＩＶＩＧ治療を行ってから４日後のデータを示し、「６ｄ」は、ＩＶＩＧ治療を行ってから６日後のデータを示し、「７ｄ」は、ＩＶＩＧ治療を行ってから７日後のデータを示し、「８ｄ」は、ＩＶＩＧ治療を行ってから８日後のデータを示している。
図６から明らかなように、大多数の患者においては、ＩＶＩＧ治療前と比較してＩＶＩＧ治療を行った直後に、血液細胞内におけるＦＣＮ１タンパク質の発現量が低下していた。
一方、図６および図７から明らかなように、大多数の患者においては、ＩＶＩＧ治療前と比較してＩＶＩＧ治療を行った直後に、血液細胞内におけるＦＣＮ１以外のタンパク質（例えば、ＨＳＰ９０、ＨｐＲ、α−Ｔｕｂｕｌｉｎなど）の発現量に有意な変化（具体的には、タンパク質の量の減少）が認められなかった。例えば、ＨｐＲに関しては、全ての患者において、略等量発現していた。
＜４．血清内におけるタンパク質の発現解析＞
ＩＶＩＧ治療において患者の静脈に投与されたＩｇＧは、主として、患者の血清中に存在することになる。それ故に、ＩＶＩＧ治療の標的分子は、主として、患者の血清中に存在すると考えられる。
ＩＶＩＧ治療において患者の静脈に投与されたＩｇＧは、主として、患者の血清中に存在することになる。それ故に、ＩＶＩＧ治療の標的分子は、主として、患者の血清中に存在すると考えられる。
そこで、本試験では、複数の川崎病の患者（ＫＤ２６〜ＫＤ４４：１９名）にＩＶＩＧ治療を行い、治療の前後において、これらの患者に由来する血清内でＦＣＮ１（Ｍ−ｆｉｃｏｌｉｎ）のタンパク質の発現が変化するか否かを、ウエスタンブロット法によって調べた。以下に、試験方法、および、試験結果について説明する。
周知の方法にしたがって、各患者の血清（１０μＬ）をウエスタンブロット法による解析に供し、血清内におけるタンパク質の発現を解析した。
図８に試験結果を示す。
図８から明らかなように、試験した全ての患者において、ＩＶＩＧ治療前（図８における「ＩＶＩＧ−」）と比較してＩＶＩＧ治療を行った直後（図８における「ＩＶＩＧ＋」）に、血清内におけるＦＣＮ１タンパク質の発現量が大幅に低下していた。
一方、大多数の患者においては、ＩＶＩＧ治療前と比較してＩＶＩＧ治療を行った直後に、血清内におけるＦＣＮ１以外のタンパク質（例えば、Ｃ１ｑ、ＨｐＲなど）の発現量に有意な変化が認められなかった。例えば、ＨｐＲに関しては、全ての患者において、略等量発現していた。一方、Ｃ１ｑに関しては、一部の患者（具体的には、ＫＤ２８、ＫＤ２９およびＫＤ３４）を除いては、ＩＶＩＧ治療前と比較してＩＶＩＧ治療を行った直後に、発現量に有意な変化が認められなかった。
＜５．ＦＣＮ１タンパク質内における、ＩｇＧタンパク質が結合する部位の特定＞
本試験では、ＩｇＧタンパク質が、ＦＣＮ１タンパク質内のどの箇所に結合するか、特定した。以下に、試験方法、および、試験結果について説明する。
本試験では、ＩｇＧタンパク質が、ＦＣＮ１タンパク質内のどの箇所に結合するか、特定した。以下に、試験方法、および、試験結果について説明する。
まず、周知の方法にしたがって、ＦＣＮ１タンパク質の全長（ＦＣＮ−Ｆｓ）を発現するベクター、ＦＣＮ１タンパク質のアミノ末端側の部分（ＦＣＮ１−Ｎｔ）を発現するベクター、および、ＦＣＮ１タンパク質のカルボキシル末端側の部分（ＦＣＮ１−Ｃｔ）を発現するベクターを作製した（図９（Ａ）参照）。なお、ＦＣＮ−Ｆｓの具体的なアミノ酸配列は、配列番号１に示されるアミノ酸配列に対応する。ＦＣＮ１−Ｎｔの具体的なアミノ酸配列は、配列番号１に示されるアミノ酸配列における、アミノ末端側から数えて１番目〜１２０番目のアミノ酸からなるアミノ酸配列に対応する（配列番号１４に対応）。ＦＣＮ１−Ｃｔの具体的なアミノ酸配列は、配列番号１に示されるアミノ酸配列における、アミノ末端側から数えて９８番目〜３２６番目のアミノ酸からなるアミノ酸配列に対応する（配列番号１５に対応）。また、上述した３種類のタンパク質は、Ｆｌａｇタグと融合した融合タンパク質として発現されるように、各ベクターを設計した。
次いで、周知の方法にしたがって、ＩｇＧタンパク質の全長（ＩｇＧ−Ｆｓ）を発現するベクターを作製した。なお、ＩｇＧ−Ｆｓの具体的なアミノ酸配列は、配列番号２に示される塩基配列を翻訳したアミノ酸配列に対応する。また、上述したタンパク質は、Ｍｙｃタグと融合した融合タンパク質として発現されるように、各ベクターを設計した。
上述したベクターを様々な組み合わせでヒト腎臓細胞（ＨＥＫ２９３Ｔ）に導入し、当該ヒト腎臓細胞内で目的のタンパク質を発現させた。当該ヒト腎臓細胞を溶液（２０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ［ｐＨ７．５］、２００ｍＭ ＮａＣｌ、１ｍＭ ＥＤＴＡ［ｐＨ８．０］、０．２% ＮＰ−４０）中で破砕した後、当該溶液を遠心分離処理して上清を得た。抗Ｍｙｃ抗体を用いて、上清から免疫沈降物を回収した。次いで、回収された免疫沈降物を、抗Ｆｌａｇ抗体を用いたウエスタンブロット解析に供した。
試験結果を図９（Ｂ）に示す。図９（Ｂ）の左側は、通常のウエスタンブロット解析の結果を示し、図９（Ｂ）の右側は、Ｗｅｓ機器を用いた自動ウエスタンブロット解析の結果を示している。図９（Ｂ）から、ＩｇＧ−Ｆｓは、ＦＣＮ−Ｆｓ、および、ＦＣＮ１−Ｎｔと結合することが明らかになった。
＜６．ＩｇＧタンパク質内における、ＦＣＮ１タンパク質が結合する部位の特定＞
本試験では、ＩｇＧタンパク質内のどの箇所にＦＣＮ１タンパク質が結合するか、特定した。以下に、試験方法、および、試験結果について説明する。
本試験では、ＩｇＧタンパク質内のどの箇所にＦＣＮ１タンパク質が結合するか、特定した。以下に、試験方法、および、試験結果について説明する。
まず、周知の方法にしたがって、ＩｇＧタンパク質を５つに分割した各部分（ＩｇＧ−１、ＩｇＧ−２、ＩｇＧ−３、ＩｇＧ−４、および、ＩｇＧ−５）を発現するベクターを作製した（図１０（Ａ）参照）。なお、ＩｇＧ−１の具体的なアミノ酸配列は、配列番号２に示されるアミノ酸配列における、アミノ末端側から数えて１番目〜１２０番目のアミノ酸からなるアミノ酸配列に対応する。ＩｇＧ−２の具体的なアミノ酸配列は、配列番号２に示されるアミノ酸配列における、アミノ末端側から数えて１２１番目〜２４０番目のアミノ酸からなるアミノ酸配列に対応する。ＩｇＧ−３の具体的なアミノ酸配列は、配列番号２に示されるアミノ酸配列における、アミノ末端側から数えて２４１番目〜３４０番目のアミノ酸からなるアミノ酸配列に対応する。ＩｇＧ−４の具体的なアミノ酸配列は、配列番号２に示されるアミノ酸配列における、アミノ末端側から数えて３４１番目〜４４０番目のアミノ酸からなるアミノ酸配列に対応する。ＩｇＧ−５の具体的なアミノ酸配列は、配列番号２に示されるアミノ酸配列における、アミノ末端側から数えて４４１番目〜５４４番目のアミノ酸からなるアミノ酸配列に対応する。また、上述した５種類のタンパク質は、Ｍｙｃタグと融合した融合タンパク質として発現されるように、各ベクターを設計した。
更に、本試験では、＜５．ＦＣＮ１タンパク質内における、ＩｇＧタンパク質が結合する部位の特定＞の欄で説明した、ＦＣＮ１タンパク質のアミノ末端側の部分（ＦＣＮ１−Ｎｔ）を発現するベクターを用いた。なお、当該タンパク質は、Ｆｌａｇタグと融合した融合タンパク質として発現されるように、ベクターを設計した。
上述したベクターを様々な組み合わせでヒト腎臓細胞（ＨＥＫ２９３Ｔ）に導入し、当該ヒト腎臓細胞内で目的のタンパク質を発現させた。当該ヒト腎臓細胞を溶液（２０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ［ｐＨ７．５］、２００ｍＭ ＮａＣｌ、１ｍＭ ＥＤＴＡ［ｐＨ８．０］、０．２% ＮＰ−４０）中で破砕した後、当該溶液を遠心分離処理して上清を得た。抗Ｍｙｃ抗体を用いて、上清から免疫沈降物を回収した。次いで、回収された免疫沈降物を、抗Ｆｌａｇ抗体を用いたウエスタンブロット解析に供した。
試験結果を図１０（Ｂ）に示す。図１０（Ｂ）から、ＦＣＮ１−Ｎｔは、ＩｇＧ−２、ＩｇＧ−３、および、ＩｇＧ−４と結合することが明らかになった。
更に、上述した試験結果の再現性を確認するために、免疫沈降に使用した抗Ｍｙｃ抗体と混ぜる細胞抽出液のタンパク質量を４倍に増やして、免疫沈降を行った。当該試験の結果を図１０（Ｃ）に示す。図１０（Ｃ）から、ＩｇＧ−２、ＩｇＧ−３、および、ＩｇＧ−４のうちでは、ＩｇＧ−３が最も強くＦＣＮ１−Ｎｔと結合することが明らかになった。そこで、今後は、ＩｇＧ−３内の結合領域を狭めることを目的として、更なる実験を行うことにした。
＜７．ＩｇＧ−３内における、ＦＣＮ１タンパク質が結合する部位の特定＞
本試験では、ＩｇＧ−３内のどの箇所にＦＣＮ１タンパク質が結合するか、特定した。以下に、試験方法、および、試験結果について説明する。
本試験では、ＩｇＧ−３内のどの箇所にＦＣＮ１タンパク質が結合するか、特定した。以下に、試験方法、および、試験結果について説明する。
まず、周知の方法にしたがって、ＩｇＧ−３を４つに分割した各部分（ＩｇＧ−３ａ、ＩｇＧ−３ｂ、ＩｇＧ−３ｃ、および、ＩｇＧ−３ｄ）を発現するベクターを作製した（図１１（Ａ）参照）。なお、ＩｇＧ−３ａの具体的なアミノ酸配列は、配列番号２に示されるアミノ酸配列における、アミノ末端側から数えて２２８番目〜２６０番目のアミノ酸からなるアミノ酸配列に対応する。ＩｇＧ−３ｂの具体的なアミノ酸配列は、配列番号２に示されるアミノ酸配列における、アミノ末端側から数えて２６１番目〜２９２番目のアミノ酸からなるアミノ酸配列に対応する。ＩｇＧ−３ｃの具体的なアミノ酸配列は、配列番号２に示されるアミノ酸配列における、アミノ末端側から数えて２９３番目〜３２０番目のアミノ酸からなるアミノ酸配列に対応する。ＩｇＧ−３ｄの具体的なアミノ酸配列は、配列番号２に示されるアミノ酸配列における、アミノ末端側から数えて３２１番目〜３５５番目のアミノ酸からなるアミノ酸配列に対応する。また、上述した４種類のタンパク質は、Ｍｙｃタグと融合した融合タンパク質として発現されるように、各ベクターを設計した。
更に、本試験では、＜５．ＦＣＮ１タンパク質内における、ＩｇＧタンパク質が結合する部位の特定＞の欄で説明した、ＦＣＮ１タンパク質のアミノ末端側の部分（ＦＣＮ１−Ｎｔ）を発現するベクターを用いた。なお、当該タンパク質は、Ｆｌａｇタグと融合した融合タンパク質として発現されるように、ベクターを設計した。
上述したベクターを様々な組み合わせでヒト腎臓細胞（ＨＥＫ２９３Ｔ）に導入し、当該ヒト腎臓細胞内で目的のタンパク質を発現させた。当該ヒト腎臓細胞を溶液（２０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ［ｐＨ７．５］、２００ｍＭ ＮａＣｌ、１ｍＭ ＥＤＴＡ［ｐＨ８．０］、０．２% ＮＰ−４０）中で破砕した後、当該溶液を遠心分離処理して上清を得た。抗Ｍｙｃ抗体を用いて、上清から免疫沈降物を回収した。次いで、回収された免疫沈降物を、抗Ｆｌａｇ抗体を用いたウエスタンブロット解析に供した。
試験結果を図１１（Ｂ）に示す。図１１（Ｂ）から、ＦＣＮ１−Ｎｔは、ＩｇＧ−３ｄと結合することが明らかになった。
＜８．ＩｇＧ−３内における、ＦＣＮ１タンパク質が結合する部位の特定−２＞
ＧＳＴ−ＦＣＮ１−Ｎｔと、Ｍｙｃ−Ｈｓ ＩｇＧ−３と、を混合した後、当該混合物にグルタチオンセファロースビーズを加えて、混合および撹拌した。その後、混合物を遠心分離することによって、沈殿物（具体的には、グルタチオンセファロースビーズ、および、当該グルタチオンセファロースビーズに結合しているタンパク質）を回収した。次いで、回収された沈殿物を、抗Ｍｙｃ抗体を用いたウエスタンブロット解析に供した。なお、ポジティブコントロールとしては、「ＣＨ１＋ＣＨ２」を用いた。
ＧＳＴ−ＦＣＮ１−Ｎｔと、Ｍｙｃ−Ｈｓ ＩｇＧ−３と、を混合した後、当該混合物にグルタチオンセファロースビーズを加えて、混合および撹拌した。その後、混合物を遠心分離することによって、沈殿物（具体的には、グルタチオンセファロースビーズ、および、当該グルタチオンセファロースビーズに結合しているタンパク質）を回収した。次いで、回収された沈殿物を、抗Ｍｙｃ抗体を用いたウエスタンブロット解析に供した。なお、ポジティブコントロールとしては、「ＣＨ１＋ＣＨ２」を用いた。
試験結果を図１２に示す。図１２より、ＩｇＧとＦＣＮ１とは、ＩｇＧ−３ｄを介して結合していることが明らかになった。
＜９．ＩｇＧ−３ｄ内における、ＦＣＮ１タンパク質が結合する部位の特定＞
本試験では、ＩｇＧ−３ｄ内のどの箇所にＦＣＮ１タンパク質が結合するか、特定した。以下に、試験方法、および、試験結果について説明する。
本試験では、ＩｇＧ−３ｄ内のどの箇所にＦＣＮ１タンパク質が結合するか、特定した。以下に、試験方法、および、試験結果について説明する。
まず、周知の方法にしたがって、ＩｇＧ−３ｄを６つに分割した各部分ペプチド（ｉＶｉｅｐ１、ｉＶｉｅｐ２、ｉＶｉｅｐ３、ｉＶｉｅｐ４、ｉＶｉｅｐ５、および、ｉＶｉｅｐ６）を化学合成した（図１３（Ａ）および（Ｂ）参照）。なお、図１３中、ｉＶｉｅｐ１、ｉＶｉｅｐ２、ｉＶｉｅｐ３、ｉＶｉｅｐ４、ｉＶｉｅｐ５、および、ｉＶｉｅｐ６の各々を、３ｄ−１、３ｄ−２、３ｄ−３、３ｄ−４、３ｄ−５、および、３ｄ−６にて示している。
各ペプチドの具体的なアミノ酸配列を、以下に示す。つまり、
ＩｇＧ−３ｄ：EEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKA （配列番号３）、
ｉＶｉｅｐ１：EEQYNS （配列番号４）、
ｉＶｉｅｐ２： TYRVVS （配列番号５）、
ｉＶｉｅｐ３： VLTVLH （配列番号６）、
ｉＶｉｅｐ４： QDWLNG （配列番号７）、
ｉＶｉｅｐ５： KEYKCK （配列番号８）、
ｉＶｉｅｐ６： KVSNKA （配列番号９）。
ＩｇＧ−３ｄ：EEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKA （配列番号３）、
ｉＶｉｅｐ１：EEQYNS （配列番号４）、
ｉＶｉｅｐ２： TYRVVS （配列番号５）、
ｉＶｉｅｐ３： VLTVLH （配列番号６）、
ｉＶｉｅｐ４： QDWLNG （配列番号７）、
ｉＶｉｅｐ５： KEYKCK （配列番号８）、
ｉＶｉｅｐ６： KVSNKA （配列番号９）。
次いで、周知の方法にしたがって、ＦＣＮ１タンパク質のアミノ末端側の部分（ＦＣＮ１−Ｎｔ）を発現するベクターを作製した。なお、上述したタンパク質は、ＧＳＴ（Glutathione S-transferase）タンパク質と融合したＧＳＴ融合タンパク質として発現されるように、ベクターを設計した。そして、周知の方法にしたがって、当該ベクターを用いて、ＧＳＴ融合タンパク質を精製した。
更に、本試験では、＜７．ＩｇＧ−３内における、ＦＣＮ１タンパク質が結合する部位の特定＞の欄で説明した、ＩｇＧ−３ｄを発現するベクターを用いた。なお、当該タンパク質は、Ｍｙｃタグと融合した融合タンパク質として発現されるように、ベクターを設計した。当該ベクターをヒト腎臓細胞（ＨＥＫ２９３Ｔ）に導入し、当該ヒト腎臓細胞内で目的のタンパク質を発現させて、ＩｇＧ−３ｄタンパク質を取得した。
ｉＶｉｅｐ１、ｉＶｉｅｐ２、ｉＶｉｅｐ３、ｉＶｉｅｐ４、ｉＶｉｅｐ５、または、ｉＶｉｅｐ６の存在下で、ＧＳＴ融合タンパク質とＩｇＧ−３ｄタンパク質とを混合および撹拌した後、更に、グルタチオンセファロースビーズを加えて、混合および撹拌した。その後、混合物を遠心分離することによって、沈殿物（具体的には、グルタチオンセファロースビーズ、および、当該グルタチオンセファロースビーズに結合しているタンパク質）を回収した。次いで、回収された沈殿物を、抗Ｍｙｃ抗体を用いたウエスタンブロット解析に供した。
試験結果を図１３（Ｃ）に示す。なお、図１３（Ｃ）にて、「ＮＣ」は「negative control」を意図し、「ＮＰ」は「no peptide added」を意図している。図１３の（Ｃ）から、ｉＶｉｅｐ３、ｉＶｉｅｐ５、および、ｉＶｉｅｐ６は、ＩｇＧ−３ｄとＦＣＮ１−Ｎｔとの結合を阻害することが明らかになった。
＜１０．ＩｇＧ内における、ＦＣＮ１タンパク質が結合する部位の特定＞
図１４の「Ａ」に示す断片化部位とは異なる断片化部位を発現するプラスミド（図１４の「Ｂ」参照）を、ヒト腎臓細胞（ＨＥＫ２９３Ｔ）細胞に遺伝子導入して発現させた後、細胞抽出液とＧＳＴ−ＦＣＮ１−Ｎｔとを混ぜ、グルタチオンセファロースを加えて遠心沈降し、沈降物をウエスタンブロット解析に供した。
図１４の「Ａ」に示す断片化部位とは異なる断片化部位を発現するプラスミド（図１４の「Ｂ」参照）を、ヒト腎臓細胞（ＨＥＫ２９３Ｔ）細胞に遺伝子導入して発現させた後、細胞抽出液とＧＳＴ−ＦＣＮ１−Ｎｔとを混ぜ、グルタチオンセファロースを加えて遠心沈降し、沈降物をウエスタンブロット解析に供した。
試験結果を図１４に示す。図１４より、ＣＨ１＋ＣＨ２とＣＨ１＋１５ａａ（ＣＨ１にリンカー領域の１５アミノ酸を付加したペプチド断片）とがＦｌａｇ−ＦＣＮ１−Ｎｔと結合することが明らかになった。
＜１１．ＩｇＧ−２内における、ＦＣＮ１タンパク質が結合する部位の特定＞
上述した＜６．ＩｇＧタンパク質内における、ＦＣＮ１タンパク質が結合する部位の特定＞では、ＩｇＧ−２のみならず、ＣＨ１を含むＩｇＧ−２もＦＣＮ１−Ｎｔと結合することが明らかになった。そこで、本試験では、ＣＨ１内のどの箇所にＦＣＮ１タンパク質が結合するか、特定した。以下に、試験方法、および、試験結果について説明する。
上述した＜６．ＩｇＧタンパク質内における、ＦＣＮ１タンパク質が結合する部位の特定＞では、ＩｇＧ−２のみならず、ＣＨ１を含むＩｇＧ−２もＦＣＮ１−Ｎｔと結合することが明らかになった。そこで、本試験では、ＣＨ１内のどの箇所にＦＣＮ１タンパク質が結合するか、特定した。以下に、試験方法、および、試験結果について説明する。
まず、周知の方法にしたがって、ＣＨを１１個に分割した各部分ペプチドを化学合成した（図１５の（Ａ）および（Ｂ）参照）。なお、各部分ペプチドの具体的なアミノ酸配列を、以下に示す。つまり、
ＣＨ１−１ ：ASTKGPSVFP （配列番号１９）
ＣＨ１−２ ：LAPSSKSTSG （配列番号２０）
ＣＨ１−３ ：GTAALGCLVK （配列番号１０）、
ＣＨ１−４ ：DYFPEPVTVS （配列番号２１）
ＣＨ１−５ ：WNSGALTSGV （配列番号１１）、
ＣＨ１−６ ：HTFPAVLQSS （配列番号２２）
ＣＨ１−７ ：GLYSLSSVVT （配列番号２３）
ＣＨ１−８ ：VPSSSLGTQT （配列番号１２）、
ＣＨ１−９ ：YICNVNHKPS （配列番号２４）
ＣＨ１−１０：NTKVDKKVEP （配列番号１３）、
ＣＨ１−１１：KSCDKTHTCPPCP （配列番号２５）
次いで、周知の方法にしたがって、ＦＣＮ１タンパク質のアミノ末端側の部分（ＦＣＮ１−Ｎｔ）を発現するベクターを作製した。なお、上述したタンパク質は、ＧＳＴ（Glutathione S-transferase）タンパク質と融合したＧＳＴ融合タンパク質として発現されるように、ベクターを設計した。そして、周知の方法にしたがって、当該ベクターを用いて、ＧＳＴ融合タンパク質を精製した。
ＣＨ１−１ ：ASTKGPSVFP （配列番号１９）
ＣＨ１−２ ：LAPSSKSTSG （配列番号２０）
ＣＨ１−３ ：GTAALGCLVK （配列番号１０）、
ＣＨ１−４ ：DYFPEPVTVS （配列番号２１）
ＣＨ１−５ ：WNSGALTSGV （配列番号１１）、
ＣＨ１−６ ：HTFPAVLQSS （配列番号２２）
ＣＨ１−７ ：GLYSLSSVVT （配列番号２３）
ＣＨ１−８ ：VPSSSLGTQT （配列番号１２）、
ＣＨ１−９ ：YICNVNHKPS （配列番号２４）
ＣＨ１−１０：NTKVDKKVEP （配列番号１３）、
ＣＨ１−１１：KSCDKTHTCPPCP （配列番号２５）
次いで、周知の方法にしたがって、ＦＣＮ１タンパク質のアミノ末端側の部分（ＦＣＮ１−Ｎｔ）を発現するベクターを作製した。なお、上述したタンパク質は、ＧＳＴ（Glutathione S-transferase）タンパク質と融合したＧＳＴ融合タンパク質として発現されるように、ベクターを設計した。そして、周知の方法にしたがって、当該ベクターを用いて、ＧＳＴ融合タンパク質を精製した。
更に、本試験では、＜６．ＩｇＧタンパク質内における、ＦＣＮ１タンパク質が結合する部位の特定＞の欄で説明した、ＩｇＧ−２を発現するベクターを用いた。なお、当該タンパク質は、Ｍｙｃタグと融合した融合タンパク質として発現されるように、ベクターを設計した。当該ベクターをヒト腎臓細胞（ＨＥＫ２９３Ｔ）に導入し、当該ヒト腎臓細胞内で目的のタンパク質を発現させて、ＩｇＧ−２タンパク質を取得した。
各ペプチドの存在下で、ＧＳＴ融合タンパク質とＩｇＧ−２タンパク質とを混合および撹拌した後、更に、グルタチオンセファロースビーズを加えて、混合および撹拌した。その後、混合物を遠心分離することによって、沈殿物（具体的には、グルタチオンセファロースビーズ、および、当該グルタチオンセファロースビーズに結合しているタンパク質）を回収した。次いで、回収された沈殿物を、抗Ｍｙｃ抗体を用いたウエスタンブロット解析に供した。
試験結果を図１５（Ｃ）に示す。図１５（Ｃ）において、Ｌａｎｅ６、８、１１および１３は、各々、ＣＨ１−３、ＣＨ１−５、ＣＨ１−８、および、ＣＨ１−１０を用いた試験の結果を示す。図１５（Ｃ）から、ＣＨ１−３、ＣＨ１−５、ＣＨ１−８、および、ＣＨ１−１０は、ＩｇＧ−２とＦＣＮ１−Ｎｔとの結合を阻害することが明らかになった。
＜１２．抗フィコリンタンパク質・マウスモノクローナル抗体の作製＞
３種類のポリペプチドを抗原として、周知の方法にしたがって、抗フィコリンタンパク質・マウスモノクローナル抗体を作製した。なお、各抗原に対し、各々２種類の抗体を作製した。抗原として用いたポリペプチドのアミノ酸配列は、以下のとおりであった。つまり、
ポリペプチド１：GDRGEKGMRGEKGDC （配列番号１６）、
ポリペプチド２：CGSSELRVDLVDFEG （配列番号１７）、
ポリペプチド３：CQFAKYKSFKVADEA （配列番号１８）。
３種類のポリペプチドを抗原として、周知の方法にしたがって、抗フィコリンタンパク質・マウスモノクローナル抗体を作製した。なお、各抗原に対し、各々２種類の抗体を作製した。抗原として用いたポリペプチドのアミノ酸配列は、以下のとおりであった。つまり、
ポリペプチド１：GDRGEKGMRGEKGDC （配列番号１６）、
ポリペプチド２：CGSSELRVDLVDFEG （配列番号１７）、
ポリペプチド３：CQFAKYKSFKVADEA （配列番号１８）。
ＩＶＩＧ治療を行う前、およびＩＶＩＧ治療を行った後の川崎病患者の血清を、作製した抗フィコリンタンパク質・マウスモノクローナル抗体を用いたウエスタンブロット解析に供した。試験結果を図１６に示す。
図１６の「♯１」および「♯２」は、ポリペプチド１を抗原として作製された２つの抗体の試験結果であり、図１６の「♯３」および「♯４」は、ポリペプチド２を抗原として作製された２つの抗体の試験結果であり、図１６の「♯５」および「♯６」は、ポリペプチド３を抗原として作製された２つの抗体の試験結果である。
図１６の「♯６」から明らかなように、ポリペプチド３を抗原として作製された抗体は、川崎病患者のフィコリンタンパク質を感度良く検出した。
＜１３．マウスモノクローナル抗体に関する検討−１＞
Candida Albicans Water Soluble Fraction（ＣＡＷＳ）をマウスに腹腔内投与すると川崎病に類似した血管炎を起こすことが知られている（Nagi-Miura N, Okuzaki D, Torigata K, Sakurai MA, Ito A, Ohno N, Nojima H: CAWS administration increases the expression of interferon gamma and complement factors that lead to severe vasculitis in DBA/2 mice. BMC Immunol, 14(1): 44, 2013参照）。
Candida Albicans Water Soluble Fraction（ＣＡＷＳ）をマウスに腹腔内投与すると川崎病に類似した血管炎を起こすことが知られている（Nagi-Miura N, Okuzaki D, Torigata K, Sakurai MA, Ito A, Ohno N, Nojima H: CAWS administration increases the expression of interferon gamma and complement factors that lead to severe vasculitis in DBA/2 mice. BMC Immunol, 14(1): 44, 2013参照）。
マウスにＣＡＷＳ投与後、０、２、３、４、５日後の各々に、ＣＡＷＳを投与した同一のマウスから少量の血液を採取し、当該血液から血清を調製してウエスタンブロット解析に供した。
マウスのＦｃｎｂ（ヒトのＦＣＮ１に相当する）に対するポリクローナル抗体を作製してウエスタンブロット解析に用いたところ、ＣＡＷＳ投与後、２日後から５日後にかけて、Ｆｃｎｂの量が徐々に増えていることが観察された（図１７の上図参照）。
一方、ＦＣＮ１に対するマウスモノクローナル抗体（具体的に、図１６における♯６のマウスモノクローナル抗体に対応）を用いたところ、抗Ｆｃｎｂポリクローナル抗体よりもマウスのＦｃｎｂを感度高く認識し、やはりＣＡＷＳ投与後、２日後から５日後にかけて、Ｆｃｎｂの量が徐々に増えていることが観察された（図１７の下図参照）。
この結果は、ＣＡＷＳ惹起型血管炎においても、Ｆｃｎｂ（ＦＣＮ１）の増加が重要な働きをしていることが示唆している。さらには、マウスモノクローナル抗体（具体的に、図１６における♯６のマウスモノクローナル抗体に対応）が、ＩＶＩＧの代替品として血管炎（例えば、ＣＡＷＳ惹起型血管炎）の治療に有用である可能性を示唆している。
＜１４．マウスモノクローナル抗体に関する検討−２＞
川崎病に類似した血管炎を生じることが知られているCandida Albican培養上清由来の可溶性多糖画分（Albicans Water Soluble Fraction：ＣＡＷＳ）をマウスに腹腔内投与した。その後、ＣＡＷＳを投与してから１週間後（ｗｋ１）または３週間後（ｗｋ３）に、当該マウスに対して、ヒト由来のＩＶＩＧ製剤、または抗ＦＣＮ１モノクローナル抗体（具体的に、図１６における♯１〜♯６のマウスモノクローナル抗体に対応）を腹腔内投与し、１、２、３、４、５週間目の体重変化を測定した（図１８のＡ参照）。
川崎病に類似した血管炎を生じることが知られているCandida Albican培養上清由来の可溶性多糖画分（Albicans Water Soluble Fraction：ＣＡＷＳ）をマウスに腹腔内投与した。その後、ＣＡＷＳを投与してから１週間後（ｗｋ１）または３週間後（ｗｋ３）に、当該マウスに対して、ヒト由来のＩＶＩＧ製剤、または抗ＦＣＮ１モノクローナル抗体（具体的に、図１６における♯１〜♯６のマウスモノクローナル抗体に対応）を腹腔内投与し、１、２、３、４、５週間目の体重変化を測定した（図１８のＡ参照）。
血管炎を発症すると、マウスの体重が減少することが知られている。特定の抗ＦＣＮ１モノクローナル抗体が投与されたマウス（図１８のＡに示す「♯５ ｍＡｂ ｗｋ１」および「♯６ ｍＡｂ ｗｋ３」参照）では、マウスの体重減少が観察されなかった。
なお、図１８において、「Ａ」は、ＣＡＷＳマウス治療実験の結果を示す折れ線グラフであり、「Ｂ」は、「Ａ」の折れ線グラフのデータを実験群毎に分けて体重変化を統計解析した結果であり、「Ｃ」は、「Ｂ」の結果に、血管炎発症実験（ＣＡＷＳマウス３匹分）を生食群として加えた上で統計解析した結果である。
実験群ごとに分けて統計解析をすると、特定の抗ＦＣＮ１モノクローナル抗体（図１６における♯５および♯６のマウスモノクローナル抗体に対応）が投与されたマウスで体重減少が見られなかった事実は歴然としていることが判明した（図１８のＢおよびＣ参照）。この結果は抗FCN1モノクローナル抗体を大量培養して製剤化すれば、ＩＶＩＧよりも優れた医薬品に成る可能性が示唆された。
本発明は、免疫不全、自己免疫疾患、または、難治性血管炎の治療に用いることができる。また、本発明は、免疫不全用、自己免疫疾患用、または、難治性血管炎用の治療剤の製造に用いることができる。
１ フィコリンタンパク質
２ 結合領域
５ 結合対象
１０ 物質
２ 結合領域
５ 結合対象
１０ 物質
Claims (4)
- フィコリンタンパク質と結合する抗体を含有し、
上記フィコリンタンパク質と結合する抗体は、配列番号１８にて示されるアミノ酸配列からなるポリペプチドと結合するものであることを特徴とする、自己免疫疾患用、または、難治性血管炎用の治療剤。 - 上記自己免疫疾患は、特発性血小板減少性紫斑病、慢性関節リウマチ、または、不明熱であることを特徴とする、請求項１に記載の自己免疫疾患用、または、難治性血管炎用の治療剤。
- 上記難治性血管炎は、川崎病、高安病、顕微鏡的多発血管炎、多発血管炎性肉芽腫症、アレルギー性肉芽腫性血管炎／Churg-Strauss症候群、または、巨細胞性動脈炎であることを特徴とする、請求項１に記載の自己免疫疾患用、または、難治性血管炎用の治療剤。
- 採取された血清に含まれるフィコリンタンパク質を、配列番号１８にて示されるアミノ酸配列からなるポリペプチドと結合する抗体によって検出する工程を有することを特徴とする、自己免疫疾患、または、難治性血管炎の診断のためのデータの取得方法。
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| JP2013520979A (ja) * | 2010-03-05 | 2013-06-10 | リグショスピタレト | 補体活性化のキメラ抑制分子 |
| JP2014520765A (ja) * | 2011-06-28 | 2014-08-25 | リグショスピタレト | フィコリン−３の治療標的 |
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