WO2018044122A1 - 생약 혼합 추출물을 포함하는 아토피 피부염의 치료용 조성물 - Google Patents

생약 혼합 추출물을 포함하는 아토피 피부염의 치료용 조성물 Download PDF

Info

Publication number
WO2018044122A1
WO2018044122A1 PCT/KR2017/009609 KR2017009609W WO2018044122A1 WO 2018044122 A1 WO2018044122 A1 WO 2018044122A1 KR 2017009609 W KR2017009609 W KR 2017009609W WO 2018044122 A1 WO2018044122 A1 WO 2018044122A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
composition
atopic dermatitis
licorice
kajd
ginseng
Prior art date
Application number
PCT/KR2017/009609
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
고성규
최인화
윤영희
홍세향
구진모
남궁원
Original Assignee
경희대학교 산학협력단
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 경희대학교 산학협력단 filed Critical 경희대학교 산학협력단
Priority to US16/329,562 priority Critical patent/US11666619B2/en
Priority to EP17847047.2A priority patent/EP3508210B1/en
Publication of WO2018044122A1 publication Critical patent/WO2018044122A1/ko

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/75—Rutaceae (Rue family)
    • A61K36/756—Phellodendron, e.g. corktree
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/105—Plant extracts, their artificial duplicates or their derivatives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/48—Fabaceae or Leguminosae (Pea or Legume family); Caesalpiniaceae; Mimosaceae; Papilionaceae
    • A61K36/484—Glycyrrhiza (licorice)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/48—Fabaceae or Leguminosae (Pea or Legume family); Caesalpiniaceae; Mimosaceae; Papilionaceae
    • A61K36/489—Sophora, e.g. necklacepod or mamani
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/53—Lamiaceae or Labiatae (Mint family), e.g. thyme, rosemary or lavender
    • A61K36/538—Schizonepeta
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/80—Scrophulariaceae (Figwort family)
    • A61K36/804—Rehmannia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/88—Liliopsida (monocotyledons)
    • A61K36/896—Liliaceae (Lily family), e.g. daylily, plantain lily, Hyacinth or narcissus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
    • A61K8/97—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution from algae, fungi, lichens or plants; from derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
    • A61K8/97—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution from algae, fungi, lichens or plants; from derivatives thereof
    • A61K8/9783—Angiosperms [Magnoliophyta]
    • A61K8/9789—Magnoliopsida [dicotyledons]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
    • A61K8/97—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution from algae, fungi, lichens or plants; from derivatives thereof
    • A61K8/9783—Angiosperms [Magnoliophyta]
    • A61K8/9794—Liliopsida [monocotyledons]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2200/00—Function of food ingredients
    • A23V2200/30—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health
    • A23V2200/318—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health having an effect on skin health and hair or coat
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
    • A61K2236/30—Extraction of the material
    • A61K2236/33—Extraction of the material involving extraction with hydrophilic solvents, e.g. lower alcohols, esters or ketones
    • A61K2236/333—Extraction of the material involving extraction with hydrophilic solvents, e.g. lower alcohols, esters or ketones using mixed solvents, e.g. 70% EtOH
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00

Definitions

  • the present invention relates to a composition for the treatment of atopic dermatitis comprising a mixed herbal extract, specifically, for the prevention or treatment of atopic dermatitis comprising a mixed extract or a fraction thereof of baekbaek, gyeonggi, ginseng, licorice, gingimun and A composition, a food composition, a quasi-drug composition, a cosmetic composition, and a method for treating atopic dermatitis using the pharmaceutical composition.
  • AD Atopic dermatitis
  • cytokines including TNF- ⁇ , chemokines and the like
  • the IgE induces mast cell activation, and thus, immune mediators including histamine precursors, chemokines, cytokines, and the like are released from mast cells.
  • These cytokines promote Th2-subtype T cell responses observed in skin lesions in the acute phase of AD, and the combination of these Th2 and Th1 responses regulates the immune response during the chronic phase of AD.
  • Topical corticosteroids have been used as a standard treatment for acute AD, but they have been reported to cause side effects on atrophogenic (Lubach D. et al., Dermatologica, 1989, 179, 67-72). However, it is necessary to develop safe anti-inflammatory factors even after long-term use without steroids.
  • tacrolimus a topical immunosuppressive agent, is currently used for the treatment of AD. Tacrolimus effectively penetrates the skin as it has a relatively small molecular size, and thus is used in the form of topical ointment (Akhavan A. et al., Semin Cutan Med Surg., 2008, 27, 151-155).
  • a composition for improving atopic dermatitis comprising fermented ginseng or red ginseng extract enhanced with ginsenoside Rd (Korean Patent Application Publication No. 2016-0019190), tofu and raw paper extract Cosmetics for atopic dermatitis containing a (Korean Patent Publication No. 2015-0065250), a composition for improving atopic dermatitis containing a millet extract (Korean Patent Publication No. 2014-0063165) has been developed.
  • yellowish (Cortex Phellodendri), mold opening (Schizonepetae Spica ), Sophorae Radix , Glycyrrhizae Radix , Liriopis Tuber , or Radix Rehmanniae Exsiccat ) is a medicinal herb used in oriental medicine, and it is known to have a therapeutic effect on menopause, cirrhosis, digestion, antibacterial activity, uterine bleeding, dysmenorrhea, dysentery, cramps, genital pruritus, etc.
  • none of these combinations have been used as a medicinal agent, and the effects of the above combinations on atopic dermatitis have not been known.
  • the present inventors have diligently researched to develop a therapeutic agent for atopic dermatitis using natural products, and as a result, it was confirmed that the mixed extracts of yellow, yellow, ginseng, licorice, lichen, ginmundong, and dried fish jelly can cure atopic dermatitis by suppressing the immune response.
  • the invention was completed.
  • One object of the present invention is to provide a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of atopic dermatitis comprising a mixed extract or a fraction thereof of baekbaek, hyeonggeum, ginseng, licorice, mackmundong and geonjihwang.
  • Another object of the present invention is to provide a method for treating atopic dermatitis comprising administering the pharmaceutical composition to a subject suspected of atopic dermatitis, except for humans.
  • Another object of the present invention is to provide a food composition for improving atopic dermatitis, including a mixed extract or fractions thereof of yellowish white, hyungae, ginseng, licorice, ganmundong and dry yellow sulfur.
  • Another object of the present invention is to provide a quasi-drug composition for the prevention or improvement of atopic dermatitis, including a mixed extract or a fraction thereof of yellowish white, hyeonghyeong, ginseng, licorice, pulsed and dried kohwang.
  • Another object of the present invention is to provide a quasi-drug composition for the prevention or improvement of atopic dermatitis, including a mixed extract or a fraction thereof of yellowish white, hyeonghyeong, ginseng, licorice, pulsed and dried kohwang.
  • the complex herbal extract of the present invention can prevent, ameliorate, and treat atopic dermatitis to a similar or better level than a drug previously known as a therapeutic agent for atopic dermatitis.
  • Figure 1 shows the KAJD (Hwangbaek, hyeonggae, ginseng, licorice, Macmundong and A schematic diagram of the experiment to confirm the therapeutic effect of atopic dermatitis of the mixed extract of Guernsey. After inducing atopic dermatitis using DNCB, KAJD was administered orally.
  • B is a graph quantifying the severity of AD induced skin lesions. The scores of the individual who evaluated the symptoms of erythema / bleeding, swelling, drought / drying, abrasion / erosion were summed up to indicate the total score.
  • C is the back skin thickness after treatment with KAJD or tacrolimus, and D is a graph showing the weight of the spleen. ### indicates P ⁇ 0.001 compared to the normal control group, and ** or *** indicates P ⁇ 0.01 or P ⁇ 0.001 compared to the DNCB treatment group, respectively.
  • A is an image of the back skin sections stained with hematoxylin and eosin (H & E)
  • B is an image of the back skin sections stained with toluidine blue, and the inflammatory cells in each image are purple dots. Marked as.
  • C is a graph showing the number of stained inflammatory cells
  • D is a graph showing the number of stained mast cells. The results are expressed as mean ⁇ SEM, ### indicates P ⁇ 0.001 compared to the normal control group, ** or *** indicates P ⁇ 0.01 or P ⁇ 0.001 compared to the DNCB treatment group, respectively.
  • FIG. 5 shows the effect of KAJD on blood cell composition in blood, including white blood cells (WBCs), lymphocytes, lymphocytes, monocytes, eosinophils, basophils and neutrophils. It is a graph showing the number of. The results are expressed as mean ⁇ SEM, where # or ### indicates P ⁇ 0.05 or P ⁇ 0.001, respectively, compared to the normal control, and ** or *** indicates P ⁇ 0.01 or P ⁇ 0.001, respectively, compared to the DNCB treatment group. Indicates.
  • RAW264.7 cells were not treated with LPS (1 ⁇ g / ml) or treated for 1 hour, followed by 50, 200 or 500 ⁇ g / ml of KAJD for an additional 24 hours.
  • the amount of NO present in the cell culture was measured with a grease reagent, and the levels of IL-6, IL-10 and TNF- ⁇ were measured by ELISA assay. Results are expressed as mean ⁇ SEM, # indicates P ⁇ 0.05 compared to the normal control group, * or *** indicates P ⁇ 0.05 or P ⁇ 0.001, respectively, compared to the DNCB treatment group.
  • FIG. 8 shows the effect of KAJD on the expression of IL-6 in splenocytes and HMC-1 cells.
  • Splenocytes were not treated with LPS (1 ⁇ g / ml) or were treated for 1 hour; HMC-1 cells were not treated with PMA (5 ng / ml) and ionomycin (Ionomycin, 500 ng / ml) or pretreated for 1 hour, then 50, 200 or 500 ⁇ g / ml for an additional 24 hours.
  • KAJD was treated.
  • Levels of IL-6 were measured by ELISA assay. The results are expressed as mean ⁇ SEM, ### indicates P ⁇ 0.001 compared to the normal control group, ** or *** indicates P ⁇ 0.01 or P ⁇ 0.001 compared to the DNCB treatment group, respectively.
  • A shows results for RAW264.7 cells, B for splenocytes, and C for HMC-1 cells.
  • RAW264.7 cells and splenic cells were treated with LPS (1 ⁇ g / ml) and HMC-1 cells with PMA (5 ng / ml) and ionomycin (500 ng / ml) for 1 hour, KAJD was treated for 24 hours. After completion of treatment, the viability of the cells was measured using a WST assay. The results are expressed as mean ⁇ SEM.
  • FIG. 11a and 11b show the result of comparing the reduced survival rate of inflammatory cells of the mixed herbal extract (KAJD; D) and the single herbal extract, A is inactivated HMC-1 cells, B is PMA (5 ng / ml ) And HMC-1 cells activated in inflammatory state by ionomycin (500 ng / ml). Survival of HMC-1 cells was measured via MTT assay. The results were expressed as mean ⁇ SEM, ### indicates that P ⁇ 0.001, *, ** and *** compared to the normal control group P ⁇ 0.05, P ⁇ 0.01 and P ⁇ 0.001, respectively.
  • Figure 12 shows the result of comparing the reduced survival rate of inflammatory cells of the mixed herbal extract (KAJD; D) and the single herbal extract.
  • Hwangbaek Mengmundong, mold opening, dried Guhwang, Gosam or licorice extract (100 ⁇ g / ml), or KAJD (D, 500 ⁇ g / ml) was treated with HMC-1 cells for 24 hours. Survival of HMC-1 cells was measured via MTT assay. The results were expressed as mean ⁇ SEM, and * indicates that P ⁇ 0.05 compared to the negative control.
  • Figure 13 shows the result of comparing the effect of reducing the expression of pro-inflammatory cytokines of mixed herbal extracts (KAJD; D) and single herbal extracts.
  • Hwangbaek Mengmundong, mold opening, dried Guangjihwang, red ginseng or licorice extract (100 ⁇ g / ml), or KAJD (D, 500 ⁇ g / ml) was treated for 24 hours.
  • MRNA levels of pro-inflammatory cytokines (IL-4, IL-6, IL-13 and TNF- ⁇ ) in activated HMC-1 mast cells were confirmed by PCR. At this time, GAPDH was used as a loading control.
  • Figure 14 shows the effect of reducing the survival rate of inflammatory cells according to the mixing ratio of the herbal medicine constituting KAJD.
  • D, D1 or D2 represents yellowish white, pulmonary dong, hyunggae, dried yellow ginseng, red ginseng and licorice, respectively 1: 1: 1: 1: 1: 1, 1: 1: 1: 1: 2: 1 or 1: 1: It means a mixed herbal extract containing in a weight ratio of 1: 1: 1: 2.
  • Survival of HMC-1 cells was measured via MTT assay. The results were expressed as mean ⁇ SEM, and * indicates that P ⁇ 0.05 compared to the negative control.
  • Figure 15 shows the effect of reducing the expression of pro-inflammatory cytokines according to the mixing ratio of the herbal medicine constituting KAJD.
  • D, D1 or D2 represents yellowish white, pulmonary dong, hyunggae, dried yellow ginseng, red ginseng and licorice, respectively 1: 1: 1: 1: 1: 1, 1: 1: 1: 1: 2: 1 or 1: 1: It means a mixed herbal extract containing in a weight ratio of 1: 1: 1: 2.
  • MRNA expression of pro-inflammatory cytokines IL-4, IL-6, IL-13 and TNF- ⁇ was confirmed in activated HMC-1 mast cells, where GAPDH was used as a loading control.
  • One aspect for achieving the above object provides a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of atopic dermatitis, including a mixed extract or fractions thereof of yellowish white, gyeonghwa, ginseng, licorice, pulsed and dried Guangji.
  • the mixed extracts of yellow, white, ginseng, licorice, lichen, pulse and geonjihwang effectively reduce the symptoms of atopic dermatitis
  • the extract can be used as a therapeutic agent for atopic dermatitis.
  • the combination of the yellowish white, gyeonggi, ginseng, licorice, pulsed dong, and dried fish yellowberry has not been known to have a therapeutic effect against atopic dermatitis, and was first identified by the present inventors.
  • yellow white refers to a dried herb of the bark of the yellow bark, and the herbal name Phellodendri Cortex , scientific name Phellodendron has wilsonii Taste is bitter and cold, and it is known to be used for nerves, bladder, large intestine, and symposium.
  • hyunghyeong is a dried herbaceous plant of Lamiaceae.
  • the herbal name Schizonepetae Spica scientific name Schizonepeta have tenuifolia Taste is bitter and warm in nature, it is known to act on menopause, liver, liver, digestion, antibacterial and so on.
  • ginseng of the present invention, the root of the skin of the ginseng peeled off, the herbal name Sophorae Radix , scientific name Sophora have flavescens It has a peculiar smell, persistent and weakness, and is very bitter and cold. It is known to be used for dysentery, lobulation, genital pruritus, itching of the skin, and pain when bladder fever.
  • Liquorice refers to dried roots or stems of licorice.
  • the herbal name Glycyrrhizae Radix scientific name Glycyrrhiza have a glabra It has a peculiar smell and tastes sweet. Licorice is known to harmonize the toxic effects of all drugs to make the drug appear well, to control the heat and morale of the book and to communicate all blood vessels, and to strengthen muscles and bones.
  • the term "gunjihwang" of the present invention dried root stems of the current state of Guhwang, a family of wild ginseng, Radix Rehmanniae Exsiccat or Rehmanniae Radix, scientific name Rehmanniae Exsiccat or Rehmannia adj have glutinosa It is characterized by sweet taste and cold nature. It is known to be used for diuretic effect, hypoglycemic effect, uterine bleeding, menstrual disorder, constipation, general weakness.
  • the mixed extracts of the baekbaek, hyeonggae, ginseng, licorice, makmundong and geonjihwang may be named mixed with "KAJD” or "KHU-ATO-JIN-D".
  • the mixed extract may be an extract of a mixture of yellow, red, red ginseng, licorice, mackmundong and dried kohwang yellow, and may also be a mixture of yellow, yellow, ginseng, licorice, lichen, ganmun-dong or dried kohwang extract.
  • the baekbaek, hyeonggae, red ginseng, licorice, mackmundong and geonjihwang may be used to buy commercially available, or can be used or collected in nature, but is not limited thereto.
  • the extract of the present invention may be an extract of a mixture of yellow, yellow, red ginseng, licorice, mackmundong and dry yellow sulfur with one or more solvents selected from the group consisting of water, alcohols having 1 to 4 carbon atoms and mixed solvents thereof.
  • extract refers to an extract obtained by extracting a mixture of yellow white, mold, red ginseng, licorice, macmundong, and dried yellow sulfur, a diluent or concentrate of the extract, a dried product obtained by drying the extract, and a crude product of the extract. And extracts of all formulations that can be formed using the extract itself and extracts, such as purified products or mixtures thereof.
  • the method of extracting the mixture is not particularly limited, and may be extracted according to methods commonly used in the art.
  • the kind of extraction solvent used to extract the mixture in the present invention is not particularly limited, and any solvent known in the art may be used.
  • Non-limiting examples of the extraction solvent may be water, alcohol or a mixed solvent thereof, and the like, these may be used alone or used in combination of one or more, specifically water may be used.
  • alcohol specifically, the C1-C4 alcohol can be used.
  • fraction refers to the result obtained by performing fractionation to separate a specific component or a specific group of components from a mixture comprising several various components.
  • the fractionation method of obtaining the fraction in the present invention is not particularly limited, and may be performed according to a method commonly used in the art.
  • Non-limiting examples of the fractionation method include a solvent fractionation method performed by treating various solvents, an ultrafiltration fractionation method performed through an ultrafiltration membrane having a constant molecular weight cut-off value, and various chromatography (size, charge, hydrophobicity). Or chromatographed fractions), and combinations thereof, which are prepared for separation according to affinity.
  • a method of obtaining a fraction from the extract by treating a predetermined solvent with an extract obtained by extracting the maple leaf of the present invention are prepared for separation according to affinity.
  • the kind of the fractionation solvent used to obtain the fraction in the present invention is not particularly limited, and any solvent known in the art may be used.
  • Non-limiting examples of the fractionation solvents include polar solvents such as water and alcohols having 1 to 4 carbon atoms; Nonpolar solvents such as hexane, ethyl acetate, chloroform and dichloromethane; Or a mixed solvent thereof. These may be used alone or in combination of one or more, but are not limited thereto.
  • extract or fraction may be prepared and used in the form of a dry powder after extraction, but is not limited thereto.
  • the mixture of yellowish white, mold opening, red ginseng, licorice, mackmundong and dried liquor is yellow-white, mold opening, red ginseng, licorice, mackmundong and dried lichen yellow
  • 0.5-1.5: 0.5-1.5: 0.5-1.5: 0.5-1.5: Weight ratio of 0.5 to 1.5 specifically, 0.7 to 1.3: 0.7 to 1.3: 0.7 to 1.3: 0.7 to 1.3: 0.7 to 1.3: 0.7 to 1.3, and more specifically 1: 1: 1: 1: 1: 1: 1. It may include, but is not limited thereto.
  • Atopic dermatitis (AD) of the present invention is a kind of autoimmune skin disease, and is a disease accompanied by skin swelling, eczema and itching. Although it is known that both environmental and genetic factors are involved in the development of the atopy, the exact pathogenesis has not been elucidated. In the present invention, the atopic dermatitis may be named in combination with "AD”.
  • prevention means any action that inhibits or delays atopic dermatitis by administration of a composition comprising the extract.
  • treatment refers to any action in which the symptoms of atopic dermatitis improve or benefit altered by administration of a composition comprising the extract.
  • the mixed extracts of yellowish white, hyungae, red ginseng, licorice, pulse and dongjiwang of the present invention is a clinical symptom of atopic dermatitis, erythema / hemorrhage, edema, seol / dry, abrasion / erosion, and skin Improving sclerosis and the like to an excellent degree (FIG. 1); Inhibits inflammatory or mast cells from infiltrating the epidermis and dermis (FIG. 3); Reduce the number of leukocytes (FIG.
  • the pharmaceutical composition of the present invention may include 0.001 to 80, specifically 0.001 to 70, more specifically 0.001 to 60% by weight based on the total weight of the composition, but is not limited thereto.
  • the pharmaceutical composition may further comprise a pharmaceutically acceptable carrier, excipient or diluent commonly used in the manufacture of the pharmaceutical composition, the carrier may comprise a non-naturally occuring carrier (carrier) Can be.
  • the carriers, excipients and diluents include lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, xylitol, erythritol, maltitol, starch, acacia gum, alginate, gelatin, calcium phosphate, calcium silicate, cellulose, methyl cellulose, microcrystalline Cellulose, polyvinyl pyrrolidone, water, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate and mineral oil.
  • the pharmaceutical composition may be a tablet, a pill, a powder, a granule, a capsule, a suspension, a solution, an emulsion, a syrup, a sterile aqueous solution, a non-aqueous solvent, a suspension, an emulsion, a lyophilized preparation, It can be formulated in the form of transdermal absorbents, gels, lotions, ointments, creams, patches, cataplasms, pastes, sprays, skin emulsions, skin suspensions, transdermal patches, drug-containing bandages or suppositories. .
  • Solid form preparations for oral administration include, but are not limited to, tablets, pills, powders, granules, capsules, and the like.
  • Such solid preparations may be prepared by mixing at least one excipient such as starch, calcium carbonate, sucrose, lactose, gelatin and the like.
  • lubricants such as magnesium stearate, talc and the like can also be used.
  • Formulations for parenteral administration include sterile aqueous solutions, non-aqueous solvents, suspensions, emulsions, lyophilized formulations and suppositories.
  • non-aqueous solvent and suspending agent propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oils such as olive oil, injectable esters such as ethyl oleate and the like can be used.
  • base of the suppository utopsol, macrogol, tween 61, cacao butter, laurin butter, glycerogelatin and the like can be used.
  • Another embodiment provides a method of treating atopic dermatitis comprising administering the pharmaceutical composition to a subject suspected of atopic dermatitis, except for humans.
  • the term “administration” means introducing a composition comprising said extract to an individual in a suitable manner.
  • the term "individual” means all animals, such as rats, mice, and livestock, including humans who may or may develop atopic dermatitis. As a specific example, it may be a mammal including a human.
  • the pharmaceutical composition of the present invention is administered in a pharmaceutically effective amount.
  • pharmaceutically effective amount means an amount sufficient to treat a disease at a reasonable benefit / risk ratio applicable to medical treatment, and an effective dose level refers to the type and severity of the subject, severity, age, sex, activity of the drug, Sensitivity to drug, time of administration, route of administration and rate of release, duration of treatment, factors including concurrent use of drugs, and other factors well known in the medical arts.
  • the mixed extract of baekbaek, hyeonggae, ginseng, licorice, mackmundong and dried liquor may be administered in a dose of 0.01 to 500 mg / kg, specifically 10 to 100 mg / kg, the administration is a day It may be administered once or in several divided doses.
  • compositions may be administered as individual therapeutic agents or in combination with other therapeutic agents and may be administered sequentially or simultaneously with conventional therapeutic agents. And single or multiple administrations. Taking all of the above factors into consideration, it is important to administer an amount that can obtain the maximum effect in a minimum amount without side effects, and can be easily determined by those skilled in the art.
  • the pharmaceutical composition may be administered orally or parenterally (eg, applied intravenously, subcutaneously, intraperitoneally, or topically) according to a desired method, and the dosage may be determined by the condition and weight of the patient, and by disease. Depending on the extent, drug form, route of administration, and time, it may be appropriately selected by those skilled in the art.
  • Another embodiment provides a food composition for improving atopic dermatitis comprising a mixed extract or a fraction thereof of baekbaek, hyeonggae, ginseng, licorice, mackmundong and geonjihwang.
  • the term "improvement” means any action that at least reduces the parameters associated with the condition to be treated by administration of a composition comprising said extract, eg, the extent of symptoms.
  • the term "food” of the present invention meat, sausage, bread, chocolate, candy, snacks, confectionery, pizza, ramen, other noodles, gum, dairy products including ice cream, various soups, drinks, tea, drinks, alcoholic beverages , Vitamin complexes, nutraceuticals and health foods, and includes all foods in the usual sense.
  • the food composition of the present invention can be ingested on a daily basis, since a high atopic dermatitis improvement effect can be expected, it can be very useful for health promotion purposes.
  • the functional food is the same term as a food for special health use (Food for special health use, FoSHU), in addition to the nutritional supply, the processed food, so that the bioregulatory function appears efficiently, high medical effect Means food.
  • Food for special health use Food for special health use, FoSHU
  • the term 'function (sex)' refers to obtaining a useful effect for health purposes such as nutrient control or physiological action on the structure and function of the human body.
  • the food of the present invention can be prepared by a method commonly used in the art, and the preparation can be prepared by adding the raw materials and ingredients commonly added in the art.
  • the formulation of the food may be prepared without limitation as long as the formulation is recognized as food.
  • Food composition of the present invention can be prepared in a variety of dosage forms, unlike the general medicine has the advantage that there is no side effect that can occur when taking a long-term use of the drug as a natural product, and because the portability is excellent, The food of the invention can be consumed as an adjuvant for enhancing the ameliorating effect of atopic dermatitis.
  • the health food refers to foods having active health maintenance or promotion effect as compared to general foods
  • the health supplement food refers to foods for health supplementation purposes.
  • nutraceutical, health food, dietary supplement are used.
  • the health functional food is a food prepared by adding the compound of the present invention to food materials such as beverages, teas, spices, gums, confections, or the like, encapsulated, powdered, suspensions, etc.
  • food materials such as beverages, teas, spices, gums, confections, or the like, encapsulated, powdered, suspensions, etc.
  • the food composition may further include a physiologically acceptable carrier, and the type of carrier is not particularly limited and may be any carrier that is commonly used in the art.
  • the food composition may include additional ingredients that are commonly used in food compositions to improve the smell, taste, time and the like.
  • additional ingredients may include vitamins A, C, D, E, B1, B2, B6, B12, niacin, biotin, folate, panthotenic acid, and the like.
  • minerals such as zinc (Zn), iron (Fe), calcium (Ca), chromium (Cr), magnesium (Mg), manganese (Mn), copper (Cu) and chromium (Cr); And amino acids such as lysine, tryptophan, cysteine, valine and the like.
  • the food composition is a preservative (potassium sorbate, sodium benzoate, salicylic acid, sodium dehydroacetic acid, etc.), fungicides (bleaching powder and highly bleaching powder, sodium hypochlorite, etc.), antioxidants (butylhydroxyanisol (BHA), butylhydride) Oxytoluene (BHT), etc.), colorant (such as tar pigment), colorant (sodium nitrite, sodium nitrite, etc.), bleach (sodium sulfite), seasoning (MSG glutamate, etc.), sweetener (ducin, cyclate, saccharin Foods such as sodium, etc.), fragrances (vanillin, lactones, etc.), swelling agents (alum, potassium D-tartrate, etc.), reinforcing agents, emulsifiers, thickeners (foils), coatings, gum herbicides, foam inhibitors, solvents, modifiers, etc. It may include food additives.
  • the additive may be
  • An example of the food composition of the present invention may be used as a health beverage composition, in which case it may contain various flavors or natural carbohydrates and the like as additional ingredients, such as a general beverage.
  • the above-mentioned natural carbohydrates include monosaccharides such as glucose and fructose; Disaccharides such as maltose and sucrose; Polysaccharides such as dextrin, cyclodextrin; Sugar alcohols such as xylitol, sorbitol, and erythritol.
  • Sweeteners include natural sweeteners such as taumartin, stevia extract; Synthetic sweeteners such as saccharin and aspartame;
  • the ratio of the natural carbohydrate may be generally about 0.01 to 0.04 g, specifically about 0.02 to 0.03 g per 100 ml of the health beverage composition of the present invention.
  • the health beverage composition includes various nutrients, vitamins, electrolytes, flavors, colorants, pectic acid, salts of pectic acid, alginic acid, salts of alginic acid, organic acids, protective colloid thickeners, pH regulators, stabilizers, preservatives, glycerin, Alcohol or carbonation agent and the like.
  • Others may contain fruit flesh for the production of natural fruit juices, fruit juice drinks, or vegetable drinks. These components can be used independently or in combination. Although the ratio of such an additive is not critical, it is generally selected from the range of 0.01 to 0.1 parts by weight per 100 parts by weight of the health beverage composition of the present invention.
  • Another aspect provides an quasi-drug composition for the prevention or amelioration of atopic dermatitis, comprising a mixed extract or fractions thereof of yellowish white, mold opening, red ginseng, licorice, pulsed dong and dried liquor.
  • the term "quasi drug” refers to a fiber, rubber product or the like used for treating, alleviating, treating or preventing a disease of a human or animal, has a weak action on the human body or does not directly act on the human body, Or non-machinery and the like, or any of the agents used for sterilization, insecticide, and similar purposes for the prevention of infection, for the purpose of diagnosing, treating, reducing, treating or preventing human or animal diseases.
  • articles to be used which are not instruments, machines or devices, and articles which are used for the purpose of pharmacologically affecting the structure and function of humans or animals, except those which are not instruments, machines or devices. Also includes supplies.
  • the mixed extracts of the white, yellow, ginseng, licorice, lichens, and lichens of the present invention when added to the quasi-drug composition for the purpose of preventing or improving atopy, can be added as it is or used with other quasi-drug components, and It can use suitably according to a method.
  • the mixed amount of the active ingredient may be suitably determined depending on the purpose of use (prevention, health or therapeutic treatment).
  • the quasi-drug composition is not particularly limited, but includes personal hygiene products, external skin preparations, antiseptic cleaning agents, shower foams, wet wipes, detergent soaps, hand washes, masks, or ointments.
  • the external skin preparations are not particularly limited thereto, but may be prepared in the form of ointments, lotions, sprays, patches, creams, powders, suspensions, gels or gels.
  • the personal hygiene product is not particularly limited thereto, but may be specifically a soap, a wet tissue, a tissue, a shampoo, a toothpaste, a hair care product, an air freshener gel or a cleaning gel.
  • Yet another aspect provides a cosmetic composition for preventing or ameliorating atopic dermatitis, including a mixed extract or a fraction thereof of yellowish white, hyungae, ginseng, licorice, lichens, ginmundong, and dried tannins.
  • the mixed extracts of the baekbaek, hyeonggae, ginseng, licorice, ganmundong and geonjihwang may include the extract in a ratio of 0.1% to 20% by weight based on the total weight of the composition, similar to the pharmaceutical composition. Specifically, the composition is included in the ratio of 0.1 wt% to 5 wt%, more specifically 0.4 to 0.6 wt%, and more specifically 0.5 wt%, based on the total weight of the composition, but is not limited thereto.
  • Components included in the cosmetic composition of the present invention includes components commonly used in cosmetic compositions in addition to the extract, for example, water, surfactants, moisturizers, lower alcohols, chelating agents, fungicides, antioxidants, preservatives, pigments And one or more additives selected from the group consisting of fragrances.
  • the cosmetic composition may be prepared in any of the formulations conventionally prepared, for example solutions, emulsions, suspensions, pastes, creams, lotions, gels, powders, sprays, surfactant-containing cleansing, oils, soaps, It may be formulated as a liquid detergent, bath, foundation, makeup base, essence, lotion, foam, pack, flexible water, sunscreen cream or sun oil, but is not limited thereto.
  • a solvent, solubilizer or emulsifier is used as the carrier component, such as water, ethanol, isopropanol, ethyl carbonate, ethyl acetate, benzyl alcohol, benzyl benzoate, propylene glycol, 1 Fatty acid esters of, 3-butylglycol oil, glycerol aliphatic ester, polyethylene glycol or sorbitan.
  • liquid carrier diluents such as water, ethanol or propylene glycol
  • suspending agents such as ethoxylated isostearyl alcohol, polyoxyethylene sorbitol ester and polyoxyethylene sorbitan ester, microcrystals Castle cellulose, aluminum metahydroxy, bentonite, tracant and the like can be used.
  • the formulation of the present invention is a paste, cream or gel, animal oils, vegetable oils, waxes, paraffins, starches, trachants, cellulose derivatives, polyethylene glycols, silicones, bentonites, silicas, talc or zinc oxide may be used as carrier components.
  • animal oils, vegetable oils, waxes, paraffins, starches, trachants, cellulose derivatives, polyethylene glycols, silicones, bentonites, silicas, talc or zinc oxide may be used as carrier components.
  • animal oils vegetable oils, waxes, paraffins, starches, trachants, cellulose derivatives, polyethylene glycols, silicones, bentonites, silicas, talc or zinc oxide
  • cellulose derivatives polyethylene glycols
  • silicones bentonites
  • silicas talc or zinc oxide
  • lactose, talc, silica, aluminum hydroxide, calcium silicate or polyamide powder may be used, in particular in the case of a spray, additionally chlorofluorohydrocarbon, propane Propellant such as butane or dimethyl ether.
  • the carrier component is an aliphatic alcohol sulfate, an aliphatic alcohol ether sulfate, a sulfosuccinic acid monoester, an isethionate, an imidazolinium derivative, a methyltaurate, a sarcosinate, a fatty acid amide.
  • Ether sulfates, alkylamidobetaines, aliphatic alcohols, fatty acid glycerides, fatty acid diethanolamides, vegetable oils, lanolin derivatives or ethoxylated glycerol fatty acid esters and the like can be used.
  • the components included in the cosmetic composition may be included in an amount generally used in the field of dermatology.
  • KAJD was manufactured in accordance with good manufacturing practices (GMP) at Hanpung Pharmaceuticals (Jeonju, Korea).
  • KAJD is yellowish (Phellodendri Cortex), mold opening (Spica Schizonepetae), Sophora flavescens (Sophorae Radix), licorice (Glycyrrhizae Radix), maekmundong (Liriopis Tuber) and Radix Rehmanniae Exsiccat ) as a hot water extract of a mixture containing a weight ratio of 1: 1: 1: 1: 1, and extracted with water, all solvent was removed using a vacuum condenser, and then freeze-dried to prepare an extract powder. The obtained powder was used by dissolving in negative water.
  • KAJD cream for animal experiments was prepared from ATEC & Co (Seoul, Korea).
  • AD Atopic dermatitis
  • DNCB 2,4-dinitrochlorobenzene
  • Many studies related to atopic dermatitis have used a model to induce atopic dermatitis using chemical antigens such as DNCB, 2,4-dinitrofluorobenzene, and 2,4,6-trinitrothlorobenzene (Dearman, RJ. Et al, Immunology, 1995, 86, 545-550).
  • mice (20 ⁇ 2 g) were used, and those purchased from Orient (Seongnam, Korea) were used. Mice were divided into any control or experimental group (untreated, DNCB, DNCB + tacrolimus, DNCB + KAJD) with 5 mice in each group. All mice were grown in an environment free of pathogens and allowed free intake of sterile distilled water and solid feed. All experiments involving mice were performed with the approval of Kyung Hee University Experimental Animal Ethics Committee (Approved Number: KHUASP (SE) -14-014).
  • mice's back skin was shaved and applied 100 ⁇ l of 2% DNCB twice daily with a 1 ⁇ 1 cm patch.
  • Tacrolimus an existing treatment of KAJD or AD, was applied to DNCB-applied skin periodically for 2 weeks. On day 28 all mice were sacrificed via CO 2 inhalation.
  • the clinical score of the KAJD treatment group was 3.13 ⁇ 1.27, and the tacrolimus treatment group score was 3.29 ⁇ 0.76, which is much lower than that of the DNCB treatment group, 5.5 ⁇ 1.38. Confirmed.
  • DNCB induced a severe degree of skin sclerosis, it was confirmed that this symptom is significantly reduced by treatment with KAJD or tacrolimus.
  • KAJD effectively alleviates the AD-like symptoms induced by DNCB, it was confirmed that the effect on the weight of skin sclerosis and spleen is better than tacrolimus used as a conventional drug.
  • H & E hematoxylin and eosin
  • T.B toluidine blue
  • DNCB was confirmed to induce the infiltration of mast cells in both the epidermis and the dermis
  • the treatment of KAJD was confirmed to reduce the number of mast cells infiltrated.
  • KAJD was confirmed that the effect of reducing the penetration of mast cells is better than tacrolimus.
  • WBCs white blood cells
  • mice whole blood samples of mice were collected from the heart and stored in Vacutainer TM tubes containing EDTA (BD science, NJ, USA).
  • mice treated with DNCB confirmed that the number of WBCs increased 3.5 times compared to the normal control.
  • KAJD or tacrolimus reduced the number of leukocytes increased by DNCB to a significant extent, and it was confirmed that the effect of reducing white blood cell count of KAJD was superior to tacrolimus.
  • KAJD and tacrolimus reduce the number of subtypes of WBCs, including lymphocytes, mononuclear leukocytes, eosinophils, basophils and neutrophils, to a similar extent to those of WBCs, and in particular KAJDs have a superior effect on the number of eosinophils that induce the severity of AD among these cells. It was confirmed to decrease to a degree.
  • Example 4-1 in vivo Blood analysis
  • AD Alzheimer's disease
  • expression levels were analyzed by sandwich ELISA using BD PharMingen mouse or human ELISA set (Pharmingen, San Diego, CA, USA). Plates were coated with capture antibody contained in ELISA coating buffer (sigma, Louis, MO, USA) and stored at 4 ° C. for one day. Plates were rinsed with 0.05% PBS-Tween 20 and then blocked with PBS with 10% FBS at 20 ° C. for 1 hour. Diluted standard antigen or sample in dilution buffer (PBS with 10% FBS) was placed in a plate and incubated at 20 ° C. for 1 hour.
  • Biotin-conjugated anti-mouse IgE and SAv-HRP streptavidin-horseradish peroxidase conjugate
  • SAv-HRP streptavidin-horseradish peroxidase conjugate
  • the DNCB-treated mice were found to increase the level of inflammatory cytokines of IL-6, IL-10 and IL-12, in particular IgE increased to a high level It was.
  • KAJD and tacrolimus were found to significantly inhibit the production of these serum IgE and inflammatory cytokines.
  • KAJD was found to reduce the levels of IgE and IL-6 induced by DNCB much more effectively than tacrolimus. The results indicate that KAJD inhibits skin inflammation by decreasing the concentration of serum IgE and pro-inflammatory cytokines increased by DNCB.
  • KAJD anti-inflammatory activity
  • the RAW 264.7 and HMC-1 cell lines were purchased from the Korea Cell Line Bank (Seoul, Korea). Each cell line was cultured in a medium containing 10% FBS (FBS, Welgene, Korea, Daegu) and 1% antibiotics (Ab, Welgene, Korea, Daegu), and Dulbecco's modified Eagle's medium (DMEM, Welgene, Korea, Daegu), respectively. ) Or Iscove's Modified Dulbecco's Medium (IMDM, Welgene, Korea, Daegu), and cultured in 5% CO 2 , 37 °C incubator.
  • FBS FBS
  • Welgene, Korea, Daegu 1% antibiotics
  • DMEM Dulbecco's modified Eagle's medium
  • IMDM Iscove's Modified Dulbecco's Medium
  • the spleen was placed in RPMI-1640 medium (including 10% FBS, 1% Ab and 0.05 mM Mecaptoethanol) and homogenized under aseptic conditions, and erythrocytes were removed with red blood cell lysis buffer (Sigma, Louis, MO, USA). The suspension was centrifuged, then resuspended in RPMI-1640, and the isolated splenocytes were cultured in an incubator at 5% CO 2 , 37 ° C.
  • RPMI-1640 medium including 10% FBS, 1% Ab and 0.05 mM Mecaptoethanol
  • each cytokine was measured by performing the ELISA described in Example 4-1, and NO production was measured using a Greases reagent kit (Promega, Madison, WI, USA). 150 ⁇ l of RAW 264.7 culture supernatant was mixed with 150 ⁇ l of grease reagent solution and transferred to a 96-well plate. The mixture was incubated for 30 minutes at room temperature, and then the optical density was measured at 570 nm using an ELISA reader (Versa Max, Molecular Devices, Calif., USA).
  • Example 4-2-1 confirms that KAJD reduces the protein expression level of proinflammatory cytokines
  • mRNA expression level was analyzed to determine whether KAJD regulates the expression of cytokines at the level of transcription.
  • Example 4-2-1 the cells of Example 4-2-1 were obtained by centrifugation, and RNA was separated from the pellets using an easy-blue RNA extraction kit (iNtRON Biotech, Korea). The amount of RNA isolated was measured by a NanoDrop ND-1000 spectrophotometer (NanoDrop Technologies Inc., Wilmington, DE, USA). 2 ⁇ g of total RNA isolated from each sample was reverse transcribed using a cDNA synthesis kit (TaKaRa, Otsu, Shinga, Japan).
  • PCR reaction mixture 20 ⁇ l was composed of DNA template, 10 pM of each gene specific primer, 10 ⁇ Taq buffer, 2.5 mM dNTP mixture, and 1 unit of Taq DNA synthase (Takara, Otsu, Shinga, Japan). .
  • the sequence of each primer is summarized in Table 1 below.
  • KAJD confirms that immune cells regulate the production of pro-inflammatory cytokines, thereby reducing AD-like symptoms induced by DNCB.
  • each cell was dispensed into 96-well culture plates at a number of 1 ⁇ 10 4 cells / well and incubated for 24 hours. Thereafter, in the presence or absence of various concentrations of KAJD, RAW 264.7 and splenocytes were treated with 1 ⁇ g / ml of LPS to activate the cells in an inflammatory state. After incubation for 24 hours, 10 ⁇ l of WST solution was added to each well, and the plate was incubated in dark conditions for an additional hour. Then, the optical density was measured at 450nm using an ELISA reader (Versa Max, Molecular Devices, CA, USA).
  • LPS-treated RAW 264.7 cells showed about 1.5-fold increase in cell viability compared to the control group.
  • KAJD treatment the survival rate of the cells increased by LPS treatment was increased. It was confirmed that the concentration-dependent decrease.
  • LPS-treated splenocytes increase the cell survival rate compared to the control group, when treated with a high concentration of KAJD of 1000 ⁇ g / ml or more of the cells increased by LPS treatment It was confirmed that the survival rate decreased in a concentration dependent manner.
  • HMC-1 cells do not increase the number of cells even when the inflammation-causing substances PMA and ionomycin (Ionomycin).
  • Ionomycin ionomycin
  • Example 6-1 Comparison of the effect of reducing the survival rate of inflammatory cells
  • HMC-1 cells which are mast cells, are treated with yellow white, paengmundong, mold opening, dried Guangji, red ginseng or licorice extract, or KAJD, and then treated with 5 ng / ml PMA and 500 ng / ml ionomycin. Each cell was activated in an inflammatory state. After incubation for 24 hours, the survival rate of HMC-1 was confirmed by MTT assay.
  • Example 6-2 Inflammatory cell Proinflammatory Comparison of cytokine expression reduction effect
  • HMC-1 cells were treated with yellow white, paengmundong, mold opening, dried guangji, red ginseng or licorice extract, or KAJD, and then treated with 5 ng / ml PMA and 500 ng / ml ionomycin to treat each cell. Activated in inflammatory state. After incubation for 24 hours, PCR was performed by the method according to Example 4-2-2.
  • the mixed herbal extract of the present invention can reduce inflammation to a greater extent than that of the extracts of Hwangbaek, Mengmundong, hyungae, geonjihwang, red ginseng or licorice alone.
  • Example 7-1 Comparison of the effect of reducing the survival rate of inflammatory cells
  • mixed herbal extracts including yellowish white, mackmundong, hyunggae, dry yellow sulfur, red ginseng and licorice in a weight ratio of 1: 1: 1: 1: 2: 1 or 1: 1: 1: 1: 1: 2 respectively (D1 or D2) was further prepared. Thereafter, in the presence or absence of 500 g / ml mixed herbal extract, HMC-1 cells were treated with 5 ng / ml PMA and 500 ng / ml ionomycin to activate each cell in an inflammatory state. . After incubation for 24 hours, the survival rate of HMC-1 mast cells was confirmed by MTT assay.
  • Example 7-2 Inflammatory cell Proinflammatory Comparison of cytokine expression reduction effect
  • mixed herbal extracts containing yellow white, makmundong, hyeonggae, geonjihwang, red ginseng and licorice in a 1: 1: 1: 1: 1, respectively 1: 1: Inflammatory cytokines IL-4, IL-6, IL-13 compared to mixed herbal extracts (D1 or D2) in a weight ratio of 1: 1: 2: 1 or 1: 1: 1: 1: 1: 2
  • mixed herbal extracts D1 or D2
  • the mixed herbal extract of the present invention can be seen that the excellent inflammation reduction effect, when containing the weight ratio of 1: 1: 1: 1: 1, white, yellow ginseng, ginseng, red ginseng, licorice there was.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)

Abstract

본 발명은 생약 혼합 추출물을 포함하는 아토피 피부염의 치료용 조성물에 관한 것으로, 구체적으로 황백, 형개, 고삼, 감초, 맥문동 및 건지황의 혼합 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 아토피 피부염의 예방 또는 치료용 약학적 조성물, 식품 조성물, 의약외품 조성물, 화장료 조성물, 및 상기 약학적 조성물을 이용한 아토피 피부염의 치료 방법에 관한 것이다. 본 발명의 복합 생약 추출물은 기존에 아토피 피부염의 치료제로 알려진 약제와 유사하거나 더 우수한 정도로 아토피 피부염을 예방, 개선 및 치료할 수 있는 효과가 있다.

Description

생약 혼합 추출물을 포함하는 아토피 피부염의 치료용 조성물
본 발명은 생약 혼합 추출물을 포함하는 아토피 피부염의 치료용 조성물에 관한 것으로, 구체적으로 황백, 형개, 고삼, 감초, 맥문동 및 건지황의 혼합 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 아토피 피부염의 예방 또는 치료용 약학적 조성물, 식품 조성물, 의약외품 조성물, 화장료 조성물, 및 상기 약학적 조성물을 이용한 아토피 피부염의 치료 방법에 관한 것이다.
아토피 피부염(Atopic dermatitis; AD)은 흔하게 발생하는 만성적인 염증 피부질환으로서, 종종 음식 알러지, 천식 또는 비염 등의 알러지 질환으로 진행되기도 한다. AD는 호산구의 수를 증가시키고, 혈청 IgE 수준을 증가시키며, TNF-α, 케모카인 등을 포함하는 전염증 사이토카인을 증가시키는 것이 특징이다(Simon D. et al., Allergy, 2004, 59, 561-570; Rousset F. et al., J Allergy Clin Immunol., 1991, 87, 58-69). 상기 IgE는 비만세포 활성화를 유도하는데, 이에 따라 히스타민(histamine) 전구체, 케모카인(chemokine)과 사이토카인(cytokine) 등을 포함하는 면역 매개자 등이 비만세포로부터 방출된다. 이러한 사이토카인은 AD의 급성기에 피부 병변에서 관찰되는 Th2-아형 T 세포 반응을 촉진하며, 이러한 Th2 및 Th1 반응의 조합에 의하여 AD의 만성기 동안 면역반응이 조절된다.
이러한 급성 AD에 대한 표준 치료제로서 국소 코르티코스테로이드(corticosteroids)가 사용되고 있으나, 피부 유전자(atrophogenic)에 부작용을 야기함이 보고되고 있어(Lubach D. et al., Dermatologica, 1989, 179, 67-72), 스테로이드를 포함하지 않고 오랜 기간 사용하여도 안전한 항염증 인자의 개발이 필요한 실정이다. 이와 관련하여, 현재는 국소 면역저해제인 타크로리무스(tacrolimus)가 AD의 치료에 사용되고 있다. 타크로리무스는 상대적으로 작은 분자크기를 가짐에 따라 피부에 효과적으로 침투하므로, 국소 연고 제제의 형태로 사용되고 있다(Akhavan A. et al., Semin Cutan Med Surg., 2008, 27, 151-155). 코르티코스테로이드에 의한 부작용의 일종인 콜라겐 합성 또는 피부 경화증을 야기하지 않으며, 얼굴 또는 목 등과 같이 피부가 얇고 매우 취약한 부분에도 안전하게 사용할 수 있다. 그러나, 타크로리무스를 오랜 기간 사용하면 효과가 반감되며, 부작용이 발생할 수 있다는 연구가 보고되고 있음에 따라, AD를 치료하기 위한 새로운 약제의 개발이 요구되고 있다.
이에 따라, 천연물을 이용한 아토피 피부염 치료제의 개발이 활발히 이루어지고 있으며, 진세노사이드 Rd가 강화된 발효 인삼 또는 홍삼 추출물을 포함하는 아토피 피부염 개선용 조성물(한국 공개특허 2016-0019190), 두충과 원지 추출물을 함유하는 아토피 피부용 화장품(한국 공개특허 2015-0065250), 좁쌀 추출물을 함유하는 아토피 피부염 개선용 조성물(한국 공개특허 2014-0063165) 등이 개발된 바 있다.
한편, 황백(Phellodendri Cortex), 형개(Schizonepetae Spica), 고삼(Sophorae Radix), 감초(Glycyrrhizae Radix), 맥문동(Liriopis Tuber) 또는 건지황(Radix Rehmanniae Exsiccat)은 한의학에서 사용되는 약재로서, 폐경, 간경, 소화작용, 향균작용, 자궁 출혈, 월경 장애, 이질, 대하, 음부소양증 등에 치료 효과가 있음이 알려져 있다. 그러나, 이의 조합을 약재로 사용한 바는 없었으며, 상기한 조합의 아토피 피부염에 대한 효과 또한 알려진 바 없었다.
본 발명자들은 천연물을 이용한 아토피 피부염의 치료제를 개발하기 위하여 예의 연구 노력한 결과, 황백, 형개, 고삼, 감초, 맥문동 및 건지황의 혼합 추출물이 면역반응을 억제함으로써 아토피 피부염을 치료할 수 있음을 확인하여, 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 하나의 목적은 황백, 형개, 고삼, 감초, 맥문동 및 건지황의 혼합 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 아토피 피부염의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 하나의 목적은 상기 약학적 조성물을 인간을 제외한 아토피 피부염 의심 개체에 투여하는 단계를 포함하는 아토피 피부염의 치료 방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 하나의 목적은 황백, 형개, 고삼, 감초, 맥문동 및 건지황의 혼합 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 아토피 피부염 개선용 식품 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 하나의 목적은 황백, 형개, 고삼, 감초, 맥문동 및 건지황의 혼합 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 아토피 피부염의 예방 또는 개선용 의약외품 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 하나의 목적은 황백, 형개, 고삼, 감초, 맥문동 및 건지황의 혼합 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 아토피 피부염의 예방 또는 개선용 의약외품 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 복합 생약 추출물은 기존에 아토피 피부염의 치료제로 알려진 약제와 유사하거나 더 우수한 정도로 아토피 피부염을 예방, 개선 및 치료할 수 있다.
도 1은 KAJD(황백, 형개, 고삼, 감초, 맥문동 및 건지황의 혼합 추출물)의 아토피 피부염 치료 효과를 확인하기 위한 실험의 개략도이다. DNCB를 이용하여 아토피 피부염을 유도한 이후, KAJD를 경구투여하였다.
도 2는 아토피 피부염(Atopic dermatitis; AD)에 대한 KAJD의 영향을 보여준다. A는 KAJD를 처리한 후에 관찰한 등 피부를 보여주는 이미지이다(n=8). B는 AD 유도 피부 병변의 심각성을 수치화한 그래프이다. 홍반/출혈, 부종, 인설/건조, 찰과상/미란의 각 증상을 평가한 개별의 점수를 합산하여 총점으로 나타내었다. C는 KAJD 또는 타크로리무스를 처리한 이후의 등 피부 두께를 나타내며, D는 지라의 무게를 나타내는 그래프이다. ###는 정상대조군 대비 P < 0.001임을 나타내며, ** 또는 ***는 DNCB 처리군 대비 각각 P < 0.01 또는 P < 0.001임을 나타낸다.
도 3은 KAJD의 처리 동안에 몸무게(A) 및 음식 섭취(B)에 대한 변화를 보여주는 그래프이다. 결과값은 평균 ± SEM으로 나타내었다(n=8).
도 4는 전염증세포 및 비만세포의 피부 침투에 대한 KAJD의 영향을 보여준다. A는 등 피부 절편을 헤마톡실린 및 에오신(hematoxylin 및 eosin; H&E)으로 염색한 이미지, B는 등 피부의 절편을 톨루이딘 블루(toluidine blue)로 염색한 이미지이며, 각 이미지에서 염증세포는 보라색 점으로 표시하였다. C는 염색된 염증세포의 수를 보여주는 그래프이고, D는 염색된 비만세포의 수를 보여주는 그래프이다. 결과값은 평균 ± SEM으로 나타내었고, ###는 정상대조군 대비 P < 0.001임을 나타내며, ** 또는 ***는 DNCB 처리군 대비 각각 P < 0.01 또는 P < 0.001임을 나타낸다.
도 5는 혈액 내 혈구 구성에 대한 KAJD의 영향을 보여주며, 백혈구(White Blood Cells; WBCs), 림프구(lymphocytes), 단핵백혈구(monocytes), 호산구(eosinophils), 호염구(basophils) 및 호중구(neutrophils)의 수를 보여주는 그래프이다. 결과값은 평균 ± SEM으로 나타내었고, # 또는 ###는 정상대조군 대비 각각 P < 0.05 또는 P < 0.001임을 나타내며, ** 또는 ***는 DNCB 처리군 대비 각각 P < 0.01 또는 P < 0.001임을 나타낸다.
도 6은 혈청 IgE 및 사이토카인의 발현량에 대한 KAJD의 영향을 보여준다. 혈액 내 IgE, IL-6, IL-10 및 IL-12의 수준은 ELISA 어세이를 이용하여 측정하였다. ###는 정상대조군 대비 P < 0.001임을 나타내며, * 또는 ***는 DNCB 처리군 대비 각각 P < 0.05 또는 P < 0.001임을 나타낸다.
도 7은 RAW264.7 세포에서, NO(nitric oxide)의 생산 및 전염증 사이토카인의 발현에 대한 KAJD의 영향을 보여준다. RAW264.7 세포에 LPS(1 ㎍/㎖)를 처리하지 않거나, 1시간 동안 처리하였으며, 이후 추가의 24시간 동안 50, 200 또는 500 ㎍/㎖의 KAJD를 처리하였다. 세포배양액에 존재하는 NO의 양은 그리스 시약으로 측정하였고, IL-6, IL-10 및 TNF-α의 수준은 ELISA 어세이로 측정하였다. 결과값은 평균 ± SEM으로 나타내었고, #는 정상대조군 대비 P < 0.05임을 나타내며, * 또는 ***는 DNCB 처리군 대비 각각 P < 0.05 또는 P < 0.001임을 나타낸다.
도 8은 지라세포(splenocyte) 및 HMC-1 세포에서, IL-6의 발현에 대한 KAJD의 영향을 보여준다. 지라세포에는 LPS(1 ㎍/㎖)를 처리하지 않거나, 1시간 동안 처리하였고; HMC-1 세포에는 PMA(5 ng/㎖) 및 이오노마이신(Ionomycin, 500 ng/㎖)를 처리하지 않거나, 1시간 동안 전처리하였으며, 이후 추가의 24시간 동안 50, 200 또는 500 ㎍/㎖의 KAJD를 처리하였다. IL-6의 수준은 ELISA 어세이로 측정하였다. 결과값은 평균 ± SEM으로 나타내었고, ###는 정상대조군 대비 P < 0.001임을 나타내며, ** 또는 ***는 DNCB 처리군 대비 각각 P < 0.01 또는 P < 0.001임을 나타낸다.
도 9는 지라세포(A) 또는 HMC-1 세포(B)에서, 전염증 사이토카인의 mRNA 발현에 대한 KAJD의 영향을 보여준다. 지라세포에는 LPS(1 ㎍/㎖)를 처리하지 않거나, 1시간 동안 처리하였고; HMC-1 세포에는 PMA(5 ng/㎖) 및 이오노마이신(500 ng/㎖)를 처리하지 않거나, 1시간 동안 전처리하였으며, 이후 추가의 24시간 동안 50, 200 또는 500 ㎍/㎖의 KAJD를 처리하였다. IL-4 또는 IL-6의 mRNA 수준은 RT-PCR 분석을 통해 측정하였다. 결과값은 평균 ± SEM으로 나타내었고, ###는 정상대조군 대비 P < 0.001임을 나타내며, ** 또는 ***는 DNCB 처리군 대비 각각 P < 0.01 또는 P < 0.001임을 나타낸다.
도 10은 염증 관련 세포의 생존율에 대한 KAJD의 영향을 보여준다. A는 RAW264.7 세포, B는 지라세포, 및 C는 HMC-1 세포에 대한 결과를 보여준다. RAW264.7 세포와 지라세포에는 LPS(1 ㎍/㎖), HMC-1 세포에는 PMA(5 ng/㎖)와 이오노마이신(500 ng/㎖)을 처리하여 1시간 동안 배양하였고, 다양한 농도의 KAJD를 24시간 동안 처리하였다. 처리 완료 후, WST 어세이를 이용하여 세포의 생존율을 측정하였다. 결과값은 평균 ± SEM으로 나타내었다. A에서 ###는 정상대조군 대비 P < 0.001, ***는 염증대조군 대비 P < 0.001; B에서 ##는 정상대조군 대비 P < 0.01, **는 염증대조군 대비 P < 0.01; C에서는 ###는 정상대조군 대비 P < 0.001, * 및 ***는 각각 염증대조군 P < 0.05 및 P < 0.001임을 나타낸다.
도 11a 및 도 11b는 혼합 생약 추출물(KAJD; D)과 단독 생약 추출물의 염증 세포의 생존율 감소 효과를 비교한 결과를 보여주며, A는 비활성화된 HMC-1 세포, B는 PMA(5 ng/㎖)와 이오노마이신(500 ng/㎖)에 의해 염증상태로 활성화된 HMC-1 세포에 대한 결과이다. HMC-1 세포의 생존율은 MTT 어세이를 통해 측정하였다. 결과값은 평균 ± SEM으로 나타내었고, ###는 정상대조군 대비 P < 0.001, *, ** 및 ***는 각각 염증대조군 P < 0.05, P < 0.01 및 P < 0.001임을 나타낸다.
도 12는 혼합 생약 추출물(KAJD; D)과 단독 생약 추출물의 염증 세포의 생존율 감소 효과를 비교한 결과를 보여준다. 황백, 맥문동, 형개, 건지황, 고삼 또는 감초 단독 추출물(100 ㎍/㎖), 또는 KAJD(D, 500 ㎍/㎖)를 HMC-1 세포에 24시간 동안 처리하였다. HMC-1 세포의 생존율은 MTT 어세이를 통해 측정하였다. 결과값은 평균 ± SEM으로 나타내었고, * 는 음성대조군 대비 P < 0.05임을 나타낸다.
도 13은 혼합 생약 추출물(KAJD; D)과 단독 생약 추출물의 전염증 사이토카인의 발현 감소 효과를 비교한 결과를 보여준다. 황백, 맥문동, 형개, 건지황, 고삼 또는 감초 단독 추출물(100 ㎍/㎖), 또는 KAJD(D, 500 ㎍/㎖)를 24시간 동안 처리하였다. 활성화된 HMC-1 비만세포에서 전염증 사이토카인(IL-4, IL-6, IL-13 및 TNF-α)의 mRNA 발현양을 PCR을 통해 확인하였다. 이때, GAPDH를 로딩 컨트롤(loading control)로 사용하였다.
도 14는 KAJD를 구성하는 생약의 혼합 비율에 따른 염증 세포의 생존율 감소 효과를 보여준다. 그래프에서, D, D1 또는 D2는 황백, 맥문동, 형개, 건지황, 고삼 및 감초를 각각 1:1:1:1:1:1, 1:1:1:1:2:1 또는 1:1:1:1:1:2의 중량비로 포함하는 혼합 생약 추출물을 의미한다. HMC-1 세포의 생존율은 MTT 어세이를 통해 측정하였다. 결과값은 평균 ± SEM으로 나타내었고, * 는 음성대조군 대비 P < 0.05임을 나타낸다.
도 15는 KAJD를 구성하는 생약의 혼합 비율에 따른 전염증 사이토카인의 발현 감소 효과를 보여준다. 그래프에서, D, D1 또는 D2는 황백, 맥문동, 형개, 건지황, 고삼 및 감초를 각각 1:1:1:1:1:1, 1:1:1:1:2:1 또는 1:1:1:1:1:2의 중량비로 포함하는 혼합 생약 추출물을 의미한다. 활성화된 HMC-1 비만세포에서 전염증 사이토카인(IL-4, IL-6, IL-13 및 TNF-α)의 mRNA 발현을 확인하였으며, 이때 GAPDH를 로딩 컨트롤로 사용하였다.
상기 목적을 달성하기 위한 하나의 양태는 황백, 형개, 고삼, 감초, 맥문동 및 건지황의 혼합 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 아토피 피부염의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명에서는, 황백, 형개, 고삼, 감초, 맥문동 및 건지황의 혼합 추출물은 아토피 피부염의 증상을 효과적으로 감소시킴을 확인함으로써, 상기 추출물은 아토피 피부염 치료제로 사용될 수 있음을 확인하였다. 상기 황백, 형개, 고삼, 감초, 맥문동 및 건지황의 조합이 아토피 피부염에 대하여 치료효과를 나타냄은 이전에 알려진 바 없었으며, 본 발명자들에 의하여 처음으로 규명되었다.
본 발명의 용어, "황백"은 황벽나무의 껍질을 말린 약재로서, 생약명 Phellodendri Cortex, 학명 Phellodendron wilsonii을 갖는다. 맛은 쓰고 성질은 찬 것이 특징이며, 신경, 방광경, 대장경, 심포경 등에 사용한다고 알려져 있다.
본 발명의 용어, "형개"는 꿀풀과 식물인 형개의 전초를 말린 것으로, 생약명 Schizonepetae Spica, 학명 Schizonepeta tenuifolia을 갖는다. 맛은 쓰고 성질은 따뜻한 것이 특징이며, 폐경, 간경 등에 작용하고 소화작용, 향균작용 등을 나타낸다고 알려져 있다.
본 발명의 용어, "고삼"은 고삼의 주피를 벗긴 뿌리로, 생약명 Sophorae Radix, 학명 Sophora flavescens을 갖는다. 특이한 냄새가 있고 잔류성이며 약성은 매우 쓰고 찬 것이 특징이며, 하초습열로 인한 이질, 대하, 음부소양증, 피부가려움증 등에 사용하고 방광열로 인하여 통증이 있을 때 사용한다고 알려져 있다.
본 발명의 용어, "감초"는 감초의 뿌리 또는 줄기를 말린 것으로, 생약명 Glycyrrhizae Radix, 학명 Glycyrrhiza glabra을 갖는다. 특이한 냄새가 나며 맛은 단 것이 특징이다. 감초는 모든 약의 독성을 조화시켜서 약효가 잘 나타나게 하고, 장부의 한열과 사기를 다스리고 모든 혈맥의 소통을 잘 시키며, 근육과 뼈를 튼튼히 한다고 알려져 있다.
본 발명의 용어, "건지황"은 현삼과 식물인 지황의 뿌리줄기를 말린 것으로, 생약명 Radix Rehmanniae Exsiccat 또는 Rehmanniae Radix, 학명 Rehmanniae Exsiccat 또는 Rehmannia adj glutinosa를 갖는다. 맛은 달고 성질은 찬 것이 특징이며, 이뇨작용, 혈당량 강하 작용 등을 나타내고 자궁 출혈, 월경 장애, 변비, 일반 허약증 등에 사용한다고 알려져 있다.
본 발명에서, 상기 황백, 형개, 고삼, 감초, 맥문동 및 건지황의 혼합 추출물은 "KAJD" 또는 "KHU-ATO-JIN-D"와 혼용되어 명명될 수 있다. 상기 혼합 추출물은 황백, 형개, 고삼, 감초, 맥문동 및 건지황의 혼합물의 추출물일 수 있으며, 또한 황백, 형개, 고삼, 감초, 맥문동 또는 건지황 추출물의 혼합물일 수 있다.
본 발명에서, 상기 황백, 형개, 고삼, 감초, 맥문동 및 건지황은 상업적으로 판매되는 것을 구입하여 사용하거나, 자연에서 채취 또는 재배된 것을 사용할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 추출물은 황백, 형개, 고삼, 감초, 맥문동 및 건지황의 혼합물을 물, 탄소수 1 내지 4의 알코올 및 이들의 혼합 용매로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 용매로 추출한 것일 수 있다.
본 발명의 용어, "추출물"이란, 황백, 형개, 고삼, 감초, 맥문동 및 건지황의 혼합물을 추출 처리하여 얻어지는 추출액, 상기 추출액의 희석액이나 농축액, 상기 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물, 상기 추출액의 조정제물이나 정제물, 또는 이들의 혼합물 등, 추출액 자체 및 추출액을 이용하여 형성 가능한 모든 제형의 추출물을 포함한다.
본 발명의 황백, 형개, 고삼, 감초, 맥문동 및 건지황의 혼합 추출물에 있어서, 상기 혼합물을 추출하는 방법은 특별히 제한되지 않으며, 당해 기술 분야에서 통상적으로 사용하는 방법에 따라 추출할 수 있다. 상기 추출 방법의 비제한적인 예로는, 열수 추출법, 초음파 추출법, 여과법, 환류 추출법 등을 들 수 있으며, 이들은 단독으로 수행되거나 2종 이상의 방법을 병용하여 수행될 수 있다.
본 발명에서 상기 혼합물을 추출하는 데 사용되는 추출 용매의 종류는 특별히 제한되지 않으며, 당해 기술 분야에서 공지된 임의의 용매를 사용할 수 있다. 상기 추출 용매의 비제한적인 예로는 물, 알코올 또는 이들의 혼합 용매 등을 들 수 있고, 이들은 단독으로 사용되거나 1종 이상 혼합하여 사용될 수 있으며, 구체적으로 물이 사용될 수 있다. 알코올을 용매로 사용하는 경우에는 구체적으로 탄소수 1 내지 4의 알코올을 사용할 수 있다.
본 발명의 용어, "분획물"은 여러 다양한 구성 성분들을 포함하는 혼합물로부터 특정 성분 또는 특정 성분 그룹을 분리하기 위하여 분획을 수행하여 얻어진 결과물을 의미한다.
본 발명에서 상기 분획물을 얻는 분획 방법은 특별히 제한되지 않으며, 당해 기술 분야에서 통상적으로 사용하는 방법에 따라 수행될 수 있다. 상기 분획 방법의 비제한적인 예로는, 다양한 용매를 처리하여 수행하는 용매 분획법, 일정한 분자량 컷-오프 값을 갖는 한외 여과막을 통과시켜 수행하는 한외여과 분획법, 다양한 크로마토그래피(크기, 전하, 소수성 또는 친화성에 따른 분리를 위해 제작된 것)를 수행하는 크로마토그래피 분획법, 및 이들의 조합 등이 있다. 구체적으로, 본 발명의 단풍나무 잎을 추출하여 얻은 추출물에 소정의 용매를 처리하여 상기 추출물로부터 분획물을 얻는 방법을 들 수 있다.
본 발명에서 상기 분획물을 얻는 데 사용되는 분획 용매의 종류는 특별히 제한되지 않으며, 당해 기술 분야에서 공지된 임의의 용매를 사용할 수 있다. 상기 분획 용매의 비제한적인 예로는 물, 탄소수 1 내지 4의 알코올 등의 극성 용매; 헥산(Hexan), 에틸 아세테이트(Ethyl acetate), 클로로포름(Chloroform), 디클로로메탄(Dichloromethane) 등의 비극성 용매; 또는 이들의 혼합용매 등을 들 수 있다. 이들은 단독으로 사용되거나 1종 이상 혼합하여 사용될 수 있지만, 이에 제한되는 것은 아니다.
또한, 상기 추출물 또는 분획물은 추출 후 건조 분말 형태로 제조되어 사용될 수 있지만, 이제 제한되는 것은 아니다.
본 발명에서, 황백, 형개, 고삼, 감초, 맥문동 및 건지황의 혼합물은 황백, 형개, 고삼, 감초, 맥문동 및 건지황을 0.5 내지 1.5 : 0.5 내지 1.5 : 0.5 내지 1.5 : 0.5 내지 1.5 : 0.5 내지 1.5 : 0.5 내지 1.5의 중량비, 구체적으로 0.7 내지 1.3 : 0.7 내지 1.3 : 0.7 내지 1.3 : 0.7 내지 1.3 : 0.7 내지 1.3 : 0.7 내지 1.3의 중량비, 더욱 구체적으로 1 : 1 : 1 : 1 : 1 : 1의 중량비로 포함할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 용어, "아토피 피부염"(Atopic dermatitis; AD)은 자가면역 피부질환의 일종으로서, 피부의 부스럼, 습진, 간지러움을 동반하는 질병이다. 상기 아토피의 발병에는 환경적 요인 및 유전학적 요인 모두가 관여하는 것으로 알려져 있으나, 정확한 발병기전은 규명되지 않았다. 본 발명에서, 상기 아토피 피부염은 "AD"와 혼용되어 명명될 수 있다.
본 발명의 용어, "예방"은 상기 추출물을 포함하는 조성물의 투여로 아토피 피부염을 억제 또는 지연시키는 모든 행위를 의미한다.
본 발명의 용어, "치료"는 상기 추출물을 포함하는 조성물의 투여로 아토피 피부염의 증세가 호전되거나 이롭게 변경되는 모든 행위를 의미한다.
본 발명의 구체적인 일 실시예에서, 본 발명의 황백, 형개, 고삼, 감초, 맥문동 및 건지황의 혼합 추출물은 아토피 피부염의 임상적인 증상인 홍반/출혈, 부종, 인설/건조, 찰과상/미란, 및 피부 경화증 등을 우수한 정도로 개선하며(도 1); 염증세포 또는 비만세포가 표피 및 진피에 침투하는 것을 저해하며(도 3); 백혈구의 수를 감소시키며(도 4); 혈청 IgE를 비롯하여 IL-6, IL-10 및 IL-12의 염증 사이토카인의 수준을 감소시킴을 확인하였다(도 5). 이러한 효과는 아토피 피부염에 대하여 기존 약제로 사용되는 타크로리무스보다 더 우수함을 확인하였는데, 이는 상기 추출물은 아토피 피부염의 예방 또는 치료에 유용하게 사용될 수 있음을 시사하는 것이다.
본 발명의 약학적 조성물은 조성물 총 중량에 대하여 상기 추출물을 0.001 내지 80, 구체적으로 0.001 내지 70, 더욱 구체적으로 0.001 내지 60 중량%로 포함할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
또한, 상기 약학적 조성물은 약학 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 약학적으로 허용가능한 담체, 부형제 또는 희석제를 추가로 포함할 수 있고, 상기 담체는 비자연적 담체(non-naturally occuring carrier)를 포함할 수 있다. 상기 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다.
또한, 상기 약학적 조성물은 각각 통상의 방법에 따라 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제, 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제, 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 경피흡수제, 겔제, 로션제, 연고제, 크림제, 첩부제, 카타플라스마제, 페이스트제, 스프레이, 피부 유화액, 피부 현탁액, 경피 전달성 패치, 약물 함유 붕대 또는 좌제의 형태로 제형화하여 사용할 수 있다. 구체적으로, 제형화할 경우 통상 사용하는 충진제, 중량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제될 수 있다. 경구투여를 위한 고형제제로는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 이러한 고형제제는 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면, 전분, 칼슘 카보네이트, 수크로오스, 락토오스, 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있다. 또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제 등도 사용될 수 있다. 경구를 위한 액상물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등을 첨가하여 조제될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제는 멸균된 수용액, 비수성 용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제 및 좌제를 포함한다. 비수성 용제 및 현탁제로는 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 오일, 에틸올레이트와 같은 주사가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔, 마크로골, 트윈 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로젤라틴 등이 사용될 수 있다.
다른 하나의 양태는 상기 약학적 조성물을 인간을 제외한 아토피 피부염 의심 개체에 투여하는 단계를 포함하는 아토피 피부염의 치료 방법을 제공한다.
본 발명의 용어, "투여"는 적절한 방법으로 개체에게 상기 추출물을 포함하는 조성물을 도입하는 것을 의미한다.
본 발명의 용어, "개체"는 아토피 피부염이 발병하였거나 발병할 수 있는 인간을 포함한 쥐, 생쥐, 가축 등의 모든 동물을 의미한다. 구체적인 예로, 인간을 포함한 포유동물일 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여한다. 상기 용어, "약학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효 용량 수준은 개체 종류 및 중증도, 연령, 성별, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료 기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 예를 들면, 상기 황백, 형개, 고삼, 감초, 맥문동 및 건지황의 혼합 추출물은 1일 0.01 내지 500 mg/kg으로, 구체적으로 10 내지 100 mg/kg의 용량으로 투여할 수 있으며, 상기 투여는 하루에 한 번 또는 수회 나누어 투여할 수도 있다.
상기 약학적 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있다. 그리고 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기 요소를 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.
또한, 상기 약학적 조성물은 목적하는 방법에 따라 경구 투여하거나 비경구 투여(예를 들어, 정맥 내, 피하, 복강 내 또는 국소에 적용)할 수 있으며, 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 시간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다.
또 다른 하나의 양태는 황백, 형개, 고삼, 감초, 맥문동 및 건지황의 혼합 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 아토피 피부염 개선용 식품 조성물을 제공한다.
이때, 상기 황백, 형개, 고삼, 감초, 맥문동, 건지황, 추출물, 분획물 및 아토피 피부염의 정의는 상기에서 설명한 바와 같다.
본 발명의 용어, "개선"은 상기 추출물을 포함하는 조성물의 투여로 치료되는 상태와 관련된 파라미터, 예를 들면 증상의 정도를 적어도 감소시키는 모든 행위를 의미한다.
본 발명의 용어, "식품"은 육류, 소시지, 빵, 초콜릿, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알코올음료, 비타민 복합제, 건강 기능 식품 및 건강 식품 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 식품을 모두 포함한다.
본 발명의 식품 조성물은 일상적으로 섭취하는 것이 가능하기 때문에 높은 아토피 피부염 개선 효과를 기대할 수 있으므로, 건강 증진 목적으로 매우 유용하게 사용될 수 있다.
상기 건강 기능(성) 식품(functional food)이란, 특정보건용 식품(food for special health use, FoSHU)과 동일한 용어로, 영양 공급 외에도 생체조절기능이 효율적으로 나타나도록 가공된 의학, 의료효과가 높은 식품을 의미한다. 여기서 '기능(성)'이라 함은 인체의 구조 및 기능에 대하여 영양소를 조절하거나 생리학적 작용 등과 같은 보건용도에 유용한 효과를 얻는 것을 의미한다. 본 발명의 식품은 당 업계에서 통상적으로 사용되는 방법에 의하여 제조가능하며, 상기 제조시에는 당 업계에서 통상적으로 첨가하는 원료 및 성분을 첨가하여 제조할 수 있다. 또한, 상기 식품의 제형은 식품으로 인정되는 제형이면 제한없이 제조될 수 있다. 본 발명의 식품용 조성물은 다양한 형태의 제형으로 제조될 수 있으며, 일반 약품과는 달리 천연물을 원료로 하여 약품의 장기 복용 시 발생할 수 있는 부작용 등이 없는 장점이 있고, 휴대성이 뛰어나므로, 본 발명의 식품은 아토피 피부염의 개선 효과를 증진시키기 위한 보조제로 섭취가 가능하다.
상기 건강 식품(health food)은 일반식품에 비해 적극적인 건강유지나 증진 효과를 가지는 식품을 의미하고, 건강보조식품(health supplement food)은 건강보조 목적의 식품을 의미한다. 경우에 따라, 건강 기능 식품, 건강식품, 건강보조식품의 용어는 호용된다.
구체적으로, 상기 건강 기능 식품은 본 발명의 화합물을 음료, 차류, 향신료, 껌, 과자류 등의 식품 소재에 첨가하거나, 캡슐화, 분말화, 현탁액 등으로 제조한 식품으로, 이를 섭취할 경우 건강상 특정한 효과를 가져오는 것을 의미하나, 일반 약품과는 달리 식품을 원료로 하여 약품의 장기 복용 시 발생할 수 있는 부작용이 없는 장점이 있다.
상기 식품 조성물은 생리학적으로 허용 가능한 담체를 추가로 포함할 수 있는데, 담체의 종류는 특별히 제한되지 않으며 당해 기술 분야에서 통상적으로 사용되는 담체라면 어느 것이든 사용할 수 있다.
또한, 상기 식품 조성물은 식품 조성물에 통상 사용되어 냄새, 맛, 시각 등을 향상시킬 수 있는 추가 성분을 포함할 수 있다. 예들 들어, 비타민 A, C, D, E, B1, B2, B6, B12, 니아신(niacin), 비오틴(biotin), 폴레이트(folate), 판토텐산(panthotenic acid) 등을 포함할 수 있다. 또한, 아연(Zn), 철(Fe), 칼슘(Ca), 크롬(Cr), 마그네슘(Mg), 망간(Mn), 구리(Cu), 크륨(Cr) 등의 미네랄; 및 라이신, 트립토판, 시스테인, 발린 등의 아미노산을 포함할 수 있다.
또한, 상기 식품 조성물은 방부제(소르빈산 칼륨, 벤조산나트륨, 살리실산, 데히드로초산나트륨 등), 살균제(표백분과 고도 표백분, 차아염소산나트륨 등), 산화방지제(부틸히드록시아니졸(BHA), 부틸히드록시톨류엔(BHT) 등), 착색제(타르색소 등), 발색제(아질산 나트륨, 아초산 나트륨 등), 표백제(아황산나트륨), 조미료(MSG 글루타민산나트륨 등), 감미료(둘신, 사이클레메이트, 사카린, 나트륨 등), 향료(바닐린, 락톤류 등), 팽창제(명반, D-주석산수소칼륨 등), 강화제, 유화제, 증점제(호료), 피막제, 검기초제, 거품억제제, 용제, 개량제 등의 식품 첨가물(food additives)을 포함할 수 있다. 상기 첨가물은 식품의 종류에 따라 선별되고 적절한 양으로 사용될 수 있다.
본 발명의 식품 조성물의 일 예로 건강음료 조성물로 사용될 수 있으며, 이 경우 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드; 말토스, 슈크로스와 같은 디사카라이드; 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드; 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜일 수 있다. 감미제는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제; 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 건강음료 조성물 100 ml 당 일반적으로 약 0.01 ~ 0.04 g, 구체적으로 약 0.02 ~ 0.03 g이 될 수 있다.
상기 외에 건강음료 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산, 펙트산의 염, 알긴산, 알긴산의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올 또는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 천연 과일주스, 과일주스 음료, 또는 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 혼합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명의 건강음료 조성물 100 중량부당 0.01 ~ 0.1 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
또 다른 하나의 양태는 목적은 황백, 형개, 고삼, 감초, 맥문동 및 건지황의 혼합 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 아토피 피부염의 예방 또는 개선용 의약외품 조성물을 제공한다.
이때, 상기 황백, 형개, 고삼, 감초, 맥문동, 건지황, 추출물, 분획물, 아토피 피부염, 예방 및 개선의 정의는 상기에서 설명한 바와 같다.
본 발명의 용어, "의약외품"은 사람이나 동물의 질병을 치료, 경감, 처치 또는 예방할 목적으로 사용되는 섬유, 고무제품 또는 이와 유사한 것, 인체에 대한 작용이 약하거나 인체에 직접 작용하지 않으며, 기구 또는 기계가 아닌 것과 이와 유사한 것, 감염 예방을 위하여 살균, 살충 및 이와 유사한 용도로 사용되는 제제 중 하나에 해당하는 물품으로서, 사람이나 동물의 질병을 진단, 치료, 경감, 처치 또는 예방할 목적으로 사용하는 물품 중 기구, 기계 또는 장치가 아닌 것 및 사람이나 동물의 구조와 기능에 약리학적 영향을 줄 목적으로 사용하는 물품 중 기구, 기계 또는 장치가 아닌 것을 제외한 물품을 의미하며, 피부 외용제 및 개인위생용품도 포함한다.
본 발명의 황백, 형개, 고삼, 감초, 맥문동 및 건지황의 혼합 추출물은 아토피의 예방 또는 개선을 목적으로 의약외품 조성물에 첨가할 경우, 상기 추출물을 그대로 첨가하거나 다른 의약외품 성분과 함께 사용할 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용할 수 있다. 유효 성분의 혼합양은 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다.
상기 의약외품 조성물은 특별히 이에 제한되지 않으나, 개인위생용품, 피부외용제, 소독청결제, 샤워폼, 물티슈, 세제비누, 핸드워시, 마스크 또는 연고제를 포함한다. 상기 피부외용제는 특별히 이에 제한되지 않으나, 구체적으로 연고제, 로션제, 스프레이제, 패취제, 크림제, 산제, 현탁제, 겔제 또는 젤의 형태로 제조되어 사용될 수 있다. 상기 개인위생용품에는 특별히 이에 제한되지 않으나, 구체적으로 비누, 물티슈, 휴지, 샴푸, 치약, 모발 손질 제품, 에어프레쉬너 겔 또는 세정 겔일 수 있다.
또 다른 하나의 양태는 황백, 형개, 고삼, 감초, 맥문동 및 건지황의 혼합 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 아토피 피부염의 예방 또는 개선용 화장료 조성물을 제공한다.
이때, 상기 황백, 형개, 고삼, 감초, 맥문동, 건지황, 추출물, 분획물, 아토피 피부염, 예방 및 개선의 정의는 상기에서 설명한 바와 같다.
상기 황백, 형개, 고삼, 감초, 맥문동 및 건지황의 혼합 추출물은 상기 조성물에 대하여 약학적 조성물과 마찬가지로 상기 추출물을 조성물 총 중량에 대하여 0.1 중량% 내지 20 중량%의 비율로 포함할 수 있다. 구체적으로 조성물 총 중량에 대하여 0.1 중량% 내지 5 중량%, 더욱 구체적으로 0.4 내지 0.6 중량%, 더더욱 구체적으로 0.5 중량%의 비율로 포함되나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 성분으로는 상기 추출물 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함하며, 예를 들어 물, 계면활성제, 보습제, 저급알코올, 킬레이트제, 살균제, 산화방지제, 방부제, 색소 및 향료로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 첨가제를 추가로 포함할 수 있다.
또한, 상기 화장료 조성물은 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될수 있으며, 예를 들어 용액, 유탁액, 현탁액, 페이스트, 크림, 로션, 겔, 파우더, 스프레이, 계면활성제-함유 클린징, 오일, 비누, 액체 세정료, 입욕제, 파운데이션, 메이크업베이스, 에센스, 화장수, 폼, 팩, 유연수, 선스크린 크림 또는 선오일 등으로 제형화 될 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.
본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.
본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.
또한, 상기 화장료 조성물에 포함되는 성분들은 피부 과학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 포함될 수 있다.
이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.
제조예 1. KAJD의 제조
KAJD는 한풍제약(한국, 전주)에서 우수제조관리기준(good manufacturing practices; GMP)에 따라 제조하였다. KAJD는 황백(Phellodendri Cortex), 형개(Schizonepetae Spica), 고삼(Sophorae Radix), 감초(Glycyrrhizae Radix), 맥문동(Liriopis Tuber) 및 건지황(Radix Rehmanniae Exsiccat) 을 1:1:1:1:1:1의 중량비로 포함하는 혼합물의 열수 추출물로서, 물에서 추출한 후 감압농축기를 이용하여 용매를 모두 제거한 후, 동결 건조하여 추출 분말을 제조하였다. 수득한 상기 분말은 음수에 녹여 사용하였다. 동물 실험을 위한 KAJD 크림은 ATEC&Co(한국, 서울)에서 제조된 것을 사용하였다.
실시예 1. KAJD의 아토피 피부염 개선 효능 평가
아토피 피부염(Atopic dermatitis; AD)에 대한 KAJD의 영향을 조사하기 위하여, BALB/c 마우스의 피부에 DNCB(2,4-dinitrochlorobenzene)를 도포하여 AD 유사 증상을 유도하였다. 많은 아토피 피부염 관련 연구에서는 DNCB, 2,4-dinitrofluorobenzene, 2,4,6-trinitrothlorobenzene 등의 화학적 항원을 이용하여 아토피와 유사한 형태의 피부염을 유발시킨 모델을 이용하고 있다(Dearman, RJ. et al, Immunology, 1995, 86, 545-550).
구체적으로, 6주령의 BALB/c 마우스(20±2g)를 이용하였으며, Orient 사(성남, 한국)에서 구입한 것을 사용하였다. 마우스를 임의의 대조군 또는 실험군(무처리, DNCB, DNCB+타크로리무스, DNCB+KAJD)으로 나누었고, 각 군마다 5마리의 마우스를 두었다. 모든 마우스는 병원균이 없는 환경에서 생육하였고, 멸균 증류수와 고형 사료를 자유롭게 섭취할 수 있도록 하였다. 마우스와 관련한 모든 실험은 경희대학교 실험동물윤리위원회(승인번호 : KHUASP (SE)-14-014)의 승인을 받아 수행하였다.
이후, 도 1에서 나타낸 바와 같은 계획을 통해 실험을 수행하였다. AD와 유사한 피부 병변을 유도하기 위하여, 마우스의 등 피부를 면도하였고, 일주일에 두 번씩 1×1 cm의 패취를 이용하여 100 ㎕의 2% DNCB를 도포하였다. KAJD 또는 AD의 기존 치료제인 타크로리무스(tacrolimus)는 DNCB가 도포된 피부에 2주 동안 주기적으로 도포하였다. 28일째 되는 날, 모든 마우스를 CO2 흡입을 통해 희생시켰다.
KAJD에 의한 BALB/c 마우스의 피부 변화를 조사하기 위하여, 일주일에 한 번씩, 4주 동안 임상적인 관찰을 수행하였다. 홍반/출혈, 부종, 인설/건조, 찰과상/미란으로 나타나는 AD와 유사한 등 피부 병변의 심각성은 0 내지 3의 범위에서 점수를 매겼다(0: 없음, 1: 가벼움, 2: 중간, 3: 심각). 각 점수를 합산하여 0 내지 12의 범위로 임상적 피부 점수를 정의하였다.
그 결과, 도 2의 A에서 볼 수 있듯이, DNCB를 도포한 이후에는 홍반/출혈, 부종, 인설/건조, 찰과상/미란으로 나타나는 상당한 정도의 피부 과민증이 유도됨을 확인하였다. 피부 병변의 심각한 정도는 마우스를 희생시킨 이후에도 지속됨을 확인하였다. 그러나, KAJD 또는 타크로리무스의 국소 도포는 피부의 심각한 증상을 현저히 감소시킴을 확인하였다.
아울러, 도 2의 B에서 볼 수 있듯이, KAJD 처리군의 임상적 점수는 3.13±1.27이었고, 타크로리무스 처리군의 점수는 3.29±0.76이었으며, 이는 DNCB 처리군의 점수인 5.5±1.38보다 훨씬 낮은 수준임을 확인하였다.
또한, 도 2의 C에서 볼 수 있듯이, DNCB는 심각한 정도의 피부 경화증을 유도하였는데, 이러한 증상은 KAJD 또는 타크로리무스의 처리에 의해 현저히 감소함을 확인하였다.
마지막으로, 도 2의 D에서 볼 수 있듯이, DNCB 처리에 의하여 증가한 비장의 무게도 KAJD 또는 타크로리무스의 처리에 의해 현저히 감소함을 확인하였다.
상기 결과를 통해, KAJD는 DNCB에 의해 유도된 AD 유사 증상을 효과적으로 경감시키며, 피부 경화증 및 비장의 무게에 대한 효과는 기존 약제로 사용되는 타크로리무스보다 더 우수함을 확인하였다.
또한, 도 3의 A 및 B에서 볼 수 있듯이, DNCB 처리군은 음식 섭취는 정상 대조군에 비하여도 차이가 없었지만, 몸무게는 정상 대조군에 비하여 15% 정도 감소함을 확인하였다. KAJD 또는 타크로리무스 또한 DNCB 처리군과 유사한 경향을 나타냄을 확인하였다.
실시예 2. KAJD의 염증세포 및 비만세포의 침투 억제 효과 확인
염증세포 또는 비만세포의 피부에 대한 침투는 알러지 반응 및 염증을 유도함에 따라 피부의 과민증을 야기한다. 이에 따라, KAJD의 염증세포 및 비만세포의 침투 억제 효과를 확인하기 위하여, H&E(hematoxylin and eosin) 및 T.B(toluidine blue) 염색을 수행하였다.
구체적으로, 피부 생검(biopsy)의 일부를 4% 파라포름알데하이드(paraformaldehyde; PFA)로 고정한 후, 드라이아이스에서 냉동 섹션 화합물(Frozen Section Compound, FSC22 Clear, Surgipath, Leica Biosystem, The Netherlands)을 이용하여 동결절편을 제작하였다. 염증 세포를 탐지하기 위하여 헤마톡실린 및 에오신(hematoxylin and eosin; H&E)으로 염색하였고, 비만 세포를 탐지하기 위하여 톨루엔블루(toluidine blue; T.B)로 염색하였다. 염색한 조직을 광학현미경의 400X 배율로 관찰하여 염증세포 침윤 및 비만세포의 증감 정도를 확인하였다.
그 결과, 도 4의 A 및 C에서 볼 수 있듯이, DNCB는 표피 및 진피 모두에서 염증세포의 침투를 유도함을 확인하였고, KAJD의 처리는 염증 세포의 침투를 저해시켜 그 수를 감소시킴을 확인하였다.
또한, 도 4의 B 및 D에서 볼 수 있듯이, DNCB는 표피 및 진피 모두에서 비만세포의 침투를 유도함을 확인하였고, KAJD의 처리는 침투된 비만세포의 수를 감소시킴을 확인하였다. 아울러, KAJD의 비만세포의 침투 감소 효과는 타크로리무스보다 더욱 우수함을 확인하였다.
실시예 3. KAJD의 백혈구 수의 감소 효과 확인
대부분의 아토피 피부염 환자에서 백혈구(white blood cells; WBCs)가 높은 수준으로 관찰된다. 이에, KAJD의 아토피 피부염 치료 효과를 확인하기 위하여 KAJD를 처리한 이후에 마우스 혈액 내에 존재하는 WBCs의 수를 분석하였다.
구체적으로, 마우스의 전체 혈액 샘플을 심장에서 채혈하였고, EDTA(BD science, NJ, USA)가 포함된 Vacutainer TM 튜브에 넣어 보관하였다. WBC, 림프구(lymphocytes), 단핵백혈구(monocytes), 호산구(eosinophils), 호염구(basophils) 또는 호중구(neutrophils)의 수는 HEMAVET 950 혈구계산기(Drew Scientific, Inc., Oxford, USA)를 이용하여 분석하였다.
그 결과, 도 5에서 볼 수 있듯이, DNCB를 처리한 마우스는 WBCs의 수가 정상 대조군에 비하여 3.5배 증가함을 확인하였다. 그러나, KAJD 또는 타크로리무스는 DNCB에 의하여 증가한 백혈구의 수를 상당한 정도로 감소시키며, 이러한 KAJD의 백혈구 수 감소 효과는 타크로리무스보다 우수함을 확인하였다. 또한, KAJD 및 타크로리무스는 림프구, 단핵백혈구, 호산구, 호염구 및 호중구를 포함한 WBC의 아형의 수를 상기 WBC와 비슷한 정도로 감소시키며, 특히 KAJD는 상기 세포 중에서도 AD의 심각성을 특히 유도하는 호산구의 수를 우수한 정도로 감소시킴을 확인하였다.
실시예 4. KAJD의 IgE 및 염증 사이토카인의 감소 효과 확인
실시예 4-1. in vivo 혈액 분석
AD의 특징 중 하나는 혈중 IgE 및 염증 사이토카인이 높은 수준으로 발현하는 것이다. 이에, KAJD의 항염증 활성 메커니즘을 분석하기 위하여, DNCB를 처리한 마우스의 혈중 IgE 및 염증 사이토카인 수준을 분석하였다.
구체적으로, BD PharMingen mouse 또는 human ELISA set(Pharmingen, San Diego, CA, USA)를 이용한 샌드위치 ELISA를 통해 발현 수준을 분석하였다. ELISA 코팅 버퍼(sigma, Louis, MO, USA)에 포함된 포획 항체(capture antibody)로 플레이트를 코팅하였고, 4℃에서 하루 동안 보관하였다. 플레이트를 0.05%의 PBS-Tween 20로 헹구었고, 이어서 1시간 동안 20℃에서 10% FBS가 포함된 PBS로 블로킹하였다. 희석 버퍼(10% FBS가 포함된 PBS)에 단계희석한 표준 항원 또는 샘플을 플레이트에 넣고, 20℃에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 이후, 비오틴-접합 항-마우스 IgE 및 SAv-HRP(streptavidin-horseradish peroxidase conjugate)를 플레이트에 넣고, 20℃에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 마지막으로, TMB(tetramethylbenzidine) 기질 용액을 플레이트에 넣고, 암조건에서 15분 동안 배양하였으며, 2N H2SO4 용액으로 반응을 종결하였다. ELISA reader(Versa Max, Molecular Devices, CA, USA)를 이용하여 450nm에서 광학밀도를 측정하였다.
그 결과, 도 6에서 볼 수 있듯이, DNCB를 처리한 마우스는 IL-6, IL-10 및 IL-12의 염증 사이토카인의 수준이 증가함을 확인하였고, 특히 IgE가 높은 수준으로 증가함을 확인하였다. 그러나, KAJD 및 타크로리무스는 상기 혈청 IgE 및 염증 사이토카인의 생산을 상당히 억제시킴을 확인하였다. 또한, KAJD는 DNCB에 의해 유도된 IgE 및 IL-6의 수준을 타크로리무스보다 훨씬 효과적으로 감소시킴을 확인하였다. 상기 결과를 통해, KAJD는 DNCB에 의하여 증가된 혈청 IgE 및 전염증 사이토카인의 농도를 감소시킴으로써 피부 염증을 억제한다는 것을 알 수 있었다.
실시예 4-2. in vitro 분석
실시예 4-2-1. 단백질 발현량 분석
KAJD의 항염증 활성 메커니즘을 분석하기 위하여, 세포 수준에서 KAJD의 활성을 평가하였으며, RAW 264.7 마우스 대식세포(macrophage), 인간 비만세포(human mast cell; HMC-1) 또는 비장세포(splenocyte)가 발현하는 전염증 사이토카인의 단백질 발현량을 분석하였다.
구체적으로, 상기 RAW 264.7 및 HMC-1 세포주는 한국세포주은행(한국, 서울)에서 구입하였다. 각 세포주는 10% FBS(FBS, Welgene, 한국, 대구), 1% 항생체(Ab, Welgene, 한국, 대구)를 포함하는 배지에서 배양하였으며, 각각 Dulbecco's modified Eagle's medium(DMEM, Welgene, 한국, 대구) 또는 Iscove's Modified Dulbecco's Medium(IMDM, Welgene, 한국, 대구)의 배지로 배양하였고, 5% CO2, 37℃의 배양기에서 배양하였다.
또한, 비장을 RPMI-1640 배지(10% FBS, 1% Ab 및 0.05mM Mecaptoethanol 포함)에 넣고 무균조건에서 균질화하였으며, 적혈구는 적혈구 세포 용해 버퍼(Sigma, Louis, MO, USA)로 제거하였다. 현탁액을 원심분리한 후, RPMI-1640에 재현탁하여 분리된 비장세포를 5% CO2, 37℃의 배양기에서 배양하였다.
이후, 각 사이토카인의 수준은 상기 실시예 4-1에 기재된 ELISA를 수행하여 측정하였고, NO 생산은 그리스시약(Griess reagent) 키트(Promega, Madison, WI, USA)를 이용하여 측정하였다. 150 ㎕의 RAW 264.7 배양 상층액을 150 ㎕의 그리스 시약 용액과 혼합하여 96-웰 플레이트에 옮겼다. 혼합액을 실온에서 30분 동안 인큐베이션하였으며, 이후 ELISA reader(Versa Max, Molecular Devices, CA, USA)를 이용하여 570nm에서 광학밀도를 측정하였다.
그 결과, 도 7에서 볼 수 있듯이, LPS(Lipopolysaccaride)에 의하여 자극된 RAW264.7 세포에서는 IL-6, IL-10 및 TNF-α의 사이토카인의 발현과 NO 생산량이 현저히 증가됨을 확인하였다. 그러나, KAJD를 처리하면 상기 사이토카인의 발현이 현저히 감소되며, NO 생산이 농도 의존적으로 감소됨을 확인하였다.
또한, 도 8에서 볼 수 있듯이, 염증상태로 활성화된 비장세포 또는 HMC-1 세포에서는 IL-6의 수준이 증가하나, KAJD를 처리하면 상기 사이토카인의 발현이 현저히 감소됨을 확인하였다.
실시예 4-2-2. mRNA 발현량 분석
상기 실시예 4-2-1을 통해 KAJD가 전염증 사이토카인의 단백질 발현량을 감소시킴을 확인함에 따라, KAJD가 전사 수준에서 사이토카인의 발현을 조절하는지 확인하기 위하여 mRNA 발현량을 분석하였다.
구체적으로, 상기 실시예 4-2-1의 세포를 원심분리로 수득한 후, 펠렛으로부터 easy-blue RNA 추출 키트(iNtRON Biotech, 한국)를 이용하여 RNA를 분리하였다. 분리한 RNA의 양은 NanoDrop ND-1000 분광광도계(NanoDrop Technologies Inc., Wilmington, DE, USA)로 측정하였다. 각 샘플로부터 분리한 2 ㎍의 토탈 RNA는 cDNA 합성 키트(TaKaRa, Otsu, Shinga, Japan)를 이용하여 역전사하였다. 이후, 20 ㎕의 PCR 반응 혼합액을 DNA 주형, 10 pM의 각 유전자 특이적 프라이머, 10x Taq 버퍼, 2.5mM dNTP 혼합액, 및 1 unit의 Taq DNA 합성효소(Takara, Otsu, Shinga, Japan)으로 구성하였다. 각 프라이머의 서열은 하기 표 1에 정리하였다.
프라이머 타입 프라이머 이름 구분 프라이머 서열
마우스(mouse) IL-4 서열번호 1 F: 5'-TCG GCA TTT TGA ACG AGG TC-3'
서열번호 2 R: 5'-GAA AAG CCC GAA AGA GTC TC-3'
IL-6 서열번호 3 F: 5'-CAA GAG ACT TCC ATC CAG TTG C-3'
서열번호 4 R: 5'-TTG CCG AGT TCT CAA AGT GAC-3'
COX-2 서열번호 5 F: 5'-AAG ACT TGC CAG GCT GAA CT-3'
서열번호 6 R: 5'-CTT CTG CAG TCC CAG GTT CAA-3'
iNOS 서열번호 7 F: 5'-AAT GGC AAC ATC AGG TCG GCC ATC ACT-3'
서열번호 8 R: 5'-GCT GTG TGT CAC AGA AGT CTC GAA CTC-3'
TNF-α 서열번호 9 F: 5'-ATG AGC ACA GAA AGC ATG ATC-3'
서열번호 10 R: 5'-TAC AGG CTT GTC ACT GGA ATT-3'
GAPDH 서열번호 11 F: 5'-GAG GGG CCA TCC ACA GTC TTC-3'
서열번호 12 R: 5'-CAT CAC CAT CTT CCA GGA GCG-3'
인간(human) IL-4 서열번호 13 F: 5'-TGC CTC CAA GAA CAC AAC TG-3'
서열번호 14 R: 5'-CTC TGG TTG GCT TCC TTC AC-3'
IL-6 서열번호 15 F: 5'-AAC CTT CCA AAG ATG GCT AGG-3'
서열번호 16 R: 5'-CAG GAA CTG GAT CAG GAC TTT-3'
IL-13 서열번호 17 R: 5'-GGT CAA CAT CAC CCA GAA CC-3'
서열번호 18 R: 5'-TTT ACA AAC TGG GCC ACC TC-3'
GAPDH 서열번호 19 F: 5'-CGT CTT CAC CAC CAT GGA GA-3'
서열번호 20 R: 5'-CGG CCA TCA CGC CAC AGT TT-3'
그 결과, 도 9에서 볼 수 있듯이, 비장세포(도 9의 A) 및 HMC-1 세포(도 9의 B)에서, 증가된 IL-4 및 IL-6의 mRNA 수준은 KAJD의 처리에 의하여 감소됨을 확인하였다. 특히, KAJD을 500 ㎍/㎖의 농도로 처리하였을 때, IL-4 및 IL-6의 수준이 대조군에 비하여 모두 감소함을 확인하였다.
상기 결과를 통해, KAJD는 면역세포가 전염증 사이토카인을 생산하는 것을 조절함으로써, DNCB에 의하여 유도된 AD 유사 증상을 감소시킴을 확인하였다.
실시예 5. KAJD의 염증세포의 생존율 감소 효과 확인
KAJD의 항염증 활성 효과를 확인하기 위하여, RAW 264.7 또는 비장세포의 생존율을 분석하였다.
구체적으로, 각 세포를 1×104 세포/웰의 수로 96-웰 배양 플레이트에 분주하였고, 24시간 동안 배양하였다. 이후, 다양한 농도의 KAJD가 존재하거나 존재하지 않는 조건에서, RAW 264.7 및 비장세포에 1 ㎍/㎖의 LPS를 처리하여 세포를 염증상태로 활성화시켰다. 24시간 동안 배양한 후, 10 ㎕의 WST 용액을 각 웰에 첨가하였고, 플레이트를 추가의 1시간 동안 암조건에서 배양하였다. 이후, ELISA reader(Versa Max, Molecular Devices, CA, USA)를 이용하여 450nm에서 광학밀도를 측정하였다.
그 결과, 도 10의 A에서 볼 수 있듯이, LPS가 처리된 RAW 264.7 세포는 세포의 생존율이 대조군에 비하여 약 1.5배 증가하는데, KAJD를 처리한 경우에는 LPS 처리에 의하여 증가된 상기 세포의 생존율이 농도 의존적으로 감소함을 확인하였다.
또한, 도 10의 B에서 볼 수 있듯이, LPS가 처리된 비장세포는 세포의 생존율이 대조군에 비하여 증가하는데, 1000 ㎍/㎖ 이상의 고농도의 KAJD를 처리한 경우에는 LPS 처리에 의하여 증가된 상기 세포의 생존율이 농도 의존적으로 감소함을 확인하였다.
한편, 도 10의 C에서 볼 수 있듯이, HMC-1 세포는 염증 야기 물질인 PMA 및 이오노마이신(Ionomycin)이 처리되어도 세포의 수가 증가하지 않음을 확인하였다. 이를 통해, HMC-1 세포는 염증 상태로 활성화 되더라도 세포의 수에는 유의한 변화가 야기되지 않는다는 기존의 연구 결과와 일치함을 확인하였다.
실시예 6. 혼합 생약 추출물( KAJD )과 단독 생약 추출물의 염증 감소 효과 비교
실시예 6-1. 염증세포의 생존율 감소 효과 비교
KAJD의 항염증 효과를 확인하기 위하여, 염증상태로 활성화된 HMC-1 비만세포의 생존율 감소에 대한 효과를 KAJD를 구성하는 한약재 단독 추출물과 비교 분석하였다.
구체적으로, 비만세포인 HMC-1 세포에 황백, 맥문동, 형개, 건지황, 고삼 또는 감초 단독 추출물, 또는 KAJD를 처리한 후, 5 ng/㎖의 PMA 및 500 ng/㎖의 이오노마이신을 처리하여 각 세포를 염증상태로 활성화시켰다. 24시간 동안 배양한 후, MTT 어세이를 통해 HMC-1의 생존율을 확인하였다.
그 결과, 도 11a, 11b 및 12에서 볼 수 있듯이, 고삼을 제외한 황백, 맥문동, 형개, 건지황 또는 감초 단독 추출물은 활성화된 HMC-1 세포의 수에 영향을 미치지 않은 반면, KAJD는 활성화된 HMC-1 세포의 수를 대조군에 비해 유의한 정도로 감소시킴을 확인하였다.
실시예 6-2. 염증세포의 전염증 사이토카인 발현량 감소 효과 비교
KAJD의 항염증 효과를 확인하기 위하여, 전염증 사이토카인의 발현양 감소에 대한 효과를 KAJD를 구성하는 한약재 단독 추출물과 비교 분석하였다.
구체적으로, HMC-1 세포에 황백, 맥문동, 형개, 건지황, 고삼 또는 감초 단독 추출물, 또는 KAJD를 처리한 후, 5 ng/㎖의 PMA 및 500 ng/㎖의 이오노마이신을 처리하여 각 세포를 염증상태로 활성화시켰다. 24시간 동안 배양한 후, 상기 실시예 4-2-2에 따른 방법으로 PCR을 수행하였다.
그 결과, 도 13에서 볼 수 있듯이, 황백, 맥문동, 형개, 건지황, 고삼 또는 감초 단독 추출물에 비하여 KAJD는 염증 유발 사이토카인인 IL-4, IL-6, IL-13 및 TNF-α의 mRNA 발현양을 현저하게 감소시킴을 확인하였다.
상기 결과를 통해, 본 발명의 혼합 생약 추출물은 황백, 맥문동, 형개, 건지황, 고삼 또는 감초 단독 추출물에 비하여, 더 우수한 정도로 염증을 감소시킬 수 있음을 알 수 있었다.
실시예 7. KAJD의 혼합 비율에 따른 염증 감소 효과 비교
실시예 7-1. 염증세포의 생존율 감소 효과 비교
가장 우수한 항염증 활성을 나타내는 황백, 맥문동, 형개, 건지황, 고삼, 감초의 혼합 비율을 확인하기 위하여 다음과 같은 실험을 수행하였다.
구체적으로, 황백, 맥문동, 형개, 건지황, 고삼 및 감초를 각각 1:1:1:1:2:1 또는 1:1:1:1:1:2의 중량비로 포함하는 혼합 생약 추출물(D1 또는 D2)을 추가로 제조하였다. 이후, 500 ㎍/㎖의 혼합 생약 추출물이 존재하거나 존재하지 않는 조건에서, HMC-1 세포에 5 ng/㎖의 PMA 및 500 ng/㎖의 이오노마이신을 처리하여 각 세포를 염증상태로 활성화시켰다. 24시간 동안 배양한 후, MTT 어세이를 통해 HMC-1 비만세포의 생존율을 확인하였다.
그 결과, 도 14에서 볼 수 있듯이, 황백, 맥문동, 형개, 건지황, 고삼 및 감초를 각각 1:1:1:1:2:1 또는 1:1:1:1:1:2의 중량비로 포함하는 혼합 생약 추출물(D1 또는 D2)은 활성화된 HMC-1 세포의 수에 영향을 미치지 않은 반면, 1:1:1:1:1:1로 포함하는 혼합 생약 추출물(KAJD; D)은 활성화된 HMC-1 세포의 수를 대조군에 비해 유의한 정도로 감소시킴을 확인하였다.
실시예 7-2. 염증세포의 전염증 사이토카인 발현량 감소 효과 비교
가장 우수한 항염증 활성을 나타내는 황백, 맥문동, 형개, 건지황, 고삼, 감초의 혼합 비율을 확인하기 위하여, 상기 실시예 7-1에 따른 방법과 같이 황백, 맥문동, 형개, 건지황, 고삼 및 감초를 각각 1:1:1:1:2:1 또는 1:1:1:1:1:2의 중량비로 포함하는 혼합 생약 추출물(D1 또는 D2)을 제조하여 HMC-1 세포에 처리하였다. 이후, 염증상태로 활성화시킨 후, 상기 실시예 4-2-2에 따른 방법으로 PCR을 수행하였다.
그 결과, 도 15에서 볼 수 있듯이, 황백, 맥문동, 형개, 건지황, 고삼 및 감초를 1:1:1:1:1:1로 포함하는 혼합 생약 추출물(KAJD; D)은 각각 1:1:1:1:2:1 또는 1:1:1:1:1:2의 중량비로 포함하는 혼합 생약 추출물(D1 또는 D2)에 비하여 염증 유발 사이토카인인 IL-4, IL-6, IL-13 및 TNF-α의 mRNA 발현양을 현저하게 감소시킴을 확인하였다.
상기 결과를 통해, 본 발명의 혼합 생약 추출물은 황백, 맥문동, 형개, 건지황, 고삼 및 감초를 1:1:1:1:1:1의 중량비로 포함할 때, 염증 감소 효과가 우수함을 알 수 있었다.
이상의 설명으로부터, 본 발명이 속하는 기술 분야의 당업자는 본 발명이 그 기술적 사상이나 필수적 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 실시될 수 있다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 이와 관련하여, 이상에서 기술한 실시 예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적인 것이 아닌 것으로서 이해해야만 한다. 본 발명의 범위는 상기 상세한 설명보다는 후술하는 특허 청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 등가 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.

Claims (11)

  1. 황백, 형개, 고삼, 감초, 맥문동 및 건지황의 혼합 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 아토피 피부염의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 추출물은 황백, 형개, 고삼, 감초, 맥문동 및 건지황의 혼합물을 물, 탄소수 1 내지 4의 알코올 및 이들의 혼합 용매로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 용매로 추출한 것인, 조성물.
  3. 제1항에 있어서, 상기 분획물은 황백, 형개, 고삼, 감초, 맥문동 및 건지황의 혼합물을 물, 탄소수 1 내지 4의 알코올, 헥산(Hexane), 에틸 아세테이트(Ethyl acetate), 클로로포름(Chloroform), 디클로로메탄(Dichloromethane) 및 이들의 혼합용매로 구성되는 군으로부터 선택되는 용매로 분획하여 제조한 것인, 조성물.
  4. 제2항 또는 제3항에 있어서, 상기 혼합물은 황백, 형개, 고삼, 감초, 맥문동 및 건지황을 0.5 내지 1.5 : 0.5 내지 1.5 : 0.5 내지 1.5 : 0.5 내지 1.5 : 0.5 내지 1.5 : 0.5 내지 1.5의 중량비로 포함하는 것인, 조성물.
  5. 제1항에 있어서, 상기 조성물은 황백, 형개, 고삼, 감초, 맥문동 및 건지황의 혼합 추출물을 총 조성물의 중량 대비 0.001 내지 80 중량%로 포함하는 것인, 조성물.
  6. 제1항에 있어서, 상기 조성물은 약학적으로 허용되는 담체, 부형제 또는 희석제를 추가로 포함하는 것인, 조성물.
  7. 제1항에 있어서, 상기 조성물은 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제, 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제, 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 경피흡수제, 겔제, 로션제, 연고제, 크림제, 첩부제, 카타플라스마제, 페이스트제, 스프레이, 피부 유화액, 피부 현탁액, 경피 전달성 패치, 약물 함유 붕대 및 좌제로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 제형을 가지는 것인, 조성물.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항의 조성물을 인간을 제외한 아토피 피부염 의심 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 아토피 피부염의 치료 방법.
  9. 황백, 형개, 고삼, 감초, 맥문동 및 건지황의 혼합 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 아토피 피부염 개선용 식품 조성물.
  10. 황백, 형개, 고삼, 감초, 맥문동 및 건지황의 혼합 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 아토피 피부염의 예방 또는 개선용 의약외품 조성물.
  11. 황백, 형개, 고삼, 감초, 맥문동 및 건지황의 혼합 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 아토피 피부염의 예방 또는 개선용 화장료 조성물.
PCT/KR2017/009609 2016-09-01 2017-09-01 생약 혼합 추출물을 포함하는 아토피 피부염의 치료용 조성물 WO2018044122A1 (ko)

Priority Applications (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US16/329,562 US11666619B2 (en) 2016-09-01 2017-09-01 Composition for treating atopic dermatitis including herbal medicine mixed extract
EP17847047.2A EP3508210B1 (en) 2016-09-01 2017-09-01 Composition comprising herbal medicinal mixture extract for treating atopic dermatitis

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR10-2016-0112687 2016-09-01
KR1020160112687A KR101782268B1 (ko) 2016-09-01 2016-09-01 생약 혼합 추출물을 포함하는 아토피 피부염의 치료용 조성물

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2018044122A1 true WO2018044122A1 (ko) 2018-03-08

Family

ID=60035748

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/KR2017/009609 WO2018044122A1 (ko) 2016-09-01 2017-09-01 생약 혼합 추출물을 포함하는 아토피 피부염의 치료용 조성물

Country Status (4)

Country Link
US (1) US11666619B2 (ko)
EP (1) EP3508210B1 (ko)
KR (1) KR101782268B1 (ko)
WO (1) WO2018044122A1 (ko)

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101782268B1 (ko) * 2016-09-01 2017-09-28 경희대학교 산학협력단 생약 혼합 추출물을 포함하는 아토피 피부염의 치료용 조성물
WO2021150088A1 (ko) * 2020-01-23 2021-07-29 주식회사 엘케이 천연소재 추출물 함유 약학적 조성물, 동물용 약학적 조성물, 식품 조성물 및 그의 제조 방법
KR20220083191A (ko) 2020-12-11 2022-06-20 강원대학교산학협력단 생리활성이 증진된 황백 발효물 제조방법
KR20220166593A (ko) * 2021-06-10 2022-12-19 주식회사 케이랩 생약 혼합 추출물의 장내 미생물 환경 개선용 조성물

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20050118820A (ko) * 2004-06-15 2005-12-20 주식회사 해피어스화장품 아토피성 피부염의 예방 효과를 가지는 조성물
KR20130077314A (ko) * 2011-12-29 2013-07-09 원광대학교산학협력단 피부 개선용 약학 조성물, 화장료 조성물 및 그 제조방법
KR101782268B1 (ko) * 2016-09-01 2017-09-28 경희대학교 산학협력단 생약 혼합 추출물을 포함하는 아토피 피부염의 치료용 조성물

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2011108907A2 (ko) * 2010-03-05 2011-09-09 (주) 메디플랜 한방추출물을 유효성분으로 함유하는 소양증 및 아토피 개선용 조성물
KR20140063165A (ko) 2012-11-16 2014-05-27 김영조 좁쌀 추출물을 함유하는 아토피 피부염 개선용 조성물
CN103520572B (zh) * 2013-10-18 2015-12-23 昌乐县乐器产业发展中心 一种用于治疗特应性皮炎的中药组合物及其制备方法
KR101599590B1 (ko) 2013-12-05 2016-03-11 소망화장품주식회사 두충과 원지 추출물을 함유하는 아토피 피부용 화장품
KR101605057B1 (ko) 2014-08-11 2016-03-21 재단법인 금산국제인삼약초연구소 진세노사이드 Rd가 강화된 발효 인삼 또는 홍삼 추출물을 포함하는 아토피 피부염 개선용 조성물

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20050118820A (ko) * 2004-06-15 2005-12-20 주식회사 해피어스화장품 아토피성 피부염의 예방 효과를 가지는 조성물
KR20130077314A (ko) * 2011-12-29 2013-07-09 원광대학교산학협력단 피부 개선용 약학 조성물, 화장료 조성물 및 그 제조방법
KR101782268B1 (ko) * 2016-09-01 2017-09-28 경희대학교 산학협력단 생약 혼합 추출물을 포함하는 아토피 피부염의 치료용 조성물

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
KIM, JI EUN ET AL.: "The Symptoms of Atopic Dermatitis in NC/ Nga Mice Were Significantly Relieved by the Water Extract of Liriope Platyphylla", LABORATORY ANIMAL RESEARCH, vol. 26, no. 4, December 2010 (2010-12-01), pages 377 - 384, XP055587089 *
LEE, WON GU ET AL.: "Suppressive Effects of Sojinjiyangtang(SJJY) on Der f-induced Atopic Dermatitis in NC/Nga Mice", JOURNAL OF HAEHWA MEDICINE, vol. 16, no. 2, 31 December 2007 (2007-12-31), pages 171 - 190, XP055587093, ISSN: 1225-603X *
See also references of EP3508210A4 *

Also Published As

Publication number Publication date
US11666619B2 (en) 2023-06-06
US20190336559A1 (en) 2019-11-07
KR101782268B1 (ko) 2017-09-28
EP3508210B1 (en) 2024-03-20
EP3508210A1 (en) 2019-07-10
EP3508210A4 (en) 2020-06-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
WO2018044122A1 (ko) 생약 혼합 추출물을 포함하는 아토피 피부염의 치료용 조성물
RU2423139C2 (ru) КОМПОЗИЦИИ, СОДЕРЖАЩИЕ Actinidia, И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ
US20100111927A1 (en) Compositions Comprising Actinidia and Methods of Use Thereof
WO2015002391A1 (ko) 월경 전기 증후군 및 월경통 완화의 기능을 갖는 조성물
WO2016032249A1 (ko) 모새나무 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 신경염증 또는 퇴행성 뇌신경 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물
KR20150086982A (ko) 원지 추출물을 유효성분으로 함유하는 아토피 피부염의 예방 또는 치료용 조성물
WO2017014502A1 (ko) 해당화 꽃 추출물을 유효성분으로 포함하는 il-6 매개성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물
KR101793503B1 (ko) 퇴행성 뇌질환 예방, 개선 또는 치료용 조성물
WO2016010340A1 (ko) 오풍칠 추출물을 유효성분으로 함유하는 염증 또는 알러지 질환의 예방 및 치료용 조성물 및 이의 용도
KR101842786B1 (ko) 생약 혼합 추출물을 포함하는 아토피 피부염의 치료용 조성물
WO2015167240A1 (ko) 알피나 골무꽃 추출물을 포함하는 조성물
KR20170091804A (ko) 알레르기 질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물
KR20150041968A (ko) 파에오닥틸룸 트리코르누툼(Phaeodactylum tricornutum)의 용매 분획물을 유효성분으로 포함하는 염증성 질환 예방용 또는 치료용 조성물
KR102272637B1 (ko) 올벚나무를 포함하는 항염증용 조성물
WO2015152653A1 (ko) 알파인 웜우드 추출물을 포함하는 조성물
KR101844890B1 (ko) 고욤나무 잎 메탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물을 유효성분으로 함유하는 아토피 피부염 예방 또는 개선용 조성물
KR101579500B1 (ko) 율무뿌리 추출물을 포함하는 미백용 조성물
WO2015105373A1 (ko) 화살나무 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 천식의 예방 또는 치료용 조성물
WO2016003120A1 (ko) 알피나 골무꽃 추출물을 포함하는 미백용 조성물
WO2019151547A1 (ko) 침향 추출물의 분획물을 유효성분으로 포함하는 퇴행성 신경질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물
WO2015167239A1 (ko) 산형화 추출물을 포함하는 조성물
WO2024101570A1 (ko) 스테비아 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화, 항염 및 항알레르기용 조성물
WO2020242010A1 (ko) 파파야 발효물을 포함하는 아토피 피부염의 예방 또는 치료용 약학적 조성물
WO2023043169A1 (ko) 쑥 및 삼백초 혼합 추출물을 포함하는 미세먼지로 인한 염증성 질환 예방 또는 치료용 조성물
KR20120140315A (ko) 천식 또는 아토피의 치료 또는 예방용 조성물

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 17847047

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2017847047

Country of ref document: EP

Effective date: 20190401