WO2018042662A1 - ラミナからなるたばこ原料の製造方法、ラミナ及びラミナ充填物 - Google Patents

ラミナからなるたばこ原料の製造方法、ラミナ及びラミナ充填物 Download PDF

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lamina
tobacco
invertase
raw material
leaf
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永井　敦
慎介 佐藤
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日本たばこ産業株式会社
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    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A24—TOBACCO; CIGARS; CIGARETTES; SIMULATED SMOKING DEVICES; SMOKERS' REQUISITES
    • A24B—MANUFACTURE OR PREPARATION OF TOBACCO FOR SMOKING OR CHEWING; TOBACCO; SNUFF
    • A24B3/00—Preparing tobacco in the factory
    • A24B3/04—Humidifying or drying tobacco bunches or cut tobacco
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A24—TOBACCO; CIGARS; CIGARETTES; SIMULATED SMOKING DEVICES; SMOKERS' REQUISITES
    • A24B—MANUFACTURE OR PREPARATION OF TOBACCO FOR SMOKING OR CHEWING; TOBACCO; SNUFF
    • A24B3/00—Preparing tobacco in the factory
    • A24B3/12—Steaming, curing, or flavouring tobacco

Definitions

  • the present invention relates to a method for producing a tobacco raw material made of lamina.
  • leaf tobacco used for the production of cigarette products such as cigarettes after harvesting, the process of enhancing the function of the enzyme by enhancing the function of the enzyme and the process of fixing the quality by drying are performed. It is common. After this treatment, the leaf tobacco is generally separated into laminae and medium bones at a raw material factory and stored in a state of being packed in a case of about 200 kg. Including this shelf life, the tobacco products such as cigarettes will be delivered to the tobacco plant such as cigarettes about 1-2 years after harvesting, including transportation by ship. As described above, there is a relatively long storage period before the harvested leaf tobacco is processed in a factory for manufacturing final products such as cigarettes. As a technique for preventing alteration that may occur in leaf tobacco during such a storage period, a technique relating to a storage sheet used for storage of dry leaf tobacco is known (Patent Document 1).
  • tobacco materials packed in cases at a raw material factory are dried before being packed in cases, but the enzymes contained in the tobacco materials are inactivated.
  • changes in the temperature and humidity changes during long-term storage cause changes in the content components of tobacco materials.
  • tobacco components that arrive at the final product manufacturing plant, such as cigarettes always have different content components. Adjustment is required.
  • the amount of the component to be contained, for example, the content of sugar is different. May come out.
  • invertase can be mentioned as an enzyme that is contained in leaf tobacco and is involved in the decomposition of sugars such as sucrose.
  • invertase Since invertase is not easily inactivated among the enzymes contained in leaf tobacco, during the long-term storage as described above, sucrose that affects the taste is brought about, so that it can be used for smoking articles that are the final product. There is a possibility of greatly affecting the flavor.
  • the present invention focuses on the invertase activity of leaf tobacco, and provides a method for producing a tobacco raw material carried out in a raw material factory for providing a tobacco raw material composed of lamina with reduced invertase activity suitable for long-term storage. The issue is to provide.
  • the leaf tobacco after curing is subjected to threading, the lamina and the middle bone are separated to obtain the lamina, and the invertase contained in the leaf tobacco is heated by heating the obtained lamina.
  • a method for producing a tobacco raw material made of lamina which includes a heating step of deactivation and a step of case-packing the lamina obtained through the heating step.
  • the activity of invertase is 1.0 U / gD. B. We found that we can provide the following lamina:
  • the present invention is as follows. [1] A process of threading leaf tobacco after curing to obtain lamina; Heating the obtained lamina to inactivate the invertase contained in the lamina; Packing the lamina obtained by inactivating the invertase into a container for long-term storage; A method for producing a tobacco raw material comprising lamina. [2] In the heating step, lamina invertase activity value is 1.0 U / gD. The method for producing a tobacco raw material according to [1], which is performed until B or lower.
  • [3] The method for producing a tobacco raw material according to [1] or [2], wherein the moisture content of the lamina used in the heating step is 10% by weight or more and 20% by weight or less.
  • [4] The method for producing a tobacco raw material according to any one of [1] to [3], wherein the heating step is performed by using an air dryer.
  • Invertase activity value is 1.0 U / gD. Lamina which is B or less.
  • the lamina according to [5] wherein the tobacco leaf used as a raw material for the lamina is a yellow species or an orientation species.
  • Invertase activity value is 0.5 U / gD.
  • [8] A lamina-filled product obtained by filling the lamina according to any one of [5] to [7] into a container for long-term storage.
  • the present invention it is possible to provide a technique for preventing changes in the content of tobacco raw materials due to the action of invertase during long-term storage of tobacco raw materials.
  • a lamina having a low activity value of invertase can be provided.
  • tobacco refers to those that are used in the production method of the present invention and that are cured at a raw material factory.
  • tobacco leaf is basically the same as “leaf tobacco”, but it is not limited to the one that is assumed to be processed in the raw material factory like leaf tobacco.
  • tobacco raw material means one that has been processed in a raw material factory, which will be described later.
  • the manufacturing process of tobacco products such as general smoking articles is stored in a warehouse after performing the following curing process on harvested leaf tobacco, then transported to a raw material factory, A series of processes such as unpacking, humidity conditioning, deboning, separation (also called threading and separation are called threading), re-drying, and case-packing are performed, and then stored for a long time (aging) in a warehouse, etc. Including the process of transporting the tobacco material to a manufacturing plant.
  • the temperature of the lamina that has been threaded as described later in the above re-drying process is high enough to deactivate the enzyme contained in the lamina. It wasn't.
  • curing is a treatment performed at an early stage on harvested leaf tobacco, and usually includes steps such as drying and humidity control, and functions of various enzymes contained in leaf tobacco. May be activated. Curing is performed mainly for the following purposes. (1) Enhancing the action of the enzyme and promoting the change in leaf color. (2) Dry the mesophyll and fix the leaf color. (3) Drain the water from the middle bone and dry the entire leaf. After this curing, leaf tobacco is transported to a raw material factory after being stored in a warehouse for a certain period. As will be described in Experimental Example 3, tobacco species called Burley species are dried by a technique called Air-curing. Through this treatment, almost all of the sucrose contained in Burley leaf tobacco is lost.
  • the “leaf tobacco after curing” as used in the present invention is a leaf tobacco that has been subjected to the general curing process as described above, and is different from a leaf tobacco that has not been processed after harvesting. It means that there is.
  • the “raw material factory” in the present invention refers to a product that has been subjected to the curing treatment described above for harvested leaf tobacco, and after being subjected to humidity conditioning, This is the place where the separated lamina is re-dried and the case is packed in a container for long-term storage. Steam is generally used for humidity control in a raw material factory. As an example, the temperature of the lamina at this time rises to about 60 ° C., and the water content rises to about 18% by weight. The next timing when the lamina is heated is during re-drying after threading. Lamina re-drying is usually performed using a multi-chamber dryer or a rotary dryer.
  • aging also referred to as long-term storage
  • aging is a process performed before transporting a tobacco raw material that has been processed in a raw material factory to a final product manufacturing factory, and is generally one year or longer. This is the process of storing in the warehouse or on board during the period.
  • the manufacturing method of the tobacco raw material which consists of lamina of this invention includes the following processes in the following order.
  • the manufacturing method of the tobacco raw material of this invention includes said process in said order, another process, for example, the humidity control process mentioned later, etc. may be included between each process.
  • the type of leaf tobacco used in the production method and lamina of the present invention is not particularly limited.
  • Nicotiana tabacum yellow species, Burley species, Orient species, local native species and Nicotianarstica brasilia species Can be mentioned. Since the activity value of invertase is originally high compared with a burley seed
  • the moisture content of the leaf tobacco after humidity conditioning is appropriately performed on the leaf tobacco subjected to threading is 10 to 20% by weight.
  • the moisture content of the leaf tobacco is given flexibility and the threading can be performed smoothly.
  • Threading can be performed by a known method. Further, the lamina and the middle bone are separated by a boning machine, a wind separator, or the like to obtain the lamina.
  • the “lamina” as used in the present invention refers to a material that has undergone threading after the above-described curing process and has not been cut into strips such as a so-called cigarette. Accordingly, the lamina defined in the present invention is different from the time stamp used for cigarettes, and the size of each lamina occupies a larger number of fragments than each piece of time stamp used for cigarettes. Specifically, the “lamina” of the present invention is an aggregate in which 80% or more of a piece of 1/4 inch ⁇ 1/4 inch or more is a value measured by CORESTA RECOMMENDED METHOD N ° 16.
  • the heat treatment for inactivating invertase include the following modes.
  • the activity value of lamina invertase after the heat treatment was 1.0 U / gD. B.
  • the following is preferable in order to prevent alteration of contents of lamina during long-term storage by invertase.
  • the activity value of lamina invertase after heat treatment is 0.5 U / gD. B.
  • the deactivation treatment can be performed by including a step of heating the lamina with heating steam at 160 ° C. to 220 ° C. using an air dryer.
  • lamina invertase activity was reduced to 0.5 U / gD.
  • B. Can be reduced to:
  • the time for heating at this time is not particularly limited as long as the invertase activity can be reduced. However, as an example, 0.2 to 30 seconds, another example is 0.3 to 20 seconds, An example is 0.5 to 10 seconds.
  • the re-drying step can be included as a step in which both the re-drying in the raw material factory and the inactivation of the invertase are performed simultaneously. In this case as well, heating steam of 160 ° C. to 220 ° C. can be applied to the lamina.
  • the time for heating at this time is not particularly limited as long as the invertase activity can be reduced. However, as an example, 0.2 to 30 seconds, another example is 0.3 to 20 seconds, An example is 0.5 to 10 seconds.
  • a laminar invertase may be deactivated simultaneously with re-drying by including a step of drying using a multi-chamber dryer with the temperature of the drying medium at a high temperature of 100 ° C. or higher.
  • the heating time is not particularly limited as long as the invertase activity can be reduced, but as an example 1 to 30 minutes, another example 2 to 30 minutes, and still another example 5 to 5 20 minutes can be mentioned.
  • one chamber may be set as a high-temperature heating section, and the deactivation treatment may be performed before or after re-drying by the multi-chamber dryer.
  • the conditions same as the above can be used for the temperature of the drying medium and the example of the heating time.
  • the heating step for inactivating the invertase contained in leaf tobacco can be performed after re-drying of lamina in the raw material factory or simultaneously with re-drying. According to the heating step exemplified above, it is possible to sufficiently reduce the invertase activity that could not be achieved by a conventionally known heating method using microwaves. As shown in the results of Experimental Example 2 below (heat treatment using microwaves), when inactivation of invertase and re-drying are performed simultaneously using microwaves, the activity value of invertase is sufficiently reduced. Absent.
  • the threaded lamina used in the heating step has a water content as high as possible. Specifically, it is 10% by weight or more, more preferably 15% by weight or more, and particularly preferably 18% by weight or more. The upper limit of the water content can be about 20% by weight. In order to obtain such a lamina, a step of appropriately adjusting the humidity may be included.
  • the air temperature is preferably 140 ° C. or higher, more preferably 160 ° C. or higher, from the viewpoint of sufficiently reducing the invertase activity value. More preferably, the temperature is more than 200 ° C., and more preferably 200 ° C. or more.
  • the airflow temperature in an airflow dryer can mention the aspect which is 350 degrees C or less.
  • the linear velocity when using an air dryer is 20 to 30 m / s.
  • the absolute humidity of the airflow when using the airflow dryer is preferably as high as possible, and examples thereof include 60 to 99% v / v.
  • the lamina subjected to the inactivation of the invertase has an invertase activity value of 1.0 U / gD. B. It has dropped to the following. That is, the present invention has an invertase activity value of 1.0 U / gD. B.
  • This invertase activity value can be further reduced according to the degree of inactivation treatment and the original invertase activity value of leaf tobacco, for example, 0.5 U / gD. B.
  • the aspect which is the following can also be mentioned.
  • the lamina of the present invention is less susceptible to alteration of content components during long-term storage before being provided to a subsequent manufacturing plant.
  • the water content of the lamina that has been subjected to the inactivation of invertase can be generally 10 to 14% by weight, and can be 11 to 12% by weight.
  • the types of leaf tobacco used as the raw material of the lamina of the present invention can include the yellow varieties of Nicotiana tabacum, Burley, Orient, local natives, and Brasilia varieties of Nicotiana rustica. A yellow species and an orientation species can be preferably exemplified.
  • the content of sucrose contained in the lamina after the inactivation of invertase is 0.4 to 5.0% by weight when the leaf tobacco is yellow or oriental. In the case of other types of leaf tobacco, an embodiment of 0.01 to 0.8% by weight can be mentioned.
  • About content of the sucrose contained in lamina it can measure using the method performed by the experimental example mentioned later.
  • the tobacco material composed of the obtained lamina is case-packed in a container for long-term storage for aging.
  • Case filling can include a mode in which the lamina is compressed in the case.
  • the container for long-term storage those conventionally used can be used.
  • the container for long-term storage here is different from the one for packing the final product such as cigarette, such as the cigarette package, and stores the tobacco raw material used for the production of the final product. It is a container for. More specific examples of containers for long-term storage include a card board of 700 mm ⁇ 700 mm ⁇ 1100 mm (about 0.5 to 0.6 m 3 ) and a wooden barrel of 2 m 3 volume.
  • the present invention also includes a lamina (lamina filling) filled in a container for long-term storage as described above.
  • the lamina water content in the lamina filling can include an embodiment of approximately 10 to 14% by weight, and an embodiment of 11 to 12% by weight.
  • the lamina constituting the lamina filling case-packed in the container for long-term storage according to the present invention has been subjected to the invertase activity deactivation treatment as described above, and the invertase activity value is 1.0 U. / GD. B. And more preferably 0.5 U / gD. B. And particularly preferably 0.2 U / gD. B. It is.
  • the lower the invertase activity value of lamina is, the lower the better from the viewpoint of reducing the function of invertase during long-term storage.
  • Preparation of crude enzyme solution Enzyme protein is extracted from 2.0 g of dried tobacco leaves using McIlvine buffer to prepare a crude enzyme solution. The operating temperature is 4 ° C. This crude enzyme solution is prepared so that the crude polymer purified product contained in 0.1 g of dry tobacco leaves is dissolved in 1 mL (soluble polymer contained in 0.1 g of dry tobacco leaves / 1 mL).
  • a value obtained by calculating the glucose production rate per minute from the rate of increase in glucose concentration per hour is defined as Amg ⁇ mL ⁇ 1 ⁇ min ⁇ 1 .
  • the value obtained by further dividing the moisture content of the dry tobacco leaf (Dry base) is defined as the invertase activity value [U / g-D.B.] Per dry matter weight in the dry tobacco leaf.
  • the enzyme activity is defined as 1 U for the amount of enzyme that liberates 1 ⁇ mol of glucose per minute.
  • the moisture content of the sample is measured in parallel with the following method, separately from the invertase activity measurement.
  • the moisture content of the dry tobacco leaf was measured by weighing 1.0 g of the sample of the next dry leaf and drying in a rotary oven (Tsukasa Co., Ltd., Tokyo) set at 100 ° C. for 1 hour. After drying, the specimen was cooled to room temperature in a desiccator. The change in weight before and after drying is taken as the water content.
  • the measurement method of the above invertase activity value will be described in more detail in the following examples.
  • the lamina obtained by the production method of the present invention is then transported to a production factory and used for producing a final product.
  • a production factory used for producing a final product.
  • the final product in addition to smoking articles such as cigarettes, non-combustion type or non-heating type smoking articles and oral cigarettes such as snus can be cited.
  • the invertase contained in the leaf tobacco after harvesting is inactivated, so that the long-term carried out in the stage before being transported to the final product production factory.
  • the present invention can provide a lamina suitable for long-term storage performed at a stage before being transported to a final product manufacturing factory.
  • ⁇ Measurement of invertase activity value> The dried tobacco leaf was pulverized to 1.0 mm mesh or less. Powdered raw material 2.0 ⁇ 0.006 g was weighed into a glass vial and 100 mL of 15 mM McIlvine buffer (4.8 mM citrate-10.2 mM disodium hydrogen phosphate buffer, pH 5) cooled to 4 ° C. 4). The suspension was homogenized, and the enzyme protein was extracted by applying ultrasonic waves for 30 minutes. The extract was filtered using Whatmann # 60, and the filtrate was centrifuged at 12,000 ⁇ g for 10 minutes.
  • McIlvine buffer 4.8 mM citrate-10.2 mM disodium hydrogen phosphate buffer, pH 5
  • the supernatant was filtered using a cellulose acetate membrane (Whatmann) having a pore size of 0.2 ⁇ m. 60 mL of the filtrate was collected, and low molecular components were removed and high molecular components were concentrated using a 30 kDa ultrafiltration membrane (Amicon Ultra, centrifugal ultrafiltration tube ⁇ 4).
  • the concentrated solution of the polymer component was diluted by adding the buffer solution used for extraction, and the polymer fraction was washed (removed low molecules) by performing ultrafiltration again. Further, the washing operation of the polymer fraction was repeated twice. The washed concentrated solution was diluted to 12 mL using the buffer solution used for extraction. This diluted solution is defined as a crude enzyme solution. All operations for preparing the crude enzyme solution were performed at 4 ° C.
  • the prepared crude enzyme solution is calculated such that a crude polymer purified product equivalent to 0.1 g of tobacco material is dissolved in 1 mL.
  • 0.1 g of soluble polymer in raw material / 1 mL Four solutions were prepared by mixing 120 ⁇ L of the prepared crude enzyme solution and 200 ⁇ L of 100 mM, pH 5.0 McIlvine buffer in an Eppendorf tube, and each was heated at 40 ° C. for 2 minutes in a heat block. Add 80 ⁇ L of 0.5 M aqueous sucrose solution to each of the four heated solutions, one after 5 minutes, the other after 10 minutes, the other after 15 minutes, and the last one for 30 minutes. Later, 200 ⁇ L of 1.0 M sodium carbonate solution was added to stop the reaction.
  • the concentration of produced glucose in each solution was measured using the hexokinase method.
  • the hexokinase method used F-kit Glucose (Roche Applied Science), and the operating method followed the manufacturer's instruction manual.
  • a value obtained by calculating the rate of glucose production per minute from the rate of increase in glucose concentration over time is defined as A mg ⁇ mL ⁇ 1 ⁇ min ⁇ 1 .
  • the moisture content of the sample was measured in parallel with the following method separately from the enzyme activity measurement.
  • the moisture content of the tobacco leaf was measured by weighing 1.0 g of the sample of the next dry leaf and dried in a rotary oven (Tsukasa Co., Ltd., Tokyo) set at 100 ° C. for 1 hour. After drying, the specimen was cooled to room temperature in a desiccator. The change in weight before and after drying was taken as the moisture content (moisture).
  • Each conditioned tobacco leaf was packed in lami zip (produced by Nihon Shasha Co., Ltd., registered trademark) and subjected to a storage test in a sealed state.
  • the storage test was performed at a constant temperature using a constant temperature environment tester, and was performed at 40 ° C. for 4 weeks.
  • the sucrose content of the raw material after the storage test was measured, and the residual ratio of sucrose was calculated from the change in the sucrose content before and after the storage test.
  • Burley leaf tobacco is generally dried by a method called Air-curing. Air-cured leaf tobacco leaves completely lose sucrose with or without aging treatment. Therefore, in this preservation test, sucrose was artificially added (sprayed with an aqueous solution) from the outside only for the Burley species and used for the test.
  • sucrose content was measured according to the following measurement method.
  • Experimental method Dry tobacco leaves before or after storage are pulverized to 1.0 mm mesh or less. Weigh 1.0 g ⁇ 0.001 g of crushed tobacco leaves into a glass vial, add 40 mL of 50 v / v% acetonitrile solution, and shake for 30 minutes at 200 rpm. After shaking, the mixture is further extracted at room temperature for 30 minutes while being assisted by ultrasound (Bransonic® cleaner (Branson Ultrasonic Co., Danbury, CT, USA)). The extract was filtered using a PVDF membrane (Whatmann) having a pore size of 0.2 ⁇ m, and the obtained filtrate was subjected to instrumental analysis.
  • a PVDF membrane Whatmann
  • Detector Differential refraction detector (G1362A reflexive index detector (Agilent Technology, CA, USA) set temperature 35 ° C., absolute calibration curve method (calibration curve range 0.1 to 10 g / L)
  • Column Carbohydrate Column (250 ⁇ 4.6 mm ID, 4 ⁇ m, Waters Co., Milford, MA, USA)
  • Elution conditions Eluent; Acetonitrile (75 v / v%), Flow rate; 1.0 mL / min, Injection volume: 20 ⁇ L
  • FIG. 3 shows the invertase activity value
  • the vertical axis shows the sucrose residual rate in the tobacco leaf after storage.
  • FIG. 3 shows that the invertase activity value of tobacco leaves is approximately 1.0 U / gD. B. If it is below, it turns out that there is little decomposition
  • the production method of the present invention it is possible to provide a technique for preventing changes in the content components of the tobacco raw material due to the action of invertase during the aging period of the tobacco raw material.
  • a lamina having a low activity value of invertase can be provided.

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Abstract

キュアリング後の葉たばこをスレッシング処理してラミナを得る工程と、得られたラミナを加熱して、ラミナに含まれていたインベルターゼを失活させる加熱工程と、インベルターゼを失活させて得たラミナを長期保存用のケースに詰める工程と、を含む、ラミナからなるたばこ原料の製造方法と、インベルターゼ活性値が１Ｕ／ｇ－Ｄ．Ｂ．以下であるラミナを提供する。

Description

[規則37.2に基づきISAが決定した発明の名称]　ラミナからなるたばこ原料の製造方法、ラミナ及びラミナ充填物
　本発明は、ラミナからなるたばこ原料の製造方法に関する。
　シガレット等のたばこ製品の作製に用いられる葉たばこについては、その収穫後、酵素の働きを高めて香喫味成分を増強させる工程や、その後乾燥させることにより品質の固定化を行う工程を含む処理を行うことが一般的である。この処理の後、原料工場にて、葉たばこはラミナと中骨に分離され、約２００ｋｇ程度のケースに詰められた状態で保存する工程を経ることが一般的である。この保存期間を含め、シガレットのようなたばこ製品の製造工場にラミナ等の分離たばこ原料が届くのは、船による輸送期間も含め収穫から約１～２年後になる。
　上記のように、収穫された葉たばこがシガレット等の最終製品の製造工場にて処理されるまでには、比較的長い時間の保存期間が存在する。そのような保存期間中に、葉たばこに起こり得る変質を防止するための技術として、乾燥葉たばこの保存に用いられる保存シートに関するものが知られている（特許文献１）。
特開平６－１１３８０７号公報
　本発明者らの最近の研究により、原料工場にてケース詰めされたたばこ原料については、ケース詰めされる前に乾燥が行われているものの、そのたばこ原料に含まれている酵素は失活しておらず、長期保存中に温湿度変化が繰り返されることで、たばこ原料の内容成分に変化が生じることが分かってきた。さらに、この変化は月差、年差があるため、シガレットのような最終製品の製造工場に届くたばこ原料は常に内容成分が異なってくるため、製品刻を作る際に、葉組構成の細かな調整が必要となる。
　また、一般的に葉たばこの種類に応じて、含有する成分の量、例えば糖の含有量は異なるので、上記の酵素の働きにより、長期保存中に糖が分解することで、香喫味に影響が出ることがある。
　ここで、葉たばこに含まれるとともに、スクロースのような糖の分解に関与する酵素として、インベルターゼを挙げることができる。
　インベルターゼは葉たばこに含まれる酵素の中でも失活しにくいので、上記のような長期保存中に、香喫味に影響を与えるスクロースの分解をもたらすことで、最終製品である喫煙物品等に用いられる刻の香喫味に大きな影響を与える可能性がある。
　これまで、シガレットのような喫煙物品を作製する製造工場内の最後の方の工程において、気流乾燥のような手段を用いて裁刻された刻みを乾燥することは行われていた。しかし、キュアリングの処理が行われた後、原料工場においてケース詰めされる前の段階で、長期保存中に葉たばこの内容成分が変化することを防止する目的で、葉たばこに含まれるインベルターゼの活性を失活させる工程を含ませることは知られていなかった。そして、インベルターゼに起因する葉たばこの成分の変質についてもよく分かっていなかったことから、葉たばこに含まれるインベルターゼの活性を失活させようとする動機付けもなかった。また、国際公開第０３／０４６４５３号にも記載されているとおり、たばこ原料に対して気流乾燥機を用いた乾燥を行うと、膨高性が高まることが知られていたことから、長期保存に供されるたばこ原料に対して、嵩を高めて省スペース性を損ねるような気流乾燥をあえて行おうという動機づけもなかった。
　これに対し、本発明では、葉たばこのインベルターゼ活性について着目し、長期保存に適した、インベルターゼの活性が低下したラミナからなるたばこ原料を提供するための、原料工場において行われるたばこ原料の製造方法を提供することを課題とする。
　本発明者が鋭意検討した結果、キュアリング後の葉たばこにスレッシングを行い、ラミナと中骨を分離してラミナを得る工程と、得られたラミナを加熱して葉たばこに含まれていたインベルターゼを失活させる加熱工程と、加熱工程を経て得られたラミナをケース詰めする工程を含む、ラミナからなるたばこ原料の製造方法により、上記課題を解決することを見出した。
　　また、本発明では、インベルターゼの活性が１．０Ｕ／ｇ－Ｄ．Ｂ．以下であるラミナを提供できることを見出した。
　すなわち、本発明は、以下のとおりである。
［１］　キュアリング後の葉たばこをスレッシング処理してラミナを得る工程と、
　得られたラミナを加熱して、ラミナに含まれていたインベルターゼを失活させる加熱工程と、
　インベルターゼを失活させて得たラミナを長期保存用の容器に詰める工程と、
　をこの順序で含む、ラミナからなるたばこ原料の製造方法。
［２］　前記加熱工程が、ラミナのインベルターゼ活性値が１．０Ｕ／ｇ－Ｄ．Ｂ以下になるまで行われる、［１］に記載のたばこ原料の製造方法。
［３］　前記加熱工程に供されるラミナの水分含有量が、１０重量％以上、２０重量％以下である、［１］または［２］に記載のたばこ原料の製造方法。
［４］　前記加熱工程が、気流乾燥機を用いて行われる、［１］～［３］のいずれかに記載のたばこ原料の製造方法。
［５］　インベルターゼ活性値が１．０Ｕ／ｇ－Ｄ．Ｂ以下である、ラミナ。
［６］　ラミナの原料となるたばこ葉が、黄色種またはオリエント種である、［５］に記載のラミナ。
［７］　インベルターゼ活性値が０．５Ｕ／ｇ－Ｄ．Ｂ以下である、［５］または［６］に記載のラミナ。
［８］　［５］～［７］のいずれかに記載のラミナが、長期保存用の容器に充填されてなる、ラミナ充填物。
　本発明によれば、たばこ原料の長期保存中にインベルターゼの働きによるたばこ原料の内容成分の変化を防止する技術を提供できる。また、インベルターゼの活性値が低いラミナを提供することができる。
葉たばこの収穫後、長期保存（エージング）までに行われる処理のフローを示す図である。 葉たばこのインベルターゼ活性を各処理ごとに比較した結果を示す図である。 葉たばこにおけるインベルターゼ活性値と、スクロース残存率の関係を示す図である。
　以下、本発明について実施形態及び例示物等を示して詳細に説明するが、本発明は以下の実施形態及び例示物等に限定されるものではなく、本発明の要旨を逸脱しない範囲において任意に変更して実施できる。
　本発明でいう「葉たばこ」とは、本発明の製造方法に供されるものであって、後述するキュアリングの処理を行い、原料工場にて処理が行われるものをいう。また「たばこ葉」については、「葉たばこ」と基本的には同じものであるが、葉たばこのように原料工場での処理が前提となるものに限られない。
　また、「たばこ原料」とは、後述する原料工場での処理を経たものを意味する。
　図１で示すように、一般的な喫煙物品等のたばこ製品の製造工程は、収穫された葉たばこに対して下記のキュアリング処理を行った後に倉庫で保存し、その後原料工場に輸送して、解包、調湿、除骨、分離（除骨と分離を併せてスレッシングともいう）、再乾燥、ケース詰めの一連の処理を行ない、その後、倉庫等で長期保存（エージング）し、その後に当該たばこ原料を製造工場に輸送する、という過程を含む。
　従来のたばこ原料の製造工程においては、上記の再乾燥の処理では後述のようにスレッシングされたラミナの品温は、そのラミナに中に含まれている酵素の活性が失活するほど高いものではなかった。
　なお、本発明でいう「キュアリング」とは、収穫された葉たばこに対する初期の段階で行う処理のことであり、通常は乾燥、調湿などの工程を含み、葉たばこに含まれる各種の酵素の働きを活性化させたりすることもある。
　キュアリングは、主に以下の目的のために行われる。
（１）酵素の働きを高め、葉色の変化を進行させる。（２）葉肉を乾燥させ、葉色を固定させる。（３）中骨の水分を抜き去り、葉全体を乾固する。
　このキュアリングの後に、一定期間の倉庫での保存を経て、葉たばこは原料工場へ輸送される。
　なお、実験例３でも記載するが、バーレー種というたばこ種に対しては、Ａｉｒ－ｃｕｒｉｎｇと呼ばれる手法によって乾燥が行われる。この処理を経ると、バーレー種の葉たばこに含まれるスクロースはほとんど失われる。
　本発明でいう「キュアリング後の葉たばこ」は、上記のような一般的なキュアリングの処理が行われた葉たばこのことであり、収穫後、何の処理もされていない葉たばことは異なるものであることを意味する。
　本発明でいう「原料工場」とは、図１に示すように、収穫された葉たばこに対して上記で説明したキュアリングの処理がなされたものについて、調湿を経た後にスレッシング(ラミナ（葉肉部ともいう)と中骨（葉脈部ともいう）への分離）を行い、分離されたラミナに対して再乾燥を行い、長期保存用の容器へのケース詰めが行われる場所である。
　原料工場での調湿には一般に蒸気が用いられ、一例として、このときのラミナの温度は約６０℃、水分含有量は１８重量％程度にまで上昇する。ラミナが加熱される次のタイミングとしてはスレッシング後の再乾燥時である。ラミナの再乾燥は、通常多室型乾燥機またはロータリー乾燥機を用いて行われる。ラミナの再乾燥時の熱風温度は約８０～１００℃であるが、熱量はラミナを乾かすため（水分を除去するため）に使われるため、ラミナの温度（品温）自体は６０℃程度にまでしか上昇しない。
　このため、従来から行われている原料工場での乾燥処理を経るだけでは、ラミナに含まれているインベルターゼは失活しない。
　また、本発明でいう「エージング（長期保存ともいう）」は、原料工場での処理が行われたたばこ原料を、最終製品の製造工場に輸送する前に行われる処理であり、概ね１年以上の期間、倉庫や船中内で蔵置する処理のことをいう。
　本発明のラミナからなるたばこ原料の製造方法は、以下の工程を以下の順序で含むものである。
　キュアリング後の葉たばこをスレッシング処理してラミナを得る工程、
　得られたラミナを加熱して、ラミナに含まれていたインベルターゼを失活させる加熱工程、
　インベルターゼを失活させて得たラミナを長期保存用の容器に詰める工程。
　本発明のたばこ原料の製造方法は、上記の工程を上記の順序で含むが、各工程間には別の工程、例えば後述する調湿工程などが含まれてもよい。
　本発明の製造方法及びラミナに用いられる葉たばこの種類は特に限定されるものではなく、例えばニコチアナタバカムの黄色種、バーレー種、オリエント種、地域固有の在来種やニコチアナルスチカのブラジリア種などを挙げることができる。
　黄色種やオリエント種は、例えばバーレー種と比べてインベルターゼの活性値が元々高いので、そのインベルターゼ活性を失活させる処理を行ったときの効果がより大きく表れる。
　本発明の製造方法において、スレッシングに供される葉たばこに対して適宜行われる調湿の後の葉たばこの水分含有量は、１０～２０重量％である態様を挙げることができる。調湿して葉たばこの水分含有量を調整することで、葉たばこに柔軟性が与えられ、スレッシングをスムーズに行うことができる。
　必要に応じて葉たばこを調湿した後、ラミナと中骨に分離する処理が行われる。スレッシングは公知の方法により行うことができる。さらに、除骨機、風選分離機などにより、ラミナと中骨の分別が行われ、ラミナを得る。
　本発明でいう「ラミナ」とは、前述のキュアリング処理の後、スレッシングを経たものであって、いわゆるたばこ刻のような細片状に裁刻される前の状態のものをいう。
　よって、本発明で規定するラミナは、シガレットに用いられる刻とは異なるものであり、また、各ラミナの大きさは、シガレットに用いられる刻の各片よりも大きい断片が多数を占める。
　具体的には、本発明の「ラミナ」は、CORESTA RECOMMENDED METHOD N° 16により測定した値で、１／４インチ×１／４インチ以上の断片が８０％以上を占める集合体である。
　インベルターゼを失活させるための加熱処理としては、以下の態様を挙げることができる。なお、いずれの態様においても、加熱処理後のラミナのインベルターゼの活性値は、１．０Ｕ／ｇ－Ｄ．Ｂ．以下であることが、インベルターゼによる長期保存中のラミナの内容成分の変質を防止するために好ましい。加熱処理後のラミナのインベルターゼの活性値は、０．５Ｕ／ｇ－Ｄ．Ｂ．以下である態様や、０．２Ｕ／ｇ－Ｄ．Ｂ．以下である態様を挙げることもできる。
　上記の原料工場における再乾燥の後に、気流乾燥機を用いて１６０℃～２２０℃の加熱蒸気でラミナを加熱する工程を含ませることにより失活処理を行うことができる。このとき、ラミナのインベルターゼ活性を０．５Ｕ／ｇ－Ｄ．Ｂ．以下にまで減少させることができる。
　このときの加熱の際の時間としては、インベルターゼの活性を低減させることができれば特に制限はされないが、一例として、０．２～３０秒、別の例として０．３～２０秒、さらに別の例として０．５～１０秒を挙げることができる。
　再乾燥工程を多室型乾燥機ではなく、気流乾燥機を用いることで、上記の原料工場における再乾燥とインベルターゼの失活処理の両方を同時に行う工程として含ませることもできる。この場合も同様に、１６０℃～２２０℃の加熱蒸気をラミナに対して当てることができる。
　このときの加熱の際の時間としては、インベルターゼの活性を低減させることができれば特に制限はされないが、一例として、０．２～３０秒、別の例として０．３～２０秒、さらに別の例として０．５～１０秒を挙げることができる。
　多室型乾燥機を用いて、乾燥媒体の温度を１００℃以上の高温にして乾燥処理する工程を含ませることで、再乾燥と同時にラミナのインベルターゼを失活させてもよい。このときの加熱の際の時間としては、インベルターゼの活性を低減させることができれば特に制限はされないが、一例として、１～３０分、別の例として２～３０分、さらに別の例として５～２０分を挙げることができる。また、多室型乾燥機を用いる場合、乾燥室の一室を高温加熱セクションに設定して、多室型乾燥機による再乾燥の前または後に失活処理を施してもよい。その際の乾燥媒体の温度や、加熱時間の例は、上記と同じ条件を用いることができる。
　上記のように、葉たばこに含まれているインベルターゼを失活させるための加熱工程は、原料工場におけるラミナの再乾燥の後、または再乾燥と同時に行う態様を挙げることができる。
　上記で例示した加熱工程によれば、従来から知られているマイクロ波を用いた加熱方法では成し得なかったインベルターゼ活性の低減を十分に行うことができる。下記の実験例２（マイクロ波を用いた加熱処理）の結果で示されるように、マイクロ波を用いてインベルターゼの失活処理と再乾燥を同時に行わせた場合、インベルターゼの活性値が十分に下がらない。
　なお、上記の加熱工程に供するスレッシングされたラミナは、その水分含有量ができるだけ高いことが、インベルターゼの失活を効率的に行う観点で望ましい。具体的には、１０重量％以上、より好ましくは１５重量％以上、特に好ましくは１８重量％以上である。水分含有量の上限値としては、２０重量％程度を挙げることができる。このようなラミナを得るために、適宜調湿する工程を含ませてもよい。
　上記の加熱工程において、気流乾燥機を用いる場合には、気流温度が、インベルターゼ活性値を十分に低減させる観点から、１４０℃以上であることが好ましく、１６０℃以上であることがより好ましく、１８０℃以上であることがさらに好ましく、２００℃以上であることが特に好ましい。
　一方で、気流乾燥機における気流温度は、３５０℃以下である態様を挙げることができる。
　また、気流乾燥機を用いる場合の線速度は、２０～３０ｍ／ｓである態様を挙げることができる。
　また、気流乾燥機を用いる場合の気流の絶対湿度はできるだけ高いことが好ましく、例えば６０～９９％v/vを挙げることができる。
　上記のインベルターゼを失活させる処理が行われたラミナは、そのインベルターゼ活性値が、１．０Ｕ／ｇ－Ｄ．Ｂ．以下にまで低下している。つまり、本発明は、インベルターゼ活性値が１．０Ｕ／ｇ－Ｄ．Ｂ．以下のラミナを提供する。このインベルターゼ活性値は、失活処理の程度や、葉たばこが有する元々のインベルターゼ活性値の程度に応じて、さらに減少させることができ、例えば、０．５Ｕ／ｇ－Ｄ．Ｂ．以下である態様や、０．２Ｕ／ｇ－Ｄ．Ｂ．以下である態様も挙げることができる。
　上記の本発明のラミナは、後の製造工場に供される前の長期保存中に内容成分の変質が起こりにくい。
　インベルターゼの失活処理が行われたラミナの含水率は、概ね１０～１４重量％である態様を挙げることができ、１１～１２重量％である態様を挙げることができる。
　本発明のラミナの原料となる葉たばこの種類は、上記で挙げた、ニコチアナタバカムの黄色種、バーレー種、オリエント種、地域固有の在来種やニコチアナルスチカのブラジリア種などを挙げることができ、黄色種やオリエント種を好適に例示できる。
　また、インベルターゼの失活処理が行われた後のラミナに含まれるスクロースの含有量は、葉たばこが黄色種やオリエント種の場合は０．４～５．０重量％である態様を挙げることができ、それ以外の葉たばこの種類の場合は、０．０１～０．８重量％である態様を挙げることができる。
　ラミナに含まれるスクロースの含有量については、後述する実験例で行った方法を用いて測定することができる。
　得られたラミナから構成されるたばこ原料は、エージングのための長期保存用の容器にケース詰めされる。ケース詰めはラミナがケース内で圧縮されるように行う態様を挙げることができる。
　長期保存用の容器としては、従来から用いられているものを用いることができる。ここでいう長期保存用の容器とは、シガレット用のパッケージのような、シガレット等の最終製品を梱包するためのものとは異なるものであり、最終製品の製造に供されるたばこ原料を保存するための容器である。
　より具体的な長期保存用の容器の例としては、７００ｍｍ×７００ｍｍ×１１００ｍｍ(約０．５～０．６ｍ３)のカードボードや、２ｍ３容積の木樽などを挙げることができる。
　本発明は、上記のような長期保存用の容器に充填されたラミナ（ラミナ充填物）も対象として含む。このとき、ラミナ充填物におけるラミナの含水率は、概ね１０～１４重量％である態様を挙げることができ、１１～１２重量％である態様を挙げることができる。
　なお、本発明の、長期保存用の容器にケース詰めされたラミナ充填物を構成するラミナは、上記のようにインベルターゼ活性の失活処理が行われたものであり、インベルターゼ活性値は１．０Ｕ／ｇ－Ｄ．Ｂ．であり、より好ましくは０．５Ｕ／ｇ－Ｄ．Ｂ．であり、特に好ましくは０．２Ｕ／ｇ－Ｄ．Ｂ．である。
　ラミナのインベルターゼ活性値は、長期保存中のインベルターゼの働きを低下させる観点から低ければ低いほど好ましい。
　＜インベルターゼ活性値の測定法＞
１．粗酵素液の調製
　たばこ乾燥葉２．０ｇから、ＭｃＩｌｖａｉｎｅ緩衝液を用いて酵素タンパク質を抽出し、粗酵素液を調製する。操作時の温度は４℃で行う。
この粗酵素液は、たばこ乾燥葉の０．１ｇに含まれる高分子粗精製物が１ｍＬに溶解しているように調製する(０．１ｇのたばこ乾燥葉に含まれる可溶性高分子／１ｍＬ)。
２．グルコースの生成と濃度の測定
　調製した粗酵素液と上記の緩衝液の混合溶液を４つ準備して、それぞれ４０℃に２分間加温し、それぞれに０．５Ｍスクロース水溶液を８０μＬ加え、一つは５分後、もう一つは１０分後、さらにもう一つは１５分後、最後の一つは３０分後に１．０Ｍ炭酸ナトリウム溶液を２００μＬ加え、グルコースの生成反応を停止させる。各溶液中の、生成したグルコースの濃度についてヘキソキナーゼ法を用いて測定する。
３．インベルターゼ活性値の算出
　グルコース濃度の時間当たりの増加速度から、１分当たりのグルコース生成速度を算出した値をＡｍｇ・ｍＬ－１・ｍｉｎ－１とする。この値に対して、
Ａ［ｍｇ・ｍＬ－１・ｍｉｎ－１］×活性測定後の最終液量（以下の実施例では０．６）［ｍＬ]÷１８０．１６[ｇ・ｍｏｌ－１（グルコースの分子量)]×１０００（単位換算ｍｍｏｌ→μｍｏｌ）÷用いた粗酵素溶液量（以下の実施例では０．１２）[ｍｌ]÷０．１[ｇ／ｍＬ(粗酵素液濃度)]の計算式により算出される値を、さらに乾燥たばこ葉の含水率から割り戻した値を（Ｄｒｙ ｂａｓｅ）乾燥たばこ葉中の乾物重量当たりのインベルターゼ活性値［Ｕ／ｇ－Ｄ.Ｂ.］とする。
　酵素活性は、１分間に１μｍｏｌのグルコースを遊離させる酵素量を１Ｕとする。
４．たばこ乾燥葉の含水率の測定
　試料の含水率は、下記の方法により、インベルターゼの活性測定とは別に、並行して測定する。乾燥たばこ葉の水分量は、次の乾燥葉の検体を１．０ｇ秤量し、１００℃に設定したロータリーオーブン（Ｔｓｕｋａｓａ Ｃｏ., Ｌｔｄ., Ｔｏｋｙｏ）内にて１時間乾燥した。乾燥後、検体はデシケーターの中で室温まで冷却した。乾燥前後での重量変化分を水分量とする。
　上記のインベルターゼ活性値の測定法については、以下の実施例でさらに詳述する。
　本発明の製造方法により得られるラミナは、その後、製造工場に輸送されて最終製品の製造に用いられる。
　最終製品としては、シガレット等の喫煙物品に加え、非燃焼型または非加熱型の喫煙物品や、スヌースなどの口腔用たばこを挙げることもできる。
　本発明のラミナからなるたばこ原料の製造方法によれば、収穫後の葉たばこに含まれていたインベルターゼが失活していることにより、最終製品の製造工場に輸送される前の段階で行われる長期保存の間に、インベルターゼの働きによって起こりうる、たばこ原料に含まれる成分の変化を防ぐことができる。
　また、本発明は最終製品の製造工場に輸送される前の段階で行われる長期保存に適したラミナを提供できる。
　本発明を実験例によって更に具体的に説明するが、本発明はその要旨を超えない限り、以下の実験例の記載に限定されるものではない。
　＜実験例１＞
　キュアリング後、スレッシング（ラミナと中骨への分離）を行った後、３か月以上経っていない葉たばこについて、インベルターゼの失活処理を行った。失活操作に先立ち、葉たばこの調湿(含水率の制御)、処理前の酵素活性測定を行った。
　葉たばこの調湿は、スプレーを用いて水を添加する方法、または一定の温湿度環境（温度２２℃、相対湿度６０～８０％ＲＨ）に原料を１日以上静置することによって調湿を行った。調湿後の含水率測定、および処理前の酵素活性測定は、以下で示すインベルターゼ活性の測定法に従って実施した。インベルターゼの失活処理は、気流乾燥機を用いて表１に示す条件で行った。
　以下の表１に示すように、気流の線速度約２０～３０ｍ／ｓ、温度１４０℃以上（３５０℃以下)の気流中に葉たばこの原料を投入する事によって効果的なインベルターゼの失活が達成できた。また、この処理は気流の絶対湿度が高い場合に特に効果が高かった。気流処理を行う時の葉たばこの水分含有量が高い方がより良好な結果が得られた。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000001
　なお、表１のバーレー種の結果については、インベルターゼの失活処理を行っていない葉たばこの活性値（コントロール２として記載）とともに図２に示した。コントロール２と比べて、気流乾燥による加熱処理を行った葉たばこのインベルターゼ活性値は著しく低下していることが分かる。
＜インベルターゼ活性値の測定＞
　乾燥たばこ葉を１．０ｍｍメッシュ以下に粉砕した。粉末した原料２．０±０．００６ｇをガラスバイアルに秤量し、４℃に冷却しておいた１００ｍＬの１５ｍＭ ＭｃＩｌｖａｉｎｅ緩衝液（４．８ｍＭクエン酸－１０．２ｍＭリン酸水素二ナトリウム緩衝液、ｐＨ５．４）に懸濁した。懸濁液をホモジナイズし、さらに超音波を掛けて３０分間酵素タンパク質を抽出した。抽出液をＷｈａｔｍａｎｎ♯６０を用いて濾過し、濾液を１２，０００×ｇ、１０分間遠心した。上清を孔径０．２μmのセルロースアセテートメンブレン（Ｗｈａｔｍａｎｎ）を用いて濾過した。濾液を６０ｍＬ分取し、３０ｋＤａ限外濾過膜（Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ、遠心式限外濾過チューブ×４）を用いて低分子成分を除去するとともに高分子成分を濃縮した。高分子成分の濃縮液に対して、抽出に用いた緩衝液を加えて希釈し、再び限外濾過を行う事により高分子画分を洗浄(低分子を除去)した。さらに高分子画分の洗浄操作を２回繰り返した。洗浄した濃縮液は、抽出に用いた緩衝液を用いて１２ｍＬにメスアップした。このメスアップした溶液を、粗酵素液と定義する。粗酵素液の調製操作は全て４℃で実施した。
　調製した粗酵素液は、たばこ原料０．１ｇ相当の高分子粗精製物が１ｍＬに溶解している計算となる。(０．１ｇの原料中可溶性高分子／１ｍＬ)
　調製した粗酵素液１２０μLと１００ｍＭ, ｐＨ５．０のＭｃＩｌｖａｉｎｅ緩衝液２００μL とをエッペンドルフチューブ内で混合した溶液を４つ調製し、それぞれヒートブロック内で４０℃、２分間加温した。加温した４つの混合溶液に、０．５Ｍスクロース水溶液をそれぞれ８０μL加え、一つは５分後、もう一つは１０分後、さらにもう一つは１５分後、最後の一つは３０分後に１．０Ｍ炭酸ナトリウム溶液を２００μＬ加え、反応を停止した。各溶液中の、生成したグルコースの濃度についてヘキソキナーゼ法を用いて測定した。ヘキソキナーゼ法はＦ－ｋｉｔ Ｇｌｕｃｏｓｅ （Ｒｏｃｈｅ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ）を用い、操作法はメーカーインストラクションマニュアルに従った。グルコース濃度の時間当の増加速度から、１分当たりのグルコース生成速度を算出した値をＡ ｍｇ・ｍＬ－１・ｍｉｎ－１とする。
　この値に対して、　Ａ［ｍｇ・ｍＬ－１・ｍｉｎ－１］×０．６［ｍＬ(活性測定後の最終液量)]÷１８０．１６［ｇ・ｍｏｌ－１(グルコースの分子量)]×１０００（単位換算ｍｍｏｌ→μｍｏｌ）÷０．１２［ｍｌ(用いた粗酵素溶液)]÷０．１[ｇ／ｍＬ(粗酵素液濃度)]の計算式により算出される値を、さらに試料の含水率から割り戻した値を（Ｄｒｙ ｂａｓｅ）乾燥たばこ葉中の乾物重量当のインベルターゼ活性値［Ｕ／ｇ－Ｄ.Ｂ.］とする。酵素活性は、１分間に１μｍｏｌのグルコースを遊離させる酵素量を１Ｕとした。試料の含水率は、下記の方法により、酵素活性測定とは別に、並行して測定した。たばこ葉の水分量は次の乾燥葉の検体を１．０ｇ秤量し、１００℃に設定したロータリーオーブン（Ｔｓｕｋａｓａ Ｃｏ., Ｌｔｄ., Ｔｏｋｙｏ）内にて１時間乾燥した。乾燥後、検体はデシケーターの中で室温まで冷却した。乾燥前後での重量変化分を含水率（水分）とした。
　＜実験例２＞
　キュアリング後、エージング前のたばこ葉（酵素活性値：５．１２Ｕ／ｇ－Ｗ.Ｂ.［Ｄｒｙ－ｂａｓｅ換算だと６．１８ Ｕ／ｇ－Ｄ.Ｂ.]、含水率１７．２％－Ｗ.Ｂ.）に対してマイクロ波加熱を実施した。マイクロ波の発振周波数は２４５０ＭＨｚ、周波出力１０００Ｗを３０ｇ－Ｗ.Ｂ.の原料に対して２分間照射した。照射後の原料の水分は４．８％－Ｗ.Ｂ.であった。本たばこ葉のインベルターゼ活性を測定すると、４．８２Ｕ／ｇ－Ｗ.Ｂ.（５．０７Ｕ／ｇ－Ｄ.Ｂ.）であった。
　なお、マイクロ波加熱は市販の電子レンジ（メーカー・型式：東芝電子レンジER-C10(S)）を用いた。
　マイクロ波加熱の前後のインベルターゼ活性値の測定結果を、実験例１の結果とともに、図２に示した。図２のコントロール１は、マイクロ波加熱を行っていないものである。
　図２の結果から、マイクロ波加熱を行ったとしても、インベルターゼ活性はほとんど失活しないことが分かった。
　＜実験例３＞
　たばこ葉の保存前後におけるスクロースの残存率と、インベルターゼ活性値の関係を調べるために、以下の実験を行った。まず、１４種類のたばこ葉を準備した。これらはすべて乾燥たばこ葉である。１４種類のたばこ葉は、黄色種、オリエント種、または人為的にスクロースを添加したバーレー種によって構成される。保存試験を実施する前に、全てのたばこ葉について２２℃、６０％相対湿度の環境で４８時間調湿した。調湿後の水分量は全て１１．５±０．５％-Ｗ.Ｂ.となった。それぞれのたばこ葉について、保存試験前にスクロース含有量［ｍｇ／ｇ－Ｄ.Ｂ.］およびインベルターゼ活性値［Ｕ／ｇ－Ｄ.Ｂ.］を測定した。
　調湿したそれぞれのたばこ葉をラミジップ（株式会社生産日本社、登録商標）に梱包し、密閉状態で保存試験に供した。保存試験は、恒温環境試験機を用いて一定温度で実施し、４０℃で４週間実施した。保存試験後の原料のスクロース含有量を測定し、保存試験前後のスクロース含有量の変化からスクロースの残存率を算出した。
（保存試験前のスクロース含有量［ｍｇ／ｇ－Ｄ.Ｂ.］÷保存試験後のスクロース含有量［ｍｇ／ｇ－Ｄ.Ｂ.］×１００（％））
　なお、バーレー種の葉たばこは、一般にＡｉｒ－ｃｕｒｉｎｇと呼ばれる手法によって乾燥される。Ａｉｒ－ｃｕｒｉｎｇされたバーレー種の葉たばこは、エージング処理の有無に関わらずスクロースが完全に失われる。そのため、本保存試験では、バーレー種に関してのみ、人工的にスクロースを外部から添加（水溶液を噴霧）して試験に供した。
　上記の実験例において、スクロースの含有量は以下の測定方法に従って行った。
　実験方法：保存前または保存後の乾燥たばこ葉を１．０ｍｍメッシュ以下に粉砕する。粉砕したたばこ葉１．０ｇ±０．００１ｇをガラスバイアルに秤量し、５０ｖ／ｖ％アセトニトリル溶液を４０ｍＬ加え、３０分間２００ｒｐｍで振盪する。振盪後さらに、超音波でアシスト(Ｂｒａｎｓｏｎｉｃ（登録商標） ｃｌｅａｎｅｒ（Ｂｒａｎｓｏｎ Ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ Ｃｏ., Ｄａｎｂｕｒｙ, ＣＴ, ＵＳＡ）)しながら、室温で３０分抽出する。抽出液を孔径０．２μｍのＰＶＤＦメンブレン（Ｗｈａｔｍａｎｎ）を用いてろ過し、得られたろ液を機器分析に供した。分析機器には高速液体クロマトグラフィー（Ａｇｉｌｅｎｔ １２００ ＨＰＬＣ ｓｙｓｔｅｍ）を用いた。機器分析条件は以下に記す。
・検出器：示差屈折検出器（Ｇ１３６２Ａ ｒｅｆｒａｃｔｉｖｅ ｉｎｄｅｘ ｄｅｔｅｃｔｏｒ （Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ, ＣＡ, ＵＳＡ）セット温度３５℃、絶対検量線法(検量線範囲０．１～１０ｇ／Ｌ)
・カラム：Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｃｏｌｕｍｎ （２５０×４．６ ｍｍ Ｉ.Ｄ., ４ μｍ, Ｗａｔｅｒｓ Ｃｏ., Ｍｉｌｆｏｒｄ, ＭＡ, ＵＳＡ)
・溶出条件：Ｅｌｕｅｎｔ； Ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ （７５ｖ／ｖ％）, Ｆｌｏｗ ｒａｔｅ； １．０ ｍＬ／ｍｉｎ, Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ｖｏｌｕｍｅ： ２０μＬ
　実験例３の結果を図３に示す。図３の横軸はインベルターゼ活性値を示し、縦軸は保存後のたばこ葉におけるスクロース残存率を示している。図３から、たばこ葉のインベルターゼ活性値が概ね１．０Ｕ／ｇ－Ｄ．Ｂ．以下であれば、保存中にインベルターゼの活性によるスクロースの分解が少ないことが分かる（スクロースの残存率が概ね８０％以上）。
　本発明の製造方法によれば、たばこ原料のエージング期間中にインベルターゼの働きによるたばこ原料の内容成分の変化を防止する技術を提供できる。また、インベルターゼの活性値が低いラミナを提供することができる。

Claims (8)

  1. 　キュアリング後の葉たばこをスレッシング処理してラミナを得る工程と、
    　得られたラミナを加熱して、ラミナに含まれていたインベルターゼを失活させる加熱工程と、
    　インベルターゼを失活させて得たラミナを長期保存用の容器に詰める工程と、
    　をこの順序で含む、ラミナからなるたばこ原料の製造方法。
  2. 　前記加熱工程が、ラミナのインベルターゼ活性値が１．０Ｕ／ｇ－Ｄ．Ｂ以下になるまで行われる、請求項１に記載のたばこ原料の製造方法。
  3. 　前記加熱工程に供されるラミナの水分含有量が、１０重量％以上、２０重量％以下である、請求項１または２に記載のたばこ原料の製造方法。
  4. 　前記加熱工程が、気流乾燥機を用いて行われる、請求項１～３のいずれか一項に記載のたばこ原料の製造方法。
  5. 　インベルターゼ活性値が１．０Ｕ／ｇ－Ｄ．Ｂ以下である、ラミナ。
  6. 　ラミナの原料となるたばこ葉が、黄色種またはオリエント種である、請求項５に記載のラミナ。
  7. 　インベルターゼ活性値が０．５Ｕ／ｇ－Ｄ．Ｂ以下である、請求項５または６に記載のラミナ。
  8. 　請求項５～７のいずれか一項に記載のラミナが、長期保存用の容器に充填されてなる、ラミナ充填物。
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