WO2018034269A1 - 細胞培養装置 - Google Patents

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WO2018034269A1
WO2018034269A1 PCT/JP2017/029305 JP2017029305W WO2018034269A1 WO 2018034269 A1 WO2018034269 A1 WO 2018034269A1 JP 2017029305 W JP2017029305 W JP 2017029305W WO 2018034269 A1 WO2018034269 A1 WO 2018034269A1
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WO
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transfer port
culture bag
base
culture
cells
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French (fr)
Inventor
幡多　徳彦
正広 村井
Original Assignee
東洋製罐グループホールディングス株式会社
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M1/00—Apparatus for enzymology or microbiology

Definitions

  • the present invention relates to a cell culture apparatus that performs cell culture using a culture bag.
  • the present applicant has constructed a closed environment using a bag-shaped culture bag made of a flexible material, and efficiently cultured cells while reducing the risk of contamination. Studies have been conducted on cell culture techniques that can be performed.
  • Patent Document 1 the applicant connects a plurality of culture bags via a transfer tube, transfers cells cultured in a culture bag having a small capacity to a culture bag having a larger capacity, and the density of the cells.
  • a cell culture method that allows cells to proliferate efficiently while maintaining a suitable level.
  • patent document 1 inclines the culture bag arrange
  • the patent document 1 shows the example which inclines a culture bag by rotating the base stand in which the culture bag was mounted, pivoting the one end side. .
  • the transfer port is usually made of a tubular member having a certain thickness, and when the culture bag 10 is placed on the base 2p as shown in FIG. A step corresponding to the thickness of the transfer port 11 is formed between the flow port 12 of the port 11 and the periphery of the transfer port 11 is caused by bending of the flexible material on the inner bottom surface of the culture bag 10. Wrinkles are likely to occur. For this reason, it is considered that the cells C that are blocked by such steps and wrinkles and cannot reach the flow hole 12 of the transfer port 11 stay in front of the transfer port 11.
  • FIG. 4 is an explanatory view showing the prior art, and shows a cross section of the culture bag 10 placed on the base 2p on the transfer port 11 side.
  • an object of the present invention is to provide a cell culture device that can collect or transfer more cells.
  • the cell culture device is a cell culture device that performs cell culture using a culture bag made of a flexible material, and is provided on a base on which the culture bag is placed and the culture bag A holder for holding the transfer port, and the base is formed with a notch at a portion facing the transfer port when the culture bag is placed, and the holder has the The lowermost part of the flow hole of the transfer port is configured to hold the transfer port in a state where the lowermost part is positioned below a reference surface including the mounting surface of the base on which the culture bag is mounted. .
  • the residual cells in the culture bag due to the cells remaining in the vicinity of the transfer port is reduced, and more cells are removed. It can be recovered or transferred.
  • FIG. 3 is a cross-sectional view taken along line AA in FIG. 2. It is explanatory drawing which shows a prior art.
  • a cell culture apparatus 1 shown in these drawings is an apparatus for performing cell culture using a culture bag 10 made of a flexible material.
  • FIG. 1 shows a state before the culture bag 10 is attached to the cell culture device 1
  • FIG. 2 shows a state where the culture bag 10 is attached to the cell culture device 1.
  • the culture bag 10 preferably has gas permeability (oxygen permeability, carbon dioxide permeability) necessary for cell culture so that cell culture can be performed in a closed system. Furthermore, in order to realize high cell growth efficiency, it is preferable that it has low cytotoxicity, low elution property, and radiation sterilization suitability, so that the progress of cell culture and the state of cells can be observed. It is preferable to have transparency to the extent that it can be seen through.
  • gas permeability oxygen permeability, carbon dioxide permeability
  • Examples of the flexible material forming the culture bag 10 include polyethylene, polypropylene, ethylene- ⁇ -olefin copolymer, ethylene-vinyl acetate copolymer, ethylene and acrylic acid or methacrylic acid copolymer, and metal ions.
  • Examples thereof include resin films made of thermoplastic resins such as ionomers, polyester-based thermoplastic elastomers, silicone-based thermoplastic elastomers, polystyrene-based thermoplastic elastomers, and tetrafluoroethylene-hexafluoropropylene copolymers (FEP). These resins may be used in a single layer or may be used by laminating the same or different resins.
  • the culture bag 10 is formed into a bag shape using such a flexible material.
  • the peripheral part can be sealed by heat sealing and formed into a desired shape such as a square shape, but prepared for culturing such cells together with the cells to be cultured.
  • the specific form is not limited as long as the medium can be accommodated without hindrance to the culture.
  • the culture bag 10 is provided with a transfer port 11 that can connect a transfer tube.
  • a transfer port 11 By providing such a transfer port 11, for example, the culture medium is supplied from the culture medium bag in which the culture medium is stored, or the cultured cells are recovered from the culture bag 10 after the culture is completed. Operations such as transfer to a bag or another culture bag can be performed while maintaining a closed system via a transfer tube connected to the transfer port 11.
  • the transfer port 11 is formed of a tubular member through which a culture medium, cells, and the like can circulate.
  • a culture medium for example, polyethylene, polypropylene, ethylene-vinyl acetate copolymer, chlorinated polyethylene resin, polybutadiene resin, silicone rubber, polyurethane-based thermoplastic elastomer .
  • a thermoplastic resin such as polyester-based thermoplastic elastomer, silicone-based thermoplastic elastomer, vinyl chloride, polystyrene-based thermoplastic elastomer, FEP, and the like
  • the feed hole 12 penetrating in the axial direction is formed by injection molding, extrusion molding, or the like. It can be formed into a predetermined shape.
  • a port blocking prevention piece projecting into 10 can be provided.
  • the transfer port 11 is formed between the resin film that forms the top surface side of the culture bag 10 and the resin film that forms the bottom surface side. It can be provided by heat-sealing with the member interposed therebetween.
  • the cell culture device 1 includes a base 2 on which such a culture bag 10 is placed and a holder 3 that holds a transfer port 11 provided in the culture bag 10.
  • the base 2 is a base having a mounting surface on which the culture bag 10 is placed.
  • the fixtures 21 standing at the four corners of the base 2 are drilled at the four corners of the culture bag 10.
  • the culture bag 10 can be placed on the mounting surface by locking the formed holes 13.
  • the base 2 may be configured to be pivotable on one end side thereof. By doing so, the culture bag 10 placed on the base 2 is tilted so that the transfer port 11 is on the lower side, and the content liquid of the culture bag 10 is sent from the transfer port 11.
  • the means for sending the liquid in the culture bag 10 from the transfer port 11 is not limited to this.
  • a peristaltic pump may be attached to a transfer tube connected to the transfer port 11, and the liquid in the culture bag 10 may be sent from the transfer port 11 by the operation.
  • the base 2 is formed with a notch 22 at a portion facing the transfer port 11 provided in the culture bag 10 when the culture bag 10 is placed.
  • the notch 22 is positioned on the base 2 so that the transfer port 11 can push down the transfer port 11 against the mounting surface of the base 2 without interfering with the base 2. It can be formed along the contour of the transfer port 11 (see FIG. 2).
  • the pushed-down transfer port 11 has a holding tool in a state where the lowermost part of the flow hole 12 is positioned below the reference surface including the mounting surface of the base 2. 3 is held.
  • 3 is a cross-sectional view taken along the line AA in FIG. 2, and the reference plane is indicated by a one-dot chain line.
  • a receiving portion 3 a provided with an insertion portion through which the transfer port 11 is inserted, and an upper portion of the transfer port 11 that is inserted into the insertion portion.
  • the holding tool 3 which consists of the presser plate 3b which presses down is simplified and shown. If the transfer port 11 can be held in a state where the lowermost portion of the flow hole 12 of the transfer port 11 is located below the reference surface including the mounting surface of the base 2, the specific configuration of the holder 3 although not limited to this, it is preferable that the transfer port 11 can be held so that the central axis of the transfer port 11 is parallel to the mounting surface of the base 2.
  • a step is formed between the inner bottom surface of the culture bag 10 placed on the base 2 and the feed hole 12 of the transfer port 11, or the culture bag around the transfer port 11.
  • the content liquid is sent from the transfer port 11, and when the cultured cells are collected or transferred, the transfer port 11 is blocked by the steps or wrinkles.
  • the cells C that could not reach the flow hole 12 stay in front of the transfer port 11 (see FIG. 4).
  • the transfer port 11 is held so that the lowermost portion of the flow hole 12 of the transfer port 11 is positioned below the reference surface including the mounting surface of the base 2.
  • the feed hole 12 of the transfer port 11 is located on the extension of the inner bottom surface of the culture bag 10 held on the tool 3 and placed on the base 2. As a result, no step is formed between the inner bottom surface of the culture bag 10 and the feed hole 12 of the transfer port 11, and the wrinkle on the inner bottom surface of the culture bag 10 is pulled by the pushed transfer port 11. Therefore, the cells C in the content liquid can easily reach the flow hole 12 of the transfer port 11 (see FIG. 3). As a result, according to the present embodiment, it is possible to effectively avoid the cells from staying in front of the transfer port 11 and collect or transfer more cells.
  • the lowermost portion of the flow hole 12 of the transfer port 11 is positioned below the reference surface including the mounting surface of the base 2 so that the cells in the content liquid are It is easy to reach the flow hole 12 of the transfer port 11.
  • the center of the flow hole 12 of the transfer port 11 is placed on the base 2. It is preferable that the uppermost part of the flow hole 12 of the transfer port 11 is located above the reference plane, preferably on the reference plane including the plane or below the reference plane. .
  • the base 2 simplified as a flat plate is illustrated and described, but the specific form of the base 2 is not limited to this.
  • the base 2 has a partition piece that can protrude from the mounting surface at a predetermined height when the partition piece is accommodated in the base. It is good also as a structure embed
  • the base 2 is provided with a pressing plate for pressing the culture bag 10 placed on the base 2, and the amount of the liquid content of the culture bag 10 is set. It can also be attached so that it can be moved up and down according to.
  • the present invention includes a base 2 on which the culture bag 10 is placed, and a holder 3 that holds a transfer port 11 provided on the culture bag 10, and the base 2 includes the culture bag 10.
  • a notch 22 is formed in a portion where the transfer port 11 faces when placed, the holder 3 is placed at the bottom of the flow hole 12 of the transfer port 11 and the culture bag 10 is placed. If the transfer port 11 is held in a state of being located below the reference surface including the mounting surface of the base 2, the other detailed configuration is limited to the above-described embodiment. It can be appropriately changed without any problem. Further, the detailed configurations described in the above-described embodiments can be appropriately selected and combined.
  • a culture bag 10 was prepared in which the peripheral part was sealed by heat sealing and formed into a rectangular shape having a length of 320 mm and a width of 90 mm.
  • a sample culture solution including cultured cells and a medium
  • the transfer port 11 located on the notch 22 formed in the base 2 is pushed down, and the lowermost part of the flow hole 12 of the transfer port 11 is the base on which the culture bag 10 is placed.
  • the transfer port 11 is held by the holder 3 in a state of being located below the reference plane including the two mounting surfaces.
  • one end side of the base 2 is pivotally supported and rotated, and the culture bag 10 placed on the base 2 is tilted so that the transfer port 11 is on the lower side.
  • the liquid was sent from the transfer port 11 by a drop, and was allowed to stand until no flow from the transfer port 11 was observed.
  • the base 2 is provided with a pressing plate that presses the upper surface side of the culture bag 10 so that the content liquid is less likely to be biased when the culture bag 10 is tilted.
  • the inclination angle of the base 2 was about 10 °.
  • the culture bag 10 was removed from the cell culture device 1, and a syringe containing physiological saline 5 mL and air 7 mL was connected to the transfer port 11 and injected into the culture bag 10.
  • the inside of the culture bag 10 is washed with injected physiological saline, the mixed solution of the culture solution and physiological saline remaining in the culture bag 10 is recovered, and the recovered solution is placed in a 15 mL centrifuge tube, and 3 at 1200 rpm. Centrifuged for minutes. Mix the collected liquid after centrifugation again with a pipette, measure the volume of the collected liquid, dilute it 10 times, measure the number of cells as usual with a hemocytometer, and calculate the number of remaining cells in the collected liquid did. The results are shown in Table 1.
  • Example 1 The content liquid in the culture bag 10 was fed from the transfer port 11 by a drop under the same conditions as in Example 1 except that the base 2p (see FIG. 4) in which the notch 22 was not formed was used. Thereafter, the inside of the culture bag 10 was washed with physiological saline, and the number of remaining cells in the collected liquid was calculated. Based on this, the reduction rate of the number of remaining cells of Comparative Example 1 of Example 1 was also calculated. The results are shown in Table 1.
  • Example 2 Comparative Example 2 Except that the cell concentration of the sample culture solution is different, the contents of the culture bag 10 are fed from the transfer port 11 by a drop under the same conditions as in Example 1 and Comparative Example 1, respectively. After washing with physiological saline, the number of remaining cells in the collected liquid was calculated. Based on this, the reduction rate of the number of remaining cells of Comparative Example 2 in Example 2 was also calculated. The results are shown in Table 1.
  • the number of remaining cells in the culture bag 10 is set such that the lowermost portion of the flow hole 12 of the transfer port 11 is positioned below the reference surface including the mounting surface of the base 2. It was confirmed that more cells could be recovered.
  • the present invention can be suitably used in regenerative medicine, immunotherapy, antibody drug production, etc., in which cells are cultured in large quantities in a closed system.

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Abstract

培養バッグ１０が載置される基台２に、培養バッグ１０を載置したときに移送用ポート１１が対向する部位に切り欠き部２２を形成し、移送用ポート１１の送流孔１２の最下部が、培養バッグ１０が載置される基台２の載置面を含む基準面よりも下方に位置する状態で、移送用ポート１１を保持具３に保持する。これにより、培養バッグ１０を用いて培養された細胞を回収又は移送するに際し、培養バッグ１０が備える移送用ポート１１の送流孔１２に細胞が到達し易くなり、より多くの細胞を回収又は移送できる。

Description

細胞培養装置
　本発明は、培養バッグを用いて細胞培養を行う細胞培養装置に関する。
　近年、医薬品の生産、遺伝子治療、再生医療、免疫療法などの医薬学・生化学分野において、細胞（組織、微生物、ウイルスなどを含む）を人工的な環境下で効率良く大量に培養することが求められている。
　このような要求に応えるべく、本出願人は、可撓性材料からなる袋状の培養バッグを用いて閉鎖系の環境を構築し、コンタミネーションのリスクを低減しつつ、効率的に細胞を培養することができる細胞培養に係る技術について検討を重ねてきた。
　例えば、本出願人は、特許文献１において、移送チューブを介して複数の培養バッグを接続し、容量の小さい培養バッグで培養された細胞をより容量の大きい培養バッグに移送して、細胞の密度を適性に維持しながら、細胞を効率良く増殖させる細胞培養方法を提案している。
　また、特許文献１では、相対的に高い位置に配置された培養バッグを、当該培養バッグが備える移送用ポートが下側となるように傾けて、その内容液（培養された細胞が培地中に懸濁した細胞懸濁液）を移送用ポートから送流することによって、相対的に低い位置に配置された培養バッグに移送することも提案している。そして、特許文献１には、培養バッグを傾ける装置の一例として、培養バッグが載置された基台を、その一端側を軸支して回動させることによって培養バッグを傾ける例を示している。
特開２０１５－１８８３９２号公報
　しかしながら、その後の本出願人の検討によれば、培養バッグが備える移送用ポートから内容液を送流して、培養された細胞を回収又は移送する際には、培養バッグ内の移送用ポートの近傍に細胞が滞留し易い傾向にあり、滞留した細胞は培養バッグ内に残って回収できなくなってしまうという知見が得られている。
　これは、次のような理由によるものと考えられる。すなわち、移送用ポートは、通常、ある程度の厚みのある管状の部材からなり、図４に示すように、培養バッグ１０を基台２ｐに載置したときに、培養バッグ１０の内底面と移送用ポート１１の送流孔１２との間には、移送用ポート１１の厚み分の段差が形成され、また、移送用ポート１１の周辺では、培養バッグ１０の内底面に可撓性材料の撓みによるシワが生じ易い。そのため、このような段差やシワに遮られて、移送用ポート１１の送流孔１２に到達できなかった細胞Ｃが、移送用ポート１１の手前に滞留してしまうためであると考えられる。
　なお、図４は、従来技術を示す説明図であり、基台２ｐに載置された培養バッグ１０の移送用ポート１１側の断面を示している。
　本発明は、このような知見に基づいてなされたものであり、培養バッグを用いて培養された細胞を回収又は移送するに際し、培養バッグが備える移送用ポートの送流孔に細胞が到達し易くすることで、より多くの細胞を回収又は移送できるようにした細胞培養装置の提供を目的とする。
　本発明に係る細胞培養装置は、可撓性材料からなる培養バッグを用いて細胞培養を行う細胞培養装置であって、前記培養バッグが載置される基台と、前記培養バッグに設けられた移送用ポートを保持する保持具とを備え、前記基台には、前記培養バッグを載置したときに前記移送用ポートが対向する部位に、切り欠き部が形成され、前記保持具が、前記移送用ポートの送流孔の最下部が、前記培養バッグが載置される前記基台の載置面を含む基準面よりも下方に位置する状態で、前記移送用ポートを保持する構成としてある。
　本発明によれば、培養バッグを用いて培養された細胞を回収又は移送するに際し、移送用ポートの近傍に細胞が滞留することによる培養バッグ内での細胞残留を軽減し、より多くの細胞を回収又は移送することができる。
本発明の実施形態に係る細胞培養装置の概略を示す説明図である。 本発明の実施形態に係る細胞培養装置の概略を示す説明図である。 図２のＡ－Ａ断面図である。 従来技術を示す説明図である。
　以下、本発明の好ましい実施形態について、図面を参照しつつ説明する。
　本発明に係る細胞培養装置の一実施形態として、その概略を図１及び図２に簡略化して示す。これらの図に示す細胞培養装置１は、可撓性材料からなる培養バッグ１０を用いて細胞培養を行うための装置である。
　なお、図１は、細胞培養装置１に培養バッグ１０を取り付ける前の状態を示しており、図２は、細胞培養装置１に培養バッグ１０を取り付けた状態を示している。
　培養バッグ１０は、細胞培養を閉鎖系で行うことができるように、細胞培養に必要なガス透過性（酸素透過性、二酸化炭素透過性）を有しているのが好ましい。さらに、高い細胞増殖効率を実現するために、低細胞毒性、低溶出性、及び放射線滅菌適性を有しているのが好ましく、細胞培養の進行状況や細胞の状態を観察できるように、内部を透視できる程度の透明性を有しているのが好ましい。
　培養バッグ１０を形成する可撓性材料としては、例えば、ポリエチレン，ポリプロピレン，エチレン－α－オレフィン共重合体，エチレン－酢酸ビニル共重合体，エチレンとアクリル酸やメタクリル酸共重合体と金属イオンを用いたアイオノマー，ポリエステル系熱可塑性エラストマー，シリコーン系熱可塑性エラストマー，ポリスチレン系熱可塑性エラストマー，テトラフルオロエチレン－ヘキサフルオロプロピレン共重合体（ＦＥＰ）等の熱可塑性樹脂からなる樹脂フィルムが挙げられる。これらの樹脂は単層で用いても、同種又は異種の樹脂を積層して用いてもよい。
　培養バッグ１０は、このような可撓性材料を用いて袋状に形成される。例えば、周辺部が熱融着によりシールされ、方形状などの所望の形状に製袋されたものとすることができるが、培養の対象となる細胞とともに、かかる細胞を培養するために調製された培地を培養に支障なく収容できれば、その具体的な形態は限定されない。
　また、培養バッグ１０には、移送チューブを接続可能とする移送用ポート１１が設けられている。このような移送用ポート１１を設けることで、例えば、培地が貯留された培地バッグから培養バッグ１０に培地を供給したり、培養された細胞を培養終了後に培養バッグ１０から回収し、回収用のバッグや別の培養バッグなどに移送したりするなどの操作を、移送用ポート１１に接続された移送チューブを介して閉鎖系を維持したまま行うことができる。
　移送用ポート１１は、培地や細胞などが流通可能な管状の部材からなり、例えば、ポリエチレン、ポリプロピレン、エチレン－酢酸ビニル共重合体、塩素化ポリエチレン樹脂、ポリブタジエン樹脂、シリコーンゴム、ポリウレタン系熱可塑性エラストマー、ポリエステル系熱可塑性エラストマー、シリコーン系熱可塑性エラストマー、塩化ビニル、ポリスチレン系熱可塑性エラストマー、ＦＥＰなどの熱可塑性樹脂を用いて、射出成形、押出成形などにより、軸方向に貫通する送流孔１２を有する所定の形状に成形することができる。
　特に図示しないが、移送用ポート１１には、培養バッグ１０の天面側と底面側の内面どうしが貼り付いて送流孔１２が閉塞してしまうのを避けるために、その基端から培養バッグ１０内に突出するポート閉塞防止片を設けることができる。
　また、移送用ポート１１は、例えば、樹脂フィルムを用いて培養バッグ１０を製袋する場合には、培養バッグ１０の天面側を形成する樹脂フィルムと、底面側を形成する樹脂フィルムとの間に、上記部材を挟んで熱融着することによって設けることができる。
　細胞培養装置１は、このような培養バッグ１０が載置される基台２と、培養バッグ１０に設けられた移送用ポート１１を保持する保持具３とを備えている。
　基台２は、培養バッグ１０が載置される載置面を有する台であり、図示する例では、基台２の四隅に立設された固定具２１に、培養バッグ１０の四隅に穿設された孔１３を係止することによって、載置面上に培養バッグ１０を定置できるようにしてある。
　特に図示しないが、基台２は、その一端側を軸支して回動させることができるようにしてもよい。このようにすることで、基台２に載置された培養バッグ１０を移送用ポート１１が下側となるように傾けて、培養バッグ１０の内容液を移送用ポート１１から送流させることによって、回収用のバッグや別の培養バッグに移送することができるが、培養バッグ１０の内容液を移送用ポート１１から送流させる手段は、これに限定されない。例えば、移送用ポート１１に接続された移送チューブにペリスタポンプを取り付けるなどして、その動作によって培養バッグ１０の内容液を移送用ポート１１から送流させるようにしてもよい。
　また、基台２には、培養バッグ１０を載置したときに培養バッグ１０に設けられた移送用ポート１１が対向する部位に、切り欠き部２２が形成されている。かかる切り欠き部２２は、移送用ポート１１が基台２と干渉せずに、基台２の載置面に対して移送用ポート１１を押し下げることができるように、基台２上に位置する移送用ポート１１の輪郭に沿って形成することができる（図２参照）。
　そして、押し下げられた移送用ポート１１は、図３に示すように、その送流孔１２の最下部が、基台２の載置面を含む基準面よりも下方に位置する状態で、保持具３に保持されている。
　なお、図３は、図２のＡ－Ａ断面図であり、上記基準面を一点鎖線で示している。
　図示する例では、移送用ポート１１を保持する保持具３の一例として、移送用ポート１１が挿通される挿通部が設けられた受け部３ａと、挿通部に挿通された移送用ポート１１の上方を押える押え板３ｂとからなる保持具３を簡略化して示している。移送用ポート１１の送流孔１２の最下部が、基台２の載置面を含む基準面よりも下方に位置する状態で、移送用ポート１１を保持できれば、保持具３の具体的な構成は、これに限定されないが、移送用ポート１１の中心軸が、基台２の載置面と平行となるように移送用ポート１１を保持できるようにするのが好ましい。
　前述したように、基台２に載置された培養バッグ１０の内底面と移送用ポート１１の送流孔１２との間に段差が形成されてしまったり、移送用ポート１１の周辺の培養バッグ１０の内底面にシワが発生してしまったりすると、移送用ポート１１から内容液を送流して、培養された細胞を回収又は移送する際に、この段差やシワに遮られて移送用ポート１１の送流孔１２に到達できなかった細胞Ｃが、移送用ポート１１の手前に滞留してしまう（図４参照）。
　これに対して、本実施形態では、移送用ポート１１の送流孔１２の最下部が、基台２の載置面を含む基準面よりも下方に位置するように、移送用ポート１１を保持具３に保持しており、基台２に載置された培養バッグ１０の内底面の延長上に移送用ポート１１の送流孔１２が位置している。これによって、培養バッグ１０の内底面と移送用ポート１１の送流孔１２との間に段差が形成されず、また、押し下げられた移送用ポート１１に引っ張られて培養バッグ１０の内底面におけるシワの発生が抑止されているため、内容液中の細胞Ｃが移送用ポート１１の送流孔１２に到達し易くなっている（図３参照）。その結果、本実施形態によれば、移送用ポート１１の手前に細胞が滞留してしまうのを有効に回避して、より多くの細胞を回収又は移送することができる。
　このように、本実施形態では、移送用ポート１１の送流孔１２の最下部が、基台２の載置面を含む基準面よりも下方に位置するようにして、内容液中の細胞が移送用ポート１１の送流孔１２に到達し易くしている。このような効果がより良好に奏されるようにする上で、移送用ポート１１を保持具３に保持したときに、移送用ポート１１の送流孔１２の中心が、基台２の載置面を含む基準面上又は当該基準面よりも下方に位置しているのが好ましく、移送用ポート１１の送流孔１２の最上部は、当該基準面よりも上方に位置しているのが好ましい。
　以上、本発明について、好ましい実施形態を示して説明したが、本発明は、前述した実施形態に限定されるものではなく、本発明の範囲で種々の変更実施が可能であることは言うまでもない。
　例えば、前述した実施形態では、基台２の一例として平板状に簡略化されたものを図示して説明したが、基台２の具体的な形態は、これに限定されない。本出願人が特願２０１５－０１７８２３で提案したように、基台２は、載置面から所定の高さで突出可能な仕切片が、かかる仕切片を基台内に収容したときに、仕切片の上端面が載置面と面一になるように埋設された構成としてもよい。さらに、本出願人が特願２０１５－０１７８２４で提案したように、基台２には、基台２に載置された培養バッグ１０を押圧する押圧板を、培養バッグ１０の内容液の液量に応じて上下動可能となるように取り付けることもできる。
　要するに、本発明は、培養バッグ１０が載置される基台２と、培養バッグ１０に設けられた移送用ポート１１を保持する保持具３とを備え、基台２には、培養バッグ１０を載置したときに移送用ポート１１が対向する部位に、切り欠き部２２が形成され、保持具３が、移送用ポート１１の送流孔１２の最下部が、培養バッグ１０が載置される基台２の載置面を含む基準面よりも下方に位置する状態で、移送用ポート１１を保持するようになっていれば、これ以外の細部の構成は、前述した実施形態に限定されることなく適宜変更することができる。また、前述した実施形態で説明した細部の構成を適宜取捨選択して組み合わせることもできる。
　以下、具体的な実施例を挙げて、本発明をより詳細に説明する。
［実施例１］
　ポリエチレン製の樹脂フィルムを用いて、周辺部を熱融着によりシールして縦３２０ｍｍ×横９０ｍｍの矩形状に製袋された培養バッグ１０を用意した。かかる培養バッグ１０に、サンプル培養液（培養細胞と培地を含む）２３０ｍＬを収容して、図２に示すように、細胞培養装置１に取り付けた。その際、基台２に形成された切り欠き部２２上に位置する移送用ポート１１を押し下げて、移送用ポート１１の送流孔１２の最下部が、培養バッグ１０が載置される基台２の載置面を含む基準面よりも下方に位置する状態で、移送用ポート１１が保持具３に保持されるようにした。
　次に、基台２の一端側を軸支して回動させて、基台２に載置された培養バッグ１０を移送用ポート１１が下側となるように傾けて、培養バッグ１０の内容液を移送用ポート１１から落差により送流させ、移送用ポート１１からの送流が認められなくなるまで静置した。
　なお、基台２には、培養バッグ１０の上面側を押圧する押圧板を設置して、培養バッグ１０を傾けたときの内容液の偏りが生じ難くなるようにした。また、基台２の傾斜角度は、約１０°とした。
　その後、培養バッグ１０を細胞培養装置１から取り外して、生理食塩水５ｍＬと空気７ｍＬを入れたシリンジを移送用ポート１１に接続し、培養バッグ１０内に注入した。次いで、培養バッグ１０内を注入生理食塩水で洗浄し、培養バッグ１０内に残った培養液と生理食塩水との混合液を回収し、その回収液を１５ｍＬ遠沈管に入れて、１２００ｒｐｍで３分間、遠心分離した。遠心分離後の回収液をピペットにて再び混合し、回収液量を測定し、１０倍希釈して、血球計算盤にて定法通りに細胞数を計測し、回収液中の残存細胞数を算出した。その結果を表１に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000001
［比較例１］
　切り欠き部２２が形成されていない基台２ｐ（図４参照）を用いた以外は、実施例１と同一の条件で、培養バッグ１０の内容液を移送用ポート１１から落差により送流させた後に、培養バッグ１０内を生理食塩水で洗浄し、その回収液中の残存細胞数を算出した。これに基づいて、実施例１の比較例１に対する残存細胞数の削減率を併せて算出した。その結果を表１に示す。
［実施例２、比較例２］
　サンプル培養液の細胞濃度が異なる以外は、それぞれ実施例１、比較例１と同一の条件で、培養バッグ１０の内容液を移送用ポート１１から落差により送流させた後に、培養バッグ１０内を生理食塩水で洗浄し、その回収液中の残存細胞数を算出した。これに基づいて、実施例２の比較例２に対する残存細胞数の削減率を併せて算出した。その結果を表１に示す。
　これらの結果から、移送用ポート１１の送流孔１２の最下部が、基台２の載置面を含む基準面よりも下方に位置するようにすることで、培養バッグ１０内の残存細胞数を減らし、より多くの細胞を回収できることが確認できた。
　この明細書に記載の文献及び本願のパリ優先権の基礎となる日本出願明細書の内容を全てここに援用する。
　本発明は、閉鎖系で細胞を大量に培養する再生医療、免疫療法、抗体医薬生産などにおいて好適に利用することが可能である。
　１　　　　　細胞培養装置
　２　　　　　基台
　２２　　　　　切り欠き部
　３　　　　　保持具
　１０　　　　　培養バッグ
　１１　　　　　移送用ポート
　１２　　　　　送流孔

Claims (3)

  1. 　可撓性材料からなる培養バッグを用いて細胞培養を行う細胞培養装置であって、
    　前記培養バッグが載置される基台と、
    　前記培養バッグに設けられた移送用ポートを保持する保持具と
    を備え、
    　前記基台には、前記培養バッグを載置したときに前記移送用ポートが対向する部位に、切り欠き部が形成され、
    　前記保持具が、前記移送用ポートの送流孔の最下部が、前記培養バッグが載置される前記基台の載置面を含む基準面よりも下方に位置する状態で、前記移送用ポートを保持することを特徴とする細胞培養装置。
  2. 　前記保持具が、前記移送用ポートの送流孔の中心が、前記基準面上又は前記基準面よりも下方に位置する状態で、前記移送用ポートを保持する請求項１に記載の細胞培養装置。
  3. 　前記保持具が、前記移送用ポートの送流孔の最上部が、前記基準面よりも上方に位置する状態で、前記移送用ポートを保持する請求項１又は２に記載の細胞培養装置。
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