WO2017198463A1 - Wasch- oder reinigungsmittel enthaltend eine polyethylenterephthalat hydrolase - Google Patents

Wasch- oder reinigungsmittel enthaltend eine polyethylenterephthalat hydrolase Download PDF

Info

Publication number
WO2017198463A1
WO2017198463A1 PCT/EP2017/060497 EP2017060497W WO2017198463A1 WO 2017198463 A1 WO2017198463 A1 WO 2017198463A1 EP 2017060497 W EP2017060497 W EP 2017060497W WO 2017198463 A1 WO2017198463 A1 WO 2017198463A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
petase
agent
amino acid
cleaning
weight
Prior art date
Application number
PCT/EP2017/060497
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Nina Mussmann
Timothy O'connell
Daniela HERBST
Margret VAN LIER
Original Assignee
Henkel Ag & Co. Kgaa
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Henkel Ag & Co. Kgaa filed Critical Henkel Ag & Co. Kgaa
Publication of WO2017198463A1 publication Critical patent/WO2017198463A1/de

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
    • C11D—DETERGENT COMPOSITIONS; USE OF SINGLE SUBSTANCES AS DETERGENTS; SOAP OR SOAP-MAKING; RESIN SOAPS; RECOVERY OF GLYCEROL
    • C11D3/00—Other compounding ingredients of detergent compositions covered in group C11D1/00
    • C11D3/16—Organic compounds
    • C11D3/38—Products with no well-defined composition, e.g. natural products
    • C11D3/386—Preparations containing enzymes, e.g. protease or amylase
    • C11D3/38636—Preparations containing enzymes, e.g. protease or amylase containing enzymes other than protease, amylase, lipase, cellulase, oxidase or reductase

Definitions

  • the present invention is in the field of enzyme technology, in particular the enzymes with anti-pilling effect, as used for example in detergents or cleaners.
  • the invention relates to an agent, in particular washing or cleaning agent, which contains a PETase (polyethylene terephthalate hydrolase) as defined herein.
  • PETase polyethylene terephthalate hydrolase
  • the present invention relates to a process for the purification of textiles using the agent as well as the use of the agent according to the invention for the removal of stains.
  • the invention is directed to the use of a PETase to reduce pilling effects and / or to reduce anti-gray effects in an agent, preferably a detergent or cleaning agent.
  • Pilling refers to the formation of nodules or lint in fabrics. These small lint arise especially with short-fiber substances. With long-fibered and twisted fibers, pilling is less pronounced. Generally, these nodules are caused by loose fibers in the fabric or those that have come loose from the fabric. Synthetic fibers are more prone to pilling than natural fibers because of their smooth surface because synthetic fibers can be released from the fabric faster than rough natural fibers. In woolen fabrics, these fibers "matt” mainly by mechanical friction and form nodules on the surface.
  • Pilling takes place especially on mechanically stressed areas, usually these are shoulder and waistband area. Due to the continuous thinning of the material, these stressed areas are in particular at risk of forming or even breaking holes.
  • cellulases are used in the cleaning agent in order to reduce the pilling effect (see, for example, DE 69632910 T3). That means that cellulases used in the detergent to give an anti-pilling or anti-gray effect, making clothes look like new for longer. Cellulases, however, work exclusively on cotton textiles. For other textiles, such as polyester textiles, there is no comparable way to reduce pilling. Therefore, it is desirable and there is a demand for solutions that reduce the pilling of textiles, especially textiles containing synthetic fibers such as polyester.
  • PETases polyethylene terephthalate hydrolases
  • a PETase from Ideonella sakaiensis are active in the washing process and exhibit an anti-pilling effect.
  • pre-pilled tissue or new tissue is less pilled after several washes with a detergent containing the PETase according to the invention.
  • the colors remain longer radiant through the also existing anti-gray effect.
  • the object described above, on which the present application is based, is therefore achieved by adding a PETase to means, in particular washing or cleaning agents.
  • the addition of the PETase causes textiles washed with the agents according to the invention, in particular polyester-containing textiles, to have a significantly reduced pilling in comparison with a control detergent without PETases.
  • the present invention is directed to an agent, in particular a washing or cleaning agent, characterized in that it contains a PETase.
  • the present invention is directed to processes for the purification of textiles, characterized in that in at least one process step, an agent according to the invention is used.
  • the present invention is further directed to the use of an agent as described herein, preferably detergents or cleaners, most preferably liquid detergents, to remove soils.
  • an agent as described herein preferably detergents or cleaners, most preferably liquid detergents, to remove soils.
  • a PETase to reduce pilling effects and / or to reduce anti-gray effects and / or to improve the cleaning performance of an agent, preferably a detergent or cleaning agent, more preferably one Liquid detergent, wherein the agent contains the PETase.
  • At least one includes, but is not limited to, 1, 2, 3, 4, 5, 6 and more.
  • PETases polyethylene terephthalate hydrolases
  • PET polyethylene terephthalate hydrolases
  • the enzyme is many times more active than previously known comparable enzymes (e.g., PET esterases and cutinases).
  • the invention is particularly directed to the use of a PETase from Ideonella sakaiensis according to SEQ ID NO: 1 (GeneBank accession number GAP3891 1 .1) or a mature PETase thereof according to SEQ ID NO: 2.
  • a PETase from Ideonella sakaiensis according to SEQ ID NO: 1 (GeneBank accession number GAP3891 1 .1) or a mature PETase thereof according to SEQ ID NO: 2.
  • the newly discovered PETase shows a significantly higher activity on amorphous and even on crystalline PET and so does at 40 ° C and neutral to mildly alkaline pH values - ie under washing conditions.
  • the enzyme prevents the pill formation on new polyester textiles or supports this effect in combination with a cellulase on polyester / cotton blended textiles.
  • already formed pills can be reduced, which corresponds to the so-called "Renew" effect, which is currently being promoted in wool care products and is caused by the cellulase technology.
  • the PETase prevents the graying of white laundry and the fading of colored laundry the PETase a direct cleaning performance on stains on polyester-containing textiles.
  • the PETase is a free enzyme. This means that the PETase can act directly with all components of the composition and, if the agent is a liquid agent, that the PETase is in direct contact with the solvent of the agent according to the invention (eg water).
  • the agent of the invention may contain PETases that interact with other molecules or contain an "envelope."
  • a single or multiple PETase molecules may be separated from the other constituents of the agent by a surrounding structure Structure may be formed by, but not limited to, vesicles such as a micelle or liposome, but the surrounding structure may also be a virus particle, a bacterial cell or a eukaryotic cell
  • the agent of the invention may include cells of Ideonella sakaiensis which express the PETases according to SEQ ID NO: 1 and SEQ ID NO: 2 or cell culture supernatants of such cells.
  • the PETase is a PETase having at least 70% sequence identity with the amino acid sequence given in SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 2 over its entire length.
  • the PETase contained in the agent according to the invention is a PETase according to SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 2.
  • the PETase is a PETase from Ideonella sakaiensis, in particular the PETase having the amino acid sequence according to SEQ ID NO: 1, or one thereof, for example by means of mutagenesis, derived PETase.
  • the means is characterized in that
  • the PETase is obtainable from a PETase as defined above as the parent molecule by single or multiple conservative amino acid substitution; and or
  • the PETase is obtainable from a PETase as a starting molecule as defined above by fragmentation, deletion, insertion or substitution mutagenesis and comprises an amino acid sequence which is over a length of at least 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490, 500, 510, 520, 530, 540, 550, 560, 570, 580, 590, 600 or 603 contiguous amino acids matches the parent molecule.
  • the agents according to the invention contain the PETase in an amount of 0.00001-1% by weight, preferably in an amount of 0.001-0.1% by weight, based on the active protein.
  • the PETase comprises an amino acid sequence which corresponds to the amino acid sequence given in SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 2 over its total length to at least 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%. , 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90.5%, 91%, 91, 5%, 92%, 92.5% , 93%, 93.5%, 94%, 94.5%, 95%, 95.5%, 96%, 96.5%, 97%, 97.5%, 98%, 98.5% and 98, respectively , 8% is identical.
  • sequence comparison is based on the BLAST algorithm established and commonly used in the prior art (see, for example, Altschul, SF, Gish, W., Miller, W., Myers, EW & Lipman, DJ. (1990) "Basic local alignment search Biol. 215: 403-410; and Altschul, Stephan F., Thomas L. Madden, Alejandro A. Schaffer, Jinghui Zhang, Hheng Zhang, Webb Miller, and David J.
  • Lipman (1997): "Gapped BLAST and PSI-BLAST: a new generation of protein database search programs"; Nucleic Acids Res., 25, pp.3389-3402) and is in principle effected by similar sequences of nucleotides or amino acids in the nucleic acid or nucleic acid sequences Amino acid sequences are assigned to each other. A tabular assignment of the respective positions is referred to as alignment.
  • Another algorithm available in the prior art is the FASTA algorithm. Sequence comparisons (alignments), in particular multiple sequence comparisons, are created with computer programs.
  • the Clustal series see, for example, Chenna et al., 2003: Multiple sequence alignment with the Clustal series of programs, Nucleic Acid Research 31, 3497-3500
  • T-Coffee see, for example, Notredame et al (2000): T-Coffee: A novel method for multiple sequence alignments, J. Mol. Biol. 302, 205-217
  • programs based on these programs or algorithms are also possible.
  • alignment comparisons with the computer program Vector NTI® Suite 10.3 (Invitrogen Corporation, 1600 Faraday Avenue, Carlsbad, California, USA) with the default parameters, whose AlignX module for sequence comparisons is based on ClustalW.
  • Such a comparison also allows a statement about the similarity of the compared sequences to each other. It is usually given in percent identity, that is, the proportion of identical nucleotides or amino acid residues at the same or in an alignment corresponding positions.
  • the broader concept of homology involves conserved amino acid substitutions in the consideration of amino acid sequences, that is, amino acids with similar chemical activity, as these usually perform similar chemical activities within the protein. Therefore, the similarity of the sequences compared may also be stated as percent homology or percent similarity.
  • Identity and / or homology information can be made about whole polypeptides or genes or only over individual regions. Homologous or identical regions of different nucleic acid or amino acid sequences are therefore defined by matches in the sequences. Such areas often have identical functions.
  • nucleic acid or amino acid sequence can be small and comprise only a few nucleotides or amino acids. Often, such small regions exert essential functions for the overall activity of the protein. It may therefore be useful to relate sequence matches only to individual, possibly small areas. Unless otherwise stated, identity or homology in the present application, but on the total length of the indicated nucleic acid or amino acid sequence.
  • an amino acid position of a numerically designated position in SEQ ID NO: 1 corresponds to the corresponding position of the numerically designated position in SEQ ID NO: 1 (or SEQ ID NO: 2) is assigned in an alignment as defined above.
  • the PETase is characterized in that its anti-pilling performance does not correspond to that of a PETase which comprises an amino acid sequence which corresponds to the amino acid sequences given in SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 2 is significantly reduced, ie has at least 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% of the reference anti-pilling benefits.
  • the anti-pilling performance can be determined in a washing system containing a detergent in a dosage between 1, 5 and 7.0 grams per liter of wash liquor and the PETase, wherein the PETases to be compared are used in concentration (based on active protein) and the anti-pilling performance is determined as described herein.
  • the washing process can be carried out for 60 minutes at a temperature of 60 ° C and the water have a water hardness between 5 and 25, preferably 10 and 20, more preferably 13 and 17 and further preferably 15.5 and 16.5 ° (German hardness) ,
  • the concentration of PETase in the detergent intended for this washing system is from 0.001 to 1% by weight, preferably from 0.001 to 0.1% by weight, and more preferably from 0.01 to 0.06% by weight on active, purified protein.
  • a preferred liquid detergent for such a washing system is composed as follows (all figures in weight percent): 4.4% alkyl benzene sulfonic acid, 5.6% anionic surfactants, 2.4% C12-C18 Na salts of fatty acids, 4.4 % non-ionic surfactants, 0.2% phosphonates, 1, 4% citric acid, 0.95% NaOH, 0.01% antifoam, 2% glycerol, 0.08% preservatives, 1% ethanol, 1, 6% enzyme mix ( Protease, amylase, cellulase, mannase), remainder demineralised water.
  • the dosage of the liquid detergent is between 4.5 and 6.0 grams per liter of wash liquor, for example, 4.7, 4.9 or 5.9 grams per liter of wash liquor. Preference is given to washing in a pH range between pH 8 and pH 10.5, preferably between pH 7.5 and pH 8.
  • the degree of whiteness, ie the brightening of the stains, as a measure of the cleaning performance is determined by optical measuring methods, preferably photometrically.
  • a suitable device for this purpose is for example the spectrometer Minolta CM508d.
  • the devices used for the measurement are previously calibrated with a white standard, preferably a supplied white standard.
  • the anti-pilling performance can be tracked by visual matching.
  • a panel of inspectors assigns a scale of 1-5 to the laundry to be examined.
  • the activity-equivalent use of the respective PETase can ensure that, even if the ratio of active substance to total protein (the values of the specific activity) diverge, the respective enzymatic properties, for example the cleaning performance on certain soils or the anti-pilling performance, be compared. In general, a low specific activity can be compensated by adding a larger amount of protein.
  • the enzymes to be investigated can also be used in the same molar amount or amount by weight if the enzymes to be investigated have a different affinity for the test substrate in an activity test.
  • the term “equal amount of substance” refers to a molar use of the enzymes to be investigated.
  • the same amount by weight refers to a weight-equivalent use of the enzymes to be investigated.
  • Proteins can be grouped into groups of immunologically related proteins by reaction with an antiserum or antibody.
  • the members of such a group are characterized by having the same antigenic determinant recognized by an antibody. They are therefore structurally so similar to each other that they are recognized by an antiserum or specific antibodies.
  • a further subject of the invention is therefore PETases, which are characterized in that they have at least one and increasingly preferably two, three or four matching antigenic determinants with a PETase used in an agent according to the invention. Due to their immunological similarities, such PETases are structurally so structurally similar to the PETases used in the agents according to the invention that a similar function is to be assumed as well.
  • PETases used in the agents according to the invention may have further amino acid changes, in particular amino acid substitutions, insertions or deletions, in comparison to the PETase described in SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 2.
  • Such PETases are, for example, further developed by targeted genetic modification, ie by mutagenesis methods, and optimized for specific applications or with regard to specific properties (for example with regard to their catalytic activity, stability, etc.).
  • nucleation Lein Acid which encode the PETases used, introduced into recombination approaches and thus be used to produce completely novel PETases or other polypeptides.
  • the goal is to introduce into the known molecules targeted mutations such as substitutions, insertions or deletions, for example, to improve the cleaning performance of enzymes of the invention.
  • targeted mutations such as substitutions, insertions or deletions, for example, to improve the cleaning performance of enzymes of the invention.
  • the surface charges and / or the isoelectric point of the molecules and thereby their interactions with the substrate can be changed.
  • the net charge of the enzymes can be changed in order to influence the substrate binding, in particular for use in detergents and cleaners.
  • one or more corresponding mutations can further increase the stability of the PETase and thereby improve its cleaning performance.
  • Advantageous properties of individual mutations, e.g. individual substitutions can complement each other.
  • a PETase already optimized with regard to certain properties, for example with respect to its activity and / or its anti-pilling performance, can therefore be further developed within the scope of the invention.
  • amino acid substitutions For the description of substitutions that concern exactly one amino acid position (amino acid substitutions), the following convention is used: first, the naturally occurring amino acid is designated in the form of the international one-letter code, followed by the associated sequence position and finally the inserted amino acid. Several exchanges within the same polypeptide chain are separated by slashes. For insertions, additional amino acids are named after the sequence position. In the case of deletions, the missing amino acid is replaced by a symbol, for example a star or a dash, or a ⁇ is specified in front of the corresponding position.
  • N58Q describes the substitution of asparagine at position 58 by glutamine, N58NA the insertion of alanine after the amino acid asparagine at position 58 and N58 * or ⁇ 58 the deletion of asparagine at position 58.
  • This nomenclature is known to those skilled in the art of enzyme technology.
  • Another object of the invention is therefore an agent comprising a PETase, which is characterized in that it is obtainable from a PETase as described above as the starting molecule by one or more conservative amino acid substitution.
  • conservative amino acid substitution means the substitution of one amino acid residue for another amino acid residue, which substitution does not result in a change in polarity or charge at the position of the exchanged amino acid, e.g. Example, the replacement of a nonpolar amino acid residue against another nonpolar amino acid residue.
  • the PETase is characterized in that it is obtainable from a PETase contained in an agent according to the invention as starting molecule by fragmentation, deletion, insertion or substitution mutagenesis and comprises an amino acid sequence which over a length of at least 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490, 500, 510, 520, 530, 540, 550, 560, 570, 580, 590, 600 or 603 contiguous amino acids matches the parent molecule.
  • the enzymes retain their hydrolytic activity even after mutagenesis, i. their hydrolytic activity is at least equal to that of the starting enzyme, i. in a preferred embodiment, the hydrolytic activity is at least 80, preferably at least 90% of the activity of the starting enzyme.
  • Other substitutions can also show beneficial effects. Both single and multiple contiguous amino acids can be substituted for other amino acids.
  • the further amino acid positions are defined here by an alignment of the amino acid sequence of a PETase contained in the agents according to the invention with the amino acid sequence of the PETase from Ideonella sakaiensis, as indicated in SEQ ID NO: 2. Furthermore, the assignment of the positions depends on the mature (mature) protein. This assignment is also to be used in particular if the amino acid sequence of a PETase according to the invention comprises a higher number of amino acid residues than the PETase from Ideonella sakaiensis according to SEQ ID NO: 2. Starting from the mentioned positions in the amino acid sequence of the PETase from Ideonella sakaiensis, the change positions in a PETase contained in the agents according to the invention are those which are just assigned to these positions in an alignment.
  • an amino acid exchange in a specific position of the PETase from Ideonella sakaiensis according to SEQ ID NO: 1 is accompanied by a change in an enzymatic parameter, for example by an increase in the M value
  • a corresponding change of the enzymatic parameter for example likewise one Increase in the M value observed in a PETase variant contained in an agent according to the invention, whose amino acid
  • a confirmation of the correct assignment is to be seen herein.
  • An object of the invention is an agent characterized by containing a PETase as defined herein.
  • the agent is preferably a washing or cleaning agent.
  • This invention includes all conceivable types of detergents or cleaners, both concentrates and undiluted agents, for use on a commercial scale, in the washing machine or in hand washing. These include detergents for textiles, carpets, or natural fibers, for which the term detergent is used.
  • the washing and cleaning agents in the context of the invention also include washing aids, which are metered into the actual detergent in manual or automatic textile washing, in order to achieve a further effect.
  • laundry detergents and cleaners in the context of the invention also include textile pre-treatment and post-treatment agents, ie those agents with which the laundry item is brought into contact before the actual laundry, for example to dissolve stubborn soiling, and also agents which are in one of the actual Textile laundry downstream step to give the laundry further desirable properties such as comfortable grip, crease resistance or low static charge.
  • textile pre-treatment and post-treatment agents ie those agents with which the laundry item is brought into contact before the actual laundry, for example to dissolve stubborn soiling
  • agents which are in one of the actual Textile laundry downstream step to give the laundry further desirable properties such as comfortable grip, crease resistance or low static charge i.a. calculated the fabric softener.
  • the washing or cleaning agents according to the invention may contain, in addition to the above-described PETase, all known ingredients customary in such agents, with preferably at least one further ingredient present in the composition is.
  • the agents according to the invention may in particular contain surfactants, builders, bleaches, in particular peroxygen compounds, or bleach activators.
  • they may contain water-miscible organic solvents, further enzymes, sequestering agents, electrolytes, pH regulators and / or further auxiliaries such as optical brighteners, grayness inhibitors, foam regulators, as well as dyes and fragrances, and combinations thereof.
  • a combination of the agent according to the invention with one or more further ingredient (s) is advantageous, since such an agent in preferred embodiments according to the invention has an improved cleaning performance by resulting synergisms.
  • a synergism can be achieved by combining the agent according to the invention with a surfactant and / or a builder (builder) and / or a peroxygen compound and / or a bleach activator, such a synergism can be achieved.
  • composition according to the invention may also contain a compound from the class of the anionic surfactants of the formula (I)
  • R represents a linear or branched unsubstituted alkylaryl group.
  • Y stands for a monovalent cation or the n-th part of an n-valent cation, the alkali metal ions being preferred, and Na + or K + being preferred, Na + being extremely preferred.
  • Other cations Y + may be selected from NhV, Mg 2+ , Y 2 Ca 2+ 2 Mn 2+ , and mixtures thereof.
  • Alkylaryl refers to organic radicals consisting of an alkyl radical and an aromatic radical Typical examples of such radicals include but are not limited to alkylbenzene radicals such as benzyl, butylbenzene radicals, nonylbenzene radicals, decylbenzene radicals, Undecylbenzene radicals, dodecylbenzene radicals, tridecylbenzene radicals and the like.
  • such surfactants are selected from linear or branched alkylbenzenesulfonates of the formula A-1
  • R ' and R " together contain from 9 to 19, preferably from 1 to 15, and in particular from 1 to 13, carbon atoms
  • a particularly preferred representative can be described by the formula A-1a:
  • the compound of formula (I) is preferably the sodium salt of a linear alkyl benzene sulfonate.
  • the at least one compound from the class of anionic surfactants of the formula (I) is present in an amount of 0.001 to 30% by weight, preferably 0.001 to 10% by weight, more preferably 2 to 6% by weight. even more preferably 3-5% by weight, contained in the washing or cleaning agent, in each case based on the total weight of the cleaning agent.
  • the agent may contain, in addition to the at least one compound of formula (I) or, alternatively, at least one other surfactant.
  • Suitable alternative or additional surfactants are in particular further anionic surfactants, nonionic surfactants and mixtures thereof, but also cationic, zwitterionic and amphoteric surfactants.
  • compositions according to the invention preferably contain at least one anionic surfactant of the formula
  • R is a linear or branched, substituted or unsubstituted alkyl, aryl or alkylaryl radical, preferably a linear, unsubstituted alkyl radical, more preferably a fatty alcohol radical.
  • Preferred radicals R are selected from decyl, undecyl, dodecyl, tridecyl, tetradecyl, pentadecyl, hexadecyl, heptadecyl, octadecyl, no-nadecyl, eicosyl radicals and mixtures thereof, where the representatives with an even number of C - atoms are preferred.
  • radicals R are derived from C 12 -C 18 -fatty alcohols, for example coconut fatty alcohol, tallow fatty alcohol, lauryl, myristyl, cetyl or stearyl alcohol or C 10 -C 20 oxo alcohols.
  • AO represents an ethylene oxide (EO) or propylene oxide (PO) moiety, preferably an ethylene oxide moiety.
  • the index n stands for an integer from 1 to 50, preferably from 1 to 20 and especially from 2 to 10. Most preferably, n stands for the numbers 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8.
  • X stands for a monovalent cation or the nth part of an n-valent cation, the alkali metal ions are preferred, and Na + or K + including Na, with Na + being extremely preferred.
  • Other cations X + can be selected from NhV, Mn 2+ , and mixtures thereof.
  • agents in various embodiments thus contain at least one anionic surfactant selected from fatty alcohol ether sulfates of the formula A-2 O
  • the cleaning agent contains the at least one anionic surfactant of the formula (II) in an amount of 2-10% by weight, preferably 3-8% by weight, based on the total weight of the cleaning agent.
  • anionic surfactants are the alkyl sulfates of the formula
  • R 2 is a linear or branched, substituted or unsubstituted alkyl radical, preferably a linear, unsubstituted alkyl radical, more preferably a fatty alcohol radical.
  • Preferred radicals R 2 are selected from decyl, undecyl, dodecyl, tridecyl, tetradecyl, pentadecyl, hexadecyl, heptadecyl, octadecyl, nonadecyl, eicosyl radicals and mixtures thereof, where the representatives with even number of carbon atoms Atoms are preferred.
  • radicals R 2 are derived from C 12-18 fatty alcohols, for example coconut fatty alcohol, tallow fatty alcohol, lauryl, myristyl, cetyl or stearyl alcohol or C 10 -C 20 -oxo alcohols.
  • Y stands for a monovalent cation or the n-th part of an n-valent cation, the alkali metal ions being preferred, and Na + or K + being preferred, Na + being extremely preferred.
  • Other cations Y + may be selected from NhV, Mg 2+ 2 Ca 2+ y 2 Mn 2+ , and mixtures thereof.
  • these surfactants are selected from fatty alcohol sulfates of formula A-3
  • the agents comprise at least one nonionic surfactant, in particular at least one fatty alcohol alkoxylate. In various embodiments, the cleaning agents therefore contain at least one nonionic surfactant of the formula
  • R 3 is a linear or branched, substituted or unsubstituted alkyl radical
  • AO is an ethylene oxide (EO) or propylene oxide (PO) grouping
  • n stands for integers from 1 to 50.
  • R 3 is a linear or branched, substituted or unsubstituted alkyl radical, preferably a linear, unsubstituted alkyl radical, particularly preferably a fatty alcohol radical.
  • Preferred radicals R 2 are selected from decyl, undecyl, dodecyl, tridecyl, tetradecyl, pentadecyl, hexadecyl, heptadecyl, octadecyl, no-nadecyl, eicosyl and mixtures thereof, wherein the even number C atoms are preferred.
  • radicals R 3 are derived from C 12-18 fatty alcohols, for example from coconut fatty alcohol, tallow fatty alcohol, lauryl, myristyl, cetyl or stearyl alcohol or from C 10 -C 20 oxo alcohols.
  • AO represents an ethylene oxide (EO) or propylene oxide (PO) moiety, preferably an ethylene oxide moiety.
  • EO ethylene oxide
  • PO propylene oxide
  • m is an integer from 1 to 50, preferably from 1 to 20 and especially from 2 to 10. Most preferably, m is the numbers 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8.
  • nonionic surfactants which may be included in the described compositions within the meaning of the present invention include, but are not limited to, alkyl glycosides, alkoxylated fatty acid alkyl esters, amine oxides, fatty acid alkanolamides, hydroxy mixed ethers, sorbitan fatty acid esters, polyhydroxy fatty acid amides, and alkoxylated alcohols.
  • Suitable amphoteric surfactants are, for example, betaines of the formula (R 1) XR 1 XR 3 N-chloroCOO-, in which R i is an alkyl radical having 8 to 25, preferably 10 to 21 carbon atoms interrupted by hetero atoms or heteroatom groups and R iv and R v are identical or different alkyl radicals 1 to 3 carbon atoms, in particular Cio-Cis-alkyl dimethylcarboxymethylbetain and Cn-Ci7-alkylamidopropyl-dimethylcarboxymethylbetain.
  • Suitable cationic surfactants are i.a. the quaternary ammonium compounds of the formula
  • R VI (R VI ) (R vii ) (R viii ) (R ix ) N + X "
  • R vi to R ix for four identical or different, in particular two long and two short-chain, alkyl radicals and X " for an anion , in particular a halide ion, for example, didecyldimethylammonium chloride, Alkylbenzyldidecylammoniumchlorid and mixtures thereof.
  • Further suitable cationic surfactants are the quaternary surface-active compounds, in particular having a sulfonium, phosphonium, iodonium or arsonium group, which are also known as antimicrobial agents.
  • the agent can be designed with an antimicrobial effect or its possibly existing antimicrobial effect due to other ingredients can be improved.
  • the total amount of the surfactants based on the weight of the composition is 2 to 30% by weight, preferably 5 to 25% by weight, more preferably 10 to 20% by weight, most preferably 14 to 18% by weight.
  • the (linear) alkylbenzenesulfonates at most in an amount of 0.001 to 30 wt .-%, preferably 0.001 to 10 wt .-%, more preferably 2 to 6 wt .-%, more preferably 3 - 5 wt .-%, based on the weight of the agent.
  • Detergents or cleaning agents according to the invention may contain other enzymes besides PETase. These may be hydrolytic enzymes or other enzymes in a concentration effective for the effectiveness of the agent.
  • One embodiment of the invention thus represents agents comprising one or more enzymes.
  • Preferred enzymes are all enzymes which can display catalytic activity in the composition according to the invention, in particular a protease, amylase, cellulase, hemicellulase, mannanase, tannase, xylanase, xanthanase, xyloglucanase, ⁇ -glucosidase, pectinase, carrageenase, perhydrolase , Oxidase, oxidoreductase, hydrolase, cutinase or lipase, and mixtures thereof.
  • Enzymes are advantageously contained in the agent in each case in an amount of 1 ⁇ 10 -8 to 5% by weight, based on active protein.
  • Each enzyme is increasingly preferred in an amount of 1 x 10 -3 ⁇ 7 wt .-%, of 0.00001-1 wt .-%, of 0.00005 to 0.5 wt .-%, from 0.0001 to 0, 1 wt .-% and particularly preferably from 0.0001 to 0.05 wt .-% in inventive compositions, based on active protein.
  • the enzymes show synergistic cleaning performance against certain stains or stains, ie the enzymes contained in the middle composition mutually support each other in their cleaning performance. Synergistic effects can occur not only between different enzymes, but also between one or more enzymes and other ingredients of the composition according to the invention.
  • the PETases according to the invention can particularly preferably be used in combination with a cellulase on polyester / cotton-blend textiles.
  • the PETase prevent the pill formation of the polyester fibers, while the cellulase has the same effect on the cotton fibers.
  • the cellulase is preferably a cellulase mixture or an incomplete cellulase, preferably or predominantly an endoglucanase and / or a cellobiohydrolase.
  • the amylase (s) is preferably an ⁇ -amylase.
  • the hemicellulase is preferably a ⁇ -glucanase, a pectinase, a pullulanase and / or a mannanase.
  • the oxidoreductase is preferably an oxidase, in particular a choline oxidase, or a perhydrolase.
  • the proteases used are preferably alkaline serine proteases. They act as nonspecific endopeptidases, that is, they hydrolyze any acid amide linkages that are located inside peptides or proteins and thereby cause degradation of proteinaceous soils on the items to be cleaned. Their pH optimum is usually in the clearly alkaline range.
  • the protein concentration can be determined by known methods, for example the BCA method (bicinchoninic acid, 2,2'-biquinolyl-4,4'-dicarboxylic acid) or the biuret method.
  • BCA method bicinchoninic acid, 2,2'-biquinolyl-4,4'-dicarboxylic acid
  • the determination of the active protein concentration takes place via a titration of the active sites using a suitable irreversible inhibitor (for proteases, for example phenylmethylsulfonyl fluoride (PMSF)) and determination of the residual activity (compare M. Bender et al., J. Am. Chem. Soc , 24 (1966), pp. 5890-5913).
  • PMSF phenylmethylsulfonyl fluoride
  • the enzymes to be used may also be formulated together with accompanying substances, for example from the fermentation.
  • the enzymes are preferably used as enzyme liquid formulation (s).
  • the enzymes are usually not provided in the form of the pure protein, but rather in the form of stabilized, storable and transportable preparations.
  • Such prefabricated preparations include, for example, the solid preparations obtained by granulation, extrusion or lyophilization or, especially in the case of liquid or gel-form detergents, solutions of the enzymes, advantageously as concentrated as possible, low in water and / or added with stabilizers or further auxiliaries.
  • the enzymes may be encapsulated for both the solid and liquid dosage forms, for example by spray-drying or extruding the enzyme solution together with a preferably natural polymer or in the form of capsules, for example those in which the enzymes are entrapped as in a solidified gel or in those of the core-shell type in which an enzyme-containing core is coated with a water, air and / or chemical impermeable protective layer.
  • a preferably natural polymer or in the form of capsules for example those in which the enzymes are entrapped as in a solidified gel or in those of the core-shell type in which an enzyme-containing core is coated with a water, air and / or chemical impermeable protective layer.
  • further active ingredients for example stabilizers, emulsifiers, pigments, bleaches or dyes, may additionally be applied.
  • Such capsules are applied by methods known per se, for example by shaking or rolling granulation or in fluid-bed processes.
  • such granules for example by applying polymeric
  • water-soluble films such as those used in the formulation of detergents and cleaners in unit dosage form.
  • Such a film allows the release of the enzymes after contact with water.
  • water-soluble refers to a film structure that is preferably completely water-soluble, Preferably, such film consists of (fully or partially hydrolyzed) polyvinyl alcohol (PVA).
  • the agent according to the invention may comprise one or more enzyme stabilizers. Therefore, the agent of the invention may further contain an enzyme stabilizer, for example, selected from the group consisting of sodium formate, sodium sulfate, lower aliphatic alcohols and boric acid and their esters and salts. Of course, two or more of these compounds may be used in combination.
  • the salts of the compounds mentioned can also be used in the form of hydrates, such as, for example, sodium sulfate decahydrate.
  • lower aliphatic alcohols as used herein includes monoalcohols, diols, and higher alcohols having up to 6 carbon atoms.
  • polyols for example, glycerol, (mono) ethylene glycol, (Mono) Propylene glycol or sorbitol, without the invention being limited to these.
  • an agent of the invention may also contain at least one further stabilizer.
  • stabilizers are known in the art.
  • Reversible protease inhibitors protect the enzymes contained in a detergent or cleanser from proteolytic degradation by reversibly inhibiting the enzymatic activity of the proteases contained in the agent.
  • Benzamine din hydrochloride, boronic acids or their salts or esters are frequently used as reversible protease inhibitors, in particular derivatives having aromatic groups, for example ortho, meta or para substituted phenylboronic acids, in particular 4-formylphenylboronic acid, or the salts or Esters of the compounds mentioned.
  • peptide aldehydes that is oligopeptides with a reduced C-terminus, especially those of 2 to 50 monomers are used for this purpose.
  • peptidic reversible protease inhibitors include ovomucoid and leupeptin.
  • enzyme stabilizers are amino alcohols such as mono-, di-, triethanol- and -propanolamine and mixtures thereof, aliphatic carboxylic acids up to C12, such as succinic acid, other dicarboxylic acids or salts of said acids. End-capped fatty acid amide alkoxylates are also suitable for this purpose. Some organic acids used as builders can additionally stabilize an enzyme. Also calcium and / or magnesium salts are used for this purpose, such as calcium acetate.
  • Polyamide oligomers or polymeric compounds such as lignin, water-soluble vinyl copolymers or cellulose ethers, acrylic polymers and / or polyamides stabilize the enzyme preparation, inter alia, against physical influences or pH fluctuations.
  • Polyamine N-oxide-containing polymers act simultaneously as enzyme stabilizers and as dye transfer inhibitors.
  • Other polymeric stabilizers are linear Cs-ds polyoxyalkylenes.
  • Alkyl polyglycosides can also stabilize the enzymatic components of the agent according to the invention and are able to increase their performance additionally.
  • Crosslinked N-containing compounds preferably perform a dual function as soil release agents and as enzyme stabilizers. Hydrophobic, nonionic polymer stabilizes in particular an optionally contained cellulase.
  • Reducing agents and antioxidants increase the stability of the enzymes to oxidative degradation;
  • sulfur-containing reducing agents are familiar, for example sodium sulfite and reducing sugars.
  • the compositions according to the present invention are liquid and contain water as the main solvent, ie they are aqueous agents.
  • the water content of the aqueous composition of the present invention is usually 15 to 70% by weight, preferably 20 to 60% by weight. In various embodiments, the water content is more than 5% by weight, preferably more than 15% by weight and particularly preferably more than 50% by weight, in each case based on the total amount of agent.
  • non-aqueous solvents may be added to the composition. Suitable non-aqueous solvents include monohydric or polyhydric alcohols, alkanolamines or glycol ethers, provided that they are miscible with water in the concentration range indicated.
  • the solvents are preferably selected from ethanol, n-propanol, i-propanol, butanols, glycol, propanediol, butanediol, methylpropanediol, glycerol, diglycol, propyldiglycol, butyldiglycol, hexyleneglycol, ethylglycolmethylether, ethyleneglycolethylether, ethyleneglycolpropylether, ethylene glycolmonon-n-butylether, Diethylene glycol methyl ether, diethylene glycol ethyl ether, propylene glycol methyl ether, propylene glycol ethyl ether, propylene glycol propyl ether, dipropylene glycol monomethyl ether, dipropylene glycol monoethyl ether, methoxytriglycol, ethoxytriglycol, butoxytriglycol, 1-butoxyethoxy-2-propano
  • the one or more non-aqueous solvents is usually contained in an amount of 0.1 to 10% by weight, preferably 1 to 8% by weight, based on the total composition.
  • compositions according to the invention may contain further ingredients which further improve the performance and / or aesthetic properties of the cleaning agent.
  • additives for improving the flow and drying behavior for adjusting the viscosity and / or for stabilization, as well as other cleaning agents and additives customary in detergents, such as UV stabilizers, perfume, pearlescing agents, dyes, corrosion inhibitors, preservatives, bittering agents, organic Salts, disinfectants, structuring polymers, defoamers, encapsulated ingredients (eg encapsulated perfume), pH stabilizers and skin feel-improving or nourishing additives.
  • An agent according to the invention in particular washing or cleaning agent, preferably contains at least one water-soluble and / or water-insoluble, organic and / or inorganic builder (builders).
  • the builders which can generally be used are, in particular, the aminocarboxylic acids and their salts, zeolites, silicates, carbonates, organic (co) builders and, where there are no ecological prejudices against their use, also the phosphates.
  • the agents are phosphate-free.
  • the water-soluble organic builder substances include polycarboxylic acids, in particular citric acid and sugar acids, monomeric and polymeric aminopolycarboxylic acids, in particular methylglycinediacetic acid, nitrilotriacetic acid and ethylenediaminetetraacetic acid and polyaspartic acid, polyphosphonic acids, in particular aminotris (methylenephosphonic acid), ethylenediaminetetrakis (methylenephosphonic acid) and 1-hydroxyethane-1, 1-diphosphonic acid, polymeric hydro- xy compounds such as dextrin and also polymeric (poly) -carboxylic acids, polymeric acrylic acids, methacrylic acids, maleic acids and mixed polymers of these, which may also contain small amounts of polymerizable substances without carboxylic acid functionality in copolymerized form.
  • polycarboxylic acids in particular citric acid and sugar acids
  • monomeric and polymeric aminopolycarboxylic acids in particular methylglycinediacetic acid, n
  • Suitable, although less preferred, compounds of this class are copolymers of acrylic or methacrylic acid with vinyl ethers, such as vinylmethyl ethers, vinyl esters, ethylene, propylene and styrene, in which the acid content is at least 50% by weight.
  • the organic builder substances can be used, in particular for the preparation of liquid agents, in the form of aqueous solutions, preferably in the form of 30 to 50 percent by weight aqueous solutions. All of the acids mentioned are generally used in the form of their water-soluble salts, in particular their alkali metal salts.
  • Organic builders may, if desired, be included in amounts of up to 40% by weight, more preferably up to 25% by weight, and preferably from 1% to 8% by weight. Quantities close to the stated upper limit are preferably used in paste-form or liquid, in particular water-containing, agents according to the invention. Aftertreatment agents according to the invention, such as e.g. Softener, may optionally also be free of organic builder.
  • Suitable water-soluble inorganic builder materials are, in particular, alkali metal silicates and polyphosphates, preferably sodium triphosphate. Crystalline or amorphous alkali metal aluminosilicates, if desired, in amounts of up to 50% by weight, preferably not more than 40% by weight and in liquid agents, in particular of 1% by weight, can be used as water-insoluble, water-dispersible inorganic builder materials. to 5 wt .-%, can be used. Among these, preferred are the detergent grade crystalline sodium aluminosilicates, especially zeolite A, P and optionally X. Amounts near the above upper limit are preferably used in solid, particulate agents. Suitable aluminosilicates have, in particular, no particles with a particle size greater than 30 ⁇ m, and preferably consist of at least 80% by weight of particles having a size of less than 10 ⁇ m.
  • Suitable substitutes or partial substitutes for the said aluminosilicate are crystalline alkali silicates which may be present alone or in a mixture with amorphous silicates.
  • the alkali metal silicates useful as builders in the compositions according to the invention preferably have a molar ratio of alkali metal oxide to SiO 2 below 0.95, in particular from 1: 1, 1 to 1: 12, and may be present in amorphous or crystalline form.
  • Preferred alkali metal silicates are the sodium silicates, in particular the amorphous sodium silicates, with a molar ratio of Na 2 O: SiO 2 of from 1: 2 to 1: 2.8.
  • Crystalline silicates which may be present alone or in a mixture with amorphous silicates are preferably crystalline phyllosilicates of the general formula Na.sub.2SixO.sub.2.sup.x + H.sub.2O.sub.2, in which x, the so-called modulus, is a number from 1.9 to 4 and y is a number from 0 is up to 20 and preferred values for x are 2, 3 or 4.
  • Preferred crystalline phyllosilicates are those in which x in the abovementioned general formula assumes the values 2 or 3.
  • beta and also delta-sodium disilicates Na2Si20s y H2O
  • compositions according to the invention are also prepared from amorphous alkali metal silicates, practically anhydrous crystalline alkali silicates of the abovementioned general formula in which x is a number from 1, 9 to 2, 1, can be used in inventive compositions.
  • a crystalline sodium layer silicate with a modulus of 2 to 3 is used, as can be prepared from sand and soda. Crystalline sodium silicates with a modulus in the range of 1.9 to 3.5 are used in a further preferred embodiment of compositions according to the invention.
  • the weight ratio of aluminosilicate to silicate, based in each case on anhydrous active substances is preferably 1:10 to 10: 1.
  • the weight ratio is from amorphous alkali metal silicate to crystalline alkali metal silicate, preferably 1: 2 to 2: 1 and in particular 1: 1 to 2: 1.
  • Builders are, if desired, in the inventive compositions preferably in amounts of up to 60 wt .-%, in particular from 5 wt .-% to 40 wt .-%, included.
  • Aftertreatment agents according to the invention such as e.g. Softener, are preferably free of inorganic builder.
  • polymeric thickeners are the polycarboxylates which have a thickening effect as polyelectrolytes, preferably homopolymers and copolymers of acrylic acid, in particular acrylic acid copolymers such as acrylic acid-methacrylic acid copolymers, and the polysaccharides, in particular heteropolysaccharides, and other customary thickening polymers.
  • Suitable polysaccharides or heteropolysaccharides are the polysaccharide gums, for example gum arabic, agar, alginates, carrageenans and their salts, guar, guar gum, tragacanth, gellan, Ramzan, dextran or xanthan and their derivatives, e.g. propoxylated guar, as well as their mixtures.
  • Other polysaccharide thickeners such as starches or cellulose derivatives, may be used alternatively, but preferably in addition to a polysaccharide gum, for example starches of various origins and starch derivatives, e.g.
  • Hydroxyethyl starch starch phosphate esters or starch acetates, or carboxymethyl cellulose or its sodium salt, methyl, ethyl, hydroxyethyl, hydroxypropyl, hydroxypropylmethyl or hydroxyethyl methyl cellulose or cellulose acetate.
  • Acrylic acid polymers which are suitable as polymeric thickeners are, for example, high molecular weight homopolymers of acrylic acid (INCI Carbomer) crosslinked with a polyalkenyl polyether, in particular an allyl ether of sucrose, pentaerythritol or propylene (INCI Carbomer), which are also referred to as carboxyvinyl polymers.
  • a polyalkenyl polyether in particular an allyl ether of sucrose, pentaerythritol or propylene (INCI Carbomer), which are also referred to as carboxyvinyl polymers.
  • acrylic acid copolymers are the following acrylic acid copolymers: (i) Copolymers of two or more monomers from the group of acrylic acid, methacrylic acid and their simple ester, preferably formed with C 1-4 alkanols (INCI acrylates copolymer), to which approx the copolymers of methacrylic acid, butyl acrylate and methyl methacrylate (CAS 25035-69-2) or of butyl acrylate and methyl methacrylate (CAS 25852-37-3); (ii) crosslinked high molecular weight acrylic acid copolymers, such as those crosslinked with an allyl ether of sucrose or pentaerythritol copolymers of Cio-30-alkyl acrylates with one or more monomers from the group of acrylic acid, methacrylic acid and their simple, preferably with Ci-4-alkanols formed esters (INCI acrylates / C 10-30 alkyl acrylate crosspolymer).
  • the content of polymeric thickener is usually not more than 8 wt .-%, preferably between 0.1 and 7 wt .-%, particularly preferably between 0.5 and 6 wt .-%, in particular between 1 and 5 wt .-% and most preferably between 1, 5 and 4 wt .-%, for example between 2 and 2.5 wt .-%, based on the total weight of the cleaning agent.
  • one or more dicarboxylic acids and / or salts thereof may be added, in particular a composition of Na salts of adipic, succinic and glutaric acid, for example as available under the trade name Sokalan ® DSC is.
  • the use is advantageously carried out in amounts of 0.1 to 8 wt .-%, preferably 0.5 to 7 wt .-%, in particular 1, 3 to 6 wt .-% and particularly preferably 2 to 4 wt .-%, based on the total weight of the cleaning agent.
  • the agent according to the invention is preferably free from dicarboxylic acid (salts).
  • the detergents according to the invention can be compared with reference detergents in order to determine the increased anti-pilling performance of the compositions according to the invention.
  • a washing system may be composed as follows (all figures in weight percent): Reference agent: 4.4% alkyl benzene sulfonic acid, 5.6% other anionic surfactants, 2.4% C12-C18 Na salts of fatty acids (soaps), 4 , 4% nonionic surfactants, 0.2% phosphonates, 1, 4% citric acid, 0.95% NaOH, 0.01% defoamer, 2.0% glycerol, 0.08% preservatives, 1% ethanol, 1, 6% enzyme mix (protease, amylase, cellulase, mannase), remainder demineralized water.
  • Reference agent 4.4% alkyl benzene sulfonic acid, 5.6% other anionic surfactants, 2.4% C12-C18 Na salts of fatty acids (soaps), 4 , 4%
  • Composition according to the invention 4.4% of alkylbenzenesulfonic acid, 5.6% of other anionic surfactants, 2.4% of C12-C18 Na salts of fatty acids (soaps), 4.4% of nonionic surfactants, 0.2% of phosphonates, 1, 4% citric acid, 0.95% NaOH, 0.01% defoamer, 2.0% glycerol, 0.08% preservatives, 1% ethanol, 1, 6% enzyme mix (protease, amylase, cellulase, mannose), 0.01 % PETase, remainder demineralised water.
  • the dosage of the liquid detergent is between 4.5 and 6.0 grams per liter of wash liquor, for example, 4.7, 4.9 or 5.9 grams per liter of wash liquor. loading It is preferred to wash in a pH range between pH 8 and pH 10.5, preferably between pH 7.5 and pH 8.
  • compositions according to the invention comprise all solid, powdered, liquid, gelatinous or paste-like administration forms of compositions according to the invention which, if appropriate, may also consist of several phases and may be present in compressed or uncompressed form.
  • the agent can be present as a free-flowing powder, in particular with a bulk density of 300 g / l to 1200 g / l, in particular 500 g / l to 900 g / l or 600 g / l to 850 g / l.
  • the solid dosage forms of the composition also include extrudates, granules, tablets or pouches.
  • the agent can also be liquid, gelatinous or pasty, for example in the form of a non-aqueous liquid detergent or a non-aqueous paste or in the form of an aqueous liquid detergent or a water-containing paste.
  • the agent may be present as a one-component system. Such funds consist of one phase.
  • an agent can also consist of several phases. Such an agent is therefore divided into several components.
  • Another object of the invention is a process for the cleaning of textiles, which is characterized in that in at least one process step, an inventive agent is applied.
  • the method described above is characterized in that the agent according to the invention at a temperature of 0-100 ° C, preferably 0-80 ° C, more preferably 10-50 and most preferably at 20-40 ° C is used ,
  • Methods for cleaning textiles are generally distinguished by the fact that various cleaning-active substances are applied to the items to be cleaned and washed off after the contact time, or that the items to be cleaned are otherwise treated with a detergent or a solution or dilution of this product. All conceivable washing or cleaning methods can be enriched in at least one of the method steps to the application of a washing or cleaning agent according to the invention and then represent embodiments of the present invention. All facts, objects and embodiments described for means according to the invention are also on these Subject of the invention applicable. Therefore, reference is made at this point expressly to the disclosure in the appropriate place with the statement that this disclosure also applies to the above inventive method.
  • Alternative embodiments of this subject matter of the invention are also processes for the treatment of textile raw materials or for textile care, in which an agent according to the invention becomes active in at least one process step.
  • methods for textile raw materials, fibers or textiles with natural components are preferred, and especially for those with wool or silk.
  • the invention also encompasses the use of the agent described herein, for example as detergents or cleaners as described above, for the (improved) removal of stains, for example textiles, in particular polyester textiles.
  • the invention also relates to the use of a PETase to reduce pilling effects and / or to reduce the anti-gray effects of an agent, preferably a detergent, more preferably a liquid detergent, which agent contains the PETase.
  • an agent preferably a detergent, more preferably a liquid detergent, which agent contains the PETase.
  • the PETase may be a PETase as defined herein.
  • the PETase is contained in an amount of 0.00001-1% by weight, especially 0.001-0.1% by weight, in the composition.
  • the PETase which causes a reduction of the pilling effect and / or the reduction of the anti-gray effect, is applied to textiles, in particular textiles consisting of polyester or polyester.
  • the gene of the PETase from Ideonella sakaiensis which codes for an enzyme according to SEQ ID NO: 2, is cloned into the Ndel and Xho I interface of the Vector PET-21 b Novagen company, so that the C-terminal fusion with a hexa-histidine Day arises.
  • the sequencing-confirmed plasmid is transformed by conventional transformation protocols into electrocompetent cells E. coli BL21 (DE3) CodonPlus RIPL (Agilent Technologies).
  • the growth of the transformed E. coli cells is carried out in LB medium at 37 ° C, with an induction with 0.1 mM IPTG at an OD of 0.6 and a lowered from this point expression temperature of 16 ° C.
  • the cells are harvested by centrifugation and resuspended in lysis buffer (50 mM Tris-HCl, pH 7.5, 300 mM NaCl, 20 mM imidazole).
  • lysis buffer 50 mM Tris-HCl, pH 7.5, 300 mM NaCl, 20 mM imidazole.
  • the cell disruption is carried out by means of ultrasound, followed by centrifugation (15,000 x g, 20 min, 4 ° C).
  • the supernatant contains the PETase-HisTag fusion protein.
  • NiNTA Purification via NiNTA is carried out according to a protocol from Qiagen.

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Detergent Compositions (AREA)

Abstract

Die vorliegende Erfindung liegt auf dem Gebiet der Enzymtechnologie, insbesondere der Enzyme mit Anti-Pilling Wirkung, wie sie zum Beispiel in Wasch- oder Reinigungsmitteln verwendet werden. Die Erfindung betrifft ein Mittel, insbesondere Wasch- oder Reinigungsmittel, welches eine PETase (Polyethylenterephthalat Hydrolase), wie hierin definiert, enthält. Ferner betrifft die vorliegende Erfindung ein Verfahren zur Reinigung von Textilien unter Verwendung des Mittels sowie die Verwendung des erfindungsgemäßen Mittels zur Entfernung von Anschmutzungen. Des Weiteren richtet sich die Erfindung auf die Verwendung einer PETase zur Verringerung von Pilling-Effekten und/oder zur Verringerung von Anti-Grau-Effekten und/oder zur Verbesserung der Reinigungsleistung in einem Mittel, vorzugsweise einem Wasch- oder Reinigungsmittel.

Description

„Wasch- oder Reinigungsmittel enthaltend eine Polyethylenterephthalat Hydrolase"
Die vorliegende Erfindung liegt auf dem Gebiet der Enzymtechnologie, insbesondere der Enzyme mit Anti-Pilling Wirkung, wie sie zum Beispiel in Wasch- oder Reinigungsmitteln verwendet werden. Die Erfindung betrifft ein Mittel, insbesondere Wasch- oder Reinigungsmittel, welches eine PETase (Polyethylenterephthalat Hydrolase), wie hierin definiert, enthält. Ferner betrifft die vorliegende Erfindung ein Verfahren zur Reinigung von Textilien unter Verwendung des Mittels sowie die Verwendung des erfindungsgemäßen Mittels zur Entfernung von Anschmutzungen. Des Weiteren richtet sich die Erfindung auf die Verwendung einer PETase zur Verringerung von Pilling-Effekten und/oder zur Verringerung von Anti-Grau-Effekten in einem Mittel, vorzugsweise einem Waschoder Reinigungsmittel.
Bei mehrfacher Wäsche von Kleidungsstücken weisen diese mit der Zeit Pilling auf. Dies gilt für Textilien jeglicher Art und ist vom Konsumenten unerwünscht, da das Kleidungsstück dadurch älter und unansehnlich wirkt. Als Pilling bezeichnet man die Knötchen- oder Fusselbildung bei Stoffen. Diese kleinen Fussel entstehen insbesondere bei kurzfaserigen Stoffen. Bei langfaserigen und verzwirnten Fasern entsteht Pilling dagegen weniger stark. Allgemein entstehen diese Knötchen durch lose Fasern im Stoff oder solche die sich aus dem Gewebe gelöst haben. Synthetische Fasern neigen durch ihre glatte Oberfläche eher zum Pilling als Naturfasern, weil synthetische Fasern schneller aus dem Gewebe gelöst werden können als raue Naturfasern. Bei Wollstoffen„verfilzen" diese Fasern hauptsächlich durch mechanische Reibung und bilden Knötchen an der Oberfläche.
Die Hauptauswirkung von Pilling ist eine optische Beeinträchtigung. Durch die Knötchenbildung an der Oberfläche sehen Stoffe schnell gebraucht und älter aus als sie sind. Dagegen wird die Funktionalität des Stoffes kaum bis gar nicht beeinträchtigt. Zum Beispiel wird durch die andauernde Ausdünnung des Stoffes die Atmungsaktivität sogar gesteigert. Pilling findet insbesondere an mechanisch stark beanspruchten Stellen statt, meist sind dies Schulter- und Bundbereich. Durch die fortlaufende Ausdünnung des Stoffes sind vor allem diese beanspruchten Bereiche gefährdet Löcher zu bilden oder gar zu reißen.
Eine technische Lösung um den Pilling-Effekt zu verringern liegt bislang nur für Baumwoll-Textilien vor. Hierbei werden Cellulasen im Reinigungsmittel verwendet um den Pilling-Effekt zu verringern (siehe beispielsweise DE 69632910 T3). Das heißt, dass Cellulasen im Waschmittel eingesetzt werden, um Anti-Pilling bzw. Anti-Grau Wirkung zu zeigen und so dafür zu sorgen, dass Kleidung länger wie neu wirkt. Cellulasen wirken jedoch ausschließlich auf Baumwolltextilien. Für andere Textilien, wie z.B. Polyester Textilien, gibt es keine vergleichbare Möglichkeit Pilling zu reduzieren. Daher ist es wünschenswert und es besteht eine Nachfrage nach Lösungen, die das Pilling von Textilien, insbesondere Textilien, die synthetische Fasern wie Polyester enthalten, zu reduzieren.
Überraschenderweise haben die Erfinder der vorliegenden Erfindung gefunden, dass PETasen (Polyethylenterephthalat Hydrolasen), insbesondere eine PETase aus Ideonella sakaiensis, im Waschprozess aktiv sind und eine Anti-Pilling Wirkung zeigen. Im Vergleich zu Waschmittel ohne PETasen, ist vorgepilltes Gewebe bzw. neues Gewebe nach mehreren Wäschen mit einem Waschmittel, das die erfindungsgemäße PETase enthält, weniger gepillt. Außerdem bleiben die Farben länger strahlend durch die ebenfalls vorhandene Anti-Grau Wirkung.
Die oben beschriebene Aufgabe, die der vorliegenden Anmeldung zugrunde liegt, wird daher dadurch gelöst, dass Mitteln, insbesondere Wasch- oder Reinigungsmitteln, eine PETase zugesetzt wird. Der Zusatz der PETase bewirkt, dass mit den erfindungsgemäßen Mitteln gewaschene Textilien, insbesondere Polyester-haltige Textilien, ein signifikant verringertes Pilling im Vergleich zu einem Kontrollwaschmittel ohne PETasen aufweisen.
Daher richtet sich in einem ersten Aspekt die vorliegende Erfindung auf ein Mittel, insbesondere ein Wasch- oder Reinigungsmittel, dadurch gekennzeichnet, dass es eine PETase enthält.
In einem weiteren Aspekt richtet sich die vorliegende Erfindung auf Verfahren zur Reinigung von Textilien, dadurch gekennzeichnet, dass in mindestens einem Verfahrensschritt ein erfindungsgemäßes Mittel angewendet wird.
In noch einem Aspekt richtet sich die vorliegende Erfindung ferner auf die Verwendung eines wie hierin beschriebenen Mittels, vorzugsweise Wasch- oder Reinigungsmittel, besonders bevorzugt flüssige Waschmittel, zur Entfernung von Anschmutzungen.
Darüber hinaus beinhaltet ein weiterer Aspekt der Erfindung, die Verwendung einer PETase zur Verringerung von Pilling-Effekten und/oder zur Verringerung von Anti-Grau-Effekten und/oder zur Verbesserung der Reinigungsleistung eines Mittels, vorzugsweise eines Wasch- oder Reinigungsmittels, besonders bevorzugt eines Flüssigwaschmittels, wobei das Mittel die PETase enthält.
Diese und weitere Aspekte, Merkmale und Vorteile der Erfindung werden für den Fachmann aus dem Studium der folgenden detaillierten Beschreibung und Ansprüche ersichtlich. Dabei kann jedes Merkmal aus einem Aspekt der Erfindung in jedem anderen Aspekt der Erfindung eingesetzt werden. Ferner ist es selbstverständlich, dass die hierin enthaltenen Beispiele die Erfindung be- schreiben und veranschaulichen sollen, diese aber nicht einschränken und insbesondere die Erfindung nicht auf diese Beispiele beschränkt ist. Alle Prozentangaben sind, sofern nicht anders angegeben, Gewichts-% bezogen auf das Gesamtgewicht der Zusammensetzung. Numerische Bereiche, die in dem Format„von x bis y" angegeben sind, schließen die genannten Werte ein. Wenn mehrere bevorzugte numerische Bereiche in diesem Format angegeben sind, ist es selbstverständlich, dass alle Bereiche, die durch die Kombination der verschiedenen Endpunkte entstehen, ebenfalls erfasst werden.
„Mindestens ein", wie hierin verwendet, schließt ein, ist aber nicht begrenzt auf, 1 , 2, 3, 4, 5, 6 und mehr.
PETasen (Polyethylenterephthalat Hydrolasen) sind eine Klasse von Hydrolasen, die im Jahr 2016 entdeckt wurden und die Eigenschaft besitzen, die Spaltung von PET (Polyethylenterephthalat) in Mono(2-hydroxyethyl)terephthalsäure zu katalysieren. Das Enzym ist um ein Vielfaches aktiver als bisher bekannte vergleichbare Enzyme (z.B. PET-Esterasen und Cutinasen).
Die Erfindung richtet sich insbesondere auf die Verwendung einer PETase aus Ideonella sakaien- sis gemäß SEQ ID NO:1 (GeneBank accession number GAP3891 1 .1 ) oder eine mature PETase davon gemäß SEQ ID NO:2. Im Gegensatz zu den bisher erforschten Cutinasen und PET- Esterasen, die bei höheren Temperaturen (> 60°C) aktiv sind und PET nur sehr langsam abbauen, zeigt die neu gefundene PETase eine wesentlich höhere Aktivität auf amorphem und sogar auf kristallinem PET und dies auch bei 40°C und neutralen bis mild alkalischen pH Werten - also unter Waschbedingungen.
Die beobachteten Leistungen dieser PETase sind vielfältig. Zum einen verhindert das Enzym die Pill-Bildung auf neuen Poylester-Textilien bzw. unterstützt diesen Effekt in Kombination mit einer Cellulase auf Polyester/Baumwoll-Mischtextilien. Zum anderen können bereits gebildete Pills reduziert werden, was dem sogenannten„Renew" Effekt entspricht, der zurzeit bei Wollpflegeprodukten ausgelobt und durch die Cellulase Technologie bewirkt wird. Des Weiteren verhindert die PETase die Vergrauung von weißer Wäsche und das Verblassen von farbiger Wäsche. Außerdem zeigt die PETase eine direkte Reinigungsleistung auf Flecken auf Polyester-haltigen Textilien.
Durch die richtige Dosierung können all die oben genannten positiven Wascheigenschaften erreicht werden, ohne die Faser signifikant zu schädigen. Ein weiterer wichtiger Aspekt, vor allem bei Behandlung von Polyester-haltiger Kleidung, ist auch die Nachhaltigkeit. Dadurch dass die Textilien länger neuwertig aussehen, werden sie länger getragen und werden seltener durch neu gekaufte Stücke ersetzt. Dies führt zu einer Reduktion des C02-Footprints, da weniger Polyester für die Produktion neuer Textilien verbraucht wird. In verschiedenen Ausführungsformen der Erfindung ist die PETase ein frei vorliegendes Enzym. Dies bedeutet, dass die PETase mit allen Komponenten des Mittels direkt agieren kann und, falls es sich bei dem Mittel um ein Flüssigmittel handelt, dass die PETase direkt mit dem Lösungsmittel des erfindungsgemäßen Mittel (z.B. Wasser) in Kontakt steht. In anderen Ausführungsformen kann das erfindungsgemäße Mittel PETasen enthalten, die einen Interaktionskomplex mit anderen Molekülen bilden oder die eine„Umhüllung" enthalten. Hierbei kann ein einzelnes oder mehrere PETase Moleküle durch eine sie umgebende Struktur von den anderen Bestandteilen des Mittels getrennt sein. Eine solche trennende Struktur kann entstehen durch, ist allerdings nicht beschränkt auf, Vesikel, wie etwa eine Micelle oder ein Liposom. Die umgebende Struktur kann aber auch ein Viruspartikel, eine bakterielle Zelle oder eine eukaryotische Zelle sein. In verschiedenen Ausführungsformen kann das erfindungsgemäße Mittel Zellen von Ideonella sakaiensis, die die PETasen gemäß SEQ ID NO: 1 und SEQ ID NO:2 exprimieren, oder Zellkulturüberstände solcher Zellen enthalten.
In verschiedenen bevorzugten Ausführungsformen der Erfindung ist die PETase eine PETase, die mindestens 70 % Sequenzidentität mit der in SEQ ID NO:1 oder SEQ ID NO:2 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge aufweist. In weiter bevorzugten Ausführungsformen ist die im erfindungsgemäßen Mittel enthaltene PETase eine PETase gemäß SEQ ID NO: 1 oder SEQ ID NO:2. In verschiedenen Ausführungsformen der Erfindung handelt es sich bei der PETase um eine PETase aus Ideonella sakaiensis, insbesondere die PETase mit der Aminosäuresequenz gemäß SEQ ID NO: 1 , bzw. eine davon, beispielsweise mittels Mutagenese, abgeleitete PETase.
In verschiedenen weiteren Ausführungsformen ist das Mittel dadurch gekennzeichnet, dass
(a) die PETase aus einer wie oben definierten PETase als Ausgangsmolekül durch ein- oder mehrfache konservative Aminosäuresubstitution erhältlich ist; und/oder
(b) die PETase aus einer wie oben definierten PETase als Ausgangsmolekül erhältlich ist durch Fragmentierung, Deletions-, Insertions- oder Substitutionsmutagenese und eine Aminosäuresequenz umfasst, die über eine Länge von mindestens 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490, 500, 510, 520, 530, 540, 550, 560, 570, 580, 590, 600 oder 603 zusammenhängenden Aminosäuren mit dem Ausgangsmolekül übereinstimmt.
Die erfindungsgemäßen Mittel enthalten die PETase in einer Menge von 0,00001 - 1 Gew.-%, bevorzugt in einer Menge von 0,001 - 0,1 Gew.-% bezogen auf das aktive Protein.
In verschiedenen Ausführungsformen der Erfindung umfasst die PETase eine Aminosäuresequenz, die zu der in SEQ ID NO:1 oder SEQ ID NO:2 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70%, 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81 %, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91 %, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist.
Die Bestimmung der Identität von Nukleinsäure- oder Aminosäuresequenzen erfolgt durch einen Sequenzvergleich. Dieser Sequenzvergleich basiert auf dem im Stand der Technik etablierten und üblicherweise genutzten BLAST-Algorithmus (vgl. beispielsweise Altschul, S.F., Gish, W., Miller, W., Myers, E.W. & Lipman, DJ. (1990) "Basic local alignment search tool." J. Mol. Biol. 215:403- 410, und Altschul, Stephan F., Thomas L. Madden, Alejandro A. Schaffer, Jinghui Zhang, Hheng Zhang, Webb Miller, and David J. Lipman (1997): "Gapped BLAST and PSI-BLAST: a new genera- tion of protein database search programs"; Nucleic Acids Res., 25, S.3389-3402) und geschieht prinzipiell dadurch, dass ähnliche Abfolgen von Nukleotiden oder Aminosäuren in den Nukleinsäure- oder Aminosäuresequenzen einander zugeordnet werden. Eine tabellarische Zuordnung der betreffenden Positionen wird als Alignment bezeichnet. Ein weiterer im Stand der Technik verfügbarer Algorithmus ist der FASTA-Algorithmus. Sequenzvergleiche (Alignments), insbesondere multiple Sequenzvergleiche, werden mit Computerprogrammen erstellt. Häufig genutzt werden beispielsweise die Clustal-Serie (vgl. beispielsweise Chenna et al. (2003): Multiple sequence alignment with the Clustal series of programs. Nucleic Acid Research 31 , 3497-3500), T-Coffee (vgl. beispielsweise Notredame et al. (2000): T-Coffee: A novel method for multiple sequence alignments. J. Mol. Biol. 302, 205-217) oder Programme, die auf diesen Programmen beziehungsweise Algorithmen basieren. Ferner möglich sind Sequenzvergleiche (Alignments) mit dem Computer- Programm Vector NTI® Suite 10.3 (Invitrogen Corporation, 1600 Faraday Avenue, Carlsbad, Kalifornien, USA) mit den vorgegebenen Standardparametern, dessen AlignX-Modul für die Sequenzvergleiche auf ClustalW basiert.
Solch ein Vergleich erlaubt auch eine Aussage über die Ähnlichkeit der verglichenen Sequenzen zueinander. Sie wird üblicherweise in Prozent Identität, das heißt dem Anteil der identischen Nukleotide oder Aminosäurereste an denselben oder in einem Alignment einander entsprechenden Positionen angegeben. Der weiter gefasste Begriff der Homologie bezieht bei Aminosäuresequenzen konservierte Aminosäure-Austausche in die Betrachtung mit ein, also Aminosäuren mit ähnlicher chemischer Aktivität, da diese innerhalb des Proteins meist ähnliche chemische Aktivitäten ausüben. Daher kann die Ähnlichkeit der verglichenen Sequenzen auch Prozent Homologie oder Prozent Ähnlichkeit angegeben sein. Identitäts- und/oder Homologieangaben können über ganze Polypeptide oder Gene oder nur über einzelne Bereiche getroffen werden. Homologe oder identische Bereiche von verschiedenen Nukleinsäure- oder Aminosäuresequenzen sind daher durch Übereinstimmungen in den Sequenzen definiert. Solche Bereiche weisen oftmals identische Funktionen auf. Sie können klein sein und nur wenige Nukleotide oder Aminosäuren umfassen. Oftmals üben solche kleinen Bereiche für die Gesamtaktivität des Proteins essentielle Funktionen aus. Es kann daher sinnvoll sein, Sequenzübereinstimmungen nur auf einzelne, gegebenenfalls kleine Bereiche zu beziehen. Soweit nicht anders angegeben beziehen sich Identitäts- oder Homologie- angaben in der vorliegenden Anmeldung aber auf die Gesamtlänge der jeweils angegebenen Nukleinsäure- oder Aminosäuresäuresequenz.
Im Zusammenhang mit der vorliegenden Erfindung bedeutet die Angabe, dass eine Aminosäureposition einer numerisch bezeichneten Position in SEQ ID NO: 1 (oder SEQ ID NO:2) entspricht daher, dass die entsprechende Position der numerisch bezeichneten Position in SEQ ID NO: 1 (oder SEQ ID NO:2) in einem wie oben definierten Alignment zugeordnet ist.
In einer weiteren Ausführungsform der Erfindung ist die PETase dadurch gekennzeichnet, dass ihre Anti-Pilling-Leistung gegenüber derjenigen einer PETase, die eine Aminosäuresequenz um- fasst, die der in SEQ ID NO:1 oder SEQ ID NO:2 angegebenen Aminosäuresequenzen entspricht, nicht signifikant verringert ist, d.h. mindestens 70%, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 % der Referenz- Anti-Pilling-Ieistung besitzt. Die Anti-Pilling-Leistung kann in einem Waschsystem bestimmt werden, das ein Waschmittel in einer Dosierung zwischen 1 ,5 und 7,0 Gramm pro Liter Waschflotte sowie die PETase enthält, wobei die zu vergleichenden PETasen konzentrationsgleich (bezogen auf aktives Protein) eingesetzt sind und die Anti-Pilling-Leistung wie hierin beschrieben ermittelt wird. Beispielsweise kann der Waschvorgang für 60 Minuten bei einer Temperatur von 60°C erfolgen und das Wasser eine Wasserhärte zwischen 5 und 25, bevorzugt 10 und 20, bevorzugter 13 und 17 und ferner bevorzugt 15,5 und 16,5° (deutsche Härte) aufweisen. Die Konzentration der PETase in dem für dieses Waschsystem bestimmten Waschmittel beträgt von 0,001-1 Gew.-%, vorzugsweise von 0,001 -0,1 Gew.-%, und noch bevorzugter von 0,01 bis 0,06 Gew.-%, bezogen auf aktives, gereinigtes Protein.
Ein bevorzugtes flüssiges Waschmittel für ein solches Waschsystem ist wie folgt zusammengesetzt (alle Angaben in Gewichts-Prozent): 4,4% Alkylbenzolsulfonsäure, 5,6% anionische Tenside, 2,4% C12-C18 Na-Salze von Fettsäuren, 4,4% nicht-ionische Tenside, 0,2% Phosphonate, 1 ,4% Zitronensäure, 0,95% NaOH, 0,01 % Antischaum, 2% Glycerin, 0,08% Konservierungsstoffe, 1 % Ethanol, 1 ,6% Enzymmix (Protease, Amylase, Cellulase, Mannase), Rest demineralisiertes Wasser. Bevorzugt beträgt die Dosierung des flüssigen Waschmittels zwischen 4,5 und 6,0 Gramm pro Liter Waschflotte, beispielsweise 4,7, 4,9 oder 5,9 Gramm pro Liter Waschflotte. Bevorzugt wird gewaschen in einem pH-Wertebereich zwischen pH 8 und pH 10,5, bevorzugt zwischen pH 7,5 und pH 8.
Im Rahmen der Erfindung erfolgt die Bestimmung der Anti-Pilling-Leistung bei 40°C unter Verwendung eines flüssigen Waschmittels wie vorstehend angegeben, wobei der Waschvorgang vorzugsweise für 60 Minuten erfolgt.
Der Weißheitsgrad, d.h. die Aufhellung der Anschmutzungen, als Maß für die Reinigungsleistung wird mit optischen Messverfahren bestimmt, bevorzugt photometrisch. Ein hierfür geeignetes Gerät ist beispielsweise das Spektrometer Minolta CM508d. Üblicherweise werden die für die Messung eingesetzten Geräte zuvor mit einem Weißstandard, bevorzugt einem mitgelieferten Weißstandard, kalibriert.
Die Anti-Pilling-Leistung kann anhand von visueller Abmusterung verfolgen. Eine Prüfergruppe ordnet in diesem Fall der zu untersuchenden Wäsche einen Wert einer Skala von 1-5 zu. Dabei steht der Wert = 1 für sehr stark gepillte Wäsche, während der Wert = 5 nicht gepillter Wäsche zugeordnet wird.
Durch den aktivitätsgleichen Einsatz der jeweiligen PETase kann sichergestellt werden, dass auch bei einem etwaigen Auseinanderklaffen des Verhältnisses von Aktivsubstanz zu Gesamtprotein (die Werte der spezifischen Aktivität) die jeweiligen enzymatischen Eigenschaften, also beispielsweise die Reinigungsleistung an bestimmten Anschmutzungen oder die Anti-Pilling-Leistung, verglichen werden. Generell gilt, dass eine niedrige spezifische Aktivität durch Zugabe einer größeren Proteinmenge ausgeglichen werden kann. Ferner können die zu untersuchenden Enzyme auch in gleicher Stoffmenge oder Gewichtsmenge eingesetzt werden, falls die zu untersuchenden Enzyme in einem Aktivitätstest eine unterschiedliche Affinität an das Testsubstrat aufweisen. Der Ausdruck „gleiche Stoffmenge" bezieht sich in diesem Zusammenhang auf eine molgleiche Verwendung der zu untersuchenden Enzyme. Der Ausdruck„gleiche Gewichtsmenge" bezieht sich auf einen gewichtsgleichen Einsatz der zu untersuchenden Enzyme.
Proteine können über die Reaktion mit einem Antiserum oder einem bestimmten Antikörper zu Gruppen immunologisch verwandter Proteine zusammengefasst werden. Die Angehörigen einer solchen Gruppe zeichnen sich dadurch aus, dass sie dieselbe, von einem Antikörper erkannte antigene Determinante aufweisen. Sie sind daher einander strukturell so ähnlich, dass sie von einem Antiserum oder bestimmten Antikörpern erkannt werden. Einen weiteren Erfindungsgegenstand bilden daher PETasen, die dadurch gekennzeichnet sind, dass sie mindestens eine und zunehmend bevorzugt zwei, drei oder vier übereinstimmende antigene Determinanten mit einer in einem erfindungsgemäßen Mittel verwendeten PETase aufweisen. Solche PETasen sind auf Grund ihrer immunologischen Übereinstimmungen den in den erfindungsgemäßen Mitteln verwendeten PETasen strukturell so ähnlich, dass auch von einer gleichartigen Funktion auszugehen ist.
Weitere in den erfindungsgemäßen Mitteln verwendete PETasen können im Vergleich zu der in SEQ ID NO: 1 oder SEQ ID NO:2 beschriebenen PETase weitere Aminosäureveränderungen, insbesondere Aminosäure-Substitutionen, -Insertionen oder -Deletionen, aufweisen. Solche PETasen sind beispielsweise durch gezielte genetische Veränderung, d.h. durch Mutageneseverfahren, weiterentwickelt und für bestimmte Einsatzzwecke oder hinsichtlich spezieller Eigenschaften (beispielsweise hinsichtlich ihrer katalytischen Aktivität, Stabilität, usw.) optimiert. Ferner können Nuk- leinsäuren, die die verwendeten PETasen kodieren, in Rekombinationsansätze eingebracht und damit zur Erzeugung völlig neuartiger PETasen oder anderer Polypeptide genutzt werden.
Das Ziel ist es, in die bekannten Moleküle gezielte Mutationen wie Substitutionen, Insertionen oder Deletionen einzuführen, um beispielsweise die Reinigungsleistung von erfindungsgemäßen Enzymen zu verbessern. Hierzu können insbesondere die Oberflächenladungen und/oder der isoelektrische Punkt der Moleküle und dadurch ihre Wechselwirkungen mit dem Substrat verändert werden. So kann beispielsweise die Nettoladung der Enzyme verändert werden, um darüber die Substratbindung insbesondere für den Einsatz in Wasch- und Reinigungsmitteln zu beeinflussen. Alternativ oder ergänzend kann durch eine oder mehrere entsprechende Mutationen die Stabilität der PETa- se noch weiter erhöht und dadurch ihre Reinigungsleistung verbessert werden. Vorteilhafte Eigenschaften einzelner Mutationen, z.B. einzelner Substitutionen, können sich ergänzen. Eine hinsichtlich bestimmter Eigenschaften bereits optimierte PETase, zum Beispiel hinsichtlich ihrer Aktivität und/oder ihrer Anti-Pilling-Leistung, kann daher im Rahmen der Erfindung zusätzlich weiterentwickelt sein.
Für die Beschreibung von Substitutionen, die genau eine Aminosäureposition betreffen (Aminosäureaustausche), wird folgende Konvention angewendet: zunächst wird die natürlicherweise vorhandene Aminosäure in Form des international gebräuchlichen Einbuchstaben-Codes bezeichnet, dann folgt die zugehörige Sequenzposition und schließlich die eingefügte Aminosäure. Mehrere Austausche innerhalb derselben Polypeptidkette werden durch Schrägstriche voneinander getrennt. Bei Insertionen sind nach der Sequenzposition zusätzliche Aminosäuren benannt. Bei Deletionen ist die fehlende Aminosäure durch ein Symbol, beispielsweise einen Stern oder einen Strich, ersetzt oder vor der entsprechenden Position ein Δ angegeben. Beispielsweise beschreibt N58Q die Substitution von Asparagin an Position 58 durch Glutamin, N58NA die Insertion von Alanin nach der Aminosäure Asparagin an Position 58 und N58* oder ΔΝ58 die Deletion von Asparagin an Position 58. Diese Nomenklatur ist dem Fachmann auf dem Gebiet der Enzymtechnologie bekannt.
Ein weiterer Gegenstand der Erfindung ist daher ein Mittel enthaltend eine PETase, die dadurch gekennzeichnet ist, dass sie aus einer PETase wie vorstehend beschrieben als Ausgangsmolekül erhältlich ist durch ein- oder mehrfache konservative Aminosäuresubstitution. Der Begriff "konservative Aminosäuresubstitution" bedeutet den Austausch (Substitution) eines Aminosäurerestes gegen einen anderen Aminosäurerest, wobei dieser Austausch nicht zu einer Änderung der Polarität oder Ladung an der Position der ausgetauschten Aminosäure führt, z. B. der Austausch eines unpolaren Aminosäurerestes gegen einen anderen unpolaren Aminosäurerest. Konservative Aminosäuresubstitutionen im Rahmen der Erfindung umfassen beispielsweise: G=A=S, l=V=L=M, D=E, N=Q, K=R, Y=F, S=T, G=A=I=V=L=M=Y=F=W=P=S=T. Alternativ oder ergänzend ist die PETase dadurch gekennzeichnet, dass sie aus einer in einem erfindungsgemäßen Mittel enthaltenen PETase als Ausgangsmolekül erhältlich ist durch Fragmentierung, Deletions-, Insertions- oder Substitutionsmutagenese und eine Aminosäuresequenz umfasst, die über eine Länge von mindestens 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490, 500, 510, 520, 530, 540, 550, 560, 570, 580, 590, 600 oder 603 zusammenhängenden Aminosäuren mit dem Ausgangsmolekül übereinstimmt.
So ist es beispielsweise möglich, an den Termini oder in den Loops des Enzyms einzelne Aminosäuren zu deletieren, ohne dass dadurch die hydrolytische Aktivität verloren oder vermindert wird. Ferner kann durch derartige Fragmentierung, Deletions-, Insertions- oder Substitutionsmutagenese beispielsweise auch die Allergenizität betreffender Enzyme gesenkt und somit insgesamt ihre Ersetzbarkeit verbessert werden. Vorteilhafterweise behalten die Enzyme auch nach der Mutagenese ihre hydrolytische Aktivität, d.h. ihre hydrolytische Aktivität entspricht mindestens derjenigen des Ausgangsenzyms, d.h. in einer bevorzugten Ausführungsform beträgt die hydrolytische Aktivität mindestens 80, vorzugsweise mindestens 90 % der Aktivität des Ausgangsenzyms. Auch weitere Substitutionen können vorteilhafte Wirkungen zeigen. Sowohl einzelne wie auch mehrere zusammenhängende Aminosäuren können gegen andere Aminosäuren ausgetauscht werden.
Die weiteren Aminosäurepositionen werden hierbei durch ein Alignment der Aminosäuresequenz einer in den erfindungsgemäßen Mitteln enthaltenen PETase mit der Aminosäuresequenz der PETase aus Ideonella sakaiensis, wie sie in SEQ ID NO:2 angegeben ist, definiert. Weiterhin richtet sich die Zuordnung der Positionen nach dem reifen (maturen) Protein. Diese Zuordnung ist insbesondere auch anzuwenden, wenn die Aminosäuresequenz einer erfindungsgemäßen PETase eine höhere Zahl von Aminosäurenresten umfasst als die PETase aus Ideonella sakaiensis gemäß SEQ ID NO:2. Ausgehend von den genannten Positionen in der Aminosäuresequenz der PETase aus Ideonella sakaiensis sind die Veränderungspositionen in einer in den erfindungsgemäßen Mitteln enthaltenen PETase diejenigen, die eben diesen Positionen in einem Alignment zugeordnet sind.
Eine weitere Bestätigung der korrekten Zuordnung der zu verändernden Aminosäuren, d.h. insbesondere deren funktionelle Entsprechung, können Vergleichsversuche liefern, wonach die beiden auf der Basis eines Alignments einander zugeordneten Positionen in beiden miteinander verglichenen PETasen auf die gleiche Weise verändert werden und beobachtet wird, ob bei beiden die en- zymatische Aktivität oder die Anti-Pilling-Leistung auf gleiche Weise verändert wird. Geht beispielsweise ein Aminosäureaustausch in einer bestimmten Position der PETase aus Ideonella sakaiensis gemäß SEQ ID NO: 1 mit einer Veränderung eines enzymatischen Parameters einher, beispielsweise mit der Erhöhung des «M-Wertes, und wird eine entsprechende Veränderung des enzymatischen Parameters, beispielsweise also ebenfalls eine Erhöhung des «M-Wertes, in einer in einem erfindungsgemäßen Mittel enthaltenen PETase-Variante beobachtet, deren Aminosäureaus- tausch durch dieselbe eingeführte Aminosäure erreicht wurde, so ist hierin eine Bestätigung der korrekten Zuordnung zu sehen.
Ein Gegenstand der Erfindung ist ein Mittel, das dadurch gekennzeichnet ist, dass es eine PETase, wie hierin definiert, enthält. Bevorzugt ist das Mittel ein Wasch- oder Reinigungsmittel.
Zu diesem Erfindungsgegenstand zählen alle denkbaren Wasch- oder Reinigungsmittelarten, sowohl Konzentrate als auch unverdünnt anzuwendende Mittel, zum Einsatz im kommerziellen Maßstab, in der Waschmaschine oder in der Handwäsche. Dazu gehören beispielsweise Waschmittel für Textilien, Teppiche, oder Naturfasern, für die die Bezeichnung Waschmittel verwendet wird. Zu den Wasch- und Reinigungsmittel im Rahmen der Erfindung zählen ferner Waschhilfsmittel, die bei der manuellen oder maschinellen Textilwäsche zum eigentlichen Waschmittel hinzudosiert werden, um eine weitere Wirkung zu erzielen. Ferner zählen zu Wasch- und Reinigungsmittel im Rahmen der Erfindung auch Textilvor- und Nachbehandlungsmittel, also solche Mittel, mit denen das Wäschestück vor der eigentlichen Wäsche in Kontakt gebracht wird, beispielsweise zum Anlösen hartnäckiger Verschmutzungen, und auch solche Mittel, die in einem der eigentlichen Textilwäsche nachgeschalteten Schritt dem Waschgut weitere wünschenswerte Eigenschaften wie angenehmen Griff, Knitterfreiheit oder geringe statische Aufladung verleihen. Zu letztgenannten Mittel werden u.a. die Weichspüler gerechnet.
Die erfindungsgemäßen Wasch- oder Reinigungsmittel, die als pulverförmige Feststoffe, in nachverdichteter Teilchenform, als homogene Lösungen oder Suspensionen vorliegen können, können neben der oben beschriebenen PETase alle bekannten und in derartigen Mitteln üblichen Inhaltsstoffe enthalten, wobei bevorzugt mindestens ein weiterer Inhaltsstoff in dem Mittel vorhanden ist. Die erfindungsgemäßen Mittel können insbesondere Tenside, Builder (Gerüststoffe), Bleichmittel, insbesondere Persauerstoffverbindungen, oder Bleichaktivatoren enthalten. Ferner können sie wassermischbare organische Lösungsmittel, weitere Enzyme, Sequestrierungsmittel, Elektrolyte, pH-Regulatoren und/oder weitere Hilfsstoffe wie optische Aufheller, Vergrauungsinhibitoren, Schaumregulatoren sowie Färb- und Duftstoffe sowie Kombinationen hiervon enthalten.
Insbesondere eine Kombination des erfindungsgemäßen Mittels mit einem oder mehreren weiteren lnhaltsstoff(en) ist vorteilhaft, da ein solches Mittel in bevorzugten erfindungsgemäßen Ausgestaltungen eine verbesserte Reinigungsleistung durch sich ergebende Synergismen aufweist. Insbesondere durch die Kombination des erfindungsgemäßen Mittels mit einem Tensid und/oder einem Builder (Gerüststoff) und/oder einer Persauerstoffverbindung und/oder einem Bleichaktivator kann ein solcher Synergismus erreicht werden.
Vorteilhafte Inhaltsstoffe erfindungsgemäßer Mittel sind offenbart in der internationalen Patentanmeldung WO2009/121725, dort beginnend auf Seite 5, vorletzter Absatz, und endend auf Seite 13 nach dem zweiten Absatz. Auf diese Offenbarung wird ausdrücklich Bezug genommen und der dortige Offenbarungsgehalt in die vorliegende Patentanmeldung einbezogen.
Das erfindungsgemäße Mittel kann neben der PETase auch eine Verbindung aus der Klasse der anionischen Tenside der Formel (I)
enthalten.
In dieser Formel (I) steht R für einen linearen oder verzweigten unsubstituierten Alkylarylrest. Y steht für ein einwertiges Kation oder den n-ten Teil eines n-wertigen Kations, bevorzugt sind dabei die Alkalimetallionen und darunter Na+ oder K+, wobei Na+ äußerst bevorzugt ist. Weitere Kationen Y+ können ausgewählt sein aus NhV,
Figure imgf000012_0001
Mg2+,Y2 Ca2+ 2 Mn2+, und deren Mischungen.
„Alkylaryl", wie hierin verwendet, bezieht sich auf organische Reste, die aus einem Alkylrest und einem aromatischen Rest bestehen. Typische Beispiele für derartige Reste schließen ein, sind aber nicht beschränkt auf Alkylbenzolreste, wie Benzyl, Butylbenzolreste, Nonylbenzolreste, De- cylbenzolreste, Undecylbenzolreste, Dodecylbenzolreste, Tridecylbenzolreste und ähnliche.
In verschiedenen Ausführungsformen sind derartige Tenside ausgewählt aus linearen oder verzweigten Alkylbenzolsulfonaten der Formel A-1
Figure imgf000012_0002
in der R' und R" zusammen 9 bis 19, vorzugsweise 1 1 bis 15 und insbesondere 1 1 bis 13 C- Atome enthalten, dargestellt. Ein ganz besonders bevorzugter Vertreter lässt sich durch die Formel A-1a beschreiben:
Figure imgf000012_0003
(A-1a). In verschiedenen Ausführungsformen handelt es sich bei der Verbindung der Formel (I) vorzugsweise um das Natriumsalz eines linearen Alkylbenzolsulfonats.
In erfindungsgemäßen Mitteln ist die mindestens eine Verbindung aus der Klasse der anionischen Tenside der Formel (I) in einer Menge von 0,001 bis 30 Gew.-%, vorzugsweise 0,001 - 10 Gew.- %, ferner bevorzugt 2 - 6 Gew.-%, noch bevorzugter 3 - 5 Gew.-%, in dem Wasch- oder Reinigungsmittel enthalten, jeweils bezogen auf das Gesamtgewicht des Reinigungsmittels.
In verschiedenen Ausführungsformen kann das Mittel neben der mindestens einen Verbindung der Formel (I) oder alternativ dazu mindestens ein anderes Tensid enthalten. Als alternative oder zusätzliche Tenside kommen insbesondere weitere anionische Tenside, nichtionische Tenside und deren Gemische, aber auch kationische, zwitterionische und amphotere Tenside in Frage.
In verschiedenen Ausführungsformen enthalten die erfindungsgemäßen Mittel vorzugsweise mindestens ein anionisches Tensid der Formel
R -0-(AO)n-S03- X+ (II).
In dieser Formel (II) steht R für einen linearen oder verzweigten, substituierten oder unsubstituier- ten Alkyl-, Aryl- oder Alkylarylrest, vorzugsweise für einen linearen, unsubstituierten Alkylrest, besonders bevorzugt für einen Fettalkoholrest. Bevorzugte Reste R sind ausgewählt aus Decyl-, Undecyl-, Dodecyl-, Tridecyl-, Tetradecyl, Pentadecyl-, Hexadecyl-, Heptadecyl-, Octadecyl-, No- nadecyl-, Eicosylresten und deren Mischungen, wobei die Vertreter mit gerader Anzahl an C- Atomen bevorzugt sind. Besonders bevorzugte Reste R sind abgeleitet von Ci2-Ci8-Fettalkoholen, beispielsweise von Kokosfettalkohol, Talgfettalkohol, Lauryl-, Myristyl-, Cetyl- oder Stearylalkohol oder von Cio-C2o-Oxoalkoholen.
AO steht für eine Ethylenoxid- (EO) oder Propylenoxid- (PO) Gruppierung, vorzugsweise für eine Ethylenoxidgruppierung. Der Index n steht für eine ganze Zahl von 1 bis 50, vorzugsweise von 1 bis 20 und insbesondere von 2 bis 10. Ganz besonders bevorzugt steht n für die Zahlen 2, 3, 4, 5, 6, 7 oder 8. X steht für ein einwertiges Kation oder den n-ten Teil eines n-wertigen Kations, bevorzugt sind dabei die Alkalimetallionen und darunter Na+ oder K+, wobei Na+ äußerst bevorzugt ist. Weitere Kationen X+ können ausgewählt sein aus NhV,
Figure imgf000013_0001
Mn2+, und deren Mischungen.
Zusammenfassend enthalten Mittel in verschiedenen Ausführungsformen somit mindestens ein anionisches Tensid ausgewählt aus Fettalkoholethersulfaten der Formel A-2 O
H3C J^SO3 " Na+
(A-2) mit k = 1 1 bis 19, n = 2, 3, 4, 5, 6, 7 oder 8. Besonders bevorzugte Vertreter sind Na-Ci2-14 Fettal- koholethersulfate mit 2 EO (k = 1 1 -13, n = 2 in Formel A-2).
In verschiedenen Ausführungsformen enthält das Reinigungsmittel das mindestens eine anionische Tensid der Formel (II) in einer Menge von 2 - 10 Gew.-%, vorzugsweise 3 - 8 Gew.-%, bezogen auf das Gesamtgewicht des Reinigungsmittels.
Weitere einsetzbare anionische Tenside sind die Alkylsulfate der Formel
R2-0-S03 X+ (III).
In dieser Formel (III) steht R2 für einen linearen oder verzweigten, substituierten oder unsubstituierten Alkylrest, vorzugsweise für einen linearen, unsubstituierten Alkylrest, besonders bevorzugt für einen Fettalkoholrest. Bevorzugte Reste R2 sind ausgewählt aus Decyl-, Undecyl-, Dodecyl-, Tridecyl-, Tetradecyl, Pentadecyl-, Hexadecyl-, Heptadecyl-, Octadecyl-, Nonadecyl-, Eicosylresten und deren Mischungen, wobei die Vertreter mit gerader Anzahl an C-Atomen bevorzugt sind. Besonders bevorzugte Reste R2 sind abgeleitet von Ci2-Ci8-Fettalkoholen, beispielsweise von Kokosfettalkohol, Talgfettalkohol, Lauryl-, Myristyl-, Cetyl- oder Stearylalkohol oder von C10-C20- Oxoalkoholen. Y steht für ein einwertiges Kation oder den n-ten Teil eines n-wertigen Kations, bevorzugt sind dabei die Alkalimetallionen und darunter Na+ oder K+, wobei Na+ äußerst bevorzugt ist. Weitere Kationen Y+ können ausgewählt sein aus NhV,
Figure imgf000014_0001
Mg2+ 2 Ca2+y2 Mn2+, und deren Mischungen.
In verschiedenen Ausführungsformen sind diese Tenside ausgewählt aus Fettalkoholsulfaten der Formel A-3
Figure imgf000014_0002
mit k = 1 1 bis 19. Ganz besonders bevorzugte Vertreter sind Na-Ci2-14 Fettalkoholsulfate (k = 1 1-13 in Formel A-3). In verschiedenen Ausführungsformen umfassen die Mittel mindestens ein nichtionisches Tensid, insbesondere mindestens ein Fettalkoholalkoxylat. In verschiedenen Ausführungsformen enthalten die Reinigungsmittel daher mindestens ein nichtionisches Tensid der Formel
R3-0-(AO)m-H (IV), in der
R3 für einen linearen oder verzweigten, substituierten oder unsubstituierten Alkylrest, AO für eine Ethylenoxid- (EO) oder Propylenoxid- (PO) Gruppierung,
m für ganze Zahlen von 1 bis 50 stehen.
In der vorstehend genannten Formel (IV) steht R3 für einen linearen oder verzweigten, substituierten oder unsubstituierten Alkylrest, vorzugsweise für einen linearen, unsubstituierten Alkylrest, besonders bevorzugt für einen Fettalkoholrest. Bevorzugte Reste R2 sind ausgewählt aus Decyl-, Undecyl-, Dodecyl-, Tridecyl-, Tetradecyl, Pentadecyl-, Hexadecyl-, Heptadecyl-, Octadecyl-, No- nadecyl-, Eicosylresten und deren Mischungen, wobei die Vertreter mit gerader Anzahl an C- Atomen bevorzugt sind. Besonders bevorzugte Reste R3 sind abgeleitet von Ci2-Ci8-Fettalkoholen, beispielsweise von Kokosfettalkohol, Talgfettalkohol, Lauryl-, Myristyl-, Cetyl- oder Stearylalkohol oder von Cio-C2o-Oxoalkoholen.
AO steht für eine Ethylenoxid- (EO) oder Propylenoxid- (PO) Gruppierung, vorzugsweise für eine Ethylenoxidgruppierung. Der Index m steht für eine ganze Zahl von 1 bis 50, vorzugsweise von 1 bis 20 und insbesondere von 2 bis 10. Ganz besonders bevorzugt steht m für die Zahlen 2, 3, 4, 5, 6, 7 oder 8.
Zusammenfassend handelt es sich bei vorzugsweise einzusetzenden Fettalkoholalkoxylaten um Verbindungen der Formel
Figure imgf000015_0001
mit k = 1 1 bis 19, m = 2, 3, 4, 5, 6, 7 oder 8. Ganz besonders bevorzugte Vertreter sind C12-18 Fettalkohole mit 7 EO (k = 1 1-17, m = 7 in Formel (V)).
Weitere nichtionische Tenside, die im Sinne der vorliegenden Erfindung in den beschriebenen Mitteln enthalten sein können, schließen ein, sind aber nicht beschränkt auf Alkylglykoside, alkoxylier- te Fettsäurealkylester, Aminoxide, Fettsäurealkanolamide, Hydroxymischether, Sorbitanfettsäures- ter, Polyhydroxyfettsäureamide und alkoxylierte Alkohole. Geeignete Amphotenside sind beispielsweise Betaine der Formel (R^XR^XR^NTChhCOO-, in der Ri einen gegebenenfalls durch Heteroatome oder Heteroatomgruppen unterbrochenen Alkylrest mit 8 bis 25, vorzugsweise 10 bis 21 Kohlenstoffatomen und Riv sowie Rv gleichartige oder verschiedene Alkylreste mit 1 bis 3 Kohlenstoffatomen bedeuten, insbesondere Cio-Cis-Alkyl- dimethylcarboxymethylbetain und Cn-Ci7-Alkylamidopropyl-dimethylcarboxymethylbetain.
Geeignete Kationtenside sind u.a. die quartären Ammoniumverbindungen der Formel
(Rvi)(Rvii)(Rviii)(Rix)N+ X", in der Rvi bis Rix für vier gleich- oder verschiedenartige, insbesondere zwei lang- und zwei kurzkettige, Alkylreste und X" für ein Anion, insbesondere ein Halogenidion, stehen, beispielsweise Didecyldimethylammoniumchlorid, Alkylbenzyldidecylammoniumchlorid und deren Mischungen. Weitere geeignete kationische Tenside sind die quaternären oberflächenaktiven Verbindungen, insbesondere mit einer Sulfonium-, Phosphonium-, Jodonium- oder Arsoniumgruppe, die auch als antimikrobielle Wirkstoffe bekannt sind. Durch den Einsatz von quaternären oberflächenaktiven Verbindungen mit antimikrobieller Wirkung kann das Mittel mit einer antimikrobiellen Wirkung ausgestaltet werden bzw. dessen gegebenenfalls aufgrund anderer Inhaltsstoffe bereits vorhandene antimikrobielle Wirkung verbessert werden.
In verschiedenen Ausführungsformen beträgt die Gesamtmenge der Tenside bezogen auf das Gewicht des Mittels 2 bis 30 Gew.-%, vorzugsweise 5 bis 25 Gew.-%, noch bevorzugter 10 bis 20 Gew.-%, am bevorzugtesten 14 bis 18 Gew.-%, wobei die (linearen) Alkylbenzolsulfonate höchstens in einer Menge von 0,001 bis 30 Gew.-%, vorzugsweise 0,001 - 10 Gew.-%, ferner bevorzugt 2 - 6 Gew.-%, noch bevorzugter 3 - 5 Gew.-%, bezogen auf das Gewicht des Mittels vorliegen.
Erfindungsgemäße Wasch- oder Reinigungsmittel können neben der PETase weitere Enzyme enthalten. Dies können hydrolytische Enzyme oder andere Enzyme in einer für die Wirksamkeit des Mittels zweckmäßigen Konzentration sein. Eine Ausführungsform der Erfindung stellen somit Mittel dar, die eines oder mehrere Enzyme umfassen. Als Enzyme bevorzugt einsetzbar sind alle Enzyme, die in dem erfindungsgemäßen Mittel eine katalytische Aktivität entfalten können, insbesondere eine Protease, Amylase, Cellulase, Hemicellulase, Mannanase, Tannase, Xylanase, Xan- thanase, Xyloglucanase, ß-Glucosidase, Pektinase, Carrageenase, Perhydrolase, Oxidase, Oxido- reduktase, Hydrolase, Cutinase oder eine Lipase, sowie deren Gemische. Enzyme sind in dem Mittel vorteilhafterweise jeweils in einer Menge von 1 x 10~8 bis 5 Gew.-% bezogen auf aktives Protein enthalten. Zunehmend bevorzugt ist jedes Enzym in einer Menge von 1 x 10~7-3 Gew.-%, von 0,00001-1 Gew.-%, von 0,00005-0,5 Gew.-%, von 0,0001 bis 0, 1 Gew.-% und besonders bevorzugt von 0,0001 bis 0,05 Gew.-% in erfindungsgemäßen Mitteln enthalten, bezogen auf aktives Protein. Besonders bevorzugt zeigen die Enzyme synergistische Reinigungsleistungen gegenüber bestimmten Anschmutzungen oder Flecken, d.h. die in der Mittelzusammensetzung enthaltenen Enzyme unterstützen sich in ihrer Reinigungsleistung gegenseitig. Synergistische Effekte können nicht nur zwischen verschiedenen Enzymen, sondern auch zwischen einem oder mehreren Enzymen und weiteren Inhaltsstoffen des erfindungsgemäßen Mittels auftreten.
Besonders bevorzugt können die erfindungsgemäßen PETasen in Kombination mit einer Cellulase auf Polyester/Baumwollmisch-Textilien eingesetzt werden. Hierbei verhindern die PETase die Pill- Bildung der Polester-Fasern, während die Cellulase dieselbe Wirkung auf die Baumwoll-Fasern hat. Bei der Cellulase handelt es sich vorzugsweise um ein Cellulase-Gemisch oder eine Einkom- ponenten-Cellulase, vorzugsweise bzw. überwiegend um eine Endoglucanase und/oder eine Cel- lobiohydrolase.
Bei der/den Amylase(n) handelt es sich vorzugsweise um eine a-Amylase. Bei der Hemicellulase handelt es sich vorzugsweise um eine ß-Glucanase, eine Pektinase, eine Pullulanase und/oder eine Mannanase. Bei der Oxidoreduktase handelt es sich vorzugsweise um eine Oxidase, insbesondere eine Cholin-Oxidase, oder um eine Perhydrolase.
Die eingesetzten Proteasen sind vorzugsweise alkalische Serin-Proteasen. Sie wirken als unspezifische Endopeptidasen, das heißt, sie hydrolysieren beliebige Säureamidbindungen, die im Inneren von Peptiden oder Proteinen liegen und bewirken dadurch den Abbau proteinhaltiger Anschmutzungen auf dem Reinigungsgut. Ihr pH-Optimum liegt meist im deutlich alkalischen Bereich.
Die Proteinkonzentration kann mit Hilfe bekannter Methoden, zum Beispiel dem BCA-Verfahren (Bicinchoninsäure; 2,2'-Bichinolyl-4,4'-dicarbonsäure) oder dem Biuret-Verfahren bestimmt werden. Die Bestimmung der Aktivproteinkonzentration erfolgt diesbezüglich über eine Titration der aktiven Zentren unter Verwendung eines geeigneten irreversiblen Inhibitors (für Proteasen beispielsweise Phenylmethylsulfonylfluorid (PMSF)) und Bestimmung der Restaktivität (vgl. M. Bender et al., J. Am. Chem. Soc. 88, 24 (1966), S. 5890-5913).
In den hierin beschriebenen Reinigungsmitteln können die einzusetzenden Enzyme ferner zusammen mit Begleitstoffen, etwa aus der Fermentation, konfektioniert sein. In flüssigen Formulierungen werden die Enzyme bevorzugt als Enzymflüssigformulierung(en) eingesetzt.
Die Enzyme werden in der Regel nicht in Form des reinen Proteins, sondern vielmehr in Form stabilisierter, lager- und transportfähiger Zubereitungen bereitgestellt. Zu diesen vorkonfektionierten Zubereitungen zählen beispielsweise die durch Granulation, Extrusion oder Lyophilisierung erhaltenen festen Präparationen oder, insbesondere bei flüssigen oder gelförmigen Mitteln, Lösungen der Enzyme, vorteilhafterweise möglichst konzentriert, wasserarm und/oder mit Stabilisatoren oder weiteren Hilfsmitteln versetzt. Alternativ können die Enzyme sowohl für die feste als auch für die flüssige Darreichungsform verkapselt werden, beispielsweise durch Sprühtrocknung oder Extrusion der Enzymlösung zusammen mit einem vorzugsweise natürlichen Polymer oder in Form von Kapseln, beispielsweise solchen, bei denen die Enzyme wie in einem erstarrten Gel eingeschlossen sind oder in solchen vom Kern- Schale-Typ, bei dem ein enzymhaltiger Kern mit einer Wasser-, Luft- und/oder Chemikalienundurchlässigen Schutzschicht überzogen ist. In aufgelagerten Schichten können zusätzlich weitere Wirkstoffe, beispielsweise Stabilisatoren, Emulgatoren, Pigmente, Bleich- oder Farbstoffe aufgebracht werden. Derartige Kapseln werden nach an sich bekannten Methoden, beispielsweise durch Schüttel- oder Rollgranulation oder in Fluid-bed-Prozessen aufgebracht. Vorteilhafterweise sind derartige Granulate, beispielsweise durch Aufbringen polymerer Filmbildner, staubarm und aufgrund der Beschichtung lagerstabil.
Weiterhin ist es möglich, zwei oder mehrere Enzyme zusammen zu konfektionieren, so dass ein einzelnes Granulat mehrere Enzymaktivitäten aufweist.
Die Enzyme können auch in wasserlösliche Filme, wie sie beispielsweise bei der Konfektionierung von Wasch- und Reinigungsmitteln in Einheitsdosisform verwendet werden, eingebracht werden. Ein derartiger Film ermöglicht die Freisetzung der Enzyme nach Kontakt mit Wasser. Wie hierin verwendet, bezieht sich„wasserlöslich" auf eine Filmstruktur, die vorzugsweise vollständig wasserlöslich ist. Bevorzugt besteht ein solcher Film aus (vollständig oder teilweise hydrolysiertem) Po- lyvinylalkohol (PVA).
In verschiedenen Ausführungsformen kann das erfindungsgemäße Mittel einen oder mehrere Enzymstabilisatoren aufweisen. Daher kann das erfindungsgemäße Mittel ferner einen Enzymstabilisator beispielsweise ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Natriumformiat, Natriumsulfat, niederen aliphatischen Alkoholen und Borsäure sowie deren Estern und Salzen enthalten. Natürlich können auch zwei oder mehr dieser Verbindungen in Kombination eingesetzt werden. Die Salze der genannten Verbindungen können auch in Form von Hydraten, wie beispielsweise Natriumsulfat Dekahydrat, eingesetzt werden.
Der Begriff„niedere aliphatische Alkohole", wie hierin verwendet, schließt Monoalkohole, Diole und höherwertige Alkohole mit bis zu 6 Kohlenstoffatomen ein. Als zu der Gruppe der niederen aliphatischen Alkohole gehörend seien in diesem Zusammenhang insbesondere Polyole, beispielsweise Glycerin, (Mono)Ethylenglykol, (Mono)Propylenglykol oder Sorbit genannt, ohne dass die Erfindung auf diese beschränkt ist.
Neben dem mindestens einen Enzymstabilisator, ausgewählt aus der obenstehenden Gruppe, kann ein erfindungsgemäßes Mittel auch mindestens einen weiteren Stabilisator enthalten. Derartige Stabilisatoren sind im Stand der Technik bekannt. Reversible Proteaseinhibitoren schützen die in einem Wasch- oder Reinigungsmittel enthaltenen Enzyme vor proteolytischem Abbau, indem die enzymatische Tätigkeit der in dem Mittel enthaltenen Proteasen reversibel inhibiert wird. Als reversible Proteaseinhibitoren werden häufig Benzami- din-Hydrochlorid, Boronsäuren oder deren Salze oder Ester eingesetzt, darunter vor allem Derivate mit aromatischen Gruppen, etwa ortho-, meta- oder para-substituierte Phenylboronsäuren, insbesondere 4-Formylphenyl-Boronsäure, beziehungsweise die Salze oder Ester der genannten Verbindungen. Auch Peptidaldehyde, das heißt Oligopeptide mit reduziertem C-Terminus, insbesondere solche aus 2 bis 50 Monomeren werden zu diesem Zweck eingesetzt. Zu den peptidischen reversiblen Proteaseinhibitoren gehören unter anderem Ovomucoid und Leupeptin.
Weitere Enzymstabilisatoren sind Aminoalkohole wie Mono-, Di-, Triethanol- und -Propanolamin und deren Mischungen, aliphatische Carbonsäuren bis zu C12, wie beispielsweise Bernsteinsäure, andere Dicarbonsäuren oder Salze der genannten Säuren. Auch endgruppenverschlossene Fett- säureamidalkoxylate sind für diesen Zweck geeignet. Auch manche als Builder eingesetzte organische Säuren vermögen zusätzlich ein Enzym zu stabilisieren. Auch Calcium- und/oder Magnesiumsalze werden zu diesem Zwecke eingesetzt, wie beispielsweise Calciumacetat.
Polyamid-Oligomere oder polymere Verbindungen wie Lignin, wasserlösliche Vinyl-Copolymere oder Cellulose-Ether, Acryl-Polymere und/oder Polyamide stabilisieren die Enzym-Präparation unter anderem gegenüber physikalischen Einflüssen oder pH-Wert-Schwankungen. Polyamin-N- Oxid-enthaltende Polymere wirken gleichzeitig als Enzymstabilisatoren und als Farbübertragungs- inhibitoren. Andere polymere Stabilisatoren sind lineare Cs-ds Polyoxyalkylene. Auch Alkylpoly- glycoside können die enzymatischen Komponenten des erfindungsgemäßen Mittels stabilisieren und vermögen vorzugsweise, diese zusätzlich in ihrer Leistung zu steigern. Vernetzte N-haltige Verbindungen erfüllen vorzugsweise eine Doppelfunktion als Soil-release-Agentien und als Enzym- Stabilisatoren. Hydrophobes, nichtionisches Polymer stabilisiert insbesondere eine gegebenenfalls enthaltene Cellulase.
Reduktionsmittel und Antioxidantien erhöhen die Stabilität der Enzyme gegenüber oxidativem Zerfall; hierfür sind beispielsweise schwefelhaltige Reduktionsmittel geläufig, etwa Natrium-Sulfit und reduzierende Zucker.
In einer Ausführungsform sind die Mittel gemäß der vorliegenden Erfindung flüssig und enthalten Wasser als Hauptlösungsmittel, d.h. es handelt sich um wässrige Mittel. Der Wassergehalt des erfindungsgemäßen wässrigen Mittels beträgt üblicherweise 15 bis 70 Gew.-%, vorzugsweise 20 bis 60 Gew.-%. In verschiedenen Ausführungsformen beträgt der Wassergehalt mehr als 5 Gew.- %, bevorzugt mehr als 15 Gew.-% und insbesondere bevorzugt mehr als 50 Gew.-%, jeweils bezogen auf die Gesamtmenge an Mittel. Daneben können dem Mittel nichtwässrige Lösungsmittel zugesetzt werden. Geeignete nichtwäss- rige Lösungsmittel umfassen ein- oder mehrwertige Alkohole, Alkanolamine oder Glykolether, sofern sie im angegebenen Konzentrationsbereich mit Wasser mischbar sind. Vorzugsweise werden die Lösungsmittel ausgewählt aus Ethanol, n-Propanol, i-Propanol, Butanolen, Glykol, Propandiol, Butandiol, Methylpropandiol, Glycerin, Diglykol, Propyldiglycol, Butyldiglykol, Hexylenglycol, Ethyl- englykolmethylether, Ethylenglykolethylether, Ethylenglykolpropylether, Ethylenglykolmono-n- butylether, Diethylenglykolmethylether, Diethylenglykolethylether, Propylenglykolmethylether, Pro- pylenglykolethylether, Propylenglykolpropylether, Dipropylenglykolmonomethylether, Dipropy- lenglykolmonoethylether, Methoxytriglykol, Ethoxytriglykol, Butoxytriglykol, 1 -Butoxyethoxy-2- propanol, 3-Methyl-3-methoxybutanol, Propylen-glykol-t-butylether, Di-n-octylether sowie Mischungen dieser Lösungsmittel.
Das eine oder die mehreren nichtwässrigen Lösungsmittel ist/sind üblicherweise in einer Menge von 0,1 bis 10 Gew.-%, vorzugsweise 1 bis 8 Gew.-% bezogen auf die Gesamtzusammensetzung enthalten.
Neben den bisher genannten Komponenten können die erfindungsgemäßen Mittel weitere Inhaltsstoffe enthalten, die die anwendungstechnischen und/oder ästhetischen Eigenschaften des Reinigungsmittels weiter verbessern. Hierzu zählen beispielsweise Additive zur Verbesserung des Ablauf- und Trocknungsverhaltens, zur Einstellung der Viskosität und/oder zur Stabilisierung, sowie weitere in Reinigungsmitteln übliche Hilfs- und Zusatzstoffe, etwa UV-Stabilisatoren, Parfüm, Perlglanzmittel, Farbstoffe, Korrosionsinhibitoren, Konservierungsmittel, Bitterstoffe, organische Salze, Desinfektionsmittel, strukturgebende Polymere, Entschäumer, verkapselte Inhaltsstoffe (z.B. ver- kapseltes Parfüm), pH-Stellmittel sowie Hautgefühl-verbessernde oder pflegende Additive.
Ein erfindungsgemäßes Mittel, insbesondere Wasch- oder Reinigungsmittel, enthält vorzugsweise mindestens einen wasserlöslichen und/oder wasserunlöslichen, organischen und/oder anorganischen Builder (Gerüststoffe).
Zu den generell einsetzbaren Gerüststoffen zählen insbesondere die Aminocarbonsäuren und deren Salze, Zeolithe, Silikate, Carbonate, organische (Co)Builder und - wo keine ökologischen Vorurteile gegen ihren Einsatz bestehen - auch die Phosphate. Vorzugsweise sind die Mittel aber phosphatfrei.
Zu den wasserlöslichen organischen Buildersubstanzen gehören Polycarbonsäuren, insbesondere Citronensäure und Zuckersäuren, monomere und polymere Aminopolycarbonsäuren, insbesondere Methylglycindiessigsäure, Nitrilotriessigsäure und Ethylendiamintetraessigsäure sowie Polyaspara- ginsäure, Polyphosphonsäuren, insbesondere Aminotris(methylenphosphonsäure), Ethylendiamin- tetrakis(methylenphosphonsäure) und 1 -Hydroxyethan-1 , 1-diphosphonsäure, polymere Hydro- xyverbindungen wie Dextrin sowie polymere (Poly-)carbonsäuren, polymere Acrylsäuren, Methac- rylsäuren, Maleinsäuren und Mischpolymere aus diesen, die auch geringe Anteile polymerisierba- rer Substanzen ohne Carbonsäurefunktionalität einpolymerisiert enthalten können. Geeignete, wenn auch weniger bevorzugte Verbindungen dieser Klasse sind Copolymere der Acrylsäure oder Methacrylsäure mit Vinylethern, wie Vinylmethylethern, Vinylester, Ethylen, Propylen und Styrol, in denen der Anteil der Säure mindestens 50 Gew.-% beträgt. Die organischen Buildersubstanzen können, insbesondere zur Herstellung flüssiger Mittel, in Form wässriger Lösungen, vorzugsweise in Form 30- bis 50-gewichtsprozentiger wässriger Lösungen eingesetzt werden. Alle genannten Säuren werden in der Regel in Form ihrer wasserlöslichen Salze, insbesondere ihre Alkalisalze, eingesetzt.
Organische Buildersubstanzen können, falls gewünscht, in Mengen bis zu 40 Gew.-%, insbesondere bis zu 25 Gew.-% und vorzugsweise von 1 Gew.-% bis 8 Gew.-% enthalten sein. Mengen nahe der genannten Obergrenze werden vorzugsweise in pastenförmigen oder flüssigen, insbesondere wasserhaltigen, erfindungsgemäßen Mitteln eingesetzt. Erfindungsgemäße Wäschenachbehandlungsmittel, wie z.B. Weichspüler, können gegebenenfalls auch frei von organischem Builder sein.
Als wasserlösliche anorganische Buildermaterialien kommen insbesondere Alkalisilikate und Poly- phosphate, vorzugsweise Natriumtriphosphat, in Betracht. Als wasserunlösliche, wasserdispergier- bare anorganische Buildermaterialien können insbesondere kristalline oder amorphe Alkalialumosi- likate, falls gewünscht, in Mengen von bis zu 50 Gew.-%, vorzugsweise nicht über 40 Gew.-% und in flüssigen Mitteln insbesondere von 1 Gew.-% bis 5 Gew.-%, eingesetzt werden. Unter diesen sind die kristallinen Natriumalumosilikate in Waschmittelqualität, insbesondere Zeolith A, P und gegebenenfalls X, bevorzugt. Mengen nahe der genannten Obergrenze werden vorzugsweise in festen, teilchenförmigen Mitteln eingesetzt. Geeignete Alumosilikate weisen insbesondere keine Teilchen mit einer Korngröße über 30 μιη auf und bestehen vorzugsweise zu wenigstens 80 Gew.- % aus Teilchen mit einer Größe unter 10 μιη.
Geeignete Substitute beziehungsweise Teilsubstitute für das genannte Alumosilikat sind kristalline Alkalisilikate, die allein oder im Gemisch mit amorphen Silikaten vorliegen können. Die in den erfindungsgemäßen Mitteln als Gerüststoffe brauchbaren Alkalisilikate weisen vorzugsweise ein molares Verhältnis von Alkalioxid zu S1O2 unter 0,95, insbesondere von 1 : 1 , 1 bis 1 : 12 auf und können amorph oder kristallin vorliegen. Bevorzugte Alkalisilikate sind die Natriumsilikate, insbesondere die amorphen Natriumsilikate, mit einem molaren Verhältnis Na20:Si02 von 1 :2 bis 1 :2,8. Als kristalline Silikate, die allein oder im Gemisch mit amorphen Silikaten vorliegen können, werden vorzugsweise kristalline Schichtsilikate der allgemeinen Formel Na2Six02x+i y H2O eingesetzt, in der x, das sogenannte Modul, eine Zahl von 1 ,9 bis 4 und y eine Zahl von 0 bis 20 ist und bevorzugte Werte für x 2, 3 oder 4 sind. Bevorzugte kristalline Schichtsilikate sind solche, bei denen x in der genannten allgemeinen Formel die Werte 2 oder 3 annimmt. Insbesondere sind sowohl beta- als auch delta-Natriumdisilikate (Na2Si20s y H2O) bevorzugt. Auch aus amorphen Alkalisilikaten hergestellte, praktisch wasserfreie kristalline Alkalisilikate der obengenannten allgemeinen Formel, in der x eine Zahl von 1 ,9 bis 2, 1 bedeutet, können in erfindungsgemäßen Mitteln eingesetzt werden. In einer weiteren bevorzugten Ausführungsform erfindungsgemäßer Mittel wird ein kristallines Natriumschichtsilikat mit einem Modul von 2 bis 3 eingesetzt, wie es aus Sand und Soda hergestellt werden kann. Kristalline Natriumsilikate mit einem Modul im Bereich von 1 ,9 bis 3,5 werden in einer weiteren bevorzugten Ausführungsform erfindungsgemäßer Mittel eingesetzt. Falls als zusätzliche Buildersubstanz auch Alkalialumosilikat, insbesondere Zeolith, vorhanden ist, beträgt das Gewichtsverhältnis Alumosilikat zu Silikat, jeweils bezogen auf wasserfreie Aktivsubstanzen, vorzugsweise 1 :10 bis 10: 1. In Mitteln, die sowohl amorphe als auch kristalline Alkalisilikate enthalten, beträgt das Gewichtsverhältnis von amorphem Alkalisilikat zu kristallinem Alkalisilikat vorzugsweise 1 :2 bis 2: 1 und insbesondere 1 : 1 bis 2: 1.
Buildersubstanzen sind, falls gewünscht, in den erfindungsgemäßen Mitteln vorzugsweise in Mengen bis zu 60 Gew.-%, insbesondere von 5 Gew.-% bis 40 Gew.-%, enthalten. Erfindungsgemäße Wäschenachbehandlungsmittel, wie z.B. Weichspüler, sind vorzugsweise frei von anorganischem Builder.
Polymere Verdickungsmittel im Sinne der vorliegenden Erfindung sind die als Polyelektrolyte verdickend wirkenden Polycarboxylate, vorzugsweise Homo- und Copolymerisate der Acrylsäure, insbesondere Acrylsäure-Copolymere wie Acrylsäure-Methacrylsäure-Copolymere, und die Polysaccharide, insbesondere Heteropolysaccharide, sowie andere übliche verdickende Polymere.
Geeignete Polysaccharide bzw. Heteropolysaccharide sind die Polysaccharidgummen, beispielsweise Gummi arabicum, Agar, Alginate, Carrageene und ihre Salze, Guar, Guaran, Tragacant, Gellan, Ramsan, Dextran oder Xanthan und ihre Derivate, z.B. propoxyliertes Guar, sowie ihre Mischungen. Andere Polysaccharidverdicker, wie Stärken oder Cellulosederivate, können alternativ, vorzugsweise aber zusätzlich zu einem Polysaccharidgummi eingesetzt werden, beispielsweise Stärken verschiedensten Ursprungs und Stärkederivate, z.B. Hydroxyethylstärke, Stärkephosphatester oder Stärkeacetate, oder Carboxymethylcellulose bzw. ihr Natriumsalz, Methyl-, Ethyl-, Hyd- roxyethyl-, Hydroxypropyl-, Hydroxypropyl-methyl- oder Hydroxyethyl-methyl-cellulose oder Celluloseacetat.
Als polymere Verdickungsmittel geeignete Acrylsäure-Polymere sind beispielsweise hochmolekulare mit einem Polyalkenylpolyether, insbesondere einem Allylether von Saccharose, Pentaerythrit oder Propylen, vernetzte Homopolymere der Acrylsäure (INCI Carbomer), die auch als Carboxyvi- nylpolymere bezeichnet werden. Besonders geeignete polymere Verdickungsmittel sind aber folgende Acrylsäure-Copolymere: (i) Copolymere von zwei oder mehr Monomeren aus der Gruppe der Acrylsäure, Methacrylsäure und ihrer einfachen, vorzugsweise mit Ci-4-Alkanolen gebildeten, Ester (INCI Acrylates Copolymer), zu denen etwa die Copolymere von Methacrylsäure, Butylacrylat und Methylmethacrylat (CAS 25035-69-2) oder von Butylacrylat und Methylmethacrylat (CAS 25852-37-3) gehören; (ii) vernetzte hochmolekulare Acrylsäurecopolymere, zu denen etwa die mit einem Allylether der Saccharose oder des Pentaerythrits vernetzten Copolymere von Cio-30-Alkylacrylaten mit einem oder mehreren Monomeren aus der Gruppe der Acrylsäure, Methacrylsäure und ihrer einfachen, vorzugsweise mit Ci-4-Alkanolen gebildeten, Ester (INCI Acrylates/C 10-30 Alkyl Acrylate Crosspolymer) gehören.
Der Gehalt an polymerem Verdickungsmittel beträgt üblicherweise nicht mehr als 8 Gew.-%, vorzugsweise zwischen 0,1 und 7 Gew.-%, besonders bevorzugt zwischen 0,5 und 6 Gew.-%, insbesondere zwischen 1 und 5 Gew.-% und äußerst bevorzugt zwischen 1 ,5 und 4 Gew.-%, beispielsweise zwischen 2 und 2,5 Gew.-%, bezogen auf das Gesamtgewicht des Reinigungsmittels.
Zur Stabilisierung des erfindungsgemäßen Mittels, insbesondere bei hohem Tensidgehalt, können ein oder mehrere Dicarbonsäuren und/oder deren Salze zugesetzt werden, insbesondere eine Zusammensetzung aus Na-Salzen der Adipin-, Bernstein- und Glutarsäure, wie sie z.B. unter dem Handelsnamen Sokalan® DSC erhältlich ist. Der Einsatz erfolgt hierbei vorteilhafterweise in Mengen von 0,1 bis 8 Gew.-%, vorzugsweise 0,5 bis 7 Gew.-%, insbesondere 1 ,3 bis 6 Gew.-% und besonders bevorzugt 2 bis 4 Gew.-%, bezogen auf das Gesamtgewicht des Reinigungsmittels.
Kann jedoch auf deren Einsatz verzichtet werden, so ist das erfindungsgemäße Mittel vorzugsweise frei von Dicarbonsäure(salze)n.
Die erfindungsgemäßen Waschmittel können mit Referenzwaschmitteln verglichen werden, um die erhöhte Anti-Pilling-Leistung der erfindungsgemäßen Mittel festzustellen. Ein solches Waschsystem kann wie folgt zusammengesetzt sein (alle Angaben in Gewichts-Prozent): Referenzmittel: 4,4% Alkylbenzolsulfonsäure, 5,6% weitere anionische Tenside, 2,4% C12-C18 Na-Salze von Fettsäuren (Seifen), 4,4% nicht-ionische Tenside, 0,2% Phosphonate, 1 ,4% Zitronensäure, 0,95% NaOH, 0,01 % Entschäumer, 2,0% Glycerin, 0,08% Konservierungsstoffe, 1 % Ethanol, 1 ,6% Enzymmix (Protease, Amylase, Cellulase, Mannase), Rest demineralisiertes Wasser. Erfindungsgemäßes Mittel: 4,4% Alkylbenzolsulfonsäure, 5,6% weitere anionische Tenside, 2,4% C12-C18 Na- Salze von Fettsäuren (Seifen), 4,4% nicht-ionische Tenside, 0,2% Phosphonate, 1 ,4% Zitronensäure, 0,95% NaOH, 0,01 % Entschäumer, 2,0% Glycerin, 0,08% Konservierungsstoffe, 1 % Ethanol, 1 ,6% Enzymmix (Protease, Amylase, Cellulase, Mannase), 0,01 % PETase, Rest demineralisiertes Wasser. Bevorzugt beträgt die Dosierung des flüssigen Waschmittels zwischen 4,5 und 6,0 Gramm pro Liter Waschflotte, beispielsweise 4,7, 4,9 oder 5,9 Gramm pro Liter Waschflotte. Be- vorzugt wird gewaschen in einem pH-Wertebereich zwischen pH 8 und pH 10,5, bevorzugt zwischen pH 7,5 und pH 8.
Die zuvor genannten Ausführungsformen der vorliegenden Erfindung umfassen alle festen, pulver- förmigen, flüssigen, gelformigen oder pastösen Darreichungsformen erfindungsgemäßer Mittel, die gegebenenfalls auch aus mehreren Phasen bestehen können sowie in komprimierter oder nicht komprimierter Form vorliegen können. Das Mittel kann als rieselfähiges Pulver vorliegen, insbesondere mit einem Schüttgewicht von 300 g/l bis 1200 g/l, insbesondere 500 g/l bis 900 g/l oder 600 g/l bis 850 g/l. Zu den festen Darreichungsformen des Mittels zählen ferner Extrudate, Granulate, Tabletten oder Pouches. Alternativ kann das Mittel auch flüssig, gelförmig oder pastös sein, beispielsweise in Form eines nicht-wässrigen Flüssigwaschmittels oder einer nicht-wässrigen Paste oder in Form eines wässrigen Flüssigwaschmittels oder einer wasserhaltigen Paste. Weiterhin kann das Mittel als Einkomponentensystem vorliegen. Solche Mittel bestehen aus einer Phase. Alternativ kann ein Mittel auch aus mehreren Phasen bestehen. Ein solches Mittel ist demnach in mehrere Komponenten aufgeteilt.
Ein weiterer Erfindungsgegenstand ist ein Verfahren zur Reinigung von Textilien, das dadurch gekennzeichnet ist, dass in mindestens einem Verfahrensschritt ein erfindungsgemäßes Mittel angewendet wird.
In verschieden Ausführungsformen zeichnet sich das oben beschriebene Verfahren dadurch aus, dass das erfindungsgemäße Mittel bei einer Temperatur von 0-100°C, bevorzugt 0-80°C, weiter bevorzugt 10-50 und am meisten bevorzugt bei 20-40°C eingesetzt wird.
Hierunter fallen sowohl manuelle als auch maschinelle Verfahren, wobei maschinelle Verfahren bevorzugt sind. Verfahren zur Reinigung von Textilien zeichnen sich im Allgemeinen dadurch aus, dass in mehreren Verfahrensschritten verschiedene reinigungsaktive Substanzen auf das Reinigungsgut aufgebracht und nach der Einwirkzeit abgewaschen werden, oder dass das Reinigungsgut in sonstiger Weise mit einem Waschmittel oder einer Lösung oder Verdünnung dieses Mittels behandelt wird. Alle denkbaren Wasch- oder Reinigungsverfahren können in wenigstens einem der Verfahrensschritte um die Anwendung eines erfindungsgemäßen Wasch- oder Reinigungsmittels bereichert werden und stellen dann Ausführungsformen der vorliegenden Erfindung dar. Alle Sachverhalte, Gegenstände und Ausführungsformen, die für erfindungsgemäße Mittel beschrieben sind, sind auch auf diesen Erfindungsgegenstand anwendbar. Daher wird an dieser Stelle ausdrücklich auf die Offenbarung an entsprechender Stelle verwiesen mit dem Hinweis, dass diese Offenbarung auch für die vorstehenden erfindungsgemäßen Verfahren gilt.
Da Enzyme natürlicherweise bereits eine katalytische Aktivität besitzen und diese auch in Medien entfalten, die sonst keine Reinigungskraft besitzen wie beispielsweise in bloßem Puffer, kann ein einzelner und/oder der einzige Schritt eines solchen Verfahrens darin bestehen, dass als einzige reinigungsaktive Komponente eine PETase mit der Anschmutzung in Kontakt gebracht wird, bevorzugt in einer Pufferlösung oder in Wasser. Dies stellt eine weitere Ausführungsform dieses Erfindungsgegenstandes dar.
Alternative Ausführungsformen dieses Erfindungsgegenstandes stellen auch Verfahren zur Behandlung von Textilrohstoffen oder zur Textilpflege dar, bei denen in wenigstens einem Verfahrensschritt ein erfindungsgemäßes Mittel aktiv wird. Hierunter sind Verfahren für Textilrohstoffe, Fasern oder Textilien mit natürlichen Bestandteilen bevorzugt, und ganz besonders für solche mit Wolle oder Seide.
Des Weiteren erfasst die Erfindung auch die Verwendung des hierin beschriebenen Mittels, beispielsweise als Wasch- oder Reinigungsmitteln wie oben beschrieben, zur (verbesserten) Entfernung von Anschmutzungen, beispielsweise von Textilien, insbesondere Polyester Textilien.
Schließlich bezieht sich die Erfindung auch auf die Verwendung einer PETase zur Verringerung von Pilling-Effekten und/oder zur Verringerung von Anti-Grau-Effekten eines Mittels, vorzugsweise eines Waschmittels, besonders bevorzugt eines Flüssigwaschmittels, wobei das Mittel die PETase enthält.
Die PETase kann eine PETase sein wie sie hierin definiert ist. In verschiedenen Ausführungsformen der Verwendung ist die PETase in einer Menge von 0,00001 - 1 Gew-%, insbesondere von 0,001 - 0, 1 Gew.-%, in dem Mittel enthalten. In weiteren verschiedenen Ausführungsformen wird die PETase, die eine Verringerung des Pilling-Effekts und/oder die Verringerung des Anti-Grau- Effekts bewirkt, auf Textilien, insbesondere Textilien, die aus Polyester bestehen oder Polyester umfassen, angewendet.
Alle Sachverhalte, Gegenstände und Ausführungsformen, die für die erfindungsgemäßen Mittel und die PETase beschrieben sind, sind auch auf die weiteren Erfindungsgegenstände anwendbar. Daher wird an dieser Stelle ausdrücklich auf die Offenbarung an entsprechender Stelle verwiesen mit dem Hinweis, dass diese Offenbarung auch für das vorstehende erfindungsgemäße Verfahren und die erfindungsgemäßen Verwendungen gilt. Beispiele
Beispiel 1 : Klonierunq und Expression
Das Gen der PETase aus Ideonella sakaiensis, das für ein Enzym gemäß SEQ ID NO:2 kodiert, wird in die Ndel und Xhol Schnittstelle des Vectors PET-21 b der Firma Novagen kloniert, so dass C-terminal die Fusion mit einem hexa-Histidin-Tag entsteht. Das durch Sequenzierung bestätigte Plasmid wird mittels üblicher Transformationsprotokolle in elektrokompetente Zellen E.coli BL21 (DE3)CodonPlus RIPL (Agilent Technologies) transformiert.
Die Anzucht der transformierten E.coli Zellen erfolgt in LB-Medium bei 37°C, mit einer Induktion mit 0,1 mM IPTG bei einer OD von 0,6 und einer ab diesem Zeitpunkt abgesenkten Expressionstemperatur von 16°C.
Die Zellen werden durch Zentrifugation geerntet und in Lysis-Puffer resuspendiert (50 mM Tris- HCI, pH 7,5, 300 mM NaCI, 20 mM Imidazol). Der Zellaufschluss erfolgt mittels Ultraschall, mit anschließender Zentrifugation (15.000 x g, 20 min, 4°C). Der Überstand enthält das PETase- HisTag Fusionsprotein.
Eine Aufreinigung über NiNTA erfolgt nach einem Protokoll der Firma Qiagen.

Claims

Patentansprüche
1. Mittel, insbesondere ein Wasch- oder Reinigungsmittel, dadurch gekennzeichnet, dass es eine PETase (Polyethylenterephthalat Hydrolase) enthält.
2. Das Mittel nach Anspruch 1 , wobei die PETase eine PETase ist, die mindestens 70 % Sequenzidentität mit der in SEQ ID NO:1 oder SEQ ID NO:2 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge aufweist.
3. Das Mittel nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, dass
(a) die PETase aus einer PETase nach Anspruch 1 oder 2 als Ausgangsmolekül durch ein- oder mehrfache konservative Aminosäuresubstitution erhältlich ist; und/oder
(b) die PETase aus einer PETase nach Anspruch 1 oder 2 als Ausgangsmolekül erhältlich ist durch Fragmentierung, Deletions-, Insertions- oder Substitutionsmutagenese und eine Aminosäuresequenz umfasst, die über eine Länge von mindestens 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490, 500, 510, 520, 530, 540, 550, 560, 570, 580, 590, 600 oder 603 zusammenhängenden Aminosäuren mit dem Ausgangsmolekül übereinstimmt.
4. Das Mittel nach einem der Ansprüche 1 bis 3, wobei die PETase in einer Menge von
0,00001 - 1 Gew-%, insbesondere von 0,001 - 0, 1 Gew.-%, in dem Mittel enthalten ist.
5. Das Mittel nach einem der Ansprüche 1 bis 4, dadurch gekennzeichnet, dass
(a) es mindestens einen zusätzlichen Inhaltsstoff ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Tensiden, Buildern (Gerüststoffe), Bleichmitteln, Bleichaktivatoren, wassermischbare organische Lösungsmittel, weitere Enzyme, Sequestrierungsmittel, Elektrolyte, pH-Regulatoren, optische Aufheller, Vergrauungsinhibitoren, Schaumregulatoren, Färb- und Duftstoffe sowie Kombinationen hiervon enthält; und/oder
(b) es in fester oder flüssiger, bevorzugt flüssiger, Form vorliegt.
6. Verfahren zur Reinigung von Textilien, dadurch gekennzeichnet, dass in mindestens einem Verfahrensschritt ein Mittel nach einem der Ansprüche 1 bis 5 angewendet wird.
7. Verwendung eines Mittels nach einem der Ansprüche 1 bis 5 zur Entfernung von Anschmutzungen.
8. Verwendung einer PETase zur Verringerung von Pilling-Effekten eines Mittels und/oder zur Verringerung von Anti-Grau-Effekten und/oder zur Verbesserung der Reinigungsleistung, vorzugsweise eines Waschmittels, besonders bevorzugt eines Flüssigwaschmittels, wobei das Mittel die PETase enthält.
9. Die Verwendung nach Anspruch 8, wobei
(a) die PETase wie in Anspruch 2 oder 3 definiert ist; und/oder
(b) die PETase in einer Menge wie in Anspruch 4 definiert in dem Mittel enthalten ist.
PCT/EP2017/060497 2016-05-17 2017-05-03 Wasch- oder reinigungsmittel enthaltend eine polyethylenterephthalat hydrolase WO2017198463A1 (de)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE102016208408.9A DE102016208408A1 (de) 2016-05-17 2016-05-17 Wasch- oder Reinigungsmittel enthaltend eine Polyethylenterephthalat Hydrolase
DE102016208408.9 2016-05-17

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2017198463A1 true WO2017198463A1 (de) 2017-11-23

Family

ID=58745199

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/EP2017/060497 WO2017198463A1 (de) 2016-05-17 2017-05-03 Wasch- oder reinigungsmittel enthaltend eine polyethylenterephthalat hydrolase

Country Status (2)

Country Link
DE (1) DE102016208408A1 (de)
WO (1) WO2017198463A1 (de)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2019038164A1 (de) * 2017-08-24 2019-02-28 Henkel Ag & Co. Kgaa Verbesserte pflegeeigenschaften von polyester textilien ii
WO2024094679A1 (en) * 2022-11-01 2024-05-10 Microo Terraforming, S.L. MICROPLASTIC-DEGRADING CLEANING COMPOSITION COMPRISING MHETase

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2015025861A1 (ja) * 2013-08-21 2015-02-26 学校法人慶應義塾 芳香族ポリエステル分解酵素及び該酵素を用いた芳香族ポリエステル分解方法
WO2015085920A1 (en) * 2013-12-11 2015-06-18 Novozymes A/S Cutinase variants and polynucleotides encoding same
WO2015135757A1 (de) * 2014-03-11 2015-09-17 Henkel Ag & Co. Kgaa Pet-esterasen und deren verwendung

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH11504062A (ja) 1995-04-28 1999-04-06 ヘンケル・コマンディットゲゼルシャフト・アウフ・アクチエン セルラーゼ含有洗剤
DE102008017103A1 (de) 2008-04-02 2009-10-08 Henkel Ag & Co. Kgaa Wasch- und Reinigungsmittel enthaltend Proteasen aus Xanthomonas

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2015025861A1 (ja) * 2013-08-21 2015-02-26 学校法人慶應義塾 芳香族ポリエステル分解酵素及び該酵素を用いた芳香族ポリエステル分解方法
WO2015085920A1 (en) * 2013-12-11 2015-06-18 Novozymes A/S Cutinase variants and polynucleotides encoding same
WO2015135757A1 (de) * 2014-03-11 2015-09-17 Henkel Ag & Co. Kgaa Pet-esterasen und deren verwendung

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2019038164A1 (de) * 2017-08-24 2019-02-28 Henkel Ag & Co. Kgaa Verbesserte pflegeeigenschaften von polyester textilien ii
WO2024094679A1 (en) * 2022-11-01 2024-05-10 Microo Terraforming, S.L. MICROPLASTIC-DEGRADING CLEANING COMPOSITION COMPRISING MHETase

Also Published As

Publication number Publication date
DE102016208408A1 (de) 2017-11-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP3638762A1 (de) Pseudomonas stutzeri lipase und ihre verwendung
EP3638780A1 (de) Microbulbifer thermotolerans lipase und ihre verwendung
WO2019038164A1 (de) Verbesserte pflegeeigenschaften von polyester textilien ii
WO2020002310A1 (de) Mittel enthaltend polyesterase i
EP3408367B1 (de) Verbessertes anti-pilling auf polyester textilien durch einsatz einer cutinase
DE102016214381A1 (de) Wollwaschmittel enthaltend Transglutaminase
EP3538633A1 (de) Amylase für wasch- und reinigungsmittelanwendungen
WO2017198463A1 (de) Wasch- oder reinigungsmittel enthaltend eine polyethylenterephthalat hydrolase
EP3814470A1 (de) Mittel enthaltend rekombinante polyesterase
WO2020002307A1 (de) Polyesterase ii
DE102017223275A1 (de) Aminoxid enthaltende Reinigungsmittel mit synergistisch wirkenden Proteasen und Amylasen
WO2024125934A1 (de) Peptide als farbübertragungsinhibitoren für wasch- oder reinigungsmittel
DE102016214382A1 (de) Waschmittel enthaltend Keratinase
US20220364027A1 (en) Improved caring properties on polyester textiles by use of a cutinase
DE102019106038A1 (de) Wasch- oder Reinigungsmittel umfassend Chlorophyll-bindendes Protein
DE102015225463A1 (de) Wasch- oder Reinigungsmittel mit verbesserter Enzymstabilität
WO2019120698A1 (de) Las enthaltende reinigungsmittel mit synergistisch wirkenden proteasen und amylasen
WO2017211661A1 (de) Festes wasch- und reinigungsmittel mit amylase, protease und löslichem builder
WO2018086877A1 (de) Festes wasch- oder reinigungsmittel mit amylase und löslichem builder

Legal Events

Date Code Title Description
NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 17724771

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

122 Ep: pct application non-entry in european phase

Ref document number: 17724771

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1