WO2017150681A1 - シグナルペプチドを指標にした筋萎縮性側索硬化症の診断方法 - Google Patents
シグナルペプチドを指標にした筋萎縮性側索硬化症の診断方法 Download PDFInfo
- Publication number
- WO2017150681A1 WO2017150681A1 PCT/JP2017/008332 JP2017008332W WO2017150681A1 WO 2017150681 A1 WO2017150681 A1 WO 2017150681A1 JP 2017008332 W JP2017008332 W JP 2017008332W WO 2017150681 A1 WO2017150681 A1 WO 2017150681A1
- Authority
- WO
- WIPO (PCT)
- Prior art keywords
- als
- signal peptide
- subject
- body fluid
- profile
- Prior art date
Links
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6803—General methods of protein analysis not limited to specific proteins or families of proteins
- G01N33/6818—Sequencing of polypeptides
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6803—General methods of protein analysis not limited to specific proteins or families of proteins
- G01N33/6848—Methods of protein analysis involving mass spectrometry
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6803—General methods of protein analysis not limited to specific proteins or families of proteins
- G01N33/6848—Methods of protein analysis involving mass spectrometry
- G01N33/6851—Methods of protein analysis involving laser desorption ionisation mass spectrometry
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
- G01N33/6896—Neurological disorders, e.g. Alzheimer's disease
-
- G—PHYSICS
- G16—INFORMATION AND COMMUNICATION TECHNOLOGY [ICT] SPECIALLY ADAPTED FOR SPECIFIC APPLICATION FIELDS
- G16H—HEALTHCARE INFORMATICS, i.e. INFORMATION AND COMMUNICATION TECHNOLOGY [ICT] SPECIALLY ADAPTED FOR THE HANDLING OR PROCESSING OF MEDICAL OR HEALTHCARE DATA
- G16H50/00—ICT specially adapted for medical diagnosis, medical simulation or medical data mining; ICT specially adapted for detecting, monitoring or modelling epidemics or pandemics
- G16H50/20—ICT specially adapted for medical diagnosis, medical simulation or medical data mining; ICT specially adapted for detecting, monitoring or modelling epidemics or pandemics for computer-aided diagnosis, e.g. based on medical expert systems
-
- G—PHYSICS
- G16—INFORMATION AND COMMUNICATION TECHNOLOGY [ICT] SPECIALLY ADAPTED FOR SPECIFIC APPLICATION FIELDS
- G16H—HEALTHCARE INFORMATICS, i.e. INFORMATION AND COMMUNICATION TECHNOLOGY [ICT] SPECIALLY ADAPTED FOR THE HANDLING OR PROCESSING OF MEDICAL OR HEALTHCARE DATA
- G16H50/00—ICT specially adapted for medical diagnosis, medical simulation or medical data mining; ICT specially adapted for detecting, monitoring or modelling epidemics or pandemics
- G16H50/30—ICT specially adapted for medical diagnosis, medical simulation or medical data mining; ICT specially adapted for detecting, monitoring or modelling epidemics or pandemics for calculating health indices; for individual health risk assessment
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/28—Neurological disorders
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A90/00—Technologies having an indirect contribution to adaptation to climate change
- Y02A90/10—Information and communication technologies [ICT] supporting adaptation to climate change, e.g. for weather forecasting or climate simulation
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Bioinformatics & Computational Biology (AREA)
- Pathology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Spectroscopy & Molecular Physics (AREA)
- Public Health (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Data Mining & Analysis (AREA)
- Databases & Information Systems (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Primary Health Care (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Neurology (AREA)
- Optics & Photonics (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Electrochemistry (AREA)
- Magnetic Resonance Imaging Apparatus (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
本発明によって提供されるALSの検出を補助する方法は、被検体由来の体液中に含まれるシグナルペプチドのプロファイルを決定すること、および、該決定した被検体のシグナルペプチドプロファイルを、予め決定した健常検体由来の体液中のシグナルペプチドのプロファイルと比較すること、を包含する。そして、上記被検体のシグナルペプチドプロファイルが、特定の分子量において上記健常検体のシグナルペプチドプロファイルと相違する場合に、被検体がALSに罹患もしくは発症していることに関連することを特徴とする。
Description
本発明は、シグナルペプチドを指標にした筋萎縮性側索硬化症の診断方法に関する。
なお、本出願は2016年3月3日に出願された日本国特許出願2016-041054号に基づく優先権を主張しており、当該日本国出願の全内容は本明細書中に参照として援用されている。
なお、本出願は2016年3月3日に出願された日本国特許出願2016-041054号に基づく優先権を主張しており、当該日本国出願の全内容は本明細書中に参照として援用されている。
神経変性疾患は、特定の神経が障害され、認知機能の低下、運動失調、不随意運動といった症状を示すことを特徴とする疾患である。かかる神経変性疾患には、アルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症(amyotrophic lateral sclerosis:ALS)などが含まれる。
筋萎縮性側索硬化症(以下ALSともいう)は、運動神経(上位運動神経、下位運動神経)が選択的に障害される進行性の神経変性疾患である。典型的に、全身性の筋萎縮や筋力低下(即ち、運動機能の障害)が生じる。かかるALSの主な臨床症状として、痙縮、腱反射亢進、線維束性収縮、歩行障害、言語障害(構音障害)、嚥下障害、呼吸障害等が挙げられる。
一般的なALSの診断では、上記ALSの臨床症状の有無、進行速度、運動機能に障害をきたす他の疾患の除外等を組み合わせて行われる。例えば、神経伝導検査、筋電図検査、筋生検、神経の画像解析(CTやMRI等)、血液検査、髄液検査等を適宜組み合わせて行われる。
ところが、早期のALSや非定型のALSは、運動機能に障害をきたす他の疾患と区別することが難しい場合がある。また、ALSが稀な疾患であるため、医師(典型的にはかかりつけ医師)によっては、ALS患者を診断(治療)した経験に乏しく、診断に慣れていない可能性がある。これらの理由から、上述のように複数の検査を組み合わせてALSの診断を試みたとしても、ALSの診断を高い精度で行うことは難しい。専門医であっても、ALSが見逃される或いは他の疾患をALSと誤診するリスクが存在する。
ALSが見逃される(他の疾患と誤診される)と、ALSの治療の開始が遅れることに加えて、不要な治療(例えば手術や投薬等)が行われる虞がある。また、他の疾患(典型的には、運動機能に障害をきたすALS以外の疾患)をALSと誤診してしまうと、本来の疾患に対して適切な治療が行われる機会が奪われる虞がある。
ALSが見逃される(他の疾患と誤診される)と、ALSの治療の開始が遅れることに加えて、不要な治療(例えば手術や投薬等)が行われる虞がある。また、他の疾患(典型的には、運動機能に障害をきたすALS以外の疾患)をALSと誤診してしまうと、本来の疾患に対して適切な治療が行われる機会が奪われる虞がある。
また、上記脳の画像解析(例えばCT、MRI)を行うためには、特殊であり且つ高額な医療機器を導入する必要があり、該画像解析を実施可能な医療機関は限定される。さらに、かかる画像解析で得られる結果の判断には熟練の技術を要する。また、ALSの診断(治療)に精通した専門医(および医療機関)は限られるため、ALSの診断を受けるためにかかる医療機関を訪れることは、患者(ALSの疑いがある者)にとって負担が大きい。
さらに、ALSの診断の難しさ等の理由から、患者(ALSの疑いがある者)がなんらかの症状を自覚してから(或いは、初診から)ALSが確定診断されるまでに要する時間が長くなりがちである。このため、ALSに対して早期に治療(ケア)を開始することが困難となるケースがある。
このような背景から、近年、ALSの診断に有用な情報を提供し得るバイオマーカーの同定およびその利用が切望されている。かかるバイオマーカーを用いてALSの診断を行うことで、該診断の特異性および感度の向上が期待できる。また、かかるバイオマーカーを用いてALSの診断を行うことによって、ALSの診断に要する期間の短縮が期待できる。
例えば、特許文献1には、ALSのバイオマーカーとして尿中のプロスタグランジンD2の代謝物(tPGDM)を用いる方法について記されている。このように、ALSの診断に利用可能なバイオマーカーの同定およびその利用に関する研究が盛んに行われているものの、精度や信頼性等の課題から臨床でのルーチン検査として実用化されるまでに至ったものはない。
例えば、特許文献1には、ALSのバイオマーカーとして尿中のプロスタグランジンD2の代謝物(tPGDM)を用いる方法について記されている。このように、ALSの診断に利用可能なバイオマーカーの同定およびその利用に関する研究が盛んに行われているものの、精度や信頼性等の課題から臨床でのルーチン検査として実用化されるまでに至ったものはない。
本発明は、ALSの検出を補助し得る新たな方法、および該方法に利用可能なバイオマーカーの提供を目的とする。また、かかるALSの検出を補助する方法に利用可能なALS検査組成物、およびALS検査キットの提供を他の目的とする。
本発明者らは、体液中に存在するシグナルペプチドに着目し、該シグナルペプチドを指標としたALSの診断方法を確立するべく、鋭意検討しつつ体液中に存在するシグナルペプチドに関する研究を重ねた。その結果、ALS患者由来の体液と健常者由来の体液との間で、特定のシグナルペプチドの存在の有無および存在量が異なることを見出した。そして、かかる特定のシグナルペプチドを指標とすることによって、ALSを診断するために有用な情報を入手可能であるという知見を得て、本発明を完成するに至った。
本発明者らは、第一に、ALS患者の体液中のシグナルペプチドのプロファイルが健常者の体液中のシグナルペプチドのプロファイルと異なることを見出した。そこで、本発明の第一の態様として、ALSの検出を補助するための方法であって、被検体由来の体液中に含まれるシグナルペプチドについて、分子量が1000~3500の範囲内のシグナルペプチドのプロファイルを決定すること、および、前記決定した被検体のシグナルペプチドプロファイルを、予め決定した健常検体由来の体液中のシグナルペプチドのプロファイルと比較すること、を包含する方法を提供する。ここで、かかる方法は、前記被検体のシグナルペプチドプロファイルが、以下の分子量:
1405.71±2, 1406.49±2, 1409.40±2, 1410.97±2, 1418.70±2, 1426.68±2, 1437.62±2, 1445.77±2, 1451.61±2, 1456.44±2, 1458.88±2, 1466.24±2, 1468.86±2, 1472.12±2, 1476.87±2, 1482.60±2, 1493.58±2, 1495.42±2, 1496.52±2, 1497.16±2, 1498.88±2, 1502.40±2, 1505.52±2, 1508.76±2, 1510.50±2, 1516.64±2, 1521.93±2, 1529.32±2, 1530.37±2, 1533.52±2, 1539.36±2, 1544.22±2, 1553.72±2, 1555.72±2, 1560.24±2, 1566.20±2, 1567.20±2, 1567.74±2, 1575.70±2, 1578.07±2, 1580.91±2, 1589.58±2, 1592.55±2, 1597.25±2, 1608.53±2, 1609.36±2, 1610.62±2, 1616.12±2, 1629.15±2, 1639.39±2, 1640.36±2, 1646.58±2, 1655.72±2, 1657.97±2, 1659.24±2, 1660.46±2, 1662.16±2, 1679.09±2, 1682.54±2, 1683.12±2, 1687.34±2, 1688.14±2, 1691.08±2, 1691.75±2, 1694.76±2, 1695.74±2, 1700.65±2, 1702.19±2, 1705.53±2, 1708.77±2, 1712.10±2, 1714.63±2, 1715.56±2, 1719.51±2, 1721.61±2, 1726.31±2, 1737.85±2, 1739.71±2, 1743.69±2, 1761.79±2, 1769.93±2, 1774.13±2, 1775.70±2, 1786.39±2, 1788.03±2, 1790.80±2, 1796.23±2, 1797.49±2, 1800.34±2, 1801.79±2, 1804.45±2, 1810.72±2, 1812.31±2, 1813.77±2, 1817.26±2, 1818.66±2, 1819.34±2, 1819.93±2, 1821.71±2, 1822.73±2, 1829.48±2, 1831.81±2, 1832.41±2, 1836.18±2, 1837.33±2, 1840.84±2, 1849.81±2, 1854.68±2, 1858.34±2, 1864.19±2, 1866.06±2, 1875.28±2, 1876.50±2, 1878.25±2, 1890.21±2, 1891.32±2, 1893.00±2, 1904.69±2, 1911.46±2, 1913.68±2, 1916.02±2, 1919.35±2, 1927.13±2, 1931.84±2, 1934.86±2, 1935.52±2, 1936.83±2, 1937.87±2, 1941.22±2, 1944.97±2, 1948.39±2, 1952.47±2, 1957.80±2, 1962.82±2, 1969.82±2, 1972.54±2, 1975.58±2, 1976.51±2, 1977.70±2, 1979.29±2, 1988.46±2, 1991.91±2, 1995.37±2, 2009.91±2, 2011.18±2, 2013.86±2, 2023.97±2, 2027.73±2, 2030.95±2, 2032.69±2, 2039.29±2, 2043.12±2, 2045.68±2, 2051.76±2, 2055.50±2, 2059.05±2, 2062.98±2, 2065.57±2, 2066.09±2, 2074.03±2, 2075.32±2, 2079.80±2, 2083.74±2, 2084.36±2, 2085.85±2, 2089.53±2, 2092.25±2, 2092.80±2, 2097.03±2, 2099.42±2, 2111.39±2, 2113.10±2, 2115.77±2, 2120.37±2, 2126.55±2, 2137.63±2, 2139.15±2, 2140.48±2, 2143.42±2, 2146.46±2, 2149.85±2, 2151.02±2, 2160.22±2, 2161.68±2, 2167.09±2, 2167.78±2, 2168.75±2, 2173.75±2, 2177.51±2, 2179.25±2, 2184.93±2, 2185.65±2, 2186.28±2, 2190.18±2, 2191.02±2, 2192.84±2, 2196.47±2, 2199.82±2, 2201.22±2, 2204.02±2, 2207.10±2, 2211.58±2, 2216.77±2, 2218.45±2, 2219.30±2, 2220.56±2, 2222.74±2, 2226.96±2, 2228.22±2, 2231.60±2, 2239.71±2, 2244.01±2, 2251.78±2, 2254.83±2, 2256.53±2, 2261.91±2, 2266.45±2, 2268.58±2, 2274.97±2, 2276.04±2, 2278.67±2, 2281.09±2, 2285.01±2, 2289.43±2, 2290.85±2, 2292.35±2, 2295.92±2, 2296.92±2, 2301.71±2, 2302.50±2, 2303.21±2, 2305.43±2 2307.22±2, 2314.24±2, 2314.81±2, 2317.68±2, 2325.30±2, 2327.73±2, 2341.14±2, 2342.87±2, 2344.45±2, 2351.97±2, 2353.99±2, 2355.29±2, 2357.54±2, 2367.75±2, 2375.59±2, 2378.35±2, 2380.39±2, 2393.64±2, 2402.11±2, 2404.01±2, 2406.49±2, 2412.79±2, 2414.25±2, 2415.20±2, 2416.30±2, 2431.13±2, 2434.36±2, 2438.19±2, 2439.22±2, 2444.37±2, 2451.90±2, 2453.96±2, 2455.44±2, 2456.62±2, 2459.43±2, 2462.31±2, 2464.16±2, 2470.97±2, 2478.17±2, 2479.28±2, 2484.18±2, 2500.40±2, 2502.64±2, 2504.73±2, 2507.42±2, 2509.21±2, 2515.26±2, 2517.43±2, 2519.07±2, 2527.31±2, 2531.06±2, 2532.26±2, 2546.08±2, 2554.96±2, 2559.48±2, 2564.01±2, 2571.26±2, 2578.45±2, 2581.25±2, 2583.37±2, 2584.81±2, 2587.01±2, 2588.90±2, 2593.68±2, 2596.11±2, 2603.33±2, 2608.20±2, 2613.31±2, 2614.91±2, 2622.46±2, 2629.26±2, 2633.69±2, 2634.61±2, 2640.51±2, 2641.73±2, 2652.85±2, 2655.08±2, 2665.15±2, 2670.00±2, 2682.80±2, 2696.41±2, 2697.73±2, 2698.27±2, 2699.82±2, 3302.01±2, 3303.21±2, 3309.84±2, 3323.89±2, 3330.34±2, 3337.92±2, 3366.84±2, 3370.39±2, 3378.18±2, 3380.43±2, 3384.77±2;
のうちのいずれかにおいて前記健常検体のシグナルペプチドプロファイルと相違する場合に、被検体がALSに罹患もしくは発症していることに関連する(典型的には、被検体がALSに罹患もしくは発症していることを示唆する)ことを特徴とする。
1405.71±2, 1406.49±2, 1409.40±2, 1410.97±2, 1418.70±2, 1426.68±2, 1437.62±2, 1445.77±2, 1451.61±2, 1456.44±2, 1458.88±2, 1466.24±2, 1468.86±2, 1472.12±2, 1476.87±2, 1482.60±2, 1493.58±2, 1495.42±2, 1496.52±2, 1497.16±2, 1498.88±2, 1502.40±2, 1505.52±2, 1508.76±2, 1510.50±2, 1516.64±2, 1521.93±2, 1529.32±2, 1530.37±2, 1533.52±2, 1539.36±2, 1544.22±2, 1553.72±2, 1555.72±2, 1560.24±2, 1566.20±2, 1567.20±2, 1567.74±2, 1575.70±2, 1578.07±2, 1580.91±2, 1589.58±2, 1592.55±2, 1597.25±2, 1608.53±2, 1609.36±2, 1610.62±2, 1616.12±2, 1629.15±2, 1639.39±2, 1640.36±2, 1646.58±2, 1655.72±2, 1657.97±2, 1659.24±2, 1660.46±2, 1662.16±2, 1679.09±2, 1682.54±2, 1683.12±2, 1687.34±2, 1688.14±2, 1691.08±2, 1691.75±2, 1694.76±2, 1695.74±2, 1700.65±2, 1702.19±2, 1705.53±2, 1708.77±2, 1712.10±2, 1714.63±2, 1715.56±2, 1719.51±2, 1721.61±2, 1726.31±2, 1737.85±2, 1739.71±2, 1743.69±2, 1761.79±2, 1769.93±2, 1774.13±2, 1775.70±2, 1786.39±2, 1788.03±2, 1790.80±2, 1796.23±2, 1797.49±2, 1800.34±2, 1801.79±2, 1804.45±2, 1810.72±2, 1812.31±2, 1813.77±2, 1817.26±2, 1818.66±2, 1819.34±2, 1819.93±2, 1821.71±2, 1822.73±2, 1829.48±2, 1831.81±2, 1832.41±2, 1836.18±2, 1837.33±2, 1840.84±2, 1849.81±2, 1854.68±2, 1858.34±2, 1864.19±2, 1866.06±2, 1875.28±2, 1876.50±2, 1878.25±2, 1890.21±2, 1891.32±2, 1893.00±2, 1904.69±2, 1911.46±2, 1913.68±2, 1916.02±2, 1919.35±2, 1927.13±2, 1931.84±2, 1934.86±2, 1935.52±2, 1936.83±2, 1937.87±2, 1941.22±2, 1944.97±2, 1948.39±2, 1952.47±2, 1957.80±2, 1962.82±2, 1969.82±2, 1972.54±2, 1975.58±2, 1976.51±2, 1977.70±2, 1979.29±2, 1988.46±2, 1991.91±2, 1995.37±2, 2009.91±2, 2011.18±2, 2013.86±2, 2023.97±2, 2027.73±2, 2030.95±2, 2032.69±2, 2039.29±2, 2043.12±2, 2045.68±2, 2051.76±2, 2055.50±2, 2059.05±2, 2062.98±2, 2065.57±2, 2066.09±2, 2074.03±2, 2075.32±2, 2079.80±2, 2083.74±2, 2084.36±2, 2085.85±2, 2089.53±2, 2092.25±2, 2092.80±2, 2097.03±2, 2099.42±2, 2111.39±2, 2113.10±2, 2115.77±2, 2120.37±2, 2126.55±2, 2137.63±2, 2139.15±2, 2140.48±2, 2143.42±2, 2146.46±2, 2149.85±2, 2151.02±2, 2160.22±2, 2161.68±2, 2167.09±2, 2167.78±2, 2168.75±2, 2173.75±2, 2177.51±2, 2179.25±2, 2184.93±2, 2185.65±2, 2186.28±2, 2190.18±2, 2191.02±2, 2192.84±2, 2196.47±2, 2199.82±2, 2201.22±2, 2204.02±2, 2207.10±2, 2211.58±2, 2216.77±2, 2218.45±2, 2219.30±2, 2220.56±2, 2222.74±2, 2226.96±2, 2228.22±2, 2231.60±2, 2239.71±2, 2244.01±2, 2251.78±2, 2254.83±2, 2256.53±2, 2261.91±2, 2266.45±2, 2268.58±2, 2274.97±2, 2276.04±2, 2278.67±2, 2281.09±2, 2285.01±2, 2289.43±2, 2290.85±2, 2292.35±2, 2295.92±2, 2296.92±2, 2301.71±2, 2302.50±2, 2303.21±2, 2305.43±2 2307.22±2, 2314.24±2, 2314.81±2, 2317.68±2, 2325.30±2, 2327.73±2, 2341.14±2, 2342.87±2, 2344.45±2, 2351.97±2, 2353.99±2, 2355.29±2, 2357.54±2, 2367.75±2, 2375.59±2, 2378.35±2, 2380.39±2, 2393.64±2, 2402.11±2, 2404.01±2, 2406.49±2, 2412.79±2, 2414.25±2, 2415.20±2, 2416.30±2, 2431.13±2, 2434.36±2, 2438.19±2, 2439.22±2, 2444.37±2, 2451.90±2, 2453.96±2, 2455.44±2, 2456.62±2, 2459.43±2, 2462.31±2, 2464.16±2, 2470.97±2, 2478.17±2, 2479.28±2, 2484.18±2, 2500.40±2, 2502.64±2, 2504.73±2, 2507.42±2, 2509.21±2, 2515.26±2, 2517.43±2, 2519.07±2, 2527.31±2, 2531.06±2, 2532.26±2, 2546.08±2, 2554.96±2, 2559.48±2, 2564.01±2, 2571.26±2, 2578.45±2, 2581.25±2, 2583.37±2, 2584.81±2, 2587.01±2, 2588.90±2, 2593.68±2, 2596.11±2, 2603.33±2, 2608.20±2, 2613.31±2, 2614.91±2, 2622.46±2, 2629.26±2, 2633.69±2, 2634.61±2, 2640.51±2, 2641.73±2, 2652.85±2, 2655.08±2, 2665.15±2, 2670.00±2, 2682.80±2, 2696.41±2, 2697.73±2, 2698.27±2, 2699.82±2, 3302.01±2, 3303.21±2, 3309.84±2, 3323.89±2, 3330.34±2, 3337.92±2, 3366.84±2, 3370.39±2, 3378.18±2, 3380.43±2, 3384.77±2;
のうちのいずれかにおいて前記健常検体のシグナルペプチドプロファイルと相違する場合に、被検体がALSに罹患もしくは発症していることに関連する(典型的には、被検体がALSに罹患もしくは発症していることを示唆する)ことを特徴とする。
なお、本明細書において、「シグナルペプチドのプロファイル」とは、特定の分子量の範囲内に存在する複数のシグナルペプチドの存在状態(シグナルペプチドが存在しているか否か、または、該シグナルペプチドの存在量の程度)に関するデータの集合をいう。典型的に、上記複数のシグナルペプチドは、分子量に基づいて区別(分類)される。
かかるシグナルペプチドのプロファイルは、例えば、質量分析(マススペクトロメトリー)によって決定することが可能であり、マススペクトルとして表すことができる。或いはまた、上記シグナルペプチドのプロファイルは、シグナルペプチドの物理化学的性質または生化学的性質に基づいた他の分析手法によって決定してもよい。例えば、シグナルペプチドを二次元電気泳動した場合の電気泳動性の差に基づいて決定することが可能であり、該二次元電気泳動ゲルで確認される複数のスポットの状態として表すことができる。或いはまた、上記シグナルペプチドのプロファイルは、該シグナルペプチドに対する抗体を用いた免疫学的手法(同時に複数のタンパク質を分析可能なタンパク質マイクロアレイが好ましい)によって決定することも可能である。
なお、かかるシグナルペプチドのプロファイルは、特定の分子量の範囲内に存在する全てのシグナルペプチドに関するデータを含む必要はなく、比較対象の分子量のシグナルペプチドに関するデータが含まれていればよい。したがって、上記シグナルペプチドのプロファイルは、2又は3以上、または5以上、または10以上、または20以上、または30以上、または40以上、または50以上、または60以上、または70以上、または80以上、または90以上、または100以上のシグナルペプチドに関するデータを含む。
かかるシグナルペプチドのプロファイルは、例えば、質量分析(マススペクトロメトリー)によって決定することが可能であり、マススペクトルとして表すことができる。或いはまた、上記シグナルペプチドのプロファイルは、シグナルペプチドの物理化学的性質または生化学的性質に基づいた他の分析手法によって決定してもよい。例えば、シグナルペプチドを二次元電気泳動した場合の電気泳動性の差に基づいて決定することが可能であり、該二次元電気泳動ゲルで確認される複数のスポットの状態として表すことができる。或いはまた、上記シグナルペプチドのプロファイルは、該シグナルペプチドに対する抗体を用いた免疫学的手法(同時に複数のタンパク質を分析可能なタンパク質マイクロアレイが好ましい)によって決定することも可能である。
なお、かかるシグナルペプチドのプロファイルは、特定の分子量の範囲内に存在する全てのシグナルペプチドに関するデータを含む必要はなく、比較対象の分子量のシグナルペプチドに関するデータが含まれていればよい。したがって、上記シグナルペプチドのプロファイルは、2又は3以上、または5以上、または10以上、または20以上、または30以上、または40以上、または50以上、または60以上、または70以上、または80以上、または90以上、または100以上のシグナルペプチドに関するデータを含む。
ここで開示されるALSの検出を補助する方法は、被検体由来の体液中に含まれるシグナルペプチドのプロファイルを決定し、該シグナルペプチドプロファイルを上記健常検体由来のシグナルペプチドのプロファイルと比較するという簡易な方法により、被検体がALSに罹患もしくは発症しているか否かを判断するために有用な情報を入手することができる。かかるALSの検出を補助する方法は、ALSの予知、診断(早期診断)、治療の導入、治療開始後の経過観察指標(典型的には、治療効果の判断指標)に好適に利用することができる。
かかる方法は、被検体から採取した体液を検査対象とするインビトロの検査であるため、被検体(患者)自身が体液中のシグナルペプチドのプロファイルを入手可能な機関へ出向く必要がない。即ち、ここで開示するALSの検出を補助する方法は、多くの医療機関で実施可能である。
また、上記の方法によると、被検体がALSに罹患もしくは発症している可能性が、決定されたシグナルペプチドのプロファイルを総合的に解析した結果として示される。このため、上記の方法によると、ALSを診断するための信頼性の高い情報を提供することができる。
かかる方法は、被検体から採取した体液を検査対象とするインビトロの検査であるため、被検体(患者)自身が体液中のシグナルペプチドのプロファイルを入手可能な機関へ出向く必要がない。即ち、ここで開示するALSの検出を補助する方法は、多くの医療機関で実施可能である。
また、上記の方法によると、被検体がALSに罹患もしくは発症している可能性が、決定されたシグナルペプチドのプロファイルを総合的に解析した結果として示される。このため、上記の方法によると、ALSを診断するための信頼性の高い情報を提供することができる。
本発明者らは、被検体のシグナルペプチドプロファイルにおいて、特定の分子量で特定されるシグナルペプチドの存在量が増大している場合に被検体がALSに罹患もしくは発症している可能性が増大することを確認した。即ち、ここで第一の態様として開示されるALSの検出を補助する方法の好適な一態様は、上記被検体のシグナルペプチドのプロファイルについて、以下の分子量:
1405.71±2, 1406.49±2, 1409.40±2, 1410.97±2, 1418.70±2, 1426.68±2, 1437.62±2, 1445.77±2, 1451.61±2, 1456.44±2, 1458.88±2, 1466.24±2, 1468.86±2, 1472.12±2, 1476.87±2, 1482.60±2, 1493.58±2, 1495.42±2, 1496.52±2, 1498.88±2, 1502.40±2, 1505.52±2, 1508.76±2, 1510.50±2, 1516.64±2, 1521.93±2, 1529.32±2, 1530.37±2, 1533.52±2, 1539.36±2, 1544.22±2, 1553.72±2, 1555.72±2, 1560.24±2, 1566.20±2, 1567.20±2, 1575.70±2, 1578.07±2, 1580.91±2, 1589.58±2, 1592.55±2, 1597.25±2, 1608.53±2, 1609.36±2, 1610.62±2, 1616.12±2, 1629.15±2, 1639.39±2, 1640.36±2, 1646.58±2, 1655.72±2, 1657.97±2, 1659.24±2, 1660.46±2, 1662.16±2, 1679.09±2, 1682.54±2, 1683.12±2, 1687.34±2, 1688.14±2, 1691.08±2, 1691.75±2, 1694.76±2, 1695.74±2, 1700.65±2, 1702.19±2, 1708.77±2, 1712.10±2, 1714.63±2, 1715.56±2, 1719.51±2, 1721.61±2, 1726.31±2, 1737.85±2, 1739.71±2, 1743.69±2, 1761.79±2, 1769.93±2, 1774.13±2, 1775.70±2, 1786.39±2, 1788.03±2, 1790.80±2, 1796.23±2, 1797.49±2, 1800.34±2, 1801.79±2, 1804.45±2, 1810.72±2, 1812.3±21, 1813.77±2, 1817.26±2, 1818.66±2, 1819.93±2, 1821.71±2, 1822.73±2, 1829.48±2, 1832.41±2, 1836.18±2, 1837.33±2, 1840.84±2, 1849.81±2, 1854.68±2, 1858.34±2, 1864.19±2, 1866.06±2, 1875.28±2, 1876.50±2, 1878.25±2, 1890.21±2, 1891.32±2, 1893.00±2, 1904.69±2, 1911.46±2, 1913.68±2, 1916.02±2, 1919.35±2, 1927.13±2, 1931.84±2, 1934.86±2, 1936.83±2, 1937.87±2, 1941.22±2, 1944.97±2, 1948.39±2, 1952.47±2, 1957.80±2, 1962.82±2, 1969.82±2, 1972.54±2, 1975.58±2, 1976.51±2, 1977.70±2, 1979.29±2, 1988.46±2, 1991.91±2, 1995.37±2, 2009.91±2, 2011.18±2, 2013.86±2, 2023.97±2, 2027.73±2, 2030.95±2, 2032.69±2, 2039.29±2, 2043.12±2, 2045.68±2, 2051.76±2, 2059.05±2, 2062.98±2, 2066.09±2, 2074.03±2, 2075.32±2, 2079.80±2, 2083.74±2, 2085.85±2, 2089.53±2, 2092.80±2, 2097.03±2, 2099.42±2, 2111.39±2, 2113.10±2, 2115.77±2, 2120.37±2, 2126.55±2, 2137.63±2, 2139.15±2, 2143.42±2, 2146.46±2, 2149.85±2, 2151.02±2, 2160.22±2, 2161.68±2, 2167.09±2, 2168.75±2, 2173.75±2, 2177.51±2, 2179.25±2, 2185.65±2, 2186.28±2, 2190.18±2, 2191.02±2, 2192.84±2, 2196.47±2, 2199.82±2, 2201.22±2, 2204.02±2, 2207.10±2, 2211.58±2, 2216.77±2, 2218.45±2, 2219.30±2, 2220.56±2, 2222.74±2, 2226.96±2, 2228.22±2, 2231.60±2, 2239.71±2, 2244.01±2, 2251.78±2, 2254.83±2, 2256.53±2, 2261.91±2, 2266.45±2, 2268.58±2, 2274.97±2, 2276.04±2, 2278.67±2, 2281.09±2, 2285.01±2, 2289.43±2, 2290.85±2, 2292.35±2, 2295.92±2, 2296.92±2, 2301.71±2, 2302.50±2, 2303.21±2, 2305.43±2, 2307.22±2, 2314.24±2, 2317.68±2, 2325.30±2, 2341.14±2, 2342.87±2, 2344.45±2, 2351.97±2, 2353.99±2, 2355.29±2, 2357.54±2, 2367.75±2, 2375.59±2, 2378.35±2, 2380.39±2, 2393.64±2, 2402.11±2, 2404.01±2, 2406.49±2, 2412.79±2, 2414.25±2, 2415.20±2, 2416.30±2, 2431.13±2, 2434.36±2, 2438.19±2, 2439.22±2, 2444.37±2, 2451.90±2, 2453.96±2, 2455.44±2, 2456.62±2, 2459.43±2, 2462.31±2, 2464.16±2, 2470.97±2, 2478.17±2, 2479.28±2, 2484.18±2, 2500.40±2, 2502.64±2, 2504.73±2, 2507.42±2, 2509.21±2, 2515.26±2, 2517.43±2, 2519.07±2, 2527.31±2, 2531.06±2, 2532.26±2, 2546.08±2, 2554.96±2, 2559.48±2, 2564.01±2, 2571.26±2, 2578.45±2, 2581.25±2, 2583.37±2, 2584.81±2, 2587.01±2, 2588.90±2, 2593.68±2, 2596.11±2, 2603.33±2, 2608.20±2, 2613.31±2, 2614.91±2, 2622.46±2, 2629.26±2, 2633.69±2, 2634.61±2, 2640.51±2, 2641.73±2, 2652.85±2, 2655.08±2, 2665.15±2, 2670.00±2, 2682.80±2, 2696.41±2, 2698.27±2, 2699.82±2, 3302.01±2, 3303.21±2, 3323.89±2, 3330.34±2, 3337.92±2, 3366.84±2, 3370.39±2, 3378.18±2, 3380.43±2, 3384.77±2;
のうちのいずれかで特定されるシグナルペプチドの存在量が前記健常検体のシグナルペプチドプロファイルと比較して増大している場合に、被検体がALSに罹患もしくは発症していることに関連する(典型的には、被検体がALSに罹患もしくは発症していることを示唆する)ことを特徴とする。
1405.71±2, 1406.49±2, 1409.40±2, 1410.97±2, 1418.70±2, 1426.68±2, 1437.62±2, 1445.77±2, 1451.61±2, 1456.44±2, 1458.88±2, 1466.24±2, 1468.86±2, 1472.12±2, 1476.87±2, 1482.60±2, 1493.58±2, 1495.42±2, 1496.52±2, 1498.88±2, 1502.40±2, 1505.52±2, 1508.76±2, 1510.50±2, 1516.64±2, 1521.93±2, 1529.32±2, 1530.37±2, 1533.52±2, 1539.36±2, 1544.22±2, 1553.72±2, 1555.72±2, 1560.24±2, 1566.20±2, 1567.20±2, 1575.70±2, 1578.07±2, 1580.91±2, 1589.58±2, 1592.55±2, 1597.25±2, 1608.53±2, 1609.36±2, 1610.62±2, 1616.12±2, 1629.15±2, 1639.39±2, 1640.36±2, 1646.58±2, 1655.72±2, 1657.97±2, 1659.24±2, 1660.46±2, 1662.16±2, 1679.09±2, 1682.54±2, 1683.12±2, 1687.34±2, 1688.14±2, 1691.08±2, 1691.75±2, 1694.76±2, 1695.74±2, 1700.65±2, 1702.19±2, 1708.77±2, 1712.10±2, 1714.63±2, 1715.56±2, 1719.51±2, 1721.61±2, 1726.31±2, 1737.85±2, 1739.71±2, 1743.69±2, 1761.79±2, 1769.93±2, 1774.13±2, 1775.70±2, 1786.39±2, 1788.03±2, 1790.80±2, 1796.23±2, 1797.49±2, 1800.34±2, 1801.79±2, 1804.45±2, 1810.72±2, 1812.3±21, 1813.77±2, 1817.26±2, 1818.66±2, 1819.93±2, 1821.71±2, 1822.73±2, 1829.48±2, 1832.41±2, 1836.18±2, 1837.33±2, 1840.84±2, 1849.81±2, 1854.68±2, 1858.34±2, 1864.19±2, 1866.06±2, 1875.28±2, 1876.50±2, 1878.25±2, 1890.21±2, 1891.32±2, 1893.00±2, 1904.69±2, 1911.46±2, 1913.68±2, 1916.02±2, 1919.35±2, 1927.13±2, 1931.84±2, 1934.86±2, 1936.83±2, 1937.87±2, 1941.22±2, 1944.97±2, 1948.39±2, 1952.47±2, 1957.80±2, 1962.82±2, 1969.82±2, 1972.54±2, 1975.58±2, 1976.51±2, 1977.70±2, 1979.29±2, 1988.46±2, 1991.91±2, 1995.37±2, 2009.91±2, 2011.18±2, 2013.86±2, 2023.97±2, 2027.73±2, 2030.95±2, 2032.69±2, 2039.29±2, 2043.12±2, 2045.68±2, 2051.76±2, 2059.05±2, 2062.98±2, 2066.09±2, 2074.03±2, 2075.32±2, 2079.80±2, 2083.74±2, 2085.85±2, 2089.53±2, 2092.80±2, 2097.03±2, 2099.42±2, 2111.39±2, 2113.10±2, 2115.77±2, 2120.37±2, 2126.55±2, 2137.63±2, 2139.15±2, 2143.42±2, 2146.46±2, 2149.85±2, 2151.02±2, 2160.22±2, 2161.68±2, 2167.09±2, 2168.75±2, 2173.75±2, 2177.51±2, 2179.25±2, 2185.65±2, 2186.28±2, 2190.18±2, 2191.02±2, 2192.84±2, 2196.47±2, 2199.82±2, 2201.22±2, 2204.02±2, 2207.10±2, 2211.58±2, 2216.77±2, 2218.45±2, 2219.30±2, 2220.56±2, 2222.74±2, 2226.96±2, 2228.22±2, 2231.60±2, 2239.71±2, 2244.01±2, 2251.78±2, 2254.83±2, 2256.53±2, 2261.91±2, 2266.45±2, 2268.58±2, 2274.97±2, 2276.04±2, 2278.67±2, 2281.09±2, 2285.01±2, 2289.43±2, 2290.85±2, 2292.35±2, 2295.92±2, 2296.92±2, 2301.71±2, 2302.50±2, 2303.21±2, 2305.43±2, 2307.22±2, 2314.24±2, 2317.68±2, 2325.30±2, 2341.14±2, 2342.87±2, 2344.45±2, 2351.97±2, 2353.99±2, 2355.29±2, 2357.54±2, 2367.75±2, 2375.59±2, 2378.35±2, 2380.39±2, 2393.64±2, 2402.11±2, 2404.01±2, 2406.49±2, 2412.79±2, 2414.25±2, 2415.20±2, 2416.30±2, 2431.13±2, 2434.36±2, 2438.19±2, 2439.22±2, 2444.37±2, 2451.90±2, 2453.96±2, 2455.44±2, 2456.62±2, 2459.43±2, 2462.31±2, 2464.16±2, 2470.97±2, 2478.17±2, 2479.28±2, 2484.18±2, 2500.40±2, 2502.64±2, 2504.73±2, 2507.42±2, 2509.21±2, 2515.26±2, 2517.43±2, 2519.07±2, 2527.31±2, 2531.06±2, 2532.26±2, 2546.08±2, 2554.96±2, 2559.48±2, 2564.01±2, 2571.26±2, 2578.45±2, 2581.25±2, 2583.37±2, 2584.81±2, 2587.01±2, 2588.90±2, 2593.68±2, 2596.11±2, 2603.33±2, 2608.20±2, 2613.31±2, 2614.91±2, 2622.46±2, 2629.26±2, 2633.69±2, 2634.61±2, 2640.51±2, 2641.73±2, 2652.85±2, 2655.08±2, 2665.15±2, 2670.00±2, 2682.80±2, 2696.41±2, 2698.27±2, 2699.82±2, 3302.01±2, 3303.21±2, 3323.89±2, 3330.34±2, 3337.92±2, 3366.84±2, 3370.39±2, 3378.18±2, 3380.43±2, 3384.77±2;
のうちのいずれかで特定されるシグナルペプチドの存在量が前記健常検体のシグナルペプチドプロファイルと比較して増大している場合に、被検体がALSに罹患もしくは発症していることに関連する(典型的には、被検体がALSに罹患もしくは発症していることを示唆する)ことを特徴とする。
また、本発明者らは、被検体のシグナルペプチドプロファイルにおいて、特定の分子量で特定されるシグナルペプチドの存在量が減少している場合に被検体がALSに罹患もしくは発症している可能性が増大することを確認した。即ち、ここで第一の態様として開示されるALSの検出を補助する方法の好適な一態様は、上記被検体のシグナルペプチドのプロファイルについて、以下の分子量:
1497.16±2, 1567.74±2, 1705.53±2, 1819.34±2, 1831.81±2, 1935.52±2, 2055.50±2, 2065.57±2, 2084.36±2, 2092.25±2, 2140.48±2, 2167.78±2, 2184.93±2, 2314.81±2, 2327.73±2, 2697.73±2, 3309.84±2;
のうちのいずれかで特定されるシグナルペプチドの存在量が前記健常検体のシグナルペプチドプロファイルと比較して減少している場合に、被検体がALSに罹患もしくは発症していることに関連する(典型的には、被検体がALSに罹患もしくは発症していることを示唆する)ことを特徴とする。
1497.16±2, 1567.74±2, 1705.53±2, 1819.34±2, 1831.81±2, 1935.52±2, 2055.50±2, 2065.57±2, 2084.36±2, 2092.25±2, 2140.48±2, 2167.78±2, 2184.93±2, 2314.81±2, 2327.73±2, 2697.73±2, 3309.84±2;
のうちのいずれかで特定されるシグナルペプチドの存在量が前記健常検体のシグナルペプチドプロファイルと比較して減少している場合に、被検体がALSに罹患もしくは発症していることに関連する(典型的には、被検体がALSに罹患もしくは発症していることを示唆する)ことを特徴とする。
ここで第一の態様として開示するALSの検出を補助する方法の好適な一態様では、上記シグナルペプチドプロファイルを、質量分析装置を用いて検査(決定)する。
質量分析装置を用いることで、体液中のシグナルペプチドの網羅解析を容易かつ高精度に実施することができる。即ち、体液中のシグナルペプチドのプロファイルは、質量分析装置を使用することで、容易かつ高精度に決定することができる。
なお、特許文献2には、質量分析法を利用して癌を検出する方法について記載されているが、ALSの検出に関しては記載が無い。
質量分析装置を用いることで、体液中のシグナルペプチドの網羅解析を容易かつ高精度に実施することができる。即ち、体液中のシグナルペプチドのプロファイルは、質量分析装置を使用することで、容易かつ高精度に決定することができる。
なお、特許文献2には、質量分析法を利用して癌を検出する方法について記載されているが、ALSの検出に関しては記載が無い。
また、ここで第一の態様として開示するALSの検出を補助する方法の好適な一態様では、前記シグナルペプチドのプロファイルを決定する前に、被検体由来の体液を熱可塑性樹脂上に固定すること、を包含し、前記熱可塑性樹脂上に固定した体液中に存在するシグナルペプチドのプロファイルを、マトリックス支援レーザー脱離イオン化飛行時間型質量分析計(Matrix Assisted Laser Desorption/Ionization-Time of Flight Mass Spectrometry:MALDI-TOFMS)により決定する。
従来は、熱可塑性樹脂に固定した試料に対してイオン化レーザーを照射して質量分析を行うと、上記試料とともに該試料が固定された熱可塑性樹脂もイオン化されてしまい、質量分析の精度が低下すると考えられていた。しかし、本発明者らの検討によると、熱可塑性樹脂上に分析対象の体液を固定した状態で質量分析を行うことで、シグナルペプチドのイオン化が促進され、質量分析を精度よく実施し得ることが確認された。
即ち、体液を熱可塑性樹脂上に固定し、MALDI-TOFMSを用いて分析することで、体液中にイオン化しづらいシグナルペプチドを含む場合であっても、該シグナルペプチドを含んだ状態のシグナルペプチドプロファイルを好適に決定することができる。
従来は、熱可塑性樹脂に固定した試料に対してイオン化レーザーを照射して質量分析を行うと、上記試料とともに該試料が固定された熱可塑性樹脂もイオン化されてしまい、質量分析の精度が低下すると考えられていた。しかし、本発明者らの検討によると、熱可塑性樹脂上に分析対象の体液を固定した状態で質量分析を行うことで、シグナルペプチドのイオン化が促進され、質量分析を精度よく実施し得ることが確認された。
即ち、体液を熱可塑性樹脂上に固定し、MALDI-TOFMSを用いて分析することで、体液中にイオン化しづらいシグナルペプチドを含む場合であっても、該シグナルペプチドを含んだ状態のシグナルペプチドプロファイルを好適に決定することができる。
本発明者らは、ALS患者の体液中のシグナルペプチドのプロファイルに関してさらに検討を進めたところ、ALS患者由来の体液と健常検体由来の体液では、特定のシグナルペプチドの存在量の程度が異なることを確認した。
そこで、本発明の第二の態様として、ALSの検出を補助する方法であって、被検体由来の体液中において、ALS関連シグナルペプチドが存在しているか否か、或いは、該ALS関連シグナルペプチドが存在している場合にはその存在量の程度を検査すること、を包含する方法を提供する。
ここで、前記ALS関連シグナルペプチドは、ALS患者由来の体液中における該シグナルペプチドの存在の有無或いはその存在量の程度が、健常検体由来の体液中における該シグナルペプチドの存在の有無或いはその存在量の程度から設定した基準レベルと異なるシグナルペプチドである。そして、上記ALS関連シグナルペプチドは、その分子量が、
1405.71±2, 1406.49±2, 1409.40±2, 1410.97±2, 1418.70±2, 1426.68±2, 1437.62±2, 1445.77±2, 1451.61±2, 1456.44±2, 1458.88±2, 1466.24±2, 1468.86±2, 1472.12±2, 1476.87±2, 1482.60±2, 1493.58±2, 1495.42±2, 1496.52±2, 1497.16±2, 1498.88±2, 1502.40±2, 1505.52±2, 1508.76±2, 1510.50±2, 1516.64±2, 1521.93±2, 1529.32±2, 1530.37±2, 1533.52±2, 1539.36±2, 1544.22±2, 1553.72±2, 1555.72±2, 1560.24±2, 1566.20±2, 1567.20±2, 1567.74±2, 1575.70±2, 1578.07±2, 1580.91±2, 1589.58±2, 1592.55±2, 1597.25±2, 1608.53±2, 1609.36±2, 1610.62±2, 1616.12±2, 1629.15±2, 1639.39±2, 1640.36±2, 1646.58±2, 1655.72±2, 1657.97±2, 1659.24±2, 1660.46±2, 1662.16±2, 1679.09±2, 1682.54±2, 1683.12±2, 1687.34±2, 1688.14±2, 1691.08±2, 1691.75±2, 1694.76±2, 1695.74±2, 1700.65±2, 1702.19±2, 1705.53±2, 1708.77±2, 1712.10±2, 1714.63±2, 1715.56±2, 1719.51±2, 1721.61±2, 1726.31±2, 1737.85±2, 1739.71±2, 1743.69±2, 1761.79±2, 1769.93±2, 1774.13±2, 1775.70±2, 1786.39±2, 1788.03±2, 1790.80±2, 1796.23±2, 1797.49±2, 1800.34±2, 1801.79±2, 1804.45±2, 1810.72±2, 1812.31±2, 1813.77±2, 1817.26±2, 1818.66±2, 1819.34±2, 1819.93±2, 1821.71±2, 1822.73±2, 1829.48±2, 1831.81±2, 1832.41±2, 1836.18±2, 1837.33±2, 1840.84±2, 1849.81±2, 1854.68±2, 1858.34±2, 1864.19±2, 1866.06±2, 1875.28±2, 1876.50±2, 1878.25±2, 1890.21±2, 1891.32±2, 1893.00±2, 1904.69±2, 1911.46±2, 1913.68±2, 1916.02±2, 1919.35±2, 1927.13±2, 1931.84±2, 1934.86±2, 1935.52±2, 1936.83±2, 1937.87±2, 1941.22±2, 1944.97±2, 1948.39±2, 1952.47±2, 1957.80±2, 1962.82±2, 1969.82±2, 1972.54±2, 1975.58±2, 1976.51±2, 1977.70±2, 1979.29±2, 1988.46±2, 1991.91±2, 1995.37±2, 2009.91±2, 2011.18±2, 2013.86±2, 2023.97±2, 2027.73±2, 2030.95±2, 2032.69±2, 2039.29±2, 2043.12±2, 2045.68±2, 2051.76±2, 2055.50±2, 2059.05±2, 2062.98±2, 2065.57±2, 2066.09±2, 2074.03±2, 2075.32±2, 2079.80±2, 2083.74±2, 2084.36±2, 2085.85±2, 2089.53±2, 2092.25±2, 2092.80±2, 2097.03±2, 2099.42±2, 2111.39±2, 2113.10±2, 2115.77±2, 2120.37±2, 2126.55±2, 2137.63±2, 2139.15±2, 2140.48±2, 2143.42±2, 2146.46±2, 2149.85±2, 2151.02±2, 2160.22±2, 2161.68±2, 2167.09±2, 2167.78±2, 2168.75±2, 2173.75±2, 2177.51±2, 2179.25±2, 2184.93±2, 2185.65±2, 2186.28±2, 2190.18±2, 2191.02±2, 2192.84±2, 2196.47±2, 2199.82±2, 2201.22±2, 2204.02±2, 2207.10±2, 2211.58±2, 2216.77±2, 2218.45±2, 2219.30±2, 2220.56±2, 2222.74±2, 2226.96±2, 2228.22±2, 2231.60±2, 2239.71±2, 2244.01±2, 2251.78±2, 2254.83±2, 2256.53±2, 2261.91±2, 2266.45±2, 2268.58±2, 2274.97±2, 2276.04±2, 2278.67±2, 2281.09±2, 2285.01±2, 2289.43±2, 2290.85±2, 2292.35±2, 2295.92±2, 2296.92±2, 2301.71±2, 2302.50±2, 2303.21±2, 2305.43±2 2307.22±2, 2314.24±2, 2314.81±2, 2317.68±2, 2325.30±2, 2327.73±2, 2341.14±2, 2342.87±2, 2344.45±2, 2351.97±2, 2353.99±2, 2355.29±2, 2357.54±2, 2367.75±2, 2375.59±2, 2378.35±2, 2380.39±2, 2393.64±2, 2402.11±2, 2404.01±2, 2406.49±2, 2412.79±2, 2414.25±2, 2415.20±2, 2416.30±2, 2431.13±2, 2434.36±2, 2438.19±2, 2439.22±2, 2444.37±2, 2451.90±2, 2453.96±2, 2455.44±2, 2456.62±2, 2459.43±2, 2462.31±2, 2464.16±2, 2470.97±2, 2478.17±2, 2479.28±2, 2484.18±2, 2500.40±2, 2502.64±2, 2504.73±2, 2507.42±2, 2509.21±2, 2515.26±2, 2517.43±2, 2519.07±2, 2527.31±2, 2531.06±2, 2532.26±2, 2546.08±2, 2554.96±2, 2559.48±2, 2564.01±2, 2571.26±2, 2578.45±2, 2581.25±2, 2583.37±2, 2584.81±2, 2587.01±2, 2588.90±2, 2593.68±2, 2596.11±2, 2603.33±2, 2608.20±2, 2613.31±2, 2614.91±2, 2622.46±2, 2629.26±2, 2633.69±2, 2634.61±2, 2640.51±2, 2641.73±2, 2652.85±2, 2655.08±2, 2665.15±2, 2670.00±2, 2682.80±2, 2696.41±2, 2697.73±2, 2698.27±2, 2699.82±2, 3302.01±2, 3303.21±2, 3309.84±2, 3323.89±2, 3330.34±2, 3337.92±2, 3366.84±2, 3370.39±2, 3378.18±2, 3380.43±2、または、3384.77±2である。
ここで、前記ALS関連シグナルペプチドは、ALS患者由来の体液中における該シグナルペプチドの存在の有無或いはその存在量の程度が、健常検体由来の体液中における該シグナルペプチドの存在の有無或いはその存在量の程度から設定した基準レベルと異なるシグナルペプチドである。そして、上記ALS関連シグナルペプチドは、その分子量が、
1405.71±2, 1406.49±2, 1409.40±2, 1410.97±2, 1418.70±2, 1426.68±2, 1437.62±2, 1445.77±2, 1451.61±2, 1456.44±2, 1458.88±2, 1466.24±2, 1468.86±2, 1472.12±2, 1476.87±2, 1482.60±2, 1493.58±2, 1495.42±2, 1496.52±2, 1497.16±2, 1498.88±2, 1502.40±2, 1505.52±2, 1508.76±2, 1510.50±2, 1516.64±2, 1521.93±2, 1529.32±2, 1530.37±2, 1533.52±2, 1539.36±2, 1544.22±2, 1553.72±2, 1555.72±2, 1560.24±2, 1566.20±2, 1567.20±2, 1567.74±2, 1575.70±2, 1578.07±2, 1580.91±2, 1589.58±2, 1592.55±2, 1597.25±2, 1608.53±2, 1609.36±2, 1610.62±2, 1616.12±2, 1629.15±2, 1639.39±2, 1640.36±2, 1646.58±2, 1655.72±2, 1657.97±2, 1659.24±2, 1660.46±2, 1662.16±2, 1679.09±2, 1682.54±2, 1683.12±2, 1687.34±2, 1688.14±2, 1691.08±2, 1691.75±2, 1694.76±2, 1695.74±2, 1700.65±2, 1702.19±2, 1705.53±2, 1708.77±2, 1712.10±2, 1714.63±2, 1715.56±2, 1719.51±2, 1721.61±2, 1726.31±2, 1737.85±2, 1739.71±2, 1743.69±2, 1761.79±2, 1769.93±2, 1774.13±2, 1775.70±2, 1786.39±2, 1788.03±2, 1790.80±2, 1796.23±2, 1797.49±2, 1800.34±2, 1801.79±2, 1804.45±2, 1810.72±2, 1812.31±2, 1813.77±2, 1817.26±2, 1818.66±2, 1819.34±2, 1819.93±2, 1821.71±2, 1822.73±2, 1829.48±2, 1831.81±2, 1832.41±2, 1836.18±2, 1837.33±2, 1840.84±2, 1849.81±2, 1854.68±2, 1858.34±2, 1864.19±2, 1866.06±2, 1875.28±2, 1876.50±2, 1878.25±2, 1890.21±2, 1891.32±2, 1893.00±2, 1904.69±2, 1911.46±2, 1913.68±2, 1916.02±2, 1919.35±2, 1927.13±2, 1931.84±2, 1934.86±2, 1935.52±2, 1936.83±2, 1937.87±2, 1941.22±2, 1944.97±2, 1948.39±2, 1952.47±2, 1957.80±2, 1962.82±2, 1969.82±2, 1972.54±2, 1975.58±2, 1976.51±2, 1977.70±2, 1979.29±2, 1988.46±2, 1991.91±2, 1995.37±2, 2009.91±2, 2011.18±2, 2013.86±2, 2023.97±2, 2027.73±2, 2030.95±2, 2032.69±2, 2039.29±2, 2043.12±2, 2045.68±2, 2051.76±2, 2055.50±2, 2059.05±2, 2062.98±2, 2065.57±2, 2066.09±2, 2074.03±2, 2075.32±2, 2079.80±2, 2083.74±2, 2084.36±2, 2085.85±2, 2089.53±2, 2092.25±2, 2092.80±2, 2097.03±2, 2099.42±2, 2111.39±2, 2113.10±2, 2115.77±2, 2120.37±2, 2126.55±2, 2137.63±2, 2139.15±2, 2140.48±2, 2143.42±2, 2146.46±2, 2149.85±2, 2151.02±2, 2160.22±2, 2161.68±2, 2167.09±2, 2167.78±2, 2168.75±2, 2173.75±2, 2177.51±2, 2179.25±2, 2184.93±2, 2185.65±2, 2186.28±2, 2190.18±2, 2191.02±2, 2192.84±2, 2196.47±2, 2199.82±2, 2201.22±2, 2204.02±2, 2207.10±2, 2211.58±2, 2216.77±2, 2218.45±2, 2219.30±2, 2220.56±2, 2222.74±2, 2226.96±2, 2228.22±2, 2231.60±2, 2239.71±2, 2244.01±2, 2251.78±2, 2254.83±2, 2256.53±2, 2261.91±2, 2266.45±2, 2268.58±2, 2274.97±2, 2276.04±2, 2278.67±2, 2281.09±2, 2285.01±2, 2289.43±2, 2290.85±2, 2292.35±2, 2295.92±2, 2296.92±2, 2301.71±2, 2302.50±2, 2303.21±2, 2305.43±2 2307.22±2, 2314.24±2, 2314.81±2, 2317.68±2, 2325.30±2, 2327.73±2, 2341.14±2, 2342.87±2, 2344.45±2, 2351.97±2, 2353.99±2, 2355.29±2, 2357.54±2, 2367.75±2, 2375.59±2, 2378.35±2, 2380.39±2, 2393.64±2, 2402.11±2, 2404.01±2, 2406.49±2, 2412.79±2, 2414.25±2, 2415.20±2, 2416.30±2, 2431.13±2, 2434.36±2, 2438.19±2, 2439.22±2, 2444.37±2, 2451.90±2, 2453.96±2, 2455.44±2, 2456.62±2, 2459.43±2, 2462.31±2, 2464.16±2, 2470.97±2, 2478.17±2, 2479.28±2, 2484.18±2, 2500.40±2, 2502.64±2, 2504.73±2, 2507.42±2, 2509.21±2, 2515.26±2, 2517.43±2, 2519.07±2, 2527.31±2, 2531.06±2, 2532.26±2, 2546.08±2, 2554.96±2, 2559.48±2, 2564.01±2, 2571.26±2, 2578.45±2, 2581.25±2, 2583.37±2, 2584.81±2, 2587.01±2, 2588.90±2, 2593.68±2, 2596.11±2, 2603.33±2, 2608.20±2, 2613.31±2, 2614.91±2, 2622.46±2, 2629.26±2, 2633.69±2, 2634.61±2, 2640.51±2, 2641.73±2, 2652.85±2, 2655.08±2, 2665.15±2, 2670.00±2, 2682.80±2, 2696.41±2, 2697.73±2, 2698.27±2, 2699.82±2, 3302.01±2, 3303.21±2, 3309.84±2, 3323.89±2, 3330.34±2, 3337.92±2, 3366.84±2, 3370.39±2, 3378.18±2, 3380.43±2、または、3384.77±2である。
かかる方法によると、上記被検体由来の体液について、上記ALS関連シグナルペプチドが存在しているか否か、また、存在している場合はその存在量を検査するという簡易な方法により、被検体がALSに罹患もしくは発症している可能性を容易に調べることができる。かかるALSの検出を補助する方法は、ALSの予知、診断(早期診断)、治療の導入、治療開始後の経過観察指標(典型的には、治療効果の判断指標)に好適に利用することができる。
上記方法によれば、被検体から採取した体液を検査対象とするインビトロの検査であるため、被検体(患者)自身が体液中のシグナルペプチドの存在の有無或いはその存在量の程度を検査可能な機関へ出向く必要がない。即ち、ここで開示するALSの検出を補助する方法は、多くの医療機関で実施可能である。
上記方法によれば、被検体から採取した体液を検査対象とするインビトロの検査であるため、被検体(患者)自身が体液中のシグナルペプチドの存在の有無或いはその存在量の程度を検査可能な機関へ出向く必要がない。即ち、ここで開示するALSの検出を補助する方法は、多くの医療機関で実施可能である。
ここで第二の態様として開示するALSの検出を補助する方法の好適な一態様では、上記ALS関連シグナルペプチドを構成するアミノ酸配列が、配列番号1~1580に示すアミノ酸配列のうちのいずれかである。
配列番号1~1580に示すアミノ酸配列のうちのいずれかからなるシグナルペプチドは、上記ALS関連シグナルペプチドの分子量に対応するシグナルペプチドの典型例である。即ち、上記配列番号1~1580に示すアミノ酸配列からなるシグナルペプチドは、上記ALS関連シグナルペプチドとして適する。
配列番号1~1580に示すアミノ酸配列のうちのいずれかからなるシグナルペプチドは、上記ALS関連シグナルペプチドの分子量に対応するシグナルペプチドの典型例である。即ち、上記配列番号1~1580に示すアミノ酸配列からなるシグナルペプチドは、上記ALS関連シグナルペプチドとして適する。
ここで開示する上記ALS関連シグナルペプチドは、ALS患者由来の体液中における該シグナルペプチドの存在の有無或いはその存在量の程度が、健常者由来の体液中における該シグナルペプチドの存在の有無或いはその存在量の程度から設定した基準レベルと異なることが、本発明者らによって確認されたシグナルペプチドである。このためかかるALS関連シグナルペプチドは、ALSを診断するためのバイオマーカーとして利用可能である。
即ち、本発明は、他の側面として、ALSの診断に用いられるバイオマーカーを提供する。かかるバイオマーカーは、配列番号1~1580に示すアミノ酸配列のうちの何れかからなるシグナルペプチドである。
即ち、本発明は、他の側面として、ALSの診断に用いられるバイオマーカーを提供する。かかるバイオマーカーは、配列番号1~1580に示すアミノ酸配列のうちの何れかからなるシグナルペプチドである。
また、ここで第二の態様として開示するALSの検出を補助する方法の好適な一態様では、上記検査したALS関連シグナルペプチドのうちの、分子量が、
1405.71±2, 1406.49±2, 1409.40±2, 1410.97±2, 1418.70±2, 1426.68±2, 1437.62±2, 1445.77±2, 1451.61±2, 1456.44±2, 1458.88±2, 1466.24±2, 1468.86±2, 1472.12±2, 1476.87±2, 1482.60±2, 1493.58±2, 1495.42±2, 1496.52±2, 1498.88±2, 1502.40±2, 1505.52±2, 1508.76±2, 1510.50±2, 1516.64±2, 1521.93±2, 1529.32±2, 1530.37±2, 1533.52±2, 1539.36±2, 1544.22±2, 1553.72±2, 1555.72±2, 1560.24±2, 1566.20±2, 1567.20±2, 1575.70±2, 1578.07±2, 1580.91±2, 1589.58±2, 1592.55±2, 1597.25±2, 1608.53±2, 1609.36±2, 1610.62±2, 1616.12±2, 1629.15±2, 1639.39±2, 1640.36±2, 1646.58±2, 1655.72±2, 1657.97±2, 1659.24±2, 1660.46±2, 1662.16±2, 1679.09±2, 1682.54±2, 1683.12±2, 1687.34±2, 1688.14±2, 1691.08±2, 1691.75±2, 1694.76±2, 1695.74±2, 1700.65±2, 1702.19±2, 1708.77±2, 1712.10±2, 1714.63±2, 1715.56±2, 1719.51±2, 1721.61±2, 1726.31±2, 1737.85±2, 1739.71±2, 1743.69±2, 1761.79±2, 1769.93±2, 1774.13±2, 1775.70±2, 1786.39±2, 1788.03±2, 1790.80±2, 1796.23±2, 1797.49±2, 1800.34±2, 1801.79±2, 1804.45±2, 1810.72±2, 1812.3±21, 1813.77±2, 1817.26±2, 1818.66±2, 1819.93±2, 1821.71±2, 1822.73±2, 1829.48±2, 1832.41±2, 1836.18±2, 1837.33±2, 1840.84±2, 1849.81±2, 1854.68±2, 1858.34±2, 1864.19±2, 1866.06±2, 1875.28±2, 1876.50±2, 1878.25±2, 1890.21±2, 1891.32±2, 1893.00±2, 1904.69±2, 1911.46±2, 1913.68±2, 1916.02±2, 1919.35±2, 1927.13±2, 1931.84±2, 1934.86±2, 1936.83±2, 1937.87±2, 1941.22±2, 1944.97±2, 1948.39±2, 1952.47±2, 1957.80±2, 1962.82±2, 1969.82±2, 1972.54±2, 1975.58±2, 1976.51±2, 1977.70±2, 1979.29±2, 1988.46±2, 1991.91±2, 1995.37±2, 2009.91±2, 2011.18±2, 2013.86±2, 2023.97±2, 2027.73±2, 2030.95±2, 2032.69±2, 2039.29±2, 2043.12±2, 2045.68±2, 2051.76±2, 2059.05±2, 2062.98±2, 2066.09±2, 2074.03±2, 2075.32±2, 2079.80±2, 2083.74±2, 2085.85±2, 2089.53±2, 2092.80±2, 2097.03±2, 2099.42±2, 2111.39±2, 2113.10±2, 2115.77±2, 2120.37±2, 2126.55±2, 2137.63±2, 2139.15±2, 2143.42±2, 2146.46±2, 2149.85±2, 2151.02±2, 2160.22±2, 2161.68±2, 2167.09±2, 2168.75±2, 2173.75±2, 2177.51±2, 2179.25±2, 2185.65±2, 2186.28±2, 2190.18±2, 2191.02±2, 2192.84±2, 2196.47±2, 2199.82±2, 2201.22±2, 2204.02±2, 2207.10±2, 2211.58±2, 2216.77±2, 2218.45±2, 2219.30±2, 2220.56±2, 2222.74±2, 2226.96±2, 2228.22±2, 2231.60±2, 2239.71±2, 2244.01±2, 2251.78±2, 2254.83±2, 2256.53±2, 2261.91±2, 2266.45±2, 2268.58±2, 2274.97±2, 2276.04±2, 2278.67±2, 2281.09±2, 2285.01±2, 2289.43±2, 2290.85±2, 2292.35±2, 2295.92±2, 2296.92±2, 2301.71±2, 2302.50±2, 2303.21±2, 2305.43±2, 2307.22±2, 2314.24±2, 2317.68±2, 2325.30±2, 2341.14±2, 2342.87±2, 2344.45±2, 2351.97±2, 2353.99±2, 2355.29±2, 2357.54±2, 2367.75±2, 2375.59±2, 2378.35±2, 2380.39±2, 2393.64±2, 2402.11±2, 2404.01±2, 2406.49±2, 2412.79±2, 2414.25±2, 2415.20±2, 2416.30±2, 2431.13±2, 2434.36±2, 2438.19±2, 2439.22±2, 2444.37±2, 2451.90±2, 2453.96±2, 2455.44±2, 2456.62±2, 2459.43±2, 2462.31±2, 2464.16±2, 2470.97±2, 2478.17±2, 2479.28±2, 2484.18±2, 2500.40±2, 2502.64±2, 2504.73±2, 2507.42±2, 2509.21±2, 2515.26±2, 2517.43±2, 2519.07±2, 2527.31±2, 2531.06±2, 2532.26±2, 2546.08±2, 2554.96±2, 2559.48±2, 2564.01±2, 2571.26±2, 2578.45±2, 2581.25±2, 2583.37±2, 2584.81±2, 2587.01±2, 2588.90±2, 2593.68±2, 2596.11±2, 2603.33±2, 2608.20±2, 2613.31±2, 2614.91±2, 2622.46±2, 2629.26±2, 2633.69±2, 2634.61±2, 2640.51±2, 2641.73±2, 2652.85±2, 2655.08±2, 2665.15±2, 2670.00±2, 2682.80±2, 2696.41±2, 2698.27±2, 2699.82±2, 3302.01±2, 3303.21±2, 3323.89±2, 3330.34±2, 3337.92±2, 3366.84±2, 3370.39±2, 3378.18±2, 3380.43±2、または、3384.77±2
であるALS関連シグナルペプチドのいずれかについて、被検体由来の体液中の該シグナルペプチドの存在量の程度が、前記基準レベルと比較して大きいことを確認する。
好ましい一態様では、前記ALS関連シグナルペプチドのアミノ酸配列が、配列番号1~16, 21~27, 29~46, 53~67, 72~87, 94~108, 118~172, 179~243, 248~295, 297~304, 307~317, 320~333, 337~354, 359~422, 424, 425, 430~585, 587~593, 595~605, 607~693, 696, 699~777, 786~902, 906~914, 918~945, 947~983, 990~1029, 1042~1201, 1208~1217, 1230~1566, 1569~1571, 1574~1580に示すアミノ酸配列のうちの何れかである。
かかるALS関連シグナルペプチドは、ALS患者由来の体液中の存在量が基準レベルと比較して大きいことを発明者らが確認したシグナルペプチドである。このため、被検体由来の体液中の該ALS関連シグナルペプチドの存在量が基準レベルと比較して大きいことは、該被検体がALSに罹患もしくは発症していることに関連する(典型的には、被検体がALSに罹患若しくは発症していることを示唆する)。
1405.71±2, 1406.49±2, 1409.40±2, 1410.97±2, 1418.70±2, 1426.68±2, 1437.62±2, 1445.77±2, 1451.61±2, 1456.44±2, 1458.88±2, 1466.24±2, 1468.86±2, 1472.12±2, 1476.87±2, 1482.60±2, 1493.58±2, 1495.42±2, 1496.52±2, 1498.88±2, 1502.40±2, 1505.52±2, 1508.76±2, 1510.50±2, 1516.64±2, 1521.93±2, 1529.32±2, 1530.37±2, 1533.52±2, 1539.36±2, 1544.22±2, 1553.72±2, 1555.72±2, 1560.24±2, 1566.20±2, 1567.20±2, 1575.70±2, 1578.07±2, 1580.91±2, 1589.58±2, 1592.55±2, 1597.25±2, 1608.53±2, 1609.36±2, 1610.62±2, 1616.12±2, 1629.15±2, 1639.39±2, 1640.36±2, 1646.58±2, 1655.72±2, 1657.97±2, 1659.24±2, 1660.46±2, 1662.16±2, 1679.09±2, 1682.54±2, 1683.12±2, 1687.34±2, 1688.14±2, 1691.08±2, 1691.75±2, 1694.76±2, 1695.74±2, 1700.65±2, 1702.19±2, 1708.77±2, 1712.10±2, 1714.63±2, 1715.56±2, 1719.51±2, 1721.61±2, 1726.31±2, 1737.85±2, 1739.71±2, 1743.69±2, 1761.79±2, 1769.93±2, 1774.13±2, 1775.70±2, 1786.39±2, 1788.03±2, 1790.80±2, 1796.23±2, 1797.49±2, 1800.34±2, 1801.79±2, 1804.45±2, 1810.72±2, 1812.3±21, 1813.77±2, 1817.26±2, 1818.66±2, 1819.93±2, 1821.71±2, 1822.73±2, 1829.48±2, 1832.41±2, 1836.18±2, 1837.33±2, 1840.84±2, 1849.81±2, 1854.68±2, 1858.34±2, 1864.19±2, 1866.06±2, 1875.28±2, 1876.50±2, 1878.25±2, 1890.21±2, 1891.32±2, 1893.00±2, 1904.69±2, 1911.46±2, 1913.68±2, 1916.02±2, 1919.35±2, 1927.13±2, 1931.84±2, 1934.86±2, 1936.83±2, 1937.87±2, 1941.22±2, 1944.97±2, 1948.39±2, 1952.47±2, 1957.80±2, 1962.82±2, 1969.82±2, 1972.54±2, 1975.58±2, 1976.51±2, 1977.70±2, 1979.29±2, 1988.46±2, 1991.91±2, 1995.37±2, 2009.91±2, 2011.18±2, 2013.86±2, 2023.97±2, 2027.73±2, 2030.95±2, 2032.69±2, 2039.29±2, 2043.12±2, 2045.68±2, 2051.76±2, 2059.05±2, 2062.98±2, 2066.09±2, 2074.03±2, 2075.32±2, 2079.80±2, 2083.74±2, 2085.85±2, 2089.53±2, 2092.80±2, 2097.03±2, 2099.42±2, 2111.39±2, 2113.10±2, 2115.77±2, 2120.37±2, 2126.55±2, 2137.63±2, 2139.15±2, 2143.42±2, 2146.46±2, 2149.85±2, 2151.02±2, 2160.22±2, 2161.68±2, 2167.09±2, 2168.75±2, 2173.75±2, 2177.51±2, 2179.25±2, 2185.65±2, 2186.28±2, 2190.18±2, 2191.02±2, 2192.84±2, 2196.47±2, 2199.82±2, 2201.22±2, 2204.02±2, 2207.10±2, 2211.58±2, 2216.77±2, 2218.45±2, 2219.30±2, 2220.56±2, 2222.74±2, 2226.96±2, 2228.22±2, 2231.60±2, 2239.71±2, 2244.01±2, 2251.78±2, 2254.83±2, 2256.53±2, 2261.91±2, 2266.45±2, 2268.58±2, 2274.97±2, 2276.04±2, 2278.67±2, 2281.09±2, 2285.01±2, 2289.43±2, 2290.85±2, 2292.35±2, 2295.92±2, 2296.92±2, 2301.71±2, 2302.50±2, 2303.21±2, 2305.43±2, 2307.22±2, 2314.24±2, 2317.68±2, 2325.30±2, 2341.14±2, 2342.87±2, 2344.45±2, 2351.97±2, 2353.99±2, 2355.29±2, 2357.54±2, 2367.75±2, 2375.59±2, 2378.35±2, 2380.39±2, 2393.64±2, 2402.11±2, 2404.01±2, 2406.49±2, 2412.79±2, 2414.25±2, 2415.20±2, 2416.30±2, 2431.13±2, 2434.36±2, 2438.19±2, 2439.22±2, 2444.37±2, 2451.90±2, 2453.96±2, 2455.44±2, 2456.62±2, 2459.43±2, 2462.31±2, 2464.16±2, 2470.97±2, 2478.17±2, 2479.28±2, 2484.18±2, 2500.40±2, 2502.64±2, 2504.73±2, 2507.42±2, 2509.21±2, 2515.26±2, 2517.43±2, 2519.07±2, 2527.31±2, 2531.06±2, 2532.26±2, 2546.08±2, 2554.96±2, 2559.48±2, 2564.01±2, 2571.26±2, 2578.45±2, 2581.25±2, 2583.37±2, 2584.81±2, 2587.01±2, 2588.90±2, 2593.68±2, 2596.11±2, 2603.33±2, 2608.20±2, 2613.31±2, 2614.91±2, 2622.46±2, 2629.26±2, 2633.69±2, 2634.61±2, 2640.51±2, 2641.73±2, 2652.85±2, 2655.08±2, 2665.15±2, 2670.00±2, 2682.80±2, 2696.41±2, 2698.27±2, 2699.82±2, 3302.01±2, 3303.21±2, 3323.89±2, 3330.34±2, 3337.92±2, 3366.84±2, 3370.39±2, 3378.18±2, 3380.43±2、または、3384.77±2
であるALS関連シグナルペプチドのいずれかについて、被検体由来の体液中の該シグナルペプチドの存在量の程度が、前記基準レベルと比較して大きいことを確認する。
好ましい一態様では、前記ALS関連シグナルペプチドのアミノ酸配列が、配列番号1~16, 21~27, 29~46, 53~67, 72~87, 94~108, 118~172, 179~243, 248~295, 297~304, 307~317, 320~333, 337~354, 359~422, 424, 425, 430~585, 587~593, 595~605, 607~693, 696, 699~777, 786~902, 906~914, 918~945, 947~983, 990~1029, 1042~1201, 1208~1217, 1230~1566, 1569~1571, 1574~1580に示すアミノ酸配列のうちの何れかである。
かかるALS関連シグナルペプチドは、ALS患者由来の体液中の存在量が基準レベルと比較して大きいことを発明者らが確認したシグナルペプチドである。このため、被検体由来の体液中の該ALS関連シグナルペプチドの存在量が基準レベルと比較して大きいことは、該被検体がALSに罹患もしくは発症していることに関連する(典型的には、被検体がALSに罹患若しくは発症していることを示唆する)。
また、ここで第二の態様として開示するALSの検出を補助する方法の好適な一態様では、上記検査したALS関連シグナルペプチドのうちの、分子量が、
1497.16±2, 1567.74±2, 1705.53±2, 1819.34±2, 1831.81±2, 1935.52±2, 2055.50±2, 2065.57±2, 2084.36±2, 2092.25±2, 2140.48±2, 2167.78±2, 2184.93±2, 2314.81±2, 2327.73±2, 2697.73±2、または、3309.84±2
であるALS関連シグナルペプチドのいずれかについて、被検体由来の体液中の該シグナルペプチドの存在量の程度が、健常検体由来の体液中における該シグナルペプチドの存在量の程度から設定した基準レベルと比較して小さいことを確認することを更に包含する。
好ましい一態様では、上記ALS関連シグナルペプチドのアミノ酸配列が、配列番号68, 69, 296, 357, 429, 903~905, 1223~1229, 1572, 1573に示すアミノ酸配列のうちの何れかである。
かかるALS関連シグナルペプチドは、ALS患者由来の体液中の存在量が基準レベルと比較して小さいことを発明者らが確認したシグナルペプチドである。このため、被検体由来の体液中の該ALS関連シグナルペプチドの存在量が基準レベルと比較して小さいことは、該被検体がALSに罹患もしくは発症していることに関連する(典型的には、被検体がALSに罹患若しくは発症していることを示唆する)。
1497.16±2, 1567.74±2, 1705.53±2, 1819.34±2, 1831.81±2, 1935.52±2, 2055.50±2, 2065.57±2, 2084.36±2, 2092.25±2, 2140.48±2, 2167.78±2, 2184.93±2, 2314.81±2, 2327.73±2, 2697.73±2、または、3309.84±2
であるALS関連シグナルペプチドのいずれかについて、被検体由来の体液中の該シグナルペプチドの存在量の程度が、健常検体由来の体液中における該シグナルペプチドの存在量の程度から設定した基準レベルと比較して小さいことを確認することを更に包含する。
好ましい一態様では、上記ALS関連シグナルペプチドのアミノ酸配列が、配列番号68, 69, 296, 357, 429, 903~905, 1223~1229, 1572, 1573に示すアミノ酸配列のうちの何れかである。
かかるALS関連シグナルペプチドは、ALS患者由来の体液中の存在量が基準レベルと比較して小さいことを発明者らが確認したシグナルペプチドである。このため、被検体由来の体液中の該ALS関連シグナルペプチドの存在量が基準レベルと比較して小さいことは、該被検体がALSに罹患もしくは発症していることに関連する(典型的には、被検体がALSに罹患若しくは発症していることを示唆する)。
また、ここで第二の態様として開示するALSの検出を補助する方法の好適な一態様では、分子量が、1502.40±2, 1521.93±2, 1629.15±2, 1682.54±2, 1691.75±2, 1705.53±2, 1821.71±2, 1836.18±2, 1948.39±2, 2011.18±2, 2092.80±2, 2099.42±2, 2177.51±2, 2179.25±2, 2186.28±2, 2211.58±2, 2226.96±2, 2254.83±2, 2278.67±2, 2290.85±2, 2292.35±2, 2502.64±2, 2640.51±2, 2698.27±2、または、3330.34±2であるALS関連シグナルペプチドの存在量の程度を少なくとも検査する。
特に好ましい一態様では、上記ALS関連シグナルペプチドを構成するアミノ酸配列が、配列番号1~180に示すアミノ酸配列のうちのいずれかである。
かかるALS関連シグナルペプチドは、ALS患者の体液中における該シグナルペプチドの存在の有無或いはその存在量の程度が、健常者由来の体液中における該シグナルペプチドの存在の有無或いはその存在量の程度(典型的には上記基準レベル)と比較して特に顕著に異なっていることが本発明者らによって確認されたシグナルペプチドである。このため、被検体由来の体液について、かかるALS関連シグナルペプチドが存在するか否か、或いは該存在する場合にはかかるALS関連シグナルペプチドの存在量の程度を検査することで、被検体がALSに罹患もしくは発症しているか否かを判断するために有用な信頼性の高い情報を入手することができる。
特に好ましい一態様では、上記ALS関連シグナルペプチドを構成するアミノ酸配列が、配列番号1~180に示すアミノ酸配列のうちのいずれかである。
かかるALS関連シグナルペプチドは、ALS患者の体液中における該シグナルペプチドの存在の有無或いはその存在量の程度が、健常者由来の体液中における該シグナルペプチドの存在の有無或いはその存在量の程度(典型的には上記基準レベル)と比較して特に顕著に異なっていることが本発明者らによって確認されたシグナルペプチドである。このため、被検体由来の体液について、かかるALS関連シグナルペプチドが存在するか否か、或いは該存在する場合にはかかるALS関連シグナルペプチドの存在量の程度を検査することで、被検体がALSに罹患もしくは発症しているか否かを判断するために有用な信頼性の高い情報を入手することができる。
また、ここで第二の態様として開示するALSの検出を補助する方法の好適な一態様では、前記被検体由来の体液について、分子量が相互に3以上異なる10種以上のALS関連シグナルペプチドについて検査する。
分子量が相互に異なる複数のALS関連シグナルペプチドについて検査することで、被検体がALSに罹患もしくは発症しているか否かを判断するための情報として、より信頼性(精度)の高い情報を入手することができる。
分子量が相互に異なる複数のALS関連シグナルペプチドについて検査することで、被検体がALSに罹患もしくは発症しているか否かを判断するための情報として、より信頼性(精度)の高い情報を入手することができる。
また、ここで第二の態様として開示するALSの検出を補助する方法の好適な一態様では、上記被検体由来の体液中のALS関連シグナルペプチドの存在の有無或いはその存在量の程度を、質量分析装置を用いて検査する。
上記質量分析装置を用いることで、複数のALS関連シグナルペプチドの存在の有無およびその存在量の程度を効率よく検査することができる。
上記質量分析装置を用いることで、複数のALS関連シグナルペプチドの存在の有無およびその存在量の程度を効率よく検査することができる。
また、ここで第二の態様として開示するALSの検出を補助する方法の好適な一態様では、前記体液中のALS関連シグナルペプチドの存在の有無およびその存在量の程度を検査する前に、該体液を熱可塑性樹脂上に固定すること、を包含し、前記熱可塑性樹脂上に固定した体液中のALS関連シグナルペプチドの存在の有無およびその存在量の程度を、マトリックス支援レーザー脱離イオン化飛行時間型質量分析計(MALDI-TOFMS)を用いて検査する。
上記熱可塑性樹脂上に体液を固定し、該固定した体液中のALS関連シグナルペプチドをMALDI-TOFMSを用いて調べることで、イオン化しづらいシグナルペプチドの存在の有無およびその存在量の程度についても、高い精度で分析することができる。
上記熱可塑性樹脂上に体液を固定し、該固定した体液中のALS関連シグナルペプチドをMALDI-TOFMSを用いて調べることで、イオン化しづらいシグナルペプチドの存在の有無およびその存在量の程度についても、高い精度で分析することができる。
また、ここで第一の態様或いは第二の態様として開示するALSの検出を補助する方法の好適な一態様では、上記体液が、脳脊髄液である。
脳脊髄液は夾雑物の混入が少ない。また、脳脊髄液は、脳内および脊髄内を絶えず循環しているため、神経系(典型的には中枢神経系)の環境の変化が反映されやすい。このため、脳脊髄液は、シグナルペプチドのプロファイルの検査対象、または、ALS関連シグナルペプチドの存在の有無或いはその存在量の程度を検査する対象として好適である。
脳脊髄液は夾雑物の混入が少ない。また、脳脊髄液は、脳内および脊髄内を絶えず循環しているため、神経系(典型的には中枢神経系)の環境の変化が反映されやすい。このため、脳脊髄液は、シグナルペプチドのプロファイルの検査対象、または、ALS関連シグナルペプチドの存在の有無或いはその存在量の程度を検査する対象として好適である。
また、本発明は、他の側面として、ALSの検出に用いられる組成物(以下、「ALS検査組成物」ともいう)組成物を提供する。ここで開示される一つの態様のALS検査組成物は、配列番号1~1580に示すアミノ酸配列のうちの何れかから成る合成ペプチドと、1種または2種以上の担体と、を含む。
また、本発明は、他の側面として、ALSの検出に用いられるキット(以下、「ALS検査キット」ともいう)を提供する。ここで開示される一つの態様のALS検査キットは、配列番号1~1580に示すアミノ酸配列のうちの何れかからなる合成ペプチドと、被検体由来の体液または前記合成ペプチドを固定(担持)するための支持体と、を含む。
上記ALS検査組成物およびALS検査キットに含まれる合成ペプチドは、本発明者らによって上記ALS関連シグナルペプチドとして見出されたシグナルペプチドと同じアミノ酸配列からなる人為的に合成されたペプチドである。したがって、かかる合成ペプチドは、ALSの検出を補助する方法において、比較対照(典型的には、陽性対照:ポジティブコントロール)或いは、標準物質として利用することができる。したがって、ここで開示する組成物あるいはキットを使用することで、ALSの検出を補助する方法を高い信頼性で実施することが可能である。
ここで開示する上記ALS検査キットの好適な一態様では、上記支持体が熱可塑性樹脂製である。
熱可塑性樹脂製の支持体の上に合成ペプチドを固定することで、イオン化しづらいペプチドであっても、イオン化方法としてMALDI(マトリックス支援レーザー脱離イオン化法)を用いた質量分析(典型的にはMALDI-TOFMS)によって好適に分析(測定)することができる。このため、上記ALS検査キットは、上記ALSの検出を補助する方法としてイオン化方法にMALDI(マトリックス支援レーザー脱離イオン化法)を用いた質量分析(典型的にはMALDI-TOFMS)を用いた場合に特に好適に使用し得る。
熱可塑性樹脂製の支持体の上に合成ペプチドを固定することで、イオン化しづらいペプチドであっても、イオン化方法としてMALDI(マトリックス支援レーザー脱離イオン化法)を用いた質量分析(典型的にはMALDI-TOFMS)によって好適に分析(測定)することができる。このため、上記ALS検査キットは、上記ALSの検出を補助する方法としてイオン化方法にMALDI(マトリックス支援レーザー脱離イオン化法)を用いた質量分析(典型的にはMALDI-TOFMS)を用いた場合に特に好適に使用し得る。
以下、本発明の好適な実施態様を説明する。本明細書において特に言及している事項(例えばここで開示されるALS関連シグナルペプチドの分子量およびアミノ酸配列等)以外の事柄であって本発明の実施に必要な事柄(例えば体液中のシグナルペプチドの分析方法、ペプチドの化学合成法、ペプチドを成分とする検査組成物の調製に関するような一般的事項)は、細胞工学、生理学、医学、薬学、有機化学、生化学、遺伝子工学、タンパク質工学、分子生物学、遺伝学等の分野における従来技術に基づく当業者の設計事項として把握され得る。本発明は、本明細書に開示されている内容と当該分野における技術常識とに基づいて実施することができる。なお、以下の説明では、場合に応じてアミノ酸をIUPAC-IUBガイドラインで示されたアミノ酸に関する命名法に準拠した1文字表記(但し配列表では3文字表記)で表す。
また、本明細書中で引用されている全ての文献の全ての内容は本明細書中に参照として組み入れられている。
また、本明細書中で引用されている全ての文献の全ての内容は本明細書中に参照として組み入れられている。
また、本明細書において「合成ペプチド」とは、そのペプチド鎖がそれのみ独立して自然界に安定的に存在するものではなく、人為的な化学合成或いは生合成(即ち遺伝子工学に基づく生産)によって製造され、所定の組成物(例えばALSの検出に用いられるALS検査組成物またはALS検査キット)中で安定して存在し得るペプチド断片をいう。
また、本明細書において「ペプチド」とは、複数のペプチド結合を有するアミノ酸ポリマーを指す用語であり、構成アミノ酸残基数に応じてポリペプチド、オリゴペプチドと呼ばれるものを包含する用語である。典型的には全アミノ酸残基数が概ね50以下(好ましくは30以下、例えば20以下)のような比較的分子量の小さいものをいう。
また、本明細書において「アミノ酸残基」とは、特に言及する場合を除いて、ペプチド鎖のN末端アミノ酸及びC末端アミノ酸を包含する用語である。
なお、本明細書中に記載されるアミノ酸配列は、常に左側がN末端側であり右側がC末端側である。
また、本明細書において「ペプチド」とは、複数のペプチド結合を有するアミノ酸ポリマーを指す用語であり、構成アミノ酸残基数に応じてポリペプチド、オリゴペプチドと呼ばれるものを包含する用語である。典型的には全アミノ酸残基数が概ね50以下(好ましくは30以下、例えば20以下)のような比較的分子量の小さいものをいう。
また、本明細書において「アミノ酸残基」とは、特に言及する場合を除いて、ペプチド鎖のN末端アミノ酸及びC末端アミノ酸を包含する用語である。
なお、本明細書中に記載されるアミノ酸配列は、常に左側がN末端側であり右側がC末端側である。
「健常」「健康」「正常」という用語は本明細書において同義語として使用される。それらは、ALSの臨床症状を全く示さず、また、ALSであると診断されない個人の健康状態を示す。即ち、本明細書において「健常検体」「健常人」および「健常者」は、「健康な個体」「正常な個体」と同義語として使用され、それらは、ALSの臨床症状を全く示さず、また、ALSであると診断されない個人を指す。なお、本明細書において、「健常検体」とは、「健常者」であって、ここで開示する発明において比較対象として用いられる被検体を指す。
好ましくは、上記「健常検体」は運動機能に障害をきたす他の疾患(例えば、脊髄性筋萎縮症、多巣性ニューロパチー、ポリオ後症候群、多発性硬化症等)に罹患あるいは発症しておらず、より好ましくは、他の神経変性疾患(例えばアルツハイマー病、パーキンソン病等)にも罹患あるいは発症していない。
また、上記「健常検体」は、試験対象の被検体と比較して、人種、年齢、性別等の背景因子が類似していることが好ましい。
好ましくは、上記「健常検体」は運動機能に障害をきたす他の疾患(例えば、脊髄性筋萎縮症、多巣性ニューロパチー、ポリオ後症候群、多発性硬化症等)に罹患あるいは発症しておらず、より好ましくは、他の神経変性疾患(例えばアルツハイマー病、パーキンソン病等)にも罹患あるいは発症していない。
また、上記「健常検体」は、試験対象の被検体と比較して、人種、年齢、性別等の背景因子が類似していることが好ましい。
本明細書において、「シグナルペプチドの存在量の程度」とは、体液中に存在するシグナルペプチドの絶対的な定量値に限定されず、該シグナルペプチドの相対的な定量値を含む。例えば、特定の体液(典型的には、健常検体由来の体液)におけるシグナルペプチドの存在量と比較した大小、または、特定の基準値(典型的には、健常検体由来の体液中のシグナルペプチドの存在量の程度から決定した基準レベル)と比較した大小であり得る。
また、本明細書において、特定の分子量Mについて「M±2」と示す場合、該「±2」は、分析装置、分析方法、および測定条件およびその違いによって生じ得る誤差範囲を意味する。ここでは、汎用型のMALDI-TOFMSを用いた質量分析において生じ得る誤差範囲を基準として「±2」と設定したが、該誤差範囲はこれに限定されず、分析装置、分析方法、測定条件に応じて適宜(例えば±1、±3等)に設定すればよい。
<第一の態様>
本発明者らは、第一に、体液中のシグナルペプチドに着目し、ALS患者由来の体液および健常検体由来の体液について、該体液中に存在するシグナルペプチドの網羅解析を鋭意検討しつつ行った。そして、ALS患者の体液中のシグナルペプチドのプロファイルが健常検体由来の体液中のシグナルペプチドのプロファイルと異なることに着目し、該シグナルペプチドのプロファイルの相違に基づいたALSの検出を補助する方法を完成するに至った。
本発明者らは、第一に、体液中のシグナルペプチドに着目し、ALS患者由来の体液および健常検体由来の体液について、該体液中に存在するシグナルペプチドの網羅解析を鋭意検討しつつ行った。そして、ALS患者の体液中のシグナルペプチドのプロファイルが健常検体由来の体液中のシグナルペプチドのプロファイルと異なることに着目し、該シグナルペプチドのプロファイルの相違に基づいたALSの検出を補助する方法を完成するに至った。
即ち、ここで第一の態様として開示されるALSの検出を補助する方法は、被検体由来の体液中に含まれるシグナルペプチドのプロファイルが、特定の分子量において健常検体由来の体液中のシグナルペプチドのプロファイルと相違する場合に、被検体がALSに罹患もしくは発症していることに関連する(典型的には、被検体がALSに罹患もしくは発症していることを示唆する、例えば被検体がALSに罹患もしくは発症している可能性の増大を示す)ことを特徴とする方法である。
具体的には、ここで第一の態様として開示されるALSの検出を補助する方法は、
(i)被検体由来の体液中に含まれるシグナルペプチドについて、分子量が1000~3500のシグナルペプチドのプロファイルを決定すること、および、
(ii)前記決定した被検体のシグナルペプチドプロファイルを、予め決定した健常検体由来の体液中のシグナルペプチドのプロファイルと比較すること、
を包含する。
(i)被検体由来の体液中に含まれるシグナルペプチドについて、分子量が1000~3500のシグナルペプチドのプロファイルを決定すること、および、
(ii)前記決定した被検体のシグナルペプチドプロファイルを、予め決定した健常検体由来の体液中のシグナルペプチドのプロファイルと比較すること、
を包含する。
かかるALSの検出を補助する方法では、被検体のシグナルペプチドプロファイルが、以下の分子量:
1405.71±2, 1406.49±2, 1409.40±2, 1410.97±2, 1418.70±2, 1426.68±2, 1437.62±2, 1445.77±2, 1451.61±2, 1456.44±2, 1458.88±2, 1466.24±2, 1468.86±2, 1472.12±2, 1476.87±2, 1482.60±2, 1493.58±2, 1495.42±2, 1496.52±2, 1497.16±2, 1498.88±2, 1502.40±2, 1505.52±2, 1508.76±2, 1510.50±2, 1516.64±2, 1521.93±2, 1529.32±2, 1530.37±2, 1533.52±2, 1539.36±2, 1544.22±2, 1553.72±2, 1555.72±2, 1560.24±2, 1566.20±2, 1567.20±2, 1567.74±2, 1575.70±2, 1578.07±2, 1580.91±2, 1589.58±2, 1592.55±2, 1597.25±2, 1608.53±2, 1609.36±2, 1610.62±2, 1616.12±2, 1629.15±2, 1639.39±2, 1640.36±2, 1646.58±2, 1655.72±2, 1657.97±2, 1659.24±2, 1660.46±2, 1662.16±2, 1679.09±2, 1682.54±2, 1683.12±2, 1687.34±2, 1688.14±2, 1691.08±2, 1691.75±2, 1694.76±2, 1695.74±2, 1700.65±2, 1702.19±2, 1705.53±2, 1708.77±2, 1712.10±2, 1714.63±2, 1715.56±2, 1719.51±2, 1721.61±2, 1726.31±2, 1737.85±2, 1739.71±2, 1743.69±2, 1761.79±2, 1769.93±2, 1774.13±2, 1775.70±2, 1786.39±2, 1788.03±2, 1790.80±2, 1796.23±2, 1797.49±2, 1800.34±2, 1801.79±2, 1804.45±2, 1810.72±2, 1812.31±2, 1813.77±2, 1817.26±2, 1818.66±2, 1819.34±2, 1819.93±2, 1821.71±2, 1822.73±2, 1829.48±2, 1831.81±2, 1832.41±2, 1836.18±2, 1837.33±2, 1840.84±2, 1849.81±2, 1854.68±2, 1858.34±2, 1864.19±2, 1866.06±2, 1875.28±2, 1876.50±2, 1878.25±2, 1890.21±2, 1891.32±2, 1893.00±2, 1904.69±2, 1911.46±2, 1913.68±2, 1916.02±2, 1919.35±2, 1927.13±2, 1931.84±2, 1934.86±2, 1935.52±2, 1936.83±2, 1937.87±2, 1941.22±2, 1944.97±2, 1948.39±2, 1952.47±2, 1957.80±2, 1962.82±2, 1969.82±2, 1972.54±2, 1975.58±2, 1976.51±2, 1977.70±2, 1979.29±2, 1988.46±2, 1991.91±2, 1995.37±2, 2009.91±2, 2011.18±2, 2013.86±2, 2023.97±2, 2027.73±2, 2030.95±2, 2032.69±2, 2039.29±2, 2043.12±2, 2045.68±2, 2051.76±2, 2055.50±2, 2059.05±2, 2062.98±2, 2065.57±2, 2066.09±2, 2074.03±2, 2075.32±2, 2079.80±2, 2083.74±2, 2084.36±2, 2085.85±2, 2089.53±2, 2092.25±2, 2092.80±2, 2097.03±2, 2099.42±2, 2111.39±2, 2113.10±2, 2115.77±2, 2120.37±2, 2126.55±2, 2137.63±2, 2139.15±2, 2140.48±2, 2143.42±2, 2146.46±2, 2149.85±2, 2151.02±2, 2160.22±2, 2161.68±2, 2167.09±2, 2167.78±2, 2168.75±2, 2173.75±2, 2177.51±2, 2179.25±2, 2184.93±2, 2185.65±2, 2186.28±2, 2190.18±2, 2191.02±2, 2192.84±2, 2196.47±2, 2199.82±2, 2201.22±2, 2204.02±2, 2207.10±2, 2211.58±2, 2216.77±2, 2218.45±2, 2219.30±2, 2220.56±2, 2222.74±2, 2226.96±2, 2228.22±2, 2231.60±2, 2239.71±2, 2244.01±2, 2251.78±2, 2254.83±2, 2256.53±2, 2261.91±2, 2266.45±2, 2268.58±2, 2274.97±2, 2276.04±2, 2278.67±2, 2281.09±2, 2285.01±2, 2289.43±2, 2290.85±2, 2292.35±2, 2295.92±2, 2296.92±2, 2301.71±2, 2302.50±2, 2303.21±2, 2305.43±2 2307.22±2, 2314.24±2, 2314.81±2, 2317.68±2, 2325.30±2, 2327.73±2, 2341.14±2, 2342.87±2, 2344.45±2, 2351.97±2, 2353.99±2, 2355.29±2, 2357.54±2, 2367.75±2, 2375.59±2, 2378.35±2, 2380.39±2, 2393.64±2, 2402.11±2, 2404.01±2, 2406.49±2, 2412.79±2, 2414.25±2, 2415.20±2, 2416.30±2, 2431.13±2, 2434.36±2, 2438.19±2, 2439.22±2, 2444.37±2, 2451.90±2, 2453.96±2, 2455.44±2, 2456.62±2, 2459.43±2, 2462.31±2, 2464.16±2, 2470.97±2, 2478.17±2, 2479.28±2, 2484.18±2, 2500.40±2, 2502.64±2, 2504.73±2, 2507.42±2, 2509.21±2, 2515.26±2, 2517.43±2, 2519.07±2, 2527.31±2, 2531.06±2, 2532.26±2, 2546.08±2, 2554.96±2, 2559.48±2, 2564.01±2, 2571.26±2, 2578.45±2, 2581.25±2, 2583.37±2, 2584.81±2, 2587.01±2, 2588.90±2, 2593.68±2, 2596.11±2, 2603.33±2, 2608.20±2, 2613.31±2, 2614.91±2, 2622.46±2, 2629.26±2, 2633.69±2, 2634.61±2, 2640.51±2, 2641.73±2, 2652.85±2, 2655.08±2, 2665.15±2, 2670.00±2, 2682.80±2, 2696.41±2, 2697.73±2, 2698.27±2, 2699.82±2, 3302.01±2, 3303.21±2, 3309.84±2, 3323.89±2, 3330.34±2, 3337.92±2, 3366.84±2, 3370.39±2, 3378.18±2, 3380.43±2, 3384.77±2;
のうちのいずれかにおいて前記健常検体のシグナルペプチドプロファイルと相違する場合に、被検体がALSに罹患もしくは発症していることに関連する(典型的には、被検体がALSに罹患若しくは発症していることを示唆する)。
1405.71±2, 1406.49±2, 1409.40±2, 1410.97±2, 1418.70±2, 1426.68±2, 1437.62±2, 1445.77±2, 1451.61±2, 1456.44±2, 1458.88±2, 1466.24±2, 1468.86±2, 1472.12±2, 1476.87±2, 1482.60±2, 1493.58±2, 1495.42±2, 1496.52±2, 1497.16±2, 1498.88±2, 1502.40±2, 1505.52±2, 1508.76±2, 1510.50±2, 1516.64±2, 1521.93±2, 1529.32±2, 1530.37±2, 1533.52±2, 1539.36±2, 1544.22±2, 1553.72±2, 1555.72±2, 1560.24±2, 1566.20±2, 1567.20±2, 1567.74±2, 1575.70±2, 1578.07±2, 1580.91±2, 1589.58±2, 1592.55±2, 1597.25±2, 1608.53±2, 1609.36±2, 1610.62±2, 1616.12±2, 1629.15±2, 1639.39±2, 1640.36±2, 1646.58±2, 1655.72±2, 1657.97±2, 1659.24±2, 1660.46±2, 1662.16±2, 1679.09±2, 1682.54±2, 1683.12±2, 1687.34±2, 1688.14±2, 1691.08±2, 1691.75±2, 1694.76±2, 1695.74±2, 1700.65±2, 1702.19±2, 1705.53±2, 1708.77±2, 1712.10±2, 1714.63±2, 1715.56±2, 1719.51±2, 1721.61±2, 1726.31±2, 1737.85±2, 1739.71±2, 1743.69±2, 1761.79±2, 1769.93±2, 1774.13±2, 1775.70±2, 1786.39±2, 1788.03±2, 1790.80±2, 1796.23±2, 1797.49±2, 1800.34±2, 1801.79±2, 1804.45±2, 1810.72±2, 1812.31±2, 1813.77±2, 1817.26±2, 1818.66±2, 1819.34±2, 1819.93±2, 1821.71±2, 1822.73±2, 1829.48±2, 1831.81±2, 1832.41±2, 1836.18±2, 1837.33±2, 1840.84±2, 1849.81±2, 1854.68±2, 1858.34±2, 1864.19±2, 1866.06±2, 1875.28±2, 1876.50±2, 1878.25±2, 1890.21±2, 1891.32±2, 1893.00±2, 1904.69±2, 1911.46±2, 1913.68±2, 1916.02±2, 1919.35±2, 1927.13±2, 1931.84±2, 1934.86±2, 1935.52±2, 1936.83±2, 1937.87±2, 1941.22±2, 1944.97±2, 1948.39±2, 1952.47±2, 1957.80±2, 1962.82±2, 1969.82±2, 1972.54±2, 1975.58±2, 1976.51±2, 1977.70±2, 1979.29±2, 1988.46±2, 1991.91±2, 1995.37±2, 2009.91±2, 2011.18±2, 2013.86±2, 2023.97±2, 2027.73±2, 2030.95±2, 2032.69±2, 2039.29±2, 2043.12±2, 2045.68±2, 2051.76±2, 2055.50±2, 2059.05±2, 2062.98±2, 2065.57±2, 2066.09±2, 2074.03±2, 2075.32±2, 2079.80±2, 2083.74±2, 2084.36±2, 2085.85±2, 2089.53±2, 2092.25±2, 2092.80±2, 2097.03±2, 2099.42±2, 2111.39±2, 2113.10±2, 2115.77±2, 2120.37±2, 2126.55±2, 2137.63±2, 2139.15±2, 2140.48±2, 2143.42±2, 2146.46±2, 2149.85±2, 2151.02±2, 2160.22±2, 2161.68±2, 2167.09±2, 2167.78±2, 2168.75±2, 2173.75±2, 2177.51±2, 2179.25±2, 2184.93±2, 2185.65±2, 2186.28±2, 2190.18±2, 2191.02±2, 2192.84±2, 2196.47±2, 2199.82±2, 2201.22±2, 2204.02±2, 2207.10±2, 2211.58±2, 2216.77±2, 2218.45±2, 2219.30±2, 2220.56±2, 2222.74±2, 2226.96±2, 2228.22±2, 2231.60±2, 2239.71±2, 2244.01±2, 2251.78±2, 2254.83±2, 2256.53±2, 2261.91±2, 2266.45±2, 2268.58±2, 2274.97±2, 2276.04±2, 2278.67±2, 2281.09±2, 2285.01±2, 2289.43±2, 2290.85±2, 2292.35±2, 2295.92±2, 2296.92±2, 2301.71±2, 2302.50±2, 2303.21±2, 2305.43±2 2307.22±2, 2314.24±2, 2314.81±2, 2317.68±2, 2325.30±2, 2327.73±2, 2341.14±2, 2342.87±2, 2344.45±2, 2351.97±2, 2353.99±2, 2355.29±2, 2357.54±2, 2367.75±2, 2375.59±2, 2378.35±2, 2380.39±2, 2393.64±2, 2402.11±2, 2404.01±2, 2406.49±2, 2412.79±2, 2414.25±2, 2415.20±2, 2416.30±2, 2431.13±2, 2434.36±2, 2438.19±2, 2439.22±2, 2444.37±2, 2451.90±2, 2453.96±2, 2455.44±2, 2456.62±2, 2459.43±2, 2462.31±2, 2464.16±2, 2470.97±2, 2478.17±2, 2479.28±2, 2484.18±2, 2500.40±2, 2502.64±2, 2504.73±2, 2507.42±2, 2509.21±2, 2515.26±2, 2517.43±2, 2519.07±2, 2527.31±2, 2531.06±2, 2532.26±2, 2546.08±2, 2554.96±2, 2559.48±2, 2564.01±2, 2571.26±2, 2578.45±2, 2581.25±2, 2583.37±2, 2584.81±2, 2587.01±2, 2588.90±2, 2593.68±2, 2596.11±2, 2603.33±2, 2608.20±2, 2613.31±2, 2614.91±2, 2622.46±2, 2629.26±2, 2633.69±2, 2634.61±2, 2640.51±2, 2641.73±2, 2652.85±2, 2655.08±2, 2665.15±2, 2670.00±2, 2682.80±2, 2696.41±2, 2697.73±2, 2698.27±2, 2699.82±2, 3302.01±2, 3303.21±2, 3309.84±2, 3323.89±2, 3330.34±2, 3337.92±2, 3366.84±2, 3370.39±2, 3378.18±2, 3380.43±2, 3384.77±2;
のうちのいずれかにおいて前記健常検体のシグナルペプチドプロファイルと相違する場合に、被検体がALSに罹患もしくは発症していることに関連する(典型的には、被検体がALSに罹患若しくは発症していることを示唆する)。
ここで、ALS患者由来の体液中のシグナルペプチドのプロファイルでは、以下の分子量:
1405.71±2, 1406.49±2, 1409.40±2, 1410.97±2, 1418.70±2, 1426.68±2, 1437.62±2, 1445.77±2, 1451.61±2, 1456.44±2, 1458.88±2, 1466.24±2, 1468.86±2, 1472.12±2, 1476.87±2, 1482.60±2, 1493.58±2, 1495.42±2, 1496.52±2, 1498.88±2, 1502.40±2, 1505.52±2, 1508.76±2, 1510.50±2, 1516.64±2, 1521.93±2, 1529.32±2, 1530.37±2, 1533.52±2, 1539.36±2, 1544.22±2, 1553.72±2, 1555.72±2, 1560.24±2, 1566.20±2, 1567.20±2, 1575.70±2, 1578.07±2, 1580.91±2, 1589.58±2, 1592.55±2, 1597.25±2, 1608.53±2, 1609.36±2, 1610.62±2, 1616.12±2, 1629.15±2, 1639.39±2, 1640.36±2, 1646.58±2, 1655.72±2, 1657.97±2, 1659.24±2, 1660.46±2, 1662.16±2, 1679.09±2, 1682.54±2, 1683.12±2, 1687.34±2, 1688.14±2, 1691.08±2, 1691.75±2, 1694.76±2, 1695.74±2, 1700.65±2, 1702.19±2, 1708.77±2, 1712.10±2, 1714.63±2, 1715.56±2, 1719.51±2, 1721.61±2, 1726.31±2, 1737.85±2, 1739.71±2, 1743.69±2, 1761.79±2, 1769.93±2, 1774.13±2, 1775.70±2, 1786.39±2, 1788.03±2, 1790.80±2, 1796.23±2, 1797.49±2, 1800.34±2, 1801.79±2, 1804.45±2, 1810.72±2, 1812.3±21, 1813.77±2, 1817.26±2, 1818.66±2, 1819.93±2, 1821.71±2, 1822.73±2, 1829.48±2, 1832.41±2, 1836.18±2, 1837.33±2, 1840.84±2, 1849.81±2, 1854.68±2, 1858.34±2, 1864.19±2, 1866.06±2, 1875.28±2, 1876.50±2, 1878.25±2, 1890.21±2, 1891.32±2, 1893.00±2, 1904.69±2, 1911.46±2, 1913.68±2, 1916.02±2, 1919.35±2, 1927.13±2, 1931.84±2, 1934.86±2, 1936.83±2, 1937.87±2, 1941.22±2, 1944.97±2, 1948.39±2, 1952.47±2, 1957.80±2, 1962.82±2, 1969.82±2, 1972.54±2, 1975.58±2, 1976.51±2, 1977.70±2, 1979.29±2, 1988.46±2, 1991.91±2, 1995.37±2, 2009.91±2, 2011.18±2, 2013.86±2, 2023.97±2, 2027.73±2, 2030.95±2, 2032.69±2, 2039.29±2, 2043.12±2, 2045.68±2, 2051.76±2, 2059.05±2, 2062.98±2, 2066.09±2, 2074.03±2, 2075.32±2, 2079.80±2, 2083.74±2, 2085.85±2, 2089.53±2, 2092.80±2, 2097.03±2, 2099.42±2, 2111.39±2, 2113.10±2, 2115.77±2, 2120.37±2, 2126.55±2, 2137.63±2, 2139.15±2, 2143.42±2, 2146.46±2, 2149.85±2, 2151.02±2, 2160.22±2, 2161.68±2, 2167.09±2, 2168.75±2, 2173.75±2, 2177.51±2, 2179.25±2, 2185.65±2, 2186.28±2, 2190.18±2, 2191.02±2, 2192.84±2, 2196.47±2, 2199.82±2, 2201.22±2, 2204.02±2, 2207.10±2, 2211.58±2, 2216.77±2, 2218.45±2, 2219.30±2, 2220.56±2, 2222.74±2, 2226.96±2, 2228.22±2, 2231.60±2, 2239.71±2, 2244.01±2, 2251.78±2, 2254.83±2, 2256.53±2, 2261.91±2, 2266.45±2, 2268.58±2, 2274.97±2, 2276.04±2, 2278.67±2, 2281.09±2, 2285.01±2, 2289.43±2, 2290.85±2, 2292.35±2, 2295.92±2, 2296.92±2, 2301.71±2, 2302.50±2, 2303.21±2, 2305.43±2, 2307.22±2, 2314.24±2, 2317.68±2, 2325.30±2, 2341.14±2, 2342.87±2, 2344.45±2, 2351.97±2, 2353.99±2, 2355.29±2, 2357.54±2, 2367.75±2, 2375.59±2, 2378.35±2, 2380.39±2, 2393.64±2, 2402.11±2, 2404.01±2, 2406.49±2, 2412.79±2, 2414.25±2, 2415.20±2, 2416.30±2, 2431.13±2, 2434.36±2, 2438.19±2, 2439.22±2, 2444.37±2, 2451.90±2, 2453.96±2, 2455.44±2, 2456.62±2, 2459.43±2, 2462.31±2, 2464.16±2, 2470.97±2, 2478.17±2, 2479.28±2, 2484.18±2, 2500.40±2, 2502.64±2, 2504.73±2, 2507.42±2, 2509.21±2, 2515.26±2, 2517.43±2, 2519.07±2, 2527.31±2, 2531.06±2, 2532.26±2, 2546.08±2, 2554.96±2, 2559.48±2, 2564.01±2, 2571.26±2, 2578.45±2, 2581.25±2, 2583.37±2, 2584.81±2, 2587.01±2, 2588.90±2, 2593.68±2, 2596.11±2, 2603.33±2, 2608.20±2, 2613.31±2, 2614.91±2, 2622.46±2, 2629.26±2, 2633.69±2, 2634.61±2, 2640.51±2, 2641.73±2, 2652.85±2, 2655.08±2, 2665.15±2, 2670.00±2, 2682.80±2, 2696.41±2, 2698.27±2, 2699.82±2, 3302.01±2, 3303.21±2, 3323.89±2, 3330.34±2, 3337.92±2, 3366.84±2, 3370.39±2, 3378.18±2, 3380.43±2, 3384.77±2;
のうちのいずれかで特定されるシグナルペプチドの存在量が、健常検体のシグナルペプチドプロファイルと比較して増大する。
即ち、被検体のシグナルペプチドプロファイルにおいて、これらの分子量のうちのいずれかで特定されるシグナルペプチドの存在量が健常検体のシグナルペプチドと比較して増大していることは、該被検体がALSに罹患もしくは発症している可能性が高いことを好適に反映する。
1405.71±2, 1406.49±2, 1409.40±2, 1410.97±2, 1418.70±2, 1426.68±2, 1437.62±2, 1445.77±2, 1451.61±2, 1456.44±2, 1458.88±2, 1466.24±2, 1468.86±2, 1472.12±2, 1476.87±2, 1482.60±2, 1493.58±2, 1495.42±2, 1496.52±2, 1498.88±2, 1502.40±2, 1505.52±2, 1508.76±2, 1510.50±2, 1516.64±2, 1521.93±2, 1529.32±2, 1530.37±2, 1533.52±2, 1539.36±2, 1544.22±2, 1553.72±2, 1555.72±2, 1560.24±2, 1566.20±2, 1567.20±2, 1575.70±2, 1578.07±2, 1580.91±2, 1589.58±2, 1592.55±2, 1597.25±2, 1608.53±2, 1609.36±2, 1610.62±2, 1616.12±2, 1629.15±2, 1639.39±2, 1640.36±2, 1646.58±2, 1655.72±2, 1657.97±2, 1659.24±2, 1660.46±2, 1662.16±2, 1679.09±2, 1682.54±2, 1683.12±2, 1687.34±2, 1688.14±2, 1691.08±2, 1691.75±2, 1694.76±2, 1695.74±2, 1700.65±2, 1702.19±2, 1708.77±2, 1712.10±2, 1714.63±2, 1715.56±2, 1719.51±2, 1721.61±2, 1726.31±2, 1737.85±2, 1739.71±2, 1743.69±2, 1761.79±2, 1769.93±2, 1774.13±2, 1775.70±2, 1786.39±2, 1788.03±2, 1790.80±2, 1796.23±2, 1797.49±2, 1800.34±2, 1801.79±2, 1804.45±2, 1810.72±2, 1812.3±21, 1813.77±2, 1817.26±2, 1818.66±2, 1819.93±2, 1821.71±2, 1822.73±2, 1829.48±2, 1832.41±2, 1836.18±2, 1837.33±2, 1840.84±2, 1849.81±2, 1854.68±2, 1858.34±2, 1864.19±2, 1866.06±2, 1875.28±2, 1876.50±2, 1878.25±2, 1890.21±2, 1891.32±2, 1893.00±2, 1904.69±2, 1911.46±2, 1913.68±2, 1916.02±2, 1919.35±2, 1927.13±2, 1931.84±2, 1934.86±2, 1936.83±2, 1937.87±2, 1941.22±2, 1944.97±2, 1948.39±2, 1952.47±2, 1957.80±2, 1962.82±2, 1969.82±2, 1972.54±2, 1975.58±2, 1976.51±2, 1977.70±2, 1979.29±2, 1988.46±2, 1991.91±2, 1995.37±2, 2009.91±2, 2011.18±2, 2013.86±2, 2023.97±2, 2027.73±2, 2030.95±2, 2032.69±2, 2039.29±2, 2043.12±2, 2045.68±2, 2051.76±2, 2059.05±2, 2062.98±2, 2066.09±2, 2074.03±2, 2075.32±2, 2079.80±2, 2083.74±2, 2085.85±2, 2089.53±2, 2092.80±2, 2097.03±2, 2099.42±2, 2111.39±2, 2113.10±2, 2115.77±2, 2120.37±2, 2126.55±2, 2137.63±2, 2139.15±2, 2143.42±2, 2146.46±2, 2149.85±2, 2151.02±2, 2160.22±2, 2161.68±2, 2167.09±2, 2168.75±2, 2173.75±2, 2177.51±2, 2179.25±2, 2185.65±2, 2186.28±2, 2190.18±2, 2191.02±2, 2192.84±2, 2196.47±2, 2199.82±2, 2201.22±2, 2204.02±2, 2207.10±2, 2211.58±2, 2216.77±2, 2218.45±2, 2219.30±2, 2220.56±2, 2222.74±2, 2226.96±2, 2228.22±2, 2231.60±2, 2239.71±2, 2244.01±2, 2251.78±2, 2254.83±2, 2256.53±2, 2261.91±2, 2266.45±2, 2268.58±2, 2274.97±2, 2276.04±2, 2278.67±2, 2281.09±2, 2285.01±2, 2289.43±2, 2290.85±2, 2292.35±2, 2295.92±2, 2296.92±2, 2301.71±2, 2302.50±2, 2303.21±2, 2305.43±2, 2307.22±2, 2314.24±2, 2317.68±2, 2325.30±2, 2341.14±2, 2342.87±2, 2344.45±2, 2351.97±2, 2353.99±2, 2355.29±2, 2357.54±2, 2367.75±2, 2375.59±2, 2378.35±2, 2380.39±2, 2393.64±2, 2402.11±2, 2404.01±2, 2406.49±2, 2412.79±2, 2414.25±2, 2415.20±2, 2416.30±2, 2431.13±2, 2434.36±2, 2438.19±2, 2439.22±2, 2444.37±2, 2451.90±2, 2453.96±2, 2455.44±2, 2456.62±2, 2459.43±2, 2462.31±2, 2464.16±2, 2470.97±2, 2478.17±2, 2479.28±2, 2484.18±2, 2500.40±2, 2502.64±2, 2504.73±2, 2507.42±2, 2509.21±2, 2515.26±2, 2517.43±2, 2519.07±2, 2527.31±2, 2531.06±2, 2532.26±2, 2546.08±2, 2554.96±2, 2559.48±2, 2564.01±2, 2571.26±2, 2578.45±2, 2581.25±2, 2583.37±2, 2584.81±2, 2587.01±2, 2588.90±2, 2593.68±2, 2596.11±2, 2603.33±2, 2608.20±2, 2613.31±2, 2614.91±2, 2622.46±2, 2629.26±2, 2633.69±2, 2634.61±2, 2640.51±2, 2641.73±2, 2652.85±2, 2655.08±2, 2665.15±2, 2670.00±2, 2682.80±2, 2696.41±2, 2698.27±2, 2699.82±2, 3302.01±2, 3303.21±2, 3323.89±2, 3330.34±2, 3337.92±2, 3366.84±2, 3370.39±2, 3378.18±2, 3380.43±2, 3384.77±2;
のうちのいずれかで特定されるシグナルペプチドの存在量が、健常検体のシグナルペプチドプロファイルと比較して増大する。
即ち、被検体のシグナルペプチドプロファイルにおいて、これらの分子量のうちのいずれかで特定されるシグナルペプチドの存在量が健常検体のシグナルペプチドと比較して増大していることは、該被検体がALSに罹患もしくは発症している可能性が高いことを好適に反映する。
また、ALS患者由来の体液中のシグナルペプチドのプロファイルでは、以下の分子量:
1497.16±2, 1567.74±2, 1705.53±2, 1819.34±2, 1831.81±2, 1935.52±2, 2055.50±2, 2065.57±2, 2084.36±2, 2092.25±2, 2140.48±2, 2167.78±2, 2184.93±2, 2314.81±2, 2327.73±2, 2697.73±2, 3309.84±2;
のうちのいずれかで特定されるシグナルペプチドの存在量が、健常検体のシグナルペプチドプロファイルと比較して減少する。
即ち、被検体のシグナルペプチドプロファイルにおいて、これらの分子量のうちのいずれかで特定されるシグナルペプチドの存在量が健常検体のシグナルペプチドと比較して減少していることは、該被検体がALSに罹患もしくは発症している可能性が高いことを好適に反映する。
1497.16±2, 1567.74±2, 1705.53±2, 1819.34±2, 1831.81±2, 1935.52±2, 2055.50±2, 2065.57±2, 2084.36±2, 2092.25±2, 2140.48±2, 2167.78±2, 2184.93±2, 2314.81±2, 2327.73±2, 2697.73±2, 3309.84±2;
のうちのいずれかで特定されるシグナルペプチドの存在量が、健常検体のシグナルペプチドプロファイルと比較して減少する。
即ち、被検体のシグナルペプチドプロファイルにおいて、これらの分子量のうちのいずれかで特定されるシグナルペプチドの存在量が健常検体のシグナルペプチドと比較して減少していることは、該被検体がALSに罹患もしくは発症している可能性が高いことを好適に反映する。
図1に、検体Aのシグナルペプチドのプロファイルの典型例を示す。図1に示すように、シグナルペプチドのプロファイルは、検体Aの体液中に存在すると仮定したシグナルペプチドの分子量を横軸とし、該シグナルペプチドの存在量を縦軸とした棒グラフとして表すことができる。
また、図2に、図1に示した検体Aのシグナルぺプチドのプロファイルとは別に検体Bのシグナルペプチドのプロファイルを決定し、これら2つのシグナルペプチドのプロファイルを重ねて表示した図を示す。かかる検体Aに係るシグナルペプチドのプロファイルと検体Bに係るシグナルペプチドのプロファイルとが図2に示す関係である場合、検体Aに係るシグナルペプチドのプロファイルは、分子量1000、1200、1400、1600、1700において検体Bに係るシグナルペプチドのプロファイルと相違する。具体的には、検体Aに係るシグナルペプチドのプロファイルは、分子量1000、1700で特定されるシグナルペプチドの存在量が、検体Bにかかるシグナルペプチドのプロファイルと比較して増大しており、また、検体Aに係るシグナルペプチドのプロファイルは、分子量1200、1400、1600で特定されるシグナルペプチドの存在量が、検体Bにかかるシグナルペプチドのプロファイルと比較して減少している。
また、図2に、図1に示した検体Aのシグナルぺプチドのプロファイルとは別に検体Bのシグナルペプチドのプロファイルを決定し、これら2つのシグナルペプチドのプロファイルを重ねて表示した図を示す。かかる検体Aに係るシグナルペプチドのプロファイルと検体Bに係るシグナルペプチドのプロファイルとが図2に示す関係である場合、検体Aに係るシグナルペプチドのプロファイルは、分子量1000、1200、1400、1600、1700において検体Bに係るシグナルペプチドのプロファイルと相違する。具体的には、検体Aに係るシグナルペプチドのプロファイルは、分子量1000、1700で特定されるシグナルペプチドの存在量が、検体Bにかかるシグナルペプチドのプロファイルと比較して増大しており、また、検体Aに係るシグナルペプチドのプロファイルは、分子量1200、1400、1600で特定されるシグナルペプチドの存在量が、検体Bにかかるシグナルペプチドのプロファイルと比較して減少している。
ここで開示するALSの検出を補助する方法において、被検体がALSに罹患もしくは発症していることに関連する情報(典型的には、被検体がALSに罹患もしくは発症していることを示唆する情報、例えば被検体がALSに罹患もしくは発症している可能性の増大を示す情報)を入手するためには、被検体のシグナルペプチドのプロファイルが健常検体のシグナルペプチドのプロファイルと比較して、上記特定の分子量において少なくとも1つ相違する(典型的には、該特定の分子量において特定される少なくとも1つのシグナルペプチドの存在量が増大している或いは減少している)ことを確認すればよい。被検体がALSに罹患しているか否かをより高い信頼性で(高精度で)判断し得る情報を入手する観点からは、上記特定の分子量から選択される複数(2個または3個以上、より好ましくは10個以上、さらに好ましくは20個以上)の分子量において、被検体のシグナルペプチドプロファイルが健常検体のシグナルペプチドと相違すること(典型的には、該特定の分子量において特定されるシグナルペプチドの存在量が増大している或いは減少している)を確認することが好ましい。
体液中のシグナルペプチドのプロファイルの決定は、目的の分子量で特定されるシグナルペプチドの有無を確認し得る公知の方法(定性的測定方法)により行えばよい。好ましくは、目的の分子量で特定されるシグナルペプチドの存在量を測定し得る方法(定量的測定方法)により行われる。
好適な一態様では、上記シグナルペプチドのプロファイルは、質量分析装置を用いた分析により決定される。即ち、上記シグナルペプチドのプロファイルは、質量分析法により決定されることが好ましい。典型的に、質量分析法によると、複数のシグナルペプチドを同時に分析し得るため、効率よくシグナルペプチドのプロファイルを決定することができる。
分析対象の体液を質量分析法により分析することで、該体液中に存在するシグナルペプチドの質量スペクトルを(マススペクトル)得ることができる。かかるマススペクトルは、上記体液中に存在するシグナルペプチドを質量電荷比(m/z)に応じて分離した結果として得られるスペクトルであり、上記シグナルペプチドのプロファイルとして利用可能である。
分析対象の体液を質量分析法により分析することで、該体液中に存在するシグナルペプチドの質量スペクトルを(マススペクトル)得ることができる。かかるマススペクトルは、上記体液中に存在するシグナルペプチドを質量電荷比(m/z)に応じて分離した結果として得られるスペクトルであり、上記シグナルペプチドのプロファイルとして利用可能である。
上記質量分析は特に限定されず、LC-MS(液体クロマトグラフ質量分析)、ESI-MS(エレクトロスプレーイオン化質量分析)、MALDI-TOFMS(マトリックス支援レーザー脱離イオン化-飛行時間型質量分析)といった従来公知の質量分析法から適宜選択すればよい。換言すると、質量分析におけるイオン化方法およびイオンの検出方法は特に限定されない。例えば、イオン化方法としてEI(Electron Ionization:電子イオン化)法、CI(Chemical Ionization、化学イオン化)法、FAB(Fast Atom Bombardment、高速原子衝撃)法、ESI(ElectroSpray Ionization、エレクトロスプレーイオン化)法、APCI(Atomospheric Pressure Cheimcal Ionization、大気圧化学イオン化)法、ICP(Inductively Coupled Plasma、誘導結合プラズマ)、MALDI(Matrix Assisted Laser Desorption Ionization、マトリックス支援レーザー脱離イオン化)法といった従来公知の手法から適宜選択すればよい。また、イオン化された分子の検出方法についても、磁場偏向型 (Magnetic Sector)、四重極型 (Quadrupole, Q)、イオントラップ型 (Ion Trap, IT)、フーリエ変換イオンサイクロトロン共鳴型 (Fourier-Transform Ion Cyclotron Resonance, FT-ICR)、加速器質量分析 (Accelerator Mass Spectrometry, AMS)、飛行時間型 (Time-of-Flight, TOF)、或いはこれらの検出方法を複数組み合わせたタンデム型といった従来公知の手法から適宜選択すればよい。
特に好適な一態様では、MALDI(マトリックス支援レーザー脱離イオン化法)を用いた質量分析(以下、MNALDIMSともいう)により分析する。MALDIMSによると、典型的に、イオン化されにくい高分子(例えば、タンパク質やぺプチド等の生体分子)の分析が可能である。また、上記MALDIMSは、典型的に、微量サンプルや、純度が低いサンプルについても分析が可能である場合が多い点も、体液中のシグナルペプチドの分析に適している。なお、かかるMALDIを用いた質量分析では、典型的に、飛行時間型質量分析(TOFMS)によりイオン化した分子が分析(検出)される。即ち、好ましくは、質量分析として、MALDI-TOFMSを採用し得る。
上記MALDIMS(典型的にはMALDI-TOFMS)により体液中のシグナルペプチドを分析する場合は、該体液を熱可塑性樹脂上に固定することが好ましい。シグナルペプチドは、典型的に、疎水性アミノ酸を多く有する疎水性が高い分子である場合が多く、イオン化効率が低い傾向にある。熱可塑性樹脂上に固定することで、シグナルペプチドのイオン化を促進し得る。また、体液を熱可塑性樹脂上に固定することで、体液中に含まれる夾雑物のイオン化が抑制し得るため、シグナルペプチドの分析精度を向上し得る。
ここで、上記体液を固定する熱可塑性樹脂としては、従来公知の樹脂材料を特に制限なく使用することができる。例えば、ポリエチレン、ポリプロピレン等のポリオレフィン樹脂、ポリメチルメタクリレート等のアクリル系樹脂、エチレン-酢酸ビニル共重合体樹脂(EVA)、ポリ塩化ビニル樹脂、ポリエステル樹脂等を主成分とする樹脂材料であり得る。シグナルペプチドのイオン化の促進と夾雑物のイオン化抑制の観点からは、エチレンー酢酸ビニル共重合体樹脂を好適に使用し得る。
好適な一態様では、薄膜状(フィルム状、シート状)に成形された熱可塑性樹脂(典型的には、熱可塑性フィルム)上に分析対象の体液を固定する。かかる熱可塑性樹脂フィルムの厚みは特に限定されない。例えば50μm~200μm程度(典型的には100μm程度)の厚みのものであり得る。
また、上記MALDIMS(典型的にはMALDI-TOFMS)により体液中のシグナルペプチドを分析する場合に使用されるマトリックスは特に限定されず、MALDIにより質量分析する際に使用される従来公知のマトリックスから適宜選択すればよい。例えば、シナピン酸(3,5-ジメトキシ-4-ヒドロキシケイ皮酸)、CHCA(α-シアノ-4-ヒドロキシケイ皮酸)、フェルラ酸(trans-4-ヒドロキシ-3-メトキシケイ皮酸)、ゲンチジン酸、DHBA(2,5-ジヒドロキシ安息香酸)、HPA(3-ヒドロキシピコリン酸)、ジスラノール(1,8-ジヒドロキシ-9,10-ジヒドロアントラセン-9-オン)等が挙げられる。シナピン酸は高分子量の分子を質量分析する際のマトリックスとして好適であり、また、ペプチドおよびタンパク質の質量分析に好適なマトリックスの一つである。このため、シグナルペプチドの質量分析におけるマトリックスとして、上記シナピン酸を好適に使用し得る。
好適な一態様では、対象の体液に対して相互に独立して複数回の質量分析を繰り返し行う。かかる複数回の質量分析により得られた結果を統計学的に処理することで、体液中に含まれるシグナルペプチドを精度よく定量し得る。
例えば、複数回の質量分析において目的のシグナルペプチドの存在が確認される頻度(検出される頻度)を算出し、該頻度を当該シグナルペプチドの定量値とみなすことで、体液中に存在するシグナルペプチドの存在量を確認することができる。或いはまた、単回の質量分析により目的のシグナルペプチドを定量し得る場合であれば、複数回の質量分析により得られた結果(定量値)から算出される平均値、または中央値は、当該シグナルペプチドの定量値として好適に採用し得る。
質量分析を繰り返す回数が増えるほど上記定量精度が向上し得るため、例えば50回以上(好ましくは100回以上、より好ましくは200回以上、さらに好ましくは300回以上)の質量分析を繰り返すことが好ましい。
例えば、複数回の質量分析において目的のシグナルペプチドの存在が確認される頻度(検出される頻度)を算出し、該頻度を当該シグナルペプチドの定量値とみなすことで、体液中に存在するシグナルペプチドの存在量を確認することができる。或いはまた、単回の質量分析により目的のシグナルペプチドを定量し得る場合であれば、複数回の質量分析により得られた結果(定量値)から算出される平均値、または中央値は、当該シグナルペプチドの定量値として好適に採用し得る。
質量分析を繰り返す回数が増えるほど上記定量精度が向上し得るため、例えば50回以上(好ましくは100回以上、より好ましくは200回以上、さらに好ましくは300回以上)の質量分析を繰り返すことが好ましい。
例えば、上記質量分析法としてMALDIMSを採用する場合であれば、例えば以下の方法により、体液中のシグナルペプチドの存在量を確認することができる。
まず、対象の体液に対して複数回(例えば50回以上、好ましくは100回以上、より好ましくは200回以上、さらに好ましくは300回以上)イオン化レーザーを繰り返し照射する。このとき、各レーザー照射毎に質量分析(好ましくはTOFMS)を行い、目的の分子量の分子(即ち、目的の分子量のシグナルペプチド)が存在するか(検出されるか)否かを確認する。そして、上記複数回のMALDIMSにおいて目的の分子量の分子の存在が確認される頻度(検出される頻度)を算出し、該頻度を目的のシグナルペプチドの存在量とみなすことで、当該目的のシグナルペプチドの存在量を確認し得る。
まず、対象の体液に対して複数回(例えば50回以上、好ましくは100回以上、より好ましくは200回以上、さらに好ましくは300回以上)イオン化レーザーを繰り返し照射する。このとき、各レーザー照射毎に質量分析(好ましくはTOFMS)を行い、目的の分子量の分子(即ち、目的の分子量のシグナルペプチド)が存在するか(検出されるか)否かを確認する。そして、上記複数回のMALDIMSにおいて目的の分子量の分子の存在が確認される頻度(検出される頻度)を算出し、該頻度を目的のシグナルペプチドの存在量とみなすことで、当該目的のシグナルペプチドの存在量を確認し得る。
また、他の好適な一態様では、上記シグナルペプチドのプロファイルは、免疫学的手法により決定されてもよい。ここで、免疫学的手法とは、典型的には、抗原(又はその断片)と特異的に反応する抗体とを抗原抗体反応させて免疫複合体を形成し、該抗体を検出(可視化)することで抗原量を把握する方法である。即ち、目的のシグナルペプチドまたはその断片と特異的に反応する抗体を用いた手法により決定され得る。
上記免疫学的手法としては、目的のシグナルペプチドを検出し得る限りにおいて、従来公知の手法を特に制限なく採用し得る。例えば、EIA、放射免疫測定法(RIA)、蛍光免疫測定法(FIA)、化学発光免疫測定法(CLIA)、ゲル内沈降反応、免疫比濁法、粒子凝集反応法、等が挙げられる。
上記免疫学的手法としては、予め何らかの標識をした抗体(標識一次抗体)を用いる方法(直接法)、又は、シグナルペプチドに対する抗体(即ち一次抗体)を特異的に認識する標識二次抗体を用いる方法(間接法)のどちらの方法も好適に採用できる。
上記抗体(一次抗体または二次抗体)の標識物質としては、ELISA等の免疫化学的手法による診断分野において当業者が通常用いる標識化合物を使用することができる。例えば、3H、14C、131I、99mTc等の放射性同位元素;β-ガラクトシダーゼ、β-グルコシダーゼ、アルカリフォスファターゼ、パーオキシダーゼ、リンゴ酸脱水素酵素等の酵素;フルオレスカミン、フルオレセインイソチオシアネート等の蛍光物質;ルシフェリン、ルミノール誘導体、イソルミノール誘導体等の発光物質;等が挙げられる。
これらの標識物質を使用した抗体の標識は、従来公知の方法で行えばよく、本発明を特徴付ける手法でもないため、詳細な説明は省略する。
上記抗体(一次抗体または二次抗体)の標識物質としては、ELISA等の免疫化学的手法による診断分野において当業者が通常用いる標識化合物を使用することができる。例えば、3H、14C、131I、99mTc等の放射性同位元素;β-ガラクトシダーゼ、β-グルコシダーゼ、アルカリフォスファターゼ、パーオキシダーゼ、リンゴ酸脱水素酵素等の酵素;フルオレスカミン、フルオレセインイソチオシアネート等の蛍光物質;ルシフェリン、ルミノール誘導体、イソルミノール誘導体等の発光物質;等が挙げられる。
これらの標識物質を使用した抗体の標識は、従来公知の方法で行えばよく、本発明を特徴付ける手法でもないため、詳細な説明は省略する。
上記免疫学的手法に用いられる抗体は、目的のシグナルペプチドを検出可能である限りにおいて、特に限定されない。例えば、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、単鎖抗体、キメラ抗体等を含む。また、免疫動物(抗体産生動物、Host、Source)や免疫グロブリンの定常領域(アイソタイプ、クラスともいう)についても特に限定されない。例えば、マウス、ラット、ウサギ、ウマ、ウシ、ヤギ、ヒツジ、ブタ等を免疫して得られた抗体であってもよいし、IgG、IgM、IgA、IgE、IgDのうちのいずれであってもよい(好ましくはIgGである)。
これらの抗体は、従来公知の方法により作製すればよく、本発明を特徴付ける手法でもないため、詳細な説明は省略する。
なお、本発明の他の側面としては、目的のシグナルペプチドを検出可能な抗体を含む組成物、キット、或いはタンパク質アレイ(典型的にはタンパク質マイクロアレイ)等が提供される。
これらの抗体は、従来公知の方法により作製すればよく、本発明を特徴付ける手法でもないため、詳細な説明は省略する。
なお、本発明の他の側面としては、目的のシグナルペプチドを検出可能な抗体を含む組成物、キット、或いはタンパク質アレイ(典型的にはタンパク質マイクロアレイ)等が提供される。
上記健常検体由来の体液中に含まれるシグナルペプチドのプロファイルは、ALSに罹患あるいは発症していない少なくとも一人の健常検体から採取した体液中のシグナルペプチドのプロファイルであればよい。しかし、健常検体であっても、個々人によって体液中に存在するシグナルペプチドのプロファイルに相違(個体差)が生じ得る。このため、上記健常検体由来の体液中に含まれるシグナルペプチドのプロファイルは、複数(2人または3人以上、好ましくは5人以上、より好ましくは10人以上)の健常検体の体液中に含まれるシグナルペプチドのプロファイルから総合的に決定されることが好ましい。
なお、上記健常検体由来の体液中のシグナルペプチドのプロファイルは、被検体のシグナルペプチドのプロファイルと同様の手法で決定されたものであることが好ましい。
なお、上記健常検体由来の体液中のシグナルペプチドのプロファイルは、被検体のシグナルペプチドのプロファイルと同様の手法で決定されたものであることが好ましい。
ここで開示するALSの検出を補助する方法において、上記被検体のシグナルペプチドプロファイルと上記健常検体のシグナルペプチドとの比較は、上記健常検体由来の体液中のシグナルペプチドのプロファイルとの相違がALSに罹患もしくは発症していることを示す上記特定の分子量のうちの少なくとも1つについて比較すればよい。
上記健常検体のシグナルペプチドプロファイルとの相違がALSに罹患もしくは発症していることを示す上記特定の分子量であって、上記被検体のシグナルペプチドプロファイルと上記健常検体のシグナルペプチドプロファイルとの比較において比べられる分子量の個数が多いほど、被検体がALSに罹患もしくは発症している可能性(典型的には該可能性の増加あるいは減少)をより高い信頼性で(高精度で)示す情報を入手することができる。即ち、上記健常検体由来の体液中のシグナルペプチドのプロファイルとの相違がALSに罹患もしくは発症していることを示す上記特定の分子量のうちの2個または3個以上(より好ましくは10個以上、より好ましくは20個以上)について、上記被検体のシグナルペプチドプロファイルと健常検体のシグナルペプチドプロファイルとを比較することが好ましい。
上記健常検体のシグナルペプチドプロファイルとの相違がALSに罹患もしくは発症していることを示す上記特定の分子量であって、上記被検体のシグナルペプチドプロファイルと上記健常検体のシグナルペプチドプロファイルとの比較において比べられる分子量の個数が多いほど、被検体がALSに罹患もしくは発症している可能性(典型的には該可能性の増加あるいは減少)をより高い信頼性で(高精度で)示す情報を入手することができる。即ち、上記健常検体由来の体液中のシグナルペプチドのプロファイルとの相違がALSに罹患もしくは発症していることを示す上記特定の分子量のうちの2個または3個以上(より好ましくは10個以上、より好ましくは20個以上)について、上記被検体のシグナルペプチドプロファイルと健常検体のシグナルペプチドプロファイルとを比較することが好ましい。
ここで開示するALSの検出を補助する方法では、上記被検体のシグナルペプチドプロファイルと上記健常検体のシグナルぺプチドプロファイルとを特定の分子量に着目して比較した場合に、該比較した特定の分子量において相違する頻度が高いほど、該被検体がALSに罹患もしくは発症している可能性(典型的には該可能性の増加)を高い精度で示す。
即ち、被検体がALSに罹患もしくは発症している可能性(典型的には該可能性の増加)をより高い信頼性で(高精度で)示す情報を入手する観点からは、上記被検体のシグナルペプチドプロファイルと上記健常検体のシグナルペプチドプロファイルとの比較において比べられる上記特定の分子量のうちの、60%以上(好ましくは70%以上、より好ましくは80%以上、さらに好ましくは95%以上)において、被検体のシグナルペプチドプロファイルと健常検体のシグナルペプチドプロファイルとで相違することを確認することが好ましい。
即ち、被検体がALSに罹患もしくは発症している可能性(典型的には該可能性の増加)をより高い信頼性で(高精度で)示す情報を入手する観点からは、上記被検体のシグナルペプチドプロファイルと上記健常検体のシグナルペプチドプロファイルとの比較において比べられる上記特定の分子量のうちの、60%以上(好ましくは70%以上、より好ましくは80%以上、さらに好ましくは95%以上)において、被検体のシグナルペプチドプロファイルと健常検体のシグナルペプチドプロファイルとで相違することを確認することが好ましい。
<第二の態様>
本発明者らは、ALS患者由来の体液中に含まれるシグナルペプチドのプロファイルと、健常検体由来の体液中に含まれるシグナルペプチドのプロファイルとをより詳細に比較、検討した。そして、ALS患者由来の体液と健常検体由来の体液とでは、特定のシグナルペプチド(即ち、上記ALS関連シグナルペプチド)の存在の有無およびその存在量の程度が異なることを見出した。そして、該特定のシグナルペプチド(即ち、上記ALS関連シグナルペプチド)を指標にしたALSの検出を補助する方法を完成するに至った。
本発明者らは、ALS患者由来の体液中に含まれるシグナルペプチドのプロファイルと、健常検体由来の体液中に含まれるシグナルペプチドのプロファイルとをより詳細に比較、検討した。そして、ALS患者由来の体液と健常検体由来の体液とでは、特定のシグナルペプチド(即ち、上記ALS関連シグナルペプチド)の存在の有無およびその存在量の程度が異なることを見出した。そして、該特定のシグナルペプチド(即ち、上記ALS関連シグナルペプチド)を指標にしたALSの検出を補助する方法を完成するに至った。
即ち、ここで第二の態様として開示されるALSの検出を補助する方法は、被検体由来の体液中における上記ALS関連シグナルペプチドの存在の有無或いはその存在量の程度が、健常検体由来の体液中における該ALS関連シグナルペプチドの存在の有無或いはその存在量の程度から設定した基準レベルと異なる場合に、被検体がALSに罹患もしくは発症していることに関連する(典型的には、被検体がALSに罹患若しくは発症していることを示唆する、例えば、被検体がALSに罹患もしくは発症している可能性の増大を示す)ことを特徴とする方法である。
具体的には、ここで第二の態様として開示されるALSの検出を補助する方法は、
(i)被検体由来の体液中において、ALS関連シグナルペプチドが1種または2種以上存在しているか否か、或いは、該ALS関連シグナルペプチドが存在している場合にはその存在量の程度を検査すること、を包含する。
(i)被検体由来の体液中において、ALS関連シグナルペプチドが1種または2種以上存在しているか否か、或いは、該ALS関連シグナルペプチドが存在している場合にはその存在量の程度を検査すること、を包含する。
かかるALSの検出を補助する方法において、上記ALS関連シグナルペプチドは、その分子量が、
1405.71±2, 1406.49±2, 1409.40±2, 1410.97±2, 1418.70±2, 1426.68±2, 1437.62±2, 1445.77±2, 1451.61±2, 1456.44±2, 1458.88±2, 1466.24±2, 1468.86±2, 1472.12±2, 1476.87±2, 1482.60±2, 1493.58±2, 1495.42±2, 1496.52±2, 1497.16±2, 1498.88±2, 1502.40±2, 1505.52±2, 1508.76±2, 1510.50±2, 1516.64±2, 1521.93±2, 1529.32±2, 1530.37±2, 1533.52±2, 1539.36±2, 1544.22±2, 1553.72±2, 1555.72±2, 1560.24±2, 1566.20±2, 1567.20±2, 1567.74±2, 1575.70±2, 1578.07±2, 1580.91±2, 1589.58±2, 1592.55±2, 1597.25±2, 1608.53±2, 1609.36±2, 1610.62±2, 1616.12±2, 1629.15±2, 1639.39±2, 1640.36±2, 1646.58±2, 1655.72±2, 1657.97±2, 1659.24±2, 1660.46±2, 1662.16±2, 1679.09±2, 1682.54±2, 1683.12±2, 1687.34±2, 1688.14±2, 1691.08±2, 1691.75±2, 1694.76±2, 1695.74±2, 1700.65±2, 1702.19±2, 1705.53±2, 1708.77±2, 1712.10±2, 1714.63±2, 1715.56±2, 1719.51±2, 1721.61±2, 1726.31±2, 1737.85±2, 1739.71±2, 1743.69±2, 1761.79±2, 1769.93±2, 1774.13±2, 1775.70±2, 1786.39±2, 1788.03±2, 1790.80±2, 1796.23±2, 1797.49±2, 1800.34±2, 1801.79±2, 1804.45±2, 1810.72±2, 1812.31±2, 1813.77±2, 1817.26±2, 1818.66±2, 1819.34±2, 1819.93±2, 1821.71±2, 1822.73±2, 1829.48±2, 1831.81±2, 1832.41±2, 1836.18±2, 1837.33±2, 1840.84±2, 1849.81±2, 1854.68±2, 1858.34±2, 1864.19±2, 1866.06±2, 1875.28±2, 1876.50±2, 1878.25±2, 1890.21±2, 1891.32±2, 1893.00±2, 1904.69±2, 1911.46±2, 1913.68±2, 1916.02±2, 1919.35±2, 1927.13±2, 1931.84±2, 1934.86±2, 1935.52±2, 1936.83±2, 1937.87±2, 1941.22±2, 1944.97±2, 1948.39±2, 1952.47±2, 1957.80±2, 1962.82±2, 1969.82±2, 1972.54±2, 1975.58±2, 1976.51±2, 1977.70±2, 1979.29±2, 1988.46±2, 1991.91±2, 1995.37±2, 2009.91±2, 2011.18±2, 2013.86±2, 2023.97±2, 2027.73±2, 2030.95±2, 2032.69±2, 2039.29±2, 2043.12±2, 2045.68±2, 2051.76±2, 2055.50±2, 2059.05±2, 2062.98±2, 2065.57±2, 2066.09±2, 2074.03±2, 2075.32±2, 2079.80±2, 2083.74±2, 2084.36±2, 2085.85±2, 2089.53±2, 2092.25±2, 2092.80±2, 2097.03±2, 2099.42±2, 2111.39±2, 2113.10±2, 2115.77±2, 2120.37±2, 2126.55±2, 2137.63±2, 2139.15±2, 2140.48±2, 2143.42±2, 2146.46±2, 2149.85±2, 2151.02±2, 2160.22±2, 2161.68±2, 2167.09±2, 2167.78±2, 2168.75±2, 2173.75±2, 2177.51±2, 2179.25±2, 2184.93±2, 2185.65±2, 2186.28±2, 2190.18±2, 2191.02±2, 2192.84±2, 2196.47±2, 2199.82±2, 2201.22±2, 2204.02±2, 2207.10±2, 2211.58±2, 2216.77±2, 2218.45±2, 2219.30±2, 2220.56±2, 2222.74±2, 2226.96±2, 2228.22±2, 2231.60±2, 2239.71±2, 2244.01±2, 2251.78±2, 2254.83±2, 2256.53±2, 2261.91±2, 2266.45±2, 2268.58±2, 2274.97±2, 2276.04±2, 2278.67±2, 2281.09±2, 2285.01±2, 2289.43±2, 2290.85±2, 2292.35±2, 2295.92±2, 2296.92±2, 2301.71±2, 2302.50±2, 2303.21±2, 2305.43±2 2307.22±2, 2314.24±2, 2314.81±2, 2317.68±2, 2325.30±2, 2327.73±2, 2341.14±2, 2342.87±2, 2344.45±2, 2351.97±2, 2353.99±2, 2355.29±2, 2357.54±2, 2367.75±2, 2375.59±2, 2378.35±2, 2380.39±2, 2393.64±2, 2402.11±2, 2404.01±2, 2406.49±2, 2412.79±2, 2414.25±2, 2415.20±2, 2416.30±2, 2431.13±2, 2434.36±2, 2438.19±2, 2439.22±2, 2444.37±2, 2451.90±2, 2453.96±2, 2455.44±2, 2456.62±2, 2459.43±2, 2462.31±2, 2464.16±2, 2470.97±2, 2478.17±2, 2479.28±2, 2484.18±2, 2500.40±2, 2502.64±2, 2504.73±2, 2507.42±2, 2509.21±2, 2515.26±2, 2517.43±2, 2519.07±2, 2527.31±2, 2531.06±2, 2532.26±2, 2546.08±2, 2554.96±2, 2559.48±2, 2564.01±2, 2571.26±2, 2578.45±2, 2581.25±2, 2583.37±2, 2584.81±2, 2587.01±2, 2588.90±2, 2593.68±2, 2596.11±2, 2603.33±2, 2608.20±2, 2613.31±2, 2614.91±2, 2622.46±2, 2629.26±2, 2633.69±2, 2634.61±2, 2640.51±2, 2641.73±2, 2652.85±2, 2655.08±2, 2665.15±2, 2670.00±2, 2682.80±2, 2696.41±2, 2697.73±2, 2698.27±2, 2699.82±2, 3302.01±2, 3303.21±2, 3309.84±2, 3323.89±2, 3330.34±2, 3337.92±2, 3366.84±2, 3370.39±2, 3378.18±2, 3380.43±2、または、3384.77±2である。
これらの分子量で特定されるシグナルペプチドは、ALS患者由来の体液中における該シグナルペプチドの存在の有無或いはその存在量の程度が、健常検体由来の体液中における該シグナルペプチドの存在の有無あるいはその存在量の程度から設定した基準レベルと異なることが、本発明者らによって確認されたシグナルペプチドである。
1405.71±2, 1406.49±2, 1409.40±2, 1410.97±2, 1418.70±2, 1426.68±2, 1437.62±2, 1445.77±2, 1451.61±2, 1456.44±2, 1458.88±2, 1466.24±2, 1468.86±2, 1472.12±2, 1476.87±2, 1482.60±2, 1493.58±2, 1495.42±2, 1496.52±2, 1497.16±2, 1498.88±2, 1502.40±2, 1505.52±2, 1508.76±2, 1510.50±2, 1516.64±2, 1521.93±2, 1529.32±2, 1530.37±2, 1533.52±2, 1539.36±2, 1544.22±2, 1553.72±2, 1555.72±2, 1560.24±2, 1566.20±2, 1567.20±2, 1567.74±2, 1575.70±2, 1578.07±2, 1580.91±2, 1589.58±2, 1592.55±2, 1597.25±2, 1608.53±2, 1609.36±2, 1610.62±2, 1616.12±2, 1629.15±2, 1639.39±2, 1640.36±2, 1646.58±2, 1655.72±2, 1657.97±2, 1659.24±2, 1660.46±2, 1662.16±2, 1679.09±2, 1682.54±2, 1683.12±2, 1687.34±2, 1688.14±2, 1691.08±2, 1691.75±2, 1694.76±2, 1695.74±2, 1700.65±2, 1702.19±2, 1705.53±2, 1708.77±2, 1712.10±2, 1714.63±2, 1715.56±2, 1719.51±2, 1721.61±2, 1726.31±2, 1737.85±2, 1739.71±2, 1743.69±2, 1761.79±2, 1769.93±2, 1774.13±2, 1775.70±2, 1786.39±2, 1788.03±2, 1790.80±2, 1796.23±2, 1797.49±2, 1800.34±2, 1801.79±2, 1804.45±2, 1810.72±2, 1812.31±2, 1813.77±2, 1817.26±2, 1818.66±2, 1819.34±2, 1819.93±2, 1821.71±2, 1822.73±2, 1829.48±2, 1831.81±2, 1832.41±2, 1836.18±2, 1837.33±2, 1840.84±2, 1849.81±2, 1854.68±2, 1858.34±2, 1864.19±2, 1866.06±2, 1875.28±2, 1876.50±2, 1878.25±2, 1890.21±2, 1891.32±2, 1893.00±2, 1904.69±2, 1911.46±2, 1913.68±2, 1916.02±2, 1919.35±2, 1927.13±2, 1931.84±2, 1934.86±2, 1935.52±2, 1936.83±2, 1937.87±2, 1941.22±2, 1944.97±2, 1948.39±2, 1952.47±2, 1957.80±2, 1962.82±2, 1969.82±2, 1972.54±2, 1975.58±2, 1976.51±2, 1977.70±2, 1979.29±2, 1988.46±2, 1991.91±2, 1995.37±2, 2009.91±2, 2011.18±2, 2013.86±2, 2023.97±2, 2027.73±2, 2030.95±2, 2032.69±2, 2039.29±2, 2043.12±2, 2045.68±2, 2051.76±2, 2055.50±2, 2059.05±2, 2062.98±2, 2065.57±2, 2066.09±2, 2074.03±2, 2075.32±2, 2079.80±2, 2083.74±2, 2084.36±2, 2085.85±2, 2089.53±2, 2092.25±2, 2092.80±2, 2097.03±2, 2099.42±2, 2111.39±2, 2113.10±2, 2115.77±2, 2120.37±2, 2126.55±2, 2137.63±2, 2139.15±2, 2140.48±2, 2143.42±2, 2146.46±2, 2149.85±2, 2151.02±2, 2160.22±2, 2161.68±2, 2167.09±2, 2167.78±2, 2168.75±2, 2173.75±2, 2177.51±2, 2179.25±2, 2184.93±2, 2185.65±2, 2186.28±2, 2190.18±2, 2191.02±2, 2192.84±2, 2196.47±2, 2199.82±2, 2201.22±2, 2204.02±2, 2207.10±2, 2211.58±2, 2216.77±2, 2218.45±2, 2219.30±2, 2220.56±2, 2222.74±2, 2226.96±2, 2228.22±2, 2231.60±2, 2239.71±2, 2244.01±2, 2251.78±2, 2254.83±2, 2256.53±2, 2261.91±2, 2266.45±2, 2268.58±2, 2274.97±2, 2276.04±2, 2278.67±2, 2281.09±2, 2285.01±2, 2289.43±2, 2290.85±2, 2292.35±2, 2295.92±2, 2296.92±2, 2301.71±2, 2302.50±2, 2303.21±2, 2305.43±2 2307.22±2, 2314.24±2, 2314.81±2, 2317.68±2, 2325.30±2, 2327.73±2, 2341.14±2, 2342.87±2, 2344.45±2, 2351.97±2, 2353.99±2, 2355.29±2, 2357.54±2, 2367.75±2, 2375.59±2, 2378.35±2, 2380.39±2, 2393.64±2, 2402.11±2, 2404.01±2, 2406.49±2, 2412.79±2, 2414.25±2, 2415.20±2, 2416.30±2, 2431.13±2, 2434.36±2, 2438.19±2, 2439.22±2, 2444.37±2, 2451.90±2, 2453.96±2, 2455.44±2, 2456.62±2, 2459.43±2, 2462.31±2, 2464.16±2, 2470.97±2, 2478.17±2, 2479.28±2, 2484.18±2, 2500.40±2, 2502.64±2, 2504.73±2, 2507.42±2, 2509.21±2, 2515.26±2, 2517.43±2, 2519.07±2, 2527.31±2, 2531.06±2, 2532.26±2, 2546.08±2, 2554.96±2, 2559.48±2, 2564.01±2, 2571.26±2, 2578.45±2, 2581.25±2, 2583.37±2, 2584.81±2, 2587.01±2, 2588.90±2, 2593.68±2, 2596.11±2, 2603.33±2, 2608.20±2, 2613.31±2, 2614.91±2, 2622.46±2, 2629.26±2, 2633.69±2, 2634.61±2, 2640.51±2, 2641.73±2, 2652.85±2, 2655.08±2, 2665.15±2, 2670.00±2, 2682.80±2, 2696.41±2, 2697.73±2, 2698.27±2, 2699.82±2, 3302.01±2, 3303.21±2, 3309.84±2, 3323.89±2, 3330.34±2, 3337.92±2, 3366.84±2, 3370.39±2, 3378.18±2, 3380.43±2、または、3384.77±2である。
これらの分子量で特定されるシグナルペプチドは、ALS患者由来の体液中における該シグナルペプチドの存在の有無或いはその存在量の程度が、健常検体由来の体液中における該シグナルペプチドの存在の有無あるいはその存在量の程度から設定した基準レベルと異なることが、本発明者らによって確認されたシグナルペプチドである。
ここで開示される上記ALS関連シグナルペプチドの典型例は、配列番号1~1580に示すアミノ酸配列のうちのいずれかからなるシグナルペプチドである。
ここで第二の態様として開示するALSの検出を補助する方法において、上記ALS関連シグナルペプチドの存在の有無およびその存在量の程度の検査は、上記第一の態様において体液中のシグナルペプチドのプロファイルを決定する場合と同様の方法により行うことができる。従って、かかる検査方法に関する詳細な説明は割愛する。
ここで、上記基準レベルは、ALSに罹患(あるいは発症)していない少なくとも一人の健常検体から採取した体液について、該体液中に目的のシグナルペプチドが存在するか否か、或いは存在する場合はその存在量の程度を検査し、該検査結果から設定すればよい。しかし、健常検体であっても、個々人によって、体液中に目的のシグナルペプチドが存在するか否か(或いはその存在量)に相違(個体差)が生じ得る。このため、上記基準レベルは、複数(2人または3人以上、好ましくは5人以上、より好ましくは10人以上)の健常検体の体液を検査した結果から総合的に決定されることが好ましい。
なお、健常検体から採取した体液の検査方法は、被検体由来の体液についてALS関連シグナルペプチドの存在の有無或いはその存在量の程度を検査する場合と同様の方法により行うことが好ましい。
なお、健常検体から採取した体液の検査方法は、被検体由来の体液についてALS関連シグナルペプチドの存在の有無或いはその存在量の程度を検査する場合と同様の方法により行うことが好ましい。
検査対照の健常検体が一人である場合は、上記基準レベルは、該一人の健常検体の検査結果を基準レベルとして決定すればよい。
一方で、検査対照の健常検体が複数である場合は、上記基準レベルは、該複数の健常検体の検査結果に対して適当な統計処理を行って決定すればよい。かかる統計処理の手法は特に限定されない。例えば、複数の健常検体の検査結果の平均値(或いは中央値)を算出し、該平均値(或いは中央値)を基準レベルの上限或いは下限として設定し得る。或いはまた、該平均値(或いは中央値)の所定倍の値を、上記基準レベルの上限或いは下限として設定してもよい。例えば、上記平均値(或いは中央値)の1.5倍、2倍、3倍、または5倍、或いは、上記平均値(或いは中央値)の0.8倍、0.5倍、または0.3倍を基準レベルの上限或いは下限とし得る。
或いはまた、上記平均値(或いは中央値)を含む適当な数値範囲を基準レベルと設定してもよい。例えば、統計学的な許容誤差範囲或いはその所定倍の範囲を上記基準レベルと設定すればよく、上記平均値(或いは中央値)から標準偏差(或いは標準誤差)の1倍、1.5倍、2倍、3倍、または5倍離れた数値までの範囲を、上記基準レベルと設定し得る。或いはまた、例えば、該平均値(或いは中央値)±10%、±20%、±30%、±40%、±50%、または±60%の数値範囲を、上記基準レベルとしてもよい。
或いはまた、適当なカットオフ値(或いは閾値)を算出し、該カットオフ値(閾値)を上記基準レベルとしてもよい。かかるカットオフ値(或いは閾値)は、ALS患者と健常者とを、所定の(例えば、50%以上、60%以上、70%以上、80%以上、90%以上、95%以上、または98%以上の)感度および/または特異性で判別し得る値として設定すればよい。かかるカットオフ値(或いは閾値)は、従来公知の統計学的手法で算出可能であり、健常者群におけるシグナルペプチドの存在量とALS患者群における存在量の分布を比較して任意に決定することができる。
例えば、ROC曲線(Receiver Operatorating Characteristic curve、受信者動作特性曲線)を利用して設定することができる。ROC曲線は、縦軸にALSの検出感度を、横軸に擬陽性率(すなわち"1-特異度")を示すグラフである。上記カットオフ値を設定するために目的のシグナルペプチドの存在量について適宜基準値を設定し、該基準値を連続的に変化させたときの感度と擬陽性率の変化をプロットすることによって、ROC曲線を得ることができる。そして、得られたROC曲線に基づいて、所望の感度および特異度を期待できる値をカットオフ値として設定すればよい。
ここで、「感度」とは、ALS患者群において、シグナルペプチドの存在量を所定の値(上記基準値)に設定したときに該ALS患者群が陽性と判断される確率(真陽性率)をいい、上記「特異度」とは、健常者群において、シグナルペプチドの存在量を所定の値(上記基準値)に設定したときに該健常者群が陰性と判断される確率(真陰性率)をいう。
或いはまた、健常者群或いはALS患者群におけるシグナルペプチドの存在量の5パーセンタイル値(好ましくは1パーセンタイル値)あるいは95パーセンタイル値(99パーセンタイル値)をカットオフ値に設定してもよい。
例えば、ROC曲線(Receiver Operatorating Characteristic curve、受信者動作特性曲線)を利用して設定することができる。ROC曲線は、縦軸にALSの検出感度を、横軸に擬陽性率(すなわち"1-特異度")を示すグラフである。上記カットオフ値を設定するために目的のシグナルペプチドの存在量について適宜基準値を設定し、該基準値を連続的に変化させたときの感度と擬陽性率の変化をプロットすることによって、ROC曲線を得ることができる。そして、得られたROC曲線に基づいて、所望の感度および特異度を期待できる値をカットオフ値として設定すればよい。
ここで、「感度」とは、ALS患者群において、シグナルペプチドの存在量を所定の値(上記基準値)に設定したときに該ALS患者群が陽性と判断される確率(真陽性率)をいい、上記「特異度」とは、健常者群において、シグナルペプチドの存在量を所定の値(上記基準値)に設定したときに該健常者群が陰性と判断される確率(真陰性率)をいう。
或いはまた、健常者群或いはALS患者群におけるシグナルペプチドの存在量の5パーセンタイル値(好ましくは1パーセンタイル値)あるいは95パーセンタイル値(99パーセンタイル値)をカットオフ値に設定してもよい。
ここで開示されるALSの検出を補助する方法では、被検体由来の体液について、少なくとも1種のALS関連シグナルペプチドの存在の有無或いはその存在量の程度を検査することで、該被検体がALSに罹患もしくは発症していることに関連する情報(典型的には、被検体がALSに罹患若しくは発症していることを示唆する情報、例えば被検体がALSに罹患もしくは発症している可能性に関する情報)を入手することができる。かかる方法により得られる情報の信頼性(典型的には精度)を向上する観点からは、2種または3種以上、より好ましくは10種以上、さらに好ましくは20種以上)のALS関連シグナルペプチドについて検査することが好ましい。また、複数のALS関連シグナルペプチドについて検査する場合は、これらALS関連シグナルペプチドの分子量は相互に3以上(より好ましくは5以上)異なることが好ましい。
ここで開示されるALSの検出を補助する方法では、上記検査されたALS関連シグナルペプチドのうちの少なくとも1種について、その検査結果(即ち、該ALS関連シグナルペプチドが被検体由来の体液中に存在するか否か、或いは被検体由来の体液中における該シグナルぺプチドの存在量)が、該ALS関連シグナルペプチドの基準レベルと異なる場合に、被検体がALSに罹患もしくは発症していることに関連する(被検体がALSに罹患もしくは発症していることを示唆する)。
即ち、ここで開示されるALSの検出を補助する方法の好適な一態様では、上記被検体由来の体液を検査した結果(即ち、被検体由来の体液中に、ALS関連シグナルペプチドが1種または2種以上存在するか否か、或いは、該ALS関連シグナルペプチドが存在する場合にはその存在量の程度)を、対応するALS関連シグナルペプチドの基準レベルと比較することをさらに含む。
即ち、ここで開示されるALSの検出を補助する方法の好適な一態様では、上記被検体由来の体液を検査した結果(即ち、被検体由来の体液中に、ALS関連シグナルペプチドが1種または2種以上存在するか否か、或いは、該ALS関連シグナルペプチドが存在する場合にはその存在量の程度)を、対応するALS関連シグナルペプチドの基準レベルと比較することをさらに含む。
ここで開示するALSの検出を補助する方法では、上記被検体由来の体液を検査した結果を対応するALS関連シグナルペプチドの基準レベルと比較した場合に、該被検体由来の体液中における上記ALS関連シグナルペプチドの存在量の程度(或いは存在の有無)が上記基準レベルと異なる頻度が高いほど、該被検体がALSに罹患もしくは発症している可能性(典型的には該可能性の増加)を高い信頼性(精度)で示す。
即ち、被検体がALSに罹患もしくは発症している可能性(典型的には該可能性の増加)を示す信頼性の高い(精度の高い)情報を入手する観点からは、検査されたALS関連シグナルペプチドのうちの60%以上(好ましくは70%以上、より好ましくは80%以上、さらに好ましくは95%以上)が、該シグナルペプチドの基準レベルと異なることを確認することが好ましい。
即ち、被検体がALSに罹患もしくは発症している可能性(典型的には該可能性の増加)を示す信頼性の高い(精度の高い)情報を入手する観点からは、検査されたALS関連シグナルペプチドのうちの60%以上(好ましくは70%以上、より好ましくは80%以上、さらに好ましくは95%以上)が、該シグナルペプチドの基準レベルと異なることを確認することが好ましい。
換言すると、ここで開示するALSの検出を補助する方法では、上記被検体由来の体液を検査した結果を対応するALS関連シグナルペプチドの基準レベルと比較した場合に、該被検体由来の体液中における上記ALS関連シグナルペプチドの存在量の程度(或いは存在の有無)が上記基準レベルと異なる頻度が低いほど、該被検体がALSに罹患もしくは発症していない可能性(典型的には、被検体がALSに罹患若しくは発症している可能性の減少)を高い信頼性(精度)で示す。
即ち、被検体がALSに罹患もしくは発症していない可能性(典型的には、被検体がALSに罹患若しくは発症している可能性の減少)を示す信頼性の高い(精度の高い)情報を入手する観点からは、検査されたALS関連シグナルペプチドのうちの60%以上(好ましくは70%以上、より好ましくは80%以上、さらに好ましくは95%以上)が、該シグナルペプチドの基準レベル内であることを確認することが好ましい。
即ち、被検体がALSに罹患もしくは発症していない可能性(典型的には、被検体がALSに罹患若しくは発症している可能性の減少)を示す信頼性の高い(精度の高い)情報を入手する観点からは、検査されたALS関連シグナルペプチドのうちの60%以上(好ましくは70%以上、より好ましくは80%以上、さらに好ましくは95%以上)が、該シグナルペプチドの基準レベル内であることを確認することが好ましい。
ここで開示されるALSの検出を補助する方法の好適な一態様では、ALS関連シグナルペプチドとして、分子量が、1502.40±2, 1521.93±2, 1629.15±2, 1682.54±2, 1691.75±2, 1705.53±2, 1821.71±2, 1836.18±2, 1948.39±2, 2011.18±2, 2092.80±2, 2099.42±2, 2177.51±2, 2179.25±2, 2186.28±2, 2211.58±2, 2226.96±2, 2254.83±2, 2278.67±2, 2290.85±2, 2292.35±2, 2502.64±2, 2640.51±2, 2698.27±2、または、3330.34±2であるALS関連シグナルペプチドのうちのいずれかを少なくとも検査する。より好ましくは、ALS関連シグナルペプチドとして、配列番号1~180に示すアミノ酸配列からなるALS関連シグナルペプチドのうちのいずれかを少なくとも検査する。換言すると、ここで開示されるALSの検出を補助する方法における検査対象の好適なALS関連シグナルペプチドは、1629.17±2, 1767.38±2, 1900.43±2, 1933.29±2, 1966.96±2, 1996.12±2, 2187.30±2, 2196.08±2, 2196.64±2, または、2240.20±2であるALS関連シグナルペプチドのうちのいずれか(好ましくは、配列番号1~180に示すアミノ酸配列からなるALS関連シグナルペプチドのうちのいずれか)を少なくとも含む。
かかるALS関連シグナルペプチドは、ALS患者由来の体液中の該シグナルペプチドの存在の有無或いはその存在量の程度が、上記基準レベルと比較して特に顕著に異なることが本発明者らによって確認されたALS関連シグナルぺプチドである。従って、被検体由来の体液について、かかるALS関連シグナルペプチドのうちの少なくとも1種(好ましくは2種または3種以上、より好ましくは5種以上、さらに好ましくは10種以上)が存在するか否か、或いは存在する場合には存在量を検査することで、ここで開示されるALSの検出を補助する方法で得られる情報(即ち、被検体がALSに罹患もしくは発症していることに関連する情報、典型的には、被検体がALSに罹患若しくは発症していることを示唆する情報、例えば被検体がALSに罹患もしくは発症している可能性に関する情報)の信頼性(典型的には精度)を向上することができる。
かかるALS関連シグナルペプチドは、ALS患者由来の体液中の該シグナルペプチドの存在の有無或いはその存在量の程度が、上記基準レベルと比較して特に顕著に異なることが本発明者らによって確認されたALS関連シグナルぺプチドである。従って、被検体由来の体液について、かかるALS関連シグナルペプチドのうちの少なくとも1種(好ましくは2種または3種以上、より好ましくは5種以上、さらに好ましくは10種以上)が存在するか否か、或いは存在する場合には存在量を検査することで、ここで開示されるALSの検出を補助する方法で得られる情報(即ち、被検体がALSに罹患もしくは発症していることに関連する情報、典型的には、被検体がALSに罹患若しくは発症していることを示唆する情報、例えば被検体がALSに罹患もしくは発症している可能性に関する情報)の信頼性(典型的には精度)を向上することができる。
また、ここで開示されるALSの検出を補助する方法の好適な一態様では、ALS患者と健常検体とを高い感度および/または高い特異性で判別可能なシグナルペプチドの存在量を検査する。例えば、ROC曲線下面積(AUC:area under the curve)を算出し、該AUCが大きいシグナルペプチドの存在量を検査する(即ち、該シグナルペプチドの存在量を上記基準レベルと比較する)ことが好ましい。なお、上記AUCはROC曲線下の面積であり、該AUCが大きい指標ほど高い診断能(予測能)で疾患を検出可能な指標であることが知られている。
ここで開示するALSの検出を補助する方法の好適な一態様では、特定のALS関連シグナルペプチドについて、被検体由来の体液中の該シグナルペプチドの存在量の程度が前記基準レベルと比較して大きいことを確認する。以下、被検体由来の体液中の該シグナルペプチドの存在量の程度が前記基準レベルと比較して大きいことを確認する上記特定のALS関連シグナルペプチドを、「ALSポジティブシグナルペプチド」ともいう。
かかるALSポジティブシグナルペプチドは、典型的に、分子量が、
1405.71±2, 1406.49±2, 1409.40±2, 1410.97±2, 1418.70±2, 1426.68±2, 1437.62±2, 1445.77±2, 1451.61±2, 1456.44±2, 1458.88±2, 1466.24±2, 1468.86±2, 1472.12±2, 1476.87±2, 1482.60±2, 1493.58±2, 1495.42±2, 1496.52±2, 1498.88±2, 1502.40±2, 1505.52±2, 1508.76±2, 1510.50±2, 1516.64±2, 1521.93±2, 1529.32±2, 1530.37±2, 1533.52±2, 1539.36±2, 1544.22±2, 1553.72±2, 1555.72±2, 1560.24±2, 1566.20±2, 1567.20±2, 1575.70±2, 1578.07±2, 1580.91±2, 1589.58±2, 1592.55±2, 1597.25±2, 1608.53±2, 1609.36±2, 1610.62±2, 1616.12±2, 1629.15±2, 1639.39±2, 1640.36±2, 1646.58±2, 1655.72±2, 1657.97±2, 1659.24±2, 1660.46±2, 1662.16±2, 1679.09±2, 1682.54±2, 1683.12±2, 1687.34±2, 1688.14±2, 1691.08±2, 1691.75±2, 1694.76±2, 1695.74±2, 1700.65±2, 1702.19±2, 1708.77±2, 1712.10±2, 1714.63±2, 1715.56±2, 1719.51±2, 1721.61±2, 1726.31±2, 1737.85±2, 1739.71±2, 1743.69±2, 1761.79±2, 1769.93±2, 1774.13±2, 1775.70±2, 1786.39±2, 1788.03±2, 1790.80±2, 1796.23±2, 1797.49±2, 1800.34±2, 1801.79±2, 1804.45±2, 1810.72±2, 1812.3±21, 1813.77±2, 1817.26±2, 1818.66±2, 1819.93±2, 1821.71±2, 1822.73±2, 1829.48±2, 1832.41±2, 1836.18±2, 1837.33±2, 1840.84±2, 1849.81±2, 1854.68±2, 1858.34±2, 1864.19±2, 1866.06±2, 1875.28±2, 1876.50±2, 1878.25±2, 1890.21±2, 1891.32±2, 1893.00±2, 1904.69±2, 1911.46±2, 1913.68±2, 1916.02±2, 1919.35±2, 1927.13±2, 1931.84±2, 1934.86±2, 1936.83±2, 1937.87±2, 1941.22±2, 1944.97±2, 1948.39±2, 1952.47±2, 1957.80±2, 1962.82±2, 1969.82±2, 1972.54±2, 1975.58±2, 1976.51±2, 1977.70±2, 1979.29±2, 1988.46±2, 1991.91±2, 1995.37±2, 2009.91±2, 2011.18±2, 2013.86±2, 2023.97±2, 2027.73±2, 2030.95±2, 2032.69±2, 2039.29±2, 2043.12±2, 2045.68±2, 2051.76±2, 2059.05±2, 2062.98±2, 2066.09±2, 2074.03±2, 2075.32±2, 2079.80±2, 2083.74±2, 2085.85±2, 2089.53±2, 2092.80±2, 2097.03±2, 2099.42±2, 2111.39±2, 2113.10±2, 2115.77±2, 2120.37±2, 2126.55±2, 2137.63±2, 2139.15±2, 2143.42±2, 2146.46±2, 2149.85±2, 2151.02±2, 2160.22±2, 2161.68±2, 2167.09±2, 2168.75±2, 2173.75±2, 2177.51±2, 2179.25±2, 2185.65±2, 2186.28±2, 2190.18±2, 2191.02±2, 2192.84±2, 2196.47±2, 2199.82±2, 2201.22±2, 2204.02±2, 2207.10±2, 2211.58±2, 2216.77±2, 2218.45±2, 2219.30±2, 2220.56±2, 2222.74±2, 2226.96±2, 2228.22±2, 2231.60±2, 2239.71±2, 2244.01±2, 2251.78±2, 2254.83±2, 2256.53±2, 2261.91±2, 2266.45±2, 2268.58±2, 2274.97±2, 2276.04±2, 2278.67±2, 2281.09±2, 2285.01±2, 2289.43±2, 2290.85±2, 2292.35±2, 2295.92±2, 2296.92±2, 2301.71±2, 2302.50±2, 2303.21±2, 2305.43±2, 2307.22±2, 2314.24±2, 2317.68±2, 2325.30±2, 2341.14±2, 2342.87±2, 2344.45±2, 2351.97±2, 2353.99±2, 2355.29±2, 2357.54±2, 2367.75±2, 2375.59±2, 2378.35±2, 2380.39±2, 2393.64±2, 2402.11±2, 2404.01±2, 2406.49±2, 2412.79±2, 2414.25±2, 2415.20±2, 2416.30±2, 2431.13±2, 2434.36±2, 2438.19±2, 2439.22±2, 2444.37±2, 2451.90±2, 2453.96±2, 2455.44±2, 2456.62±2, 2459.43±2, 2462.31±2, 2464.16±2, 2470.97±2, 2478.17±2, 2479.28±2, 2484.18±2, 2500.40±2, 2502.64±2, 2504.73±2, 2507.42±2, 2509.21±2, 2515.26±2, 2517.43±2, 2519.07±2, 2527.31±2, 2531.06±2, 2532.26±2, 2546.08±2, 2554.96±2, 2559.48±2, 2564.01±2, 2571.26±2, 2578.45±2, 2581.25±2, 2583.37±2, 2584.81±2, 2587.01±2, 2588.90±2, 2593.68±2, 2596.11±2, 2603.33±2, 2608.20±2, 2613.31±2, 2614.91±2, 2622.46±2, 2629.26±2, 2633.69±2, 2634.61±2, 2640.51±2, 2641.73±2, 2652.85±2, 2655.08±2, 2665.15±2, 2670.00±2, 2682.80±2, 2696.41±2, 2698.27±2, 2699.82±2, 3302.01±2, 3303.21±2, 3323.89±2, 3330.34±2, 3337.92±2, 3366.84±2, 3370.39±2, 3378.18±2, 3380.43±2、または、3384.77±2で特定されるALS関連シグナルペプチドである。
1405.71±2, 1406.49±2, 1409.40±2, 1410.97±2, 1418.70±2, 1426.68±2, 1437.62±2, 1445.77±2, 1451.61±2, 1456.44±2, 1458.88±2, 1466.24±2, 1468.86±2, 1472.12±2, 1476.87±2, 1482.60±2, 1493.58±2, 1495.42±2, 1496.52±2, 1498.88±2, 1502.40±2, 1505.52±2, 1508.76±2, 1510.50±2, 1516.64±2, 1521.93±2, 1529.32±2, 1530.37±2, 1533.52±2, 1539.36±2, 1544.22±2, 1553.72±2, 1555.72±2, 1560.24±2, 1566.20±2, 1567.20±2, 1575.70±2, 1578.07±2, 1580.91±2, 1589.58±2, 1592.55±2, 1597.25±2, 1608.53±2, 1609.36±2, 1610.62±2, 1616.12±2, 1629.15±2, 1639.39±2, 1640.36±2, 1646.58±2, 1655.72±2, 1657.97±2, 1659.24±2, 1660.46±2, 1662.16±2, 1679.09±2, 1682.54±2, 1683.12±2, 1687.34±2, 1688.14±2, 1691.08±2, 1691.75±2, 1694.76±2, 1695.74±2, 1700.65±2, 1702.19±2, 1708.77±2, 1712.10±2, 1714.63±2, 1715.56±2, 1719.51±2, 1721.61±2, 1726.31±2, 1737.85±2, 1739.71±2, 1743.69±2, 1761.79±2, 1769.93±2, 1774.13±2, 1775.70±2, 1786.39±2, 1788.03±2, 1790.80±2, 1796.23±2, 1797.49±2, 1800.34±2, 1801.79±2, 1804.45±2, 1810.72±2, 1812.3±21, 1813.77±2, 1817.26±2, 1818.66±2, 1819.93±2, 1821.71±2, 1822.73±2, 1829.48±2, 1832.41±2, 1836.18±2, 1837.33±2, 1840.84±2, 1849.81±2, 1854.68±2, 1858.34±2, 1864.19±2, 1866.06±2, 1875.28±2, 1876.50±2, 1878.25±2, 1890.21±2, 1891.32±2, 1893.00±2, 1904.69±2, 1911.46±2, 1913.68±2, 1916.02±2, 1919.35±2, 1927.13±2, 1931.84±2, 1934.86±2, 1936.83±2, 1937.87±2, 1941.22±2, 1944.97±2, 1948.39±2, 1952.47±2, 1957.80±2, 1962.82±2, 1969.82±2, 1972.54±2, 1975.58±2, 1976.51±2, 1977.70±2, 1979.29±2, 1988.46±2, 1991.91±2, 1995.37±2, 2009.91±2, 2011.18±2, 2013.86±2, 2023.97±2, 2027.73±2, 2030.95±2, 2032.69±2, 2039.29±2, 2043.12±2, 2045.68±2, 2051.76±2, 2059.05±2, 2062.98±2, 2066.09±2, 2074.03±2, 2075.32±2, 2079.80±2, 2083.74±2, 2085.85±2, 2089.53±2, 2092.80±2, 2097.03±2, 2099.42±2, 2111.39±2, 2113.10±2, 2115.77±2, 2120.37±2, 2126.55±2, 2137.63±2, 2139.15±2, 2143.42±2, 2146.46±2, 2149.85±2, 2151.02±2, 2160.22±2, 2161.68±2, 2167.09±2, 2168.75±2, 2173.75±2, 2177.51±2, 2179.25±2, 2185.65±2, 2186.28±2, 2190.18±2, 2191.02±2, 2192.84±2, 2196.47±2, 2199.82±2, 2201.22±2, 2204.02±2, 2207.10±2, 2211.58±2, 2216.77±2, 2218.45±2, 2219.30±2, 2220.56±2, 2222.74±2, 2226.96±2, 2228.22±2, 2231.60±2, 2239.71±2, 2244.01±2, 2251.78±2, 2254.83±2, 2256.53±2, 2261.91±2, 2266.45±2, 2268.58±2, 2274.97±2, 2276.04±2, 2278.67±2, 2281.09±2, 2285.01±2, 2289.43±2, 2290.85±2, 2292.35±2, 2295.92±2, 2296.92±2, 2301.71±2, 2302.50±2, 2303.21±2, 2305.43±2, 2307.22±2, 2314.24±2, 2317.68±2, 2325.30±2, 2341.14±2, 2342.87±2, 2344.45±2, 2351.97±2, 2353.99±2, 2355.29±2, 2357.54±2, 2367.75±2, 2375.59±2, 2378.35±2, 2380.39±2, 2393.64±2, 2402.11±2, 2404.01±2, 2406.49±2, 2412.79±2, 2414.25±2, 2415.20±2, 2416.30±2, 2431.13±2, 2434.36±2, 2438.19±2, 2439.22±2, 2444.37±2, 2451.90±2, 2453.96±2, 2455.44±2, 2456.62±2, 2459.43±2, 2462.31±2, 2464.16±2, 2470.97±2, 2478.17±2, 2479.28±2, 2484.18±2, 2500.40±2, 2502.64±2, 2504.73±2, 2507.42±2, 2509.21±2, 2515.26±2, 2517.43±2, 2519.07±2, 2527.31±2, 2531.06±2, 2532.26±2, 2546.08±2, 2554.96±2, 2559.48±2, 2564.01±2, 2571.26±2, 2578.45±2, 2581.25±2, 2583.37±2, 2584.81±2, 2587.01±2, 2588.90±2, 2593.68±2, 2596.11±2, 2603.33±2, 2608.20±2, 2613.31±2, 2614.91±2, 2622.46±2, 2629.26±2, 2633.69±2, 2634.61±2, 2640.51±2, 2641.73±2, 2652.85±2, 2655.08±2, 2665.15±2, 2670.00±2, 2682.80±2, 2696.41±2, 2698.27±2, 2699.82±2, 3302.01±2, 3303.21±2, 3323.89±2, 3330.34±2, 3337.92±2, 3366.84±2, 3370.39±2, 3378.18±2, 3380.43±2、または、3384.77±2で特定されるALS関連シグナルペプチドである。
好ましい一態様では、上記ALSポジティブシグナルペプチドは、配列番号1~16, 21~27, 29~46, 53~67, 72~87, 94~108, 118~172, 179~243, 248~295, 297~304, 307~317, 320~333, 337~354, 359~422, 424, 425, 430~585, 587~593, 595~605, 607~693, 696, 699~777, 786~902, 906~914, 918~945, 947~983, 990~1029, 1042~1201, 1208~1217, 1230~1566, 1569~1571, 1574~1580に示すアミノ酸配列のうちの何れかからなる。
かかるALSポジティブシグナルペプチドは、上記ALS関連シグナルペプチドのうちの一部であって、ALS患者由来の体液中における存在量の程度が、上記基準レベルと比較して大きいことが本発明者らによって確認されたシグナルペプチドである。即ち、被検体由来の体液において、ALSポジティブシグナルペプチドのいずれかの存在量の程度が基準レベルと比較して大きいことは、該被検体がALSに罹患もしくは発症している可能性が高いことを好適に反映する。
また、ここで開示するALSの検出を補助する方法の好適な一態様では、特定のALS関連シグナルペプチドについて、被検体由来の体液中の該シグナルペプチドの存在量の程度が前記基準レベルと比較して小さいことを確認する。以下、被検体由来の体液中の該シグナルペプチドの存在量の程度が前記基準レベルと比較して小さいことを確認する上記特定のALS関連シグナルペプチドを、「ALSネガティブシグナルペプチド」ともいう。
かかるALSネガティブシグナルペプチドは、典型的に、分子量が、
1497.16±2, 1567.74±2, 1705.53±2, 1819.34±2, 1831.81±2, 1935.52±2, 2055.50±2, 2065.57±2, 2084.36±2, 2092.25±2, 2140.48±2, 2167.78±2, 2184.93±2, 2314.81±2, 2327.73±2, 2697.73±2、または、3309.84±2で特定されるALS関連シグナルペプチドである。
1497.16±2, 1567.74±2, 1705.53±2, 1819.34±2, 1831.81±2, 1935.52±2, 2055.50±2, 2065.57±2, 2084.36±2, 2092.25±2, 2140.48±2, 2167.78±2, 2184.93±2, 2314.81±2, 2327.73±2, 2697.73±2、または、3309.84±2で特定されるALS関連シグナルペプチドである。
好ましい一態様では、上記ALSネガティブシグナルペプチドは、配列番号68, 69, 296, 357, 429, 903~905, 1223~1229, 1572, 1573に示すアミノ酸配列のうちの何れかからなる。
かかるALSネガティブシグナルペプチドは、上記ALS関連シグナルペプチドの一部であって、ALS患者由来の体液中における存在量の程度が、上記基準レベルと比較して小さいことが本発明者らによって確認されたシグナルペプチドである。即ち、被検体由来の体液において、ALSネガティブシグナルペプチドのいずれかの存在量の程度が基準レベルと比較して小さいことは、該被検体がALSに罹患もしくは発症している可能性が高いことを好適に反映する。
上記被検体がALSに罹患もしくは発症している可能が高いことを確認する場合は、被検体由来の体液について、上記ALSポジティブシグナルペプチドの存在量の程度(或いは該ALSポジティブシグナルペプチドが被検体由来の体液中に存在するか否か)を検査することが好ましい。
一方で、上記被検体がALSに罹患もしくは発症していない可能性が高いことを確認する場合には、被検体由来の体液について、上記ALSネガティブシグナルペプチドの存在量の程度(或いは該ALSネガティブシグナルペプチドが被検体由来の体液中に存在するか否か)を検査することが好ましい。
一方で、上記被検体がALSに罹患もしくは発症していない可能性が高いことを確認する場合には、被検体由来の体液について、上記ALSネガティブシグナルペプチドの存在量の程度(或いは該ALSネガティブシグナルペプチドが被検体由来の体液中に存在するか否か)を検査することが好ましい。
ここで第一の態様或いは第二の態様として開示するALSの検出を補助する方法において、上記体液は、疾患の検出(診断)を補助するインビトロの検査において検査対象物として用いられ得るものであれば特に制限はなく、予め被検体から採取した被検体由来の生体試料、例えば、脳脊髄液、血液、血漿、血清、リンパ液、腹水、唾液、滑液、精液、涙液、汗、尿、等をそのまま若しくは適宜希釈等して調製したものを使用することができる。特に、脳脊髄液、血液、血清、または血漿の使用が好ましく、特に脳脊髄液の使用が好ましい。
或いはまた、上記体液は、被検体から採取した生体試料から予めシグナルペプチドを単離する(該シグナルペプチドの存在量を増大させる)前処理が施されたものであってもよい。
或いはまた、上記体液は、被検体から採取した生体試料から予めシグナルペプチドを単離する(該シグナルペプチドの存在量を増大させる)前処理が施されたものであってもよい。
<バイオマーカー>
ALS患者由来の体液中の存在量の程度(或いは存在の有無)と健常者由来の体液中の存在量の程度(或いは存在の有無)とが有意に異なるシグナルペプチドであって、該シグナルペプチドの存在量の程度を指標にすることでALSの検出(診断)を可能にするシグナルペプチドは、ALSの診断に用いられるバイオマーカー(以下、ALSバイオマーカーともいう)として利用することができる。
ここで、本明細書において「有意に異なる」ことは、統計学的有意差検定における有意水準を5%として評価し得る。即ち、統計学的有意差検定によって得られるp値がp<0.05である場合、有意に異なると判断することができる。なお、上記統計学的有意差検定としては、t検定(例えばStudent's t-test)やU検定(Mann-Whitney's U test)といった従来公知の検定方法を特に制限なく適用し得る。
ALS患者由来の体液中の存在量の程度(或いは存在の有無)と健常者由来の体液中の存在量の程度(或いは存在の有無)とが有意に異なるシグナルペプチドであって、該シグナルペプチドの存在量の程度を指標にすることでALSの検出(診断)を可能にするシグナルペプチドは、ALSの診断に用いられるバイオマーカー(以下、ALSバイオマーカーともいう)として利用することができる。
ここで、本明細書において「有意に異なる」ことは、統計学的有意差検定における有意水準を5%として評価し得る。即ち、統計学的有意差検定によって得られるp値がp<0.05である場合、有意に異なると判断することができる。なお、上記統計学的有意差検定としては、t検定(例えばStudent's t-test)やU検定(Mann-Whitney's U test)といった従来公知の検定方法を特に制限なく適用し得る。
上記ALSの検出を補助する方法の第二の態様においてALS関連シグナルペプチド(上記ALSポジティブシグナルペプチドおよび上記ALSネガティブシグナルペプチドを含む)として示されるシグナルペプチドは、ALS患者由来の体液中の存在量の程度と健常者由来の体液中の存在量の程度とをU検定(Mann-Whitney's U test)により比較した際のp値がいずれもP<0.05であることが本発明者らによって確認されたシグナルペプチドである。従って、これらALS関連シグナルペプチドは、ALSバイオマーカーとして好適に利用可能である。
即ち、本発明によって提供されるALSバイオマーカーの典型例は、配列番号1~1580に示すアミノ酸配列のうちの何れかからなるシグナルペプチドである。
即ち、本発明によって提供されるALSバイオマーカーの典型例は、配列番号1~1580に示すアミノ酸配列のうちの何れかからなるシグナルペプチドである。
なかでも、上記ALS関連シグナルペプチドのうちで、分子量が1502.40±2, 1521.93±2, 1629.15±2, 1682.54±2, 1691.75±2, 1705.53±2, 1821.71±2, 1836.18±2, 1948.39±2, 2011.18±2, 2092.80±2, 2099.42±2, 2177.51±2, 2179.25±2, 2186.28±2, 2211.58±2, 2226.96±2, 2254.83±2, 2278.67±2, 2290.85±2, 2292.35±2, 2502.64±2, 2640.51±2, 2698.27±2、または、3330.34±2であるシグナルペプチド(典型的には、配列番号1~180に示すアミノ酸配列から成るシグナルペプチド)は、ALS患者由来の体液中の存在量の程度と健常者由来の体液中の存在量の程度とをU検定(Mann-Whitney's U test)により比較した際のp値がいずれもP<0.01であることが本発明者らによって確認されたシグナルペプチドである。従って、これらのALS関連シグナルペプチドは、ALSバイオマーカーとして特に好適に利用可能である。
或いはまた、上記ALSポジティブシグナルペプチド(典型的には、配列番号1~16, 21~27, 29~46, 53~67, 72~87, 94~108, 118~172, 179~243, 248~295, 297~304, 307~317, 320~333, 337~354, 359~422, 424, 425, 430~585, 587~593, 595~605, 607~693, 696, 699~777, 786~902, 906~914, 918~945, 947~983, 990~1029, 1042~1201, 1208~1217, 1230~1566, 1569~1571, 1574~1580に示すアミノ酸配列のいずれかから成るシグナルペプチド)は、該シグナルペプチドの存在量の増大がALSに罹患もしくは発症していることに関連する(典型的には、ALSに罹患もしくは発症していることを示唆する、例えばALSに罹患若しくは発症している可能性の増大を示す)バイオマーカー(以下、ポジティブバイオマーカーともいう)として好適に利用し得る。
また、上記ALSネガティブシグナルペプチド(典型的には、配列番号68, 69, 296, 357, 429, 903~905, 1223~1229, 1572, 1573に示すアミノ酸配列のいずれかから成るシグナルペプチド)は、該シグナルペプチドの存在量の減少がALSに罹患もしくは発症していることに関連する(典型的には、ALSに罹患もしくは発症していることを示唆する、例えばALSに罹患若しくは発症している可能性の増大を示す)バイオマーカー(以下、ネガティブバイオマーカーともいう)として好適に利用し得る。
また、上記ALSネガティブシグナルペプチド(典型的には、配列番号68, 69, 296, 357, 429, 903~905, 1223~1229, 1572, 1573に示すアミノ酸配列のいずれかから成るシグナルペプチド)は、該シグナルペプチドの存在量の減少がALSに罹患もしくは発症していることに関連する(典型的には、ALSに罹患もしくは発症していることを示唆する、例えばALSに罹患若しくは発症している可能性の増大を示す)バイオマーカー(以下、ネガティブバイオマーカーともいう)として好適に利用し得る。
また、本発明によると、上記ALS診断用バイオマーカーを構成するアミノ酸配列のうちのいずれかからなる人為的に合成されたペプチド(以下、合成マーカーペプチドともいう)が提供される。
かかる合成マーカーペプチドは、ALSの検出を補助する方法において、比較対照(典型的には、陽性対照:ポジティブコントロール)、或いは、標準物質(典型的には、内部標準物質、または、外部標準物質)として好適に利用することができる。或いはまた、かかる合成マーカーペプチドは、ALSの検出を補助する方法において使用する機器を校正する目的にも好適に使用し得る。
かかる合成マーカーペプチドは、ALSの検出を補助する方法において、比較対照(典型的には、陽性対照:ポジティブコントロール)、或いは、標準物質(典型的には、内部標準物質、または、外部標準物質)として好適に利用することができる。或いはまた、かかる合成マーカーペプチドは、ALSの検出を補助する方法において使用する機器を校正する目的にも好適に使用し得る。
即ち、本発明によって提供される合成マーカーペプチドの典型例は、配列番号1~1580に示すアミノ酸配列のうちの何れかからなる人為的に合成されたペプチドである。
なお、以下、上記ポジティブバイオマーカーを構成するアミノ酸配列のうちのいずれかからなる合成マーカーペプチドを「合成陽性マーカーペプチド」ともいう。また、上記ネガティブバイオマーカーを構成するアミノ酸配列のうちのいずれかからなる合成マーカーペプチドを「合成陰性マーカーペプチド」ともいうこととする。
なお、以下、上記ポジティブバイオマーカーを構成するアミノ酸配列のうちのいずれかからなる合成マーカーペプチドを「合成陽性マーカーペプチド」ともいう。また、上記ネガティブバイオマーカーを構成するアミノ酸配列のうちのいずれかからなる合成マーカーペプチドを「合成陰性マーカーペプチド」ともいうこととする。
或いはまた、本発明によると、ここで開示される合成マーカーペプチドのうちから選択される2種または3種以上(好ましくは5種以上、より好ましくは10種以上、さらに好ましくは20種以上)の合成マーカーペプチドの組み合わせからなるペプチドセットが提供される。合成マーカーペプチドの組み合わせは、ALSの検出を補助する方法において着目するALSバイオマーカーに対応して適宜選択すればよい。
かかるペプチドセットは、ALSの検出を補助する方法にとして、同時に複数のシグナルペプチドに着目する場合(或いは、シグナルペプチドのプロファイルについて、同時に複数の分子量に着目する場合)に好適に利用することができる。
かかるペプチドセットは、ALSの検出を補助する方法にとして、同時に複数のシグナルペプチドに着目する場合(或いは、シグナルペプチドのプロファイルについて、同時に複数の分子量に着目する場合)に好適に利用することができる。
ここで開示されるペプチドセットは、例えば、上記合成陽性マーカーペプチドのうちから選択されるペプチドセット、或いは、上記合成陰性マーカーペプチドのうちから選択されるペプチドセットであり得る。
また、上記ペプチドセットは、分子量が1502.40±2, 1521.93±2, 1629.15±2, 1682.54±2, 1691.75±2, 1705.53±2, 1821.71±2, 1836.18±2, 1948.39±2, 2011.18±2, 2092.80±2, 2099.42±2, 2177.51±2, 2179.25±2, 2186.28±2, 2211.58±2, 2226.96±2, 2254.83±2, 2278.67±2, 2290.85±2, 2292.35±2, 2502.64±2, 2640.51±2, 2698.27±2、または、3330.34±2であるALS関連シグナルペプチド(即ちALSバイオマーカー)に対応する合成マーカーペプチド(典型的には、配列番号1~180に示すアミノ酸配列の何れかからなる合成マーカーペプチド)から選択されるペプチドセットであり得る。
或いはまた、上記ペプチドセットは、分子量が特定の範囲内のALS関連シグナルペプチド(即ちALSバイオマーカー)に対応する合成マーカーペプチドから選択されるペプチドセットであり得る。例えば、分子量が1000以上2000未満、2000以上2500未満、2500以上3000未満、または3000以上3500未満のALS関連シグナルペプチド(即ちALSバイオマーカー)に対応する合成マーカーペプチドから選択されるペプチドセットであり得る。
また、上記ペプチドセットは、分子量が1502.40±2, 1521.93±2, 1629.15±2, 1682.54±2, 1691.75±2, 1705.53±2, 1821.71±2, 1836.18±2, 1948.39±2, 2011.18±2, 2092.80±2, 2099.42±2, 2177.51±2, 2179.25±2, 2186.28±2, 2211.58±2, 2226.96±2, 2254.83±2, 2278.67±2, 2290.85±2, 2292.35±2, 2502.64±2, 2640.51±2, 2698.27±2、または、3330.34±2であるALS関連シグナルペプチド(即ちALSバイオマーカー)に対応する合成マーカーペプチド(典型的には、配列番号1~180に示すアミノ酸配列の何れかからなる合成マーカーペプチド)から選択されるペプチドセットであり得る。
或いはまた、上記ペプチドセットは、分子量が特定の範囲内のALS関連シグナルペプチド(即ちALSバイオマーカー)に対応する合成マーカーペプチドから選択されるペプチドセットであり得る。例えば、分子量が1000以上2000未満、2000以上2500未満、2500以上3000未満、または3000以上3500未満のALS関連シグナルペプチド(即ちALSバイオマーカー)に対応する合成マーカーペプチドから選択されるペプチドセットであり得る。
ここで開示される合成マーカーペプチドは、一般的な化学合成法に準じて容易に製造することができる。例えば、従来公知の固相合成法又は液相合成法のいずれを採用してもよい。アミノ基の保護基としてBoc(t-butyloxycarbonyl)或いはFmoc(9-fluorenylmethyloxycarbonyl)を適用した固相合成法が好適である。
ここで開示される合成マーカーペプチドは、市販のペプチド合成機(例えば、Intavis AG社、Protein Technologies社等から入手可能である。)を用いた固相合成法により、所望するアミノ酸配列、修飾(C末端アミド化等)部分を有するペプチド鎖を合成することができる。
ここで開示される合成マーカーペプチドは、市販のペプチド合成機(例えば、Intavis AG社、Protein Technologies社等から入手可能である。)を用いた固相合成法により、所望するアミノ酸配列、修飾(C末端アミド化等)部分を有するペプチド鎖を合成することができる。
或いは、遺伝子工学的手法に基づいて合成マーカーペプチドを生合成してもよい。すなわち、所望する合成マーカーペプチドのアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列(ATG開始コドンを含む。)のポリヌクレオチド(典型的にはDNA)を合成する。そして、合成したポリヌクレオチド(DNA)と該アミノ酸配列を宿主細胞内で発現させるための種々の調節エレメント(プロモーター、リボゾーム結合部位、ターミネーター、エンハンサー、発現レベルを制御する種々のシスエレメントを包含する。)とから成る発現用遺伝子構築物を有する組換えベクターを、宿主細胞に応じて構築する。
一般的な技法によって、この組換えベクターを所定の宿主細胞(例えばイースト、昆虫細胞、植物細胞)に導入し、所定の条件で当該宿主細胞又は該細胞を含む組織や個体を培養する。このことにより、目的とするペプチドを細胞内で発現、生産させることができる。そして、宿主細胞(分泌された場合は培地中)からペプチドを単離し、必要に応じてリフォールディング、精製等を行うことによって、目的の合成マーカーペプチドを得ることができる。
なお、組換えベクターの構築方法及び構築した組換えベクターの宿主細胞への導入方法等は、当該分野で従来から行われている方法をそのまま採用すればよく、かかる方法自体は特に本発明を特徴付けるものではないため、詳細な説明は省略する。
一般的な技法によって、この組換えベクターを所定の宿主細胞(例えばイースト、昆虫細胞、植物細胞)に導入し、所定の条件で当該宿主細胞又は該細胞を含む組織や個体を培養する。このことにより、目的とするペプチドを細胞内で発現、生産させることができる。そして、宿主細胞(分泌された場合は培地中)からペプチドを単離し、必要に応じてリフォールディング、精製等を行うことによって、目的の合成マーカーペプチドを得ることができる。
なお、組換えベクターの構築方法及び構築した組換えベクターの宿主細胞への導入方法等は、当該分野で従来から行われている方法をそのまま採用すればよく、かかる方法自体は特に本発明を特徴付けるものではないため、詳細な説明は省略する。
例えば、宿主細胞内で効率よく大量に生産させるために融合タンパク質発現システムを利用することができる。すなわち、目的の合成マーカーペプチドのアミノ酸配列をコードする遺伝子(DNA)を化学合成し、該合成遺伝子を適当な融合タンパク質発現用ベクター(例えばノバジェン社から提供されているpETシリーズ及びアマシャムバイオサイエンス社から提供されているpGEXシリーズのようなGST(Glutathione S-transferase)融合タンパク質発現用ベクター)の好適なサイトに導入する。そして該ベクターにより宿主細胞(典型的には大腸菌)を形質転換する。得られた形質転換体を培養して目的の融合タンパク質を調製する。次いで、該タンパク質を抽出し、精製する。次いで、得られた精製融合タンパク質を所定の酵素(プロテアーゼ)で切断し、遊離した目的のペプチド断片(設計した合成マーカーペプチド)をアフィニティクロマトグラフィー等の方法によって回収する。また、必要に応じて適当な方法によってリフォールディングする。このような従来公知の融合タンパク質発現システム(例えばアマシャムバイオサイエンス社により提供されるGST/Hisシステムを利用し得る。)を用いることによって、ここで開示される合成マーカーペプチドを製造することができる。
或いは、無細胞タンパク質合成システム用の鋳型DNA(即ち合成マーカーペプチドのアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含む合成遺伝子断片)を構築し、ペプチド合成に必要な種々の化合物(ATP、RNAポリメラーゼ、アミノ酸類等)を使用し、いわゆる無細胞タンパク質合成システムを採用して目的のポリペプチドをインビトロ合成することができる。無細胞タンパク質合成システムについては、例えばShimizuらの論文(Shimizu et al., Nature Biotechnology, 19, 751-755(2001))、Madinらの論文(Madin et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 97(2), 559-564(2000))が参考になる。これら論文に記載された技術に基づいて、本願出願時点において既に多くの企業がポリペプチドの受託生産を行っており、また、無細胞タンパク質合成用キット(例えば、日本の(株)セルフリーサイエンスから入手可能なPROTEIOS(商標)Wheat germ cell-free protein synthesis kit)が市販されている。
或いは、無細胞タンパク質合成システム用の鋳型DNA(即ち合成マーカーペプチドのアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含む合成遺伝子断片)を構築し、ペプチド合成に必要な種々の化合物(ATP、RNAポリメラーゼ、アミノ酸類等)を使用し、いわゆる無細胞タンパク質合成システムを採用して目的のポリペプチドをインビトロ合成することができる。無細胞タンパク質合成システムについては、例えばShimizuらの論文(Shimizu et al., Nature Biotechnology, 19, 751-755(2001))、Madinらの論文(Madin et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 97(2), 559-564(2000))が参考になる。これら論文に記載された技術に基づいて、本願出願時点において既に多くの企業がポリペプチドの受託生産を行っており、また、無細胞タンパク質合成用キット(例えば、日本の(株)セルフリーサイエンスから入手可能なPROTEIOS(商標)Wheat germ cell-free protein synthesis kit)が市販されている。
ここで開示される合成マーカーペプチドをコードするヌクレオチド配列及び/又は該配列と相補的なヌクレオチド配列を含む一本鎖又は二本鎖のポリヌクレオチドは、従来公知の方法によって容易に製造(合成)することができる。すなわち、設計したアミノ酸配列を構成する各アミノ酸残基に対応するコドンを選択することによって、合成マーカーペプチドのアミノ酸配列に対応するヌクレオチド配列が容易に決定され、提供される。そして、ひとたびヌクレオチド配列が決定されれば、DNA合成機等を利用して、所望するヌクレオチド配列に対応するポリヌクレオチド(一本鎖)を容易に得ることができる。さらに得られた一本鎖DNAを鋳型として用い、種々の酵素的合成手段(典型的にはPCR)を採用して目的の二本鎖DNAを得ることができる。また、ポリヌクレオチドは、DNAの態様であってもよく、RNA(mRNA等)の態様であってもよい。DNAは、二本鎖又は一本鎖で提供され得る。一本鎖で提供される場合は、コード鎖(センス鎖)であってもよく、それと相補的な配列の非コード鎖(アンチセンス鎖)であってもよい。
こうして得られるポリヌクレオチドは、上述のように、種々の宿主細胞中で又は無細胞タンパク質合成システムにて、合成マーカーペプチド生産のための組換え遺伝子(発現カセット)を構築するための材料として使用することができる。
こうして得られるポリヌクレオチドは、上述のように、種々の宿主細胞中で又は無細胞タンパク質合成システムにて、合成マーカーペプチド生産のための組換え遺伝子(発現カセット)を構築するための材料として使用することができる。
ここで開示される合成マーカーペプチドは、塩の態様であってもよい。例えば、常法に従って通常使用されている無機酸又は有機酸を付加反応させることにより得られ得る該ペプチドの酸付加塩を使用することができる。或いは、他の塩(例えば金属塩)であってもよい。従って、本明細書及び特許請求の範囲に記載の「ペプチド」は、かかる塩態様のものを包含する。
<ALS検査組成物>
本発明によって提供されるALS検査組成物は、上記合成マーカーペプチドの少なくとも1つを含む。かかる組成物は、例えば、ALSの検出を補助する方法において、比較対照(典型的には、陽性対照:ポジティブコントロール)或いは、標準物質として利用することができる。換言すると、本発明によって、ALSの検出を補助する方法における比較対照用組成物(典型的には、ポジティブコントロール用組成物)或いは、標準物質用組成物が提供される。
なお、ここで開示されるALS検査組成物は、2つまたは3つ以上の上記合成マーカーペプチドを含むものであり得る。即ち、かかるALS検査組成物は、上述した合成マーカーペプチドセットを含むものであり得る。
本発明によって提供されるALS検査組成物は、上記合成マーカーペプチドの少なくとも1つを含む。かかる組成物は、例えば、ALSの検出を補助する方法において、比較対照(典型的には、陽性対照:ポジティブコントロール)或いは、標準物質として利用することができる。換言すると、本発明によって、ALSの検出を補助する方法における比較対照用組成物(典型的には、ポジティブコントロール用組成物)或いは、標準物質用組成物が提供される。
なお、ここで開示されるALS検査組成物は、2つまたは3つ以上の上記合成マーカーペプチドを含むものであり得る。即ち、かかるALS検査組成物は、上述した合成マーカーペプチドセットを含むものであり得る。
ここで開示されるALS検査組成物は、従来の体外診断薬(体外検査薬)やペプチド製剤と同様、主成分たる合成マーカーペプチドの他に、種々の成分を含みうる。通常、合成マーカーペプチドの他、該ペプチドを安定して(典型的には変性、または分解されずに)保持し得る少なくとも1種の副成分を含みうる。かかる副成分は、ALS検査組成物の用途や態様(使用態様)に応じて適宜異なり得るが、薬学(医薬)上許容され得る種々の担体(キャリア)であり得る。従来の体外診断薬(体外検査薬)において希釈剤、賦形剤等として一般的に使用される担体が好ましい。
例えば、生理食塩水や薬学的に許容できる各種の緩衝液を溶媒、即ちキャリア(担体)として含ませることができる。典型的には、水、生理学的緩衝液(例えばリン酸緩衝生理食塩水(PBS))、種々の有機溶媒が挙げられる。適当な濃度のアルコール(エタノール等)水溶液、グリセロール、オリーブ油のような不乾性油であり得る。或いはリポソームであってもよい。或いはまた各種糖質(デキストリン、乳糖等)のような賦形剤を含ませることができる。その他、従来の診断薬剤やペプチド製剤と同様、防腐剤、安定化剤、pH調整剤等の薬剤、或いは、々の充填剤、増量剤、結合剤、付湿剤、表面活性剤、色素、香料等を添加してもよい。
ALS検査組成物の態様に関して特に限定はない。例えば、典型的な態様として、液剤、懸濁剤、乳剤、エアロゾル、泡沫剤、顆粒剤、粉末剤、錠剤、カプセル、軟膏、水性ジェル剤等が挙げられる。また、使用直前に生理食塩水又は適当な緩衝液(例えばPBS)等に溶解して薬液を調製するための凍結乾燥物、造粒物とすることもできる。
なお、合成マーカーペプチド(主成分)及び種々の担体(副成分)を材料にして種々の態様の薬剤(組成物)を調製するプロセス自体は従来公知の方法に準じればよく、かかる製剤方法自体は本発明を特徴付けるものでもないため詳細な説明は省略する。処方に関する詳細な情報源として、例えばComprehensive Medicinal Chemistry, Corwin Hansch監修,Pergamon Press刊(1990)が挙げられる。この書籍の全内容は本明細書中に参照として援用されている。
例えば、生理食塩水や薬学的に許容できる各種の緩衝液を溶媒、即ちキャリア(担体)として含ませることができる。典型的には、水、生理学的緩衝液(例えばリン酸緩衝生理食塩水(PBS))、種々の有機溶媒が挙げられる。適当な濃度のアルコール(エタノール等)水溶液、グリセロール、オリーブ油のような不乾性油であり得る。或いはリポソームであってもよい。或いはまた各種糖質(デキストリン、乳糖等)のような賦形剤を含ませることができる。その他、従来の診断薬剤やペプチド製剤と同様、防腐剤、安定化剤、pH調整剤等の薬剤、或いは、々の充填剤、増量剤、結合剤、付湿剤、表面活性剤、色素、香料等を添加してもよい。
ALS検査組成物の態様に関して特に限定はない。例えば、典型的な態様として、液剤、懸濁剤、乳剤、エアロゾル、泡沫剤、顆粒剤、粉末剤、錠剤、カプセル、軟膏、水性ジェル剤等が挙げられる。また、使用直前に生理食塩水又は適当な緩衝液(例えばPBS)等に溶解して薬液を調製するための凍結乾燥物、造粒物とすることもできる。
なお、合成マーカーペプチド(主成分)及び種々の担体(副成分)を材料にして種々の態様の薬剤(組成物)を調製するプロセス自体は従来公知の方法に準じればよく、かかる製剤方法自体は本発明を特徴付けるものでもないため詳細な説明は省略する。処方に関する詳細な情報源として、例えばComprehensive Medicinal Chemistry, Corwin Hansch監修,Pergamon Press刊(1990)が挙げられる。この書籍の全内容は本明細書中に参照として援用されている。
<ALS検査キット>
本発明によって、ALSの検出を補助する方法に用いられるALS検査キットが提供される。かかる検査キットは、上記合成マーカーペプチドの少なくとも1つを備える。
或いはまた、かかるALS検査キットは、2つまたは3つ以上の上記合成マーカーペプチドを備えるものであり得る。即ち、かかるALS検査キットは、上述した合成マーカーペプチドセットを備えるものであり得る。
本発明によって、ALSの検出を補助する方法に用いられるALS検査キットが提供される。かかる検査キットは、上記合成マーカーペプチドの少なくとも1つを備える。
或いはまた、かかるALS検査キットは、2つまたは3つ以上の上記合成マーカーペプチドを備えるものであり得る。即ち、かかるALS検査キットは、上述した合成マーカーペプチドセットを備えるものであり得る。
かかるキットに含まれる試薬や器具は、検査方法(典型的には、体液中のシグナルペプチドの存在量の程度(或いは存在の有無)を分析する手法、或いは、体液中のシグナルペプチドのプロファイルを決定する方法)の種類や適用される検出・測定装置(通常は市販の装置を用い、その使用マニュアルに応じて適する薬品類や器具(基材等)が選択される。)に応じて、適宜選択すればよい。例えば、上記ALS検査組成物を構成する上記合成マーカーペプチドや各種担体(生理食塩水のような溶媒を包含する。)の他に、上記合成マーカーペプチドまたは測定対象の体液を希釈するための希釈液(典型的には各種の緩衝液)や、MALDI MSにおけるマトリックス等が挙げられる。
ここで開示されるALS検査キットの好適な一態様として、相互に異なる合成マーカーペプチドを含む上記ALS検査組成物を複数備えたキットが挙げられる。例えば、上記合成陽性マーカーペプチドのうちの少なくとも1つを含むALS検査組成物と、上記合成陰性マーカーペプチドのうちの少なくとも1つを含むALS検査組成物とを備えたキットであり得る。
また、ここで開示されるALS検査キットの好適な一態様は、上記合成マーカーペプチドまたは体液を固定(担持)する基材を備えたものであり得る。
例えば、合成マーカーペプチドが予め基材に固定(担持)されたものを含むキットであり得る。或いは、キットに基材と上記合成マーカーペプチドとを別個に装備しておき、使用時に該合成マーカーペプチドを当該基材に担持(固定化)させてもよい。
なお、測定対象の体液(即ち被検体由来の体液)は、上記合成マーカーペプチドが固定された基材と同一、または異なる基材のいずれに固定してもよく、検査方法に応じて選択すればよい。
例えば、合成マーカーペプチドが予め基材に固定(担持)されたものを含むキットであり得る。或いは、キットに基材と上記合成マーカーペプチドとを別個に装備しておき、使用時に該合成マーカーペプチドを当該基材に担持(固定化)させてもよい。
なお、測定対象の体液(即ち被検体由来の体液)は、上記合成マーカーペプチドが固定された基材と同一、または異なる基材のいずれに固定してもよく、検査方法に応じて選択すればよい。
上記基材としては、典型的には種々の高分子化合物(例えばアガロース、セルロース)や合成樹脂(例えばポリスチレン、ポリプロピレン、ポリカーボネート)製若しくはガラス等のセラミック製であるものが挙げられる。基材の形状は、使用目的に応じてプレート、ビーズ、メンブレン、スティック、試験管等の形状が挙げられ、特に制限はない。ペプチドの基材への担持(固定)方法は、従来と同様でよく特に制限はない。例えば、従来公知の物理的吸着法、共有結合法、イオン結合法、架橋法等を採用すればよい。
上記上記合成マーカーペプチド又は体液を固定(保持)する面が熱可塑性樹脂製である基材(好ましくは、熱可塑性樹脂製の基材)を備えたキットは、MALDI MSを用いた検査方法(ALSの検出を補助する方法)に好適に使用し得る。このとき、かかる基材の形状は薄膜(フィルム、シート)、プレート、メンブレン、スティック、チップ等が好ましい。また、かかる基材へのペプチドの担持は、該熱可塑性樹脂を加熱により溶融することにより行い得る。
上記上記合成マーカーペプチド又は体液を固定(保持)する面が熱可塑性樹脂製である基材(好ましくは、熱可塑性樹脂製の基材)を備えたキットは、MALDI MSを用いた検査方法(ALSの検出を補助する方法)に好適に使用し得る。このとき、かかる基材の形状は薄膜(フィルム、シート)、プレート、メンブレン、スティック、チップ等が好ましい。また、かかる基材へのペプチドの担持は、該熱可塑性樹脂を加熱により溶融することにより行い得る。
或いはまた、ここで開示されるALS検査キットの好適な一態様として、薄膜状あるいは板状の基材上に上記合成マーカーペプチドのうちのすくなくとも1つが固定(担持)されたALS検査チップを備えたキットが挙げられる。かかる基材は、上記合成マーカーペプチドの担持面が熱可塑性樹脂製である。
換言すると、本発明によって、薄膜状あるいは板状の基材上に上記合成マーカーペプチドのうちのすくなくとも1つが固定(担持)されたALS検査チップであって、上記基材の合成マーカーペプチドの担持面が熱可塑性樹脂製のALS検査チップが提供される。
換言すると、本発明によって、薄膜状あるいは板状の基材上に上記合成マーカーペプチドのうちのすくなくとも1つが固定(担持)されたALS検査チップであって、上記基材の合成マーカーペプチドの担持面が熱可塑性樹脂製のALS検査チップが提供される。
かかるALS検査チップの好適な一態様では、2種または3種以上(好ましくは5種以上、より好ましくは10種以上、さらに好ましくは20種以上)の合成マーカーペプチドが同一の基材上に固定されている。典型的には、上述した合成マーカーペプチドセットを構成する合成マーカーペプチドが同一の基材上に固定されたものであり得る。
上記同一の基材上に複数の合成マーカーペプチドが固定されたALS検査チップにおいて、かかる複数の合成マーカーペプチドは、基材上に同一スポットとして固定されていてもよいし、相互に独立した別のスポットとして固定されていてもよい。例えば、上述した合成マーカーペプチドセットを構成する合成マーカーペプチドごとに、同一スポットとして固定されたものであり得る。
ここで開示されるALS検査キットの好適な一態様として、相互に異なる合成マーカーペプチドが固定されたALS検査チップを複数備えたキットが挙げられる。例えば、上記合成陽性マーカーペプチドのうちの少なくとも1つが固定されたALS検査チップと、上記合成陰性マーカーペプチドのうちの少なくとも1つを含むALS検査チップとを備えたキットであり得る。
以下、本発明に関するいくつかの実施例を説明するが、本発明をかかる実施例に示すものに限定することを意図したものではない。
<実施例1>
健常者群およびALS患者群から得られた各体液について、該体液中に含まれるシグナルペプチドのプロファイルを決定した。本実施例では、体液中のシグナルペプチドのプロファイルは、MALDI TOFMSを用いた網羅解析により決定した。具体的な手順を以下に示す。
健常者群およびALS患者群から得られた各体液について、該体液中に含まれるシグナルペプチドのプロファイルを決定した。本実施例では、体液中のシグナルペプチドのプロファイルは、MALDI TOFMSを用いた網羅解析により決定した。具体的な手順を以下に示す。
本実施例では、5名の健常検体から採取された脳脊髄液と5名のALS患者(いずれもヒスパニック系)から採取された脳脊髄液を試料とした。かかる脳脊髄液試料は、何れも市販のものを購入して使用した。各群における脳脊髄液提供者の特性(性別、人種、病期等)を表1に示す。
各脳脊髄液試料をマトリックスと混合して基材上に固定した。
まず、脳脊髄液試料と、マトリックス液とを、1:1の体積比で混合した。上記マトリックス液としては、マトリックスとしてのシナピン酸(CHCA)が0.1体積%のトリフルオロ酢酸を含む50体積%のアセトニトリル水溶液(0.1%TFA/50%ACN水溶液)中に5mg/mLの濃度で含まれるものを用いた。
そして、上記マトリックス液と脳脊髄液試料とを混合したマトリックス混合脳脊髄液試料を2μL基材上に滴下し、該マトリックス混合脊髄液試料を真空乾燥した。基材としては、MALDI MSにおいて通常使用される測定用プレート上に、EVAフィルムを貼りつけたものを使用した。即ち、本実施例において体液を固定する基材は、体液が固定される面が熱可塑性樹脂製である。
まず、脳脊髄液試料と、マトリックス液とを、1:1の体積比で混合した。上記マトリックス液としては、マトリックスとしてのシナピン酸(CHCA)が0.1体積%のトリフルオロ酢酸を含む50体積%のアセトニトリル水溶液(0.1%TFA/50%ACN水溶液)中に5mg/mLの濃度で含まれるものを用いた。
そして、上記マトリックス液と脳脊髄液試料とを混合したマトリックス混合脳脊髄液試料を2μL基材上に滴下し、該マトリックス混合脊髄液試料を真空乾燥した。基材としては、MALDI MSにおいて通常使用される測定用プレート上に、EVAフィルムを貼りつけたものを使用した。即ち、本実施例において体液を固定する基材は、体液が固定される面が熱可塑性樹脂製である。
上記準備した測定試料について、質量分析を行った。
質量分析装置(MALDI-TOFMS)としては、島津製作所社製のAXIMA(登録商標) Performanceを用いた。測定条件は、レーザー光源:N2封入型レーザー(λ=337.1nm)、加速電圧:+20kV、遅延引き出し:m/z2200に最適化、飛行モード:Linerモードに設定した。このとき、キャリブラント(キャリブレーション用スタンダード)としては、Antiotensin II (m/z 1046.54)、ACTH fragment 18-39 (m/z 2465.20)、Insulin (m/z5730.61)を用い、外部標準法により測定機器の校正を行った。そして、各脳脊髄液試料に対して、200回のレーザー照射を行い、単回のレーザー照射毎にマススペクトルを得た。
上記レーザー照射毎に個別に得られたマススペクトルを積算平均化して各脳脊髄液試料の代表マススペクトルとした。
また、上記200回のレーザー照射により個別に得られた各マススペクトルを比較し、かかる200個のマススペクトルにおいて各ピークが検出される回数を積算し、該積算値をピーク値(Peak Value)とした。即ち、上記200回のレーザー照射により個別に得られた200個のマススペクトルにおいて、m/z1000のピークが100回検出された場合、該ピークのピーク値は100である。
質量分析装置(MALDI-TOFMS)としては、島津製作所社製のAXIMA(登録商標) Performanceを用いた。測定条件は、レーザー光源:N2封入型レーザー(λ=337.1nm)、加速電圧:+20kV、遅延引き出し:m/z2200に最適化、飛行モード:Linerモードに設定した。このとき、キャリブラント(キャリブレーション用スタンダード)としては、Antiotensin II (m/z 1046.54)、ACTH fragment 18-39 (m/z 2465.20)、Insulin (m/z5730.61)を用い、外部標準法により測定機器の校正を行った。そして、各脳脊髄液試料に対して、200回のレーザー照射を行い、単回のレーザー照射毎にマススペクトルを得た。
上記レーザー照射毎に個別に得られたマススペクトルを積算平均化して各脳脊髄液試料の代表マススペクトルとした。
また、上記200回のレーザー照射により個別に得られた各マススペクトルを比較し、かかる200個のマススペクトルにおいて各ピークが検出される回数を積算し、該積算値をピーク値(Peak Value)とした。即ち、上記200回のレーザー照射により個別に得られた200個のマススペクトルにおいて、m/z1000のピークが100回検出された場合、該ピークのピーク値は100である。
上記得られた代表マススペクトルにおいて検出されるピークは、対象の脳脊髄液試料中に該ピークのm/zに対応する分子量のシグナルペプチドが存在することを反映している。即ち、かかる代表マススペクトルは、脳脊髄液中のシグナルペプチドのプロファイルを定性的に示す。従って、ここで開示する方法によって、体液中(脳脊髄液中)に存在するシグナルペプチドのプロファイルを代表マススペクトルとして決定することができる。
また、上記得られたピーク値は、対象の脳脊髄液試料中における、該ピークのm/zに対応する分子量のシグナルペプチドの存在量の程度を反映している。即ち、これらピーク値に関するデータの集合は、脳脊髄液中のシグナルペプチドのプロファイルを定量的に示す。従って、ここで開示する方法によって、体液中(脳脊髄液中)に存在するシグナルペプチドのプロファイルをピーク値に関するデータの集合として決定することができる。
また、上記得られたピーク値は、対象の脳脊髄液試料中における、該ピークのm/zに対応する分子量のシグナルペプチドの存在量の程度を反映している。即ち、これらピーク値に関するデータの集合は、脳脊髄液中のシグナルペプチドのプロファイルを定量的に示す。従って、ここで開示する方法によって、体液中(脳脊髄液中)に存在するシグナルペプチドのプロファイルをピーク値に関するデータの集合として決定することができる。
<実施例2:ALS患者群と健常者群との比較>
そして、上記実施例1で得られた各ピークのピーク値について、ALS患者群と健常者群との間でそれぞれ統計学的有意差検定を行った。ここでは、上記統計学的有意差検定として、U検定(Mann-Whitney's U test)を採用し、両側検定(twe-tail test
)を行った。かかる有意差検定では、有意水準を5%(即ち、P値がP<0.05の場合に有意差有り)とした。
その結果、ALS患者群と健常者群との間で、327個のピークについて有意差が認められた。結果を表2~9に示す。
そして、上記実施例1で得られた各ピークのピーク値について、ALS患者群と健常者群との間でそれぞれ統計学的有意差検定を行った。ここでは、上記統計学的有意差検定として、U検定(Mann-Whitney's U test)を採用し、両側検定(twe-tail test
)を行った。かかる有意差検定では、有意水準を5%(即ち、P値がP<0.05の場合に有意差有り)とした。
その結果、ALS患者群と健常者群との間で、327個のピークについて有意差が認められた。結果を表2~9に示す。
表2~9に示すように、ALS患者群と健常者群でピーク値が有意に異なる327個のピーク(m/zが1405.71, 1406.49, 1409.40, 1410.97, 1418.70, 1426.68, 1437.62, 1445.77, 1451.61, 1456.44, 1458.88, 1466.24, 1468.86, 1472.12, 1476.87, 1482.60, 1493.58, 1495.42, 1496.52, 1497.16, 1498.88, 1502.40, 1505.52, 1508.76, 1510.50, 1516.64, 1521.93, 1529.32, 1530.37, 1533.52, 1539.36, 1544.22, 1553.72, 1555.72, 1560.24, 1566.20, 1567.20, 1567.74, 1575.70, 1578.07, 1580.91, 1589.58, 1592.55, 1597.25, 1608.53, 1609.36, 1610.62, 1616.12, 1629.15, 1639.39, 1640.36, 1646.58, 1655.72, 1657.97, 1659.24, 1660.46, 1662.16, 1679.09, 1682.54, 1683.12, 1687.34, 1688.14, 1691.08, 1691.75, 1694.76, 1695.74, 1700.65, 1702.19, 1705.53, 1708.77, 1712.10, 1714.63, 1715.56, 1719.51, 1721.61, 1726.31, 1737.85, 1739.71, 1743.69, 1761.79, 1769.93, 1774.13, 1775.70, 1786.39, 1788.03, 1790.80, 1796.23, 1797.49, 1800.34, 1801.79, 1804.45, 1810.72, 1812.31, 1813.77, 1817.26, 1818.66, 1819.34, 1819.93, 1821.71, 1822.73, 1829.48, 1831.81, 1832.41, 1836.18, 1837.33, 1840.84, 1849.81, 1854.68, 1858.34, 1864.19, 1866.06, 1875.28, 1876.50, 1878.25, 1890.21, 1891.32, 1893.00, 1904.69, 1911.46, 1913.68, 1916.02, 1919.35, 1927.13, 1931.84, 1934.86, 1935.52, 1936.83, 1937.87, 1941.22, 1944.97, 1948.39, 1952.47, 1957.80, 1962.82, 1969.82, 1972.54, 1975.58, 1976.51, 1977.70, 1979.29, 1988.46, 1991.91, 1995.37, 2009.91, 2011.18, 2013.86, 2023.97, 2027.73, 2030.95, 2032.69, 2039.29, 2043.12, 2045.68, 2051.76, 2055.50, 2059.05, 2062.98, 2065.57, 2066.09, 2074.03, 2075.32, 2079.80, 2083.74, 2084.36, 2085.85, 2089.53, 2092.25, 2092.80, 2097.03, 2099.42, 2111.39, 2113.10, 2115.77, 2120.37, 2126.55, 2137.63, 2139.15, 2140.48, 2143.42, 2146.46, 2149.85, 2151.02, 2160.22, 2161.68, 2167.09, 2167.78, 2168.75, 2173.75, 2177.51, 2179.25, 2184.93, 2185.65, 2186.28, 2190.18, 2191.02, 2192.84, 2196.47, 2199.82, 2201.22, 2204.02, 2207.10, 2211.58, 2216.77, 2218.45, 2219.30, 2220.56, 2222.74, 2226.96, 2228.22, 2231.60, 2239.71, 2244.01, 2251.78, 2254.83, 2256.53, 2261.91, 2266.45, 2268.58, 2274.97, 2276.04, 2278.67, 2281.09, 2285.01, 2289.43, 2290.85, 2292.35, 2295.92, 2296.92, 2301.71, 2302.50, 2303.21, 2305.43, 2307.22, 2314.24, 2314.81, 2317.68, 2325.30, 2327.73, 2341.14, 2342.87, 2344.45, 2351.97, 2353.99, 2355.29, 2357.54, 2367.75, 2375.59, 2378.35, 2380.39, 2393.64, 2402.11, 2404.01, 2406.49, 2412.79, 2414.25, 2415.20, 2416.30, 2431.13, 2434.36, 2438.19, 2439.22, 2444.37, 2451.90, 2453.96, 2455.44, 2456.62, 2459.43, 2462.31, 2464.16, 2470.97, 2478.17, 2479.28, 2484.18, 2500.40, 2502.64, 2504.73, 2507.42, 2509.21, 2515.26, 2517.43, 2519.07, 2527.31, 2531.06, 2532.26, 2546.08, 2554.96, 2559.48, 2564.01, 2571.26, 2578.45, 2581.25, 2583.37, 2584.81, 2587.01, 2588.90, 2593.68, 2596.11, 2603.33, 2608.20, 2613.31, 2614.91, 2622.46, 2629.26, 2633.69, 2634.61, 2640.51, 2641.73, 2652.85, 2655.08, 2665.15, 2670.00, 2682.80, 2696.41, 2697.73, 2698.27, 2699.82, 3302.01, 3303.21, 3309.84, 3323.89, 3330.34, 3337.92, 3366.84, 3370.39, 3378.18, 3380.43, 3384.77であるピーク)を同定した。即ち、これらの結果は、上記ALS患者群と健常者群でピーク値が有意に異なる327個のピークのm/zに対応する分子量のシグナルペプチドが、ALS関連シグナルペプチドであることを示している。
また、上記の結果は、上記ALS患者群と健常者群でピーク値が有意に異なる327個のピークのm/zに対応する分子量のシグナルペプチド(即ちALS関連シグナルペプチド)は、体液中における該シグナルペプチドの存在量の程度を指標にすることで、ALS患者と健常者とを判別可能なシグナルペプチド(即ち、ALSバイオマーカー)であることを示している。
また、上記の結果は、上記ALS患者群と健常者群でピーク値が有意に異なる327個のピークのm/zに対応する分子量のシグナルペプチド(即ちALS関連シグナルペプチド)は、体液中における該シグナルペプチドの存在量の程度を指標にすることで、ALS患者と健常者とを判別可能なシグナルペプチド(即ち、ALSバイオマーカー)であることを示している。
また、これらの結果は、実施例2において決定したALS患者のシグナルペプチドプロファイルと、健常者のシグナルペプチドプロファイルとが、これら327個のピークのm/z(或いは該ピークのm/zに対応する分子量)のいずれかにおいて相違することを示している。即ち、これらの結果から、被検体から採取した体液について、該体液中に存在するシグナルペプチドのプロファイルを決定し、該被検体のシグナルペプチドプロファイルと健常者のシグナルペプチドプロファイルとを、これら327個のピークのm/z(或いは該ピークのm/zに対応する分子量)のいずれかについて比較することで、該被検体がALSに罹患もしくは発症している可能性が高いか否かを示す情報を入手し得ることを確認した。
また、これらの結果から、被検体から採取した体液について、これら327個のピークのm/zに対応する分子量のシグナルペプチドのうちのいずれかの存在量の程度を検査し、健常者由来の体液における該シグナルペプチドの存在量の程度と比較することで、該被検体がALSに罹患もしくは発症している可能性が高いか否かを示す情報を入手し得ることを確認した。
また、これらの結果から、被検体から採取した体液について、これら327個のピークのm/zに対応する分子量のシグナルペプチドのうちのいずれかの存在量の程度を検査し、健常者由来の体液における該シグナルペプチドの存在量の程度と比較することで、該被検体がALSに罹患もしくは発症している可能性が高いか否かを示す情報を入手し得ることを確認した。
また、表2~9に示すように、m/zが1405.71, 1406.49, 1409.40, 1410.97, 1418.70, 1426.68, 1437.62, 1445.77, 1451.61, 1456.44, 1458.88, 1466.24, 1468.86, 1472.12, 1476.87, 1482.60, 1493.58, 1495.42, 1496.52, 1498.88, 1502.40, 1505.52, 1508.76, 1510.50, 1516.64, 1521.93, 1529.32, 1530.37, 1533.52, 1539.36, 1544.22, 1553.72, 1555.72, 1560.24, 1566.20, 1567.20, 1575.70, 1578.07, 1580.91, 1589.58, 1592.55, 1597.25, 1608.53, 1609.36, 1610.62, 1616.12, 1629.15, 1639.39, 1640.36, 1646.58, 1655.72, 1657.97, 1659.24, 1660.46, 1662.16, 1679.09, 1682.54, 1683.12, 1687.34, 1688.14, 1691.08, 1691.75, 1694.76, 1695.74, 1700.65, 1702.19, 1708.77, 1712.10, 1714.63, 1715.56, 1719.51, 1721.61, 1726.31, 1737.85, 1739.71, 1743.69, 1761.79, 1769.93, 1774.13, 1775.70, 1786.39, 1788.03, 1790.80, 1796.23, 1797.49, 1800.34, 1801.79, 1804.45, 1810.72, 1812.31, 1813.77, 1817.26, 1818.66, 1819.93, 1821.71, 1822.73, 1829.48, 1832.41, 1836.18, 1837.33, 1840.84, 1849.81, 1854.68, 1858.34, 1864.19, 1866.06, 1875.28, 1876.50, 1878.25, 1890.21, 1891.32, 1893.00, 1904.69, 1911.46, 1913.68, 1916.02, 1919.35, 1927.13, 1931.84, 1934.86, 1936.83, 1937.87, 1941.22, 1944.97, 1948.39, 1952.47, 1957.80, 1962.82, 1969.82, 1972.54, 1975.58, 1976.51, 1977.70, 1979.29, 1988.46, 1991.91, 1995.37, 2009.91, 2011.18, 2013.86, 2023.97, 2027.73, 2030.95, 2032.69, 2039.29, 2043.12, 2045.68, 2051.76, 2059.05, 2062.98, 2066.09, 2074.03, 2075.32, 2079.80, 2083.74, 2085.85, 2089.53, 2092.80, 2097.03, 2099.42, 2111.39, 2113.10, 2115.77, 2120.37, 2126.55, 2137.63, 2139.15, 2143.42, 2146.46, 2149.85, 2151.02, 2160.22, 2161.68, 2167.09, 2168.75, 2173.75, 2177.51, 2179.25, 2185.65, 2186.28, 2190.18, 2191.02, 2192.84, 2196.47, 2199.82, 2201.22, 2204.02, 2207.10, 2211.58, 2216.77, 2218.45, 2219.30, 2220.56, 2222.74, 2226.96, 2228.22 2231.60, 2239.71, 2244.01, 2251.78, 2254.83, 2256.53, 2261.91, 2266.45, 2268.58, 2274.97, 2276.04, 2278.67, 2281.09, 2285.01, 2289.43, 2290.85, 2292.35, 2295.92, 2296.92, 2301.71, 2302.50, 2303.21, 2305.43, 2307.22, 2314.24, 2317.68, 2325.30, 2341.14, 2342.87, 2344.45, 2351.97, 2353.99, 2355.29, 2357.54, 2367.75, 2375.59, 2378.35, 2380.39, 2393.64, 2402.11, 2404.01, 2406.49, 2412.79, 2414.25, 2415.20, 2416.30, 2431.13, 2434.36, 2438.19, 2439.22, 2444.37, 2451.90, 2453.96, 2455.44, 2456.62, 2459.43, 2462.31, 2464.16, 2470.97, 2478.17, 2479.28, 2484.18, 2500.40, 2502.64, 2504.73, 2507.42, 2509.21, 2515.26, 2517.43, 2519.07, 2527.31, 2531.06, 2532.26, 2546.08, 2554.96, 2559.48, 2564.01, 2571.26, 2578.45, 2581.25, 2583.37, 2584.81, 2587.01, 2588.90, 2593.68, 2596.11, 2603.33, 2608.20, 2613.31, 2614.91, 2622.46, 2629.26, 2633.69, 2634.61, 2640.51, 2641.73, 2652.85, 2655.08, 2665.15, 2670.00, 2682.80, 2696.41, 2698.27, 2699.82, 3302.01, 3303.21, 3323.89, 3330.34, 3337.92, 3366.84, 3370.39, 3378.18, 3380.43, 3384.77のいずれかであるピーク(計310個のピーク)は、ALS患者群におけるピーク値が、健常者群におけるピーク値と比較して、有意に高値であった。かかる結果は、これら310個のピークのm/zに対応する分子量のシグナルペプチドが、ALSポジティブシグナルペプチド(即ち、ポジティブバイオマーカー)であることを示している。
また、表2~9に示すように、m/zが1497.16, 1567.74, 1705.53, 1819.34, 1831.81, 1935.52, 2055.50, 2065.57, 2084.36, 2092.25, 2140.48, 2167.78, 2184.93, 2314.81, 2327.73, 2697.73, 3309.84のいずれかであるピーク(計17個のピーク)は、ALS患者群におけるピーク値が、健常者群におけるピーク値と比較して、有意に低値であった。かかる結果は、これら17個のピークのm/zに対応する分子量のシグナルペプチドが、ALSネガティブシグナルペプチド(即ち、ネガティブバイオマーカー)であることを示している。
また、表2~9に示すように、m/zが1502.40, 1521.93, 1629.15, 1682.54, 1691.75, 1705.53, 1821.71, 1836.18, 1948.39, 2011.18, 2092.80, 2099.42, 2177.51, 2179.25, 2186.28, 2211.58, 2226.96, 2254.83, 2278.67, 2290.85, 2292.35, 2502.64, 2640.51, 2698.27, 3330.34のいずれかであるピーク(計25個のピーク)は、ALS患者群におけるピーク値が、健常者群におけるピーク値と比較して、特に顕著に異なる(p≦0.01)ピークであった。かかる結果は、これら25個のピークのm/zに対応する分子量のシグナルペプチドは、体液中における該シグナルペプチドの存在量の程度を指標にすることで、ALS患者と健常者とを高い精度で(高い信頼性で)判別可能なシグナルペプチドであることを示している。
即ち、かかる結果は、被検体から採取した体液について、該体液中に存在するシグナルペプチドのプロファイルを決定し、該被検体のシグナルペプチドプロファイルと健常者のシグナルペプチドプロファイルとがこれら25個のピークのm/z(或いは該ピークのm/zに対応する分子量)のいずれかにおいて相違する場合に、該被検体がALSに罹患もしくは発症している可能性が高いことを示す信頼性の高い(精度の高い)情報を入手し得ることを確認した。
換言すると、被検体から採取した体液について、これら25個のピークのm/zに対応する分子量のシグナルペプチドのうちのいずれかの存在量の程度を検査し、健常者由来の体液における該シグナルペプチドの存在量の程度と比較することで、該被検体がALSに罹患もしくは発症している可能性が高いか否かを示す信頼性の高い(精度の高い)情報を入手し得ることを確認した。
即ち、かかる結果は、被検体から採取した体液について、該体液中に存在するシグナルペプチドのプロファイルを決定し、該被検体のシグナルペプチドプロファイルと健常者のシグナルペプチドプロファイルとがこれら25個のピークのm/z(或いは該ピークのm/zに対応する分子量)のいずれかにおいて相違する場合に、該被検体がALSに罹患もしくは発症している可能性が高いことを示す信頼性の高い(精度の高い)情報を入手し得ることを確認した。
換言すると、被検体から採取した体液について、これら25個のピークのm/zに対応する分子量のシグナルペプチドのうちのいずれかの存在量の程度を検査し、健常者由来の体液における該シグナルペプチドの存在量の程度と比較することで、該被検体がALSに罹患もしくは発症している可能性が高いか否かを示す信頼性の高い(精度の高い)情報を入手し得ることを確認した。
<実施例3:シグナルペプチドの特定>
上記実施例2で同定された、ALS患者群と健常者群でピーク値が有意に異なる327個のピークについて、該ピークに対応するシグナルペプチドを特定した。即ち、各ピークのm/zと従来公知のシグナルペプチドの分子量とを比較し、シグナルペプチドの分子量が目的のピークのm/z±2の範囲内であるシグナルペプチドを、目的のピークに対応するシグナルペプチドとして特定した。結果を表10~44に示す。
上記実施例2で同定された、ALS患者群と健常者群でピーク値が有意に異なる327個のピークについて、該ピークに対応するシグナルペプチドを特定した。即ち、各ピークのm/zと従来公知のシグナルペプチドの分子量とを比較し、シグナルペプチドの分子量が目的のピークのm/z±2の範囲内であるシグナルペプチドを、目的のピークに対応するシグナルペプチドとして特定した。結果を表10~44に示す。
表10~44に示すように、ここで開示されるALS関連シグナルペプチド(即ち、ALSバイオマーカー)として、配列番号1~1580に示すアミノ酸配列から成るシグナルペプチドが特定された。
これらの結果は、配列番号1~1580に示すアミノ酸配列の何れかから成るシグナルペプチドについて、該シグナルペプチドの体液中の存在量の程度を指標とすることで、ALSの検出(診断)を補助する情報を入手し得る(典型的には、ALSの診断が可能である)ことを示している。
これらの結果は、配列番号1~1580に示すアミノ酸配列の何れかから成るシグナルペプチドについて、該シグナルペプチドの体液中の存在量の程度を指標とすることで、ALSの検出(診断)を補助する情報を入手し得る(典型的には、ALSの診断が可能である)ことを示している。
<実施例3:ペプチド合成>
上述した配列番号1~180に示すアミノ酸配列から成る合成ペプチドを市販のペプチド合成機(Intavis AG社製)を用いてマニュアルどおりに固相合成法(Fmoc法)を実施して合成した。なお、以下の説明では、当該合成ペプチドをペプチド1~180と呼称する。なお、ペプチド合成機の使用態様自体は本発明を特徴付けるものではないため、詳細な説明は省略する。
上述した配列番号1~180に示すアミノ酸配列から成る合成ペプチドを市販のペプチド合成機(Intavis AG社製)を用いてマニュアルどおりに固相合成法(Fmoc法)を実施して合成した。なお、以下の説明では、当該合成ペプチドをペプチド1~180と呼称する。なお、ペプチド合成機の使用態様自体は本発明を特徴付けるものではないため、詳細な説明は省略する。
<実施例4:液状組成物の調製>
上記ペプチド1~180に係る合成ペプチド(合成マーカーペプチド)を1μmol/mLのペプチド濃度となるように、0.1%TFA/50%ACN水溶液にそれぞれ溶解し、ここで開示される合成マーカーペプチドを主成分とする液状組成物(ALS検査組成物)を得た。
上記ペプチド1~180に係る合成ペプチド(合成マーカーペプチド)を1μmol/mLのペプチド濃度となるように、0.1%TFA/50%ACN水溶液にそれぞれ溶解し、ここで開示される合成マーカーペプチドを主成分とする液状組成物(ALS検査組成物)を得た。
<実施例5:ALS検査用チップの作製>
上記ペプチド1~180に係る合成ペプチド(合成マーカーペプチド)を基材上に固定したALS検査用チップを作製した。基材としては、MALDI MSにおいて通常使用される測定用プレート上に、EVAフィルムを貼りつけたものを使用した。即ち、かかる基材は、合成マーカーペプチドが固定される面が熱可塑性樹脂製の板状の基材である。
まず、各ALS検査組成物を、それぞれ、0.1%TFA/50%ACN水溶液で100倍希釈し、合成マーカーペプチド希釈液を準備した。そして、かかる合成マーカーペプチド希釈液と、マトリックス液とを1:1の体積比で混合した。上記マトリックス液としては、シナピン酸(CHCA)が0.1%TFA/50%ACN水溶液中に5mg/mL含まれるものを用いた。
そして、上記マトリックス液と合成マーカーペプチド希釈液とを混合した混合溶液を2μL基材上に滴下し、真空乾燥することにより、ALS検査用チップを作製した。
上記ペプチド1~180に係る合成ペプチド(合成マーカーペプチド)を基材上に固定したALS検査用チップを作製した。基材としては、MALDI MSにおいて通常使用される測定用プレート上に、EVAフィルムを貼りつけたものを使用した。即ち、かかる基材は、合成マーカーペプチドが固定される面が熱可塑性樹脂製の板状の基材である。
まず、各ALS検査組成物を、それぞれ、0.1%TFA/50%ACN水溶液で100倍希釈し、合成マーカーペプチド希釈液を準備した。そして、かかる合成マーカーペプチド希釈液と、マトリックス液とを1:1の体積比で混合した。上記マトリックス液としては、シナピン酸(CHCA)が0.1%TFA/50%ACN水溶液中に5mg/mL含まれるものを用いた。
そして、上記マトリックス液と合成マーカーペプチド希釈液とを混合した混合溶液を2μL基材上に滴下し、真空乾燥することにより、ALS検査用チップを作製した。
上述のように、ここで開示されるALSの検出を補助する方法によると、被検体がALSに罹患もしくは発症していることに関連する(典型的には、被検体がALSに罹患もしくは発症している可能性が高いか否か示す)情報を入手することができる。即ち、ここで開示されるALSの検出を補助する方法によると、ALSを高い精度で検出することができる。したがって、ここで開示されるALSの検出を補助する方法は、ALSの予知、ALSの診断(早期診断)、治療の導入、治療開始後の経過観察指標(典型的には、治療効果の判断指標)に好適に利用することができる。
また、ここで開示されるALSバイオマーカーは、該被検体がALSに罹患もしくは発症していることを高い精度で検出(診断)するための指標として好適に利用することができる。即ち、ここで開示される合成マーカーペプチド、(または、該合成マーカーペプチドを含むALS検査組成物、ALS検査キット、ALS検査チップ)は、ALSを高い精度で検出(診断)する目的で好適に利用することができる。
また、ここで開示されるALSバイオマーカーは、該被検体がALSに罹患もしくは発症していることを高い精度で検出(診断)するための指標として好適に利用することができる。即ち、ここで開示される合成マーカーペプチド、(または、該合成マーカーペプチドを含むALS検査組成物、ALS検査キット、ALS検査チップ)は、ALSを高い精度で検出(診断)する目的で好適に利用することができる。
配列番号1~1580 ペプチド
Claims (22)
- 筋萎縮性側索硬化症(ALS)の検出を補助するための方法であって、
被検体由来の体液中に含まれるシグナルペプチドについて、分子量が1000~3500の範囲内のシグナルペプチドのプロファイルを決定すること、および、
前記決定した被検体のシグナルペプチドプロファイルを、予め決定した健常検体由来の体液中のシグナルペプチドのプロファイルと比較すること、を包含し、
ここで、前記被検体のシグナルペプチドプロファイルが、以下の分子量:
1405.71±2, 1406.49±2, 1409.40±2, 1410.97±2, 1418.70±2, 1426.68±2, 1437.62±2, 1445.77±2, 1451.61±2, 1456.44±2, 1458.88±2, 1466.24±2, 1468.86±2, 1472.12±2, 1476.87±2, 1482.60±2, 1493.58±2, 1495.42±2, 1496.52±2, 1497.16±2, 1498.88±2, 1502.40±2, 1505.52±2, 1508.76±2, 1510.50±2, 1516.64±2, 1521.93±2, 1529.32±2, 1530.37±2, 1533.52±2, 1539.36±2, 1544.22±2, 1553.72±2, 1555.72±2, 1560.24±2, 1566.20±2, 1567.20±2, 1567.74±2, 1575.70±2, 1578.07±2, 1580.91±2, 1589.58±2, 1592.55±2, 1597.25±2, 1608.53±2, 1609.36±2, 1610.62±2, 1616.12±2, 1629.15±2, 1639.39±2, 1640.36±2, 1646.58±2, 1655.72±2, 1657.97±2, 1659.24±2, 1660.46±2, 1662.16±2, 1679.09±2, 1682.54±2, 1683.12±2, 1687.34±2, 1688.14±2, 1691.08±2, 1691.75±2, 1694.76±2, 1695.74±2, 1700.65±2, 1702.19±2, 1705.53±2, 1708.77±2, 1712.10±2, 1714.63±2, 1715.56±2, 1719.51±2, 1721.61±2, 1726.31±2, 1737.85±2, 1739.71±2, 1743.69±2, 1761.79±2, 1769.93±2, 1774.13±2, 1775.70±2, 1786.39±2, 1788.03±2, 1790.80±2, 1796.23±2, 1797.49±2, 1800.34±2, 1801.79±2, 1804.45±2, 1810.72±2, 1812.31±2, 1813.77±2, 1817.26±2, 1818.66±2, 1819.34±2, 1819.93±2, 1821.71±2, 1822.73±2, 1829.48±2, 1831.81±2, 1832.41±2, 1836.18±2, 1837.33±2, 1840.84±2, 1849.81±2, 1854.68±2, 1858.34±2, 1864.19±2, 1866.06±2, 1875.28±2, 1876.50±2, 1878.25±2, 1890.21±2, 1891.32±2, 1893.00±2, 1904.69±2, 1911.46±2, 1913.68±2, 1916.02±2, 1919.35±2, 1927.13±2, 1931.84±2, 1934.86±2, 1935.52±2, 1936.83±2, 1937.87±2, 1941.22±2, 1944.97±2, 1948.39±2, 1952.47±2, 1957.80±2, 1962.82±2, 1969.82±2, 1972.54±2, 1975.58±2, 1976.51±2, 1977.70±2, 1979.29±2, 1988.46±2, 1991.91±2, 1995.37±2, 2009.91±2, 2011.18±2, 2013.86±2, 2023.97±2, 2027.73±2, 2030.95±2, 2032.69±2, 2039.29±2, 2043.12±2, 2045.68±2, 2051.76±2, 2055.50±2, 2059.05±2, 2062.98±2, 2065.57±2, 2066.09±2, 2074.03±2, 2075.32±2, 2079.80±2, 2083.74±2, 2084.36±2, 2085.85±2, 2089.53±2, 2092.25±2, 2092.80±2, 2097.03±2, 2099.42±2, 2111.39±2, 2113.10±2, 2115.77±2, 2120.37±2, 2126.55±2, 2137.63±2, 2139.15±2, 2140.48±2, 2143.42±2, 2146.46±2, 2149.85±2, 2151.02±2, 2160.22±2, 2161.68±2, 2167.09±2, 2167.78±2, 2168.75±2, 2173.75±2, 2177.51±2, 2179.25±2, 2184.93±2, 2185.65±2, 2186.28±2, 2190.18±2, 2191.02±2, 2192.84±2, 2196.47±2, 2199.82±2, 2201.22±2, 2204.02±2, 2207.10±2, 2211.58±2, 2216.77±2, 2218.45±2, 2219.30±2, 2220.56±2, 2222.74±2, 2226.96±2, 2228.22±2, 2231.60±2, 2239.71±2, 2244.01±2, 2251.78±2, 2254.83±2, 2256.53±2, 2261.91±2, 2266.45±2, 2268.58±2, 2274.97±2, 2276.04±2, 2278.67±2, 2281.09±2, 2285.01±2, 2289.43±2, 2290.85±2, 2292.35±2, 2295.92±2, 2296.92±2, 2301.71±2, 2302.50±2, 2303.21±2, 2305.43±2 2307.22±2, 2314.24±2, 2314.81±2, 2317.68±2, 2325.30±2, 2327.73±2, 2341.14±2, 2342.87±2, 2344.45±2, 2351.97±2, 2353.99±2, 2355.29±2, 2357.54±2, 2367.75±2, 2375.59±2, 2378.35±2, 2380.39±2, 2393.64±2, 2402.11±2, 2404.01±2, 2406.49±2, 2412.79±2, 2414.25±2, 2415.20±2, 2416.30±2, 2431.13±2, 2434.36±2, 2438.19±2, 2439.22±2, 2444.37±2, 2451.90±2, 2453.96±2, 2455.44±2, 2456.62±2, 2459.43±2, 2462.31±2, 2464.16±2, 2470.97±2, 2478.17±2, 2479.28±2, 2484.18±2, 2500.40±2, 2502.64±2, 2504.73±2, 2507.42±2, 2509.21±2, 2515.26±2, 2517.43±2, 2519.07±2, 2527.31±2, 2531.06±2, 2532.26±2, 2546.08±2, 2554.96±2, 2559.48±2, 2564.01±2, 2571.26±2, 2578.45±2, 2581.25±2, 2583.37±2, 2584.81±2, 2587.01±2, 2588.90±2, 2593.68±2, 2596.11±2, 2603.33±2, 2608.20±2, 2613.31±2, 2614.91±2, 2622.46±2, 2629.26±2, 2633.69±2, 2634.61±2, 2640.51±2, 2641.73±2, 2652.85±2, 2655.08±2, 2665.15±2, 2670.00±2, 2682.80±2, 2696.41±2, 2697.73±2, 2698.27±2, 2699.82±2, 3302.01±2, 3303.21±2, 3309.84±2, 3323.89±2, 3330.34±2, 3337.92±2, 3366.84±2, 3370.39±2, 3378.18±2, 3380.43±2, 3384.77±2;
のうちのいずれかにおいて前記健常検体のシグナルペプチドプロファイルと相違する場合に、被検体がALSに罹患もしくは発症していることに関連する、ALSの検出を補助するための方法。 - 前記被検体のシグナルペプチドのプロファイルについて、以下の分子量:
1405.71±2, 1406.49±2, 1409.40±2, 1410.97±2, 1418.70±2, 1426.68±2, 1437.62±2, 1445.77±2, 1451.61±2, 1456.44±2, 1458.88±2, 1466.24±2, 1468.86±2, 1472.12±2, 1476.87±2, 1482.60±2, 1493.58±2, 1495.42±2, 1496.52±2, 1498.88±2, 1502.40±2, 1505.52±2, 1508.76±2, 1510.50±2, 1516.64±2, 1521.93±2, 1529.32±2, 1530.37±2, 1533.52±2, 1539.36±2, 1544.22±2, 1553.72±2, 1555.72±2, 1560.24±2, 1566.20±2, 1567.20±2, 1575.70±2, 1578.07±2, 1580.91±2, 1589.58±2, 1592.55±2, 1597.25±2, 1608.53±2, 1609.36±2, 1610.62±2, 1616.12±2, 1629.15±2, 1639.39±2, 1640.36±2, 1646.58±2, 1655.72±2, 1657.97±2, 1659.24±2, 1660.46±2, 1662.16±2, 1679.09±2, 1682.54±2, 1683.12±2, 1687.34±2, 1688.14±2, 1691.08±2, 1691.75±2, 1694.76±2, 1695.74±2, 1700.65±2, 1702.19±2, 1708.77±2, 1712.10±2, 1714.63±2, 1715.56±2, 1719.51±2, 1721.61±2, 1726.31±2, 1737.85±2, 1739.71±2, 1743.69±2, 1761.79±2, 1769.93±2, 1774.13±2, 1775.70±2, 1786.39±2, 1788.03±2, 1790.80±2, 1796.23±2, 1797.49±2, 1800.34±2, 1801.79±2, 1804.45±2, 1810.72±2, 1812.3±21, 1813.77±2, 1817.26±2, 1818.66±2, 1819.93±2, 1821.71±2, 1822.73±2, 1829.48±2, 1832.41±2, 1836.18±2, 1837.33±2, 1840.84±2, 1849.81±2, 1854.68±2, 1858.34±2, 1864.19±2, 1866.06±2, 1875.28±2, 1876.50±2, 1878.25±2, 1890.21±2, 1891.32±2, 1893.00±2, 1904.69±2, 1911.46±2, 1913.68±2, 1916.02±2, 1919.35±2, 1927.13±2, 1931.84±2, 1934.86±2, 1936.83±2, 1937.87±2, 1941.22±2, 1944.97±2, 1948.39±2, 1952.47±2, 1957.80±2, 1962.82±2, 1969.82±2, 1972.54±2, 1975.58±2, 1976.51±2, 1977.70±2, 1979.29±2, 1988.46±2, 1991.91±2, 1995.37±2, 2009.91±2, 2011.18±2, 2013.86±2, 2023.97±2, 2027.73±2, 2030.95±2, 2032.69±2, 2039.29±2, 2043.12±2, 2045.68±2, 2051.76±2, 2059.05±2, 2062.98±2, 2066.09±2, 2074.03±2, 2075.32±2, 2079.80±2, 2083.74±2, 2085.85±2, 2089.53±2, 2092.80±2, 2097.03±2, 2099.42±2, 2111.39±2, 2113.10±2, 2115.77±2, 2120.37±2, 2126.55±2, 2137.63±2, 2139.15±2, 2143.42±2, 2146.46±2, 2149.85±2, 2151.02±2, 2160.22±2, 2161.68±2, 2167.09±2, 2168.75±2, 2173.75±2, 2177.51±2, 2179.25±2, 2185.65±2, 2186.28±2, 2190.18±2, 2191.02±2, 2192.84±2, 2196.47±2, 2199.82±2, 2201.22±2, 2204.02±2, 2207.10±2, 2211.58±2, 2216.77±2, 2218.45±2, 2219.30±2, 2220.56±2, 2222.74±2, 2226.96±2, 2228.22±2, 2231.60±2, 2239.71±2, 2244.01±2, 2251.78±2, 2254.83±2, 2256.53±2, 2261.91±2, 2266.45±2, 2268.58±2, 2274.97±2, 2276.04±2, 2278.67±2, 2281.09±2, 2285.01±2, 2289.43±2, 2290.85±2, 2292.35±2, 2295.92±2, 2296.92±2, 2301.71±2, 2302.50±2, 2303.21±2, 2305.43±2, 2307.22±2, 2314.24±2, 2317.68±2, 2325.30±2, 2341.14±2, 2342.87±2, 2344.45±2, 2351.97±2, 2353.99±2, 2355.29±2, 2357.54±2, 2367.75±2, 2375.59±2, 2378.35±2, 2380.39±2, 2393.64±2, 2402.11±2, 2404.01±2, 2406.49±2, 2412.79±2, 2414.25±2, 2415.20±2, 2416.30±2, 2431.13±2, 2434.36±2, 2438.19±2, 2439.22±2, 2444.37±2, 2451.90±2, 2453.96±2, 2455.44±2, 2456.62±2, 2459.43±2, 2462.31±2, 2464.16±2, 2470.97±2, 2478.17±2, 2479.28±2, 2484.18±2, 2500.40±2, 2502.64±2, 2504.73±2, 2507.42±2, 2509.21±2, 2515.26±2, 2517.43±2, 2519.07±2, 2527.31±2, 2531.06±2, 2532.26±2, 2546.08±2, 2554.96±2, 2559.48±2, 2564.01±2, 2571.26±2, 2578.45±2, 2581.25±2, 2583.37±2, 2584.81±2, 2587.01±2, 2588.90±2, 2593.68±2, 2596.11±2, 2603.33±2, 2608.20±2, 2613.31±2, 2614.91±2, 2622.46±2, 2629.26±2, 2633.69±2, 2634.61±2, 2640.51±2, 2641.73±2, 2652.85±2, 2655.08±2, 2665.15±2, 2670.00±2, 2682.80±2, 2696.41±2, 2698.27±2, 2699.82±2, 3302.01±2, 3303.21±2, 3323.89±2, 3330.34±2, 3337.92±2, 3366.84±2, 3370.39±2, 3378.18±2, 3380.43±2, 3384.77±2;
のうちのいずれかで特定されるシグナルペプチドの存在量が前記健常検体のシグナルペプチドプロファイルと比較して増大している場合に、被検体がALSに罹患もしくは発症していることに関連する、請求項1に記載の方法。 - 前記被検体のシグナルペプチドプロファイルについて、以下の分子量:
1497.16±2, 1567.74±2, 1705.53±2, 1819.34±2, 1831.81±2, 1935.52±2, 2055.50±2, 2065.57±2, 2084.36±2, 2092.25±2, 2140.48±2, 2167.78±2, 2184.93±2, 2314.81±2, 2327.73±2, 2697.73±2, 3309.84±2;
のうちのいずれかで特定されるシグナルペプチドの存在量が前記健常検体のシグナルペプチドプロファイルと比較して減少している場合に、被検体がALSに罹患もしくは発症していることに関連する、請求項1に記載の方法。 - 前記被検体由来の体液中のシグナルペプチドプロファイルを、質量分析装置を用いて検査する、請求項1~3のいずれか一項に記載の方法。
- 前記シグナルペプチドのプロファイルを決定する前に、被検体由来の体液を熱可塑性樹脂上に固定すること、を包含し、
前記熱可塑性樹脂上に固定した体液中に存在するシグナルペプチドのプロファイルを、マトリックス支援レーザー脱離イオン化飛行時間型質量分析計を用いて決定する、請求項4に記載の方法。 - 前記体液が、脳脊髄液である、請求項1~5のいずれか一項に記載の方法。
- 筋萎縮性側索硬化症(ALS)の検出を補助するための方法であって、
被検体由来の体液中において、ALS関連シグナルペプチドが存在しているか否か、或いは、該ALS関連シグナルペプチドが存在している場合にはその存在量の程度を検査すること、を包含し、
ここで、前記ALS関連シグナルペプチドは、ALS患者由来の体液中における該シグナルペプチドの存在の有無或いはその存在量の程度が、健常検体由来の体液中における該シグナルペプチドの存在の有無或いはその存在量の程度から設定した基準レベルと異なるシグナルペプチドであって、該シグナルペプチドの分子量が、
1405.71±2, 1406.49±2, 1409.40±2, 1410.97±2, 1418.70±2, 1426.68±2, 1437.62±2, 1445.77±2, 1451.61±2, 1456.44±2, 1458.88±2, 1466.24±2, 1468.86±2, 1472.12±2, 1476.87±2, 1482.60±2, 1493.58±2, 1495.42±2, 1496.52±2, 1497.16±2, 1498.88±2, 1502.40±2, 1505.52±2, 1508.76±2, 1510.50±2, 1516.64±2, 1521.93±2, 1529.32±2, 1530.37±2, 1533.52±2, 1539.36±2, 1544.22±2, 1553.72±2, 1555.72±2, 1560.24±2, 1566.20±2, 1567.20±2, 1567.74±2, 1575.70±2, 1578.07±2, 1580.91±2, 1589.58±2, 1592.55±2, 1597.25±2, 1608.53±2, 1609.36±2, 1610.62±2, 1616.12±2, 1629.15±2, 1639.39±2, 1640.36±2, 1646.58±2, 1655.72±2, 1657.97±2, 1659.24±2, 1660.46±2, 1662.16±2, 1679.09±2, 1682.54±2, 1683.12±2, 1687.34±2, 1688.14±2, 1691.08±2, 1691.75±2, 1694.76±2, 1695.74±2, 1700.65±2, 1702.19±2, 1705.53±2, 1708.77±2, 1712.10±2, 1714.63±2, 1715.56±2, 1719.51±2, 1721.61±2, 1726.31±2, 1737.85±2, 1739.71±2, 1743.69±2, 1761.79±2, 1769.93±2, 1774.13±2, 1775.70±2, 1786.39±2, 1788.03±2, 1790.80±2, 1796.23±2, 1797.49±2, 1800.34±2, 1801.79±2, 1804.45±2, 1810.72±2, 1812.31±2, 1813.77±2, 1817.26±2, 1818.66±2, 1819.34±2, 1819.93±2, 1821.71±2, 1822.73±2, 1829.48±2, 1831.81±2, 1832.41±2, 1836.18±2, 1837.33±2, 1840.84±2, 1849.81±2, 1854.68±2, 1858.34±2, 1864.19±2, 1866.06±2, 1875.28±2, 1876.50±2, 1878.25±2, 1890.21±2, 1891.32±2, 1893.00±2, 1904.69±2, 1911.46±2, 1913.68±2, 1916.02±2, 1919.35±2, 1927.13±2, 1931.84±2, 1934.86±2, 1935.52±2, 1936.83±2, 1937.87±2, 1941.22±2, 1944.97±2, 1948.39±2, 1952.47±2, 1957.80±2, 1962.82±2, 1969.82±2, 1972.54±2, 1975.58±2, 1976.51±2, 1977.70±2, 1979.29±2, 1988.46±2, 1991.91±2, 1995.37±2, 2009.91±2, 2011.18±2, 2013.86±2, 2023.97±2, 2027.73±2, 2030.95±2, 2032.69±2, 2039.29±2, 2043.12±2, 2045.68±2, 2051.76±2, 2055.50±2, 2059.05±2, 2062.98±2, 2065.57±2, 2066.09±2, 2074.03±2, 2075.32±2, 2079.80±2, 2083.74±2, 2084.36±2, 2085.85±2, 2089.53±2, 2092.25±2, 2092.80±2, 2097.03±2, 2099.42±2, 2111.39±2, 2113.10±2, 2115.77±2, 2120.37±2, 2126.55±2, 2137.63±2, 2139.15±2, 2140.48±2, 2143.42±2, 2146.46±2, 2149.85±2, 2151.02±2, 2160.22±2, 2161.68±2, 2167.09±2, 2167.78±2, 2168.75±2, 2173.75±2, 2177.51±2, 2179.25±2, 2184.93±2, 2185.65±2, 2186.28±2, 2190.18±2, 2191.02±2, 2192.84±2, 2196.47±2, 2199.82±2, 2201.22±2, 2204.02±2, 2207.10±2, 2211.58±2, 2216.77±2, 2218.45±2, 2219.30±2, 2220.56±2, 2222.74±2, 2226.96±2, 2228.22±2, 2231.60±2, 2239.71±2, 2244.01±2, 2251.78±2, 2254.83±2, 2256.53±2, 2261.91±2, 2266.45±2, 2268.58±2, 2274.97±2, 2276.04±2, 2278.67±2, 2281.09±2, 2285.01±2, 2289.43±2, 2290.85±2, 2292.35±2, 2295.92±2, 2296.92±2, 2301.71±2, 2302.50±2, 2303.21±2, 2305.43±2 2307.22±2, 2314.24±2, 2314.81±2, 2317.68±2, 2325.30±2, 2327.73±2, 2341.14±2, 2342.87±2, 2344.45±2, 2351.97±2, 2353.99±2, 2355.29±2, 2357.54±2, 2367.75±2, 2375.59±2, 2378.35±2, 2380.39±2, 2393.64±2, 2402.11±2, 2404.01±2, 2406.49±2, 2412.79±2, 2414.25±2, 2415.20±2, 2416.30±2, 2431.13±2, 2434.36±2, 2438.19±2, 2439.22±2, 2444.37±2, 2451.90±2, 2453.96±2, 2455.44±2, 2456.62±2, 2459.43±2, 2462.31±2, 2464.16±2, 2470.97±2, 2478.17±2, 2479.28±2, 2484.18±2, 2500.40±2, 2502.64±2, 2504.73±2, 2507.42±2, 2509.21±2, 2515.26±2, 2517.43±2, 2519.07±2, 2527.31±2, 2531.06±2, 2532.26±2, 2546.08±2, 2554.96±2, 2559.48±2, 2564.01±2, 2571.26±2, 2578.45±2, 2581.25±2, 2583.37±2, 2584.81±2, 2587.01±2, 2588.90±2, 2593.68±2, 2596.11±2, 2603.33±2, 2608.20±2, 2613.31±2, 2614.91±2, 2622.46±2, 2629.26±2, 2633.69±2, 2634.61±2, 2640.51±2, 2641.73±2, 2652.85±2, 2655.08±2, 2665.15±2, 2670.00±2, 2682.80±2, 2696.41±2, 2697.73±2, 2698.27±2, 2699.82±2, 3302.01±2, 3303.21±2, 3309.84±2, 3323.89±2, 3330.34±2, 3337.92±2, 3366.84±2, 3370.39±2, 3378.18±2, 3380.43±2、または、3384.77±2である、ALSの検出を補助するための方法。 - 前記ALS関連シグナルペプチドを構成するアミノ酸配列が、配列番号1~1580に示すアミノ酸配列のうちのいずれかである、請求項7に記載の方法。
- 上記検査したALS関連シグナルペプチドのうちの、分子量が、
1405.71±2, 1406.49±2, 1409.40±2, 1410.97±2, 1418.70±2, 1426.68±2, 1437.62±2, 1445.77±2, 1451.61±2, 1456.44±2, 1458.88±2, 1466.24±2, 1468.86±2, 1472.12±2, 1476.87±2, 1482.60±2, 1493.58±2, 1495.42±2, 1496.52±2, 1498.88±2, 1502.40±2, 1505.52±2, 1508.76±2, 1510.50±2, 1516.64±2, 1521.93±2, 1529.32±2, 1530.37±2, 1533.52±2, 1539.36±2, 1544.22±2, 1553.72±2, 1555.72±2, 1560.24±2, 1566.20±2, 1567.20±2, 1575.70±2, 1578.07±2, 1580.91±2, 1589.58±2, 1592.55±2, 1597.25±2, 1608.53±2, 1609.36±2, 1610.62±2, 1616.12±2, 1629.15±2, 1639.39±2, 1640.36±2, 1646.58±2, 1655.72±2, 1657.97±2, 1659.24±2, 1660.46±2, 1662.16±2, 1679.09±2, 1682.54±2, 1683.12±2, 1687.34±2, 1688.14±2, 1691.08±2, 1691.75±2, 1694.76±2, 1695.74±2, 1700.65±2, 1702.19±2, 1708.77±2, 1712.10±2, 1714.63±2, 1715.56±2, 1719.51±2, 1721.61±2, 1726.31±2, 1737.85±2, 1739.71±2, 1743.69±2, 1761.79±2, 1769.93±2, 1774.13±2, 1775.70±2, 1786.39±2, 1788.03±2, 1790.80±2, 1796.23±2, 1797.49±2, 1800.34±2, 1801.79±2, 1804.45±2, 1810.72±2, 1812.3±21, 1813.77±2, 1817.26±2, 1818.66±2, 1819.93±2, 1821.71±2, 1822.73±2, 1829.48±2, 1832.41±2, 1836.18±2, 1837.33±2, 1840.84±2, 1849.81±2, 1854.68±2, 1858.34±2, 1864.19±2, 1866.06±2, 1875.28±2, 1876.50±2, 1878.25±2, 1890.21±2, 1891.32±2, 1893.00±2, 1904.69±2, 1911.46±2, 1913.68±2, 1916.02±2, 1919.35±2, 1927.13±2, 1931.84±2, 1934.86±2, 1936.83±2, 1937.87±2, 1941.22±2, 1944.97±2, 1948.39±2, 1952.47±2, 1957.80±2, 1962.82±2, 1969.82±2, 1972.54±2, 1975.58±2, 1976.51±2, 1977.70±2, 1979.29±2, 1988.46±2, 1991.91±2, 1995.37±2, 2009.91±2, 2011.18±2, 2013.86±2, 2023.97±2, 2027.73±2, 2030.95±2, 2032.69±2, 2039.29±2, 2043.12±2, 2045.68±2, 2051.76±2, 2059.05±2, 2062.98±2, 2066.09±2, 2074.03±2, 2075.32±2, 2079.80±2, 2083.74±2, 2085.85±2, 2089.53±2, 2092.80±2, 2097.03±2, 2099.42±2, 2111.39±2, 2113.10±2, 2115.77±2, 2120.37±2, 2126.55±2, 2137.63±2, 2139.15±2, 2143.42±2, 2146.46±2, 2149.85±2, 2151.02±2, 2160.22±2, 2161.68±2, 2167.09±2, 2168.75±2, 2173.75±2, 2177.51±2, 2179.25±2, 2185.65±2, 2186.28±2, 2190.18±2, 2191.02±2, 2192.84±2, 2196.47±2, 2199.82±2, 2201.22±2, 2204.02±2, 2207.10±2, 2211.58±2, 2216.77±2, 2218.45±2, 2219.30±2, 2220.56±2, 2222.74±2, 2226.96±2, 2228.22±2, 2231.60±2, 2239.71±2, 2244.01±2, 2251.78±2, 2254.83±2, 2256.53±2, 2261.91±2, 2266.45±2, 2268.58±2, 2274.97±2, 2276.04±2, 2278.67±2, 2281.09±2, 2285.01±2, 2289.43±2, 2290.85±2, 2292.35±2, 2295.92±2, 2296.92±2, 2301.71±2, 2302.50±2, 2303.21±2, 2305.43±2, 2307.22±2, 2314.24±2, 2317.68±2, 2325.30±2, 2341.14±2, 2342.87±2, 2344.45±2, 2351.97±2, 2353.99±2, 2355.29±2, 2357.54±2, 2367.75±2, 2375.59±2, 2378.35±2, 2380.39±2, 2393.64±2, 2402.11±2, 2404.01±2, 2406.49±2, 2412.79±2, 2414.25±2, 2415.20±2, 2416.30±2, 2431.13±2, 2434.36±2, 2438.19±2, 2439.22±2, 2444.37±2, 2451.90±2, 2453.96±2, 2455.44±2, 2456.62±2, 2459.43±2, 2462.31±2, 2464.16±2, 2470.97±2, 2478.17±2, 2479.28±2, 2484.18±2, 2500.40±2, 2502.64±2, 2504.73±2, 2507.42±2, 2509.21±2, 2515.26±2, 2517.43±2, 2519.07±2, 2527.31±2, 2531.06±2, 2532.26±2, 2546.08±2, 2554.96±2, 2559.48±2, 2564.01±2, 2571.26±2, 2578.45±2, 2581.25±2, 2583.37±2, 2584.81±2, 2587.01±2, 2588.90±2, 2593.68±2, 2596.11±2, 2603.33±2, 2608.20±2, 2613.31±2, 2614.91±2, 2622.46±2, 2629.26±2, 2633.69±2, 2634.61±2, 2640.51±2, 2641.73±2, 2652.85±2, 2655.08±2, 2665.15±2, 2670.00±2, 2682.80±2, 2696.41±2, 2698.27±2, 2699.82±2, 3302.01±2, 3303.21±2, 3323.89±2, 3330.34±2, 3337.92±2, 3366.84±2, 3370.39±2, 3378.18±2, 3380.43±2、または、3384.77±2
であるALS関連シグナルペプチドのいずれかについて、被検体由来の体液中の該シグナルペプチドの存在量の程度が、前記基準レベルと比較して大きいことを確認する、請求項7または8に記載の方法。 - 前記ALS関連シグナルペプチドのアミノ酸配列が、配列番号1~16, 21~27, 29~46, 53~67, 72~87, 94~108, 118~172, 179~243, 248~295, 297~304, 307~317, 320~333, 337~354, 359~422, 424, 425, 430~585, 587~593, 595~605, 607~693, 696, 699~777, 786~902, 906~914, 918~945, 947~983, 990~1029, 1042~1201, 1208~1217, 1230~1566, 1569~1571, 1574~1580に示すアミノ酸配列のうちの何れかである、請求項9に記載の方法。
- 上記検査したALS関連シグナルペプチドのうちの、分子量が、
1497.16±2, 1567.74±2, 1705.53±2, 1819.34±2, 1831.81±2, 1935.52±2, 2055.50±2, 2065.57±2, 2084.36±2, 2092.25±2, 2140.48±2, 2167.78±2, 2184.93±2, 2314.81±2, 2327.73±2, 2697.73±2、または、3309.84±2
であるALS関連シグナルペプチドのいずれかについて、被検体由来の体液中の該シグナルペプチドの存在量の程度が、前記基準レベルと比較して小さいことを確認することを更に包含する、請求項7または8に記載の方法。 - 前記ALS関連シグナルペプチドのアミノ酸配列が、配列番号68, 69, 296, 357, 429, 903~905, 1223~1229, 1572, 1573に示すアミノ酸配列のうちの何れかである、請求項11に記載の方法。
- 分子量が、1502.40±2, 1521.93±2, 1629.15±2, 1682.54±2, 1691.75±2, 1705.53±2, 1821.71±2, 1836.18±2, 1948.39±2, 2011.18±2, 2092.80±2, 2099.42±2, 2177.51±2, 2179.25±2, 2186.28±2, 2211.58±2, 2226.96±2, 2254.83±2, 2278.67±2, 2290.85±2, 2292.35±2, 2502.64±2, 2640.51±2, 2698.27±2または、3330.34±2
であるALS関連シグナルペプチドの存在量の程度を少なくとも検査する、請求項7~12のいずれか一項に記載の方法。 - 前記ALS関連シグナルペプチドを構成するアミノ酸配列が、配列番号1~180に示すアミノ酸配列のうちのいずれかである、請求項13に記載の方法。
- 前記被検体由来の体液について、分子量が相互に3以上異なる10種以上のALS関連シグナルペプチドについて検査する、請求項7~14のいずれか一項に記載の方法。
- 前記被検体由来の体液中のALS関連シグナルペプチドの存在の有無或いはその存在量の程度を、質量分析装置を用いて検査する、請求項7~15のいずれか一項に記載の方法。
- 前記体液中のALS関連シグナルペプチドの存在の有無およびその存在量の程度を検査する前に、該体液を熱可塑性樹脂上に固定すること、を包含し、
前記熱可塑性樹脂上に固定した体液中のALS関連シグナルペプチドの存在の有無およびその存在量の程度を、マトリックス支援レーザー脱離イオン化飛行時間型質量分析計を用いて検査する、請求項16に記載の方法。 - 前記体液が、脳脊髄液である、請求項7~17のいずれか一項に記載の方法。
- 筋萎縮性側索硬化症(ALS)の診断に用いられるバイオマーカーであって、
配列番号1~1580に示すアミノ酸配列のうちの何れかのアミノ酸配列からなるシグナルペプチドである、バイオマーカー。 - 筋萎縮性側索硬化症(ALS)の検出に用いられる組成物であって、
配列番号1~1580に示すアミノ酸配列のうちの何れかから成る合成ペプチドと、
1種または2種以上の担体と、
を含む、組成物。 - 筋萎縮性側索硬化症(ALS)の検出に用いられるキットであって、
配列番号1~1580に示すアミノ酸配列のうちの何れかからなる合成ペプチドと、
被検体由来の体液または前記合成ペプチドを固定するための支持体と、
を含む、ALS診断用キット。 - 前記支持体が熱可塑性樹脂製である、請求項21に記載のキット。
Priority Applications (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2018503408A JP7076076B2 (ja) | 2016-03-03 | 2017-03-02 | シグナルペプチドを指標にした筋萎縮性側索硬化症の診断方法 |
US16/081,247 US11313862B2 (en) | 2016-03-03 | 2017-03-02 | Method for diagnosing amyotrophic lateral sclerosis using signal peptide as indicator |
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2016041054 | 2016-03-03 | ||
JP2016-041054 | 2016-03-03 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
WO2017150681A1 true WO2017150681A1 (ja) | 2017-09-08 |
Family
ID=59743068
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
PCT/JP2017/008332 WO2017150681A1 (ja) | 2016-03-03 | 2017-03-02 | シグナルペプチドを指標にした筋萎縮性側索硬化症の診断方法 |
Country Status (3)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US11313862B2 (ja) |
JP (1) | JP7076076B2 (ja) |
WO (1) | WO2017150681A1 (ja) |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2019175381A1 (en) * | 2018-03-16 | 2019-09-19 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Antigenic peptides deriving from pcsk2 and uses thereof for the diagnosis and treatment of type 1 diabetes |
JP2020003360A (ja) * | 2018-06-28 | 2020-01-09 | 東亞合成株式会社 | 3大神経変性疾患の診断補助方法 |
US20210024603A1 (en) * | 2018-03-16 | 2021-01-28 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Antigenic peptides deriving from urocortin 3 and uses thereof for the diagnosis and treatment of type 1 diabetes |
Families Citing this family (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN111462814B (zh) * | 2020-04-01 | 2023-02-17 | 广州市中医医院(广州市中医中药研究所) | 一种基于网络药理学分析马钱子活性成分镇痛作用的方法 |
WO2023159187A2 (en) * | 2022-02-18 | 2023-08-24 | La Jolla Institute For Immunology | Anti-sars-cov2 spike (s) antibodies and uses thereof |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2005042761A2 (en) * | 2003-10-23 | 2005-05-12 | University Of Pittsburgh Of The Commonwealth System Of Higher Education | Biomarkers for amyotrophic lateral sclerosis |
US20050244904A1 (en) * | 2003-10-29 | 2005-11-03 | Leong Ng | Diagnostics based on signal peptide detection |
WO2015178249A1 (ja) * | 2014-05-19 | 2015-11-26 | 国立大学法人名古屋大学 | サンプル中の成分の分析方法、サンプル中の成分の特異的分離方法及び質量分析用サンプル |
WO2016032319A1 (en) * | 2014-08-28 | 2016-03-03 | Erasmus University Medical Center Rotterdam | Protein quantitation with mass spectrometry. |
Family Cites Families (18)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS5154062A (ja) | 1974-11-07 | 1976-05-12 | Kobe Steel Ltd | Seisuiatsuoshidashipuresu |
CA2383690A1 (en) * | 1999-07-23 | 2001-02-01 | Human Genome Sciences, Inc. | 29 human secreted proteins |
EP1234030A4 (en) * | 1999-11-19 | 2003-05-07 | Human Genome Sciences Inc | 18 HUMAN SECRETED PROTEINS |
AU2001271714A1 (en) * | 2000-06-30 | 2002-01-14 | Human Genome Sciences, Inc. | B7-like polynucleotides, polypeptides, and antibodies |
US20030143191A1 (en) * | 2001-05-25 | 2003-07-31 | Adam Bell | Chemokine beta-1 fusion proteins |
US20040266674A1 (en) * | 2001-09-05 | 2004-12-30 | Mills Bradley Jay | Lp mammalian proteins; related reagents |
CA2468408A1 (en) * | 2001-11-28 | 2003-06-05 | Genset S.A. | Human cdnas and proteins and uses thereof |
EP1522856A1 (en) * | 2003-10-09 | 2005-04-13 | BioVisioN AG | Method for the detection of a neurological or psychiatric, demential disease, especially Alzheimer's disease by use of cholecystokinin (CCK)-molecules, corresponding substances and detection reagents |
WO2005113831A2 (en) * | 2004-05-19 | 2005-12-01 | Ppd Biomarker Discovery Sciences, Llc | Biomarkers for multiple sclerosis and methods of use thereof |
WO2006107814A2 (en) * | 2005-04-06 | 2006-10-12 | Washington University In St. Louis | Methods for measuring the metabolism of neurally derived biomolecules in vivo |
WO2007100782A2 (en) * | 2006-02-28 | 2007-09-07 | Metabolon, Inc. | Biomarkers for amyotrophic lateral sclerosis and methods using the same |
JP5422785B2 (ja) | 2008-09-12 | 2014-02-19 | 国立大学法人名古屋大学 | 質量分析法を利用した複数癌腫の血液検出のための方法および生物マーカー |
IT1392551B1 (it) * | 2008-11-25 | 2012-03-09 | Bioindustry Park Del Canavese S P A | Biomarcatori per la diagnosi e per rilevare la progressione di malattie neurodegenerative, in particolare della sclerosi laterale amiotrofica |
JP5731109B2 (ja) * | 2009-07-09 | 2015-06-10 | 東亞合成株式会社 | 疎水性ペプチドに対する抗体の製造方法 |
WO2011108534A1 (ja) | 2010-03-01 | 2011-09-09 | Shinozawa Takao | プロスタグランディンD2とその代謝物およびクレアチニンの分析による筋萎縮性側索硬化症(ALS)の診断方法、治療における薬物の有効性を評価する方法および尿中のtPGDM濃度を推測するシステム |
US9861686B2 (en) * | 2011-12-05 | 2018-01-09 | Ben-Gurion University Of The Negev Research & Development Authority | Diagnostic and therapeutic methods and their application in amyotrophic lateral sclerosis (ALS) |
WO2013177533A1 (en) * | 2012-05-25 | 2013-11-28 | California Institute Of Technology | Expression of secreted and cell-surface polypeptides |
EP3107939B1 (en) * | 2014-02-19 | 2020-06-17 | University of Florida Research Foundation, Inc. | Delivery of nrf2 as therapy for protection against reactive oxygen species |
-
2017
- 2017-03-02 WO PCT/JP2017/008332 patent/WO2017150681A1/ja active Application Filing
- 2017-03-02 US US16/081,247 patent/US11313862B2/en active Active
- 2017-03-02 JP JP2018503408A patent/JP7076076B2/ja active Active
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2005042761A2 (en) * | 2003-10-23 | 2005-05-12 | University Of Pittsburgh Of The Commonwealth System Of Higher Education | Biomarkers for amyotrophic lateral sclerosis |
US20050244904A1 (en) * | 2003-10-29 | 2005-11-03 | Leong Ng | Diagnostics based on signal peptide detection |
WO2015178249A1 (ja) * | 2014-05-19 | 2015-11-26 | 国立大学法人名古屋大学 | サンプル中の成分の分析方法、サンプル中の成分の特異的分離方法及び質量分析用サンプル |
WO2016032319A1 (en) * | 2014-08-28 | 2016-03-03 | Erasmus University Medical Center Rotterdam | Protein quantitation with mass spectrometry. |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
B UTTERFIELD,D.A.: "MASS SPECTROMETRY AND REDOX PROTEOMICS: APPLICATIONS IN DISEASE", MASS SPECTROMETRY REVIEWS, vol. 33, no. 4, 2014, pages 277 - 301, XP055414964 * |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2019175381A1 (en) * | 2018-03-16 | 2019-09-19 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Antigenic peptides deriving from pcsk2 and uses thereof for the diagnosis and treatment of type 1 diabetes |
US20210024603A1 (en) * | 2018-03-16 | 2021-01-28 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Antigenic peptides deriving from urocortin 3 and uses thereof for the diagnosis and treatment of type 1 diabetes |
JP2020003360A (ja) * | 2018-06-28 | 2020-01-09 | 東亞合成株式会社 | 3大神経変性疾患の診断補助方法 |
JP7194926B2 (ja) | 2018-06-28 | 2022-12-23 | 東亞合成株式会社 | 3大神経変性疾患の診断補助方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JPWO2017150681A1 (ja) | 2019-01-17 |
US20190094236A1 (en) | 2019-03-28 |
US11313862B2 (en) | 2022-04-26 |
JP7076076B2 (ja) | 2022-05-27 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP7076076B2 (ja) | シグナルペプチドを指標にした筋萎縮性側索硬化症の診断方法 | |
Good et al. | Naturally occurring human urinary peptides for use in diagnosis of chronic kidney disease | |
JP4717810B2 (ja) | 1型糖尿病と2型糖尿病を識別するためのバイオマーカー | |
US8911960B2 (en) | Method for identifying idiopathic pneumonia progression by measuring the level of mannose-binding protein C | |
JP7285215B2 (ja) | 大腸がんを検出するためのバイオマーカー | |
EP3232198A1 (en) | Biomarker for diagnosis of hepatoma and use thereof | |
US11467167B2 (en) | SRM methods in Alzheimer's disease and neurological disease assays | |
EP1977250A1 (en) | Method and markers for the diagnosis of renal diseases | |
WO2013172105A1 (ja) | 膵臓癌を検出するためのマーカー | |
JP2013515272A (ja) | 上皮成長因子受容体(egfregfr)タンパク質srm/mrmアッセイ | |
US20060286602A1 (en) | Method and markers for the diagnosis of renal diseases | |
Nedelkov et al. | Top-down mass spectrometric immunoassay for human insulin and its therapeutic analogs | |
Loo et al. | Proteomics in molecular diagnosis: typing of amyloidosis | |
JP7076075B2 (ja) | シグナルペプチドを指標にしたアルツハイマー病の診断方法 | |
JP2013515273A (ja) | インスリン様増殖因子1受容体(igf−1r)タンパク質srm/mrmアッセイ | |
JP6046147B2 (ja) | がんの評価のための多重mrmアッセイ | |
WO2006108051A2 (en) | Compositions and methods relating to alzheimer's disease | |
US20140336281A1 (en) | SRM/MRM Assay for the Ephrin Typa-A Receptor 2 Protein | |
US20160209412A1 (en) | Msia-srm assay for biomarker analysis | |
JP2013515271A (ja) | インスリン受容体基質1(irs1)タンパク質srm/mrmアッセイ | |
WO2019012667A1 (ja) | 認知機能障害疾患のバイオマーカー及び該バイオマーカーを用いる認知機能障害疾患の検出方法 | |
JP6046144B2 (ja) | 脂肪酸シンターゼタンパク質に対するsrm/mrmアッセイ | |
US20180067130A1 (en) | Pglyrp2 biomarker in idiopathic pneumonia syndrome | |
JP7336097B2 (ja) | 乳がんに関するペプチドマーカー | |
JP2013515274A (ja) | 酸性およびシステインに富む分泌(sparc)タンパク質srm/mrmアッセイ |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
WWE | Wipo information: entry into national phase |
Ref document number: 2018503408 Country of ref document: JP |
|
NENP | Non-entry into the national phase |
Ref country code: DE |
|
121 | Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application |
Ref document number: 17760144 Country of ref document: EP Kind code of ref document: A1 |
|
122 | Ep: pct application non-entry in european phase |
Ref document number: 17760144 Country of ref document: EP Kind code of ref document: A1 |