WO2017043670A1 - 유자 추출물을 함유하는 화장료 조성물 - Google Patents

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WO2017043670A1
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    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin

Definitions

  • the present invention relates to a cosmetic composition containing a citron extract, and more specifically, citron seed oil, a citron seed extract, essential oil and a gas produced during drying, which are produced by collecting and liquefying a gas generated during drying, and then liquefied It relates to a cosmetic composition containing the active ingredient extracted from the extract of the yuzu bark and containing the yuzu extract excellent in antibacterial, moisturizing, deodorant effect.
  • the skin of the human body is an important organ that protects the body from external stimuli.
  • the surface of the skin is composed of a structure in which the sebaceous glands secreted by sebum and sweat glands cover the stratum corneum, which always replenishes insufficient moisture and maintains a healthy and shiny state.
  • the skin protects the skin from ultraviolet rays, and plays an important role of the body, such as performing a temperature control function in the body.
  • the skin is an organ that is actively extinguished and produced. It protects the body and prevents water loss. Ideal when the moisture content of the stratum corneum is 20%, but loss of moisture causes the keratin to drop off and to be exposed to the outside, causing irritation and skin diseases. Dry skin is weakened immune function, not only atopic dermatitis, but also allergic to skin erythema, itching, itching. Therefore, it is important to prevent skin moisture loss.
  • the cosmetics used to protect these skins and to enhance barrier and skin-enhancing effects are mixed with various ingredients.
  • Solubilizers, emulsifiers, preservatives, fragrances, sunscreens, and other functionally active ingredients that are less related to skin protection purposes It is known to cause irritation, inflammation, allergies, erythema, edema, and itching.
  • Korean Patent Publication No. 2009-0073632 discloses a cosmetic for alleviating the skin irritation for the purpose of irritating and anti-inflammatory effect, which contains Yeok tree extract and licorice extract
  • Korea Patent No. 1064570 discloses' Disclosed is a composition for relieving skin irritation due to erythema, itching or itching, which contains red ginseng, cinnamon, triticale and tanza mixed extract as an active ingredient.
  • the inventors of the present invention while searching for a substance having a skin stimulating effect by the irritating component of ultraviolet rays or cosmetics, citron oil using citron seed oil shows an excellent skin irritant effect, and confirmed that the erythema production inhibitory and skin moisturizing effect is also excellent
  • the present invention has been completed.
  • the present invention has been made to solve the above problems, the present invention is to provide a cosmetic composition containing an active ingredient of citron seed oil, citron essential oil and citron seed extract.
  • Another object of the present invention is to provide a cosmetic composition
  • a cosmetic composition comprising citron seed oil, citron essential oil and citron seed extract as active ingredients.
  • Cosmetic composition containing the citron extract according to the present invention comprises a first step of washing after separating the citron seed;
  • the washed citron seed is naturally dried in the shade for 1 to 3 days and then artificially dried for 25 to 27 hours in a dryer, wherein the moisture contained in the citron seed is 1 to 4% by weight of the second drying.
  • a third step of preparing powder by grinding the dried citron seed A fourth step of heating and humidifying the citron seed powder by adding steam for 1 to 2 hours in a steamer; A fifth step of manufacturing the heating and humidifying the citron seeds and milking, while rotating the buntae per minute from 40 to 50 and up to 180 °C to 200 °C a milking machine which is pressed to 450kgf / cm 2 to 500kgf / cm 2 citrus seed oil;
  • a sixth step of preparing the citron shell oil by collecting and liquefying the gas produced by vacuum drying the citron fruit shell in its original state or pulverizing at a vacuum degree of 200 to 250 mmHg and 25 to 30 ° C.
  • the functional mixture is stearic acid, palmitic acid, tocopheryl acetate, beeswax, cetyl alcohol, glyceryl stearate, Fiji-75 stearate, three TES-20, steares-20, polysorbate-20, purified water, carbomer, glycerin, butylene glycol, phenoxyethanol, methyl paraben, disodium ethane and triethanolamine
  • a ninth step characterized in that the manufacturing including.
  • the present invention is also composed of natural oils have atopic dermatitis improvement effect and skin vitality and anti-aging effect, there is a skin softening action and skin regeneration effect.
  • 1 is a flow chart showing a cosmetic composition manufacturing method containing the citron extract of the present invention
  • the fragrance may evaporate.
  • the ninth step (S90) is to prepare a cosmetic by mixing the functional mixture in the citron essential oil.
  • the functional mixture is 1 part by weight of palmitic acid, 1 part by weight of tocopheryl acetate, 1.5 parts by weight of beeswax, 0.6 parts by weight of cetyl alcohol, 0.6 parts by weight of glyceryl stearate, and 1 part by weight of stearic acid.
  • the stearic acid is a higher fatty acid that maintains the formulation and forms a skin moisturizing film.
  • the palmitic acid is a mixture of higher saturated fatty acids and is contained in surfactants and flavoring agents.
  • the tocopheryl acetate is a fat-soluble compound, also called vitamin E acetate. It is mainly used as a raw material for skin-related products such as skin cream, and it protects the skin from harmful oxygen.
  • the beeswax is a natural material extracted from a natural honeycomb, and has a propolis effect to enhance immunity and suppress the growth of bacteria.
  • the cetyl alcohol does not have emulsifying power per se, but is used as an emulsifying stabilizer of an emulsified product.
  • the glyceryl stearate is a nonionic surfactant and an emulsifier made by addition polymerization of ethylene oxide to the free hydroxyl group of glycerin monostearate.
  • the sebum stearate has a moisture and moisturizing effect and helps to calm the skin.
  • the cetes is used as a surfactant or emulsifier and used as a skin conditioning agent.
  • the steares are used as surfactants or emulsifiers or inhibit water evaporation.
  • the polysorbate acts as an emulsifier to easily dissolve other ingredients that are not mixed with each other in cosmetics.
  • the polysorbate is preferably used with components that serve as other emulsifiers than those used alone.
  • the carbomer is a polymer compound that increases the viscosity.
  • the glycerin has a strong absorbency and was used as a moisturizer.
  • the butylene glycol is a colorless transparent moisturizer.
  • the phenoxyethanol is used as a preservative.
  • the methylparaben has an antimicrobial action and is used as a natural preservative.
  • the disodium id is used as an ion regulator.
  • the triethanolamine is a kind of surfactant, so that oil and water are well mixed in the present invention to improve applicability.
  • the cosmetic is preferably mixed 95 to 100 parts by weight of the functional mixture with respect to 1 part by weight of the citron essential oil.
  • Comparative Example 1 is a commercial moisture cosmetic.
  • Example 1 is a cosmetic composition containing a naturally dried citron extract for 20 hours in the shade in the dry condition in the second step based on the above.
  • Example 2 is a cosmetic composition containing a naturally dried citron extract for 5 days in the shade in the dry condition in the second step based on the above.
  • Example 3 is a cosmetic composition containing the citron extract artificially dried for 20 hours in a drying condition in the second step based on the above.
  • Example 4 is a cosmetic composition containing the citron extract artificially dried for 30 hours in a drying condition in the second step based on the above.
  • Example 5 is a cosmetic composition containing the heated and humidified citron extract for 30 minutes the time of applying the steam in the fourth step based on the above.
  • Example 6 is a cosmetic composition containing the heated and humidified citron extract for 3 hours the steam is added in the fourth step based on the above.
  • Example 7 is a cosmetic composition containing a citron extract prepared by the vacuum pressure of 100 mmHg in the sixth step based on the above.
  • Example 8 is a cosmetic composition containing a citron extract prepared by the vacuum pressure 300mmHg in the sixth step based on the above.
  • Example 9 is a cosmetic composition containing a citron extract prepared by the vacuum temperature in the sixth step to 20 °C based on the above.
  • Example 10 is a cosmetic composition containing a citron extract prepared by the vacuum temperature in the sixth step to 40 °C based on the above.
  • Example 11 is a cosmetic composition containing the citron extract prepared by the vacuum time for 4 hours in the sixth step based on the above.
  • Example 12 is a cosmetic composition containing the citron extract prepared by the vacuum time for 8 hours in the sixth step based on the above.
  • Example 13 is a cosmetic composition containing a citron extract prepared based on the above of the present invention.
  • Example 1 Sample types Manufacture conditions Sensory properties Dryness Application Uniformity during application Comparative Example 1 - 7.3 7.0 7.7 Example 1 Natural drying time 7.0 7.1 7.0 Example 2 7.2 7.3 7.0 Example 3 Artificial drying time 7.5 7.6 7.5 Example 4 7.8 7.7 7.9 Example 5 Warming and humidifying time 6.8 6.4 6.3 Example 6 7.0 7.1 7.0 Example 7 Vacuum pressure condition 7.5 7.5 7.8 Example 8 7.5 7.6 7.7 Example 9 Vacuum pressure temperature 7.0 7.1 7.1 Example 10 7.5 7.5 7.6 Example 11 Vacuum pressure time 8.0 8.2 8.3 Example 12 8.1 8.2 8.1 Example 13 Conditions of the Invention 8.8 8.8 8.9
  • Example 13 which prepared a cosmetic containing citron extract, showed the best dry feeling and application ability, and the uniformity when applied also showed the highest preference.
  • the cosmetic composition containing the prepared citron extract was tested for cytotoxicity test by calculating the appropriate test sample concentration and confirming whether the concentration used affects safety.
  • the cells used in the experiment were a Human Skin Keratinocytes cell line (HaCaT), Dulbecco's modified Eagle's medium with 37 ° C, 5% CO2, 10% Fetal bovine serum (FBS, Lonza), and 50 ⁇ g / mL streptomycin (Sigma). (DMEM, Invitrogen) was incubated.
  • HaCaT Human Skin Keratinocytes cell line
  • Dulbecco's modified Eagle's medium with 37 ° C, 5% CO2, 10% Fetal bovine serum (FBS, Lonza), and 50 ⁇ g / mL streptomycin (Sigma).
  • FBS Fetal bovine serum
  • streptomycin 50 ⁇ g / mL streptomycin
  • Example 2 After incubation, the medium was removed, and the mixed oil prepared in Example 1 was diluted with dimethyl sulfoxide so as to have a final concentration of 100, 500, 1000, and 5000 ⁇ g / ml, and then cultured for 24 hours, followed by MTT ( 100 [mu] l of 3- [4,5-dimethylthiazol-2yl] -2,5-diphenyltetrazolium boromide, Sigma, USA) was added to each well (3 mg / ml) and further incubated for 4 hours.
  • MTT 100 [mu] l of 3- [4,5-dimethylthiazol-2yl] -2,5-diphenyltetrazolium boromide, Sigma, USA
  • the cells used in the experiment were a Human Skin Keratinocytes cell line (HaCaT), Dulbecco's modified Eagle's medium with 37 ° C, 5% CO2, 10% Fetal bovine serum (FBS, Lonza), and 50 ⁇ g / mL streptomycin (Sigma). (DMEM, Invitrogen) was incubated. The cells were stressed by UV irradiation for 1 hour after incubation. As a control, cells irradiated with UV without treating the sample were used.
  • RNA in cells was extracted from the cell culture using Trizol reagent (Invitrogen, USA) for RNA analysis. Purity and integrity of the RNA was confirmed by measuring the A260nm / A280nm ratio, RNA yield was measured by absorbance at 260nm.
  • cDNA synthesis was performed by adding 3 ⁇ g of total RNA to Oligo dT 15 (500ng / ⁇ l) primer, dNTP (10mM), RTase inhibitor (40 U / ⁇ l), and Powerscript II RTase (Clontech, USA) for 10 minutes. Primer annealing, cDNA was synthesized for 60 minutes at 42 °C and RTase denaturation for 5 minutes at 95 °C.
  • PCR amplified TNF- ⁇ and GAPDH from cDNA by mixing 3 ⁇ l cDNA, 5 ⁇ l of 10X taq polymerase buffer, 2 ⁇ l of 10mM dNTP, 2 ⁇ l of 10 pmol primer, 0.5 ⁇ l of taq polymerase, and adjusting to 50 ⁇ l by adding distilled water. Then amplified. Primer sequences are shown in Table 2. The product produced by PCR was confirmed by an image analyzer (UGEN, U: Genius) by electrophoresis on 1% agarose gel, and the density of each band was measured using a density tool (Gene Tools from Syngene). Measured.
  • Human skin cells Human Skin Keratinocytes cell line
  • DMEM Human Skin Keratinocytes cell line
  • DMEM Human Skin Keratinocytes cell line
  • DMEM Sigma
  • DMEM Human Skin Keratinocytes cell line
  • the cells were completely attached to each other through a microscope to see whether they grew well, and the experiment was carried out using 0.005% retinol as a skin cell stimulator. Normal skin cells generally die off at the retinol concentration.
  • Example 13 200 ⁇ l of DMEM (Sigma) medium containing 0.005% retinol was added to each of 96 wells of the plate in which HaCaT cells were cultured, and then each cosmetic blocking cosmetic composition containing citron extract prepared in Example 13 was 0.01. , 0.05, 0.1 and 0.5% were added, and the control group did not add the cosmetic composition containing the retinol and citron extract, and the retinol was added to the comparative group only [Example 5], [Example 6] and What was added to [Example 13] was prepared separately.
  • DMEM Sigma
  • the present invention has the effect of reducing the hypersensitivity reaction of the skin, forming a skin protective film to protect the skin.

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Abstract

본 발명은 유자 추출물을 함유하는 화장료 조성물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 유자씨 오일, 건조시 생성되는 기체를 포집 후 액화하여 제조되는 유자씨 추출물, 에센셜오일 및 건조시 생성되는 기체를 포집 후 액화하여 제조되는 유자껍질 추출물로부터 추출된 유효성분을 함유하고 항균, 피부보습, 소취효과가 우수한 유자 추출물을 함유하는 화장료 조성물에 관한 것이다.

Description

유자 추출물을 함유하는 화장료 조성물
본 발명은 유자 추출물을 함유하는 화장료 조성물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 유자씨 오일, 건조시 생성되는 기체를 포집 후 액화하여 제조되는 유자씨 추출물, 에센셜오일 및 건조시 생성되는 기체를 포집 후 액화하여 제조되는 유자껍질 추출물로부터 추출된 유효성분을 함유하고 항균, 피부보습, 소취효과가 우수한 유자 추출물을 함유하는 화장료 조성물에 관한 것이다.
인체의 피부는 신체를 외부 자극으로부터 보호하는 역할을 하는 중요한 기관으로서, 피부 표면은 피지와 땀샘에서 분비되는 피지막이 각질층을 덮고 있는 구조로 이루어져 항상 부족한 수분을 보충해주고 윤기 있는 건강한 상태로 유지된다. 또한, 피부는 자외선으로부터 피부를 보호하며, 체내 온도 조절 기능을 수행하는 등 신체의 중요한 역할을 담당하고 있다. 피부는 다른 기관에 비해서 소멸과 생성이 주기적으로 활발히 일어나는 기관으로 물리적 보호와 체내 수분 손실을 막아주는 기능을 한다. 각질층의 수분함량이 20%일 때 이상적이지만 수분이 손실이 되면 각질이 탈락 되면서 외부에 노출되기 용이하게 되면서 자극에 대한 염증 및 피부 질환이 유발된다. 건조한 피부는 면역기능이 약화되어 아토피 피부염뿐만 아니라 피부 홍반, 가려움증, 따가움 등의 알러지가 유발되기 쉬워진다. 그러므로 피부의 수분손실을 방지하는 것은 중요하다.
이러한 피부를 보호하고 장벽강화 및 피부 증진 효능을 위해 사용하는 화장품에는 여러 가지 성분들이 혼합되어 있는데, 피부 보호 목적과 관련이 적은 가용화제, 유화제, 방부제, 향료, 자외선 차단제, 기타 기능성 활성성분은 피부 자극이나 염증, 알러지, 홍반, 부종, 가려움증 등을 유발하는 원인이 된다고 알려져 있다.
따라서 피부자극을 완화하기 위한 여러 가지 방법이 시도되어 왔다. 예를 들면 피부 자극을 유발하는 물질을 제거하는 방법이 시도되었다. 그러나, 기능성 원료 자체가 자극원으로 작용하는 경우가 허다하기 때문에 이와 같은 연구에는 한계가 있으며, 기능성 원료의 효과는 그대로 유지하면서, 부작용을 줄이고 자극완화 효과를 갖는 물질을 이용하는 것이 요구된다.
그 예로써 대한민국공개특허 제2009-0073632호에는 '예덕나무 추출물 및 감초 추출물을 함유하는 자극완화 및 항염 효과를 목적으로 하는 피부 자극 완화용 화장료'가 개시되어 있으며, 대한민국 등록특허 제1064570호에는 '고삼, 계피, 삼백초 및 탱자 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 홍반, 따가움 또는 가려움에 의한 피부자극 완화용 조성물'이 개시되어 있다.
본 발명자들은 자외선이나 화장품의 자극성 성분에 의한 피부자극완화효과를 가지는 물질을 탐색하던 중 유자씨 오일을 사용한 유자오일은 우수한 피부 자극완화 효과를 나타내며, 홍반생성억제 및 피부보습효과도 우수한 것을 확인하여 본 발명을 완성하였다.
본 발명은 상기의 문제점을 해결하기 위해서 안출된 것으로서, 본 발명은 유자씨 오일, 유자 에센셜오일 및 유자씨 추출물의 유효성분을 함유하는 화장료 조성물 제공을 목적으로 한다.
또한, 본 발명은 유자씨 오일, 유자 에센셜오일 및 유자씨 추출물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물을 제공하는 것을 다른 목적으로 한다.
발명이 해결하고자 하는 기술적 과제들은 이상에서 언급한 기술적 과제들로 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 기술적 과제들은 아래의 기재로부터 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.
본 발명에 따른 유자 추출물을 함유하는 화장료 조성물은 유자종자를 분리 후 세정하는 제 1단계; 상기 세정 된 유자종자를 음지에서 1 내지 3일 동안 자연 건조시킨 후 건조기에서 25 내지 27시간 동안 인공 건조시키되, 상기 유자종자 내에 함유된 수분이 1 내지 4중량% 인 것을 특징으로 하여 건조하는 제 2단계; 상기 건조 된 유자종자를 분쇄하여 분태를 제조하는 제 3단계; 상기 유자종자 분태를 스팀기에서 1 내지 2시간 동안 증기를 가하여 가온 및 가습하는 제 4단계; 상기 가온 및 가습 된 유자종자 분태를 분당 40 내지 50로 회전하고 450kgf/cm2 내지 500kgf/cm2으로 가압되는 착유기로 180℃ 내지 200℃로 유지하면서 착유하여 유자종자 오일을 제조하는 제 5단계; 유자열매 껍질을 원상태 또는 분쇄한 뒤 진공도 200 내지 250mmHg 및 25 내지 30℃ 조건에서 5 내지 7시간 동안 진공건조하여 생성된 기체를 포집하여 액화시켜 유자껍질 오일을 제조하는 제 6단계; 상기 유자종자 오일과 상기 유자껍질 오일을 혼합하여 유자 오일을 제조하는 제 7단계; 상기 유자 오일에 프랑킨센스 오일을 50 내지 70℃의 온도에서 혼합하여 유자에센셜 오일을 제조하는 제 8단계; 및 상기 유자에센셜 오일에 기능성 혼합물을 혼합하여 화장료을 제조하되, 상기 기능성 혼합물은 스테아릭애씨드, 팔미틱애씨드, 토코페릴아세테이트, 비즈왁스, 세틸알코올, 글리세릴스테아레이트, 피이지-75 스테아레이트, 세테스-20, 스테아레스-20, 폴리솔베이트-20, 정제수, 카보머, 글리세린, 부틸렌글라이콜, 페녹시에탄올, 메칠파라벤, 디소듐이디티에이, 트리에탄올아민 중 적어도 어느 하나를 포함하여 혼합하는 제 9단계;를 포함하여 제조되는 것을 특징으로 한다.
상기 과제의 해결 수단에 의해, 본 발명은 또한, 천연오일로 구성되어 있어 아토피 피부염 개선 효과 및 피부 활력과 노화방지 효과가 있으며, 피부 유연작용 및 피부재생효과가 있다.
또한, 유자씨와 유자껍질의 정유 성분을 각각 추출하여 이용함으로써 유자 각 부분이 가진 유효 성분을 효율적으로 얻을 수 있는 효과가 있다.
도 1은 본 발명의 유자 추출물을 함유하는 화장료 조성물 제조방법을 보여주는 순서도
도 2 및 도 3은 보습능력 임상실험 결과를 보여주는 그래프
℃ 미만일 경우 두 오일 간에 완전한 혼합이 일어나지 않을 우려가 있고 70℃ 이상인 경우 향이 증발할 우려가 있으므로 상기 조건으로 혼합하는 것이 바람직하다.
다음으로, 제 9단계(S90)는 상기 유자에센셜 오일에 기능성 혼합물을 혼합하여 화장료을 제조한다. 구체적으로, 상기 기능성 혼합물은 스테아릭애씨드 1 중량부에 대하여 팔미틱애씨드 1 중량부, 토코페릴아세테이트 1 중량부, 비즈왁스 1.5 중량부, 세틸알코올 0.6 중량부, 글리세릴스테아레이트 0.6 중량부, 피이지 스테아레이트 0.6 중량부, 세테스 0.6 중량부, 스테아레스0 0.6 중량부, 폴리솔베이트 1.5 중량부, 정제수 73.73 중량부, 카보머 0.4 중량부, 글리세린 10.0 중량부, 부틸렌글라이콜 1.0, 중량부, 페녹시에탄올 0.2 중량부, 메칠파라벤 0.2 중량부, 디소듐이디티에이 0.02 중량부, 트리에탄올아민 0.25 중량부를 혼합하는 것이 바람직하다.
상기 스테아릭애시드는 제형을 유지해주며 피부 보습막을 형성하는 고급지방산이다.
상기 팔미틱애씨드는 고급포화지방산의 혼합물이며 계면활성제, 착향제에 함유된다.
상기 토코페릴아세테이트는 지용성 화합물로 비타민 E 아세테이트로도 불린다. 스킨 크림 등 피부 관련 제품의 원료로 주로 사용되며, 유해산소로부터 피부를 보호하는 역할을 한다.
상기 비즈왁스는 천연벌집에서 추출하여 만들어진 천연재료로서, 면역력을 증진시켜주고 세균의 번식을 억제해주는 프로폴리스 효능을 가지고 있다.
상기 세틸알코올은 자체적으로는 유화력이 없으나 유화제품의 유화안정제로 사용한다.
상기 글리세릴스테아레이트는 모노스테아린산글리세린의 유리수산기에 산화에칠렌을 부가중합하여 만든 비이온계면활성제 및 유화제이다.
상기 피이지 스테아레이트 수분 및 보습효과가 있고 피부 진정에 도움을 준다.
상기 세테스는 계면활성제 또는 유화제로 사용되고 피부컨디셔닝제로 사용된다.
상기 스테아레스는 계면활성제 또는 유화제로 사용되거나 수분증발을 억제한다.
상기 폴리솔베이트(Polysorbate)는 화장품에서 서로 섞이지 않는 다른 성분들을 쉽게 녹여주는 유화제 역할을 한다. 상기 폴리솔베이트(Polysorbate)는 단독으로 사용하는 것 보다 다른 유화제 역할을 하는 성분들과 함께 사용하는 것이 바람직하다.
상기 카보머는 점도를 증가시켜주는 고분자화합물이다.
상기 글리세린은 강한 흡수성을 가지고 있어 보습제로서 사용되었다.
상기 부틸렌글라이콜은 무색 투명한 보습제이다.
상기 페녹시에탄올은 보존제로 사용된다.
상기 메칠파라벤은 항균작용이 있고, 천연 보존제로 사용된다.
상기 디소듐이디티에이는 이온조절제로 사용된다.
상기 트리에탄올아민은 계면활성제의 일종으로 본 발명에서 유성과 수성분이 잘 섞이게 하여 발림성을 좋게 한다.
또한, 상기 화장료은 상기 유자에센셜 오일 1 중량부에 대하여 상기 기능성 혼합물 95 내지 100 중량부를 혼합하는 것이 바람직하다.
상기 유자에센셜 오일 5 중량부에 대하여 상기 기능성 혼합물 95 중량부 미만으로 혼합할 경우 본 발명인 화장료에 그 기능성 효과를 충분히 부여하지 못할 우려가 있고, 상기 유자에센셜 오일 1 중량부에 대하여 상기 기능성 혼합물 100 중량부를 초과하여 혼합할 경우 유자의 수분 보습 기능을 충분히 부여하지 못할 우려가 있으므로 상기 조건으로 혼합하는 것이 바람직하다.
하기에서는 본 발명에서의 유자 추출물을 함유하는 화장료 조성물 제조시 사용되는 건조조건, 스팀시간 및 진공도 달리하여 제조한 유자 추출물을 함유하는 화장료 조성물의 실험 내용을 상세하게 설명한다.
ㄱ. 제조 조건 관능평가
하기 실험은 본 발명의 유자 추출물을 함유하는 화장료 화장료 조성물의 특성 중 제조 조건을 비교하기 위하여 검사원으로서의 적합성이 인정된 대학원생을 선발하여 본 실험의 목적에 적합한 훈련을 시킨 후에 관능평가를 하였다. 관능검사 항목은 건조감, 발림성, 도포시 균일감으로 굉장히 좋으면 9점, 매우 나쁘면 1점으로 평가하는 9점 척도법(Liker scale)으로 실시하였다.
[비교예 1]
비교예 1은 시중에서 판매되는 수분 화장료이다.
[실시예 1]
실시예 1은 상기 을 바탕으로 상기 제 2단계에서 건조 조건이 음지에서 20 시간 동안 자연 건조한 유자 추출물을 함유하는 화장료 조성물이다.
[실시예 2]
실시예 2는 상기 을 바탕으로 상기 제 2단계에서 건조 조건이 음지에서 5일 동안 자연 건조한 유자 추출물을 함유하는 화장료 조성물이다.
[실시예 3]
실시예 3은 상기 을 바탕으로 상기 제 2단계에서 건조 조건이 건조기에서 20 시간 동안 인공 건조한 유자 추출물을 함유하는 화장료 조성물이다.
[실시예 4]
실시예 4는 상기 을 바탕으로 상기 제 2단계에서 건조 조건이 건조기에서 30 시간 동안 인공 건조한 유자 추출물을 함유하는 화장료 조성물이다.
[실시예 5]
실시예 5는 상기 을 바탕으로 상기 제 4단계에서 증기를 가하는 시간이 30분 동안 가온 및 가습한 유자 추출물을 함유하는 화장료 조성물이다.
[실시예 6]
실시예 6은 상기 을 바탕으로 상기 제 4단계에서 증기를 가하는 시간이 3시간 동안 가온 및 가습한 유자 추출물을 함유하는 화장료 조성물이다.
[실시예 7]
실시예 7은 상기 을 바탕으로 상기 제 6단계에서 진공 압력이 100 mmHg로 하여 제조된 유자 추출물을 함유하는 화장료 조성물이다.
[실시예 8]
실시예 8은 상기 을 바탕으로 상기 제 6단계에서 진공 압력이 300mmHg로 하여 제조된 유자 추출물을 함유하는 화장료 조성물이다.
[실시예 9]
실시예 9는 상기 을 바탕으로 상기 제 6단계에서 진공 온도가 20℃로 하여 제조된 유자 추출물을 함유하는 화장료 조성물이다.
[실시예 10]
실시예 10은 상기 을 바탕으로 상기 제 6단계에서 진공 온도가 40℃로 하여 제조된 유자 추출물을 함유하는 화장료 조성물이다.
[실시예 11]
실시예 11은 상기 을 바탕으로 상기 제 6단계에서 진공 시간이 4시간 동안 하여 제조된 유자 추출물을 함유하는 화장료 조성물이다.
[실시예 12]
실시예 12는 상기 을 바탕으로 상기 제 6단계에서 진공 시간이 8시간 동안 하여 제조된 유자 추출물을 함유하는 화장료 조성물이다.
[실시예 13]
실시예 13은 본 발명의 상기 을 바탕으로 제조된 유자 추출물을 함유하는 화장료 조성물이다.
표 1
샘플 종류 제조 조건 관능 특성
건조감 발림성 도포시 균일감
비교예 1 - 7.3 7.0 7.7
실시예 1 자연 건조 시간 7.0 7.1 7.0
실시예 2 7.2 7.3 7.0
실시예 3 인공 건조 시간 7.5 7.6 7.5
실시예 4 7.8 7.7 7.9
실시예 5 가온 및 가습 시간 6.8 6.4 6.3
실시예 6 7.0 7.1 7.0
실시예 7 진공 압력 조건 7.5 7.5 7.8
실시예 8 7.5 7.6 7.7
실시예 9 진공 압력 온도 7.0 7.1 7.1
실시예 10 7.5 7.5 7.6
실시예 11 진공 압력 시간 8.0 8.2 8.3
실시예 12 8.1 8.2 8.1
실시예 13 본 발명 조건 8.8 8.8 8.9
관능평가 실시 결과, 표 1과 도 2에 나타난 바와 같이 본 발명의 조건하에서 유자 추출물을 함유하는 화장료을 제조한 실시예 13이 가장 우수한 건조감 및 발림성 관능을 나타내었고, 도포시 균일감 또한 가장 높은 선호도를 나타내었다.
ㄴ. 세포독성실험
제조한 유자 추출물을 함유하는 화장료 조성물을 유효성시험에 들어가기전 농도별 세포성장률을 확인함으로써 적절한 시험 시료농도를 산출하고 사용하는 농도가 안전에 영향을 미치는지에 대한 확인시험으로 세포독성시험을 실시하였다.
실험에 사용된 세포는 HaCaT(Human Skin Keratinocytes cell line)이며 37℃, 5%의 CO2, 10%의 Fetal bovine serum(FBS, Lonza), 50μg/mL의 streptomycin(Sigma)을 첨가한 Dulbecco's modified Eagle's medium(DMEM, Invitrogen)에서 배양하였다. 배양 후 배지를 제거하고 실시예 1에서 제조한 혼합오일을 최종 농도가 100, 500, 1000, 5000㎍/㎖가 되도록 디메틸설폭시드에 희석하여 제조한 희석용액을 처리하여 24시간 배양한 후에 MTT(3-[4,5-dimethylthiazol-2yl]-2,5-diphenyltetrazolium boromide, Sigma, U.S.A.)용액을 각 well에 100㎕씩첨가한 후 (3㎎/㎖) 4시간 동안 더 배양하였다. 이후 상층액을 제거하고, 150㎕의디메틸설폭시드를 첨가한 후, 30분간 shaking하여 생성된 formazan을 녹여 multimicroplate reader(Molecular device Spectra max190)를 이용하여 540nm에서 흡광도를 측정하였다. 세포생존율은 아래의 식에 따라 계산하였으며 그 결과는 하기의 표 2에 나타내었다.
세포 생존율(%)=시료첨가군의 흡광도 / 대조군의 흡광도 × 100
표 2
시료농도(㎍/㎖) 세포생존율(%)
Control [실시예 1] [실시예 2] [실시예 13]
100 100 100 100 100
500 100 100 100
1000 100 100 100
5000 99.50 99.40 99.52
상기 표 2의 결과에서 보는 바와 같이, [실시예 1], [실시예 2] 및 [실시예 13]을 적용한 시료 모두 99% 이상의 세포생존율이 확인됨에 따라 세포 독성에는 영향을 미치지 않는 것으로 확인되었고, 이에 본 발명에 의해 제조된 유자 추출물을 함유하는 화장료 조성물에는 안전에는 문제가 없는 것을 확인하였다.
ㄷ. 자극완화 실험
상기 실시예 13의 유자 추출물을 함유하는 화장료 조성물의 항염 활성 효과를 확인해 보기 위해 초기 염증성 분자 중 하나인종양괴사인자(TNF-α) 생성에 대한 효과를 알아보았다.
TNF-α와 같은 염증성 사이토카인(pro-inflammatory cytokine)의 형성은 포스포리파제 A2(phospholipase A2)의 활성으로 인해 아라키돈산(arachidonic acid)이 프로스타글란딘(prostaglandin)으로 바뀌는 과정 및 NO 형성 과정으로 이어지게 된다. 실험에 사용된 세포는 HaCaT(Human Skin Keratinocytes cell line)이며 37℃, 5%의 CO2, 10%의 Fetal bovine serum(FBS, Lonza), 50μg/mL의 streptomycin(Sigma)을 첨가한 Dulbecco's modified Eagle's medium(DMEM, Invitrogen)에서 배양하였다. 배양 후 1시간 동안 UV를 조사시켜 세포에 스트레스를 주었다. 대조구로는 시료를 처리하지 않고 UV를 조사한 세포를 사용하였다.
RNA 분석을 위해 세포 내의 total RNA를 세포 배양으로부터 Trizol reagent(Invitrogen, USA)를 사용하여 추출하였다. RNA의 순도와 무결성은 A260nm/A280nm비율 측정을 통해 확인하였고, RNA 수율은 260nm에서 흡광도로 측정하였다. cDNA합성은 3㎍의 total RNA를 Oligo dT 15(500ng/㎕l) primer, dNTP(10mM), RTase inhibitor(40 U/㎕), Powerscript Ⅱ RTase(Clontech, USA)를 첨가하여 25℃에서 10분간 primer annealing, 42℃에서 60분간 cDNA를 합성하고 95℃에서 5분간 RTase denaturation 시켰다. PCR은 cDNA로부터 TNF-α, GAPDH를 증폭하기 위하여 cDNA 3㎕, 10X taq polymerase buffer 5㎕, 10mM dNTP 2㎕, 10pmol primer 각각 2㎕, taq polymerase 0.5㎕를 혼합하고 증류수를 더하여 50㎕로 조정한 후 증폭시켰다. 프라이머 서열은 표 2에 나타내었다. PCR에 의하여 생성된 산물은 1% 아가로우스 겔(agarose gel)에서 전기영동하여 image analyzer(UGEN, U:Genius)로 확인하였으며 각 밴드의 밀도는 밀도계측프로그램(Gene Tools from Syngene)을 이용하여 측정하였다.
표 3
Gene Primer sequence
GAPDH Forward 5' - AAC GAA TTT GGT CGA ACA GC - 3'
Reverse 5' - TGA GGA GGG ATT CAG TG - 3'
TNF-α Forward 5' - CAG AGG GAA GAG TTC CCC AG - 3'
Reverse 5' - CCT TGG TCT GGT AGG AGA CG - 3'
그 결과를 하기의 표 4에 나타내었다.
표 4
TNF-α expression(%) 미조사 UV 조사
0.00% 0.00% 0.01% 0.05% 0.10% 0.50%
Blank 6.18 100 - - - -
[비교예 1] - - 55.2 30.21 11.53 8.62
[실시예 13] - - 42.32 22.36 10.60 6.85
α-Bisabolol - - 28.75
상기 표 3에서 확인되는 바와 같이, 본 발명에 의한 [실시예 13] UV에 의해 유발된 염증 반응 유발인자인 종양괴사인자(TNF-α)의 발현을 농도 의존적으로 감소시킴으로써 염증반응을 억제한 것을 알 수 있었다. 그러므로, 본 발명에 의한 유자 추출물을 함유하는 화장료 조성물이 피부 염증 반응을 효과적으로 억제하며, 이로써 피부자극 및 피부 트러블을 완화시키는 효능 또한 뛰어나다는 것을 확인할 수 있다.
ㄹ. 레티놀에 의한 피부 자극완화 효과
인간 피부 세포인 HaCaT(Human Skin Keratinocytes cell line)를 DMEM(Sigma) 배지가 있는 T-75 플라스크(Falcon, USA)에서 80% 정도 성장할 때까지 배양하고, 다시 DMEM(Sigma) 배지가 있는 96-웰 플레이트(Falcon, USA)에서 1×105cfu/well이 될 때까지 12시간 동안 배양하였다. 배양 후, 현미경을 통해 세포가 완전히 부착되어 잘 성장하는지 여부를 확인하고, 피부 세포 자극원으로 0.005% 레티놀을 이용하여 다음과 같이 실험을 진행하였다. 상기 레티놀의 농도에서 정상 피부세포는 일반적으로 모두 사멸한다. HaCaT cell이 배양된 상기 플레이트의 96 웰 각각에 0.005% 레티놀이 함유된 DMEM(Sigma) 배지를 200 ㎕씩 첨가하고, 이어 [실시예 13]에서 준비된 유자 추출물을 함유하는 화장료 차단 화장료 조성물을 각각 0.01, 0.05, 0.1 그리고 0.5 %로 첨가하였으며, 대조군에는 레티놀과 유자 추출물을 함유하는 화장료 조성물을 첨가하지 않았고, 비교군으로는 레티놀만 첨가한 것과 레티놀을 [실시예 5], [실시예 6] 및 [실시예 13]에 첨가한 것을 별도로 준비하였다.
시험 물질을 첨가하고 12시간이 경과한 후에, 세포의 생존율을 비교하기 위하여 MTT시약을 각 웰에 10 ㎕씩 첨가하고, 4시간 동안 방치한 후, ELISA기기(Molecular Devices 사)를 이용하여 각 세포의 흡광도를 측정하고, 다음과 같은 수학식으로 세포 생존율을 측정하였으며, 그 결과는 다음 표 5에 정리하였다.
세포 생존율(%) = [(대조군 흡광도-시험물질 흡광도)/대조군흡광도]×100
표 5
시료농도(%) 세포 생존율(%)
[비교예 1] [실시예 5] [실시예 13] 레티놀
0.01 23.31 27.82 48.52 세포 모두 사멸
0.05 35.23 41.36 63.25
0.1 64.36 63.54 85.31
0.5 80.34 83.37 95.37
결과에서 보는 바와 같이, [비교예 1], [실시예 5] 및 [실시예 13]에 의한 피부 세포 사멸을 억제하는 효과가 매우 우수하였다. 즉, 유자 추출물을 함유하는 화장료 조성물은 피부 자극물질인 레티놀에 의해 유발되는 피부 자극을 완화시키는 효과가 우수함을 알 수 있었다.
ㅁ. 보습 능력 임상실험
하기 실험은 본 발명의 유자 추출물을 함유하는 화장료 화장료 조성물의 특성 중 보습 능력 실험을 수행하기 위하여 증류수와 해양심층수에 상기 유자에센셜 오일의 함량을 0.5에서 50%까지 첨가하여 확인하였다. 상기 보습 능력 임상실험 및 도 2를 통하여 상기 화장료은 상기 유자에센셜 오일 5 중량부에 대하여 상기 기능성 혼합물 95 내지 100 중량부를 혼합하는 것이 가장 바람직함을 나타내었다.
상기 과제의 해결 수단에 의해, 본 발명은 피부의 과민 반응을 감소하고, 피부 보호막을 형성하여 피부를 보호하는 효과가 있다.
또한, 천연오일로 구성되어 있어 피부 활력과 노화방지 효과가 있고 피부 유연작용 및 피부재생효과가 있다.
또한, 유자씨와 유자껍질의 정유 성분을 각각 추출하여 이용함으로써 유자 각 부분이 가진 유효 성분을 효율적으로 오일로 얻을 수 있는 효과가 있다.
이와 같이, 상술한 본 발명의 기술적 구성은 본 발명이 속하는 기술분야의 당업자가 본 발명의 그 기술적 사상이나 필수적 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 실시될 수 있다는 것을 이해할 수 있을 것이다.
그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적인 것이 아닌 것으로서 이해되어야 하고, 본 발명의 범위는 상기 상세한 설명보다는 후술하는 특허청구범위에 의하여 나타나며, 특허청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 등가 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.

Claims (5)

  1. 유자종자를 분리 후 세정하는 제 1단계;
    상기 세정 된 유자종자를 음지에서 1 내지 3일 동안 자연 건조시킨 후 건조기에서 25 내지 27시간 동안 인공 건조시키되, 상기 유자종자 내에 함유된 수분이 1 내지 4중량% 인 것을 특징으로 하여 건조하는 제 2단계;
    상기 건조 된 유자종자를 분쇄하여 유자종자 분태를 제조하는 제 3단계;
    상기 유자종자 분태를 스팀기에서 1 내지 2시간 동안 증기를 가하여 가온 및 가습하는 제 4단계;
    상기 가온 및 가습 된 유자종자 분태를 분당 40 내지 50로 회전하고 450kgf/cm2 내지 500kgf/cm2으로 가압되는 착유기로 180℃ 내지 200℃로 유지하면서 착유하여 유자종자 오일을 제조하는 제 5단계;
    유자열매 껍질을 원상태 또는 분쇄한 뒤 진공도 200 내지 250mmHg 및 25 내지 30℃ 조건에서 5 내지 7시간 동안 진공건조하여 생성된 기체를 포집하여 액화시켜 유자껍질 오일을 제조하는 제 6단계;
    상기 유자종자 오일과 상기 유자껍질 오일을 혼합하여 유자 오일을 제조하는 제 7단계;
    상기 유자 오일에 프랑킨센스 오일을 50 내지 70℃의 온도에서 혼합하여 유자에센셜 오일을 제조하는 제 8단계; 및
    상기 유자에센셜 오일에 기능성 혼합물을 혼합하여 화장료을 제조하되,
    상기 기능성 혼합물은 스테아릭애씨드, 팔미틱애씨드, 토코페릴아세테이트, 비즈왁스, 세틸알코올, 글리세릴스테아레이트, 피이지 스테아레이트, 세테스, 스테아레스, 폴리솔베이트, 정제수, 카보머, 글리세린, 부틸렌글라이콜, 페녹시에탄올, 메칠파라벤, 디소듐이디티에이, 트리에탄올아민 중 적어도 어느 하나를 포함하여 혼합하는 제 9단계;를 특징으로 하여 제조되는 유자 추출물을 함유하는 화장료 조성물
  2. 제 1항에 있어서,
    상기 유자오일은 상기 유자종자 오일 1 중량부에 대하여 상기 유자껍질 오일 0.1 내지 0.5 중량부를 혼합하여 제조되는 것을 특징으로 하는 유자 추출물을 함유하는 화장료 조성물
  3. 제 1항에 있어서,
    상기 유자에센셜 오일은 상기 프랑킨센스 오일 1 중량부에 대하여 상기 유자오일 25 중량부를 혼합하여 제조되는 것을 특징으로 하는 유자 추출물을 함유하는 화장료 조성물
  4. 제 1항에 있어서,
    상기 기능성 혼합물은 스테아릭애씨드 1 중량부에 대하여 팔미틱애씨드 1 중량부, 토코페릴아세테이트 1 중량부, 비즈왁스 1.5 중량부, 세틸알코올 0.6 중량부, 글리세릴스테아레이트 0.6 중량부, 피이지 스테아레이트 0.6 중량부, 세테스0.6 중량부, 스테아레스 0.6 중량부, 폴리솔베이트 1.5 중량부, 정제수 73.73 중량부, 카보머 0.4 중량부, 글리세린 10.0 중량부, 부틸렌글라이콜 1.0, 중량부, 페녹시에탄올 0.2 중량부, 메칠파라벤 0.2 중량부, 디소듐이디티에이 0.02 중량부, 트리에탄올아민 0.25 중량부를 혼합하여 제조되는 것을 특징으로 하는 유자 추출물을 함유하는 화장료 조성물
  5. 제 1항에 있어서,
    상기 화장료은 상기 유자에센셜 오일 5 중량부에 대하여 상기 기능성 혼합물 95 내지 100 중량부를 혼합하여 제조되는 것을 특징으로 하는 유자 추출물을 함유하는 화장료 조성물
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