WO2017003190A1 - 백심 뿌리 추출물을 포함하는 미백용 화장료 조성물 - Google Patents

백심 뿌리 추출물을 포함하는 미백용 화장료 조성물 Download PDF

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WO2017003190A1
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skin
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viniferin
cosmetic composition
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이정노
김효민
김재문
윤광준
이승기
김재훈
김연숙
임주혁
김형미
문성호
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(주)셀트리온
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Definitions

  • the present invention is Caragana Sinica ) root extract, a fraction thereof or alpha-viniferin isolated from it relates to a cosmetic composition excellent in skin whitening effect.
  • Melanism of the skin is caused by the response of skin cells to internal and external factors.
  • a representative factor is skin exposure to ultraviolet rays. That is, when the skin is exposed to ultraviolet light, tyrosinase is activated, which acts on tyrosine, a type of amino acid present in skin tissue, to generate dopa. Thereafter, a polymer called melanin is synthesized in the melanosomes in melanocytes, which are skin pigment cells, through an oxidation process that produces dopaquinone. The melanin is delivered to keratinocytes, keratinocytes of the skin, and reaches the skin surface by the keratinization process to protect the skin from ultraviolet rays.
  • Melanin is an indispensable UV protective agent in the human body and plays the role of a free radical scavenger that is effective in removing various radicals that modify biological components such as proteins, lipids and nucleic acids.
  • a free radical scavenger that is effective in removing various radicals that modify biological components such as proteins, lipids and nucleic acids.
  • melanin is locally excessively synthesized or skin physiological function of skin lesions and aging due to aging, melanin is deposited on the surface of the skin causing blemishes, freckles and various pigmentation.
  • Arbutin while having an excellent tyrosinase activity inhibitory effect, there is a problem in stability, such as lowering the titer due to discoloration and change over time when formulated in cosmetics, there is a limit on the use of large skin irritation.
  • Ascorbic acid has a low tyrosinase activity inhibitory effect and low stability of the molecule itself, which is not suitable as a melanogenesis inhibitor.
  • Hydroquinone has a high irritation to the skin and there is a problem that its use is limited in the current cosmetic formulation due to safety issues.
  • most plant extracts have a relatively high inhibitory effect on tyrosinase activity only at high concentrations, and at low concentrations, there is a problem such that little inhibitory effect appears.
  • the existing melanogenesis inhibitors the biggest problem is that the whitening effect is weak in the clinical experiment on the actual human skin.
  • the present inventors conducted a study to solve the problems of natural plant extracts, whitening root extract, its fractions or alpha-viniferin isolated from it has been confirmed the excellent whitening efficacy and completed the present invention.
  • the object of the present invention Fishnets (Caragana Sinica ) Root extract, a fraction thereof or an alpha-viniferin ( ⁇ -viniferin) isolated from it to provide a cosmetic composition for whitening comprising as an active ingredient.
  • Another problem to be solved by the present invention is to provide a skin whitening method comprising the step of applying the cosmetic composition to the skin.
  • Another problem to be solved by the present invention is to provide a pharmaceutical composition for preventing or treating melanin hyperpigmentation disease comprising a white heart root extract, a fraction thereof or alpha-viniferin isolated therefrom as an active ingredient.
  • the present invention is a bag ( Caragana Sinica ) Root extract, a fraction thereof or an alpha-viniferin ( ⁇ -viniferin) isolated from it provides a cosmetic composition for whitening comprising as an active ingredient.
  • the present invention provides a skin whitening method comprising the step of applying the cosmetic composition to the skin.
  • the present invention also provides a pharmaceutical composition for preventing or treating melanin hyperpigmentation disease, which comprises a white heart root extract, a fraction thereof or alpha-viniferin isolated therefrom as an active ingredient.
  • the present invention is Caragana Sinica ) Root extract, a fraction thereof or an alpha-viniferin ( ⁇ -viniferin) isolated from it provides a cosmetic composition for whitening comprising as an active ingredient.
  • the white heart ( Caragana Sinica ) is a perennial deciduous, broad-leaved shrub plant, which is characterized by white compared to other recent plants, goldamcho, golden wood, marigold, silver gye, gangnam geumbong, pachihwa, jangpanjang and the like.
  • Baeksim is vertically below 400m above sea level, and is wild in various parts of Korea such as Jeonbuk, Gyeongnam, Chungnam, Gyeonggi, and planted near villages. Branches cluster on the stem and reach 2 m in height.
  • the leaves are two pairs of right upper lobes, reborn, and the ends of the leaves are usually thorns, and 4 lobules are obovate or oval and thick.
  • the fruit is 1 ⁇ 3 cm long, the surface is dark green, glossy, the back is gray green, and there is no hair. Petioles 4-8 mm long, turning into spines. Branches grow upside down, with five ridges, greyish brown, and hairless. Overall spiny, long roots grow long. Flowers bloom in May with a butterfly-shaped yellow-red flower. The flower is about 1 cm long, with one segment in the center. Calyxes are bell-shaped with some brown hairs. Pincers 3 ⁇ 3.5 cm long, columnar, hairless, ripening in September, but rarely fruiting.
  • the extract may be obtained by extracting the baeksim root with water, a lower alcohol of C 1 to C 4 or a mixed solvent thereof, the lower alcohol may be ethanol or methanol, more specifically ethanol.
  • the baeksim root ethanol extract inhibits tyrosinase activity, inhibits melanin production and shows an excellent skin whitening effect.
  • the extract, fraction or alpha-viniferin may be included in 0.001% to 30% by weight, more specifically 0.01% to 10% by weight relative to the total composition weight.
  • content of the extract, fraction or alpha-viniferin is less than 0.001% by weight does not appear to improve the skin whitening, when it exceeds 30% by weight, the degree of increase of the skin whitening improvement effect for the increase in content is insignificant, There is a problem with safety and stability, and it is not economical.
  • the fraction of the baeksim root extract may be obtained by adding any one organic solvent selected from the group consisting of hexane, chloroform, ethyl acetate and butanol, more specifically may be obtained by adding ethyl acetate, but is not limited thereto. .
  • the hexane fraction, chloroform fraction, ethyl acetate fraction, butanol fraction obtained from the baeksim root extract inhibited tyrosinase activity, inhibited melanin production and showed excellent skin whitening effect, ethyl It was confirmed that the whitening effect of the acetate fraction was better.
  • the fraction of the baeksim root extract may include alpha-viniferin in 0.001% to 30% by weight relative to the total fraction weight, more specifically 0.01% to 10% by weight, even more specifically 0.1 It may comprise from 1% by weight to 1% by weight.
  • the alpha-viniferin has a structure represented by the following [Formula 1].
  • the baeksim root extract or a fraction thereof may be prepared by a manufacturing method comprising the following steps, but is not limited thereto:
  • step 3 drying the filtered extract of step 2) under reduced pressure and then drying;
  • the baeksim root of step 1) can be used without limitation, such as cultivated or commercially available.
  • the extraction method of the white heart root extract can be used a conventional method in the art, such as filtration, hot water extraction, immersion extraction, reflux cooling extraction, ultrasonic extraction, supercritical extraction, it is known in the art It can be prepared under conditions of temperature and pressure.
  • the extraction solvent may be obtained by extraction with water, C 1 to C 4 lower alcohol, or a mixed solvent thereof, the lower alcohol may be ethanol or methanol.
  • the extraction solvent may be extracted by adding 1 to 20 times the amount of dried white core root, specifically, 5 to 15 times may be added, but is not limited thereto.
  • the extraction temperature may be 20 to 70 °C, specifically may be 25 to 65 °C, more specifically may be 30 to 60 °C, but is not limited thereto.
  • the extraction time may be 1 to 20 hours, specifically 2 to 15 hours, but is not limited thereto.
  • the white heart root extract of step 2) may be filtered 1 to 5 times, but is not limited thereto.
  • the decompression concentration in step 3) may use a vacuum decompression concentrator or a vacuum rotary evaporator, but is not limited thereto.
  • the drying may be a reduced pressure drying, vacuum drying, boiling drying, spray drying or freeze drying, but is not limited thereto.
  • the organic solvent of step 4) may be hexane, chloroform, ethyl acetate, butanol or water, but is not limited thereto.
  • the fraction may be any one of a hexane fraction, a chloroform fraction, an ethyl acetate fraction, a butanol fraction or a water fraction obtained by fractionating a white heart root extract with the hexane, chloroform, ethyl acetate, butanol or water, and more specifically, an ethyl acetate fraction. Can be.
  • the fraction may be concentrated under reduced pressure after fractionation.
  • the present invention can be prepared by a method for preparing a fraction of a white heart root extract comprising alpha-beniferin comprising the following steps:
  • the cosmetic composition of the present invention may include components conventionally used in cosmetic compositions, and includes, for example, conventional auxiliaries such as antioxidants, stabilizers, solubilizers, vitamins, pigments and flavors, and carriers.
  • auxiliaries such as antioxidants, stabilizers, solubilizers, vitamins, pigments and flavors, and carriers.
  • Cosmetic compositions of the present invention may be prepared in any formulation conventionally prepared in the art, for example solutions, suspensions, emulsions, pastes, gels, creams, lotions, powders, soaps, surfactant-containing cleansing, oils Powder formulations, emulsion foundations, wax foundations, packs, massage creams and sprays, etc., but are not limited thereto. More specifically, it may be prepared in the form of a flexible lotion, nutrition lotion, nutrition cream, massage cream, essence, eye cream, cleansing cream, cleansing foam, cleansing water, pack, spray or powder.
  • the carrier component is animal oil, vegetable oil, wax, paraffin, starch, tragacanth, cellulose derivative, polyethylene glycol, silicone, bentonite, silica, talc or Zinc oxide or the like can be used.
  • a solvent, a solubilizing agent or an emulsifying agent is used as the carrier component.
  • a solvent, a solubilizing agent or an emulsifying agent is used as the carrier component.
  • water, ethanol, isopropanol, ethyl carbonate, ethyl acetate, benzyl alcohol, benzyl benzo Fatty acid esters of ate, propylene glycol, 1,3-butylene glycol oil, glycerol aliphatic esters, polyethylene glycols or sorbitan may be used.
  • a liquid diluent such as water, ethanol or propylene glycol, ethoxylated isostearyl alcohol, polyoxyethylene sorbitol ester and polyoxyethylene sorbitan ester are used as carrier components.
  • Suspending agents, microcrystalline cellulose, aluminum metahydroxy, bentonite, agar or tragacanth and the like can be used.
  • lactose, talc, silica, aluminum hydroxide, calcium silicate or polyamide powder may be used as a carrier component when the formulation is a powder or a spray, and in particular, in the case of a spray, additionally chlorofluoro Propellants such as rohydrocarbon, propane / butane or dimethyl ether.
  • the carrier component is an aliphatic alcohol sulfate, an aliphatic alcohol ether sulfate, a sulfosuccinic acid monoester, an isethionate, an imidazolinium derivative, a sarcosinate, a fatty acid amide.
  • Ether sulfates, alkylamidobetaines, aliphatic alcohols, fatty acid glycerides, fatty acid diethanolamides, vegetable oils, lanolin derivatives or ethoxylated glycerol fatty acid esters and the like can be used.
  • the cosmetic composition of the present invention in the case of a surfactant-containing cleansing formulation or a surfactant-free cleansing formulation or soap, it may be applied to the skin, followed by wiping, peeling off or washing with water.
  • the soap is a liquid soap, powdered soap, solid soap and oil soap
  • the surfactant cleansing formulation is a cleansing foam, cleansing water, cleansing towel and cleansing pack
  • the surfactant non-cleansing formulation is a cleansing cream, Cleansing lotion, cleansing water and cleansing gel.
  • the cosmetic composition of the present invention can be used in combination with other cosmetic compositions other than the present invention.
  • the cosmetic composition according to the present invention may be used according to a conventional method of use, and the number of times of use may vary depending on the skin condition or taste of the user.
  • the cosmetic composition according to the present invention has excellent skin whitening effect by inhibiting tyrosinase activity and inhibiting melanogenesis, including baeksim root extract comprising alpha-viniferin as an active ingredient, a fraction thereof or alpha-viniferin isolated therefrom. Do.
  • the present invention provides a skin whitening method comprising the step of applying to the skin a cosmetic composition comprising a white heart root extract, a fraction thereof or alpha-viniferin isolated therefrom as an active ingredient.
  • the term "application” means any method of contacting the composition of the present invention with the skin of an individual in any suitable manner, through which the purpose is to absorb the composition into the skin.
  • the extract may be obtained by extracting the baeksim root with water, a lower alcohol of C 1 to C 4 or a mixed solvent thereof, the lower alcohol may be ethanol or methanol, more specifically ethanol.
  • the extract, fraction or alpha-viniferin may be included in 0.001% to 30% by weight, more specifically 0.01% to 10% by weight relative to the total composition weight.
  • the fraction of the baeksim root extract may be obtained by adding any one organic solvent selected from the group consisting of hexane, chloroform, ethyl acetate and butanol, more specifically may be obtained by adding ethyl acetate, but is not limited thereto. .
  • the fraction of the baeksim root extract may include alpha-viniferin in 0.001% to 30% by weight relative to the total fraction weight, more specifically 0.01% to 10% by weight, even more specifically 0.1 It may comprise from 1% by weight to 1% by weight.
  • the present invention also provides a pharmaceutical composition for preventing or treating melanin hyperpigmentation disease, which comprises a white heart root extract, a fraction thereof or alpha-viniferin isolated therefrom as an active ingredient.
  • hypopigmentation of melanin pigment means that the skin or nails become black or dark compared to other areas due to excessive increase of melanin.
  • the melanin hyperpigmentation disease includes, but is not limited to, blemishes, freckles, senile plaques, or solar lentigines.
  • the extract may be obtained by extracting the baeksim root with water, a lower alcohol of C 1 to C 4 or a mixed solvent thereof, the lower alcohol may be ethanol or methanol, more specifically ethanol.
  • the extract, fraction or alpha-viniferin may be included in 0.001% to 30% by weight, more specifically 0.01% to 10% by weight relative to the total composition weight.
  • the fraction of the baeksim root extract may be obtained by adding any one organic solvent selected from the group consisting of hexane, chloroform, ethyl acetate and butanol, more specifically may be obtained by adding ethyl acetate, but is not limited thereto. .
  • the fraction of the baeksim root extract may include alpha-viniferin in 0.001% to 30% by weight relative to the total fraction weight, more specifically 0.01% to 10% by weight, even more specifically 0.1 It may comprise from 1% by weight to 1% by weight.
  • the pharmaceutical composition of the present invention may include a pharmaceutically acceptable carrier in addition to the active ingredient, and such carriers are commonly used in the preparation of lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, starch, acacia rubber.
  • a pharmaceutically acceptable carrier in addition to the active ingredient, and such carriers are commonly used in the preparation of lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, starch, acacia rubber.
  • the pharmaceutical composition of the present invention may further include a lubricant, a humectant, a sweetener, a flavoring agent, an emulsifier, a suspending agent, a preservative, and the like.
  • a lubricant e.g., talc, kaolin, kaolin, kaolin, kaolin, kaolin, kaolin, kaolin, kaolin, kaolin, a kaolin, sorbitol, sorbitol, sorbitol, sorbitol, sorbitol, sorbitol, sorbitol, sorbitol, sorbitol, sorbitol, sorbitol, sorbitol, sorbitol, mannitol, mannitol, mannitol, mannitol, mannitol, mannitol, mannitol, mannitol, mannitol, mann
  • Suitable dosages of the pharmaceutical compositions of the present invention may be prescribed in various ways depending on factors such as formulation method, mode of administration, age, weight, sex, morbidity, condition of food, time of administration, route of administration, rate of excretion and response to response of the patient. Can be. On the other hand, the dosage of the pharmaceutical composition of the present invention may preferably be 0.0001-100 mg / kg (body weight) per day.
  • the pharmaceutical composition of the present invention may be administered orally or parenterally, and in the case of parenteral administration, it may be administered topically to the skin, intravenous injection, subcutaneous injection, intramuscular injection, intraperitoneal injection, transdermal administration, and the like. .
  • parenteral administration it may be administered topically to the skin.
  • the concentration of the active ingredient included in the pharmaceutical composition of the present invention can be determined in consideration of the purpose of treatment, the condition of the patient, the period of time, etc., and is not limited to a specific range of concentration.
  • compositions of the present invention may be prepared in unit dosage form by formulating with a pharmaceutically acceptable carrier and / or excipient according to methods which can be easily carried out by those skilled in the art. Or may be prepared by incorporation into a multi-dose container.
  • the formulations here may be in the form of solutions, suspensions or emulsions in oils or aqueous media, or in the form of extracts, powders, granules, tablets or capsules, and may further comprise dispersants or stabilizers.
  • the pharmaceutical composition of the present invention has an external dermal formulation.
  • the external dermal formulation may be a powder, gel, ointment, cream, lotion, liquid or aerosol formulation, but is not limited thereto.
  • Caragana of the present invention Sinica ) root extract, fractions thereof or alpha-viniferin isolated therefrom is effective in skin whitening by inhibiting tyrosinase activity and inhibiting melanin production. Therefore, the present invention can be usefully used as a cosmetic composition for whitening or a pharmaceutical composition for preventing or treating melanin hyperpigmentation disease.
  • Figure 2 shows the results of the component analysis via HPLC of alpha-viniferin isolated from baeksim root ethanol extract.
  • Figure 3a shows the results of 1H-NMR analysis of alpha-viniferin isolated from the ethyl acetate fraction of baeksim root ethanol extract.
  • Figure 3b shows the results of 13C-NMR analysis of alpha-viniferin isolated from ethyl acetate fraction of baeksim root ethanol extract.
  • Figure 4 shows the melanin production inhibitory effect of alpha-viniferin isolated from the ethyl acetate fraction of baeksim root ethanol extract.
  • Figure 5 shows the clinical evaluation results of the skin brightness change according to the application of the cosmetic composition comprising a fraction of baeksim root extract.
  • Figure 6 shows the clinical evaluation results of the skin melanin content change according to the application of the cosmetic composition comprising a fraction of the baeksim root extract.
  • Figure 7 shows the visual evaluation results of the skin color change according to the application of the cosmetic composition comprising a fraction of the baeksim root extract.
  • Example 10 g of baeksim root ethanol extract obtained in Example 1 was subjected to solvent fractionation using a hexane, chloroform, ethyl acetate and butanol in a conventional manner, and then concentrated under reduced pressure to obtain 2.12 g of the hexane fraction of Example 2, and chloroform of Example 3. 1.32 g of a fraction, 1.24 g of an ethyl acetate fraction of Example 4, and 0.82 g of a butanol fraction of Example 5 were obtained.
  • Tyrosinase is an enzyme that accelerates the oxidation process of a substance called tyrosine in vivo to produce melanin.
  • tyrosine a substance called tyrosine in vivo to produce melanin.
  • tyrosinase was isolated and purified from mushrooms and purchased from Sigma.
  • L-tyrosine, a substrate was dissolved in 0.05 M sodium phosphate buffer (pH 6.8) to make a 0.1 mg / ml solution, and the baeksim root ethanol extracts and fractions of Examples 1 to 5 were dissolved in 0.05 M sodium phosphate buffer (pH 6.8).
  • 0.05 M sodium phosphate buffer pH 6.8
  • Example 1 0.2% 67.2 0.1% 45.8 0.05% 32.2
  • Example 2 0.2% 45.5 0.1% 23.2 0.05% 13.2
  • Example 3 0.2% 53.1 0.1% 31.2 0.05% 16.4
  • Example 4 0.2% 79.2 0.1% 55.8 0.05% 36.2
  • Example 5 0.2% 49.7 0.1% 29.2 0.05% 12.4
  • baeksim root ethanol extracts and fractions of Examples 1 to 5 concentration-dependently inhibited tyrosinase activity As a result, as shown in Table 2, baeksim root ethanol extracts and fractions of Examples 1 to 5 concentration-dependently inhibited tyrosinase activity.
  • the ethyl acetate fraction of the baeksim root extract of Example 4 and arbutin as a positive control showed a similar inhibitory effect, it was confirmed that the ethyl acetate fraction of baeksim root extract was excellent in inhibiting tyrosinase activity.
  • B16F1 melanocyte-forming cells are mouse cell-derived cells, and were used after being sold from the American Type Culture Collection (ATCC).
  • the B16F1 melanin forming cells were dispensed in 6-well plates at a concentration of 2 ⁇ 10 5 per well, and after the cells were attached, they were dispensed at a concentration that does not cause toxicity. Thereafter, the white heart root ethanol extracts and fractions of Examples 1 to 5 were treated by concentration and incubated for 72 hours. After 72 hours of incubation, the cells were detached with trypsin-EDTA, the cell number was measured and centrifuged to recover the cells.
  • alpha-viniferin or arbutin and melanin-producing stimulant ⁇ -MSH isolated from the ethyl acetate fraction of baeksim root ethanol extract of Example 4 were simultaneously treated, and then 70-74 hours later, as in Example 2-2.
  • the melanin amount was measured.
  • the inhibitory effect of melanin production induced by alpha-viniferin by ⁇ -MSH was 8% inhibition rate at sample concentration of 4 ⁇ M, 21% at 6 ⁇ M, and 63% at 8 ⁇ M.
  • the IC 50 value was 7 ⁇ .
  • the inhibitory effect on melanin production induced by ⁇ -MSH stimulation of control arbutin showed 13% inhibition at 100 ⁇ M, 44% at 200 ⁇ M and 73% at 400 ⁇ M. Was 242 ⁇ . Therefore, it was confirmed that the whitening effect of alpha-viniferin on melanin production induced by ⁇ -MSH was about 35 times higher than arbutin.
  • the ethyl acetate fraction of baeksim root extract of Example 4 was dissolved in a solvent mixed with butylene glycol and purified water in a ratio of 50:50. After the solubilization formulation was prepared as shown in Table 4 below.
  • the ethyl acetate fraction of baeksim root extract of Example 4 was dissolved in a solvent mixed with butylene glycol and purified water in a ratio of 50:50. After the preparation, an essence formulation was prepared as shown in Table 5 below.
  • the ethyl acetate fraction of baeksim root extract of Example 4 was dissolved in a solvent mixed with butylene glycol and purified water in a ratio of 50:50. After the preparation, a cream formulation was prepared as shown in Table 6 below.
  • solubilized formulations, essence formulations, and cream formulations of Formulation Examples 1 to 3 were stored at 4 ° C., 30 ° C., 45 ° C. for 12 weeks, and then visually evaluated and sensory evaluation. Through the observation of color, odor, and formulation changes, the results are shown in the following [Table 8] to [Table 10]. At this time, the degree of change in color and odor formulation was evaluated according to the following evaluation criteria.
  • alpha-viniferin did not fall in content for 2 weeks at a high temperature of 50 °C, it was confirmed that the stability is superior to cobophenol A, another whitening material of the white heart extract.
  • the skin brightness before use, after 4 weeks, after 6 weeks of use, and after 8 weeks of use was measured using a Chroma meter CM700d. In each measurement, the skin brightness of the same site was measured three times and the average value was used as an evaluation data.
  • Table 13 the data indicates skin brightness measurement results of 23 subjects as a mean value ⁇ standard deviation (SE), and a graph of the degree of change is shown in FIG. 5.
  • SE standard deviation
  • the measured skin brightness after using the test product was significantly increased after 6 weeks of use and after 8 weeks of use (significance probability ⁇ 0.05), compared with the control product, compared with the control product. After 6 weeks of use, and after 8 weeks, there was a significant difference (significance probability ⁇ 0.05).
  • the cosmetic composition containing a fraction of the baeksim root extract was found to help skin brightness after 6 weeks of use.
  • the skin melanin content before, after 4 weeks, after 6 weeks of use, and after 8 weeks of use was measured using a narrow-band reflectanoe wpectrophotometer called Mexameter at 568 nm (green). ), And it was measured using the reflected light at 660nm (red), 880nm (infrared). In each measurement, the melanin amount of the same site was measured three times and the average value was used as an evaluation data.
  • the skin melanin measurements after using the test product were significantly decreased after 6 weeks and after 8 weeks of use (significance probability ⁇ 0.017) compared with the control, and compared with the control product. Significant differences (significance probability ⁇ 0.05) were seen after 4 weeks, 6 weeks, and 8 weeks after use. Therefore, the cosmetic composition comprising a fraction of the baeksim root extract was found to help reduce the skin melanin content after 6 weeks of use.
  • the Intensity score table which is a standard for skin color evaluation, and evaluated the brightness of the skin color from 1 point (bright and transparent) to 10 points (dark and dull) according to the skin color. If there was a difference between the two researchers, a lower value was chosen as the evaluation data.
  • the expert whitening visual evaluation score of the test product group was significantly decreased after 6 weeks and 8 weeks of use compared to before use (significance probability ⁇ 0.017), and used in comparison with the control product. After 8 weeks there was a significant difference (significance probability ⁇ 0.05). Therefore, it can be seen that the cosmetic composition comprising a fraction of the white heart root extract helps to whiten the skin after 6 weeks of use.

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Abstract

본 발명은 백심(Caragana Sinica) 뿌리 추출물을 포함하는 미백용 화장료 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 백심 뿌리 추출물, 이의 분획물 또는 이로부터 분리된 알파-비니페린(α-viniferin)을 포함하여 피부 미백 효과가 우수한 화장료 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 백심 뿌리 추출물, 이의 분획물 또는 이로부터 분리된 알파-비니페린은 티로시나아제 활성을 저해하고 멜라닌 생성을 억제하여 피부 미백에 효과가 있다.

Description

백심 뿌리 추출물을 포함하는 미백용 화장료 조성물
본 발명은 백심(Caragana Sinica) 뿌리 추출물, 이의 분획물 또는 이로부터 분리된 알파-비니페린(α-viniferin)을 포함하여 피부 미백 효과가 우수한 화장료 조성물에 관한 것이다.
피부의 흑화(Melanism)는 내적, 외적 요인에 대한 피부세포의 반응에 의하여 발생하는 것으로, 대표적인 요인은 피부가 자외선에 노출됨으로 인한 것이다. 즉, 피부가 자외선에 노출되면 티로시나제가 활성화되고, 이것은 피부조직에 존재하는 아미노산의 일종인 티로신에 작용하여 도파(dopa)를 생성시킨다. 이후 다시 도파퀴논(dopaquinone)을 생성시키는 산화과정을 통해 피부 색소세포인 멜라노사이트(Melanocyte) 내의 멜라노좀(Melanosome)에서 멜라닌이라는 중합체가 합성된다. 이 멜라닌은 피부의 각질형성세포인 케라티노사이트(Keratinocyte)로 전달되며, 각질화 과정에 의해 피부 표면에 도달하여 자외선으로부터 피부를 보호하게 된다.
멜라닌은 우리 인체에 없어서는 안 되는 자외선 방어제이며, 단백질, 지질, 핵산 등과 같은 생체성분을 변형시키는 다양한 라디칼을 제거하는데 효과적인 프리 라디칼 소거제의 역할을 담당한다. 하지만, 멜라닌이 국소적으로 과도하게 합성되거나 피부병변 및 노화에 따른 피부의 생리기능이 떨어지게 되면, 멜라닌이 피부 표면에 침착 되어 기미, 주근깨 및 다양한 색소침착을 유발하게 된다.
이러한 피부 흑화의 원인과 기작이 밝혀지면서, 피부 흑화 과정에 관여하는 티로시나제(Tyrosinase)의 활성 저해 효과를 갖는 물질들을 화장료에 배합하거나, 멜라닌 생성과정 중의 일부 반응을 저해함으로써 멜라닌의 생성을 감소시키는 방법이 피부 흑화를 방지하기 위해 일반적으로 사용되고 있다. 이러한 목적으로 사용되고 있는 대표적인 물질로는 알부틴, 아스코르빈산, 히드로퀴논과 식물 추출물로는 상백피 추출물 및 감초 추출물 등이 있다.
알부틴의 경우, 우수한 티로시나제 활성 저해 작용을 갖는 반면, 화장품에 배합 시 변색 및 경시변화에 따른 역가 저하 등 안정성에 문제점이 있으며, 피부자극이 커 사용상 한계가 있다. 아스코르빈산은 티로시나제 활성 저해 효과가 낮고, 분자 자체의 안정성이 낮아 멜라닌 생성 억제제로 적합하지 않은 문제가 있다. 히드로퀴논은 피부에 대한 자극이 높아 안전성 문제로 현재 화장품 배합 시에 그 사용성이 제한되는 문제가 있다. 또한, 대부분의 식물 추출물들은 고농도에서만 비교적 높은 티로시나제 활성 저해 효과를 나타내며, 저농도에서는 저해 효과가 거의 나타나지 않는 등의 문제점을 갖고 있다. 특히, 기존 멜라닌 생성 억제제들은, 실제 사람 피부에 대한 임상적인 실험 시 미백 효과가 미약하다는 가장 큰 문제점이 있다.
이에, 본 발명자들은 천연 식물소재 추출물들의 문제점을 해결하고자 연구를 수행한 결과, 백심 뿌리 추출물, 이의 분획물 또는 이로부터 분리된 알파-비니페린에서 우수한 미백 효능을 확인하고 본 발명을 완성하게 되었다.
따라서, 본 발명이 해결하고자 하는 과제는 백심(Caragana Sinica) 뿌리 추출물, 이의 분획물 또는 이로부터 분리된 알파-비니페린(α-viniferin)을 유효성분으로 포함하는 미백용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.
또한, 본 발명이 해결하고자 하는 다른 과제는 상기 화장료 조성물을 피부에 도포하는 단계를 포함하는 피부 미백 방법을 제공하는 것이다.
또한, 본 발명이 해결하고자 하는 또 다른 과제는 백심 뿌리 추출물, 이의 분획물 또는 이로부터 분리된 알파-비니페린을 유효성분으로 포함하는 멜라닌 색소 과다침착 질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
상기 과제를 해결하고자, 본 발명은 백심(Caragana Sinica) 뿌리 추출물, 이의 분획물 또는 이로부터 분리된 알파-비니페린(α-viniferin)을 유효성분으로 포함하는 미백용 화장료 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 화장료 조성물을 피부에 도포하는 단계를 포함하는 피부 미백 방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 백심 뿌리 추출물, 이의 분획물 또는 이로부터 분리된 알파-비니페린을 유효성분으로 포함하는 멜라닌 색소 과다침착 질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
이하, 본 발명을 보다 구체적으로 설명한다.
본 발명은 백심(Caragana Sinica) 뿌리 추출물, 이의 분획물 또는 이로부터 분리된 알파-비니페린(α-viniferin)을 유효성분으로 포함하는 미백용 화장료 조성물을 제공한다.
상기 백심(Caragana Sinica)은 다년생의 낙엽, 활엽의 관목식물로서 다른 근연 식물에 비하여 하얀 것이 특징이며, 골담초, 금작목, 금작화, 은계아, 강남금봉, 파치화, 장판자 등으로도 불린다. 백심은 수직적으로는 표고 400 m 이하, 수평적으로는 전북, 경남, 충남, 경기 등 우리나라 각지에 야생하며 촌락 부근에도 식재한다. 줄기에 가지가 뭉쳐나고 높이는 2 m에 달한다. 잎은 우상복엽으로 2쌍씩 붙어 있고 호생하며, 잎의 끝은 대개 가시로 되고 소엽은 4개로서 도란형, 또는 타원형이며 두껍다. 열매는 길이가 1~3 cm 이며 표면은 진록색이고, 광택이 나며 뒷면은 회록색이며 털은 없다. 잎자루는 길이가 4~8 mm이며, 가시로 변한다. 위를 향한 가지는 사방으로 늘어져 자라고, 가지는 5개의 능선이 있으며 회갈색이고 털이 없다. 전체적으로 가시가 있으며, 잔뿌리는 길게 자란다. 꽃은 5월에 나비 모양의 황적색 꽃이 1개씩 총장화서로 핀다. 화경은 길이 1 cm 정도로 중앙부에 한 개의 환절이 있다. 꽃받침은 종 모양이며 갈색 털이 약간 있다. 협과는 길이가 3~3.5 cm로서 원주형이고 털이 없으며 9월에 익지만 결실이 드물다.
상기 추출물은 백심 뿌리를 물, C1 내지 C4의 저급 알코올 또는 이들의 혼합 용매로 추출하여 수득할 수 있으며, 상기 저급 알코올은 에탄올 또는 메탄올일 수 있고, 보다 구체적으로 에탄올일 수 있다.
본 발명의 일 구체예에서, 백심 뿌리 에탄올 추출물이 티로시나아제 활성을 억제하고, 멜라닌 생성을 억제하여 우수한 피부 미백 효과를 나타냄을 확인하였다.
상기 추출물, 분획물 또는 알파-비니페린은 총 조성물 중량 대비 0.001중량% 내지 30중량%로 포함될 수 있고, 보다 구체적으로 0.01중량% 내지 10중량%로 포함될 수 있다. 상기 추출물, 분획물 또는 알파-비니페린의 함량이 0.001중량% 미만인 경우에는 피부 미백 개선 효과가 나타나지 않으며, 30중량%를 초과하는 경우에는 함유량 증가에 대한 피부 미백 개선 효과 증대 정도가 미미하고, 제형상의 안전 및 안정성에 문제가 있으며, 경제적이지 않다.
상기 백심 뿌리 추출물의 분획물은 헥산, 클로로포름, 에틸아세테이트 및 부탄올로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나의 유기용매를 가하여 수득한 것일 수 있고, 보다 구체적으로 에틸아세테이트를 가하여 수득한 것일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 일 구체예에서, 백심 뿌리 추출물로부터 얻어진 헥산 분획물, 클로로포름 분획물, 에틸아세테이트 분획물, 부탄올 분획물이 티로시나아제 활성을 억제하고, 멜라닌 생성을 억제하여 우수한 피부 미백 효과를 나타냄을 확인하였으며, 에틸아세테이트 분획물의 미백 효과가 보다 우수함을 확인하였다.
상기 백심 뿌리 추출물의 분획물은 총 분획물 중량 대비 0.001중량% 내지 30중량%로 알파-비니페린을 포함할 수 있고, 보다 구체적으로 0.01중량% 내지 10중량%로 포함할 수 있으며, 보다 더 구체적으로 0.1중량% 내지 1중량%로 포함할 수 있다.
상기 알파-비니페린은 하기 [화학식 1]로 표시되는 구조를 가진다.
Figure PCTKR2016006983-appb-C000001
본 발명에서, 상기 백심 뿌리 추출물 또는 이의 분획물은 하기의 단계들을 포함하는 제조방법에 의해 제조될 수 있으나, 이에 제한되지 않는다:
1) 백심 뿌리에 추출용매를 가하여 추출하는 단계;
2) 단계 1)의 추출물을 여과하는 단계;
3) 단계 2)의 여과한 추출물을 감압 농축한 후 건조하는 단계; 및
4) 단계 3)의 건조한 추출물에 유기용매를 가하여 백심 뿌리 분획물을 제조하는 단계.
상기 방법에 있어서, 단계 1)의 백심 뿌리는 재배한 것 또는 시판되는 것 등 제한 없이 사용할 수 있다.
상기 방법에 있어서, 백심 뿌리 추출물의 추출 방법으로는 여과법, 열수 추출, 침지 추출, 환류냉각 추출, 초음파 추출, 초임계 추출 등 당업계의 통상적인 방법을 이용할 수 있고, 당업계에 공지된 통상적인 온도와 압력의 조건 하에서 제조될 수 있다. 또한, 추출용매는 물, C1 내지 C4의 저급 알코올, 또는 이들의 혼합 용매로 추출하여 수득할 수 있으며, 상기 저급 알코올은 에탄올 또는 메탄올일 수 있다. 상기 추출용매는 건조된 백심 뿌리 분량의 1 내지 20 배 첨가하여 추출할 수 있고, 구체적으로 5 내지 15 배 첨가하여 추출할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 또한, 추출온도는 20 내지 70℃일 수 있고, 구체적으로 25 내지 65℃일 수 있으며, 보다 구체적으로 30 내지 60℃일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 또한, 추출시간은 1 내지 20 시간일 수 있고, 구체적으로 2 내지 15 시간일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
상기 방법에 있어서, 단계 2)의 백심 뿌리 추출물을 1 내지 5회 여과할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
상기 방법에 있어서, 단계 3)의 감압농축은 진공감압농축기 또는 진공회전증발기를 이용할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 또한, 건조는 감압건조, 진공건조, 비등건조, 분무건조 또는 동결건조 하는 것일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
상기 방법에 있어서, 단계 4)의 유기용매는 헥산, 클로로포름, 에틸아세테이트, 부탄올 또는 물일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 상기 분획물은 백심 뿌리 추출물을 상기 헥산, 클로로포름, 에틸아세테이트, 부탄올 또는 물로 분획하여 수득한 헥산 분획물, 클로로포름 분획물, 에틸아세테이트 분획물, 부탄올 분획물 또는 물 분획물 중 어느 하나일 수 있으며, 보다 구체적으로 에틸아세테이트 분획물일 수 있다. 상기 분획물은 분획 후 감압 농축할 수 있다.
본 발명의 일 구체예에서, 본 발명은 다음의 단계를 포함하는 알파-베니페린을 포함한 백심 뿌리 추출물의 분획물 제조방법에 의해 제조될 수 있다:
(a) 백심 뿌리 분쇄물을 물, C1 내지 C4의 저급 알코올 또는 이들의 혼합 용매로 추출하는 단계;
(b) 상기 추출물을 헥산, 클로로포름, 에틸아세테이트 및 부탄올로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나의 유기용매로 분획하는 단계; 및
(c) 상기 분획물로부터 알파-비니페린을 분리하는 단계.
본 발명의 화장료 조성물은 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 일 예로 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함한다.
본 발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 일 예로 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-포함 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션, 팩, 마사지크림 및 스프레이 등으로 제형화 될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징크림, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물에 있어서, 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라가칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물에 있어서, 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 일 예로 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 이용될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물에 있어서, 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소 결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라가칸트 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물에 있어서, 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물에 있어서, 제형이 계면활성제 포함 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물에 있어서, 계면활성제 포함된 클렌징 제형 또는 계면활성제 비포함 클렌징 제형 또는 비누일 경우, 피부에 도포한 후 닦아내거나 떼거나 물로 씻어낼 수도 있다. 일 예로, 상기 비누는 액상비누, 가루비누, 고형비누 및 오일비누이며, 상기 계면활성제 포함 클렌징 제형은 클렌징 폼, 클렌징 워터, 클렌징 수건 및 클렌징 팩이며, 상기 계면활성제 비 포함 클렌징 제형은 클렌징크림, 클렌징 로션, 클렌징 워터 및 클렌징 겔이며, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 화장료 조성물은 본 발명 이외의 다른 화장료 조성물과 중복하여 사용할 수 있다. 또한 본 발명에 따른 화장료 조성물은 통상적인 사용방법에 따라 사용될 수 있으며, 사용자의 피부 상태 또는 취향에 따라 그 사용횟수를 달리할 수 있다.
본 발명에 의한 화장료 조성물은 활성성분으로 알파-비니페린을 포함하는 백심 뿌리 추출물, 이의 분획물 또는 이로부터 분리된 알파-비니페린을 포함하여 티로시나제 활성을 저해하고 멜라닌 생성을 억제함으로써 피부 미백 효과가 우수하다.
또한, 본 발명은 백심 뿌리 추출물, 이의 분획물 또는 이로부터 분리된 알파-비니페린을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물을 피부에 도포하는 단계를 포함하는 피부 미백 방법을 제공한다.
본 명세서에서 사용되는 용어, "도포"는 어떠한 적절한 방법으로 개체의 피부에 본 발명에 따른 조성물을 접촉시키는 모든 방법을 의미하며, 이를 통해 해당 조성물을 피부 내부로 흡수시키는 것을 목적으로 한다.
상기 추출물은 백심 뿌리를 물, C1 내지 C4의 저급 알코올 또는 이들의 혼합 용매로 추출하여 수득할 수 있으며, 상기 저급 알코올은 에탄올 또는 메탄올일 수 있고, 보다 구체적으로 에탄올일 수 있다.
상기 추출물, 분획물 또는 알파-비니페린은 총 조성물 중량 대비 0.001중량% 내지 30중량%로 포함될 수 있고, 보다 구체적으로 0.01중량% 내지 10중량%로 포함될 수 있다.
상기 백심 뿌리 추출물의 분획물은 헥산, 클로로포름, 에틸아세테이트 및 부탄올로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나의 유기용매를 가하여 수득한 것일 수 있고, 보다 구체적으로 에틸아세테이트를 가하여 수득한 것일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
상기 백심 뿌리 추출물의 분획물은 총 분획물 중량 대비 0.001중량% 내지 30중량%로 알파-비니페린을 포함할 수 있고, 보다 구체적으로 0.01중량% 내지 10중량%로 포함할 수 있으며, 보다 더 구체적으로 0.1중량% 내지 1중량%로 포함할 수 있다.
또한, 본 발명은 백심 뿌리 추출물, 이의 분획물 또는 이로부터 분리된 알파-비니페린을 유효성분으로 포함하는 멜라닌 색소 과다침착 질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "멜라닌 색소의 과다침착(hyperpigmentation)"은 피부 또는 손발톱의 특정 부위에서 멜라닌의 과도한 증가에 의해 다른 부위에 비해 검게 또는 어둡게 되는 것을 의미한다.
상기 멜라닌 색소 과다침착 질환은 기미, 주근깨, 노인성 색소반, 또는 일광흑색증(solar lentigines) 등을 포함하나 이에 제한되지 않는다.
상기 추출물은 백심 뿌리를 물, C1 내지 C4의 저급 알코올 또는 이들의 혼합 용매로 추출하여 수득할 수 있으며, 상기 저급 알코올은 에탄올 또는 메탄올일 수 있고, 보다 구체적으로 에탄올일 수 있다.
상기 추출물, 분획물 또는 알파-비니페린은 총 조성물 중량 대비 0.001중량% 내지 30중량%로 포함될 수 있고, 보다 구체적으로 0.01중량% 내지 10중량%로 포함될 수 있다.
상기 백심 뿌리 추출물의 분획물은 헥산, 클로로포름, 에틸아세테이트 및 부탄올로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나의 유기용매를 가하여 수득한 것일 수 있고, 보다 구체적으로 에틸아세테이트를 가하여 수득한 것일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
상기 백심 뿌리 추출물의 분획물은 총 분획물 중량 대비 0.001중량% 내지 30중량%로 알파-비니페린을 포함할 수 있고, 보다 구체적으로 0.01중량% 내지 10중량%로 포함할 수 있으며, 보다 더 구체적으로 0.1중량% 내지 1중량%로 포함할 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 유효성분 이외에 약학적으로 허용되는 담체를 포함할 수 있으며, 이러한 담체는 제제 시에 통상적으로 이용되는 것으로서, 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아카시아 고무, 인산 칼슘, 알기네이트, 젤라틴, 규산 칼슘, 미세결정성 셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로스, 물, 시럽, 메틸 셀룰로스, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 활석, 스테아르산 마그네슘 및 미네랄 오일 등을 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다. 본 발명의 약학적 조성물은 상기 성분들 이외에 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제, 유화제, 현탁제, 보존제 등을 추가로 포함할 수 있다. 적합한 약학적으로 허용되는 담체 및 제제는 Remington's Pharmaceutical Sciences (19th ed., 1995)에 상세히 기재되어 있다.
본 발명의 약학적 조성물의 적합한 투여량은 제제화 방법, 투여 방식, 환자의 연령, 체중, 성, 병적 상태, 음식, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하게 처방될 수 있다. 한편, 본 발명의 약학적 조성물의 투여량은 바람직하게는 1일 당 0.0001-100 mg/kg(체중)일 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 경구 또는 비경구로 투여할 수 있으며, 비경구 투여의 경우, 피부에 국소적으로 도포, 정맥내 주입, 피하 주입, 근육 주입, 복강 주입, 경피 투여 등으로 투여할 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물이 멜라닌 색소 과다침착 질환을 예방 또는 치료를 위해 적용되는 점을 감안하면, 피부에 국소적으로 도포되어 이루어지는 것이 바람직하다.
본 발명의 약학적 조성물에 포함되는 유효성분의 농도는 치료 목적, 환자의 상태, 필요기간 등을 고려하여 결정할 수 있으며 특정 범위의 농도로 제한되지 않는다.
본 발명의 약학적 조성물은 당해 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있는 방법에 따라, 약학적으로 허용되는 담체 및/또는 부형제를 이용하여 제제화 함으로써 단위 용량 형태로 제조되거나 또는 다용량 용기 내에 내입시켜 제조될 수 있다. 이때 제형은 오일 또는 수성 매질 중의 용액, 현탁액 또는 유화액 형태이거나 엑스제, 분말제, 과립제, 정제 또는 캅셀제 형태일 수도 있으며, 분산제 또는 안정화제를 추가적으로 포함할 수 있다.
본 발명의 일 구체예에 있어서, 본 발명의 약학적 조성물은 피부외용 제형을 갖는다. 상기 피부외용 제형은 파우더, 젤, 연고, 크림, 로션, 액제 또는 에어로졸 제형일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 백심(Caragana Sinica) 뿌리 추출물, 이의 분획물 또는 이로부터 분리된 알파-비니페린은 티로시나아제 활성을 저해하고 멜라닌 생성을 억제하여 피부 미백에 효과가 있다. 따라서 본 발명은 미백용 화장료 조성물 또는 멜라닌 색소 과다침착 질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.
도 1은 백심 뿌리 에탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물의 HPLC를 통한 성분 분석 결과를 나타낸다.
도 2는 백심 뿌리 에탄올 추출물로부터 분리한 알파-비니페린의 HPLC를 통한 성분 분석 결과를 나타낸다.
도 3a는 백심 뿌리 에탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물에서 분리한 알파-비니페린의 1H-NMR 분석 결과를 나타낸다.
도 3b는 백심 뿌리 에탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물에서 분리한 알파-비니페린의 13C-NMR 분석 결과를 나타낸다.
도 4는 백심 뿌리 에탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물에서 분리한 알파-비니페린의 멜라닌 생성 억제 효과를 나타낸다.
도 5는 백심 뿌리 추출물의 분획물을 포함하는 화장료 조성물의 도포에 따른 피부 밝기 변화 임상 평가 결과를 나타낸다.
도 6은 백심 뿌리 추출물의 분획물을 포함하는 화장료 조성물의 도포에 따른 피부 멜라닌 함량 변화 임상 평가 결과를 나타낸다.
도 7은 백심 뿌리 추출물의 분획물을 포함하는 화장료 조성물의 도포에 따른 피부색 변화 육안 평가 결과를 나타낸다.
이하, 본 발명을 실시예, 실험예 및 제형예에 의하여 상세히 설명한다.
단, 하기 실시예, 실험예 및 제형예는 본 발명을 구체적으로 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 실시예, 실험예 및 제형예에 의해 한정되는 것은 아니다.
실시예 1: 백심( Caragana Sinica ) 뿌리 추출물의 제조
세절하여 음건한 백심 뿌리 500 g을 분쇄하여 분쇄물을 제조하였다. 상기 분쇄물에 70% 에탄올 5 ℓ를 첨가한 후, 5시간 동안 환류추출하고 냉침하였다. 상기 추출물을 400메쉬(mesh) 여과포로 여과한 후, 여과지 No.2(Whatman)로 다시 한번 여과하였다. 그 후, 감압 농축하여 백심 뿌리 에탄올 추출물 24 g을 수득하였다.
실시예 2 ~ 5: 백심 뿌리 추출물의 분획물 제조
상기 실시예 1에서 얻은 백심 뿌리 에탄올 추출물 10 g을 헥산과 클로로포름, 에틸아세테이트 및 부탄올을 이용하여 통상적인 방법으로 용매분획을 실시한 후 감압농축하여 실시예 2의 헥산 분획물 2.12 g, 실시예 3의 클로로포름 분획물 1.32 g, 실시예 4의 에틸아세테이트 분획물 1.24 g, 실시예 5의 부탄올 분획물 0.82 g을 수득하였다.
실험예 1: 백심 뿌리 추출물의 분획물 유효성분 분리 및 분석
상기 실시예 2 ~ 5에서 얻은 백심 뿌리 추출물의 분획물 0.1 g 각각을 메탄올로 용해하여 10 ㎖ 검액을 획득하였다. 또한, 알파-비니페린(C42H30O9:678.68) 표준품 10 mg을 메탄올로 100 ml가 되도록 용해한 후, 이 중 0.5 ㎖를 메탄올로 100 ㎖가 되도록 다시 용해하고 1/2, 1/4 로 희석하여 표준액을 획득하였다. 상기 검액 및 표준액 20 ㎕씩을 가지고 HPLC 분석을 하여 알파-비니페린 함량을 측정하였다.
HPLC를 통한 분석은 UV/VIS 151 검출기가 장착된 길슨 HPLC 시스템(Gilson Inc., Middleton, WI, USA)을 이용하였다. 고정상으로는 5 ㎛ 헥터-M C18 컬럼(Hector-M C18 column; 4.6 mm×250 mm; RS tech co., Daejeon, Korea)을 사용하였다. 이동상으로는 0.5% 포름산(formic acid; A)과 아세토니트릴(acetonitrile; B)의 혼합용액을 이용하였으며, 50분에 걸쳐 B의 함량을 30%에서 100%로 일정한 구배로 증가시키면서 진행하였다. 유속은 분당 0.8 ㎖이었고, 자외선 검출기의 검출파장은 280 nm로 설정하였다. HPLC 분석결과를 도 1 및 도 2에 나타내었으며, 분석 결과 실시예 2 ~ 5의 알파-비니페린 함량을 하기 [표 1]에 나타내었다.
샘플 알파-비니페린 함량 (중량%)
실시예 2 -
실시예 3 0.12%
실시예 4 0.52%
실시예 5 0.17%
또한, 상기 실시예 4의 백심 뿌리 에탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물에 포함된 알파-비니페린을 NMR 분석을 통해 확인하였다.
구체적으로, 상기 실시예 4의 백심 뿌리 에탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물 15 g을 실리카 겔 컬럼 크로마토그라피(silica gel column chromatography) (2.5 × 28 cm, EtOAc : MeOH = 10 : 1→100% MeOH)를 시행하여 8개의 분획(CE1 ~ CE8)으로 구분하였고, 분획 CE7에 대하여 실리카 겔 컬럼 크로마토그라피 (2.5 × 28 cm, CH2Cl2: MeOH = 50 : 1 → 100% MeOH), 그리고 sephadex LH-20 컬럼 크로마토그라피( 70% MeOH 100% MeOH )를 시행하여 알파-비니페린 0.1 g을 분리하였다.
NMR 기기로 1H-NMR은 바리안사(Varian, GEMINI, 500 MHz), 13C-NMR은 바리안사(Varian, GEMINI, 200 MHz)의 NMR 기기로 그 구조를 분석하였으며, 사용된 용매는 아세톤(acetone-d6)으로 알드리치(Aldrich)사에서 구입하여 사용하였고, 내부표준물질로 트리메칠실란을 사용하여 δ값(ppm)으로 나타내었으며, NMR 결과를 도 3a 및 도 3b에 나타내었다.
1H-NMR (500MHz, Acetone-d): δppm 4.11 (s, 1H, H-3(I)), 4.77 (d, 1H, H-3(III)), 4.85 (d, 1H, H-3(II)), 5.05 (d, 1H, H-2(III)), 6.09 (d, 1H, H-2(II)), 6.14 (d, 1H, H-5(I)), 6.22 (s, 1H, H-2(I)), 6.38 (m, 3H, H-7(I, II, III)), 6.74 (d, 1H, H-5(III)), 6.87 (m, 3H, H-3', 5'(I), H-5(II)), 6.92(m, 4H, H-3', 5'(II, III)), 7.18(m, 4H, H-2', 6'(I, III)), 7.36 (m, 2H, H-2', 6' (II))
13C-NMR (125MHz, Acetone-d): δppm 46.4 (C-3(I)), 52.8 (C-3(II)), 55.7 (C-3(III)), 86.4 (C-2(I)), 90.0 (C-2(II)), 95.6 (C-2(III)), 96.6 (C-7(II, III)), 98.0 (C-7(I)), 105.8 (C-5(III)), 106.2 (C-5(II)), 108.5 (C-5(I)), 115.7 (C-3', 5' (I)), 116.1 (C-3', 5' (III,II)), 118.8 (C-3a(I)), 119.7 (C-3a(III)), 120.9 (C-3a(II)), 128.1 (C-2', 6' (I)), 128.2 (C-2', 6' (II)), 128.6 (C-2', 6' (III)), 132.0 (C-1' (I)), 132.3 (C-1' (II)), 132.5 (C-1' (III)), 138.7 (C-4(III)), 159.4 (C-6(II,I)), 160.7 (C-7a(II)), 160.8 (C-6(III)), 161.6 (C-7a(I)), 161.8 C-7a(III))
실험예 2: 백심 뿌리 추출물 및 이의 분획물의 미백 효과 확인
실험예 2-1: 백심 뿌리 추출물 및 이의 분획물의 티로시나제 활성 저해 효과 확인
티로시나제는 생체 내에서 티로신(tyrosine)이라는 물질의 산화과정을 촉진하여 멜라닌이 생성되도록 하는 효소이다. 따라서, 상기 실시예 1 ~ 5에서 제조된 백심 뿌리 에탄올 추출물 및 이의 분획물의 티로시나제 활성 저해 효과를 확인하였다.
구체적으로, 티로시나제는 버섯에서 분리 및 정제된 것으로 시그마(Sigma) 사에서 구입하여 사용하였다. 기질인 L-티로신은 0.05 M 인산나트륨 완충용액(pH 6.8)에 용해하여 0.1 ㎎/㎖ 용액으로 만들고, 상기 실시예 1 ~ 5의 백심 뿌리 에탄올 추출물 및 분획물을 0.05 M 인산나트륨 완충용액(pH 6.8)에 0.05%, 0.1%, 및 0.2% 농도로 용해하였다. 그 다음, L-티로신 용액 0.5 ㎖를 시험관에 넣고 상기 백심 뿌리 추출물 및 분획물 시료액 0.5 ㎖를 가하고 37℃ 항온기에서 10분간 방치하였다. 그 후, 200 unit/㎖ 티로시나제 0.5 ㎖를 첨가하고 37℃에서 10분간 반응시켰다. 이 반응액이 든 시험관을 얼음 위에 놓아 급냉시켜 반응을 중지시킨 후, 분광광도계로 파장 475 nm에서의 흡광도를 측정하였다. 대조군으로는 백심 뿌리 추출물 대신 완충용액 0.5 ㎖를 넣은 것을 사용하였으며 비교 대상으로서 피부 미백제로 잘 알려진 알부틴을 사용하였다. 이때, 티로시나제에 대한 활성 저해율(%)은 하기 [수학식 1]에 의하여 계산하였으며, 그 결과를 하기 [표 2]에 나타내었다.
Figure PCTKR2016006983-appb-M000001
시료 농도 티로시나아제 활성 저해율(%)
실시예 1 0.2% 67.2
0.1% 45.8
0.05% 32.2
실시예 2 0.2% 45.5
0.1% 23.2
0.05% 13.2
실시예 3 0.2% 53.1
0.1% 31.2
0.05% 16.4
실시예 4 0.2% 79.2
0.1% 55.8
0.05% 36.2
실시예 5 0.2% 49.7
0.1% 29.2
0.05% 12.4
알부틴 0.2% 78.7
0.1% 38.4
0.05% 21.2
그 결과, 표 2에 나타낸 바와 같이, 실시예 1 ~ 5의 백심 뿌리 에탄올 추출물 및 분획물은 티로시나제 활성을 농도의존적으로 저해하였다. 특히, 실시예 4의 백심 뿌리 추출물의 에틸아세테이트 분획물과 양성 대조군인 알부틴을 비교하였을 때 유사한 저해능을 나타내었으므로, 백심 뿌리 추출물의 에틸아세테이트 분획물이 티로시나제 활성 억제 효과가 뛰어난 것을 확인하였다.
실험예 2-2: 백심 뿌리 추출물 및 이의 분획물의 멜라닌 생성 억제 효과 확인
상기 실시예 1 ~ 5에서 제조된 백심 뿌리 에탄올 추출물 및 이의 분획물의 미백 효과를 확인하기 위하여, B16F1 멜라닌 형성 세포에 대한 멜라닌 생성 억제 효과를 확인하였다.
구체적으로, B16F1 멜라닌 형성 세포는 마우스에서 유래한 세포군으로, ATCC(American Type Culture Collection)로부터 분양 받아 사용하였다. 상기 B16F1 멜라닌 형성 세포를 6웰 플레이트에 각 웰당 2×105 농도로 분주하고, 세포를 부착시킨 후 독성을 유발하지 않는 농도로 분주하였다. 이후, 상기의 실시예 1 ~ 5의 백심 뿌리 에탄올 추출물 및 분획물을 농도별로 처리하여 72시간 동안 배양하였다. 72시간 배양 후, 세포를 트립신-EDTA로 떼어내고, 세포 수를 측정한 다음 원심분리하여 세포를 회수하였다. 세포 내 멜라닌의 정량은 로탄(Lotan: Cancer Res., 40: 3345-3350, 1980)의 방법을 변형하여 실시하였다. 셀 펠릿을 PBS로 1회 세척한 후 균질화 버퍼액(50 mM 소듐 포스페이트, pH6.8, 1% Triton X-100, 2 mM PMSF) 1 ml를 첨가하여 5분간 와류하여 세포를 파쇄하였다. 원심분리(3,000rpm, 10분)하여 얻은 세포 여액에 1N NaOH(10% DMSO)를 첨가하여 추출된 멜라닌을 용해한 후, 마이크로 플레이트 판독기로 405 nm에서 멜라닌의 흡광도를 측정한 다음 멜라닌을 정량하여 시료의 멜라닌 생성 저해율(%)을 측정하였다. B16F1 멜라닌 형성 세포의 멜라닌 생성 저해율(%)은 하기 [수학식 2]에 의하여 계산하였으며, 그 결과를 [표 3]에 나타내었다.
Figure PCTKR2016006983-appb-M000002
A: 시료를 첨가하지 않은 웰의 멜라닌 양
B: 시료를 첨가한 웰의 멜라닌 양
시료 처리 농도(㎍/㎖) 멜라닌 생성 저해율(%)
무처리군 0.2 -
실시예 1 200 75.3
100 60.5
실시예 2 200 69.4
100 51.9
실시예 3 200 71.7
100 58.9
실시예 4 200 82.1
100 69.6
실시예 5 200 34.7
100 24.9
알부틴 200 75.7
100 63.5
그 결과, 표 3에 나타낸 바와 같이, 실시예 1 ~ 5의 백심 뿌리 추출물 및 이의 분획물은 멜라닌 생성을 농도의존적으로 저해하는 것을 확인하였다. 특히, 실시예 4의 백심 뿌리 추출물의 에틸아세테이트 분획물은 멜라닌 생성 억제능이 미백제로 알려진 알부틴보다 우수하게 나타나는 것을 확인하였다.
실험예 2-3: 알파-비니페린의 멜라닌 생성 억제 효과 확인
상기 실시예 4의 백심 뿌리 분획물에서 분리한 알파-비니페린의 미백 효과를 확인하기 위해 B16F1 멜라닌 형성 세포에 대한 멜라닌 생성 억제 효과를 확인하였다.
구체적으로, 상기 실시예 4의 백심 뿌리 에탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물에서 분리한 알파-비니페린 또는 알부틴과 멜라닌 생성 자극제 α-MSH를 동시에 처리한 다음 70-74 시간 후 상기 실시예 2-2와 같이 멜라닌 양을 측정하였다.
그 결과, 도 4에 나타낸 바와 같이, 알파-비니페린의 α-MSH에 의해 유도한 멜라닌 생성 억제 효과가 시료 농도 4 μM에서 8%의 억제율, 6 μM에서 21% 그리고 8 μM에서 63%의 억제율을 나타내었고, IC50값은 7 μM이었다. 반면, 대조물질인 알부틴의 α-MSH 자극으로 유도한 멜라닌 생성에 대한 억제 효과는 시료농도 100 μM에서 13%의 억제율, 200 μM에서 44% 그리고 400 μM에서 73%의 억제율을 나타내었고, IC50값은 242 μM이었다. 따라서, 알파-비니페린이 α-MSH로 유도한 멜라닌 생성에 대한 미백 효과가 알부틴보다 약 35배 높음을 확인하였다.
제형예 1: 백심 뿌리 추출물의 분획물을 포함하는 가용화 제형의 제조
백심 뿌리 추출물의 분획물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물의 안정성을 확인하기 위하여, 부틸렌글리콜, 정제수가 50:50의 비율로 혼합된 용매에 상기 실시예 4의 백심 뿌리 추출물의 에틸아세테이트 분획물을 용해시킨 후, 하기 [표 4]와 같이 가용화 제형을 제조하였다.
상 성분 함량 (%)
수상 정제수 To 100
글리세린 10 ~ 25
디프로필렌글라이콜
베타인
D-판테놀
소디움히알루로네이트
점증제 적량
금속이온 봉쇄제 적량
가용화상 피이지-60하이드로제네이티드캐스터오일 0 ~ 2
피이지-40하이드로제네이티드캐스터오일 0 ~ 2
다가알코올 0 ~ 10
향료 적량
에탄올 0 ~ 20
첨가 I 실시예 4의 백심 뿌리 추출물의 에틸아세테이트 분획물 3.2
첨가 II 보존제 적량
기타 첨가제 적량
<제조방법>
(1) 수상과 가용화상을 각각 균일하게 혼합 및 용해시켰다.
(2) 수상에 가용화상을 넣고 혼합 및 가용화 시켰다.
(3) 첨가 I은 실시예 4의 백심 뿌리 추출물의 에틸아세테이트 분획물을 포함한 상으로 가용화 한 후 투입하여 혼합시킨 후 첨가 II를 혼합하여 완료하였다.
제형예 2: 백심 뿌리 추출물의 분획물을 포함하는 에센스 제형의 제조
백심 뿌리 추출물의 분획물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물의 안정성을 확인하기 위하여, 부틸렌글리콜, 정제수가 50:50의 비율로 혼합된 용매에 상기 실시예 4의 백심 뿌리 추출물의 에틸아세테이트 분획물을 용해시킨 후, 하기 [표 5]와 같이 에센스 제형을 제조하였다.
상 성분 함량 (%)
수상 정제수 To 100
세테아리스-6올리베이트 0.1 ~ 3
글리세린 10 ~ 25
1,2-프로판디올
소디움히알루로네이트
점증제 적량
금속이온 봉쇄제 적량
유상 피이지-100스테아레이트 0.1 ~ 1
글리세릴스테아레이트 0.1 ~ 1
폴리소르베이트 60 0.1 ~ 1
세틸알코올 0.1 ~ 1
베헤닐알코올 0.1 ~ 1
스쿠알란 5 ~ 20
토코페릴아세테이트 0.1 ~ 0.5
실시예 4의 백심 뿌리 추출물의 에틸아세테이트 분획물 3.2
첨가상 I 향 적량
첨가상 II 보존제 적량
기타 첨가제 적량
<제조방법>
(1) 수상과 유상을 가온 하여 각각 균일하게 혼합 및 용해시켰다.
(2) 75℃에서 수상에 유상을 넣고 혼합시켜 유화시켰다
(3) 첨가상 I은 실시예 4의 백심 뿌리 추출물의 에틸아세테이트 분획물을 유효성분으로 포함한 상으로 50℃에서 투입하고 혼합시킨 후 첨가상 II를 혼합하였다.
제형예 3: 백심 뿌리 추출물의 분획물을 포함하는 크림 제형의 제조
백심 뿌리 추출물의 분획물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물의 안정성을 확인하기 위하여, 부틸렌글리콜, 정제수가 50:50의 비율로 혼합된 용매에 상기 실시예 4의 백심 뿌리 추출물의 에틸아세테이트 분획물을 용해시킨 후, 하기 [표 6]과 같이 크림 제형을 제조하였다.
상 성분 함량 (%)
수상 정제수 To 100
글리세린 10 ~ 25
베타인
소디움히알루로네이트
점증제 적량
금속이온 봉쇄제 적량
유상 피이지-100스테아레이트 0.1 ~ 2
글리세릴스테아레이트 0.1 ~ 2
폴리소르베이트 60 0.1 ~ 2
스테아릭애씨드 0.1 ~ 2
세테아릴알코올 0.1 ~ 2
카프릭카프릴릭트리글리세라이드 10 ~ 30
토코페릴아세테이트 0.1 ~ 0.5
첨가 I 실시예 4의 백심 뿌리 추출물의 에틸아세테이트 분획물 3.2
첨가 II 향 적량
보존제 적량
기타 첨가제 적량
<제조방법>
(1) 수상과 유상을 가온 하여 각각 균일하게 혼합 및 용해시켰다.
(2) 75℃에서 수상에 유상을 넣고 혼합시켜 유화시켰다
(3) 첨가상 I은 실시예 4의 백심 뿌리 추출물의 에틸아세테이트 분획물을 유효성분으로 포함한 상으로 50℃에서 투입하고 혼합시킨 후 첨가상 II를 혼합하였다.
실험예 3: 백심 뿌리 추출물의 분획물을 포함하는 화장료 조성물의 안정성 확인
실험예 3-1: 백심 뿌리 추출물의 분획물을 포함하는 화장료 조성물의 원료 안정성 확인
원료 안정성을 확인하기 위하여, 상기 제형예 1 내지 제형예 3의 가용화 제형, 에센스 제형, 크림 제형을 4℃, 30℃, 45℃, 일광의 조건에 12주 동안 보관한 후, 상기 실험예 1과 동일한 방법으로 HPLC 분석을 통해 백심 뿌리 추출물의 에틸아세테이트 분획물에 포함된 알파-비니페린 성분의 경시 변화를 관찰하였고, 그 결과를 하기 [표 7]에 나타내었다.
경과시간 알파-비니페린(초기 함량 대비 %)
가용화 제형 에센스 제형 크림 제형
4℃ 30℃ 45℃ 일광 4℃ 30℃ 45℃ 일광 4℃ 30℃ 45℃ 일광
초기 99.9 100 99 99.2 99 99.8 100 99.3 100 99.5. 99.3 100
1주 96.2 96.7 97.2 97 97.3 96.6 96 97.7 97 96.2 95.7 94.4
3주 97 97.6 97.3 94.3 97 98.1 98.5 97.1 96.7 97.7 98.3 92.4
5주 97.6 98.2 97.7 90.9 96.1 96.1 98.8 96.3 95.8 96.8 99.4 92
8주 96.6 99 94.6 86.4 94.3 96 96.6 96.9 96.4 95.2 100.2 90.9
12주 94.9 94.2 98.7 92.3 97 95.7 98.1 94.2 95.9 93.9 101.7 88.9
결과 안정 안정 안정 안정 안정 안정 안정 안정 안정 안정 안정 안정
그 결과, 표 7에 나타낸 바와 같이, 가용화 제형, 에센스 제형 및 크림 제형 모두 고온 조건 및 일광 조건에서 백심 뿌리 추출물의 에틸아세테이트 분획물 내 유효성분인 알파-비니페린의 안정성이 우수함을 확인하였다.
실험예 3-2: 백심 뿌리 추출물의 분획물을 포함하는 화장료 조성물의 제형 안정성 확인
제형 안정성을 확인하기 위하여, 상기 제형예 1 내지 제형예 3의 가용화 제형, 에센스 제형, 크림 제형을 4℃, 30℃, 45℃, 일광의 조건에 12주 동안 보관한 후, 육안평가와 관능평가를 통해 색, 취, 제형 변화를 관찰하였으며, 그 결과를 하기 [표 8] 내지 [표 10]에 나타내었다. 이때, 색, 취 제형 변화 정도는 하기의 평가 기준에 따라 분류하여 평가하였다.
<평가 기준>
변화 무: ○
약간의 변화: △
유의적 변화: ×
경과시간 가용화 제형
취 변화 색 변화 제형 변화
4℃ 30℃ 45℃ 일광 4℃ 30℃ 45℃ 일광 4℃ 30℃ 45℃ 일광
1주 ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
2주 ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
4주 ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
8주 ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
12주 ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
경과시간 에센스 제형
취 변화 색 변화 제형 변화
4℃ 30℃ 45℃ 일광 4℃ 30℃ 45℃ 일광 4℃ 30℃ 45℃ 일광
1주 ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
2주 ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
4주 ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
8주 ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
12주 ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
경과시간 크림 제형
취 변화 색 변화 제형 변화
4℃ 30℃ 45℃ 일광 4℃ 30℃ 45℃ 일광 4℃ 30℃ 45℃ 일광
1주 ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
2주 ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
4주 ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
8주 ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
12주 ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
그 결과, 표 8 내지 표 10에 나타낸 바와 같이, 가용화 제형, 에센스 제형 및 크림 제형 모두 고온 조건 및 일광 조건에서 안정성이 우수함을 확인하였다.
실험예 3-3: 백심 뿌리 추출물의 분획물로부터 분리된 알파- 비니페린의 안정성 확인
알파-비니페린의 안정성을 확인하기 위하여, 상기 실험예 1의 백심 뿌리 에탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물에서 분리한 알파-비니페린을 50℃ 조건에 2주 동안 보관한 후, 상기 실험예 1과 동일한 방법으로 HPLC 분석을 통해 함량 변화를 관찰하였다. 대조군으로는 백심 뿌리 추출물에서 분리한 코보페놀 A를 사용하였으며, 알파-비니페린과 동일 조건에서 보관 후 동일한 방법으로 함량 변화 관찰하였다. 그 결과를 하기 [표 11]에 나타내었다.
시험 조건 및 기간 코보페놀 A 알파- 비니페린
초기 121.4ppm 252.8ppm
1주 115.6ppm 249.60ppm
95.2% 98.7%
2주 103.6ppm 253.45ppm
85.3% 100.3%
그 결과, 표 11에 나타낸 바와 같이, 알파-비니페린은 50℃의 고온에서 2주 동안 함량이 떨어지지 않아, 백심 추출물의 또다른 미백 물질인 코보페놀 A에 비하여 안정성이 우수함을 확인하였다.
실험예 4: 백심 뿌리 추출물의 분획물을 포함하는 화장료 조성물의 피부 자극 확인
백심 뿌리 추출물의 분획물을 포함하는 화장료 조성물의 피부 자극을 확인하기 위하여, 상기 제형예 3의 크림 제형의 피부 자극에 대한 평가를 실시하였다.
구체적으로, 성인 30명을 대상으로 등 부위에 5×20 cm 크기로 상기 제형예 3에서 제조한 백심 뿌리 에탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물을 농도의존적으로 포함하는 크림 제형의 일정량(20 ㎕)을 24시간 동안 첩포한 후, 제거하고, 1시간, 24시간 경과 후 육안으로 피부 상태 변화를 판독하였으며, 그 결과를 [표 12]에 나타내었다. 이때, 피부상태의 변화 정도는 하기의 피부상태 평가 기준에 따라 분류하여 평가하였다.
<피부 상태 평가 기준>
0: 변화 없음
1: 극히 조금 변함
2: 조금 변함
3: 조금 심하게 변함
4: 심하게 변함
5: 극히 심하게 변함
피검자(성별, 피부타입) 경과시간 분획물 함량에 따른 피부 상태
3.2% 6.4% 16%
1(남, 중성) 1시간 0 0 0
24시간 0 0 0
2(여, 중성) 1시간 0 0 0
24시간 0 0 0
3(여, 중성) 1시간 0 0 0
24시간 0 0 0
4(여, 중성) 1시간 0 0 0
24시간 0 0 0
5(여, 중성) 1시간 0 0 0
24시간 0 0 0
6(여, 중성) 1시간 0 0 0
24시간 0 0 0
7(남, 중성) 1시간 0 0 0
24시간 0 0 0
8(여, 중성) 1시간 0 0 0
24시간 0 0 0
9(여, 중성) 1시간 0 0 0
24시간 0 0 0
10(여, 중성) 1시간 0 0 0
24시간 0 0 0
11(여, 중성) 1시간 0 0 0
24시간 0 0 0
12(여, 중성) 1시간 0 0 0
24시간 0 0 0
13(여, 중성) 1시간 0 0 0
24시간 0 0 0
14(여, 중성) 1시간 0 0 0
24시간 0 0 0
15(여, 중성) 1시간 0 0 0
24시간 0 0 1
16(여, 중성) 1시간 0 0 0
24시간 0 0 0
17(여, 중성) 1시간 0 0 0
24시간 0 0 0
18(여, 중성) 1시간 0 0 0
24시간 0 0 0
19(여, 중성) 1시간 0 0 0
24시간 0 0 0
20(여, 중성) 1시간 0 0 0
24시간 0 0 0
21(남, 중성) 1시간 0 0 0
24시간 0 0 0
22(여, 중성) 1시간 0 0 0
24시간 0 0 0
23(여, 중성) 1시간 0 0 0
24시간 0 0 1
24(여, 중성) 1시간 0 0 0
24시간 0 0 0
25(여, 중성) 1시간 0 0 0
24시간 0 0 0
26(여, 중성) 1시간 0 0 0
24시간 0 0 0
27(여, 중성) 1시간 0 0 0
24시간 0 0 0
28(여, 중성) 1시간 0 0 0
24시간 0 0 0
29(여, 중성) 1시간 0 0 0
24시간 0 0 0
30(여, 중성) 1시간 0 0 0
24시간 0 0 1
그 결과, 표 12에 나타낸 바와 같이, 높은 함량의 알파-비니페린을 포함한 크림 제형에서도 피부 자극이 적은 것을 확인하였다.
실험예 5: 백심 뿌리 추출물의 분획물을 포함하는 화장료 조성물의 유효성 임상 평가
백심 뿌리 추출물의 분획물을 포함하는 화장료 조성물의 유효성 평가를 위하여, 평균연령 만44세의 여성 23명에 대하여 임상을 수행하였다. 시험제품으로서 백심 뿌리 추출물의 분획물 3.2%가 포함된 화장료 조성물을 사용하였으며, 대조제품으로서는 시험제품에서 백심 뿌리 추출물의 분획물 대신 정제수를 포함한 플라시보 크림을 사용하였다. 상기 시험제품과 대조제품을 피험자의 얼굴 왼쪽과 오른쪽에 무작위로 각각 도포하였으며, 1일 2회 주기로 재도포하면서 8주 동안 변화를 관찰하였다.
실험예 5-1: 백심 뿌리 추출물의 분획물을 포함하는 화장료 조성물의 도포에 따른 피부 밝기 변화 임상 평가
시험제품 및 대조제품 사용에 의한 피부 밝기의 변화를 확인하기 위하여 사용 전, 사용 4주 후, 사용 6주 후, 사용 8주 후의 피부 밝기를 피부색 측정기인 Chroma meter CM700d를 이용하여 측정하였다. 매 측정시마다 동일한 부위에 대한 피부 밝기를 3회씩 측정하여 그 평균값을 평가 자료로 사용하였다.
구분 시험제품 대조제품 시험-대조 비교 유의확률
밝기(L*) 유의확률 밝기(L*) 유의확률
개체 내 효과 검정 - 0.000* - 0.000* -
사용 전 62.567±3.117 - 63.114±2.802 - -
사용 4주 후 65.235±2.761 0.121 63.544±2.265 0.696 0.554
사용 6주 후 67.346±2.912 0.045* 62.239±2.450 0.062 0.000**
사용 8주 후 68.565±2.559 0.000* 62.507±2.215 0.306 0.000**
* : p<0.05 정규성 검정에 따라 모수적 방법인 ANOVA로 반복하여 측정한 비모수적검정의 사후 검정결과
**: p<0.05 독립표본 t 검정결과
표 13에서 데이터는 피험자 23명에 대한 피부 밝기 측정 결과를 평균값±표준편차(Standard Error, SE)로 표시하였으며, 그 변화 정도 그래프를 도5로 나타내었다.
표 13 및 도 5에서 확인할 수 있는 바와 같이, 시험제품 사용 후 피부 밝기 측정값이, 사용 전과 비교하여 사용 6주 후, 8주 후에 유의적으로 증가(유의확률<0.05)하였고, 대조제품과 비교하여 사용 6주 후, 8주 후 유의미한 차이(유의확률<0.05)를 나타내었다. 이를 통하여 백심 뿌리 추출물의 분획물을 포함하는 화장료 조성물은 6주 사용 후부터 피부 밝기에 도움을 주는 것으로 확인되었다.
실험예 5-2: 백심 뿌리 추출물의 분획물을 포함하는 화장료 조성물의 도포에 따른 피부 멜라닌 함량 변화 임상 평가
시험제품 및 대조제품 사용에 의한 피부 밝기의 변화를 확인하기 위하여 사용 전, 사용 4주 후, 사용 6주 후, 사용 8주 후의 피부 멜라닌 양을 Mexameter라는 Narrow-band reflectanoe wpectrophotometer로 probe에서 568nm(green), 660nm(red), 880nm(infrared)에서의 반사빛을 이용하여 측정하였다. 매 측정시마다 동일한 부위에 대한 멜라닌 양을 3회씩 측정하여 그 평균값을 평가 자료로 사용하였다.
구분 시험제품 대조제품 시험-대조 비교 유의확률
밝기(L*) 유의확률 밝기(L*) 유의확률
개체 내 효과 검정 - 0.000* - 0.198 -
사용 전 113.652±30.693 - 117.783±32.342 - -
사용 4주 후 108.913±26.258 0.068 118.478±27.860 - 0.008##
사용 6주 후 105.188±26.619 0.000# 117.232±32.130 - 0.000#
사용 8주 후 101.873±26.170 0.001# 117.043±32.472 - 0.003##
# : p<0.017(=5%/3) 정규성 검정에 따라 비모수적 방법인 Friedman test로 검정하고 비모수적 검정방법으로 사후 검정한 결과
## : p<0.05 만-위트니 유 검정결과
표 14에서의 데이터는 피험자 23명에 대한 결과를 평균값±표준편차(Standard Error, SE)로 표시하였으며, 그 변화 정도 그래프를 도6으로 나타내었다.
표 14 및 도 6에서 확인할 수 있는 바와 같이, 시험제품 사용 후 피부 멜라닌 측정값이 사용 전과 비교하여 사용 6주 후, 8 주 후 유의적으로 감소(유의확률<0.017)하였고, 대조제품과 비교하여 사용 4주 후, 6주 후, 8주 후 유의미한 차이(유의확률<0.05)를 나타내었다. 따라서, 백심 뿌리 추출물의 분획물을 포함하는 화장료 조성물은 6주 사용 후부터 피부 멜라닌 함량을 줄이는데 도움을 주는 것으로 확인되었다.
실험예 5-3: 백심 뿌리 추출물의 분획물을 포함하는 화장료 조성물의 도포에 따른 피부색 변화 육안 평가
시험제품 및 대조제품 사용에 의한 피부 밝기의 변화를 확인하기 위하여 사용 전, 사용 4주 후, 사용 6주 후, 사용 8주 후의 피부에 대한 육안 평가를 진행하였다.
평가는 전문가 2명이 피부색 평가 기준표인 Intensity score table을 기준으로 시험부위의 피부색을 육안평가 하고, 피부색에 따라 1점(밝고 투명함)에서 10점(어둡고 칙칙함)까지 피부색의 밝기를 평가하였다. 두 연구원의 평가에 차이가 있을 경우 낮은 값을 평가 자료로 선택하였다.
구분 시험제품 대조제품 시험-대조 비교 유의확률
점수 유의확률 점수 유의확률
개체 내 효과검정 - 0.000# - 0.697 -
사용 전 3.174±0.576 - 3.087±0.793 - -
사용 4주 후 3.000±0.739 0.046 3.043±0.878 - 0.252
사용 6주 후 2.826±0.778 0.005# 3.000±0.953 - 0.108
사용 8주 후 2.564±0.752 0.002# 3.130±0.920 - 0.006##
# : p<0.017(=5%/3) 정규성 검정에 따라 비모수적 방법인 Friedman test로 검정하고 비모수적 검정방법으로 사후 검정한 결과
## : p<0.05 만-위트니 유 검정결과
표 15에서의 데이터는 피험자 23명에 대한 결과를 평균값±표준편차(Standard Error, SE)로 표시하였으며, 그 변화 정도 그래프를 도7로 나타내었다.
표 15 및 도 7에서 확인할 수 있는 바와 같이, 시험제품군의 전문가 미백 육안평가 점수는 사용 전과 비교하여 사용 6주 후, 8주 후에 유의하게 감소(유의확률<0.017)하였고, 대조제품과 비교하여 사용 8주 후 유의미한 차이(유의확률<0.05)를 나타내었다. 따라서, 백심 뿌리 추출물의 분획물을 포함하는 화장료 조성물은 6주 사용 후부터 피부 미백에 도움을 주는 것을 확인할 수 있다.

Claims (8)

  1. 백심(Caragana Sinica) 뿌리 추출물, 이의 분획물 또는 이로부터 분리된 알파-비니페린(α-viniferin)을 유효성분으로 포함하는 미백용 화장료 조성물.
  2. 제 1항에 있어서, 상기 추출물은 백심 뿌리를 물, C1 내지 C4의 저급 알코올 또는 이들의 혼합 용매로 추출하여 수득하는 것을 특징으로 하는 피부 미백용 화장료 조성물.
  3. 제 1항에 있어서, 상기 추출물, 분획물 또는 알파-비니페린은 총 조성물 중량 대비 0.001중량% 내지 30중량%로 포함되는 것을 특징으로 하는 미백용 화장료 조성물.
  4. 제 1항에 있어서, 상기 분획물은 헥산, 클로로포름, 에틸아세테이트 및 부탄올로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나의 유기용매를 가하여 수득하는 것을 특징으로 하는 미백용 화장료 조성물.
  5. 제 4항에 있어서, 상기 분획물은 총 분획물 중량 대비 0.001중량% 내지 30중량%로 알파-비니페린을 포함하는 것을 특징으로 하는 미백용 화장료 조성물.
  6. 제 1항 내지 제 5항 중 어느 한 항의 화장료 조성물을 피부에 도포하는 단계를 포함하는 피부 미백 방법.
  7. 백심 뿌리 추출물, 이의 분획물 또는 이로부터 분리된 알파-비니페린을 유효성분으로 포함하는 멜라닌 색소 과다침착 질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  8. 제 7항에 있어서, 상기 멜라닌 색소 과다침착 질환은 기미, 주근깨, 노인성 색소반 또는 일광흑색종인 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
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