WO2016050494A1 - Probennahmevorrichtung mit probenaufarbeitungsfunktion - Google Patents

Probennahmevorrichtung mit probenaufarbeitungsfunktion Download PDF

Info

Publication number
WO2016050494A1
WO2016050494A1 PCT/EP2015/070957 EP2015070957W WO2016050494A1 WO 2016050494 A1 WO2016050494 A1 WO 2016050494A1 EP 2015070957 W EP2015070957 W EP 2015070957W WO 2016050494 A1 WO2016050494 A1 WO 2016050494A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
liquid
sample
sampling device
lysis
transport container
Prior art date
Application number
PCT/EP2015/070957
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Franz Aberl
Norbert Kaspers
Original Assignee
Abf Diagnostics Gmbh
Dne Gmbh
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Abf Diagnostics Gmbh, Dne Gmbh filed Critical Abf Diagnostics Gmbh
Publication of WO2016050494A1 publication Critical patent/WO2016050494A1/de

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
    • C12N15/1003—Extracting or separating nucleic acids from biological samples, e.g. pure separation or isolation methods; Conditions, buffers or apparatuses therefor
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61F—FILTERS IMPLANTABLE INTO BLOOD VESSELS; PROSTHESES; DEVICES PROVIDING PATENCY TO, OR PREVENTING COLLAPSING OF, TUBULAR STRUCTURES OF THE BODY, e.g. STENTS; ORTHOPAEDIC, NURSING OR CONTRACEPTIVE DEVICES; FOMENTATION; TREATMENT OR PROTECTION OF EYES OR EARS; BANDAGES, DRESSINGS OR ABSORBENT PADS; FIRST-AID KITS
    • A61F13/00—Bandages or dressings; Absorbent pads
    • A61F13/15—Absorbent pads, e.g. sanitary towels, swabs or tampons for external or internal application to the body; Supporting or fastening means therefor; Tampon applicators
    • A61F13/36—Surgical swabs, e.g. for absorbency or packing body cavities during surgery
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L3/00—Containers or dishes for laboratory use, e.g. laboratory glassware; Droppers
    • B01L3/50—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes
    • B01L3/502—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes with fluid transport, e.g. in multi-compartment structures
    • B01L3/5029—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes with fluid transport, e.g. in multi-compartment structures using swabs
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/5308—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for analytes not provided for elsewhere, e.g. nucleic acids, uric acid, worms, mites
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L2300/00—Additional constructional details
    • B01L2300/04—Closures and closing means
    • B01L2300/041—Connecting closures to device or container
    • B01L2300/044—Connecting closures to device or container pierceable, e.g. films, membranes
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L2300/00—Additional constructional details
    • B01L2300/04—Closures and closing means
    • B01L2300/046—Function or devices integrated in the closure
    • B01L2300/047—Additional chamber, reservoir
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L2300/00—Additional constructional details
    • B01L2300/06—Auxiliary integrated devices, integrated components
    • B01L2300/0672—Integrated piercing tool
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L2300/00—Additional constructional details
    • B01L2300/12—Specific details about materials
    • B01L2300/123—Flexible; Elastomeric
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
    • G01N2001/002—Devices for supplying or distributing samples to an analysing apparatus
    • G01N2001/007—Devices specially adapted for forensic samples, e.g. tamper-proofing, sample tracking
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
    • G01N1/02—Devices for withdrawing samples
    • G01N2001/028—Sampling from a surface, swabbing, vaporising

Definitions

  • the invention relates to a sampling device for collecting and transporting nucleic acid-containing biological samples and their use in the fields of forensics, medicine, microbiology and hygiene.
  • a common problem in the analysis of nucleic acid-containing biological samples is the professional removal (extraction), the transport and the preparation of the sample, without damaging or even destroying the biological sample material.
  • the reasons for this lie in the sensitivity of biological materials to environmental influences, in the spatial and temporal decoupling of the sampling from the analysis and, for the respective
  • Sampling devices known in the prior art consist predominantly of a swab and a transport tube.
  • the swabs which are also referred to as cotton swabs, swabs, swabs or brushes (brush), usually consist of an elongated, rod-shaped stem having a sample collection area at one end and a holding area at the other end.
  • the holding area then also forms the closure of the transport tube.
  • the sample is then examined directly on site or transported to a laboratory, where it is prepared and analyzed using suitable procedures. It is easy to imagine that the first steps in the analytical chain, the collection and transport of the sample and their processing have a decisive influence on the quality of the analytical result.
  • a simple, sterile cotton swab is used in many cases.
  • the cotton swab may be used dry or moistened with water or buffer.
  • the surface to be examined is rubbed off with the cotton wool of the stick.
  • Such swabs are packaged either individually or in larger units sterile.
  • Typical packaging is blister packaging made of paper, plastic or
  • the sample If the sample is taken locally or not in the laboratory, the sample must be transferred to the laboratory after collection. In order to avoid contamination and to protect the sample, it has been established that the cotton swab is introduced into a transport tube, the holding area of the cotton swab usually being connected to the closure of the transport tube.
  • the transport tube prevents both
  • Multiplicable microorganisms are thus introduced directly into a culture medium in which they find optimal survival conditions and can already multiply during transport.
  • WO 95/25948 A1 describes a sampling device with a swab which brings a sample into contact with a liquid mixture produced in the reagent container after puncturing a release film.
  • Swab which, after piercing a membrane, introduces a sample into a liquid chamber at the side of which a plurality of liquid reservoirs are provided.
  • No. 6,524,530 Bl describes a sample collecting container comprising a swab and a container with a liquid for the extraction of material picked up with the swab and a reagent container with a reagent solution.
  • the device makes it possible to extract the material hanging from the swab and to analyze it in the device.
  • US 2014/0051 178 A1 describes a sealed sampling device comprising a swab and a transport container.
  • the swab has a hollow shaft through which the swab from a reagent container at the end of the shaft can be moistened with a liquid specific to the sample taken.
  • US 8 506 898 B2 describes a sampling device that can be used in forensics.
  • the device comprises a swab and a housing, wherein the
  • Housing forms a chamber containing a liquid for preserving the DNA taken up with the swab.
  • EP 0 058 008 A2 describes a sampling device for medical samples, comprising a swab and a transport container, in which, separated by a
  • Partition a medium for preserving the sample taken is located.
  • Bacterial samples comprising a swab and a sample tube in which, sealed in a separate chamber, is a culture medium or analysis fluid. After sampling, the dividing wall of the chamber is pierced with the swab, so that the swab is brought into contact with the sample with the medium.
  • Bacterial samples comprising a swab and a swab reservoir.
  • the container contains a glass ampoule containing culture medium, which is broken after sampling to moisten the swab containing the sample with the culture medium and thus to stabilize the sample.
  • US 4 707 450 AI and US 4 747 719 A1 describe sampling assays for biological samples comprising a swab having a hollow stem.
  • a liquid is provided to wet the swab tip prior to sampling, or test liquid can be forced into the swab tip through the stem so that the sample can come into direct contact with the test fluid and be analyzed.
  • US 5 078 968 A1 and WO 93/12421 A1 describe a biological sample sampling device which contains one or more reagent or test liquids which can be brought into contact with the sample on the swab. After contact with the sample, the liquid obtained can be further investigated. This approach is disadvantageous if it is not the preservation of the sample or the cultivation and identification of reproductive microorganisms in the foreground, but the analysis of the nucleic acids contained in the sample.
  • the transport of biological sample is disadvantageous if it is not the preservation of the sample or the cultivation and identification of reproductive microorganisms in the foreground, but the analysis of
  • DE 60 2004 008 884 relates to a device for the storage and transport of forensic and / or biological material comprising a sealable tubular container and a swab for receiving and storing the sample.
  • the swab is connected to the cap of the container, which hermetically seals the container.
  • one or more ventilation holes are introduced, which are closed when not in use. Since the swab is dry prior to use, the swab must be moistened to obtain dry samples. After placing the wet sample into the container, the closure is removed from the vent holes and the vent holes are exposed so that the sample material can air dry again while remaining protected from contamination within the container. Disadvantages of this invention are that the
  • Drying rate of the sample depends on the ambient conditions and is either very slow or does not take place at high ambient humidity.
  • DE 10 2007 006 505 describes various embodiments of a swab in a transport tube, which by its special design achieves drying and thus preservation of a moist sample.
  • the housing of the transport tube is provided with one or more pores, through which the moisture can escape from the sample and the sample is nevertheless protected against accidental contamination.
  • Pore openings are covered by a water vapor permeable membrane. Even with this device, the drying rate depends on the ambient conditions and the swab must be moistened before use.
  • Drying of a moist, biological sample is achieved by a desiccant, which is integrated directly into the transport tube and arranged so that it surrounds the cotton head with the sample as possible.
  • a desiccant which is integrated directly into the transport tube and arranged so that it surrounds the cotton head with the sample as possible.
  • sample preparation Depending on the sample material (tissue, skin, blood, saliva, etc.), different methods of sample preparation are used in the subsequent laboratory analysis. As a rule, in the first stage, lysis (digestion) of the sample, whereby the collected
  • Sample preparation due to transport from the sampling site to the laboratory has several disadvantages. If the biological sample is in a liquid or wet state, the samples may be recovered by means of a dry swab. However, since in many cases the biological sample is already dried or at least highly viscous (for skin smears or smears from surfaces), the swab must be moistened directly on site. This is cumbersome and carries the risk of accidental contamination. The construction of the prior art devices, however, precludes the provision of a moistened swab due to the presence of the ventilation membrane or the integrated one
  • Drying rate depends on the ambient conditions and thus difficult to control or to realize only by consuming integration of a desiccant.
  • Swab is recovered, the sample is dried again for preservation for transport and then moistened for workup in the laboratory, z. B. by separating the swab head from the stem and introducing the head into a suitable lysis or extraction buffer. This is cumbersome, time consuming and harbors
  • a common method for extracting DNA from a biological sample is the treatment of the biological samples with a detergent / proteinase K solution. This leads to a dissolution of the cell wall and to a degradation of the cellular proteins including the existing nucleases and histones.
  • the object of the present invention is to provide a Probennalimevorraum which eliminates the above-mentioned disadvantages of the prior art and both the collecting and makes the transport and processing of nucleic acid-containing biological samples easier and safer.
  • a sampling device for collecting and transporting nucleic acid-containing biological samples comprising: a swab and a transport container for receiving the swab, wherein the swab comprises at one end a sample collection area and at the opposite end with a moisture-proof seal to Closing the transport container is connected, so that the swab is arranged after closing the transport container in the transport container, wherein on or in the sampling device one or more liquid reservoirs and means for releasing the liquids contained in the liquid reservoirs in the
  • Liquid reservoir a lysis liquid for digestion of the biological sample on
  • Sample collection area of the swab after sampling contains.
  • the inventive closed device with integrated liquid reservoir thus has a sample digestion and Probenaufleungs- or -vorushungsfunlction and allows that sampling, transport and processing of the biological sample carried out under controlled humid conditions.
  • the sampling device according to the invention can be used in particular for collecting, digesting and transporting nucleic acid-containing biological samples in medicine, microbiology and hygiene, and more particularly in forensics.
  • Nucleic acid-containing biological samples are here and below understood as meaning poly- and oligonucleotide-containing biological samples which are to be collected and made accessible for analytical detection of the nucleic acid molecules contained, for example DNA, RNA, cDNA, mtDNA or plasmids, in particular DNA.
  • Biological samples in the Accordingly, the meaning of the present invention includes body fluids or secretions such as blood, saliva, urine, sweat, tears, sperm, vaginal fluids, nasal secretions or wound fluid, as well as other endogenous material such as skin,
  • biological sample encompasses both human body materials and animal samples for
  • the sampling device comprises a swab and a moisture-tight sealable transport container for receiving the Abstrichtupfers.
  • Transport container for receiving the Abstrichtupfers are known in the art. These are usually containers in the form of a sample tube, also referred to below as a transport tube. Usually, the transport tube is made substantially of plastic material, preferably a transparent plastic material.
  • Suitable transport tubes usually have a length in the range of 10 to 25 cm, for example 12 to 20 cm, and a diameter in the range of 1 to 2 cm, for example 1 to 1, 5 cm.
  • Swabs that can be used for the sampling device according to the invention are known in the art.
  • Such swabs consist essentially of a holding element, for example a hollow or solid stem or shaft made of wood or plastic, and a sample collection area for collecting the biological sample, which is located at one end of the holding element.
  • the material of the sample collection area is not particularly limited, as long as it is capable of substantially permanently taking up the biological sample until further processing in the laboratory and then releasing it in the course of the analysis during treatment with suitable extraction or reagent solutions.
  • the sample collection area may be formed from a cotton ball, but other materials and structures may be used. Examples of such materials and structures are spongy materials such as polyurethane,
  • Nonwoven materials or pure cotton, polyester or other plastic fibers are nonwoven materials or pure cotton, polyester or other plastic fibers.
  • the fibers in the sample collection area can be disordered or ordered take place, for example, as a winding, as flocking or in the form of fleece-shaped or woven textiles.
  • Typical swabs have a cotton head made of wound but disordered cotton fibers.
  • the swab is separably or inseparably connected to a closure with which the container serving to receive and store the swab can be sealed in a moisture-proof manner.
  • the transport container can be closed in various ways with the closure, for example by a screw or a positive connection. Depending on the type of connection, the interface between the closure and the transport container must be designed accordingly.
  • Suitable closure devices are, for example, screw or plug-in closures, for example those with a sealing insert made of moisture-proof material.
  • the sampling device according to the invention comprises one or more liquid reservoirs.
  • Under liquid reservoir is here and below a
  • Sampling device one or two liquid reservoirs, more preferably a single liquid reservoir.
  • Liquid reservoir be welded, for example, in a plastic film.
  • a plastic film may in particular be a composite film with aluminum content, which is characterized by a reduced water vapor permeability, which in turn is advantageous for the long-term stability of the sampling device.
  • the liquid may be enclosed in a glass ampule of appropriate size.
  • the liquid reservoir is a container arranged on the sampling device, in particular a plastic container, for example made of a plastic with less
  • the seal or cover may be, for example, a thin metal foil such as an aluminum foil, a plastic foil or a composite foil such as a foil
  • Plastic aluminum composite foil This advantageous embodiment saves a separate packaging of the liquid.
  • One of the liquid reservoirs contains a lysis liquid, ie a liquid which is suitable for digesting the nucleic acid-containing biological sample, ie. H. in particular of the cell material contained in the sample, and is suitable for releasing the nucleic acids.
  • the lysis fluid is at the same time a stabilizing the released nucleic acids
  • Preservative liquid d. h, it stabilizes the released after digestion
  • the lysis liquor typically has a pH in the range of 2.0 to 14.0, preferably in the range of 7.5 to 14.0, for example 8.0 to 13.0.
  • the alkaline reaction conditions support the lysis of the biological sample, but also stabilize and conserve the liberated nucleic acid.
  • the lysis liquid consists of an alkali such as NaOH, KOH or a comparable base, which itself no
  • the lysis liquid is preferably a lysis buffer, in particular a lysis buffer based on a basic buffer system having a pH of 7.5 to 14.
  • the buffer systems used can be conventional buffer systems which ensure a pH in these ranges.
  • suitable buffer systems may be selected from tris-puffs, phosphate buffers, carbonate buffers, borate buffers, and / or 3 - [(3-cholamidopropyl) dimethylammonio] -l-propanesulfonate (CHAPS) buffers.
  • the lysis fluid may comprise one or more detergents and / or chaotropic substances.
  • the effect of the detergents lies primarily in the denaturation of
  • Digestion of the biological sample may be anionic, nonionic and zwitterionic surfactants or mixtures thereof.
  • anionic surfactants are examples of suitable anionic surfactants.
  • nonionic or zwitterionic surfactants are, for example polysorbates, as they are under the trade name Tween are available, for. B. Tween 20, alkylphenol ethoxylates, such as those available under the trade name Triton ® , z. B. Triton® X-100, and polyalkylene glycol ethers, such as those available under the trade name Brij.
  • the lysis fluid may further comprise one or more chaotropic substances which, like detergents, have a denaturing effect on proteins and are suitable for digesting the biological sample. Examples of preferred chaotropic substances are urea, guanidine thiocyanate, guanidine hydrochloride, sodium iodide and sodium perchlorate. Other denaturing components with comparable effect can also be found in the
  • the lysis fluid may also include one or more lytic enzymes.
  • Preferred lytic enzymes are, for example, proteases, such as. B.
  • Proteinase K and glycosidases, such as lysozyme.
  • Detergents, chaotropic substances and lytic enzymes simultaneously have a nucleic acid stabilizing effect by inhibiting nucleases or complexes with the
  • the lysis liquid may comprise further substances for stabilizing the liberated nucleic acids, such as, for example, one or more cationic surfactants and / or chelators.
  • Suitable cationic surfactants are quaternary ammonium salts.
  • Ammonium salts such as cetyltrimethylammonium bromide (CT AB), cetylpyridinium chloride and benzalkonium chloride and mixtures thereof.
  • Chelators are known as nuclease inhibitors, and suitable chelators are, for example, ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA),
  • Ethylenediamine disuccinic acid EDDS
  • NTA nitrilotriacetic acid
  • the volume of the lysis liquid in the liquid reservoirs of the sampling device is usually in a range from 0.05 ml to 5 ml, preferably in a range from 0.2 to 1 ml and particularly preferably at about 0.5 ml.
  • the Abstrichtpfer in the closed transport container before the first removal of the swab from the transport container for sampling one containing a sampling liquid is usually in a range from 0.05 ml to 5 ml, preferably in a range from 0.2 to 1 ml and particularly preferably at about 0.5 ml.
  • the sample collection area is therefore in a moist state, moistened with a liquid for sampling.
  • the sample liquid for the swab must be compatible with the surface to be wiped and must not destroy the object to be wiped or make it unusable for further forensic treatment.
  • the sampling liquid is used in the production of the
  • inventive device applied by metering the desired amount of liquid.
  • Suitable sampling liquids are, for example, high-purity sterile water, mono- and polyalcohols such as methanol, ethanol, propanol, isopropanol. Glycerin and glycol, and
  • the sampling liquid is an aqueous buffer solution, for example a buffer solution based on tris, phosphate or citrate buffers, which preferably contains one or more additives such as detergents, salts and / or organic
  • Detergents are added.
  • buffer ions have a positive effect on the sample collection efficiency.
  • Suitable detergents are anionic, nonionic and zwitterionic surfactants, as they are also exemplified above.
  • Organic components may be, for example, mono- and polyalcohols, as exemplified above.
  • Liquid reservoir and means for releasing the liquid contained in the liquid reservoirs disposed in the interior of the transport container Liquid reservoir and means for releasing the liquid contained in the liquid reservoirs disposed in the interior of the transport container.
  • the transport container containing a lysis liquid and, for forming a liquid reservoir on the side of the Abstrichtupfers, provided with a sealed reagent container such that reagent container and transport container against each other movable, for example, against each other slidably or screwed together are, being in the transport container
  • a sealed reagent container such that reagent container and transport container against each other movable, for example, against each other slidably or screwed together are, being in the transport container
  • the reagent container is advantageously in the form of a cap, for example a screw cap.
  • the reagent container is not itself
  • Liquid reservoir but in the reagent container is a liquid reservoir
  • a liquid bag for example, a liquid bag, containing lysis liquid.
  • Liquid reservoir contained lysis liquid is released by the means for releasing the liquid into the interior of the transport container, when the reagent container with, for example, the liquid bag and the transport container are moved relative to each other.
  • the reagent container may also contain first and second liquid reservoirs, wherein a first liquid reservoir contains the lysis liquid and a second liquid reservoir contains a preserving liquid for the released nucleic acids or a sampling liquid for moistening the sample collecting region of the swab.
  • the liquids contained in the liquid reservoirs are successively released into the interior of the transport container when the reagent container and the transport container are moved relative to each other.
  • the order of arrangement of the liquid reservoirs with the liquids to be released in the reagent container depends on which of the liquids is to be released first.
  • Reagent container and transport container can be connected to each other for example by a screw thread.
  • the means for releasing the liquid contained in the liquid reservoirs are in these embodiments in the transport container at a position between the
  • Reagent container with the liquid or the liquid reservoirs and the
  • Sample collecting the Abstrichtupfers arranged so that the liquid is released when the reagent container and transport containers are moved relative to each other.
  • Such means may include, for example, arranged on the bottom of the transport container water-permeable bottom plate arranged on the side facing the reagent container Domfort algebran.
  • Appropriately securing means such as retaining rings are arranged on the sampling device between the reagent container and the means for releasing the liquid contained in the liquid reservoir further arranged, which prevent unintentional relative movement between the reagent container and the transport container.
  • a reagent container for example in the form of a screw cap, arranged such that reagent container and closure are mutually movably connected to each other, the reagent container containing a liquid reservoir with lysis liquid, and the closure having means by which the lysis liquid contained in the liquid reservoir is released into the interior of the transport container when the reagent container and closure are moved relative to one another.
  • the reagent container also first and second
  • Contain liquid reservoir wherein a first liquid reservoir contains the lysis liquid and a second liquid reservoir a preservative liquid for the released
  • Nucleic acids or a sampling liquid for moistening the sample collection area of the swab contains.
  • the liquids contained in the liquid reservoirs are released successively into the interior of the transport container when reagent container and closure are moved relative to each other.
  • Liquid reservoir with the liquids to be released in the reagent container depends on which of the liquids is to be released first.
  • the means for releasing the liquid contained in the liquid reservoirs are in the embodiments in which the liquid reservoirs are arranged on the closure, arranged between the closure and the reagent container, so that the liquids are released when the reagent container and closure are moved relative to each other.
  • Such means may be arranged, for example, on the side facing the reagent container
  • securing means such as a circlip, are against unintentional
  • one or more liquid reservoirs and means for releasing the liquids contained in the liquid reservoir into the interior of the container are laterally on the transport container
  • Transport container wherein the one or more liquid reservoirs are elastic liquid bag and a liquid bag contains the lysis liquid, and wherein the liquid contained in the liquid reservoirs are released into the interior of the transport container when the liquid reservoirs are pressed against the means for releasing the liquids.
  • Means for releasing the liquid contained in the liquid reservoirs are in the embodiments in which the liquid reservoirs are arranged on the side of the transport container, for example spinous processes, which are arranged on the liquid reservoir side facing the transport container, wherein in the wall of the
  • Transport container at the same time openings are provided through which the liquid is released into the transport container.
  • a cap over the liquid reservoir can be used as a securing means against unintentional opening of the liquid reservoir.
  • the preparation of the device according to the invention can be carried out in a manner known to the person skilled in the art with a number of established production technologies.
  • the sampling device consists of only a small number of components that, taken individually, are simple and inexpensive to manufacture and then assemble with little effort.
  • manufacturing methods can be used according to the prior art, such as injection molding, extrusion or deep drawing. In these methods, the plastic parts can be accurately produced in high quantities and inexpensively.
  • the items are made in a clean room under controlled conditions and, if necessary, additionally sterilized prior to assembly.
  • the assembly of the individual parts also takes place in a clean room under controlled conditions or on a laminar flow workstation with appropriately filtered air.
  • aqueous buffers and organic or biochemical components have to be provided in the device according to the invention for a long time, materials with a low water vapor permeability, such as aluminum, glass or certain thermoplastics having a high water vapor barrier effect, such as COC, polypropylene and polyethylene, are used.
  • the liquids to be used are sterile in the reagent container and in the
  • Sampling device introduced. This can be done either in the form of a separate blister, or the liquid is introduced directly into a reagent container and then sealed with a foil or a thin lid. After that, the
  • the reagent container is screwed onto a transport tube up to the already snapped-on circlip with the aid of the present thread.
  • the stem and sample collection area of the swab are designed as described above.
  • the stem can be pressed into the closure, glued or welded.
  • moistening of the swab is ideally carried out directly prior to assembly of the device according to the invention, for example by simply pipetting on or adding up the required amount of liquid with the aid of a suitable metering device.
  • the moistening of the swab may also be accomplished by immersing the sample collection area in the sampling liquid.
  • FIG. 1 shows a sampling system with ventilation membrane according to the prior art in the open state (Fig. 1.1) and in the closed state (Fig. 1 .2).
  • Fig. 2 is a schematic representation of an embodiment of the device according to the invention with a liquid reservoir in a reagent container at the bottom of a
  • FIG. 3 is a schematic representation of an embodiment of the device according to the invention with two (2) separate liquid reservoirs in a reagent container at the bottom of a transport tube in the initial state with the two filled liquid reservoirs in a reagent container (Fig. 3.1) and after the sampling and emptying of the two Liquid reservoir into the interior of the transport tube (Fig. 3.2).
  • Fig. 4 is a schematic representation of an embodiment of the device according to the invention with a reagent container on the closure of a transport tube in
  • Fig. 5 is a schematic representation of an embodiment of the device according to the invention with two liquid reservoirs in a reagent container at the closure of a transport tube in the initial state with the two filled liquid reservoirs in the reagent container ( Figure 5.1) and after the sampling and emptying of the two
  • Liquid reservoir through the closure into the interior of the transport tube (Fig 5.2).
  • 6 is a schematic representation of an embodiment of the device according to the invention with a reagent container and a liquid reservoir on the side of a transport tube in the initial state with the filled liquid reservoir and the reagent container protected by a cover (FIG. 6.1) and after the sampling and emptying of the lateral liquid reservoir into the interior of the transport tube (Fig. 6.2).
  • Fig. 7 is a schematic representation of an embodiment of the device according to the invention with two reagent containers and liquid reservoirs on one side
  • Fig. 7.1 Transport tubes in the initial state with filled liquid reservoirs and reagent containers protected by a cover (Fig. 7.1) and after sampling and draining the lateral liquid reservoirs into the interior of the transport tube (Fig. 7.2).
  • Fig. 8.1 to 8.7 show different Ausflihrungsformen of Abstrichtupfern for the device according to the invention.
  • FIG. 1 shows a first
  • a swab 10 which has a stem 1 1 and a sample collection area 12, fixedly connected to a closure 14. In unused condition, the swab 10 is connected by a thread 15 fixed to the transport tube 13. For sampling, the swab 10 from the
  • the sample collection area 12 is provided with a
  • Fig. 2 shows an example of a first embodiment of a device 2 according to the invention with a liquid reservoir 25 containing the lysis liquid in a reagent container 26 at the bottom of the transport tube 23.
  • Abstrichtupfer 20 and closure 24 are firmly connected to each other, and the Abstrichtupfer is introduced in the direction A in the transport tube ,
  • the sample collection area 22 may be moistened with a sampling liquid. Illustration
  • FIG. 2.2 shows the swab after sampling and emptying the liquid reservoir 25 into the interior of the transport tube 23.
  • the lysis liquid is in this embodiment in a separate liquid reservoir 25 in one
  • the reagent container 26 is designed in the form of a screw cap.
  • the liquid reservoir 25 is introduced and secured, for example by a securing ring 28 against the unintentional release of the lysis liquid.
  • the reagent container 26 is rotated with the liquid reservoir 25 by means of a thread in the direction B.
  • the bottom of the transport tube can (in one piece) as
  • water-permeable bottom plate 27 may be formed, which has one or more spinous processes on the liquid reservoir side.
  • the liquid reservoir 25 is pressed against the spinous processes, the liquid reservoir bursts and the enclosed Lysis liquid is pressed into the interior of the transport tube by further rotation (Fig. 2.2).
  • the subsequent wetting of the sample collection area 22 on the stem 21 of the swab 20 with the lysis liquid causes the biological sample to be disrupted and the nucleic acids to be released. At the same time, they can be stabilized and preserved by the lysis liquid, so that they remain intact in the transport buffer for a longer period of time.
  • Fig. 3 shows by way of example a further embodiment of a device (3) according to the invention similar to Fig. 2 but with two separate liquid reservoirs 35a and 35b in a reagent container 36. Two separate liquid reservoirs allow the biological sample to be sequentially sampled on the sample collection region with two different ones
  • the first liquid reservoir 35a may contain a lysis liquid
  • the second liquid reservoir 35b may contain a stabilizing or preserving liquid for the released nucleic acids.
  • the lysis liquid can be released from the liquid reservoir 35a and the sample digested.
  • the second liquid reservoir 35b can be opened and thus the stabilizing or preserving liquid can be supplied.
  • the sample collecting region 32 on the stem 31 of the swab 30 can be provided in dry form.
  • Liquid reservoir 35a then contains a sample liquid for moistening the sample collection area 32, and liquid reservoir 35b contains the lysis liquid for sample digestion and sample stabilization.
  • Fig. 4 shows schematically a further embodiment of an inventive
  • Reagent container 46 is connected by a thread with the closure 44 and secured with a securing device 48, such as a circlip, against accidental rotation. After sampling and inserting the sample into the
  • Transport tube 43 by screwing the shutter 44 in the direction A is the
  • Reagent container 46 unlocked, for example by removing the retaining ring 48th
  • the reagent container 46 can be rotated in direction B onto the closure 44.
  • the Closure is provided on the Reagenz electerseite with spike-like projections and has at the same time liquid-permeable pores, capillaries or channels.
  • the liquid reservoir 45 is pressed onto the spinous processes, whereby the liquid reservoir 45 is opened and the lysis liquid is released.
  • the lysis liquid from the reagent container 46 is displaced into the interior of the transport tube by the pores, channels or capillaries present in the closure (FIG. 4.2).
  • Nucleic acids are stabilized and preserved by the lysis over a longer period of time.
  • Fig. 5 shows schematically a further embodiment of the device according to the invention similar to Fig. 4, but with two separate liquid reservoirs 55a and 55b in one
  • Reagent container 56 located at the top of the reagent container 56.
  • the reagent container 56 is located at the top of the reagent container 56.
  • Sampling device 5 can be pressed by turning or pushing on the closure 54 of the transport tube 53. Also in this embodiment, two separate liquid reservoirs open the possibility of the biological sample on the
  • Sample collection area 52 to be treated sequentially with two different reagents sequentially with two different reagents.
  • the liquid reservoir 55a may be released and the sample digested.
  • the liquid reservoir 55 b are opened and thus, for example, stabilization or
  • Liquid reservoir of the sample collection area 52 which is located at the lower end of stem 51 of the swab 50, are provided in a dry form.
  • Liquid reservoir 55a then contains a sample liquid for moistening the sample collection area 52, and liquid reservoir 55b contains the lysis liquid for sample digestion and for
  • Fig. 6 shows schematically a further embodiment of a device 6 according to the invention, in which the reagent container 66 with the liquid reservoir 65 laterally on the wall of the Transport tube 63 is arranged.
  • Fig. 6.1 describes schematically the initial state with the filled liquid reservoir 65 and
  • Figure 6.2 shows the swab 60 after sampling and the emptying of the liquid reservoir 65 in the interior of the
  • Transport tube 63 The placement of the reagent container 66 on the surface of the
  • Transport tube 63 can be chosen arbitrarily.
  • Liquid reservoir 65 is protected by a removable cover 68 against accidental opening.
  • Liquid reservoir 65 in a reagent container 66 on the outside of the transport tube 63 Liquid reservoir 65 in a reagent container 66 on the outside of the transport tube 63.
  • Figure 6.1 shows the design of the reagent container 66 in the form of an externally fixed elastic fluid bag. A fixation of the liquid bag on the outside of the
  • Transport tube 63 can be made for example by gluing or by welding.
  • Reagent container 66 is pressed in the direction B against the spinous processes.
  • the liquid reservoir 65 bursts and the lysis buffer contained in the liquid reservoir is forced into the interior by further pressures through openings in the wall of the transport tube 63 (FIG. 6.2).
  • reagent container 66 and liquid reservoir 65 are identical.
  • the wall of the liquid reservoir 65 also fulfills the function of the reagent container 66.
  • Swab 60 with the lysis buffer is used to disrupt the biological sample and to release the nucleic acids to be examined. At the same time, the released
  • Nucleic acids are stabilized and preserved by the lysis liquid, so that they are intact in the lysis liquid for a longer period of time.
  • Fig. 7 shows schematically a further embodiment of a device according to the invention.
  • the device 7 according to the invention essentially corresponds to the exemplary embodiment in FIG. 6.
  • two reagent containers 76a and 76b each having a liquid reservoir 75a and 75b fixed to the outer wall of the transport tube 73. The exact positioning of the two
  • Reagent container with the two liquid reservoirs can be chosen arbitrarily, the two reagent containers can therefore, for example, on opposite sides of the
  • Transport tube may be arranged and not as shown in Figure 7.1 indicated one above the other on the same side.
  • the reagent containers 76 are again protected by a removable cover 78 against accidental opening.
  • the two fluid bags are pressed against the spinous processes (direction B), the fluid reservoirs 75a and 75b burst and the fluids contained therein are forced through openings in the bag Wall of the transport tube 73 pressed into the interior (Fig. 7.2).
  • the reagent containers 76a and 76b may be identical to the liquid reservoirs 75a or 75b.
  • Two separate fluid reservoirs allow the biological sample on the sample collection area 72 at the end of stem 71 of the swab 70 to be treated sequentially with two different reagents.
  • the liquid reservoir 75a can be released and the sample digested. Thereafter, by pressing the liquid reservoir 75b further reagents for
  • the sample collection area 72 of the swab 70 may be provided in dry form and liquid reservoir 75a may be used to moisten the sample collection area 72.
  • the lysis buffer in liquid reservoir 75b would then perform the functions of sample digestion and sample stabilization.
  • Fig. 8.1 to 8.7 show different variants of a standard swab with a sample collection area at one end and a closure device at the other end, as come as part of the inventive device into consideration.
  • Figure 8.1 shows a standard round head swab 82a used in the majority of applications.
  • Fig. 8.2 shows a swab with a tapered sample collection area 82b as used for sample collection from crevices, grooves or tight corners.
  • FIG. 3 shows a swab with a flocked sample collection area 82c.
  • Flocked swabs are characterized by their good sample delivery.
  • Fig. 8.4 and 8.5 show ejection swabs, the design of which already enables a simple stripping of the sample collection area 82d or 82e.
  • Figure 8.6 shows a swab that is particularly beneficial for collecting biological samples from larger areas. The stem is curved and widened at the end.
  • Sample collecting area 82f itself is made flat and mounted only on one side of the widened stem end.
  • Fig. 8.7 shows a swab, in which the closure device is supplemented by a conical support element 80, at the end of which there is a shortened swab.
  • a conical support element 80 different shapes are conceivable, for example, a cone or a cylinder.
  • the closure and the cone-shaped element can either be produced as a single part or produced as two parts and joined together afterwards.
  • This embodiment of a swab has the great advantage that a bending of the Abstrichtupferstiels is largely prevented and the sampling can take place even under significantly higher contact pressure, which in turn increases the efficiency of sampling.
  • Reagent reservoirs in a single, closed sampling device have significant handling advantages over the prior art, since the biological sample in the device according to the invention can not be stored and transported in a special lysis liquid in a dry state but in a moist state. If the user has the need to secure a biological sample, he removes the swab from the sampling device according to the invention. Since this can already be in a wet state, no further manipulation of the swab is required. The recording of the biological sample is carried out by pressing on the moist Sample collecting area on the surface to be examined and repeated rubbing of the surface. This leads to a transfer of the biological sample to the
  • sample collection area of the device according to the invention is introduced into the transport tube and screwed liquid-tight or plugged together.
  • the reagent container is screwed onto the transport tube, if necessary after removal of the securing ring.
  • the liquid reservoir is perforated, squeezed out and the lysis liquid is released.
  • This wets the sample collection area of the swab includes a biological sample present there and stabilizes the nucleic acids present until further analysis in the laboratory.
  • two different liquids can be supplied with the device according to the invention.
  • the two liquid reservoirs can be unlocked by removing a retaining ring.
  • the reagent container By rotating the reagent container, first the first and then the second liquid is released.
  • an alkaline lysis can be carried out, which is subsequently neutralized and stopped by a second buffer.
  • the sampling device is sent to the responsible laboratory for further examination. There, the swab is removed from the sampling system and the resulting extraction solution, the lysis liquid after
  • Sample digestion corresponds, further processed according to the established laboratory processes.
  • the biological sample is digested in the device according to the invention in a lysis liquid.
  • the lysis liquid is from a liquid reservoir immediately after the introduction of the biological sample in the
  • the released nucleic acid can be stabilized and stored in this lysis liquid in a moist state for at least as long that it survives the transport into the laboratory without degradation of the nucleic acids contained. This eliminates the cumbersome drying of the sample in a special transport tube and the necessary transfer of the sample into a lysis or extraction buffer in the laboratory.
  • the processing of the biological sample starts at the
  • Embodiment of the invention already during the transfer period of Sampling in the laboratory, and the biological sample arrives already in the processed state in the laboratory. Since with the device according to the invention, a part of the analysis process, namely the sample processing, is shifted to the time of sample transport, the integrated sampling device according to the invention allows a considerable time and
  • Swab containing a wetted before removal of the swab from the transport container sample collection area eliminates the cumbersome and error-prone humidification of Abstrichtupfers at the place of sampling.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Surgery (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Clinical Laboratory Science (AREA)
  • Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)

Abstract

Es wird eine Probennahmevorrichtung zum Sammeln und Transportieren einer nukleinsäurehaltigen biologischen Probe beschrieben, mit der die biologische Probe bereits unmittelbar nach der Probenahme aufgearbeitet werden kann. Die Vorrichtung (2) umfasst einen Abstrichtupfer (20) und einen Transportbehälter (23) zur Aufnahme des Abstrichtupfers. Der Abstrichtupfer trägt an einem Ende einen Probensammelbereich (22) und ist am anderen Ende mit einem Verschluss (24) zum feuchtigkeitsdichten Verschließen des Transportbehälters verbunden. An der Vorrichtung ist wenigstens ein Flüssigkeitsreservoir (25) angeordnet, das eine Lyseflüssigkeit zum Aufschluss der biologischen Probe enthält, die nach der Probenahme in den Innenraum des Transportbehälters freigesetzt wird. Die Vorrichtung eignet sich zur Probenahme nukleinsäurehaltiger biologischer Proben in der Medizin, Mikrobiologie, Hygiene und Forensik.

Description

Probennahmevorrichtung mit Probenaufarbeitungsfunktion
Die Erfindung betrifft eine Probennahmevorrichtung zum Sammeln und zum Transport nukleinsäurehaltiger biologischer Proben und deren Verwendung in den Gebieten der Forensik, der Medizin, der Mikrobiologie und der Hygiene.
Eine häufige Problemstellung in der Analytik nukleinsäurehaltiger biologischer Proben ist die fachgerechte Entnahme (Gewinnung), der Transport und die Aufbereitung der Probe, ohne das biologische Probenmaterial zu beschädigen oder gar zu zerstören. Die Ursachen hierfür liegen in der Empfindlichkeit biologischer Materialien gegen Umwelteinflüsse, in der räumlichen und zeitlichen Entkopplung der Probenahme von der Analyse sowie der, für den jeweiligen
Anwendungsfall ungeeigneten, konstruktiven Ausgestaltung der aktuell verfügbaren
Probennahmevorrichtungen.
Diese Randbedingungen haben dazu geführt, dass nukl einsäurehaltige biologische Proben heute bevorzugt mit trockenen Abstrichtupfem gesammelt werden, der Abstrichtupfer aber zur Verbesserung der Probennahmeeffizienz zuerst angefeuchtet, zur Stabilisierung der biologischen Probe dann aber wieder getrocknet und anschließend zur Aufarbeitung im Labor wieder angefeuchtet wird. Dieser Prozess ist umständlich, zeitaufwendig, fehleranfällig und schlecht zu automatisieren.
In vielen Bereichen der Analytik werden heute spezielle Probennahmesysteme zum Sammeln nukleinsäurehaltiger biologischer Proben verwendet. Da die Probennahme am Anfang der analytischen Kette steht, ist die Qualität der Probenentnahme, insbesondere bei biologischen Proben, von entscheidender Bedeutung für das spätere Analysenergebnis.
Im Stand der Technik bekannte Probennahmevorrichtungen bestehen überwiegend aus einem Abstrichtupfer und einem Transportröhrchen. Die Abstrichtupfer, die auch als Wattestäbchen, Tupfer, Swabs oder Brushes (Bürste) bezeichnet werden, bestehen in der Regel aus einem länglichen, stäbchenförmigen Stiel, der an einem Ende einen Probensammelbereich und am anderen Ende einen Haltebereich aufweist. Für die Entnahme biologischer Proben außerhalb des Labors oder wenn eine Analyse der Probe nur mit einer gewissen zeitlichen Verzögerung erfolgen kann, werden derartige Tupfer mit einem Transportröhrchen kombiniert, wobei der Haltebereich dann zugleich auch den Verschluss des Transportröhrchens bildet.
Für eine Untersuchung bzw. eine Analyse der verschiedenen biologischen Materialien ist im ersten Schritt eine Gewinnung/Entnahme des Probenmaterials von einem Patienten, einem Gegenstand (auch Proben- oder Spurenträger genannt) oder einem Untersuchungsort
erforderlich. In Abhängigkeit vom Probenmaterial und der analytischen Fragestellung wird die Probe dann unmittelbar vor Ort untersucht oder zu einem Labor transportiert, in dem sie mit geeigneten Verfahren aufbereitet und analysiert wird. Es ist leicht vorstellbar, dass die ersten Schritte in der analytischen Kette, die Gewinnung und der Transport der Probe sowie deren Aufarbeitung entscheidenden Einfluss auf die Qualität des Analysenergebnisses haben.
In aller Regel wird zur Untersuchung im Labor bei Abstrichtupfersystemen der
Probensammelbereich in ein Gefäß überführt, in dem entweder Lyse und Extraktion der enthaltenen Probe erfolgen, oder aber zusätzlich auch die weitere Aufarbeitung vorgenommen wird. Hierbei handelt es sich z. B. um so genannte Spin-B askets oder andere Laborgefäße wie Eppendorf-Reaktionsgefäße.
Im Rahmen der nachgeschalteten Aufarbeitung im Labor ist die längliche Haltevorrichtung (Stiel) störend. Vor der Bearbeitung erfolgt daher üblicherweise eine Abtrennung des
Probensammelbereichs von der Haltevorrichtung. Es muss dabei sorgfältig darauf geachtet werden, dass im Rahmen der Abtrennung keine Kontamination des Probensammelbereichs erfolgt. Außerdem ist im Rahmen der Laborlogistik und auch im Hinblick auf die in aller Regel relativ große Anzahl von zu bearbeitenden Proben eine weitgehende Automatisierung erwünscht. Aus dem Stand der Technik sind eine Vielzahl von Abstrichtupfern und Wattestäbchen zur Entnahme biologischer Proben bekannt, die sich je nach Anwendungsgebiet in ihrer
Ausführungsform unterscheiden. Kann eine Probe sofort nach der Gewinnung weiterverarbeitet werden, z. B. weil die Probenahme direkt im Labor oder nahe beim Labor erfolgt, wird in vielen Fällen ein einfaches, steriles Wattestäbchen eingesetzt. Je nach Probe kann das Wattestäbchen trocken verwendet werden oder mit Wasser oder Puffer angefeuchtet werden. Zur Gewinnung der Probe wird die zu untersuchende Oberfläche mit dem Wattekopf des Stäbchens abgerieben. Derartige Abstrichtupfer sind entweder einzeln oder in größeren Einheiten steril verpackt. Typische Verpackung sind Blister- Verpackungen aus Papier, Kunststoff oder
Aluminiumverbundfolien.
Erfolgt die Entnahme der Probe dezentral oder nicht im Labor, muss die Probe nach der Gewinnung in das Labor überführt werden. Zur Vermeidung von Kontaminationen und zum Schutz der Probe hat es sich durchgesetzt, dass das Wattestäbchen in ein Transportröhrchen eingebracht wird, wobei der Haltebereich des Wattestäbchens in der Regel mit dem Verschluss des Transportröhrchens verbunden ist. Das Transportröhrchen verhindert sowohl eine
Kontamination von außen, d.h. eine unbeabsichtigte Übertragung von biologischem Material auf den Wattekopf des Transportröhrchens wie auch die Kontamination der Umgebung mit der eigentlichen Probe. Ein geschlossenes Transportröhrchen besitzt den Nachteil, dass eine feuchte biologische Probe in einem abgeschlossenen Röhrchen leicht kaputt gehen oder degradieren kann und dadurch unbrauchbar wird. Für mikrobiologische Proben ist man daher bereits vor einigen Jahren dazu übergegangen zum Schutz der Proben ein zusätzliches Kulturmedium in das Transportröhrchen einzubringen. Dies ist insbesondere bei mikrobiellen Proben heute Stand der Technik, bei denen das Überleben von Mikroorganismen für eine spätere Laboruntersuchung sichergestellt werden soll.
Vermehrungsfähige Mikroorganismen werden so direkt in ein Kulturmedium eingebracht, in dem sie optimale Überlebensbedingungen vorfinden und sich bereits während des Transportes vermehren können.
WO 95/25948 AI beschreibt eine Probennahmevorrichtung mit einem Abstrichtupfer, der eine Probe nach Durchstoßen einer Trennfolie in Kontakt mit einem im Reagenzbehälter erzeugten Flüssigkeitsgemisch bringt.
DE 10 2012 024 354 AI beschreibt eine Probenbehandlungsvorrichtung mit einem
Abstrichtupfer, der nach Durchstoßen einer Membran eine Probe in eine Flüssigkeitskammer einführt, an der seitlich eine Vielzahl von Flüssigkeitsreservoirs vorgesehen sind.
US 6 524 530 Bl beschreibt einen Probensammelbehälter, der einen Ab strich tupfer und einen Behälter mit einer Flüssigkeit zur Extraktion von mit dem Tupfer aufgenommenem Material und einen Reagenzbehälter mit einer Reagenzienlösung umfasst. Die Vorrichtung ermöglicht es, das an dem Tupfer hängende Material zu extrahieren und in der Vorrichtung zu analysieren.
US 2014/0051 178 AI beschreibt eine abgeschlossene Probennahmevorrichtung, die einen Abstrichtupfer und einen Transportbehälter umfasst, Der Abstrichtupfer weist einen hohlen Schaft auf, durch den der Tupfer aus einem Reagenzbehälter am Ende des Schafts mit einer für die aufgenommene Probe spezifischen Flüssigkeit angefeuchtet werden kann.
US 8 506 898 B2 beschreibt eine Probennahmevorrichtung, die in der Forensik verwendet werden kann. Die Vorrichtung umfasst einen Abstrichtupfer und ein Gehäuse, wobei das
Gehäuse eine Kammer ausbildet, die eine Flüssigkeit zur Konservierung der mit dem Tupfer aufgenommenen DNA enthält.
EP 0 058 008 A2 beschreibt eine Probennahmevorrichtung für medizinische Proben, die einen Abstrichtupfer und einen Transportbehälter umfasst, in dem sich, abgetrennt durch eine
Trennwand, ein Medium zur Konservierung der genommenen Probe befindet. Nach der
Probennahme wird die Trennwand mit dem Abstrichtupfer durchstoßen, so dass der Tupfer mit der Probe in das Medium taucht. US 4 353 868 AI und US 4 409 988 AI beschreiben Probennahmevonichtungen für
Bakterienproben, die einen Abstrichtupfer und ein Probenröhrchen umfassen, in dem sich, abgedichtet in einer separaten Kammer, ein Kulturmedium oder eine Analyseflüssigkeit befindet. Nach Probenahme wird die Trennwand der Kammer mit dem Abstrichtupfer durchstoßen, so dass der Tupfer mit der Probe mit dem Medium in Kontakt gebracht wird.
US 3 450 129 AI und US 4 31 1 792 AI beschreiben Probennahmevorrichtung für
Bakterienproben, die einen Abstrichtupfer und einen Behälter für den Abstrichtupfer umfassen. Der Behälter enthält eine Glasampulle mit Kulturmedium, die nach Probenahme zerbrochen wird, um den die Probe enthaltenden Tupfer mit dem Kulturmedium zu befeuchten und die Probe so zu stabilisieren.
US 4 707 450 AI und US 4 747 719 AI beschreiben Probennahmevonichtungen für biologische Proben, die einen Abstrichtupfer umfassen, der einen hohlen Schaft aufweist. In dem Schaft befindet sich entweder eine Flüssigkeit, mit dem die Tupferspitze vor der Probenahme befeuchtet werden kann, oder durch den Schaft kann Testflüssigkeit in die Tupferspitze gedrückt werden, so dass die Probe direkt mit der Testflüssigkeit in Kontakt kommt und analysiert werden kann. US 5 078 968 AI und WO 93/12421 AI beschreiben eine Probennahmevorrichtung für biologische Proben, die ein oder mehrere Reagenz- oder Testflüssigkeiten enthält, die mit der Probe am Abstrichtupfer in Kontakt gebracht werden können. Nach Kontakt mit der Probe kann die erhaltene Flüssigkeit weiter untersucht werden. Dieser Ansatz ist nachteilig wenn nicht die Konservierung der Probe oder die Kultivierung und Identifizierung vermehrungsfähiger Mikroorganismen im Vordergrund steht, sondern die Analyse der in der Probe enthaltenen Nukleinsäuren. Der Transport von biologischen
Materialien in einer feuchten Umgebung kann durch in der Probe enthaltene Nukleasen oder das Aufwachsen Nuklease sezemierender Mikroorganismen zu Degradationseffekten und damit zum Verlust der eigentlichen Zielnukleinsäure führen. Deshalb zeichnet sich der Stand der Technik heute dadurch aus, dass nukleinsäurehaltige, aber nicht vermehrungsfähige biologische Proben vor dem Transport zur Vermeidung einer Probendegradation getrocknet werden. Dazu existieren verschiedene technische Lösungen, die unterschiedlichen Vor- und Nachteile besitzen. DE 60 2004 008 884 betrifft eine Vorrichtung für die Aufbewahrung und den Transport von forensischem und/oder biologischem Material, die einen verschließbaren, röhrenförmigen Behälter und einen Abstrichtupfer zur Aufnahme und Aufbewahrung der Probe umfasst. Der Abstrichtupfer ist mit der Verschlusskappe des Behälters verbunden, welche den Behälter hermetisch abschließt. In die Behälterwand sind ein oder mehrere Lüftungslöcher eingebracht, die in unbenutztem Zustand verschlossen sind. Da der Abstrichtupfer vor der Benutzung in trockenem Zustand vorliegt, muss der Abstrichtupfer zur Gewinnung trockener Proben angefeuchtet werden. Nach dem Einbringen der feuchten Probe in den Behälter, wird der Verschluss von den Lüftungslöchern abgenommen und die Lüftungslöcher werden freigelegt, so dass das Probenmaterial an der Luft wieder trocknen kann, während es vor Kontamination geschützt innerhalb des Behälters verbleibt. Nachteile dieser Erfindung sind, dass die
Trocknungsgeschwindigkeit der Probe von den Umgebungsbedingungen abhängt und bei hoher Umgebungsfeuchte entweder sehr langsam vor sich geht oder überhaupt nicht stattfindet. DE 10 2007 006 505 beschreibt verschiedene Ausführungsformen eines Abstrichtupfers in einem Transportröhrchen, das durch seine spezielle Konstruktion eine Trocknung und damit eine Konservierung einer feuchten Probe erreicht. Dazu ist das Gehäuse des Transportröhrchens mit einer oder mehreren Poren versehen, durch die die Feuchtigkeit aus der Probe entweichen kann und die Probe aber trotzdem vor einer unbeabsichtigten Kontamination geschützt ist. Die
Porenöffnungen sind durch eine wasserdampfdurchlässige Membran abgedeckt. Auch bei dieser Vorrichtung ist die Trocknungsgeschwindigkeit von den Umgebungsbedingungen abhängig und der Abstrichtupfer muss vor dem Einsatz angefeuchtet werden.
DE 10 2008 035 851 AI und WO 201 1/106784 AI beschreiben Systeme, bei denen die
Trocknung einer feuchten, biologischen Probe durch ein Trockenmittel erreicht wird, welches direkt in das Transportröhrchen integriert und so angeordnet ist, dass es den Wattekopf mit der Probe möglichst umschließt. Dies gewährleistet zwar eine hocheffiziente Trocknung der Probe, aber auch hier liegt der Abstrichtupfer vor der Benutzung in trockener Form vor und muss bei trockenem Probenmaterial angefeuchtet werden. Gleichzeit führt der komplexe Aufbau des Abstrichtupfers zu hohen Herstellkosten. Da das eingebrachte Trockenmittel nicht transparent um den Kopf des Abstrichtupfers angeordnet ist, besteht zudem das Risiko, dass ein
unbeabsichtigter Kontakt zwischen dem Kopf des Abstrichtupfers und der Röhrchenwand zu einem Verlust der Probe führen kann.
Bei der anschließenden Laboranalyse kommen heute je nach Probenmaterial (Gewebe, Haut, Blut, Speichel, etc.) verschiedene Verfahren der Probenaufbereitung zum Einsatz. In der Regel erfolgt in der ersten Stufe eine Lyse (Aufschluss) der Probe, wodurch das gesammelte
Zellmaterial aufgeschlossen und das enthaltene Nukleinsäurematerial freigesetzt wird. In einer zweiten Stufe wird entweder die DNA aus der Aufschlusslösung extrahiert oder die
Aufschlusslösung von störenden Komponenten (Inhibitoren) befreit.
Das gegenwärtige Vorgehen bei der Gewinnung biologischer Proben weist bedingt durch die Eigenschaften der biologischen Proben, die Konstruktion der bekannten
Probenentnahmevorrichtungen und die zeitliche Entkopplung der Probenahme von der
Probenaufbereitung (bedingt durch den Transport vom Probennahmeort ins Labor) mehrere Nachteile auf. Liegt die biologische Probe in flüssigem oder feuchtem Zustand vor, kann die Gewinnung der Proben mit Hilfe eines trockenen Abstrichtupfers erfolgen. Da aber in vielen Fällen die biologische Probe bereits getrocknet oder zumindest hochviskos ist (bei Hautabstrichen oder bei Abstrichen von Oberflächen) muss der Abstrichtupfer direkt vor Ort angefeuchtet werden. Dies ist umständlich und birgt das Risiko einer unbeabsichtigten Kontamination. Die Konstruktion der Vorrichtungen nach dem Stand der Technik schließt aber die Bereitstellung eines angefeuchteten Abstrichtupfers wegen der vorhandenen Belüftungsmembran oder dem integrierten
Trockenmittel aus. Je nach Ausführungsform des Abstrichtupfers ist die
Trocknungsgeschwindigkeit von den Umgebungsbedingungen abhängig und damit schwer zu kontrollieren oder nur durch aufwendige Integration eines Trockenmittels zu realisieren.
Unabhängig davon, ob eine Probe bereits feucht vorliegt oder mit einem angefeuchteten
Abstrichtupfer gewonnen wird, wird die Probe zur Konservierung für den Transport wieder getrocknet und anschließend zur Aufarbeitung im Labor wieder angefeuchtet, z. B. durch Trennung des Abstrichtupferkopfes vom Stiel und Einbringen des Kopfes in einen geeigneten Lyse- oder Extraktionspuffer. Dies ist umständlich, zeitaufwendig und birgt
Kontaminationsrisiken.
Die derzeit praktizierten Verfahren zur Extraktion von Nukleinsäuren wie DNA aus dem biologischen Probenmaterial auf dem Wattekopf sind zeit- und kostenaufwendig und bergen zudem weitere, unnötige Kontaminationsrisiken. Ein verbreitetes Verfahren zur Extraktion von DNA aus einer biologischen Probe ist die Behandlung der biologischen Proben mit einer Detergenz/Proteinase K-Lösung. Dies führt zu einer Auflösung der Zellwand und zu einer Degradation der zellulären Proteine inklusive der vorhandenen Nukleasen und Histone.
Anschließend wird eine Mischung aus den organischen Lösemitteln Chloroform und Phenol zugegeben. Während die DNA in der wässrigen Phase bleibt, reichern sich
Proteinabbauprodukte, Lipide und andere störende Komponenten an der Grenzfläche und in der organischen Phase an. Das Verfahren stellt hochmolekulare doppelsträngige DNA zur
Verfügung, besitzt aber den Nachteil, dass mit toxischen Chemikalien umgegangen werden muss und die Methode dadurch insgesamt sehr fehleranfällig und arbeitsaufwendig ist.
Aufgabe der vorliegenden Erfindung ist es, eine Probennalimevorrichtung bereitzustellen, die die oben genannten Nachteile des Standes der Technik beseitigt und sowohl das Sammeln als auch den Transport und die Aufarbeitung nukleinsäurehaltiger biologischer Proben vereinfacht und sicherer macht.
Diese Aufgabe wird durch eine Probennahmevorrichtung zum Sammeln und zum Transport nukleinsäurehaltiger biologischer Proben gemäß Anspruch 1 gelöst, welche umfasst: einen Abstrichtupfer und einen Transportbehälter zur Aufnahme des Abstrichtupfers, wobei der Abstrichtupfer an einem Ende einen Probensammelbereich aufweist und am gegenüberliegenden Ende mit einem feuchtigkeitsdichten Verschluss zum Verschließen des Transportbehälters verbunden ist, so dass der Abstrichtupfer nach Verschließen des Transportbehälters in dem Transportbehälter angeordnet ist, wobei an oder in der Probennahmevorrichtung ein oder mehrere Flüssigkeitsreservoirs sowie Mittel zum Freisetzen der in den Flüssigkeitsreservoirs enthaltenen Flüssigkeiten in den
Innenraum des Transportbehälters angeordnet sind, wobei eines der ein oder mehreren
Flüssigkeitsreservoirs eine Lysefiüssigkeit zum Aufschluss der biologischen Probe am
Probensammelbereich des Abstrichtupfers nach der Probennahme enthält.
Weitere Ausführungsformen der erfindungsgemäßen ProbennahmevoiTichtung sind in den Unteransprüchen beschrieben.
Die erfmdungsgemäße abgeschlossene Vorrichtung mit integriertem Flüssigkeitsreservoir hat somit eine Probenaufschluss- und Probenaufbereitungs- oder -vorbereitungsfunlction und erlaubt es, dass Probennahme, Transport und Aufarbeitung der biologischen Probe unter kontrollierten feuchten Bedingungen erfolgen. Die erfindungsgemäße Probennahmevorrichtung kann insbesondere zum Sammeln, Aufschließen und Transportieren von nukleinsäurehaltigen biologischer Proben in der Medizin, Mikrobiologie und Hygiene, und ganz besonders in der Forensik verwendet werden. Unter nukleinsäurehaltigen biologischen Proben werden hier und im Folgenden poly- und oligonukleotidhaltige biologische Proben verstanden, die für einen analytischen Nachweis der enthaltenen Nukleinsäuremoleküle, beispielsweise DNA, RNA, cDNA, mtDNA oder Plasmide, insbesondere DNA, gesammelt und zugänglich gemacht werden sollen. Biologische Proben im Sinne der vorliegenden Erfindung beinhalten dementsprechend sowohl KörperfTüssigkeiten oder Sekrete, beispielsweise Blut, Speichel, Urin, Schweiß, Tränen, Sperma, Vaginalflüssigkeiten, Nasalsekrete oder Wundflüssigkeit, als auch anderes körpereigenes Material wie Haut,
Hautschuppen, Gewebe, Knochen, Knorpel, Fingernägel oder Haare. Der Begriff biologische Probe umfasst dabei sowohl humane Körpermaterialien als auch tierische Proben zur
Untersuchung für veterinärmedizinische, tierforensische oder hygienische Zwecke. Weiterhin beinhaltet dieser Begriff pafhogene und nicht-pathogene Mikroorganismen wie Eukaryonten, Prokaryonten, Viren und Prionen. Die erfindungsgemäße Probennahmevorrichtung umfasst einen Abstrichtupfer und einen feuchtigkeitsdicht verschließbaren Transportbehälter zur Aufnahme des Abstrichtupfers.
Transportbehälter zur Aufnahme des Abstrichtupfers sind im Stand der Technik bekannt. Es handelt sich üblicherweise um Behälter in Form eines Probenröhrchens, im Folgenden auch als Transportröhrchen bezeichnet. Gewöhnlich ist das Transportröhrchen im Wesentlichen aus Kunststoffmaterial hergestellt, vorzugsweise einem durchsichtigen Kunststoffmaterial.
Geeignete Transportröhrchen haben üblicherweise eine Länge im Bereich von 10 bis 25 cm, beispielsweise 12 bis 20 cm, und einen Durchmesser im Bereich von 1 bis 2 cm, beispielsweise 1 bis 1 ,5 cm.
Abstrichtupfer, die für die erfindungsgemäße Probennahmevorrichtung eingesetzt werden können, sind im Stand der Technik bekannt. Derartige Abstrichtupfer bestehen im Wesentlichen aus einem Halteelement, beispielsweise einem hohlen oder massiven Stiel oder Schaft aus Holz oder Kunststoff, und einem Probensammelbereich zum Sammeln der biologischen Probe, der sich an einem Ende des Halteelements befindet. Das Material des Probensammelbereichs unterliegt keiner besonderen Einschränkung, solange es in der Lage ist, die biologische Probe bis zur Weiterverarbeitung im Labor im Wesentlichen dauerhaft aufzunehmen und dann im Zuge der Analyse bei der Behandlung mit geeigneten Extraktions- oder Reagenzienlösungen wieder freizugeben. Der Probensammelbereich kann beispielsweise aus einem Wattebausch gebildet sein, es können jedoch auch andere Materialien und Strukturen verwendet werden. Beispiele für solche Materialien und Strukturen sind schwammartige Materialien wie Polyurethan,
Vliesmaterialien oder reine Baumwoll-, Polyester- oder andere Kunststofffasern. Die
Aufbringung der Fasern im Probensammelbereich kann dabei ungeordnet oder geordnet erfolgen, zum Beispiel als Wicklung, als Beflockung oder in Form vliesförmiger oder gewebter Textilien. Typische Abstrichtupfer besitzen einen Baumwollkopf, der aus gewickelten, aber ungeordneten Baumwollfasern besteht. An dem dem Probensammelbereich gegenüberliegenden Ende ist der Abstrichtupfer trennbar oder untrennbar fest mit einem Verschluss verbunden, mit dem sich der Behälter, der der Aufnahme und Aufbewahrung des Abstrichtupfers dient, feuchtigkeitsdicht verschließen lässt. Der Transportbehälter ist auf verschiedene Art und Weise mit dem Verschluss verschließbar, beispielsweise durch eine Schraubverbindung oder eine formschlüssige Steckverbindung. Je nach Art der Verbindung muss die Schnittstelle zwischen Verschluss und Transportbehälter entsprechend ausgeführt sein. Entscheidend ist, dass die Schnittstelle zwischen Verschluss und Transportröhrchen feuchtigkeitsdicht ausgeführt ist, damit weder die Feuchtigkeit aus dem Abstrichtupfer noch der später freigesetzte Transportpuffer entweichen können. Geeignete Verschlusseinrichtungen sind beispielsweise Schraub- oder Steckverschlüsse, beispielsweise solche mit einer Dichteinlage aus feuchtigkeitsdichtem Material.
Vorzugsweise umfasst die erfindungsgemäße Probennahmevorrichtung ein oder mehrere Flüssigkeitsreservoirs. Unter Flüssigkeitsreservoir wird hier und im Folgenden ein
abgeschlossenes, eine sterile Flüssigkeit enthaltendes Behältnis verstanden, aus dem die Flüssigkeit mit geeigneten Mitteln freigesetzt werden kann. Vorzugsweise umfasst die
Probennahmevorrichtung ein oder zwei Flüssigkeitsreservoirs, besonders bevorzugt ein einziges Flüssigkeitsreservoir.
Gemäß einer Ausführungsform der Erfindung kann die Flüssigkeit zur Ausbildung des
Flüssigkeitsreservoirs beispielsweise in eine Kunststofffolie eingeschweißt sein. Eine solche Kunststofffolie kann insbesondere eine Verbundfolie mit Aluminiumanteil sein, die sich durch eine verminderte Wasserdampfdurchlässigkeit auszeichnet, was wiederum vorteilhaft für die Langzeitstabilität der Probennahmevorrichtung ist. Alternativ kann die Flüssigkeit in einer Glasampulle passender Größe eingeschlossen sein. Gemäß einer weiteren Ausführungsform ist das Flüssigkeitsreservoir ein an der Probennahmevorrichtung angeordneter Behälter, insbesondere ein Kunststoffbehälter, beispielsweise aus einem Kunststoff mit geringer
Wasserdampfdurchlässigkeit wie Cycloolefin-Copolymer (COC), der mit dem Transportpuffer gefüllt ist und, zur Ausbildung des Flüssigkeitsreservoirs, mit einer Abdichtung oder Abdeckung versehen ist. Die Abdichtung oder Abdeckung kann beispielsweise eine dünne Metallfolie, wie eine Aluminiumfolie, eine Kunststofffolie oder eine Verbundfolie, wie eine
Kunststoffaluminiumverbundfolie, umfassen. Diese vorteilhafte Ausfuhrungsform erspart eine separate Verpackung der Flüssigkeit.
Eines der Flüssigkeitsreservoirs enthält eine Lyseflüssigkeit, also eine Flüssigkeit, die zum Aufschluss der nukleinsäurehaltigen biologischen Probe, d. h. insbesondere des in der Probe enthaltenen Zellmaterials, und zur Freisetzung der Nukleinsäuren geeignet ist. Vorzugsweise ist die Lyseflüssigkeit gleichzeitig eine die freigesetzten Nukleinsäuren stabilisierende
Konservierungsflüssigkeit, d. h, sie stabilisiert die nach dem Aufschluss freigesetzten
Nukleinsäuren, indem sie die Nukleinsäuren vor Degradation schützt.
Die Lyseflüssigkeit hat typischerweise einen pH-Wert im Bereich von 2,0 bis 14,0, bevorzugt im Bereich von 7,5 bis 14,0, beispielsweise von 8,0 bis 13,0. Die alkalischen Reaktionsbedingungen unterstützen die Lyse der biologischen Probe, stabilisieren und konservieren aber auch zugleich die freigesetzte Nukleinsäure. Im einfachsten Fall besteht die Lyseflüssigkeit aus einer Lauge wie zum Beispiel NaOH, KOH oder einer vergleichbaren Base, die selbst keine
Puffereigenschaften aufweist, aber in ausreichender Konzentration eingesetzt wird (ImM bis 2M), um einen konstanten pH Wert zu garantieren. Bevorzugt ist die Lyseflüssigkeit ein Lysepuffer, insbesondere ein Lysepuffer auf Basis eines basischen Puffersystems mit einem pH- Wert von 7,5 bis 14. Als Puffersysteme können übliche Puffersysteme verwendet werden, die einen pH- Wert in diesen Bereichen sicherstellen. Geeignete Puffersystem können insbesondere ausgewählt sein aus Tris-Puffem, Phosphatpuffern, Carbonatpuffern, Boratpuffern und/oder 3-[(3-Cholamidopropyl)dimethylammonio]-l-propansulfonat (CHAPS)-Puffern.
Die Lyseflüssigkeit kann ein oder mehrere Detergenzien und/oder chaotrope Substanzen umfassen. Die Wirkung der Detergenzien liegt in erster Linie in der Denaturierung von
Proteinen, gleichzeitig erhöhen sie aber auch die Löslichkeit hydrophober Zellbruchstücke wie Membranen und hydrophober und denaturierter Proteine. Geeignete Detergenzien zum
Aufschluss der biologischen Probe können anionische, nichtionische und zwitterionische Tenside oder deren Mischungen sein. Beispiele geeigneter anionischer Tenside sind
Natriumdodecylsulfat (SDS) und Natriumlaurylsarcosinat (SLS). Beispiele für nichtionische oder zwitterionische Tenside sind beispielsweise Polysorbate, wie sie unter dem Handelsnamen Tween erhältlich sind, z. B. Tween 20, Alkylphenolethoxylate, wie sie unter dem Handelsnamen Triton® erhältlich sind, z. B. Triton® X-100, und Polyalkylenglycolether, wie sie unter dem Handlesnamen Brij erhältlich sind. Die Lyseflüssigkeit kann weiterhin ein oder mehrere chaotrope Substanzen umfassen, die wie Detergenzien eine denaturierende Wirkung auf Proteine besitzen und zum Aufschluss der biologischen Probe geeignet sind. Beispiele für bevorzugte chaotrope Substanzen sind Harnstoff, Guanidinthiocyanat, Guanidinhydrochlorid, Natriumiodid und Natriumperchlorat. Andere denaturierende Komponenten mit vergleichbarer Wirkung können ebenfalls in der
Lyseflüssigkeit enthalten sein.
Zur Verbesserung der Lyse von in der biologischen Probe enthaltenem Zellmaterial,
beispielsweise von keratinoiden Zellen, kann die Lyseflüssigkeit auch ein oder mehrere lytische Enzyme umfassen. Bevorzugte lytische Enzyme sind beispielsweise Proteasen, wie z. B.
Proteinase K, und Glycosidasen, wie Lysozym.
Detergenzien, chaotrope Substanzen und lytische Enzyme haben gleichzeitig eine Nukleinsäuren stabilisierende Wirkung, indem sie Nukleasen inhibieren oder Komplexe mit den
Nukleinsäuremolekülen bilden.
Gemäß einer weiteren Ausfuhrungsform kann die Lyseflüssigkeit weitere Substanzen zur Stabilisierung der freigesetzten Nukleinsäuren umfassen, wie beispielsweise ein oder mehrere kationische Tenside und/oder Chelatoren. Geeignete kationische Tenside sind quartäre
Ammoniumsalze wie Cetyltrimethylammoniumbromid (CT AB), Cetylpyridiniumchlorid und Benzalkoniumchlorid und Mischungen davon. Chelatoren sind als Nukleaseinhibitoren bekannt, und geeignete Chelatoren sind beispielsweise Ethylendiamintetraessigsäure (EDTA),
Ethylenglycol-bis(aminoethylether)-N,N,N',N'-tetraessigsäure (EGTA),
Ethylendiamindibernsteinsäure (EDDS) und Nitrilotriessigsäure (NTA), wobei EDTA besonders bevorzugt ist.
Das Volumen der Lyseflüssigkeit in den Flüssigkeitsreservoirs der Probennahmevorrichtung liegt üblicherweise in einem Bereich von 0,05 ml bis 5 ml, bevorzugt in einem Bereich von 0,2 bis 1 ml und besonders bevorzugt bei etwa 0,5 ml. Gemäß einer bevorzugten Ausfuhrungsform der vorliegenden Erfindung weist der Abstrichtupfer in dem verschlossenen Transportbehälter vor der ersten Entnahme des Abstrichtupfers aus dem Transportbehälter zur Probenahme einen eine Probennahmeflüssigkeit enthaltenden
Probensammelbereich auf. Der Probensammelbereich liegt also in feuchtem Zustand, angefeuchtet mit einer Flüssigkeit zur Probenahme vor. Die Probennahmeflüssigkeit für den Abstrichtupfer muss mit der abzuwischenden Oberfläche kompatibel sein und darf den abzuwischenden Gegenstand weder zerstören noch für die weitere forensische Behandlung unbrauchbar machen. Die Probennahmeflüssigkeit wird bei der Herstellung der
erfindungsgemäßen Vorrichtung durch Aufdosieren der gewünschten Flüssigkeitsmenge aufgebracht.
Geeignete Probennahmeflüssigkeiten sind beispielsweise hochreines steriles Wasser, Mono- und Polyalkohole wie Methanol, Ethanol, Propanol, Isopropanol. Glycerin und Glycol, und
Mischungen davon. Bevorzugt ist die Probennahmeflüssigkeit eine wässrige Pufferlösung, beispielsweise eine Pufferlösung auf Basis von Tris-, Phosphat- oder Citratpuffern, der vorzugsweise ein oder mehrere Zusätze wie Detergenzien, Salze und/oder organische
Komponenten hinzugefügt sind. Detergenzien, Pufferionen, Salze oder organische Komponenten wirken sich positiv auf die Probensammeleffizienz aus. Geeignete Detergenzien sind anionische, nichtionische und zwitterionische Tenside, wie sie beispielhaft auch weiter oben genannt sind. Organische Komponenten können beispielsweise Mono- und Polyalkohole sein, wie sie oben beispielhaft genannt sind.
An oder in der Probennahmevorrichtung, insbesondere an oder im Transportbehälter und/oder Verschluss des Transportbehälters, sind erfindungsgemäß ein oder mehrere
Flüssigkeitsreservoirs und Mittel zum Freisetzen der in den Flüssigkeitsreservoirs enthaltenen Flüssigkeit in den Innenraum des Transportbehälters angeordnet.
Gemäß einer Ausführungsform der Erfindung ist am unteren Ende des Transportbehälters ein die Lyseflüssigkeit enthaltender und, zur Ausbildung eines Flüssigkeitsreservoirs auf der Seite des Abstrichtupfers, mit einer Abdichtung versehener Reagenzbehälter derart angeordnet, dass Reagenzbehälter und Transportbehälter gegeneinander beweglich, beispielsweise gegeneinander verschiebbar oder eindrehbar, miteinander verbunden sind, wobei in dem Transportbehälter Mittel angeordnet sind, durch die die in dem Flüssigkeitsreservoir enthaltene Lyseflüssigkeit in den Innenraum des Transportbehälters freigesetzt wird, wenn Reagenzbehälter und
Transportbehälter relativ zueinander bewegt werden. Der Reagenzbehälter ist vorteilhaft in Form einer Kappe, beispielsweise einer Schraubkappe, ausgebildet.
Gemäß einer weiteren Ausführungsform ist der Reagenzbehälter nicht selbst das
Flüssigkeitsreservoir, sondern in dem Reagenzbehälter ist ein Flüssigkeitsreservoir,
beispielsweise ein Flüssigkeitsbeutel, mit Lyseflüssigkeit enthalten. Die in dem
Flüssigkeitsreservoir enthaltene Lyseflüssigkeit wird durch die Mittel zur Freisetzung der Flüssigkeit in den Innenraum des Transportbehälters freigesetzt, wenn der Reagenzbehälter mit beispielsweise dem Flüssigkeitsbeutel und der Transportbehälter relativ zueinander bewegt werden. Alternativ kann der Reagenzbehälter auch erste und zweite Flüssigkeitsreservoirs enthalten, wobei ein erstes Flüssigkeitsreservoir die Lyseflüssigkeit enthält und ein zweites Flüssigkeitsreservoir eine Konservierungsflüssigkeit für die freigesetzten Nukleinsäuren oder eine Probennahmeflüssigkeit zum Anfeuchten des Probensammelbereichs des Abstrichtupfers enthält. Die in den Flüssigkeitsreservoirs enthaltenen Flüssigkeiten werden nacheinander in den Innenraum des Transportbehälters freigesetzt, wenn Reagenzbehälter und Transportbehälter relativ zueinander bewegt werden. Die Reihenfolge der Anordnung der Flüssigkeitsreservoirs mit den freizusetzenden Flüssigkeiten im Reagenzbehälter richtet sich danach, welche der Flüssigkeiten zuerst freigesetzt werden soll.
Reagenzbehälter und Transportbehälter können beispielsweise durch ein Schraubgewinde miteinander verbunden sein. Die Mittel zum Freisetzen der in den Flüssigkeitsreservoirs enthaltenen Flüssigkeit sind bei diesen Ausführungsformen in dem Transportbehälter an einer Position zwischen dem
Reagenzbehälter mit der Flüssigkeit oder den Flüssigkeitsreservoirs und dem
Probensammelbereich des Abstrichtupfers angeordnet, so dass die Flüssigkeit freigesetzt wird, wenn Reagenzbehälter und Transportbehälter relativ zueinander bewegt werden. Solche Mittel können beispielsweise eine am Boden des Transportbehälters angeordnete wasserdurchlässige Bodenplatte mit auf der dem Reagenzbehälter zugewandten Seite angeordneten Domfortsätzen umfassen. Zweckmäßig sind an der Probennahmevorrichtung zwischen dem Reagenzbehälter und den Mitteln zum Freisetzen der in den Flüssigkeitsreservoirs enthaltenen Flüssigkeit weiterhin Sicherungsmittel wie Sicherungsringe angeordnet, die eine unbeabsichtigte relative Bewegung zwischen Reagenzbehälter und Transportbehälter verhindern.
Gemäß einer weiteren Ausfuhrungsform der erfindungsgemäßen Probennahmevorrichtung ist am oberen Ende der Vorrichtung auf dem Verschluss des Transportbehälters ein Reagenzbehälter, beispielsweise in Form einer Schraubkappe, derart angeordnet, dass Reagenzbehälter und Verschluss gegeneinander beweglich miteinander verbunden sind, wobei der Reagenzbehälter ein Flüssigkeitsreservoir mit Lyseflüssigkeit enthält, und wobei der Verschluss Mittel aufweist, durch die die in dem Flüssigkeitsreservoir enthaltene Lyseflüssigkeit in den Innenraum des Transportbehälters freigesetzt wird, wenn Reagenzbehälter und Verschluss relativ zueinander bewegt werden. Alternativ kann der Reagenzbehälter auch erste und zweite
Flüssigkeitsreservoirs enthalten, wobei ein erstes Flüssigkeitsreservoir die Lyseflüssigkeit enthält und ein zweites Flüssigkeitsreservoir eine Konservierungsflüssigkeit für die freigesetzten
Nukleinsäuren oder eine Probennahmeflüssigkeit zum Anfeuchten des Probensammelbereichs des Abstrichtupfers enthält. Die in den Flüssigkeitsreservoirs enthaltenen Flüssigkeiten werden nacheinander in den Innenraum des Transportbehälters freigesetzt, wenn Reagenzbehälter und Verschluss relativ zueinander bewegt werden. Die Reihenfolge der Anordnung der
Flüssigkeitsreservoirs mit den freizusetzenden Flüssigkeiten im Reagenzbehälter richtet sich danach, welche der Flüssigkeiten zuerst freigesetzt werden soll.
Die Mittel zum Freisetzen der in den Flüssigkeitsreservoirs enthaltenen Flüssigkeit sind bei den Ausführungsformen, bei denen die Flüssigkeitsreservoirs auf dem Verschluss angeordnet sind, zwischen Verschluss und Reagenzienbehälter angeordnet, so dass die Flüssigkeiten freigesetzt werden, wenn Reagenzbehälter und Verschluss relativ zueinander bewegt werden. Solche Mittel können beispielsweise auf der dem Reagenzbehälter zugewandten Seite angeordnete
Dornfortsätze sowie Kanäle, Kapillaren oder Poren in der Verschlusseinrichtung umfassen, durch die die freigesetzte Flüssigkeit in den Transportbehälter gelangen kann. In diesem Fall sind Sicherungsmittel, beispielsweise ein Sicherungsring, gegen ein unbeabsichtigtes
Verschieben des Reagenzbehälters gegen den Verschluss zwischen dem Reagenzbehälter und den Mitteln zum Freisetzen der in den Flüssigkeitsreservoirs enthaltenen Flüssigkeit angeordnet. Gemäß einer weiteren Ausführungsform der erfindungsgemäßen Probennahmevorrichtung sind seitlich am Transportbehälter ein oder mehrere Flüssigkeitsreservoirs und Mittel zum Freisetzen der in den Flüssigkeitsreservoirs enthaltenen Flüssigkeiten in den Innenraum des
Transportbehälters angeordnet, wobei die ein oder mehreren Flüssigkeitsreservoirs elastische Flüssigkeitsbeutel sind und ein Flüssigkeitsbeutel die Lyseflüssigkeit enthält, und wobei die in den Flüssigkeitsreservoirs enthaltenen Flüssigkeiten in den Innenraum des Transportbehälters freigesetzt werden, wenn die Flüssigkeitsreservoirs gegen die Mittel zum Freisetzen der Flüssigkeiten gepresst werden. Mittel zum Freisetzen der in den Flüssigkeitsreservoirs enthaltenen Flüssigkeit sind bei den Ausführungsformen, bei denen die Flüssigkeitsreservoirs an der Seite des Transportbehälters angeordnet sind, beispielsweise Dornfortsätze, die auf der dem Flüssigkeitsreservoir zugewandten Seite des Transportbehälters angeordnet sind, wobei in der Wand des
Transportbehälters gleichzeitig Öffnungen vorgesehen sind, durch die die Flüssigkeit in den Transportbehälter freigesetzt wird. Als Sicherungsmittel gegen ein unbeabsichtigtes Öffnen der Flüssigkeitsreservoirs kann eine Abdeckkappe über den Flüssigkeitsreservoirs verwendet werden.
Die Herstellung der erfindungsgemäßen Vorrichtung kann in dem Fachmann bekannter Weise mit einer Reihe etablierter Produktionstechnologien erfolgen. Aus Kostengründen besteht die Probennahmevorrichtung nur aus einer geringen Zahl von Bauteilen, die, jedes für sich genommen, einfach und preiswert zu fertigen und anschließend mit wenigen Handgriffen zusammenzubauen sind. Für die Fertigung der Kunststoffteile können Fertigungsverfahren nach dem Stand der Technik, wie Spritzgießen, Extrudieren oder Tiefziehen verwendet werden. Bei diesen Verfahren können die Kunststoffteile formgenau in hohen Stückzahlen und kostengünstig hergestellt werden. Üblicherweise werden die Einzelteile in einem Reinraum unter kontrollierten Bedingungen hergestellt und, falls erforderlich, vor der Montage zusätzlich sterilisiert. Die Montage der Einzelteile erfolgt ebenfalls in einem Reinraum unter kontrollierten Bedingungen oder an einem Laminar Flow Arbeitsplatz mit entsprechend gefilterter Luft. Da wässrige Puffer und organische oder biochemische Komponenten langzeitstabil in der erfindungsgemäßen Vorrichtung bereitgestellt werden müssen, finden vor allem Materialien mit niedriger Wasserdampfdurchlässigkeit, wie Aluminium, Glas oder bestimmte thermoplastische Kunststoffe mit einer hohen Sperrwirkung gegen Wasserdampf, wie COC, Polypropylen und Polyethylen, Verwendung,
Die einzusetzenden Flüssigkeiten werden steril in die Reagenzbehälter und in die
Probennahmevorrichtung eingebracht. Dies kann entweder in Form eines separaten Blisters erfolgen, oder die Flüssigkeit wird direkt in einen Reagenzienbehälter eingebracht und anschließend mit einer Folie oder einem dünnen Deckel versiegelt. Danach wird der
Reagenzienbehälter beispielsweise bis zum bereits aufgeschnappten Sicherungsring mit Hilfe des vorliegenden Gewindes auf ein Transportröhrchen aufgeschraubt.
Der Stiel und der Probesammelbereich des Abstrichtupfers sind wie oben beschrieben ausgeführt. Der Stiel kann in den Verschluss gepresst, eingeklebt oder eingeschweißt werden.
Um unnötige Kontaminationsrisiken zu vermeiden, erfolgt eine Befeuchtung des Abstrichtupfers idealerweise direkt vor der Montage der erfindungsgemäßen Vorrichtung, beispielsweise durch einfaches Aufpipettieren oder Aufdosieren der erforderlichen Flüssigkeitsmenge mit Hilfe einer geeigneten Dosiervorrichtung. Alternativ kann die Befeuchtung des Abstrichtupfers auch durch Eintauchen des Probensammelbereichs in die Probennahmeflüssigkeit erfolgen.
Die vorliegende Erfindung wird nachfolgend unter Verweis auf die Abbildungen genauer beschrieben. Abb. 1 zeigt ein Probennahmesystem mit Belüftungsmembran nach dem Stand der Technik in geöffnetem Zustand (Abb. 1.1) und in geschlossenem Zustand (Abb. 1 .2).
Abb. 2 ist eine schematische Darstellung einer Ausführungsform der erfindungsgemäßen Vorrichtung mit einem Flüssigkeitsreservoir in einem Reagenzbehälter am Boden eines
Transportröhrchens im Ausgangszustand mit dem gefüllten Reagenzbehälter (Abb. 2.1 ) und nach der Probenahme und der Entleerung des Flüssigkeitsreservoirs in den Innenraum des
Transportröhrchens (Abb. 2.2). Abb. 3 ist eine schematische Darstellung einer Ausführungsform der erfindungsgemäßen Vorrichtung mit zwei (2) getrennten Flüssigkeitsreservoirs in einem Reagenzbehälter am Boden eines Transportröhrchens im Ausgangszustand mit den beiden gefüllten Flüssigkeitsreservoirs in einem Reagenzbehälter (Abb. 3.1) und nach der Probenahme und der Entleerung der beiden Flüssigkeitsreservoirs in den Innenraum des Transportröhrchens (Abb. 3.2).
Abb. 4 ist eine schematische Darstellung einer Ausführungsform der erfindungsgemäßen Vorrichtung mit einem Reagenzbehälter am Verschluss eines Transportröhrchens im
Ausgangszustand mit dem gefüllten Flüssigkeitsreservoir in einem Reagenzbehälter am
Verschluss (Abb. 4.1) und nach der Probenahme und der Entleerung des Flüssigkeitsreservoirs durch den Verschluss in den Innenraum des Transportröhrchens (Abb. 4.2).
Abb. 5 ist eine schematische Darstellung einer Ausführungsform der erfindungsgemäßen Vorrichtung mit zwei Flüssigkeitsreservoirs in einem Reagenzbehälter am Verschluss eines Transportröhrchens im Ausgangszustand mit den beiden gefüllten Flüssigkeitsreservoirs im Reagenzbehälter (Abb. 5.1) und nach der Probenahme und der Entleerung der beiden
Flüssigkeitsreservoirs durch den Verschluss in den Innenraum des Transportröhrchens (Abb. 5.2). Abb. 6 ist eine schematische Darstellung einer Ausführungsform der erfindungsgemäßen Vorrichtung mit einem Reagenzbehälter und einem Flüssigkeitsreservoir seitlich an einem Transportröhrchen im Ausgangszustand mit dem gefüllten Flüssigkeitsreservoir und dem durch eine Abdeckung geschützten Reagenzbehälter (Abb. 6.1) und nach der Probenahme und der Entleerung des seitlichen Flüssigkeitsreservoirs in den Innenraum des Transportröhrchens (Abb. 6.2).
Abb. 7 ist eine schematische Darstellung einer Ausführungsform der erfindungsgemäßen Vorrichtung mit zwei Reagenzbehältern und Flüssigkeitsreservoirs seitlich an einem
Transportröhrchen im Ausgangszustand mit gefüllten Flüssigkeitsreservoirs und durch eine Abdeckung geschützten Reagenzbehältern (Abb. 7.1) und nach der Probenahme und der Entleerung der seitlichen Flüssigkeitsreservoirs in den Innenraum des Transportröhrchens (Abb. 7.2). Abb. 8.1 bis 8.7 zeigen verschiedene Ausflihrungsformen von Abstrichtupfern für die erfindungsgemäße Vorrichtung.
Zum Vergleich mit der vorliegenden Erfindung zeigt Abb. 1 zunächst eine
Probennahmevorrichtung 1 nach dem Stand der Technik. Hierbei ist ein Abstrichtupfer 10, der einen Stiel 1 1 und einem Probensammelbereich 12 aufweist, fest mit einem Verschluss 14 verbunden. In unbenutztem Zustand ist der Abstrichtupfer 10 über ein Gewinde 15 fest mit dem Transportröhrchen 13 verbunden. Zur Probenahme wird der Abstrichtupfer 10 aus dem
Transportröhrchen 13 entnommen. Der Probensammelbereich 12 wird mit einem
Probensammelpuffer angefeuchtet und die biologische Spur durch Abreiben des Spurenträgers aufgenommen. Anschließend wird der Abstrichtupfer 10, der die biologische Spur enthält, in das Transportröhrchen 13 zurückgesteckt und mit Hilfe der Belüftungsmembran 16 getrocknet.
Abb. 2 zeigt beispielhaft eine erste Ausführungsform einer erfindungsgemäßen Vorrichtung 2 mit einem die Lyseflüssigkeit enthaltenden Flüssigkeitsreservoir 25 in einem Reagenzbehälter 26 am Boden des Transportröhrchens 23. Abstrichtupfer 20 und Verschluss 24 sind fest miteinander verbunden, und der Abstrichtupfer wird in Richtung A in das Transportröhrchen eingebracht.
Der Probensammelbereich 22 kann mit einer Probennahmeflüssigkeit angefeuchtet sein. Abb.
2.1 beschreibt schematisch den Ausgangszustand mit dem gefüllten Flüssigkeitsreservoir 25 im Reagenzbehälter 26. Abb. 2.2 zeigt den Abstrichtupfer nach der Probenahme und der Entleerung des Flüssigkeitsreservoirs 25 in den Innenraum des Transportröhrchens 23. Die Lyseflüssigkeit befindet sich in diesem Ausführungsbeispiel in einem eigenen Flüssigkeitsreservoir 25 in einem
Reagenzbehälter 26 am Boden des Transportröhrchens, Gemäß dieser Ausfuhrungsform ist der Reagenzbehälter 26 in Form einer Schraubkappe ausgestaltet. In diese wird das Flüssigkeitsreservoir 25 eingebracht und zum Beispiel durch einen Sicherungsring 28 gegen die unbeabsichtigte Freisetzung der Lyseflüssigkeit gesichert. Nach der Probenahme und dem Verschluss des Transportröhrchens wird der Sicherungsring 28 abgezogen und der Reagenzbehälter 26 mit dem Flüssigkeitsreservoir 25 mit Hilfe eines Gewindes in Richtung B gedreht. Der Boden des Transportröhrchens kann (in einem Stück) als
wasserdurchlässige Bodenplatte 27 ausgebildet sein, die auf der Flüssigkeitsreservoir-Seite ein oder mehrere Dornfortsätze besitzt. Durch die Drehbewegung wird das Flüssigkeitsreservoir 25 gegen die Dornfortsätze gedrückt, das Flüssigkeitsreservoir platzt auf und die eingeschlossene Lyseflüssigkcit wird durch weiteres Drehen in das Innere des Transportröhrchens gepresst (Abb. 2.2). Durch die anschließende Benetzung des Probensammelbereichs 22 am Stiel 21 des Abstrichtupfers 20 mit der Lyseflüssigkcit kommt es zum Aufschluss der biologischen Probe und zur Freisetzung der Nukleinsäuren. Gleichzeitig können diese durch die Lyseflüssigkcit stabilisiert und konserviert werden, so dass sie auch über einen längeren Zeitraum unversehrt im Transportpuffer vorliegen.
Abb. 3 zeigt beispielhaft eine weitere Ausführungsform einer erfindungsgemäßen Vorrichtung (3) ähnlich Abb. 2, aber mit zwei getrennten Flüssigkeitsreservoirs 35a und 35b in einem Reagenzbehälter 36. Zwei getrennte Flüssigkeitsreservoirs eröffnen die Möglichkeit, die biologische Probe auf dem Probensammelbereich sequenziell mit zwei verschiedenen
Reagenzien zu behandeln. So kann das erste Flüssigkeitsreservoir 35a beispielsweise eine Lyseflüssigkeit enthalten, und das zweite Flüssigkeitsreservoir 35b kann eine Stabilisierungsoder Konservierungsflüssigkeit für die freigesetzten Nukleinsäuren enthalten. Durch Drehen des Reagenzbehälters 36 in Richtung B kann die Lyseflüssigkeit aus Flüssigkeitsreservoir 35a freigesetzt und die Probe aufgeschlossen werden. Danach kann durch weiteres Drehen in Richtung C das zweite Flüssigkeitsreservoir 35b geöffnet werden und damit die Stabilisierungsoder Konservierungsflüssigkeit zugeführt werden. Alternativ kann bei dieser Ausführungsform der erfindungsgemäßen Vorrichtung mit zwei Flüssigkeitsreservoirs der Probensammelbereich 32 am Stiel 31 des Abstrichtupfers 30 in trockener Form bereitgestellt werden.
Flüssigkeitsreservoir 35a enthält dann eine Probennahmeflüssigkeit zur Befeuchtung des Probensammelbereichs 32, und Flüssigkeitsreservoir 35b enthält die Lyseflüssigkeit zum Probenaufschluss und zur Probenstabilisierung. Abb. 4 zeigt schematisch eine weitere Ausführungsform einer erfindungsgemäßen
Vorrichtung 4, wobei sich der Reagenzbehälter 46 mit einem Lyseflüssigkeit enthaltenden Flüssigkeitsreservoir 45 am Kopfende einer Probennahmevorrichtung 4 befindet. Der
Reagenzbehälter 46 ist durch ein Gewinde mit dem Verschluss 44 verbunden und mit einer Sicherungseinrichtung 48, beispielsweise einem Sicherungsring, gegen unbeabsichtigtes Verdrehen gesichert. Nach der Probenahme und dem Einführen der Probe in das
Transportröhrchen 43 durch Eindrehen des Verschlusses 44 in Richtung A wird der
Reagenzbehälter 46 entsichert, zum Beispiel durch Entfernung des Sicherungsringes 48.
Dadurch kann der Reagenzbehälter 46 in Richtung B auf den Verschluss 44 gedreht werden. Der Verschluss ist auf der Reagenzbehälterseite mit dornförmigen Fortsätzen versehen und besitzt zugleich flüssigkeitsdurchlässige Poren, Kapillaren oder Kanäle. Durch das Eindrehen des Reagenzbehälters 46 wird das Flüssigkeitsreservoir 45 auf die Dornfortsätze gedrückt, wodurch das Flüssigkeitsreservoir 45 geöffnet und die Lyseflüssigkeit freigesetzt wird. Durch weiteres Drehen wird die Lyseflüssigkeit aus dem Reagenzbehälter 46 durch die im Verschluss vorhandenen Poren, Kanäle oder Kapillaren in den Innenraum des Transportröhrchens verdrängt (Abb. 4.2). Die Zuführung der Lyseflüssigkeit in den Innenraum des Transportröhrchens 43 führt zwangsläufig zu einer Benetzung des Probensammelbereichs 42 am Ende von Stiel 41 des Abstrichtupfers 40 mit Lyseflüssigkeit, wodurch es zum Aufschluss der biologischen Probe und zur Freisetzung der zu untersuchenden Nukleinsäuren kommt. Gleichzeitig können die
Nukleinsäuren durch die Lyseflüssigkeit über einen längeren Zeitraum stabilisiert und konserviert werden.
Abb. 5 zeigt schematisch eine weitere Ausführungsform der erfindungsgemäßen Vorrichtung ähnlich Abb. 4, aber mit zwei getrennten Flüssigkeitsreservoirs 55a und 55b in einem
Reagenzbehälter 56. Der Reagenzbehälter 56 befindet sich am Kopfende der
Probennahmevorrichtung 5 und kann durch Drehen oder Schieben auf den Verschluss 54 des Transportröhrchens 53 gepresst werden. Auch bei dieser Ausführungsform eröffnen zwei getrennte Flüssigkeitsreservoirs die Möglichkeit, die biologische Probe auf dem
Probensammelbereich 52 sequenziell mit zwei verschiedenen Reagenzien zu behandeln. So kann durch Drehen des Reagenzbehälters 56 in Richtung B das Flüssigkeitsreservoir 55a freigesetzt und die Probe aufgeschlossen werden. Danach kann durch weiteres Drehen in Richtung C das Flüssigkeitsreservoir 55b geöffnet werden und damit zum Beispiel Stabilisierungs- oder
Konservierungsreagenzien für die freigesetzten Nukleinsäuren zugeführt werden. Alternativ kann auch bei dieser Ausführungsform der erfindungsgemäßen Vorrichtung mit zwei
Flüssigkeitsreservoirs der Probensammelbereich 52, der sich am unteren Ende von Stiel 51 des Abstrichtupfers 50 befindet, in trockener Form bereitgestellt werden. Flüssigkeitsreservoir 55a enthält dann eine Probennahmeflüssigkeit zur Befeuchtung des Probensammelbereichs 52, und Flüssigkeitsreservoir 55b enthält die Lyseflüssigkeit zum Probenaufschluss und zur
Probenstabilisierung.
Abb. 6 zeigt schematisch eine weitere Ausführungsform einer erfindungsgemäßen Vorrichtung 6, bei der der Reagenzbehälter 66 mit dem Flüssigkeitsreservoir 65 seitlich an der Wand des Transportröhrchens 63 angeordnet ist. Abb. 6.1 beschreibt schematisch den Ausgangszustand mit dem gefüllten Flüssigkeitsreservoir 65 und Abbildung 6.2 zeigt den Abstrichtupfer 60 nach der Probenahme und der Entleerung des Flüssigkeitsreservoirs 65 in den Innenraum des
Transportröhrchens 63. Die Platzierung des Reagenzbehälters 66 auf der Oberfläche des
Transportröhrchens 63 kann beliebig gewählt werden. Der Reagenzbehälter 66 mit dem
Flüssigkeitsreservoir 65 ist durch eine abnehmbare Abdeckung 68 gegen unbeabsichtigtes Offnen geschützt.
Bei dieser Ausführungsform befindet sich die Lyseflüssigkcit in einem eigenen
Flüssigkeitsreservoir 65 in einem Reagenzbehälter 66 an der Außenseite des Transportröhrchens 63. Für den Reagenzbehälter 66 sind verschiedene Ausführungsformen denkbar. Abbildung 6.1 zeigt die Ausgestaltung des Reagenzbehälters 66 in Form eines von außen fixierten elastischen Flüssigkeitsbeutels. Eine Fixierung des Flüssigkeitsbeutels an der Außenseite des
Transportröhrchens 63 kann zum Beispiel durch Kleben oder durch Schweißen erfolgen.
Zwischen dem Flüssigkeitsbcutcl und der Wand des Transportröhrchens sind spitze
Dornfortsätze angeordnet, die bei entsprechendem Druck die Wandung des
Flüssigkeitsreservoirs 65 auf der Seite des Transportröhrchens 63 perforieren.
Nach der Probenahme und dem Verschluss des Transportröhrchens durch Aufschrauben des Abstrichtupfers 60 in Richtung A wird die Schutzabdeckung 69 entfernt und der
Reagenzbehälter 66 in Richtung B gegen die Dornfortsätze gedrückt. Das Flüssigkeitsreservoir 65 platzt auf und der in dem Flüssigkeitsreservoir enthaltene Lysepuffer wird durch weiteres Drücken durch Öffnungen in der Wand des Transportröhrchens 63 in das Innere gepresst (Abb. 6.2). Idealerweise sind Reagenzbehälter 66 und Flüssigkeitsreservoir 65 identisch. Die Wand des Flüssigkeitsreservoirs 65 erfüllt also zugleich die Funktion des Reagenzbehälters 66. Durch die Benetzung des Probensammelbereichs 62 am unteren Ende des Stiels 61 von
Abstrichtupfer 60 mit dem Lysepuffer kommt es zum Aufschluss der biologischen Probe und zur Freisetzung der zu untersuchenden Nukleinsäuren. Gleichzeitig können die freigesetzten
Nukleinsäuren durch die Lyseflüssigkcit stabilisiert und konserviert werden, so dass sie auch über einen längeren Zeitraum unversehrt in der Lyseflüssigkeit vorliegen.
Abb. 7 zeigt schematisch eine weitere Ausführungsform einer erfindungsgemäßen Vorrichtung. Die erfindungsgemäße Vorrichtung 7 entspricht im Wesentlichen dem Ausführungsbeispiel in Abbildung 6. An Stelle von einem Reagenzbehälter mit einem Flüssigkeitsreservoir sind jedoch zwei Reagenzbehälter 76a und 76b mit jeweils einem Flüssigkeitsreservoir 75a und 75b an der Außenwand des Transportröhrchens 73 fixiert. Die exakte Positionierung der beiden
Reagenzbehälter mit den beiden Flüssigkeitsreservoirs kann beliebig gewählt werden, die beiden Reagenzbehälter können also zum Beispiel auch an gegenüberliegenden Seiten des
Transportröhrchens angeordnet sein und nicht wie in Abbildung 7.1 angedeutet übereinander an derselben Seite. Die Reagenzbehälter 76 sind wieder durch eine abnehmbare Abdeckung 78 gegen unbeabsichtigtes Öffnen geschützt.
Nach der Probenahme und dem Verschluss des Transportröhrchens 73 durch Drehen des Verschlusses 74 in Richtung A werden die beiden Flüssigkeitsbeutel gegen die Dornfortsätze gedrückt (Richtung B), die Flüssigkeitsreservoirs 75a und 75b platzen auf und die darin enthaltenen Flüssigkeiten werden durch weiteres Drücken durch Öffnungen in der Wand des Transportröhrchens 73 in das Innere gepresst (Abb. 7.2). Bei entsprechender Gestaltung können die Reagenzbehälter 76a und 76b mit den Flüssigkeitsreservoirs 75a oder 75b identisch sein.
Zwei getrennte Flüssigkeitsreservoirs eröffnen die Möglichkeit, die biologische Probe auf dem Probensammelbereich 72 am Ende von Stiel 71 des Abstrichtupfers 70 sequenziell mit zwei verschiedenen Reagenzien zu behandeln. So kann durch Auspressen des Reagenzbehälters in Richtung B das Flüssigkeitsreservoir 75a freigesetzt und die Probe aufgeschlossen werden. Danach können durch Auspressen des Flüssigkeitsreservoirs 75b weitere Reagenzien zur
Stabilisierung oder Konservierung der freigesetzten Nukleinsäuren zugeführt werden. Alternativ kann der Probensammelbereich 72 des Abstrichtupfers 70 in trockener Form bereitgestellt werden, und Flüssigkeitsreservoir 75a dient zur Befeuchtung des Probensammelbereichs 72. Der Lysepuffer in Flüssigkeitsreservoir 75b würde dann die Funktionen des Probenaufschlusses und der Probenstabilisierung übernehmen.
Abb. 8.1 bis 8.7 zeigen unterschiedliche Varianten eines Standardabstrichtupfers mit einem Probensammelbereich an einem Ende und einer Verschlusseinrichtung am anderen Ende, wie sie als Bestandteil der erfindungsgemäßen Vorrichtung in Betracht kommen.
Abb. 8.1 zeigt einen Standardabstrichtupfer mit rundem Kopf 82a, der in der überwiegenden Anzahl der Anwendungsfälle verwendet wird. Abb. 8.2 zeigt einen Abstrichtupfer mit einem spitz zulaufenden Probensammelbereich 82b, wie er für die Probengewinnung aus Spalten, Rillen oder engen Ecken eingesetzt wird.
Abb. 8.3 zeigt einen Abstrichtupfer mit einem beflockten Probensammelbereich 82c. Beflockte Abstrichtupfer zeichnen sich durch ihre gute Probenabgabe aus.
Abb. 8.4 und 8.5 zeigen Abwurfabstrichtupfer, deren Konstruktion bereits ein einfaches Abstreifen des Probensammelbereichs 82d bzw. 82e ermöglicht. Abb. 8.6 zeigt einen Abstrichtupfer, der besonders vorteilhaft für die Sammlung biologischer Proben von größeren Flächen ist. Der Stiel ist gekrümmt und am Ende verbreitert. Der
Probensammelbereich 82f selbst ist flächig ausgeführt und nur auf einer Seite des verbreiterten Stielendes angebracht. Abb. 8.7 zeigt einen Abstrichtupfer, bei dem die Verschlusseinrichtung durch ein kegelförmiges Stützelement 80 ergänzt ist, an dessen Ende sich ein verkürzter Abstrichtupfer befindet. Für das Stützelement 80 sind verschiedene Gestaltungsformen denkbar, beispielsweise ein Kegel oder ein Zylinder. Verschluss und kegelförmiges Element können entweder als ein einziges Teil hergestellt werden oder als 2 Teile produziert und hinterher zusammengefügt werden. Diese Ausführungsform eines Abstrichtupfers hat den großen Vorteil, dass eine Verbiegung des Abstrichtupferstiels weitgehend unterbunden wird und die Probenahme selbst unter deutlich höherem Anpressdruck stattfinden kann, was wiederum die Effizienz der Probenahme erhöht.
Die spezielle Konstruktion der erfindungsgemäßen Vorrichtung mit integrierten
Reagenzienreservoirs in einer einzigen, abgeschlossenen Probennahmevorrichtung weist signifikante Handhabungsvorteile gegenüber dem Stand der Technik auf, da die biologische Probe in der erfindungsgemäßen Vorrichtung nicht in trockenem, sondern in feuchtem Zustand in einer speziellen Lyseflüssigkeit gelagert und transportiert werden kann. Besteht für den Anwender die Notwendigkeit, eine biologische Probe zu sichern, so entnimmt er aus der erfindungsgemäßen Probennahmevorrichtung den Abstrichtupfer. Da dieser bereits in feuchtem Zustand vorliegen kann, ist keine weitere Manipulation des Abstrichtupfers mehr erforderlich. Die Aufnahme der biologischen Probe erfolgt durch Aufpressen des feuchten Probensammelbereicb.es auf die zu untersuchende Oberfläche und mehrmaliges Abreiben der Oberfläche. Dadurch kommt es zu einer Übertragung der biologischen Probe auf den
Probensammelbereich der erfindungsgemäßen Vorrichtung. Anschließend wird der Abstrichtupfer in das Transportröhrchen eingeführt und flüssigkeitsdicht verschraubt oder zusammengesteckt. Zur Behandlung der Probe wird, gegebenenfalls nach Entfernung des Sicherungsrings, der Reagenzbehälter auf das Transportröhrchen aufgeschraubt. Dadurch wird das Flüssigkeitsreservoir perforiert, ausgepresst und die Lyseflüssigkeit freigesetzt. Diese benetzt den Probensammelbereich des Abstrichtupfers, schließt eine dort vorliegende biologische Probe auf und stabilisiert die vorhandenen Nukleinsäuren bis zur weiteren Analyse im Labor.
Falls erforderlich können mit der erfindungsgemäßen Vorrichtung auch zwei unterschiedliche Flüssigkeiten zugeführt werden. Nach Einbringen des Abstrichtupfers in das Transportröhrchen können die beiden Flüssigkeitsreservoirs durch Entfernen eines Sicherungsringes entsichert werden. Durch Drehung des Reagenzbehälters wird zuerst die erste und anschließend die zweite Flüssigkeit freigesetzt. Dadurch kann etwa eine alkalische Lyse durchgeführt werden, die nachfolgend durch einen zweiten Puffer neutralisiert und gestoppt wird. Nach Zugabe der Lyseflüssigkeit erfolgt die Übersendung der Probennahmevorrichtung in das zuständige Labor zur weiteren Untersuchung. Dort wird der Abstrichtupfer aus dem Probennahmesystem entnommen und die entstandene Extraktionslösung, die der Lyseflüssigkeit nach
Probenaufschluss entspricht, entsprechend der etablierten Laborprozesse weiterverarbeitet.
Im Gegensatz zum Stand der Technik wird die biologische Probe in der erfindungsgemäßen Vorrichtung in einer Lyseflüssigkeit aufgeschlossen. Die Lyseflüssigkeit wird aus einem Flüssigkeitsreservoir direkt nach der Einbringung der biologischen Probe in die
Probennahmevorrichtung freigesetzt. Nach dem Aufschluss kann die freigesetzte Nukleinsäure in dieser Lyseflüssigkeit in feuchtem Zustand wenigstens so lange stabilisiert und aufbewahrt werden, dass sie den Transport in das Labor ohne Degradation der enthaltenen Nukleinsäuren übersteht. Dadurch erübrigen sich die umständliche Trocknung der Probe in einem speziellen Transportröhrchen sowie die im Labor notwendige Überführung der Probe in einen Lyse- oder Extraktionspuffer. Die Aufarbeitung der biologischen Probe startet also bei der
erfindungsgemäßen Ausführungsform bereits während der Überführungsperiode vom Probennahmeort in das Labor, und die biologische Probe kommt bereits in aufgearbeitetem Zustand im Labor an. Da mit der erfindungsgemäßen Vorrichtung ein Teil des Analyseprozesses, nämlich die Probenaufarbeitung, auf die Zeit des Probentransportes verlagert wird, ermöglicht die erfindungsgemäße integrierte Probennahmevorrichtung eine erhebliche Zeit- und
Kostenersparnis für das Labor. Durch Bereitstellung eines Transportbehälters, der einen
Abstrichtupfer mit einem vor Entnahme des Abstrichtupfers aus dem Transportbehälter angefeuchteten Probensammelbereich enthält, entfällt die umständliche und fehleranfällige Befeuchtung des Abstrichtupfers am Ort der Probenahme.
Bezugszeichenliste
I, 2,3,4, 5,6,7 Probennahmevorrichtung
10, 20,30, 40, 50, 60, 70 Abstrichtupfer
II, 21,31,41,51,61,71 Stiel des Abstrichtupfers
12, 22,32, 42, 52,62,72, 82a- Probensammelbereich
13,23,33,43,53,63,73 Transportb ehälter
14, 24, 34, 44, 54, 64, 74 Vers chlus seinri chtung
5, 35a,b, 45, 55a,b, 65, 75a,b Flüssigkeitsreservoir
6, 36, 46, 56, 66, 76 Reagenzbehälter
7, 37, 47, 57, 67, 77 Mittel zur Flüssigkeitsfreisetzung
8,38,48, 58,68, 78 Sicherungsmittel
0 Stützelement

Claims

Ansprüche
1. Probennahmevorrichtung (2, 3) zum Sammeln und zum Transport nukleinsäurehaltiger biologischer Proben, welche umfasst: einen Abstrichtupfer (20, 30) und einen Transportbehälter (23, 33) zur Aufnahme des
Abstrichtupfers, wobei der Abstrichtupfer an einem Ende einen Probensammelbereich (22, 32) aufweist und am gegenüberliegenden Ende mit einem feuchtigkeitsdichten Verschluss (24, 34) zum Verschließen des Transportbehälters verbunden ist, so dass der Abstrichtupfer nach
Verschließen des Transportbehälters in dem Transportbehälter angeordnet ist, wobei an oder in der Probennahmevorrichtung ein oder mehrere Flüssigkeitsreservoirs (25, 35a, 35b) sowie Mittel (27, 37) zum Freisetzen der in den Flüssigkeitsreservoirs enthaltenen
Flüssigkeiten in den Innenraum des Transportbehälters angeordnet sind, wobei eines der ein oder mehreren Flüssigkeitsreservoirs eine Lyseflüssigkeit zum Aufschluss der biologischen Probe am Probensammelbereich des Abstrichtupfers nach der Probenahme enthält.
2. Probennahmevorrichtung nach Anspruch 1 , wobei die Lyseflüssigkeit eine die freigesetzten Nukleinsäuren stabilisierende Lyseflüssigkeit ist.
3. Probennahmevorrichtung nach Anspruch 1 oder 2, wobei die Lyseflüssigkeit einen pH-Wert im Bereich von 2,0 bis 14,0, insbesondere von 7,5 bis 14,0, hat.
4. Probennahmevorrichtung nach Anspruch 3, wobei die Lyseflüssigkeit ein Lysepuffer auf Basis eines basischen Puffersystems ist, das insbesondere ausgewählt ist aus Tris-Puffem, Phosphatpuffern, Carbonatpuffern, Boratpuffern und/oder CHAPS-Puffern.
5. Probennahmevorrichtung nach einem der Ansprüche 1 bis 4, wobei die Lyseflüssigkeit ein oder mehrere Detergenzien und/oder chaotrope Substanzen umfasst.
6. Probennahmevorrichtung nach einem der Ansprüche 1 bis 5, wobei die Lyseflüssigkeit wenigstens ein lytisches Enzym, insbesondere eine Protease, vorzugsweise Proteinase K, enthält.
7. Probennahmevorrichtung nach einem der Ansprüche 1 bis 6, wobei die Lyseflüssigkeit wenigstens ein kationisches Tensid und/oder einen Chelator als Nukleinsäure stabilisierende Substanz enthält.
8. Probennahmevorrichtung nach einem der Ansprüche 1 bis 7, wobei der Transportbehälter (23, 33) in Form eines Proberöhrchens ausgebildet ist.
9. Probennahmevorrichtung nach einem der Ansprüche 1 bis 8, wobei der Abstrichtupfer (20, 30) in dem verschlossenen Transportbehälter (23, 33) vor Entnahme zur Probenahme einen eine Probennahmeflüssigkeit enthaltenden Prob en s am m e 1 berei ch (22, 32) aufweist.
10. Probennahmevorrichtung nach einem der Ansprüche 1 bis 9, wobei die
Probennahmevorrichtung (3) erste und zweite Flüssigkeitsreservoirs (35a, 35b) umfasst, wobei ein erstes Flüssigkeitsreservoir (35b) die Lyseflüssigkeit und ein zweites Flüssigkeitsreservoir (35a) eine Probennahmeflüssigkeit zum Anfeuchten des Probensammelbereichs (32) des Abstrichtupfers (30) vor Entnahme des Abstrichtupfers aus dem verschlossenen
Transportbehälter (33) zum Gebrauch enthält.
11. Probennahmevorrichtung nach einem der Ansprüche 1 bis 9, wobei die
Probennahmevorrichtung erste und zweite Flüssigkeitsreservoirs (35a, 35b) umfasst, wobei ein erstes Flüssigkeitsreservoir (35a) die Lyseflüssigkeit und ein zweites Flüssigkeitsreservoir (35b) eine Nukleinsäure stabilisierende Flüssigkeit enthält.
12. Probennahmevorrichtung nach einem der Ansprüche 1 bis 9, wobei am unteren Ende des Transportbehälters (23, 33) ein die Lyseflüssigkeit enthaltender, mit einer Abdichtung versehener Reagenzbehälter (26, 36) derart angeordnet ist, dass Reagenzbehälter und
Transportbehälter gegeneinander beweglich miteinander verbunden sind, und wobei in dem Transportbehälter Mittel (27, 37) angeordnet sind, durch die die in dem Flüssigkeitsreservoir (25, 35a, 35b) enthaltene Lyseflüssigkeit in den Innenraum des Transportbehälters freigesetzt wird, wenn Reagenzbehälter und Transportbehälter relativ zueinander bewegt werden.
13, Probennahmevorrichtung nach einem der Ansprüche 1 bis 9, wobei am unteren Ende des Transportbehälters (23, 33) ein Reagenzbehälter (26, 36) derart angeordnet ist, dass
Reagenzbehälter und Transportbehälter gegeneinander beweglich miteinander verbunden sind, wobei der Reagenzbehälter ein Flüssigkeitsreservoir (25, 35a, 35b) mit Lyseflüssigkeit enthält, und wobei in dem Transportbehälter Mittel (27, 37) angeordnet sind, durch die die in dem Flüssigkeitsreservoir enthaltene Lyseflüssigkeit in den Innenraum des Transportbehälters freigesetzt wird, wenn Reagenzbehälter und Transportbehälter relativ zueinander bewegt werden,
14, Probennahmevorrichtung nach Anspruch 13, wobei der Reagenzbehälter (36) erste und zweite Flüssigkeitsreservoir (35a, 35b) enthält, wobei ein erstes Flüssigkeitsreservoir (35a, 35b) die Lyseflüssigkeit enthält und ein zweites Flüssigkeitsreservoir (35a, 35b) eine
Konservierungsflüssigkeit für die freigesetzten Nukleinsäuren oder eine Prob enn ahm efl üss i gk ei t zum Anfeuchten des Probensammelbereichs (32) des Abstrichtupfers (30) enthält, und wobei in dem Transportbehälter Mittel (37) angeordnet sind, durch die die in den Flüssigkeitsreservoirs enthaltenen Flüssigkeiten nacheinander in den Innenraum des Transportbehälters freigesetzt werden, wenn Reagenzbehälter und Transportbehälter relativ zueinander bewegt werden,
15, Probennahmevorrichtung nach einem der Ansprüche 12 bis 14, wobei die Mittel (27, 37) zum Freisetzen der in den Flüssigkeitsreservoirs (25, 35a, 35b) enthaltenen Flüssigkeit
Dornfortsätze umfassen, die in einer Position zwischen dem Reagenzbehälter (26, 36) und dem Abstrichtupfer (20, 30) angeordnet sind.
16, Probennahmevorrichtung nach einem der Ansprüche 12 bis 15, wobei in der
Probennahmevorrichtung zwischen dem Reagenzbehälter (26, 36) und den Mitteln (27, 37) zum Freisetzen der in den Flüssigkeitsreservoirs (25, 35a, 35b) enthaltenen Flüssigkeit
Sicherungsmittel (28, 38) angeordnet sind, die eine unbeabsichtigte relative Bewegung zwischen Reagenzbehälter und Transportbehälter verhindern.
17. Verwendung einer Probennahmevorrichtung nach einem der Ansprüche 1 bis 16 zum Sammeln, Aufschließen und Transportieren von nukleinsäurehaltigen biologischen Proben in der Forensik, Medizin, Mikrobiologie und Hygiene.
PCT/EP2015/070957 2014-10-02 2015-09-14 Probennahmevorrichtung mit probenaufarbeitungsfunktion WO2016050494A1 (de)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE102014220090.3 2014-10-02
DE102014220090.3A DE102014220090B3 (de) 2014-10-02 2014-10-02 Probennahmevorrichtung mit Probenaufarbeitungsfunktion

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2016050494A1 true WO2016050494A1 (de) 2016-04-07

Family

ID=54145763

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/EP2015/070957 WO2016050494A1 (de) 2014-10-02 2015-09-14 Probennahmevorrichtung mit probenaufarbeitungsfunktion

Country Status (2)

Country Link
DE (1) DE102014220090B3 (de)
WO (1) WO2016050494A1 (de)

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112577809A (zh) * 2020-12-29 2021-03-30 南京启迪环保新能源有限公司 一种沉积物的消解方法
CN114164084A (zh) * 2021-12-15 2022-03-11 中国医科大学附属盛京医院 一种采样检测一体化检测管结构
CN115886884A (zh) * 2022-11-30 2023-04-04 江西业力医疗器械有限公司 一种样本采集、保存处理一体装置及其处理方法
CN117165422A (zh) * 2023-11-03 2023-12-05 哈尔滨师范大学 一种微生物样品采集装置

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3205722B1 (de) 2016-02-11 2018-08-01 Sarstedt AG & Co. KG Vorrichtung und verfahren zur isolierung von nukleinsäuren aus vollblut
EP3980349A4 (de) * 2019-06-05 2023-07-12 Viome Life Sciences, Inc. Verfahren und vorrichtungen zum sammeln von proben

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1024354A1 (de) * 1997-10-13 2000-08-02 Kikkoman Corporation Probensammelbehälter und wischispektionsvorrichtung
US6159703A (en) * 1995-09-14 2000-12-12 Unipath Limited Assays
US20100285572A1 (en) * 2006-05-09 2010-11-11 Salter Robert S Inhibition Assay Method and Device for Detection of Antibiotics
US20120082977A1 (en) * 2009-05-06 2012-04-05 Raj Rajagopal Articles with matrix comprising a cell extractant and biodetection methods thereof
DE102012024354A1 (de) * 2012-12-13 2014-06-18 Testo Ag Probenbehandlungsvorrichtung
DE102012024355A1 (de) * 2012-12-13 2014-06-18 Testo Ag Probenbehandlungsvorrichtung und Verfahren zur Probenbehandlung

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE69230853T2 (de) * 1991-12-19 2000-08-17 Frederic Nason Probenuntersuchungseinheit
GB9405590D0 (en) * 1994-03-22 1994-05-11 Celsis Ltd Assay device

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6159703A (en) * 1995-09-14 2000-12-12 Unipath Limited Assays
EP1024354A1 (de) * 1997-10-13 2000-08-02 Kikkoman Corporation Probensammelbehälter und wischispektionsvorrichtung
US20100285572A1 (en) * 2006-05-09 2010-11-11 Salter Robert S Inhibition Assay Method and Device for Detection of Antibiotics
US20120082977A1 (en) * 2009-05-06 2012-04-05 Raj Rajagopal Articles with matrix comprising a cell extractant and biodetection methods thereof
DE102012024354A1 (de) * 2012-12-13 2014-06-18 Testo Ag Probenbehandlungsvorrichtung
DE102012024355A1 (de) * 2012-12-13 2014-06-18 Testo Ag Probenbehandlungsvorrichtung und Verfahren zur Probenbehandlung

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112577809A (zh) * 2020-12-29 2021-03-30 南京启迪环保新能源有限公司 一种沉积物的消解方法
CN114164084A (zh) * 2021-12-15 2022-03-11 中国医科大学附属盛京医院 一种采样检测一体化检测管结构
CN115886884A (zh) * 2022-11-30 2023-04-04 江西业力医疗器械有限公司 一种样本采集、保存处理一体装置及其处理方法
CN117165422A (zh) * 2023-11-03 2023-12-05 哈尔滨师范大学 一种微生物样品采集装置
CN117165422B (zh) * 2023-11-03 2024-01-26 哈尔滨师范大学 一种微生物样品采集装置

Also Published As

Publication number Publication date
DE102014220090B3 (de) 2015-10-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
DE102014220090B3 (de) Probennahmevorrichtung mit Probenaufarbeitungsfunktion
EP1421361B1 (de) Verfahren und vorrichtung zur vorbereitung einer biologischen urprobe für die bestimmung zumindest einer darin enthaltenen komponente
DE69633932T2 (de) Gefäss zur Trocknung von biologischen Proben, Verfahren zur Herstellung desselben und Verfahren zu seinem Gebrauch
EP2030684B1 (de) Vorrichtung zur Bereitstellung von pipettierbaren Substanzen
EP3663387B1 (de) Vorrichtung und verfahren zum aufbereiten von flüssigkeiten, insbesondere körperflüssigkeiten
EP0734749B1 (de) Verfahren zur Isolierung eines biologischen Materials
DE19519886A1 (de) Blutsammelvorrichtung mit Additivausgabeeinrichtung sowie Verfahren zur Probenentnahme unter Verwendung derselben
DE102008007352B4 (de) Vorrichtung zur Gewinnung, Konservierung und Lagerung von Probenmaterial mit einem Probenbehälter
EP0734768B1 (de) Verfahren zur Bindung eines biologischen Materials
EP0734767A2 (de) Gefäss zur kontaminationsreduzierten Behandlung von Flüssigkeiten
EP1234165B1 (de) Probenbehälter zur konservierung und trockenlagerung von dna-/rna-haltigem material
DE1498679B2 (de) Verfahren zum herstellen von zur mikroskopischen untersuchung bestimmter praeparate aus insbesondere krebsverdaechtigen zellenmaterialproben und geraet zum durchfuehren des verfahrens
DE102005034217A1 (de) System mit einem Abstrichinstrument für die Entnahme von Zellen oder das Auftragen von Präparaten sowie Aufnahmevorrichtung hierzu
US20160116379A1 (en) Apparatuses for sterilely delivering fluid
DE102020212266B4 (de) Mit vliesstoff verschlossener behälter
EP2889047B1 (de) Steriles Blutbeutelsystem für die medizinische Entnahme und Kryokonservierung von Nabelschnurblut
US20240041439A1 (en) Systems and methods for preservation of a cervicovaginal fluid sample
DE102009015724B4 (de) Behälter zur Sicherung, Aufbewahrung und zum Transport von biologischen Proben
EP2662028B1 (de) Tupfer und Behälter zur Erfassung und sterilen Aufbewahrung von biologischen Proben
WO2021008814A1 (de) Multi-connector-port
DE19956983C1 (de) Container zum Transport von vitalen Gewebe-, Flüssigkeits- und Zellmaterialien
DE102017127015A1 (de) Vorrichtung zur Entnahme einer Probe aus einem Behälter
WO2012019720A1 (de) Verschluss für ein zentrifugengefäss mit halterung für ein abstrichgerät
EP3310483A1 (de) Verfahren und vorrichtung zum bereitstellen von eine getrocknete flüssigkeitsmenge, insbesondere blut, aufweisenden, saugfähigen probenträgern
DE10016163A1 (de) Verfahren und Container zur Aufbewahrung oder zum Transport von vitalen Gewebe-, Flüssigkeits- und Zellmaterialien

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 15763898

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

122 Ep: pct application non-entry in european phase

Ref document number: 15763898

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1