WO2016002753A1 - カチオン性脂質 - Google Patents

カチオン性脂質 Download PDF

Info

Publication number
WO2016002753A1
WO2016002753A1 PCT/JP2015/068778 JP2015068778W WO2016002753A1 WO 2016002753 A1 WO2016002753 A1 WO 2016002753A1 JP 2015068778 W JP2015068778 W JP 2015068778W WO 2016002753 A1 WO2016002753 A1 WO 2016002753A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
alkyl
octadeca
cationic lipid
enyl
compound
Prior art date
Application number
PCT/JP2015/068778
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
慎太郎 細江
智幸 直井
Original Assignee
協和発酵キリン株式会社
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 協和発酵キリン株式会社 filed Critical 協和発酵キリン株式会社
Priority to EP15814545.8A priority Critical patent/EP3162794B1/en
Priority to CA2959358A priority patent/CA2959358C/en
Priority to AU2015285279A priority patent/AU2015285279A1/en
Priority to JP2016531381A priority patent/JP6641272B2/ja
Priority to KR1020167035857A priority patent/KR20170023004A/ko
Priority to US15/322,271 priority patent/US10500158B2/en
Priority to CN201580031885.4A priority patent/CN106458884A/zh
Publication of WO2016002753A1 publication Critical patent/WO2016002753A1/ja

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D205/00—Heterocyclic compounds containing four-membered rings with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D205/02—Heterocyclic compounds containing four-membered rings with one nitrogen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings
    • C07D205/04—Heterocyclic compounds containing four-membered rings with one nitrogen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127—Liposomes
    • A61K9/1271—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes, liposomes coated with polymers
    • A61K9/1272—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes, liposomes coated with polymers with substantial amounts of non-phosphatidyl, i.e. non-acylglycerophosphate, surfactants as bilayer-forming substances, e.g. cationic lipids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A61K31/7105—Natural ribonucleic acids, i.e. containing only riboses attached to adenine, guanine, cytosine or uracil and having 3'-5' phosphodiester links
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A61K31/713—Double-stranded nucleic acids or oligonucleotides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/22—Heterocyclic compounds, e.g. ascorbic acid, tocopherol or pyrrolidones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/541—Organic ions forming an ion pair complex with the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/545—Heterocyclic compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127—Liposomes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D207/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D207/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D207/04—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D207/06—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with radicals, containing only hydrogen and carbon atoms, attached to ring carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C12N2310/14—Type of nucleic acid interfering N.A.
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/31—Chemical structure of the backbone
    • C12N2310/315—Phosphorothioates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/34—Spatial arrangement of the modifications
    • C12N2310/344—Position-specific modifications, e.g. on every purine, at the 3'-end
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2320/00—Applications; Uses
    • C12N2320/30—Special therapeutic applications
    • C12N2320/32—Special delivery means, e.g. tissue-specific

Definitions

  • the present invention relates to a cationic lipid that facilitates introduction of a nucleic acid into a cell, for example, a composition containing the cationic lipid, and the like.
  • Cationic lipids are amphiphilic molecules having a lipophilic region containing one or more hydrocarbon groups and a hydrophilic region containing at least one positively charged polar head group.
  • Cationic lipids and macromolecules such as nucleic acids form a positively charged complex that makes it easy for macromolecules such as nucleic acids to pass through the plasma membrane of the cell and enter the cytoplasm.
  • Lipids are useful. This process, which can be performed in vitro and in vivo, is known as transfection.
  • Patent Documents 1-4 describe cationic lipids useful for delivering nucleic acids into cells in vivo and for use in nucleic acid-lipid particle compositions suitable for disease treatment and lipids containing the lipids Disclosed are particles.
  • Patent Document 1 for example,
  • An object of the present invention is to provide, for example, a cationic lipid that facilitates introduction of a nucleic acid into a cell, a composition containing the cationic lipid, and the like.
  • the present invention relates to the following (1) to (35).
  • (1) Formula (I) [Wherein, R 1 and R 2 are the same or different and each represents a linear or branched alkyl, alkenyl or alkynyl having 8 to 24 carbon atoms, or C7-C20 alkyloxy C1-C3 alkyl or C7-C20 Alkynyloxy C1-C3 alkyl, R 3 is a hydrogen atom, alkyl having 1 to 3 carbon atoms, formula (A) (Wherein R 4 and R 5 are the same or different and are a hydrogen atom or alkyl having 1 to 3 carbon atoms, or together with the nitrogen atom to which R 4 and R 5 are bonded, 2 to 6 may form a nitrogen-containing heterocyclic ring, and n 3 is an integer of 2 to 6), or formula (B) (Wherein R 6 and R 7 are the same or different and are a hydrogen atom or alkyl having 1 to 3 carbon atoms, or together with the nitrogen
  • R 1 and R 2 are the same or different, tetradecyl, hexadecyl, (Z) -tetradec-9-enyl, (Z) -hexadeca-9-enyl, (Z) -octadeca-6-enyl, ( Z) -octadeca-9-enyl, (E) -octadeca-9-enyl, (Z) -octadeca-11-enyl, (9Z, 12Z) -octadeca-9,12-dienyl, (9Z, 12Z, 15Z) Selected from the group consisting of -octadeca-9,12,15-trienyl, (Z) -icosa-11-enyl, (11Z, 14Z) -icosa-11,14-
  • R 1 and R 2 are the same or different, and (Z) -hexadec-9-enyl, (Z) -octadeca-9-enyl, (9Z, 12Z) -octadeca-9,12-dienyl and ( The cationic lipid according to (1) above, which is selected from the group consisting of 11Z, 14Z) -icosa-11,14-dienyl.
  • R 3 is alkyl having 1 to 3 carbon atoms or formula (A).
  • R 1 and R 2 are the same.
  • n 1 is 1 and n 2 is an integer of 1 to 3.
  • n 1 and n 2 are 1.
  • R 1 ′ and R 2 ′ are the same or different and each represents a linear or branched alkyl, alkenyl or alkynyl having 8 to 24 carbon atoms, or a C7-C20 alkyloxy C1-C3 alkyl, C7 -C20 alkenyloxy C1-C3 alkyl or C7-C20 alkynyloxy C1-C3 alkyl, R 3 is a hydrogen atom, alkyl having 1 to 3 carbon atoms, formula (A) (Wherein R 4 and R 5 are the same or different and are a hydrogen atom or alkyl having 1 to 3 carbon atoms, or together with the nitrogen atom to which R 4 and R 5 are bonded, 2 to 6 may form a nitrogen-containing heterocyclic ring, and n 3 is an integer of 2 to 6), or formula (B) (Wherein R 6 and R 7 are the same or different and are a hydrogen atom or alkyl having 1 to
  • R 1 ′ and R 2 ′ are the same or different and are tetradecyl, hexadecyl, (Z) -tetradec-9-enyl, (Z) -hexadeca-9-enyl, (Z) -octadeca-6-enyl , (Z) -octadeca-9-enyl, (E) -octadeca-9-enyl, (Z) -octadeca-11-enyl, (9Z, 12Z) -octadeca-9,12-dienyl, (9Z, 12Z, From the group consisting of (15Z) -octadeca-9,12,15-trienyl, (Z) -icosa-11-enyl, (11Z, 14Z) -icos
  • R 1 ′ and R 2 ′ are the same or different and are (Z) -hexadec-9-enyl, (Z) -octadec-9-enyl, (9Z, 12Z) -octadec-9,12-dienyl
  • the cationic lipid according to (8) which is selected from the group consisting of: (11Z, 14Z) -icosa-11,14-dienyl.
  • (11) The cationic lipid according to any one of (8) to (10), wherein R 3 is alkyl having 1 to 3 carbon atoms or formula (A).
  • (12) The cationic lipid according to any one of (8) to (11), wherein R 1 ′ and R 2 ′ are the same.
  • R 1 ′ and R 2 ′ are the same or different and each represents a linear or branched alkyl, alkenyl or alkynyl having 8 to 24 carbon atoms, or a C7-C20 alkyloxy C1-C3 alkyl, C7 -C20 alkenyloxy C1-C3 alkyl or C7-C20 alkynyloxy C1-C3 alkyl, R 3 ′ is a hydrogen atom, alkyl having 1 to 3 carbon atoms, hydroxy C2-C4 alkyl, C1-C3 dialkylamino C2-C4 alkyl, formula (A) (Wherein R 4 and R 5 are the same or different and are a hydrogen atom or alkyl having 1 to 3 carbon atoms, or together with the nitrogen atom to which R 4 and R 5 are bonded, 2 to 6 may form a nitrogen-containing heterocyclic ring, and n 3 is an integer of 2 to 6), or
  • n 1 is an integer from 0 to 4
  • n 2 is an integer from 1 to 4 (except when n 1 is 0 and n 2 is 1)
  • Z 1 is each independently a hydrogen atom or alkyl having 1 to 3 carbon atoms for each carbon to be bonded
  • Z 2 is independently a hydrogen atom or alkyl having 1 to 3 carbon atoms for each carbon to be bonded.
  • R 1 ′ and R 2 ′ are the same or different and are tetradecyl, hexadecyl, (Z) -tetradec-9-enyl, (Z) -hexadeca-9-enyl, (Z) -octadeca-6-enyl , (Z) -octadeca-9-enyl, (E) -octadeca-9-enyl, (Z) -octadeca-11-enyl, (9Z, 12Z) -octadeca-9,12-die
  • R 1 ′ and R 2 ′ are the same or different and are (Z) -hexadec-9-enyl, (Z) -octadec-9-enyl, (9Z, 12Z) -octadec-9,12-dienyl And the cationic lipid according to (15), which is selected from the group consisting of: (11Z, 14Z) -icosa-11,14-dienyl. (18) The cationic lipid according to any one of (15) to (17), wherein R 3 ′ is alkyl having 1 to 3 carbon atoms or formula (A). (19) The cationic lipid according to any one of (15) to (18), wherein R 1 ′ and R 2 ′ are the same.
  • a composition comprising the cationic lipid according to any one of (1) to (21) and a nucleic acid.
  • the cationic lipid and the nucleic acid form a complex, or a combination of the cationic lipid with a neutral lipid and / or polymer and the nucleic acid form a complex
  • the cationic lipid and the nucleic acid form a complex, or a combination of the cationic lipid with a neutral lipid and / or polymer and the nucleic acid form a complex.
  • the composition according to (22) above comprising a lipid membrane encapsulating the complex.
  • the nucleic acid is a nucleic acid having an action of suppressing the expression of a target gene using RNA interference (RNAi).
  • RNAi RNA interference
  • the composition according to (25) above, wherein the target gene is a gene expressed in liver, lung, kidney or spleen.
  • the method according to (27) above, wherein the cell is a cell in the liver, lung, kidney or spleen of a mammal.
  • the method according to the above (27) or (28), wherein the method of introducing into a cell is a method of introducing into the cell by intravenous administration of the composition.
  • the method according to (30) above, wherein the method of administration is intravenous administration.
  • a medicament for use in the treatment of a disease comprising the composition according to (25).
  • a therapeutic agent for a disease associated with liver, lung, kidney or spleen comprising the composition according to (26).
  • the nucleic acid can be easily introduced into a cell, for example.
  • the vertical axis shows the relative value of the Factor VII protein concentration in plasma when the physiological saline administration group is 100.
  • the horizontal axis indicates the compound number.
  • the concentration of Factor VII protein in plasma is shown 48 hours after administration of the preparation obtained in Example 22 (preparation using each of compounds 2 and 4) to each mouse in an amount equivalent to 0.3 mg / kg siRNA.
  • the vertical axis shows the relative value of the Factor VII protein concentration in plasma when the physiological saline administration group is 100.
  • the horizontal axis indicates the compound number.
  • Example 23 The preparation obtained in Example 23 (preparation using Compound 1) and the preparation obtained in Comparative Example 1 (preparation using Compound A) were siRNA ⁇ ⁇ ⁇ 0.3 mg / kg and 0.03 mg / kg equivalent to mice, respectively.
  • the concentration of Factor VII protein in plasma 48 hours after administration is shown.
  • the vertical axis shows the relative value of the Factor VII protein concentration in plasma when the physiological saline administration group is 100.
  • the horizontal axis indicates the compound number.
  • the cationic lipid of the present invention is Formula (I)
  • R 1 and R 2 are the same or different and are linear or branched alkyl, alkenyl or alkynyl having 8 to 24 carbon atoms, or C7-C20 alkyloxy C1-C3 alkyl or C7-C20) Alkynyloxy C1-C3 alkyl, R 3 is a hydrogen atom, alkyl having 1 to 3 carbon atoms, formula (A) (Wherein R 4 and R 5 are the same or different and contain a hydrogen atom, an alkyl having 1 to 3 carbon atoms, or a nitrogen atom to which R 4 and R 5 are bonded together to contain 2 to 6 carbon atoms.
  • a nitrogen heterocycle may be formed, and n 3 is an integer of 2 to 6), or formula (B) (In the formula, R 6 and R 7 are the same or different and contain a hydrogen atom, an alkyl having 1 to 3 carbon atoms, or a nitrogen atom to which R 6 and R 7 are bonded, A nitrogen heterocycle may be formed, and n 4 is an integer of 1 to 6), n 1 is an integer of 0 to 4, and n 2 is an integer of 1 to 4 (except that n 1 is 0 and n 2 is 1).
  • n 1 is an integer of 0 to 4
  • n 2 is an integer of 1 to 4 (except when n 1 is 0 and n 2 is 1)].
  • Is or formula (I '') [Wherein R 1 ′ and R 2 ′ are the same or different and each represents a linear or branched alkyl, alkenyl or alkynyl having 8 to 24 carbon atoms, or a C7-C20 alkyloxy C1-C3 alkyl, C7 -C20 alkenyloxy C1-C3 alkyl or C7-C20 alkynyloxy C1-C3 alkyl, R 3 ′ is a hydrogen atom, alkyl having 1 to 3 carbon atoms, hydroxy C2-C4 alkyl, C1-C3 dialkylamino C2-C4 alkyl, formula (A) (Wherein R 4 and R 5 are the same or different and are a hydrogen atom or alkyl having 1 to 3 carbon atoms, or together with the
  • n 1 is an integer from 0 to 4
  • n 2 is an integer from 1 to 4 (except when n 1 is 0 and n 2 is 1)
  • Z 1 is each independently a hydrogen atom or alkyl having 1 to 3 carbon atoms for each carbon to be bonded
  • Z 2 is a cationic lipid represented by a hydrogen atom or an alkyl having 1 to 3 carbon atoms independently for each carbon to be bonded.
  • the compound represented by the formula (I) is the compound (I)
  • the compound represented by the formula (I ′) is the compound (I ′)
  • the compound represented by the formula (I ′′) is the compound (I ′′).
  • Sometimes applies to the compounds of other formula numbers.
  • linear or branched alkyl having 8 to 24 carbon atoms examples include octyl, decyl, dodecyl, tridecyl, tetradecyl, 2,6,10-trimethylundecyl, pentadecyl, 3,7,11-trimethyldodecyl, Hexadecyl, heptadecyl, octadecyl, 6,10,14-trimethylpentadecan-2-yl, nonadecyl, 2,6,10,14-tetramethylpentadecyl, icosyl, 3,7,11,15-tetramethylhexadecyl, henicosyl , Docosyl, tricosyl, tetracosyl, etc., preferably decyl, dodecyl, tetradecyl, hexadecyl, octadecyl, icosyl, etc., more preferably
  • the straight-chain or branched alkenyl having 8 to 24 carbon atoms may be any straight-chain or branched alkenyl having 8 to 24 carbon atoms containing one or more double bonds.
  • the linear or branched alkynyl having 8 to 24 carbon atoms may be any linear or branched alkynyl having 8 to 24 carbon atoms containing one or more triple bonds.
  • C7-C20 alkyl moiety in C7-C20 alkyloxy C1-C3 alkyl examples include heptyl, octyl, decyl, dodecyl, tridecyl, tetradecyl, 2,6,10-trimethylundecyl, pentadecyl, 3,7,11-trimethyl.
  • C1-C3 alkyl moiety examples include alkylene corresponding to methyl, ethyl, propyl and the like.
  • Examples of the C7-C20 alkenyl moiety in C7-C20 alkenyloxy C1-C3 alkyl include (Z) -tetradec-9-enyl, (Z) -hexadeca-9-enyl, (Z) -octadeca-6-enyl, ( Z) -octadeca-9-enyl, (E) -octadeca-9-enyl, (Z) -octadeca-11-enyl, (9Z, 12Z) -octadeca-9,12-dienyl, (9Z, 12Z, 15Z) -Octadeca-9,12,15-trienyl, (Z) -icosa-11-enyl, (11Z, 14Z) -icosa-11,14-dienyl, 3,7,11-trimethyldodeca-2,6,10- Trienyl, 3,7,11,15-tetramethylhexa
  • Examples of the C7-C20 alkynyl moiety in C7-C20 alkynyloxy C1-C3 alkyl include dodeca-11-ynyl, tetradec-6-ynyl, hexadec-7-ynyl, hexadec-5,7-diynyl, and octadec-9-ynyl.
  • Examples of the C1-C3 alkyl moiety include methyl, ethyl, propyl and the like.
  • a group having a cyclopropane ring in which a methylene biradical is added to a straight or branched alkenyl double bond having 8 to 24 carbon atoms is also a straight chain having 8 to 24 carbon atoms. Included in chain or branched alkenyl. The same applies to the C7-C20 alkenyl moiety in the C7-C20 alkenyloxy C1-C3 alkyl.
  • alkyl having 1 to 3 carbon atoms examples include methyl, ethyl, propyl, isopropyl, cyclopropyl and the like.
  • Examples of the C2-C4 alkyl moiety in hydroxy C2-C4 alkyl include alkylene corresponding to ethyl, propyl, butyl and the like.
  • Examples of the C1-C3 alkyl moiety in C1-C3 dialkylamino C2-C4 alkyl include methyl, ethyl, propyl and the like, which may be the same or different.
  • Examples of the C2-C4 alkyl moiety in C1-C3 dialkylamino C2-C4 alkyl include alkylene corresponding to ethyl, propyl, butyl and the like.
  • Examples of the nitrogen-containing heterocycle having 2 to 6 carbon atoms include an aziridine ring, an azetidine ring, a pyrrolidine ring, a piperidine ring, a piperazine ring, and an azepane ring.
  • R 1 and R 2 are preferably the same or different and are linear or branched alkyl or alkenyl having 8 to 24 carbon atoms, or C7-20 alkyloxy C1-C3 alkyl, and are the same or It is more preferably a linear alkenyl having 8 to 24 carbon atoms.
  • R 1 and R 2 are more preferably the same, and in that case, they are more preferably straight-chain or branched alkyl, alkenyl or alkynyl having 12 to 24 carbon atoms, More preferably, it is 12 to 24 linear alkenyl.
  • R 1 ′ and R 2 ′ are the same or different and are linear or branched alkyl or alkenyl having 8 to 24 carbon atoms, or C7-20 alkyloxy C1-C3 alkyl or C7-C20 alkenyloxy C1- More preferably, it is C3 alkyl, and even more preferably the same or different linear alkenyl having 8 to 24 carbon atoms.
  • R 1 ′ and R 2 ′ are more preferably the same, and in that case, they are more preferably linear or branched alkyl, alkenyl or alkynyl having 12 to 24 carbon atoms, More preferably, it is a straight chain alkenyl having 12 to 24 carbon atoms.
  • R 1 and R 2 and R 1 ′ and R 2 ′ are different, R 1 and R 1 ′ are straight-chain or branched alkyl, alkenyl or alkynyl having 16 to 24 carbon atoms; It is also one of the preferred embodiments of the present invention that 2 and R 2 ′ are linear or branched alkyl, alkenyl or alkynyl having 8 to 12 carbon atoms.
  • R 1 and R 1 ′ are linear alkenyl having 16 to 24 carbon atoms
  • R 2 and R 2 ′ are linear alkyl having 8 to 12 carbon atoms
  • 1 and R 1 ′ are (Z) -octadec-9-enyl or (9Z, 12Z) -octadeca-9,12-dienyl and R 2 and R 2 ′ are octyl, decyl or dodecyl. .
  • R 1 and R 2 and R 1 ′ and R 2 ′ are the same or different and are linear or branched alkyl or alkenyl having 8 to 24 carbon atoms, the same or different decyl, dodecyl, Tetradecyl, hexadecyl, octadecyl, icosyl, (Z) -tetradec-9-enyl, (Z) -hexadeca-9-enyl, (Z) -octadec-6-enyl, (Z) -octadeca-9-enyl, (E ) -Octadeca-9-enyl, (Z) -octadeca-11-enyl, (9Z, 12Z) -octadeca-9,12-dienyl, (9Z, 12Z, 15Z) -octadeca-9,12,15-trienyl, (Z) -icosa-11-enyl,
  • R 3 and R 3 ′ are preferably alkyl having 1 to 3 carbon atoms or the above formula (A), more preferably methyl, ethyl, propyl or cyclopropyl, and preferably methyl or ethyl. More preferred is methyl.
  • R 3 is the formula (A)
  • R 4 and R 5 are the same or different and are preferably a hydrogen atom or alkyl having 1 to 3 carbon atoms
  • R 3 is the formula (B)
  • R 6 and R 7 are the same or different and are preferably a hydrogen atom or alkyl having 1 to 3 carbon atoms.
  • Preferred examples of the nitrogen-containing heterocycle having 2 to 6 carbon atoms formed together with the nitrogen atom to which R 4 and R 5 are bonded include azetidine ring, pyrrolidine ring, piperidine ring and azepan ring.
  • R 5 is preferably methyl or ethyl, more preferably methyl, Most preferably, 4 and R 5 are each methyl.
  • R 4 together with R 5 forms a nitrogen-containing heterocyclic ring having 2 to 6 carbon atoms, it is preferable to form a pyrrolidine ring or a piperidine ring.
  • n 3 is preferably an integer of 2 to 4, and more preferably 3.
  • R 6 in the formula (B) does not form a nitrogen-containing heterocyclic ring having 2 to 6 carbon atoms together with R 7 is preferably R 7 is methyl or ethyl, a methyl Are more preferred, and most preferably R 6 and R 7 are each methyl.
  • R 6 and R 7 together with a nitrogen-containing heterocyclic ring having 2 to 6 carbon atoms form a pyrrolidine ring or piperidine ring, it is preferable.
  • n 4 is preferably an integer of 2 to 4, and more preferably 3.
  • n 1 is preferably 1.
  • n 2 is preferably an integer of 1 to 3, and more preferably 1.
  • Z 1 is preferably each independently a hydrogen atom or alkyl having 1 to 3 carbon atoms, more preferably a hydrogen atom or methyl, and even more preferably a hydrogen atom for each carbon to be bonded.
  • the term “independently for each carbon to be bonded” means that in the case where two or more Z 1 exist in the formula (I ′′), each Z atom to which Z 1 is bonded is each Z It means that 1 is the same or different and a hydrogen atom or alkyl having 1 to 3 carbon atoms can be selected.
  • each Z 1 selects the same substituent, but one Z 1 is a hydrogen atom, It is meant to include the case where the other Z 1 is alkyl having 1 to 3 carbon atoms.
  • Z 2 is preferably each independently a hydrogen atom or alkyl having 1 to 3 carbon atoms, more preferably a hydrogen atom or methyl, and even more preferably a hydrogen atom for each carbon to be bonded.
  • the term “independently for each carbon to be bonded” means that in the case where two or more Z 2 are present in the formula (I ′′), each Z 2 is bonded to each Z atom to which Z 2 is bonded. It means that 2 are the same or different and a hydrogen atom or alkyl having 1 to 3 carbon atoms can be selected.
  • each Z 2 selects the same substituent, but one Z 2 is a hydrogen atom, It is meant to include the case where the other Z 2 is alkyl having 1 to 3 carbon atoms.
  • Z 1 and Z 2 are preferably the same or different and each is preferably a hydrogen atom or methyl, Z 1 is a hydrogen atom or methyl, and Z 2 is a hydrogen atom. More preferably, Z 1 and Z 2 are the same hydrogen atom.
  • compound (Ia) in which n 1 and n 2 are both 1 and R 3 is a hydrogen atom or alkyl having 1 to 3 carbon atoms can be produced by the following method.
  • compounds (I ′) a compound in which n 1 and n 2 are both 1 and R 3 is a hydrogen atom or an alkyl having 1 to 3 carbon atoms can be similarly produced by the following method.
  • n 1 and n 2 are both 1, Z 1 and Z 2 are both hydrogen atoms, R 3 ′ is a hydrogen atom, alkyl having 1 to 3 carbon atoms, hydroxy
  • a compound that is C2-C4 alkyl or C1-C3 dialkylamino C2-C4 alkyl can be similarly prepared by the following method.
  • R 3a is a hydrogen atom or alkyl having 1 to 3 carbon atoms as defined above when R 3 is alkyl having 1 to 3 carbon atoms
  • X 1 , X 2 and X 3 are the same or different and represent a leaving group such as chlorine atom, bromine atom, iodine atom, trifluoromethanesulfonyloxy, methanesulfonyloxy, benzenesulfonyloxy, p-toluenesulfonyloxy, etc.
  • Step 1 and 2 Compound (IIa) is obtained by reacting dimethyl malonate with compound (IIIa) in the absence of solvent or in the presence of 1 to 10 equivalents of base at a temperature between room temperature and 200 ° C. for 5 minutes to 100 hours. Can be manufactured. Further, compound (IIb) is obtained by reacting compound (IIa) and compound (IIIb) without solvent or in the presence of 1 to 10 equivalents of base at a temperature between room temperature and 200 ° C. for 5 minutes to 100 It can manufacture by making it react for time.
  • solvent examples include methanol, ethanol, dichloromethane, chloroform, 1,2-dichloroethane, toluene, ethyl acetate, acetonitrile, diethyl ether, tetrahydrofuran, 1,2-dimethoxyethane, dioxane, N, N-dimethylformamide, N, N -Dimethylacetamide, N-methylpyrrolidone, pyridine and the like can be mentioned, and these can be used alone or in combination.
  • Examples of the base include potassium carbonate, cesium carbonate, potassium hydroxide, sodium hydroxide, sodium methoxide, potassium tert-butoxide, sodium hydride, triethylamine, diisopropylethylamine, N-methylmorpholine, pyridine, 1,8-diazabicyclo [ 5.4.0] -7-Undecene (DBU).
  • Compound (IIIa) and Compound (IIIb) are commercially available products or known methods (for example, “5th edition, Experimental Chemistry Course 13, Synthesis of Organic Compounds I”, 5th edition, p.374, Maruzen (2005)). Or it can also obtain by the method according to it, or the below-mentioned manufacturing method.
  • Dimethyl malonate can be obtained as a commercial product.
  • Compound (IIc) is compound (IIb) in the presence of 4 equivalents to a large excess of a hydride reducing agent and optionally a catalytic amount to 10 equivalents of an additive between -20 ° C and 150 ° C in a solvent. It can be produced by reacting at a temperature for 5 minutes to 72 hours.
  • the catalyst amount means 0.01 equivalent to 0.5 equivalent.
  • Examples of the hydride reducing agent include lithium aluminum hydride, lithium borohydride, lithium triethylborohydride, diisobutylaluminum hydride, sodium bis (2-methoxyethoxy) aluminum hydride, and the like.
  • Examples of the solvent include toluene, dichloromethane, diethyl ether, tetrahydrofuran, 1,2-dimethoxyethane, 1,4-dioxane and the like, and these can be used alone or in combination.
  • aluminum chloride, cerium chloride, titanium tetrachloride, titanium tetraisopropoxide, or the like can be used as the additive.
  • Compound (IId) is compound (IIc) with 2 or more equivalents of a halogenating reagent or pseudohalogenating reagent, without solvent or in a solvent, preferably 1 to 10 equivalents of a base, and preferably 1 to 10 equivalents if necessary. In the presence of the above additives at a temperature between ⁇ 20 ° C. and 150 ° C. for 5 minutes to 100 hours.
  • halogenating reagent or pseudo-halogenating reagent examples include thionyl chloride, sulfuryl chloride, phosphorus trichloride, phosphorus pentachloride, phosphorus oxychloride, phosphorus tribromide, hydrogen bromide, hydrogen iodide, mesyl anhydride, mesylate chloride. , Tosylic anhydride, benzenesulfonic acid chloride, anhydrous benzenesulfonic acid, tosylic acid chloride, anhydrous trifluoromethanesulfonic acid, and the like.
  • Examples of the solvent include those exemplified in Step 3.
  • Examples of the base include pyridine, 2,6-lutidine, 2,4,6-collidine, triethylamine, N, N-diisopropylethylamine and the like.
  • Examples of the additive include sodium chloride, sodium bromide, lithium bromide, lithium chloride and the like.
  • Process 5 Compound (Ia) is obtained by reacting compound (IId) with 1 equivalent to a large excess of compound (IVa) in the absence of solvent or in a solvent at a temperature between room temperature and 200 ° C. for 5 minutes to 100 hours. Can be manufactured.
  • Examples of the solvent include those exemplified in Steps 1 and 2.
  • Compound (IVa) can be obtained as a commercial product.
  • compound (Ic) in which n 1 and n 2 are both 1 and R 3 is formula (A) can be produced by the following method.
  • a compound in which n 1 and n 2 are both 1 and R 3 is the formula (A) can also be produced in the same manner by the following method.
  • a compound in which n 1 and n 2 are both 1, Z 1 and Z 2 are both hydrogen atoms, and R 3 ′ is formula (A) is also obtained by the following method. It can be manufactured similarly.
  • Ar represents a substituted phenyl group such as p-nitrophenyl, o-nitrophenyl, p-chlorophenyl or unsubstituted phenyl; Represents a group
  • Compound (VII) comprises compound (V) and compound (VI) in the absence of or in a solvent, preferably in the presence of 1 to 10 equivalents of an additive, and / or preferably 1 to 10 equivalents if necessary. In the presence of a base at a temperature between ⁇ 20 ° C. and 150 ° C. for 5 minutes to 72 hours.
  • solvent examples include dichloromethane, chloroform, 1,2-dichloroethane, toluene, ethyl acetate, acetonitrile, diethyl ether, tetrahydrofuran, 1,2-dimethoxyethane, 1,4-dioxane, N, N-dimethylformamide, N, N -Dimethylacetamide, N-methylpyrrolidone, dimethylsulfoxide and the like can be mentioned, and these can be used alone or in combination.
  • additives examples include 1-hydroxybenzotriazole and 4-dimethylaminopyridine.
  • Examples of the base include potassium carbonate, potassium hydroxide, sodium hydroxide, sodium methoxide, potassium tert-butoxide, triethylamine, diisopropylethylamine, N-methylmorpholine, pyridine, 1,8-diazabicyclo [5.4.0] -7- Undecene (DBU) and the like.
  • Compound (V) can be obtained as a commercial product.
  • Compound (VI) is a commercially available product or a known method (for example, “5th edition Experimental Chemistry Course 14 Synthesis of Organic Compounds II”, 5th edition, p.1, Maruzen (2005)) or a method analogous thereto. Can be obtained at
  • Compound (Ic) is obtained by reacting Compound (Ib) and Compound (VII) in the absence of solvent or in a solvent, optionally in the presence of 1 to 10 equivalents of an additive, and / or optionally in the presence of 1 to 10 equivalents of a base. Then, it can be produced by reacting at a temperature between ⁇ 20 ° C. and 150 ° C. for 5 minutes to 72 hours.
  • Compound (Ib) can be produced by using ammonia as compound (IVa) in Step 5 of Production Method 1 or by Production Method 7.
  • Examples of the solvent, additive, and base include those exemplified in Step 6.
  • compound (Id) in which n 1 and n 2 are both 1 and R 3 is formula (B) can be produced by the following method.
  • a compound in which n 1 and n 2 are both 1 and R 3 is the formula (B) can also be produced in the same manner by the following method.
  • a compound in which n 1 and n 2 are both 1, Z 1 and Z 2 are both hydrogen atoms, and R 3 ′ is a formula (B) is also obtained by the following method. It can be manufactured similarly. (Wherein R 1 , R 2 , R 6 , R 7 and n 4 are the same as defined above)
  • Process 8 Compound (IIe) is obtained by reacting Compound (Ib) with Compound (VIII) in the absence of solvent or in a solvent, preferably in the presence of 1 to 10 equivalents of a base, at a temperature between ⁇ 20 ° C. and 150 ° C. , By reacting for 5 minutes to 72 hours.
  • Examples of the solvent include those exemplified in Step 6.
  • Examples of the base include those exemplified in Step 4.
  • Compound (VIII) can be obtained as a commercial product.
  • Step 9 Compound (Id) comprises compound (IIe) and 1 to 20 equivalents of compound (VIb) in the absence of a solvent or optionally in the presence of 1 to 10 equivalents of a base at a temperature between room temperature and 200 ° C. , By reacting for 5 minutes to 100 hours.
  • Compound (VIb) can be obtained as a commercial product.
  • Examples of the solvent include those exemplified in Steps 1 and 2.
  • Examples of the base include those exemplified in Step 6.
  • the compound (IIId) in which R 1 and / or R 2 is C7-C20 alkyloxy C2-C3 alkyl or C7-C20 alkynyloxy C2-C3 alkyl is prepared by the following method: Can be manufactured.
  • R 1 ′ and / or R 2 ′ are C7-C20 alkyloxy C2-C3 alkyl, C7-C20 alkenyloxy C2-C3 alkyl or C7-C20.
  • the compound corresponding to the compound (IIId) used for producing the compound that is alkynyloxy C2-C3 alkyl can also be produced by the following method.
  • R 9 is an alkyl having 7 to 20 carbon atoms as defined for the C7-C20 alkyl moiety in the C7-C20 alkyloxy C1-C3 alkyl, the C7 C7-C20 alkenyl having the same meaning as C7-C20 alkenyl in C1-C20 alkyl or C7-C20 alkynyl having the same meaning as C7-C20 alkynyl in C7-C20 alkynyloxy C1-C3 alkyl (Wherein Y represents ethylene or propylene)
  • Step 10 Compound (X) is obtained by reacting Compound (IIIc) and Compound (IX) in the absence of solvent or in the presence of 1 to 10 equivalents of a base at a temperature between room temperature and 200 ° C. for 5 minutes to 100 ° C. It can manufacture by making it react for time.
  • Examples of the solvent and the base include those exemplified in Step 6.
  • Compound (IIIc) is a commercially available product or a known method (for example, “5th edition, Experimental Chemistry Course 14, Synthesis of Organic Compounds II”, 5th edition, p.1, Maruzen (2005)) or a method analogous thereto. Can be obtained at
  • Compound (IX) can be obtained as a commercial product.
  • Step 11 Compound (IIId) is obtained by adding Compound (X) with a halogenating reagent or pseudohalogenating reagent in the absence of a solvent or in a solvent, preferably 1 to 10 equivalents of a base, and preferably 1 to 10 equivalents, if necessary. It can be produced by reacting at a temperature between ⁇ 20 ° C. and 150 ° C. for 5 minutes to 100 hours in the presence of the agent.
  • Examples of the solvent and the base include those exemplified in Step 6.
  • halogenating reagent or pseudo-halogenating reagent examples include those exemplified in Step 4.
  • additives examples include those exemplified in Step 4.
  • compound (Ie) wherein n 1 is 1 and R 3 is alkyl having 1 to 3 carbon atoms can be produced by the following method.
  • a compound in which n 1 is 1 and R 3 is alkyl having 1 to 3 carbon atoms can be similarly produced by the following method.
  • a compound in which n 1 is 1, Z 1 and Z 2 are both hydrogen atoms, and R 3 ′ is alkyl having 1 to 3 carbon atoms is also the same by the following method. Can be manufactured.
  • R 1 , R 2 , n 2 , X 1 and X 2 have the same meanings as described above, X 6 has the same meaning as X 1 , and R 10 has R 3 having 1 to 3 carbon atoms. (It represents alkyl having 1 to 3 carbon atoms as defined for alkyl)
  • Compound (XIb) is obtained by reacting Compound (XIa) with Compound (IIIe) in the absence of solvent or in the presence of 1 to 10 equivalents of base at a temperature between room temperature and 200 ° C. for 5 minutes to 100 hours. Can be manufactured.
  • Examples of the solvent and the base include those exemplified in Step 1 and Step 2, respectively.
  • Step 13 and Step 14 Compound (XIc) is obtained by reacting Compound (XIb) and Compound (IIIa) without solvent or in the presence of 1 to 10 equivalents of base at a temperature between room temperature and 200 ° C. for 5 minutes to 100 hours. Can be manufactured. Further, compound (XId) is obtained by reacting compound (XIc) and compound (IIIb) in the absence of solvent or in the presence of 1 to 10 equivalents of a base at a temperature between room temperature and 200 ° C. for 5 minutes to 100 minutes. It can manufacture by making it react for time.
  • Examples of the solvent include those exemplified in Step 3.
  • Examples of the base include lithium diisopropylamide, hexamethyldisilazane lithium, sodium hexamethyldisilazane, and n-butyllithium.
  • Process 15 Compound (Ie) is compound (XId) in the presence of 4 to 100 equivalents of a hydride reducing agent and optionally a catalytic amount to 10 equivalents of an additive in a solvent at a temperature between ⁇ 20 ° C. and 150 ° C. , By reacting for 5 minutes to 72 hours.
  • the catalyst amount is as defined above.
  • Examples of the hydride reducing agent, additive and solvent include those exemplified in Step 3.
  • n 1 and n 2 are the same or different and are an integer of 1 to 4 (except that n 1 is 1 and n 2 is 1), and R 3 is a hydrogen atom
  • the compound (If) which is alkyl having 1 to 3 carbon atoms can be produced by the following method.
  • n 1 and n 2 are the same or different and are an integer of 1 to 4 (except that n 1 is 1 and n 2 is 1), R 3 A compound in which is a hydrogen atom or alkyl having 1 to 3 carbon atoms can be similarly produced by the following method.
  • n 1 and n 2 are the same or different and are an integer of 1 to 4 (provided that n 1 is 1 and n 2 is 1), and Z
  • 1 and Z 2 are both hydrogen atoms and R 3 ′ is a hydrogen atom, alkyl having 1 to 3 carbon atoms, hydroxy C2-C4 alkyl or C1-C3 dialkylamino C2-C4 alkyl.
  • R 3 ′ is a hydrogen atom, alkyl having 1 to 3 carbon atoms, hydroxy C2-C4 alkyl or C1-C3 dialkylamino C2-C4 alkyl.
  • R 1 , R 2 , R 3a , X 1 , X 2 and X 3 are the same as defined above, and m 1 and m 2 are the same or different and are an integer of 1 to 4 (provided that m P 1 and P 2 are the same or different and represent a protecting group except when 1 is 1 and m 2 is 1)
  • Step 16 and Step 17 Compound (XIIb) can be obtained in the same manner as in Step 1, except that compound (XIIa) is used instead of dimethyl malonate.
  • Compound (XIIc) is obtained in the same manner as in Step 2, except that compound (XIIb) is used instead of compound (IIa).
  • (XIIc) when R 1 and R 2 are the same can be obtained by using 2 equivalents or more of compound (IIIa) in step 16.
  • P 1 and P 2 are protecting groups commonly used in organic synthetic chemistry (for example, Protective Groups in Organic Synthesis, third edition, by TWGreene, John Wiley & Sons). Inc. (1999) etc.] can be used.
  • Compound (XIIa) can be obtained by a known method [for example, “New Experimental Chemistry Lecture 14 Synthesis and Reaction of Organic Compounds (II)”, First Edition, p.751, Maruzen (1977)] or a method analogous thereto. .
  • Step 19 Compound (XIIe) can be obtained by removing protecting groups P 1 and P 2 of compound (XIId) by an appropriate method.
  • Methods for removing protecting groups include those commonly used in organic synthetic chemistry (for example, Protective Groups in Organic Synthesis, third edition, TW Greene, John The removal method described in Wiley & Sons Inc. (1999), etc.] can be used, whereby the target compound can be produced.
  • Step 21 Compound (If) can be obtained by the same method as in Step 5, using compound (XIIf) instead of compound (IId).
  • compound (Ib) in which n 1 and n 2 are 1 and R 3 is a hydrogen atom can be produced by the following method.
  • a compound in which n 1 and n 2 are 1 and R 3 is a hydrogen atom can be similarly produced by the following method.
  • compounds in which n 1 and n 2 are 1, Z 1 and Z 2 are both hydrogen atoms, and R 3 ′ is a hydrogen atom are also produced in the same manner by the following method. can do.
  • R 1 , R 2 , X 1 , X 2 and X 3 are as defined above, and P 3 represents a protecting group such as tert-butoxycarbonyl, o-nitrobenzenesulfonyl or p-methylbenzenesulfonyl)
  • Steps 22 and 23 Compound (XIIIa) can be produced by reacting ethyl cyanoacetate with compound (IIIa) under the same conditions as in Step 1. Furthermore, compound (XIIIb) can be produced by reacting compound (XIIIa) with compound (IIIb) under the same conditions as in Step 2.
  • Ethyl cyanoacetate can be obtained as a commercial product.
  • Compound (IIIa) and compound (IIIb) are the same as those described in Production Method 1.
  • Process 24 Compound (XIIIc) can be produced by reacting compound (XIIIb) under the same conditions as in Step 3.
  • Step 25 Compound (XIIId) is obtained by combining Compound (XIIIc) with 1 to 10 equivalents of ditert-butoxycarbonyl carbonate, o-nitrobenzenesulfonyl chloride, p-methylbenzenesulfonyl chloride, etc., and 1 to 10 equivalents of a base in a solvent. Then, it can be produced by reacting at a temperature between 0 ° C. and 200 ° C. for 5 minutes to 100 hours.
  • Examples of the solvent include those exemplified in Step 6.
  • Examples of the base include those exemplified in Step 4.
  • Step 26 Compound (XIIIe) is obtained by adding compound (XIIId) at ⁇ 0 ° C. and 150 ° C. in the presence of one or more equivalents of a halogenating reagent or pseudohalogenating reagent and no solvent or in a solvent, preferably in the presence of 1 to 10 equivalents of a base. It can be produced by reacting at a temperature between 0 ° C. and 5 minutes to 100 hours.
  • halogenating reagent or pseudo-halogenating reagent examples include those exemplified in Step 4.
  • Examples of the solvent include those exemplified in Step 3.
  • Examples of the base include those exemplified in Step 4.
  • Step 27 Compound (XIIIf) is obtained by subjecting compound (XIIIe) to a molecular weight in the absence of a solvent or in a solvent, preferably in the presence of 1 to 10 equivalents of a base, at a temperature between 0 ° C. and 150 ° C. for 5 minutes to 72 hours. It can be produced by reacting.
  • Examples of the base include potassium carbonate, potassium hydroxide, sodium hydroxide, sodium methoxide, potassium tert-butoxide, triethylamine, diisopropylethylamine, N-methylmorpholine, pyridine, 1,8-diazabicyclo [5.4.0] -7-
  • Examples include undecene (DBU), lithium diisopropylamide, hexamethyldisilazane lithium, hexamethyldisilazane sodium, and n-butyllithium.
  • Examples of the solvent include those exemplified in Steps 1 and 2.
  • Step 28 Compound (Ib) can be obtained by removing the protecting group P 3 of compound (XIIIf) by an appropriate method.
  • Methods for removing protecting groups include those commonly used in organic synthetic chemistry (for example, Protective Groups in Organic Synthesis, third edition, TW Greene, John The removal method described in Wiley & Sons Inc. (1999), etc.] can be used, whereby the target compound can be produced.
  • Production method 8 Among the compounds (I), (Ig) in which n 1 and n 2 are 1 and R 3 is alkyl having 1 to 3 carbon atoms can be produced by the following method.
  • a compound in which n 1 and n 2 are 1 and R 3 is alkyl having 1 to 3 carbon atoms can be similarly produced by the following method.
  • a compound in which n 1 and n 2 are 1, Z 1 and Z 2 are both hydrogen atoms, and R 3 ′ is alkyl having 1 to 3 carbon atoms is also represented by the following formula: It can be similarly manufactured by a method.
  • R 11 is a hydrogen atom, methyl or ethyl
  • R 12 is a hydrogen atom or methyl
  • R 11 and R 12 are adjacent carbons.
  • Step 29 Compound (Ig) comprises compound (Ib), preferably 1 to 10 equivalents of compound (XIX), preferably 1 equivalent to a large excess of reducing agent and preferably 1 to 10 equivalents of acid in a solvent. It can be produced by reacting in the presence at a temperature between ⁇ 20 ° C. and 150 ° C. for 5 minutes to 72 hours.
  • solvent examples include methanol, ethanol, dichloromethane, chloroform, 1,2-dichloroethane, toluene, ethyl acetate, acetonitrile, diethyl ether, tetrahydrofuran, 1,2-dimethoxyethane, dioxane, N, N-dimethylformamide, N, N -Dimethylacetamide, N-methylpyrrolidone, water and the like can be mentioned, and these can be used alone or in combination.
  • Examples of the reducing agent include sodium triacetoxyborohydride, sodium cyanoborohydride and the like.
  • Examples of the acid include hydrochloric acid and acetic acid.
  • Compound (XIX) can be obtained as a commercial product.
  • Manufacturing method 9 Among the compounds (I ′′), compounds in which n 1 and n 2 are 1, R 3 ′ is hydrogen, Z 1 is alkyl having 1 to 3 carbon atoms, and Z 2 is a hydrogen atom (I '' b) can be produced by the following method. (Wherein R 1 ′ , R 2 ′ , X 3 and P 3 are the same as defined above, and Z 1a is the same as C 1 -C 3 in the case where Z 1 is alkyl having 1 to 3 carbon atoms. And M represents lithium, magnesium bromide, magnesium chloride, etc.)
  • Compound (XIIIh) can be produced by reacting compound (XIIIg) in a solvent with 1 to 10 equivalents of an oxidizing agent at a temperature between 0 ° C. and 150 ° C. for 5 minutes to 72 hours.
  • the oxidizing agent include Dess-Martin reagent, pyridinium chlorochromate, pyridinium dichromate, and tetrapropylammonium perruthenate.
  • the solvent include those exemplified in Step 6.
  • Compound (XIIIg) can be produced by a method similar to that for compound (XIIId) in Production Method 7.
  • Step 31 Compound (XIIIi) can be produced by reacting compound (XIIIh) with 1 to 10 equivalents of an organometallic reagent in a solvent at a temperature between ⁇ 78 ° C. and 100 ° C. for 5 minutes to 72 hours.
  • organometallic reagent include alkyl lithium reagents such as methyl lithium and ethyl lithium, Grignard reagents such as methyl magnesium bromide and ethyl magnesium bromide, and organic zinc reagents such as dimethyl zinc and diethyl zinc.
  • the solvent include those exemplified in Step 3.
  • Process 32 Compound (XIIIj) can be produced in the same manner as in step 26.
  • Step 33 Compound (XIIIk) can be produced in the same manner as in step 27.
  • Step 34 Compound (I ′′ b) can be produced in the same manner as in step 28.
  • a compound (I''d) in which n 1 and n 2 are 1, R 3 ′ is the formula (B), Z 1 is alkyl having 1 to 3 carbon atoms, and Z 2 is a hydrogen atom Can be produced by the following method. (Wherein R 1 ′ , R 2 ′ , R 4 , R 5 , R 6 , R 7 , R 11 , R 12 , n 3 , n 4 , Ar and Z 1a are as defined above)
  • Step 35 Compound (I ′′ g) can be produced in the same manner as in step 29.
  • Step 36 Compound (I ′′ c) can be produced in the same manner as in Step 7.
  • Step 37 Compound (II′e) can be produced by the same method as in Step 8.
  • Step 38 Compound (I ′′ d) can be produced in the same manner as in Step 9.
  • the intermediates and target compounds in each of the above production methods are isolated and purified by separation and purification methods commonly used in organic synthetic chemistry, such as filtration, extraction, washing, drying, concentration, recrystallization, and various chromatography. be able to.
  • the intermediate can be subjected to the next reaction without any particular purification.
  • a hydrogen ion may be coordinated to a lone pair on the nitrogen atom in the structure, and in that case, a salt is formed with a pharmaceutically acceptable anion (as defined above).
  • the cationic lipid of the present invention includes a compound in which a hydrogen ion is coordinated to a lone electron pair on the nitrogen atom.
  • examples of the pharmaceutically acceptable anion include inorganic ions such as chloride ion, bromide ion, nitrate ion, sulfate ion and phosphate ion, acetate ion, oxalate ion, maleate ion, and fumarate ion. And organic acid ions such as citrate ion, benzoate ion, and methanesulfonate ion.
  • cationic lipids of the present invention may have stereoisomers such as geometric isomers and optical isomers, tautomers and the like, but the cationic lipids of the present invention include these, Includes all possible isomers and mixtures thereof.
  • each atom in the cationic lipid of the present invention may be replaced with a corresponding isotope atom, and the compound (I) includes a compound replaced with these isotope atoms.
  • the hydrogen atoms in compound (I) may be hydrogen atoms having an atomic weight of 2 (deuterium atoms).
  • a compound in which a part or all of each atom in the cationic lipid of the present invention is replaced with a corresponding isotope atom can be produced by a method similar to each of the above production methods using a commercially available building block. it can.
  • a compound in which some or all of the hydrogen atoms in compound (I) are replaced with deuterium atoms is, for example, iridium complex as a catalyst, deuterium as a deuterium source, alcohol, carboxylic acid and the like as deuterium. It is also possible to synthesize it using the method described in [Journal of American Chemical Society (J. Am. Chem. Soc.), Vol. 124, No. 10, 2092 (2002)].
  • cationic lipid of the present invention Specific examples of the cationic lipid of the present invention are shown in Tables 1 to 3. However, the cationic lipid of the present invention is not limited to these.
  • the nucleic acid used in the present invention may be any molecule as long as it is a molecule in which nucleotides and / or molecules having functions equivalent to nucleotides are polymerized, for example, ribonucleic acid that is a polymer of ribonucleotides.
  • RNA ribonucleic acid
  • DNA deoxyribonucleic acid
  • chimeric nucleic acids composed of RNA and DNA chimeric nucleic acids composed of RNA and DNA
  • nucleotides in which at least one nucleotide of these nucleic acids is replaced with a molecule having a function equivalent to that nucleotide A polymer etc. are mentioned.
  • nucleic acid of the present invention a derivative containing at least a part of a structure of a molecule obtained by polymerizing nucleotides and / or molecules having functions equivalent to nucleotides is also included in the nucleic acid of the present invention.
  • uracil U and thymine T can be replaced with each other.
  • nucleotide derivatives examples include nucleotide derivatives.
  • the nucleotide derivative may be any molecule as long as it is a modified molecule, for example, in order to improve nuclease resistance or stabilize from other degradation factors compared to RNA or DNA, for example.
  • a molecule in which ribonucleotide or deoxyribonucleotide is modified is preferably used.
  • nucleotide derivatives include sugar-modified nucleotides, phosphodiester bond-modified nucleotides, base-modified nucleotides, and the like.
  • any or all of the nucleotide sugar chemical structure may be modified or substituted with an arbitrary substituent, or substituted with an arbitrary atom.
  • 2'-modified nucleotides are preferably used.
  • Examples of the modifying group in the sugar moiety-modified nucleotide include 2′-cyano, 2′-alkyl, 2′-substituted alkyl, 2′-alkenyl, 2′-substituted alkenyl, 2′-halogen and 2′-O-cyano.
  • sugar-modified nucleotide examples include a crosslinked structure-type artificial nucleic acid (BNA) having two cyclic structures by introducing a crosslinked structure into the sugar moiety, and specifically, an oxygen at the 2 ′ position.
  • BNA crosslinked structure-type artificial nucleic acid
  • LNA Locked Nucleic Acid
  • Ethylene bridged nucleic acid Ethylene bridged nucleic acid
  • PNA peptide nucleotides
  • OPNA oxypeptide nucleic acids
  • PRNA Peptide ribonucleic acid
  • 2′-cyano, 2′-fluoro, 2′-chloro, 2'-bromo, 2'-trifluoromethyl, 2'-O-methyl, 2'-O-ethyl, 2'-O-isopropyl, 2'-O-trifluoromethyl, 2'-O- [2- (Methoxy) ethyl], 2'-O- (3-aminopropyl), 2'-O- [2- (N, N-dimethylaminooxy) ethyl], 2'-O- [3- (N, N -Dimethylamino) propyl], 2'-O- ⁇ 2- [2- (N, N-dimethylamino) ethoxy] ethyl ⁇ , 2'-O- [2- (methylamino) -2-oxoethyl], 2 '-Se-methyl and the like are more preferable, 2'-O-methyl, 2'-O-ethyl, 2'-
  • the modifying group in the sugar moiety-modified nucleotide can also define a preferred range from its size, and from the size of fluoro, the one corresponding to the size of -O-butyl is preferable, and the size of -O-methyl To the equivalent of -O-ethyl.
  • alkyl in the modifying group in the sugar-modified nucleotide examples include alkyl having 1 to 6 carbon atoms, such as methyl, ethyl, propyl, isopropyl, butyl, isobutyl, sec-butyl, tert-butyl, pentyl, isopentyl, neopentyl, Alkyl having 1 to 6 carbon atoms such as hexyl.
  • alkenyl in the modifying group in the sugar moiety-modified nucleotide examples include alkenyl having 3 to 6 carbon atoms, such as allyl, 1-propenyl, butenyl, pentenyl, hexenyl and the like.
  • halogen in the modifying group in the sugar-modified nucleotide examples include a fluorine atom, a chlorine atom, a bromine atom, and an iodine atom.
  • amino acids in amino acid residues include aliphatic amino acids (specifically, glycine, alanine, valine, leucine, isoleucine, etc.), hydroxy amino acids (specifically, serine, threonine, etc.), acidic amino acids (specifically, Is aspartic acid, glutamic acid, etc.), acidic amino acid amide (specifically, asparagine, glutamine, etc.), basic amino acid (specifically, lysine, hydroxylysine, arginine, ornithine, etc.), sulfur-containing amino acid (specifically, Cysteine, cystine, methionine, etc.), imino acids (specifically, proline, 4-hydroxyproline, etc.) and the like.
  • aliphatic amino acids specifically, glycine, alanine, valine, leucine, isoleucine, etc.
  • hydroxy amino acids specifically, serine, threonine, etc.
  • acidic amino acids specifically, Is aspartic
  • Examples of the substituted alkyl in the modified group in the sugar-modified nucleotide and the substituent in the substituted alkenyl include halogen (as defined above), hydroxy, sulfanyl, amino, oxo, -O-alkyl (the alkyl portion of the -O-alkyl is -S-alkyl (the alkyl part of the -S-alkyl is the same as the alkyl having 1-6 carbon atoms), -NH-alkyl (the alkyl of -NH-alkyl) Part is synonymous with the alkyl having 1 to 6 carbon atoms), dialkylaminooxy (the two alkyl parts of the dialkylaminooxy are the same or different and are synonymous with the alkyl having 1 to 6 carbon atoms), dialkylamino (the dialkylamino The two alkyl moieties are the same or different and have the same meaning as the alkyl having 1 to 6 carbon atoms), dialkylaminoal
  • the phosphodiester bond-modified nucleotide is any nucleotide that has been modified or substituted with an arbitrary substituent for a part or all of the chemical structure of the phosphodiester bond of the nucleotide, or with any atom.
  • a nucleotide in which a phosphodiester bond is replaced with a phosphorothioate bond a nucleotide in which a phosphodiester bond is replaced with a phosphorodithioate bond
  • a nucleotide in which a phosphodiester bond is replaced with an alkylphosphonate bond a phosphate
  • Examples include nucleotides in which a diester bond is substituted with a phosphoramidate bond.
  • any or all of the nucleotide base chemical structure modified or substituted with an arbitrary substituent or substituted with an arbitrary atom may be used.
  • oxygen atoms are substituted with sulfur atoms
  • hydrogen atoms are substituted with alkyl groups having 1 to 6 carbon atoms
  • methyl groups are substituted with hydrogen atoms or alkyl groups with 2 to 6 carbon atoms
  • Examples thereof include those in which an amino group is protected with a protecting group such as an alkyl group having 1 to 6 carbon atoms or an alkanoyl group having 1 to 6 carbon atoms.
  • nucleotide derivative a nucleotide, sugar moiety, phosphodiester bond or nucleotide derivative modified with at least one of a base, a lipid, phospholipid, phenazine, folate, phenanthridine, anthraquinone, acridine, fluorescein, rhodamine, coumarin, Examples include dyes and other chemical substances added.
  • 5'-polyamine-added nucleotide derivatives examples include a fluorescent dye (Cy3) -added nucleotide derivative, a red fluorescent dye (Cy5) -added nucleotide derivative, a fluorescein (6-FAM) -added nucleotide derivative, and a biotin-added nucleotide derivative.
  • the nucleotide or nucleotide derivative is different from other nucleotides or nucleotide derivatives in the nucleic acid with an alkylene structure, a peptide structure, a nucleotide structure, an ether structure, an ester structure, and at least one of these.
  • a cross-linked structure such as a combined structure may be formed.
  • the nucleic acid used in the present invention is preferably a nucleic acid that suppresses the expression of the target gene, and more preferably a nucleic acid that has an action of suppressing the expression of the target gene using RNA interference (RNAi).
  • RNAi RNA interference
  • the target gene in the present invention is not particularly limited as long as it is a gene that produces and expresses mRNA, for example, a gene related to tumor or inflammation is preferable, for example, vascular endothelial growth factor (hereinafter referred to as VEGF).
  • VEGF vascular endothelial growth factor
  • VEGFR vascular endothelial growth factor receptor
  • fibroblast growth factor fibroblast growth factor receptor
  • platelet-derived growth factor platelet-derived growth factor receptor
  • hepatocyte Growth factor hepatocyte growth factor receptor
  • Kruppel-like factor KLF
  • Ets express sequence tag transcription factor
  • nuclear factor hypoxia-inducible factor
  • cell cycle-related factor cell cycle-related factor
  • chromosome replication Related factors chromosome repair-related factors, microtubule-related factors, growth signal pathway-related factors, growth-related transcription factors, apoptosis-related factors, etc. And the like.
  • VEGF gene VEGFR gene, fibroblast growth factor gene, fibroblast growth factor receptor gene, platelet-derived growth factor gene, platelet-derived growth factor receptor gene , Hepatocyte growth factor gene, hepatocyte growth factor receptor gene, KLF gene, Ets transcription factor gene, nuclear factor gene, hypoxia inducible factor gene, cell cycle related factor gene, chromosome replication related factor gene, chromosome repair related factor gene , Microtubule-related factor genes (for example, CKAP5 gene), growth signal pathway-related factor genes (for example, KRAS gene), growth-related transcription factor genes, apoptosis-related factors (for example, BCL-2 gene), etc. .
  • CKAP5 gene growth signal pathway-related factor genes
  • KRAS gene growth-related transcription factor genes
  • apoptosis-related factors for example, BCL-2 gene
  • a gene expressed in the liver, lung, kidney or spleen is preferable, and a gene expressed in the liver is more preferable.
  • the above-mentioned gene related to tumor or inflammation hepatitis B virus Genome, hepatitis C virus genome, apolipoprotein (APO), hydroxymethylglutaryl (HMG) CoA reductase, kexin type 9 serine protease (PCSK9), factor 12, glucagon receptor, glucocorticoid receptor, leukotriene receptor , Thromboxane A2 receptor, histamine H1 receptor, carbonic anhydrase, angiotensin converting enzyme, renin, p53, tyrosine phosphatase (PTP), sodium-dependent glucose transporter, tumor necrosis factor, interleukin, hepcidin, transsilence, anti Thrombin, protein C Matriptase enzyme
  • the nucleic acid that suppresses the expression of the target gene includes, for example, a nucleic acid that includes a base sequence complementary to a partial base sequence of mRNA of a gene encoding a protein (target gene) and suppresses the expression of the target gene. If so, for example, using any nucleic acid such as double-stranded nucleic acid such as siRNA (short interference RNA), miRNA (micro RNA), single-stranded nucleic acid such as shRNA (short hairpin RNA), antisense nucleic acid, ribozyme, etc. However, double-stranded nucleic acids are preferred.
  • a nucleic acid containing a base sequence complementary to a part of the base sequence of the target gene mRNA is called an antisense strand nucleic acid
  • a nucleic acid containing a base sequence complementary to the base sequence of the antisense strand nucleic acid is a sense strand.
  • a sense strand nucleic acid refers to a nucleic acid capable of forming a double strand forming part by pairing with an antisense strand nucleic acid, such as a nucleic acid itself consisting of a partial base sequence of a target gene.
  • a double-stranded nucleic acid refers to a nucleic acid in which two strands are paired and have a duplex forming part.
  • the double-stranded forming part refers to a part where nucleotides constituting the double-stranded nucleic acid or a derivative thereof constitute a base pair to form a double strand.
  • the base pair constituting the duplex forming part is usually 15 to 27 base pairs, preferably 15 to 25 base pairs, more preferably 15 to 23 base pairs, further preferably 15 to 21 base pairs, and 15 to 19 base pairs. Base pairs are particularly preferred.
  • the antisense strand nucleic acid of the duplex forming part for example, a nucleic acid consisting of a partial sequence of the mRNA of the target gene, or 1 to 3 bases, preferably 1 to 2 bases, more preferably 1 base in the nucleic acid, A nucleic acid that is deleted or added and has the activity of suppressing the expression of the target protein is preferably used.
  • the single-stranded nucleic acid constituting the double-stranded nucleic acid usually consists of a series of 15 to 30 bases (nucleosides), preferably 15 to 29 bases, more preferably 15 to 27 bases, and further preferably 15 to 25 bases. 17 to 23 bases are particularly preferred, and 19 to 21 bases are most preferred.
  • the antisense strand, the sense strand, or both of the nucleic acids constituting the double-stranded nucleic acid have an additional nucleic acid that does not form a duplex on the 3 ′ side or 5 ′ side following the duplex forming part. May be.
  • the part that does not form a double chain is also referred to as a protrusion (overhang).
  • the double-stranded nucleic acid having a protruding portion for example, one having a protruding portion consisting of 1 to 4 bases, usually 1 to 3 bases at the 3 ′ end or 5 ′ end of at least one strand is used. Those having protrusions made of are preferably used, and those having protrusions made of dTdT or UU are more preferably used.
  • the overhang can have only the antisense strand, only the sense strand, and both the antisense strand and the sense strand, but a double-stranded nucleic acid having an overhang on both the antisense strand and the sense strand is preferably used. .
  • a sequence that partially or completely matches the base sequence of the target gene mRNA following the duplex formation portion, or a base sequence and a portion of the complementary strand of the target gene mRNA that follows the duplex formation portion may be used.
  • a nucleic acid that suppresses the expression of a target gene for example, a nucleic acid molecule that generates the above-mentioned double-stranded nucleic acid by the action of a ribonuclease such as Dicer (International Publication No. 2005/089287), a 3 ′ end or a 5 ′ end It is also possible to use a double-stranded nucleic acid or the like that does not have a protruding portion.
  • the antisense strand preferably has a sequence of at least the 1st to 17th bases (nucleosides) from the 5 ′ end to the 3 ′ end. It is a sequence of bases complementary to a sequence of 17 consecutive nucleotides of mRNA, and more preferably, the antisense strand has a sequence of bases 1 to 19 from the 5 ′ end to the 3 ′ end, The base sequence is complementary to the 19-base sequence of the target gene mRNA, or the base sequence 1 to 21 is complementary to the 21-base sequence of the target gene mRNA sequence.
  • the sequence of the 1st to 25th bases is a base sequence complementary to the sequence of 25 consecutive bases of the mRNA of the target gene.
  • nucleic acid used in the present invention is siRNA, preferably 10 to 70%, more preferably 15 to 60%, and still more preferably 20 to 50% of the sugar in the nucleic acid is modified at the 2 ′ position.
  • Ribose substituted with ribose substituted with a modifying group at the 2′-position means that the hydroxyl group at the 2′-position of ribose is substituted with the modifying group, and has the same configuration as the hydroxyl group at the 2′-position of ribose. Although it may be present or different, the configuration is preferably the same as the hydroxyl group at the 2 ′ position of ribose.
  • Examples of the modifying group in ribose substituted with a modifying group at the 2′-position include those exemplified in the definition of the modifying group in the 2′-modified nucleotide in the sugar moiety-modified nucleotide and the hydrogen atom, such as 2′-cyano, 2 ′ -Halogen, 2'-O-cyano, 2'-alkyl, 2'-substituted alkyl, 2'-O-alkyl, 2'-O-substituted alkyl, 2'-O-alkenyl, 2'-O-substituted alkenyl , 2'-Se-alkyl, 2'-Se-substituted alkyl, etc.
  • 2'-cyano, 2'-fluoro, 2'-chloro, 2'-bromo, 2'-trifluoromethyl, 2'-O -Methyl, 2'-O-ethyl, 2'-O-isopropyl, 2'-O-trifluoromethyl, 2'-O- [2- (methoxy) ethyl], 2'-O- (3-aminopropyl ), 2'-O- [2- (N, N-dimethyl) aminooxy] ethyl, 2'-O- [3- (N, N-dimethylamino) propyl], 2'-O- ⁇ 2- [ 2- (N, N-dimethylamino) ethoxy] ethyl ⁇ , 2'-O- [2- (methyl Amino) -2-oxoethyl], 2'-Se-methyl, hydrogen atom and the like are more preferable, 2'-O-methyl, 2'-O-ethyl
  • the nucleic acid used in the present invention includes a derivative in which an oxygen atom or the like contained in a phosphoric acid part, an ester part or the like in the structure of the nucleic acid is substituted with another atom such as a sulfur atom.
  • the sugar that binds to the 5 ′ terminal base of the antisense strand and the sense strand has a 5′-position hydroxyl group, a phosphate group or the aforementioned modifying group, or a phosphate group or a nucleolytic enzyme in vivo. It may be modified by a group that is converted to the above-mentioned modifying group.
  • the sugar that binds to the 3 ′ terminal base of the antisense strand and the sense strand has a phosphate group or the above-mentioned modifying group, or a phosphate group or a nucleolytic enzyme in vivo in each 3 ′ position. It may be modified by a group that is converted to the above-mentioned modifying group.
  • Examples of the single-stranded nucleic acid include 15 to 27 bases (nucleosides) of the target gene, preferably 15 to 25 bases, more preferably 15 to 23 bases, still more preferably 15 to 21 bases, and particularly preferably 15 to 25 bases.
  • a nucleic acid comprising a sequence complementary to a sequence comprising 19 bases, or 1 to 3 bases, preferably 1 to 2 bases, more preferably 1 base substituted or deleted or added in the nucleic acid, and having an activity of suppressing the expression of the target protein Any nucleic acid can be used.
  • the single-stranded nucleic acid preferably consists of a series of 15 to 30 bases (nucleosides), more preferably 15 to 27 bases, still more preferably 15 to 25 bases, particularly preferably 15 to 23 bases. Nucleic acids are preferably used.
  • the single-stranded nucleic acid one obtained by linking the antisense strand and the sense strand constituting the double-stranded nucleic acid via a spacer sequence (spacer oligonucleotide) may be used.
  • the spacer oligonucleotide is preferably a 6- to 12-base single-stranded nucleic acid molecule, and the sequence at the 5 'end is preferably 2 Us.
  • An example of a spacer oligonucleotide is a nucleic acid having the sequence UUCAAGAGA. Either the antisense strand or the sense strand connected by the spacer oligonucleotide may be on the 5 'side.
  • the single-stranded nucleic acid is preferably a single-stranded nucleic acid such as an shRNA having a double-strand formation portion with a stem-loop structure.
  • Single-stranded nucleic acids such as shRNA are usually 50 to 70 bases in length.
  • a nucleic acid having a length of 70 bases or less, preferably 50 bases or less, more preferably 30 bases or less, designed to produce the above single-stranded nucleic acid or double-stranded nucleic acid by the action of ribonuclease or the like may be used. Good.
  • the nucleic acid used in the present invention can be produced using a known RNA or DNA synthesis method and RNA or DNA modification method.
  • the composition of the present invention is a composition containing the cationic lipid and nucleic acid of the present invention, for example, a complex of the cationic lipid of the present invention and a nucleic acid, or a neutral lipid and / or a cationic lipid of the present invention.
  • a composition containing a complex of a combination of polymers and a nucleic acid, a composition containing the complex and a lipid membrane encapsulating the complex, and the like can be given.
  • the lipid membrane may be a lipid single membrane (lipid monomolecular membrane) or a lipid bilayer membrane (lipid bimolecular membrane).
  • the lipid membrane may contain the cationic lipid, neutral lipid and / or polymer of the present invention.
  • the complex and / or the lipid membrane may contain a cationic lipid other than the cationic lipid of the present invention.
  • the composition of the present invention includes, for example, a complex of a cationic lipid other than the cationic lipid of the present invention and a nucleic acid, or a cationic lipid other than the cationic lipid of the present invention and a neutral lipid and / or polymer. And a composition comprising a combination of a nucleic acid and a nucleic acid, and a lipid membrane encapsulating the complex, the lipid membrane containing the cationic lipid of the present invention.
  • the lipid membrane in this case may also be a lipid monolayer (lipid monomolecular membrane) or a lipid bilayer membrane (lipid bimolecular membrane).
  • the lipid membrane may contain a cationic lipid other than the cationic lipid of the present invention, a neutral lipid and / or a polymer.
  • composition of the present invention a composition containing the complex of the cationic lipid of the present invention and a nucleic acid, a complex of the cationic lipid of the present invention and a nucleic acid, and a lipid membrane encapsulating the complex
  • the composition containing the cationic lipid of the present invention is more preferred, the composition containing the complex of the cationic lipid of the present invention and a nucleic acid, and the complex of the cationic lipid and the nucleic acid of the present invention and the complex More preferably, the composition contains a lipid membrane that encapsulates the body, and the lipid membrane contains the cationic lipid of the present invention.
  • the complex of the cationic lipid and nucleic acid of the present invention and the lipid membrane that encapsulates the complex Containing Composition containing a cationic lipid of the present invention a lipid membrane is most preferred.
  • the lipid membrane may contain a neutral lipid and / or a polymer.
  • the complex and / or the lipid membrane may contain a cationic lipid other than the cationic lipid of the present invention.
  • Examples of the form of the complex include a complex of a nucleic acid and a membrane composed of a single lipid (single molecule) layer (reverse micelle), a complex of a nucleic acid and a liposome, a complex of a nucleic acid and a micelle, and the like. And a complex of a nucleic acid and a lipid monolayer or a complex of a nucleic acid and a liposome.
  • composition containing a complex and a lipid membrane that encapsulates the complex examples include liposomes that encapsulate the complex and the complex with a lipid bilayer.
  • composition of the present invention one or more kinds of the cationic lipid of the present invention may be used, and the cationic lipid of the present invention is mixed with a cationic lipid other than the cationic lipid of the present invention. May be.
  • Examples of the cationic lipid other than the cationic lipid of the present invention include N- [1- (2,3-dioleyl) disclosed in JP-A-61-161246 (US Pat. No. 5,049,386).
  • the cationic lipid which has.
  • the unsubstituted alkyl group of the tertiary amine moiety and the quaternary ammonium moiety is more preferably a methyl group.
  • the composition of this invention can contain a nucleic acid, it can also contain the compound chemically approximated with the nucleic acid.
  • the composition of the present invention can be produced by a known production method or a similar method, and may be produced by any production method.
  • a known method for preparing liposomes can be applied to the production of a composition containing liposome, which is one of the compositions.
  • Known liposome preparation methods include, for example, Bangham et al.'S liposome preparation method [“J. Mol. Biol.”, 1965, Vol. 13, p.238- 252], ethanol injection method [“Journal of Cell Biology”, 1975, Vol. 66, pp. 621-634], French press method [“FBS Letters (FEBS Lett.) ”, 1979, Vol. 99, p. 210-214], freeze-thaw method [“ Arch. Biochem.
  • liposomes for example, an antioxidant such as citric acid, ascorbic acid, cysteine or ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA), for example, an isotonic agent such as glycerin, glucose or sodium chloride can be added. is there.
  • an antioxidant such as citric acid, ascorbic acid, cysteine or ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA)
  • an isotonic agent such as glycerin, glucose or sodium chloride
  • the cationic lipid of the present invention, or a mixture of the cationic lipid of the present invention and a cationic lipid other than the cationic lipid of the present invention is dissolved in an organic solvent such as ethanol, and the solvent is distilled off. Thereafter, liposomes can also be produced by adding physiological saline or the like, stirring with shaking, and forming liposomes.
  • composition of the present invention is prepared by, for example, dissolving the cationic lipid of the present invention or a mixture of the cationic lipid of the present invention and a cationic lipid other than the cationic lipid in chloroform in advance, Aqueous solution and methanol are added and mixed to form a cationic lipid / nucleic acid complex.
  • the chloroform layer is then taken out, and polyethylene glycolated phospholipid, neutral lipid, and water are added to the water-in-oil type (W / O) a method of producing an emulsion and treating it by the reverse phase evaporation method (see Japanese Patent Publication No.
  • a nucleic acid in an acidic aqueous electrolyte solution for example, the cationic lipid of the present invention
  • a mixture of the cationic lipid of the present invention and a cationic lipid other than the cationic lipid of the present invention in ethanol is added, and the ethanol concentration is lowered to 20 v / v% to prepare the nucleic acid-encapsulated liposome.
  • the sample is further dialyzed by raising the pH to remove nucleic acids adhering to the surface of the composition (Japanese Patent Publication No. 2002-501511 and Biochimica et al Biophysica Acta, 2001, Vol. 1510, pages 152-166) and the like.
  • compositions of the present invention a complex of the cationic lipid of the present invention and a nucleic acid, or a complex of the cationic lipid of the present invention combined with a neutral lipid and / or a polymer and a nucleic acid, and the complex
  • a composition containing a liposome containing a lipid bilayer encapsulating a body can be produced, for example, according to the production method described in WO02 / 28367 and WO2006 / 080118.
  • compositions of the present invention for example, a complex of the cationic lipid of the present invention and a nucleic acid, or a complex of a combination of the cationic lipid of the present invention and a neutral lipid and / or polymer, and a nucleic acid
  • a composition containing a lipid membrane encapsulating the complex, a complex of a cationic lipid other than the cationic lipid of the present invention and a nucleic acid, or a neutral lipid and a cationic lipid other than the cationic lipid of the present invention A composition comprising a combination of a polymer and a nucleic acid and a lipid membrane encapsulating the complex, and the lipid membrane containing the cationic lipid of the present invention are disclosed in WO 02 / According to the production methods described in 28367 and International Publication No.
  • the respective complexes are produced and dispersed in water or a 0-40% ethanol aqueous solution without dissolving them (liquid A ), Separately These lipid membrane components are dissolved in, for example, an aqueous ethanol solution (liquid B), mixed with liquid A and liquid B in equal amounts or in a volume ratio of 1: 1 to 7: 3, and further appropriately added with water. be able to.
  • liquid A and the liquid B one or plural kinds of the cationic lipid of the present invention or a cationic lipid other than the cationic lipid of the present invention may be used. Lipids and cationic lipids other than the cationic lipid of the present invention may be used in combination.
  • the complex of the cationic lipid of the present invention and a nucleic acid or the complex of the cationic lipid of the present invention combined with a neutral lipid and / or a polymer and a nucleic acid, and the complex A composition containing an encapsulated lipid membrane, a complex of a cationic lipid other than the cationic lipid of the present invention and a nucleic acid, or a cationic lipid other than the cationic lipid of the present invention with a neutral lipid and / or polymer.
  • a nucleic acid in a complex comprising a complex of the combination and a nucleic acid, and a lipid membrane encapsulating the complex, the composition containing the cationic lipid of the present invention in the lipid membrane, and after production
  • the structure of the complex and membrane may be displaced by electrostatic interaction between the lipid and the cationic lipid in the lipid membrane, or by fusion of the cationic lipid in the complex and the cationic lipid in the lipid membrane.
  • a composition comprising, a complex of a cationic lipid other than the cationic lipid of the present invention and a nucleic acid, or a combination of a cationic lipid other than the cationic lipid of the present invention and a neutral lipid and / or polymer It includes a complex with a nucleic acid and a lipid membrane encapsulating the complex, and the lipid membrane contains the cationic lipid of the present invention.
  • a nucleic acid (as defined above), preferably a double-stranded nucleic acid, a cationic lipid of the present invention and / or a cation of the present invention
  • a complex with a liposome containing a cationic lipid other than a functional lipid is produced and dispersed in water or a 0 to 40% aqueous ethanol solution without dissolving the complex (solution A).
  • Cationic lipids and / or cationic lipids other than the cationic lipid of the present invention are dissolved in an aqueous ethanol solution (liquid B) and mixed in equal amounts or in a volume ratio of 1: 1 to 7: 3.
  • the composition containing the nucleic acid and the cationic lipid can also be obtained by adding water appropriately.
  • the composition is preferably a composition containing a complex of a cationic lipid and a nucleic acid and a lipid membrane encapsulating the complex, or consists of a lipid monolayer containing the nucleic acid and the cationic lipid.
  • the lipid membrane in these cases may be a lipid monolayer (lipid monomolecular membrane) or a lipid bilayer membrane (lipid bimolecular membrane).
  • the liposome in the complex of the nucleic acid of the present disclosure and the liposome is preferably a liposome whose size is adjusted in advance to an average particle size of 10 nm to 400 nm, more preferably 20 nm to 110 nm, and further preferably 30 nm to 80 nm.
  • the complex and / or lipid membrane may contain a neutral lipid and / or a polymer.
  • the solution A may have an ethanol concentration of 20 to 70% as long as a complex of liposomes and the nucleic acid can be formed.
  • liquid A and liquid B instead of mixing equal amounts of liquid A and liquid B, mix them at a ratio that will result in an ethanol concentration that does not dissolve the complex after mixing liquid A and liquid B, and does not dissolve the cationic lipids in liquid B. Also good. Instead of mixing the A solution and the B solution in such a ratio that preferably the complex does not dissolve, the cationic lipid in the B solution does not dissolve, and the ethanol concentration is 30 to 60% ethanol aqueous solution. Alternatively, after mixing liquid A and liquid B, mix the liquid A and liquid B at a ratio that gives an ethanol concentration that does not dissolve the complex, and then add water to add the cationic lipid in liquid B. It is also possible to make the ethanol concentration at which no dissolution occurs.
  • the complex of a nucleic acid and a liposome in the A liquid of the present disclosure is prepared by mixing a liquid A and a B liquid, and further adding water appropriately, and then a membrane composed of a lipid monolayer containing a cationic lipid ( The morphology is changed to a complex of reverse micelle) and nucleic acid.
  • the composition containing the nucleic acid and the cationic lipid obtained by the production method of the present disclosure is preferably a composition containing a complex of a cationic lipid and a nucleic acid and a lipid membrane encapsulating the complex.
  • composition comprising a membrane (reverse micelle) composed of a lipid monolayer containing a cationic lipid and a nucleic acid, and a lipid membrane encapsulating the complex, the composition containing a cationic lipid in the lipid membrane And its manufacturability (yield and / or uniformity) is excellent.
  • a membrane reverse micelle
  • the total number of molecules of the cationic lipid of the present invention in the complex is preferably 0.5 to 4 times, more preferably 1.5 to 3.5 times the number of phosphorus atoms of the nucleic acid. Is more preferably 2 to 3 times. Further, the total number of molecules of the cationic lipid of the present invention and of the cationic lipid other than the cationic lipid of the present invention in the complex is preferably 0.5 to 4 times the number of phosphorus atoms of the nucleic acid. The ratio is more preferably 1.5 to 3.5 times, and even more preferably 2 to 3 times.
  • the total number of molecules of the cationic lipid of the present invention in the composition containing the complex and the lipid membrane encapsulating the complex is 1 to 10 relative to the number of phosphorus atoms of the nucleic acid. Is preferably 2.5 times, more preferably 2.5 to 9 times, and even more preferably 3.5 to 8 times.
  • the total number of molecules of the cationic lipid of the present invention and of the cationic lipid other than the cationic lipid of the present invention in the composition is preferably 1 to 10 times the number of phosphorus atoms of the nucleic acid. 2.5 to 9 times is more preferable, and 3.5 to 8 times is more preferable.
  • the neutral lipid may be any of simple lipids, complex lipids or derived lipids, and examples thereof include, but are not limited to, phospholipids, glyceroglycolipids, sphingoglycolipids, sphingoids, and sterols.
  • the total number of neutral lipid molecules is based on the total number of cationic lipid molecules of the present invention and cationic lipids other than the cationic lipids of the present invention.
  • the ratio is preferably 0.1 to 2 times, more preferably 0.2 to 1.5 times, and still more preferably 0.3 to 1.2 times.
  • Each of the compositions of the present invention may contain a neutral lipid in a complex, may be contained in a lipid membrane encapsulating the complex, or at least contained in a lipid membrane encapsulating the complex. More preferably, it is contained in both the complex and the lipid membrane encapsulating the complex.
  • phospholipids in neutral lipids include phosphatidylcholine (specifically soybean phosphatidylcholine, egg yolk phosphatidylcholine (EPC), distearoylphosphatidylcholine (DSPC), dipalmitoylphosphatidylcholine (DPPC), palmitoyloleoylphosphatidylcholine (POPC), dimyristoylphosphatidylcholine).
  • EPC egg yolk phosphatidylcholine
  • DSPC distearoylphosphatidylcholine
  • DPPC dipalmitoylphosphatidylcholine
  • POPC palmitoyloleoylphosphatidylcholine
  • dimyristoylphosphatidylcholine dimyristoylphosphatidylcholine
  • DMPC dioleoylphosphatidylcholine
  • DOPC dioleoylphosphatidylcholine
  • phosphatidylethanolamine specifically distearoyl phosphatidylethanolamine (DSPE), dipalmitoyl phosphatidylethanolamine (DPPE), dioleoylphosphatidylethanolamine (DOPE)), Dimyristoylphosphoethanolamine (DMPE), 16-0-monomethyl PE, 16-0-dimethyl PE, 18-1-trans PE, palmitoyl oleoyl-phosphatidylethanolamine ( POPE), 1 -stearoyl-2-oleoyl-phosphatidylethanolamine (SOPE), etc.), glycerophospholipids (specifically phosphatidylserine, phosphatidic acid, phosphatidylglycerol, phosphatidylinositol, palmitoyloleoylphosphatidylglycerol (PO
  • Examples of the glyceroglycolipid in the neutral lipid include sulfoxyribosyl glyceride, diglycosyl diglyceride, digalactosyl diglyceride, galactosyl diglyceride, glycosyl diglyceride and the like.
  • glycosphingolipid in the neutral lipid examples include galactosyl cerebroside, lactosyl cerebroside, ganglioside and the like.
  • Examples of the sphingoid in the neutral lipid include sphingan, icosasphingan, sphingosine, and derivatives thereof.
  • Derivatives include, for example, —NH 2 such as sphingan, icosasphingan, or sphingosine —NHCO (CH 2 ) xCH 3 (wherein x is an integer of 0 to 18, among which 6, 12 or 18 is preferred) And the like converted to.
  • sterols in neutral lipids include cholesterol, dihydrocholesterol, lanosterol, ⁇ -sitosterol, campesterol, stigmasterol, brassicasterol, ergocasterol, fucosterol or 3 ⁇ - [N- (N ', N'-dimethyl Aminoethyl) carbamoyl] cholesterol (DC-Chol) and the like.
  • macromolecules include proteins, albumin, dextran, polyfect, chitosan, dextran sulfate, such as poly-L-lysine, polyethyleneimine, polyaspartic acid, styrene maleic acid copolymer, isopropylacrylamide-acrylpyrrolidone copolymer
  • examples thereof include a polymer, a micelle composed of one or more of polymers such as polyethylene glycol-modified dendrimer, polylactic acid, polylactic acid polyglycolic acid or polyethylene glycolated polylactic acid, or a salt thereof.
  • polymer salts include, for example, metal salts, ammonium salts, acid addition salts, organic amine addition salts, amino acid addition salts, and the like.
  • the metal salt include alkali metal salts such as lithium salt, sodium salt and potassium salt, alkaline earth metal salts such as magnesium salt and calcium salt, aluminum salt and zinc salt.
  • an ammonium salt salts, such as ammonium or tetramethylammonium, are mentioned, for example.
  • acid addition salts include inorganic acid salts such as hydrochloride, sulfate, nitrate or phosphate, and organic acid salts such as acetate, maleate, fumarate or citrate.
  • the organic amine addition salt include addition salts such as morpholine and piperidine.
  • amino acid addition salts include addition salts such as glycine, phenylalanine, aspartic acid, glutamic acid or lysine.
  • any of the compositions of the present invention preferably contains a lipid derivative or fatty acid derivative of one or more substances selected from, for example, sugars, peptides, nucleic acids, and water-soluble polymers, or surfactants, etc. May be contained in the lipid membrane encapsulating the complex, and it is more preferred that both the complex and the lipid membrane encapsulating the complex are contained.
  • composition of the present invention contains a lipid derivative or fatty acid derivative of one or more substances selected from sugars, peptides, nucleic acids, and water-soluble polymers, they are selected from sugars, peptides, nucleic acids, and water-soluble polymers.
  • the total number of lipid derivatives and fatty acid derivative molecules of one or more substances is preferably 0.01 to 0.3 times the total number of cationic lipid molecules of the present invention and cationic lipids other than the cationic lipids of the present invention.
  • the ratio is more preferably 0.02 to 0.25 times, and further preferably 0.03 to 0.15 times.
  • a lipid derivative or fatty acid derivative of one or more substances selected from sugars, peptides, nucleic acids, and water-soluble polymers, or a surfactant is a part of the molecule and other components of the composition such as hydrophobic affinity, electrostatic It is a substance with a two-sided property, which has the property of binding by mechanical interaction, etc., and the other part has the property of binding to the solvent at the time of production of the composition by, for example, hydrophilic affinity, electrostatic interaction, etc. Is preferred.
  • lipid derivatives or fatty acid derivatives of sugars, peptides, or nucleic acids include sugars such as sucrose, sorbitol, and lactose, such as casein-derived peptides, egg white-derived peptides, soybean-derived peptides, peptides such as glutathione, or DNA, RNA, plasmids, etc.
  • Nucleic acids such as siRNA and ODN and neutral lipids listed in the definition of the composition or the cationic lipid of the present invention or fatty acids such as stearic acid, palmitic acid, myristic acid, lauric acid, etc. And the like.
  • examples of the sugar lipid derivative or fatty acid derivative include glyceroglycolipid and glycosphingolipid mentioned in the definition of the composition.
  • water-soluble polymer lipid derivative or fatty acid derivative examples include polyethylene glycol, polyglycerin, polyethyleneimine, polyvinyl alcohol, polyacrylic acid, polyacrylamide, oligosaccharide, dextrin, water-soluble cellulose, dextran, chondroitin sulfate, polyglycerin, Chitosan, polyvinylpyrrolidone, polyaspartic acid amide, poly-L-lysine, mannan, pullulan, oligoglycerol and the like or their derivatives and the neutral lipids mentioned in the definition of the composition or the cationic lipid of the present invention, Or, for example, those formed by bonding with fatty acids such as stearic acid, palmitic acid, myristic acid or lauric acid, salts thereof, and the like, more preferably lipid inducers such as polyethylene glycol or polyglycerin. Include body or fatty acid derivatives and their salts, more preferable example is a lipid derivative
  • Examples of lipid derivatives or fatty acid derivatives of polyethylene glycol include polyethylene glycolated lipids [specifically, polyethylene glycol-phosphatidylethanolamine (more specifically, 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine- N- [methoxy (polyethylene glycol) -2000] (PEG-DSPE), 1,2-dimyristoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine-N- [methoxy (polyethylene glycol) -2000] (PEG-DMPE) Etc.), polyoxyethylene hydrogenated castor oil 60, Cremophor EL, etc.], polyethylene glycol sorbitan fatty acid esters (specifically polyoxyethylene sorbitan monooleate) or polyethylene glycol fatty acid esters, etc. More preferably, a polyethylene glycolated lipid is mentioned.
  • lipid derivative or fatty acid derivative of polyglycerin examples include polyglycerinized lipid (specifically polyglycerin-phosphatidylethanolamine and the like) or polyglycerin fatty acid esters, and more preferably polyglycerinized lipid. It is done.
  • surfactant examples include polyoxyethylene sorbitan monooleate (specifically, polysorbate 80), polyoxyethylene polyoxypropylene glycol (specifically, Pluronic F68), sorbitan fatty acid ester (specifically, sorbitan) Monolaurate, sorbitan monooleate, etc.), polyoxyethylene derivatives (specifically polyoxyethylene hydrogenated castor oil 60, polyoxyethylene lauryl alcohol, etc.), glycerin fatty acid ester or polyethylene glycol alkyl ether, etc. are preferred, Examples thereof include polyoxyethylene polyoxypropylene glycol, glycerin fatty acid ester or polyethylene glycol alkyl ether.
  • the complex and lipid membrane in the composition of the present invention can optionally be subjected to surface modification with a water-soluble polymer, for example [Radics, edited by F. Martin, “ Stealth Liposomes "(USA), CRC Press Inc, 1995, p. 93-102].
  • water-soluble polymers that can be used for surface modification include polyethylene glycol, polyglycerin, polyethyleneimine, polyvinyl alcohol, polyacrylic acid, polyacrylamide, oligosaccharide, dextrin, water-soluble cellulose, dextran, chondroitin sulfate, and polyglycerin.
  • lipid derivative or fatty acid derivative (as defined above) of one or more substances selected from sugars, peptides, nucleic acids, and water-soluble polymers can be used.
  • the complex and the lipid membrane in the composition of the present invention contain a lipid derivative or fatty acid derivative of one or more substances selected from sugar, peptide, nucleic acid and water-soluble polymer, or a surfactant.
  • a lipid derivative or fatty acid derivative of one or more substances selected from sugar, peptide, nucleic acid and water-soluble polymer, or a surfactant selected from sugar, peptide, nucleic acid and water-soluble polymer, or a surfactant.
  • the targeting ligand can optionally be directly bound to the surface of the composition of the present invention by covalently binding to the polar head residue of the lipid component of the composition of the present invention (WO 2006). / 116107).
  • the average particle size of the complex in the composition of the present invention or the lipid membrane encapsulating the complex can be freely selected as desired, but the average particle size described below is preferred.
  • a method for adjusting the average particle size for example, an extrusion method, a method of mechanically crushing large multilamellar liposomes (MLV) or the like (specifically using a manton gourin, a microfluidizer, etc.) [Müller (RH Muller, S. Benita, B. Bohm, “Emulsion and Nanosuspensions for the Formulation of Poorly Soluble Drugs) ”, Scientific Publishers Stuttgart, 1998, p.267-294].
  • the average size of the composite in the composition of the present invention is preferably about 5 nm to 200 nm, more preferably about 20 nm to 150 nm, and further preferably about 30 nm to 100 nm.
  • the size of the composition of the present invention is preferably about 10 nm to 300 nm, more preferably about 30 nm to 200 nm, and more preferably about 50 nm to 150 nm. Is more preferable.
  • the average particle size of the complex in the composition of the present invention or the lipid membrane encapsulating the complex can be measured, for example, by a dynamic light scattering method.
  • the nucleic acid in the composition of the present invention can be introduced into cells by introducing the composition of the present invention into mammalian cells.
  • the introduction of the composition of the present invention into mammalian cells in vivo may be performed according to known transfection procedures that can be performed in vivo.
  • the composition of the present invention is intravenously administered to a mammal, including a human, so that the composition is delivered to, for example, a tumor or an inflamed organ or site, and the cells of the delivery organ or site are contained in the composition of the present invention.
  • the organ or site where the tumor or inflammation has occurred is not particularly limited, and examples thereof include stomach, large intestine, liver, lung, spleen, pancreas, kidney, bladder, skin, blood vessel, and eyeball.
  • composition of the present invention is intravenously administered to mammals including humans, and is delivered to, for example, the liver, lung, spleen and / or kidney, and the composition of the present invention is contained in the cells of the delivery organ or site.
  • Liver, lung, spleen and / or kidney cells can be normal cells, cells associated with tumors or inflammation or cells associated with other diseases.
  • the nucleic acid in the composition of the present invention is a nucleic acid having an inhibitory action on the expression of a target gene using RNA interference (RNAi), the nucleic acid that suppresses the expression of the target gene in a mammalian cell in vivo, etc. Can be introduced, and the expression of the target gene can be suppressed.
  • RNAi RNA interference
  • the administration subject is preferably a human.
  • the target gene in the present invention is a gene expressed in, for example, the liver, lung, kidney or spleen, preferably a gene expressed in the liver
  • the composition of the present invention is related to the liver, lung, kidney or spleen. It can be used as a therapeutic or prophylactic agent for diseases, preferably as a therapeutic or prophylactic agent for diseases related to the liver. That is, the present invention also provides a method for treating a disease associated with the liver, lung, kidney or spleen, wherein the composition of the present invention described above is administered to a mammal.
  • the administration subject is preferably a person, more preferably a person suffering from a disease related to the liver, lung, kidney or spleen.
  • composition of the present invention is used as a tool for verifying the effectiveness of suppressing a target gene in an in vivo drug efficacy evaluation model for a therapeutic or prophylactic agent for diseases related to liver, lung, kidney or spleen. It can also be used.
  • composition of the present invention for example, stabilizes the nucleic acid in biological components such as blood components (for example, blood, digestive tract, etc.), reduces side effects, or accumulates drugs in tissues or organs containing target gene expression sites. It can also be used as a preparation for the purpose of increasing the amount.
  • composition of the present invention is used as a therapeutic or prophylactic agent for pharmaceutical diseases such as diseases related to liver, lung, kidney or spleen
  • the most effective route for treatment is used.
  • parenteral or oral administration such as buccal, intratracheal, rectal, subcutaneous, intramuscular or intravenous can be mentioned, preferably intravenous or intramuscular administration can be mentioned, and more preferred Includes intravenous administration.
  • the dose varies depending on the disease state, age, administration route, etc. of the administration subject, but may be administered so that the daily dose converted to nucleic acid is about 0.1 ⁇ g to 1000 mg, for example.
  • an injection can be mentioned, and a dispersion of the composition prepared by the above-described method can be used as it is in the form of an injection, for example.
  • the dispersion can be used after removing the solvent, for example, by filtration, centrifugation, etc., or the dispersion can be used after lyophilization, and / or an excipient such as mannitol, lactose, trehalose, maltose or glycine.
  • the added dispersion can be lyophilized for use.
  • an injection for example, water, acids, alkalis, various buffers, physiological saline or amino acid infusions, etc. are mixed with the dispersion of the composition or the composition from which the solvent is removed or lyophilized. It is preferable to prepare an agent.
  • an injection can be prepared by adding an antioxidant such as citric acid, ascorbic acid, cysteine or EDTA or an isotonic agent such as glycerin, glucose or sodium chloride.
  • an antioxidant such as citric acid, ascorbic acid, cysteine or EDTA or an isotonic agent such as glycerin, glucose or sodium chloride.
  • it can also be cryopreserved by adding a cryopreservation agent such as glycerin.
  • Reference example 1 2,2-Bis [(9Z, 12Z) -octadeca-9,12-dien-1-yl] propane-1,3-diol (Compound IIc-1) Dimethyl malonate (Tokyo Chemical Industry Co., Ltd., 0.50 g, 3.78 mmol) was dissolved in tetrahydrofuran (20 mL), and (9Z, 12Z) -octadeca-9,12-dienyl methanesulfonate (Newcheck Prep Inc.
  • the obtained residue was purified with a short column to obtain a crude product of dimethyl 2,2-bis [(9Z, 12Z) -octadeca-9,12-dien-1-yl] malonate.
  • the obtained crude product was dissolved in tetrahydrofuran (4 mL), lithium aluminum hydride (manufactured by Tokyo Chemical Industry Co., Ltd., 0.826 g, 21.8 mmol) was added under ice cooling, and the mixture was stirred for 1 hour. Water (0.75 mL), 15% aqueous sodium hydroxide solution (0.75 mL) and water (2.25 mL) were sequentially added to the reaction mixture to stop the reaction. The resulting insoluble material was removed by filtration.
  • trifluoromethanesulfonic anhydride manufactured by Nacalai Tesque, 0.855 mL, 5.24 mmol
  • water was added to the reaction mixture, and the mixture was extracted 3 times with heptane.
  • the organic layer was washed with an aqueous ammonium chloride solution and saturated brine, dried over anhydrous magnesium sulfate, and filtered.
  • Reference example 2 2,2-bis [(Z) -octadeca-9-en-1-yl] propane-1,3-diol (Compound IIc-2)
  • (Z) -octadeca-9-en-1-yl methanesulfonate (Nu-Chek Prep, Inc., 4.50 g, 13.0 mmol) was used to obtain Compound IIc-2 (1.06 g, yield 35%).
  • Reference example 3 2,2-Bis [(Z) -hexadec-9-en-1-yl] propane-1,3-diol (Compound IIc-3)
  • (Z) -hexadeca-9-en-1-yl methanesulfonate (Nu-Chek Prep, Inc., 5.00 g, 15.7 mmol) was used to obtain Compound IIc-3 (2.07 g, yield 59%).
  • Reference example 4 2,2-bis [(11Z, 14Z) -icosa-11,14-dien-1-yl] propane-1,3-diol (Compound IIc-4)
  • (11Z, 14Z) -icosa-11,14-dien-1-yl methanesulfonate (Nu -Chek Prep, Inc., 5.00 g, 13.4 mmol) was used to obtain compound IIc-4 (2.07 g, yield 59%).
  • the obtained crude product was dissolved in tetrahydrofuran (8 mL), lithium aluminum hydride (0.239 g, 6.30 mmol) was added under ice cooling, and the mixture was stirred at room temperature for 1 hr. Water (0.24 mL), 15% aqueous sodium hydroxide solution (0.24 mL), and water (0.72 mL) were sequentially added to the reaction mixture to stop the reaction. The resulting insoluble material was removed by filtration.
  • a composition was prepared as follows.
  • the nucleic acid used is the sense strand [5'-rGrGrAfUfCrAfUfCfUfCrArArGfUfCfUfUrAfCdTdT-3 '
  • the ribose is a phosphorothioate bond between deoxyribose that binds to the 20th base and deoxyribose that binds to the 21st base from the 5 'end toward the 3' end)) [5'-rGfUrArArGrAfCfUfUrGrArGrAfUfCfCdTdT-3 ' From the side toward the 3 ′ end side, the bond between deoxyribose that binds to the 20th base and deoxyribose that binds to the 21st base is a phosphorothioate bond)]
  • the nucleic acid was prepared to 24 mg / mL with distilled water.
  • f7 siRNA-1 solution 3: 1, and further mixed with 3 times the amount of distilled water.
  • a dispersion of Compound 1 / PEG-DMPE Na / f7 siRNA-1 complex was prepared.
  • lipid membrane component solution was mixed with the obtained compound 1 / PEG-DMPE Na / f7 siRN-1 complex dispersion at a ratio of 1: 1, and several times the amount of distilled water was added.
  • the obtained crude preparation was concentrated using Amicon Ultra (manufactured by Millipore), diluted with physiological saline, and filtered in a clean bench using a 0.2 ⁇ m filter (manufactured by Toyo Roshi Kaisha, Ltd.).
  • the siRNA concentration of the obtained composition was measured, and diluted with physiological saline in accordance with the administration concentration to obtain a preparation (composition containing compound 1 and f7 siRNA-1).
  • Example 21 Using compounds 2 and 4-7, which are the compounds obtained in Examples 2 and 4-7, respectively, in the same manner as in Example 21 (containing compounds 2 and 4-7, respectively, and f7 siRNA-1) Composition) was obtained.
  • the average particle size of the preparations (compositions) obtained in Examples 21 and 22 was measured with a particle size measuring apparatus. The results are shown in Table 4.
  • the f7 siRNA-1 used in Example 21 has a sense strand of 5′- CCCUGUCUUGGUUUCAAUUAA -3 ′ (all the sugars that bind to the base are ribose), and the antisense strand is 5′- AAUUGAAACCAAGACAGGGUG-3 ′ (bonded to the base) All the sugars to be used were ribose, and the 5 ′ end was modified with a phosphate group.) The preparation was prepared in the same manner as in Example 21, except that it was changed to f7 siRNA-2.
  • Comparative Example 1 1-methyl-3,3-bis ⁇ [(9Z, 12Z) -octadeca-9,12-dien-1-yloxy] methyl ⁇ azetidine synthesized by a method according to the method described in Patent Document 3 A preparation was prepared in the same manner as in Example 23, except that Compound A) was used.
  • Example 23 The average particle size of the preparations (compositions) obtained in Example 23 and Comparative Example 1 was measured with a particle size measuring apparatus, and the results are shown in Table 5.
  • Test example 1 For each of the preparations obtained in Examples 21 and 22 (compositions containing each of compounds 1, 2, 4 to 7 and f7 siRNA-1), an in vivo drug efficacy evaluation test was performed by the following method. Each preparation was diluted with physiological saline in accordance with the test. After mice (Balb / c, obtained from Clea Japan) were acclimated and bred, each formulation was administered intravenously to mice at an siRNA concentration of 0.03 and / or 0.3 mg / kg. Blood was collected 48 hours after administration, and the collected blood was centrifuged at 8000 rpm for 8 minutes at 4 ° C. using a micro high-speed cooling centrifuge (TOMY MX305: manufactured by Tommy Seiko Co., Ltd.).
  • TOMY MX305 manufactured by Tommy Seiko Co., Ltd.
  • BIOPHEN VII kit (ANIARA cat #: A221304)
  • ARVO 405 nm
  • a calibration curve was created from the obtained absorbance, and the Factor VII protein concentration in plasma was calculated. The number of cases was 3 in each group. The results of the calculated Factor VII protein concentration in plasma are shown in FIG. 1 and FIG.
  • Test example 2 Test Example 2 was carried out in the same manner as in Test Example 1, except that the preparations obtained in Examples 21 and 22 were changed to the respective preparations obtained in Example 23 and Comparative Example 1. The calculated results of Factor VII protein concentration in plasma are shown in FIG.
  • compositions of the present invention can introduce a nucleic acid into a cell or the like, and the cationic lipid of the present invention facilitates delivery of the nucleic acid into a cell in vivo.
  • the nucleic acid can be easily introduced into a cell, for example.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)

Abstract

　本発明は、　式(I)　[式中、R1およびR2は、炭素数8～24のアルキル等であり、R3は、水素原子、炭素数1～3のアルキル、式(A) (式中、R4およびR5は、水素原子等であり、n3は2～6の整数である)、または式(B) (式中、R6およびR7は、水素原子等であり、n4は1～6の整数である)であり、　n1は0～4の整数であり、n2は1～4の整数である(但し、n1が0であり、n2が1である場合を除く)]で表されるカチオン性脂質、ならびに該カチオン性脂質および核酸を含有する組成物等を提供する。

Description

カチオン性脂質
　本発明は、核酸を、例えば、細胞内等に導入することを容易にするカチオン性脂質、該カチオン性脂質を含有する組成物等に関する。
　カチオン性脂質は、一つまたは複数の炭化水素基を含む脂質親和性領域と、少なくとも一つのプラスに帯電した極性ヘッドグループを含む親水性領域を有する両親媒性分子である。カチオン性脂質と核酸等の巨大分子が、総荷電としてプラスに帯電する複合体を形成することにより、核酸等の巨大分子が細胞の原形質膜を通過して細胞質に入りやすくなるため、カチオン性脂質は有用である。インビトロおよびインビボにおいて行うことのできるこのプロセスは、トランスフェクションとして知られている。
　特許文献1～4は、インビボにて核酸を細胞内に送達するために、および疾患の治療に好適な核酸-脂質粒子組成物に使用するために有用であるカチオン性脂質および該脂質を含む脂質粒子を開示している。特許文献1には、例えば、
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000007
2,2-ジリノレイル-4-(2-ジメチルアミノエチル)-[1,3]-ジオキソラン(2,2-dilinoleyl-4-(2-dimethylaminoethyl)-[1,3]-dioxolane; DLin-KC2-DMA)等、特許文献2には、例えば、
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000008
(6Z,9Z,28Z,31Z)-ヘプタトリアコンタ-6,9,28,31-テトラエン-19-イル 4-(ジメチルアミノ)ブタノアート((6Z,9Z,28Z,31Z)-heptatriaconta-6,9,28,31-tetraen-19-yl 4-(dimethylamino)butanoate; DLin-MC3-DMA)等、特許文献3には、例えば、
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000009
　1-メチル-3，3-ビス{[(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イルオキシ]メチル}アゼチジン (1-methyl-3,3-bis{[(9Z,12Z)-octadeca-9,12-diene-1-yloxy]methyl}azetidine)等、特許文献4には、例えば
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000010
　2-(1-メチルピロリジン-2-イル)エチル ジ[(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニル]カルバマート(2-(1-methylpyrrolidin-2-yl)ethyl di[(9Z,12Z)-octadeca-9,12-dienyl]carbamate)等のカチオン性脂質が開示されている。
国際公開第2010/042877号 国際公開第2010/054401号 国際公開第2012/108397号 国際公開第2014/007398号
　本発明の目的は、例えば、細胞内等に核酸を導入することを容易にするカチオン性脂質、該カチオン性脂質を含有する組成物等を提供することにある。
　本発明は以下の(1)～(35)に関する。
　(1) 式(I)
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000011
　[式中、R1およびR2は、同一または異なって、炭素数8～24の直鎖状または分枝状のアルキル、アルケニルもしくはアルキニル、またはC7-C20アルキルオキシC1-C3アルキルもしくはC7-C20アルキニルオキシC1-C3アルキルであり、
　R3は、水素原子、炭素数1～3のアルキル、式(A)
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000012
　(式中、R4およびR5は、同一または異なって、水素原子もしくは炭素数1～3のアルキルであるか、またはR4およびR5が結合する窒素原子と一緒になって炭素数2～6の含窒素複素環を形成してもよく、n3は2～6の整数である)、または式(B)
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000013
　(式中、R6およびR7は、同一または異なって、水素原子もしくは炭素数1～3のアルキルであるか、またはR6およびR7が結合する窒素原子と一緒になって炭素数2～6の含窒素複素環を形成してもよく、n4は1～6の整数である)であり、
　n1は0～4の整数であり、n2は1～4の整数である(但し、n1が0であり、n2が1である場合を除く)]で表されるカチオン性脂質。
　(2) R1およびR2が、同一または異なって、テトラデシル、ヘキサデシル、(Z)-テトラデカ-9-エニル、(Z)-ヘキサデカ-9-エニル、(Z)-オクタデカ-6-エニル、(Z)-オクタデカ-9-エニル、(E)-オクタデカ-9-エニル、(Z)-オクタデカ-11-エニル、(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニル、(9Z,12Z,15Z)-オクタデカ-9,12,15-トリエニル、(Z)-イコサ-11-エニル、(11Z,14Z)-イコサ-11,14-ジエニルおよび(Z)-ドコサ-13-エニルからなる群から選ばれる、前記(1)記載のカチオン性脂質。
　(3) R1およびR2が、同一または異なって、(Z)-ヘキサデカ-9-エニル、(Z)-オクタデカ-9-エニル、(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニルおよび(11Z,14Z)-イコサ-11,14-ジエニルからなる群から選ばれる、前記(1)記載のカチオン性脂質。
　(4) R3が、炭素数1～3のアルキルまたは式(A)である、前記(1)～(3)のいずれかに記載のカチオン性脂質。
　(5) R1およびR2が同一である、前記(1)～(4)のいずれかに記載のカチオン性脂質。
　(6) n1が1であり、n2が1～3の整数である、前記(1)～(5)のいずれかに記載のカチオン性脂質。
　(7) n1およびn2がともに1である、前記(1)～(5)のいずれかに記載のカチオン性脂質。
　(8) 式(I’)
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000014
　[式中、R1’およびR2’は、同一または異なって、炭素数8～24の直鎖状または分枝状のアルキル、アルケニルもしくはアルキニル、またはC7-C20アルキルオキシC1-C3アルキル、C7-C20アルケニルオキシC1-C3アルキルもしくはC7-C20アルキニルオキシC1-C3アルキルであり、
　R3は、水素原子、炭素数1～3のアルキル、式(A)
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000015
　(式中、R4およびR5は、同一または異なって、水素原子もしくは炭素数1～3のアルキルであるか、またはR4およびR5が結合する窒素原子と一緒になって炭素数2～6の含窒素複素環を形成してもよく、n3は2～6の整数である)、または式(B)
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000016
　(式中、R6およびR7は、同一または異なって、水素原子もしくは炭素数1～3のアルキルであるか、またはR6およびR7が結合する窒素原子と一緒になって炭素数2～6の含窒素複素環を形成してもよく、n4は1～6の整数である)であり、
　n1は0～4の整数であり、n2は1～4の整数である(但し、n1が0であり、n2が1である場合を除く)]で表されるカチオン性脂質。
　(9) R1’およびR2’が、同一または異なって、テトラデシル、ヘキサデシル、(Z)-テトラデカ-9-エニル、(Z)-ヘキサデカ-9-エニル、(Z)-オクタデカ-6-エニル、(Z)-オクタデカ-9-エニル、(E)-オクタデカ-9-エニル、(Z)-オクタデカ-11-エニル、(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニル、(9Z,12Z,15Z)-オクタデカ-9,12,15-トリエニル、(Z)-イコサ-11-エニル、(11Z,14Z)-イコサ-11,14-ジエニルおよび(Z)-ドコサ-13-エニルからなる群から選ばれる、前記(8)記載のカチオン性脂質。
　(10) R1’およびR2’が、同一または異なって、(Z)-ヘキサデカ-9-エニル、(Z)-オクタデカ-9-エニル、(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニルおよび(11Z,14Z)-イコサ-11,14-ジエニルからなる群から選ばれる、前記(8)記載のカチオン性脂質。
　(11) R3が、炭素数1～3のアルキルまたは式(A)である、前記(8)～(10)のいずれかに記載のカチオン性脂質。
　(12) R1’およびR2’が同一である、前記(8)～(11)のいずれかに記載のカチオン性脂質。
　(13) n1が1であり、n2が1～3の整数である、前記(8)～(12)のいずれかに記載のカチオン性脂質。
　(14) n1およびn2がともに1である、前記(8)～(12)のいずれかに記載のカチオン性脂質。
　(15) 式(I’’)
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000017
 [式中、R1’およびR2’は、同一または異なって、炭素数8～24の直鎖状または分枝状のアルキル、アルケニルもしくはアルキニル、またはC7-C20アルキルオキシC1-C3アルキル、C7-C20アルケニルオキシC1-C3アルキルもしくはC7-C20アルキニルオキシC1-C3アルキルであり、
　R3’は、水素原子、炭素数1～3のアルキル、ヒドロキシC2-C4アルキル、C1-C3ジアルキルアミノC2-C4アルキル、式(A)
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000018
　(式中、R4およびR5は、同一または異なって、水素原子もしくは炭素数1～3のアルキルであるか、またはR4およびR5が結合する窒素原子と一緒になって炭素数2～6の含窒素複素環を形成してもよく、n3は2～6の整数である)、または式(B)
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000019
　(式中、R6およびR7は、同一または異なって、水素原子もしくは炭素数1～3のアルキルであるか、またはR6およびR7が結合する窒素原子と一緒になって炭素数2～6の含窒素複素環を形成してもよく、n4は1～6の整数である)であり、
　n1は0～4の整数であり、n2は1～4の整数であり(但し、n1が0であり、n2が1である場合を除く)、
　Z1は、結合する炭素ごとにそれぞれ独立して、水素原子または炭素数1～3のアルキルであり、
　Z２は、結合する炭素ごとにそれぞれ独立して、水素原子または炭素数1～3のアルキルである]で表わされるカチオン性脂質。
　(16) R1’およびR2’が、同一または異なって、テトラデシル、ヘキサデシル、(Z)-テトラデカ-9-エニル、(Z)-ヘキサデカ-9-エニル、(Z)-オクタデカ-6-エニル、(Z)-オクタデカ-9-エニル、(E)-オクタデカ-9-エニル、(Z)-オクタデカ-11-エニル、(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニル、(9Z,12Z,15Z)-オクタデカ-9,12,15-トリエニル、(Z)-イコサ-11-エニル、(11Z,14Z)-イコサ-11,14-ジエニルおよび(Z)-ドコサ-13-エニルからなる群から選ばれる、前記(15)記載のカチオン性脂質。
　(17) R1’およびR2’が、同一または異なって、(Z)-ヘキサデカ-9-エニル、(Z)-オクタデカ-9-エニル、(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニルおよび(11Z,14Z)-イコサ-11,14-ジエニルからなる群から選ばれる、前記(15)記載のカチオン性脂質。
　(18) R3’が、炭素数1～3のアルキルまたは式(A)である、前記(15)～(17)のいずれかに記載のカチオン性脂質。
　(19) R1’およびR2’が同一である、前記(15)～(18)のいずれかに記載のカチオン性脂質。
　(20) n1が1であり、n2が1～3の整数である、前記(15)～(19)のいずれかに記載のカチオン性脂質。
　(21) n1およびn2がともに1である、前記(15)～(19)のいずれかに記載のカチオン性脂質。
　(22) 前記(1)～(21)のいずれかに記載のカチオン性脂質および核酸を含有する組成物。
　(23) 該カチオン性脂質と該核酸とが複合体を形成しているか、または該カチオン性脂質に中性脂質および/もしくは高分子を組み合わせたものと該核酸とが複合体を形成している、前記(22)記載の組成物。
　(24) 該カチオン性脂質と該核酸とが複合体を形成しているか、または該カチオン性脂質に中性脂質および/もしくは高分子を組み合わせたものと該核酸とが複合体を形成しており、該複合体を封入する脂質膜を含有する、前記(22)記載の組成物。
　(25)核酸が、RNA干渉(RNAi)を利用した標的遺伝子の発現抑制作用を有する核酸である、前記(22)～(24)のいずれかに記載の組成物。
　(26) 標的遺伝子が、肝臓、肺、腎臓または脾臓において発現する遺伝子である、前記(25)記載の組成物。
　(27) 前記(22)～(26)のいずれかに記載の組成物を用いて該核酸を細胞内に導入する方法。
　(28) 細胞が、哺乳動物の肝臓、肺、腎臓または脾臓にある細胞である、前記(27)記載の方法。
　(29) 細胞内に導入する方法が、該組成物の静脈内投与によって細胞内に導入する方法である、前記(27)または(28)記載の方法。
　(30) 前記(26)記載の組成物を哺乳動物に投与する工程を含む、肝臓、肺、腎臓または脾臓に関連する疾患の治療方法。
　(31) 投与する方法が、静脈内投与である、前記(30)記載の方法。
　(32) 前記(25)記載の組成物を含む、疾患の治療に用いるための医薬。
　(33) 静脈内投与用である、前記(32)記載の医薬。
　(34) 前記(26)記載の組成物を含む、肝臓、肺、腎臓または脾臓に関連する疾患の治療剤。
　(35) 静脈内投与用である、前記(34)記載の肝臓、肺、腎臓または脾臓に関連する疾患の治療剤。
　本発明のカチオン性脂質および核酸を含有する組成物を、哺乳動物等に投与することにより、該核酸を、例えば細胞内等に容易に導入することができる。
実施例21および22で得られた製剤(化合物1、2、4～7のそれぞれを用いた製剤)を、それぞれマウスにsiRNA 0.03mg/kg相当量投与してから48時間後の血漿中Factor VIIタンパクの濃度を示す。縦軸は生理食塩水投与群を100とした場合の血漿中Factor VIIタンパクの濃度の相対値を示す。横軸は化合物番号を示す。 実施例22で得られた製剤(化合物2、4のそれぞれを用いた製剤)を、それぞれマウスにsiRNA 0.3mg/kg相当量投与してから48時間後の血漿中Factor VIIタンパクの濃度を示す。縦軸は生理食塩水投与群を100とした場合の血漿中Factor VIIタンパクの濃度の相対値を示す。横軸は化合物番号を示す。 実施例23で得られた製剤（化合物1を用いた製剤)および比較例1で得られた製剤（化合物Aを用いた製剤）を、それぞれマウスにsiRNA 0.3mg/kgと0.03mg/kg相当量投与してから48時間後の血漿中Factor VIIタンパクの濃度を示す。縦軸は生理食塩水投与群を100とした場合の血漿中Factor VIIタンパクの濃度の相対値を示す。横軸は化合物番号を示す。
　本発明のカチオン性脂質は、
　式(I)
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000020
 
　(式中、R1およびR2は、同一または異なって、炭素数8～24の直鎖状または分枝状のアルキル、アルケニルもしくはアルキニル、またはC7-C20アルキルオキシC1-C3アルキルもしくはC7-C20アルキニルオキシC1-C3アルキルであり、
　R3は、水素原子、炭素数1～3のアルキル、式(A)
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000021
(式中、R4およびR5は、同一または異なって、水素原子、炭素数1～3のアルキル、もしくはR4およびR5が結合する窒素原子と一緒になって炭素数2～6の含窒素複素環を形成してもよく、n3は2～6の整数である)、または式(B)
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000022
　(式中、R6およびR7は、同一または異なって、水素原子、炭素数1～3のアルキル、もしくはR6およびR7が結合する窒素原子と一緒になって炭素数2～6の含窒素複素環を形成してもよく、n4は1～6の整数である)であり、
　n1は0～4の整数であり、n2は1～4の整数である(但し、n1が0であり、n2が1である場合を除く)である)で表されるカチオン性脂質であるか、または
式(I’)
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000023
　[式中、R1’およびR2’は、同一または異なって、炭素数8～24の直鎖状または分枝状のアルキル、アルケニルもしくはアルキニル、またはC7-C20アルキルオキシC1-C3アルキル、C7-C20アルケニルオキシC1-C3アルキルもしくはC7-C20アルキニルオキシC1-C3アルキルであり、
　R3は、水素原子、炭素数1～3のアルキル、式(A)
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000024
　(式中、R4およびR5は、同一または異なって、水素原子もしくは炭素数1～3のアルキルであるか、またはR4およびR5が結合する窒素原子と一緒になって炭素数2～6の含窒素複素環を形成してもよく、n3は2～6の整数である)、または式(B)
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000025
　(式中、R6およびR7は、同一または異なって、水素原子もしくは炭素数1～3のアルキルであるか、またはR6およびR7が結合する窒素原子と一緒になって炭素数2～6の含窒素複素環を形成してもよく、n4は1～6の整数である)であり、
　n1は0～4の整数であり、n2は1～4の整数である(但し、n1が0であり、n2が1である場合を除く)]で表されるカチオン性脂質であるか、または
式(I’’)
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000026
 [式中、R1’およびR2’は、同一または異なって、炭素数8～24の直鎖状または分枝状のアルキル、アルケニルもしくはアルキニル、またはC7-C20アルキルオキシC1-C3アルキル、C7-C20アルケニルオキシC1-C3アルキルもしくはC7-C20アルキニルオキシC1-C3アルキルであり、
　R3’は、水素原子、炭素数1～3のアルキル、ヒドロキシC2-C4アルキル、C1-C3ジアルキルアミノC2-C4アルキル、式(A)
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000027
　(式中、R4およびR5は、同一または異なって、水素原子もしくは炭素数1～3のアルキルであるか、またはR4およびR5が結合する窒素原子と一緒になって炭素数2～6の含窒素複素環を形成してもよく、n3は2～6の整数である)、または式(B)
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000028
　(式中、R6およびR7は、同一または異なって、水素原子もしくは炭素数1～3のアルキルであるか、またはR6およびR7が結合する窒素原子と一緒になって炭素数2～6の含窒素複素環を形成してもよく、n4は1～6の整数である)であり、
　n1は0～4の整数であり、n2は1～4の整数であり(但し、n1が0であり、n2が1である場合を除く)、
　Z1は、結合する炭素ごとにそれぞれ独立して、水素原子または炭素数1～3のアルキルであり、
　Z２は、結合する炭素ごとにそれぞれ独立して、水素原子または炭素数1～3のアルキルである]で表わされるカチオン性脂質である。
　以下、式(I)で表される化合物を化合物(I)、式(I’)で表される化合物を化合物(I’)、式(I’’)で表わされる化合物を化合物(I’’)ということもある。他の式番号の化合物についても同様である。
　炭素数8～24の直鎖状または分枝状のアルキルとしては、例えばオクチル、デシル、ドデシル、トリデシル、テトラデシル、2,6,10-トリメチルウンデシル、ペンタデシル、3,7,11-トリメチルドデシル、ヘキサデシル、ヘプタデシル、オクタデシル、6,10,14-トリメチルペンタデカン-2-イル、ノナデシル、2,6,10,14-テトラメチルペンタデシル、イコシル、3,7,11,15-テトラメチルヘキサデシル、ヘニコシル、ドコシル、トリコシル、テトラコシル等が挙げられ、好ましくはデシル、ドデシル、テトラデシル、ヘキサデシル、オクタデシル、イコシル等が挙げられ、より好ましくはテトラデシル、ヘキサデシルが挙げられる。
　炭素数8～24の直鎖状または分枝状のアルケニルとしては、1以上の2重結合を含む炭素数8～24の直鎖状または分枝状のアルケニルであればよく、例えば(Z)-テトラデカ-9-エニル、(Z)-ヘキサデカ-9-エニル、(Z)-オクタデカ-6-エニル、(Z)-オクタデカ-9-エニル、(E)-オクタデカ-9-エニル、(Z)-オクタデカ-11-エニル、(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニル、(9Z,12Z,15Z)-オクタデカ-9,12,15-トリエニル、(Z)-イコサ-11-エニル、(11Z,14Z)-イコサ-11,14-ジエニル、3,7,11-トリメチルドデカ-2,6,10-トリエニル、3,7,11,15-テトラメチルヘキサデカ-2-エニル、(Z)-ドコサ-13-エニル等が挙げられ、好ましくは(Z)-テトラデカ-9-エニル、(Z)-ヘキサデカ-9-エニル、(Z)-オクタデカ-6-エニル、(Z)-オクタデカ-9-エニル、(E)-オクタデカ-9-エニル、(Z)-オクタデカ-11-エニル、(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニル、(9Z,12Z,15Z)-オクタデカ-9,12,15-トリエニル、(Z)-イコサ-11-エニル、(11Z,14Z)-イコサ-11,14-ジエニル、(Z)-ドコサ-13-エニル等が挙げられる。
　炭素数8～24の直鎖状または分枝状のアルキニルとしては、1以上の3重結合を含む炭素数8～24の直鎖状または分枝状のアルキニルであればよく、例えばドデカ-11-イニル、テトラデカ-6-イニル、ヘキサデカ-7-イニル、ヘキサデカ-5,7-ジイニル、オクタデカ-9-イニル等が挙げられる。
　C7-C20アルキルオキシC1-C3アルキルにおけるC7-C20アルキル部分としては、例えばヘプチル、オクチル、デシル、ドデシル、トリデシル、テトラデシル、2,6,10-トリメチルウンデシル、ペンタデシル、3,7,11-トリメチルドデシル、ヘキサデシル、ヘプタデシル、オクタデシル、6,10,14-トリメチルペンタデカン-2-イル、ノナデシル、2,6,10,14-テトラメチルペンタデシル、イコシル、3,7,11,15-テトラメチルヘキサデシル等が挙げられ、C1-C3アルキル部分としてはメチル、エチル、プロピル等に対応するアルキレンが挙げられる。
　C7-C20アルケニルオキシC1-C3アルキルにおけるC7-C20アルケニル部分としては、例えば(Z)-テトラデカ-9-エニル、(Z)-ヘキサデカ-9-エニル、(Z)-オクタデカ-6-エニル、(Z)-オクタデカ-9-エニル、(E)-オクタデカ-9-エニル、(Z)-オクタデカ-11-エニル、(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニル、(9Z,12Z,15Z)-オクタデカ-9,12,15-トリエニル、(Z)-イコサ-11-エニル、(11Z,14Z)-イコサ-11,14-ジエニル、3,7,11-トリメチルドデカ-2,6,10-トリエニル、3,7,11,15-テトラメチルヘキサデカ-2-エニル等が挙げられ、好ましくは(Z)-ヘキサデカ-9-エニル、(Z)-オクタデカ-6-エニル、(Z)-オクタデカ-9-エニル、(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニル、(Z)-イコサ-11-エニル、(11Z,14Z)-イコサ-11,14-ジエニル等が挙げられ、C1-C3アルキル部分としてはメチル、エチル、プロピル等に対応するアルキレンが挙げられる。
　C7-C20アルキニルオキシC1-C3アルキルにおけるC7-C20アルキニル部分としては、例えばドデカ-11-イニル、テトラデカ-6-イニル、ヘキサデカ-7-イニル、ヘキサデカ-5,7-ジイニル、オクタデカ-9-イニル等が挙げられ、C1-C3アルキル部分としてはメチル、エチル、プロピル等が挙げられる。
　また、本発明においては、炭素数8～24の直鎖状または分枝状のアルケニルの二重結合にメチレンビラジカルが形式的に付加したシクロプロパン環を有する基も、炭素数8～24の直鎖状または分枝状のアルケニルに包含される。さらに、C7-C20アルケニルオキシC1-C3アルキルにおけるC7-C20アルケニル部分についても同様である。例えば、(Z)-ヘキサデカ-9-エニル、(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニル、(8Z,11Z)-ヘプタデカ-8,11-ジエニルに対応する以下のシクロプロパン環を有する基
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000029
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000030
および
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000031
等が挙げられる。
　炭素数1～3のアルキルとしては、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、シクロプロピル等が挙げられる。
　ヒドロキシC2-C4アルキルにおけるC2-C4アルキル部分としては、エチル、プロピル、ブチル等に対応するアルキレンが挙げられる。
　C1-C3ジアルキルアミノC2-C4アルキルにおけるC1-C3アルキル部分としては、メチル、エチル、プロピル等が挙げられ、それらは同一でも異なっていてもよい。またC1-C3ジアルキルアミノC2-C4アルキルにおけるC2-C4アルキル部分としては、エチル、プロピル、ブチル等に対応するアルキレンが挙げられる。
　炭素数2～6の含窒素複素環としては、アジリジン環、アゼチジン環、ピロリジン環、ピペリジン環、ピペラジン環、アゼパン環等が挙げられる。
　なお、R1およびR2は、同一または異なって炭素数8～24の直鎖状または分枝状のアルキルもしくはアルケニル、またはC7-20アルキルオキシC1-C3アルキルであることがより好ましく、同一または異なって直鎖状の炭素数8～24のアルケニルであることがさらに好ましい。また、R1およびR2は、同一であることがより好ましく、その場合には、炭素数12～24の直鎖状または分枝状のアルキル、アルケニルもしくはアルキニルであることがより好ましく、炭素数12～24の直鎖状のアルケニルであることがさらに好ましい。またR1’およびR2’は、同一または異なって炭素数8～24の直鎖状または分枝状のアルキルもしくはアルケニル、またはC7-20アルキルオキシC1-C3アルキルもしくはC7-C20アルケニルオキシC1-C3アルキルであることがより好ましく、同一または異なって直鎖状の炭素数8～24のアルケニルであることがさらに好ましい。また、R1’およびR2’は、同一であることがより好ましく、その場合には、炭素数12～24の直鎖状または分枝状のアルキル、アルケニルもしくはアルキニルであることがより好ましく、炭素数12～24の直鎖状のアルケニルであることがさらに好ましい。
　R1およびR2ならびにR1’およびR2’が、異なる場合には、R1およびR1’が炭素数16～24の直鎖状または分枝状のアルキル、アルケニルもしくはアルキニルであり、R2およびR2’が炭素数8～12の直鎖状または分枝状のアルキル、アルケニルもしくはアルキニルであることも本発明の好ましい形態のひとつである。この場合、R1およびR1’が炭素数16～24の直鎖状のアルケニルであり、R2およびR2’が炭素数8～12の直鎖状のアルキルであることがより好ましく、R1およびR1’が(Z)-オクタデカ-9-エニルまたは(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニルであり、R2およびR2’がオクチル、デシルまたはドデシルであることが最も好ましい。
　R1およびR2ならびにR1’およびR2’が、同一または異なって炭素数8～24の直鎖状もしくは分枝状のアルキルもしくはアルケニルである場合には、同一または異なってデシル、ドデシル、テトラデシル、ヘキサデシル、オクタデシル、イコシル、(Z)-テトラデカ-9-エニル、(Z)-ヘキサデカ-9-エニル、(Z)-オクタデカ-6-エニル、(Z)-オクタデカ-9-エニル、(E)-オクタデカ-9-エニル、(Z)-オクタデカ-11-エニル、(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニル、(9Z,12Z,15Z)-オクタデカ-9,12,15-トリエニル、(Z)-イコサ-11-エニル、(11Z,14Z)-イコサ-11,14-ジエニルまたは(Z)-ドコサ-13-エニルであることが好ましく、同一または異なってテトラデシル、ヘキサデシル、(Z)-テトラデカ-9-エニル、(Z)-ヘキサデカ-9-エニル、(Z)-オクタデカ-6-エニル、(Z)-オクタデカ-9-エニル、(E)-オクタデカ-9-エニル、(Z)-オクタデカ-11-エニル、(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニル、(9Z,12Z,15Z)-オクタデカ-9,12,15-トリエニル、(Z)-イコサ-11-エニル、(11Z,14Z)-イコサ-11,14-ジエニルまたは(Z)-ドコサ-13-エニルであることがより好ましい。
　R3およびR3’は、炭素数1～3のアルキル、または上記式(A)であることが好ましく、メチル、エチル、プロピルまたはシクロプロピルであることがより好ましく、メチルまたはエチルであることがさらに好ましく、メチルであることが最も好ましい。そしてR3が式(A)である場合、R4およびR5は、同一または異なって、水素原子、または炭素数1～3のアルキルであることが好ましく、R3が式(B)である場合、R6およびR7は、同一または異なって、水素原子、もしくは炭素数1～3のアルキルであることが好ましい。
　R４とR５が結合する窒素原子と一緒になって形成する、炭素数2～6の含窒素複素環として、好ましくはアゼチジン環、ピロリジン環、ピペリジン環、アゼパン環が挙げられる。
　なお、R4がR5と一緒になって炭素数2～6の含窒素複素環を形成しない場合には、R5はメチルまたはエチルであることが好ましく、メチルであることがより好ましく、R４とR5がそれぞれメチルであることが最も好ましい。また、R4がR5と一緒になって炭素数2～6の含窒素複素環を形成する場合には、ピロリジン環またはピペリジン環を形成することが好ましい。
　n3は2～4の整数であることが好ましく、3であることがより好ましい。
　上記式(B)中のR6がR7と一緒になって炭素数2～6の含窒素複素環を形成しない場合には、R7はメチルまたはエチルであることが好ましく、メチルであることがより好ましく、R６とR７がそれぞれメチルであることが最も好ましい。また、R6がR7と一緒になって炭素数2～6の含窒素複素環を形成する場合には、ピロリジン環またはピペリジン環を形成することが好ましい。
　n4は2～4の整数であることが好ましく、3であることがより好ましい。
　n1は1であることが好ましい。この場合、n2は1～3の整数であることが好ましく、1であることがより好ましい。
　Z1は、結合する炭素ごとにそれぞれ独立して、水素原子または炭素数1～3のアルキルであることが好ましく、水素原子またはメチルであることがより好ましく、水素原子であることがさらに好ましい。ここで、用語「結合する炭素ごとにそれぞれ独立して」とは、式（I’’）に2つ以上のZ1が存在する場合において、Z1が結合する炭素原子ごとに、それぞれのZ1が同一または異なって、水素原子または炭素数1～3のアルキルを選択できることを意味する。例えば、式（I’’）中にZ1が2つ存在する場合、それぞれのZ1が同一の置換基を選択し得ることを意味するだけでなく、一方のZ1が水素原子であり、他方のZ1が炭素数1～3のアルキルである場合も包含することを意味する。
　Z2は、結合する炭素ごとにそれぞれ独立して、水素原子または炭素数1～3のアルキルであることが好ましく、水素原子またはメチルであることがより好ましく、水素原子であることがさらに好ましい。ここで、用語「結合する炭素ごとにそれぞれ独立して」とは、式（I’’）に2つ以上のZ2が存在する場合において、Z2が結合する炭素原子ごとに、それぞれのZ2が同一または異なって、水素原子または炭素数1～3のアルキルを選択できることを意味する。例えば、式（I’’）中にZ2が2つ存在する場合、それぞれのZ2が同一の置換基を選択し得ることを意味するだけでなく、一方のZ2が水素原子であり、他方のZ2が炭素数1～3のアルキルである場合も包含することを意味する。
　またn1とn2がともに1である時、Z1とZ2がそれぞれ同一または異なって水素原子またはメチルであることが好ましく、Z1が水素原子またはメチルであり、Z2が水素原子であることがより好ましく、Z1とZ2が同一に水素原子であることが最も好ましい。
　次に本発明のカチオン性脂質の製造法について説明する。なお、以下に示す製造法において、定義した基が該製造法の条件下で変化するかまたは該製造法を実施するのに不適切な場合、有機合成化学で常用される保護基の導入および除去方法[例えば、プロテクティブ・グループス・イン・オーガニック・シンセシス第3版(Protective Groups in Organic Synthesis, third edition)、グリーン(T.W.Greene)著、John Wiley＆Sons Inc.(1999年)等に記載の方法]等を用いることにより、目的化合物を製造することができる。また、必要に応じて置換基導入等の反応工程の順序を変えることもできる。
　製造法1
　化合物(I)のうち、n1およびn2がともに1であり、R3が水素原子または炭素数1～3のアルキルである化合物(Ia)は以下の方法によって製造することができる。なお、化合物(I’)のうち、n1およびn2がともに1であり、R3が水素原子または炭素数1～3のアルキルである化合物も以下の方法によって同様に製造することができる。さらに、化合物(I’’)のうち、n1およびn2がともに1であり、Z1およびZ2がともに水素原子であり、R3’が水素原子、炭素数1～3のアルキル、ヒドロキシC2-C4アルキルまたはC1-C3ジアルキルアミノC2-C4アルキルである化合物も以下の方法によって同様に製造することができる。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000032
　(式中、R1およびR2はそれぞれ前記と同義であり、R3ａは水素原子または前記R3が炭素数1～3のアルキルである場合と同義の炭素数1～3のアルキルであり、X1、X2およびX3は、同一または異なって、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子、トリフルオロメタンスルホニルオキシ、メタンスルホニルオキシ、ベンゼンスルホニルオキシ、p-トルエンスルホニルオキシ等の脱離基を表す)
　工程１および２
　化合物(IIa)は、マロン酸ジメチルと化合物(IIIa)を、無溶媒でまたは溶媒中、1～10当量の塩基の存在下、室温と200℃の間の温度で、5分間～100時間反応させることにより製造することができる。さらに、化合物(IIb)は、化合物(IIa)と化合物(IIIb)を、無溶媒でまたは溶媒中、1～10当量の塩基の存在下、室温と200℃の間の温度で、5分間～100時間反応させることにより製造することができる。
　溶媒としては、例えばメタノール、エタノール、ジクロロメタン、クロロホルム、1,2-ジクロロエタン、トルエン、酢酸エチル、アセトニトリル、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、1,2-ジメトキシエタン、ジオキサン、N,N-ジメチルホルムアミド、N,N-ジメチルアセトアミド、N-メチルピロリドン、ピリジン等が挙げられ、これらは単独でまたは混合して用いることができる。
　塩基としては、例えば炭酸カリウム、炭酸セシウム、水酸化カリウム、水酸化ナトリウム、ナトリウムメトキシド、カリウム　tert-ブトキシド、水素化ナトリウム、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、N-メチルモルホリン、ピリジン、1,8-ジアザビシクロ[5.4.0]-7-ウンデセン(DBU)等が挙げられる。
　化合物(IIIa)および化合物(IIIb)は、市販品としてまたは公知の方法(例えば、「第5版実験化学講座13　有機化合物の合成I」、第5版、p.374、丸善(2005年))もしくはそれに準じた方法、または後述の製造法で得ることもできる。
R1とR2が同一の場合の化合物(IIb)は、工程1において、2当量以上の化合物(IIIa)を用いることで得ることができる。
　マロン酸ジメチルは市販品として得ることができる。
　工程3
　化合物(IIc)は化合物(IIb)を4当量～大過剰量のヒドリド還元剤と、必要に応じて触媒量～10当量の添加剤の存在下、溶媒中、-20℃と150℃の間の温度で、5分間～72時間反応させることにより製造することができる。ここで、触媒量とは0.01当量～0.5当量であることを示す。
　ヒドリド還元剤としては、例えば水素化アルミウニウムリチウム、水素化ホウ素リチウム、水素化トリエチルホウ素リチウム、水素化ジイソブチルアルミニウム、水素化ビス(2-メトキシエトキシ)アルミニウムナトリウム等が挙げられる。
　溶媒としては、例えばトルエン、ジクロロメタン、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、1,2-ジメトキシエタン、1,4-ジオキサン等が挙げられ、これらは単独でまたは混合して用いることができる。
　添加剤としては、塩化アルミニウム、塩化セリウム、四塩化チタン、チタニウムテトライソプロポキシド等を用いることができる。
　工程4
　化合物(IId)は化合物(IIc)を2当量以上のハロゲン化試薬または擬ハロゲン化試薬と、無溶媒でまたは溶媒中、必要により好ましくは1～10当量の塩基および必要により好ましくは1～10当量の添加剤の存在下、-20℃と150℃の間の温度で、5分間～100時間反応させることにより製造することができる。
　ハロゲン化試薬または擬ハロゲン化試薬としては、例えば塩化チオニル、塩化スルフリル、三塩化リン、五塩化リン、オキシ塩化リン、三臭化リン、臭化水素、ヨウ化水素、無水メシル酸、メシル酸クロリド、無水トシル酸、ベンゼンスルホン酸クロリド、無水ベンゼンスルホン酸、トシル酸クロリド、無水トリフルオロメタンスルホン酸等が挙げられる。
　溶媒としては、工程3で例示したものが挙げられる。
　塩基としては、例えばピリジン、2,6-ルチジン、2,4,6-コリジン、トリエチルアミン、N,N-ジイソプロピルエチルアミン等が挙げられる。
　添加剤としては、例えば塩化ナトリウム、臭化ナトリウム、臭化リチウム、塩化リチウム等が挙げられる。
　工程5
　化合物(Ia)は、化合物(IId)と1当量～大過剰量の化合物(IVa)を、無溶媒でまたは溶媒中、室温と200℃の間の温度で、5分間～100時間反応させることにより製造することができる。
　溶媒としては、工程1および2で例示したものが挙げられる。
　化合物(IVa)は、市販品として得ることができる。
　製造法2
　化合物(I)のうち、n1およびn2がともに1であり、R3が式(A)である化合物(Ic)は以下の方法によって製造することができる。なお、化合物(I’)のうち、n1およびn2がともに1であり、R3が式(A)である化合物も以下の方法によって同様に製造することができる。さらに、化合物(I’’)のうち、n1およびn2がともに1であり、Z1およびZ2がともに水素原子であり、R3’が式(A)である化合物も以下の方法によって同様に製造することができる。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000033
　(式中、R1、R2、R4、R5およびn3はそれぞれ前記と同義であり、Arはp-ニトロフェニル、o-ニトロフェニル、p-クロロフェニル等の置換フェニル基または無置換フェニル基を表す)
　工程6
　化合物(VII)は、化合物(V)と化合物(VI)を、無溶媒でまたは溶媒中、必要により好ましくは1～10当量の添加剤の存在下、および/または必要により好ましくは1～10当量の塩基の存在下、-20℃と150℃の間の温度で、5分間～72時間反応させることにより製造することができる。
　溶媒としては、例えばジクロロメタン、クロロホルム、1,2-ジクロロエタン、トルエン、酢酸エチル、アセトニトリル、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、1,2-ジメトキシエタン、1,4-ジオキサン、N,N-ジメチルホルムアミド、N,N-ジメチルアセトアミド、N-メチルピロリドン、ジメチルスルホキシド等が挙げられ、これらは単独でまたは混合して用いることができる。
　添加剤としては、例えば1-ヒドロキシベンゾトリアゾール、4-ジメチルアミノピリジン等が挙げられる。
　塩基としては、例えば炭酸カリウム、水酸化カリウム、水酸化ナトリウム、ナトリウムメトキシド、カリウム　tert-ブトキシド、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、N-メチルモルホリン、ピリジン、1,8-ジアザビシクロ[5.4.0]-7-ウンデセン(DBU)等が挙げられる。
　化合物(V)は、市販品として得ることができる。
　化合物(VI)は、市販品としてまたは公知の方法(例えば、「第5版実験化学講座14　有機化合物の合成II」、第5版、p.1、丸善(2005年))もしくはそれに準じた方法で得ることができる。
　工程7
　化合物(Ic)は、化合物(Ib)と化合物(VII)を、無溶媒でまたは溶媒中、必要により1～10当量の添加剤の存在下、および／または必要により1～10当量の塩基の存在下、-20℃と150℃の間の温度で、5分間～72時間反応させることにより製造することができる。
　化合物(Ib)は製造法1の工程5で化合物(IVa)としてアンモニアを用いるか、または製造法7で製造することができる。
　溶媒、添加剤および塩基としては、それぞれ工程6で例示したものが挙げられる。
　製造法3
　化合物(I)のうち、n1およびn2がともに1であり、R3が式(B)である化合物(Id)は以下の方法によって製造することができる。なお、化合物(I’)のうち、n1およびn2がともに1であり、R3が式(B)である化合物も以下の方法によって同様に製造することができる。さらに、化合物(I’’)のうち、n1およびn2がともに1であり、Z1およびZ2がともに水素原子であり、R3’が式(B)である化合物も以下の方法によって同様に製造することができる。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000034
　(式中、R1、R2、R6、R7およびn4はそれぞれ前記と同義である)
　工程8
　化合物(IIe)は、化合物(Ib)を、化合物(VIII)と、無溶媒でまたは溶媒中、必要により好ましくは1～10当量の塩基の存在下、-20℃と150℃の間の温度で、5分間～72時間反応させることにより製造することができる。
　溶媒としては、工程6で例示したものが挙げられる。
　塩基としては、工程4で例示したものが挙げられる。
　化合物(VIII)は、市販品として得ることができる。
　工程9
　化合物(Id)は、化合物(IIe)と1～20当量の化合物(VIb)を、無溶媒でまたは溶媒中、必要により1～10当量の塩基の存在下、室温と200℃の間の温度で、5分間～100時間反応させることにより製造することができる。
　化合物(VIb)は、市販品として得ることができる。
　溶媒としては、工程1および2で例示したものが挙げられる。
　塩基としては、工程6で例示したものが挙げられる。
　製造法4
　化合物(IIIa)および化合物(IIIb)のうち、R1および/またはR2がC7-C20アルキルオキシC2-C3アルキルもしくはC7-C20アルキニルオキシC2-C3アルキルである化合物(IIId)は、以下の方法によって製造できる。なお、化合物(I’)および化合物(I’’)のうち、R1’および/またはR2’がC7-C20アルキルオキシC2-C3アルキル、C7-C20アルケニルオキシC2-C3アルキルもしくはC7-C20アルキニルオキシC2-C3アルキルである化合物を製造する際に用いる化合物(IIId)に相当する化合物も、以下の方法によって同様に製造することができる。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000035
　(式中、X4およびX5は前記X1と同義であり、R9は前記C7-C20アルキルオキシC1-C3アルキルにおけるC7-C20アルキル部分と同義の炭素数7～20のアルキル、前記C7-C20アルケニルオキシC1-C3アルキルにおけるC7-C20アルケニル部分と同義の炭素数7～20のアルケニル、もしくは前記C7-C20アルキニルオキシC1-C3アルキルにおけるC7-C20アルキニル部分と同義の炭素数7～20のアルキニルであり、Yはエチレンまたはプロピレンを表す)
　工程10
　化合物(X)は、化合物(IIIc)と化合物(IX)を、無溶媒でまたは溶媒中、必要により1～10当量の塩基の存在下、室温と200℃の間の温度で、5分間～100時間反応させることにより製造することができる。
　溶媒および塩基としては、それぞれ工程6で例示したものが挙げられる。
　化合物(IIIc)は、市販品としてまたは公知の方法(例えば、「第5版実験化学講座14　有機化合物の合成II」、第5版、p.1、丸善(2005年))もしくはそれに準じた方法で得ることができる。
　化合物(IX)は、市販品として得ることができる。
　工程11
　化合物(IIId)は、化合物(X)を、ハロゲン化試薬または擬ハロゲン化試薬と、無溶媒でまたは溶媒中、必要により好ましくは1～10当量の塩基および必要により好ましくは1～10当量の添加剤の存在下、-20℃と150℃の間の温度で、5分間～100時間反応させることにより製造することができる。
　溶媒および塩基としては、それぞれ工程6で例示したものが挙げられる。
　ハロゲン化試薬または擬ハロゲン化試薬としては、工程4で例示したものが挙げられる。
　添加剤としては、工程4で例示したものが挙げられる。
　製造法5
　化合物(I)のうち、n1が1であり、R3が炭素数1～3のアルキルである化合物(Ie)は以下の方法によって製造することができる。なお、化合物(I’)のうち、n1が1であり、R3が炭素数1～3のアルキルである化合物も以下の方法によって同様に製造することができる。さらに、化合物(I’’)のうち、n1が1であり、Z1およびZ2がともに水素原子であり、R3’が炭素数1～3のアルキルである化合物も以下の方法によって同様に製造することができる。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000036
　(式中、R1、R2、n2、X1およびX2はそれぞれ前記と同義であり、X6は前記X1と同義であり、R10は前記R3が炭素数1～3のアルキルである場合と同義の炭素数1～3のアルキルを表す)
　工程12
　化合物(XIb)は、化合物(XIa)と化合物(IIIe)を、無溶媒でまたは溶媒中、1～10当量の塩基の存在下、室温と200℃の間の温度で、5分間～100時間反応させることにより製造することができる。
　溶媒および塩基としては、それぞれ工程1および工程2で例示したものが挙げられる。
　化合物(XIa)および化合物(IIIe)はそれぞれ市販品として得ることができる。
　工程13および工程14
　化合物(XIc)は、化合物(XIb)と化合物(IIIa)を、無溶媒でまたは溶媒中、1～10当量の塩基の存在下、室温と200℃の間の温度で、5分間～100時間反応させることにより製造することができる。さらに、化合物(XId)は、化合物(XIc)と化合物(IIIb)を、無溶媒でまたは溶媒中、1～10当量の塩基の存在下、室温と200℃の間の温度で、5分間～100時間反応させることにより製造することができる。
　溶媒としては、工程3で例示したものが挙げられる。
　塩基としては、リチウムジイソプロピルアミド、ヘキサメチルジシラザンリチウム、ヘキサメチルジシラザンナトリウム、n-ブチルリチウム等が挙げられる。
　R1とR2が同一の場合の化合物(XId)は、工程13において、2当量以上の化合物(IIIa)を用いることで得ることができる。
　工程15
　化合物(Ie)は化合物(XId)を4～100当量のヒドリド還元剤と、必要に応じて触媒量～10当量の添加剤の存在下、溶媒中、-20℃と150℃の間の温度で、5分間～72時間反応させることにより製造することができる。ここで、触媒量は、前記と同義である。
　ヒドリド還元剤、添加剤および溶媒としては工程3で例示したものが挙げられる。
　製造法6
　化合物(I)のうち、n1およびn2が同一または異なって1～4の整数であり(但し、n1が1であり、n2が1である場合を除く)、R3が水素原子または炭素数1～3のアルキルである化合物(If)は以下の方法によって製造することができる。なお、化合物(I’)のうち、n1およびn2が同一または異なって1～4の整数であり(但し、n1が1であり、n2が1である場合を除く)、R3が水素原子または炭素数1～3のアルキルである化合物も以下の方法によって同様に製造することができる。さらに、化合物(I’’)のうち、n1およびn2が同一または異なって1～4の整数であり(但し、n1が1であり、n2が1である場合を除く)、Z1およびZ2がともに水素原子であり、R3’が水素原子、炭素数1～3のアルキル、ヒドロキシC2-C4アルキルまたはC1-C3ジアルキルアミノC2-C4アルキルである化合物も以下の方法によって同様に製造することができる。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000037
　[式中、R1、R2、R3a、X1、X2およびX3はそれぞれ前記と同義であり、m1およびm2は同一または異なって1～4の整数であり(但し、m1が1であり、m2が1である場合を除く)、P1およびP2は、同一または異なって保護基を表す]
　工程16および工程17
　化合物(XIIb)は、マロン酸ジメチルの代わりに化合物(XIIa)を用い、工程１と同様の方法により得られる。化合物(XIIc)は、化合物(IIa)の代わりに化合物(XIIb)を用い、工程2と同様の方法により得られる。R1とR2が同一の場合の(XIIc)については工程16において２等量以上の化合物(IIIa)を用いることによって得られる。ここで、P1およびP2としては有機合成化学で常用される保護基[例えば、プロテクティブ　グループス　イン　オーガニック　シンセシス第3版(Protective Groups in Organic Synthesis, third edition)、グリーン(T.W.Greene)著、John Wiley＆Sons Inc.(1999年)等に記載の保護基]を用いることができる。また、化合物(XIIa)は公知の方法[例えば、「新実験化学講座14　有機化合物の合成と反応(II)」、初版、p.751、丸善(1977年)]もしくはそれに準じた方法で得られる。
　工程18
　化合物(XIId)は、化合物(XIIc)を公知の方法[例えば、「新実験化学講座15　酸化と還元(II)」、初版、丸善(1977年)]もしくはそれに準じた方法で還元することで得られる。
　工程19
　化合物(XIIe)は、化合物(XIId)の保護基P1およびP2をそれぞれ適切な方法で除去することによって得られる。保護基の除去方法としては、有機合成化学で常用される保護基の除去方法[例えば、プロテクティブ　グループス　イン　オーガニック　シンセシス第3版(Protective Groups in Organic Synthesis, third edition)、グリーン(T.W.Greene)著、John Wiley＆Sons Inc.(1999年)等に記載の除去方法]を用いることができ、これにより目的とする化合物を製造することができる。
　工程20
　化合物(XIIf)は、化合物(IIc)の代わりに化合物(XIIe)を用い、工程4と同様の方法により得られる。
　工程21
　化合物(If)は、化合物(IId)の代わりに化合物(XIIf)を用い、工程5と同様の方法により得られる。
　製造法7
　化合物(I)のうち、n1およびn2が1であり、R3が水素原子である化合物(Ib)は以下の方法によって製造することができる。なお、化合物(I’)のうち、n1およびn2が1であり、R3が水素原子である化合物も以下の方法によって同様に製造することができる。さらに、化合物(I’’)のうち、n1およびn2が1であり、Z1およびZ2がともに水素原子であり、R3’が水素原子である化合物も以下の方法によって同様に製造することができる。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000038
　(式中、R1、R2、X1、X2およびX3はそれぞれ前記と同義であり、P3はtert-ブトキシカルボニル、o-ニトロベンゼンスルホニルまたはp-メチルベンゼンスルホニル等の保護基を表す)
工程22および23
　化合物(XIIIa)は、シアノ酢酸エチルと化合物(IIIa)を、工程１と同様の条件で反応させることにより製造することができる。さらに、化合物(XIIIb)は、化合物(XIIIa)と化合物(IIIb)を、工程2と同様の条件で反応させることにより製造することができる。
　R1とR2が同一の場合の化合物(XIIIb)は、工程22において、2当量以上の化合物(IIIa)を用いることで得ることができる。
　シアノ酢酸エチルは市販品として得ることができる。
　化合物(IIIa)および化合物(IIIb)は、製造法1に記載のものと同様である。
　工程24
　化合物(XIIIc)は化合物(XIIIb)を工程3と同様の条件で反応させることにより製造することができる。
　工程25
　化合物(XIIId)は、化合物(XIIIc)を、1～10当量の炭酸ジtert-ブトキシカルボニル、o-ニトロベンゼンスルホニルクロリドまたはp-メチルベンゼンスルホニルクロリド等と、溶媒中、1～10当量の塩基の存在下、0℃と200℃の間の温度で、5分間～100時間反応させることにより製造することができる。
　溶媒としては、工程6で例示したものが挙げられる。
　塩基としては、工程4で例示したものが挙げられる。
　工程26
　化合物(XIIIe)は化合物(XIIId)を1当量以上のハロゲン化試薬または擬ハロゲン化試薬と、無溶媒でまたは溶媒中、必要により好ましくは1～10当量の塩基の存在下、-0℃と150℃の間の温度で、5分間～100時間反応させることにより製造することができる。
　ハロゲン化試薬または擬ハロゲン化試薬としては、工程4で例示したものが挙げられる。
　溶媒としては、工程3で例示したものが挙げられる。
　塩基としては、工程4で例示したものが挙げられる。
　工程27
　化合物(XIIIf)は化合物(XIIIe)を無溶媒でまたは溶媒中、必要により好ましくは1～10当量の塩基の存在下、0℃と150℃の間の温度で、5分間～72時間分子内で反応させることにより製造することができる。
　塩基としては、例えば炭酸カリウム、水酸化カリウム、水酸化ナトリウム、ナトリウムメトキシド、カリウム　tert-ブトキシド、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、N-メチルモルホリン、ピリジン、1,8-ジアザビシクロ[5.4.0]-7-ウンデセン(DBU)、リチウムジイソプロピルアミド、ヘキサメチルジシラザンリチウム、ヘキサメチルジシラザンナトリウム、n-ブチルリチウム等が挙げられる。
　溶媒としては、工程１および２で例示したものが挙げられる。
　工程28
　化合物(Ib)は、化合物(XIIIf)の保護基P3を適切な方法で除去することによって得られる。保護基の除去方法としては、有機合成化学で常用される保護基の除去方法[例えば、プロテクティブ　グループス　イン　オーガニック　シンセシス第3版(Protective Groups in Organic Synthesis, third edition)、グリーン(T.W.Greene)著、John Wiley＆Sons Inc.(1999年)等に記載の除去方法]を用いることができ、これにより目的とする化合物を製造することができる。
　製造法8
　化合物(I)のうち、n1およびn2が1であり、R3が炭素数1-3のアルキルである(Ig)は以下の方法によって製造することができる。なお、化合物(I’)のうち、n1およびn2が1であり、R3が炭素数1-3のアルキルである化合物も以下の方法によって同様に製造することができる。さらに、化合物(I’’)のうち、n1およびn2が1であり、Z1およびZ2がともに水素原子であり、R3’が炭素数1-3のアルキルである化合物も以下の方法によって同様に製造することができる。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000039
　[式中、R1、R2はそれぞれ前記と同義であり、R11は水素原子、メチルまたはエチルであり、R12は水素原子またはメチルであるか、またはR11とR12は隣接する炭素と一緒になってシクロプロピル環を形成する（ただし、R11が水素原子またはエチルであるとき、R12はメチルでない)]
　工程29
　化合物(Ig)は、化合物(Ib)を好ましくは1～10当量の化合物(XIX)と、溶媒中、好ましくは1当量～大過剰量の還元剤および必要により好ましくは1～10当量の酸の存在下、-20℃と150℃の間の温度で、5分間～72時間反応させることにより製造することができる。
　溶媒としては、例えばメタノール、エタノール、ジクロロメタン、クロロホルム、1,2-ジクロロエタン、トルエン、酢酸エチル、アセトニトリル、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、1,2-ジメトキシエタン、ジオキサン、N,N-ジメチルホルムアミド、N,N-ジメチルアセトアミド、N-メチルピロリドン、水等があげられ、これらは単独でまたは混合して用いられる。
　還元剤としては、例えばトリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム、シアン化水素化ホウ素ナトリウム等があげられる。
　酸としては、例えば塩酸、酢酸等があげられる。
　化合物(XIX)は、市販品として得ることができる。
　製造法9
　化合物(I’’)のうち、n1およびn2が1であり、R3’が水素であり、Z1が炭素数1～3のアルキルであり、Z2が水素原子である化合物(I’’b)は以下の方法によって製造することができる。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000040
(式中、R1’、R2’、X3およびP3はそれぞれ前記と同義であり、Z1aは前記Z1が炭素数1～3のアルキルである場合と同義の炭素数1～3のアルキルであり、Mはリチウム、マグネシウムブロミド、マグネシウムクロリド等を表す。)
　工程30
　化合物(XIIIh)は化合物(XIIIg)を溶媒中、1～10当量の酸化剤と0℃と150℃の間の温度で、5分間～72時間反応させることにより製造することができる。
　酸化剤としては、例えばデス-マーチン試薬、クロロクロム酸ピリジニウム、二クロム酸ピリジニウム、過ルテニウム酸テトラプロピルアンモニウム等が挙げられる。
　溶媒としては、工程6で例示したものが挙げられる。
　化合物(XIIIg)は製造法7における化合物（XIIIｄ）と同様の方法により製造することができる。
工程31
　化合物（XIIIi）は化合物(XIIIh)を溶媒中、1～10当量の有機金属試薬と、-78℃と100℃の間の温度で5分間～72時間反応させることにより製造することができる。
　有機金属試薬としては、例えばメチルリチウム、エチルリチウム等のアルキルリチウム試薬、メチルマグネシウムブロミド、エチルマグネシウムブロミド等のグリニャール試薬、ジメチル亜鉛、ジエチル亜鉛等の有機亜鉛試薬等が挙げられる。
　溶媒としては、工程3で例示したものが挙げられる。
工程32
　化合物(XIIIj)は工程26と同様の方法により製造することができる。
工程33
　化合物(XIIIk)は工程27と同様の方法により製造することができる。
工程34
　化合物(I’’b)は工程28と同様の方法により製造することができる。
　製造法10
　化合物(I’’)のうち、n1およびn2が1であり、R3’が炭素数1-3のアルキルであり、Z1が炭素数1～3のアルキルであり、Z2が水素原子である化合物(I’’g)は以下の方法によって製造することができる。また、n1およびn2が1であり、R3’が式(A)であり、Z1が炭素数1～3のアルキルであり、Z2が水素原子である化合物(I’’c)は以下の方法によって製造することができる。さらに、n1およびn2が1であり、R3’が式(B)であり、Z1が炭素数1～3のアルキルであり、Z2が水素原子である化合物(I’’d)は以下の方法によって製造することができる。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000041
(式中、R1’、R2’、R4、R5、R6、R7、R11、R12、n3、n4、ArおよびZ1aはそれぞれ前記と同義である)
　工程35
　化合物(I’’g)は工程29と同様の方法により製造することができる。
　工程36
　化合物(I’’c)は工程7と同様の方法により製造することができる。
　工程37
　化合物(II’e)は工程8と同様の方法により製造することができる。
　工程38
　化合物(I’’d)は工程9と同様の方法により製造することができる。
　なお、化合物(I)、(I’)、(I’’)のうち、前記化合物(Ia)～(Ig)および(I’’b)～(I’’d)以外の化合物は、目的とする化合物の構造に適した原料や試薬等を採用することにより、上記の製造法に準じて、あるいは有機合成化学で常用される一般的な製造方法を適用することによって製造することができる。
　上記各製造法における中間体および目的化合物は、有機合成化学で常用される分離精製法、例えば、ろ過、抽出、洗浄、乾燥、濃縮、再結晶、各種クロマトグラフィー等に付して単離精製することができる。また、中間体においては特に精製することなく次の反応に供することも可能である。
　本発明のカチオン性脂質において、構造中の窒素原子上の孤立電子対に水素イオンが配位してもよく、その場合には、製薬上許容し得る陰イオン(前記と同義)と塩を形成していてもよく、本発明のカチオン性脂質には、該窒素原子上の孤立電子対に水素イオンが配位した化合物も包含される。
　本発明において、製薬上許容し得る陰イオンとしては、例えば塩化物イオン、臭化物イオン、硝酸イオン、硫酸イオン、リン酸イオン等の無機イオン、酢酸イオン、シュウ酸イオン、マレイン酸イオン、フマル酸イオン、クエン酸イオン、安息香酸イオン、メタンスルホン酸イオン等の有機酸イオン等が挙げられる。
　本発明のカチオン性脂質の中には、幾何異性体、光学異性体等の立体異性体、互変異性体等が存在し得るものもあるが、本発明のカチオン性脂質は、これらを含め、全ての可能な異性体およびそれらの混合物を包含する。
　本発明のカチオン性脂質中の各原子の一部またはすべては、それぞれ対応する同位体原子で置き換わっていてもよく、化合物(I)は、これら同位体原子で置き換わった化合物も包含する。例えば、化合物(I)中の水素原子の一部またはすべては、原子量2の水素原子(重水素原子)であってもよい。
　本発明のカチオン性脂質中の各原子の一部またはすべてが、それぞれ対応する同位体原子で置き換わった化合物は、市販のビルディングブロックを用いて、上記各製造法と同様な方法で製造することができる。また、化合物(I)中の水素原子の一部またはすべてが重水素原子で置き換わった化合物は、例えば、イリジウム錯体を触媒として用い、重水を重水素源として用いてアルコール、カルボン酸等を重水素化する方法[ジャーナル・オブ・アメリカン・ケミカル・ソサイアティ(J.Am.Chem.Soc.), Vol.124,No.10,2092(2002)参照]等を用いて合成することもできる。
　本発明のカチオン性脂質の具体例を表1～表3に示す。ただし、本発明のカチオン性脂質はこれらに限定されるものではない。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000042
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000043
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000044
　また、本発明で用いられる核酸としては、例えばヌクレオチドおよび/またはヌクレオチドと同等の機能を有する分子が重合した分子であれば、いかなる分子であってもよく、例えばリボヌクレオチドの重合体であるリボ核酸(RNA)、デオキシリボヌクレオチドの重合体であるデオキシリボ核酸(DNA)、RNAとDNAとからなるキメラ核酸、およびこれらの核酸の少なくとも一つのヌクレオチドが該ヌクレオチドと同等の機能を有する分子で置換されたヌクレオチド重合体等が挙げられる。また、ヌクレオチドおよび/またはヌクレオチドと同等の機能を有する分子が重合した分子の構造を少なくとも一部に含む誘導体も、本発明の核酸に含まれる。なお、本発明において、ウラシルUと、チミンTとは、それぞれ読み替えることができる。
　ヌクレオチドと同等の機能を有する分子としては、例えばヌクレオチド誘導体等が挙げられる。
　ヌクレオチド誘導体としては、例えばヌクレオチドに修飾を施した分子であればいかなる分子であってもよいが、例えばRNAまたはDNAと比較して、ヌクレアーゼ耐性を向上させるかもしくはその他の分解因子から安定化させるため、相補鎖核酸とのアフィニティーをあげるため、細胞透過性をあげるため、または可視化させるために、リボヌクレオチドまたはデオキシリボヌクレオチドに修飾を施した分子等が好適に用いられる。
　ヌクレオチド誘導体としては、例えば糖部修飾ヌクレオチド、リン酸ジエステル結合修飾ヌクレオチド、塩基修飾ヌクレオチド等が挙げられる。
　糖部修飾ヌクレオチドとしては、例えばヌクレオチドの糖の化学構造の一部あるいは全てに対し、任意の置換基で修飾もしくは置換したもの、または任意の原子で置換したものであればいかなるものでもよいが、2’-修飾ヌクレオチドが好ましく用いられる。
　糖部修飾ヌクレオチドにおける修飾基としては、例えば、2’-シアノ、2’-アルキル、2’-置換アルキル、2’-アルケニル、2’-置換アルケニル、2’-ハロゲン、2’-O-シアノ、2’-O-アルキル、2’-O-置換アルキル、2’-O-アルケニル、2’-O-置換アルケニル、2’-S-アルキル、2’-S-置換アルキル、2’-S-アルケニル、2’-S-置換アルケニル、2’-アミノ、2’-NH-アルキル、2’-NH-置換アルキル、2’-NH-アルケニル、2’-NH-置換アルケニル、2’-SO-アルキル、2’-SO-置換アルキル、2’-カルボキシ、2’-CO-アルキル、2’-CO-置換アルキル、2’-Se-アルキル、2’-Se-置換アルキル、2’-SiH2-アルキル、2’-SiH2-置換アルキル、2’-ONO2、2’-NO2、2’-N3、2’-アミノ酸残基(アミノ酸のカルボン酸から水酸基が除去されたもの)、2’-O-アミノ酸残基(前記アミノ酸残基と同義)等が挙げられる。
　糖部修飾ヌクレオチドとしては、糖部に架橋構造を導入することにより2つの環状構造を有する架橋構造型人工核酸(Bridged Nucleic Acid)(BNA)があげられ、具体的には、2’位の酸素原子と4’位の炭素原子がメチレンを介して架橋したロックト人工核酸(Locked Nucleic Acid)(LNA) [“テトラヘドロンレターズ(Tetrahedron Letters)”, Volume 38, Issue 50, 1997, Pages 8735-8738、および“テトラヘドロン (Tetrahedron)”, Volume 54, Issue 14, 1998, Pages 3607-3630]、エチレン架橋構造型人工核酸(Ethylene bridged nucleic acid)(ENA)[“ヌクレイックアシッドリサーチ(Nucleic Acid Research)”, 32, e175(2004)]等があげられる。
　さらに糖部修飾ヌクレオチドとして、ペプチド核酸(PNA)[Acc. Chem. Res., 32, 624(1999)]、オキシペプチド核酸(OPNA)[J. Am. Chem. Soc., 123, 4653(2001)]、ペプチドリボ核酸(PRNA)[J. Am. Chem. Soc., 122, 6900(2000)]等も挙げられる。
　糖部修飾ヌクレオチドにおける修飾基として、2’-シアノ、2’-ハロゲン、2’-O-シアノ、2’-アルキル、2’-置換アルキル、2’-O-アルキル、2’-O-置換アルキル、2’-O-アルケニル、2’-O-置換アルケニル、2’-Se-アルキル、2’-Se-置換アルキル等が好ましく、2’-シアノ、2’-フルオロ、2’-クロロ、2’-ブロモ、2’-トリフルオロメチル、2’-O-メチル、2’-O-エチル、2’-O-イソプロピル、2’-O-トリフルオロメチル、2'-O-[2-(メトキシ)エチル]、2'-O-(3-アミノプロピル)、2'-O-[2-(N,N-ジメチルアミノオキシ)エチル]、2'-O-[3-(N,N-ジメチルアミノ)プロピル]、2'-O-{2-[2-(N,N-ジメチルアミノ)エトキシ]エチル}、2'-O-[2-(メチルアミノ)-2-オキソエチル]、2’-Se-メチル等がより好ましく、2’-O-メチル、2’-O-エチル、2’-フルオロ等がさらに好ましく、2’-O-メチルおよび2’-O-エチルが最も好ましい。
　また、糖部修飾ヌクレオチドにおける修飾基は、その大きさから好ましい範囲を定義することもでき、フルオロの大きさから-O-ブチルの大きさに相当するものが好ましく、-O-メチルの大きさから-O-エチルの大きさに相当するものがより好ましい。
　糖部修飾ヌクレオチドにおける修飾基におけるアルキルとしては、炭素数1～6のアルキルが挙げられ、例えばメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、sec-ブチル、tert-ブチル、ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、ヘキシル等の炭素数1～6のアルキルである。
　糖部修飾ヌクレオチドにおける修飾基におけるアルケニルとしては、炭素数3～6のアルケニルが挙げられ、例えばアリル、1-プロペニル、ブテニル、ペンテニル、ヘキセニル等が挙げられる。
　糖部修飾ヌクレオチドにおける修飾基におけるハロゲンとしては、例えばフッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子等が挙げられる。
　アミノ酸残基におけるアミノ酸としては、例えば脂肪族アミノ酸(具体的には、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン等)、ヒドロキシアミノ酸(具体的には、セリン、トレオニン等)、酸性アミノ酸(具体的には、アスパラギン酸、グルタミン酸等)、酸性アミノ酸アミド(具体的には、アスパラギン、グルタミン等)、塩基性アミノ酸(具体的には、リジン、ヒドロキシリジン、アルギニン、オルニチン等)、含硫アミノ酸(具体的には、システイン、シスチン、メチオニン等)、イミノ酸(具体的には、プロリン、4-ヒドロキシプロリン等)等が挙げられる。
　糖部修飾ヌクレオチドにおける修飾基における置換アルキルおよび置換アルケニルにおける置換基としては、例えば、ハロゲン(前記と同義)、ヒドロキシ、スルファニル、アミノ、オキソ、-O-アルキル(該-O-アルキルのアルキル部分は前記炭素数1～6のアルキルルと同義)、-S-アルキル(該-S-アルキルのアルキル部分は前記炭素数1～6のアルキルと同義)、-NH-アルキル(該-NH-アルキルのアルキル部分は前記炭素数1～6のアルキルと同義)、ジアルキルアミノオキシ(該ジアルキルアミノオキシの2つのアルキル部分は同一または異なって前記炭素数1～6のアルキルと同義)、ジアルキルアミノ(該ジアルキルアミノの2つのアルキル部分は同一または異なって前記炭素数1～6のアルキルと同義)、ジアルキルアミノアルキルオキシ(該ジアルキルアミノアルキルオキシの2つのアルキル部分は同一または異なって前記炭素数1～6のアルキルと同義であり、アルキレン部分は前記アルキルから水素原子が1つ除かれたものを意味する)等が挙げられ、置換数は好ましくは1～3である。
　リン酸ジエステル結合修飾ヌクレオチドとしては、ヌクレオチドのリン酸ジエステル結合の化学構造の一部あるいは全てに対し、任意の置換基で修飾もしくは置換したもの、または任意の原子で置換したものであればいかなるものでもよく、例えば、リン酸ジエステル結合がホスホロチオエート結合に置換されたヌクレオチド、リン酸ジエステル結合がホスホロジチオエート結合に置換されたヌクレオチド、リン酸ジエステル結合がアルキルホスホネート結合に置換されたヌクレオチド、リン酸ジエステル結合がホスホロアミデート結合に置換されたヌクレオチド等が挙げられる。
　塩基修飾ヌクレオチドとしては、ヌクレオチドの塩基の化学構造の一部あるいは全てに対し、任意の置換基で修飾もしくは置換したもの、または任意の原子で置換したものであればいかなるものでもよく、例えば、塩基内の酸素原子が硫黄原子で置換されたもの、水素原子が炭素数1～6のアルキル基で置換されたもの、メチル基が水素原子もしくは炭素数2～6のアルキル基で置換されたもの、アミノ基が炭素数1～6のアルキル基、炭素数1～6のアルカノイル基等の保護基で保護されたもの等が挙げられる。
　さらに、ヌクレオチド誘導体として、ヌクレオチドまたは糖部、リン酸ジエステル結合もしくは塩基の少なくとも一つが修飾されたヌクレオチド誘導体に脂質、リン脂質、フェナジン、フォレート、フェナントリジン、アントラキノン、アクリジン、フルオレセイン、ローダミン、クマリン、色素等、別の化学物質を付加したものも挙げられ、具体的には、5’-ポリアミン付加ヌクレオチド誘導体、コレステロール付加ヌクレオチド誘導体、ステロイド付加ヌクレオチド誘導体、胆汁酸付加ヌクレオチド誘導体、ビタミン付加ヌクレオチド誘導体、緑色蛍光色素(Cy3)付加ヌクレオチド誘導体、赤色蛍光色素(Cy5)付加ヌクレオチド誘導体、フルオロセイン(6-FAM)付加ヌクレオチド誘導体、およびビオチン付加ヌクレオチド誘導体等が挙げられる。
　また、本発明で用いられる核酸においては、ヌクレオチドまたはヌクレオチド誘導体が、該核酸内の他のヌクレオチドまたはヌクレオチド誘導体とアルキレン構造、ペプチド構造、ヌクレオチド構造、エーテル構造、エステル構造、およびこれらの少なくとも一つを組み合わせた構造等の架橋構造を形成してもよい。
　本発明で用いられる核酸としては、好ましくは標的遺伝子の発現を抑制する核酸が挙げられ、より好ましくはRNA干渉(RNAi)を利用した標的遺伝子の発現抑制作用を有する核酸が挙げられる。
　本発明における標的遺伝子としては、mRNAを産生して発現する遺伝子であれば特に限定されないが、例えば、腫瘍または炎症に関連する遺伝子が好ましく、例えば血管内皮増殖因子(vascular endothelial growth factor、以下VEGFと略す)、血管内皮増殖因子受容体(vascular endothelial growth factor receptor、以下VEGFRと略す)、線維芽細胞増殖因子、線維芽細胞増殖因子受容体、血小板由来増殖因子、血小板由来増殖因子受容体、肝細胞増殖因子、肝細胞増殖因子受容体、クルッペル様因子(Kruppel-like factor、以下KLFと略す)、エクスプレスドシーケンスタグ(Ets)転写因子、核因子、低酸素誘導因子、細胞周期関連因子、染色体複製関連因子、染色体修復関連因子、微小管関連因子、増殖シグナル経路関連因子、増殖関連転写因子、アポトーシス関連因子等のタンパク質をコードする遺伝子等が挙げられ、具体的にはVEGF遺伝子、VEGFR遺伝子、線維芽細胞増殖因子遺伝子、線維芽細胞増殖因子受容体遺伝子、血小板由来増殖因子遺伝子、血小板由来増殖因子受容体遺伝子、肝細胞増殖因子遺伝子、肝細胞増殖因子受容体遺伝子、KLF遺伝子、Ets転写因子遺伝子、核因子遺伝子、低酸素誘導因子遺伝子、細胞周期関連因子遺伝子、染色体複製関連因子遺伝子、染色体修復関連因子遺伝子、微小管関連因子遺伝子(例えば、CKAP5遺伝子等)、増殖シグナル経路関連因子遺伝子(例えば、KRAS遺伝子等)、増殖関連転写因子遺伝子、アポトーシス関連因子(例えば、BCL-2遺伝子等)等が挙げられる。
　また、本発明における標的遺伝子としては、例えば、肝臓、肺、腎臓または脾臓において発現する遺伝子が好ましく、肝臓において発現する遺伝子がより好ましく、例えば前記の腫瘍または炎症に関連する遺伝子、B型肝炎ウイルスゲノム、C型肝炎ウイルスゲノム、アポリポタンパク質(APO)、ヒドロキシメチルグルタリル(HMG)CoA還元酵素、ケキシン 9 型セリンプロテアーゼ(PCSK9)、第12因子、グルカゴン受容体、グルココルチコイド受容体、ロイコトリエン受容体、トロンボキサンA2受容体、ヒスタミンH1受容体、炭酸脱水酵素、アンギオテンシン変換酵素、レニン、p53、チロシンホスファターゼ(PTP)、ナトリウム依存性グルコース輸送担体、腫瘍壊死因子、インターロイキン、ヘプシジン、トランスサイレン、アンチトロンビン、プロテインC、マトリプターゼ酵素(例えば、TMPRSS6遺伝子等)等のタンパク質をコードする遺伝子等が挙げられる。
　標的遺伝子の発現を抑制する核酸としては、例えば蛋白質等をコードする遺伝子(標的遺伝子)のmRNAの一部の塩基配列に対して相補的な塩基配列を含み、かつ標的遺伝子の発現を抑制する核酸であれば、例えばsiRNA(short interference RNA)、miRNA(micro RNA)等の二本鎖核酸、shRNA(short hairpin RNA)、アンチセンス核酸、リボザイム等の一本鎖核酸等、いずれの核酸を用いてもよいが、二本鎖核酸が好ましい。
　標的遺伝子のmRNAの一部の塩基配列に対して相補的な塩基配列を含む核酸をアンチセンス鎖核酸といい、アンチセンス鎖核酸の塩基配列に対して相補的な塩基配列を含む核酸をセンス鎖核酸ともいう。センス鎖核酸は、標的遺伝子の一部の塩基配列からなる核酸そのもの等、アンチセンス鎖核酸と対合して二重鎖形成部ができる核酸をいう。
　二本鎖核酸とは、二本の鎖が対合し二重鎖形成部を有する核酸をいう。二重鎖形成部とは、二本鎖核酸を構成するヌクレオチドまたはその誘導体が塩基対を構成して二重鎖を形成している部分をいう。二重鎖形成部を構成する塩基対は、通常15～27塩基対であり、15～25塩基対が好ましく、15～23塩基対がより好ましく、15～21塩基対がさらに好ましく、15～19塩基対が特に好ましい。
　二重鎖形成部のアンチセンス鎖核酸としては、例えば標的遺伝子のmRNAの一部配列からなる核酸、または該核酸において1～3塩基、好ましくは1～2塩基、より好ましくは1塩基が置換、欠失もしくは付加され、かつ標的蛋白質の発現抑制活性を有する核酸が好適に用いられる。二本鎖核酸を構成する一本鎖の核酸は、通常15～30塩基(ヌクレオシド)の連なりからなるが、15～29塩基が好ましく、15～27塩基がより好ましく、15～25塩基がさらに好ましく、17～23塩基が特に好ましく、19～21塩基が最も好ましい。
　二本鎖核酸を構成するアンチセンス鎖、センス鎖のいずれか一方、または両方の核酸は、二重鎖形成部に続く3’側または5’側に二重鎖を形成しない追加の核酸を有してもよい。この二重鎖を形成しない部分を突出部(オーバーハング)ともいう。
　突出部を有する二本鎖核酸としては、例えば少なくとも一方の鎖の3’末端または5’末端に1～4塩基、通常は1～3塩基からなる突出部を有するものが用いられるが、2塩基からなる突出部を有するものが好ましく用いられ、dTdTまたはUUからなる突出部を有するものがより好ましく用いられる。突出部は、アンチセンス鎖のみ、センス鎖のみ、およびアンチセンス鎖とセンス鎖の両方に有することができるが、アンチセンス鎖とセンス鎖の両方に突出部を有する二本鎖核酸が好ましく用いられる。
　また、二重鎖形成部に続いて標的遺伝子のmRNAの塩基配列と一部または全てが一致する配列、または、二重鎖形成部に続いて標的遺伝子のmRNAの相補鎖の塩基配列と一部または全てが一致する配列を用いてもよい。さらに、標的遺伝子の発現を抑制する核酸としては、例えばDicer等のリボヌクレアーゼの作用により前記の二本鎖核酸を生成する核酸分子(国際公開第2005/089287号)や、3’末端や5’末端の突出部を有していない二本鎖核酸等を用いることもできる。
　また、前記の二本鎖核酸がsiRNAである場合、好ましくはアンチセンス鎖は、5’末端側から3’末端側に向って少なくとも1～17番目の塩基(ヌクレオシド)の配列が、標的遺伝子のmRNAの連続する17塩基の配列と相補的な塩基の配列であり、より好ましくは、該アンチセンス鎖は、5’末端側から3’末端側に向って1～19番目の塩基の配列が、標的遺伝子のmRNAの連続する19塩基の配列と相補的な塩基の配列であるか、1～21番目の塩基の配列が、標的遺伝子のmRNAの連続する21塩基の配列と相補的な塩基の配列であるか、1～25番目の塩基の配列が、標的遺伝子のmRNAの連続する25塩基の配列と相補的な塩基の配列である。
　さらに、本発明で用いられる核酸がsiRNAである場合、好ましくは該核酸中の糖の10～70%、より好ましくは15～60%、さらに好ましくは20～50%が、2’位において修飾基で置換されたリボースである。本発明における2’位において修飾基で置換されたリボースとは、リボースの2’位の水酸基が修飾基に置換されているものを意味し、リボースの2’位の水酸基と立体配置が同じであっても異なっていてもよいが、好ましくはリボースの2’位の水酸基と立体配置が同じである。2’位において修飾基で置換されたリボースにおける修飾基としては、糖部修飾ヌクレオチドにおける2’-修飾ヌクレオチドにおける修飾基の定義で例示したものおよび水素原子が挙げられ、2’-シアノ、2’-ハロゲン、2’-O-シアノ、2’-アルキル、2’-置換アルキル、2’-O-アルキル、2’-O-置換アルキル、2’-O-アルケニル、2’-O-置換アルケニル、2’-Se-アルキル、2’-Se-置換アルキル等が好ましく、2’-シアノ、2’-フルオロ、2’-クロロ、2’-ブロモ、2’-トリフルオロメチル、2’-O-メチル、2’-O-エチル、2’-O-イソプロピル、2’-O-トリフルオロメチル、2'-O-[2-(メトキシ)エチル]、2'-O-(3-アミノプロピル)、2'-O-[2-(N,N-ジメチル)アミノオキシ]エチル、2'-O-[3-(N,N-ジメチルアミノ)プロピル]、2'-O-{2-[2-(N,N-ジメチルアミノ)エトキシ]エチル}、2'-O-[2-(メチルアミノ)-2-オキソエチル]、2’-Se-メチル、水素原子等がより好ましく、2’-O-メチル、2’-O-エチル、2’-フルオロ、水素原子等がさらに好ましく、2’-O-メチルおよび2’-O-フルオロが最も好ましい。
　本発明で用いられる核酸は、核酸の構造中のリン酸部、エステル部等に含まれる酸素原子等が、例えば硫黄原子等の他の原子に置換された誘導体を包含する。
　また、アンチセンス鎖およびセンス鎖の5’末端の塩基に結合する糖は、それぞれ5’位の水酸基が、リン酸基もしくは前記の修飾基、または生体内の核酸分解酵素等でリン酸基もしくは前記の修飾基に変換される基によって修飾されていてもよい。
　また、アンチセンス鎖およびセンス鎖の3’末端の塩基に結合する糖は、それぞれ3’位の水酸基が、リン酸基もしくは前記の修飾基、または生体内の核酸分解酵素等でリン酸基もしくは前記の修飾基に変換される基によって修飾されていてもよい。
　一本鎖の核酸としては、例えば標的遺伝子の連続する15～27塩基(ヌクレオシド)、好ましくは15～25塩基、より好ましくは15～23塩基、さらに好ましくは15～21塩基、特に好ましくは15～19塩基からなる配列の相補配列からなる核酸、または該核酸において1～3塩基、好ましくは1～2塩基、より好ましくは1塩基が置換、欠失もしくは付加され、かつ標的蛋白質の発現抑制活性を有する核酸であればいずれでもよい。該一本鎖の核酸は、15～30塩基(ヌクレオシド)の連なりからなることが好ましく、より好ましくは15～27塩基、さらに好ましくは15～25塩基、特に好ましくは15～23塩基の一本鎖核酸が好適に用いられる。
　一本鎖核酸として、上記の二本鎖核酸を構成するアンチセンス鎖およびセンス鎖を、スペーサー配列(スペーサーオリゴヌクレオチド)を介して連結したものを用いてもよい。スペーサーオリゴヌクレオチドとしては6～12塩基の一本鎖核酸分子が好ましく、その5’末端側の配列は2個のUであるのが好ましい。スペーサーオリゴヌクレオチドの例として、UUCAAGAGAの配列からなる核酸が挙げられる。スペーサーオリゴヌクレオチドによってつながれるアンチセンス鎖およびセンス鎖の順番はどちらが5’側になってもよい。該一本鎖核酸としては、例えばステムループ構造によって二重鎖形成部を有するshRNA等の一本鎖核酸であることが好ましい。shRNA等の一本鎖核酸は、通常50～70塩基長である。
　リボヌクレアーゼ等の作用により、上記の一本鎖核酸または二本鎖核酸を生成するように設計した、70塩基長以下、好ましくは50塩基長以下、さらに好ましくは30塩基長以下の核酸を用いてもよい。
　なお、本発明で用いられる核酸は、既知のRNAまたはDNA合成法、およびRNAまたはDNA修飾法を用いて製造することができる。
　本発明の組成物は、本発明のカチオン性脂質および核酸を含有する組成物であり、例えば本発明のカチオン性脂質と核酸との複合体、または本発明のカチオン性脂質に中性脂質および/もしくは高分子を組み合わせたものと核酸との複合体を含有する組成物、該複合体および該複合体を封入する脂質膜を含有する組成物等が挙げられる。該脂質膜は、脂質一重膜(脂質1分子膜)でも脂質二重膜(脂質2分子膜)であってもよい。なお、該脂質膜に、本発明のカチオン性脂質、中性脂質および/または高分子を含有していてもよい。また、該複合体および/または該脂質膜に、本発明のカチオン性脂質以外のカチオン性脂質を含有していてもよい。
　また、本発明の組成物としては、例えば本発明のカチオン性脂質以外のカチオン性脂質と核酸との複合体、または本発明のカチオン性脂質以外のカチオン性脂質に中性脂質および/もしくは高分子を組み合わせたものと核酸との複合体ならびに該複合体を封入する脂質膜を含有し、該脂質膜に本発明のカチオン性脂質を含有する組成物等も挙げられる。この場合の脂質膜も、脂質一重膜(脂質1分子膜)でも脂質二重膜(脂質2分子膜)であってもよい。また、該脂質膜に、本発明のカチオン性脂質以外のカチオン性脂質、中性脂質および/または高分子を含有していてもよい。
　本発明の組成物において、本発明のカチオン性脂質と核酸との複合体を含有する組成物、本発明のカチオン性脂質と核酸との複合体および該複合体を封入する脂質膜を含有し、該脂質膜に本発明のカチオン性脂質を含有する組成物、ならびに本発明のカチオン性脂質以外のカチオン性脂質と核酸との複合体および該複合体を封入する脂質膜を含有し、該脂質膜に本発明のカチオン性脂質を含有する組成物がより好ましく、本発明のカチオン性脂質と核酸との複合体を含有する組成物、ならびに本発明のカチオン性脂質と核酸との複合体および該複合体を封入する脂質膜を含有し、該脂質膜に本発明のカチオン性脂質を含有する組成物がさらに好ましく、本発明のカチオン性脂質と核酸との複合体および該複合体を封入する脂質膜を含有し、該脂質膜に本発明のカチオン性脂質を含有する組成物が最も好ましい。なお、いずれの場合も該脂質膜に、中性脂質および/または高分子を含有していてもよい。また、該複合体および/または該脂質膜に、本発明のカチオン性脂質以外のカチオン性脂質を含有していてもよい。
　複合体の形態としては、例えば核酸と脂質一重(一分子)層からなる膜(逆ミセル)との複合体、核酸とリポソームとの複合体、核酸とミセルとの複合体等が挙げられ、好ましくは核酸と脂質一重層からなる膜との複合体または核酸とリポソームとの複合体が挙げられる。
　複合体および該複合体を封入する脂質膜を含有する組成物としては、例えば該複合体および該複合体を脂質二重膜で封入するリポソーム等が挙げられる。
　なお、本発明の組成物には、本発明のカチオン性脂質を一種または複数種を使用してよく、また本発明のカチオン性脂質には、本発明のカチオン性脂質以外のカチオン性脂質を混合してもよい。
　本発明のカチオン性脂質以外のカチオン性脂質としては、例えば、特開昭61-161246号公報(米国特許5049386号明細書)中で開示される、N-[1-(2,3-ジオレイルオキシ)プロピル]-N,N,N-トリメチルアンモニウムクロリド(DOTMA)、N-(2,3-ジ-(9-(Z)-オクタデセノイルオキシ))-プロパ-1-イル-N,N,N-トリメチルアンモニウムクロリド(DOTAP)等、国際公開第91/16024号および国際公開第97/019675号中で開示される、N-[1-(2,3-ジオレイルオキシプロピル)]-N,N-ジメチル-N-ヒドロキシエチル臭化アンモニウム(DORIE)、2,3-ジオレイルオキシ-N-[2-(スペルミンカルボキシアミド)エチル]-N,N-ジメチル-1-プロパナミニウムトリフルオロ酢酸(DOSPA)等、国際公開第2005/121348号中で開示される、DLinDMA等、国際公開第2009/086558号中で開示される、DLin-K-DMA、国際公開第2011/136368号中で開示される、(3R,4R)-3,4-ビス((Z)-ヘキサデカ-9-エニルオキシ)-1-メチルピロリジン、N-メチル-N,N-ビス(2-((Z)-オクタデカ-6-エニルオキシ)エチル)アミン等が挙げられ、好ましくはDOTMA、DOTAP、DORIE、DOSPA、1,2-ジリノレイルオキシ- N,N-ジメチルアミノプロパン(DLinDMA)、2,2-ジリノレイル-4-ジメチルアミノメチル-[1,3]-ジオキソラン(DLin-K-DMA)等の2つの非置換アルキル基を有する3級アミン部位または3つの非置換アルキル基を有する4級アンモニウム部位を有するカチオン性脂質が挙げられ、より好ましくは、該3級アミン部位を有するカチオン性脂質が挙げられる。該3級アミン部位および該4級アンモニウム部位の非置換アルキル基はメチル基であることがより好ましい。
　なお、本発明の組成物は、核酸を含有することができるが、核酸と化学的に近似した化合物も含有することもできる。
　本発明の組成物は、公知の製造方法またはそれに準じて製造することができ、いかなる製造方法で製造されたものであってよい。例えば、組成物の1つであるリポソームを含有する組成物の製造には、公知のリポソームの調製方法が適用できる。公知のリポソームの調製方法としては、例えばバンガム(Bangham)らのリポソーム調製法[“ジャーナル・オブ・モレキュラー・バイオロジー(J.Mol.Biol.)”,1965年,第13巻,p.238-252参照]、エタノール注入法[“ジャーナル・オブ・セル・バイオロジー(J.Cell Biol.)”,1975年,第66巻,p.621-634参照]、フレンチプレス法[“エフイービーエス・レターズ(FEBS Lett.)”,1979年,第99巻,p.210-214参照]、凍結融解法[“アーカイブス・オブ・バイオケミストリー・アンド・バイオフィジックス(Arch.Biochem.Biophys.)”,1981年,第212巻,p.186-194参照]、逆相蒸発法[“プロシーディングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンス・ユナイテッド・ステイツ・オブ・アメリカ(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)”,1978年,第75巻, p.4194-4198参照]またはpH勾配法(例えば特許第2572554号公報、特許第2659136号公報等参照)等が挙げられる。リポソームの製造の際にリポソームを分散させる溶液としては、例えば水、酸、アルカリ、種々の緩衝液、生理食塩水またはアミノ酸輸液等を用いることができる。また、リポソームの製造の際には、例えばクエン酸、アスコルビン酸、システインまたはエチレンジアミン四酢酸(EDTA)等の抗酸化剤、例えばグリセリン、ブドウ糖または塩化ナトリウム等の等張化剤等の添加も可能である。また、例えば、本発明のカチオン性脂質、または本発明のカチオン性脂質と本発明のカチオン性脂質以外のカチオン性脂質との混合物等を例えばエタノール等の有機溶媒に溶解し、溶媒を留去した後、生理食塩水等を添加、振とう攪拌し、リポソームを形成させることによってもリポソームを製造することができる。
　また、本発明の組成物は、例えば、本発明のカチオン性脂質、または本発明のカチオン性脂質と本発明のカチオン性脂質以外のカチオン性脂質との混合物をクロロホルムに予め溶解し、次いで核酸の水溶液とメタノールを加えて混合してカチオン性脂質/核酸の複合体を形成させ、さらにクロロホルム層を取り出し、これにポリエチレングリコール化リン脂質と中性の脂質と水を加えて油中水型(W/O)エマルジョンを形成し、逆相蒸発法で処理して製造する方法(特表2002-508765号公報参照)や、核酸を、酸性の電解質水溶液に溶解し、例えば、本発明のカチオン性脂質、または本発明のカチオン性脂質と本発明のカチオン性脂質以外のカチオン性脂質との混合物(エタノール中)を加え、エタノール濃度を20v/v%まで下げて前記核酸内包リポソームを調製し、サイジングろ過し、透析によって、過剰のエタノールを除去した後、試料をさらにpHを上げて透析して組成物表面に付着した核酸を除去して製造する方法(特表2002-501511号公報およびバイオキミカ・エト・バイオフィジカ・アクタ(Biochimica et Biophysica Acta),2001年,第1510巻,p.152-166参照)等によって製造することができる。
　本発明の組成物のうち、本発明のカチオン性脂質と核酸との複合体、または本発明のカチオン性脂質に中性脂質および/もしくは高分子を組み合わせたものと核酸との複合体ならびに該複合体を封入した脂質二重膜を含有するリポソームを含有する組成物は、例えば、国際公開第02/28367号および国際公開第2006/080118号等に記載の製造方法に従って製造することができる。
　また、本発明の組成物のうち、例えば本発明のカチオン性脂質と核酸との複合体、または本発明のカチオン性脂質に中性脂質および/もしくは高分子を組み合わせたものと核酸との複合体ならびに該複合体を封入した脂質膜を含有する組成物、本発明のカチオン性脂質以外のカチオン性脂質と核酸との複合体、または本発明のカチオン性脂質以外のカチオン性脂質に中性脂質および/もしくは高分子を組み合わせたものと核酸との複合体ならびに該複合体を封入する脂質膜を含有し、該脂質膜に本発明のカチオン性脂質を含有する組成物等は、国際公開第02/28367号および国際公開第2006/080118号等に記載の製造方法に従って、それぞれの複合体を製造し、水または0～40%エタノール水溶液中に、該複合体を溶解させずに分散させ(A液)、別途、それぞれの脂質膜成分を、例えばエタノール水溶液中に溶解させ(B液)、等量または体積比1:1～7:3のA液とB液を混合し、さらに適宜に水を加えることで得ることができる。なお、A液およびB液中のカチオン性脂質としては、一種または複数種の本発明のカチオン性脂質または本発明のカチオン性脂質以外のカチオン性脂質を使用してよく、また本発明のカチオン性脂質と本発明のカチオン性脂質以外のカチオン性脂質を組み合わせて混合して使用してもよい。
　なお、本発明において、本発明のカチオン性脂質と核酸との複合体、または本発明のカチオン性脂質に中性脂質および/もしくは高分子を組み合わせたものと核酸との複合体ならびに該複合体を封入した脂質膜を含有する組成物、本発明のカチオン性脂質以外のカチオン性脂質と核酸との複合体、または本発明のカチオン性脂質以外のカチオン性脂質に中性脂質および/もしくは高分子を組み合わせたものと核酸との複合体ならびに該複合体を封入する脂質膜を含有し、該脂質膜に本発明のカチオン性脂質を含有する組成物等の製造中および製造後に、複合体中の核酸と脂質膜中のカチオン性脂質との静電相互作用や、複合体中のカチオン性脂質と脂質膜中のカチオン性脂質との融合によって、複合体および膜の構造が変位したものも、それぞれ本発明のカチオン性脂質と核酸との複合体、または本発明のカチオン性脂質に中性脂質および/もしくは高分子を組み合わせたものと核酸との複合体ならびに該複合体を封入した脂質膜を含有する組成物、または本発明のカチオン性脂質以外のカチオン性脂質と核酸との複合体、または本発明のカチオン性脂質以外のカチオン性脂質に中性脂質および/もしくは高分子を組み合わせたものと核酸との複合体ならびに該複合体を封入する脂質膜を含有し、該脂質膜に本発明のカチオン性脂質を含有する組成物等に包含される。
　国際公開第02/28367号および国際公開第2006/080118号等に記載の製造方法に従って、核酸(前記と同義)、好ましくは二本鎖核酸と本発明のカチオン性脂質および/または本発明のカチオン性脂質以外のカチオン性脂質を含有するリポソームとの複合体を製造し、水または0～40%エタノール水溶液中に、該複合体を溶解させずに分散させ(A液)、別途、本発明のカチオン性脂質および/または本発明のカチオン性脂質以外のカチオン性脂質を、エタノール水溶液中に溶解させ(B液)、等量または体積比1:1～7:3のA液とB液を混合すること、または、さらに適宜に水を加えることでも、該核酸と該カチオン性脂質を含有する組成物を得ることができる。該組成物は、好ましくはカチオン性脂質と核酸との複合体および該複合体を封入する脂質膜を含有する組成物であるか、または該核酸と該カチオン性脂質を含有する脂質一重層からなる膜(逆ミセル)との複合体および該複合体を封入する脂質膜を含有する組成物である。これらの場合の脂質膜は、脂質一重膜(脂質1分子膜)でも脂質二重膜(脂質2分子膜)であってもよい。
　また、本開示の該核酸と該リポソームとの複合体中のリポソームは、予め大きさを、平均粒子径10nm～400nm、より好ましくは20nm～110nm、さらに好ましくは30nm～80nmに調節したリポソームが好ましい。また、該複合体および/または脂質膜に、中性脂質および/または高分子を含有していてもよい。また、A液は、リポソームと該核酸との複合体を形成させることができれば、エタノール濃度は、20～70%であってもよい。
　また、等量のA液とB液を混合する代わりに、A液とB液を混合後に複合体が溶解せず、かつB液中のカチオン性脂質が溶解しないエタノール濃度となる比率で混ぜてもよい。好ましくは複合体が溶解せず、B液中のカチオン性脂質が溶解せず、かつエタノール濃度が30～60%のエタノール水溶液になるような比でA液とB液を混合することに代えてもよく、あるいはA液とB液を混合後に複合体が溶解しないようなエタノール濃度になるような比でA液とB液を混合し、さらに水を加えることで、B液中のカチオン性脂質が溶解しなくなるエタノール濃度にすることにしてもよい。
　本開示の該A液中での核酸とリポソームとの複合体は、A液とB液を混合し、さらに適宜に水を加えた後には、カチオン性脂質を含有する脂質一重層からなる膜(逆ミセル)と核酸との複合体に形態が変化している。本開示の製造方法で得られる該核酸と該カチオン性脂質を含有する組成物は、好ましくはカチオン性脂質と核酸との複合体および該複合体を封入する脂質膜を含有する組成物であり、または、カチオン性脂質を含有する脂質一重層からなる膜(逆ミセル)と核酸との複合体および該複合体を封入する脂質膜を含有し、該脂質膜にカチオン性脂質を含有する組成物であり、その製造性(収率および/または均一性)は優れている。
　本発明の組成物において、複合体中の本発明のカチオン性脂質の分子の総数は、該核酸のリン原子の数に対して0.5～4倍であるのが好ましく、1.5～3.5倍であるのがより好ましく、2～3倍であるのがさらに好ましい。また、該複合体中の本発明のカチオン性脂質および本発明のカチオン性脂質以外のカチオン性脂質の分子の総数は、該核酸のリン原子の数に対して0.5～4倍であるのが好ましく、1.5～3.5倍であるのがより好ましく、2～3倍であるのがさらに好ましい。
　本発明の組成物において、複合体および該複合体を封入する脂質膜を含有する組成物中の本発明のカチオン性脂質の分子の総数は、該核酸のリン原子の数に対して1～10倍であるのが好ましく、2.5～9倍であるのがより好ましく、3.5～8倍であるのがさらに好ましい。また、該組成物中の本発明のカチオン性脂質および本発明のカチオン性脂質以外のカチオン性脂質の分子の総数は、該核酸のリン原子の数に対して1～10倍であるのが好ましく、2.5～9倍であるのがより好ましく、3.5～8倍であるのがさらに好ましい。
　中性脂質としては、単純脂質、複合脂質または誘導脂質のいかなるものであってもよく、例えばリン脂質、グリセロ糖脂質、スフィンゴ糖脂質、スフィンゴイドまたはステロール等が挙げられるがこれらに限定されない。
　本発明の組成物において中性脂質を含有する場合には、中性脂質の分子の総数は、本発明のカチオン性脂質および本発明のカチオン性脂質以外のカチオン性脂質の分子の総数に対して0.1～2倍であるのが好ましく、0.2～1.5倍であるのがより好ましく、0.3～1.2倍であるのがさらに好ましい。本発明の組成物は、いずれも中性脂質を、複合体に含有してもよく、複合体を封入する脂質膜に含有していてもよく、少なくとも複合体を封入する脂質膜に含有していることがより好ましく、複合体および該複合体を封入する脂質膜のどちらにも含有していることがさらに好ましい。
　中性脂質におけるリン脂質としては、例えばホスファチジルコリン(具体的には大豆ホスファチジルコリン、卵黄ホスファチジルコリン(EPC)、ジステアロイルホスファチジルコリン(DSPC)、ジパルミトイルホスファチジルコリン(DPPC)、パルミトイルオレオイルホスファチジルコリン(POPC)、ジミリストイルホスファチジルコリン(DMPC)、ジオレオイルホスファチジルコリン(DOPC)等)、ホスファチジルエタノールアミン(具体的にはジステアロイルホスファチジルエタノールアミン(DSPE)、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン(DPPE)、ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン(DOPE)、ジミリストイルホスホエタノールアミン(DMPE)、16-0-モノメチルPE、16-0-ジメチルPE、18-1-トランスPE、パルミトイルオレオイル-ホスファチジルエタノールアミン(POPE)、1 -ステアロイル-2-オレオイル-ホスファチジルエタノールアミン(SOPE)等)、グリセロリン脂質(具体的にはホスファチジルセリン、ホスファチジン酸、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルイノシトール、パルミトイルオレオイルホスファチジルグリセロール(POPG)、リゾホスファチジルコリン等)、スフィンゴリン脂質(具体的にはスフィンゴミエリン、セラミドホスホエタノールアミン、セラミドホスホグリセロール、セラミドホスホグリセロリン酸等)、グリセロホスホノ脂質、スフィンゴホスホノ脂質、天然レシチン(具体的には卵黄レシチン、大豆レシチン等)または水素添加リン脂質(具体的には水素添加大豆ホスファチジルコリン等)等の天然または合成のリン脂質が挙げられる。
　中性脂質におけるグリセロ糖脂質としては、例えばスルホキシリボシルグリセリド、ジグリコシルジグリセリド、ジガラクトシルジグリセリド、ガラクトシルジグリセリドまたはグリコシルジグリセリド等が挙げられる。
　中性脂質におけるスフィンゴ糖脂質としては、例えばガラクトシルセレブロシド、ラクトシルセレブロシドまたはガングリオシド等が挙げられる。
　中性脂質におけるスフィンゴイドとしては、例えばスフィンガン、イコサスフィンガン、スフィンゴシンまたはそれらの誘導体等が挙げられる。誘導体としては、例えばスフィンガン、イコサスフィンガンまたはスフィンゴシン等の-NH2を-NHCO(CH2)xCH3(式中、xは0～18の整数であり、中でも6、12または18が好ましい)に変換したもの等が挙げられる。
　中性脂質におけるステロールとしては、例えばコレステロール、ジヒドロコレステロール、ラノステロール、β-シトステロール、カンペステロール、スチグマステロール、ブラシカステロール、エルゴカステロール、フコステロールまたは3β-[N-(N',N'-ジメチルアミノエチル)カルバモイル]コレステロール(DC-Chol)等が挙げられる。
　高分子としては、例えばタンパク質、アルブミン、デキストラン、ポリフェクト(polyfect)、キトサン、デキストラン硫酸、例えばポリ-L-リジン、ポリエチレンイミン、ポリアスパラギン酸、スチレンマレイン酸共重合体、イソプロピルアクリルアミド-アクリルピロリドン共重合体、ポリエチレングリコール修飾デンドリマー、ポリ乳酸、ポリ乳酸ポリグリコール酸またはポリエチレングリコール化ポリ乳酸等の高分子またはそれらの塩の1以上からなるミセル等が挙げられる。
　ここで、高分子の塩は、例えば金属塩、アンモニウム塩、酸付加塩、有機アミン付加塩、アミノ酸付加塩等を包含する。金属塩としては、例えばリチウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩、マグネシウム塩、カルシウム塩等のアルカリ土類金属塩、アルミニウム塩または亜鉛塩等が挙げられる。アンモニウム塩としては、例えばアンモニウムまたはテトラメチルアンモニウム等の塩が挙げられる。酸付加塩としては、例えば塩酸塩、硫酸塩、硝酸塩またはリン酸塩等の無機酸塩、および酢酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩またはクエン酸塩等の有機酸塩が挙げられる。有機アミン付加塩としては、例えばモルホリンまたはピペリジン等の付加塩が挙げられる。アミノ酸付加塩としては、例えばグリシン、フェニルアラニン、アスパラギン酸、グルタミン酸またはリジン等の付加塩が挙げられる。
　また、本発明の組成物はいずれも、例えば糖、ペプチド、核酸および水溶性高分子から選ばれる1以上の物質の脂質誘導体もしくは脂肪酸誘導体、または界面活性剤等を含有することが好ましく、複合体に含有していてもよく、複合体を封入する脂質膜に含有していてもよく、複合体および該複合体を封入する脂質膜ともに含有していることがより好ましい。
　本発明の組成物が、糖、ペプチド、核酸および水溶性高分子から選ばれる1以上の物質の脂質誘導体もしくは脂肪酸誘導体を含有する場合には、糖、ペプチド、核酸および水溶性高分子から選ばれる1以上の物質の脂質誘導体および脂肪酸誘導体の分子の総数は、本発明のカチオン性脂質および本発明のカチオン性脂質以外のカチオン性脂質の分子の総数に対して0.01～0.3倍であるのが好ましく、0.02～0.25倍であるのがより好ましく、0.03～0.15倍であるのがさらに好ましい。
　糖、ペプチド、核酸および水溶性高分子から選ばれる1以上の物質の脂質誘導体もしくは脂肪酸誘導体、または界面活性剤としては、好ましくは、糖脂質、または水溶性高分子の脂質誘導体もしくは脂肪酸誘導体が挙げられ、より好ましくは、水溶性高分子の脂質誘導体または脂肪酸誘導体が挙げられる。糖、ペプチド、核酸および水溶性高分子から選ばれる1以上の物質の脂質誘導体もしくは脂肪酸誘導体、または界面活性剤は、分子の一部が組成物の他の構成成分と例えば疎水性親和力、静電的相互作用等で結合する性質をもち、他の部分が組成物の製造時の溶媒と例えば親水性親和力、静電的相互作用等で結合する性質をもつ、2面性をもつ物質であるのが好ましい。
　糖、ペプチドまたは核酸の脂質誘導体または脂肪酸誘導体としては、例えばショ糖、ソルビトール、乳糖等の糖、例えばカゼイン由来ペプチド、卵白由来ペプチド、大豆由来ペプチド、グルタチオン等のペプチド、または例えばDNA、RNA、プラスミド、siRNA、ODN等の核酸と、前記組成物の定義の中で挙げた中性脂質もしくは本発明のカチオン性脂質または例えばステアリン酸、パルミチン酸、ミリスチン酸、ラウリン酸等の脂肪酸とが結合してなるもの等が挙げられる。
　また、糖の脂質誘導体または脂肪酸誘導体としては、例えば前記組成物の定義の中で挙げたグリセロ糖脂質またはスフィンゴ糖脂質等も含まれる。
　水溶性高分子の脂質誘導体または脂肪酸誘導体としては、例えばポリエチレングリコール、ポリグリセリン、ポリエチレンイミン、ポリビニルアルコール、ポリアクリル酸、ポリアクリルアミド、オリゴ糖、デキストリン、水溶性セルロース、デキストラン、コンドロイチン硫酸、ポリグリセリン、キトサン、ポリビニルピロリドン、ポリアスパラギン酸アミド、ポリ-L-リジン、マンナン、プルラン、オリゴグリセロール等またはそれらの誘導体と、前記組成物の定義の中で挙げた中性脂質もしくは本発明のカチオン性脂質、または例えばステアリン酸、パルミチン酸、ミリスチン酸またはラウリン酸等の脂肪酸とが結合してなるもの、それらの塩等が挙げられ、より好ましくは、ポリエチレングリコールまたはポリグリセリン等の脂質誘導体または脂肪酸誘導体およびそれらの塩が挙げられ、さらに好ましくは、ポリエチレングリコールの脂質誘導体または脂肪酸誘導体およびそれらの塩が挙げられる。
　ポリエチレングリコールの脂質誘導体または脂肪酸誘導体としては、例えばポリエチレングリコール化脂質[具体的にはポリエチレングリコール-ホスファチジルエタノールアミン(より具体的には1,2-ジステアロイル-sn-グリセロ-3-ホスホエタノールアミン-N-[メトキシ(ポリエチレングリコール)-2000](PEG-DSPE)、1,2-ジミリストイル-sn-グリセロ-3-ホスホエタノールアミン-N-[メトキシ(ポリエチレングリコール)-2000](PEG-DMPE)等)、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油60、クレモフォアイーエル(CREMOPHOR　EL)等]、ポリエチレングリコールソルビタン脂肪酸エステル類(具体的にはモノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン等)またはポリエチレングリコール脂肪酸エステル類等が挙げられ、より好ましくは、ポリエチレングリコール化脂質が挙げられる。
　ポリグリセリンの脂質誘導体または脂肪酸誘導体としては、例えばポリグリセリン化脂質(具体的にはポリグリセリン-ホスファチジルエタノールアミン等)またはポリグリセリン脂肪酸エステル類等が挙げられ、より好ましくは、ポリグリセリン化脂質が挙げられる。
　界面活性剤としては、例えばモノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン(具体的にはポリソルベート80等)、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレングリコール(具体的にはプルロニックF68等)、ソルビタン脂肪酸エステル(具体的にはソルビタンモノラウレート、ソルビタンモノオレエート等)、ポリオキシエチレン誘導体(具体的にはポリオキシエチレン硬化ヒマシ油60、ポリオキシエチレンラウリルアルコール等)、グリセリン脂肪酸エステルまたはポリエチレングリコールアルキルエーテル等が挙げられ、好ましくは、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレングリコール、グリセリン脂肪酸エステルまたはポリエチレングリコールアルキルエーテル等が挙げられる。
　また、本発明の組成物中の複合体および脂質膜には、例えば水溶性高分子等による表面改質も任意に行うことができる[ラジック(D.D.Lasic)、マーティン(F.Martin)編,“ステルス・リポソームズ(Stealth Liposomes)”(米国),シーアールシー・プレス・インク(CRC Press Inc),1995年,p.93-102参照]。表面改質に使用し得る水溶性高分子としては、例えばポリエチレングリコール、ポリグリセリン、ポリエチレンイミン、ポリビニルアルコール、ポリアクリル酸、ポリアクリルアミド、オリゴ糖、デキストリン、水溶性セルロース、デキストラン、コンドロイチン硫酸、ポリグリセリン、キトサン、ポリビニルピロリドン、ポリアスパラギン酸アミド、ポリ-L-リジン、マンナン、プルラン、オリゴグリセロール等が挙げられ、好ましくはデキストラン、プルラン、マンナン、アミロペクチンまたはヒドロキシエチルデンプン等が挙げられる。また、表面改質には、糖、ペプチド、核酸および水溶性高分子から選ばれる1以上の物質の脂質誘導体または脂肪酸誘導体(前記と同義)等を用いることができる。該表面改質は、本発明の組成物中の複合体および脂質膜に糖、ペプチド、核酸および水溶性高分子から選ばれる1以上の物質の脂質誘導体もしくは脂肪酸誘導体、または界面活性剤を含有させる方法の1つである。
　また、標的化リガンドを、本発明の組成物の脂質成分の極性ヘッド残基に共有結合することにより本発明の組成物の表面に直接結合させることも任意に行うことができる(国際公開第2006/116107号参照)。
　本発明の組成物中の複合体または複合体を封入する脂質膜の平均粒子径は、所望により自由に選択できるが、下記する平均粒子径とするのが好ましい。平均粒子径を調節する方法としては、例えばエクストルージョン法、大きな多重膜リポソーム(MLV)等を機械的に粉砕(具体的にはマントンゴウリン、マイクロフルイダイザー等を使用)する方法[ミュラー(R.H.Muller)、ベニタ(S.Benita)、ボーム(B.Bohm)編著,“エマルジョン・アンド・ナノサスペンジョンズ・フォー・ザ・フォーミュレーション・オブ・ポアリー・ソラブル・ドラッグズ(Emulsion and Nanosuspensions for the Formulation of Poorly Soluble Drugs)”,ドイツ,サイエンティフィック・パブリッシャーズ・スチュットガルト(Scientific Publishers Stuttgart),1998年,p.267-294参照]等が挙げられる。
　本発明の組成物中の複合体の大きさは、平均粒子径が約5nm～200nmであるのが好ましく、約20nm～150nmであるのがより好ましく、約30nm～100nmであるのがさらに好ましい。
　本発明の組成物(複合体を封入する脂質膜)の大きさは、平均粒子径が約10nm～300nmであるのが好ましく、約30nm～200nmであるのがより好ましく、約50nm～150nmであるのがさらに好ましい。
　本発明の組成物中の複合体または複合体を封入する脂質膜の平均粒子径は、例えば動的光散乱法で測定することができる。
　本発明の組成物を、哺乳動物の細胞に導入することで、本発明の組成物中の核酸を細胞内に導入することができる。
　インビボにおける本発明の組成物の哺乳動物の細胞への導入は、インビボにおいて行うことのできる公知のトランスフェクションの手順に従って行えばよい。例えば、本発明の組成物を、人を含む哺乳動物に静脈内投与することで、例えば腫瘍または炎症の生じた臓器または部位へ送達され、送達臓器または部位の細胞内に本発明の組成物中の核酸を導入することができる。腫瘍または炎症の生じた臓器または部位としては、特に限定されないが、例えば胃、大腸、肝臓、肺、脾臓、膵臓、腎臓、膀胱、皮膚、血管、眼球等が挙げられる。また、本発明の組成物を、人を含む哺乳動物に静脈内投与することで、例えば肝臓、肺、脾臓および/または腎臓へ送達され、送達臓器または部位の細胞内に本発明の組成物中の核酸を導入することができる。肝臓、肺、脾臓および/または腎臓の細胞は、正常細胞、腫瘍もしくは炎症に関連した細胞またはその他の疾患に関連した細胞のいずれでもよい。
　本発明の組成物中の核酸が、RNA干渉(RNAi)を利用した標的遺伝子の発現抑制作用を有する核酸であれば、インビボで哺乳動物の細胞内に、標的遺伝子の発現を抑制する該核酸等を導入することができ、標的遺伝子の発現の抑制ができる。投与対象は、人であることが好ましい。
　また、本発明における標的遺伝子が、例えば肝臓、肺、腎臓または脾臓において発現する遺伝子、好ましくは肝臓において発現する遺伝子であれば、本発明の組成物を、肝臓、肺、腎臓または脾臓に関連する疾患の治療剤または予防剤、好ましくは肝臓に関連する疾患の治療剤または予防剤として使用することができる。即ち、本発明は、上記説明した本発明の組成物を哺乳動物に投与する肝臓、肺、腎臓または脾臓に関連する疾患の治療方法も提供する。投与対象は、人であることが好ましく、肝臓、肺、腎臓または脾臓に関連する疾患に罹患している人がより好ましい。
　また、本発明の組成物は、肝臓、肺、腎臓または脾臓に関連する疾患の治療剤または予防剤に関するインビボの薬効評価モデルにおいて、標的遺伝子を抑制することの有効性を検証するためのツールとして使用することもできる。
　本発明の組成物は、例えば血液成分等の生体成分(例えば血液、消化管等)中での前記核酸の安定化、副作用の低減または標的遺伝子の発現部位を含む組織または臓器への薬剤集積性の増大等を目的とする製剤としても使用できる。
　本発明の組成物を、医薬品の肝臓、肺、腎臓または脾臓に関連する疾患等の治療剤または予防剤として使用する場合、投与経路としては、治療に際し最も効果的な投与経路を使用するのが望ましく、例えば口腔内、気道内、直腸内、皮下、筋肉内または静脈内等の非経口投与または経口投与を挙げることができ、好ましくは静脈内投与または筋肉内投与を挙げることができ、より好ましくは静脈内投与が挙げられる。
　投与量は、投与対象の病状や年齢、投与経路等によって異なるが、例えば核酸に換算した1日投与量が約0.1μg～1000mgとなるように投与すればよい。
　静脈内投与または筋肉内投与に適当な製剤としては、例えば注射剤が挙げられ、上述の方法により調製した組成物の分散液をそのまま例えば注射剤等の形態として用いることも可能であるが、該分散液から例えば濾過、遠心分離等によって溶媒を除去して使用することも、該分散液を凍結乾燥して使用する、および/または例えばマンニトール、ラクトース、トレハロース、マルトースもしくはグリシン等の賦形剤を加えた分散液を凍結乾燥して使用することもできる。
　注射剤の場合、前記の組成物の分散液または前記の溶媒を除去または凍結乾燥した組成物に、例えば水、酸、アルカリ、種々の緩衝液、生理食塩水またはアミノ酸輸液等を混合して注射剤を調製することが好ましい。また、例えばクエン酸、アスコルビン酸、システインもしくはEDTA等の抗酸化剤またはグリセリン、ブドウ糖もしくは塩化ナトリウム等の等張化剤等を添加して注射剤を調製することも可能である。また、例えばグリセリン等の凍結保存剤を加えて凍結保存することもできる。
　次に、実施例、参考例および試験例により、本発明を具体的に説明する。ただし、本発明はこれら実施例、参考例および試験例に限定されるものではない。
　なお、実施例および参考例に示されたプロトン核磁気共鳴スペクトル(1H　NMR)は、270MHz、300MHz、400MHzまたは500MHzで測定されたものであり、化合物および測定条件によっては交換性プロトンが明瞭には観測されないことがある。なお、シグナルの多重度の表記としては通常用いられるものを用いている。
　参考例1
　2,2-ビス[(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル]プロパン-1,3-ジオール(化合物IIc-1)
　マロン酸ジメチル (東京化成工業社製, 0.50 g, 3.78 mmol)をテトラヒドロフラン (20 mL)に溶解させ、(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニル　メタンスルホナート (ニューチェック・プレップ・インク(Nu-Chek Prep,Inc)社製, 3.26 g, 9.46 mmol)、水素化ナトリウム (ナカライテスク社製,　油性60%, 0.454 g, 11.4 mmol)およびヨウ化テトラブチルアンモニウム (和光純薬工業社製, 0.280 g, 0.757 mmol)を加えて、70℃で3時間撹拌した。反応混合物に飽和塩化アンモニウム水溶液を加え、水層をヘプタンで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後ろ過し、減圧濃縮した。得られた残渣をショートカラムにて精製することで2,2-ビス[(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル]マロン酸ジメチルの粗生成物を得た。
　得られた粗生成物をテトラヒドロフラン (4 mL)に溶解させ、氷冷下水素化アルミニウムリチウム (東京化成工業社製, 0.826 g, 21.8 mmol)を加え、1時間撹拌した。反応混合物に水 (0.75 mL)、15% 水酸化ナトリウム水溶液 (0.75 mL)、水 (2.25 mL)を順次加え、反応を停止した。生じた不溶物をろ過することにより除去した。ろ液を減圧濃縮し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ヘプタン/酢酸エチル=80/20)で精製することにより、化合物IIc-1 (1.51 g, 収率70%)を得た。
ESI-MS m/z: 573 (M + H)+
　1-メチル-3,3-ビス[(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル]アゼチジン(化合物1)
　工程１
　参考例1で得られる化合物IIc-1 (1.00 g, 1.75 mmol)をジクロロメタン(5 mL)に溶解させ、ピリジン (和光純薬工業社製, 1.41 mL, 17.5 mmol)およびジメチルアミノピリジン (ナカライテスク社製, 0.0210 g, 0.175 mmol)を加えた。氷冷下、無水トリフルオロメタンスルホン酸 (ナカライテスク社製, 0.855 mL, 5.24 mmol)を加え、1時間撹拌した。反応混合物に水を加え、ヘプタンで3回抽出した。有機層を塩化アンモニウム水溶液、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧濃縮することで、2,2-ビス[(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル]プロパン-1,3-ジイル ビス(トリフルオロメタンスルホナート)の粗生成物 (1.50g, 収率100%)を得た。
　工程2
　工程1で得られる粗生成物 (0.500 g, 0597 mmol)をN,N-ジメチルアセトアミド (3 mL)に溶解させ、メチルアミン (東京化成工業社製, 約9.8 mol/Lメタノール溶液, 3.05 mmol, 29.9 mmol)を加え、油浴上60℃で1時間撹拌した。室温まで冷却後、反応混合物に水を加え、ヘキサンで抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧濃縮し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(NHシリカゲル、ヘキサン/酢酸エチル=100/0～70/30)で精製することで、化合物1 (0.32 g, 収率94%)を得た。
ESI-MS m/z: 568(M + H)+; 1H-NMR (CDCl3) δ: 0.89 (6H, t, J = 6.8 Hz), 1.12-1.38 (36H, m), 1.48-1.55 (4H, m), 2.05 (8H, q, J = 6.8 Hz), 2.30 (3H, s), 2.78 (4H, t, J = 6.8 Hz), 2.93 (4H, s), 5.29-5.43 (8H, m).
　3,3-ビス[(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル]-1-プロピルアゼチジン(化合物2)
　工程1
　参考例1で得られる化合物IIc-1 (3.50 g, 6.11 mmol)をジクロロメタン (15 mL)に溶解させ、氷冷下トリエチルアミン (和光純薬工業社製, 2.55 mL, 18.3 mmol)およびメシル酸クロリド(東京化成工業社製, 1.12 mL, 15.3 mmol)加え、1時間撹拌した。反応混合物に水を加え、ヘプタンで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧濃縮し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(クロロホルム/メタノール=100/0～97/3)で精製することで、2,2-ビス[(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル]プロパン-1,3-ジイル ジメタンスルホナート (3.30 g,収率74%)を得た。
　工程2
　工程1で得られる2,2-ビス[(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル]プロパン-1,3-ジイル ジメタンスルホナート (0.200 g, 0.274 mmol)をN,N-ジメチルアセトアミド (0.5 mL)に溶解させ、プロピルアミン (0.451 mL, 5.49 mmol)を加え、マイクロ波反応装置を用いて130℃で6時間攪拌した。反応混合物に水を加え、ヘプタンで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧濃縮し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(NHシリカゲル、ヘプタン/酢酸エチル=100/0～80/20)で精製することで、化合物2 (14.8 mg, 収率9%)を得た。
ESI-MS m/z: 597(M + H)+; 1H-NMR (CDCl3) δ: 0.84-0.92 (9H, m), 1.11-1.41 (38H, m), 1.49-1.56 (4H, m), 2.05 (8H, q, J = 6.6 Hz), 2.36 (2H, t, J = 7.7 Hz), 2.77 (4H, t, J = 5.9 Hz), 2.90 (4H, s), 5.27-5.45 (8H, m).
　3,3-ビス[(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル]アゼチジン(化合物3)
　実施例1と同様の方法で、メチルアミンの代わりにアンモニア (シグマアルドリッチ(Sigma-Aldrich) 社製, 約7 mol/Lメタノール溶液, 4.27 mL, 29.9 mmol)を用い、化合物3 (0.0750g, 収率23%)を得た。
ESI-MS m/z: 554(M + H)+; 1H-NMR (CDCl3)δ: 0.89 (6H, t, J = 7.0 Hz), 1.12-1.38 (36H, m), 1.53-1.58 (4H, m), 2.05 (8H, q, J = 6.8 Hz), 2.78 (4H, t, J = 6.8 Hz), 3.28 (4H, s), 5.31-5.41 (8H, m).
　3-(ジメチルアミノ)プロピル 3,3-ビス[(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル]アゼチジン-1-カルボキシラート(化合物4)
　実施例3で得られた化合物3をアセトニトリル (2 mL)に溶解させ、“ジャーナル・オブ・アメリカン・ケミカル・ソサイエティー(J.Am.Chem.Soc.)”,1981年,第103巻,p.4194-4199記載の方法に準じた方法で合成した3-(ジメチルアミノ)プロピル　4-ニトロフェニルカルボナート塩酸塩(化合物VII-1) (0.0620 g, 0.203 mmol)およびトリエチルアミン (0.0570 mL, 0.406 mmol)を加え、80℃で2時間攪拌した。反応混合物を酢酸エチルで希釈し、水で洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後ろ過し、減圧濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(NHシリカゲル、ヘキサン/酢酸エチル=80/20)で精製することにより、化合物4 (0.0580 g, 収率63%)を得た。
ESI-MS m/z: 683(M + H)+;　1H-NMR (CDCl3) δ: 0.89 (6H, t, J = 6.8 Hz), 1.13-1.22 (4H, m), 1.25-1.39 (32H, m), 1.49-1.55 (4H, m), 1.73-1.81 (2H, m), 2.05 (8H, q, J = 6.8 Hz), 2.22 (6H, s), 2.33 (2H, t, J = 7.6 Hz), 2.77 (4H, t, J = 6.8 Hz), 3.58 (4H, s), 4.08 (2H, t, J = 6.5 Hz), 5.29-5.42 (8H, m).
　参考例2
　2,2-ビス[(Z)-オクタデカ-9-エン-1-イル]プロパン-1,3-ジオール(化合物IIc-2)
　参考例1と同様の方法で、(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニル　メタンスルホナートの代わりに(Z)-オクタデカ-9-エン-1-イル　メタンスルホナート (Nu-Chek Prep,Inc社製, 4.50 g, 13.0 mmol)を用い、化合物IIc-2 (1.06 g, 収率35%)を得た。
ESI-MS m/z: 577(M + H)+
　1-メチル-3,3-ビス[(Z)-オクタデカ-9-エン-1-イル]アゼチジン(化合物5)
　実施例1と同様の方法で、参考例1で得られる化合物IIc-1の代わりに参考例2で得られる化合物IIc-2 (0.300 g, 0.520 mmol)を用い、化合物5 (0.272 g, 収率92%)を得た。
ESI-MS m/z: 572(M + H)+; 1H-NMR (CDCl3) δ: 0.88 (6H, t, J = 6.8 Hz), 1.14-1.35 (48H, m), 1.50-1.53 (4H, m), 2.02 (8H, q, J = 6.8 Hz), 2.31 (3H, s), 2.94 (4H, s), 5.31-5.39 (4H, m).
　参考例3
　2,2-ビス[(Z)-ヘキサデカ-9-エン-1-イル]プロパン-1,3-ジオール(化合物IIc-3)
　参考例1と同様の方法で、(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニル　メタンスルホナートの代わりに(Z)-ヘキサデカ-9-エン-1-イル　メタンスルホナート (Nu-Chek Prep,Inc社製, 5.00 g, 15.7 mmol)を用い、化合物IIc-3 (2.07 g, 収率59%)を得た。
ESI-MS m/z: 521(M + H)+
　3,3-ビス[(Z)-ヘキサデカ-9-エン-1-イル]-1-メチルアゼチジン(化合物6)
　実施例1と同様の方法で、参考例1で得られる化合物IIc-1の代わりに参考例3で得られる化合物IIc-3 (0.300 g, 0.576 mmol)を用い、化合物6 (0.263 g, 収率89%)を得た。
　ESI-MS m/z: 516(M + H)+; 1H-NMR (CDCl3) δ: 0.89 (6H, t, J = 6.8 Hz), 1.14-1.35 (40H, m), 1.50-1.53 (4H, m), 2.02 (8H, q, J = 6.8 Hz), 2.31 (3H, s), 2.94 (4H, s), 5.31-5.39 (4H, m).
　参考例4
　2,2-ビス[(11Z,14Z)-イコサ-11,14-ジエン-1-イル]プロパン-1,3-ジオール(化合物IIc-4)
　参考例1と同様の方法で、(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニル　メタンスルホナートの代わりに(11Z,14Z)-イコサ-11,14-ジエン-1-イル　メタンスルホナート (Nu-Chek Prep,Inc社製, 5.00 g, 13.4 mmol)を用い、化合物IIc-4 (2.07 g, 収率59%)を得た。
ESI-MS m/z: 629(M + H)+
　3,3-ビス[(11Z,14Z)-イコサ-11,14-ジエン-1-イル]-1-メチルアゼチジン(化合物7)
　実施例1と同様の方法で、参考例1で得られる化合物IIc-1の代わりに参考例4で得られる化合物IIc-4 (0.300 g、0.477 mmol)を用い、化合物7(0.256 g、収率86%)を得た。
　ESI-MS m/z: 624(M + H)+; 1H-NMR (CDCl3) δ: 0.89 (6H, t, J = 6.4 Hz), 1.16-1.37 (44H, m), 1.50-1.54 (4H, m), 2.05 (8H, q, J = 6.8 Hz), 2.31 (3H, s), 2.78 (4H, t, J = 6.4 Hz), 2.94 (4H, s), 5.30-5.42 (8H, m).
　3-(3,3-ジ((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)アゼチジン-1-イル)プロパン-1-オール(化合物8)
　実施例1と同様の方法で、メチルアミンの代わりに3-アミノプロパン-1-オール (東京化成工業社製, 0.468 mL, 6.16 mmol)を用い、化合物8 (0.237 g, 収率63%)を得た。
ESI-MS m/z: 613(M + H)+; 1H-NMR (CDCl3)δ: 0.89 (6H, t, J = 6.8 Hz), 1.13-1.39 (40H, m), 1.50-1.56 (2H, m), 2.05 (8H, q, J = 6.8 Hz), 2.69 (2H, t, J = 5.4 Hz), 2.77 (4H, t, J = 6.3 Hz), 2.93 (4H, s), 3.75 (2H, t, J = 5.4 Hz), 5.27-5.44 (8H, m).
　 2-(3,3-ジ((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)アゼチジン-1-イル)エタン-1-オール(化合物9)
　実施例2と同様の方法で、メチルアミンの代わりに2-アミノエタノール (東京化成工業社製, 0.800 g, 13.1 mmol)を用い、化合物9 (0.012 g, 収率13%)を得た。
ESI-MS m/z: 598(M + H)+; 1H-NMR (CDCl3)δ: 0.89 (6H, t, J = 6.8 Hz), 1.14-1.42 (40H, m), 2.05 (8H, q, J = 6.5 Hz),  2.59 (2H, t, J = 5.3 Hz), 2.77 (4H, t, J = 5.9 Hz), 2.96 (4H, s), 3.48 (2H, t, J = 5.3 Hz), 5.28-5.44 (8H, m).
　参考例5
　 2-デシル-2-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)プロパン-1,3-ジオール (化合物IIc-5)
　工程1
　マロン酸ジメチル (0.400 g, 3.03 mmol)をアセトニトリル (10 mL)に溶解させ、(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニル　メタンスルホナート (1.25 g, 3.63 mmol)、炭酸セシウム (和光純薬工業社製, 1.97 g, 6.06 mmol)およびヨウ化テトラブチルアンモニウム (1.34 g, 3.63 mmol)を加えて、60℃で1時間撹拌した。反応混合物に水を加え、水層をヘキサンで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後ろ過し、減圧濃縮した。得られた残渣をカラムクロマトグラフィー(ヘキサン/酢酸エチル=90/10)にて精製することでジメチル 2-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)マロナート (0.800 g, 収率69%)を得た。
　ESI-MS m/z: 381(M + H)+;
　工程2
　工程1で得られたジメチル 2-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)マロナート(0.400 g, 1.05 mmol)をテトラヒドロフラン (2 mL)に溶解させ、1-ブロモデカン(東京化成工業社製, 0.326 g, 1.58 mmol)、水素化ナトリウム (油性60%, 0.063 g, 1.58 mmol)およびヨウ化テトラブチルアンモニウム (0.280 g, 0.757 mmol)を加えて、70℃で3時間撹拌した。反応混合物に水を加え、水層をヘキサンで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後ろ過した。ろ液を減圧濃縮することにより、ジメチル 2-デシル-2-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)マロナートの粗生成物を得た。
　得られた粗生成物をテトラヒドロフラン (3 mL)に溶解させ、氷冷下水素化アルミニウムリチウム (0.122 g, 3.23 mmol)を加え、1時間撹拌した。反応混合物に水 (0.1 mL)、15% 水酸化ナトリウム水溶液 (0.1 mL)、水 (0.3 mL)を順次加え、反応を停止した。生じた不溶物をろ過することにより除去した。ろ液を減圧濃縮し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ヘキサン/酢酸エチル=90/10～50/50)で精製することにより、化合物IIc-5 (0.265 g, 収率53%)を得た。
　ESI-MS m/z: 465(M + H)+
　3-デシル-1-メチル-3-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)アゼチジン(化合物10)
　実施例1と同様の方法で、参考例1で得られる化合物IIc-1の代わりに参考例5で得られる化合物IIc-5 (0.265 g, 0.570 mmol)を用い、化合物10 (0.206 g, 収率79%)を得た。
　ESI-MS m/z: 460(M + H)+; 1H-NMR (CDCl3) δ: 0.84-0.93 (6H, m), 1.11-1.40 (34, m), 1.50-1.55 (4H, m), 2.05 (4H, q, J = 6.8 Hz), 2.30 (3H, s), 2.77 (2H, t, J = 6.5 Hz), 2.93 (4H, s), 5.29-5.43 (4H, m).
　3-(3,3-ジ((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)アゼチジン-1-イル)-N,N-ジメチルプロパン-1-アミン(化合物11)
　実施例1と同様の方法で、メチルアミンの代わりにN,N-ジメチル-1,3-プロパンジアミン (東京化成工業社製, 0.427 mL, 4.18 mmol)を用い、化合物11 (0.091 g, 収率34%)を得た。
　ESI-MS m/z: 639(M + H)+; 1H-NMR (CDCl3)δ:0.86 (6H, t, J = 7.0 Hz), 1.08-1.18 (4H, m), 1.21-1.38 (32H, m), 1.56-1.60 (4H, m), 1.61-1.69 (2H, m), 2.01 (8H, q, J = 6.8 Hz), 2.21 (6H, s), 2.31 (2H, t, J = 7.1 Hz), 2.65-2.72 (2H, m), 2.75 (4H, t, J = 6.7 Hz), 3.20 (4H, s), 5.25-5.40 (8H, m).
　2-(3,3-ジ((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)アゼチジン-1-イル)-N,N-ジメチルエタン-1-アミン(化合物12)
　実施例1と同様の方法で、メチルアミンの代わりにN,N-ジメチルエチレンジアミン (東京化成工業社製, 0.709 mL, 6.51 mmol)を用い、化合物12 (0.312 g, 収率77%)を得た。
　ESI-MS m/z: 625(M + H)+; 1H-NMR (CDCl3)δ:0.89 (6H, t, J = 7.0 Hz), 1.11-1.20 (4H, m), 1.23-1.39 (32H, m), 1.49-1.55 (4H, m), 2.05 (8H, q, J = 6.8 Hz), 2.21 (6H, s), 2.22-2.26 (2H, m), 2.52-2.58 (2H, m), 2.77 (4H, t, J = 6.7 Hz), 2.93 (4H, s), 5.28-5.43 (8H, m).
　参考例6
　 2-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)-2-オクタデシルプロパン-1,3-ジオール (化合物IIc-6)
　参考例5と同様の方法で、1-ブロモデカンの代わりに1-ブロモオクタデカン (東京化成工業社製, 0.394 g, 1.18 mmol)を用い、化合物IIc-6 (0.186 g, 通し収率28%)を得た。
ESI-MS m/z: 577(M + H)+
　1-メチル-3-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)-3-オクタデシルアゼチジン(化合物13)
　実施例1と同様の方法で、参考例1で得られる化合物IIc-1の代わりに参考例6で得られる化合物IIc-6 (0.186 g, 0.322 mmol)を用い、化合物13 (0.030 g, 収率16%)を得た。
　ESI-MS m/z: 572(M + H)+; 1H-NMR (CDCl3) δ:0.84-0.90 (6H, m), 1.10-1.22 (4H, m), 1.23-1.38 (46H, m), 1.56-1.62 (4H, m), 2.04 (4H, q, J = 6.8 Hz), 2.51 (3H, s), 2.76 (2H, t, J = 6.7 Hz), 3.25 (4H, s), 5.28-5.42 (4H, m).
　参考例7
　1-((2-ニトロフェニル)スルホニル)-3,3-ビス(2-(((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)オキシ)エチル)アゼチジン(化合物XIIIf-1)
　工程1
　国際公開第2012/108397号に記載の方法で合成した2-((9Z,12)-オクタデカ9,12-ジエン-1-イルオキシ)エタノール (2.30 g, 7.41 mmol)をジクロロメタン(20 mL)に溶解させ、氷冷下トリエチルアミン (1.55 mL, 11.1 mmol)、2-ニトロベンゼン-1-スルホニルクロリド (2.13 g, 9.63 mmol)を加え、2時間撹拌した。反応混合物に水を加え、水層を酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後ろ過し、減圧濃縮した。得られた残渣をカラムクロマトグラフィー(ヘキサン/酢酸エチル=90/10)にて精製することで2-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イルオキシ)エチル 2-ニトロベンゼンスルホナート(1.93 g, 収率53%)を得た。
　ESI-MS m/z: 496(M + H)+
　工程2
　工程1で得られた2-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イルオキシ)エチル 2-ニトロベンゼンスルホナート (1.93g, 3.89 mmol)をN,N-ジメチルホルムアミド (8 mL)に溶解させ、2-シアノ酢酸エチル (東京化成工業社製, 0.189 ml, 1.77 mmol)、炭酸セシウム (1.73 g, 5.30 mmol)を加えて、100℃で1時間撹拌した。反応混合物に水を加え、水層をヘキサンで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後ろ過した。ろ液を減圧濃縮することでエチル 2-シアノ-4-(((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)オキシ)-2-(2-(((9Z,12Z)-オクタデエカ-9,12-ジエン-1-イル)オキシ)エチル)ブタノアートの粗生成物を得た。
　得られた粗生成物をテトラヒドロフラン (8 mL)に溶解させ、氷冷下水素化アルミニウムリチウム (0.239 g, 6.30 mmol)を加え、室温で1時間撹拌した。反応混合物に水 (0.24 mL)、15%水酸化ナトリウム水溶液 (0.24 mL)、水 (0.72 mL)を順次加え、反応を停止した。生じた不溶物をろ過することにより除去した。ろ液を減圧濃縮し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ヘキサン/酢酸エチル=99/1～50/50)で精製することにより、 2-(アミノエチル)-4-(((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)オキシ)-2-(2-(((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)オキシ)エチル)ブタン-1-オール (0.350 g, 収率34%)を得た。
　ESI-MS m/z: 660 (M + H)+
　工程3
　工程2で得られる2-(アミノエチル)-4-(((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)オキシ)-2-(2-(((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)オキシ)エチル)ブタン-1-オール (0.53 g, 0.803 mmolをジクロロメタン (4 mL)に溶解させ、氷冷下トリエチルアミン (0.168 mL, 1.20 mmol)、2-ニトロベンゼン-1-スルホニルクロリド (0.231 g, 1.04 mmol)を加え、1時間撹拌した。反応混合物に水を加え、水層をヘキサンで抽出した。有機層を水、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後ろ過した。ろ液を濃縮することによりN-(2-(ヒドロキシメチル)-4-(((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)オキシ)-2-(2-(((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)オキシ)エチル)ブチル)-2-ニトロベンゼンスルホンアミドの粗生成物を得た。
　得られた粗生成物をテトラヒドロフラン (4 mL)に溶解させ、トリフェニルホスフィン (ナカライテスク社製, 0.340 g, 1.30 mmol)、アゾジカルボン酸ジイソプロピル (東京化成工業社製, 40%トルエン溶液, 1.9 mol/L, 0.682 mL, 1.30 mmol)を加え、室温で15分撹拌した。反応混合物に水を加え、水層をヘキサンで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後ろ過し、減圧濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ヘキサン/酢酸エチル=95/5～70/30)で精製することにより、化合物XIIIf-1 (0.585 g, 収率82%)を得た。
　ESI-MS m/z: 827 (M + H)+
　3,3-ビス(2-(((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)オキシ)エチル)アゼチジン(化合物14)
　参考例7で得られた化合物XIIIf-1 (0.585 g, 0.707 mmol)をアセトニトリル (7 mL)に溶解させ、1-ドデカンチオール (東京化成工業社製, 0.412 mL, 1.77 mmol)、1,8-ジアザビシクロ[5.4.0]-7-ウンデセン (ナカライテスク社製, 0.246 mL, 1.77 mmol)を加え、70℃で1時間撹拌した。反応混合物に水を加え、水層をヘキサンで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後ろ過し、減圧濃縮した。得られた残渣をNHシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ヘキサン/酢酸エチル=99/1～30/70)で精製することにより、化合物14 (0.045 g, 収率10%)を得た。
ESI-MS m/z: 642(M + H)+; 1H-NMR (CDCl3) δ: 0.89 (6H, t, J = 7.0 Hz), 1.24-1.39 (32H, m), 1.50-1.57 (4H, m), 1.91(4H, t, J = 7.0 Hz), 2.05 (8H, q, J = 6.9 Hz), 2.77 (4H, t, J = 6.6 Hz), 3.38 (4H, t, J = 6.7 Hz), 3.41 (4H, s), 3.46 (4H, t, J = 7.0 Hz), 5.28-5.44 (8H, m).
　1-メチル－3,3-ビス(2-(((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)オキシ)エチル)アゼチジン(化合物15)
　実施例14で得られる化合物14 (0.134 g, 0.209 mmol)を1,2-ジクロロエタン (1 mL)とメタノール (1 mL)に溶解させ、ホルムアルデヒド (和光純薬工業社製, 37%水溶液, 0.076 mL, 1.04 mmol)、ナトリウムトリアセトキシボロヒドリド (東京化成工業社製, 0.111 g, 0.522 mmol)を加え、室温で一晩撹拌した。反応混合物に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加え、水層をクロロホルムで抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後ろ過し、減圧濃縮した。得られた残渣をNHシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ヘキサン/酢酸エチル=90/10)で精製することにより、化合物15 (0.088 g, 収率64%)を得た。
　ESI-MS m/z: 656(M + H)+; 1H-NMR (CDCl3) δ: 0.89 (6H, t, J = 6.8 Hz), 1.24-1.40 (32H, m), 1.49-1.57 (4H, m), 1.87 (4H, t, J = 6.8 Hz), 2.05 (8H, q, J = 6.9 Hz), 2.30 (3H, s), 2.77 (4H, t, J = 6.3 Hz), 3.04 (4H, s), 3.37 (4H, t, J= 6.7 Hz), 3.44 (4H, t, J = 7.0 Hz), 5.28-5.44 (8H, m).
　参考例8
　1-((2-ニトロフェニル)スルホニル)-3,3-ビス(3-(((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)オキシ)プロピル)アゼチジン(化合物XIIIf-2)
　工程1 
　(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニル　メタンスルホナート (10.0 g、29.0 mmol)を1,4-ジオキサン (20 mL)に溶解させ、1,3-プロパンジオール (和光純薬工業社製, 55.2 g, 726 mmol)を加えて、加熱環流下2日間撹拌した。反応混合物に水を加え、水層をクロロホルムで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後ろ過し、減圧濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ヘキサン/酢酸エチル=90/10)で精製することにより、3-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イルオキシ)プロパン-1-オール (4.96 g, 収率53%)を得た。
ESI-MS m/z: 324(M + H)+; 
　工程2
　工程1で得られた3-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イルオキシ)プロパン-1-オール (4.95 g, 15.3 mmol)をジクロロメタン (20 mL)に溶解させ、氷冷下トリエチルアミン (4.25 mL, 30.5 mmol)、メシル酸クロリド (2.36 mL、30.5 mmol)を加えて、0℃で2時間撹拌した。反応混合物に水を加え、水層を酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後ろ過し、減圧濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ヘキサン/酢酸エチル=90/10)で精製することにより、3-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イルオキシ)プロピル メタンスルホナート (5.47 g, 収率89%)を得た。
ESI-MS m/z: 403(M + H)+; 
　工程3
　参考例7の工程2、工程3と同様の方法で、2-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イルオキシ)エチル 2-ニトロベンゼンスルホナートの代わりに工程2で得られた3-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イルオキシ)プロピル メタンスルホナート (1.57 g, 3.89 mmol)を用い、化合物XIIIf-2 (0.109 g, 通し収率7.6%)を得た。
　ESI-MS m/z: 855(M + H)+; 
　3,3-ビス(3-(((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)オキシ)プロピル)アゼチジン(化合物16)
　実施例14と同様の方法で、化合物XIIIf-1の代わりに化合物XIIIf-2 (0.109 g, 0.135 mmol)を用い、化合物16 (0.062 g, 収率69%)を得た。
ESI-MS m/z: 670(M + H)+; 1H-NMR (CDCl3) δ: 0.89 (6H, t, J = 7.0 Hz), 1.22-1.40 (32H, m), 1.44-1.67 (12H, m), 2.05 (8H, q, J = 6.8 Hz), 2.77 (4H, t, J = 6.7 Hz), 3.31 (4H, s), 3.39 (8H, t, J = 6.7 Hz), 5.28-5.45 (8H, m).
　1-メチル－3,3-ビス(3-(((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)オキシ)プロピル)アゼチジン(化合物17)
　実施例15と同様の方法で、化合物14の代わりに化合物16 (0.062 g, 0.093 mmol)を用い、化合物17 (0.056 g, 収率88%)を得た。
　ESI-MS m/z: 684(M + H)+;  1H-NMR (CDCl3) δ: 0.89 (6H, t, J = 6.8 Hz), 1.23-1.40 (32H, m), 1.42-1.62 (12H, m), 2.05 (8H, q, J = 6.9 Hz), 2.31 (3H, s), 2.77 (4H, t, J = 6.7 Hz), 2.96 (4H, s), 3.35-3.43 (8H, m), 5.25-5.47 (8H, m).
　2-ジメチル-3,3-ジ((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)アゼチジン(化合物18)
　工程1
　シアノ酢酸エチル (2.00 g, 17.7 mmol)をアセトニトリル(50 mL)に溶解させ、(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニル　メタンスルホナート (13.4 g, 38.9 mmol)、炭酸セシウム(17.3 g, 53.1 mmol)を加えて、60℃で2時間撹拌した。反応混合物に水を加え、水層をヘキサンで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後ろ過した、ろ液を減圧濃縮することで、エチル (11Z,14Z)-2-シアノ-2-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)イコサ-11,14-ジエノアートの粗生成物を得た。
　得られた粗生成物をテトラヒドロフラン (5 mL)に溶解させ、氷冷下水素化アルミニウムリチウム (2.49 g, 65.6 mmol)を加え、30分撹拌した。反応混合物に水 (2.5 mL)、15% 水酸化ナトリウム水溶液 (2.5 mL)、水 (7.5 mL)を順次加え、反応を停止した。生じた不溶物をろ過することにより除去した。ろ液を減圧濃縮し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(クロロホルム/メタノール=99/1～90/10)で精製することにより、 (11Z,14Z)-2-(アミノエチル)-2-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)イコサ-11,14-ジエン-1-オール (2.50 g, 収率25%)を得た。
　ESI-MS m/z: 572 (M + H)+
　工程2
　工程1で得られた(11Z,14Z)-2-(アミノエチル)-2-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)イコサ-11,14-ジエン-1-オール(2.50 g, 4.37 mmol)をテトラヒドロフラン(20 mL)に溶解させ、トリエチルアミン (1.83 mL, 13.1 mmol)、二炭酸tert-ブチル (渡辺化学社製, 1.12 mL, 4.81 mmol)を加えて、室温で終夜撹拌した。反応混合物を減圧下濃縮し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ヘキサン/酢酸エチル=95/5)で精製することにより、tert-ブチル ((11Z,14Z)-2-(ヒドロキシメチル)-2-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)イコサ-11,14-ジエン-1-イル)カルバマート (2.65 g, 収率90%)を得た。
　ESI-MS m/z: 672 (M + H)+
　工程3
　工程2で得られたtert-ブチル ((11Z,14Z)-2-(ヒドロキシメチル)-2-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)イコサ-11,14-ジエン-1-イル)カルバマート (2.10 g, 3.12 mmol)をジクロロメタン (10 mL)に溶解させ、氷冷下デスマーチン試薬 (東京化成工業社製, 1.72 g, 4.06　mmol)を加え、室温で2時間撹拌した。反応混合物に水を加え、ヘキサンで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後ろ過し、減圧下濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ヘキサン/酢酸エチル=100/0～80/20)で精製することにより、tert-ブチル ((11Z,14Z)-2-ホルミル-2-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)イコサ-11,14-ジエン-1-イル)カルバマート (2.00 g, 収率96%)を得た。
　ESI-MS m/z: 670(M + H)+
　工程4
　工程3で得られたtert-ブチル((11Z,14Z)-2-ホルミル-2-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)イコサ-11,14-ジエン-1-イル)カルバマート (0.432 g, 0.645 mmol)をテトラヒドロフラン(2 mL)に溶解させ、氷冷下メチルマグネシウムブロミド (関東化学工業社製,  mol/L, 0.258 mL, 0.774 mmol)を加えた。その後-50℃まで冷却し、メチルマグネシウムブロミド (3 mol/L, 0.150 mL, 0.451 mmol)を加えて、1時間撹拌した。反応混合物に飽和塩化アンモニウム水溶液を加えて反応を停止させた後、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後ろ過し、減圧濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ヘキサン/酢酸エチル=95/5～50/50)で精製することにより、tert-ブチル ((11Z,14Z)-2-(1-ヒドロキシエチル)-2-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)イコサ-11,14-ジエン-1-イル)カルバマート (0.200 g, 収率45%)を得た。
　ESI-MS m/z: 686(M + H)+
　工程5
　工程4で得られるtert-ブチル ((11Z,14Z)-2-(1-ヒドロキシエチル)-2-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)イコサ-11,14-ジエン-1-イル)カルバマート (0.290 g, 0.423 mmol)をジクロロメタン (2 mL)に溶解させ、氷冷下ピリジン(0.171 mL, 2.11 mmol)、メシル酸クロリド (0.049 mL, 0.634 mmol)を加えて、0℃で30分撹拌した。さらにピリジン (0.171 mL, 2.11 mmol)、メシル酸クロリド (0.098 mL, 1.27 mmol)を順に添加し、反応を完結させた。反応混合物に水を加え、水層を酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後ろ過した。得られたろ液を減圧濃縮することで、(12Z,15Z)-3-(((tert-ブトキシカルボニル)アミノ)メチル)-3- ((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)ヘンイコサ-12,15-ジエン-2-イル メタンスルホナートの粗生成物を得た。
　得られた粗生成物をN,N-ジメチルホルムアミド (8 mL)に溶解させ、氷冷下水素化ナトリウム (油性60%, 8 mg, 0.335 mmol)を加えた。その後、50℃で1時間撹拌し、室温で終夜撹拌した。反応混合物に飽和塩化アンモニウム水溶液を加え、水層を酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後ろ過し、減圧濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ヘキサン/酢酸エチル=95/5～50/50)で精製することにより、tert-ブチル 2-メチル-3,3-ジ((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)アゼチジン-1-カルボキシラート (0.070 g, 収率31%)を得た。
ESI-MS m/z: 668 (M + H)+
　工程6
　工程5で得られるtert-ブチル 2-メチル-3,3-ジ((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)アゼチジン-1-カルボキシラート (0.090 g, 0.135 mmol)をジクロロメタン(2 mL)に溶解させ、氷冷下トリフルオロ酢酸 (0.500 mL, 6.49 mmol)を加え、0℃で30分撹拌した。反応混合物に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加え、クロロホルムで抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後ろ過し、減圧濃縮した。得られた残渣をNHシリカゲルカラムクロマトグラフィー(クロロホルム/メタノール=100/0～90/10)で精製することにより、化合物18 (0.030 g, 収率39%)を得た。
ESI-MS m/z: 568(M + H)+; 
　1,2-ジメチル-3,3-ジ((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)アゼチジン(化合物19)
実施例15と同様の方法で、化合物14の代わりに化合物18 (0.030 g, 0.053 mmol)を用い、化合物19 (0.020 g, 収率65%)を得た。
ESI-MS m/z: 582(M + H)+; 1H-NMR (CDCl3) δ: 0.89 (6H, t, J = 6.8 Hz), 1.03 (3H, d, J = 6.6 Hz), 1.07-1.65 (40H, m), 2.05 (8H, q, J= 6.8 Hz), 2.27 (3H, s), 2.39 (1H, d, J = 6.8 Hz), 2.69-2.81 (5H, m), 3.21 (1H, d, J = 6.6 Hz), 5.28-5.44 (8H, m).
　参考例9
　2-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)-2-((((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)オキシ)メチル)プロパン-1,3-ジオール(化合物IIc-7)
　工程1
　参考例5と同様の方法で、1-ブロモデカンの代わりに2-(クロロメトキシ)エチルトリメチルシラン (0.210 mL, 1.18 mmol)を用いることで、2-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)-2-((2-(トリメチルシリル)エトキシ)メチル)プロパン-1,3-ジオール(0.312 g, 通し収率87％)を得た。
　ESI-MS m/z: 455(M + H)+
　工程2
　工程1で得られた2-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)-2-((2-(トリメチルシリル)エトキシ)メチル)プロパン-1,3-ジオール (0.312 g, 0.686 mmol)をテトラヒドロフラン (4 mL)に溶解させ、氷冷下水素化ナトリウム (油性60%, 0.063 g, 1.58 mmol)および(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニル　メタンスルホナート (0.355 g, 1.03 mmol)を加えて、60℃で2時間撹拌した。反応混合物に飽和塩化アンモニウム水溶液を加え、水層をヘキサンで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後ろ過し、減圧下濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ヘキサン/酢酸エチル=99/1～70/30)で精製することにより(11Z,14Z)-2-((((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)オキシ)メチル)-2-((2-(トリメチルシリル)エトキシ)メチル)イコサ-11,14-ジエン-1-オール(0.230 g, 収率48%)を得た。
　ESI-MS m/z: 703(M + H)+
　工程3
　工程2で得られた(11Z,14Z)-2-((((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)オキシ)メチル)-2-((2-(トリメチルシリル)エトキシ)メチル)イコサ-11,14-ジエン-1-オール (0.230 g、0.327 mmol)をジクロロメタン (2 mL)に溶解させ、氷冷下三ふっ化ほう素ジエチルエーテル錯体 (東京化成工業社製, 0.207 mL, 1.64 mmol)を加えて、0℃で1時間撹拌した。反応混合物に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加え、水層を酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後ろ過し、減圧下濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ヘキサン/酢酸エチル=99/1～50/50)で精製することにより化合物IIc-7 (0.150 g, 収率76%)を得た。
　ESI-MS m/z: 603(M + H)+
　1-メチル-3-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)-3-((((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)オキシ)メチル)アゼチジン(化合物20)
　実施例1と同様の方法で、参考例1で得られる化合物IIc-1の代わりに参考例8で得られる化合物IIc-7 (0.140 g, 0.232 mmol)を用い、化合物20 (0.080 g, 収率58%)を得た。
　ESI-MS m/z: 598(M + H)+; 1H-NMR (CDCl3) δ: 0.89 (6H, t, J = 7.0 Hz), 1.17-1.40 (34H, m), 1.52-1.61 (4H, m), 2.02-2.08 (8H, m), 2.30 (3H, s), 2.77 (4H, t, J = 6.6 Hz), 2.90 (2H, d, J = 7.6 Hz), 3.10 (2H, d, J = 7.6 Hz), 3.39-3.45 (4H, m), 5.27-5.44 (8H, m).
　実施例1で得られた化合物1を用いて、以下のように組成物を調製した。用いた核酸は、センス鎖[5'-rGrGrAfUfCrAfUfCfUfCrArArGfUfCfUfUrAfCdTdT -3'(r、dおよびfが付された塩基に結合する糖は、それぞれリボース、デオキシリボースおよび2’位の水酸基がフッ素で置換されているリボースであり、5’末端側から3’末端側に向って 20番目の塩基に結合するデオキシリボースと21番目の塩基に結合するデオキシリボースとの結合がホスホロチオエート結合である)]と、アンチセンス鎖[5'-rGfUrArArGrAfCfUfUrGrArGrAfUrGrAfUfCfCdTdT-3'(r、dおよびfが付された塩基に結合する糖は、それぞれリボース、デオキシリボースおよび2’位の水酸基がフッ素で置換されているリボースであり、5’末端側から3’末端側に向って 20番目の塩基に結合するデオキシリボースと21番目の塩基に結合するデオキシリボースとの結合がホスホロチオエート結合である)]からなる、血液凝固第7因子(Blood Coagulation Factor VII、以下f7と表す)遺伝子の発現を抑制する抗f7 siRNAであり、ジーンデザイン社から入手した(以下f7 siRNA-1という)。核酸は蒸留水で24 mg/mLに調製して用いた。
　化合物1/PEG-DMPE Na(日油社製)=57.3/5.52 mmol/Lとなるように、各試料を秤量し、塩酸およびエタノールを含有する水溶液に懸濁させ、vortex攪拌ミキサーで攪拌および、加温を繰り返して均一な懸濁液を得た。この懸濁液を室温下で、0.05 μmのポリカーボネートメンブランフィルターに通し、化合物1/PEG-DMPE Naの粒子(リポソーム)の分散液を得た。粒子径測定装置で得られたリポソームの平均粒子径を測定し、30 nmから100 nmの範囲内であることを確認した。得られたリポソームの分散液と、f7 siRNA-1溶液を、リポソームの分散液:f7 siRNA-1溶液=3:1の割合で混合し、さらに3倍量の蒸留水を加えて混合することで化合物1/PEG-DMPE Na/ f7 siRNA-1複合体の分散液を調製した。
　一方、化合物1/PEG-DMPE Na(日油社製)/DSPC(日油社製)/コレステロール(日油社製)= 8.947/0.147/5.981/14.355 mmol/Lとなるように、各試料を秤量しエタノールに溶解させ、脂質膜構成成分の溶液を調製した。
　得られた脂質膜構成成分の溶液を、得られた化合物1/PEG-DMPE Na/ f7 siRN-1複合体の分散液と、1:1の割合で混合し、さらに数倍量の蒸留水を混合し、粗製剤を得た。
　得られた粗製剤はアミコンウルトラ(Millipore社製)を用いて濃縮後、生理食塩水で希釈し、0.2 μmのフィルター(東洋濾紙社製)を用いてクリーンベンチ内でろ過した。得られた組成物のsiRNA濃度を測定し、投与濃度にあわせて生理食塩水を用いて希釈することで、製剤(化合物1およびf7 siRNA-1を含有する組成物)を得た。
　実施例2および4～7で得られた化合物である化合物2および4～7をそれぞれ用いて、実施例21と同様にして製剤(化合物2および4～7のそれぞれ、およびf7 siRNA-1を含有する組成物)を得た。
　実施例21および22で得られた製剤(組成物)の平均粒子径を粒子径測定装置で測定し、その結果を表4に示した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000045
　実施例21で用いたf7 siRNA-1を、センス鎖が5'- CCCUGUCUUGGUUUCAAUUAA -3'(塩基に結合する糖は全てリボース)であり、アンチセンス鎖が5'- AAUUGAAACCAAGACAGGGUG-3'(塩基に結合する糖は全てリボース。5’末端はリン酸基で修飾されている。)であるf7 siRNA-2に変更し、実施例21と同様の方法で製剤を調製した。
　比較例1
　化合物1を、特許文献3記載の方法に準じた方法で合成した1-メチル-3，3-ビス{[(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イルオキシ]メチル}アゼチジン(化合物A)にした以外、実施例23と同様の方法で製剤を調製した。
　実施例23と比較例1で得られた製剤(組成物)の平均粒子径を粒子径測定装置で測定し、その結果を表5に示した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000046
　試験例1
　実施例21および22で得られた各製剤(化合物1、2、4～7のそれぞれと、f7 siRNA-1を含有する組成物)について、それぞれ以下の方法によりインビボ薬効評価試験を実施した。なお、各製剤は、試験に合わせて生理食塩水で希釈して用いた。
　マウス(Balb/c、日本クレアより入手)を馴化飼育後、各製剤を、siRNA濃度で0.03、および/または0.3mg/kgでマウスに静脈内投与した。投与から48時間後に採血し、採取した血液を微量高速冷却遠心機(TOMY MX305:トミー精工社製)を用いて8000rpm、8分間、4℃で遠心分離した。BIOPHEN VII kit(ANIARA社製　cat#: A221304)を用いて、製品の説明書に記載された方法に従い、標準液および、血漿サンプル中の吸光度をARVO(405nm)で測定した。得られた吸光度から検量線を作成し、血漿中のFactor VIIタンパク濃度を算出した。なお例数は各群3匹とした。
　算出された血漿中のFactor VIIタンパク濃度の結果を、図1および図2に示す。
　試験例2
　実施例21および22で得られた各製剤を、実施例23および比較例1で得られた各製剤にした以外、試験例１と同様にして、試験例2を実施した。
　算出された血漿中のFactor VIIタンパク濃度の結果を、図3に示す。
　図1および図2から明らかなように、実施例21および22で得られた各製剤(化合物1、2、4～7のそれぞれと、f7 siRNA-1を含有する組成物)を投与することによって、Factor VII遺伝子の発現が強く抑制された。
　また、図3から明らかなように、実施例23で得られた製剤（化合物1と、f7 siRNA-2を含有する組成物)は、比較例１で得られた製剤（化合物Aとf7 siRNA-2を含有する組成物）よりもFactor VII遺伝子の発現を強く抑制した。
　よって、本発明の組成物は、核酸を細胞内等に導入することができ、本発明のカチオン性脂質は、インビボで細胞内に核酸を送達することを容易にすることが明らかとなった。
　本発明のカチオン性脂質および核酸を含有する組成物を、哺乳動物等に投与することにより、該核酸を、例えば細胞内等に容易に導入することができる。
　配列番号1-血液凝固第7因子 siRNA-1 センス鎖
　配列番号2-血液凝固第7因子 siRNA-1 アンチセンス鎖
　配列番号3-血液凝固第7因子 siRNA-2 センス鎖
　配列番号4-血液凝固第7因子 siRNA-2 アンチセンス鎖

Claims (28)

  1. 式(I)
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000001
    　[式中、R1およびR2は、同一または異なって、炭素数8～24の直鎖状または分枝状のアルキル、アルケニルもしくはアルキニル、またはC7-C20アルキルオキシC1-C3アルキルもしくはC7-C20アルキニルオキシC1-C3アルキルであり、
    　R3は、水素原子、炭素数1～3のアルキル、式(A)
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000002
    　(式中、R4およびR5は、同一または異なって、水素原子もしくは炭素数1～3のアルキルであるか、またはR4およびR5が結合する窒素原子と一緒になって炭素数2～6の含窒素複素環を形成してもよく、n3は2～6の整数である)、または式(B)
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000003
    　(式中、R6およびR7は、同一または異なって、水素原子もしくは炭素数1～3のアルキルであるか、またはR6およびR7が結合する窒素原子と一緒になって炭素数2～6の含窒素複素環を形成してもよく、n4は1～6の整数である)であり、
    　n1は0～4の整数であり、n2は1～4の整数である(但し、n1が0であり、n2が1である場合を除く)]で表されるカチオン性脂質。
  2. R1およびR2が、同一または異なって、テトラデシル、ヘキサデシル、(Z)-テトラデカ-9-エニル、(Z)-ヘキサデカ-9-エニル、(Z)-オクタデカ-6-エニル、(Z)-オクタデカ-9-エニル、(E)-オクタデカ-9-エニル、(Z)-オクタデカ-11-エニル、(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニル、(9Z,12Z,15Z)-オクタデカ-9,12,15-トリエニル、(Z)-イコサ-11-エニル、(11Z,14Z)-イコサ-11,14-ジエニルおよび(Z)-ドコサ-13-エニルからなる群から選ばれる、請求項1記載のカチオン性脂質。
  3. R1およびR2が、同一または異なって、(Z)-ヘキサデカ-9-エニル、(Z)-オクタデカ-9-エニル、(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニルおよび(11Z,14Z)-イコサ-11,14-ジエニルからなる群から選ばれる、請求項1記載のカチオン性脂質。
  4. R3が、炭素数1～3のアルキルまたは式(A)である、請求項1～3のいずれか1項に記載のカチオン性脂質。
  5. R1およびR2が同一である、請求項1～4のいずれか1項に記載のカチオン性脂質。
  6. n1が1であり、n2が1～3の整数である、請求項1～5のいずれか1項に記載のカチオン性脂質。
  7. n1およびn2がともに1である、請求項1～5のいずれか1項に記載のカチオン性脂質。
  8. 式(I’’)
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000004
    [式中、R1’およびR2’は、同一または異なって、炭素数8～24の直鎖状または分枝状のアルキル、アルケニルもしくはアルキニル、またはC7-C20アルキルオキシC1-C3アルキル、C7-C20アルケニルオキシC1-C3アルキルもしくはC7-C20アルキニルオキシC1-C3アルキルであり、
    　R3’は、水素原子、炭素数1～3のアルキル、ヒドロキシC2-C4アルキル、C1-C3ジアルキルアミノC2-C4アルキル、式(A)
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000005
    　(式中、R4およびR5は、同一または異なって、水素原子もしくは炭素数1～3のアルキルであるか、またはR4およびR5が結合する窒素原子と一緒になって炭素数2～6の含窒素複素環を形成してもよく、n3は2～6の整数である)、または式(B)
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000006
    　(式中、R6およびR7は、同一または異なって、水素原子もしくは炭素数1～3のアルキルであるか、またはR6およびR7が結合する窒素原子と一緒になって炭素数2～6の含窒素複素環を形成してもよく、n4は1～6の整数である)であり、
    　n1は0～4の整数であり、n2は1～4の整数であり(但し、n1が0であり、n2が1である場合を除く)、
    　Z1は、結合する炭素ごとにそれぞれ独立して、水素原子または炭素数1～3のアルキルであり、
    　Z２は、結合する炭素ごとにそれぞれ独立して、水素原子または炭素数1～3のアルキルである]で表わされるカチオン性脂質。
  9. R1’およびR2’が、同一または異なって、テトラデシル、ヘキサデシル、(Z)-テトラデカ-9-エニル、(Z)-ヘキサデカ-9-エニル、(Z)-オクタデカ-6-エニル、(Z)-オクタデカ-9-エニル、(E)-オクタデカ-9-エニル、(Z)-オクタデカ-11-エニル、(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニル、(9Z,12Z,15Z)-オクタデカ-9,12,15-トリエニル、(Z)-イコサ-11-エニル、(11Z,14Z)-イコサ-11,14-ジエニルおよび(Z)-ドコサ-13-エニルからなる群から選ばれる、請求項8記載のカチオン性脂質。
  10. R1’およびR2’が、同一または異なって、(Z)-ヘキサデカ-9-エニル、(Z)-オクタデカ-9-エニル、(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニルおよび(11Z,14Z)-イコサ-11,14-ジエニルからなる群から選ばれる、請求項8記載のカチオン性脂質。
  11. R3’が、炭素数1～3のアルキルまたは式(A)である、請求項8～9のいずれか1項に記載のカチオン性脂質。
  12. R1’およびR2’が同一である、請求項8～11のいずれか1項に記載のカチオン性脂質。
  13. n1が1であり、n2が1～3の整数である、請求項8～12のいずれか1項に記載のカチオン性脂質。
  14. n1およびn2がともに1である、請求項8～12のいずれか1項に記載のカチオン性脂質。
  15. 請求項1～14のいずれか1項に記載のカチオン性脂質および核酸を含有する組成物。
  16. 該カチオン性脂質と該核酸とが複合体を形成しているか、または該カチオン性脂質に中性脂質および/もしくは高分子を組み合わせたものと該核酸とが複合体を形成している、請求項15記載の組成物。
  17. 該カチオン性脂質と該核酸とが複合体を形成しているか、または該カチオン性脂質に中性脂質および/もしくは高分子を組み合わせたものと該核酸とが複合体を形成しており、該複合体を封入する脂質膜を含有する、請求項15記載の組成物。
  18. 核酸が、RNA干渉(RNAi)を利用した標的遺伝子の発現抑制作用を有する核酸である、請求項15～17のいずれか1項に記載の組成物。
  19. 標的遺伝子が、肝臓、肺、腎臓または脾臓において発現する遺伝子である、請求項18記載の組成物。
  20. 請求項15～19のいずれか1項に記載の組成物を用いて該核酸を細胞内に導入する方法。
  21. 細胞が、哺乳動物の肝臓、肺、腎臓または脾臓にある細胞である、請求項20記載の方法。
  22. 細胞内に導入する方法が、該組成物の静脈内投与によって細胞内に導入する方法である、請求項20または21記載の方法。
  23. 請求項26記載の組成物を哺乳動物に投与する工程を含む、肝臓、肺、腎臓または脾臓に関連する疾患の治療方法。
  24. 投与する方法が、静脈内投与である、請求項23記載の方法。
  25. 請求項18記載の組成物を含む、疾患の治療に用いるための医薬。
  26. 静脈内投与用である、請求項25記載の医薬。
  27. 請求項19記載の組成物を含む、肝臓、肺、腎臓または脾臓に関連する疾患の治療剤。
  28. 静脈内投与用である、請求項34記載の肝臓、肺、腎臓または脾臓に関連する疾患の治療剤。
PCT/JP2015/068778 2014-06-30 2015-06-30 カチオン性脂質 WO2016002753A1 (ja)

Priority Applications (7)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP15814545.8A EP3162794B1 (en) 2014-06-30 2015-06-30 Alkyl substituted azetidines as cationic lipid
CA2959358A CA2959358C (en) 2014-06-30 2015-06-30 Cationic lipid
AU2015285279A AU2015285279A1 (en) 2014-06-30 2015-06-30 Cationic lipid
JP2016531381A JP6641272B2 (ja) 2014-06-30 2015-06-30 カチオン性脂質
KR1020167035857A KR20170023004A (ko) 2014-06-30 2015-06-30 양이온성 지질
US15/322,271 US10500158B2 (en) 2014-06-30 2015-06-30 Cationic lipid
CN201580031885.4A CN106458884A (zh) 2014-06-30 2015-06-30 阳离子性脂质

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2014133913 2014-06-30
JP2014-133913 2014-06-30

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2016002753A1 true WO2016002753A1 (ja) 2016-01-07

Family

ID=55019285

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/JP2015/068778 WO2016002753A1 (ja) 2014-06-30 2015-06-30 カチオン性脂質

Country Status (9)

Country Link
US (1) US10500158B2 (ja)
EP (1) EP3162794B1 (ja)
JP (1) JP6641272B2 (ja)
KR (1) KR20170023004A (ja)
CN (1) CN106458884A (ja)
AU (1) AU2015285279A1 (ja)
CA (1) CA2959358C (ja)
TW (1) TW201619137A (ja)
WO (1) WO2016002753A1 (ja)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2017111172A1 (ja) * 2015-12-25 2017-06-29 協和発酵キリン株式会社 カチオン性脂質としての化合物
WO2018062413A1 (ja) * 2016-09-28 2018-04-05 協和発酵キリン株式会社 核酸含有脂質ナノ粒子
WO2019027055A1 (ja) 2017-08-04 2019-02-07 協和発酵キリン株式会社 核酸含有脂質ナノ粒子

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US10501416B2 (en) * 2016-06-24 2019-12-10 Eisai R&D Management Co., Ltd. Cationic lipid

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2011136368A1 (ja) * 2010-04-28 2011-11-03 協和発酵キリン株式会社 カチオン性脂質
WO2011136369A1 (ja) * 2010-04-28 2011-11-03 協和発酵キリン株式会社 カチオン性脂質
JP2012508261A (ja) * 2008-11-10 2012-04-05 アルニラム・ファーマシューティカルズ・インコーポレーテッド 治療薬を送達するための新規な脂質及び組成物
WO2012108397A1 (ja) * 2011-02-08 2012-08-16 第一三共株式会社 新規脂質
WO2014007398A1 (ja) * 2012-07-06 2014-01-09 協和発酵キリン株式会社 カチオン性脂質
WO2014013995A1 (ja) * 2012-07-16 2014-01-23 協和発酵キリン株式会社 KRAS遺伝子発現抑制RNAi医薬組成物

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU1830200A (en) * 1998-11-25 2000-06-13 Vanderbilt University Cationic liposomes for gene transfer
CA2984026C (en) 2008-10-09 2020-02-11 Arbutus Biopharma Corporation Improved amino lipids and methods for the delivery of nucleic acids
US9839616B2 (en) * 2011-12-12 2017-12-12 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Lipid nano particles comprising cationic lipid for drug delivery system
JP2013245190A (ja) * 2012-05-25 2013-12-09 Biomedcore Inc 脂質膜構造体にｐＨ依存性カチオン性を付与する剤、それによりｐＨ依存性カチオン性が付与された脂質膜構造体および脂質膜構造体の製造方法

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2012508261A (ja) * 2008-11-10 2012-04-05 アルニラム・ファーマシューティカルズ・インコーポレーテッド 治療薬を送達するための新規な脂質及び組成物
WO2011136368A1 (ja) * 2010-04-28 2011-11-03 協和発酵キリン株式会社 カチオン性脂質
WO2011136369A1 (ja) * 2010-04-28 2011-11-03 協和発酵キリン株式会社 カチオン性脂質
WO2012108397A1 (ja) * 2011-02-08 2012-08-16 第一三共株式会社 新規脂質
WO2014007398A1 (ja) * 2012-07-06 2014-01-09 協和発酵キリン株式会社 カチオン性脂質
WO2014013995A1 (ja) * 2012-07-16 2014-01-23 協和発酵キリン株式会社 KRAS遺伝子発現抑制RNAi医薬組成物

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2017111172A1 (ja) * 2015-12-25 2017-06-29 協和発酵キリン株式会社 カチオン性脂質としての化合物
JPWO2017111172A1 (ja) * 2015-12-25 2018-10-18 協和発酵キリン株式会社 カチオン性脂質としての化合物
US10525138B2 (en) 2015-12-25 2020-01-07 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Compound as cationic lipid
WO2018062413A1 (ja) * 2016-09-28 2018-04-05 協和発酵キリン株式会社 核酸含有脂質ナノ粒子
WO2019027055A1 (ja) 2017-08-04 2019-02-07 協和発酵キリン株式会社 核酸含有脂質ナノ粒子

Also Published As

Publication number Publication date
EP3162794A4 (en) 2018-01-24
EP3162794B1 (en) 2020-09-16
EP3162794A1 (en) 2017-05-03
US20170224619A1 (en) 2017-08-10
CN106458884A (zh) 2017-02-22
CA2959358C (en) 2022-07-26
TW201619137A (zh) 2016-06-01
US10500158B2 (en) 2019-12-10
AU2015285279A1 (en) 2017-02-16
KR20170023004A (ko) 2017-03-02
JPWO2016002753A1 (ja) 2017-06-01
CA2959358A1 (en) 2016-01-07
JP6641272B2 (ja) 2020-02-05

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP6226476B2 (ja) カチオン性脂質
JP6182457B2 (ja) カチオン性脂質を含有するドラックデリバリーシステムのための脂質ナノ粒子
JP6182458B2 (ja) カチオン性脂質の組み合わせを含有する脂質ナノ粒子
JP6272226B2 (ja) ＫＲＡＳ遺伝子発現抑制ＲＮＡｉ医薬組成物
WO2018225871A1 (ja) カチオン性脂質としての化合物
JP6641272B2 (ja) カチオン性脂質
WO2015186770A1 (ja) ＣＫＡＰ５遺伝子発現抑制ＲＮＡｉ医薬組成物
JP6495408B2 (ja) カチオン性脂質
JP6774965B2 (ja) カチオン性脂質としての化合物
JP7043411B2 (ja) カチオン性脂質としての化合物
WO2018225873A1 (ja) 核酸含有ナノ粒子
US20140294978A1 (en) Cationic lipid

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 15814545

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2016531381

Country of ref document: JP

Kind code of ref document: A

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 20167035857

Country of ref document: KR

Kind code of ref document: A

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

REEP Request for entry into the european phase

Ref document number: 2015814545

Country of ref document: EP

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2015814545

Country of ref document: EP

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2015285279

Country of ref document: AU

Date of ref document: 20150630

Kind code of ref document: A

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2959358

Country of ref document: CA