JPWO2017111172A1 - カチオン性脂質としての化合物 - Google Patents
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Abstract
Description
(1) 式(I)
n1は0〜4の整数であり、n2は1〜4の整数であり(但し、n1が0であり、n2が1である場合を除く)、
Z1は、結合する炭素ごとにそれぞれ独立して、水素原子またはC1-C3アルキルであり、
Z2は、結合する炭素ごとにそれぞれ独立して、水素原子またはC1-C3アルキルであり、
A1およびA2は同一または異なって、直鎖状または分岐状のC8-C20アルキレンもしくはC8-C20アルケニレンであるか、またはC6-C18アルキレンオキシC1-C3アルキレンもしくはC6-C18アルケニレンオキシC1-C3アルキレンであり、
M1およびM2は同一または異なって、-OC(O)-、-C(O)O-、-SC(O)-、-C(O)S-、-OC(S)-、-C(S)O-、-SS-、-C(R6)=N-、-N=C(R6)-、-C(R6)=N-O-、-O-N=C(R6)-、-N(R6)C(O)-、-C(O)N(R6)-、-N(R6)C(S)-、-C(S)N(R6)-、-N(R6)C(O)N(R7)-、-N(R6)C(O)O-、-OC(O)N(R6)-および-OC(O)O-からなる群から選ばれ、
R6およびR7は同一または異なって、水素原子またはC1-C4アルキルであり、
B1およびB2は同一または異なって、直鎖状または分岐状のC1-C16アルキルまたはC2-C16アルケニルである]で表わされる化合物、またはその製薬上許容し得る塩(カチオン性脂質)。
(2) M1およびM2が同一または異なって、-OC(O)-、-C(O)O-、-N(R6)C(O)-および-C(O)N(R6)-からなる群から選ばれる、上記(1)記載の化合物、またはその製薬上許容し得る塩(カチオン性脂質)。
(3) M1およびM2が同一または異なって、-OC(O)-または-C(O)O-である、上記(2)記載の化合物、またはその製薬上許容し得る塩(カチオン性脂質)。
(4) A1およびA2が同一または異なって、直鎖状または分岐状のC8-C20アルキレンまたはC8-C20アルケニレンである、上記(1)〜(3)のいずれかに記載の化合物、またはその製薬上許容し得る塩(カチオン性脂質)。
(5) B1-M1-A1-およびB2-M2-A2-が同一である、上記(1)〜(4)のいずれかに記載の化合物、またはその製薬上許容し得る塩(カチオン性脂質)。
(6) R1がC1-C3アルキルである、上記(1)〜(5)のいずれかに記載の化合物、またはその製薬上許容し得る塩(カチオン性脂質)。
(7) n1が1であり、n2が1〜3の整数である、上記(1)〜(6)のいずれかに記載の化合物、またはその製薬上許容し得る塩(カチオン性脂質)。
(8) n1およびn2がともに1である、上記(1)〜(7)のいずれかに記載の化合物、またはその製薬上許容し得る塩(カチオン性脂質)。
(9) 上記(1)〜(8)のいずれかに記載の化合物、またはその製薬上許容し得る塩(カチオン性脂質)および核酸を含有する組成物。
(10) 中性脂質および/または高分子をさらに含有する、上記(9)記載の組成物。
(11) 化合物、またはその製薬上許容し得る塩(カチオン性脂質)と核酸とが複合体を形成しているか、または化合物、またはその製薬上許容し得る塩(カチオン性脂質)に中性脂質および/もしくは高分子を組み合わせたものと核酸とが複合体を形成している、上記(9)または(10)記載の組成物。
(12) 複合体を封入する脂質膜を含有する、上記(11)記載の組成物。
(13) 核酸が、RNA干渉(RNAi)を利用した標的遺伝子の発現抑制作用を有する核酸である、上記(9)〜(12)のいずれかに記載の組成物。
(14) 標的遺伝子が、肝臓、肺、腎臓、消化管、中枢神経系または脾臓において発現する遺伝子である、上記(13)記載の組成物。
(15)静脈内投与用である、上記(9)〜(14)のいずれかに記載の組成物。
(16) 上記(9)〜(15)のいずれかに記載の組成物を用いて核酸を細胞内に導入する方法。
(17) 細胞が、哺乳動物の肝臓、肺、腎臓、消化管、中枢神経系または脾臓にある細胞である、上記(16)記載の方法。
(18) 組成物の静脈内投与によって核酸を細胞内に導入する、上記(16)または(17)記載の方法。
(19) 上記(9)〜(15)のいずれかに記載の組成物を哺乳動物に投与する工程を含む、肝臓、肺、腎臓、消化管、中枢神経系または脾臓に関連する疾患の治療方法。
(20) 静脈内投与する、上記(19)記載の方法。
(21) 上記(9)〜(15)のいずれかに記載の記載の組成物を含む、医薬。
(22) 上記(9)〜(15)のいずれかに記載の記載の組成物を含む、疾患の治療に用いるための医薬。
(23) 疾患が、肝臓、肺、腎臓、消化管、中枢神経系または脾臓に関連する疾患である、上記(22)に記載の医薬。
(24) 静脈内投与用である、上記(21)〜(23)のいずれかに記載の医薬。
(25) 上記(9)〜(15)のいずれかに記載の組成物を含む、肝臓、肺、腎臓、消化管、中枢神経系または脾臓に関連する疾患の治療剤。
(26) 静脈内投与用である、上記(25)記載の肝臓、肺、腎臓、消化管、中枢神経系または脾臓治療剤。
(27) 上記(9)〜(15)のいずれかに記載の組成物をそれを必要とする患者に投与することを含む、肝臓、肺、腎臓、消化管、中枢神経系または脾臓に関連する疾患の治療方法。
(28) 静脈内投与する、上記(27)記載の方法。
(29) 肝臓、肺、腎臓、消化管、中枢神経系または脾臓に関連する疾患の治療用の上記(9)〜(15)のいずれかに記載の組成物。
(30) 静脈内投与用の、上記(29)記載の組成物。
式(I)
n1は0〜4の整数であり、n2は1〜4の整数であり(但し、n1が0であり、n2が1である場合を除く)、
Z1は、結合する炭素ごとにそれぞれ独立して、水素原子またはC1-C3アルキルであり、
Z2は、結合する炭素ごとにそれぞれ独立して、水素原子またはC1-C3アルキルであり、
A1およびA2は同一または異なって、直鎖状または分岐状のC8-C20アルキレンもしくはC8-C20アルケニレンであるか、またはC6-C18アルキレンオキシC1-C3アルキレンもしくはC6-C18アルケニレンオキシC1-C3アルキレンであり、
M1およびM2は同一または異なって、-OC(O)-、-C(O)O-、-SC(O)-、-C(O)S-、-OC(S)-、-C(S)O-、-SS-、-C(R6)=N-、-N=C(R6)-、-C(R6)=N-O-、-O-N=C(R6)-、-N(R6)C(O)-、-C(O)N(R6)-、-N(R6)C(S)-、-C(S)N(R6)-、-N(R6)C(O)N(R7)-、-N(R6)C(O)O-および-OC(O)N(R6)-、-OC(O)O-からなる群から選ばれ、
R6およびR7は同一または異なって、水素原子またはC1-C4アルキルであり、
B1およびB2は同一または異なって、直鎖状または分岐状のC1-C16アルキルまたはC2-C16アルケニル]で表わされる化合物である。
本発明において、C1-C3アルキルである場合を例示して説明すると、C1-C3アルキルのC1-C3は、炭素数が1〜3であることを意味する。
ジC1-C3アルキルアミノにおけるC1-C3アルキル部分としては、メチル、エチル、プロピル、イソプロピルおよびシクロプロピル等が挙げられ、C1-C3アルキル部分は同一でも異なっていてもよい。
直鎖状または分岐状のC8-C20アルキレンとしての記載において、2,6,10-トリメチルウンデシレンを例にして説明すると、置換基の置換位置を示す2,6,10-は、含窒素複素環の炭素原子に結合するA1およびA2における炭素原子を1位とする。
直鎖状または分岐状のC8-C20アルケニレンとしての記載において、(Z)-テトラデカ-9-エニレンを例にして説明すると、二重結合の位置を示す-9-は、含窒素複素環の炭素原子に結合するA1およびA2における炭素原子を1位とする。
C6-C18アルキレンオキシC1-C3アルキレンにおけるC6-C18アルキレン部分としては、例えばヘキシレン、ヘプチレン、オクチレン、ノニレン、デシレン、ウンデシレン、トリデシレン、テトラデシレン、2,6,10-トリメチルウンデシレン、ペンタデシレン、3,7,11-トリメチルドデシレン、ヘキサデシレン、ヘプタデシレンおよびオクタデシレン等が挙げられ、好ましくは、ヘキシレン、ヘプチレン、オクチレン、ノニレン、デシレンが挙げられる。
C6-C18アルキレンオキシC1-C3アルキレンおよびC6-C18アルケニレンオキシC1-C3アルキレンを構成するC1-C3アルキレン部分は、式(I)中の含窒素複素環側に位置する。
直鎖状または分岐状のC1-C16アルキルとしての記載において、3,7,11-トリメチルドデシルを例にして説明すると、置換基の置換位置を示す3,7,11-は、M1およびM2に結合するB1およびB2における炭素原子を1位とする。
直鎖状または分岐状のC2-C16のアルケニルとしての記載において、(Z)-ブタ-2-エンを例にして説明すると、置換基の置換位置を示す-2-は、M1およびM2に結合するB1およびB2における炭素原子を1位とする。
(Z)-ノナ-2-エンを例にして説明すると、シクロプロパン環を有する以下の基も、本発明における直鎖または分岐状のC8-C20アルケニレンに包含される。
M1およびM2としての記載において、M1およびM2が-OC(O)-である場合を例にして説明すると、-OC(O)-は、B1-OC(O)-A1またはB2-OC(O)-A2として結合していることを意味する。
n5は、1〜10の整数であることが好ましく、1〜5の整数であることがより好ましく、2〜4の整数であることがさらに好ましく、2または4であることがよりさらに好ましい。
R1がC1-C3アルキルである場合、メチル、エチル、プロピルまたはシクロプロピルであることが好ましく、メチルまたはエチルであることがより好ましく、メチルであることがさらに好ましい。
R1が式(A)である場合、R2およびR3は、同一または異なって、水素原子またはC1-C3アルキルであることが好ましく、R1が式(B)である場合、R4およびR5は、同一または異なって、水素原子またははC1-C3アルキルであることが好ましい。
R2とR3が同一または異なって、C1-C3アルキルである場合、R3はメチルまたはエチルであることが好ましく、メチルであることがより好ましい。
R2とR3が同一であり、メチルであることが好ましい。
R4とR5が同一または異なって、C1-C3アルキルである場合、R4とR5はメチルまたはエチルであることが好ましく、メチルであることがより好ましい。
R4とR5が同一であり、メチルであることが好ましい。
以下に示す製造法において、定義した基が該製造法の条件下で変化するかまたは該製造法を実施するのに不適切な場合、有機合成化学で常用される保護基の導入および除去方法[例えば、プロテクティブ・グループス・イン・オーガニック・シンセシス第3版(Protective Groups in Organic Synthesis, third edition)、グリーン(T.W.Greene)著、John Wiley&Sons Inc.(1999年)等に記載の方法]等を用いることにより、目的化合物を製造することができる。また、必要に応じて置換基導入等の反応工程の順序を変えることもできる。
化合物(I)のうち、n1およびn2がともに1であり、Z1およびZ2がともに水素原子であり、R1が水素原子、C1-C3アルキル、ヒドロキシC2-C4アルキルまたはジC1-C3アルキルアミノC2-C4アルキルであり、M1およびM2が同一であり、-OC(O)-である化合物(Ia)は、例えば、以下の方法によって製造することができる。
化合物(IIIa)は化合物(IIa)と化合物(IIb)を、無溶媒でまたは溶媒中、1〜10当量の縮合剤と、1〜10当量の塩基の存在下、室温〜200℃で、5分間〜100時間反応させることにより製造することができる。
化合物(IIb)は市販品として得ることができる。
化合物(IIc)は、マロン酸ジtert-ブチルと化合物(IIIa)を、無溶媒でまたは溶媒中、1〜10当量の塩基の存在下、室温〜200℃で、5分間〜100時間反応させることにより製造することができる。
化合物(IId)は、化合物(IIc)と化合物(IIIb)を、無溶媒でまたは溶媒中、1〜10当量の塩基の存在下、室温〜200℃で、5分間〜100時間反応させることにより製造することができる。
化合物(IIIb)は化合物(IIIa)と同様の方法で製造することができる。
化合物(IIe)は化合物(IId)を、無溶媒でまたは溶媒中、5〜100当量の酸と、-78℃〜100℃で、5分間〜100時間反応させることにより製造することができる。
化合物(IIf)は化合物(IIe)を、溶媒中、4当量〜大過剰量の還元剤と、必要に応じて触媒量〜10当量の添加剤の存在下、-20℃〜150で、5分間〜72時間反応させることにより製造することができる。触媒量は0.01当量〜0.5当量であることを意味する。
化合物(IIg)は化合物(IIf)を、無溶媒でまたは溶媒中、2当量以上のハロゲン化試薬または擬ハロゲン化試薬と、必要により好ましくは1〜10当量の塩基および必要により好ましくは1〜10当量の添加剤の存在下、-20℃〜150℃で、5分間〜100時間反応させることにより製造することができる。
化合物(Ia)は化合物(IIf)と1当量〜大過剰量の化合物(IVa)を、無溶媒でまたは溶媒中、室温〜200℃で、5分間〜100時間反応させることにより製造することができる。
化合物(I)のうち、n1およびn2がともに1であり、Z1およびZ2がともに水素原子であり、R1が水素原子、C1-C3アルキル、ヒドロキシC2-C4アルキルまたはジC1-C3アルキルアミノC2-C4アルキルである化合物(Ia’)は、例えば、以下の方法によって製造することができる。
化合物(IIc’)は、化合物(IIIa)の代わりに化合物(IIIa’)を用いることで、工程2と同様の方法により製造することができる。
化合物(IId’)は、化合物(IIc)および(IIIb)の代わりに化合物(IIc’)および(IIIb’)を用い、工程3と同様の方法により製造することができる。
化合物(IIIa’)および化合物(IIIb’)のうち、M1およびM2が-OC(O)-以外であるものも対応する市販原料を用いることで製造することができる。
化合物(IIe’)は化合物(IId)の代わりに化合物(IId’)を用いることで、工程4と同様の方法により製造することができる。
化合物(IIf’)は化合物(IIe)の代わりに化合物(IIe’)を用いることで、工程5と同様の方法により製造することができる。
化合物(IIg’)は化合物(IIf)の代わりに化合物(IIf’)を用いることで、工程6と同様の方法により製造することができる。
化合物(Ia’)は化合物(IIg)の代わりに化合物(IIg’)を用いることで、工程7と同様の方法により製造することができる。
化合物(I)のうち、n1およびn2がともに1であり、Z1およびZ2がともに水素原子であり、R3が式(A)である化合物(Ic)は、例えば、以下の方法によって製造することができる。
化合物(VII)は化合物(V)と化合物(VI)を、無溶媒でまたは溶媒中、必要により好ましくは1〜10当量の添加剤および/または必要により好ましくは1〜10当量の塩基の存在下、-20℃〜150℃で、5分間〜72時間反応させることにより製造することができる。
化合物(VI)は、市販品としてまたは公知の方法(例えば、「第5版実験化学講座14 有機化合物の合成II」、第5版、p.1、丸善(2005年))もしくはそれに準じた方法によって得ることができる。
化合物(Ic)は化合物(Ib)と化合物(VII)を、無溶媒でまたは溶媒中、必要により1〜10当量の添加剤および/または必要により1〜10当量の塩基の存在下、-20℃〜150℃で、5分間〜72時間反応させることにより製造することができる。
化合物(I)のうち、n1およびn2がともに1であり、Z1およびZ2がともに水素原子であり、R3が式(B)である化合物(Id)は、例えば、以下の方法によって製造することができる。
化合物(IIh)は化合物(Ib)と化合物(VIII)を、無溶媒でまたは溶媒中、必要により好ましくは1〜10当量の塩基の存在下、-20℃〜150℃で、5分間〜72時間反応させることにより製造することができる。
化合物(Id)は化合物(IIh)と1〜20当量の化合物(VIb)を、無溶媒でまたは溶媒中、必要により1〜10当量の塩基の存在下、室温〜200℃で、5分間〜100時間反応させることにより製造することができる。
化合物(I)のうち、n1およびn2が同一または異なって1〜4の整数であり(但し、n1およびn2がともに1である場合を除く)、R1が水素原子、C1-C3のアルキル、ヒドロキシC2-C4アルキルまたはC1-C3ジアルキルアミノC2-C4アルキルであり、Z1およびZ2が水素原子である化合物(Ie)は、例えば、以下の方法によって製造することができる。
化合物(IXb)は、マロン酸ジtert-ブチルの代わりに化合物(IXa)を用い、工程2と同様の方法により製造することができる。
化合物(IXc)は、化合物(IIc)の代わりに化合物(IXb)を用い、工程3と同様の方法により製造することができる。
B1-M1-A1とB2-M2-A2が同一である場合の化合物(IXc)は、工程18において、2当量以上の化合物(IIIa’)を用いることにより製造することができる。
P1およびP2としては有機合成化学で常用される保護基[例えば、プロテクティブ グループス イン オーガニック シンセシス第3版(Protective Groups in Organic Synthesis, third edition)、グリーン(T.W.Greene)著、John Wiley&Sons Inc.(1999年)等に記載の保護基]を用いることができる。
化合物(IXd)は、化合物(IXc)を公知の方法[例えば、「新実験化学講座15 酸化と還元(II)」、初版、丸善(1977年)]もしくはそれに準じた方法で還元することにより製造することができる。
化合物(IXe)は、化合物(IXd)の保護基P1およびP2をそれぞれ適切な方法で除去することにより製造することができる。
保護基の除去方法としては、有機合成化学で常用される保護基の除去方法[例えば、プロテクティブ グループス イン オーガニック シンセシス第3版(Protective Groups in Organic Synthesis, third edition)、グリーン(T.W.Greene)著、John Wiley&Sons Inc.(1999年)等に記載の除去方法]を用いることができ、これにより目的とする化合物を製造することができる。
化合物(IXf)は、化合物(IIf)の代わりに化合物(IXe)を用い、工程6と同様の方法により製造することができる。
化合物(Ie)は、化合物(IIg)の代わりに化合物(IXf)を用い、工程7と同様の方法により製造することができる。
本発明の式(I)で表される化合物の製薬上許容し得る塩としては、例えば塩酸塩、臭酸塩、硝酸塩、硫酸塩、リン酸塩、酢酸塩、シュウ酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、クエン酸塩、安息香酸塩およびメタンスルホン酸塩等が挙げられる。
核酸としては、例えばリボヌクレオチドの重合体であるリボ核酸(RNA)、デオキシリボヌクレオチドの重合体であるデオキシリボ核酸(DNA)、RNAとDNAとからなるキメラ核酸、およびこれらの核酸の少なくとも一つのヌクレオチドが該ヌクレオチドと同等の機能を有する分子で置換されたヌクレオチド重合体等が挙げられる。
ヌクレオチドおよび/またはヌクレオチドと同等の機能を有する分子が重合した分子の構造を少なくとも一部に含む誘導体も、本発明で用いられる核酸に含まれる。
本発明において、ウラシルUと、チミンTとは、それぞれ読み替えることができる。
架橋構造型人工核酸としては、例えば2’位の酸素原子と4’位の炭素原子がメチレンを介して架橋したロックト人工核酸(Locked Nucleic Acid)(LNA) [“テトラヘドロンレターズ(Tetrahedron Letters)”, Volume 38, Issue 50, 1997, Pages 8735-8738、および“テトラヘドロン (Tetrahedron)”, Volume 54, Issue 14, 1998, Pages 3607-3630]ならびにエチレン架橋構造型人工核酸(Ethylene bridged nucleic acid)(ENA)[“ヌクレイックアシッドリサーチ(Nucleic Acid Research)”, 32, e175(2004)]等が挙げられる。
リン酸ジエステル結合修飾ヌクレオチドとしては、例えばリン酸ジエステル結合がホスホロチオエート結合に置換されたヌクレオチド、リン酸ジエステル結合がホスホロジチオエート結合に置換されたヌクレオチド、リン酸ジエステル結合がアルキルホスホネート結合に置換されたヌクレオチドおよびリン酸ジエステル結合がホスホロアミデート結合に置換されたヌクレオチド等が挙げられる。
塩基修飾ヌクレオチドとしては、例えば、塩基内の酸素原子が硫黄原子で置換されたもの、水素原子がC1-C6アルキルで置換されたもの、メチルが水素原子もしくはC2-C6アルキルで置換されたものおよびアミノがC1-C6アルキルまたはC1-C6アルカノイル等の保護基で保護されたもの等が挙げられる。
標的遺伝子となる腫瘍または炎症に関連する遺伝子としては、具体的には、血管内皮増殖因子受容体(vascular endothelial growth factor receptor)、線維芽細胞増殖因子、線維芽細胞増殖因子受容体、血小板由来増殖因子、血小板由来増殖因子受容体、肝細胞増殖因子、肝細胞増殖因子受容体、クルッペル様因子(Kruppel-like factor)、エクスプレスドシーケンスタグ(Ets)転写因子、核因子、低酸素誘導因子、細胞周期関連因子、染色体複製関連因子、染色体修復関連因子、微小管関連因子、増殖シグナル経路関連因子、増殖関連転写因子およびアポトーシス関連因子等のタンパク質をコードする遺伝子等が挙げられ、具体的には血管内皮増殖因子遺伝子、血管内皮増殖因子受容体遺伝子、線維芽細胞増殖因子遺伝子、線維芽細胞増殖因子受容体遺伝子、血小板由来増殖因子遺伝子、血小板由来増殖因子受容体遺伝子、肝細胞増殖因子遺伝子、肝細胞増殖因子受容体遺伝子、クルッペル様因子遺伝子、エクスプレスドシーケンスタグ(Ets)転写因子遺伝子、核因子遺伝子、低酸素誘導因子遺伝子、細胞周期関連因子遺伝子、染色体複製関連因子遺伝子、染色体修復関連因子遺伝子、微小管関連因子遺伝子(例えば、CKAP5遺伝子等)、増殖シグナル経路関連因子遺伝子(例えば、KRAS遺伝子等)、増殖関連転写因子遺伝子およびアポトーシス関連因子(例えば、BCL-2遺伝子等)等が挙げられる。
二重鎖形成部を構成する塩基対は、通常15〜27塩基対であり、15〜25塩基対が好ましく、15〜23塩基対がより好ましく、15〜21塩基対がさらに好ましく、15〜19塩基対がよりさらに好ましい。
突出部を有する二本鎖核酸において、突出部は、2塩基からなる突出部であることが好ましく、dTdTまたはUUからなる突出部であることがより好ましい。
突出部は、アンチセンス鎖のみ、センス鎖のみ、およびアンチセンス鎖とセンス鎖の両方に有することができるが、アンチセンス鎖とセンス鎖の両方に突出部を有する二本鎖核酸が好ましい。
標的遺伝子の発現を抑制する核酸としては、例えばDicer等のリボヌクレアーゼの作用により二本鎖核酸を生成する核酸分子(国際公開第2005/089287号)や、3’末端や5’末端の突出部を有していない二本鎖核酸等を用いることもできる。
一本鎖核酸は、好ましくは15〜30塩基(ヌクレオシド)、より好ましくは15〜27塩基、さらに好ましくは15〜25塩基、よりさらに好ましくは15〜23塩基の連なりからなる。
二本鎖核酸を構成するアンチセンス鎖およびセンス鎖が、スペーサーオリゴヌクレオチドを介して連結した一本鎖核酸としては、例えばステムループ構造によって二重鎖形成部を有するshRNA等の一本鎖核酸であることが好ましい。shRNA等の一本鎖核酸は、通常50〜70塩基長である。
本発明の組成物は、例えば本発明のカチオン性脂質と核酸との複合体であってよい。
本発明の組成物は、本発明のカチオン性脂質と、中性脂質および/または高分子と、核酸とを含有する組成物であり、例えば、本発明のカチオン性脂質と、中性脂質および/または高分子と、核酸との複合体であってよい。
本発明の組成物は、脂質膜を含有し、複合体が脂質膜により封入されていてもよい。
脂質膜は、脂質一重膜(脂質1分子膜)でも脂質二重膜(脂質2分子膜)であってもよい。脂質膜に、本発明のカチオン性脂質、中性脂質および/または高分子を含有していてもよい。
複合体および/または脂質膜に、本発明の式(I)で表される化合物、またはその製薬上許容し得る塩であるカチオン性脂質以外のカチオン性脂質を含有していてもよい。
いずれの組成物においても、脂質膜に、中性脂質および/または高分子を含有していてもよい。また、複合体および/または脂質膜に、本発明のカチオン性脂質以外のカチオン性脂質を含有していてもよい。
本発明のカチオン性脂質以外のカチオン性脂質としては、好ましくはDOTMA、DOTAP、DORIE、DOSPA、1,2-ジリノレイルオキシ- N,N-ジメチルアミノプロパン(DLinDMA)、2,2-ジリノレイル-4-ジメチルアミノメチル-[1,3]-ジオキソラン(DLin-K-DMA)等の2つの非置換アルキル基を有する3級アミン部位または3つの非置換アルキル基を有する4級アンモニウム部位を有するカチオン性脂質であり、より好ましくは、3級アミン部位を有するカチオン性脂質である。
3級アミン部位および4級アンモニウム部位の非置換アルキル基はメチル基であることが好ましい。
本発明の組成物は、核酸に加え、核酸と化学的に近似した化合物を含有してもよい。
公知のリポソームの調製方法としては、例えばバンガム(Bangham)らのリポソーム調製法[“ジャーナル・オブ・モレキュラー・バイオロジー(J.Mol.Biol.)”,1965年,第13巻,p.238-252参照]、エタノール注入法[“ジャーナル・オブ・セル・バイオロジー(J.Cell Biol.)”,1975年,第66巻,p.621-634参照]、フレンチプレス法[“エフイービーエス・レターズ(FEBS Lett.)”,1979年,第99巻,p.210-214参照]、凍結融解法[“アーカイブス・オブ・バイオケミストリー・アンド・バイオフィジックス(Arch.Biochem.Biophys.)”,1981年,第212巻,p.186-194参照]、逆相蒸発法[“プロシーディングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンス・ユナイテッド・ステイツ・オブ・アメリカ(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)”,1978年,第75巻, p.4194-4198参照]およびpH勾配法(例えば特許第2572554号公報、特許第2659136号公報等参照)等が挙げられる。
リポソームの製造の際にリポソームを分散させる溶液としては、例えば水、酸、アルカリ、種々の緩衝液、生理食塩水およびアミノ酸輸液等が挙げられる。
リポソームの製造の際には、例えばクエン酸、アスコルビン酸、システインおよびエチレンジアミン四酢酸(EDTA)等の抗酸化剤、例えばグリセリン、ブドウ糖および塩化ナトリウム等の等張化剤等を添加してもよい。
本発明のカチオン性脂質、または本発明のカチオン性脂質と本発明のカチオン性脂質以外のカチオン性脂質との混合物等を、例えばエタノール等の有機溶媒に溶解し、溶媒を留去した後、生理食塩水等を添加、振とう攪拌することで、リポソームを形成させることができる。
A液およびB液中のカチオン性脂質としては、一種または複数種の本発明のカチオン性脂質または本発明のカチオン性脂質以外のカチオン性脂質を使用してよく、本発明のカチオン性脂質と本発明のカチオン性脂質以外のカチオン性脂質を組み合わせて混合して使用してもよい。
本製法により得られる組成物は、好ましくはカチオン性脂質と核酸との複合体および複合体を封入する脂質膜を含有する組成物であるか、または核酸とカチオン性脂質を含有する脂質一重層からなる膜(逆ミセル)との複合体および複合体を封入する脂質膜を含有する組成物である。該組成物における脂質膜は、脂質一重膜(脂質1分子膜)、脂質二重膜(脂質2分子膜)または多重膜のいずれであってもよい。
A液は、リポソームと核酸との複合体を形成させることができれば、エタノール濃度は、20〜70%であってもよい。
複合体中の本発明のカチオン性脂質および本発明のカチオン性脂質以外のカチオン性脂質の分子の総数は、核酸のリン原子の数に対して0.5〜4倍であるのが好ましく、1.5〜3.5倍であるのがより好ましく、2〜3倍であるのがさらに好ましい。
組成物中の本発明のカチオン性脂質および本発明のカチオン性脂質以外のカチオン性脂質の分子の総数は、核酸のリン原子の数に対して1〜10倍であるのが好ましく、2.5〜9倍であるのがより好ましく、3.5〜8倍であるのがさらに好ましい。
本発明の組成物は、中性脂質を、複合体に含有してもよく、複合体を封入する脂質膜に含有していてもよい。
中性脂質を、複合体を封入する脂質膜に含有していることが好ましく、複合体および複合体を封入する脂質膜のどちらにも含有していることがより好ましい。
誘導体としては、例えばスフィンガン、イコサスフィンガンまたはスフィンゴシン等の-NH2を-NHCO(CH2)xCH3(式中、xは0〜18の整数であり、中でも6、12または18が好ましい)に変換したもの等が挙げられる。
高分子としては、例示した高分子の塩の1以上からなるミセルであってもよい。
金属塩としては、例えばリチウム塩、ナトリウム塩およびカリウム塩等のアルカリ金属塩、マグネシウム塩およびカルシウム塩等のアルカリ土類金属塩、アルミニウム塩ならびに亜鉛塩等が挙げられる。
アンモニウム塩としては、例えばアンモニウムおよびテトラメチルアンモニウム等の塩が挙げられる。
酸付加塩としては、例えば塩酸塩、硫酸塩、硝酸塩およびリン酸塩等の無機酸塩、ならびに酢酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩およびクエン酸塩等の有機酸塩が挙げられる。
有機アミン付加塩としては、例えばモルホリンおよびピペリジン等の付加塩が挙げられる。
アミノ酸付加塩としては、例えばグリシン、フェニルアラニン、アスパラギン酸、グルタミン酸およびリジン等の付加塩が挙げられる。
糖、ペプチド、核酸および水溶性高分子から選ばれる1以上の物質の脂質誘導体もしくは脂肪酸誘導体、または界面活性剤は、分子の一部が本発明の組成物中の他の構成成分と例えば疎水性親和力または静電的相互作用等で結合する性質をもち、他の部分が組成物の製造時の溶媒と例えば親水性親和力または静電的相互作用等で結合する性質をもつ、2面性をもつ物質であるのが好ましい。
水溶性高分子の脂質誘導体または脂肪酸誘導体は、塩であってもよい。
表面改質に使用し得る水溶性高分子としては、例えばポリエチレングリコール、ポリグリセリン、ポリエチレンイミン、ポリビニルアルコール、ポリアクリル酸、ポリアクリルアミド、オリゴ糖、デキストリン、水溶性セルロース、デキストラン、コンドロイチン硫酸、ポリグリセリン、キトサン、ポリビニルピロリドン、ポリアスパラギン酸アミド、ポリ-L-リジン、マンナン、プルランおよびオリゴグリセロール等が挙げられ、好ましくはデキストラン、プルラン、マンナン、アミロペクチンまたはヒドロキシエチルデンプンである。
表面改質には、糖、ペプチド、核酸および水溶性高分子から選ばれる1以上の物質の脂質誘導体または脂肪酸誘導体等を用いることができる。表面改質は、本発明の組成物中の複合体および脂質膜に糖、ペプチド、核酸および水溶性高分子から選ばれる1以上の物質の脂質誘導体もしくは脂肪酸誘導体、または界面活性剤を含有させる方法の1つである。
平均粒子径を調節する方法としては、例えばエクストルージョン法、大きな多重膜リポソーム(MLV)等を機械的に粉砕(具体的にはマントンゴウリンまたはマイクロフルイダイザー等を使用)する方法[ミュラー(R.H.Muller)、ベニタ(S.Benita)、ボーム(B.Bohm)編著,“エマルジョン・アンド・ナノサスペンジョンズ・フォー・ザ・フォーミュレーション・オブ・ポアリー・ソラブル・ドラッグズ(Emulsion and Nanosuspensions for the Formulation of Poorly Soluble Drugs)”,ドイツ,サイエンティフィック・パブリッシャーズ・スチュットガルト(Scientific Publishers Stuttgart),1998年,p.267-294参照]等が挙げられる。
投与対象は、人であることが好ましい。
本発明は、本発明の組成物を哺乳動物に投与する肝臓、肺、腎臓、消化管、中枢神経系または脾臓に関連する疾患の治療方法も提供する。投与対象は、人であることが好ましく、肝臓、肺、腎臓、消化管、中枢神経系または脾臓に関連する疾患に罹患している患者がより好ましい。
適当な製剤としては、好ましくは、分散液から例えば濾過または遠心分離等によって溶媒を除去した製剤、分散液を凍結乾燥した製剤、ならびに例えばマンニトール、ラクトース、トレハロース、マルトースおよびグリシン等の賦形剤を加えた分散液を凍結乾燥した製剤である。
なお、実施例および参考例に示されたプロトン核磁気共鳴スペクトル(1H NMR)は、400MHzで測定されたものであり、化合物および測定条件によっては交換性プロトンが明瞭には観測されないことがある。なお、シグナルの多重度の表記としては通常用いられるものを用いている。
ジノニル11,11-ビス(ヒドロキシメチル)ヘニコサンジオアート(化合物IIf-1)
工程1
ノナン-1-オール (東京化成工業社製, 6.03 g, 41.8 mmol)をジクロロメタン (30 mL)に溶解させ、10-ブロモデカン酸 (東京化成工業社製, 7.00 g, 27.9 mmol)、1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド塩酸塩(東京化成工業社製, 8.01 g, 41.8 mmol)およびジメチルアミノピリジン (3.40 g, 27.9 mmol)を順次加えて、室温で終夜反応させた。反応混合物を減圧濃縮し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ヘキサン/酢酸エチル=98/2)で精製することにより、ノニル 10-ブロモデカノアート (5.75 g, 収率55%)を得た。
1H-NMR (CDCl3) δ: 0.88 (t, J = 6.8 Hz, 3H), 1.23-1.37 (m, 20H), 1.37-1.45 (m, 2H), 1.57-1.66 (m, 4H), 1.80-1.89 (m, 2H), 2.29 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 3.40 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 4.06 (t, J = 6.8 Hz, 2H).
工程2
マロン酸ジtert-ブチル (東京化成工業社製, 1.03 mL, 4.62 mmol)をテトラヒドロフラン (15 mL)に溶解させ、0℃にて水素化ナトリウム (ナカライテスク社製, 油性60%, 0.555 g, 11.4 mmol)を加えて、発泡が収まるまでしばらく撹拌した。工程1にて得られたノニル 10-ブロモデカノアート (5.24 g, 13.9 mmol)のテトラヒドロフラン溶液(5 mL)を0℃にて加えた後、70℃にて2時間撹拌した。反応混合物に飽和塩化アンモニウム水溶液を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後ろ過し、減圧濃縮することで、10,10-ジ-tert-ブチル1,19-ジノニル ノナデカン-1,10,10,19-テトラカルボキシラートの粗生成物を得た。
得られた粗生成物をジクロロメタン (20 mL)に溶解させ、0℃にてトリフルオロ酢酸 (10 mL, 130 mmol)を加えて、室温にて2時間撹拌した。反応混合物を減圧濃縮し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(クロロホルム/メタノール=99/1〜90/10)で精製することにより、2,2-ビス(10-(ノニロキシ)-10-オキソデシル)マロン酸(1.89 g, 収率37%)を得た。
ESI-MS m/z: 695 (M - H)-
工程3
工程2で得られた2,2-ビス(10-(ノニロキシ)-10-オキソデシル)マロン酸(1.84 g, 2.64 mmol)をテトラヒドロフラン (10 mL)に溶解させ、0℃にてボラン・テトラヒドロフラン錯体 (シグマアルドリッチ(Sigma-Aldrich)社製, 1 mol/L, 7.92 mL, 7.92 mmol)を加え、室温で終夜撹拌した。反応混合物に水を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧濃縮し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ヘキサン/酢酸エチル=90/10〜40/60)で精製することで化合物IIf-1 (0.400g, 収率23%)を得た。
ESI-MS m/z: 670 (M + H)+
工程1
参考例1で得られた化合物IIf-1 (0.400 g, 0.598 mmol)をジクロロメタン(4 mL)に溶解させ、ピリジン (0.484 mL, 5.98 mmol)を加えた。0℃にて、無水トリフルオロメタンスルホン酸 (ナカライテスク社製, 0.303 mL, 1.79 mmol)を加え、30分撹拌した。反応混合物に水を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧濃縮することで、ジノニル11,11-ビス((((トリフルオロメチル)スルフォニル)オキシ)メチル)ヘニコサンジオアートの粗生成物 (0.558g)を得た。
得られた粗生成物 (0.558 g)をN,N-ジメチルアセトアミド (4 mL)に溶解させ、メチルアミン (東京化成工業社製, 約9.8 mol/Lメタノール溶液, 0.35 mL, 2.99 mmol)を加え、60℃で1時間撹拌した。室温まで冷却後、反応混合物に水を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧濃縮し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(NHシリカゲル、ヘキサン/酢酸エチル=99/1〜70/30)で精製することで、化合物1 (0.220 g, 収率55%)を得た。
ESI-MS m/z: 664(M + H)+; 1H-NMR (CDCl3) δ: 0.88 (t, J = 6.8 Hz, 6H), 1.09-1.20 (m, 4H), 1.20-1.38 (m, 44H), 1.46-1.54 (m, 4H), 1.56-1.72 (m, 8H), 2.29 (t, J = 7.7 Hz, 4H), 2.31 (s, 3H), 2.93 (s, 4H), 4.06 (t, J = 6.7 Hz, 4H).
工程1
実施例1で得られた化合物1 (0.170 g, 0.205 mmol)をテトラヒドロフラン (1.5 mL)に溶解させ、水酸化リチウム1水和物 (Sigma-Aldrich社製, 0.086 g, 2.05 mmol)の水(0.5 mL)溶液を加え、1時間撹拌した。反応の進行が確認できなかったので、エタノール(1 mL)を加え、60℃で2時間撹拌した。反応混合物に水を加え、酢酸エチルにて水層を2回洗浄した。水層を1 mol/Lの塩酸にてpH4程度にした後、酢酸エチルで2回、クロロホルム/メタノール=9/1の混合溶媒で1回抽出した。得られた有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧濃縮することで、10,10'-(1-メチルアゼチジン-3,3-ジイル)ビス(デカン酸)の粗生成物を得た。
ESI-MS m/z: 410(M - H)-
工程2
工程1で得られた10,10'-(1-メチルアゼチジン-3,3-ジイル)ビス(デカン酸) をジクロロメタン(1.5 mL)に溶解させ、(Z)-ノナ-2-エン-1-オール (東京化成工業社製, 0.138 g, 0.972 mmol)、1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド塩酸塩(0.140 g, 0.729 mmol)、ジメチルアミノピリジン (0.0590 g, 0.486 mmol)を順次加えて、室温で終夜反応させた。反応混合物に水を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧濃縮し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(NHシリカゲル、ヘキサン/酢酸エチル=99/2〜80/20)で精製することにより、化合物2 (0.0640 g, 収率47%)を得た。
ESI-MS m/z: 660(M + H)+; 1H-NMR (CDCl3) δ: 0.88 (t, J = 7.0 Hz, 6H), 1.12-1.20 (m, 4H), 1.22-1.41 (m, 32H), 1.50-1.56 (m, 4H), 1.56-1.71 (m, 8H), 2.10 (dd, J = 14.4, 7.2 Hz, 4H), 2.30 (t, J = 7.6 Hz, 4H), 2.36 (s, 3H), 3.01 (s, 4H), 4.62 (d, J = 6.8 Hz, 4H), 5.49-5.55 (m, 2H), 5.61-5.67 (m, 2H).
参考例1と同様の方法で、10-ブロモデカン酸の代わりに12-ブロモドデカン酸(Sigma-Aldrich社製, 5.00 g, 17.9 mmol)を用い、化合物IIf-2 (0.180 g, 収率7%)を得た。
ESI-MS m/z: 726(M + H)+;
実施例1と同様の方法で、参考例1で得られた化合物IIf-1の代わりに参考例2で得られた化合物IIf-2 (0.180 g, 0.248 mmol)を用い、化合物3 (0.120 g, 収率67%)を得た。
ESI-MS m/z: 720(M + H)+; 1H-NMR (CDCl3) δ: 0.88 (t, J = 6.8 Hz, 6H), 1.11-1.20 (m, 4H), 1.23-1.35 (m, 52H), 1.49-1.55 (m, 4H), 1.57-1.66 (m, 8H), 2.29 (t, J = 7.6 Hz, 4H), 2.31 (s, 3H), 2.94 (s, 4H), 4.06 (t, J = 6.7 Hz, 4H).
実施例2と同様の方法で、実施例1で得られた化合物1の代わりに実施例3で得られた化合物3を用い、化合物4 (0.0390 g、収率36%)を得た。
ESI-MS m/z: 716(M + H)+; 1H-NMR (CDCl3) δ: 0.88 (t, J = 6.8 Hz, 6H), 1.10-1.21 (m, 4H), 1.21-1.39 (m, 44H), 1.51-1.67 (m, 8H), 2.10 (q, J = 6.9 Hz, 4H), 2.30 (t, J = 7.6 Hz, 4H), 2.42 (s, 3H), 3.11 (s, 4H), 4.62 (dt, J = 6.8, 0.6 Hz, 4H), 5.49-5.56 (m, 2H), 5.61-5.67 (m, 2H).
化合物1/PEG-DMPE Na(日油社製)=57.3/5.52 (すべての数値単位はmmol/Lである)となるように、各試料を秤量し、塩酸およびエタノールを含有する水溶液に懸濁させ、vortex攪拌ミキサーで攪拌および、加温を繰り返して均一な懸濁液を得た。得られた懸濁液を室温下で、0.05 μmのポリカーボネートメンブランフィルターに通し、化合物1/PEG-DMPE Naの粒子(リポソーム)の分散液を得た。粒子径測定装置で得られたリポソームの平均粒子径を測定し、30 nmから100 nmの範囲内であることを確認した。得られたリポソームの分散液と、HPRT1 siRNA溶液を、リポソームの分散液: HPRT1 siRNA溶液=3:1の割合で混合し、さらに29倍量の蒸留水を加えて混合することで化合物1/PEG-DMPE Na/ HPRT1 siRNA複合体の分散液を調製した。
化合物1/PEG-DMPE Na(日油社製)/DSPC(日油社製)/コレステロール(日油社製)= 8.947/0.147/5.981/14.355(すべての数値単位はmmol/Lである)となるように、各試料を秤量しエタノールに溶解させ、脂質膜構成成分の溶液を調製した。
得られた脂質膜構成成分の溶液に4倍量のエタノールを追加し、得られた化合物1/PEG-DMPE Na/ HPRT1 siRNA複合体の分散液と、2:3の割合で混合し、さらに数倍量の蒸留水と混合し、粗製剤を得た。
得られた粗製剤はアミコンウルトラ(Millipore社製)を用いて濃縮後、生理食塩水で希釈し、0.2 μmのフィルター(東洋濾紙社製)を用いてクリーンベンチ内でろ過した。得られた製剤のsiRNA濃度を測定し、投与濃度にあわせて生理食塩水を用いて希釈することで、製剤1(化合物1およびHPRT1 siRNAを含有する組成物)を得た。
実施例5および6で得られた製剤1〜3(組成物)の平均粒子径を粒子径測定装置で測定し、その結果を表4に示した。
化合物1/PEG-DMPE Na(日油社製)/コレステロール(日油社製)= 8.947/0.147/20.336(すべての数値単位はmmol/Lである)となるように、各試料を秤量しエタノールに溶解させ、脂質膜構成成分の溶液を調製した。
得られた脂質膜構成成分の溶液に4倍量のエタノールを追加し、得られた化合物1/PEG-DMPE Na/ HPRT1 siRNA複合体の分散液と、2:3の割合で混合し、さらに数倍量の蒸留水と混合し、粗製剤を得た。
得られた粗製剤はアミコンウルトラ(Millipore社製)を用いて濃縮後、生理食塩水で希釈し、0.2 μmのフィルター(東洋濾紙社製)を用いてクリーンベンチ内でろ過した。得られた組成物のsiRNA濃度を測定し、投与濃度にあわせて生理食塩水を用いて希釈することで、製剤4(化合物1およびHPRT1 siRNAを含有する組成物)を得た。
実施例7および8で得られた製剤(組成物)の平均粒子径を粒子径測定装置で測定し、その結果を表5に示した。
実施例5および6で得られた製剤1〜3(化合物1〜3のそれぞれと、HPRT1 siRNAを含有する組成物)の活性を調べるため、以下に記載の方法で評価した。
ヒト膵臓癌細胞株MIA-PaCa2を、10%ウシ胎仔血清(FBS)を含むDMEM培地(ナカライテスク、08458-45)中、またヒト肺癌細胞株NCI-H358を、10%ウシ胎仔血清(FBS)を含むRPMI1640培地(ナカライテスク、30264-85)中、7500細胞数/80uL/ウェルで播種し、37℃、5%CO2条件下で24時間培養した。その後、実施例5および6で調製した各種製剤をsiRNA濃度として終濃度0.3〜100nMとなるようOpti-MEM培地(サーモフィッシャー(Thermo Fisher)、11058021)で希釈し、20uLを細胞に添加した。また陰性対照として、Opti-MEM培地20uLを細胞に添加した。
各種製剤を処理した細胞を37℃の5%CO2インキュベーター内で24時間培養し、氷冷したリン酸緩衝生理食塩水(Phosphate buffered saline, PBS)で洗浄し、Thermo Fisher社 Cells-to-Ct Kit(Thermo Fisher、AM1729)を用い、添付の使用説明書に従いtotal RNAを回収、cDNAを作成した。
得られたcDNAをPCR反応の鋳型に用い、アプライド バイオシステムズ クァントスタジオ 12K フレックス(Applied Biosystems QuantStudio 12K Flex)(ABI社)を用いたTaqMan PCR (TaqMan Gene Expression、4331182)によりHPRT1遺伝子および構成的発現遺伝子であるGAPDH(D-glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase)遺伝子に特異的なPCR増幅をそれぞれ行い、mRNA量の定量を行った。PCR反応の条件はTaqMan Gene Expression添付の使用説明書に従った。検体のmRNA量は、GAPDHのmRNA量に対するHPRT1のmRNA量を算出し、陰性対照処理群における当該値を1としたときの相対的な割合として算出した。HPRT1のmRNA量についての結果を図1および図2に示す。
実施例7および8で得られた製剤4〜8(化合物1〜4のそれぞれと、HPRT1 siRNAを含有する組成物)の活性を調べるため、試験例1と同様の方法で評価した。HPRT1のmRNA量についての結果を図3および図4に示す。
よって、本発明の組成物は、核酸を細胞内等に導入することができ、本発明のカチオン性脂質は、インビボで細胞内に核酸を送達することを容易にすることが明らかとなった。
配列番号2:ヒポキサンチン-グアニンホスホリボシル基転移酵素siRNA アンチセンス鎖
Claims (17)
- 式(I)
n1は0〜4の整数であり、n2は1〜4の整数であり(但し、n1が0であり、n2が1である場合を除く)、
Z1は、結合する炭素ごとにそれぞれ独立して、水素原子またはC1-C3アルキルであり、
Z2は、結合する炭素ごとにそれぞれ独立して、水素原子またはC1-C3アルキルであり、
A1およびA2は同一または異なって、直鎖状または分岐状のC8-C20アルキレンもしくはC8-C20アルケニレンであるか、またはC6-C18アルキレンオキシC1-C3アルキレンもしくはC6-C18アルケニレンオキシC1-C3アルキレンであり、
M1およびM2は同一または異なって、-OC(O)-、-C(O)O-、-SC(O)-、-C(O)S-、-OC(S)-、-C(S)O-、-SS-、-C(R6)=N-、-N=C(R6)-、-C(R6)=N-O-、-O-N=C(R6)-、-N(R6)C(O)-、-C(O)N(R6)-、-N(R6)C(S)-、-C(S)N(R6)-、-N(R6)C(O)N(R7)-、-N(R6)C(O)O-、-OC(O)N(R6)-および-OC(O)O-からなる群から選ばれ、
R6およびR7は同一または異なって、水素原子またはC1-C4アルキルであり、
B1およびB2は同一または異なって、直鎖状または分岐状のC1-C16アルキルまたはC2-C16アルケニルである]で表わされる化合物、またはその製薬上許容し得る塩。 - M1およびM2が同一または異なって、-OC(O)-、-C(O)O-、-N(R6)C(O)-および-C(O)N(R6)-からなる群から選ばれる、請求項1記載の化合物、またはその製薬上許容し得る塩。
- M1およびM2が同一または異なって、-OC(O)-または-C(O)O-である、請求項2記載の化合物、またはその製薬上許容し得る塩。
- A1およびA2が同一または異なって、直鎖状または分岐状のC8-C20アルキレンまたはC8-C20アルケニレンである、請求項1〜3のいずれか1項に記載の化合物、またはその製薬上許容し得る塩。
- B1-M1-A1-およびB2-M2-A2-が同一である、請求項1〜4のいずれか1項に記載の化合物、またはその製薬上許容し得る塩。
- R1がC1-C3アルキルである、請求項1〜5のいずれか1項に記載の化合物、またはその製薬上許容し得る塩。
- n1が1であり、n2が1〜3の整数である、請求項1〜6のいずれか1項に記載の化合物、またはその製薬上許容し得る塩。
- n1およびn2がともに1である、請求項1〜7のいずれか1項に記載の化合物、またはその製薬上許容し得る塩。
- 請求項1〜8のいずれか1項に記載の化合物、またはその製薬上許容し得る塩および核酸を含有する組成物。
- 中性脂質および/または高分子をさらに含む、請求項9記載の組成物。
- 核酸が、RNA干渉(RNAi)を利用した標的遺伝子の発現抑制作用を有する核酸である、請求項9または10に記載の組成物。
- 標的遺伝子が、肝臓、肺、腎臓、消化管、中枢神経系または脾臓において発現する遺伝子である、請求項11記載の組成物。
- 静脈内投与用である、請求項9〜12のいずれか1項に記載の組成物。
- 請求項9〜13のいずれか1項に記載の組成物を含む、医薬。
- 請求項9〜13のいずれか1項に記載の組成物を含む、肝臓、肺、腎臓、消化管、中枢神経系または脾臓に関連する疾患の治療剤。
- 請求項9〜13のいずれか1項に記載の組成物をそれを必要とする患者に投与することを含む、肝臓、肺、腎臓、消化管、中枢神経系または脾臓に関連する疾患の治療方法。
- 肝臓、肺、腎臓、消化管、中枢神経系または脾臓に関連する疾患の治療用の請求項9〜13のいずれか1項に記載の組成物。
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