WO2015141819A1 - 長時間作用型アドレノメデュリン誘導体 - Google Patents

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和雄 北村
丈司 加藤
恵是 久保
健二 桑迫
茂 久保
久美子 熊谷
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国立大学法人宮崎大学
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    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/22—Hormones

Definitions

  • the present invention relates to a long-acting adrenomedullin derivative.
  • AM Adrenomedullin
  • Non-patent Document 1 Adrenomedullin
  • Patent Document 2 discloses adrenomedullin or a derivative thereof having an activity of suppressing non-bacterial inflammation, or a salt thereof having an activity of suppressing non-bacterial inflammation.
  • a preventive or therapeutic agent for non-bacterial inflammatory bowel disease is described.
  • Patent Document 3 is a method for preventing or treating inflammatory bowel disease in a patient who needs prevention or treatment of inflammatory bowel disease where it is difficult or insufficient to use a steroid preparation, immunosuppressive agent or biological preparation. And administering an effective amount of adrenomedullin, a modified form thereof having an activity to suppress inflammation, or a salt of the adrenomedullin or the modified form and having an activity to suppress inflammation to the patient.
  • the method for preventing or treating is described.
  • Non-Patent Documents 2 to 9 In addition, from the structure-activity relationship studies of AM, identification of essential sequences that can contribute to the biological activity of AM was advanced (Non-Patent Documents 2 to 9).
  • Adrenomedullin a novel hypotensive peptide isolated from human pheochromocytoma. , Pp. 553-601 Belloni, A.S., et al., Structure-activity relationships of adrenomedullin in the adrenal gland. Endocr Res, 1998, 24 (3-4), p. 729-30.
  • Champion, H.C., et al., Catecholamine release mediates pressor effects of adrenomedullin- (15-22) in the rat. Hypertension, 1996, 628 (6), p. 1041-6.
  • Adrenomedullin is a compound having various pharmacological actions. For this reason, the medicine containing adrenomedullin as an active ingredient is expected to be applied to the prevention or treatment of various diseases.
  • adrenomedullin is a peptide. In general, it is known that peptides have a short half-life due to metabolic reactions in vivo (for example, in blood). For this reason, a medicine containing adrenomedullin as an active ingredient may have a very short action time in a subject (for example, a human patient). As described above, there is room for further improvement in order to apply adrenomedullin for pharmaceutical use.
  • an object of the present invention is to provide a novel adrenomedullin derivative capable of acting continuously for a long period of time as compared with natural adrenomedullin.
  • the present inventors have chemically modified the N-terminal amino group of natural adrenomedullin with a specific modifying group, while retaining the biological activity of natural adrenomedullin.
  • the present inventors have found that the blood half-life can be prolonged as compared with natural adrenomedullin. Based on the above findings, the present inventors have completed the present invention.
  • the gist of the present invention is as follows.
  • the adrenomedullin or a modified form thereof having adrenomedullin activity is: (I) a peptide comprising the amino acid sequence of adrenomedullin, (Ii) a peptide consisting of an amino acid sequence of adrenomedullin, wherein two cysteine residues in the amino acid sequence form a disulfide bond, (Iii) In the peptide of (ii), the disulfide bond is substituted with an ethylene group, and the peptide has adrenomedullin activity, (Iv) the peptide of any one of (i) to (iii), wherein 1 to 15 amino acids are deleted, substituted or added, and has adrenomedullin activity, (V) In any peptide of (i) to (iv), a peptide in which the C-terminus is amidated, and in any of the peptides (vi) (i) to (iv), a glycine residue is
  • the adrenomedullin or a modified form thereof is: (A) a peptide consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1, or a peptide consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1, wherein the cysteine residue at position 16 and the cysteine residue at position 21 form a disulfide bond; (B) a peptide consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 3, or a peptide consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 3, wherein the cysteine residue at position 16 and the cysteine residue at position 21 form a disulfide bond; (C) a peptide consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 5, or a peptide consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 5, wherein the cysteine residue at position 16 and the cysteine residue at position 21 form a disulfide bond; (D) a peptide consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 7, or a peptid
  • a precursor of a peptide moiety B derived from adrenomedullin or a modified product thereof, a precursor of a modifying group A selected from the group consisting of a palmitoyl group and a polyethylene glycol group, and a precursor of a divalent group L n The method for producing a compound according to any one of the above (1) to (3), comprising a linking step, wherein a compound represented by formula (I) is obtained by linking each other.
  • a medicament comprising the compound according to any one of (1) to (3) or a pharmaceutically acceptable salt thereof, or a pharmaceutically acceptable hydrate thereof as an active ingredient.
  • Cardiovascular disease or inflammation containing the compound according to any one of (1) to (3) or a pharmaceutically acceptable salt thereof, or a pharmaceutically acceptable hydrate thereof as an active ingredient.
  • a pharmaceutical composition comprising a carrier.
  • adrenomedullin derivative that can act continuously for a long period of time as compared with natural adrenomedullin.
  • FIG. 1 is a diagram showing a dose response curve of the concentration of Pal-h.AM (1-52), PEG5000-h.AM (1-52) or h.AM (1-52) and the increase of cAMP concentration. is there.
  • FIG. 2 is a graph showing the relationship between the elapsed time from the start of administration of h.AM (1-52) and the AM concentration in plasma.
  • FIG. 3 is a graph showing the relationship between the elapsed time from the start of administration of Pal-h.AM (1-52) and the plasma AM concentration.
  • FIG. 4 is a graph showing the relationship between the elapsed time from the start of administration of PEG5000-h.AM (1-52) and the AM concentration in plasma.
  • FIG. 1 is a diagram showing a dose response curve of the concentration of Pal-h.AM (1-52), PEG5000-h.AM (1-52) or h.AM (1-52) and the increase of cAMP concentration. is there.
  • FIG. 2 is a graph showing the relationship between the elapsed time from
  • FIG. 5 shows the relationship between the elapsed time from the start of administration of h.AM (1-52), Pal-h.AM (1-52) or PEG5000-h.AM (1-52) and mean blood pressure.
  • FIG. FIG. 6 is a view showing plasma AM concentrations in a control group, and 0.02, 0.1, and 0.5 nmol / kg / hr PEG5000-h.AM (1-52) administration group.
  • FIG. 7 is a graph showing the relationship between the elapsed time from the start of administration of PEG5000-h.AM (1-52) and the total score of the control group and each administration group.
  • FIG. 8 is a graph showing the length of the intestinal tract of the control group and 0.02, 0.1, and 0.5 nmol / kg / hr PEG5000-h.AM (1-52) administration group.
  • Adrenomedullin derivatives The present invention is directed to formula (I): AL n -B (I) Or a salt thereof, or a hydrate thereof.
  • the compound represented by the formula (I) may be described as “adrenomedullin derivative”.
  • adrenomedullin is not only a human-derived peptide (SEQ ID NO: 1, Non-Patent Document 1) isolated and identified from human brown cell tissue, but also, for example, pig (SEQ ID NO: 3), dog (sequence) It may be a peptide (ortholog) derived from other non-human mammals (for example, warm-blooded animals) such as No. 5), bovine (SEQ ID NO: 7), rat (SEQ ID NO: 9) or mouse (SEQ ID NO: 11).
  • SEQ ID NO: 1 human-derived peptide
  • Non-Patent Document 1 isolated and identified from human brown cell tissue
  • pig SEQ ID NO: 3
  • dog sequence
  • It may be a peptide (ortholog) derived from other non-human mammals (for example, warm-blooded animals) such as No. 5), bovine (SEQ ID NO: 7), rat (SEQ ID NO: 9) or mouse (SEQ ID NO: 11).
  • the peptide having a disulfide bond and a C-terminal amide group may be referred to as “natural adrenomedullin” or simply “adrenomedullin”.
  • the present invention can be applied to any of the above peptides.
  • C-terminal amidation means one embodiment of post-translational modification of a peptide in vivo.
  • the main chain carboxyl group of the C-terminal amino acid residue of the peptide is an amide group. It means a reaction that is converted to a form.
  • formation of disulfide bond of cysteine residue or “disulfation of cysteine residue” means one embodiment of post-translational modification of a peptide in vivo. It means a reaction in which two cysteine residues in an amino acid sequence form a disulfide bond (-SS-).
  • bioactive peptides produced in vivo are initially biosynthesized as precursor proteins with higher molecular weights, such as C-terminal amidation and / or disulfation of cysteine residues during the process of intracellular translocation. It undergoes a post-translational modification reaction and becomes a mature bioactive peptide.
  • C-terminal amidation usually proceeds by the action of a C-terminal amidating enzyme on the precursor protein.
  • a Gly residue is bonded to the C-terminal carboxyl group to be amidated, and the Gly residue is C-terminal by a C-terminal amidating enzyme. Converted to an amide group.
  • the C-terminal propeptide of the precursor protein has a repeating sequence of a combination of basic amino acid residues such as Lys-Arg or Arg-Arg (Mizuno, Biochemistry Vol. 61, No. 12, 1435-1461 (1989)). Disulfidation of cysteine residues can proceed under oxidative conditions. In vivo, disulfation of cysteine residues usually proceeds by the action of protein disulfide isomerase on the precursor protein.
  • Adrenomedullin a known physiologically active substance
  • a medicine containing adrenomedullin as an active ingredient may have a very short time during which it can act effectively in the living body of a subject (for example, a human patient).
  • Adrenomedullin also has a strong vasodilatory effect.
  • a powerful vasodilatory action causes undesirable side reactions (eg, excessive blood pressure reduction, tachycardia associated with increased reflex sympathetic activity, and / or Or an increase in renin activity).
  • a medicine containing adrenomedullin as an active ingredient has to be administered to a subject by continuous intravenous infusion. Such an administration method may impose an excessive burden on the subject.
  • the compound represented by the formula (I), which is an adrenomedullin derivative retains substantially the same biological activity as that of the natural adrenomedullin and has a half-life in blood compared with that of the natural adrenomedullin. It was found that can be significantly extended. Therefore, by applying the compound represented by the formula (I) of the present invention to a symptom, disease and / or disorder that can be prevented or treated by adrenomedullin, the symptom, disease and / or disorder is sustained. Can be prevented or treated.
  • B must be adrenomedullin or a peptide moiety derived from a modified form having adrenomedullin activity.
  • adrenomedullin modified product means a peptide obtained by chemically modifying the natural adrenomedullin described above.
  • adrenomedullin activity means the biological activity of adrenomedullin. Examples of adrenomedullin activity include the following.
  • Cardiovascular system Vasodilatory effect, blood pressure lowering effect, cardiac output increase / heart failure improvement effect, pulmonary hypertension improvement effect, angiogenesis effect, lymphangiogenesis effect, vascular endothelial function improvement effect, anti-arteriosclerosis effect , Myocardial protective action (for example, myocardial protective action in ischemia-reperfusion injury or inflammation), remodeling inhibitory action after myocardial infarction, cardiac hypertrophy inhibitory action, and angiotensin converting enzyme inhibitory action.
  • Kidney / water electrolyte system diuretic action, natriuretic action, antidiuretic hormone inhibitory action, aldosterone lowering action, renal protective action (for example, myocardial protective action in hypertension or ischemia-reperfusion injury), drinking water action inhibiting action, And salt demand suppression action.
  • Brain / nervous system neuroprotection / brain injury inhibitory action, anti-inflammatory action, apoptosis inhibitory action (for example, apoptosis inhibitory action in ischemia-reperfusion injury or inflammation), autoregulatory ability maintenance action, and oxidative stress inhibitory action .
  • Urogenital Erection improving effect, blood flow improving effect, and implantation promoting effect.
  • Digestive system anti-ulcer action, tissue repair action, mucosal neoplasia action, blood flow improvement action, anti-inflammatory action, and liver function improvement action.
  • Orthopedic system Osteoblast stimulation and arthritis improvement.
  • Endocrine metabolic system adipocyte differentiation action, lipolysis control action, insulin sensitivity improvement action, and insulin secretion control action.
  • Others Circulation improvement action, anti-inflammatory action, cytokine control action, organ protection action, oxidative stress suppression action, tissue repair action (for example, anti-decubitus action), septic shock improvement action, multi-organ failure suppression action And an inhibitory effect on autoimmune diseases.
  • the blood pressure lowering action is preferably a vasodilatory antihypertensive action.
  • the anti-inflammatory action in the digestive system is a preventive or therapeutic action for inflammatory bowel diseases such as steroid resistant or steroid dependent inflammatory bowel diseases (eg, ulcerative colitis, Crohn's disease or intestinal Behcet's disease).
  • inflammatory bowel diseases such as steroid resistant or steroid dependent inflammatory bowel diseases (eg, ulcerative colitis, Crohn's disease or intestinal Behcet's disease).
  • adrenomedullin activity is expressed through an increase in intracellular cAMP concentration. Therefore, an increase in intracellular cAMP concentration can be used as an index of adrenomedullin activity.
  • the compound represented by the formula (I) of the present invention is an organism substantially equivalent to natural adrenomedullin.
  • An activity ie, adrenomedullin activity
  • the adrenomedullin or a modified form thereof having adrenomedullin activity is: (I) a peptide comprising the amino acid sequence of adrenomedullin, (Ii) a peptide consisting of an amino acid sequence of adrenomedullin, wherein two cysteine residues in the amino acid sequence form a disulfide bond, (Iii) In the peptide of (ii), the disulfide bond is substituted with an ethylene group, and the peptide has adrenomedullin activity, (Iv) the peptide of any one of (i) to (iii), wherein 1 to 15 amino acids are deleted, substituted or added, and has adrenomedullin activity, (V) In any peptide of (i) to (iv), a peptide in which the C-terminus is amidated, and in any of the peptides (vi) (i) to (iv), a glycine residue is
  • the peptide comprises the amino acid sequence of adrenomedullin included in (v), the C-terminus is amidated, and two cysteine residues in the amino acid sequence are disulfide
  • the peptide forming the bond corresponds to the mature natural adrenomedullin.
  • the peptide consisting of the amino acid sequence of adrenomedullin in (i) corresponds to the natural adrenomedullin in the form before undergoing post-translational modification of C-terminal amidation and disulfation of cysteine residues (ie, immature).
  • other peptides than the peptides described above correspond to adrenomedullin modifications.
  • the peptide of (ii) is formed by air-oxidizing the thiol groups of the two cysteine residues of the peptide of (i) or oxidizing them with an appropriate oxidizing agent to convert them into disulfide bonds. Can be made.
  • the three-dimensional structure of the peptide part B can be made similar to the three-dimensional structure of natural adrenomedullin.
  • the adrenomedullin activity of the compound represented by the formula (I) can be substantially equivalent to that of the natural adrenomedullin.
  • the peptide (iii) can be formed by converting the disulfide bond of the peptide (ii) to an ethylene group.
  • the substitution from the disulfide bond to the ethylene group can be performed by a method well known in the art (O. Keller et al., Helv. Chim. Acta, 1974, 5757, p. 1253).
  • the peptide (iii) By using the peptide (iii), the three-dimensional structure of the peptide part B can be stabilized. Thereby, the compound represented by the formula (I) can continuously express adrenomedullin activity in vivo.
  • the deleted, substituted or added amino acid residues are preferably in the range of 1 to 12, more preferably in the range of 1 to 10, and 1 to 8 The range is more preferably 1 to 5, particularly preferably 1 to 5, and most preferably 1 to 3.
  • the preferred peptide (iv) is the peptide of any one of (i) to (iii), 1 to 15, 1 to 12, 1 to 10, 1 to 8, 1 to 5 from the N-terminal side.
  • one or a plurality of amino acids may be further deleted, substituted or added.
  • the adrenomedullin activity of the compound represented by the formula (I) can be substantially substantially equivalent to that of natural adrenomedullin.
  • the compound represented by the formula (I) can continuously express adrenomedullin activity in vivo.
  • the peptide (vi) can be converted to the peptide (v) by converting the C-terminal glycine residue into a C-terminal amide group by the action of the C-terminal amidating enzyme. Therefore, by administering the peptide (vi) to a subject, a C-terminal amidated peptide can be formed in the subject's living body after a lapse of a certain time. Thereby, the compound represented by the formula (I) can continuously express adrenomedullin activity in vivo.
  • the adrenomedullin or a modified form thereof is as follows: (A) a peptide consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1, or a peptide consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1, wherein the cysteine residue at position 16 and the cysteine residue at position 21 form a disulfide bond; (B) a peptide consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 3, or a peptide consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 3, wherein the cysteine residue at position 16 and the cysteine residue at position 21 form a disulfide bond; (C) a peptide consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 5, or a peptide consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 5, wherein the cysteine residue at position 16 and the cysteine residue at position 21 form a disulfide bond; (D) a peptide consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 7, or a
  • the number of deleted, substituted or added amino acid residues is preferably in the range of 1 to 12, more preferably in the range of 1 to 10, and 1 to 8 The range is more preferably 1 to 5, particularly preferably 1 to 5, and most preferably 1 to 3.
  • the preferred peptide (h) is any one of the peptides (a) to (g), 1 to 15, 1 to 12, 1 to 10, 1 to 8, 1 to 5 from the N-terminal side.
  • one or a plurality of amino acids may be further deleted, substituted or added.
  • the adrenomedullin activity of the compound represented by the formula (I) can be made substantially equivalent to that of natural adrenomedullin.
  • the compound represented by formula (I) can continuously express adrenomedullin activity in vivo.
  • A must be a modifying group.
  • A is preferably a modifying group selected from the group consisting of palmitoyl group, polyethylene glycol group, myristoyl group, sugar group and peptide group, and is a modifying group selected from the group consisting of palmitoyl group and polyethylene glycol group It is more preferable.
  • the sugar group is preferably a monovalent group (for example, a glycosyl group) derived from a monosaccharide, disaccharide, oligosaccharide or polysaccharide.
  • the peptide group is a monovalent group derived from polyglycine, polyglutamic acid, polylysine, polyasparagine or the like (for example, a monovalent group that forms a bond via an N-terminal amino group, a C-terminal carboxyl group, or a side chain group).
  • the polyethylene glycol group preferably has an average molecular weight in the range of 200 to 40,000, more preferably has an average molecular weight in the range of 500 to 20,000, and still more preferably has an average molecular weight in the range of 500 to 10,000.
  • the compound represented by the formula (I) can continuously exhibit adrenomedullin activity in a living body for a long time.
  • the adrenomedullin activity of the compound represented by formula (I) is substantially substantially equivalent to that of natural adrenomedullin. can do.
  • the compound represented by the formula (I) can continuously express adrenomedullin activity in vivo.
  • L needs to be a divalent linking group.
  • the divalent linking group L is preferably a substituted or unsubstituted divalent hydrocarbon group, a substituted or unsubstituted divalent aliphatic hydrocarbon group, a substituted or unsubstituted divalent alicyclic group. More preferably a substituted or unsubstituted divalent aromatic group, a substituted or unsubstituted C 1 to C 10 alkylene group, a C 2 to C 10 alkenylene group or a C 2 to C 10 alkynylene group. More preferably.
  • the group preferably contains one or more heteroatoms, and more preferably contains a divalent group containing one or more heteroatoms such as oxo (carbonyl), thiocarbonyl, carbamate, or carbonimidoyl. preferable.
  • the divalent group containing one or more heteroatoms is preferably arranged at one or both ends of the divalent linking group L, and is arranged at the terminal that forms a bond with the peptide moiety B. Is more preferable.
  • the compound represented by the formula (I) is cleaved at the divalent linking group L by an in vivo metabolic reaction such as hydrolysis to release adrenomedullin or a modified product having adrenomedullin activity. obtain.
  • a particularly preferred divalent linking group L is 1-oxo-1,6-hexanediyl.
  • n must be an integer of 0 or 1.
  • the compound represented by the formula (I) of the present invention is represented by the formula (Ia): AB (Ia) It is a compound represented by these.
  • the peptide portion B needs to be bonded to the modifying group A or the linking group L via a group in the region near the N-terminus.
  • the peptide part B is preferably bound to the modifying group A or the linking group L via its N-terminal amino group.
  • the “group in the region near the N-terminus” of the peptide part B is a group of amino acid residues contained in the region from the N-terminal amino acid residue to the 13th amino acid residue of the peptide part B (for example, , ⁇ -amino group of the N-terminal amino acid residue, or the amino group, carboxyl group, hydroxyl group, imidazole group or guaninyl group of the side chain of each amino acid residue), and a modifying group bonded to the amino acid residue .
  • N-terminal amino group of peptide part B means the ⁇ -amino group of the N-terminal amino acid residue of peptide part B. Due to the binding form, the compound represented by the formula (I) of the present invention can continuously express adrenomedullin activity in vivo.
  • Particularly preferred compounds of the formula (I) are A is a modifying group which is a palmitoyl group, n is 0, B is a peptide moiety derived from adrenomedullin or a modified form thereof having adrenomedullin activity; Provided that the peptide moiety B is linked to the modifying group A via its N-terminal amino group, or A is a modifying group which is a polyethylene glycol group, L is a divalent linking group which is a substituted or unsubstituted divalent hydrocarbon group (the above group includes one or more heteroatoms); n is 1, B is a peptide moiety derived from adrenomedullin or a modified form thereof having adrenomedullin activity; However, the peptide part B is bonded to the modifying group A or the linking group L via its N-terminal amino group.
  • the compound represented by the formula (I) includes not only the compound itself but also a salt thereof.
  • the compound represented by formula (I) is in the form of a salt, it is preferably a pharmaceutically acceptable salt.
  • the counter ion of the salt of the compound of the present invention is not limited, but includes, for example, a cation such as sodium ion, potassium ion, calcium ion, magnesium ion, or substituted or unsubstituted ammonium ion, or chloride ion.
  • the compound represented by the formula (I) includes not only the compound itself but also a solvate of the compound or a salt thereof.
  • the compound represented by the formula (I) or a salt thereof is in the form of a solvate, it is preferably a pharmaceutically acceptable solvate.
  • Solvents that can form solvates with the above-mentioned compounds or salts thereof are not limited. For example, water or methanol, ethanol, 2-propanol (isopropyl alcohol), dimethyl sulfoxide (DMSO), acetic acid, ethanol Organic solvents such as amines, acetonitrile or ethyl acetate are preferred.
  • the adrenomedullin activity of the compound can be substantially substantially equivalent to that of natural adrenomedullin. .
  • the compound represented by the formula (I) includes not only the above or the following compounds themselves, but also their protected forms.
  • the “protected form” means a form in which a protecting group is introduced into one or a plurality of functional groups (for example, a side chain amino group of a lysine residue).
  • a “protecting group” is a group introduced into a specific functional group in order to prevent an undesirable reaction from progressing, and is quantitatively removed under specific reaction conditions. In other reaction conditions, it means a group that is substantially stable, that is, reaction-inactive.
  • Protecting groups that can form protected forms of the compound include, but are not limited to, for example, t-butoxycarbonyl (Boc), 2-bromobenzyloxycarbonyl (BrZ), 9-fluorenylmethoxycarbonyl (Fmoc ), P-toluenesulfonyl (Tos), benzyl (Bzl), 4-methylbenzyl (4-MeBzl), 2-chlorobenzyloxycarbonyl (ClZ), cyclohexyl (cHex), and phenacyl (Pac);
  • As protecting groups for benzyloxycarbonyl p-chlorobenzyloxycarbonyl, p-bromobenzyloxycarbonyl, p-nitrobenzyloxycarbonyl, p-methoxybenzyloxycarbonyl, benzhydryloxycarbonyl, 2- (p-biphenyl) Isopropyloxycarbonyl, 2- (3,5-dime
  • the compound represented by the formula (I) also includes a mixture of individual enantiomers and diastereomers of the compound, and stereoisomers of the compound, such as a racemate.
  • the compound represented by the formula (I) can continuously exhibit adrenomedullin activity in vivo without substantially reducing the adrenomedullin activity.
  • adrenomedullin derivatives can continuously exhibit a biological activity substantially equivalent to the parent molecule adrenomedullin (ie, adrenomedullin activity) in vivo. Therefore, the present invention relates to a medicament containing the compound represented by the formula (I) of the present invention as an active ingredient.
  • the compound represented by the formula (I) of the present invention When the compound represented by the formula (I) of the present invention is applied for pharmaceutical use, the compound may be used alone or in combination with one or more pharmaceutically acceptable ingredients. .
  • the medicament of the present invention can be formulated into various dosage forms usually used in the art depending on the desired administration method. Therefore, the medicament of the present invention can also be provided in the form of a pharmaceutical composition containing the compound represented by the formula (I) of the present invention and one or more pharmaceutically acceptable carriers. it can.
  • the pharmaceutical composition of the present invention comprises one or more pharmaceutically acceptable carriers, excipients, binders, vehicles, solubilizers, preservatives, stabilizers, swelling agents, lubricants. , Surfactants, oily liquids, buffers, soothing agents, antioxidants, sweetening agents, flavoring agents, and the like.
  • the pharmaceutical dosage form containing the compound represented by the formula (I) of the present invention as an active ingredient is not particularly limited, and may be a preparation for use in parenteral administration, or for use in oral administration. It may be a formulation.
  • the pharmaceutical dosage form of the present invention may be a unit dosage form or a multiple dosage form. Examples of the preparation for use in parenteral administration include injections such as sterile solutions or suspensions with water or other pharmaceutically acceptable liquids.
  • Additives that can be incorporated into injections include, but are not limited to, isotonic, including, for example, saline, glucose or other adjuvants (eg, D-sorbitol, D-mannitol, or sodium chloride) Vehicle such as liquid, alcohol (eg ethanol or benzyl alcohol), ester (eg benzyl benzoate), solubilizer such as polyalcohol (eg propylene glycol or polyethylene glycol), polysorbate 80 or polyoxyethylene hydrogenated castor oil
  • Nonionic surfactant such as oily liquid such as sesame oil or soybean oil, buffer such as phosphate buffer or sodium acetate buffer, soothing agent such as benzalkonium chloride or procaine hydrochloride, human Of serum albumin or polyethylene glycol Una stabilizer, may be mentioned preservatives, and antioxidants, and the like.
  • the prepared injection is usually filled in an appropriate vial (for example, an ampoule) and stored in an appropriate environment until use.
  • Examples of the preparation for use in oral administration include tablets, capsules, elixirs, microcapsules, tablets, syrups, suspensions, and the like with sugar coating or a soluble coating as necessary.
  • Additives that can be incorporated into tablets or capsules are not limited, but include, for example, binders such as gelatin, corn starch, gum tragacanth and gum arabic, excipients such as crystalline cellulose, corn starch Swelling agents such as gelatin and alginic acid, lubricants such as magnesium stearate, sweeteners such as sucrose, lactose or saccharin, flavoring agents such as peppermint, red mono oil or cherry.
  • binders such as gelatin, corn starch, gum tragacanth and gum arabic
  • excipients such as crystalline cellulose
  • corn starch Swelling agents such as gelatin and alginic acid
  • lubricants such as magnesium stearate
  • sweeteners such as sucrose, lactose or
  • the compound represented by the formula (I) of the present invention can continuously exhibit an adrenomedullin activity substantially equivalent to the parent molecule adrenomedullin in vivo. Therefore, the medicine containing the compound represented by the formula (I) of the present invention as an active ingredient can be formulated as a depot preparation.
  • the medicament of the present invention in the form of a depot preparation can be administered, for example, by subcutaneous or intramuscular implantation or by intramuscular injection.
  • the adrenomedullin activity of the compound represented by the formula (I) of the present invention can be continuously expressed over a long period of time.
  • the medicament containing the compound represented by formula (I) of the present invention as an active ingredient can be used in combination with one or more other drugs useful as a medicament.
  • the medicament of the present invention may be provided in the form of a single medicament comprising the compound represented by formula (I) of the present invention and one or more other drugs, and the formula ( The compound represented by I) and one or more other drugs may be provided in the form of a pharmaceutical combination or kit containing a plurality of formulations formulated separately.
  • the respective formulations can be administered simultaneously or separately (eg sequentially).
  • the compound represented by the formula (I) of the present invention is not only the compound itself, but also a pharmaceutically acceptable salt of the compound, and And pharmaceutically acceptable solvates thereof.
  • the pharmaceutically acceptable salt of the compound represented by the formula (I) of the present invention and the pharmaceutically acceptable solvate thereof include, but are not limited to, the salts and solvents exemplified above. Japanese products are preferred.
  • the compound represented by the formula (I) is in the form of the aforementioned salt or solvate, the compound can be applied to a desired pharmaceutical use.
  • the medicament containing the compound represented by formula (I) of the present invention as an active ingredient can similarly prevent or treat various symptoms, diseases and / or disorders that are prevented or treated by adrenomedullin.
  • Examples of the symptom, disease and / or disorder include, but are not limited to, the following.
  • Cardiovascular disease heart failure, pulmonary hypertension, obstructive arteriosclerosis, Buerger's disease, myocardial infarction, lymphedema, Kawasaki disease, myocarditis, hypertension, organ damage due to hypertension, and arteriosclerosis.
  • Kidney / water electrolyte diseases renal failure and nephritis.
  • Brain / neurological disorders Cerebral infarction and encephalitis.
  • Urogenital disease erectile dysfunction (ED).
  • Gastrointestinal disease inflammatory bowel disease, ulcer disease, intestinal bechet, and liver failure.
  • Orthopedic disease arthritis.
  • Endocrine metabolic disease Diabetes and organ damage caused by diabetes.
  • Other Septic shock, autoimmune disease, multiple organ failure, and pressure ulcers.
  • the cardiovascular disease is preferably myocardial infarction, pulmonary hypertension, heart failure or the like.
  • the gastrointestinal disease is preferably an inflammatory disease such as steroid resistant or steroid dependent inflammatory bowel disease (eg, ulcerative colitis, Crohn's disease or intestinal Behcet's disease).
  • the compound represented by formula (I) of the present invention has a structure in which a natural physiologically active peptide adrenomedullin and a modifying group are linked. For this reason, the compound represented by the formula (I) of the present invention is safe and has low toxicity. Therefore, the medicament containing the compound represented by the formula (I) of the present invention as an active ingredient can be applied to various subjects in need of prevention or treatment of the symptoms, diseases and / or disorders.
  • the subject is a subject or patient of a human or non-human mammal (eg, a warm-blooded animal such as a pig, dog, cow, rat, mouse, guinea pig, rabbit, chicken, sheep, cat, monkey, baboon or chimpanzee). Preferably there is.
  • various symptoms, diseases and / or disorders prevented or treated with adrenomedullin can be prevented or treated.
  • prevention means substantially preventing the occurrence (onset or onset) of symptoms, diseases and / or disorders.
  • treatment means to suppress (e.g., suppress progression), relieve, repair, and / or cure a symptom, disease, and / or disorder that has occurred (onset or onset).
  • the compound represented by the formula (I) of the present invention is used in a subject having the symptoms, diseases and / or disorders described above (for example, cardiovascular disease, peripheral vascular disease or inflammatory disease). It can be used to prevent or treat disorders. Therefore, the medicament of the present invention is preferably a medicament for use in the prevention or treatment of the symptoms, diseases and / or disorders described above, and is suitable for the prevention or prevention of cardiovascular diseases, inflammatory diseases or peripheral vascular diseases. More preferably it is a medicament for use in therapy.
  • the present invention also relates to a preventive or therapeutic agent for cardiovascular disease, inflammatory disease or peripheral vascular disease, containing the compound represented by formula (I) of the present invention as an active ingredient. By using the compound represented by the formula (I) of the present invention for the prevention or treatment of the symptoms, diseases and / or disorders described above, the symptoms, diseases and / or disorders are continuously prevented or treated. be able to.
  • the compound represented by the formula (I) of the present invention is used in a subject having the symptoms, diseases and / or disorders described above (for example, cardiovascular disease, peripheral vascular disease or inflammatory disease). It can be used to prevent or treat disorders. Therefore, one embodiment of the present invention provides an effective amount of a compound represented by formula (I) of the present invention or a compound thereof, in a subject in need of prevention or treatment of the symptoms, diseases and / or disorders described above. It is a method for the prophylaxis or treatment of the disease or symptom, which comprises administering a pharmaceutically acceptable salt or a pharmaceutically acceptable hydrate thereof. Said symptoms, diseases and / or disorders are preferably cardiovascular diseases, peripheral vascular diseases or inflammatory diseases. By administering the compound represented by the formula (I) of the present invention to a subject in need of prevention or treatment of the symptom, disease and / or disorder, the symptom, disease and / or disorder is prevented or treated. be able to.
  • Another embodiment of the present invention is a compound represented by the formula (I) of the present invention or a pharmaceutically acceptable salt thereof for use in the prevention or treatment of the symptoms, diseases and / or disorders described above. Salt, or a pharmaceutically acceptable hydrate thereof.
  • Another embodiment of the present invention provides a compound represented by formula (I) of the present invention or a pharmaceutical product thereof for the manufacture of a medicament for use in the prevention or treatment of the symptoms, diseases and / or disorders described above.
  • the symptoms, diseases and / or disorders are preferably cardiovascular diseases, inflammatory diseases or peripheral vascular diseases.
  • a medicament containing the compound represented by formula (I) of the present invention as an active ingredient is administered to a subject, particularly a human patient
  • the exact dose and the number of administration are determined by the subject's age, sex, prevention or treatment.
  • the physician should ultimately determine the therapeutically effective dose and number of doses in view of many factors such as the symptoms to be observed, the exact state of the disease and / or disorder (eg severity), and the route of administration. It is. Therefore, in the medicament of the present invention, the compound represented by the formula (I) as an active ingredient is administered to a subject in a therapeutically effective amount and frequency.
  • the dose of the compound represented by the formula (I) as an active ingredient is usually in the range of 0.01 to 100 mg / 60 kg / day. Typically, it is in the range of 0.01 to 10 mg / 60 kg body weight per day.
  • the administration route and the administration frequency of the pharmaceutical agent containing the compound represented by the formula (I) of the present invention as an active ingredient are not particularly limited, and may be administered orally once or plural times, parenterally. Single or multiple doses may be administered.
  • the medicament of the present invention is preferably administered by a parenteral route such as intravenous administration, enema administration, subcutaneous administration, intramuscular administration or intraperitoneal administration, and more preferably intravenous administration or subcutaneous administration.
  • the medicament of the present invention is preferably administered once.
  • the medicament of the present invention is particularly preferably used for single administration intravenously or subcutaneously.
  • Adrenomedullin which is the parent molecule of the compound represented by the formula (I) of the present invention, has a strong vasodilatory action. For this reason, when a single dose of a therapeutically effective amount of adrenomedullin is administered, a powerful vasodilatory effect may cause excessive blood pressure reduction, tachycardia associated with increased reflex sympathetic activity, and / or increased renin activity. May cause undesirable side reactions.
  • the compound represented by the formula (I) of the present invention has significantly higher blood half-life compared to natural adrenomedullin while maintaining substantially the same adrenomedullin activity as natural adrenomedullin. Can be extended.
  • a single administration of a medicament containing the compound represented by the formula (I) of the present invention as an active ingredient into a subject's vein suppresses an undesirable side reaction caused by the vasodilating action of adrenomedullin.
  • the subject's symptoms, diseases and / or disorders can be continuously prevented or treated.
  • the present invention also relates to a method for producing the compound represented by formula (I) of the present invention.
  • adrenomedullin or precursor peptide moiety B is derived from modifications thereof, precursor of the modifying group A selected from the group consisting of a palmitoyl group and a polyethylene glycol group and a precursor of the divalent group L n A step of preparing at least one of the above may be included.
  • a precursor of a peptide moiety B derived from adrenomedullin or a modified product thereof “a precursor of a modifying group A selected from the group consisting of a palmitoyl group and a polyethylene glycol group” and “a divalent group L n ⁇ Precursor '' means adrenomedullin or a modified form thereof, palmitic acid or polyethylene glycol, and HL n -H, respectively, or in the linking step described below, the peptide moiety B, the modifying group A and the divalent group.
  • one or both ends of the group L n is to be coupled to each other by a condensation reaction, it refers to the appropriate modified or activated derivatives thereof.
  • the precursor of peptide part B is preferably adrenomedullin or a modification thereof itself, or a protected form thereof.
  • the precursor of the modifying group A is preferably palmitic acid or polyethylene glycol itself, an activated derivative thereof, or a protected form thereof.
  • the modifying group A is a palmitoyl group, it is preferably an acid halide of palmitic acid such as palmitoyl chloride.
  • Precursor divalent group L n is a divalent group L n hydrogen adduct HL n -H itself, an activated derivative thereof, or is preferably those protected form.
  • the divalent group L n is 1-oxo-1,6-hexanediyl (n is 1), it is preferably an active ester such as 6-chlorohexanoic acid N-hydroxysuccinimide ester.
  • the precursor is in a protected form, it preferably has the protecting group described above. In this step, by preparing a precursor having the above characteristics, the linking reaction of each precursor in the linking step described below can be performed with a high yield.
  • the precursor of peptide part B derived from adrenomedullin or a modified form thereof can be formed by means usually used in the art.
  • the precursor of peptide part B is adrenomedullin or a modification thereof itself
  • solid or liquid phase peptide synthesis methods may be used, and human or non-human mammalian tissue capable of producing adrenomedullin
  • a method for purifying a natural peptide from cells may be used.
  • a DNA encoding adrenomedullin in a human or non-human mammal capable of producing adrenomedullin eg, SEQ ID NO: 2, 4, 6, 8, 10 or 12
  • a method of expressing a large amount of recombinant protein may be used. Or you may purchase and use the peptide manufactured previously. Either case is included in the embodiment of this step.
  • two cysteine residues in the amino acid sequence are disulfide bonded by disulfiding the thiol group of the two cysteine residues in the amino acid sequence.
  • the precursor which forms can be obtained.
  • the disulfide bond formed between the two cysteine residues in the amino acid sequence is replaced by an ethylene group, whereby the disulfide bond is converted to ethylene.
  • Precursors substituted by groups can be obtained.
  • the disulfide reaction and the substitution reaction with an ethylene group can be carried out based on conditions usually used in the art.
  • the disulfide reaction and the substitution reaction with an ethylene group may be performed in this step or may be performed in a connecting step described below. Either case is encompassed by the method embodiments of the present invention.
  • Precursor peptide portion B, and at least one precursor of the precursor and divalent groups L n modifying group A is their protected form, in this step, if desired, the precursor of a peptide moiety B, modified A protective step of introducing one or more protecting groups into at least one of the precursor of the group A and the precursor of the divalent group L n , and / or the precursor of the peptide moiety B, the precursor of the modifying group A, and 2
  • a deprotection step of deprotecting at least one protecting group of at least one of the protected forms of the precursor of the valent group L n may be performed.
  • the protection step and the deprotection step can be performed by a protection reaction and a deprotection reaction that are usually used in the art.
  • the protection step and the deprotection step may be performed in this step, or may be performed in a connection step described below. Either case is encompassed by the method embodiments of the present invention.
  • the method of the present invention comprises a precursor of a peptide moiety B derived from adrenomedullin or a modified form thereof, a precursor of a modifying group A selected from the group consisting of a palmitoyl group and a polyethylene glycol group, and a divalent group L n . It is necessary to include a linking step in which a precursor is linked to obtain a compound represented by formula (I).
  • this step is carried out by linking the precursor of the peptide moiety B and the precursor of the modifying group A.
  • n 1
  • the process is carried out by linking a precursor of the peptide portion B, a precursor of the modifying group A, the divalent group L n and a precursor .
  • a precursor of the peptide portion B, a precursor of the modifying group A, means for coupling the precursor of the divalent group L n is not particularly limited.
  • n 1, and the precursor of a peptide moiety B, a precursor of the modifying group A
  • the order of coupling the precursor of the divalent group L n is not particularly limited.
  • a precursor of the modifying group A, a precursor of the divalent group L n first connection then, can be further connected to a precursor of the connecting member and the peptide portion B of the precursor.
  • a precursor of the peptide portion B, and a precursor of the divalent group L n first connection then, can be further connected to a precursor of the connecting member and the modifying group A of the precursor. Either case is encompassed by the method embodiments of the present invention.
  • a precursor of group B derived from adrenomedullin (AM) was synthesized.
  • a peptide (h.AM (1-52)) corresponding to amino acid residues 1 to 52 of human adrenomedullin was divided into 6 segments (Seg-1 to Seg-6). After each segment was synthesized, each segment was condensed to synthesize a precursor peptide of group B. Thereafter, a palmitoyl group (Pal) or a polyethylene glycol group (PEG) was linked to the precursor peptide of group B to synthesize an adrenomedullin derivative.
  • Pal palmitoyl group
  • PEG polyethylene glycol group
  • Boc-Phe-Gln-Gly-OPac Boc-Gln-Gly-OPac (54.8 g) was dissolved in trifluoroacetic acid. The resulting solution was stirred under cooling for 10 minutes and then at room temperature for 50 minutes. From the reaction solution, trifluoroacetic acid was distilled off under reduced pressure, and a dioxane solution of hydrogen chloride (5.5 mol / L) (28 mL) was added. Diethyl ether was added to the resulting mixture. The deposited precipitate was collected by filtration and washed with diethyl ether. The obtained hydrochloride salt was dissolved in N, N-dimethylformamide.
  • Boc-Asn-Phe-Gln-Gly-OPac Boc-Phe-Gln-Gly-OPac (67.9 g) was dissolved in trifluoroacetic acid. The resulting solution was stirred under cooling for 10 minutes and then at room temperature for 50 minutes. From the reaction solution, trifluoroacetic acid was distilled off under reduced pressure, and a dioxane solution of hydrogen chloride (5.5 mol / L) (26 mL) was added. Diethyl ether was added to the resulting mixture. The deposited precipitate was collected by filtration and washed with diethyl ether. The obtained hydrochloride salt was dissolved in N, N-dimethylformamide.
  • Boc-Asn-Asn-Phe-Gln-Gly-OPac Boc-Asn-Phe-Gln-Gly-OPac (81 g) was dissolved in trifluoroacetic acid. The resulting solution was stirred under cooling for 10 minutes and then at room temperature for 50 minutes. Trifluoroacetic acid was distilled off from the reaction solution under reduced pressure, and a dioxane solution (5.5 mol / L) of hydrogen chloride (26 mL) was added. Diethyl ether was added to the resulting mixture. The deposited precipitate was collected by filtration and washed with diethyl ether.
  • the obtained hydrochloride was dissolved in a mixture of N, N-dimethylformamide / 1,3-dimethyl-2-imidazolidinone.
  • Boc-Asn-OH 28.9 g
  • 1-hydroxybenzotriazole (19.2 g) were added to the resulting solution.
  • 1-ethyl-3- (3-dimethylaminopropyl) carbodiimide (26.0 mL) was added dropwise under cooling.
  • the reaction solution was stirred at room temperature overnight. Water was added to the reaction solution.
  • the deposited precipitate was collected by filtration and washed with water, acetonitrile and diethyl ether. By the above operation, 74 g of the desired product was obtained.
  • Boc-Met-Asn-Asn-Phe-Gln-Gly-OPac Boc-Asn-Asn-Phe-Gln-Gly-OPac (50.0 g) was dissolved in trifluoroacetic acid. The resulting solution was stirred under cooling for 10 minutes and then at room temperature for 50 minutes. From the reaction solution, trifluoroacetic acid was distilled off under reduced pressure, and hydrogen chloride in dioxane (5.5 mol / L) (13.7 mL) was added. Diethyl ether was added to the resulting mixture. The deposited precipitate was collected by filtration and washed with diethyl ether.
  • the obtained hydrochloride was dissolved in a mixed solution of N, N-dimethylformamide / 1-methyl-2-pyrrolidone / 1,3-dimethyl-2-imidazolidinone.
  • Boc-Met-OH (16.4 g) and 1-hydroxybenzotriazole (9.4 g) were added.
  • 1-ethyl-3- (3-dimethylaminopropyl) carbodiimide (12.6 mL) was added dropwise under cooling.
  • the reaction solution was stirred at room temperature overnight. Water was added to the reaction solution.
  • the deposited precipitate was collected by filtration and washed with water, acetonitrile and diethyl ether. By the above operation, 54 g of the desired product was obtained.
  • Boc-Gln-Ser (Bzl) -Met-Asn-Asn-Phe-Gln-Gly-OPac Boc-Ser (Bzl) -Met-Asn-Asn-Phe-Gln-Gly-OPac (30.0 g) was dissolved in trifluoroacetic acid. The resulting solution was stirred under cooling for 10 minutes and then at room temperature for 50 minutes. From the reaction solution, trifluoroacetic acid was distilled off under reduced pressure, and hydrogen chloride in dioxane (5.5 mol / L) (5.9 mL) was added. Diethyl ether was added to the resulting mixture.
  • the deposited precipitate was collected by filtration and washed with diethyl ether.
  • the obtained hydrochloride was dissolved in a dimethyl sulfoxide / 1-methyl-2-pyrrolidone / 1,3-dimethyl-2-imidazolidinone mixed solution.
  • Boc-Gln-OH 7. g
  • 1-hydroxybenzotriazole 5.5 g
  • 1-ethyl-3- (3-dimethylaminopropyl) carbodiimide 7.5 mL
  • the reaction solution was stirred at room temperature overnight. Water was added to the reaction solution.
  • the deposited precipitate was collected by filtration and washed with water, acetonitrile and diethyl ether. By the above operation, 24.0 g of the target product was obtained.
  • the deposited precipitate was collected by filtration and washed with diethyl ether.
  • the obtained hydrochloride was dissolved in a dimethyl sulfoxide / 1-methyl-2-pyrrolidone mixed solution.
  • Boc-Arg (Tos) -OH (7.4 g) and 1-hydroxybenzotriazole (2.1 g) were added.
  • 1-ethyl-3- (3-dimethylaminopropyl) carbodiimide 2.9 mL was added dropwise under cooling.
  • the reaction solution was stirred at room temperature overnight. Water was added to the reaction solution.
  • the deposited precipitate was collected by filtration and washed with water, acetonitrile and diethyl ether. By the above operation, 12.5 g of the target product was obtained.
  • Boc-Arg (Tos) -Gln-Ser (Bzl) -Met-Asn-Asn-Phe-Gln-Gly-OPac (6.0 g) was dissolved in dimethyl sulfoxide.
  • acetic acid (18.7 mL) and zinc dust (10.2 g) were added at 30 ° C.
  • Boc-Ser (Bzl) -Phe-Gly-OPac Boc-Phe-Gly-OPac (8.8 g) was dissolved in trifluoroacetic acid. The resulting solution was stirred under cooling for 10 minutes and then at room temperature for 50 minutes. From the reaction solution, trifluoroacetic acid was distilled off under reduced pressure, and hydrogen chloride in dioxane (5.5 mol / L) (4.5 mL) was added. Diethyl ether was added to the resulting mixture. The deposited precipitate was collected by filtration and washed with diethyl ether. The obtained hydrochloride salt was dissolved in N, N-dimethylformamide.
  • Boc-Arg (Tos) -Ser (Bzl) -Phe-Gly-OPac Boc-Ser (Bzl) -Phe-Gly-OPac (11.4 g) was dissolved in trifluoroacetic acid. The resulting solution was stirred under cooling for 10 minutes and then at room temperature for 50 minutes. From the reaction solution, trifluoroacetic acid was distilled off under reduced pressure, and hydrogen chloride in dioxane (5.5 mol / L) (4.8 mL) was added. Diethyl ether was added to the resulting mixture. The deposited precipitate was collected by filtration and washed with diethyl ether. The obtained hydrochloride salt was dissolved in N, N-dimethylformamide.
  • Boc-Arg (Tos) -OH (10 g) and 1-hydroxybenzotriazole (2.8 g) were added to the resulting solution.
  • 1-ethyl-3- (3-dimethylaminopropyl) carbodiimide (4 mL) was added dropwise under cooling.
  • the reaction solution was stirred at room temperature overnight.
  • the reaction solution was diluted with ethyl acetate and washed with 5% aqueous sodium hydrogen carbonate solution, 0.5 N aqueous hydrochloric acid and saturated brine.
  • the organic layer was dried over MgSO 4 and then ethyl acetate was distilled off under reduced pressure. Diethyl ether was added to the residue.
  • the deposited precipitate was collected by filtration and washed with diethyl ether.
  • the obtained crystals were dissolved in ethyl acetate.
  • the solvent was removed under reduced pressure. Diethyl ether was added.
  • the deposited precipitate was collected by filtration and washed with diethyl ether.
  • Boc-Leu-Arg (Tos) -Ser (Bzl) -Phe-Gly-OPac Boc-Arg (Tos) -Ser (Bzl) -Phe-Gly-OPac (15.7 g) was dissolved in trifluoroacetic acid. The resulting solution was stirred under cooling for 10 minutes and then at room temperature for 50 minutes. From the reaction solution, trifluoroacetic acid was distilled off under reduced pressure, and hydrogen chloride in dioxane (5.5 mol / L) (4 mL) was added. Diethyl ether was added to the resulting mixture. The deposited precipitate was collected by filtration and washed with diethyl ether.
  • the obtained hydrochloride salt was dissolved in N, N-dimethylformamide. Boc-Leu-OH.H 2 O (4.6 g) and 1-hydroxybenzotriazole (2.6 g) were added to the resulting solution. To this mixture, 1-ethyl-3- (3-dimethylaminopropyl) carbodiimide (3.6 mL) was added dropwise under cooling. The reaction solution was stirred at room temperature for 4 hours. Water was added to the reaction solution. The deposited precipitate was collected by filtration and washed with water. The obtained crystals were dissolved in a chloroform / methanol mixture. The solvent was removed under reduced pressure. Diethyl ether was added. The deposited precipitate was collected by filtration and washed with diethyl ether. By the above operation, 17.6 g of the target product was obtained.
  • Boc-Leu-Arg (Tos) -Ser (Bzl) -Phe-Gly-OH Boc-Leu-Arg (Tos) -Ser (Bzl) -Phe-Gly-OPac 17.6 g was dissolved in acetic acid.
  • zinc dust 55.2 g was added at 40 ° C. After 2 hours, zinc dust was filtered off from the reaction solution and washed with acetic acid. After acetic acid was distilled off under reduced pressure, the solution was diluted with ethyl acetate. The resulting solution was washed with 0.1 N aqueous hydrochloric acid and saturated brine.
  • Boc-Arg (Tos) -Phe-Gly-OPac Boc-Phe-Gly-OPac (8.8 g) was dissolved in trifluoroacetic acid. The resulting solution was stirred under cooling for 10 minutes and then at room temperature for 50 minutes. From the reaction solution, trifluoroacetic acid was distilled off under reduced pressure, and hydrogen chloride in dioxane (5.5 mol / L) (4.0 mL) was added. Diethyl ether was added to the resulting mixture. The deposited precipitate was collected by filtration and washed with diethyl ether. The obtained hydrochloride salt was dissolved in N, N-dimethylformamide.
  • Boc-Cys (4-MeBzl) -Arg (Tos) -Phe-Gly-OPac Boc-Arg (Tos) -Phe-Gly-OPac (14.5 g) was dissolved in trifluoroacetic acid. The resulting solution was stirred under cooling for 10 minutes and then at room temperature for 50 minutes. From the reaction solution, trifluoroacetic acid was distilled off under reduced pressure, and a dioxane solution (5.5 mol / L) of hydrogen chloride (3.9 mL) was added. Diethyl ether was added to the resulting mixture. The deposited precipitate was collected by filtration and washed with diethyl ether.
  • Boc-Leu-Arg (Tos) -Ser (Bzl) -Phe-Gly-Cys (4-MeBzl) -Arg (Tos) -Phe-Gly-OPac Boc-Cys (4-MeBzl) -Arg (Tos) -Phe-Gly-OPac (9.1 g) was dissolved in trifluoroacetic acid. The resulting solution was stirred under cooling for 10 minutes and then at room temperature for 50 minutes. From the reaction solution, trifluoroacetic acid was distilled off under reduced pressure, and a dioxane solution (5.5 mol / L) of hydrogen chloride (1.9 mL) was added. Diethyl ether was added to the resulting mixture.
  • the deposited precipitate was collected by filtration and washed with diethyl ether.
  • the obtained hydrochloride salt was dissolved in N, N-dimethylformamide.
  • 1-ethyl-3- (3-dimethylaminopropyl) carbodiimide (1.8 mL) was added dropwise under cooling. The reaction solution was stirred at room temperature overnight. Water was added to the reaction solution.
  • the deposited precipitate was collected by filtration and washed with water and diethyl ether.
  • Boc-Leu-Arg (Tos) -Ser (Bzl) -Phe-Gly-Cys (4-MeBzl) -Arg (Tos) -Phe-Gly-OPac (7.1 g) was converted to 1-methyl-2-pyrrolidone / N It was dissolved in N-dimethylformamide mixture.
  • Boc-Lys (ClZ) -Leu-Ala-OPac Boc-Leu-Ala-OPac (29.4 g) was dissolved in trifluoroacetic acid. The resulting solution was stirred under cooling for 10 minutes and then at room temperature for 50 minutes. From the reaction solution, trifluoroacetic acid was distilled off under reduced pressure, and hydrogen chloride in dioxane (5.5 mol / L) (16.5 mL) was added. Diisopropyl ether was added to the resulting mixture. The deposited precipitate was collected by filtration and washed with diisopropyl ether. The obtained hydrochloride salt was dissolved in N, N-dimethylformamide.
  • Boc-Lys (ClZ) -OH 30.5 g
  • 1-hydroxybenzotriazole 10.2 g
  • 1-ethyl-3- (3-dimethylaminopropyl) carbodiimide 13.8 mL
  • the reaction solution was stirred at room temperature for 3 hours.
  • the solution was diluted with ethyl acetate. This solution was washed with 0.5 N aqueous hydrochloric acid and saturated brine. Ethyl acetate was distilled off under reduced pressure, and diethyl ether was added to the residue. The deposited precipitate was collected by filtration and washed with diethyl ether.
  • Boc-Gln-Lys (ClZ) -Leu-Ala-OPac Boc-Lys (ClZ) -Leu-Ala-OPac (47.3 g) was dissolved in trifluoroacetic acid. The resulting solution was stirred under cooling for 10 minutes and then at room temperature for 50 minutes. From the reaction solution, trifluoroacetic acid was distilled off under reduced pressure, and hydrogen chloride in dioxane (5.5 mol / L) (15.6 mL) was added. Diethyl ether was added to the resulting mixture. The deposited precipitate was collected by filtration and washed with diethyl ether. The obtained hydrochloride salt was dissolved in N, N-dimethylformamide.
  • Boc-Gln-OH (17.6 g) and 1-hydroxybenzotriazole (9.8 g) were added to the resulting solution.
  • 1-ethyl-3- (3-dimethylaminopropyl) carbodiimide (13.3 mL) was added dropwise under cooling.
  • the reaction solution was stirred at room temperature for 4 hours. Water was added to the reaction solution.
  • the deposited precipitate was collected by filtration and washed with water, methanol and diethyl ether. By the above operation, 54.5 g of the target product was obtained.
  • Boc-Val-Gln-Lys (ClZ) -Leu-Ala-OPac was dissolved in trifluoroacetic acid. The resulting solution was stirred under cooling for 10 minutes and then at room temperature for 50 minutes. From the reaction solution, trifluoroacetic acid was distilled off under reduced pressure, and hydrogen chloride in dioxane (5.5 mol / L) (15 mL) was added. Diethyl ether was added to the resulting mixture. The deposited precipitate was collected by filtration and washed with diethyl ether.
  • Boc-Cys (4-MeBzl) -Thr (Bzl) -Val-Gln-Lys (ClZ) -Leu-Ala-OPac Boc-Thr (Bzl) -Val-Gln-Lys (ClZ) -Leu-Ala-OPac (34.1 g) was dissolved in trifluoroacetic acid. The resulting solution was stirred under cooling for 10 minutes and then at room temperature for 50 minutes. From the reaction solution, trifluoroacetic acid was distilled off under reduced pressure, and hydrogen chloride in dioxane (5.5 mol / L) (7.1 mL) was added. Diethyl ether was added to the resulting mixture.
  • Boc-Thr (Bzl) -Cys (4-MeBzl) -Thr (Bzl) -Val-Gln-Lys (ClZ) -Leu-Ala-OPac Boc-Cys (4-MeBzl) -Thr (Bzl) -Val-Gln-Lys (ClZ) -Leu-Ala-OPac (37.6 g) was dissolved in trifluoroacetic acid. The resulting solution was stirred under cooling for 10 minutes and then at room temperature for 50 minutes. From the reaction solution, trifluoroacetic acid was distilled off under reduced pressure, and hydrogen chloride in dioxane (5.5 mol / L) (6.5 mL) was added.
  • the deposited precipitate was collected by filtration and washed with water, methanol, diethyl ether, acetonitrile and diethyl ether. The residue was dissolved in a chloroform / 2,2,2-trifluoroethanol mixed solution. The solvent was removed under reduced pressure. Diethyl ether was added. The deposited precipitate was collected by filtration and washed with diethyl ether. By the above operation, 42.0 g of the target product was obtained.
  • an aqueous ammonium formate solution (10 mmol / L) (10 mL), acetic acid (6 mL) and zinc dust (32 g) were added at 30 ° C. After 30 minutes, zinc dust was removed from the reaction solution by filtration, and washed with a mixed solution of methylene chloride / 2,2,2-trifluoroethanol. The solvent was distilled off under reduced pressure, and aqueous hydrochloric acid was added to the residue. The deposited precipitate was collected by filtration and washed with water and diethyl ether. The obtained crystals were dissolved in N, N-dimethylformamide. The solvent was removed under reduced pressure. Diethyl ether was added. The deposited precipitate was collected by filtration and washed with diethyl ether. By the above operation, 14.1 g of the desired product was obtained.
  • the deposited precipitate was collected by filtration and washed with diethyl ether.
  • the obtained crystals were added to an ethyl acetate / methanol mixture.
  • the solvent was removed under reduced pressure.
  • Diethyl ether was added.
  • the deposited precipitate was collected by filtration and washed with diethyl ether.
  • Boc-Ile-Tyr (BrZ) -Gln-OPac Boc-Tyr (BrZ) -Gln-OPac (29 g) was dissolved in trifluoroacetic acid. The resulting solution was stirred under cooling for 10 minutes and then at room temperature for 50 minutes. From the reaction solution, trifluoroacetic acid was distilled off under reduced pressure, and a dioxane solution (5.5 mol / L) of hydrogen chloride (9 mL) was added. Diethyl ether was added to the resulting mixture. The deposited precipitate was collected by filtration and washed with diethyl ether. The resulting hydrochloride salt was added to N, N-dimethylformamide.
  • Boc-Gln-Ile-Tyr (BrZ) -Gln-OPac Boc-Ile-Tyr (BrZ) -Gln-OPac (25.5 g) was dissolved in trifluoroacetic acid. The resulting solution was stirred under cooling for 10 minutes and then at room temperature for 50 minutes. From the reaction solution, trifluoroacetic acid was distilled off under reduced pressure, and a dioxane solution (5.5 mol / L) of hydrogen chloride (7 mL) was added. Diethyl ether was added to the resulting mixture. The deposited precipitate was collected by filtration and washed with diethyl ether. The resulting hydrochloride salt was added to N, N-dimethylformamide.
  • Boc-Gln-OH (7.7 g) and 1-hydroxybenzotriazole (4.5 g) were added to the resulting solution.
  • 1-ethyl-3- (3-dimethylaminopropyl) carbodiimide (6 mL) was added dropwise under cooling.
  • the reaction solution was stirred at room temperature overnight.
  • Acetonitrile was added to the reaction solution.
  • the deposited precipitate was collected by filtration and washed with acetonitrile and diethyl ether. By the above operation, 27.3 g of the target product was obtained.
  • Boc-His-Gln-Ile-Tyr (BrZ) -Gln-OPac Boc-Gln-Ile-Tyr (BrZ) -Gln-OPac (19.6 g) was dissolved in trifluoroacetic acid. The resulting solution was stirred under cooling for 10 minutes and then at room temperature for 50 minutes. From the reaction solution, trifluoroacetic acid was distilled off under reduced pressure, and hydrogen chloride in dioxane (5.5 mol / L) (5 mL) was added. Diethyl ether was added to the resulting mixture. The deposited precipitate was collected by filtration and washed with diethyl ether.
  • Boc-His-Gln-Ile-Tyr (BrZ) -Gln-OH (Segment 4) Boc-His-Gln-Ile-Tyr (BrZ) -Gly-OPac (15.0 g) was dissolved in a mixture of methylene chloride / 2,2,2-trifluoroethanol / acetic acid. To the resulting solution, zinc dust (43.9 g) was added at 40 ° C. After 30 minutes, zinc dust was removed from the reaction solution by filtration, and washed with a mixed solution of methylene chloride / 2,2,2-trifluoroethanol. The solvent was distilled off under reduced pressure, and water was added to the residue.
  • the deposited precipitate was collected by filtration and washed with water, aqueous hydrochloric acid, water, diethyl ether, acetonitrile and diethyl ether. The obtained crystals were dissolved in N, N-dimethylformamide. The solvent was removed under reduced pressure. Diethyl ether was added. The deposited precipitate was collected by filtration and washed with diethyl ether. By the above operation, 9.5 g of the target product was obtained.
  • Boc-Val-Ala-Pro-OPac Boc-Ala-Pro-OPac (25.8 g) was dissolved in trifluoroacetic acid. The resulting solution was stirred under cooling for 10 minutes and then at room temperature for 50 minutes. From the reaction solution, trifluoroacetic acid was distilled off under reduced pressure, and a dioxane solution (5.5 mol / L) of hydrogen chloride (14.7 mL) was added. Diethyl ether was added to the resulting mixture. The deposited precipitate was collected by filtration and washed with diethyl ether. The resulting hydrochloride salt was added to N, N-dimethylformamide.
  • the deposited precipitate was collected by filtration and washed with n-hexane. The obtained crystals were dissolved in ethyl acetate. The solvent was removed under reduced pressure. Diethyl ether was added. The deposited precipitate was collected by filtration and washed with diethyl ether. By the above operation, 24.4 g of the desired product was obtained.
  • Boc-Asn-Val-Ala-Pro-OPac Boc-Val-Ala-Pro-OPac (24.4 g) was dissolved in trifluoroacetic acid. The resulting solution was stirred under cooling for 10 minutes and then at room temperature for 50 minutes. From the reaction solution, trifluoroacetic acid was distilled off under reduced pressure, and hydrogen chloride in dioxane (5.5 mol / L) (11.2 mL) was added. Diethyl ether was added to the resulting mixture. The deposited precipitate was collected by filtration and washed with diethyl ether. The resulting hydrochloride salt was added to N, N-dimethylformamide.
  • Boc-Asn-OH (11.8 g) and 1-hydroxybenzotriazole (7.2 g) were added.
  • 1-ethyl-3- (3-dimethylaminopropyl) carbodiimide (9.8 mL) was added dropwise under cooling.
  • the reaction solution was stirred at room temperature overnight.
  • the reaction solution was diluted with ethyl acetate.
  • the resulting solution was washed with 5% aqueous sodium hydrogen carbonate solution, 0.5 N aqueous hydrochloric acid and saturated brine.
  • the organic layer was dried over MgSO 4 and then ethyl acetate was distilled off under reduced pressure. Diethyl ether was added to the residue.
  • the deposited precipitate was collected by filtration and washed with diethyl ether.
  • the obtained crystals were dissolved in chloroform.
  • the solvent was removed under reduced pressure. Diethyl ether was added.
  • the deposited precipitate was collected by filtration and washed with diethyl ether.
  • Boc-Lys (ClZ) -Asp (OcHex) -Asn-Val-Ala-Pro-OPac Boc-Asp (OcHex) -Asn-Val-Ala-Pro-OPac (33.8 g) was dissolved in trifluoroacetic acid. The resulting solution was stirred under cooling for 10 minutes and then at room temperature for 50 minutes. From the reaction solution, trifluoroacetic acid was distilled off under reduced pressure, and hydrogen chloride in dioxane (5.5 mol / L) (9.6 mL) was added. Diethyl ether was added to the resulting mixture. The deposited precipitate was collected by filtration and washed with diethyl ether.
  • the resulting hydrochloride salt was added to N, N-dimethylformamide.
  • Boc-Lys (ClZ) -OH (18.0 g) and 1-hydroxybenzotriazole (6.2 g) were added.
  • 1-ethyl-3- (3-dimethylaminopropyl) carbodiimide (8.4 mL) was added dropwise under cooling.
  • the reaction solution was stirred at room temperature overnight.
  • the reaction solution was diluted with ethyl acetate.
  • the resulting solution was washed with 5% aqueous sodium hydrogen carbonate solution, 0.5 N aqueous hydrochloric acid and saturated brine.
  • Boc-Asp (OcHex) -Lys (ClZ) -Asp (OcHex) -Asn-Val-Ala-Pro-OPac Boc-Lys (ClZ) -Asp (OcHex) -Asn-Val-Ala-Pro-OPac (45.8 g) was dissolved in trifluoroacetic acid. The resulting solution was stirred under cooling for 10 minutes and then at room temperature for 50 minutes. From the reaction solution, trifluoroacetic acid was distilled off under reduced pressure, and a dioxane solution (5.5 mol / L) of hydrogen chloride (9.5 mL) was added. Diethyl ether was added to the resulting mixture.
  • the deposited precipitate was collected by filtration and washed with diethyl ether.
  • the obtained hydrochloride was dissolved in a 1-methyl-2-pyrrolidone / N, N-dimethylformamide mixed solution.
  • Boc-Asp (OcHex) -OH (12.2 g) and 1-hydroxybenzotriazole (5.5 g) were added.
  • 1-ethyl-3- (3-dimethylaminopropyl) carbodiimide (7.4 mL) was added dropwise under cooling. The reaction solution was stirred at room temperature overnight. Water was added to the reaction solution.
  • the deposited precipitate was collected by filtration and washed with water.
  • Boc-Lys (ClZ) -Asp (OcHex) -Lys (ClZ) -Asp (OcHex) -Asn-Val-Ala-Pro-OPac Boc-Asp (OcHex) -Lys (ClZ) -Asp (OcHex) -Asn-Val-Ala-Pro-OPac (23.6 g) was dissolved in trifluoroacetic acid. The resulting solution was stirred under cooling for 10 minutes and then at room temperature for 50 minutes. From the reaction solution, trifluoroacetic acid was distilled off under reduced pressure, and hydrogen chloride in dioxane (5.5 mol / L) (4.2 mL) was added.
  • the deposited precipitate was collected by filtration and washed with water and diethyl ether.
  • the residue was dissolved in a chloroform / methanol mixture, and the solvent was distilled off under reduced pressure. Diethyl ether was added to the residue.
  • the deposited precipitate was collected by filtration and washed with diethyl ether. By the above operation, 24.2 g of the target product was obtained.
  • Boc-Asp (OcHex) -Lys (ClZ) -Asp (OcHex) -Lys (ClZ) -Asp (OcHex) -Asn-Val-Ala-Pro-OPac Boc-Lys (ClZ) -Asp (OcHex) -Lys (ClZ) -Asp (OcHex) -Asn-Val-Ala-Pro-OPac (24.0 g) was dissolved in trifluoroacetic acid. The resulting solution was stirred under cooling for 10 minutes and then at room temperature for 50 minutes.
  • Boc-Thr (Bzl) -Asp (OcHex) -Lys (ClZ) -Asp (OcHex) -Lys (ClZ) -Asp (OcHex) -Asn-Val-Ala-Pro-OPac Boc-Asp (OcHex) -Lys (ClZ) -Asp (OcHex) -Lys (ClZ) -Asp (OcHex) -Asn-Val-Ala-Pro-OPac (27.1 g) was dissolved in trifluoroacetic acid. The resulting solution was stirred under cooling for 10 minutes and then at room temperature for 50 minutes.
  • Boc-Gln-Gly-Tyr (Br-Z) -NH 2 Boc-Gly-Tyr (Br-Z) -NH 2 (55 g) was dissolved in trifluoroacetic acid. The resulting solution was stirred under cooling for 10 minutes and then at room temperature for 50 minutes. From the reaction solution, trifluoroacetic acid was distilled off under reduced pressure, and a dioxane solution (5.5 mol / L) of hydrogen chloride (21.8 mL) was added. Diethyl ether was added to the resulting mixture. The deposited precipitate was collected by filtration and washed with diethyl ether. The obtained hydrochloride salt was dissolved in N, N-dimethylformamide.
  • Boc-Pro-Gln-Gly-Tyr (Br-Z) -NH 2 Boc-Gln-Gly-Tyr (Br-Z) -NH 2 (59 g) was dissolved in trifluoroacetic acid. The resulting solution was stirred under cooling for 10 minutes and then at room temperature for 50 minutes. From the reaction solution, trifluoroacetic acid was distilled off under reduced pressure, and hydrogen chloride in dioxane (5.5 mol / L) (19.0 mL) was added. Diethyl ether was added to the resulting mixture. The deposited precipitate was collected by filtration and washed with diethyl ether. The obtained hydrochloride salt was dissolved in N, N-dimethylformamide.
  • Boc-Ser (Bzl) -Pro-Gln-Gly-Tyr (Br-Z) -NH 2 Boc-Pro-Gln-Gly-Tyr (Br-Z) -NH 2 (60.6 g) was dissolved in trifluoroacetic acid. The resulting solution was stirred under cooling for 10 minutes and then at room temperature for 50 minutes. Trifluoroacetic acid was distilled off from the reaction solution under reduced pressure, and a dioxane solution (5.5 mol / L) of hydrogen chloride (15.4 mL) was added. Diethyl ether was added to the resulting mixture. The deposited precipitate was collected by filtration and washed with diethyl ether.
  • Boc-Ser (Bzl) -Pro-Gln-Gly-Tyr (Br-Z) -NH 2 (16.7 g) was dissolved in trifluoroacetic acid. The resulting solution was stirred under cooling for 10 minutes and then at room temperature for 50 minutes. From the reaction solution, trifluoroacetic acid was distilled off under reduced pressure, and hydrogen chloride in dioxane (5.5 mol / L) (4.2 mL) was added. Diethyl ether was added to the resulting mixture. The deposited precipitate was collected by filtration and washed with diethyl ether.
  • the obtained hydrochloride salt was dissolved in N, N-dimethylformamide. Boc-Ile-OH ⁇ 1/2 H 2 O (4.8 g) and 1-hydroxybenzotriazole (2.9 g) were added to the resulting solution. To this mixture, 1-ethyl-3- (3-dimethylaminopropyl) carbodiimide (3.9 mL) was added dropwise under cooling. The reaction solution was stirred at room temperature overnight. To the reaction solution, an aqueous sodium hydrogen carbonate solution was added. The deposited precipitate was collected by filtration and washed with water and diethyl ether. By the above operation, 17 g of the desired product was obtained.
  • the reaction solution was stirred at room temperature overnight.
  • an aqueous sodium hydrogen carbonate solution was added to the reaction solution.
  • the deposited precipitate was collected by filtration and washed with water and methanol. By the above operation, 23.1 g of the target product was obtained.
  • Boc-Phe-Thr (Bzl) -Asp (OcHex) -Lys (ClZ) -Asp (OcHex) -Lys (ClZ) -Asp (OcHex) -Asn-Val-Ala-Pro-OH 2.0 g
  • 1-hydroxybenzotriazole 0.15 g
  • 1-ethyl-3- (3-dimethylaminopropyl) carbodiimide (0.20 mL) was added dropwise under cooling. The reaction solution was stirred at room temperature overnight.
  • an aqueous sodium hydrogen carbonate solution was added.
  • the deposited precipitate was collected by filtration and washed with water and diethyl ether. The residue was dissolved in N, N-dimethylformamide. N, N-dimethylformamide was distilled off under reduced pressure from the resulting solution, and ethyl acetate was added. The deposited precipitate was collected by filtration and washed with ethyl acetate. By the above operation, 3.3 g of the target product was obtained.
  • Boc-His-Gln-Ile-Tyr (BrZ) -Gln-OH (0.9 g) and 3,4-dihydro-3-hydroxy-4-oxo-1,2,3-benzotriazine ( 0.13 g) was added.
  • 1-ethyl-3- (3-dimethylaminopropyl) carbodiimide (0.18 mL) was added dropwise under cooling.
  • the reaction solution was stirred at room temperature overnight.
  • an aqueous sodium hydrogen carbonate solution was added.
  • the deposited precipitate was collected by filtration and washed with water and diethyl ether. The residue was dissolved in N, N-dimethylformamide.
  • N, N-dimethylformamide was distilled off under reduced pressure, and acetonitrile was added.
  • the deposited precipitate was collected by filtration and washed with acetonitrile. By the above operation, 3.0 g of the target product was obtained.
  • Boc-Thr (Bzl) -Cys (4-MeBzl) -Thr (Bzl) -Val-Gln-Lys (ClZ) -Leu-Ala-OH (0.78 g) and 3,4-dihydro- 3-Hydroxy-4-oxo-1,2,3-benzotriazine (0.077 g) was added.
  • 1-ethyl-3- (3-dimethylaminopropyl) carbodiimide (0.10 mL) was added dropwise under cooling. The reaction solution was stirred at room temperature overnight.
  • an aqueous sodium hydrogen carbonate solution was added.
  • the deposited precipitate was collected by filtration and washed with water and diethyl ether. The residue was dissolved in a chloroform / 2,2,2-trifluoroethanol mixture. The solvent was distilled off from the resulting solution under reduced pressure, and ethyl acetate was added. The deposited precipitate was collected by filtration and washed with ethyl acetate. By the above operation, 2.1 g of the desired product was obtained.
  • Boc-Thr (Bzl) -Cys (4-MeBzl) -Thr (Bzl) -Val-Gln-Lys (ClZ) -Leu-Ala-OH (0.56 g) and 1-hydroxybenzotriazole ( 0.091 g) was added.
  • 1-ethyl-3- (3-dimethylaminopropyl) carbodiimide (0.12 mL) was added dropwise under cooling.
  • the reaction solution was stirred at room temperature overnight.
  • an aqueous sodium hydrogen carbonate solution was added. The deposited precipitate was collected by filtration and washed with water and diethyl ether.
  • the resulting solution was mixed with Boc-Tyr (BrZ) -Arg (Tos) -Gln-Ser (Bzl) -Met-Asn-Asn-Phe-Gln-Gly-OH (0.40 g) and 1-hydroxybenzotriazole (0.081). g) was added. To this mixture, 1-ethyl-3- (3-dimethylaminopropyl) carbodiimide (0.11 mL) was added dropwise under cooling. The reaction solution was stirred at room temperature overnight. To the reaction solution, an aqueous sodium hydrogen carbonate solution was added. The deposited precipitate was collected by filtration and washed with water and diethyl ether.
  • the reaction solution was stirred at room temperature overnight. Water was added to the reaction solution. The deposited precipitate was collected by filtration and washed with water and acetonitrile. The precipitate was dissolved in a chloroform / 2,2,2-trifluoroethanol mixed solution. The solvent was removed under reduced pressure and diethyl ether was added. The deposited precipitate was collected by filtration and washed with diethyl ether. By the above operation, 0.76 g of the target product was obtained.
  • PEG5000-NHS is a compound formed from PEG having an average molecular weight of 5000 and 6-chlorohexanoic acid N-hydroxysuccinimide ester, wherein PEG having an average molecular weight of 5000 and N-hydroxysuccinimide is 1-oxo. It is a compound having a structure linked through -1,6-hexanediyl.
  • the reaction solution was stirred overnight.
  • the desired product was purified from the reaction solution by reverse phase HPLC. The desired product was obtained as a 35 mg white powder after lyophilization.
  • the resulting mixture was reacted for 40 minutes under ice cooling.
  • the solvent was distilled off from the reaction solution under reduced pressure.
  • the residue was dissolved in milliQ water.
  • the target product was purified by reverse phase HPLC.
  • the desired product was obtained as a white powder of 30 mg after lyophilization.
  • ⁇ II Usage example> [II-1: Increase in intracellular cAMP concentration by adrenomedullin derivatives]
  • Administration of adrenomedullin (AM) increases the concentration of intracellular cAMP. For this reason, it is considered that the action of AM is expressed through an increase in intracellular cAMP concentration. Therefore, Pal-h.AM (1-52), PEG5000-h.AM (1-52) or h.AM (1-52) was added to the cultured cell line (HEK293 cell line) in which AM receptor was expressed. In addition, the amount of intracellular cAMP produced was measured.
  • FIG. 1 shows a dose response curve of the concentration of Pal-h.AM (1-52), PEG5000-h.AM (1-52) or h.AM (1-52) and the increase in cAMP concentration.
  • the vertical axis indicates the relative value (%) of the increase in cAMP concentration in each test group with respect to the maximum response value of the increase in cAMP concentration by h.AM (1-52).
  • intracellular cAMP concentration in AM receptor-expressing HEK293 cells increased by administration of Pal-h.AM (1-52) or PEG5000-h.AM (1-52).
  • Pal-h.AM (1-52) and PEG5000-h.AM (1-52) are substantially equivalent to the maximum response value and pEC50 value (h.AM ( 1-52): 8.59 ⁇ 0.90; Pal-h.AM (1-52): 8.49 ⁇ 0.12; PEG5000-h.AM (1-52): 8.19 ⁇ 0.10).
  • Pal-h.AM (1-52) and PEG5000-h.AM (1-52) exhibit approximately the same cAMP concentration increasing activity as h.AM (1-52) in cultured cells. Turned out to be.
  • the left carotid artery was isolated from the treated rat, and a catheter tube equivalent to 23G was inserted.
  • Pal-h.AM (1-52), PEG5000-h.AM (1-52) or h.AM (1-52) dissolved in physiological saline was administered from the right jugular vein catheter tube.
  • 300 ⁇ l of blood was collected from the catheter inserted into the carotid artery over time from the start of administration.
  • EDTA-2Na (300 ⁇ g) and aprotinin (21 ⁇ g) were immediately added to the obtained blood sample, and further centrifuged at 3000 rpm for 10 minutes to obtain plasma.
  • the plasma AM concentration of each specimen was measured by chemiluminescent enzyme immunoassay.
  • Figure 2 shows the relationship between the elapsed time from the start of administration of h.AM (1-52), Pal-h.AM (1-52) or PEG5000-h.AM (1-52) and plasma AM concentration. Shown in 4 respectively.
  • the first phase half-life of Pal-h.AM (1-52) and PEG5000-h.AM (1-52) is 3.51 or 6.18 min, respectively, The period was 123 or 133 minutes.
  • the first phase half-life of h.AM (1-52) was 0.61 minutes and the second phase half-life was 18.9 minutes. That is, Pal-h.AM (1-52) and PEG5000-h.AM (1-52) had a significantly increased blood half-life compared to h.AM (1-52). From the above results, it was found that by chemically modifying an adrenomedullin molecule with palmitic acid or polyethylene glycol, the blood half-life is significantly prolonged as compared with the parent molecule adrenomedullin.
  • a single dose of Pal-h.AM (1-52), PEG5000-h.AM (1-52), or h.AM (1-52) was administered intravenously to anesthetized rats to determine the blood pressure of the rats. The progress was observed.
  • Male Wistar rats aged 11-14 weeks were anesthetized by inhalation of isoflurane. After tracheotomy, inhalation anesthesia management was performed at an isoflurane concentration of 1.5-2.5% and a flow rate of 0.6-0.8 L / min.
  • the right jugular vein was isolated from the rat, and a catheter tube equivalent to 26G was inserted.
  • the left carotid artery was isolated from the treated rat, and a catheter tube equivalent to 23G was inserted.
  • Pal-h.AM (1-52), PEG5000-h.AM (1-52) or h.AM (1-52) dissolved in physiological saline was administered from the right jugular vein catheter tube.
  • a saline heparin solution (saline solution: 100 ml; heparin: 1000 units) was replenished from the right jugular vein catheter tube at 2.4 ml / hour. From the same catheter tube, 10 nmol / kg of Pal-h.AM (1-52), PEG5000-h.AM (1-52) or h.AM (1-52) was dissolved in physiological saline. Administered.
  • FIG. 5 shows the relationship between the elapsed time from the start of administration of h.AM (1-52), Pal-h.AM (1-52) or PEG5000-h.AM (1-52) and the average blood pressure.
  • the vertical axis represents the difference obtained by subtracting the average blood pressure before each drug administration from the average blood pressure at the time of each drug administration.
  • II-4-1 Preparation of model A C57BL / 6J Jcl mouse (6 weeks old) was incised through the dorsal skin under isoflurane (2%) inhalation anesthesia.
  • An osmotic pump (1002 type Alzet (registered trademark) mini osmotic pump) filled with the administration solution was implanted subcutaneously, and the skin was sutured with a suture thread. The subcutaneous part of the back of the osmotic pump implantation site was shaved and disinfected.
  • DSS sodium dextran sulfate
  • adrenomedullin derivative PEG5000-h.AM (1-52)
  • the dose was 0.02, 0.1 or 0.5 nmol / kg / hr, and the dose rate was 0.2 ⁇ L / hr.
  • the DSS intake start date was defined as the administration start date (day 0) of the adrenomedullin derivative. Under the above conditions, administration was carried out for 14 days. The control group was similarly administered with physiological saline. On day 14 after the start of administration, heparinized blood was collected from the abdominal vena cava under inhalation anesthesia with isoflurane (2%). An incision was made in the abdominal aorta and abdominal vena cava to exsanguinate the blood. Next, the intestinal tract from the anal region to the ileocecal region was collected.
  • the dissected excised intestinal tract was opened vertically to remove adipose tissue, followed by washing with physiological saline. Next, the length of the intestinal tract was measured.
  • the total score of the 0.1 nmol / kg / hr PEG5000-h.AM (1-52) administration group on days 3, 5, 7, 10 and 14 after the start of administration was 0.0 [0.7 ⁇ 0.3] and 1.5 [1.9, respectively. ⁇ 0.5], 5.0 [4.1 ⁇ 0.4], 2.0 [2.0 ⁇ 0.5] and 0.0 [0.0 ⁇ 0.0].
  • the total scores of the 0.5 nmol / kg / hr PEG5000-h.AM (1-52) administration group on days 3, 5, 7, 10 and 14 after the start of administration were 1.0 [1.3 ⁇ 0.3] and 1.5 [1.1], respectively. ⁇ 0.3], 3.0 [3.0 ⁇ 0.3], 2.0 [2.1 ⁇ 0.4] and 0.0 [0.0 ⁇ 0.0].
  • FIG. 7 shows the relationship between the elapsed time from the start of administration of PEG5000-h.AM (1-52) and the total score of the control group and each administration group.
  • Significant decreases were observed in the total score values on the 5th, 7th and 10th days after the start of administration in the administration group compared to the total score value in the control group (Steel's multiple comparison test, p. ⁇ 0.05 or P ⁇ 0.01).
  • Intestinal length The length of the intestinal tract measured in the above procedure is expressed as mean ⁇ standard error.
  • the intestinal lengths of the control group and 0.02, 0.1 and 0.5 nmol / kg / hr PEG5000-h.AM (1-52) administration group were 65.0 ⁇ 1.3, 69.4 ⁇ 1.5, 71.4 ⁇ 0.9 and 72.4 ⁇ 0.9 mm, respectively.
  • FIG. 8 shows the lengths of the intestinal tract of the control group and 0.02, 0.1, and 0.5 nmol / kg / hr PEG5000-h.AM (1-52) administration group. As shown in FIG.

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Abstract

　天然型アドレノメデュリンと比較して長期間持続的に作用し得る新規アドレノメデュリン誘導体を提供する。本発明は、式（I）：　A-Ln-B　（I） ［式中、　Aは、パルミトイル基及びポリエチレングリコール基からなる群より選択される修飾基であり、　Lは、2価の連結基であり、　nは、0又は1の整数であり、　Bは、アドレノメデュリン又はアドレノメデュリン活性を有するその修飾体から誘導されるペプチド部分であり、　但し、ペプチド部分Bは、そのN末端アミノ基を介して修飾基A又は連結基Lと結合されている。］ で表される化合物若しくはその塩、又はそれらの水和物に関する。

Description

長時間作用型アドレノメデュリン誘導体
　本発明は、長時間作用型アドレノメデュリン誘導体に関する。
　アドレノメデュリン（adrenomedullin、以下、「AM」とも記載する）は、1993年に褐色細胞組織より単離及び同定された生理活性ペプチドである（非特許文献1）。発見当初、AMは、強力な血管拡張性の降圧作用を発揮することが判明した。例えば、特許文献1は、ヒトAMのアミノ酸配列を含む血圧降下作用を有するペプチドを記載する。
　その後の研究により、AMは、心血管保護作用、抗炎症作用、血管新生作用及び組織修復促進作用等の、多彩な薬理作用を発揮することが明らかになった。また、AMの薬理作用を、疾患治療に応用することを目指して、種々の疾患患者に対するAMの投与研究が行われてきた。なかでも、炎症性腸疾患、肺高血圧症、末梢血管疾患又は急性心筋梗塞の治療薬としてのAMの有用性が期待されている。
　例えば、特許文献2は、アドレノメデュリン若しくはその誘導体であって、非細菌性の炎症を抑制する活性を有するもの、又はそれらの塩であって非細菌性の炎症を抑制する活性を有するものを有効成分として含有する非細菌性の炎症性腸疾患の予防又は治療剤を記載する。
　特許文献3は、ステロイド製剤、免疫抑制剤又は生物学的製剤の使用が困難又は効果不十分な炎症性腸疾患の予防又は治療を必要とする患者における前記炎症性腸疾患の予防又は治療方法であって、有効量のアドレノメデュリン、その修飾体であって炎症を抑制する活性を有するもの、又は前記アドレノメデュリン若しくは前記修飾体の塩であって炎症を抑制する活性を有するものを前記患者に投与することを含む前記予防又は治療方法を記載する。
　また、AMの構造活性相関研究から、AMの生物活性に寄与し得る必須配列の特定が進められた（非特許文献2～9）。
特許第2774769号公報 特許第4830093号公報 国際公開第2012/096411号
Kitamura K, Kangawa K, Kawamoto M, Ichiki Y, Nakamura S, Matsuo H, Eto T. Adrenomedullin: a novel hypotensive peptide isolated from human pheochromocytoma. Biochem Biophys Res Commun, 1993年4月30日, 第192(2)巻, pp. 553-601 Belloni, A.S. ら, Structure-activity relationships of adrenomedullin in the adrenal gland. Endocr Res, 1998年, 第24(3-4)巻, p. 729-30. Champion, H.C. ら, Catecholamine release mediates pressor effects of adrenomedullin-(15-22) in the rat. Hypertension, 1996年, 第28(6)巻, p. 1041-6. Champion, H.C., G.G. Nussdorfer, 及びP.J. Kadowitz, Structure-activity relationships of adrenomedullin in the circulation and adrenal gland. Regul Pept, 1999年, 第85(1)巻, p. 1-8. Eguchi, S. ら, Structure-activity relationship of adrenomedullin, a novel vasodilatory peptide, in cultured rat vascular smooth muscle cells. Endocrinology, 1994年, 第135(6)巻, p. 2454-8. Garcia, M.A. ら, Synthesis, biological evaluation, and three-dimensional quantitative structure-activity relationship study of small-molecule positive modulators of adrenomedullin. J Med Chem, 2005年, 第48(12)巻, p. 4068-75. Mitsuda, Y. ら, Large-scale production of functional human adrenomedullin: expression, cleavage, amidation, and purification. Protein Expr Purif, 2002年, 第25(3)巻, p. 448-55. Roldos, V. ら, Small-molecule negative modulators of adrenomedullin: design, synthesis, and 3D-QSAR study. ChemMedChem, 2008年, 第3(9) 巻, p. 1345-55. Watanabe, T.X. ら, Vasopressor activities of N-terminal fragments of adrenomedullin in anesthetized rat. Biochem Biophys Res Commun, 1996年, 第219(1)巻, p. 59-63.
　アドレノメデュリンは、様々な薬理作用を有する化合物である。このため、アドレノメデュリンを有効成分として含有する医薬は、種々の疾患等の予防又は治療に適用されることが期待される。しかしながら、アドレノメデュリンは、ペプチドである。一般に、ペプチドは、生体内（例えば血中）における代謝反応に起因して、半減期が短いことが知られている。このため、アドレノメデュリンを有効成分として含有する医薬は、対象（例えばヒト患者）における作用時間が極めて短時間となる可能性がある。以上のように、アドレノメデュリンを医薬用途に適用するためには、さらなる改良の余地が存在した。
　それ故、本発明は、天然型アドレノメデュリンと比較して長期間持続的に作用し得る新規アドレノメデュリン誘導体を提供することを目的とする。
　本発明者らは、前記課題を解決するための手段を種々検討した結果、天然型アドレノメデュリンのN末端アミノ基を特定の修飾基で化学修飾することにより、天然型アドレノメデュリンの生物活性を保持しつつ、天然型アドレノメデュリンと比較して血中半減期を延長し得ることを見出した。本発明者らは、前記知見に基づき本発明を完成した。
　すなわち、本発明の要旨は以下の通りである。
　（1）式（I）：
　　　A-Ln-B　　（I）
［式中、
　Aは、パルミトイル基及びポリエチレングリコール基からなる群より選択される修飾基であり、
　Lは、2価の連結基であり、
　nは、0又は1の整数であり、
　Bは、アドレノメデュリン又はアドレノメデュリン活性を有するその修飾体から誘導されるペプチド部分であり、
　但し、ペプチド部分Bは、そのN末端アミノ基を介して修飾基A又は連結基Lと結合されている。］
で表される化合物若しくはその塩、又はそれらの水和物。
　（2）前記アドレノメデュリン又はアドレノメデュリン活性を有するその修飾体が、下記：
（i）アドレノメデュリンのアミノ酸配列からなるペプチド、
（ii）アドレノメデュリンのアミノ酸配列からなり、且つ該アミノ酸配列中の2個のシステイン残基がジスルフィド結合を形成しているペプチド、
（iii）（ii）のペプチドにおいて、前記ジスルフィド結合が、エチレン基によって置換されており、且つアドレノメデュリン活性を有するペプチド、
（iv）（i）～（iii）のいずれかのペプチドにおいて、1～15個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されており、且つアドレノメデュリン活性を有するペプチド、
（v）（i）～（iv）のいずれかのペプチドにおいて、C末端がアミド化されているペプチド、並びに
（vi）（i）～（iv）のいずれかのペプチドにおいて、C末端にグリシン残基が付加されているペプチド
からなる群より選択されるペプチドである、前記（1）に記載の化合物。
　（3）　前記アドレノメデュリン又はその修飾体が、下記：
（a）配列番号1のアミノ酸配列からなるペプチド、又は配列番号1のアミノ酸配列からなり、且つ16位のシステイン残基と21位のシステイン残基とがジスルフィド結合を形成しているペプチド；
（b）配列番号3のアミノ酸配列からなるペプチド、又は配列番号3のアミノ酸配列からなり、且つ16位のシステイン残基と21位のシステイン残基とがジスルフィド結合を形成しているペプチド；
（c）配列番号5のアミノ酸配列からなるペプチド、又は配列番号5のアミノ酸配列からなり、且つ16位のシステイン残基と21位のシステイン残基とがジスルフィド結合を形成しているペプチド；
（d）配列番号7のアミノ酸配列からなるペプチド、又は配列番号7のアミノ酸配列からなり、且つ16位のシステイン残基と21位のシステイン残基とがジスルフィド結合を形成しているペプチド；
（e）配列番号9のアミノ酸配列からなるペプチド、又は配列番号9のアミノ酸配列からなり、且つ14位のシステイン残基と19位のシステイン残基とがジスルフィド結合を形成しているペプチド；
（f）配列番号11のアミノ酸配列からなるペプチド、又は配列番号11のアミノ酸配列からなり、且つ14位のシステイン残基と19位のシステイン残基とがジスルフィド結合を形成しているペプチド；
（g）前記（a）～（f）のいずれかのペプチドにおいて、前記ジスルフィド結合が、エチレン基によって置換されており、且つアドレノメデュリン活性を有するペプチド；
（h）前記（a）～（g）のいずれかのペプチドにおいて、1～15個のアミノ酸残基が欠失、置換若しくは付加されており、且つアドレノメデュリン活性を有するペプチド；
（i）前記（a）～（h）のいずれかのペプチドにおいて、C末端がアミド化されているペプチド；並びに
（j）前記（a）～（h）のいずれかのペプチドにおいて、C末端にグリシン残基が付加されているペプチド；
からなる群より選択されるペプチドである、前記（1）又は（2）に記載の化合物。
　（4）　アドレノメデュリン又はその修飾体から誘導されるペプチド部分Bの前駆体と、パルミトイル基及びポリエチレングリコール基からなる群より選択される修飾基Aの前駆体と、2価基Lnの前駆体とを連結させて、式（I）で表される化合物を得る、連結工程を含む、前記（1）～（3）のいずれかに記載の化合物の製造方法。
　（5）　前記（1）～（3）のいずれかに記載の化合物若しくはその製薬上許容される塩、又はそれらの製薬上許容される水和物を有効成分として含有する医薬。
　（6）　循環器疾患、炎症性疾患又は末梢血管疾患の予防又は治療に使用するための、前記（5）に記載の医薬。
　（7）　前記（1）～（3）のいずれかに記載の化合物若しくはその製薬上許容される塩、又はそれらの製薬上許容される水和物を有効成分として含有する、循環器疾患、炎症性疾患又は末梢血管疾患の予防又は治療剤。
　（8）　前記（1）～（3）のいずれかに記載の化合物若しくはその製薬上許容される塩、又はそれらの製薬上許容される水和物と、1種以上の薬学的に許容し得る担体とを含有する医薬組成物。
　（9）　循環器疾患、炎症性疾患又は末梢血管疾患の予防又は治療に使用するための、前記（8）に記載の医薬組成物。
　（10）　症状、疾患及び／若しくは障害の予防又は治療を必要とする対象に、有効量の前記（1）～（3）のいずれかに記載の化合物若しくはその製薬上許容される塩、又はそれらの製薬上許容される水和物を投与することを含む、前記症状、疾患及び／若しくは障害の予防又は治療方法。
　（11）　前記症状、疾患及び／若しくは障害が、循環器疾患、炎症性疾患又は末梢血管疾患である、前記（10）に記載の方法。
　（12）　症状、疾患及び／若しくは障害の予防又は治療に使用するための、前記（1）～（3）のいずれかに記載の化合物若しくはその製薬上許容される塩、又はそれらの製薬上許容される水和物。
　（13）　前記症状、疾患及び／若しくは障害が、循環器疾患、炎症性疾患又は末梢血管疾患である、前記（12）に記載の化合物。
　（14）　症状、疾患及び／若しくは障害の予防又は治療に用いるための医薬の製造のための、前記（1）～（3）のいずれかに記載の化合物若しくはその製薬上許容される塩、又はそれらの製薬上許容される水和物の使用。
　（15）　前記症状、疾患及び／若しくは障害が、循環器疾患、炎症性疾患又は末梢血管疾患である、前記（14）に記載の使用。
　本発明により、天然型アドレノメデュリンと比較して長期間持続的に作用し得る新規アドレノメデュリン誘導体を提供することが可能となる。
　本明細書は、本願の優先権の基礎である日本国特許出願第2014-058225号の明細書及び／又は図面に記載される内容を包含する。
図1は、Pal-h.AM(1-52)、PEG5000-h.AM(1-52)又はh.AM(1-52)の濃度とcAMP濃度の上昇との用量応答曲線を示す図である。 図2は、h.AM(1-52)の投与開始時からの経過時間と血漿中AM濃度との関係を示す図である。 図3は、Pal-h.AM(1-52)の投与開始時からの経過時間と血漿中AM濃度との関係を示す図である。 図4は、PEG5000-h.AM(1-52)の投与開始時からの経過時間と血漿中AM濃度との関係を示す図である。 図5は、h.AM(1-52)、Pal-h.AM(1-52)又はPEG5000-h.AM(1-52)の投与開始時からの経過時間と平均血圧との関係を示す図である。 図6は、対照群、並びに0.02、0.1及び0.5 nmol/kg/hr PEG5000-h.AM(1-52)投与群の血漿中AM濃度を示す図である。 図7は、PEG5000-h.AM(1-52)の投与開始時からの経過時間と、対照群及び各投与群の総スコアとの関係を示す図である。 図8は、対照群、並びに0.02、0.1及び0.5 nmol/kg/hr PEG5000-h.AM(1-52)投与群の腸管の長さを示す図である。
＜1. アドレノメデュリン誘導体＞
　本発明は、式（I）：
　　　A-Ln-B　　（I）
で表される化合物若しくはその塩、又はそれらの水和物に関する。本明細書において、式（I）で表される化合物を、「アドレノメデュリン誘導体」と記載する場合がある。
　本発明において、アドレノメデュリン（AM）は、ヒト褐色細胞組織より単離及び同定されたヒト由来のペプチド（配列番号1、非特許文献1）だけでなく、例えばブタ（配列番号3）、イヌ（配列番号5）、ウシ（配列番号7）、ラット（配列番号9）又はマウス（配列番号11）等の他の非ヒト哺乳動物（例えば温血動物）由来のペプチド（オーソログ）であってもよい。生体内において、これらのペプチドは、そのアミノ酸配列中の2個のシステイン残基がジスルフィド結合を形成しており、且つC末端がアミド化されている。本明細書において、前記ペプチドであってジスルフィド結合及びC末端アミド基を有するものを、「天然型アドレノメデュリン」又は単に「アドレノメデュリン」と記載する場合がある。本発明は、前記のいずれのペプチドに対しても適用することができる。
　本明細書において、「C末端のアミド化」は、生体内におけるペプチドの翻訳後修飾の一態様を意味し、具体的には、ペプチドのC末端アミノ酸残基の主鎖カルボキシル基がアミド基の形態へ変換される反応を意味する。また、本明細書において、「システイン残基のジスルフィド結合の形成」又は「システイン残基のジスルフィド化」は、生体内におけるペプチドの翻訳後修飾の一態様を意味し、具体的には、ペプチドのアミノ酸配列中の2個のシステイン残基がジスルフィド結合（-S-S-）を形成する反応を意味する。生体内で産生される多くの生理活性ペプチドは、はじめ分子量のより大きな前駆体タンパク質として生合成され、これが細胞内移行の過程で、C末端アミド化及び／又はシステイン残基のジスルフィド化のような翻訳後修飾反応を受けて、成熟した生理活性ペプチドとなる。C末端のアミド化は、通常は、前駆体タンパク質に対し、C末端アミド化酵素が作用することによって進行する。C末端アミド基を有する生理活性ペプチドの場合、その前駆体タンパク質においては、アミド化されるC末端カルボキシル基にGly残基が結合しており、該Gly残基がC末端アミド化酵素によってC末端アミド基に変換される。また、前駆体タンパク質のC末端側プロペプチドには、例えばLys-Arg又はArg-Arg等の塩基性アミノ酸残基の組合せの繰返し配列が存在する（水野、生化学第61巻、第12号、1435～1461頁（1989））。システイン残基のジスルフィド化は、酸化的条件下で進行し得る。生体内においては、システイン残基のジスルフィド化は、通常は、前駆体タンパク質に対し、タンパク質ジスルフィド異性化酵素が作用することによって進行する。
　公知の生理活性物質であるアドレノメデュリンは、ペプチドである。このため、アドレノメデュリンを有効成分として含有する医薬は、対象（例えばヒト患者）の生体内において有効に作用し得る時間が極めて短時間となる可能性がある。また、アドレノメデュリンは、強力な血管拡張作用を有する。このため、治療上有効な量のアドレノメデュリンを単回投与する場合、強力な血管拡張作用により、望ましくない副反応（例えば、過度の血圧低下、反射性の交感神経活性上昇に伴う頻脈、及び／又はレニン活性の上昇等）を引き起こす可能性がある。前記のような問題が生じることを回避するために、アドレノメデュリンを有効成分として含有する医薬は、持続静注によって対象に投与される必要があった。このような投与方法は、対象に過度の負担を強いる可能性がある。
　本発明者らは、アドレノメデュリン誘導体である式（I）で表される化合物は、天然型アドレノメデュリンと実質的に略同等の生物活性を保持しつつ、天然型アドレノメデュリンと比較して、血中半減期を有意に延長し得ることを見出した。それ故、本発明の式（I）で表される化合物を、アドレノメデュリンによって予防又は治療し得る症状、疾患及び／又は障害に対して適用することにより、該症状、疾患及び／又は障害を持続的に予防又は治療することができる。
　式（I）において、Bは、アドレノメデュリン又はアドレノメデュリン活性を有するその修飾体から誘導されるペプチド部分であることが必要である。本発明において、「アドレノメデュリンの修飾体」は、前記で説明した天然型アドレノメデュリンが化学修飾されたペプチドを意味する。また、本発明において、「アドレノメデュリン活性」は、アドレノメデュリンの有する生物活性を意味する。アドレノメデュリン活性としては、下記のものを挙げることができる。
（1）心血管系：血管拡張作用、血圧降下作用、心拍出量増加・心不全改善作用、肺高血圧症改善作用、血管新生作用、リンパ管新生作用、血管内皮機能改善作用、抗動脈硬化作用、心筋保護作用（例えば、虚血再灌流障害又は炎症における心筋保護作用）、心筋梗塞後のリモデリング抑制作用、心肥大抑制作用、及びアンジオテンシン変換酵素抑制作用。
（2）腎臓・水電解質系：利尿作用、ナトリウム利尿作用、抗利尿ホルモン抑制作用、アルドステロン低下作用、腎保護作用(例えば、高血圧又は虚血再灌流障害における心筋保護作用)、飲水行動抑制作用、及び食塩要求抑制作用。
（3）脳・神経系：神経保護・脳障害抑制作用、抗炎症作用、アポトーシス抑制作用（例えば、虚血再灌流障害又は炎症におけるアポトーシス抑制作用）、自動調節能維持作用、及び酸化ストレス抑制作用。
（4）泌尿生殖器：勃起改善作用、血流改善作用、及び着床促進作用。
（5）消化器系：抗潰瘍作用、組織修復作用、粘膜新生作用、血流改善作用、抗炎症作用、及び肝機能改善作用。
（6）整形外科系：骨芽細胞刺激作用、及び関節炎改善作用。
（7）内分泌代謝系：脂肪細胞分化作用、脂肪分解制御作用、インスリン感受性改善作用、及びインスリン分泌制御作用。
（8）その他：循環改善作用、抗炎症作用、サイトカイン制御作用、臓器保護作用、酸化ストレス抑制作用、組織修復作用（例えば、抗褥瘡作用）、敗血症性ショックの改善作用、多臓器不全の抑制作用、及び自己免疫疾患の抑制作用。
　前記血圧降下作用は、血管拡張性の降圧作用であることが好ましい。前記消化器系における抗炎症作用は、ステロイド抵抗性又はステロイド依存性の炎症性腸疾患（例えば、潰瘍性大腸炎、クローン病又は腸管ベーチェット病）のような炎症性腸疾患の予防又は治療作用であることが好ましい。前記のアドレノメデュリン活性は、細胞内cAMPの濃度上昇を介して発現する。このため、細胞内cAMPの濃度上昇を、アドレノメデュリン活性の指標とすることができる。前記のような生物活性を有するアドレノメデュリン又はその修飾体から誘導されるペプチド部分Bを含むことにより、本発明の式（I）で表される化合物は、天然型アドレノメデュリンと実質的に略同等の生物活性（すなわち、アドレノメデュリン活性）を発現することができる。
　前記アドレノメデュリン又はアドレノメデュリン活性を有するその修飾体は、下記：
（i）アドレノメデュリンのアミノ酸配列からなるペプチド、
（ii）アドレノメデュリンのアミノ酸配列からなり、且つ該アミノ酸配列中の2個のシステイン残基がジスルフィド結合を形成しているペプチド、
（iii）（ii）のペプチドにおいて、前記ジスルフィド結合が、エチレン基によって置換されており、且つアドレノメデュリン活性を有するペプチド、
（iv）（i）～（iii）のいずれかのペプチドにおいて、1～15個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されており、且つアドレノメデュリン活性を有するペプチド、
（v）（i）～（iv）のいずれかのペプチドにおいて、C末端がアミド化されているペプチド、並びに
（vi）（i）～（iv）のいずれかのペプチドにおいて、C末端にグリシン残基が付加されているペプチド
からなる群より選択されるペプチドであることが好ましい。
　前記（i）～（vi）のペプチドにおいて、（v）に包含される、アドレノメデュリンのアミノ酸配列からなり、C末端がアミド化されており、且つ該アミノ酸配列中の2個のシステイン残基がジスルフィド結合を形成しているペプチドは、成熟した天然型アドレノメデュリンに相当する。（i）のアドレノメデュリンのアミノ酸配列からなるペプチドは、C末端アミド化及びシステイン残基のジスルフィド化の翻訳後修飾を受ける前の（すなわち未成熟な）形態の天然型アドレノメデュリンに相当する。前記（i）～（vi）のペプチドにおいて、前記で説明したペプチドを除く他のペプチドは、アドレノメデュリンの修飾体に相当する。
　前記（ii）のペプチドは、前記（i）のペプチドの2個のシステイン残基のチオール基を空気酸化するか、又は適切な酸化剤を用いて酸化してジスルフィド結合に変換することにより、形成させることができる。前記（ii）のペプチドを用いることにより、ペプチド部分Bの立体構造を、天然型アドレノメデュリンの立体構造に類似させることができる。これにより、式（I）で表される化合物のアドレノメデュリン活性を、天然型アドレノメデュリンと実質的に略同等のものとすることができる。
　前記（iii）のペプチドは、前記（ii）のペプチドのジスルフィド結合をエチレン基に変換することにより、形成させることができる。ジスルフィド結合からエチレン基への置換は、当該技術分野で周知の方法により、行うことができる（O. Kellerら, Helv. Chim. Acta, 1974年, 第57巻, p. 1253）。前記（iii）のペプチドを用いることにより、ペプチド部分Bの立体構造を安定化させることができる。これにより、式（I）で表される化合物は、生体内において、持続的にアドレノメデュリン活性を発現することができる。
　前記（iv）のペプチドにおいて、欠失、置換若しくは付加されているアミノ酸残基は、1～12個の範囲であることが好ましく、1～10個の範囲であることがより好ましく、1～8個の範囲であることがさらに好ましく、1～5個の範囲であることが特に好ましく、1～3個の範囲であることがもっとも好ましい。好適な（iv）のペプチドは、（i）～（iii）のいずれかのペプチドにおいて、N末端側から1～15位、1～12位、1～10位、1～8位、1～5位又は1～3位のアミノ酸が欠失されており、且つアドレノメデュリン活性を有するペプチドである。前記好適なペプチドにおいて、1又は複数個（例えば、1～5個、1～3個、又は1若しくは2個）のアミノ酸がさらに欠失、置換若しくは付加されていてもよい。前記（iv）のペプチドを用いることにより、式（I）で表される化合物のアドレノメデュリン活性を、天然型アドレノメデュリンと実質的に略同等のものとすることができる。また、前記（iv）のペプチドを用いることにより、式（I）で表される化合物は、生体内において、持続的にアドレノメデュリン活性を発現することができる。
　前記（vi）のペプチドは、C末端アミド化酵素の作用によってC末端のグリシン残基がC末端アミド基に変換されて、前記（v）のペプチドに変換されることができる。それ故、前記（vi）のペプチドを対象に投与することにより、該対象の生体内において、一定時間経過後に、C末端アミド化されたペプチドを形成させることができる。これにより、式（I）で表される化合物は、生体内において、持続的にアドレノメデュリン活性を発現することができる。
　前記アドレノメデュリン又はその修飾体は、下記：
（a）配列番号1のアミノ酸配列からなるペプチド、又は配列番号1のアミノ酸配列からなり、且つ16位のシステイン残基と21位のシステイン残基とがジスルフィド結合を形成しているペプチド；
（b）配列番号3のアミノ酸配列からなるペプチド、又は配列番号3のアミノ酸配列からなり、且つ16位のシステイン残基と21位のシステイン残基とがジスルフィド結合を形成しているペプチド；
（c）配列番号5のアミノ酸配列からなるペプチド、又は配列番号5のアミノ酸配列からなり、且つ16位のシステイン残基と21位のシステイン残基とがジスルフィド結合を形成しているペプチド；
（d）配列番号7のアミノ酸配列からなるペプチド、又は配列番号7のアミノ酸配列からなり、且つ16位のシステイン残基と21位のシステイン残基とがジスルフィド結合を形成しているペプチド；
（e）配列番号9のアミノ酸配列からなるペプチド、又は配列番号9のアミノ酸配列からなり、且つ14位のシステイン残基と19位のシステイン残基とがジスルフィド結合を形成しているペプチド；
（f）配列番号11のアミノ酸配列からなるペプチド、又は配列番号11のアミノ酸配列からなり、且つ14位のシステイン残基と19位のシステイン残基とがジスルフィド結合を形成しているペプチド；
（g）前記（a）～（f）のいずれかのペプチドにおいて、前記ジスルフィド結合が、エチレン基によって置換されており、且つアドレノメデュリン活性を有するペプチド；
（h）前記（a）～（g）のいずれかのペプチドにおいて、1～15個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されており、且つアドレノメデュリン活性を有するペプチド；
（i）前記（a）～（h）のいずれかのペプチドにおいて、C末端がアミド化されているペプチド；並びに
（j）前記（a）～（h）のいずれかのペプチドにおいて、C末端にグリシン残基が付加されているペプチド；
からなる群より選択されるペプチドであることがより好ましい。
　前記（h）のペプチドにおいて、欠失、置換若しくは付加されているアミノ酸残基は、1～12個の範囲であることが好ましく、1～10個の範囲であることがより好ましく、1～8個の範囲であることがさらに好ましく、1～5個の範囲であることが特に好ましく、1～3個の範囲であることがもっとも好ましい。好適な（h）のペプチドは、（a）～（g）のいずれかのペプチドにおいて、N末端側から1～15位、1～12位、1～10位、1～8位、1～5位又は1～3位のアミノ酸が欠失されており、且つアドレノメデュリン活性を有するペプチドである。前記好適なペプチドにおいて、1又は複数個（例えば、1～5個、1～3個、又は1若しくは2個）のアミノ酸がさらに欠失、置換若しくは付加されていてもよい。前記（h）のペプチドを用いることにより、式（I）で表される化合物のアドレノメデュリン活性を、天然型アドレノメデュリンと実質的に略同等のものとすることができる。また、前記（h）のペプチドを用いることにより、式（I）で表される化合物は、生体内において、持続的にアドレノメデュリン活性を発現することができる。
　式（I）において、Aは、修飾基であることが必要である。Aは、パルミトイル基、ポリエチレングリコール基、ミリストイル基、糖基及びペプチド基からなる群より選択される修飾基であることが好ましく、パルミトイル基及びポリエチレングリコール基からなる群より選択される修飾基であることがより好ましい。前記糖基は、単糖、二糖、オリゴ糖又は多糖から誘導される一価の基（例えば、グリコシル基）であることが好ましい。前記ペプチド基は、ポリグリシン、ポリグルタミン酸、ポリリジン又はポリアスパラギン等から誘導される一価の基（例えば、N末端アミノ基、C末端カルボキシル基又は側鎖基を介して結合を形成する一価の基）であることが好ましい。前記ポリエチレングリコール基は、200～40,000の範囲の平均分子量を有することが好ましく、500～20,000の範囲の平均分子量を有することがより好ましく、500～10,000の範囲の平均分子量を有することがさらに好ましい。ポリエチレングリコール基の平均分子量が200以上の場合、式（I）で表される化合物は、生体内において、長時間に亘って持続的にアドレノメデュリン活性を発現することができる。前記の修飾基Aでアドレノメデュリン又はその修飾体のN末端アミノ基が化学修飾されることにより、式（I）で表される化合物のアドレノメデュリン活性を、天然型アドレノメデュリンと実質的に略同等のものとすることができる。また、式（I）で表される化合物は、生体内において、持続的にアドレノメデュリン活性を発現することができる。
　式（I）において、Lは、2価の連結基であることが必要である。2価の連結基Lは、置換又は非置換の2価の炭化水素基であることが好ましく、置換若しくは非置換の2価の脂肪族炭化水素基、置換若しくは非置換の2価の脂環式基又は置換若しくは非置換の2価の芳香族基であることがより好ましく、置換若しくは非置換のC1～C10アルキレン基、C2～C10アルケニレン基若しくはC2～C10アルキニレン基であることがさらに好ましい。前記の基は、1個以上の複素原子を含むことが好ましく、オキソ（カルボニル）、チオカルボニル、カルバメート又はカルボンイミドイル等の、1個以上の複素原子を含む2価の基を含むことがより好ましい。前記1個以上の複素原子を含む2価の基は、2価の連結基Lの一端又は両端に配置されていることが好ましく、ペプチド部分Bとの結合を形成する末端に配置されていることがより好ましい。この場合、式（I）で表される化合物は、加水分解等の生体内の代謝反応によって、2価の連結基Lの部分で切断されて、アドレノメデュリン又はアドレノメデュリン活性を有するその修飾体を放出し得る。特に好適な2価の連結基Lは、1-オキソ-1,6-ヘキサンジイルである。前記の特徴を備える2価の連結基Lを有することにより、本発明の式（I）で表される化合物は、生体内において、持続的にアドレノメデュリン活性を発現することができる。
　式（I）において、nは、0又は1の整数であることが必要である。nが0の場合、本発明の式（I）で表される化合物は、式（Ia）：
　　　A-B　　（Ia）
で表される化合物である。
　式（Ia）において、A及びBは、式（I）で定義されるものと同一の意味を有する。
　式（I）において、ペプチド部分Bは、そのN末端近傍の領域の基を介して修飾基A又は連結基Lと結合されていることが必要である。ペプチド部分Bは、そのN末端アミノ基を介して修飾基A又は連結基Lと結合されていることが好ましい。本発明において、ペプチド部分Bの「N末端近傍の領域の基」は、ペプチド部分BのN末端アミノ酸残基から13残基目のアミノ酸残基までの領域に含まれるアミノ酸残基の基（例えば、N末端アミノ酸残基のα-アミノ基、又は各アミノ酸残基の側鎖のアミノ基、カルボキシル基、ヒドロキシル基、イミダゾール基若しくはグアジニル基）、及び前記アミノ酸残基に結合した修飾基を意味する。
　また、本発明において、「ペプチド部分BのN末端アミノ基」は、ペプチド部分BのN末端アミノ酸残基のα-アミノ基を意味する。前記の結合形態であることにより、本発明の式（I）で表される化合物は、生体内において、持続的にアドレノメデュリン活性を発現することができる。
　特に好適な式（I）で表される化合物は、
　Aが、パルミトイル基である修飾基であり、
　nが、0であり、
　Bが、アドレノメデュリン又はアドレノメデュリン活性を有するその修飾体から誘導されるペプチド部分であり、
　但し、ペプチド部分Bが、そのN末端アミノ基を介して修飾基Aと結合されているか、或いは、
　Aが、ポリエチレングリコール基である修飾基であり、
　Lが、置換又は非置換の2価の炭化水素基（前記の基は、1個以上の複素原子を含む）である2価の連結基であり、
　nが、1であり、
　Bが、アドレノメデュリン又はアドレノメデュリン活性を有するその修飾体から誘導されるペプチド部分であり、
　但し、ペプチド部分Bが、そのN末端アミノ基を介して修飾基A又は連結基Lと結合されている。
　本発明において、式（I）で表される化合物は、該化合物自体だけでなく、その塩も包含する。式（I）で表される化合物が塩の形態である場合、薬学的に許容し得る塩であることが好ましい。本発明の化合物の塩の対イオンとしては、限定するものではないが、例えば、ナトリウムイオン、カリウムイオン、カルシウムイオン、マグネシウムイオン、若しくは置換若しくは非置換のアンモニウムイオンのようなカチオン、又は塩化物イオン、臭化物イオン、ヨウ化物イオン、リン酸イオン、硝酸イオン、硫酸イオン、炭酸イオン、炭酸水素イオン、過塩素酸イオン、ギ酸イオン、酢酸イオン、トリフルオロ酢酸イオン、プロピオン酸イオン、乳酸イオン、マレイン酸イオン、ヒドロキシマレイン酸イオン、メチルマレイン酸イオン、フマル酸イオン、アジピン酸イオン、安息香酸イオン、2-アセトキシ安息香酸イオン、p-アミノ安息香酸イオン、ニコチン酸イオン、ケイ皮酸イオン、アスコルビン酸イオン、パモ酸イオン、コハク酸イオン、サリチル酸イオン、ビスメチレンサリチル酸イオン、シュウ酸イオン、酒石酸イオン、リンゴ酸イオン、クエン酸イオン、グルコン酸イオン、アスパラギン酸イオン、ステアリン酸イオン、パルミチン酸イオン、イタコン酸イオン、グリコール酸イオン、グルタミン酸イオン、ベンゼンスルホン酸イオン、シクロヘキシルスルファミン酸イオン、メタンスルホン酸イオン、エタンスルホン酸イオン、イセチオン酸イオン、ベンゼンスルホン酸イオン、p-トルエンスルホン酸イオン、若しくはナフタレンスルホン酸イオンのようなアニオンが好ましい。式（I）で表される化合物が前記の対イオンとの塩の形態である場合、該化合物のアドレノメデュリン活性を、天然型アドレノメデュリンと実質的に略同等のものとすることができる。
　式（I）で表される化合物は、前記の化合物自体だけでなく、該化合物又はその塩の溶媒和物も包含する。式（I）で表される化合物又はその塩が溶媒和物の形態である場合、薬学的に許容し得る溶媒和物であることが好ましい。前記化合物又はその塩と溶媒和物を形成し得る溶媒としては、限定するものではないが、例えば、水、或いはメタノール、エタノール、2-プロパノール（イソプロピルアルコール）、ジメチルスルホキシド（DMSO）、酢酸、エタノールアミン、アセトニトリル又は酢酸エチルのような有機溶媒が好ましい。式（I）で表される化合物又はその塩が前記の溶媒との溶媒和物の形態である場合、該化合物のアドレノメデュリン活性を、天然型アドレノメデュリンと実質的に略同等のものとすることができる。
　式（I）で表される化合物は、前記又は下記の化合物自体だけでなく、その保護形態も包含する。本明細書において、「保護形態」は、1個又は複数個の官能基（例えばリジン残基の側鎖アミノ基）に保護基が導入された形態を意味する。また、本明細書において、「保護基」は、望ましくない反応の進行を防止するために、特定の官能基に導入される基であって、特定の反応条件において定量的に除去され、且つそれ以外の反応条件においては実質的に安定、即ち反応不活性である基を意味する。前記化合物の保護形態を形成し得る保護基としては、限定するものではないが、例えば、t-ブトキシカルボニル（Boc）、2-ブロモベンジルオキシカルボニル（BrZ）、9-フルオレニルメトキシカルボニル（Fmoc）、p-トルエンスルホニル（Tos）、ベンジル（Bzl）、4-メチルベンジル（4-MeBzl）、2-クロロベンジルオキシカルボニル（ClZ）、シクロヘキシル（cHex）、及びフェナシル（Pac）；アミノ基の他の保護基として、ベンジルオキシカルボニル、p-クロロベンジルオキシカルボニル、p-ブロモベンジルオキシカルボニル、p-ニトロベンジルオキシカルボニル、p-メトキシベンジルオキシカルボニル、ベンズヒドリルオキシカルボニル、2-（p-ビフェニル）イソプロピルオキシカルボニル、2-(3,5-ジメトキシフェニル)イソプロピルオキシカルボニル、p-フェニルアゾベンジルオキシカルボニル、トリフェニルホスホノエチルオキシカルボニル、9-フルオレニルメチルオキシカルボニル、t-アミルオキシオキシカルボニル、ジイソプロピルメチルオキシカルボニル、イソプロピルオキシカルボニル、エチルオキシカルボニル、アリルオキシカルボニル、2-メチルスルホニルエチルオキシカルボニル、2,2,2-トリクロロエチルオキシカルボニル、シクロペンチルオキシカルボニル、シクロヘキシルオキシカルボニル、アダマンチルオキシカルボニル、イソボルニルオキシカルボニル、ベンゼンスルホニル、メシチレンスルフォニル、メトキシトリメチルフェニルスルホニル、2-ニトロベンゼンスルホニル、2-ニトロベンゼンスルフェニル、4-ニトロベンゼンスルホニル、及び4-ニトロベンゼンスルフェニル；カルボキシル基の他の保護基として、メチルエステル、エチルエステル、t-ブチルエステル、p-メトキシベンジルエステル、及びp-ニトロベンジルエステル；Argの他の側鎖保護基として、2,2,4,6,7-ペンタメチル-2,3-ジヒドロベンゾフラン-5-スルホニル、4-メトキシ-2,3,6-トリメチルベンゼンスルホニル、2,2,5,7,8-ペンタメチルクロマン-6-スルホニル、及び2-メトキシベンゼンスルホニル；Tyrの他の保護基として、2,6-ジクロロベンジル、t-ブチル、及びシクロヘキシル；Cysの他の保護基として、4-メトキシベンジル、t-ブチル、トリチル、アセトアミドメチル、及び3-ニトロ-2-ピリジンスルフェニル；Hisの他の保護基として、ベンジルオキシメチル、p-メトキシベンジルオキシメチル、t-ブトキシメチル、トリチル、及び2,4-ジニトロフェニル；並びに、Ser及びThrの他の保護基として、ｔ-ブチル等を挙げることができる。式（I）で表される化合物が前記の保護基による保護形態である場合、該化合物のアドレノメデュリン活性を、天然型アドレノメデュリンと実質的に略同等のものとすることができる。
　また、式（I）で表される化合物は、該化合物の個々のエナンチオマー及びジアステレオマー、並びにラセミ体のような、該化合物の立体異性体の混合物も包含する。
　前記特徴を有することにより、式（I）で表される化合物は、アドレノメデュリン活性を実質的に低下させることなく、生体内において、持続的にアドレノメデュリン活性を発現することができる。
＜2. アドレノメデュリン誘導体の医薬用途＞
　本発明の式（I）で表される化合物は、生体内において、親分子であるアドレノメデュリンと実質的に略同等の生物活性（すなわちアドレノメデュリン活性）を、持続的に発現することができる。それ故、本発明は、本発明の式（I）で表される化合物を有効成分として含有する医薬に関する。
　本発明の式（I）で表される化合物を医薬用途に適用する場合、該化合物を単独で使用してもよく、1種以上の薬学的に許容し得る成分と組み合わせて使用してもよい。本発明の医薬は、所望の投与方法に応じて、当該技術分野で通常使用される様々な剤形に製剤されることができる。それ故、本発明の医薬はまた、本発明の式（I）で表される化合物と、1種以上の薬学的に許容し得る担体とを含有する医薬組成物の形態で提供されることもできる。本発明の医薬組成物は、前記成分に加えて、薬学的に許容し得る1種以上の担体、賦形剤、結合剤、ビヒクル、溶解補助剤、防腐剤、安定剤、膨化剤、潤滑剤、界面活性剤、油性液、緩衝剤、無痛化剤、酸化防止剤、甘味剤及び香味剤等を含んでもよい。
　本発明の式（I）で表される化合物を有効成分として含有する医薬の剤形は、特に限定されず、非経口投与に使用するための製剤であってもよく、経口投与に使用するための製剤であってもよい。また、本発明の医薬の剤形は、単位用量形態の製剤であってもよく、複数投与形態の製剤であってもよい。非経口投与に使用するための製剤としては、例えば、水若しくはそれ以外の薬学的に許容し得る液との無菌性溶液又は懸濁液等の注射剤を挙げることができる。注射剤に混和することができる添加剤としては、限定するものではないが、例えば、生理食塩水、ブドウ糖若しくはその他の補助薬（例えば、D-ソルビトール、D-マンニトール若しくは塩化ナトリウム）を含む等張液のようなビヒクル、アルコール（例えばエタノール若しくはベンジルアルコール）、エステル（例えば安息香酸ベンジル）、ポリアルコール（例えばプロピレングリコール若しくはポリエチレングリコール）のような溶解補助剤、ポリソルベート80又はポリオキシエチレン硬化ヒマシ油のような非イオン性界面活性剤、ゴマ油又は大豆油のような油性液、リン酸塩緩衝液又は酢酸ナトリウム緩衝液のような緩衝剤、塩化ベンザルコニウム又は塩酸プロカインのような無痛化剤、ヒト血清アルブミン又はポリエチレングリコールのような安定剤、保存剤、並びに酸化防止剤等を挙げることができる。調製された注射剤は、通常、適当なバイアル（例えばアンプル）に充填され、使用時まで適切な環境下で保存される。
　経口投与に使用するための製剤としては、例えば、必要に応じて糖衣や溶解性被膜を施した錠剤、カプセル剤、エリキシル剤、マイクロカプセル剤、タブレット、シロップ、懸濁液等を挙げることができる。錠剤又はカプセル剤等に混和することができる添加剤としては、限定するものではないが、例えば、ゼラチン、コーンスターチ、トラガントガム及びアラビアゴムのような結合剤、結晶性セルロースのような賦形剤、コーンスターチ、ゼラチン及びアルギン酸のような膨化剤、ステアリン酸マグネシウムのような潤滑剤、ショ糖、乳糖又はサッカリンのような甘味剤、ペパーミント、アカモノ油又はチェリーのような香味剤等を挙げることができる。製剤がカプセル剤の場合、さらに油脂のような液状担体を含有してもよい。
　本発明の式（I）で表される化合物は、生体内において、親分子であるアドレノメデュリンと実質的に略同等のアドレノメデュリン活性を、持続的に発現することができる。それ故、本発明の式（I）で表される化合物を有効成分として含有する医薬は、デポー製剤として製剤化することもできる。この場合、デポー製剤の剤形の本発明の医薬を、例えば皮下若しくは筋肉に埋め込み、又は筋肉注射により投与することができる。本発明の医薬をデポー製剤に適用することにより、本発明の式（I）で表される化合物のアドレノメデュリン活性を、長期間に亘って持続的に発現することができる。
　本発明の式（I）で表される化合物を有効成分として含有する医薬は、医薬として有用な1種以上の他の薬剤と併用することもできる。この場合、本発明の医薬は、本発明の式（I）で表される化合物と1種以上の他の薬剤とを含む単一の医薬の形態で提供されてもよく、本発明の式（I）で表される化合物と1種以上の他の薬剤とが別々に製剤化された複数の製剤を含む医薬組合せ又はキットの形態で提供されてもよい。医薬組合せ又はキットの形態の場合、それぞれの製剤を同時又は別々に（例えば連続的に）投与することができる。
　本発明の式（I）で表される化合物を医薬用途に適用する場合、式（I）で表される化合物は、該化合物自体だけでなく、該化合物の製薬上許容される塩、及びそれらの製薬上許容される溶媒和物も包含する。本発明の式（I）で表される化合物の製薬上許容される塩、及びそれらの製薬上許容される溶媒和物としては、限定するものではないが、例えば、前記で例示した塩又は溶媒和物が好ましい。式（I）で表される化合物が前記の塩又は溶媒和物の形態である場合、該化合物を所望の医薬用途に適用することができる。
　本発明の式（I）で表される化合物を有効成分として含有する医薬は、アドレノメデュリンによって予防又は治療される種々の症状、疾患及び／又は障害を、同様に予防又は治療することができる。前記症状、疾患及び／又は障害としては、限定するものではないが、例えば下記のものを挙げることができる。
（1）循環器疾患：心不全、肺高血圧症、閉塞性動脈硬化症、バージャー病、心筋梗塞、リンパ浮腫、川崎病、心筋炎、高血圧、高血圧による臓器障害、及び動脈硬化症。
（2）腎臓・水電解質系疾患：腎不全、及び腎炎。
（3）脳・神経疾患：脳梗塞、及び脳炎。
（4）泌尿生殖器疾患：勃起不全（ED）。
（5）消化器疾患：炎症性腸疾患、潰瘍性疾患、腸管ベーチェット、及び肝不全。
（6）整形外科疾患：関節炎。
（7）内分泌代謝疾患：糖尿病及び糖尿病による臓器障害。
（8）その他：敗血症性ショック、自己免疫疾患、多臓器不全、及び褥瘡。
　前記循環器疾患は、心筋梗塞、肺高血圧症又は心不全等であることが好ましい。前記消化器疾患は、ステロイド抵抗性又はステロイド依存性の炎症性腸疾患（例えば、潰瘍性大腸炎、クローン病又は腸管ベーチェット病）のような炎症性疾患であることが好ましい。
　本発明の式（I）で表される化合物は、天然の生理活性ペプチドであるアドレノメデュリンと修飾基とを連結した構造を有する。このため、本発明の式（I）で表される化合物は、安全で低毒性である。それ故、本発明の式（I）で表される化合物を有効成分として含有する医薬は、前記症状、疾患及び／又は障害の予防又は治療を必要とする様々な対象に適用することができる。前記対象は、ヒト又は非ヒト哺乳動物（例えば、ブタ、イヌ、ウシ、ラット、マウス、モルモット、ウサギ、ニワトリ、ヒツジ、ネコ、サル、マントヒヒ若しくはチンパンジー等の温血動物）の被験体又は患者であることが好ましい。前記対象に本発明の医薬を投与することにより、アドレノメデュリンによって予防又は治療される種々の症状、疾患及び／又は障害を予防又は治療することができる。
　本明細書において、「予防」は、症状、疾患及び／又は障害の発生（発症又は発現）を実質的に防止することを意味する。また、本明細書において、「治療」は、発生（発症又は発現）した症状、疾患及び／又は障害を抑制（例えば進行の抑制）、軽快、修復及び／又は治癒することを意味する。
　本発明の式（I）で表される化合物は、前記で説明した症状、疾患及び／又は障害（例えば、循環器疾患、末梢血管疾患又は炎症性疾患）を有する対象において、該症状、疾患及び／又は障害の予防又は治療に使用することができる。それ故、本発明の医薬は、前記で説明した症状、疾患及び／又は障害の予防又は治療に使用するための医薬であることが好ましく、循環器疾患、炎症性疾患又は末梢血管疾患の予防又は治療に使用するための医薬であることがより好ましい。また、本発明は、本発明の式（I）で表される化合物を有効成分として含有する、循環器疾患、炎症性疾患又は末梢血管疾患の予防又は治療剤に関する。本発明の式（I）で表される化合物を前記で説明した症状、疾患及び／又は障害の予防又は治療に使用することにより、該症状、疾患及び／又は障害を持続的に予防又は治療することができる。
　本発明の式（I）で表される化合物は、前記で説明した症状、疾患及び／又は障害（例えば、循環器疾患、末梢血管疾患又は炎症性疾患）を有する対象において、該症状、疾患及び／又は障害の予防又は治療に使用することができる。それ故、本発明の一実施形態は、前記で説明した症状、疾患及び／又は障害の予防又は治療を必要とする対象に、有効量の本発明の式（I）で表される化合物若しくはその製薬上許容される塩、又はそれらの製薬上許容される水和物を投与することを含む、前記疾患若しくは症状の予防又は治療方法である。前記症状、疾患及び／又は障害は、循環器疾患、末梢血管疾患又は炎症性疾患であることが好ましい。前記症状、疾患及び／又は障害の予防又は治療を必要とする対象に、本発明の式（I）で表される化合物を投与することにより、該症状、疾患及び／又は障害を予防又は治療することができる。
　本発明の他の一実施形態は、前記で説明した症状、疾患及び／又は障害の予防又は治療に使用するための、本発明の式（I）で表される化合物若しくはその製薬上許容される塩、又はそれらの製薬上許容される水和物である。本発明の別の実施形態は、前記で説明した症状、疾患及び／又は障害の予防又は治療に用いるための医薬の製造のための、本発明の式（I）で表される化合物若しくはその製薬上許容される塩、又はそれらの製薬上許容される水和物の使用である。前記症状、疾患及び／又は障害は、循環器疾患、炎症性疾患又は末梢血管疾患であることが好ましい。本発明の医薬を前記で説明した症状、疾患及び／又は障害の予防又は治療に使用することにより、該症状、疾患及び／又は障害を持続的に予防又は治療することができる。
　本発明の式（I）で表される化合物を有効成分として含有する医薬を、対象、特にヒト患者に投与する場合、正確な投与量及び投与回数は、対象の年齢、性別、予防又は治療されるべき症状、疾患及び／又は障害の正確な状態（例えば重症度）、並びに投与経路等の多くの要因を鑑みて、担当医が治療上有効な投与量及び投与回数を最終的に決定すべきである。それ故、本発明の医薬において、有効成分である式（I）で表される化合物は、治療上有効な量及び回数で、対象に投与される。例えば、本発明の医薬をヒト患者に投与する場合、有効成分である式（I）で表される化合物の投与量は、通常は、1日に体重60 kg当り0.01～100 mgの範囲であり、典型的には、1日に体重60 kg当り0.01～10 mgの範囲である。
　本発明の式（I）で表される化合物を有効成分として含有する医薬の投与経路及び投与回数は、特に限定されず、経口的に単回若しくは複数回投与されてもよく、非経口的に単回若しくは複数回投与されてもよい。本発明の医薬は、静脈投与、注腸投与、皮下投与、筋肉内投与又は腹腔内投与のような非経口的経路で投与されることが好ましく、静脈投与又は皮下投与されることがより好ましい。また、本発明の医薬は、単回投与されることが好ましい。本発明の医薬は、静脈又は皮下に単回投与するために使用されることが特に好ましい。本発明の式（I）で表される化合物の親分子であるアドレノメデュリンは、強力な血管拡張作用を有する。このため、治療上有効な量のアドレノメデュリンを単回投与する場合、強力な血管拡張作用により、過度の血圧低下、反射性の交感神経活性上昇に伴う頻脈、及び／又はレニン活性の上昇のような望ましくない副反応を引き起こす可能性がある。これに対し、本発明の式（I）で表される化合物は、天然型アドレノメデュリンと実質的に略同等のアドレノメデュリン活性を保持しつつ、天然型アドレノメデュリンと比較して、血中半減期を有意に延長し得る。それ故、本発明の式（I）で表される化合物を有効成分として含有する医薬を対象の静脈に単回投与することにより、アドレノメデュリンの血管拡張作用に起因する望ましくない副反応を抑制しつつ、対象の症状、疾患及び／又は障害を持続的に予防又は治療することができる。
＜3. アドレノメデュリン誘導体の製造方法＞
　本発明はまた、本発明の式（I）で表される化合物の製造方法に関する。
［3-1.前駆体準備工程］
　本発明の方法は、アドレノメデュリン又はその修飾体から誘導されるペプチド部分Bの前駆体、パルミトイル基及びポリエチレングリコール基からなる群より選択される修飾基Aの前駆体及び2価基Lnの前駆体の少なくともいずれかを準備する工程を含んでもよい。
　本発明において、「アドレノメデュリン又はその修飾体から誘導されるペプチド部分Bの前駆体」、「パルミトイル基及びポリエチレングリコール基からなる群より選択される修飾基Aの前駆体」及び「2価基Lnの前駆体」は、それぞれ、アドレノメデュリン又はその修飾体、パルミチン酸又はポリエチレングリコール、及びH-Ln-Hを意味するか、或いは、以下で説明する連結工程において、ペプチド部分B、修飾基A及び2価基Lnの一端又は両端が縮合反応によって互いに連結されるように、適宜改変又は活性化されたそれらの誘導体を意味する。ペプチド部分Bの前駆体は、アドレノメデュリン若しくはその修飾体自体、又はそれらの保護形態であることが好ましい。修飾基Aの前駆体は、パルミチン酸若しくはポリエチレングリコール自体、それらの活性化誘導体、又はそれらの保護形態であることが好ましい。修飾基Aがパルミトイル基である場合、例えば、パルミトイルクロライドのようなパルミチン酸の酸ハロゲン化物であることが好ましい。2価基Lnの前駆体は、2価基Lnの水素付加体H-Ln-H自体、その活性化誘導体、又はそれらの保護形態であることが好ましい。2価基Lnが1-オキソ-1,6-ヘキサンジイル（nが1）である場合、例えば、6-クロロヘキサン酸 N-ヒドロキシコハク酸イミドエステルのような活性エステルであることが好ましい。前記の前駆体が保護形態の場合、前記で説明した保護基を有することが好ましい。本工程において、前記の特徴を有する前駆体を準備することにより、以下で説明する連結工程における各前駆体の連結反応を高収率で実施することができる。
　本工程において、アドレノメデュリン又はその修飾体から誘導されるペプチド部分Bの前駆体は、当該技術分野で通常使用される手段により形成することができる。ペプチド部分Bの前駆体が、アドレノメデュリン又はその修飾体自体である場合、例えば、固相系又は液相系のペプチド合成法を用いてもよく、アドレノメデュリンを産生し得るヒト又は非ヒト哺乳動物の組織又は細胞から、天然ペプチドを精製する方法を用いてもよい。或いは、アドレノメデュリンを産生し得るヒト又は非ヒト哺乳動物におけるアドレノメデュリンをコードするDNA（例えば、配列番号2、4、6、8、10又は12）を使用して、大腸菌又は出芽酵母等の形質転換系で組換えタンパク質を大量発現させる方法を用いてもよい。或いは、予め製造されたペプチドを購入等して用いてもよい。いずれの場合も、本工程の実施形態に包含される。
　前記の手段によって形成されたペプチド部分Bの前駆体において、該アミノ酸配列中の2個のシステイン残基のチオール基をジスルフィド化することにより、該アミノ酸配列中の2個のシステイン残基がジスルフィド結合を形成している前駆体を得ることができる。また、前記の手段によって形成されたペプチド部分Bの前駆体において、該アミノ酸配列中の2個のシステイン残基の間で形成されたジスルフィド結合をエチレン基によって置換することにより、該ジスルフィド結合がエチレン基によって置換された前駆体を得ることができる。前記ジスルフィド化反応及びエチレン基による置換反応は、当該技術分野で通常使用される条件に基づき実施することができる。前記ジスルフィド化反応及びエチレン基による置換反応は、本工程において実施してもよく、以下で説明する連結工程において実施してもよい。いずれの場合も本発明の方法の実施形態に包含される。
　ペプチド部分Bの前駆体、修飾基Aの前駆体及び2価基Lnの前駆体の少なくともいずれかがそれらの保護形態である場合、本工程において、所望により、ペプチド部分Bの前駆体、修飾基Aの前駆体及び2価基Lnの前駆体の少なくともいずれかに1種以上の保護基を導入する保護工程、並びに／又は、ペプチド部分Bの前駆体、修飾基Aの前駆体及び2価基Lnの前駆体の保護形態の少なくともいずれかの1種以上の保護基を脱保護する脱保護工程を実施してもよい。前記保護工程及び脱保護工程は、当該技術分野で通常使用される保護化反応及び脱保護化反応によって実施することができる。前記保護工程及び脱保護工程は、本工程において実施してもよく、以下で説明する連結工程において実施してもよい。いずれの場合も本発明の方法の実施形態に包含される。
［3-2. 連結工程］
　本発明の方法は、アドレノメデュリン又はその修飾体から誘導されるペプチド部分Bの前駆体と、パルミトイル基及びポリエチレングリコール基からなる群より選択される修飾基Aの前駆体と、2価基Lnの前駆体とを連結させて、式（I）で表される化合物を得る、連結工程を含むことが必要である。
　式（I）において、nが0である場合、本工程は、ペプチド部分Bの前駆体と、修飾基Aの前駆体とを連結させることによって実施される。式（I）において、nが1である場合、本工程は、ペプチド部分Bの前駆体と、修飾基Aの前駆体と、2価基Lnの前駆体とを連結させることによって実施される。
　本工程において、ペプチド部分Bの前駆体と、修飾基Aの前駆体と、2価基Lnの前駆体とを連結する手段は特に限定されない。当該技術分野で通常使用される、酸ハロゲン化物（例えば酸クロライド）又は活性エステル（例えばN-ヒドロキシコハク酸イミドエステル）等を前駆体として用いるペプチド結合の形成反応を使用することができる。
　式（I）において、nが1である場合、ペプチド部分Bの前駆体と、修飾基Aの前駆体と、2価基Lnの前駆体とを連結する順序は特に限定されない。例えば、修飾基Aの前駆体と、2価基Lnの前駆体とをまず連結し、その後、該前駆体の連結体とペプチド部分Bの前駆体とをさらに連結させることができる。或いは、ペプチド部分Bの前駆体と、2価基Lnの前駆体とをまず連結し、その後、該前駆体の連結体と修飾基Aの前駆体とをさらに連結させることができる。いずれの場合も本発明の方法の実施形態に包含される。
　以下、実施例を用いて本発明をさらに具体的に説明する。但し、本発明の技術的範囲はこれら実施例に限定されるものではない。
＜I：化合物の調製＞
　下記のスキームに従い、アドレノメデュリン（AM）から誘導される基Bの前駆体を合成した。ヒトアドレノメデュリンの1～52アミノ酸残基に対応するペプチド（h.AM(1-52)）を、6個のセグメント（Seg-1～Seg-6）に分割した。各セグメントを合成した後、それぞれのセグメントを縮合して、基Bの前駆体ペプチドを合成した。その後、基Bの前駆体ペプチドに、パルミトイル基（Pal）又はポリエチレングリコール基（PEG）を連結して、アドレノメデュリン誘導体を合成した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000001
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000002
［I-1：セグメント1の合成］
　Boc-Gln-Gly-OPac
　Boc-Gly-OPac（88.0 g）を、トリフルオロ酢酸に溶解した。得られた溶液を、冷却下で10分間、その後、室温で50分間攪拌した。反応溶液から、トリフルオロ酢酸を減圧留去し、塩化水素のジオキサン溶液（5.5 mol/L）（65.5 mL）を添加した。得られた混合物に、ジエチルエーテルを加えた。析出した沈殿を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄した。得られた塩酸塩を、N,N-ジメチルホルムアミドに溶解した。得られた溶液に、Boc-Gln-OH（81.3 g）及び1-ヒドロキシベンゾトリアゾール（48.7 g）を添加した。この混合物に、冷却下で、1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド（65.9 mL）を滴下した。反応溶液を、室温で3時間攪拌した。N,N-ジメチルホルムアミドを減圧留去した。酢酸エチルを加えて、得られた溶液を希釈した。この溶液を、5％炭酸水素ナトリウム水溶液、0.5 N塩酸水及び飽和食塩水にて洗浄した。有機層を、MgSO4にて乾燥した後、酢酸エチルを減圧留去した。残渣にジエチルエーテルを加えた。析出した沈殿を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄した。得られた結晶を、クロロホルム/メタノール混合液に溶解した。溶媒を減圧留去した。ジエチルエーテルを加えた。析出した沈殿を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄した。前記操作により、56 gの目的物を得た。
　Boc-Phe-Gln-Gly-OPac
　Boc-Gln-Gly-OPac（54.8 g）を、トリフルオロ酢酸に溶解した。得られた溶液を、冷却下で10分間、その後、室温で50分間攪拌した。反応溶液から、トリフルオロ酢酸を減圧留去し、塩化水素のジオキサン溶液（5.5 mol/L)（28 mL）を添加した。得られた混合物に、ジエチルエーテルを加えた。析出した沈殿を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄した。得られた塩酸塩を、N,N-ジメチルホルムアミドに溶解した。得られた溶液に、Boc-Phe-OH（35.2 g）及び1-ヒドロキシベンゾトリアゾール（19.3 g）を添加した。この混合物に、冷却下で、1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（26.2 mL）を滴下した。反応溶液を、室温で4時間攪拌した。反応溶液に、水を加えた。析出した沈殿を濾取し、水及びジエチルエーテルで洗浄した。得られた結晶を、クロロホルム/メタノール混合液に溶解した。溶媒を減圧留去した。ジエチルエーテルを加えた。析出した沈殿を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄した。前記操作により、68.7 gの目的物を得た。
　Boc-Asn-Phe-Gln-Gly-OPac
　Boc-Phe-Gln-Gly-OPac（67.9 g）を、トリフルオロ酢酸に溶解した。得られた溶液を、冷却下で10分間、その後、室温で50分間攪拌した。反応溶液から、トリフルオロ酢酸を減圧留去し、塩化水素のジオキサン溶液（5.5 mol/L)（26 mL）を添加した。得られた混合物に、ジエチルエーテルを加えた。析出した沈殿を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄した。得られた塩酸塩を、N,N-ジメチルホルムアミドに溶解した。得られた溶液に、Boc-Asn-OH（30.5 g）及び1-ヒドロキシベンゾトリアゾール（19.4 g）を添加した。この混合物に、冷却下で、1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（21.8 mL）を滴下した。反応溶液を、室温で終夜攪拌した。反応溶液に、水を加えた。析出した沈殿を濾取し、水及びジエチルエーテルで洗浄した。得られた結晶を、N,N-ジメチルホルムアミドに溶解した。溶媒を減圧留去した。ジエチルエーテルを加えた。析出した沈殿を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄した。前記操作により、81 gの目的物を得た。
　Boc-Asn-Asn-Phe-Gln-Gly-OPac
　Boc-Asn-Phe-Gln-Gly-OPac（81 g）を、トリフルオロ酢酸に溶解した。得られた溶液を、冷却下で10分間、その後、室温で50分間攪拌した。反応溶液から、トリフルオロ酢酸を減圧留去し、塩化水素のジオキサン溶液（5.5 mol/L）（26 mL）を添加した。得られた混合物に、ジエチルエーテルを加えた。析出した沈殿を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄した。得られた塩酸塩を、N,N-ジメチルホルムアミド/1,3-ジメチル-2-イミダゾリジノン混合液に溶解した。得られた溶液に、Boc-Asn-OH（28.9 g）及び1-ヒドロキシベンゾトリアゾール（19.2 g）を添加した。この混合物に、冷却下で、1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（26.0 mL)を滴下した。反応溶液を、室温で終夜攪拌した。反応溶液に、水を加えた。析出した沈殿を濾取し、水、アセトニトリル及びジエチルエーテルで洗浄した。前記操作により、74 gの目的物を得た。
　Boc-Met-Asn-Asn-Phe-Gln-Gly-OPac
　Boc-Asn-Asn-Phe-Gln-Gly-OPac（50.0 g）を、トリフルオロ酢酸に溶解した。得られた溶液を、冷却下で10分間、その後、室温で50分間攪拌した。反応溶液から、トリフルオロ酢酸を減圧留去し、塩化水素のジオキサン溶液（5.5 mol/L）（13.7 mL）を添加した。得られた混合物に、ジエチルエーテルを加えた。析出した沈殿を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄した。得られた塩酸塩を、N,N-ジメチルホルムアミド/1-メチル-2-ピロリドン/1,3-ジメチル-2-イミダゾリジノン混合液に溶解した。得られた溶液に、Boc-Met-OH（16.4 g）及び1-ヒドロキシベンゾトリアゾール（9.4 g）を添加した。この混合物に、冷却下で、1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（12.6 mL）を滴下した。反応溶液を、室温で終夜攪拌した。反応溶液に、水を加えた。析出した沈殿を濾取し、水、アセトニトリル及びジエチルエーテルで洗浄した。前記操作により、54 gの目的物を得た。
　Boc-Ser(Bzl)-Met-Asn-Asn-Phe-Gln-Gly-OPac
　Boc-Met-Asn-Asn-Phe-Gln-Gly-OPac（53.0 g）を、トリフルオロ酢酸に溶解した。得られた溶液を、冷却下で10分間、その後、室温で50分間攪拌した。反応溶液から、トリフルオロ酢酸を減圧留去し、塩化水素のジオキサン溶液（5.5 mol/L）（12.5 mL）を添加した。得られた混合物に、ジエチルエーテルを加えた。析出した沈殿を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄した。得られた塩酸塩を、1-メチル-2-ピロリドン/1,3-ジメチル-2-イミダゾリジノン混合液に溶解した。得られた溶液に、Boc-Ser(Bzl)-OH（17.7 g)及び1-ヒドロキシベンゾトリアゾール（8.5 g)を添加した。この混合物に、冷却下で、1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（11.5 mL）を滴下した。反応溶液を、室温で終夜攪拌した。反応溶液に、水を加えた。析出した沈殿を濾取し、水、アセトニトリル及びジエチルエーテルで洗浄した。前記操作により、56.5 gの目的物を得た。
　Boc-Gln-Ser(Bzl)-Met-Asn-Asn-Phe-Gln-Gly-OPac
　Boc-Ser(Bzl)-Met-Asn-Asn-Phe-Gln-Gly-OPac（30.0 g）を、トリフルオロ酢酸に溶解した。得られた溶液を、冷却下で10分間、その後、室温で50分間攪拌した。反応溶液から、トリフルオロ酢酸を減圧留去し、塩化水素のジオキサン溶液（5.5 mol/L）（5.9 mL）を添加した。得られた混合物に、ジエチルエーテルを加えた。析出した沈殿を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄した。得られた塩酸塩を、ジメチルスルホキシド/1-メチル-2-ピロリドン/1,3-ジメチル-2-イミダゾリジノン混合液に溶解した。得られた溶液に、Boc-Gln-OH（7.3 g)及び1-ヒドロキシベンゾトリアゾール（5.5 g)を添加した。この混合物に、冷却下で、1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（7.5 mL）を滴下した。反応溶液を、室温で終夜攪拌した。反応溶液に、水を加えた。析出した沈殿を濾取し、水、アセトニトリル及びジエチルエーテルで洗浄した。前記操作により、24.0 gの目的物を得た。
　Boc-Arg(Tos)-Gln-Ser(Bzl)-Met-Asn-Asn-Phe-Gln-Gly-OPac
　Boc-Gln-Ser(Bzl)-Met-Asn-Asn-Phe-Gln-Gly-OPac（16.2 g）を、トリフルオロ酢酸に溶解した。得られた溶液を、冷却下で10分間、その後、室温で50分間攪拌した。反応溶液から、トリフルオロ酢酸を減圧留去し、塩化水素のジオキサン溶液（5.5 mol/L）（2.9 mL）を添加した。得られた混合物に、ジエチルエーテルを加えた。析出した沈殿を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄した。得られた塩酸塩を、ジメチルスルホキシド/1-メチル-2-ピロリドン混合液に溶解した。得られた溶液に、Boc-Arg(Tos)-OH（7.4 g)及び1-ヒドロキシベンゾトリアゾール（2.1 g)を添加した。この混合物に、冷却下で、1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（2.9 mL)を滴下した。反応溶液を、室温で終夜攪拌した。反応溶液に、水を加えた。析出した沈殿を濾取し、水、アセトニトリル及びジエチルエーテルで洗浄した。前記操作により、12.5 gの目的物を得た。
　Boc-Tyr(BrZ)-Arg(Tos)-Gln-Ser(Bzl)-Met-Asn-Asn-Phe-Gln-Gly-OPac
　Boc-Arg(Tos)-Gln-Ser(Bzl)-Met-Asn-Asn-Phe-Gln-Gly-OPac（12.5 g）を、トリフルオロ酢酸に溶解した。得られた溶液を、冷却下で10分間、その後、室温で50分間攪拌した。反応溶液から、トリフルオロ酢酸を減圧留去し、塩化水素のジオキサン溶液（5.5 mol/L）（1.7 mL）を添加した。得られた混合物に、ジエチルエーテルを加えた。析出した沈殿を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄した。得られた塩酸塩を、ジメチルスルホキシド/1-メチル-2-ピロリドン混合液に溶解した。得られた溶液に、Boc-Tyr(BrZ)-OH（4.4 g）及び1-ヒドロキシベンゾトリアゾール（1.5 g)を添加した。この混合物に、冷却下で、1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（1.7 mL)を滴下した。反応溶液を、室温で終夜攪拌した。反応溶液に、アセトニトリルを加えた。析出した沈殿を濾取し、アセトニトリル及びジエチルエーテルで洗浄した。前記操作により、11 gの目的物を得た。
　Boc-Tyr(BrZ)-Arg(Tos)-Gln-Ser(Bzl)-Met-Asn-Asn-Phe-Gln-Gly-OH　（セグメント1）
　Boc-Arg(Tos)-Gln-Ser(Bzl)-Met-Asn-Asn-Phe-Gln-Gly-OPac（6.0 g）を、ジメチルスルホキシドに溶解した。得られた溶液に、30℃でギ酸アンモニウム水溶液（10 mmol/L）（15.6 mL）、酢酸（18.7 mL）及び亜鉛末（10.2 g）を添加した。1時間後、反応溶液から亜鉛末を濾過して除き、ジメチルスルホキシドで洗浄した。反応溶液に、水を加えた。析出した沈殿を濾取し、水、アセトニトリル及びジエチルエーテルで洗浄した。前記操作により、5.5 gの目的物を得た。
［I-2：セグメント2の合成］
　Boc-Phe-Gly-OPac
　Boc-Gly-OPac（44 g）を、トリフルオロ酢酸に溶解した。得られた溶液を、冷却下で10分間、その後、室温で50分間攪拌した。反応溶液から、トリフルオロ酢酸を減圧留去し、塩化水素のジオキサン溶液（5.5 mol/L）（33 mL）を添加した。得られた混合物に、ジエチルエーテルを加えた。析出した沈殿を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄した。得られた塩酸塩を、塩化メチレンに溶解した。得られた溶液に、Boc-Phe-OH（36.6 g）を添加した。この混合物に、冷却下で、1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（27.5 mL）を滴下した。反応溶液を、室温で終夜攪拌した。反応溶液を、0.5 N塩酸水及び飽和食塩水にて洗浄した。有機層を、MgSO4にて乾燥した後、塩化メチレンを減圧留去した。残渣にジエチルエーテルを加えた。析出した沈殿を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄した。得られた結晶を、クロロホルムに溶解した。溶媒を減圧留去した。ジエチルエーテルを加えた。析出した沈殿を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄した。前記操作により、38 gの目的物を得た。
　Boc-Ser(Bzl)-Phe-Gly-OPac
　Boc-Phe-Gly-OPac（8.8 g）を、トリフルオロ酢酸に溶解した。得られた溶液を、冷却下で10分間、その後、室温で50分間攪拌した。反応溶液から、トリフルオロ酢酸を減圧留去し、塩化水素のジオキサン溶液（5.5 mol/L)（4.5 mL）を添加した。得られた混合物に、ジエチルエーテルを加えた。析出した沈殿を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄した。得られた塩酸塩を、N,N-ジメチルホルムアミドに溶解した。得られた溶液に、Boc-Ser(Bzl)-OH（6.2 g）及び1-ヒドロキシベンゾトリアゾール（2.8 g）を添加した。この混合物に、冷却下で、1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（3.8 mL)を滴下した。反応溶液を、室温で終夜攪拌した。反応溶液に、水を加えた。析出した沈殿を濾取し、水で洗浄した。得られた結晶を、クロロホルム/メタノール混合液に溶解した。溶媒を減圧留去した。ジエチルエーテルを加えた。析出した沈殿を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄した。前記操作により、11.5 gの目的物を得た。
　Boc-Arg(Tos)-Ser(Bzl)-Phe-Gly-OPac
　Boc-Ser(Bzl)-Phe-Gly-OPac（11.4 g）を、トリフルオロ酢酸に溶解した。得られた溶液を、冷却下で10分間、その後、室温で50分間攪拌した。反応溶液から、トリフルオロ酢酸を減圧留去し、塩化水素のジオキサン溶液（5.5 mol/L）（4.8 mL）を添加した。得られた混合物に、ジエチルエーテルを加えた。析出した沈殿を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄した。得られた塩酸塩を、N,N-ジメチルホルムアミドに溶解した。得られた溶液に、Boc-Arg(Tos)-OH（10 g）及び1-ヒドロキシベンゾトリアゾール（2.8 g）を添加した。この混合物に、冷却下で、1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（4 mL）を滴下した。反応溶液を、室温で終夜攪拌した。反応溶液を、酢酸エチルにて希釈し、5％炭酸水素ナトリウム水溶液、0.5 N塩酸水及び飽和食塩水にて洗浄した。有機層を、MgSO4にて乾燥した後、酢酸エチルを減圧留去した。残渣にジエチルエーテルを加えた。析出した沈殿を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄した。得られた結晶を、酢酸エチルに溶解した。溶媒を減圧留去した。ジエチルエーテルを加えた。析出した沈殿を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄した。前記操作により、15.8 gの目的物を得た。
　Boc-Leu-Arg(Tos)-Ser(Bzl)-Phe-Gly-OPac
　Boc-Arg(Tos)-Ser(Bzl)-Phe-Gly-OPac（15.7 g）を、トリフルオロ酢酸に溶解した。得られた溶液を、冷却下で10分間、その後、室温で50分間攪拌した。反応溶液から、トリフルオロ酢酸を減圧留去し、塩化水素のジオキサン溶液（5.5 mol/L）（4 mL）を添加した。得られた混合物に、ジエチルエーテルを加えた。析出した沈殿を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄した。得られた塩酸塩を、N,N-ジメチルホルムアミドに溶解した。得られた溶液に、Boc-Leu-OH・H2O（4.6 g）及び1-ヒドロキシベンゾトリアゾール（2.6 g）を添加した。この混合物に、冷却下で、1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（3.6 mL)を滴下した。反応溶液を、室温で4時間攪拌した。反応溶液に、水を加えた。析出した沈殿を濾取し、水で洗浄した。得られた結晶を、クロロホルム/メタノール混合液に溶解した。溶媒を減圧留去した。ジエチルエーテルを加えた。析出した沈殿を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄した。前記操作により、17.6 gの目的物を得た。
　Boc-Leu-Arg(Tos)-Ser(Bzl)-Phe-Gly-OH
　Boc-Leu-Arg(Tos)-Ser(Bzl)-Phe-Gly-OPac（17.6 g）を、酢酸に溶解した。得られた溶液に、40℃で亜鉛末（55.2 g）を添加した。2時間後、反応溶液から亜鉛末を濾過して除き、酢酸で洗浄した。酢酸を減圧留去した後、酢酸エチルにて溶液を希釈した。得られた溶液を、0.1 N塩酸水及び飽和食塩水にて洗浄した。有機層を、MgSO4にて乾燥した後、酢酸エチルを減圧留去した。残渣にジエチルエーテルを加えた。析出した沈殿を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄した。得られた結晶を、クロロホルムに溶解した。溶媒を減圧留去した。ジエチルエーテルを加えた。析出した沈殿を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄した。前記操作により、13.9 gの目的物を得た。
　Boc-Arg(Tos)-Phe-Gly-OPac
　Boc-Phe-Gly-OPac（8.8 g）を、トリフルオロ酢酸に溶解した。得られた溶液を、冷却下で10分間、その後、室温で50分間攪拌した。反応溶液から、トリフルオロ酢酸を減圧留去し、塩化水素のジオキサン溶液（5.5 mol/L）（4.0 mL）を添加した。得られた混合物に、ジエチルエーテルを加えた。析出した沈殿を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄した。得られた塩酸塩を、N,N-ジメチルホルムアミドに溶解した。得られた溶液に、Boc-Arg(Tos)-OH（10.3 g)及び1-ヒドロキシベンゾトリアゾール（2.8 g）を添加した。この混合物に、冷却下で、1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（3.8 mL）を滴下した。反応溶液を、室温で終夜攪拌した。酢酸エチルにて溶液を希釈した。得られた溶液を、5％炭酸水素ナトリウム水溶液、0.5 N塩酸水及び飽和食塩水にて洗浄した。有機層を、MgSO4にて乾燥した後、酢酸エチルを減圧留去した。残渣にジエチルエーテルを加えた。析出した沈殿を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄した。得られた結晶を、酢酸エチルに溶解した。溶媒を減圧留去した。ジエチルエーテルを加えた。析出した沈殿を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄した。前記操作により、14.7 gの目的物を得た。
　Boc-Cys(4-MeBzl)-Arg(Tos)-Phe-Gly-OPac
　Boc-Arg(Tos)-Phe-Gly-OPac（14.5 g）を、トリフルオロ酢酸に溶解した。得られた溶液を、冷却下で10分間、その後、室温で50分間攪拌した。反応溶液から、トリフルオロ酢酸を減圧留去し、塩化水素のジオキサン溶液（5.5 mol/L）（3.9 mL）を添加した。得られた混合物に、ジエチルエーテルを加えた。析出した沈殿を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄した。得られた塩酸塩を、N,N-ジメチルホルムアミドに溶解した。得られた溶液に、Boc-Cys(4-MeBzl)-OH（6.9 g）及び1-ヒドロキシベンゾトリアゾール（2.8 g）を添加した。この混合物に、冷却下で、1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（3.8 mL）を滴下した。反応溶液を、室温で3時間攪拌した。反応溶液に、水を加えた。析出した沈殿を濾取し、水及びn-ヘキサンで洗浄した。得られた結晶を、クロロホルム/メタノール混合液に溶解した。溶媒を減圧留去した。ジエチルエーテルを加えた。析出した沈殿を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄した。前記操作により、17.2 gの目的物を得た。
　Boc-Leu-Arg(Tos)-Ser(Bzl)-Phe-Gly-Cys(4-MeBzl)-Arg(Tos)-Phe-Gly-OPac
　Boc-Cys(4-MeBzl)-Arg(Tos)-Phe-Gly-OPac（9.1 g）を、トリフルオロ酢酸に溶解した。得られた溶液を、冷却下で10分間、その後、室温で50分間攪拌した。反応溶液から、トリフルオロ酢酸を減圧留去し、塩化水素のジオキサン溶液（5.5 mol/L）（1.9 mL）を添加した。得られた混合物に、ジエチルエーテルを加えた。析出した沈殿を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄した。得られた塩酸塩を、N,N-ジメチルホルムアミドに溶解した。得られた溶液に、Boc-Leu-Arg(Tos)-Ser(Bzl)-Phe-Gly-OH（9.2 g)及び1-ヒドロキシベンゾトリアゾール（1.4 g)を添加した。この混合物に、冷却下で、1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（1.8 mL)を滴下した。反応溶液を、室温で終夜攪拌した。反応溶液に、水を加えた。析出した沈殿を濾取し、水及びジエチルエーテルで洗浄した。得られた結晶を、N,N-ジメチルホルムアミドに溶解した。溶媒を減圧留去した。アセトニトリルを加えた。析出した沈殿を濾取し、アセトニトリル及びジエチルエーテルで洗浄した。前記操作により、16.2 gの目的物を得た。
　Boc-Leu-Arg(Tos)-Ser(Bzl)-Phe-Gly-Cys(4-MeBzl)-Arg(Tos)-Phe-Gly-OH　（セグメント2）
　Boc-Leu-Arg(Tos)-Ser(Bzl)-Phe-Gly-Cys(4-MeBzl)-Arg(Tos)-Phe-Gly-OPac（7.1 g）を、1-メチル-2-ピロリドン/N,N-ジメチルホルムアミド混合液に溶解した。得られた溶液に、40℃でギ酸アンモニウム水溶液（10 mmol/L）（12 mL）、酢酸（7.2 mL）及び亜鉛末（7.8 g）を添加した。１時間後、反応溶液から亜鉛末を濾過して除き、N,N-ジメチルホルムアミドで洗浄した。N,N-ジメチルホルムアミドを減圧留去し、残渣に水を加えた。析出した沈殿を濾取し、水及びジエチルエーテルで洗浄した。得られた結晶を、N,N-ジメチルホルムアミドに溶解した。溶媒を減圧留去した。ジエチルエーテルを加えた。析出した沈殿を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄した。前記操作により、6 gの目的物を得た。
［I-3：セグメント3の合成］
　Boc-Leu-Ala-OPac
　Boc-Ala-OPac（33.8 g）を、トリフルオロ酢酸に溶解した。得られた溶液を、冷却下で10分間、その後、室温で50分間攪拌した。反応溶液から、トリフルオロ酢酸を減圧留去し、塩化水素のジオキサン溶液（5.5 mol/L）（25 mL）を添加した。得られた混合物に、ジエチルエーテルを加えた。析出した沈殿を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄した。得られた塩酸塩を、塩化メチレンに溶解した。得られた溶液に、Boc-Leu-OH・H2O（24.9 g）を添加した。この混合物に、冷却下で、1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（19.2 mL）を滴下した。反応溶液を、室温で3時間攪拌した。反応溶液を、0.5 N塩酸水及び飽和食塩水にて洗浄した。塩化メチレンを減圧留去し、残渣にジエチルエーテルを加えた。析出した沈殿を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄した。得られた結晶を、クロロホルムに溶解した。溶媒を減圧留去した。ジエチルエーテルを加えた。析出した沈殿を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄した。前記操作により、30.1 gの目的物を得た。
　Boc-Lys(ClZ)-Leu-Ala-OPac
　Boc-Leu-Ala-OPac（29.4 g）を、トリフルオロ酢酸に溶解した。得られた溶液を、冷却下で10分間、その後、室温で50分間攪拌した。反応溶液から、トリフルオロ酢酸を減圧留去し、塩化水素のジオキサン溶液（5.5 mol/L)（16.5 mL）を添加した。得られた混合物に、ジイソプロピルエーテルを加えた。析出した沈殿を濾取し、ジイソプロピルエーテルで洗浄した。得られた塩酸塩を、N,N-ジメチルホルムアミドに溶解した。得られた溶液に、Boc-Lys(ClZ)-OH（30.5 g）及び1-ヒドロキシベンゾトリアゾール（10.2 g）を添加した。この混合物に、冷却下で、1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（13.8 mL）を滴下した。反応溶液を、室温で3時間攪拌した。酢酸エチルにて溶液を希釈した。この溶液を、0.5 N塩酸水及び飽和食塩水にて洗浄した。酢酸エチルを減圧留去し、残渣にジエチルエーテルを加えた。析出した沈殿を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄した。得られた結晶を、クロロホルム/メタノール混合液に溶解した。溶媒を減圧留去した。ジエチルエーテルを加えた。析出した沈殿を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄した。前記操作により、47.5 gの目的物を得た。
　Boc-Gln-Lys(ClZ)-Leu-Ala-OPac
　Boc-Lys(ClZ)-Leu-Ala-OPac（47.3 g）を、トリフルオロ酢酸に溶解した。得られた溶液を、冷却下で10分間、その後、室温で50分間攪拌した。反応溶液から、トリフルオロ酢酸を減圧留去し、塩化水素のジオキサン溶液（5.5 mol/L）（15.6mL）を添加した。得られた混合物に、ジエチルエーテルを加えた。析出した沈殿を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄した。得られた塩酸塩を、N,N-ジメチルホルムアミドに溶解した。得られた溶液に、Boc-Gln-OH（17.6 g）及び1-ヒドロキシベンゾトリアゾール（9.8 g）を添加した。この混合物に、冷却下で、1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（13.3 mL)を滴下した。反応溶液を、室温で4時間攪拌した。反応溶液に、水を加えた。析出した沈殿を濾取し、水、メタノール及びジエチルエーテルで洗浄した。前記操作により、54.5 gの目的物を得た。
　Boc-Val-Gln-Lys(ClZ)-Leu-Ala-OPac
　Boc-Gln-Lys(ClZ)-Leu-Ala-OPac（54.1 g）を、トリフルオロ酢酸に溶解した。得られた溶液を、冷却下で10分間、その後、室温で50分間攪拌した。反応溶液から、トリフルオロ酢酸を減圧留去し、塩化水素のジオキサン溶液（5.5 mol/L）（15 mL）を添加した。得られた混合物に、ジエチルエーテルを加えた。析出した沈殿を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄した。得られた塩酸塩を、N,N-ジメチルホルムアミドに溶解した。得られた溶液に、Boc-Val-OH（14.6 g）及び1-ヒドロキシベンゾトリアゾール（9.1 g）を添加した。この混合物に、冷却下で、1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（13.3 mL)を滴下した。反応溶液を、室温で4時間攪拌した。反応溶液に、水を加えた。析出した沈殿を濾取し、水、メタノール及びジエチルエーテルで洗浄した。前記操作により、59.2 gの目的物を得た。
　Boc-Thr(Bzl)-Val-Gln-Lys(ClZ)-Leu-Ala-OPac
　Boc-Val-Gln-Lys(ClZ)-Leu-Ala-OPac（58.6 g）を、トリフルオロ酢酸に溶解した。得られた溶液を、冷却下で10分間、その後、室温で50分間攪拌した。反応溶液から、トリフルオロ酢酸を減圧留去し、塩化水素のジオキサン溶液（5.5 mol/L）（15 mL）を添加した。得られた混合物に、ジエチルエーテルを加えた。析出した沈殿を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄した。得られた塩酸塩を、N,N-ジメチルホルムアミドに溶解した。得られた溶液に、Boc-Thr(Bzl)-OH（14.6 g）及び1-ヒドロキシベンゾトリアゾール（8.8 gを添加した。この混合物に、冷却下で、1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（11.9 mL）を滴下した。反応溶液を、室温で4時間攪拌した。反応溶液に、水を加えた。析出した沈殿を濾取し、水、メタノール、ジエチルエーテル、アセトニトリル及びジエチルエーテルで洗浄した。前記操作により、70.2 gの目的物を得た。
　Boc-Cys(4-MeBzl)-Thr(Bzl)-Val-Gln-Lys(ClZ)-Leu-Ala-OPac
　Boc-Thr(Bzl)-Val-Gln-Lys(ClZ)-Leu-Ala-OPac（34.1 g）を、トリフルオロ酢酸に溶解した。得られた溶液を、冷却下で10分間、その後、室温で50分間攪拌した。反応溶液から、トリフルオロ酢酸を減圧留去し、塩化水素のジオキサン溶液（5.5 mol/L）（7.1 mL）を添加した。得られた混合物に、ジエチルエーテルを加えた。析出した沈殿を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄した。得られた塩酸塩を、1-メチル-2-ピロリドンに溶解した。得られた溶液に、Boc-Cys(4-MeBzl)-OH（10.5 g）、1-ヒドロキシベンゾトリアゾール（4.5 g）を添加した。この混合物に、冷却下で、1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（6.0 mL）を滴下した。反応溶液を、室温で4時間攪拌した。反応溶液に、水を加えた。析出した沈殿を濾取し、水、メタノール、ジエチルエーテル、アセトニトリル及びジエチルエーテルで洗浄した。前記操作により、38.4 gの目的物を得た。
　Boc-Thr(Bzl)-Cys(4-MeBzl)-Thr(Bzl)-Val-Gln-Lys(ClZ)-Leu-Ala-OPac
　Boc-Cys(4-MeBzl)-Thr(Bzl)-Val-Gln-Lys(ClZ)-Leu-Ala-OPac（37.6 g）を、トリフルオロ酢酸に溶解した。得られた溶液を、冷却下で10分間、その後、室温で50分間攪拌した。反応溶液から、トリフルオロ酢酸を減圧留去し、塩化水素のジオキサン溶液（5.5 mol/L）（6.5 mL）を添加した。得られた混合物に、ジエチルエーテルを加えた。析出した沈殿を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄した。得られた塩酸塩を、ジメチルスルホキシド/1-メチル-2-ピロリドン/1,3-ジメチル-2-イミダゾリジノン混合液に溶解した。得られた溶液に、Boc-Thr(Bzl)-OH（9.3 g）及び1-ヒドロキシベンゾトリアゾール（4.2 g）を添加した。この混合物に、冷却下で、1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（5.6 mL）を滴下した。反応溶液を、室温で4時間攪拌した。反応溶液に、水を加えた。析出した沈殿を濾取し、水、メタノール、ジエチルエーテル、アセトニトリル及びジエチルエーテルで洗浄した。残渣を、クロロホルム/2,2,2-トリフルオロエタノール混合液に溶解した。溶媒を減圧留去した。ジエチルエーテルを加えた。析出した沈殿を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄した。前記操作により、42.0 gの目的物を得た。
　Boc-Thr(Bzl)-Cys(4-MeBzl)-Thr(Bzl)-Val-Gln-Lys(ClZ)-Leu-Ala-OH　（セグメント3）
　Boc-Thr(Bzl)-Cys(4-MeBzl)-Thr(Bzl)-Val-Gln-Lys(ClZ)-Leu-Ala-OPac （15.3 g）を、塩化メチレン/2,2,2-トリフルオロエタノール混合液に溶解した。得られた溶液に、30℃でギ酸アンモニウム水溶液（10 mmol/L）（10 mL）、酢酸（6 mL）及び亜鉛末（32 g）を添加した。30分後、反応溶液から亜鉛末を濾過して除き、塩化メチレン/2,2,2-トリフルオロエタノール混合液で洗浄した。溶媒を減圧留去し、残渣に塩酸水を加えた。析出した沈殿を濾取し、水、ジエチルエーテルで洗浄した。得られた結晶を、N,N-ジメチルホルムアミドに溶解した。溶媒を減圧留去した。ジエチルエーテルを加えた。析出した沈殿を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄した。前記操作により、14.1 gの目的物を得た。
［I-4：セグメント4の合成］
　Boc-Tyr(BrZ)-Gln-OPac
　Boc-Gln-OPac （36.5 g）を、トリフルオロ酢酸に溶解した。得られた溶液を、冷却下で10分間、その後、室温で50分間攪拌した。反応溶液から、トリフルオロ酢酸を減圧留去し、塩化水素のジオキサン溶液（5.5 mol/L）（20 mL）を添加した。得られた混合物に、ジエチルエーテルを加えた。析出した沈殿を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄した。得られた塩酸塩を、N,N-ジメチルホルムアミドに添加した。得られた混合物に、Boc-Tyr(BrZ)-OH（54 g）及び1-ヒドロキシベンゾトリアゾール（14.8 g）を添加した。この混合物に、冷却下で、1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（20 mL）を滴下した。反応溶液を、室温で終夜攪拌した。酢酸エチルにて反応溶液を希釈した。この溶液を、5％炭酸水素ナトリウム水溶液、0.5 N塩酸水及び飽和食塩水にて洗浄した。有機層を、MgSO4にて乾燥した後、酢酸エチルを減圧留去した。残渣にジエチルエーテルを加えた。析出した沈殿を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄した。得られた結晶を、酢酸エチル/メタノール混合液に添加した。溶媒を減圧留去した。ジエチルエーテルを加えた。析出した沈殿を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄した。前記操作により、29.8 gの目的物を得た。
　Boc-Ile-Tyr(BrZ)-Gln-OPac
　Boc-Tyr(BrZ)-Gln-OPac （29 g）を、トリフルオロ酢酸に溶解した。得られた溶液を、冷却下で10分間、その後、室温で50分間攪拌した。反応溶液から、トリフルオロ酢酸を減圧留去し、塩化水素のジオキサン溶液（5.5 mol/L）（9 mL）を添加した。得られた混合物に、ジエチルエーテルを加えた。析出した沈殿を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄した。得られた塩酸塩を、N,N-ジメチルホルムアミドに添加した。この混合物に、Boc-Ile-OH・1/2 H2O （10.5 g）及び1-ヒドロキシベンゾトリアゾール（5.9 g）を添加した。この混合物に、冷却下で、1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（8 mL）を滴下した。反応溶液を、室温で終夜攪拌した。反応溶液に、アセトニトリルを加えた。析出した沈殿を濾取し、アセトニトリル及びジエチルエーテルで洗浄した。前記操作により、32.0 gの目的物を得た。
　Boc-Gln-Ile-Tyr(BrZ)-Gln-OPac
　Boc-Ile-Tyr(BrZ)-Gln-OPac （25.5 g）を、トリフルオロ酢酸に溶解した。得られた溶液を、冷却下で10分間、その後、室温で50分間攪拌した。反応溶液から、トリフルオロ酢酸を減圧留去し、塩化水素のジオキサン溶液（5.5 mol/L）（7 mL）を添加した。得られた混合物に、ジエチルエーテルを加えた。析出した沈殿を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄した。得られた塩酸塩を、N,N-ジメチルホルムアミドに添加した。得られた溶液に、Boc-Gln-OH（7.7 g）及び1-ヒドロキシベンゾトリアゾール（4.5 g）を添加した。この混合物に、冷却下で、1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（6 mL）を滴下した。反応溶液を、室温で終夜攪拌した。反応溶液に、アセトニトリルを加えた。析出した沈殿を濾取し、アセトニトリル及びジエチルエーテルで洗浄した。前記操作により、27.3 ｇの目的物を得た。
　Boc-His-Gln-Ile-Tyr(BrZ)-Gln-OPac
　Boc-Gln-Ile-Tyr(BrZ)-Gln-OPac（19.6 g）を、トリフルオロ酢酸に溶解した。得られた溶液を、冷却下で10分間、その後、室温で50分間攪拌した。反応溶液から、トリフルオロ酢酸を減圧留去し、塩化水素のジオキサン溶液（5.5 mol/L）（5 mL）を添加した。得られた混合物に、ジエチルエーテルを加えた。析出した沈殿を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄した。得られた塩酸塩を、N,N-ジメチルホルムアミドに添加した。得られた溶液に、Boc-His(Tos)-OH（9.0 g）及び1-ヒドロキシベンゾトリアゾール（3.0 g）を添加した。この混合物に、冷却下で、1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（4 mL）を滴下した。反応溶液を、室温で終夜攪拌した。反応溶液に、アセトニトリルを加えた。析出した沈殿を濾取し、アセトニトリル及びジエチルエーテルで洗浄した。前記操作により、18.3 gの目的物を得た。
　Boc-His-Gln-Ile-Tyr(BrZ)-Gln-OH　（セグメント4）
　Boc-His-Gln-Ile-Tyr(BrZ)-Gly-OPac （15.0 g）を、塩化メチレン/2,2,2-トリフルオロエタノール/酢酸混合液に溶解した。得られた溶液に、40℃で亜鉛末（43.9 g）を添加した。30分後、反応溶液から亜鉛末を濾過して除き、塩化メチレン/2,2,2-トリフルオロエタノール混合液で洗浄した。溶媒を減圧留去し、残渣に水を加えた。析出した沈殿を濾取し、水、塩酸水、水、ジエチルエーテル、アセトニトリル及びジエチルエーテルで洗浄した。得られた結晶を、N,N-ジメチルホルムアミドに溶解した。溶媒を減圧留去した。ジエチルエーテルを加えた。析出した沈殿を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄した。前記操作により、9.5 gの目的物を得た。
［I-5：セグメント5の合成］
　Boc-Ala-Pro-OPac
　Boc-Ala-OH（95 g）、Pro-OBzl・HCl（127 g）及び1-ヒドロキシベンゾトリアゾール（7 g）を塩化メチレンに添加した。得られた溶液に、冷却下で、1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（96 mL)を滴下した。反応溶液を、室温で終夜攪拌した。塩化メチレンを減圧留去し、残渣を酢酸エチルにて希釈した。有機層を、5％炭酸水素ナトリウム水溶液、0.5 N塩酸水及び飽和食塩水にて洗浄した。酢酸エチルを減圧留去し、残渣にn-ヘキサンを加えた。析出した沈殿を濾取し、n-ヘキサンで洗浄した。前記操作により、158 ｇの結晶を得た。27.1 gの前記結晶をメタノールに溶解した。得られた溶液に、5% Pd-C（5 g）を添加した。反応溶液に水素ガスを添加した。反応終了後、5% Pd-Cを濾過して除いた。メタノールを減圧留去した。ジエチルエーテルを加えた。析出した沈殿を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄した。前記操作により、19.7 ｇの結晶を得た。19.7 gの前記結晶をN,N-ジメチルホルムアミドに溶解した。得られた溶液に、フェナシルブロマイド（14.4 g）及びトリエチルアミン（10.1 mL）を添加した。反応溶液を、1時間撹拌した。反応溶液を、酢酸エチルにて希釈した。得られた溶液を、5％炭酸水素ナトリウム水溶液、0.5 N塩酸水及び飽和食塩水にて洗浄した。有機層を、MgSO4にて乾燥した後、酢酸エチルを減圧留去した。n-ヘキサンを加えた。析出した沈殿を濾取し、n-ヘキサンで洗浄した。前記操作により、25.2 gの目的物を得た。
　Boc-Val-Ala-Pro-OPac
　Boc-Ala-Pro-OPac（25.8 g）を、トリフルオロ酢酸に溶解した。得られた溶液を、冷却下で10分間、その後、室温で50分間攪拌した。反応溶液から、トリフルオロ酢酸を減圧留去し、塩化水素のジオキサン溶液（5.5 mol/L）（14.7 mL）を添加した。得られた混合物に、ジエチルエーテルを加えた。析出した沈殿を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄した。得られた塩酸塩を、N,N-ジメチルホルムアミドに添加した。得られた溶液に、Boc-Val-OH（14.5 g）及び1-ヒドロキシベンゾトリアゾール（9.5 g）を添加した。この混合物に、冷却下で、1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（12.8 mL）を滴下した。反応溶液を、室温で終夜攪拌した。酢酸エチルにて反応溶液を希釈した。得られた溶液を、5％炭酸水素ナトリウム水溶液、0.5 N塩酸水及び飽和食塩水にて洗浄した。有機層を、MgSO4にて乾燥した後、酢酸エチルを減圧留去した。残渣にn-ヘキサンを加えた。析出した沈殿を濾取し、n-ヘキサンで洗浄した。得られた結晶を、酢酸エチルに溶解した。溶媒を減圧留去した。ジエチルエーテルを加えた。析出した沈殿を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄した。前記操作により、24.4 gの目的物を得た。
　Boc-Asn-Val-Ala-Pro-OPac
　Boc-Val-Ala-Pro-OPac（24.4 g）を、トリフルオロ酢酸に溶解した。得られた溶液を、冷却下で10分間、その後、室温で50分間攪拌した。反応溶液から、トリフルオロ酢酸を減圧留去し、塩化水素のジオキサン溶液（5.5 mol/L）（11.2 mL）を添加した。得られた混合物に、ジエチルエーテルを加えた。析出した沈殿を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄した。得られた塩酸塩を、N,N-ジメチルホルムアミドに添加した。得られた溶液に、Boc-Asn-OH（11.8 g）及び1-ヒドロキシベンゾトリアゾール（7.2 g）を添加した。この混合物に、冷却下で、1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（9.8 mL）を滴下した。反応溶液を、室温で終夜攪拌した。酢酸エチルにて反応溶液を希釈した。得られた溶液を、5％炭酸水素ナトリウム水溶液、0.5 N塩酸水及び飽和食塩水にて洗浄した。有機層を、MgSO4にて乾燥した後、酢酸エチルを減圧留去した。残渣にジエチルエーテルを加えた。析出した沈殿を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄した。得られた結晶を、クロロホルムに溶解した。溶媒を減圧留去した。ジエチルエーテルを加えた。析出した沈殿を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄した。前記操作により、26.5 gの目的物を得た。
　Boc-Asp(OcHex)-Asn-Val-Ala-Pro-OPac
　Boc-Asn-Val-Ala-Pro-OPac（26.5 g）を、トリフルオロ酢酸に溶解した。得られた溶液を、冷却下で10分間、その後、室温で50分間攪拌した。反応溶液から、トリフルオロ酢酸を減圧留去し、塩化水素のジオキサン溶液（5.5 mol/L）（10 mL）を添加した。得られた混合物に、ジエチルエーテルを加えた。析出した沈殿を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄した。得られた塩酸塩を、N,N-ジメチルホルムアミドに添加した。得られた溶液に、Boc-Asp(OcHex)-OH（14.2 g）及び1-ヒドロキシベンゾトリアゾール（6.4 g）を添加した。この混合物に、冷却下で、1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（8.6 mL）を滴下した。反応溶液を、室温で終夜攪拌した。酢酸エチルにて反応溶液を希釈した。得られた溶液を、5％炭酸水素ナトリウム水溶液、0.5 N塩酸水及び飽和食塩水にて洗浄した。有機層を、MgSO4にて乾燥した後、酢酸エチルを減圧留去した。残渣にジエチルエーテルを加えた。析出した沈殿を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄した。前記操作により、33.8 gの目的物を得た。
　Boc-Lys(ClZ)-Asp(OcHex)-Asn-Val-Ala-Pro-OPac
　Boc-Asp(OcHex)-Asn-Val-Ala-Pro-OPac（33.8 g）を、トリフルオロ酢酸に溶解した。得られた溶液を、冷却下で10分間、その後、室温で50分間攪拌した。反応溶液から、トリフルオロ酢酸を減圧留去し、塩化水素のジオキサン溶液（5.5 mol/L）（9.6 mL）を添加した。得られた混合物に、ジエチルエーテルを加えた。析出した沈殿を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄した。得られた塩酸塩を、N,N-ジメチルホルムアミドに添加した。得られた溶液に、Boc-Lys(ClZ)-OH（18.0 g）及び1-ヒドロキシベンゾトリアゾール（6.2 g）を添加した。この混合物に、冷却下で、1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（8.4 mL）を滴下した。反応溶液を、室温で終夜攪拌した。酢酸エチルにて反応溶液を希釈した。得られた溶液を、5％炭酸水素ナトリウム水溶液、0.5 N塩酸水及び飽和食塩水にて洗浄した。有機層を、MgSO4にて乾燥した後、酢酸エチルを減圧留去した。残渣にジエチルエーテルを加えた。析出した沈殿を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄した。得られた結晶を、クロロホルムに溶解した。溶媒を減圧留去した。ジエチルエーテルを加えた。析出した沈殿を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄した。前記操作により、46.0 gの目的物を得た。
　Boc-Asp(OcHex)-Lys(ClZ)-Asp(OcHex)-Asn-Val-Ala-Pro-OPac
　Boc-Lys(ClZ)-Asp(OcHex)-Asn-Val-Ala-Pro-OPac（45.8 g）を、トリフルオロ酢酸に溶解した。得られた溶液を、冷却下で10分間、その後、室温で50分間攪拌した。反応溶液から、トリフルオロ酢酸を減圧留去し、塩化水素のジオキサン溶液（5.5 mol/L）（9.5 mL）を添加した。得られた混合物に、ジエチルエーテルを加えた。析出した沈殿を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄した。得られた塩酸塩を、1-メチル-2-ピロリドン/N,N-ジメチルホルムアミド混合液に溶解した。得られた溶液に、Boc-Asp(OcHex)-OH（12.2 g)及び1-ヒドロキシベンゾトリアゾール（5.5 g)を添加した。この混合物に、冷却下で、1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（7.4 mL）を滴下した。反応溶液を、室温で終夜攪拌した。反応溶液に水を加えた。析出した沈殿を濾取し、水で洗浄した。残渣をクロロホルムに溶解し、溶媒を減圧留去した。残渣にジエチルエーテルを加えた。析出した沈殿を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄した。前記操作により、50.3 gの目的物を得た。
　Boc-Lys(ClZ)-Asp(OcHex)-Lys(ClZ)-Asp(OcHex)-Asn-Val-Ala-Pro-OPac
　Boc-Asp(OcHex)-Lys(ClZ)-Asp(OcHex)-Asn-Val-Ala-Pro-OPac（23.6 g）を、トリフルオロ酢酸に溶解した。得られた溶液を、冷却下で10分間、その後、室温で50分間攪拌した。反応溶液から、トリフルオロ酢酸を減圧留去し、塩化水素のジオキサン溶液（5.5 mol/L）（4.2 mL）を添加した。得られた混合物に、ジエチルエーテルを加えた。析出した沈殿を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄した。得られた塩酸塩を、1-メチル-2-ピロリドン/N,N-ジメチルホルムアミド混合液に溶解した。得られた溶液に、Boc-Lys(ClZ)-OH（7.4 g）及び1-ヒドロキシベンゾトリアゾール（2.5 g）を添加した。この混合物に、冷却下で、1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（3.4 mL）を滴下した。反応溶液を、室温で終夜攪拌した。反応溶液に水を加えた。析出した沈殿を濾取し、水及びジエチルエーテルで洗浄した。残渣をクロロホルム/メタノール混合液に溶解し、溶媒を減圧留去した。残渣にジエチルエーテルを加えた。析出した沈殿を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄した。前記操作により、24.2 gの目的物を得た。
　Boc-Asp(OcHex)-Lys(ClZ)-Asp(OcHex)-Lys(ClZ)-Asp(OcHex)-Asn-Val-Ala-Pro-OPac
　Boc-Lys(ClZ)-Asp(OcHex)-Lys(ClZ)-Asp(OcHex)-Asn-Val-Ala-Pro-OPac（24.0 g）を、トリフルオロ酢酸に溶解した。得られた溶液を、冷却下で10分間、その後、室温で50分間攪拌した。反応溶液から、トリフルオロ酢酸を減圧留去し、塩化水素のジオキサン溶液（5.5 mol/L)（3.4 mL）を添加した。得られた混合物に、ジエチルエーテルを加えた。析出した沈殿を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄した。得られた塩酸塩を、1-メチル-2-ピロリドン/N,N-ジメチルホルムアミド混合液に溶解した。得られた溶液に、Boc-Asp(OcHex)-OH（4.9 g）及び1-ヒドロキシベンゾトリアゾール（2.2 g)を添加した。この混合物に、冷却下で、1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（3.0 mL）を滴下した。反応溶液を、室温で終夜攪拌した。反応溶液に水を加えた。析出した沈殿を濾取し、水及びジエチルエーテルで洗浄した。残渣をクロロホルム/2,2,2-トリフルオロエタノール混合液に溶解し、溶媒を減圧留去した。残渣にジエチルエーテルを加えた。析出した沈殿を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄した。前記操作により、27.1 gの目的物を得た。
　Boc-Thr(Bzl)-Asp(OcHex)-Lys(ClZ)-Asp(OcHex)-Lys(ClZ)-Asp(OcHex)-Asn-Val-Ala-Pro-OPac
　Boc-Asp(OcHex)-Lys(ClZ)-Asp(OcHex)-Lys(ClZ)-Asp(OcHex)-Asn-Val-Ala-Pro-OPac（27.1 g）を、トリフルオロ酢酸に溶解した。得られた溶液を、冷却下で10分間、その後、室温で50分間攪拌した。反応溶液から、トリフルオロ酢酸を減圧留去し、塩化水素のジオキサン溶液（5.5 mol/L)（3.4 mL）を添加した。得られた混合物に、ジエチルエーテルを加えた。析出した沈殿を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄した。得られた塩酸塩を、1-メチル-2-ピロリドン/N,N-ジメチルホルムアミド混合液に溶解した。得られた溶液に、Boc-Thr(Bzl)-OH（4.6 g）及び1-ヒドロキシベンゾトリアゾール（2.1 g）を添加した。この混合物に、冷却下で、1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（2.9 mL）を滴下した。反応溶液を、室温で終夜攪拌した。反応溶液に水を加えた。析出した沈殿を濾取し、水及びジエチルエーテルで洗浄した。残渣をクロロホルム/2,2,2-トリフルオロエタノール混合液に溶解し、溶媒を減圧留去した。残渣にジエチルエーテルを加えた。析出した沈殿を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄した。前記操作により、26.0 gの目的物を得た。
　Boc-Phe-Thr(Bzl)-Asp(OcHex)-Lys(ClZ)-Asp(OcHex)-Lys(ClZ)-Asp(OcHex)-Asn-Val-Ala-Pro-OPac
　Boc-Thr(Bzl)-Asp(OcHex)-Lys(ClZ)-Asp(OcHex)-Lys(ClZ)-Asp(OcHex)-Asn-Val-Ala-Pro-OPac（24.0 g）を、トリフルオロ酢酸に溶解した。得られた溶液を、冷却下で10分間、その後、室温で50分間攪拌した。反応溶液から、トリフルオロ酢酸を減圧留去し、塩化水素のジオキサン溶液（5.5 mol/L）（2.8 mL）を添加した。得られた混合物に、ジエチルエーテルを加えた。析出した沈殿を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄した。得られた塩酸塩を、1-メチル-2-ピロリドン/N,N-ジメチルホルムアミド混合液に溶解した。得られた溶液に、Boc-Phe-OH（3.4 g）及び1-ヒドロキシベンゾトリアゾール（1.8 g）を添加した。この混合物に、冷却下で、1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（2.4 mL）を滴下した。反応溶液を、室温で終夜攪拌した。反応溶液に水を加えた。析出した沈殿を濾取し、水及びジエチルエーテルで洗浄した。残渣をN,N-ジメチルホルムアミド混合液に溶解した。得られた溶液に、アセトニトリルを加えた。析出した沈殿を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄した。前記操作により、24.3 gの目的物を得た。
　Boc-Phe-Thr(Bzl)-Asp(OcHex)-Lys(ClZ)-Asp(OcHex)-Lys(ClZ)-Asp(OcHex)-Asn-Val-Ala-Pro-OH　（セグメント5）
　Boc-Phe-Thr(Bzl)-Asp(OcHex)-Lys(ClZ)-Asp(OcHex)-Lys(ClZ)-Asp(OcHex)-Asn-Val-Ala-Pro-OPac（24.3 g）を、酢酸に溶解した。得られた溶液に、40℃で亜鉛末（36.9 g）を添加した。2時間後、反応溶液から亜鉛末を濾過して除き、酢酸で洗浄した。酢酸を減圧留去し、残渣に水を加えた。析出した沈殿を濾取し、水及びジエチルエーテルで洗浄した。残渣をN,N-ジメチルホルムアミド混合液に添加し、アセトニトリルを加えた。析出した沈殿を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄した。前記操作により、21.0 gの目的物を得た。
［I-6：セグメント6の合成］
　Boc-Gly-Tyr(Br-Z)-NH2
　Boc-Tyr(Br-Z)-NH2（49.3 g）を、トリフルオロ酢酸に溶解した。得られた溶液を、冷却下で10分間、その後、室温で50分間攪拌した。反応溶液から、トリフルオロ酢酸を減圧留去し、塩化水素のジオキサン溶液（5.5 mol/L）（21.8 mL）を添加した。得られた混合物に、ジエチルエーテルを加えた。析出した沈殿を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄した。得られた塩酸塩を、N,N-ジメチルホルムアミドに溶解した。得られた溶液に、Boc-Gly-OH（18.0 g）及び1-ヒドロキシベンゾトリアゾール（14.9 g）を添加した。この混合物に、冷却下で、1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（20.1 mL）を滴下した。反応溶液を、室温で終夜攪拌した。反応溶液に、炭酸水素ナトリウム水溶液を加えた。析出した沈殿を濾取し、水で洗浄した。残渣をクロロホルム/メタノール混合液に溶解し、溶媒を減圧留去した。残渣にジエチルエーテルを加えた。析出した沈殿を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄した。前記操作により、55 gの目的物を得た。
　Boc-Gln-Gly-Tyr(Br-Z)-NH2
　Boc-Gly-Tyr(Br-Z)-NH2（55 g）を、トリフルオロ酢酸に溶解した。得られた溶液を、冷却下で10分間、その後、室温で50分間攪拌した。反応溶液から、トリフルオロ酢酸を減圧留去し、塩化水素のジオキサン溶液（5.5 mol/L）（21.8 mL）を添加した。得られた混合物に、ジエチルエーテルを加えた。析出した沈殿を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄した。得られた塩酸塩を、N,N-ジメチルホルムアミドに溶解した。得られた溶液に、Boc-Gln-OH（27 g）及び1-ヒドロキシベンゾトリアゾール（14.9 g）を添加した。この混合物に、冷却下で、1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（20.1 mL）を滴下した。反応溶液を、室温で終夜攪拌した。反応溶液に、炭酸水素ナトリウム水溶液を加えた。析出した沈殿を濾取し、水で洗浄した。残渣をクロロホルム/メタノール混合液に溶解し、溶媒を減圧留去した。残渣にジエチルエーテルを加えた。析出した沈殿を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄した。前記操作により、59 gの目的物を得た。
　Boc-Pro-Gln-Gly-Tyr(Br-Z)-NH2
　Boc-Gln-Gly-Tyr(Br-Z)-NH2（59 g）を、トリフルオロ酢酸に溶解した。得られた溶液を、冷却下で10分間、その後、室温で50分間攪拌した。反応溶液から、トリフルオロ酢酸を減圧留去し、塩化水素のジオキサン溶液（5.5 mol/L）（19.0 mL）を添加した。得られた混合物に、ジエチルエーテルを加えた。析出した沈殿を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄した。得られた塩酸塩を、N,N-ジメチルホルムアミドに溶解した。得られた溶液に、Boc-Pro-OH（19.3 g）及び1-ヒドロキシベンゾトリアゾール（12.9 g）を添加した。この混合物に、冷却下で、1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（17.5 mL）を滴下した。反応溶液を、室温で終夜攪拌した。反応溶液に、炭酸水素ナトリウム水溶液を加えた。析出した沈殿を濾取し、水で洗浄した。残渣をクロロホルム/メタノール混合液に溶解し、溶媒を減圧留去した。残渣にジエチルエーテルを加えた。析出した沈殿を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄した。前記操作により、60.6 gの目的物を得た。
　Boc-Ser(Bzl)-Pro-Gln-Gly-Tyr(Br-Z)-NH2
　Boc-Pro-Gln-Gly-Tyr(Br-Z)-NH2（60.6 g）を、トリフルオロ酢酸に溶解した。得られた溶液を、冷却下で10分間、その後、室温で50分間攪拌した。反応溶液から、トリフルオロ酢酸を減圧留去し、塩化水素のジオキサン溶液（5.5 mol/L）（15.4 mL）を添加した。得られた混合物に、ジエチルエーテルを加えた。析出した沈殿を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄した。得られた塩酸塩を、N,N-ジメチルホルムアミドに溶解した。得られた溶液に、Boc-Ser(Bzl)-OH（24.3 g）及び1-ヒドロキシベンゾトリアゾール（11.6 g）を添加した。この混合物に、冷却下で、1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（15.8 mL）を滴下した。反応溶液を、室温で終夜攪拌した。反応溶液から、N,N-ジメチルホルムアミドを減圧留去した。残渣に炭酸水素ナトリウム水溶液を加えた。析出した沈殿を濾取し、水及びジエチルエーテルで洗浄した。残渣をクロロホルム/メタノール混合液に溶解し、溶媒を減圧留去した。残渣にジエチルエーテルを加えた。析出した沈殿を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄した。前記操作により、17 gの目的物を得た。
　Boc-Ile-Ser(Bzl)-Pro-Gln-Gly-Tyr(Br-Z)-NH2
　Boc-Ser(Bzl)-Pro-Gln-Gly-Tyr(Br-Z)-NH2（16.7 g）を、トリフルオロ酢酸に溶解した。得られた溶液を、冷却下で10分間、その後、室温で50分間攪拌した。反応溶液から、トリフルオロ酢酸を減圧留去し、塩化水素のジオキサン溶液（5.5 mol/L）（4.2 mL）を添加した。得られた混合物に、ジエチルエーテルを加えた。析出した沈殿を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄した。得られた塩酸塩を、N,N-ジメチルホルムアミドに溶解した。得られた溶液に、Boc-Ile-OH・1/2 H2O（4.8 g）及び1-ヒドロキシベンゾトリアゾール（2.9 g）を添加した。この混合物に、冷却下で、1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（3.9 mL）を滴下した。反応溶液を、室温で終夜攪拌した。反応溶液に、炭酸水素ナトリウム水溶液を加えた。析出した沈殿を濾取し、水及びジエチルエーテルで洗浄した。前記操作により、17 gの目的物を得た。
　Boc-Lys(ClZ)-Ile-Ser(Bzl)-Pro-Gln-Gly-Tyr(Br-Z)-NH2
　Boc-Ile-Ser(Bzl)-Pro-Gln-Gly-Tyr(Br-Z)-NH2（17.9 g）を、トリフルオロ酢酸に溶解した。得られた溶液を、冷却下で10分間、その後、室温で50分間攪拌した。反応溶液から、トリフルオロ酢酸を減圧留去し、塩化水素のジオキサン溶液（5.5 mol/L）（4.0 mL）を添加した。得られた混合物に、ジエチルエーテルを加えた。析出した沈殿を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄した。得られた塩酸塩を、N,N-ジメチルホルムアミドに溶解した。得られた溶液に、Boc-Lys(ClZ)-OH（8.0 g）及び1-ヒドロキシベンゾトリアゾール（2.7 g）を添加した。この混合物に、冷却下で、1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（3.7 mL）を滴下した。反応溶液を、室温で終夜攪拌した。反応溶液に、炭酸水素ナトリウム水溶液を加えた。析出した沈殿を濾取し、水及びメタノールで洗浄した。前記操作により、22.0 gの目的物を得た。
　Boc-Ser(Bzl)-Lys(ClZ)-Ile-Ser(Bzl)-Pro-Gln-Gly-Tyr(Br-Z)-NH2
　Boc-Lys(ClZ)-Ile-Ser(Bzl)-Pro-Gln-Gly-Tyr(Br-Z)-NH2（22.0 g）を、トリフルオロ酢酸に溶解した。得られた溶液を、冷却下で10分間、その後、室温で50分間攪拌した。反応溶液から、トリフルオロ酢酸を減圧留去し、塩化水素のジオキサン溶液（5.5 mol/L）（3.8 mL）を添加した。得られた混合物に、ジエチルエーテルを加えた。析出した沈殿を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄した。得られた塩酸塩を、N,N-ジメチルホルムアミドに溶解した。得られた溶液に、Boc-Ser(Bzl)-OH（5.4 g）及び1-ヒドロキシベンゾトリアゾール（2.6 g）を添加した。この混合物に、冷却下で、1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（3.5 mL）を滴下した。反応溶液を、室温で終夜攪拌した。反応溶液に、炭酸水素ナトリウム水溶液を加えた。析出した沈殿を濾取し、水及びメタノールで洗浄した。前記操作により、20.2 gの目的物を得た。
　Boc-Arg(Tos)-Ser(Bzl)-Lys(ClZ)-Ile-Ser(Bzl)-Pro-Gln-Gly-Tyr(Br-Z)-NH2　（セグメント6）
　Boc-Ser(Bzl)-Lys(ClZ)-Ile-Ser(Bzl)-Pro-Gln-Gly-Tyr(Br-Z)-NH2（22.2 g）を、トリフルオロ酢酸に溶解した。得られた溶液を、冷却下で10分間、その後、室温で50分間攪拌した。反応溶液から、トリフルオロ酢酸を減圧留去し、塩化水素のジオキサン溶液（5.5 mol/L）（3.0 mL）を添加した。得られた混合物に、ジエチルエーテルを加えた。析出した沈殿を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄した。得られた塩酸塩を、N,N-ジメチルホルムアミドに溶解した。得られた溶液に、Boc-Arg(Tos)-OH（7.3 g）及び1-ヒドロキシベンゾトリアゾール（2.1 g）を添加した。この混合物に、冷却下で、1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（2.8 mL）を滴下した。反応溶液を、室温で終夜攪拌した。反応溶液に、炭酸水素ナトリウム水溶液を加えた。析出した沈殿を濾取し、水及びメタノールで洗浄した。前記操作により、23.1 gの目的物を得た。
［I-7：保護h.AMのセグメント縮合（1）］
　Boc-Phe-Thr(Bzl)-Asp(OcHex)-Lys(ClZ)-Asp(OcHex)-Lys(ClZ)-Asp(OcHex)-Asn-Val-Ala-Pro-Arg(Tos)-Ser(Bzl)-Lys(ClZ)-Ile-Ser(Bzl)-Pro-Gln-Gly-Tyr(Br-Z)-NH2
　Boc-Arg(Tos)-Ser(Bzl)-Lys(ClZ)-Ile-Ser(Bzl)-Pro-Gln-Gly-Tyr(Br-Z)-NH2（1.9 g）を、トリフルオロ酢酸に溶解した。得られた溶液を、冷却下で10分間、その後、室温で50分間攪拌した。反応溶液から、トリフルオロ酢酸を減圧留去し、塩化水素のジオキサン溶液（5.5 mol/L）（0.22 mL）を添加した。得られた混合物に、ジエチルエーテルを加えた。析出した沈殿を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄した。得られた塩酸塩を、1-メチル-2-ピロリドン/N,N-ジメチルホルムアミド混合液に溶解した。得られた溶液に、Boc-Phe-Thr(Bzl)-Asp(OcHex)-Lys(ClZ)-Asp(OcHex)-Lys(ClZ)-Asp(OcHex)-Asn-Val-Ala-Pro-OH（2.0 g）及び1-ヒドロキシベンゾトリアゾール（0.15 g）を添加した。この混合物に、冷却下で、1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（0.20 mL）を滴下した。反応溶液を、室温で終夜攪拌した。反応溶液に、炭酸水素ナトリウム水溶液を加えた。析出した沈殿を濾取し、水及びジエチルエーテルで洗浄した。残渣をN,N-ジメチルホルムアミドに溶解した。得られた溶液からN,N-ジメチルホルムアミドを減圧留去し、酢酸エチルを加えた。析出した沈殿を濾取し、酢酸エチルで洗浄した。前記操作により、3.3 gの目的物を得た。
［I-8：保護h.AMのセグメント縮合（2）］
　Boc-His-Gln-Ile-Tyr(BrZ)-Gln-Phe-Thr(Bzl)-Asp(OcHex)-Lys(ClZ)-Asp(OcHex)-Lys(ClZ)-Asp(OcHex)-Asn-Val-Ala-Pro-Arg(Tos)-Ser(Bzl)-Lys(ClZ)-Ile-Ser(Bzl)-Pro-Gln-Gly-Tyr(Br-Z)-NH2
　Boc-Phe-Thr(Bzl)-Asp(OcHex)-Lys(ClZ)-Asp(OcHex)-Lys(ClZ)-Asp(OcHex)-Asn-Val-Ala-Pro-Arg(Tos)-Ser(Bzl)-Lys(ClZ)-Ile-Ser(Bzl)-Pro-Gln-Gly-Tyr(Br-Z)-NH2（3.3 g）を、トリフルオロ酢酸に溶解した。得られた溶液を、冷却下で10分間、その後、室温で50分間攪拌した。反応溶液から、トリフルオロ酢酸を減圧留去し、塩化水素のジオキサン溶液（5.5 mol/L）（0.19 mL）を添加した。得られた混合物に、ジエチルエーテルを加えた。析出した沈殿を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄した。得られた塩酸塩を、1-メチル-2-ピロリドンに溶解した。得られた溶液に、Boc-His-Gln-Ile-Tyr(BrZ)-Gln-OH（0.9 g）及び3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-4-オキソ-1,2,3-ベンゾトリアジン（0.13 g）を添加した。この混合物に、冷却下で、1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（0.18 mL）を滴下した。反応溶液を、室温で終夜攪拌した。反応溶液に、炭酸水素ナトリウム水溶液を加えた。析出した沈殿を濾取し、水及びジエチルエーテルで洗浄した。残渣をN,N-ジメチルホルムアミドに溶解した。得られた溶液から、N,N-ジメチルホルムアミドを減圧留去し、アセトニトリルを加えた。析出した沈殿を濾取し、アセトニトリルで洗浄した。前記操作により、3.0 gの目的物を得た。
［I-9：保護h.AMのセグメント縮合（3）］
　Boc-Thr(Bzl)-Cys(4-MeBzl)-Thr(Bzl)-Val-Gln-Lys(ClZ)-Leu-Ala-His-Gln-Ile-Tyr(BrZ)-Gln-Phe-Thr(Bzl)-Asp(OcHex)-Lys(ClZ)-Asp(OcHex)-Lys(ClZ)-Asp(OcHex)-Asn-Val-Ala-Pro-Arg(Tos)-Ser(Bzl)-Lys(ClZ)-Ile-Ser(Bzl)-Pro-Gln-Gly-Tyr(Br-Z)-NH2
　Boc-His-Gln-Ile-Tyr(BrZ)-Gln-Phe-Thr(Bzl)-Asp(OcHex)-Lys(ClZ)-Asp(OcHex)-Lys(ClZ)-Asp(OcHex)-Asn-Val-Ala-Pro-Arg(Tos)-Ser(Bzl)-Lys(ClZ)-Ile-Ser(Bzl)-Pro-Gln-Gly-Tyr(Br-Z)-NH2（2.5 g）を、トリフルオロ酢酸に溶解した。得られた溶液を、冷却下で10分間、その後、室温で50分間攪拌した。反応溶液から、トリフルオロ酢酸を減圧留去し、塩化水素のジオキサン溶液（5.5 mol/L）（0.23 mL）を添加した。得られた混合物に、ジエチルエーテルを加えた。析出した沈殿を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄した。得られた塩酸塩を、1-メチル-2-ピロリドン/N,N-ジメチルホルムアミド混合液に溶解した。得られた溶液に、Boc-Thr(Bzl)-Cys(4-MeBzl)-Thr(Bzl)-Val-Gln-Lys(ClZ)-Leu-Ala-OH（0.78 g）及び3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-4-オキソ-1,2,3-ベンゾトリアジン（0.077 g）を添加した。この混合物に、冷却下で、1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（0.10 mL）を滴下した。反応溶液を、室温で終夜攪拌した。反応溶液に、炭酸水素ナトリウム水溶液を加えた。析出した沈殿を濾取し、水及びジエチルエーテルで洗浄した。残渣をクロロホルム/2,2,2-トリフルオロエタノール混合液に溶解した。得られた溶液から、溶媒を減圧留去し、酢酸エチルを加えた。析出した沈殿を濾取し、酢酸エチルで洗浄した。前記操作により、2.1 gの目的物を得た。
［I-10：保護h.AMのセグメント縮合（4）］
　Boc-Leu-Arg(Tos)-Ser(Bzl)-Phe-Gly-Cys(4-MeBzl)-Arg(Tos)-Phe-Gly-Thr(Bzl)-Cys(4-MeBzl)-Thr(Bzl)-Val-Gln-Lys(ClZ)-Leu-Ala-His-Gln-Ile-Tyr(BrZ)-Gln-Phe-Thr(Bzl)-Asp(OcHex)-Lys(ClZ)-Asp(OcHex)-Lys(ClZ)-Asp(OcHex)-Asn-Val-Ala-Pro-Arg(Tos)-Ser(Bzl)-Lys(ClZ)-Ile-Ser(Bzl)-Pro-Gln-Gly-Tyr(Br-Z)-NH2
　Boc-Thr(Bzl)-Cys(4-MeBzl)-Thr(Bzl)-Val-Gln-Lys(ClZ)-Leu-Ala-His-Gln-Ile-Tyr(BrZ)-Gln-Phe-Thr(Bzl)-Asp(OcHex)-Lys(ClZ)-Asp(OcHex)-Lys(ClZ)-Asp(OcHex)-Asn-Val-Ala-Pro-Arg(Tos)-Ser(Bzl)-Lys(ClZ)-Ile-Ser(Bzl)-Pro-Gln-Gly-Tyr(Br-Z)-NH2（2.0 g）を、トリフルオロ酢酸に溶解した。得られた溶液を、冷却下で10分間、その後、室温で50分間攪拌した。反応溶液から、トリフルオロ酢酸を減圧留去し、塩化水素のジオキサン溶液（5.5 mol/L）（0.15 mL）を添加した。得られた混合物に、ジエチルエーテルを加えた。析出した沈殿を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄した。得られた塩酸塩を、ジメチルスルホキシド/1-メチル-2-ピロリドン/N,N-ジメチルホルムアミド混合液に溶解した。得られた溶液に、Boc-Thr(Bzl)-Cys(4-MeBzl)-Thr(Bzl)-Val-Gln-Lys(ClZ)-Leu-Ala-OH（0.56 g）及び1-ヒドロキシベンゾトリアゾール（0.091 g）を添加した。この混合物に、冷却下で、1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（0.12 mL）を滴下した。反応溶液を、室温で終夜攪拌した。反応溶液に、炭酸水素ナトリウム水溶液を加えた。析出した沈殿を濾取し、水及びジエチルエーテルで洗浄した。残渣をクロロホルム/2,2,2-トリフルオロエタノール混合液に溶解した。得られた溶液から、溶媒を減圧留去し、アセトニトリルを加えた。析出した沈殿を濾取し、アセトニトリルで洗浄した。前記操作により、1.8 gの目的物を得た。
［I-11：保護h.AMのセグメント縮合（5）］
　Boc-Tyr(BrZ)-Arg(Tos)-Gln-Ser(Bzl)-Met-Asn-Asn-Phe-Gln-Gly-Leu-Arg(Tos)-Ser(Bzl)-Phe-Gly-Cys(4-MeBzl)-Arg(Tos)-Phe-Gly-Thr(Bzl)-Cys(4-MeBzl)-Thr(Bzl)-Val-Gln-Lys(ClZ)-Leu-Ala-His-Gln-Ile-Tyr(BrZ)-Gln-Phe-Thr(Bzl)-Asp(OcHex)-Lys(ClZ)-Asp(OcHex)-Lys(ClZ)-Asp(OcHex)-Asn-Val-Ala-Pro-Arg(Tos)-Ser(Bzl)-Lys(ClZ)-Ile-Ser(Bzl)-Pro-Gln-Gly-Tyr(Br-Z)-NH2　（Boc-保護h.AM(1-52)）
　Boc-Leu-Arg(Tos)-Ser(Bzl)-Phe-Gly-Cys(4-MeBzl)-Arg(Tos)-Phe-Gly-Thr(Bzl)-Cys(4-MeBzl)-Thr(Bzl)-Val-Gln-Lys(ClZ)-Leu-Ala-His-Gln-Ile-Tyr(BrZ)-Gln-Phe-Thr(Bzl)-Asp(OcHex)-Lys(ClZ)-Asp(OcHex)-Lys(ClZ)-Asp(OcHex)-Asn-Val-Ala-Pro-Arg(Tos)-Ser(Bzl)-Lys(ClZ)-Ile-Ser(Bzl)-Pro-Gln-Gly-Tyr(Br-Z)-NH2（1.5 g）を、トリフルオロ酢酸に溶解した。得られた溶液を、冷却下で10分間、その後、室温で50分間攪拌した。反応溶液から、トリフルオロ酢酸を減圧留去し、塩化水素のジオキサン溶液（5.5 mol/L）（0.09 mL）を添加した。得られた混合物に、ジエチルエーテルを加えた。析出した沈殿を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄した。得られた塩酸塩を、ジメチルスルホキシドに溶解した。得られた溶液に、Boc-Tyr(BrZ)-Arg(Tos)-Gln-Ser(Bzl)-Met-Asn-Asn-Phe-Gln-Gly-OH（0.40 g）及び1-ヒドロキシベンゾトリアゾール（0.081 g）を添加した。この混合物に、冷却下で、1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド(0.11 mL)を滴下した。反応溶液を、室温で終夜攪拌した。反応溶液に、炭酸水素ナトリウム水溶液を加えた。析出した沈殿を濾取し、水及びジエチルエーテルで洗浄した。残渣をクロロホルム/2,2,2-トリフルオロエタノール混合液に溶解した。得られた溶液から、溶媒を減圧留去し、ジエチルエーテルを加えた。析出した沈殿を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄した。前記操作により、1.6 gの目的物を得た。
［I-12：パルミトイル-h.AMの合成（1）］
　Pal-Tyr(BrZ)-Arg(Tos)-Gln-Ser(Bzl)-Met-Asn-Asn-Phe-Gln-Gly-Leu-Arg(Tos)-Ser(Bzl)-Phe-Gly-Cys(4-MeBzl)-Arg(Tos)-Phe-Gly-Thr(Bzl)-Cys(4-MeBzl)-Thr(Bzl)-Val-Gln-Lys(ClZ)-Leu-Ala-His-Gln-Ile-Tyr(BrZ)-Gln-Phe-Thr(Bzl)-Asp(OcHex)-Lys(ClZ)-Asp(OcHex)-Lys(ClZ)-Asp(OcHex)-Asn-Val-Ala-Pro-Arg(Tos)-Ser(Bzl)-Lys(ClZ)-Ile-Ser(Bzl)-Pro-Gln-Gly-Tyr(Br-Z)-NH2
　Boc-Tyr(BrZ)-Arg(Tos)-Gln-Ser(Bzl)-Met-Asn-Asn-Phe-Gln-Gly-Leu-Arg(Tos)-Ser(Bzl)-Phe-Gly-Cys(4-MeBzl)-Arg(Tos)-Phe-Gly-Thr(Bzl)-Cys(4-MeBzl)-Thr(Bzl)-Val-Gln-Lys(ClZ)-Leu-Ala-His-Gln-Ile-Tyr(BrZ)-Gln-Phe-Thr(Bzl)-Asp(OcHex)-Lys(ClZ)-Asp(OcHex)-Lys(ClZ)-Asp(OcHex)-Asn-Val-Ala-Pro-Arg(Tos)-Ser(Bzl)-Lys(ClZ)-Ile-Ser(Bzl)-Pro-Gln-Gly-Tyr(Br-Z)-NH2（0.23 g）を、トリフルオロ酢酸に溶解した。得られた溶液を、冷却下で10分間、その後、室温で50分間攪拌した。反応溶液から、トリフルオロ酢酸を減圧留去し、塩化水素のジオキサン溶液（5.5 mol/L）（0.02 mL）を添加した。得られた混合物に、ジエチルエーテルを加えた。析出した沈殿を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄した。得られた塩酸塩を、クロロホルム/2,2,2-トリフルオロエタノール混合液に溶解した。得られた溶液に、パルミトイルクロライド（0.015 g）、1-ヒドロキシ-7-アザベンゾトリアゾール（0.015 g）及びジイソプロピルエチルアミン（0.014 mL）をテトラヒドロフランに添加した溶液と、ジイソプロピルエチルアミン（0.004 mL）とを、冷却下で滴下した。反応溶液を、室温で終夜攪拌した。反応溶液から溶媒を減圧留去し、アセトニトリルを加えた。析出した沈殿を濾取し、アセトニトリルで洗浄した。前記操作により、0.24 gの目的物を得た。
［I-13：パルミトイル-h.AMの合成（2）］
　Pal-h.AM(1-52) トリフルオロ酢酸塩
　Pal-Tyr(BrZ)-Arg(Tos)-Gln-Ser(Bzl)-Met-Asn-Asn-Phe-Gln-Gly-Leu-Arg(Tos)-Ser(Bzl)-Phe-Gly-Cys(4-MeBzl)-Arg(Tos)-Phe-Gly-Thr(Bzl)-Cys(4-MeBzl)-Thr(Bzl)-Val-Gln-Lys(ClZ)-Leu-Ala-His-Gln-Ile-Tyr(BrZ)-Gln-Phe-Thr(Bzl)-Asp(OcHex)-Lys(ClZ)-Asp(OcHex)-Lys(ClZ)-Asp(OcHex)-Asn-Val-Ala-Pro-Arg(Tos)-Ser(Bzl)-Lys(ClZ)-Ile-Ser(Bzl)-Pro-Gln-Gly-Tyr(Br-Z)-NH2（238 mg）に、p-クレゾール（1.5 mL）及びメチオニン（37 mg）を加えた。得られた溶液に、無水フッ化水素（6 mL）を冷却下で加えた。反応溶液を、-2～-5℃下、60分間処理した。反応溶液から、無水フッ化水素を減圧留去し、ジエチルエーテルを加えた。析出した沈殿を濾取した。得られた粗ペプチドを、50％酢酸水に溶解した。得られた溶液に、0.1 M ヨウ素/メタノール溶液（0.24 mL）を加えた。1分後、この溶液に、1 Mアスコルビン酸/水（0.24 mL）を加えた。得られた溶液から、目的物を逆相HPLCにて精製した。目的物は、凍結乾燥の後に、38 mgの白色粉末として得られた。
［I-14：パルミトイル-h.AMの合成（3）］
　Pal-h.AM(1-52)酢酸塩
　Pal-h.AM(1-52) トリフルオロ酢酸塩（38 mg）を、5％酢酸水に溶解した。得られた溶液を、ムロマック 1×2（酢酸型）カラム（3 mL）に通液し、5％酢酸水で流出させた。流出液を凍結乾燥した。目的物は、凍結乾燥の後に、32 mgの白色粉末として得られた。
［I-15：パルミトイル-h.AMの合成（4）］
　Pal-h.AM(1-52)酢酸塩　バイアル詰め
　Pal-h.AM(1-52) 酢酸塩（16.5 mg）を、ミリQ水（18.3 mL）に溶解した。得られた溶液を、0.30 mLずつバイアル瓶に分注し、凍結乾燥した。得られた凍結乾燥物のうち、3本を、6 M塩酸水にて加水分解した。得られた加水分解物を、アミノ酸分析した。前記アミノ酸分析により、内容量を定量した。　収量：38 nmol×57本。
［I-16：PEG5000-h.AMの合成（1）］
　Fmoc-Tyr(BrZ)-Arg(Tos)-Gln-Ser(Bzl)-Met-Asn-Asn-Phe-Gln-Gly-Leu-Arg(Tos)-Ser(Bzl)-Phe-Gly-Cys(4-MeBzl)-Arg(Tos)-Phe-Gly-Thr(Bzl)-Cys(4-MeBzl)-Thr(Bzl)-Val-Gln-Lys(ClZ)-Leu-Ala-His-Gln-Ile-Tyr(BrZ)-Gln-Phe-Thr(Bzl)-Asp(OcHex)-Lys(ClZ)-Asp(OcHex)-Lys(ClZ)-Asp(OcHex)-Asn-Val-Ala-Pro-Arg(Tos)-Ser(Bzl)-Lys(ClZ)-Ile-Ser(Bzl)-Pro-Gln-Gly-Tyr(Br-Z)-NH2
　Boc-Tyr(BrZ)-Arg(Tos)-Gln-Ser(Bzl)-Met-Asn-Asn-Phe-Gln-Gly-Leu-Arg(Tos)-Ser(Bzl)-Phe-Gly-Cys(4-MeBzl)-Arg(Tos)-Phe-Gly-Thr(Bzl)-Cys(4-MeBzl)-Thr(Bzl)-Val-Gln-Lys(ClZ)-Leu-Ala-His-Gln-Ile-Tyr(BrZ)-Gln-Phe-Thr(Bzl)-Asp(OcHex)-Lys(ClZ)-Asp(OcHex)-Lys(ClZ)-Asp(OcHex)-Asn-Val-Ala-Pro-Arg(Tos)-Ser(Bzl)-Lys(ClZ)-Ile-Ser(Bzl)-Pro-Gln-Gly-Tyr(Br-Z)-NH2（0.9 g）を、トリフルオロ酢酸に溶解した。得られた溶液を、冷却下で10分間、その後、室温で50分間攪拌した。反応溶液から、トリフルオロ酢酸を減圧留去し、塩化水素のジオキサン溶液（5.5 mol/L）（0.05 mL）を添加した。得られた混合物に、ジエチルエーテルを加えた。析出した沈殿を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄した。得られた塩酸塩を、ジメチルスルホキシド/N,N-ジメチルホルムアミド混合液に溶解した。得られた溶液に、炭酸9-フルオレニルメチルスクシンイミジル（0.34 g）及びジイソプロピルエチルアミン（0.05 mL）を添加した。反応溶液を、室温で終夜攪拌した。反応溶液に水を加えた。析出した沈殿を濾取し、水及びアセトニトリルで洗浄した。沈殿を、クロロホルム/2,2,2-トリフルオロエタノール混合液に溶解した。溶媒を減圧留去し、ジエチルエーテルを加えた。析出した沈殿を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄した。前記操作により、0.76 gの目的物を得た。
［I-17：PEG5000-h.AMの合成（2）］
　Fmoc-Tyr-Arg-Gln-Ser-Met-Asn-Asn-Phe-Gln-Gly-Leu-Arg-Ser-Phe-Gly-Cys-Arg-Phe-Gly-Thr-Cys-Thr-Val-Gln-Lys-Leu-Ala-His-Gln-Ile-Tyr-Gln-Phe-Thr-Asp-Lys-Asp-Lys-Asp-Asn-Val-Ala-Pro-Arg-Ser-Lys-Ile-Ser-Pro-Gln-Gly-Tyr-NH2　(Cys16-Cys21ジスルフィド架橋体)
　Fmoc-Tyr(BrZ)-Arg(Tos)-Gln-Ser(Bzl)-Met-Asn-Asn-Phe-Gln-Gly-Leu-Arg(Tos)-Ser(Bzl)-Phe-Gly-Cys(4-MeBzl)-Arg(Tos)-Phe-Gly-Thr(Bzl)-Cys(4-MeBzl)-Thr(Bzl)-Val-Gln-Lys(ClZ)-Leu-Ala-His-Gln-Ile-Tyr(BrZ)-Gln-Phe-Thr(Bzl)-Asp(OcHex)-Lys(ClZ)-Asp(OcHex)-Lys(ClZ)-Asp(OcHex)-Asn-Val-Ala-Pro-Arg(Tos)-Ser(Bzl)-Lys(ClZ)-Ile-Ser(Bzl)-Pro-Gln-Gly-Tyr(Br-Z)-NH2（740 mg）に、p-クレゾール（6.0 mL）及びメチオニン（122 mg）を加えた。得られた溶液に、無水フッ化水素（24 mL）を冷却下で加えた。反応溶液を、-2～-5℃下、60分間処理した。反応溶液から、無水フッ化水素を減圧留去し、ジエチルエーテルを加えた。析出した沈殿を濾取した。得られた粗ペプチドを、50％酢酸水に溶解した。得られた溶液に、0.1 M ヨウ素/メタノール溶液（0.8 mL）を加えた。30秒後、この溶液に、1 Mアスコルビン酸/水（0.8 mL）を加えた。得られた溶液から、目的物を逆相HPLCにて精製した。目的物は、凍結乾燥の後に、134 mgの白色粉末として得られた。
［I-18：PEG5000-h.AMの合成（3）］
　Tyr-Arg-Gln-Ser-Met-Asn-Asn-Phe-Gln-Gly-Leu-Arg-Ser-Phe-Gly-Cys-Arg-Phe-Gly-Thr-Cys-Thr-Val-Gln-Lys(Boc)-Leu-Ala-His-Gln-Ile-Tyr-Gln-Phe-Thr-Asp-Lys(Boc)-Asp-Lys(Boc)-Asp-Asn-Val-Ala-Pro-Arg-Ser-Lys(Boc)-Ile-Ser-Pro-Gln-Gly-Tyr-NH2　(Cys16-Cys21ジスルフィド架橋体)
　Fmoc-Tyr-Arg-Gln-Ser-Met-Asn-Asn-Phe-Gln-Gly-Leu-Arg-Ser-Phe-Gly-Cys-Arg-Phe-Gly-Thr-Cys-Thr-Val-Gln-Lys-Leu-Ala-His-Gln-Ile-Tyr-Gln-Phe-Thr-Asp-Lys-Asp-Lys-Asp-Asn-Val-Ala-Pro-Arg-Ser-Lys-Ile-Ser-Pro-Gln-Gly-Tyr-NH2　(Cys16-Cys21ジスルフィド架橋体)（184 mg）を、ジメチルスルホキシド（18 mL）に溶解した。得られた溶液に、炭酸 t-ブチルスクシンイミジル（87 mg）及びジイソプロピルエチルアミン（0.06 mL）を加えた。反応溶液を、5時間撹拌した。反応溶液に、酢酸水を加えた後、凍結乾燥した。残渣を、ジメチルスルホキシド（20 mL）に溶解した。得られた溶液に、ジエチルアミン（2 mL）を加えた。得られた溶液を、70分間攪拌した。反応溶液に、酢酸水を加えて希釈した。得られた溶液から、目的物を逆相HPLCにて精製した。目的物は、凍結乾燥の後に、116 mgの白色粉末として得られた。
［I-19：PEG5000-h.AMの合成（4）］
　PEG5000-Tyr-Arg-Gln-Ser-Met-Asn-Asn-Phe-Gln-Gly-Leu-Arg-Ser-Phe-Gly-Cys-Arg-Phe-Gly-Thr-Cys-Thr-Val-Gln-Lys(Boc)-Leu-Ala-His-Gln-Ile-Tyr-Gln-Phe-Thr-Asp-Lys(Boc)-Asp-Lys(Boc)-Asp-Asn-Val-Ala-Pro-Arg-Ser-Lys(Boc)-Ile-Ser-Pro-Gln-Gly-Tyr-NH2　(Cys16-Cys21ジスルフィド架橋体)
　Tyr-Arg-Gln-Ser-Met-Asn-Asn-Phe-Gln-Gly-Leu-Arg-Ser-Phe-Gly-Cys-Arg-Phe-Gly-Thr-Cys-Thr-Val-Gln-Lys(Boc)-Leu-Ala-His-Gln-Ile-Tyr-Gln-Phe-Thr-Asp-Lys(Boc)-Asp-Lys(Boc)-Asp-Asn-Val-Ala-Pro-Arg-Ser-Lys(Boc)-Ile-Ser-Pro-Gln-Gly-Tyr-NH2　(Cys16-Cys21ジスルフィド架橋体)（40 mg）を、ジメチルスルホキシド（4 mL）に溶解した。得られた溶液に、PEG5000-NHS（205 mg）及びジイソプロピルエチルアミン（0.001 mL）を加えた。PEG5000-NHSは、平均分子量5000のPEGと6-クロロヘキサン酸 N-ヒドロキシコハク酸イミドエステルとから形成される化合物であって、平均分子量5000のPEGとN-ヒドロキシコハク酸イミドとが1-オキソ-1,6-ヘキサンジイルを介して連結された構造を有する化合物である。反応溶液を、終夜撹拌した。反応溶液から、目的物を逆相HPLCにて精製した。目的物は、凍結乾燥の後に、35 mgの白色粉末として得られた。
［I-20：PEG5000-h.AMの合成（5）］
　PEG5000-h.AM(1-52) トリフルオロ酢酸塩
　PEG5000-Tyr-Arg-Gln-Ser-Met-Asn-Asn-Phe-Gln-Gly-Leu-Arg-Ser-Phe-Gly-Cys-Arg-Phe-Gly-Thr-Cys-Thr-Val-Gln-Lys(Boc)-Leu-Ala-His-Gln-Ile-Tyr-Gln-Phe-Thr-Asp-Lys(Boc)-Asp-Lys(Boc)-Asp-Asn-Val-Ala-Pro-Arg-Ser-Lys(Boc)-Ile-Ser-Pro-Gln-Gly-Tyr-NH2　(Cys16-Cys21ジスルフィド架橋体)（34 mg）に、氷冷下で、95％トリフルオロ酢酸水（5 mL）を加えて、粗ペプチドを溶解した。得られた混合物を、氷冷下で40分間反応させた。反応溶液から、溶媒を減圧留去した。残渣をミリQ水に溶解した。得られた溶液から、目的物を逆相HPLCにて精製した。目的物は、凍結乾燥の後に、30 mgの白色粉末として得られた。
［I-21：PEG5000-h.AMの合成（6）］
　PEG5000-h.AM(1-52)　酢酸塩　バイアル詰め
　PEG5000-h.AM(1-52) トリフルオロ酢酸塩（30 mg）を、3％酢酸水に溶解した。得られた溶液を、ムロマック 1×2(酢酸型)カラム（2 mL）に通液し、3％酢酸水で流出させた。流出液を凍結乾燥した。凍結乾燥物の全量を、ミリQ水（18.3 mL）に溶解した。得られた溶液を、0.30 mLずつバイアル瓶に分注し、凍結乾燥した。得られた凍結乾燥物のうち、3本を、6 M塩酸水にて加水分解した。得られた加水分解物を、アミノ酸分析した。前記アミノ酸分析により、内容量を定量した。　収量：37 nmol×56本。
＜II：使用例＞
［II-1：アドレノメデュリン誘導体による細胞内cAMP濃度上昇作用］
　アドレノメデュリン（AM）の投与により、細胞内cAMPの濃度が上昇する。このため、AMの作用は、細胞内cAMPの濃度上昇を介して発現すると考えられる。そこで、AM受容体を発現させた培養細胞株（HEK293細胞株）に、Pal-h.AM(1-52)、PEG5000-h.AM(1-52)又はh.AM(1-52)を添加して、細胞内cAMPの産生量を測定した。コンフルエントのHEK293細胞（細胞数：5×104）に、0.5 mMのIBMXの存在下、10-11～10-6 mol/LのPal-h.AM(1-52)、PEG5000-h.AM(1-52)又はh.AM(1-52)を添加して、15分間インキュベートした。その後、cAMP測定用ELISAキット（GEヘルスケアー、＃RPN2251）を用いて、各試験区のHEK293細胞における細胞内cAMP濃度を測定した。Pal-h.AM(1-52)、PEG5000-h.AM(1-52)又はh.AM(1-52)の濃度とcAMP濃度の上昇との用量応答曲線を図1に示す。なお、図中、縦軸は、h.AM(1-52)によるcAMP濃度上昇の最大応答値に対する、各試験区のcAMP濃度上昇の相対値（％）を示す。
　図1に示すように、Pal-h.AM(1-52)又はPEG5000-h.AM(1-52)の投与により、AM受容体発現HEK293細胞における細胞内cAMP濃度が上昇した。Pal-h.AM(1-52)及びPEG5000-h.AM(1-52)は、h.AM(1-52)と比較して、略同等の最大応答値及びpEC50値（h.AM(1-52)：8.59±0.90；Pal-h.AM(1-52)：8.49±0.12；PEG5000-h.AM(1-52)：8.19±0.10）を示した。前記の結果より、Pal-h.AM(1-52)及びPEG5000-h.AM(1-52)は、培養細胞において、h.AM(1-52)と略同等のcAMP濃度上昇活性を発揮することが判明した。
［II-2：アドレノメデュリン誘導体の血中半減期］
　麻酔下ラットの静脈内に、Pal-h.AM(1-52)、PEG5000-h.AM(1-52)又はh.AM(1-52)を単回投与して、アドレノメデュリン誘導体の血中濃度の経時変化を観察した。11～14週齢の雄性ウイスターラットを、イソフルランの吸入により麻酔導入した。気管切開の後、1.5～2.5％のイソフルラン濃度及び0.6～0.8 L/分の流量にて、吸入麻酔管理を行った。前記ラットから、右頸静脈を単離し、26G相当のカテーテルチューブを挿入した。次に、前記処置後のラットから、左頸動脈を単離し、23G相当のカテーテルチューブを挿入した。生理食塩水に溶解したPal-h.AM(1-52)、PEG5000-h.AM(1-52)又はh.AM(1-52)を、右頸静脈のカテーテルチューブより投与した。頸動脈に挿入したカテーテルより、投与開始時から経時的に、300 μlの採血を行った。得られた血液検体に、直ちにEDTA-2Na（300 μg）及びアプロチニン（21 μg）を添加して、さらに3000回転、10分間の条件で遠心分離して、血漿を得た。各検体の血漿中AM濃度を、化学発光酵素免疫法にて測定した。2-コンパートメントモデルを用いて、血漿中AM濃度の測定結果から、第一相及び第二相の血中半減期を算出した。h.AM(1-52)、Pal-h.AM(1-52)又はPEG5000-h.AM(1-52)の投与開始時からの経過時間と血漿中AM濃度との関係を図2～4にそれぞれ示す。
　図3及び4に示すように、Pal-h.AM(1-52)及びPEG5000-h.AM(1-52)の第一相半減期は、それぞれ3.51又は6.18分であり、第二相半減期は、123又は133分であった。これに対し、図2に示すように、h.AM(1-52)の第一相半減期は、0.61分であり、第二相半減期は、18.9分であった。すなわち、Pal-h.AM(1-52)及びPEG5000-h.AM(1-52)は、h.AM(1-52)と比較して、血中半減期が顕著に延長された。前記の結果より、アドレノメデュリン分子をパルミチン酸又はポリエチレングリコールで化学修飾することにより、親分子であるアドレノメデュリンと比較して、血中半減期が顕著に延長されることが判明した。
［II-3：アドレノメデュリン誘導体による降圧作用］
　麻酔下ラットの静脈内に、Pal-h.AM(1-52)、PEG5000-h.AM(1-52)又はh.AM(1-52)を単回投与して、該ラットの血圧の経過を観察した。11～14週齢の雄性ウイスターラットを、イソフルランの吸入により麻酔導入した。気管切開の後、1.5～2.5％のイソフルラン濃度及び0.6～0.8 L/分の流量にて、吸入麻酔管理を行った。前記ラットから、右頸静脈を単離し、26G相当のカテーテルチューブを挿入した。次に、前記処置後のラットから、左頸動脈を単離し、23G相当のカテーテルチューブを挿入した。生理食塩水に溶解したPal-h.AM(1-52)、PEG5000-h.AM(1-52)又はh.AM(1-52)を、右頸静脈のカテーテルチューブより投与した。右頸静脈のカテーテルチューブより、生理食塩水ヘパリン溶液（生理食塩水：100ml；ヘパリン：1000単位)を2.4 ml/時間で補液した。同じカテーテルチューブより、10 nmol/kgのPal-h.AM(1-52)、PEG5000-h.AM(1-52)又はh.AM(1-52)を、生理食塩水に溶解した形態で投与した。頸動脈に挿入したカテーテルを、圧トランスデューサーに接続した。Pal-h.AM(1-52)、PEG5000-h.AM(1-52)又はh.AM(1-52)の投与前の血圧と投与後の血圧とを、経時的に測定した。h.AM(1-52)、Pal-h.AM(1-52)又はPEG5000-h.AM(1-52)の投与開始時からの経過時間と平均血圧との関係を図5に示す。なお、図中、縦軸は、各薬剤投与時の平均血圧から、各薬剤投与前の平均血圧を差し引いた差を示す。
　図5に示すように、10 nmol/kgのPal-h.AM(1-52)、PEG5000-h.AM(1-52)又はh.AM(1-52)の静脈内単回投与により、ラットの血圧が低下した。h.AM(1-52)の場合、投与後2分に最大降圧が観察され、30分後には、投与前の血圧に回復した。これに対し、Pal-h.AM(1-52)又はPEG5000-h.AM(1-52)投与時の最大降圧値は、h.AM(1-52)の場合と比較して低い値であった。また、これら誘導体の場合、投与後90分においても降圧作用が持続していた。前記の結果より、Pal-h.AM(1-52)及びPEG5000-h.AM(1-52)の降圧効果は、緩徐に且つ長時間持続することが判明した。また、本試験によって示されたアドレノメデュリン誘導体による降圧効果は、前記試験によって示された血中半減期の延長とよく一致した。
［II-4：アドレノメデュリン誘導体による炎症性腸疾患モデルでの治療効果］
II-4-1：モデルの作製
　C57BL/6J Jclマウス（6週齢）に対し、イソフルラン（2％）吸入麻酔下で背部皮膚を切開した。投与液を充填した浸透圧ポンプ（1002型Alzet（登録商標）ミニ浸透圧ポンプ）を皮下に埋め込み、皮膚を縫合糸で縫合した。浸透圧ポンプ埋め込み部位の背部皮下は、刈毛し消毒した。処置後のマウスに、3質量／体積％デキストラン硫酸ナトリウム（Sodium Dextran Sulfate、DSS）（和光純薬工業株式会社）を飲用水として7日間摂取させ、炎症性腸疾患モデルを作製した。DSS誘発性腸炎は、炎症性腸疾患のモデルとして広く用いられている。
　DSS摂取開始日より、浸透圧ポンプを用いてアドレノメデュリン誘導体（PEG5000-h.AM(1-52)）の持続皮下投与を行った。投与量は、0.02、0.1又は0.5 nmol/kg/hrとし、投与速度は0.2μL/hrとした。DSS摂取開始日を、アドレノメデュリン誘導体の投与開始日（0日）とした。前記条件で、投与を14日間実施した。対照群には、生理食塩水を同様に投与した。投与開始後14日目に、イソフルラン（2％）の吸入麻酔下で、腹部大静脈からヘパリン加血液を採取した。腹部大動脈及び腹部大静脈を切開して、放血致死させた。次に、肛門部から回盲部までの腸管を採取した。
II-4-2：測定
（1）AM濃度
　前記手順に従って採取したヘパリン加血液を、4℃、1800×g、10分間の条件で遠心分離して、血漿を得た。得られた各検体中の血漿中AM濃度を、化学発光酵素免疫法にて測定した。
（2）体重
　投与開始後3、5、7、10及び14日目に、対象マウスの体重を測定した。
（3）スコア
　投与開始後3、5、7、10及び14日目における、対象マウスの体重及び便の性状を、以下のスコア判定の基準に基づき評価した。得られたスコア値を合計して、各検体の総スコア値を算出した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000003
（4）腸管の長さ
　解剖摘出した腸管を縦に開き、脂肪組織を除去した後、生理食塩液で洗浄した。次に、腸管の長さを測定した。
II-4-3：結果
（1）AM濃度
　前記手順で測定した血漿中AM濃度を、平均値±標準誤差で表す。対照群、並びに0.02、0.1及び0.5 nmol/kg/hr PEG5000-h.AM(1-52)投与群の血漿中AM濃度は、それぞれ、0.091±0.036、1.430±0.242、3.289±0.525及び12.96±2.432 fmol/mlであった。対照群、並びに0.02、0.1及び0.5 nmol/kg/hr PEG5000-h.AM(1-52)投与群の血漿中AM濃度を図6に示す。
（2）スコア評価
　前記手順で評価した総スコアを、中央値［平均値 ± 標準誤差］で表す。投与開始後3、5、7、10及び14日目における対照群の総スコアは、それぞれ0.0［0.6±0.3］、4.0［3.7±0.4］、6.0［5.4±0.5］、3.5［4.1±0.4］及び0.0［0.0±0.0］であった。投与開始後3、5、7、10及び14日目における、0.02 nmol/kg/hr PEG5000-h.AM(1-52)投与群の総スコアは、それぞれ1.0［0.8±0.2］、2.5［2.8±0.5］、5.5［5.7±0.4］、2.5［3.1±0.8］及び0.0［0.0±0.0］であった。投与開始後3、5、7、10及び14日目における、0.1 nmol/kg/hr PEG5000-h.AM(1-52)投与群の総スコアは、それぞれ0.0［0.7±0.3］、1.5［1.9±0.5］、5.0［4.1±0.4］、2.0［2.0±0.5］及び0.0［0.0±0.0］であった。投与開始後3、5、7、10及び14日目における、0.5 nmol/kg/hr PEG5000-h.AM(1-52)投与群の総スコアは、それぞれ1.0［1.3±0.3］、1.5［1.1±0.3］、3.0［3.0±0.3］、2.0［2.1±0.4］及び0.0［0.0±0.0］であった。PEG5000-h.AM(1-52)の投与開始時からの経過時間と、対照群及び各投与群の総スコアとの関係を図7に示す。図7に示すように、0.1 nmol/kg/hr PEG5000-h.AM(1-52)投与群の投与開始後10日目における総スコア値、並びに0.5 nmol/kg/hr PEG5000-h.AM(1-52)投与群の投与開始後5、7及び10日目における総スコア値は、対照群の総スコア値と比較していずれも有意な減少が認められた（Steelの多重比較検定、p<0.05又はP<0.01）。
（3）腸管の長さ
　前記手順で測定した腸管の長さを、平均値 ± 標準誤差で表す。対照群、並びに0.02、0.1及び0.5 nmol/kg/hr PEG5000-h.AM(1-52)投与群の腸管の長さは、それぞれ65.0±1.3、69.4±1.5、71.4±0.9及び72.4±0.9 mmであった。対照群、並びに0.02、0.1及び0.5 nmol/kg/hr PEG5000-h.AM(1-52)投与群の腸管の長さを図8に示す。図8に示すように、PEG5000-h.AM(1-52)投与群の腸管の長さは、全ての濃度処理群において、対照群の腸管の長さと比較していずれも有意な差が認められた（Dunnettの多重比較検定、P<0.05又はP<0.01）。
　本明細書で引用した全ての刊行物、特許及び特許出願をそのまま参考として本明細書にとり入れるものとする。

Claims (7)

  1. 　式（I）：
    　　　A-Ln-B　　（I）
    ［式中、
    　Aは、パルミトイル基及びポリエチレングリコール基からなる群より選択される修飾基であり、
    　Lは、2価の連結基であり、
    　nは、0又は1の整数であり、
    　Bは、アドレノメデュリン又はアドレノメデュリン活性を有するその修飾体から誘導されるペプチド部分であり、
    　但し、ペプチド部分Bは、そのN末端アミノ基を介して修飾基A又は連結基Lと結合されている。］
    で表される化合物若しくはその塩、又はそれらの水和物。
  2. 　前記アドレノメデュリン又はアドレノメデュリン活性を有するその修飾体が、下記：
    （i）アドレノメデュリンのアミノ酸配列からなるペプチド、
    （ii）アドレノメデュリンのアミノ酸配列からなり、且つ該アミノ酸配列中の2個のシステイン残基がジスルフィド結合を形成しているペプチド、
    （iii）（ii）のペプチドにおいて、前記ジスルフィド結合が、エチレン基によって置換されており、且つアドレノメデュリン活性を有するペプチド、
    （iv）（i）～（iii）のいずれかのペプチドにおいて、1～15個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されており、且つアドレノメデュリン活性を有するペプチド、
    （v）（i）～（iv）のいずれかのペプチドにおいて、C末端がアミド化されているペプチド、並びに
    （vi）（i）～（iv）のいずれかのペプチドにおいて、C末端にグリシン残基が付加されているペプチド
    からなる群より選択されるペプチドである、請求項1に記載の化合物。
  3. 　前記アドレノメデュリン又はその修飾体が、下記：
    （a）配列番号1のアミノ酸配列からなるペプチド、又は配列番号1のアミノ酸配列からなり、且つ16位のシステイン残基と21位のシステイン残基とがジスルフィド結合を形成しているペプチド；
    （b）配列番号3のアミノ酸配列からなるペプチド、又は配列番号3のアミノ酸配列からなり、且つ16位のシステイン残基と21位のシステイン残基とがジスルフィド結合を形成しているペプチド；
    （c）配列番号5のアミノ酸配列からなるペプチド、又は配列番号5のアミノ酸配列からなり、且つ16位のシステイン残基と21位のシステイン残基とがジスルフィド結合を形成しているペプチド；
    （d）配列番号7のアミノ酸配列からなるペプチド、又は配列番号7のアミノ酸配列からなり、且つ16位のシステイン残基と21位のシステイン残基とがジスルフィド結合を形成しているペプチド；
    （e）配列番号9のアミノ酸配列からなるペプチド、又は配列番号9のアミノ酸配列からなり、且つ14位のシステイン残基と19位のシステイン残基とがジスルフィド結合を形成しているペプチド；
    （f）配列番号11のアミノ酸配列からなるペプチド、又は配列番号11のアミノ酸配列からなり、且つ14位のシステイン残基と19位のシステイン残基とがジスルフィド結合を形成しているペプチド；
    （g）前記（a）～（f）のいずれかのペプチドにおいて、前記ジスルフィド結合が、エチレン基によって置換されており、且つアドレノメデュリン活性を有するペプチド；
    （h）前記（a）～（g）のいずれかのペプチドにおいて、1～15個のアミノ酸残基が欠失、置換若しくは付加されており、且つアドレノメデュリン活性を有するペプチド；
    （i）前記（a）～（h）のいずれかのペプチドにおいて、C末端がアミド化されているペプチド；並びに
    （j）前記（a）～（h）のいずれかのペプチドにおいて、C末端にグリシン残基が付加されているペプチド；
    からなる群より選択されるペプチドである、請求項1又は2に記載の化合物。
  4. 　アドレノメデュリン又はその修飾体から誘導されるペプチド部分Bの前駆体と、パルミトイル基及びポリエチレングリコール基からなる群より選択される修飾基Aの前駆体と、2価基Lnの前駆体とを連結させて、式（I）で表される化合物を得る、連結工程を含む、請求項1～3のいずれか1項に記載の化合物の製造方法。
  5. 　請求項1～3のいずれか1項に記載の化合物を有効成分として含有する医薬。
  6. 　循環器疾患、炎症性疾患又は末梢血管疾患の予防又は治療に使用するための、請求項5に記載の医薬。
  7. 　請求項1～3のいずれか1項に記載の化合物を有効成分として含有する、循環器疾患、炎症性疾患又は末梢血管疾患の予防又は治療剤。
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Cited By (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2017047788A1 (ja) * 2015-09-18 2017-03-23 国立大学法人宮崎大学 長時間作用型アドレノメデュリン誘導体
JP2017178866A (ja) * 2016-03-31 2017-10-05 国立大学法人 宮崎大学 アドレノメデュリン凍結乾燥製剤の製造方法
WO2018181638A1 (ja) * 2017-03-29 2018-10-04 国立大学法人宮崎大学 長時間作用型アドレノメデュリン誘導体
WO2021112220A1 (ja) * 2019-12-05 2021-06-10 国立大学法人 宮崎大学 異常タンパク質蓄積性神経変性疾患の治療剤
WO2021112235A1 (ja) * 2019-12-05 2021-06-10 国立大学法人宮崎大学 Ｃ３腎症を予防又は治療するための医薬、医薬組成物及び補体Ｃ３ｂ分解促進剤
WO2021201271A1 (ja) 2020-04-02 2021-10-07 国立大学法人宮崎大学 新規アドレノメデュリン類縁体、その製造方法及びその医薬用途
WO2022030580A1 (ja) * 2020-08-06 2022-02-10 国立大学法人宮崎大学 長時間作用型新規アドレノメデュリン誘導体、その製造方法及びその医薬用途
WO2022054825A1 (ja) * 2020-09-09 2022-03-17 国立大学法人宮崎大学 ウイルス性感染症を有する対象における症状又は障害を予防又は治療するための医薬
WO2022054826A1 (ja) * 2020-09-09 2022-03-17 国立大学法人宮崎大学 抗ウイルス剤

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106164088B (zh) * 2014-03-20 2021-11-23 国立大学法人宫崎大学 长效肾上腺髓质素衍生物

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2008051383A2 (en) * 2006-10-19 2008-05-02 Amgen Inc. Use of alcohol co-solvents to improve pegylation reaction yields
WO2012138867A2 (en) * 2011-04-07 2012-10-11 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Long-acting peptide analogs
WO2013064508A1 (en) * 2011-11-03 2013-05-10 Bayer Pharma Aktiengesellschaft Polyethylene glycol based prodrug of adrenomedullin and use thereof

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS4830093B1 (ja) 1969-10-29 1973-09-17
JP2774769B2 (ja) 1993-04-26 1998-07-09 賢治 寒川 アドレノメデュリン
US6858580B2 (en) * 2001-06-04 2005-02-22 Nobex Corporation Mixtures of drug-oligomer conjugates comprising polyalkylene glycol, uses thereof, and methods of making same
TW200522976A (en) 2003-09-19 2005-07-16 Novo Nordisk As Novel plasma protein affinity tags
WO2005044846A1 (ja) * 2003-10-24 2005-05-19 Mochida Pharmaceutical Co., Ltd. アドレノメデュリン２およびその用途
US8475764B2 (en) * 2004-05-24 2013-07-02 Institut De Cardiologie De Montreal Labelled adrenomedullin derivatives and their use for imaging and therapy
JP4830093B2 (ja) 2005-04-08 2011-12-07 国立大学法人 宮崎大学 非細菌性の炎症性疾患の予防又は治療剤
US9629895B2 (en) 2011-01-12 2017-04-25 University Of Miyazaki Method for prevention or treatment of intractable inflammatory bowel disease
CN106164088B (zh) 2014-03-20 2021-11-23 国立大学法人宫崎大学 长效肾上腺髓质素衍生物
CN108026182B (zh) * 2015-09-18 2022-04-26 国立大学法人宫崎大学 长效肾上腺髓质素衍生物

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2008051383A2 (en) * 2006-10-19 2008-05-02 Amgen Inc. Use of alcohol co-solvents to improve pegylation reaction yields
WO2012138867A2 (en) * 2011-04-07 2012-10-11 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Long-acting peptide analogs
WO2013064508A1 (en) * 2011-11-03 2013-05-10 Bayer Pharma Aktiengesellschaft Polyethylene glycol based prodrug of adrenomedullin and use thereof

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
K.KUBO ET AL.: "Biological properties of adrenomedullin conjugated with polyethylene glycol", PEPTIDES, vol. 57, 27 May 2014 (2014-05-27), pages 118 - 121, XP028854862 *
See also references of EP3127914A4 *

Cited By (20)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP6991569B2 (ja) 2015-09-18 2022-02-15 国立大学法人 宮崎大学 長時間作用型アドレノメデュリン誘導体
JP2022019883A (ja) * 2015-09-18 2022-01-27 国立大学法人 宮崎大学 長時間作用型アドレノメデュリン誘導体
JPWO2017047788A1 (ja) * 2015-09-18 2018-07-05 国立大学法人 宮崎大学 長時間作用型アドレノメデュリン誘導体
US11478551B2 (en) 2015-09-18 2022-10-25 University Of Miyazaki Long-acting adrenomedullin derivative
EP3351561A4 (en) * 2015-09-18 2019-05-15 University of Miyazaki PROLONGED ACTION ADRENOMEDULLIN DERIVATIVE
AU2016324119B2 (en) * 2015-09-18 2019-11-14 Himuka AM Australia Pty Ltd. Long-acting adrenomedullin derivative
WO2017047788A1 (ja) * 2015-09-18 2017-03-23 国立大学法人宮崎大学 長時間作用型アドレノメデュリン誘導体
US10842879B2 (en) 2015-09-18 2020-11-24 University Of Miyazaki Long-acting adrenomedullin derivative
JP2017178866A (ja) * 2016-03-31 2017-10-05 国立大学法人 宮崎大学 アドレノメデュリン凍結乾燥製剤の製造方法
JP7001285B2 (ja) 2017-03-29 2022-01-19 国立大学法人 宮崎大学 長時間作用型アドレノメデュリン誘導体
JPWO2018181638A1 (ja) * 2017-03-29 2020-02-13 国立大学法人 宮崎大学 長時間作用型アドレノメデュリン誘導体
WO2018181638A1 (ja) * 2017-03-29 2018-10-04 国立大学法人宮崎大学 長時間作用型アドレノメデュリン誘導体
JPWO2021112235A1 (ja) * 2019-12-05 2021-06-10
WO2021112235A1 (ja) * 2019-12-05 2021-06-10 国立大学法人宮崎大学 Ｃ３腎症を予防又は治療するための医薬、医薬組成物及び補体Ｃ３ｂ分解促進剤
WO2021112220A1 (ja) * 2019-12-05 2021-06-10 国立大学法人 宮崎大学 異常タンパク質蓄積性神経変性疾患の治療剤
JP7499533B2 (ja) 2020-04-02 2024-06-14 国立大学法人 宮崎大学 新規アドレノメデュリン類縁体、その製造方法及びその医薬用途
WO2021201271A1 (ja) 2020-04-02 2021-10-07 国立大学法人宮崎大学 新規アドレノメデュリン類縁体、その製造方法及びその医薬用途
WO2022030580A1 (ja) * 2020-08-06 2022-02-10 国立大学法人宮崎大学 長時間作用型新規アドレノメデュリン誘導体、その製造方法及びその医薬用途
WO2022054826A1 (ja) * 2020-09-09 2022-03-17 国立大学法人宮崎大学 抗ウイルス剤
WO2022054825A1 (ja) * 2020-09-09 2022-03-17 国立大学法人宮崎大学 ウイルス性感染症を有する対象における症状又は障害を予防又は治療するための医薬

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