WO2015104484A1 - Extrait végétal comprenant des sucrose-esters en tant que principe actif pour son utilisation dans une composition cosmétique, dermatologique ou nutracosmétique - Google Patents

Extrait végétal comprenant des sucrose-esters en tant que principe actif pour son utilisation dans une composition cosmétique, dermatologique ou nutracosmétique Download PDF

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skin
phase
extract
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esters
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PCT/FR2015/000011
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Rémi LAVILLE
Esmeralda CICCHETTI
Sébastien Garnier
Leslie DUROURE
Gérard MANZONE
Jérémie BORSOTTO
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Cosmo International Ingredients
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Definitions

  • the present invention is in the field of cosmetics, dermatology and nutracosmetics.
  • the invention relates to a plant extract derived from the calyx of one of the numerous plants of the Solanaceae family, of the genus Ph sis comprising mainly one or more medium polar to apolar sugar sucrose esters having a carbon number of the acyl groups of Cl to C10. for its use as an active ingredient in cosmetic, dermatological or nutracosmetic compositions.
  • the invention also relates to the purified sucrose esters of the plant extract or the synthesized sucrose esters as described for the same use.
  • the invention also relates to a cosmetic, dermatological or nutracosmetic composition comprising as active ingredient, in a suitable physiological medium, a plant extract or synthesized sucrose-esters. It also relates to the process for preparing said plant extract.
  • the cosmetic, dermatological and nutracosmetic compositions are intended to improve the hydration, the barrier function of the epidermis, to promote healing, to depigment the skin and to fight preventively and / or curatively against skin aging.
  • the skin is a vital organ composed of several layers (dermis, proliferative layers and stratum corneum) which covers the entire surface of the body and essentially provides a barrier function vis-à-vis the external environment.
  • This barrier function is based in particular on the quality of the epidermis which depends in particular on the state of the stratum corneum and the balance between proliferation and differentiation of epidermal keratinocytes.
  • Keratinocytes are cells constituting 90% of the superficial layer of the skin (epidermis) and integuments (nails, hair, hair). They synthesize keratin, a fibrous and insoluble protein in water, which gives the skin its impermeability and external protection properties.
  • the epidermis is divided into four layers based on the morphology of the keratinocytes, which pass gradually from the basal layer to the upper layers by cell differentiation to the stratum corneum or they form a layer of dead cells called dander, by apoptosis. This layer is a protective barrier and reduces the loss of water in the body. Keratinocytes are in perpetual renewal. They take about 1 month to go from the basal layer to the stratum corneum but this process can be accelerated in case of hyperproliferation of keratinocytes (psoriasis).
  • keratinocyte differentiation is a biological process that can intervene in the treatment of the manifestations of skin aging, both in the barrier function of the skin and in the formation of wrinkles.
  • active inhibiting the differentiation of keratinocytes include retinoids (retinol, retinoic acid among others) which are recognized as active ingredients and cosmetic dermatological acting against many skin problems such as psoriasis, acne and wrinkles. 21 '22 However, retinoids induce inflammation of the skin encouraging research laboratories investigate new active retinoid-like inhibitors of differentiation of non-inflammatory keratinocytes. 23
  • Fibroblasts are cells found in connective tissue, sometimes called support cells. It is in particular resident cells of the dermis that ensure consistency and flexibility. They secrete proteoglycans and glycoproteins. They secrete, in particular, collagen, elastin and fibrinins, of which fibrillin 1.
  • Fibrillin 1 is a glycoprotein that belongs to a family of proteins comprising three members, whose regulation remains poorly known today. It is secreted by both fibroblasts and keratinocytes. It is the major element of microfibrils in elastic and non-elastic extracellular matrices. Fibrillin 1 thus participates in the formation of fibers and their functional and structural properties play a key role in the elasticity of the connective tissue, especially at the level of the dermo-epidermal junction. Indeed, it allows an anchoring of the epidermal cells to the elastic fibers of the dermis.
  • Fibrillin 1 is cited, sometimes with elastin, as a protein involved in the processes of firmness and elasticity 9,10 , acting in the anti-aging mechanism 11 ' 12 ' 13 ' 14 ' 15 , and is used in particular as a biomarker of the acceleration of the aging by the ultraviolet rays 16 ' 17 ' 18 , and / or for the treatment of certain cicatricial processes as for stretch marks.
  • the activation of the synthesis of fibrillin 1 would thus make it possible to treat the skins aged intrinsically, said genetically programmed or chronological, or extrinsically, in particular due to an oxidative stress like the UV, the tobacco or the pollution and to treat the scars of the skin.
  • fibroblasts and keratinocytes play a primordial role in the biological process of the skin, in particular by the secretion of fibrillin 1, to regulate firmness, elasticity, cell cohesion and in the process of healing and aging of the skin. skin.
  • the present invention consists mainly in the discovery that a certain class of sucrose-esters, present in certain plant extracts, or synthesized, exhibit interesting biochemical and biological activities on the skin, superficial body growths and mucous membranes, in particular to improve hydration, the barrier function of the epidermis and prevent and / or fight against the signs of skin aging.
  • Sucroesters are acyl esters of one or more acyl groups with a number of carbon more or less important (Cl to C22 for example) and a sugar.
  • sugar is sucrose and is then referred to as sucrose-esters or sucroesters.
  • the sucrose esters have an amphiphilic character which can be modulated according to the degree of esterification of the sugar and the nature of the acyl groups.
  • sucrose-esters are known to provide an alternative solution to industries in the surfactant sector because they have certain advantages such as their safety, lack of taste and odor and their non-ionic character.
  • the applications of sucrose-esters as surfactants are diverse such as in the field of food processing, detergency, cosmetics and pharmaceuticals.
  • sucrose-esters found on the market are mainly of synthetic origin and biosynthetic pathways are increasingly developed to claim an eco-responsible process and a 100% natural product.
  • sucrose esters have biological activities such as anti-bacterial, anti-inflammatory, antiparasitic, and can modulate multi-drug resistance. 5 '6 Compared with synthetic sucrose esters, acyl groups of natural sucrose esters may also be aromatic in nature (benzoate, ). 7 These aromatic sucrose-esters are the subject of much research in medicinal chemistry as antitumor agents. 8
  • sucrose esters to increase the penetration of biological actives through the skin.
  • sucrose-esters obtained by synthesis, are sucrose monolaurate or alternatively the mixture of sucrose of coconut fatty acids whose major fatty acid is lauric acid (C12).
  • JP61271205 discloses that certain very long chain synthetic glucose esters (greater than 22 carbons), in combination with glycosylceramide or ceramide, are useful for increasing the wettability, flexibility and elasticity of the skin.
  • JP 2001 122731 discloses that a plant extract, without indicating the plant or part of the plant, is useful in cosmetics for remedying the dryness of the skin and as a detergent.
  • the solvents cited to obtain the extraction are essentially polar and therefore lead to the extraction of polar molecules.
  • JP 2011 051920 discloses the use of an extract of Physalis peruviana to whiten skin and reduce age spots. In this document, the fruit of Physalis peruviana is used.
  • the document FR 2 896 155 discloses the use of Physalis extract, in particular alkenkegi, to act in the field of cosmetics against aging.
  • the extraction process of the active molecules is a hydrophilic and polar extraction and the extracted molecules are therefore polar, especially polyphenols, whitanolides and sugars.
  • sucrose esters an interesting class of substances for cosmetics
  • Perfumery und kosmetik, Huethig, Heidelberg, DE, vol.66, No. 10, January 1, 1985 discloses synthetic sucrose esters. which are interesting for cosmetics.
  • Table 1 describes sucrose esters having a carbon number of C12 to C18 acyl groups. These sucrose-esters are considered moisturizing, smoothing and anti-irritant and make it possible to obtain non-irritating makeup removers for cosmetics and pharmacy.
  • sucrose esters derived from plant extracts have a biological activity on the activation of fibrillin 1 and on the inhibition of the differentiation of keratinocytes in particular.
  • Said sucrose esters have also surprisingly demonstrated a biological activity on several biological targets such as collagen I, III and IV, elastin, fibrillin-1, involucrine, melanin and fillagrin.
  • the inventors of the present invention have surprisingly demonstrated a new active ingredient of plant origin capable of activating several biological targets related to aging, hydration and depigmentation.
  • the inventors have in particular demonstrated a new active ingredient of plant origin capable of activating the synthesis of fibrillin 1 by fibroblasts and keratinocytes and / or of inhibiting the differentiation of keratinocytes and acting biologically on several biological targets such as collagen I, III and IV, elastin, fibrillin-1, pinvolucrine, melanin and fillagrin, and thus improve the appearance of the skin, mucous membranes and integuments, to prevent and / or fight against manifestations of intrinsic and / or extrinsic skin aging, to help the healing process especially in the case of stretch marks, to prevent and / or fight against dryness of the skin, mucous membranes and / or integuments and to depigment the skin.
  • a new active ingredient of plant origin capable of activating the synthesis of fibrillin 1 by fibroblasts and keratinocytes and / or of inhibiting the differentiation of keratinocytes and acting biologically on several biological targets such as collagen I, III and IV
  • Effective amount of active ingredient the necessary amount of active molecules to obtain the desired result, namely, to obtain a biological activity on the skin, superficial body growths and / or mucous membranes. It will be understood in the present invention "effective amount of plant extract” or “effective amount of sucrose-esters” knowing that the plant extract according to the invention mainly comprises sucrose esters as active ingredient.
  • S "active principle" one or more sucrose-esters or plant extract mainly comprising one or more sucrose-esters.
  • Topical application the act of applying or spreading the active principle according to the invention, or a composition containing it, on the surface of the skin, a mucous membrane or superficial body growths.
  • Cosmetically or dermatologically acceptable that the active ingredient according to the invention, or a composition containing it, is suitable for coming into contact with the skin or a mucosa without causing toxicity or intolerance reactions.
  • compositions are suitable for topical or transdermal use, in contact with the mucous membranes, superficial body growths (nails, hair, hair), scalp and mammalian skin and more particularly human skin, the compositions being ingested or injected into the skin, without risk of toxicity, incompatibility, instability, allergic response.
  • "Physiologically suitable or acceptable medium” or “appropriate excipient” without being limiting, an aqueous or hydroalcoholic solution, a water-in-oil emulsion, a oil-in-water emulsion, a microemulsion, an aqueous gel, an anhydrous gel, a serum, a dispersion of vesicles, a powder.
  • This physiologically acceptable medium forms what is conventionally called the excipient of the composition.
  • "Biologically active" which has an activity in vivo or in vitro characteristic of the activity of the active ingredient according to the invention”.
  • sucrose-esters obtained by extraction of a vegetable matrix are present in the majority in the plant extract, that is to say more than 50% by weight, preferably more than 80%, more preferably more than 90% up to 100%.
  • sucrose-synthesized esters any way to obtain sucrose-esters, by semisynthesis or synthesis, whether by chemical, biochemical or biotechnological synthesis.
  • a first object according to the invention consists of a plant extract derived from the calyx of one of the numerous plants of the Solanaceae family, of the genus Physalis mainly comprising one or more medium polar to apolar sugar sucrose esters having a carbon number of the acyl groups of C1 to C10 for use as a biologically active active ingredient on skin, integuments and mucous membranes.
  • the invention consists of a plant extract derived from the calyx of one of the numerous plants of the family Solanaceae, of the genus Physalis mainly comprising one or more medium polar to apolar sucrose esters having a carbon number of the acyl groups of Cl. to C10 for use as a biologically active active ingredient on skin, integuments and mucous membranes, excluding anti-inflammatory activity.
  • This biological activity is more precisely to improve the appearance of the skin, mucous membranes and superficial body growths, to prevent and / or fight against the manifestations of intrinsic and / or extrinsic skin aging, to help the healing process, particularly in the skin. Stretch marks, to prevent and / or fight against dryness of the skin, mucous membranes and / or integuments and to depigment the skin.
  • the one or more medium polar to apolar sugar esters having a carbon number of the acyl groups of Cl to C10 are of the following general formula:
  • the medium polar to apolar sucrose esters having a carbon number of the acyl groups of Cl to C10 as described in the general formula are present in the plant extract at a level of 50 to 100% by weight of the total extract, from preferably 80 to 100% by weight of the total extract and more preferably 100% by weight of the total extract. These amounts are based on Examples 1, 2 and 3 which made it possible to test the biological activity of the sucrose-esters present in the plant extract according to the invention.
  • a plant extract comprising from 80 to 100% of medium polar to apolar sucrose esters having a carbon number of C1 to C10 acyl groups. It is also possible to separate the different sucrose-esters obtained to obtain a purified extract of a single sucrose ester as described above.
  • the plant extract comprises one or more of the following sucrose-esters:
  • the plant extract comprises one or more of the following sucrose-esters:
  • the plant extract comes from the chalice of Physalis peruviana.
  • a second object according to the invention relates to medium polar to apolar sucrose-esters having a number of carbons from C1 to C10 acyl groups obtained from the plant extract according to the invention or synthesized, for their use as biologically active principle. active on the skin, superficial body growths and mucous membranes.
  • the invention relates to medium polar to apolar sucrose esters having a number of carbon atoms of Cl to C10 acyl groups obtained from the plant extract according to the invention or synthesized, for their use as biologically active active principle on the skin, the integuments and the mucous membranes, excluding the anti-inflammatory activity.
  • the medium polar to apolar sucrose esters having a carbon number of the acyl groups of Cl to C10 are of the following general formula:
  • the medium polar to apolar sucrose esters having a carbon number of C1 to C10 acyl groups which are useful as active ingredients in cosmetic, dermatological and nutracosmetic compositions, can come from:
  • sucrose esters individually to form an active ingredient based on sucrose-esters according to the invention.
  • Medium polar to apolar sucrose esters having a carbon number of C1 to C10 acyl groups are acyl esters of one or more acyl groups with a number of C1 to C10 carbons and sucrose.
  • a third object according to the invention relates to a cosmetic, dermatological or nutracosmetic composition
  • a cosmetic, dermatological or nutracosmetic composition comprising as active ingredient, in a suitable physiological medium, a plant extract according to the invention or sucrose-esters according to the invention synthesized.
  • composition according to the invention can be formulated in the form of various preparations suitable for topical administration, oral, rectal, vaginal, nasal, atrial or bronchial administration, parenteral administration.
  • the various preparations are suitable for topical administration and include creams, emulsions, milks, ointments, lotions, oils, aqueous or hydro-alcoholic or glycolic solutions, powders, patches , sprays or any other product for external application.
  • the different preparations are suitable for oral administration; the plant extract comprising sucrose-esters that can enter either a food composition or a dietary supplement.
  • the dietary supplement may be in the form of capsules or soft capsules of gelatin or vegetable in the context of the present invention. Said dietary supplement may then contain from 0.01 to 100% by weight of the plant extract.
  • the composition will advantageously be formulated in the form of a preparation adapted for topical administration.
  • the composition will advantageously be formulated in the form of a preparation suitable for oral administration. It may not comprise an excipient and consist entirely of the plant extract mainly comprising the sucrose-esters or sucrose-esters synthesized and advantageously corresponding to the general formula indicated above.
  • compositions according to the invention are intended more particularly for topical administration. These compositions must therefore contain a cosmetically and / or dermatologically acceptable medium, that is to say compatible with the skin and superficial body growths, and cover all cosmetic or dermatological forms. These compositions may especially be in the form of creams, oil-in-water emulsions, or water-in-oil or multiple emulsions, solutions, suspensions, gels, milks, lotions, sticks or powders, and adapted to an application on the skin, lips and / or integuments. These compositions comprise the excipients necessary for their formulation, such as solvents, thickeners, diluents, surfactants, antioxidants, dyes, preservatives, perfumes. They can be used as a care product and / or as a make-up product for the skin.
  • the composition according to the invention may in particular consist of a composition for hair care, and in particular a shampoo, a conditioner, a treatment lotion, a cream or a styling gel, a restructuring lotion for the hair, a mask, etc.
  • the cosmetic composition according to the invention can be used in particular in treatments using an application that is followed or not by a rinse, or in the form of shampoo.
  • the composition according to the invention may advantageously be used in dandruff care. It can also be in the form of dye or mascara to be applied with a brush or a comb, in particular on eyelashes, eyebrows or hair.
  • compositions according to the invention furthermore comprise any additive commonly used in the field of application envisaged as well as the adjuvants necessary for their formulation, such as solvents, thickeners, diluents, antioxidants, dyes, sunscreens, self-tanning agents, pigments, fillers, preservatives, perfumes, odor absorbers, cosmetic or pharmaceutical active ingredients, essential oils, vitamins, essential fatty acids, surfactants, film-forming polymers, etc.
  • additives commonly used in the field of application envisaged as well as the adjuvants necessary for their formulation, such as solvents, thickeners, diluents, antioxidants, dyes, sunscreens, self-tanning agents, pigments, fillers, preservatives, perfumes, odor absorbers, cosmetic or pharmaceutical active ingredients, essential oils, vitamins, essential fatty acids, surfactants, film-forming polymers, etc.
  • D.C. discloses a wide variety, without limitation, of cosmetic and pharmaceutical ingredients commonly used in the skincare industry, which are suitable for use as additional ingredients in the compositions of the present invention.
  • Non-limiting examples of these additional ingredient classes include: healing agents, anti-aging agents, anti-wrinkle agents, anti-atrophy agents, moisturizing agents, softening agents, antibacterial agents, anti-parasitic agents , antifungal agents, fungicidal agents, fungistatic agents, bactericidal agents, bacteriostatic agents, antimicrobial agents, anti-inflammatory agents, anti-pruriginous agents, anesthetic agents, antiviral agents, keratolytic agents, anti-free radical agents, anti-seborrhoeic agents, anti-dandruff agents, agents for differentiating differentiation, proliferation or skin pigmentation, penetration enhancers, desquamating agents, agents stimulating or inhibiting melanin synthesis , whiteners, depigmenting agents, or brighteners, propigmenting agents, auto agents tanning agents, NO-synthase inhibiting agents, antioxidants, free radical scavengers and / or anti-air pollution agents, anti-glycation agents,
  • reducing agents include reducing agents, sequestering agents, bleaching agents and / or skin lighteners, skin conditioning agents (Le., humectants, including miscellaneaous and occlusive agents), moisture-retentive substances, alpha hydroxy acids, beta hydroxy acids, moisturizers, epidermal hydrolytic enzymes, soothing and / or healing agents, skin treating agents, anti-wrinkle agents, agents capable of reducing or treating bags under the eyes, exfoliating agents, thickeners, softeners, gelling polymers, vitamins and their derivatives, wetting agents, peeling agents, calming agents, curative agents for the skin, lignans, preservatives (iephenoxyethanol and parabens), anti-UV agents, cytotoxic agents, anti-neoplastic agents, viscosity modifiers, non-volatile solvents, pearling agents, antiperspirants, depilatories res, vaccines, scented water, skin restructuring agent, excipients, fillers, minerals, anti
  • additional ingredients should not unacceptably alter the benefits of the assets of the invention.
  • additional ingredients may be synthetic or natural such as plant extracts or come from a biofermentation process. Additional examples can be found in FINCI Dictionary & Handbook
  • Such additional ingredients may be selected from the group consisting of: amino sugars, glucosamine, D-glucosamine, N-acetylglucosamine, N-acetyl-D-glucosamine, mannosamine, N-acetyl mannosamine, galactosamine, N-acetylgalactosamine, vitamin B3 and its derivatives, niacinamide, dehydro-sodium acetate, dehydroacetic acid and its salts, phytosterols, salicylic acid compounds, hexamidines, dialkanoyl dihydroxyproline compounds, extracts and soy derivatives, equol, isoflavones, flavonoids, phytantriol, farnesol, geraniol, bisabolol, peptides and their derivatives, di -, tri -, tetra -, penta -, and hexapeptides and their derivatives, lys-thr-thr-lys
  • the cosmetic, dermatological or nutracosmetic composition comprises between 10 "6 and 50% by weight relative to the total weight of the active ingredient composition.
  • the effective amount of active ingredient or plant extract corresponds to the amount necessary to obtain the desired result, namely, to improve the hydration and the barrier function of the epidermis, to prevent and / or fight against the dryness of the skin and mucous membranes and against the manifestations of skin aging, to help the healing process and to depigment the skin.
  • the anti-inflammatory activity is excluded from the field of dermatological activity claimed.
  • the effective amount or the content of active ingredient in the composition according to the invention is from 10 6 to 25% by weight relative to the total weight of the composition, more preferably from 10 "6 to 10% by weight relative to the total weight of the composition.
  • the effective amounts indicated are based on the results given precisely in Examples 21 to 23. Thus, depending on the concentration of sucrose-esters of the extract, the dilution carried out if necessary, the effective amount varies in the proportions indicated ci - before.
  • the cosmetic composition is suitable for topical administration and is particularly suitable for form of an aqueous, hydro-alcoholic or oily solution or in the form of an oil-in-water emulsion, water-in-oil or multiple emulsions or in the form of creams, suspensions or powders; said composition may be more or less fluid or solid and have the appearance of a cream, a lotion, a milk, a shampoo, a serum, an ointment, a gel, a paste, a mousse or a stick.
  • a fourth object according to the invention consists of a cosmetic treatment method for improving the appearance of the skin, mucous membranes or integuments, for preventing and / or combating the dryness of the skin and mucous membranes, for preventing and / or to fight against the cutaneous signs of aging and / or photo-aging, to fight against the loss of elasticity and firmness of the skin and to depigment the skin, a process consisting in applying to the surface of the skin and / or hair, an effective amount of a cosmetic composition according to the invention as defined above.
  • the depigmenting activity of the cosmetic composition according to the invention has an inhibitory activity on the production of melanin.
  • a fifth object according to the invention consists of an effective amount of a plant extract according to the invention or sucrose-esters according to the invention synthesized, alone or in combination with other active ingredients, for its or their use in the dermatological treatment of pathologies involving a pathological dryness of the skin, mucous membranes or integuments and to promote healing.
  • the invention consists of an effective amount of a plant extract according to the invention or of sucrose-esters according to the invention synthesized, alone or in combination with other active ingredients, for its or their use in the dermatological treatment of pathologies involving pathological dryness of the skin, mucous membranes or integuments and to promote healing, excluding anti-inflammatory activity.
  • the effective amount is also based on the results given precisely in Examples 21 to 23.
  • a sixth object according to the invention consists in using an effective amount of a plant extract according to the invention or sucrose-esters according to the invention synthesized, alone or in combination with other active ingredients, to prepare a nutracosmetic composition to be ingested for improving the appearance of the skin, mucous membranes or integuments, to prevent and / or fight against dryness of the skin and mucous membranes, to prevent and / or fight against the cutaneous signs of aging and / or photo-aging.
  • a seventh object according to the invention consists of a process for preparing a plant extract or active ingredient essentially comprising one or more sucrose-esters.
  • any method of extraction and purification known to those skilled in the art can be used to prepare the plant extract according to the invention comprising sucrose-esters as described above and having a biological activity on the skin, the mucous membranes and the dander.
  • the plant and parts of the plant can be harvested by so-called wild harvest, by conventional cultivation, by cultivation above ground or in hydroponic culture.
  • the process for preparing the crude extract of the plant extract may be carried out by more or less conventional solid / liquid plant extraction methods, mainly using organic solvents, which are well known to the man of the art. art.
  • the extraction process can be single contact batch, semi-continuous or continuous. It can also be multi-stage, co-current or countercurrent. It can be assisted by ultrasound, by microwaves, by thermomagnetic induction, by pulsed electric fields or under pressure.
  • the vegetable matrix may be prepared beforehand by drying and then by grinding or cryomilling, by flash flash or controlled instantaneous relaxation. Also, the plant matrix can also be digested by enzymes in order to release the maximum of molecules of interest.
  • the solvents that can be used to extract the sucrose esters are:
  • alcohols such as methanol, ethanol, propanol, isopropanol or butanol, etc.
  • glycols such as ethylene glycol, propylene glycol, 1,2 and 1,3 propanediols, butylene glycol, glycerol, etc.
  • ketones such as acetone, methyl isobutyl ketone, methyl ethyl ketone, etc.
  • aliphatic or cyclic ethers such as diethyl ether, methyl tertiary butyl ether, ethyl tert-butyl ether, tetrahydrofuran (THF), methyl THF,
  • glycol ethers such as 2-methoxy-1-methylethyl acetate, 2- (2-butoxyethoxy) ethanol and its acetate, etc.
  • esters of longer or shorter chain acids and of longer or shorter chain alcohols such as ethyl acetate, ethyl lactate, ethyl propionate, ethyl oleate, methyl stearate, oleyl oleate, ...
  • ionic liquids such as 1- (4-sulfobutyl) -3-methylimidazolium hydrogeno
  • supercritical fluids such as carbon dioxide with or without co-solvents
  • agro-solvents such as vegetable oils, terpenes such as limonene or pinene,
  • the extract thus obtained can be purified by various methods, in particular by liquid-liquid extraction, by centrifugation, by adsorption (for example by decolorization with active charcoal or bleaching earth), by sublimation, by crystallization, by preparative chromatography, by distillation especially by molecular distillation of the centrifugal or scraped film type or by membrane filtration.
  • a subsequent filtration and desolvation step may be carried out.
  • the crude plant extract is obtained with one of the following solvents: cyclohexane, ethyl acetate and supercritical carbon dioxide with an addition of a cosolvent such as a alcohol, for example an aliphatic alcohol such as ethanol, or a vegetable oil, preferably refined or an ester such as caprylate / glycerol caprate.
  • a cosolvent such as a alcohol, for example an aliphatic alcohol such as ethanol, or a vegetable oil, preferably refined or an ester such as caprylate / glycerol caprate.
  • the process for preparing a plant extract according to the invention comprises the following stages: drying of the plant part,
  • the method according to the invention comprises the following steps:
  • the calyxes of Physalis peruviana are milled in a knife mill with a grid of 1 mm, which makes it possible to obtain a powder whose particle size is mainly around 500 ⁇ .
  • the powder (50 g) thus obtained is placed in a cellulose cartridge, this cartridge is placed in a Soxhlet type extractor.
  • the solvent used to extract is 96% ethanol (50 ml), with about twenty cycles of extraction.
  • the extract in a solvent medium is evaporated in a rotary evaporator to remove the solvent.
  • the calyxes of Physalis peruviana are milled in a knife mill with a grid of 1 mm, which makes it possible to obtain a powder whose particle size is mainly around 500 ⁇ .
  • the powder thus obtained (50 g) is placed in a cellulose cartridge, this cartridge is placed in a Soxhlet type extractor.
  • the solvent used to extract is ethyl acetate, with twenty cycles of extraction.
  • the extract thus obtained in a solvent medium can be purified by liquid-liquid extraction on a column with water, at a temperature of between 20 ° C. and 65 ° C., against current to remove water-soluble molecules.
  • the organic phase comprising ethyl acetate and the extract is then evaporated in a rotary evaporator to remove the solvent.
  • the washed extract is exsanguinated with polyphenols, whitanolides and free sugars.
  • the calyxes of Physalis peruviana are milled in a knife mill with a grid of 1 mm, which makes it possible to obtain a powder whose particle size is mainly around 500 ⁇ .
  • the powder thus obtained (500 g) is placed in a supercritical fluid extractor.
  • the solvent used to extract is carbon dioxide with an addition of a cosolvent such as an aliphatic alcohol such as ethanol.
  • the extraction parameters are for a pressure of between 75 and 200 bars, a temperature of between 35 and 50 ° C., a flow rate of CO 2 of between 2 and 20 kg / h, and 1 to 5% of ethanol per report to C0 2 .
  • the extract thus obtained in a solvent medium is decolorized with active charcoal or bleaching earth, crystallized under cold conditions, then filtered and evaporated.
  • the extract thus obtained can be purified by centrifugal molecular distillation or scraped film, in order to obtain a calyx extract of Physalis peruviana at 99.9% of chromatographic purity.
  • a calyx extract of Physalis (1 g) obtained according to Example 1 is solubilized in 6 ml of a solvent mixture CH3CN / H 2 O 1: 1.
  • the solution is filtered on a cartridge by Solid Phase Extraction (SPE) (Cl 8, 10 g) which is rinsed with 10 ml of the same mixture CH 3 CN / H 2 0 1: 1.
  • SPE Solid Phase Extraction
  • fraction 1 (300 mg).
  • the charged cartridge is then successively eluted according to the solvent gradient CH 3 CN / H 2 0 7: 3 (20 mL) and 1: 0 (20 mL) to obtain fractions 2 (500 mg) and 3 (100 mg).
  • Fractions 1, 2 and 3 are analyzed by HPLC-DAD-DEDL and are compared with the chromatogram of the initial extract.
  • Fraction 1 consists of polyphenolic compounds, withanolides and physalins and polar compounds such as sugars.
  • Fraction 2 is composed of sucrose-esters.
  • Fraction 3 is a lipid fraction.
  • Fraction 2 (500 mg) is subjected to fractionation by preparative HPLC (Cl 8, 50 ⁇ 150 mm, 5 ⁇ m) according to a H 2 O / CH 3 CN solvent gradient (from 3: 7 to 0: 1 in 35 minutes). to obtain the fractions:
  • transcriptomic analysis was carried out after 4 to 24 hours incubation using the Affymetrix Gene Atlas TM platform and the U219 "millet human transcriptome” chip containing 36000 transcripts and variants.
  • NHEK Normal human epidermal keratinocytes
  • Cell type Normal human epidermal keratinocytes Culture conditions 37 ° C, 5% C0 2 Culture medium: Keratinocyte-SFM supplemented with
  • EGF Epidermal Growth Factor
  • Cell Type Normal Human Dermal Fibroblasts (NHDF), Culture Conditions 37 ° C, 5% CQ 2 Culture Medium: DMEM supplemented with
  • Test medium DMEM supplemented with
  • RNAs of each sample were extracted using TriPure Isolation Reagent ® according to the protocol recommended by the supplier.
  • the quantity and quality of the RNAs were evaluated by capillary electrophoresis (Bioanalyzer 2100, Agilent).
  • RNA amplification and synthesis of biotinylated RNA analogues were performed using the GeneChip 3'IVT Express kit (Affymetrix®).
  • the single-stranded complementary DNAs (cDNAs) were synthesized by reverse transcription of the total RNAs in the presence of oligo (dT). By action of a DNA polymerase, a double-stranded cDNA (dsDNA) was then synthesized.
  • dsDNA double-stranded cDNA
  • Biotinylated RNAs were then synthesized from the cDNAs and in the presence of biotinylated ribonucleotide analogs.
  • biotinylated RNAs were hydrolyzed into fragments of 35 to 200 nucleotides with a peak at 100-120 nucleotides (fragmented targets).
  • This step was carried out using the kit “GeneAtlas TM hybridization, wash and stain kit for 3'IVT arrays” (Affymetrix ® ).
  • Hybridization control probes BioB, BioC and BioD
  • control polyA RNAs Lis, Phe and Dap
  • the poly-A control RNAs are used to validate the quality of the marking.
  • the raw data has been transferred and processed under Microsoft Excel software.
  • the standard error of the mean (esm) represents the deviation of the sample mean from the average of the true population.
  • the esm is calculated by dividing the Sd by the square root of the sample size.
  • Viability (%) (OD posed com / OD control) x 100 6 Results
  • Fibrillin 1 (major constituent of the extracellular matrix) is secreted by fibroblasts and is an important component of microfibrils. It is particularly involved in the assembly of elastin fibers, and plays an important role in the elasticity of the skin.
  • the active ingredient according to the invention may be present in the various compositions in an effective amount of between 10 -6 to 3% by weight of the composition.
  • Example 6 Compositions for oral administration
  • the calyx extract of Physalis peruviana containing the sucrose-esters, is incorporated into oral compositions, in compositions allowing the administration of 50 mg to 200 mg of extract per day.
  • This composition is administered from 4 to 6 capsules per day.
  • skimmed milk powder almonds, glycerol, sorbitol,
  • sweetened condensed milk soy lecithin, mono and
  • This composition is administered once a day.
  • Skimmed milk powder flavoring, fructose, egg white,
  • This composition is administered once a day.
  • Active ingredient according to the invention (according to Example 1 or 2 or 3) 2.00
  • phase A weigh phase A and allow to swell without stirring for 30 minutes. Put phase A to heat at 75 ° C in a water bath. Weigh and mix phase B. Weigh phase C and heat to 75 ° C in a water bath. Add phase B to phase A. Mix well. With stirring for phase C in phase A + B. Well homogenize. Add phase D, extemporaneously Add phase E, mix well. Add phase F, mix well.
  • Example 8 Cosmetic composition - Gel form for the face
  • Active ingredient according to the invention (according to Example 1 or 2 or 3) 1.00
  • Phase A Disperse Phase A with agitation. Sprinkle the Ultrez 10 in the water, allow to swell for 30 minutes. Heat Phase C until completely dissolved. Mix Phase A with Phase B. Add C in Phase (B + A). Add Phase D, with stirring, to the Phase (A + B + C). Add Phase E. Neutralize with Phase F. Add Phase G and mix.
  • Phase A Sprinkle carbomer in water, allow to swell for 15 minutes.
  • Mix Phase B. Pour Phase B into Phase A, homogenize. Then Weigh Phase C, mix and add in Phase A + B, with stirring. Allow to swell 1 hour. Extemporaneously add Phase D in the previous phase with agitation. Neutralize with Phase E. Stir. Then add Phase F. Allow to mix for at least 1 hour with stirring and then add Phase G. Mix well.
  • Active ingredient according to the invention (according to Example 1 or 2 or 3) 1.00
  • Example 11 Cream for the body.
  • Active ingredient according to the invention (according to Example 1 or 2 or 3) 2.00
  • Active ingredient according to the invention (according to Example 1 or 2 or 3) 2.00
  • Active ingredient according to the invention (according to Example 1 or 2 or 3) 2.00
  • Active ingredient according to the invention (according to Example 1 or 2 or 3) 2.00
  • Phase A Pour Ultrez 10 into the water and allow to swell for 30 minutes. With propeller stirring (300 rpm), pour in Phase B and allow to swell for 1 hour. Add Phase A in Phase B with propeller stirring (300 rpm), mix well. Weigh and stir Phase C, weigh Phase D and mix. Add Phase C to Phase A + B with knife stirring (300 rpm). Add Phase D to Phase A + B + C. Well homogenize. Add Phase E then Phase F and G and finally Phase H. Mix well.
  • Active ingredient according to the invention (according to Example 1 or 2 or 3) 1.00
  • Phase A Disperse Ultrez 10 in water and allow to swell for 20 minutes. Mix Phase B and heat to 60 ° C until completely diluted. Add Phase B to Phase A with agitation. Heat Phase A + B. Weigh Phase C and heat to 75 ° C. Add Phase G to Phase A + B with stirring. Homogenize carefully and add Phase D. Add Phase E. Neutralize with Phase F at 50 ° C. Add Phase G and H at 35 ° C and adjust the pH to 6.3 with NaOH.
  • Active ingredient according to the invention (according to Example 1 or 2 or 3) 1.00
  • Example 18 Moisturizing makeup.
  • Active ingredient according to the invention (according to Example 1 or 2 or 3) 0.50
  • the Uchuva extract is abbreviated EUc.
  • the Uchuva extract comes from the extraction method described in Example 3 having 99.9% chromatographic purity sucrose-esters.
  • the dermis provides the epidemic with a solid support, it is also its nurturing element. It consists mainly of fibroblasts and an extracellular matrix composed mainly of coUagene, elastin and a substance called the fundamental substance. These components are synthesized by fibroblasts. The cohesion between the epidermis and the dermis is ensured by the dermal-epidermal junction.
  • CoUagens are the major proteins of the extracellular matrices of the skin. To date, 20 types of coUagene are identified and noted from I to XX. The coUagens predominantly present in the entire dermis are the type I and co coUagens that form the extracellular matrix of the entire dermis (these are the coUagens that constitute 70-80% of the dry weight of the dermis). With aging, the dermis gets older and wrinkles appear on the surface of the skin.
  • Collagen I is the majority collagen that gives the skin its mechanical resistance.
  • This protein represents 90% of the collagen of a vertebrate. It constitutes the frame of the bone (to compare with the reinforcements of the reinforced concrete), and more generally the ordinary connective tissues. It is found in bones, skin, tendons, cornea and internal organs.
  • the cells were treated 24h in the presence of the test products.
  • the cells were then fixed with formalin and the expression of the proteins was detected by immunofluorescence.
  • Fluorescent markings were imaged and quantified by automated microscopy (Arrayscan CellomicsTM). Fluorescence was quantified by the Bioapplication Compartmental Analysis.
  • the compound was contacted with the cells for 24 hours. During the last 3 hours of Roche's WST1 ready-to-use calorimetric test was introduced into the medium.
  • This reagent contains tetrazolium salts, a purple indicator. This reagent is cleaved into formazan, a yellow indicator, by metabolically active cells. The level of yellow coloration is therefore proportional to the number of living cells.
  • the absorbance measurement is 450nm. The test considers that a value less than 90% of the control indicates a cytotoxicity of the possible product (symbolized by a green line in the graphs). It may also indicate that the metabolic activity of the cells is decreased. A value below 75% indicates significant cytotoxicity (symbolized by a red line in the graphs)
  • Uchuva extract is cytotoxic at the highest concentrations tested from 100 to 20 ppm and becomes less cytotoxic from 2ppm.
  • Uchuva extract is tested at the following concentrations 2 - 1 - 0.5 ppm.
  • Uchuva extract restores Collagen I expression in young cells.
  • the expression of Collagen I is not homogeneous, some cells have a strong marking and others have a weaker marking.
  • the expression reactivated by the Uchuva extract is more homogeneous in the treated cells.
  • Uchuva extract is an ingredient that acts on collagen I, the target of skin aging, by restoring protein expression to that observed in young cells. 2 - Evaluation of the effect of Uchuva extract on the production of Collagen I by fibroblasts
  • the NHDF cells are seeded at 0, in a 96-well plate, at a rate of 4x10 cells per well. They are treated on day 1 for 48 hours of culture in complete medium. The concentrations of the test substance are expressed as% of the extract.
  • the stock solution of the product to be tested was prepared in dimethylsulfoxide (DMSO) at the concentration of
  • the first dilution was carried out at 1/1000 .
  • the following dilutions were performed at 1 ⁇ 2 while maintaining the final DMSO concentration at 0.1%.
  • the RN test is carried out on D3: the medium is removed and the cells are rinsed with 250 of PBS preheated to 37 ° C. 200 ⁇ l of neutral red are added to the cells. After incubation for 3 hours at 37 ° C., 5% CO 2, the medium containing the neutral red is removed and the cells are then rinsed with 2 ⁇ 200 ⁇ l of PBS preheated to 37 ° C. 100 ⁇ l of revealing solution (ethanol 50% - 1% acetic acid) are added and the cells are incubated at room temperature with stirring and protected from light for 45 minutes.
  • the OD 540 nm is measured after homogenization.
  • NB Preparation of the neutral red solution: the mother solution of neutral red is prepared at 0.4% in Ultra Pure water (this solution can be stored at 4 ° C for 15 days), it is diluted extemporaneously at 1 / 80th in the complete culture medium and then centrifuged for 10 minutes at 3000 rpm (rpm) before use.
  • the NHDF cells are seeded on day 0, in a 96-well plate, at a rate of 4x10 cells per well. They are treated on day 1 for 48 hours of culture in complete medium.
  • the concentrations of the test substance are expressed as% of the extract.
  • the stock solution of the extract was prepared in DMSO at 20% concentration (w / v).
  • the first dilution was performed at 171000 e .
  • the following dilutions were performed at 1 ⁇ 2 now the concentration of final DMSO at 0.1%.
  • the MTT test is performed on D3: the medium is replaced by 100 ⁇ . MTT at 0.5 g / L in complete medium. After incubation for 3 hours at 37 ° C., 5% CO 2, the MTT solution is replaced by 100 ⁇ l of DMSO. The DO540nm is measured after homogenization (assay condition as specified for the previous test at neutral red).
  • the cells are seeded at 0, on 6-well plates, at a rate of 25 ⁇ 10 cells per well. They are treated on day 1 for 48 hours of culture in complete medium.
  • the concentrations of the test substance are expressed as% of the extract.
  • the stock solution of the extract was prepared in DMSO at a concentration of 20% (w / v).
  • the first dilution was carried out at 1/1000 .
  • the following dilutions were performed by maintaining the final DMSO concentration at 0.016% (corresponding to the concentration of DMSO at the highest concentration of the extract).
  • the culture supernatants are recovered and stored at -80 ° C.
  • the collagen I dosage is carried out according to the instructions of the supplier of the ELISA kit
  • Extract (TUchmTî ⁇ EUC) 8 x IO "5% 12 57.6 69.8 64.8 59.5 63.0 5.5
  • Ummki extract (EUc> 16 x 10 '5 % 12 63.8 63.8 65.5 63.0 64.0 1.06
  • the cells are seeded at 0, on 6-well plates, at a rate of 25 ⁇ 10 6 cells per well. They are treated on day 1 for 48 hours of culture in complete medium.
  • the concentrations of the test substance are expressed as% of the extract.
  • the stock solution of the extract was prepared in DMSO at a concentration of 20% (w / v).
  • the first dilution was carried out at 1/1000 .
  • the following dilutions were made by maintaining the final DMSO concentration at 0.016% (corresponding to the concentration of DMSO at the highest concentration of the extract):
  • the collagen assay ⁇ is performed according to the instructions of the supplier of the ELISA kit (SunRed).
  • Collagen is the major constituent of ECM (approximately 70%) synthesized by fibroblasts. There are fibrillar collagens (I, II, ⁇ , V, XI) and non-fibrillar collagens (IX, XII, XTV, XVI). Collagen fibers are flexible and resist tensile forces in tissues. They form corrugated beams of variable length and thickness. Type IV collagen is particular, it forms the "primary network" of basement membranes (lamina densa). It is involved in cell adhesion, proliferation, migration and in angiogenesis (melanoma). It has a site of interaction with the integrin receptor.
  • Collagen IV with laminins 1, forms a network which constitutes the framework of the basement membrane in order to achieve a structural and functional maintenance of tissues.
  • the cells are seeded on day 8, on Millicell 8-well slides, at 4.10 cells per ml in 400 ⁇ l of complete medium. They are treated on day 1 for 48 hours of culture in complete medium.
  • the concentrations of the test substance are expressed as% of the extract.
  • the stock solution of the extract was prepared in DMSO at a concentration of 20% (w / v).
  • the first dilution was carried out in 1/1000.
  • the following dilutions were performed while maintaining the final DMSO concentration at 0.1%.
  • the cells are fixed with an alcohol / acid mixture.
  • the cells are then labeled with an anti-collagen IV antibody (Rockland) diluted in PBS + BSA / tween at 1: 50 for 1 hour.
  • an anti-collagen IV antibody Rockland
  • the slides are then rinsed twice with PBS.
  • the specific labeling is revealed using a FITC-coupled secondary antibody (Santa Cruz) diluted in PBS + BSA / tween 1/100 for 1 hour.
  • the slides are then rinsed twice with PBS and mounted between blade and coverslip using RotiMount Fluocare + DAPI mounting fluid (Roth).
  • Elastin is a structural glycoprotein (such as laminin and fibronectin) used in the composition of ECM.
  • Elastin is a protein of the structural fibrous protein family. Secreted by fibroblasts mainly during the growth period, it has elastic properties. Its synthesis decreases with age and elastin is replaced by inextensible collagen. Stretch marks are a visible example of this process, which is related to mechanical stresses. Skin aging is a second example. In the extracellular matrix:
  • Elastin is synthesized and secreted in the extracellular space by fibroblasts first in proelastin, then in tropoelastin. Elastin is the major component (up to 90%) of elastic fibers to which fibrillin is added. Thus, collagen, associated with elastin and fibrillin that form elastic fibers, by covalent cross-links, are the main constituents of the extracellular matrix. The total production of elastin stops around puberty. After that, the amount of elastin available will decrease over time.
  • the degradation of elastin is related to the action of elastase, an enzyme secreted by fibroblasts.
  • the enzymatic action of elastase is inhibited by ⁇ -antitrypsin. Inhibition of degradation creates a balance that increases the stability of elastin.
  • Elastin allows cells to bind and allows biological tissue to form.
  • the proper functioning of the skin, lungs, blood vessels, connective tissues, certain tendons and cartilages is closely related to the characteristics of elastin.
  • elastin is elastic. At equal diameter, it is 5 times more elastic than a rubber band. It can stretch up to 150% of its length at rest before breaking. Thus, it allows the tissues to stretch and regain their initial state after stretching, which gives them flexibility.
  • the dermis The dermis:
  • Elastin is found in the dermis of the skin, which acts as a support. During aging, for example, the loss of elasticity and tonicity of the dermis that can no longer oppose the contraction effects of the underlying muscles gives rise to the appearance of wrinkles. In addition, exposure to ultraviolet rays increases the degradation of elastin.
  • NHDFs Normal or young Human Dermal Fibroblasts aged or aged by replicative senescence were seeded in 96-well plates and incubated 24h at 37 ° C., 5% CO 2.
  • the cells were treated 24h in the presence of the test products. The cells were then fixed with formalin and the expression of the proteins was detected by immunofluorescence. Fluorescent markings were imaged and quantified by automated microscopy (Arrayscan Cellomics TM). Fluorescence was quantified by the Bioapplication Compartmental Analysis.
  • Uchuva extract restores the expression of Elastin slightly above the protein level of young cells.
  • the Uchuva extract has an improvement in in vitro elasticity that can be extrapolated in vivo.
  • Methylation is a modification of the N-termini of histones. It can be carried out either on lysines or on arginines and can be concretized by the addition of one, two or three methyl groups. According to the methylated residues and the number of groupings added it is associated with activation or repression of transcription. Long regarded as static, histone methylation appears to be a reversible modification involved in a dynamic process, although more stable than acetylation and phosphorylation. An increasing number of histone demethylases are identified. In general, this type of modification is antagonistic to acetylation, and the deacetylation of lysines must precede their methylation.
  • This antagonism results in the establishment of a certain dynamic equilibrium between the heterochromatin (generally non-expressible and methylated on certain key amino acids) and euchromatin (usually expressible and acetylated) territories.
  • Lysine 9 of histone H3 is known to be associated with repression of surrounding chromatin when methylated.
  • This methylation is recognized by a protein, HP1, which therefore binds to methylated H3.
  • HP1 attracts the Suv39 protein, a Histone MethylTransferase, which will methylate the H3 histone H3 lysine 9, and so on. So we see how, step by step, the histones H3 will be methylated and the chromatin will be condensed.
  • This process is related to epigenetic changes such as methylation changes at cytosine-specific DNA residues, as described in many publications. "24- 31.
  • epigenetic modifications such as methylation changes at cytosine-specific DNA residues, as described in many publications. "24- 31.
  • NHDFs Normal Human Dermal Fibroblasts
  • the young, or intrinsically aged, replenished NHDFs were seeded in 6-well plates and incubated at 37 ° C, 5% C02 until subconfluence.
  • the cells were treated 24h in the presence of the test products.
  • the cells were then peeled off in the presence of trypsin and lysed.
  • Genomic DNA was precipitated with ethanol.
  • the methylation rate of the DNA was assayed by ELISA using the kit Enzo: 5-Methylcytosine DNA ELISA kit. The values are represented from 50% for a better visibility of the results.
  • the Uchuva extract is tested at the following concentrations: 2 - 1 - 0.5 ppm.
  • the Uchuva extract makes it possible to reduce the level of methylation at the three concentrations tested compared with the model of aged skin.
  • Fibrillin 1 is a protein that constitutes microfibrils, which are associated with elastic fibers and participate in their assembly.
  • the young NHDFs Normal Human Dermal Fibroblasts
  • the cells intended for extrinsic aging were irradiated 3 times with UVA with 24 hours between each irradiation and 1 time with UVB.
  • the cells were treated in the presence of the test products between each irradiation.
  • the cells were then fixed with formalin and the expression of the proteins was detected by immunofluorescence. Fluorescent markings were imaged and quantified by automated microscopy (Arrayscan Cellomics TM). Fluorescence has been quantified by bioapplication Compartmental Analysis.
  • Uchuva extract is tested at the following concentrations: 2 - 1 - 0.5 ppm following the preliminary evaluation of its toxicity.
  • Uchuva extract at 0.5 ppm restores the expression of Fibrillin 1 at a level equivalent to or slightly higher than that of young cells.
  • Uchuva extract restores the expression of the 3 markers.
  • Uchuva extract fully restores protein expression compared to young controls. This is the interest of the effects observed, there is no aberrant overexpression, Uchuva extract respects the biological balance of the skin.
  • the Uchuva extract also strongly increases the expression of fibroblastic collagen IV compared with untreated cells, in the manner of Rhamnose recognized for this wart.
  • the amount of Collagen ⁇ is also increased during treatment of fibroblasts with Uchuva extract.
  • the Uchuva extract shows homogeneous results in this experiment, it decreases the methylation at the 3 concentrations tested. This effect gives information on the mode of action of this product to reactivate the expression of proteins of the extracellular matrix, giving it its rejuvenating effect.
  • Uchuva extract is therefore an active ingredient or ingredient with biological anti-aging, anti-aging and rejuvenating activity. It acts coherently on 3 skin aging targets by restoring the protein expression to that observed in young cells. It also presents an innovative activity on epigenetics as demonstrated by its action on the methylation of DNA in mature cells. Finally, it demonstrates an anti-aging action in depth by its efficiency on the synthesis of proteins of the extracellular matrix. EXAMPLE 22 Tests Demonstrating the Moisturizing and Structuring Power of the Epidermis of the Skin by Uchuva Extract
  • Flaggrine is synthesized in the stratum granulosum as a precursor, profilaggrin (repetition of 10-12 monomers of fagagine and the regulatory protein S-100 NH2 terminal). The detection of this protein is associated with a state of terminal differentiation of the epidermis because it appears after dephosphorylation and proteolysis of profilaggrin which takes place during terminal differentiation.
  • Flaggrin participates in the aggregation of keratin during the formation of macrofibrils packets
  • Fagaglin monomers are components of the cornified layer (EC, which is deposited on the inner surface of the plasma membrane of corneocytes: participates in the impermeable properties of the skin with the intercorneocyte lipid matrix),
  • Involucin such as glaggrin and loricrin, is a marker of terminal differentiation. It is a cornified envelope (CE) protein that is the target of transglutaminase (TGM) and particularly of TGM1. Involucin is oligomerized by TGM1 during the initial stages of cornified envelope formation and at later stages of EC formation, involucrine is bound to ceramides 35 . The labeling is located in the epidermis from the upper layers of the spinous layer into the granular layer and the first layers of the SC. - Effect of topical treatment of Uchuva extract on human skin explants -Material and method:
  • Culture medium DMEM medium 4.5 g / L glucose, supplemented and with antibiotics (Penicillin-streptomycin-Amphotericin)
  • the Uchuva extract obtained according to Example 3 is diluted to 0.05% and 0.01% (w / v) in paraffin oil.
  • the solvent TRIGLYCERIDES C8C10 55/45 (Code EC-09-271) is used.
  • Circular skin disks with a diameter of 1 cm were obtained using a punch.
  • a stainless steel grid of 1.6 cm in diameter is placed in 5 ml of culture medium.
  • Each explant in culture is deposited on its grid so as to bathe in the culture medium while leaving the epidermis in the air.
  • the explants were cultured for 48 hours without changing the culture medium.
  • the different treatments were carried out by a topical deposit of 10 ⁇ l of the test preparations on day 0 and day 1. Each experimental condition was repeated on 3 punches.
  • Control explants were cultured in the same manner as the treated explants. The treatments were carried out by a topical deposition of 10 ⁇ l of TRIGLYCERIDES solvent at a concentration of 0.05%.
  • Cross sections 5 ⁇ thick of each explant were made using a cryotome. The sections were dried in ambient air. After rehydration in PBS, the sections were incubated for 1 hour with the solution of primary antibody prepared in a solution (PBS-BSA-Tween). After successive washings, the primary antibodies were revealed by a secondary antibody coupled to a FITC probe at 1 / 100th of the commercial form. The cell nuclei were labeled with the DAPI fluorescent dye.
  • the results showed that the topical treatment of skin explants in culture for 48h with Uchuva extract induced an increase in the expression of proteins involved in the hydration and the barrier effect of skin (respectively filaggrin and involucrine).
  • the expression increase induced by Uchuva extract was greater for involucrine than for filaggrin.
  • the maximum expression of these Protein has always been observed at the concentration of 0.05%.
  • the Uchuva extract according to the invention has a moisturizing and structuring activity profile of the epidermis.
  • the depigmenting potential of Uchuva extract was investigated in a model of normal human epidermal melanocytes (NHEM).
  • NHEM human epidermal melanocytes
  • the effect of Uchuva extract on melanin synthesis was evaluated after 10 days of incubation under L-tyrosine-stimulated conditions.
  • the reference inhibitory molecule is lipoic acid, the mechanism of action of which involves inhibition of the expression of the MITF transcription factor (microphthalrnia-associated transcription factor).
  • This transcription factor is the major regulator of tyrosinase expression and its inhibition has the consequence of decreasing the expression of tyrosinase, an enzyme involved in melanin synthesis.
  • the melanocytes were seeded in a 24-well plate and cultured in a culture medium for 24 hours.
  • the medium was then replaced with culture medium (Medium 254 supplemented with free PMA HMGS-2 + Penicillin 50 U / ml - Streptomycin 50 ⁇ g / ml) supplemented with L-tyrosine (at 1 mM) and containing or not (control stimulated) the compound or reference (lipoic acid tested at 5 ⁇ g / ml).
  • a non-stimulated control condition was performed in parallel.
  • the cells were then incubated for a total of 10 days, with treatment renewals after 3 and 7 days of incubation. After incubation, melanin was extracted by lysing the cells with 0.5 N NaOH solution.
  • the optical density (OD) of the samples was measured at 405 nm, then the amount of melanin was determined in comparison with a range of melanin. exogenous (melanin curve including standards from 0.39 to 100 ⁇ g / ml). The results were expressed in ⁇ g / ml of melanine, in percentage of stimulated control and in percentage inhibition.
  • NHEM normal human epidermal melanocytes
  • the cells were incubated in the presence of MTT (tetrazolium salt) whose transformation into blue crystals of formazan is proportional to the activity of succinate dehydrogenase (mitochondrial enzyme).
  • MTT tetrazolium salt
  • succinate dehydrogenase mitochondrial enzyme
  • the table below shows the correspondence of the concentrations of the Uchuva extract tested in Examples 21 to 23 (ppm and% by weight relative to the total concentration of the composition.
  • Oligosaccharide esters from the roots of Polygala arillata Kobayashi et al. J. Nat. Prod. 2000, 63, 1066-1069
  • Fibrillin Assembly Requires Fibronectin, L. Sabatier et al., Molecular Biology of the Cell, Vol. 20, 846-858, February 1, 2009.
  • Type VII collagen expression by human skin fibroblasts and keratinocytes in culture influence of donor age and cytokine responses, Y.K. Chen et al., J Invest Dermatol. 1994 Feb; 102 (2): 205-9.
  • Aging is associated with highly defined epigenetic changes in the human epidermis, Raddatz et al. Epigenetics & Chromatin 2013, 6:36. Aging, rejuvenation and epigenetic reprogramming: resetting the aging clock, TA Rando, Chang HY, The Glenn Laboratories for the Biology of Aging, Stanford University School of Medicine, Cell. 2012 Jan 2; 148 (1-2): 46-57.doi: 10.1016 / j.cell.2012.01.003.

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Abstract

L'invention concerne un extrait végétal provenant du calice d'une des nombreuses plantes de la famille des Solanaceae, du genre Physalis comprenant principalement un ou plusieurs sucrose-esters moyennement polaires à apolaires ayant un nombre de carbone des groupements acyles de C1 à C10 pour son utilisation en tant que principe actif dans des composition cosmétique, dermatologique ou nutracosmétique. L'invention concerne également les sucrose-esters purifiés de l'extrait végétal ou les sucrose-esters synthétisés tels que décrits pour la même utilisation. L'invention concerne également une composition cosmétique, dermatologique ou nutracosmétique comprenant comme principe actif, dans un milieu physiologique adapté, un extrait végétal ou les sucrose-esters synthétisés. Elle concerne encore le procédé de préparation dudit extrait végétal.

Description

EXTRAIT VÉGÉTAL COMPRENANT DES SUCROSE-ESTERS EN TANT QUE PRINCIPE ACTIF POUR SON UTILISATION DANS UNE COMPOSITION COSMÉTIQUE,
DERMATOLOGIQUE OU NUTRACOSMÉTIQUE.
La présente invention se situe dans le domaine cosmétique, dermatologique et nutracosmétique.
L'invention concerne un extrait végétal provenant du calice d'une des nombreuses plantes de la famille des Solanaceae, du genre Ph salis comprenant principalement un ou plusieurs sucrose-esters moyennement polaires à apolaires ayant un nombre de carbone des groupements acyles de Cl à C10 pour son utilisation en tant que principe actif dans des composition cosmétique, dermatologique ou nutracosmétique. L'invention concerne également les sucrose-esters purifiés de l'extrait végétal ou les sucrose-esters synthétisés tels que décrits pour la même utilisation. L'invention concerne encore une composition cosmétique, dermatologique ou nutracosmétique comprenant comme principe actif, dans un milieu physiologique adapté, un extrait végétal ou les sucrose-esters synthétisés. Elle concerne encore le procédé de préparation dudit extrait végétal.
Les compositions cosmétique, dermatologique et nutracosmétique sont destinées à améliorer l'hydratation, la fonction barrière de l'épiderme, à favoriser la cicatrisation, à dépigmenter la peau et à lutter de manière préventive et/ou curative contre le vieillissement cutané.
La peau est un organe vital composé de plusieurs couches (derme, couches prolifératives et stratum corneum) qui recouvre toute la surface du corps et assure essentiellement une fonction de barrière vis-à-vis du milieu extérieur. Cette fonction barrière repose en particulier sur la qualité de l'épiderme qui dépend notamment de l'état du stratum corneum et de l'équilibre entre la prolifération et la différenciation des kératinocytes épidermiques.
Les kératinocytes sont des cellules constituant 90% de la couche superficielle de la peau (épiderme) et des phanères (ongles, cheveux, poils). Ils synthétisent la kératine, une protéine fibreuse et insoluble dans l'eau, qui assure à la peau sa propriété d'imperméabilité et de protection extérieure. L'épiderme est divisé en quatre couches basées sur la morphologie des kératinocytes, lesquels passent progressivement de la couche basale vers les couches supérieures par différenciation cellulaire jusqu'au stratum corneum ou ils forment une couche de cellules mortes nommées squames, par apoptose. Cette couche constitue une barrière de protection et réduit la perte d'eau de l'organisme. Les kératinocytes sont en perpétuel renouvellement. Ils mettent environ 1 mois pour aller de la couche basale au stratum corneum mais ce processus peut être accéléré en cas d'hyperprolifération de kératinocytes (psoriasis).
La modulation de la différenciation des kératinocytes est un processus biologique qui peut intervenir dans le traitement des manifestations du vieillissement cutané, que ce soit tant dans la fonction barrière de la peau que dans la formation des rides. Comme actif inhibant la différentiation des kératinocytes on peut citer les rétinoïdes (rétinol, acide rétinoïque entre autres) qui sont reconnus comme principes actifs cosmétiques et dermatologiques agissant contre de nombreux problèmes cutanés tels que le psoriasis, l'acné et les rides.21'22 Cependant, les rétinoïdes induisent une inflammation de la peau incitant des laboratoires de recherche a investiguer de nouveaux actifs rétinoïde-like inhibiteurs de la différenciation des kératinocytes non inflammatoires.23
Les fibroblastes sont des cellules présentes dans le tissu conjonctif, elles sont parfois appelées cellules de soutien. Ce sont notamment des cellules résidentes du derme qui en assurent la cohérence et la souplesse. Elles sécrètent des protéoglycanes et des glycoprotéines. Elles sécrètent notamment du collagène, de l'élastine et des fïbrillines dont la fibrilline 1.
La fibrilline 1 est une glycoprotéine qui appartient à une famille de protéines comprenant trois membres, dont leur régulation reste mal connue aujourd'hui. Elle est sécrétée à la fois par les fibroblastes et par les kératinocytes. Elle constitue l'élément majeur des microfibrilles dans les matrices extracellulaires élastiques et non élastiques. La fibrilline 1 participe donc à la formation des fibres et leurs propriétés fonctionnelles et structurales jouent un rôle primordial dans l'élasticité du tissu conjonctif, notamment au niveau de la jonction dermo- épidermique. En effet, elle permet un ancrage des cellules épidermiques aux fibres élastiques du derme.
Au niveau du derme, on observe avec l'âge une diminution d'activité des fibroblastes avec une baisse de leur prolifération, de biosynthèse et d'échanges avec la matrice extracellulaire, ainsi qu'une altération des fibres de soutien tant qualitative que quantitative.
Au niveau de la jonction dermo-épidermique apparaît un aplatissement qui entraîne une diminution de la cohésion entre ces deux zones (derme et épiderme), avec raréfaction des éléments du derme et ainsi que des fibres d'ancrage, ce qui a pour conséquence une baisse des échanges métaboliques et la formation des rides. Les vergetures résultent d'une distension trop rapide et trop intense de la peau qui a pour conséquence l'atteinte des cellules fibroblastiques associées à une altération prédominante du tissu collagénique et des glycoprotéines de structure. La formation des vergetures semble être une modification du métabolisme des fibroblastes entraînant alors une mauvaise cicatrisation, ainsi qu'une rupture de contact entre les cellules et la matrice tel que cité dans le brevet WO 200100700620.
La fibrilline 1 est citée, parfois avec Pélastine, comme protéine impliquée dans les processus de fermeté et d'élasticité9,10, agissant dans le mécanisme anti-âge11' 12' 13' 14' 15, et est notamment utilisée comme biomarqueur de l'accélération du vieillissement par les rayons ultraviolets16'17'18, et/ou pour le traitement de certains processus cicatriciels comme pour les vergetures. L'activation de la synthèse de la fibrilline 1 permettrait ainsi de traiter les peaux vieillies intrinsèquement, dit génétiquement programmé ou chronologique, ou extrinsèquement, notamment dues à un stress oxydatif comme les UV, le tabac ou la pollution et de traiter les cicatrices de la peau.
Ainsi, les fibroblastes et les kératinocytes jouent un rôle primordial dans le processus biologique de la peau notamment par la sécrétion de la fibrilline 1, pour réguler la fermeté, l'élasticité, la cohésion cellulaire et dans le processus de cicatrisation et du vieillissement de la peau.
Au cours du vieillissement cutané, la peau devient sèche. Ainsi, il est très souvent constaté chez les sujets âgés, et notamment de plus de 50 ans, la manifestation d'une xérose ou d'une sécheresse des muqueuses, liée à une moindre sécrétion de sébum, à des modifications hormonales ou à des ralentissements du flux hydrique à travers l'épiderme. La peau est alors le siège de démangeaisons et de tiraillements, deux symptômes caractéristiques d'une peau sèche. Parmi les pathologies acquises se traduisant par une sécheresse de la peau, on peut citer la xérose induite par la photo-chimiothérapie et l'eczéma. Parmi les pathologies acquises provoquant une sécheresse de la bouche, ou xérostomie, on peut citer le syndrome de Sjogren ou la radiothérapie du cou. Enfin, parmi les pathologies impliquant une sécheresse des muqueuses, on peut citer les sécheresses oculaires ou vaginales.
Pour pallier à ces problèmes de sécheresse et vieillissement de la peau, il est communément utilisé des produits par voie topique destinés à restaurer la barrière cutanée. On peut citer les agents humectants, les agents filmogènes, les molécules de type rétinoïde et les agents capables de reconstruire la barrière cutanée comme le squalène par exemple.
La présente invention consiste principalement en la découverte qu'une certaine catégorie de sucrose-esters, présents dans certains extraits végétaux, ou synthétisés, présentent des activités biochimiques et biologiques intéressantes sur la peau, les phanères et les muqueuses notamment pour améliorer l'hydratation, la fonction barrière de l'épiderme et prévenir et/ou lutter contre les signes du vieillissement cutané. Les sucroesters sont des acylesters d'un ou plusieurs groupement acyles avec un nombre de carbone plus ou moins important (Cl à C22 par exemple) et d'un sucre. Généralement, le sucre est le saccharose et on parle alors de sucrose-esters ou sucroesters. Les sucrose-esters possèdent un caractère amphiphile qui peut être modulé selon le degré d'estérification du sucre et la nature des groupements acyles.
Les sucrose-esters sont connus pour apporter une solution alternative aux industries du secteur des tensioactifs car ils présentent des avantages certains tels que leur innocuité, l'absence de goût et d'odeur et leur caractère non-ionique. Les applications des sucrose-esters en tant que tensioactifs sont diverses telles que dans le domaine de l'agroalimentaire, de la détergence, de la cosmétique et de la pharmaceutique.
Les sucrose-esters rencontrés sur le marché sont principalement d'origine synthétique et des voies de biosynthèse sont de plus en plus développées pour revendiquer un procédé éco-responsable et un produit 100% naturel.1,2 Les sucroesters naturels existent mais ils sont méconnus du secteur industriel. En effet, la famille des Solanaceae, dont les représentants les plus connus sont Nicotiana tabacum (le tabac) et Solarium lycopersicum (tomate), sont reconnus pour synthétiser et stocker des sucrose-esters dans leurs tnchomes, moyens de défense contre de potentiels prédateurs.3'4
Dans le cadre de recherche de sucrose-esters naturels, les laboratoires de recherche se sont interrogés sur l'utilisation de telles molécules en tant qu'actifs thérapeutiques. Les sucrose- esters possèdent des activités biologiques telles que anti-bactériens, anti-inflammatoires, antiparasitaires, et peuvent moduler la multi-résistance médicamenteuse.5'6 En comparaison avec les sucrose-esters synthétiques, les groupements acyles des sucrose-esters naturels peuvent aussi être de nature aromatique (benzoate, ...).7 Ces sucrose-esters aromatiques font l'objet de beaucoup de recherche en chimie thérapeutique comme agents antitumoraux.8
Le document EP 0 280 413 décrit l'utilisation de sucrose-esters pour augmenter la pénétration d'actifs biologiques à travers la peau. Ces sucrose-esters, obtenus par synthèse, sont le sucrose monolaurate ou alternativement le mélange de sucrose d'acides gras de noix de Coco dont l'acide gras majoritaire est l'acide laurique (C12).
Le document JP61271205 décrit que certains glucose-esters synthétiques à chaînes très longues (supérieures à 22 carbones), en combinaison avec le glycosylcéramide ou le céramide, sont utiles pour augmenter la mouillabilité, la flexibilité et l'élasticité de la peau.
Le document JP 2001 122731 décrit qu'un extrait de plante, sans indiquer la plante ou la partie de plante, est utile en cosmétique pour remédier à la sécheresse de la peau et en tant que détergent. Les solvants cités pour obtenir l'extraction sont essentiellement polaires et conduisent par conséquent à l'extraction de molécules polaires. Le document JP 2011 051920 décrit l'utilisation d'un extrait de Physalis peruviana pour blanchir la peau et réduire les tâches de vieillesse. Dans ce document, c'est le fruit de Physalis peruviana qui est utilisé.
Le document de Franco L A et al. , « Actividad antiinflammatoria de extractos y fracciones obtenidas de calices de Physalis peruviana L », Biomedica, vol. 27, 1 Janvier 2007, divulgue un procédé d'extraction d'un extrait à partir du calice de Physalis peruviana pour envisager une activité anti-inflammatoire dudit extrait.
Le document de E.M Taleo Barrientos et al., « Anti-inflammatory effect of the ether extract and major fraction of Physalis peruviana calyces in acute TNBS-induced colitis », Abstract of the 6th European Congress of pharmacology, 2012, divulgue un procédé d'extraction d'un extrait à partir du calice de Physalis peruviana pour démontrer que deux nouveaux sucrose- esters présentent une activité anti-inflammatoire au niveau du colon.
Le document FR 2 896 155 divulgue l'utilisation d'extrait de Physalis, notamment alkenkegi, pour agir dans le domaine de la cosmétique contre le vieillissement. Le procédé d'extraction des molécules actives est une extraction hydrophile et polaire et les molécules extraites sont donc polaires, notamment les poly phénols, whitanolides et sucres.
Le document de Desai N B et al., « Sucrose esters - an interesting class of substances for cosmetics », Parfumerie und kosmetik, Huethig, Heidelberg, DE, vol.66, N°10, 1 janvier 1985, divulgue des esters de saccharose synthétiques qui sont intéressants pour les produits cosmétiques. Le tableau 1 décrit des sucrose-esters ayant un nombre de carbone des groupements acyle de C12 à C18. Ces sucrose-esters sont considérés comme hydratant, lissant et anti-irritant et permettent d'obtenir des produits démaquillants non-irritants pour la cosmétique et la pharmacie.
Outre leur propriété tensioactive et thérapeutique notamment anti-bactérienne, antiinflammatoire et antiparasitaire, les sucrose-esters moyennement polaires à apolaires ayant un nombre de carbone des groupements acyles de Cl à C10 n'ont jamais été décrits comme possédant une activité cosmétique, dermatologique ou nutracosmétique au niveau de la peau, des muqueuses ou des phanères.
Il a en particulier été mis en évidence par les inventeurs que certains sucrose-esters moyennement polaire à apolaires provenant d'extrait végétal ont une activité biologique sur l'activation de la fibrilline 1 et sur l'inhibition de la différenciation des kératinocytes notamment. Lesdits sucrose-esters ont montré également de manière surprenante une activité biologique sur plusieurs cibles biologiques telles que le collagène I, III et IV, l'élastine, la fibrilline- 1, l'involucrine, la mélanine et la fillagrine. Ainsi, les inventeurs de la présente invention ont mis en évidence de manière surprenante un nouveau principe actif d'origine végétale capable d'activer plusieurs cibles biologiques liées au vieillissement, à l'hydratation et la dépigmentation. Les inventeurs ont notamment mis en évidence un nouveau principe actif d'origine végétale capable d'activer la synthèse de la fibrilline 1 par les fibroblastes et les kératinocytes et/ou d'inhiber la différenciation des kératinocytes et agir biologiquement sur plusieurs cibles biologiques telles que le collagène I, III et IV, l'élastine, la fibrilline- 1, Pinvolucrine, la mélanine et la fillagrine, et ainsi améliorer l'aspect de la peau, des muqueuses et des phanères, de prévenir et/ou de lutter contre les manifestations du vieillissement cutané intrinsèque et/ou extrinsèque, d'aider le processus de cicatrisation notamment dans le cas des vergetures, de prévenir et ou de lutter contre la sécheresse de la peau, des muqueuses et/ou des phanères et de dépigmenter la peau.
Dans la présente invention, on entend par
« quantité efficace de principe actif » la quantité nécessaire de molécules actives pour obtenir le résultat recherché, à savoir, permettre d'obtenir une activité biologique sur la peau, les phanères et/ou les muqueuses. On comprendra dans la présente invention « quantité efficace d'extrait végétal » ou « quantité efficace de sucrose-esters » sachant que l'extrait végétal selon l'invention comprend principalement des sucrose- esters comme principe actif.
•S « principe actif » l'un ou plusieurs des sucrose-esters ou l'extrait végétal comprenant principalement l'un ou plusieurs des sucrose-esters.
« application topique », le fait d'appliquer ou d'étaler le principe actif selon l'invention, ou une composition le contenant, à la surface de la peau, d'une muqueuse ou des phanères.
« cosmétiquement ou dermatologiquement acceptable », que le principe actif selon l'invention, ou une composition le contenant, est approprié pour entrer en contact avec la peau ou une muqueuse sans provoquer de réactions de toxicité ou d'intolérance.
« physiologiquement adapté ou acceptable » que les compositions conviennent à une utilisation topique ou transdermique, en contact avec les muqueuses, les phanères (ongles, cheveux, poils), le cuir chevelu et la peau de mammifère et plus particulièrement humaine, les compositions pouvant être ingérées ou injectées dans la peau, sans risque de toxicité, d'incompatibilité, d'instabilité, de réponse allergique. « milieu physiologiquement adapté ou acceptable » ou "excipient approprié" sans être limitatif, une solution aqueuse ou hydro alcoolique, une émulsion eau-dans-huile, une émulsion huile-dans-eau, une microémulsion, un gel aqueux, un gel anhydre, un sérum, une dispersion de vésicules, une poudre. Ce milieu physiologiquement acceptable forme ce que l'on appelle classiquement l'excipient de la composition. « biologiquement actif », « qui possède une activité in vivo ou in vitro caractéristique de l'activité du principe actif selon l'invention ».
« manifestations cutanées du vieillissement », toutes modifications de l'aspect extérieur de la peau et des phanères dues au vieillissement comme, par exemple, les rides et ridules, la peau flétrie, la peau molle, la peau amincie, le manque d'élasticité et/ou de tonus de la peau, la peau terne et sans éclat ou les taches de pigmentation de la peau, la décoloration des cheveux ou les taches sur les ongles, mais également toute modification interne de la peau qui ne se traduit pas systématiquement par un aspect extérieur modifié comme, par exemple, toute dégradation interne de la peau consécutive à une exposition aux rayonnements ultraviolets (UV).
"comprend principalement", le fait que les sucrose-esters obtenues par extraction d'une matrice végétale soient présents en majorité dans l'extrait végétal, c'est à dire à plus de 50% en poids, de préférence plus de 80%, de préférence encore plus de 90% jusqu'à 100%.
•S « sucrose-esters synthétisés » toute manière d'obtenir des sucrose-esters, par hémisynthèse ou synthèse, que ce soit par synthèse chimique, biochimique ou biotechnologique.
Un premier objet selon l'invention consiste en extrait végétal provenant du calice d'une des nombreuses plantes de la famille des Solanaceae, du genre Physalis comprenant principalement un ou plusieurs sucrose-esters moyennement polaires à apolaires ayant un nombre de carbone des groupements acyles de Cl à C10 pour son utilisation en tant que principe actif biologiquement actif sur la peau, les phanères et les muqueuses.
De manière préférentielle l'invention consiste en extrait végétal provenant du calice d'une des nombreuses plantes de la famille des Solanaceae, du genre Physalis comprenant principalement un ou plusieurs sucrose-esters moyennement polaires à apolaires ayant un nombre de carbone des groupements acyles de Cl à C10 pour son utilisation en tant que principe actif biologiquement actif sur la peau, les phanères et les muqueuses, à l'exclusion de l'activité anti-inflammatoire.
Cette activité biologique est plus précisément pour améliorer l'aspect de la peau, des muqueuses et des phanères, pour prévenir et/ou lutter contre les manifestations du vieillissement cutané intrinsèque et/ou extrinsèque, pour aider le processus de cicatrisation notamment dans le cas des vergetures, pour prévenir et ou lutter contre la sécheresse de la peau, des muqueuses et/ou des phanères et pour dépigmenter la peau.
Dans un mode de réalisation préférentiel, l'un ou plusieurs sucrose-esters moyennement polaires à apolaires ayant un nombre de carbone des groupements acyles de Cl à C10 est de formule générale suivante :
Figure imgf000009_0001
Les sucrose-esters moyennement polaires à apolaires ayant un nombre de carbone des groupements acyles de Cl à C10 tel que décrit dans la formule générale sont présents dans l'extrait végétal à hauteur de 50 à 100% en poids de l'extrait total, de préférence de 80 à 100% en poids de l'extrait total et de préférence encore de 100% en poids de l'extrait total. Ces quantités sont basées sur les exemples 1, 2 et 3 qui ont permis de tester l'activité biologique des sucroses-esters présents dans l'extrait végétal selon l'invention.
Comme cela est indiqué dans les exemples ci-après, il est possible d'obtenir un extrait végétal comprenaùt de 80 à 100% de sucrose-esters moyennement polaires à apolaires ayant un nombre de carbone des groupements acyles de Cl à C10. Il est également possible de séparer les différents sucrose-esters obtenus pour obtenir un extrait purifié d'un seul sucrose- ester tel que décrit ci-dessus.
Dans un mode de réalisation préférentiel selon l'invention, l'extrait végétal comprend un ou plusieurs des sucrose-esters suivants :
- le 3-0-(2-methyl-l-oxopropyl)-P-D-fructofuranosyle(l - 2)-3,4-bis(2-methylpropanoate)-2- decanoate-a-D-glucopyranoside,
- le 3-0-(3-memyl-l-oxobutyl)-P-D-fructofuranosyle(l - 2)-3,4-bis(2-methylpropanoate)-2- decanoate-a-D-glucopyranoside,
- le 3-0-(3-memyI-l-oxobutyl)- -D-fmctofuranosyle(l ->2)-3-(2-methylpropanoate)-2- decanoate-a-D-glucppyranoside,
- le 3-0-(2-memyl-l-oxopropyl)- -D-fhictofuranosyle(l - 2)-3,6-bis(2-methylpropanoate)-2- decanoate-a-D-glucopyranoside, - le 3-0-(2-memyl-l-oxopropyl)-P-D-rructofuranosyle(l - 2)-3-(3-methylbutanoate)-2- decanoate-a-D-glucopyranoside.
- le 3-0-(2-memyl-l-oxopropyl)-P-D-fructoruranosyle(1^2)-3,4-bis(2-methylpropanoate)-2- nonanoate-a-D-glucopyranoside,
- le 3-0-(2-memyl-l-oxopropyl)- -D-rhictofuranosyle(l ->2)-3,4-bis(2-methylpropanoate)-2- octanoate-a-D-glucopyranoside.
Dans un mode de réalisation plus préférentiel encore selon l'invention, l'extrait végétal comprend un ou plusieurs des sucrose-esters suivants :
- le 3-0-(2-memyl-l-oxopropyl)-P-D-fhictofuranosyle(l->2)-3,4-bis(2-methyl pro- panoate)-2-decanoate-a-D-glucopyranoside,
- le 3-0-(3-memyl-l-oxobutyl)-P-D-fmctofuranosyle(l- 2)-3,4-bis(2-methylpropa- noate)-2-decanoate-a-D-glucopyranoside.
Dans un mode de réalisation préférentiel selon l'invention, l'extrait végétal provient du calice de Physalis peruviana.
Un second objet selon l'invention concerne des sucrose-esters moyennement polaires à apolaires ayant un nombre de carbones des groupements acyles de Cl à C10 obtenus de l'extrait végétal selon l'invention ou synthétisés, pour leur utilisation en tant que principe actif biologiquement actif sur la peau, les phanères et les muqueuses.
Dans un mode de réalisation préférentiel, l'invention concerne des sucrose-esters moyennement polaires à apolaires ayant un nombre de carbones des groupements acyles de Cl à C10 obtenus de l'extrait végétal selon l'invention ou synthétisés, pour leur utilisation en tant que principe actif biologiquement actif sur la peau, les phanères et les muqueuses, à l'exclusion de l'activité anti-inflammatoire.
Dans un mode de réalisation préférentiel, les sucrose-esters moyennement polaires à apolaires ayant un nombre de carbone des groupements acyles de Cl à C10 sont de formule générale suivante :
Figure imgf000010_0001
En effet, les sucrose-esters moyennement polaires à apolaires ayant un nombre dé carbones des groupements acyles de Cl à C10, utiles en tant que principe actif dans des compositions cosmétique, dermatologique et nutracosmétique, peuvent provenir :
- soit du procédé d'extraction du calice d'une des nombreuses plantes de la familles des Solanaceae, du genre Physalis, permettant ainsi d'obtenir un extrait comprenant principalement un mélange de sucrose-esters moyennement polaires à apolaires ayant un nombre de carbones des groupements acyles de Cl à C10, ou après purification, une quantité d'un seul sucrose-ester moyennement polaires à apolaires ayant un nombre de carbones des groupements acyles de Cl à C10.
- soit de la synthèse d'un ou plusieurs des sucrose-esters moyennement polaires à apolaires ayant un nombre de carbones des groupements acyles de Cl à C10 tels que décrits. L'homme du métier étant à même de synthétiser de différentes manières connues les sucrose- esters individuellement pour constituer un principe actif à base de sucrose-esters selon l'invention.
Les sucrose-esters moyennement polaires à apolaires ayant un nombre de carbone des groupements acyles de Cl à C10 sont des acylesters d'un ou plusieurs groupements acyles avec un nombre de carbones de Cl à C10 et d'un saccharose.
Un troisième objet selon l'invention concerne une composition cosmétique, dermatologique ou nutracosmétique comprenant comme principe actif, dans un milieu physiologique adapté, un extrait végétal selon l'invention ou les sucrose-esters selon l'invention synthétisés.
La composition selon l'invention peut être formulée sous la forme de différentes préparations adaptées à une administration topique, à une administration orale, rectale, vaginale, nasale, auriculaire ou bronchique, à une administration parentérale.
Selon une première variante, les différentes préparations sont adaptées à l'administration topique et incluent les crèmes, les émulsions, les laits, les pommades, les lotions, les huiles, les solutions aqueuses ou hydro-alcooliques ou glycoliques, les poudres, les patchs, les sprays ou tout autre produit pour application externe.
Selon une deuxième variante, les différentes préparations sont adaptées à une administration orale ; l'extrait végétal comprenant les sucrose-esters pouvant entrer soit dans une composition alimentaire soit dans un complément alimentaire. Le complément alimentaire peut se présenter sous forme de gélules ou de capsules molles de gélatine ou végétales dans le cadre de la présente invention. Ledit complément alimentaire peut alors contenir de 0,01 à 100% en poids de l'extrait végétal.
Dans le cadre d'une utilisation cosmétique ou dermatologique, la composition sera avantageusement formulée sous la forme d'une préparation adaptée à une administration topique. Dans le cadre d'une utilisation alimentaire, à visée nutritive ou cosmétique (cosmeto- food ou nutri-cosmétique ou nutracosmétique), la composition sera avantageusement formulée sous la forme d'une préparation adaptée à une administration orale. Elle pourra ne pas comprendre d'excipient et être constituée, en intégralité, de l'extrait végétal comprenant principalement les sucrose-esters ou des sucrose-esters synthétisés et correspondant avantageusement à la formule générale indiquée ci-avant.
Les compositions selon l'invention sont destinées plus particulièrement à une administration par voie topique. Ces compositions doivent donc contenir un milieu cosmétiquement et/ou dermatologiquement acceptable, c'est-à-dire compatible avec la peau et les phanères, et couvrent toutes les formes cosmétiques ou dermatologiques. Ces compositions pourront notamment être sous forme de crèmes, émulsions huile-dans-eau, ou eau-dans-huile ou émulsions multiples, solutions, suspensions, gels, laits, lotions, sticks ou encore de poudres, et adaptées à une application sur la peau, les lèvres et/ou les phanères. Ces compositions comprennent les excipients nécessaires à leur formulation, tels que solvants, épaississants, diluants, tensioactifs, anti-oxydants, colorants, conservateurs, parfums. Elles peuvent être utilisées comme produit de soin et/ou comme produit de maquillage de la peau.
La composition selon l'invention peut en particulier consister en une composition pour soins capillaires, et notamment un shampooing, un après-shampooing, une lotion traitante, une crème ou un gel coiffant, une lotion restructurante pour les cheveux, un masque, etc. La composition cosmétique selon l'invention peut être utilisée notamment dans les traitements mettant en œuvre une application qui est suivie ou non d'un rinçage, ou encore sous forme de shampooing. La composition selon l'invention pourra avantageusement être utilisée dans les soins antipelliculaires. Elle peut également se présenter sous forme de teinture ou de mascara à appliquer au pinceau ou au peigne, en particulier sur les cils, les sourcils ou les cheveux.
Les compositions selon l'invention comprennent, en outre, tout additif communément utilisé dans le domaine d'application envisagé ainsi que les adjuvants nécessaires à leur formulation, tels que des solvants, des épaississants, des diluants, des anti-oxydants, des colorants, des filtres solaires, des agents auto-bronzants, des pigments, des charges, des conservateurs, des parfums, des absorbeurs d'odeur, des actifs cosmétiques ou pharmaceutiques, des huiles essentielles, des vitamines, des acides gras essentiels, des tensioactifs, des polymères fïlmogènes, etc.
L'INCI Dictionary & Handbook ("International Nomenclature of Cosmetic
Ingrédients 13ème Ed. 2010) publié par "the Personal Care Products Council, Inc.", Washington,
D.C.) décrit une grande variété, sans limitation, d'ingrédients cosmétiques et pharmaceutiques habituellement utilisés dans l'industrie du soin de la peau, qui conviennent pour être utilisés comme ingrédients additionnels dans les compositions selon la présente invention.
il Des exemples non limitatifs de ces classes d'ingrédients additionnels incluent : les agents cicatrisants, les agents anti-âge, les agents anti-rides, les agents anti-atrophie, les agents hydratants, les agents adoucissants, les agents antibactériens, les agents antiparasitaires, les agents antifongiques, les agents fongicides, les agents fongistatiques, les agents bactéricides, les agents bactériostatiques, les agents antimicrobiens, les agents anti-inflammatoires, les agents anti-prurigineux, les agents anesthésiques, les agents antiviraux, les agents kératolytiques, les agents anti-radicaux libres, les agents anti-séborrhéiques, les agents anti-pelliculaires, les agents modulant la différenciation, la prolifération ou la pigmentation cutanée, les agents accélérateurs de pénétration, les agents desquamants, les agents stimulant ou inhibant la synthèse de mélanine, les agents blanchissants, dépigmentants, ou éclaircissants, les agents propigmentants, les agents auto bronzants, les agents inhibant la NO-synthase, les agents antioxydants, les agents piégeurs de radicaux libres et/ou anti-pollution atmosphérique, les agents anti-glycation, les agents raffermissants, les agents stimulant la synthèse des macromolécules dermiques ou épidermiques et/ou les agents capables de prévenir ou inhiber leur dégradation, les agents stimulant la synthèse de collagène, les agents stimulant la synthèse d'élastine, les agents stimulant la synthèse de décorine, les agents stimulant la synthèse de laminine, les agents stimulant la synthèse de défensine, les agents stimulant la synthèse de chaperon, les agents stimulant la synthèse de d'aquaporine, les agents stimulant la synthèse d'acide hyaluronique, les agents stimulant la synthèse de lipides et de composants du stratum corneum (céramides, acides gras, ...), les agents inhibant la dégradation du collagène, les agents inhibant la dégradation de l'élastine, les agents stimulant la prolifération des fïbroblastes, les agents stimulant la prolifération des kératinocytes, les agents stimulant la prolifération des adipocytes, les agents stimulant la prolifération des mélanocytes, les agents stimulant la différenciation des kératinocytes, les agents stimulant la différenciation des adipocytes, les agents inhibant l'acétylcholinestérase, les agents stimulant la synthèse des glycosaminoglycanes, les agents réparant l'ADN, les agents protégeant l'ADN, les agents anti-démangeaison, les agents pour le traitement et/ou le soin de la peau sensible, les agents raffermissants, les agents anti-vergetures, les agents astringents, les agents régulant la production du sébum, les agents dermo-relaxants, les agents adjuvants de guérison, les agents stimulant la réépithélialisation, les agents adjuvants de réépithélialisation, les facteurs de croissance de cytokine, les agents calmants, les agents anti-inflammatoires, les agents agissant sur la circulation et/ ou microcirculation capillaire, les agents stimulant l'angiogénèse, les agents inhibant la perméabilité vasculaire, les agents agissant sur le métabolisme cellulaire, les agents destinés à améliorer la jonction dermo-épidermique, les agents induisant la pousse des cheveux et/ou des poils, les agents inhibant ou ralentissant la pousse des cheveux et/ou des poils, les agents myorelaxants, les agents anti-pollution et/ou anti-radicalaires, les agents stimulant la lipolyse, les agents amincissants, les agents anti-cellulite, les agents agissant sur la microcirculation, les agents agissant sur le métabolisme des cellules, les agents nettoyants, les agents de coiffage du cheveu, les stimulants de la pousse des cheveux, les écrans solaires, les écrans totaux, les agents de maquillage, les détergents, les produits pharmaceutiques, les agents émulsifiants, les émollients, les solvants organiques, les agents antiseptiques, les actifs déodorants, les milieux physiologiquement acceptables, les surfactants, les agents abrasifs, les absorbants, les composants esthétiques comme les parfums, les pigments, les teintures, colorants et colorants naturels, les huiles essentielles, les agents de toucher, les astringents cosmétiques, les agents anti-acné, les agents anti-coagulation, les agents anti-mousse, les antioxydants, les liguants, les additifs biologiques, les enzymes, les inhibiteurs enzymatiques, les inducteurs enzymatiques, les coenzymes, les agents chélatants, les extraits végétaux et dérivés de plantes, les huiles essentielles, les extraits marins, les agents venant d'un procédé de biofermentation et/ou de biotechnologie, les sels minéraux, les extraits cellulaires, les écrans solaires (les agents photoprotecteurs orgamques ou minéraux qui sont actifs contre les rayons ultraviolets A et/ou B) les céramides, les peptides, les tampons, les agents de volume, les agents chélatants, les additifs chimiques, les colorants, les biocides cosmétiques, les dénaturants, les astringents médicinaux, les analgésiques externes, les agents filmogènes, comme les polymères, pour exacerber les propriétés filmogènes et la substantivité de la composition, les dérivés quaternaires, les agents augmentant la substantivité, les agents opacifiants, les ajusteurs et régulateurs de pH (ex. triethanolamine), les propellants, les agents réducteurs, les séquestrants, les agents décolorants et/ou éclaircissants de la peau, les agents conditionnant de la peau (Le., humectants, incluant miscellanées et occlusifs), les substances retenant l'humidité, les alpha hydroxy acides, les béta hydroxy acides, les hydratants, les enzymes hydrolytiques épidermiques, les agents apaisants et/ou cicatrisants, les agents traitant la peau, les agents anti-rides, les agents capables de réduire ou traiter les poches sous les yeux, les agents exfoliants, les épaississants, les adoucissants, les polymères gélifiants, les vitamines et leurs dérivés, les agents mouillants, les agents pelants, les agents calmants, les agents curatifs de la peau, les lignanes, les conservateurs (i.e.phenoxyethanol et parabens), les anti-UV, les agents cytotoxiques, anti néoplasiques, agents modifiant la viscosité, les solvants non volatils, des agents perlants, les agents antitranspirants, les dépilatoires, vaccins, eau parfumée, agent restructurant la peau, les excipients, les charges, les minerais, les agents anti-mycobactériens, les agents anti-allergéniques, les antiWstaminiques Hl ou H2, les anti-irritants, les agents stimulant le système immunitaire, les agents inhibant le système immunitaire, les agents répulsifs d'insectes, les lubrifiants, les pigmentants ou colorants, les agents hypopigmentants, les agents photo-stabilisants, et leurs mélanges, tant qu'ils sont physiquement et chimiquement compatibles avec les autres ingrédients de la composition et spécialement avec les actifs de la présente invention.
Par ailleurs, la nature de ces ingrédients additionnels ne doit pas altérer de manière inacceptable les bénéfices des actifs de l'invention. Ces ingrédients additionnels peuvent être synthétiques ou naturels comme par exemple les extraits de plantes ou venir d'un procédé de biofermentation. Des exemples additionnels peuvent être trouvés dans FINCI Dictionary & Handbook
De tels ingrédients additionnels peuvent être choisis dans le groupe comprenant : les sucres aminés, glucosamine, D-glucosamine, N-acetyl- glucosamine, N-acetyl-D-glucosamine, mannosamine, N-acetyl mannosamine, galactosamine, N-acétyl galactosamine, vitamine B3 et ses dérivés, le niacinamide, déhydro-acétate de sodium, l'acide déhydroacétique et ses sels, phytosterols, composés d'acide salicylique, hexamidines, composés dihydroxyproline de dialkanoyl, extraits et dérivés de soja, equol, isoflavones, flavonoïdes, phytantriol, farnesol, géraniol, bisabolol, peptides et leurs dérivés, di -, tri -, tétra -, penta -, et hexapeptides et leurs dérivés, lys-thr-thr-lys-ser, palmitoyl-lys-thr-thr-lys-ser, carnosine, composés d'acide aminé N- acyl, rétinoïdes, propionate de rétinyl, rétinol, palmitate de rétinyl, acétate de rétinyl, rétinal, acide rétinoïque, vitamines hydrosolubles, ascorbates, vitamine C, glucoside ascorbyl, palmitate ascorbyl, magnésium ascorbyl phosphate, sodium ascorbyl phosphate, vitamines et leurs sels et dérivés, provitamines et leurs sels et dérivés, ethyl panthenol, vitamine B et ses dérivés, vitamine Bl, vitamine B2, vitamine B6, vitamine B12, vitamine K et ses dérivés, acide pantothénique et ses dérivés, éther éthylique de pantothenyl, panthenol et ses dérivés, panthenol ethylique, dexpanthenol, biotine, acides aminés et leurs sels et les dérivés, acides aminés hydrosolubles, asparagine, alanine, indol, acide glutamique, vitamines insolubles dans l'eau, vitamine A, vitamine E, vitamine F , vitamine D et ses composés, mono-, di -, et triterpénoïdes, bêta-ionol, cedrol, et leurs dérivés, acides aminés insolubles dans l'eau, tyrosine, tryptamine, matériaux particulaires, hydroxytoluène butylé, hydroxyanisole butylé, allantoine, nicotinate de tocophérol, tocophérol, esters de tocophérol, palmitoyl-gly-his-lys, phytostérol, hydroxy acides, acide glycolique, acide lactique, acide lactobionique, kétoacides, acide pyruvique, acide phytique, acide lysophosphatidique, stilbenes, cinnamates, resveratrol, kinétine, zeatin, dimethylaminoethanol, peptides naturels, les peptides de soja, sels de sucres acides, gluconate de manganèse, gluconate de zinc, olamine de piroctone, 3,4,4'- trichlorocarbanilide, triclocarban, pyrithione de zinc, hydroquinone, acide kojique, acide ascorbique, magnésium ascorbyl phosphate, ascorbyl glucoside, pyridoxine, l'aloe vera, les alcools de terpène, allantoine, bisabolol, glycyrrhizinate dipotassique, acide de glycérol, de sorbitol, de pentaerythritol, de pyrrolidone et ses sels, dihydroxyacetone, erythrulose, glycéraldéhyde, tartaraldehyde, l'essence de clou de girofle, le menthol, le camphre, l'essence d'eucalyptus, eugénol, le lactate de menthyle, le distillât d'hamamélis, copolymère d'eicosene et vinyl pyrrolidone, iodopropyl butylcarbamate, un polysaccharide, un acide gras essentiel, un salicylate, un acide glycyrrhétinique, des caroténoïdes, des céramides et des pseudo-céramides, un lipide complexe, les huiles en générale d'origine naturelle telles le beurre de karité, l'huile d'abricot, l'huile d'onagre, l'huile de pruneau, l'huile de palme, l'huile de monoï, l'huile de kahai, hydroquinone, l'HEPES, la procystéine, l'O-octanoyl-6-D-maltose, le sel disodique d'acide méthyl glycine diacétique, les stéroïdes tels que la diosgénine et les dérivés de la DHEA, la DHEA déhydroépiandrostérone et/ou un précurseur ou dérivé chimique ou biologique, le N- éthylcarbonyl-4-para-aminophénol, les extraits de myrtille, les phytohormones, les extraits de levure Saccharomyces cerevisiae, les extraits d'algues, les extraits de soja, de lupin, de maïs et/ou de pois, l'alvérine et ses sels, en particulier le citrate d'alvérine, les extraits de petits houx et de marron d'inde et leurs combinaisons, un inhibiteur de métalloprotéinases, les extraits de Schinus molle.
Dans tous les cas, l'homme de métier veillera à ce que ces adjuvants ainsi que leurs proportions soient choisis de telle manière à ne pas nuire aux propriétés avantageuses recherchées de la composition selon l'invention.
Dans un mode de réalisation préférentiel selon l'invention, la composition cosmétique, dermatologique ou nutracosmétique comprend entre 10"6 et 50% en poids par rapport au poids total de la composition de principe actif.
La quantité efficace de principe actif ou d'extrait végétal correspond à la quantité nécessaire pour obtenir le résultat recherché, à savoir, améliorer l'hydratation et la fonction barrière de l'épiderme, prévenir et/ou lutter contre la sécheresse de la peau et des muqueuses et contre les manifestations du vieillissement cutané, aider au processus de cicatrisation et dépigmenter la peau. L'activité anti-inflammatoire est exclue du champ d'activité dermatologique revendiqué.
Selon un mode de réalisation avantageux de l'invention, la quantité efficace ou la teneur en principe actif dans la composition selon l'invention est de 10"6 à 25 % en poids par rapport au poids total de la composition, de préférence encore est de 10"6 à 10 % en poids par rapport au poids total de la composition.
Les quantités efficaces indiquées sont basées sur les résultats donnés précisément dans les exemples 21 à 23. Ainsi, en fonction de la concentration en sucrose-esters de l'extrait, de la dilution effectuée si nécessaire, la quantité efficace varie dans les proportions indiquées ci- avant.
Dans un mode de réalisation plus avantageux encore selon l'invention, la composition cosmétique est adaptée à une administration topique et se présente notamment sous forme d'une solution aqueuse, hydro-alcoolique ou huileuse ou sous la forme d'une émulsion huile-dans-eau, eau-dans-huile ou émulsions multiples ou sous forme de crèmes, de suspensions, ou encore de poudres ; ladite composition pouvant être plus ou moins fluide ou solide et avoir l'aspect d'une crème, d'une lotion, d'un lait, d'un shampooing, d'un sérum, d'une pommade, d'un gel, d'une pâte, d'une mousse ou d'un stick.
Un quatrième objet selon l'invention consiste en un procédé de traitement cosmétique pour améliorer l'aspect de la peau, des muqueuses ou des phanères, pour prévenir et/ou lutter contre la sécheresse de la peau et des muqueuses, pour prévenir et/ou à lutter contre les signes cutanés du vieillissement et/ou du photo-vieillissement, pour lutter contre la perte d'élasticité et de fermeté de la peau et pour dépigmenter la peau, procédé consistant à appliquer sur la surface de la peau et/ou des cheveux, une quantité efficace d'une composition cosmétique selon l'invention telle que définie ci-avant.
Il est à noter que l'activité dépigmentante de la composition cosmétique selon l'invention présente une activité inhibitrice sur la production de la mélanine.
Un cinquième objet selon l'invention consiste en une quantité efficace d'un extrait végétal selon l'invention ou de sucrose-esters selon l'invention synthétisés, seul ou en association avec d'autres principes actifs, pour son ou leur utilisation dans le traitement dermatologique des pathologies impliquant une sécheresse pathologique de la peau, des muqueuses ou des phanères et pour favoriser la cicatrisation.
Dans un mode de réalisation préférentiel, l'invention consiste en une quantité efficace d'un extrait végétal selon l'invention ou de sucrose-esters selon l'invention synthétisés, seul ou en association avec d'autres principes actifs, pour son ou leur utilisation dans le traitement dermatologique des pathologies impliquant une sécheresse pathologique de la peau, des muqueuses ou des phanères et pour favoriser la cicatrisation, à l'exclusion de l'activité anti- inflammatoire.
La quantité efficace est également basée sur les résultats donnés précisément dans les exemples 21 à 23. Les tests notamment sur le collagène III, le collagène IV et la fibrilline-1 permettent d'identifier une quantité efficace d'au moins 10"6 % en poids par rapport au poids total de la composition.
Un sixième objet selon l'invention consiste en l'utilisation d'une quantité efficace d'un extrait végétal selon l'invention ou de sucrose-esters selon l'invention synthétisés, seul ou en association avec d'autres principes actifs, pour préparer une composition nutracosmétique à ingérer destinée à améliorer l'aspect de la peau, des muqueuses ou des phanères, à prévenir et/ou lutter contre la sécheresse de la peau et des muqueuses, à prévenir et/ou à lutter contre les signes cutanés du vieillissement et/ou du photo-vieillissement.
Enfin, un septième objet selon l'invention consiste en un procédé de préparation d'un extrait végétal ou principe actif comprenant essentiellement un ou plusieurs sucrose-esters.
Pour réaliser l'extraction, on peut utiliser une plante entière, ou une partie spécifique de la plante (feuilles, graines, tiges, racines, calices, pétales, fruits, etc.)
Plus particulièrement selon l'invention on utilise le calice d'une des nombreuses plantes de la famille des Solanaceae, du genre Physalis et préférentiellement l'espèce peruviana.
Toute méthode d'extraction et de purification connue de l'homme du métier peut être utilisée afin de préparer l'extrait végétal selon l'invention comprenant des sucrose-esters tel que décrits précédemment et possédant une activité biologique sur la peau, les muqueuses et les phanères.
Le procédé de préparation d'un extrait végétal selon l'invention est décrit plus précisément ci-dessous.
La plante et parties de plante peuvent être récoltées par cueillette dite sauvage, par mise en culture conventionnelle, par mise en culture hors sol ou encore en culture hydroponique.
De façon non exhaustive, le procédé de préparation de l'extrait brut de l'extrait végétal peut être effectué par des procédés d'extraction végétale solide/liquide plus ou moins conventionnels, utilisant principalement des solvants organiques, bien connus de l'homme de l'art. Le procédé d'extraction peut être à simple contact en discontinu, en semi-continu ou en continu. Il peut être aussi à étages multiples, à co-courant ou à contre-courant. Il peut être assisté par ultrasons, par micro-ondes, par induction thermomagnétique, par champs électriques puisés ou encore sous pression.
La matrice végétale peut-être préparée au préalable par séchage puis par broyage ou cryobroyage, par flash détente ou encore par détente instantanée contrôlée. Aussi, la matrice végétale peut aussi être digérée par des enzymes afin de libérer le maximum de molécules d'intérêt.
Les solvants pouvant être utilisés pour extraire les sucrose-esters sont :
- des hydrocarbures, aliphatiques linéaires ou ramifiés, aromatiques ou cycliques tels que
Γ hexane, le cyclohexane, ...
- des hydrocarbures hàlogénés, tels que le dichloroéthylène, le chloroforme, ... ;
- des alcools tels que le méthanol, l'éthanol, le propanol, Pisopropanol ou le butanol, ...
- des glycols tels que Péthylène glycol, le propylène glycol, les 1,2 et 1,3 propanediols, le butylène glycol, le glycérol, ...
- des cétones tels que l'acétone, le méthyl isobutyl cétone, la méthyl éthyl cétone, ... - des éthers aliphatiques ou cycliques tels que l'éther diéthylique, le méthyl tertio butyl éther, l'éthyl tertio butyl éther, le TétraHydroFurane (THF), le méthyl THF,
- des éthers de glycol tels que le 2-méthoxy-l-méthyléthyl acétate, le 2-(2-butoxyéthoxy) éthanol et son acétate, ...
- des esters, d'acides à chaîne plus ou moins longue et d'alcools à chaîne plus ou moins longue tels que l'acétate d'éthyle, le lactate d'éthyle, le propionate d'éthyle, Poléate d'éthyle, le stéarate de méthyle, l'oléate d'oleyle, ...
- des liquides ioniques tels que le l-(4-sulfobutyl)-3-methylimidazolium hydrogeno
sulfate, le l-Emyl-3-methylimidazolium bis (trifluoromethanesulfonyl) imide, ...
- des fluides supercritiques tels que le dioxyde de carbone avec ou sans co-solvants ;
des agro-solvants tels que des huiles végétales, des terpènes comme le limonène ou le pinène,
une combinaison de ces solvants.
L'extrait ainsi obtenu peut être purifié par différentes méthodes, notamment par extraction liquide - liquide, par centrifugation, par adsorption (par exemple par décoloration au charbon actif ou à la terre décolorante), par sublimation, par cristallisation , par chromatographie préparative, par distillation notamment par distillation moléculaire de type centrifuge ou à film raclée ou encore par filtration membranaire.
Selon la technique de purification utilisée, on effectuera éventuellement une étape ultérieure de filtration et de désolvantation.
Dans un mode de réalisation préférentiel, l'extrait végétal brut est obtenu avec l'un des solvants suivants : le cyclohexane, l'acétate d'éthyle et le dioxyde de carbone supercritique avec une addition d'un co-solvant tel qu'un alcool, par exemple un alcool aliphatique comme l'éthanol, ou une huile végétale, de préférence raffinée ou encore un ester comme le caprylate/caprate de glycérol.
Ainsi, le procédé de préparation d'un extrait végétal selon l'invention comprend les étapes suivantes : séchage de la partie de plante,
- broyage,
- extraction avec un solvant organique approprié, puis
- éventuellement désolvantation, puis
- éventuellement une purification avec une ou plusieurs méthodes appropriées. Dans un mode de réalisation préférentiel, le procédé selon l'invention comprend les étapes suivantes :
séchage de la partie de plante,
- cryobroyage,
- extraction avec l'acétate d'éthyle, le cyclohexane, Péthanol ou le dioxyde de carbone supercritique sans ou avec co-solvant tels qu'un alcool ou une huile végétale ou encore un ester,
- purification par cristallisation ou adsorption, puis
- éventuellement filtration, et
- éventuellement désolvantation.
D'autres avantages et caractéristiques de l'invention apparaîtront mieux à la lecture des exemples donnés à titre illustratif et non limitatif.
Exemple 1 : Préparation d'un extrait végétal à partir du calice de Phvsalis peruviana
Les calices de Physalis peruviana, séparés préalablement des fruits et séchés, sont broyés dans un broyeur à couteaux comportant une grille de 1 mm, ce qui permet d'obtenir une poudre dont la taille des particules se situe majoritairement vers 500 μπι.
La poudre (50 g) ainsi obtenue est placée dans une cartouche en cellulose, cette cartouche est placée dans un extracteur type Soxhlet.
Le solvant utilisé pour extraire est l'éthanol 96% (50 ml), avec une vingtaine de cycles d'extraction.
L'extrait en milieu solvant est évaporé au rotavapor afin d'éliminer le solvant.
Il est ainsi obtenu 11,0 g d'extrait de calices de Physalis peruviana contenant 57% de sucrose-esters.
Exemple 2 : Préparation d'un extrait végétal à partir du calice de Phvsalis peruviana
Les calices de Physalis peruviana, séparés préalablement des fruits et séchés, sont broyés dans un broyeur à couteaux comportant une grille de 1 mm, ce qui permet d'obtenir une poudre dont la taille des particules se situe majoritairement vers 500 μπι.
La poudre ainsi obtenue (50 g) est placée dans une cartouche en cellulose, cette cartouche est placée dans un extracteur type Soxhlet.
Le solvant utilisé pour extraire est l'acétate d'éthyle, avec une vingtaine de cycles d'extraction. L'extrait ainsi obtenu en milieu solvant peut-être purifié par une extraction liquide - liquide sur colonne avec de l'eau, à une température comprise entre 20°C et 65°C, à contre- courant afin d'éliminer des molécules hydrosolubles. La phase organique comprenant l'acétate d'éthyle et l'extrait est ensuite évaporé au rotavapor afin d'éliminer le solvant.
L'extrait ainsi lavé est exsangue de polyphénols, de whitanolides et de sucres libres.
Il est ainsi obtenu 6,2 g d'extrait de calices de Physalis peruviana contenant 89,0% de sucrose-esters.
Exemple 3 : Préparation d'un extrait végétal à partir du calice de Physalis peruviana
Les calices de Physalis peruviana, séparés préalablement des fruits et séchés, sont broyés dans un broyeur à couteaux comportant une grille de 1 mm, ce qui permet d'obtenir une poudre dont la taille des particules se situe majoritairement vers 500 μπι. La poudre ainsi obtenue (500 g) est placée dans un extracteur à fluides supercritiques.
Le solvant utilisé pour extraire est le dioxyde de carbone avec une addition d'un co- solvant tel qu'un alcool aliphatique comme l'éthanol.
Les paramètres d'extraction sont pour une pression comprise entre 75 et 200 bars, une température comprise entre 35 et 50°C, un débit de C02 compris entre 2 et 20 kg/h, ainsi que 1 à 5% d'éthanol par rapport au C02.
L'extrait ainsi obtenu en milieu solvant est décoloré au charbon actif ou à la terre décolorante, cristallisé à froid puis filtré et évaporé.
Il est ainsi obtenu 85,5 g d'extrait de calices de Physalis peruviana contenant 87,6% de sucrose-esters.
Si nécessaire, l'extrait ainsi obtenu pourra être purifié par distillation moléculaire de type centrifuge ou à film raclé, afin d'obtenir un extrait de calices de Physalis peruviana à 99,9% de pureté chromatographique.
Exemple 4 : Purification des sucrose-esters à partir d'un extrait végétal obtenu à partir du calice de Physalis peruviana
Un extrait de calice de physalis (1 g) obtenu selon l'exemple 1 est solubilisé dans 6 ml d'un mélange de solvant CH3CN/H2O 1:1. La solution est filtrée sur une cartouche par Extraction sur Phase Solide (SPE) (Cl 8, 10 g) qui est rincée avec 10 mL d'un même mélange CH3CN/H20 1:1.
L'éluat obtenu est associé au solvant de charge pour obtenir la fraction 1 (300 mg).
La cartouche chargée est alors successivement éluée selon le gradient de solvant CH3CN/H20 7:3 (20 mL) et 1 :0 (20 mL) pour obtenir les fractions 2 (500 mg) et 3 (100 mg).
Les fractions 1, 2 et 3 sont analysées par HPLC-DAD-DEDL et sont comparées au chromatogramme de l'extrait initial. La fraction 1 est constituée des composés polyphénoliques, des withanolides et physalines et de composés polaires tels que des sucres.
La fraction 2 est composée des sucrose-esters.
La fraction 3 est une fraction lipidique.
La fraction 2 (500 mg) est soumise à un fractionnement par HPLC préparative (Cl 8, 50x150 mm, 5μπι) selon un gradient de solvant H20/CH3CN (de 3:7 à 0:1 en 35 min.) pour obtenir les fractions :
- Fraction Illb (élution entre 4 et 14 min.),
- Fraction I (élution entre 14 et 18 min. ; 230 mg),
- Fraction II (élution entre 18 et 25 min. ; 200 mg) et
- Fraction Ma (entre 25 et 35 min.).
Les fractions Fraction Illa et Illb sont rassemblées pour obtenir la fraction Fraction
III (50 mg).
Composition des fractions obtenues :
Fraction I : Composé 1, 3-O-(2-memyl-l-oxopropyl)-^-Z)-fructofuranosyle (l->2)- 3,4-bis(2-methylpropanoate) -2-decanoate-a- -glucopyranoside.
Fraction II : Composé 2, 3-O-(3-methyl-l-oxobutyl)-je- -fructofuranosyle (l->2)- 3,4-bis(2-methylpropanoate)-2-decanoate- - -glucopyranoside.
Fraction III : sucrose-esters autres que précédemment et comprenant notamment
- le 3-0-(3-memyl-l-oxobutyl)-p-D-fructofuranosyle(l ->2)-3-(2-methylpropanoate)-2- decanoate-a-D-glucopyranoside,
- le 3-0-(2-methyl-l -oxopropyl)-P-D-fructofuranosyle(l ->2)-3,6-bis(2-methylpropanoate)-2- decanoate-a-D-glucopyranoside.
- le 3-0-(2-memyl-l -oxopropyl)-P-D-fructofuranosyle(l ->2)-3-(3-methylbutanoate)-2- decanoate-a-D-glucopyranoside
- le 3-0-(2-memyl-l-oxopropyl)-P-D-fructofuranosyle(l ->2)-3,4-bis(2-methylpropanoate)-2- nonanoate-a-D-glucopyranoside,
- le 3 -0-(2-methyl- 1 -oxopropyl)-P-D-fructofuranosy le( 1 -> 2)-3 ,4-bis(2-methy lpropanoate)-2- octanoate-a-D-glucopyranoside,
Exemple 5 : Effets des fractions I. II et III sur le profil d'expression de cellules cutanées
Les effets des fractions I, II et II ont été recherchés par analyse transcriptomique sur les modèles de kératinocytes épidermiques humains normaux et de fibroblastes dermiques humains. Cette analyse globale d'expression de transcrits a été réalisée après 4 à 24 heures d'incubation en utilisant la plateforme Affymetrix Gene Atlas™ et la puce « mil transcriptome humain » U219 contenant 36000 transcrits et variants.
1.Modèles biologiques
Kératinocytes épidermiques humains normaux (NHEK)
Type cellulaire : Kératinocytes épidermiques humains normaux Conditions de culture 37°C, 5% C02 Milieu de culture : Keratinocyte-SFM complémenté avec
Epidermal Growth Factor (EGF) 0.25 ng ml
Extrait Pituitaire (EP) 25 μ^ηιΐ
Gentamycine 25 μg/ml
- Milieu d'essai : Keratinocyte-SFM complémenté avec
Gentamycine 25 μg ml
Fibroblastes dermiques humains normaux (NHDF)
Type cellulaire : Fibroblastes dermiques humains normaux (NHDF), Conditions de culture 37°C, 5% CQ2 Milieu de culture : DMEM complémenté avec
L-glutamine 2 mM
Pénicilline 50 U/ml - Streptomycine 50
Figure imgf000023_0001
Sérum de veau foetal (S VF) 10%
Milieu d'essai : DMEM complémenté avec
L-glutamine 2 mM
Pénicilline 50 U/ml - Streptomycine 50 μ^ηιΐ
S VF 1%
2. Composés testés
Figure imgf000023_0002
3 Culture et traitement
Les cellules ont été ensemencées et cultivées en milieu de culture pendant 24 heures puis incubées dans leur milieu d'essai pendant 24 heures supplémentaires. Le milieu a ensuite été remplacé par le milieu d'essai contenant ou non (témoin) les composés à l'essai et les cellules ont été incubées pendant 4 heures ou 24 heures. Toutes les conditions ont été réalisées en n=3. A la fin de l'incubation, les surnageants de culture ont été éliminés et les tapis cellulaires ont été rincés avec une solution de PBS. Les plaques ont été immédiatement congelées à sec à -80°C.
4. Principe d'utilisation de la puce Affvmetrix® U219 - Analyse de l'expression différentielle
- Préparation des cibles
Les ARN totaux de chaque échantillon ont été extraits à l'aide de TriPure Isolation Reagent® selon le protocole préconisé par le fournisseur. La quantité et la qualité des ARN ont été évaluées par électrophorèse capillaire (Bioanalyzer 2100, Agilent).
L'amplification des ARN et la synthèse des analogues d'ARN biotinylés (ARNa) ont été réalisées à l'aide du kit « GeneChip 3'IVT Express » (Affymetrix®). Les ADN complémentaires (ADNc) simple brin ont été synthétisés par transcription inverse des ARN totaux en présence d'oligo(dT). Par action d'une ADN polymérase, un ADNc double brin (ADNdb) a ensuite été synthétisé. Des ARN biotinylés ont ensuite été synthétisés à partir des ADNc et en présence d'analogues de ribonucléotides biotinylés. Après une étape de purification sur billes magnétiques, permettant d'éliminer les sels, enzymes et nucléotides libres, les ARN biotinylés ont été hydrolysés en fragments de 35 à 200 nucléotides avec un pic à 100-120 nucléotides (cibles fragmentées).
Des contrôles qualité des ARN biotinylés synthétisés ont été réalisés par électrophorèse capillaire (Bioanalyzer 2100, Agilent), avant et après fragmentation.
- Protocole d'hybridation et de marquage
Cette étape a été réalisée à l'aide du kit « GeneAtlas™ hybridization, wash and stain kit for 3'IVT arrays » (Affymetrix®).
L'hybridation des ARNa fragmentés sur la puce Affymetrix® U219 (36 000 transcrits et variants) a été réalisée sur la station d'hybridation « GeneAtlas™ fluidics station » (Affymetrix®) pendant 20 heures à 45°C. Des sondes de contrôle de l'hybridation (BioB, BioC et BioD) et des ARN polyA contrôles (Lys, Phe et Dap) ont été ajoutées au cours de l'hybridation. Les sondes de contrôle de l'hybridation, directement couplées à la phycoérythrine, permettent de s'assurer de l'efficacité de l'hybridation indépendamment de l'étape de marquage. Les ARN poly-A contrôles sont quant à eux utilisés pour valider la qualité du marquage.
Le marquage a ensuite été effectué en 3 étapes (+ étapes de lavage intermédiaires) :
- Fixation du complexe streptavidine - phycoérythrine sur les ARNa hybridës sur la puce,
- Reconnaissance de ce complexe par un anticorps anti-streptavidine couplé à la biotine, - Ajout de la streptavidine couplée à la phycoérythrine permettant une amplification du signal.
5 Traitement des données
Les données brutes ont été transférées et traitées sous le logiciel Microsoft Excel.
Les comparaisons intergroupes ont été réalisées à l'aide du test T de Student bilatéral non apparié. Les analyses statistiques peuvent être interprétées si n>5 ; cependant pour n<5, les données calculées ne sont fournies qu'à titre indicatif.
Formules utilisées :
Erreur standard de la esm = écart-type (Sd)/vn
moyenne :
L'erreur standard de la moyenne (esm) représente l'écart de la moyenne de l'échantillon par rapport à la moyenne de la vraie population. L'esm est calculé en divisant le Sd par la racine carrée de la taille de l'échantillon.
Pourcentage de viabilité : viabilité (%) = (DO composé / DO témoin) x 100 6 Résultats
Une analyse des « fold change » dans le logiciel Excel a été effectuée puis une analyse fonctionnelle a été réalisée à l'aide du logiciel IPA (Interactive Pathway Analysis) d'Ingenuity. Cette analyse permet de regrouper les gènes significativement modulés dans des fonctions (processus) biologiques
Analyse des fibroblastes (NHDF
L'analyse des profils transcriptomiques des fibroblastes traités par les fractions (I, II et III) a montré une modulation d'expression de gènes, surtout avec la fraction II.
Au niveau de la fraction II, la modulation de l'expression du gène codant pour la fibrilline 1 (FBN1) est très intéressante. En effet, l'expression de ce gène est augmentée de façon significative aux temps 4 heures (X 3.27) et 24 heures (X 8.24).
La fibrilline 1 (constituant majeur de la matrice extracellulaire) est sécrétée par les fibroblastes et constitue un composant important des microfibrilles. Elle est impliquée notamment dans l'assemblage des fibres d'élastine, et joue un rôle important dans l'élasticité de la peau.
Analyse des kératinocytes (NHEK)
L'analyse des profils transcriptomiques des kératinocytes traités par les 3 fractions (I, II et III) a montré une modulation d'expression de gènes, surtout avec la fraction III.
Les traitements des kératinocytes par les 3 fractions (I, II et III) ont induit des inhibitions d'expression de gènes codant pour des protéines de différenciation du kératinocyte : KRT1, IVL, DSG1, DSC1, SPRR2A, SPRR2E, SPRR1 A, SPRR2D, CALML5, SBSN et KRTDAP. Cet effet permet de dire que les fractions I, II et III ont un effet anti différenciant sur les kératinocytes.
Dans les exemples qui suivent, l'ingrédient actif selon l'invention peut être présent dans les différentes compositions en une quantité efficace comprise entre 10"6 à 3% en masse de la composition.
Exemple 6 : Compositions pour administration par voie orale
L'extrait de calice de Physalis peruviana, contenant les sucrose-esters, est intégré à des compositions orales, dans des compositions permettant l'administration de 50 mg à 200 mg d'extrait par jour.
1) Composition anti-âge sous forme de capsules molles
- Extrait de calice de Physalis peruviana selon exemple
1 ou 2 ou 3 30 mg
- Huile d'Argan 60 mg
- Huile de germes de blé riche en insaponifïable 300 mg
- Vitamine du groupe B (Bl, B2, B3, B5, B6, B9, B12) QSP 100% des AJR
- Tocotriènols QSP 50% des AJR
- Vitamine E
- Cire d'abeilles
- Lécithine de Soja
- Gélatine alimentaire
- Glycérine QSP 1 capsule molle
Cette composition est administrée de 4 à 6 capsules par jour.
2) Composition fermeté de la peau sous forme de comprimés
- Extrait de calice de Physalis peruviana selon exemple
1 ou 2 ou 3 25 mg
- Extraits de céréales (blé, sarrasin, riz, quinoa) 200 mg
riches en acides aminés soufrés
- Zinc sous forme de chélate QSP 100% des AJR
- Vitamine C QSP 50% des AJR
- Glycosaminoglycanes issus de cartilages de poissons 200 mg
- Glucidex IT 19 (agent de compression) QSP 1 comprimé de 800 mg Cette composition est administrée de 5 à 8 comprimés par jour.
3) Exemple en barre céréalière goût chocolat
- Extrait de calice de Physalis peruviana selon exemple 1 ou 2 ou 3 200 mg
- Lycopène 6 mg
- Astaxanthine 4 mg
- Fucoxanthine 4 mg
- Lutéine sous forme micro-encapsulée 4 mg
- Tocotriènols micro-encapsulés QSP 100% AJR en Vitamine E
- chocolat noir, oligo-fructose, sucre, sirop de fructose,
cacao maigre en poudre, céréales croustillantes,
lait écrémé en poudre, amandes, glycérol, sorbitol,
huiles végétales, sirop de glucose, arôme,
lait concentré sucré, lécitine de soja, mono et
diglycérides d'acides gras, sirop caramélisé,
maltodextrine, sel, sorbate de potassium,
alpha tocophérol QSP une barre de 50 g
Cette composition est administrée une fois par jour.
4) Exemple en boisson lactée goût vanille
- Extrait de calice de Physalis peruviana selon exemple
1 ou 2 ou 3 200 mg
- Extrait de thé vert riche en polyphénols 100 mg
- Vitamine du groupe B (Bl, B2, B3, B5, B6, B9, B12) QSP 100% des AJR
- Zinc, magnésium, sélénium ( QSP 100% des AJR
Lait écrémé en poudre, arôme, fructose, blanc d'œuf,
grains de vanille épuisée, sucre, caramel, béta carotène,
gomme xanthane, asparthame, acésulfame de potassium,
lécithine de soja, maltodextrine. ( QSP un sachet de 30 g
Cette composition est administrée une fois par jour.
Exemple 7 : Composition cosmétique - Crème de jour pour le visage
Noms INCI % en masse
Phase A
Eau Qsp 100
Carbomère 0,25
Phase B
Butylène glycol 2,00 Phenoxyethanol qs
Phase C
Steareth-2 0,40
Steareth-10 1,20
Cetearyl alcohol & Dicetyl phosphate & Ceteth 10 phosphate 4,00
Cetearyl Alcohol 1,00
Azone 2,50
Cyclohexasiloxane & Cyclopentasiloxane 2,00
Ethylhexyl succinate 7,00
Phase D
Sorbâte de potassium 0,10
Phase E
Eau 3,00
Hydroxyde de sodium 0,40
Phase F
Ingrédient actif selon l'invention (selon exemple 1 ou 2 ou 3) 2,00
Mode opératoire:
Peser la phase A et laisser gonfler sans agitation pendant 30 mn. Mettre la phase A à chauffer à 75 °C au bain-marie. Peser et mélanger la phase B. Peser la phase C et mettre à chauffer à 75°C au bain-marie. Rajouter la phase B dans la phase A. Bien mélanger. Sous agitation verser la phase C dans la phase A+B. Bien homogénéiser. Rajouter la phase D, extemporanément Rajouter la phase E, bien homogénéiser. Rajouter la phase F, bien homogénéiser.
Exemple 8 ; Composition cosmétique - Forme gel pour le visage
Figure imgf000028_0001
Ethyl & Methyl & Propyl parabens 0,30
Phase D
Huile minérale 4,00
Polysorbate 20 1,00
C12-15 Alkyl Benzoate 2,00
C 10-30 Alkyl Acrylate cross polymer 0,30
Phase £
Sorbate de potassium 0,10
Phase F
Eau 5,00
Hydroxyde de sodium 0,50
Phase G
Ingrédient actif selon l'invention (selon exemple 1 ou 2 ou 3) 1,00
Mode opératoire :
Disperser la Phase A sous agitation. Saupoudrer l'Ultrez 10 dans l'eau, laisser gonfler 30 minutes. Chauffer la Phase C jusqu'à dissolution complète. Mélanger la Phase A avec la Phase B. Rajouter C dans la Phase (B+A). Ajouter la Phase D, sous agitation, dans la Phase (A+B+C). Rajouter la Phase E. Neutraliser avec la Phase F. Ajouter la Phase G et mélanger.
Exemple 9 : Composition cosmétique - Forme sérum
Figure imgf000029_0001
Cyclopentasiloxane 1,00
Phase D
Sorbate de potassium 0,10
Phase E
Hydroxyde de sodium 0,45
Eau 4,00
Phase F
Ingrédient actif selon l'invention (exemple 1 ou 2 ou 3) 1,00
Phase G
Fragrance 0,10
Mode opératoire :
Phase A : Saupoudrer le carbomer dans l'eau, laisser gonfler 15 minutes. Mélanger la Phase B. Verser la Phase B dans la Phase A, homogénéiser. Puis Peser la Phase C, mélanger et rajouter dans la Phase A+B, sous agitation. Laisser gonfler 1 heure. Extemporanément rajouter la Phase D dans la phase précédente sous agitation. Neutraliser avec la Phase E. Mettre sous agitation. Ensuite rajouter la Phase F. Laisser mélanger au moins 1 heure sous agitation puis rajouter la Phase G. Bien mélanger.
Exemple 10 : Crème de nuit pour visage
Noms INCI % en masse
Phase A
Eau Qsp 100
Carbomère 0,40
Phase B
Glycérine 3,00
Ethyl & Methyl & Propyl parabens 0,30
Phase C
Cetearyl Alcohol & polysorbate 20 1,0
Cetearyl Alcohol 1,00
PPG-3 Benzyl Ether Myristate 1,0
Dimethicone 2,50
Isotridecyl Isononanoate 5,00
Phase D
Sorbate de potassium 0,10 Phase £
Hydroxyde de sodium 0,40
Eau 4,00
Phase F
Ingrédient actif selon l'invention (selon exemple 1 ou 2 ou 3) 1,00
Phase G
Fragrance 0,10
Mode opératoire : Peser Phase A et laisser gonfler pendant 30 minutes. Chauffer Phase A dans un bain d'eau à 75°C ; Chauffer Phase B jusqu'à solubilisation complète. Ajouter Phase B à Phase A. Chauffer Phase C dans un bain d'eau à 75°C. Ajouter la Phase C à la Phase A+B sous agitation. Ajouter Phase D et bien homogénéiser. Neutraliser avec Phase E à 55°C. Ajouter Phase F puis Phase G et bien homogénéiser.
Exemple 11 : Crème pour le corps.
Figure imgf000031_0001
Ingrédient actif selon l'invention (selon exemple 1 ou 2 ou 3) 2,00
Phase G
Fragrance 0,10
Mode opératoire : Peser Phase A et laisser gonfler pendant 30 minutes. Chauffer Phase A dans un bain d'eau à 75°C. Chauffer Phase B jusqu'à solubilisation complète. Ajouter Phase B à Phase A. Chauffer Phase C dans un bain d'eau à 75°C. Ajouter Phase C à Phase A+B sous agitation. Ajouter Phase D et bien homogénéiser. Neutraliser avec Phase E à 55°C. Ajouter Phase F puis Phase G et bien homogénéiser.
Exemple 12 : Lotion
Figure imgf000032_0001
Mode opératoire : Peser Phase A. Peser Phase B et mélanger. Ajouter Phase B à Phase A sous agitation pendant 30 minutes. Peser Phase C, mélanger jusqu'à obtenir un mélange homogène. Ajouter Phase C à Phase A+B sous agitation. Ajouter Phase au mélange précédent. Ajouter Phase E au mélange précédent sous agitation. Bien homogénéiser. Peser Phase F, mélanger et ajouter au mélange précédent. Mélanger de manière insistante.
Exemple 13 : Crème de jour
Figure imgf000032_0002
Eau Qsp 100
Carbomère 0,2
Phase B
Butylène Glycol 2,00
Phenoxyethanol 1,30
Phase C
Glyceryi stéarate & PEG 100 stéarate 1,00
Caprylic/capric Triglycérides 4,00
Phase D
Acrylates/C 10-30 Alkyl Acrylates cross polymer 0,20
PPG-3 Benzyl Ether Myristate 1,00
Dimethicone 1,00
Phase E
Sorbate 0,10
Phase F
Hydroxyde de sodium 0,40
Eau 4,00
Phase G
Ingrédient actif selon l'invention (selon exemple 1 ou 2 ou 3) 2,00
Phase H
Fragrance 0,10
Mode opératoire : Phase A : Verser Ultrez 10 dans l'eau et laisser gonfler pendant 30 minutes. Peser Phase B et laisser fondre à 60 °C. Chauffer Phase A dans un bain d'eau à 75°C. Peser Phase C et chauffer à 75°C dans un bain d'eau. Sous agitation (Starvo v=500 t min), ajouter Phase C à Phase A. Ajouter arbitrairement Phase B et Phase D dans Phase A+B puis y ajouter Phase E. Bien homogénéiser. Refroidir à 45°C et ajouter Phase F. A 35°C, ajouter Phase G, bien homogénéiser. Ajouter Phase H, bien homogénéiser.
Exemple 14 ; Fluide pour le corps,
Figure imgf000033_0001
Phase B
Eau Qsp 100
Hydroxyethyl cellulose 0,40
Phase C
Butylène Glycoï 3,00
Phenoxyethanol 1,30
Phase D
C12-C15 Alkyl Benzoate 2,00
Caprylic/capric Triglycéride 3,00
Polysorbate 20 1,00
PPG-3 Ben2yl Ether Myristate 1,00
Acrylates/C 10-30 Alkyl Acrylates cross polymer 0,20
Phase £
Sorbate 0,10
Phase F
Hydroxyde de sodium 0,50
Eau 5,00
Phase G
Ingrédient actif selon l'invention (selon exemple 1 ou 2 ou 3) 2,00
Phase H
Fragrance 0,10
Mode opératoire : Phase A : Verser Ultrez 10 dans l'eau et laisser gonfler pendant 30 minutes. Sous agitation à hélice (300 t/min), verser Phase B et laisser gonfler pendant lh. Ajouter Phase A dans Phase B sous agitation à hélice (300 t/min), bien homogénéiser. Peser et mettre sous agitation Phase C, peser Phase D et mélanger. Ajouter Phase C à Phase A+B. Ajouter Phase D à Phase A+B+C. Bien homogénéiser. Ajouter Phase E puis Phase F et G et enfin Phase H. pH = 6.2.
Exemple 15 : Crème de nuit
Figure imgf000034_0001
Eau Qsp 100
Hydroxyethyl cellulose 0,40
Phase C
Butylène Glycol 3,00
Phenoxyethanol 1,30
Phase D
PPG-3 Benzyl Ether Myristate 1,00
Acrylates/C10-30 Alkyl Acrylates cross polymer 0,20
Phase £
Sorbate 0,10
Phase F
Hydroxyde de sodium 0,50
Eau 5,00
Phase G
Ingrédient actif selon l'invention (selon exemple 1 ou 2 ou 3) 2,00
Phase H
Fragrance 0,10
Mode opératoire : Phase A : Verser Ultrez 10 dans l'eau et laisser gonfler pendant 30 minutes. Sous agitation à hélice (300 t/min), verser Phase B et laisser gonfler pendant lh. Ajouter Phase A dans Phase B sous agitation à hélice (300 t/min), bien homogénéiser. Peser et mettre sous agitation Phase C, peser Phase D et mélanger. Ajouter Phase C à Phase A+B sous agitation à couteau (300 t/min). Ajouter Phase D à Phase A+B+C. Bien homogénéiser. Ajouter Phase E puis Phase F et G et enfin Phase H. Bien homogénéiser.
Exemple 16; Crème anti-vergeture
Figure imgf000035_0001
Cetearyl alocholCroda 0,50
Myristyl Lactate 0,30
Polysorbate 20 1,00
Phase D
Acrylates/C 10-30 Alkyl Acrylates cross polymer 0,20
Cyclomethicone 2,00
Phase E
Sorbate de potassium 0,10
Phase F
Hydroxyde de sodium 0,60
Eau 6,00
Phase G
Ingrédient actif selon l'invention (selon exemple 1 ou 2 ou 3) 1,00
Phase H
Fragrance 0,10
Mode opératoire :
Phase A : Disperser Ultrez 10 dans l'eau et laisser gonfler pendant 20 minutes. Mélanger Phase B et chauffer à 60°C jusqu'à dilution complète. Ajouter Phase B à Phase A sous agitation. Chauffer Phase A+B. Peser Phase C et chauffer à 75°C. Ajouter Phase G à Phase A+B sous agitation. Homogénéiser avec précaution puis ajouter Phase D. Ajouter Phase E. Neutraliser avec Phase F à 50 °C. Ajouter Phase G et H à 35°C et ajuster le pH à 6,3 avec NaOH.
Exemple 17 : Lotion pour cheveux
Figure imgf000036_0001
Ingrédient actif selon l'invention (selon exemple 1 ou 2 ou 3) 1,00
Phase D
Polysorbate 20 1,00
Fragrance 0,10
Exemple 18 : Maquillage hydratant.
Figure imgf000037_0001
Exemple 19 : Baume à lèyre. Noms INCI % en masse
Phase A
Eau Qsp 100
Sorbate de potassium 0,10
Sulfate de magnésium 0,70
Phase B
Cetyl Dimethicone Copolyol 3,00
Methyl Paraben 1,00
Tribehenin 0,30
PPG-3 BEnzyl Ether Myristate 2,00
Argania spinoa Kernel Oil 19,00
Phase C
Ingrédient actif selon l'invention (selon exemple 1 ou 2 ou 3) 0,50
Phase D
Fragrance 0,10
Mode opératoire : Chauffer Phase A à 85°C. Mélanger Phase B et chauffer à 85°C. Ajouter doucement Phase A à Phase B sous agitation (Staro v=3000 t min puis 1200 t/min). Ajouter Phase C préchauffée à 80°C, homogénéiser. Ajouter Phase D à 35°C. Verser.
Exemple 20 ; Spray protecteur cheveux
Figure imgf000038_0001
Hydroxyde de sodium 0,05
Mode opératoire : Peser et mélanger la Phase A avec un agitateur à couteau v = 300 t/rnin. Ajouter la Phase B, mélanger puis ajouter la Phase C. Ajuster le pH entre 5,0 et 5,5 avec la Phase D.
Exemple 21 : Tests démontrant l'activité anti-âge et rajeunissante de l'extrait d'Uchuva
Dans les figures accompagnant les exemples 21 à 23, l'extrait d'Uchuva est abrégé EUc. Dans tous ces exemples 21 à 23, l'extrait d'Uchuva provient du procédé d'extraction décrit dans l'exemple 3 présentant 99,9% de pureté chromatographique en sucrose-esters.
Le derme fournit à l'épidémie un support solide, c'est également son élément nourricier. Il est principalement constitué de fibroblastes et d'une matrice extracellulaire composée majoritairement de coUagènes, d'élastine et d'une substance, dite substance fondamentale. Ces composants sont synthétisés par les fibroblastes. La cohésion entre l'épiderme et le derme est assurée par la jonction dermo-épidermique.
Les coUagènes sont les protéines majoritaires des matrices extracellulaires de la peau. A ce jour, 20 types de coUagènes sont identifiés et notés de I à XX. Les coUagènes majoritairement présents dans l'ensemble du derme sont les coUagènes de type I et ΙΠ qui forment la matrice extracellulaire de l'ensemble du derme (ce sont ces coUagènes qui constituent 70-80 % du poids sec du derme). Avec le vieillissement, le derme s'aminçit et des rides apparaissent à la surface de la peau. En conséquence, compte tenu du rôle important du collagène au niveau de l'intégrité de la peau et de sa résistance aux agressions externes de type mécaniques, la stimulation de la synthèse de ces coUagènes, et en particulier du collagène de type I et m, apparaît comme un moyen efficace pour pallier les signes du vieillissement cutané (revue par Tzaphlidou M., Micron 35 (2004) 173-177).
- Cibles Collagène I et III
Le Collagène I est le Collagène majoritaire qui apporte à la peau sa résistance mécanique.
Cette protéine représente 90 % du collagène d'un vertébré. Il constitue la trame de l'os (à comparer aux armatures du béton armé), et plus généralement des tissus conjonctifs banals. Il se trouve dans les os, la peau, les tendons, la cornée et les organes internes.
1 - Etude sur cellules jeunes versus cellules vieillies
L'étude qui suit a permis d'étudier l'effet de l'extrait d'Uchuva sur l'expression du collagène I, constituant essentiel de la matrice extracellulaire du derme.
- Méthode Les NHDF (Normal Human Dermal Fibroblasts) jeunes ou vieillis par sénescence réplicative ont été ensemencés en plaque 96 puits et incubées 24h à 37°C, 5%C02.
Les cellules ont été traitées 24h en présence des produits d'essai.
Les cellules ont ensuite été fixées avec de la formaline et l'expression des protéines a été détectée par immunofluorescence.
Les marquages fluorescents ont été imagés et quantifiés par microscopie automatisée (Arrayscan CellomicsTM). La fluorescence a été quantifiée par la bioapplication Compartimentai Analysis.
- Evaluation préalable de la cytotoxicité
Le composé a été mis en contact avec les cellules pendant 24 heures. Durant les 3 dernières heures du test calorimétrique prêt à l'emploi WST1 de Roche® a été introduit dans le milieu. Ce réactif contient des sels de tetrazolium, un indicateur violet. Ce réactif est clivé en formazan, un indicateur jaune, par les cellules métaboliquement actives. Le niveau de coloration jaune est donc proportionnel au nombre de cellules vivantes. La mesure de l'absorbance se fait à 450nm. Le test considère qu'une valeur inférieure à 90% du témoin indique une cytotoxicité du produit éventuelle (symbolisée par une ligne verte dans les graphes). Cela peut aussi indiquer que l'on diminue l'activité métabolique des cellules. Une valeur inférieure à 75% indique une cytotoxicité significative (symbolisée par une ligne rouge dans les graphes)
Par ailleurs les cellules ont été observées au microscope pour observer et comparer leur physionomie.
Les résultats sont donnés dans la figure 1A.
L'extrait d'Uchuva est cytotoxique aux plus fortes concentrations testées de 100 à 20 ppm et devient moins cytotoxique à partir de 2ppm.
Concentrations retenues pour être testées :
L'Extrait d'Uchuva est testé aux concentrations suivantes 2 - 1 - 0,5 ppm.
Les résultats sont donnés dans la figure 1B.
L'extrait d'Uchuva permet de rétablir l'expression de Collagène I au niveau des cellules jeunes. Dans les cellules jeunes l'expression du Collagène I n'est pas homogène, certaines cellules présentent un marquage fort et d'autres un marquage plus faible. Au sein des cellules vieillies par réplication, l'expression réactivée par l'extrait d'Uchuva est plus homogène dans les cellules traitées.
Le fait que la concentration la plus basse soit active peut s'expliquer par le fait que les concentrations les plus fortes présentent une légère cytotoxicité qui affecte la synthèse protéique.
- Conclusion
L'extrait d'Uchuva, est un ingrédient qui agit sur le collagène I, cible du vieillissement cutané, en rétablissant l'expression protéique à hauteur de celle observée dans les cellules jeunes. 2 - Evaluation de l'effet de l'extrait d'Uchuva sur la production de Collagène I par les fibroblastes
Matériels et méthodes utilisées
- Système d'essai
Désignation : Modèle Fibroblastes humains (NHDF) en culture utilisés entre les passages 3 à 6.
Milieu de culture : DMEM glucose 4,5 g/L + 1% NEAA + 10% S VF
Conditions de culture : 37°C, 5% de C02
- Méthode de culture et traitement des fibroblastes
- Evaluation de la cvtotoxicité par le test du rouge neutre
Les cellules NHDF sont ensemencées à J0, en plaque 96 puits, à raison de 4x10 cellules par puits. Elles sont traitées à Jl pendant 48 heures de culture en milieu complet. Les concentrations de l'actif à tester sont exprimées en % de l'extrait. La solution mère du produit à tester a été préparée dans du diméthylsulfoxyde (DMSO) à la concentration de
20% (p/v). La première dilution a été réalisée au l/1000e. Les dilutions suivantes ont été réalisées au ½ en maintenant la concentration de DMSO finale à 0,1%.
Le test RN est réalisé à J3: le milieu est éliminé et les cellules sont rincées par 250 de PBS préchauffé à 37 °C. 200 μΐ de rouge neutre sont ajoutés aux cellules. Après 3 heures d'incubation à 37°C, 5% de C02, le milieu contenant le rouge neutre est éliminé puis les cellules sont rincées avec 2 x 200 μΐ de PBS pré-chauffé à 37°C. 100 μΐ de solution de révélation (éthanol 50% - acide acétique 1%) sont ajoutés et les cellules sont incubées à température ambiante sous agitation et à l'abri de la lumière pendant 45 minutes.
La DO540nm est mesurée après homogénéisation.
NB : Préparation de la solution de rouge neutre : la solution mère de rouge neutre est préparée à 0,4% dans l'eau Ultra Pure (cette solution se conserve à 4°C pendant 15 jours), elle est diluée extemporanément au l/80ème dans le milieu de culture complet puis centrifugée 10 minutes à 3000 tours par minute (tpm) avant utilisation.
-Evaluation de l'activité métabolique par le test MTT (Méthyl Thiazol Tétrazolium) Les cellules NHDF sont ensemencées à J0, en plaque 96 puits, à raison de 4x10 cellules par puits. Elles sont traitées à Jl pendant 48 heures de culture en milieu complet.
Les concentrations de l'actif à tester sont exprimées en % de l'extrait. La solution mère de l'extrait a été préparée dans du DMSO à la concentration 20% (p/v). La première dilution a été réalisée au 171000e. Les dilutions suivantes ont été réalisées au ½ en maintenant la concentration de DMSO finale à 0,1%.
Le test MTT est réalisé à J3 : le milieu est remplacé par 100 μΐ. de MTT à 0,5 g/L dans du milieu complet. Après 3 heures d'incubation à 37°C, 5% de C02, la solution de MTT est remplacée par 100 μΐ, de DMSO. La DO540nm est mesurée après homogénéisation (condition de dosage comme précisé pour le test précédent au rouge neutre).
- Produit testé et mode de préparation
Dénomination du produit à tester : Extrait d'Uchuva
A l'issue des 2 premiers tests donnés ci-dessus, 3 concentrations du produit à tester ont été sélectionnées pour la suite des tests à réaliser : 8.10~^%(0,8 ppm), 16.10"^% (1,6 ppm) et 32.
10"5% (3,2 ppm)
- Dosage du collagène I dans les surnageants de culture par méthode ELISA
Les cellules sont ensemencées à J0, sur plaques 6 puits, à raison de 25x10 cellules par puits. Elles sont traitées à Jl pendant 48 heures de culture en milieu complet.
Les concentrations de l'actif à tester sont exprimées en % de l'extrait. La solution mère de l'extrait a été préparée dans du DMSO à la concentration de 20% (p/v). La première dilution a été réalisée au l/1000e. Les dilutions suivantes ont été réalisées en maintenant la concentration de DMSO finale à 0,016% (correspondant à la concentration de DMSO à la plus forte concentration de l'extrait).
Après 48h, les surnageants de culture sont récupérés et stockés à -80°C.
Le dosage collagène I est réalisé selon les instructions du fournisseur du kit ELISA
(Tecomedical).
Effet de l'extrait d'Uchuva sur la production de collagène I par des fibroblastes en culture
48 h:
Tableau présentant les quantités de collagène I (ng) pour 10 ,4 cellules nb de cellules par moyenne quantité de écart-type quantité de
„ 2,5 x 10 cellules/puits quantité Collagène 1 quantité Collagène 1 quantité Collagène 1 quantité Collagène 1
Coaditiofls ... . .„ condition Collagène 1 enngpour Collagène 1 enngpour dilution au 1/5 enng lO cell DOl enng 10" cell. DO2 en ng/lO celL D03 enng/10" ceH DO4
(X 10 ) 10"4 cellules 10-4 cellules
Témoin 14 49,4 4S,1 49,7 49,0 49,0 0,71
Témoin DMO 16 47,5 48,9 46,0 50,5 48,2 1,93
Extrait (TUchmTî <EUc) 8 x ÎO"5 % 12 57,6 69,8 64,8 59,5 63,0 5,5
Extrait ÎUdmKi (EUc> 16 x 10'5 % 12 63,8 63,8 65,5 63,0 64,0 1,06
Extrait tfUcfcura (Etîc) 32 x 13 52,7 56,1 47,3 50,2 51,6 3,74
Ces résultats permettent de constater une augmentation significative de la production de Collagène I de 29% et 30% par les fibroblastes traités pendant 48 h par l'extrait d'Uchuva aux concentrations les plus faibles (respectivement 8.10"^% et 16.10"-*%) par rapport au contrôle.
A la concentration la plus forte (32. 10"^%), la production de Collagène I par les fibroblastes diminue à un niveau proche des conditions contrôles. Cette diminution peut être expliquée par un début de toxicité cellulaire à cette plus forte concentration.
Les résultats sont présentés dans la figure 2A.
3- Evaluation de l'effet de l'extrait d'Uchuva sur la production de Collagène III par les fibroblastes
Les Cellules sont ensemencées à J0, sur plaques 6 puits, à raison de 25x10^ cellules par puits. Elles sont traitées à Jl pendant 48 heures de culture en milieu complet.
Les concentrations de l'actif à tester sont exprimées en % de l'extrait. La solution mère de l'extrait a été préparée dans du DMSO à la concentration de 20% (p/v). La première dilution a été réalisée au l/1000e. Les dilutions suivantes ont été réalisées en maintenant la concentration de DMSO finale à 0,016% (correspondant à la concentration de DMSO à la plus forte concentration de l'extrait) :
EUc EUc EUc
8 x 10 -5 % 16 x 10 -5 % 32 x 10 -S % Après 48h, les surnageants de culture sont récupérés et stockés à -80°C.
Le dosage collagène ΓΠ est réalisé selon les instructions du fournisseur du kit ELISA (SunRed).
Effet de l'extrait d'Uchuva sur la production de collagène III par des fibroblastes en culture 48 h:
Tableau suivant présentant les quantités de collagène III ^g) pour 10^ cellules :
Figure imgf000043_0001
L'analyse de ces résultats . met en évidence une augmentation de la concentration dépendante de la production de Collagène ΠΙ induite par l ' extrait d'Uchuva. La production est maximale à la concentration de 16.10"^% (+50% par rapport aux contrôles).
A la concentration de l'extrait la plus forte (32.10"^%), la production de Collagène III par les fibroblastes diminue à un niveau proche de celle de la condition contrôle comme dans le cas de la production de Collagène I. Cette observation confirme la présence d'une toxicité cellulaire à ce niveau de concentration. Les résultats sont présentés dans la figure 2B.
4 - Evaluation de l'effet de l'extrait d'Uchuva sur la cible Collagène IV
Le collagène est le constituant majoritaire de la MEC (environ 70%) synthétisé par les fibroblastes. Il existe les collagènes fibrillaires (I, II, ΙΠ, V, XI) et non fibrillaires (IX, XII, XTV, XVI). Les fibres de collagènes sont flexibles et elles résistent aux forces de tension dans les tissus. Elles forment des faisceaux ondulés de longueur et d'épaisseur variable. Le collagène de type IV est particulier, il forme le « réseau primaire » des membranes basales (lamina densa). Il est impliqué dans l'adhésion cellulaire, la prolifération, la migration et dans l'angiogenèse (mélanome). Il possède un site d'interaction avec le récepteur aux intégrines. Il est situé au point de contact entre la lame basale et la MEC (S Pasco et al., Cancer Détection and Prévention, 29,260, 2005). Le collagène IV, avec les laminines 1, forme un réseau qui constitue la charpente de la membrane basale afin de réaliser un maintien structural et fonctionnel des tissus.
Les deux concentrations de 4.10"^% et 8.10"^% de l'extrait d'Uchuva ont été testées.
Evaluation de la quantité de protéines de la matrice extracellulaire produites par les fibroblastes durant 48h
- Détection de l'expression du collagène IV par immunocytologie
Les cellules sont ensemencées à J0, sur lames Millicell 8 puits, à raison de 4.10 cellules par ml dans 400 μΐ de milieu complet. Elles sont traitées à Jl pendant 48 heures de culture en milieu complet. Les concentrations de l'actif à tester sont exprimées en % de l'extrait. La solution mère de l'extrait a été préparée dans du DMSO à la concentration de 20% (p/v). La première dilution a été réalisée au 1/1000e. Les dilutions suivantes ont été réalisées en maintenant la concentration de DMSO finale à 0,1%. Après 48h, les cellules sont fixées par un mélange alcool/acide. Les cellules sont ensuite marquées à l'aide d'un anticorps anti- collagène IV (Rockland) dilué dans du PBS + BSA/tween au 1/50 pendant 1 h. Les lames sont ensuite rincées 2 fois par du PBS. La révélation du marquage spécifique se fait à l'aide d'un anticorps secondaire couplé FITC (Santa-Cruz) dilué dans du PBS + BSA/tween au 1/100 pendant 1 heure. Les lames sont ensuite rincées 2 fois par du PBS et montées entre lame et lamelle à l'aide du liquide de montage RotiMount Fluocare + DAPI (Roth).
Des photos dans le vert et dans le bleu ont été réalisées à l'aide d'une caméra DP72 (Olympus, Japan) couplé à un microscope à épifluorescence BX-60 (Olympus, Japan).
Les photos ont été observées par 2 lecteurs et un scoring de l'intensité de fluorescence a été réalisé sur une échelle linéaire allant de 0 (pas de marquage) à 4 (très fort marquage). En parallèle, une concentration de rhamnose a été intégrée à cet essai en tant que contrôle positif pour l'expression du Collagène IV. En effet, le rhamnose et les polysaccharides contenant du rhamnose sont décrits pour induire la synthèse des collagènes dans les fibroblastes 22. Les résultats sont présentés dans la figure 3A.
L'analyse des résultats met en évidence une forte augmentation de l'expression du Collagène IV (environ +300%) dans les fibroblastes traités pendant 48 h par l'extrait d'UCHUVA et ceci quelque soit la concentration utilisée. L'amplitude de cette augmentation d'expression du Collagène IV est comparable à celle obtenue avec le rhamnose.
5 - Evaluation de l'effet de l'extrait d'Uchuva sur la cible Elastine
L'élastine est une glycoprotéine structurale (comme la laminine et la fibronectine) entrant dans la composition de la MEC. L'élastine est une protéine de la famille des protéines fibreuses de type structural. Sécrétée par les fibroblastes essentiellement durant la période de croissance, elle possède des propriétés élastiques. Sa synthèse diminue avec l'âge et l'élastine se trouve remplacée par du collagène inextensible. Les vergetures sont un exemple visible de ce processus, qui est lié à des contraintes mécaniques. Le vieillissement cutané en est un deuxième exemple. Dans la matrice extracellulaire :
L'élastine est synthétisée et sécrétée dans l'espace extracellulaire par les fibroblastes d'abord en proélastine, puis en tropoélastine. L'élastine est la composante majeure (jusqu'à 90 %) des fibres élastiques auxquelles s'ajoute la fibrilline. Donc, le collagène, associé à l'élastine et la fibrilline qui forment les fibres élastiques, par des liaisons transversales covalentes, sont les principaux constituants de la matrice extracellulaire. La production totale d'élastine s'arrête autour de la puberté. Après quoi, la quantité d'élastine disponible diminuera avec le temps.
Dégradation :
La dégradation de l'élastine est liée à l'action de l'élastase, une enzyme sécrétée par les fibroblastes. L'action enzymatique de l'élastase est inhibée par αΐ-antitrypsine. L'inhibition de la dégradation crée un équilibre augmentant la stabilité de l'élastine.
Rôle :
Des traits distinctifs caractérisent l'élastine : l'élastine permet aux cellules de se lier et permet aux tissus biologiques de se former. Ainsi, le bon fonctionnement de la peau, des poumons, des vaisseaux sanguins, des tissus conjonctifs, de certains tendons et cartilages est étroitement lié aux caractéristiques de l'élastine. Comme son nom l'indique, l'élastine est élastique. À diamètre égal, elle est 5 fois plus élastique qu'un élastique. Elle peut s'étirer jusqu'à 150% de sa longueur au repos avant de se briser. Ainsi, elle permet aux tissus de s'étirer et de retrouver leur état initial après l'étirement, ce qui leur donne de la souplesse.
Le derme :
L'élastine se retrouve dans le derme de la peau, celui-ci agissant en tant que soutien. Au cours du vieillissement, par exemple, la perte d'élasticité et de tonicité du derme qui ne peut plus s'opposer aux effets de contraction des muscles sous-jacents donne lieu à l'apparition des rides. Par ailleurs, l'exposition aux ultraviolets augmente la dégradation de l'élastine.
Etude sur cellules jeunes versus cellules vieillies
L'étude qui suit a permis d'étudier l'effet de l'extrait d'Uchuva sur l'expression de la protéine élastine.
Méthode
Les NHDF (Normal Human Dermal Fibroblasts) jeunes ou vieillis par sénescence réplicative ont été ensemencés en plaque 96 puits et incubées 24h à 37°C, 5%C02.
Les cellules ont été traitées 24h en présence des produits d'essai. Les cellules ont ensuite été fixées avec de la formaline et l'expression des protéines a été détectée par immunofluorescence. Les marquages fluorescents ont été imagés et quantifiés par microscopie automatisée (Arrayscan Cellomics^^), La fluorescence a été quantifiée par la bioapplication Compartimentai Analysis.
Modèles cellulaires :
Jeunes : NHDF de donneur jeune (25 ans)
Vieillissement par sénescence réplicative : NHDF de donneur jeune cultivés sur plusieurs passages jusqu'à atteindre la sénescence.
Les résultats sont présentés dans la figure 3B.
L'extrait d'Uchuva permet de rétablir l'expression de l'Elastine légèrement au-dessus du niveau protéique des cellules jeunes.
Conclusion
Au vu des résultats obtenus, l'extrait d'Uchuva présente une amélioration de l'élasticité in vitro qui pourra être extrapolée in vivo.
6- Evaluation de l'effet de l'extrait d'Uchuva sur la cible méthylation de l'ADN
La méthylation est une modification des extrémités N-terminales des histones. Elle peut s'effectuer soit sur des lysines soit sur des arginines et peut se concrétiser par l'ajout d'un, de deux ou de trois groupements méthyles. Selon les résidus méthylés et le nombre de groupements ajoutés elle est associée à une activation ou une répression de la transcription. Longtemps considérée comme statique, la méthylation des histones s'avère être une modification réversible impliquée dans un processus dynamique, bien que plus stable que l'acétylation et la phosphorylation. Un nombre croissant d'histones déméthylases sont identifiés. De manière générale, ce type de modifications est antagoniste à l'acétylation, et la désacétylation des lysines doit précéder leur méthylation. Cet antagonisme entraîne la mise en place d'un certain équilibre dynamique entre les territoires hétérochromatiniens (généralement non exprimables et méthylés sur certains acides aminés clés) et euchromatiniens (généralement exprimables et acétylés). Par exemple, la Lysine 9 de l'histone H3 est connue pour être associée à une répression de la chromatine environnante lorsqu'elle est méthylée. Cette méthylation est reconnue par une protéine, HP1, qui se fixe donc sur H3 méthylée. À son tour, HP1 attire la protéine Suv39, une Histone MethylTransférase, qui pourra méthyler la lysine 9 de l'histone H3 du nucléosomevoisin, et ainsi de suite. On voit donc, comment, de proche en proche, les histones H3 seront méthylées et la chromatine sera condensée. Cependant, cette invasion hétérochromatinienne sera stoppée si la lysine 9 de H3 rencontrée est déjà acétylée. Ainsi se met en place un équilibre compétitif entre domaines chromatiniens exprimés et réprimés. Les modifications des queues d'histones jouent le rôle de « marques » épigénétiques qui entraînent le recrutement de différentes classes de protéines, puisque les lysines acétylées ou méthylées sont reconnues par des domaines protéiques différents. De plus, le recrutement de certains facteurs au niveau de la chromatine nécessite l'existence préalable de modifications d'histones et de protéines déjà liées. Le code des histones est donc interprété dans le contexte d'autres facteurs associés à la chromatine et c'est la combinaison d'interaction entre les histones modifiées et d'autres facteurs qui détermine si une protéine est recrutée à la chromatine. Tous les tissus des organismes sont affectés par le vieillissement. Ce processus est lié aux modifications épigénétiques telles que les changements de méthylation au niveau de résidus cytosine spécifiques de l'ADN, tel que décrit dans de nombreuses publications24"31. Le rôle des modifications épigénétiques sur le vieillissement, l'accumulation de divisions cellulaires et de macromolécules détériorées contribuent à un phénotype âgé. Les événements environnementaux et aléatoires peuvent de plus modifier ce phénotype par l'intermédiaire de mécanismes épigénétiques tels que la méthylation de l'ADN et la méthylation et l'acétylation des histones. La potentielle réversibilité des modifications épigénétiques fait d'eux des cibles attractives pour le traitement des pathologies liées au vieillissement.
Etude sur cellules jeunes versus cellules vieillies
Afin de comprendre le mécanisme de réactivation de l'expression des protéines observée, nous avons procédé à une analyse de la méthylation de l'ADN sur cellules vieillies de manière intrinsèque. En effet l'une des signatures de la sénescence cellulaire est l'accumulation de zones méthylées au sein de l'ADN, au niveau des Cytosines contenues dans les dinucléotides CpG. Ceci entraîne l'inactivation de promoteurs et la diminution de l'expression de certains gènes. - Méthode
Les NHDF (Normal Human Dermal Fibroblasts) jeunes ou vieillis de manière intrinsèque par réplication ont été ensemencés en plaque 6 puits et incubées à 37°C, 5%C02 jusqu'à subconfluence. Les cellules ont été traitées 24h en présence des produits d'essai. Les cellules ont ensuite été décollées en présence de trypsine et lysées. L'ADN génomique a été précipité à l'Ethanol. Le taux de méthylation de l'ADN a été dosé par ELISA en utilisant le kit Enzo : 5- Methylcytosine DNA ELISA kit. Les valeurs sont représentées à partir de 50% pour une meilleure visibilité des résultats.
Modèles cellulaires :
- Jeunes : NHDF de donneur jeune (25 ans)
- Vieillissement par sénescence réplicative : NHDF de donneur jeune cultivés sur plusieurs passages jusqu'à atteindre la sénescence.
Suite à l'évaluation préalable de sa cytotoxicité, l 'extrait d'Uchuva est testé aux concentrations suivantes 2 - 1 - 0,5 ppm.
- Résultats : Les résultats sont présentés dans la figure 4A.
Conclusion
Au vu des résultats obtenus, l'extrait d'Uchuva permet de réduire le taux de méthylation aux trois concentrations testées par rapport au modèle de peau vieillie.
7 - Evaluation de l'effet de l'extrait d'Uchuva sur la cible Fibrilline-1
La Fibrilline 1 est une protéine qui constitue les microfibrilles, lesquelles sont associées aux fibres élastiques et participent à leur assemblage.
Etude sur cellules jeunes versus cellules vieillies
Méthode
Les NHDF (Normal Human Dermal Fibroblasts) jeunes ont été ensemencés en plaque 96 puits et incubées 24h à 37°C, 5%C02. Les cellules destinées au vieillissement extrinsèque ont été irradiées 3 fois aux UVA avec 24h entre chaque irradiation et 1 fois aux UVB. Les cellules ont été traitées en présence des produits d'essai entre chaque irradiation. Les cellules ont ensuite été fixées avec de la formaline et l'expression des protéines a été détectée par immunofluorescence. Les marquages fluorescents ont été imagés et quantifiés par microscopie automatisée (Arrayscan Cellomics™). La fluorescence a été quantifiée par la bioapplication Compartimentai Analysis.
Modèles cellulaires :
- Jeunes : NHDF de donneur jeune (25 ans)
- Vieillissement UVA/B-induit : NHDF de donneur jeune, irradiés aux UVA et aux UVB
Produits testés
L'extrait d'Uchuva est testé aux concentrations suivantes :2 - 1 - 0,5 ppm suite à l'évaluation préalable de sa toxicité.
Résultats
Les résultats sont présentés dans la figure 4B.
L'extrait d'Uchuva à 0.5 ppm permet de rétablir l'expression de la Fibrilline 1 à un niveau équivalent voire légèrement supérieur à celui des cellules jeunes.
- Conclusion générale sur l'activité anti-âge et rajeunissante
Au cours du vieillissement les fibres de collagène et les fibres élastiques sont altérées du fait d'une synthèse réduite et d'une dégradation accrue. Pour démontrer que l'extrait d'Uchuva agit sur le rajeunissement cellulaire, l'expression des protéines impliquées dans la structure de ces fibres au sein de cellules vieillies de manière intrinsèque (sénescence réplicative) dans le cas du Collagène I et de l'Elastine, ou extrinsèque par irradiations UV répétées (photo vieillissement) dans le cas de la Fibrilline 1 ont été quantifiées.
L'extrait d'Uchuva permet de rétablir l'expression des 3 marqueurs.
Dans ces études, l'extrait d'Uchuva rétablit en totalité l'expression des protéines en comparaison aux témoins jeunes. C'est tout l'intérêt des effets observés, il n'y a pas de surexpression aberrante, l'extrait d'Uchuva respecte l'équilibre biologique de la peau.
Parallèlement l'extrait d'Uchuva augmente aussi fortement l'expression du Collagène IV fibroblastique par rapport à des cellules non traitées, à la manière du Rhamnose reconnu pour cette verrue. La quantité de Collagène ΙΠ se trouve aussi accrue lors d'un traitement des fibroblastes par l'extrait d'Uchuva. Ces résultats viennent renforcer son efficacité anti-âge au niveau structural et redensifiant.
Dans le cadre de l'analyse de la méthylation de l'ADN l'extrait d'Uchuva présente des résultats homogènes dans cette expérience, il diminue la méthylation aux 3 concentrations testées. Cet effet donne une information sur le mode d'action de ce produit permettant de réactiver l'expression de protéines de la matrice extracellulaire, lui conférant son effet rajeunissant.
L'extrait d'Uchuva est par conséquent un ingrédient ou principe actif présentant une activité biologique anti-âge, antivieillissement et rajeunissant. Il agit de manière cohérente sur 3 cibles du vieillissement cutané en rétablissant l'expression protéique à hauteur de celle observée dans les cellules jeunes. Il présente également une activité novatrice sur l'épigénétique comme le démontre son action sur la méthylation de l'ADN au sein de cellules matures. Enfin, il démontre une action anti-âge en profondeur par son efficacité sur la synthèse des protéines de la matrice extracellulaire. Exemple 22 : Tests démontrant le pouvoir hydratant et structurant de l'épidermc de la peau par l'extrait d'Uchuva
La fîlaggrine est synthétisée dans le stratum granulosum sous forme d'un précurseur, la profilaggrine (répétition de 10-12 monomères de fîlaggrine et de la protéine de régulation S- 100 NH2 terminale). La détection de cette protéine est associée à un état de différenciation terminal de l'épiderme car elle apparaît après déphosphorylation et protéolyse de la profilaggrine qui a lieu durant la différenciation terminale.
1) La fîlaggrine participe à l'agrégation de la kératine durant la formation des paquets de macrofibrilles,
2) Les monomères de fîlaggrine sont des composants de la couche cornifiée (CE ; enveloppe qui est déposée à la surface interne de la membrane plasmique des cornéocytes: participe aux propriétés imperméables de la peau avec la matrice lipidique intercornéocytaire),
3) Les monomères sont complètements dégradés sur les couches les plus supérieures du stratum corneum pour produire une mixture d'aminoacides hygroscopiques (NMFs ou Natural Moisturizing Factors) qui sont importants pour maintenir une hydratation de l'épiderme32.
Dans des situations pathologiques où l'on observe une xérose ou sécheresse de la peau (dermatite atopique, ichtyose), une diminution de la profilaggrine et/ou de la fîlaggrine a été détectée33.
Selon Proksch et al34, le suivi de l'expression de la fîlaggrine est un bon moyen de suivre la fonction barrière et/ou le niveau d'hydratation du Stratum Corneum. C'est le seul réel marqueur qui a du poids comme marqueur d'hydratation des couches supérieures dans les revues de dermatologie. C'est néanmoins en clinique un marqueur qui passe après la mesure du TEWL (TransEpidemal Water Loss).
L'involucrine, comme la fîlaggrine et la loricrine est un marqueur de différenciation terminale. C'est une protéine de l'enveloppe cornifiée (CE) qui est la cible des transglutaminases (TGM) et particulièrement de la TGM1. L'involucrine est oligomérisée par la TGM1 durant les étapes initiales de la formation de l'enveloppe cornifiée et sur des étapes plus tardives de la formation de la CE, l'involucrine est liée aux céramides35. Le marquage est localisé dans l'épiderme à partir des couches supérieures de la couche spineuse jusque dans la couche granuleuse et les premières couches du SC. - Effet du traitement topique de l'extrait d'Uchuva sur explants de peau humaine -Matériel et méthode :
Désignation : Explant de peau mammaire humaine provenant d'une femme de type caucasien âgée de 51 ans (Biopredic - 35000 RENNES).
Nombre : Réalisation de 9 punchs de peau dégraissée d'un diamètre de 1 cm
Conditions de culture : 37°C, 5% de C02
Milieu de culture : Milieu DMEM 4,5 g/L de glucose, supplémenté et avec antibiotiques (Pénicilline-streptomycine-Amphotéricine)
- Produits testés
L'extrait d'Uchuva obtenu selon l'exemple 3 est dilué à 0,05% et 0,01% (p/v) dans de l'huile de paraffine. Le solvant TRIGLYCERIDES C8C10 55/45 (Code EC-09-271) est utilisé.
- Méthode de culture et traitement des explants
A réception, les explants ont été dégraissés. Des disques de peau circulaires d'un diamètre de 1 cm ont été obtenus à l'aide d'un emporte-pièce. Dans une plaque six puits, une grille en acier inoxydable de 1,6 cm de diamètre est placée dans 5 ml de milieu de culture. Chaque explant en culture est déposé sur sa grille de manière à baigner dans le milieu de culture tout en laissant l'épiderme à l'air. Les explants ont été cultivés pendant 48 heures sans changement du milieu de culture. Les différents traitements ont été réalisés par un dépôt topique de 10 μL des préparations à tester à J0 et à Jl. Chaque condition expérimentale a été répétée sur 3 punchs. Des explants contrôles ont été cultivés de la même manière que les explants traités. Les traitements ont été réalisés par un dépôt topique de 10 iL du solvant TRIGLYCERIDES à la concentration de 0,05%.
- Immunomarquages in situ
A la fin du temps de culture, les explants ont été recueillis puis divisés en deux parties égales à
TTV/Ï
l'aide d'un scalpel. Une moitié a été congelée dans du tissu Teck (Sakura) à l'aide d'isopentane refroidi dans de l'azote liquide puis conservée à -80° C en attente de l'immunomarquage. La seconde moitié a été conservée dans du formol tamponné à 4%.
Des coupes transversales de 5 μπι d'épaisseur de chaque explant ont été réalisées à l'aide d'un cryotome. Les coupes ont été séchées à l'air ambiant. Après réhydratation dans du PBS, les coupes ont été incubées pendant 1 heure avec la solution d'anticorps primaire préparée dans une solution (PBS- BSA-Tween). Après lavages successifs, les anticorps primaires ont été révélés par un anticorps secondaire couplé à une sonde FITC au l/100ème de la forme commerciale. Les noyaux cellulaires ont été marqués par le colorant fluorescent DAPI.
Des lames poly-lysine ont été utilisées pour recueillir les sections de peau. - Observations microscopiques
Chaque section de peau a été observée à l'aide d'un microscope à épifluorescence Olympus BX60 au grossissement 20X. Pour chaque section, deux photographies ont été réalisées à l'aide d'une caméra Olympus DP72® pilotée par le logiciel Cell F. Les clichés ont été identifiés de la manière suivante : Date du marquage - Condition de traitement - Numéro de l'image - Marqueur. La contre coloration des noyaux a été réalisée à l'aide du marqueur nucléaire DAPI. Par un glissement de teinte à l'aide d'un logiciel de traitement d'image, la couleur des noyaux a été transformée du bleu au rouge. Pour chaque condition de traitement des épidémies, un scoring visuel portant sur l'intensité du marquage a été réalisé au grossissement xlO. L'échelle d'évaluation était la suivante :
Marquage très faible 1
Marquage faible 2
Marquage modéré 3
Marquage fort 4
Les données obtenues ont été analysées, présentées sous forme d'histogrammes en comparaison aux conditions contrôle solvant Triglycérides.
-Résultats
L'ensemble des marquages était localisé au niveau des couches supérieures de l'épiderme (spineuse et/ou granuleuse et/ou cornée de l'épiderme).
- Immunomarquage Filaggrine
Les résultats des scorings réalisés sont présentés dans le graphique de la figure 5A.
L'analyse des données d'expression du marquage Filaggrine indique une augmentation dose dépendante de la quantité de fluorescence pour les explants traités avec l'extrait d'Uchuva à 0,01% (+21%) et 0,05% (+37%) en comparaison au groupe Contrôle Solvant.
- Immunomarquage Involucrine
Les résultats des scorings réalisés sont présentés dans le graphique de la figure 5B. L'analyse des données d'expression du marquage INVOLUCRINE indique une augmentation significative dose dépendante de la quantité de fluorescence pour les explants traités avec l ' extrait d'Uchuva à 0,01% (+64%) et 0,05% (+86%) en comparaison au groupe Contrôle. - Conclusion
Dans cette étude, les résultats ont montré que le traitement topique d'expiants de peau en culture pendant 48h avec l'extrait d'Uchuva a induit une augmentation de l'expression de protéines impliquées dans l'hydratation et l'effet barrière de la peau (respectivement la filaggrine et l'involucrine). L'augmentation d'expression induite par l'extrait d'Uchuva a été plus importante pour l'involucrine que pour la filaggrine. Le maximum d'expression de ces protéines a toujours été observé à la concentration de 0,05%. D'après ces résultats, l'extrait d'Uchuva selon l'invention présente un profil d'activité hydratante et structurante de l'épiderme.
Exemple 23 : Tests démontrant le pouvoir dépigmentant de la peau par l'extrait d'Uchuva
Le potentiel effet dépigmentant de l'extrait d'Uchuva a été recherché dans un modèle de mélanocytes épidermiques humains normaux (NHEM). L'effet de l'extrait d'Uchuva sur la synthèse de mélanine a été évalué après 10 jours d'incubation en condition stimulée par la L- tyrosine. Dans ce test, la molécule inhibitrice de référence est l'acide lipoïque, dont le mécanisme d'action passe par une inhibition de l'expression du facteur de transcription MITF (microphthalrnia-associated transcription factor). Ce facteur de transcription est le régulateur majeur de l'expression de la tyrosinase et son inhibition a pour conséquence de diminuer l'expression de la tyrosinase, enzyme impliquée dans la synthèse de mélanine. Les mélanocytes ont été ensemencés en plaque 24 puits et cultivés en milieu de culture pendant 24 heures. Le milieu a ensuite été remplacé par du milieu de culture (Médium 254 complémenté avec PMA free HMGS-2 + Pénicilline 50 U/ml - Streptomycine 50 μg/ml) supplémenté en L-tyrosine (à 1 mM) et contenant ou non (témoin stimulé) le composé ou la référence (acide lipoïque testée à 5 μg/ml). Une condition témoin non stimulé a été réalisée en parallèle. Les cellules ont ensuite été incubées pendant une durée totale de 10 jours, avec renouvellements des traitements après 3 et 7 jours d'incubation. Après incubation, la mélanine a été extraite par lyse des cellules avec une solution de NaOH 0.5 N. La densité optique (DO) des échantillons a été mesurée à 405 nm, puis la quantité de mélanine a été déterminée en comparaison avec une gamme de mélanine exogène (courbe de mélanine incluant des standards de 0.39 à 100 μg/ml). Les résultats ont été exprimés en μg/ml de mélanine, en pourcentage de témoin stimulé et en pourcentage d'inhibition. Le traitement des mélanocytes épidermiques humains normaux (NHEM) par la L-tyrosine, testée à 1 mM, a fortement stimulé la synthèse de mélanine. La référence, acide lipoïque, testé à 5 μg/ml, a fortement inhibé la stimulation induite par la L-tyrosine (108% d'inhibition). Cet effet était attendu et a permis de valider le test.
Les concentrations à tester de l'extrait d'Uchuva dans l'étude ont été sélectionnées suite à un test préliminaire de cytotoxicité :
- Type cellulaire : NHEM en milieu de culture
- Temps d'incubation : 72 + 96 + 72 heures
- Paramètres Réduction du MTT et observations morphologiques au d'évaluation : microscope.
A la fin du traitement, les cellules ont été incubées en présence de MTT (sel de tétrazolium) dont la transformation en cristaux bleus de formazan est proportionnelle à l'activité de la succinate deshydrogénase (enzyme mitochondriale). Après dissociation des cellules et solubilisation du formazan par ajout de DMSO, la densité optique (DO), représentative du nombre de cellules vivantes et de leur activité métabolique, a été mesurée avec un lecteur de microplaques à 540 nm (VERSAmax, Molecular Devices).
Les concentrations ainsi retenues pour la suite de l'étude sont : 0.5 - 1.6 - 5 μί»/ηι1 correspondant respectivement à 5.10"5, 16.10"5 et 5.10"5%. Dans les conditions expérimentales de cette étude, l'extrait d'Uchuva, testé à 5 μ{*/πι1, a modérément inhibé la synthèse de mélanine (40% d'inhibition). Testé à des concentrations plus faibles, 0.5 et 1.6 μ^ιηΐ, le composé n'a pas présenté d'effet. Les résultats sont présentés dans le diagramme de la figure 6. Dans les conditions expérimentales de cette étude, l'extrait d'Uchuva a présenté un effet dépigmentant modéré et qui a été observé seulement à la plus forte concentration testée (5 g/ml).
Le tableau ci-dessous présente la correspondance des concentrations de l'extrait d'Uchuva testé dans les exemples 21 à 23 (ppm et % en poids par rapport à la concentration totale de la composition.
CIBLES CONC. TESTEES ppm CONC. TESTEES % I
0,8 8.10-5
Collagène I
1,6 16.10-5
3,2 32.10-5
0,5 5.10-5
Collagène I
1 10.10-5
2 20.10-5
0,8 8.10-5
Collagène III
1,6 16.10-5
3,2 32.10-5
Collagène IV 0,4 4.10-5
0,8 8.10-5
0,5 5.10-5
Elastine
1 10.10-5
2 20.10-5
0,5 5.10-5
Fibrilline-1
1 10.10-5
2 20.10-5
Niveau de 0,5 5.10-5
éthylatton 1 10.10-5
2 20.10-5
Filaggrinê 100 0,01
500 0,05
Involucrine 100 0,01
500 0,05
0,5 5.10-5
Mélanine
1,6 16.10-5
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Claims

REVENDICATIONS
1. Extrait végétal provenant du calice d'une des nombreuses plantes de la famille des Solanaceae, du genre Phy salis caractérisé en ce qu'il comprend principalement un ou plusieurs sucrose-esters moyennement polaires à apolaires ayant un nombre de carbone des groupements acyles de Cl à C10 pour son utilisation en tant que principe actif biologiquement actif sur la peau, les phanères et les muqueuses.
2. Extrait végétal selon la revendication 1 caractérisé en ce qu'il provient du calice de Physalis peruviana.
3. Sucrose-esters moyennement polaires à apolaires ayant un nombre de carbones des groupements acyles de Cl à C10 caractérisés en ce qu'ils sont obtenus de l'extrait végétal selon la revendication 1 ou sont synthétisés, pour leur utilisation en tant que principe actif biologiquement actif sur la peau, les phanères et les muqueuses.
4. Composition cosmétique, dermatologique ou nutracosmétique caractérisée en ce qu'elle comprend comme principe actif, dans un milieu physiologique adapté, un extrait végétal selon les revendications 1 et 2 ou les sucrose-esters selon la revendication 3.
5. Composition selon la revendication 4 caractérisée en ce que le principe actif est présent à une concentration comprise entre 10"6 et 50 % en poids par rapport au poids total de la composition.
6. Composition cosmétique selon la revendication 4 ou 5 caractérisée en ce qu'elle est adaptée à une administration topique et se présente notamment sous forme d'une solution aqueuse, hydro-alcoolique ou huileuse ou sous la forme d'une émulsion huile-dans-eau, eau- dans-huile ou émulsions multiples ou sous forme de crèmes, de suspensions, ou encore de poudres ; ladite composition pouvant être plus ou moins fluide ou solide et avoir l'aspect d'une crème, d'une lotion, d'un lait, d'un shampooing, d'un sérum, d'une pommade, d'un gel, d'une pâte, d'une mousse ou d'un stick.
7. Procédé de traitement cosmétique pour améliorer l'aspect de la peau, des muqueuses ou des phanères, pour prévenir et/ou lutter contre la sécheresse de la peau et des muqueuses, pour prévenir et/ou à lutter contre les signes cutanés du vieillissement et/ou du photo-vieillissement, pour lutter contre la perte d'élasticité et de fermeté de la peau et pour dépigmenter la peau, consistant à appliquer sur la surface de la peau et/ou des cheveux, une quantité efficace d'une composition telle que définie dans l'une quelconque des revendications 4 à 6.
8. Quantité efficace d'un extrait végétal selon la revendication 1 ou de sucrose-esters selon la revendication 3, seul ou en association avec d'autres principes actifs, pour son utilisation dans le traitement dermatologique des pathologies impliquant une sécheresse pathologique de la peau, des muqueuses ou des phanères et pour favoriser la cicatrisation.
9. Utilisation d'une quantité efficace d'un extrait végétal selon la revendication 1 ou de sucrose-esters selon la revendication 3, seul ou en association avec d'autres principes actifs, pour préparer une composition nutracosmétique à ingérer destinée à améliorer l'aspect de la peau, des muqueuses ou des phanères, à prévenir et/ou lutter contre la sécheresse de la peau et des muqueuses, à prévenir et/ou à lutter contre les signes cutanés du vieillissement et/ou du photo- vieillissement.
10. Procédé de préparation d'un extrait végétal selon la revendication 1, comprenant les étapes suivantes:
- séchage de la partie de plante,
- broyage,
- extraction avec un solvant organique approprié, puis
- éventuellement une désolvantation, puis
- éventuellement une purification avec une ou plusieurs méthodes appropriées.
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