WO2015068623A1 - レニン活性の評価方法、原発性アルドステロン症への罹患可能性の試験方法およびそれに用いるキット - Google Patents

レニン活性の評価方法、原発性アルドステロン症への罹患可能性の試験方法およびそれに用いるキット Download PDF

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WO2015068623A1
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evaluation
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renin activity
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PCT/JP2014/078751
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浩幸 小堀
成 西山
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国立大学法人香川大学
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    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/74—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving hormones or other non-cytokine intercellular protein regulatory factors such as growth factors, including receptors to hormones and growth factors
    • G01N33/743—Steroid hormones
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
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    • G—PHYSICS
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    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/04—Endocrine or metabolic disorders

Definitions

  • the present invention relates to a method for evaluating renin activity, a method for testing the possibility of suffering from primary aldosteronism, and a kit used therefor.
  • Primary aldosteronism is a disease in which the blood aldosterone concentration increases due to a lesion such as a tumor occurring in the adrenal cortex. Its main symptoms are hypertension and hypokalemia, but it is also known that there is a very high risk of causing cerebral infarction, myocardial infarction, heart failure and renal failure. Although it has been designated as an intractable disease as an extremely rare disease (0.1% or less of hypertensive patients), it has recently been considered to account for 5-20% of hypertensive patients.
  • the present invention provides a new method for evaluating renin activity, a test method for the possibility of morbidity of primary aldosteronism, and a method for evaluating the possibility of morbidity of primary aldosteronism, in order to more easily and accurately test the possibility of morbidity of primary aldosteronism It aims at providing the kit used for it.
  • the method for evaluating renin activity of the present invention comprises a calculation step for calculating the relationship between the amount of X below and the amount of Y below for a subject; An evaluation step of evaluating the renin activity of the subject by comparing the relationship calculated for the subject and an evaluation criterion;
  • the evaluation criterion is a correlation between the relationship between the amount of X and the amount of Y below in the standard sample and the renin activity of the standard sample.
  • X Angiotensinogen with angiotensin I (intact AGT)
  • Y Angiotensinogen from which angiotensin I is eliminated (des-AngI AGT)
  • the test method of the present invention is a method for testing a subject's possibility of suffering from primary aldosteronism, For a subject derived from a subject, a step of evaluating renin activity by the evaluation method of the present invention, The test result of the renin activity obtained in the evaluation step, and by comparing with the evaluation criteria, testing the possibility of suffering from primary aldosteronism in the subject,
  • the evaluation criterion is a correlation between renin activity and morbidity of primary aldosteronism.
  • the test method of the present invention is a method for testing a subject's possibility of suffering from primary aldosteronism, A calculation step of calculating a relationship between the amount of X and the amount of Y for a subject derived from a subject; Testing the subject's likelihood of suffering from primary aldosteronism by comparing the relationship calculated for the subject and an evaluation criterion,
  • the evaluation criterion is a correlation between the relationship between the amount of X and the amount of Y in a standard sample and the incidence of primary aldosteronism in the standard sample.
  • the kit of the present invention is a kit for use in the method for evaluating renin activity of the present invention, and includes a measuring reagent for measuring the amount of X and a measuring reagent for measuring the amount of Y.
  • the kit of the present invention is a kit for use in the method for testing the possibility of suffering from primary aldosteronism in the subject of the present invention, and includes the kit for evaluating the renin activity of the present invention. It is characterized by that.
  • renin activity which is an index of primary aldosteronism
  • AngI activity is indirectly evaluated by the amount of released AngI, but the measured value varies depending on changes in the posture of the patient. Moreover, since fluctuations within the day also occur, accurate evaluation cannot be performed.
  • the present inventors have found that "Angiotensinogen with AngI (intact AGT); X” that is not degraded by renin and "Angio from which AngI has been eliminated” It was found that the relationship with tensinogen (des-AngI AGT); Y ”has an excellent correlation with the renin activity.
  • the correlation between the relationship and the renin activity was not affected by a change in the posture of the patient, and the diurnal variation was not confirmed.
  • the present invention is based on this finding, and the renin activity of the analyte can be easily and accurately evaluated from the stable correlation between the relationship and the renin activity.
  • renin activity is an index of primary aldosteronism
  • the subject can be easily and accurately determined from a stable correlation between the relationship and renin activity or primary aldosteronism. The possibility of developing primary aldosteronism can be tested. For this reason, it can be said that the present invention is extremely useful in, for example, the medical field and the biochemical field.
  • FIG. 1 is a graph showing the ratio (Plasma Y / X) between the amount of X (intact AGT) and the amount of Y (des-AngI AGT) in plasma in Example 1.
  • FIG. 2 is a graph showing Plasma Y / X in Example 2.
  • FIG. 3 is a graph showing Plasma Y / X in Example 3.
  • FIG. 4 is a graph showing Plasma Y / X in Example 4.
  • FIG. 5 is a graph showing Plasma Y / X in Example 5.
  • FIG. 6A is a graph showing Plasma Y / X in Example 6.
  • FIG. 6 (B) is a graph showing the production ability of angiotensin I in the comparative example.
  • ⁇ Method for evaluating renin activity> The method for evaluating renin activity of the present invention, as described above, for a subject, a calculation step for calculating the relationship between the amount of X below and the amount of Y below, An evaluation step of evaluating the renin activity of the subject by comparing the relationship calculated for the subject and an evaluation criterion;
  • the evaluation criterion is a correlation between the relationship between the amount of X and the amount of Y below in the standard sample and the renin activity of the standard sample.
  • X Angiotensinogen with angiotensin I (intact AGT)
  • Y Angiotensinogen from which angiotensin I is eliminated (des-AngI AGT)
  • the subject is blood or urine.
  • the evaluation method of the present invention includes, for example, a measurement step of measuring the amount of X (intact AGT) and the amount of Y (des-AngI AGT) for the subject prior to the calculation step.
  • the evaluation method of the present invention measures the amount of X (intact AGT) and the total amount of X and Y (des-AngI AGT) for the subject in the measurement step, and The amount of Y is calculated by subtracting the amount of X from the total amount.
  • the evaluation method of the present invention is, for example, in the measurement step, the measurement of the amount of X (intact AGT) is measurement using a first binding substance that specifically binds to angiotensin I in X.
  • the measurement of the total amount of X and Y (des-AngI AGT) is measurement using a second binding substance that specifically binds to the common site of X and Y.
  • the first binding substance and the second binding substance are each an antibody.
  • the evaluation method of the present invention is, for example, in the measurement step,
  • the measurement of the amount of X is a measurement using a first binding substance that specifically binds to angiotensin I in X.
  • the measurement of the amount of Y is measurement using a fourth binding substance that specifically binds to Y.
  • the first binding substance and the fourth binding substance are labeled with different labeling substances.
  • the relationship between the amount of X and the amount of Y is not particularly limited, and examples thereof include an arbitrary relationship represented by the amount of X and the amount of Y.
  • the relationship between the amount of X and the amount of Y is, for example, one of the following (1), (2), and (3).
  • (1) Ratio of the amount of X and the amount of Y (2) Ratio of the amount of X and the total amount of X and Y (hereinafter also referred to as “X + Y amount”) (3)
  • the way of expressing the ratio between X (intact AGT) and Y (des-AngI AGT) is not particularly limited, and for example, it may be expressed as Y / X or expressed as X / Y. Also good.
  • the ratio is represented by “Y / X”
  • the Y / X indicates, for example, a relatively low value as the renin activity is relatively low, and a relatively high value as the renin activity is relatively high. High value.
  • the renin activity which is an index of primary aldosteronism, is relatively low in affected patients and relatively high in unaffected healthy persons. Therefore, Y / X is, for example, relatively affected in affected patients. It shows a low value, and a healthy person who is not affected shows a relatively high value. Table 1 below outlines the relationship between renin activity and Y / X between patients with primary aldosteronism and healthy subjects.
  • X / Y indicates a relatively high value as the renin activity is relatively low, and indicates a relatively low value as the renin activity is relatively high.
  • the renin activity which is an index of primary aldosteronism, is relatively low in affected patients and relatively high in unaffected healthy persons. Therefore, X / Y is, for example, relatively affected in affected patients. High values are shown, and unaffected healthy people show relatively low values.
  • Table 2 the explanation of the correlation between renin activity and primary aldosteronism when the ratio of X and Y is expressed as “Y / X” can be used after replacing “X / Y” according to the above description. .
  • the way of expressing the ratio of X (intact AGT) and X + Y (intact AGT + des-AngI AGT) is not particularly limited, and for example, it may be expressed by X / (X + Y) X + Y) / X.
  • the ratio is represented by “X / (X + Y)”
  • the X / (X + Y) indicates, for example, a relatively high value as the renin activity is relatively low, and a relatively high renin activity. Shows a relatively low value.
  • the renin activity which is an index of primary aldosteronism, is relatively low in affected patients, and relatively high in unaffected healthy individuals.
  • X / (X + Y) is, for example, relative to affected patients. High values, and unaffected healthy individuals show relatively low values. Table 3 below summarizes the relationship between renin activity and X / (X + Y) between patients with primary aldosteronism and healthy subjects.
  • the ratio is represented by “(X + Y) / X”
  • the correlation between (X + Y) / X and renin activity and primary aldosteronism is opposite to the explanation for “X / (X + Y)”.
  • the (X + Y) / X indicates, for example, a relatively low value as the renin activity is relatively low, and a relatively high value as the renin activity is relatively high.
  • the renin activity which is an index of primary aldosteronism, is relatively low in affected patients and relatively high in unaffected healthy individuals. Therefore, (X + Y) / X is, for example, relative to affected patients. Low values, and unaffected healthy people show relatively high values.
  • the way of expressing the ratio of Y (des-AngI AGT) and X + Y (intact AGT + des-AngI AGT) is not particularly limited, and may be expressed by, for example, Y / (X + Y). , (X + Y) / Y.
  • the ratio is expressed by “Y / (X + Y)”, for example, the Y / (X + Y) shows a relatively low value as the renin activity is relatively low, and the renin activity is relatively high. Shows a relatively high value.
  • renin activity which is an index of primary aldosteronism is relatively low in affected patients and relatively high in unaffected healthy persons
  • the Y / (X + Y) is, for example, relative to affected patients. Low values, and unaffected healthy people show relatively high values.
  • Table 5 below outlines the relationship between renin activity and Y / (X + Y) between patients with primary aldosteronism and healthy subjects.
  • the type of the specimen is not particularly limited, and examples include biological specimens.
  • biological specimens include, for example, whole blood, blood such as plasma and serum, biopsy specimens such as urine, liver, and kidney; liquid collected from a living body including peritoneal dialysis perfusate; cell culture solution, cell extract, etc.
  • the living body include humans or non-human animals, and examples of the non-human animal include mammals such as monkeys, mice, rats, dogs, pigs, and cows.
  • the calculation step is a step of calculating the amount of X (intact AGT) and the amount of Y (des-AngI AGT) as described above.
  • the calculation method of the amount of X and the amount of Y is not particularly limited, and can be performed, for example, by a measurement method as exemplified below.
  • the amount of X is preferably measured, for example, by a method capable of detecting X without substantially detecting Y (des-AngI AGT). “Substantially does not detect Y” means that, for example, in the detection of X, even if Y is detected, the measurement result of X is not affected. Is preferably below the detection limit.
  • the X intact AGT
  • AngI angiotensin I
  • Y des-AngI AGT
  • the measurement of the amount of X preferably uses, for example, a first binding substance that specifically binds to angiotensin I in X.
  • the amount of X can be measured by detecting the presence or absence or amount of binding between X and the first binding substance.
  • Y (des-AngI AGT) is a protein obtained by detaching AngI from X (intact AGT)
  • Y and X have a common site other than AngI.
  • a second binding substance that specifically binds to the common site of X and Y may be used.
  • the amount of Y can be calculated by detecting the presence or absence or amount of binding between the X and Y and the second binding substance.
  • the method for measuring the amount of Y is not limited to this.
  • the amount of Y can be measured without substantially detecting X (intact AGT). May be. “Substantially does not detect X” means that, for example, in the detection of Y, even if the X is detected, it does not affect the measurement result of Y. Is preferably below the detection limit.
  • the amount of Y is preferably measured using, for example, a fourth binding substance that specifically binds to Y. In this case, for example, the amount of Y can be measured by detecting the presence or absence or amount of binding between Y and the fourth binding substance.
  • the first binding substance, the second binding substance, and the fourth binding substance may be any binding substance that specifically binds to the target, and the type thereof is not particularly limited.
  • the binding substance include antibodies and nucleic acids.
  • the method for preparing the binding substance is not particularly limited, and can be performed by a known method according to the type.
  • the first binding substance used for the measurement of X is an antibody
  • an antibody may be prepared by using AngI alone or a fragment thereof as an antigen, or an antibody using the X having AngI as an antigen. May be prepared.
  • the first binding substance is preferably one that does not substantially cross-react with Y (des-AngI AGT), for example.
  • the second binding substance used for the measurement of the total amount of X (intact AGT) and Y (des-AngI AGT) is an antibody
  • a common site of X and Y or a fragment thereof is used as an antigen.
  • an antibody may be prepared, or an antibody may be prepared using the above Y or fragment thereof from which AngI has been eliminated as an antigen.
  • the second binding substance preferably exhibits a cross reaction with the X and the Y.
  • the fourth binding substance used for the measurement of Y is an antibody, for example, an antibody may be prepared using Y or a fragment thereof from which AngI has been removed as an antigen.
  • the fourth binding substance is preferably one that does not substantially cross-react with the X (intact AGT).
  • Binding of X (intact AGT) to the first binding substance, binding of X (intact AGT) and Y (des-AngI AGT) to the second binding substance, and Y (des-AngI AGT) ) And the fourth binding substance can be detected by, for example, a known method.
  • the method for detecting the binding is not particularly limited, and for example, a general sandwich method can be used. The sandwich method will be described below as an example, but the present invention is not limited to this.
  • the binding between the X (intact AGT) and the first binding substance, and the X It is preferable that the binding between (intact AGT) and Y (des-AngI AGT) and the second binding substance is measured in a separate reaction system.
  • the reactor it is preferable to immobilize the first binding substance in the reactor. Then, in the reactor, the analyte is brought into contact with the immobilized first binding substance, and a complex of the first binding substance and the X (intact AGT) in the specimen (hereinafter referred to as “first”
  • first a complex of the first binding substance and the X (intact AGT) in the specimen
  • Detection of the first complex means detection of the binding.
  • the reactor is washed between the formation of the complex and the detection of the first complex. By the washing, a substance that is not bound to the immobilized first binding substance can be removed.
  • the second binding substance is preferably immobilized in the reactor. Then, in the reactor, the analyte is brought into contact with the immobilized second binding substance, and the X (intact AGT) and Y (des-AngI AGT) in the second binding substance and the analyte are contacted. (Hereinafter also referred to as “second complex”). Further, the second complex is detected by the detection reagent for the second complex. Detection of the second complex means detection of the binding. Preferably, the reactor is washed between the formation of the complex and the detection of the second complex. By the washing, a substance that is not bound to the immobilized second binding substance can be removed.
  • the detection reagent for the first complex and the detection reagent for the second complex for example, a binding substance that specifically binds to the complex can be used.
  • Each of the first complex and the second complex has a common site other than the first binding substance, the second binding substance, and AngI. Therefore, the third binding substance that specifically binds to the common site can be used, for example, as the detection reagent for the first complex and the detection reagent for the second complex, and both are the same third binding substance. May be used.
  • the third binding substance is preferably a substance that binds to a site different from the second binding substance.
  • the third binding substance is not particularly limited, and examples thereof include antibodies and nucleic acids.
  • the third binding substance is preferably labeled with, for example, a detectable labeling substance.
  • a detectable labeling substance By detecting the labeling substance, the first complex or the second complex bound to the third binding substance can be indirectly detected.
  • the labeling substance is not particularly limited, and examples thereof include enzymes such as peroxidase, fluorescent substances, coloring substances, radioactive isotopes, substances detectable with ultraviolet rays or far infrared rays, and the like.
  • the labeling substance can be detected by, for example, a detection reagent depending on the type.
  • the labeling substance is an enzyme
  • a substrate that generates a signal by the catalytic reaction of the enzyme is preferably used in combination as the detection reagent.
  • the binding between the X (intact AGT) and the first binding substance, and The binding between Y (des-AngI AGT) and the fourth binding substance may be measured in a separate reaction system or in the same reaction system.
  • the amount of Y is, for example, in the calculation of the amount of X + Y using the second binding substance, using the fourth binding substance instead of the second binding substance, A complex of the fourth binding substance and the Y (des-AngI AGT) can be calculated by using a binding substance that specifically binds to the complex.
  • the third binding substance that specifically binds to the common site is preferably immobilized in the reactor. Then, in the reactor, the analyte is brought into contact with the immobilized third binding substance, and a complex of the third binding substance and the X (intact AGT) in the analyte (hereinafter referred to as “the second binding substance”). 3 complex) and the complex of the third binding substance and Y (des-AngI AGT) in the subject (hereinafter also referred to as “fourth complex”). Further, the third complex is detected by the detection reagent of the third complex, and the fourth complex is detected by the detection reagent of the fourth complex.
  • Detection of the third complex and detection of the fourth complex mean detection of the binding.
  • the reactor is washed between the formation of the third complex and the fourth complex and the detection of the third complex and the fourth complex.
  • the washing can remove substances that are not bound to the immobilized third binding substance.
  • the detection reagent for the third complex and the detection reagent for the fourth complex for example, a binding substance that specifically binds to the complex can be used.
  • the third complex and the fourth complex have a common site other than angiotensin I. For this reason, for example, a first binding substance that specifically binds to angiotensin I in X is used as a detection reagent for the third complex, and a fourth binding substance that specifically binds to Y is used as the fourth complex. It can be used as a body detection reagent.
  • the first binding substance and the fourth binding substance are preferably labeled with a detectable labeling substance, and the first binding substance and the fourth binding substance can be distinguished from each other. More preferably, the first binding substance and the fourth binding substance are labeled with different labeling substances.
  • the third complex bound to the first binding substance and the fourth complex bound to the second binding substance can be indirectly detected.
  • the detection of the labeling substance of the first binding substance and the labeling substance of the fourth binding substance may be performed simultaneously or separately.
  • the evaluation step is a step of evaluating the renin activity of the subject by comparing the relationship between the amount of X and the amount of Y calculated for the subject and the evaluation criteria, The correlation between the amount of X and the amount of Y in the standard sample and the renin activity of the standard sample.
  • the evaluation criterion is set by, for example, calculating the ratio of X and Y for a standard sample with known renin activity it can.
  • the evaluation criteria include “correlation between fluctuations in renin activity and fluctuations in the ratio” set by calculating the ratio for a plurality of standard samples having different renin activities.
  • the renin activity of the subject can be indirectly calculated according to the evaluation criteria.
  • the evaluation criterion may be, for example, “correlation between an arbitrary renin activity and the ratio” set by calculating a ratio of X and Y for a standard sample exhibiting an arbitrary renin activity.
  • the renin activity of the analyte is greater than or less than the critical value, or exceeds or exceeds the critical value. It can be judged whether it is the following.
  • the evaluation criterion is “the ratio of X and Y”. , Respectively, can be used after reading as "ratio of X and X + Y" and "ratio of Y and X + Y"
  • the arbitrary renin activity can be set to, for example, the renin activity of a patient with primary aldesteronism or the renin activity of a healthy person who does not suffer from primary aldosteronism.
  • renin activity is known as an index for determining morbidity of primary aldesteronism. Therefore, if the arbitrary renin activity is set to the renin activity of a patient with primary aldosteronism, when the relationship is expressed as Y / X, the Y / X of the subject is compared with the evaluation criterion.
  • the renin activity is likely to be affected, i.e., it can be determined that the subject is likely to be affected, or is significantly more compared to the assessment criteria.
  • the renin activity is low, that is, the subject is less likely to be affected.
  • the arbitrary renin activity is set to the renin activity of a healthy person who does not suffer from primary aldosteronism, when the Y / X of the subject is significantly lower than the evaluation criteria, Renin activity with a high likelihood of morbidity, that is, it can be determined that the subject is highly likely to be afflicted, or is less likely to be affected if it is equal to or higher than the evaluation criteria It can be determined that it is renin activity, that is, the subject is less likely to be affected.
  • the arbitrary renin activity is set to the renin activity of a patient with primary aldosteronism, when the relationship is expressed as X / (X + Y), the X / (X + Y) of the subject is compared with the evaluation criterion. If it is equal or better, it is determined that the renin activity is likely to be affected, that is, the subject is highly likely to be affected, or is significantly lower than the evaluation criteria, It can be determined that the renin activity has a low possibility of morbidity, that is, the morbidity of the subject is low.
  • X / (X + Y) of the subject is significantly higher than the evaluation criteria If it is determined that the renin activity is likely to be affected, i.e. the subject is likely to be affected, or if it is equal to or less than the evaluation criteria, the likelihood of being affected Can be determined to have low renin activity, that is, the subject is less likely to be affected.
  • the arbitrary renin activity is set to the renin activity of a patient with primary aldosteronism, when the relationship is expressed as Y / (X + Y), Y / (X + Y) of the subject is compared with the evaluation criterion
  • the renin activity is likely to be affected, i.e., it is determined that the subject is highly likely to be affected, or is significantly higher than the evaluation criteria, It can be determined that the renin activity has a low possibility of morbidity, that is, the morbidity of the subject is low.
  • Y / (X + Y) of the subject is significantly lower than the evaluation criteria.
  • the arbitrary renin activity is set to, for example, a critical value of the renin activity between the renin activity of a specimen derived from a patient with primary aldosteronism and the renin activity of a specimen derived from a healthy subject not suffering from primary aldosteronism. can do.
  • the relationship is represented by Y / X
  • the Y / X of the subject is significantly lower than Y / X corresponding to the critical value of the renin activity, the renin activity is highly likely to be affected.
  • the renin activity is less likely to be affected, , It can be determined that the subject is less likely to be affected.
  • Renin activity that is, it can be determined that the subject is likely to be affected, or if it is significantly lower than X / (X + Y) corresponding to the critical value of the renin activity, renin is less likely to be affected It can be determined that it is active, that is, the subject is less likely to be affected.
  • Renin activity that is, it can be determined that the subject is highly likely to be affected, or if it is significantly higher than Y / (X + Y) corresponding to the critical value of the renin activity, renin is less likely to be affected It can be determined that it is active, that is, the subject is less likely to be affected.
  • 1 U of plasma renin activity can be defined as, for example, 1 ng AngI / ml / hr of plasma renin activity that produces 1 ng / ml of angiotensin I (AngI) in a reaction time of 1 hour.
  • the plasma renin activity in the blood of patients with primary aldosteronism is 0.1 ng AngI / ml / hr or less, and the plasma renin activity in the blood of healthy individuals is generally 0.5 ng AngI / ml.
  • Y / X in the blood corresponding to the critical value of the plasma renin activity is, for example, 3.1.
  • X / (X + Y) and Y / (X + Y) in the blood corresponding to the critical value of the plasma renin activity are calculated based on, for example, Y / X in the blood corresponding to the critical value of the plasma renin activity. it can.
  • the test method of the present invention is a method for testing the possibility of a subject suffering from primary aldosteronism, and includes the following first and second forms.
  • the first and second embodiments are both characterized in that they are test methods based on the relationship between the amount of X (intact AGT) and the amount of Y (des-AngI AGT), Other processes and conditions are not particularly limited.
  • a test excellent in both sensitivity and specificity can be performed for morbidity of primary aldosteronism.
  • excellent sensitivity means, for example, that the affected patient has a high probability of being positive
  • excellent specificity is that the unaffected healthy person has a high probability of being negative. Means.
  • the first test method of the present invention comprises a step of evaluating renin activity for a subject derived from a subject by the evaluation method of the present invention, The test result of the renin activity obtained in the evaluation step, and by comparing with the evaluation criteria, testing the possibility of suffering from primary aldosteronism in the subject,
  • the evaluation criterion is a correlation between renin activity and morbidity of primary aldosteronism.
  • the renin activity of the subject is evaluated from the relationship between the amount of X (intact AGT) and the amount of Y (des-AngI AGT) by the renin activity evaluation method of the present invention.
  • the subject is tested for the possibility of suffering from primary aldosteronism.
  • the description of the renin activity evaluation method of the present invention can be used for the renin activity evaluation step.
  • the evaluation criterion is a correlation between renin activity and morbidity of primary aldosteronism.
  • the evaluation criterion is preferably, for example, the renin activity of a patient with primary aldosteronism or the renin activity of a healthy person who does not suffer from primary aldosteronism.
  • the test step is preferably, for example, any one of the following (A1), (A2), and (A3), and the description in the renin activity evaluation method of the present invention can be cited.
  • the evaluation criterion is renin activity of a specimen derived from a patient with primary aldosteronism, If the renin activity of the subject is equal to or less than the evaluation criterion, the subject is determined to have a high possibility of being affected, or significantly higher than the evaluation criterion The subject is determined to be less likely to be affected (A2), the evaluation criterion is the renin activity of a specimen from a healthy subject not suffering from primary aldosteronism, When the renin activity of the subject is significantly low compared to the evaluation criterion, it is determined that the subject is likely to be affected, or is equal to or higher than the evaluation criterion (A3)
  • the evaluation criteria are the renin activity of a specimen derived from a patient with primary aldosteronism and
  • renin activity of the subject is significantly lower than the critical value, it is determined that the subject is highly likely to be affected, or if the subject is significantly higher than the critical value, the subject is affected Is determined to be unlikely
  • the possibility of morbidity is comprehensively evaluated together with the plasma aldosterone concentration (PAC) and active renin concentration (ARC). You can also
  • the second test method of the present invention relates to the relationship between the amount of X (intact AGT) and the amount of Y (des-AngI AGT) for a subject derived from a subject.
  • the evaluation criterion is a correlation between the relationship between the amount of X and the amount of Y in a standard sample and the incidence of primary aldosteronism in the standard sample.
  • the primary aldosterone of the subject can be directly evaluated without evaluating renin activity from the relationship between the amount of X (intact AGT) and the amount of Y (des-AngI AGT). This is a form for testing the possibility of suffering from the disease.
  • the description of the renin activity evaluation method of the present invention can be used for the calculation step of the relationship between X and Y.
  • the renin activity and the relationship between X and Y have a correlation, and the possibility of primary aldosteronism and the renin activity have a correlation. For this reason, there is also a correlation between the relationship between X and Y and the possibility of morbidity. For this reason, in the test process, the correlation between the relationship between X and Y of the standard sample and the morbidity of the standard sample with primary aldosteronism can be used as the evaluation criterion.
  • the evaluation criteria are set by calculating the relationship between X and Y for, for example, a standard specimen derived from a patient with primary aldesteronism or a standard specimen derived from a healthy person who does not suffer from primary aldosteronism it can.
  • the test step is preferably any of the following (B1), (B2), and (B3).
  • the evaluation criterion is a ratio (Y / X) between the amount of X and the amount of Y in a specimen derived from a patient with primary aldosteronism,
  • Y / X of the subject is equal to or less than the evaluation criterion, the subject is determined to have a high possibility of being affected, or significantly compared to the evaluation criterion If it is high, it is determined that the subject is unlikely to be affected (B2).
  • the ratio of the amount of X to the amount of Y in a specimen derived from a healthy subject not affected by primary aldosteronism (Y / X)
  • Y / X The ratio of the amount of X to the amount of Y in a specimen derived from a healthy subject not affected by primary aldosteronism. If the subject's Y / X is significantly lower than the evaluation criteria, it is determined that the subject has a high possibility of morbidity, or is equal to or higher than the evaluation criteria In this case, it is determined that the subject is less likely to be affected (B3).
  • the evaluation criterion is a ratio (Y / X) between the amount of X and the amount of Y in a specimen derived from a patient with primary aldosteronism.
  • a critical value between the ratio of the amount of X to the amount of Y (Y / X) in a specimen from a healthy subject not suffering from primary aldosteronism When the subject's Y / X is significantly lower than the critical value, the subject is determined to have a high possibility of being affected, or when the subject's Y / X is significantly higher than the critical value, Decide that the likelihood of morbidity is low
  • the evaluation criterion is a ratio (X / (X + Y)) of the amount of X of a specimen derived from a patient with primary aldosteronism and the total amount of X and Y,
  • X / (X + Y) of the subject is equal to or higher than the evaluation criterion, it is determined that the subject is likely to be affected, or compared with the evaluation criterion When significantly lower, it is determined that the subject is less likely to be affected (C2).
  • the evaluation criterion is that the amount of X of a sample from a healthy subject not suffering from primary aldosteronism, the X and the The ratio of Y to the total amount (X / (X + Y)) If the subject's X / (X + Y) is significantly higher compared to the evaluation criteria, the subject is determined to have a higher likelihood of being affected, or is equivalent to the evaluation criteria or If it is less than that, it is determined that the subject is less likely to be affected (C3).
  • the evaluation criterion is that the amount of X in a specimen derived from a patient with primary aldosteronism and the total amount of X and Y Between the ratio (X / (X + Y)) and the ratio of the amount of X in a healthy subject not suffering from primary aldosteronism and the total amount of X and Y (X / (X + Y)) Is the critical value at When X / (X + Y) of the subject is significantly higher than the critical value, it is determined that the subject is highly likely to be affected, or when the subject is significantly lower than the critical value, the subject The person is less likely to be affected
  • the evaluation criterion is a ratio (Y / (X + Y)) of the amount of Y of a specimen derived from a primary aldosteronism patient and the total amount of X and Y,
  • Y / (X + Y) of the subject is equal to or less than the evaluation criterion, it is determined that the subject is highly likely to be affected, or compared with the evaluation criterion If significantly higher, the subject is determined to be less likely to be affected (D2).
  • the evaluation criterion is that the amount of Y of a sample from a healthy subject not suffering from primary aldosteronism, the X and the The ratio of Y to the total amount (Y / (X + Y))
  • Y / (X + Y) of the subject is significantly lower than the evaluation criterion, the subject is determined to have a high possibility of being affected, or is equivalent to the evaluation criterion or If it is more than that, it is determined that the subject is less likely to be affected (D3).
  • the evaluation criterion is the amount of Y in the specimen derived from a patient with primary aldosteronism and the total amount of X and Y.
  • test method of the present invention can be read as a diagnostic method for primary aldosteronism, for example.
  • the evaluation kit of the present invention is a kit for use in the renin activity evaluation method of the present invention, comprising a measuring reagent for measuring the amount of X (intact AGT), and Y (des-AngI AGT). And a measuring reagent for measuring the amount.
  • the renin activity evaluation method of the present invention can be easily performed.
  • the evaluation kit of the present invention is not particularly limited as long as it contains a reagent capable of measuring the amount of X (intact AGT) and the amount of Y (des-AngI AGT).
  • the reagent for measuring the amount of X preferably contains, for example, the first binding substance that specifically binds to AngI in X, and can be said to be a detection reagent for X.
  • the reagent for measuring the amount of Y includes, for example, the first binding substance and the second binding substance that specifically binds to the common site of X and Y. Or a fourth binding substance that specifically binds to Y.
  • the former can be said to be the X detection reagent, and the latter to be the X and Y detection reagents.
  • the measurement reagent for Y includes the first binding substance and the second binding substance, according to the measurement reagent for Y, the amount of the X is measured by the first binding substance, and the second binding substance is measured.
  • the amount of Y can be calculated by measuring the total amount of X and Y by a substance and subtracting the amount of X from the total amount.
  • the first binding substance, the second binding substance, and the fourth binding substance are, for example, as described above.
  • the measurement reagent for Y includes the first binding substance and the second binding substance
  • the measurement result of X can be used for the measurement of Y in the evaluation method of the present invention. It can also be said that the X measurement reagent also serves as a part of the Y measurement reagent.
  • the evaluation kit of the present invention may further contain other reagents.
  • the other reagent include a complex of the first binding substance and the X (first complex).
  • examples of the other reagent include a detection reagent and a detection reagent of a complex (second complex) of the second binding substance and the Y.
  • each detection reagent include the third binding substance.
  • the third binding substance is preferably labeled with a labeling substance.
  • the evaluation kit of the present invention further includes a detection reagent for the labeling substance as the other reagent. May be included. The aforementioned description can be used for the labeling substance and the like.
  • examples of the other reagent include a capture reagent that forms a complex with X and Y.
  • An example of the capture reagent is the third binding substance.
  • the first binding substance of the X measurement reagent and the fourth binding substance of the Y measurement reagent are labeled with the labeling substance as described above, More preferably, the substance and the fourth binding substance are labeled with different labeling substances.
  • the evaluation kit of the present invention may further include a detection reagent for the labeling substance as the other reagent.
  • the evaluation kit of the present invention may be, for example, a single reagent system in which all measurement reagents coexist, a two reagent system separated into two or more, or a multiple reagent system separated into two or more.
  • the evaluation kit of the present invention can also be referred to as an evaluation reagent, for example.
  • the evaluation kit of the present invention when each of the measurement reagents is a reagent system separated and stored in the same container (reactor), the evaluation kit of the present invention is, for example, It can also be referred to as an evaluation array.
  • the evaluation kit of the present invention is preferably a reagent system in which the first binding substance and the second binding substance are separated, for example.
  • the evaluation kit of the present invention is preferably a reagent system in which the first binding substance and the fourth binding substance are not separated.
  • the evaluation kit of the present invention may further contain a reactor, a buffer solution, instructions for use and the like.
  • the labeling substance is preferably at least one of a fluorescent substance and a coloring substance, and more preferably a fluorescent substance.
  • the first binding substance and the fourth binding substance are preferably labeled with different labeling substances.
  • Reagent 1 the third binding substance immobilized + the first binding substance labeled with the labeling substance + the fourth binding substance labeled with the labeling substance
  • the labeling substance is preferably an enzyme
  • the detection reagent is preferably a substrate of the enzyme, more preferably a chromogenic substrate.
  • Reagent 1 the first binding substance immobilized + the third binding substance labeled with a labeling substance
  • Reagent 2 the second binding substance immobilized + the third binding substance labeled with a labeling substance
  • Reagent 3 Detection reagent for the labeling substance of the third binding substance
  • the test kit of the present invention is a kit for use in the test method for the possibility of suffering from primary aldosteronism of the present invention, and includes the evaluation kit of the present invention.
  • the configuration of these kits may be the same as the evaluation kit of the present invention, for example.
  • Example 1 blood was collected in different postures in the same healthy subject, and the change in posture at the time of blood collection was the ratio between the amount of X (intact AGT) and the amount of Y (des-AngI AGT) in plasma ( (Plasma Y / X) was confirmed not to be affected.
  • Plasma Y / X was calculated based on these values.
  • FIG. 1 is a graph showing Plasma Y / X.
  • the horizontal axis indicates the posture of the patient, and the vertical axis indicates Plasma Y / X.
  • P 0.7464
  • Example 2 blood was collected from the same healthy subject at different times, and it was confirmed that circadian rhythm did not affect Plasma Y / X.
  • Plasma Y / X was calculated in the same manner as in Example 1.
  • FIG. 2 is a graph showing Plasma Y / X.
  • the horizontal axis indicates the time of blood collection, and the vertical axis indicates Plasma Y / X.
  • FIG. 2 there was no significant difference in Plasma Y / X regardless of the time of blood collection. From these results, it was found that circadian rhythm does not affect Plasma Y / X.
  • Plasma Y / X was increased by administering angiotensin II receptor antagonist (Olmesartan) to rats and increasing renin activity.
  • angiotensin II receptor antagonist Opmesartan
  • the rat is injected with 1 mL of physiological saline from the catheter, heparin-blocked, and the antagonist is dissolved in a 0.5% NaHCO 3 aqueous solution.
  • Drinking water was administered at 1 mg / kg / day (weight / body weight / hour) for 7 days.
  • blood was collected from the rat after a predetermined period (days 3 and 7) with reference to day 0 of blood collection, and plasma was sampled.
  • Plasma Y / X was calculated in the same manner as in Example 1.
  • FIG. 3 is a graph showing Plasma Y / X.
  • the horizontal axis indicates the blood collection date with reference to day 0 of blood collection, and the vertical axis indicates Plasma Y / X.
  • Plasma Y / X on and after the third day was higher than Plasma Y / X on the 0th day. From these results, it was found that Plasma Y / X increases by administering an angiotensin II receptor antagonist and increasing renin activity.
  • Example 4 In this example, it was confirmed that Plasma Y / X decreased by administering angiotensin II and NaCl to rats and suppressing renin activity.
  • FIG. 4 is a graph showing Plasma Y / X.
  • the horizontal axis indicates the blood collection date with reference to day 0 of blood collection, and the vertical axis indicates Plasma Y / X.
  • Plasma Y / X after the third day was significantly decreased compared to Plasma Y / X on the 0th day. From these results, it was found that Plasma Y / X decreased by administering angiotensin II and NaCl and suppressing renin activity.
  • Example 5 In this example, the correlation between the morbidity of aldosteronism and Plasma Y / X was confirmed.
  • aldosterone was continuously administered subcutaneously to the rats by an osmotic minipump at 50 ng / min.
  • the rats mimicked the state of aldosteronism by administration of aldosterone at 7 to 11 weeks of age.
  • aldosterone administration was discontinued at 11 weeks of age, thereby imitating a state in which the adenoma was removed when the rats were 15 weeks of age.
  • the rats were collected at 6 weeks, 11 weeks, and 15 weeks, and the plasma was sampled. Plasma Y / X in the plasma was calculated in the same manner as in Example 1.
  • FIG. 5 is a graph showing Plasma Y / X.
  • the horizontal axis indicates the age of the rat
  • the 6-week-old is a rat that has not developed aldosteronism
  • the 11-week-old is a rat that imitates the state of developing aldosteronism
  • 15 Aged rats are rats that mimic the state after adenomaectomy.
  • the vertical axis represents Plasma Y / X.
  • Plasma Y / X significantly decreased in the 11-week-old rat imitating the state of developing aldosteronism compared to the 6-week-old rat not developing aldosteronism.
  • Example 6 In this example, it was confirmed that Plasma Y / X was decreased by administering a renin inhibitor (Aliskiren) to humans and suppressing renin activity.
  • a renin inhibitor Aliskiren
  • blood was collected from the patient and plasma was sampled (day 0 of blood collection).
  • plasma was collected from the patient after a predetermined period (days 2, 4, 7, 11, 21, and 35) with reference to day 0 of blood collection, and plasma was collected.
  • Plasma Y / X was calculated in the same manner as in Example 1.
  • the production capacity (PRA) of angiotensin I per hour of the plasma was measured using Renin Riabeads (registered trademark) (manufactured by Yamasa Shoyu Co., Ltd.) according to the attached protocol.
  • FIG. 6 (A) is a graph showing Plasma Y / X, and (B) is a graph showing angiotensin I production ability.
  • the horizontal axis indicates the blood collection date when the blood collection is based on day 0, in (A), the vertical axis indicates Plasma Y / X, and in (B), The vertical axis shows the production ability of angiotensin I.
  • Plasma Y / X after the 2nd day decreased with respect to Plasma Y / X on the 0th day.
  • the renin activity of the subject can be easily and accurately evaluated from the stable correlation between the relationship between X and Y and the renin activity.
  • renin activity is an index of primary aldosteronism
  • the present invention from the stable correlation between the above-described relationship and renin activity or primary aldosteronism, it is possible to easily and accurately detect the primary aldosteronism of the subject.
  • the possibility of developing sexual aldosteronism can be tested. For this reason, it can be said that the present invention is extremely useful in, for example, the medical field and the biochemical field.

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Abstract

　レニン活性の評価方法および原発性アルドステロン症への罹患可能性の試験方法の提供を目的とする。　被検体について、Ｘ（アンジオテンシンＩを有するアンジオテンシノーゲン：intact　AGT）の量とＹ（アンジオテンシンＩが脱離したアンジオテンシノーゲン：des-AngI　AGT）の量との関係を算出し、算出した前記関係と評価基準との比較により、前記被検体のレニン活性を評価する。前記評価基準は、標準検体のＸの量とＹの量との関係と、前記標準検体のレニン活性との相関関係である。前記レニン活性は、原発性アルドステロン症の罹患の相関関係を示すため、前記関係に基づいてレニン活性を評価することで、前記被検体について、原発性アルドステロン症の罹患の可能性を試験できる。

Description

レニン活性の評価方法、原発性アルドステロン症への罹患可能性の試験方法およびそれに用いるキット
　本発明は、レニン活性の評価方法、原発性アルドステロン症への罹患可能性の試験方法およびそれに用いるキットに関する。
　原発性アルドステロン症は、副腎皮質に生じる腫瘍等の病変によって、血中のアルドステロン濃度が上昇する疾患である。その主症状は、高血圧および低カリウム血症であるが、さらに、脳梗塞、心筋梗塞、心不全、腎不全を引き起こす危険性が非常に高いことが知られている。極めて希な疾患（高血圧患者の０．１％以下）として難病に指定されているが、近年、高血圧患者の５～２０％を占めると考えられている。
　原発性アルドステロン症は、診断が困難であるため、信頼性のある診断が可能な施設は限られており、一般的な施設では、血液検査による不確定なスクリーニング診断が行われている。具体的に、前記血液検査は、血漿中アルドステロン濃度（ＰＡＣ）、血漿レニン活性（ＰＲＡ）または活性レニン濃度（ＡＲＣ）等を指標とし、これらを組み合わせて診断が行われている（非特許文献１）。中でも前記血漿レニン活性は、レニンの基質アンジオテンシノーゲンからレニンにより遊離されるアンジオテンシンＩの量を測定することにより、算出されている。しかしながら、この診断法では、患者の姿勢の変化により測定値が変化することが知られており、患者は、３０分間安静臥位の後、採血することが推奨されている。しかし、実際には、この条件は守られておらず、また、前記測定値は、日内変動を示すとの報告もなされているが、この点についての対策はとられていない。
　このような事情から、原発性アルドステロン症については、確定診断を行うには、専門医療機関で、長時間にわたる各種負荷試験や、侵襲性の高い副腎静脈採血等が必要であり、患者および医療機関における負担が大きい。このため、より簡便で正確に安定した診断結果を得るための方法の開発が望まれている。
一般社団法人日本内分泌学会ホームページ　「臨床重要課題３課題の決定　原発性アルドステロン症の診断治療ガイドライン」ＵＲＬ（http://square.umin.ac.jp/endocrine/rinsho_juyo/aldosteron.htm）
　そこで、本発明は、原発性アルドステロン症の罹患の可能性について、より簡便で正確に試験を行うための、新たなレニン活性の評価方法、原発性アルドステロン症への罹患可能性の試験方法、およびそれに用いるキットの提供を目的とする。
　本発明のレニン活性の評価方法は、被検体について、下記Ｘの量と下記Ｙの量との関係を算出する算出工程と、
前記被検体について算出した前記関係と、評価基準との比較により、前記被検体のレニン活性を評価する評価工程とを含み、
前記評価基準が、標準検体の下記Ｘの量と下記Ｙの量との関係と、前記標準検体のレニン活性との相関関係であることを特徴とする。
　Ｘ：アンジオテンシンＩを有するアンジオテンシノーゲン（intact　AGT）
　Ｙ：アンジオテンシンＩが脱離したアンジオテンシノーゲン（des-AngI　AGT）
　本発明の試験方法は、被検者の原発性アルドステロン症への罹患の可能性を試験する方法であり、
被検者由来の被検体について、前記本発明の評価方法によりレニン活性を評価する工程と、
前記評価工程で得られたレニン活性の評価結果と、評価基準との比較により、前記被検者の原発性アルドステロン症への罹患の可能性を試験する工程とを含み、
前記評価基準が、レニン活性と原発性アルドステロン症への罹患との相関関係であることを特徴とする。
　本発明の試験方法は、被検者の原発性アルドステロン症への罹患の可能性を試験する方法であり、
被検者由来の被検体について、前記Ｘの量と前記Ｙの量との関係を算出する算出工程と、
前記被検体について算出した前記関係と、評価基準との比較により、前記被検者の原発性アルドステロン症への罹患の可能性を試験する工程とを含み、
前記評価基準が、標準検体の前記Ｘの量と前記Ｙの量との関係と、前記標準検体の原発性アルドステロン症への罹患との相関関係であることを特徴とする。
　本発明のキットは、前記本発明のレニン活性の評価方法に使用するためのキットであり、前記Ｘの量を測定する測定試薬と、前記Ｙの量を測定する測定試薬とを含むことを特徴とする。
　本発明のキットは、前記本発明の被検者の原発性アルドステロン症への罹患の可能性を試験する方法に使用するためのキットであり、前記本発明のレニン活性の評価方法用キットを含むことを特徴とする。
　前述のように、従来法では、原発性アルドステロン症の指標であるレニン活性を、脱離したAngIの量により間接的に評価しているが、前記測定値は、患者の姿勢の変化で変動し、また、日内変動も生じることから、正確な評価を行うことができない。これに対して、本発明者らは、鋭意研究の結果、レニンにより分解されていない「AngIを有するアンジオテンシノーゲン（intact　AGT）；Ｘ」と、レニンにより分解されて「AngIが脱離したアンジオテンシノーゲン（des-AngI　AGT）；Ｙ」との関係が、レニン活性と優れた相関関係を有するとの知見を得た。具体的に、前記関係とレニン活性との相関関係は、例えば、患者の姿勢の変化に影響されず、また、日内変動も確認されず、極めて安定であるとの知見を得た。本発明は、この知見に基づくものであり、前記関係とレニン活性との安定な相関関係から、簡便且つ正確に、前記被検体のレニン活性を評価することができる。また、レニン活性は、原発性アルドステロン症の指標であるため、本発明によれば、前記関係とレニン活性または原発性アルドステロン症との間における安定な相関関係から、簡便且つ正確に、被検者の原発性アルドステロン症の罹患の可能性を試験できる。このため、本発明は、例えば、医療分野や生化学分野において、極めて有用といえる。
図１は、実施例１における血漿中のＸ（intact　AGT）の量とＹ（des-AngI　AGT）の量との比（Ｐｌａｓｍａ　Ｙ／Ｘ）を示すグラフである。 図２は、実施例２におけるＰｌａｓｍａ　Ｙ／Ｘを示すグラフである。 図３は、実施例３におけるＰｌａｓｍａ　Ｙ／Ｘを示すグラフである。 図４は、実施例４におけるＰｌａｓｍａ　Ｙ／Ｘを示すグラフである。 図５は、実施例５におけるＰｌａｓｍａ　Ｙ／Ｘを示すグラフである。 図６（Ａ）は、実施例６におけるＰｌａｓｍａ　Ｙ／Ｘを示すグラフである。図６（Ｂ）は、比較例におけるアンジオテンシンＩの産生能を示すグラフである。
＜レニン活性評価方法＞
　本発明のレニン活性の評価方法は、前述のように、被検体について、下記Ｘの量と下記Ｙの量との関係を算出する算出工程と、
前記被検体について算出した前記関係と、評価基準との比較により、前記被検体のレニン活性を評価する評価工程とを含み、
前記評価基準が、標準検体の下記Ｘの量と下記Ｙの量との関係と、前記標準検体のレニン活性との相関関係であることを特徴とする。
　Ｘ：アンジオテンシンＩを有するアンジオテンシノーゲン（intact　AGT）
　Ｙ：アンジオテンシンＩが脱離したアンジオテンシノーゲン（des-AngI　AGT）
　本発明の評価方法は、例えば、前記被検体が、血液または尿である。
　本発明の評価方法は、例えば、前記算出工程に先立って、前記被検体について、前記Ｘ（intact　AGT）の量および前記Ｙ（des-AngI　AGT）の量を測定する測定工程を含む。
　本発明の評価方法は、例えば、前記測定工程において、前記被検体について、前記Ｘ（intact　AGT）の量と、前記Ｘと前記Ｙ（des-AngI　AGT）との総量とを測定し、且つ、前記総量から前記Ｘの量を差し引いて、前記Ｙの量を算出する。
　本発明の評価方法は、例えば、前記測定工程において、前記Ｘ（intact　AGT）の量の測定が、前記ＸにおけるアンジオテンシンＩに対して特異的に結合する第１結合物質を用いた測定であり、
前記Ｘと前記Ｙ（des-AngI　AGT）との総量の測定が、前記Ｘと前記Ｙの共通部位に対して特異的に結合する第２結合物質を用いた測定である。
　本発明の評価方法は、例えば、前記第１結合物質および前記第２結合物質が、それぞれ抗体である。
　本発明の評価方法は、例えば、前記測定工程において、
前記Ｘの量の測定が、前記ＸにおけるアンジオテンシンＩに対して特異的に結合する第１結合物質を用いた測定であり、
前記Ｙの量の測定が、前記Ｙに対して特異的に結合する第４結合物質を用いた測定であり、
前記第１結合物質および前記第４結合物質が、異なる標識物質で標識化されている。
　以下に、本発明の評価方法について、具体的に説明する。
　本発明において、Ｘの量とＹの量との関係は、特に制限されず、例えば、前記Ｘの量と前記Ｙの量とから表される任意の関係があげられる。前記Ｘの量と前記Ｙの量との関係は、例えば、下記（１）、（２）および（３）のいずれかがあげられる。
（１）前記Ｘの量と前記Ｙの量との比
（２）前記Ｘの量と前記Ｘと前記Ｙとの総量（以下、「Ｘ＋Ｙの量」ともいう。）との比
（３）前記Ｙの量と前記Ｘと前記Ｙとの総量との比
　前記（１）において、Ｘ（intact　AGT）とＹ（des-AngI　AGT）との比の表し方は、特に制限されず、例えば、Ｙ／Ｘで表してもよいし、Ｘ／Ｙで表してもよい。前記比を「Ｙ／Ｘ」で表した場合、前記Ｙ／Ｘは、例えば、レニン活性が相対的に低い程、相対的に低い値を示し、レニン活性が相対的に高い程、相対的に高い値を示す。なお、原発性アルドステロン症の指標であるレニン活性は、罹患患者が相対的に低く、罹患していない健常者が相対的に高いことから、前記Ｙ／Ｘは、例えば、罹患患者が相対的に低い値を示し、罹患していない健常者が相対的に高い値を示す。原発性アルドステロン症患者と健常者との間における、レニン活性およびＹ／Ｘの関係の概略を下記表１に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000001
　また、前記比を「Ｘ／Ｙ」で表した場合、Ｘ／Ｙとレニン活性および原発性アルドステロン症との相関関係は、「Ｙ／Ｘ」についての説明と逆になる。つまり、前記Ｘ／Ｙは、例えば、レニン活性が相対的に低い程、相対的に高い値を示し、レニン活性が相対的に高い程、相対的に低い値を示す。なお、原発性アルドステロン症の指標であるレニン活性は、罹患患者は相対的に低く、罹患していない健常者は相対的に高いことから、前記Ｘ／Ｙは、例えば、罹患患者が相対的に高い値を示し、罹患していない健常者が相対的に低い値を示す。これらの関係の概略を下記表２に示す。以下、ＸとＹとの比を「Ｙ／Ｘ」で表した場合におけるレニン活性および原発性アルドステロン症との相関関係の説明は、「Ｘ／Ｙ」について、上記内容に従って読み替えの上、援用できる。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000002
　前記（２）において、Ｘ（intact　AGT）とＸ＋Ｙ（intact　AGT + des-AngI　AGT）との比の表し方は、特に制限されず、例えば、Ｘ／（Ｘ＋Ｙ）で表してもよいし、（Ｘ＋Ｙ）／Ｘで表してもよい。前記比を「Ｘ／（Ｘ＋Ｙ）」で表した場合、前記Ｘ／（Ｘ＋Ｙ）は、例えば、レニン活性が相対的に低い程、相対的に高い値を示し、レニン活性が相対的に高い程、相対的に低い値を示す。なお、原発性アルドステロン症の指標であるレニン活性は、罹患患者が相対的に低く、罹患していない健常者が相対的に高いことから、前記Ｘ／（Ｘ＋Ｙ）は、例えば、罹患患者が相対的に高い値を示し、罹患していない健常者が相対的に低い値を示す。原発性アルドステロン症患者と健常者との間における、レニン活性およびＸ／（Ｘ＋Ｙ）の関係の概略を下記表３に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000003
　また、前記比を「（Ｘ＋Ｙ）／Ｘ」で表した場合、（Ｘ＋Ｙ）／Ｘとレニン活性および原発性アルドステロン症との相関関係は、「Ｘ／（Ｘ＋Ｙ）」についての説明と逆になる。つまり、前記（Ｘ＋Ｙ）／Ｘは、例えば、レニン活性が相対的に低い程、相対的に低い値を示し、レニン活性が相対的に高い程、相対的に高い値を示す。なお、原発性アルドステロン症の指標であるレニン活性は、罹患患者は相対的に低く、罹患していない健常者は相対的に高いことから、前記（Ｘ＋Ｙ）／Ｘは、例えば、罹患患者が相対的に低い値を示し、罹患していない健常者が相対的に高い値を示す。これらの関係の概略を下記表４に示す。以下、ＸとＸ＋Ｙとの比を「Ｘ／（Ｘ＋Ｙ）」で表した場合におけるレニン活性および原発性アルドステロン症との相関関係の説明は、「（Ｘ＋Ｙ）／Ｘ」について、上記内容に従って読み替えの上、援用できる。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000004
　前記（３）において、Ｙ（des-AngI　AGT）とＸ＋Ｙ（intact　AGT + des-AngI　AGT）との比の表し方は、特に制限されず、例えば、Ｙ／（Ｘ＋Ｙ）で表してもよいし、（Ｘ＋Ｙ）／Ｙで表してもよい。前記比を「Ｙ／（Ｘ＋Ｙ）」で表した場合、前記Ｙ／（Ｘ＋Ｙ）は、例えば、レニン活性が相対的に低い程、相対的に低い値を示し、レニン活性が相対的に高い程、相対的に高い値を示す。なお、原発性アルドステロン症の指標であるレニン活性は、罹患患者が相対的に低く、罹患していない健常者が相対的に高いことから、前記Ｙ／（Ｘ＋Ｙ）は、例えば、罹患患者が相対的に低い値を示し、罹患していない健常者が相対的に高い値を示す。原発性アルドステロン症患者と健常者との間における、レニン活性およびＹ／（Ｘ＋Ｙ）の関係の概略を下記表５に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000005
　また、前記比を「（Ｘ＋Ｙ）／Ｙ」で表した場合、（Ｘ＋Ｙ）／Ｙとレニン活性および原発性アルドステロン症との相関関係は、「Ｙ／（Ｘ＋Ｙ）」についての説明と逆になる。つまり、前記（Ｘ＋Ｙ）／Ｙは、例えば、レニン活性が相対的に低い程、相対的に高い値を示し、レニン活性が相対的に高い程、相対的に低い値を示す。なお、原発性アルドステロン症の指標であるレニン活性は、罹患患者は相対的に低く、罹患していない健常者は相対的に高いことから、前記（Ｘ＋Ｙ）／Ｙは、例えば、罹患患者が相対的に高い値を示し、罹患していない健常者が相対的に低い値を示す。これらの関係の概略を下記表６に示す。以下、ＹとＸ＋Ｙとの比を「Ｙ／（Ｘ＋Ｙ）」で表した場合におけるレニン活性および原発性アルドステロン症との相関関係の説明は、「（Ｘ＋Ｙ）／Ｙ」について、上記内容に従って読み替えの上、援用できる。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000006
　本発明の評価方法において、前記被検体の種類は、特に制限されず、生体由来の検体があげられる。具体例としては、例えば、全血、血漿および血清等の血液、尿、肝臓、腎臓等の生検検体；腹膜透析灌流液等を含む生体から採取された液体；細胞培養液、細胞抽出液等の細胞由来の検体等があげられる。前記生体は、例えば、ヒトまたは非ヒト動物があげられ、前記非ヒト動物は、例えば、サル、マウス、ラット、イヌ、ブタ、ウシ等の哺乳類等があげられる。
　前記算出工程は、前述のように、前記Ｘ（intact　AGT）の量および前記Ｙ（des-AngI　AGT）の量を算出する工程である。前記Ｘの量および前記Ｙの量の算出方法は、特に制限されず、例えば、以下に例示するような測定方法によって行うことができる。
　前記Ｘ（intact　AGT）の量は、例えば、前記Ｙ（des-AngI　AGT）を実質的に検出することなく、前記Ｘを検出できる方法によって測定することが好ましい。「前記Ｙを実質的に検出しない」とは、例えば、前記Ｘの検出において、仮に前記Ｙが検出されても、前記Ｘの測定結果に影響を及ぼさない程度であることを意味し、具体的には、検出限界以下であることが好ましい。
　前記Ｘ（intact　AGT）は、前記Ｙ（des-AngI　AGT）と異なり、アンジオテンシンＩ（以下、「AngI」ともいう）を有している。このため、前記Ｘの量の測定は、例えば、前記ＸにおけるアンジオテンシンＩに特異的に結合する第１結合物質を用いることが好ましい。この場合、例えば、前記Ｘと前記第１結合物質との結合の有無または量を検出することにより、前記Ｘの量を測定できる。
　前記Ｙ（des-AngI　AGT）の量は、例えば、前記Ｘ（intact　AGT）の量の測定結果を利用して、求めることができる。具体的には、例えば、前記Ｘと前記Ｙの総量を測定し、且つ、下記式に示すように、前記総量から前記Ｘの量を差し引くことで、前記Ｙの量を算出できる。前記総量は、例えば、「全AGT量」(total　AGT量)ということもできる。
Ｙ＝（Ｘ＋Ｙ）－Ｘ
　前記Ｙ（des-AngI　AGT）は、前記Ｘ（intact　AGT）からAngIが脱離したタンパク質であるため、前記Ｙと前記Ｘとは、AngI以外において、共通部位を有している。このため、前記Ｘと前記Ｙの総量の測定は、例えば、前記Ｘと前記Ｙの共通部位に対して特異的に結合する第２結合物質を用いてもよい。この場合、例えば、前記Ｘおよび前記Ｙと前記第２結合物質との結合の有無または量を検出することにより、前記Ｙの量を算出できる。
　なお、前記Ｙ（des-AngI　AGT）の量の測定方法は、これには制限されず、例えば、前記Ｘ（intact　AGT）を実質的に検出することなく、前記Ｙを検出できる方法によって測定してもよい。「前記Ｘを実質的に検出しない」とは、例えば、前記Ｙの検出において、仮に前記Ｘが検出されても、前記Ｙの測定結果に影響を及ぼさない程度であることを意味し、具体的には、検出限界以下であることが好ましい。前記Ｙの量の測定は、例えば、前記Ｙに特異的に結合する第４結合物質を用いることが好ましい。この場合、例えば、前記Ｙと前記第４結合物質との結合の有無または量を検出することにより、前記Ｙの量を測定できる。
　前記第１結合物質、前記第２結合物質、および前記第４結合物質は、前述のターゲットに特異的に結合する結合物質であればよく、その種類は、特に制限されない。前記結合物質は、例えば、抗体、核酸等があげられる。前記結合物質の調製方法は、特に制限されず、その種類に応じて、公知の方法により行うことができる。前記Ｘ（intact　AGT）の測定に使用する前記第１結合物質が抗体の場合、例えば、AngI単体またはその断片を抗原として、抗体を調製してもよいし、AngIを有する前記Ｘを抗原として抗体を調製してもよい。そして、前記第１結合物質は、例えば、前記Ｙ（des-AngI　AGT）に対して、実質的に交差反応を示さないものが好ましい。他方、前記Ｘ（intact　AGT）と前記Ｙ（des-AngI　AGT）の総量の測定に使用する前記第２結合物質が抗体の場合、例えば、前記Ｘと前記Ｙとの共通部位またはその断片を抗原として抗体を調製してもよいし、AngIが脱離した前記Ｙまたはその断片を抗原として抗体を調製してもよい。前記第２結合物質は、前記Ｘと前記Ｙを検出するため、前記Ｘと前記Ｙに対して、交差反応を示すことが好ましい。また、前記Ｙの測定に使用する前記第４結合物質が抗体の場合、例えば、AngIが脱離した前記Ｙまたはその断片を抗原として抗体を調製してもよい。前記第４結合物質は、前記Ｘ（intact　AGT）に対して、実質的に交差反応を示さないものが好ましい。
　前記Ｘ（intact　AGT）と前記第１結合物質との結合、前記Ｘ（intact　AGT）および前記Ｙ（des-AngI　AGT）と前記第２結合物質との結合、ならびに、前記Ｙ（des-AngI　AGT）と前記第４結合物質との結合は、例えば、公知の方法により検出できる。前記結合の検出方法は、特に制限されず、例えば、一般的なサンドイッチ法等が使用できる。前記サンドイッチ法を例にあげて、以下に説明するが、本発明は、これには制限されない。
　前記第１結合物質および前記第２結合物質を使用し、前記Ｘの量と前記Ｙの量とを算出する場合、前記Ｘ（intact　AGT）と前記第１結合物質との結合、ならびに、前記Ｘ（intact　AGT）および前記Ｙ（des-AngI　AGT）と前記第２結合物質との結合は、それぞれ、別個の反応系で測定することが好ましい。
　前者の反応系においては、例えば、前記第１結合物質を、その反応器に固定化することが好ましい。そして、前記反応器において、固定化した前記第１結合物質に前記被検体を接触させて、前記第１結合物質と前記被検体中の前記Ｘ（intact　AGT）との複合体（以下、「第１複合体」ともいう）を形成し、前記第１複合体の検出試薬により、前記第１複合体を検出する。前記第１複合体の検出が、前記結合の検出を意味する。前記複合体の形成と、前記第１複合体の検出との間において、前記反応器の洗浄を含むことが好ましい。前記洗浄によって、固定化した前記第１結合物質に非結合の物質を除去できる。
　後者の反応系においては、例えば、前記第２結合物質を、その反応器に固定化することが好ましい。そして、前記反応器において、固定化した前記第２結合物質に前記被検体を接触させて、前記第２結合物質と前記被検体中の前記Ｘ（intact　AGT）および前記Ｙ（des-AngI　AGT）との複合体（以下、「第２複合体」ともいう）を形成する。さらに、前記第２複合体の検出試薬により、前記第２複合体を検出する。前記第２複合体の検出が、前記結合の検出を意味する。前記複合体の形成と、前記第２複合体の検出との間において、前記反応器の洗浄を含むことが好ましい。前記洗浄によって、固定化した前記第２結合物質に非結合の物質を除去できる。
　前記第１複合体の検出試薬および前記第２複合体の検出試薬は、例えば、それぞれ、前記複合体に特異的に結合する結合物質が使用できる。前記第１複合体および前記第２複合体は、それぞれ、前記第１結合物質と前記第２結合物質およびＡｎｇＩ以外において、共通部位を有している。このため、前記共通部位に特異的に結合する第３結合物質を、例えば、前記第１複合体の検出試薬および前記第２複合体の検出試薬として使用でき、両者は、同一の第３結合物質を使用してもよい。前記第３結合物質は、前記第２結合物質とは異なる部位に結合する物質であることが好ましい。前記第３結合物質は、特に制限されず、例えば、抗体、核酸等があげられる。
　前記第３結合物質は、例えば、検出可能な標識物質で標識化されていることが好ましい。前記標識物質を検出することで、前記第３結合物質が結合した前記第１複合体または前記第２複合体を、それぞれ、間接的に検出できる。前記標識物質は、特に制限されず、ペルオキシダーゼ等の酵素、蛍光物質、発色物質、放射性同位体、紫外線または遠赤外線で検出可能な物質等があげられる。前記標識物質は、その種類に応じて、例えば、検出試薬により検出できる。具体例として、前記標識物質が酵素の場合、例えば、前記酵素の触媒反応によりシグナルを発生する基質を、前記検出試薬として併用することが好ましい。
　前記第１結合物質および前記第４結合物質を使用し、前記Ｘの量と前記Ｙの量との関係を算出する場合、前記Ｘ（intact　AGT）と前記第１結合物質との結合、ならびに、前記Ｙ（des-AngI　AGT）と前記第４結合物質との結合は、それぞれ、別個の反応系で測定してもよいし、同一の反応系で測定してもよい。
　前者の反応系においては、前記Ｙの量は、例えば、前記第２結合物質を使用した前記Ｘ＋Ｙの量の算出において、前記第２結合物質に代えて、前記第４結合物質を使用し、前記第４結合物質と前記Ｙ（des-AngI　AGT）との複合体を、前記複合体に特異的に結合する結合物質を使用することで、算出できる。
　後者の反応系においては、例えば、前記共通部位に特異的に結合する前記第３結合物質を、その反応器に固定化することが好ましい。そして、前記反応器において、固定化した前記第３結合物質に前記被検体を接触させて、前記第３結合物質と前記被検体中の前記Ｘ（intact　AGT）との複合体（以下、「第３複合体」ともいう）および前記第３結合物質と前記被検体中の前記Ｙ（des-AngI　AGT）との複合体（以下、「第４複合体」ともいう。）を形成する。さらに、前記第３複合体の検出試薬により、前記第３複合体を、前記第４複合体の検出試薬により、前記第４複合体を検出する。前記第３複合体の検出および前記第４複合体の検出が、前記結合の検出を意味する。前記第３複合体および前記第４複合体の形成と、前記第３複合体および前記第４複合体の検出との間において、前記反応器の洗浄を含むことが好ましい。前記洗浄によって、固定化した前記第３結合物質に非結合の物質を除去できる。
　前記第３複合体の検出試薬および前記第４複合体の検出試薬は、例えば、それぞれ、前記複合体に特異的に結合する結合物質が使用できる。前記第３複合体および前記第４複合体は、アンジオテンシンＩ以外において、共通部位を有している。このため、例えば、前記ＸにおけるアンジオテンシンＩに特異的に結合する第１結合物質を、前記第３複合体の検出試薬として、前記Ｙに特異的に結合する第４結合物質を、前記第４複合体の検出試薬として使用できる。
　前記第１結合物質および前記第４結合物質は、例えば、検出可能な前記標識物質で標識化されていることが好ましく、前記第１結合物質と前記第４結合物質とを区別できることから、前記第１結合物質および前記第４結合物質は、異なる標識物質で標識化されていることがより好ましい。そして、前記標識物質を検出することで、前記第１結合物質が結合した前記第３複合体および前記第２結合物質が結合した第４複合体を、それぞれ、間接的に検出できる。前記第１結合物質の標識物質および前記第４結合物質の標識物質の検出は、同時に行ってもよいし、別々に行ってもよい。
　つぎに、前記評価工程は、前記被検体について算出したＸの量とＹの量との関係と、評価基準との比較により、前記被検体のレニン活性を評価する工程であり、前記評価基準は、標準検体のＸの量とＹの量との関係と、前記標準検体のレニン活性との相関関係である。
　前記Ｘの量と前記Ｙの量との関係が前記（１）の場合、前記評価基準は、例えば、レニン活性が既知である標準検体について、前記ＸとＹとの比を算出することによって設定できる。前記評価基準は、例えば、レニン活性が異なる複数の標準検体について、前記比を算出することによって設定した、「レニン活性の変動と前記比の変動との相関関係」があげられる。この場合、前記評価基準によって、例えば、前記被検体のレニン活性を、間接的に算出できる。また、前記評価基準は、例えば、任意のレニン活性を示す標準検体について、ＸとＹとの比を算出することによって設定した、「任意のレニン活性とその比との相関関係」でもよい。この場合、例えば、前記任意のレニン活性を任意の臨界値とすることで、前記被検体のレニン活性が、臨界値以上であるか臨界値未満であるか、または、臨界値を超えるか臨界値以下であるかを判断できる。また、前記Ｘの量と前記Ｙの量との関係が前記（２）または（３）の場合、前記評価基準は、例えば、前記（１）の場合において、「ＸとＹとの比」を、それぞれ、「ＸとＸ＋Ｙとの比」および「ＹとＸ＋Ｙとの比」に読み替えた上、援用できる。
　前記任意のレニン活性は、例えば、原発性アルデステロン症患者のレニン活性、または、原発性アルデステロン症に罹患していない健常者のレニン活性に設定することができる。前述のように、レニン活性は、原発性アルデステロン症への罹患を判断する指標として知られている。このため、前記任意のレニン活性を、原発性アルデステロン症患者のレニン活性に設定すれば、前記関係をＹ／Ｘで表した場合、前記被検体のＹ／Ｘが、前記評価基準と比較して同等またはそれ以下の場合、罹患の可能性が高いレニン活性である、つまり、前記被検体の罹患の可能性が高いと決定でき、または、前記評価基準と比較して有意に高い場合、罹患の可能性が低いレニン活性である、つまり、前記被検体の罹患の可能性が低いと決定できる。他方、前記任意のレニン活性を、原発性アルデステロン症に罹患していない健常者のレニン活性に設定すれば、前記被検体のＹ／Ｘが、前記評価基準と比較して有意に低い場合、罹患の可能性が高いレニン活性である、つまり、前記被検者の罹患の可能性が高いと決定でき、または、前記評価基準と比較して同等またはそれ以上の場合、罹患の可能性が低いレニン活性である、つまり、前記被検者の罹患の可能性が低いと決定できる。
　前記任意のレニン活性を、原発性アルデステロン症患者のレニン活性に設定すれば、前記関係をＸ／（Ｘ＋Ｙ）で表した場合、前記被検体のＸ／（Ｘ＋Ｙ）が、前記評価基準と比較して同等またはそれ以上の場合、罹患の可能性が高いレニン活性である、つまり、前記被検体の罹患の可能性が高いと決定でき、または、前記評価基準と比較して有意に低い場合、罹患の可能性が低いレニン活性である、つまり、前記被検体の罹患の可能性が低いと決定できる。他方、前記任意のレニン活性を、原発性アルデステロン症に罹患していない健常者のレニン活性に設定すれば、前記被検体のＸ／（Ｘ＋Ｙ）が、前記評価基準と比較して有意に高い場合、罹患の可能性が高いレニン活性である、つまり、前記被検者の罹患の可能性が高いと決定でき、または、前記評価基準と比較して同等またはそれ以下の場合、罹患の可能性が低いレニン活性である、つまり、前記被検者の罹患の可能性が低いと決定できる。
　前記任意のレニン活性を、原発性アルデステロン症患者のレニン活性に設定すれば、前記関係をＹ／（Ｘ＋Ｙ）で表した場合、前記被検体のＹ／（Ｘ＋Ｙ）が、前記評価基準と比較して同等またはそれ以下の場合、罹患の可能性が高いレニン活性である、つまり、前記被検体の罹患の可能性が高いと決定でき、または、前記評価基準と比較して有意に高い場合、罹患の可能性が低いレニン活性である、つまり、前記被検体の罹患の可能性が低いと決定できる。他方、前記任意のレニン活性を、原発性アルデステロン症に罹患していない健常者のレニン活性に設定すれば、前記被検体のＹ／（Ｘ＋Ｙ）が、前記評価基準と比較して有意に低い場合、罹患の可能性が高いレニン活性である、つまり、前記被検者の罹患の可能性が高いと決定でき、または、前記評価基準と比較して同等またはそれ以上の場合、罹患の可能性が低いレニン活性である、つまり、前記被検者の罹患の可能性が低いと決定できる。
　また、任意のレニン活性は、例えば、原発性アルドステロン症患者由来の検体のレニン活性と原発性アルドステロン症に罹患していない健常者由来の検体のレニン活性との間におけるレニン活性の臨界値に設定することができる。この場合、前記関係をＹ／Ｘで表した場合、前記被検体のＹ／Ｘが、前記レニン活性の臨界値に対応するＹ／Ｘより有意に低い場合、罹患の可能性が高いレニン活性である、つまり、前記被検体の罹患の可能性が高いと決定でき、または、前記レニン活性の臨界値に対応するＹ／Ｘより有意に高い場合、罹患の可能性が低いレニン活性である、つまり、前記被検体の罹患の可能性が低いと決定できる。
　前記関係をＸ／（Ｘ＋Ｙ）で表した場合、前記被検体のＸ／（Ｘ＋Ｙ）が、前記レニン活性の臨界値に対応するＸ／（Ｘ＋Ｙ）より有意に高い場合、罹患の可能性が高いレニン活性である、つまり、前記被検体の罹患の可能性が高いと決定でき、または、前記レニン活性の臨界値に対応するＸ／（Ｘ＋Ｙ）より有意に低い場合、罹患の可能性が低いレニン活性である、つまり、前記被検体の罹患の可能性が低いと決定できる。
　前記関係をＹ／（Ｘ＋Ｙ）で表した場合、前記被検体のＹ／（Ｘ＋Ｙ）が、前記レニン活性の臨界値に対応するＹ／（Ｘ＋Ｙ）より有意に低い場合、罹患の可能性が高いレニン活性である、つまり、前記被検体の罹患の可能性が高いと決定でき、または、前記レニン活性の臨界値に対応するＹ／（Ｘ＋Ｙ）より有意に高い場合、罹患の可能性が低いレニン活性である、つまり、前記被検体の罹患の可能性が低いと決定できる。
　血漿レニン活性の１Ｕは、例えば、１時間の反応時間で、１ｎｇ／ｍｌのアンジオテンシンＩ（ＡｎｇＩ）を生成する血漿レニン活性を、１ｎｇ　ＡｎｇＩ／ｍｌ／ｈｒと定義できる。一般的に、原発性アルデステロン症患者の血液中の血漿レニン活性は、０．１ｎｇ　ＡｎｇＩ／ｍｌ／ｈｒ以下であり、健常者の血液中の血漿レニン活性は、一般に、０．５ｎｇ　ＡｎｇＩ／ｍｌ／ｈｒ以上であるため、この間の血漿レニン活性（例えば、０．１ＡｎｇＩ／ｍｌ／ｈｒを超え０．５ｎｇ　ＡｎｇＩ／ｍｌ／ｈｒ未満）を臨界値に設定して、患者と健常者とを判別できる。前記血漿レニン活性の臨界値に対応する血液中のＹ／Ｘは、例えば、３．１である。また、前記血漿レニン活性の臨界値に対応する血液中のＸ／（Ｘ＋Ｙ）およびＹ／（Ｘ＋Ｙ）は、例えば、前記血漿レニン活性の臨界値に対応する血液中のＹ／Ｘに基づき、算出できる。
＜原発性アルドステロン症への罹患可能性の試験方法＞
　本発明の試験方法は、被検者の原発性アルドステロン症への罹患の可能性を試験する方法であり、以下の第１の形態と第２の形態があげられる。なお、第１の形態および第２の形態は、いずれも、前記Ｘ（intact　AGT）の量と前記Ｙ（des-AngI　AGT）の量との関係に基づく試験方法であることが特徴であり、その他の工程および条件は、特に制限されない。
　本発明によれば、例えば、原発性アルドステロン症への罹患について、感度および特異度の両方に優れる試験が可能である。本発明において、「感度が優れる」とは、例えば、罹患患者が陽性となる確率が高いことを意味し、「特異度が優れる」は、罹患していない健常者が陰性となる確率が高いことを意味する。
　まず、本発明の第１の試験方法は、前述のように、被検者由来の被検体について、前記本発明の評価方法によりレニン活性を評価する工程と、
前記評価工程で得られたレニン活性の評価結果と、評価基準との比較により、前記被検者の原発性アルドステロン症への罹患の可能性を試験する工程とを含み、
前記評価基準が、レニン活性と原発性アルドステロン症への罹患との相関関係であることを特徴とする。
　前記第１の試験方法は、前記本発明のレニン活性の評価方法により、前記Ｘ（intact　AGT）の量と前記Ｙ（des-AngI　AGT）の量との関係から前記被検体のレニン活性を評価し、さらに、その評価結果から、前記被検者の原発性アルドステロン症への罹患の可能性を試験する形態である。
　前記第１の試験方法において、前記レニン活性の評価工程は、前記本発明のレニン活性の評価方法の記載を援用できる。
　前記試験工程において、前記評価基準は、レニン活性と原発性アルドステロン症への罹患との相関関係である。前記評価基準は、例えば、原発性アルデステロン症患者のレニン活性、または、原発性アルデステロン症に罹患していない健常者のレニン活性であることが好ましい。
　前記試験工程は、例えば、下記（Ａ１）、（Ａ２）および（Ａ３）のいずれかであることが好ましく、前記本発明のレニン活性の評価方法における説明を援用できる。
（Ａ１）前記評価基準が、原発性アルドステロン症患者由来の検体のレニン活性であり、
前記被検者のレニン活性が、前記評価基準と比較して同等またはそれ以下の場合、前記被検者の罹患の可能性が高いと決定し、または、前記評価基準と比較して有意に高い場合、前記被検者の罹患の可能性が低いと決定する
（Ａ２）前記評価基準が、原発性アルドステロン症に罹患していない健常者由来の検体のレニン活性であり、
前記被検者のレニン活性が、前記評価基準と比較して有意に低い場合、前記被検者の罹患の可能性が高いと決定し、または、前記評価基準と比較して同等またはそれ以上の場合、前記被検者の罹患の可能性が低いと決定する
（Ａ３）前記評価基準が、原発性アルドステロン症患者由来の検体のレニン活性と原発性アルドステロン症に罹患していない健常者由来の検体のレニン活性との間における臨界値であり、
前記被検者のレニン活性が、前記臨界値より有意に低い場合、前記被検者の罹患の可能性が高いと決定し、または、前記臨界値より有意に高い場合、前記被検者の罹患の可能性が低いと決定する
　前記第１の試験方法においては、例えば、前記レニン活性による評価に加えて、さらに、血漿中アルドステロン濃度（ＰＡＣ）および活性レニン濃度（ＡＲＣ）等とあわせて、総合的に罹患の可能性を評価することもできる。
　つぎに、本発明の第２の試験方法は、前述のように、被検者由来の被検体について、前記Ｘ（intact　AGT）の量と前記Ｙ（des-AngI　AGT）の量との関係を算出する算出工程と、
前記被検体について算出した前記関係と、評価基準との比較により、前記被検者の原発性アルドステロン症への罹患の可能性を試験する工程とを含み、
前記評価基準が、標準検体のＸの量とＹの量との関係と、前記標準検体の原発性アルドステロン症への罹患との相関関係であることを特徴とする。
　前記第２の試験方法は、前記Ｘ（intact　AGT）の量と前記Ｙ（des-AngI　AGT）の量との関係から、レニン活性を評価することなく、直接、前記被検者の原発性アルドステロン症への罹患の可能性を試験する形態である。
　前記第２の試験方法において、前記ＸとＹとの関係の算出工程は、前記本発明のレニン活性の評価方法の記載を援用できる。
　前述のように、前記レニン活性と前記ＸとＹとの関係とは相関関係を有しており、原発性アルデステロン症の罹患の可能性と前記レニン活性とは相関関係を有している。このため、前記ＸとＹとの関係と前記罹患の可能性との間にも相関関係がある。このため、前記試験工程においては、前記評価基準として、標準検体のＸとＹとの関係と、前記標準検体の原発性アルドステロン症への罹患との相関関係が使用できる。
　前記評価基準は、例えば、原発性アルデステロン症患者由来の標準検体、または、原発性アルデステロン症に罹患していない健常者由来の標準検体について、ＸとＹとの関係を算出することによって設定できる。
　前記試験工程は、例えば、前記関係をＹ／Ｘで表した場合、下記（Ｂ１）、（Ｂ２）および（Ｂ３）のいずれかであることが好ましい。
（Ｂ１）前記評価基準が、原発性アルドステロン症患者由来の検体のＸの量とＹの量との比（Ｙ／Ｘ）であり、
前記被検者のＹ／Ｘが、前記評価基準と比較して同等またはそれ以下の場合、前記被検者の罹患の可能性が高いと決定し、または、前記評価基準と比較して有意に高い場合、前記被検者の罹患の可能性が低いと決定する
（Ｂ２）前記評価基準が、原発性アルドステロン症に罹患していない健常者由来の検体のＸの量とＹの量との比（Ｙ／Ｘ）であり、
前記被検者のＹ／Ｘが、前記評価基準と比較して有意に低い場合、前記被検者の罹患の可能性が高いと決定し、または、前記評価基準と比較して同等またはそれ以上の場合、前記被検者の罹患の可能性が低いと決定する
（Ｂ３）前記評価基準が、原発性アルドステロン症患者由来の検体のＸの量とＹの量との比（Ｙ／Ｘ）と、原発性アルドステロン症に罹患していない健常者由来の検体のＸの量とＹの量との比（Ｙ／Ｘ）との間における臨界値であり、
前記被検者のＹ／Ｘが、前記臨界値より有意に低い場合、前記被検者の罹患の可能性が高いと決定し、または、前記臨界値より有意に高い場合、前記被検者の罹患の可能性が低いと決定する
　前記試験工程が、前記関係をＸ／（Ｘ＋Ｙ）で表した場合、下記（Ｃ１）、（Ｃ２）および（Ｃ３）のいずれかであることが好ましい。
（Ｃ１）前記評価基準が、原発性アルドステロン症患者由来の検体のＸの量と前記Ｘと前記Ｙとの総量との比（Ｘ／（Ｘ＋Ｙ））であり、
前記被検者のＸ／（Ｘ＋Ｙ）が、前記評価基準と比較して同等またはそれ以上の場合、前記被検者の罹患の可能性が高いと決定し、または、前記評価基準と比較して有意に低い場合、前記被検者の罹患の可能性が低いと決定する
（Ｃ２）前記評価基準が、原発性アルドステロン症に罹患していない健常者由来の検体のＸの量と前記Ｘと前記Ｙとの総量との比（Ｘ／（Ｘ＋Ｙ））であり、
前記被検者のＸ／（Ｘ＋Ｙ）が、前記評価基準と比較して有意に高い場合、前記被検者の罹患の可能性が高いと決定し、または、前記評価基準と比較して同等またはそれ以下の場合、前記被検者の罹患の可能性が低いと決定する
（Ｃ３）前記評価基準が、原発性アルドステロン症患者由来の検体のＸの量と前記Ｘと前記Ｙとの総量との比（Ｘ／（Ｘ＋Ｙ））と、原発性アルドステロン症に罹患していない健常者由来の検体のＸの量と前記Ｘと前記Ｙとの総量との比（Ｘ／（Ｘ＋Ｙ））との間における臨界値であり、
前記被検者のＸ／（Ｘ＋Ｙ）が、前記臨界値より有意に高い場合、前記被検者の罹患の可能性が高いと決定し、または、前記臨界値より有意に低い場合、前記被検者の罹患の可能性が低いと決定する
前記試験工程が、前記関係をＹ／（Ｘ＋Ｙ）で表した場合、下記（Ｄ１）、（Ｄ２）および（Ｄ３）のいずれかであることが好ましい。
（Ｄ１）前記評価基準が、原発性アルドステロン症患者由来の検体のＹの量と前記Ｘと前記Ｙとの総量との比（Ｙ／（Ｘ＋Ｙ））であり、
前記被検者のＹ／（Ｘ＋Ｙ）が、前記評価基準と比較して同等またはそれ以下の場合、前記被検者の罹患の可能性が高いと決定し、または、前記評価基準と比較して有意に高い場合、前記被検者の罹患の可能性が低いと決定する
（Ｄ２）前記評価基準が、原発性アルドステロン症に罹患していない健常者由来の検体のＹの量と前記Ｘと前記Ｙとの総量との比（Ｙ／（Ｘ＋Ｙ））であり、
前記被検者のＹ／（Ｘ＋Ｙ）が、前記評価基準と比較して有意に低い場合、前記被検者の罹患の可能性が高いと決定し、または、前記評価基準と比較して同等またはそれ以上の場合、前記被検者の罹患の可能性が低いと決定する
（Ｄ３）前記評価基準が、原発性アルドステロン症患者由来の検体のＹの量と前記Ｘと前記Ｙとの総量との比（Ｙ／（Ｘ＋Ｙ））と、原発性アルドステロン症に罹患していない健常者由来の検体のＹの量と前記Ｘと前記Ｙとの総量との比（Ｙ／（Ｘ＋Ｙ））との間における臨界値であり、
前記被検者のＹ／（Ｘ＋Ｙ）が、前記臨界値より有意に低い場合、前記被検者の罹患の可能性が高いと決定し、または、前記臨界値より有意に高い場合、前記被検者の罹患の可能性が低いと決定する
　本発明の試験方法は、例えば、原発性アルドステロン症の診断方法に読み替え可能である。
＜キット＞
　本発明の評価用キットは、前記本発明のレニン活性の評価方法に使用するためのキットであり、前記Ｘ（intact　AGT）の量を測定する測定試薬と、前記Ｙ（des-AngI　AGT）の量を測定する測定試薬とを含むことを特徴とする。本発明の評価用キットによれば、前記本発明のレニン活性の評価方法を、容易に行うことができる。
　本発明の評価用キットは、前記Ｘ（intact　AGT）の量と前記Ｙ（des-AngI　AGT）の量とを測定できる試薬を含んでいればよく、その構成は、特に制限されない。前記Ｘの量を測定する試薬（Ｘの測定試薬）は、例えば、前記ＸにおけるAngIに対して特異的に結合する前記第１結合物質を含むことが好ましく、Ｘの検出試薬ともいえる。また、前記Ｙの量を測定する試薬（Ｙの測定試薬）は、例えば、前記第１結合物質と、前記Ｘと前記Ｙの共通部位に対して特異的に結合する前記第２結合物質とを含んでもよく、前記Ｙに対して特異的に結合する第４結合物質と含んでもよい。前記Ｙの測定試薬が前記第１結合物質と前記第２結合物質とを含む場合、前者は、前記Ｘの検出試薬、後者は、前記ＸおよびＹの検出試薬といもいえる。前記Ｙの測定試薬が前記第１結合物質と前記第２結合物質とを含む場合、前記Ｙの測定試薬によれば、前記第１結合物質により、前記Ｘの量を測定し、前記第２結合物質により、前記Ｘと前記Ｙとの総量を測定し、前記総量から前記Ｘの量を差し引いて、前記Ｙの量を算出できる。前記第１結合物質、前記第２結合物質、および前記第４結合物質は、例えば、前述の通りである。
　前述のように、前記Ｙの測定試薬が前記第１結合物質と前記第２結合物質とを含む場合、本発明の評価方法においては、前記Ｘの測定結果を、前記Ｙの測定に利用できることから、前記Ｘの測定試薬は、前記Ｙの測定試薬の一部を兼ねているということもできる。
　本発明の評価用キットは、さらに、他の試薬を含んでもよい。前記Ｙの測定試薬が前記第１結合物質と前記第２結合物質とを含む場合、前記他の試薬としては、例えば、前記第１結合物質と前記Ｘとの複合体（第１複合体）の検出試薬、ならびに、前記第２結合物質と前記Ｙとの複合体（第２複合体）の検出試薬があげられる。前記各検出試薬は、例えば、前記第３結合物質があげられる。前記第３結合物質は、前述のように、標識物質で標識化されていることが好ましく、この場合、本発明の評価用キットは、前記他の試薬として、さらに、前記標識物質の検出試薬を含んでもよい。前記標識物質等は、前述の記載を援用できる。前記Ｙの測定試薬が前記第４結合物質を含む場合、前記他の試薬としては、前記Ｘおよび前記Ｙと複合体を形成する捕捉試薬があげられる。前記捕捉試薬は、例えば、前記第３結合物質があげられる。この場合、前記Ｘの測定試薬の前記第１結合物質および前記Ｙの測定試薬の前記第４結合物質は、前述のように、前記標識物質で標識化されていることが好ましく、前記第１結合物質および前記第４結合物質は、異なる前記標識物質で標識化されていることがより好ましい。この場合、本発明の評価用キットは、前記他の試薬として、さらに、前記標識物質の検出試薬を含んでもよい。
　本発明の評価用キットは、例えば、各測定試薬が、全て併存する１試薬系でもよいし、２つ以上に分離された２試薬系、またはそれ以上に分離された複数試薬系でもよい。前記１試薬系の場合、本発明の評価用キットは、例えば、評価用試薬ということもできる。また、前記２試薬系または前記複数試薬系において、前記各測定試薬が、同一の容器（反応器）において、分離されて収納されている試薬系である場合、本発明の評価用キットは、例えば、評価用アレイということもできる。前記第１結合物質と前記第２結合物質とを含む場合、本発明の評価用キットは、例えば、前記第１結合物質と前記第２結合物質が分離された試薬系であることが好ましい。前記第１結合物質と前記第４結合物質とを含む場合、本発明の評価用キットは、前記第１結合物質と前記第４結合物質が分離されていない試薬系であることが好ましい。
　本発明の評価用キットは、さらに、反応器、緩衝液、使用説明書等を含んでもよい。
　本発明の評価用キットについて、１試薬系の具体例を以下に示すが、本発明は、この例示に限定されない。以下の例において、前記標識物質は、蛍光物質および発色物質の少なくとも一方が好ましく、蛍光物質がより好ましい。また、前記第１結合物質および前記第４結合物質は、異なる前記標識物質で標識化されていることが好ましい。
試薬１：固定化された前記第３結合物質＋標識物質で標識化された前記第１結合物質＋標識物質で標識化された前記第４結合物質
　本発明の評価用キットについて、３試薬系の具体例を以下に示すが、本発明は、この例示に限定されない。以下の例において、前記標識物質は、酵素が好ましく、前記検出試薬は、前記酵素の基質が好ましく、より好ましくは発色基質である。
試薬１：固定化された前記第１結合物質＋標識物質で標識化された前記第３結合物質
試薬２：固定化された前記第２結合物質＋標識物質で標識化された前記第３結合物質
試薬３：前記第３結合物質の標識物質に対する検出試薬
　本発明の試験用キットは、本発明の原発性アルドステロン症への罹患可能性の試験方法に使用するキットであり、前記本発明の評価キットを含むことを特徴とする。これらのキットの構成は、例えば、前記本発明の評価キットと同様であってもよい。
　以下、実施例および比較例により本発明を更に具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
［実施例１］
　本実施例では、同一の健常者において、異なる姿勢で採血を行い、採血時の姿勢の変動が、血漿中のＸ（intact　AGT）の量とＹ（des-AngI　AGT）の量との比（Ｐｌａｓｍａ　Ｙ／Ｘ）に影響しないことを確認した。
　まず、同一の健常者（ｎ＝５）において、背臥位（ｓｕｐｉｎｅ）または立位（ｓｔａｎｄｉｎｇ）で採血し、血漿を回収した。前記血漿中の全ＡＧＴ（Ｘ＋Ｙ）の量およびＸ（intact　AGT）の量は、それぞれ、Ｔｏｔａｌ　ＡＧＴ　ＥＬＩＳＡ　ｋｉｔｓ（ＩＢＬ社）およびＩｎｔａｃｔ　ＡＧＴ　ＥＬＩＳＡ　ｋｉｔｓ（ＩＢＬ社）を用いて測定した。そして、前記全ＡＧＴ（Ｘ＋Ｙ）の量および前記Ｘ（intact　AGT）の量から、前記Ｙ（des-AngI　AGT）の量を算出し、これらの値に基づき、Ｐｌａｓｍａ　Ｙ／Ｘを算出した。
　これらの結果を図１に示す。図１は、Ｐｌａｓｍａ　Ｙ／Ｘを示すグラフである。図１において、横軸は、患者の姿勢を示し、縦軸は、Ｐｌａｓｍａ　Ｙ／Ｘを示す。図１に示すように、採血時の姿勢にかかわらず、Ｐｌａｓｍａ　Ｙ／Ｘには、有意な差がなかった（Ｐ＝０．７４６４）。これらの結果から、採血時の姿勢が、血漿中のＰｌａｓｍａ　Ｙ／Ｘに影響しないことがわかった。
［実施例２］
　本実施例では、同一の健常者から異なる時間に採血を行い、概日リズムが、Ｐｌａｓｍａ　Ｙ／Ｘに影響しないことを確認した。
　同一の健常者（ｎ＝４３）から所定時間（６時、１２時、１８時）に採血し、前記実施例１と同様にして、Ｐｌａｓｍａ　Ｙ／Ｘを算出した。
　これらの結果を図２に示す。図２は、Ｐｌａｓｍａ　Ｙ／Ｘを示すグラフである。図２において、横軸は、採血した時間を示し、縦軸は、Ｐｌａｓｍａ　Ｙ／Ｘを示す。図２に示すように、採血した時間によらずＰｌａｓｍａ　Ｙ／Ｘには、有意な差がなかった。これらの結果から、概日リズムが、Ｐｌａｓｍａ　Ｙ／Ｘに影響しないことがわかった。
［実施例３］
　本実施例では、ラットにアンジオテンシンII受容体拮抗薬（Ｏｌｍｅｓａｒｔａｎ）を投与し、レニン活性を上昇させることで、Ｐｌａｓｍａ　Ｙ／Ｘが上昇することを確認した。
　まず、７－８週齢のＳＤラット（ｎ＝８）の静脈にカテーテルを挿管し、前記挿管から１日後、採血を行って血漿をサンプリングした（採血０日目）。前記採血後、前記採血０日目の間に、前記ラットに、前記カテーテルから生理食塩水１ｍＬを注入し、ヘパリンブロックを行い、さらに、前記拮抗薬を０．５％ＮａＨＣＯ３水溶液に溶解し、１ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ（重量／体重／時間）で７日間飲水投与した。そして、前記採血０日目を基準とし、所定期間後（３、７日目）に、前記ラットから採血を行い、血漿をサンプリングした。そして、サンプリングした各血漿について、前記実施例１と同様にしてＰｌａｓｍａ　Ｙ／Ｘを算出した。
　これらの結果を図３に示す。図３は、Ｐｌａｓｍａ　Ｙ／Ｘを示すグラフである。図３において、横軸は、前記採血０日目を基準としたときの採血日を示し、縦軸は、Ｐｌａｓｍａ　Ｙ／Ｘを示す。図３に示すように、３日目以降のＰｌａｓｍａ　Ｙ／Ｘは、０日目のＰｌａｓｍａ　Ｙ／Ｘに対して、上昇した。これらの結果から、アンジオテンシンII受容体拮抗薬を投与し、レニン活性を上昇させることで、Ｐｌａｓｍａ　Ｙ／Ｘが上昇することがわかった。
［実施例４］
　本実施例では、ラットにアンジオテンシンIIおよびＮａＣｌを投与し、レニン活性を抑制することで、Ｐｌａｓｍａ　Ｙ／Ｘが減少することを確認した。
　６－８週齢のＳＤラット（ｎ＝７）を用いた以外は、前記実施例３と同様にして、採血（採血０日目）と、ヘパリンブロックを行い、さらに、１％ＮａＣｌ水溶液を、前記採血後５日間、前記ラットに自由飲水させた。また、前記採血後５日間、毎分８０ｎｇで浸透圧ミニポンプにより、アンジオテンシンIIを継続的に前記ラットに皮下投与した。さらに、前記採血０日目を基準とし、所定期間後（３、５日目）に前記ラットから採血を行い、血漿を回収した。そして、前記実施例１と同様にして、Ｐｌａｓｍａ　Ｙ／Ｘを算出した。
　これらの結果を図４に示す。図４は、Ｐｌａｓｍａ　Ｙ／Ｘを示すグラフである。図４において、横軸は、前記採血０日目を基準としたときの採血日を示し、縦軸は、Ｐｌａｓｍａ　Ｙ／Ｘを示す。図４に示すように、３日目以降のＰｌａｓｍａ　Ｙ／Ｘは、０日目のＰｌａｓｍａ　Ｙ／Ｘに対して、有意に減少した。これらの結果から、アンジオテンシンIIおよびＮａＣｌを投与し、レニン活性を抑制することで、Ｐｌａｓｍａ　Ｙ／Ｘが減少することがわかった。
［実施例５］
　本実施例では、アルドステロン症の罹患とＰｌａｓｍａ　Ｙ／Ｘとの相関関係を確認した。
　まず、６週齢のＳＤラット（ｎ＝８）に対して、７週齢～１５週齢の間、毎日１回、１％ＮａＣｌ水溶液を自由飲水させ、並行して、７週齢～１１週齢の間、毎分５０ｎｇで浸透圧ミニポンプにより、アルドステロンを継続的に前記ラットに皮下投与した。前記ラットは、７週齢から１１週齢におけるアルドステロン投与により、アルドステロン症の状態を模した。そして、１１週齢にてアルドステロン投与を中止することにより、前記ラットが１５週齢になった段階で、腺腫摘出術を行った状態を模した。前記ラットは、６週齢、１１週齢、１５週齢で、採血を行い、血漿をサンプリングし、前記実施例１と同様にして、前記血漿中のＰｌａｓｍａ　Ｙ／Ｘを算出した。
　これらの結果を図５に示す。図５は、Ｐｌａｓｍａ　Ｙ／Ｘを示すグラフである。図５において、横軸は、ラットの週齢を示し、６週齢は、アルドステロン症を発症していないラットであり、１１週齢は、アルドステロン症を発症した状態を模したラットであり、１５週齢は、腺腫摘出術後の状態を模したラットである。図５において、縦軸は、Ｐｌａｓｍａ　Ｙ／Ｘを示す。図５に示すように、アルドステロン症を発症していない６週齢のラットに対して、アルドステロン症を発症した状態を模した１１週齢のラットは、Ｐｌａｓｍａ　Ｙ／Ｘが有意に減少した。また、腺腫摘出術後を模した１５週齢のラットは、腺腫摘出前のアルドステロン症を模した１１週齢のラットに対して、Ｐｌａｓｍａ　Ｙ／Ｘが有意に上昇し、且つ、アルドステロン症を発症していない６週齢のラットに対して、Ｐｌａｓｍａ　Ｙ／Ｘの有意差は示さなかった。これらの結果から、Ｐｌａｓｍａ　Ｙ／Ｘが、アルドステロン症の発症の有無（罹患の有無）と非常に高い相関関係を示していることがわかった。また、Ｐｌａｓｍａ　Ｙ／Ｘ＝３．１をカットオフ値（評価基準値）に設定することで、アルドステロン症を発症していないラット（６ｗおよび１５ｗ）とアルドステロン症を発症したラット（１１ｗ）とを、感度＝１、特異度＝１、Ｙｏｕｄｅｎ　ｉｎｄｅｘ＝１で判別できた。感度＝１は、１００％の感度、つまり、罹患患者が陽性となる確率を意味し、特異度＝１は、１００％の特異度、つまり、罹患していない健常者が陰性となる確率が高いことを意味する。このように、Ｘ（intact　AGT）の量とＹ（des-AngI　AGT）の量との比により、優れた精度でアルドステロン症の罹患を判断ができることがわかった。
［実施例６］
　本実施例では、ヒトにレニン阻害剤（Ａｌｉｓｋｉｒｅｎ）を投与し、レニン活性を抑制することで、Ｐｌａｓｍａ　Ｙ／Ｘが低下することを確認した。
　まず、高血圧症の透析患者（ｎ＝１１）に対して、１週間当たり３日、１日１回１５０ｍｇのレニン阻害剤を経口投与した。また、前記レニン阻害剤投与開始直前に、前記患者から採血を行って血漿をサンプリングした（採血０日目）。さらに、前記採血０日目を基準とし、所定期間後（２、４、７、１１、２１および３５日目）に前記患者から採血を行い、血漿を回収した。そして、前記実施例１と同様にして、Ｐｌａｓｍａ　Ｙ／Ｘを算出した。また、比較例として、前記血漿の１時間当たりのアンジオテンシンＩの産生能（ＰＲＡ）を、レニン・リアビーズ（登録商標）（ヤマサ醤油株式会社製）を使用し、添付のプロトコルにしたがって測定した。
　これらの結果を図６に示す。図６において、（Ａ）は、Ｐｌａｓｍａ　Ｙ／Ｘを示すグラフであり、（Ｂ）は、アンジオテンシンＩの産生能を示すグラフである。（Ａ）および（Ｂ）において、横軸は、前記採血０日目を基準としたときの採血日を示し、（Ａ）において、縦軸は、Ｐｌａｓｍａ　Ｙ／Ｘを示し、（Ｂ）において、縦軸は、アンジオテンシンＩの産生能示す。（Ａ）に示すように、２日目以降のＰｌａｓｍａ　Ｙ／Ｘは、０日目のＰｌａｓｍａ　Ｙ／Ｘに対して、減少した。これに対し、（Ｂ）に示すように、２１日目のアンジオテンシンＩの産生能は、０日目のアンジオテンシンＩの産生能に対して有意に減少したが、それ以外の採血日では、有意に減少しなかった。これらの結果から、ヒトにおいても、レニン阻害剤を投与し、レニン活性を抑制することで、Ｐｌａｓｍａ　Ｙ／Ｘが減少することがわかった。また、Ｐｌａｓｍａ　Ｙ／Ｘが、一般的に用いられているアンジオテンシンＩの産生能に対して、レニン活性と優れた相関性を有することがわかった。
　以上、実施形態および実施例を参照して本発明を説明したが、本発明は上記実施形態および実施例に限定されるものではない。本発明の構成や詳細には、本発明のスコープ内で当業者が理解し得る様々な変更をすることができる。
　この出願は、２０１３年１１月７日に出願された日本出願特願２０１３－２３１５３１を基礎とする優先権を主張し、その開示の全てをここに取り込む。
　以上のように、本発明によれば、前記ＸとＹとの関係と、レニン活性との間における安定な相関関係から、簡便且つ正確に、前記被検体のレニン活性を評価することができる。また、レニン活性は、原発性アルドステロン症の指標であるため、本発明によれば、前記関係とレニン活性または原発性アルドステロン症との安定な相関関係から、簡便且つ正確に、被検者の原発性アルドステロン症の罹患の可能性を試験することができる。このため、本発明は、例えば、医療分野や生化学分野において、極めて有用といえる。

Claims (22)

  1. 被検体について、下記Ｘの量と下記Ｙの量との関係を算出する算出工程と、
    前記被検体について算出した前記関係と、評価基準との比較により、前記被検体のレニン活性を評価する評価工程とを含み、
    前記評価基準が、標準検体の下記Ｘの量と下記Ｙの量との関係と、前記標準検体のレニン活性との相関関係であることを特徴とする、レニン活性の評価方法。
    　Ｘ：アンジオテンシンＩを有するアンジオテンシノーゲン（intact　AGT）
    　Ｙ：アンジオテンシンＩが脱離したアンジオテンシノーゲン（des-AngI　AGT）
  2. 前記Ｘの量と下記Ｙの量との関係が、下記（１）、（２）および（３）のいずれかである、請求項１記載の評価方法。
    （１）前記Ｘの量と前記Ｙの量との比
    （２）前記Ｘの量と前記Ｘと前記Ｙとの総量との比
    （３）前記Ｙの量と前記Ｘと前記Ｙとの総量との比
  3. 前記被検体が、血液または尿である、請求項１または２記載の評価方法。
  4. 前記算出工程に先立って、前記被検体について、前記Ｘの量および前記Ｙの量を測定する測定工程を含む、請求項１から３のいずれか一項に記載の評価方法。
  5. 前記測定工程において、前記被検体について、前記Ｘの量と、前記Ｘと前記Ｙとの総量とを測定し、且つ、前記総量から前記Ｘの量を差し引いて、前記Ｙの量を算出する、請求項４記載の評価方法。
  6. 前記測定工程において、
    前記Ｘの量の測定が、前記ＸにおけるアンジオテンシンＩに対して特異的に結合する第１結合物質を用いた測定であり、
    前記Ｘと前記Ｙとの総量の測定が、前記Ｘと前記Ｙの共通部位に対して特異的に結合する第２結合物質を用いた測定である、請求項５記載の評価方法。
  7. 前記第１結合物質および前記第２結合物質が、それぞれ抗体である、請求項６記載の評価方法。
  8. 前記測定工程において、
    前記Ｘの量の測定が、前記ＸにおけるアンジオテンシンＩに対して特異的に結合する第１結合物質を用いた測定であり、
    前記Ｙの量の測定が、前記Ｙに対して特異的に結合する第４結合物質を用いた測定であり、
    前記第１結合物質および前記第４結合物質が、異なる標識物質で標識化されている、請求項４記載の評価方法。
  9. 被検者由来の被検体について、請求項１から８のいずれか一項に記載の評価方法によりレニン活性を評価する工程と、
    前記評価工程で得られたレニン活性の評価結果と、評価基準との比較により、前記被検者の原発性アルドステロン症への罹患の可能性を試験する工程とを含み、
    前記評価基準が、レニン活性と原発性アルドステロン症への罹患との相関関係であることを特徴とする、原発性アルドステロン症への罹患可能性の試験方法。
  10. 前記試験工程が、下記（Ａ１）、（Ａ２）および（Ａ３）のいずれかである、請求項９記載の試験方法。
    （Ａ１）前記評価基準が、原発性アルドステロン症患者由来の検体のレニン活性であり、
    前記被検者のレニン活性が、前記評価基準と比較して同等またはそれ以下の場合、前記被検者の罹患の可能性が高いと決定し、または、前記評価基準と比較して有意に高い場合、前記被検者の罹患の可能性が低いと決定する
    （Ａ２）前記評価基準が、原発性アルドステロン症に罹患していない健常者由来の検体のレニン活性であり、
    前記被検者のレニン活性が、前記評価基準と比較して有意に低い場合、前記被検者の罹患の可能性が高いと決定し、または、前記評価基準と比較して同等またはそれ以上の場合、前記被検者の罹患の可能性が低いと決定する
    （Ａ３）前記評価基準が、原発性アルドステロン症患者由来の検体のレニン活性と原発性アルドステロン症に罹患していない健常者由来の検体のレニン活性との間における臨界値であり、
    前記被検者のレニン活性が、前記臨界値より有意に低い場合、前記被検者の罹患の可能性が高いと決定し、または、前記臨界値より有意に高い場合、前記被検者の罹患の可能性が低いと決定する
  11. 被検者由来の被検体について、下記Ｘの量と下記Ｙの量との関係を算出する算出工程と、
    前記被検体について算出した前記関係と、評価基準との比較により、前記被検者の原発性アルドステロン症への罹患の可能性を試験する工程とを含み、
    前記評価基準が、標準検体の下記Ｘの量と下記Ｙの量との関係と、前記標準検体の原発性アルドステロン症への罹患との相関関係であることを特徴とする、原発性アルドステロン症への罹患可能性の試験方法。
    　Ｘ：アンジオテンシンＩを有するアンジオテンシノーゲン（intact　AGT）
    　Ｙ：アンジオテンシンＩが脱離したアンジオテンシノーゲン（des-AngI　AGT）
  12. 前記Ｘの量と下記Ｙの量との関係が、下記（１）、（２）および（３）のいずれかである、請求項１１記載の試験方法。
    （１）前記Ｘの量と前記Ｙの量との比
    （２）前記Ｘの量と前記Ｘと前記Ｙとの総量との比
    （３）前記Ｙの量と前記Ｘと前記Ｙとの総量との比
  13. 前記試験工程が、前記関係をＹ／Ｘで表した場合、下記（Ｂ１）、（Ｂ２）および（Ｂ３）のいずれかである、請求項１１または１２記載の試験方法。
    （Ｂ１）前記評価基準が、原発性アルドステロン症患者由来の検体のＸの量とＹの量との比（Ｙ／Ｘ）であり、
    前記被検者のＹ／Ｘが、前記評価基準と比較して同等またはそれ以下の場合、前記被検者の罹患の可能性が高いと決定し、または、前記評価基準と比較して有意に高い場合、前記被検者の罹患の可能性が低いと決定する
    （Ｂ２）前記評価基準が、原発性アルドステロン症に罹患していない健常者由来の検体のＸの量とＹの量との比（Ｙ／Ｘ）であり、
    前記被検者のＹ／Ｘが、前記評価基準と比較して有意に低い場合、前記被検者の罹患の可能性が高いと決定し、または、前記評価基準と比較して同等またはそれ以上の場合、前記被検者の罹患の可能性が低いと決定する
    （Ｂ３）前記評価基準が、原発性アルドステロン症患者由来の検体のＸの量とＹの量との比（Ｙ／Ｘ）と、原発性アルドステロン症に罹患していない健常者由来の検体のＸの量とＹの量との比（Ｙ／Ｘ）との間における臨界値であり、
    前記被検者のＹ／Ｘが、前記臨界値より有意に低い場合、前記被検者の罹患の可能性が高いと決定し、または、前記臨界値より有意に高い場合、前記被検者の罹患の可能性が低いと決定する
  14. 前記試験工程が、前記関係をＸ／（Ｘ＋Ｙ）で表した場合、下記（Ｃ１）、（Ｃ２）および（Ｃ３）のいずれかである、請求項１１または１２記載の試験方法。
    （Ｃ１）前記評価基準が、原発性アルドステロン症患者由来の検体のＸの量と前記Ｘと前記Ｙとの総量との比（Ｘ／（Ｘ＋Ｙ））であり、
    前記被検者のＸ／（Ｘ＋Ｙ）が、前記評価基準と比較して同等またはそれ以上の場合、前記被検者の罹患の可能性が高いと決定し、または、前記評価基準と比較して有意に低い場合、前記被検者の罹患の可能性が低いと決定する
    （Ｃ２）前記評価基準が、原発性アルドステロン症に罹患していない健常者由来の検体のＸの量と前記Ｘと前記Ｙとの総量との比（Ｘ／（Ｘ＋Ｙ））であり、
    前記被検者のＸ／（Ｘ＋Ｙ）が、前記評価基準と比較して有意に高い場合、前記被検者の罹患の可能性が高いと決定し、または、前記評価基準と比較して同等またはそれ以下の場合、前記被検者の罹患の可能性が低いと決定する
    （Ｃ３）前記評価基準が、原発性アルドステロン症患者由来の検体のＸの量と前記Ｘと前記Ｙとの総量との比（Ｘ／（Ｘ＋Ｙ））と、原発性アルドステロン症に罹患していない健常者由来の検体のＸの量と前記Ｘと前記Ｙとの総量との比（Ｘ／（Ｘ＋Ｙ））との間における臨界値であり、
    前記被検者のＸ／（Ｘ＋Ｙ）が、前記臨界値より有意に高い場合、前記被検者の罹患の可能性が高いと決定し、または、前記臨界値より有意に低い場合、前記被検者の罹患の可能性が低いと決定する
  15. 前記試験工程が、前記関係をＹ／（Ｘ＋Ｙ）で表した場合、下記（Ｄ１）、（Ｄ２）および（Ｄ３）のいずれかである、請求項１１または１２記載の試験方法。
    （Ｄ１）前記評価基準が、原発性アルドステロン症患者由来の検体のＹの量と前記Ｘと前記Ｙとの総量との比（Ｙ／（Ｘ＋Ｙ））であり、
    前記被検者のＹ／（Ｘ＋Ｙ）が、前記評価基準と比較して同等またはそれ以下の場合、前記被検者の罹患の可能性が高いと決定し、または、前記評価基準と比較して有意に高い場合、前記被検者の罹患の可能性が低いと決定する
    （Ｄ２）前記評価基準が、原発性アルドステロン症に罹患していない健常者由来の検体のＹの量と前記Ｘと前記Ｙとの総量との比（Ｙ／（Ｘ＋Ｙ））であり、
    前記被検者のＹ／（Ｘ＋Ｙ）が、前記評価基準と比較して有意に低い場合、前記被検者の罹患の可能性が高いと決定し、または、前記評価基準と比較して同等またはそれ以上の場合、前記被検者の罹患の可能性が低いと決定する
    （Ｄ３）前記評価基準が、原発性アルドステロン症患者由来の検体のＹの量と前記Ｘと前記Ｙとの総量との比（Ｙ／（Ｘ＋Ｙ））と、原発性アルドステロン症に罹患していない健常者由来の検体のＹの量と前記Ｘと前記Ｙとの総量との比（Ｙ／（Ｘ＋Ｙ））との間における臨界値であり、
    前記被検者のＹ／（Ｘ＋Ｙ）が、前記臨界値より有意に低い場合、前記被検者の罹患の可能性が高いと決定し、または、前記臨界値より有意に高い場合、前記被検者の罹患の可能性が低いと決定する
  16. 下記Ｘの量を測定する測定試薬と、下記Ｙの量を測定する測定試薬とを含むことを特徴とする、請求項１から８のいずれか一項に記載のレニン活性の評価方法用の評価キット。
    　Ｘ：アンジオテンシンＩを有するアンジオテンシノーゲン（intact　AGT）
    　Ｙ：アンジオテンシンＩが脱離したアンジオテンシノーゲン（des-AngI　AGT）
  17. さらに、反応器を含み、
    前記Ｘの量を測定する測定試薬と、前記Ｙの量を測定する測定試薬とが、前記反応器内で分離されて収納されている、請求項１６記載の評価キット。
  18. 前記Ｘの測定試薬が、前記ＸにおけるアンジオテンシンＩに対して特異的に結合する第１結合物質を含む、請求項１６または１７記載の評価キット。
  19. 前記Ｙの測定試薬が、前記ＸにおけるアンジオテンシンＩに対して特異的に結合する第１結合物質と、前記Ｘと前記Ｙの共通部位に対して特異的に結合する第２結合物質とを含み、
    前記第１結合物質により、前記Ｘの量を測定し、
    前記第２結合物質により、前記Ｘと前記Ｙとの総量を測定し、前記総量から前記Ｘの量を差し引いて、前記Ｙの量を算出する、請求項１６から１８のいずれか一項に記載の評価キット。
  20. 前記第１結合物質および前記第２結合物質が、抗体である、請求項１８または１９記載の評価キット。
  21. 前記Ｙの測定試薬が、前記Ｙに特異的に結合する第４結合物質を含む、請求項１６から１８のいずれか一項に記載の評価キット。
  22. 請求項１６から２１のいずれか一項に記載のレニン活性の評価方法用の評価キットを含むことを特徴とする、請求項９から１５のいずれか一項に記載の原発性アルドステロン症への罹患可能性の試験方法用のキット。
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