WO2015025528A1 - 新規マングロマイシン化合物及びそれを含有するフリーラジカル消去剤 - Google Patents

新規マングロマイシン化合物及びそれを含有するフリーラジカル消去剤 Download PDF

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WO2015025528A1
WO2015025528A1 PCT/JP2014/004345 JP2014004345W WO2015025528A1 WO 2015025528 A1 WO2015025528 A1 WO 2015025528A1 JP 2014004345 W JP2014004345 W JP 2014004345W WO 2015025528 A1 WO2015025528 A1 WO 2015025528A1
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mangromycin
methanol
compound
hydrate
salt
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PCT/JP2014/004345
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English (en)
French (fr)
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大村　智
高橋　洋子
中島　琢自
正人 岩月
厚子 松本
Original Assignee
学校法人北里研究所
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Publication date
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D493/00—Heterocyclic compounds containing oxygen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system
    • C07D493/02—Heterocyclic compounds containing oxygen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D493/08—Bridged systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/18—Antioxidants, e.g. antiradicals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P39/00—General protective or antinoxious agents
    • A61P39/06—Free radical scavengers or antioxidants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
    • C12P17/18—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms containing at least two hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system, e.g. rifamycin
    • C12P17/181—Heterocyclic compounds containing oxygen atoms as the only ring heteroatoms in the condensed system, e.g. Salinomycin, Septamycin

Definitions

  • the present invention relates to a novel mangromycin compound, a production method thereof, a pharmaceutical composition containing mangromycins as an active ingredient, and a free radical scavenger.
  • Reactive oxygen species are also produced in vascular endothelium, smooth muscle cells, gastrointestinal mucosal epithelium and the like, and are reported to be associated with many pathological conditions and diseases by targeting many in vivo molecules.
  • NO nitric oxide
  • macrophages which are one of the immunocompetent cells, are known to produce a large amount of nitrate and generate nitric oxide (hereinafter referred to as “NO”), which is a kind of free radical, in vivo.
  • NO is known to be a substance having a relaxing action released from vascular endothelial cells in the circulatory system field.
  • NO is produced by nitric oxide synthase (hereinafter referred to as “NOS”) using L-arginine as a substrate.
  • NOS nitric oxide synthase
  • NOS inhibitors include L-arginine derivatives such as N ⁇ -monomethyl-L-arginine, N ⁇ -dimethyl-L-arginine, N ⁇ -nitro-L-arginine, and arginines such as aminoguanidine and S-ethylisothiourea. Similar compounds have been reported. Moreover, as NO elimination agent, metal complexes, such as diethylenetriamine pentaacetic acid and desferrioxamine, are reported, for example.
  • Patent Document 1 describes mangromycin A, B and C, and discloses that such mangromycin has antitrypanosome activity.
  • an object of the present invention is to provide a novel free radical scavenger in order to solve the above-described problems of the prior art.
  • mangromycin D mangromycin D
  • mangromycin E mangromycin E
  • mangromycin F mangromycin G
  • mangromycin H mangromycin I
  • the present invention has been made based on such findings. Therefore, in one aspect, the present invention is isolated from a culture solution of Lechevaleria sp. K10-0216 strain, each represented by the following formula (I ) To (VI), the novel compounds mangromycin D, E, F, G, H, and I, or ester derivatives thereof, or salts or hydrates thereof are provided.
  • the present invention provides a culture comprising culturing a microorganism belonging to actinomycetes having the ability to produce the mangromycin represented by any one of formulas (I) to (VI) in a medium.
  • the mangromycin represented by any one of the formulas (I) to (VI) is accumulated, and the mangromycin represented by any one of the formulas (I) to (VI) is accumulated from the culture.
  • the present invention relates to a method for producing a mangromycin represented by any one of the above formulas (I) to (VI).
  • the present invention relates to a pharmaceutical composition containing, as an active ingredient, a mangromycin represented by any one of the above formulas (I) to (VI), an ester derivative thereof, or a salt or hydrate thereof.
  • the present invention relates to the above-described formulas (I) to (VI) and the mangromycins represented by any one of the following formulas (VII), (VIII), and (IX), or ester derivatives thereof, or their
  • the present invention relates to a nitric oxide scavenger containing a salt or hydrate as an active ingredient.
  • the present invention relates to a mangromycin represented by any one of formulas (I) to (VI) and (VII), (VIII), and (IX) or an ester derivative thereof, or a salt thereof.
  • the present invention relates to a therapeutic or prophylactic agent for a disease or disorder in which excessive NO production containing a hydrate as an active ingredient contributes to onset or aggravation.
  • mangromycin D in the present specification may be a compound having a structure represented by the following formula I.
  • mangromycin E in the present specification may be a compound having a structure represented by the following formula II.
  • mangromycin F in the present specification may be a compound having a structure represented by the following formula III.
  • mangromycin G in the present specification may be a compound having a structure represented by the following formula IV.
  • mangromycin H in the present specification may be a compound having a structure represented by the following formula V.
  • mangromycin I is a compound having the following physical properties: (1) Property: white powder or pale yellow powder (2) molecular weight: 408 (3) Molecular formula: C 22 H 32 O 7 (4) [M + H] + theoretical value (m / z) 409.2226, measured value (m / z) 409.2222 by high resolution mass spectrometry (5) Ultraviolet absorption maximum (in methanol) ⁇ max ( ⁇ ): 246 (490) (6) Infrared absorption maximum ⁇ max (KBr tablet): maximum absorption at 3431, 1651 cm ⁇ 1 (8) 1 H NMR (in heavy methanol) ⁇ ppm: 2.13 (1H, dd), 4.93 (1H, d), 2.11 (1H, dd), 4.78 (1H, dd), 4.20 (1H, d), 3.20 (1H, d), 3.40 (1H, d) , 2.56 (1H, m), 1.63 (1H, dd), 1.83 (1H, dd), 1.
  • mangromycin I in the present specification may be a compound having a structure represented by the following formula VI.
  • the salt of the compound represented by the formula (I) to (IX) of the present invention means a complex salt formed by coordination of a metal or the like to the compound represented by the formula (I) to (IX). To do. Further, hydrates or solvates of the compounds represented by the formulas (I) to (IX) of the present invention and hydrates or solvates of the salts of the compounds represented by the formulas (I) to (IX) of the present invention. Products are also encompassed by the present invention.
  • salts of the compounds represented by formulas (I) to (IX) of the present invention and hydrates or solvates of the compounds represented by formulas (I) to (IX) of the present invention and Hydrates or solvates of the salts of the compounds represented by formulas (I) to (IX) are pharmacologically acceptable.
  • the compounds represented by the formulas (I) to (IX) or salts thereof of the present invention may be crystalline or amorphous.
  • the compounds of the present invention include pharmacologically acceptable ester derivatives of these compounds in addition to the above compounds.
  • the “pharmacologically acceptable ester derivative” is a compound containing a group that is metabolized in vivo to give the compound of the present invention, and is an ester that can be administered to the body as a pharmaceutical. That is.
  • the ester includes not only an ester-bonded compound but also an amide-bonded compound. Esters may be degraded by in vivo esterases to give active compounds.
  • ester substituted or unsubstituted lower alkyl ester, lower alkenyl ester, lower alkylamino lower alkyl ester, acylamino lower alkyl ester, acyloxy lower alkyl ester, aryl ester, aryl lower alkyl ester, amide
  • alkylamides and hydroxide amides include alkylamides and hydroxide amides.
  • the ester is preferably a propionate or an acyl ester.
  • the compound of the present invention may have an asymmetric carbon, optical isomers may exist.
  • the compound of the present invention may be either a dextrorotatory (+) or levorotatory ( ⁇ ) compound, or a mixture of these isomers such as a racemate.
  • the compound of the present invention includes any tautomer or geometric isomer (for example, E-form, Z-form, etc.).
  • the type of pharmaceutical composition is not particularly limited, and dosage forms include tablets, capsules, granules, powders, syrups, suspensions, suppositories, ointments, creams. Agents, gels, patches, inhalants, injections and the like.
  • dosage forms include tablets, capsules, granules, powders, syrups, suspensions, suppositories, ointments, creams. Agents, gels, patches, inhalants, injections and the like.
  • These preparations can be prepared according to a conventional method. In the case of a liquid preparation, it may be dissolved or suspended in water or other appropriate solvent at the time of use. Tablets and granules may be coated by a known method. In the case of injection, it is prepared by dissolving the compound of the present invention in water, but it may be dissolved in physiological saline or glucose solution as necessary, and a buffer or preservative may be added. Good.
  • a pharmaceutical composition for oral administration in the form of granules, fine granules, powders, hard capsules, soft capsules, syrups, emulsions, suspensions or liquids, for intravenous administration, for intramuscular administration
  • a pharmaceutical composition for parenteral administration in the form of injections, drops, transdermal absorbents, transmucosal absorbents, nasal drops, inhalants, suppositories, etc. for subcutaneous administration.
  • Injections, infusions, and the like can be prepared as powdered dosage forms such as freeze-dried forms, and can be used by dissolving in an appropriate aqueous medium such as physiological saline at the time of use.
  • free radical means an atom or molecule having one or more unpaired electron pairs, and is preferably a free radical that can be generated in vivo.
  • free radicals in the present specification include superoxide (.O 2 ⁇ ), hydroxyl radical (HO.), Hydroperoxyl radical (HOO.), Alkoxyl radical (LO.), Alkylperoxyl radical (LOO.).
  • radical species such as nitric oxide (NO), hydrogen peroxide (H 2 O 2 ), singlet oxygen ( 1 O 2 ), peroxynitrite (ONOO ⁇ ), lipid hydroperoxide (LOOH)
  • Active oxygen molecular species including non-radical species such as hypochlorous acid (HOCl) and ozone (O 3 ); and chlorine, DPPH (diphenylpicrylhydrazide), preferably nitric oxide and DPPH More preferably, it is nitric oxide.
  • the free radical scavenger means a drug used for the purpose of scavenging free radicals.
  • the present invention provides a pharmaceutical composition comprising a compound represented by formula (I)-(VI) as an active ingredient.
  • the compound of the present invention can be treated or prevented by administering an effective amount to a patient in need thereof, by treating or contributing to the onset or exacerbation of (excessive) generation of free radicals. Can be used in the method.
  • the present invention relates to a disease or a disease in which (excessive) generation of free radicals containing compounds represented by formulas (I) to (IX) as an active ingredient is related to or contributes to onset or aggravation It provides a therapeutic or prophylactic agent for disorders.
  • the present invention relates to the use of a compound of formula (I)-(IX) for the treatment or prevention of a disease or disorder associated with or contributing to the onset or exacerbation of (excessive) generation of free radicals. .
  • Diseases or disorders related to or contributing to the onset or exacerbation of free radical generation include, for example, cerebral infarction, myocardial infarction, heart failure, ischemic disease, cardiac ischemia reperfusion injury, liver ischemia reperfusion Disorder, cerebral ischemia reperfusion injury, gastrointestinal ischemia reperfusion injury, ischemia reperfusion injury, acute respiratory distress syndrome, acute gastric mucosal lesion, Behcet's disease, cataract, dry eye, Alzheimer's disease, Parkinson's disease, aging, pollen Disease, stomatitis, inflammation, emphysema, bronchial asthma, renal failure, glomerulonephritis, nephrotic syndrome, diabetic nephropathy, drug-induced nephropathy, arteriosclerosis, arteriosclerosis, cancer, reflux esophagitis, gastric ulcer, Mention may be made of inflammatory bowel disease, ulcerative colitis, rheumatoid arthritis, collagen
  • the mangromycins of the present invention have a free radical scavenging action, they can be used for the treatment or prevention of diseases or disorders in which (excessive) generation of free radicals is related to or contributes to onset or exacerbation, Anti-inflammatory action is expected. That is, since the mangromycins of the present invention have a free radical scavenging action, they are considered to have an anti-inflammatory action, and are considered to be effective for the treatment or prevention of various inflammatory diseases and various allergic diseases. .
  • FIG. 1 shows the scavenging activity (%) of mangromycin A to I against DPPH free radicals.
  • the vertical axis indicates the ratio of DPPH free radical scavenging activity when each drug is added when the DPPH free radical scavenging activity is 100%, and the horizontal axis indicates the drug used (each mangromycin and vitamin E (VE)). ).
  • FIG. 2 is a graph showing the NO elimination effect induced by stimulating RAW264.7 cells with LPS / IFN- ⁇ . The vertical axis represents the amount of NO generated when each drug is added, assuming that the amount of NO generated in the control (no drug added) is 100%.
  • the horizontal axis shows each added drug (mangromycin A, B, C, D, E, F, G, H and I from the left), and “no addition” on the horizontal axis was stimulated with LPS / IFN- ⁇ .
  • RAW 264.7 cells are not treated with drug.
  • the mangromycins represented by the above formulas (I) to (VI) of the present invention are obtained by culturing microorganisms belonging to actinomycetes having the ability to produce mangromycins in a medium, and accumulating the mangromycins in the culture, It can be produced by collecting (separating, extracting and purifying) mangromycins from the culture.
  • microorganism belonging to actinomycetes having the ability to produce mangromycins is a microorganism belonging to actinomycetes and having the ability to produce mangromycins. If it does not specifically limit.
  • the strains that can be used in the method for producing the mangromycins of the present invention include all of the strains having the ability to produce the mangromycins belonging to actinomycetes, in addition to the above-mentioned strains. Whether or not a microorganism is “a microorganism belonging to actinomycetes having the ability to produce mangromycins” can be determined, for example, by the following method.
  • liquid medium consisting of starch 2.4%, glucose 0.1%, peptone 0.3%, skipjack extract 0.3%, yeast extract 0.5%, calcium bicarbonate 0.4% 1 mL of a test microorganism cultured in a liquid medium was inoculated into a 500 mL Erlenmeyer flask, and after shaking culture at 27 ° C.
  • the obtained seed culture solution was mixed with 5.0% starch, 0.5% glycerol, 1 mL is inoculated into a 500 mL Erlenmeyer flask containing 100 mL of a liquid medium (pH 7.0) composed of 1.0% defatted wheat germ, 1.0% dry yeast, and 0.5% calcium bicarbonate, and is treated at 27 ° C. for 8 days.
  • a liquid medium pH 7.0
  • mangromycins are present in the culture obtained by shaking culture, it is possible to determine that the microorganisms belong to actinomycetes having the ability to produce mangromycins. it can.
  • the microorganism belonging to actinomycetes having the ability to produce mangromycins is Lechevaleria sp.
  • mutant strain refers to Lechevaleria sp. By artificial or natural mutagenesis stimulation. It is a strain having a mycological property or gene different from that of the K10-0216 strain, and such mutant strains include Lechevaleria sp. In addition to strains derived from the K10-0216 strain, Lechevaleria sp. The original strain from which the K10-0216 strain was derived is also included. In the present specification, the mutant strain does not ask for the presence or absence of actual derivation. For example, Lechevaleria sp.
  • a strain having a gene having high homology (for example, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, etc.) with a K10-0216 strain gene (for example, 16S rRNA gene) is also included in the mutant strain. Moreover, as long as such mutant strains maintain the production ability of mangromycins, it does not matter whether they are artificially produced or collected from nature.
  • the medium for culturing microorganisms belonging to actinomycetes capable of producing mangromycins can contain a nutrient that can be used as a nutrient source for actinomycetes.
  • a nutrient source for actinomycetes for example, commercially available peptone, meat extract, corn steep liquor, cottonseed flour, peanut flour, soy flour, yeast extract, NZ-amine, casein hydrate, nitrogen sources such as sodium nitrate, ammonium nitrate, ammonium sulfate, glycerin , Carbohydrates such as starch, glucose, galactose, and mannose, or carbon sources such as fat, and inorganic salts such as sodium chloride, phosphate, calcium carbonate, and magnesium sulfate can be used alone or in combination.
  • a trace amount of a metal salt, a moving / planting / mineral oil or the like as an antifoaming agent can be added to the medium. Any of these may be used for the production of mangromycins using the produced bacteria, and all known actinomycete culture materials can be used.
  • the culture of microorganisms belonging to actinomycetes having the ability to produce mangromycins is carried out in a temperature range in which the producing bacteria can grow and produce mangromycins (for example, 10 ° C to 40 ° C, preferably 25 to 30 ° C). Can be carried out by shaking culture for several days to 2 weeks.
  • the culture conditions can be appropriately selected and performed according to the properties of the mangromycin-producing bacterium to be used with reference to the description of the present specification.
  • the collection of mangromycins can be performed by extracting from the culture solution using a water-immiscible organic solvent such as ethyl acetate.
  • a water-immiscible organic solvent such as ethyl acetate.
  • known methods used for collecting fat-soluble substances such as adsorption chromatography, partition chromatography, gel filtration chromatography, scraping from thin layer chromatography, centrifugal countercurrent distribution chromatography, high performance liquid It can be purified to be pure by appropriately combining or repeating chromatography.
  • the mangromycins A, B, and C represented by the formulas (VII), (VIII), and (IX) represent the Lechevaleria sp. K10-0216 strain (Accession number NITE BP-1114), respectively. And can be obtained according to the method described in International Publication No. WO2013 / 031239.
  • the pharmaceutical composition of the present invention can be formulated by a conventional method using a normal pharmaceutically acceptable carrier.
  • a pharmaceutical composition containing the mangromycins of the present invention as an active ingredient
  • solid preparations such as tablets, pills, capsules, powders, granules, solutions, suspensions
  • It can be used orally as a liquid preparation such as an emulsion, or parenterally as an injection, intravenous, intramuscular, subcutaneous, or the like, a suppository, or a patch.
  • a solid preparation for oral administration When preparing a solid preparation for oral administration, add excipients to the active ingredient and, if necessary, binders, disintegrants, lubricants, etc., and then add solvents, granules, powders, capsules, etc. by conventional methods. And When preparing an injection, a pH adjuster, a buffer, a stabilizer, a solubilizing agent, etc. may be added to the main drug as necessary to obtain a subcutaneous or intravenous injection by a conventional method.
  • excipients such as starch, lactose, glucose, calcium phosphate, magnesium stearate, carboxymethyl cellulose can be used, and if necessary, lubricants, disintegrants, coating agents, coloring agents, etc. Can be used.
  • stabilizers, solution aids, suspending agents, emulsifiers, buffers, preservatives and the like can be contained.
  • the mangromycins of the present invention comprise administering to a patient in need thereof an effective amount of the mangromycins of the present invention, wherein (excessive) generation of free radicals is associated with or contributes to onset or exacerbation It can be used in a method for treating or preventing a disease or disorder.
  • the pharmaceutical composition containing the mangromycins of the present invention as an active ingredient is administered orally or parenterally such as injections or drops. It can be administered in the form.
  • mangromycins of the present invention When the mangromycins of the present invention are administered to mammals, etc., they may be administered orally as tablets, powders, granules, syrups, etc., or parenterally as injections or drops. Good. The dose varies depending on symptoms, age, sex, body weight, dosage form, etc. For example, when administered orally to an adult, the daily dose is usually 0.1-1000 mg.
  • Example 1 Acquisition of mangromycin D, E, F, G, H and I Starch 2.4%, glucose 0.1%, peptone (manufactured by Kyokuto Pharmaceutical Co., Ltd.) 0.3%, skipjack extract (Far East) 500 mL Erlenmeyer flask containing 100 mL of liquid medium (pH 7.0) consisting of 0.3% Yeast Extract (manufactured by Oriental Yeast Co., Ltd.) 0.5%, calcium bicarbonate 0.4% In 100 pieces of Lechevaleria sp. Cultured in a liquid medium. 1 ml each of K10-0216 (NITE BP-1114) was inoculated and cultured with shaking at 27 ° C. for 3 days.
  • the obtained seed culture solution was starch 5.0%, glycerol 0.5%, defatted wheat germ (Nisshin Pharma Co., Ltd.) 1.0%, dry yeast (JT Foods Co., Ltd.) 1%, bicarbonate 100 mL of a 500 mL Erlenmeyer flask containing 100 mL of a liquid medium (pH 7.0) consisting of 0.5% calcium was inoculated into 1 mL each and cultured at 27 ° C. for 8 days with shaking.
  • a liquid medium pH 7.0
  • the crude purified product 2 is dissolved in a small amount of methanol and is eluted stepwise in methanol-water system using ODS (Fuji Silysia Chemical Co., Ltd.) open column chromatography (methanol concentration 0%, 20%, 30%, 40%). 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%) to obtain a 50% to 80% fraction containing crude mangromycin D (crude product 6).
  • ODS Fluji Silysia Chemical Co., Ltd.
  • the crude product 6 was dissolved in methanol, injected into an octadecylsilyl column (Inertsil ODS-4, ⁇ 14 ⁇ 250 mm, flow rate 6.5 mL / min, detection 254 nm) by high performance liquid chromatography, and eluted with 15% acetonitrile water. . A peak around a retention time of 13 minutes was collected and concentrated under reduced pressure to obtain 70 mg of mangromycin D as a white powder.
  • the crude product 3 was dissolved in a small amount of methanol and injected into an octadecylsilyl column (Inertsil ODS-4, ⁇ 14 ⁇ 250 mm, flow rate 9.3 mL / min, detection 254 nm) by high performance liquid chromatography, and 40% acetonitrile water was used. Eluted. A peak with a retention time of around 16 minutes was collected and concentrated under reduced pressure to obtain 11 mg of mangromycin E as a white powder.
  • an octadecylsilyl column Inertsil ODS-4, ⁇ 14 ⁇ 250 mm, flow rate 9.3 mL / min, detection 254 nm
  • the crudely purified product 4 is dissolved in a small amount of methanol, and is eluted stepwise with methanol-water system using ODS (Fuji Silysia Chemical Co., Ltd.) open column chromatography (methanol concentration 0%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%) to obtain a 50% fraction (crude product 7) containing mangromycin F and G.
  • ODS Fluji Silysia Chemical Co., Ltd.
  • open column chromatography methanol concentration 0%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%
  • Crude product 7 was dissolved in methanol, injected into an octadecylsilyl column (Inertsil ODS-4, ⁇ 10 ⁇ 250 mm, flow rate 4.7 mL / min, detection 254 nm) by high performance liquid chromatography, and eluted with 10% acetonitrile water. .
  • a peak at a retention time of about 17 minutes was fractionated, and 20 mg of mangromycin F was collected as a white powder by vacuum concentration, and a peak at around 19 minutes was fractionated, and 9 mg of mangromycin G was obtained as a white powder by vacuum concentration.
  • the crude product 5 is dissolved in a small amount of methanol, and is eluted stepwise in methanol-water system using ODS (Fuji Silysia Chemical Co., Ltd.) open column chromatography (methanol concentration 0%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%) to obtain a 50% fraction (crude product 8) containing mangromycin H and I.
  • ODS Fluji Silysia Chemical Co., Ltd.
  • open column chromatography methanol concentration 0%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%
  • Crude product 8 was dissolved in methanol, injected into an octadecylsilyl column (Inertsil ODS-4, ⁇ 10 ⁇ 250 mm, flow rate 4.7 mL / min, detection 254 nm) by high performance liquid chromatography, and eluted with 10% acetonitrile water. . A peak around a retention time of 17 minutes was collected, and 20 mg of mangromycin F was obtained as a white powder by concentration under reduced pressure.
  • octadecylsilyl column Inertsil ODS-4, ⁇ 10 ⁇ 250 mm, flow rate 4.7 mL / min, detection 254 nm
  • the crude product 8 was dissolved in methanol, and injected into an octadecylsilyl column (Inertsil ODS-4, ⁇ 10 ⁇ 250 mm, flow rate 4.7 mL / min, detection 254 nm) by high performance liquid chromatography, and 20% acetonitrile water was used. Eluted. A peak around a retention time of 25 minutes was collected and concentrated under reduced pressure to obtain 2.3 mg of mangromycin I as a white powder.
  • octadecylsilyl column Inertsil ODS-4, ⁇ 10 ⁇ 250 mm, flow rate 4.7 mL / min, detection 254 nm
  • Mangromycin I (1) Property: white powder or pale yellow powder (2) molecular weight: 408 (3) Molecular formula: C 22 H 32 O 7 [M + H] + theoretical value (m / z) 409.2226, measured value (m / z) 409.2222 by high resolution mass spectrometry (4) Ultraviolet absorption maximum (in methanol) ⁇ max ( ⁇ ): 246 (490) (5) Infrared absorption maximum ⁇ max (KBr tablet): Maximum absorption at 3431, 1651 cm ⁇ 1 (6) Proton nuclear magnetic resonance spectrum: chemical shift (ppm) in deuterated methanol is shown in Table 6.
  • mangromycin D, E, F, G, H and I which have obtained various physicochemical properties, have been reported so far, mangromycin D, E, F, G, H and I is considered a novel substance.
  • Example 2 Erase Activity Test for DPPH (1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl) Free Radical Mangomycin D, E, F, G, H and I obtained in Example 1 and International Publication WO2013 /
  • the scavenging activity against DPPH free radicals of mangromycin A, B and C obtained according to 031239 was examined as follows.
  • a DPPH solution was prepared using ethanol so that the DPPH had a concentration of 100 ⁇ M.
  • a test solution was prepared using methanol so that each mangromycin had a concentration of 100 ⁇ M.
  • each well of a 96-well plate 80 ⁇ l of ethanol was dispensed into each well of a 96-well plate, 10 ⁇ l of DPPH solution, 10 ⁇ l of the test solution was added, and the 96-well plate was shielded from light with aluminum foil and left at room temperature for 20 minutes. Thereafter, each well was measured at 517 nm, and the radical scavenging activity of mangromycin was measured.
  • ⁇ -tocopherol (VE) having a final concentration of 10 ⁇ M, which is an antioxidant, was used.
  • the DPPH free radical scavenging activity of mangromycins and VE was as shown in FIG. From this result, it was shown that all the mangromycins of the present invention have DPPH free radical scavenging activity.
  • Example 3 Erase activity test against NO produced by RAW264.7 cells
  • Mouse-macrophage cell line RAW264.7 (hereinafter referred to as “RAW264.7 cells”) was placed in a 96-well plate, and Dulbecco's modified Eagle medium (hereinafter referred to as “RAW264.7 cells”).
  • DMEM medium Dulbecco's modified Eagle medium
  • serum-free, phenol red free serum-free, phenol red free
  • the medium was extracted from the wells, washed twice with 200 ⁇ l of PBS, 196 ⁇ l of DMEM medium was added, and 2 ⁇ l of 0.5 mg / mL LPS and 1000 U / mL IFN- ⁇ diluted with DMEM medium were added.
  • a blank was prepared by adding 4 ⁇ l of DMEM medium without adding LPS and IFN- ⁇ stimulants.
  • KRP buffer solution Krebs-Ringer phosphate buffer solution
  • DAF-2 Krebs-Ringer phosphate buffer solution
  • DAF-2 each mangromycin dissolved in DMSO (mangromycin D, E, F, G, H or I obtained in Example 1 or international publication)
  • Mangomycin A, B and C obtained according to publication WO2013 / 031239 (both final concentrations 100 ⁇ M)
  • L-NMMA dissolved in DMSO final concentration 100 ⁇ M
  • DMSO alone was added, and further 37 ° C., 5% CO 2 Incubated for 2 hours in incubator.
  • the final concentration of DMSO was adjusted to a final concentration of 0.5%.
  • 100 ⁇ l of the supernatant was transferred to a black 96 well plate for fluorescence measurement, excited at a wavelength of 495 nm, and measured at a wavelength of 515 nm.
  • NO erasing activity 100 ⁇ (SB) / (LB) ⁇ 100 (S: Absorbance of test substance and well added with LPS / IFN- ⁇ , B: Absorbance of well added with DMSO (blank), L: Absorbance of well added with LPS / IFN- ⁇ (drug-free group))
  • FIG. 2 shows the results of the NO production inhibition rate for the mangromycin addition group in this experiment.
  • Example 4 Toxicity test of mangromycins to RAW264.7 cells
  • a mouse macrophage cell line RAW264.7 is prepared in a 96-well plate to 5 ⁇ 10 5 cells / ml in DMEM medium, seeded with 200 ⁇ L, and 37 The cells were cultured for 16 hours at 5 ° C. in a 5% CO 2 incubator. After culturing, each mangromycin (mangromycin D, E, F, G, H or I obtained in Example 1 or mangromycin A, B and C obtained according to International Publication WO2013 / 031239) in DMSO.
  • each mangromycin solution prepared by lysis and dilution with DMEM medium to a final concentration of 100 ⁇ M was added to each well and incubated in a 37 ° C., 5% CO 2 incubator for 24 hours.
  • DMSO was prepared to a final concentration of 0.5%.
  • a DMEM medium containing 0.5% DMSO containing no test substance (mangromycin) was added, and the blank was only a DMEM medium containing 0.5% DMSO containing no cells.
  • 20 ⁇ L of Alamar Blue reagent (Sigma-Aldrich, USA) was added, mixed, and cultured at 37 ° C. in a 5% CO 2 incubator for 24 hours.
  • the absorbance of each well was measured at two wavelengths (570 nm and 600 nm) using a microplate reader.
  • the mangromycins of the present invention do not exhibit an inhibitory effect on the growth of RAW264.7 cells, and have radical scavenging activity against DPPH free radicals and scavenging activity against NO. It was shown to have a very excellent effect as an anti-inflammatory drug for diseases such as NO production.

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Abstract

　本発明は、炎症惹起などの既存のフリーラジカル産生抑制剤／消去剤における問題を解決する新規のフリーラジカル消去剤を提供することを課題とする。具体的には、本発明は、新規物質マングロマイシンＤ、マングロマイシンＥ、マングロマイシンＦ、マングロマイシンＧ、マングロマイシンＨ及びマングロマイシンＩ、マングロマイシン類を有効成分として含有するフリーラジカルを消去剤、並びに、マングロマイシン類を有効成分として含有する過剰なフリーラジカルの発生が発症又は増悪に寄与する疾患又は障害の治療薬又は予防薬等に関する。

Description

新規マングロマイシン化合物及びそれを含有するフリーラジカル消去剤 クロスリファレンス
　本出願は、２０１３年８月２３日に日本国において出願された特願２０１３－１７３４８９号に基づく優先権を主張するものであり、当該出願に記載された内容は全て、参照によりそのまま本明細書に援用される。また、本願において引用した全ての特許、特許出願及び文献に記載された内容は全て、参照によりそのまま本明細書に援用される。
　本発明は、新規マングロマイシン化合物、その製造方法、及びマングロマイシン類を有効成分として含有する医薬組成物及びフリーラジカル消去剤に関する。
　フリーラジカルは、生体内においてミトコンドリア電子伝達系、ミクロソーム電子伝達系等で発生する他、大気汚染物質、放射線、薬剤、紫外線、タバコなどの外的要因によって発生することが知られている。好中球等の食細胞が産生するスーパーオキシドやそれにより派生するフリーラジカルは、殺菌作用や抗腫瘍効果等の生体防御における重要な役割を果たす一方、虚血再灌流障害や自己免疫疾患などの炎症反応において組織障害を引き起こすと考えられている。生体内で発生したスーパーオキシドは、酵素的／非酵素的還元により、より反応性の高い活性酸素種を生み出し、急性呼吸窮迫症候群、潰瘍性大腸炎、急性胃粘膜病変、ベーチェット病等の病変形成に寄与する。活性酸素種は血管内皮、平滑筋細胞、消化管粘膜上皮などでも産生され、多くの生体内分子を標的として多くの病態・疾患と関連することが報告されている。
　例えば、免疫担当細胞の一つであるマクロファージは、多量の硝酸塩を産生し、フリーラジカルの一種である一酸化窒素（以下「ＮＯ」という）を生体内で生成することが知られている。また、ＮＯは循環器系分野では血管内皮細胞から放出される弛緩作用を有する物質であることが知られている。
　ＮＯは、Ｌ－アルギニンを基質として一酸化窒素合成酵素（以下、「ＮＯＳ」という）によって生成される。
　生体内ＮＯの作用には二面性があり、産生量が多すぎても少なすぎても疾病に結びつくと考えられている。例えば、敗血症では、過剰なＮＯ産生によって血管が拡張され、血圧が急激に低下することによりショック状態（敗血症性ショック）を引き起こすことが知られている。また、過剰に産生したＮＯは、マクロファージが産生する活性酸素と反応して強力な酸化剤となり、神経細胞障害や動脈硬化を引き起こす原因となったり、マクロファージ等の免疫細胞自身を破壊したりする可能性も指摘されている。
　過剰に産生された生体内ＮＯを低減する手段として、ＮＯＳを不活性化する阻害剤やＮＯと速やかに反応する消去剤等の使用が検討されている。このようなＮＯＳ阻害剤としては、Ｎω－モノメチル－Ｌ－アルギニン、Ｎω－ジメチル－Ｌ－アルギニン、Ｎω－ニトロ－Ｌ－アルギニン等のＬ－アルギニン誘導体やアミノグアニジンやＳ－エチルイソチオウレア等のアルギニン類似化合物が報告されている。また、ＮＯ消去剤としては、例えば、ジエチレントリアミン５酢酸やデスフェリオキサミン等の金属錯体が報告されている。
　特許文献１には、マングロマイシン（Ｍａｎｇｒｏｍｉｃｉｎ）Ａ、Ｂ及びＣが記載されており、そのようなマングロマイシンが抗トリパノソーマ活性を有することが開示されている。
国際公開公報ＷＯ２０１３／０３１２３９
　しかしながら、上記のようなＮＯＳ阻害剤を投与した臨床的な試みにおいては、症状の改善にはつながるものの、血圧の上昇、臓器の血流低下・障害等の様々な副作用を引き起こすという問題があることが分かった。また、上記のようなＮＯ消去剤であるジエチレントリアミン５酢酸の鉄錯体は、皮膚などに付着すると人によっては炎症を起こす副作用が知られている。よって、本発明は、上述の従来技術の問題を解決するために新規のフリーラジカル消去剤を提供することを課題とする。
　本発明者らは種々の化合物の探索を行い、その生物活性について鋭意検討を行った結果、新規物質マングロマイシンＤ、マングロマイシンＥ、マングロマイシンＦ、マングロマイシンＧ、マングロマイシンＨ及びマングロマイシンＩがフリーラジカルを消去する活性を有することを明らかにするに至った。また、本発明者らは、既に報告したマングロマイシンＡ、Ｂ及びＣについても同様の検討を行い、これらの化合物が同様にフリーラジカルを消去する活性を有することを見出した。（以下、マングロマイシンＡ～Ｉを総称して「マングロマイシン類」ということがある。）
　本発明はかかる知見に基づきなされたものであり、よって、一態様において本発明は、レシェバリエリア・エスピー（Ｌｅｃｈｅｖａｌｉｅｒｉａ　ｓｐ．）Ｋ１０－０２１６株の培養液から単離された、それぞれ下記式（Ｉ）～（ＶＩ）で表わされる、新規化合物マングロマイシンＤ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ及びＩ又はそのエステル誘導体あるいはそれらの塩又は水和物を提供するものである。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000001
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000002
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000003
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000004
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000005
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000006
　また、別の態様において、本発明は、前記式（Ｉ）～（ＶＩ）のいずれか一つで表わされるマングロマイシン類を生産する能力を有する放線菌に属する微生物を培地で培養し、培養物中前記式（Ｉ）～（ＶＩ）のいずれか一つで表わされるマングロマイシン類を蓄積せしめ、該培養物から前記式（Ｉ）～（ＶＩ）のいずれか一つで表わされるマングロマイシン類を採取することを特徴とする、前記式（Ｉ）～（ＶＩ）のいずれか一つで表わされるマングロマイシン類の製造方法に関する。
　あるいは、本発明は、前記式（Ｉ）～（ＶＩ）のいずれか１つで表わされるマングロマイシン類若しくはそのエステル誘導体又はそれらの塩若しくは水和物を有効成分として含有する医薬組成物に関する。
　更に、本発明は、前記式（Ｉ）～（ＶＩ）、並びに、下記式（ＶＩＩ）、（ＶＩＩＩ）、及び（ＩＸ）のいずれか１つで表わされるマングロマイシン類若しくはそのエステル誘導体又はそれらの塩若しくは水和物を有効成分として含有する一酸化窒素消去剤に関する。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000007
　別の態様において、本発明は、前記式（Ｉ）～（ＶＩ）並びに（ＶＩＩ）、（ＶＩＩＩ）、及び（ＩＸ）のいずれか１つで表わされるマングロマイシン類若しくはそのエステル誘導体又はそれらの塩若しくは水和物を有効成分として含有する過剰なＮＯ産生が発症又は増悪化に寄与する疾患又は障害の治療薬又は予防薬に関する。
　本明細書において、マングロマイシンＤとは、以下の物性を有する化合物である：
（１）性状：白色粉末または淡黄色粉末
（２）分子量：４１０
（３）分子式：Ｃ２２Ｈ３４Ｏ７
（４）高分解能質量分析による［Ｍ＋Ｈ］＋　理論値（ｍ／ｚ）４１１．２３８３、実測値（ｍ／ｚ）４１１．２３９２
（５）比旋光度：［α］Ｄ ２４．８＝＋２７．９６（ｃ＝０．１、メタノール）
（６）紫外部吸収極大（メタノール中）λｍａｘ（ε）：２５１（１８０６）
（７）赤外部吸収極大νｍａｘ（ＫＢｒ錠）：３４２１，１６５５ｃｍ－１に極大吸収を有する
（８）１Ｈ　ＮＭＲ（重メタノール中）δ　ｐｐｍ：２．１２（１Ｈ，ｔ），４．５６（１Ｈ，ｄ），２．３３（１Ｈ，ｍ），４．１６（１Ｈ，ｄｄ），２．９６（１Ｈ，ｍ），１．６８（１Ｈ，ｍ），１．８４（１Ｈ，ｍ），３．５０（１Ｈ，ｍ），３．３８（１Ｈ，ｄｄ），２．３０（１Ｈ，ｍ），１．５４（１Ｈ，ｍ），１．６４（１Ｈ，ｄｄ），１．１８（１Ｈ，ｄｄｄ），２．３８（１Ｈ，ｍ），１．９３（１Ｈ，ｄｄ），２．７１（１Ｈ，ｍ），１．４８（２Ｈ，ｓ），１．３０（１Ｈ，ｍ），１．４４（１Ｈ，ｍ），０．８８（３Ｈ，ｔ），３．３０（１Ｈ，ｍ），３．５０（１Ｈ，ｍ），１．００（３Ｈ，ｄ），１．２６（３Ｈ，ｓ）
（９）１３Ｃ　ＮＭＲ（重メタノール中）δ　ｐｐｍ：１６４．４，１０１．８，１６３．６，４１．４，７１．２，４５．５，２１０．１，４９．２，３３．０，６６．３，８１．２，３５．０，４７．９，８１．２，３４．５，１８．１，３２．９，１９．１，１３．４，６２．３，１４．６，２４．０
（１０）溶解性：エタノール及びメタノールに易溶、水に難溶。
　または、本明細書におけるマングロマイシンＤは、以下の式Ｉで表わされる構造を有する化合物であってもよい。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000008
　本明細書において、マングロマイシンＥとは、以下の物性を有する化合物である：
（１）性状：白色粉末または淡黄色粉末
（２）分子量：３９２
（３）分子式：Ｃ２２Ｈ３２Ｏ６
（４）高分解能質量分析による［Ｍ＋Ｈ］＋　理論値（ｍ／ｚ）３９３．２２７７、実測値（ｍ／ｚ）３９３．２２７７
（５）比旋光度：［α］Ｄ ２５．３＝＋３０．４８（ｃ＝０．１、メタノール）
（６）紫外部吸収極大（メタノール中）λｍａｘ（ε）：２３１（３１４）
（７）赤外部吸収極大νｍａｘ（ＫＢｒ錠）：３４５１，１６５１ｃｍ－１に極大吸収を有する
（８）１Ｈ　ＮＭＲ（重メタノール中）δ　ｐｐｍ：４．６３（１Ｈ，ｄｄ），２．８３（１Ｈ，ｄｄｄ），４．９４（１Ｈ，ｄｄｄ），２．５１（１Ｈ，ｍ），３．７１（１Ｈ，ｔ），６．７１（１Ｈ，ｄｑ），４．７９（１Ｈ，ｄｄ），３．６０（１Ｈ，ｄｄ），２．４２（１Ｈ，ｍ），１．４５（１Ｈ，ｄｄ），２．１０（１Ｈ，ｄｄ）１．２８（１Ｈ，ｍ），２．５６（１Ｈ，ｍ），１．６７（１Ｈ，ｍ），２．４５（１Ｈ，ｍ），１．３２（１Ｈ，ｍ），１．９７（１Ｈ，ｍ），１．３８（１Ｈ，ｍ），１．４８（１Ｈ，ｍ），０．９８（３Ｈ，ｄ），１．７９（３Ｈ，ｄ），１．２０（３Ｈ，ｄ），１．４２（３Ｈ，ｄ）
（９）１３Ｃ　ＮＭＲ（重メタノール中）δ　ｐｐｍ：１７２．２，５５．２，２０３．６，５０．９，７７．８，３８．４，２０４．３，１３６．７，１４８．０，６９．１，８３．５，３７．６，５０．５，８３．３，３３．２，２１．４，２８．５，２１．１，１４．３，１１．８，１８．７，２５．５
（１０）溶解性：エタノール及びメタノールに易溶、水に難溶。
　または、本明細書におけるマングロマイシンＥは、以下の式ＩＩで表わされる構造を有する化合物であってもよい。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000009
　本明細書において、マングロマイシンＦとは、以下の物性を有する化合物である：
（１）性状：白色粉末または淡黄色粉末
（２）分子量：３９６
（３）分子式：Ｃ２１Ｈ３２Ｏ７
（４）高分解能質量分析による［Ｍ＋Ｈ］＋　理論値（ｍ／ｚ）３９７．２２２６、実測値（ｍ／ｚ）３９７．２２１８
（５）比旋光度：［α］Ｄ ２５．３＝＋５１．５６（ｃ＝０．１、メタノール）
（６）紫外部吸収極大（メタノール中）λｍａｘ（ε）：２５０（１３８８）
（７）赤外部吸収極大νｍａｘ（ＫＢｒ錠）：３４３３，１６５１ｃｍ－１に極大吸収を有する
（８）１Ｈ　ＮＭＲ（重メタノール中）δ　ｐｐｍ：２．０７（１Ｈ，ｍ），４．３４（１Ｈ，ｍ），２．３６（１Ｈ，ｍ），４．３５（１Ｈ，ｄｄ），３．１０（１Ｈ，ｍ），１．７８（１Ｈ，ｍ），１．８１（１Ｈ，ｍ），３．６４（１Ｈ，ｍ），３．５４（１Ｈ，ｍ），２．４０（１Ｈ，ｍ），１．６８（１Ｈ，ｄｄ），１．７３（１Ｈ，ｍ），１．２７（１Ｈ，ｄｄｄ），２．４９（１Ｈ，ｄｄｄ），２．０４（１Ｈ，ｍ），２．８６（１Ｈ，ｄｄｄ），１．６４（２Ｈ，ｍ），３．５０（１Ｈ，ｍ），３．６７（１Ｈ，ｍ），１．０３（３Ｈ，ｔ），１．０７（３Ｈ，ｄ），１．３５（１Ｈ，ｓ）
（９）１３Ｃ　ＮＭＲ（重メタノール中）δ　ｐｐｍ：１６９．７，１０３．８，１６８．０，４５．９，７４．１，４７．８，２１３．７，５０．１，３５．１，６９．４，８３．８，３７．７，５０．２，８４．２，３６．５，２０．０，２６．２，６５．３，１２．３，１４．９，２５．４
（１０）溶解性：エタノール及びメタノールに易溶、水に難溶。
　または、本明細書におけるマングロマイシンＦは、以下の式ＩＩＩで表わされる構造を有する化合物であってもよい。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000010
　本明細書において、マングロマイシンＧとは、以下の物性を有する化合物である：
（１）性状：白色粉末または淡黄色粉末
（２）分子量：４１０
（３）分子式：Ｃ２２Ｈ３４Ｏ７
（４）高分解能質量分析による［Ｍ＋Ｈ］＋　理論値（ｍ／ｚ）４１１．２３８３、実測値（ｍ／ｚ）４１１．２３７５
（５）比旋光度：［α］Ｄ ２５．３＝＋２９．１６（ｃ＝０．１、メタノール）
（６）紫外部吸収極大（メタノール中）λｍａｘ（ε）：２５１（１２３２）
（７）赤外部吸収極大νｍａｘ（ＫＢｒ錠）：３４２５，１６５１ｃｍ－１に極大吸収を有する
（８）１Ｈ　ＮＭＲ（重メタノール中）δ　ｐｐｍ：２．１３（１Ｈ，ｍ），４．７３（１Ｈ，ｄｄ），２．１５（１Ｈ，ｄｄ），４．４６（１Ｈ，ｄｄ），２．７２（１Ｈ，ｍ），１．９０（１Ｈ，ｍ）、２．３２（１Ｈ，ｍ），３．５８（１Ｈ，ｄｄｄ），３．３３（１Ｈ，ｍ），２．６０（１Ｈ，ｍ），１．４４（１Ｈ，ｍ），２．１５（１Ｈ，ｍ），１．３７（１Ｈ，ｍ），２．５６（１Ｈ，ｍ），２．０５（１Ｈ，ｄｔ），２．７３（１Ｈ，ｍ），１．６１（１Ｈ，ｍ），１．５７（１Ｈ，ｍ），１．３８（１Ｈ，ｍ），１．５３（１Ｈ，ｍ），０．９６（３Ｈ，ｔ），３．４７（１Ｈ，ｄ），３．９６（１Ｈ，ｄ），１．０３（３Ｈ，ｄ），１．０９（３Ｈ，ｄ）
（９）１３Ｃ　ＮＭＲ（重メタノール中）δ　ｐｐｍ：１６９．１，１０３．０，１６７．９，４４．２，７３．９，４４．０，２１２．４，４３．６，３８．６，６９．２，８２．１，３６．９，４１．８，８７．１，３４．２，１８．９，４３．２，２１．３，１４．４，６５．９，１５．３，１３．７
（１０）溶解性：エタノール及びメタノールに易溶、水に難溶。
　または、本明細書におけるマングロマイシンＧは、以下の式ＩＶで表わされる構造を有する化合物であってもよい。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000011
　本明細書において、マングロマイシンＨとは、以下の物性を有する化合物である：
（１）性状：白色粉末または淡黄色粉末
（２）分子量：３８０
（３）分子式：Ｃ２１Ｈ３２Ｏ６
（４）高分解能質量分析による［Ｍ＋Ｈ］＋　理論値（ｍ／ｚ）３８１．２２７７、実測値（ｍ／ｚ）３８１．２２７２
（５）比旋光度：［α］Ｄ ２５．３＝＋３３．８０（ｃ＝０．１、メタノール）
（６）紫外部吸収極大（メタノール中）λｍａｘ（ε）：２５１（１５２２）
（７）赤外部吸収極大νｍａｘ（ＫＢｒ錠）：３４３０，１６５１ｃｍ－１に極大吸収を有する
（８）１Ｈ　ＮＭＲ（重メタノール中）δ　ｐｐｍ：２．１３（１Ｈ，ｄｄ），４．７９（１Ｈ，ｄｄ），２．３６（１Ｈ，ｍ），４．４８（１Ｈ，ｄｄ），２．７２（１Ｈ，ｍ），１．７６（１Ｈ，ｍ），２．４２（１Ｈ，ｍ），３．５７（１Ｈ，ｄｄｄ），３．４０（１Ｈ，ｍ）、２．４４（１Ｈ，ｍ），１．６４（１Ｈ，ｍ），１．７０（１Ｈ，ｍ），１．２５（１Ｈ，ｄｄｄ），２．４８（１Ｈ，ｄｄｄ），２．０４（１Ｈ，ｄｔ），２．８８（１Ｈ，ｄｄｄ），１．６４（１Ｈ，ｍ），１．７０（１Ｈ，ｍ），１．０３（３Ｈ，ｔ），１．０６（３Ｈ（ｄ），１．３４（３Ｈ，ｓ），１．０５（３Ｈ，ｄ）
（９）１３Ｃ　ＮＭＲ（重メタノール中）δ　ｐｐｍ：１６９．６，１０２．８，１６９．３，４６．１，７３．７，４４．３，２１２．８，４９．３，３７．７，６９．２，８２．０，３７．０，４９．４，８３．８，３６．５，１９．５，２５．８，１１．９，１５．５，２５．３，１５．５
（１０）溶解性：エタノール及びメタノールに易溶、水に難溶。
　または、本明細書におけるマングロマイシンＨは、以下の式Ｖで表わされる構造を有する化合物であってもよい。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000012
　本明細書において、マングロマイシンＩとは、以下の物性を有する化合物である：
（１）性状：白色粉末または淡黄色粉末
（２）分子量：４０８
（３）分子式：Ｃ２２Ｈ３２Ｏ７
（４）高分解能質量分析による［Ｍ＋Ｈ］＋　理論値（ｍ／ｚ）４０９．２２２６、実測値（ｍ／ｚ）４０９．２２２２
（５）紫外部吸収極大（メタノール中）λｍａｘ（ε）：２４６（４９０）
（６）赤外部吸収極大νｍａｘ（ＫＢｒ錠）：３４３１，１６５１ｃｍ－１に極大吸収を有する
（８）１Ｈ　ＮＭＲ（重メタノール中）δ　ｐｐｍ：２．１３（１Ｈ，ｄｄ），４．９３（１Ｈ，ｄ），２．１１（１Ｈ，ｄｄ），４．７８（１Ｈ，ｄｄ），４．２０（１Ｈ，ｄ），３．２０（１Ｈ，ｄ），３．４０（１Ｈ，ｄ），２．５６（１Ｈ，ｍ），１．６３（１Ｈ，ｄｄ），１．８３（１Ｈ，ｄｄ），１．２８（１Ｈ，ｄｄｄ），２．３８（１Ｈ，ｍ），２．０８（１Ｈ，ｄｄｄ），２．９０（１Ｈ，ｄｄｄ），５．６８（１Ｈ，ｄ），６．４４（１Ｈ，ｄ），１．７０（１Ｈ，ｄｄ），１．７３（１Ｈ，ｄｄ），１．０３（３Ｈ，ｔ），３．２４（３Ｈ，ｓ），１．０５（３Ｈ，ｄ），１．３８（３Ｈ，ｓ）
（９）１３Ｃ　ＮＭＲ（重メタノール中）δ　ｐｐｍ：１６９．２，１６８．０，１６７．５，４７．９，７３．８，４５．６，１９６．７，１４７．６，８２．３，７９．５，８０．１，３７．５，４８．０，８５．０，３７．３，１９．４，１２６．６，２５．６，１１．８，５７．０，１３．７，２４．５
（１０）溶解性：エタノール及びメタノールに易溶、水に難溶。
　または、本明細書におけるマングロマイシンＩは、以下の式ＶＩで表わされる構造を有する化合物であってもよい。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000013
　本明細書において、マングロマイシンＡ、Ｂ及びＣとは、それぞれ順に、上述の式（ＶＩＩ）、（ＶＩＩＩ）及び（ＩＸ）で表わされる化合物である。より具体的には、本明細書において、マングロマイシンＣとは、以下の物性を有する化合物である：
（１）性状：白色粉末または淡黄色粉末
（２）分子量：３９４
（３）分子式：Ｃ２２Ｈ３４Ｏ６
（４）高分解能質量分析による［Ｍ＋Ｈ］＋理論値（ｍ／ｚ）３９５．２４３４、実測値（ｍ／ｚ）３９５．２４１３
（５）比旋光度：［α］Ｄ ２５．３＝２３．２４°（ｃ＝０．１、メタノール）
（６）紫外部吸収極大（メタノール中）λｍａｘ（ε）：２５１（５５９５）
（７）赤外部吸収極大νｍａｘ（ＫＢｒ錠）：３４３０，１６５７ｃｍ－１に極大吸収を有する
（８）１Ｈ　ＮＭＲ（重メタノール中）δ　ｐｐｍ：４．７８（１Ｈ，ｄ），２．１４（１Ｈ），２．０２（１Ｈ，ｄｄ），２．８５（１Ｈ，ｄｄｄｄ），１．２５（１Ｈ，ｄｄｄ），２．４６（１Ｈ），１．６８（２Ｈ，ｍ），２．７４（１Ｈ，ｍ），１．７２（１Ｈ，ｄｄｄ），２．４３（１Ｈ），３．５６（１Ｈ，ｄｄｄ），３．３９（１Ｈ），２．４３（１Ｈ），２．３８（１Ｈ），４．４６（１Ｈ），１．６１（２Ｈ，ｍ），１．３８（１Ｈ），１．５２（１Ｈ），０．９６（３Ｈ，ｔ），１．３４（３Ｈ，ｓ），１．０６（３Ｈ，ｄ），１．０４（３Ｈ，ｄ）
（９）１３Ｃ　ＮＭＲ（重メタノール中）δ　ｐｐｍ：７４．０，４３．９，１６７．３，１０３．７，１９．５，３６．５，８３．７，４９．９，４４．４，３７．６，６９．５，８１．９，３７．０，２１２．６，４４．２，１６９．２，３５．０，２１．２，１４．４，２５．２，１５．４
（１０）　ＨＭＢＣ　ｐｏｓｉｔｉｏｎ　（δ　ｐｐｍ）：　ｆｒｏｍ　Ｈ－１　（４．７８）　ｔｏ　Ｃ－３　（１６７．３），　Ｃ－１５　（４４．２），　Ｃ－１６　（１６９．２），　ａｎｄ　Ｃ－１’　（３５．０）；　ｆｒｏｍ　Ｈ－２　（２．１４）　ｔｏ　Ｃ－３　（１６７．３），　Ｃ－４　（１０３．７），　Ｃ－１５　（４４．２），　Ｃ－１’　（３５．０）　ａｎｄ　Ｃ－２’　（２１．２）；　ｆｒｏｍ　Ｈ２－５　（２．０２　ｏｒ　２．８５）　ｔｏ　Ｃ－４　（１０３．７），　Ｃ－７　（８３．７）　ａｎｄ　Ｃ－１６　（１６９．２）；　ｆｒｏｍ　Ｈ２－６　（１．２５　ｏｒ　２．４６）　ｔｏ　Ｃ－４　（１０３．７），　Ｃ－７　（８３．７）　ａｎｄ　Ｃ－７－Ｍｅ　（２５．２）；　ｆｒｏｍ　Ｈ２－８　（１．６８）　ｔｏ　Ｃ－７－Ｍｅ　（２５．２）　ａｎｄ　Ｃ－９－Ｍｅ　（１５．４）；　ｆｒｏｍ　Ｈ－９　（２．７４）　ｔｏ　Ｃ－７　（８３．７），　Ｃ－８　（４９．９），　Ｃ－１０　（８１．９），　ａｎｄ　Ｃ－１１　（６９．５）；　ｆｒｏｍ　Ｈ－１０　（３．３９）　ｔｏ　Ｃ－８　（４９．９），　Ｃ－１２　（３７．６）　ａｎｄ　Ｃ－９－Ｍｅ　（１９．５）；　ｆｒｏｍ　Ｈ－１１　（３．５６）　ｔｏ　Ｃ－１０　（８１．９）；　ｆｒｏｍ　Ｈ２－１２　（１．７２　ｏｒ　２．４３）　ｔｏ　Ｃ－１０　（８１．９），　Ｃ－１１　（６９．５），　Ｃ－１４　（２１２．６），　ａｎｄ　Ｃ－１３－Ｍｅ　（１５．４）；　ｆｒｏｍ　Ｈ－１３　（２．４３）　ｔｏ　Ｃ－１２　（３７．６）；　ｆｒｏｍ　Ｈ２－１５　（２．３８　ｏｒ　４．４６）　ｔｏ　Ｃ－１　（７４．０），　Ｃ－２　（４３．９）　ａｎｄ　Ｃ－１４　（２１２．６）；　ｆｒｏｍ　Ｈ３－７－Ｍｅ　（１．３４）　ｔｏ　Ｃ－６　（３６．５），　Ｃ－７　（８３．７）　ａｎｄ　Ｃ－８　（４９．９）；　ｆｒｏｍ　Ｈ３－９－Ｍｅ　（１．０６）　ｔｏ　Ｃ－８　（４９．９），　Ｃ－９　（４４．４）　ａｎｄ　Ｃ－１０　（８１．９）；　ｆｒｏｍ　Ｈ３－１３－Ｍｅ　（１．０４）　ｔｏ　Ｃ－１２　（３７．６），　Ｃ－１３　（３７．０）　ａｎｄ　Ｃ－１４　（２１２．６）；　ｆｒｏｍ　Ｈ２－１’　（１．６１）　ｔｏ　Ｃ－１　（７４．０），　Ｃ－２　（４３．９），　Ｃ－３　（１６７．３），　ａｎｄ　Ｃ－２’　（２１．１）；　ｆｒｏｍ　Ｈ２－２’　（１．３８　ｏｒ　１．５２）　ｔｏ　Ｃ－２　（４３．９），　Ｃ－１’　（３５．０）　ａｎｄ　Ｃ－３’　（１４．４）　；　ｆｒｏｍ　Ｈ３－３’　（１．０４）　ｔｏ　Ｃ－１’　（３５．０）　ａｎｄ　Ｃ－２’　（２１．１）
（１１）溶解性：クロロホルム、ジクロロメタン、エタノール、メタノールに易溶、水に難溶。
　本明細書において、本発明の式（Ｉ）～（ＩＸ）で表わされる化合物の塩とは、式（Ｉ）～（ＩＸ）で表わされる化合物に金属等が配位して形成する錯塩を意味する。また、本発明の式（Ｉ）～（ＩＸ）で表わされる化合物の水和物又は溶媒和物及び本発明の式（Ｉ）～（ＩＸ）で表わされる化合物の塩の水和物又は溶媒和物も本発明に包含される。好ましくは、本発明の式（Ｉ）～（ＩＸ）で表わされる化合物の塩、及び、本発明の式（Ｉ）～（ＩＸ）で表わされる化合物の水和物又は溶媒和物及び本発明の式（Ｉ）～（ＩＸ）で表わされる化合物の塩の水和物又は溶媒和物は、薬理学的に許容されるものである。また、本発明の式（Ｉ）～（ＩＸ）で表わされる化合物又はその塩は結晶であってもよいし、非晶体であってもよい。
　本発明の化合物は、上記化合物の他、これらの化合物の薬理学的に許容されるエステル誘導体を包含する。ここで、「薬理学的に許容されるエステル誘導体」は、生体内において代謝されて、本願発明の化合物を与える基を含む化合物であって、医薬として体内に投与することが許容可能なエステルのことである。本明細書において、エステルは、エステル結合した化合物の他、アミド結合した化合物を含む。エステルは、生体内のエステラーゼにより分解されて活性型の化合物を与えてもよい。例えば、エステルとしては、置換され又は置換されていない、低級アルキルエステル、低級アルケニルエステル、低級アルキルアミノ低級アルキルエステル、アシルアミノ低級アルキルエステル、アシルオキシ低級アルキルエステル、アリールエステル、アリール低級アルキルエステル、アミド、低級アルキルアミド、水酸化アミドを挙げることができる。エステルとして、好ましくは、プロピオオン酸エステル又はアシルエステルである。
　本発明の化合物は不斉炭素を有することがあることから、光学異性体が存在することがある。本発明の化合物としては、右旋性（＋）又は左旋性（－）の何れの化合物であってもよいし、ラセミ体などのこれらの異性体の混合物であってもよい。また、本発明の化合物は、特に断らない限り、いずれの互変異性体、又は幾何異性体（例えば、Ｅ体、Ｚ体など）も含むものである。
　また、本発明において医薬組成物とは、その種類が特に限定されるものではなく、剤型としては、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、シロップ剤、懸濁剤、座剤、軟膏、クリーム剤、ゲル剤、貼付剤、吸入剤、注射剤等が挙げられる。これらの製剤は常法に従って調製することができる。また、液体製剤にあっては、用時、水又は他の適当な溶媒に溶解又は懸濁する形であってもよい。また錠剤、顆粒剤は周知の方法でコーティングしてもよい。注射剤の場合には、本発明の化合物を水に溶解させて調製されるが、必要に応じて生理食塩水或いはブドウ糖溶液に溶解させてもよく、また緩衝剤や保存剤を添加してもよい。経口投与用又は非経口投与用の任意の製剤形態で提供される。例えば、顆粒剤、細粒剤、散剤、硬カプセル剤、軟カプセル剤、シロップ剤、乳剤、懸濁剤又は液剤等の形態の経口投与用医薬組成物、静脈内投与用、筋肉内投与用、若しくは皮下投与用などの注射剤、点滴剤、経皮吸収剤、経粘膜吸収剤、点鼻剤、吸入剤、坐剤などの形態の非経口投与用医薬組成物として調製することができる。注射剤や点滴剤などは、凍結乾燥形態などの粉末状の剤形として調製し、用時に生理食塩水などの適宜の水性媒体に溶解して用いることもできる。
　本明細書において、「フリーラジカル」とは、１以上の不対電子対を有する原子又は分子を意味し、好ましくは生体内で発生し得るフリーラジカルである。本明細書におけるフリーラジカルとしては、例えば、スーパーオキシド（・Ｏ２ －）、ヒドロキシルラジカル（ＨＯ・）、ヒドロペルオキシルラジカル（ＨＯＯ・）、アルコキシルラジカル（ＬＯ・）、アルキルペルオキシルラジカル（ＬＯＯ・）、及び、一酸化窒素（ＮＯ）等のラジカル種、並びに、過酸化水素（Ｈ２Ｏ２）、一重項酸素（１Ｏ２）、ペルオキシナイトライト（ＯＮＯＯ－）、脂質ヒドロペルオキシド（ＬＯＯＨ）、次亜塩素酸（ＨＯＣｌ）、オゾン（Ｏ３）等のノンラジカル種を含む活性酸素分子種；並びに、塩素、ＤＰＰＨ（ジフェニルピクリルヒドラジド）を含み、好ましくは、一酸化窒素及びＤＰＰＨであり、より好ましくは、一酸化窒素である。
　本明細書において、フリーラジカル消去剤とは、フリーラジカルの消去を目的として使用される薬剤を意味する。別の態様において、本発明は式（Ｉ）～（ＶＩ）で表わされる化合物を有効成分として含有する医薬組成物を提供するものである。また、本発明の化合物は、それを必要とする患者に有効量を投与することにより、フリーラジカルの（過剰な）発生が発症又は増悪化に関係し又は寄与する疾患又は障害の治療方法又は予防方法に用いることができる。よって、より具体的には、本発明は式（Ｉ）～（ＩＸ）で表わされる化合物を有効成分として含有するフリーラジカルの（過剰な）発生が発症又は増悪化に関係し又は寄与する疾患又は障害の治療薬又は予防薬を提供するものである。あるいは、本発明は、フリーラジカルの（過剰な）発生が発症又は増悪化に関係し又は寄与する疾患又は障害の治療又は予防のための式（Ｉ）～（ＩＸ）で表わされる化合物の使用に関する。フリーラジカルの（過剰な）発生が発症又は増悪化に関係し又は寄与する疾患又は障害としては、例えば、脳梗塞、心筋梗塞、心不全、虚血性疾患、心虚血再灌流障害、肝虚血再灌流障害、脳虚血再灌流障害、消化管虚血再灌流障害、虚血再灌流障害、急性呼吸窮迫症候群、急性胃粘膜病変、ベーチェット病、白内障、ドライアイ、アルツハイマー病、パーキンソン病、老化、花粉症、口内炎、炎症、肺気腫、気管支喘息、腎不全、糸球体腎炎、ネフローゼ症候群、糖尿病性腎症、薬物性腎障害、閉塞性動脈硬化症、動脈硬化症、癌、逆流性食道炎、胃潰瘍、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、関節リウマチ、膠原病、自己免疫疾患、アルコール性肝疾患、非アルコール性脂肪性肝炎、及び神経変性疾患を挙げることができる。
　本発明のマングロマイシン類は、フリーラジカル消去作用を有することから、フリーラジカルの（過剰な）発生が発症又は増悪化に関係し又は寄与する疾患又は障害の治療又は予防に利用することができ、抗炎症作用等が期待される。即ち、本発明のマングロマイシン類は、フリーラジカル消去作用を有することから、抗炎症作用を有すると考えられ、各種炎症性疾患、各種アレルギー性疾患等の治療薬または予防に有効であると考えられる。
図１は、マングロマイシンＡ～ＩのＤＰＰＨフリーラジカルに対する消去活性（％）を示す。縦軸は、ＤＰＰＨフリーラジカル消去活性を１００％とした時の、各薬剤を添加した際のＤＰＰＨフリーラジカル消去活性の割合を示し、横軸は使用した薬剤（各マングロマイシン及びビタミンＥ（ＶＥ））を示す。 図２は、ＲＡＷ２６４．７細胞をＬＰＳ／ＩＦＮ－γで刺激することにより誘導されたＮＯの消去効果を示すグラフである。縦軸はコントロール（薬剤無添加）のＮＯの発生量を１００％とした時の、各薬剤を添加した際のＮＯ発生量を示す。横軸は、添加した各薬剤（左からマングロマイシンＡ，Ｂ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ及びＩ）を示し、横軸の「無添加」はＬＰＳ／ＩＦＮ－γで刺激したＲＡＷ２６４．７細胞に薬剤を無処置であった群を示す。
　本発明の上記式（Ｉ）～（ＶＩ）で表わされるマングロマイシン類は、マングロマイシン類を生産する能力を有する放線菌に属する微生物を培地で培養し、培養物中マングロマイシン類を蓄積せしめ、該培養物からマングロマイシン類を採取（分離・抽出・精製）することにより製造することができる。
　本発明のマングロマイシン類の製造方法において、「マングロマイシン類を生産する能力を有する放線菌に属する微生物」は、放線菌に属する菌であって、マングロマイシン類を生産する能力を有する微生物であれば特に限定されない。本発明のマングロマイシン類の製造方法に用いることのできる菌株には、上記菌株の他、その変異株をはじめ、放線菌に属するマングロマイシン類を生産する能力を有する菌のすべてが含まれる。微生物が「マングロマイシン類を生産する能力を有する放線菌に属する微生物」であるか否かは、例えば、以下の方法により決定することができる。スターチ２．４％、グルコース０．１％、ペプトン０．３％、カツオエキス０．３％、酵母エキス０．５％、炭酸水素カルシウム０．４％からなる液体培地（ｐＨ　７．０）１００ｍＬを含む５００ｍＬ容三角フラスコに、液体培地で培養した被験微生物１ｍＬを植菌し、２７℃で３日間振盪培養後、得られた種培養液を、スターチ５．０％、グリセロール０．５％、脱脂小麦胚芽１．０％、ドライ酵母１．０％、炭酸水素カルシウム０．５％からなる液体培地（ｐＨ７．０）１００ｍＬを含む５００ｍＬ容三角フラスコに、１ｍＬ植菌し、２７℃で８日間振盪培養することにより得られた培養物の中に、マングロマイシン類が存在すれば当該微生物はマングロマイシン類を生産する能力を有する放線菌に属する微生物であると決定することができる。好ましくは、マングロマイシン類を生産する能力を有する放線菌に属する微生物は、沖縄県西表島マングローブ土壌より分離された、レシェバリエリア・エスピー（Ｌｅｃｈｅｖａｌｉｅｒｉａ　ｓｐ．）Ｋ１０－０２１６株である。本微生物は、２０１１年７月２１日付にて、独立行政法人製品評価技術基盤機構　特許微生物寄託センター（千葉県木更津市かずさ鎌足２－５－８）に受託番号ＮＩＴＥ　ＢＰ－１１１４として寄託されている。
　本明細書において、「変異株」とは、人工的又は自然界における変異誘発刺激によりＬｅｃｈｅｖａｌｉｅｒｉａ　ｓｐ．Ｋ１０－０２１６株とは異なる菌学的性状又は遺伝子を有する株のことであり、このような変異株にはＬｅｃｈｅｖａｌｉｅｒｉａ　ｓｐ．　Ｋ１０－０２１６株から派生した菌株の他、Ｌｅｃｈｅｖａｌｉｅｒｉａ　ｓｐ．　Ｋ１０－０２１６株を派生させた元の菌株も含まれる。本明細書において、変異株は実際の派生の痕跡の有無を問うものではなく、例えば、Ｌｅｃｈｅｖａｌｉｅｒｉａ　ｓｐ．　Ｋ１０－０２１６株遺伝子（例えば、１６Ｓ　ｒＲＮＡ遺伝子）と高い相同性（例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上など）を有する遺伝子を有する菌株もまた変異株に含まれる。また、このような変異株は、マングロマイシン類の産生能を維持している限り、人工的に作製したものであるか、天然から採取したものであるかを問わない。
　マングロマイシン類を生産する能力を有する放線菌に属する微生物を培養するための培地には、栄養源として、放線菌の栄養源として使用し得るものを含有することができる。例えば、市販のペプトン、肉エキス、コーン・スティープ・リカー、綿実粉、落花生粉、大豆粉、酵母エキス、ＮＺ－アミン、カゼインの水和物、硝酸ソーダ、硝酸アンモニウム、硫酸アンモニウム等の窒素源、グリセリン、スターチ、グルコース、ガラクトース、マンノース等の炭水化物、あるいは脂肪等の炭素源、及び食塩、リン酸塩、炭酸カルシウム、硫酸マグネシウム等の無機塩を単独あるいは組み合わせて使用することができる。その他、培地には、必要に応じて微量の金属塩、消泡剤として動・植・鉱物油等を添加することもできる。これらのものは生産菌を利用したマングロマイシン類の生産の役だつものであればよく、公知の放線菌の培養材料はすべて用いることができる。
　また、マングロマイシン類を生産する能力を有する放線菌に属する微生物の培養は、生産菌が発育しマングロマイシン類を生産できる温度範囲（例えば、１０℃～４０℃、好ましくは、２５～３０℃）で数日～２週間振盪培養することにより行うことができる。培養条件は、本明細書の記載を参照しながら、使用するマングロマイシン類生産菌の性質に応じて適宜選択して行なうことができる。
　マングロマイシン類の採取は、培養液より酢酸エチル等の水不混和性の有機溶媒を用いて抽出することにより行うことができる。本抽出法に加え、脂溶性物質の採取に用いられる公知の方法、例えば吸着クロマトグラフィー、分配クロマトグラフィー、ゲル濾過クロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィーよりのかき取り、遠心向流分配クロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィー等を適宜組合せあるいは繰返すことによって純粋になるまで精製することができる。
　前記式（ＶＩＩ）、（ＶＩＩＩ）及び（ＩＸ）でそれぞれ表わされるマングロマイシンＡ、Ｂ及びＣは、前記レシェバリエリア・エスピー（Ｌｅｃｈｅｖａｌｉｅｒｉａ　ｓｐ．）Ｋ１０－０２１６株（受託番号　ＮＩＴＥ　ＢＰ－１１１４）を用いて、国際公開公報ＷＯ２０１３／０３１２３９に記載の方法に従って得ることができる。
　本発明の医薬組成物は、通常の薬学的に許容される担体を用いて、常法により製剤化することができる。本発明のマングロマイシン類を有効成分として含有する医薬組成物を製剤化するための剤型に制限はなく錠剤、丸剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤等の固形剤、溶液、懸濁液、乳剤などの液状製剤として経口的に、あるいは、静脈内、筋肉内、皮下などの注射剤、坐剤、貼付剤などとして非経口的に使用することができる。経口用固形製剤を調製する場合は、主薬に賦形剤、更に必要に応じて、結合剤、崩壊剤、滑沢剤等を加えた後、常法により溶剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤等とする。注射剤を調製する場合には、主薬に必要によりｐＨ調整剤、緩衝剤、安定化剤、可溶化剤等を添加し、常法により皮下又は静脈内用注射剤とすることができる。
　固形剤となす場合には澱粉、乳糖、グルコース、リン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、カルボキシメチルセルロースなどの賦形剤を用いることができ、必要であれば滑沢剤、崩壊剤、被覆剤、着色剤なども使用することができる。注射剤、及び液状製剤になす場合には安定化剤、溶液助剤、懸濁化剤、乳化剤、緩衝剤、保存剤などを含有させることができる。
　本発明のマングロマイシン類は、それを必要とする患者に有効量の本発明のマングロマイシン類を投与することを備える、フリーラジカルの（過剰な）発生が発症又は増悪化に関係し又は寄与する疾患又は障害の治療方法又は予防方法に使用することができる。例えば、本発明のマングロマイシン類を治療又は予防目的で使用する場合、本発明のマングロマイシン類を有効成分として含有する医薬組成物を、経口投与形態、又は注射剤、点滴剤等の非経口投与形態で投与することができる。本発明のマングロマイシン類を哺乳動物等に投与する場合、錠剤、散剤、顆粒剤、シロップ剤等として経口投与してもよいし、又は、注射剤、点滴剤として非経口的に投与してもよい。投与量は、症状、年齢、性別、体重、投与形態等により異なるが、例えば成人に経口的に投与する場合には、通常１日量は０．１－１０００ｍｇである。
　以下に実施例を挙げて本発明を具体的に説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。なお、本願全体を通して引用される全文献は参照によりそのまま本願に組み込まれる。
（実施例１）マングロマイシンＤ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ及びＩの取得
　スターチ２．４％、グルコース０．１％、ペプトン（極東製薬工業株式会社製）０．３％、カツオエキス（極東製薬工業株式会社製）０．３％、酵母エキス（オリエンタル酵母工業株式会社製）０．５％、炭酸水素カルシウム０．４％からなる液体培地（ｐＨ　７．０）１００ｍＬを含む５００ｍＬ容三角フラスコに１００本に、液体培地で培養したＬｅｃｈｅｖａｌｉｅｒｉａ　ｓｐ．　Ｋ１０－０２１６（ＮＩＴＥ　ＢＰ－１１１４）を各１ｍｌずつ植菌し、２７℃で３日間振盪培養した。得られた種培養液を、スターチ５．０％、グリセロール０．５％、脱脂小麦胚芽（日清ファルマ株式会社製）１．０％、ドライ酵母（ＪＴフーズ株式会社製）１％、炭酸水素カルシウム０．５％からなる液体培地（ｐＨ７．０）１００ｍＬを含む５００ｍＬ容三角フラスコに１００本に、各１ｍＬずつ植菌し、２７℃で８日間振盪培養した。
　培養の終了した５００ｍＬ容三角フラスコ１００本にそれぞれ１００ｍＬのエタノールを加えて１時間激しく撹拌した。次にその抽出液中のエタノールを減圧留去し、得られた水溶液に１０Ｌの酢酸エチルを加えよく撹拌後、酢酸エチル層を回収した。エバポレーターを用い、濃縮乾固して５．９８ｇの粗精製物１を得た。これを少量のメタノールに溶解し、シリカゲル（ＭＥＲＣＫ社製）オープンカラムクロマトグラフィーを用いて、ヘキサン－クロロホルム－メタノール溶媒系で段階溶出（１００：０：０，５０：１：０，１：１：０，０：１００：０，０：１００：１，０：５０：１，０：１０：１，０：１：１，０：０：１００）させ、マングロマイシンＤを含む０：５０：１画分（粗精製物２）を５１０ｍｇ、マングロマイシンＥを含む１：１：０画分（粗精製物３）を１３８ｍｇ、マングロマイシンＦおよびＧを含む０：１０：１画分（粗精製物４）を６５０ｍｇ、マングロマイシンＨおよびＩを含む０：１００：１画分（粗精製物５）を５５０ｍｇ得た。
　粗精製物２を少量のメタノールに溶解し、ＯＤＳ（富士シリシア化学株式会社社製）オープンカラムクロマトグラフィーを用いて、メタノール－水系で段階溶出（メタノール濃度０％，２０％，３０％，４０％，５０％，６０％，７０％，８０％，９０％，１００％）し、マングロマイシンＤを含む５０％～８０％画分（粗精製物６）を得た。粗精製物６をメタノールに溶解し、高速液体クロマトグラフィーにてオクタデシルシリルカラム（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ　ＯＤＳ－４，φ１４×２５０ｍｍ，流速６．５ｍＬ／ｍｉｎ，検出２５４ｎｍ）に注入し、１５％アセトニトリル水で溶出した。保持時間１３分付近のピークを分取し、減圧濃縮によりマングロマイシンＤを白色粉末として７０ｍｇ得た。
　粗精製物３を少量のメタノールに溶解し、高速液体クロマトグラフィーにてオクタデシルシリルカラム（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ　ＯＤＳ－４，φ１４×２５０ｍｍ，流速９．３ｍＬ／ｍｉｎ，検出２５４ｎｍ）に注入し、４０％アセトニトリル水で溶出した。保持時間１６分付近のピークを分取し、減圧濃縮によりマングロマイシンＥを白色粉末として１１ｍｇ得た。
　粗精製物４を少量のメタノールに溶解し、ＯＤＳ（富士シリシア化学株式会社社製）オープンカラムクロマトグラフィーにて、メタノール－水系で段階溶出（メタノール濃度０％，２０％，３０％，４０％，５０％，６０％，７０％，８０％，９０％，１００％）し、マングロマイシンＦ及びＧを含む５０％画分（粗精製物７）を得た。粗精製物７をメタノールに溶解し、高速液体クロマトグラフィーにてオクタデシルシリルカラム（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ　ＯＤＳ－４，φ１０×２５０ｍｍ，流速４．７ｍＬ／ｍｉｎ，検出２５４ｎｍ）に注入し、１０％アセトニトリル水で溶出した。保持時間１７分付近のピークを分取し、減圧濃縮によりマングロマイシンＦを白色粉末として２０ｍｇおよび１９分付近のピークを分取し、減圧濃縮によりマングロマイシンＧを白色粉末として９ｍｇ得た。
　粗精製物５を少量のメタノールに溶解し、ＯＤＳ（富士シリシア化学株式会社社製）オープンカラムクロマトグラフィーにて、メタノール－水系で段階溶出（メタノール濃度０％，２０％，３０％，４０％，５０％，６０％，７０％，８０％，９０％，１００％）し、マングロマイシンＨ及びＩを含む５０％画分（粗精製物８）を得た。粗精製物８をメタノールに溶解し、高速液体クロマトグラフィーにてオクタデシルシリルカラム（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ　ＯＤＳ－４，φ１０×２５０ｍｍ，流速４．７ｍＬ／ｍｉｎ，検出２５４ｎｍ）に注入し、１０％アセトニトリル水で溶出した。保持時間１７分付近のピークを分取し、減圧濃縮によりマングロマイシンＦを白色粉末として２０ｍｇ得た。また、粗精製物８をメタノールに溶解し、高速液体クロマトグラフィーにてオクタデシルシリルカラム（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ　ＯＤＳ－４，φ１０×２５０ｍｍ，流速４．７ｍＬ／ｍｉｎ，検出２５４ｎｍ）に注入し、２０％アセトニトリル水で溶出した。保持時間２５分付近のピークを分取し、減圧濃縮によりマングロマイシンＩを白色粉末として２．３ｍｇ得た。
　得られたマングロマイシンＤ，マングロマイシンＥ，マングロマイシンＦ，マングロマイシンＧ，マングロマイシンＨおよびマングロマイシンＩの理化学的性状を測定した結果、次の通りであった。
マングロマイシンＤ
（１）性状：白色粉末または淡黄色粉末
（２）分子量：４１０
（３）分子式：Ｃ２２Ｈ３４Ｏ７
高分解能質量分析による［Ｍ＋Ｈ］＋　理論値（ｍ／ｚ）４１１．２３８３、実測値（ｍ／ｚ）４１１．２３９２
（４）比旋光度：［α］Ｄ ２４．８＝＋２７．９６（ｃ＝０．１、メタノール）
（５）紫外部吸収極大（メタノール中）λｍａｘ（ε）：２５１（１８０６）
（６）赤外部吸収極大νｍａｘ（ＫＢｒ錠）：３４２１，１６５５ｃｍ－１に極大吸収を有する
（７）プロトン核磁気共鳴スペクトル：重メタノール中の化学シフト（ｐｐｍ）を表１に示す。（表中、ｓは一重線、ｄは二重線、ｍは多重線、Ｈはプロトンの数を示す。）
（８）カーボン核磁気共鳴スペクトル：重メタノール中の化学シフト（ｐｐｍ）を表１に示す。
（９）溶剤に対する溶解性：エタノール、メタノールに易溶。水に難溶。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000001
マングロマイシンＥ
（１）性状：白色粉末または淡黄色粉末
（２）分子量：３９２
（３）分子式：Ｃ２２Ｈ３２Ｏ６
高分解能質量分析による［Ｍ＋Ｈ］＋　理論値（ｍ／ｚ）３９３．２２７７、実測値（ｍ／ｚ）３９３．２２７７
（４）比旋光度：［α］Ｄ ２５．３＝＋３０．４８（ｃ＝０．１、メタノール）
（５）紫外部吸収極大（メタノール中）λｍａｘ（ε）：２３１（３１４）
（６）赤外部吸収極大νｍａｘ（ＫＢｒ錠）：３４５１，１６５１ｃｍ－１に極大吸収を有する
（７）プロトン核磁気共鳴スペクトル：重メタノール中の化学シフト（ｐｐｍ）を表２に示す。（表中、ｓは一重線、ｄは二重線、ｍは多重線、Ｈはプロトンの数を示す。）
（８）カーボン核磁気共鳴スペクトル：重メタノール中の化学シフト（ｐｐｍ）を表２に示す。
（９）溶剤に対する溶解性：エタノール、メタノールに易溶。水に難溶。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000002
マングロマイシンＦ
（１）性状：白色粉末または淡黄色粉末
（２）分子量：３９６
（３）分子式：Ｃ２１Ｈ３２Ｏ７
高分解能質量分析による［Ｍ＋Ｈ］＋　理論値（ｍ／ｚ）３９７．２２２６、実測値（ｍ／ｚ）３９７．２２１８
（４）比旋光度：［α］Ｄ ２５．３＝＋５１．５６（ｃ＝０．１、メタノール）
（５）紫外部吸収極大（メタノール中）λｍａｘ（ε）：２５０（１３８８）
（６）赤外部吸収極大νｍａｘ（ＫＢｒ錠）：３４３３，１６５１ｃｍ－１に極大吸収を有する
（７）プロトン核磁気共鳴スペクトル：重メタノール中の化学シフト（ｐｐｍ）を表３に示す。（表中、ｓは一重線、ｄは二重線、ｍは多重線、Ｈはプロトンの数を示す。）
（８）カーボン核磁気共鳴スペクトル：重メタノール中の化学シフト（ｐｐｍ）を表３に示す。
（９）溶剤に対する溶解性：エタノール、メタノールに易溶。水に難溶。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000003
マングロマイシンＧ
（１）性状：白色粉末または淡黄色粉末
（２）分子量：４１０
（３）分子式：Ｃ２２Ｈ３４Ｏ７
高分解能質量分析による［Ｍ＋Ｈ］＋　理論値（ｍ／ｚ）４１１．２３８３、実測値（ｍ／ｚ）４１１．２３７５
（４）比旋光度：［α］Ｄ ２５．３＝＋２９．１６（ｃ＝０．１、メタノール）
（５）紫外部吸収極大（メタノール中）λｍａｘ（ε）：２５１（１２３２）
（６）赤外部吸収極大νｍａｘ（ＫＢｒ錠）：３４２５，１６５１ｃｍ－１に極大吸収を有する
（７）プロトン核磁気共鳴スペクトル：重メタノール中の化学シフト（ｐｐｍ）を表４に示す。（表中、ｓは一重線、ｄは二重線、ｍは多重線、Ｈはプロトンの数を示す。）
（８）カーボン核磁気共鳴スペクトル：重メタノール中の化学シフト（ｐｐｍ）を表４に示す。
（９）溶剤に対する溶解性：エタノール、メタノールに易溶。水に難溶。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000004
マングロマイシンＨ
（１）性状：白色粉末または淡黄色粉末
（２）分子量：３８０
（３）分子式：Ｃ２１Ｈ３２Ｏ６
高分解能質量分析による［Ｍ＋Ｈ］＋　理論値（ｍ／ｚ）３８１．２２７７、実測値（ｍ／ｚ）３８１．２２７２
（４）比旋光度：［α］Ｄ ２５．３＝＋３３．８０（ｃ＝０．１、メタノール）
（５）紫外部吸収極大（メタノール中）λｍａｘ（ε）：２５１（１５２２）
（６）赤外部吸収極大νｍａｘ（ＫＢｒ錠）：３４３０，１６５１ｃｍ－１に極大吸収を有する
（７）プロトン核磁気共鳴スペクトル：重メタノール中の化学シフト（ｐｐｍ）を表５に示す。（表中、ｓは一重線、ｄは二重線、ｍは多重線、Ｈはプロトンの数を示す。）
（８）カーボン核磁気共鳴スペクトル：重メタノール中の化学シフト（ｐｐｍ）を表５に示す。
（９）溶剤に対する溶解性：エタノール、メタノールに易溶。水に難溶。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000005
マングロマイシンＩ
（１）性状：白色粉末または淡黄色粉末
（２）分子量：４０８
（３）分子式：Ｃ２２Ｈ３２Ｏ７
高分解能質量分析による［Ｍ＋Ｈ］＋　理論値（ｍ／ｚ）４０９．２２２６、実測値（ｍ／ｚ）４０９．２２２２
（４）紫外部吸収極大（メタノール中）λｍａｘ（ε）：２４６（４９０）
（５）赤外部吸収極大νｍａｘ（ＫＢｒ錠）：３４３１，１６５１ｃｍ－１に極大吸収を有する
（６）プロトン核磁気共鳴スペクトル：重メタノール中の化学シフト（ｐｐｍ）を表６に示す。（表中、ｓは一重線、ｄは二重線、ｍは多重線、Ｈはプロトンの数を示す。）
（７）カーボン核磁気共鳴スペクトル：重メタノール中の化学シフト（ｐｐｍ）を表６に示す。
（８）溶剤に対する溶解性：エタノール、メタノールに易溶。水に難溶。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000006
　以上のとおり各種理化学的性状が得られたマングロマイシンＤ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ及びＩに一致する化合物はこれまで報告されていないことから、マングロマイシンＤ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ及びＩは新規物質であると考えられる。
（実施例２）ＤＰＰＨ（１，１－Ｄｉｐｈｅｎｙｌ－２－ｐｉｃｒｙｌｈｙｄｒａｚｙｌ）フリーラジカルに対する消去活性試験
　実施例１で得られたマングロマイシンＤ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ及びＩ、並びに国際公開公報ＷＯ２０１３／０３１２３９に従って得たマングロマイシンＡ、Ｂ及びＣのＤＰＰＨフリーラジカルに対する消去活性を以下の通り調べた。ＤＰＰＨは１００μＭの濃度になるようにエタノールを用いてＤＰＰＨ溶液を調製した。各マングロマイシンは１００μＭの濃度になるようにメタノールを用いて被験溶液を調製した。９６ウェルプレートの各ウェルに８０μｌのエタノールを分注し、１０μｌのＤＰＰＨ溶液、１０μｌの被験溶液を添加し、９６ウェルプレートをアルミホイルで遮光し、２０分間、室温で放置した。その後、各ウェルを５１７ｎｍで測定し、マングロマイシンのラジカル消去活性を測定した。
　比較対象として抗酸化剤である終濃度１０μＭのα－トコフェロール（ＶＥ）を用いた。
ＤＰＰＨフリーラジカル消去活性は次式により求めた。
ＤＰＰＨフリーラジカル消去活性（％）＝１００－（サンプル－ブランク）／コントロール－ブランク）
（サンプル：被験物質添加群ウェル吸光度、コントロール：被験物質無添加群ウェル吸光度、ブランク：１００μｌエタノールウェル吸光度）
　マングロマイシン類とＶＥのＤＰＰＨフリーラジカル消去活性は図１に示す通りであった。この結果から、本発明のマングロマイシン類がいずれもＤＰＰＨフリーラジカル消去活性を有することが示された。
（実施例３）ＲＡＷ２６４．７細胞が産生するＮＯに対する消去活性試験
　９６ウェルプレートにマウス・マクロファージ系細胞株ＲＡＷ２６４．７（以下、「ＲＡＷ２６４．７細胞」という。）を、ダルベッコ改変イーグル培地（以下、「ＤＭＥＭ培地」という。）（無血清、ｐｈｅｎｏｌ　ｒｅｄ　ｆｒｅｅ）で５×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍｌに調製して、２００μＬ播き、３７℃、５％ＣＯ２インキュベーターで１６時間培養した。培養後、ウェルから培地を抜き取り、２００μｌのＰＢＳで２回洗い、１９６μｌのＤＭＥＭ培地を加え、ＤＭＥＭ培地で希釈した０．５ｍｇ／ｍＬのＬＰＳと１０００Ｕ／ｍＬのＩＦＮ－γを２μＬずつ加えた。なお、ＬＰＳとＩＦＮ－γの刺激剤を加えず、４μｌのＤＭＥＭ培地を添加したものをブランクとした。
　６時間インキュベート後、１１Ｍのグルコースを含んだＫｒｅｂｓ－Ｒｉｎｇｅｒ　ｐｈｏｓｐｈａｔｅ緩衝液（以下、「ＫＲＰ緩衝液」という。）で２回洗浄後、１ｍＭのＬ－アルギニン、１０μＭのＮＯ検出用蛍光試薬Ｄｉａｍｉｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ－２（以下、「ＤＡＦ－２」という。）、及び、（１）ＤＭＳＯに溶解した各マングロマイシン（実施例１で得られたマングロマイシンＤ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ又はＩ、あるいは、国際公開公報ＷＯ２０１３／０３１２３９に従って得たマングロマイシンＡ、Ｂ及びＣ）（いずれも終濃度１００μＭ）、（２）ＤＭＳＯに溶解したＬ－ＮＭＭＡ（終濃度１００μＭ）又は、（３）コントロールとしてＤＭＳＯのみ、を含んだＫＲＰ緩衝液２００μｌを添加し、さらに、３７℃、５％ＣＯ２インキュベーターで２時間インキュベートした。なお、ＤＭＳＯの終濃度は終濃度０．５％に調製した。
　上清１００μｌを蛍光測定用ブラック９６ウェルプレートに移し、波長４９５ｎｍで励起し、波長５１５ｎｍを測定した。
　ＮＯ消去活性は次式により求めた。
ＮＯ消去活性（％）＝１００－（Ｓ－Ｂ）／（Ｌ－Ｂ）×１００
（Ｓ：被験物質及びＬＰＳ／ＩＦＮ－γ添加ウェル吸光度、Ｂ：ＤＭＳＯ添加ウェル吸光度（ブランク）、Ｌ：ＬＰＳ／ＩＦＮ－γ添加ウェル吸光度（薬剤無添加群））
　ＤＭＳＯのみを添加したブランク群（Ｂ）では、ＮＯの産生がほとんど見られなかったのに対し、ＬＰＳ／ＩＦＮ－γで刺激を加えた群（Ｌ）ではＲＡＷ２６４．７細胞のＮＯ産生が確認できた。
　本実験におけるマングロマイシン類添加群についてのＮＯ産生抑制率の結果を図２に示す。
　図２より、ＲＡＷ２６４．７細胞をＬＰＳ／ＩＦＮ－γで刺激することにより誘導されたＮＯに対し、マングロマイシン類は消去効果を示していることがわかった。なかでもマングロマイシンＩが、高いＮＯ消去活性を示し、ＮＯ合成阻害薬として知られているＮＧ－モノメチル－Ｌ－アルギニン（Ｌ－ＮＭＭＡ）のＮＯ産生阻害効果（終濃度１００μＭで５２％阻害、結果は非図示）と同程度の効果を示した。
　この実験結果より、本発明のマングロマイシン類は優れたＮＯ消去効果を有することが明らかとなった。
（実施例４）ＲＡＷ２６４．７細胞に対するマングロマイシン類の毒性試験
　９６ウェルプレートにマウス・マクロファージ系細胞株ＲＡＷ２６４．７をＤＭＥＭ培地で５×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍｌに調製して、２００μＬを播き、３７℃、５％ＣＯ２インキュベーターで１６時間培養した。培養後、各マングロマイシン（実施例１で得られたマングロマイシンＤ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ又はＩ、あるいは、国際公開公報ＷＯ２０１３／０３１２３９に従って得たマングロマイシンＡ、Ｂ及びＣ）をＤＭＳＯに溶解し、終濃度１００μＭになるようにＤＭＥＭ培地で希釈して調製した各マングロマイシン溶液２００μｌを各ウェルに加え、３７℃、５％ＣＯ２インキュベーターで２４時間インキュベートした。ＤＭＳＯは終濃度０．５％に調製した。コントロールには被験物質（マングロマイシン）を含んでいない０．５％ＤＭＳＯ含有ＤＭＥＭ培地を添加し、ブランクは細胞を含まない０．５％ＤＭＳＯ含有ＤＭＥＭ培地のみとした。インキュベート後、アラマーブルー試薬（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｏｒｉｃｈ社製、米国）２０μＬを添加、混和し、３７℃にて５％ＣＯ２インキュベーターで２４時間培養した。次に、マイクロプレートリーダーを用いて２波長（５７０ｎｍと６００ｎｍ）で各ウェルの吸光度を測定した。
　ＲＡＷ２６４．７細胞に対するマングロマイシン類の毒性は次式により求めた。
細胞生存率（％）＝（Ａ／Ｂ）×１００
※　Ａ＝サンプルウェル（Ａ５７０ｎｍ－Ａ６００ｎｍ）－ブランクウェル（Ａ５７０ｎｍ－Ａ６００ｎｍ）
Ｂ＝コントロールウェル（Ａ５７０ｎｍ－Ａ６００ｎｍ）－ブランクウェル（Ａ５７０ｎｍ－Ａ６００ｎｍ）
ＲＡＷ２６４．７細胞に対するマングロマイシン類の毒性の結果を表７に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000007
　表７に示される通り、本発明のマングロマイシン類には１００μＭでＲＡＷ２６４．７細胞に対して毒性がないことがわかった。
　以上の結果から本発明のマングロマイシン類は、ＲＡＷ２６４．７細胞の増殖に対して阻害効果を示さず、ＤＰＰＨフリーラジカルに対してラジカル消去活性及びＮＯに対する消去活性を有していることから過剰なＮＯ産生による疾患などの抗炎症薬剤として非常に優れた効果を有することが示された。

 

Claims (10)

  1. 　下記式Ｉで表される化合物又はそのエステル誘導体あるいはそれらの塩又は水和物。
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000014
  2. 　下記式ＩＩで表される化合物又はそのエステル誘導体あるいはそれらの塩又は水和物。
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000015
  3. 　下記式ＩＩＩで表される化合物又はそのエステル誘導体あるいはそれらの塩又は水和物。
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000016
  4. 　下記式ＩＶで表される化合物又はそのエステル誘導体あるいはそれらの塩又は水和物。
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000017
  5. 　下記式Ｖで表される化合物又はそのエステル誘導体あるいはそれらの塩又は水和物。
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000018
  6. 　下記式ＶＩで表される化合物又はそのエステル誘導体あるいはそれらの塩又は水和物。
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000019
  7. 　請求項１～６のいずれか１項に記載の化合物を生産する能力を有する放線菌に属する微生物を培地で培養し、培養物中請求項１～６のいずれか１項に記載の化合物を蓄積せしめ、該培養物から請求項１～６のいずれか１項に記載の化合物を採取することを特徴とする、請求項１～６のいずれか１項に記載の化合物の製造方法。
  8. 　請求項１～６のいずれか１項に記載の化合物若しくはそのエステル誘導体又はそれらの塩若しくは水和物を有効成分として含有する医薬組成物。
  9. 　請求項１～６のいずれか１項に記載の化合物若しくはそのエステル誘導体又はそれらの塩若しくは水和物、あるいは、下記式ＶＩＩ、ＶＩＩＩ、及びＩＸのいずれか１つで表わされる化合物若しくはそのエステル誘導体又はそれらの塩若しくは水和物を有効成分として含有するフリーラジカル消去剤。
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000020
  10. 　請求項１～６のいずれか１項に記載の化合物若しくはそのエステル誘導体又はそれらの塩若しくは水和物、あるいは、下記ＶＩＩ、ＶＩＩＩ、及びＩＸのいずれか１つで表わされる化合物若しくはそのエステル誘導体又はそれらの塩若しくは水和物を有効成分として含有する過剰なフリーラジカルの発生が発症又は増悪に寄与する疾患又は障害の治療薬又は予防薬。
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000021
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