WO2014089951A1 - 防治草莓黄萎病的棘孢木霉菌株gy20及膏状制剂 - Google Patents

防治草莓黄萎病的棘孢木霉菌株gy20及膏状制剂 Download PDF

Info

Publication number
WO2014089951A1
WO2014089951A1 PCT/CN2013/075026 CN2013075026W WO2014089951A1 WO 2014089951 A1 WO2014089951 A1 WO 2014089951A1 CN 2013075026 W CN2013075026 W CN 2013075026W WO 2014089951 A1 WO2014089951 A1 WO 2014089951A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
strain
trichoderma
trichoderma asperellum
paste preparation
paste
Prior art date
Application number
PCT/CN2013/075026
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
李楠
张海军
罗志会
刘慕兰
李惠
Original Assignee
江苏耕耘化学有限公司
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 江苏耕耘化学有限公司 filed Critical 江苏耕耘化学有限公司
Publication of WO2014089951A1 publication Critical patent/WO2014089951A1/zh

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
    • A01N63/30—Microbial fungi; Substances produced thereby or obtained therefrom
    • A01N63/38—Trichoderma
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/37—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from fungi

Definitions

  • the invention relates to a strain and a preparation thereof, and more particularly to a Trichoderma asperellum and a cream preparation thereof for controlling strawberry verticillium wilt, and belongs to the technical field of fruit disease prevention and treatment.
  • Strawberry belongs to the perennial herb of the genus Rosaceae. At present, the annual output of strawberry in the world has exceeded 5 million tons. Its production ranks first in the world's small berry production. In recent years, strawberry cultivation in greenhouses is gradually emerging. The planting area is gradually expanding, but there is a contradiction between crop rotation and facility fixation. Continuous cropping obstacles are becoming more and more obvious. Strawberry continuous cropping is the main factor restricting strawberry production, especially strawberry verticillium, which is popular in strawberry producing regions around the world. The disease, the occurrence of the disease, led to reduced production and reduced income, and severe cases, which severely restricted the sustainable development of strawberries.
  • Fusarium oxysporum Schl.f.sp.lagenaria Wnks et W is a common soil-borne disease in the planting of grass poisonous grass, Verticllium albo-atrum Reinke dt Berthold And Verticillium dahliae Klrmahn) pathogen infection caused disease, Chinese alias, strawberry citrus.
  • Verticllium albo-atrum Reinke dt Berthold And Verticillium dahliae Klrmahn pathogen infection caused disease
  • Chinese alias strawberry citrus.
  • the incidence of strawberry verticillium in the second year of strawberry planting was 82.9%, and the incidence rate in the third year was 100%.
  • the biological control of strawberry verticillium is the need for sustainable development of strawberry production. Microbial pesticides have less pressure on the environment and are less likely to cause resistance to target pathogens. Therefore, research on bio-sourced pesticides will provide people with safer and more efficient ways to control strawberry verticillium.
  • the microorganisms that have been used to control Verticillium dahliae are mainly Bacillus subtilis, Pseudomonas sp., Serratia sp., VAM fungi, etc.
  • the dosage form is mainly wettable. Powders, suspending agents, oil suspensions, etc.
  • Trichoderma asperellum and its cream preparations to control strawberry verticillium and related patent applications. Summary of the invention
  • the technical problem to be solved by the present invention is to disclose a Trichoderma asperellum which is resistant to strawberry verticillium wilt and its paste-like preparation L1.
  • the invention is achieved by the following technical solutions:
  • the strain GY20 for controlling cucumber wilt of the present invention is Trichoderma oxysporum, and the Latin literature name is Trichoderma asperellum, which has been on the ordinary microbiology center of the Chinese Microbial Organisms Collection and Management Committee on May 25, 2011. Preservation, the preservation number is: CGMCC NO: 4899 ⁇
  • the strain GY20 has the following characteristics: cultured at 25 °C for 4 days in dark conditions, colony diameter 53-55mm, mycelium white, flocculent, lush; conidial structure produced in large quantities , sporulation area evenly distributed, gray-green; bottle stem-type sporulation, conidia oval, nearly spherical, fine surface. Trichoderma has effects on a variety of important plant pathogenic fungi, such as Pythium, Verticillium, Fusarium, Fusarium oxysporum, Alternaria, Rhizoctonia, Botrytis and the like.
  • the preparation method for preparing the biocontrol cream preparation prepared by controlling the cucumber wilt strain GY20 of the present invention comprises the following steps:
  • GY20 spores previously cultured on potato dextrose medium (PDA) medium were picked up with a sterile inoculating knife and inoculated into a 750 ml flask containing 200 ml of potato grape liquid medium (PD) at 26 Incubate for 48 h at 150 °C, 150 rpm/min, and inoculate 200 ml aliquots of the above-mentioned culture solution in 4 volumes of 2000 ml flasks containing 500 ml of PD medium, 150 rpm, 26 °C.
  • the culture was shaken for 48 h under the conditions; the obtained 2000 ml of the culture solution was inoculated into a 30 L fermenter (Zhenjiang Dongfang GUS-30) containing 20 L of the culture solution, and the content of the 20 L fermentation broth was: beet solution 400.0 g, heptahydrate sulfuric acid Magnesium 4.0g and potassium dihydrogen phosphate 40.0g, the fermentation conditions were set as follows: dissolved oxygen 100%, stirring speed 350 rpm, fermentation temperature 26 ° C, fermentation time 48 h, pH 7.0-7.2.
  • the fermented fermentation broth is processed into a paste preparation as follows: First, the fermentation broth is centrifuged at 8000 rpm/min for 10 minutes to obtain a mixture of hyphae and chlamydospores, and the pH is adjusted to 3.0 to 4.0 with hydrochloric acid, and 0.001 is added. ⁇ 0.05% of the copper ion inhibitor, and finally added 5 ⁇ 10% of soluble starch, and stirred to form a paste preparation.
  • the bio-pesticide composition of the GY20 strain of the present invention is composed of a pesticide component and an auxiliary material, and the pesticide component is Trichoderma hyphae and Trichoderma spore, and Trichoderma spores are dispersed in Trichoderma hyphae.
  • the characteristic is that the auxiliary material is starch; the maximum advantage of the composition of the invention and the paste type biological pesticide prepared by the method is that the product quality is stable, can be stored at room temperature for 18 months, and stored under refrigeration for 3 years, the bacteria agent pair Cucumber wilt has good control effect.
  • the results of the greenhouse test showed that the control effect of the microbial agent on cucumber wilt was more than 90%.
  • the strain GY20 for controlling cucumber wilt of the present invention is Trichoderma oxysporum, and the Latin literature name is Trichoderma asperellum, which was on May 25, 2011 at the General Microbiology Center of the China Microbial Organisms Collection and Management Committee. Preservation, the preservation number is: CGMCC NO: 4899 ⁇
  • the strain GY20 has the following characteristics: cultured at 25 °C for 4 days in dark conditions, colony diameter 53-55mm, mycelium white, flocculent, lush; conidial structure produced in large quantities , sporulation area evenly distributed, gray-green; bottle stem-type sporulation, conidia oval, nearly spherical, with fine thorns on the surface. Trichoderma has effects on a variety of important plant pathogenic fungi, such as Pythium, Verticillium, Fusarium, Fusarium oxysporum, Alternaria, Rhizoctonia, Botrytis and the like.
  • the preparation method for preparing the biocontrol cream preparation prepared by controlling the cucumber wilt strain GY20 of the present invention comprises the following steps:
  • GY20 spores previously cultured on potato dextrose medium (PDA) medium were picked up with a sterile inoculating knife and inoculated into a 750 ml flask containing 200 ml of potato grape liquid medium (PD) at 26 Incubate for 48 h at 150 °C, 150 rpm/min, and inoculate 200 ml aliquots of the above-mentioned culture solution in 4 volumes of 2000 ml flasks containing 500 ml of PD medium, 150 rpm, 26 °C.
  • the culture was shaken for 48 h under the conditions; the obtained 2000 ml of the culture solution was inoculated into a 30 L fermenter (Zhenjiang Dongfang GUS-30) containing 20 L of the culture solution, and the content of the 20 L fermentation broth was: beet solution 400.0 g, heptahydrate sulfuric acid Magnesium 4.0g and potassium dihydrogen phosphate 40.0g, the fermentation conditions were set as follows: dissolved oxygen 100%, stirring speed 350 rpm, fermentation temperature 26 ° C, fermentation time 48 h, pH 7.0-7.2.
  • the fermented fermentation broth is processed into a paste preparation as follows: First, the fermentation broth is centrifuged at 8000 rpm/min for 10 minutes to obtain a mixture of hyphae and chlamydospores, and the pH is adjusted to 3.0 to 4.0 with hydrochloric acid, and 0.001 is added. ⁇ 0.05% of the copper ion inhibitor, and finally added 5 ⁇ 10% of soluble starch, and stirred to form a paste preparation.
  • the field application method of the live bacterial preparation of the present invention is as follows:
  • the application method for controlling strawberry verticillium wilt is as follows: 1KG preparation is diluted with 100 ⁇ 150L water, and the microbial agent is mixed with water firstly, and rooting (100 ml per plant) or alfalfa root (dipping 5) when transplanting strawberry seedlings Min) Use. Effect of the implementation of the present invention
  • Test site conditions The experiment was arranged in the strawberry continuous crop (20 years) in the fruit tree research room of Zhenjiang Agricultural Science Research Institute in the hilly area of Jiangsu province, and the verticillium wilt was re-issued. The strawberry was transferred on September 15, 2010, and the strawberry variety tested was Mingbao.
  • Test treatment method When the strawberry seedlings are transplanted, the roots are treated. That is, the finished GY20 paste preparation was diluted with 100-150 L of water in a 1 KG preparation, and the roots were treated with cucumber roots for 5 min when the cucumber seedlings were transplanted, and the blank control was replaced with fresh water.
  • the control biocontrol agent was "EM mycorrhiza" 500 times liquid immersion. Root treatment for 5 min, 300 seedlings per treatment, divided into 3 replicates, the cells were randomly arranged, and the incidence was investigated 50 days after transfer, and the disease rate and control effect were calculated.

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • Pest Control & Pesticides (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)

Abstract

本发明涉及一种棘孢木霉菌GY20及其该菌株制备的防治草莓黄萎病的膏状制剂。其拉丁英文名为Trichoderma asperellum，该菌种已于2011年5月25日在中国微生物生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏号为：CGMCC NO：4899。本发明膏状剂型的生物农药组合物由农药组分与辅料组成，农药组分为木霉菌丝与木霉厚垣孢子，木霉厚垣孢子分散在木霉菌丝中。本发明的组合物和用本方法制备成的膏状剂型生物农药最大的优点是产品质量稳定，可室温保存18个月，冷藏条件下保存3年，菌剂对草莓黄萎病有良好防效。其次本发明配方考究，工艺先进，不产生任何废水废气废渣，利于环境保护。

Description

防治草莓黄萎病的棘孢木霉菌株 GY20及膏状制剂
技术领域
本发明涉及一种菌株及其制剂， 更具体地说涉及一种防治草莓黄萎病的棘孢木霉 GY20 (Trichoderma asperellum) 及其膏状制剂， 属于水果防病治病技术领域。
背景技术
草莓（Fragaria ananassa )属于蔷薇科（Rosaceae)草莓属多年生草本植物， 目前世界草莓 每年的产量已经超过 500万吨， 在世界小浆果生产中其产量荣居首位， 近年来大棚栽培草莓 在逐渐兴起， 种植面积逐渐扩大， 但却存在着轮作换地与设施固定的矛盾， 连作障碍日益明 显， 草莓连作病害是目前制约草莓生产的主要因素， 尤其是草莓黄萎病， 世界各国草莓产区 普遍流行此病， 该病害的发生， 轻者导致减产减收， 重者绝收， 严重制约了草莓的可持续发 展。
草毒黄姜病 (Fusarium oxysporum Schl.f.sp.lagenaria Wnks et W) 是草毒禾中植中——禾中常见 的土传性病害， 由大丽花轮枝孢菌 (Verticllium albo-atrum Reinke dt Berthold和 Verticillium dahliae Klrmahn) 病原菌侵染引起病害， 中文别名， 草莓桔萎病。 该病发病时， 植株发育不 良， 叶变黄， 叶表面粗糙， 失去鲜亮感， 自叶缘开始变黄褐色向内凋萎、 干枯， 甚至全株枯 死。
据调查显示， 第二年连茬栽种草莓地草莓黄萎病发病率达 82.9 %， 第三年发病率可达 100 %。为此， 草莓黄萎病的生物防治特别是生物农药的研究与开发是草莓生产可持续发展的 需要。 微生物农药对环境的选择压力较小， 且不易使靶标病原菌产生抗药性， 因此， 生物源 农药的研究将会为人们提供更安全更高效的防治草莓黄萎病的途径。
现在已用于防治草莓黄萎病的微生物主要有枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis ) 、 假单胞菌 ( Pseudomonas sp. ) 、 沙雷氏菌（ Serratia sp. ) 、 VAM真菌等， 剂型主要为可湿性粉剂、 悬浮 剂、 油悬浮剂等。 但是到目前为止， 尚没有用棘孢木霉菌株 （Trichoderma asperellum) 及其 膏状制剂防治草莓黄萎病的报道和相关专利申请。 发明内容
本发明所要解决的技术问题是，公开一种防治草莓黄萎病的棘孢木霉 GY20 ( Trichoderma asperellum) 及其膏状制齐 Ll。 本发明是通过以下技术方案实现的：
本发明的防治黄瓜枯萎病的菌株 GY20 , 该菌株 GY20 为棘孢木霉， 拉丁文学名为 Trichoderma asperellum, 该菌种己于 2011年 5月 25日在中国微生物生物菌种保藏管理委员 会普通微生物中心保藏，保藏号为： CGMCC NO: 4899ο所述菌种 GY20具有如下特征： 25 °C 黑暗条件下培养 4d， 菌落直径 53-55mm， 菌丝体白色， 絮状， 茂盛； 分生孢子结构大量产生， 产孢区均匀分布， 灰绿色； 瓶梗式产孢， 分生孢子椭圆形、 近球形， 表面有细剌。 木霉菌对 多种重要植物病原真菌有作用， 如腐霉菌、 轮枝菌、 镰刀菌、 长孺孢菌、 交链孢菌、 丝核菌、 葡萄孢菌等。
用本发明的防治黄瓜枯萎病菌株 GY20制备的生防膏状制剂，其制备方法包括以下步骤:
(A) 菌液的获得
用无菌接种刀挑取事先在马铃薯葡萄糖培养基 （PDA) 培养基上培养好的 GY20孢子， 接种于装有 200ml 马铃薯葡萄液体培养基（PD)的容积为 750 ml的三角瓶中， 于 26 °C、 150 rpm/min条件下振荡培养 48 h，将上步所得培养液 200 ml等份接种于 4个装有 500ml PD培养 液的容积为 2000 ml的三角瓶中， 150 rpm、 26°C条件下振荡培养 48 h; 把所得的 2000ml培 养液接种于装有 20L培养液的容积为 30L的发酵罐 （镇江东方 GUS-30), 20L发酵培养液含 量为： 甜菜液 400.0g、 七水硫酸镁 4.0g、 磷酸二氢钾 40.0g， 设置发酵条件为： 溶氧 100%， 搅拌速度为 350 rpm， 发酵温度 26 °C， 发酵时间 48 h， pH 7.0-7.2。
(B) 膏状制剂加工工艺
将发酵好的发酵液按如下方法加工成膏状制剂： 先将发酵液在 8000rpm/min条件下离心 lOmin, 得菌丝及厚垣孢子混合体， 用盐酸调节 pH至 3.0~4.0， 并加入 0.001~0.05%的铜离子 抑制剂， 最后加入 5~10%的可溶性淀粉， 搅拌均匀即制成了膏状制剂。
本发明的有益效果是：
( 1 ) 本发明所得 GY20菌种的膏状剂型的生物农药组合物由农药组分与辅料组成， 农 药组分为木霉菌丝与木霉厚垣孢子， 木霉厚垣孢子分散在木霉菌丝中， 特征是辅料为淀粉； 本发明的组合物和用本方法制备成的膏状剂型生物农药最大的优点是产品质量稳定， 可室温 保存 18个月， 冷藏条件下保存 3年， 菌剂对黄瓜枯萎病有良好防效。 温室试验结果表明， 该 菌剂对黄瓜枯萎病的防治效果均达 90%以上。
(2) 由于本发明的 GY20菌株为可安全释放的真菌， 所以没有因化学农药的使用所带 来的一系列环境负效应。 该制剂的使用极大的减少黄瓜生产中化学农药的施用量， 为黄瓜无 公害生物防治提供可靠保证， 造福于现代高效农业。
(3 ) 菌剂生产成本低， 企业获取的利润空间极大。 具体实施方式
实施例
本发明的防治黄瓜枯萎病的菌株 GY20 , 该菌株 GY20 为棘孢木霉， 拉丁文学名为 Trichoderma asperellum, 该菌种已于 2011年 5月 25日在中国微生物生物菌种保藏管理委员 会普通微生物中心保藏，保藏号为： CGMCC NO: 4899ο所述菌种 GY20具有如下特征： 25 °C 黑暗条件下培养 4d， 菌落直径 53-55mm， 菌丝体白色， 絮状， 茂盛； 分生孢子结构大量产生， 产孢区均匀分布， 灰绿色； 瓶梗式产孢， 分生孢子椭圆形、 近球形， 表面有细刺。 木霉菌对 多种重要植物病原真菌有作用， 如腐霉菌、 轮枝菌、 镰刀菌、 长孺孢菌、 交链孢菌、 丝核菌、 葡萄孢菌等。
用本发明的防治黄瓜枯萎病菌株 GY20制备的生防膏状制剂，其制备方法包括以下步骤:
(A) 菌液的获得
用无菌接种刀挑取事先在马铃薯葡萄糖培养基 （PDA) 培养基上培养好的 GY20孢子， 接种于装有 200ml 马铃薯葡萄液体培养基（PD)的容积为 750 ml的三角瓶中， 于 26 °C、 150 rpm/min条件下振荡培养 48 h，将上步所得培养液 200 ml等份接种于 4个装有 500ml PD培养 液的容积为 2000 ml的三角瓶中， 150 rpm、 26°C条件下振荡培养 48 h; 把所得的 2000ml培 养液接种于装有 20L培养液的容积为 30L的发酵罐 （镇江东方 GUS-30), 20L发酵培养液含 量为： 甜菜液 400.0g、 七水硫酸镁 4.0g、 磷酸二氢钾 40.0g， 设置发酵条件为： 溶氧 100%, 搅拌速度为 350 rpm， 发酵温度 26 °C， 发酵时间 48 h， pH 7.0-7.2。
(B) 膏状制剂加工工艺
将发酵好的发酵液按如下方法加工成膏状制剂： 先将发酵液在 8000rpm/min条件下离心 lOmin, 得菌丝及厚垣孢子混合体， 用盐酸调节 pH至 3.0~4.0， 并加入 0.001~0.05%的铜离子 抑制剂， 最后加入 5~10%的可溶性淀粉， 搅拌均匀即制成了膏状制剂。 本发明活菌制剂的大田施用方法如下：
防治草莓黄萎病的应用方法为， 按 1KG制剂用 100〜150L水稀释， 先将菌剂与水混合均 匀， 在草莓苗移栽时灌根 （每株 100 ml)、 或蘸根 （浸 5 min) 使用。 本发明的实施效果
对草莓黄萎病田间防效试验
试验地条件： 本试验安排在江苏丘陵地区镇江农业科学研宄所果树研宄室草莓连作 （20 年） 大棚田， 黄萎病为重发。 草莓于 2010年 9月 15日移载， 供试草莓品种为明宝。 试验处理方法： 于草莓苗移栽时蘸根处理。 即， 将成品 GY20膏状制剂按 1KG制剂用 100-150L水稀释后， 在黄瓜苗移栽时浸根处理 5min， 空白对照用清水代替， 对照生防药剂 为 "EM菌根" 500倍液浸根处理 5 min， 每处理 300棵苗， 分 3重复， 小区随机排列， 移载 后 50 d调查发病情况， 计算病株率和防效。
结果：温室试验结果（表 1 )表明， GY20对草莓黄萎病的防治效果 90.5%，显著高于 "EM 菌根"对草莓黄萎病的防治效果为 56.8。
GY20菌剂对草莓黄萎病的田间防治试验结果
枯萎病
处理
病株率 （％) 防效 （％)
GY20 1.7B 91.5A
EM菌根 7.3A 56.8B
CK 13.5 0 注： 不同大写字母表示差异显著水平 P=0.01。
打印件 (原件为电子形式)
Figure imgf000006_0001
下面的说明与本申请说明书中此处提到的
保藏的微生物或其他生物材料相关：
-1 页码 第 2页
-2 行号： 1-3
-3 保藏事项
-3-1 保藏单位名称 CG CC 中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心 -3-2 保藏单位地址 Institute of icrobiology, Chinese Academy of
Sciences, No. 1, West Beichen Road, Chaoyang District, Bei j ing 100101, China
-3-3 保藏日期 2011年 5月 25日 （25.05.2011)
-3-4 保藏号 CGMCC 4899
-5 本说明是对下列指定国 所有指定国
-6 单独提交的说明 保藏证明
这些说明将随后提交给国际局 由受理局填写
-4 本表格与国际申请一起收到：
(是或否）
-4-1 受权官员 由国际局填写 -5 国际局收到本表格日期： -5-1 受权官员

Claims

权 利 要 求
1、 一种防治草莓黄萎病的菌株 GY20, 该菌株拉丁文学名为 Trichoderma asperellum, 该菌种 已于 2011年 5月 25日在中国微生物生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏， 保藏号 为： CGMCC NO: 4899。
2、 权利要求 1所述的防治草莓黄萎病的菌株 GY20在草莓黄萎病害方面的应用。
3、 一种用权利要求 1所述的防治草莓黄萎病的菌株 GY20制备的生防膏状制剂。
4、 根据权利要求 3所述的生防膏状制剂的制备方法， 其特征在于包括以下步骤：
(A) 菌液的获得
用无菌接种刀挑取事先在马铃薯葡萄糖培养基 （PDA) 培养基上培养好的 GY20孢子， 接种于装有 200ml 马铃薯葡萄液体培养基（PD)的容积为 750 ml的三角瓶中， 于 26 °C、 150 rpm/min条件下振荡培养 48 h，将上步所得培养液 200 ml等份接种于 4个装有 500ml PD培养 液的容积为 2000 ml的三角瓶中， 150 rpm、 26°C条件下振荡培养 48 h; 把所得的 2000ml培 养液接种于装有 20L培养液的容积为 30L的发酵罐 （镇江东方 GUS-30), 20L发酵培养液含 量为： 甜菜液 400.0g、 七水硫酸镁 4.0g、 磷酸二氢钾 40.0g， 设置发酵条件为： 溶氧 100%， 搅拌速度为 350 rpm， 发酵温度 26 °C， 发酵时间 48 h， pH 7.0-7.2。
(B) 膏状制剂加工工艺
将发酵好的发酵液按如下方法加工成膏状制剂： 先将发酵液在 SOOOrpm/min条件下离心 lOmin, 得菌丝及厚垣孢子混合体， 用盐酸调节 pH至 3.0~4.0， 并加入 0.001 0.05%的铜离子 抑制剂， 最后加入 5~10%的可溶性淀粉， 搅拌均匀即制成了膏状制剂。
5、 根据权利要求 4所述的生防膏状制剂的制备方法， 其特征在于所述的膏状剂型的生 物农药组合物由农药组分与辅料组成， 农药组分为木霉菌丝与木霉厚垣孢子， 木霉厚垣孢子 分散在木霉菌丝中， 特征是辅料为可溶性淀粉。
PCT/CN2013/075026 2012-12-14 2013-04-29 防治草莓黄萎病的棘孢木霉菌株gy20及膏状制剂 WO2014089951A1 (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201210541989.8 2012-12-14
CN201210541989.8A CN103013838B (zh) 2012-12-14 2012-12-14 草莓黄萎病的膏状生防制剂、制备方法、应用及其专用菌株

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2014089951A1 true WO2014089951A1 (zh) 2014-06-19

Family

ID=47962956

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/CN2013/075026 WO2014089951A1 (zh) 2012-12-14 2013-04-29 防治草莓黄萎病的棘孢木霉菌株gy20及膏状制剂

Country Status (2)

Country Link
CN (1) CN103013838B (zh)
WO (1) WO2014089951A1 (zh)

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110144302A (zh) * 2019-02-28 2019-08-20 陕西省生物农业研究所 一种高产嗜铁素极端东方化假单胞菌以及菌剂和用途
CN111807893A (zh) * 2020-06-23 2020-10-23 秦皇岛禾苗生物技术有限公司 一种黄瓜专用抗重茬生物菌肥
CN113549557A (zh) * 2021-06-25 2021-10-26 宁夏农林科学院植物保护研究所（宁夏植物病虫害防治重点实验室） 一种用于防治压砂西瓜枯萎病的木霉复合生物菌剂及其应用
CN113678844A (zh) * 2021-08-17 2021-11-23 山东五福生生态工程有限公司 一种哈茨木霉可分散油悬剂及其应用
CN114369538A (zh) * 2021-12-21 2022-04-19 中国热带农业科学院热带生物技术研究所 一种捕食香蕉枯萎病菌的棘孢木霉及其应用
CN117511749A (zh) * 2023-10-31 2024-02-06 中国农业科学院烟草研究所(中国烟草总公司青州烟草研究所) 一种棘孢木霉HG1与枯草芽孢杆菌Tpb55的固态发酵方法及其应用

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103013839B (zh) * 2012-12-14 2015-05-13 江苏耕耘化学有限公司 黄瓜枯萎病的膏状生防制剂、制备方法、应用及其专用菌株
CN103013838B (zh) * 2012-12-14 2015-05-13 江苏耕耘化学有限公司 草莓黄萎病的膏状生防制剂、制备方法、应用及其专用菌株
CN109321476B (zh) * 2018-11-26 2021-08-27 内蒙古农业大学 一株防控马铃薯和向日葵黄萎病的棘孢木霉pt-29及其应用

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101785482A (zh) * 2009-12-18 2010-07-28 江苏耕耘化学有限公司 膏状剂型的生物农药组合物及其制备方法
CN101874484A (zh) * 2009-12-18 2010-11-03 江苏耕耘化学有限公司 膏状剂型的木霉菌生物农药组合物及其制备方法
CN102067885A (zh) * 2010-03-31 2011-05-25 惠州市南天生物科技有限公司 一种木霉孢子粉剂及其制备方法和应用
CN103013838A (zh) * 2012-12-14 2013-04-03 江苏耕耘化学有限公司 草莓黄萎病的膏状生防制剂、制备方法、应用及其专用菌株
CN103013839A (zh) * 2012-12-14 2013-04-03 江苏耕耘化学有限公司 黄瓜枯萎病的膏状生防制剂、制备方法、应用及其专用菌株

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102144642B (zh) * 2010-12-20 2013-02-20 惠州市南天生物科技有限公司 一种木霉滴丸剂及其制备方法和应用

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101785482A (zh) * 2009-12-18 2010-07-28 江苏耕耘化学有限公司 膏状剂型的生物农药组合物及其制备方法
CN101874484A (zh) * 2009-12-18 2010-11-03 江苏耕耘化学有限公司 膏状剂型的木霉菌生物农药组合物及其制备方法
CN102067885A (zh) * 2010-03-31 2011-05-25 惠州市南天生物科技有限公司 一种木霉孢子粉剂及其制备方法和应用
CN103013838A (zh) * 2012-12-14 2013-04-03 江苏耕耘化学有限公司 草莓黄萎病的膏状生防制剂、制备方法、应用及其专用菌株
CN103013839A (zh) * 2012-12-14 2013-04-03 江苏耕耘化学有限公司 黄瓜枯萎病的膏状生防制剂、制备方法、应用及其专用菌株

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ZHANG, HAIJUN ET AL.: "Inhibition Mechanism and Control Efficiency of Trichoderma viride GY20 against Cotton Verticillium dahliae in Greenhouse", ACTA AGRICULTURAE JIANGXI, vol. 23, no. 7, July 2011 (2011-07-01), pages 127 - 128 *

Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110144302A (zh) * 2019-02-28 2019-08-20 陕西省生物农业研究所 一种高产嗜铁素极端东方化假单胞菌以及菌剂和用途
CN110144302B (zh) * 2019-02-28 2023-04-18 陕西省生物农业研究所 一种高产嗜铁素极端东方化假单胞菌以及菌剂和用途
CN111807893A (zh) * 2020-06-23 2020-10-23 秦皇岛禾苗生物技术有限公司 一种黄瓜专用抗重茬生物菌肥
CN113549557A (zh) * 2021-06-25 2021-10-26 宁夏农林科学院植物保护研究所（宁夏植物病虫害防治重点实验室） 一种用于防治压砂西瓜枯萎病的木霉复合生物菌剂及其应用
CN113678844A (zh) * 2021-08-17 2021-11-23 山东五福生生态工程有限公司 一种哈茨木霉可分散油悬剂及其应用
CN114369538A (zh) * 2021-12-21 2022-04-19 中国热带农业科学院热带生物技术研究所 一种捕食香蕉枯萎病菌的棘孢木霉及其应用
CN117511749A (zh) * 2023-10-31 2024-02-06 中国农业科学院烟草研究所(中国烟草总公司青州烟草研究所) 一种棘孢木霉HG1与枯草芽孢杆菌Tpb55的固态发酵方法及其应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN103013838A (zh) 2013-04-03
CN103013838B (zh) 2015-05-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
WO2014089951A1 (zh) 防治草莓黄萎病的棘孢木霉菌株gy20及膏状制剂
CN105886428B (zh) 一株微白黄链霉菌及其在微生物肥料中的应用
CN102533617B (zh) 一株枯草芽孢杆菌及其应用
CN113388529B (zh) 一株茶树内生菌Penicillium ehrlichii及其应用
CN105820981B (zh) 一株高地芽孢杆菌菌剂的制备及应用
CN104673705B (zh) 一株防治小麦赤霉病的解淀粉芽孢杆菌及其应用
CN101250495A (zh) 一株植物病原真菌拮抗菌及其在防治植物病害中的应用
CN108048354B (zh) 一株枯草芽孢杆菌及其应用
CN107136122A (zh) 一种防治马铃薯晚疫病的生防菌剂
CN113005056A (zh) 一种贝莱斯芽孢杆菌hy19及其应用
WO2016150152A1 (zh) 一种凝结芽胞杆菌菌悬液的制备方法
CN115058358B (zh) 一株耐盐芽孢杆菌及其应用
CN113817615A (zh) 一种利用双黄连药渣发酵生产的复合生防菌剂及其应用
CN104450551A (zh) 一株防治立枯病的枯草芽孢杆菌dppg-26及应用
CN106119134B (zh) 黄色蠕形霉y28及其在防治果树腐烂病中的应用
CN114736821A (zh) 一株对橡胶树红根病菌具有拮抗作用的贝莱斯芽孢杆菌sf305及其应用
WO2021208989A1 (zh) 一种山田平脐蠕孢菌菌株、其筛选和鉴定方法及其用途
CN107586735B (zh) 一种高效防治柑橘溃疡病的生防菌株ch01及其应用
CN108396002B (zh) 一株地衣芽孢杆菌及其在防治甜瓜枯萎病中的应用
CN112625923B (zh) 类棘孢木霉及其应用
CN114058542B (zh) 一种多粘类芽孢杆菌菌剂及其对胡萝卜根腐病的防治作用
CN113549558B (zh) 一株新型茶树内生生防真菌Diaporthe australiana及其应用
CN105087428A (zh) 一种铜绿假单胞菌及其应用
CN107118978B (zh) 一株植物内生真菌
CN104745510A (zh) 一种发酵乳杆菌及其在植物真菌病害防治中的应用

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 13863233

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

122 Ep: pct application non-entry in european phase

Ref document number: 13863233

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1