WO2013189467A2 - Compuestos a partir de los frutos de acrocomia crispa y acrocomia aculeata contra la inflamación y el estrés oxidativo - Google Patents

Compuestos a partir de los frutos de acrocomia crispa y acrocomia aculeata contra la inflamación y el estrés oxidativo Download PDF

Info

Publication number
WO2013189467A2
WO2013189467A2 PCT/CU2013/000003 CU2013000003W WO2013189467A2 WO 2013189467 A2 WO2013189467 A2 WO 2013189467A2 CU 2013000003 W CU2013000003 W CU 2013000003W WO 2013189467 A2 WO2013189467 A2 WO 2013189467A2
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
active ingredient
fruits
crispa
inflammation
aculeata
Prior art date
Application number
PCT/CU2013/000003
Other languages
English (en)
French (fr)
Other versions
WO2013189467A3 (es
Inventor
Victor Luis GONZALES CANAVACIOLO
Roxana de la Caridad SIERRA PÉREZ
Rosa María MAS FERREIRO
Yohani PÉREZ GUERRA
Ámbar OYARZÁBAL YERA
Eduardo Antonio RODRÍGUEZ LEYES
Vivían MOLINA CUEVAS
Rafael GÁMEZ MENÉNDEZ
Original Assignee
Centro Nacional De Investigaciones Cientificas (Cnic)
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=48876979&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=WO2013189467(A2) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Priority to IN10888DEN2014 priority Critical patent/IN2014DN10888A/en
Priority to CA2876907A priority patent/CA2876907A1/en
Priority to AU2013279850A priority patent/AU2013279850A1/en
Priority to EP13742149.1A priority patent/EP2862567B1/en
Priority to JP2015517603A priority patent/JP6134953B2/ja
Priority to CN201380037947.3A priority patent/CN104684544A/zh
Priority to US14/408,443 priority patent/US20150190358A1/en
Application filed by Centro Nacional De Investigaciones Cientificas (Cnic) filed Critical Centro Nacional De Investigaciones Cientificas (Cnic)
Priority to KR1020157001296A priority patent/KR102145079B1/ko
Priority to DK13742149.1T priority patent/DK2862567T3/da
Priority to MX2014015774A priority patent/MX361904B/es
Priority to BR112014031826A priority patent/BR112014031826A2/pt
Priority to ES13742149.1T priority patent/ES2648489T3/es
Publication of WO2013189467A2 publication Critical patent/WO2013189467A2/es
Publication of WO2013189467A3 publication Critical patent/WO2013189467A3/es
Priority to IL236282A priority patent/IL236282A0/en
Priority to PH12014502817A priority patent/PH12014502817B1/en
Priority to NO20150088A priority patent/NO20150088A1/en

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
    • A61K31/20—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having a carboxyl group bound to a chain of seven or more carbon atoms, e.g. stearic, palmitic, arachidic acids
    • A61K31/201—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having a carboxyl group bound to a chain of seven or more carbon atoms, e.g. stearic, palmitic, arachidic acids having one or two double bonds, e.g. oleic, linoleic acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/105—Plant extracts, their artificial duplicates or their derivatives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/045—Hydroxy compounds, e.g. alcohols; Salts thereof, e.g. alcoholates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
    • A61K31/20—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having a carboxyl group bound to a chain of seven or more carbon atoms, e.g. stearic, palmitic, arachidic acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/21—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates
    • A61K31/215—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids
    • A61K31/22—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids of acyclic acids, e.g. pravastatin
    • A61K31/23—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids of acyclic acids, e.g. pravastatin of acids having a carboxyl group bound to a chain of seven or more carbon atoms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/88—Liliopsida (monocotyledons)
    • A61K36/889—Arecaceae, Palmae or Palmaceae (Palm family), e.g. date or coconut palm or palmetto
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A61K47/12—Carboxylic acids; Salts or anhydrides thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
    • A61K8/97—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution from algae, fungi, lichens or plants; from derivatives thereof
    • A61K8/9783—Angiosperms [Magnoliophyta]
    • A61K8/9794—Liliopsida [monocotyledons]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0014—Skin, i.e. galenical aspects of topical compositions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/20—Pills, tablets, discs, rods
    • A61K9/2004—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/2022—Organic macromolecular compounds
    • A61K9/205—Polysaccharides, e.g. alginate, gums; Cyclodextrin
    • A61K9/2059—Starch, including chemically or physically modified derivatives; Amylose; Amylopectin; Dextrin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/08—Drugs for disorders of the urinary system of the prostate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P39/00—General protective or antinoxious agents
    • A61P39/06—Free radical scavengers or antioxidants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine

Definitions

  • This invention is related to obtaining a new active ingredient that can be used as a nutritional supplement or as a pharmaceutical or cosmetic product, with a view to preventing and / or treating the inflammatory processes and oxidative stress that accompany the aging process and numerous pathologies. , such as benign prostatic hyperplasia (BPH), prostatitis and osteoarthritis, among others, as well as being related to the process of obtaining said active ingredient from green or ripe fruits of Acrocomia crispa or Acrocomia aculeata, both from the Arecaceae family.
  • BPH benign prostatic hyperplasia
  • prostatitis and osteoarthritis among others, as well as being related to the process of obtaining said active ingredient from green or ripe fruits of Acrocomia crispa or Acrocomia aculeata, both from the Arecaceae family.
  • This active ingredient includes a mixture of linear fatty acids between 6 and 28 carbon atoms, mostly saturated ones: C 8 : 0 , Cio : o, Ci2: o, C14.0, Ci6 : o and Ci8: o, and the unsaturated: Ci6: i, Ci 8: i, Ci8: 2 and C ⁇ es, and may also contain sterols and high molecular weight fatty alcohols.
  • the process of obtaining this active ingredient starts from drying and grinding the fruits, and can include partial or total hydrolysis (enzymatic, basic or acidic) of both the plant material and its lipid fraction with subsequent recovery of fatty acids; Selective extraction of the lipid fraction can be performed with organic solvents or by extraction with supercritical fluid. Both procedures, with and without hydrolysis, allow to obtain active ingredients with similar pharmacological and physiological effects.
  • the present invention relates to the food and pharmaceutical industry, as the active ingredient obtained can be used as such or in doses between 50 and 1000 mg, as part of nutritional, cosmetic and / or pharmaceutical formulations for prevention and / or the treatment of inflammation and oxidative stress, including BPH, prostatitis and osteoarthritis.
  • Inflammation is the vascular and cellular response of tissues to infection, irritation or the presence of foreign substances. This is one of the mechanisms of The body's most important defense, but when the response is increased too much it can be harmful and in some cases fatal. Inflammation is an important etiological factor in the development of chronic diseases such as osteoarthritis, BPH, prostatitis, inflammatory bowel diseases, cancer, among others. The frequency of suffering from chronic inflammatory diseases increases with age and with the increase in life expectancy.
  • AA Arachidonic acid
  • fatty acid 20 carbon atoms (5, 8, 11, 14-eicosatetraenoic acid) obtained from food or by conversion of linoleic acid
  • phospholipase A2 an enzyme that is activated by physical, chemical or biological stimuli
  • eicosanoids The metabolites derived from AA, called eicosanoids, are synthesized through the cyclooxygenase (COX) enzyme (COX-1 and COX-2) pathway, which allows the generation of prostaglandins, and thromboxanes, and through the pathway of lipoxygenases (LOX), a family of cytosolic enzymes 5-LOX, 15-LOX and 12-LOX, which allow the generation of leukotrienes and lipoxins (D ⁇ az, 2001; Gajraj, 2003). Eicosanoids can intervene in the different phases of inflammation, they are in the inflammatory exudate and their synthesis is increased in the places of inflammation.
  • COX cyclooxygenase
  • COX-1 and COX-2 cyclooxygenase
  • LOX lipoxygenases
  • Inflammation is classified, according to the intensity and duration of the response, into acute or chronic.
  • Acute inflammation is of short duration and involves three fundamental mechanisms: vasodilation, increased capillary permeability and leukocyte migration (mainly of neutrophils) from the blood to the inflammatory focus, although it also includes phagocytosis and cell regeneration and repair (Gallin et al. 1992).
  • the characteristic signs of acute inflammation are: flushing, swelling, heat, pain and loss of function (Parakrama and Clive, 2005; Porth, 2007).
  • lipid peroxidation (PL) of polyunsaturated fatty acids (PUFA) by enzymatic route produces radical species of lipid origin, which occur in this case, so controlled, by the action of enzymes involved in cellular metabolic pathways.
  • LOX lipid hydroperoxides
  • COX hydroxylated products
  • the organic hydroperoxides formed are quite stable structures, they can decompose in the presence of transition metals (copper and iron ions) and generate a complex mixture of secondary peroxidation products, such as hydrocarbon gases (ethane and pentane) and aldehydes (malondialdehyde and 4-hydroxynonenal), which can consequently damage cell structure (Halliwell, 1995).
  • transition metals copper and iron ions
  • secondary peroxidation products such as hydrocarbon gases (ethane and pentane) and aldehydes (malondialdehyde and 4-hydroxynonenal)
  • NSAIDs non-spheroidal anti-inflammatory drugs
  • IVAs spheroidal anti-inflammatory drugs
  • AD adverse experiences
  • NSAIDs The mechanism of action of NSAIDs is based on the inhibition of the enzymatic activity of COX. NSAIDs are classified as: non-selective or nonspecific (inhibit COX-2 isoforms 1 and 2) and selective COX-2 (Sciulli et al. 2005).
  • Non-selective NSAIDs acetylsalicylic acid, indomethacin, naproxen, ibuprofen, diclofenac, among others
  • EAs that produce the gastrointestinal tract, becoming severe if administered for prolonged periods or in elderly patients advanced They can also cause elevated blood pressure and nephrotoxicity (Garc ⁇ a and Hernández-D ⁇ az, 2004; Lanas and Ferrandez, 2006).
  • COX-2-specific NSAIDs are newer-generation drugs and their high selectivity for isoform 2 supports better gastric tolerability (Silverstein et al. 2000). However, its use is associated with the occurrence of severe cardiovascular EAs that have even led to the withdrawal of rofecoxib and valdecoxib from the market (Blandizzi et al. 2008).
  • IEAs prednisone, prednisolone, dexamethasone, among others
  • gastrointestinal AD hyperglycemia
  • bone osteoporosis and osteonecrosis leading to various fractures
  • Cushing's syndrome arterial hypertension
  • petechiae and ecchymosis facial erythema, vertigo and headache
  • dual anti-inflammatories (5-LOX and COX inhibitors) reduce the progression and development of chronic inflammatory processes without producing the typical gastrotoxicity of nonspecific NSAIDs (Whitehouse and Butters, 2003; Whitehouse, 2004).
  • BPH Among the pathologies that involve chronic inflammation is BPH, since it is known that infiltration of inflammatory cells in the prostate is an important etiological factor in its development (Roehrborn, 2008; Zhu and McGinley, 2009) so substances that Possessing an anti-inflammatory effect could be useful in the treatment of this disease. BPH is, together with cancer and prostatitis, among the most relevant pathological processes that affect the prostate and decrease the quality of life of the adult male population, mainly in men over 50 years (Fernández and Pereira, 2008; Alcaraz et al., 2008).
  • BPH is the non-malignant and uncontrolled growth of the prostate, a gland that, when located at the exit of the bladder and surrounding the first part of the urethra, tends to cause obstruction when it grows. Consequently, the majority of patients with BPH present with symptoms of the urinary tract (STBU) such as urinary retention, decreased urine volume and urination pressure, increased latency to urinate, irritation, bladder incontinence and nocturia (Nix and Carson, 2007; Roehrborn, 2008; Zhu and McGinley, 2009).
  • STBU urinary tract
  • the etiology of BPH fundamentally involves a hormonal factor consisting in the increase in the conversion of testosterone to dihydrotestosterone (DHT) by the action of prosthetic 5-a-reductase that triggers cell proliferation and enlargement of the prostate (static component of BPH), and for a non-hormonal component consisting of the increase in the tone of the smooth muscle of the bladder and prostate (dynamic component) regulated by adrenoceptors (ADR) -al (Nix and Carson, 2007; Zhu and McGinley, 2009). While the hormonal component plays a crucial role in the development of hyperplasia and in increasing the size of the prostate, increasing the tone of the urogenital smooth muscles is essential in the development of STBU (Roehrborn, 2008).
  • DHT dihydrotestosterone
  • ADR adrenoceptors
  • the treatment of BPH includes, depending on the degree of progression of the disease, from careful surveillance to surgery, although the most commonly used is the pharmacological one, which is mainly based on using prostatic 5a-reductase inhibitors and antagonists of ADR-cc1 (Doggrell, 2004; Roehrborn et al., 2008; Schwinn and Roehrborn, 2008).
  • ADR-a1 antagonists (Alfuzosin, doxazosin, prazosin, terazosin, tamsulosin) usually relieve symptoms quickly, but do not affect prostate size and can cause AD such as orthostatic hypotension, fatigue, dizziness, ejaculatory dysfunction and alterations.
  • the mechanism of action of the ELSr is multifactorial and involves several of the aforementioned factors, such as the inhibition of 5a-reductase (Raynaud et al., 2000; Abe et al., 2009), the antagonism of ADR-a1 (Gerber et al., 2001; Debruyne et al., 2002; Abe et al., 2009), anti-inflammatory activity by inhibition of COX and 5-lipoxygenase (5-LOX) enzymes (Mogul et al., 2000; Potenziani , 2003; Raman et al., 2007; Curt ⁇ s, 2008) and antioxidant effects (Henry, 2000; Perona, 2005; Chapkin et al., 2007), among others. Although its preclinical toxicology data are scarce, the ELSr is well tolerated, and has a low frequency of AD (Rockville, 2005).
  • D004 Another lipid extract with potentialities in the treatment of BPH, D004, has recently been developed from fruits of Roystonea regia.
  • the mechanism of action that underpins its efficacy in PH models is multifactorial, and involves the competitive inhibition of prosthetic 5th reductase, and the non-competitive antagonism of the contractile response of ADR-a mediated prosthetic tissue.
  • D-004 produces anti-inflammatory pleiotropic effects (associated with the inhibition of 5-LOX) and antioxidants (both in normal prostate tissue and in hypertrophy), which could potentially contribute to its effectiveness (Menéndez, 2006; Pérez, 2008).
  • osteoarthritis the most common degenerative arthritis, which is characterized by a disorder of the normal balance between the synthesis and degradation of the cartilaginous matrix (constituted by proteoglycans, collagen and water), destruction of the cartilage, alteration of the subchondral bone and subsequent inflammatory reaction, in which the cartilage not only does not regenerate later, but can disappear (Little, 2008).
  • OA OA involves all components of the joint, not only cartilage, since structures such as subchondral bone, ligaments, joint capsule, synovial membrane, periarticular muscles, menisci and sensory nerve endings participate in the inflammatory process (Lotz, 2010; Heinegard, 2011).
  • the response of the subchondral bone in OA includes the production of "new bone” that leads to the development of marginal osteophytes that project outside as nodules that can be inflamed secondarily or as bone growths capable of irritating neighboring structures (Buckland-Wright, 2004; Little, 2008).
  • NSAIDs drugs that improve pain and functional disability
  • IEAs irritable bowel syndrome
  • NSAIDs produce various EAs.
  • Antiresortives have also been used in the management of OA, having shown that alendronate and estrogens significantly reduce subchondral bone lesions in elderly women with knee OA compared to untreated elderly women (Carbone, 2004), supporting the concept that the OA involves every joint organ (cartilage and bone).
  • the process for obtaining the active ingredient object of the present invention is based on the use of green or ripe fruits of the species A. crispa and / or A. aculeata, both of the Arecaceae family. These fruits are dried in environmental conditions or in stoves and milled in a knife mill, hammer or laminator until a particle size ⁇ 3 mm is obtained, and from this dry and ground material an active ingredient of a lipid nature composed mostly of Free fatty acids, although it can also contain lower sterile proportions and high molecular weight aliphatic alcohols.
  • an enzymatic (total or partial) hydrolysis can be applied, basic or acidic, with a subsequent recovery of the fatty acids, or the active ingredient can be obtained by selective extraction with organic solvents (hydrocarbons, alcohols, ethyl acetate, acetone or mixtures thereof) or by extraction with supercritical fluid. Hydrolysis can be applied directly to the ground plant material or to the lipid active ingredient obtained from it.
  • the dried and ground plant material is subjected to selective extraction with organic solvents, with subsequent filtration and removal of the solvents with reduced pressure heat, or extraction in supercritical conditions.
  • a conventional liquid solid extractor can be used, such as a stirred reactor or a soxhlet type extractor, where fatty acids (in the form of acylglycerides, ethyl esters and to a lesser extent free) are separated from the components that they are accompanied in the plant material by selectively dissolving in a suitable solvent, sought between alcohols of 1 to 3 carbon atoms (methanol, ethanol, 2-propanol) and hydrocarbons of 5 to 8 carbon atoms (pentane, isopentane, hexane, heptane and octane), ethyl acetate, acetone or mixtures thereof, and can also be obtained by supercritical extraction with CO 2 .
  • the extraction with ethanol favors the obtaining of ethyl esters, present in a small proportion in the plant, which is favored in an acid medium.
  • an enzymatic hydrolysis (with lipases) is applied, basic (with alkaline or alkaline toric hydroxidps, organic, or ammonium hydroxide) or acid (with hydrochloric, citric or sulfuric acid).
  • Said hydrolysis which can be total or partial, can be applied to the ground plant material or to the lipid extract obtained therefrom and subsequently the free fatty acids are recovered.
  • basic hydrolysis is applied, the fatty acids are released in an acidic medium with stirring (using dilute hydrochloric, citric or sulfuric acid) and separate from the aqueous phase forming an upper oil phase, which is washed with treated and dried water. with heat under reduced pressure.
  • This method achieves between 10 and 40% yield from the dried and ground plant material, resulting in obtaining this active ingredient, which is mainly composed of free or esterified linear acids such as acylglycerides or ethyl, mainly acids saturated with 8, 10, 12, 14, 16 and 18 carbon atoms, as well as with unsaturated 16 and 18 carbon atoms, and may also contain sterols and fatty alcohols.
  • the proportion of fatty acids (free or esterified) in this mixture is presented in Table 1.
  • Oleic Acid (Ci8; l) * 33.8 31.7 * The mixture of C 18: i oleic acid, Ci8: 2 linoleic acid and Ci 8: 3 linoleic acid is determined and reported as oleic acid.
  • Example 1 The effect of the active ingredients referred to in Example 1 was evaluated in a chronic inflammation model (cotton granuloma) for which they used male Sprague Dawley rats (250-270 g) adapted for 7 days to laboratory conditions. After the adaptation period the rats were distributed randomly in different groups and anesthetized with sodium thiopental (30 mg / kg, ip). The back area was disinfected with 70% alcohol and an incision was made in the lateral back half, creating a subcutaneous tunnel using blunt tweezers, where a 50 mg sterile cotton speck was placed. The wound was sutured and a local antiseptic was applied.
  • a chronic inflammation model cotton granuloma
  • rats were distributed randomly in different groups and anesthetized with sodium thiopental (30 mg / kg, ip).
  • the back area was disinfected with 70% alcohol and an incision was made in the lateral back half, creating a subcutaneous tunnel using blunt tweezers, where a 50 mg
  • the rats were sacrificed in an ether atmosphere, the granulomas were carefully dissected and placed in an oven at 60 ° C for 24 hours, until they reached a constant weight.
  • the weight of the cotton speck 50 mg was subtracted from this value.
  • the degree (%) of inhibition was expressed by taking the weight of the granuloma of the control group as 100% inflammation.
  • the extracts of the fruits of A. crispa and A. aculeata were emulsified in a Tween-20 / H 2 O solution.
  • the rats were randomly distributed in 7 groups (10 rats / group): a control treated with the vehicle, 3 groups treated with extracts of A. crispa and 3 with extracts of A. aculeata (25, 200 and 500 mg / kg) respectively.
  • Administration was performed by gastric intubation (5mL / kg) during the 6 days following the implantation of the cotton speck. Subsequently, the granuloma dry weight was quantified.
  • the comparison between the control and treated groups was made with the Mann Whitney U test.
  • Example 2 The effect of the active ingredients cited in Example 2 was evaluated in a model of acute inflammation (pleurisy by carragenin single dose in rats).
  • Male Sprague Dawley rats (190-290 g weight) were used, which were adapted for 7 days to laboratory conditions. After the adaptation period the animals were randomly distributed in different groups. Subsequently, the rats were anesthetized in ether atmosphere, an incision was made in the lateral dorsum and 0.3 ml of the 1% carrageenan solution in saline solution was injected into the pleural cavity. Five hours after the induction of inflammation, the rats were sacrificed to obtain pleural exudate, for which they were anesthetized in an ether atmosphere and bled by the abdominal aorta.
  • the pleural cavity was opened and 1 ml_ of 3.15% sodium citrate was added, which was homogenized with the exudate, which was carefully extracted using an automatic pipette. Once collected, it was transferred to a graduated plastic tube to determine the volume of exudate (VE). Subsequently, the activity of myeloperoxidase (MPO) in the exudate was determined.
  • MPO myeloperoxidase
  • the extracts of the fruits of A. crispa and A. aculeata were emulsified in a Tween-20 / H 2 O solution, being administered as single doses by gastric intubation (5mLJkg).
  • the rats were randomly distributed in 8 groups (10 rats / group): a negative control to which saline solution was injected into the pleural cavity and 7 groups to which pleurisy was induced by carrageenan injection: a vehicle-treated positive control, 3 treated groups with extracts of A. crispa and 3 with extracts of A. aculeata (25, 200 and 500 mg / kg) respectively.
  • the comparison between the control and treated groups was made using the Mann Whitney U test.
  • the carrageenan injection produced a significant increase in the VE and the enzymatic activity of the MPO in the exudate with respect to the negative control group (Table 8).
  • Administration of the object of the present invention 25, 200, 500 mg / kg orally (single dose) was effective in reducing the VE and inhibiting the enzymatic activity of the MPO in a significant and dose-dependent manner, so that the highest dose tested (500 mg / kg) reduced the VE by more than 50% compared to the positive control, and inhibited the activity of the MPO.
  • results obtained demonstrate the efficacy of the extracts of the fruits of A. crispa and A. aculeata in the carrageenan pleurisy model in rats, observing a dose-dependent reduction of the VE and the activity of the MPO, showing its potential as an anti-inflammatory.
  • Table 8 Effect of oral treatment with the extracts of the fruits of A. crispa and A. aculeata on the formation of edema and increased MPO activity in the carrageenan pleurisy model in rats.
  • mice young adult male OF- mice (20-30 g) adapted for 7 days to laboratory conditions were used. After the adaptation period the mice were randomly distributed into 6 groups: a negative control + vehicle, a positive control (treated with the vehicle + application of Xylene); and 4 treated with the extracts of A. crispa, A. aculeata, ELSr and D004, to which xylene was applied, all administered at doses of 400 mg / kg. All treatments were administered 1 hour before edema induction.
  • Edema induction was performed, topically applying 30 ⁇ L ⁇ of pure xylene on the dorsal surface of the right ear of the mouse. Two hours later the edema was quantified, for which the mice were anesthetized in ether atmosphere and sacrificed by cervical dislocation. Both ears were cut and weighed on an analytical balance (Mettler Toledo). Edema formation was calculated by the difference in weight (mg) between the right ear (with edema) and the left ear (without edema) ( ⁇ ). The comparison between the control and treated groups was made using the Mann Whitney U test.
  • Topical application of xylene significantly increased the difference in weight between both ears, indicative of edema formation compared to the negative control group (table 9). All treatments significantly inhibited the increase in edema.
  • Example 4 To evaluate the antioxidant effect of the active ingredients referred to in Example 4, male Sprague Dawley rats (200-250 g weight) adapted for 7 days to laboratory conditions were used. After completing their adaptation period, the animals were randomly distributed in different groups, anesthetized in ether atmosphere and bled by the abdominal aorta. Blood was collected with EDTA (10%) (final concentration: 1mg / ml of blood). The plasma was obtained by centrifugation at 3000 rpm for 10 min and was used to determine the concentrations of malondialdehyde (MDA) (product of PL) and sulfydryl groups (SH) (product of protein oxidation).
  • MDA malondialdehyde
  • SH sulfydryl groups
  • the extracts of the fruits of A. crispa and A. aculeata were emulsified in a Tween-20 / H2O solution.
  • the rats were randomly distributed into 9 groups (10 rats / group): a vehicle-treated control, 4 with A. crispa extracts and 4 with A. aculeata extracts (5, 25, 50 and 200 mg / kg), respectively .
  • the treatments were administered by gastric intubation for 30 days. Subsequently, the plasma concentrations of MDA and SH were quantified.
  • the comparison between the control and treated groups was made using the Mann Whitney U test. As can be seen in Table 10, both extracts reduced the plasma figures of MDA and SH in a marked and significant way. With A.
  • Example 5 To evaluate the effect of the active ingredients described in Example 5, they were emulsified in a Tween-20 / H2O vehicle and their effects on an HP model in rats were investigated.
  • male Sprague Dawley rats 300 - 360 g adapted for 7 days to laboratory conditions were used, which were randomly distributed in 8 experimental groups: a negative control + (vehicle) and 7 groups to which they were induced HP with testosterone injection (4 mg / kg), a positive control, which only received the vehicle, and another 6 treated: 3 of them with the extract of the fruits of A. crispa and 3 with that of A. aculeata ( 50, 200 and 400 mg / kg).
  • Testosterone propionate was dissolved in vegetable oil and injected daily, sc for 14 days.
  • Oral treatments were administered. by gastric intubation (5mL / kg), once a day, for 14 days. Subsequently, the rats were sacrificed under anesthesia, bled, he opened his abdomen through an incision in the ventral midline, his prostates were separated from the bladders, they were removed and weighed. The comparison between the control and treated groups was made with the Mann Whitney U test.
  • Testosterone injection produced a significant increase in prostate weight and prostate weight / body weight ratio compared to the negative control group (Table 11).
  • the administration of the extracts of the fruits of A. crispa and A. aculeata orally for 14 days significantly reduced the increase in the size of the prostate induced by the injection of testosterone ( ⁇ 44% with the highest dose tested).
  • the effect of the active ingredients referred to in example 1 on an osteoarthritis model was evaluated in the mono-iodoacetate-induced arthritis (MIA) model in rats.
  • MIA mono-iodoacetate-induced arthritis
  • Male Sprague Dawley rats with body weight between 150 and 175g adapted for 7 days were adapted to the laboratory conditions, which were randomly distributed in 8 experimental groups: a negative control + (vehicle) and 7 groups to which they were induced damage with MIA; a positive control, which only received the vehicle, and another 6 treated: 3 of them with the extract of the fruits of A. crispa and 3 with that of A. aculeata (100, 200 and 400 mg / kg).
  • the left knee joint was removed and kept in formalin for 24 hours. It was then decalcified in 0.5 M disodium EDTA (pH 7.4) at 4 ° C for 4 weeks. Upon completion of decalcification the joint was sectioned in the longitudinal plane to obtain 2 halves, being subsequently included in paraffin, cut and colored with Hematoxylin and Eosin and toluidine blue to analyze the cartilage.
  • Cartilage damage was assessed according to its depth and extent using the modified Mankin score, as follows: • Depth (0-5): 0- normal, 1- minimum, affecting only the surface area, 2- slight invasion of the upper middle zone only, 3- moderate invasion also in the middle zone, 4- marked invasion to the deep zone, but not to the dividing line or interphase existing between the uncalcified and calcified cartilage (tidemark) and 5- severe degradation from all the thickness to the dividing line between the non-calcified and the calcified cartilage.
  • Matrix staining reduction (0-4): 0 - normal / slight staining reduction, 1- reduced coloration in the radial layer, 2-reduced coloration in the inter-territorial matrix, 3- coloration present only in the pericellular matrix and 4- absent coloration.
  • Cartilage changes (0-6): 0-normal, 1-irregular surface, including fissures in the radial layer, 2 - pannus, 3 - absence of superficial layers of cartilage, 4 - slight disorganization (absent cell columns, some conglomerates small superficial), 5- fissure in the calcified cartilage layer, and 6- disorganization (chaotic structure, conglomerates and osteoclastic activity).
  • Cellular abnormalities (0-3): 0- normal, 1- hypercellularity, including small surface conglomerates, 2- conglomerates and 3- hypocellularity.
  • Loss of cortical or trabecular bone 0- normal, 1- minimal loss of cortical bone in a few places, 2- slight loss of cortical or trabecular bone, 3- moderate loss of bone in many places and 4 - marked loss of bone in many sites with fragmentation and penetration throughout the thickness of the inflammatory process or the formation of pannus in the cortical bone.
  • Osteoclasts (0-4): 0 -normal (essentially non-osteoclasts), 1- few osteoclasts (aligned in 5% of the majority of the affected bone surface), 2 -some osteoclasts (aligned between 5 and 25 % of most affected bone surfaces), 3- many osteoclasts (aligned between 26-50% of most affected bone surfaces) and 4-large number of osteoclasts (aligned on more than 50% of the affected bone surface ).
  • the mean scores of the histological parameters studied were calculated.
  • the histological score was calculated as the average of all the histological variables evaluated.
  • the comparison between the control and treated groups was made with the Mann Whitney U test.
  • MIA mono-iodoacetate
  • MIA mono-iodoacetate
  • MIA mono-iodoacetate
  • Example 1 Several formulations with the active ingredient referred to in Example 1 were developed in doses between 50 and 1000 mg, as presented below: tablets containing corn starch, lactose, talc, gelatin, croscarmellose sodium, magnesium stearate, carboxymethylcellulose; hard capsules and soft gelatin capsules.
  • Lotions and shampoo containing the active ingredient referred to in Example 1 in concentrations between 0.1 and 90%, and as excipients, polysorbates, propylene glycol, carboxymethyl cellulose, glycerin, sodium lauryl sulfate, methyl and propyl parabens, sodium monobasic phosphate, purified water and triethanolamine.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)

Abstract

Esta invención está relacionada con la obtención de un nuevo ingrediente activo y su proceso de obtención a partir de los frutos verdes o maduros de Acrocomia crispa y/o Acrocomia aculeata, ambas de la familia Arecaceae. Dicho ingrediente activo puede ser empleado como suplemento nutricional, Formulaciones con funciones cosméticas-terapéuticas o en composiciones farmacéuticas para prevenir y/o tratar la inflamación y el estrés oxidativo, e incluye una mezcla de ácidos grasos (libres y/o como acilglicéridos o ésteres etílicos) entre 6 y 28 átomos de carbono, mayoritariamente los saturados de cadena lineal de 8, 10, 12, 14, 16 y 18 átomos de carbono y los insaturados de 16 y 18 átomos de carbono, pudiendo contener además esteróles y alcoholes grasos de alto peso molecular.

Description

COMPUESTOS A PARTIR DE LOS FRUTOS DE ACROCOMIA CRISPA Y ACROCOMIA ACULEATA CONTRA LA INFLAMACIÓN Y EL ESTRÉS
OXIDATIVO Sector técnico.
Esta invención está relacionada con la obtención de un nuevo ingrediente activo que puede ser empleado como suplemento nutricional o como producto farmacéutico o cosmético, con vistas a prevenir y/o tratar los procesos inflamatorios y el estrés oxidativo que acompañan al proceso de envejecimiento y a numerosas patologías, tales como la hiperplasia prostática benigna (HPB), la prostatitis y la osteoartritis, entre otras, así como también está relacionada con el proceso de obtención de dicho ingrediente activo a partir de frutos verdes o maduros de Acrocomia crispa o de Acrocomia aculeata, ambas de la familia Arecaceae. Este ingrediente activo incluye una mezcla de ácidos grasos lineales entre 6 y 28 átomos de carbono, mayoritariamente los saturados: C8:0, Cio:o, Ci2:o, C14.0, Ci6:o y Ci8:o, y los insaturados: Ci6:i, Ci8:i, Ci8:2 y Cíes, pudiendo contener además esteróles y alcoholes grasos de alto peso molecular.
El proceso de obtención de este ingrediente activo parte de secar y moler los frutos, y puede incluir una hidrólisis parcial o total (enzimática, básica o ácida) tanto del material vegetal como de su fracción lipídica con recuperación posterior de los ácidos grasos; la extracción selectiva de la fracción lipídica se puede realizar con disolventes orgánicos o mediante una extracción con fluido supercrítico. Ambos procedimientos, con y sin hidrólisis, permiten obtener ingredientes activos con efectos farmacológicos y fisiológicos similares.
La presente invención se relaciona con la industria alimenticia y con la farmacéutica, pues el ingrediente activo obtenido puede ser utilizado como tal o en dosis entre 50 y 1000 mg, como parte de formulaciones nutricionales, cosméticas y/o farmacéuticas para la prevención y/o el tratamiento de la inflamación y el estrés oxidativo, incluida la HPB, la prostatitis y osteoartritis.
Nivel conocido de la técnica. Características de las soluciones técnicas análogas
La inflamación es la respuesta vascular y celular de los tejidos a la infección, irritación o a la presencia de sustancias extrañas. Este es uno de los mecanismos de defensa más importantes del organismo, pero cuando la respuesta se incrementa demasiado puede ser perjudicial y en algunos casos fatal. La inflamación constituye un factor etiológico importante en el desarrollo de enfermedades crónicas como la osteoartritis, la HPB, la prostatitis, las enfermedades inflamatorias del intestino, el cáncer, entre otras. La frecuencia de padecer enfermedades inflamatorias crónicas se incrementa con la edad y con el aumento de la expectativa de vida.
Durante la inflamación, las células activadas son capaces de utilizar los lípidos de su membrana celular para generar mediadores lipidíeos que actúan como señales intracelulares o extracelulares. El ácido araquidónico (AA), ácido graso polinsaturado de 20 átomos de carbono (ácido 5, 8, 11 , 14-eicosatetraenóico) obtenido de los alimentos o por conversión del ácido linoléico, se libera de los fosfolípidos de la membrana celular a través de la activación de la fosfolipasa A2, enzima que se activa por estímulos físicos, químicos o biológicos (Aster, 2009). Los metabolitos derivados del AA, denominados eicosanoides, se sintetizan a través de la vía de las enzimas ciclooxigenasas (COX) (COX-1 y COX-2), la cual permite la generación de prostaglandinas, y tromboxanos, y a través de la vía de las lipooxigenasas (LOX), familia de enzimas citosólicas 5-LOX, 15-LOX y 12-LOX, que permiten la generación de leucotrienos y lipoxinas (Díaz, 2001 ; Gajraj, 2003). Los eicosanoides pueden intervenir en las diferentes fases de la inflamación, se encuentran en el exudado inflamatorio y su síntesis está incrementada en los lugares de la inflamación.
La inflamación se clasifica, de acuerdo con la intensidad y duración de la respuesta, en aguda o crónica. La inflamación aguda es de corta duración e involucra tres mecanismos fundamentales: vasodilatación, aumento de la permeabilidad capilar y migración leucocitaria (principalmente de neutrófilos) desde la sangre hacia el foco inflamatorio, aunque también incluye la fagocitosis y la regeneración y reparación celular (Gallin et al. 1992). Los signos característicos de la inflamación aguda son: rubor, hinchazón, calor, dolor y pérdida de la función (Parakrama y Clive, 2005; Porth, 2007).
Por su parte, la inflamación crónica puede durar semanas o meses y se caracteriza por la infiltración predominante de linfocitos y macrófagos en el sitio de la lesión, aunque también participan eosinófilos, mastocitos, linfocitos y neutrófilos. La proliferación de vasos sanguíneos y la presencia de fibrosis y necrosis tisular también caracterizan esta fase (Choyillas, 2000). La inflamación y el estrés oxidativo están estrechamente relacionados, ya que se ha descrito que la peroxidación lipídica (PL) de los ácidos grasos polünsaturados (AGPI) por vía enzimática produce especies radicalarias de origen lipídico, las que se producen en este caso, de manera controlada, por la acción de enzimas implicadas en vías metabólicas celulares. Dentro de este tipo de PL se describe típicamente las acciones de la LOX y la COX, puesto que ambas enzimas catalizan la reacción entre el O2 y varios AGPI produciendo hidroperóxidos y endoperóxidos lipidíeos. En el caso de la LOX se describe que su acción catalítica sobre el AA genera hidroperóxidos lipidíeos (HPETE) que pueden a su vez transformarse en productos hidroxilados (HETE).
Por otro lado, aunque los hidroperóxidos orgánicos formados son estructuras bastante estables, pueden descomponerse en presencia de metales de transición (iones cobre y hierro) y generar una compleja mezcla de productos de peroxidación secundarios, tales como gases hidrocarburos (etano y pentano) y aldehidos (malondialdehido y 4-hidroxinonenal), que consecuentemente pueden dañar la estructura celular (Halliwell, 1995).
En tal sentido y con el objetivo de aliviar la inflamación se ha desarrollado y utilizado durante décadas una amplia gama de agentes antiinflamatorios, tanto de origen sintético como natural. Dentro de los más reconocidos se encuentran los antiinflamatorios no esferoidales (AINE) y los esferoidales (AIE), medicamentos muy efectivos empleados para tratar la inflamación aguda, crónica y el dolor asociado, los cuales representan clases terapéuticas muy prescritas. No obstante, estos agentes producen diversas experiencias adversas (EA), entre las que se destacan las gastrointestinales, renales y/o cardiovasculares, según el tipo de anti-inflamatorio (Salles, 2007).
El mecanismo de acción de los AINE se basa en la inhibición de la actividad enzimática de la COX. Los AINE se clasifican en: no selectivos o inespecíficos (inhiben las isoformas 1 y 2 de la COX) y selectivos de la COX-2 (Sciulli et al. 2005). Los AINE no selectivos (ácido acetil salicílico, indometacina, naproxeno, ibuprofeno, diclofenaco, entre otros) son muy efectivos en el control del dolor y de la progresión de enfermedades inflamatorias agudas y crónicas, pero su principal limitación la constituyen las EA que producen sobre el tracto gastrointestinal, llegando a ser severos si se administran por períodos prolongados o en pacientes de edad avanzada. También pueden producir elevación de la presión arterial y nefrotoxicidad (García y Hernández-Díaz, 2004; Lanas y Ferrandez, 2006).
Los AINE específicos de la COX-2 (celecoxib, etoricoxib) son medicamentos de generación más reciente y su alta selectividad por la isoforma 2 sustenta una mejor tolerabilidad gástrica (Silverstein et al. 2000). Sin embargo, su uso se asocia a la ocurrencia de severas EA cardiovasculares que incluso han conducido a la retirada del mercado del rofecoxib y valdecoxib (Blandizzi et al. 2008). Los AIE (prednisona, prednisolona, dexametasona, entre otros) producen EA gastrointestinales, hiperglicemia, óseos (osteoporosis y osteonecrosis que conducen a diversas fracturas, síndrome de Cushing, hipertensión arterial, petequias y equimosis, eritema facial, vértigo y cefaleas) (Mazziotti et al. 2006; Kerachian et al. 2009). Finalmente, los antiinflamatorios duales (inhibidores de la 5-LOX y la COX) reducen la progresión y desarrollo de los procesos inflamatorios crónicos sin producir la gastrotoxicidad típica de los AINE inespecíficos (Whitehouse y Butters, 2003; Whitehouse, 2004). Entre las patologías que involucran la inflamación crónica se encuentra la HPB, ya que se conoce que la infiltración de células inflamatorias en la próstata constituye un factor etiológico importante en su desarrollo (Roehrborn, 2008; Zhu y McGinley, 2009) por lo que sustancias que posean un efecto antiinflamatorio podrían ser útiles en el tratamiento de esta enfermedad. La HPB se encuentra, junto al cáncer y la prostatitis, entre los procesos patológicos más relevantes que afectan la próstata y disminuyen la calidad de vida de la población masculina adulta, fundamentalmente en hombres mayores de 50 años (Fernández y Pereira, 2008; Alcaraz et al., 2008). La HPB consiste en el crecimiento no maligno e incontrolado de la próstata, glándula que al localizarse a la salida de la vejiga y rodear la primera parte de la uretra, tiende a causar obstrucción cuando crece. En consecuencia, la mayoría de los pacientes con HPB presentan síntomas del tracto bajo urinario (STBU) como retención urinaria, disminución del volumen de orina y de la presión de la micción, latencia aumentada para orinar, irritación, incontinencia vesical y nocturia (Nix y Carson, 2007; Roehrborn, 2008; Zhu y McGinley, 2009).
La etiología de la HPB, multifactorial y no del todo dilucidada, involucra fundamentalmente un factor hormonal consistente en el aumento de la conversión de testosterona en dihidrotestosterona (DHT) por acción de la 5 a-reductasa prostética que desencadena la proliferación celular y el agrandamiento de la próstata (componente estático de la HPB), y por un componente no hormonal consistente en el aumento del tono del músculo liso de la vejiga y la próstata (componente dinámico) regulado por los adrenoreceptores (ADR)-al (Nix y Carson, 2007; Zhu y McGinley, 2009). Mientras el componente hormonal desempeña un papel crucial en el desarrollo de la hiperplasia y en el aumento del tamaño de la próstata, el aumento del tono de la musculatura lisa urogenital es fundamental en el desarrollo de los STBU (Roehrborn, 2008).
El tratamiento de la HPB incluye, según el grado de avance de la enfermedad, desde la vigilancia atenta hasta la cirugía, si bien el más utilizado es el farmacológico, el cual se basa fundamentalmente en emplear inhibidores de la 5a-reductasa prostática y antagonistas de los ADR-cc1 (Doggrell, 2004; Roehrborn et al., 2008; Schwinn y Roehrborn, 2008). Sin embargo, el tratamiento con los primeros (finasteride, dutasteride), aunque previene la progresión de la HPB y reduce moderadamente el volumen prostático, no siempre mejora los síntomas y puede provocar EA como disminución de la libido, impotencia y trastornos de la eyaculación (Sandhu y Te, 2004; González y Vegas, 2007; Roehrborn, 2008; Roehrborn et al., 2008). Por su parte, los antagonistas de los ADR-a1 (Alfuzosin, doxazosin, prazosin, terazosin, tamsulosin) suelen aliviar rápidamente los síntomas, pero no afectan el tamaño prostático y pueden provocar EA como hipotensión ortostática, fatiga, mareos, disfunción eyaculatoria y alteraciones del músculo iridiano (Lepor, 2006; Van Dijk et al., 2006; Bar-Yosef et al., 2008; Prata et al., 2009). Además, la inflamación crónica y el aumento del estrés oxidativo se vinculan a la etiopatogenia de la HPB, ya que evidencias crecientes demuestran la importancia de la inflamación crónica en la etiología y progresión de la HPB, por lo cual recientemente se incorpora el uso de sustancias antiinflamatorias al manejo de esta patología. Por otra parte, varias evidencias sugieren una relación causal entre el estrés oxidativo celular en el tejido prostático y el desarrollo de la HPB, y que sustancias que reducen la hiperplasia prostática (HP) y producen efectos antioxidantes, presentan un beneficio adicional sobre la próstata hipertrofiada (Aydin et al., 2006; Aryal et al., 2007; Siddiqui et al., 2006; Belostottskaia et al., 2006; Prasad et al., 2006).
Entre los tratamientos farmacológicos de la entidad HPB/STBU se destaca sin embargo, como una alternativa con menores EA, la fitoterapia con extractos de frutos de Serenoa repens, semillas de Cucúrbita pepo, resina del árbol Prunus africana y raíces de Urtica dioica (Wilt et al., 2000; Koch, 2001 ; Curtís, 2008). De estos, el extracto lipídico de los frutos de S. repens (ELSr), consistente en una mezcla de ácidos grasos libres y esterificados, esteróles y alcoholes grasos, es el más utilizado (Lowe, 2001 ; Gordon y Shaughnessy, 2003; Rockville, 2005; Curtís, 2008). El mecanismo de acción del ELSr es multifactorial e involucra varios de los factores referidos, tales como la inhibición de la 5a-reductasa (Raynaud et al., 2000; Abe et al., 2009), el antagonismo de los ADR-a1 (Gerber et al., 2001 ; Debruyne et al., 2002; Abe et al., 2009), la actividad antí-inflamatoria por inhibición de las enzimas COX y 5-lipooxigenasa (5-LOX) (Mogul et al., 2000; Potenziani, 2003; Raman et al., 2007; Curtís, 2008) y efectos antioxidantes (Henry, 2000; Perona, 2005; Chapkin et al., 2007), entre otros. Aunque sus datos de toxicología preclínica son escasos, el ELSr es bien tolerado, y presenta una baja frecuencia de EA (Rockville, 2005).
Otro extracto lipídico con potencialidades en el tratamiento de la HPB, el D004, ha sido recientemente desarrollado a partir de frutos de Roystonea regia. El mecanismo de acción que sustenta su eficacia en modelos de HP es multifactorial, e involucra la inhibición competitiva de la 5a reductasa prostética, y el antagonismo no competitivo de la respuesta contráctil del tejido prostético mediada por los ADR-a . Además, el D-004 produce efectos pleiotrópicos anti-ínflamatorios (asociados a la inhibición de la 5-LOX) y antioxidantes (tanto en tejido prostático normal como en el hipertrofiado), lo cual potencialmente podría contribuir a su eficacia (Menéndez, 2006; Pérez, 2008).
Otra de las patologías donde se encuentran presentes procesos inflamatorios es la osteoartritis (OA), la más común de las artritis degenerativas, que se caracteriza por un desorden del equilibrio normal entre la síntesis y degradación de la matriz cartilaginosa (constituida por proteoglicanos, colágeno y agua), destrucción del cartílago, alteración del hueso subcondral y posterior reacción inflamatoria, en la cual el cartílago no solo no se regenera posteriormente, sino que puede llegar a desaparecer (Little, 2008).
En el pasado las investigaciones sobre OA se centraban fundamentalmente en la degeneración del cartílago por considerarse el cambio subyacente más importante, pero actualmente se acepta que la OA involucra todos los componentes de la articulación, no sólo el cartílago, ya que estructuras como el hueso subcondral, ligamentos, cápsula articular, membrana sinovial, músculos periarticulares, meniscos y terminaciones nerviosas sensoriales participan en el proceso inflamatorio (Lotz, 2010; Heinegard, 2011). La respuesta del hueso subcondral en la OA incluye la producción de "hueso nuevo" que da lugar al desarrollo de osteofitos marginales que se proyectan al exterior como nodulos que pueden inflamarse secundariamente o bien como crecimientos óseos capaces de irritar estructuras vecinas (Buckland- Wright, 2004; Little, 2008).
Los medicamentos más utilizados para tratar la OA son los que mejoran el dolor y la incapacidad funcional como los AINE y AIE, pero que no modifican el curso de la enfermedad, ya que no evitan el daño del cartílago (McMahon, 2008). Los AINE producen diversas EA. Los antiresortivos también se han utilizado en el manejo de la OA, habiéndose demostrado que el alendronato y los estrógenos reducen significativamente las lesiones de hueso subcondral en ancianas con OA de rodilla con respecto a las ancianas no tratadas (Carbone, 2004), apoyando el concepto de que la OA involucra todo órgano articular (cartílago y hueso).
El aumento del estrés oxidativo, desequilibrio entre la producción de especies reactivas de oxígeno (ROS) y radicales (RL) generados en el metabolismo celular y la capacidad de los sistemas antioxidantes para contrarrestar su producción y/o efectos, se considera un factor que contribuye a la etiopatogenia de la OA, en la cual se produce un aumento de la PL y una reducción de defensas antioxidantes endógenas como la vitamina C y la actividad de la superóxidodismutasa (SOD) (Manesh, 2005; Chandran, 2009).
Sin embargo, hasta el presente no se había reportado la obtención de ingredientes activos a partir de frutos de las especies Acrocomia crispa (A, crispa) y/o Acrocomia aculeata (A. aculeata), con efectos antioxidantes y efectivos en la prevención y tratamiento de procesos inflamatorios, incluidos los anteriormente referidos, ni tampoco un método tan sencillo y económico para la obtención de este tipo de sustancia. El ingrediente activo reivindicado en la presente invención supera además en eficacia y potencia a los extractos de origen natural anteriormente mencionados sin presentar los efectos adversos reportados para las drogas sintéticas. Exposición de la invención.
El procedimiento de obtención del ingrediente activo objeto de la presente invención se basa en el empleo de los frutos verdes o maduros de las especies A. crispa y/o A. aculeata, ambas de la familia Arecaceae. Dichos frutos son secados en condiciones ambientales o en estufas y molidos en un molino de cuchillas, martillo o laminador hasta obtener un tamaño de partícula < 3 mm, y a partir de este material seco y molido se obtiene un ingrediente activo de naturaleza lípídica compuesto mayoritariamente por ácidos grasos libres, aunque también puede contener en menores proporciones esteróles y alcoholes alifáticos de alto peso molecular. En la obtención de dicho ingrediente activo se puede aplicar una hidrólisis (total o parcial) enzimática, básica o ácida, con una posterior recuperación de los ácidos grasos, o bien obtener el ingrediente activo mediante una extracción selectiva con disolventes orgánicos (hidrocarburos, alcoholes, acetato de etilo, acetona o mezclas de estos) o mediante una extracción con fluido supercrítico. La hidrólisis puede ser aplicada directamente al material vegetal molido o al ingrediente activo lipídico obtenido a partir de él.
Para obtener el ingrediente activo con los ácidos grasos mayoritariamente en forma de acilglicéridos o ésteres etílicos el material vegetal seco y molido se somete a una extracción selectiva con disolventes orgánicos, con posterior filtrado y eliminación de los disolventes con calor a presión reducida, o a una extracción en condiciones supercríticas. En el proceso de extracción se puede emplear un extractor sólido líquido convencional, como un reactor con agitación o un extractor del tipo soxhlet, donde los ácidos grasos (en forma de acilglicéridos, ésteres etílicos y en menor proporción libres) se separan de los componentes que les acompañan en el material vegetal al disolverse selectivamente en un disolvente adecuado, buscado entre alcoholes de 1 a 3 átomos de carbono (metanol, etanol, 2-propanol) e hidrocarburos de 5 a 8 átomos de carbono (pentano, isopentano, hexano, heptano y octano), acetato de etilo, acetona o mezclas de estos, y también pueden obtenerse por extracción supercrítica con CO2. La extracción con etanol propicia la obtención de ésteres etílicos, presentes en pequeña proporción en la planta, lo cual se favorece en un medio ácido.
Para obtener el ingrediente activo con los ácidos grasos en forma libre se aplica una hidrólisis enzimática (con lipasas), básica (con hidróxidps alcalinos o alcalino tórreos, orgánicos, o hidróxido de amonio) o ácida (con ácido clorhídrico, cítrico o sulfúrico). Dicha hidrólisis, que puede ser total o parcial, se puede aplicar al material vegetal molido o al extracto lipídico obtenido a partir de él y posteriormente se recuperan los ácidos grasos libres. Al ser aplicada la hidrólisis básica, los ácidos grasos son liberados en un medio ácido con agitación (empleando ácido clorhídrico, cítrico o sulfúrico diluido) y se separan de la fase acuosa formando una fase oleosa superior, la cual es lavada con agua tratada y secada con calor a presión reducida.
Por este método se logra entre un 10 y un 40 % de rendimiento a partir del material vegetal seco y molido, resultando la obtención de este ingrediente activo, el cual se compone mayoritariamente por ácidos lineales libres o esterificados como acilglicéridos o etílicos, principalmente los ácidos saturados de 8, 10, 12, 14, 16 y 18 átomos de carbono, así como por los insaturados de 16 y 18 átomos de carbono, pudiendo también contener esteróles y alcoholes grasos. La proporción de ácidos grasos (libres o esterificados) en esta mezcla se presenta en la Tabla 1.
Tabla 1. Contenido de ácidos grasos en el ingrediente activo
Figure imgf000010_0001
* Se determina y se reporta como ácido oleico a la mezcla del propio ácido oleico C18.1 (60 - 70 % del total); el linoleico Ci8:2 (25 - 40 % del total) y el linolénico C18.3 (<
10 % del total).
Una valoración global permite afirmar que esta sustancia o ingrediente activo es más eficaz y potente que los ingredientes activos de origen vegetal conocidos hasta el presente para la prevención y/o tratamiento de procesos inflamatorios y estrés oxidativo, incluidos la HPB, la prostatitis y la osteoartritis. Este ingrediente activo ha demostrado ausencia de toxicidad en estudios con roedores y ha resultado muy bien tolerado en humanos, lo cual representa una ventaja de su uso potencial.
Ejemplos de realización.
Los objetivos de la presente invención se describirán en detalle a continuación mediante ejemplos que no limitan al alcance de la misma.
Ejemplo 1
Se toman 5 kg. de frutos frescos de A. crispa, se ponen a secar en estufa con temperatura controlada a 60 °C durante 7 días y posteriormente se muelen en molino de cuchillas hasta obtener un tamaño de partícula comprendido entre 500 y 2000 μίπ. De este polvo se toman 1000 g y se sitúan en un reactor agitado, se someten a extracción con 10 L de hexano con calentamiento a 55 °C y agitación constante durante 16 horas, este proceso se repite tres veces. Al cabo de este tiempo se filtra y se evapora a sequedad a 50 °C empleando vacío. La sustancia obtenida pesa 120 g y presenta la composición mostrada en la Tabla 2, la cual se determina por cromatografía de gases. Al aplicar igual procedimiento a frutos de A. aculeata se obtuvieron 150 g de ingrediente activo.
Tabla 2. Composición de ácidos grasos (%) en el ingrediente activo
Figure imgf000011_0001
Se determina y se reporta como ácido oleico a la mezcla del ácido oleico Cie:i, el linoleico Ci8:2 y el linolénico C18.3. Ejemplo 2
Se toman 10 kg. de frutos frescos de A. aculeata, se ponen a secar en condiciones ambientales durante 15 días y posteriormente se muelen empleando un molino de martillos hasta obtener un tamaño de partícula < 1500 μιτι. De este polvo se toman 1000 g, se someten a hidrólisis alcalina, se liberan los ácidos con HCI al 30 %, se extrae la fase orgánica, se lava 5 veces con agua, se filtra y se evapora a sequedad a 80 °C con la ayuda de vacío. La sustancia así obtenida se pesa (200 g) y se analiza por cromatografía de gases, resultando la composición que se presenta en la Tabla 3. Al aplicar igual procedimiento a frutos de A. crispa se obtuvieron 230 g de ingrediente activo.
Tabla 3. Composición de ácidos grasos (%) en el ingrediente activo
Figure imgf000012_0001
* Se determina y se reporta como ácido oleico a la mezcla del ácido oleico Cie:i, el linoleico C^ y el linolénico Cie.3- Ejemplo 3
Se toman 5 kg. de frutos frescos de A. crispa y 5 kg de frutos frescos de A. aculeata y, se ponen a secar en estufa con temperatura controlada a 45 °C durante 7 días y posteriormente se muelen empleando un molino hasta obtener un tamaño de partícula comprendido entre 1500 y 1800 μητι. De este polvo se toman 1000 g, se someten a extracción supercrítica continua con 10 L de CO2 por 2 h a 35 °C y 250 bar. Posteriormente el extracto obtenido se somete a hidrólisis enzimática, se pesa (150 g) y se analiza por cromatografía de gases, presentando la composición que se muestra en la Tabla 4. Tabla 4. Composición de ácidos grasos (%) en el ingrediente activo
Figure imgf000013_0001
* Se determina y se reporta como ácido oleico a la mezcla del ácido oleico Cia:i, el linoleico Cis:2 y el linolénico Ci8:3-
Ejemplo 4
Se tomaron 10 kg. de frutos frescos de A. crispa, se pusieron a secar en condiciones ambientales durante 20 días y posteriormente se molieron empleando un molino laminador hasta obtener un tamaño de partícula < 1000 μητι. De este polvo se tomaron 1000 g, los que se trataron en soxhiet con 10 L de etanol a 65 °C con agitación constante durante 36 horas. Al cabo de este tiempo se filtró y se evaporó a sequedad a 80 °C empleando vacío. Luego de eliminado el disolvente se hidrolizó parcialmente con una disolución de hidróxido de amonio a 60 °C. Liberados los ácidos grasos con ácido sulfúrico al 10 % el extracto así obtenido se lavó con agua y se secó al vacío, se pesó (300 g) y se analizó por cromatografía de gases, la composición obtenida se presenta en la Tabla 5. Al aplicar igual procedimiento a frutos de A. aculeata se obtuvieron 280 g de ingrediente activo.
Tabla 5. Composición de ácidos grasos (%) en el ingrediente activo
Componente Ingrediente activo Ingrediente activo
obtenido de A. obtenido de A.
crispa (%) aculeata (%)
Acido caprílico (Ca o) 0,9 0,7
Acido cáprico (C10.0) 1 ,5 1 ,8
Acido láurico (Ci2:o) 39,8 39,9
Acido mirístico (Ci4;o) 14,3 14,1
Acido palmítico (Ci6:o) 7,4 8,6
Acido palmitoleico (C16.1) 1 ,2 0,9
Ácido esteárico (Ci8:o) 1 ,1 1 ,3
ÁcidO OleiCO (Ci8;l) * 33,8 31 ,7 * Se determina y se reporta como ácido oleico a la mezcla del ácido oleíco C18:i, el linoleico Ci8:2 y el linolénico Ci8:3.
Ejemplo 5
Se tomaron 10 kg. de frutos frescos de A. crispa, se pusieron a secar en condiciones ambientales durante 20 días y posteriormente se molieron empleando un molino laminador hasta obtener un tamaño de partícula < 1000 μηη. De este polvo se tomaron 1000 g, los que se trataron en un reactor agitado con 10 L de etanol a 65 °C con agitación constante durante 36 horas. Al cabo de este tiempo se filtró y se evaporó a sequedad a 80 °C empleando vacío. Luego de eliminado el disolvente se hidrolizó con una disolución de ácido clorhídrico a 60 °C. El extracto así obtenido se lavó con agua y se secó al vacío, se pesó (250 g) y se analizó por cromatografía de gases, la composición obtenida se presenta en la Tabla 6. Al aplicar igual procedimiento a frutos de A. aculeata se obtuvieron 220 g de ingrediente activó.
Tabla 6. Composición de ácidos grasos (%) en el ingrediente activo
Figure imgf000014_0001
* Se determina y se reporta como ácido oleico a la mezcla del ácido oleico C18.1 , el linoleico Ci8:2 y el linolénico Ci8:3.
Ejemplo 6
El efecto de los ingredientes activos referidos en el ejemplo 1 se evaluó en un modelo de inflamación crónica (granuloma por algodón) para lo cual utilizaron ratas Sprague Dawley machos (250 - 270 g) adaptadas durante 7 días a las condiciones de laboratorio. Después del período de adaptación las ratas se distribuyeron aleatoriamente en diferentes grupos y se anestesiaron con tiopental sódico (30 mg/kg, i.p). Se les desinfectó la zona de la espalda con alcohol al 70 % y se les realizó una incisión en la mitad dorso lateral, creando un túnel subcutáneo mediante pinzas romas, donde se colocó una mota de algodón estéril de 50 mg. La herida se suturó y se aplicó un antiséptico local. Transcurridas 18 horas de la última administración, las ratas se sacrificaron en atmósfera de éter, los granulomas se disecaron cuidadosamente y se colocaron en una estufa a 60 °C durante 24 horas, hasta alcanzar un peso constante. Para calcular el peso seco de los granulomas, el peso de la mota de algodón (50 mg) se sustrajo dé este valor. El grado (%) de inhibición se expresó tomando como 100 % de inflamación el peso del granuloma del grupo control.
Los extractos de los frutos de A. crispa y A. aculeata, fueron emulsionados en una disolución Tween-20/H2O. Las ratas se distribuyeron aleatoriamente en 7 grupos (10 ratas/grupo): un control tratado con el vehículo, 3 grupos tratados con extractos de A. crispa y 3 con extractos de A. aculeata (25, 200 y 500 mg/kg) respectivamente. La administración se realizó mediante entubación gástrica (5mL/kg) durante los 6 días siguientes a la implantación de la mota de algodón. Posteriormente, se cuantificó el peso seco del granuloma. La comparación entre los grupos controles y tratados se realizó con el test de la U de Mann Whitney.
La implantación subcutánea de una mota de algodón en la mitad dorso lateral de los animales produjo la formación de un granuloma (Tabla 7). Todos los tratamientos redujeron significativamente el peso seco del granuloma en relación al de los controles. El efecto de los extractos de los frutos de A. crispa y A. aculeata aumentó con las dosis hasta un 54,6 y 55,4 % de inhibición, respectivamente, con la dosis de 500 mg/kg. Los resultados obtenidos en este trabajo demuestran la eficacia de los extractos de los frutos de A. crispa y A. aculeata en el modelo del granuloma por algodón en ratas observándose una disminución significativa del peso seco del granuloma, mostrando su potencial terapéutico como antiinflamatorio. Tabla 7. Efecto de los extractos de A. crispa y A. aculeata en el modelo de granuloma por algodón en ratas
Figure imgf000016_0001
Valores expresados como Media ± EEM (error estándar de la media); I (%):
porcentaje de inhibición
* p < 0,05; ** p < 0,01 Comparación vs Control, (Test de la U de Mann Whitney)
Ejemplo 7
El efecto de los ingredientes activos citados en el ejemplo 2 se evaluó en un modelo de inflamación aguda (pleuresía por carragenina dosis única en ratas). Se emplearon ratas Sprague Dawley machos (190-290 g de peso) las cuales se adaptaron durante 7 días a las condiciones de laboratorio. Después del período de adaptación los animales se distribuyeron aleatoriamente en diferentes grupos. Posteriormente, las ratas se anestesiaron en atmósfera de éter, se les realizó una incisión en el dorso lateral y se le inyectó 0,3 ml_ de la disolución de carragenina al 1 % en disolución salina en la cavidad pleural. Cinco horas después de la inducción de la inflamación las ratas se sacrificaron para la obtención del exudado pleural, para lo cual se anestesiaron en atmósfera de éter y se desangraron por la aorta abdominal. Para obtener el exudado pleural la cavidad pleural se abrió y se le añadió 1 ml_ de citrato de sodio al 3,15 % que se homogenizó con el exudado, el cual se extrajo cuidadosamente utilizando una pipeta automática. Una vez colectado se trasvasó a un tubo plástico graduado para determinar el volumen de exudado (VE). Posteriormente, se determinó la actividad de la mieloperoxidasa (MPO) en el exudado.
Para su administración, los extractos de los frutos de A. crispa y A. aculeata, fueron emulsionados én una disolución Tween-20/H2O, administrándose como dosis únicas mediante entubación gástrica (5mLJkg). Las ratas se distribuyeron aleatoriamente en 8 grupos (10 ratas/grupo): un control negativo al cual se le inyectó disolución salina en la cavidad pleural y 7 grupos a los cuales se les indujo la pleuresía mediante la inyección de carragenina: un control positivo tratado con vehículo, 3 grupos tratados con extractos de A. crispa y 3 con extractos de A. aculeata (25, 200 y 500 mg/kg) respectivamente. La comparación entre los grupos controles y tratados fue realizada mediante el test de la U de Mann Whitney.
La inyección de carragenina produjo un aumento significativo del VE y de la actividad enzimática de la MPO del exudado con respecto al grupo control negativo (Tabla 8). La administración del objeto de la presente invención (25, 200, 500 mg/kg) por vía oral (dosis única) resultó efectivo en reducir el VE e inhibir la actividad enzimática de la MPO de modo significativo y dependiente de la dosis, de modo que la mayor dosis ensayada (500 mg/kg) redujo el VE en más de un 50% respecto al control positivo, e inhibió la actividad de la MPO.
Los resultados obtenidos demuestran la eficacia de los extractos de los frutos de A. crispa y A. aculeata en el modelo de pleuresía por carragenina en ratas observándose una reducción dosis-dependiente del VE y la actividad de la MPO, mostrando su potencial como antiinflamatorio.
Tabla 8. Efecto del tratamiento oral con los extractos de los frutos de A. crispa y A. aculeata sobre la formación de edema y aumento de la actividad de la MPO en el modelo de pleuresía por carragenina en ratas.
Figure imgf000017_0001
Valores expresados como Media ± EEM (error estándar de la media); VE: volumen de exudado; MPO: mieloperoxidasa; I (%): porcentaje de inhibición; C: carragenina. *p<0,05; **p<0,01; ***p<0,001. Comparación vs grupo control (+); Test de la U de Mann Whitney
Ejemplo 8
Estudio comparativo de los efectos de los ingredientes activos referidos en el ejemplo 3 con los de extractos lipidíeos de los frutos de S. repens (ELSr) y R. regia (D004) sobre un modelo de inflamación aguda (edema en la oreja de ratón por xileno).
Para realizar este estudio se emplearon ratones machos adultos jóvenes OF- (20- 30 g) adaptados durante 7 días a las condiciones de laboratorio. Después del período de adaptación los ratones se distribuyeron aleatoriamente en 6 grupos: un control negativo + vehículo, un control positivo (tratado con el vehículo + aplicación del Xileno); y 4 tratados con los extractos de A. crispa, A. aculeata, ELSr y D004, a los que se le aplico el xileno, todos administrados a dosis de 400 mg/kg. Todos los tratamientos se administraron 1 hora antes de la inducción del edema.
La inducción del edema se realizó, aplicando tópicamente 30 μL· de xileno puro en la superficie dorsal de la oreja derecha del ratón. Dos horas más tarde se cuantificó el edema, para lo cual los ratones se anestesiaron en atmósfera de éter y se sacrificaron por dislocación cervical. Ambas orejas se cortaron y se pesaron en una balanza analítica (Mettler Toledo). La formación de edema se calculó mediante la diferencia de peso (mg) entre la oreja derecha (con edema) y la oreja izquierda (sin edema) (ΔΟ). La comparación entre los grupos controles y tratados fue realizada mediante el test de la U de Mann Whitney.
La aplicación tópica de xileno aumentó significativamente la diferencia de peso entre ambas orejas, indicativo de formación de edema comparado con el grupo de control negativo (tabla 9).Todos los tratamientos inhibieron significativamente el aumento del edema. Los extractos de A. crispa (54,5 % de reducción) y A. aculeata (52,9 % de reducción) resultaron más efectivos que el ELSr (26,7 % de reducción) y el D004 (34,0% de reducción).
Estos resultados indican que la eficacia del tratamiento oral con extractos de los frutos de A. crispa y A. aculeata (400 mg/kg) tras la inducción del edema por xileno en la oreja de ratón fue mayor que la de similares dosis de ELSr y D004. Tabla 9. Efecto de los extractos de los frutos de Acrocomia crispa, Acrocomia aculeata, ELSr y D004 sobre el edema inducido por xileno en oreja de ratón.
Figure imgf000019_0001
Valores expresados como Media ± EEM (error estándar de la media;
% I: porcentaje de inhibición. * p< 0.05, **p<0.01 comparación vs control (+), + p< 0.05 comparación vs Acrocomia crispa.† p< 0.05 comparación vs Acrocomia aculeata , Test de la U de Mann Whitney
Ejemplo 9
Para evaluar el efecto antioxidante de los ingredientes activos referidos en el ejemplo 4 se utilizaron ratas Sprague Dawley machos (200 - 250 g de peso) adaptadas durante 7 días a las condiciones de laboratorio. Después de culminar su período de adaptación, los animales se distribuyeron aleatoriamente en diferentes grupos, se anestesiaron en atmósfera de éter y se desangraron por la aorta abdominal. La sangre se colectó con EDTA (10%) (concentración final: 1mg/ml de sangre). El plasma se obtuvo por centrifugación a 3000 rpm durante 10 min y se utilizó para determinar las concentraciones de malondialdehido (MDA) (producto de la PL) y grupos sulfidrilos (SH) (producto de la oxidación de proteínas).
Los extractos de los frutos de A. crispa y A. aculeata, fueron emulsionados en una disolución Tween-20/H2O. Las ratas se distribuyeron aleatoriamente en 9 grupos (10 ratas/grupo): un control tratado con vehículo, 4 con extractos de A. crispa y 4 con extractos de A. aculeata (5, 25, 50 y 200 mg/kg), respectivamente. Los tratamientos se administraron mediante entubación gástrica durante 30 días. Posteriormente, se cuantificó las concentraciones plasmáticas de MDA y SH. La comparación entre los grupos controles y tratados fue realizada mediante el test de la U de Mann Whitney. Como se observa en la tabla 10, ambos extractos redujeron las cifras plasmáticas de MDA y SH de modo marcado y significativo. Con A. crispa se lograron reducciones de un 64,2 % (MDA) y un 58,7% (grupos SH), y con A. aculeata de un 63,4% (MDA) y un 59,4% (SH). Estos resultados demuestran la eficacia de los extractos de los frutos de A. crispa y A. aculeata en reducir los niveles plasmáticos de marcadores de la PL (MDA) y de la oxidación proteica (SH) demostrando que ambos extractos tienen efectos antioxidantes. Tabla 10. Efecto del tratamiento oral con los extractos de A. crispa y A. aculeata sobre las cifras plasmáticos de MDA y grupos SH en ratas.
Figure imgf000020_0001
Valores expresados como Media ± EEM (error estándar de la media);
I (%): porcentaje de inhibición.
*p<0.05, **p<0.01 Comparación vs grupo control., Test de la U de Mann Whitney
Ejemplo 10
Para evaluar el efecto de los ingredientes activos descritos en el ejemplo 5 fueron emulsionados en un vehículo Tween-20/H2O y se investigaron sus efectos sobre un modelo de HP en ratas. Para ello se utilizaron ratas Sprague Dawley machos (300 - 360 g) adaptadas durante 7 días a las condiciones de laboratorio, las cuales se distribuyeron aleatoriamente en 8 grupos experimentales: un control negativo + (vehículo) y 7 grupos a los cuales se les indujo la HP con inyección de testosterona (4 mg/kg), un control positivo, que solo recibió el vehículo, y otros 6 tratados: 3 de ellos con el extracto de los frutos de A. crispa y 3 con el de A. aculeata (50, 200 y 400 mg/kg). El propionato de testosterona se disolvió en aceite vegetal y se inyectó diariamente, por vía s.c durante 14 días. Los tratamientos orales se administraron mediante entubación gástrica (5mL/kg), una vez al día, durante 14 días. Posteriormente, las ratas se sacrificaron bajo anestesia, se desangraron, el abrió su abdomen mediante una incisión en la línea media ventral, se separaron sus próstatas de las vejigas, se extrajeron y se pesaron. La comparación entre los grupos controles y tratados se realizó con el test de la U de Mann Whitney.
La inyección de testosterona produjo un aumento significativo del peso de la próstata y de la relación peso próstata/peso corporal comparado con el grupo control negativo (Tabla 11). La administración de los extractos de los frutos de A. crispa y A. aculeata por vía oral durante 14 días redujo significativamente el aumento del tamaño de la próstata inducida por la inyección de testosterona (≡ 44 % con la mayor dosis ensayada).
Estos resultados obtenidos indican la eficacia de los extractos de frutos de A. crispa y A. aculeata en reducir significativa y marcadamente el aumento del tamaño de la próstata inducido con testosterona en roedores, lo que habla de las potencialidades terapéuticas de estos extractos.
Tabla 11. Efecto de los extractos de A. crispa y A. aculeata la HP inducida con testosterona en ratas.
Figure imgf000021_0001
Valores expresados como Media ± EEM (error estándar de la media);
testosterona; PC: peso corporal (g); PP: peso de la próstata (mg),
% I: porcentaje de inhibición * p< 0.05, **p<0.01 comparación vs control (+), Test de la U de Mann Whitney Ejemplo 11
El efecto de los ingredientes activos referidos en el ejemplo 1 sobre un modelo de osteoartritis se evaluó en el modelo de artritis inducida por mono-iodoacetato (MIA) en ratas. Se utilizaron ratas Sprague Dawley machos con peso corporal entre 150 y 175g adaptadas durante 7 días a las condiciones de laboratorio, las cuales se distribuyeron aleatoriamente en 8 grupos experimentales: un control negativo + (vehículo) y 7 grupos a los cuales se les indujo el daño con MIA; un control positivo, que solo recibió el vehículo, y otros 6 tratados: 3 de ellos con el extracto de los frutos de A. crispa y 3 con el de A. aculeata (100, 200 y 400 mg/kg).
El daño artrítico se indujo por una inyección única de MIA (50 μΙ) en la cavidad sinovial de la rodilla izquierda. Un volumen equivalente de disolución salina se inyectó en la rodilla derecha. Los tratamientos se administraron mediante entubación gástrica (5mL/kg), inmediatamente después de inducido el daño. Posteriormente, las ratas se sacrificaron bajo anestesia.
Para el estudio histopatológico la articulación de la rodilla izquierda se extrajo y se conservó en formol por 24 horas. Luego se descalcificó en EDTA disódico 0.5 M (pH 7.4) a 4 °C durante 4 semanas. Al completar la descalcificación la articulación se seccionó en el plano longitudinal para obtener 2 mitades, siendo posteriormente incluidas en parafina, cortadas y coloreados con Hematoxilina y Eosina y azul de toluidina para analizar el cartílago. El daño del cartílago se evaluó de acuerdo a su profundidad y extensión utilizando el puntaje modificado de Mankin, como sigue: • Profundidad (0-5): 0- normal, 1- mínimo, afectando solo la zona superficial, 2- ligera invasión a la zona media superior solamente, 3- moderada invasión también en la zona media, 4- marcada invasión a la zona profunda, pero no a la línea divisoria o interfase existente entre el cartílago no calcificado y el calcificado (tidemark) y 5- severa degradación de todo el espesor hasta la línea divisoria existente entre el cartílago no calcificado y el calcificado.
· Reducción de la tinción de la matriz (0-4): 0 - normal/ligera reducción de tinción, 1- coloración reducida en la capa radial, 2 -coloración reducida en la matriz interterritorial, 3- coloración presente solo en la matriz pericelular y 4- coloración ausente. • Cambios del cartílago (0-6): 0-normal, 1 -superficie irregular, incluyendo fisuras en la capa radial, 2 - pannus, 3 - ausencia de capas superficiales de cartílago, 4 - ligera desorganización (columnas celulares ausentes, algunos conglomerados pequeños superficiales), 5- fisura en la capa de cartílago calcificado, y 6- desorganización (estructura caótica, conglomerados y actividad osteoclástica).
• Extensión de la inflamación (0-4): 0- normal (no infiltrado), 1- mínima infiltración inflamatoria, 2- ligera infiltración, 3- moderada infiltración y 4 - marcada infiltración.
• Anormalidades celulares (0-3): 0- normal, 1- hipercelularidad, incluyendo pequeños conglomerados superficiales, 2- conglomerados y 3- hipocelularidad.
• Extensión del daño a la tibia (0-3): 0-normal, 1-mínimo, 2-moderado y 3-severo.
• Pérdida de hueso cortical o trabecular (0-4): 0 - normal, 1- pérdida mínima de hueso cortical en unos pocos sitios, 2- ligera pérdida de hueso cortical o trabecular, 3- moderada pérdida de hueso en muchos sitios y 4- marcada pérdida de hueso en muchos sitios con fragmentación y penetración en todo el espesor del proceso inflamatorio o la formación de pannus en el hueso cortical.
• Presencia de Osteoclastos (0-4): 0 -normal (esencialmente no osteoclastos), 1- pocos osteoclastos (alineados en el 5% de la mayoría de la superficie ósea afectada), 2 -algunos osteoclastos (alineados entre el 5 y 25% de la mayoría de superficies óseas afectadas ), 3- muchos osteoclastos (alineados entre el 26- 50% de la mayoría de las superficies óseas afectadas) y 4 -gran cantidad de osteoclastos (alineados en más del 50% de la superficie ósea afectada).
Se calcularon las medias de los puntajes de los parámetros histológicos estudiados. Se calculó el puntaje histológico como el promedio de todas las variables histológicas evaluadas. La comparación entre los grupos controles y tratados se realizó con el test de la U de Mann Whitney.
Ningún animal del grupo control negativo y todos los del grupo control positivo mostraron evidencias de daño de acuerdo a las variables estudiadas (Tablas 12, 13 y 14). La administración de los extractos de los frutos de A. crispa y A. aculeata redujo significativamente el aumento del puntaje histológico inducido por el MIA en la articulación de la rodilla (50 % con la mayor dosis ensayada).
Estos resultados indican la eficacia de los extractos de frutos de A. crispa y A. aculeata en reducir significativa y marcadamente el aumento del daño inducido por una inyección única de MIA en la cavidad sinovial de la rodilla izquierda en ratas, lo que habla de su potencialidad terapéutica en la osteoartritis.
Tabla 12. Efectos de los extractos de A. crispa y A. aculeata sobre el puntaje histológico total
Figure imgf000024_0001
Tanto el control positivo como todos los grupos tratados con los extractos recibieron inyecciones de mono-iodoacetato (MIA); Valores expresados como Media ± EEM
(error estándar de la media); % I: porcentaje de inhibición; **p< 0.01 ; *** p< 0.001 comparación vs control (+); Test de la U de Mann Whitney
Tabla 13. Efectos de los extractos de A. crispa y A. aculeata sobre el daño del cartílago
Figure imgf000024_0002
Tanto el control positivo como todos los grupos tratados con los extractos recibieron inyecciones de mono-iodoacetato (MIA); Valores expresados como Media ± EEM (error estándar de la media); % I: porcentaje de inhibición; * p<0,05; **p< 0,01 ; *** p< 0,001 , comparación vs control (+); Test de la U de Mann Whitney Tabla 14. Efectos de los extractos de A. crispa y A. aculeata sobre el daño del cartílago
Figure imgf000025_0002
Tanto el control positivo como todos los grupos tratados con los extractos recibieron inyecciones de mono-iodoacetato (MIA); Valores expresados como Media ± EEM (error estándar de la media);
% I: porcentaje de inhibición; * p<0,05; **p< 0,01 ; *** p< 0,001 , comparación vs control (+);
Test de la U de Mann Whitney
Ejemplo 12.
Se desarrollaron varias formulaciones con el ingrediente activo referido en el ejemplo 1 en dosis entre 50 y 1000 mg, según se presenta a continuación: tabletas conteniendo almidón de maiz, lactosa, talco, gelatina, croscarmelosa sódica, estearato de magnesio, carboximetilcelulosa; cápsulas duras y cápsulas blandas de gelatina. Cremas conteniendo el ingrediente activo referido en el ejemplo 1 en concentraciones entre 0, 1 y 90 %, y como excipientes petrolato sólido, alcohol cetílico, polisorbatos, propilenglicol, glicerina, alcohol estearílico, laurilsulfato de sodio, metil y propil parabenos, sodio fosfato monobásico, agua purificada, edetato de sodio, carbopol, dimeticona, cera de abejas, trietanolamina. Lociones y champú, conteniendo el ingrediente activo referido en el ejemplo 1 en concentraciones entre 0, 1 y 90 %, y como excipientes, polisorbatos, propilenglicol, carboximetilcelulosa, glicerina, laurilsulfato de sodio, metil y propil parabenos, sodio fosfato monobásico, agua purificada y trietanolamina.
Figure imgf000025_0001

Claims

REIVINDICACIONES
1. Ingrediente activo caracterizado por ser obtenido a partir de los frutos de Acrocomia crispa y/o Acrocomia aculeata, ambas especies de la familia Arecaceae, el cual contiene una mezcla de ácidos grasos de 6 a 28 átomos de carbono (libres o en forma de acilglicéridos o ásteres etílicos), pudiendo contener además esteróles y alcoholes grasos de alto peso molecular, incluyendo mayoritariamente los ácidos: caprílico (C8:o), cáprico (Ci0:o), láurico (C12.0), mirístico (Ci4:o). palmítico (C16:o), palmitoleico (Ci6:i), esteárico (Ci8:o), oleico (Ci8:i), linoleico (C18:2) y linolénico (Ci8:3) en la siguiente proporción:
Figure imgf000026_0001
* Se determina y se reporta como ácido oleico a la mezcla del propio ácido oleico (60 - 70 % del total); el ácido linoleico (25 - 40 % del total) y el ácido linolénico (< 10 % del total)
2. Ingrediente activo según reivindicación 1 , caracterizado por ser obtenido a partir de una hidrólisis parcial o total (enzimática, básica o ácida) de los acilglicéridos contenidos en el fruto; la cual puede ser aplicada al material vegetal o al extracto lipídico obtenido a partir del material vegetal.
3. Ingrediente activo según reivindicaciones 1 y 2, caracterizado por ser obtenido a partir del empleo de lipasas, hidróxidos de metales alcalinos (sodio o potasio), hidróxidos de metales alcalinotérreos (magnesio o calcio), hidróxido de amonio o hidróxidos orgánicos; así como los ácidos clorhídrico, cítrico o sulfúrico.
4. Ingrediente activo según reivindicaciones 1 , 2 y 3, caracterizado porque en su obtención se incluyen las etapas de secado, molido y tamizado de los frutos (tamaño de partícula < 3 mm), y por la separación posterior de una sustancia lipídica por extracción con fluido supercrítico con CO2 o por extracción sólido-líquido en reactor agitado o soxhlet, usando como disolventes orgánicos hidrocarburos, alcoholes, acetato de etilo, acetona o mezclas de estos; el filtrado y la evaporación del disolvente.
5. Ingrediente activo según reivindicaciones 1 , 2, 3 y 4, caracterizado porque el hidrocarburo utilizado es seleccionado del grupo del pentano, hexano, heptano, octano y el alcohol es seleccionado del grupo del metanol, etanol, propanol y 2- propanol.
6. Uso del ingrediente activo según reivindicación 1 caracterizado para el tratamiento y/o prevención de la inflamación aguda y crónica, del aumento del estrés oxidativo y de la osteoartritis.
7. Uso del ingrediente activo según reivindicación 1 caracterizado para el tratamiento y/o prevención de la Hiperplasia Prostética Benigna y la prostatitis.
8. Composición farmacéutica caracterizada por contener al ingrediente activo según reivindicación 1 , en dosis entre 50 mg y 1000 mg.
9. Composición farmacéutica acorde a la reivindicación 8, caracterizada por estar formulada como forma oral sólida (cápsula, cápsula blanda, tableta), semisólida (supositorio, crema, ungüento), o líquida (emulsión, suspensión, tintura, loción o champú).
10. Composición farmacéutica acorde a las reivindicaciones 8 y 9, caracterizada por su empleo en el tratamiento y/o prevención de la inflamación aguda y crónica, del aumento del estrés oxidativo y de la osteoartritis.
11. Composición farmacéutica acorde a las reivindicaciones 8 y 9, caracterizada por su empleo en el tratamiento y/o prevención de la Hiperplasia Prostática Benigna y la prostatitis.
12. Suplementos nutricionales caracterizados por contener al ingrediente activo según reivindicación 1, en dosis entre 50 mg y 1000 mg.
13. Suplementos nutricionales acorde a la reivindicación 12, caracterizados por su administración en forma de alimentos funcionales, nutracéuticos, dietéticos, componentes para alimentos y bebidas, y cosméticos.
14. Suplementos nutricionales acorde a las reivindicaciones 12 y 13, caracterizados por su empleo en la prevención de la inflamación y el estrés oxidativo.
15. Formulaciones con funciones cosméticas-terapéuticas caracterizados por contener al ingrediente activo según reivindicación 1 , en concentraciones entre 0,1% y 90%.
16. Formulaciones con funciones cosméticas-terapéuticas acorde a la reivindicación 15, caracterizadas por su administración en forma de cremas, jabones, lociones, champús, geles de baño, geles de pelo, ungüentos, aceites corporales, protectores labiales y productos para el cuidado de la piel, incluidos los protectores solares.
17. Formulaciones con funciones cosméticas-terapéuticas acorde a las reivindicaciones 15 y 16, caracterizadas por su empleo en la prevención de la inflamación y el estrés oxidativo.
PCT/CU2013/000003 2012-06-19 2013-06-17 Compuestos a partir de los frutos de acrocomia crispa y acrocomia aculeata contra la inflamación y el estrés oxidativo WO2013189467A2 (es)

Priority Applications (15)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020157001296A KR102145079B1 (ko) 2012-06-19 2013-06-17 염증 및 산화 스트레스를 예방하는 acrocomia crispa 및 acrocomia aculata의 과실류로부터의 화합물
DK13742149.1T DK2862567T3 (da) 2012-06-19 2013-06-17 Forbindelser fra frugterne af acrocomia crispa og acrocomia aculata mod inflammation og oxidativ stress
CA2876907A CA2876907A1 (en) 2012-06-19 2013-06-17 Compounds from the fruits of acrocomia crispa and acrocomia aculata against inflammation and oxidative stress
MX2014015774A MX361904B (es) 2012-06-19 2013-06-17 Compuestos a partir de los frutos de acrocomia crispa y acrocomia aculeata contra la inflamación y el estrés oxidativo.
JP2015517603A JP6134953B2 (ja) 2012-06-19 2013-06-17 炎症及び酸化ストレスに対するアクロコミア・クリスパ及びアクロコミア・アクレアタ（ａｃｕｌｅａｔａ）の果実由来化合物
CN201380037947.3A CN104684544A (zh) 2012-06-19 2013-06-17 来源于古巴腹棕榈(Acrocomia crispa)和格鲁格鲁棕榈(Acrocomia aculeata)果实用作抗炎和抗氧化应激的化合物
US14/408,443 US20150190358A1 (en) 2012-06-19 2013-06-17 Compounds from the fruits of acrocomia crispa and acrocomia aculeata for use against oxidative stress and inflammation
IN10888DEN2014 IN2014DN10888A (es) 2012-06-19 2013-06-17
ES13742149.1T ES2648489T3 (es) 2012-06-19 2013-06-17 Compuestos a partir de los frutos de Acrocomia crispa y Acrocomia aculata contra la inflamación y el estrés oxidativo
AU2013279850A AU2013279850A1 (en) 2012-06-19 2013-06-17 Compounds from the fruits of Acrocomia crispa and Acrocomia aculeata against inflammation and oxidative stress
EP13742149.1A EP2862567B1 (en) 2012-06-19 2013-06-17 Compounds from the fruits of acrocomia crispa and acrocomia aculata against inflammation and oxidative stress
BR112014031826A BR112014031826A2 (pt) 2012-06-19 2013-06-17 princípio ativo obtido a partir dos frutos de acrocomia crispa e acrocomia aculeata, uso do princípio ativo, composição farmacêutica, suplementos nutricionais e formulações de função cosmético-terapêutica
IL236282A IL236282A0 (en) 2012-06-19 2014-12-15 Compositions from the fruits of Acrocomia crispa and Acrocomia aculeata for use against oxidative stress and inflammation
PH12014502817A PH12014502817B1 (en) 2012-06-19 2014-12-17 Compounds from the fruits of acrocomia crispa and acrocomia aculeata for use against oxidative stress and inflammation
NO20150088A NO20150088A1 (en) 2012-06-19 2015-01-19 Compounds from the fruits of Acrocomia Crispa and Acrocomia Aculeata for use against oxidative stress and inflammation

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CUCU/P/2012/000097 2012-06-19
CUP2012000097A CU24143B1 (es) 2012-06-19 2012-06-19 Ingrediente activo para el tratamiento y la prevención de la inflamación y el estrés oxidativo, así como su procedimiento de obtención a partir de los frutos de acrocomina crispa y/o acrocomia aculeata

Publications (2)

Publication Number Publication Date
WO2013189467A2 true WO2013189467A2 (es) 2013-12-27
WO2013189467A3 WO2013189467A3 (es) 2014-02-20

Family

ID=48876979

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/CU2013/000003 WO2013189467A2 (es) 2012-06-19 2013-06-17 Compuestos a partir de los frutos de acrocomia crispa y acrocomia aculeata contra la inflamación y el estrés oxidativo

Country Status (19)

Country Link
US (1) US20150190358A1 (es)
EP (1) EP2862567B1 (es)
JP (1) JP6134953B2 (es)
KR (1) KR102145079B1 (es)
CN (1) CN104684544A (es)
AU (1) AU2013279850A1 (es)
BR (1) BR112014031826A2 (es)
CA (1) CA2876907A1 (es)
CO (1) CO7240409A2 (es)
CU (1) CU24143B1 (es)
DK (1) DK2862567T3 (es)
ES (1) ES2648489T3 (es)
IL (1) IL236282A0 (es)
IN (1) IN2014DN10888A (es)
MX (1) MX361904B (es)
NO (1) NO20150088A1 (es)
PH (1) PH12014502817B1 (es)
PT (1) PT2862567T (es)
WO (1) WO2013189467A2 (es)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP4082518A1 (en) * 2021-04-28 2022-11-02 Cnce Innovacion, S.L. Fatty acid compositions for the treatment and prevention of hair loss and alopecia

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB191412621A (en) * 1914-05-22 1915-08-05 Armenak Haroutune Suzmeyan Method and Process to Obtain Oil and Glucose from Nuts and Shells.
GB0012621D0 (en) 2000-05-25 2000-07-12 Zeta Controls Ltd Electronic pedals
CU23256A1 (es) * 2003-03-20 2008-01-24 Dalmer Lab Sa EXTRACTO OBTENIDO A PARTIR DE FRUTOS DE ROYSTONEA REGIA UTILIZADO CONTRA LA HIPERPLASIA PROSTáTICA Y LA PROSTATITIS
TW200637488A (en) * 2005-01-21 2006-11-01 Western Holdings Llc Compositions containing botanical extracts rich in phlorizin and methods for using such compositions in blood glucose modification and to affect aging

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
None

Also Published As

Publication number Publication date
KR20150029710A (ko) 2015-03-18
PT2862567T (pt) 2017-11-27
EP2862567B1 (en) 2017-07-26
PH12014502817A1 (en) 2015-02-23
MX361904B (es) 2018-12-19
US20150190358A1 (en) 2015-07-09
CN104684544A (zh) 2015-06-03
CU20120097A7 (es) 2014-01-29
MX2014015774A (es) 2015-11-16
DK2862567T3 (da) 2017-11-06
AU2013279850A1 (en) 2015-01-29
CA2876907A1 (en) 2013-12-27
ES2648489T3 (es) 2018-01-03
BR112014031826A2 (pt) 2017-06-27
JP6134953B2 (ja) 2017-05-31
PH12014502817B1 (en) 2015-02-23
CU24143B1 (es) 2016-01-29
IN2014DN10888A (es) 2015-09-11
KR102145079B1 (ko) 2020-08-31
JP2015521606A (ja) 2015-07-30
NO20150088A1 (en) 2015-01-19
CO7240409A2 (es) 2015-04-17
IL236282A0 (en) 2015-02-26
EP2862567A2 (en) 2015-04-22
WO2013189467A3 (es) 2014-02-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US8557302B2 (en) Andrographis paniculata extract
JPH07300421A (ja) 抗炎症剤
DK2276461T3 (en) PHARMACEUTICAL FORMULATION CONTAINING PALMITOYLETHANOLAMIDE AND STEAROYLETHANOLAMIDE
ES2364153T3 (es) Utilización de alquil-furanos para el tratamiento cosmético de la celulitis.
KR20090103000A (ko) 관절염 치료를 위한 약제학적 조성물
US9950003B2 (en) Pectin based nanoparticles
EP3416650B1 (fr) Celastrol et ses derives dans le traitement des tumeurs et pathologies pre-cancereuses cutanees
WO2013189467A2 (es) Compuestos a partir de los frutos de acrocomia crispa y acrocomia aculeata contra la inflamación y el estrés oxidativo
ES2674874T3 (es) Composición antiinflamatoria
FR2756183A1 (fr) Association d&#39;huile et de peptides d&#39;argan utile pour le traitement des troubles lies au vieillissement cutane
Yi̇pel et al. The protective effect of Boswellic acid and Ellagic acid loaded, colon targeted, and pH-sensitive N-succinyl chitosan in ulcerative colitis rat model
BR112018011580B1 (pt) Compostos de éster, compostos de amida, composição e uso de pelo menos um composto
JP4804729B2 (ja) 末梢血行改善用組成物
JP2006248909A (ja) レーザー光を照射して得られるラジカル消去作用を呈する抗炎症剤、それを含有する食品製剤、化粧品製剤
Ali et al. Nanoliposomal in situ gel of fluoxetine and embelin as a potent intervention for depression via the intranasal route in CUMS animal model
WO2022219567A1 (es) Composición de naproxeno nano-particulado en aceite vegetal útil para el tratamiento de la inflamación y el dolor
IT202100011210A1 (it) Composizione di combinazione per la prevenzione e il trattamento di disturbi alla prostata e urologici
PL235651B1 (pl) Emulsja kosmetyczna z ekstraktem z kwiatostanów czeremchy
KR20100120082A (ko) 캡사이신 또는 캡사이신 유사 화합물을 유효성분으로 함유하는 항비만용 피부 외용제 조성물
JP2014118349A (ja) プロスタグランジンｅ２産生抑制剤
JP2011162520A (ja) 脱共役蛋白質発現促進剤

Legal Events

Date Code Title Description
REEP Request for entry into the european phase

Ref document number: 2013742149

Country of ref document: EP

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: IDP00201407824

Country of ref document: ID

Ref document number: 2013742149

Country of ref document: EP

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2876907

Country of ref document: CA

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 14408443

Country of ref document: US

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: MX/A/2014/015774

Country of ref document: MX

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2015517603

Country of ref document: JP

Kind code of ref document: A

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 14279656

Country of ref document: CO

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: P1398/2014

Country of ref document: AE

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 20157001296

Country of ref document: KR

Kind code of ref document: A

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2015100110

Country of ref document: RU

Kind code of ref document: A

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: A20150015

Country of ref document: BY

Ref document number: A201413809

Country of ref document: UA

121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 13742149

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A2

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2013279850

Country of ref document: AU

Date of ref document: 20130617

Kind code of ref document: A

REG Reference to national code

Ref country code: BR

Ref legal event code: B01A

Ref document number: 112014031826

Country of ref document: BR

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 112014031826

Country of ref document: BR

Kind code of ref document: A2

Effective date: 20141218