JP2011162520A

JP2011162520A - 脱共役蛋白質発現促進剤

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Publication number: JP2011162520A
Application number: JP2010029804A
Authority: JP
Inventors: Shingo Ikeuchi; 進吾池内; Takaaki Yamada; 貴亮山田
Original assignee: Nippon Menard Cosmetic Co Ltd
Current assignee: Nippon Menard Cosmetic Co Ltd
Priority date: 2010-02-15
Filing date: 2010-02-15
Publication date: 2011-08-25

Abstract

【課題】本発明は、効果的で安全性の高い抗肥満剤、及び脱共役蛋白質発現促進剤を提供することを目的とする。
【解決手段】本発明は、ピンクロックローズの抽出物を含有することを特徴とする。製剤形態は種々のものが選択できるが、特に皮膚外用剤が好ましい。投与量は、使用目的、年齢、体重等によって異なるが、好ましくは０．０２〜２０ｍｇ／ｋｇ、特に好ましくは０．１〜１０ｍｇ／ｋｇである。本発明は、肥満に対して優れた改善効果を発揮するため、肥満、及び肥満に関連する生活習慣病の予防・改善を目的とする化粧品、医薬品、及び医薬部外品等に有用である。
【選択図】なし

Description

本発明は、ピンクロックローズの抽出物を含有することを特徴とする抗肥満剤及び脱共役蛋白質発現促進剤に関する。

近年では、食生活の欧米化や運動不足によるエネルギーの過剰摂取により肥満が急増している。肥満とは、脂肪が過度に蓄積した状態のことであるが、脂肪の蓄積は肥満だけでなく高脂血症、糖尿病、高血圧症等の危険性を増加させる為、非常に深刻な問題となっている。そこで、種々の抗肥満剤が提案されている。

抗肥満剤として代表的なものに、脂質や糖質の消化や吸収を妨げることにより肥満を予防改善するものがある。例えば、カンカニクジュヨウの抽出物を含有することを特徴とするリパーゼ阻害剤である（特許文献１）。

アディポネクチンは、脂肪組織の脂肪細胞から特異的に産生、分泌されるサイトカインであり、骨格筋や肝臓のＡＭＰキナーゼを活性化することによって脂肪燃焼を促進する。近年、アディポネクチンの産生を促進することにより肥満を予防改善するものとして、アディポネクチン産生促進剤が提案されている。例えば、冬蟲夏草の熱水抽出物を有効成分とするアディポネクチン産生促進剤である（特許文献２）。

又、肥満は脂肪細胞と密接な関係があることから、前駆脂肪細胞から脂肪細胞への分化を抑制することにより、肥満を予防改善する試みもなされている。例えば、ケンフェロール等のフラボノイド類を有効成分とするグリセロリン酸脱水酵素阻害剤である（特許文献３）。

エネルギーの消費を亢進させるものとして、褐色脂肪細胞のミトコンドリア内膜に存在する脱共役蛋白質（ＵＣＰ）が知られている。ミトコンドリアは脂肪酸やグルコースの化学エネルギーからＡＴＰを生産する細胞内器官である。脂肪酸が分解される際の化学エネルギーによってミトコンドリア内膜の内外でプロトン勾配が形成される。このプロトン勾配による電位差を利用してＡＴＰが合成されるが、脱共役蛋白質はこのプロトン勾配を解消し、脂肪酸の化学エネルギーをＡＴＰではなく、直接熱エネルギーへ変換して放出させる（非特許文献１）。この脱共役蛋白質の発現を促進することで、エネルギー消費を亢進して脂肪を分解させ、肥満を予防改善することができる。
前述のケンフェロールは、人骨格筋芽細胞において脱共役蛋白質の発現を増加させ、酸素消費を亢進する作用を有することが報告されている（非特許文献２）。

本発明に関わるピンクロックローズとは、地中海沿岸原産のハンニチバナ科に属する多年生の植物で、学名を「ＣｉｓｔｕｓｉｎｃａｎｕｓＬ.」という。ピンクロックローズについては、インフルエンザの予防処置用薬剤調製のためのピンクロックローズの使用（特許文献４）、ピンクロックローズを用いた風邪の予防治療用組成物（特許文献５）、ピンクロックローズの抽出物を有効成分とする抗炎症剤（特許文献６）が開示されている。又、抗菌作用（非特許文献３）や、抗酸化作用及びＤＮＡの分裂防止作用（非特許文献４）が報告されている。

しかし、ピンクロックローズの抗肥満作用及び脱共役蛋白質発現促進作用については、全く知られていない。

特開第２００９−１９６９０８号公報特開第２００７−３１３０２号公報特開平１０−９５７３２号公報国際公開第２００７/０３１２９７号公報国際公開第２００７/１１０１３３号公報特開第２００８−８８０９７号公報斉藤昌之、「臨床栄養」、２００６年、１０８巻、Ｐ．７1８−７２４ＷａｇｎｅｒＳ．ｄａ−Ｓｉｌｖａ等、「ＤＩＡＢＥＴＥＳ」、２００７年、５６巻、Ｐ．７６７―７７６Ｈ．Ｂｏｕａｍａ等、「Ｔｈｅｒａｐｉｅ」、１９９９年、５４巻、Ｐ．７３１−７３３Ｇ．Ａｔｔａｇｕｉｌｅ等、「ＣｅｌｌＢｉｏｌｏｇｙａｎｄＴｏｘｉｃｏｌｏｇｙ」、２０００年、１６巻、Ｐ．８３−９０

本発明は、効果的で安全性の高い抗肥満剤、及び脱共役蛋白質発現促進剤を提供することを目的とする。

本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意研究した結果、ピンクロックローズ抽出物が、抗肥満効果、及び脱共役蛋白質発現促進効果を発揮することを見出し、本発明を完成するに至った。

本発明に関わるピンクロックローズの抽出物は、ピンクロックローズの地上部を溶媒で抽出することによって得られる。抽出に用いるピンクロックローズは、生及び乾燥物の何れも用いることができる。その抽出方法は特に限定されず、例えば、加熱抽出、常温抽出等を適宜選択することができる。又、ピンクロックローズの抽出物は、市販品を用いることもできる。

抽出する溶媒としては、例えば、水、低級アルコール類（メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、１−ブタノール、２−ブタノール等）、液状多価アルコール類（１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等）、ケトン類（アセトン、メチルエチルケトン等）、アセトニトリル、エステル類（酢酸エチル、酢酸ブチル等）、炭化水素類（ヘキサン、ヘプタン等）、エーテル類（エチルエーテル、テトラヒドロフラン、プロピルエーテル等）が挙げられる。これらの溶媒は１種でも２種以上を混合して用いても良い。好ましくは、水、低級アルコール等の極性溶媒が良く、特に好ましくは含水エタノールである。

上記抽出物は、抽出した溶液のまま用いても良く、必要に応じて濃縮、希釈、濾過、活性炭等による脱色、脱臭等の処理をして用いても良い。更に、濃縮乾固物、噴霧乾燥物、凍結乾燥物等として用いることもできる。

本発明に関わる抗肥満剤又は脱共役蛋白質発現促進剤には、上記抽出物と共に他の成分を配合することもできる。
皮膚外用剤の成分としては、例えば、炭化水素、ロウ類、各種エステル油、動物油、植物油、シリコーン油、脂肪酸、高級アルコール等の油剤、エタノール、多価アルコール等のアルコール類、酸化チタン、マイカ、酸化鉄等の顔料、カルボキシビニルポリマー、キサンタンガム、ヒアルロン酸等の高分子類、ビタミン、アミノ酸等の栄養成分、植物抽出物等の薬効成分、界面活性剤、香料、防腐剤、キレート剤等である。
内服剤の成分としては、乳糖、ショ糖、ソルビット、マルチトール、エリスリトール、澱粉、セルロース等の賦形剤、オリーブ油、サフラワー油、魚油等の油剤、プルラン、ヒドロキシプロピルセルロース、ゼラチン等の結合剤、タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム等の滑沢剤、ビタミン、アミノ酸等の栄養成分、植物抽出物等の薬効成分、界面活性剤、香料、保存料等である。

本発明に用いる抗肥満剤又は脱共役蛋白質発現促進剤は、化粧品、医薬部外品、及び医薬品等として用いることができる。皮膚外用剤の剤型としては、化粧水、クリーム、乳液、エアゾール剤、軟膏、パップ剤、パック、洗浄剤、浴用剤、ファンデーション、打粉、口紅等が挙げられる。内服剤としては、散剤、顆粒剤、錠剤、糖衣錠剤、カプセル剤、シロップ剤、丸剤、懸濁剤、液剤、乳剤等が挙げられる。その他の剤型としては注射薬、座薬等がある。

本発明に関わる抽出物の配合量は、製剤形態、使用目的等によって異なるが、通常、乾燥固形分として０．００１〜１００％、好ましくは０．０１〜５０．０重量％である。製剤への添加法は予め加えておいても、製造途中で添加しても良く、作業性を考えて適宜選択すれば良い。又、本発明に関わる抽出物の一日の投与量は、使用目的、年齢、体重等によって異なるが、好ましくは０．０２〜２０ｍｇ／ｋｇ、特に好ましくは０．１〜１０ｍｇ／ｋｇである。

本発明に関わる脱共役蛋白質発現促進剤は、優れた抗肥満効果、及び脱共役蛋白質発現促進効果を発揮し、肥満の予防改善に有効である。

本発明を詳細に説明するため実施例を挙げるが、本発明はこれに限定されるものではない。実施例に示す配合量の部とは重量部を示し、％は重量％を示す。

製造例１ピンクロックローズの熱水抽出物
ピンクロックローズの地上部の乾燥物１００ｇに精製水２ｋｇを加え、９５〜１００℃で２時間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥して熱水抽出物を５０ｇ得た。

製造例２ピンクロックローズの５０％エタノール抽出物
ピンクロックローズの地上部の乾燥物１００ｇに精製水１ｋｇ、及びエタノール１ｋｇを加え、常温で３日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥して５０％エタノール抽出物を４５ｇ得た。

製造例３ピンクロックローズのエタノール抽出物
ピンクロックローズの地上部の乾燥物１００ｇにエタノール２ｋｇを加え、常温で３日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥してエタノール抽出物を３０ｇ得た。

処方例１化粧水
処方配合量(部)
１．ピンクロックローズの熱水抽出物（製造例１）１．０
２．１，３‐ブチレングリコール８．０
３．グリセリン２．０
４．キサンタンガム０．０２
５．クエン酸０．０１
６．クエン酸ナトリウム０．１
７．エタノール５．０
８．パラオキシ安息香酸メチル０．１
９．ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（４０Ｅ．Ｏ．）０．１
１０．香料適量
１１．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分１〜６及び１１と、成分７〜１０をそれぞれ均一に溶解し、両者を混合し濾過して製品とする。

処方例２クリーム
処方配合量(部)
１．ピンクロックローズの２０％エタノール抽出物（市販品）０．５
２．スクワラン５．５
３．オリーブ油３．０
４．ステアリン酸２．０
５．ミツロウ２．０
６．ミリスチン酸オクチルドデシル３．５
７．ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．）３．０
８．ベヘニルアルコール１．５
９．モノステアリン酸グリセリン２．５
１０．香料０．１
１１．パラオキシ安息香酸メチル０．２
１２．パラオキシ安息香酸エチル０．０５
１３．１，３‐ブチレングリコール８．５
１４．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分２〜９を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１及び１１〜１４を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化し、かき混ぜながら冷却し、４５℃で成分１０を加え、更に３０℃まで冷却して製品とする。

処方例３乳液
処方配合量(部)
１．ピンクロックローズの熱水抽出物（製造例１）０．０１
２．スクワラン５．０
３．オリーブ油５．０
４．ホホバ油５．０
５．セタノール１．５
６．モノステアリン酸グリセリン２．０
７．ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．）３．０
８．ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（２０Ｅ．Ｏ．）２．０
９．香料０．１
１０．プロピレングリコール１．０
１１．グリセリン２．０
１２．パラオキシ安息香酸メチル０．２
１３．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分２〜８を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１及び１０〜１３を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化し、かき混ぜながら冷却し、４５℃で成分９を加え、更に３０℃まで冷却して製品とする。

処方例４ゲル剤
処方配合量(部)
１．ピンクロックローズの２０％エタノール抽出物（市販品）１．０
２．エタノール５．０
３．パラオキシ安息香酸メチル０．１
４．ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（６０Ｅ．Ｏ．）０．１
５．香料適量
６．１，３‐ブチレングリコール５．０
７．グリセリン５．０
８．キサンタンガム０．１
９．カルボキシビニルポリマー０．２
１０．水酸化カリウム０．２
１１．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分２〜５と、成分１及び６〜１１をそれぞれ均一に溶解し、両者を混合して製品とする。

処方例５パック
処方配合量(部)
１．ピンクロックローズの熱水抽出物（製造例１）０．１
２．ピンクロックローズの５０％エタノール抽出物（製造例２）０．１
３．ポリビニルアルコール１２．０
４．エタノール５．０
５．１，３‐ブチレングリコール８．０
６．パラオキシ安息香酸メチル０．２
７．ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（２０Ｅ．Ｏ．）０．５
８．クエン酸０．１
９．クエン酸ナトリウム０．３
１０．香料適量
１１．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分１〜１１を均一に溶解し製品とする。

処方例６ファンデーション
処方配合量(部)
１．ピンクロックローズのエタノール抽出物（製造例３）１．０
２．ステアリン酸２．４
３．ポリオキシエチレンソルビタンモノステアレート（２０Ｅ．Ｏ．）１．０
４．ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．）２．０
５．セタノール１．０
６．液状ラノリン２．０
７．流動パラフィン３．０
８．ミリスチン酸イソプロピル６．５
９．カルボキシメチルセルロースナトリウム０．１
１０．ベントナイト０．５
１１．プロピレングリコール４．０
１２．トリエタノールアミン１．１
１３．パラオキシ安息香酸メチル０．２
１４．二酸化チタン８．０
１５．タルク４．０
１６．ベンガラ１．０
１７．黄酸化鉄２．０
１８．香料適量
１９．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分２〜８を加熱溶解し、８０℃に保ち油相とする。成分１９に成分９をよく膨潤させ、続いて、成分１及び１０〜１３を加えて均一に混合する。これに粉砕機で粉砕混合した成分１４〜１７を加え、ホモミキサーで撹拌し７５℃に保ち水相とする。この油相に水相をかき混ぜながら加え、冷却し、４５℃で成分１８を加え、かき混ぜながら３０℃まで冷却して製品とする。

処方例７浴用剤
処方配合量(部)
１．ピンクロックローズの熱水抽出物（製造例１）５．０
２．炭酸水素ナトリウム５０．０
３．黄色２０２号（１）適量
４．香料適量
５．硫酸ナトリウムにて全量を１００とする
［製造方法］成分１〜５を均一に混合し製品とする。

処方例８軟膏
処方配合量(部)
１．ピンクロックローズの２０％エタノール抽出物（市販品）０．０１
２．ポリオキシエチレンセチルエーテル（３０Ｅ．Ｏ．）２．０
３．モノステアリン酸グリセリン１０．０
４．流動パラフィン５．０
５．セタノール６．０
６．パラオキシ安息香酸メチル０．１
７．プロピレングリコール１０．０
８．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分２〜５を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１及び６〜８を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化し、かき混ぜながら３０℃まで冷却して製品とする。

処方例９錠剤
処方配合量(部)
１．ピンクロックローズの熱水抽出物（製造例１）１．０
２．乾燥コーンスターチ２９．０
３．カルボキシメチルセルロースカルシウム２０．０
４．微結晶セルロース４０．０
５．ポリビニルピロリドン７．０
６．タルク３．０
［製法］成分１〜５を混合し、次いで１０部の水を加え、押出し造粒後乾燥する。成形した顆粒に成分６を加えて混合し、打錠する。

次に、本発明の効果を詳細に説明するため、実験例を挙げる。

実験例
マウス背部より摘出した褐色脂肪組織を、細切処理し、０．２％コラゲナーゼＳ１（新田ゼラチン社製）中で、３７℃、１時間インキュベートした。酵素処理した組織を、１００μｍ径のセルストレーナー（ベクトンディッキンソン社製）にてろ過し、遠心分離した。沈殿した褐色脂肪前駆細胞をリン酸緩衝生理食塩水にて洗浄し、１０％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭ培地中で、コンフレントに達するまで５％ＣＯ_２存在下、３７℃で培養した。細胞がコンフレントに達した後、０．２５％トリプシン−ＥＤＴＡ溶液にて剥離し、２×１０^４個／ウェルとなるように、２４ウェルプレートに播種した。再びコンフレントに達した後、培地を分化誘導培地１(ＤＭＥＭ、１０％ＦＢＳ、１０μｇ／ｍＬインスリン、３３μＭビオチン、１μＭデキザメタゾン、０．５ｍＭ３−イソブチルメチルキサンチン、０．２ｍＭインドメタシン)に置換し、３日間培養した。次いで、培地を分化誘導培地２（ＤＭＥＭ、１０％ＦＢＳ、１０μｇ／ｍＬインスリン、３３μＭビオチン）に置換し２日間培養した後、ピンクロックローズ２０％エタノール抽出物（フラックスマン社製）を添加し、２４時間培養した。また、コントロールとして、ピンクロックローズ抽出物を添加しない未適用対照と、カンカニクジュヨウ抽出物（自社にて熱水抽出したもの）、冬蟲夏草抽出物（大蔵製薬社製）、及びケンフェロール（ＳＩＧＭＡ社製）を添加した群を設けた。培養終了時に、細胞よりＴＯＲＩＺＯＬ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製）にて細胞を溶解することによって総ＲＮＡを抽出し、総ＲＮＡを基に、ＲＴ−ＰＣＲ法によりｍＲＮＡ発現量の測定を行った。ＲＴ−ＰＣＲ法にはＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔIII ＰｌａｔｉｎｕｍＴｗｏ−ＳｔｅｐｑＲＴ−ＰＣＲＫｉｔｗｉｔｈＳＹＢＲＧｒｅｅｎ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製）を用い、定量ＰＣＲ反応に供し、脱共役蛋白質１の発現量を定量した。発現量は、ＧＡＰＤＨの発現量にて規格化（ノーマライズ）した。尚、各遺伝子の発現の測定に使用したプライマーは、次の通りである。

脱共役蛋白質１用のプライマーセット
ＧＣＡＧＣＣＴＡＣＡＧＡＧＧＴＣＧＴＧＡＡ（配列番号１）
ＧＧＧＴＴＴＧＡＴＣＣＣＡＴＧＣＡＧＡＴ（配列番号２）
ＧＡＰＤＨ用のプライマーセット
ＴＧＣＡＣＣＡＣＣＡＡＣＴＧＣＴＴＡＧＣ（配列番号３）
ＴＣＴＴＣＴＧＧＧＴＧＧＣＡＧＴＧＡＴＧ（配列番号４）

定量化は、ΔΔＣｔ法にて行い、ピンクロックローズ抽出物無添加時の遺伝子発現量に対するピンクロックローズ抽出物添加時の遺伝子発現量を算出した。その結果を表１に示す。表示の通りピンクロックローズ抽出物を添加したときに、脱共役蛋白質１の発現の上昇が見られた。脱共役蛋白質１の発現は、添加するピンクロックローズ抽出物の濃度に依存しており、無添加条件と比較して０．５ｍｇ／ｍＬ添加時には約５倍の発現上昇が見られた。又、前述した抗肥満剤として既知であるカンカニクジュヨウ抽出物、冬蟲夏草抽出物及びケンフェロール添加群よりも著しく効果が高く、また、低濃度でも十分高い効果が得られた。

本発明に関わるピンクロックローズの抽出物を含有することを特徴とする抗肥満剤、及び脱共役蛋白質発現促進剤は、各剤の目的に対して優れた改善効果を発揮する。よって、肥満や生活習慣病の予防を目的とする化粧品、医薬品、及び医薬部外品等に有用である。

Claims

ピンクロックローズの抽出物を含有することを特徴とする脱共役蛋白質発現促進剤。
請求項１記載の脱共役蛋白質発現促進剤を含有することを特徴とする抗肥満剤。
請求項１記載の脱共役蛋白質発現促進剤又は請求項２記載の抗肥満剤を含有することを特徴とする皮膚外用剤。