WO2013107429A1 - 1-氧代/酰化-14-酰化的冬凌草甲素衍生物、及其制备方法和应用 - Google Patents

1-氧代/酰化-14-酰化的冬凌草甲素衍生物、及其制备方法和应用 Download PDF

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WO2013107429A1
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acylated
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alkyl
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徐荣臻
荣风光
谢福文
赖洪喜
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杭州本生药业有限公司
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    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia

Definitions

  • the present invention belongs to the field of natural medicines and medicinal chemistry and relates to novel Rubescensine A derivatives, in particular 1-oxo/acylated-14-acylated oridonin derivatives, and methods for preparing the same, A composition comprising the compound and its use in the preparation of an anti-tumor drug. Background technique
  • Oridonin is an isocene diterpenoid natural organic compound isolated from Labtea genus Rabdosia, which is the main component of Rubescens. It has the functions of clearing away heat and detoxifying, promoting blood circulation and removing blood stasis, antibacterial, anti-inflammatory and anti-tumor. (Zhao Yongxing et al. Preparation of Rubescens A Nanoparticles and Its Antitumor Activity in Vitro] [J]. Chinese Journal of Hospital Pharmacy, 2008, 28(11): 864-867; Liu Chenjiang et al. Antitumor effect of Rubescensine A [J]. Chinese Journal of Pharmaceutical Sciences, 1998, 33:577).
  • Rubescensine A has a cytotoxic effect, and its anti-tumor spectrum is very broad, including acute myeloid leukemia, chronic myeloid leukemia. , uterine cancer, breast cancer, lymphoma, osteosarcoma, gastric cancer, esophageal cancer, liver cancer, biliary cancer, nasopharyngeal carcinoma, lung cancer, melanoma, skin cancer, etc. (Liu Jiayin et al. Research and development of Rubescensine A Tumor activity [J]. Chinese Journal of New Drugs and Clinical Medicine, 2010, 29(2): 81-84).
  • Rubescensine A induces apoptosis of tumor cells by controlling the mitochondrial apoptosis pathway, mainly controlling the following pathways p53, Ras/Raf/ERK, PI3K/Akt and NF-kl3, to block cell cycle and malignant growth ( Li Chunyang et al. Rubescensine A: Cancer therapeutic activity that blocks cell cycle, induces apoptosis and autophagy [J]. International Journal of Biochemistry and Cell Biology, 2011, 43(5): 701- 704; Li Xiaojie et al. Rubescensine A regulates mitochondrial apoptosis by controlling signal transduction pathways [J]. Cancer Research and Clinic, 2010, 22(4): 286-288).
  • One of the objects of the present invention is to provide a 1-oxo/acylated-14-acylated amylose derivative of the formula (I) or a pharmaceutically acceptable salt thereof,
  • W is oxo or -0(CO)R,
  • n 1 or 2;
  • R is dC 6 alkyl
  • R is aryl, heteroaryl, C 3 -C 7 cycloalkyl, C 3 -C 7 cycloalkenyl, heterocyclyl, C r C 6 alkyl, amino C r C 6 alkyl, (C r C 6 alkyl)amino C r C 6 alkyl, bis(C r C 6 alkyl)amino c r c 6 alkyl, hydroxy c r c 6 alkyl, aryl c r c 6 alkyl, or heteroaryl c r c 6 alkyl;
  • aryl, heteroaryl, C 3 -C 7 cycloalkyl, C 3 -C 7 cycloalkenyl and heterocyclyl are each optionally substituted with a substituent selected from the group consisting of halogen, amino, CC 6 alkylamino, bis(dC 6 alkyl)amino, nitro, tt, hydroxy, dC 6 alkoxy, dC 6 haloalkoxy, fluorenyl, dC 6 alkylthio, dC 6 alkyl, hydroxy dC 6 An alkyl group and a dC 6 haloalkyl group; the c 3 -c 7 cycloalkenyl group is also optionally substituted by a carboxyl group;
  • LR is not a methyl group.
  • a second object of the present invention is to provide a 1-oxo/acylated-14- of the formula (I) of the present invention.
  • a third object of the present invention is to provide a pharmaceutical composition comprising a compound of the present invention, the pharmaceutical composition comprising at least one compound of the present invention, and optionally a pharmaceutically acceptable excipient.
  • a fourth object of the present invention is to provide a use of a compound of the present invention or a pharmaceutical composition comprising the same for the preparation of a medicament, particularly an antitumor medicament. Accordingly, the invention provides a method of treating a tumor patient comprising administering to a patient in need of treatment a therapeutically effective amount of at least one compound of the invention.
  • the tumor is particularly selected from the group consisting of leukemia, multiple myeloma, lymphoma, liver cancer, gastric cancer, breast cancer, cholangiocarcinoma, pancreatic cancer, lung cancer, colon cancer, osteosarcoma, melanoma, human cervical cancer, glioma, Nasopharyngeal cancer, laryngeal cancer, esophageal cancer, middle ear tumor, prostate cancer, etc.
  • the invention also relates to compounds of the invention for use in the treatment of tumors. detailed description
  • the present invention relates to a 1-oxo/acylated-14-acylated oridonin derivative of the formula (I) or a pharmaceutically acceptable salt thereof,
  • W is oxo or -0(CO)R,
  • n 1 or 2;
  • R is dC 6 alkyl
  • R is aryl, heteroaryl, C 3 -C 7 cycloalkyl, C 3 -C 7 cycloalkenyl, heterocyclyl, C r C 6 alkyl, amino C r C 6 alkyl, (C r C 6 alkyl)amino C r C 6 alkyl, bis(C r C 6 alkyl)amino c r c 6 alkyl, hydroxy c r c 6 alkyl, aryl c r c 6 alkyl, or heteroaryl c r c 6 alkyl;
  • aryl, heteroaryl, c 3 -c 7 cycloalkyl, c 3 -c 7 cycloalkenyl and heterocyclyl are each optionally substituted with a substituent selected from the group consisting of halogen, amino, Ci-C 6 alkylamino, bis(dC 6 alkyl)amino, nitro, tt, hydroxy, dC 6 alkoxy, dC 6 haloalkoxy, fluorenyl, dC 6 alkylthio, dC 6 alkyl, hydroxy a dC 6 alkyl group and a dC 6 haloalkyl group; the c 3 -c 7 cycloalkenyl group is also optionally substituted by a carboxyl group;
  • LR is not a methyl group.
  • the compounds of the invention have anti-tumor activity.
  • the compounds of the invention tested in this application all showed superior antitumor activity over unmodified Rubescensine A.
  • the compound of formula (I) is a compound of formula (1-1), wherein as defined in formula (I), n is as Defined in formula (I).
  • the compound of formula (I) is a compound of formula (1-2) wherein R 2 is -C(0)R or - C(0)S(0) 2 R, wherein R is as defined in formula (I).
  • the compound of formula (I) is a compound of formula (1-3) wherein R 3 is -C(0)R or -C(0 ) S(0) 2 R, wherein R is as defined in formula (I).
  • a compound of formula (1-4) wherein W is -0(CO)R, L is a direct bond or -(CH CH) n- , wherein R is as defined in formula (I) , R 4 is as defined for R in equation (I), n
  • the five- or six-membered aromatic ring group of the atom, more preferably the heteroaryl group is a furyl group, a thienyl group, a pyrrolyl group, a pyridyl group, an oxazole or the like.
  • Each of -C 7 cycloalkyl, C 3 -C 7 cycloalkenyl and heterocyclyl is optionally substituted with a substituent selected from the group consisting of halogen, amino, nitro, tt, dC 6 alkoxy, dC 6 Haloalkoxy, dC 6 alkylthio, dC 6 alkyl.
  • the substituent is fluorine, chlorine, bromine, nitro, cyano, methoxy, ethoxy, propoxy, methyl, ethyl, propyl, isopropyl, trifluoromethyl, Butyl, isobutyl, tert-butyl.
  • R is cyclopropyl, cyclopentyl, cyclohexyl, cyclopentenyl, cyclohexenyl, methyl, ethyl, propyl, isopropyl, n-butyl, isobutyl, tert-butyl Base, aminobutyl, arylmethyl, or arylethyl and the like.
  • the invention particularly preferably comprises the following compound of formula (I):
  • the present invention relates to compounds of the formula (I) according to the invention in the form of their salts, solvates, hydrates, adducts, complexes, Polymorph or prodrug.
  • 'OR' refers to Oridonin Rubescensine A.
  • alkyl refers to a straight or branched alkyl group containing the specified number of carbon atoms.
  • the alkyl group may contain 1-6, 1-5, 1-4 or 1-3 carbon atoms.
  • Examples of alkyl groups include, but are not limited to, methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, t-butyl, n-pentyl, and n-hexyl.
  • alkenyl refers to a straight or branched alkenyl group containing the specified number of carbon atoms.
  • the alkenyl group may contain 2-6, 2-5, 2-4 or 2-3 carbon atoms.
  • Examples of alkenyl groups include, but are not limited to, vinyl, allyl, butenyl, isobutenyl.
  • alkynyl refers to a straight or branched alkynyl group containing the specified number of carbon atoms.
  • the alkynyl group may contain 2-6, 2-5, 2-4 or 2-3 carbon atoms.
  • Examples of alkynyl groups include, but are not limited to, ethynyl and propynyl.
  • C 3 -C 7 cycloalkyl or cycloalkenyl refers to a hydrocarbyl group of a 3-7 membered monocyclic ring system having a saturated or unsaturated ring.
  • the C 3 -C 7 cycloalkyl or cycloalkenyl group may be a cyclopropyl group, a cyclobutyl group, a cyclopentyl group, a cyclohexyl group, a cycloheptyl group, a cyclopropenyl group, and a cyclohexenyl group.
  • aryl refers to a monocarbocyclic aryl group or a fused or non-fused polycarbocyclic aryl group containing 6 to 14 (eg, 6 to 12, 6 to 20) carbon atoms, in a multicarbocyclic ring. In the case, as long as one carbon ring is aromatic.
  • the aryl group also includes an aryl group fused to a heterocyclic group. Examples of the aryl group are a phenyl group, a biphenyl group, a naphthyl group, a 5,6,7,8-tetrahydronaphthyl group, a 2.3-dihydrobenzofuranyl group and the like.
  • heteroaryl refers to an aromatic ring group containing from 1 to 4 heteroatoms (eg 1, 2, 3 or 4 heteroatoms) as ring members in the ring. Heteroatoms refer to nitrogen, oxygen or sulfur. Miscellaneous
  • the group may be a monocyclic heteroaryl group having 5 to 7 ring atoms, or a bicyclic heteroaryl group having 7 to 11 ring atoms. As long as one ring of the bicyclic aryl group is an aromatic heterocyclic ring, the other may be aromatic or non-aromatic, hetero atom-containing or hetero atom-free.
  • heteroaryl group examples include, for example, a pyrrolyl group, a pyrazolyl group, an imidazolyl group, an oxazolyl group, a pyridyl group, a pyrimidinyl group, a furyl group, a thienyl group, an isoxazolyl group, a fluorenyl group and the like.
  • heterocyclyl refers to a non-aromatic cyclic group containing from 1 to 4 heteroatoms (e.g., 1, 2, 3 or 4 heteroatoms) as ring members. Heteroatoms refer to nitrogen, oxygen or sulfur.
  • the heterocyclic group may be a monocyclic heterocyclic group having 4 to 8 ring atoms (for example, a 4-7 membered ring, a 5-7 membered ring, a 5-6 membered ring), or a bicyclic heterocyclic ring having 7 to 11 ring atoms. Ring base.
  • the heterocyclic group may be aromatic or non-aromatic.
  • heterocyclic groups are azetidinyl, pyrrolidinyl, pyrrolinyl, tetrahydrofuranyl, dihydrofuranyl, piperazinyl, piperidinyl, morpholinyl, thiomorpholinyl, tetrahydropyran Base, tetrahydrothiol and the like.
  • halogen means fluoro, chloro, bromo or iodo.
  • alkylamino refers to an amino group substituted by one or two alkyl groups as defined above.
  • alkoxy includes alkyl-0- groups wherein the alkyl group is as defined above.
  • alkylthio alkyl-S- group wherein said alkyl group is as defined above.
  • pharmaceutically acceptable admixtures and complexes of the compounds of formula (I) refers to products in which the compounds of the present invention are further combined with other small molecules or biomacromolecules by non-chemical or non-covalent intramolecular forces.
  • an example of the term "pharmaceutically acceptable salt of a compound of formula (I)" is an organic acid salt formed from an organic acid which forms a pharmaceutically acceptable anion; such organic acid salts include, but are not limited to, toluene Acid salt, methanesulfonate, malate, acetate, citrate, malonate, tartrate, succinate, benzoate, ascorbate, lactate, alpha-ketoglutarate Salts and (X-glycerol phosphates; suitable inorganic salts are also formed; these include, but are not limited to, hydrochlorides, sulfates, nitrates, bicarbonates and carbonates, phosphates, hydrobromides , hydroiodide, etc. Pharmaceutically acceptable salts can be obtained using standard procedures well known in the art. For example, it is produced by administering a sufficient amount of a basic compound and a suitable pharmaceutically acceptable anion.
  • polymorph refers to the solid crystalline form of a compound of the invention or a complex thereof. Different polymorphs of the same compound may exhibit different physical, chemical and/or spectral properties. Different physical properties include, but are not limited to, stability (e.g., to heat or light), compressibility and density (important for formulation and product production), and dissolution rate (which can affect bioabsorbability and availability).
  • Differences in stability can result in chemical reactivity (eg, differential oxidation, such that when formulated from one polymorph, fades faster than when formed from another polymorph) or mechanical properties (eg, as storage) Changes in the kinetically favorable polymorphic tablet granules converted to thermodynamically more stable polymorphs) or both (for example, a polymorphic tablet is more susceptible to breakage at high humidity) .
  • the different physical properties of polymorphs can affect their processing. For example, one polymorph may be more likely to form a solvate than the other or may be more difficult to filter or wash away than the other due to, for example, the different shape or size distribution of the particles.
  • hydrate refers to a compound of the invention or a salt thereof, which further comprises a stoichiometric or non-stoichiometric amount of water bound by non-covalent intermolecular forces.
  • prodrug refers to a derivative that can be hydrolyzed, oxidized, or otherwise reacted under biological conditions (in vitro or in vivo) to provide a compound of the invention. Prodrugs undergo this reaction to become active compounds only under biological conditions, or they are active in their unreacted form. Prodrugs can generally be prepared using well-known methods, for example, 1 Burger's Medicinal Chemistry and Drug Discovery (1995) 172-178, 949-982 (Manfred E. Wolff, ed. 5th edition) and J. Rautio's Prodrugs and Targeted Delivery ( 201 1) 31-60 (Wiley-VCH, Methods and Principles in Medicinal Chemistry, Vol.
  • anti-tumor activity refers to direct inhibition or killing of tumor cells or tissues.
  • the antitumor activity of the compounds of the invention is determined in part by the examples of the present application.
  • treating generally refers to obtaining the desired pharmacological and/or physiological effects.
  • the effect # may prevent the disease or its symptoms completely or partially, may be prophylactic; and/or may be therapeutic based on partial or complete stabilization or cure of the disease and/or side effects due to the disease.
  • treatment encompasses any treatment for a patient's condition, including: (a) prevention of a disease or condition in a patient who is susceptible to an infectious disease or condition but has not yet diagnosed the disease; (b) inhibition of the symptoms of the disease, That is, to prevent its development; or (c) to alleviate the symptoms of the disease, that is, to cause the disease or symptoms to degenerate.
  • the invention also provides a process for the preparation of a compound of formula (I) according to the invention, wherein
  • the 1-hydroxyl group of the Rubescensine A is selectively oxidized to form an OR-Ketone intermediate; the intermediate is then associated with the corresponding organic acid, organic anhydride or organic An acid chloride, which undergoes an acylation reaction in the presence of a base to form a 1-oxo-14-acylated oridonin derivative (1-1);
  • 1-oxo-inosinin intermediate OR-Ketone
  • N-tert-butoxycarbonpiperidine-4-carboxylic acid in the presence of a base and a condensing agent, react to form 1-oxo-14- (N-tert-butoxycarbonyl 4-piperidyloxy) oridonin intermediate (OR-Ll-Boc)
  • this intermediate is acid treated to remove the tert-butoxycarbon protecting group to give the amine ( An ammonium salt) intermediate (0R-L1);
  • this amine (ammonium salt) intermediate is reacted with a corresponding organic acid, an organic acid anhydride, an organic acid chloride or a cross-acid chloride in the presence of a base to form a formula (I- 2 ) -oxo-14-(piperidinyloxy) Rubescensine A derivative;
  • 1-oxo oridonin intermediate OR-Ketone
  • 1-(N-tert-butoxycarbyl)amino-4-ring Hexyl carboxylic acid in the presence of a base and a coupling reagent, reacts to form 1-oxo-14-(1-(N-tert-butoxycarbylamino)-4-cyclohexanoyloxy) oryroin (0R-L2-BOC)
  • this intermediate is acid-treated to remove the tert-butoxycarbonyl protecting group to give an amine (ammonium salt) intermediate (0R-L2)
  • this amine (ammonium salt) intermediate has a base
  • the 1-oxo-14-(1-(amino)cyclohexyl-4-acyloxy group of formula (1-3) is formed.
  • the 1-oxo-14-acylated oridonin derivative (I: 1-1) of the present invention can be obtained by a two-step reaction as shown in the above formula.
  • the 1-position hydroxyl group of the Rubescensine A extracted and extracted from the natural medicinal material is selectively oxidized to form an OR-Ketone intermediate.
  • the oxidation reaction can be carried out with permanganic acid or a Jones oxidant.
  • the temperature of the oxidation reaction may be room temperature.
  • the hydroxyl group at the 1-position is oxidized, the other hydroxyl groups do not require specific protection.
  • the reaction is generally carried out in a solvent.
  • Solvents used include, but are not limited to, organic polar solvents. For example: acetone, dichloromethane (DCM), tetrahydrofuran (THF), N, N-dimethylformamide (DMF), dimethyl sulfoxide (DMSO), and the like.
  • the 14-position hydroxyl group of OR-Ketone is reacted with an organic acid, an organic acid halide or an organic acid anhydride to form 1-oxo-14-acylated amylose derivative. (I: 1-1).
  • This reaction is generally carried out in the presence of a base and a condensation reagent.
  • the base here may be an organic base or an inorganic base. For example: 4-dimethylaminopyridine, triethylamine and carbonic acid clock.
  • the condensing agent used in the acylation reaction may be 1, 3-dicyclohexylcarbodiimide, 2-(7-azobenzotriazole)-indole, hydrazine, hydrazine, ⁇ '-tetramethylurea Hexafluorotitrate (HATU), benzotriazole-oxime, guanidine, ⁇ ', ⁇ '-tetramethylurea hexafluoroborate (HBTU), benzotriazole-1-yloxy III (Dimethylamino)phosphoryl hexafluorophosphate ( ⁇ ), benzotriazole-oxime, hydrazine, ⁇ ', ⁇ '-tetramethylurea hexafluoroborate (TBTU).
  • the acylating agent used in the acylation reaction may be the corresponding organic acid, organic acid halide or organic acid anhydride.
  • the sulfonylating agent used in the sulfonylation reaction may be the corresponding organic sulfonyl halide.
  • the acylation reaction is generally carried out in a solvent.
  • solvent The choice of solvent depends on the polarity and solubility of the starting materials. Solvents used include, but are not limited to, organic polar solvents. For example: dichloromethane (DCM), tetrahydrofuran (THF), N, N-dimethylformamide (DMF), dimethyl sulfoxide (DMSO). Warm down. " 1 :
  • 1-oxo-inosinin intermediate OR-Ketone
  • N-tert-butoxycarbonylpiperidine-4-carboxylic acid in the presence of a base and a condensing agent, react to form 1-oxo-14- (N-tert-Butoxycarbonyl 4-piperidinyloxy) Rubescensine A intermediate (OR-Ll-Boc).
  • the above acylation reaction conditions reaction temperature, reaction time, condensing agent and base) are suitable for the present reaction.
  • 1-oxo-14-(N-tert-butoxycarbonyl 4-piperidinyloxy) orribine A intermediate (OR-Ll-Boc) is acid-treated to remove tert-butoxycarbon-based protective agent.
  • An amine (ammonium salt) intermediate (OR-Ll) is obtained.
  • the acid used in the reaction may be an organic acid or an inorganic acid such as trifluoroacetic acid and hydrochloric acid.
  • the resulting product of the reaction generally forms the corresponding ammonium salt.
  • the yield of the reaction is generally quantitative.
  • the acylation reaction of the (OR-L1)amine (ammonium salt) intermediate is generally carried out in the presence of a condensing agent.
  • the condensing agent here may be, but not limited to, an organic condensing agent.
  • 2-(7-azobenzotriazole)- ⁇ , ⁇ , ⁇ ', ⁇ '-tetramethylurea hexafluorophosphate (HATU) benzotriazole-oxime, ⁇ , ⁇ ' , ⁇ '- tetramethylurea hexafluoroborate (HBTU), benzotriazol-1-yloxytris(dimethylamino)phosphonium hexafluoroate ( ⁇ ), benzotriazine Oxazole-oxime, oxime, ⁇ ', ⁇ '-tetramethylurea hexafluoroborate (TBTU).
  • HATU 2-(7-azobenzotriazole)- ⁇ , ⁇ , ⁇ ', ⁇ '-tetramethylurea
  • the acylation reaction of the intermediate must be carried out in the presence of a base.
  • the role of the base is to neutralize the acid in the ammonium salt to give the free amine and to participate in the condensative acylation of the amine intermediate with an organic acid, anhydride or acid chloride.
  • the base here may be, but not limited to, an organic base.
  • DIPEA ⁇ , ⁇ -diisopropylethylamine
  • TEA triethylamine
  • pyridine 4-dimethylaminopyridine (DMAP).
  • the acylation of the amine is generally carried out in a solvent or in the absence of a solvent.
  • Solvents used include, but are not limited to, organic polar solvents. For example: dichloromethane (DCM), tetrahydrofuran (THF), hydrazine, hydrazine-dimethylformamide (DMF), dimethyl sulfoxide (DMSO), and the like.
  • the 1,14-diacylated oridonin derivative (1-4) can be obtained by a four-step reaction as shown in the above formula.
  • the hydroxyl group at the 7, 14-position is first protected with an acetal to form OR-2.
  • the protective reagent can be the corresponding ketone or aldehyde.
  • the protection reaction needs to be carried out in the presence of a catalytic amount of acid.
  • the 1-position hydroxyl group of the intermediate OR-2 can be acylated by a conventional method to give the intermediate OR-3.
  • the acylating agent may be an organic acid, an organic acid anhydride or an organic acid chloride.
  • the acylation reaction needs to be carried out in the presence of a solvent and a base.
  • the intermediate OR-3 is deprotected by acid treatment to give the intermediate OR-4.
  • the deprotected reagent can be an organic acid such as 80% acetic acid.
  • the reaction temperature depends on the activity of the reaction substrate.
  • the acylation of the intermediate OR-4 gives the 1,14-diacylated oridonin derivative (1-4).
  • the acylation reaction of OR-4 is basically the same as the 1-oxo-14-acylated oridonin derivative of the formula (1-1) in terms of reaction temperature, reaction solvent, reaction reagent and reaction operation. similar. Wherein Ri, R 4 are the same as defined above in the formula (1-4).
  • Protecting groups are those which, once attached to an active moiety (eg, hydroxyl or amino), prevent these Examples of hydroxy protecting groups include, but are not limited to, alkyl, benzyl, allyl, trityl (ie, triphenylmethyl), acyl (eg, benzoyl, acetyl or HOOC-X).
  • X is an alkylene, alkenylene, cycloalkylene or arylene group, a silyl group (for example, trimethylsilyl, triethylsilyl and tert-butyldimethyl) Silyl), alkoxycarbonyl, aminocarbonyl (for example, dimethylaminocarbonyl, methylethylaminocarbonyl and phenylaminocarbonyl), alkoxymethyl, benzyloxymethyl and alkylhydrazinemethyl.
  • silyl group for example, trimethylsilyl, triethylsilyl and tert-butyldimethyl
  • alkoxycarbonyl for example, aminocarbonyl (for example, dimethylaminocarbonyl, methylethylaminocarbonyl and phenylaminocarbonyl), alkoxymethyl, benzyloxymethyl and alkylhydrazinemethyl.
  • amino protecting group examples include, but are not limited to, an alkoxycarbonyl group, an alkanoyl group, an aryloxycarbonyl group, an aryl-substituted alkyl group, and the like. Hydroxy and amino protecting groups have been discussed in TW Greene and PG. M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 2nd Edition, John Wiley and Sons (1991). Both the hydroxy group and the amino protecting group can be removed by a conventional method after the reaction.
  • the invention also provides a pharmaceutical composition comprising a compound of formula I of the invention.
  • the present invention provides a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising at least one compound of the formula I of the present invention as described above, and optionally a pharmaceutically acceptable excipient.
  • Methods of preparing the pharmaceutical compositions include the incorporation of suitable pharmaceutical excipients, carriers, diluents and the like.
  • the pharmaceutical preparation of the present invention is produced by a known method, including a conventional mixing, dissolving or lyophilizing method.
  • the compounds of the present invention can be formulated into pharmaceutical compositions and administered to a patient in a variety of ways suitable for the chosen mode of administration, e.g., oral, gastrointestinal, intravenous or intramuscular and subcutaneous.
  • the compounds of the invention may be administered systemically, for example, orally, in combination with a pharmaceutically acceptable carrier such as an inert diluent or an edible carrier. They can be enclosed in hard or soft shell gelatin capsules and can be compressed into tablets.
  • a pharmaceutically acceptable carrier such as an inert diluent or an edible carrier.
  • the active compound may be combined with one or more excipients and in the form of swallowable tablets, buccal tablets, troches, capsules, elixirs, suspensions, syrups, wafers, and the like.
  • Such compositions and preparations should contain At least 0.1% active compound.
  • the ratio of such compositions and formulations may of course vary and may range from about 1% to about 99% by weight of a given unit dosage form.
  • the amount of active compound is such that an effective dosage level can be obtained.
  • Tablets, lozenges, pills, capsules, and the like may also contain: a binder such as tragacanth, acacia, corn starch or gelatin; an excipient such as dicalcium phosphate; a disintegrant such as corn starch , potato starch, alginic acid, etc.; a lubricant such as magnesium stearate; and a sweetener such as sucrose, fructose, lactose or aspartame; or a flavoring agent such as mint, wintergreen or cherry.
  • a binder such as tragacanth, acacia, corn starch or gelatin
  • an excipient such as dicalcium phosphate
  • a disintegrant such as corn starch , potato starch, alginic acid, etc.
  • a lubricant such as magnesium stearate
  • a sweetener such as sucrose, fructose, lactose or aspartame
  • a flavoring agent such as mint, winter
  • any material used to prepare any unit dosage form should be pharmaceutically acceptable and substantially non-toxic in the amounts employed.
  • the active compound can be incorporated into a sustained release preparation and a sustained release device.
  • the active compound can also be administered intravenously or intraperitoneally by infusion or injection.
  • An aqueous solution of the active compound or a salt thereof, optionally a miscible non-toxic surfactant, can be prepared.
  • Dispersants in glycerin, liquid polyethylene glycols, triacetin and mixtures thereof, and oils can also be prepared. Under ordinary conditions of storage and use, these preparations contain a preservative to prevent microbial growth.
  • Pharmaceutical dosage forms suitable for injection or infusion may include sterile aqueous solutions or dispersions of the active ingredient (optionally encapsulated in liposomes) containing the immediate formulation of a suitable injectable or injectable solution or dispersing agent. Or sterile powder. In all cases, the final dosage form must be sterile, liquid, and stable under the conditions of manufacture and storage.
  • the liquid carrier can be a solvent or liquid dispersion medium including, for example, water, ethanol, polyol (for example, glycerol, propylene glycol, liquid polyethylene glycol, and the like), vegetable oil, non-toxic glycerides, and suitable mixtures thereof.
  • Proper fluidity can be maintained, for example, by liposome formation, by maintaining the desired particle size in the case of a dispersing agent, or by the use of a surfactant. It can be produced by various antibacterial and antifungal agents (such as parabens, chlorobutanol, phenol, sorbic acid, thimerosal, etc.) Prevent the action of microorganisms. In many cases, it will be preferable to include isotonic agents, such as sugars, buffers or sodium chloride. Prolonged absorption of the injectable compositions can be brought about by the use of compositions that delay the absorbent (e.g., aluminum monostearate and gelatin).
  • an absorbent e.g., aluminum monostearate and gelatin.
  • Sterile injectable solutions are prepared by combining the required active compound in a suitable solvent with the various other ingredients listed above, followed by filter sterilization.
  • the preferred preparation methods are vacuum drying and lyophilization techniques which result in a powder of the active ingredient plus any additional ingredients present in the previously sterile filtration solution. .
  • Useful solid carriers include comminuted solids (e.g., talc, clay, microcrystalline cellulose, silica, alumina, etc.).
  • Useful liquid carriers include water, ethanol or ethylene glycol or a water-ethanol/ethylene glycol mixture, and the compounds of the present invention may be dissolved or dispersed in an effective amount, optionally with the aid of a non-toxic surfactant.
  • Adjuvants e.g., fragrances
  • additional antimicrobial agents can be added to optimize the properties for a given use.
  • Thickeners can also be used with liquid carriers to form coatable pastes, gels, ointments. , soap, etc., used directly on the user's skin.
  • the therapeutic requirements of a compound or an active salt or derivative thereof depend not only on the particular salt selected, but also on the mode of administration, the nature of the condition being treated, and the age and condition of the patient, ultimately depending on the attending physician or clinician decision.
  • unit dosage form is a unit dispersion unit containing a unit dosage unit suitable for administration to humans and other mammalian bodies.
  • the unit dosage form can be a capsule or tablet, or a lot of capsules or tablets.
  • the amount of unit dose of the active ingredient can vary or be adjusted between about 0.1 to about 1000 grams or more.
  • the invention also provides the use of a compound of the invention or a composition comprising the compound for the preparation of a medicament, in particular an antitumor medicament. Accordingly, the invention provides a method of treating a tumor patient comprising administering to a patient in need of treatment a therapeutically effective amount of at least one compound of the invention.
  • the 1-oxo/acylated-14-acylated oridonin derivative of the present invention or a pharmaceutically acceptable salt thereof can be used, for example, for the treatment of leukemia, multiple myeloma, lymphoid Barney, liver cancer, gastric cancer, breast cancer, cholangiocarcinoma, pancreatic cancer, lung cancer, colorectal cancer, osteosarcoma, melanoma, human cervical cancer, glioma, nasopharyngeal carcinoma, laryngeal cancer, esophageal cancer, middle ear tumor , prostate cancer and other tumors.
  • Chromium trioxide (240 mg, 2.4 mmol) was dissolved in 2 mL of water, and 0.22 mL of concentrated citric acid was added at 0 °C, then 3 mL of water was added and stirred to prepare Jone's Jones Reagent.
  • BS-OR-003 BS-OR-020 was prepared by reacting the compound 1-oxotoxin with o-bromobenzoyl chloride using the same reagent as above:
  • 2-chloronicotinic acid is 2-chloronicotinic acid
  • DCC is 1,3-dicyclohexyldiimide
  • DMAP is 4-dimethylaminopyridine.
  • BS-OR-012 was prepared by reacting the compound 1-oxotoxin A with 4-picolinic acid according to the method of BS-OR-013 using the same reagent as above:
  • BS-OR-013 BS-OR-014 was prepared by reacting the compound 1-oxostrobinol with 5-methyl-4-isoxazolecarboxylic acid using the same reagent as above:
  • BS-OR-017 was prepared by reacting the compound 1-oxostrobinol with cyclopropanecarboxylic acid using the same reagent as above:
  • OR-ketone OR-L1 -Boc Dissolve 1,3-dicyclohexylcarbodiimide (247 mg, 1.2 mmol) in 10 mL of dry dichloromethane and add N-tert-butoxy at 0 °C.
  • Deoxylpiperidine-4-carboxylic acid (251 mg, 1.1 mmol), after stirring for half an hour, add 1-oxotominol (362 mg, 1 mmol) and 4-dimethylaminopyridine (10 mg) , catalytic amount), stirred at room temperature overnight.
  • the obtained crude product is used in a silica gel column Separation and purification gave 1-oxo-14-(4-methyl)benzoyloxystrobinol (435 mg, yield 79%).
  • Example 4 Compound (BS- Synthesis of OR-037) Where 3-nitrobenzene- 1 -sulfonyl chloride is 3-mercaptophthale yellow ugly chlorine.
  • BS-OR-037 using the same reagent as above, 1-oxo-14-(4-acyloxypiperidine) Rubescensine trifluoroacetate and 2, BS-OR-026 was prepared by reacting 4,6-trimethylbenzenesulfonyl chloride:
  • 4-methylbenzoic acid is p-toluic acid.
  • BS-OR-050 was prepared by reacting 1-oxo-14-(4-acyloxypiperidine) Rubescensine trifluoroacetate with phenylpropionic acid using the same reagent as above:
  • 1-oxo-14-(4-acyloxy) BS-OR-064 was prepared by reacting cyclohexylamine) Rubescensine A trifluoroacetate with 3-(trifluoromethyl)benzenesulfonyl chloride:
  • BS-OR-070 was prepared by reacting 1-oxo-14-(4-acyloxycyclohexylamine) Rubescensine trifluoroacetate with benzylsulfonyl chloride:
  • BS-OR-072 use the same as above
  • the reagent was prepared by reacting 1-oxo-14-(4-acyloxycyclohexylamine) oridonin trifluoroacetate with 2-furancarboxylic acid to prepare BS-OR-088:
  • TsOH is benzenesulfonic acid.
  • 1-OAc-OR is 1-acetylstroperrin.
  • p-Methylbenzoic acid (30.6 mg, 0.225 mmol) was dissolved in dry dichloromethane (5 mL), oxalyl chloride (38 mg, 0.30 mmol) was added, and stirred at room temperature for 1.5 hours, then dried to give p-methylbenzene.
  • Acid chloride; 1-acetylorchinolate A (61.0 mg, 0.15 mmol), triethylamine (45.5 mg, 0.45 mmol) was dissolved in dichloromethane (5 mL), and the obtained p-methylbenzoyl chloride was added. After stirring at room temperature for 2 hours, add dichloromethane (30 mL) and saturated carbon. ⁇ 60-3 ⁇ 4o-sa i ⁇ w Fengji ⁇ ⁇
  • N-Boc-4 piperidinecarboxylic acid (183.3 mg, 0.74 mmol) was added to dry dichloromethane (10 mL), followed by oxalyl chloride (140 mg, 1.1 mmol). Then, dichloromethane (5 mL) in which 1-acetylacetoin A (200 mg, 0.49 mmol), triethylamine (222 mg, 2.2 mmol) was dissolved was stirred at room temperature for 2 hours. After the completion of the reaction, methylene chloride (30 mL) was added to the mixture, and the mixture was evaporated, evaporated, evaporated, evaporated.
  • Leukemia cell line leukemia cell line: K562/adr (resistant chronic myeloid leukemia, CML), NB4 (acute promyelocytic leukemia, AML), Kasumi-1 (acute myeloid leukemia M2, AML-M2), Jurkat (acute lymphocytic leukemia, ALL), above cells Departments were awarded to the Institute of Oncology, Zhejiang University; H9 (Acute Lymphocytic Leukemia, ALL), purchased from the China Center for Type Culture Collection.
  • Rubescensine A (OR) standard was purchased from Xi'an Yuxuan Biotechnology Co., Ltd., 1-oxo/acylated-14-acylated amylose derivative of the present invention.
  • Table 1 shows that the 1-oxo/acylated-14-acylated oridonin derivative of the present invention can effectively induce cell death and inhibition of human chronic myeloid leukemia, acute myeloid leukemia and acute lymphocytic leukemia. Leukemia cells grow.
  • the 1-oxo/acylated-14-acylated oridonin derivative of the present invention has significant anti-cell strain activity, wherein the compound BS-OR-090, BS- OR-093 is particularly prominent, and the activity of K562/adr, Kasumi-1 and Jurkat cell lines is increased by 3 to 4 times, while the activity of anti-NB4 and H9 cell lines is increased by 15 times and 22 times; in addition, BS- The anti-Kasumi-1 cell line activity of OR-004 and BS-OR-005 derivatives was increased by more than 3 times; the activity of BS-OR-005 and BS-OR-010 was also increased by nearly 4 times on anti-Jurkat cell line.
  • Table 1 Determination of growth inhibition concentration of leukemia cells by 1-oxo/acylated-14-acylated amylose derivative (72 h, IC 5 Q (iglmL) value and IC 9 Q (g/mL) Value).
  • Example 12 1-oxo/acylated acyl- 14-acylated amylose A derivative against human multiple myeloma cell activity assay
  • Myeloma cell line RPMI 8226 (multiple myeloma), purchased from Shanghai Fuxiang Biotechnology Co., Ltd.
  • Table 2 shows that the 1-oxo/acylated-14-acylated oridonin derivative of the present invention can induce death of human myeloma cells and inhibit the growth of these tumor cells.
  • the 1-oxo/acylated-14-acylated oridonin derivative BS-OR-005, BS-OR-010, BS-OR-090 of the present invention , BS-OR-093 improves the activity of anti-RPMI 8226 cells
  • Example 13 1-oxo/acylated acyl- 14-acylated ampicillin A derivative against human solid tumor
  • Hep-2 (larynx cancer), A549 (human lung cancer), CaEs-17 (esophage cancer cells), PC-3 (prostate cancer), CNE (nasopharyngeal carcinoma cells), SK-OV-3 (ovarian cancer cells) Purchased from the China Center for Type Culture Collection; RKO (human colon adenocarcinoma), MGC-803 (human gastric cancer cells), MG-63 (osteosarcoma), U87-MG (malignant glioma cells) were purchased from Shanghai Fuxiang Biotechnology Co., Ltd.; PANC-1 (pancreatic cancer), Becap-37 (human breast cancer cells), Hela (human cervical cancer cells), Hep G2 (human liver cancer cells) were all donated to the Institute of Cancer Research, Zhejiang University.
  • 6000 well-grown human solid tumor cells were taken and inoculated into the wells of a 96-well cell culture plate.
  • the culture medium was DMEM high glucose cell culture medium containing 10% fetal calf serum. Place in a carbon dioxide (5% C0 2 ) cell culture incubator 37. C was cultured for 24 hours, and then, different concentrations of 1-oxo/acylated-14-acylated oridonin derivative were added, and after mixing, carbon dioxide (5% CO 2 ) cell incubator 37 was further placed. C was cultured for 72 hours. The viable cell concentration was then determined by the MTT method. In this experiment, the cell viability was set to 100% in the control group (without compound treatment), and cell viability (%) and 72-hour leukemia cell growth inhibition concentration (72 h IC 5 value) were calculated.
  • Table 2 shows that the 1-oxo/acylated-14-acylated oridonin derivative of the present invention has an activity against human solid tumors, induces death of human solid tumor cells or inhibits the growth of these tumor cells.
  • the 1-oxo/acylated-14-acylated oridonin derivatives BS-OR-090 and BS-OR-091 anti-MGC-803 and Hep of the present invention are compared with Rubescensin itself.
  • BS-OR-004, BS-OR-005, BS-OR-019 and BS-OR-093 increased the activity of CaEs-17 by more than 3 times
  • BS-OR-004 And BS-OR-090 anti-CNE activity increased nearly 6 times
  • BS-OR-090 and BS-OR-093 anti-SK-OV-3 activity increased by more than 7 times
  • BS-OR-004, BS-OR-005 And BS-OR-090 increased the activity of anti-PANC-1 and Hep G2 cell lines by nearly 7 to 8 times
  • BS-OR-004 and BS-OR-005 also increased the activity of Becap-37 and RKO by more than 7 times.
  • BS-OR-004, BS-OR-005, BS-OR-019 and BS-OR-090 have more than 5 times more activity against MG-63; BS-OR-090 has more than 5 times more activity against Hela activity; BS- The anti-PC-3 activity of OR-005 and BS-OR-090 also increased by more than 5 times.
  • Table 2 Determination of growth inhibition concentration of human solid tumor cells by 1-oxo/acylated-14-acylated amylose A derivative (72 h, IC 5 Q (iglmL) value and IC 9 Q (g/ mL) value).

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Abstract

本发明属于天然药物及药物化学领域，具体涉及通式（I）的新型1- 氧代/酰化-14-酰化的冬凌草甲素衍生物或其药学上可接受的盐，制备这些化合物的方法、包含该化合物的药物组合物及其在制备抗肿瘤药物中的用途。

Description

1-氧代 /酰化 -14-酰化的冬凌草甲素衍生物、 及其制备方法和应用 技术领域
本发明属于天然药物及药物化学领域并涉及新型冬凌草甲素衍 生物， 特别是 1-氧代 /酰化 -14-酰化的冬凌草甲素衍生物， 及制备这些 化合物的方法、 包含该化合物的组合物及其在制备抗肿瘤药物中的用 途。 背景技术
冬凌草甲素 (Oridonin)是从唇形科（ Labtea )香茶菜属（ Rabdosia ) 植物碎米桠中分离出的一种贝壳烯二萜类天然有机化合物， 是冬凌 草的主要成分， 具有清热解毒， 活血化瘀， 抗菌消炎， 抗肿瘤等功 效。 （赵永星等. 冬凌草甲素纳米粒制备及其体外抗肿瘤活性 [J]. 中 国医院药学杂志， 2008, 28(11):864-867； 刘晨江等. 冬凌草甲素的抗 肿瘤作用 [J]. 中国药学杂志， 1998, 33:577 ) 。
科学家对冬凌草甲素及其相似物进行了大量的研究， 包括分 离、 提纯、 结构鉴定与修饰、 体内与体外的生物活性研究， 以期发 现可用于临床的新的药物（刘珂等. 冬凌草甲素衍生物及其制备方法 [P]. CN 101723951, 2010; 卢金健等. 从中草药中分离得到的抗癌天 然 产 物 [J]. 中 国 中 药 杂 志 ， 201 1, 6:27-27; 赵 明 等 . HPLC-PDA/(-)ESI-MS单联方法鉴定香茶菜属植物中 30种水溶性成 分 [J]. Journal of Chromatography, B Analytical Technologies in the Biomedical and Life Sciences, 201 1, 879(26):2783-2793; 赵鹏等. UPLC 方法测定香茶菜属植物中冬凌草甲素含量 [J]. 中成药， 201 1, 3(3):540-542； 孙汉董等， 香茶菜属植物二萜化合物， 科学出版社， 2001 ; 徐进宜等.冬凌草甲素衍生物及其制备方法 [P]. CN 102002050, 2008; 徐进宜等. 具有抗肿瘤活性的 ent-6,7-开环贝壳杉烷型冬凌草 甲素衍生物、 其制备方法及用途 [P]. CN 101 139351, 2011 ; 徐进宜等. 具有抗肿瘤活性的冬凌草甲素及 6,7-开环冬凌草甲素含氟衍生物、制 备方法及用途 [P]. CN102295649, 201 1 ) 。
Figure imgf000003_0001
卢氏冬凌草甲素 信阳冬凌草甲素 鲁山冬凌草丁素 研究发现， 冬凌草甲素具有细胞毒作用， 其抗瘤谱很广， 包括 急性髓性白血病， 慢性粒性白血病， 子宫癌， 乳房癌， 淋巴癌， 骨 肉癌， 胃癌， 食管癌， 肝癌， 胆嚢癌， 鼻咽癌， 肺癌， 黑色素瘤， 皮肤癌等（刘佳音等. 冬凌草甲素的研究进展以及抗肿瘤活性 [J]. 中 国新药与临床杂志， 2010, 29(2):81-84 ) 。
冬凌草甲素通过控制线粒体凋亡路径引导肿瘤细胞的凋亡， 主 要控制以下转换途径 p53, Ras/Raf/ERK, PI3K/Akt和 NF-kl3，达到阻 断细胞周期和恶性增长的作用（李春阳等. 冬凌草甲素： 具有阻断细 胞周期，引导细胞凋亡和自体吞噬的癌症治疗活性二萜 [J]. 国际生物 化学和细胞生物学杂志， 2011, 43(5):701-704； 李晓杰等. 冬凌草甲素 通过控制信号转换路径调节线粒体凋亡 [J]. 肿瘤研究与临床， 2010, 22(4):286-288 ) 。
由于冬凌草甲素的水溶性差和生物利用率低， 限制了在临床上 的应用。 人们对冬凌草甲素进行结构改造， 试图找到活性更好的化 合物。 日本 Fujita小组对冬凌草甲素 14位羟基进行了结构改造， 发 现只有长链脂肪酸在 14位酰化后的衍生物活性显著高于冬凌草甲素 本身的生物活性 ( Fujita, Eiichi. Biologic and physiological activity. II Antitumor activity of acylated oridonin[J], Chemic & Pharmaceutical Bulletin, 1981, 29(11):3208-3213 ) 。
本领域需要新的具有抗肿瘤活性、 特别是具有更高抗肿瘤活性 的化合物。 发明内容
本发明的目的之一是提供通式 (I)的 1-氧代 /酰化 -14-酰化的冬凌 草甲素衍生物或其药学上可接受的盐，
Figure imgf000004_0001
式中， W为氧代或 -0(CO)R，；
L选自直接键、 -(CH=CH)n -、 哌啶子基羰基、 哌啶子基磺酰基、 环己基 氨基羰基、 环己基氨基磺酰基；
n为 1或 2;
R，为 d-C6烷基；
R为芳基、 杂芳基、 C3-C7环烷基、 C3-C7环烯基、 杂环基、 CrC6烷基、 氨基 CrC6烷基、 （CrC6烷基）氨基 CrC6烷基、 二 （CrC6烷基） 氨基 crc6烷基、 羟基 crc6烷基、 芳基 crc6烷基、 或杂芳基 crc6 烷基；
其中， 所述芳基、 杂芳基、 C3-C7环烷基、 C3-C7环烯基和杂环基各自 任选地被选自下组的取代基取代：鹵素、氨基、 C C6烷基氨基、二（ d-C6 烷基）氨基、 硝基、 tt、 羟基、 d-C6烷氧基、 d-C6鹵代烷氧基、 巯 基、 d-C6烷硫基、 d-C6烷基、 羟基 d-C6烷基和 d-C6鹵代烷基； 所 述 c3-c7环烯基还任选地被羧基取代；
其中， 当 W为- 0(CO)CH3时， L-R不为甲基。
本发明的目的之二是提供制备本发明通式（I )的 1-氧代 /酰化 -14- 酰化的冬凌草甲素衍生物的方法。
本发明的目的之三是提供包含本发明化合物的药物组合物， 所述 药物组合物包括至少一种本发明化合物， 和任选的药学上可以接受的 赋形剂。
本发明的目的之四是提供本发明化合物或包含该化合物的药物 组合物在制备药物、 特别是抗肿瘤药物中的用途。 相应地， 本发明提 供一种治疗肿瘤患者的方法， 包括给予需要治疗的患者治疗有效量 的至少一种本发明的化合物。 所述肿瘤特别选自白血病、 多发性骨 髓瘤、 淋巴瘤、 肝癌、 胃癌、 乳腺癌、 胆管细胞癌、 胰腺癌、 肺癌、 大肠癌、 骨肉瘤、 黑色素瘤、 人宫颈癌、 神经胶质瘤、 鼻咽癌、 喉 癌、 食管癌、 中耳肿瘤、 前列腺癌等。
本发明还涉及用于治疗肿瘤的本发明的化合物。 具体实施方式
本发明涉及通式 (I)的 1 -氧代 /酰化- 14-酰化的冬凌草甲素衍生物 或其药学上可接受的盐，
Figure imgf000005_0001
式中， W为氧代或 -0(CO)R，；
L选自直接键、 -(CH=CH)n -、 哌啶子基羰基、 哌啶子基磺酰基、 环己基 氨基羰基、 环己基氨基磺酰基；
n为 1或 2;
R，为 d-C6烷基；
R为芳基、 杂芳基、 C3-C7环烷基、 C3-C7环烯基、 杂环基、 CrC6烷基、 氨基 CrC6烷基、 （CrC6烷基）氨基 CrC6烷基、 二 （CrC6烷基） 氨基 crc6烷基、 羟基 crc6烷基、 芳基 crc6烷基、 或杂芳基 crc6 烷基；
其中， 所述芳基、 杂芳基、 c3-c7环烷基、 c3-c7环烯基和杂环基各自 任选地被选自下组的取代基取代：鹵素、氨基、 Ci-C6烷基氨基、二（ d-C6 烷基）氨基、 硝基、 tt、 羟基、 d-C6烷氧基、 d-C6鹵代烷氧基、 巯 基、 d-C6烷硫基、 d-C6烷基、 羟基 d-C6烷基和 d-C6鹵代烷基； 所 述 c3-c7环烯基还任选地被羧基取代；
其中， 当 W为- 0(CO)CH3时， L-R不为甲基。
本发明的化合物具有抗肿瘤活性。 本申请中所测试的本发明化合 物均显示出优于未经修饰的冬凌草甲素的抗肿瘤活性。
当 W为氧代、 L为直接键或 -(CH=CH)n-时，式（I )化合物即为式（1-1 ) 化合物， 其中 如式（I ) 中对 R的定义， n如式（I ) 中所定义。
当 W为氧代、 L为哌啶子基叛基或哌啶子基磺酰基时， 式（ I )化合 物即为式（ 1-2 )化合物， 其中 R2为 -C(0)R或 -C(0)S(0)2R, 所述 R如式 ( I ) 中所定义。
当 W为氧代、 L为环己基氨基羰基或环己基氨基磺酰基时， 式（ I ) 化合物即为式（1-3 )化合物， 其中 R3为 -C(0)R或 -C(0)S(0)2R, 所述 R 如式（I ) 中所定义。
当 W为 -0(CO)R，、 L为直接键或 -(CH=CH)n-的式（I )化合物即式 ( 1-4 )化合物， 其中 如式（I ) 中对 R的定义， R4如式（I ) 中对 R， 的定义， n
Figure imgf000006_0001
1-1 I-2
Figure imgf000007_0001
1-3 1-4 根据式（I )的 1-氧代 /酰化 -14-酰化的冬凌草甲素衍生物或其药学 上可接受的盐， 其中优选 W为氧代或甲酰氧基。
根据式（I )的 1-氧代 /酰化 -14-酰化的冬凌草甲素衍生物或其药学 上可接受的盐， 其中优选所述芳基为苯基。
根据式（I )的 1-氧代 /酰化 -14-酰化的冬凌草甲素衍生物或其药学 上可接受的盐，优选其中所述杂芳基为含氧、 氮或硫杂原子的五元或六 元芳环基团， 更优选杂芳基为呋喃基、 噻吩基、 吡咯基、 吡啶基、 噁唑 等。
根据式（I )的 1-氧代 /酰化 -14-酰化的冬凌草甲素衍生物或其药学 上可接受的盐， 其中优选所述所述芳基、 杂芳基、 C3-C7环烷基、 C3-C7 环烯基和杂环基各自任选地被选自下组的取代基取代： 鹵素、氨基、 硝 基、 tt、 d-C6烷氧基、 d-C6鹵代烷氧基、 d-C6烷硫基、 d-C6烷基。 更优选所述取代基为氟、 氯、 溴、 硝基、 氰基、 甲氧基、 乙氧基、 丙氧 基、 甲基、 乙基、 丙基、 异丙基、 三氟甲基、 正丁基、 异异丁基、 叔丁 基。
根据式（I )的 1-氧代 /酰化 -14-酰化的冬凌草甲素衍生物或其药学 上可接受的盐，优选其中 R为 C3-C7环烷基、 C3-C7环烯基、 CrC6烷基、 氨基 CrC6烷基、 芳基 CrC6烷基、 或杂芳基 CrC6烷基。 更优选所 述 R为环丙基、 环戊基、 环己基、 环戊烯基、 环己烯基、 甲基、 乙基、 丙基、 异丙基、 正丁基、 异丁基、 叔丁基、 氨基丁基、 芳基甲基、 或 芳基乙基等。
本发明的部分 1-氧代 /酰化 -14-酰化的冬凌草甲素衍生物如下所示。 这些实施例举只对本发明做进一步说明，并不对本发明的范围构成任何 ///〇 s80/-020si>l>d 6is-s20iM
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BS-OR-075 C32H39N08S 597.7 无色 晶体 58.46
BS-OR-076 C34H41N08 591.7 无色 晶 37.92
BS-OR-077 C34H40FNO8 609.7 无色 晶 40.29
BS-OR-078 C34H40ClNO8 626.1 无色 晶 45.82
BS-OR-079 C34H40ClNO8 626.1 无色 晶 48.98
BS-OR-080 C32H45N08 571.7 无色 晶 58.46
BS-OR-083 C33H40N2O8 592.7 无色 晶 35.55
BS-OR-086 C33H40CINO9S 662.2 无色 晶 51.35
BS-OR-087 C33H40N2O11S 672.7 无色 晶 41.87
BS-OR-088 C32H39NO9 581.7 无色 晶 45.82
BS-OR-090 524.6 无色 晶 16.33
BS-OR-091 540.6 无色 晶 16.80
BS-OR-092 C29H33NO10 555.6 无色 晶 17.74
BS-OR-093 C29H33CIO10 545 无色 晶 16.80
BS-OR-094 C31H36O8 536.6 无色 晶体 16.80
BS-OR-095 C33H38C1N08 612.1 白色 固体 31.6
BS-OR-099 C35H42CINO9 656.2 白色 固体 24.02 在另一种实施方式中， 本发明特别优选如下的通式 （I )化合物:
Figure imgf000017_0001
BS-OR-004
1-氧代 -14- ( 4-甲基） 苯甲酰氧基冬凌草甲素
Figure imgf000017_0002
BS-OR-005 1-氧代 -14- ( 4-甲氧基）苯甲酰氧基冬凌草甲素
Figure imgf000018_0001
BS-OR-019
i -氧代 _14-苯基丙烯酰氧基冬凌草甲素
Figure imgf000018_0002
BS-OR-090
1-乙酰基 -14- ( 4-甲基）苯甲酰氧基冬凌草甲素
Figure imgf000018_0003
BS-OR-091
-乙酰基 -14- ( 4-甲氧基）苯甲酰氧基冬凌草甲素
Figure imgf000018_0004
BS-OR-093
1-乙酰基 -14-对氯苯甲酰氧基冬凌草甲素
Figure imgf000019_0001
BS-OR-094
1-乙酰基 -14-苯基丙烯酰氧基冬凌草甲素 本发明涉及以下形式的本发明的式 (I)化合物： 它们的盐、 溶剂 化物、 水合物、 加成物、 复合物、 多晶型物或前药。
如本文所使用， 术语' OR"是指 Oridonin冬凌草甲素。
如本文所使用，术语"烷基"是指含有指定碳原子数的直链或支链 的烷基。 所述烷基可以包含 1-6个、 1-5个、 1-4个或 1-3个碳原子。 烷基的例子包括但不限于甲基、 乙基、 正丙基、 异丙基、 叔丁基、 正戊基和正己基。
术语"烯基"是指含有指定碳原子数的直链或支链的烯基。所述烯 基可以包含 2-6个、 2-5个、 2-4个或 2-3个碳原子。 烯基的例子包括 但不限于乙烯基、 烯丙基、 丁烯基、 异丁烯基。
术语"炔基"是指含有指定碳原子数的直链或支链的炔基。所述炔 基可以包含 2-6个、 2-5个、 2-4个或 2-3个碳原子。 炔基的例子包括 但不限于乙炔基和丙炔基。
术语 "C3-C7环烷基或环烯基"是指具有饱和或不饱和环的 3-7元 单环系统的烃基。 C3-C7环烷基或环烯基可以为环丙基、 环丁基、 环戊 基、 环己基、 环庚基、 环丙烯基和环己烯基。
术语"芳基"是指含有 6-14个（例如 6-12个、 6-20个）碳原子的 单碳环芳香基或稠合或非稠合的多碳环芳香基， 在多碳环的情况下， 只要一个碳环是芳香的即可。 芳基也包括与杂环基稠合的芳基。 所 述芳基的例子有苯基、 联苯基、 萘基、 5,6,7,8-四氢萘基、 2.3-二氢苯 并呋喃基等。
术语"杂芳基 "是指在环中含有 1-4个杂原子 （例如 1、 2、 3或 4 个杂原子）作为环成员的芳香环基团。 杂原子是指氮、 氧或硫。 杂芳 基可以是具有 5-7个环原子的单环杂芳基， 或者具有 7-11个环原子的 双环杂芳基。 所述双环芳基中只要一个环是芳香杂环即可， 另一个可以 是芳香的或非芳香的、含杂原子的或不含杂原子的。 杂芳基的例子有例 如吡咯基、 吡唑基、 咪唑基、 噁唑基、 吡啶基、 嘧啶基、 呋喃基、 噻吩 基、 异噁唑基、 吲哚基等。
术语"杂环基 "是指含有 1-4个杂原子（例如 1、 2、 3或 4个杂原 子）作为环成员的非芳香环基团。 杂原子是指氮、 氧或硫。 杂环基 可以是具有 4-8个环原子的单环杂环基（例如 4-7元环、 5-7元环、 5-6元环）， 或者具有 7- 11个环原子的双环杂环基。 杂环基可以是芳 香或非芳香的。 杂环基的例子有氮杂环丁基、 吡咯烷基、 吡咯啉基、 四氢呋喃基、 二氢呋喃基、 哌嗪基、 哌啶基、 吗啉基、 硫代吗啉基、 四氢吡喃基、 四氢噻喻基等。
术语"鹵素"是指氟、 氯、 溴或碘。
术语"烷基氨基"是指被一个或两个如上所定义的烷基取代的氨 基。
术语"烷氧基 "包括烷基 -0-基团， 其中所述烷基如上所定义。
术语"烷硫基 "烷基 -S-基团， 其中所述烷基如上所定义。
术语"式 (I)化合物的药学上可以接受的加和物和复合物"是指本发 明的化合物进一步与其他小分子或生物大分子以非化学键或者非共 价分子间力结合的产物。
如本文所使用，术语"式 (I)化合物的药学上可以接受的盐"的例子是 由形成药学上可以接受的阴离子的有机酸形成的有机酸盐；这些有机酸 盐包括但不限于甲苯磺酸盐、 甲磺酸盐、苹果酸盐、醋酸盐、柠檬酸盐、 丙二酸盐、 酒石酸盐、 琥珀酸盐、 苯甲酸盐、 抗坏血酸盐、 乳酸盐、 α- 酮戊二酸盐和（X-甘油磷酸盐； 也可形成合适的无机盐； 这些无机酸盐包 括但不限于盐酸盐、 硫酸盐、 硝酸盐、 碳酸氢盐和碳酸盐、 磷酸盐、 氢 溴酸盐、 氢碘酸盐等。 药学上可以接受的盐可使用本领域熟知的标准程序获得。例如， 通 过将足量的碱性化合物和提供药学上可以接受的阴离子的合适的^ 应生成。
如本文所使用，术语"多晶型物 "是指本发明的化合物或其复合物 的固体晶体形式。 相同化合物的不同的多晶型物可以显示不同的物 理、 化学和 /或光谱性质。 不同的物理性质包括但不限于稳定性 （例 如， 对热或光） 、 可压缩性和密度 （对于配制制剂和产品生产是重 要的） 和溶解速率 （其可以影响生物吸收度和利用度） 。 稳定性的 不同会造成化学反应性 （例如差异氧化， 使得当由一种多晶型物构 成时比由另一多晶型物构成时剂型更快地褪色）或机械性能（例如， 储存时作为动力学有利的多晶型物的片剂碎末转化成热力学更加稳 定的多晶型物） 或两者 （例如， 一种多晶型物的片剂在高潮湿度时 更加容易破碎） 中的变化。 多晶型物的不同的物理性质可以影响它 们的加工。 例如， 一种多晶型物可能比另一种更可能形成溶剂化物 或可能比另一种更加难以过滤或洗去杂质， 这是由于例如其颗粒的 形状或大小分布不同的缘故。
如本文所使用， 术语"水合物 "是指本发明的化合物或其盐， 其进 一步包含通过非共价分子间力结合的化学计量的或非化学计量的 水。
如本文所使用， 除非另外说明， 术语"前药"是指可以在生物学条 件 （体外或体内） 下水解、 氧化或进行其他反应以提供本发明的化 合物的衍生物。 前药仅在生物学条件下经过该反应成为活性化合物， 或者它们在它们不反应的形式中具有活性。 通常可以使用公知的方 法制备前药， 例如 1 Burger's Medicinal Chemistry and Drug Discovery (1995) 172-178, 949-982 (Manfred E. Wolff编， 第 5版)和 J. Rautio' s Prodrugs and Targeted Delivery (201 1) 31-60 (Wiley-VCH, Methods and Principles in Medicinal Chemistry 第 47 卷)和 G. Thomas's Fundamentals of Medicinal Chemistry (2003) 195-200(Wiley)中描述的 那些方法。 本文所述 "抗肿瘤活性" 是指对肿瘤细胞或组织的直接抑制或 杀伤作用。 本申请实施例部分测定了本发明化合物的抗肿瘤活性。
本文使用的术语"治疗"一般是指获得需要的药理和 /或生理效 应。 该效应 #居完全或部分地预防疾病或其症状， 可以是预防性的； 和 /或根据部分或完全稳定或治愈疾病和 /或由于疾病产生的副作用， 可以是治疗性的。 本文使用的 "治疗"涵盖了对患者疾病的任何治疗， 包括： （a)预防易感染疾病或症状但还没诊断出患病的患者所发生的 疾病或症状； （b)抑制疾病的症状， 即阻止其发展； 或（c)緩解疾病的 症状， 即， 导致疾病或症状退化。
本发明还提供制备本发明式（I )化合物的方法， 其中
1 ) 对于 W为氧代、 L为直接键或 -(CH=CH)n-的式（ I )化合物即 式（1-1 )化合物， 其中 如式（I ) 中对 R的定义， n如式（I ) 中所定 义， 该方法包括
Figure imgf000022_0001
Oridonin OR-Ketone
先将冬凌草甲素的 1-位羟基选择性的氧化， 生成 1-氧代冬凌草甲素中 间体（OR-Ketone ) ； 再将此中间体与相应的有机酸、 有机酸酐或有机 酰氯， 在有碱的存在下发生酰化反应， 生成 1-氧代 -14-酰化的冬凌草甲 素衍生物 (1-1);
2 )对于 W为氧代、 L为哌啶子基叛基或哌啶子基磺酰基的式（ I ) 化合物即式（1-2 )化合物， 其中 R2为 -C(0)R或 -C(0)S(0)2R, 所述 R如 式（I ) 中所定义， 该方法包括
Figure imgf000023_0001
Figure imgf000023_0002
OR-L1
1-氧代冬凌草甲素中间体（OR-Ketone)与 N-叔丁氧碳基哌啶- 4-羧酸， 在有碱和缩合剂存在下， 反应生成 1-氧代 -14- (N-叔丁氧碳基 4-哌啶 酰氧基）冬凌草曱素中间体（OR-Ll-Boc) ， 此中间体经酸处理， 去除 叔丁氧碳基保护基， 得到胺（铵盐） 中间体（0R-L1) ； 此胺（铵盐） 中间体在有碱存在下， 与相应的有机酸、 有机酸酐、 有机酰氯、 横酰氯 反应， 生成式（ I-2 ) 的 1-氧代 -14- (哌啶酰氧基）冬凌草甲素衍生物;
3 )对于 W为氧代、 L为环己基氨基羰基或环己基氨基磺酰基的式 (I)化合物即式 (1-3)化合物， 其中 R3为 -C(0)R或 -C(0)S(0)2R, 所 述 R如式（I) 中所定义， 该方法包括
Figure imgf000023_0003
OR-Ketone OR-L2-Boc
Figure imgf000023_0004
OR-L2
1-氧代冬凌草甲素中间体（OR-Ketone)与 1-(N-叔丁氧碳基)氨基- 4-环 己基羧酸， 在有碱和耦合试剂存在下， 反应生成 1-氧代 -14- (1-(N-叔 丁氧碳基胺基 )-4-环己酰氧）冬凌草甲素中间体（0R-L2-BOC ) ， 此中 间体经酸处理，去除叔丁氧碳基保护基，得到胺（铵盐）中间体（ 0R-L2 ); 此胺（铵盐） 中间体在有碱存在下， 与相应的有机酸、 有机酸酐、 有机 酰氯或磺酰氯反应， 生成式（1-3) 的 1-氧代 -14- (1- (胺基）环己基 -4-酰氧基）冬凌草甲素衍生物；
4)对于 W为- 0(CO)R，、 L为直接键或 -(CH=CH)n-的式（I)化合 物即式（1-4)化合物， 其中 如式（I) 中对 R的定义， R4如式（I) 中对 R，的定义， n如式（I) 中所定义， 该方法包括
Figure imgf000024_0001
OR-4 1-4
先将 7,14-位的羟基用缩醛保护生成 OR-2; 而后对 1-位羟基酰化， 得到 中间体 OR-3; OR-3经酸处理脱保护， 得中间体 OR-4; 对 OR-4进行 酰化， 即得 1, 14-双酰化的冬凌草甲素衍生物 （1-4) ；
5)对于 W为- 0(CO)R'、 L为哌啶子基叛基或哌啶子基磺酰基的 式（I)化合物， 其中 R，如式（I) 中所定义， 该方法包括
按照上述 2) 中的方法进行， 其中将 OR-Ketone用上述 4) 中的 OR-4 替代； 或
6 )对于 W为 -0(CO)R，、 L为环己基氨基羰基或环己基氨基磺酰 基的式（I)化合物， 其中 R，如式（I) 中所定义， 该方法包括
按照上述 3 )中的方法进行，其中将 OR-Ketone用上述 4 )中的 OR-4 替代。 例如， 本发明的式 (I)化合物可以按如下的方法制备:
Figure imgf000025_0001
Oridonin OR-Ketone
本发明的 1-氧代 -14-酰化的冬凌草甲素衍生物 (I: 1-1)可按上式所示 两步反应制取。由天然药材提取分离得到的冬凌草甲素的 1-位羟基经选 择性的氧化， 生成 1-氧代冬凌草甲素中间体（OR-Ketone ) 。 氧化反应 可用高锰酸 4甲或琼斯氧化剂。 氧化反应的温度可以是室温。 氧化 1-位 的羟基时， 其他羟基不需要特定保护。 反应一般在溶剂中进行。 使用的 溶剂包括但不限于有机极性溶剂。 例如： 丙酮、 二氯甲烷（DCM ) ， 四氢呋喃（THF )， N， N-二甲基甲酰胺（DMF ) ， 二甲亚砜（DMSO ) 等。
1-氧代冬凌草甲素中间体（OR-Ketone )的 14-位羟基与有机酸、有 机酰鹵或有机酸酐反应， 生成 1-氧代 -14-酰化的冬凌草甲素衍生物 (I: 1-1)。 该反应一般在有碱和缩合试剂存在下进行。 这里碱可以为有机碱 或无机碱。 例如： 4-二甲胺基吡啶， 三乙胺和碳酸钟。
用于酰化反应的缩合剂可以是 1, 3-二环己基碳二亚胺， 2-(7-偶氮苯 并三氮唑） -Ν,Ν,Ν',Ν'-四甲基脲六氟磚酸酯 （HATU ) , 苯并三氮唑 -Ν,Ν,Ν',Ν'-四甲基脲六氟硼酸盐 （HBTU ) , 苯并三氮唑 -1-基氧基三 (二 甲基氨基)磷鑰六氟磷酸盐（ΒΟΡ )， 苯并三氮唑 -Ν,Ν,Ν',Ν'-四甲基脲六 氟硼酸盐 （TBTU ) 。
用于酰化反应的酰化试剂可以是相应的有机酸、有机酰鹵或有机酸 酐。 用于磺酰化反应的磺酰化试剂可以是相应的有机磺酰鹵。
酰化反应一般在溶剂中进行。溶剂的选择取决于原料的极性和溶解 性。使用的溶剂包括但不限于有机极性溶剂。例如： 二氯甲烷（DCM )， 四氢呋喃（THF )， N， N-二甲基甲酰胺（DMF )， 二甲亚砜（DMSO )。 温下进行。 " 1 ：
Figure imgf000026_0001
Figure imgf000026_0002
OR-L1
1-氧代冬凌草甲素中间体（OR-Ketone ) 与 N-叔丁氧碳基哌啶 -4- 羧酸， 在有碱和缩合剂存在下， 反应生成 1-氧代 -14- ( N-叔丁氧碳基 4- 哌啶酰氧基）冬凌草甲素中间体（OR-Ll-Boc ) 。 上述的酰化反应条件 (反应温度、 反应时间、 缩合剂和碱）适用于本反应。
1-氧代 -14- ( N-叔丁氧碳基 4-哌啶酰氧基） 冬凌草甲素中间体 ( OR-Ll-Boc )经酸处理， 去除叔丁氧碳基保护剂， 得到胺（铵盐） 中 间体（OR-Ll )。 反应所用的酸可以是有机酸或无机酸， 例如： 三氟乙 酸与盐酸。反应的生成物一般是形成相应的铵盐。反应的收率一般是定 量的。
1-氧代 -14- ( 4-哌啶酰氧基）冬凌草甲素中间体（OR-L1 )胺（铵 盐）在有碱存在下， 与相应的！ ¾代烃、 有机酸、 有机酸酐、 有机酰氯、 或有机磺酰氯反应， 生成式（1:1-2 ) 的 1-氧代 -14- (哌啶酰氧基）冬凌 草甲素衍生物。 式中 R2与上文在通式 (I: 1-2)中的定义相同。
( OR-L1 )胺（铵盐）中间体的酰化反应一般在有缩合剂存在下进 行。 这里缩合剂可以是但不限于有机缩合剂。 例如： 2-(7-偶氮苯并三氮 唑) -Ν,Ν,Ν',Ν'-四甲基脲六氟磷酸酯 （HATU ) , 苯并三氮唑 -Ν,Ν,Ν',Ν'- 四甲基脲六氟硼酸盐 （HBTU ) , 苯并三氮唑 -1-基氧基三 (二甲基氨基) 磷鑰六氟磚酸盐 （ΒΟΡ ) ， 苯并三氮唑 -Ν,Ν,Ν',Ν'-四甲基脲六氟硼酸盐 ( TBTU ) 。
( OR-L1 )胺（铵盐） 中间体的酰化反应必须在有碱存在下进行。 碱的作用是中和铵盐中的酸给出游离的胺和参与此胺中间体与有机酸、 酸酐或酰氯的缩合酰化反应。 这里碱可以是但不限于有机碱。 例如： Ν,Ν-二异丙基乙基胺（DIPEA ) ， 三乙基胺 ( TEA ) ， 吡啶， 4-二甲胺 基吡啶 ( DMAP ) 。
胺的酰化反应一般在溶剂中进行，也可在无溶剂存在下进行。使用 的溶剂包括但不限于有机极性溶剂。 例如： 二氯甲烷（DCM ) ， 四氢 呋喃（THF ) ， Ν,Ν-二甲基甲酰胺（DMF ) ， 二甲亚砜（ DMSO ) 等。
Figure imgf000027_0001
- etone
Figure imgf000027_0002
1-氧代冬凌草甲素中间体（ OR-Ketone )与 1-(N-叔丁氧碳基)氨基 -4- 环己基羧酸， 在有碱和耦合试剂存在下， 反应生成 1-氧代 -14- ( 1-(N- 叔丁氧碳基胺基) -4-环己酰氧）冬凌草甲素中间体（OR-L2-Boc ) ， 此 中间体经酸处理， 去除叔丁氧碳基保护剂， 得到胺 （铵盐） 中间体
( OR-L2 )； 此胺（铵盐） 中间体在有碱存在下， 与相应的鹵代烃、 有 机酸、 有机酸酐或有机酰氯、 磺酰氯反应， 生成式（1-3 )的 1-氧代 -14-
( 1- (胺基）环己基 -4-酰氧基）冬凌草甲素衍生物。 式中 R3与上文在 通式 (1-3)中的定义相同。
制取式（1-3 ) 的 1-氧代 -14- ( 1- (胺基）环己基 -4-酰氧基）冬凌草 甲素衍生物以及相对应的中间体， 在反应温度、反应溶剂、反应试剂和 反应操作等方面， 与制取式（1-2 )的 1-氧代 -14- (哌啶酰氧基）冬凌草 甲素衍生物基本相似。
Figure imgf000028_0001
OR-4 1-4
1,14-双酰化的冬凌草甲素衍生物 （1-4 )可按上式所示由四步反应 制取。 先将 7, 14-位的羟基按常规方法用缩醛保护生成 OR-2。 保护试剂 可以是相应的酮或者醛。 保护反应需要在催化量的酸存在下进行。
中间体 OR-2 的 1-位羟基可按常规方法进行酰化， 得到中间体 OR-3。 酰化试剂可以是有机酸、 有机酸酐或有机酰氯。 酰化反应需要 在溶剂和碱存在下进行。
中间体 OR-3经酸处理脱保护，得中间体 OR-4。脱保护的试剂可以 是有机酸， 如 80%的醋酸。 反应温度取决于反应底物的活性。
对中间体 OR-4进行酰化，即得 1,14-双酰化的冬凌草甲素衍生物（ 1-4 )。 OR-4的酰化反应在反应温度、反应溶剂、反应试剂和反应操作等方面， 与制取式（1- 1 )的 1-氧代 -14-酰化的冬凌草甲素衍生物基本相似。 式中 Ri , R4与上文在通式 (1-4)中的定义相同。
常规的化学转换与操作可用于实施本发明。 本领域的技术人员 可以决定用于这些化学转换的适当的化学试剂、 溶剂、 保护基和反 应条件。 相关信息描述于 R. Larock， Comprehensive Organic Transformations , VCH Publishers ( 1989); T. W. Greene and P.G.M. Wuts , Protective Groups in Organic Synthesis , 3rd Ed , John Wiley and Sons( 1999) ; L. Fieser and M. Fieser, Fieser and Fieser's Reagents for Organic Synthesis , John Wiley and Sons( 1994); L. A. Paquette editor, Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis， John Wiley and Sons( 1995)及其后来的版本。 保护基指那些一旦连接活性部分 (例如， 羟基或氨基)， 防止这些 羟基保护基的例子包括但不限于， 烷基、 苯甲基、 烯丙基、 三苯甲 基 (即，三苯基甲基）、酰基 (例如，苯甲酰基、乙酰基或 HOOC-X"-CO-， X"为亚烷基、 亚链烯基、 亚环烷基或亚芳基)、 甲硅烷基 (例如， 三甲 基硅烷基、 三乙基硅烷基和叔丁基二甲基硅烷基)、 烷氧基羰基、 氨 基羰基 (例如， 二甲基氨基羰基、 甲基乙氨基羰基和苯基氨基羰基)、 烷氧甲基、 苯甲氧甲基和烷基巯甲基。 氨基保护基的例子包括但不 限于， 烷氧基羰基、 烷酰基、 芳氧基羰基、 芳基取代的烷基等。 羟 基和氨基保护基已在 T.W. Greene and P.G..M. Wuts , Protective Groups in Organic Synthesis , 2nd Edition, John Wiley and Sons( 1991) 中讨论。 羟基和氨基保护基都可在反应后通过常规的方法去除。 本发明还提供了包含本发明式 I化合物的药物组合物。
本发明提供了这样的药物组合物， 其中包含至少一种如上所述 的本发明的式 I化合物， 和任选的药学上可以接受的赋形剂。
制备各种含有一定量的活性成分的药物组合物的方法是已知
^口 REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES, Martin, E.W., ed., Mack Publishing Company, 19th ed. (1995) 所述。 制备所述药物组合物的方 法包括掺入适当的药学赋形剂、 载体、 稀释剂等。
以已知的方法制造本发明的药物制剂， 包括常规的混合、 溶解 或冻干方法。
本发明的化合物可以制成药物组合物，并向患者以适于选定的施用 方式的各种途径施用， 例如： 口 j ， 肠胃灌注， 静脉内注射或肌内与皮 下注射。
因此， 本发明的化合物结合药学上可以接受的载体（如惰性稀释剂 或可食用的载体）可以全身施用， 例如， 口服。 它们可以封闭在硬或软 壳的明胶胶嚢中， 可以压为片剂。 对于口服治疗施用， 活性化合物可以 结合一种或多种赋形剂，并以可吞咽的片剂、颊含片剂、含片、胶嚢剂、 酏剂、 悬浮剂、 糖浆、 圆片等的形式使用。 这种组合物和制剂应该包含 至少 0.1%的活性化合物。 这种组合物和制剂的比例当然可以变化， 可 以占给定的单位剂型重量的大约 1%至大约 99%。 在这种治疗有用的组 合物中， 活性化合物的量使得能够获得有效剂量水平。
片剂、 含片、 丸剂、 胶嚢剂等也可以包含： 粘合剂， 如黄蓍胶、 阿 拉伯胶、 玉米淀粉或明胶； 赋形剂， 如磷酸氢二钙； 崩解剂， 如玉米淀 粉、 马铃薯淀粉、 藻酸等； 润滑剂， 如硬脂酸镁； 和甜味剂， 如蔗糖、 果糖、 乳糖或阿司帕坦； 或调味剂， 如薄荷、 冬青油或樱桃香味。 当单 位剂型是胶嚢时， 除了上面类型的材料， 它还可以包含液体载体， 如植 物油或聚乙二醇。 各种其他材料可以存在， 作为包衣， 或以其他方式改 变固体单位剂型的物理形式。 例如， 片剂、 丸剂或胶嚢剂可以用明胶、 蜡、 虫胶或糖等包衣。 糖浆或酏剂可以包含活性化合物， 蔗糖或果糖作 为甜味剂，对羟苯甲酸甲酯或对羟苯甲酸丙酯作为防腐剂， 染料和调味 剂（如樱桃香料或桔子香料）。 当然， 用于制备任何单位剂型的任何材 料应该是药学上可以接受的且以应用的量基本上无毒。 此外， 活性化合 物可以掺入緩释制剂和緩释装置中。
活性化合物也可以通过输注或注射到静脉内或腹膜内施用。可以制 备活性化合物或其盐的水溶液，任选可混的无毒的表面活性剂。也可以 制备在甘油、 液体聚乙二醇、甘油三乙酸酯及其混合物以及油中的分散 剂。在普通的储存和使用条件下， 这些制剂包含防腐剂以防止微生物生 长。
适于注射或输注的药物剂型可以包括包含适于无菌的可注射或可 输注的溶液或分散剂的即时制剂的活性成分（任选封装在脂质体中）的 无菌水溶液或分散剂或无菌粉末。在所有情况下， 最终的剂型在生产和 储存条件下必须是无菌的、 液体的和稳定的。 液体载体可以是溶剂或液 体分散介质， 包括， 例如水、 乙醇、 多元醇（例如， 甘油、 丙二醇、 液 体聚乙二醇等）、 植物油、 无毒的甘油酯及其合适的混合物。 可以维持 合适的流动性， 例如， 通过脂质体的形成， 通过在分散剂的情况下维持 所需的粒子大小， 或通过表面活性剂的使用。 可以通过各种抗细菌剂和 抗真菌剂 （如对羟苯甲酸酯、 氯丁醇、 苯酚、 山梨酸、 硫柳汞等）产生 预防微生物的作用。 在许多情况下， 优选包括等渗剂， 如糖、 緩冲剂或 氯化钠。 通过使用延緩吸收剂的组合物（例如， 单硬脂酸铝和明胶）可 以产生可注射的组合物的延长吸收。
通过将合适的溶剂中的需要量的活性化合物与需要的上面列举的 各种其他成分结合， 然后进行过滤灭菌， 制备无菌可注射溶液。 在用于 制备无菌注射溶液的无菌粉末的情况下，优选的制备方法是真空干燥和 冷冻干燥技术，这会产生活性成分加上任何另外需要的以前无菌过滤溶 液中存在的成分的粉末。
有用的固体载体包括粉碎的固体（如滑石、 粘土、 微晶纤维素、 二 氧化硅、 氧化铝等） 。 有用的液体载体包括水、 乙醇或乙二醇或水-乙 醇 /乙二醇混合物， 本发明的化合物可以任选在无毒的表面活性剂的帮 助下以有效含量溶解或分散在其中。 可以加入佐剂（如香味）和另外的 抗微生物剂来优化对于给定用途的性质。
增稠剂 （如合成的聚合物、 脂肪酸、 脂肪酸盐和酯、 脂肪醇、 改性 纤维素或改性无机材料）也可和液体载体用于形成可涂覆的糊剂、凝胶、 软膏、 肥皂等， 直接用于使用者的皮肤上。
化合物或其活性盐或衍生物的治疗需要量，不仅取决于选择的特定 的盐，而且取决于施药方式、待治疗的疾病的本质和患者的年龄和状态， 最终取决于在场医师或临床医生的决定。
上述制剂可以以单位剂型存在， 该单位剂型是含有单位剂量的 物理分散单元， 适于向人体和其它哺乳动物体给药。 单位剂型可以 是胶嚢或片剂， 或是很多胶嚢或片剂。 根据所涉及的具体治疗， 活 性成分的单位剂量的量可以在大约 0.1到大约 1000亳克或更多之间 进行变化或调整。
本发明还提供本发明的化合物或包含该化合物的组合物在制备 药物、 特别是抗肿瘤药物中的用途。 相应地， 本发明提供一种治疗 肿瘤患者的方法， 包括给予需要治疗的患者治疗有效量的至少一种 本发明的化合物。 本发明的 1-氧代 /酰化 -14-酰化的冬凌草甲素衍生物 或其药学上可接受的盐例如可用于治疗白血病、 多发性骨髓瘤、 淋 巴瘤、 肝癌、 胃癌、 乳腺癌、 胆管细胞癌、 胰腺癌、 肺癌、 大肠癌、 骨肉瘤、 黑色素瘤、 人宫颈癌、 神经胶质瘤、 鼻咽癌、 喉癌、 食管 癌、 中耳肿瘤、 前列腺癌等肿瘤。
在下列实施例中， 将更加具体地解释本发明。 但应理解， 下列 实施例旨在说明本发明而不对本发明的范围构成任何限制。 的合成方法获得。 -OR-003)的合成
Figure imgf000032_0001
Oridonin OR-Ketone
将三氧化铬 (240 mg， 2.4 mmol)溶于 2 mL 的水中， 在 0 °C条件下 加入 0.22 mL 浓^琉酸， 然后加入 3 mL水， 搅拌， 制成 Jone's琼斯试剂 备用。
向冬凌草甲素 (730 mg， 2 mmol)中加入丙酮 (20 mL)成悬浊液，在水 浴条件下慢慢滴入琼斯试剂 （2.4 mmol 三氧化铬） ， 搅拌 3小时后， 反应液温度升至室温， 反应用异丙醇淬灭， 除去丙酮溶剂。 粗产物用二 氯甲烷 (30 mL*3)萃取三次， 有机相用饱和碳酸氢钠洗涤， 然后用饱和 食盐水洗涤， 干燥， 旋干。 所得粗品经硅胶柱（石油醚:乙酸乙酯 =1: 1 ) 分离纯化， 得到白色粉末状 1-氧代冬凌草甲素 (520 mg， 收率 71%)， 同 时回收 lOO mg冬凌草甲素， 回收率为 14%。
MS(m/z): 363 [M+H] +, 385 [M+Na] +。
Figure imgf000032_0002
OR-Ketone BS-OR-003 式中 2-chlorobenzoyl chloride为 2-氯苯甲酰氯。
将 1-氧代冬凌草甲素 (36.5 mg, 0.1 mmol)和 2-氯苯甲酰氯 (87 mg, 0.5 mmol) 溶于干燥的二氯甲烷（ 2 mL )中， 在 0 °C条件下滴入三乙胺 (50.5 mg, 0.5 mmol), 反应升至室温， 搅拌 1小时。 反应结束后， 用 30 mL二氯甲烷稀释， 用水的 5%碳酸钠水溶液洗涤两次， 然后经水洗， 饱和食盐水洗，有机相干燥，旋干，得到的粗产品用硅胶柱（乙酸乙酯： 石油醚 =1 :2 )分离纯化， 最终得到无色晶体 BS-OR-003 (41.8 mg， 收率 88%)。
MS (m/z): 501 [M+H] +, 523 [M+Na]+.
!H NMR(300 MHz, CDC13): δ 7.77-7.79 (m, IH, H-苯环)， 7.39-7.41 (m, 2H, H-苯环)， 7.26-7.29 (m, IH, H-苯环)， 6.28 (s, IH, H-17), 6.14 (s, IH, H-14), 5.65 (s, IH, H-17), 5.39 (d, IH, J =15.5 Hz, OH-6), 4.36 (d, IH, J =14.3 Hz), 4.06 (d, 1H, / =12.3 Hz), 4.0(s, IH), 3.75-3.82 (m, IH), 3.31 (d, IH, J =12.4 Hz), 2.30-2.61 (m, 5H), 1.78-1.99 (m, 3H), 1.55-1.73 (m, 2H), 1.20 (s, 3H, CH3-18), 1.01 (s, 3H, CH3-19). 按照 BS-OR-003的方法， 使用上述同样的试剂， 将化合物 1-氧 代冬凌草甲素与苯甲酰氯反应， 制备了 BS-OR-001 :
MS (m/z): 467 [M+H] +, 489 [M+Na]+. 按照 BS-OR-003的方法， 使用上述同样的试剂， 将化合物 1-氧 代冬凌草甲素与对甲基苯甲酰氯反应， 制备了 BS-OR-004:
MS (m/z): 481 [M+H] +, 503 [M+Na]+.
!H NMR (300 MHz, CDC13): δ 7.80 (d, 2H, J =11.0 Hz, H-苯环)， 7.20 (d, 2H, J =11.3 Hz, H-苯环)， 6.28 (s, IH, H-17), 6.06 (s, IH, H-14), 5.61 (s, IH, H-17), 5.43(d, 1H, / =15.4 Hz ,OH-6), 4.34 (d, IH, J = 14.3 Hz), 4.16 (s， IH), 4.05 (d, IH, J =14.3 Hz), 3.77-3.84 (m, IH), 3.28 (d, 1H, J = 12.4 Hz), 2.36 (s, 3H, H-CH3), 2.27-2.46 (m, 5H), 1.77-1.99 (m, 3H), 1.55-1.76 (m, 2H), 1.21 (s, 3H, CH3-I8), 1.01 (s, 3H, CH3-19). 按照 BS-OR-003的方法， 使用上述同样的试剂， 将化合物 1-氧 代冬凌草甲素与对甲氧基苯甲酰氯反应， 制备了 BS-OR-005:
MS (m/z): 497 [M+H] +, 519 [M+Na]+.
!H NMR (300 MHz, CDC13): δ 7.84-7.88 (m, 2H, H-苯环)， 6.86-6.89 (m, 2H, H-苯环)， 6.28 (s, IH, H-17), 6.03 (s, IH, H-14), 5.61 (s, IH, H-17), 5.44 (d, IH, J= 15.4Hz, OH-6), 4.34 (d, IH, J= 14.2 Hz), 4.19 (s, IH), 4.03-4.07 (m, IH), 3.83 (s, 3H, H-CH3), 3.77-3.84 (m, IH), 3.26-3.29 (m, IH), 2.26-2.65 (m, 5H), 1.89-2.09 (m, 3H), 1.56-1.79 (m, 2H), 1.21 (s, 3H, CH3-18), 1.01 (s, 3H, CH3-19). 按照 BS-OR-003的方法， 使用上述同样的试剂， 将化合物 1-氧 代冬凌草甲素与 3-硝基苯甲酰氯反应， 制备了 BS-OR-006:
MS (m/z): 512 [M+H] +, 534 [M+Na]+. 按照 BS-OR-003的方法， 使用上述同样的试剂， 将化合物 1-氧 代冬凌草甲素与 2-噻吩甲酸反应， 制备了 BS-OR-007:
MS (m/z): 473 [M+H] +, 495 [M+Na]+. 按照 BS-OR-003的方法， 使用上述同样的试剂， 将化合物 1-氧 代冬凌草甲素与 3-甲基苯甲酰氯反应， 制备了 BS-OR-008:
MS (m/z): 481 [M+H] +, 503 [M+Na]+. 按照 BS-OR-003的方法， 使用上述同样的试剂， 将化合物 1-氧 代冬凌草甲素与苯丙酰氯反应， 制备了 BS-OR-009:
MS (m/z): 495 [M+H] +, 517 [M+Na]+. 按照 BS-OR-003的方法， 使用上述同样的试剂， 将化合物 1-氧 代冬凌草甲素与对氯苯甲酰氯反应， 制备了 BS-OR-010:
MS (m/z): 501 [M+H] +, 523 [M+Na]+, 539 [M+K]+; HPLC: 保留时间 5.507 min (99.85%). !H NMR (300 MHz, CDC13): δ 7.87 (d, 2H, / =8.7 Hz, H-苯环)， 7.38 (d, 2H J =8.7 Hz, H-苯环)， 6.30 (s, IH, H-17), 6.12 (s, IH, H-14), 5.64 (s, IH, H-17), 5.44 (d, IH, J= 12 Hz, OH-6), 4.37 (d, IH, J= 10.5 Hz), 4.06 (d, IH, J= 10.5 Hz), 3.80 (m, IH), 3.25 (d, IH, J= 9.6 Hz), 1.20 (s, 3H, CH3-I8), 1.00 (s, 3H, CH3-19). 按照 BS-OR-003的方法， 使用上述同样的试剂， 将化合物 1-氧 代冬凌草甲素与苯基丙烯酰氯反应， 制备了 BS-OR-019:
MS (m/z): 493 [M+H]+, 515 [M+Na]+, 531 [M+K]+; HPLC: 保留时间 5.372 min (100.00%). 按照 BS-OR-003的方法， 使用上述同样的试剂， 将化合物 1-氧 代冬凌草甲素与邻溴苯甲酰氯反应， 制备了 BS-OR-020:
MS (m/z): 545 [M+H]+, 567 [M+Na]+, 583 [M+K]+; HPLC: 保留时间 6.471 min (98.05%).
!H NMR(300 MHz, CDC13): δ 7.76 (m, IH, H-苯环)， 7.63 (m, IH, H-苯环) 7.34 (m, 2H, H-苯环)， 6.28 (s, IH, H-17), 6.14 (s, IH, H-14), 5.65 (s, IH, H-17), 5.41 (d, IH, J =8.7 Hz, OH-6), 4.37 (d, IH, J =10.5 Hz), 4.08 (dd, IH, J = 10.5 Hz, 1.5 Hz), 3.97 (s, IH), 3.77 (m, IH), 3.33 (d, 1H, J =9.9 Hz) 1.20 (s, 3H, CH3-I8), 1.01 (s, 3H, CH3-19). 实施例 2: 化合物（BS-OR-013)的合成
Figure imgf000035_0001
OR-Ketone BS-OR-013
式中 2-chloronicotinic acid为 2-氯烟酸； DCC为 1,3-二环己基二亚胺； DMAP为 4-二甲胺基吡啶。
将 1,3-二环己基二亚胺 (31 mg， 0.15 mmol)溶于 2 mL二氯甲烷， 在 0 °C条件下， 加入 1-氧代冬凌草甲素 (36.5 mg， 0.1 mmol), 搅拌 0.5小 时后， 加入 2-氯烟酸 (23.6 mg， 0.15 mmol)和 4-二甲胺基吡啶 (10 mg， 催化量)， 室温搅拌过夜， 旋干溶剂， 所得粗产品用硅胶柱（乙酸乙酯： 石油醚 =1 : 1 )分离纯化， 最终得到无色晶体 BS-OR-013 ( 35.5 mg, 收 率为 70% ) 。
MS (m/z): 502 [M+H]+, 524 [M+Na]+, 540 [M+K]+; HPLC: 保留时间 3.804 min (95.14%).
!H NMR (300 MHz, CDC13): δ 8.48 (d, IH, J =4.8 Hz, H-吡0 8.17 (m, IH, H-吡0 7.30-7.36 (m, IH, H-吡啶基)， 6.29 (s, IH, H-17), 6.22 (s, IH, H-14), 5.67 (s, IH, H-17), 5.38(d, IH, J =16.0 Hz, OH-6), 4.36 (d, IH, / = 4.2 Hz), 4.03-4.07 (m, 2H), 3.85 (s, IH), 3.71-3.78 (m, IH), 2.05-2.70 (m, 5H), 1.70-1.95 (m, 3H), 1.57-1.67 (m, 2H), 1.19 (s, 3H, CH3-18), 1.00 (s, 3H, CH3-19)。 按照 BS-OR-013的方法， 使用上述同样的试剂， 将化合物 1-氧 代冬凌草甲素与 3,4-二甲氧基苯甲酸反应， 制备了 BS-OR-015:
MS (m/z): 527 [M+H]+, 549 [M+Na]+, 565 [M+K]+; HPLC: 保留时间 4.750 min (96.42%).
!H NMR (300 MHz, CDC13): δ 7.45-7.52 (m, 3H, H-苯环)， 6.28 (s, IH, H-17), 6.03 (s, IH, H-14), 5.62 (s, IH, H-17), 5.46 (d, IH, J = 15.4 Hz ,OH-6), 4.36 (m, IH), 4.15 (s, IH), 4.03-4.07 (m, IH), 3.91 (s, 3H, H-CH3), 3.88 (s, 3H, H-CH3), 3.30 (m, IH), 1.91-2.04 (m, 3H), 1.71-1.89 (m, 2H), 1.21 (s, 3H, CH3-18), 1.01 (s, 3H, CH3-19)。 按照 BS-OR-013的方法， 使用上述同样的试剂， 将化合物 1-氧 代冬凌草甲素与 3-吡啶甲酸反应， 制备了 BS-OR-011 :
MS (m/z): 468 [M+H]+, 490 [M+Na]+, 506 [M+K]+; HPLC: 保留时间 3.079 min (99.92%). 按照 BS-OR-013的方法， 使用上述同样的试剂， 将化合物 1-氧 代冬凌草甲素与 4-吡啶甲酸反应， 制备了 BS-OR-012:
MS (m/z): 468 [M+H]+, 490 [M+Na]+, 506 [M+K]+; HPLC: 保留时间 3.160 min (99.99%). 按照 BS-OR-013的方法， 使用上述同样的试剂， 将化合物 1-氧 代冬凌草甲素与 5-甲基 -4-异恶唑甲酸反应， 制备了 BS-OR-014:
MS (m/z): 494 [M+Na]+, 510 [M+K]+; HPLC: 保留时间 3.765 min
(98.81%). 按照 BS-OR-013的方法， 使用上述同样的试剂， 将化合物 1-氧 代冬凌草甲素与环丙甲酸反应， 制备了 BS-OR-017:
MS (m/z): 431 [M+H]+, 453 [M+Na]+ , 469 [M+K]+; HPLC: 保留时间 3.535 min (98.26%).
!H NMR (300 MHz, CDC13): δ 6.26 (s, 1H, H-17), 5.80 (s, 1H, H-14), 5.61 (s, 1H, H-17), 5.42 (d, 1H, J= 11.4 Hz, OH-6), 4.30 (d, 1H, J= 10.5 Hz), 4.05 (d, 1H, J= 10.5 Hz), 3.84 (dd, J= 11.4 Hz, 8.7 Hz, 1H), 1.20 (s, 3H, CH3-18), 1.00 (s, 3H, CH3-19). 实施例 3: 化合物（BS-OR-043)的合成
Figure imgf000037_0001
OR-ketone OR-L1 -Boc 将 1,3-二环己基碳二亚胺 (247 mg, 1.2 mmol)溶于 10 mL干燥的二 氯甲烷中， 在 0 °C条件下加入 N-叔丁氧叛基哌啶 -4-羧酸 (251 mg， 1.1 mmol), 搅拌半小时后， 加入 1-氧代冬凌草甲素 (362 mg， 1 mmol)和 4- 二甲胺基吡啶 (10 mg， 催化量)， 室温搅拌过夜。 所得粗产品用硅胶柱 分离纯化， 得到 1-氧代 -14- ( 4-甲基）苯甲酰氧基冬凌草甲素 ( 435 mg, 收率 79% ) 。
Figure imgf000038_0001
OR-L1 -Boc OR-L1
将 1-氧代 -14- ( N-叔丁氧叛基 -4-酰氧基哌啶）冬凌草甲素（114 mg， 0.2 mmol)溶于 5 mL二氯甲烷中， 加入三氟乙酸（ 0.2 mL )，室温搅拌 1 小时后， 旋干溶剂得到的粗产品（ 114.2 mg )不经纯化直接用于下一步 反应。
Figure imgf000038_0002
OR-L1 BS-OR-043
将 1-氧代 -14- ( 4-酰氧基哌啶）冬凌草甲素三氟乙酸盐（114.2 mg， 0.2 mmol)和吡啶（ 0.1 mL )溶于 5 mL的二氯甲烷中， 在 0。C条件下加 入四氢苯酐 (45.6 mg， 0.3 mmol), 室温搅拌 4小时， 薄层色语法检测原 料消失， 加入二氯甲烷（30 mL )稀释， 用 5%的盐酸溶液洗涤， 再经 水洗， 饱和食盐水洗涤后， 有机相干燥， 浓缩， 所得粗品用硅胶柱分离 纯化， 得到白色固体 BS-OR-043 ( 56.0 mg, 收率 45.03% ) 。
MS (m/z): 626 [M+H]+, 648 [M+Na]+, 664 [M+K]+; HPLC: 保留时间 4.199 min (99.31%). 实施例 4: 化合物（BS-OR-037)的合成
Figure imgf000039_0001
式中 3 -nitrobenzene- 1 -sulfonyl chloride为 3-趟基苯石黄醜氯。
将 1-氧代 -14- ( 4-酰氧基哌啶）冬凌草甲素三氟乙酸盐（114.2 mg， 0.2 mmol), 三乙胺（ 0.3 mL )和 4-二甲胺基吡啶 (10 mg， 催化量)溶于 5 mL的二氯甲烷中， 在 0 °C条件下加入 3-硝基苯磺酰氯 (66.3 mg， 0.3 mmol), 室温搅拌 3小时后， 用二氯甲烷（ 30 mL )稀释， 经饱和碳酸 氢钠水溶液洗涤， 饱和食盐水洗涤， 有机相干燥， 旋干， 所得粗品用硅 胶柱分离纯化， 得到白色固体 BS-OR-037 ( 26.2 mg, 收率 83% ) 。
MS (m/z): 681 [M+Na]+; HPLC: 保留时间 3.885 min (100.00%).
!H NMR (300 MHz, CDC13): δ 8.586 (m, IH, H-苯环)， 8.46 (d, IH, J =8.1 Hz, H-苯环)， 8.07 (d, 1Η, / =7.5 Hz, H-苯环)， 7.76 (t, IH, H-苯环)， 6.24 (s, IH, H-17), 5.92 (s, IH, H-14), 5.62 (s, IH, H-17), 5.36 (d, IH, J =11.9 Hz, OH-6), 4.27 (d, IH, J =10.0 Hz), 3.90-3.95 (m, 2H), 3.71 (dd, IH, H-6), 3.59-3.70 (m, 2H), 3.00 (d, IH, J =8.8 Hz, H-13), 1.60-1.80 (m, 3H), 1.25-1.40 (m, 2H), 1.17 (s, 3H, C¾-18), 0.98 (s, 3H, CH3-19). 按照 BS-OR-037的方法， 使用上述同样的试剂， 将 1-氧代 -14- ( 4-酰氧基哌啶 )冬凌草甲素三氟乙酸盐与 3- (三氟甲基）苯磺酰氯反 应， 制备了 BS-OR-041 :
MS (m/z): 704 [M+Na]+, 720 [M+K]+; HPLC: 保留时间 3.173 min
(99.30%).
!H NMR (300 MHz, CDC13): δ 7.98 (s, IH, H-苯环)， 7.93 (d, 1Η, / =7.8 Hz: H-苯环)， 7.87 (d, 1Η, / =7.5 Hz, H-苯环)， 7.69 (t, IH, H-苯环)， 6.23 (s, IH H-17), 5.92 (s, IH, H-14), 5.60 (s, IH, H-17), 5.33 (d, IH, J =12.0 Hz, OH-6), 4.26 (d, 1H, / =10.6 Hz), 3.90 (d, J = 10.2 Hz IH), 3.89 (s,lH), 3.71 (dd, IH, H-6), 3.58-3.70 (m, 2H), 3.00 (d, 1H, J =9.0 Hz, H-13), 1.17 (s, 3H CH3-I8), 0.98 (s, 3H, C¾-19)。 按照 BS-OR-037的方法， 使用上述同样的试剂， 将 1-氧代 -14- ( 4-酰氧基哌啶 )冬凌草甲素三氟乙酸盐与 4- (三氟甲基）苯磺酰氯反 应， 制备了 BS-OR-042:
MS (m/z): 704 [M+Na]+, 720 [M+K]+; HPLC: 保留时间 3.944 min
(96.09%).
!H NMR (300 MHz, CDC13): δ 7.78-7.87 (m, 4H, H-苯环)， 6.23 (s, IH, H-17), 5.92 (s, IH, H-14), 5.60 (s, IH, H-17), 5.33 (d, IH, J =11.9 Hz, OH-6), 4.28 (d, IH, J =10.5 Hz), 4.00 (d, IH, J =10.5 Hz), 3.89 ( s, IH ) 3.70 (dd, IH, H-6), 3.58-3.70 (m, 2H), 3.00 (d, IH, J =9.0 Hz, H-13), 1.60-1.80 (m, 3H), 1.22-1.35 (m, 2H), 1.17 (s, 3H, CH3-I8), 0.98 (s, 3H, CH3-19)。 按照 BS-OR-037 的方法， 使用上述同样的试剂， 将 1-氧代 -14-
( 4-酰氧基哌啶 )冬凌草甲素三氟乙酸盐与对甲基苯磺酰氯反应， 制备 了 BS-OR-025:
MS (m/z): 628 [M+H]+, 650 [M+Na]+; HPLC: 保留时间 6.005 min
(92.55%). 按照 BS-OR-037 的方法， 使用上述同样的试剂， 将 1-氧代 -14- ( 4-酰氧基哌啶）冬凌草甲素三氟乙酸盐与 2,4,6-三甲基苯磺酰氯反应， 制备了 BS-OR-026:
MS (m/z): 678 [M+Na]+; HPLC: 保留时间 12.816 min (99.65%). 按照 BS-OR-037 的方法， 使用上述同样的试剂， 将 1-氧代 -14- ( 4-酰氧基哌啶 )冬凌草甲素三氟乙酸盐与对氯苯磺酰氯反应，制备了 BS-OR-027:
MS (m/z): 670 [M+Na]+; HPLC: 保留时间 10.437 min (98.79%). 按照 BS-OR-037 的方法， 使用上述同样的试剂， 将 1-氧代 -14- ( 4-酰氧基哌啶） 冬凌草甲素三氟乙酸盐与苯磺酰氯反应， 制备了 BS-OR-032:
MS (m/z): 636 [M+Na]+; HPLC: 保留时间 4.285 min (99.10%). 按照 BS-OR-037 的方法， 使用上述同样的试剂， 将 1-氧代 -14- ( 4-酰氧基哌啶 )冬凌草甲素三氟乙酸盐与邻硝基苯磺酰氯反应， 制备 了 BS-OR-034:
MS (m/z): 681 [M+Na]+; HPLC: 保留时间 6.485 min (98.08%). 按照 BS-OR-037 的方法， 使用上述同样的试剂， 将 1-氧代 -14- ( 4-酰氧基哌啶 )冬凌草甲素三氟乙酸盐与对硝基苯磺酰氯反应， 制备 了 BS-OR-035:
MS (m/z): 681 [M+Na]+; HPLC: 保留时间 7.550 min (100.00%). 按照 BS-OR-037 的方法， 使用上述同样的试剂， 将 1-氧代 -14- ( 4-酰氧基哌啶）冬凌草甲素三氟乙酸盐与乙基磺酰氯反应， 制备了 BS-OR-038:
MS (m/z): 588 [M+Na]+, 604 [M+K]+; HPLC: 保留时间 3.849 min
(99.05%). 按照 BS-OR-037 的方法， 使用上述同样的试剂， 将 1-氧代 -14- ( 4-酰氧基哌啶 )冬凌草甲素三氟乙酸盐与正丁基磺酰氯反应，制备了 BS-OR-039:
MS (m/z): 616 [M+Na]+, 632 [M+K]+; HPLC: 保留时间 6.844 min
(100.00%). 按照 BS-OR-037 的方法， 使用上述同样的试剂， 将 1-氧代 -14- ( 4-酰氧基哌啶） 冬凌草甲素三氟乙酸盐与甲磺酰氯反应， 制备了 BS-OR-040:
MS (m/z): 574 [M+Na]+, 590 [M+K]+; HPLC: 保留时间 3.618 min
(100.00%). 按照 BS-OR-037 的方法， 使用上述同样的试剂， 将 1-氧代 -14- ( 4-酰氧基哌啶 )冬凌草甲素三氟乙酸盐与对氟苯磺酰氯反应，制备了 BS-OR-044:
MS (m/z): 654 [M+Na]+; HPLC: 保留时间 5.203 min (91.89%). 实施例 5: 化合物（BS-OR-050)的合成
Figure imgf000042_0001
OR-L1 BS-OR-050
4-methylbenzoic acid为对甲基苯甲酸。
将对甲基苯甲酸 (41 mg， 0.3 mmol )溶于 2 mL二氯甲烷， 在 0。C 条件下加入 1,3-二环己基碳二亚胺 (65 mg， 0.25 mmol ),搅拌 1小时后， 加入 1-氧代 -14- ( 4-酰氧基哌啶）冬凌草甲素三氟乙酸盐（114.2 mg， 0.2 mmol), 加入溶有三乙胺 ( 0.3 mL ) 的二氯甲烷 ( 3 mL ) ， 常温搅拌 8 小时后，所得粗产品经硅胶柱纯化，得到白色固体 BS-OR-050( 34.1 mg， 收率 74% ) 。
MS (m/z): 592 [M+H]+, 614 [M+Na]+, 630 [M+K]+; HPLC: 保留时间 4.901 min (98.49%). 按照 BS-OR-050 的方法， 使用上述同样的试剂， 将 1-氧代 -14- ( 4-酰氧基哌啶）冬凌草甲素三氟乙酸盐与对氟苯甲酸反应， 制备了
BS-OR-047:
MS (m/z): 596 [M+H]+; HPLC: 保留时间 8.615 min (92.83%). 按照 BS-OR-050 的方法， 使用上述同样的试剂， 将 1-氧代 -14- ( 4-酰氧基哌啶） 冬凌草甲素三氟乙酸盐与特戊酸反应， 制备了 BS-OR-048:
MS (m/z): 558 [M+H]+, 580 [M+Na]+; HPLC: 保留时间 3.453 min
(96.79%). 按照 BS-OR-050 的方法， 使用上述同样的试剂， 将 1-氧代 -14- ( 4-酰氧基哌啶）冬凌草甲素三氟乙酸盐与对甲氧基苯甲酸反应， 制备 了 BS-OR-049:
MS (m/z): 608 [M+H]+, 620 [M+Na]+; HPLC: 保留时间 4.044 min
(97.96%). 按照 BS-OR-050 的方法， 使用上述同样的试剂， 将 1-氧代 -14- ( 4-酰氧基哌啶） 冬凌草甲素三氟乙酸盐与环丙甲酸反应， 制备了 BS-OR-051 :
MS (m/z): 542 [M+H]+, 564 [M+Na]+; HPLC: 保留时间 3.809 min
(100.00%). 按照 BS-OR-050 的方法， 使用上述同样的试剂， 将 1-氧代 -14-
( 4-酰氧基哌啶）冬凌草甲素三氟乙酸盐与 2-氯异烟酸反应， 制备了 BS-OR-052:
MS (m/z): 635 [M+Na]+, 651 [M+K]+; HPLC: 保留时间 4.281 min
(90.77%). 按照 BS-OR-050 的方法， 使用上述同样的试剂， 将 1-氧代 -14- ( 4-酰氧基哌啶） 冬凌草甲素三氟乙酸盐与糠酸反应， 制备了 BS-OR-053 :
MS (m/z): 568 [M+H]+, 590 [M+Na]+; HPLC: 保留时间 4.065 min (98.6386%). 按照 BS-OR-050 的方法， 使用上述同样的试剂， 将 1-氧代 -14- ( 4-酰氧基哌啶）冬凌草甲素三氟乙酸盐与 2-噻吩甲酸反应， 制备了 BS-OR-054:
MS (m/z): 623 [M+H]+, 645 [M+Na]+; HPLC: 保留时间 4.361 min
(97.90%). 按照 BS-OR-050 的方法， 使用上述同样的试剂， 将 1-氧代 -14- ( 4-酰氧基哌啶）冬凌草甲素三氟乙酸盐与对硝基苯甲^应，制备了 BS-OR-055:
MS (m/z): 584 [M+H]+, 606 [M+Na]+; HPLC: 保留时间 4.610 min
(98.78%). 按照 BS-OR-050 的方法， 使用上述同样的试剂， 将 1-氧代 -14-
( 4-酰氧基哌啶） 冬凌草甲素三氟乙酸盐与苯甲酸反应， 制备了 BS-OR-056:
MS (m/z): 578 [M+H]+, 600 [M+Na]+, 616 [M+K]+; HPLC: 保留时间 4.986 min (98.68%). 按照 BS-OR-050 的方法， 使用上述同样的试剂， 将 1-氧代 -14- ( 4-酰氧基哌啶） 冬凌草甲素三氟乙酸盐与苯丙酸反应， 制备了 BS-OR-057:
MS (m/z): 606 [M+H]+, 628 [M+Na]+, 644 [M+K]+; HPLC: 保留时间 8.003 min (98.08%). 按照 BS-OR-050 的方法， 使用上述同样的试剂， 将 1-氧代 -14- ( 4-酰氧基哌啶）冬凌草甲素三氟乙酸盐与 D-缬氨酸反应， 制备了 BS-OR-058: MS (m/z): 556 [M+H]+, 578 [M+Na]+, 594 [M+K]+; HPLC: 保留时间 6.586 min (98.80%). 实施例 6: 化合物（BS-OR-059)的合成
Figure imgf000045_0001
OR-L2 BS-OR-059
式中 benzenesulfonyl chloride为笨石黄醜氯。
将 1-氧代 -14- ( 4-酰氧基环己基胺）冬凌草甲素三氟乙酸盐 (116.8 mg, 0.2 mmol), 三乙胺 （ 0.3 mL )和 4-二甲胺基吡啶 (10 mg， 催化量) 溶于 5 mL 的二氯甲烷中， 在水浴条件下加入苯磺酰氯 (53 mg, 0.3 mmol), 常温搅拌 3小时后， 用 30 mL二氯甲烷稀释， 用饱和碳酸氢钠 水溶液洗涤再用饱和食盐水洗涤， 干燥， 旋干， 所得粗品用硅胶柱分离 纯化得到白色固体 BS-OR-059 ( 21.0 mg， 收率为 53% ) 。
MS (m/z): 650 [M+Na]+; HPLC: 保留时间 4.869 min (95.26%).
!H NMR (300 MHz, CDC13): δ 7.85-7.87 (m, 2H, H-苯环)， 7.50-7.57 (m, 3H, H-苯环)， 6.24 (s, IH, H-17), 5.87 (s, IH, H-14), 5.61 (s, IH, H-17), 5.38 (d, IH, J =15.8 Hz, OH-6), 4.68-4.72 (m, IH), 4.29 (d, IH, J =13.8 Hz), 4.15 ( s,lH ) , 4.02 (d, IH, J =13.9 Hz), 3.74-3.81(m, IH), 3.07 (d, IH, / = 11.8 Hz, H-13), 2.18-2.54 (m, 5H), 1.74-1.96 (m, 3H), 1.26-1.35 (m, 2H) 1.17 (s, 3H, CH3-18), 0.99 (s, 3H, CH3-19). 按照 BS-OR-059 的方法， 使用上述同样的试剂， 将 1-氧代 -14- ( 4-酰氧基环己基胺 )冬凌草甲素三氟乙酸盐与间硝基苯磺酰氯反应， 制备了 BS-OR-063 :
MS (m/z): 695 [M+Na]+, 711 [M+K]+.; HPLC: 保留时间 5.356 min
(100.00%). !H NMR (300 MHz, CDC13): δ 8.71-8.72 (m, IH, H-基)， 8.41-8.44 (m, IH, H-苯环)， 8.20-8.23 (m, IH, H-苯环)， 7.71-7.76 (m, IH, H-苯环)， 6.25 (s, IH, H-17), 5.93 (s, IH, H-14), 5.62 (s, IH, H-17), 5.39-5.41 (m, IH, OH-6), 4.27-4.31 (m, 2H), 4.03 (d, IH, J =13.9 Hz), 3.80 (t, IH, /= 13.7 Hz), 3.32-3.41 (m, IH), 3.07 (d, IH, J =4.2 Hz, H-13), 2.18-2.54 (m, 5H), 1.68-1.96 (m, 3H), 1.26-1.35 (m, 2H), 1.19 (s, 3H, CH3-I8), 1.00 (s, 3H, CH3-19). 按照 BS-OR-059 的方法， 使用上述同样的试剂， 将 1-氧代 -14- ( 4-酰氧基环己基胺）冬凌草甲素三氟乙酸盐与 3- (三氟甲基)苯磺酰氯 反应， 制备了 BS-OR-064:
MS (m/z): 718 [M+Na]+, 734 [M+K]+; HPLC: 保留时间 6.755 min
(100.00%).
!H NMR (300 MHz, CDC13): δ 8.05-8.14 (m, 2H, H-苯环)， 7.82-7.84 (m, IH, H-苯环)， 7.64-7.69(m, IH, H-苯环)， 6.24(s, IH, H-17), 5.93 (s, IH, H-14), 5.61 (s, IH, H-17), 5.39-5.41(m, IH, OH-6), 4.29(d, 2H, / =14.4 Hz) 4.03 (d, 1H, / =12.9 Hz), 3.79-3.82 (m, IH), 3.28-3.37 (m, IH), 3.06 (d, IH, / =11.9 Hz, H-13), 2.19-2.52 (m, 5H), 1.78-1.96 (m, 3H), 1.20-1.29 (m, 2H) 1.19 (s, 3H, CH3-I8), 1.00 (s, 3H, CH3-19). 按照 BS-OR-059 的方法， 使用上述同样的试剂， 将 1-氧代 -14- ( 4-酰氧基环己基胺 )冬凌草甲素三氟乙酸盐与对甲基苯磺酰氯反应， 制备了 BS-OR-029:
MS (m/z): 664 [M+Na]+; HPLC: 保留时间 6.893 min (100.00%). 按照 BS-OR-059 的方法， 使用上述同样的试剂， 将 1-氧代 -14- ( 4-酰氧基环己基胺 )冬凌草甲素三氟乙酸盐与邻硝基苯磺酰氯反应， 制备了 BS-OR-061 :
MS (m/z): 695 [M+Na]+, 711 [M+K]+; HPLC: 保留时间 4.315 min (100.00%).
!H NMR (300 MHz, CDC13): δ 8.15 (m, IH, H-苯环)， 7.90 (m, IH, H-苯 环)， 7.75 (m, 2H, H-苯环)， 6.24 (s, IH, H-17), 5.86 (s, IH, H-14), 5.63 (s, IH, H-17), 5.37 (d, IH, OH-6), 4.31 (d, 1H, / = 10.2 Hz), 4.04 (m, IH), 3.79 (dd, / = 12 Hz, 6 Hz, IH), 3.51 (m, IH), 3.11 (d, lH, / =9.9 Hz, H-13), 1.95 (d, / =9.3 Hz, IH), 1.27-1.34 (m, 2H), 1.19 (s, 3H, CH3-18), 0.99 (s, 3H, CH3-19). 按照 BS-OR-059 的方法， 使用上述同样的试剂， 将 1-氧代 -14- ( 4-酰氧基环己基胺）冬凌草甲素三氟乙酸盐与丁基磺酰氯反应， 制备 了 BS-OR-062:
MS (m/z): 630 [M+Na]+; HPLC: 保留时间 4.994 min (97.54%). 按照 BS-OR-059 的方法， 使用上述同样的试剂， 将 1-氧代 -14- ( 4-酰氧基环己基胺）冬凌草甲素三氟乙酸盐与 4- (三氟甲基)苯磺酰氯 反应， 制备了 BS-OR-065:
MS (m/z): 718 [M+Na]+, 734 [M+K]+; HPLC: 保留时间 6.942 min
(98.94%).
!H NMR (300 MHz, CDC13): δ 8.01 (d, 1H, J =8.4 Hz, H-苯环)， 7.79 (d, IH J =8.7 Hz, H-苯环)， 6.24 (s, IH, H-17), 5.89 (s, IH, H-14), 5.61 (s, IH, H-17), 5.39 (d, 1H, / =11.7 Hz, OH-6), 4.87 (d, 1H, J =6.6 Hz), 4.31 (d, IH, J =10.5 Hz), 4.12 (s, IH), 4.04 (d, J =10.2 Hz, IH), 3.77 (dd, J =11.7 Hz, 8.7 Hz, IH), 3.36 (m, IH), 3.07 (d, 1H, J =9.0 Hz, H-13), 1.96 (d, / =9.3 Hz: IH), 1.19 (s, 3H, CH3-18), 1.00 (s, 3H, CH3-19). 按照 BS-OR-059 的方法， 使用上述同样的试剂， 将 1-氧代 -14- ( 4-酰氧基环己基胺）冬凌草甲素三氟乙酸盐与 4-氟苯磺酰氯反应，制 备了 BS-OR-066:
MS (m/z): 668 [M+Na]+, 684 [M+K]+; HPLC: 保留时间 4.681 min (93.63%). 按照 BS-OR-059 的方法， 使用上述同样的试剂， 将 1-氧代 -14- ( 4-酰氧基环己基胺）冬凌草甲素三氟乙酸盐与 4-叔丁基苯磺酰氯反 应， 制备了 BS-OR-067:
MS (m/z): 706 [M+Na]+; HPLC: 保留时间 8.732 min (97.67%).
!H NMR (300 MHz, CDC13): δ 7.78 (d, 1H, / =8.1 Hz, H-苯环)， 7.61 (d, IH J =8.4 Hz, H-苯环)， 6.24 (s, IH, H-17), 5.86 (s, IH, H-14), 5.61 (s, IH, H-17), 5.37 (d, IH, OH-6), 4.55 (d, IH), 4.31 (d, 1H, / = 10.8 Hz), 4.04 (d, J =10.8 Hz, IH), 3.77 (m, IH), 3.30 (m, IH), 3.09 (d, 1H, J =9.3 Hz, H-13), 1.96 (d, / =7.8 Hz, IH), 1.19 (s, 3H, CH3-18), 1.00 (s, 3H, CH3-19). 按照 BS-OR-059 的方法， 使用上述同样的试剂， 将 1-氧代 -14- ( 4-酰氧基环己基胺 )冬凌草甲素三氟乙酸盐与苄基磺酰氯反应， 制备 了 BS-OR-070:
MS (m/z): 664 [M+Na]+, 680 [M+K]+; HPLC: 保留时间 5.296 min
(90.88%). 按照 BS-OR-059 的方法， 使用上述同样的试剂， 将 1-氧代 -14- ( 4-酰氧基环己基胺）冬凌草甲素三氟乙酸盐与对氯苯磺酰氯反应， 制 备了 BS-OR-086:
MS (m/z): 684 [M+Na]+; HPLC: 保留时间 8.923 min (93.73%). 按照 BS-OR-059 的方法， 使用上述同样的试剂， 将 1-氧代 -14- ( 4-酰氧基环己基胺）冬凌草甲素三氟乙酸盐与对硝基苯磺酰氯反应， 制备了 BS-OR-087:
MS (m/z): 673 [M+H]+, 695 [M+Na]+, 711 [M+K]+; HPLC: 保留时间 4.121 min (90.67%). 实施例 7: 化合物（BS-OR-072)的合成
Figure imgf000049_0001
OR-L2 BS-OR-072
式中 4-methylbenzoic acid为对甲基苯甲酸。
将对甲基苯甲酸 (41 mg， 0.3 mmol )溶于 2 mL二氯甲烷， 在水浴条 件下加入 1,3-二环己基碳二亚胺 (65 mg， 0.25 mmol )， 搅拌 1小时后， 加入 1-氧代 -14- ( 4-酰氧基环己基胺 )冬凌草甲素三氟乙酸盐（116.8 mg， 0.2 mmol), 随后加入溶有三乙胺 (0.3 mL)的二氯甲烷 (3 mL)， 室温搅拌 8 小时后， 所得粗产品用硅胶柱分离纯化， 得到白色固体 BS-OR-072 ( 40.0 mg, 收率为 66% ) 。
MS (m/z): 606 [M+H]+, 628 [M+Na]+, 644 [M+K]+; HPLC: 保留时间 6.475 min (93.18%).
!H NMR (300 MHz, CDC13): δ 7.61-7.64 (m, 2H, H-苯环)， 7.26-7.27 (m, 2H, H-苯环)， 6.25 (s, IH, H-17), 6.00-6.02 (m,lH), 5.84-5.89 (m, IH, H-14), 5.62 (s, IH, H-17), 5.35-5.39 (m, IH, OH-6), 4.27-4.28 (m, IH), 4.02-4.13 (m, 2H), 3.78-3.79 (m, IH), 3.07-3.11 (m, IH, H-13), 2.35 ( s, 3H, CH3-苯环 ) , 2.21-2.47 (m, 5H), 1.40-1.72 (m, IH), 1.26-1.32 (m, 3H), 1.20 (s, 3H, CH3- 18), 1.07- 1.11 (m, 2H) ,1.00 (s, 3H, CH3-19). 按照 BS-OR-072的方法， 使用上述同样的试剂， 将 1-氧代 -14- ( 4-酰氧基环己基胺）冬凌草甲素三氟乙酸盐与对氯苯甲酸反应， 制备 了 BS-OR-079:
MS (m/z): 648 [M+Na]+, 664 [M+K]+; HPLC: 保留时间 7.276 min
(93.66%).
!H NMR (300 MHz, CDC13): δ 7.66-7.69 (m, 2H, H-苯环)， 7.38-7.42 (m, 2H, H-苯环)， 6.25 (s, IH, H-17), 6.00-6.02 (m, IH), 5.87 (d, IH, J =19.6 Hz, H-14), 5.62 (s, IH, H-17), 5.39 (d, IH, J =16.0 Hz, OH-6), 4.30 (d, IH, / =14.0 Hz), 4.02-4.10 (m, 2H), 3.73-3.80 (m, IH), 3.04-3.11 (m, IH, H-13} 2.21-2.47 (m, 5H), 1.40-1.72 (m, 10H), 1.26-1.32 (m, 3H), 1.19 (s, 3H, CH3-18), 1.07-1.11 (m, 2H) ,1.00 (s, 3H, CH3-19). 按照 BS-OR-072的方法， 使用上述同样的试剂， 将 1-氧代 -14- ( 4- 酰氧基环己基胺）冬凌草甲素三氟乙酸盐与特戊酸反应， 制备了
BS-OR-080:
MS (m/z): 572 [M+H]+, 594 [M+Na]+, 610 [M+K]+; HPLC: 保留时间
5.584 min (94.02%).
!H NMR (300 MHz, CDC13): δ 6.26 (s, IH, H-17), 5.86 (d, IH, J =25.4 Hz, H-14), 5.62 (s, IH, H-17), 5.32-5.38 (m, IH, OH-6), 4.26-4.31 (m, IH), 4.02-4.06 (m, 2H), 3.64-3.85 (m, 2H), 3.08-3.12 (m, IH), 2.22-2.44 (m, 5H): 1.62-1.72 (m, 10H), 1.29-1.32 (m, 3H), 1.17 (s, 12H, H-CH3), 1.07-1.14 (m, 2H), 1.00 (s, 3H, CH3-19). 按照 BS-OR-072的方法， 使用上述同样的试剂， 将 1-氧代 -14- ( 4- 酰氧基环己基胺）冬凌草甲素三氟乙酸盐与 2-吡啶甲酸反应， 制备了 BS-OR-083 :
MS (m/z): 593 [M+H]+, 615 [M+Na]+, 631 [M+K]+; HPLC: 保留时间
5.072 min (98.23%).
!H NMR (300 MHz, CDC13): δ 8.58-8.60 (m, IH, H-吡0 8.16-8.19 (m, IH, H-吡啶基)， 7.83-7.87 (m, IH, H-吡啶基)， 7.41-7.44 (m, IH, H-吡啶 基)， 6.26 (s, IH, H-17), 5.87 (d, 1H, / =12.44 Hz, H-14), 5.62 (s, IH, H-17), 5.37-5.43 (m, IH, OH-6), 4.23-4.33 (m, 2H), 4.07-4.11 (m, IH),
4.02-4.07 (m, IH), 3.76-3.82 (m, IH), 3.14 (d, IH, /=13.0 Hz, H-13), 2.35-2.47 (m, 5H), 1.62-1.72 (m, 10H), 1.29-1.32 (m, 3H), 1.20 (s, 3H, CH3-I8), 1.07-1.14 (m, 2H) ,1.00 (s, 3H, CH3-19). 按照 BS-OR-072的方法， 使用上述同样的试剂， 将 1-氧代 -14- ( 4-酰氧基环己基胺 )冬凌草甲素三氟乙酸盐与对甲氧基苯甲酸反应， 制备了 BS-OR-071 :
MS (m/z): 622 [M+H]+, 644 [M+Na]+, 660 [M+K]+; HPLC: 保留时间
5.520 min (90.14%).
!H NMR (300 MHz, CDC13): δ 7.71 (d, 1H, J =9.0 Hz, H-苯环)， 6.94 (d, IH J =8.7 Hz, H-苯环)， 6.25 (s, IH, H-17), 5.90 (d, IH, J =12.44 Hz, H-14), 5.62 (s, IH, H-17), 5.39 (d, IH, J=l l.l Hz, OH-6), 4.32 (d, / = 10.5 Hz, 1H): 4.05 (d, / =9.6 Hz, IH), 3.85 (s, 3H), 3.13 (d, IH, H-13), 1.29-1.32 (m, 2H), 1.20 (s, 3H, CH3-18), 1.00 (s, 3H, CH3-19). 按照 BS-OR-072 的方法， 使用上述同样的试剂， 将 1-氧代 -14- ( 4-酰氧基环己基胺）冬凌草甲素三氟乙酸盐与 3-甲基苯甲酸反应，制 备了 BS-OR-073 :
MS (m/z): 606 [M+H]+, 628 [M+Na]+, 644 [M+K]+; HPLC: 保留时间
6.575 min (94.92%).
!H NMR (300 MHz, CDC13): δ 7.55 (m, 2H, H-苯环)， 7.30 (m, 2H, H-苯 环)， 6.25 (s, IH, H-17), 5.90 (s, IH, H-14), 5.62 (s, IH, H-17), 5.40 (d, IH, J=11.7 Hz, OH-6), 4.32 (d, J =10.5 Hz, IH), 4.05 (d, J =10.2 Hz, IH), 3.46 (m, IH), 3.13 (d, IH, H-13), 2.47 (s, 3H), 1.29-1.32 (m, 2H), 1.20 (s, 3H, CH3-I8), 1.00 (s, 3H, CH3-19). 按照 BS-OR-072 的方法， 使用上述同样的试剂， 将 1-氧代 -14- ( 4-酰氧基环己基胺）冬凌草甲素三氟乙酸盐与 3-硝基苯甲酸反应，制 备了 BS-OR-074:
MS (m/z): 637 [M+H]+, 659 [M+Na]+; HPLC: 保留时间 5.965 min
(100.00%).
!H NMR (300 MHz, CDC13): δ 8.58 (s, IH, H-苯环)， 8.37 (d, 1Η, / =7.2 Hz: H-苯环)， 8.12 (d, IH, H-苯环)， 7.68 (t, IH, J=7.8 Hz, H-苯环)， 6.25 (s, IH, H-17), 5.92 (s, IH, H-14), 5.63 (s, IH, H-17), 5.42 (d, IH, J=l l. l Hz, OH-6), 4.33 (d, J =10.5 Hz, IH), 4.05 (d, J =10.2 Hz, IH), 3.09 (d, IH, H- 13), 1.25 (m, 2H), 1.20 (s, 3H, CH3-18), 1.00 (s, 3H, CH3- 19). 按照 BS-OR-072 的方法， 使用上述同样的试剂， 将 1-氧代 - 14- ( 4-酰氧基环己基胺）冬凌草甲素三氟乙酸盐与 2-噻吩甲酸反应， 制 备了 BS-OR-075 :
MS (m/z): 598 [M+H]+, 620 [M+Na]+, 636 [M+K]+; HPLC: 保留时间 4.937 min (95.67%).
!H NMR (300 MHz, CDC13): δ 7.47 (d, 2H, J=7.8 Hz, H-噻吩)， 7.09 (t, IH, H-噻吩)， 6.26 (s, IH, H-17), 5.90 (s, IH, H- 14), 5.62 (s, IH, H- 17), 5.40 (d, IH, J=1 1.7 Hz, OH-6), 4.30 (d, J =10.2 Hz, IH), 4.06 (d, J =10.5 Hz, IH), 3.12 (d, IH, /=9.6 Hz, H- 13), 1.26 (m, 2H), 1.20 (s, 3H, CH3- 18), 1.00 (s, 3H, CH3- 19). 按照 BS-OR-072 的方法， 使用上述同样的试剂， 将 1-氧代 - 14-
( 4-酰氧基环己基胺）冬凌草甲素三氟乙酸盐与苯甲酸反应， 制备了 BS-OR-076:
MS (m/z): 592 [M+H]+, 614 [M+Na]+, 630 [M+K]+; HPLC: 保留时间 4.923 min (97.14%).
!H NMR (300 MHz, CDC13): δ 7.74 (d, 2H, J=6.6 Hz, H-苯环)， 7.46 (m, 3H, H-苯环)， 6.25 (s, IH, H- 17), 5.90 (s, IH, H- 14), 5.62 (s, IH, H-17), 5.40 (d, IH, J=1 1.4 Hz, OH-6), 4.29 (d, IH), 4.06 (d, / =10.2 Hz, IH), 3.09 (d, IH, H- 13), 1.26 (m, 2H), 1.20 (s, 3H, CH3- 18), 1.00 (s, 3H, CH3- 19). 按照 BS-OR-072 的方法， 使用上述同样的试剂， 将 1-氧代 - 14-
( 4-酰氧基环己基胺 )冬凌草甲素三氟乙酸盐与对氟苯甲酸反应， 制备 了 BS-OR-077 :
MS (m/z): 610 [M+H]+, 632 [M+Na]+, 648 [M+K]+; HPLC: 保留时间 5.824 min (97.27%). !H NMR (300 MHz, CDC13): δ 7.77 (d, 2H, J=8.1 Hz, H-苯环)， 7.11 (d, 2H, /=8.1 Hz, H-苯环)， 6.25 (s, IH, H-17), 5.90 (s, IH, H-14), 5.62 (s, IH, H-17), 5.36 (d, IH, OH-6), 4.29 (d, IH), 4.06 (d, J =10.8 Hz, IH), 3.08 (d, IH, H-13), 1.20 (s, 3H, CH3-I8), 1.00 (s, 3H, CH3-19). 按照 BS-OR-072 的方法， 使用上述同样的试剂， 将 1-氧代 -14- ( 4-酰氧基环己基胺）冬凌草甲素三氟乙酸盐与邻氯苯甲酸反应， 制 备了 BS-OR-078:
MS (m/z): 626 [M+H]+, 648 [M+Na]+; HPLC: 保留时间 5.344 min
(95.34%).
!H NMR (300 MHz, CDC13): δ 7.66 (m, IH, H-苯环)， 7.41 (m, 3H, H-苯 环)， 6.25 (s, IH, H-17), 5.88 (s, IH, H-14), 5.61 (s, IH, H-17), 5.40 (d, IH, OH-6), 4.31 (d, J =10.2 Hz, IH), 4.05 (d, J =10.8 Hz, IH), 3.08 (d, IH, H-13), 1.20 (s, 3H, CH3-I8), 1.00 (s, 3H, CH3-19). 按照 BS-OR-072 的方法， 使用上述同样的试剂， 将 1-氧代 -14- ( 4-酰氧基环己基胺）冬凌草甲素三氟乙酸盐与 2-呋喃甲酸反应， 制 备了 BS-OR-088:
MS (m/z): 582 [M+H]+, 604 [M+Na]+; HPLC: 保留时间 6.675 min
(95.92%). 实施例 8: 化合物（BS-OR-090)的合成
Figure imgf000053_0001
Oridonin OR-2
式中， TsOH为苯磺酸。 将冬凌草甲素 (3 g， 8.23 mmol)溶于 90 mL丙酮， 加入催化量的苯 磺酸 (90 mg， 0.52 mmol), 25。C搅拌过夜。 TLC检测反应 （乙酸乙酯： 石油醚 =1: 1 ) 结束后， 加入饱和碳酸氢钠淬灭， 经二氯甲烷萃取
( 40mL*3 ) ， 合并有机相， 饱和食盐水洗， 干燥， 浓缩， 所得粗产物 用硅胶柱分离纯化（石油醚:乙酸乙酯 = 1： 1 )，得到白色固体化合物 OR-2
( 1.05 g, 收率 31.5% ) 。
MS (m/z): 427 [M+Na]+.
!H NMR (300 MHz, CDC13): δ 6.15 (s, IH, H-17), 5.78 (d, 1H, / = 15.76 Hz; H-14), 5.55 (s, IH, H-17), 4.80 (s, IH, OH-6), 4.25 (d, IH, / =13.12 Hz), 4.03-4.07 (m, IH), 3.86-3.93 (m, IH), 3.45-3.50 (m, IH), 3.07 (d, IH, J =12.6 Hz, H-13), 2.50-2.55 (m,lH), 1.88-2.00 (m, IH), 1.25-1.77
(m, 9H), 1.33 (s, 6H), 1.17 (s, 3H, CH3-18),1.15 (s, 3H, CH3-19).
Figure imgf000054_0001
OR-2 3
式中 Ac20为醋酐。
将化合物 OR-2(1.05 g , 2.6 mmol)溶于 70 mL的无水吡啶， 慢慢滴 入醋酐 (3.5 g， 3.9 mmol), 室温搅拌过夜。 旋干除去溶剂， 所得粗产品 用硅胶柱分离纯化（石油醚： 乙酸乙酯 =3: 1 ) ， 得到白色固体化合物 3 ( 1.1 g, 收率 95% ) 。
MS (m/z): 447 [M+H]+, 469 [M+Na]+.
!H NMR (300 MHz, CDC13): δ 6.18 (s, IH, H-17), .81(d, IH, J =15.8 Hz, H-14), 5.57 (s, IH, H-17), 4.77 (s, IH, OH-6), 4.59-4.65 (m, IH), 4.15-4.25 (m, 2H), 3.90-3.97 (m, IH), 3.07 (d, IH, J =12.3 Hz, H-13), 2.45-2.53 (m,lH), 1.99 (s, 3H), 1.25-1.83 (m, 9H), 1.33 (s, 6H), 1.17 (s, 3H, CH3-18), 1.15 (s, 3H, CH3-19).
Figure imgf000055_0001
3 1 -OAc-OR
式中 1-OAc-OR为 1-乙酰基冬凌草甲素。 将化合物 3(1.1 g, 2.46 mmol)溶于 33 mL的 80%醋酸溶液中， 40。C 条件反应 12小时。 反应结束后， 反应液浓缩， 得到的粗产品经硅胶柱 分离纯化（二氯甲烷： 甲醇 =20: 1 ) ， 得到白色固体 1-乙酰基冬凌草甲 素 ( 780 mg, 收率 78% ) 。
MS (m/z): 429 [M+Na]+.
!H NMR (300 MHz, CDC13): δ 6.46 (m, IH), 6.20 (s, IH, H-17), 5.58 (s, IH, H-17), 4.87 (s, IH, OH-6), 4.58-4.62 (m, IH), 4.18-4.26 (m, 2H), 3.75-3.82 (m, 2H), 3.50 (s, IH), 3.08 (d, IH, J =12.7 Hz, H-13), 2.32-2.45 (m, IH), 2.00(s, 3H), 1.25-1.83 (m, 9H), 1.33 (s, 6H), 1.16 (s, 3H, CH3-18),1.15 (s, 3H, CH3-19).
Figure imgf000055_0002
1 -OAc-OR BS-OR-090
将对甲基苯甲酸 (30.6 mg, 0.225 mmol)溶于干燥的二氯甲烷 （5 mL ) ， 加入草酰氯 (38 mg， 0.30 mmol), 常温搅拌 1.5小时后， 旋干得 到对甲基苯甲酰氯； 将 1-乙酰基冬凌草甲素 (61.0 mg， 0.15 mmol), 三 乙胺 (45.5mg， 0.45 mmol)溶于二氯甲烷 ( 5 mL ) ， 加入前述得到的对 甲基苯甲酰氯， 室温搅拌 2小时后， 加入二氯甲烷（30 mL )和饱和碳 ^60-¾o-sa i^w 峯 吉^ ζζ
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C080.0/Cl0ZN3/X3d 6Ζ1^0ΐ/εΐΟΖ OAV 3.79-3.85 (m, 1H), 3.27 (d, 1H, / = 12 Hz, H-13), 2.50-2.70 (m, 1H), 2.02 (s 3H), 1.26-1.80 (m, 9H), 1.14 (s, 3H, CH3-18), 1.13 (s, 3H, CH3-19). 实施例 9: 化合物（BS-OR-095)的合成
Figure imgf000058_0001
OR-L1 BS-OR-095 向 1-氧代 -14- ( 4-酰氧基哌啶）冬凌草甲素三氟乙酸盐 (0.1 mmol) 中加入邻氯苯甲酰氯 (26.3 mg, 0.15 mmol),三乙胺 (30.3 mg, 0.3 mmol), 反应室温搅拌 2小时。反应结束后，向反应液中加入二氯甲烷（30 mL )， 饱和碳酸氢钠 （30 mL ) ， 反应液分层分离得到有机相， 经饱和食盐水 洗， 无水硫酸钠干燥， 旋干后得到的粗产物经硅胶柱 (石油醚:乙酸乙酯 = 2: 1 〜 1: 1) 分离纯化后得到白色固体化合物 BS-OR-095 (30 mg， 收率 49%)。
MS (m/z): 612.3 [M+H]+, 634.3 [M+Na]+; HPLC: 保留时间 5.132 min (93.37%).
1H NMR (300 MHz, CDC13) δ 7.38-7.19 (m, 4H), 6.26 6.24 (m, 1H), 5.93 (s, 1H, H-14), 5.6-5.61 (d, 1H), 5.36-5.32 (d, 1H, / = 12.0 Hz, OH-6), 4.59-4.47 (m, 1H), 4.31-4.28 (d, 1H, J = 10.5 Hz, H-20), 4.03-4.00 (d, 1H, J = 10.5 Hz, H-20), 3.93-3.91 (m, 1H), 3.78-3.70 (m, 1H), 3.44-3.33 (m, 1H), 3.09-2.87 (m, 3H), 1.18 (s, 3H), 0.98 (s, 3 H). 实施例 10: 化合物（BS-OR-099)的合成
Figure imgf000059_0001
向干燥的二氯甲烷（lOmL) 中加入 N-Boc-4哌啶甲酸 (183.3mg， 0.74 mmol), 随后加入草酰氯（140 mg， 1.1 mmol), 反应液室温搅拌 1.5 小时后移除溶剂， 接着加入溶有 1-乙酰基冬凌草甲素 (200 mg, 0.49 mmol), 三乙胺 (222 mg， 2.2 mmol)的二氯甲烷（ 5 mL ) ， 反应室温搅 拌 2小时。 反应结束后， 向反应液中加入二氯甲烷（30 mL) ， 饱和碳 酸氢钠 （30mL) ， 反应液分层分离得到有机相， 经饱和食盐水洗， 无 水硫酸钠干燥， 旋干后得到的粗产物经硅胶柱 (石油醚:乙酸乙酯 =3:1) 分离纯化后得到白色固体化合物 1-乙酰基 -14- ( N-Boc-4-哌啶酰氧基） 冬凌草甲素 (230 mg, 收率 76%)。
Figure imgf000059_0002
1-OAC-OR-L1-BOC 1-OAC-OR-L1 向二氯甲烷（3mL) 中加入 1-乙酰基 -14- ( N-Boc-4-哌啶酰氧基） 冬凌草甲素 (92mg， 0.15 mmol), 然后逐滴加入三氟乙酸（ 0.3 mL ) ， 反应液室温搅拌 1小时。反应结束后旋干溶剂，得到的粗产物不经纯化 直接用于下一步反应。
Figure imgf000060_0001
向二氯甲烷（5 mL ) 中加入上步反应得到的粗产物（0.15 mmol)， 随后加入三乙胺 (222 mg, 2.2 mmol), 2-氯苯甲酰氯 (40 mg, 0.225 mmol), 反应液室温搅拌 2 小时。 反应结束后， 向反应液中加入二氯甲烷（30 mL ) ， 饱和碳酸氢钠（30 mL ) ， 反应液分层分离得到有机相， 经饱和 食盐水洗， 无水硫酸钠干燥， 旋干后得到的粗产物经硅胶柱 (石油醚:乙 酸乙酯 = 3: 1) 分离纯化后得到白色固体化合物 BS-OR-099 (28 mg， 收 率 28.5%)。 MS (m/z): 656.3 [M+H]+, 678.3 [M+Na]+; HPLC: 保留时间 6.253 min (90.49%).
!H NMR (300 MHz, CDC13) δ 7.38-7.23 (m, 1H), 6.16-6.11 (m, 2H), 5.86 (s, 1H, H-14), 5.53-5.49 (d, 1H, / = 10.2 Hz), 4.64-4.56 (m, 2H), 4.30-4.26 (d, 1H, J = 11.1 Hz, H-20), 4.20-4.16 (m, 1H), 4.03-4.07 3.99 (m, 1H), 3.80-3.73 (m, 1H), 3.45-3.33 (m, 1H), 2.60-2.45 (m, 2H), 1.99 (s, 3H), 1.12 (m, 6 H). 实施例 11: 本发明的 1-氧代 /酰化 -14-酰化的冬凌草甲素衍生物抗白血 病的活性测定
(1) 实验材料
白血病细胞株： 白血病细胞株： K562/adr (耐药慢性髓系白血病， CML)、 NB4 (急性早幼粒细胞白血病， AML)、 Kasumi-1 (急性髓系白血 病 M2型， AML-M2)、 Jurkat (急性淋巴细胞白血病， ALL)， 以上细胞 系均受赠于浙江大学肿瘤研究所； H9 (急性淋巴细胞白血病， ALL)， 购 自中国典型培养物保藏中心。
试剂： 冬凌草甲素 （OR )标准品购自西安昊轩生物有限公司， 本 发明的 1-氧代 /酰化 -14-酰化的冬凌草甲素衍生物。
主要仪器： 细胞培养箱 （型号： Thermo Scientific 3111 ) ， 酶标仪
(型号： Bio-Rad iMark ) 。
(2) 实验方法
取生长良好的白血病细胞 6000个， 接种到 96孔细胞培养板孔内。 培养液为含 10%胎牛血清的 RPMI-1640细胞培养液。 第二天加入不同 浓度的 1-氧代 /酰化 -14-酰化的冬凌草甲素衍生物， 混匀后， 置于二氧化 碳（ 5%C02 )细胞培养箱 37。C培养 72小时。 然后用 MTT法测定活细 胞浓度。 在本实验中对照组（不加化合物处理） 细胞活力设为 100%， 并计算出化合物作用后细胞活力 （％)和 72小时白血病细胞半数生长 抑制浓度 (72 、时 IC5。值， g/mL)。
(3) 实验结果
实验结果见表 1。
表 1显示本发明的 1-氧代 /酰化 -14-酰化的冬凌草甲素衍生物能有 效的诱导人慢性髓系白血病、急性髓系白血病和急性淋巴细胞白血病细 胞死亡和抑制这些白血病细胞生长。 与冬凌草甲素本身比较， 本发明的 1 -氧代 /酰化- 14-酰化的冬凌草甲素衍生物具有明显的抗细胞株活性， 其 中化合物 BS-OR-090， BS-OR-093尤为突出， 抗 K562/adr、 Kasumi-1 和 Jurkat细胞株活性均提高 3至 4倍，而在抗 NB4和 H9细胞株上活性 更是提高至 15倍及 22倍； 此外， BS-OR-004和 BS-OR-005衍生物抗 Kasumi-1细胞株活性提高 3倍以上； BS-OR-005和 BS-OR-010在抗 Jurkat细胞株上活性也都提高近 4倍左右。
表 1 : 1-氧代 /酰化 -14-酰化的冬凌草甲素衍生物对白血病细胞生长 抑制浓度测定（ 72小时， IC5Q ( iglmL )值和 IC9Q ( g/mL )值） 。
K562/ADR Kasumi- 1 NB4 Jurkat H9 化合物 IC50 IC90 IC50 IC90 IC50 IC90 IC50 IC90 IC50 IC90
OR 1.32 3.46 1.32 3.72 0.78 2.4 1.89 3.95 1.36 3.57
BS-OR-001 0.6 1.73 0.72 1.86 0.14 0.47 0.68 2.63 0.45 0.95
BS-OR-003 0.71 2.07 0.72 2.25 0.22 0.81 0.81 2.72 0.83 1.82
BS-OR-004 0.41 1.72 0.41 1.68 0.13 0.76 0.62 2.7 0.34 0.83
BS-OR-005 0.4 1.44 0.43 1.05 0.07 0.49 0.44 2.88 0.38 0.92
BS-OR-007 0.47 1.86 0.71 1.76 0.08 0.47 0.71 4.45 0.41 0.92
BS-OR-008 0.52 2.33 0.73 1.84 0.29 0.92 0.73 2.6 0.76 1.79
BS-OR-010 0.44 1.98 0.57 1.76 0.15 0.95 0.48 6.06 0.38 0.96
BS-OR-011 0.75 2.35 1.03 1.94 0.27 0.9 0.87 5.24 0.56 1.23
BS-OR-012 0.75 3.2 1.15 2.39 0.32 1.3 0.99 5.77 0.75 1.99
BS-OR-015 0.51 1.97 0.51 1.15 0.11 0.43 0.69 2.31 0.45 1.82
BS-OR-017 0.52 1.9 0.69 1.7 0.14 0.82 0.92 5.63 0.53 0.98
BS-OR-019 0.43 1.74 0.58 1.55 1.02 3.66 0.58 2.48 2.69 5.41
BS-OR-020 0.73 2.31 0.76 2.85 0.27 1.34 0.88 4.31 0.89 1.84
BS-OR-032 1.09 2.97 1.5 2.92 4.09 9.77 0.93 6.15 6.71 12.73
BS-OR-034 1.52 4.77 1.58 3.46 0.5 1.94 1.32 5.36 0.78 1.73
BS-OR-037 1.32 3.6 1.41 3.19 0.35 1.66 1.16 4.4 1.64 3.46
BS-OR-038 1.43 3.92 1.1 3.95 0.44 2.63 1.36 5.91 1.42 3.01
BS-OR-083 0.58 1.94 1.09 2.59 0.31 0.99 0.89 4.13 0.56 1.54
BS-OR-090 0.36 1.48 0.37 1.3 0.05 0.94 0.4 2.62 0.06 0.37
BS-OR-091 0.45 1.72 0.52 1.22 0.13 0.73 0.55 2.31 0.14 0.46
BS-OR-093 0.37 1.57 0.41 1.31 0.05 0.47 0.44 3.03 0.06 0.33
BS-OR-094 0.7 2.17 0.72 1.72 0.1 0.49 0.65 2.68 0.19 0.49
实施例 12: 本发明 1-氧代 /酰化 -14-酰化的冬凌草甲素衍生物抗人多发 性骨髓瘤细胞活性测定
(1) 实验材料
骨髓瘤细胞株： RPMI 8226(多发性骨髓瘤)，购自上海复祥生物科技 有限公司。
试剂： 同实施例 11
主要仪器： Thermo Scientific 3111细胞培养箱， Bio-Rad iMark酶 标仪。
(2) 实验方法
取生长良好的上述肿瘤细胞 6000个，接种到 96孔细胞培养板孔内。 培养液为含 10%胎牛血清的 RPMI-1640细胞培养液。 第二天加入不同 浓度的 1-氧代 /酰化 -14-酰化的冬凌草甲素衍生物， 混匀后， 置于二氧化 碳（ 5%C02 )细胞培养箱 37。C培养 72小时。 然后用 MTT法测定活细 胞浓度。 在本实验中对照组（不加化合物处理） 细胞活力设为 100%， 并计算出化合物作用后细胞活力 （％)和 72小时白血病细胞半数生长 抑制浓度 (72 、时 IC5。值， g/mL)。
(3) 实验结果
实验结果见表 2。
表 2显示本发明的 1-氧代 /酰化 -14-酰化的冬凌草甲素衍生物能诱 导人骨髓瘤细胞死亡和抑制这些肿瘤细胞生长。 与冬凌草甲素本身相 比， 其中本发明 1-氧代 /酰化 -14-酰化的冬凌草甲素衍生物 BS-OR-005， BS-OR-010, BS-OR-090, BS-OR-093在抗 RPMI 8226细胞活性上提高
9倍以上。 实施例 13: 本发明 1-氧代 /酰化 -14-酰化的冬凌草甲素衍生物抗人实体 瘤作用测定
(1) 实验材料
人实体瘤细胞株：
Hep-2(喉癌）、 A549(人肺癌）、 CaEs-17(食道癌细胞)、 PC-3(前列腺 癌）、 CNE (鼻咽癌细胞)、 SK-OV-3(卵巢癌细胞)均购自中国典型培养物 保藏中心； RKO(人结肠腺癌细胞)、 MGC-803(人胃癌细胞)、 MG-63(骨 肉瘤）、 U87-MG (恶性脑胶质瘤细胞)均购自上海复祥生物科技有限公 司； PANC-1(胰腺癌）、 Becap-37(人乳腺癌细胞)、 Hela (人宫颈癌细胞)、 Hep G2(人肝癌细胞)均受赠于浙江大学肿瘤研究所。
试剂： 同实施例 11
主要仪器： Thermo Scientific 3111细胞培养箱， Bio-Rad iMark酶 标仪。
(2) 实验方法
取生长良好的人实体瘤细胞 6000个，接种到 96孔细胞培养板孔内。 培养液为含 10%胎牛血清的 DMEM 高糖细胞培养液。 置于二氧化碳 ( 5% C02 ) 细胞培养箱 37。C培养 24小时， 然后， 加入不同浓度的 1- 氧代 /酰化 -14-酰化的冬凌草甲素衍生物， 混匀后, 继续置二氧化碳 ( 5%C02 )细胞培养箱 37。C培养 72小时。 然后用 MTT法测定活细胞 浓度。 在本实验中对照组（不加化合物处理） 细胞活力设为 100%， 并 计算出化合物作用后细胞活力 （％)和 72小时白血病细胞半数生长抑 制浓度 (72小时 IC5。值)。
(3) 实验结果
实验结果见表 2。
表 2显示本发明的 1-氧代 /酰化 -14-酰化的冬凌草甲素衍生物具有 明显的抗人实体瘤的活性，诱导人实体瘤细胞死亡或抑制这些肿瘤细胞 生长。 与冬凌草甲素本身相比， 本发明的 1-氧代 /酰化 -14-酰化的冬凌草 甲素衍生物 BS-OR-090和 BS-OR-091抗 MGC-803及 Hep-2活性分别 提高近 10倍及 5倍； BS-OR-004、BS-OR-005、BS-OR-019和 BS-OR-093 抗 CaEs-17活性提高 3倍以上； BS-OR-004和 BS-OR-090抗 CNE活性 提高近 6倍； 此外， BS-OR-090和 BS-OR-093抗 SK-OV-3活性提高 7 倍以上； BS-OR-004、 BS-OR-005和 BS-OR-090在抗 PANC-1和 Hep G2 细胞株上活性均提高近 7至 8倍； BS-OR-004及 BS-OR-005抗 Becap-37 和 RKO活性也均提高 7倍以上； BS-OR-004、 BS-OR-005 , BS-OR-019 和 BS-OR-090抗 MG-63活性提高 5倍以上； BS-OR-090抗 Hela活性 活性提高 5倍以上； BS-OR-005和 BS-OR-090抗 PC-3活性也都提高 5 倍以上。
表 2: 1-氧代 /酰化 -14-酰化的冬凌草甲素衍生物对人实体瘤细胞生 长抑制浓度测定（ 72小时， IC5Q ( iglmL )值和 IC9Q ( g/mL )值） 。
Figure imgf000064_0001
/:/:/ O s80/-020si>l£ 6is20iAVs-
Figure imgf000065_0001
/:/:/ O s80/-020si>l£ 6is-s20iAV
Figure imgf000066_0001
/:/:/ O s80/-020si>l£ 6is-s20iAV
Figure imgf000067_0001

Claims

权 利 要 求 书
1.通式 (I)的 1-氧代 /酰化 -14-酰化的冬凌草甲素衍生物或其药学上可 接受的盐，
Figure imgf000068_0001
式中， W为氧代或 -0(CO)R' ;
L选自直接键、 -(CH=CH)n -、 哌啶子基羰基、 哌啶子基磺酰基、 环己基 氨基羰基、 环己基氨基磺酰基；
n为 1或 2;
R，为 d-C6烷基；
R为芳基、 杂芳基、 C3-C7环烷基、 C3-C7环烯基、 杂环基、 d-C6烷基、 氨基 C 烷基、 （d-C6烷基）氨基 d-C6烷基、 二 （d-C6烷基） 氨基 C 烷基、 羟基 d-C6烷基、 芳基 d-C6烷基、 或杂芳基^-^ 烷基；
其中， 所述芳基、 杂芳基、 c3-c7环烷基、 c3-c7环烯基和杂环基各自 任选地被选自下组的取代基取代：鹵素、氨基、 d-C6烷基氨基、二（ d-C6 烷基）氨基、 硝基、 tt、 羟基、 crc6烷氧基、 crc6鹵代烷氧基、 巯 基、 d-C6烷硫基、 crc6烷基、 羟基 crc6烷基和 crc6鹵代烷基； 所 述 c3-c7环烯基还任选地被羧基取代；
其中， 当 W为- 0(CO)CH3时， L-R不为甲基。
2. 根据权利要求 1的 1-氧代 /酰化 -14-酰化的冬凌草甲素衍生物或其药 学上可接受的盐， 其中 W为氧代或甲酰氧基。
3. 根据权利要求 1或 2的 1-氧代 /酰化 -14-酰化的冬凌草甲素衍生物或 其药学上可接受的盐， 其中所述芳基为苯基。
4. 根据权利要求 1或 2的 1-氧代 /酰化 -14-酰化的冬凌草甲素衍生物或 其药学上可接受的盐， 其中所述杂芳基为含氧、 氮或硫杂原子的五元或 六元芳环基团。
5. 根据权利要求 4的 1-氧代 /酰化 -14-酰化的冬凌草甲素衍生物或其药 学上可接受的盐， 其中杂芳基为呋喃基、 噻吩基、 吡咯基、 吡啶基。
6. 根据权利要求 1-5任一项的 1-氧代 /酰化 -14-酰化的冬凌草甲素衍生 物或其药学上可接受的盐，其中所述所述芳基、杂芳基、 c3-c7环烷基、 c3-c r、烯基和杂环基各自任选地被选自下组的取代基取代： 鹵素、 氨 基、硝基、 CrC6烷氧基、 CrC6鹵代烷氧基、 d-C6烷硫基、 crc6 烷基。
7. 根据权利要求 6的 1-氧代 /酰化 -14-酰化的冬凌草甲素衍生物或其药 学上可接受的盐， 其中所述取代基为氟、 氯、 溴、硝基、 氰基、 甲氧基、 乙氧基、 丙氧基、 甲基、 乙基、 丙基、 异丙基、 三氟甲基、 正丁基、 异 异丁基、 叔丁基。
8. 根据权利要求 1或 2的 1-氧代 /酰化 -14-酰化的冬凌草甲素衍生物或 其药学上可接受的盐， 其中 R为（ 3-( 7环烷基、 （ 3-( 7环烯基、 Ci-C6 烷基、 氨基 d-C6烷基、 芳基 d-C6烷基、 或杂芳基^-^烷基。
9. 根据权利要求 8的 1-氧代 /酰化 -14-酰化的冬凌草甲素衍生物或其药 学上可接受的盐， 其中 R为环丙基、 环戊基、 环己基、 环戊烯基、 环 己烯基、 甲基、 乙基、 丙基、 异丙基、 正丁基、 异丁基、 叔丁基、 氨基 丁基、 芳基甲基、 或芳基乙基。
10. 根据权利要求 1的 1-氧代 /酰化 -14-酰化的冬凌草甲素衍生物或其 药学上可接受盐， 选自下述化合物： BS-OR-001、 BS-OR-003 ,
BS-OR-004、 BS-OR-005、 BS-OR-007、 BS-OR-008、 BS-OR-010、 BS-OR-011、 BS-OR-012、 BS-OR-015、 BS-OR-017、 BS-OR-019、 BS-OR-020、 BS-OR-032, BS-OR-034、 BS-OR-037, BS-OR-038、 BS-OR-083、 BS-OR-090、 BS-OR-091、 BS-OR-093, BS-OR-094。
11. 根据权利要求 1的 1-氧代 /酰化 -14-酰化的冬凌草甲素衍生物或其 药学上可接受盐， 选自下述化合物：
Figure imgf000070_0001
BS-OR-004
1-氧代 -14- (4-甲基）苯甲酰氧基冬凌草甲素
Figure imgf000070_0002
BS-OR-005
1-氧代 -14- (4-甲氧基）苯甲酰氧基冬凌草甲素
Figure imgf000070_0003
BS-OR-019
1-氧代 -14-苯基丙烯酰氧基冬凌草甲素
Figure imgf000070_0004
BS-OR-090
1-乙酰基 -14- (4-甲基）苯甲酰氧基冬凌草甲素
Figure imgf000070_0005
BS-OR-091 1-乙酰基 -14- ( 4-甲氧基）苯甲酰氧基冬凌草甲素
Figure imgf000071_0001
BS-OR-093
1 -乙酰基 - 14-对氯苯甲酰氧基冬凌草甲素
Figure imgf000071_0002
BS-OR-094
1 -乙酰基 - 14-苯基丙烯酰氧基冬凌草甲素
12. 制备权利要求 1的式（I )化合物的方法， 其中
1 ) 对于 W为氧代、 L为直接键或 -(CH=CH)n-的式（ I )化合物即 式（ 1-1 )化合物， 其中 如权利要求 1中对 R的定义， n如权利要求 1 中所定义， 该方法包括
Figure imgf000071_0003
Oridonin OR-Ketone 1-1
先将冬凌草甲素的 1-位羟基选择性的氧化， 生成 1-氧代冬凌草甲素中 间体（OR-Ketone ) ； 再将此中间体与相应的有机酸、 有机酸酐或有机 酰氯， 在有碱的存在下发生酰化反应， 生成 1-氧代 -14-酰化的冬凌草甲 素衍生物 (1-1);
2 )对于 W为氧代、 L为哌啶子基羰基或哌啶子基磺酰基的式（ I ) 化合物即式（1-2 )化合物， 其中 R2为 -C(0)R或 -C(0)S(0)2R, 所述 R如 权利要求 1中所定义， 该方法包括
Figure imgf000072_0001
OR-L1 I-2
1-氧代冬凌草甲素中间体（OR-Ketone )与 N-叔丁氧碳基哌啶- 4-羧酸， 在有碱和缩合剂存在下， 反应生成 1-氧代 -14- ( N-叔丁氧碳基 4-哌啶 酰氧基）冬凌草甲素中间体（OR-Ll-Boc ) ， 此中间体经酸处理， 去除 叔丁氧碳基保护基， 得到胺（铵盐） 中间体（0R-L1 ) ； 此胺（铵盐） 中间体在有碱存在下， 与相应的有机酸、 有机酸酐、 有机酰氯、 磺酰氯 反应， 生成式（ 1-2 ) 的 1-氧代 -14- (哌啶酰氧基）冬凌草甲素衍生物； 3 )对于 W为氧代、 L为环己基氨基羰基或环己基氨基磺酰基的式 ( I )化合物即式 ( 1-3 )化合物， 其中 R3为 -C(0)R或 -C(0)S(0)2R, 所 述 R如权利要求 1中所定义， 该方法包括
Figure imgf000073_0001
OR-Ketone OR-L2-Boc
Figure imgf000073_0002
OR-L2 1-3
1-氧代冬凌草甲素中间体（OR-Ketone)与 1-(N-叔丁氧碳基)氨基- 4-环 己基羧酸， 在有碱和耦合试剂存在下， 反应生成 1-氧代 -14- (1-(N-叔 丁氧碳基胺基 )-4-环己酰氧）冬凌草甲素中间体（0R-L2-BOC ) ， 此中 间体经酸处理，去除叔丁氧碳基保护基，得到胺（铵盐）中间体（ 0R-L2 ); 此胺（铵盐） 中间体在有碱存在下， 与相应的有机酸、 有机酸酐、 有机 酰氯或磺酰氯反应， 生成式（1-3) 的 1-氧代 -14- (1- (胺基）环己基 -4-酰氧基）冬凌草甲素衍生物；
4)对于 W为- 0(CO)R，、 L为直接键或 -(CH=CH)n-的式（I)化合 物即式（1-4)化合物， 其中 如权利要求 1中对 R的定义， R4如权利 要求 1中对 R，的定义， n如权利要求 1中所定义， 该方法包括
Figure imgf000073_0003
OR-4 1-4
先将 7,14-位的羟基用缩醛保护生成 OR-2; 而后对 1-位羟基酰化， 得 中间体 OR-3; OR-3经酸处理脱保护， 得中间体 OR-4; 对 OR-4进行 酰化， 即得 1, 14-双酰化的冬凌草甲素衍生物 （1-4 ) ；
5 )对于 W为 -0(CO)R'、 L为哌啶子基叛基或哌啶子基磺酰基的 式（I )化合物， 其中 R，如权利要求 1中所定义， 该方法包括
按照上述 2 ) 中的方法进行， 其中将 OR-Ketone用上述 4 ) 中的 OR-4 替代； 或
6 )对于 W为 -0(CO)R，、 L为环己基氨基羰基或环己基氨基磺酰 基的式（I )化合物， 其中 R，如权利要求 1中所定义， 该方法包括 按照上述 3 ) 中的方法进行， 其中将 OR-Ketone用上述 4 ) 中的 OR-4 替代。
13. 一种药物组合物， 其中包含权利要求 1-11中任一项的 1-氧代 /酰化 -14-酰化的冬凌草甲素衍生物或其药学上可接受的盐和任选的药学上 可以接受的赋形剂。
14. 权利要求 1-11 中的任一项的 1-氧代 /酰化 -14-酰化的冬凌草甲素衍 生物或其药学上可接受的盐在制备抗肿瘤药物中的用途。
15. 一种治疗肿瘤患者的方法，包括给予需要治疗的患者治疗有效量 的根据权利要求 1-11任一项的 1-氧代 /酰化 -14-酰化的冬凌草甲素衍生 物或其药学上可接受的盐。
16. 作为抗肿瘤治疗剂的权利要求 1- 11任一项的 1-氧代 /酰化 -14-酰 化的冬凌草甲素衍生物或其药学上可接受的盐。
17. #居权利要求 14、 15或 16的用途、 方法或 1-氧代 /酰化 -14-酰化 的冬凌草甲素衍生物， 其中， 所述肿瘤选自白血病、 多发性骨髓瘤、 淋巴瘤、 肝癌、 胃癌、 乳腺癌、 胆管细胞癌、 胰腺癌、 肺癌、 大肠 癌、 骨肉瘤、 人宫颈癌、 神经胶质瘤、 鼻咽癌、 喉癌、 食管癌、 中 耳肿瘤、 黑色素瘤和前列腺癌。
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