WO2013045736A1 - Moduladores alostéricos de gsk-3 de naturaleza heterocíclica - Google Patents

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Ana MARTÍNEZ GIL
Carmen GIL AYUSO-GONTÁN
Valle Palomo Ruiz
Concepción PEREZ MARTÍN
Daniel I. PÉREZ FERNÁNDEZ
Julio Alberto REYES RODRÍGUEZ
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Consejo Superior De Investigaciones Científicas (Csic)
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    • C07D215/16—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen atoms or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D215/48—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen
    • C07D215/54—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen attached in position 3
    • C07D215/56—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen attached in position 3 with oxygen atoms in position 4

Definitions

  • the present invention relates to heterocyclic derivatives of substituted quinolines as allosteric inhibitors of the glycogen synthase kinase 3 enzyme (GSK-3). These compounds, therefore, are useful for the manufacture of a medicament for the treatment and / or prevention of diseases in which GSK-3 is involved, such as neurodegenerative diseases, inflammatory diseases, cancer, diabetes, as well as for promoting various regenerative processes Therefore, the invention could be framed in the field of pharmaceutical chemistry.
  • GSK-3 glycogen synthase kinase 3 enzyme
  • Glycogen synthase kinase 3 (GSK-3) is an enzyme of the kinase family that catalyzes phosphorylation of serine or threonine residues in various substrates. It was originally discovered for its role in glycogen biosynthesis, to which it owes its name [Rylatt, DB; Aitken, A .; Bilham, T .; Condom, GD; Embi, N .; Cohen, P. Glycogen Synthase Kinase 3 from rabbit skeletal muscle. Separation from cyclic-AMP-dependent protein kinase and phosphorylase kinase. Eur J Biochem. 1980 107, 519-527].
  • This enzyme plays a key role in several cell signaling pathways, including Wnt pathways, cell division cycle, inflammation, cell proliferation, DNA damage response, cell death and survival, and differentiation. neuronal among others [Phukan, S .; Babu, VS; Kannoji, A .; Hariharan, R .; Balaji, VN GSK3beta: role in therapeutic landscape and development of modulators. Br. J. Pharmacol. 2010, 160, 1-19].
  • GSK-3 overexpression / superactivation of GSK-3 is sufficient to induce neuronal death, relating to various pathologies such as bipolar disorders, neurodegenerative diseases, especially Alzheimer's disease, type II diabetes and inflammatory diseases chronicles [Kannoji, A., Phukan, S., Sudher, V., Balaji, VN "GSK3beta: a master switch and a promising target”. Expert Opin Ther Targets. 2008, 12, 1443-1455].
  • GSK-3 inhibitors have been synthesized, resulting promising molecules for the treatment of various diseases, such as diabetes, cancer and neurodegenerative diseases [Mart ⁇ nez, A. Preclinical efficacy on GSK-3 inhibitors: towards a future generation of powerful drugs. Med. Res.
  • the present invention presents a family of compounds, and their mode of production, which possess the ability to inhibit the GSK-3 enzyme in micromolar order.
  • the kinetic studies of GSK-3 inhibition that are presented show these compounds as allosteric inhibitors of GSK-3.
  • these compounds are capable of reducing inflammation in cellular models presented here.
  • the present invention relates to the use of a compound of formula I)
  • Ri is selected from H, an optionally substituted C1-C5 alkyl group, an optionally substituted C2-C5 alkenyl group
  • R2 is an optionally substituted C5-C15 alkyl group
  • R3 is selected from H, halogen, a C1-C5 alkyl group optionally substituted or an optionally substituted - (O) - C1-C5 alkyl group
  • n is a value between 1 and 4
  • R 4 , R 5 and R 6 are independently selected from H or an optionally substituted C1-C5 alkyl group, with the condition that when R1 is ethyl or H and R3 R4, R5 and R6 are H, R 2 cannot be heptyl, for the manufacture of a medicament for the treatment and / or prevention of a disease selected from neurodegenerative diseases, inflammatory diseases, cancer, diabetes, or to promote regenerative processes.
  • alkyl refers, in the present invention, to radicals of hydrocarbon chains, linear or branched, having 1 to 15 carbon atoms and which are attached to the rest of the molecule by a single bond, for example, propyl , ethyl, methyl, isopropyl, undecanoyl, heptadecanoyl, octadecanoyl, etc.
  • alkyl radicals may be optionally substituted in one or more positions by one or more groups such as cycloalkyl, hydroxyl, amines, amides, oxo, cyano, halogens, aryl, etc.
  • cycloalkyl refers, in the present invention, to cyclic hydrocarbon chain radicals, preferably 3 to 6 carbon atoms and more preferably 3, which is saturated or partially saturated, and which only consists of carbon atoms and hydrogen, such as cyclopropyl, cyclopentyl or cyclohexyl and which may be optionally substituted by one or more groups such as alkyl, halogens, hydroxyl, amines, amides, cyano etc.
  • alkenyl refers, in the present invention, to hydrocarbon radicals, linear or branched, containing one or more double carbon-carbon bonds, for example, vinyl, 1-propenyl, allyl, isoprenyl, 2-butenyl , 1, 3-butadienyl etc. Alkenyl radicals may be optionally substituted by one or more groups such as halogen, hydroxyl, carboxyl, cyano, carbonyl, acyl, amino, nitro etc.
  • aryl refers, in the present invention, to single or multiple aromatic rings, having between 5 and 18 links in which a proton has been removed from the ring. Preferably the aryl group has 5 to 7 carbon atoms.
  • aryl groups are for example, but not limited to phenyl, naphthyl, diphenyl, indenyl, phenanthryl or anthracil.
  • the aryl radicals may be optionally substituted by one or more substituents such as alkyl, hydroxyl, amines, amide, cyano, halogens, etc.
  • Halogen refers to fluorine, chlorine, bromine or iodine.
  • R 4 , R 5 and R 6 are H. In another preferred embodiment of the present invention, it is H or a C 1 -C 3 alkyl group, more preferably R 1 is H, optionally substituted methyl, ethyl or isobutyl In a more preferred embodiment, R 1 is a methyl group substituted by a cycloalkyl, preferably cyclopropyl, or an aryl, preferably phenyl.
  • R 2 is a C 7 -C 11 alkyl group, more preferably R 2 is a C 7 alkyl group or a C 11 alkyl group.
  • R3 is a halogen group, it is preferably Br, Cl or F and more preferably n is 1.
  • N'-Dodecanoyl-4-hydroxy-2-oxo-2-hydroquinolin-3-carbohydrazide (13) ⁇ 7-Chloro-4-hydroxy-N'-octanoyl-2-oxo-2-hydroquinolin-3-carbohydrazide
  • the compounds of the present invention are allosteric inhibitors of GSK-3, therefore, these compounds are used for the treatment and / or prevention of diseases in which it is this enzyme involved. Allosteric inhibitors produce a smoother modulation of enzymes than competitive inhibitors, with IC50 values of the micromolar order.
  • the GSK-3 enzyme is involved in multiple cell signaling pathways, so inhibitors of this enzyme directed to a specific pathway related to a specific pathology end up affecting other pathways, thus generating unwanted side effects.
  • An allosteric modulation of GSK-3 supposes less impact on the routes that are not related to the disease to be treated, so that the side effects in a patient would be minimized.
  • Neurodegenerative diseases can be selected from the list that includes, but is not limited to Alzheimer's disease, Parkinson's disease, amyotrophic lateral sclerosis, cerebral ischemia, post-encephalitic parkinsonisms, dystonia, Tourette syndrome, periodic limbic movement pathologies, restless legs, attention deficit hyperactivity disorder, Huntington's disease, progressive supranuclear palsy, Pick's disease, dementia fro n tote mpo ral or neuromuscular diseases.
  • Inflammatory diseases can be selected, but not limited to, from Crohn's disease, ulcerative colitis, rheumatoid arthritis, atherosclerosis, vasculitis or multiple sclerosis.
  • Cancer can be selected, but not limited to, from glioblastoma, leukemia, lymphomas, lung, breast, prostate or colon cancer.
  • Diabetes can be non-dependent insulin type II diabetes.
  • differentiation of the stem cells of the nervous system, the hematopoietic system, the bone system or the myocardium is preferably involved.
  • the present invention relates to a compound of formula
  • Ri is selected from H or an alkyl group CrC optionally substituted 5 or C2-C5 optionally substituted alkenyl group
  • F3 ⁇ 4 is an alkyl group C5-C15 optionally substituted
  • R3 is a halogen
  • n is a value between 1 and 4
  • R 4 , R 5 and R6 are independently selected from H or an optionally substituted C1-C5 alkyl group.
  • R 4 , R 5 are independently selected from H or an optionally substituted C1-C5 alkyl group.
  • Ri is H or a C1-C3 alkyl group, preferably optionally substituted methyl, ethyl or isobutyl.
  • R 1 is a methyl group substituted by a cycloalkyl, preferably cyclopropyl, or an aryl, preferably phenyl.
  • R1 is H.
  • R 2 is a C 7 -Cu alkyl group, more preferably R 2 is a C 7 alkyl group or a Cu alkyl group.
  • R3 is Br, Cl or F and preferably n is 1.
  • R3 is H and preferably n is 1.
  • a more preferred embodiment of the compounds of formula (II), comprises the following compounds:
  • Another preferred embodiment relates to a compound that is selected from the following group:
  • the present invention relates to the use of a compound of formula (II) as described above for the manufacture of a medicament.
  • the present invention relates to a pharmaceutical composition comprising a compound of formula (II) as described above, together with a pharmaceutically suitable carrier.
  • this composition further comprises another active ingredient known and used for the treatment and / or prevention of any of the above-mentioned diseases.
  • the compounds of the present invention represented by the formula (I) or by the formula (II), and more specifically, the specific compounds belonging to this general formula described above may include isomers, depending on the presence of multiple bonds (e.g., Z, E), including optical isomers or enantiomers, depending on the presence of chiral centers.
  • the individual isomers, enantiomers or diastereoisomers and mixtures thereof fall within the scope of the present invention.
  • the individual enantiomers or diastereoisomers, as well as mixtures thereof, can be separated by conventional techniques.
  • solvate includes both pharmaceutically acceptable solvates, that is, solvates of the compound of formula (I) that can be used in the manufacture of a medicament, as pharmaceutically acceptable solvates, which may be useful in the preparation of pharmaceutically acceptable solvates or salts.
  • pharmaceutically acceptable solvate is not critical as long as it is pharmaceutically acceptable.
  • the solvate is a hydrate. Solvates can be obtained by conventional solvation methods well known to those skilled in the art.
  • the compounds of formula (I) or of formula (II) for therapeutic use are prepared in solid form or aqueous suspension, in a pharmaceutically acceptable diluent. These preparations may be administered by any appropriate route of administration, for which said preparation will be formulated in the pharmaceutical form appropriate to the route of administration chosen.
  • the administration of the compound of formula (I) provided by this invention is carried out orally, topically, rectally or parenterally (including subcutaneously, intraperitoneally, intradermally, intramuscularly, intravenously, etc.).
  • the compounds described in the present invention, their pharmaceutically acceptable salts, solvates as well as the pharmaceutical compositions containing them can be used together with other additional drugs to provide a combination therapy.
  • Said additional drugs may be part of the same pharmaceutical composition or, alternatively, they may be provided in the form of a separate composition for simultaneous or non-simultaneous administration to the pharmaceutical composition comprising a compound of formula (I) or of formula (II ), or a pharmaceutically acceptable salt, stereoisomer or solvate thereof.
  • the compounds of the invention also include compounds that differ only in the presence of one or more isotopically enriched atoms.
  • compounds having said structure, except for the replacement of a hydrogen with a deuterium or tritium, or the substitution of a carbon for a carbon enriched in 13 C or 14 C or a nitrogen enriched in 15 N are within the scope of this invention.
  • the present invention relates to a process for obtaining a compound of formula (II) comprising the following steps:
  • R 7 and R 8 are the same or different CrC 5 alkyl groups.
  • R3 is defined as above.
  • Rg is a C1-C5 alkyl group
  • R 2 is defined as above.
  • R 7 and Rs are independently a C1-C3 alkyl group, and more preferably they are a methyl group.
  • Rg a C1-C3, and more preferably is ethyl.
  • Figure 1 Shows the reciprocal double chart. ATP concentrations were varied from 1 to 50 ⁇ , while the concentration of GS-2 peptide remained constant at 12.5 ⁇ . The concentrations of the inhibitor used (compound 6) are shown in the graph.
  • Figure 2. Shows the reciprocal double chart. The concentrations of GS-2 varied from 15.5 to 100 ⁇ , while the concentration of ATP remained constant at 1 ⁇ . The concentrations of the inhibitor used (compound 6) are shown in the graph.
  • Figure 3 Shows the decrease in inflammatory activity in cell cultures in the presence of varying concentrations of compound 6.
  • Reagents Compound 1 and dodecanoylhydrazide.
  • Reagents Compound 2 and dodecanoylhydrazide.
  • Reagents methyl anthranilate and dodecanoylhydrazide.
  • Reagents methyl 2-amino-4-chlorobenzoate and dodecanoylhydrazide.
  • R 3 H
  • R1 CH 2 -cyclopropyl Comp 31
  • R 3 H
  • R1 CH 2 -Ph Comp 32
  • Reagents Comp 20 (1.38 mmol, 0.3 g); Sodium Hydride (2.91 mmol, 0.07 g); Diethyl malonate (6.91 mmol, 1.1 g).
  • R 3 H
  • R1 CH 2 -cyclopropyl
  • R 2 Jr 10 Comp 45
  • R 3 7-CI
  • R1 CH 2 -Ph
  • R 2 Comp 62
  • Enzyme inhibition assays were performed using the kinasa-glo® luminometric method methodology.
  • Recombinant human enzyme GSK3 (catalog No. 14-306) was purchased from Upstate (Dundee, UK).
  • the prefosphorylated polypeptide was synthesized by American Peptide Inc (Sunnyvale, CA).
  • the luminescent kinase kit (catalog No. V671 1) was obtained from Promega. ATP and other reagents were purchased in Sigma-Aldrich (St. Louis, MO)
  • the tests were performed in buffer using 96-well plates. 10 ⁇ of the compound to be tested (dissolved in DMSO at a concentration of 1 mM, and in turn dissolved in buffer until the concentration necessary for the experiment) and 10 ⁇ (20 ng) of the enzyme are added to each well followed by 20 ⁇ buffer containing 25 ⁇ of the substrate and 1 ⁇ of ATP. The final concentration of DMSO in the experiment did not exceed 1%. After an incubation of half an hour at 30 ° C, the enzymatic reaction is stopped with 40 ⁇ of the kinase-glo® reagent. The luminescence is measured after ten minutes using a POLARstar Optima multimode reader. The activity is proportional to the difference between total and consumed ATP. The Inhibition activities were calculated based on maximum activity, measured in the absence of inhibitor.
  • a monolayer culture of RAW 264.7 cells is used growing in 96-well plates.
  • the cells are treated for 1 h with the compounds evaluated.
  • the inflammatory activity is then stimulated with 0.4 ⁇ g / ml of LPS for 24 h.
  • the production of nitrites by the Griess method is valued. Briefly, 50 ⁇ of supernatant is transferred to 96-well plates and 50 ⁇ of Griess reagent is added. The mixture is incubate for 15 minutes at room temperature and the absorbance at 520 nm is measured in a microplate reader.
  • compound 6 In order to determine the ability to reduce the activation of inflammation of allosteric inhibitors of GSK-3P in cell cultures, compound 6 has been evaluated at various concentrations (1, 25, 2.5, 5 and 10 ⁇ ), finding an effect on the decrease of dose dependent nitrite release.

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Abstract

La presente invención se refiere a derivados heterocíclicos de quinolinas sustituidas como inhibidores alostéricos del enzima glucógeno sintasa quinasa 3 (GSK-3). Estos compuestos, por tanto, son útiles para la fabricación de un medicamento para el tratamiento y/o prevención de enfermedades en las que GSK-3 esté implicada, tales como, enfermedades neurodegenerativas, enfermedades inflamatorias, cáncer, diabetes, así como para promover diversos procesos regenerativos.

Description

MODULADORES ALOSTÉRICOS DE GSK-3 DE NATURALEZA
HETEROCÍCLICA
La presente invención se refiere a derivados heterocíclicos de quinolinas sustituidas como inhibidores alostéricos del enzima glucógeno sintasa quinasa 3 (GSK-3). Estos compuestos, por tanto, son útiles para la fabricación de un medicamento para el tratamiento y/o prevención de enfermedades en las que GSK-3 esté implicada, tales como, enfermedades neurodegenerativas, enfermedades inflamatorias, cáncer, diabetes, así como para promover diversos procesos regenerativos. Por tanto, la invención se podría encuadrar en el campo de la química farmacéutica.
ESTADO DE LA TÉCNICA La glucógeno sintasa quinasa 3 (GSK-3) es una enzima de la familia de las quinasas que cataliza la fosforilación de residuos de serina o treonina en diversos sustratos. Originariamente fue descubierta por su papel en la biosíntesis del glucógeno, al cual debe su nombre [Rylatt, D.B.; Aitken, A.; Bilham, T.; Condón, G.D.; Embi, N.; Cohén, P. Glycogen Synthase Kinase 3 from rabbit skeletal muscle. Separation from cyclic-AMP-dependent protein kinase and phosphorylase kinase. Eur J Biochem. 1980 107, 519-527]. Esta enzima juega un papel clave en varias rutas de señalización celular, entre las que se encuentran las rutas de Wnt, el ciclo de división celular, inflamación, proliferación celular, la respuesta de daño en el ADN, la muerte y supervivencia celular y la diferenciación neuronal entre otras [Phukan, S.; Babu, V.S.; Kannoji, A.; Hariharan, R.; Balaji, V.N. GSK3beta: role in therapeutic landscape and development of modulators. Br. J. Pharmacol. 2010, 160, 1 -19]. Recientemente se ha demostrado que una sobreexpresión/superactivación de GSK-3 es suficiente para inducir la muerte neuronal, relacionándose con diversas patologías tales como desórdenes bipolares, enfermedades neurodegenerativas, en especial la enfermedad de Alzheimer, diabetes de tipo II y enfermedades inflamatorias crónicas [Kannoji, A., Phukan, S., Sudher, V., Balaji, V.N. "GSK3beta: a master switch and a promising target". Expert Opin Ther Targets. 2008, 12, 1443-1455]. En los últimos años se han sintetizado numerosos inhibidores de GSK-3, que resultan moléculas prometedoras para el tratamiento de enfermedades diversas, como la diabetes, cáncer y enfermedades neurodegenerativas [Martínez, A. Preclinical efficacy on GSK-3 inhibitors: towards a future generation of powerful drugs. Med. Res. Rev. 2008, 28, 773-796]. Sin embargo, y dado que el quinoma humano está formado por más de 500 quinasas con gran identidad en el sitio catalítico, es decir el de unión al ATP, el descubrimiento y/o diseño de inhibidores específicos para una quinasa determinada es un reto abierto. Una de las posibilidades de aumentar esta selectividad en quinasas es diseñando moduladores alóstericos [Eglen, R.; Reisine, T. Drug discovery and the human kinome: recent trends. Pharmacol. Ther. 201 1 , 130, 144-156]. Estos compuestos generalmente se unen a regiones únicas y específicas de la quinasa, induciendo cambios conformacionales, y resultando muy útiles cuando aparecen resistencias debidas a los inhibidores que compiten con el adenosín trifosfato (ATP) [Mclnnes, C; Fischer, P.M. Strategies for the design of potent and selective kinase inhibitors. Curr. Pharm. Des. 2005, 1 1 , 1845-1863]. Además, los moduladores alostéricos proporcionan una modulación suave del enzima correspondiente lo que es particularmente importante en la inhibición de GSK-3. [Martínez, A., Gil, C, Pérez, D.l. Glycogen synthase kinase 3 inhibitors in the next horizon for Alzheimer's disease treatment" Int. J. Alzheimer's Dis. 201 1 , doi: 10,4061/201 1/280502]. En este caso, sólo la sobreexpresión/superactivación aberrante de GSK-3 debe inhibirse para tratar las patologías donde esté implicada esta quinasa.
DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN La presente invención presenta una familia de compuestos, y su modo de obtención, que poseen la capacidad de inhibir la enzima GSK-3 en orden micromolar. Los estudios cinéticos de inhibición de la GSK-3 que se presentan, muestran estos compuestos como inhibidores alostéricos de GSK-3. Por otro lado, estos compuestos son capaces de disminuir la inflamación en modelos celulares que aquí se presentan.
En un primer aspecto, la presente invención se refiere al uso de un compuesto de fórmula I)
Figure imgf000004_0001
Fórmula (I)
o sus sales, solvatos o estereoisómeros,
donde Ri se selecciona entre H, un grupo alquilo C1-C5 opcionalmente sustituido, un grupo alquenilo C2-C5 opcionalmente sustituido, R2 es un grupo alquilo C5-C15 opcionalmente sustituido, R3 se selecciona entre H, halógeno, un grupo alquilo C1-C5 opcionalmente sustituido o un grupo -(O)-alquilo C1-C5 opcionalmente sustituido, n es un valor entre 1 y 4, R4, R5 y R6 se seleccionan independientemente entre H o un grupo alquilo C1-C5 opcionalmente sustituido, con la condición de que cuando R1 es etilo o H y R3 R4 , R5 y R6 son H, R2 no puede ser heptilo, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento y/o prevención de una enfermedad que se selecciona entre enfermedades neurodegenerativas, enfermedades inflamatorias, cáncer, diabetes, o para promover procesos regenerativos. El término "alquilo" se refiere, en la presente invención, a radicales de cadenas hidrocarbonadas, lineales o ramificadas, que tienen de 1 a 15 átomos de carbono y que se unen al resto de la molécula mediante un enlace sencillo, por ejemplo, propilo, etilo, metilo, isopropilo, undecanoilo, heptadecanoilo, octadecanoilo, etc. Estos radicales alquilo pueden estar opcionalmente sustituidos en una o más posiciones por uno o más grupos tales como cicloalquilo, hidroxilo, aminas, amidas, oxo, ciano, halógenos, arilo, etc. El término "cicloalquilo" se refiere, en la presente invención, a radicales de cadenas hidrocarbonadas cíclicas, preferiblemente de 3 a 6 átomos de carbono y más preferiblemente de 3, que está saturado o parcialmente saturado, y que sólo consiste en átomos de carbono e hidrógeno, tal como ciclopropilo, ciclopentilo o ciclohexilo y que puede estar opcionalmente sustituido por uno o más grupos tales como alquilo, halógenos, hidroxilo, aminas, amidas, ciano etc.
El término "alquenilo" se refiere, en la presente invención, a radicales de cadenas hidrocarbonadas, lineales o ramificadas, que contienen uno o más enlaces carbono-carbono dobles, por ejemplo, vinilo, 1 -propenilo, alilo, isoprenilo, 2-butenilo, 1 ,3-butadienilo etc. Los radicales alquenilo pueden estar opcionalmente sustituidos por uno o más grupos tales como halógeno, hidroxilo, carboxilo, ciano, carbonilo, acilo, amino, nitro etc. El término "arilo" se refiere, en la presente invención, a anillos aromáticos sencillos o múltiples, que tienen de entre 5 a 18 eslabones en los que se ha eliminado un protón del anillo. Preferentemente el grupo arilo tiene de 5 a 7 átomos de carbono. Los grupos arilo son por ejemplo, pero sin limitarse a fenilo, naftilo, difenilo, indenilo, fenantrilo o antracilo. Los radicales arilo pueden estar opcionalmente sustituidos por uno o más sustituyentes tales como alquilo, hidroxilo, aminas, amida, ciano, halógenos, etc. "Halógeno" se refiere a flúor, cloro, bromo o yodo.
En una realización preferida de la presente invención, R4, R5 y R6 son H. En otra realización preferida de la presente invención, es H o un grupo alquilo C1 -C3, más preferiblemente R1 es H, metilo opcionalmente sustituido, etilo o isobutilo. En una realización más preferida, R1 es un grupo metilo sustituido por un cicloalquilo, preferiblemente ciclopropilo, o un arilo, preferiblemente fenilo.
En otra realización preferida de la presente invención, R2 es un grupo alquilo C7-C11 , más preferiblemente R2 es un grupo alquilo C7 o un grupo alquilo C11. En el compuesto de fórmula (I) de la invención, cuando R3 es un grupo halógeno, preferiblemente es Br, Cl o F y más preferiblemente n es 1 .
En el compuesto de fórmula (I) de la invención, cuando R3 es H, preferiblemente n es 4.
Una realización más preferida se refiere al uso de un compuesto que se selecciona del siguiente grupo:
■ 4-Hidroxi-1 -metil-N'-octanoil-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida (3)
■ N'-Dodecanoil-4-hidroxi-1 -metil-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida (4)
N'-Dodecanoil-1 -etil-4-hidroxi-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida (6)
N'-Dodecanoil-4-hidroxi-2-oxo-2-hidroquinolin-3-carbohidrazida (13) ■ 7-Cloro-4-hidroxi-N'-octanoil-2-oxo-2-hidroquinolin-3-carbohidrazida
(14) ■ 7-Cloro-N'-dodecanoil-4-hidroxi-2-oxo-2-hidroquinolin-3- carbohidrazida (15)
■ 6-Fluor-N'-dodecanoil-4-hidroxi-2-oxo-2-hidroquinolin-3- carbohidrazida (17)
■ 4-Hidroxi-1 -(isoprenil)- N'-octanoil-2-oxo- 1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida (42)
N'-Dodecanoil-4-hidroxi-1 -(isoprenil)-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida (43)
N'-Dodecanoil-4-hidroxi-1 -isobutil-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida (44)
1 -(Ciclopropilmetil)- N'-dodecanoil-4-hidroxi-2-oxo-1 ,2- dihidroquinolina-3-carbohidrazida (45)
1 -Bencil-N'-dodecanoil-4-hidroxi-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida (46)
■ 6-Bromo-N'-dodecanoil-4-hidroxi-2-oxo-2-hidroquinolin-3- carbohidrazida (47)
■ 6-Cloro-N'-dodecanoil-4-hidroxi-2-oxo-2-hidroquinolin-3- carbohidrazida (48)
■ 6-Bromo-4-hidroxi-1 -metil-N'-octanoil-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida (49)
■ 6-Bromo-N'-dodecanoil-4-hidroxi-1 -metil-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida (50)
■ 6-Bromo-1 -etil-4-hidroxi-N'-octanoil-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida (51 )
■ 6-Bromo-N'-dodecanoll-1 -etil-4-hidroxi-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida (52)
■ 6-Cloro-4-hidroxi-1 -metil-N'-octanoil-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida (53)
■ 6-Cloro-N'-dodecanoil-4-hidroxi-1 -metil-2-oxo-1 ,2-dihidroquinoline-3- carbohidrazida (54)
■ 6-Cloro-1 -etil-4-hidroxi-N'-octanoil-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida (55) ■ 6-Cloro-N'-dodecanoil-1 -etil-4-hidroxi-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida (56)
■ 7-Cloro-4-hidroxi-1 -metil-N'-octanoil-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida (57)
■ 7-Cloro- N'-dodecanoil-4-hidroxi-1 -metil-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida (58)
■ 7-Cloro-1 -etil-4-hidroxi-N'-octanoil-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida (59)
■ 7-Cloro-N'dodecanoil-1 -etil-4-hidroxi-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida (60)
1 -Bencil-7-cloro-4-hidroxi-N'-octanoil-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida (61 )
1 -Bencil-7-cloro-N'dodecanoil-4-hidroxi-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida (62)
■ N',1 -Dibencil-N'dodecanoil-4-hidroxi-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida (63)
Otra realización preferida se refiere al uso de un compuesto que se selecciona del siguiente grupo:
■ N'-Dodecanoil-1 -etil-4-hidroxi-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida (4)
■ 7-Cloro-N'-dodecanoil-4-hidroxi-2-oxo-2-hidroquinolin-3- carbohidrazida (15)
■ 6-Bromo-N'-dodecanoil-4-hidroxi-2-oxo-2-hidroquinolin-3- carbohidrazida (47)
■ 6-Cloro-N'-dodecanoil-4-hidroxi-2-oxo-2-hidroquinolin-3- carbohidrazida (48)
■ 6-Bromo-N'-dodecanoll-1 -etil-4-hidroxi-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida (52)
■ 6-Cloro-N'-dodecanoil-1 -etil-4-hidroxi-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida (56) ■ 7-Cloro- N'-dodecanoil-4-hidroxi-1 -metil-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida (58)
■ 7-Clorc-N'dodecanoil-1 -etil-4-hidroxi-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida (60) o sus sales, solvatos o estereoisómeros para la fabricación de un medicamento para el tratamiento y/o prevención de una enfermedad que se selecciona entre enfermedades neurodegenerativas, enfermedades inflamatorias, cáncer, diabetes, o para promover procesos regenerativos.
Los compuestos de la presente invención, tanto de fórmula general (I) como de fórmula general (II) son inhibidores alostéricos de GSK-3, por tanto, estos compuestos se utilizan para el tratamiento y/o la prevención de enfermedades en las que está implicada esta enzima. Los inhibidores alostéricos producen una modulación de las enzimas más suave que los inhibidores competitivos, con valores de CI50 del orden micromolar. La enzima GSK-3 está implicada en múltiples rutas de señalización celular, por lo que los inhibidores de esta enzima dirigidos a una ruta específica relacionada con una patología concreta acaban afectando a otras vías, generando así efectos secundarios indeseados. Una modulación alostérica de GSK-3 supone menor impacto sobre las rutas que no están relacionadas con la enfermedad a tratar, por lo que se minimizarían los efectos secundarios en un paciente. Las enfermedades neurodegenerativas se pueden seleccionar de la lista que comprende, pero sin limitarse a enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson, esclerosis lateral amiotrófica, isquemia cerebral, parkinsonismos post-encefalítico, distonias, síndrome de Tourette, patologías de movimientos límbicos periódicos, síndrome de piernas inquietas, trastornos de déficit de atención con hiperactividad, enfermedad de Huntington, parálisis supranuclear progresiva, enfermedad de Pick, demencia fro n tote mpo ral o enfermedades neuromusculares. Las enfermedades inflamatorias se pueden seleccionar, pero sin limitarse, de entre enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa, artritis reumatoide, aterosclerosis, vasculitis o esclerosis múltiple.
El cáncer se puede seleccionar, pero sin limitarse, de entre glioblastoma, leucemias, linfomas, cáncer de pulmón, de mama, de próstata o de colon.
La diabetes puede ser diabetes tipo II insulino no dependiente.
En el proceso regenerativo a promover mediante el uso de compuestos de fórmula (I), preferiblemente está implicada la diferenciación de las células madres del sistema nervioso, del sistema hematopoyético, del sistema óseo o del miocardio.
En otro aspecto, la presente invención se refiere a un compuesto de fórmula
Figure imgf000010_0001
(II)
o sus sales, solvatos o estereoisómeros,
donde Ri se selecciona entre H o un grupo alquilo CrC5 opcionalmente sustituido o un grupo alquenilo C2-C5 opcionalmente sustituido, F¾ es un grupo alquilo C5-C15 opcionalmente sustituido, R3 es un halógeno, n es un valor entre 1 y 4, R4, R5 y R6 se seleccionan independientemente entre H o un grupo alquilo C1-C5 opcionalmente sustituido. En una realización preferida de los compuestos la presente invención, R4, R5
Figure imgf000011_0001
En otra realización preferida de los compuestos la presente invención, Ri es H o un grupo alquilo C1-C3, preferiblemente metilo opcionalmente sustituido, etilo o isobutilo.
En una realización más preferida, R1 es un grupo metilo sustituido por un cicloalquilo, preferiblemente ciclopropilo, o un arilo, preferiblemente fenilo.
En otra realización más preferida, R1 es H.
En otra realización preferida de los compuestos la presente invención, R2 es un grupo alquilo C7- Cu, más preferiblemente R2 es un grupo alquilo C7 o un grupo alquilo Cu .
En otra realización preferida R3 es Br, Cl o F y preferiblemente n es 1 .
En otra realización preferida R3 es H y preferiblemente n es 1 .
Una realización más preferida de los compuestos de fórmula (II), comprende los siguientes compuestos:
■ 7-Cloro-4-hidroxi-N'-octanoil-2-oxo-2-hidroquinolin-3-carbohidrazida (14)
■ 7-Cloro-N'-dodecanoil-4-hidroxi-2-oxo-2-hidroquinolin-3- carbohidrazida (15)
■ 6-Fluor-N'-dodecanoil-4-hidroxi-2-oxo-2-hidroquinolin-3- carbohidrazida (17)
■ 4-Hidroxi-1 (isoprenil)- N'-octanoil-2-oxo- 1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida (42)
N'-Dodecanoil-4-hidroxi-1 -(isoprenil)-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida (43) N'-Dodecanoil-4-hidroxi-1 -isobutil-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida (44)
1 -(Ciclopropilmetil)-N'-dodecanoil-4-hidroxi-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolina- 3-carbohidrazida (45)
■ 1 -Bencil-N'-dodecanoil-4-hidroxi-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida (46)
■ 6-Bromo-N'-dodecanoil-4-hidroxi-2-oxo-2-hidroquinolin-3- carbohidrazida (47)
■ 6-Cloro-N'-dodecanoil-4-hidroxi-2-oxo-2-hidroquinolin-3- carbohidrazida (48)
■ 6-Bromo-4-hidroxi-1 -metil-N'-octanoil-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida (49)
■ 6-Bromo-N'-dodecanoil-4-hidroxi-1 -metil-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida (50)
■ 6-Bromo-1 -etil-4-hidroxi-N'-octanoil-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida (51 )
■ 6-Bromo-N'-dodecanoll-1 -etil-4-hidroxi-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida (52)
■ 6-Cloro-4-hidroxi-1 -metil-N'-octanoil-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida (53)
■ 6-Cloro-N'-dodecanoil-4-hidroxi-1 -metil-2-oxo-1 ,2-dihidroquinoline-3- carbohidrazida (54)
■ 6-Cloro-1 -etil-4-hidroxi-N'-octanoil-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida (55)
■ 6-Cloro-N'-dodecanoil-1 -etil-4-hidroxi-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida (56)
■ 7-Cloro-4-hidroxi-1 -metil-N'-octanoil-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida (57)
■ 7-Cloro- N'-dodecanoil-4-hidroxi-1 -metil-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida (58)
■ 7-Cloro-1 -etil-4-hidroxi-N'-octanoil-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida (59) ■ 7-Cloro-N'dodecanoil-1 -etil-4-hidroxi-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida (60)
1 -Bencil-7-cloro-4-hidroxi-N'-octanoil-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida (61 )
■ 1 -Bencil-7-cloro-N'dodecanoil-4-hidroxi-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida (62)
N',1 -Dibencil-N'dodecanoil-4-hidroxi-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida (63) Otra realización preferida se refiere a un compuesto que se selecciona del siguiente grupo:
■ N'-Dodecanoil-1 -etil-4-hidroxi-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida (6)
■ 7-Cloro-N'-dodecanoil-4-hidroxi-2-oxo-2-hidroquinolin-3- carbohidrazida (15)
■ 6-Bromo-N'-dodecanoil-4-hidroxi-2-oxo-2-hidroquinolin-3- carbohidrazida (47)
■ 6-Cloro-N'-dodecanoil-4-hidroxi-2-oxo-2-hidroquinolin-3- carbohidrazida (48)
■ 6-Bromo-N'-dodecanoil-1 -etil-4-hidroxi-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida (52)
■ 6-cloro-N'-dodecanoil-1 -etil-4-hidroxi-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida (56)
■ 7-Cloro-N'-dodecanoil-4-hidroxi-1 -metil-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida (58)
■ 7-Cloro-N'dodecanoil-1 -etil-4-hidroxi-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida (60)
En un tercer aspecto, la presente invención se refiere al uso de un compuesto de fórmula (II) según descrito anteriormente para la fabricación de un medicamento. En un cuarto aspecto, la presente invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula (II) según descrito anteriormente, junto con un vehículo farmacéuticamente adecuado. En una realización preferida, esta composición además comprende otro principio activo conocido y usado para el tratamiento y/o prevención de alguna de las enfermedades arriba mencionadas.
Los compuestos de la presente invención representados por la fórmula (I) o por la fórmula (II), y más concretamente, los compuestos específicos pertenecientes a esta fórmula general anteriormente descrita pueden incluir isómeros, dependiendo de la presencia de enlaces múltiples (por ejemplo, Z, E), incluyendo isómeros ópticos o enantiómeros, dependiendo de la presencia de centros quirales. Los isómeros, enantiómeros o diastereoisómeros individuales y las mezclas de los mismos caen dentro del alcance de la presente invención. Los enantiómeros o diastereoisómeros individuales, así como sus mezclas, pueden separarse mediante técnicas convencionales.
Los compuestos de la invención pueden estar en forma cristalina como compuestos libres o como solvatos y se pretende que ambas formas estén dentro del alcance de la presente invención. En este sentido, el término "solvato", tal como aquí se utiliza, incluye tanto solvatos farmacéuticamente aceptables, es decir, solvatos del compuesto de fórmula (I) que pueden ser utilizados en la elaboración de un medicamento, como solvatos farmacéuticamente no aceptables, los cuales pueden ser útiles en la preparación de solvatos o sales farmacéuticamente aceptables. La naturaleza del solvato farmacéuticamente aceptable no es crítica siempre y cuando sea farmacéuticamente aceptable. En una realización particular, el solvato es un hidrato. Los solvatos pueden obtenerse por métodos convencionales de solvatación bien conocidos por los técnicos en la materia. Los compuestos de fórmula (I) o de fórmula (II) para uso terapéutico se preparan en forma sólida o suspensión acuosa, en un diluyente farmacéuticamente aceptable. Estos preparados pueden ser administrados por cualquier vía de administración apropiada, para lo cual dicho preparado se formulará en la forma farmacéutica adecuada a la vía de administración elegida. En una realización particular, la administración del compuesto de fórmula (I) la proporcionado por esta invención se efectúa por vía oral, tópica, rectal o parenteral (incluyendo subcutánea, intraperitoneal, intradérmica, intramuscular, intravenosa, etc.). Una revisión de las distintas formas farmacéuticas de administración de medicamentos y de los excipientes necesarios para la obtención de las mismas puede encontrarse, por ejemplo, en el "Tratado de Farmacia Galénica", C. Faulí i Trillo, 1993, Luzán 5, S.A. Ediciones, Madrid, u en otros habituales o similares de la Farmacopeas Española y en Estados Unidos.
Los compuestos descritos en la presente invención, sus sales farmacéuticamente aceptables, solvatos así como las composiciones farmacéuticas que los contienen pueden ser utilizados junto con otros fármacos adicionales para proporcionar una terapia de combinación. Dichos fármacos adicionales pueden formar parte de la misma composición farmacéutica o, alternativamente, pueden ser proporcionados en forma de una composición separada para su administración simultánea o no a la de la composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula (I) o de fórmula (II), o una sal, estereoisómero o solvato farmacéuticamente aceptables del mismo.
A menos que se indique lo contrario, los compuestos de la invención también incluyen compuestos que difieren sólo en la presencia de uno o más átomos isotópicamente enriquecidos. Por ejemplo, compuestos que tienen dicha estructura, a excepción de la sustitución de un hidrógeno por un deuterio o por tritio, o la sustitución de un carbono por un carbono enriquecido en 13C o 14C o un nitrógeno enriquecido en 15N, están dentro del alcance de esta invención.
En un último aspecto, la presente invención se refiere a un procedimiento de obtención de un compuesto de fórmula (II) que comprende las siguientes etapas:
1 ) Reacción de una resina con un compuesto de fórmula (III)
Figure imgf000016_0001
(III)
donde R7 y R8 son grupos alquilo CrC5 iguales o diferentes.
2) Reacción del producto obtenido en la etapa anterior con un producto de fórmula (IV):
Figure imgf000016_0002
(IV)
donde R3 se define como anteriormente.
3) Reacción del producto obtenido en la etapa anterior
compuesto de fórmula (V):
Figure imgf000016_0003
(V)
donde Rg es un grupo alquilo C1-C5
4) Ciclación del producto obtenido en la etapa anterior. 5) Reacción del producto obtenido en la etapa anterior compuesto de fórmula (VI):
Figure imgf000017_0001
(VI)
donde R2 se define como anteriormente.
En una realización preferida del procedimiento de la invención, R7 y Rs son, de manera independiente un grupo alquilo C1-C3, y más preferiblemente son un grupo metilo.
En una realización preferida del procedimiento de la invención, Rg un grupo alquilo C1-C3,, y más preferiblemente es un grupo etilo.
A lo largo de la descripción y las reivindicaciones la palabra "comprende" y sus variantes no pretenden excluir otras características técnicas, aditivos, componentes o pasos. Para los expertos en la materia, otros objetos, ventajas y características de la invención se desprenderán en parte de la descripción y en parte de la práctica de la invención. Los siguientes ejemplos y figuras se proporcionan a modo de ilustración, y no se pretende que sean limitativos de la presente invención.
FIGURAS
Figura 1. Muestra el gráfico de dobles de recíprocos. Las concentraciones de ATP se variaron de 1 a 50 μΜ, mientras que la concentración de péptido GS-2 se mantuvo constante a 12,5 μΜ. Las concentraciones utilizadas del inhibidor (compuesto 6) se muestran en el gráfico. Figura 2. Muestra el gráfico de dobles de recíprocos. Las concentraciones de GS-2 se variaron de 15,5 a 100 μΜ, mientras que la concentración de ATP se mantuvo constante a 1 μΜ. Las concentraciones utilizadas del inhibidor (compuesto 6) se muestran en el gráfico.
Figura 3. Muestra la disminución de la actividad inflamatoria en cultivos celulares en presencia de concentraciones variables del compuesto 6.
EJEMPLOS
A continuación se ilustrará la invención mediante unos ensayos realizados por los inventores, que ponen de manifiesto la especificidad y efectividad de los compuestos de la invención.
Los compuestos 1 -17 fueron sintetizados de acuerdo con las rutas sintéticas que se recogen en los esquemas 1 y 2.
Procedimiento general de síntesis de los compuestos 1 y 2.
Figure imgf000018_0001
R^Me Comp. 1 ^2 =-^% Comp. 3
Figure imgf000018_0002
Comp. 4 R1 =Et Comp. 2 Comp. 6
R1 =Et Comp. 2
Esquema 1
Se disuelve el anhídrido correspondiente (1 equiv) en 40ml de DMF y se añade el hidruro sódico (1 ,2 equiv) y el malonato de dietilo (1 ,2 equiv). A continuación, se calienta a 85°C durante 6h. Tras este tiempo se deja enfriar la mezcla y se acidifica con una disolución de HCI 1 M. Al llegar a medio ácido precipita un sólido blanco que tras ser filtrado resulta ser el compuesto final puro. 4-Hidroxi-1 -metil-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolina-3-carboxilato de etilo (1 ). Rendimiento 56%. 1 H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 8,12 (d, J = 8,0 Hz, 1 H), 7,64 (t, J = 7,9 Hz, 1 H), 7,36 - 7,1 1 (m, 3H), 4,48 (q, J = 7,1 Hz, 2H), 3,61 (s, 3H), 1 ,99 (sa, 1 H), 1 ,46 (t, J = 7,1 Hz, 3H),13C NMR (75 MHz, CDCI3) δ 172,8, 171 ,8, 159,7, 141 ,4, 134,5, 125,9, 122,0, 1 15,0, 1 14,3, 98,1 , 62,4, 29,35, 14,44. P.f.= 95-96°C. HPLC: Pureza >99%. MS (ES): m/z = 248, 201 , 133. Análisis Elemental (C13H13NO4) Calculado: C 63,15%; H 5,30%; N 5,67%. Hallado: C 63,31 %; H 5,08%; N 5,77%.
1 -Etil-4-hidroxi-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolina-3-carboxilato de etilo (2). Rendimiento 56%. 1 H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 14,22 (s, 1 H), 8,20 (dd, J = 8,1 , 1 ,5 Hz, 1 H), 7,68 (ddd, J = 8,7, 7,2, 1 ,6 Hz, 1 H), 7,39 - 7,16 (m, 2H), 4,51 (q, J = 7,1 Hz, 2H), 4,31 (q, J = 7,1 Hz, 2H), 1 ,49 (t, J = 7,1 Hz, 3H), 1 ,34 (t, J = 7,1 Hz, 3H). 13C NMR (75 MHz, CDCI3) δ 172,5, 171 ,4, 159,0, 140,1 , 134,1 , 125,7, 121 ,5, 1 14,9, 1 13,8, 97,7, 62,1 , 37,0, 14,0, 12,5. P.f.= 68-69°C. HPLC: Pureza 97%. MS (ES): m/z = 263, 217, 187. Análisis elemental (Ci4Hi5N04) Calculado: C 64,36%; H 5,79%; N 5,36%. Hallado: C 64,72%; H 5,63%; N 5,05%.
Procedimiento general de síntesis de los compuestos 3-6.
Se ponen en un matraz 1 equivalente de 1 ó 2 según se indica en cada caso, la hidrazida correspondiente (1 equiv) y 0,2 mi de DMF y se calienta a 160°C durante 3 min. Se deja enfriar, se añade MeOH con mucho cuidado, precipitando un sólido blanco que se filtra y purifica con lavados de MeOH. 4-Hidroxi-1 -metil-N'-octanoil-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3-carbohidrazida (3). Reactivos: Compuesto 1 y octanoilhidrazida. Rendimiento 99%.1H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 15,49 (s, 1H), 12,46 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 8,28 (d, J = 5,7 Hz, 1H), 8,18 (dd, J = 8,1, 1,5 Hz, 1H), 7,71 (t, J = 7,9 Hz, 1H), 7,44 - 7,27 (m, 2H), 3,69 (s, 3H), 2,44 - 2,20 (t, J = 7,6 Hz, 2H), 1,90 - 1,56 (m, 2H), 1,45 - 1,18 (m, 8H), 0,88 (t, J = 6,8 Hz, 3H).13C NMR (75 MHz, CDCI3) δ 172,4, 171,4, 166,9, 162,4, 140,2, 134,8, 126,2, 129,9, 115,8, 115,1, 96,1, 34,4, 31,8, 31,3, 29,6, 29,4, 25,4, 22,7, 14,1. P.f.= 157-158°C. HPLC: Pureza >99%. MS (ES): m/z = 360, 234. Análisis Elemental (C19H25N3O4) Calculado: C 63,49%; H 7,01%; N 11,69%. Hallado: C 63,76%; H 6,94%; N 11,65%.
N'-Dodecanoil-4-hidroxi-1-metil-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3-carbohidrazida (4). Reactivos: Compuesto 1 y dodecanoilhidrazida.
Rendimiento 93%.1H NMR (300 MHz, DMSO) δ 15,50 (s, 1H), 12,47 (d, J =
5.6 Hz, 1H), 8,20 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 8,16 (d, J = 5,9 Hz, 1H), 7,72 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 7,42 - 7,29 (m, 1H), 3,70 (s, 3H), 2,32 (t, J = 7,6 Hz, 2H), 1,77 -
1,66 (m, 2H), 1,26 (s, 16H), 0,88 (t, J = 6,6 Hz, 3H). 13C NMR (75 MHz, CDCI3) δ 171,1, 169,0, 166,6, 161,9, 140,1, 134,1, 125,4, 122,5, 115,6, 114,3, 96,2, 34,4, 31,8, 29,5, 29,4, 29,3, 29,1, 25,4, 22,6, 14,0. P.f.= 219- 220°C. HPLC: Pureza >99%. MS (ES): m/z = 416, 234. Análisis Elemental (C23H33N3O4) Calculado: C 66,48%; H 8,00%; N 10,11%. Hallado: C 64,76%; H 7,79%; N 10,27%.
N'-Dodecanoil-1 -etil-4-hidroxi-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3-carbohidrazida (6). Reactivos: Compuesto 2 y dodecanoilhidrazida.
Rendimiento 91%.1H NMR (300 MHz, DMSO) δ 16,22 (s, 1H), 12,05 (d, J =
3.7 Hz, 1H), 10,80 (d, J = 3,7 Hz, 1H), 8,09 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,82 (t, J = 7,1 Hz, 1H), 7,68 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 7,38 (t, J = 7,4 Hz, 1H), 4,31 (d, J = 6,7 Hz, 2H), 2,24 (m, 2H), 1,55 (m, 2H), 1,23 (m, 19H), 0,84 (m, 3H).13C NMR (75 MHz, DMSO) δ 171,3, 170,3, 167,9, 161,5, 139,5, 135,2, 125,3, 123,2, 115,8, 96,4, 37,6, 33,7, 31,9, 29,6, 29,5, 29,3, 29,2, 25,6, 22,7, 14,5, 13,3. P.f.= 133-134°C. HPLC: Pureza >99%. MS (ES): m/z = 430, 248. Análisis Elemental (C24H35N3O4) Calculado: C 67,1 1 %; H 8,21 %; N 9,78%. Hallado: C 67,40%; H 8,31 %; N 9,88%.
Procedimiento general de síntesis de los compuestos 12-17
Figure imgf000021_0001
Figure imgf000021_0002
R3=7-CI, f f 0 Comp.15
Figure imgf000021_0003
Esquema 2
La resina de Merrifield (7) (1 equiv) se añade sobre dimetilacetamida seca y la mezcla se burbujea con argón. Se añade el 4-hidroxi-2,6- dimetoxibenzaldehído (2,13 equiv) disuelto en dimetilacetamida y el carbonato de cesio (2,56 equiv). Se cierra el vial herméticamente y se deja reaccionar a 85°C durante 36h. Tras lavar convenientemente la resina 8 se añade diclorometano seco, el derivado del benzoato de metilo correspondiente (3 equiv) y triacetoxiborohidruro sódico (3 equiv). La mezcla se deja agitando a temperatura ambiente durante 16h. Tras los lavados correspondientes se añade diclorometano seco a la resina 9, el monomalonato de etilo (3 equiv), oxicloruro de fosforilo (3 equiv) y piridina (6 equiv) y se deja agitando a temperatura ambiente durante 2h. Tras los lavados correspondientes se añade THF seco sobre la resina 10 y una disolución 0,5 M de KHMDS en tolueno (10 equiv) y se deja reaccionar durante 12h a temperatura ambiente. Tras los lavados correspondientes se lleva a cabo el desanclaje de la resina 1 1 empleando una disolución de TFA/CH2CI2 (50:50) y agitando durante 1 h a temperatura ambiente. La mezcla se filtra y el filtrado se lava con agua. La fase orgánica se seca con MgS04 y el disolvente es evaporado a presión reducida. El producto obtenido se hace reaccionar con la hidrazida correspondiente (1 equiv) en DMF y se calienta a 160°C durante 3 min. Se deja enfriar, se añade MeOH y precipita un sólido blanco que se filtra, purificándose a continuación con lavados de MeOH.
N'-Dodecanoil-4-hidroxi-2-oxo-2-hidroquinolin-3-carbohidrazida (13).
Reactivos: antranilato de metilo y dodecanoilhidrazida.
Rendimiento 98%. 1 H NMR (300 MHz, DMSO) δ 16,1 1 (s, 1 H), 1 1 ,98 (s, 1 H), 1 1 ,92 (s, 1 H), 10,63 (s, 1 H), 7,98 (d, J = 8,1 Hz, 1 H), 7,71 (t, J = 7,7 Hz, 1 H), 7,39 (d, J = 8,3 Hz, 1 H), 7,31 (t, J = 7,6 Hz, 1 H), 2,23 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 1 ,57 (d, J = 6,6 Hz, 2H), 1 ,25 (s, 16H), 0,85 (t, J = 6,2 Hz, 3H). 13C NMR (75 MHz, DMSO) δ 172,2, 170,0, 167,8, 162,3, 139,1 , 134,5, 124,3, 122,9, 1 16,3, 1 14,5, 99,4, 33,2, 31 ,6, 31 ,0, 29,3, 29,0, 28,8, 25,3, 22,4, 14,3. P.f.= 256- 257°C. HPLC: Pureza >99%. MS (ES): m/z = 402, 220. Análisis Elemental (C22H3iN3O4) Calculado: C 65,81 %; H 7,78%; N 10,47%. Hallado: C 66,02%; H 7,83%; N 10,74%.
7-Cloro-4-hidroxi-N'-octanoil-2-oxo-2-hidroquinolin-3-carbohidrazida (14). Reactivos: 2-amino-4-clorobenzoato de metilo y octanoilhidrazida.
Rendimiento 86%. 1H NMR (300 MHz, DMSO) δ 16,1 1 (sa, 1 H), 12,09 (s, 1 H), 1 1 ,79 (s, 1 H), 10,71 (d, J = 3,1 Hz, 1 H), 7,94 (d, J = 5,0 Hz, 1 H), 7,48 - 7,16 (m, 2H), 2,87 (s, 2H), 2,71 (s, 2H), 2,49 (s, 2H), 2,21 (t, J = 7,3 Hz, 2H), 1 ,61 - 1 ,42 (m, 2H), 1 ,25 (s, 2H), 0,85 (t, J = 6,6 Hz, 3H). P.f.= 290-291 °C. HPLC: Pureza 95%. MS (ES): m/z = 380, 254, 222. Análisis Elemental (C18H22CIN3O4) Calculado: C 56,92%; H 5,84%; N 1 1 ,06%. Hallado: C 56,84%; H 5,73%; N 1 1 ,00%.
7-Cloro-N'-dodecanoil-4-hidroxi-2-oxo-2-hidroquinolin-3-carbohidrazida (15).
Reactivos: 2-amino-4-clorobenzoato de metilo y dodecanoilhidrazida.
Rendimiento última reacción 92%. 1H NMR (300 MHz, DMSO) δ 16,21 (s, 1 H), 12,10 (s, 1 H), 1 1 ,80 (s, 1 H), 10,71 (s, 1 H), 7,98 (d, J = 8,6 Hz, 1 H), 7,42
(d, J = 1 ,8 Hz, 1 H), 7,31 (dd, J = 8,7, 2,0 Hz, 1 H), 2,87 (s, 2H), 2,71 (s, 2H),
2,20 (t, J = 7,4 Hz, 2H), 1 ,53 (s, 2H), 1 ,23 (s, 12H), 0,82 (d, J = 6,7 Hz, 3H).
P.f.= 291 -292°C. HPLC: Pureza 97%. MS (ES): m/z = 436, 254, 222. Análisis
Elemental (C22H30CIN3O4) Calculado: C 60,42%; H 6,94%; N 9,64%. Hallado: C 60,42%; H 6,71 %; N 9,58%.
6-Fluor-N'-dodecanoil-4-hidroxi-2-oxo-2-hidroquinolin-3-carbohidrazida (17). Reactivos: 2-amino-5-fluorbenzoato de metilo y dodecanoilhidrazida.
Rendimiento 93%. 1 H NMR (400 MHz, DMSO) δ 1 1 ,86 (s, 1 H), 10,42 (s, 1 H), 7,64 (d, J = 6,9 Hz, 1 H), 7,56 (td, J = 8,7, 2,9 Hz, 1 H), 7,42 (dd, J = 9,2, 4,5 Hz, 1 H), 2,47 (m, 2H), 2,21 (t, J = 7,3 Hz, 2H), 1 ,66 - 1 ,42 (m, 2H), 1 ,24 (s, 14H), 0,83 (t, J = 6,9 Hz, 3H). P.f.= 178-179°C. HPLC: Pureza 95%. MS (ES): m/z = 420, 238, 206. Análisis Elemental (C22H30FN3O4) Calculado: C 62,99%; H 7,21 %; N 10,02%. Hallado: C 63,20%; H 7,42%; N 9,87%.
Procedimiento general de síntesis de los compuestos 18 - 28
Se disuelve el anhídrido isatoico correspondiente (1 equiv) en 15 mL de DMF anhidra y a continuación se añade el hidruro sódico (1 ,5 equiv) poco a poco a 0 °C. Después de 30 minutos, se añade el derivado halogenado correspondiente (1 .5 - 3 equiv.) y se deja agitar la reacción a temperatura ambiente durante toda la noche. A continuación se añaden diclorometano (15 mL) y agua (15 mL). Se separa la fase orgánica, y la fase acuosa se vuelve a extraer con diclorometano (15 mL). Se juntan las fases orgánicas y se lavan con una disolución saturada de NaCI (15 mL). La fase orgánica se seca sobre sulfato magnésico anhidro, se filtra y evapora el disolvente a vacío. El sólido resultante se recristaliza en diclorometano / hexano dando lugar al producto final deseado.
Figure imgf000024_0001
R3= H Ri = isoprenilo Comp 18
R3= H Ri = isobutilo Comp 19
R3= H Ri = CH2-ciclopropilo Comp 20
R3= H Ri = CH2-Ph Comp 21
R3= 6-Br Ri= Me Comp 22
R3= 6-Br Ri= Et Comp 23
R3= 6-CI Ri= Me Comp 24
R3= 6-CI Ri= Et Comp 25
R3= 7-CI Ri= Me Comp 26
R3= 7-CI Ri= Et Comp 27
R3= 7-CI Ri= CH2-Ph Comp 28
Esquema 3
Anhídrido de /V-isoprenil isatoico (18).
Reactivos: Anhídrido isatoico (6.13 mmoles, 1 g); Hidruro sódico (9.2 mmoles, 0.23 g); Bromuro de isoprenilo (12 mmoles, 1 .9 g). Rendimiento: 0.95 g (67 %), sólido blanco, p.f. = 1 19-120 °C
1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 8.01 (d, J = 1 .6, 7.8 Hz, 1 H), 7.85 (t, J = 1 .6, 7.3, 8.8 Hz, 1 H), 7.32 - 7.26 (m, 2H), 5.19 (t, J = 1 .4, 6.4 Hz, 1 H), 4.64 (d, J = 6.2 Hz, 2H), 1 .81 (s, J = 1 .4 Hz, 3H), 1 .70 (s, J = 1 .4 Hz, 3H);13C NMR (75 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 159.9, 147.6, 141 .3, 137.1 , 136.4, 129.6, 123.6, 1 18.2, 1 1 1 .9, 42.7, 25.4, 18.1 . HPLC: Pureza >99%, t.r.= 8.9 min. ESI MS (m/z): 232 [M + H]+. Anhídrido de /V-isobutil isatoico (19).
Reactivos: Anhídrido isatoico (6.13 mmoles, 1 g); Hidruro sódico (9.2 mmoles, 0.22 g); yoduro de isobutilo (18 mmoles, 3.4 g). Rendimiento: 0.6 g (46 %), sólido blanco, p.f. = 85-86 °C
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 8.10 (dd, J = 1.7, 7.9 Hz, 1H), 7.68 (ddd, J= 1.6, 7.3, 8.4 Hz, 1H), 7.25 - 7.18 (m, 1H), 7.10 (d, J = 8.5 Hz, 1H) 3.93 (d, J= 7.6 Hz, 2H), 2.25-2.10 (m, 1H), 1.03 (d, J= 6.7 Hz, 6H); 13C NMR (75 MHz, CDCI3) δ (ppm): 162.4, 158.7, 148.3, 141.8, 137.2, 131.1, 124.0, 114.4, 112.0, 51.7, 26.9, 20.1, 19.9. HPLC: Pureza >99%, t.r.= 8.6 min. ESI MS (m/z): 220 [M + H]+.
Anhídrido de /V-ciclopropil metil isatoico (20).
Reactivos: Anhídrido isatoico (4.9 mmoles, 0.8 g); Hidruro sódico (5.9 mmoles, 0.14 g); Bromuro de metil ciclopropilo (5.9 mmoles, 0.8 g). Rendimiento: 0.53 g (50 %), sólido marrón claro, p.f. =122-123 °C
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 8.11 (dd, J = 1.6, 7.7 Hz, 1 H), 7.75- 7.67 (m, 1H), 7.27 - 7.20 (m, 2H), 3.95 (d, J = 7.0 Hz, 2H), 1.25-1.10 (m, 1H), 0.54-0.40 (m, 4H);13C NMR (75 MHz, CDCI3) δ (ppm): 158.7, 148.4, 141.7, 137.3, 131.0, 124.0, 114.3, 111.9, 49.2, 9.3, 4.1. HPLC: Pureza >97%, t.r.= 8.2 min. ESI MS (m/z): 218 [M + H]+.
Anhídrido de /V-bencil isatoico (21).
Reactivos: Anhídrido isatoico (6.13 mmoles, 1 g); Hidruro sódico (9.2 mmoles, 0.22 g); Bromuro de bencilo (12.3 mmoles, 1.4 g). Rendimiento: 0.2 g (15 %), sólido blanco, p.f. = 139-140 °C
1H NMR (300 MHz, CDCI3) δ (ppm): 8.10 (dd, J = 1.6, 7.8 Hz, 1H), 7.56 (td, J = 1.6, 7.3, 8.7 Hz, 1H), 7.35-7.10 (m, 6H), 7.05 (dd, J= 8.5 Hz, 1H), 5.24 (s, 2H); 13C NMR (75 MHz, CDCI3) δ (ppm): 157.3, 147.4, 140.3, 136.2, 133.4, 129.8, 128.1, 127.1, 125.7, 123.1, 113.7, 110.8, 47.5. HPLC: Pureza >99%, t.r.= 8.7 min. ESI MS (m/z): 254 [M + H]+. Anhídrido de 6-bromo /V-metil isatoico (22).
Reactivos: Anhídrido de 5-bromo isatoico (4.13 mmoles, 1 g); Hidruro sódico (6.2 mmoles, 0.15 g); Yoduro de metilo (6.2 mmoles, 0.9 g). Rendimiento: 0.69 g (66 %), sólido blanco, p.f. = 201 -202 °C
1 H NMR (300 MHz, CDCI3) δ (ppm): 8.06 (d, J = 2.5 Hz, 1 H), 7.64 (dd, J = 2.5, 9.0 Hz, 1 H), 7.08 (d, J = 9.0 Hz, 1 H), 2.92 (s, 3H); 13C NMR (75 MHz, CDCI3) δ (ppm): 157.2, 147.4, 141 .0, 140.0, 133.0, 1 16.9, 1 15.6, 1 13.2, 32.0. HPLC: Pureza >98%, t.r.= 7.7 min. ESI MS (m/z): 256 [M + H]+. Anhídrido de 6-bromo /V-etil isatoico (23).
Reactivos: Anhídrido de 5-bromo isatoico (8.26 mmoles, 2 g); Hidruro sódico (12.5 mmoles, 0.3 g); Yoduro de etilo (12.5 mmoles, 1 .9 g). Rendimiento: 1 .4 g (63 %), sólido blanco, p.f. =177-178 °C
1 H NMR (300 MHz, CDCI3) δ (ppm): 8.21 (d, J = 2.4 Hz, 1 H), 7.78 (dd, J = 2.4, 8.9 Hz, 1 H), 7.02 (d, J = 8.9 Hz, 1 H), 4.05 (c, J = 7.2 Hz, 2H), 1 .31 (t, J = 7.2 Hz, 3H); 13C NMR (75 MHz, CDCI3) δ (ppm): 157.3, 146.9, 140.0, 139.0, 133.2, 1 16.6, 1 15.5, 1 13.4, 40.3, 12.0. HPLC: Pureza >97%, t.r.= 8.4 min. ESI MS (m/z): 270 [M + H]+. Anhídrido de 6-cloro /V-metil isatoico (24).
Reactivos: Anhídrido de 5-cloro isatoico (3.97 mmoles, 0.78 g); Hidruro sódico (5.95 mmoles, 0.14 g); Yoduro de metilo (1 1 .4 mmoles, 1 .6 g). Rendimiento: 0.5 g (60 %), sólido blanco, p.f. = 203-204 °C
1 H NMR (300 MHz, CDCI3) δ (ppm): 8.05 (d, J = 2.5 Hz, 1 H), 7.66 (dd, J = 2.5, 8.9 Hz, 1 H), 7.09 (d, J = 8.9 Hz, 1 H), 3.52 (s, 3H); 13C NMR (75 MHz, CDCI3) δ (ppm): 156.3, 146.4, 139.5, 136.2, 129.0, 1 14.4, 1 1 1 .9. HPLC: Pureza >98%, t.r.= 7.3 min.
Anhídrido de 6-cloro /V-etil isatoico (25).
Reactivos: Anhídrido de 5-cloro isatoico (2.53 mmoles, 0.5 g); Hidruro sódico (3.8 mmoles, 0.09 g); Yoduro de etilo (3.8 mmoles, 0.6 g). Rendimiento: 0.4 g (70 %), sólido blanco, p.f. =150-151 °C 1 H NMR (300 MHz, CDCI3) δ (ppm): 8.07 (d, J = 2.5 Hz, 1 H), 7.64 (dd, J = 2.5, 8.9 Hz, 1 H), 7.08 (d, J = 8.9 Hz, 1 H), 4.06 (c, J = 7.2 Hz, 2H), 1 .31 (t, J = 7.2 Hz, 3H); 13C NMR (75 MHz, CDCI3) δ (ppm): 171 .5, 169.5, 164.1 , 157.8, 137.8, 133.3, 126.4, 124.2, 1 15.1 , 1 14.5, 97.5, 36.4, 13.2. HPLC: Pureza >99%, t.r.= 8.3 min. ESI MS (m/z): 226 [M + H]+.
Anhídrido de 7-cloro /V-metil isatoico (26).
Reactivos: Anhídrido de 4-cloro isatoico (4.55 mmoles, 0.9 g); Hidruro sódico (5.46 mmoles, 0.9 g); Yoduro de metilo (13.7 mmoles, 1 .9 g). Rendimiento: 0.4 g (42 %), sólido amarillo, p.f. =215-216 °C
1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ (ppm):7.99 (d, J = 8.4 Hz, 1 H), 7.59 (d, J = 1 .8 Hz, 1 H), 7.39 (dd, J = 1 .8, 8.4 Hz, 1 H), 3.46 (s, 3H); 13C NMR (75 MHz, DMSO-de) δ (ppm): 158.6, 147.9, 143.9, 142.3, 131 .4, 124.1 , 1 15.4, 1 1 1 .1 , 32.4. HPLC: Pureza >96%, t.r.= 7.3 min. ESI MS (m/z): 212 [M + H]+.
Anhídrido de 7-cloro N-et\\ isatoico (27).
Reactivos: Anhídrido de 4-cloro isatoico (4.55 mmoles, 0.9 g); Hidruro sódico (5 mmoles, 0.12 g); Yoduro de etilo (8.3 mmoles, 1 .3 g). Rendimiento: 0.65 g (63 %), sólido blanco, p.f. = 156-157 °C
1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 8.00 (d, J = 8.4 Hz, 1 H), 7.64 (d, J = 1 .7 Hz, 1 H), 7.37 (dd, J = 1 .7, 8.4 Hz, 1 H), 4.06 (c, J = 7.0 Hz, 2H), 1 .20 (t, J = 7.0 Hz, 3H); 13C NMR (75 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 158.8, 147.6, 142.8, 142.5, 131 .8, 124.1 , 1 14.9, 1 1 1 .4, 40.2, 12.3. HPLC: Pureza >97%, t.r.= 8.1 min. ESI MS (m/z): 226 [M + H]+.
Anhídrido de 7-cloro /V-bencil isatoico (28).
Reactivos: Anhídrido de 4-cloro isatoico (5 mmoles, 1 .0 g); Hidruro sódico (7.83 mmoles, 0.19 g); Bromuro de bencilo (10.1 mmoles, 1 .7 g). Rendimiento: 0.9 g (38 %), sólido blanco, p.f. = 207-208 °C.
1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 8.03 (d, J = 8.3 Hz, 1 H), 7.42 (m, 2H), 7.37 (m, 1 H), 7.35 (m, 3H), 7.29 (m, 1 H), 5.31 (s, 2H); 13C NMR (75 MHz, DMSO-de) δ (ppm): 158.2, 148.1 , 142.5, 141 .5, 135.0, 131 .2,128.7,127.4, 126.6, 123.8, 1 14.9, 1 1 1 .3, 47.6. HPLC: Pureza >99%, t.r.= 9.4 min. ESI MS (m/z): 288 [M + H]+.
Procedimiento general de síntesis de los compuestos 29 - 41 .
El malonato de dietilo se añade gota a gota sobre una disolución de hidruro sódico en DMF anhidra (15 mL) bajo atmósfera de nitrógeno. La mezcla se deja agitando durante 30 minutos a temperatura ambiente. A continuación, la reacción se añade sobre un matraz que contiene el derivado de anhídrido isatoico correspondiente disuelto en DMF anhidra (15 mL) bajo atmósfera de Nitrógeno. La mezcla se calienta a 50 °C durante 5 horas. A la mezcla se añade diclorometano (30 mL) y agua (50 mL) y una disolución de HCI (1 N) hasta pH=5. Se separa la fase orgánica, y la fase acuosa se vuelve a extraer con diclorometano (30 mL). Se juntan las fases orgánicas y se lavan con una disolución saturada de NaCI (30 mL). La fase orgánica se seca sobre sulfato magnésico anhidro, se filtra y evapora el disolvente a vacío. El sólido resultante se recristaliza en diclorometano / hexano dando lugar al producto final deseado.
Figure imgf000029_0001
R3= H R1 = isoprenilo Comp 29
R3= H R1 = isobutilo Comp 30
R3= H R1 =CH2-ciclopropilo Comp 31
R3= H R1 =CH2-Ph Comp 32
R3= 6-Br R1 = H Comp 33
R3= 6-CI R1 = H Comp 34
R3= 6-Br R1 = Me Comp 35
R3= 6-Br R1 = Et Comp 36
R3= 6-CI R1 = Me Comp 37
R3= 6-CI R1 = Et Comp 38
R3= 7-CI R1 = Me Comp 39
R3= 7-CI R1 = Et Comp 40
R3= 7-CI R1 = CH2-Ph Comp 41
Esquema 4.
4-Hidroxi-1 -(isoprenil)-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolina-3-carboxilato de etilo (29). Reactivos: Comp 18 (1 .3 mmoles, 0.3 g); Hidruro sódico (1 .3 mmoles, 0.065 g); Malonato de dietilo (6.5 mmoles, 1 .0 g). Rendimiento: 0.08 g (21 %), sólido blanco, p.f. = 123-124 °C.
1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 14.2 (s, 1 H), 8.18 (dd, J = 1 .6, 8.3 Hz, 1 H), 7.65 (td, J = 1 .6, 7.1 , 7.9 Hz, 1 H), 7.24 (m, 2H), 5.10 (m, 1 H), 4.88 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 4.51 (c, J = 7.1 Hz, 2H), 1 .80 (s, 3H), 1 .63 (s, 3H), 1 .41 (t, J = 7.1 Hz, 3H); 13C NMR (75 MHz, CDCI3) δ (ppm): 172.9, 171 .8, 159.5, 140.9, 135.8, 134.3, 125.9, 121 .8, 1 19.7, 1 15.2, 1 14.7, 98.0, 62.5, 40.9, 25.7, 18.5, 14.4. HPLC: Pureza >96%, t.r.= 10.2 min. ESI MS (m/z): 302 [M + H]+.
4-Hidroxi-1 -isobutil-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolina-3-carboxilato de etilo (30). Reactivos: Comp 19 (1 ,36 mmoles, 0.3 g); Hidruro sódico (5.75 mmoles, 0.138 g); Malonato de dietilo (6.84 mmoles, 1 .1 g). Rendimiento: 0.15 g (38 %), aceite amarillo. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 13.02 (s, 1H), 8.06 (dd, J = 1.55, 8.3 Hz, 1 H), 7.72 (ddd, J = 1.60, 7.0, 8.7 Hz, 1 H), 7.55 (d, J = 8.6 Hz, 1 H), 7.29 (ddd, J = 0.86, 7.0, 7.9 Hz, 1H), 4.33 (c, J = 8.6 Hz, 2H), 4.07 (d, J = 7.4 Hz, 2H), 2.10 (sept, J= 7.0 Hz, 1H), 1.31 (t, J= 7.4 Hz, 3H), 0.89 (d, J= 7.4 Hz, 6H); 13C NMR (75 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 169.2, 165.5, 158.9, 140.0, 133.6, 124.6, 121.7, 115.3, 114.5, 101.0, 61.4, 47.5, 26.6, 19.8, 13.9. HPLC: Pureza >95%, t.r.= 10.0 min. ESI MS (m/z): 290 [M + H]+.
1 -(ciclopropilmetil)-4-Hidroxi-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolina-3-carboxilato de etilo (31).
Reactivos: Comp 20 (1.38 mmoles, 0.3 g); Hidruro sódico (2.91 mmoles, 0.07 g); Malonato de dietilo (6.91 mmoles, 1.1 g).
El producto de reacción (solido blanco) no se purifica y se utiliza para el siguiente paso de reacción.1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 14.2 (s, 1H), 8.13 (dt, J = 1.25, 8.1 Hz, 1H), 7.61 (td, J = 1.59, 7.27, 7.97 Hz, 1H), 7.37 (d, J = 8.63 Hz, 1H), 7.18 (m, 1H), 4.44 (c, J= 7.12 Hz, 2H), 4.12 (d, J = 6.67 Hz, 2H), 1.41 (t, J= 7.12 Hz, 3H), 1.25-1.10 (m, 1H), 0.55-0.38 (m, 4H) ; HPLC: Pureza >86%, t.r.= 9.7 min. ESI MS (m/z): 288 [M + H]+. 1 -Bencil-4-hidroxi-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolina-3-carboxilato de etilo (32).
Reactivos: Comp 21 (3.4 mmoles, 0.85 g); Hidruro sódico (7.37 mmoles, 0.18 g); Malonato de dietilo (16.8 mmoles, 2.7 g). Rendimiento: 0.1 g (9 %), sólido blanco, p.f. = 117-118 °C.
1H NMR (300 MHz, CDCI3) δ (ppm): 14.29 (s, 1H), 8.13 (dd, J= 1.5, 8.0 Hz, 1H), 7.48-7.43 (m, 1H), 7.23-7.18 (m, 2H), 7.15-7.11 (m, 5H), 5.44 (s, 2H), 4.45 (c, J= 7.1 Hz, 2H), 1.42 (t, J= 7.1 Hz, 3H); 13C NMR (75 MHz, CDCI3) δ (ppm): 171.7, 171.0, 158.7, 139.8, 135.4, 133.3, 127.7, 126.2, 125.4, 124.7, 121.0, 113.9, 96.8, 61.4, 44.6, 13.21. HPLC: Pureza >99%, t.r.= 9.9 min. ESI MS (m/z): 324 [M + H]+.
6-Bromo-4-hidroxi-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolina-3-carboxilato de etilo (33). Reactivos: anhídrido 5-bromo isatoico (4.1 mmoles, 1 .0 g); Hidruro sódico
(8.3 mmoles, 0.2 g); Malonato de dietilo (20.8 mmoles, 3.3 g).
El producto final no se aisla y se utiliza para el siguiente paso de la reacción. 6-Cloro-4-hidroxi-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolina-3-carboxilato de etilo (34).
Reactivos: anhídrido 5-cloro isatoico (5.0 mmoles, 1 .0 g); Hidruro sódico
(10.4 mmoles, 0.25 g); Malonato de dietilo (25 mmoles, 4.0 g).
El producto final no se aisla y se utiliza para el siguiente paso de la reacción. 6-Bromo-4-hidroxi-1 -metil-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolina-3-carboxilato de etilo
(35) .
Reactivos: Comp 22 (2.3 mmoles, 0.6 g); Hidruro sódico (4.8 mmoles, 0.12 g); Malonato de dietilo (1 1 .5 mmoles, 1 .8 g). Rendimiento: 0.3 g (40 %), sólido blanco, p.f. = 139-140 °C.
1 H NMR (300 MHz, CDCI3) δ (ppm): 14.14 (s, 1 H), 8.28 (d, J= 2.4 Hz, 1 H), 7.74 (dd, J= 2.4, 9.0 Hz, 1 H), 7.18 (d, J= 9.0 Hz, 1 H), 4.50 (c, J= 7.1 Hz, 2H), 3.62 (s, 3H), 1 .48 (t, J=7.1 Hz, 3H); 13C NMR (75 MHz, CDCI3) δ (ppm): 172.5, 170.6, 159.3, 140.3, 137.2, 128.2, 1 16.5, 1 16.0, 1 15.0, 98.7, 62.7, 29.4, 14.3. HPLC: Pureza >96%, t.r.= 9.6 min. ESI MS (m/z): 328 [M + H]+.
6-Bromo-1 -etil-4-hidroxi-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolina-3-carboxilato de etilo
(36) .
Reactivos: Comp 23 (1 .8 mmoles, 0.5 g); Hidruro sódico (3.7 mmoles, 0.09 g); Malonato de dietilo (4.25 mmoles, 1 .5 g). Rendimiento: 0.3 g (48 %), sólido blanco, p.f. = 129-130 °C.
1 H NMR (300 MHz, CDCI3) δ (ppm): 14.14 (s, 1 H), 8.23 (d, J= 2.4 Hz, 1 H), 7.67 (dd, J= 2.4, 9.0 Hz 1 H), 7.13 (d, J= 9.0 Hz, 1 H), 4.44 (c, J= 7.1 Hz, 2H), 4.20 (c, J= 7.1 Hz, 2H), 1 .42 (t, J= 0.5, 7.1 Hz, 3H), 1 .24 (t, J= 1 .5, 7.2 Hz, 3H); 13C NMR (75 MHz, CDCI3) δ (ppm): 172.4, 170.4, 158.7, 139.2, 137.0, 128.7, 1 16.6, 1 15.7, 1 14.6, 98.5, 62.5, 37.4, 14.2, 12.7. HPLC: Pureza >99%, t.r.= 10.6 min. ESI MS (m/z): 342 [M + H]+. 6-Cloro-4-hidroxi-1 -metil-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolina-3-carboxilato de etilo (37).
Reactivos: Comp 24 (3.5 mmoles, 0.8 g); Hidruro sódico (7.1 mmoles, 0.18 g); Malonato de dietilo (18 mmoles, 2.8 g). Rendimiento: 0.3 g (30 %), sólido blanco, p.f. = 138-139 °C.
1 H NMR (300 MHz, CDCI3) δ (ppm): 14.13 (s, 1 H), 8.07 (d, J= 2.5 Hz, 1 H), 7.55 (dd, J= 2.5, 9.0 Hz 1 H), 7.20 (d, J= 2.0 Hz, 1 H), 4.44 (c, J= 7.1 Hz, 2H), 3.57 (s, 3H), 1 .41 (t, J= 7.1 Hz, 3H); 13C NMR (75 MHz, CDCI3) δ (ppm): 172.5, 170.6, 159.4, 139.9, 134.4, 127.9, 125.15, 1 16.1 , 1 15.7, 98.7, 62.6, 29.5, 14.3. HPLC: Pureza >96%, t.r.= 9.4 min. ESI MS (m/z): 282 [M + H]+.
6- Cloro-1 -etil-4-hidroxi-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolina-3-carboxilato de etilo (38). Reactivos: Comp 25 (3.5 mmoles, 0.8 g); Hidruro sódico (7.4 mmoles, 0.17 g); Malonato de dietilo (17.7 mmoles, 2.8 g). Rendimiento: 0.5 g (48 %), sólido blanco, p.f. = 140-141 °C.
1 H NMR (300 MHz, CDCI3) δ (ppm): 14.14 (s, 1 H), 8.09 (d, J= 2.5 Hz, 1 H), 7.54 (dd, J= 2.5, 9.1 Hz 1 H), 7.19 (d, J= 2.0 Hz, 1 H), 4.44 (c, J= 7.1 Hz, 2H), 4.21 (c, J= 7.1 Hz, 2H), 1 .42 (t, J= 7.1 Hz, 3H), 1 .25 (t, J= 7.1 Hz, 3H); 13C NMR (75 MHz, CDCI3) δ (ppm): 171 .4, 169.5, 157.7, 137.8, 133.3, 126.4, 124.2, 1 15.1 , 1 14.5, 97.5, 61 .2, 36.4,14.3, 13.2. HPLC: Pureza >99%, t.r.= 9.9 min. ESI MS (m/z): 296 [M + H]+.
7- Cloro-4-hidroxi-1 -metil-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolina-3-carboxilato de etilo (39).
Reactivos: Comp 26 (2.05 mmoles, 0.4 g); Hidruro sódico (4.16 mmoles, 0.1 g); Malonato de dietilo (10.2 mmoles, 1 .65 g). Rendimiento: 0.28 g (49 %), sólido blanco, p.f. = 153-154 °C.
1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 12.95 (s, 1 H), 8.02 (d, J= 8.6 Hz, 1 H), 7.59 (d, J= 1 .8 Hz, 1 H), 7.33 (dd, J= 1 .9, 8.7 Hz, 1 H), 4.32 (c, J= 7.1 Hz, 2H), 3.52 (s, 3H), 1 .30 (t, J= 7.1 Hz, 3H); 13C NMR (75 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 168.9, 164.6, 159.2, 141 .7, 138.9, 126.7, 122.5, 1 15.1 , 1 13.7, 102.3, 61 .8, 49.1 , 29.4, 14.4. HPLC: Pureza >99%, t.r.= 5.1 min. ESI MS (m/z): 282 [M + H]+.
7-Cloro-1 -etil-4-hidroxi-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolina-3-carboxilato de etilo (40). Reactivos: Comp 27 (2.6 mmoles, 0.6 g); Hidruro sódico (4.6 mmoles, 0.1 1 g); Malonato de dietilo (1 1 .5 mmoles, 1 .85 g). Rendimiento: 0.46 g (62 %), sólido amarillo, p.f. = 141 -142 °C.
1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 13.00 (s, 1 H), 8.03 (d, J= 8.6 Hz, 1 H), 7.64 (d, J= 1 .8 Hz, 1 H), 7.33 (dd, J= 1 .9, 8.6 Hz, 1 H), 4.32 (c, J= 7.1 Hz, 2H), 4.19 (c, J= 7.1 Hz, 2H),1 .30 (t, J= 7.1 Hz, 3H), 1 .15 (t, J= 7.1 Hz, 3H); 13C NMR (75 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 169.0, 164.8, 158.6, 140.7, 139.0, 127.0, 122.3, 1 14.6, 1 13.9, 102.0, 61 .8, 37.1 ,14.4, 13.0. HPLC: Pureza >99%, t.r.= 9.9 min. ESI MS (m/z): 296 [M + H]+. 1 -Bencil-7-cloro-4-hidroxi-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolina-3-carboxilato de etilo (41 ).
Reactivos: Comp 28 (1 .9 mmoles, 0.5 g); Hidruro sódico (3.96 mmoles, 0.09 g); Malonato de dietilo (9.6 mmoles, 1 .55 g). Rendimiento: 0.9 g (94 %), sólido blanco, p.f. = 172-173 °C.
1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 13.17 (s, 1 H), 8.07 (d, J= 8.6 Hz, 1 H), 7.43 (d, J= 1 .8 Hz, 1 H), 7.35-7.32 (m, 3H), 7.26-7.23 (m, 1 H), 7.18 (dd, J= 1 .3, 8.6 Hz, 2H), 5.47 (s, 2H), 4.34 (c, J= 7.1 Hz, 2H),1 .31 (t, J= 7.1 Hz, 3H); 13C NMR (75 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 168.5, 164.8, 158.9, 140.6, 138.7, 136.5, 128.7, 127.1 , 126.6, 126.4, 122.3, 1 14.9, 1 13.8, 101 .6, 61 .5, 44.5, 13.9. HPLC: Pureza >99%, t.r.= 10.8 min. ESI MS (m/z): 358 [M + H]+.
Procedimiento general de síntesis de los compuestos 42-62.
Se añade en un matraz el derivado de carboxilato de etilo correspondiente (compuestos 29-41 ), junto con la hidrazida correspondiente en DMF (0.3 mL). La mezcla se calienta a 160 °C durante 3 min. La reacción se deja enfriar a temperatura ambiente y a continuación se añade MeOH (5 formándose un precipitado que se filtra y purifica con lavados de MeOH.
Figure imgf000034_0001
R3= H R1 = isobutilo R2= Comp 44
10
R3= H R1 =CH2-ciclopropilo R2= Jr 10 Comp 45
Figure imgf000034_0002
R3= 7-CI R1 = Et R2= Comp 59
R3= 7-CI R-i = Et R2= Comp 60
R3= 7-CI R-i = CH2-Ph R2= Comp 61
R3= 7-CI R1 = CH2-Ph R2= Comp 62
Esquema 5. 4-Hidroxi-1-isoprenil-N'-octanoil-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3-carbohidrazida (42).
Reactivos: Comp 29 (0.66 mmoles, 0.2 g); octanoil hidrazina (0.73 mmoles, 0.12 g). Rendimiento: 0.125 g (22 %), sólido blanco, p.f. =114-115 °C.
1H NMR (300 MHz, CDCI3) δ (ppm): 15.37 (s, 1H), 12.38 (d, J= 5.3 Hz, 1H), 8.67-8.55 (m, 1H), 8.06 (d, J= 7.9 Hz, 1H), 7.57 (t, J= 7.9 Hz, 1H), 7.22-7.14 (m, 2H), 5.1-5.02 (m, 1H), 4.81-4.76 (m, 2H), 2.26 (t, J= 7.5 Hz, 2H), 1.80 (s, 31-0,1.7-1.52 (m, 5H), 1.38-1.1 (m, 8H), 0.79 (t, J= 6.4 Hz, 3H); 13C NMR (75 MHz, CDCI3) δ (ppm): 170.1, 169.6, 166.9, 161.7, 139.7, 136.5, 134.09, 125.1, 122.4, 119.1, 115.8, 114.9, 96.4, 40.9, 34.4, 31.8, 29.3, 29.1, 25.7, 26.6, 22.7, 18.5, 14.2. HPLC: Pureza >99%, t.r.= 13.7 min. ESI MS (m/z): 414 [M + H]+. Análisis Elemental (C23H13N3O4) Calculado: C 66.81 %; H 7.51 %; N 10.16%. Hallado: C 66,73%; H 7,74%; N 10,25%. N '-Dodecanoil-4-hidroxi-1 -isoprenil-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida (43).
Reactivos: Comp 29 (0.66 mmoles, 0.2 g); dodecanoil hidrazina (0.73 mmoles, 0.16 g). Rendimiento: 0.125 g (40 %), sólido blanco, p.f. = 107-108 °C.
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 16.28 (s, 1H), 11.97 (d, J= 3.9 Hz, 1H), 10.77 (d, J= 3.9 Hz, 1H), 8.11 (dd, J= 7.9, 1.5 Hz, 1H), 7.83 (td, J= 9.18, 7.2, 1.6 Hz, 1H), 7.51 (d, J= 8.6 Hz, 1H), 7.39 (t, J= 8.6 Hz, 1H), 5.51-5.05 (m, 1H), 4.95-4.85 (m, 2H), 2.23 (t, J= 7.3 Hz, 2H), 1.85 (s, 3H), 1.67 (s, 3H), 1.6-1.40 (m, 2H), 1.35-1.1 (m, 16H), 0.84 (t, J= 6.5 Hz, 3H); 13C NMR (75 MHz, DMSO-de) δ (ppm): 170.7, 169.6, 167.3, 160.9, 139.0, 135.8, 134.7, 124.7, 122.7, 119.2, 115.5, 114.9, 95.7, 32.9, 31.3, 29.0, 28.9, 28.8, 28.7, 28.5, 25.3, 24.9, 22.1, 18.2, 13.9. HPLC: Pureza >99%, t.r.= 4.9 min. ESI MS (m/z): 470 [M + 2H]+. Análisis Elemental (C27H37N3O4) Calculado: C 69.35 %; H 7.98 %; N 8.99%. Hallado: C 69,48%; H 8,01%; N 8,86%. N '-Dodecanoil-4-hidroxi-1 -isobutil-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida (44).
Reactivos: Comp 30 (0.52 mmoles, 0.15 g); dodecanoil hidrazina (0.78 mmoles, 0.17 g). Rendimiento: 0.05 g (21 %), sólido blanco, p.f. = 1 12-1 13 °C.
1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 16.32 (s, 1 H), 12.05 (d, J= 4.1 Hz, 1 H), 10.79 (d, J= 4.1 Hz, 1 H), 8.12 (d, J= 1 .6 Hz, 1 H), 7.9-7.75 (m, 1 H), 7.70 (d, J= 8.5 Hz, 1 H), 7.35 (t, J= 7.6 Hz, 1 H), 4.18 (d, J= 7.5 Hz, 2H), 2.30-2.05 (m, 3H), 1 .52-1 .35 (m, 2H), 1 .25-1 .05 (m, 16H), 0.95-0.80 (m, 9H); 13C NMR (75 MHz, DMSO-de) δ (ppm): 170.6, 169.4, 167.0, 161 .5, 139.4, 134.5, 124.6, 122.6, 1 15.9, 1 14.9, 95.5, 47.85, 31 .3, 29.0, 28.9, 28.7, 28.6, 28.5, 26.7, 24.9, 22.0, 19.8, 13.9. HPLC: Pureza >97%, t.r.= 6.6 min. ESI MS (m/z): 458 [M + H]+. Análisis Elemental (C26H39N3O4) Calculado: C 68.24 %; H 8.59 %; N 9.18%. Hallado: C 68,33%; H 8,71 %; N 9,44%.
1 -(ciclopropilmetil)-N '-dodecanoil-4-hidroxi -2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida (45).
Reactivos: Comp 31 (0.45 mmoles, 0.13 g); dodecanoil hidrazina (0.68 mmoles, 0.15 g). Rendimiento: 0.09 g (49 %), sólido blanco, p.f. = 121 -122 °C.
1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 16.30 (s, 1 H), 12.01 (d, J= 4.1 Hz, 1 H), 10.76 (d, J= 4.1 Hz, 1 H), 8.12 (d, J= 7.9 Hz, 1 H), 7.8-7.6 (m, 2H), 7.35 (t, J= 7.6 Hz, 1 H), 4.23 (d, J= 6.9 Hz, 2H), 2.23 (t, J= 7.6 Hz, 2H), 1 .6-1 .42 (m, 2H), 1 .32-1 .17 (m, 16H), 0.84 (t, J= 6.9 Hz, 3H), 0.52-0.42 (m, 5H); 13C NMR (75 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 170.7, 169.5, 167.0, 161 .3, 139.3, 134.6, 124.6, 122.7, 1 15.8, 1 14.9, 95.6, 45.2, 32.9, 31 .3, 29.0, 28.9, 28.8, 28.7, 28.5, 25.0, 22.1 , 13.9, 9.8, 3.7. HPLC: Pureza >99%, t.r.= 15.8 min. ESI MS (m/z): 456 [M + H]+. Análisis Elemental (C26H37N3O4) Calculado: C 68.54 %; H 8.19 %; N 9.22%. Hallado: C 68,50%; H 8,28%; N 9,04%.
1 -Bencil-N '-dodecanoil-4-hidroxi-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3-carbohidrazida (46). Reactivos: Comp 32 (0.12 mmoles, 0.04 g); dodecanoil hidrazina (0.15 mmoles, 0.033 g). Rendimiento: 0.045 g (75 %), sólido blanco, p.f. = 150-151 °C.
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 15.63 (s, 1H), 12.13 (d, J= 4.1 Hz, 1H), 8.25-8.08 (m, 2H), 7.3-7.1 (m, 7H), 5.46 (s, 2H), 2.35-2.10 (m, 2H), 1.75-1.50 (m, 2H), 1.5-1.1 (m, 16H), 0.9-0.75 (m, 3H); 13C NMR (75 MHz, DMSO-de) δ (ppm): 170.5, 168.2, 165.8, 161.1, 138.7, 134.9, 133.2, 127.9, 126.4, 125.4, 121.6, 114.9, 114.2, 95.1, 44.9, 33.4, 30.9, 28.6, 28.4, 28.3, 28.2, 24.4, 21.7, 13.1. HPLC: Pureza >99%, t.r.= 9.6 min. ESI MS (m/z): 493 [M + H]+. Análisis Elemental (C29H37N3O4) Calculado: C 70.85 %; H 7.59 %; N 8.55%. Hallado: C 71,02%; H 7,70%; N 8,68%.
6-Bromo-N'-dodecanoil-4-hidroxi-2-oxo-2-hidroquinolin-3-carbohidrazida (47).
Reactivos: Comp 33 (0.25 mmoles, 0.07 g); dodecanoil hidrazina (0.27 mmoles, 0.06 g). Rendimiento: 0.103 g (85 %), sólido blanco, p.f. = 286-287 °C.
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 16.20 (s, 1H), 12.17 (sa, 1H), 11.9 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 10.76 (d, J = 4.1 Hz, 1H), 8.1-8.0 (m, 1H), 7.86 (dd, J = 8.7 Hz, 1 H), 7.33 (d, J= 8.9 Hz, 1 H), 2.2 (t, J= 7.3 Hz, 2H), 1.60-1.42 (m, 2H), 1.2 (s, 16H), 0.84 (t, J= 6.6 Hz, 3H); 13C NMR (75 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 170.4, 169.4, 167.0, 161.5, 137.6, 136.0, 134.9, 132.3, 126.0, 125.4, 117.9, 113.8, 32.6, 30.7, 28.4, 28.3, 28.2, 28.1, 28.0, 24.4, 21.4, 13.2. El MS (m/z): 481. Análisis Elemental (C22H3oBrN304) Calculado: C 55.0 %; H 6.29 %; N 8.75%. Hallado: C 54,98%; H 6,57%; N 8,90%.
6-Cloro-N'-dodecanoil-4-hidroxi-2-oxo-2-hidroquinolin-3-carbohidrazida (48). Reactivos: Comp 34 (0.14 mmoles, 0.037 g); dodecanoil hidrazina (0.15 mmoles, 0.034 g). Rendimiento: 0.045 g (73 %), sólido blanco, p.f. = 285-286 °C.
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 16.22 (s, 1H), 12.18 (s, 1H), 11.9 (d, J = 4.2 Hz, 1H), 10.75 (sa, 1H), 7.97-7.90 (m, 1H), 7.76 (dd, J = 2.46, 8.8 Hz, 1 H), 7.40 (d, J= 8.8 Hz, 1 H), 2.2 (t, J= 7.3 Hz, 2H), 1.60-1.45 (m, 2H), 1.2 (s, 16H), 0.85 (t, J=6.4 Hz, 3H);
6-Bromo-4-hidroxi-1 -metil-N '-octanoil-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida (49).
Reactivos: Comp 35 (0.46 mmoles, 0.15 g); octanoil hidrazina (0.5 mmoles, 0.08 g). Rendimiento: 0.13 g (64 %), sólido blanco, p.f. =185-186 °C.
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 16.30 (s, 1H), 11.94 (d, J = 4.2 Hz ,1H), 10.8 (d, J = 4.2 Hz, 1H), 8.12 (s, 1H), 7.95 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 7.61 (d, J= 9.0 Hz, 1H), 3.6 (s, 3H), 2.23 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 1.6-1.42 (m, 2H), 1.27 (s, 8H), 0.86 (t, J = 6.2 Hz, 3H); 13C NMR (75 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 169.4, 169.3, 166.8, 160.8, 138.7, 136.4, 126.0, 117.7, 116.2, 114.5, 96.3, 32.7, 30.8, 29.2, 28.2, 27.9, 24.6, 21.6, 13.5. HPLC: Pureza >98%, t.r.= 9.8 min. ESI MS (m/z): 440 [M + H]+. Análisis Elemental
Figure imgf000038_0001
Calculado: C 52.0 %; H 5.52 %; N 9.59%. Hallado: C 52,06%; H 5,50%; N 9,77%.
6-Bromo-N '-dodecanoil-4-hidroxi-1 -metil-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida (50).
Reactivos: Comp 35 (0.36 mmoles, 0.12 g); dodecanoil hidrazina (0.4 mmoles, 0.08 g). Rendimiento: 0.1 g (55 %), sólido blanco, p.f. = 160-161 °C. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 16.23 (s, 1H), 11.85 (sa, J = 4.3 Hz,1H), 10.5 (sa, J = 5.5 Hz, 1H), 8.14 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 7.91 (dd, J = 9.1, 1.4 Hz, 1H), 7.58 (d, J= 9.1 Hz, 1H), 3.6 (s, 3H), 2.26 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 1.6-1.45 (m, 2H), 1.27 (s, 16H), 0.87 (t, J = 6.4 Hz, 3H); 13C NMR (75 MHz, DMSO-de) δ (ppm): 170.4, 167.8, 161.8, 139.7, 137.4, 127.0, 118.6, 117.3, 115.4, 97.2, 32.6, 30.7, 28.9, 28.5, 28.4, 28.2, 28.0, 24.4, 21.5, 13.2. HPLC: Pureza >98%, t.r.= 14.3 min. ESI MS (m/z): 494 [M + H]+. Análisis Elemental (C23H32BrN304) Calculado: C 55.8%; H 6.52%; N 8.50%. Hallado: C 55,94%; H 6,80%; N 8,61%. 6-Bromo-1 -etil-4-hidroxi-N '-octanoil-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida (51).
Reactivos: Comp 36 (0.36 mmoles, 0.12 g); octanoil hidrazina (0.4 mmoles, 0.06 g). Rendimiento: 0.13 g (80 %), sólido blanco, p.f. = 171-172 °C.
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 16.24 (s, 1H), 11.88 (d, J = 4.0 Hz ,1H), 10.6 (d, J = 4.1 Hz, 1H), 8.12 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.90 (dd, J = 9.1, 2.5 Hz, 1H), 7.61 (d, J= 9.1 Hz, 1H), 4.3 (c, J = 7.0 Hz, 2H), 2.22 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 1.57-1.50 (m, 2H), 1.30-1.17 (m, 11H), 0.84 (t, J = 6.7 Hz, 3H); 13C NMR (75 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 169.4, 166.7, 160.4, 137.8, 136.7, 126.3, 117.5, 116.6, 114.4, 96.2, 36.9, 32.8, 30.9, 28.3, 28.1, 24.7, 21.7, 13.6, 12.4. HPLC: Pureza >98%, t.r.= 13.5 min. ESI MS (m/z): 452 [M + H]+.
6-Bromo-N '-dodecanoil-1 -etil-4-hidroxi-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida (52).
Reactivos: Comp 36 (0.36 mmoles, 0.12 g); dodecanoil hidrazina (0.4 mmoles, 0.08 g). Rendimiento: 0.15 g (80 %), sólido blanco, p.f. = 146-147 °C.
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 16.28 (s, 1H), 11.97 (s,1H), 10.8 (s, 1H), 8.16 (s, 1H), 7.97 (dd, J = 9.6, 2.5 Hz, 1H), 7.62 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 4.3 (c, J= 6.9 Hz, 2H), 2.24 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 1.6-1.45 (m, 2H), 1.26 (s, 19H), 0.85 (t, J = 8.6 Hz, 3H); 13C NMR (75 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 169.3, 166.7, 160.3, 137.6, 136.4, 126.2, 117.2, 116.5, 114.2, 96.0, 36.7, 32.6, 30.8, 28.5, 28.4, 28.2, 28.1, 28.0, 24.4, 21.5, 13.2, 12.1. HPLC: Pureza >98%, t.r.= 6.2 min. ESI MS (m/z): 510 [M + 2H]+. Análisis Elemental (C24H34BrN304) Calculado: C 56.7 %; H 6.74 %; N 8.26%. Hallado: C 56,75%; H 7,01%; N 8,43%.
6-Cloro-4-hidroxi-1 -metil-N '-octanoil-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida (53).
Reactivos: Comp 37 (0.36 mmoles, 0.1 g); octanoil hidrazina (0.39 mmoles, 0.062 g). Rendimiento: 0.12 g (86 %), sólido blanco, p.f. = 187-188 °C. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 16.33 (s, 1H), 11.96 (d, J = 4.2 Hz, 1H), 10.8 (d, J = 4.2 Hz, 1H), 8.06 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 7.86 (dd, J = 9.0, 2.5 Hz, 1H), 7.68 (d, J= 9.1 Hz, 1H), 3.6 (s, 3H), 2.24 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 1.6- 1.45 (m, 2H), 1.26 (s, 16H), 0.87 (t, J = 6.2 Hz, 3H); 13C NMR (75 MHz, DMSO-de) δ (ppm): 169.4, 166.8, 161.1, 160.8, 138.4, 133.7, 126.9, 122.9, 117.5, 115.9, 96.2, 32.7, 30.8, 29.2, 28.2, 28.0, 24.6, 21.6, 13.5. HPLC: Pureza >97%, t.r.= 12.3 min. ESI MS (m/z): 394 [M + H]+. Análisis Elemental (C19H24CIN3O4) Calculado: C 57.9 %; H 6.14 %; N 10.67%. Hallado: C 58,10%; H 6,27%; N 10,95%.
6-Cloro-N '-dodecanoil-4-hidroxi-1 -metil-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida (54).
Reactivos: Comp 37 (0.36 mmoles, 0.10 g); dodecanoil hidrazina (0.39 mmoles, 0.08 g). Rendimiento: 0.143 g (90 %), sólido blanco, p.f. = 156.5- 157.5 °C.
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 16.33 (s, 1H), 11.96 (d, J = 4.2 Hz ,1H), 10.8 (d, J = 4.2 Hz, 1H), 8.00 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.86 (dd, J = 9.1 , 2.5 Hz, 1H), 7.69 (d, J= 9.1 Hz, 1H), 3.6 (s, 3H), 2.23 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 1.6- 1.47 (m, 2H), 1.25 (s, 16H), 0.85 (t, J = 6.4 Hz, 3H); 13C NMR (75 MHz, DMSO-de) δ (ppm): 169.6, 169.4, 166.8, 160.8, 138.4, 133.7, 126.9, 122.9, 117.5, 115.8, 96.2, 32.9, 29.2, 28.6, 28.5, 28.3, 28.3, 28.2, 24.6, 21.7,13.5. HPLC: Pureza >99%, t.r.= 13.9 min. ESI MS (m/z): 450 [M + H]+. Análisis Elemental (C23H32CIN3O4) Calculado: C 61.39 %; H 7.17 %; N 9.34%. Hallado: C 61,46%; H 7,44%; N 9,60%.
6-Cloro-1 -etil-4-hidroxi-N '-octanoil-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3-carbohidrazida (55).
Reactivos: Comp 38 (0.68 mmoles, 0.2 g); octanoil hidrazina (0.74 mmoles, 0.119 g). Rendimiento: 0.19 g (70 %), sólido blanco, p.f. = 160-161 °C.
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 16.33 (s, 1H), 11.98 (d, J = 4.1 Hz ,1H), 10.8 (d, J = 4.1 Hz, 1H), 8.03 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 7.86 (dd, J = 9.2, 2.6 Hz, 1H), 7.75 (d, J= 9.2 Hz, 1H), 4.3 (c, J = 6.9 Hz, 2H), 2.24 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 1.60-1.53 (m, 2H), 1.35-1.18 (m, 11 H), 0.87 (t, J = 6.4 Hz, 3H); Ί NMR (100 MHz, DMSO-de) δ (ppm): 170.3, 166.6, 161.3, 138.2, 134.8, 127.7, 124.2, 118.2, 117.0, 97.1, 39.8, 37.8, 33.6, 31.7, 29.2, 28.9, 25.6, 22.6, 14.5, 13.3. HPLC: Pureza >98%, t.r.= 13.1 min. ESI MS (m/z): 408 [M + H]+. Análisis Elemental (C20H26CIN3O4) Calculado: C 58.89 %; H 6.42 %; N 10.30%. Hallado: C 59,11%; H 6,38%; N 10,50%.
6- Cloro-N '-dodecanoil-1 -etil-4-hidroxi-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida (56).
Reactivos: Comp 36 (0.68 mmoles, 0.2 g); dodecanoil hidrazina (0.75 mmoles, 0.16 g). Rendimiento: 0.234 g (74 %), sólido blanco, p.f. = 149-150 °C.
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 16.3 (s, 1H), 11.9 (d, J= 4.2 Hz, 1H), 10.8 (d, J= 4.2 Hz, 1H), 8.05 (d, J= 2.6 Hz, 1H), 7.97 (dd, J = 9.1, 2.6 Hz, 1 H), 7.62 (d, J= 9.2 Hz, 1 H), 4.3 (c, J= 6.9 Hz, 2H), 2.23 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 1.35-1.17 (m, 19H), 0.86 (t, J = 7.4 Hz, 3H); 13C NMR (75 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 169.2, 166.6, 160.3, 137.2, 133.6, 126.6, 123.1, 117.0, 116.0, 96.1, 36.8, 32.6, 30.8, 28.5, 28.5, 28.4, 28.2, 28.1, 28.0, 24.5, 21.5, 13.2, 12.1. HPLC: Pureza >98%, t.r.= 14.9 min. ESI MS (m/z): 464 [M + H]+. Análisis Elemental (C24H34CIN3O4) Calculado: C 62.12 %; H 7.39 %; N 9.06%. Hallado: C 61,94%; H 7,61%; N 9,18%.
7- Cloro-4-hidroxi-1 -metil-N '-octanoil-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida (57).
Reactivos: Comp 39 (0.36 mmoles, 0.1 g); octanoil hidrazina (0.39 mmoles, 0.063 g). Rendimiento: 0.07 g (50 %), sólido blanco, p.f. = 164-165 °C.
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 16.31 (s, 1H), 11.89 (sa, 1H), 10.5 (sa, 1H), 8.09 (dd, J = 8.6, 2.5 Hz, 1H), 7.72-7.70 (m, , 1H), 7.43-7.40 (m, 1H), 3.64 (s, 3H), 2.25 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 1.6-1.42 (m, 2H), 1.29 (s, 8H), 0.88 (t, J = 6.6 Hz, 3H); 13C NMR (75 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 170.1, 169.5, 167.0, 161.1, 140.6, 139.2, 126.0, 122.6, 115.0, 113.5, 95.7, 32.7, 30.8, 29.2, 29.1, 28.2, 28.0, 24.6, 21.7, 13.5. HPLC: Pureza >99%, t.r.= 7.5 min. ESI MS (m/z): 394 [M + H]+. Análisis Elemental (C19H24CIN3O4) Calculado: C 57.94 %; H 6.14 %; N 10.67%. Hallado: C 57,85%; H 6,42%; N 10,88%.
7-Cloro-N '-dodecanoil-4-hidroxi-1 -metil-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida (58).
Reactivos: Comp 39 (0.36 mmoles, 0.10 g); dodecanoil hidrazina (0.39 mmoles, 0.08 g). Rendimiento: 0.105 g (65 %), sólido blanco, p.f. = 165-166 °C.
1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 16.30 (s, 1 H), 1 1 .89 (sa, 1 H), 10.8 (sa, 1 H), 8.06 (d, J = 8.6 Hz, 1 H), 7.74 (d, J = 1 .6, Hz, 1 H), 7.69 (dd, J= 8.6, 1 .7 Hz, 1 H), 3.6 (s, 3H), 2.23 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 1 .53-1 .27 (m, 2H), 1 .23 (s, 16H), 0.84 (t, J = 6.5 Hz, 3H); 13C NMR (75 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 170.0, 169.4, 166.9, 161 .0, 140.6, 139.1 , 126.0, 122.6, 1 14.9, 1 13.5, 1 13.4, 32.7, 30.9, 29.2, 29.1 , 28.6, 28.5, 28.3, 28.3, 28.2, 24.6, 21 .7,13.5. HPLC: Pureza >98%, t.r.= 13.8 min. ESI MS (m/z): 450 [M + H]+. Análisis Elemental (C23H32CIN3O4) Calculado: C 61 .39 %; H 7.17 %; N 9.34%. Hallado: C 61 ,12%; H 7,19%; N 9,61 %.
7-Cloro-1 -etil-4-hidroxi-N '-octanoil-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3-carbohidrazida (59).
Reactivos: Comp 40 (0.5 mmoles, 0.15 g); octanoil hidrazina (0.55 mmoles, 0.09 g). Rendimiento: 0.06 g (29 %), sólido blanco, p.f. = 161 -162 0 C.
1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 16.31 (s, 1 H), 1 1 .91 (d, J = 4.1 Hz ,1 H), 10.8 (d, J = 4.1 Hz, 1 H), 8.09 (d, J = 8.6 Hz, 1 H), 7.90 (d, J = 1 .9 Hz, 1 H), 7.61 (dd, J= 8.6, 1 .8 Hz, 1 H), 4.3 (c, J = 7.0 Hz, 2H), 2.23 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 1 .60-1 .45 (m, 2H), 1 .35-1 .12 (m, 1 1 H), 0.86 (t, J = 6.6 Hz, 3H); 13C NMR (75 MHz, DMSO-de) δ (ppm): 170.0, 169.4, 166.9, 160.7, 139.5, 139.3, 126.3, 122.6, 1 14.6, 1 13.7, 95.6, 36.9, 32.7, 30.8, 28.2, 28.0, 24.6, 21 .6, 13.5, 12.3. HPLC: Pureza >99%, t.r.= 8.2 min. ESI MS (m/z): 408 [M + H]+. Análisis Elemental (C20H26CIN3O4) Calculado: C 58.9 %; H 6.42 %; N 10.30%. Hallado: C 59,13%; H 6,70%; N 10,58%. 7-Cloro-N '-dodecanoil-1 -etil-4-hidroxi-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida (60).
Reactivos: Comp 40 (0.5 mmoles, 0.15 g); dodecanoil hidrazina (0.56 mmoles, 0.124 g). Rendimiento: 0.221 g (95 %), sólido blanco, p.f. = 138-139 °C.
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 16.17 (s, 1H), 11.91 (sa,1H), 10.8 (sa, 1H), 8.11 (d, J= 8.6 Hz, 1H), 7.75 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 7.42 (dd, J= 8.6, 1.8 Hz, 1H), 4.3 (c, J= 6.9 Hz, 2H), 2.23 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 1.54-1.40 (m, 2H), 1.37-1.10 (m, 19H), 0.84 (t, J = 6.3 Hz, 3H); 13C NMR (75 MHz, DMSO- d6) δ (ppm): 169.9, 169.3, 166.7, 160.6, 139.4, 139.2, 126.2, 122.4, 114.3, 113.7, 95.5, 36.7, 32.6, 30.8, 28.5, 28.4, 28.3, 28.2, 24.5, 21.6, 13.3, 12.1. HPLC: Pureza >98%, t.r.= 14.7 min. ESI MS (m/z): 464 [M + H]+. Análisis Elemental (C24H34CIN3O4) Calculado: C 62.1 %; H 7.39 %; N 9.06%. Hallado: C 62,33%; H 7,57%; N 9,24%.
1 -Bencil-7-cloro-4-hidroxi-N '-octanoil-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida (61).
Reactivos: Comp 41 (0.5 mmoles, 0.20 g); octanoil hidrazina (0.62 mmoles, 0.100 g). Rendimiento: 0.196 g (74 %), sólido blanco, p.f. = 182-183 °C.
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 16.51 (s, 1H), 11.86 (d, J= 4.2 Hz, 1H), 10.8 (d, J=4.2 Hz, 1H), 8.11 (d, J= 8.6 Hz, 1H), 7.57 (d, J= 1.8 Hz, 1H), 7.42 (dd, J= 8.6, 1.8 Hz, 1H), 7.36-7.30 (m, 2H), 7.28-7.20 (m, 3H), 5.6 (s, 2H), 2.24 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 1.60-1.50 (m, 2H), 1.35-1.15 (m, 8H), 0.86 (t, J = 6.8 Hz, 3H); 13C NMR (75 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 170.7, 169.6, 166.9, 161.5, 140.1, 139.3, 136.1, 128.7, 127.3, 126.7, 126.4, 123.2, 115.5, 114.1, 95.8, 44.8, 32.9, 31.2, 28.5, 28.4, 24.9, 22.1, 13.9. HPLC: Pureza >98%, t.r.= 2.4 min. ESI MS (m/z): 470 [M + H]+. Análisis Elemental (C25H28CIN3O4) Calculado: C 63.89 %; H 6.01 %; N 8.94%. Hallado: C 63,47%; H 6,30%; N 9,08%.
1 -Bencil-7-cloro-N '-dodecanoil-4-hidroxi-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida (62). Reactivos: Comp 41 (0.56 mmoles, 0.20 g); dodecanoil hidrazina (0.62 mmoles, 0.133 g). Rendimiento: 0.25 g (85%), sólido blanco, p.f. = 167-168 °C.
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 16.49 (s, 1 H), 11.87 (d, J= 4.2 Hz, 1 H), 10.87 (d, J= 4.2 Hz, 1 H), 8.11 (d, J= 8.6 Hz, 1 H), 7.57 (d, J = 1.8 Hz, 1 H), 7.41 (dd, J= 8.6, 1.8 Hz, 1 H), 7.36-7.30 (m, 2H), 7.28-7.20 (m, 3H), 5.6 (s, 2H), 2.23 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 1.60-1.50 (m, 2H), 1.30-1.10 (m, 16H), 0.84 (t, J = 6.8 Hz, 3H); 13C NMR (75 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 170.7, 169.5, 166.9, 161.5, 140.1 , 139.3, 136.1 , 128.7, 127.2, 126.6, 126.4, 123.2, 115.5, 114.1 , 95.8, 44.8, 32.9, 31.3, 29.0, 28.9, 28.7, 28.7, 28.5, 24.9, 22.1 , 13.9. HPLC: Pureza >99%, t.r.= 5.1 min. ESI MS (m/z): 526 [M + H]+. Análisis Elemental (C29H36CIN3O4) Calculado: C 66.21 %; H 6.90 %; N 7.99%. Hallado: C 66,21 %; H 7,06%; N 8,12%.
Síntesis de NM-dibencil-N'-dodecanoil-4-hidroxi-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida (Comp 63)
Figure imgf000044_0001
Comp 13 Comp 63
Esquema 6
Se calienta en microondas durante 1 h a 160 °C, una mezcla que contiene bromuro de bencilo (1.88 mmoles, 0.32g), carbonato de cesio (1.88 mmol, 0.363 g) y el Compuesto 13 (1.24 mmol, 0.5 g) en DMF (2 mL).
A la mezcla se añade diclorometano (25 mL) y agua (25 mL). Se separa la fase orgánica, y la fase acuosa se vuelve a extraer con diclorometano (25 mL). Se juntan las fases orgánicas y se lavan con una disolución saturada de NaCI (30 mL). La fase orgánica se seca sobre sulfato magnésico anhidro, se filtra y evapora el disolvente a vacío. El sólido resultante se purifica mediante placa preparativa de gel de sílice utilizando como eluyentes Acetato de etilo:hexano (1 :20). Se obtiene un sólido blanco 1 1 mg (2 %). 1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 15.94 (s, 1 H), 1 1 .80 (s, 1 H), 8.13 (d, J= 8.0 Hz, 1 H), 7.73 (t, J = 7.8 Hz, 1 H), 7.48 (d, J= 8.7 Hz, 1 H), 7.58-7.30 (m, 1 1 H), 5.5 (s, 2H), 4.77 (s, 2H), 2.36 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 1 .70-1 .52 (m, 2H), 1 .43-1 .2 (m, 16H), 0.81 (t, J = 7.6 Hz, 3H); 13C NMR (75 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 173.9, 171 .5, 170.6, 161 .5, 139.4, 136.4, 136.3, 134.9, 128.7, 128.5, 128.2, 127.4, 127.2, 126.5, 1 14.9, 96.0, 50.45, 44.8, 31 .5, 31 .3, 29.0, 28.9, 28.7, 28.5, 24.2, 22.1 , 14.0. HPLC: Pureza >99%, t.r.= 14.6 min. ESI MS (m/z): 582 [M + H]+.
Medida de la inhibición de GSK-3B
Los ensayos de inhibición enzimática se realizaron utilizando la metodología del método luminométrico de kinasa-glo®. La enzima humana recombinante GSK3 (n° catálogo 14-306) se adquirió de Upstate (Dundee, UK). El polipéptido prefosforilado se sintetizó por American Peptide Inc (Sunnyvale, CA). El kit de quinasa luminiscente (n° catálogo V671 1 ) se obtuvo de Promega. El ATP y otros reactivos se compraron en Sigma-Aldrich (St. Louis, MO)
Los ensayos fueron realizados en buffer utilizando placas de 96 pocilios. 10 μΙ del compuesto a ensayar (disuelto en DMSO a una concentración de 1 mM, y a su vez disuelto en buffer hasta la concentración necesaria para el experimento) y 10 μΙ (20 ng) de la enzima se añaden a cada pocilio seguidos de 20 μΙ de buffer que contiene 25 μΜ del sustrato y 1 μΜ de ATP. La concentración final de DMSO en el experimento no excedió el 1 %. Tras una incubación de media hora a 30°C se para la reacción enzimática con 40 μΙ del reactivo de kinasa-glo®. La luminiscencia se mide tras diez minutos usando un POLARstar Optima multimode reader. La actividad es proporcional a la diferencia entre el ATP total y el consumido. Las actividades de inhibición se calcularon en función de la actividad máxima, medida en ausencia de inhibidor.
Tabla 1 . Concentración inhibitoria 50 (CI50) de algunos de los compuestos de fórmula (I)
Compuesto CI50GSK-3p (μΜ)
3 8,67±0,40
4 7,35±0,23
6 2,85±0,36
13 4,47±0,29
14 9,00±0,30
15 3,12±0,03
17 5,81 ±0,76
42 7,1 1 ±0,25
43 7,78±0,15
45 5,25±0,58
46 5,51 ±0,27
47 3,54±0,18
48 3,81 ±0,12
49 6,28±0,33
50 4,28±0,50
51 7,34±0,20
52 2,01 ±0,18
53 8,48±0,30
54 5,95±0,49
55 9,42±0,23
56 3,18±0,28
57 6,66±0,29
58 4,03±0,19
59 4,83±0,23
60 2,48±0,26 61 5,96±0,17
62 5,99±0,22
63 6,84±0,51
Estudios cinéticos en la inhibición de GSK-3B
Con el fin de determinar el modo de unión de estos compuestos se han llevado a cabo diferentes estudios cinéticos variando tanto los tiempos de reacción, como la concentración de ATP y la concentración de sustrato. Así, cuando se lleva a cabo el estudio cinético a diferentes tiempos de incubación del enzima con el inhibidor 6 y a dos concentraciones diferentes de inhibidor, se observa que el % de inhibición enzimática no varía por lo que se puede concluir que es un inhibidor reversible.
Tabla 2. Estudio de la inhibición de GSK-3P por el compuesto 6 en función del tiempo.
Figure imgf000047_0001
Los estudios cinéticos variando la concentración de ATP desde 1 a 50 μΜ y la del inhibidor 6 de 5 a 10 μΜ se realizaron utilizando el ADP-Glo™ Kinase Assay. La representación de dobles recíprocos (Figura 1 ) muestra cómo el corte con el eje vertical (1/V) aumenta cuando la concentración del compuesto 6 aumenta (de 5 a 10 μΜ), mientras que el corte con el eje horizontal (1/[ATP]) no cambia. Esto significa que, mientras la actividad máxima del enzima (Vmax) disminuye en presencia del inhibidor, la constante de Michaelis-Menten (Km) permanece invariante. Estos resultados son compatibles con el hecho de que 6 actúe como un inhibidor de GSK-3P no competitivo con ATP, ya que un aumento en la concentración de ATP (de 1 a 50 μΜ) no interfiere con la inhibición enzimática.
Por otra parte, también se ha estudiado la dependencia de la actividad de GSK-3P en presencia de estos inhibidores en función de la concentración del sustrato, el péptido GS-2, utilizado en los ensayos. En estos estudios cinéticos se ha variado la concentración de GS-2 desde 15,5 a 100 μΜ manteniendo la concentración de ATP constante a 1 μΜ. La representación de dobles recíprocos (Figura 2) muestra de nuevo cómo el corte con el eje vertical (1/V) aumenta cuando la concentración del compuesto 6 aumenta (de 5 a 10 μΜ), mientras que el corte con el eje horizontal (1/[GS-2]) no cambia. Esto significa que, mientras la actividad máxima del enzima (Vmax) disminuye en presencia del inhibidor, la constante de Michaelis-Menten (Km) permanece invariante. Estos resultados son compatibles con el hecho de que el compuesto 6 actúe como un inhibidor de GSK-3 β no competitivo con sustrato, ya que un aumento en la concentración de GS-2 (de 15,5 a 100 μΜ) no interfiere con la inhibición enzimática.
Todos los estudios enzimáticos, tanto de niveles de actividad, como cinéticos aquí descritos, son compatibles con una modulación alostérica por parte de estos inhibidores sobre el enzima GSK-3p. Determinación de la actividad antiinflamatoria en modelos celulares.
Se utiliza un cultivo en monocapa de Células RAW 264,7 creciendo en placas de 96 pocilios. Las células se tratan durante 1 h con los compuestos evaluados. A continuación se estimula la actividad inflamatoria con 0,4 μg/ml de LPS durante 24 h. Pasado este tiempo se valora la producción de nitritos por el método Griess. Brevemente, 50 μΙ de sobrenadante se transfiere a placas de 96 pocilios y se añaden 50 μΙ de reactivo Griess. La mezcla se incuba durante 15 minutos a temperatura ambiente y la absorbancia a 520 nm se mide en un lector de microplacas.
Con el fin de determinar la capacidad de reducir la activación de la inflamación de los inhibidores alostéricos de GSK-3P en cultivos celulares, se ha evaluado el compuesto 6 a diversas concentraciones (1 ,25, 2,5, 5 y 10 μΜ), encontrando un efecto en la disminución de la liberación de nitritos dependiente de dosis.

Claims

REIVINDICACIONES
1 .- Uso de un mpuesto de fórmula (I)
Figure imgf000050_0001
Fórmula (I)
o sus sales, solvatos o estereoisómeros,
donde Ri se selecciona entre H, un grupo alquilo C1-C5 opcionalmente sustituido o un grupo alquenilo C2-C5 opcionalmente sustituido, R2 es un grupo alquilo C5-C15 opcionalmente sustituido, R3 se selecciona entre H, halógeno, un grupo alquilo C1-C5 opcionalmente sustituido o un grupo -(O)- alquilo C1-C5 opcionalmente sustituido, n es un valor entre 1 y 4, R4, R5 y R6 se seleccionan independientemente entre H o un grupo alquilo C1-C5 opcionalmente sustituido, con la condición de que cuando R1 es etilo o H y R3, R4, R5 y Re son H, R2 no puede ser heptilo, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento y/o prevención de una enfermedad que se selecciona entre enfermedades neurodegenerativas, enfermedades inflamatorias, cáncer, diabetes, o para promover procesos regenerativos.
2. - Uso de un compuesto según la reivindicación 1 , donde R4, R5 y R6 son H.
3. - Uso de un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2, donde R1 es H.
4.- Uso de un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2, donde Ri se selecciona de entre metilo opcionalmente sustituido, etilo o isobutilo.
5.- Uso de un compuesto según la reivindicación 4 donde Ri es metilo sustituido por ciclopropilo o fenilo.
6. - Uso de un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2, donde Ri es alquenilo C4.
7. - Uso de un compuesto según la reivindicación 6 donde Ri es isoprenilo.
8. - Uso de un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde R2 es un grupo alquilo C7.
9. - Uso de un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, donde R2 es un grupo alquilo Cu .
10.- Uso de un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9 donde R3 es Br, Cl o F.
1 1 . - Uso de un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, donde n es 1 .
12. - Uso de un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde R3 es H.
13.- Uso de un compuesto según la reivindicación 1 , donde dicho compuesto se selecciona del siguiente grupo: ■ 4-Hidroxi-1 -metil-N'-octanoil-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida
N'-Dodecanoil-4-hidroxi-1 -metil-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida
N'-Dodecanoil-1 -etil-4-hidroxi-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida
N'-Dodecanoil-4-hidroxi-2-oxo-2-hidroquinolin-3-carbohidrazida
■ 7-Cloro-4-hidroxi-N'-octanoil-2-oxo-2-hidroquinolin-3-carbohidrazida
■ 7-Cloro-N'-dodecanoil-4-hidroxi-2-oxo-2-hidroquinolin-3- carbohidrazida
■ 6-Fluor-N'-dodecanoil-4-hidroxi-2-oxo-2-hidroquinolin-3- carbohidrazida
■ 4-Hidroxi-1 -(isoprenil)-N'-octanoil-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida
N'-Dodecanoil-4-hidroxi-1 -(isoprenil)-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida
N'-Dodecanoil-4-hidroxi-1 -isobutil-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida
1 -(Ciclopropilmetil)-N'-dodecanoil-4-hidroxi-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolina- 3-carbohidrazida
1 -Bencil-N'-dodecanoil-4-hidroxi-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida
■ 6-Bromo-N'-dodecanoil-4-hidroxi-2-oxo-2-hidroquinolin-3- carbohidrazida
■ 6-Cloro-N'-dodecanoil-4-hidroxi-2-oxo-2-hidroquinolin-3- carbohidrazida
■ 6-Bromo-4-hidroxi-1 -metil-N'-octanoil-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida
■ 6-Bromo-N'-dodecanoil-4-hidroxi-1 -metil-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida
■ 6-Bromo-l -etil-4-hidroxi-N'-octanoil-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida ■ 6-Bromo-N'-dodecanoil-1 -etil-4-hidroxi-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida
■ 6-Cloro-4-hidroxi-1 -metil-N'-octanoil-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida
■ 6-Cloro-N'-dodecanoil-4-hidroxi-1 -metil-2-oxo-1 ,2-dihidroquinoline-3- carbohidrazida
■ 6-Cloro-1 -etil-4-hidroxi-N'-octanoil-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida
■ 6-Cloro-N'-dodecanoil-1 -etil-4-hidroxi-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida
■ 7-Cloro-4-hidroxi-1 -metil-N'-octanoil-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida
■ 7-Cloro-N'-dodecanoil-4-hidroxi-1 -metil-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida
■ 7-Cloro-1 -etil-4-hidroxi-N'-octanoil-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida
■ 7-Cloro-N'dodecanoil-1 -etil-4-hidroxi-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida
1 -Bencil-7-cloro-4-hidroxi-N'-octanoil-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida
1 -Bencil-7-cloro-N'dodecanoil-4-hidroxi-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida
N',1 -Dibencil-N'dodecanoil-4-hidroxi-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida
14.- Compuesto según la reivindicación 1 que se selecciona del siguiente grupo:
■ N'-Dodecanoil-1 -etil-4-hidroxi-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida
■ 7-Cloro-N'-dodecanoil-4-hidroxi-2-oxo-2-hidroquinolin-3- carbohidrazida ■ 6-Bromo-N'-dodecanoil-4-hidroxi-2-oxo-2-hidroquinolin-3- carbohidrazida
■ 6-Cloro-N'-dodecanoil-4-hidroxi-2-oxo-2-hidroquinolin-3- carbohidrazida
■ 6-Bromo-N'-dodecanoil-1 -etil-4-hidroxi-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida
■ 6-Cloro-N'-dodecanoil-1 -etil-4-hidroxi-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida
■ 7-Cloro-N'-dodecanoil-4-hidroxi-1 -metil-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida
■ 7-Clorc-N'dodecanoil-1 -etil-4-hidroxi-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida
15. - Uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14 donde la enfermedad neurodegenerativa se selecciona entre enfermedad de
Alzheimer, enfermedad de Parkinson, esclerosis lateral amiotrófica, isquemia cerebral, parkinsonismos post-encefalítico, distonias, síndrome de Tourette, patologías de movimientos límbicos periódicos, síndrome de piernas inquietas, trastornos de déficit de atención con hiperactividad, enfermedad de Huntington, parálisis supranuclear progresiva, enfermedad de Pick, demencia frontotemporal o enfermedades neuromusculares.
16. - Uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14 donde la enfermedad inflamatoria se selecciona entre enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa, artritis reumatoide, aterosclerosis, vasculitis o esclerosis múltiple.
17. - Uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14 donde el cáncer se selecciona entre glioblastoma, leucemias, linfomas, cáncer de pulmón, de mama, de próstata o de colon.
18. - Uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14 donde la diabetes es diabetes tipo II insulino no dependiente.
19. - Uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14 donde en el proceso regenerativo está implicada la diferenciación de las células madres del sistema nervioso, del sistema hematopoyético, del sistema óseo o del miocardio.
20. - Compuesto de fórmula II)
Figure imgf000055_0001
(II)
o sus sales, solvatos o estereoisómeros,
donde Ri se selecciona entre H, un grupo alquilo C1 -C5 opcionalmente sustituido o un grupo alquenilo C2-C5 opcionalmente sustituido, F¾ es un grupo alquilo C5-C15 opcionalmente sustituido, R3 es un halógeno, n es un valor entre 1 y 4, R4, R5 y R6 se seleccionan independientemente entre H o un grupo alquilo C1 -C5 opcionalmente sustituido.
21 . - Compuesto según la reivindicación 20 donde R4, R5 y R6 son H .
22. - Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 20 ó 21 , donde R1 es H .
23. - Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 20 ó 21 donde R1 se selecciona de entre metilo opcionalmente sustituido, etilo o isobutilo.
24.- Compuesto según la reivindicación 23 donde R1 es metilo sustituido por ciclopropilo o fenilo.
25. - Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 20 ó 21 donde Ri es un alquenilo C5.
26. - Compuesto según la reivindicación 25 donde Ri es isoprenilo.
27. - Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 20 a 26 donde R2 es un grupo alquilo Cu .
28. - Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 20 a 26 donde R2 es un grupo alquilo C7.
29. - Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 20 a 28 donde R3 se selecciona entre bromo, cloro o flúor.
30. - Compuesto según la reivindicación anterior, donde n es 1 .
31 . - Compuesto según la reivindicación 20, donde dicho compuesto se selecciona de entre el siguiente grupo:
■ 7-Cloro-4-hidroxi-N'-octanoil-2-oxo-2-hidroquinolin-3-carbohidrazida
7-Cloro-N'-dodecanoil-4-hidroxi-2-oxo-2-hidroquinolin-3- carbohidrazida
6-Fluor-N'-dodecanoil-4-hidroxi-2-oxo-2-hidroquinolin-3- carbohidrazida
4-Hidroxi-1 -(isoprenil)-N'-octanoil-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida
N'-Dodecanoil-4-hidroxi-1 -(isoprenil)-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida
N'-Dodecanoil-4-hidroxi-1 -isobutil-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida
1 -(Ciclopropilmetil)-N'-dodecanoil-4-hidroxi-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolina-
3-carbohidrazida 1 -Bencil-N'-dodecanoil-4-hidroxi-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida
■ 6-Bromo-N'-dodecanoil-4-hidroxi-2-oxo-2-hidroquinolin-3- carbohidrazida
■ 6-Cloro-N'-dodecanoil-4-hidroxi-2-oxo-2-hidroquinolin-3- carbohidrazida
■ 6-Bromo-4-hidroxi-1 -metil-N'-octanoil-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida
■ 6-Bromo-N'-dodecanoil-4-hidroxi-1 -metil-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida
■ 6-Bromo-1 -etil-4-hidroxi-N'-octanoil-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida
■ 6-Bromo-N'-dodecanoil-1 -etil-4-hidroxi-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida
■ 6-Cloro-4-hidroxi-1 -metil-N'-octanoil-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida
■ 6-Cloro-N'-dodecanoil-4-hidroxi-1 -metil-2-oxo-1 ,2-dihidroquinoline-3- carbohidrazida
■ 6-Cloro-1 -etil-4-hidroxi-N'-octanoil-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida
■ 6-Cloro-N'-dodecanoil-1 -etil-4-hidroxi-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida
■ 7-Cloro-4-hidroxi-1 -metil-N'-octanoil-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida
■ 7-Cloro-N'-dodecanoil-4-hidroxi-1 -metil-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida
■ 7-Cloro-1 -etil-4-hidroxi-N'-octanoil-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida
■ 7-Cloro-N'dodecanoil-1 -etil-4-hidroxi-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida
1 -Bencil-7-cloro-4-hidroxi-N'-octanoil-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida 1 -Bencil-7-cloro-N'dodecanoil-4-hidroxi-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida
N',1 -Dibencil-N'dodecanoil-4-hidroxi-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida
32.- Compuesto según la reivindicación 20 que se selecciona del siguiente grupo:
■ N'-Dodecanoil-1 -etil-4-hidroxi-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida
■ 7-Cloro-N'-dodecanoil-4-hidroxi-2-oxo-2-hidroquinolin-3- carbohidrazida
■ 6-Bromo-N'-dodecanoil-4-hidroxi-2-oxo-2-hidroquinolin-3- carbohidrazida
■ 6-Cloro-N'-dodecanoil-4-hidroxi-2-oxo-2-hidroquinolin-3- carbohidrazida
■ 6-Bromo-N'-dodecanoil-1 -etil-4-hidroxi-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida
■ 6-Cloro-N'-dodecanoil-1 -etil-4-hidroxi-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida
■ 7-Cloro-N'-dodecanoil-4-hidroxi-1 -metil-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida
■ 7-Cloro-N'-dodecanoil-1 -etil-4-hidroxi-2-oxo-1 ,2-dihidroquinolin-3- carbohidrazida
33.- Uso de un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 20 a 32 para la fabricación de un medicamento.
34. - Composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula (II) según cualquiera de las reivindicaciones 20 a 32.
35. - Composición según la reivindicación 34 que además comprende otro principio activo.
36.- Procedimiento de obtención de un compuesto de fórmula según la reivindicación 20 que comprende las siguientes etapas:
1 ) Reacción de una resina con un compuesto de fórmula
Figure imgf000059_0001
(I I I)
donde R7 y Rs son grupos alquilo C1-C5 iguales o diferentes.
2) Reacción del producto obtenido en la etapa anterior con un producto de fórmula (IV):
Figure imgf000059_0002
(IV)
donde R3 se define como en la reivindicación 20.
3) Reacción del producto obtenido en la etapa anterior
compuesto de fórmula (V):
Figure imgf000059_0003
(V)
donde R9 es un grupo alquilo C1-C5
4) Ciclación del producto obtenido en la etapa anterior.
5) Reacción del producto obtenido en la etapa anterior con un compuesto de fórmula (VI):
Figure imgf000060_0001
donde R2 se define como en la reivindicación 20.
37.- Procedimiento según la reivindicación 36 donde R7 y Rs son metilo.
38.- Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 36 ó 37 donde R9 es etilo.
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