WO2012141280A1 - Ｄｎａワクチン - Google Patents

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core antigen
hepatitis
antigen polypeptide
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森下　竜一
啓徳 中神
弘 郡山
太志 中神
奈都記 吉田
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国立大学法人 大阪大学
アンジェスＭｇ株式会社
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    • C12N2770/32011—Picornaviridae
    • C12N2770/32411—Hepatovirus, i.e. hepatitis A virus
    • C12N2770/32434—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein

Definitions

  • the present invention relates to a DNA vaccine effective for the treatment or prevention of lifestyle-related diseases such as hypertension.
  • Non-patent Document 1 Non-patent Document 1
  • a vaccine against hypertension refers to an exacerbation factor of hypertension, an epitope contained in the exacerbation factor, or an expression vector encoding them, to a hypertensive patient, and an antibody against the exacerbation factor is administered to the hypertensive patient. It is a method for treating hypertension by neutralizing the function of the exacerbation factor and alleviating the symptoms of hypertension.
  • Various factors including renin, angiotensin II, and AT-1 receptor have been proposed as vaccine targets (Non-patent Document 1).
  • Hepatitis B virus core (HBc) antigen protein self-assembles to form spherical core particles.
  • This core particle is very immunogenic.
  • a fusion polypeptide obtained by inserting a desired epitope at a specific site of the HBc antigen protein or linking the desired epitope to the end of the HBc antigen protein is used, the surface of the particle formed by self-assembly The epitope is presented. Therefore, when this fusion polypeptide is used, the inserted epitope is easily recognized by the immune system, and antibody production that recognizes the epitope can be efficiently induced.
  • attempts have been made to induce antibody production against an antigen that is difficult to be recognized by the immune system by using the HBc antigen protein as a vaccine platform (Non-patent Documents 2 and 3).
  • Patent Document 1 discloses a particle composed of a chimeric HBc antigen protein containing a foreign amino acid sequence having an epitope, wherein the foreign amino acid sequence is inserted between amino acid residues 80-81 of the HBc antigen. ing.
  • Patent Document 2 and Non-Patent Document 4 disclose a complex comprising an angiotensin II partial peptide, a spacer, and a virus-like particle (VLP), wherein the angiotensin II partial peptide is bound to the VLP via the spacer. . It is described that the complex can be useful as a vaccine against hypertension.
  • VLP virus-like particle
  • Patent Document 3 discloses an immunogenic polypeptide obtained by inserting a cholesteryl ester transfer protein (CETP) immunogen into a specific region of a hepatitis B core protein.
  • CETP cholesteryl ester transfer protein
  • Non-Patent Document 5 describes a DNA vaccine that encodes an epitope of 26 amino acid cholesteryl ester transfer protein (CETP) displayed on hepatitis B virus core (HBc) antigen protein and contains CpG DNA. It has been disclosed that arteriosclerosis was suppressed in an arteriosclerotic rabbit model by This DNA vaccine is designed such that the CETP epitope is inserted between amino acid residues 80-81 of the HBc antigen protein.
  • CETP cholesteryl ester transfer protein
  • Non-Patent Document 6 discloses that the position at which a foreign antigen is inserted into a hepatitis B virus core (HBc) antigen protein determines the immunogenicity. Further, it is disclosed that when an epitope is inserted between amino acid residues 75-81 of the hepatitis B virus core (HBc) antigen protein, the antibody titer against the inserted epitope is increased and the antibody titer against HBc is decreased. .
  • Non-Patent Document 7 discloses a hybrid HBcAb-CS particle designed so that a malaria CS protein repeat epitope is inserted between amino acid residues 75-81 of a hepatitis B virus core (HBc) antigen protein. It has been disclosed to prevent malaria infection in mice.
  • HBc hepatitis B virus core
  • Non-patent Document 8 an immunostimulatory sequence (ISS) as an adjuvant into a vaccine or insert it into an expression vector of an active ingredient
  • An object of the present invention is to provide an excellent vaccine against lifestyle-related diseases such as hypertension and hyperlipidemia.
  • the present inventors successfully treated hypertension with an expression vector encoding an angiotensin II-specific epitope inserted between amino acid residues 80 and 81 of the hepatitis B virus core antigen polypeptide. I found out that I could do it.
  • the administration mode of the expression vector was examined in detail, it was surprisingly successful to achieve good therapeutic results by subcutaneous administration with a needleless syringe or the like.
  • the antibody titer against angiotensin II induced by vaccine administration was monitored, the antibody titer became extremely high after only 3 administrations.
  • the present invention was completed.
  • the present invention relates to the following.
  • a therapeutic or ameliorating agent for a lifestyle-related disease comprising an expression vector encoding a chimeric hepatitis B virus core antigen polypeptide into which an amino acid sequence containing a specific epitope of a lifestyle-related factor is inserted, A therapeutic or ameliorating agent, wherein the amino acid sequence containing the specific epitope is inserted between amino acid residues 80 and 81 of the hepatitis B virus core antigen polypeptide.
  • the treatment or ameliorating agent according to [1] wherein the lifestyle-related disease is a kind selected from the group consisting of hypertension and hyperlipidemia.
  • a therapeutic or ameliorating agent for hypertension comprising an expression vector encoding a chimeric hepatitis B virus core antigen polypeptide into which the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 16 has been inserted, wherein the amino acid sequence comprises: A therapeutic or ameliorating agent inserted between amino acid residues 80 and 81 of a hepatitis B virus core antigen polypeptide.
  • CETP cholesteryl ester transfer protein
  • a therapeutic or ameliorating agent for hyperlipidemia comprising an expression vector encoding a chimeric hepatitis B virus core antigen polypeptide into which the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 17 is inserted, wherein the amino acid sequence Is inserted between amino acid residues 80 and 81 of the hepatitis B virus core antigen polypeptide.
  • the therapeutic or ameliorating agent according to any one of [1] to [7], wherein an immunostimulatory sequence (ISS) is further incorporated in the expression vector.
  • ISS immunostimulatory sequence
  • the therapeutic or ameliorating agent according to [8], wherein the immunostimulatory sequence (ISS) consists of the nucleotide sequence represented by SEQ ID NO: 22.
  • the treatment or ameliorating agent according to [1] to [14] which is administered three times at intervals of 2 weeks.
  • An expression vector encoding a chimeric hepatitis B virus core antigen polypeptide into which the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 17 has been inserted for use in the treatment or improvement of hyperlipidemia An expression vector wherein the amino acid sequence is inserted between amino acid residues 80 and 81 of the hepatitis B virus core antigen polypeptide.
  • Expression vector and needle encoding a chimeric hepatitis B virus core antigen polypeptide into which an amino acid sequence containing a specific epitope of a lifestyle-related disease factor is inserted, for use in the treatment or improvement of lifestyle-related diseases
  • An injection preparation comprising a syringe-free device, wherein the amino acid sequence containing the specific epitope is inserted between amino acid residues 80 and 81 of the hepatitis B virus core antigen polypeptide, and the expression vector
  • the mammal comprising administering an effective amount of an expression vector encoding a chimeric hepatitis B virus core antigen polypeptide into which an amino acid sequence containing a specific epitope of a lifestyle-related disease-related factor is inserted, to the mammal
  • [22] Hypertension in a mammal comprising administering to the mammal an effective amount of an expression vector encoding the chimeric hepatitis B virus core antigen polypeptide into which the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 16 has been inserted.
  • a high fat in a mammal comprising administering to the mammal an effective amount of an expression vector encoding a chimeric hepatitis B virus core antigen polypeptide into which the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 17 has been inserted.
  • a method for treating or ameliorating septicemia wherein the amino acid sequence is inserted between amino acid residues 80 and 81 of a hepatitis B virus core antigen polypeptide.
  • Injecting an effective amount of an expression vector encoding a chimeric hepatitis B virus core antigen polypeptide into which an amino acid sequence containing a specific epitope of a lifestyle-related disease-related factor is inserted into a mammal using a needleless syringe The method for treating or improving the lifestyle-related disease, wherein the amino acid sequence containing the specific epitope is inserted between amino acid residues 80 and 81 of the hepatitis B virus core antigen polypeptide.
  • the vertical axis represents rat blood pressure (mmHg), and the horizontal axis represents the time (weeks) after the start of administration. Change in antibody titer against AngII induced by administration of HBc-AngII ISS (+) over time.
  • the vertical axis represents absorbance, and the horizontal axis represents serum dilution.
  • the vertical axis represents absorbance, and the horizontal axis represents serum dilution. Effect of HBc-AngII ISS (+) administration on hypertension.
  • the vertical axis represents rat blood pressure (mmHg), and the horizontal axis represents the time (weeks) after the start of administration. Change in antibody titer against AngII induced by administration of HBc-AngII ISS (+) over time.
  • the vertical axis represents absorbance, and the horizontal axis represents time (weeks) after the start of administration.
  • the present invention is a therapeutic or ameliorating agent for a lifestyle-related disease comprising an expression vector encoding a chimeric hepatitis B virus core antigen polypeptide comprising an amino acid sequence into which an epitope of a lifestyle-related disease-related factor is inserted,
  • the present invention provides a therapeutic or ameliorating agent in which an amino acid sequence containing an epitope is inserted between amino acid residues 80 and 81 of a hepatitis B virus core antigen polypeptide.
  • lifestyle-related diseases are a general term for diseases caused by lifestyle habits such as eating habits, exercise habits, rest, smoking, and drinking.
  • Examples of lifestyle-related diseases include hypertension, hyperlipidemia, diabetes, arteriosclerosis, ischemic diseases (myocardial infarction, stroke, etc.), obesity and the like.
  • the lifestyle-related disease is preferably hypertension or hyperlipidemia. Particularly preferred is hypertension.
  • the lifestyle-related disease-related factor means a polypeptide that contributes to exacerbation of lifestyle-related diseases.
  • the therapeutic or ameliorating agent of the present invention induces antibody production against a lifestyle-related disease-related factor, and the antibody neutralizes the lifestyle-related disease-related factor to treat or improve lifestyle-related disease. Therefore, in consideration of this mechanism, the lifestyle-related disease-related factor is preferably a factor secreted outside the cell or a factor expressed on the cell surface so that it can be recognized by an antibody induced in the body of the patient.
  • the hypertension-related factor include polypeptides that contribute to an increase in blood pressure, such as angiotensin II, angiotensin I, ACE, renin, and AT-1 receptor.
  • the hypertension-related factor is preferably angiotensin II.
  • hyperlipidemia-related factors include polypeptides that contribute to an increase in blood lipid (particularly cholesterol or neutral fat) concentration such as cholesteryl ester transfer protein (CETP).
  • a lifestyle-related disease-related factor derived from a mammal of the same species as the mammal to which the therapeutic or ameliorating agent of the present invention is applied.
  • the application target of the therapeutic or ameliorating agent of the present invention is a mammal.
  • mammals include rodents such as mice, rats, hamsters, and guinea pigs, rabbit eyes such as rabbits, ungulates such as pigs, cows, goats, horses, and sheep, cats such as dogs and cats, and humans Primates such as monkeys, rhesus monkeys, cynomolgus monkeys, marmosets, orangutans and chimpanzees.
  • the mammal is preferably a rodent (such as a mouse) or a primate (such as a human). Therefore, for example, when the therapeutic or ameliorating agent of the present invention is applied to humans, use of human-related lifestyle-related disease-related factors is contemplated. In addition, when the therapeutic or ameliorating agent of the present invention is applied to mice, the use of lifestyle-related diseases-related factors derived from mice is contemplated.
  • factor X derived from organism Y” or “organism Y factor X” means that the amino acid sequence or nucleic acid sequence of factor X in organism Y It means having the same or substantially the same amino acid sequence or nucleic acid sequence as that of Factor X that is naturally expressed. “Substantially the same” means that the focused amino acid sequence or nucleic acid sequence is 70% or more (preferably 80% or more, more preferably 90%) of the amino acid sequence or nucleic acid sequence of factor X naturally expressed in the organism X. % Or more, more preferably 95% or more, most preferably 99% or more), and the function of the factor X is maintained.
  • an “epitope” is a basic element or minimum unit of recognition by an individual antibody or T cell receptor, and refers to a specific domain, region or molecular structure to which the antibody or T cell receptor binds.
  • the epitope of lifestyle-related disease-related factor is preferably specific for the lifestyle-related disease-related factor. “Specific” means that a gene product other than the lifestyle-related disease-related factor naturally expressed in the mammal from which the lifestyle-related disease-related factor is derived does not contain the epitope.
  • the epitope of the lifestyle-related disease-related factor is preferably selected as the epitope in which the activity of the lifestyle-related disease-related factor is inhibited when an antibody that recognizes the epitope binds to the epitope.
  • Such epitopes can be found in functional sites such as ligand binding sites, receptor binding sites, substrate binding sites, coenzyme binding sites, divalent ion binding sites, channel sites, sites recognized by specific enzymes, etc. obtain.
  • a person skilled in the art can appropriately select an epitope based on the three-dimensional structure of a lifestyle-related disease-related factor.
  • the length of the amino acid sequence of the epitope is usually 5 to 30 amino acids, preferably 6 to 25 amino acids. If the amino acid sequence is too short, the antigenicity as an epitope may be lost. If the amino acid sequence is too long, the chimeric hepatitis B virus core antigen polypeptide is difficult to form a core particle by self-assembly, and as a result, an antibody that specifically recognizes the epitope is not produced, and the disease is against lifestyle-related diseases. There is a possibility that a good treatment or improvement effect cannot be obtained.
  • Suitable epitopes related to lifestyle-related diseases include the following.
  • the epitope sequence of m) is useful for the treatment or amelioration of lifestyle diseases (preferably hypertension) in humans and rats.
  • a suitable epitope for angiotensin II is preferably DRVYIHPF (SEQ ID NO: 16). When this epitope is used, an antibody having a higher specificity for angiotensin II than for angiotensin I is induced.
  • RDGFLLLLQMDFGFPEHLLVDFFLQSL SEQ ID NO: 17
  • the epitope of a) is particularly useful for the treatment or amelioration of human, mouse and rabbit lifestyle-related diseases (preferably hyperlipidemia).
  • the hepatitis B virus core antigen polypeptide used in the present invention is: (1) a polypeptide comprising the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 2, or (2) 90% or more (preferably 95% or more, more preferably 97% or more, more preferably, the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 2 Is a polypeptide having an amino acid sequence having an identity of 99% or more) and having an activity of forming a core particle by self-assembly.
  • Self-assembly refers to a phenomenon in which an aggregate is formed by the association of molecules dissolved in a solution.
  • a core particle refers to a rigid structure having an inherent repetitive configuration.
  • the core particle herein may be a product of a synthesis process or a product of a biological process.
  • polypeptide of the aspect (2) examples include a polypeptide comprising the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 3 disclosed in WO2003 / 031466.
  • One or more cysteine residues at positions corresponding to positions 48, 61, 107 and 185 of the polypeptide having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 3 have been deleted or other amino acid residues (e.g. A polypeptide substituted with a serine residue) is also preferable as the polypeptide of the embodiment (2).
  • a cysteine residue at a similar position in a polypeptide having an amino acid sequence different from that shown in SEQ ID NO: 3 is also deleted or substituted with another amino acid residue. Polypeptides obtained by these deletions and substitutions are also included in the polypeptide of the embodiment (2).
  • polypeptide of the aspect (2) includes a mutant polypeptide in which the isoleucine residue at the position corresponding to position 97 in SEQ ID NO: 3 is substituted with a leucine residue or a phenylalanine residue (Yuan) Et al., J. Virol., 73, 10122-10128 (1999)).
  • amino acid sequences of many HBcAg mutants and several hepatitis B core antigen precursor mutants are GenBank reports AAF121240, AF121239, X85297, X02496, X85305, X85303, AF151735, X85259, X85286, X85260, X85317, X85298, AF043593 , M20706, X85295, X80925, X85284, X85275, X72702, X85291, X65258, X85302, M32138, X85293, X85315, U95555, X85256, X85316, X85296, 853X585 , X85272 X85319, AB010289, X85285, AB010289, AF121242, M90520, P03153, AF110999 and M95589, each of which is incorporated herein by reference, and poly
  • the variants are positions 12, 13, 21, 22, 24, 29, 32, 33, 35, 38, 40, 42, 44, 45, 49, 51, 57, 58, 59, 64, SEQ ID NO: 3. 66, 67, 69, 74, 77, 80, 81, 87, 92, 93, 97, 98, 100, 103, 105, 106, 109, 113, 116, 121, 126, 130, 133, 135, 141, The amino acid sequences at many positions are different, including amino acid residues corresponding to those present at 147, 149, 157, 176, 178, 182 and 183.
  • polypeptides comprising the amino acid sequences of the HBcAg variants described in WO 01/98333, WO 01/77158 and WO 02/14478, all of which are incorporated herein by reference. , (2) are included in the polypeptide.
  • the position of the amino acid residue of the amino acid sequence of the hepatitis B virus core antigen polypeptide is specified based on the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 2 unless otherwise specified.
  • the amino acid sequence of the polypeptide is aligned with the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 2, and the position of the corresponding amino acid residue is adopted. .
  • the hepatitis B virus core antigen polypeptide used in the present invention is preferably a polypeptide comprising the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 2.
  • the amino acid sequence containing the epitope of the lifestyle-related disease-related factor is inserted between amino acid residues 80 and 81 of the hepatitis B virus core antigen polypeptide. Has been.
  • the chimeric hepatitis B virus core antigen polypeptide used in the present invention comprises the following components (a) to (c): (A) the N-terminal partial polypeptide residue of the hepatitis B virus core antigen polypeptide (consisting of a continuous amino acid sequence from the N terminus of the hepatitis B virus core antigen polypeptide to amino acid residue 80), (B) the amino acid sequence of the epitope of lifestyle-related disease-related factor, and (c) the C-terminal partial polypeptide residue of hepatitis B virus core antigen polypeptide (from amino acid residues 81 to C of hepatitis B virus core antigen polypeptide) Consists of amino acid sequences that continue to the end) From the N-terminal side in the order of (a), (b), (c).
  • the chimeric hepatitis B virus core antigen polypeptide used in the present invention forms core particles by self-assembly with the above-described configuration, and epitopes of lifestyle-related disease-related factors are presented outside the particles.
  • the component (a) and the component (b) may be directly linked by a covalent bond or may be linked via a spacer sequence.
  • the component (a) and The component (b) is preferably linked via a spacer sequence.
  • spacer sequence is meant an amino acid sequence comprising one or more amino acid residues inserted between two adjacent components contained in a chimeric hepatitis B virus core antigen polypeptide.
  • the length of the spacer sequence is not limited as long as the chimeric hepatitis B virus core antigen polypeptide forms a core particle by self-assembly, and the epitope of lifestyle-related disease-related factor is presented on the outside of the particle. 10 amino acids, preferably 1 to 5 amino acids, more preferably 1 to 3 amino acids, most preferably 2 or 3 amino acids.
  • the type of the spacer sequence is not limited as long as the chimeric hepatitis B virus core antigen polypeptide forms a core particle by self-assembly and an epitope of a lifestyle-related disease-related factor is presented on the outside of the particle. Examples of preferred spacer sequences include IT, GAT, CGG and the like, but are not limited thereto.
  • the component (b) and the component (c) may be directly linked by a covalent bond or may be linked via a spacer sequence.
  • the component (b) and the component (b) are arranged so that the epitope of the lifestyle-related disease-related factor can be stably presented outside the core particle formed by self-assembly of the chimeric hepatitis B core antigen polypeptide.
  • the component (c) is preferably linked via a spacer sequence.
  • the length of the spacer sequence is not limited as long as the chimeric hepatitis B virus core antigen polypeptide forms a core particle by self-assembly, and the epitope of lifestyle-related disease-related factor is presented on the outside of the particle.
  • the type of the spacer sequence is not limited as long as the chimeric hepatitis B virus core antigen polypeptide forms a core particle by self-assembly and an epitope of a lifestyle-related disease-related factor is presented on the outside of the particle.
  • preferred spacer sequences include IT, GAT, CGG and the like, but are not limited thereto.
  • the component (a) and the component (b) are linked via the spacer sequence IT, and the component (b) and the component (c) are linked via the spacer sequence GAT.
  • the expression vector used in the present invention is a recombinant vector incorporating a polynucleotide encoding the chimeric hepatitis B virus core antigen polypeptide.
  • the expression vector When the expression vector is administered to the target mammal, the expression vector is taken into the cells of the target mammal, and the cells express the chimeric hepatitis B virus core antigen polypeptide.
  • Examples of the expression vector into which the polynucleotide encoding the chimeric hepatitis B virus core antigen polypeptide is inserted include plasmids, viruses, phages, cosmids, and other vectors conventionally used in the art.
  • Plasmid vectors include pCAGGS (Gene 108: 193-199 (1991)), pCR-X8 (Vaccine 24: 4942-4950 (2006)), pcDNA3.1 (trade name, Invitrogen), pZeoSV (trade name, Invitrogen) And pBK-CMV (trade name, Stratagene) and the like, but are not limited thereto.
  • the viral vector is a DNA virus or an RNA virus.
  • Viral vectors include detoxified retrovirus, adenovirus, adeno-associated virus, herpes virus, vaccinia virus, poxvirus, poliovirus, Sindbis virus, Sendai virus (HVJ), SV40, and human immunodeficiency virus (HIV), etc. However, it is not limited to these.
  • Sendai virus envelope HVJ-E can be used.
  • a polynucleotide preferably DNA
  • a chimeric hepatitis B virus core antigen polypeptide is used as a promoter capable of exhibiting promoter activity in a mammalian (preferably human) cell to be administered. Functionally linked.
  • the promoter used is not particularly limited as long as it can function in mammalian cells to be administered.
  • a pol I promoter, pol II promoter, pol III promoter, or the like can be used as the promoter.
  • SV40-derived early promoter, viral promoter such as cytomegalovirus LTR, mammalian constituent protein gene promoter such as ⁇ -actin gene promoter, and RNA promoter such as tRNA promoter are used.
  • the expression vector preferably contains a transcription termination signal, that is, a terminator region, downstream of the polynucleotide encoding the chimeric hepatitis B virus core antigen polypeptide.
  • a selection marker gene for selecting transformed cells a gene that imparts resistance to drugs such as tetracycline, ampicillin, and kanamycin, a gene that complements an auxotrophic mutation, and the like.
  • the expression vector may contain an immunostimulatory sequence (ISS) (also referred to as CpG) in order to enhance the immune effect.
  • Immunostimulatory sequences are DNA containing bacterial unmethylated CpG motifs and are known to act as ligands for specific receptors (Toll-like receptor 9) (see Biochim. Biophys. Acta 1489, for details). 107-116 (1999) and Curr. Opin. Microbiol. 6, 472-477 (2003)).
  • Preferable examples of the immunostimulatory sequence include the following.
  • ISS sequences include the following. 5'-ggt gca tcg atg cag ggg gg tga ctg tga acg ttc gag atg a tcg tcg aac gtt cgagat gat tcg aac gtt cga acg ttc gaa cgt t-3 '(SEQ ID NO: 22)
  • the therapeutic or ameliorating agent of the present invention can be provided as a pharmaceutical composition containing an arbitrary carrier, for example, a pharmaceutically acceptable carrier, in addition to a therapeutically effective amount of the expression vector.
  • Examples of pharmaceutically acceptable carriers include sucrose, starch, mannitol, sorbit, lactose, glucose, cellulose, talc, calcium phosphate, calcium carbonate, and other excipients, cellulose, methylcellulose, hydroxypropylcellulose, gelatin, arabic Binders such as rubber, polyethylene glycol, sucrose, starch, starch, carboxymethyl cellulose, hydroxypropyl starch, sodium-glycol starch, sodium bicarbonate, calcium phosphate, calcium citrate and other disintegrants, magnesium stearate, aerosil, talc Lubricants such as sodium lauryl sulfate, fragrances such as citric acid, menthol, glycyrrhizin / ammonium salt, glycine, orange powder, sodium benzoate, hydrogen sulfite Preservatives such as thorium, methylparaben, propylparaben, stabilizers such as citric acid, sodium citrate and acetic acid, suspensions
  • the therapeutic or ameliorating agent of the present invention may further contain an adjuvant in order to enhance its effect.
  • the adjuvant include aluminum hydroxide, complete Freund's adjuvant, incomplete Freund's adjuvant, Bordetella pertussis adjuvant, poly (I: C), CpG-DNA and the like.
  • the therapeutic or improving agent of the present invention may further contain a nucleic acid introduction reagent.
  • reagents for nucleic acid introduction lipofectin (trade name, Invitrogen), lipofectamine (trade name, Invitrogen), transfectam (trade name, Promega), DOTAP (trade name, Roche Applied Science), dioctadecylamidoglycyl spermine (DOGS), L -dioleoyl phosphatidyl-ethanolamine (DOPE), dimethyldioctadecyl-ammonium bromide (DDAB), N, N-di-n-hexadecyl-N, N-dihydroxyethylammonium bromide (DHDEAB), Nn-hexadecyl-N, N-dihydroxyethylammonium Bromide (H) , Polybrene, or cationic lipids such as poly (ethylene), lipofectamine (trade name, Invitrogen
  • the expression vector may be encapsulated in any known liposome composed of lipid bilayers such as electrostatic liposomes.
  • the liposomes may be fused to a virus such as inactivated Sendai virus (Hemagglutinating virus of Japan; HVJ).
  • HVJ-liposomes have a very high fusion activity with respect to cell membranes compared to normal liposomes.
  • retronectin, fibronectin, polybrene, or the like can be used as an introduction reagent.
  • the content of the expression vector in the pharmaceutical composition is not particularly limited and is appropriately selected in a wide range, but is usually about 0.00001 to 100% by weight of the whole pharmaceutical composition.
  • the therapeutic or ameliorating agent of the present invention induces in vivo expression of the chimeric hepatitis B virus core antigen polypeptide by introducing the expression vector into a mammalian tissue (or cell) to be applied, Inducing the production of an antibody against an epitope of a lifestyle-related disease-related factor contained in the chimeric hepatitis B virus core antigen polypeptide and neutralizing the activity of the lifestyle-related disease-related factor in the mammal, It treats or improves the lifestyle-related diseases.
  • Various methods for introducing a nucleic acid such as an expression vector into a living body are known (T.
  • Methods for introducing expression vectors into mammalian tissues (or cells) in vivo include internal liposome method, electrostatic liposome method, HVJ-liposome method, HVJ-AVE liposome method, receptor-mediated gene introduction, particle Examples include, but are not limited to, the cancer method, the naked DNA method, and the introduction method using a positively charged polymer.
  • blood cells, bone marrow cells and the like are isolated from the mammal to which the method is applied, the expression vector is introduced into the cells ex vivo, and then the cells containing the obtained expression vector are applied. It may be returned to the mammal.
  • Examples of methods for introducing an expression vector into mammalian cells ex vivo include, but are not limited to, lipofection method, calcium phosphate coprecipitation method, DEAE-dextran method, and direct DNA introduction method using a micro glass tube. .
  • the therapeutic or ameliorating agent of the present invention induces in vivo expression of the chimeric hepatitis B virus core antigen polypeptide in a mammal to be administered, and is associated with lifestyle-related diseases contained in the chimeric hepatitis B virus core antigen polypeptide. Any method may be used as long as it induces antibody production against the epitope of the factor and can treat or ameliorate lifestyle-related diseases.
  • the therapeutic or ameliorating agent of the present invention induces antibody production against an epitope of a lifestyle-related disease-related factor contained in a chimeric hepatitis B virus core antigen polypeptide parenterally to a mammal to be administered, An amount sufficient to treat or ameliorate is administered.
  • the therapeutic or ameliorating agent of the present invention is injected subcutaneously or intramuscularly, preferably subcutaneously.
  • the therapeutic or ameliorating agent of the present invention is administered subcutaneously with a needleless syringe.
  • the needleless syringe is preferably a pressure syringe.
  • needleless syringes include Shimajet (trade name, Shimadzu Corporation), Twinjector EZII (trade name, Nippon Chemical Research), Sirijet (trade name, Keystone), ZEEO (trade name, crossject), and the like. Although it can, it is not limited to these.
  • the therapeutic or ameliorating agent of the present invention can be provided as an injection preparation comprising the expression vector and a needleless syringe, wherein the expression vector is enclosed in the needleless syringe.
  • the therapeutic or ameliorating agent of the present invention is administered subcutaneously, intradermally or intramuscularly with a gene gun.
  • the expression vector can be used for administration by coating on carrier particles such as colloidal gold particles introduced into the living body. Techniques for coating carrier particles with a polynucleotide are known (see, for example, WO 93/17706).
  • the expression vector can be prepared in an aqueous solution such as physiological saline suitable for administration to a living body.
  • the therapeutic or ameliorating agent of the present invention is preferably administered multiple times at regular intervals.
  • the number of times can be appropriately set while monitoring the strength of the immune response, but is usually 2 to 10 times, preferably 2 to 6 times, more preferably 2 to 4 times, and most preferably 3 times.
  • the administration frequency is usually once every 3 days to 3 months, preferably once every 1 to 4 weeks, more preferably once every 1.5 to 3 weeks, and most preferably once every 2 weeks.
  • the therapeutic or ameliorating agent of the present invention is administered to the target mammal three times at 2-week intervals.
  • the dose of the therapeutic or ameliorating agent of the present invention can be adjusted to the immunogenicity in the mammal to which the epitope of the lifestyle-related disease-related factor contained in the chimeric hepatitis B virus core antigen polypeptide encoded by the expression vector as an active ingredient is administered.
  • a certain amount of the expression vector is administered to a mammal to be administered, and an antibody titer specific to the epitope is measured by an assay method such as ELISA, and the immune response is observed.
  • the dose required for a good immune response can be determined.
  • the immunogenicity of the therapeutic or ameliorating agent of the present invention also depends on the strength of a control sequence such as a promoter used in an expression vector which is an active ingredient.
  • a control sequence such as a promoter used in an expression vector which is an active ingredient.
  • a person skilled in the art can easily adjust the dose of the therapeutic or ameliorating agent of the present invention according to the type of expression vector used.
  • Example 1 Construction of HBc-AngII expressing construct 1-1-1. Preparation of HBc- AngII and HBc sequences and TA cloning Plasmid pPLc3 (Accession number LMBP 2470) was purchased from BCCM / LMBP Plasmid Collection. The following primers were designed and synthesized.
  • Each primer sequence corresponds to the following position of the nucleotide sequence (SEQ ID NO: 1) encoding the hepatitis B virus core (HBc) antigen protein.
  • HBc F 1st to 33rd nucleotides.
  • HBc R nucleotides 527 to 556.
  • H2 A nucleotide encoding 2 amino acids (IT) of spacer and a part of AngII sequence are linked to nucleotides 221 to 241.
  • H3-II A part of AngII sequence and 3 amino acids (GAT) of spacer are linked to nucleotides 242 to 259.
  • the first DNA fragment containing the N-terminal part of HBc, the spacer, and a part of AngII was amplified by PCR using a template (plasmid pPLc3) and a primer set (HBc F and H2). Furthermore, a second DNA fragment containing a part of AngII, a spacer, and a C-terminal part of HBc was amplified by PCR using a template (plasmid pPLc3) and a primer set (H3-II and HBc R).
  • the first DNA fragment and the second DNA fragment are amplified by the third PCR (primer set; HBc F and HBc R) using the annealing of the overlapping portion.
  • Two DNA fragments were ligated to obtain an amplification product (HBc-AngII). That is, it encodes a polypeptide comprising a spacer and a partial sequence of AngII between the 241st base and the 242nd base of the nucleotide sequence (SEQ ID NO: 1) encoding the hepatitis B virus core (HBc) antigen protein.
  • SEQ ID NO: 1 encoding the hepatitis B virus core (HBc) antigen protein.
  • the nucleotide sequence to be inserted was inserted.
  • HBc-AngII ISS (-) vector was obtained by TA cloning of HBc-AngII into pcDNA3.1 / V5-His TOPO TA ExpressiontroKit (Invitrogen). Similarly, PCR was performed using a template (plasmid pPLc3) and a primer set (HBcF and HBcR) to prepare a DNA fragment encoding the full-length polypeptide of HBc, which was then added to the pcDNA 3.1 / V5-His TOPO vector. The HBcBISS ( ⁇ ) vector was obtained by cloning.
  • HBc-AngII ISS (+) and HBc ISS (+) vectors preparation of ISS sequences and insertion into vectors
  • the following templates CpG (A + B + C + C) -F and CpG (A + B + C + C) -R) and primers (DraIII-F and DraIII-R) were designed and synthesized.
  • CpG (A + B + C + C) -F and CpG (A + B + C + C) -R are used as templates, PCR is performed using DraIII-F and DraIII-R primer sets, and DraIII at both ends.
  • a DNA fragment (DraIII-ISS) containing an ISS sequence having a site was obtained.
  • DraIII-ISS and vectors HBc-AngII ISS (-) and HBc ISS (-) were cleaved with DraIII.
  • the vector was treated with alkaline phosphatase, and ligated with the enzyme digestion product of DraIII-ISS to insert ISS into the vector DraIII site (1621).
  • HBc-AngII ISS (+) group 12 HBc ISS (+) group: 7 mice were administered at 0 weeks, 2 weeks and 4 weeks, and blood pressure measurement, serum collection and antibody titer measurement were performed 0 weeks, 4 weeks, 8 weeks and 16 weeks after the start of administration.
  • Tail-cuff method (1) (Tail cuff method measuring equipment) Manufacturer: Softron Co., Ltd. Product name BP-98A (rat / mouse non-invasive automatic blood pressure measuring device)
  • Tail cuff method (2) (References) Evaluation of New Tail-cuff Method for Blood Pressure Measurement in Rats with Special Reference to the Effect of Ambient Temperature EXPERIMENTAL ANIMALS Vol.40 No.3: 331-336 (1991) Antihypertensive Effect of Sesamin.I.
  • ELISA method (reagents and measuring instruments) ⁇ Angiotensin II-BSA conjugate, Angiotensin I-BSA conjugate: DSS (Disuccinimidyl suberate) as a spacer ⁇ Angiotensinogen (Human): sigma A2562 ⁇ Nunc Maxisorp (Cat.442404) ⁇ 3% skim milk (PBS diluted) ⁇ PBS-T (0.05% Tween) ⁇ Secondary antibody: HRP-conjugated anti-mouse IgG secondary antibody (GE, NA931V), HRP-conjugated anti-rat IgG secondary antibody (GE, NA935V) ⁇ TMB solution: sigma T0440 Stop solution: 0.5N H 2 SO 4 ⁇ Microplate reader (InterMed, ImmunoMini NJ-2300)
  • the antibody titer against BSA-AngII which was not observed before the vaccine administration, was increased by a total of three vaccine administrations (weeks 0, 2, and 4). The antibody titer increased most at 8 weeks after 3 administrations, and was maintained in a decreasing trend at 16 weeks (FIG. 2). Moreover, the HBc-AngII vaccine administration increased the antibody titer against BSA-AngII more strongly than the antibody titer against BSA-AngI (FIG. 3).
  • Example 2 Similar to Animal Experiment Example 1, each vector was administered three times every two weeks using Shimajet (trade name, Shimadzu Corp.) on the dorsal skin of 10-week-old hypertensive rats (SHR) (100 ⁇ g / ⁇ l ⁇ 2 Place / times).
  • HBc-AngII ISS (+) group 6
  • HBc ISS (+) group 4 mice
  • Saline group 5 mice administered at 0 weeks, 2 weeks, 4 weeks, 0 weeks, 4 weeks, 8 weeks, 12 weeks, 16 weeks, 20 weeks and 24 from the start of administration After a week, blood pressure measurement, serum collection and antibody titer measurement were performed.
  • Blood pressure measurement by tail cuff method As in Example 1, blood pressure was measured by the tail cuff method. Each individual was measured 5 to 15 times, and the average value was used. (result) In the HBc ISS (+) group (control) and the physiological saline group, the blood pressure of SHR rats increased. On the other hand, the HBc-AngII ISS (+) group showed a clear decrease in blood pressure (FIG. 4). This blood pressure lowering effect lasted 24 weeks after the start of administration.
  • the antibody titer against BSA-AngII which was not observed before the vaccine administration, was increased by a total of three vaccine administrations (weeks 0, 2, and 4). An increase in antibody titer was detected 4 weeks after the start of administration. This increase in antibody titer was maintained after 24 weeks from the start of administration (FIG. 5).

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Abstract

　本発明は、生活習慣病関連因子の特異的エピトープを含むアミノ酸配列が挿入されたキメラＢ型肝炎ウイルスコア抗原ポリペプチドをコードする発現ベクターを含む、当該生活習慣病の治療又は改善剤であって、該特異的エピトープを含むアミノ酸配列が、Ｂ型肝炎ウイルスコア抗原ポリペプチドのアミノ酸残基８０と８１の間に挿入されている、治療又は改善剤を提供するものである。

Description

ＤＮＡワクチン
　本発明は、高血圧症等の生活習慣病の治療又は予防に有効なＤＮＡワクチンに関する。
　米国における高血圧症の患者のうち、わずか３５％しか適切に血圧をコントロールできていないことが報告されている。このように、高血圧症治療の成績が振るわないのは、患者が医師の指示に従わないこと（即ち、ノンコンプライアンス）が、主要な原因の１つとなっている。このノンコンプライアンスの問題を解決しうる療法として、高血圧症に対するワクチンが注目されている（非特許文献１）。
　高血圧症に対するワクチンとは、高血圧症の増悪因子、該増悪因子に含まれるエピトープ、或いはこれらをコードする発現ベクターを高血圧症の患者に対して投与し、該増悪因子に対する抗体を該高血圧症の患者の体内に誘導することにより、該増悪因子の機能を中和し、高血圧症の症状を緩和する、高血圧症の治療方法である。レニン、アンギオテンシンＩＩ、及びＡＴ－１受容体を含む様々な因子が、ワクチンのターゲットとして提案されている（非特許文献１）。
　しかしながら、レニン、アンギオテンシンＩＩ、ＡＴ－１受容体等の因子は、そもそも患者自身の成分であるため、通常はこれらの因子に対する免疫寛容が成立している。そのため、これらの因子やその部分ペプチドをそのまま患者に投与しても、これらの因子に対する抗体を患者の体内に誘導することは困難である。そこで、これらの自己抗原を患者の免疫系に認識させ、これに対する抗体産生を誘導するための技術的な工夫が必要である。
　Ｂ型肝炎ウイルスコア（ＨＢｃ）抗原タンパク質は、自己集合して球状のコア粒子を構成する。このコア粒子は非常に免疫原性が高い。このＨＢｃ抗原タンパク質の特定の部位に、所望のエピトープを挿入するか、ＨＢｃ抗原タンパク質の末端に所望のエピトープを連結することにより得られる融合ポリペプチドを用いると、自己集合により形成される粒子の表面に当該エピトープが提示される。そのため、この融合ポリペプチドを用いると、挿入したエピトープが免疫系に認識され易くなり、当該エピトープを認識する抗体産生を効率的に誘導することができる。そこで、ＨＢｃ抗原タンパク質をワクチンのプラットフォームとして利用して、免疫系に認識されにくい抗原に対する抗体産生を誘導する試みがなされている（非特許文献２、非特許文献３）。
　特許文献１には、エピトープを有する外来アミノ酸配列を含むキメラＨＢｃ抗原タンパク質から構成される粒子であって、外来アミノ酸配列がＨＢｃ抗原のアミノ酸残基８０－８１の間に挿入された粒子が開示されている。
　特許文献２及び非特許文献４には、アンギオテンシンＩＩの部分ペプチド、スペーサー、及びウイルス様粒子（ＶＬＰ）を含み、アンギオテンシンＩＩの部分ペプチドがスペーサーを介してＶＬＰに結合した複合体が開示されている。そして該複合体が高血圧症に対するワクチンとして有用であり得ることが記載されている。
　特許文献３には、コレステリル・エステル転送蛋白（ＣＥＴＰ）免疫原をＢ型肝炎コアタンパク質の特定の領域に挿入することにより得られる免疫原性ポリペプチドが開示されている。
　非特許文献５には、Ｂ型肝炎ウイルスコア（ＨＢｃ）抗原タンパク質に表示させた、２６アミノ酸からなるコレステリル・エステル転送蛋白（ＣＥＴＰ）のエピトープをコードし、ＣｐＧ ＤＮＡを含む、ＤＮＡワクチンを筋肉内に免疫することにより、動脈硬化ウサギモデルにおいて、動脈硬化を抑制したことが開示されている。このＤＮＡワクチンは、ＨＢｃ抗原タンパク質のアミノ酸残基８０－８１の間にＣＥＴＰのエピトープが挿入されるようにデザインされている。
　非特許文献６には、外来性の抗原をＢ型肝炎ウイルスコア（ＨＢｃ）抗原タンパク質に挿入する位置が、免疫原性を決定することが開示されている。そして、Ｂ型肝炎ウイルスコア（ＨＢｃ）抗原タンパク質のアミノ酸残基７５－８１の間にエピトープを挿入すると、挿入したエピトープに対する抗体価が上昇し、ＨＢｃに対する抗体価が減少したことが開示されている。
　非特許文献７には、Ｂ型肝炎ウイルスコア（ＨＢｃ）抗原タンパク質のアミノ酸残基７５－８１の間にマラリアのＣＳタンパク質リピートエピトープが挿入されるようにデザインされた、ハイブリッドＨＢｃＡｂ－ＣＳ粒子が、マウスのマラリア感染を防止したことが開示されている。
　また、免疫効果を増強するために、アジュバントとして免疫刺激配列（ＩＳＳ）をワクチンに配合し、或いは有効成分の発現ベクターの中に挿入することが提案されている（非特許文献８）。
　しかしながら、高血圧症等の生活習慣病に対するワクチンの有効性は十分に満足できるものではない。
特許第３２２８７３７号公報 国際公開第２００３／０３１４６６号パンフレット 国際公開第９９／１５６５５号パンフレット
T. H. Do et al., Expert Opin. Biol. Ther., vol.10, no.7, pp.1077-1087, 2010 D. C. Whitacre et al., Expert Rev. Vaccines, vol.8, no.11, pp.1565-1573, 2009 B. E. Clarke et al., Nature, vol.330, pp.381-384, 1987 P. M. Ambuhl et al., Journal of Hypertension, vol.25, no.1, pp.63-72, 2007 D. Mao et al., Vaccine, vol.24, pp.4942-4950, 2006 F. Schodel et al., Journal of Virology, vol.66, no.1, pp.106-114, 1992 F. Schodel et al., The Journal of Experimental Medicine, vol.180, pp.1037-1046, 1994 J D Marshall et al., Journal of Leukocyte Biology, vol.82, pp.497-508, 2007
　本発明は、高血圧症、高脂血症等の生活習慣病に対する優れたワクチンを提供することを目的とする。
　本発明者らは、鋭意検討の結果、Ｂ型肝炎ウイルスコア抗原ポリペプチドのアミノ酸残基８０と８１の間に挿入した、アンギオテンシンＩＩ特異的エピトープをコードする発現ベクターにより、高血圧症を良好に治療し得ることを見出した。発現ベクターの投与態様について詳細に検討したところ、意外にも針無注射器等で皮下に投与することにより良好な治療成績を上げることに成功した。更に、ワクチン投与により誘導されるアンギオテンシンＩＩに対する抗体価をモニターしたところ、わずか３回の投与により抗体価が極めて高くなった。これらの知見に基づき、更に検討を加えた結果、本発明を完成させた。
　即ち、本発明は以下に関する。
［１］生活習慣病関連因子の特異的エピトープを含むアミノ酸配列が挿入されたキメラＢ型肝炎ウイルスコア抗原ポリペプチドをコードする発現ベクターを含む、当該生活習慣病の治療又は改善剤であって、該特異的エピトープを含むアミノ酸配列が、Ｂ型肝炎ウイルスコア抗原ポリペプチドのアミノ酸残基８０と８１の間に挿入されている、治療又は改善剤。
［２］生活習慣病が、高血圧症及び高脂血症からなる群から選択された一種である、［１］記載の治療又は改善剤。
［３］生活習慣病関連因子が、アンギオテンシンＩＩ(AngＩＩ)又はコレステリル・エステル転送蛋白(CETP)である、［１］又は［２］記載の治療又は改善剤。
［４］生活習慣病関連因子が、アンギオテンシンＩＩ(AngＩＩ)であり、且つ特異的エピトープを含むアミノ酸配列が、配列番号１６で表されるアミノ酸配列である、［３］記載の治療又は改善剤。
［５］配列番号１６で表されるアミノ酸配列が挿入された、キメラＢ型肝炎ウイルスコア抗原ポリペプチドをコードする発現ベクターを含む、高血圧症の治療又は改善剤であって、該アミノ酸配列が、Ｂ型肝炎ウイルスコア抗原ポリペプチドのアミノ酸残基８０と８１の間に挿入されている、治療又は改善剤。
［６］生活習慣病関連因子が、コレステリル・エステル転送蛋白(CETP)であり、且つ特異的エピトープを含むアミノ酸配列が、配列番号１７で表されるアミノ酸配列である、［３］記載の治療又は改善剤。
［７］配列番号１７で表されるアミノ酸配列が挿入された、キメラＢ型肝炎ウイルスコア抗原ポリペプチドをコードする発現ベクターを含む、高脂血症の治療又は改善剤であって、該アミノ酸配列が、Ｂ型肝炎ウイルスコア抗原ポリペプチドのアミノ酸残基８０と８１の間に挿入されている、治療又は改善剤。
［８］発現ベクター中に、さらに免疫刺激性配列(ISS)が組み込まれている、［１］～［７］のいずれか１つに記載の治療又は改善剤。
［９］免疫刺激性配列(ISS)が、配列番号２２で表されるヌクレオチド配列からなる、［８］記載の治療又は改善剤。
［１０］針無注射器を用い、皮下に投与されることを特徴とする、［１］～［９］のいずれか１つに記載の治療又は改善剤。
［１１］針無注射器が圧力注射器である、［１０］記載の治療又は改善剤。
［１２］複数回投与されることを特徴とする、［１］～［１１］のいずれか１つに記載の治療又は改善剤。
［１３］投与回数が２又は３回である、［１２］記載の治療又は改善剤。
［１４］投与回数が３回である、［１３］記載の治療又は改善剤。
［１５］２週間隔で３回投与することを特徴とする、［１］～［１４］記載の治療又は改善剤。
［１６］生活習慣病関連因子の特異的エピトープを含むアミノ酸配列が挿入されたキメラＢ型肝炎ウイルスコア抗原ポリペプチドをコードする発現ベクター及び針無注射器を含む、当該生活習慣病の治療又は改善用注射製剤であって、該特異的エピトープを含むアミノ酸配列が、Ｂ型肝炎ウイルスコア抗原ポリペプチドのアミノ酸残基８０と８１の間に挿入されており、該発現ベクターが該針無注射器内に封入されている、注射製剤。
［１７］生活習慣病の治療又は改善において使用するための、当該生活習慣病関連因子の特異的エピトープを含むアミノ酸配列が挿入されたキメラＢ型肝炎ウイルスコア抗原ポリペプチドをコードする発現ベクターであって、該特異的エピトープを含むアミノ酸配列が、Ｂ型肝炎ウイルスコア抗原ポリペプチドのアミノ酸残基８０と８１の間に挿入されている、発現ベクター。
［１８］高血圧症の治療又は改善において使用するための、配列番号１６で表されるアミノ酸配列が挿入された、キメラＢ型肝炎ウイルスコア抗原ポリペプチドをコードする発現ベクターであって、該アミノ酸配列が、Ｂ型肝炎ウイルスコア抗原ポリペプチドのアミノ酸残基８０と８１の間に挿入されている、発現ベクター。
［１９］高脂血症の治療又は改善において使用するための、配列番号１７で表されるアミノ酸配列が挿入された、キメラＢ型肝炎ウイルスコア抗原ポリペプチドをコードする発現ベクターであって、該アミノ酸配列が、Ｂ型肝炎ウイルスコア抗原ポリペプチドのアミノ酸残基８０と８１の間に挿入されている、発現ベクター。
［２０］生活習慣病の治療又は改善において使用するための、当該生活習慣病関連因子の特異的エピトープを含むアミノ酸配列が挿入されたキメラＢ型肝炎ウイルスコア抗原ポリペプチドをコードする発現ベクター及び針無注射器を含む注射製剤であって、該特異的エピトープを含むアミノ酸配列が、Ｂ型肝炎ウイルスコア抗原ポリペプチドのアミノ酸残基８０と８１の間に挿入されており、該発現ベクターが該針無注射器内に封入されている、注射製剤。
［２１］生活習慣病関連因子の特異的エピトープを含むアミノ酸配列が挿入されたキメラＢ型肝炎ウイルスコア抗原ポリペプチドをコードする発現ベクターの有効量を哺乳動物に投与することを含む、当該哺乳動物における当該生活習慣病の治療又は改善方法であって、該特異的エピトープを含むアミノ酸配列が、Ｂ型肝炎ウイルスコア抗原ポリペプチドのアミノ酸残基８０と８１の間に挿入されている、方法。
［２２］配列番号１６で表されるアミノ酸配列が挿入された、キメラＢ型肝炎ウイルスコア抗原ポリペプチドをコードする発現ベクターの有効量を哺乳動物に投与することを含む、該哺乳動物における高血圧症の治療又は改善方法であって、該アミノ酸配列が、Ｂ型肝炎ウイルスコア抗原ポリペプチドのアミノ酸残基８０と８１の間に挿入されている、方法。
［２３］配列番号１７で表されるアミノ酸配列が挿入された、キメラＢ型肝炎ウイルスコア抗原ポリペプチドをコードする発現ベクターの有効量を哺乳動物に投与することを含む、該哺乳動物における高脂血症の治療又は改善方法であって、該アミノ酸配列が、Ｂ型肝炎ウイルスコア抗原ポリペプチドのアミノ酸残基８０と８１の間に挿入されている、方法。
［２４］生活習慣病関連因子の特異的エピトープを含むアミノ酸配列が挿入されたキメラＢ型肝炎ウイルスコア抗原ポリペプチドをコードする発現ベクターの有効量を針無注射器により哺乳動物へ注入することを含む、当該生活習慣病の治療又は改善方法であって、該特異的エピトープを含むアミノ酸配列が、Ｂ型肝炎ウイルスコア抗原ポリペプチドのアミノ酸残基８０と８１の間に挿入されている、方法。
［２５］生活習慣病の治療又は改善剤を製造するための、当該生活習慣病関連因子の特異的エピトープを含むアミノ酸配列が挿入されたキメラＢ型肝炎ウイルスコア抗原ポリペプチドをコードする発現ベクターの使用であって、該特異的エピトープを含むアミノ酸配列が、Ｂ型肝炎ウイルスコア抗原ポリペプチドのアミノ酸残基８０と８１の間に挿入されている、使用。
［２６］高血圧症の治療又は改善剤を製造するための、配列番号１６で表されるアミノ酸配列が挿入された、キメラＢ型肝炎ウイルスコア抗原ポリペプチドをコードする発現ベクターの使用であって、該アミノ酸配列が、Ｂ型肝炎ウイルスコア抗原ポリペプチドのアミノ酸残基８０と８１の間に挿入されている、使用。
［２７］高脂血症の治療又は改善剤を製造するための、配列番号１７で表されるアミノ酸配列が挿入された、キメラＢ型肝炎ウイルスコア抗原ポリペプチドをコードする発現ベクターの使用であって、該アミノ酸配列が、Ｂ型肝炎ウイルスコア抗原ポリペプチドのアミノ酸残基８０と８１の間に挿入されている、使用。
［２８］生活習慣病の治療又は改善用注射製剤を製造するための、当該生活習慣病関連因子の特異的エピトープを含むアミノ酸配列が挿入されたキメラＢ型肝炎ウイルスコア抗原ポリペプチドをコードする発現ベクター及び針無注射器の使用であって、該特異的エピトープを含むアミノ酸配列が、Ｂ型肝炎ウイルスコア抗原ポリペプチドのアミノ酸残基８０と８１の間に挿入されている、使用。
　高血圧症、高脂血症等の生活習慣病の治療や予防に対する優れたワクチンが提供される。
高血圧症に対するHBc-AngII　ISS(+)投与の効果。縦軸はラットの血圧（mmHg）を、横軸は投与開始後の時間（週）を示す。 HBc-AngII　ISS(+)投与により誘導されるAngIIに対する抗体価の経時的変化。縦軸は吸光度、横軸は血清の希釈率を示す。 HBc-AngII　ISS(+)投与により誘導される8週のAngI及びAngIIに対する抗体価。縦軸は吸光度、横軸は血清の希釈率を示す。 高血圧症に対するHBc-AngII　ISS(+)投与の効果。縦軸はラットの血圧（mmHg）を、横軸は投与開始後の時間（週）を示す。 HBc-AngII　ISS(+)投与により誘導されるAngIIに対する抗体価の経時的変化。縦軸は吸光度、横軸は投与開始後の時間（週）を示す。
　本発明は、生活習慣病関連因子のエピトープが挿入されたアミノ酸配列を含むキメラＢ型肝炎ウイルスコア抗原ポリペプチドをコードする発現ベクターを含む、当該生活習慣病の治療又は改善剤であって、該エピトープを含むアミノ酸配列が、Ｂ型肝炎ウイルスコア抗原ポリペプチドのアミノ酸残基８０と８１の間に挿入されている、治療又は改善剤を提供するものである。
　本明細書において生活習慣病とは、食生活や運動習慣、休養、喫煙、飲酒などの生活習慣によって引き起こされる病気の総称である。生活習慣病としては、高血圧症、高脂血症、糖尿病、動脈硬化症、虚血性疾患（心筋梗塞、脳卒中等）、肥満等を挙げることができる。生活習慣病は、好ましくは、高血圧症又は高脂血症である。特に好ましくは高血圧症である。
　本明細書において生活習慣病関連因子とは、生活習慣病の増悪に寄与するポリペプチドを意味する。本発明の治療又は改善剤は、生活習慣病関連因子に対する抗体産生を誘導し、その抗体が生活習慣病関連因子を中和することにより生活習慣病を治療又は改善するものである。従って、このメカニズムを考慮すると、生活習慣病関連因子は、患者の体内に誘導された抗体により認識され得るように、細胞外に分泌される因子又は細胞表面に発現する因子であることが好ましい。
　高血圧症関連因子としては、例えば、アンギオテンシンＩＩ、アンギオテンシンＩ、ＡＣＥ、レニン、ＡＴ－１受容体等の血圧の上昇に寄与するポリペプチドを挙げることができる。高血圧症関連因子は、好ましくは、アンギオテンシンＩＩである。
　高脂血症関連因子としては、例えば、コレステリル・エステル転送蛋白（ＣＥＴＰ）等の血液中の脂質（特に、コレステロール又は中性脂肪）濃度の上昇に寄与するポリペプチドを挙げることができる。
　本発明においては、本発明の治療又は改善剤の適用対象である哺乳動物と同一種の哺乳動物由来の生活習慣病関連因子の使用が意図される。本発明の治療又は改善剤の適用対象は、哺乳動物である。哺乳動物としては、例えば、マウス、ラット、ハムスター、モルモット等のげっ歯類、ウサギ等のウサギ目、ブタ、ウシ、ヤギ、ウマ、ヒツジ等の有蹄目、イヌ、ネコ等のネコ目、ヒト、サル、アカゲザル、カニクイザル、マーモセット、オランウータン、チンパンジーなどの霊長類等を挙げることが出来る。哺乳動物は、好ましくはげっ歯類（マウス等）又は霊長類（ヒト等）である。従って、例えば、本発明の治療又は改善剤をヒトへ適用する場合、ヒト由来の生活習慣病関連因子の使用が意図される。また、本発明の治療又は改善剤をマウスへ適用する場合、マウス由来の生活習慣病関連因子の使用が意図される。
　本明細書において、特定の因子Ｘ（ポリペプチド又はポリヌクレオチド）について、「生物Ｙ由来の因子Ｘ」又は「生物Ｙ因子Ｘ」とは、該因子Ｘのアミノ酸配列又は核酸配列が、生物Ｙにおいて天然に発現している該因子Ｘのアミノ酸配列又は核酸配列と同一又は実質的に同一のアミノ酸配列又は核酸配列を有することを意味する。「実質的に同一」とは、着目したアミノ酸配列又は核酸配列が、生物Ｘにおいて天然に発現している因子Ｘのアミノ酸配列又は核酸配列と７０％以上（好ましくは８０％以上、より好ましくは９０％以上、更に好ましくは９５％以上、最も好ましくは９９％以上）の同一性を有しており、且つ当該因子Ｘの機能が維持されていることを意味する。
　本明細書において、「エピトープ」とは、個々の抗体又はＴ細胞受容体による認識の基本要素又は最小単位であって、前記抗体又はＴ細胞受容体が結合する特定のドメイン、領域又は分子構造をいう。
　生活習慣病関連因子のエピトープは、当該生活習慣病関連因子に特異的であることが好ましい。「特異的」とは、当該生活習慣病関連因子が由来する哺乳動物において天然に発現している当該生活習慣病関連因子以外の遺伝子産物が当該エピトープを含まないことを意味する。
　生活習慣病関連因子のエピトープは、当該エピトープを認識する抗体が該エピトープに結合した場合に、当該生活習慣病関連因子の活性が阻害される位置にあるものが好適に選択される。そのようなエピトープは、例えば、リガンド結合部位、受容体結合部位、基質結合部位、補酵素結合部位、２価イオン結合部位、チャンネル部位、特異的酵素により認識される部位等の機能的部位にあり得る。当業者であれば、生活習慣病関連因子の立体構造等に基づき、適宜エピトープを選択することができる。
　当該エピトープのアミノ酸配列の長さは、通常５～３０アミノ酸、好ましくは６～２５アミノ酸である。該アミノ酸配列が短すぎるとエピトープとしての抗原性が失われる可能性ある。また該アミノ酸配列が長すぎると、キメラＢ型肝炎ウイルスコア抗原ポリペプチドが自己集合によりコア粒子を形成し難くなり、結果として当該エピトープを特異的に認識する抗体が産生されず、生活習慣病に対する良好な治療又は改善効果が得られなくなる可能性がある。
　生活習慣病関連因子の好適なエピトープの具体例として、以下のものを挙げることができる。
（アンギオテンシンＩＩ）（WO2003/031466及びJournal of Hypertension, vol.25, no.1, pp.63-72, 2007）
ａ）ＣＧＧＤＲＶＹＩＨＰＦ（配列番号４）
ｂ）ＣＧＧＤＲＶＹＩＨＰＦＨＬ（配列番号５）
ｃ）ＤＲＶＹＩＨＰＦＨＬＧＧＣ（配列番号６）
ｄ）ＣＤＲＶＹＩＨＰＦＨＬ（配列番号７）
ｅ）ＣＨＰＦＨＬ（配列番号８）
ｆ）ＣＧＰＦＨＬ（配列番号９）
ｇ）ＣＹＩＨＰＦ（配列番号１０）
ｈ）ＣＧＩＨＰＦ（配列番号１１）
ｉ）ＣＧＧＨＰＦ（配列番号１２）
ｊ）ＣＲＶＹＩＧＧＣ（配列番号１３）
ｋ）ＤＲＶＹＧＧＣ（配列番号１４）
ｌ）ＤＲＶＧＧＣ（配列番号１５）
ｍ）ＤＲＶＹＩＨＰＦ（配列番号１６）
　ａ）～ｌ）のエピトープは、特に、ヒト及びマウスの生活習慣病（好ましくは高血圧症）の治療又は改善に有用である。ｍ）のエピトープ配列はヒト及びラットの生活習慣病（好ましくは高血圧症）の治療又は改善に有用である。
　アンギオテンシンＩＩの好適なエピトープは、好ましくはＤＲＶＹＩＨＰＦ（配列番号１６）である。該エピトープを用いるとアンギオテンシンＩよりもアンギオテンシンＩＩに特異性の高い抗体が誘導される。
（コレステリル・エステル転送蛋白(ＣＥＴＰ)）（Vaccine, vol.24, pp.4942-4950, 2006）
ａ）ＲＤＧＦＬＬＬＱＭＤＦＧＦＰＥＨＬＬＶＤＦＬＱＳＬ（配列番号１７）
　ａ）のエピトープは、特に、ヒト、マウス及びラビットの生活習慣病（好ましくは高脂血症）の治療又は改善に有用である。
　本発明において使用されるＢ型肝炎ウイルスコア抗原ポリペプチドは、
（１）配列番号２で表されるアミノ酸配列を含むポリペプチド、又は
（２）配列番号２で表されるアミノ酸配列と９０％以上（好ましくは９５％以上、より好ましくは９７％以上、更に好ましくは９９％以上）の同一性を有するアミノ酸配列を含み、且つ自己集合によりコア粒子を形成する活性を有するポリペプチド
である。
　自己集合とは、溶液中に溶けている分子が会合することによって集合体を形成する現象をいう。コア粒子とは、固有の反復性の構成を有する剛性構造をいう。本明細書中のコア粒子は合成工程の産物または生物的工程の産物であってよい。
　（２）の態様のポリペプチドとして、ＷＯ２００３／０３１４６６に開示された配列番号３で表されるアミノ酸配列を含むポリペプチドが挙げられる。配列番号３で表されるアミノ酸配列を有するポリペプチドの位置４８、６１、１０７および１８５に対応する位置の１つ又は複数のシステイン残基を欠失させた、又は他のアミノ酸残基（例えば、セリン残基）で置換したポリペプチドも、（２）の態様のポリペプチドとして好ましい。当業者が認識しているように、配列番号３に示されているものと異なるアミノ酸配列を有するポリペプチドにおける同様な位置にあるシステイン残基も欠失させ、又は他のアミノ酸残基で置換することができ、これらの欠失、置換により得られるポリペプチドも（２）の態様のポリペプチドに包含される。
　また、（２）の態様のポリペプチドには、配列番号３における位置９７に対応する位置のイソロイシン残基がロイシン残基又はフェニルアラニン残基で置換されている変異体ポリペプチドが包含される（Ｙｕａｎら、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．第７３巻、１０１２２～１０１２８頁（１９９９））。また、多くのＨＢｃＡｇ変異体ならびに数種のＢ型肝炎コア抗原前駆変異体のアミノ酸配列がＧｅｎＢａｎｋ報告ＡＡＦ１２１２４０、ＡＦ１２１２３９、Ｘ８５２９７、Ｘ０２４９６、Ｘ８５３０５、Ｘ８５３０３、ＡＦ１５１７３５、Ｘ８５２５９、Ｘ８５２８６、Ｘ８５２６０、Ｘ８５３１７、Ｘ８５２９８、ＡＦ０４３５９３、Ｍ２０７０６、Ｘ８５２９５、Ｘ８０９２５、Ｘ８５２８４、Ｘ８５２７５、Ｘ７２７０２、Ｘ８５２９１、Ｘ６５２５８、Ｘ８５３０２、Ｍ３２１３８、Ｘ８５２９３、Ｘ８５３１５、Ｕ９５５５１、Ｘ８５２５６、Ｘ８５３１６、Ｘ８５２９６、ＡＢ０３３５５９、Ｘ５９７９５、Ｘ８５２９、Ｘ８５３０７、Ｘ６５２５７、Ｘ８５３１１、Ｘ８５３０１、Ｘ８５３１４、Ｘ８５２８７、Ｘ８５２７２、Ｘ８５３１９、ＡＢ０１０２８９、Ｘ８５２８５、ＡＢ０１０２８９、ＡＦ１２１２４２、Ｍ９０５２０、Ｐ０３１５３、ＡＦ１１０９９９およびＭ９５５８９に開示されており（この開示のそれぞれが参照により本明細書に組込まれる）、これらの変異体のアミノ酸配列を含むポリペプチドも（２）の態様のポリペプチドに包含される。上記変異体は、配列番号３における位置１２、１３、２１、２２、２４、２９、３２、３３、３５、３８、４０、４２、４４、４５、４９、５１、５７、５８、５９、６４、６６、６７、６９、７４、７７、８０、８１、８７、９２、９３、９７、９８、１００、１０３、１０５、１０６、１０９、１１３、１１６、１２１、１２６、１３０、１３３、１３５、１４１、１４７、１４９、１５７、１７６、１７８、１８２および１８３に存在するアミノ酸残基に対応するアミノ酸残基を含む多くの位置におけるアミノ酸配列が異なっている。
　更に、全部が参照により本明細書に組込まれる国際公開第０１／９８３３３号、国際公開第０１／７７１５８号および国際公開第０２／１４４７８号に記載されたＨＢｃＡｇ変異体のアミノ酸配列を含むポリペプチドも、（２）の態様のポリペプチドに包含される。
　本明細書において、Ｂ型肝炎ウイルスコア抗原ポリペプチドのアミノ酸配列のアミノ酸残基の位置は、特にことわりのない限り、配列番号２で表されるアミノ酸配列を基準として特定される。配列番号２で表されるアミノ酸配列を含まないポリペプチドの場合には、当該ポリペプチドのアミノ酸配列を配列番号２で表されるアミノ酸配列と並び合わせ、対応するアミノ酸残基の位置が採用される。
　本発明において使用されるＢ型肝炎ウイルスコア抗原ポリペプチドは、好ましくは、配列番号２で表されるアミノ酸配列を含むポリペプチドである。
　本発明に用いられるキメラＢ型肝炎ウイルスコア抗原ポリペプチドにおいては、上記生活習慣病関連因子のエピトープを含むアミノ酸配列が、Ｂ型肝炎ウイルスコア抗原ポリペプチドのアミノ酸残基８０と８１の間に挿入されている。即ち、本発明に用いられるキメラＢ型肝炎ウイルスコア抗原ポリペプチドは、以下の（ａ）～（ｃ）の構成要素：
（ａ）Ｂ型肝炎ウイルスコア抗原ポリペプチドのＮ末端部分ポリペプチド残基（Ｂ型肝炎ウイルスコア抗原ポリペプチドのＮ末端からアミノ酸残基８０までの連続する部位アミノ酸配列からなる）、
（ｂ）生活習慣病関連因子のエピトープのアミノ酸配列、及び
（ｃ）Ｂ型肝炎ウイルスコア抗原ポリペプチドのＣ末端部分ポリペプチド残基（Ｂ型肝炎ウイルスコア抗原ポリペプチドのアミノ酸残基８１からＣ末端までの連続する部位アミノ酸配列からなる）
をＮ末端側から（ａ）、（ｂ）、（ｃ）の順序で含む。
　本発明に用いられるキメラＢ型肝炎ウイルスコア抗原ポリペプチドは、上記構成により、自己集合によりコア粒子を形成し、その粒子の外側に生活習慣病関連因子のエピトープが提示される。
　構成要素（ａ）と構成要素（ｂ）とは、直接共有結合により連結されていてもよいし、スペーサー配列を介して連結されていてもよい。キメラＢ型肝炎ウイルスコア抗原ポリペプチドが自己集合して形成するコア粒子の外側に、生活習慣病関連因子のエピトープがその構造を維持しながら安定に提示され得るように、構成要素（ａ）と構成要素（ｂ）とは、スペーサー配列を介して連結されていることが好ましい。スペーサー配列とは、キメラＢ型肝炎ウイルスコア抗原ポリペプチドに含まれる２つの近接した構成要素の間に挿入される１以上のアミノ酸残基を含むアミノ酸配列を意味する。スペーサー配列の長さは、キメラＢ型肝炎ウイルスコア抗原ポリペプチドが自己集合によりコア粒子を形成し、その粒子の外側に生活習慣病関連因子のエピトープが提示される限り限定されないが、通常１～１０アミノ酸、好ましくは１～５アミノ酸、より好ましくは１～３アミノ酸、最も好ましくは２又は３アミノ酸である。スペーサー配列の種類も、キメラＢ型肝炎ウイルスコア抗原ポリペプチドが自己集合によりコア粒子を形成し、その粒子の外側に生活習慣病関連因子のエピトープが提示される限り限定されない。好ましいスペーサー配列として、ＩＴ、ＧＡＴ、ＣＧＧ等を例示することができるが、これらに限定されない。
　構成要素（ｂ）と構成要素（ｃ）とは、直接共有結合により連結されていてもよいし、スペーサー配列を介して連結されていてもよい。キメラＢ型肝炎ウイルスコア抗原ポリペプチドが自己集合して形成するコア粒子の外側に、生活習慣病関連因子のエピトープがその構造を維持しながら安定に提示され得るように、構成要素（ｂ）と構成要素（ｃ）とは、スペーサー配列を介して連結されていることが好ましい。スペーサー配列の長さは、キメラＢ型肝炎ウイルスコア抗原ポリペプチドが自己集合によりコア粒子を形成し、その粒子の外側に生活習慣病関連因子のエピトープが提示される限り限定されないが、通常１～１０アミノ酸、好ましくは１～５アミノ酸、より好ましくは１～３アミノ酸、最も好ましくは２又は３アミノ酸である。スペーサー配列の種類も、キメラＢ型肝炎ウイルスコア抗原ポリペプチドが自己集合によりコア粒子を形成し、その粒子の外側に生活習慣病関連因子のエピトープが提示される限り限定されない。好ましいスペーサー配列として、ＩＴ、ＧＡＴ、ＣＧＧ等を例示することができるが、これらに限定されない。
　好ましい態様において、構成要素（ａ）と構成要素（ｂ）とがスペーサー配列ＩＴを介して連結し、構成要素（ｂ）と構成要素（ｃ）とがスペーサー配列ＧＡＴを介して連結する。
　本発明において用いられる発現ベクターは、上記キメラＢ型肝炎ウイルスコア抗原ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを組込んだ組換えベクターである。当該発現ベクターを対象哺乳動物に投与すると、当該対象哺乳動物の細胞内に該発現ベクターが取り込まれ、該細胞が上記キメラＢ型肝炎ウイルスコア抗原ポリペプチドを発現する。キメラＢ型肝炎ウイルスコア抗原ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを挿入する発現ベクターとしてはプラスミド、ウイルス、ファージ、コスミド、及び、当分野において従来用いられるその他のベクターを例示することができる。プラスミドベクターとしては、pCAGGS（Gene 108：193～199（1991））、pCR-X8（Vaccine 24：4942～4950（2006））、pcDNA3.1(商品名、Invitrogen）、pZeoSV(商品名、Invitrogen）、およびpBK-CMV(商品名、Stratagene）等を例示することができるがこれらに限定されない。ウイルスベクターは、DNAウイルス又はRNAウイルスである。ウイルスベクターとしては、無毒化レトロウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルス、ワクシニアウイルス、ポックスウイルス、ポリオウイルス、シンドビスウイルス、センダイウイルス（HVJ）、SV40、およびヒト免疫不全ウイルス（HIV）等を例示することができるがこれらに限定されない。さらにセンダイウイルスエンベロープ（HVJ-E）等も利用できる。
　上記発現ベクターにおいては、キメラＢ型肝炎ウイルスコア抗原ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド（好ましくはＤＮＡ）が、投与対象である哺乳動物（好ましくはヒト）の細胞内でプロモーター活性を発揮し得るプロモーターに機能的に連結されている。
　使用されるプロモーターは、投与対象である哺乳動物の細胞内で機能し得るものであれば特に制限はない。プロモーターとしては、ｐｏｌＩ系プロモーター、ｐｏｌＩＩ系プロモーター、ｐｏｌＩＩＩ系プロモーター等を使用することができる。具体的には、ＳＶ４０由来初期プロモーター、サイトメガロウイルスＬＴＲ等のウイルスプロモーター、β－アクチン遺伝子プロモーター等の哺乳動物の構成蛋白質遺伝子プロモーター、並びにｔＲＮＡプロモーター等のＲＮＡプロモーター等が用いられる。
　上記発現ベクターは、好ましくはキメラＢ型肝炎ウイルスコア抗原ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの下流に転写終結シグナル、すなわちターミネーター領域を含有する。さらに、形質転換細胞選択のための選択マーカー遺伝子（テトラサイクリン、アンピシリン、カナマイシン等の薬剤に対する抵抗性を付与する遺伝子、栄養要求性変異を相補する遺伝子等）をさらに含有することもできる。
　一態様において、上記発現ベクターは、免疫効果を増強するため、免疫刺激性配列（ＩＳＳ）（ＣｐＧともいう）を含んでいてもよい。免疫刺激性配列は、細菌の非メチル化CpGモチーフを含むDNAであり、特定の受容体（Toll-like receptor 9）のリガンドとして働くことが知られている（詳細はBiochim. Biophys. Acta 1489, 107-116 (1999) 及び Curr. Opin. Microbiol. 6, 472-477 (2003)参照）。免疫刺激性配列の好適な例として、以下を挙げることができる。
CpG-B1018 22bp
5’-tga ctg tga acg ttc gag atg a-3’（配列番号１８）
CpG-A D19 20bp (D type)
5’-ggt gca tcg atg cag ggg gg-3’（配列番号１９）
CpG-CC274 21bp
5’-tcg tcg aac gtt cga gat gat-3’（配列番号２０）
CpG-CC695 25bp
5’-tcg aac gtt cga acg ttc gaa cgt t-3’（配列番号２１）
　或いはこれらのＩＳＳのうちの２、３又は４個を連結して使用してもよい。連結したＩＳＳ配列の好適な例として以下を挙げることができる。
5’-ggt gca tcg atg cag ggg gg tga ctg tga acg ttc gag atg a tcg tcg aac gtt cgagat gat tcg aac gtt cga acg ttc gaa cgt t-3’（配列番号２２）
　当業者であれば、例えば、“ｅｄｉｔ．Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（１９８９）Ｎ．Ｙ．”、及び、“ｅｄｉｔ．Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（１９８７）Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ” 等に記載の周知の遺伝子工学的技術により上述の発現ベクターを構築することが可能である。
　本発明の治療又は改善剤は、治療的有効量の上記発現ベクターに加え、任意の担体、例えば医薬上許容される担体を含む医薬組成物として提供することができる。
　医薬上許容され得る担体としては、例えば、ショ糖、デンプン、マンニット、ソルビット、乳糖、グルコース、セルロース、タルク、リン酸カルシウム、炭酸カルシウム等の賦形剤、セルロース、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ゼラチン、アラビアゴム、ポリエチレングリコール、ショ糖、デンプン等の結合剤、デンプン、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルスターチ、ナトリウム－グリコール－スターチ、炭酸水素ナトリウム、リン酸カルシウム、クエン酸カルシウム等の崩壊剤、ステアリン酸マグネシウム、エアロジル、タルク、ラウリル硫酸ナトリウム等の滑沢剤、クエン酸、メントール、グリチルリチン・アンモニウム塩、グリシン、オレンジ粉等の芳香剤、安息香酸ナトリウム、亜硫酸水素ナトリウム、メチルパラベン、プロピルパラベン等の保存剤、クエン酸、クエン酸ナトリウム、酢酸等の安定剤、メチルセルロース、ポリビニルピロリドン、ステアリン酸アルミニウム等の懸濁剤、界面活性剤等の分散剤、水、生理食塩水等の希釈剤、カカオ脂、ポリエチレングリコール、白灯油等のベースワックスなどが挙げられるが、それらに限定されるものではない。
　本発明の治療又は改善剤は、その効果を増強するため、アジュバントを更に含有してもよい。アジュバントとしては、水酸化アルミニウム、完全フロイントアジュバント、不完全フロイントアジュバント、百日咳菌アジュバント、ポリ（Ｉ：Ｃ）、ＣｐＧ－ＤＮＡ等が挙げられる。
　発現ベクターの細胞内への導入を促進するために、本発明の治療又は改善剤は、核酸導入用試薬を更に含有してもよい。核酸導入用試薬としては、リポフェクチン(商品名、Invitrogen）、リポフェクタミン(商品名、Invitrogen）、トランスフェクタム（商品名、Promega）、ＤＯＴＡＰ（商品名、Roche Applied Science）、dioctadecylamidoglycyl spermine（ＤＯＧＳ）、L-dioleoyl phosphatidyl-ethanolamine（ＤＯＰＥ）、dimethyldioctadecyl-ammonium bromide（ＤＤＡＢ）、N,N-di-n-hexadecyl-N,N-dihydroxyethylammonium bromide（ＤＨＤＥＡＢ）、N-n-hexadecyl-N,N-dihydroxyethylammonium bromide（ＨＤＥＡＢ）、ポリブレン、あるいはポリ（エチレンイミン）（ＰＥＩ）等の陽イオン性脂質、を用いることが出来る。また、発現ベクターを静電気的リポソームのような脂質二重層で構成される任意の既知のリポソームに封入してもよい。該リポソームは、不活化センダイウイルス（Hemagglutinating virus of Japan；HVJ）のようなウイルスに融合させてもよい。HVJ-リポソームは、通常のリポソームと比較して細胞膜に対して非常に高い融合活性を有する。また、発現ベクターとしてレトロウイルスを用いる場合には、導入試薬としてレトロネクチン、ファイブロネクチン、ポリブレン等を用いることができる。
　当該医薬組成物中の上記発現ベクターの含有量は、特に限定されず広範囲に適宜選択されるが、通常、医薬組成物全体の約０．００００１ないし１００重量％である。
　本発明の治療又は改善剤は、適用対象である哺乳動物の組織（又は細胞）内への上記発現ベクターの導入により、上記キメラＢ型肝炎ウイルスコア抗原ポリペプチドのｉｎ ｖｉｖｏ発現を誘導し、該キメラＢ型肝炎ウイルスコア抗原ポリペプチドに含まれる生活習慣病関連因子のエピトープに対する抗体産生を誘導し、誘導された抗体が当該生活習慣病関連因子の活性を中和することにより、該哺乳動物における当該生活習慣病を治療又は改善するものである。発現ベクター等の核酸を生体内へ導入する種々の方法が知られており（Ｔ．Ｆｒｉｅｄｍａｎ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４４：１２７５－１２８１（１９８９））、上記キメラＢ型肝炎ウイルスコア抗原ポリペプチドのｉｎ ｖｉｖｏ発現を誘導し、該キメラＢ型肝炎ウイルスコア抗原ポリペプチドに含まれる生活習慣病関連因子のエピトープに対する抗体産生を誘導し、生活習慣病を治療又は改善する限り、どのような導入方法を採用することも可能である。
　ｉｎ ｖｉｖｏで哺乳動物の組織（又は細胞）内に発現ベクターを導入する方法としては、内部型リポソーム法、静電気型リポソーム法、HVJ-リポソーム法、HVJ-AVEリポソーム法、受容体媒介遺伝子導入、パーティクルガン法、裸のDNA法、陽性荷電ポリマーによる導入法が挙げられるが、これらに限定されない。
　或いは、適用対象である哺乳動物から、血液細胞、骨髄細胞等の細胞を単離し、該細胞へｅｘ ｖｉｖｏで上記発現ベクターを導入し、その後、得られた上記発現ベクターを含む細胞を適用対象の哺乳動物へ戻してもよい。
　ｅｘ ｖｉｖｏで哺乳動物の細胞内に発現ベクターを導入する方法としては、リポフェクション法、リン酸カルシウム共沈殿法、DEAE-デキストラン法、微小ガラス管を用いる直接DNA導入法等が挙げられるが、これらに限定されない。
　本発明の治療又は改善剤は、投与対象哺乳動物に、上記キメラＢ型肝炎ウイルスコア抗原ポリペプチドのｉｎ ｖｉｖｏ発現を誘導し、該キメラＢ型肝炎ウイルスコア抗原ポリペプチドに含まれる生活習慣病関連因子のエピトープに対する抗体産生を誘導し、生活習慣病を治療又は改善しうる限り、いかなる方法により投与してもよい。好ましくは、本発明の治療又は改善剤は非経口的に、投与対象哺乳動物にキメラＢ型肝炎ウイルスコア抗原ポリペプチドに含まれる生活習慣病関連因子のエピトープに対する抗体産生を誘導し、生活習慣病を治療又は改善するのに十分な量が投与される。例えば、静脈内、腹腔内、皮下、皮内、脂肪組織内、乳腺組織内、または筋肉内の経路を介しての注射；ガス誘導性粒子衝撃法（電子銃等による）；点鼻薬等の形態での粘膜経路を介する方法等が投与方法として例示される。一態様において、本発明の治療又は改善剤は、皮下又は筋肉内、好ましくは皮下に注射される。
　一実施態様において、本発明の治療又は改善剤は、針無注射器により皮下に投与される。針無注射器は、好ましくは圧力注射器である。針無注射器としては、シマジェット(商品名、島津製作所)、ツインジェクターＥＺＩＩ（商品名、日本ケミカルリサーチ）、シリジェット（商品名、キーストン）、ＺＥＮＥＯ(商品名、クロスジェクト)等を挙げることができるが、これらに限定されない。この場合、本発明の治療又は改善剤は、上記発現ベクター及び針無注射器を含み、該発現ベクターが該針無注射器に封入された、注射製剤として提供することができる。
　一実施態様において、本発明の治療又は改善剤は、遺伝子銃により皮下、皮内又は筋肉内へ投与される。この場合、上記発現ベクターを、生体内に導入されるコロイド金粒子等の担体粒子上に被覆して、投与に用いることができる。ポリヌクレオチドで担体粒子をコートする技術は公知である（例えば、ＷＯ９３／１７７０６参照）。最終的に発現ベクターは、生体への投与に適する生理的食塩水等の水溶液中に調製することができる。
　良好な免疫応答を誘導するため、本発明の治療又は改善剤は、一定の間隔をあけて複数回投与することが好ましい。該回数は、免疫応答の強さをモニターしながら適宜設定することができるが、通常２～１０回、好ましくは２～６回、より好ましくは２～４回、最も好ましくは３回である。
　投与頻度は、通常３日～３ヶ月に１回、好ましくは１～４週間に１回、より好ましくは１．５～３週間に１回、最も好ましくは２週間に１回である。
　一実施態様において、本発明の治療又は改善剤は２週間隔で３回、対象哺乳動物に対して投与される。
　本発明の治療又は改善剤の投与量は、有効成分である発現ベクターがコードするキメラＢ型肝炎ウイルスコア抗原ポリペプチドに含まれる生活習慣病関連因子のエピトープの投与対象哺乳動物における免疫原性に依存するが、一定量の発現ベクターを投与対象である哺乳動物に投与し、ＥＬＩＳＡ等の検定法により当該エピトープに特異的な抗体価を測定して、免疫応答を観察することにより当業者であれば良好な免疫応答に必要な用量を決定することができる。本発明の治療又は改善剤の免疫原性が、有効成分である発現ベクターで用いるプロモーター等の制御配列の強さにも依存するものであることが当業者には理解される。そして当業者であれば、使用する発現ベクターの種類に応じ本発明の治療又は改善剤の投与量を調節することも容易に行い得る。
　刊行物、特許文献等を含む、本明細書に引用されたすべての参考文献は、引用により、それらが個々に具体的に参考として援用されかつその内容全体が具体的に記載されているのと同程度まで、本明細書に援用される。
　以下、実施例を示して本発明をより具体的に説明するが、本発明は以下に示す実施例によって何ら限定されるものではない。
［実施例１］
１．方法
１－１．HBc-AngIIを発現するコンストラクトの作製
１－１－１．HBc-AngII, HBc配列の作製とTAクローニング
　BCCM/LMBP Plasmid Collectionよりplasmid pPLc3（Accession number LMBP 2470）を購入した。以下のプライマーを設計し、合成した。
HBcF　5’-gcc atg gat atc gat cct tat aaa gaa ttc gga gc-3’（配列番号２３）
HBcR　5’-ggc ctc tca cta aca ttg aga ttc ccg aga ttg aga-3’（配列番号２４）
H2　5’-ggg gtg gat gta tac gcg gtc agt gat agc tgg atc ttc caa gtt aac-3’ （配列番号２５）
H3-II　5’-c cgc gta tac atc cac ccc ttt ggt gct act agc agg gac ctg gta gtc -3’ （配列番号２６）
　それぞれのプライマー配列はＢ型肝炎ウイルスコア（ＨＢｃ）抗原タンパク質をコードするヌクレオチド配列（配列番号１）の以下の位置に該当する。
HBc F :　第１～３３番目のヌクレオチド。
HBc R :　第５２７～５５６番目のヌクレオチド。
H2 :　第２２１～２４１番目のヌクレオチドに、スペーサーの２アミノ酸（IT）をコードするヌクレオチドとAngII配列の一部を連結。
H3-II :　AngII配列の一部とスペーサーの３アミノ酸（GAT）を、第２４２～２５９番目のヌクレオチドに連結。
　まず、鋳型（plasmid pPLc3）、及びプライマーセット（HBc F及びH2）を用いて、ＰＣＲにより、HBcのN末端部分、スペーサー及びAngIIの一部を含む第１のＤＮＡ断片を増幅した。更に、鋳型（plasmid pPLc3）、及びプライマーセット（H3-II及びHBc R）を用いて、ＰＣＲにより、AngIIの一部、スペーサー、及びHBcのC末端部分を含む第２のＤＮＡ断片を増幅した。両増幅産物は、AngII配列の一部が重複するので、その重複部分がアニーリングすることを利用して、３回目のＰＣＲ（プライマーセット；HBc F及びHBc R）により、第１のＤＮＡ断片と第２のＤＮＡ断片とを連結し、増幅産物（HBc-AngII）を得た。即ち、Ｂ型肝炎ウイルスコア（ＨＢｃ）抗原タンパク質をコードするヌクレオチド配列（配列番号１）の第２４１番目の塩基と第２４２番目の塩基の間に、スペーサーおよびAngIIの部分配列を含むポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を挿入した。挿入したヌクレオチド配列がコードするアミノ酸配列は、IT-DRVYIHPF-GAT（配列番号２７、１３アミノ酸）である。pcDNA 3.1/V5-His TOPO TA Expression Kit (Invitrogen)にHBc-AngIIをTAクローニングすることによりHBc-AngII ISS(-)ベクターを得た。同様に、鋳型（plasmid pPLc3）、及びプライマーセット（HBcF及びHBcR）を用いてＰＣＲを行い、HBcの全長ポリペプチドをコードするＤＮＡ断片を作製し、これをpcDNA 3.1/V5-His TOPOベクターにTAクローニングすることによりHBc ISS(-)ベクターを得た。
１－１－２．HBc-AngII ISS(+), HBc ISS(+)ベクターの作製（ISS配列の作製とベクターへの挿入）
　以下のテンプレート（CpG (A+B+C+C)-F及びCpG (A+B+C+C)-R）及びプライマー（DraIII-F及びDraIII-R）を設計し、合成した。
CpG (A+B+C+C)-F
5’-ggt gca tcg atg cag ggg gg tga ctg tga acg ttc gag atg a tcg tcg aac gtt cga gat gat tcg aac gtt cga acg ttc gaa cgt t-3’（配列番号２８）
CpG (A+B+C+C)-R
5’-a acg ttc gaa cgt tcg aac gtt cga -atc atc tcg aac gtt cga cga -t cat ctc gaa cgt tca cag tca -cc ccc ctg cat cga tgc acc-3’（配列番号２９）
DraIII-F　5’-ttt-cacgtagtg- ggt gca tcg atg cag g-3’（配列番号３０）
DraIII-R　5’-ggt-cactacgtg- a acg ttc gaa cgt tcg-3’（配列番号３１）
　CpG (A+B+C+C)-F及びCpG (A+B+C+C)-Rをテンプレートとし、DraIII-F及びDraIII-Rのプライマーセットを使用してPCRを行い、両端にDraIIIサイトを持つISS配列を含むＤＮＡ断片（DraIII-ISS）を得た。次にDraIII-ISSとベクターHBc-AngII ISS(-)及びHBc ISS(-)をDraIIIで切断した。ベクターをアルカリフォスファターゼ処理し、DraIII-ISSの酵素消化産物とライゲーション反応を行うことにより、ベクターのDraIII site (1621)にISSを挿入した。
１－２．動物実験
　10週齢高血圧ラット（SHR）背部皮膚にシマジェット(商品名、島津製作所)を用いて２週間ごとに、各ベクターを３回投与した（100μg/μl×2カ所/回）。
HBc-AngII　ISS(+)群：１２匹
HBc　 ISS(+)群：７匹
　０週、２週、４週に投与し、投与開始から０週、４週間、８週間、１６週間後に血圧測定、血清採取および抗体価測定を行った。
１－２－１(ａ)．テイル・カフ法（１）
（テイル・カフ法の測定機器）
メーカー：株式会社ソフトロン
製品名　BP-98A　（ラット・マウス非観血自動血圧測定装置）
１－２－１(ａ)．テイル・カフ法（２）
（参考文献）
Evaluation of New Tail-cuff Method for Blood Pressure Measurement in Rats with Special Reference to the Effect of Ambient Temperature
EXPERIMENTAL ANIMALS Vol.40 No.3:331-336 (1991) 
 
Antihypertensive Effect of Sesamin.I. Protection against Deoxycorticosterone Acetate-Salt-Induced Hypertension and Cardiovascular Hypertrophy 
BIOLOGICAL & PHARMACEUTICAL BULLETIN Vol.18 1016-1019 (1995)
 
Establishment of an adrenocortical carcinoma xenograft with normotensive hyperaldosteronism in vivo
APMIS 106:1056-1060 (1998)
 
Endotherin-1 enhances Pressor Responses to Norepinephrine Involvement of Endothelin-B Receptor
JOURNAL OF CARDIOVASCULAR PHARMACOLOGY Vol.13 119-121 (1998)
 
Effect of dopamine receptor antagonists on the calcium-depenedent central function that reduces blood pressure in spontaneously hypertensive rats.
ELSEVIER NEUROSCIENCE LETTERS Vol.269 133-136 (1999)
 
Leprosy in Hypertensive Nude Rats(SHR/NCrj-rnu)
INTERNATIONAL JOURNAL OF LEPROSY Vol.67 No.4 435-443 (1999)
 
Potentiation by endothelin-1 of vasoconstrictor response in stroke-prone spontaneously hypertensive rats.
EUROPEAN JOURNAL OF PHARMACOLOGY Vol.415 45-49 (2001)
１－２－１（ｂ）．テイル・カフ法による血圧測定
(方法）
　血圧測定はテイル・カフ法で行った。一回一個体あたり、５～１５回測定し、その平均値を使用した。
（結果）
　HBc ISS(+)群（コントロール）では、ＳＨＲラットの血圧が上昇した。一方、HBc-AngII ISS(+)群では、明らかな血圧低下を示した（図１）。
１－２－２（ａ）．ELISA法
（試薬および測定機器）
・Angiotensin II-BSA conjugate, Angiotensin I-BSA conjugate: DSS (Disuccinimidyl suberate)をスペーサーとして作成
・Angiotensinogen (Human) : sigma A2562
・Nunc Maxisorp(Cat.442404)
・3% skim milk (PBS希釈)
・PBS-T(0.05% Tween)
・2次抗体：HRP-conjugated anti-mouse IgG secondary antibody (GE, NA931V), HRP-conjugated anti-rat IgG secondary antibody (GE, NA935V)
・TMB溶液：sigma T0440
・停止液：0.5N H2SO4
・マイクロプレートリーダー (InterMed, ImmunoMini　NJ-2300)
１－２－２（ｂ）．ELISA法による血清中のAngiotensin II又はAngiotensin Iに対する抗体価測定
（方法）
　10μg/ml の濃度でAngiotensin II-BSA、Angiotensin I-BSA, Angiotensinogenを96 well plateにそれぞれ50μlずつ添加し、４℃で終夜インキュベートした。その後、ウェルの内容物を捨て、3% skim milk（150μl/well）を加え、2時間、室温にてインキュベートすることによりブロッキングした。
　ウェル内の内容物を捨て、3% skim milkで希釈したマウス血清を50μlずつ添加し、４℃にて終夜インキュベートした。
　各ウェルをPBS-Tで5回洗浄した。3% skim milk で1/1000倍に希釈したHRP-conjugated anti-mouse IgG secondary antibody又はHRP-conjugated anti-rat IgG secondary antibody（50μll/well）を添加し、３時間、室温にてインキュベートした。ウェル内の内容物を捨て、各ウェルをPBS-Tで3回洗浄した。TMB溶液（50μl/well）を添加し、３０分間、室温にてインキュベートした。0.5N H2SO4（50μl/well）の添加により反応を停止し、450nmで吸光度を測定した。
（結果）
　ワクチン投与前には認められなかったBSA-AngIIに対する抗体価が、計３回のワクチン投与（０週および２、４週）により上昇した。抗体価は、３回投与後の８週の時点で最も上昇しており、１６週も減少傾向ながら維持された（図２）。またHBc-AngIIワクチン投与によって、BSA-AngIに対する抗体価よりもBSA-AngIIに対する抗体価のほうがより強く上昇した（図３）。
２．まとめ
　以上、血圧測定および抗体価測定の結果から、HBc-AngII　ISS(+)ＤＮＡワクチン投与により、AngIIに対する抗体価を上昇させ、高血圧症を予防又は治療し得ることが示された。
［実施例２］
１．動物実験
　実施例１と同様に、10週齢高血圧ラット（SHR）背部皮膚にシマジェット(商品名、島津製作所)を用いて２週間ごとに、各ベクターを３回投与した（100μg/μl×2カ所/回）。
HBc-AngII　ISS(+)群：６匹
HBc　ISS(+)群：４匹
生理食塩水群：５匹
　０週、２週、４週に投与し、投与開始から０週、４週間、８週間、１２週間、１６週間、２０週間及び２４週間後に血圧測定、血清採取および抗体価測定を行った。
２．テイル・カフ法による血圧測定
(方法）
　実施例１と同様に、血圧測定はテイル・カフ法で行った。一回一個体あたり、５～１５回測定し、その平均値を使用した。
（結果）
　HBc ISS(+)群（コントロール）及び生理食塩水群では、ＳＨＲラットの血圧が上昇した。一方、HBc-AngII ISS(+)群では、明らかな血圧低下を示した（図４）。この血圧低下効果は、投与開始から２４週後まで持続した。
３（ａ）．ELISA法
（試薬および測定機器）
Angiotensin II-BSA conjugate, Angiotensin I-BSA conjugate: DSS (Disuccinimidyl suberate)をスペーサーとして作成
Angiotensinogen (Human) : sigma A2562
Nunc Maxisorp(Cat.442404)
5% skim milk (PBS希釈)
PBS-T(0.05% Tween)
2次抗体：HRP-conjugated anti-mouse IgG secondary antibody (GE, NA931V), HRP-conjugated anti-rat IgG secondary antibody (GE, NA935V)
TMB溶液：sigma T0440
停止液：0.5N H2SO4
マイクロプレートリーダー (Bio-Rad Inc, Japan)
３（ｂ）．ELISA法による血清中のAngiotensin IIに対する抗体価測定
（方法）
　10μg/mlの濃度でAngiotensin II-BSA、Angiotensin I-BSA, Angiotensinogenを96 well plateにそれぞれ50μlずつ添加し、４℃で終夜インキュベートした。その後、ウェルの内容物を捨て、5% skim milk（150μl/well）を加え、2時間、室温にてインキュベートすることによりブロッキングした。
　ウェル内の内容物を捨て、5% skim milkで希釈したマウス血清を50μlずつ添加し、４℃にて終夜インキュベートした。
　各ウェルをPBS-Tで5回洗浄した。5% skim milkで1/1000倍に希釈したHRP-conjugated anti-mouse IgG secondary antibody 又はHRP-conjugated anti-rat IgG secondary antibody （50μll/well）を添加し、３時間、室温にてインキュベートした。ウェル内の内容物を捨て、各ウェルをPBS-Tで3回洗浄した。TMB溶液（50μl/well）を添加し、３０分間、室温にてインキュベートした。0.5N H2SO4（50μl/well）の添加により反応を停止し、450nmで吸光度を測定した。
（結果）
　ワクチン投与前には認められなかったBSA-AngIIに対する抗体価が、計３回のワクチン投与（０週および２、４週）により上昇した。抗体価の上昇は、投与開始から４週間後には検出された。この抗体価の上昇は投与開始から２４週間後も維持された（図５）。
４．まとめ
　以上より、HBc-AngII　ISS(+)ＤＮＡワクチン投与により、AngIIに対する抗体価を上昇させ、高血圧症を予防又は治療し得ることが示された。
　高血圧症、高脂血症等の生活習慣病に対する優れたワクチンが提供される。
　本出願は日本で出願された特願２０１１－０９１４９３（出願日：２０１１年４月１５日）及び特願２０１１－２２７３２０（出願日：２０１１年１０月１４日）を基礎としており、その内容は本明細書に全て包含されるものである。

Claims (28)

  1. 　生活習慣病関連因子の特異的エピトープを含むアミノ酸配列が挿入されたキメラＢ型肝炎ウイルスコア抗原ポリペプチドをコードする発現ベクターを含む、当該生活習慣病の治療又は改善剤であって、該特異的エピトープを含むアミノ酸配列が、Ｂ型肝炎ウイルスコア抗原ポリペプチドのアミノ酸残基８０と８１の間に挿入されている、治療又は改善剤。
  2. 　生活習慣病が、高血圧症及び高脂血症からなる群から選択された一種である、請求項１記載の治療又は改善剤。
  3. 　生活習慣病関連因子が、アンギオテンシンＩＩ(AngＩＩ)又はコレステリル・エステル転送蛋白(CETP)である、請求項１又は２記載の治療又は改善剤。
  4. 　生活習慣病関連因子が、アンギオテンシンＩＩ(AngＩＩ)であり、且つ特異的エピトープを含むアミノ酸配列が、配列番号１６で表されるアミノ酸配列である、請求項３記載の治療又は改善剤。
  5. 　配列番号１６で表されるアミノ酸配列が挿入された、キメラＢ型肝炎ウイルスコア抗原ポリペプチドをコードする発現ベクターを含む、高血圧症の治療又は改善剤であって、該アミノ酸配列が、Ｂ型肝炎ウイルスコア抗原ポリペプチドのアミノ酸残基８０と８１の間に挿入されている、治療又は改善剤。
  6. 　生活習慣病関連因子が、コレステリル・エステル転送蛋白(CETP)であり、且つ特異的エピトープを含むアミノ酸配列が、配列番号１７で表されるアミノ酸配列である、請求項３記載の治療又は改善剤。
  7. 　配列番号１７で表されるアミノ酸配列が挿入された、キメラＢ型肝炎ウイルスコア抗原ポリペプチドをコードする発現ベクターを含む、高脂血症の治療又は改善剤であって、該アミノ酸配列が、Ｂ型肝炎ウイルスコア抗原ポリペプチドのアミノ酸残基８０と８１の間に挿入されている、治療又は改善剤。
  8. 　発現ベクター中に、さらに免疫刺激性配列(ISS)が組み込まれている、請求項１～７のいずれか１項に記載の治療又は改善剤。
  9. 　免疫刺激性配列(ISS)が、配列番号２２で表されるヌクレオチド配列からなる、請求項８記載の治療又は改善剤。
  10. 　針無注射器を用い、皮下に投与されることを特徴とする、請求項１～９のいずれか１項に記載の治療又は改善剤。
  11. 　針無注射器が圧力注射器である、請求項１０記載の治療又は改善剤。
  12. 　複数回投与されることを特徴とする、請求項１～１１記載のいずれか１項の治療又は改善剤。
  13. 　投与回数が２又は３回である、請求項１２記載の治療又は改善剤。
  14. 　投与回数が３回である、請求項１３記載の治療又は改善剤。
  15. 　２週間隔で３回投与することを特徴とする、請求項１～１４記載の治療又は改善剤。
  16. 　生活習慣病関連因子の特異的エピトープを含むアミノ酸配列が挿入されたキメラＢ型肝炎ウイルスコア抗原ポリペプチドをコードする発現ベクター及び針無注射器を含む、当該生活習慣病の治療又は改善用注射製剤であって、該特異的エピトープを含むアミノ酸配列が、Ｂ型肝炎ウイルスコア抗原ポリペプチドのアミノ酸残基８０と８１の間に挿入されており、該発現ベクターが該針無注射器内に封入されている、注射製剤。
  17. 　生活習慣病の治療又は改善において使用するための、当該生活習慣病関連因子の特異的エピトープを含むアミノ酸配列が挿入されたキメラＢ型肝炎ウイルスコア抗原ポリペプチドをコードする発現ベクターであって、該特異的エピトープを含むアミノ酸配列が、Ｂ型肝炎ウイルスコア抗原ポリペプチドのアミノ酸残基８０と８１の間に挿入されている、発現ベクター。
  18. 　高血圧症の治療又は改善において使用するための、配列番号１６で表されるアミノ酸配列が挿入された、キメラＢ型肝炎ウイルスコア抗原ポリペプチドをコードする発現ベクターであって、該アミノ酸配列が、Ｂ型肝炎ウイルスコア抗原ポリペプチドのアミノ酸残基８０と８１の間に挿入されている、発現ベクター。
  19. 　高脂血症の治療又は改善において使用するための、配列番号１７で表されるアミノ酸配列が挿入された、キメラＢ型肝炎ウイルスコア抗原ポリペプチドをコードする発現ベクターであって、該アミノ酸配列が、Ｂ型肝炎ウイルスコア抗原ポリペプチドのアミノ酸残基８０と８１の間に挿入されている、発現ベクター。
  20. 　生活習慣病の治療又は改善において使用するための、当該生活習慣病関連因子の特異的エピトープを含むアミノ酸配列が挿入されたキメラＢ型肝炎ウイルスコア抗原ポリペプチドをコードする発現ベクター及び針無注射器を含む注射製剤であって、該特異的エピトープを含むアミノ酸配列が、Ｂ型肝炎ウイルスコア抗原ポリペプチドのアミノ酸残基８０と８１の間に挿入されており、該発現ベクターが該針無注射器内に封入されている、注射製剤。
  21. 　生活習慣病関連因子の特異的エピトープを含むアミノ酸配列が挿入されたキメラＢ型肝炎ウイルスコア抗原ポリペプチドをコードする発現ベクターの有効量を哺乳動物に投与することを含む、当該哺乳動物における当該生活習慣病の治療又は改善方法であって、該特異的エピトープを含むアミノ酸配列が、Ｂ型肝炎ウイルスコア抗原ポリペプチドのアミノ酸残基８０と８１の間に挿入されている、方法。
  22. 　配列番号１６で表されるアミノ酸配列が挿入された、キメラＢ型肝炎ウイルスコア抗原ポリペプチドをコードする発現ベクターの有効量を哺乳動物に投与することを含む、該哺乳動物における高血圧症の治療又は改善方法であって、該アミノ酸配列が、Ｂ型肝炎ウイルスコア抗原ポリペプチドのアミノ酸残基８０と８１の間に挿入されている、方法。
  23. 　配列番号１７で表されるアミノ酸配列が挿入された、キメラＢ型肝炎ウイルスコア抗原ポリペプチドをコードする発現ベクターの有効量を哺乳動物に投与することを含む、該哺乳動物における高脂血症の治療又は改善方法であって、該アミノ酸配列が、Ｂ型肝炎ウイルスコア抗原ポリペプチドのアミノ酸残基８０と８１の間に挿入されている、方法。
  24. 　生活習慣病関連因子の特異的エピトープを含むアミノ酸配列が挿入されたキメラＢ型肝炎ウイルスコア抗原ポリペプチドをコードする発現ベクターの有効量を針無注射器により哺乳動物へ注入することを含む、当該生活習慣病の治療又は改善方法であって、該特異的エピトープを含むアミノ酸配列が、Ｂ型肝炎ウイルスコア抗原ポリペプチドのアミノ酸残基８０と８１の間に挿入されている、方法。
  25. 　生活習慣病の治療又は改善剤を製造するための、当該生活習慣病関連因子の特異的エピトープを含むアミノ酸配列が挿入されたキメラＢ型肝炎ウイルスコア抗原ポリペプチドをコードする発現ベクターの使用であって、該特異的エピトープを含むアミノ酸配列が、Ｂ型肝炎ウイルスコア抗原ポリペプチドのアミノ酸残基８０と８１の間に挿入されている、使用。
  26. 　高血圧症の治療又は改善剤を製造するための、配列番号１６で表されるアミノ酸配列が挿入された、キメラＢ型肝炎ウイルスコア抗原ポリペプチドをコードする発現ベクターの使用であって、該アミノ酸配列が、Ｂ型肝炎ウイルスコア抗原ポリペプチドのアミノ酸残基８０と８１の間に挿入されている、使用。
  27. 　高脂血症の治療又は改善剤を製造するための、配列番号１７で表されるアミノ酸配列が挿入された、キメラＢ型肝炎ウイルスコア抗原ポリペプチドをコードする発現ベクターの使用であって、該アミノ酸配列が、Ｂ型肝炎ウイルスコア抗原ポリペプチドのアミノ酸残基８０と８１の間に挿入されている、使用。
  28. 　生活習慣病の治療又は改善用注射製剤を製造するための、当該生活習慣病関連因子の特異的エピトープを含むアミノ酸配列が挿入されたキメラＢ型肝炎ウイルスコア抗原ポリペプチドをコードする発現ベクター及び針無注射器の使用であって、該特異的エピトープを含むアミノ酸配列が、Ｂ型肝炎ウイルスコア抗原ポリペプチドのアミノ酸残基８０と８１の間に挿入されている、使用。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2015099167A1 (ja) 2013-12-27 2015-07-02 国立大学法人大阪大学 Ｉｌ－１７ａを標的とするワクチン
WO2016080540A1 (ja) * 2014-11-20 2016-05-26 アンジェスＭｇ株式会社 Ｄｎａ－ペプチド併用ワクチン

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP6001974B2 (ja) 2012-09-21 2016-10-05 アンジェスＭｇ株式会社 アポリポプロテイン（ａ）の特異的エピトープを含むＤＮＡワクチン
CN104830783A (zh) * 2015-05-05 2015-08-12 杨光华 基于hbv1抗原的dc细胞、靶向性免疫细胞群及其制备方法和用途
CN104830784A (zh) * 2015-05-05 2015-08-12 杨光华 基于hbv2抗原的dc细胞、靶向性免疫细胞群及其制备方法和用途
EP4277654A1 (en) 2021-01-18 2023-11-22 Conserv Bioscience Limited Coronavirus immunogenic compositions, methods and uses thereof

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1993017706A1 (en) 1992-03-11 1993-09-16 Agracetus, Inc. Genetic vaccine for immunodeficiency viruses
WO1999015655A1 (en) 1997-09-19 1999-04-01 Monsanto Company Dna vaccination against cholesterol ester transfer protein in the treatment of atherosclerosis
WO2001077158A1 (en) 2000-04-07 2001-10-18 University Of Leeds Innovations Limited Hepatitis b core antigen fusion proteins
JP3228737B2 (ja) 1989-09-19 2001-11-12 ザ ウエルカム ファウンデーション リミテッド キメラヘパドナウイルスコア抗原蛋白
WO2001098333A2 (en) 2000-06-22 2001-12-27 Celltech Pharmaceuticals Limited Modification of hepatitis b core antigen
WO2002014478A2 (en) 2000-08-16 2002-02-21 Apovia, Inc. IMMUNOGENIC HBc CHIMER PARTICLES HAVING ENHANCED STABILITY
WO2003031466A2 (en) 2001-10-05 2003-04-17 Cytos Biotechnology Ag Angiotensin peptide-carrier conjugates and uses thereof

Family Cites Families (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5721138A (en) 1992-12-15 1998-02-24 Sandford University Apolipoprotein(A) promoter and regulatory sequence constructs and methods of use
PT1049767E (pt) 1998-01-08 2005-10-31 Agronomique Inst Nat Rech Coelho transgenico que expressa uma lipoproteina (a) humana funcional
TWI229679B (en) 1998-06-20 2005-03-21 United Biomedical Inc Artificial T helper cell epitopes as immune stimulators for synthetic peptide immunogens
US7094409B2 (en) 2001-01-19 2006-08-22 Cytos Biotechnology Ag Antigen arrays for treatment of allergic eosinophilic diseases
BR0213117A (pt) * 2001-10-05 2004-09-21 Cytos Biotechnology Ag Conjugados peptìdeo angiotensina-veìculo e seus usos
DK1575977T3 (da) * 2002-12-23 2009-11-09 Dynavax Tech Corp Oligonukleotider med Immunstimulatorisk sekvens og fremgangsmåder til anvendelse af disse
CN1706502A (zh) 2005-05-25 2005-12-14 中国药科大学 一种抗高血压核酸疫苗及其制备方法
CN1896094B (zh) 2006-06-08 2010-08-04 华中科技大学同济医学院附属协和医院 一种血管紧张素ii受体1型人免疫源性肽段的应用
CN101015689A (zh) 2007-01-18 2007-08-15 中国药科大学 基于血管紧张素ⅱ的肿瘤多肽疫苗
WO2010138555A2 (en) * 2009-05-26 2010-12-02 University Of Florida Research Foundation, Inc. Small peptide expression system in mammalian cells
CN102247604B (zh) 2011-06-24 2013-03-27 华中科技大学同济医学院附属协和医院 一种血管紧张素ⅱ受体1型多肽-载体疫苗及其用途
JP6001974B2 (ja) 2012-09-21 2016-10-05 アンジェスＭｇ株式会社 アポリポプロテイン（ａ）の特異的エピトープを含むＤＮＡワクチン
JP3228737U (ja) 2020-07-08 2020-11-12 正伸 原田 面マスクホルダー

Patent Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP3228737B2 (ja) 1989-09-19 2001-11-12 ザ ウエルカム ファウンデーション リミテッド キメラヘパドナウイルスコア抗原蛋白
WO1993017706A1 (en) 1992-03-11 1993-09-16 Agracetus, Inc. Genetic vaccine for immunodeficiency viruses
WO1999015655A1 (en) 1997-09-19 1999-04-01 Monsanto Company Dna vaccination against cholesterol ester transfer protein in the treatment of atherosclerosis
WO2001077158A1 (en) 2000-04-07 2001-10-18 University Of Leeds Innovations Limited Hepatitis b core antigen fusion proteins
WO2001098333A2 (en) 2000-06-22 2001-12-27 Celltech Pharmaceuticals Limited Modification of hepatitis b core antigen
WO2002014478A2 (en) 2000-08-16 2002-02-21 Apovia, Inc. IMMUNOGENIC HBc CHIMER PARTICLES HAVING ENHANCED STABILITY
WO2003031466A2 (en) 2001-10-05 2003-04-17 Cytos Biotechnology Ag Angiotensin peptide-carrier conjugates and uses thereof
JP2005514333A (ja) * 2001-10-05 2005-05-19 サイトス バイオテクノロジー アーゲー アンジオテンシンペプチド−担体複合体およびその使用

Non-Patent Citations (27)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
"Current Protocols in Molecular Biology", 1987, JOHN WILEY & SONS
"Molecular Cloning A Laboratory Manual", 1989, COLD SPRING HARBOR LABORATORY
APMIS, vol. 106, 1998, pages 1056 - 1060
B. E. CLARKE ET AL., NATURE, vol. 330, 1987, pages 381 - 384
BIOCHIM. BIOPHYS. ACTA, vol. 1489, 1999, pages 107 - 116
BIOLOGICAL & PHARMACEUTICAL BULLETIN, vol. 18, 1995, pages 1016 - 1019
CURR. OPIN. MICROBIOL., vol. 6, 2003, pages 472 - 477
D. C. WHITACRE ET AL., EXPERT REV. VACCINES, vol. 8, no. 11, 2009, pages 1565 - 1573
D. MAO ET AL., VACCINE, vol. 24, 2006, pages 4942 - 4950
ELSEVIER NEUROSCIENCE LETTERS, vol. 269, 1999, pages 133 - 136
EUROPEAN JOURNAL OF PHARMACOLOGY, vol. 415, 2001, pages 45 - 49
EXPERIMENTAL ANIMALS, vol. 40, no. 3, 1991, pages 331 - 336
F. SCHODEL ET AL., JOURNAL OF VIROLOGY, vol. 66, no. 1, 1992, pages 106 - 114
F. SCHODEL ET AL., THE JOURNAL OF EXPERIMENTAL MEDICINE, vol. 180, 1994, pages 1037 - 1046
GENE, vol. 108, 1991, pages 193 - 199
INTERNATIONAL JOURNAL OF LEPROSY, vol. 67, no. 4, 1999, pages 435 - 443
J D MARSHALL ET AL., JOURNAL OF LEUKOCYTE BIOLOGY, vol. 82, 2007, pages 497 - 508
JOURNAL OF CARDIOVASCULAR PHARMACOLOGY, vol. 13, 1998, pages 119 - 121
JOURNAL OF HYPERTENSION, vol. 25, no. 1, 2007, pages 63 - 72
MAO D. ET AL.: "Intramuscular immunization with a DNA vaccine encoding a 26-amino acid CETP epitope displayed by HBc protein and containing CpG DNA inhibits atherosclerosis in a rabbit model of atherosclerosis", VACCINE, vol. 24, 2006, pages 4942 - 4950, XP028010689 *
P. M. AMBUHL ET AL., JOURNAL OF HYPERTENSION, vol. 25, no. 1, 2007, pages 63 - 72
See also references of EP2698164A4
T. FRIEDMAN, SCIENCE, vol. 244, 1989, pages 1275 - 1281
T. H. DO ET AL., EXPERT OPIN. BIOL. THER., vol. 10, no. 7, 2010, pages 1077 - 1087
TISSOT C.A. ET AL.: "Effect of immunisation against angiotensin II with CYT006-AngQb on ambulatory blood pressure: a double-blind, randomised, placebo-controlled phase IIa study", THE LANCET, vol. 371, 2008, pages 821 - 827, XP022513793 *
VACCINE, vol. 24, 2006, pages 4942 - 4950
YUAN ET AL., J. VIROL., vol. 73, 1999, pages 10122 - 10128

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2015099167A1 (ja) 2013-12-27 2015-07-02 国立大学法人大阪大学 Ｉｌ－１７ａを標的とするワクチン
WO2016080540A1 (ja) * 2014-11-20 2016-05-26 アンジェスＭｇ株式会社 Ｄｎａ－ペプチド併用ワクチン
US10695420B2 (en) 2014-11-20 2020-06-30 Anges, Inc. DNA-peptide combination vaccine

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