WO2012070971A1 - Косметологическая и фармацевтическая композиция для омоложения и восстанов- ления кожи, в том числе после хирургических операций - Google Patents

Косметологическая и фармацевтическая композиция для омоложения и восстанов- ления кожи, в том числе после хирургических операций Download PDF

Info

Publication number
WO2012070971A1
WO2012070971A1 PCT/RU2010/000697 RU2010000697W WO2012070971A1 WO 2012070971 A1 WO2012070971 A1 WO 2012070971A1 RU 2010000697 W RU2010000697 W RU 2010000697W WO 2012070971 A1 WO2012070971 A1 WO 2012070971A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
cosmetic
pharmaceutical composition
composition according
liposomes
collagen
Prior art date
Application number
PCT/RU2010/000697
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Борис Славинович ФАРБЕР
Софья Борисовна ФАРБЕР
Артур Викторович МАРТЫНОВ
Александр Николаевич СИТЕНКО
Original Assignee
Farber Boris Slavinovich
Farber Sof Ya Borisovna
Martynov Artur Viktorovich
Sitenko Aleksandr Nikolaevich
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Farber Boris Slavinovich, Farber Sof Ya Borisovna, Martynov Artur Viktorovich, Sitenko Aleksandr Nikolaevich filed Critical Farber Boris Slavinovich
Priority to PCT/RU2010/000697 priority Critical patent/WO2012070971A1/ru
Priority to US12/931,463 priority patent/US8846064B2/en
Publication of WO2012070971A1 publication Critical patent/WO2012070971A1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0014—Skin, i.e. galenical aspects of topical compositions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/22—Hormones
    • A61K38/28—Insulins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
    • A61K38/46—Hydrolases (3)
    • A61K38/47—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2), e.g. cellulases, lactases
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
    • A61K38/46—Hydrolases (3)
    • A61K38/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • A61K38/4886—Metalloendopeptidases (3.4.24), e.g. collagenase
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/02—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by special physical form
    • A61K8/14—Liposomes; Vesicles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
    • A61K8/64—Proteins; Peptides; Derivatives or degradation products thereof
    • A61K8/65—Collagen; Gelatin; Keratin; Derivatives or degradation products thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
    • A61K8/64—Proteins; Peptides; Derivatives or degradation products thereof
    • A61K8/66—Enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127—Liposomes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A61Q19/08—Anti-ageing preparations
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
    • C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12Y302/01035—Hyaluronoglucosaminidase (3.2.1.35), i.e. hyaluronidase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
    • C12Y304/24—Metalloendopeptidases (3.4.24)

Definitions

  • the invention relates to pharmacy and cosmetology, and can be used as a medicine and cosmetic for skin rejuvenation, resorption of scars, treatment of postoperative adhesive disease, acceleration of tissue regeneration in the postoperative period, to eliminate cellulite.
  • State of the art can be used as a medicine and cosmetic for skin rejuvenation, resorption of scars, treatment of postoperative adhesive disease, acceleration of tissue regeneration in the postoperative period, to eliminate cellulite.
  • cross-linking in collagen fibrils is possible due to the modification of the oxylysine residues of the initial ⁇ -chains with the participation of such an extracellular enzyme as lysyl oxidase.
  • the cross-linked 06-formed in this way can be of the type lysinonorleucine (- (CH2) 4-NH- (CH2) 4) or oxylysinonorleucin (- (CH2) 4-NH-CH2-CH0H- (CH2) 2).
  • cross-linking may occur due to the formation of S-S bonds between chains with the participation of cysteine residues that are present in any type of collagen molecules. Therefore, we can assume that the attitude of newly emerging relationships of this kind to external influences will be different. Apparently, the participation of these bonds in the modification of the general structure of the protein will also be different.
  • Collagen fibrils are composed of monomers (rather, segments), and each segment consists of three polypeptide chains folded in a spiral form relative to each other.
  • Polypeptide chains have several structural variants: al (I), al (II), ⁇ ( ⁇ ), al (IV) and, similarly, variants of the a2 chains, which differ in the sequence of amino acids and therefore, their synthesis is apparently encoded different genes.
  • Every giving the ⁇ chain is approximately 1050 amino acids and has a molecular weight of about 100 KDa.
  • the central part of the ⁇ chain consists of approximately 1000 amino acid fragments connected through alternating Gly-x-y sequences. Thus, the glycine fragment occupies every third position in the chain.
  • Glycine has no side substituents - it is the smallest (in size) amino acid.
  • the nitrogen of the amino group of glycine of one chain is hydrogen bonded to the carbonyl oxygen of glycine of the other chain.
  • the energy of such bonds is only 3-5 kcal / mol, the existence of a large number of individual bonds (two bonds per three peptide chains) provides strong holding three chains in a spiral state.
  • the other two positions “X” and “Y” in the above Gly-x-y triad may be occupied by other amino acids.
  • Proline and hydroxyproline are often found. The higher the total content of proline and hydroxyproline, the higher the stability and melting point. So, the collagen in the calf’s skin contains 232 fragments of these amino acids, and its melting point is 39 ° ⁇ , while the cod skin collagen contains 155 fragments of proline and hydroxyproline, which leads to a decrease in the melting temperature of collagen to 16 ° ⁇ . It should also be emphasized that not only the total amount of proline and hydroxyproline determines the stability of collagen, but also the ratio of these amino acids in its molecule.
  • So collagen which contains only proline, has a melting point in the range from 20 to 25 ° C. If hydroxyproline is contained instead of proline, the melting point rises to 37 ° C. These changes are explained by the ability of the hydroxyproline fragment to form additional hydrogen bonds.
  • the formulated segment consisting of three peptides twisted into a spiral, is crosslinked with other similar segments, forming a collagen fibril.
  • Collagen fibrils depending on the location in the body and on age, have a different structure.
  • the skin of the embryo contains more type III collagen than type I, and in adults this ratio reverses.
  • collagenase enzyme is always located in the zone of location of its own substrate. It doesn’t matter in which organ of the animal collagen fibrils are located - in the tendon of the tail or in the skin.
  • the purpose of collagenase is to “collapse” collagen threads, facilitating the process of their renewal, since collagenase together with proteolytic enzymes degrades the collagen molecule to low molecular weight peptides, which again return to fibroblasts as starting material in which the synthesis of new collagen precursors takes place.
  • collagen is constantly updated with a half-life ( ⁇ 1 / 2) of about 15 days.
  • Collagen together with elastin and reticulin, is a supporting structural protein localized in the dermis. It makes up the bulk of the dermis (up to 70% in terms of dry weight) and is the main structural component of connective tissue. This protein, specific in amino acid composition and in structure, does not dissolve in water under ordinary conditions (it only swells). Proteolytic enzymes (pepsin, trypsin, papain) break down only soluble fragments of collagen filaments.
  • Collagenase is an enzyme that is capable of converting a collagen filament (fibril) into a soluble state due to partial hydrolysis.
  • the most acceptable option for describing the state of a system associated with the synthesis and destruction of collagen filaments in the normal state of the body is the mandatory equality of the VCHHT speeds. And Udestr .. In this case, the values of the absolute values should determine the lifetime of the collagen filament ( ⁇ ). The higher the equilibrium synthesis and destruction rates, the lower the value of ⁇ and vice versa.
  • the aging process is accompanied by the accumulation of insoluble forms of collagen that do not react with collagenase.
  • This can only mean one thing - a certain amount of collagen substrate is derived from the equilibrium synthesis and destruction of collagen filaments considered above, and the lifetime ( ⁇ ) of these molecules increases indefinitely.
  • the number of cross-links in the molecules of collagen that is not reactive with respect to collagenase continues to increase, and the collagen matrix of the skin becomes more and more rigid, which leads to a decrease in skin elasticity and the appearance (fixation) of wrinkles.
  • Hard collagen accumulates in the skin, inevitably contributing to the manifestations of its aging.
  • cyclic equilibrium processes are nothing more than a natural system for protecting the structure of biopolymers from possible changes, which contributes to an increase in the stability of biological structures and organisms. We will return to these processes with the participation of other biopolymers. Now we’ll try to formulate the consequences of cosmetologists that are important for the participation of collagen structures in the equilibrium process under discussion.
  • the total volume concentration of collagen (soluble and insoluble or collagen that does not interact with endogenous collagenase) throughout a person's life remains constant.
  • collagen destruction rate in the presence of a synthesis regulation mechanism can be regulated automatically. Indeed, if cross-linked collagen structures accumulate in the endogenous collagenase action zone, and the number of “young” or not very modified collagen threads with which the enzyme can interact gradually decreases, the overall destruction rate decreases, depending on the concentration reactive substrate. Along with this, the lifetime of collagen structures involved in the process of dynamic equilibrium increases, which, in turn, Red, increases the likelihood of crosslinking and accelerates the aging process. There is evidence that collagen metabolism gradually slows with age, since development is accompanied by a decrease in the rate of collagen synthesis and destruction. It is also noted that collagenase, when it is not necessary, exists in an inactive form (M. Kanungo, 1982).
  • Collagenase enzyme as an ingredient in cosmetic preparations.
  • the molecular weight of the enzyme should provide real access to the internal structures of the skin
  • - administered collagenase should have less specificity of action compared with endogenous collagenase of human skin or interact with a wider range of substrates;
  • a purified collagenase preparation contains a set of substances with molecular weights from 16 to 32 KDa. The dominant (up to 80%) is the molecular weight of 23.5 KDa.
  • This drug has the ability to break down peptide bonds in natural collagen.
  • the collagenolytic activity of the drug may be accompanied by trypsin-like, chymotrypsin-like, carbohydrate and DNase activities.
  • available data suggest that collagenase isolated from the liver of Far Eastern crabs is specific for action effect, for example, from collagenase preparations secreted by microorganisms of the genus Clostridium.
  • a collagenolytic enzyme from crab liver exhibits high activity against various types of natural collagen.
  • collagenase hydrolyzes specific substrates for trypsin, chymotrypsin and elastase. It was also shown [5] that purified collagenase secreted from the liver of crab in certain concentrations is compatible with many cellular systems.
  • the processing of a monolayer of transplantable cell cultures such as L68, SV1, MDCK, Hep2 and LEC leads to a fairly rapid detachment of cells from a solid substrate with preservation of their morphology and low percentage of dead cells at an enzyme concentration of from 0.0001 to 0.01 %
  • the above characteristics of the collagenolytic drug suggested the potential for its effective use as an additive to cosmetic compositions that prevent or inhibit the skin aging mechanism associated with the accumulation of cross-links in collagen molecules.
  • the molecular mass of the enzyme allows it with a certain degree of probability to reach the localization zone of collagen filaments (papillary dermis).
  • Those few information about the specific features of the action of the enzyme preparation allowed us to hope for the implementation of a kind of “help” to endogenous human collagenase. So, for example, for cosmetologists it is extremely important to involve those collagen threads into the hydrolysis reaction with which own collagenase can no longer interact.
  • Mucopolysaccharides play an essential role in the structure and functions of the skin, which include hyaluronic acid. It is found in the granular and lower layers of the epidermis, as well as in the papillary dermis. The molecular weight of hyaluronic acid may exceed 100 ppm Da.
  • the repeating fragment of this biopolymer is a compound of glucuronic acid and amino sugar, in which one of the hydrogen atoms of the amino group is replaced by an acyl fragment (the remainder of acetic acid).
  • hyaluronic acid A remarkable physical property of hyaluronic acid is its ability to form a stable gel with water molecules, which has a high viscosity. This circumstance determines the functions of hyaluronic acid associated with maintaining the moisture of the epidermis and the internal structures of the skin, as well as its role as a cementing substance that binds cells, collagen bundles and fibrils to each other. Like any biopolymer, hyaluronic acid is in a certain relationship with the corresponding enzyme - hyaluronidase.
  • reaction rates of the synthesis and destruction of hyaluronic acid are characterized by half-lives from 1.9 to 7.7 days, which approximately corresponds to the lifetime of the hyaluronic acid molecule from 4 to 16 days
  • Skin hyaluronidase primarily interacts with high molecular weight hyaluronic acid, and subsequent degradation of fragments of hyaluronic acid is completed by other enzymes.
  • the depolymerization of hyaluronic acid leads to an increase in the permeability of the skin and, conversely, a high degree of polymerization, achieved, including through possible additional crosslinking, for example, under the influence of lipid peroxidation products, reduces the permeability of the skin.
  • collagenase and hyaluronidase are the most important enzymes requiring special attention of cosmetologists. This follows at least from the fact that both enzymes and their substrate pairs (collagen and hyaluronic acid) are localized in the intercellular space of the skin, and the effect of cosmetic components on the dynamic equilibrium processes of synthesis and destruction of biopolymers can be direct interaction. The situation is somewhat different, for example, with such pairs as nucleic acids and nucleases. The main events associated with the synthesis and destruction of nucleases unfold in the intracellular space, separated from the intercellular bilayer lipid membrane.
  • the reasons for this deterioration may be: B.1.
  • Known cosmetic composition for the treatment of cellulite and body rejuvenation consisting of iodinated vegetable oils in the form of vesicles (liposomes) and containing thiomucase and hyaluronidase and other ingredients [ 8 ].
  • iodinated vegetable oils in the form of vesicles (liposomes) and containing thiomucase and hyaluronidase and other ingredients [ 8 ].
  • the disadvantage of this invention is the lack of the ability of the composition to adapt to the body of a particular patient, which significantly reduces the effectiveness of the composition in the population (percentage of effectiveness), inefficiency in the treatment of collagen scars due to the lack of collagenase in the composition, the lack of regenerative / anabolic properties due to the lack of the composition of the insulin composition and the applicability of the composition only for cosmetic purposes, which does not make it possible to use this composition in medicine I accelerate the healing of scar tissue after surgery in order to prevent adhesive disease and scarring.
  • the objective of the invention was to develop a cosmetic and pharmaceutical composition for skin rejuvenation and restoration, with the ability adapt to the body of a particular person, significantly accelerate tissue regeneration in the postoperative period, rejuvenate the skin.
  • the problem is solved by creating a cosmetic and pharmaceutical composition for rejuvenating and restoring the skin, including after surgery, containing liposomes with proteins and including an effective amount of the main active substances and pharmaceutically acceptable excipients, forming substances, characterized in that the supramolecular ensemble of partially acylated proteins with a degree of modification from 0.1 to 10% by weight of the protein is used as proteins, where Cove may act partially succinylated insulin gialuronizaza collagenase and in various combinations, and to create liposomes of phosphatidylcholine may be used fosfotidiletano- lamin and in various combinations and to be prepared by methods scoring and reverse phases.
  • the developed composition has powerful regenerating, anti-aging and anti-cellulite properties.
  • supramolecular chemistry The objects of supramolecular chemistry are supramolecular ensembles built spontaneously from complementary, that is, having geometrical and chemical correspondence of fragments, similar to spontaneous assembly of complex spatial structures in a living cell [9,10]
  • Adhesive disease of the peritoneum Pain form. Dynamic intestinal obstruction.
  • the treatment was prescribed according to the following method: infusion-antispasmodic therapy in a volume of 800.0 ml, antispasmodics, cleansing enema.
  • a composition with liposomal hyaluronidase, collagenase and insulin was used as a 1% suspension (protein) on carboxymethyl cellulose.
  • the patient noted a significant improvement in health, subsidence of the pain syndrome.
  • Adhesive disease of the peritoneum Pain form. Partial adhesive intestinal obstruction.
  • Treatment was prescribed by the following method: infusion-antispasmodic therapy in a volume of 800, 0 ml, antispasmodics, cleansing enema.
  • a composition with liposomal hyaluronidase, collagenase and insulin was used as a 1% suspension (protein) on carboxymethyl cellulose.
  • the patient noted improvement in well-being, subsidence of pain.
  • Ultrasound revealed a decrease in the number of planar viscero-parietal adhesions. Visually significant scar reduction.
  • the invention relates to pharmacy and cosmetology, and can be used as a medicine and cosmetic for skin rejuvenation, resorption of scars, treatment of postoperative adhesive disease, acceleration of tissue regeneration in the postoperative period, to eliminate cellulite.
  • the composition in the form of a rejuvenating cosmetic cream can be produced by the industry in sufficient quantities, taking into account the availability of all components of the composition. For the production of the composition does not require unique equipment, high energy consumption and original inaccessible reagents.
  • Verzar F. The aging of collagen. Sci. Am., 1963, 208, 104-114;

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Gerontology & Geriatric Medicine (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Cosmetics (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

Изобретение может быть использовано в фармации и косметологии, и может быть использовано в качестве лекарственного и косметического средства для омоложения кожи, рассасывания рубцов, лечения послеоперационной спаечной болезни, ускорения регенерации тканей в послеоперационном периоде, для ликвидации целлюлита. Суть изобретения: Косметологическая и фармацевтическая композиция для омоложения и восстановления кожи, в том числе после хирургических операций и способ ее получения, содержащая липосомы с белками, которая отличается тем, что в качестве белков используют систему на основе частично ацилированных с замещением от 0 до 10% массы белка гиалуронидазы, инсулина и коллагеназы в разных соотношениях. Композиция в виде омолаживающего косметического крема может производиться про- мышленностью в достаточных количествах с учетом доступности всех компонентов ком- позиции.

Description

^
Косметологическая и фармацевтическая композиция для омоложения и восстанов- ления кожи, в том числе после хирургических операций
Область техники
Изобретение относится к фармации и косметологии, и может быть использовано в качестве лекарственного и косметического средства для омоложения кожи, рассасывания рубцов, лечения послеоперационной спаечной болезни, ускорения регенерации тканей в послеоперационном периоде, для ликвидации целлюлита. Предшествующий уровень техники
Широкое распространение получила гипотеза о том, что полипептидные цепи кол- лагена в старческом возрасте имеют повышенное содержание сшивок. Наблюдения, ле- жащие в основе этой гипотезы, привели к созданию коллагеновой теории старения [1]. В соответствии с теорией, накопление числа ковалентных сшивок в коллагене при увеличе- нии возраста животного переводит белок в нерастворимое состояние. Вследствие чего он накапливается в тканях в ущерб клеткам, вызывая нарушение в функционировании орга- нов и всего организма. Не вдаваясь в детали этой теории на уровне организма в целом, рассмотрим некоторые детали строения коллагеновых фибрилл и их взаимопревращения в коже животных.
Однако предварительно следует заметить, что причиной сшивок в молекуле колла- гена могут быть совершенно разные химические процессы. Так, образование поперечных сшивок в коллагеновых фибриллах возможно за счёт модификации оксилизиновых остат- ков исходных α-цепей с участием такого внеклеточного фермента как лизилоксидаза. 06- разованные таким образом поперечные сшивки могут иметь тип лизинонорлейцина (- (CH2)4-NH-(CH2)4) или оксилизинонорлейцина (-(CH2)4-NH-CH2-CH0H-(CH2)2). Кроме этого, возможно появление сшивок за счёт образования связей S-S между цепями с уча- стием цистеиновых остатков, которые присутствуют в молекулах коллагена любого типа. Поэтому можно полагать, что и отношение вновь возникающих связей такого рода к внешним воздействиям будет различным. По-видимому, различным будет и участие этих связей в модификации общей структуры белка.
Коллагеновые фибриллы состоят из мономеров (скорее из отрезков), а каждый от- резок представляет собой три полипептидные цепи, свернутые относительно друг друга в виде спирали. Полипептидные цепи имеют несколько вариантов строения: al(I), al(II), αΙ(ΙΙΙ), al(IV) и, аналогично, варианты цепей а2, которые отличаются последовательно- стью аминокислот и поэтому, по-видимому, их синтез кодируются разными генами. Каж- дая α-цепь состоит приблизительно из 1050 аминокислот и имеет молекулярную массу около 100 KDa. Центральная часть α-цепи состоит из примерно 1000 аминокислотных фрагментов, соединённых через чередующиеся последовательности Гли-х-у. Таким обра- зом, глициновый фрагмент занимает каждое третье положение в цепи. У глицина нет бо- ковых заместителей - это самая маленькая (по размеру) аминокислота. Азот аминогруппы глицина одной цепи связан водородной связью с карбонильным кислородом глицина дру- гой цепи. И таких водородных связей между тремя свитыми в спираль цепями может быть образовано более 600. Несмотря на то, что энергия таких связей составляет всего 3-5 ккал/моль, существование большого числа индивидуальных связей (две связи на три пеп- тидные цепи) обеспечивают прочное удерживание трёх цепей в спиралевидном состоя- нии.
Остальные два положения "X" и "Y" в упоминаемой выше триаде Гли-х-у, могут занимать другие аминокислоты. Часто встречаются пролин и гидроксипролин. Чем выше суммарное содержание пролина и гидроксипролина, тем выше стабильность и температу- ра плавления. Так, коллаген в коже телёнка содержит 232 фрагмента этих аминокислот, и температура его плавления равняется 39°С, в то время как коллаген кожи трески содержит 155 фрагментов пролина и гидроксипролина, что приводит к снижению температуры плавления коллагена до 16°С. Следует также подчеркнуть, что не только суммарное коли- чество пролина и гидроксипролина определяет стабильность коллагена, но и соотношение указанных аминокислот в его молекуле. Так коллаген, в котором содержится только про- лин, имеет температуру плавления в интервале от 20 до 25°С. Если же вместо пролина со- держится гидроксипролин, температура плавления повышается до 37°С. Эти изменения объясняются возможностью гидроксипролинового фрагмента образовывать дополнитель- ные водородные связи. Таким образом, сформулированный отрезок (проколлаген), со- стоящий из трёх пептидов, скрученных в спираль, сшивается с другими аналогичными от- резками, образуя коллагеновую фибриллу.
Коллагеновые фибриллы, в зависимости от места локализации в организме и от возраста, имеют разное строение. Например, кожа зародыша содержит больше коллагена типа III, чем типа I, а у взрослых это соотношение меняется на обратное.
Изменение содержания количества коллагена в коже животных в процессе старения
Возвращаясь к рассмотрению графика, представленного на рис.9.6, отметим, что в сухожилии хвоста крыс в процессе старения общее количество коллагена возрастает. Од- нако это обстоятельство находится в противоречии с более поздними данными [31] и с широко распространённым среди косметологов-профессионалов мнением о том, что об- щее количество коллагена в коже в процессе старения наоборот снижается. Так в работе [2] в графическом виде приводятся данные, свидетельствующие о том, что концентрация коллагена в коже человека снижается в процессе старения.
Не обсуждая гигантский разброс значений содержания коллагена в коже после 50 лет, авторы приходят к мнению о том, что для поддержания кожи в нормальном состоя- нии необходимо ингибировать процесс ферментативной деградации коллагена. С этой це- лью предлагается использовать специфические ингибиторы коллагеназы, предназначен- ной для расщепления коллагеновых фибрилл.
Однако не следует делать скоропалительных выводов. Во-первых, фермент колла- геназа всегда находится в зоне расположения "своего" субстрата. Не важно, в каком орга- не животного находятся коллагеновые фибриллы - в сухожилии хвоста или в коже. Пред- назначение коллагеназы в том и состоит, чтобы "расшивать" коллагеновые нити, способ- ствуя процессу их обновления, так как коллагеназа совместно с протеолитическими фер- ментами деструктурирует коллагеновую молекулу до низкомолекулярных пептидов, ко- торые вновь в качестве исходного материала возвращаются в фибробласты, в которых и происходит синтез новых предшественников коллагена. Как отмечают авторы работы [2], за счёт этого процесса коллаген постоянно обновляется с полупериодом жизни (τ1/2) око- ло 15 суток. И теперь для разрешения ситуации, представленной в виде парадокса, следует предположить, что по каким-то причинам в процессе старения организма коллагеназа крысы замедляет расщепление коллагена, сдвигая динамическое равновесие в сторону увеличения его синтеза, а человеческая коллагеназа наоборот усиливает свою активность, сдвигая равновесие в сторону снижения концентрации коллагена. Можно было, конечно, объяснить последнее обстоятельство увеличением скорости синтеза коллагена в фиброб- ластах кожи. Однако ряд косвенных данных позволяет считать такое объяснение малове- роятным.
В настоящее время следует признать, что в вопросе о том, накапливается коллаген в коже в процессе старения организма или, наоборот, его концентрация снижается, ясно- сти нет. А значит, существует сформулированный нами парадокс.
Для объяснения изменений, происходящих с коллагеном в коже человека, можно привлекать многочисленные данные о влиянии ферментов и продуктов перекисного окис- ления липидов, способствующих образованию поперечных сшивок, и обсуждать возмож- ное влияние на этот процесс изменений, протекающих на генетическом уровне (см., на- пример, [2]). Однако, при этом можно "утонуть" в разнообразных взаимосвязанных фак- тах и проявлениях, не добравшись до сути изучаемого (весьма сложного) процесса. На наш взгляд, в таких случаях является целесообразным использование в определённой сте- „
4
пени упрощённых логических построений, которые опираются на имеющиеся экспери- ментальные данные и справедливость которых может быть проверена опытным путём.
В данном случае имеется процесс синтеза и деструкции коллагена с учётом нали- чия динамического равновесия между скоростями этих реакций (Фиг.1.).
Коллаген вместе с эластином и ретикулином является опорно-структурным белком, локализованным в дерме. Он составляет основную массу дермы (до 70% в пересчёте на сухой вес) и является главным структурным компонентом соединительной ткани. Этот специфический по аминокислотному составу и по строению белок не растворяется в воде в обычных условиях (только набухает). Протеолитические ферменты (пепсин, трипсин, папаин) расщепляют лишь растворимые фрагменты коллагеновых нитей. Ферментом, ко- торый способен перевести коллагеновую нить (фибриллу) в растворимое состояние за счёт частичного гидролиза, является коллагеназа.
Для такого рода процессов в норме характерно обязательное наличие равенства скоростей:
Усинт^Удестр.
Равенство скоростей синтеза и деструкции коллагена определяет наличие устойчи- вого динамического равновесия. Естественно предположить, что при увеличении скорости синтеза или снижении скорости деструкции коллагеновых фрагментов может наступать состояние организма, связанное с излишней коллагенизацией дермы и, наоборот, при снижении скорости синтеза и увеличении скорости деструкции может наступить деколла- генизация ткани дермы.
На наш взгляд, существует заблуждение, связанное с тем, что полагают, будто бы синтез коллагена осуществляется быстрее, чем его деградация. Так в монографии [3] в разделе "Обмен коллагеновых белков" сообщается следующее: "В нормальных условиях коллаген синтезируется со скоростью сравнимой с темпом образования других белков. Но разрушается коллаген очень медленно (период полураспада 50-60 дней, что является осо- бенностью его обмена. Преобладание синтеза коллагена над его деструкцией обусловлено тем, что вновь образованные молекулы этого белка слишком ригидны и недоступны для действия протеологических ферментов". Возникает интересная ситуация. С одной сторо- ны, многие полагают, что количество коллагена в коже в процессе старения организма снижается. А с другой стороны, снижение скорости деструкции коллагена при нормаль- ной скорости синтеза должно приводить к его накоплению.
Нам кажется, что автор вышеприведённых высказываний слишком драматизирует различия в скоростях синтеза и деструкции коллагена. Визуально и в 20, и в 30 лет и даже в более старшем возрасте изменения в состоянии кожи являются быстрыми, затрагивая только самые "слабые места" поверхности нашего тела (обычно первые морщинки появ- ляются в уголках глаз, где самая тонкая кожа). Таким образом, процесс накопления визу- альных изменений в состоянии кожи человека растянут на несколько десятков лет. А ведь если бы действительно коллаген разрушался "очень медленно", то мы были бы вправе ожидать появления этих изменений в гораздо более молодом возрасте.
Можно было бы, конечно, предположить, что по каким-то причинам скорость де- градации коллагена, достаточно высокая в раннем периоде развития организма, замедля- ется в последующие годы, например, за счёт снижения активности фермента коллагеназы. К сожалению, у нас нет информации об изменении активности коллагеназы в процессе старения организма.
Таким образом, наиболее приемлемым вариантом описания состояния системы, связанной с синтезом и деструкцией коллагеновых нитей при нормальном состоянии ор- ганизма, является обязательное равенство скоростей VCHHT. И Удестр.. При этом величины абсолютных значений должны определять время жизни коллагеновой нити (τ). Чем выше равновесные скорости синтеза и деструкции, тем ниже значение τ и наоборот.
Как уже отмечалось ранее, в процессе старения организма в коже снижается содержание растворимого коллагена с одновременным повышением концентрации его нерастворимых форм, что свидетельствовало об увеличении числа межмолекулярных сшивок и возмож- ном изменении структуры коллагена. Все это не могло не отразиться на процессе взаимо- действия коллагеназы с коллагеновыми нитями, так как ферменты зачастую обладают значительной специфичностью. Поэтому при накоплении сшивок в молекуле коллагена коллагеназа в определенный момент могла потерять свою активность по отношению к ви- доизмененному под влиянием сшивок коллагеновому субстрату. То есть, фактически фермент мог потерять способность "узнавать" молекулу коллагена и реагировать с ним. Действительно, обнаружилось, что сшитый (нерастворимый) коллаген является устойчи- вым по отношению к коллагеназе [4], а измеряя количество коллагена, не реагирующего с - эндогенной коллагеназой организма, можно определять возраст человека.
Таким образом, процесс старения организма сопровождается накоплением нерас- творимых форм коллагена, которые не реагируют с коллагеназой. Это может означать только одно - некоторое количество коллагенового субстрата выводится из рассмотренно- го выше равновесного процесса синтеза и деструкции коллагеновых нитей, и время жизни (τ) этих молекул увеличивается до бесконечности. В результате количество сшивок в мо- лекулах нереакционноспособного по отношению к коллагеназе коллагена продолжает увеличиваться, и коллагеновый матрикс кожи становится все более жестким, что приво- дит к снижению эластичности кожи и появлению (фиксации) морщин. Жесткий коллаген накапливается в коже, неотвратимо способствуя проявлениям ее старения. Оставшиеся без изменения коллагеновые фрагменты или фрагменты, количество сшивок в которых оказалось недостаточным для того, чтобы заблокировать деструкцию коллагена, продол- жают участвовать в циклическом равновесном процессе, приводя к синтезу новых немо- дифицированных ("молодых") коллагеновых структур. Вообще, такого рода циклические равновесные процессы есть ни что иное, как естественная система защиты структуры биополимеров от возможных изменений, способствующая увеличению стабильности био- логических структур и организмов. К этим процессам с участием других биополимеров мы еще вернемся. А сейчас попробуем сформулировать важные с точки зрения космето- логов последствия участия коллагеновых структур в обсуждаемом равновесном процессе. Суммарная объемная концентрация коллагена (растворимого и нерастворимого или кол- лагена, не взаимодействующего с эндогенной коллагеназой) в течение всей жизни челове- ка остается величиной постоянной. Такое предположение нам представляется в достаточ- ной степени обоснованным, так как, если существует механизм регулировки скорости синтеза пептидных предшественников коллагеновых нитей в фибробластах дермы, то ос- новой такой регулировки, на наш взгляд, должна быть именно объемная концентрация коллагенового матрикса кожи. Тот факт, что в процессе старения организма часть колла- геновых структур выводится из рассматриваемого динамического равновесия (синтез- деструкция), может служить косвенным доводом в пользу существования механизма ре- гулировки синтеза коллагеновых предшественников фибробластами кожи. В противном случае мы должны были неизбежно столкнуться с явлением избыточной коллагенизации структур кожи. Такой механизм регулировки напоминает контактного торможения деле- ния клеток, в соответствии с которым при формировании монослоя в процесс деления во- влекаются только клетки, не имеющие соседей, а при полном формировании монослоя деление большинства видов клеток полностью прекращается!
Высказанное предположение слишком серьезно, чтобы не сформулировать очеред- ной парадокс, который можно обозначить парадоксом регулировки синтеза коллагена.
Интересным представляется также то обстоятельство, что скорость деструкции коллагена при наличии механизма регулировки синтеза, в свою очередь, может регулиро- ваться автоматически. Действительно, если в зоне действия эндогенной коллагеназы на- капливаются сшитые коллагеновые структуры, а количество "молодых" или не очень мо- дифицированных коллагеновых нитей, с которыми фермент может взаимодействовать, постепенно снижается, то снижается и общая скорость деструкции, зависящая от концен- трации реакционноспособного субстрата. Наряду с этим увеличивается время жизни кол- лагеновых структур, вовлекаемых в процесс динамического равновесия, что, в свою оче- редь, увеличивает вероятность накопления сшивок и ускоряет процесс старения. Имеются сведения о том, что обмен коллагена с возрастом постепенно замедляется, так как разви- тие сопровождается уменьшением скорости синтеза и разрушения коллагена. Отмечается также, что коллагеназа, когда в ней нет необходимости, существует в неактивной форме (М.Канунго, 1982). Эти факты, по нашему мнению, соответствуют высказанному ранее предположению, сформулированному в виде парадокса. А теперь обратимся к возмож- ным следствиям высказанного выше предположения. Если суммарное количество колла- гена в единице объема кожи в течение всей жизни человека постоянно, то можно поста- вить под сомнение необходимость использования и полезность косметических препара- тов, содержащих в своем составе ингредиенты коллагеновой природы. Допустим, мы ис- пользуем кремовую композицию, содержащую коллаген, извлекаемый из соединительной ткани или хрящей молодых животных. Естественно полагать, что молекулы такого колла- гена практически не имеют внутри- и межмолекулярных сшивок и поэтому достаточно эластичны. Очевидным результатом нанесения такого крема на поверхность кожи окажет- ся сиюминутное повышение ее эластичности. Однако, учитывая наличие предела прони- цаемости кожи, можно полагать, что эффект применения такой композиции в болыпинст- ве случаев исчезнет сразу после процедуры удаления крема с поверхности кожи. В доста- точной степени высокомолекулярные коллагеновые структуры не могут проникнуть в глубь кожи, оставаясь на ее поверхности. Совершенно иная ситуация возникает при ис- пользовании коллагеновых структур с молекулярными массами ниже 100 KDa. Обладая способностью преодолевать трансэпидермальный барьер, эти структуры, с одной стороны, более эффективно повышают эластичность кожи, влияя не только на ее поверхность, но и затрагивая более глубокие слои. Однако, с другой стороны, попадая в зону действия кол- лагеназы, коллагеновые фрагменты способны отвлекать фермент от взаимодействия с собственным коллагеновым матриксом кожи и, в результате, скорость основной реакции снижается - наступает известное в биохимии состояние, называемое конкурентным тор- можением основного процесса. Такое торможение увеличивает время жизни собственных коллагеновых структур и, соответственно, вероятность образования внутри- и межмоле- кулярных сшивок. Все это неотвратимо ведет к ускорению старения кожи. Таким образом, если наши предположения верны, то с позиций теории мягких косметологических воздей- ствий использование кремовых композиций, содержащих коллагеновые фрагменты, спо- собные преодолевать трансэпидермальный барьер, при кажущейся сиюминутной полезно- сти может иметь отрицательные последствия, ускоряя процессы старения коллагеновых структур кожи. о
Таким образом, имеется парадокс, суть которого сводится к тому, что можно под- вергнуть сомнению целесообразность использования в косметологии любых сырьевых источников коллагенового происхождения, способных отвлекать фермент коллагеназу от основной реакции. Предлагаем назвать это обстоятельство парадоксом отвлекающих свя- зей и будем надеяться, что специальные эксперименты подтвердят или, наоборот, позво- лять отбросить сделанные нами предположения, которые (следует подчеркнуть) появи- лись не на пустом месте.
И еще одно следствие, вытекающее из предыдущих рассуждений, нужно иметь в виду. Оно связано с необходимостью тщательной проверки исходного сырья для произ- водства косметических препаратов на совместимость с ферментами кожи и, в частности, с коллагеназой.
Фермент коллагеназа в качестве ингредиента косметических препаратов. Имеется еще одно интересное для косметологов следствие функционирования рассмотренного ди- намического равновесного процесса синтеза и деструкции коллагеновых волокон. Оно сводится к тому, что если собственная (эндогенная) коллагеназа, расположенная в зоне коллагенового матрикса кожи с возрастом начинает "пропускать" некоторые модифици- рованные сшивками коллагеновые структуры, которые, накапливаясь в коже снижают ее эластичность, то возникает желание помочь организму за счет введения дополнительных количеств фермента. При этом необходимо, чтобы были выполнены следующие основные условия:
- молекулярная масса фермента должна обеспечивать реальный доступ к внутренним структурам кожи;
- вводимая коллагеназа должна обладать меньшей специфичностью действия по сравне- нию с эндогенной коллагеназой кожи человека или взаимодействовать с более широким набором субстратов;
- взаимодействие с клеточными системами должно быть в достаточной степени щадящим. Существует большое количество ферментов, обладающих коллагенолитическим действи- ем.
По данным работы [5], очищенный препарат коллагеназы содержит набор веществ с молекулярными массами от 16 до 32 KDa. Доминирующей (до 80%) является молекуляр- ная масса 23,5 KDa. Этот препарат обладает способностью разрушать пептидные связи в природном коллагене. В зависимости от степени очистки коллагенолитическая активность препарата может сопровождаться трипсиноподобной, химотрипсиноподобной, карбогид- разной и ДНКазной активностями. Имеющиеся данные позволяют полагать, что коллаге- наза, выделенная из печени дальневосточных крабов, отличается специфичностью дейст- вия, например, от препаратов коллагеназ, выделяемых микроорганизмами рода Clostridium. Коллагенолитический фермент из печени краба проявляет высокую актив- ность по отношению к различным типам природного коллагена. Так он, в отличие от мик- робных коллагеназ, расщепляет коллаген III типа из кожи теленка и коллаген IV типа из хрусталика глаза быка. Являясь ферментом, относящимся к классу сериновых протеаз, коллагеназа гидролизует специфические субстраты для трипсина, химотрипсина и эласта- зы. Показано также [5], что очищенная коллагеназа, выделяемая из печени крабов, в оп- ределенных концентрациях совместима с многими клеточными системами. Так, обработка монослоя таких перевиваемых клультур клеток, как L68, SV1, MDCK, Нер2 и ЛЭЧ приво- дит к достаточно быстрому отслоению клеток от твердого субстрата с сохранением их морфологии и низким процентом мертвых клеток при концентрации фермента от 0,0001 до 0,01%.
Таким образом, рассмотренные выше характеристики коллагенолитического пре- парата позволяли полагать наличие потенциальной возможности его эффективного ис- пользования в качестве добавки к косметическим композициям, предотвращающим или тормозящим механизм старения кожи, связанный с накоплением сшивок в молекулах кол- лагена. Действительно, молекулярная масса фермента позволяет ему с определенной сте- пенью вероятности достигать зоны локализации коллагеновых нитей (сосочковый слой дермы). Те немногочисленные сведения об особенностях специфичности действия фер- ментативного препарата позволяли надеяться на реализацию своеобразной "помощи" эн- догенной коллагеназе человека. Так, например, для косметологов чрезвычайно важным является вовлечение в реакцию гидролиза тех коллагеновых нитей, с которыми уже не может взаимодействовать собственная коллагеназа. Если бы такой процесс в действитель- ности был запущен с помощью добавляемой экзогенной коллагеназы, то это, образно го- воря, напоминало бы эффект дополнительного дворника, вычищающего "мусор" из тех углов, куда не дотягивается метла основного уборщика. Однако, мы должны признать, что для окончательных утверждений о реализации такого рода процесса у нас нет достаточ- ных оснований. Как обычно в таких случаях, при отсутствии информации можно сформу- лировать парадокс эффекта дополнительного дворника.
Тем не менее, введение в косметические средства коллагеназы, выделенной из пе- чени крабов, кажется оправданным с той точки зрения, что воздействуя на коллагеновые нити совместно с эндогенной коллагеназой и ускоряя тем самым скорость их деградации, препарат будет способствовать снижению времени жизни коллагеновых нитей и, соответ- ственно, снижению вероятности накопления сшивок. А щадящее действие препарата на клеточные культуры с позиций теории мягких косметологических воздействий разрешает движение разработчиков косметических средств в указанном направлении. В работе [5] было проведено экспериментальное изучение безвредности, биохимических механизмов действия, а также влияния на структуру кожи комплекса ферментов "коллагеназа крабов". На основании этих исследований рекомендовано использовать этот препарат в концентра- ции 0,75% в косметических препаратах, предназначенных для ухода за увядающей кожей лица. К сожалению, мы не имеем информации об активности и качестве используемой в этих экспериментах коллагеназы. Однако несколько смущает то обстоятельство, что ре- комендуемая концентрация превышает щадящую для клеток концентрацию в 75-7500 раз. Причины такого превышения могут быть связаны с различиями в активностях (чистоте) испытуемых препаратов. Однако нам это представляется маловероятным. Скорее всего, мы снова имеем дело с косметологическими парадоксами, связанными с безоглядным ис- пользованием аномально высоких концентраций биологически активных веществ. И в этом случае разработчикам косметических средств нет никакого дела до того, что будет происходить с клетками базального слоя эпидермиса при воздействии ферментов в "реко- мендуемых" концентрациях. Если же подобный вопрос задать цитологу, клеточному био- технологу ("культуралыцику"), то в ответ можно получить любопытные высказывания. Складывается такое впечатление, что косметологи скорее уподобляются "кожевенных дел мастерам", так как сопоставимые концентрации препарата "Коллагеназа краба" использу- ются при выделке шкур животных (информация Тихоокеанского института биоорганиче- ской химии) для получения одежных кож, кож для верха обуви из сырья крупного рогато- го скота и особо эластичных кож из свиного сырья.
Возвращаясь к основной задаче косметологии, предусматривающей противодейст- вие процессу старения кожи, и к теории мягких косметологических воздействий, позво- ляющей влиять на биохимические процессы и взаимопревращения клеточных систем ко- жи, для реализации этой основной задачи необходимо подчеркнуть, что даже те концен- трации фермента, которые использовались авторами работы [5] для достижения своих це- лей (отделение монослоя от субстрата, диспергирование животных тканей), по-видимому, не могут служить ориентиром для конструирования "щадящих" косметических средств. Наиболее приемлемые концентрации коллагеназы в косметических средствах, на наш взгляд, не должны значительно превышать содержание коллагеназы в структуре кожи че- ловека. По крайне мере, клеточные тест-системы должны выдерживать действие фермента больший период времени, чем 5-15 минутное воздействие, используемое авторами работы [5]. Этот вопрос требует детального рассмотрения и, возможно, экспериментальной про- верки. И нас не должно "убаюкивать" то обстоятельство, что при концентрации 0,75% препарат "Коллагеназа краба", добавляемый в косметическое средство, благотворно влия- ^ ет "на морфологическую структуру кожи". Детальное обоснование концентрации потре- бовало бы от экспериментаторов постановку специальных экспериментов для выявления отдаленных последствий.
Следует, однако, заметить, что при обсуждении этого вопроса мы сознательно вы- пустили из рассмотрения проблему стабильности коллагеназы и ее совместимость с тех- нологией производства косметических средств. По данным авторов, фермент должен хра- ниться при температуре - 20-0°С. Срок хранения при этом составляет 3 года. К сожале- нию, мы не имеем информации об условиях приготовления опытных образцов кремовых композиций, используемых авторами в эксперименте, также как и о том, проверялась ли конечная активность фермента в опытных образцах в процессе его проведения, и в каких условиях хранились эти образцы. Однако на основании исследований [6] можно утвер- ждать, что коллагенолитическая активность фермента сохраняется при выдерживании косметического препарата, содержащего 0,05% специально очищенной коллагеназы, вы- деленной из печени дальневосточных крабов, облепиховое или пихтовое масло, экстракт прополиса и гель полиэтиленоксида (в качестве основы) при +7°С в течение шести меся- цев. Наряду с этим, при +37°С активность препарата снижается практически до нулевых значений в течение нескольких суток. Таким образом, это тот самый случай, когда хране- ние косметического средства требует пониженных температур.
Пути старения кожи, связанные с модификацией других биополимеров. В структу- ре и функциях кожи существенную роль играют мукополисахариды (гликозаминоглика- ны), к которым следует отнести гиалуроновую кислоту. Она обнаруживается в зернистом и более низких слоях эпидермиса, а также в сосочковом слое дермы. Молекулярная масса гиалуроновой кислоты может превышать 100 млн-Da. Повторяющимся фрагментом этого биополимера является соединение глюкуроновой кислоты и аминосахара, у которого один из атомов водорода аминогруппы замещен на ацильный фрагмент (остаток уксусной ки- слоты). Замечательным физическим свойством гиалуроновой кислоты является ее способ- ность образовывать стабильный гель с молекулами воды, обладающий высокой вязко- стью. Это обстоятельство определяет функции гиалуроновой кислоты, связанные с под- держанием влажности эпидермиса и внутренних структур кожи, а также ее роль в качест- ве цементирующего вещества, связывающего клетки, коллагеновые пучки и фибриллы между собой. Как и любой биополимер, гиалуроновая кислота находится в определенных взаимоотношениях с соответствующим ферментом - гиалуронидазой. Совершенно оче- видно, что эта пара субстрат (гиалуроновая кислота) - фермент (гиалуронидаза), по анало- гии с коллагеном и коллагеназой, участвует в динамическом равновесном процессе, ос- новная роль которого заключается в предотвращении накопления внутри и межмолеку- лярных сшивок в молекуле гиалуроновой кислоты. Скорости реакции синтеза и деструк- ции гиалуроновой кислоты, по-видимому, зависящие от возраста организма и других па- раметров, характеризуются периодами полураспада от 1,9 до 7,7 суток, что примерно со- ответствует времени жизни молекулы гиалуроновой кислоты от 4 до 16 суток. Гиалуро- нидаза кожи преимущественно взаимодействует с гиалуроновой кислотой, имеющей вы- сокую молекулярную массу, а последующая деградация фрагментов гиалуроновой кисло- ты завершается другими ферментами. Деполимеризация гиалуроновой кислоты ведет к увеличению проницаемости кожи и, наоборот, высокая степень полимеризации, достигае- мая, в том числе, и за счет возможных дополнительных сшивок, например, под влиянием продуктов ПОЛ, приводит к снижению проницаемости кожи. Это обстоятельство пред- ставляется очень важным, хотя бы потому, что все метаболиты плазмы крови на пути к базальным клеткам вынуждены преодолевать гелевую систему гиалуроновой кислоты и скорость их поступления к клеткам будет зависеть от состояния ее молекулы. Аналогич- ным образом продукты клеточного метаболизма удаляются в лимфатическую и венозную системы. Таким образом, регулировка вязкости геля, образуемого полисахаридами с во- дой, является весьма существенным процессом. Наличие барьера проницаемости кожи делает бессмысленными попытки введения гиалуроновой кислоты с высокими молеку- лярными массами в косметические препараты с целью влияния на рассматриваемое дина- мическое равновесие, поддерживающее вязкость геля на определенном уровне. Единст- венно достижимым результатом введения индивидуальной гиалуроновой кислоты в кос- метические средства является увлажнение поверхности кожи. При этом, естественно, нельзя исключать воздействия на внутренние структуры кожи биологически активных низкомолекулярных фрагментов, которые могут быть связаны (включены в гель) с гиалу- роновой кислотой. Что же касается низкомолекулярных фрагментов гиалуроновой кисло- ты, способных преодолевать трансэпидермальный барьер, то, по аналогии с системой кол- лаген-коллагеназа, можно предположить их негативное влияние за счет отвлечения гиалу- ронидазы от основной реакции (конкурентное торможение). Во всяком случае, при введе- нии низкомолекулярных субстратов гиалуроновой кислоты, мы можем ожидать увеличе- ния вязкости геля, образованного гиалуроновой кислотой, снижения скорости доставки питательных веществ к базальному слою клеток эпидермиса и повышения концентрации продуктов клеточного метаболизма в зоне расположения этих клеток. В соответствии с основными постулатами теории мягких косметологических воздействий реализация тако- го рода событий будет нарушать динамическое равновесие формирования эпидермиса, ускоряя процессы, ведущие к старению кожи. „
13
Естественным образом, по аналогии с коллагеназой, можно рассматривать вариан- ты создания косметических композиций, содержащих гиалуронидазу (см., например, [7]). При этом возникают фактически те же самые вопросы, на которые мы пытались ответить в предыдущем обсуждении коллагенового пути старения кожи:
- величина молекулярной массы молекулы гиалуронидазы;
- величина оптимальной концентрации фермента;
- стабильность фермента в процессе приготовления косметического препарата и его хра- нения.
Собственно говоря, коллагеназа и гиалуронидаза являются важнейшими фермен- тами, требующими особого внимания косметологов. Это вытекает хотя бы из того, что оба фермента и их субстратные пары (коллаген и гиалуроновая кислота) локализованы в меж- клеточном пространстве кожи, и влияние компонентов косметических средств на динами- ческие равновесные процессы синтеза и деструкции биополимеров может носить характер прямого взаимодействия. Несколько иначе обстоит дело, например, с такими парами как нуклеиновые кислоты и нуклеазы. Основные события, связанные с синтезом и деструкци- ей нуклеаз разворачиваются во внутриклеточном пространстве, отделенном от межкле- точного бислойной липидной мембраной. Поэтому, только в случае проникновения ин- гредиентов косметического средства во внутриклеточное пространство возможно их пря- мое влияние на динамическое равновесие между брутто-скоростями синтеза и деструкции нуклеиновых кислот, существование которого из общих соображений, несмотря на всю сложность рассматриваемых процессов, не должно вызывать сомнений. В противном слу- чае реализовались бы варианты, связанные либо с накоплением, либо с дефицитом суб- страта.
Косметические композиции с одновременной блокировкой нескольких механизмов старения кожи. Завершая рассмотрение механизмов старения кожи, которые обсуждались прямо или косвенно в различных разделах этой монографии, следует подвести некоторые итоги. В процессе старения организма человека отчетливо могут прослеживаться вариан- ты неблагоприятных изменений, которые отражаются на состоянии кожи.
А. Процессы перекисного окисления липидов, продукты которого могут провоцировать существенные изменения в функционировании клеточных и биохимических систем кожи. Б. Ухудшение реологических характеристик движения межклеточной жидкости, постав- ляющей питательные вещества базальным клеткам эпидермиса и удаляющей продукты клеточного метаболизма из зоны расположения этих клеток.
В свою очередь причинами такого ухудшения могут являться: Б.1. Сужение и потеря эластичности микрокапилляров (петелек) кровеносной системы, расположенных в сосочковом слое дермы.
Б.2. Снижение проницаемости геля гиалуроновой кислоты (и других полисахаридов), че- рез который и осуществляется доставка питательных веществ и удаление продуктов кле- точного метаболизма.
В. Увеличение жесткости коллагеновых структур кожи.
Г. Изменение уровня и соотношения гормонов и гормоноподобных веществ в плазме кро- ви человека.
А теперь на основании всего вышеизложенного можно представить себе идеальную кремовую композицию, допустим, для возраста 30-35 лет и старше. Очевидно, в ее составе должны содержаться вещества, обладающие антиоксидантным действием (блокировка механизма старения, связанного с реализацией ПОЛ - вариант А), вещества, способст- вующие повышению эластичности микрокапилляров сосочкового слоя дермы, или иные приемы, повышающие их эластичность (блокировка механизма старения по варианту Б.1), фермент гиалуронидаза (блокировка механизма старения по варианту Б.2), фермент кол- лагеназа (блокировка механизма старения по варианту В и регенерирующие добавки, об- ладающие гормональной и регулирующей деление клеток активностью (блокировка меха- низма старения по пути Г). Для блокировки варианта Б.1 возможно также использование строго выверенных в зависимости от возраста концентраций питательных ингредиентов.
Известна косметическая композиция для лечения целлюлита и омоложения организма, состоящая из йодированных растительных масел в виде везикул (липосом) и содержащая тиомуказу и гиалуронидазу и другие ингредиенты [8]. Применение такой композиции позволяет эффективно устранять целлюлит, омолаживать кожу, избавляться от рубцов. Недостатком данного изобретения является отсутствие у композиции способности адаптироваться к организму конкретного пациента, что значительно сужает эффективность композции в популяции (процент эффективности), неэффективность в лечении коллагеновых рубцов в связи с отсутствием в составе композиции коллагеназы, отсутствие регенерирующих/анаболических свойств в связи с отсутствием в составе композиции инсулина и применимость композиции только для косметических целей, что не дает возможность применять данную композицию в медицине для ускорения заживления Рубцовых тканей после оперативного вмешательства с целью предотвращения спаечной болезни и образования рубцов.
Раскрытие изобретения
Задачей изобретения являлось разработать косметологическую и фармацевтиче- скую композиция для омоложения и восстановления кожи, обладающую способностью адаптироваться к организму конкретного человека, значительно ускорять регенерацию тканей в послеоперационном периоде, омолаживать кожу.
Поставленная задача решается путем создания косметологической и фармацевти- ческой композиции для омоложения и восстановления кожи, в том числе после хирурги- ческих операций, содержащей липосомы с белками и включающей эффективное количе- ство основных действующих веществ и фармацевтически приемлемых вспомогательных формообразующих веществ, отличающаяся тем, что в качестве белков используют суп- рамолекулярный ансамбль из частично ацилированных белков со степенью модификации от 0,1 до 10% от массы белка, где в качестве ацилированных белков могут выступать час- тично сукцинилированные инсулин, коллагеназа и гиалуронизаза в разных комбинациях, а для создания липосом могут быть использованы фосфотидилхолин и фосфотидилэтано- ламин в разных комбинациях и быть получены методами озвучивания и обратных фаз. Разработанная композиция обладает мощными регенеринующими, омолаживающими и антицеллюлитными свойствами. Нами использован ансамбль из смеси частично модифи- цированных белков (инсулина, коллагеназы, гиалуронидазы), но счастично измененными на противоположные зарядами молекул. Ансамбль - термин из супрамолекулярной хи- мии. Объекты супрамолекулярной химии— супрамолекулярные ансамбли, строящиеся самопроизвольно из комплементарных, т. е. имеющих геометрическое и химическое соот- ветствие фрагментов, подобно самопроизвольной сборке сложнейших пространственных структур в живой клетке [9,10]
Краткое описание чертежей
Зависимость между концентрацией коллагена в коже и возрастом человека Примеры осуществления изобретения
Пример 1.
Получение композиции. Готовят по 50 мл 3% раствора гиалуронидазы, коллагеназы и инсулина, смешивают с образованием 150 мл раствора с концентрацией белка 1%, добавляют 105 мг сухого янтарного ангидрида и перемешивают до полного его растворения, добавляют к полученному раствору 0,06 г бензалкония хлорида в качестве консерванта. Полученный раствор вливают в 10,0 г смеси сухих лиофилизированных фосфотидилхолиновых липосом, перемешивают до однородности. В полученную суспензию вводят 3,0 г карбоксиэтилцеллюлозы, перемешивают до однородности и оставляют на сутки для набухания. Полученный крем должен храниться в холодильнике. lo
Пример 2.
Больная 3., 26 лет, поступила в хирургическое отделение (история болезни N°2243) с жалобами на ноющие боли в мезогастрии, тошноту, однократную рвоту. Отмечает ухудшение состояния в течение 2-х дней. Из анамнеза болезни: страдает спаечной болезнью брюшины с 2006 года после перенесенной аппендэктомии. Обострения заболевания 1-2 раза в год. Самостоятельно не лечилась.
Объективно при поступлении: состояние средней тяжести, определяется келоидный рубец в правой подвздошной области живота, при пальпации резкая болезненность по всему животу, симптом натяжения (Кохера) положительный. По остальным системам без особенностей.
При поступлении: обзорная рентгенография органов брюшной полости: определяются единичные чаши Клойбера.
На УЗИ выявлено наличие плоскостных висцеро-висцеральных и висцеро-париетальных спаек в правой подвздошной области живота.
Установлен диагноз: Спаечная болезнь брюшины, болевая форма. Динамическая кишечная непроходимость.
Назначено лечение по следующей методике: инфузионно-спазмолитическая терапия в объеме 800,0 мл, спазмолитики, очистительная клизма. На 2-й день применяли композицию с липосомальной гиалуронидазой, коллагеназой и инсулином в виде 1 % суспензии (по белку) на карбоксиметилцеллюлозе. В динамике на 5-е сутки больная отмечала значительное улучшение самочувствия, стихание болевого синдрома.
На УЗИ было выявлено снижение количества плоскостных висцеро-париетальных спаек. При выписке (23.04.04) больная жалоб не предъявляла. Клинически при пальпации живот мягкий, безболезненный. Симптомов раздражения брюшины нет.
Пример 3.
Больной М., 40 лет, поступил в хирургическое отделение (история болезни N°3476) с жалобами на постоянные тупые боли в мезогастрии, тошноту. Отмечает ухудшение состояния в течение 12 часов. Из анамнеза болезни: страдает спаечной болезнью брюшины с 1993. года после перенесенной прободной язвы двенадцатиперстной кишки. Оперировался неоднократно по поводу спаечной болезни брюшины (1999, 2001, 2005 г.) Обострения заболевания 2-3 раза в год.
Объективно при поступлении: состояние средней тяжести, определяется келоидный рубец по средней линии живота, при пальпации резкая болезненность по всему животу, локально симптомы раздражения брюшины положительные. По остальным системам без особенностей.
При поступлении: обзорная рентгенография органов брюшной полости: определяются единичные чаши Клойбера. Пассаж бария по кишечнику замедлен, частично проходим. На УЗИ выявлено большое количество плоскостных висцеро-висцеральных и висцеро- париетальных спаек в области Послеоперационного рубца по средней линии живота.
Установлен диагноз: Спаечная болезнь брюшины, болевая форма. Частичная спаечная кишечная непроходимость.
Назначено лечение по следующей методике: инфузионно-спазмолитическая терапия в объеме 800, 0 мл, спазмолитики, очистительная клизма. На 2-й день применяли композицию с липосомальной гиалуронидазой, коллагеназой и инсулином в виде 1 % суспензии (по белку) на карбоксиметилцеллюлозе. В динамике на 6-е сутки больной отмечал улучшение самочувствия, стихание болевого синдрома. На УЗИ было выявлено снижение количества плоскостных висцеро-париетальных спаек. Визуально значительное уменьшение рубца.
Больному произведена операция: 06.05.08 лапароскопический адгезиолизис, во время операции отмечалось размягчение спаечного процесса, переход плоскостных спаек в тяжистые или нитевидные.
При выписке больной жалоб не предъявлял. Клинически при пальпации живот мягкий, безболезненный. Симптомов раздражения брюшины нет.
Таким образом, применение композиции липосомальных ацилированных коллагеназы, гиалуронизады и инсулина способствовало стиханию явлений спаечной кишечной непроходимости за счет регресса спаек брюшной полости.
Промышленная применимость
Изобретение относится к фармации и косметологии, и может быть использовано в качестве лекарственного и косметического средства для омоложения кожи, рассасывания рубцов, лечения послеоперационной спаечной болезни, ускорения рагенерации тканей в послеоперационном периоде, для ликвидации целлюлита. Композиция в виде омолаживающего косметического крема может производиться промышленностью в достаточных количествах с учетом доступности всех компонентов композиции. Для производства композиции не требуется уникального оборудования, высоких энергозатрат и оригинальных малодоступных реактивов. Список литературы:
1 Verzar F., The aging of collagen. Sci.Am., 1963, 208, 104-114;
2 Abdul Malak N., Perrier E. "TIMP-1 like; a new strategy for anti-aging cosmetic formulations" XX Congr. Intern. Federation of the Societies of cosmetic Chemists", Cannes, Sept. 14-18, 1998, V.1, 79-90;
3 "Кожа. Строение, функция, общая патология и терапия", под ред. А.М.Чернуха,
Е.П.Фролова, М.; Медицина, 1982
4 Hamlin C.R., Kohn R.R., Expl.Gerontol., 7, 377-379(1972);
5 Сандахчиев Л.С., Зиновьев В.В., Царева А.А. и др. "Применение коллазы для культиви- рования клеток", Вопр. Вирусол., 39(6)284-286 (1994);
6 Зиновьев В.В., Попова СР. и др. "Средство для ухода за кожей" Пат.РФ М>2089177, 1997;
7 Децина А.Н. "Косметический суперкрем для ухода за кожей" Пат.РФ N°2139039, 1999.
8 US Patent 4187291 "Cosmetic composition for the skin"
9 http://dic.academic.ru/dic.nsf/ruwiki/79240
10 Jean-Marie Lehn. Supramolecular Chemistry. Concepts and Perspectives.- Weinheim; New York; Basel; Cambridge; Tokyo: VCH Verlagsgesellschaft mbH, 1995. -P. 103 (Chapter 7)

Claims

Формула изобретения
1. Косметологическая и фармацевтическая композиция для омоложения и восстановления кожи, в том числе после хирургических операций, содержащая липосомы с белками, включающая эффективное количество основных действующих веществ и фармацевтиче- ски приемлемые вспомогательные формообразующие вещества, отличающаяся тем, что в качестве белков используют супрамолекулярный ансамбль из частично ацилированных белков.
2. Косметологическая и фармацевтическая композиция по п. 1, отличающаяся тем, что в качестве частично ацилированного белка используют гиалуронидазу
3. Косметологическая и фармацевтическая композиция по п. 1, отличающаяся тем, что в качестве частично ацилированного белка используют коллагеназу
4. Косметологическая и фармацевтическая композиция по п. 1, отличающаяся тем, что в качестве частично ацилированного белка используют инсулин
5. Косметологическая и фармацевтическая композиция по п. 1, отличающаяся тем, что в качестве частично ацилированного белка используют смесь коллагеназы, гиалуронидазы и инсулина
6. Косметологическая и фармацевтическая композиция по п.п.2-5, отличающаяся тем, что ацилирование белка проводят янтарным ангидридом
7. Косметологическая и фармацевтическая композиция по п. 1, отличающаяся тем, что для получения липосом используют метод обратных фаз с последующей обработкой ли- посом ультразвуком
8. Косметологическая и фармацевтическая композиция по п. 1, отличающаяся тем, что для получения липосом используют метод замораживания-размораживания
9. Косметологическая и фармацевтическая композиция по п. 1, отличающаяся тем, что для получения липосом используют метод введения раствора белка в суспензию лиофили- зированных липосом
10. Косметологическая и фармацевтическая композиция по п.п. 7-9, отличающаяся тем, что для получения липосом используют фосфотидилхолин
11. Косметологическая и фармацевтическая композиция по п.п. 7-9, отличающаяся тем, что для получения липосом используют фосфотидилэтаноламин
12. Косметологическая и фармацевтическая композиция по п. 7-9, отличающаяся тем, что для получения липосом используют смесь фосфотидилхолина и фосфотилилэтанола- мина
13. Способ получения косметологической и фармацевтической композиции для омоложе- ния и восстановления кожи, в том числе после хирургических операций, содержащей ли- посомы с белками, отличающийся тем, что берут белок, ацилируют с замещением от 0 до 10% массы белка с образованием смеси (супрамолекулярного ансамбля) ацилирован- ных белков и без дальнейшей очистки вводят в липосомы, а затем вводят в композицию.
14. Способ получения косметологической и фармацевтической композиции по п. 13, от- личающийся тем, что в качестве частично ацилированного белка используют гиалуро- нидазу
15. Способ получения косметологической и фармацевтической композиции по п. 13, от- личающийся тем, что в качестве частично ацилированного белка используют коллаге- назу
16. Способ получения косметологической и фармацевтической композиции по п. 13, от- личающийся тем, что в качестве частично ацилированного белка используют инсулин
17. Способ получения косметологической и фармацевтической композиции по п. 13, от- личающийся тем, что в качестве частично ацилированного белка используют смесь коллагеназы, гиалуронидазы и инсулина
18. Способ получения косметологической и фармацевтической композиции по п.п. 14-17, отличающийся тем, что ацилирование белка проводят янтарным ангидридом.
19. Способ получения косметологической и фармацевтической композиции по п. 13, от- личающийся тем, что для получения липосом используют метод обратных фаз с после- дующей обработкой липосом ультразвуком.
20. Способ получения косметологической и фармацевтической композиции по п. 13, от- личающийся тем, что для получения липосом используют метод замораживания- размораживания.
21. Способ получения косметологической и фармацевтической композиции по п. 13, от- личающийся тем, что для получения липосом используют метод введения раствора белка в суспензию лиофилизированных липосом
22. Способ получения косметологической и фармацевтической композиции по п. п.19-21, отличающийся тем, что для получения липосом используют фосфотидилхолин.
23. Способ получения косметологической и фармацевтической композиции по п. п.19-21, отличающийся тем, что для получения липосом используют фосфотидилэтаноламин 24. Способ получения косметологической и фармацевтической композиции по п.п. 19-21, отличающийся тем, что для получения липосом используют смесь фосфотидилхолина и фосфотилилэтаноламина
PCT/RU2010/000697 2010-11-22 2010-11-22 Косметологическая и фармацевтическая композиция для омоложения и восстанов- ления кожи, в том числе после хирургических операций WO2012070971A1 (ru)

Priority Applications (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PCT/RU2010/000697 WO2012070971A1 (ru) 2010-11-22 2010-11-22 Косметологическая и фармацевтическая композиция для омоложения и восстанов- ления кожи, в том числе после хирургических операций
US12/931,463 US8846064B2 (en) 2010-11-22 2011-02-01 Cosmetic and pharmaceutical compositions having modified proteins in the form of a supramolecular assembly

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PCT/RU2010/000697 WO2012070971A1 (ru) 2010-11-22 2010-11-22 Косметологическая и фармацевтическая композиция для омоложения и восстанов- ления кожи, в том числе после хирургических операций

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
US12/931,463 Continuation US8846064B2 (en) 2010-11-22 2011-02-01 Cosmetic and pharmaceutical compositions having modified proteins in the form of a supramolecular assembly

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2012070971A1 true WO2012070971A1 (ru) 2012-05-31

Family

ID=46146100

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/RU2010/000697 WO2012070971A1 (ru) 2010-11-22 2010-11-22 Косметологическая и фармацевтическая композиция для омоложения и восстанов- ления кожи, в том числе после хирургических операций

Country Status (2)

Country Link
US (1) US8846064B2 (ru)
WO (1) WO2012070971A1 (ru)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2604160C1 (ru) * 2015-08-11 2016-12-10 ОБЩЕСТВО С ОГРАНИЧЕННОЙ ОТВЕТСТВЕННОСТЬЮ "НПО Петровакс Фарм" Стабильная косметическая композиция на основе иммобилизованной гиалуронидазы и способ ее получения

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20150072929A1 (en) * 2011-02-01 2015-03-12 Artur Martynov Pharmaceutical composition comprising a mixture of carboxylated oligopeptides
US10183064B2 (en) 2014-03-20 2019-01-22 Technion Research & Development Foundation Limited Delivery system comprising a proteolytic enzyme or effector thereof for use in a method for oral treatment and uses thereof

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2000035427A1 (en) * 1998-12-15 2000-06-22 Collagenesis, Inc. Methods for reducing the immunogenicity of proteins, tissues, or organs
WO2001010457A2 (en) * 1999-08-09 2001-02-15 Tripep Ab Pharmaceutical compositions containing tripeptides
EP1334765A1 (en) * 2000-10-13 2003-08-13 National Institute of Advanced Industrial Science and Technology Process for producing liposome and apparatus therefor
WO2009072556A1 (ja) * 2007-12-05 2009-06-11 3-D Matrix, Ltd. 創傷治癒・皮膚再建材
US20090291133A1 (en) * 2008-05-23 2009-11-26 National Health Research Institutes Methods and compostions for enhancing transdermal drug delivery

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4446240A (en) * 1981-01-30 1984-05-01 Nerenberg Samuel T Pancreas specific protein systems
US4708861A (en) * 1984-02-15 1987-11-24 The Liposome Company, Inc. Liposome-gel compositions
AU664561B2 (en) * 1991-06-21 1995-11-23 University Of Cincinnati, The Orally administrable therapeutic proteins and method of making
US5986050A (en) * 1996-12-26 1999-11-16 Poly-Med, Inc. Peracylated proteins and synthetic polypeptides and process for making the same

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2000035427A1 (en) * 1998-12-15 2000-06-22 Collagenesis, Inc. Methods for reducing the immunogenicity of proteins, tissues, or organs
WO2001010457A2 (en) * 1999-08-09 2001-02-15 Tripep Ab Pharmaceutical compositions containing tripeptides
EP1334765A1 (en) * 2000-10-13 2003-08-13 National Institute of Advanced Industrial Science and Technology Process for producing liposome and apparatus therefor
WO2009072556A1 (ja) * 2007-12-05 2009-06-11 3-D Matrix, Ltd. 創傷治癒・皮膚再建材
US20090291133A1 (en) * 2008-05-23 2009-11-26 National Health Research Institutes Methods and compostions for enhancing transdermal drug delivery

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2604160C1 (ru) * 2015-08-11 2016-12-10 ОБЩЕСТВО С ОГРАНИЧЕННОЙ ОТВЕТСТВЕННОСТЬЮ "НПО Петровакс Фарм" Стабильная косметическая композиция на основе иммобилизованной гиалуронидазы и способ ее получения

Also Published As

Publication number Publication date
US20120195945A1 (en) 2012-08-02
US8846064B2 (en) 2014-09-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP5642388B2 (ja) 注射用ヒアルロン酸ゲル移植片混合物
CN103415307B (zh) 透明质酸组合物
JP5735965B2 (ja) 充填剤および線維芽細胞成長培地を組合せる注射用組成物
US5604200A (en) Wound therapeutic mixture containing medical grade hyaluronic acid and tissue culture grade plasma-fibronectin in a delivery system that creates a moist environment which simulates in utero healing
US8828927B2 (en) Elastin digest compositions and methods utilizing same
JP6440691B2 (ja) ボツリヌス神経毒を含む医薬組成物およびその使用
US20110124596A1 (en) Composition for treating inflammatory diseases
DK2621520T3 (en) Collagenase G and collagenase H-compositions for the treatment of diseases involving changes of collagen
KR20160031465A (ko) 하이알루론산의 가교 방법, 주사용 하이드로젤의 제조방법, 수득한 하이드로젤 및 수득한 하이드로젤의 용도
JP5247676B2 (ja) 皮膚のトリートメントにおいて有用な合成ペプチド類および化粧品または皮膚薬剤組成物中でのその用途
KR20080108996A (ko) 셀룰라이트 치료용 아교질분해효소
KR102429451B1 (ko) 진피 연결 조직 중 섬유엘라스틴 회복을 위한 아미노산 기반의 조성물
MX2013013219A (es) Composiciones para el desbridamiento de heridas que contienen seaprosa y metodos para tratar heridas usando esas composiciones.
Abd Samad et al. Collagen: New dimension in cosmetic and healthcare
WO2012070971A1 (ru) Косметологическая и фармацевтическая композиция для омоложения и восстанов- ления кожи, в том числе после хирургических операций
WO2012052562A1 (en) Compositions comprising a filler product and a chemically modified tetracycline
Lambe et al. Isolation, purification and characterization of hyaluronic acid: a concise review
CN102988962A (zh) 一种用于预防或治疗皮肤瘙痒症的复合物
Okhunov et al. Diagnosis and treatment of necrotizing soft tissue infection complicated by sepsis
US20060233783A1 (en) Topical composition in the form of a gel for treating skin burns
CN105727252A (zh) 一种护理组合物
Onwubu et al. Biobased materials in skin rejuvenation
Goldie Local steroid therapy in painful orthopaedic conditions
CN114621323B (zh) 一类具有皮肤修复作用的多肽化合物及其制备方法和应用
US20240277893A1 (en) Hydrogel Preparations for Acute and Chronic Wound Healing

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 10860060

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

DPE2 Request for preliminary examination filed before expiration of 19th month from priority date (pct application filed from 20040101)
NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

122 Ep: pct application non-entry in european phase

Ref document number: 10860060

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1