WO2012053787A2 - Ｈｉｆ-1 활성을 저해하는 아릴옥시페녹시아크릴계 화합물, 이의 제조방법 및 이를 유효성분으로 함유하는 약학적 조성물 - Google Patents

Ｈｉｆ-1 활성을 저해하는 아릴옥시페녹시아크릴계 화합물, 이의 제조방법 및 이를 유효성분으로 함유하는 약학적 조성물 Download PDF

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    • C07D295/088—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms with substituted hydrocarbon radicals attached to ring nitrogen atoms substituted by singly bound oxygen or sulfur atoms with the ring nitrogen atoms and the oxygen or sulfur atoms attached to the same carbon chain, which is not interrupted by carbocyclic rings to an acyclic saturated chain
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    • C07C2603/74—Adamantanes

Definitions

  • An aryloxyphenoxyacrylic compound which inhibits H I F-1 activity a process for producing the same, and a pharmaceutical composition containing the compound as an active ingredient
  • the present invention relates to an aryloxyphenoxyacrylic compound which inhibits the activity of HIF-1, a process for producing the same, and a pharmaceutical composition containing the same as an active ingredient.
  • Cancer remains one of the incurable diseases, despite civilization's constant efforts for decades.
  • anticancer drugs with new action mechanisms such as Gleevec have been developed, and new target molecules have emerged after the Human Genome Project .
  • Hypoxia Inducible Factor-1 is a hypoxia-inducible transcription factor that is heterodimerized by a HIF-la subunit and a HIF- ⁇ subunit, Cancer Metastasis Rev. , 17, 187-195, 1998; Trends Mo 1. Med. , 7, 345-350, 2001].
  • the HIF-la protein is oxygen-dependent and the furin residue at positions 402 and 564 is hydroxylated to form the cancer suppressor gene pVHL (Von Hippel-Lindau) (HIF-la protein), which binds to the HIF-I protein and migrates to the nucleus (Fig. 1).
  • HIF-1 a In the hypoxic state, [Science 292, 468-472, 2001; Science 292, 468- 472, 2001].
  • the stability of HIF-1 a is influenced by the factors involved in the oxygen sensing pathway, including transition metal ions, iron chelator, Or an antioxidant.
  • the HIF-1 ⁇ protein has no epidermal growth factor, heregulin, kininsulin-like growth factors-I and insulin-like growth factor-II Or by the activation of oncogenes such as Er
  • PI3K-AKT The MAPK signaling pathway is activated. The synthesis of HIF-la protein is increased to accumulate HIF-1 ⁇ protein.
  • HIF that has migrated into the nucleus binds to the HRE (Hypoxia Responsive Element, 5 '-ACGTG-3') on the promoter of the target gene and induces the expression of the gene.
  • HRE Hydropoxia Responsive Element
  • 5 '-ACGTG-3' As a gene regulated by HIF, ( ⁇ ⁇ Rev. Cancer 2, 38-47, 2002; J. Biol. Chew. 278, 19575-19578, 2003), including vascular endothelial growth factor A (VEGF) Nat, Med., 9, 677-684, 2003; Biochew. Pharmacol., 64, 993-998, 2002).
  • Hypoxia in cancer, especially solid cancer, is a common phenomenon. Solid cancer cells have been adapted to these hypoxic conditions through various genetic changes.
  • HIF-1 is known to be the most important molecule to balance cancer cells against this hypoxic condition, and the amount of HIF-la protein is known to have a close correlation with the prognosis of cancer patients.
  • HIF-1 activated by cancer cells under hypoxic conditions or by inactivation of growth factors, oncogenes, or inactivation of cancer-suppressing genes such as pVHL, as described above, can be induced by nuclear hormone kinase 2 (hexokinase 2) , Glucose transporter Kglucose transporter 1), erythropoietin, IGF 2, endogl in, VEGF, ⁇ P-2, uPAR, MDR1 and the like to induce apoptosis ), Increased angiogenesis, increased cell proliferation, and increased invasion, resulting in cancer cells becoming malignant.
  • HIF plays an important role in the growth, proliferation and malignancy of cancer, particularly solid cancer.
  • HIF-1 inhibitors have been actively developed through cell-based reporter assay using cell-based reporter assay using HRE (Nature Reviews Cancer 2003, 3, 721-732; JNCI 95, 516, 2003) (Cancer Res 65, 4918, 2005; Cancer Cell 6, 33, 2004; Cancer Res. 62, 4316, 2002).
  • HIF-1 can be used not only as a cancer, but also as a target for the development of a therapeutic agent for a disease associated with aggravation of disease, by activation of angiogenesis.
  • Another object of the present invention is to provide a pharmaceutical composition for the treatment of diabetic retinopathy comprising the novel compound as an active ingredient.
  • a process for preparing a compound represented by the formula (1) comprising the step of preparing a compound of formula (1) by reacting a Hunig base and a condensation reagent with a compound of the formula (2) and a compound of the formula (3)
  • the present invention relates to a pharmaceutical composition for preventing or treating cancer, which comprises the compound of the above formula (1) or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient Gt;
  • the present invention also provides a pharmaceutical composition for preventing or treating diabetic retinopathy comprising the compound of formula (I) or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.
  • the present invention provides a pharmaceutical composition for preventing or treating rheumatoid arthritis, which comprises the compound of formula (I) or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.
  • the compound of formula (I) inhibits HRE transcription activation by inhibiting the activity of HIF-1 and selectively inhibits the expression of VEGF and EPO, rather than exhibiting anticancer activity by non-selective cytotoxicity Inhibits growth and metastasis of cancer, it can be used not only as an active ingredient of an anticancer agent but also as an active ingredient of a therapeutic agent for diabetic retinopathy or arthritis which is exacerbated by an increased expression of VEGF.
  • FIG. 1 is a graph showing the HRE transcription activity measured when treating compounds according to one embodiment of the present invention at a concentration of 10 .mu.M.
  • FIG. 1 is a graph showing the HRE transcription activity measured when treating compounds according to one embodiment of the present invention at a concentration of 10 .mu.M.
  • FIG. 2 is a graph showing the results of measuring the HRE transcription inhibiting activity of a compound according to an embodiment of the present invention.
  • Figure 3 is a graph showing the degree to which compounds according to one embodiment of the present invention inhibit HIF-la accumulation.
  • FIG. 4 is a graph showing the degree to which a compound according to an embodiment of the present invention inhibits HIF-la accumulation.
  • Figure 5 is a graph showing the degree to which a compound according to one embodiment of the present invention inhibits the expression of VEGF and EPO.
  • FIG. 6 is an optical microscopic image showing that the expression of HIF-la is decreased in the compound according to an embodiment of the present invention.
  • FIG. ' is an optical microscopic image showing that the expression of HIF-la is decreased in the compound according to an embodiment of the present invention.
  • FIG. 7 is a graph showing the effect of a compound according to an embodiment of the present invention on angiogenesis. ⁇
  • FIG. 8 is a photograph showing the effect of the compound according to the embodiment of the present invention on the angiogenesis.
  • FIG. 9 is a photograph microscopically showing that the compound according to an embodiment of the present invention inhibits cell migration.
  • FIG. 10 is a photograph showing a change in the number of cancer metastasis clusters of lungs during compound treatment according to an embodiment of the present invention.
  • the present invention provides a novel aryloxyphenoxyacrylic compound represented by the following formula (I) or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
  • R is d- 10 straight or branched chain alkyl or C 8 - 12 a second cyclic ring
  • R 2 is -H, C00R 5) COORsRg, -S0 2 ⁇ 2, -S0 -4 straight or branched alkyl, or - C0NHR. ego,
  • R < 3 > is -H, -0H or C00C- 4 straight chain or branched chain alkyl
  • R 4 is H or d- 4 straight or branched chain alkyl
  • R < 6 > is a 5-6 heterocyclic ring containing one or more N < 4 & gt ;, N or 0,
  • R 7 is -H or - (C 4) n R 8 ,
  • R 8 is -H, a 5- to 6-membered heteroaryl containing at least one ring N or 0, or a 5- to 6-membered heterocyclic ring containing at least one N or 0 in the ring,
  • n may be an integer of 0 to 4.
  • R is d-) linear or branched alkyl or,
  • R 2 is -H, C00R 5, C00R 5 R 6, -S0 2 NH 2> -S0 2 CH 3 or _C0NHR 7,
  • R 3 is -H, -OH or COOCH 3 ,
  • R < 4 > is -H or methyl
  • R < 6 &gt is a 5-6-membered heterocyclic ring containing one or more -N < 3 & gt ;, N or 0,
  • R 7 is -H or-3 ⁇ 4) n -R s ,
  • R 8 is -H, a 5- to 6-membered heteroaryl containing 1 or more N in the ring, or a 6-membered heterocyclic ring containing one or more N or 0 in the ring, and n may be an integer of 0 to 3.
  • R is -H, -C00H, -C00CH 3, -C00CH 2 CH 3, -C00CH 2 CH 2 0CH 3, -C0NH 2, -S0 2 N3 ⁇ 4
  • R is _H, -OH or -C00CH 3
  • R 4 is -H or methyl. Specific examples of the compound of formula (1) are as follows.
  • Example 21 C00H HH Example 22 C00CH 2 CH 2 0CH 3 HH Example 23 HH present invention, as well as salts new aryloxy phenoxy acrylic compound or a pharmaceutically acceptable thereof of the formula (1), to be prepared therefrom Or a pharmaceutically acceptable salt, solvate, hydrate or prodrug thereof.
  • the derivatives of formula (I) of the present invention can be used in the form of pharmaceutically acceptable salts, and as salts, acid addition salts formed by pharmaceutically acceptable free acids are useful.
  • the acid addition salts are hydrochloric acid, nitric acid, phosphoric acid, sulfuric acid, hydrobromic acid, iodine hwasu dissipation, nitrous acid or phosphorous acid organic acids as aliphatic mono and dicarboxylate, phenyl, such as - the alkanoates, hydroxy Al-substituted alkanoates, and Alkanedioates, aromatic acids, non-toxic organic acids such as aliphatic and aromatic sulfonic acids.
  • Such pharmaceutically innocuous salts include, but are not limited to, sulfates, pyrosulfates, bisulfates, sulfites, baitsulfites, nitrates, phosphates, monohydrogenphosphates, dihydrogenphosphates, metaphosphates, pyrophosphate chlorides, bromides, But are not limited to, but are not limited to, fluorine, fluorine, acetate, propionate, decanoate, caprylate, acrylate, formate, isobutyrate, caprate, heptanoate, propylacetate, oxalate, malonate, succinate But are not limited to, but are not limited to, butyric acid, succinic acid, succinate, sebacate, sebacate, fumarate, malate, butyne-1,4-dioate, nucleic acid-1,6-dioate, benzoate, chlorobenzoate, Methoxybenzoate, phthalate,
  • the acid addition salts according to the invention are conventional methods, for example, by dissolving a compound of formula 1 in excess aqueous acid solution, this, the suheun methane, for flammable organic solvent, such a salt, ethanol, acetone or acetonitrile, ≪ / RTI > By heating the same amount of the compound of formula (I) and the acid or alcohol in water, and then evaporating the dried product to dryness, or by filtering the precipitated salt by suction filtration.
  • bases can be used to make pharmaceutically acceptable metal salts.
  • the alkaline metal or alkaline earth metal salt is obtained, for example, by dissolving the compound in an excess of an alkali metal hydroxide or alkaline earth metal hydroxide solution, filtering the insoluble compound salt, and evaporating and drying the filtrate. At this time, it is preferable for the metal salt to produce sodium, potassium or bean salt. Also, the silver salt which is the countermeasure .
  • An alkali metal or alkaline earth metal salt is obtained by reacting with a suitable silver salt (for example, silver nitrate).
  • the present invention also provides a process for preparing a novel aryloxyphenoxyacrylic compound represented by the general formula (1).
  • the preparation method according to the present invention is characterized in that a Hunig base and a condensation reagent are introduced using a compound of the formula (2) and a compound of the formula (3) as shown in the following reaction formula . ≪ / RTI >
  • R to R are the same as defined in the above formula (1).
  • DIPEA DIPEA
  • TAA triethylamine
  • the condensation reaction may be carried out in the presence of a base such as 6,7-azabenzotriazol-1-yl) -??? ', TAM tetramethyluronium tetrafluoroborate (HATU), 1- [3- (dimethylamino) 3-ethylcarbodiimide hydrochloride, EDO, ⁇ benzotriazole-s, TV ', V' -tetramethyl-euenium-nuclear fullerene (HBTU), 1-hydroxybenzotriazole (HOBt), benzotriazol-1-al-oxy-tris-pyrrolidinedino-phosphonium hexafluorophosphate
  • a base such as 6,7-azabenzotriazol-1-yl) -??? ', TAM tetramethyluronium tetrafluoroborate (HATU), 1- [3- (dimethylamino) 3-ethylcarbodiimide hydrochloride, EDO, ⁇ be
  • dimethylformamide (DMF) or methylene chloride (C 4 Cl 2 ) is preferably used as the organic solvent.
  • the compounds of Formula 2 and Formula 3 may be commercially available or may be synthesized by known methods.
  • the compound of Formula 2 may be prepared by Michael addition reaction of the compound of Formula 4, as shown in the following Formula 1, to prepare a compound of Formula 5 (Step 1);
  • novel aryloxyphenoxyacrylic compound according to the present invention is not limited to the above-mentioned production method, and if it is a method capable of synthesizing the novel aryloxyphenoxyacrylic compound, .
  • the novel aryloxyphenoxyacrylic compound prepared according to the present invention can be separated and purified by high performance liquid chromatography after the preparation, and then the molecular structure can be confirmed by nuclear magnetic resonance.
  • the present invention provides a pharmaceutical composition for preventing or treating cancer, which contains a salt in which the "acceptable compound of formula (I) or a pharmaceutically thereof as an active ingredient.
  • the compound of formula (I) or a pharmaceutically acceptable salt thereof of the present invention does not exhibit anticancer activity by non-selective cytotoxicity, but exhibits activity of HIF-1, a transcription factor that plays an important role in the growth and metastasis of cancer cells And exhibit anticancer activity.
  • the HIF-1 activity inhibition includes all of a series of phenomena that inhibit HIF-1 ACGTG-3 ') transcriptional activity inhibition, HIF-la protein accumulation inhibition, or expression of HIF-1 target gene protein .
  • the compound of the present invention significantly improved HIF-1 activity inhibitory effect compared to the conventional compound having a similar structure under hypoxic condition (See Fig. 1). Accordingly, the compound of formula (I) of the present invention inhibits the HRE transcription activity of HIF-1 under hypoxic conditions, inhibiting the expression of genes involved in cancer malignancy and inhibiting the growth and metastasis of cancer, ≪ / RTI >
  • the compound of formula (I) according to the present invention is useful for the growth and the cancer of cancer, which are known to contribute to the proliferation and metastasis of cancer among the target genes of HIF-1.
  • VEGF vascular endothelial growth factor A
  • EPO erythropoietin
  • the compound of the present invention can be used as an active ingredient of an anticancer agent because of its inhibitory effect on the expression of VEGF and EPO, which are target genes of HIF-1, which contribute to cancer proliferation and metastasis.
  • the compound of formula (I) of the present invention or a pharmaceutically acceptable salt thereof effectively inhibits the activity of HIF-1, and thus can be used for the treatment of colon cancer, Ovarian cancer, rectal cancer, esophageal cancer, small intestine cancer, anorectal cancer, colon cancer, fallopian tube carcinoma, endometrial carcinoma, cervical cancer, vaginal carcinoma, vulvar carcinoma, Hodgkin's disease, prostate cancer, bladder cancer, renal cancer, Cell carcinoma, kidney pelvic carcinoma, central nervous system tumor, and the like.
  • the present invention also provides a pharmaceutical composition which shows the therapeutic effect of diabetic retinopathy or arthritis through inhibition of HIF-1 activity, which comprises the compound of formula (I) or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.
  • HIF-1 can be used as a target for the development of a therapeutic agent for diseases in which activation of angiogenesis is associated with aggravation of disease.
  • angiogenic factors such as VEGF induced by HIF-1 activated in a hypoxic state are associated with progression of arthritis, such as diabetic retinopathy or rheumatoid arthritis.
  • Diabetic retinopathy or arthritis can be exacerbated by increased expression of VEGF by HIF-1 in the hypoxic state.
  • compounds that inhibit HIF-1 activated from the hypoxic state of a disease state are used as therapeutic agents for diabetic retinopathy or arthritis (Eiji Ikeda, Pathology International, 2005, Vol 55, 603-610).
  • the compound of formula (I) of the present invention selectively inhibits the expression of VEGF (vascular endothelial growth factor A), which is an angiogenic factor, without affecting the expression of GAPDH as a control gene under hypoxic condition Therefore, it can be used as an active ingredient for the treatment of diabetic retinopathy or arthritis, which is exacerbated by increased expression of VEGF by HIF-1 in a hypoxic state.
  • VEGF vascular endothelial growth factor A
  • the present invention provides a method for treating cancer, comprising administering to a patient in need thereof a therapeutically effective amount of a novel compound represented by the above-mentioned formula (1), or a pharmaceutically acceptable salt thereof do.
  • the cancer may be cancer of the colon, cancer of the liver, cancer of the liver, colon cancer, bone cancer, pancreatic cancer, head or neck cancer, uterine cancer, ovarian cancer, rectal cancer, esophageal cancer, small intestine cancer, , Colon cancer, fallopian tube carcinoma, endometrial carcinoma, cervical cancer, vaginal carcinoma, vulvar carcinoma, Hodgkin's disease, prostate cancer, bladder cancer, renal cancer, ureter cancer, renal cell carcinoma, renal pelvic carcinoma, .
  • the present invention also relates to a method of treating diabetic retinopathy, comprising administering to a patient in need thereof a therapeutically effective amount of a novel compound of formula 1, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, ≪ / RTI >
  • a novel compound represented by Formula 1, or a pharmaceutically acceptable salt thereof is characterized by inhibiting the activity of HIF-1 and the expression of VEGF protein, thereby inhibiting the formation of a new blood vessel.
  • the present invention provides a method of treating rheumatoid arthritis comprising administering to a patient in need of such treatment a therapeutically effective amount of a novel compound of formula 1, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, in the treatment of rheumatoid arthritis ≪ / RTI >
  • the novel compound represented by Formula 1, or a pharmaceutically acceptable salt thereof is characterized by inhibiting the activity of HIF-1 and inhibiting the formation of a new blood vessel.
  • the pharmaceutical composition of the present invention can be formulated into various oral or parenteral dosage forms.
  • formulations for oral administration include tablets, pills, light / soft capsules, liquids, suspensions, emulsifying syrups, granules, elixirs and the like, (E.g., silica, talc, stearic acid and its magnesium or succinic acid, and / or sodium alginate) in addition to a diluent such as lactose, sucrose, sucrose, mannitol, sorbitol, Pulley ethylene glycol).
  • a diluent such as lactose, sucrose, sucrose, mannitol, sorbitol, Pulley ethylene glycol.
  • the tablets may also contain binders such as magnesium aluminum silicate, starch paste, gelatin, methylcellulose, sodium carboxymethylcellulose, and / or polyvinylpyrrolidine, optionally mixed with starch, A disintegrating or boiling mixture such as its sodium salt and / or an absorbent, a colorant, a flavoring agent, and a sweetening agent.
  • binders such as magnesium aluminum silicate, starch paste, gelatin, methylcellulose, sodium carboxymethylcellulose, and / or polyvinylpyrrolidine, optionally mixed with starch,
  • a disintegrating or boiling mixture such as its sodium salt and / or an absorbent, a colorant, a flavoring agent, and a sweetening agent.
  • the pharmaceutical composition containing the compound of formula (I) according to the present invention as an active ingredient can be administered parenterally, and parenteral administration is by subcutaneous injection, intravenous injection, intramuscular injection, or injection into the chest.
  • parenteral administration is by subcutaneous injection, intravenous injection, intramuscular injection, or injection into the chest.
  • the compound of Formula 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof may be prepared into a droplet or suspension by mixing with water or a stabilizer or a topical layering agent, .
  • the composition may contain sterilized and / or preservatives, stabilizers, wettable or emulsifying accelerators, adjuvants such as salts and / or topical thickeners for the control of osmotic pressure, and other therapeutically useful substances, Granulation or coating method.
  • the compound of formula (I) as an active ingredient is administered orally or sublingually in an amount of 0.1 to 500 mg / kg (body weight) per day, preferably 0.5 to 100 mg / kg (body weight) per day for a mammal including a person Can be administered via a parenteral route.
  • the target compound was obtained as yellow oil (365.5 mg, yield 51.9%) from 4- (2,4,4-trimethylpentan-2-yl) phenol in the same manner as in Preparation Example 1.
  • the target compound was obtained as a white solid (41.0 mg, yield 40.0%) from C ⁇ -3- (4-butylphenoxy) acrylic acid in the same manner as in the above Example 1.
  • the target compound was obtained as a white solid (18.2 mg, yield 20.1%) from 3-aminobenzenesulfonamide in the same manner as in the above Example 1.
  • the target compound was obtained as a white solid (18.2 mg, yield 2 (? 3 ⁇ 4) from 3- (methylsulfonyl) benzeneamine in the same manner as in Example 1.
  • the target compound was obtained as a white solid (9.3 mg, yield 18.6%) in the same manner as in Example 12 from 2- (pyridin-1-yl) ethyl chloride hydrochloric acid.
  • the target compound was obtained as a white solid (9.3 mg, yield 18.6%) in the same manner as in Example 12 from the parent polymorphoyl chloride.
  • Hydrochloric acid. (DMSO-d 6 , 300 MHz)? 10.13 (1H, s, NH), 8.27 (1H, m, aromatic-
  • the pGL3-basic vector (Promega) using luciferase as a reporter, HRE (PGL3-HRE-lucif erase) vector replicated on a multi-cloning site (Hypoxia Responsive Element, 5'-ACGTG-3 1 ) Respectively.
  • HCT116 cells manufactured by manufacturer
  • a human rectal cancer cell line 25 ng of pGL3-HRE-luciferase vector and 2.5 ng of Renilla control group were transfected together using polyfect reagent (manufacturer) .
  • polyfect reagent manufactured by manufacturer
  • the compounds prepared in the examples were treated to 10 ⁇ M concentration, respectively, and hypoxic conditions (1% oxygen, 94% nitrogen, 5% ) For 12 hours.
  • Example 1 The procedure of Example 1 was repeated except that the compound prepared in Example 1 and the compound of Comparative Example 1 were treated at 0, 1, 3, 5, 10, and 20 ⁇ M concentrations, respectively.
  • FIG. 1 is a graph showing the HRE transcriptional activity measured when 10 ⁇ M concentration of the compounds according to an embodiment of the present invention was treated.
  • FIG. 1 is a graph showing the HRE transcriptional activity measured when 10 ⁇ M concentration of the compounds according to an embodiment of the present invention was treated.
  • FIG. 2 is a graph showing the results of measuring the HRE transcription inhibiting activity of a compound according to an embodiment of the present invention.
  • Table 2 Fig. 1 and Fig. 2
  • the compound of Example 1 in the screen (AC- 428) Comparative Example 1 "atda confirmed that have at least about three times as high HRE activity before use inhibition in cancer cell lines compared with the water.
  • the compound inhibits HRE transcription activity which is activated by HIF-1 and inhibits growth and metastasis of cancer, Can be used.
  • HIF-la protein is one of the constituent proteins of HIF-1 and plays an important role in the expression of HIF-1 target genes.
  • HIF-la accumulation inhibition was measured in the HCT116 cell line of the rectal cancer cell line for the compound of Chemical Formula 1 showing the strong HIF-1 transcriptional activity inhibition degree by the above Experimental Example 1.
  • the effect of inhibiting the production of HIF-la protein induced by hypoxia conditions by the compounds prepared in the examples of the present invention was measured by Western blot analysis.
  • the effect of the compound of Chemical Formula 1 prepared in Example 1 and the compound prepared in Comparative Example 1 in the concentration-dependent inhibition of the production of HIF-la protein induced by hypoxia condition was evaluated by Western blot ) Analysis method.
  • HCT116 cells manufactured by manufacturer
  • a human rectal cancer cell line were cultured in a cell culture container in 2X
  • the VHL protein was treated.
  • Fig. 3 is a graph showing the degree to which compounds according to one embodiment of the present invention inhibit HIF-la accumulation.
  • FIG. 4 is a graph showing the degree to which a compound according to an embodiment of the present invention inhibits HIF-la accumulation.
  • the compounds of formula (I) prepared in the examples of the present invention inhibit the production of HIF-la protein without affecting the production of GAPDH or beta actin under hypoxic conditions Dependent inhibition of tumor growth and increased expression of tumor suppressor VHL. Therefore, the compound of the present invention can be usefully used as an active ingredient of an anticancer agent because it inhibits the accumulation of HIF-la, which aggravates cancer, and increases the expression of tumor suppressor VHL.
  • VEGFCV endothelial growth factor A is an important angiogenic factor for cancer growth and metastasis to other tissues
  • EPO erythropoietin
  • HIF-1 inhibitory activity of the compound of the present invention the degree of inhibition of the expression of VEGF and EPO, which are typical target genes of HIF-1, was measured. Specifically, HCT116 cells, a rectal cancer cell line, were used and measured by the following method.
  • HCT116 cells were seeded at a density of 2 ⁇ 10 5 cells / ml in a cell culture vessel and cultured for 24 hours for 4 hours in a hypoxic condition (1% oxygen, 94% nitrogen, 5 carbon dioxide)) to accumulate HIF-1 ⁇ ,
  • the compound prepared in Example 1 was treated at a concentration of 10, 20 ⁇ M (experimental group), then cultured under the hypoxic conditions for 12 hours, and purified using :: trizol .
  • concentrations of 0, 10, 15 and 20 ⁇ M were performed with the treated control group.
  • RNA was synthesized by RT-PCR kit (Invitrogen) and RT-PCR and real-time RT-PCR were performed to determine the target gene of HIF-lci, VEGF (vascular endothelial growth factor A) the amount of mRNA of erythropoietin was measured.
  • VEGF vascular endothelial growth factor A
  • GAPDH was simultaneously amplified as an internal control gene, and the selective inhibitory activity of the compound of formula (1) on VEGF / EPO was measured.
  • Fig. This compound is a view according to an exemplary embodiment showing the degree to inhibit the expression of VEGF and EP0: 5 is one of the present invention.
  • the compound of Chemical Formula 1 prepared in Example 1 had no effect on the expression of the internal control gene GAPDH under hypoxic conditions. But
  • the compounds of general formula (I) of the present invention is the growth and cancer of the like can be used as a due to selective inhibition as an important factor in the expression of VEGF and EP0 to spread to other tissues, is useful as an effective component of anticancer agent. Also, it can be effectively used as an active ingredient of a therapeutic agent for diabetic retinopathy or arthritis, which is exacerbated by increased expression of VEGF in a hypoxic state.
  • In vivo anti-cancer activity was measured in mice to evaluate the inhibitory activity against rectal cancer growth when the compound prepared in Example 1 was intravenously administered.
  • the experimental group and the control group were composed of 5 nude mice per group, and the tumor volume, tumor size and tumor weight were measured, and the anticancer activity was measured.
  • 6-week-old female nude mice (source: BALB / c nu / nu, Charles River) were housed in sterile conditions maintained at constant temperature and humidity during the experiment. After nude mice were anesthetized
  • HCT116 cells a human cancer cell line
  • a human cancer cell line were transplanted into the rectum and transplanted with surgical clips at a transplant concentration of 4 ⁇ 10 7 cells / mouse.
  • the size of cancer was measured by calipers. When the cancer size was 54.5 ⁇ 3 , the compound prepared in Example 1 was administered.
  • the compound of Example 1 was used (hereinafter referred to as "solvent A") consisting of 80% of saline, 10% of DMAC and 10% of Tween 80 to give a concentration of 30 mg / kg, / kg < / RTI >
  • the control group was orally administered once per day at a dose of 15 ml / kg alone without the compound A.
  • the comparative group was intravenously administered at a dose of 15 ml / kg once a day for a dose of 2 mg / kg of topotecan. Thereafter, the size and body weight of the cancer cell lines were measured once at 0, 2, 3, 4, and 6 days.
  • the tumor volume was calculated by the following equation (1), and the change in body weight of the mice to evaluate the degree of toxicity upon intravenous administration by repeating the compound of Example 1 is shown in Table 3, The changes in size are shown in Table 4.
  • the inhibition (%) in Table 4 was calculated by the following equation (2), and the degree of inhibition of tumor formation by the compound is expressed as a percentage.
  • Tumor size ( 3 ) (long axis length of tumor cells, mm) s (short axis length of tumor cells, mm 2 s0.5
  • the compound of formula (1) It has little toxicity and can be used as an active ingredient of anticancer drugs.
  • the test group administered with 30 mg / kg of the compound prepared in Example 1 inhibited the growth of cancer cells to 45.7% as compared with the control group. Therefore, when the compound of the present invention is administered intravenously, it has anticancer activity in vivo, and has little toxicity, so that it can be effectively used as an active ingredient of an anticancer drug.
  • In vivo (// 7 Vivo) anticancer activity was measured in mice to evaluate the inhibitory activity of kidney cancer growth when the compound prepared in Example 1 was intravenously administered.
  • the experimental group and the control group were composed of 5 nude mice per group, and the tumor volume, tumor size and tumor weight were measured, and the anticancer activity was measured.
  • the compound of Example 1 was dissolved in a solvent composed of Cremophor 10%, DMAC 10% and pH 10 complete solution 80% (Hereinafter referred to as " solvent B ") to give a compound concentration of 20 ng / kg, and administered intravenously once daily at a dose of 15 ml / kg.
  • the control group was orally administered once daily with 15 ml / kg of the solvent B without the compound.
  • 1 mg / kg of topotecan was administered intravenously every 15 ml / kg. Thereafter, the size and weight of the cancer cell line were measured once at 0, 2 ⁇ 4, 7, 9, 11, and 14 days.
  • the tumor volume was calculated by the above Equation 1 in Experimental Example 4, and the compound of Example 1 was repeated.
  • the body weight change of the mice to evaluate the degree of toxicity upon intravenous administration is shown in Table 5
  • changes in tumor weight and size are shown in Table 6.
  • the degree of inhibition (%) in Table 6 was calculated by the following equation (2), and the degree of inhibition of tumor formation by the compound is expressed as a percentage.
  • Example 6 (%) - 20.1 26.6 33.8 40.6 40.9 45.8 48.0
  • Table 6 the compound prepared in Example 1 was administered at 20 mg / kg
  • One experimental group showed about 30% tumor growth inhibition effect compared with the control group.
  • an immunoassay experiment of tumor tissue was conducted. Specifically, topotecan was treated as a comparative group, and the compound of Example 1 was treated as an experimental group to perform an immunoassay test of tumor tissue.
  • FIG. FIG. 6 is an optical microscope image showing that the expression of HIF-la is decreased by a compound according to an embodiment of the present invention. As shown in FIG. 6, the expression of HIF-la was clearly observed in the control group, but the expression of HIF-la was significantly decreased in the tumor tissue of the mouse when the compound of Example 1 was administered.
  • the compound of formula (I) of the present invention when administered intravenously, the expression of HIF-la is reduced in tumor tissues and has anticancer activity. Therefore, it can be usefully used as an effective ingredient of anticancer agent with little toxicity.
  • the compound of formula (1) has little toxicity and can be used as an active ingredient of an anticancer drug.
  • FIG. 7 is a graph showing the effect of a compound according to an embodiment of the present invention on angiogenesis.
  • the compound of formula (I) according to the present invention has an activity of inhibiting angiogenesis, and thus can be used as an active ingredient of an anticancer agent.
  • Example 1 In order to evaluate the effect of the compound of Example 1 on inhibiting cell migration, a wound-healing experiment was performed. Specifically, in a 6-well cell culture container,
  • FIG. 9 is a photograph microscopically showing that the compound according to an embodiment of the present invention inhibits cell migration.
  • FIG. If hayeoteul 9 10 ⁇ treatment of the compound of Example 1 described 'as shown in is confirmed that the cell movement is significantly reduced. Therefore, the compound according to the present invention has an activity of inhibiting cell migration, and thus can be used as an active ingredient of an anticancer agent. ≪ Experimental Example 8 > Evaluation of inhibition of cancer metastasis activity
  • FIG. 10 is a photograph showing changes in the number of cancer metastasis clusters in the lungs during treatment of a compound according to an embodiment of the present invention.
  • FIG. As shown in Table 10 and FIG. 10, mice were regenerated on the last day of the experiment (day 12), and the number of tumor clusters in the lungs was visually counted. As a result, the control group averaged 306.8 transitional groups, whereas the compound of Example 1 In the experimental group treated with 20 mg / kg, an average of 207 transitional clusters formed, showing a statistically significant inhibitory activity of 32.5%.
  • the compound of formula (I) according to the present invention has an inhibitory activity against cancer metastasis and thus can be used as an active ingredient of an anticancer agent.
  • Examples of formulations using the composition of the present invention are illustrated below.
  • tablets were prepared by tableting according to a conventional tablet preparation method.
  • capsules were prepared by layering on gelatin capsules according to the conventional preparation method of capsule beads.
  • ≪ Formulation Example 4 Preparation of injection solution
  • the pH of the resulting solution was adjusted to pH 3.5 with dilute hydrochloric acid BP and the volume was adjusted using sodium chloride BCl solution. Respectively.
  • the solution was packed in a 5-type I ampoule made of transparent glass, sealed in an upper lattice of air by dissolving the glass, and sterilized by autoclaving at 120 ° C for 15 minutes or longer.

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Abstract

본 발명은 HIF-1 활성을 저해하는 화합물, 이의 제조방법 및 이를 유효성분으로 함유하는 약학적 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 따른 화합물은 비선택적인 세포독성에 의해 항암 활성을 나타내는 것이 아니라, 암세포의 성장 및 전이에 중요한 역할을 하는 전사인자인 HIF-1의 활성을 저해하여 항암 활성을 나타낸다. 따라서, 본 발명에 따른 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염은 HIF-1 활성을 저해하여 대장암, 간암, 위암 및 유방암 등의 다양한 고형암 질환의 치료제로 사용될 수 있다. 또한, 본 발명에 따른 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염은 저산소 상태에서 HIF-1에 의한 VEGF의 발현이 증가되어 악화되는 당뇨병성 망막증이나 관절염 치료제의 유효성분으로 사용될 수 있다.

Description

【명세서】
【발명의 명칭】
H I F-1 활성을 저해하는 아릴옥시페녹시아크릴계 화합물， 이의 제조방법 및 이를 유효성분으로 함유하는 약학적 조성물
【기술분야】
본 발명은 HIF-1의 활성을 저해하는 아릴옥시페녹시아크릴계 화합물， 이의 제조방법 및 이를 유효성분으로 함유하는 약학적 조성물에 관한 것이다.
【배경기술】
암은 인류의 지난 수십 년간의 부단한 노력에도 불구하고 난치병 중의 하나 로 여전히 남아 있다. 최근에 암세포생물학， 의약 화학 등의 제반 학문의 눈부신 발전과 더불어 글리백 (Gleevec)과 같은 새로운 작용 기전을 가진 항암제가 개발되 고 있으며， 인간 게놈 프로젝트 (Human Genome Project) 이후 새로운 표적분자들이 대두되고 있다.
HIF-1 (Hypoxia Inducible Factor-1)는 저산소증 (hypoxia)에서 유도되는 전사 인자로서 산소 의존적으로 분해되는 HIF-la 서브유니트 (subunit)와 항시 발현되는 HIF-Ιβ 서브유니트로 구성된 헤테로 다이머 (dimer)로세 Cancer Metastasis Rev. , 17， 187-195, 1998； Trends Mo 1. Med. , 7, 345-350, 2001], 보통의 산소 농도 조건 하에서 HIF-la 단백질은 산소 의존적으로 402번 및 564번의 프를린 잔기가 히드록 시화되어 암 억제 유전자인 pVHL(Von Hippel-Lindau)단백질과 결합하여 유비퀴틴 (ubiquitin)화되고 프로테아좀에 의해 분해되나， 저산소상태에서는 이러한 일련의 반웅이 저해되어 HIF-la 단백질이 축적되어 이미 존재하고 있는 HIF-Ι 단백질과 결합하여 핵으로 이동하게 된다 [Science 292, 468-472, 2001； Science 292, 468- 472, 2001]. HIF-1 a의 안정성은 산소분압 외에도 산소감지경로 (oxygen sensing pathway)에 관여하는 인자들에 의해 영향을 받게 되며, 이러한 인자들로는 전이금 속 이온 (transition metal ion) , 철 킬레이트제 (iron chelator) 또는 항산화제 (antioxidant) 등을 들 수 있다. 또한， HIF— 1 α 단백질은 산소 농도쎄 상관없이 표 피 성장 인자 (epidermal growth factor), 헤레굴린 (heregulin) , 인술린 유사 성장 인자 -Kinsulin-like growth factors-I)과 인슐린 유사 성장인자 -II 등과 같은 성 장인자 (growth factor)나 Er|3B2 등과 같은 온코진 (oncogene)의 활성화에 의해 축 적되기도 한다. 이러한 성장인자들이 각자의 수용체에 결합하게 되면 PI3K-AKT, MAPK 신호전달경로가 활성화되고. HIF-la 단백질의 합성이 증가되어 HIF-1 α 단백 질이 축적된다.
핵으로 이동한 HIF는 표적 유전자의 프로모터 (promoter)상의 HRE(Hypoxia Responsive Element, 5 ' -ACGTG-3 ' )에 결합하여 유전자의 발현을 유도하게 되는데 HIF에 의해 조절되는 유전자로는 혈관 내피 성장 인자 (vascular endothelial growth factor A, VEGF)를:포함하여 현재까지 약 60종 이상이 알려져 있다 (Λ Λ Rev. Cancer 2, 38—47， 2002； J. Biol. Chew. 278, 19575-19578, 2003； Nat, Med. 9, 677-684, 2003； Biochew. Pharmacol. 64, 993-998, 2002) . 암， 특히 고형암에서의 저산소증은 일반적으로 나타나는 현상으로서, 고형암 세포들은 다양한 유전적인 변화를 거쳐 이러한 저산소 조건에 적응되어 있어 암세 포가 더욱 악성화되고 항암제에 대한 내성을 갖게 되는데， 실제로 저산소증은 인간 의 모든 암종의 70%이상의 암을 악성화시키는 주요 유발인자로서 알려져 있다 (Nature 386, 403, 1997； Hockel M and Vaupel P, Semin. Oncol. 28, 36-41 , 2001, Nature Med. 6, 1335， 2000; Bos et al . Cancer 2003, 97， 1573-1581). HIF-1은 이 러한 저산소 상태에 대한 암세포의 적웅을 조잘하는 가장 중요한 분자로서 알려져 있고， HIF-la 단백질의 양과 암 환자의 예후는 밀접한 상관 관계를 갖는 것으로 알려져 있다. 암세포가 저산소 조건에 의해 또는 상기에서 언급한 성장 인자의 자 극이나 온코진 (oncogene)의 활성화， 또는 pVHL과 같은 암 억제유전자의 불활성화에 의해 활성화된 HIF-1은 핵소키나아제 2(hexokinase 2), 글루코스 전달체 Kglucose transporter 1)， 에리쓰로포이에틴 (erythropoiet in) , IGFᅳ 2， 엔도글린 (endogl in)， VEGF, 匪 P-2, uPAR, MDR1 등과 같은 유전자의 발현을 유도하여 세포사 (apoptosis) 에 대한 내성， 혈관신생능의 증가, 세포증식능의 증가ᅳ 침윤 (invasion)능의 증가 등의 형질을 획득하게 되어 결국 암 세포는 악성화되게 된다. 따라서， 이와 같이 HIF는 암 특히 고형암의 성장， 증식 및 악성화에 중요한 역할을 하기 때문에 이를 표적으로 하여 항암제를 개발하려는 연구가 매우 활발히 진행되고 있다 (Cancer Res. 62, 4316, 2002; Nat Rev Drug Discovery 2, 1, 2003； Semenza et al. Nature Reviews Cancer 2003, 3， 721-732) . 최근， 탁솔 (taxol), 라파마이신 (rafamycin) 및 17-AAG(17-allylaminogeldanamycin)와 같은 상당수의 기존에 알려진 항암제들이나， 구아닐레일 사이클라제 활성화제 (guanylaly cyclase activator)인 저분자 화합물 YC-1(3_(5'-히드록시메틸 -2'-퓨릴)— 1-벤질인다졸， 3-(5'— hydroxymethy 1-2 '-fury 1)- 1-benzylindazole)이 HIF-1 저해제로서 이들은 여러 단계의 임상실험 중에 있으며 [Johnson et al Nature Reviews Drug Discovery 2003, 2， 1-9； Semenza et al . Nature Reviews Cancer 2003， 3， 721-732； JNCI 95, 516， 2003] , HRE를 활용한 세 포 단계에서의 리포터 분석 (cell based reporter assay)을 통한 새로운 구조의 HIF-1 저해제 개발도 활발하게 진행되고 있으나 (Cancer Res 65， 4918, 2005； Cancer Cell 6， 33， 2004； Cancer Res. 62, 4316 , 2002), 아직 초기 단계이다. 한편， HIF-1은 암 뿐만 아니라 혈관 신생작용의 활성화가 질환의 악화와 관 련되는 질환의 치료제 개발의 표적으로 활용될 수 있다. 저산소 상태에서 활성화되 는 HIF-1에 의해 유래되는 VEGF와 같은 혈관 신생 인자들은 암은 물론 당뇨병성 망 막증과 관절염의 진전과 관련되어 있다. 따라서ᅳ 질환 조직의 저산소 상태로부터 활성화되는 HIF-1을 저해하는 화합물은 당뇨병성 망막증이나 류마티스성 관절염과 같은 질환의 새로운 치료제로 활용될 수 있을 것이다 (Eiji Ikeda, Pathology International, 2005， Vol 55, 603-610) . 그러나 이 분야 역시 아직은 초기 단계이 다. . 이에 본 발명자들은 HIF-1 활성을 저해하는 화합물을 연구하던 중, HIF-1의 활성 억제， 암 전이 억제 및 신생혈관 형성 저해 효과가 현저히 우수할 뿐만 아니 라 인체 내에서 안정성이 향상된 화합물을 합성하고， 본 발명을 완성하였다.
【발명의 상세한 설명】
【기술적 과제】
본 발명의 목적은 HIF-1 활성을 저해하는 신규 화합물을 제공하는 것이다. 본 발명의 다른 목적은 상기 신규 화합물의 제조방법을 제공하는 것이다. 본 발명의 또 다른 목적은 상기 신규 화합물을 유효성분으로 함유하는 암 치 료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 상기 신규 화합물을 유효성분으로 함유하는 당뇨병성 망막증 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 상기 신규 화합물올 유효성분으로 함유하는 류마 티스성 관절염 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다. 【기술적 해결방법]
상기 목적을 달성하기 위하여， 하기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 제공한다:
1]
Figure imgf000006_0001
(상기 화학식 1에서， R 내지 R는 본 명세서에서 정의한 바와 같다).
또한， 본 발명은 하기 반웅식 1에 나타난 바와 같이 ,
화학식 2의 화합물과 화학식 3의 화합물을 출발물질로 하여 후니그 (Hunig) 염기와 축합 시약을 넣고 유기용매 하에서 반웅시켜 화학식 1을 제조하는 단계를 포함하는 화학식 1의 화합물의 제조방법을 제공한다:
Figure imgf000006_0002
2 3 1
(상기 반웅식 1에서， R 내지 R는 본 명세서에서 정의한 바와 같다)： 나아가， 본 발명은 상기 화학식 1의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능 한 염을 유효성분으로 함유하는 암 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다. 또한, 본 발명은 상기 화학식 1의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염올 유효성분으로 함유하는 당뇨병성 망막증 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
나아가， 본 발명은 상기 화학식 1의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능 한 염을 유효성분으로 함유하는 류마티스성 관절염 예방 또는 치료용 약학적 조성 물을 제공한다.
[유리한 효과： I
본 발명에 따른 화학식 1의 화합물은， 비선택적인 세포독성에 의해 항암 활 성을 나타내는 것이 아니라， HIF-1의 활성을 저해함으로써 HRE 전사활성화를 억제 하고， VEGF 및 EP0의 발현을 선택적으로 억제하여 암의 성장 및 전이 등을 억제하 므로， 항암제의 유효성분으로 사용될 수 있올 뿐만 아니라， VEGF의 발현이 증가되 어 악화되는 당뇨병성 망막증이나 관절염 치료제의 유효성분으로 사용될 수 있다. 【도면의 간단한 설명】
도 1은 본 발명의 일실시예에 따른 화합물들을 10 μΜ농도로 처리시 나타나 는 HRE 전사 활성을 측정한 그래프이다.
도 2는 본 발명의 일실시예에 따른 화합물의 HRE 전사 저해 활성을 측정한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 3은 본 발명의 일실시예에 따른 화합물들이 HIF-la 축적을 저해하는 정 도를 나타내는 도면이다.
도 4는 본 발명의 일실시예에 따른 화합물이 HIF-la 축적을 저해하는 정도 를 나타내는 도면이다.
도 5는 본 발명의 일실시예에 따른 화합물이 VEGF 및 EP0의 발현을 저해하는 정도를 나타내는 도면이다.
도 6은 본 발명의 일실시예에 따른 화합물에 와해 HIF-la의 발현이 감소하 는 것을 광학현미경으로 관찰한 이미지이다. '
도 7은 본 발명의 일실시예에 따른 화합물이 신생혈관 생성에 미치는 영향을 나타낸 그래프이다. ᅳ
도 8은 본 발명의 알실시예에 따른 화합물이 신생혈관 생성에 미치는 영향을 나타낸 사진이다.
도 9는 본 발명의 일실시예에 따른 화합물이 세포이동을 억제하는 것을 현미 경으로 관찰하며 찍은 사진이다.
도 10은 본 발명의 일실시예에 따른 화합물 처리 시 폐의 암 전이 군집 수 변화를 찍은 사진이다.
【발명의 실시를 위한 최선의 형태】
이하， 본 발명을 상세히 설명한다. 본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 신규 아릴옥시페녹시아크릴계 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 제공한다.
【 11
Figure imgf000007_0001
상기 화학식 1에서， R은 d-10직쇄 또는 측쇄 알킬 또는 C8-122환식고리이고,
R2는 -H, C00R5) COORsRg, -S02丽 2， -S0 -4직쇄 또는 측쇄 알킬 또는 — C0NHR. 이고，
R3는 -H, -0H또는 C00C— 4직쇄 또는 측쇄 알킬이고,
R4는 H또는 d-4직쇄 또는 측쇄 알킬이고，
！^는 d-4직쇄 또는 측쇄 알킬， d-4알콕시이고，
R6는 N¾, N 또는 0를 1개 이상 포함하는 5-6각 헤테로고리이고,
R7은 -H 또는 -(C¾)n R8이고，
R8은 -H, 고리 내ᅳ N 또는 0를 1이상 함유하는 5-6각 헤테로아릴 또는 고리 내 N또는 0를 1이상 함유하는 5-6각 헤테로고리이고，
n은 0 내지 4의 정수일 수 있다. 바람직하게는，
R은 d- )직쇄 또는 측쇄 알킬 또는 이고，
R2는 -H, C00R5, C00R5R6, -S02NH2> -S02CH3 또는 _C0NHR7이고,
R3는 -H, -OH 또는 C00CH3이고，
R4는 -H 또는 메틸이고，
！^는 -H, 메틸， 에틸， 메톡시 또는 에록시이고;
R6는 -N¾, N또는 0를 1개 이상 포함하는 5-6각 헤테로고리이고，
R7은 -H또는 - ¾)n-Rs이고，
R8은 -H, 고리 내 N 또는 0를 1이상 함유하는 5-6각 헤테로아릴 또는 고리 내 N또는 0를 1이상 함유하는 6각 헤테로고리이고， n은 0 내지 3의 정수일 수 있다. 더욱 하게는，
Figure imgf000009_0001
R는 -H, -C00H, -C00CH3, -C00CH2CH3, -C00CH2CH20CH3 , -C0NH2, -S02N¾
Figure imgf000009_0002
R은 _H, -OH 또는 -C00CH3이고, R4는 -H 또는 메틸이다. 상기 화학식 1의 화합물의 구체적인 예는 아래와 같다.
(1) (£)-3-[3-(4-아다만탄 -1-일-페녹시) -아크릴로일아미노] -벤조산메틸에스 테르，
(2) (^-3-(3_(4- -부틸페녹시)아크릴아미도)벤조산메틸에스테르,
(3) (£)-3-(3-(4-(2,4，4-트리메틸펜탄 -2-일)페녹시)아크릴아미도)벤조산메틸 에스테르,
(4) (£)-3-(3-(4-아다만탄 -1-일 -2-메틸페녹시)아크릴아미도)벤조산메틸에스 테르，
(5) (Ε)-4-( 3- (4-아다만탄 -1-일페녹시 )아크릴아미도)벤조산메틸에스테르，
(6) 3-(4-아다만탄 -1-일페녹시) -Ν-(3-설파모일페닐)아크릴아미드,
(7) (£)-3-(4-아다만탄 -1-일페녹시) -Ν-(3- (메틸설포닐)페닐)아크릴아미드，
(8) (£)-5-[3-(4-아다만탄 -1-일-페녹시) -아크릴로아미노] -2-히드록시-벤조산 메틸에스테르，
(9) (£)-3-[3— (4-아다만탄 -1-일―페녹시) -아크릴로일아미노] -벤조산,
(10) (£)-3-(3-(4-아다만탄 -1-일페녹시)아크릴아미도)벤조산에틸에스테르，
(11) (£) -3- ( 3- ( 4-아다만탄 - 1-일페녹시)아크릴아미도)벤조산 2-메록시에틸에 (12) (£)-3-(3-(4-아다만탄— 1-일-페녹시)아크릴아미도)벤조산 2- (디메틸아미 노)에틸에스테르，
(13) (£>-3-(3-(4-아다만탄 -1-일페녹시)아크릴아미도)벤조산 2—피롤리딘— 1- 일)에틸에스테르，
(14) ( )-3-(3-(4—아다만탄 -1-일페녹시)아크릴아미도)벤조산모폴리노에틸에 스테르，
(15) (£)-3-[3-(4-아다만탄 -1-일―페녹시) -아크릴로일아미노] -벤즈아미드，
(16) (£)ᅳ3-[3-(4-아다만탄 -1—일-페녹시) -아크릴로일아미노] -Λ 이소프로필- 벤즈아미드，
(17) 3— [3-(4-아다만탄 -1-일-페녹시) -아크릴로일아미노]— 퓨란 -2—일메 틸-벤즈아미드，
(18) (£)-3-[3-(4_아다만탄 -1-일-페녹시) -아크릴로일아미노] -Λ 2-모폴린— 4- 일-에틸) -벤즈아미드，
(19) (£)-3-[3-(4-아다만탄— 1-일-페녹시) -아크릴로일아미노] - 2-피리딘 -4- 일-에틸)—벤즈아미드，
(20) (£)-3-[3-(4-아다만탄 -1-일-페녹시) -아크릴로일아미노] -Λ 3-이미다졸- 1-일-프로필) -벤즈아미드,
(21) )— 3-(3_(4-(2，4,4-트리메틸펜탄 -2-일)페녹시)아크릴아미도)벤조산，
(22) 2-메록시에틸 3-(3-(4-(2，4，4-트리메틸펜탄 -2-일)페녹시)아크릴아 미도)벤조에이트， 및
(23) ( -2-모폴리노에틸 3-(3-(4— (2,4,4-트리메틸펜탄 -2-일)페녹시)아크릴 아미도)벤조에이트. 본 발명에 따른 화학식 1의 신규 아릴옥시페녹시아크릴계 화합물의 구체적인 예를 하기 표 1에 정리하였다.
【표 1】 실시예 No. 구조
1 2 3 4 : R R R R 실시예 1 ' COOCH3 H H 실시예 2 COOCH3 H H 실시예 3 MM- COOCH3 H H 실시예 4 COOCH3 H CH3 실시예 5 H COOCH3 H 실시예 6 S02NH2 H H 실시예 7 S02CH3 H H 실시예 8 COOCH3 OH H 실시예 9 C00H H H 실시예 10 C00CH2CH3 H H 실시예 11 C00CH2CH20CH3 H H 실시예 12 0 1
。〜^、 H H 실시예 13 H H 실시예 14 H H 실시예 15 X C0NH2 H H 실시예 16 X . > H H H
0 ᅵ
실시예 17 H H
O
실시예 18 H H 실시예 19 H H H
。 K
실시예 20 H H
0
실시예 21 C00H H H 실시예 22 C00CH2CH20CH3 H H 실시예 23 H H 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 신규 아릴옥시페녹시아크릴계 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염뿐만 아니라， 이로부터 제조될 수 있는 가능한 용매화물， 수화물 또는 프로드럭을 모두 포함한다. 본 발명의 화학식 1의 유도체는 약학적으로 허용 가능한 염의 형태로 사용할 수 있으며, 염으로는 약학적으로 허용 가능한 유리산 (free acid)에 의해 형성된 산 부가염이 유용하다. 산 부가염은 염산， '질산， 인산， 황산， 브롬화수소산， 요드화수 소산， 아질산 또는 아인산과 같은 무기산류와 지방족 모노 및 디카르복실레이트， 페닐-치환된 알카노에이트, 하이드록시 알카노에이트 및 알칸디오에이트， 방향족 산류， 지방족 및 방향족 설폰산류와 같은 무독성 유기산으로부터 얻는다. 이러한 약학적으로 무독한 염류로^ 설페이트， 피로설페이트， 바이설페이트， 설파이트， 바 이설파이트, 니트레이트, 포스페이트， 모노하이드로겐 포스페이트, 디하이드로겐 포스페이트， 메타포스페이트， 피로포스페이트 클로라이드， 브로마이드， 아이오다이 드， 플루오라이드， 아세테이트， 프로피오네이트， 데카노에이트， 카프릴레이트， 아 크릴레이트， 포메이트， 이소부티레이트， 카프레이트, 헵타노에이트， 프로피을레이 트, 옥살레이트， 말로네이트， 석시네이트， ·수베레이트， 세바케이트， 푸마레이트， 말리에이트, 부틴 -1,4-디오에이트， 핵산 -1,6-디오에이트， 벤조에이트， 클로로ᅳ벤조 에이트， 메틸벤조에이트， 디니트로 벤조에이트， 하이드록시벤조에이트， 메톡시벤조 에이트， 프탈레이트， 테레프탈레이트， 벤젠설포네이트， 를루엔설포네이트, 클로로 벤젠설포네이트， 크실렌설포네이트， 페닐아세테이트， 페닐프로피오네이트 페닐부 티레이트， 시트레이트， 락테이트， β-하이드록시부티레이트， 글리콜레이트， 말레이 트ᅳ 타트레이트, 메탄설포네이트， 프로판설포네이트， 나프탈렌 -1-설포네이트， 나프 탈렌 -2-설포네이트 또는 만델레이트를 포함한다.
본 발명에 따른 산 부가염은 통상의 방법, 예를 들면， 화학식 1의 화합물을 과량의 산 수용액 중에 용해시키고, 이 ,염을 수흔화성 유기 용매, 예를 들면 메탄 을， 에탄올， 아세톤 또는 아세토니트릴을 사용하여 침전시켜서 제조할 수 있다. 동량의 화학식 1의 화합물 및 물 중의 산 또는 알코올을 가열하고， 이어서 이 흔합 물을 증발시켜서 건조시키거나 또는 석출된 염을 흡입 여과시켜 제조할 수도 있다. 또한， 염기를 사용하여 약학적으로 허용 가능한 금속염을 만들 수 있다. 알 칼리 금속 또는 알칼리 토금속 염은 예를 들면 화합물을 과량의 알칼리 금속 수산 화물 또는 알칼리 토금속 수산화물 용액 중에 용해하고， 비용해 화합물 염을 여과 하고 여액을 증발， 건조시켜 얻는다. 이때， 금속염으로는 나트륨， 칼륨 또는 칼슴 염을 제조하는 것이 제약상 적합하다. 또한， 이에 대웅하는 은염은.알칼리 금속 또 는 알칼리 토금속 염을 적당한 은염 (예， 질산은)과 반웅시켜 얻는다. 또한， 본 발명은 화학식 1의 신규 아릴옥시페녹시아크릴계 화합물의 제조방 법을 제공한다.
본 발명에 따른 제조방법은 하기 반웅식 1에 나타낸 바와 같이， 화학식 2의 화합물과 화학식 3의 화합물을 출발물질로 하여 후니그 (Hunig) 염기와 축합 시약을 넣고 유기용매 하에서 반웅 ᅵ켜 화학식 1을 제조하는 단계를 포함한다:
Figure imgf000013_0001
2 3
상기 반웅식 1에서， R 내지 R는 상기 화학식 1에서 정의한 바와 같다.
이때， 상기 후니그 염기로는 디이소프로필에틸아민((1^301) 131^1 ，
DIPEA) 또는 트리에틸아민 (triethylamine, TEA)을 사용할 수 있다.
또한, 상기 축합시^으로는 6 7-아자벤조트리아졸 -1-일) -^Λ^ ',ΤΓ 테트라 메틸유로니움테트라플루오로보레이트 (HATU), 1-[3(디메틸아미노)프로필 ]-3-에틸카 보디이미드 염산염 (l-[3-(dimethylamino)propyl ]— 3— ethylcarbodi imide hydrochloride, EDO, ^벤조트리아졸-씨 ,TV',;V '—테트라메틸-유로니움 -핵사풀루오 로 -포스페이트 (HBTU), 1-히드록시벤조트리아졸 (l-hydroxybenzotriazole, HOBt), 벤 조트리아졸 -1-알—옥시 -트리스 -피롤리ᅳ디노-포스포늄 핵사플로로포스페이트
( benzot r i azo 1 -1-y 1 ~oxy-t r i s-pyr r o 1 i di nophosphon i umhexa f luoro phosphate , PyBOP) 및 1-히드록시 -7-아자벤조트리아졸 (l-hydroxy-7-azabenzo triazole)로 이루 어진 군으로부터 선택되는 1종 이상을 사용할 수 있다.
나아가， 상기 유기용매로는 디메틸포름아미드 (DMF)나 메틸렌클로라이드 (C¾C12)를 사용하는 것이 바람직하다. 상기 화학식 2 및 화하식 3의 화합물은 시판되거나， 공지된 방법으로 합성하 여 제조할 수 있다. 일례로, 상기 화학식 2의 화합물은 하기 반웅식 2에 나타낸 바 와 같이, 화학식 4의 화합물을 마이클 첨가 반웅 (Michael addition reaction)시켜 화학식 5의 화합물을 제조하는 단계 (단계 1); 및
화학식 5의 화합물을 유기용매하에서 LiOH와 반웅시켜 화학식 2의 화합물을 제조하는 단계 (단계 2)를 포함하는 제조방법을 사용하여 제조할 수 있다: [반웅식 2]
Figure imgf000014_0001
상기 반웅식 2에서， R 및 R는 상기 화학식 1에서 정의한 바와 같다. 본 발명에 따른 신규 아릴옥시페녹시아크릴계 화합물은 상기 제조방법에 제 한되지 않으며， 이외에 이미 공지된 방법뿐만 아니라 미공지된 방법이라도 상기 신 규 아릴옥시페녹시아크릴계 화합물을 합성할 수 있는 방법이라면 사용할 수 있다 . 상기와 같이 본 발명에 따라 제조된 신규 아릴옥시페녹시아크릴계 화합물은 제조 후, 고속 액체크로마토그래피로 분리 정제한 후 핵자기 공명에 의해 분자구조 를 확인할 수 있다. 나아가， 본 발명은 상기 '화학식 1의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 유효성분으로 함유하는 암 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명의 화학식 1의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염은 비선택적 인 세포독성에 의해 항암 활성을 나타내는 것이 아니라， 암세포의 성장 및 전이에 중요한 역할을 수행하는 전사인자인 HIF-1의 활성을 저해하여 항암 활성을 나타낸 다.
상기 HIF-1 활성 저해는 HRE Hypoxia Responsive Element, 5'-ACGTG-3') 전 사 활성 저해， HIF-la 단백질 축적 저해 또는 HIF-1 표적 유전자 단백질의 발현을 저해하는 일련의 현상을 모두 포함한다.
본 발명에 따른 화학식 1의 화합물의 HIF-1의 HRE 전사 활성 저해 실험 결 과, 본 발명에 따른 화합물은， 저산소 조건에서 유사한 구조를 갖는 종래의 화합물 보다 HIF-1 활성 저해효과가 현저히 향상되는 것으로 나타났다 (도 1 참조). 따라 서, 본 발명의 화학식 1의 화합물은 저산소 조건에서 HIF-1의 HRE 전사 활성을 저 해하므로 암의 악성화와 관련된 유전자들의 발현을 저해하여 암의 성장 및 전이를 억제할 수 있기 때문에 항암제의 유효성분으로 사용될 수 있다.
또한， 본 발명에 따른 화학식 1의 화합물은, 저산소 조건에서 베타액틴 (β- actin)의 생성에는 영향을 주지 않으면서, HIF-la 단백질의 생성을 농도 의존적으 로 저해하는 것으로 나타났다 (도 2 참조). 따라서ᅳ 본원 발명의 화합물은 비선택적 인 세포 독성에 의해 항암 활성을 나타내는 것이 아니라， HIF— la 단백질의 축적을 선택적으로 저해하여 암의 성장 및 전이를 억제할 수 있으므로， 항암 활성을 나타 내면서 부작용을 최소화할 수 있다.
나아가， 본 발명에 따른 화학식 1의 화합물은， HIF-1의 표적 유전자들 중 암 의 증식과 전이에 기여하는 것으로 알려져 있는， 암의 성장 및 암이 다른 조직으로 전이하는데 있어서 중요한：혈관 신생 인자인 VEGF( Vascular endothelial growth factor A) 및 적혈구의 생성을 촉진시키는 EPO(erythropoiet in)의 발현을 농도 의 존적으로 저해하는 것으로 나타났다 (도 3 참조). 이로부터， 본 발명의 화합물은 암 의 증식과 전이에 기여하는 HIF-1의 표적 유전자인 VEGF 및 EP0의 발현 저해 작용 이 있으므로 항암제의 유효성분으로 사용될 수 있다.
따라서， 본 발명의 화학식 1의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염은 HIF-1의 활성을 효과적으로 저해하므로 대장암， 간암， 위암， 유방암， 결장암， 골 암， 췌장암, 두부 또는 경부 암， 자궁암， 난소암， 직장암， 식도암， 소장암， 항문 부근암， 결장암， 나팔관암종， 자궁내막암종， 자궁경부암종， 질암종， 음문암종， 호 지킨병， 전립선암， 방광암， 신장암, 수^관암， 신장세포암종, 신장골반암종, 중추 신경계 종양 등의 다양한 얌의 치료제로 사용될 수 있다. 또한， 본 발명은 상기 화학식 1의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염 을 유효성분으로 함유하는 HIF-1 활성의 저해를 통하여 당뇨병성 망막증이나 관절 염의 치료 효과를 나타내는 약학적 조성물을 제공한다.
상기 HIF-1 활성 저해는 HRE 전사 활성 저해, HIF-la 단백질 축적 저해 또 는 HIF-1 표적 유전자 단백질의 발현을 저해하는 일련의 현상을 모두 포함한다.
HIF-1은 혈관 신생작용의 활성화가 질환의 악화와 관련되는 질환의 치료제 개발에 표적으로 이용될 수 있다. 특히， 저산소 상태에서 활성화되는 HIF-1에 의해 유발되는 VEGF와 같은 혈관 신생 인자들은 당뇨병성 망막증 또는 류마티스성 관절 염과 같은 관절염의 진전과;:관련되어 있다. 당뇨병성 망막증 또는 관절염은 저산소 상태에서 HIF-1에 의해 VEGF의 발현이 증가되어 악화될 수 있다. 따라서, 질환 조 직의 저산소 상태로부터 활성화되는 HIF-1을 저해하는 화합물은 당뇨병성 망막증 또는 관절염의 치료제로 활용되는 것이다 (Eiji Ikeda, Pathology International , 2005, Vol 55, 603-610) . 상기에서 언급한 바와 같이 본 발명의 화학식 1의 화합물은 저산소 조건에서 대조 유전자인 GAPDH의 발현에는 전혀 영향을 주지 않으면서， 혈관 신생 인자인 VEGF( Vascular endothelial growth factor A)의 발현을 선택적으로 저해할 수 있으 므로， 저산소 상태에서 HIF-1에 의한 VEGF의 발현이 증가되어 악화되는 당뇨병성 망막증 또는 관절염 치료제희 유효성분으로 사용될 수 있다. 나아가， 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 신규 화합물， 또는 이의 약학 적으로 허용가능한 염을 치료적으로 유효한 양으로 암 치료를 필요로 하는 환자에 게 투여하는 단계를 포함하는 암의 치료방법을 제공한다.
이때， 상기 암으로는 HIF-la 단백질의 축적이 많이 일어나는 고형암인 대장 암， 간암 위암， 유방암， 결장암， 골암, 췌장암， 두부 또는 경부암, 자궁암， 난소 암， 직장암， 식도암, 소장암， 항문부근암， 결장암， 나팔관암종， 자궁내막암종， 자 궁경부암종， 질암종, 음문암종, 호지킨병， 전립선암， 방광암, 신장암， 수뇨관암， 신장세포암종， 신장골반암종， 중추신경계 종양 등을 들 수 있다. 또한， 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 신규 화합물， 또는 이의 약학적 으로 허용가능한 염을 치료적으로 유효한 양으로 당뇨병성 망막증 치료를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 당뇨병성 망막증의 치료방법을 제공한다. 이때， 상기 화학식 1로 표시되는 신규 화합물， 또는 이의 약학적으로 허용가 능한 염은 HIF-1의 활성 및 VEGF 단백질 발현을 저해하여 신생혈관의 생성을 억제 하는 것을 특징으로 한다. 나아가, 본 발명은 화학식 1로 표시되는 신규 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 치료적으로 유효한 양으로 류마티스성 관절염 치료를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 Ϊ함하는 류마티스성 관절염의 치료방법을 제공한다. 이때， 상기 화학식 1로 표시되는 신규 화합물， 또는 이의 약학적으로 허용가 능한 염은 HIF-1의 활성을 저해하여 신생혈관의 생성을 억제하는 것을 특징으로 한 다. 본 발명의 약학적 조성물은 다양한 경구 또는 비경구투여 형태로 제형화할 수 있다. 경구투여용 제형으로는 예를 들면 정제， 환제， 경 /연질 캅셀제， 액제， 현 탁제， 유화제 시럽제， 과립제， 엘릭시르제 등이 있는데 , 이들 제형은 유효성분 이 외에 희석제 (예: 락토즈， 스트로즈， 수크로즈：, 만니를， 솔비를, 셀를로즈 및 / 또 는 글리신), 활택제 (예: 실리카， 탈크， 스테아르산 및 그의 마그네슘 또는 칼슴염 및 /또는 풀리에틸렌 글리콜)를 함유하고 있다. 정제는 또한 마그네슘 알루미늄 실 리케이트 , 전분 페이스트， 젤라틴， 메틸셀를로즈， 나트륨 카복시메틸셀를로즈 및 / 또는 폴리비닐피롤리딘과 같은 결합제를 함유할 수 있으며， 경우에 따라 전분， 한 천, 알긴산 또는 그의 나트륨 염과 같은 붕해제 또는 비등 흔합물 및 /또는 흡수제, 착색제， 향미제， 및 감미제를 함유할 수 있다.
본 발명에 따른 화학식 1의 화합물을 유효성분으로 하는 약학 조성물은 비경 구투여할 수 있으며, 비경구투여는 피하주사， 정맥주사， 근육내 주사 또는 흉부내 주사를 주입하는 방법에 의한다. 이때, 비경구투여용 제형으로 제제화하기 위하여 상기 화학식 1의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 안정제 또는 완층제 와 함께 물에 흔합하여 용맥 또는 현탁액으로 제조하고， 이를 앰풀 또는 바이알 단 위 투여형으로 제조할 수 있다. 상기 조성물은 멸균되고 /되거나 방부제， 안정화제， 수화제 또는 유화 촉진제， 삼투압 조절을 위한 염 및 /또는 완층제 등의 보조제， 및 기타 치료적으로 유용한 물질을 함유할 수 있으며， 통상적인 방법인 흔합， 과립화 또는 코팅 방법에 따라 제제화할 수 있다. 유효성분으로서 화학식 1의 화합물은 사 람을 포함하는 포유동물에 대해서 하루 0.1 내지 500mg/kg (체중), 바람직하게는 0.5 내지 100mg/kg (체중)의 양으로 1일 1회 또는 분할하여 경구 또는 비경구 경로 를 통해 투여할 수 있다.
본 발명의 조성물은 단독으로， 또는 수술， 방사선 치료， 호르몬 치료， 화학 치료 및 생물학적 반웅 조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있다.
【발명의 실시를 위한 형태】
이하, 본 발명을 실시예에 의해 더욱 상세하게 설명한다. 단, 하기의 실시예 는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 이에 한정되는 것은 아니다.
<제조예 1> (^)-3-(4—아다만탄 -1-일-페녹시) -아크릴산 메틸에스테르 (£)-3— ( 4-Adamant an- 1-y 1 -phenoxy ) -ac r 1 i c acid methyl ester의 제조
Figure imgf000017_0001
4- (아다만탄 -1-일) -페놀 (1.0 mg, 4.38隱 ol)과 methyl propiolate (737 mg, 0.74 mi, 8.76 mmol)를 를루인 25 녹인 후， 반웅용액에 Ph3P(l.15g,4.38腿 ol)를 첨가하였다. 반웅 흔합물을 115 °C에서 3 시간 환류하였다. 반웅용액을 농축하고 EtoAC와 염화나트륨 수용액으로 분리하였다. 유기층을 무수 MgS04으로 건조하고 농 축하였다. 잔여 물질을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피 (n-Hexane:EtOAc=50:l)로 분 리하여 목적 화합물을 흰색 고체로 얻었다 (1.24 g, 수득율 90.6%).
H-NMR (CDC13) 300 腿 ζ) δ 7.81 (1H, d, J =12.3 Hz, CH),7.35 (2H, d, J
= 9.3 Hz, aromatic-H), 7.01 (2H, d, / = 8.7 Hz, aromatic— H), 5.53 (1H, d, J = 12.3 Hz, CH), 3.73 (3H, s, 0CH3) , 2.10 (3H, m, adamant ly-H) , 1.89 (6H, m, adamant ly-H), 1.77 (6H, m, adamant ly-H)
<제조예 2> (^-3-(4- -부틸페녹시)아크릴산메틸에스테르 E)—3- —tert- Buty lphenoxy ) aery 1 icacidmethy 1 ester≤ 제조
Figure imgf000018_0001
부틸페놀로부터 상기 제조예 1과 동일한 방법으로 실시하여 목적 화합물을 노란색 오일로 얻었다 (750.7 mg, 수득율 69.1%).
H-NMR (CDC13, 300 MHz) δ 7.80 (1Η, d, / - 12.0 Hz, CH)， 7.38 (2H, d,
J = 9.0 Hz, aromatic-H), 6.99 (2H, d, J = 8.7 Hz, aromatic-H), 5.53 (1H, d, J = 12.0 Hz, CH), 3.73 (3H, s, 0CH3) , 1.32 (9H, s, C¾) .
<제조예 3> (£)-3-(4-(2，4，4-트리메틸펜탄 -2-일)페녹시)아크릴산메틸에스테 르 ( -3- ( 4- ( 2 , 4 , 4-Tr i me t h 1 pent an-2-y 1 )phenoxy ) aery 1 icacidmethy 1 ester≤1 제조
Figure imgf000018_0002
4-(2, 4, 4-트리메틸펜탄 -2—일)페놀로부터 상기 제조예 1과 동일한 방법으로 실시하여 목적 화합물을 노란색 오일로 얻었다 (365.5 mg, 수득율 51.9%).
-醒 R (CDC13, 300 MHz) δ 7.8 (1H, d, / = 12.3Hz, CH) , 7.36 (2H, d, J = 8.7 Hz, aromatic-H), 6.97 (2H, d, J= 8.4 Hz, aromatic-H), 5.53 (1H, d, / = 12.0 Hz, CH), 3.73 (3H, s, 0C¾)， 1.73 (2H, s, CH2) , 1.36 (6H, s , CH3), 0.71 (9H, s, CH3)
<제조예 4> ( )」3-(4-아다만탄 -1-일 -2-메틸페녹시)아크릴산메틸에스테르 一3— ( 4-Adamant an— 1— y 1 -2-me t h 1 phenoxy )acryl icaci dme t hy 1 es t er의 제조
Figure imgf000019_0001
4-아다만탄 -1-일 -2-메틸페놀로부터 상기 제조예 1과 동일한 방법을 실시하여 목적 화합물을 노란색 오일로 얻었다 (442.8 mg, 수득율 100%).
H-NMR (CDCls, 300 MHz) δ 7.77 (1H, d, J = 12.3 Hz, CH), 7.16 7.19
(2H, m,aromatic-H), 6.92 (1H, d, J = 9.0 Hz, aromatic-H), 5.36 (1H, d, J = 12.0 Hz, CH), 3.71 (3H, s , 0CH3) , 2.23 (3H, s, CH3), 2.10 (3H, m, adamant ly-
H), 1.89 (6H, m, adamant ly-H) , 1.77 (6H, m, adamant ly-H)
<제조예 5> (£)-3-(4-아다만탄 -1-일-페녹시) -아크릴산 ( 〕 -3- (4-Adamant an— l-yl-phenoxy)-acryl ic acid의 조
Figure imgf000019_0002
3-(4-아다만탄 -1-일-페녹시) -아크릴산메틸에스테르 (569 mg, 1.82 腿 ol)를 흔 합용액 THF/H20(3:1, 20 i )에 녹인다. 정제수 (5 에 녹인 리튬 히드록시드 모노 하이드레이트 (lithium hydroxide monohydrate)(153 mg, 3.65 画 ol)을 첨가하고, 반 응용액을 12시간 동안 교반하였다. 반응용액을 10% 염산 수용액으로 처리하고， 에 틸아세테이트와 염화나트륨 수용액으로 분리하고， 유기층을 무수 황산마그네슘 (MgS04)으로 건조하고 농축하였다. 잔여 물질을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피 (n-
Hexane:EtOAc=3:l)로 분리하여 목적 화합물을 흰색 고체로 얻었다 (526 mg, 수득율 96.7%). 'H-NMR (DMSD-de, 300 丽 z) δ 12.07 (1H, s, COOH) , 7.55 (1H, d, / = 7.2
Hz, CH), 7.40 (2H, d, J = 5.4 Hz, aromat ic-H) , 7.11 (2H, d, J = 5.1 Hz, aromatic-H), 5.44 (1H, d, J = 7.2 Hz, CH) , 2.06 (3H, m, adamant ly-H) , 1.85 (6H, m, adamant ly-H) , 1.73 (6H, m, adamant ly-H)
<제조예 6> (£)-3-(4-t-부틸페녹시)아크릴산 (£)-3-(4-tert— Butylphenoxy) acrylicacid의 제조
Figure imgf000020_0001
( )-3-(4- —부틸페녹시)아크릴산메틸에스테르로부터 상기 제조예 5와 동일한 방법으로 실시하여 목적 화합물을 노란색 오일로 얻었다 (75.1 mg, 수득율 11.0%).
-匪 R (CDCl3l 300 MHz) δ 7.89 (1Η, d, J = 12.3 Hz, CH),7.39 (2H, d, J
= 8.4 Hz, aromatic-H), 7.00 (2H, d, J = 8.7 Hz, aromatic-H), 5.50 (1H, d, J = 12.3 Hz, CH),1.32 (9H, s, CH3)
<제조예 7> (£)-3-(4-(2，4，4-트리메틸펜탄 -2-일)페녹시)아크릴산 (^)-3-(4- (2,4, 4-Tr i me t hy 1 pent an-2- 1 ) henoxy ) acr y 1 i cac i d≤] 제조
Figure imgf000020_0002
(^)-3-(4-(2, 4， 4-트리메틸펜탄 -2-일 )페녹시 )아크릴산메틸에스테르로부터 상 기 제조예 5와 동일한 방법으로 실시하여 목적 화합물을 노란색 오일로 얻었다 (1.92 mg, 수득율 43.3%).
H-NMR (CDC13) 300 MHz) δ 7.89 (1Η, d, J = 11.7 Hz, CH) , 7.37 (2H, d,
J = 9.0 Hz, aromatic-H), 6.98 (2H, d, J = 8.7 Hz, aromatic-H), 5.50 (1H, d, J = 12.3 Hz, CH), 1.73 (2H, s, CH2) , 1.36 (6H, s, C¾)， 0.71 (9H, s, CH3)
<제조예 8〉 (£H3-(4-아다만탄 -1-일 -2-메틸페녹시)아크릴산 (£)-3-(4- Adamant an- 1-y 1 -2-me thy 1 phenoxy ) aery 1 i cac i d≤ 제조
Figure imgf000021_0001
0?)-3-(4-아다만탄 -1-일 -2-메틸페녹시)아크릴산메틸쎄스테르로부터 상기 제 조예 5와 동일한 방법으로 실시하여 목적 화합물을 노란색 오일로 얻었다 (167.4 mg, 수득율 50.2%).
-匪 R (CDC13, 300 MHz) δ 7.85 (1Η, ά, J = 12.0 Hz, CH) , 7.18 7.20
(2H, m, aromatic— H), 6.93 (1H, d, J = 8.7 Hz, aromatic-H), 5.33 (1H, d, J = 12.3 Hz, CH), 2.23 (3H, s, CH3)， 2.10 (3H, m, adamant ly-H) , 1.89 (6H, m, adamant iy-H) , 1.77 (6H, m, adamant ly-H)
<실시예 1> (£)-3_[3-(4-아다만탄 -1-일-페녹시) -아크릴로일아미노] -벤조산메 틸에스테르 ( E) -3- [ 3- ( 4-Adamant an-1-y 1 -phenoxy )— acr y loylamino]—benzo ic acid methyl ester의 제조 (AC-428)
Figure imgf000021_0002
3-(4—아다만탄— 1-일-페녹시) -아크릴산 (110.6 mg, 0.5 誦 ol)과 3-아미노벤조 산 메틸 에스테르 (151.2 mg, 1.0 匪 ol) 및 HATU 143.8 mg, 0.75 隱 ol)를 DMF 5 mi 에 넣고 DIPEA(0.13 mi, 0.75 mmol)를 첨가하였다. 반웅 흔합물을 상온에서 24 시 간 교반하였다. 반웅 흔합액을 에틸아세테이트와 10% 염산으로 분리하고， 유기층을 염화나트륨 수용액， 물 순서로 세척하고， 무수 황산마그네슘으로 건조하고 농축하 였다. 잔여 물질올 실리카겔 컬럼 크로마토그래피 OHlexane:Et0Ac=10:l)로 분리하 여 목적 화합물을 흰색 고체로 얻었다 (21.5 mg, 수득율 10.6%)
-匪 R (CDC13, 300 MHz) δ 8.06 (1Η, s, aromatic-H), 7.89 7.95 (2H, m, aromatic-H, CH) , 7.77 (1H, d, / = 7.5 Hz, aromatic-H), 7.33 7.42 (3H, m, aromatic-H), 7.02 (2H, d, J = 8.7 Hz, aromatic-H), 5.68 (1H, d, J = 11.7 Hz, CH), 3.90 (3H, s, CH3), 2.11 (3H, m, adamant ly-H) , 1.90 (6H, m, adamant ly-H) ,
1.77 (6H, m, adamant ly-H) . <실시예 2> )-3-(3-(4- -부틸페녹시)아크릴아미도)벤조산메틸에스테르 ( -3- ( 3- ( 4-t er t -Bu t y 1 phenoxy ) aery 1 am i do ) benzoicacidmethylester의 제조 (AC— 629)
Figure imgf000022_0001
C£ -3-(4- -부틸페녹시)아크릴산으로부터 상기 실시예 1과 동일한 방법으로 실시하여 목적 화합물을 흰색 고체로 얻었다 (41.0 mg, 수득율 40.0%).
-匪 R (CDC13, 300 MHz) δ 8.05 (1Η, m, aromat ic-H) , 7.93 7.89 (2H, m, aromatic-H, CH) , 7.77 (1H, d, J = 8.1 Hz, aromat ic-H), 7.43 7.37 (3H, m, aromat ic-H), 7.18 (1H, s, NH)， 7.02 (2H, d, J = 9.0 Hz, aromatic-H), .7.00 (2H, d, J = 8.7 Hz, aromatic-H), 5.66 (1H, d, J = 11.4 Hz, CH) , 3.91 (3H, s, 0CH3) , 1.32 (9H, s, (CH3)3)
<실시예 3> ( )-3-(3-(4-(2，4，4-트리메틸펜탄 -2-일)페녹시)아크릴아미도)벤 조산메틸에스테르 ( £) -3— ( 3- ( 4- ( 2， 4， 4-Tr imethylpent an-2-y 1 ) phenoxy )acryl amido)benzoicacidmethylester의 제조 (AC— 630)
Figure imgf000022_0002
0?)-3-(4-(2，4，4-트리메틸펜탄 2-일)페녹시)아크릴산으로부터 상기 실시예 1 과 동일한 방법으로 실시하여 목적 화합물올 흰색 고체로 얻었다 (733.0 mg, 수득율 62.8%).
H-NM (DMS0-d6, 300 MHz) δ 8.05 (1H, m, aromatic-H), 7.89 7.93 (2H, m, aromatic-H, CH)， 7.78 (1H, d, J = 7.8 Hz, aromatic-H), 7.41 (1H, d, J = 8.4 Hz, aromatic-H), 7.37 (2H, d, J = 8.4 Hz, aromatic-H), 7.11 (1H, s, NH) , 7.00 (2H, d, J = 8.7 Hz, aromatic-H), 5.66 (1H, d, J = 11.4 Hz, CH) , 3.91 (3H, s, 0CH3) , 1.73 (2H, s, C¾) , 1.37 (6H, s, (CH3)2) , 0.72 (9H, s, (CH3)3) <실시예 4> ( )-3-(3-(4-아다만탄 -1-일 -2-메틸페녹시)아크릴아미도)벤조산메 틸에스테르 ( ) -3- ( 3- ( 4-Adamant an-1-y 1 -2-methy 1 phenoxy) aery 1 am i do ) benzo i cac i dmethylester의 제조 (AC— 635)
Figure imgf000023_0001
)-3-(4-아다만탄 -1-일 -2-메틸페녹시)아크릴산으로부터 상기 실시예 1과 동 일한 방법으로 실시하여 목적 화합물을 흰색 고체로 얻었다 (63.7 mg, 수득율 74.5%).
-匿 (DMSO-ds, 300 MHz) δ 10.05 (1Η, s, NH) , 8.27 (1H, m, aromatic-
H), 7.82 7.84 (1H, m, aromat ic-H) , 7.72 (1H, d, / = 12.3 Hz, CH), 7.60 - 7.62 (1H, m, aromat ic-H), 7.43 (1H, t, J = 8.1 Hz, aromat ic-H), 7.32 (1H, m, aromat ic-H), 7.26 (1H, dd, J = 3.0 & 8.55 Hz, aromat ic-H) , 7.06 (1H, d, J = 8.1 Hz, aromat ic-H), 5.58 (1H, d, J = 12.3 Hz, CH) , 3.84 (3H, s, 0CH3) , 2.20
(3H, s, CH3), 2.06 (3H, m, adamant ly-H) , 1.87 (6H, m, adamant ly-H) , 1.74 (6H, m, adamant ly-H)
<실시예 5> (£)-4-(3— (4-아다만탄 -1-일페녹시)아크릴아미도)벤조산메틸에스 테르 ( E) -4- ( 3- ( 4-Admant an- 1-y 1 phenoxy ) aery 1 am i do ) benzo i cac i dme thylester≤l 제 조 (AC-636)
Figure imgf000023_0002
4-아미노벤조산메틸에스테르로부터 상기 실시예 1과 동일한 방법으로 실시하 여 목적 화합물을 흰색 고체로 얻었다 (9.7 mg, 수득율 11.2%).
H-NMR (DMS0-d6, 300 MHz) δ 10.23 (1Η, s, NH) , 7.91 (2H, d,
J=8.7Hz , aromat i c-H) , 7.737.79 (3H, m, aromat ic-H, CH) , 7.42 (2H, d, / = 8.7 Hz, aromat ic-H), 7.14 (2H, d, J = 8.4 Hz, aromat ic-H), 5.83 (1H, d, J = 11.7 Hz,CH), 3.82 (3H, s, C¾) ' 2.06 (3H, m, adamant ly-H) , 1.86 (6H, m, adamantly- H), 1.74 (6H, m, adamant ly-H)
<실시예 ·6> ( )-3-(4-아다만탄 -1-일페녹시) -N-(3-설파모일페닐)아크릴아미드 ( E) _3一 ( 4-Adamant an- 1-y 1 phenoxy)一 N— (3-sulf amoy 1 pheny 1 ) acr y 1 am i de의 제조 ( AC_ 627)
Figure imgf000024_0001
3-아미노벤젠설폰아미드로부터 상기 실시예 1과 동일한 방법으로 실시하여 목적 화합물을 흰색 고체로 얻었다 (18.2 mg, 수득율 20.1%).
-匪 R (DMSD-dg, 300 MHz) δ 10.19 (1Η, s, NH) , 8.17 (1H, s, aromatic—
H), 7.75 7.79 (2H, m, aromatic-H, CH) , 7.48 7.49 (2H, m, aromatic-H), 7.43 (2H, d, J = 8.7 Hz, aromatic-H), 7.14 (2H, d, J = 9 Hz, aromatic-H), 5.81 (1H, d, J = 11.4 Hz, CH), 2.06 (3H, m, adamant ly-H) , 1.86 (6H, m, adamant ly- H), 1.74 (6H, m, adamant ly-H)
<실시예 7> (£)-3-(4-아다만탄 -1-일페녹시) -N-(3- (메틸설포닐)페닐)아크릴아 미드 ( -3- ( 4-Adamant an- 1-y 1 phenoxy ) -N- (3-(methylsulf ony 1 ) pheny 1 ) acr yl amide 의 제조 (AC-628)
Figure imgf000024_0002
3- (메틸설포닐)벤젠아민으로부터 상기 실시예 1과 동일한 방법으로 실시하여 목적 화합물을 흰색 고체로 얻었다 (18.2 mg, 수득율 2(λ¾). .
H-NMR (DMSD-de, 300 MHz) δ 10.29 (1Η, s, NH)， 8.26 (1H, s, aromatic-
H), 7.86 7.90 (1H, m, aromatic-H), 7.79 (1H, d, J = 12.0 Hz, CH),7.57 7.59 (2H, m, aromatic-H), 7.43 (2H, d, J = 8.7 Hz, aromatic-H), 7.14 (2H, d, J = 9 Hz, aromatic-H), 5.82 (1H, d, / = 12.3 Hz, CH)， 2.19 (3H, s, C¾) , 2.06 (3H, m, adamant ly-H) , 1.86 (6H,m, adamant ly-H) , 1.74 (6H, m, adamant ly-H) <실시예 8> (£)-5-[3-(4-아다만탄 -1-일-페녹시) -아크릴로아미노]— 2-히드록시 -벤조산메틸에스테르 ( -5— [ 3- ( 4— Adamant an- 1-y 1 -phenoxy )-acryloylamino]-2- hydroxy-benzoicacidmethylester-^ 제조 (AC— 551)
Figure imgf000025_0001
5-아미노 -2-히드록시—벤조산메틸에스테르로부터 상기 실시예 1과 동일한 방 법으로 실시하여 목적 화합물을 흰색 고체로 얻었다 (52.6 mg, 수득율 34.6%).
H-NMR (CDC13) 300 丽 ζ) δ 10.61 (1Η, s, NH) , 8.11 (1H, s, OH), 7.89
(1H, d, / = 11.7 Hz, CH), 7.50 7.52 (1H, m, aromatic— H), 7.36 (2H, d, J = 8.7 Hz, aromatic-H), 7.03 (2H, d, J = 8.7 Hz, aromat ic-H) , 6.95 (1H, d, / = 8.7 Hz, aromatic-H), 6.93 (1H, s, aromatic-H), 5.62 (1H, d, J = 11.1 Hz, CH) , 3.94 (3H, s, CH3), 2.11 (3H, m, adamant ly-H) , 1.90 (6H, m, adamant ly-H) , 1.77
(6H, m, adamant ly-H)
<실시예 9> (£)-3-[3-(4-아다만탄 -1-일-페녹시) -아크릴로일아미노] -벤조산 一3一 [ 3_ ( 4— Adamant an- 1- 1 -phenoxy )-acryloylamino] -benzo i c ac i d의 제조 ( AC— 553 )
Figure imgf000025_0002
( E) -3- [ 3- ( 4-아다만탄 -1-일 -페녹시) -아크릴로일아미노] -벤조산메틸에스테르 로부터 상기 제조예 5와 동일한 방법으로 실시하여 목적 화합물을 흰색 고체로 얻 었다 (19.2 mg, 수득율 65.7%).
H-NMR (DMSO-de, 300 MHz) δ 10.08 (1Η, s, NH) , 8.23 (1H, s, aromat ic-
H), 7.86 (1H, d, / = 8.7 Hz, aromatic-H), 7.75 (1H, d, J = 12.0 Hz, CH), 7.60 (1H, d, J = 7.5 Hz, aromatic-H), 7.39 7.44 (3H, m, aromatic-H), 7.14 (2H, d, J = 9.0 Hz, aromatic-H), 5.81 (1H, d, J = 11.7 Hz, CH) , 2.06 (3H, m, adamant ly-H) , 1.86 (6H, m, adamant ly-H) , 1.74 (6H, m, adamant ly-H)
<실시예 10> 05)-3-(:3-(4-아다만탄 -1-일페녹시)아크릴아미도)벤조산에틸에스 테르 (i¾-3-(3-(4-Adamantan-l-ylphenoxy)acryl ami do)benzoicacidethyl ester≤1 제 조 (AC-610)
Figure imgf000026_0001
3-아미노벤조산 에틸 에스테르로부터 상기 실시예 1과 동일한 방법으로 실시 하여 목적 화합물을 흰색 고체로 얻었다 (44.6 mg, 수득율 50.0%).
H-NMR (DMSO-de, 300 MHz) δ 10.12 (1H, s, NH) , 8.26 (1H, d, / = 1.2
Hz, aromatic— H), 7.89 (1H, d, J = 8.4 Hz, aromat ic-H) , 7.77 (1H, dd, J = 1.5 & 12.2 Hz, CH), 7.62 (1H, d, J = 7.5 Hz, aromat ic-H), 7.41 7.47 (3H, m, aromat ic-H), 7.14 (2H, d, J = 7.2 Hz, aromat ic-H), 5.81 (1H, d, J = 12.0 Hz, CH), 4.31 (2H, q, J = 6.9Hz, CH2) , 3.90(3H, s, CH3), 2.06 (3H, m, adamantly—
H), 1.86 (6H, m, adamant ly-H) , 1.74 (6H, m, adamant ly-H) , 1.32 (3H, t, J = 7.2 Hz, CH3)
<실시예 11> (£)-3-(3-(4—아다만탄 -1-일페녹시)아크릴아미도)벤조산 2-메톡시 에틸에스테르 {£) -3- ( 3- (4-Adamant an- 1-y 1 phenoxy) aery 1 am i do ) benzo icacid 2- methoxyethylester의 조 (AC-611)
Figure imgf000026_0002
3-아미노벤조산 2-메록시에틸에스테르로부터 상기 실시예 1과 동일한 방법으 로 실시하여 목적 화합물을 흰색 고체로 얻었다 (569.8 mg, 수득율 51.1%).
H-NMR (DMSO-de, 300 MHz) δ 10.14 (1Η, s, NH) , 8.24 (1H, s, aromat ic-
H), 7.92 (1H, d, / = 8.7 Hz, aromatic— H), 7.77 (1H, d, / = 11.4 Hz, CH) , 7.63 (1H, d, J = 7.8 Hz, aromat ic-H), 7.41 7.48 (3H, m, aromat ic-H), 7.14 (2H, d, J = 9.0 Hz, aromat ic-H), 5.81 (1H, d, / = 12.0 Hz, CH), 4.39 (2H, m, C¾)，
4.39 (2H, m, CH2) , 3.31 (3H, s, C¾)， 2.06 (3H, m, adamant ly-H) , 1.86 (6H, m, adamant ly-H) , 1.74 (6H, m, adamant ly-H) <실시예 12> G5)-3-(3-(4—아다만탄 -1-일-페녹시)아크릴아미도)벤조산 2- (디 메틸아미노)에틸에스테르 ( £) -3- ( 3- ( 4-adaman t an- 1-y 1 -phenoxy )acrylamido) benzoicacid 2-(dimeth l amino) ethylester≤ 제조 (AC— 632)
Figure imgf000027_0001
(£)-3-(3-(4-아다만탄 -1-일―페녹시)아크릴아미도)벤조산 (60 mg, 0.144 瞧 ol) 와 2- (디메틸아미노)에틸 클로라이드.염산 (31.1 mg, 0.216 圍 ol)를 DMF(3 ᅳ)에 녹 인 후， 반웅 용액에 K2C03(39.8 mg, 0.288画 ol)를 추가하고 60 °C에서 12시간 동안 교반하였다. 반웅 흔합액을 에틸아세테이트와 NaHC03수용액으로 분리하고， 유기층을 염화나트륨 수용액， 물 순서로 세척하고， 무수 황산마그네슴으로 건조하고 농축하 였다. 잔여 물질을 Prep-TLC(/Hlexane:Et0Ac=10:l)로 분리하여 목적 화합물을 흰색 고체로 얻었다 (21.5 mg, 수득율 10.6 ))..
H-NMR (DMS0-d6, 300 MHz) δ 10.13 (1H, s, NH) , 8.25 (1H, m, aromatic-
H), 7.88 7.91 (1H, m, aromat ic-H) , 7.77 (1H, d, J = 12.0 Hz, CH) , 7.61 - 7.63 (1H, m, aromat ic-H) , 7.41 - 7.48 (3H, m, aromat ic-H), 7.14 (2H, d, J = 9.0 Hz, aromat ic-H), 5.81 (1H, d, J = 12.0 Hz, CH) , 4.35 (2H, t, J = 6.0Hz, CH2), 2.61 (2H, t, / = 6.0 Hz, CH2) , 2.21 (6H, s, N(CH3)2), 2.06 (3H, m, adamant ly-H) , 1.87 (6H, m, adamant ly-H) , 1.74 (6H, m, adamant ly-H)
<실시예 13〉 (£)-3-(3-(4-아다만탄 -1-일페녹시)아크릴아미도)벤조산 2-피롤 리딘 - 1-일)에틸에스테르 ( -3- ( 3- ( 4-adamant an- 1-y 1 phenoxy ) aery 1 am i do ) benzoicacid 2一 (pyrrol idin l— l )ethylester의 제조 (AC— 633)
Figure imgf000027_0002
2- (피를리딘 -1-일)에틸 클로라이드.염산으로부터 상기 실시예 12와 동일한 방법으로 실시하여 목적 화합물을 흰색 고체로 얻었다 (9.3 mg, 수득율 18.6%). H-匪 R (DMSO-de, 300 MHz) δ 10.13 (1H, s, NH) , 8.26 (1H, s, aromatic-
H), 7.90 (1H, d, J = 8.7 Hz, aromatic— H), 7.77 (1H, d, J = 12.0 Hz, CH) , 7.62 (1H, d, J = 7.5 Hz, aromatic— H), 7.45 (1H, t, J = 8.1 Hz, aromatic-H), 7.42 (2H, d, J = 8.7 Hz, aromatic-H), 7.14 (2H, d, J = 9.0 Hz, aromatic-H), 5.81 (1H, d, J = 11.4 Hz, CH), 4.37 (2H, t, / = 5.7 Hz, C¾)， 2.78 (2H, t, J = 5.4
Hz, CH2), 2.50 2.53 (4H, m, CH2) , 2.06 (3H, m, adamant ly-H) , 1.86 (6H, m, adamant ly-H), 1.74 (6H, m, adamant ly-H) , 1.68 (4H, m, CH2)
<실시예 14〉 (£)-3-(3-(4-아다만탄 -1-일페녹시)아크릴아미도)벤조산모폴리노 에틸에스테르 (£) -3- ( 3一 ( 4-adamant an- 1-y 1 phenoxy )acrylamido) benzo icacid morpholinoethylester 제^ (AC—634)
Figure imgf000028_0001
모폴리노에틸 클로라이드.염산으로부터 상기 실시예 12와 동일한 방법으로 실시하여 목적 화합물을 흰색 고체로 얻었다 (9.3 mg, 수득율 18.6%). -匪 R (DMS0-d6, 300 MHz) δ 10.13 (1Η, s, NH)， 8.27 (1H, m, aromatic-
H), 7.86 7.89 (1H, m, aromatic-H), 7.76 (1H, d, J = 11.7 Hz, CH) , 7.62 (1H, d, / = 7.8 Hz, aromatic-H), 7.41 - 7.48 (3H, m, aromatic-H), 7.14 (2H, d, / = 9.0 Hz, aromatic-H), 5.81； (1H, d, / = 12.0 Hz, CH) , 4.38 (2H, t, J = 6.0 Hz, CH2), 3.56 (4H, t, J = 5.1 Hz, CH2) , 2.68 (2H, t, / = 6.0 Hz, C¾)， 2.47 (4H, t, J = 4.8 Hz, CH2), 2.06 (3H, m, adamant ly-H) , 1.86 (6H, m, adamant ly-H) ,
1.74 (6H, m, adamant ly-H)
<실시예 15> (£)-3-[3-(4-아다만탄 -1-일-페녹시) -아크릴로일아미노] -벤즈아 미드 ( E)_2>- [ 3- ( 4-Adamant an- 1-y 1 -phenoxy) -acryloylamino] -benz m i de의 제조 ( AC一 552)
Figure imgf000029_0001
(£卜3-[3-(4-아다만탄 -1-일-페녹시) -아크릴로일아미노] -벤조산과 NH4C1로부 터 상기 실시예 1과 동일한 방법으로 실시하여 목적 화합물을 흰색 고체로 얻었다 (9.3 mg, 수득율 18,6%).
-匪 R (DMSO-de, 300 MHz) δ 10.03 (1Η, s, NH)， 8.02 (1H, m, aromatic-
H), 7.91 (1H, br-s, NH2)； 7.79 7.82 (1H, m, aromat ic-H) , 7.74 (1H, d, J =
12.0 Hz, CH), 7.51 (1H, d, J = 7.5 Hz, aromat ic-H), 7.42 (2H, d, J = 9.0 Hz, aromat ic-H), 7.36 (1H, d, J = 15.6 Hz, aromat ic-H) , 7.31(1H, br-s, NH2) , 7.13
(2H, d, / - 8.4 Hz, aromat ic-H) , 5.83 (1H, d, J = 12.0 Hz, CH) , 2.06 (3H, m, adamant ly-H) , 1.86 (6H, m, adamant ly-H) , 1.73 (6H, m, adamant ly-H)
<실시예 16> (£)-3-[3-(4-아다만탄 -1-일-페녹시) -아크릴로일아미노 ]-그이소 프로필一벤즈아미드 ( E) -3- [ 3- ( -Adamant an- 1-y 1 -phenoxy ) -acr y 1 oy 1 am i no ] ~N~ i s op ropy 1 -benzam i de의 조 ( AC-550 )
Figure imgf000029_0002
3-아미노-그이소프로필 -벤즈아미드로부터 상기 실시예 1과 동일한 방법으로 실시하여 목적 화합물을 흰색 고체로 얻었다 (57.8 mg, 수득율 37. W .
H-NMR (DMSO-de, 300 MHz) δ 10.03 (1Η, s, NH)ᅳ 8.18 (1H, d, / = 7.2
Hz, NHCH) , 7.96 (1H, sᅳ aromat i c-H) , 7.82 (1H, d, J = 9.0 Hz, aromat ic-H), 7.82 (1H, d, J = 11.7 Hz, CH) , 7.33 7.49 (4H, m, aromat ic-H), 7.13 (2H, d, J = 9.0 Hz, aromat ic-H), 5.83 (1H, d, J = 12.3 Hz, CH) , 4.01 4.11 (1H, m, CH (CH3)2) , 2.06 (3H, m, adamant ly-H) , 1.86 (6H, m, adamant ly-H) , 1.74 (6H, m, adamant ly-H), 1.15 (6H, d, J = 6.6 Hz, CH3) <실시예 17> ( 〕-3-[3-(4-아다만탄 -1-일―페녹시) -아크릴로일아미노] 퓨란- 2-일메틸 -벤즈아미드 ( -3- [ 3- ( 4-Adamant an-1-y 1 -phenoxy )-acryloylamino]-y^- f ur an-2-y 1 methyl -benzam i de의 제조 ( AC-559 )
Figure imgf000030_0001
( -3-[3— (4-아다만탄 -1-일-페녹시) -아크릴로일아미노] -벤조산과 푸르푸릴아 민 (furfurylamine)으로부터 상기 실시예 1과 동일한 방법으로 실시하여 목적 화합 물을 흰색 고체로 얻었다 (37.7 mg, 수득율 63.3%).
H-NMR (DMSO-dg, 300 MHz) δ 10.05 (1Η, s, NH) , 8.92 (1H, t, J = 6Hz, NHCH2) , 8.03 (1H, m, aromatic— H)， 7.79 7.82 (1H, m, aromatic-H), 7.74 (1H, d,
J = 12.0 Hz, CH), 7.56 (1H, m, aromatic-H), 7.51 (1H, d, J = 8.1 Hz, aromatic-H), 7.42 (2H, d, J = 9.0 Hz, aromatic-H), 7.37 (1H, t, J = 8.1 Hz, aromatic-H), 7.13 (2H, d,; / = 8.7 Hz, aromatic-H), 6.39 (1H, m, aromatic-H), 6.26 (1H, d, J = 3.3 Hz, aromatic-H), 5.83 (1H, d, J = 12.0 Hz, CH) , 4.44 (2Hᅳ d, J - 5.4 Hz, CH2), 2.06 (3H, m, adamant ly-H) , 1.86 (6H, m, adamant ly-
H), 1.73 (6H, m, adamant ly-H)
<실시예 18> 3-[3-(4-아다만탄 -1-일-페녹시) -아크릴로일아미노] -Λ 2-모 폴린 -4—일-에틸) -벤즈아미드 (£)-3-[3-( 4-Adamant an-1-y 1 -phenoxy ) - acr y 1 oy 1 am i no ] -N- ( 2-mor ho 1 i η-4-y 1 -et hy 1 )_benzamide의 제조 (AC一 571)
Figure imgf000030_0002
3-아미노 -Λ 2-모폴리노에틸)벤즈아미드로부터 상기 실시예 1과 동일한 방법 으로 실시하여 목적 화합물을 흰색 고체로 얻었다 (42.9 mg, 수득율 40.5%).
- H-NMR (CDC13) 300 MHz) δ 7.98 (1Η, s, aromatic-H), 7.90 (1H, d, J =
11.7 Hz, CH), 7.79 (1H, d, J = 7.2 Hz, aromatic-H), 7.48 (1H, d, J = 8.1 Hz, aromatic-H), 7.35 7.42 (3H, m, aromatic-H), 7.04 (2H, d, J = 8.7 Hz, aromatic-H), 6.93 (1H, m,:;NHCH2), 5.70 (1H, d, J= 11.7 Hz, CH) , 3.75 (4H, t,
J = 4.5 Hz, CH2), 3.53 3.59 (2H, m, CH2) , 2.61 (2H, t, J = 6.0 Hz, CH2) , 2.52
(4H, t, J = 4.5 Hz, C¾), 2.11 (3H, m, adamant ly-H) , 1.90 (6H, m, adamant ly-
H), 1.77 (6H, m, adamant ly-H)
<실시예 19> (£)-3-[3-(4-아다만탄 -1-일-페녹시) -아크릴로일아미노] -7H:2-피 리딘— 4-일 -에틸) -벤즈아미드 ( £) -3- [ 3- ( 4-Adamant an- 1-y 1 -phenoxy ) - acryloylamino] ~N~ ( 2- r i d i n— 4— y 1 -ethyl ) -benzam i de의 제조 ( AC— 554 )
Figure imgf000031_0001
3-아미노 2-피리딘 -4-일-에틸) -벤즈아미드로부터 상기 실시예 1과 '동일한 방법으로 실시하여 목적 화합물을 흰색 고체로 얻었다 (81.2 mg, 수득율 66.5%).
-應 R (DMS0-d6, 300丽 z) δ 10.04 (1H, s, NH) , 8.53 (1Η, t, / = 5.4 Hz, NHCH2) , 8.46 (2H, d, J = 6.0 Hz, aromatic-H), 8.00 (1H, s, aromatic-H), 7.78
(1H, d, J = 9.0 Hz, aromatic-H), 7.75 (1H, d, J = 12.0 Hz, CH) , 7.41 7.44 (3H, m, aromatic-H), 7.36 (1H, t, J = 7.5 Hz, aromatic-H), 7.27 (2H, d, J = 5.7 Hz, aromatic-H), 5.83 (1H, d, J = 12.0 Hz, CH), 3.49 3.55 (2H, m, C¾)，
2.87 (2H, t, / = 6.9 Hz, CH2), 2.06 (3H, m, adamant ly-H) , 1.86 (6H, m, adamant ly-H) , 1.74 (6H, m, adamant ly-H)
<실시예 20> ( ) -3-[3-(4-아다만탄 -1-일―페녹시) -아크릴로일아미노] -Λ 3-이 미다졸 -1-일-프로필) -벤즈아미드 G -3-[3-( 4-Adamant an- 1-y 1 -phenoxy ) - aery 1 oyl amino] -71^(3- i mi dazol -1- 1 -propyl )—benzamide의 제조 (AC— 555)
Figure imgf000031_0002
3-아미노 -Λ 3-이마다졸 -1-일-프로필) -벤즈아미드로부터 상기 실시예 1과 동 일한 방법으로 실시하여 목적 화합물을 흰색 고체로 얻었다 (41.3 mg, 수득율 23.2%).
H-NMR (DMS0-d6, 300 MHz) δ 10.05 (1H, s, NH) , 8.49 (1H, t, J = 5.4
Hz, NHCH2) , 8.02 (1H, s, aromat ic-H) , 7.81 (1H, d, / = 8.4 Hz, aromatic-H) ,
7.75 (1H, d, J= 12.0 Hz, CH)， 7.65 (1H, s, aromatic-H), 7.49 (1H, d, J= 7.5 Hz, aromatic-H), 7.42 (2H, d, J = 8.7 Hz, aromatic-H), 7.38 (1H, t, J = 7.8 Hz, aromatic-H), 7.21 (1H, s, aromatic-H), 7.13 (2H, d, J = 8.7 Hz, aromat ic- H), 6.89 (1H, s, aromatic-H), 5.83 (1H, d, J = 12.0 Hz, CH) , 4.01 (2H, t, / = 6.9 Hz, CH2), 3.19 3.25 (2H, m, CH2) , 2.06 (3H, m, adamant ly-H) , 1.95 (2H, m,
CH2), 1.86 (6H, m, adamant ly-H) , 1.74 (6H, m, adamant ly-H)
<실시예 21> (£)-3-(3-(4-(2，4,4-트리메틸펜탄 -2-일)페녹시)아크릴아미도)벤 조산 (^)-3-(3-(4-(2,4,4-ΪΓ imethylpent an-2-y 1 ) phenoxy ) aery 1 ami do)benzoic acid 의 제조
Figure imgf000032_0001
(£)-3-(4-(2，4.,4-트리메틸펜탄 -2-일)페녹시)아크릴산 메틸에스테르로부터 상 기 제조예 5와 동일한 방법으로 실시하여 목적 화합물을 흰색 고체로 얻었다 (646.7 mg, 수득율 86.5%).
-丽 R (DMSO-de, 300 MHz) δ 12.92 (1Η, s, C00H) , 10.09 (1H, s, NH) ,
8.24 (1H, s, aromatic-H), 7.87 (1H, d, J = 8.7 Hz, aromatic-H), 7.74 (1H, d,
J = 12.0 Hz, CH), 7.61 (1H, d, J = 7.8 Hz, aromatic-H), 7.40 7.46 (3H, m, aromatic-H), 7.11 (2H, d, J = 8.7 Hz, aromatic-H), 5.85 (1H, d, J = 12.3 Hz, CH), 1.73 (2H, s, CH2), 1.33 (6H, s, CH3)， 0.69 (9H, s, CH3)
<실시예 22> (^ -2-메록시에틸 3-(3— (4-(2，4，4-트리메틸펜탄 -2-일)페녹시)아 크릴아미도)벤조에이트 (£)-2-methoxyethyl 3-(3-(4-(2,4,4-trimethylpentan-2- yl )phenoxy)acrylamido)benzoate의 제조 (AC_695)
Figure imgf000033_0001
( ) -3-(4-(2，4，4-트리메틸펜탄 -2—일)페녹시)아크릴산과 3-아미노벤조산 2-메 록시에틸에스테르로부터 상기 실시예 12와 동일한 방법으로 실시하여 목적 화합물 을 흰색 고체로 얻었다 (61.1 mg, 수득율 53.2%).
-NMR (CDCls, 500 MHz) δ 8.02 (1Η, d, / = 7.6 Hz, aromatic— H), 7.96
(1H, s, aromaticᅳ H), 7.91 (1H, d, J = 11.6 Hz, CH) , 7.80 (1H, d, J= 7.8 Hz, aromatic-H), 7.41 (1H, t, J = 7.98 Hz, aromatic— H), 7.37 (2H, d, J = 8.7 Hz, aromatic— H), 7.09 (1H, s, NH) , 7.00 (2H, d, J = 8.7 Hz, aromatic-H), 5.65 (1H, d, 11.6 Hz, CH), 4.47 (2H, t, J= 4.7 Hz, CH2)， 3.73 (2H, t, / = 4.8
Hz, CH2), 3.44 (3H, s, 0CH3)， 1.74 (2H, s, CH2) ' 1.37 (6H, s, C¾) , 0.72 (9H, s' CH3)
<실시예 23> ( ) -2-모폴리노에틸 3-(3-(4-(2，4，4—트리메틸펜탄 -2—일)페녹시) 아크릴아미도)벤조에이트 (£> -2-morpho linoethyl 3-(3-(4-(2,4,4-tr imethylpentan- 2-yl )phenoxy) aery 1 ami do benzoate-≤l 제조 (AC—694)
Figure imgf000033_0002
(^)-3-(3-(4-(2，4，4-트리메틸펜탄 -2-일)페녹시)아크릴아미도)벤조산과 모폴 리노에틸 클로라이드.염산으로부터 상기 실시예 12와 동일한 방법으로 실시하여 목 적 화합물을 흰색 고체로 얻었다 (402.9 mg, 수득율 71.4%).
H-NMR (DMSO-dg, 500 丽∑) δ 10.14 (1H, s, NH) , 8.27 (1Η, s, aromatic-
H), 7.88 - 7.80 (1H, m, aromatic-H), 7.75 (1H, d, J = 12.0 Hz, CH) , 7.62 (1H, d, J = 7.8 Hz, aromatic-H), 7.44 - 7.47 (3H, m, aromatic-H), 7.11 (2H, d, J = 8.8 Hz, aromatic-H), 5.85 (1H, d, J - 12.0 Hz, CH)， 4.39 (2H, t, J = 5.71 Hz, CH2), 3.56 (4H, t, /= 4.44 Hz, CH2) ' 2.68 (2H, t, /= 5.75 Hz, CH2) ,
2.48 (4H, m, C¾)， 1.73 (2H, s, CH2)， 1.34 (6H, s, CH3), 0.69 (9H, s, CH3) <비교예 1> 3-[2-(4-아다만탄— 1-일-페녹시) -아세틸아미노] -4-히드록시 -벤조 산 메틸 에스테르 ( 3- [ 2- ( 4-Adamant an- 1-y 1 -phenoxy ) -ace t y 1 am i no ] -4-hydr oxy- benzoic acid methyl ester) 조
Figure imgf000034_0001
4-아다만탄 -1-일-페녹시 아세트산 (143.2 mg, 0.5 謹 ol)을 THF 5 ml 및 옥살 릴 클로라이드 (oxalyl chloride, 178.5 mg, 0.11 ml , 1.5誦 ol)에 용해시키고， DMF 를 적가하였다ᅳ 한 시간 동안 상온에서 반웅시킨 후에， 3-아미노 -4-히드록시—벤조 산 메틸 에스테르 (125.4 mg, 0.75 腿 ol) 및 피리딘 0.05 ml를 첨가하고, 흔합물을 상온에서 반웅시켰다. 반웅이 완료된 후， 에틸 아세테이트와 염화나트륨 수용액으 로 분리하고， 유기층을 무수 황산 마그네슴으로건조시키고， 농축시켰다. 실리카겔 컬럼 크로마토그래피 (N-Hexane: EtOAc:MeOH=6:3:l)로 분리하여 목적 화합물 (183.2 mg, 수득율 :84.1%)을 흰색 고체로 얻었다.
H-NMR (DMSO-de, 300 Hz) 11.10(1H, s, OH), 9.24(1H, s, NH) , 8.69(1H, m, aromatic-H), 7.60-7.64 (1H, m, aromatic-H), 7.30(2H, d, J=8.4 Hz, aromatic-H), 6.94-6.99 (3H, m, aromatic-H) , 4.74(2H, s, CH2) , 3.79(3H, s,
CH3), 2.04(3H, m, adamant ly-H) , 1.83(6H, m, adamant ly-H) , 1.72(6H, m, adamant ly-H)
<실험예 1> HIF-1에 의해 매개된 HRE 전사활성화 저해도 측정
본 발명의 실시예에서 제조된 화합물의 HIF-1 전사활성 저해도를 측정하기 위해 전달체 (reporter)로서 루시퍼라아제 (luciferase)를 이용하는 pGL3-basic 백터 (Promega사)에 인간 VEGF 유전자에 존재하는 HRE(Hypoxia Responsive Element, 5'- ACGTG-31)가 여섯 번 반복되도록 멀티클로닝사이트 (随 lti-cloning site)에 복제시 켜 pGL3-HRE-루시퍼라아제 (pGL3-HRE-lucif erase) 백터를 제조하여 사용하였다.
48-웰 세포 배양 용기에서 인간 직장암 세포주인 HCT116 세포 (제조사)를 파 종하고， 하루가 지난 다음, 폴리펙트 시약 (Polyfect reagent , 제조사)을 이용하여 25 ng의 pGL3-HRE-루시퍼라아제 백터와 2.5 ng의 레닐라 (Renilla) 대조군 백터를 함께 형질전환 (transfection)시켰다. 24시간 동안 배양한 후 배지를 교체하고， 4시 간 동안 추가 배양한 다음， 실시예에서 제조된 화합물들을 각각 10 μΜ 농도로 처 리하고， 저산소 조건 (산소 1%, 질소 94%, 이산화탄소 5%)에서 12시간 배양하였다. RIPA 완충용액 (RIPA buffer)을 이용하여 용해물 (lysate)을 얻어 이중—루시퍼라아제 리포터 분석 시스템 (Dual-luciferase assay system, Promega사)을 사용하여 저산소 조건에서 유도된 루시퍼라아제의 활성을 측정함으로써 각 실시예에서 제조된 화합 물들의 HIF-1 저해 활성을 측정한 결과를 도 1에 나타내었다. 또한， 실시예 1에서 제조된 화합물 및 비교예 1의 화합물을 각각 0, 1, 3， 5， 10， 20 μΜ 농도로 처리 한 것을 제외하고는 상기와 동일한 방법으로 실행하여 저산소 조건에서 유도된 루 시퍼라아제의 활성을 측정함으로써 실시예 1 및 비교예 1에서 제조된 각 화합물의 HIF-1 저해 활성을 비교한 결과를 하기 표 2 및 도 2에 나타내었다.
【표 2】
Figure imgf000035_0001
、 도 1은 본 발명의 일실시예에 따른 화합물들을 10 μΜ 농도로 처리시 나타나 는 HRE 전사 활성을 측정한 그래프이다.
도 2는 본 발명의 일실시예에 따른 화합물이 HRE 전사 저해 활성을 측정한 결과를 나타낸 그래프이다. 표 2， 도 1 및 도 2에 나타난 바와 같이， 저산소 조건에서 유도되는 HIF-1에 의해 매개된 HRE 전사활성화에 본 발명에 따른 화합물들이 미치는 영향을 측정한 결과, HRE 활성을 현저히 저해하는 것으로 나타났다. 그 중에서 실시예 1의 화합물 (AC— 428)이 비교예 1의 화 "물에 비하여 암 세포주에서 약 3배 이상 우수한 HRE 전 사활성 저해도를 가지고 있음을 확인할 수 았다. 따라서， 본 발명에 따른 화합물은 HIF-1에 의해 활성화되는 HRE 전사활성을 저해하여 암의 성장 및 전이 등을 억제할 수 있으므로， 항암제의 유효성분으로 유 용하게 사용될 수 있다.
<실험예 2> 저산소 상태에서의 HIF-la 축적 저해도 측정
HIF-la 단백질은 HIF-1을 구성하는 단백질의 하나로서 HIF-1 표적 유전자들 의 발현에 중요한 역할올 한다.
상기 실험예 1을 통해 강한 HIF-1 전사활성 저해도를 나타낸 화학식 1의 화 합물에 대하여 직장암 세포주인 HCT116 세포에서 HIF-la 축적 (accumulat ion) 저해 도를 측정하였다. 구체적으로는, 본 발명의 실시예에서 제조된 화합물들이 저산소 (hypoxia) 조건에 의해 유도되는 HIF-la 단백질의 생성을 저해하는 효과를 웨스턴 블롯 (Western blot) 분석법을 이용하여 측정하였다. 또한, 실시예 1에서 제조된 화 학식 1의 화합물 및 비교예 1에서 제조된 화합물이 저산소 (hypoxia) 조건에 의해 유도되는 HIF-la 단백질의 생성을 농도의존적으로 저해하는 효과를 웨스턴 블롯 (Western blot) 분석법을 이용하여 비교하였다.
먼저， 세포배양용기에서 인간의 직장암 세포주인 HCT116 세포 (제조사)를 2X
105 cell/ml로 파종하고， 24시간 동안 배양한 다음， 저산소 조건 (산소 1%， 질소 94%, 이산화탄소 5%， 도 1에서 1% 02로 표시)에서 4시간 동안 전처리하여 HIF-la의 축적올 유도한 후， 화학식 1의 화합물을 DMS0 용매에 녹여 0~30 μΜ의 농도로 HCT116 세포에 처리한 다음, 상기 저산소 조건에서 12시간 동안 배양한 다음 RIPA 완층용액을 이용하여 핵 추출물을 조제하였다. 이때, 저산소 조건에 따른 HIF— 1 표 적 유전자의 발현을 비교하기 위하여 산소 20%를 포함하는 대조군과 함께 실험을 수행하였다. 상기 핵 추출물 각 시료당 약 30 / 을 SDS PAGE(sodi飄 dodecyl sulfate— polyacrylamide gel electrophoresis)로 분리하고 폴리비닐리덴 들루오라 이드 ^(polyvinyl idene fluoride membrane)에 옮긴 후 HIF-1 α 항처 KR,D System 사) 및 HRP( horseradish peroxidase)로 표식된'' 2차 항체' (AmershanHPharmacia사)를 사용하여 HIF-la 단백질의 양을 검출하였고, 내부 대조 유전자로 GAPDH를 사용하 였다.
또한 본 발명의 실시예에 따른 화합물이 종양억제자 VHL Von Hippel-Lindau) 의 발현에 미치는 영향을 알아보기 위하여 VHL 단백질을 처리하였다.
나아가， 각 PVDF 막에 동일한 양의 핵 추출물이 함유되어 있는 것을 다시 확 인하기 위해， HIF-la를 검출에 사용한 막에서 HIF-la 항체를 2-메르캅토에탄올을 함유한 완층 용액을 사용하여 떼어내고, 다시 베타액틴 (β-actin)을 이용하여 베타 액틴의 양을 검출하였다. 그 결과를 도 3 및 도 4에 나타내었다. 도 3은 본 발명의 일실시예에 따른 화합물들이 HIF-la 축적을 저해하는 정 도를 나타내는 도면이다.
도 4는 본 발명의 일실시예에 따른 화합물이 HIF-la 축적을 저해하는 정도 를 나타내는 도면이다. 도 3 및 도 4에 나타난 바와 같이， 본 발명의 실시예에서 제조된 화학식 1의 화합물들은 저산소 조건에서 GAPDH또는 베타액틴 ( -actin)의 생성에는 영향을 주 지 않으면서 HIF-la 단백질의 생성을 농도 의존적으로 저해하고 종양억제자 VHL의 발현을 증가시키고 있음을 확인할 수 있다. 따라서， 본 발명에 따른 화합물은 암을 악성화시키는 HIF-la의 축적을 억제 하고 종양억제자 VHL의 발현을 증가시키므로， 항암제의 유효성분으로 유용하게 사 용될 수 있다.
<실험예 3> HIF-1의 표적 유전자인 VEGF및 EP0발현에 화학식 1의 화합물이 미치는 영향 측정 (RT—PCR, reverse transcriptase polymerase chain reaction 분 석)
HIF-1의 표적 유전자들 중, VEGFCVascular endothelial growth factor A)는 암의 성장 및 암이 다른 조직으로 전이하는데 있어서 중요한 혈관 신생 인자이고, EPO(erythropoietin)는 적혈구의 생성을 촉진시키는 역할을 하는 인자이다. 이들 표적 유전자들은 암의 증식과 전이에 기여하는 것으로 알려져 있다.
본 발명에 따른 화합물의 HIF-1 저해 활성을 확인하기 위하여， 실시예 1에서 제조된 화학식 1의 화합물이 HIF-1의 대표적인 표적 유전자인 VEGF 및 EP0의 발현 을 저해하는 정도를 측정하였다. 구체적으로는， 직장암 세포주인 HCT116 세포를 사 용하여 다음과 같은 방법으로 측정하였다.
세포배양용기에서 HCT116 세포를 2X105 cell /ml로 파종하고, 24시간 동안 배양한 다음， 저산소 조건 (산소 1%， 질소 94%， 이산화탄소 5)) 상태로 4시간 동안 처리하여 HIF— 1α의 축적을 유도한 후 실시예 1에서 제조된 화합물을 10， 20 μΜ의 농도로 처리한 (실험군) 다음， 상기 저산소 조건에서 12시간 동안 배양하고， 트리졸 (trizol)을 이용하여:: mRNA를 정제하였다. 이때， 비교예 1에서 제조된 화합물 에 따른 HIF-1 표적 유전자의 발현을 비교하기 위하여 0, 10， 15， 20 μΜ의 농도로 처리한 대조군과 함께 실험을 수행하였다. 다음으로， 정제한 mRNA를 RT-PCR 키트 (Invitrogen사)를 이용하여 cDNA를 합성하고 RT-PCR과 실시간 RT—PCR을 이용하여 HIF-lci의 표적 유전자인 VEGF(Vascular endothelial growth factor A) 및 EP0( erythropoietin)의 mRNA 양을 측정하였다. 이때， 내부 대조 유전자로 GAPDH를 동시에 증폭하여 화학식 1의 화합물의 VEGF\ EP0에 대한 선택적 발현 저해 활성을 측정하였다. 그 결과를 도 5에 나타내었다. 도 5는 본 발명의 일 :실시예에 따른 화합물이 VEGF 및 EP0의 발현을 저해하는 정도를 나타내는 도면이다. 도 5에 나타난 바와 같이， 실시예 1에서 제조된 화학식 1의 화합물은 저산소 조건에서 내부 대조 유전자인 GAPDH의 발현에는 전혀 영향을 주지 않았다. 그러나
HIF-1의 표적 유전자인 VEGF 및 EP0의 발현은 실시예 1의 화합물의 농도에 의존적 으로 저해됨을 확인할 수 있다. . 따라서， 본 발명의 화학식 1의 화합물은 맘의 성장 및 암이 다른 조직으로 전이하는데 중요한 인자인 VEGF 및 EP0의 발현을 선택적으로 저해할 수 있기 때문 에 항암제의 유효성분으로 '유용하게 사용될 수 있다. 또한， 저산소 상태에서 VEGF 의 발현이 증가되어 악화되는 당뇨병성 망막증이나 관절염 치료제의 유효성분으로 도 유용하게 사용될 수 있다.
<실험예 4> 정맥투여에 의한 생체 내 항암 활성 축정 1
실시예 1에서 제조된 화합물을 정맥투여하였을 때의 직장암 성장 억제 활성 을 평가하기 위해 마우스에서의 생체 내 vivo) 항암 활성을 측정하였다. 구체적 으로는， 군마다 5 마리의 누드 마우스로 실험군 및 대조군을 구성하여 마우스의 체 중변화， 종양크기 및 종양무게를 측정하여 항암 활성을 측정하였다.
6주령의 암컷 누드 마우스 (출처: BALB/c nu/nu, Charles River사)는 실험기간 동안 항온, 항습이 유지되는 무균 상태로 사육하였다. 누드 마우스를 마취시킨 후
4X107 cells/mouse의 이식농도로 인체유래 직장암 세포주인 HCT116 세포를 직장 조 직에 이식하고， 수술용 클립으로 봉하였다. 직장암 세포주를 이식한 후 칼리퍼스로 암의 크기를 측정하여 암의 크기가 54.5 誦 3으로 자랐을 때， 실시예 1에서 제조돤 화합물을 투여하였다. 구체적으로는， 실험군에 대해서는 실시예 1의 화합물을 살린 (saline) 80%, DMAC 10% 및 트원 80(Tween 80) 10%로 구성되는 용매 (이하， '용매 A'라고 함)에 용해시켜 화합물의 농도가 30 mg/kg가 되도록 하여, 각각 15 ml /kg 용량으로 매일 1회씩 정맥투여하였다. 대조군은 화합물을 첨가하지 않은 용매 A만 15 ml /kg씩 매일 1회 경구투여하였고， 비교군은 토포테칸 2 mg/kg가 되도록 하여 , 각각 15 ml /kg 용량으로 매일 1회씩 정맥투여하였다. 이후 암 세포주의 크기 및 체 중은 0 2, 3 4 5, 6 8일째에 1회씩 측정하였다.
종양의 크기 (tumor volume)는 하기의 수학식 1로 계산하였고， 실시예 1의 화 합물을 반복하여 정맥투여 시의 독성 정도를 알아보기 위한 마우스의 체중변화를 표 3에 나타내었고， 종양 무게 및 크기의 변화를 표 4에 나타내었다. 이때, 표 4의 저해도 (%)는 하기 수학식 2로 계산하였는데， 화합물에 의한 종양 생성의 저해도를 백분율로 나타낸 것이다.
【수학식 1】
종양의크기 ( 3) = (종양세포의장축길이 ,mm)s (종양세포의단축길이 ,mm 2s0.5
【수학식 2] 켸 [/。八 r (대조군종양크기 -실험군종양크기) ^
저。도(%)=[ 대조군종양크기 ]sl00
【표 3】
Figure imgf000039_0001
표 3에 나타난 바와 같이， 실시예 1의 화합물을 30 mg/kg의 용량으로 누드 마우스 에 반복 정맥투여한 기간 동안 특이한 일반 증상은 관찰되지 않았으며, 마 우스 체중 변화의 최종일 (8일째) 결과를 보면 대조군과 비교하여 실험군에서 통계 적으로 유의한 체중 감소는 없는 것을 알 수 았다. 따라서, 화학식 1의 화합물은 독성이 거의 없어 항암제의 유효성분으로 사용될 수 있다.
【표 4】
Figure imgf000040_0001
표 4에 나타난 바와 같이， 실시예 1에서 제조된 화합물을 30 mg/kg을 투여한 실험군은 대조군에 비하여 45.7%로 암세포의 성장을 저해하였음을 알 수 있다. 따라서, 본 발명의 화합물을 정맥투여할 경우 생체 내 항암 활성을 가지며， 독성이 거의 없어 항암제의 유효성분으로 유용하게 사용될 수 있다.
<실험예 5> 정맥투여에 의한 생체 내 항암 활성 축정 2
실시예 1에서 제조된 화합물을 정맥투여하였을 때의 신장암 성장 억제 활성 을 평가하기 위해 마우스에서의 생체 내 (//7 Vivo) 항암 활성을 측정하였다. 구체적 으로는， 군마다 5 마리의 누드 마우스로 실험군 및 대조군을 구성하여 마우스의 체 중변화， 종양크기 및 종양무게를 측정하여 항암 활성을 측정하였다.
6주령의 암컷 누드 마우스 (출처 : BALB/c. nu/nu, Charles River사)는 실험기간 동안 항온, 항습이 유지되는 무균 상태로 사육하였다. 누드 마우스를 마취시킨 후 4X107 cells/mouse의 이식농도로 인체유래 신장암 세포주인 Caki-1 세포주를 신장 조직에 이식하고， 수술용 클립으로 봉하였다. 신장암 세포주를 이식한 후 칼리퍼스 로 암의 크기를 측정하여 암의 크기가 52.7 mm3으로 자랐을 때， 실시예 1에서 제조 된 화합물을 투여하였다. 군체적으로는， 실험군에 대해서는 실시예 1의 화합물을 크레모포아 (Cremophor) 10%, DMAC 10% 및 pH 10 완층용액 80%로 구성되는 용매 (이 하， '용매 B'라고 함)에 용해시켜 화합물의 농도가 20 nig/kg가 되도록 하여， 각각 15 ml /kg 용량으로 매일 1회씩 정맥투여하였다. 대조군은 화합물을 첨가하지 않은 용매 B만 15 ml/kg씩 매일 1회 경구투여하였고, 비교군은 토포테칸 2 mg/kg가 되도 록 하여， 각각 15 ml /kg 용량으로 매일 1회씩 정맥투여하였다. 이후 암 세포주의 크기 및 체중은 0， 2ᅳ 4， 7, 9， 11， 14일째에 1회씩 측정하였다..
종양의 크기 (tumor volume)는 실험예 4의 상기 수학식 1로 계산하였고， 실시 예 1의 화합물을 반복하여 :：정맥투여 시의 독성 정도를 알아보기 위한 마우스의 체 중변화를 표 5에 나타내었고, 종양 무게 및 크기의 변화를 표 6에 나타내었다. 이 때， 표 6의 저해도 (%)는 하기 수학식 2로 계산하였는데， 화합물에 의한 종양 생성 의 저해도를 백분율로 나타낸 것이다.
【표 5】
Figure imgf000041_0001
표 5에 나타난 바와 같이， 실시예 1의 화합물을 20 mg/kg의 용량으로 누드 마우스에 반복 정맥투여한 기간 동안 특이한 일반 증상은 관찰되지 않았으며， 마우 스 체중 변화의 최종일 (14일째) 결과를 보면 대조군과 비교하여 실험군에서 통계적 으로 유의한 체중 감소는 없는 것을 알 수 있다. 따라서， 화학식 1의 화합물은 독 성이 거의 없어 항암제의 유효성분으로 사용될 수 있다.
【표 6】 1의 화합물의 반복 정맥투여에 의하 종양크기 변화 및 최종일의 종양 무게 군 투여량 종양크기 (隱 3) 종양무
(n=5) (mg/kg/ 게 (ms) 투여 경과 ᄋ 수
day)
0 : 2 4 7 9 11 14 14 대조군 0 0.0 20.9 52.8 102.3 148.9 204.5 289.7 909.3
±0.0 ±4.0 ±11.9 ±12.2 ±30.4 土 39.2 ±64.5 土 216.0 실험군 20 0.0 17.1 41.4 77.6 107.0 141.9 200.2 640.0
±0.0 ±2.0 ±13.5 ±11.8 土 18.5 ±14.8 ±34.2 ±61.8 저해≤(%) ― 18.4 21.6 24.2 28.2 30.6 30.9 29.6 비교군 2 0.0 16.7 38.7 67.8 88.5 120.9 156.9 472.4
±0.0 ±2.3 ±4.8 ±8.6 ±19.6 ±36.0 ±51.3 ±137.6 저해도 (%) - 20.1 26.6 33.8 40.6 40.9 45.8 48.0 표 6에 나타난 바와 같이， 실시예 1에서 제조된 화합물을 20 mg/kg을 투여한 실험군은 대조군에 비하여 약 30%의 종양성장 억제 효과가 관찰되었다. 추가적으로， 본 실험;예 5에서 나타난 항암 활성 결과가 HIF-la의 발현 감소 에 의한 것인지 알아보기 위하여 종양조직의 면역반웅실험을 실시하였다. 구체적으 로, 비교군으로 토포테칸 (topotecan)을 처리하고, 실험군으로 실시예 1의 화합물을 처리하여 종양조직의 면역반웅 실험을 실시하였고, 그 결과를 도 6에 나타내었다. 도 6은 본 발명의 일실시예에 따른 화합물에 의해 HIF-la의 발현이 감소하 는 것을 광학현미경으로 관찰한 이미지이다. 도 6에 나타난 바와 같이, 대조군의 경우에는 HIF-la의 발현이 뚜렷히 관찰 되지만， 실시예 1의 화합물을 투여한 경우에는 쥐의 종양조직에서 HIF-la 발현이 확연히 감소함을 알 수 있다.
. 따라서， 본 발명의 화학식 1의 화합물을 정맥투여할 경우 종양조직에서 HIF- la 발현을 감소시켜 항암 활성을 가지며， 독성이 거의 없어 항암제의 유효성분으 로 유용하게 사용될 수 있다.
<실험예 6> 신생혈관생성 억제 활성 평가
화학식 1의 화합물이 신생혈관생성을 억제하는 정도와 종양이 감소되는 정도 를 확인하고자 다음과 같이 ^험을 수행하였다. 구체적으로， 6주령 암컷 쥐 (C57BL) 5마리를 1군으로 하여 B16F10 melanoma 세포주를 이식하고 암세포 배양 후 화학식 1의 화합물 20 mg/kg농도로 5일간 매일 복강 투여하여 종양이 감소되는 정도와 신생혈관 형성 억제 정도를 관찰하였다. 대 조군으로는 10% DMAC, 10% 크레모포아 및 80% 버퍼 (pH 10)의 흔합용액을 매일마다 투여하였고, 비교군으로는 토포테칸 (Topotecan) 2 mg/kg을 2일마다 1회 투여하여， 마우스의 체중변화 및 생성된 신생혈관 수를 측정하였고， 그 결과를 표 7， 표 8， 도 7 및 도 8에 나타내었다. 이때， 하기 표 8의 종양크기는 실험예 4의 수학식 1로 계산하였고， 저해도는 실험예 4의 상기 수학식 2로 계산하였다.
【표 7]
Figure imgf000043_0002
Figure imgf000043_0001
마우스에 반복 복강투여한 기간 동안 특이한 일반 증상은 관찰되지 않았으며， 마우 스 체중 변화의 최종일 (5일째) 결과를 보면 각 대조군과 비교하여 각 실험군에서 통계적으로 유의한 체중 감소는 없는 것을 알 수 있다. 따라서， 화학식 1의 화합물 은 독성이 거의 없어 항암제의 유효성분으로 사용될 수 있다.
Figure imgf000043_0003
표 8에 나타난 바와 같이， 실시예 1에서 제조된 화합물을 20 mg/kg을 투여한 실험군은 대조군에 비하여 28.9%로 암세포의 성장을 저해하였음을 알 수 있다. 도 7은 본 발명의 일실시예에 따른 화합물이 신생혈관 생성에 미치는 영향을 나타낸 그래프이다.
도 8은 본 발명의 일실시예에 따른 화합물이 신생혈관 생성에 미치는 영향을 나타낸 사진이다. 도 7 및 도 8에 나타난 바와 같이， 실시예 1의 화합물을 종양 조직에 처리하 였을 경우에는 아무런 처리 » 하지 않은 경우에 비하여 신생혈관 생성 수가 약 40% 감소되었음을 확인하였다. 따라서， 본 발명에 따른 화학식 1의 화합물은 신생혈관생성 억제 활성이 있 으므로， 항암제의 유효성분으로 사용될 수 있다.
<실험예 7>세포이동 (cell migration) 억제 효과 평가
실시예 1의 화합물이 세포이동을 억제하는 효과를 평가하기 위하여， 상처-치 료 (wound-healing) 실험을 수행하였다. 구체적으로는， 6-웰 세포배양용기에 인서트
(제조사: Ibidi)를 핀셋을 이용하여 중앙에 잘 ,놓고 HCT116 세포를 3X105 cell/ml 농도로 각 웰에 70 씩 넣'었다. 다음으로, 인서트 주위에 배지를 채워 넣어 주고 24시간 후 핀셋을 이용하여 인서트를 조심히 제거한 후 배지로 세포가 접시 바닥에 서 떨어지지 않도록 하면서 세척하였다. 그리고， 대조군에는 DMS0가 첨가된 회석한 배지를 넣어주고， 실험군에는 10 μΜ의 실시예 1의 화합물이 첨가된 회석한 배지를 넣어준 다음 48시간이 지난 후 현미경으로 세포이동의 저해를 확인하였다. 그 결과 를 도 9에 나타내었다. 도 9는 본 발명의 일실시예에 따른 화합물이 세포이동을 억제하는 것을 현미 경으로 관찰하며 찍은 사진이다. 도 9에 나타난 바와 '같이, 실시예 1의 화합물을 10 μΜ 처리하였을 경우에는 세포이동이 현저히 감소함을 확인하였다. 따라서, 본 발명에 따른 화합물은 세포이동 억제 활성이 있으므로 항암제의 유효성분으로 사용될 수 있다. <실험예 8> 암 전이 활성 억제 평가
실시예 1의 화합물이 암 전이를 억제하는 정도를 확인하고자 다음과 같이 실 험을 수행하였다.
구체적으로， 6주령 암컷 쥐 (C57BL) 6마리를 1군으로 하여 B16F10 melanoma 세포주를 이식하고 암세포 배양 후 화학식 1의 화합물 20 mg/kg 농도로 12일간 매 일 복강 투여하여 종양이 감소되는 정도와 신생혈관 형성 억제 정도를 관찰하였다. 대조군에는 정제수를 매일마다 투여하였고, 비교군에는 토포테칸 (Topotecan) 2 mg/kg을 2일마다 1회 투여하여， 마우스의 체증변화 및 암 전이 정도를 측정하였고， 그 결과를 표 9， 표 10 및 도 10에 나타내었다.
【표 9]
Figure imgf000045_0001
표 9에 나타난 바와 같이， 실시예 1의 화합물을 20 mg/kg의 용량으로 누드 마우스에 반복 복강투여한 기간 동안 특이한 일반 증상은 관찰되지 않았으며， 마우 스 체중 변화의 최종일 (12일째) 결과를 보면 대조군과 비교하여 실험군에서 통계적 으로 유의한 체중 감소는 없는 것을 알 수 있다. 따라서， 화학식 1의 화합물은 독 성이 거의 없어 항암제의쒜효성분으로 사용될 수 있다.
【표 10]
Figure imgf000045_0002
도 10은 본 발명의 일실시예에 따른 화합물 처리 시 폐의 암 전이 군집 수 변화를 찍ᅵ은 사진이다. 표 10 및 도 10에 나타난 바와 같이， 실험 최종일 (day 12)에 마우스를 회생 시켜 폐의 종양 군집 수를 육안으로 계수한 결과 대조군은 평균 306.8개의 전이 군 집을 형성한 반면에， 실시예 1의 화합물 20 mg/kg을 투여한 실험군은 평균 207개의 전이 군집만을 형성하여， 32.5%의 통계적으로 유의한 전이 억제 활성을 나타냈다.
따라서， 본 발명에 따른 화학식 1의 화합물은 암 전이 억제 활성이 있으므 로， 항암제의 유효성분으로 사용될 수 있다. 이하， 본 발명의 조성물을 이용한 제제예를 예시한다.
<제제예 1>산제의 제조
화학식 1의 화합물 2 g
유당 1 g
상기의 성분을 흔합하고 기밀포에 층진하여 산제를 제조하였다. -
<제제예 2> 정제의 제조
화학식 1의 화합물 100 mg
옥수수 전분 100 mg
유당 100 mg
스테아린산 마그네슴 2 mg
상기의 상분을 흔합한 후， 통상의 정제 제조방법에 따라 타정하여 정제를 제 조하였다. '
<제제예 3> 캡슐제의 제조
화학식 1의 화합물 100 mg
옥수수전분 100 mg
유당 100 mg
스테아린산 마그네슘 2 mg
상기의 성분을 흔합한 후, 통상의 캡슐채의 제조방법에 따라서 젤라틴 캡술 에 층전하여 캡슐제를 제조하였다. <제제예 4>주사액제의 제조
화학식 1의 화합물 10
Figure imgf000047_0001
묽은 염산 BP ^ 3.5로 될 때까^ 주사용 염화나트륨 BP 최대 1
적당한 용적의 주사용 염화나트륨 BP 중에 본 발명에 따른 화학식 1의 화합 물을 용해시키고, 생성된 용액의 pH를 묽은 염산 BP를 사용하여 pH 3.5로 조절하 고, 주사용 염화나트륨 ΒΡ» 사용하여 용적을 조절하고 층분히 흔합하였다. 용액을 투명 유리로 된 5 타입 I 앰플 중에 층전시키고， 유리를 용해시킴으로써 공기의 상부 격자하에 봉입시키고, 120 °C에서 15 분 이상 오토클래이브시켜 살균하여 주 사액제를 제조하였다.

Claims

【청구의 범위】
【청구항 1】
하기 화학식 1로 표시되는 신규 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염 [ 학식 1]
Figure imgf000048_0001
(상기 화학식 1에서，
R1은 d-10직쇄 또는 측쇄 알킬 또는 C8_122환식고리이고;
R2는 -H, C00R5, C00R5R6l -S02NH2l -S02d-4직쇄 또는 측쇄 알킬 또는 -C0NHR? 이고；
R3는 -H, -0H 또는 COOd-4직쇄 또는 측쇄 알킬이고;
R4는 -H 또는 d-4직쇄 또는 측쇄 알킬이고;
R5는 직쇄 또는 측쇄 알킬， Cw알콕시이고;
R6는 -NH2, N 또는 0를 1개 이상 포함하는 5— 6각 헤테로고리이고;
R7은 -H 또는 -(C¾)n-R8이고;
R8은 고리 내 N 또는 0를 1이상 함유하는 5ᅳ6각 헤테로아릴 또는 고리 내 N또는 0를 1이상 함유하는 5-6각 헤테로고리이고;
n은 0 내지 4의 정수이다).
【청구항 2】 제 1항에 있어서, 상기 R1은 C o직쇄 또는 측쇄 알킬 또는 '이고; R2는 -H, C00R5, C00R5R6) -S02N¾, -S02CH3 또는 _C0NHR7이고; R3는 -H, -OH 또는 C00C¾이고; R는 -H 또는 메틸이고;
R5는 -Η, 메틸， 에틸， 메특시 또는 에특시이고；
R6는 -NH2, N 또는 0를 1개 이상 포함하는 5-6각 헤테로고리이고;
R7은 -H또는 -(C¾)n-R이고;
R8은 -H, 고리 내 N 또는 0를 1이상 함유하는 5-6각 헤테로아릴 또는 고리 내 N또는 0를 1이상 함유하는 6각 헤테로고리이고;
n은 0 내지 3의 정수인 것을 특징으로 하는 화합물 또는 이의 약학적으로 허 용가능한 염 . ；
【청구항 3】 제 1항에 있어서 , 상기 R은
Figure imgf000049_0001
， 卞
화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염 .
【청구항 4】
제 1항에 있어서, 상기 R는 -H, -C00H, -COOCHs, -C00CH2CH3, -C00CH2C¾0C¾， -C0NH2, -S02NH2) -S02CH3 또는 하기 구조식으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어 느 하나인 으로 하는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염 :
Figure imgf000049_0002
【청구항 5】
제 1항에 있어서， 상기 화학식 1로 표시되는 화합물은
(£ -3-[3-(4-아다만탄 -1-일 -페녹시)—아크릴로일아미노] -벤조산메틸에스테르，
( )-3-(3-(4-—부틸페녹시)아크릴아미도)벤조산메틸에스테르，
(^ᅳ 3ᅳ(3— (4-(2，4，4-트리메틸펜탄 -2-일)페녹시)아크릴아미도)벤조산메틸에스 ( 3-(3-(4-아다만탄 -1-일 -2-메틸페녹시)아크릴아미도)벤조산메틸에스테르， (£)-4-(3-(4-아다만탄 -1-일페녹시)아크릴아미도)벤조산메틸에스테르， (£)-3-(4-아다만탄 -1-일페녹시) -N-(3-설파모일페닐)아크릴아미드，
(£)ᅳ3-(4-아다만탄 -1-일페녹시) -N-(3- (메틸설포닐)페닐)아크릴아미드， (£)-5— [3-(4-아다만탄 -1-일-페녹시) -아크릴로아미노] -2-히드록시 -벤조산메틸 에스테르，
3-[3-(4-아다만탄 -1-일-페녹시) -아크릴로일아미노] -벤조산， ( )-3-(3-(4-아다만탄— 1—일페녹시)아크릴아미도)벤조산에틸에스테르，
( )-3-(3-(4-아다만탄 -1-일페녹시)아크릴아미도)벤조산 2-메특시에틸에스테 르
( )-3-(3-(4-아다만탄 -1-일-페녹시)아크릴아미도)벤조산 2- (디메틸아미노)에 틸에스테르,
(£)-3-(3-(4-아다만탄 -1-일페녹시)아크릴아미도)벤조산 2-피롤리딘 -1-일)에 틸에스테르， '
(£)-3-(3-(4-아다만탄 -1-일페녹시)아크릴아미도)벤조산모폴리노에틸에스테 르
(£)-3-[3-(4-아다만탄 -1-일-페녹시) -아크릴로일아미노] -벤즈아미드，
( )-3ᅳ[3-(4-아다만탄 -1—일-페녹시) -아크릴로일아미노 이소프로필—벤즈아 미-드，
(£)-3-[3-(4-아다만탄 -1-일-페녹시) -아크릴로일아미노 퓨란 -2-일메틸-벤 즈아미드
(£ -3-[3-(4-아다만탄— 1-일-페녹시) -아크릴로일아미노] -Λ 2-모플린 -4-일-에 틸) -벤즈아미드，
(£)-3-[3-(4-아다만탄 -1—일-페녹시) -아크릴로일아미노] -71 2ᅳ피리딘 -4-일-에 틸)—벤즈아미드,
05 -3-[3-(4-아다만탈 -1-일-페녹시) -아크뮐로일아미노] -Λ 3-이미다졸 -1-일- 프로필) -벤즈아미드,
)-3-(3-(4-(2,4,4-트리메틸펜탄 -2-일)페녹시)아크릴아미도)벤조산， 메록시에틸 3-(3-(4— (2,4,4-트리메틸펜탄 -2-일)페녹시)아크릴아미도) 벤조에이트， 및
( ) -2-모폴리노에틸 3- ( 3- ( 4- ( 2， 4， 4ᅳ트리메틸펜탄— 2-일)페녹시)아크릴아미 도)벤조에이트로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염 .
【청구항 6】
하기 반웅식 1에 나타난 바와 같이，
화학식 2의 화합물과 화학식 3의 화합물을 출발물질로 하여 후니그 (Hunig) 염기와 축합 시약을 넣고 유기용매 하에서 반웅시켜 화학식 1을 제조하는 단계 (단 계 1)를 포함하는 화학식 1의 화합물의 제조방법 :
[반웅식 1]
Figure imgf000051_0001
2 3
(상기 반웅식 1에서，： R , R , R 및 R는 상기 화학식 1에서 정의한 바와 같 다).
【청구항 7】
제 6항에 있어서， 상기 후니그 염기는 디이소프로필에틸아민 (diisopropylamine, DIPEA) 또는 트리에틸아민 (triethylamine, TEA)인 것을 특징으 로 하는 화합물의 제조방법 .
【청구항 8】
제 6항에 있어서, 상기 축합시약은 (7-아자벤조트리아졸-1-일)- 씨', '- 테트라메틸유로니움테트라플루오로보레이트 (HATU)， 1-[3(디메틸아미노)프로필 ]-3- 에틸카보디이미드 염산염 (l-[3-(dimethylamino)propyl]—3-ethylcarbodi imide hydrochloride, EDO, 벤조트리아졸-씨 ,^',ΤΓ-테트라메틸-유로니움 -핵사플루오 로 -포스페이트 (HBTU), 1-히드록시벤조트리아졸 (l-hydroxybenzotriazole, HOBt), 벤 조트리아졸 -1-일-옥시—트리스-피를리디노―포스포늄핵사플루오로포스페이트 (benzotr i azo 1 - 1-y 1 -oxy- 1 r i s-py r r o 1 i d i no- phosphoniumhexaf luoro phosphate, PyBOP) 및 1-히드록시— 7-아자벤조트리아졸 (l-hydroxy-7— azabenzo triazole)로 이루어진 군으 로부터 선택되는 1종 이상인 것을 특징으로 하는 화합물의 제조방법.
【청구항 9】 제 6항에 있어서， 상기 유기용매는 디메틸포름아미드 (DMF) 또는 메틸렌클로라 이드 (CH2C12)인 것을 특징으로 하는 화합물의 제조방법.
【청구항 10]
거 U항의 화합물을 유효성분으로 함유하는 암 예방 또는 치료용 약학적 조성 물.
【청구항 11】
제 10항에 있어서， 샴기 암은 HIF-la 단백질의 축적이 많이 일어나는 고형암 인 대장암， 간암， 위암， 유방암， 결장암， 골암， 췌장암， 두부 또는 경부암， 자궁 암，' 난소암， 직장암， 식도암, 소장암， 항문부근암， 결장암， 나팔관암종， 자궁내막 암종， 자궁경부암종， 질암종， 음문암종， 호지킨병， 전립선암， 방광암， 신장암, 수 뇨관암， 신장세포암종, 신장골반암종 및 중추신경계 종양으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 암 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
【청구항 12]
제 10항에 있어서， 상기 조성물은 HIF-1의 활성을 저해하여 항암 활성을 나타 내는 것을 특징으로 하는 암 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
【청구항 13】
제 1항의 화합물을, 유효성분으로 함유하는 당뇨병성 망막증 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
【청구항 14】
제 13항에 있어서， 상기 조성물은 HIF-1의 활성 및 VEGF 단백질 발현을 저해 하여 신생혈관의 생성을 억제하는 것을 특징으로 하는 당뇨병성 망막증 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
[청구항 15】
제 1항의 화합물을 유효성분으로 함유하는 류마티스성 관절염 예방 또는 치료 용 약학적 조성물.
【청구항 16】
제 15항에 있어서， 상기 조성물은 HIF— 1의 활성을 저해하여 신생혈관의 생성 을 억제하는 것을 특징으로 하는 류마티스성 관절염 예방 또는 치료용 약학적 조성 물
[청구항 17】
제 1항의 화학식 1로 표시되는 신규 화합물， 또는 이의 약학적으로 허용가능 한 염을 치료적으로 유효한 양으로 암 치료를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계 를 포함하는 암의 치료방법 .
【청구항 18】
제 1항의 화학식 1로 표시되는 신규 화합물， 또는 이의 약학적으로 허용가능 한 염을 치료적으로 유효한 양으로 당뇨병성 망막증 치료를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 당뇨병성 망막증의 치료방법. [청구항 19】
거 U항의 화학식 1로 표시되는 신규 화합물， 또는 이의 약학적으로 허용가능 한 염올 치료적으로 유효한 양으로 류마티스성 관절염 치료를 필요로 하는 환자에 게 투여하는 단계를 포함하는 류마티스성 관절염의 치료방법.
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